デルフィニウムの花色交配法
本発明は、デルフィニウムの後代に特定の花色を遺伝させる花色交配法と、デルフィニウムの後代に二色系の花色を遺伝させる花色交配法を提供する。また、暖地で効率よく季節咲きさせる方法を提供し、萼片中の主要な内性色素の比率からデルフィニウムの花色を決定する方法を提供する。全色系花色のデルフィニウムを花粉親または種子親として他殖交配し、特定の花色を後代に遺伝させることができると共に、二色系の花色を後代に遺伝させることができることを見出した。デルフィニウムを約１５℃の温度下シャーレ内で発芽させる条件で育苗し、暖地において効率よく季節咲きさせる方法を見出した。デルフィニウムの花色と内生色素を分析し、デルフィニウムの花色を決定する数式を見出した。新規アントシアニンを主成分として含む紫色花または淡紫色花デルフィニウムの交配法を見出した。その新規アントシアニン色素の単離、精製方法を見出した。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、特定の花色を有するデルフィニウムの種子を繁殖するための効率的な交配方法に関する。また、二色系の花色（ビカラー）を有するデルフィニウムの種子を繁殖するための効率的な交配方法に関する。より詳しくは、開花植物、すなわち、被子植物の花と、遺伝子形を改変するための処理である交配の方法とからなる新規植物またはそれらを得るための処理に関する。また、生殖交雑（ｓｅｘｕａｌ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ）の段階を含む育種過程（ｂｒｅｅｄｉｎｇ ｐｒｏｃｅｓｓ）において得られた植物やその一部を用いる方法である。さらにまた、新規植物（ｎｅｗ ｐｌａｎｔｓ）またはそれらを得るための方法であって、被子植物（ａｎｇｉｏｓｐｅｒｍｓ）などの花き類（ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ ｐｌａｎｔｓ）に関する。
【背景技術】
【０００２】
デルフィニウム（飛燕草、Ｄｅｌｐｈｉｎｉｕｍ）は、キンポウゲ科（Ｒａｎｕｎｃｕｌａｃｅａｅ）デルフィニウム属の草本植物である。世界に２００種以上が存在し、その大部分は北半球のヨーロッパ、地中海沿岸、シベリア、カリフォルニアに分布する（非特許文献１、園芸植物大事典、小学館、３４８−３５０、１９８９）。
【０００３】
デルフィニウムはヨーロッパで花壇用花卉（宿根草）として取り扱われていたが、２０世紀初頭には欧米諸国で品種改良に成功し、現在は１年草として取り扱われている。アメリカでは大輪八重咲きのパシフィックジャイアント（Ｐａｃｉｆｉｃ Ｇｉａｎｔ）系やドワーフブルーファウンテン（Ｄｗａｒｆ Ｂｌｕｅ Ｆｏｕｎｔａｉｎ）系、イギリスとオランダでは一重で分枝の多いベラドンナ（Ｂｅｌｌａｄｏｎｎａ）系やピンクセンセーション（Ｐｉｎｋ Ｓｅｎｓａｔｉｏｎ）系などの品種群が作出された（非特許文献１；非特許文献２、朝日園芸百科０３、朝日新聞社、２０４−２０６、１９８４）。
【０００４】
日本国への導入は明治初期といわれ、最近になってようやくデルフィニウム種苗の供給、新品種改良を本格的に取り組むようになった。例えば、デルフィニウムの周年安定生産技術の開発（非特許文献３、上山茂文、農林水産総合技術センター暖地園芸センター園芸部、平成１０年度成果発表、６ページ、１９９８）、暖地におけるデルフィニウムの促成栽培の技術確立（非特許文献４、中村 薫、宮崎県総農試研報、１３−２９、１９９５）など、生産方法の開発に力が注がれているが、中でも宮崎県農業試験場が育成した‘シリウス’をはじめとする品種群は暖地の促成栽培に適したＦ１品種としては逸品である（非特許文献５、中村 広、宮崎県総農試研報、５３−６１、２００１）。
【０００５】
デルフィニウムは草丈約１．５ｍ以上に成長し、花穂（花序）は約５０花以上つけるものを良品としている。花穂は一見花弁のように思えるが、実は萼片であり、これが青、紫、桃、赤、黄、白に染まり、様々な花色をかもし出している（非特許文献６、朝日園芸百科０６、朝日新聞社、２０２−２０４、１９８４）。
【０００６】
萼片に含まれるアントシアニン色素について、青色萼片には過度にアシル化された、シアノデルフィン（ｃｙａｎｏｄｅｌｐｈｉｎ）が含まれていることが知られている（非特許文献７、Ｋｏｎｄｏ、Ｔ．、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．４４：６３７５−６３７８、１９９１）。また、紫色の萼片にはアシル化アントシアニンであるヴィオルデルフィン（ｖｉｏｌｄｅｌｐｈｉｎ）が含まれていることが明らかにされ、これらの色素がそれぞれの萼片が青色ならびに紫色に着色する本体であることが報告されている（非特許文献８、Ｋｏｎｄｏ、Ｔ．、Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．、１３７−１３８、１９９０）。
【０００７】
花色は、光が花弁表面にあたり、花弁表皮細胞内に存在する色素類に吸収されなかった光が反射されることにより、人間の目に感知される。しかし、光、または色彩に対する感受性に個人差があるために、花色を明確に表現する手法が必要であるとされてきた（非特許文献９、Ｖｏｓｓ、Ｄ．Ｈ．：ＨｏｒｔＳｃｉ．、２７：１２５６〜１２６０、１９９２）。
【０００８】
花色（ｆｌｏｗｅｒ ｃｏｌｏｒ）を測定する方法として、色彩計、または、色差計（ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｅｒ）を用い、ＣＩＥＬａｂ表色系の座標にプロットする測定方法がある。これは、色の三属性（ｃｏｌｏｒ ａｔｔｒｉｂｕｔｅ）、すなわち、色相（ｈｕｅ）、明度（ｂｒｉｇｈｔｎｅｓｓ）、彩度（ｃｈｒｏｍａ）を三次元の立体空間座標系（ｔｈｒｅｅ ｄｉｍｅｎｔｉｏｎａｌ ｇｌｏｂａｌ ｃｏｌｏｒ ｃｈａｒｔ）、つまり、色立体として考えたもので、本空間中の色差（ｈｕｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ）は、肉眼で感知した色の差を正確に反映する（非特許文献１０、Ｇｏｎｎｅｔ、Ｊ．Ｆ．：Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ．、６３：４０９〜４１５、１９９８）。
【０００９】
近年、デルフィニウムの花色と内生色素濃度（シアノデルフィン、ｃｙａｎｏｄｅｌｐｈｉｎ、やヴィオルデルフィン、ｖｉｏｌｄｅｌｐｈｉｎ）との関係について報告した（非特許文献１１、Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ、Ｆ．、Ｊ．Ｓｏｃ．Ｈｏｒｔ．Ｓｃｉ．、６９：４２８〜４３４、２０００）。より詳しくは、デルフィニウムの萼片の花色を測色して、萼片から得られた内生色素との関係を述べ、花色をより正確に求めることができることを報告した。
【００１０】
さらに、デルフィニウムの内生色素濃度（シアノデルフィン、ｃｙａｎｏｄｅｌｐｈｉｎ、やヴィオルデルフィン、ｖｉｏｌｄｅｌｐｈｉｎ）は開花後、時間が経過するとともにそれらの萼片内の濃度が変化することを報告し、これらの生合成について述べた（非特許文献１２、Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ、Ｆ．、Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、６６：１６５２〜１６５９、２００２）。より詳しくは、デルフィニウム萼片内から得られたチューリッパニン（ｔｕｌｉｐａｎｉｎ）を出発色素とし、これが時間とともにビスデアシルプラチコニン（ｂｉｓｄｅａｃｙｌｐｌａｔｙｃｏｎｉｎ）、ヴィオルデルフィン（ｖｉｏｌｄｅｌｐｈｉｎ）、シアノデルフィン（ｃｙａｎｏｄｅｌｐｈｉｎ）へ変化することを述べた。この生合成（ｂｉｏｇｅｎｅｓｉｓ）は、アントシアニンの母核をなすアントシアニジンの生合成ではなく、アントシアニジンであるデルフィニジンに、配糖化並びにアシル化反応を誘導する生合成に関する。
【００１１】
青色系デルフィニウム萼片の発色機構について、萼片上皮細胞の液胞中の金属アルミニウム（Ａｌ３＋）の存在が重要で、シアノデルフィン（ｃｙａｎｏｄｅｌｐｈｉｎ）などとの助色素効果（コピグメント効果、ｃｏｐｉｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ）を起こすことにより青色化（ｂｌｕｉｎｇ）しているとの報告がある（非特許文献１３、吉田久美、日本植物生理学会年会要旨、２６２、２００２）。また、萼片上皮細胞をプロトプラスト化して、その液胞中の青色繊維状物質を調査し、青色化には金属イオンが関与していないことの報告がある（非特許文献１４、吉田久美、日本農芸化学会年会要旨、２６３、２００３）。さらに、青色系デルフィニウム萼片の発色機構を調査するために、萼片上皮細胞の液胞中のｐＨを測定し、約５．０程度であることの報告がある（非特許文献１５、吉田久美、日本植物生理学会年会要旨、２７７、２００１）。
【００１２】
市販されているデルフィニウム品種について、二、四、六倍体の倍数性を有すると言われている。パシフィックジャイアント系の品種は四倍体である（非特許文献１６、Ｌｅｇｒｏ、Ｒ．Ａ．Ｈ．、Ｅｕｐｈｙｔｉｃａ、１０：１〜２３、１９６１）。四倍体であるため他殖交配を行った場合、様々な花色を有する後代が得られ、特定の花色を後代に遺伝させる方法がなかったなどの問題点がある。その中で、二色系デルフィニウムとして‘ギネバー’が選抜されているが、これはメリクロン苗により継代され増殖されたもので、種子繁殖により増殖されるものではない（非特許文献５）。よって、交配により自由に二色系デルフィニウムの種子繁殖苗を得る事ができず、たくさんの二色系デルフィニウムを市場に提供できなかった問題点がある。
【００１３】
デルフィニウムは冷涼地または高冷地でよく育ち、暖地では高温のため生育が悪い（非特許文献４）。その理由から、暖地では季咲き栽培は避けられている。したがって、暖地では促成栽培を行わなければ、デルフィニウムを効率よく栽培することができなかったなどの問題点がある。
【００１４】
デルフィニウムの花色を正確に数値化できるようになったが（非特許文献１１）、萼片の花色と萼片中の内生色素との関係が不明であったため、内生色素の蓄積からデルフィニウムの花色を決定することができなかったなどの問題点がある。
【００１５】
その他、第２６回国際園芸学会議（トロント、カナダ）の講演要旨には、トルコギキョウ花弁中の３種の主要アントシアニジンの遺伝の記載がある（非特許文献１７、Ｕｄｄｉｎ、Ａ．Ｆ．Ｍ．Ｊ．：ｔｈｅ ＸＸＶＩｔｈ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｃｏｎｇｒｅｓｓ ａｎｄ Ｅｘｈｉｂｉｔｉｏｎ、２００２年、Ａｕｇｕｓｔ １１−１７、Ｐ．４７５−４７６）。
この内容を、特願２００３−０２６５９８号（以下、特許文献１という）として出願し、トルコギキョウの花色遺伝型交配法（特許文献１の第００１５段落）と記載した。「トルコギキョウの主要花色素である、３つのアントシアニジン：ペラルゴニジン（Ｐｇｎ）、シアニジン（Ｃｙｎ）、デルフィニジン（Ｄｐｎ）の遺伝に着目し、自殖や正逆交雑を行い検討した結果、Ｆ１〜Ｆ３世代の色素表現型の分離から、新しい遺伝の法則を見出した。」、「色素前駆体のＢ環の水酸化に関与するフラボノイド３’−ヒドロキシラーゼ（Ｆ３’Ｈ）とフラボノイド３’、５’−ヒドロキシラーゼ（Ｆ３’、５’Ｈ）の酵素反応系には、ＨＴ、ＨＦ、ＨＤ、ＨＯの４つの複対立遺伝子が存在し、これらが３’位の水酸化、５’位の水酸化、３’、５’位の水酸化、および３’位と３’、５’位の水酸化を制御し、これらの組み合せによって花色表現型が決定されることを見出し、本発明を完成した。」という記載がある。
【００１６】
特開平１１−１０３７０４号明細書（以下、特許文献２という）には、組織培養苗により増殖して得られるメリクロン苗を用いて、その苗同士を交配してＦ１種子を得る方法の記載がある。「二つの自殖系統デルフィニウムの選抜個体のうち、少なくとも一つを組織培養により増殖し、得られた一方のメリクロン苗と他方の自殖系統個体、または双方のメリクロン苗どうしを交配して、デルフィニウムＦ１種子を得ることを特徴とするデルフィニウムＦ１品種の作出方法。」という記載がある（特許文献２の請求項１）。
【００１７】
特開平１１−０３２６０４号明細書（以下、特許文献３という）には、種間交雑苗生産方法の記載がある。「本発明は、デルフィニウム属植物の種間交雑を行って得た種子の胚を摘出または胚の少なくとも一部を露出して、胚培養を行うことを特徴とするデルフィニウム属植物の種間交雑苗生産方法を要旨とするものである。」という記載がある（特許文献３の第０００８段落）。
【００１８】
米国特許第１３０１０号明細書（以下、特許文献４という）には、デルフィニウムの新規園芸品種‘ドルチェヴィタ（Ｄｏｌｃｅ Ｖｉｔａ）’の記載がある。「八重の花を持ち、青色の二色系の花である。」という記載がある（特許文献４の第００１０段落）。
【００１９】
米国特許第１４１５２号明細書（以下、特許文献５という）には、デルフィニウムの新規園芸品種‘デルガスタム（Ｄｅｌｇａ Ｓｔａｍ）’の記載がある。「本発明は、デルフィニウム属植物の新規園芸品種に関するものであって、植物学的にデルフィニウムの交雑品種であり」、「花色は青紫色／淡緑色の花を特徴とし、」という記載がある（特許文献５の第０００４および第００１１段落）。
【特許文献１】特願２００３−０２６５９８号（第００１５段落）
【特許文献２】特開平１１−１０３７０４号公報（請求項１）
【特許文献３】特開平１１−０３２６０４号公報（第０００８段落）
【特許文献４】米国特許第１３０１０号明細書（第００１０段落）
【特許文献５】米国特許第１４１５２号明細書（第０００４および第００１１段落）
【非特許文献１】「デルフィニウム属」、園芸植物大事典、小学館、１９８９年２月、Ｐ．３４８−３５０。
【非特許文献２】「デルフィニウム」、朝日園芸百科０３、朝日新聞社、１９８４年６月、Ｐ．２０４−２０６。
【非特許文献３】上山茂文、「デルフィニウムの周年安定生産技術」、農林水産総合技術センター暖地園芸センター園芸部、平成１０年度成果発表、１９９８年、６ページ。
【非特許文献４】中村 薫、他５名、「暖地におけるデルフィニウムの促成栽培の技術確立」、宮崎県総農試研報、１９９５年７月、Ｐ．１３−２９。
【非特許文献５】中村 広、他５名、「暖地の促成栽培に適したデルフィニウムＦ１品種‘シリウス’の育成と特性」、宮崎県総農試研報、２００１年３月、Ｐ．５３−６１。
【非特許文献６】「デルフィニウム」、朝日園芸百科０６、朝日新聞社、１９８４年９月、Ｐ．２０２−２０４。
【非特許文献７】Ｋｏｎｄｏ、Ｔ．、他６名、「Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ Ｃｙａｎｏｄｅｌｐｈｉｎ、ａ Ｔｅｔｒａ−ｐ−ｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚｏａｔｅｄ Ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎ ｆｒｏｍ Ｂｌｕｅ Ｆｌｏｗｅｒ ｏｆ Ｄｅｌｐｈｉｎｉｕｍ ｈｙｂｒｉｄｕｍ」、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．、１９９１年、第４４巻、Ｐ．６３７５−６３７８」。
【非特許文献８】Ｋｏｎｄｏ、Ｔ．、他３名、「Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ Ｖｉｏｌｄｅｌｐｈｉｎ、ａｎ Ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎ ｆｒｏｍ Ｖｉｏｌｅｔ Ｆｌｏｗｅｒ ｏｆ Ｄｅｌｐｈｉｎｉｕｍ ｈｙｂｒｉｄｕｍ」、Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．、１９９０年、Ｐ．１３７−１３８。
【非特許文献９】Ｖｏｓｓ、Ｄ．Ｈ．、「Ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｅｒ Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｃｏｌｏｒ ｔｏ ｔｈｅ Ｒｏｙａｌ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ Ｃｏｌｏｕｒ Ｃｈａｒｔ」、ＨｏｒｔＳｃｉ．、１９９２年、第２７巻、Ｐ．１２５６〜１２６０。
【非特許文献１０】Ｇｏｎｎｅｔ、Ｊ．Ｆ．、「Ｃｏｌｏｒ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ Ｃｏ−ｐｉｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｓ ｒｅｖｉｓｉｔｅｄ．１．Ａ Ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ Ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎ Ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ＣＩＥ ＬＡＢ Ｓｃａｌｅ」、Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ．、１９９８年、第６３巻、Ｐ．４０９〜４１５。
【非特許文献１１】Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ、Ｆ．、他４名、「Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｙａｎｉｃ Ｆｌｏｗｅｒ Ｃｏｌｏｒ ｏｆ Ｄｅｌｐｈｉｎｉｕｍ Ｃｕｌｔｉｖａｒｓ」、Ｊ．Ｓｏｃ．Ｈｏｒｔ．Ｓｃｉ．、２０００年、第６９巻、Ｐ．４２８〜４３４。
【非特許文献１２】Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ、Ｆ．、他５名、「Ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ Ｆｌｏｗｅｒ Ｃｏｌｏｒａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｓｅｐａｌ Ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｓ ｏｆ Ｃｙａｎｉｃ Ｄｅｌｐｈｉｎｉｕｍ Ｃｕｌｔｉｖａｒｓ ｄｕｒｉｎｇ Ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ」、Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、２００２年、第６６巻、Ｐ．１６５２〜１６５９。
【非特許文献１３】吉田久美、他５名、「青色デルフィニウム花弁の発色機構」、日本植物生理学会年会要旨、２００２年、Ｐ．２６２。
【非特許文献１４】吉田久美、他４名、「青色デルフィニウム花弁の発色機構２−液胞内青色物質の分析」、日本農芸化学会年会要旨、２００３年、Ｐ．２６３。
【非特許文献１５】吉田久美、他４名、「細胞内微小電極による花弁液胞ｐＨの測定と花色」、日本植物生理学会年会要旨、２００１年、Ｐ．２７７。
【非特許文献１６】Ｌｅｇｒｏ、Ｒ．Ａ．Ｈ．、「Ｓｐｅｃｉｅｓ Ｈｙｂｒｉｄｓ ｉｎ Ｄｅｌｐｈｉｎｉｕｍ」、Ｅｕｐｈｙｔｉｃａ、１９６１年、第１０巻、Ｐ．１〜２３。
【非特許文献１７】Ｕｄｄｉｎ、Ａ．Ｆ．Ｍ．Ｊ．、他２名、「Ｉｎｈｅｒｉｔａｎｃｅ Ｍｏｄｅｌ ｏｆ Ｔｈｒｅｅ Ｍａｊｏｒ Ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎｓ ｉｎ Ｅｕｓｔｏｍａ ｇｒａｎｄｉｆｌｏｒｕｍ Ｃｕｌｔｉｖａｒｓ」、Ｏｎ−Ｓｉｔｅ Ｐｒｏｇｒａｍ、ｔｈｅ ＸＸＶＩｔｈ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｃｏｎｇｒｅｓｓ ａｎｄ Ｅｘｈｉｈｉｂｉｔｉｏｎ、Ｔｏｒｏｎｔｏ、Ｃａｎａｄａ、２００２年、Ａｕｇｕｓｔ １１−１７、Ｐ．４７５−４７６（Ｓ１９−Ｐ−１９）。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００２０】
しかしながら、デルフィニウムは他殖性であり、自殖を繰り返すと自殖弱性を起こす。したがって、自殖によって特定の花色を持つ種子の繁殖が困難であったため、それらの特定の花色を持つ種子を維持することができなかったなどの問題点がある。また、デルフィニウムで他殖交配を行った場合、様々な花色を有する後代が得られ、特定の花色を後代に遺伝させることができなかったなどの問題点がある。
二色系デルフィニウムはメリクロン苗により継代され増殖させることができたが、種子繁殖ができなかったため、たくさんの二色系デルフィニウムを市場に提供できなかったなどの問題点がある。
【００２１】
デルフィニウムは冷涼地または高冷地でよく育つが、暖地では高温のため生育が悪い。そのため暖地では促成栽培を行わなければ、デルフィニウムを効率よく生育させることができなかったなどの問題点がある。
デルフィニウムの花色を正確に数値化できるようになったが、萼片の花色と萼片中の内性色素との関係が不明であったため、萼片の内性色素の蓄積からデルフィニウムの花色を決定することができなかったなどの問題点がある。
また、デルフィニウムの萼片には化学構造が不明なアントシアニン色素を含み、これらを特徴とする紫色花のデルフィニウムを市場に提供できなかったなどの問題点がある。
【００２２】
本発明の課題は、全色系デルフィニウムの他殖交配により特定の花色をもつ種子を得ることのできる方法を提供する。同時に、他殖交配することにより二色系の花色（ビカラー）をもつデルフィニウムの種子を得ることのできる交配方法を提供することである。また、本発明の別の課題は前記デルフィニウムを暖地で効率よく季節咲き栽培する方法を提供することである。
本発明の課題は、他殖交配により特定の花色をもつ種子を自由に得ることができる方法を提供することである。また、本発明の課題は、種子繁殖によるたくさんの二色系花色（ビカラー）のデルフィニウムを提供することである。
更に、本発明の課題は、新規アントシアニンを主成分として含む紫色花または淡紫色花デルフィニウムを提供することおよび、その新規アントシアニン色素の単離、精製方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００２３】
本発明者らは、上記の課題を解決するために、全色系花色をもつデルフィニウムを花粉親または種子親として他殖交配し、特定の花色を後代に遺伝させることができることを見出した。
【００２４】
さらに、デルフィニウムを花粉親または種子親として他殖交配し、二色系の花色（ビカラー）を後代に遺伝させることができることを見出した。
本発明者らは、上記の課題を解決するために、全色系花色をもつデルフィニウムを花粉親または種子親として他殖交配し、特定の花色を後代に遺伝させることができることを見出した。
【００２５】
また、前記したデルフィニウムを、１５℃±１℃（１４〜１６℃、以下約１５℃と言う）の温度下シャーレ内で発芽させる条件で育苗することによって、デルフィニウムを効率よく（季節咲き）生育すること、特に暖地において効率よく（季節咲き）生育することが可能となった。
【００２６】
本発明は、更にデルフィニウムの花色と内生色素を分析し、横軸を萼片中の内性色素の含量比とし、縦軸に花色を示す色相角度として得た数式１
【００２７】
【数１】
【００２８】
（式中、ＣＤ／ＶＤはデルフィニウム萼片の内生色素の比率を示し、Ｈｍａｘは花色である最大色相角を示し、ＫＨは最大色相角の２分の１になる場合の内生色素の比率を定数として示す）
を用い、デルフィニウムの花色を決定する方法を見出した。
【００２９】
本発明のデルフィニウムの花色交配法は、デルフィニウムの花色を作出する花色交配の組み合わせを決定するものであって、花粉親または種子親の配偶子を行または列とする組合せ早見表を用いて、花色を想定することを特徴とする。
【００３０】
本発明はまた、本発明のデルフィニウムの花色交配法により作出されたデルフィニウムの花色が、下記の式（Ｉ）で示すことのできる新規アントシアニン色素または式（ＩＩ）で示すことができるアントシアニン色素（ＩＩ）で発現することを特徴とするものを含む。
【００３１】
【化１】
【００３２】
【化２】
【００３３】
これらの色素は新規若しくはデルフィニウムから単離されていない。従って、本発明は、本発明の方法により作出されたデルフィニウムこれらの色素を単離・精製する方法も含む。更に本発明は、式（Ｉ）で示される、３−Ｏ−（６−Ｏ−（α−Ｌ−ｒｈａｍｎｏｓｙｌ）−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−７−Ｏ−（３−Ｏ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ−６−Ｏ−（４−Ｏ−（６−Ｏ−ｐ−ｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚｏｙｌ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−ｐ−ｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚｏｙｌ）−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−ｄｅｌｐｈｉｎｉｄｉｎも包含する。
【図面の簡単な説明】
【００３４】
【図１】ビカラーの花色をＣＩＥＬａｂ表色系座標にプロットした図である。（実施例５）
【図２】青色系の二色花（ビカラー・ブルー、Ｂ青）の生物の形態写真である。（実施例５）
【図３】淡青色系の二色花（ビカラーウイトブルー、Ｂ淡青）の生物の形態写真である。（実施例５）
【図４】パシフィックジャイアント（紫色）とブルーミラー（青色）の色相角（ｈ）の経時的変化を示す図である。（実施例７）
【図５】パシフィックジャイアント（紫色）の萼片の主内生色素比（ＶＤ／ＴＰ）およびブルーミラー（青色）萼片の主内生色素比（ＣＤ／ＶＤ）に対する色相角（ｈ）の関係を示す図である。（実施例７）
【図６】パシフィックジャイアント（紫色）の萼片の主内生色素比（ＶＤ／ＴＰ）の逆数およびブルーミラー（青色）萼片の主内生色素比（ＣＤ／ＶＤ）の逆数に対する色相角（ｈ）の逆数の関係を示す図である。（実施例７）
【図７】パシフィックジャイアントを他殖交配して得たハイブリッド種子（Ｈｙｂｒｉｄ種子）と購入種子（店種）との生存率との比較を示す図である。（実施例１０）
【図８】薄層クロマトグラフィーを示す図である。（実施例１１）
【図９】薄層クロマトグラフィーを示す図である。（実施例１１）
【図１０】式（Ｉ）で示すことのできる新規アントシアニン色素の核磁気共鳴スペクトルで、異核化学シフト相関（ＨＭＱＣ）と同核シフト相関（１Ｈ−１Ｈ ＴＯＣＯＳＹ、矢印のついた曲線）を示す図である。（実施例１２）
【図１１】式（Ｉ）で示すことのできる新規アントシアニン色素の核磁気共鳴スペクトルで、プロトン（１Ｈ）に相関する１３炭素（１３Ｃ）の遠距離相関（ＨＭＢＣ）を示す図である。（実施例１２）
【発明を実施するための最良の形態】
【００３５】
以下、本発明の実施の形態を説明する。
本発明は、全色系花色をもつデルフィニウムを花粉親または種子親として他殖交配し、特定の花色を後代に遺伝させるデルフィニウムの花色交配法に関する。
【００３６】
より詳しくは、パシフィックジャイアントについて、青色花と淡青色花を他殖交配することにより青色花を得ることができ、青色花と白色花を他殖交配することにより白色花を得ることができ、青色花と紫色花を、または、紫色花と淡紫色花を他殖交配することにより紫色花を得ることができ、淡紫色花と白色花を他殖交配することにより淡紫色花を得ることができる。
また、ブルースプリングスについて、青色花と淡紫色花を他殖交配することにより青色花と淡青色花を得ることができ、淡青色花と白色花を他殖交配することにより白色花を得ることができ、紫色花と淡紫色花を、または、淡紫色花と桃色花を他殖交配することにより紫色花を得ることができ、桃色花と赤桃色花を他殖交配することにより赤桃色花を得ることができる。
【００３７】
さらに、デルフィニウムを花粉親または種子親として他殖交配し、二色系の花色（ビカラー）を後代に遺伝させることができることを見出した。より詳しくは、パシフィックジャイアントが淡青色花であって、ブルースプリングスが赤桃色花であって、パシフィックジャイアントとブルースプリングスを花粉親または種子親として交配し、萼片の外側が青色、萼片の内側が紫色の青色系の二色花（ビカラー・ブルー、Ｂ青）を得ることができる。
パシフィックジャイアントについて、淡青色花と淡紫色花を花粉親または種子親として他殖交配することにより二色花（ビカラー・ブルー、Ｂ青）、並びに、萼片の外側が淡青色、萼片の内側が淡紫色の二色花（ビカラー・ライトブルー、Ｂ淡青）を得ることができ、淡青色花と白色花を他殖交配することにより二色花（ビカラー・ブルー、Ｂ淡青）を得ることができる。
ブルースプリングスについて、青色花と赤桃色花を花粉親または種子親として他殖交配することにより二色花（ビカラー・ブルー、Ｂ青）を得ることができ、淡青色花と淡紫色花を他殖交配することにより二色花（ビカラー・ライトブルー、Ｂ淡青）を得ることができ、淡青色花と赤桃色花を他殖交配することにより二色花（ビカラー・ブルー、Ｂ青）を得ることができ、青色花と紫色花を他殖交配することによりビカラー・ブルーとビカラー・ライトブルーを得ることができ、青色花と白色花を他殖交配することによりビカラー・ブルーとビカラー・ライトブルーを得ることができる。
【００３８】
このように、種々の全色系をもつデルフィニウムを他殖交配することにより特定の花色、特に二色系（ビカラー）の花色を後代に遺伝させることが可能となる。
【００３９】
本発明の花色交配法に使用できるデルフィニウム（Ｄｅｌｐｈｉｎｉｕｍ）として、限定されるものではないが、例えば、Ｄ．ｃｈｅｉｌａｎｔｕｍ、Ｄ．ｃａｒｄｉｎａｌｅ、Ｄ．ｃｏｎｓｏｌｉｄａ、Ｄ．ｅｌａｔｕｍ、Ｄ．ｇｒａｎｄｉｆｌｏｒｕｍ、Ｄ．ｎｕｄｉｃａｕｌｅ、Ｄ．ｚａｌｉｌ、Ｄ．ｔａｔｓｉｅｎｅｎｓｅ、Ｄ．ｐａｒｒｙｉ、Ｄ．ｔｒｏｌｌｉｉｆｏｌｉｕｍ、Ｄ．ｎｕｔｔａｌｌｉａｎｕｍ、Ｄ．ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ、Ｄ．ｔｒｉｃｏｒｎｅ、Ｄ．ｂｉｃｏｌｏｒ、Ｄ．ｂａｒｂｅｙｉ、Ｄ．ｄｕｂｉｕｍ、Ｄ．ａｎｔｈｒｉｓｃｉｆｏｌｉｕｍ、Ｄ．ｌａｃｏｓｔｅｉ、Ｄ．ｍａｃｒｏｃｅｎｔｒｏｎ、Ｄ．ｃａｅｒｕｌｅｕｍが挙げられる。
【００４０】
また、本発明の花色交配法に使用できる本発明のデルフィニウム品種（Ｄｅｌｐｈｉｎｉｕｍ ｈｙｂｒｉｄｕｍ）として、限定されるものではないが、例えば、ブラックナイト（Ｂｌａｃｋ Ｎｉｇｈｔ）、ブルーバード（Ｂｌｕｅ Ｂｉｒｄ）、ゲラハド（Ｇｅｌａｈａｄ）、グウェナヴィア（Ｇｕｅｎｅｖｅｒｅ）、キングアーサー（Ｋｉｎｇ Ａｒｔｈｕｒ）、パーシヴァル（Ｐｅｒｃｉｖａｌ）、サマースカイ（Ｓｕｍｍｅｒ Ｓｋｉｅｓ）、サー・ランスロット（Ｓｉｒ Ｌａｎｃｅｌｏｔ）、ベイビードール（Ｂａｂｙ Ｄｏｌｌ）、ブルーナイル（Ｂｌｕｅ Ｎｉｌｅ）、バターボール（Ｂｕｔｔｅｒｂａｌｌ）、パープルシェイド（Ｐｕｒｐｌｅ Ｓｈａｄｅ）、ロナルドワッツ（Ｒｏｎａｌｄ Ｗａｔｔｓ）、ドワーフ・パシフィック（Ｄｗａｒｆ Ｐａｃｉｆｉｃ）、ドワーフ・デルフィニウム（Ｄｗａｒｆ Ｄｅｌｐｈｉｎｉｕｍ）、リトル・デルフィニウム（Ｌｉｔｔｌｅ Ｄｅｌｐｈｉｎｉｕｍ）、マジック・フォンテン（Ｍａｇｉｃ Ｆｏｕｎｔａｉｎ）、スノーホワイト（Ｓｎｏｗ Ｗｈｉｔｅ）、ブルースプリングス（Ｂｌｕｅ Ｓｐｒｉｎｇｓ）、ベラドンナ（Ｂｌｌａｄｏｎｎａ）、ブルービー（Ｂｌｕｅ Ｂｅｅ）、メライミー（Ｍｏｅｒｈｅｉｍｉｉ）、ピンクセンセーション（Ｐｉｎｋ Ｓｅｎｓａｔｉｏｎ）、ウェンディ（Ｗｅｎｄｙ）、ユニバーシティ・ハイブリッド（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｈｙｂｒｉｄ）、プリンセス・カロライン（Ｐｒｉｎｃｅｓｓ Ｃａｒｏｌｉｎｅ）、ロイヤルレッド（Ｒｏｙａｌ Ｒｅｄ）、ロイヤルイエロー（Ｒｏｙａｌ Ｙｅｌｌｏｗ）、サマードリーム（Ｓｕｍｍｅｒ Ｄｒｅａｍ）、サンキスト（Ｓｕｎｋｉｓｔ）、スカイロケット（Ｓｋｙ Ｒｏｃｋｅｔ）、ビーバリーヒルズ・スカーレット（Ｂｅａｖｅｒｙ Ｈｉｌｌｓ Ｓｃａｒｌｅｔ）、ビーバリーヒルズ・イエローシェード（Ｂｅａｖｅｒｙ Ｈｉｌｌｓ Ｙｅｌｌｏｗ Ｓｈａｄｅ）、ビーバリーヒルズ・サーモンシェード（Ｂｅａｖｅｒｙ Ｈｉｌｌｓ Ｓａｌｍｏｎ Ｓｈａｄｅ）、スワンレイク（Ｓｗａｎ Ｌａｋｅ）、ブルーパール（Ｂｌｕｅ Ｐｅａｒｌ）が挙げられる。
【００４１】
本発明はまた、このようにして交配したデルフィニウムを１５℃±１℃の温度下シャーレ内で発芽させる条件で育苗することによって効率よく（季節咲き）生育することが可能であることを見出した。特に、従来デルフィニウムを暖地において効率よく育成することが困難であったが、このような条件で発芽させることによってデルフィニウムを暖地でも効率よく育苗することが可能となった。
【００４２】
より詳しくは、他殖交配させたデルフィニウムの（二色系の花色を含む）種子について、約１５℃の温度下シャーレ内で発芽させ育苗し、一方では市販種子を同様の条件で育苗したものと比較し、最終生存（開花）率を調べたところ、市販種子は全播種数に対して０〜１５％程度の生存（開花）率を与えたのに対して、他殖交配種子は約１５〜２８％と有意な生存（開花）率を与え、結果として他殖交配種子を約１５℃の温度下シャーレ内で発芽させる条件で育苗すると暖地栽培での生存（開花）率を上げることができる。
【００４３】
本発明のデルフィニウムの花色交配法において花色を決定するに当たって、デルフィニウムの花色と内生色素を分析し、横軸を萼片中の内性色素の含量比とし、縦軸に花色を示す色相角度として得た数式１
【００４４】
【数１】
【００４５】
（式中、ＣＤ／ＶＤはデルフィニウム萼片の内生色素の比率を示し、Ｈｍａｘは花色である最大色相角を示し、ＫＨは最大色相角の２分の１になる場合の内生色素の比率を定数として示す）
を用いると、効率よく花色を決定することが可能であることが判った。
【００４６】
デルフィニウムの花色は、開花後時間と共に変化する。このときの色相角（ｈ）の逆数を縦軸にとる。花色に関わる主要色素は青色花および淡青色花の場合、時間の経過と共にヴィオルデルフィン（ｖｉｏｌｄｅｌｐｈｉｎ、ＶＤ）からシアノデルフィン（ｃｙａｎｏｄｅｌｐｈｉｎ、ＣＤ）へと変わり、また、紫色花および淡紫色花の場合、チューリパニン（ｔｕｌｉｐａｎｉｎ、ＴＰ）からビオルデルフィン（ＶＤ）へと変わる。この主要な内生色素の、分子を変化前の主要色素濃度、分母を変化後の主要色素濃度とし、これらの濃度比の逆数を横軸とする。すなわち、青色花および淡青色花の主要な内生色素の濃度比は、シアノデルフィン濃度÷ビオルデルフィン濃度で求めることができる。これを［ＣＤ／ＶＤ］で示す。一方、紫色花および淡紫色花の主要な内生色素の濃度比は、ヴィオルデルフィン濃度÷チューリパニン濃度で求めることができる。これを［ＶＤ／ＴＰ］で示す。
縦軸に色相角（ｈ）の逆数（マイナス値）をとり、横軸に主要な内生色素の濃度比の逆数をとると、この二つの関係を回帰直線式で示すことができ、したがって、数式１または数式２でこの関係を表すことができる。
【００４７】
【数１】
【００４８】
（式中、ＣＤ／ＶＤはデルフィニウム萼片の主要内生色素の比率を示し、ＣＤはシアノデルフィン、ＶＤはヴィオルデルフィンであり、Ｈｍａｘは花色である最大色相角を示し、ＫＨは最大色相角の２分の１になる場合の内生色素の比率を定数として示す）
【００４９】
【数２】
【００５０】
この数式から最大色相角（Ｈｍａｘ）を得ることができる。最大色相角（Ｈｍａｘ）とは、デルフィニウムが開花にともない変化する花色が、開花後花色が熟して安定するときの、花色のＣＩＥＬａｂ表色系図上の色相角度である。また、数式１および数式２中ＫＨとするものは濃度比定数を示し、これは最大色相角（Ｈｍａｘ）が２分の１になるときの萼片の主要な内生色素の濃度比である。これらの数式１および数式２からデルフィニウムの花色を決定する方法を見出した。
【００５１】
青色系デルフィニウム（青色、淡青色、紫色、淡紫色のデルフィニウム）の萼片（花）を採集し、酢酸とメタノールを１対１で混合した溶液（５０％酢酸−メタノール）でアントシアニン色素を抽出した。抽出液を綿栓でろ過した後、溶媒を減圧下、ロータリーエバポレーターで留去した。抽出残渣を５％酢酸水溶液に溶解し、オープンカラムクロマトグラフィーに付した。オープンカラムクロマトグラフィーの条件は、固定相にエムシーアイゲルＣＨＰ−２０Ｐ（ＭＣＩ ｇｅｌ ＣＨＰ−２０Ｐ、三菱化学株式会社、Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、セファデックスＬＨ−２０（Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０、ファルマシアバイオテック株式会社、Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ）、クロマトレックスＯＤＳ（Ｃｈｒｏｍａｔｏｒｅｘ ＯＤＳ、富士シリシア化学株式会社、Ｆｕｊｉ Ｓｉｌｙｓｉａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ ＬＴＤ．）を用い、移動層にＡ液として５％酢酸水溶液、Ｂ液として５％酢酸−メタノールを用い、Ａ液からＢ液の含量を増やすことによって各種クロマトグラフィーを行った。また、固定相にセファデックスＬＨ−２０（Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０、ファルマシアファインケミカル株式会社）を用い、移動層にＡ液として５％酢酸水溶液、Ｃ液として５％酢酸−アセトンを用い、Ｃ液からＡ液の含量を増やすことによってクロマトグラフィーを行った。これらのオープンカラムクロマトグラフィーを繰り返し行うことによって、式（Ｉ）で示すことのできる新規アントシアニン色素と式（ＩＩ）で示すことのできるアントシアニン色素を単離できることを見出した。
【００５２】
前記したデルフィニウムを、１５℃±１℃の温度下シャーレ内で発芽させる条件で育苗することによって、デルフィニウムを効率よく（季節咲き）生育すること、特に暖地において効率よく（季節咲き）生育することが可能となった。
【００５３】
自殖系淡紫色花パシフィックジャイアントの萼片アントシアニンを調査したところ、新規アントシアニン色素（Ｉ）を含み、かつアントシアニン色素（ＩＩ）を主要色素とすることを見出した。青色花パシフィックジャイアントと淡紫色花パシフィックジャイアントを他殖交配することにより、新規アントシアニン色素（Ｉ）を含み、かつアントシアニン色素（ＩＩ）を主要色素として含む紫色花パシフィックジャイアントおよび淡紫色花パシフィックジャイアントを得ることができる。青色花パシフィックジャイアントと白色花パシフィックジャイアントを他殖交配することにより、アントシアニン色素（ＩＩ）を主要色素として含む紫色花パシフィックジャイアントを得ることができる。淡青色花パシフィックジャイアントと白色花パシフィックジャイアントを他殖交配することにより、新規アントシアニン色素（Ｉ）を含み、かつアントシアニン色素（ＩＩ）を主要色素として含む淡紫色花パシフィックジャイアントを得ることができることを見出した。
【００５４】
淡青色花ブルースプリングスと淡紫色花ブルースプリングスを他殖交配することにより、外側の萼片が新規アントシアニン色素（Ｉ）を含み、かつアントシアニン色素（ＩＩ）を主要色素として含むブルースプリングスの二色花（ビカラー・ライトブルー、Ｂ淡青）を得ることができる。淡青色花ブルースプリングスと白色花ブルースプリングスを他殖交配することにより、内側の萼片が新規アントシアニン色素（Ｉ）を含み、かつアントシアニン色素（ＩＩ）を主要色素として含むブルースプリングスの二色花（ビカラー・ブルー、Ｂ青）を得ることができる。淡紫色花パシフィックジャイアントと赤桃色花ブルースプリングスを他殖交配することにより、新規アントシアニン色素（Ｉ）を含み、かつアントシアニン色素（ＩＩ）を主要色素として含む紫色花デルフィニウムの雑種品種を得ることができる。白色花パシフィックジャイアントと青色花ブルースプリングスを他殖交配することにより、新規アントシアニン色素（Ｉ）を含み、かつアントシアニン色素（ＩＩ）を主要色素として含む淡紫色花デルフィニウムの雑種品種を得ることができることを見出し、本発明を完成した。
【００５５】
【化１】
【００５６】
【化２】
【００５７】
本発明のデルフィニウムの花色交配法は、全色系花色をもつデルフィニウムを花粉親または種子親として他殖交配し、特定の花色を後代に遺伝させる方法である。その方法には、デルフィニウムを花粉親または種子親として交配し、二色系の花色を後代に遺伝させる方法を含む。
【００５８】
本発明は、前記したデルフィニウムの花色交配法により作出したデルフィニウムを１５℃±１℃（１４℃〜１６℃）の温度下シャーレ内で発芽させる条件で育苗することを特徴とするデルフィニウムの栽培方法を含む。
【００５９】
本発明のデルフィニウムの花色交配法は、横軸を萼片中の内性色素の含量比［ＣＤ／ＶＤ］とし、縦軸に花色を示す色相角度として得た数式１、
【００６０】
【数１】
【００６１】
（式中、ＣＤ／ＶＤはデルフィニウム萼片の主要内生色素の比率を示し、ＣＤはシアノデルフィン、ＶＤはヴィオルデルフィンであり、Ｈｍａｘは花色である最大色相角を示し、ＫＨは最大色相角の２分の１になる場合の内生色素の比率を定数として示す）
を適用し、デルフィニウムの花色を決定する方法を含む。
【００６２】
本発明のデルフィニウムの花色交配法は、前記数式１において、［ＣＤ／ＶＤ］を［ＶＤ／ＴＰ］
（式中、、［ＶＤ／ＴＰ］は、紫色花および淡紫色花の主要な内生色素の濃度比であって、ヴィオルデルフィン濃度ＶＤ÷チューリパニン濃度ＴＰで求めることができる値である。）で示される数式を適用し、デルフィニウムの花色を決定する方法を含む。
【００６３】
本発明のデルフィニウムの花色交配法は、デルフィニウムの花色を作出する花色交配の組み合わせを決定するものであって、花粉親または種子親の配偶子を行または列とする組合せ早見表を用いて、花色を想定することを特徴とする。
【００６４】
本発明のデルフィニウムの花色交配法により作出されたデルフィニウムの花色が、下記の式（Ｉ）で示すことのできる新規アントシアニン色素で発現することを特徴とするものを含む。
【００６５】
【化１】
【００６６】
新規アントシアニン色素は、３−Ｏ−（６−Ｏ−（α−Ｌ−ｒｈａｍｎｏｓｙｌ）−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−７−Ｏ−（３−Ｏ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ−６−Ｏ−（４−Ｏ−（６−Ｏ−ｐ−ｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚｏｙｌ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−ｐ−ｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚｏｙｌ）−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−ｄｅｌｐｈｉｎｉｄｉｎ（Ｉ）で示される。
【００６７】
本発明のデルフィニウムの花色交配法により作出されたデルフィニウムの花色が、上記の式（Ｉ）で示すことのできる新規アントシアニン色素および／または下記の式（ＩＩ）で示すことのできるアントシアニン色素で発現することを特徴とするものを含む。
【００６８】
【化２】
【００６９】
アントシアニン色素は、３−Ｏ−（６−Ｏ−（α−Ｌ−ｒｈａｍｎｏｓｙｌ）−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−７−Ｏ−（３−Ｏ−（３−Ｏ−（β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−６−Ｏ−（４−Ｏ−（６−Ｏ−ｐ−ｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚｏｙｌ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−ｐ−ｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚｏｙｌ）−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−ｄｅｌｐｈｉｎｉｄｉｎ（ＩＩ）で示される。
【００７０】
本発明により、前記した新規アントシアニン色素（Ｉ）および／またはアントシアニン色素（ＩＩ）をデルフィニウム萼片より単離、精製することができる。
【実施例】
【００７１】
以下、本発明を実施例により具体的に説明するが、本発明は、これらの実施例に限定されるものではない。
実施例１
【００７２】
［約１５℃の温度下シャーレ内で発芽させる条件で育苗する栽培方法］
パシフィックジャイアントを１９９９年春に他殖交配し、Ｆ１種子を得た。２０００年８月中旬にＦ１種子をシャーレ内に播種した。シャーレ内は予め脱脂綿を引き、種が半分沈む程度に水を吸わせた。種を播いたシャーレを約１５℃の冷蔵庫に約７日〜１０日暗黒条件下で発芽させた。発芽したものから順次セルトレイに移植した。移植したセルトレイを温室内で２５〜３２℃の高温度で育苗し、１１月上旬にビニルハウスへ定植した。生育促進のため、１２月下旬から暖房による加温をはじめ、ビニルハウス内の温度を約１５℃に保温した。花芽分化促進のため、２００１年１月中旬から４月下旬の開花期まで、電照による長日処理を行った。電照の条件は以下の通りである。畝からの高さ１．１ｍ、９平米の広さに１００ワット白熱球１個を割り当て、午後９時〜午前３時の６時間の間、照明した。シャーレ内に播種した種の数を数え、２００１年４月〜５月に開花に至った株数を数え、生存（開花）率として算出した。
比較のため自殖した種子を同様に、シャーレ内に播種し、育苗して生存（開花）率を求めた。
この栽培方法を、２００１年８月と２００２年８月の合計３回繰り返し行い、２００１年〜２００３年に開花した株数を調査した。
一方、比較のため２００１年８月と２００２年８月の合計２回、購入種子をシャーレ内に播種し、前記した方法にてデルフィニウム市販種子を育苗して生存（開花）率を求めた。
さらに、ブルースプリングスについても同様の試験を行った。
さらにまた、パシフィックジャイアントとブルースプリングスを他殖交配し、Ｆ１種子を得たものについても同様に試験調査を行った。その結果を表１に示す。
【００７３】
【表１】
【００７４】
表１から明らかなように、他殖交配し得られたＦ１からの実生苗がもっともよく生存したことがわかる。
実施例２
【００７５】
パシフィックジャイアントを花粉親または種子親として他殖交配しＦ１種子を得た。Ｆ１種子を前記した約１５℃の温度下シャーレ内で発芽させる条件で育苗し、実生苗を栽培し、開花させ、後代の花色を調査した。その結果を表２に示す。
【００７６】
【表２】
【００７７】
表２に示すように、青色花と淡青色花を花粉親または種子親として他殖交配することにより青色花８個体と紫色花１個体を得た。青色花と白色花を他殖交配することにより半数以上の確率で白色花１５個体を得た。青色花と紫色花を他殖交配することにより紫色花１２個体、青色花１個体、二色花（ビカラー・ブルー）１個体を得た。紫色花と淡紫色花を他殖交配することにより紫色花９個体を得た。淡紫色花と白色花を他殖交配することにより淡紫色花１０個体を得た。表２中カッコ内に示す値は、他殖交配で得られた各花色系統を総個体数で割った値の百分率を示す。
【００７８】
表２に示すように、淡青色花と淡紫色花を花粉親または種子親として他殖交配することによりビカラー・ブルー１個体、ビカラー・ライトブルー７個体、白色花１個体を得た。淡青色花と白色花を他殖交配することによりビカラー・ライトブルー４個体と淡青色花４個体を得た。この早見表２より、後代に分離する花色を速やかに知ることができる。
実施例３
【００７９】
ブルースプリングスを花粉親または種子親として他殖交配しＦ１種子を得た。Ｆ１種子を前記した約１５℃の温度下シャーレ内で発芽させる条件で育苗し、実生苗を栽培し、開花させ、後代の花色を調査した。その結果を表３に示す。
【００８０】
【表３】
【００８１】
表３に示すように、青色花と淡紫色花を花粉親または種子親として他殖交配することにより青色花５個体と淡青色花７個体、紫色花１個体、ビカラー・ブルー２個体、ビカラー・ライトブルー８個体を得た。淡青色花と白色花を他殖交配することにより白色花１１個体、淡紫色花３個体、淡青色花１個体、ビカラー・ライトブルー１７個体を得た。紫色花と淡紫色花を花粉親または種子親として他殖交配することにより、紫色花６個体とビカラー・ブルー１個体を得た。淡紫色花と桃色花を他殖交配することにより紫色花１１個体、淡紫色花２個体、ビカラー・ブルー１個体を得た。桃色花と赤桃色花を他殖交配することにより赤桃色花５個体を得た。表３中カッコ内に示す値は、他殖交配で得られた各花色系統を総個体数で割った値の百分率を示す。
【００８２】
表３に示すように、青色花と赤桃色花を花粉親または種子親として他殖交配することにより、主としてビカラー・ブルー３３個体を得た。淡青色花と淡紫色花を他殖交配することにより淡紫色花９個体とビカラー・ライトブルー１３個体を得た。淡青色花と赤桃色花を他殖交配することによりビカラー・ブルー５個体を得た。青色花と紫色花を他殖交配することにより青色花２個体、ビカラー・ブルー６個体、ビカラー・ライトブルー２個体を得た。青色花と白色花を他殖交配することにより、淡青色花１個体、白色花１個体、ビカラー・ブルー３個体、ビカラー・ライトブルー８個体を得た。この早見表３より、後代に分離する花色を速やかに知ることができる。
実施例４
【００８３】
パシフィックジャイアントとブルースプリングスを花粉親または種子親として他殖交配しＦ１種子を得た。Ｆ１種子を前記した約１５℃の温度下シャーレ内で発芽させる条件で育苗し、実生苗を栽培し、開花させ、後代の花色を調査した。その結果を表４に示す。
【００８４】
【表４】
【００８５】
表４に示すように、パシフィックジャイアントが淡青色花であって、ブルースプリングスが赤桃色花であった場合、主としてビカラー・ブルー３５個体を得た。この早見表４より、後代に分離する花色を速やかに知ることができる。表４中カッコ内に示す値は、他殖交配で得られた各花色系統を総個体数で割った値の百分率を示す。
実施例５
【００８６】
青色系の二色花（ビカラー・ブルー、Ｂ青）と淡青色系の二色花（ビカラー・ライトブルー、Ｂ淡青）の花色を文献記載の方法で測色した（非特許文献１１および１２）。その結果を図１に示す。また、青色系の二色花（ビカラー・ブルー、Ｂ青）と淡青色系の二色花（ビカラー・ライトブルー、Ｂ淡青）の写真を図２および図３にそれぞれ示す。萼片の内側と外側の花色が明らかに異なることがわかる。萼片の内側の花色は、青色系の二色花（ビカラー・ブルー、Ｂ青）と淡青色系の二色花（ビカラー・ライトブルー、Ｂ淡青）はそれぞれ紫色〜淡紫色に分布し、回帰直線式（ｙ＝−０．６２７ｘ−６．３９３）では相関係数０．８４２であり有意な関係があることがわかる。また、萼片の外側の花色は、青色系の二色花（ビカラー・ブルー、Ｂ青）と淡青色系の二色花（ビカラー・ライトブルー、Ｂ淡青）は図上それぞれ青紫色〜青色に分布し、回帰直線式（ｙ＝−０．７２１ｘ−１７．５９）では相関係数０．９０４であり有意な関係があることがわかる。
実施例６
【００８７】
青色系の二色花（ビカラー・ブルー、Ｂ青）と淡青色系の二色花（ビカラー・ライトブルー、Ｂ淡青）の内側と外側の萼片の色素組成を文献記載の方法で測定した（非特許文献１１および１２）。その結果を表５に示す。
【００８８】
【表５】
【００８９】
表５から、ビカラーの内側と外側の萼片の色素組成は同様であることがわかる。表５中の内生色素として、１はビスデアシルプラティコニン（ｂｉｓｄｅａｃｙｌｐｌａｔｙｃｏｎｉｎ）、２はチューリパニン（ｔｕｌｉｐａｎｉｎ）、３はヴィオルデルフィン（ｖｉｏｌｄｅｌｐｈｉｎ）、４はシアノデルフィン（ｃｙａｎｏｄｅｌｐｈｉｎ）を示す。表５中の内生色素として、ｃは未同定色素であるが、高速液体クロマトグラフィーによる分離は良好であった。色素ａとｂは、それぞれ式（Ｉ）で示すことのできる新規アントシアニンと式（ＩＩ）で示すことのできるアントシアニンである。各色素の保持時間（ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ ｔｉｍｅ）は、１（９．１分）、２（１５．９分）、３（３１．６分）、色素ａ（Ｉ）（３４．２分）、色素ｂ（ＩＩ）（３４．７分）、色素ｃ（５１．６分）、４（５８．５分）であった。
実施例７
【００９０】
開花後の花色と萼片の内生色素を調査した。調査した時間は、開花直後から、開花後３、６、９、１２、１８、２４、３６、４８、６０、７２、８４、９６、１２０時間目を調査した。デルフィニウム・パシフィックジャイアント（紫色）とブルーミラー（青色）の色相角度（ｈ）の経時的（時間的）変化を図４に示す。パシフィックジャイアント（紫色）については、萼片の主要な内生色素であるチューリッパニン（ｔｕｌｉｐａｎｉｎ、ＴＰ）とヴィオルデルフィン（ｖｉｏｌｄｅｌｐｈｉｎ、ＶＤ）の比率を横軸にとり、ブルーミラー（青色）については、萼片の主要な内生色素であるヴィオルデルフィン（ｖｉｏｌｄｅｌｐｈｉｎ、ＶＤ）とシアノデルフィン（ｃｙａｎｏｄｅｌｐｈｉｎ、ＣＤ）の比率を横軸にとり、縦軸に色相角度（ｈ）をとり、それらの関係を図５に示す。また、図５の縦軸と横軸にプロットしたものをそれぞれ逆数としてプロットしたものを図６に示した。
【００９１】
図６から数式１と数式２を導いた。この結果から、萼片の主要な内生色素の比率と花色には数式１と数式２に示す関係があることがわかり、内生色素の比率から花色を決定できることがわかる。
【００９２】
【数１】
【００９３】
（式中、ＣＤ／ＶＤはデルフィニウム萼片の主要内生色素の比率を示し、ＣＤはシアノデルフィン、ＶＤはヴィオルデルフィンであり、Ｈｍａｘは花色である最大色相角を示し、ＫＨは最大色相角の２分の１になる場合の内生色素の比率を定数として示す）
【００９４】
【数２】
【００９５】
数式１および数式２の関係をもとに、ブルーミラー（青色）、パシフィックジャイアント（青色）、パシフィックジャイアント（淡青色）、パシフィックジャイアント（紫色）、パシフィックジャイアント（淡紫色）の開花後の花色と萼片の内生色素を調査した。調査した時間は、開花直後から、開花後３、６、９、１２、１８、２４、３６、４８、６０、７２、８４、９６、１２０時間目を調査し、最大色相角（Ｈｍａｘ）とＫＨを算出した。その結果を表６に示す。
【００９６】
【表６】
【００９７】
表６から、萼片の主要な内生色素の濃度比により最大色相角（Ｈｍａｘ）、すなわち成熟花序の花色を知ることができる。
実施例８
【００９８】
開花後の萼片のｐＨを調査した。調査した時間は、開花直後から、開花後３、６、９、１２、１８、２４、３６、４８、６０、７２、８４、９６、１２０時間目を調査した。その結果を表７に示す。
【００９９】
【表７】
【０１００】
表７から、萼片のｐＨは変化しないことがわかる。
実施例９
【０１０１】
［自殖系種子を約１５℃の温度下シャーレ内で発芽させる条件で育苗する栽培方法と自殖系種子を６月直播栽培で育苗する栽培方法との比較］
ベラドンナベラモーサム、ベラドンナカサブランカ、ブルーミラー、パシフィックジャイアント、ブルースプリングス、マジックフォンテンの購入種子を１９９９年春に自殖し、種子を得た。１９９９年８月中旬に自殖種子をシャーレ内に播種した。シャーレ内は予め脱脂綿を引き、種が半分沈む程度に水を吸わせた。種を播いたシャーレを約１５℃の冷蔵庫に約７日〜１０日暗黒条件下で発芽させた。発芽したものから順次セルトレイに移植した。移植したセルトレイを温室内で２５〜３２℃の高温度で育苗し、１１月上旬にビニルハウスへ定植した。生育促進のため、１２月下旬から暖房による加温をはじめ、ビニルハウス内の温度を約１５℃に保温した。花芽分化促進のため、２０００年１月中旬から４月下旬の開花期まで、電照による長日処理を行った。電照の条件は以下の通りである。畝からの高さ１．１ｍ、９平米の広さに１００ワット白熱球１個を割り当て、午後９時〜午前３時の６時間の間、照明した。シャーレ内に播種した種の数を数え、２０００年４月〜５月に開花に至った株数を数え、生存（開花）率として算出した。この栽培方法を２０００年、２００１年に同様に繰り返し、２００１年および２００２年４月〜５月に開花に至った株数を数え、シャーレ播き種子の生存（開花）率として算出した（表８）。
【０１０２】
一方、比較のため自殖種子を１９９９年６月にセルトレイに直接播種し、以下前記した方法と同様に、温室内で２５〜３２℃の高温度で育苗し、１１月上旬にビニルハウスへ定植した。生育促進のため、１２月下旬から暖房による加温をはじめ、ビニルハウス内の温度を約１５℃に保温した。花芽分化促進のため、２０００年１月中旬から４月下旬の開花期まで、電照による長日処理を行った。電照の条件は以下の通りである。畝からの高さ１．１ｍ、９平米の広さに１００ワット白熱球１個を割り当て、午後９時〜午前３時の６時間の間、照明した。シャーレ内に播種した種の数を数え、２０００年４月〜５月に開花に至った株数を数え、生存（開花）率として算出した。この栽培を２０００年、２００１年に同様に繰り返し、２００１年および２００２年４月〜５月に開花に至った株数を数え、直播き種子の生存（開花）率として算出した（表８）。
【０１０３】
【表８】
【０１０４】
表８の結果、各種デルフィニウムの育苗、栽培について、シャーレ内で播種したものの方が生存率が高いことが分かる。
実施例１０
【０１０５】
ハイブリッド種子と購入種子との生存率の比較を行った。ハイブリッド種子として、パシフィックジャイアントを他殖交配した９系統を用いた。栽培は共に、前記したシャーレ内で播種し、育苗し、生存（開花）率として算出した。その結果を図７に示す。ハイブリッド種子は９系統の平均値と標準偏差で示し、購入種子は５系統の平均値と標準偏差で示す。この結果、ハイブリッド種子が約２２％の生存率を示したのに対し、購入種子は約５％程度に留まり、ハイブリッド種子が、より生存することが分かる（図７）。
実施例１１
【０１０６】
［青色系デルフィニウムの萼片から色素（Ｉ）および（ＩＩ）の抽出と単離、精製方法］
青色系デルフィニウム（青色、淡青色、紫色、淡紫色のデルフィニウム）の萼片（花）を採集した。生萼片の重量は１１．６ｋｇであった。これに酢酸とメタノールを１対１で混合した溶液（５０％酢酸−メタノール）を加え、アントシアニン色素を抽出した。抽出液を綿栓でろ過した後、溶媒を減圧下、ロータリーエバポレーターで留去した。抽出残渣を５％酢酸水溶液に溶解し、オープンカラムクロマトグラフィーに付した。オープンカラムクロマトグラフィーの条件は、固定相にエムシーアイゲルＣＨＰ−２０Ｐ（ＭＣＩ ｇｅｌ ＣＨＰ−２０Ｐ、三菱化学株式会社、Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、セファデックスＬＨ−２０（Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０、ファルマシアバイオテック株式会社、Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ）、クロマトレックスＯＤＳ（Ｃｈｒｏｍａｔｏｒｅｘ ＯＤＳ、富士シリシア化学株式会社、Ｆｕｊｉ Ｓｉｌｙｓｉａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ ＬＴＤ．）を用い、移動層にＡ液として５％酢酸水溶液、Ｂ液として５％酢酸−メタノールを用い、Ａ液からＢ液の含量を増やすことによって各種クロマトグラフィーを行った。また、固定相にセファデックスＬＨ−２０（Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０、ファルマシアファインケミカル株式会社）を用い、移動層にＡ液として５％酢酸水溶液、Ｃ液として５％酢酸−アセトン（アセトンに酢酸を５％量加えたもの）を用い、Ｃ液からＡ液の含量を増やすことによってクロマトグラフィーを行った。これらのオープンカラムクロマトグラフィーを繰り返し行うことによって、式（Ｉ）で示すことのできる新規アントシアニン色素（２９．９ｍｇ）と式（ＩＩ）で示すことのできるアントシアニン色素（６２．４ｍｇ）を単離した。両者とも、紫色の粉末であった。加えて、キキョウ属植物（Ｃａｍｐａｎｕｌａ）より単離、構造決定された既知のアントシアニン色素であるモノデアシルカンパニン（ｍｏｎｏｄｅａｃｙｌｃａｍｐａｎｉｎ）（３２．８ｍｇ）を単離した（Ｂｒａｎｄｔ、Ｋ．、Ｐｈｙｔｏ ｃｈｅｍ．３３：２０９−２１２、１９９３）。モノデアシルカンパニンがデルフィニウムの萼片（花）に含まれていることが初めて分かる。
【０１０７】
単離した前記の化合物の純度を検定するため、薄層クロマトグラフィー（Ｔｈｉｎ Ｌａｙｅｒ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）を行った。用いた薄層は、アルミプレートに予めシリカゲルをコーティングしたもの（メルク社製、Ｍｅｒｃｋ、キーゼルゲル ６０ Ｆ２５４アルミニウムプレート、Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ ６０ Ｆ２５４ ａｌｕｍｉｎｉｕｍ ｐｌａｔｅ）を用いた。薄層クロマトグラフィーの展開溶媒について、非特許文献１２に記載の展開溶媒を用いた。この方法のように、展開溶媒のＡ液として、ベンゼン：ギ酸エチル：ギ酸の１：７：１の比率で混合した溶液と、Ｂ液として、ギ酸エチル：ギ酸：水の３：１：１の比率で混合した溶液を用いた。これらの溶液を、Ａ液：Ｂ液の１：１の比率で混合した展開溶媒で多重展開（２回展開）した。その結果を図８に示す。また、Ａ液：Ｂ液の１：３の比率で混合した展開溶媒で１回展開した。その結果を図９に示す。式（Ｉ）で示すことのできるアントシアニン色素と式（ＩＩ）および（ＩＩＩ）で示すことのできるアントシアニン色素が単一の色素であることが分かる。この図８、Ｙの結果より、非特許文献１２に記載の展開溶媒であるＡ液とＢ液の、比率を変えることと、加えて、多重展開することによっても、これらが単一の色素であること知ることができる。図８、Ｙ中、左から１はビスデアシルプラティコニン（ｂｉｓｄｅａｃｙｌｐｌａｔｙｃｏｎｉｎ）、２はチューリパニン（ｔｕｌｉｐａｎｉｎ）、３はヴィオルデルフィン（ｖｉｏｌｄｅｌｐｈｉｎ）、４はシアノデルフィン（ｃｙａｎｏｄｅｌｐｈｉｎ）を示す。式（ＩＩＩ）で示すことのできるアントシアニン色素は、モノデアシルカンパニン（ｍｏｎｏｄｅａｃｙｌｃａｍｐａｎｉｎ）である。薄層クロマトグラフィーによるＲｆの値（色素が薄層を移動した距離に対して、展開溶媒が薄層を移動した距離で割った値）は、図８中、１（０．２６５）、２（０．６４５）、３（０．２３８）、４（０．１１０）、（Ｉ）（０．１１０）、（ＩＩ）（０．０３４）、（ＩＩＩ）（０．０６８）である。また、図９中では、１（０．３７３）、２（０．５７３）、３（０．４０３）、４（０．３４１）、（Ｉ）（０．２６８）、（ＩＩ）（０．１７９）、（ＩＩＩ）（０．２０２）である。
実施例１２
【０１０８】
単離・精製した式（Ｉ）で示すことのできる新規アントシアニン色素のプロトン核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ−Ｎｕｃｌｅａｒ ｍａｇｎｅｔｉｃ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ［ＮＭＲ］ｓｐｅｃｔｒｕｍ）を測定した。測定装置は、ＪＮＭ−ＥＣＡ６００型核磁気共鳴装置（ＪＥＯＬ ＪＮＭ−ＥＣＡ６００ ＫＳ、日本電子データム株式会社、ＪＥＯＬ ＤＡＴＵＭ ＬＴＤ．）を用いた。その結果は次の通りである。１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ＋ＣＦ３ＣＯＯＤ，９：１）δ：１．２９（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，ｒｈａ−６−ＣＨ３），３．５０−４．００（ｓｕｇａｒ−Ｈ），３．７０（１Ｈ，ｍ，ｇｌｃ［ＩＩＩ］−Ｈ−６ｂ），３．７１（１Ｈ，ｍ，３−Ｏ−ｇｌｃ−Ｈ−６ｂ），３．９０（１Ｈ，ｍ，ｇｌｃ［Ｉ］−Ｈ−３），３．９４（１Ｈ，ｍ，ｇｌｃ［ＩＩ］−Ｈ−６ｂ），３．９６（１Ｈ，ｍ，ｇｌｃ［ＩＩＩ］−Ｈ−６ａ），４．１８（１Ｈ，ｂｒ ｄ，Ｊ＝１０．３Ｈｚ，３−Ｏ−ｇｌｃ−Ｈ−６ａ），４．２６（１Ｈ，ｍ，ｇｌｃ［Ｉ］−Ｈ−６ｂ），４．２８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，ｇｌｃ［ＩＩ］−Ｈ−１），４．６１（１Ｈ，ｂｒ ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，ｇｌｃ［ＩＩ］−Ｈ−６ａ），４．７１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，ｇｌｃ［ＩＩＩ］−Ｈ−１），４．８８（１Ｈ，ｓ，ｒｈａ−Ｈ−１），５．１４（１Ｈ，ｂｒ ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，ｇｌｃ［Ｉ］−Ｈ−６ａ），５．３８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，ｇｌｃ［Ｉ］−Ｈ−１），５．４５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，３−Ｏ−ｇｌｃ−Ｈ−１），６．４３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，ｐ−ＨＢＡ［ＩＩ］−Ｈ−３’，５’），６．６４（１Ｈ，ｓ，Ｈ−６），６．８０（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，ｐ−ＨＢＡ［Ｉ］−Ｈ−３’，５’），７．１４（１Ｈ，ｓ，Ｈ−８），７．３５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，ｐ−ＨＢＡ［ＩＩ］−Ｈ−２’，６’），７．７９（２Ｈ，ｓ，Ｈ−２’，６’），７．８９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，ｐ−ＨＢＡ［Ｉ］−Ｈ−２’，６’），８．６１（１Ｈ，ｓ，Ｈ−４）．
【０１０９】
単離・精製した式（Ｉ）で示すことのできる新規アントシアニン色素の１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル（１３Ｃ−Ｎｕｃｌｅａｒ ｍａｇｎｅｔｉｃ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ［ＮＭＲ］ｓｐｅｃｔｒｕｍ）を測定した。測定装置は、ＪＮＭ−ＥＣＡ６００型核磁気共鳴装置（ＪＥＯＬ ＪＮＭ−ＥＣＡ６００ＫＳ、日本電子データム株式会社、ＪＥＯＬ ＤＡＴＵＭ ＬＴＤ．）を用いた。その結果は次の通りである。１３Ｃ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ＋ＣＦ３ＣＯＯＤ，９：１）δ：１８．１（ｒｈａ−Ｃ−６），６２．７（ｇｌｃ［ＩＩＩ］−Ｃ−６），６６．０（ｇｌｃ［ＩＩ］−Ｃ−６），６６．３（ｇｌｃ［Ｉ］−Ｃ−６），６８．０（３−Ｏ−ｇｌｃ−Ｃ−６），６９．９（ｒｈａ−Ｃ−５），７１．０，７１．４，７１．７，７１．９，７２．７，７２．８，７３．７，７４．１，７４．４，７４．６，７４．８，７５．６，７５．９，７７．７，７７．９，７８．０，７８．１，７８．３，８７．４（ｇｌｃ［Ｉ］−Ｃ−３），９４．８（Ｃ−８），１００．３（３−Ｏ−ｇｌｃ−Ｃ−１），１００．８（ｇｌｃ［ＩＩ］−Ｃ−１），１０２．０（ｒｈａ−Ｃ−１），１０３．５（ｇｌｃ［Ｉ］−Ｃ−１），１０４．８（Ｃ−６），１０５．４（ｇｌｃ［ＩＩＩ］−Ｃ−１），１１３．４（Ｃ−１０），１１３．７（Ｃ−２’，６’），１１６．２（ｐ−ＨＢＡ［ＩＩ］−Ｃ−３’，５’），１１６．４（Ｃ−１’），１１７．３（ｐ−ＨＢＡ［Ｉ］−Ｃ−３’，５’），１２１．６（ｐ−ＨＢＡ［ＩＩ］−Ｃ−１’），１２５．０（ｐ−ＨＢＡ［Ｉ］−Ｃ−１’），１３２．３（ｐ−ＨＢＡ［Ｉ］−Ｃ−２’，６’），１３２．４（ｐ−ＨＢＡ［ＩＩ］−Ｃ−２’，６’），１３３．９（Ｃ−４），１４６．７（Ｃ−４’），１４７．２（Ｃ−３），１４７．８（Ｃ−３’，５’），１５６．３（Ｃ−９），１５８．１（Ｃ−５），１６２．４（ｐ−ＨＢＡ［Ｉ］−Ｃ−４’），１６３．２（ｐ−ＨＢＡ［ＩＩ］−Ｃ−４’），１６３．７（Ｃ−２），１６６．５（ｐ−ＨＢＡ［Ｉ］−ＣＯＯ），１６７．６（ｐ−ＨＢＡ［ＩＩ］−ＣＯＯ），１６８．１（Ｃ−７）．
【０１１０】
式（Ｉ）で示すことのできる新規アントシアニン色素（１．１ｍｇ）の紫外部吸収スペクトル（Ｕｌｔｒａ Ｖｉｏｌｅｔ ｓｐｅｃｔｒｕｍ）を測定した。測定には、島津製作所株式会社の分光機器（ＵＶ−ｖｉｓｉｂｌｅ ｒｅｃｏｒｄｉｎｇ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ、ＵＶ−２１００）を用いた。その結果は次の通りである。測定溶媒はメタノールである。ＵＶ λ ＭｅＯＨ／ｍａｘ ｎｍ（ｌｏｇ ｅ）：３７８ｓ（３．１１）、６３１（３．４４）、７０５（３．３０）；＋０．０１％ＨＣｌ：５４６（４．３７）；＋ＡｌＣｌ３：５８５（４．４４）。
【０１１１】
高分解能質量分析計（ｐｏｓｉｔｉｖｅ−ｉｏｎ ＨＲ ＦＡＢ−ＭＳ）を用いて式（Ｉ）で示すことのできる新規アントシアニン色素の質量を測定した。理論値は、Ｃ５９Ｈ６９Ｏ３５：１３３７．３６２０であり、測定値はｍ／ｚ：１３３７．３９３４［Ｍ］＋であり、理論値と測定値が良く一致した。
【０１１２】
単離・精製した式（Ｉ）で示すことのできる新規アントシアニン色素のプロトン核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ−Ｎｕｃｌｅａｒ ｍａｇｎｅｔｉｃ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ［ＮＭＲ］ｓｐｅｃｔｒｕｍ）を測定した。核磁気共鳴スペクトルで、異核化学シフト相関（ＨＭＱＣ、ｈｅｔｅｒｏｎｕｃｌｅａｒ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｑｕａｎｔｕｍ ｃｏｈｅｒｅｎｃｅ ｓｐｅｃｔｒｕｍ）の測定と、同核シフト相関（１Ｈ−１Ｈ ＴＯＣＯＳＹ、１Ｈ−１Ｈ ｔｏｔａｌ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ）の測定を行った。測定装置は、ＪＮＭ−ＥＣＡ６００型核磁気共鳴装置（ＪＥＯＬ ＪＮＭ−ＥＣＡ６００ＫＳ、日本電子データム株式会社、ＪＥＯＬ ＤＡＴＵＭ ＬＴＤ．）を用いた。その結果を図１０に示す。図中の数字はプロトン（１Ｈ）に対応する１３炭素（１３Ｃ）の帰属である。また、曲線の両側に矢印のついたものは１Ｈ−１Ｈ ＴＯＣＯＳＹの相関関係にあることを示す。
【０１１３】
単離・精製した式（Ｉ）で示すことのできる新規アントシアニン色素のプロトン核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ−Ｎｕｃｌｅａｒ ｍａｇｎｅｔｉｃ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ［ＮＭＲ］ｓｐｅｃｔｒｕｍ）を測定した。核磁気共鳴スペクトルでプロトン（１Ｈ）に対応する１３炭素（１３Ｃ）の遠距離相関（ＨＭＢＣ、ｈｅｔｅｒｏｎｕｃｌｅａｒ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｂｏｎｄ ｃｏｈｅｒｅｎｃｅ ｓｐｅｃｔｒｕｍ）の測定を行った。測定装置は、ＪＮＭ−ＥＣＡ６００型核磁気共鳴装置（ＪＥＯＬ ＪＮＭ−ＥＣＡ６００ＫＳ、日本電子データム株式会社、ＪＥＯＬ ＤＡＴＵＭ ＬＴＤ．）を用いた。その結果を図１１に示す。図１１中の数字は１３炭素（１３Ｃ）の帰属である。また、点曲線の両側に矢印のついたものは１Ｈ−１３Ｃ ＨＭＢＣの相関関係にあることを示す。これらの結果から、新規アントシアニン色素の化学構造が式（Ｉ）であることが分かる。
【０１１４】
【化１】
実施例１３
【０１１５】
単離・精製した式（ＩＩ）で示すことのできるアントシアニン色素のプロトン核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ−Ｎｕｃｌｅａｒ ｍａｇｎｅｔｉｃ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ［ＮＭＲ］ｓｐｅｃｔｒｕｍ）を測定した。測定装置は、ＪＮＭ−ＥＣＡ６００型核磁気共鳴装置（ＪＥＯＬ ＪＮＭ−ＥＣＡ６００ＫＳ、日本電子データム株式会社、ＪＥＯＬ ＤＡＴＵＭ ＬＴＤ．）を用いた。その結果は次の通りである。１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ＋ＣＦ３ＣＯＯＤ，９：１）δ：１．２８（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，ｒｈａ−６−ＣＨ３），３．１０−４．２０（ｓｕｇａｒ−Ｈ），３．９６（１Ｈ，ｍ，ｇｌｃ［ＩＩ］−Ｈ−６ｂ），４．１７（１Ｈ，ｂｒ ｄ，Ｊ＝１０．３Ｈｚ，３−Ｏ−ｇｌｃ−Ｈ−６ａ），４．２７（１Ｈ，ｍ，ｇｌｃ［Ｉ］−Ｈ−６ｂ），４．５８（１Ｈ，ｂｒ ｓ，ｇｌｃ［ＩＩ］−Ｈ−１），４．５９（１Ｈ，ｂｒ ｓ，ｇｌｃ［ＩＩＩ］−Ｈ−１），４．６２（１Ｈ，ｍ，ｇｌｃ［ＩＩ］−Ｈ−６ａ），４．７８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，ｇｌｃ［ＩＩ］−Ｈ−１），４．８６（１Ｈ，ｓ，ｒｈａ−Ｈ−１），５．３９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，３−Ｏ−ｇｌｃ−Ｈ−１），５．４４（１Ｈ，ｂｒ ｓ，ｇｌｃ［Ｉ］−Ｈ−１），６．４２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，ｐ−ＨＢＡ［ＩＩ］−Ｈ−３’，５’），６．６２（１Ｈ，ｓ，Ｈ−６），６．７９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，ｐ−ＨＢＡ［Ｉ］−Ｈ−３’，５’），７．０９（１Ｈ，ｓ，Ｈ−８），７．３４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，ｐ−ＨＢＡ［ＩＩ］−Ｈ−２’，６’），７．７５（２Ｈ，ｓ，Ｈ−２’，６’），７．８６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，ｐ−ＨＢＡ［Ｉ］−Ｈ−２’，６’），８．５８（１Ｈ，ｓ，Ｈ−４）．
【０１１６】
単離・精製した式（ＩＩ）で示すことのできるアントシアニン色素の１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル（１３Ｃ−Ｎｕｃｌｅａｒ ｍａｇｎｅｔｉｃ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ［ＮＭＲ］ｓｐｅｃｔｒｕｍ）を測定した。測定装置は、ＪＮＭ−ＥＣＡ６００型核磁気共鳴装置（ＪＥＯＬ ＪＮＭ−ＥＣＡ６００ＫＳ、日本電子データム株式会社、ＪＥＯＬ ＤＡＴＵＭ ＬＴＤ．）を用いた。その結果は次の通りである。１３Ｃ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ＋ＣＦ３ＣＯＯＤ，９：１）δ：１８．０（ｒｈａ−Ｃ−６），６２．６，６２．７（ｇｌｃ［ＩＩＩ，ＩＶ］−Ｃ−６），６５．８（ｇｌｃ［ＩＩ］−Ｃ−６），６６．１（ｇｌｃ［Ｉ］−Ｃ−６），６７．９（３−Ｏ−ｇｌｃ−Ｃ−６），６９．８（ｒｈａ−Ｃ−５），７０．１，７０．７，７１．３，７１．６，７１．８，７２．６，７２．７，７３．７，７４．０，７４．３，７４．５，７４．７，７４．９，７５．５，７５．８，７７．６，７７．８（ｘ２），７７．９，７８．０，７８．１，８７．０（ｇｌｃ［ＩＩＩ］−Ｃ−３），８７．６（ｇｌｃ［Ｉ］−Ｃ−３），９４．６（Ｃ−８），１００．２（ｇｌｃ［Ｉ］−Ｃ−１），１００．６（ｇｌｃ［ＩＩ］−Ｃ−１），１０１．９（ｒｈａ−Ｃ−１，ｇｌｃ［ＩＶ］−Ｃ−１），１０３．３（３−Ｏ−ｇｌｃ−Ｃ−１），１０４．８（Ｃ−６），１０５．２（ｇｌｃ［ＩＩＩ］−Ｃ−１），１１３．７（Ｃ−１０，Ｃ−２’，６’），１１６．１（ｐ−ＨＢＡ［ＩＩ］−Ｃ−３’，５’），１１６．３（Ｃ−１’），１１７．２（ｐ−ＨＢＡ［Ｉ］−Ｃ−３’，５’），１２１．５（ｐ−ＨＢＡ［ＩＩ］−Ｃ−１’），１２４．８（ｐ−ＨＢＡ［Ｉ］−Ｃ−１’），１３２．２（ｐ−ＨＢＡ［ＩＩ］−Ｃ−２’，６’），１３２．３（ｐ−ＨＢＡ［Ｉ］−Ｃ−２’，６’），１３３．０（Ｃ−４），１４６．６（Ｃ−４’），１４７．１（Ｃ−３），１４７．７（Ｃ−３’，５’），１５６．１（Ｃ−９），１５８．０（Ｃ−５），１６２．２（ｐ−ＨＢＡ［ＩＩ］−Ｃ−４’），１６３．１（ｐ−ＨＢＡ［Ｉ］−Ｃ−４’），１６３．４（Ｃ−２），１６７．０（Ｃ−７），１６７．４（ｐ−ＨＢＡ［ＩＩ］−ＣＯＯ），１６７．５（ｐ−ＨＢＡ［Ｉ］−ＣＯＯ）．
【０１１７】
式（ＩＩ）で示すことのできるアントシアニン色素（１．２ｍｇ）の紫外部吸収スペクトル（Ｕｌｔｒａ Ｖｉｏｌｅｔ ｓｐｅｃｔｒｕｍ）を測定した。測定には、島津製作所株式会社の分光機器（ＵＶ−ｖｉｓｉｂｌｅ ｒｅｃｏｒｄｉｎｇ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ、ＵＶ−２１００）を用いた。その結果は次の通りである。測定溶媒はメタノールである。ＵＶ λ ＭｅＯＨ／ｍａｘ ｎｍ（ｌｏｇ ｅ）：５７７（２．７９）、６１４（２．７５）；＋０．０１％ＨＣｌ：５４６（４．６２）；＋ＡｌＣｌ３：５８３（４．７５）。
【０１１８】
高分解能質量分析計（ｐｏｓｉｔｉｖｅ−ｉｏｎ ＨＲ ＦＡＢ−ＭＳ）を用いて式（ＩＩ）で示すことのできるアントシアニン色素の質量を測定した。理論値は、Ｃ６５Ｈ７９Ｏ４０：１４９９．４１４８であり、測定値はｍ／ｚ：１４９９．４２８１［Ｍ］＋であり、理論値と測定値が良く一致した。
【０１１９】
これらの結果から、式（ＩＩ）で示すことのできるアントシアニン色素の化学構造は、非特許文献７に記載の、シアノデルフィンを部分加水分解して得られたビスデアシルシアノデルフィン（ｂｉｓｄｅａｃｙｌｃｙａｎｏｄｅｌｐｈｉｎ）と同一であることが分かる。この結果から、式（ＩＩ）で示すことのできるアントシアニン色素が誘導体または合成品としてではなく、天然色素としてデルフィニウム萼片に含まれていることが初めて分かる。
【０１２０】
【化２】
実施例１４
【０１２１】
単離・精製した式（ＩＩＩ）で示すことのできるモノデアシルカンパニン（ｍｏｎｏｄｅａｃｙｌｃａｍｐａｎｉｎ）のプロトン核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ−Ｎｕｃｌｅａｒ ｍａｇｎｅｔｉｃ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ［ＮＭＲ］ｓｐｅｃｔｒｕｍ）を測定した。測定装置は、ＪＮＭ−ＥＣＡ６００型核磁気共鳴装置（ＪＥＯＬ ＪＮＭ−ＥＣＡ６００ＫＳ、日本電子データム株式会社、ＪＥＯＬ ＤＡＴＵＭＬＴＤ．）を用いた。その結果は次の通りである。１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ＋ＣＦ３ＣＯＯＤ，９：１）δ：１．３２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，ｒｈａ−６−ＣＨ３），３．３０−４．００（ｓｕｇａｒ−Ｈ），４．０２（１Ｈ，ｂｒ ｓ，ｇｌｃ［ＩＩ］−Ｈ−１），４．２０（１Ｈ，ｂｒ ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，３−Ｏ−ｇｌｃ−Ｈ−６ａ），４．３１（１Ｈ，ｂｒ ｔ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，ｇｌｃ［Ｉ］−Ｈ−６ｂ），４．６１（１Ｈ，ｂｒ ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，ｇｌｃ［ＩＩ］−Ｈ−６ａ），４．９１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，ｇｌｃ［ＩＩＩ］−Ｈ−１），４．９５（１Ｈ，ｓ，ｒｈａ−Ｈ−１），４．９９（１Ｈ，ｂｒ ｄ，Ｊ＝１０．３Ｈｚ，ｇｌｃ［Ｉ］−Ｈ−６ａ），５．３２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，３−Ｏ−ｇｌｃ−Ｈ−１），５．３９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，ｇｌｃ［Ｉ］−Ｈ−１），６．５７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，ｐ−ＨＢＡ［ＩＩ］−Ｈ−３’，５’），６．６７（１Ｈ，ｓ，Ｈ−６），６．８７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，ｐ−ＨＢＡ［Ｉ］−Ｈ−３’，５’），７．１９（１Ｈ，ｓ，Ｈ−８），７．３５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，ｐ−ＨＢＡ［ＩＩ］−Ｈ−２’，６’），７．８８（２Ｈ，ｓ，Ｈ−２’，６’），８．００（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，ｐ−ＨＢＡ［Ｉ］−Ｈ−２’，６’），８．４８（１Ｈ，ｓ，Ｈ−４）．
【０１２２】
単離・精製した式（ＩＩＩ）で示すことのできるモノデアシルカンパニン（ｍｏｎｏｄｅａｃｙｌｃａｍｐａｎｉｎ）の１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル（１３Ｃ−Ｎｕｃｌｅａｒ ｍａｇｎｅｔｉｃ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ［ＮＭＲ］ｓｐｅｃｔｒｕｍ）を測定した。測定装置は、ＪＮＭ−ＥＣＡ６００型核磁気共鳴装置（ＪＥＯＬ ＪＮＭ−ＥＣＡ６００ＫＳ、日本電子データム株式会社、ＪＥＯＬ ＤＡＴＵＭ ＬＴＤ．）を用いた。その結果は次の通りである。１３Ｃ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ＋ＣＦ３ＣＯＯＤ，９：１）δ：１８．１（ｒｈａ−Ｃ−６），６２．３（ｇｌｃ［ＩＩＩ］−Ｃ−６），６６．５（ｇｌｃ［Ｉ］−Ｃ−６），６６．６（ｇｌｃ［ＩＩ］−Ｃ−６），６７．８（３−Ｏ−ｇｌｃ−Ｃ−６），６９．８，７１．３，７１．５，７１．８，７２．４，７２．８（ｘ２），７４．０，７４．２，７４．４，７４．５，７４．７，７４．８，７６．０，７７．６，７７．９，７８．０，７８．１，７８．２，７８．３，９４．２（Ｃ−８），１００．０（ｇｌｃ［ＩＩＩ］−Ｃ−１），１０１．０（ｇｌｃ［Ｉ，ＩＩ］−Ｃ−１），１０１．８（ｒｈａ−Ｃ−１），１０３．８（３−Ｏ−ｇｌｃ−Ｃ−１），１０５．６（Ｃ−６），１１３．８（Ｃ−１０，Ｃ−２’，６’），１１６．３（ｐ−ＨＢＡ［ＩＩ］−Ｃ−３’，５’），１１７．４（ｐ−ＨＢＡ［Ｉ］−Ｃ−３’，５’），１１９．４（Ｃ−１’），１２４．０（ｐ−ＨＢＡ［ＩＩ］−Ｃ−１’），１２５．２（ｐ−ＨＢＡ［Ｉ］−Ｃ−１’），１３１．８（ｐ−ＨＢＡ［ＩＩ］−Ｃ−２’，６’），１３２．２（ｐ−ＨＢＡ［Ｉ］−Ｃ−２’，６’），１３４．０（Ｃ−４），１４７．０（Ｃ−４’），１４７．３（Ｃ−３），１４７．９（Ｃ−３’，５’），１５６．３（Ｃ−９），１５７．８（Ｃ−５），１６２．０（ｐ−ＨＢＡ［ＩＩ］−Ｃ−４’），１６２．５（ｐ−ＨＢＡ［Ｉ］−Ｃ−４’），１６３．４（Ｃ−２），１６７．０（ｐ−ＨＢＡ［ＩＩ］−ＣＯＯ），１６７．１（Ｃ−７），１６７．６（ｐ−ＨＢＡ［Ｉ］−ＣＯＯ）．
【０１２３】
既知アントシアニン色素（２．２ｍｇ）であるモノデアシルカンパニン（ｍｏｎｏｄｅａｃｙｌｃａｍｐａｎｉｎ）の紫外部吸収スペクトル（Ｕｌｔｒａ Ｖｉｏｌｅｔ ｓｐｅｃｔｒｕｍ）を測定した。測定には、島津製作所株式会社の分光機器（ＵＶ−ｖｉｓｉｂｌｅ ｒｅｃｏｒｄｉｎｇ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ、ＵＶ−２１００）を用いた。その結果は次の通りである。測定溶媒はメタノールである。ＵＶ λ ＭｅＯＨ／ｍａｘ ｎｍ（ｌｏｇ ｅ）：５２６（２．８６）、５７１（２．９９）、６２０（２．８８）；＋０．０１％ＨＣｌ：５４９（４．４９）；＋ＡｌＣｌ３：５８４（４．５４）。
【０１２４】
高分解能質量分析計（ｐｏｓｉｔｉｖｅ−ｉｏｎ ＨＲ ＦＡＢ−ＭＳ）を用いて既知アントシアニン色素であるモノデアシルカンパニン（ｍｏｎｏｄｅａｃｙｌｃａｍｐａｎｉｎ）の質量を測定した。理論値は、Ｃ５９Ｈ６９Ｏ３５：１３３７．３６２０であり、測定値はｍ／ｚ：１３３７．３７３２［Ｍ］＋であり、理論値と測定値が良く一致した。
【０１２５】
これらの結果から、デルフィニウム萼片より単離されたアントシアニン色素（ＩＩＩ）の化学構造は、文献（Ｂｒａｎｄｔ、Ｋ．、Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍ．３３：２０９−２１２、１９９３）に記載の、既知アントシアニン色素であるモノデアシルカンパニン（ｍｏｎｏｄｅａｃｙｌｃａｍｐａｎｉｎ）と同一であることが分かる。この結果から、式（ＩＩＩ）で示すことのできるモノデアシルカンパニンがデルフィニウム萼片に含まれていることが初めて分かる。
【０１２６】
【化３】
実施例１５
【０１２７】
前記した自殖系種子をシャーレ内で播種、育苗し、生育させた淡紫色花パシフィックジャイアントの萼片アントシアニンを調べた。その結果を表９に示す。新規アントシアニン色素（Ｉ）を含み、かつアントシアニン色素（ＩＩ）を主要色素とすることが分かる。これまで紫色花のデルフィニウムはヴィオルデルフィン（ｖｉｏｌｄｅｌｐｈｉｎ）を優性色素とすると言われていたが、この結果から、ヴィオルデルフィン（ｖｉｏｌｄｅｌｐｈｉｎ）よりも萼片中含量の多いアントシアニン色素（ＩＩ）を含む個体があることが分かる。表９中（ＩＩＩ）で示すアントシアニン色素は、モノデアシルカンパニン（ｍｏｎｏｄｅａｃｙｌｃａｍｐａｎｉｎ）の濃度を示す。表９中の内生色素として、１はビスデアシルプラティコニン（ｂｉｓｄｅａｃｙｌｐｌａｔｙｃｏｎｉｎ）、２はチューリパニン（ｔｕｌｉｐａｎｉｎ）、３はヴィオルデルフィン（ｖｉｏｌｄｅｌｐｈｉｎ）、４はシアノデルフィン（ｃｙａｎｏｄｅｌｐｈｉｎ）を示す。
【０１２８】
【表９】
実施例１６
【０１２９】
青色花パシフィックジャイアントと淡紫色花パシフィックジャイアントを他殖交配し、前記したシャーレ内で播種、育苗し、生育させた交雑パシフィックジャイアントの紫色花および淡紫色花の萼片アントシアニンを文献記載の方法で調べた（非特許文献１１および１２）。その結果を表１０に示す。新規アントシアニン色素（Ｉ）を含み、かつアントシアニン色素（ＩＩ）を主要色素として含む紫色花パシフィックジャイアントおよび淡紫色花パシフィックジャイアントが、交配によって得られることが分かる。また、市販種子の紫色花パシフィックジャイアントと花色、萼片アントシアニンを調べた。その結果、市販種子の紫色花に比べて、他殖交配によって得ることのできる紫色花パシフィックジャイアント（８個体）は、比較して明るい花色を有し、やや青みを帯びることを特徴とすることが分かる（表１０）。表１０中（ＩＩＩ）で示すアントシアニン色素は、モノデアシルカンパニン（ｍｏｎｏｄｅａｃｙｌｃａｍｐａｎｉｎ）の濃度を示す。モノデアシルカンパニンの保持時間は１９．１分であった。表１０中の内生色素として、１はビスデアシルプラティコニン（ｂｉｓｄｅａｃｙｌｐｌａｔｙｃｏｎｉｎ）、２はチューリパニン（ｔｕｌｉｐａｎｉｎ）、３はヴィオルデルフィン（ｖｉｏｌｄｅｌｐｈｉｎ）、４はシアノデルフィン（ｃｙａｎｏｄｅｌｐｈｉｎ）を示す。表中の数値は、個体数の平均値の値を示す。
【０１３０】
【表１０】
実施例１７
【０１３１】
青色花パシフィックジャイアントと白色花パシフィックジャイアントを他殖交配し、前記したシャーレ内で播種、育苗し、生育させた交雑パシフィックジャイアントの紫色花の萼片アントシアニンを文献記載の方法で調べた（非特許文献１１および１２）。その結果を表１１に示す。アントシアニン色素（ＩＩ）を主要色素として含む紫色花パシフィックジャイアントを得ることができることを見出した。表１１中（ＩＩＩ）で示すアントシアニン色素は、モノデアシルカンパニン（ｍｏｎｏｄｅａｃｙｌｃａｍｐａｎｉｎ）の濃度を示す。表１１中の内生色素として、１はビスデアシルプラティコニン（ｂｉｓｄｅａｃｙｌｐｌａｔｙｃｏｎｉｎ）、２はチューリパニン（ｔｕｌｉｐａｎｉｎ）、３はヴィオルデルフィン（ｖｉｏｌｄｅｌｐｈｉｎ）、４はシアノデルフィン（ｃｙａｎｏｄｅｌｐｈｉｎ）を示す。
【０１３２】
【表１１】
実施例１８
【０１３３】
淡青色花パシフィックジャイアントと白色花パシフィックジャイアントを他殖交配し、前記したシャーレ内で播種、育苗し、生育させた交雑パシフィックジャイアントの紫色花の萼片アントシアニンを文献記載の方法で調べた（非特許文献１１および１２）。その結果を表１２に示す。新規アントシアニン色素（Ｉ）を含み、かつアントシアニン色素（ＩＩ）を主要色素として含む紫色花パシフィックジャイアントが他殖交配によって得られることが分かる。表１２中（ＩＩＩ）で示すアントシアニン色素は、モノデアシルカンパニン（ｍｏｎｏｄｅａｃｙｌｃａｍｐａｎｉｎ）の濃度を示す。表１２中の内生色素として、１はビスデアシルプラティコニン（ｂｉｓｄｅａｃｙｌｐｌａｔｙｃｏｎｉｎ）、２はチューリパニン（ｔｕｌｉｐａｎｉｎ）、３はヴィオルデルフィン（ｖｉｏｌｄｅｌｐｈｉｎ）、４はシアノデルフィン（ｃｙａｎｏｄｅｌｐｈｉｎ）を示す。
【０１３４】
【表１２】
実施例１９
【０１３５】
淡青色花ブルースプリングスと淡紫色花ブルースプリングスを他殖交配し、前記したシャーレ内で播種、育苗し、生育させた交雑二色系パシフィックジャイアント（ビカラー・ライトブルー、Ｂ淡青）の萼片アントシアニンを文献記載の方法で調べた（非特許文献１１および１２）。その結果を表１３に示す。外側の萼片が新規アントシアニン色素（Ｉ）を含み、かつアントシアニン色素（ＩＩ）を主要色素として含むブルースプリングスの二色花（ビカラー・ライトブルー、Ｂ淡青）を得られることが分かる。表１３中（ＩＩＩ）で示すアントシアニン色素は、モノデアシルカンパニン（ｍｏｎｏｄｅａｃｙｌｃａｍｐａｎｉｎ）の濃度を示す。表１３中の内生色素として、１はビスデアシルプラティコニン（ｂｉｓｄｅａｃｙｌｐｌａｔｙｃｏｎｉｎ）、２はチューリパニン（ｔｕｌｉｐａｎｉｎ）、３はヴィオルデルフィン（ｖｉｏｌｄｅｌｐｈｉｎ）、４はシアノデルフィン（ｃｙａｎｏｄｅｌｐｈｉｎ）を示す。
【０１３６】
【表１３】
実施例２０
【０１３７】
淡青色花ブルースプリングスと白色花ブルースプリングスを他殖交配し、前記したシャーレ内で播種、育苗し、生育させた交雑二色系パシフィックジャイアント（ビカラー・ブルー、Ｂ青）の萼片アントシアニンを文献記載の方法で調べた（非特許文献１１および１２）。その結果を表１４に示す。内側の萼片が新規アントシアニン色素（Ｉ）を含み、かつアントシアニン色素（ＩＩ）を主要色素として含む青色花ブルースプリングスの二色花（ビカラー・ブルー、Ｂ青）を得られることが分かる。表１４中（ＩＩＩ）で示すアントシアニン色素は、モノデアシルカンパニン（ｍｏｎｏｄｅａｃｙｌｃａｍｐａｎｉｎ）の濃度を示す。表１４中の内生色素として、１はビスデアシルプラティコニン（ｂｉｓｄｅａｃｙｌｐｌａｔｙｃｏｎｉｎ）、２はチューリパニン（ｔｕｌｉｐａｎｉｎ）、３はヴィオルデルフィン（ｖｉｏｌｄｅｌｐｈｉｎ）、４はシアノデルフィン（ｃｙａｎｏｄｅｌｐｈｉｎ）を示す。
【０１３８】
【表１４】
実施例２１
【０１３９】
淡紫色花パシフィックジャイアントと赤桃色花ブルースプリングスを他殖交配し、前記したシャーレ内で播種、育苗し、生育させた交雑品種の萼片アントシアニンを文献記載の方法で調べた（非特許文献１１および１２）。その結果を表１５に示す。新規アントシアニン色素（Ｉ）を含み、かつアントシアニン色素（ＩＩ）を主要色素として含む紫色花デルフィニウムの雑種品種を得られることが分かる。表１５中（ＩＩＩ）で示すアントシアニン色素は、モノデアシルカンパニン（ｍｏｎｏｄｅａｃｙｌｃａｍｐａｎｉｎ）の濃度を示す。表１５中の内生色素として、１はビスデアシルプラティコニン（ｂｉｓｄｅａｃｙｌｐｌａｔｙｃｏｎｉｎ）、２はチューリパニン（ｔｕｌｉｐａｎｉｎ）、３はヴィオルデルフィン（ｖｉｏｌｄｅｌｐｈｉｎ）、４はシアノデルフィン（ｃｙａｎｏｄｅｌｐｈｉｎ）を示す。
【０１４０】
【表１５】
実施例２２
【０１４１】
白色花パシフィックジャイアントと青色花ブルースプリングスを他殖交配し、前記したシャーレ内で播種、育苗し、生育させた交雑品種の萼片アントシアニンを文献記載の方法で調べた（非特許文献１１および１２）。その結果を表１６に示す。新規アントシアニン色素（Ｉ）を含み、かつアントシアニン色素（ＩＩ）を主要色素として含む淡紫色花デルフィニウムの雑種品種を得られることが分かる。表１６中（ＩＩＩ）で示すアントシアニン色素は、モノデアシルカンパニン（ｍｏｎｏｄｅａｃｙｌｃａｍｐａｎｉｎ）の濃度を示す。表１６中の内生色素として、１はビスデアシルプラティコニン（ｂｉｓｄｅａｃｙｌｐｌａｔｙｃｏｎｉｎ）、２はチューリパニン（ｔｕｌｉｐａｎｉｎ）、３はヴィオルデルフィン（ｖｉｏｌｄｅｌｐｈｉｎ）、４はシアノデルフィン（ｃｙａｎｏｄｅｌｐｈｉｎ）を示す。
【表１６】
【０１４２】
これらの実施例から、本発明のデルフィニウムの花色交配法が優れた、特定の花色を後代に遺伝させるデルフィニウム、二色系のデルフィニウム、新規アントシアニンで花色を発現するデルフィニウム、を作出する方法であることは明らかである。
【産業上の利用可能性】
【０１４３】
デルフィニウムは他殖性であり、自殖を繰り返すと自殖弱性を起こすことから自殖による種子の繁殖が困難であったが、デルフィニウムで他殖交配を行った場合にも、特定の花色を後代に遺伝させることができるようになった。
二色系デルフィニウムはメリクロン苗によってのみ継代と増殖が可能で、種子繁殖することはできなかったが、他殖交配により自由に二色系デルフィニウムの種子繁殖苗を得る事ができるようになり、たくさんの二色系デルフィニウムを市場に提供できるようになった。
【０１４４】
デルフィニウムは冷涼地または高冷地でよく生育し、暖地では高温のため栽培効率が悪く、暖地では促成栽培を行わなければ、デルフィニウムを効率よく栽培することができなかったが、他殖交配したデルフィニウムを約１５℃の温度下シャーレ内で発芽させる条件で育苗すると、暖地で効率よく（季節咲き）栽培することができるようになった。
デルフィニウムの萼片の花色と萼片中の内性色素との関係が不明であったが、萼片中の主要な内性色素の比率からデルフィニウムの花色を決定することができるようになった。
【０１４５】
本発明により、全色系デルフィニウムを他殖交配し特定の花色をもつ種子を得ることのできる方法を提供する。同時に、他殖交配により二色系の花色をもつデルフィニウムの種子を得ることのできる交配方法を提供する。また、前記デルフィニウムを暖地で効率よく季節咲きさせる栽培方法を提供する。
本発明により、種子繁殖による二色系の花色をもつデルフィニウムを提供できる。
本発明によりデルフィニウムより新規のアントシアニジン色素を提供することができる。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、特定の花色を有するデルフィニウムの種子を繁殖するための効率的な交配方法に関する。また、二色系の花色（ビカラー）を有するデルフィニウムの種子を繁殖するための効率的な交配方法に関する。より詳しくは、開花植物、すなわち、被子植物の花と、遺伝子形を改変するための処理である交配の方法とからなる新規植物またはそれらを得るための処理に関する。また、生殖交雑（ｓｅｘｕａｌ ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ）の段階を含む育種過程（ｂｒｅｅｄｉｎｇ ｐｒｏｃｅｓｓ）において得られた植物やその一部を用いる方法である。さらにまた、新規植物（ｎｅｗ ｐｌａｎｔｓ）またはそれらを得るための方法であって、被子植物（ａｎｇｉｏｓｐｅｒｍｓ）などの花き類（ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ ｐｌａｎｔｓ）に関する。
【背景技術】
【０００２】
デルフィニウム（飛燕草、Ｄｅｌｐｈｉｎｉｕｍ）は、キンポウゲ科（Ｒａｎｕｎｃｕｌａｃｅａｅ）デルフィニウム属の草本植物である。世界に２００種以上が存在し、その大部分は北半球のヨーロッパ、地中海沿岸、シベリア、カリフォルニアに分布する（非特許文献１、園芸植物大事典、小学館、３４８−３５０、１９８９）。
【０００３】
デルフィニウムはヨーロッパで花壇用花卉（宿根草）として取り扱われていたが、２０世紀初頭には欧米諸国で品種改良に成功し、現在は１年草として取り扱われている。アメリカでは大輪八重咲きのパシフィックジャイアント（Ｐａｃｉｆｉｃ Ｇｉａｎｔ）系やドワーフブルーファウンテン（Ｄｗａｒｆ Ｂｌｕｅ Ｆｏｕｎｔａｉｎ）系、イギリスとオランダでは一重で分枝の多いベラドンナ（Ｂｅｌｌａｄｏｎｎａ）系やピンクセンセーション（Ｐｉｎｋ Ｓｅｎｓａｔｉｏｎ）系などの品種群が作出された（非特許文献１；非特許文献２、朝日園芸百科０３、朝日新聞社、２０４−２０６、１９８４）。
【０００４】
日本国への導入は明治初期といわれ、最近になってようやくデルフィニウム種苗の供給、新品種改良を本格的に取り組むようになった。例えば、デルフィニウムの周年安定生産技術の開発（非特許文献３、上山茂文、農林水産総合技術センター暖地園芸センター園芸部、平成１０年度成果発表、６ページ、１９９８）、暖地におけるデルフィニウムの促成栽培の技術確立（非特許文献４、中村 薫、宮崎県総農試研報、１３−２９、１９９５）など、生産方法の開発に力が注がれているが、中でも宮崎県農業試験場が育成した‘シリウス’をはじめとする品種群は暖地の促成栽培に適したＦ１品種としては逸品である（非特許文献５、中村 広、宮崎県総農試研報、５３−６１、２００１）。
【０００５】
デルフィニウムは草丈約１．５ｍ以上に成長し、花穂（花序）は約５０花以上つけるものを良品としている。花穂は一見花弁のように思えるが、実は萼片であり、これが青、紫、桃、赤、黄、白に染まり、様々な花色をかもし出している（非特許文献６、朝日園芸百科０６、朝日新聞社、２０２−２０４、１９８４）。
【０００６】
萼片に含まれるアントシアニン色素について、青色萼片には過度にアシル化された、シアノデルフィン（ｃｙａｎｏｄｅｌｐｈｉｎ）が含まれていることが知られている（非特許文献７、Ｋｏｎｄｏ、Ｔ．、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．４４：６３７５−６３７８、１９９１）。また、紫色の萼片にはアシル化アントシアニンであるヴィオルデルフィン（ｖｉｏｌｄｅｌｐｈｉｎ）が含まれていることが明らかにされ、これらの色素がそれぞれの萼片が青色ならびに紫色に着色する本体であることが報告されている（非特許文献８、Ｋｏｎｄｏ、Ｔ．、Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．、１３７−１３８、１９９０）。
【０００７】
花色は、光が花弁表面にあたり、花弁表皮細胞内に存在する色素類に吸収されなかった光が反射されることにより、人間の目に感知される。しかし、光、または色彩に対する感受性に個人差があるために、花色を明確に表現する手法が必要であるとされてきた（非特許文献９、Ｖｏｓｓ、Ｄ．Ｈ．：ＨｏｒｔＳｃｉ．、２７：１２５６〜１２６０、１９９２）。
【０００８】
花色（ｆｌｏｗｅｒ ｃｏｌｏｒ）を測定する方法として、色彩計、または、色差計（ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｅｒ）を用い、ＣＩＥＬａｂ表色系の座標にプロットする測定方法がある。これは、色の三属性（ｃｏｌｏｒ ａｔｔｒｉｂｕｔｅ）、すなわち、色相（ｈｕｅ）、明度（ｂｒｉｇｈｔｎｅｓｓ）、彩度（ｃｈｒｏｍａ）を三次元の立体空間座標系（ｔｈｒｅｅ ｄｉｍｅｎｔｉｏｎａｌ ｇｌｏｂａｌ ｃｏｌｏｒ ｃｈａｒｔ）、つまり、色立体として考えたもので、本空間中の色差（ｈｕｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ）は、肉眼で感知した色の差を正確に反映する（非特許文献１０、Ｇｏｎｎｅｔ、Ｊ．Ｆ．：Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ．、６３：４０９〜４１５、１９９８）。
【０００９】
近年、デルフィニウムの花色と内生色素濃度（シアノデルフィン、ｃｙａｎｏｄｅｌｐｈｉｎ、やヴィオルデルフィン、ｖｉｏｌｄｅｌｐｈｉｎ）との関係について報告した（非特許文献１１、Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ、Ｆ．、Ｊ．Ｓｏｃ．Ｈｏｒｔ．Ｓｃｉ．、６９：４２８〜４３４、２０００）。より詳しくは、デルフィニウムの萼片の花色を測色して、萼片から得られた内生色素との関係を述べ、花色をより正確に求めることができることを報告した。
【００１０】
さらに、デルフィニウムの内生色素濃度（シアノデルフィン、ｃｙａｎｏｄｅｌｐｈｉｎ、やヴィオルデルフィン、ｖｉｏｌｄｅｌｐｈｉｎ）は開花後、時間が経過するとともにそれらの萼片内の濃度が変化することを報告し、これらの生合成について述べた（非特許文献１２、Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ、Ｆ．、Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、６６：１６５２〜１６５９、２００２）。より詳しくは、デルフィニウム萼片内から得られたチューリッパニン（ｔｕｌｉｐａｎｉｎ）を出発色素とし、これが時間とともにビスデアシルプラチコニン（ｂｉｓｄｅａｃｙｌｐｌａｔｙｃｏｎｉｎ）、ヴィオルデルフィン（ｖｉｏｌｄｅｌｐｈｉｎ）、シアノデルフィン（ｃｙａｎｏｄｅｌｐｈｉｎ）へ変化することを述べた。この生合成（ｂｉｏｇｅｎｅｓｉｓ）は、アントシアニンの母核をなすアントシアニジンの生合成ではなく、アントシアニジンであるデルフィニジンに、配糖化並びにアシル化反応を誘導する生合成に関する。
【００１１】
青色系デルフィニウム萼片の発色機構について、萼片上皮細胞の液胞中の金属アルミニウム（Ａｌ３＋）の存在が重要で、シアノデルフィン（ｃｙａｎｏｄｅｌｐｈｉｎ）などとの助色素効果（コピグメント効果、ｃｏｐｉｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ）を起こすことにより青色化（ｂｌｕｉｎｇ）しているとの報告がある（非特許文献１３、吉田久美、日本植物生理学会年会要旨、２６２、２００２）。また、萼片上皮細胞をプロトプラスト化して、その液胞中の青色繊維状物質を調査し、青色化には金属イオンが関与していないことの報告がある（非特許文献１４、吉田久美、日本農芸化学会年会要旨、２６３、２００３）。さらに、青色系デルフィニウム萼片の発色機構を調査するために、萼片上皮細胞の液胞中のｐＨを測定し、約５．０程度であることの報告がある（非特許文献１５、吉田久美、日本植物生理学会年会要旨、２７７、２００１）。
【００１２】
市販されているデルフィニウム品種について、二、四、六倍体の倍数性を有すると言われている。パシフィックジャイアント系の品種は四倍体である（非特許文献１６、Ｌｅｇｒｏ、Ｒ．Ａ．Ｈ．、Ｅｕｐｈｙｔｉｃａ、１０：１〜２３、１９６１）。四倍体であるため他殖交配を行った場合、様々な花色を有する後代が得られ、特定の花色を後代に遺伝させる方法がなかったなどの問題点がある。その中で、二色系デルフィニウムとして‘ギネバー’が選抜されているが、これはメリクロン苗により継代され増殖されたもので、種子繁殖により増殖されるものではない（非特許文献５）。よって、交配により自由に二色系デルフィニウムの種子繁殖苗を得る事ができず、たくさんの二色系デルフィニウムを市場に提供できなかった問題点がある。
【００１３】
デルフィニウムは冷涼地または高冷地でよく育ち、暖地では高温のため生育が悪い（非特許文献４）。その理由から、暖地では季咲き栽培は避けられている。したがって、暖地では促成栽培を行わなければ、デルフィニウムを効率よく栽培することができなかったなどの問題点がある。
【００１４】
デルフィニウムの花色を正確に数値化できるようになったが（非特許文献１１）、萼片の花色と萼片中の内生色素との関係が不明であったため、内生色素の蓄積からデルフィニウムの花色を決定することができなかったなどの問題点がある。
【００１５】
その他、第２６回国際園芸学会議（トロント、カナダ）の講演要旨には、トルコギキョウ花弁中の３種の主要アントシアニジンの遺伝の記載がある（非特許文献１７、Ｕｄｄｉｎ、Ａ．Ｆ．Ｍ．Ｊ．：ｔｈｅ ＸＸＶＩｔｈ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｃｏｎｇｒｅｓｓ ａｎｄ Ｅｘｈｉｂｉｔｉｏｎ、２００２年、Ａｕｇｕｓｔ １１−１７、Ｐ．４７５−４７６）。
この内容を、特願２００３−０２６５９８号（以下、特許文献１という）として出願し、トルコギキョウの花色遺伝型交配法（特許文献１の第００１５段落）と記載した。「トルコギキョウの主要花色素である、３つのアントシアニジン：ペラルゴニジン（Ｐｇｎ）、シアニジン（Ｃｙｎ）、デルフィニジン（Ｄｐｎ）の遺伝に着目し、自殖や正逆交雑を行い検討した結果、Ｆ１〜Ｆ３世代の色素表現型の分離から、新しい遺伝の法則を見出した。」、「色素前駆体のＢ環の水酸化に関与するフラボノイド３’−ヒドロキシラーゼ（Ｆ３’Ｈ）とフラボノイド３’、５’−ヒドロキシラーゼ（Ｆ３’、５’Ｈ）の酵素反応系には、ＨＴ、ＨＦ、ＨＤ、ＨＯの４つの複対立遺伝子が存在し、これらが３’位の水酸化、５’位の水酸化、３’、５’位の水酸化、および３’位と３’、５’位の水酸化を制御し、これらの組み合せによって花色表現型が決定されることを見出し、本発明を完成した。」という記載がある。
【００１６】
特開平１１−１０３７０４号明細書（以下、特許文献２という）には、組織培養苗により増殖して得られるメリクロン苗を用いて、その苗同士を交配してＦ１種子を得る方法の記載がある。「二つの自殖系統デルフィニウムの選抜個体のうち、少なくとも一つを組織培養により増殖し、得られた一方のメリクロン苗と他方の自殖系統個体、または双方のメリクロン苗どうしを交配して、デルフィニウムＦ１種子を得ることを特徴とするデルフィニウムＦ１品種の作出方法。」という記載がある（特許文献２の請求項１）。
【００１７】
特開平１１−０３２６０４号明細書（以下、特許文献３という）には、種間交雑苗生産方法の記載がある。「本発明は、デルフィニウム属植物の種間交雑を行って得た種子の胚を摘出または胚の少なくとも一部を露出して、胚培養を行うことを特徴とするデルフィニウム属植物の種間交雑苗生産方法を要旨とするものである。」という記載がある（特許文献３の第０００８段落）。
【００１８】
米国特許第１３０１０号明細書（以下、特許文献４という）には、デルフィニウムの新規園芸品種‘ドルチェヴィタ（Ｄｏｌｃｅ Ｖｉｔａ）’の記載がある。「八重の花を持ち、青色の二色系の花である。」という記載がある（特許文献４の第００１０段落）。
【００１９】
米国特許第１４１５２号明細書（以下、特許文献５という）には、デルフィニウムの新規園芸品種‘デルガスタム（Ｄｅｌｇａ Ｓｔａｍ）’の記載がある。「本発明は、デルフィニウム属植物の新規園芸品種に関するものであって、植物学的にデルフィニウムの交雑品種であり」、「花色は青紫色／淡緑色の花を特徴とし、」という記載がある（特許文献５の第０００４および第００１１段落）。
【特許文献１】特願２００３−０２６５９８号（第００１５段落）
【特許文献２】特開平１１−１０３７０４号公報（請求項１）
【特許文献３】特開平１１−０３２６０４号公報（第０００８段落）
【特許文献４】米国特許第１３０１０号明細書（第００１０段落）
【特許文献５】米国特許第１４１５２号明細書（第０００４および第００１１段落）
【非特許文献１】「デルフィニウム属」、園芸植物大事典、小学館、１９８９年２月、Ｐ．３４８−３５０。
【非特許文献２】「デルフィニウム」、朝日園芸百科０３、朝日新聞社、１９８４年６月、Ｐ．２０４−２０６。
【非特許文献３】上山茂文、「デルフィニウムの周年安定生産技術」、農林水産総合技術センター暖地園芸センター園芸部、平成１０年度成果発表、１９９８年、６ページ。
【非特許文献４】中村 薫、他５名、「暖地におけるデルフィニウムの促成栽培の技術確立」、宮崎県総農試研報、１９９５年７月、Ｐ．１３−２９。
【非特許文献５】中村 広、他５名、「暖地の促成栽培に適したデルフィニウムＦ１品種‘シリウス’の育成と特性」、宮崎県総農試研報、２００１年３月、Ｐ．５３−６１。
【非特許文献６】「デルフィニウム」、朝日園芸百科０６、朝日新聞社、１９８４年９月、Ｐ．２０２−２０４。
【非特許文献７】Ｋｏｎｄｏ、Ｔ．、他６名、「Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ Ｃｙａｎｏｄｅｌｐｈｉｎ、ａ Ｔｅｔｒａ−ｐ−ｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚｏａｔｅｄ Ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎ ｆｒｏｍ Ｂｌｕｅ Ｆｌｏｗｅｒ ｏｆ Ｄｅｌｐｈｉｎｉｕｍ ｈｙｂｒｉｄｕｍ」、Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．、１９９１年、第４４巻、Ｐ．６３７５−６３７８」。
【非特許文献８】Ｋｏｎｄｏ、Ｔ．、他３名、「Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ Ｖｉｏｌｄｅｌｐｈｉｎ、ａｎ Ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎ ｆｒｏｍ Ｖｉｏｌｅｔ Ｆｌｏｗｅｒ ｏｆ Ｄｅｌｐｈｉｎｉｕｍ ｈｙｂｒｉｄｕｍ」、Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．、１９９０年、Ｐ．１３７−１３８。
【非特許文献９】Ｖｏｓｓ、Ｄ．Ｈ．、「Ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｅｒ Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｃｏｌｏｒ ｔｏ ｔｈｅ Ｒｏｙａｌ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ Ｃｏｌｏｕｒ Ｃｈａｒｔ」、ＨｏｒｔＳｃｉ．、１９９２年、第２７巻、Ｐ．１２５６〜１２６０。
【非特許文献１０】Ｇｏｎｎｅｔ、Ｊ．Ｆ．、「Ｃｏｌｏｒ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ Ｃｏ−ｐｉｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｓ ｒｅｖｉｓｉｔｅｄ．１．Ａ Ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ Ｄｅｆｉｎｉｔｉｏｎ Ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ＣＩＥ ＬＡＢ Ｓｃａｌｅ」、Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ．、１９９８年、第６３巻、Ｐ．４０９〜４１５。
【非特許文献１１】Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ、Ｆ．、他４名、「Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｙａｎｉｃ Ｆｌｏｗｅｒ Ｃｏｌｏｒ ｏｆ Ｄｅｌｐｈｉｎｉｕｍ Ｃｕｌｔｉｖａｒｓ」、Ｊ．Ｓｏｃ．Ｈｏｒｔ．Ｓｃｉ．、２０００年、第６９巻、Ｐ．４２８〜４３４。
【非特許文献１２】Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ、Ｆ．、他５名、「Ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ Ｆｌｏｗｅｒ Ｃｏｌｏｒａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｓｅｐａｌ Ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｓ ｏｆ Ｃｙａｎｉｃ Ｄｅｌｐｈｉｎｉｕｍ Ｃｕｌｔｉｖａｒｓ ｄｕｒｉｎｇ Ｆｌｏｗｅｒｉｎｇ」、Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、２００２年、第６６巻、Ｐ．１６５２〜１６５９。
【非特許文献１３】吉田久美、他５名、「青色デルフィニウム花弁の発色機構」、日本植物生理学会年会要旨、２００２年、Ｐ．２６２。
【非特許文献１４】吉田久美、他４名、「青色デルフィニウム花弁の発色機構２−液胞内青色物質の分析」、日本農芸化学会年会要旨、２００３年、Ｐ．２６３。
【非特許文献１５】吉田久美、他４名、「細胞内微小電極による花弁液胞ｐＨの測定と花色」、日本植物生理学会年会要旨、２００１年、Ｐ．２７７。
【非特許文献１６】Ｌｅｇｒｏ、Ｒ．Ａ．Ｈ．、「Ｓｐｅｃｉｅｓ Ｈｙｂｒｉｄｓ ｉｎ Ｄｅｌｐｈｉｎｉｕｍ」、Ｅｕｐｈｙｔｉｃａ、１９６１年、第１０巻、Ｐ．１〜２３。
【非特許文献１７】Ｕｄｄｉｎ、Ａ．Ｆ．Ｍ．Ｊ．、他２名、「Ｉｎｈｅｒｉｔａｎｃｅ Ｍｏｄｅｌ ｏｆ Ｔｈｒｅｅ Ｍａｊｏｒ Ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｄｉｎｓ ｉｎ Ｅｕｓｔｏｍａ ｇｒａｎｄｉｆｌｏｒｕｍ Ｃｕｌｔｉｖａｒｓ」、Ｏｎ−Ｓｉｔｅ Ｐｒｏｇｒａｍ、ｔｈｅ ＸＸＶＩｔｈ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｃｏｎｇｒｅｓｓ ａｎｄ Ｅｘｈｉｈｉｂｉｔｉｏｎ、Ｔｏｒｏｎｔｏ、Ｃａｎａｄａ、２００２年、Ａｕｇｕｓｔ １１−１７、Ｐ．４７５−４７６（Ｓ１９−Ｐ−１９）。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００２０】
しかしながら、デルフィニウムは他殖性であり、自殖を繰り返すと自殖弱性を起こす。したがって、自殖によって特定の花色を持つ種子の繁殖が困難であったため、それらの特定の花色を持つ種子を維持することができなかったなどの問題点がある。また、デルフィニウムで他殖交配を行った場合、様々な花色を有する後代が得られ、特定の花色を後代に遺伝させることができなかったなどの問題点がある。
二色系デルフィニウムはメリクロン苗により継代され増殖させることができたが、種子繁殖ができなかったため、たくさんの二色系デルフィニウムを市場に提供できなかったなどの問題点がある。
【００２１】
デルフィニウムは冷涼地または高冷地でよく育つが、暖地では高温のため生育が悪い。そのため暖地では促成栽培を行わなければ、デルフィニウムを効率よく生育させることができなかったなどの問題点がある。
デルフィニウムの花色を正確に数値化できるようになったが、萼片の花色と萼片中の内性色素との関係が不明であったため、萼片の内性色素の蓄積からデルフィニウムの花色を決定することができなかったなどの問題点がある。
また、デルフィニウムの萼片には化学構造が不明なアントシアニン色素を含み、これらを特徴とする紫色花のデルフィニウムを市場に提供できなかったなどの問題点がある。
【００２２】
本発明の課題は、全色系デルフィニウムの他殖交配により特定の花色をもつ種子を得ることのできる方法を提供する。同時に、他殖交配することにより二色系の花色（ビカラー）をもつデルフィニウムの種子を得ることのできる交配方法を提供することである。また、本発明の別の課題は前記デルフィニウムを暖地で効率よく季節咲き栽培する方法を提供することである。
本発明の課題は、他殖交配により特定の花色をもつ種子を自由に得ることができる方法を提供することである。また、本発明の課題は、種子繁殖によるたくさんの二色系花色（ビカラー）のデルフィニウムを提供することである。
更に、本発明の課題は、新規アントシアニンを主成分として含む紫色花または淡紫色花デルフィニウムを提供することおよび、その新規アントシアニン色素の単離、精製方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００２３】
本発明者らは、上記の課題を解決するために、全色系花色をもつデルフィニウムを花粉親または種子親として他殖交配し、特定の花色を後代に遺伝させることができることを見出した。
【００２４】
さらに、デルフィニウムを花粉親または種子親として他殖交配し、二色系の花色（ビカラー）を後代に遺伝させることができることを見出した。
本発明者らは、上記の課題を解決するために、全色系花色をもつデルフィニウムを花粉親または種子親として他殖交配し、特定の花色を後代に遺伝させることができることを見出した。
【００２５】
また、前記したデルフィニウムを、１５℃±１℃（１４〜１６℃、以下約１５℃と言う）の温度下シャーレ内で発芽させる条件で育苗することによって、デルフィニウムを効率よく（季節咲き）生育すること、特に暖地において効率よく（季節咲き）生育することが可能となった。
【００２６】
本発明は、更にデルフィニウムの花色と内生色素を分析し、横軸を萼片中の内性色素の含量比とし、縦軸に花色を示す色相角度として得た数式１
【００２７】
【数１】
【００２８】
（式中、ＣＤ／ＶＤはデルフィニウム萼片の内生色素の比率を示し、Ｈｍａｘは花色である最大色相角を示し、ＫＨは最大色相角の２分の１になる場合の内生色素の比率を定数として示す）
を用い、デルフィニウムの花色を決定する方法を見出した。
【００２９】
本発明のデルフィニウムの花色交配法は、デルフィニウムの花色を作出する花色交配の組み合わせを決定するものであって、花粉親または種子親の配偶子を行または列とする組合せ早見表を用いて、花色を想定することを特徴とする。
【００３０】
本発明はまた、本発明のデルフィニウムの花色交配法により作出されたデルフィニウムの花色が、下記の式（Ｉ）で示すことのできる新規アントシアニン色素または式（ＩＩ）で示すことができるアントシアニン色素（ＩＩ）で発現することを特徴とするものを含む。
【００３１】
【化１】
【００３２】
【化２】
【００３３】
これらの色素は新規若しくはデルフィニウムから単離されていない。従って、本発明は、本発明の方法により作出されたデルフィニウムこれらの色素を単離・精製する方法も含む。更に本発明は、式（Ｉ）で示される、３−Ｏ−（６−Ｏ−（α−Ｌ−ｒｈａｍｎｏｓｙｌ）−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−７−Ｏ−（３−Ｏ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ−６−Ｏ−（４−Ｏ−（６−Ｏ−ｐ−ｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚｏｙｌ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−ｐ−ｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚｏｙｌ）−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−ｄｅｌｐｈｉｎｉｄｉｎも包含する。
【図面の簡単な説明】
【００３４】
【図１】ビカラーの花色をＣＩＥＬａｂ表色系座標にプロットした図である。（実施例５）
【図２】青色系の二色花（ビカラー・ブルー、Ｂ青）の生物の形態写真である。（実施例５）
【図３】淡青色系の二色花（ビカラーウイトブルー、Ｂ淡青）の生物の形態写真である。（実施例５）
【図４】パシフィックジャイアント（紫色）とブルーミラー（青色）の色相角（ｈ）の経時的変化を示す図である。（実施例７）
【図５】パシフィックジャイアント（紫色）の萼片の主内生色素比（ＶＤ／ＴＰ）およびブルーミラー（青色）萼片の主内生色素比（ＣＤ／ＶＤ）に対する色相角（ｈ）の関係を示す図である。（実施例７）
【図６】パシフィックジャイアント（紫色）の萼片の主内生色素比（ＶＤ／ＴＰ）の逆数およびブルーミラー（青色）萼片の主内生色素比（ＣＤ／ＶＤ）の逆数に対する色相角（ｈ）の逆数の関係を示す図である。（実施例７）
【図７】パシフィックジャイアントを他殖交配して得たハイブリッド種子（Ｈｙｂｒｉｄ種子）と購入種子（店種）との生存率との比較を示す図である。（実施例１０）
【図８】薄層クロマトグラフィーを示す図である。（実施例１１）
【図９】薄層クロマトグラフィーを示す図である。（実施例１１）
【図１０】式（Ｉ）で示すことのできる新規アントシアニン色素の核磁気共鳴スペクトルで、異核化学シフト相関（ＨＭＱＣ）と同核シフト相関（１Ｈ−１Ｈ ＴＯＣＯＳＹ、矢印のついた曲線）を示す図である。（実施例１２）
【図１１】式（Ｉ）で示すことのできる新規アントシアニン色素の核磁気共鳴スペクトルで、プロトン（１Ｈ）に相関する１３炭素（１３Ｃ）の遠距離相関（ＨＭＢＣ）を示す図である。（実施例１２）
【発明を実施するための最良の形態】
【００３５】
以下、本発明の実施の形態を説明する。
本発明は、全色系花色をもつデルフィニウムを花粉親または種子親として他殖交配し、特定の花色を後代に遺伝させるデルフィニウムの花色交配法に関する。
【００３６】
より詳しくは、パシフィックジャイアントについて、青色花と淡青色花を他殖交配することにより青色花を得ることができ、青色花と白色花を他殖交配することにより白色花を得ることができ、青色花と紫色花を、または、紫色花と淡紫色花を他殖交配することにより紫色花を得ることができ、淡紫色花と白色花を他殖交配することにより淡紫色花を得ることができる。
また、ブルースプリングスについて、青色花と淡紫色花を他殖交配することにより青色花と淡青色花を得ることができ、淡青色花と白色花を他殖交配することにより白色花を得ることができ、紫色花と淡紫色花を、または、淡紫色花と桃色花を他殖交配することにより紫色花を得ることができ、桃色花と赤桃色花を他殖交配することにより赤桃色花を得ることができる。
【００３７】
さらに、デルフィニウムを花粉親または種子親として他殖交配し、二色系の花色（ビカラー）を後代に遺伝させることができることを見出した。より詳しくは、パシフィックジャイアントが淡青色花であって、ブルースプリングスが赤桃色花であって、パシフィックジャイアントとブルースプリングスを花粉親または種子親として交配し、萼片の外側が青色、萼片の内側が紫色の青色系の二色花（ビカラー・ブルー、Ｂ青）を得ることができる。
パシフィックジャイアントについて、淡青色花と淡紫色花を花粉親または種子親として他殖交配することにより二色花（ビカラー・ブルー、Ｂ青）、並びに、萼片の外側が淡青色、萼片の内側が淡紫色の二色花（ビカラー・ライトブルー、Ｂ淡青）を得ることができ、淡青色花と白色花を他殖交配することにより二色花（ビカラー・ブルー、Ｂ淡青）を得ることができる。
ブルースプリングスについて、青色花と赤桃色花を花粉親または種子親として他殖交配することにより二色花（ビカラー・ブルー、Ｂ青）を得ることができ、淡青色花と淡紫色花を他殖交配することにより二色花（ビカラー・ライトブルー、Ｂ淡青）を得ることができ、淡青色花と赤桃色花を他殖交配することにより二色花（ビカラー・ブルー、Ｂ青）を得ることができ、青色花と紫色花を他殖交配することによりビカラー・ブルーとビカラー・ライトブルーを得ることができ、青色花と白色花を他殖交配することによりビカラー・ブルーとビカラー・ライトブルーを得ることができる。
【００３８】
このように、種々の全色系をもつデルフィニウムを他殖交配することにより特定の花色、特に二色系（ビカラー）の花色を後代に遺伝させることが可能となる。
【００３９】
本発明の花色交配法に使用できるデルフィニウム（Ｄｅｌｐｈｉｎｉｕｍ）として、限定されるものではないが、例えば、Ｄ．ｃｈｅｉｌａｎｔｕｍ、Ｄ．ｃａｒｄｉｎａｌｅ、Ｄ．ｃｏｎｓｏｌｉｄａ、Ｄ．ｅｌａｔｕｍ、Ｄ．ｇｒａｎｄｉｆｌｏｒｕｍ、Ｄ．ｎｕｄｉｃａｕｌｅ、Ｄ．ｚａｌｉｌ、Ｄ．ｔａｔｓｉｅｎｅｎｓｅ、Ｄ．ｐａｒｒｙｉ、Ｄ．ｔｒｏｌｌｉｉｆｏｌｉｕｍ、Ｄ．ｎｕｔｔａｌｌｉａｎｕｍ、Ｄ．ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ、Ｄ．ｔｒｉｃｏｒｎｅ、Ｄ．ｂｉｃｏｌｏｒ、Ｄ．ｂａｒｂｅｙｉ、Ｄ．ｄｕｂｉｕｍ、Ｄ．ａｎｔｈｒｉｓｃｉｆｏｌｉｕｍ、Ｄ．ｌａｃｏｓｔｅｉ、Ｄ．ｍａｃｒｏｃｅｎｔｒｏｎ、Ｄ．ｃａｅｒｕｌｅｕｍが挙げられる。
【００４０】
また、本発明の花色交配法に使用できる本発明のデルフィニウム品種（Ｄｅｌｐｈｉｎｉｕｍ ｈｙｂｒｉｄｕｍ）として、限定されるものではないが、例えば、ブラックナイト（Ｂｌａｃｋ Ｎｉｇｈｔ）、ブルーバード（Ｂｌｕｅ Ｂｉｒｄ）、ゲラハド（Ｇｅｌａｈａｄ）、グウェナヴィア（Ｇｕｅｎｅｖｅｒｅ）、キングアーサー（Ｋｉｎｇ Ａｒｔｈｕｒ）、パーシヴァル（Ｐｅｒｃｉｖａｌ）、サマースカイ（Ｓｕｍｍｅｒ Ｓｋｉｅｓ）、サー・ランスロット（Ｓｉｒ Ｌａｎｃｅｌｏｔ）、ベイビードール（Ｂａｂｙ Ｄｏｌｌ）、ブルーナイル（Ｂｌｕｅ Ｎｉｌｅ）、バターボール（Ｂｕｔｔｅｒｂａｌｌ）、パープルシェイド（Ｐｕｒｐｌｅ Ｓｈａｄｅ）、ロナルドワッツ（Ｒｏｎａｌｄ Ｗａｔｔｓ）、ドワーフ・パシフィック（Ｄｗａｒｆ Ｐａｃｉｆｉｃ）、ドワーフ・デルフィニウム（Ｄｗａｒｆ Ｄｅｌｐｈｉｎｉｕｍ）、リトル・デルフィニウム（Ｌｉｔｔｌｅ Ｄｅｌｐｈｉｎｉｕｍ）、マジック・フォンテン（Ｍａｇｉｃ Ｆｏｕｎｔａｉｎ）、スノーホワイト（Ｓｎｏｗ Ｗｈｉｔｅ）、ブルースプリングス（Ｂｌｕｅ Ｓｐｒｉｎｇｓ）、ベラドンナ（Ｂｌｌａｄｏｎｎａ）、ブルービー（Ｂｌｕｅ Ｂｅｅ）、メライミー（Ｍｏｅｒｈｅｉｍｉｉ）、ピンクセンセーション（Ｐｉｎｋ Ｓｅｎｓａｔｉｏｎ）、ウェンディ（Ｗｅｎｄｙ）、ユニバーシティ・ハイブリッド（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｈｙｂｒｉｄ）、プリンセス・カロライン（Ｐｒｉｎｃｅｓｓ Ｃａｒｏｌｉｎｅ）、ロイヤルレッド（Ｒｏｙａｌ Ｒｅｄ）、ロイヤルイエロー（Ｒｏｙａｌ Ｙｅｌｌｏｗ）、サマードリーム（Ｓｕｍｍｅｒ Ｄｒｅａｍ）、サンキスト（Ｓｕｎｋｉｓｔ）、スカイロケット（Ｓｋｙ Ｒｏｃｋｅｔ）、ビーバリーヒルズ・スカーレット（Ｂｅａｖｅｒｙ Ｈｉｌｌｓ Ｓｃａｒｌｅｔ）、ビーバリーヒルズ・イエローシェード（Ｂｅａｖｅｒｙ Ｈｉｌｌｓ Ｙｅｌｌｏｗ Ｓｈａｄｅ）、ビーバリーヒルズ・サーモンシェード（Ｂｅａｖｅｒｙ Ｈｉｌｌｓ Ｓａｌｍｏｎ Ｓｈａｄｅ）、スワンレイク（Ｓｗａｎ Ｌａｋｅ）、ブルーパール（Ｂｌｕｅ Ｐｅａｒｌ）が挙げられる。
【００４１】
本発明はまた、このようにして交配したデルフィニウムを１５℃±１℃の温度下シャーレ内で発芽させる条件で育苗することによって効率よく（季節咲き）生育することが可能であることを見出した。特に、従来デルフィニウムを暖地において効率よく育成することが困難であったが、このような条件で発芽させることによってデルフィニウムを暖地でも効率よく育苗することが可能となった。
【００４２】
より詳しくは、他殖交配させたデルフィニウムの（二色系の花色を含む）種子について、約１５℃の温度下シャーレ内で発芽させ育苗し、一方では市販種子を同様の条件で育苗したものと比較し、最終生存（開花）率を調べたところ、市販種子は全播種数に対して０〜１５％程度の生存（開花）率を与えたのに対して、他殖交配種子は約１５〜２８％と有意な生存（開花）率を与え、結果として他殖交配種子を約１５℃の温度下シャーレ内で発芽させる条件で育苗すると暖地栽培での生存（開花）率を上げることができる。
【００４３】
本発明のデルフィニウムの花色交配法において花色を決定するに当たって、デルフィニウムの花色と内生色素を分析し、横軸を萼片中の内性色素の含量比とし、縦軸に花色を示す色相角度として得た数式１
【００４４】
【数１】
【００４５】
（式中、ＣＤ／ＶＤはデルフィニウム萼片の内生色素の比率を示し、Ｈｍａｘは花色である最大色相角を示し、ＫＨは最大色相角の２分の１になる場合の内生色素の比率を定数として示す）
を用いると、効率よく花色を決定することが可能であることが判った。
【００４６】
デルフィニウムの花色は、開花後時間と共に変化する。このときの色相角（ｈ）の逆数を縦軸にとる。花色に関わる主要色素は青色花および淡青色花の場合、時間の経過と共にヴィオルデルフィン（ｖｉｏｌｄｅｌｐｈｉｎ、ＶＤ）からシアノデルフィン（ｃｙａｎｏｄｅｌｐｈｉｎ、ＣＤ）へと変わり、また、紫色花および淡紫色花の場合、チューリパニン（ｔｕｌｉｐａｎｉｎ、ＴＰ）からビオルデルフィン（ＶＤ）へと変わる。この主要な内生色素の、分子を変化前の主要色素濃度、分母を変化後の主要色素濃度とし、これらの濃度比の逆数を横軸とする。すなわち、青色花および淡青色花の主要な内生色素の濃度比は、シアノデルフィン濃度÷ビオルデルフィン濃度で求めることができる。これを［ＣＤ／ＶＤ］で示す。一方、紫色花および淡紫色花の主要な内生色素の濃度比は、ヴィオルデルフィン濃度÷チューリパニン濃度で求めることができる。これを［ＶＤ／ＴＰ］で示す。
縦軸に色相角（ｈ）の逆数（マイナス値）をとり、横軸に主要な内生色素の濃度比の逆数をとると、この二つの関係を回帰直線式で示すことができ、したがって、数式１または数式２でこの関係を表すことができる。
【００４７】
【数１】
【００４８】
（式中、ＣＤ／ＶＤはデルフィニウム萼片の主要内生色素の比率を示し、ＣＤはシアノデルフィン、ＶＤはヴィオルデルフィンであり、Ｈｍａｘは花色である最大色相角を示し、ＫＨは最大色相角の２分の１になる場合の内生色素の比率を定数として示す）
【００４９】
【数２】
【００５０】
この数式から最大色相角（Ｈｍａｘ）を得ることができる。最大色相角（Ｈｍａｘ）とは、デルフィニウムが開花にともない変化する花色が、開花後花色が熟して安定するときの、花色のＣＩＥＬａｂ表色系図上の色相角度である。また、数式１および数式２中ＫＨとするものは濃度比定数を示し、これは最大色相角（Ｈｍａｘ）が２分の１になるときの萼片の主要な内生色素の濃度比である。これらの数式１および数式２からデルフィニウムの花色を決定する方法を見出した。
【００５１】
青色系デルフィニウム（青色、淡青色、紫色、淡紫色のデルフィニウム）の萼片（花）を採集し、酢酸とメタノールを１対１で混合した溶液（５０％酢酸−メタノール）でアントシアニン色素を抽出した。抽出液を綿栓でろ過した後、溶媒を減圧下、ロータリーエバポレーターで留去した。抽出残渣を５％酢酸水溶液に溶解し、オープンカラムクロマトグラフィーに付した。オープンカラムクロマトグラフィーの条件は、固定相にエムシーアイゲルＣＨＰ−２０Ｐ（ＭＣＩ ｇｅｌ ＣＨＰ−２０Ｐ、三菱化学株式会社、Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、セファデックスＬＨ−２０（Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０、ファルマシアバイオテック株式会社、Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ）、クロマトレックスＯＤＳ（Ｃｈｒｏｍａｔｏｒｅｘ ＯＤＳ、富士シリシア化学株式会社、Ｆｕｊｉ Ｓｉｌｙｓｉａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ ＬＴＤ．）を用い、移動層にＡ液として５％酢酸水溶液、Ｂ液として５％酢酸−メタノールを用い、Ａ液からＢ液の含量を増やすことによって各種クロマトグラフィーを行った。また、固定相にセファデックスＬＨ−２０（Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０、ファルマシアファインケミカル株式会社）を用い、移動層にＡ液として５％酢酸水溶液、Ｃ液として５％酢酸−アセトンを用い、Ｃ液からＡ液の含量を増やすことによってクロマトグラフィーを行った。これらのオープンカラムクロマトグラフィーを繰り返し行うことによって、式（Ｉ）で示すことのできる新規アントシアニン色素と式（ＩＩ）で示すことのできるアントシアニン色素を単離できることを見出した。
【００５２】
前記したデルフィニウムを、１５℃±１℃の温度下シャーレ内で発芽させる条件で育苗することによって、デルフィニウムを効率よく（季節咲き）生育すること、特に暖地において効率よく（季節咲き）生育することが可能となった。
【００５３】
自殖系淡紫色花パシフィックジャイアントの萼片アントシアニンを調査したところ、新規アントシアニン色素（Ｉ）を含み、かつアントシアニン色素（ＩＩ）を主要色素とすることを見出した。青色花パシフィックジャイアントと淡紫色花パシフィックジャイアントを他殖交配することにより、新規アントシアニン色素（Ｉ）を含み、かつアントシアニン色素（ＩＩ）を主要色素として含む紫色花パシフィックジャイアントおよび淡紫色花パシフィックジャイアントを得ることができる。青色花パシフィックジャイアントと白色花パシフィックジャイアントを他殖交配することにより、アントシアニン色素（ＩＩ）を主要色素として含む紫色花パシフィックジャイアントを得ることができる。淡青色花パシフィックジャイアントと白色花パシフィックジャイアントを他殖交配することにより、新規アントシアニン色素（Ｉ）を含み、かつアントシアニン色素（ＩＩ）を主要色素として含む淡紫色花パシフィックジャイアントを得ることができることを見出した。
【００５４】
淡青色花ブルースプリングスと淡紫色花ブルースプリングスを他殖交配することにより、外側の萼片が新規アントシアニン色素（Ｉ）を含み、かつアントシアニン色素（ＩＩ）を主要色素として含むブルースプリングスの二色花（ビカラー・ライトブルー、Ｂ淡青）を得ることができる。淡青色花ブルースプリングスと白色花ブルースプリングスを他殖交配することにより、内側の萼片が新規アントシアニン色素（Ｉ）を含み、かつアントシアニン色素（ＩＩ）を主要色素として含むブルースプリングスの二色花（ビカラー・ブルー、Ｂ青）を得ることができる。淡紫色花パシフィックジャイアントと赤桃色花ブルースプリングスを他殖交配することにより、新規アントシアニン色素（Ｉ）を含み、かつアントシアニン色素（ＩＩ）を主要色素として含む紫色花デルフィニウムの雑種品種を得ることができる。白色花パシフィックジャイアントと青色花ブルースプリングスを他殖交配することにより、新規アントシアニン色素（Ｉ）を含み、かつアントシアニン色素（ＩＩ）を主要色素として含む淡紫色花デルフィニウムの雑種品種を得ることができることを見出し、本発明を完成した。
【００５５】
【化１】
【００５６】
【化２】
【００５７】
本発明のデルフィニウムの花色交配法は、全色系花色をもつデルフィニウムを花粉親または種子親として他殖交配し、特定の花色を後代に遺伝させる方法である。その方法には、デルフィニウムを花粉親または種子親として交配し、二色系の花色を後代に遺伝させる方法を含む。
【００５８】
本発明は、前記したデルフィニウムの花色交配法により作出したデルフィニウムを１５℃±１℃（１４℃〜１６℃）の温度下シャーレ内で発芽させる条件で育苗することを特徴とするデルフィニウムの栽培方法を含む。
【００５９】
本発明のデルフィニウムの花色交配法は、横軸を萼片中の内性色素の含量比［ＣＤ／ＶＤ］とし、縦軸に花色を示す色相角度として得た数式１、
【００６０】
【数１】
【００６１】
（式中、ＣＤ／ＶＤはデルフィニウム萼片の主要内生色素の比率を示し、ＣＤはシアノデルフィン、ＶＤはヴィオルデルフィンであり、Ｈｍａｘは花色である最大色相角を示し、ＫＨは最大色相角の２分の１になる場合の内生色素の比率を定数として示す）
を適用し、デルフィニウムの花色を決定する方法を含む。
【００６２】
本発明のデルフィニウムの花色交配法は、前記数式１において、［ＣＤ／ＶＤ］を［ＶＤ／ＴＰ］
（式中、、［ＶＤ／ＴＰ］は、紫色花および淡紫色花の主要な内生色素の濃度比であって、ヴィオルデルフィン濃度ＶＤ÷チューリパニン濃度ＴＰで求めることができる値である。）で示される数式を適用し、デルフィニウムの花色を決定する方法を含む。
【００６３】
本発明のデルフィニウムの花色交配法は、デルフィニウムの花色を作出する花色交配の組み合わせを決定するものであって、花粉親または種子親の配偶子を行または列とする組合せ早見表を用いて、花色を想定することを特徴とする。
【００６４】
本発明のデルフィニウムの花色交配法により作出されたデルフィニウムの花色が、下記の式（Ｉ）で示すことのできる新規アントシアニン色素で発現することを特徴とするものを含む。
【００６５】
【化１】
【００６６】
新規アントシアニン色素は、３−Ｏ−（６−Ｏ−（α−Ｌ−ｒｈａｍｎｏｓｙｌ）−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−７−Ｏ−（３−Ｏ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ−６−Ｏ−（４−Ｏ−（６−Ｏ−ｐ−ｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚｏｙｌ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−ｐ−ｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚｏｙｌ）−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−ｄｅｌｐｈｉｎｉｄｉｎ（Ｉ）で示される。
【００６７】
本発明のデルフィニウムの花色交配法により作出されたデルフィニウムの花色が、上記の式（Ｉ）で示すことのできる新規アントシアニン色素および／または下記の式（ＩＩ）で示すことのできるアントシアニン色素で発現することを特徴とするものを含む。
【００６８】
【化２】
【００６９】
アントシアニン色素は、３−Ｏ−（６−Ｏ−（α−Ｌ−ｒｈａｍｎｏｓｙｌ）−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−７−Ｏ−（３−Ｏ−（３−Ｏ−（β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−６−Ｏ−（４−Ｏ−（６−Ｏ−ｐ−ｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚｏｙｌ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−ｐ−ｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚｏｙｌ）−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−ｄｅｌｐｈｉｎｉｄｉｎ（ＩＩ）で示される。
【００７０】
本発明により、前記した新規アントシアニン色素（Ｉ）および／またはアントシアニン色素（ＩＩ）をデルフィニウム萼片より単離、精製することができる。
【実施例】
【００７１】
以下、本発明を実施例により具体的に説明するが、本発明は、これらの実施例に限定されるものではない。
実施例１
【００７２】
［約１５℃の温度下シャーレ内で発芽させる条件で育苗する栽培方法］
パシフィックジャイアントを１９９９年春に他殖交配し、Ｆ１種子を得た。２０００年８月中旬にＦ１種子をシャーレ内に播種した。シャーレ内は予め脱脂綿を引き、種が半分沈む程度に水を吸わせた。種を播いたシャーレを約１５℃の冷蔵庫に約７日〜１０日暗黒条件下で発芽させた。発芽したものから順次セルトレイに移植した。移植したセルトレイを温室内で２５〜３２℃の高温度で育苗し、１１月上旬にビニルハウスへ定植した。生育促進のため、１２月下旬から暖房による加温をはじめ、ビニルハウス内の温度を約１５℃に保温した。花芽分化促進のため、２００１年１月中旬から４月下旬の開花期まで、電照による長日処理を行った。電照の条件は以下の通りである。畝からの高さ１．１ｍ、９平米の広さに１００ワット白熱球１個を割り当て、午後９時〜午前３時の６時間の間、照明した。シャーレ内に播種した種の数を数え、２００１年４月〜５月に開花に至った株数を数え、生存（開花）率として算出した。
比較のため自殖した種子を同様に、シャーレ内に播種し、育苗して生存（開花）率を求めた。
この栽培方法を、２００１年８月と２００２年８月の合計３回繰り返し行い、２００１年〜２００３年に開花した株数を調査した。
一方、比較のため２００１年８月と２００２年８月の合計２回、購入種子をシャーレ内に播種し、前記した方法にてデルフィニウム市販種子を育苗して生存（開花）率を求めた。
さらに、ブルースプリングスについても同様の試験を行った。
さらにまた、パシフィックジャイアントとブルースプリングスを他殖交配し、Ｆ１種子を得たものについても同様に試験調査を行った。その結果を表１に示す。
【００７３】
【表１】
【００７４】
表１から明らかなように、他殖交配し得られたＦ１からの実生苗がもっともよく生存したことがわかる。
実施例２
【００７５】
パシフィックジャイアントを花粉親または種子親として他殖交配しＦ１種子を得た。Ｆ１種子を前記した約１５℃の温度下シャーレ内で発芽させる条件で育苗し、実生苗を栽培し、開花させ、後代の花色を調査した。その結果を表２に示す。
【００７６】
【表２】
【００７７】
表２に示すように、青色花と淡青色花を花粉親または種子親として他殖交配することにより青色花８個体と紫色花１個体を得た。青色花と白色花を他殖交配することにより半数以上の確率で白色花１５個体を得た。青色花と紫色花を他殖交配することにより紫色花１２個体、青色花１個体、二色花（ビカラー・ブルー）１個体を得た。紫色花と淡紫色花を他殖交配することにより紫色花９個体を得た。淡紫色花と白色花を他殖交配することにより淡紫色花１０個体を得た。表２中カッコ内に示す値は、他殖交配で得られた各花色系統を総個体数で割った値の百分率を示す。
【００７８】
表２に示すように、淡青色花と淡紫色花を花粉親または種子親として他殖交配することによりビカラー・ブルー１個体、ビカラー・ライトブルー７個体、白色花１個体を得た。淡青色花と白色花を他殖交配することによりビカラー・ライトブルー４個体と淡青色花４個体を得た。この早見表２より、後代に分離する花色を速やかに知ることができる。
実施例３
【００７９】
ブルースプリングスを花粉親または種子親として他殖交配しＦ１種子を得た。Ｆ１種子を前記した約１５℃の温度下シャーレ内で発芽させる条件で育苗し、実生苗を栽培し、開花させ、後代の花色を調査した。その結果を表３に示す。
【００８０】
【表３】
【００８１】
表３に示すように、青色花と淡紫色花を花粉親または種子親として他殖交配することにより青色花５個体と淡青色花７個体、紫色花１個体、ビカラー・ブルー２個体、ビカラー・ライトブルー８個体を得た。淡青色花と白色花を他殖交配することにより白色花１１個体、淡紫色花３個体、淡青色花１個体、ビカラー・ライトブルー１７個体を得た。紫色花と淡紫色花を花粉親または種子親として他殖交配することにより、紫色花６個体とビカラー・ブルー１個体を得た。淡紫色花と桃色花を他殖交配することにより紫色花１１個体、淡紫色花２個体、ビカラー・ブルー１個体を得た。桃色花と赤桃色花を他殖交配することにより赤桃色花５個体を得た。表３中カッコ内に示す値は、他殖交配で得られた各花色系統を総個体数で割った値の百分率を示す。
【００８２】
表３に示すように、青色花と赤桃色花を花粉親または種子親として他殖交配することにより、主としてビカラー・ブルー３３個体を得た。淡青色花と淡紫色花を他殖交配することにより淡紫色花９個体とビカラー・ライトブルー１３個体を得た。淡青色花と赤桃色花を他殖交配することによりビカラー・ブルー５個体を得た。青色花と紫色花を他殖交配することにより青色花２個体、ビカラー・ブルー６個体、ビカラー・ライトブルー２個体を得た。青色花と白色花を他殖交配することにより、淡青色花１個体、白色花１個体、ビカラー・ブルー３個体、ビカラー・ライトブルー８個体を得た。この早見表３より、後代に分離する花色を速やかに知ることができる。
実施例４
【００８３】
パシフィックジャイアントとブルースプリングスを花粉親または種子親として他殖交配しＦ１種子を得た。Ｆ１種子を前記した約１５℃の温度下シャーレ内で発芽させる条件で育苗し、実生苗を栽培し、開花させ、後代の花色を調査した。その結果を表４に示す。
【００８４】
【表４】
【００８５】
表４に示すように、パシフィックジャイアントが淡青色花であって、ブルースプリングスが赤桃色花であった場合、主としてビカラー・ブルー３５個体を得た。この早見表４より、後代に分離する花色を速やかに知ることができる。表４中カッコ内に示す値は、他殖交配で得られた各花色系統を総個体数で割った値の百分率を示す。
実施例５
【００８６】
青色系の二色花（ビカラー・ブルー、Ｂ青）と淡青色系の二色花（ビカラー・ライトブルー、Ｂ淡青）の花色を文献記載の方法で測色した（非特許文献１１および１２）。その結果を図１に示す。また、青色系の二色花（ビカラー・ブルー、Ｂ青）と淡青色系の二色花（ビカラー・ライトブルー、Ｂ淡青）の写真を図２および図３にそれぞれ示す。萼片の内側と外側の花色が明らかに異なることがわかる。萼片の内側の花色は、青色系の二色花（ビカラー・ブルー、Ｂ青）と淡青色系の二色花（ビカラー・ライトブルー、Ｂ淡青）はそれぞれ紫色〜淡紫色に分布し、回帰直線式（ｙ＝−０．６２７ｘ−６．３９３）では相関係数０．８４２であり有意な関係があることがわかる。また、萼片の外側の花色は、青色系の二色花（ビカラー・ブルー、Ｂ青）と淡青色系の二色花（ビカラー・ライトブルー、Ｂ淡青）は図上それぞれ青紫色〜青色に分布し、回帰直線式（ｙ＝−０．７２１ｘ−１７．５９）では相関係数０．９０４であり有意な関係があることがわかる。
実施例６
【００８７】
青色系の二色花（ビカラー・ブルー、Ｂ青）と淡青色系の二色花（ビカラー・ライトブルー、Ｂ淡青）の内側と外側の萼片の色素組成を文献記載の方法で測定した（非特許文献１１および１２）。その結果を表５に示す。
【００８８】
【表５】
【００８９】
表５から、ビカラーの内側と外側の萼片の色素組成は同様であることがわかる。表５中の内生色素として、１はビスデアシルプラティコニン（ｂｉｓｄｅａｃｙｌｐｌａｔｙｃｏｎｉｎ）、２はチューリパニン（ｔｕｌｉｐａｎｉｎ）、３はヴィオルデルフィン（ｖｉｏｌｄｅｌｐｈｉｎ）、４はシアノデルフィン（ｃｙａｎｏｄｅｌｐｈｉｎ）を示す。表５中の内生色素として、ｃは未同定色素であるが、高速液体クロマトグラフィーによる分離は良好であった。色素ａとｂは、それぞれ式（Ｉ）で示すことのできる新規アントシアニンと式（ＩＩ）で示すことのできるアントシアニンである。各色素の保持時間（ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ ｔｉｍｅ）は、１（９．１分）、２（１５．９分）、３（３１．６分）、色素ａ（Ｉ）（３４．２分）、色素ｂ（ＩＩ）（３４．７分）、色素ｃ（５１．６分）、４（５８．５分）であった。
実施例７
【００９０】
開花後の花色と萼片の内生色素を調査した。調査した時間は、開花直後から、開花後３、６、９、１２、１８、２４、３６、４８、６０、７２、８４、９６、１２０時間目を調査した。デルフィニウム・パシフィックジャイアント（紫色）とブルーミラー（青色）の色相角度（ｈ）の経時的（時間的）変化を図４に示す。パシフィックジャイアント（紫色）については、萼片の主要な内生色素であるチューリッパニン（ｔｕｌｉｐａｎｉｎ、ＴＰ）とヴィオルデルフィン（ｖｉｏｌｄｅｌｐｈｉｎ、ＶＤ）の比率を横軸にとり、ブルーミラー（青色）については、萼片の主要な内生色素であるヴィオルデルフィン（ｖｉｏｌｄｅｌｐｈｉｎ、ＶＤ）とシアノデルフィン（ｃｙａｎｏｄｅｌｐｈｉｎ、ＣＤ）の比率を横軸にとり、縦軸に色相角度（ｈ）をとり、それらの関係を図５に示す。また、図５の縦軸と横軸にプロットしたものをそれぞれ逆数としてプロットしたものを図６に示した。
【００９１】
図６から数式１と数式２を導いた。この結果から、萼片の主要な内生色素の比率と花色には数式１と数式２に示す関係があることがわかり、内生色素の比率から花色を決定できることがわかる。
【００９２】
【数１】
【００９３】
（式中、ＣＤ／ＶＤはデルフィニウム萼片の主要内生色素の比率を示し、ＣＤはシアノデルフィン、ＶＤはヴィオルデルフィンであり、Ｈｍａｘは花色である最大色相角を示し、ＫＨは最大色相角の２分の１になる場合の内生色素の比率を定数として示す）
【００９４】
【数２】
【００９５】
数式１および数式２の関係をもとに、ブルーミラー（青色）、パシフィックジャイアント（青色）、パシフィックジャイアント（淡青色）、パシフィックジャイアント（紫色）、パシフィックジャイアント（淡紫色）の開花後の花色と萼片の内生色素を調査した。調査した時間は、開花直後から、開花後３、６、９、１２、１８、２４、３６、４８、６０、７２、８４、９６、１２０時間目を調査し、最大色相角（Ｈｍａｘ）とＫＨを算出した。その結果を表６に示す。
【００９６】
【表６】
【００９７】
表６から、萼片の主要な内生色素の濃度比により最大色相角（Ｈｍａｘ）、すなわち成熟花序の花色を知ることができる。
実施例８
【００９８】
開花後の萼片のｐＨを調査した。調査した時間は、開花直後から、開花後３、６、９、１２、１８、２４、３６、４８、６０、７２、８４、９６、１２０時間目を調査した。その結果を表７に示す。
【００９９】
【表７】
【０１００】
表７から、萼片のｐＨは変化しないことがわかる。
実施例９
【０１０１】
［自殖系種子を約１５℃の温度下シャーレ内で発芽させる条件で育苗する栽培方法と自殖系種子を６月直播栽培で育苗する栽培方法との比較］
ベラドンナベラモーサム、ベラドンナカサブランカ、ブルーミラー、パシフィックジャイアント、ブルースプリングス、マジックフォンテンの購入種子を１９９９年春に自殖し、種子を得た。１９９９年８月中旬に自殖種子をシャーレ内に播種した。シャーレ内は予め脱脂綿を引き、種が半分沈む程度に水を吸わせた。種を播いたシャーレを約１５℃の冷蔵庫に約７日〜１０日暗黒条件下で発芽させた。発芽したものから順次セルトレイに移植した。移植したセルトレイを温室内で２５〜３２℃の高温度で育苗し、１１月上旬にビニルハウスへ定植した。生育促進のため、１２月下旬から暖房による加温をはじめ、ビニルハウス内の温度を約１５℃に保温した。花芽分化促進のため、２０００年１月中旬から４月下旬の開花期まで、電照による長日処理を行った。電照の条件は以下の通りである。畝からの高さ１．１ｍ、９平米の広さに１００ワット白熱球１個を割り当て、午後９時〜午前３時の６時間の間、照明した。シャーレ内に播種した種の数を数え、２０００年４月〜５月に開花に至った株数を数え、生存（開花）率として算出した。この栽培方法を２０００年、２００１年に同様に繰り返し、２００１年および２００２年４月〜５月に開花に至った株数を数え、シャーレ播き種子の生存（開花）率として算出した（表８）。
【０１０２】
一方、比較のため自殖種子を１９９９年６月にセルトレイに直接播種し、以下前記した方法と同様に、温室内で２５〜３２℃の高温度で育苗し、１１月上旬にビニルハウスへ定植した。生育促進のため、１２月下旬から暖房による加温をはじめ、ビニルハウス内の温度を約１５℃に保温した。花芽分化促進のため、２０００年１月中旬から４月下旬の開花期まで、電照による長日処理を行った。電照の条件は以下の通りである。畝からの高さ１．１ｍ、９平米の広さに１００ワット白熱球１個を割り当て、午後９時〜午前３時の６時間の間、照明した。シャーレ内に播種した種の数を数え、２０００年４月〜５月に開花に至った株数を数え、生存（開花）率として算出した。この栽培を２０００年、２００１年に同様に繰り返し、２００１年および２００２年４月〜５月に開花に至った株数を数え、直播き種子の生存（開花）率として算出した（表８）。
【０１０３】
【表８】
【０１０４】
表８の結果、各種デルフィニウムの育苗、栽培について、シャーレ内で播種したものの方が生存率が高いことが分かる。
実施例１０
【０１０５】
ハイブリッド種子と購入種子との生存率の比較を行った。ハイブリッド種子として、パシフィックジャイアントを他殖交配した９系統を用いた。栽培は共に、前記したシャーレ内で播種し、育苗し、生存（開花）率として算出した。その結果を図７に示す。ハイブリッド種子は９系統の平均値と標準偏差で示し、購入種子は５系統の平均値と標準偏差で示す。この結果、ハイブリッド種子が約２２％の生存率を示したのに対し、購入種子は約５％程度に留まり、ハイブリッド種子が、より生存することが分かる（図７）。
実施例１１
【０１０６】
［青色系デルフィニウムの萼片から色素（Ｉ）および（ＩＩ）の抽出と単離、精製方法］
青色系デルフィニウム（青色、淡青色、紫色、淡紫色のデルフィニウム）の萼片（花）を採集した。生萼片の重量は１１．６ｋｇであった。これに酢酸とメタノールを１対１で混合した溶液（５０％酢酸−メタノール）を加え、アントシアニン色素を抽出した。抽出液を綿栓でろ過した後、溶媒を減圧下、ロータリーエバポレーターで留去した。抽出残渣を５％酢酸水溶液に溶解し、オープンカラムクロマトグラフィーに付した。オープンカラムクロマトグラフィーの条件は、固定相にエムシーアイゲルＣＨＰ−２０Ｐ（ＭＣＩ ｇｅｌ ＣＨＰ−２０Ｐ、三菱化学株式会社、Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、セファデックスＬＨ−２０（Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０、ファルマシアバイオテック株式会社、Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ）、クロマトレックスＯＤＳ（Ｃｈｒｏｍａｔｏｒｅｘ ＯＤＳ、富士シリシア化学株式会社、Ｆｕｊｉ Ｓｉｌｙｓｉａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ ＬＴＤ．）を用い、移動層にＡ液として５％酢酸水溶液、Ｂ液として５％酢酸−メタノールを用い、Ａ液からＢ液の含量を増やすことによって各種クロマトグラフィーを行った。また、固定相にセファデックスＬＨ−２０（Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０、ファルマシアファインケミカル株式会社）を用い、移動層にＡ液として５％酢酸水溶液、Ｃ液として５％酢酸−アセトン（アセトンに酢酸を５％量加えたもの）を用い、Ｃ液からＡ液の含量を増やすことによってクロマトグラフィーを行った。これらのオープンカラムクロマトグラフィーを繰り返し行うことによって、式（Ｉ）で示すことのできる新規アントシアニン色素（２９．９ｍｇ）と式（ＩＩ）で示すことのできるアントシアニン色素（６２．４ｍｇ）を単離した。両者とも、紫色の粉末であった。加えて、キキョウ属植物（Ｃａｍｐａｎｕｌａ）より単離、構造決定された既知のアントシアニン色素であるモノデアシルカンパニン（ｍｏｎｏｄｅａｃｙｌｃａｍｐａｎｉｎ）（３２．８ｍｇ）を単離した（Ｂｒａｎｄｔ、Ｋ．、Ｐｈｙｔｏ ｃｈｅｍ．３３：２０９−２１２、１９９３）。モノデアシルカンパニンがデルフィニウムの萼片（花）に含まれていることが初めて分かる。
【０１０７】
単離した前記の化合物の純度を検定するため、薄層クロマトグラフィー（Ｔｈｉｎ Ｌａｙｅｒ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ）を行った。用いた薄層は、アルミプレートに予めシリカゲルをコーティングしたもの（メルク社製、Ｍｅｒｃｋ、キーゼルゲル ６０ Ｆ２５４アルミニウムプレート、Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ ６０ Ｆ２５４ ａｌｕｍｉｎｉｕｍ ｐｌａｔｅ）を用いた。薄層クロマトグラフィーの展開溶媒について、非特許文献１２に記載の展開溶媒を用いた。この方法のように、展開溶媒のＡ液として、ベンゼン：ギ酸エチル：ギ酸の１：７：１の比率で混合した溶液と、Ｂ液として、ギ酸エチル：ギ酸：水の３：１：１の比率で混合した溶液を用いた。これらの溶液を、Ａ液：Ｂ液の１：１の比率で混合した展開溶媒で多重展開（２回展開）した。その結果を図８に示す。また、Ａ液：Ｂ液の１：３の比率で混合した展開溶媒で１回展開した。その結果を図９に示す。式（Ｉ）で示すことのできるアントシアニン色素と式（ＩＩ）および（ＩＩＩ）で示すことのできるアントシアニン色素が単一の色素であることが分かる。この図８、Ｙの結果より、非特許文献１２に記載の展開溶媒であるＡ液とＢ液の、比率を変えることと、加えて、多重展開することによっても、これらが単一の色素であること知ることができる。図８、Ｙ中、左から１はビスデアシルプラティコニン（ｂｉｓｄｅａｃｙｌｐｌａｔｙｃｏｎｉｎ）、２はチューリパニン（ｔｕｌｉｐａｎｉｎ）、３はヴィオルデルフィン（ｖｉｏｌｄｅｌｐｈｉｎ）、４はシアノデルフィン（ｃｙａｎｏｄｅｌｐｈｉｎ）を示す。式（ＩＩＩ）で示すことのできるアントシアニン色素は、モノデアシルカンパニン（ｍｏｎｏｄｅａｃｙｌｃａｍｐａｎｉｎ）である。薄層クロマトグラフィーによるＲｆの値（色素が薄層を移動した距離に対して、展開溶媒が薄層を移動した距離で割った値）は、図８中、１（０．２６５）、２（０．６４５）、３（０．２３８）、４（０．１１０）、（Ｉ）（０．１１０）、（ＩＩ）（０．０３４）、（ＩＩＩ）（０．０６８）である。また、図９中では、１（０．３７３）、２（０．５７３）、３（０．４０３）、４（０．３４１）、（Ｉ）（０．２６８）、（ＩＩ）（０．１７９）、（ＩＩＩ）（０．２０２）である。
実施例１２
【０１０８】
単離・精製した式（Ｉ）で示すことのできる新規アントシアニン色素のプロトン核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ−Ｎｕｃｌｅａｒ ｍａｇｎｅｔｉｃ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ［ＮＭＲ］ｓｐｅｃｔｒｕｍ）を測定した。測定装置は、ＪＮＭ−ＥＣＡ６００型核磁気共鳴装置（ＪＥＯＬ ＪＮＭ−ＥＣＡ６００ ＫＳ、日本電子データム株式会社、ＪＥＯＬ ＤＡＴＵＭ ＬＴＤ．）を用いた。その結果は次の通りである。１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ＋ＣＦ３ＣＯＯＤ，９：１）δ：１．２９（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，ｒｈａ−６−ＣＨ３），３．５０−４．００（ｓｕｇａｒ−Ｈ），３．７０（１Ｈ，ｍ，ｇｌｃ［ＩＩＩ］−Ｈ−６ｂ），３．７１（１Ｈ，ｍ，３−Ｏ−ｇｌｃ−Ｈ−６ｂ），３．９０（１Ｈ，ｍ，ｇｌｃ［Ｉ］−Ｈ−３），３．９４（１Ｈ，ｍ，ｇｌｃ［ＩＩ］−Ｈ−６ｂ），３．９６（１Ｈ，ｍ，ｇｌｃ［ＩＩＩ］−Ｈ−６ａ），４．１８（１Ｈ，ｂｒ ｄ，Ｊ＝１０．３Ｈｚ，３−Ｏ−ｇｌｃ−Ｈ−６ａ），４．２６（１Ｈ，ｍ，ｇｌｃ［Ｉ］−Ｈ−６ｂ），４．２８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，ｇｌｃ［ＩＩ］−Ｈ−１），４．６１（１Ｈ，ｂｒ ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，ｇｌｃ［ＩＩ］−Ｈ−６ａ），４．７１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，ｇｌｃ［ＩＩＩ］−Ｈ−１），４．８８（１Ｈ，ｓ，ｒｈａ−Ｈ−１），５．１４（１Ｈ，ｂｒ ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，ｇｌｃ［Ｉ］−Ｈ−６ａ），５．３８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，ｇｌｃ［Ｉ］−Ｈ−１），５．４５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，３−Ｏ−ｇｌｃ−Ｈ−１），６．４３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，ｐ−ＨＢＡ［ＩＩ］−Ｈ−３’，５’），６．６４（１Ｈ，ｓ，Ｈ−６），６．８０（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，ｐ−ＨＢＡ［Ｉ］−Ｈ−３’，５’），７．１４（１Ｈ，ｓ，Ｈ−８），７．３５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，ｐ−ＨＢＡ［ＩＩ］−Ｈ−２’，６’），７．７９（２Ｈ，ｓ，Ｈ−２’，６’），７．８９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，ｐ−ＨＢＡ［Ｉ］−Ｈ−２’，６’），８．６１（１Ｈ，ｓ，Ｈ−４）．
【０１０９】
単離・精製した式（Ｉ）で示すことのできる新規アントシアニン色素の１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル（１３Ｃ−Ｎｕｃｌｅａｒ ｍａｇｎｅｔｉｃ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ［ＮＭＲ］ｓｐｅｃｔｒｕｍ）を測定した。測定装置は、ＪＮＭ−ＥＣＡ６００型核磁気共鳴装置（ＪＥＯＬ ＪＮＭ−ＥＣＡ６００ＫＳ、日本電子データム株式会社、ＪＥＯＬ ＤＡＴＵＭ ＬＴＤ．）を用いた。その結果は次の通りである。１３Ｃ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ＋ＣＦ３ＣＯＯＤ，９：１）δ：１８．１（ｒｈａ−Ｃ−６），６２．７（ｇｌｃ［ＩＩＩ］−Ｃ−６），６６．０（ｇｌｃ［ＩＩ］−Ｃ−６），６６．３（ｇｌｃ［Ｉ］−Ｃ−６），６８．０（３−Ｏ−ｇｌｃ−Ｃ−６），６９．９（ｒｈａ−Ｃ−５），７１．０，７１．４，７１．７，７１．９，７２．７，７２．８，７３．７，７４．１，７４．４，７４．６，７４．８，７５．６，７５．９，７７．７，７７．９，７８．０，７８．１，７８．３，８７．４（ｇｌｃ［Ｉ］−Ｃ−３），９４．８（Ｃ−８），１００．３（３−Ｏ−ｇｌｃ−Ｃ−１），１００．８（ｇｌｃ［ＩＩ］−Ｃ−１），１０２．０（ｒｈａ−Ｃ−１），１０３．５（ｇｌｃ［Ｉ］−Ｃ−１），１０４．８（Ｃ−６），１０５．４（ｇｌｃ［ＩＩＩ］−Ｃ−１），１１３．４（Ｃ−１０），１１３．７（Ｃ−２’，６’），１１６．２（ｐ−ＨＢＡ［ＩＩ］−Ｃ−３’，５’），１１６．４（Ｃ−１’），１１７．３（ｐ−ＨＢＡ［Ｉ］−Ｃ−３’，５’），１２１．６（ｐ−ＨＢＡ［ＩＩ］−Ｃ−１’），１２５．０（ｐ−ＨＢＡ［Ｉ］−Ｃ−１’），１３２．３（ｐ−ＨＢＡ［Ｉ］−Ｃ−２’，６’），１３２．４（ｐ−ＨＢＡ［ＩＩ］−Ｃ−２’，６’），１３３．９（Ｃ−４），１４６．７（Ｃ−４’），１４７．２（Ｃ−３），１４７．８（Ｃ−３’，５’），１５６．３（Ｃ−９），１５８．１（Ｃ−５），１６２．４（ｐ−ＨＢＡ［Ｉ］−Ｃ−４’），１６３．２（ｐ−ＨＢＡ［ＩＩ］−Ｃ−４’），１６３．７（Ｃ−２），１６６．５（ｐ−ＨＢＡ［Ｉ］−ＣＯＯ），１６７．６（ｐ−ＨＢＡ［ＩＩ］−ＣＯＯ），１６８．１（Ｃ−７）．
【０１１０】
式（Ｉ）で示すことのできる新規アントシアニン色素（１．１ｍｇ）の紫外部吸収スペクトル（Ｕｌｔｒａ Ｖｉｏｌｅｔ ｓｐｅｃｔｒｕｍ）を測定した。測定には、島津製作所株式会社の分光機器（ＵＶ−ｖｉｓｉｂｌｅ ｒｅｃｏｒｄｉｎｇ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ、ＵＶ−２１００）を用いた。その結果は次の通りである。測定溶媒はメタノールである。ＵＶ λ ＭｅＯＨ／ｍａｘ ｎｍ（ｌｏｇ ｅ）：３７８ｓ（３．１１）、６３１（３．４４）、７０５（３．３０）；＋０．０１％ＨＣｌ：５４６（４．３７）；＋ＡｌＣｌ３：５８５（４．４４）。
【０１１１】
高分解能質量分析計（ｐｏｓｉｔｉｖｅ−ｉｏｎ ＨＲ ＦＡＢ−ＭＳ）を用いて式（Ｉ）で示すことのできる新規アントシアニン色素の質量を測定した。理論値は、Ｃ５９Ｈ６９Ｏ３５：１３３７．３６２０であり、測定値はｍ／ｚ：１３３７．３９３４［Ｍ］＋であり、理論値と測定値が良く一致した。
【０１１２】
単離・精製した式（Ｉ）で示すことのできる新規アントシアニン色素のプロトン核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ−Ｎｕｃｌｅａｒ ｍａｇｎｅｔｉｃ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ［ＮＭＲ］ｓｐｅｃｔｒｕｍ）を測定した。核磁気共鳴スペクトルで、異核化学シフト相関（ＨＭＱＣ、ｈｅｔｅｒｏｎｕｃｌｅａｒ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｑｕａｎｔｕｍ ｃｏｈｅｒｅｎｃｅ ｓｐｅｃｔｒｕｍ）の測定と、同核シフト相関（１Ｈ−１Ｈ ＴＯＣＯＳＹ、１Ｈ−１Ｈ ｔｏｔａｌ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ）の測定を行った。測定装置は、ＪＮＭ−ＥＣＡ６００型核磁気共鳴装置（ＪＥＯＬ ＪＮＭ−ＥＣＡ６００ＫＳ、日本電子データム株式会社、ＪＥＯＬ ＤＡＴＵＭ ＬＴＤ．）を用いた。その結果を図１０に示す。図中の数字はプロトン（１Ｈ）に対応する１３炭素（１３Ｃ）の帰属である。また、曲線の両側に矢印のついたものは１Ｈ−１Ｈ ＴＯＣＯＳＹの相関関係にあることを示す。
【０１１３】
単離・精製した式（Ｉ）で示すことのできる新規アントシアニン色素のプロトン核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ−Ｎｕｃｌｅａｒ ｍａｇｎｅｔｉｃ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ［ＮＭＲ］ｓｐｅｃｔｒｕｍ）を測定した。核磁気共鳴スペクトルでプロトン（１Ｈ）に対応する１３炭素（１３Ｃ）の遠距離相関（ＨＭＢＣ、ｈｅｔｅｒｏｎｕｃｌｅａｒ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｂｏｎｄ ｃｏｈｅｒｅｎｃｅ ｓｐｅｃｔｒｕｍ）の測定を行った。測定装置は、ＪＮＭ−ＥＣＡ６００型核磁気共鳴装置（ＪＥＯＬ ＪＮＭ−ＥＣＡ６００ＫＳ、日本電子データム株式会社、ＪＥＯＬ ＤＡＴＵＭ ＬＴＤ．）を用いた。その結果を図１１に示す。図１１中の数字は１３炭素（１３Ｃ）の帰属である。また、点曲線の両側に矢印のついたものは１Ｈ−１３Ｃ ＨＭＢＣの相関関係にあることを示す。これらの結果から、新規アントシアニン色素の化学構造が式（Ｉ）であることが分かる。
【０１１４】
【化１】
実施例１３
【０１１５】
単離・精製した式（ＩＩ）で示すことのできるアントシアニン色素のプロトン核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ−Ｎｕｃｌｅａｒ ｍａｇｎｅｔｉｃ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ［ＮＭＲ］ｓｐｅｃｔｒｕｍ）を測定した。測定装置は、ＪＮＭ−ＥＣＡ６００型核磁気共鳴装置（ＪＥＯＬ ＪＮＭ−ＥＣＡ６００ＫＳ、日本電子データム株式会社、ＪＥＯＬ ＤＡＴＵＭ ＬＴＤ．）を用いた。その結果は次の通りである。１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ＋ＣＦ３ＣＯＯＤ，９：１）δ：１．２８（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，ｒｈａ−６−ＣＨ３），３．１０−４．２０（ｓｕｇａｒ−Ｈ），３．９６（１Ｈ，ｍ，ｇｌｃ［ＩＩ］−Ｈ−６ｂ），４．１７（１Ｈ，ｂｒ ｄ，Ｊ＝１０．３Ｈｚ，３−Ｏ−ｇｌｃ−Ｈ−６ａ），４．２７（１Ｈ，ｍ，ｇｌｃ［Ｉ］−Ｈ−６ｂ），４．５８（１Ｈ，ｂｒ ｓ，ｇｌｃ［ＩＩ］−Ｈ−１），４．５９（１Ｈ，ｂｒ ｓ，ｇｌｃ［ＩＩＩ］−Ｈ−１），４．６２（１Ｈ，ｍ，ｇｌｃ［ＩＩ］−Ｈ−６ａ），４．７８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，ｇｌｃ［ＩＩ］−Ｈ−１），４．８６（１Ｈ，ｓ，ｒｈａ−Ｈ−１），５．３９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，３−Ｏ−ｇｌｃ−Ｈ−１），５．４４（１Ｈ，ｂｒ ｓ，ｇｌｃ［Ｉ］−Ｈ−１），６．４２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，ｐ−ＨＢＡ［ＩＩ］−Ｈ−３’，５’），６．６２（１Ｈ，ｓ，Ｈ−６），６．７９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，ｐ−ＨＢＡ［Ｉ］−Ｈ−３’，５’），７．０９（１Ｈ，ｓ，Ｈ−８），７．３４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，ｐ−ＨＢＡ［ＩＩ］−Ｈ−２’，６’），７．７５（２Ｈ，ｓ，Ｈ−２’，６’），７．８６（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，ｐ−ＨＢＡ［Ｉ］−Ｈ−２’，６’），８．５８（１Ｈ，ｓ，Ｈ−４）．
【０１１６】
単離・精製した式（ＩＩ）で示すことのできるアントシアニン色素の１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル（１３Ｃ−Ｎｕｃｌｅａｒ ｍａｇｎｅｔｉｃ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ［ＮＭＲ］ｓｐｅｃｔｒｕｍ）を測定した。測定装置は、ＪＮＭ−ＥＣＡ６００型核磁気共鳴装置（ＪＥＯＬ ＪＮＭ−ＥＣＡ６００ＫＳ、日本電子データム株式会社、ＪＥＯＬ ＤＡＴＵＭ ＬＴＤ．）を用いた。その結果は次の通りである。１３Ｃ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ＋ＣＦ３ＣＯＯＤ，９：１）δ：１８．０（ｒｈａ−Ｃ−６），６２．６，６２．７（ｇｌｃ［ＩＩＩ，ＩＶ］−Ｃ−６），６５．８（ｇｌｃ［ＩＩ］−Ｃ−６），６６．１（ｇｌｃ［Ｉ］−Ｃ−６），６７．９（３−Ｏ−ｇｌｃ−Ｃ−６），６９．８（ｒｈａ−Ｃ−５），７０．１，７０．７，７１．３，７１．６，７１．８，７２．６，７２．７，７３．７，７４．０，７４．３，７４．５，７４．７，７４．９，７５．５，７５．８，７７．６，７７．８（ｘ２），７７．９，７８．０，７８．１，８７．０（ｇｌｃ［ＩＩＩ］−Ｃ−３），８７．６（ｇｌｃ［Ｉ］−Ｃ−３），９４．６（Ｃ−８），１００．２（ｇｌｃ［Ｉ］−Ｃ−１），１００．６（ｇｌｃ［ＩＩ］−Ｃ−１），１０１．９（ｒｈａ−Ｃ−１，ｇｌｃ［ＩＶ］−Ｃ−１），１０３．３（３−Ｏ−ｇｌｃ−Ｃ−１），１０４．８（Ｃ−６），１０５．２（ｇｌｃ［ＩＩＩ］−Ｃ−１），１１３．７（Ｃ−１０，Ｃ−２’，６’），１１６．１（ｐ−ＨＢＡ［ＩＩ］−Ｃ−３’，５’），１１６．３（Ｃ−１’），１１７．２（ｐ−ＨＢＡ［Ｉ］−Ｃ−３’，５’），１２１．５（ｐ−ＨＢＡ［ＩＩ］−Ｃ−１’），１２４．８（ｐ−ＨＢＡ［Ｉ］−Ｃ−１’），１３２．２（ｐ−ＨＢＡ［ＩＩ］−Ｃ−２’，６’），１３２．３（ｐ−ＨＢＡ［Ｉ］−Ｃ−２’，６’），１３３．０（Ｃ−４），１４６．６（Ｃ−４’），１４７．１（Ｃ−３），１４７．７（Ｃ−３’，５’），１５６．１（Ｃ−９），１５８．０（Ｃ−５），１６２．２（ｐ−ＨＢＡ［ＩＩ］−Ｃ−４’），１６３．１（ｐ−ＨＢＡ［Ｉ］−Ｃ−４’），１６３．４（Ｃ−２），１６７．０（Ｃ−７），１６７．４（ｐ−ＨＢＡ［ＩＩ］−ＣＯＯ），１６７．５（ｐ−ＨＢＡ［Ｉ］−ＣＯＯ）．
【０１１７】
式（ＩＩ）で示すことのできるアントシアニン色素（１．２ｍｇ）の紫外部吸収スペクトル（Ｕｌｔｒａ Ｖｉｏｌｅｔ ｓｐｅｃｔｒｕｍ）を測定した。測定には、島津製作所株式会社の分光機器（ＵＶ−ｖｉｓｉｂｌｅ ｒｅｃｏｒｄｉｎｇ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ、ＵＶ−２１００）を用いた。その結果は次の通りである。測定溶媒はメタノールである。ＵＶ λ ＭｅＯＨ／ｍａｘ ｎｍ（ｌｏｇ ｅ）：５７７（２．７９）、６１４（２．７５）；＋０．０１％ＨＣｌ：５４６（４．６２）；＋ＡｌＣｌ３：５８３（４．７５）。
【０１１８】
高分解能質量分析計（ｐｏｓｉｔｉｖｅ−ｉｏｎ ＨＲ ＦＡＢ−ＭＳ）を用いて式（ＩＩ）で示すことのできるアントシアニン色素の質量を測定した。理論値は、Ｃ６５Ｈ７９Ｏ４０：１４９９．４１４８であり、測定値はｍ／ｚ：１４９９．４２８１［Ｍ］＋であり、理論値と測定値が良く一致した。
【０１１９】
これらの結果から、式（ＩＩ）で示すことのできるアントシアニン色素の化学構造は、非特許文献７に記載の、シアノデルフィンを部分加水分解して得られたビスデアシルシアノデルフィン（ｂｉｓｄｅａｃｙｌｃｙａｎｏｄｅｌｐｈｉｎ）と同一であることが分かる。この結果から、式（ＩＩ）で示すことのできるアントシアニン色素が誘導体または合成品としてではなく、天然色素としてデルフィニウム萼片に含まれていることが初めて分かる。
【０１２０】
【化２】
実施例１４
【０１２１】
単離・精製した式（ＩＩＩ）で示すことのできるモノデアシルカンパニン（ｍｏｎｏｄｅａｃｙｌｃａｍｐａｎｉｎ）のプロトン核磁気共鳴スペクトル（１Ｈ−Ｎｕｃｌｅａｒ ｍａｇｎｅｔｉｃ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ［ＮＭＲ］ｓｐｅｃｔｒｕｍ）を測定した。測定装置は、ＪＮＭ−ＥＣＡ６００型核磁気共鳴装置（ＪＥＯＬ ＪＮＭ−ＥＣＡ６００ＫＳ、日本電子データム株式会社、ＪＥＯＬ ＤＡＴＵＭＬＴＤ．）を用いた。その結果は次の通りである。１Ｈ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ＋ＣＦ３ＣＯＯＤ，９：１）δ：１．３２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，ｒｈａ−６−ＣＨ３），３．３０−４．００（ｓｕｇａｒ−Ｈ），４．０２（１Ｈ，ｂｒ ｓ，ｇｌｃ［ＩＩ］−Ｈ−１），４．２０（１Ｈ，ｂｒ ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，３−Ｏ−ｇｌｃ−Ｈ−６ａ），４．３１（１Ｈ，ｂｒ ｔ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，ｇｌｃ［Ｉ］−Ｈ−６ｂ），４．６１（１Ｈ，ｂｒ ｄ，Ｊ＝９．６Ｈｚ，ｇｌｃ［ＩＩ］−Ｈ−６ａ），４．９１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，ｇｌｃ［ＩＩＩ］−Ｈ−１），４．９５（１Ｈ，ｓ，ｒｈａ−Ｈ−１），４．９９（１Ｈ，ｂｒ ｄ，Ｊ＝１０．３Ｈｚ，ｇｌｃ［Ｉ］−Ｈ−６ａ），５．３２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，３−Ｏ−ｇｌｃ−Ｈ−１），５．３９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，ｇｌｃ［Ｉ］−Ｈ−１），６．５７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，ｐ−ＨＢＡ［ＩＩ］−Ｈ−３’，５’），６．６７（１Ｈ，ｓ，Ｈ−６），６．８７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，ｐ−ＨＢＡ［Ｉ］−Ｈ−３’，５’），７．１９（１Ｈ，ｓ，Ｈ−８），７．３５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，ｐ−ＨＢＡ［ＩＩ］−Ｈ−２’，６’），７．８８（２Ｈ，ｓ，Ｈ−２’，６’），８．００（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，ｐ−ＨＢＡ［Ｉ］−Ｈ−２’，６’），８．４８（１Ｈ，ｓ，Ｈ−４）．
【０１２２】
単離・精製した式（ＩＩＩ）で示すことのできるモノデアシルカンパニン（ｍｏｎｏｄｅａｃｙｌｃａｍｐａｎｉｎ）の１３Ｃ−核磁気共鳴スペクトル（１３Ｃ−Ｎｕｃｌｅａｒ ｍａｇｎｅｔｉｃ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ［ＮＭＲ］ｓｐｅｃｔｒｕｍ）を測定した。測定装置は、ＪＮＭ−ＥＣＡ６００型核磁気共鳴装置（ＪＥＯＬ ＪＮＭ−ＥＣＡ６００ＫＳ、日本電子データム株式会社、ＪＥＯＬ ＤＡＴＵＭ ＬＴＤ．）を用いた。その結果は次の通りである。１３Ｃ−ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ＋ＣＦ３ＣＯＯＤ，９：１）δ：１８．１（ｒｈａ−Ｃ−６），６２．３（ｇｌｃ［ＩＩＩ］−Ｃ−６），６６．５（ｇｌｃ［Ｉ］−Ｃ−６），６６．６（ｇｌｃ［ＩＩ］−Ｃ−６），６７．８（３−Ｏ−ｇｌｃ−Ｃ−６），６９．８，７１．３，７１．５，７１．８，７２．４，７２．８（ｘ２），７４．０，７４．２，７４．４，７４．５，７４．７，７４．８，７６．０，７７．６，７７．９，７８．０，７８．１，７８．２，７８．３，９４．２（Ｃ−８），１００．０（ｇｌｃ［ＩＩＩ］−Ｃ−１），１０１．０（ｇｌｃ［Ｉ，ＩＩ］−Ｃ−１），１０１．８（ｒｈａ−Ｃ−１），１０３．８（３−Ｏ−ｇｌｃ−Ｃ−１），１０５．６（Ｃ−６），１１３．８（Ｃ−１０，Ｃ−２’，６’），１１６．３（ｐ−ＨＢＡ［ＩＩ］−Ｃ−３’，５’），１１７．４（ｐ−ＨＢＡ［Ｉ］−Ｃ−３’，５’），１１９．４（Ｃ−１’），１２４．０（ｐ−ＨＢＡ［ＩＩ］−Ｃ−１’），１２５．２（ｐ−ＨＢＡ［Ｉ］−Ｃ−１’），１３１．８（ｐ−ＨＢＡ［ＩＩ］−Ｃ−２’，６’），１３２．２（ｐ−ＨＢＡ［Ｉ］−Ｃ−２’，６’），１３４．０（Ｃ−４），１４７．０（Ｃ−４’），１４７．３（Ｃ−３），１４７．９（Ｃ−３’，５’），１５６．３（Ｃ−９），１５７．８（Ｃ−５），１６２．０（ｐ−ＨＢＡ［ＩＩ］−Ｃ−４’），１６２．５（ｐ−ＨＢＡ［Ｉ］−Ｃ−４’），１６３．４（Ｃ−２），１６７．０（ｐ−ＨＢＡ［ＩＩ］−ＣＯＯ），１６７．１（Ｃ−７），１６７．６（ｐ−ＨＢＡ［Ｉ］−ＣＯＯ）．
【０１２３】
既知アントシアニン色素（２．２ｍｇ）であるモノデアシルカンパニン（ｍｏｎｏｄｅａｃｙｌｃａｍｐａｎｉｎ）の紫外部吸収スペクトル（Ｕｌｔｒａ Ｖｉｏｌｅｔ ｓｐｅｃｔｒｕｍ）を測定した。測定には、島津製作所株式会社の分光機器（ＵＶ−ｖｉｓｉｂｌｅ ｒｅｃｏｒｄｉｎｇ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ、ＵＶ−２１００）を用いた。その結果は次の通りである。測定溶媒はメタノールである。ＵＶ λ ＭｅＯＨ／ｍａｘ ｎｍ（ｌｏｇ ｅ）：５２６（２．８６）、５７１（２．９９）、６２０（２．８８）；＋０．０１％ＨＣｌ：５４９（４．４９）；＋ＡｌＣｌ３：５８４（４．５４）。
【０１２４】
高分解能質量分析計（ｐｏｓｉｔｉｖｅ−ｉｏｎ ＨＲ ＦＡＢ−ＭＳ）を用いて既知アントシアニン色素であるモノデアシルカンパニン（ｍｏｎｏｄｅａｃｙｌｃａｍｐａｎｉｎ）の質量を測定した。理論値は、Ｃ５９Ｈ６９Ｏ３５：１３３７．３６２０であり、測定値はｍ／ｚ：１３３７．３７３２［Ｍ］＋であり、理論値と測定値が良く一致した。
【０１２５】
これらの結果から、デルフィニウム萼片より単離されたアントシアニン色素（ＩＩＩ）の化学構造は、文献（Ｂｒａｎｄｔ、Ｋ．、Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍ．３３：２０９−２１２、１９９３）に記載の、既知アントシアニン色素であるモノデアシルカンパニン（ｍｏｎｏｄｅａｃｙｌｃａｍｐａｎｉｎ）と同一であることが分かる。この結果から、式（ＩＩＩ）で示すことのできるモノデアシルカンパニンがデルフィニウム萼片に含まれていることが初めて分かる。
【０１２６】
【化３】
実施例１５
【０１２７】
前記した自殖系種子をシャーレ内で播種、育苗し、生育させた淡紫色花パシフィックジャイアントの萼片アントシアニンを調べた。その結果を表９に示す。新規アントシアニン色素（Ｉ）を含み、かつアントシアニン色素（ＩＩ）を主要色素とすることが分かる。これまで紫色花のデルフィニウムはヴィオルデルフィン（ｖｉｏｌｄｅｌｐｈｉｎ）を優性色素とすると言われていたが、この結果から、ヴィオルデルフィン（ｖｉｏｌｄｅｌｐｈｉｎ）よりも萼片中含量の多いアントシアニン色素（ＩＩ）を含む個体があることが分かる。表９中（ＩＩＩ）で示すアントシアニン色素は、モノデアシルカンパニン（ｍｏｎｏｄｅａｃｙｌｃａｍｐａｎｉｎ）の濃度を示す。表９中の内生色素として、１はビスデアシルプラティコニン（ｂｉｓｄｅａｃｙｌｐｌａｔｙｃｏｎｉｎ）、２はチューリパニン（ｔｕｌｉｐａｎｉｎ）、３はヴィオルデルフィン（ｖｉｏｌｄｅｌｐｈｉｎ）、４はシアノデルフィン（ｃｙａｎｏｄｅｌｐｈｉｎ）を示す。
【０１２８】
【表９】
実施例１６
【０１２９】
青色花パシフィックジャイアントと淡紫色花パシフィックジャイアントを他殖交配し、前記したシャーレ内で播種、育苗し、生育させた交雑パシフィックジャイアントの紫色花および淡紫色花の萼片アントシアニンを文献記載の方法で調べた（非特許文献１１および１２）。その結果を表１０に示す。新規アントシアニン色素（Ｉ）を含み、かつアントシアニン色素（ＩＩ）を主要色素として含む紫色花パシフィックジャイアントおよび淡紫色花パシフィックジャイアントが、交配によって得られることが分かる。また、市販種子の紫色花パシフィックジャイアントと花色、萼片アントシアニンを調べた。その結果、市販種子の紫色花に比べて、他殖交配によって得ることのできる紫色花パシフィックジャイアント（８個体）は、比較して明るい花色を有し、やや青みを帯びることを特徴とすることが分かる（表１０）。表１０中（ＩＩＩ）で示すアントシアニン色素は、モノデアシルカンパニン（ｍｏｎｏｄｅａｃｙｌｃａｍｐａｎｉｎ）の濃度を示す。モノデアシルカンパニンの保持時間は１９．１分であった。表１０中の内生色素として、１はビスデアシルプラティコニン（ｂｉｓｄｅａｃｙｌｐｌａｔｙｃｏｎｉｎ）、２はチューリパニン（ｔｕｌｉｐａｎｉｎ）、３はヴィオルデルフィン（ｖｉｏｌｄｅｌｐｈｉｎ）、４はシアノデルフィン（ｃｙａｎｏｄｅｌｐｈｉｎ）を示す。表中の数値は、個体数の平均値の値を示す。
【０１３０】
【表１０】
実施例１７
【０１３１】
青色花パシフィックジャイアントと白色花パシフィックジャイアントを他殖交配し、前記したシャーレ内で播種、育苗し、生育させた交雑パシフィックジャイアントの紫色花の萼片アントシアニンを文献記載の方法で調べた（非特許文献１１および１２）。その結果を表１１に示す。アントシアニン色素（ＩＩ）を主要色素として含む紫色花パシフィックジャイアントを得ることができることを見出した。表１１中（ＩＩＩ）で示すアントシアニン色素は、モノデアシルカンパニン（ｍｏｎｏｄｅａｃｙｌｃａｍｐａｎｉｎ）の濃度を示す。表１１中の内生色素として、１はビスデアシルプラティコニン（ｂｉｓｄｅａｃｙｌｐｌａｔｙｃｏｎｉｎ）、２はチューリパニン（ｔｕｌｉｐａｎｉｎ）、３はヴィオルデルフィン（ｖｉｏｌｄｅｌｐｈｉｎ）、４はシアノデルフィン（ｃｙａｎｏｄｅｌｐｈｉｎ）を示す。
【０１３２】
【表１１】
実施例１８
【０１３３】
淡青色花パシフィックジャイアントと白色花パシフィックジャイアントを他殖交配し、前記したシャーレ内で播種、育苗し、生育させた交雑パシフィックジャイアントの紫色花の萼片アントシアニンを文献記載の方法で調べた（非特許文献１１および１２）。その結果を表１２に示す。新規アントシアニン色素（Ｉ）を含み、かつアントシアニン色素（ＩＩ）を主要色素として含む紫色花パシフィックジャイアントが他殖交配によって得られることが分かる。表１２中（ＩＩＩ）で示すアントシアニン色素は、モノデアシルカンパニン（ｍｏｎｏｄｅａｃｙｌｃａｍｐａｎｉｎ）の濃度を示す。表１２中の内生色素として、１はビスデアシルプラティコニン（ｂｉｓｄｅａｃｙｌｐｌａｔｙｃｏｎｉｎ）、２はチューリパニン（ｔｕｌｉｐａｎｉｎ）、３はヴィオルデルフィン（ｖｉｏｌｄｅｌｐｈｉｎ）、４はシアノデルフィン（ｃｙａｎｏｄｅｌｐｈｉｎ）を示す。
【０１３４】
【表１２】
実施例１９
【０１３５】
淡青色花ブルースプリングスと淡紫色花ブルースプリングスを他殖交配し、前記したシャーレ内で播種、育苗し、生育させた交雑二色系パシフィックジャイアント（ビカラー・ライトブルー、Ｂ淡青）の萼片アントシアニンを文献記載の方法で調べた（非特許文献１１および１２）。その結果を表１３に示す。外側の萼片が新規アントシアニン色素（Ｉ）を含み、かつアントシアニン色素（ＩＩ）を主要色素として含むブルースプリングスの二色花（ビカラー・ライトブルー、Ｂ淡青）を得られることが分かる。表１３中（ＩＩＩ）で示すアントシアニン色素は、モノデアシルカンパニン（ｍｏｎｏｄｅａｃｙｌｃａｍｐａｎｉｎ）の濃度を示す。表１３中の内生色素として、１はビスデアシルプラティコニン（ｂｉｓｄｅａｃｙｌｐｌａｔｙｃｏｎｉｎ）、２はチューリパニン（ｔｕｌｉｐａｎｉｎ）、３はヴィオルデルフィン（ｖｉｏｌｄｅｌｐｈｉｎ）、４はシアノデルフィン（ｃｙａｎｏｄｅｌｐｈｉｎ）を示す。
【０１３６】
【表１３】
実施例２０
【０１３７】
淡青色花ブルースプリングスと白色花ブルースプリングスを他殖交配し、前記したシャーレ内で播種、育苗し、生育させた交雑二色系パシフィックジャイアント（ビカラー・ブルー、Ｂ青）の萼片アントシアニンを文献記載の方法で調べた（非特許文献１１および１２）。その結果を表１４に示す。内側の萼片が新規アントシアニン色素（Ｉ）を含み、かつアントシアニン色素（ＩＩ）を主要色素として含む青色花ブルースプリングスの二色花（ビカラー・ブルー、Ｂ青）を得られることが分かる。表１４中（ＩＩＩ）で示すアントシアニン色素は、モノデアシルカンパニン（ｍｏｎｏｄｅａｃｙｌｃａｍｐａｎｉｎ）の濃度を示す。表１４中の内生色素として、１はビスデアシルプラティコニン（ｂｉｓｄｅａｃｙｌｐｌａｔｙｃｏｎｉｎ）、２はチューリパニン（ｔｕｌｉｐａｎｉｎ）、３はヴィオルデルフィン（ｖｉｏｌｄｅｌｐｈｉｎ）、４はシアノデルフィン（ｃｙａｎｏｄｅｌｐｈｉｎ）を示す。
【０１３８】
【表１４】
実施例２１
【０１３９】
淡紫色花パシフィックジャイアントと赤桃色花ブルースプリングスを他殖交配し、前記したシャーレ内で播種、育苗し、生育させた交雑品種の萼片アントシアニンを文献記載の方法で調べた（非特許文献１１および１２）。その結果を表１５に示す。新規アントシアニン色素（Ｉ）を含み、かつアントシアニン色素（ＩＩ）を主要色素として含む紫色花デルフィニウムの雑種品種を得られることが分かる。表１５中（ＩＩＩ）で示すアントシアニン色素は、モノデアシルカンパニン（ｍｏｎｏｄｅａｃｙｌｃａｍｐａｎｉｎ）の濃度を示す。表１５中の内生色素として、１はビスデアシルプラティコニン（ｂｉｓｄｅａｃｙｌｐｌａｔｙｃｏｎｉｎ）、２はチューリパニン（ｔｕｌｉｐａｎｉｎ）、３はヴィオルデルフィン（ｖｉｏｌｄｅｌｐｈｉｎ）、４はシアノデルフィン（ｃｙａｎｏｄｅｌｐｈｉｎ）を示す。
【０１４０】
【表１５】
実施例２２
【０１４１】
白色花パシフィックジャイアントと青色花ブルースプリングスを他殖交配し、前記したシャーレ内で播種、育苗し、生育させた交雑品種の萼片アントシアニンを文献記載の方法で調べた（非特許文献１１および１２）。その結果を表１６に示す。新規アントシアニン色素（Ｉ）を含み、かつアントシアニン色素（ＩＩ）を主要色素として含む淡紫色花デルフィニウムの雑種品種を得られることが分かる。表１６中（ＩＩＩ）で示すアントシアニン色素は、モノデアシルカンパニン（ｍｏｎｏｄｅａｃｙｌｃａｍｐａｎｉｎ）の濃度を示す。表１６中の内生色素として、１はビスデアシルプラティコニン（ｂｉｓｄｅａｃｙｌｐｌａｔｙｃｏｎｉｎ）、２はチューリパニン（ｔｕｌｉｐａｎｉｎ）、３はヴィオルデルフィン（ｖｉｏｌｄｅｌｐｈｉｎ）、４はシアノデルフィン（ｃｙａｎｏｄｅｌｐｈｉｎ）を示す。
【表１６】
【０１４２】
これらの実施例から、本発明のデルフィニウムの花色交配法が優れた、特定の花色を後代に遺伝させるデルフィニウム、二色系のデルフィニウム、新規アントシアニンで花色を発現するデルフィニウム、を作出する方法であることは明らかである。
【産業上の利用可能性】
【０１４３】
デルフィニウムは他殖性であり、自殖を繰り返すと自殖弱性を起こすことから自殖による種子の繁殖が困難であったが、デルフィニウムで他殖交配を行った場合にも、特定の花色を後代に遺伝させることができるようになった。
二色系デルフィニウムはメリクロン苗によってのみ継代と増殖が可能で、種子繁殖することはできなかったが、他殖交配により自由に二色系デルフィニウムの種子繁殖苗を得る事ができるようになり、たくさんの二色系デルフィニウムを市場に提供できるようになった。
【０１４４】
デルフィニウムは冷涼地または高冷地でよく生育し、暖地では高温のため栽培効率が悪く、暖地では促成栽培を行わなければ、デルフィニウムを効率よく栽培することができなかったが、他殖交配したデルフィニウムを約１５℃の温度下シャーレ内で発芽させる条件で育苗すると、暖地で効率よく（季節咲き）栽培することができるようになった。
デルフィニウムの萼片の花色と萼片中の内性色素との関係が不明であったが、萼片中の主要な内性色素の比率からデルフィニウムの花色を決定することができるようになった。
【０１４５】
本発明により、全色系デルフィニウムを他殖交配し特定の花色をもつ種子を得ることのできる方法を提供する。同時に、他殖交配により二色系の花色をもつデルフィニウムの種子を得ることのできる交配方法を提供する。また、前記デルフィニウムを暖地で効率よく季節咲きさせる栽培方法を提供する。
本発明により、種子繁殖による二色系の花色をもつデルフィニウムを提供できる。
本発明によりデルフィニウムより新規のアントシアニジン色素を提供することができる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
全色系花色をもつデルフィニウムを花粉親または種子親として他殖交配し、特定の花色を後代に遺伝させるデルフィニウムの花色交配法。
【請求項２】
前記特定の花色が、二色系の花色である請求項１に記載のデルフィニウムの花色交配法。
【請求項３】
請求項１または請求項２に記載のデルフィニウムの花色交配法により作出したデルフィニウムを１５℃±１℃の温度下シャーレ内で発芽させる条件で育苗することを特徴とするデルフィニウムを栽培する方法。
【請求項４】
横軸を萼片中の内性色素の含量比［ＣＶ／ＶＤ］とし、縦軸に花色を示す色相角度として得た数式１
【数１】
（式中、ＣＤ／ＶＤはデルフィニウム萼片の主要内生色素の比率を示し、ＣＤはシアノデルフィン、ＶＤはヴィオルデルフィンであり、Ｈｍａｘは花色である最大色相角を示し、ＫＨは最大色相角の２分の１になる場合の内生色素の比率を定数として示す）
を適用し、デルフィニウムの花色を決定する方法。
【請求項５】
前記数式１において、［ＣＤ／ＶＤ］を［ＶＤ／ＴＰ］
（式中、［ＶＤ／ＴＰ］は、紫色花および淡紫色花の主要な内生色素の濃度比であって、ヴィオルデルフィン濃度ＶＤ÷チューリパニン濃度ＴＰで求めることができる値である。）で示される数式を適用することを特徴とする請求項４に記載のデルフィニウムの花色を決定する方法。
【請求項６】
デルフィニウムの花色を作出する花色交配の組み合わせを決定するものであって、花粉親または種子親の配偶子を行または列とする組合せ早見表を用いて、花色を想定することを特徴とする請求項１または請求項２のいずれかに記載のデルフィニウムの花色交配法。
【請求項７】
前記デルフィニウムの花色を予め検出したアントシアニン色素に基づいて決定することを特徴とする請求項１または請求項２に記載のデルフィニウムの花色交配法。
【請求項８】
検出したアントシアニン色素が下記式（Ｉ）：
【化１】
で示される新規のアントシアニン色素、３−Ｏ−（６−Ｏ−（α−Ｌ−ｒｈａｍｎｏｓｙｌ）−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−７−Ｏ−（３−Ｏ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ−６−Ｏ−（４−Ｏ−（６−Ｏ−ｐ−ｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚｏｙｌ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−ｐ−ｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚｏｙｌ）−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−ｄｅｌｐｈｉｎｉｄｉｎである請求項７に記載のデルフィニウムの花色交配法。
【請求項９】
検出したアントシアニン色素が下記の式（ＩＩ）：
【化２】
で示される３−Ｏ−（６−Ｏ−（α−Ｌ−ｒｈａｍｎｏｓｙｌ）−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−７−Ｏ−（３−Ｏ−（３−Ｏ−（β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−６−Ｏ−（４−Ｏ−（６−Ｏ−ｐ−ｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚｏｙｌ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−ｐ−ｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚｏｙｌ）−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−ｄｅｌｐｈｉｎｉｄｉｎ（ＩＩ）である請求項７に記載のデルフィニウムの花色交配法。
【請求項１０】
請求項８または請求項９に記載のデルフィニウムの花色交配法により得られたデルフィニウムの萼片からアントシアニン色素（Ｉ）、アントシアニン色素（ＩＩ）または両者をデルフィニウム萼片より単離し、精製することを特徴とするアントシアニン色素の抽出方法。
【請求項１１】
式（Ｉ）：
【化１】
で示される新規化合物３−Ｏ−（６−Ｏ−（α−Ｌ−ｒｈａｍｎｏｓｙｌ）−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−７−Ｏ−（３−Ｏ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ−６−Ｏ−（４−Ｏ−（６−Ｏ−ｐ−ｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚｏｙｌ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−ｐ−ｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚｏｙｌ）−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−ｄｅｌｐｈｉｎｉｄｉｎ。
【請求項１】
全色系花色をもつデルフィニウムを花粉親または種子親として他殖交配し、特定の花色を後代に遺伝させるデルフィニウムの花色交配法。
【請求項２】
前記特定の花色が、二色系の花色である請求項１に記載のデルフィニウムの花色交配法。
【請求項３】
請求項１または請求項２に記載のデルフィニウムの花色交配法により作出したデルフィニウムを１５℃±１℃の温度下シャーレ内で発芽させる条件で育苗することを特徴とするデルフィニウムを栽培する方法。
【請求項４】
横軸を萼片中の内性色素の含量比［ＣＶ／ＶＤ］とし、縦軸に花色を示す色相角度として得た数式１
【数１】
（式中、ＣＤ／ＶＤはデルフィニウム萼片の主要内生色素の比率を示し、ＣＤはシアノデルフィン、ＶＤはヴィオルデルフィンであり、Ｈｍａｘは花色である最大色相角を示し、ＫＨは最大色相角の２分の１になる場合の内生色素の比率を定数として示す）
を適用し、デルフィニウムの花色を決定する方法。
【請求項５】
前記数式１において、［ＣＤ／ＶＤ］を［ＶＤ／ＴＰ］
（式中、［ＶＤ／ＴＰ］は、紫色花および淡紫色花の主要な内生色素の濃度比であって、ヴィオルデルフィン濃度ＶＤ÷チューリパニン濃度ＴＰで求めることができる値である。）で示される数式を適用することを特徴とする請求項４に記載のデルフィニウムの花色を決定する方法。
【請求項６】
デルフィニウムの花色を作出する花色交配の組み合わせを決定するものであって、花粉親または種子親の配偶子を行または列とする組合せ早見表を用いて、花色を想定することを特徴とする請求項１または請求項２のいずれかに記載のデルフィニウムの花色交配法。
【請求項７】
前記デルフィニウムの花色を予め検出したアントシアニン色素に基づいて決定することを特徴とする請求項１または請求項２に記載のデルフィニウムの花色交配法。
【請求項８】
検出したアントシアニン色素が下記式（Ｉ）：
【化１】
で示される新規のアントシアニン色素、３−Ｏ−（６−Ｏ−（α−Ｌ−ｒｈａｍｎｏｓｙｌ）−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−７−Ｏ−（３−Ｏ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ−６−Ｏ−（４−Ｏ−（６−Ｏ−ｐ−ｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚｏｙｌ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−ｐ−ｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚｏｙｌ）−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−ｄｅｌｐｈｉｎｉｄｉｎである請求項７に記載のデルフィニウムの花色交配法。
【請求項９】
検出したアントシアニン色素が下記の式（ＩＩ）：
【化２】
で示される３−Ｏ−（６−Ｏ−（α−Ｌ−ｒｈａｍｎｏｓｙｌ）−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−７−Ｏ−（３−Ｏ−（３−Ｏ−（β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−６−Ｏ−（４−Ｏ−（６−Ｏ−ｐ−ｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚｏｙｌ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−ｐ−ｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚｏｙｌ）−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−ｄｅｌｐｈｉｎｉｄｉｎ（ＩＩ）である請求項７に記載のデルフィニウムの花色交配法。
【請求項１０】
請求項８または請求項９に記載のデルフィニウムの花色交配法により得られたデルフィニウムの萼片からアントシアニン色素（Ｉ）、アントシアニン色素（ＩＩ）または両者をデルフィニウム萼片より単離し、精製することを特徴とするアントシアニン色素の抽出方法。
【請求項１１】
式（Ｉ）：
【化１】
で示される新規化合物３−Ｏ−（６−Ｏ−（α−Ｌ−ｒｈａｍｎｏｓｙｌ）−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−７−Ｏ−（３−Ｏ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ−６−Ｏ−（４−Ｏ−（６−Ｏ−ｐ−ｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚｏｙｌ−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−ｐ−ｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚｏｙｌ）−β−Ｄ−ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｙｌ）−ｄｅｌｐｈｉｎｉｄｉｎ。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０２７６２２
【国際公開日】平成１７年３月３１日（２００５．３．３１）
【発行日】平成１９年１１月１５日（２００７．１１．１５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００５−５１４００８（Ｐ２００５−５１４００８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＪＰ２００４／０１１９７９
【国際出願日】平成１６年８月２０日（２００４．８．２０）
【出願人】（３０２０６８２１０）
【出願人】（３０２０６８２０９）
【Ｆターム（参考）】
【国際公開日】平成１７年３月３１日（２００５．３．３１）
【発行日】平成１９年１１月１５日（２００７．１１．１５）
【国際特許分類】
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＪＰ２００４／０１１９７９
【国際出願日】平成１６年８月２０日（２００４．８．２０）
【出願人】（３０２０６８２１０）
【出願人】（３０２０６８２０９）
【Ｆターム（参考）】
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