ポリフェノール組成物
【課題】エグ味が低減されたカメリアシネンシス由来のポリフェノール組成物を提供すること。
【解決手段】カメリアシネンシス由来のフラボノールアグリコン及びフラボノール配糖体を含有するポリフェノール組成物であって、
次の（Ａ）及び（Ｂ）：
（Ａ）高速液体クロマトグラフィーにより測定される、加水分解後の当該ポリフェノール組成物の固形分中のフラボノールアグリコン総量。
（Ｂ）酒石酸鉄法により測定される、当該ポリフェノール組成物の固形分中に含有されるポリフェノール総量。
の質量比［（Ｂ）／（Ａ）］が０．０１〜１８であることを特徴とする、ポリフェノール組成物。
【解決手段】カメリアシネンシス由来のフラボノールアグリコン及びフラボノール配糖体を含有するポリフェノール組成物であって、
次の（Ａ）及び（Ｂ）：
（Ａ）高速液体クロマトグラフィーにより測定される、加水分解後の当該ポリフェノール組成物の固形分中のフラボノールアグリコン総量。
（Ｂ）酒石酸鉄法により測定される、当該ポリフェノール組成物の固形分中に含有されるポリフェノール総量。
の質量比［（Ｂ）／（Ａ）］が０．０１〜１８であることを特徴とする、ポリフェノール組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、カメリアシネンシスから得られるポリフェノール組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、消費者の嗜好の多様化、健康志向の高揚により、多種多様の健康食品が上市され需要が拡大している。例えば、ポリフェノールは、抗酸化力を有することが知られており、抗動脈硬化、抗アレルギー、血流増強等の効果が期待されるため、健康食品の重要な成分として認識されている。
【０００３】
このようなポリフェノールは、例えば、烏龍茶の水性抽出液を活性炭又は吸着樹脂と接触させ非重合体カテキン類を除去してポリフェノール画分として得ることができる（特許文献１）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】国際公開第２００５／０７７３８４号パンフレット
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、ポリフェノールは本来エグ味が強いため、飲食品中に多量に含まれる場合には、その嗜好性が大きく損なわれてしまうことが多い。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、カメリアシネンシス由来のポリフェノール組成物について種々検討したところ、ポリフェノール組成物中のフラボノールアグリコン及びフラボノール配糖体の含有比率が特定範囲内にあると、ポリフェノール特有のエグ味が顕著に低減されることを見出した。
【０００７】
すなわち、本発明は、カメリアシネンシス由来のフラボノールアグリコン及びフラボノール配糖体を含有するポリフェノール組成物であって、
次の（Ａ）及び（Ｂ）；
（Ａ）高速液体クロマトグラフィーにより測定される、加水分解後の当該ポリフェノール組成物の固形分中に含有されるフラボノールアグリコン総量。
（Ｂ）酒石酸鉄法により測定される、当該ポリフェノール組成物の固形分中に含有されるポリフェノール総量。
の質量比［（Ｂ）／（Ａ）］が０．０１〜１８である、
ポリフェノール組成物を提供するものである。
【０００８】
本発明はまた、上記ポリフェノール組成物を含有する飲食品を提供するものである。
【０００９】
本発明は更に、上記ポリフェノール組成物の製造方法であって、
カメリアシネンシス抽出物を合成吸着剤に吸着させる工程と、
上記合成吸着剤に第１の有機溶媒水溶液を接触させて、第１の画分を溶出させる工程と、
上記第１の画分を溶出した後の合成吸着剤に、上記第１の有機溶媒水溶液よりも疎水性の高い第２の有機溶媒水溶液を接触させて、ポリフェノール組成物を含む第２の画分を溶出させる工程
を含む、製造方法を提供するものである。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、高濃度のポリフェノールを含有するにも拘らず、ポリフェノール特有のエグ味が顕著に低減されたカメリアシネンシス由来ポリフェノール組成物が提供される。このポリフェノール組成物は、非重合体カテキン類やフラボノール類単独では味わえない嗜好性の高い苦味を有しているが、甘味料や調味料で苦味を緩和しても後味に違和感を生じないことから、健康食品等として常食に適するものである。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図１は、試験例１における食後の血糖値の推移を示す図である。
【図２】図２は、試験例２におけるα−アミラーゼ活性阻害作用を示す図である。
【図３】図３は、試験例３におけるリパーゼ活性阻害作用を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
先ず、本明細書で使用する用語について説明する。
本明細書において「ポリフェノール」とは、酒石酸鉄法により測定されるものをいい、具体的には、フラボノール類、フラバン−３−オール類、プロアントシアニジン類及びそれらの重合体が例示される。フラボノール類には、ケルセチン、ミリセチン、ケンフェロール等やそれらの配糖体が包含され、またフラバン−３−オール類にはカテキン類が包含され、更にその重合体にはテアフラビン類、ウーロンホモビスフラバン類等が包含される。
「カメリアシネンシス（Camellia sinensis）」とは、ツバキ科ツバキ属のチャノキのことであるが、加工方法により、不発酵茶、半発酵茶、発酵茶に大別することができる。
中でも、不発酵茶が好ましい。不発酵茶としては、Camellia属、例えば、C.var.sinensis（やぶきた種を含む）、C.var.assamica及びそれらの雑種から選択される茶から製茶された、茎茶、棒茶、芽茶、煎茶、番茶、碾茶、釜入り茶等の緑茶が例示される。半発酵茶としては、総称して烏龍茶と呼ばれる鉄観音、色種、黄金桂、武夷岩茶等が例示される。発酵茶としては、紅茶と呼ばれるダージリン、ウバ、キーマン等が例示される。ここで、本明細書において「不発酵茶、半発酵茶、発酵茶、緑茶、烏龍茶、紅茶」とは、飲用に供される茶抽出物ではなく、該茶抽出物を得るための茶原料をいう。
本明細書において「フラボノールアグリコン」とは、ミリセチン、ケルセチン及びケンフェロールからなる混合物の総称である。また本明細書において「フラボノール配糖体」とは、ミリセチン、ケルセチン及びケンフェロールをアグリコン骨格として有する配糖体をいい、これら配糖体に更に糖が結合したものも包含される。本明細書における「フラボノールアグリコン総量」は、これらフラボノールアグリコン及びフラボノール配糖体を含むポリフェノール組成物を加水分解し、加水分解後の溶液中に含有されるミリセチン、ケルセチン及びケンフェロールの合計量に基づいて定義される。
【００１３】
次に、本発明のポリフェノール組成物について説明する。
本発明のポリフェノール組成物は、次の（Ａ）及び（Ｂ）を特定の比率で含有することを特徴とするものである。
ここで、（Ａ）は、高速液体クロマトグラフィーにより測定される、加水分解後の当該ポリフェノール組成物の固形分中に含有されるフラボノールアグリコン総量（以下、「（Ａ）フラボノールアグリコン総量」という）であるが、（Ａ）フラボノールアグリコン総量は０．７〜５０質量％であることが好ましく、風味や水への溶解性の観点から、１．５〜４５質量％、更に５〜４０質量％、更に７〜３５質量％、特に９〜２５質量％であることが好ましい。
また、（Ｂ）は、酒石酸鉄法により測定される、当該ポリフェノール組成物の固形分中に含有されるポリフェノール総量（以下、「（Ｂ）ポリフェノール総量」という）であるが、（Ｂ）ポリフェノールの総量は５〜９５質量％であることが好ましく、風味や水への溶解性の観点から、１０〜９０質量％、更に１５〜８０質量％、更に２０〜７０質量％、特に２５〜４０質量％であることが好ましい。ここで、本明細書において「固形分」とは、ポリフェノール組成物を１０５℃の電気恒温乾燥機で３時間乾燥して水などの揮発物質を除いた残分をいう。
そして、上記（Ａ）及び（Ｂ）の質量比［（Ｂ）／（Ａ）］は０．０１〜１８であるが、エグ味低減の観点から、０．０１〜１６、更に０．１〜１１、更に０．３〜９、更に０．５〜７、特に１〜５であることが好ましい。
なお、「（Ａ）フラボノールアグリコン総量」及び「（Ｂ）ポリフェノール総量」は、後掲の実施例に記載の方法により定量されたものである。
【００１４】
また、本発明のポリフェノール組成物はルチンを含有することができるが、本発明のポリフェノール組成物は、エグ味低減の観点から、カメリアシネンシスから抽出して得られる従来の抽出物（例えば、緑茶抽出物、紅茶抽出物及び烏龍茶抽出物）に比べてルチン含有量が高いことが好ましい。具体的には、（Ｃ）当該ポリフェノール組成物の固形分中のルチンの含有量は０．４〜３０質量％であることが好ましく、より一層のエグ味低減の観点から、０．８〜２５質量％、更に２〜２０質量％、更に４〜１５質量％、特に６〜１５質量％であることが好ましい。ここで、「ルチン」とは、フラボノール配糖体の一種であり、ケルセチンの３位の酸素原子にβ−ルチノース（６−Ｏ−α−Ｌ−ラムノシル−Ｄ−β−グルコース）が結合したものである。
【００１５】
上記質量比［（Ｂ）／（Ａ）］及び（Ｃ）ルチン含有量が上記範囲内にあるポリフェノール組成物は、例えば、下記の工程（１）〜（３）によりカメリアシネンシス抽出物を分画して得ることができる。
（１）カメリアシネンシス抽出物を合成吸着剤に吸着させる工程、
（２）上記合成吸着剤に第１の有機溶媒水溶液を接触させて、第１の画分を溶出させる工程、
（３）上記第１の画分を溶出した後の合成吸着剤に、上記第１の有機溶媒水溶液よりも疎水性の高い第２の有機溶媒水溶液を接触させて、ポリフェノール組成物を含む第２の画分を溶出させる工程。
【００１６】
工程（１）で使用するカメリアシネンシス抽出物としては、例えば、カメリアシネンシスから熱水又は水溶性有機溶媒により抽出した抽出物が例示される。カメリアシネンシス抽出物は、そのまま使用しても、乾燥又は濃縮して使用してもよい。茶抽出物の形態としては、例えば、液体、スラリー、半固体、固体が例示される。抽出方法としては、攪拌抽出、カラム抽出、ドリップ抽出等の公知の方法を採用することができる。
また、カメリアシネンシス抽出物として、上記カメリアシネンシス抽出物を使用する代わりに、カメリアシネンシス抽出物の濃縮物を水又は有機溶媒に溶解又は希釈したものを用いても、カメリアシネンシス抽出物及びその濃縮物を併用してもよい。ここで、カメリアシネンシス抽出物の濃縮物とは、カメリアシネンシス抽出物から溶媒を一部除去したものであり、例えば、特開昭５９−２１９３８４号公報、特開平４−２０５８９号公報、特開平５−２６０９０７号公報、特開平５−３０６２７９号公報等に記載の方法により調製することができる。また、カメリアシネンシス抽出物の濃縮物として市販品を使用してもよく、例えば、三井農林（株）の「ポリフェノン」、伊藤園（株）の「テアフラン」、太陽化学（株）の「サンフェノン」等の緑茶抽出物の濃縮物が挙げられる。
【００１７】
カメリアシネンシス抽出物としては緑茶抽出物が好適に用いられる。なお、カメリアシネンシス抽出物は、必要によりタンナーゼ処理しても（例えば、特開２００４−３２１１０５号公報）、当該タンナーゼ処理後に更に活性炭、酸性白土及び活性白土から選ばれる少なくとも１種で処理してもよい（例えば、特開２００７−２８２５６８号公報）。
【００１８】
合成吸着剤としては、イオン交換能が１ｍｅｑ／ｇ未満であり、かつ不溶性の三次元架橋構造を有するポリマーからなるものが好ましい。また、合成吸着剤の粒子形状は、球形、不均一形状等のいずれの形状であってもよいが、良好な分離条件を満たすために球形であることが好ましい。
このような合成吸着剤は公知の方法により製造してもよいが、市販品を使用してもよい。市販の合成吸着剤としては、例えば、アンバーライトＸＡＤ４、ＸＡＤ１６ＨＰ、ＸＡＤ１１８０、ＸＡＤ２０００（供給元：米国ローム＆ハース社）、ダイヤイオンＨＰ２０、ＨＰ２１（三菱化学社製）、セパビーズＳＰ−８５０、ＳＰ−８２５、ＳＰ−７００、ＳＰ−７０（三菱化学社製）、ＶＰＯＣ１０６２（Ｂａｙｅｒ社製）等のスチレン系；セパビーズＳＰ２０５、ＳＰ２０６、ＳＰ２０７（三菱化学社製）等の芳香環に臭素原子を導入して吸着能を高めた置換スチレン系；ダイヤイオンＨＰ１ＭＧ、ＨＰ２ＭＧ（三菱化学社製）等のメタクリル系；アンバーライトＸＡＤ７６１（ロームアンドハース社製）等のフェノール系；アンバーライトＸＡＤ７ＨＰ（ロームアンドハース社製）等のアクリル系；ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ、ＨＷ-４０Ｃ（東ソー社製）等のポリビニル系；ＳＥＰＨＡＤＥＸ、ＬＨ−２０（ファルマシア社製）等のデキストラン系が例示される。
中でも、合成吸着剤としては、その母体がスチレン系、メタクリル系、アクリル系、ポリビニル系が好ましく、分離能の観点から、スチレン系が特に好ましい。
【００１９】
合成吸着剤の使用量としては、カメリアシネンシス抽出物中の非重合体カテキン類の全質量と、合成吸着剤の全容量との比が２０〜６０ｇ／Ｌ、更に２５〜５５ｇ／Ｌ、特に３０〜５０ｇ／Ｌとなる量を選択することが、分離能の観点から好ましい。
【００２０】
工程（１）においては、カメリアシネンシス抽出物に合成吸着剤を添加し撹拌して吸着させた後、ろ過操作により合成吸着剤を回収するバッチ方法、あるいは合成吸着剤を充填したカラムを用いて連続的に吸着処理を行なうカラム方法を採用することができるが、生産性の点からカラムによる連続処理方法が好ましい。
【００２１】
工程（１）に供する際、カメリアシネンシス抽出物中の非重合体カテキン類濃度を好ましくは０．５〜１０質量％、特に好ましくは０．８〜５質量％に調整することが、吸着効率の観点から好ましい。なお、カメリアシネンシス抽出物中の非重合体カテキン類濃度を上記範囲内に調整するために、カメリアシネンシス抽出物を必要により濃縮又は希釈等してもよい。
【００２２】
第１及び第２の有機溶媒水溶液としては、エタノール、メタノール等のアルコール類、アセトン等のケトン類、酢酸エチル等のエステル類等の有機溶媒の水溶液が例示される。第２の有機溶媒水溶液としては、第１の有機溶媒水溶液よりも疎水性の高いものであれば特に限定されず、例えば、第１の有機溶媒水溶液よりも有機溶媒濃度の高い水溶液を使用するか、あるいは第１の有機溶媒よりも炭素数の多い有機溶媒を含む水溶液を使用することができる。第１及び第２の有機溶媒水溶液中の有機溶媒濃度は適宜設定することが可能であるが、例えば、第１の有機溶媒水溶液中の有機溶媒濃度としては、好ましくは１０〜４５質量％、特に好ましくは２０〜４０質量％であり、また第２の有機溶媒水溶液中の有機溶媒濃度としては、好ましくは５０〜９８質量％、特に好ましくは５０〜９５質量％である。
【００２３】
上記工程（１）及び（２）における具体的な操作方法としては、例えば、特開２００６−１６０６５６号公報、特開２００８−０７９６０９号公報等に記載の方法を採用することが可能である。
有機溶媒水溶液の通液条件は適宜設定することが可能であり、第２の有機溶媒水溶液の通液条件は第１の有機溶媒水溶液と同一でも異なっていてもよい。第１及び第２の有機溶媒水溶液の通液条件は、例えば、通液速度（ＳＶ）が好ましくは０．５〜１０［ｈ-1］、特に好ましくは０．５〜５［ｈ-1］であり、かつ通液倍数（ＢＶ）が合成吸着剤の容量に対して好ましくは０．５〜１０［ｖ／ｖ］、特に好ましくは１〜４［ｖ／ｖ］である。
【００２４】
工程（３）後においては、第２の画分を濃縮することで疎水性のポリフェノール組成物を得ることができるが、濃縮は蒸留、減圧蒸留、精留、薄膜蒸留、膜濃縮等により行うことが可能である。また、濃縮前又は濃縮後において、必要によりろ過及び／又は遠心分離処理により夾雑物を分離してもよい。ポリフェノール組成物の形態としては、固体、半固体、液体、スラリー等の種々のものが例示される。
【００２５】
また、本発明においては、上記ポリフェノール画分に、カメリアシネンシス抽出物、その濃縮物及びそれらの精製物、並びに他のポリフェノール組成物から選ばれる少なくとも１種を配合して所望の質量比［（Ｂ）／（Ａ）］及び（Ｃ）ルチン含有量に調整してもよい。ここで、カメリアシネンシス抽出物の精製物とは、溶剤やカラムを用いてカメリアシネンシス抽出物又はその濃縮物から沈殿物等を除去したものをいう。カメリアシネンシス抽出物、その濃縮物及びそれらの精製物の形態としては、固体、水溶液、スラリー状等の種々のものが例示される。なお、ポリフェノール画分に配合する「カメリアシネンシス抽出物、その濃縮物及びそれらの精製物」は、ポリフェノール画分と同種及び異種の何れのカメリアシネンシスから得られたものであってもよい。一方、「他のポリフェノール組成物」としては、例えば、異なる分画条件で得られたポリフェノール画分や、異種のポリフェノール含有植物から得られたポリフェノール画分が例示される。
【００２６】
本発明のポリフェノール組成物は、高濃度のポリフェノールを含有するにも拘らず、ポリフェノール特有のエグ味が低減されている。また、本発明のポリフェノール組成物は、非重合体カテキン類やフラボノール類単独では味わえない嗜好性の高い苦味を有しているが、甘味料や調味料で苦味を緩和しても後味に違和感が生じない。したがって、本発明のポリフェノール組成物は、飲食品に配合して使用することができる。
【００２７】
本発明の飲食品中のポリフェノール組成物の含有量は、食品の種類や形態により適宜選択することができるが、通常固形分換算で０．１〜１０質量％である。
【００２８】
本発明の飲料としては、例えば、茶飲料、非茶系飲料が挙げられる。茶飲料としては、例えば、緑茶飲料、烏龍茶飲料、紅茶飲料が挙げられる。また、非茶系飲料としては、清涼飲料（例えば、果汁ジュース、野菜ジュース、スポーツ飲料、アイソトニック飲料、炭酸飲料）、コーヒー飲料、栄養ドリンク剤、美容ドリンク剤等の非アルコール飲料、ビール、ワイン、清酒、梅酒、発泡酒、ウィスキー、ブランデー、焼酎、ラム、ジン、リキュール類等のアルコール飲料が例示される。
【００２９】
本発明の飲料は、ポリフェノール組成物をそのまま又は希釈して容器詰飲料とすることが可能であるが、ポリフェノール組成物の水溶解性を改善するために、有機酸及び／又はその塩を配合してもよい。
【００３０】
有機酸としては、分子中に１個以上のカルボキシル基を有すれば、芳香族でも、脂肪族でも、ラクトンでもよいが、ヒドロキシカルボン酸又はそのラクトンが好ましい。具体的には、アスコルビン酸、エリソルビン酸、クエン酸、グルコン酸、コハク酸、酒石酸、乳酸、アジピン酸、フマル酸、リンゴ酸等が例示され、中でもアスコルビン酸、クエン酸、グルコン酸、酒石酸、乳酸、リンゴ酸が好ましい。なお、塩としては、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、アミノ酸塩が挙げられ、中でもアルカリ金属塩が好ましく、特にナトリウム塩、カリウム塩が好ましい。
【００３１】
有機酸及び／又はその塩は、本発明の飲料中の有機酸イオン濃度が１〜１００ｍｍｏｌ／Ｌとなるように配合することが好ましい。有機酸イオン濃度は、溶解性向上及び外観改善の観点から、好ましくは２〜９５ｍｍｏｌ／Ｌ、より好ましくは５〜９０ｍｍｏｌ／Ｌ、より好ましくは１０〜８５ｍｍｏｌ／Ｌ、より好ましくは１５〜８０ｍｍｏｌ／Ｌ、更に好ましくは１８〜７０ｍｍｏｌ／Ｌ、特に好ましくは２０〜６０ｍｍｏｌ／Ｌである。なお、有機酸イオン濃度は、例えば、有機酸がｎ価の多価カルボン酸である場合、第１段〜第ｎ段まで解離状態にあるカルボキシルアニオン（ＣＯＯ−）の合計濃度である。
【００３２】
本発明の飲料には、飲食品を調製する際に用いられる一般的な添加物、例えば、酸化防止剤、苦渋味抑制剤、ビタミン、香料、各種エステル類、無機酸類、無機酸塩類、無機塩類、色素類、乳化剤、保存料、調味料、甘味料、酸味料、果汁エキス類、野菜エキス類、花蜜エキス類、ｐＨ調整剤、品質安定剤等の他、コーヒー抽出物等の植物エキスを単独で又は併用して配合することができる。
【００３３】
本発明の飲料は、ｐＨ（２５℃）が２〜９であることが好ましく、風味及び外観の観点から、２．５〜８、更に３〜７．０、特に３．５〜６．５であることが好ましい。
【００３４】
本発明の飲料を充填する容器としては、一般の飲料と同様にポリエチレンテレフタレートを主成分とする成形容器（いわゆるＰＥＴボトル）、金属缶、金属箔やプラスチックフィルムと複合化した紙容器、瓶等の通常の包装容器が挙げられる。
【００３５】
また、容器詰飲料は、例えば、金属缶のような容器に充填後、加熱殺菌できる場合にあっては適用されるべき法規（日本にあっては食品衛生法）に定められた殺菌条件で製造できる。ＰＥＴボトル、紙容器のようにレトルト殺菌できないものについては、あらかじめ上記と同等の殺菌条件、例えばプレート式熱交換器などで高温短時間殺菌後、一定の温度迄冷却して容器に充填する等の方法が採用できる。また無菌下で、充填された容器に別の成分を配合して充填してもよい。さらに、酸性下で加熱殺菌後、無菌下でｐＨを中性に戻すことや、中性下で加熱殺菌後、無菌下でｐＨを酸性に戻すなどの操作も可能である。
【００３６】
本発明の食品の形態としては、摂取しやすい形態であれば特に限定されるものではなく、例えば、ペースト状、粉末、液体、ゲル状、スラリー状、造粒物、顆粒、錠剤、カプセル剤等の固形状物が例示される。また、食品の形態に応じて、本発明のポリフェノール組成物を減圧濃縮や薄膜濃縮などにより溶媒を除去しても、噴霧乾燥や凍結乾燥等により粉体化してもよい。
【００３７】
本発明の食品としては、例えば、菓子類（例えば、パン、ケーキ、クッキー、ビスケット等の焼菓子、チューインガム、チョコレート、キャンデー）、デザート類（例えば、ゼリー、ヨーグルト、アイスクリーム）、レトルト食品、調味料（例えば、ソース、スープ、ドレッシング、マヨネーズ、クリーム）が例示される。
【００３８】
本発明の食品には、食品を調製する際に用いられる一般的な食品添加物、例えば、ミネラル、ビタミン、アミノ酸、甘味料、酸味料、香料、果実又は野菜の乾燥品、果汁、野菜汁又はそれらの粉末乾燥品等を配合することができる。さらに、賦形剤、滑沢剤、被覆剤等の成形助剤を配合してもよい。
【実施例】
【００３９】
１．非重合体カテキン類及びカフェインの測定
試料溶液をフィルター（０．４５μｍ）で濾過し、高速液体クロマトグラフ（型式ＳＣＬ−１０ＡＶＰ、島津製作所製）を用い、オクタデシル基導入液体クロマトグラフ用パックドカラム（Ｌ−カラムＴＭ ＯＤＳ、４．６ｍｍφ×２５０ｍｍ：財団法人 化学物質評価研究機構製）を装着し、カラム温度３５℃でグラディエント法により分析した。移動相Ａ液は酢酸を０．１ｍｏｌ／Ｌ含有する蒸留水溶液、Ｂ液は酢酸を０．１ｍｏｌ／Ｌ含有するアセトニトリル溶液とし、試料注入量は２０μＬ、ＵＶ検出器波長は２８０ｎｍの条件で行った。なお、グラディエントの条件は、以下のとおりである。
【００４０】
時間（分） Ａ液濃度（体積％） Ｂ液濃度（体積％）
０．０ ９７ ３
５．０ ９７ ３
３７．０ ８０ ２０
４３．０ ８０ ２０
４３．５ ０ １００
４８．５ ０ １００
４９．０ ９７ ３
６０．０ ９７ ３
【００４１】
２．ルチンの測定
試料溶液をフィルター（０．４５μｍ）で濾過し、高速液体クロマトグラフ（型式Ｗａｔｅｒｓ２６９５、ＷＡＴＥＲＳ製）を用い、カラム（Ｓｈｉｍｐａｃｈ ＶＰ ＯＤＳ、１５０×４．６ｍｍＩ．Ｄ．）を装着し、カラム温度４０℃でグラディエント法により分析した。移動相Ａ液はリン酸を０．０５質量％含有する蒸留水溶液、Ｂ液はメタノール溶液とし、流速は１ｍＬ／分、試料注入量は１０μＬ、ＵＶ検出器波長は３６８ｎｍの条件で行った。なお、グラディエントの条件は、以下のとおりである。
【００４２】
時間（分） Ａ液濃度（体積％） Ｂ液濃度（体積％）
０．０ ９５ ５
２０．０ ８０ ２０
４０．０ ３０ ７０
４１．０ ０ １００
４６．０ ０ １００
４７．０ ９５ ５
６０．０ ９５ ５
【００４３】
３．フラボノールアグリコン（ミリセチン、ケルセチン及びケンフェロール）の測定
（１）試料の加水分解
固形分濃度０．２質量％に調整した試料溶液５ｍＬにメルカプトエタノール２００μＬ、２Ｎ塩酸５００μＬを添加した。その後、ドライブロックバス（アズワン株式会社製）にて設定温度１２０℃で４０分間加熱し試料中のフラボノール配糖体を加水分解してフラボノールアグリコン（ミリセチン、ケルセチン、ケンフェロール）を生成させた後に、冷却した。
【００４４】
（２）分析
加水分解後の試料溶液中に存在しているミリセチン、ケルセチン及びケンフェロールを、高速液体クロマトグラフィーにより定量した。なお、定量はグラディエント法により行ったが、その分析方法は上記「ルチンの測定」と同じである。
【００４５】
（３）フラボノールアグリコンの総量
上記分析により定量されたミリセチン量、ケルセチン量及びケンフェロール量の総和として求めた。
【００４６】
４．ポリフェノールの測定
（１）試薬の調製
１）酒石酸鉄試薬の調製
５００ｍＬメスフラスコに硫酸第一鉄七水塩０．５０ｇと（＋）酒石酸ナトリウム・カリウム四水和物２．５０ｇを採取し、イオン交換水でメスアップした。
【００４７】
２）リン酸バッファーの調製
２０００ｍＬメスフラスコにリン酸水素二ナトリウム・二水和物２０．００ｇとリン酸二水素カリウム２．９０ｇを採取し、イオン交換水でメスアップした。この溶液のｐＨが７．５〜７．６になるように調整した。ｐＨ７．６を超える場合、リン酸二水素カリウム・二水和物０．９ｇ／１００ｍＬ水溶液を添加し、ｐＨ７．５未満の場合、リン酸二水素カリウム１．２ｇ／１００ｍＬ水溶液を添加し調整した。
【００４８】
（２）装置及び器具
１）分光光度計（Ｕ−２０１０；日立製作所製）
２）石英製セル（１０ｍｍ×１０ｍｍ）
３）２５ｍＬ、１００ｍＬ、２００ｍＬ、５００ｍＬ、２０００ｍＬのメスフラスコ
４）１ｍＬ、５ｍＬ、１０ｍＬ、２０ｍＬ、３０ｍＬのホールピペット
５）１ｍＬ、３ｍＬ、５ｍＬのマイクロピペット
【００４９】
（３）分析条件
１）測定波長：５４０ｎｍ
２）温度 ：２０℃±２℃
【００５０】
（４）操作：
１）検量線作成
ｉ）没食子酸エチル約０．５ｇを使用前に２〜３時間乾燥させた。
ii）２００ｍＬメスフラスコに乾燥した没食子酸エチル０．２ｇを採取し、イオン交換水でメスアップした。（１００ｍｇ／１００ｍＬ標準液）
iii）１００ｍＬメスフラスコに、ii）の標準液を用い、５ｍｇ／１００ｍＬ、１０ｍｇ／１００ｍＬ、２０ｍｇ／１００ｍＬ、３０ｍｇ／１００ｍＬの各標準液を調製した。
iv）２５ｍＬメスフラスコに、iii）の標準液をそれぞれ５ｍＬ採取し、酒石酸鉄試薬５ｍＬを加えリン酸バッファーでメスアップした。また、ブランクとして標準液を加えないものを調製した。
ｖ）分光光度計にて吸光度を測定し検量線を作成した。
なお、検量線については下記を目安にし、逸脱した時は再調整した。
Ｒ２ ：０．９９９５〜１．００００
検量線傾き：３４．５±０．４
切片 ：０．３以下
【００５１】
２）試料測定
ｉ）イオン交換水にて分光光度計をゼロ補正した。
ii）２５ｍＬメスフラスコに試料を所定量採取し、酒石酸鉄試薬５ｍＬを加えリン酸バッファーでメスアップした後、吸光度を測定した。なお、吸光度の測定は、発色後４０分以内とした。
【００５２】
実施例１
ポリフェノール組成物Ａ
緑茶葉（大葉種）を熱水で抽出した後、噴霧乾燥により緑茶抽出物Ａを得た。『緑茶抽出物Ａ』は、非重合体カテキン類濃度３０．８質量％、カフェイン濃度５．５質量％であった。
次いで、『緑茶抽出物Ａ』の非重合体カテキン類濃度が１質量％になるようにイオン交換水で希釈した。次いで、『緑茶抽出物Ａ』の希釈液８００ｇをカラム（内径５０ｍｍ×高さ１８０ｍｍ、容積３５３．３ｍＬ）に充填した合成吸着剤（ＳＰ−７０、三菱化学（株）製）２００ｍＬに吸着させた。次いで、イオン交換水３００ｍＬ、３０質量％エタノール水溶液４００ｍＬを順次合成吸着剤に通液して非重合体カテキン類を溶出させた。次いで、合成吸着剤に５０質量％エタノール水溶液を４００ｍＬ通液してポリフェノール組成物を溶出させた。なお、本分画操作はすべて、通液速度ＳＶ＝０．８〜１．２［ｈ-1］、通液倍数（ＢＶ）＝２．０［ｖ／ｖ］になるように流量調整して行った。次いで、得られた溶出液を減圧濃縮によりエタノールを留去しつつ不溶物を除去した後、凍結乾燥により水分を除去して『ポリフェノール組成物Ａ』を得た。
『ポリフェノール組成物Ａ』は、（Ａ）フラボノールアグリコン総量が１９．２質量％、（Ｂ）ポリフェノール総量が３３．１質量％、質量比［（Ｂ）／（Ａ）］が１．７２、（Ｃ）ルチン含有量が１０．６質量％であった。なお、『ポリフェノール組成物Ａ』は、後掲の本発明品１〜５に使用した。
【００５３】
実施例２
ポリフェノール組成物Ｂ
緑茶葉（大葉種）を熱水で抽出した後、噴霧乾燥により緑茶抽出物Ｂを得た。『緑茶抽出物Ｂ』は、非重合体カテキン類濃度３０．３質量％、カフェイン濃度５．５質量％であった。
次いで『緑茶抽出物Ｂ』の非重合体カテキン類濃度が１質量％になるようにイオン交換水で希釈した。次いで、『緑茶抽出物Ｂ』の希釈液８０００ｇをカラム（内径８９．２ｍｍ×高さ６００ｍｍ、容積３７４８ｍＬ）に充填した合成吸着剤（ＳＰ−７０、三菱化学（株）製）２０００ｍＬに吸着させた。次いで、イオン交換水３０００ｍＬ、２５質量％エタノール水溶液９０００ｍＬを順次合成吸着剤に通液して非重合体カテキン類を溶出させた。次いで、合成吸着剤に９２．５質量％エタノール水溶液を４０００ｍＬ通液してポリフェノール組成物を溶出させた。なお、本分画操作はすべて、流速ＳＶ＝０．５〜２．１［ｈ-1］、通液倍数（ＢＶ）＝２．０［ｖ／ｖ］になるように流量調整して行った。次いで、得られた溶出液を減圧濃縮によりエタノールを留去した後、凍結乾燥により水分を除去して『ポリフェノール組成物Ｂ』を得た。
『ポリフェノール組成物Ｂ』は、（Ａ）フラボノールアグリコン総量が１８．３質量％、（Ｂ）ポリフェノール総量が３４．０質量％、質量比［（Ｂ）／（Ａ）］が１．８６、（Ｃ）ルチン含有量が９．３質量％であった。なお、『ポリフェノール組成物Ｂ』は、後掲の本発明品６に使用した。
【００５４】
実施例３
ポリフェノール組成物Ｃ
実施例２で得た『緑茶抽出物Ｂ』の非重合体カテキン類濃度が１質量％になるようにイオン交換水で希釈した。次いで、『緑茶抽出物Ｂ』の希釈液２４００ｇをカラム（内径６０．６ｍｍ×高さ３３０ｍｍ、容積９５１ｍＬ）に充填した合成吸着剤（ＳＰ−７０、三菱化学（株）製）６００ｍＬに吸着させた。次いで、イオン交換水９００ｍＬ、２５質量％エタノール２７００ｍＬを順次合成吸着剤に通液して非重合体カテキン類を溶出させた。次いで、合成吸着剤に９２．５質量％エタノール水溶液を１２００ｍＬ通液してポリフェノール組成物を溶出させた。なお、本分画操作はすべて、流速ＳＶ＝０．７〜１．８［ｈ-1］、通液倍数（ＢＶ）＝２．０［ｖ／ｖ］になるように流量調整して行った。次いで、得られた溶出液を減圧濃縮によりエタノールを留去した後、凍結乾燥により水分を除去して『ポリフェノール組成物Ｃ』を得た。
『ポリフェノール組成物Ｃ』は、（Ａ）フラボノールアグリコン総量が２３．３質量％、（Ｂ）ポリフェノール総量が３４．１質量％、質量比［（Ｂ）／（Ａ）］が１．４６、（Ｃ）ルチン含有量が７．４質量％であった。なお、『ポリフェノール組成物Ｃ』は、後掲の本発明品７に使用した。
【００５５】
実施例４
ポリフェノール組成物Ｄ
実施例１で得られたポリフェノール組成物Ａ ０．０８質量部と、市販の緑茶抽出物（ＥＧＣｇ製剤、DSM Nutritional Products社製、以下『緑茶抽出物ａ』という）０．１２質量部を混合して『ポリフェノール組成物Ｄ』を得た。なお、『緑茶抽出物ａ』は、（Ａ）フラボノールアグリコンの総量が０．０質量％、（Ｂ）ポリフェノールの総量が１１０．５質量％※（※酒石酸鉄法の分析値）である。
『ポリフェノール組成物Ｄ』は、（Ａ）フラボノールアグリコン総量が７．７質量％、（Ｂ）ポリフェノール総量が７９．５質量％、質量比［（Ｂ）／（Ａ）］が１０．３２、（Ｃ）ルチン含有量が４．２質量％であった。なお、『ポリフェノール組成物Ｄ』は、後掲の本発明品８に使用した。
【００５６】
実施例５
ポリフェノール組成物Ｅ
市販の紅茶葉（ヌワラエリア、ブルックボンドハウス社製）５ｇを沸騰水５００ｇに添加し、１５０ｒｐｍで５分間攪拌抽出した。次いで、２号ろ紙で吸引ろ過し採液量を測定後、氷冷（液温２５℃以下）した。その後、水分を凍結乾燥で除いて紅茶抽出物を得た。得られた紅茶抽出物を、以下『紅茶抽出物ａ』という。
紅茶抽出物ａ ０．４２質量部と、実施例１で得られたポリフェノール組成物Ａ ０．０２５質量部とを混合して『ポリフェノール組成物Ｅ』を得た。
『ポリフェノール組成物Ｅ』は、（Ａ）フラボノールアグリコン総量が１．９質量％、（Ｂ）ポリフェノール総量が１７．７質量％、質量比［（Ｂ）／（Ａ）］が９．３２、（Ｃ）ルチン含有量が１．３質量％であった。なお、『ポリフェノール組成物Ｅ』は、後掲の本発明品９に使用した。
【００５７】
実施例６
ポリフェノール組成物Ｆ
市販の紅茶葉（ＡＳ ＣＴＣ、ブルックボンドハウス社製）茶葉５ｇを沸騰水５００ｇに添加し、１５０ｒｐｍで５分間攪拌抽出した。次いで、２号ろ紙で吸引ろ過し採液量を測定後、氷冷（液温２５℃以下）した。その後、水分を凍結乾燥で除いて紅茶抽出物を得た。得られた紅茶抽出物を、以下『紅茶抽出物ｂ』という。
紅茶抽出物ｂ ０．３９質量部と、実施例１で得られたポリフェノール組成物Ａ ０．０２５質量部とを混合して『ポリフェノール組成物Ｆ』を得た。
『ポリフェノール組成物Ｆ』は、（Ａ）フラボノールアグリコン総量が１．４質量％、（Ｂ）ポリフェノール総量が１３．３質量％、質量比［（Ｂ）／（Ａ）］が９．５、（Ｃ）ルチン含有量が０．９質量％であった。なお、『ポリフェノール組成物Ｆ』は、後掲の本発明品１０に使用した。
【００５８】
実施例７
ポリフェノール組成物Ｇ
市販の烏龍茶葉（ウーロン茶、国太楼社製）５ｇを沸騰水５００ｇに添加し、１５０ｒｐｍで５分間攪拌抽出し、２号ろ紙で吸引ろ過し採液量を測定後、氷冷（液温２５℃以下）した。その後、水分を凍結乾燥で除いて烏龍茶抽出物を得た。得られた烏龍茶抽出物を、以下『烏龍茶抽出物ａ』という。
烏龍茶抽出物ａ ０．３９質量部と、実施例１で得られたポリフェノール組成物Ａ ０．０２５質量部とを混合して『ポリフェノール組成物Ｇ』を得た。
『ポリフェノール組成物Ｇ』は、（Ａ）フラボノールアグリコン総量が１．６質量％、（Ｂ）ポリフェノール総量が１４．７質量％、質量比［（Ｂ）／（Ａ）］が９．１９、（Ｃ）ルチン含有量が０．８質量％であった。なお、『ポリフェノール組成物Ｇ』は、後掲の本発明品１１に使用した。
【００５９】
実施例８
ポリフェノール組成物Ｈ
実施例１で得られたポリフェノール組成物Ａ ０．０５質量部と、緑茶抽出物ａ ０．１３８質量部を混合して『ポリフェノール組成物Ｈ』を得た。
『ポリフェノール組成物Ｈ』は、（Ａ）フラボノールアグリコン総量が５．１質量％、（Ｂ）ポリフェノール総量が８９．９質量％、質量比［（Ｂ）／（Ａ）］が１７．６３、（Ｃ）ルチン含有量が２．８質量％であった。なお、『ポリフェノール組成物Ｈ』は、後掲の本発明品１２に使用した。
【００６０】
実施例９
ポリフェノール組成物Ｉ
実施例１で得られたポリフェノール組成物Ａ ０．０１質量部と、紅茶抽出物ａ ０．４３質量部を混合して『ポリフェノール組成物Ｉ』を得た。
『ポリフェノール組成物Ｉ』は、（Ａ）フラボノールアグリコン総量が１．３質量％、（Ｂ）ポリフェノール総量が１７．２質量％、質量比［（Ｂ）／（Ａ）］が１３．２３、（Ｃ）ルチン含有量が０．９質量％であった。なお、『ポリフェノール組成物Ｉ』は、後掲の本発明品１３に使用した。
【００６１】
実施例１０
ポリフェノール組成物Ｊ
実施例１で得られたポリフェノール組成物Ａ ０．０１質量部と、紅茶抽出物ｂ ０．４４質量部を混合して『ポリフェノール組成物Ｊ』を得た。
『ポリフェノール組成物Ｊ』は、（Ａ）フラボノール量アグリコン総が０．７質量％、（Ｂ）ポリフェノール総量が１２．５質量％、質量比［（Ｂ）／（Ａ）］が１７．８５、（Ｃ）ルチン含有量が０．５質量％であった。なお、『ポリフェノール組成物Ｊ』は、後掲の本発明品１４に使用した。
【００６２】
実施例１１
ポリフェノール組成物Ｋ
実施例１で得られたポリフェノール組成物Ａ ０．０１質量部と、烏龍茶抽出物ａ ０．４１質量部を混合して『ポリフェノール組成物Ｋ』を得た。
『ポリフェノール組成物Ｋ』は、（Ａ）フラボノールアグリコン総量が０．９質量％、（Ｂ）ポリフェノール総量が１４．０質量％、質量比［（Ｂ）／（Ａ）］が１５．５６、（Ｃ）ルチン含有量が０．４質量％であった。なお、『ポリフェノール組成物Ｋ』は、後掲の本発明品１５に使用した。
【００６３】
比較例１
市販の緑茶抽出物（ポリフェノン７０Ａ、三井農林社製、以下『緑茶抽出物ｂ』という）を用いた。
緑茶抽出物ｂは、（Ａ）フラボノールアグリコン総量が１．１質量％、（Ｂ）ポリフェノール総量が９９．０質量％、質量比［（Ｂ）／（Ａ）］が９０．００、（Ｃ）ルチン含有量が０．１質量％であった。なお、『緑茶抽出物ｂ』は、後掲の比較品１に使用した。
【００６４】
比較例２
紅茶抽出物ａを用いた。
紅茶抽出物ａは、（Ａ）フラボノールアグリコン総量が０．９質量％、（Ｂ）ポリフェノール総量が１６．８質量％、質量比［（Ｂ）／（Ａ）］が１８．６７、（Ｃ）ルチン含有量が０．７質量％であった。なお、『紅茶抽出物ａ』は、後掲の比較品２に使用した。
【００６５】
比較例３
紅茶抽出物ｂを用いた。
紅茶抽出物ｂは、（Ａ）フラボノールアグリコン総量が０．３質量％、（Ｂ）ポリフェノール総量が１２．０質量％、質量比［（Ｂ）／（Ａ）］が４０．００、（Ｃ）ルチン含有量が０．２質量％であった。なお、『紅茶抽出物ｂ』は、後掲の比較品３に使用した。
【００６６】
比較例４
烏龍茶抽出物ａを用いた。
烏龍茶抽出物ａは、（Ａ）フラボノールアグリコン総量が０．５質量％、（Ｂ）ポリフェノール総量が１３．５質量％、質量比［（Ｂ）／（Ａ）］が２７．００、（Ｃ）ルチン含有量が０．１質量％であった。なお、『烏龍茶抽出物ａ』は、後掲の比較品４に使用した。
【００６７】
比較例５
０．１５質量％の重曹水溶液（９５℃）で６００ｇのウーロン茶葉をカラム法で抽出し、抽出物約６０００ｇを得た。液温を６０〜６５℃に保ち、４００ｇの粒状活性炭（クラレ社製、GW-H32/60）に通液し、非重合カテキン類及びカフェインを選択的に除去した。この通過液を減圧下で濃縮し、Ｂｒｉｘ１０以上の茶抽出物約９００ｇを調製し『烏龍茶抽出物ｂ』を得た。
『烏龍茶抽出物ｂ』は、（Ａ）フラボノールアグリコン総量が０．８４質量％、（Ｂ）ポリフェノール総量が１９．４質量％、質量比［（Ｂ）／（Ａ）］が２３．１、（Ｃ）ルチン含有量が０．１８質量％であった。なお、『烏龍茶抽出物ｂ』は、後掲の比較品５に使用した。
【００６８】
比較例６
緑茶抽出物ｃの製造
緑茶抽出液の濃縮物（ポリフェノンＨＧ、三井農林（株）製）２００ｇを、２５℃にて２５０ｒ／ｍｉｎ攪拌条件下の４０質量％エタノール水溶液８００ｇ中に分散させ、酸性白土（ミズカエース＃６００、水澤化学社製）８０ｇを投入後、約１０分間攪拌を続けた。次に、２号ろ紙で濾過した後、濾液に活性炭８ｇを添加し再び２号ろ紙で濾過した。次に、０．２μｍメンブランフィルターによって再濾過した。次に、４０℃、減圧下にて濾液からエタノールを留去し、イオン交換水で非重合体カテキン類濃度を調整して「緑茶抽出物ｃ」を得た。
「緑茶抽出物ｃ」は、（Ａ）フラボノールアグリコン総量が１．５質量％、（Ｂ）ポリフェノール総量が４７．７質量％、質量比［（Ｂ）／（Ａ）］が３２．４９、（Ｃ）ルチン含有量が０．９６質量％であった。なお、『緑茶抽出物ｃ』は、後掲の比較品６に使用した。
【００６９】
（１）風味の評価
表１及び２に示す各成分をサンプル瓶中にて各配合量に秤量し、その中にイオン交換水を投入して分散させた。その後、６０℃のウォーターバス中で溶解してから、室温（２５℃）で２時間静置し、飲料を調製した。各飲料が室温に調温したところで官能試験を下記の基準で行った。その結果を表１及び２に示す。
【００７０】
（２）評価基準
５：大変良好（嗜好性の高い苦味があり、エグ味が少ない）
４：良好（エグ味は感じるが気にならない）
３：やや良好（エグ味が若干気にかかる）
２：やや不良（エグ味がやや強い）
１：不良（エグ味が強い）
【００７１】
【表１】
【００７２】
【表２】
【００７３】
表１及び２から、（Ａ）フラボノールアグリコン総量と、（Ｂ）ポリフェノール総量との質量比［（Ｂ）／（Ａ）］が０．０１〜１８であるポリフェノール組成物は、従来のカメリアシネンシス抽出物に比べてポリフェノール特有のエグ味が顕著に低減されており、風味が良好で口当たりのよいことが確認された。
【００７４】
焼き菓子の評価
実施例１のポリフェノール組成物Ａを用いて焼き菓子を作製した。
材料α（脱脂粉乳２５質量部、無塩バター２５質量部、白砂糖２９質量部、マーガリン４５質量部）を秤量し、ミキサー［Hobart社製 Ｎ５０ ＭＩＸＥＲ（５コートミキサー）］に入れ、ビーターを用いて低速３０秒で攪拌後、さらに中速にて攪拌し比重０．９の生地を調製した。
次に、材料αに低速で３０秒攪拌しながら、卵を溶いたものを３分割して加えた。１回目の卵を添加後、低速で３０秒撹拌を行った。２回目の添加時に食塩を溶解させた卵水と、ポリフェノール組成物Ａを同時にミキサーに直接投入し、低速にて３０秒撹拌を行った。上記終了後、ミキサーの壁に付着した油をかき落とした後、最後の卵を加え、低速３０秒撹拌後、さらに均一なクリーム状になるまで中速にて２分間撹拌を行った。
次に、薄力粉を入れ、低速で４５秒間撹拌した。攪拌により得られた原料を２０ｇ秤量し、縦７２mm×横２２mm×高さ１４mmの長方形の焼き型に詰め、剥離紙を敷いた展板にならべ、型に詰めた生地表面に６個の穴をつまようじで開けた。展板１枚当たり、４個／４個／４個ずつ３列に並べ、計１２個を並べた。次に、上記展板の下にさらに２枚の展板を重ね、表面にアルミホイルをかけた。焼成はオーブン中、１６０℃にて行った。アルミホイルをかぶせて２０分間焼成、アルミを外した後１８分間焼成を行い、焼き菓子を調製した。焼成後、網の上で室温下２０分冷却後、チャック付きポリエチレン袋に入れ、２０℃恒温室にて１晩放置した。食感評価の結果、食感上の問題を意識することなく食べることができた。
【００７５】
試験例１
食後の血糖値上昇抑制効果
雄性マウスＣ５７ＢＬ/６Ｊ（７週齢）を６日間予備飼育し、試験開始前に１６時間絶食させてから４群（実施例１群、比較例６群、比較例５群、対照群（水）、各群ｎ＝５）に分け、血液を採取した。
実施例１群には実施例１で得られた製剤を２０質量％エタノール水溶液に溶解し、これを０．５７ｍｇ／ｇ体重として経口投与した。また、比較例６群には比較例６で得られた製剤を２０質量％エタノール水溶液に溶解し、これを０．３９ｍｇ／ｇ体重として経口投与した。更に、比較例５群には比較例５で得られた製剤を２０質量％エタノール水溶液に溶解し、これを１．００ｍｇ／ｇ体重として経口投与した。一方、対照群には２０質量％エタノールを経口投与した。そして、各試料を投与直後のマウスに、表３に示す組成の脂肪乳剤を４０ｍｇ／ｇ体重となるように経口投与した。
【００７６】
【表３】
【００７７】
乳剤投与から１０分、３０分、６０分、１２０分経過ごとに各マウスから血液を採取し、グルコースＣII‐テストワコー（和光純薬社製）により血糖値を分析した。食後の血糖値の推移を図１に示す。ａ，ｂ，ｃは、グラフ間で有意差があることを示す。
【００７８】
図１から、次のことが確認された。すなわち、対照群は脂肪乳剤の投与により食後の血糖値が上昇するのに対し、比較例５群は対照群と同等の値をとり、実施例１群、比較例６群はともに食後の血糖値上昇が抑制されるが、実施例１群の方が比較例６群よりも食後の血糖値上昇が極めて抑制されることが確認された。
【００７９】
試験例２
α−アミラーゼ活性阻害効果
α−アミラーゼ活性の測定は、下記の方法により行った。
酵素 ：50U/mL ブタ膵臓由来アミラーゼ(dissolved in buffer)
基質 ：20mg Starch Azure(in 80 μL buffer)
緩衝液：40mMリン酸緩衝液（20mM NaClを含む）（pH7.0）
阻害剤：実施例１で得た製剤（被験試料）又は比較例５及び６で得た製剤（対照試料）
(dissolved in 20%EtOH)
手順：
（１）基質20mg/80μLと阻害剤10μLを等量混和し、37℃5分間プレインキュベート
（２）酵素溶液10μLを加え、37℃15分間反応
（３）100 mM リン酸緩衝液（pH4.3）900μLを添加
（４）反応液を遠心分離し、上清を波長595 nmで測定
【００８０】
測定結果を図２に示す。図２から、実施例１群は比較例６群及び比較例５群に比較してα−アミラーゼ活性を強く阻害することが確認された。
【００８１】
試験例３
リパーゼ活性阻害効果
リパーゼ活性の測定は、下記の方法により行った。
酵素 ：50U/mL ブタ膵臓由来リパーゼ(Sigma type II dissolved in buffer)
基質 ：0.1M 4-Methylumbelliferyl oleate(dissolved in DMSO)
緩衝液：150 mM NaCl、1.36mM CaCl2を含む 13 mM Tris-HCl (pH 8.0)
阻害剤：実施例１で得た製剤又は比較例５及び６で得た製剤(dissolved in 20%EtOH)
手順 ：
（１）25℃でマイクロプレートに、緩衝液60μL、基質20μLを添加し混合
（２）阻害剤10μLを添加
（３）酵素10μLを添加
（４）25℃で30分間インキュベート
（５）停止液（クエン酸緩衝液pH4.2）100μLを添加
（６）励起波長355nmで波長460nmの蛍光を測定
【００８２】
蛍光測定の結果を図３に示す。図３から、実施例１群は比較例６群及び比較例５群に比較してリパーゼ活性を強く阻害することが確認された。
【００８３】
これら試験例により、本発明のポリフェノール組成物は、優れた、食後の血糖値上昇抑制作用、α−アミラーゼ活性阻害作用及びリパーゼ活性阻害作用を有することが確認されたことから、食事由来の脂肪吸収の抑制、血中中性脂肪の上昇抑制、肥満防止等のための医薬の有効成分として有用である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、カメリアシネンシスから得られるポリフェノール組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、消費者の嗜好の多様化、健康志向の高揚により、多種多様の健康食品が上市され需要が拡大している。例えば、ポリフェノールは、抗酸化力を有することが知られており、抗動脈硬化、抗アレルギー、血流増強等の効果が期待されるため、健康食品の重要な成分として認識されている。
【０００３】
このようなポリフェノールは、例えば、烏龍茶の水性抽出液を活性炭又は吸着樹脂と接触させ非重合体カテキン類を除去してポリフェノール画分として得ることができる（特許文献１）。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】国際公開第２００５／０７７３８４号パンフレット
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかしながら、ポリフェノールは本来エグ味が強いため、飲食品中に多量に含まれる場合には、その嗜好性が大きく損なわれてしまうことが多い。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、カメリアシネンシス由来のポリフェノール組成物について種々検討したところ、ポリフェノール組成物中のフラボノールアグリコン及びフラボノール配糖体の含有比率が特定範囲内にあると、ポリフェノール特有のエグ味が顕著に低減されることを見出した。
【０００７】
すなわち、本発明は、カメリアシネンシス由来のフラボノールアグリコン及びフラボノール配糖体を含有するポリフェノール組成物であって、
次の（Ａ）及び（Ｂ）；
（Ａ）高速液体クロマトグラフィーにより測定される、加水分解後の当該ポリフェノール組成物の固形分中に含有されるフラボノールアグリコン総量。
（Ｂ）酒石酸鉄法により測定される、当該ポリフェノール組成物の固形分中に含有されるポリフェノール総量。
の質量比［（Ｂ）／（Ａ）］が０．０１〜１８である、
ポリフェノール組成物を提供するものである。
【０００８】
本発明はまた、上記ポリフェノール組成物を含有する飲食品を提供するものである。
【０００９】
本発明は更に、上記ポリフェノール組成物の製造方法であって、
カメリアシネンシス抽出物を合成吸着剤に吸着させる工程と、
上記合成吸着剤に第１の有機溶媒水溶液を接触させて、第１の画分を溶出させる工程と、
上記第１の画分を溶出した後の合成吸着剤に、上記第１の有機溶媒水溶液よりも疎水性の高い第２の有機溶媒水溶液を接触させて、ポリフェノール組成物を含む第２の画分を溶出させる工程
を含む、製造方法を提供するものである。
【発明の効果】
【００１０】
本発明によれば、高濃度のポリフェノールを含有するにも拘らず、ポリフェノール特有のエグ味が顕著に低減されたカメリアシネンシス由来ポリフェノール組成物が提供される。このポリフェノール組成物は、非重合体カテキン類やフラボノール類単独では味わえない嗜好性の高い苦味を有しているが、甘味料や調味料で苦味を緩和しても後味に違和感を生じないことから、健康食品等として常食に適するものである。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図１は、試験例１における食後の血糖値の推移を示す図である。
【図２】図２は、試験例２におけるα−アミラーゼ活性阻害作用を示す図である。
【図３】図３は、試験例３におけるリパーゼ活性阻害作用を示す図である。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
先ず、本明細書で使用する用語について説明する。
本明細書において「ポリフェノール」とは、酒石酸鉄法により測定されるものをいい、具体的には、フラボノール類、フラバン−３−オール類、プロアントシアニジン類及びそれらの重合体が例示される。フラボノール類には、ケルセチン、ミリセチン、ケンフェロール等やそれらの配糖体が包含され、またフラバン−３−オール類にはカテキン類が包含され、更にその重合体にはテアフラビン類、ウーロンホモビスフラバン類等が包含される。
「カメリアシネンシス（Camellia sinensis）」とは、ツバキ科ツバキ属のチャノキのことであるが、加工方法により、不発酵茶、半発酵茶、発酵茶に大別することができる。
中でも、不発酵茶が好ましい。不発酵茶としては、Camellia属、例えば、C.var.sinensis（やぶきた種を含む）、C.var.assamica及びそれらの雑種から選択される茶から製茶された、茎茶、棒茶、芽茶、煎茶、番茶、碾茶、釜入り茶等の緑茶が例示される。半発酵茶としては、総称して烏龍茶と呼ばれる鉄観音、色種、黄金桂、武夷岩茶等が例示される。発酵茶としては、紅茶と呼ばれるダージリン、ウバ、キーマン等が例示される。ここで、本明細書において「不発酵茶、半発酵茶、発酵茶、緑茶、烏龍茶、紅茶」とは、飲用に供される茶抽出物ではなく、該茶抽出物を得るための茶原料をいう。
本明細書において「フラボノールアグリコン」とは、ミリセチン、ケルセチン及びケンフェロールからなる混合物の総称である。また本明細書において「フラボノール配糖体」とは、ミリセチン、ケルセチン及びケンフェロールをアグリコン骨格として有する配糖体をいい、これら配糖体に更に糖が結合したものも包含される。本明細書における「フラボノールアグリコン総量」は、これらフラボノールアグリコン及びフラボノール配糖体を含むポリフェノール組成物を加水分解し、加水分解後の溶液中に含有されるミリセチン、ケルセチン及びケンフェロールの合計量に基づいて定義される。
【００１３】
次に、本発明のポリフェノール組成物について説明する。
本発明のポリフェノール組成物は、次の（Ａ）及び（Ｂ）を特定の比率で含有することを特徴とするものである。
ここで、（Ａ）は、高速液体クロマトグラフィーにより測定される、加水分解後の当該ポリフェノール組成物の固形分中に含有されるフラボノールアグリコン総量（以下、「（Ａ）フラボノールアグリコン総量」という）であるが、（Ａ）フラボノールアグリコン総量は０．７〜５０質量％であることが好ましく、風味や水への溶解性の観点から、１．５〜４５質量％、更に５〜４０質量％、更に７〜３５質量％、特に９〜２５質量％であることが好ましい。
また、（Ｂ）は、酒石酸鉄法により測定される、当該ポリフェノール組成物の固形分中に含有されるポリフェノール総量（以下、「（Ｂ）ポリフェノール総量」という）であるが、（Ｂ）ポリフェノールの総量は５〜９５質量％であることが好ましく、風味や水への溶解性の観点から、１０〜９０質量％、更に１５〜８０質量％、更に２０〜７０質量％、特に２５〜４０質量％であることが好ましい。ここで、本明細書において「固形分」とは、ポリフェノール組成物を１０５℃の電気恒温乾燥機で３時間乾燥して水などの揮発物質を除いた残分をいう。
そして、上記（Ａ）及び（Ｂ）の質量比［（Ｂ）／（Ａ）］は０．０１〜１８であるが、エグ味低減の観点から、０．０１〜１６、更に０．１〜１１、更に０．３〜９、更に０．５〜７、特に１〜５であることが好ましい。
なお、「（Ａ）フラボノールアグリコン総量」及び「（Ｂ）ポリフェノール総量」は、後掲の実施例に記載の方法により定量されたものである。
【００１４】
また、本発明のポリフェノール組成物はルチンを含有することができるが、本発明のポリフェノール組成物は、エグ味低減の観点から、カメリアシネンシスから抽出して得られる従来の抽出物（例えば、緑茶抽出物、紅茶抽出物及び烏龍茶抽出物）に比べてルチン含有量が高いことが好ましい。具体的には、（Ｃ）当該ポリフェノール組成物の固形分中のルチンの含有量は０．４〜３０質量％であることが好ましく、より一層のエグ味低減の観点から、０．８〜２５質量％、更に２〜２０質量％、更に４〜１５質量％、特に６〜１５質量％であることが好ましい。ここで、「ルチン」とは、フラボノール配糖体の一種であり、ケルセチンの３位の酸素原子にβ−ルチノース（６−Ｏ−α−Ｌ−ラムノシル−Ｄ−β−グルコース）が結合したものである。
【００１５】
上記質量比［（Ｂ）／（Ａ）］及び（Ｃ）ルチン含有量が上記範囲内にあるポリフェノール組成物は、例えば、下記の工程（１）〜（３）によりカメリアシネンシス抽出物を分画して得ることができる。
（１）カメリアシネンシス抽出物を合成吸着剤に吸着させる工程、
（２）上記合成吸着剤に第１の有機溶媒水溶液を接触させて、第１の画分を溶出させる工程、
（３）上記第１の画分を溶出した後の合成吸着剤に、上記第１の有機溶媒水溶液よりも疎水性の高い第２の有機溶媒水溶液を接触させて、ポリフェノール組成物を含む第２の画分を溶出させる工程。
【００１６】
工程（１）で使用するカメリアシネンシス抽出物としては、例えば、カメリアシネンシスから熱水又は水溶性有機溶媒により抽出した抽出物が例示される。カメリアシネンシス抽出物は、そのまま使用しても、乾燥又は濃縮して使用してもよい。茶抽出物の形態としては、例えば、液体、スラリー、半固体、固体が例示される。抽出方法としては、攪拌抽出、カラム抽出、ドリップ抽出等の公知の方法を採用することができる。
また、カメリアシネンシス抽出物として、上記カメリアシネンシス抽出物を使用する代わりに、カメリアシネンシス抽出物の濃縮物を水又は有機溶媒に溶解又は希釈したものを用いても、カメリアシネンシス抽出物及びその濃縮物を併用してもよい。ここで、カメリアシネンシス抽出物の濃縮物とは、カメリアシネンシス抽出物から溶媒を一部除去したものであり、例えば、特開昭５９−２１９３８４号公報、特開平４−２０５８９号公報、特開平５−２６０９０７号公報、特開平５−３０６２７９号公報等に記載の方法により調製することができる。また、カメリアシネンシス抽出物の濃縮物として市販品を使用してもよく、例えば、三井農林（株）の「ポリフェノン」、伊藤園（株）の「テアフラン」、太陽化学（株）の「サンフェノン」等の緑茶抽出物の濃縮物が挙げられる。
【００１７】
カメリアシネンシス抽出物としては緑茶抽出物が好適に用いられる。なお、カメリアシネンシス抽出物は、必要によりタンナーゼ処理しても（例えば、特開２００４−３２１１０５号公報）、当該タンナーゼ処理後に更に活性炭、酸性白土及び活性白土から選ばれる少なくとも１種で処理してもよい（例えば、特開２００７−２８２５６８号公報）。
【００１８】
合成吸着剤としては、イオン交換能が１ｍｅｑ／ｇ未満であり、かつ不溶性の三次元架橋構造を有するポリマーからなるものが好ましい。また、合成吸着剤の粒子形状は、球形、不均一形状等のいずれの形状であってもよいが、良好な分離条件を満たすために球形であることが好ましい。
このような合成吸着剤は公知の方法により製造してもよいが、市販品を使用してもよい。市販の合成吸着剤としては、例えば、アンバーライトＸＡＤ４、ＸＡＤ１６ＨＰ、ＸＡＤ１１８０、ＸＡＤ２０００（供給元：米国ローム＆ハース社）、ダイヤイオンＨＰ２０、ＨＰ２１（三菱化学社製）、セパビーズＳＰ−８５０、ＳＰ−８２５、ＳＰ−７００、ＳＰ−７０（三菱化学社製）、ＶＰＯＣ１０６２（Ｂａｙｅｒ社製）等のスチレン系；セパビーズＳＰ２０５、ＳＰ２０６、ＳＰ２０７（三菱化学社製）等の芳香環に臭素原子を導入して吸着能を高めた置換スチレン系；ダイヤイオンＨＰ１ＭＧ、ＨＰ２ＭＧ（三菱化学社製）等のメタクリル系；アンバーライトＸＡＤ７６１（ロームアンドハース社製）等のフェノール系；アンバーライトＸＡＤ７ＨＰ（ロームアンドハース社製）等のアクリル系；ＴＯＹＯＰＥＡＲＬ、ＨＷ-４０Ｃ（東ソー社製）等のポリビニル系；ＳＥＰＨＡＤＥＸ、ＬＨ−２０（ファルマシア社製）等のデキストラン系が例示される。
中でも、合成吸着剤としては、その母体がスチレン系、メタクリル系、アクリル系、ポリビニル系が好ましく、分離能の観点から、スチレン系が特に好ましい。
【００１９】
合成吸着剤の使用量としては、カメリアシネンシス抽出物中の非重合体カテキン類の全質量と、合成吸着剤の全容量との比が２０〜６０ｇ／Ｌ、更に２５〜５５ｇ／Ｌ、特に３０〜５０ｇ／Ｌとなる量を選択することが、分離能の観点から好ましい。
【００２０】
工程（１）においては、カメリアシネンシス抽出物に合成吸着剤を添加し撹拌して吸着させた後、ろ過操作により合成吸着剤を回収するバッチ方法、あるいは合成吸着剤を充填したカラムを用いて連続的に吸着処理を行なうカラム方法を採用することができるが、生産性の点からカラムによる連続処理方法が好ましい。
【００２１】
工程（１）に供する際、カメリアシネンシス抽出物中の非重合体カテキン類濃度を好ましくは０．５〜１０質量％、特に好ましくは０．８〜５質量％に調整することが、吸着効率の観点から好ましい。なお、カメリアシネンシス抽出物中の非重合体カテキン類濃度を上記範囲内に調整するために、カメリアシネンシス抽出物を必要により濃縮又は希釈等してもよい。
【００２２】
第１及び第２の有機溶媒水溶液としては、エタノール、メタノール等のアルコール類、アセトン等のケトン類、酢酸エチル等のエステル類等の有機溶媒の水溶液が例示される。第２の有機溶媒水溶液としては、第１の有機溶媒水溶液よりも疎水性の高いものであれば特に限定されず、例えば、第１の有機溶媒水溶液よりも有機溶媒濃度の高い水溶液を使用するか、あるいは第１の有機溶媒よりも炭素数の多い有機溶媒を含む水溶液を使用することができる。第１及び第２の有機溶媒水溶液中の有機溶媒濃度は適宜設定することが可能であるが、例えば、第１の有機溶媒水溶液中の有機溶媒濃度としては、好ましくは１０〜４５質量％、特に好ましくは２０〜４０質量％であり、また第２の有機溶媒水溶液中の有機溶媒濃度としては、好ましくは５０〜９８質量％、特に好ましくは５０〜９５質量％である。
【００２３】
上記工程（１）及び（２）における具体的な操作方法としては、例えば、特開２００６−１６０６５６号公報、特開２００８−０７９６０９号公報等に記載の方法を採用することが可能である。
有機溶媒水溶液の通液条件は適宜設定することが可能であり、第２の有機溶媒水溶液の通液条件は第１の有機溶媒水溶液と同一でも異なっていてもよい。第１及び第２の有機溶媒水溶液の通液条件は、例えば、通液速度（ＳＶ）が好ましくは０．５〜１０［ｈ-1］、特に好ましくは０．５〜５［ｈ-1］であり、かつ通液倍数（ＢＶ）が合成吸着剤の容量に対して好ましくは０．５〜１０［ｖ／ｖ］、特に好ましくは１〜４［ｖ／ｖ］である。
【００２４】
工程（３）後においては、第２の画分を濃縮することで疎水性のポリフェノール組成物を得ることができるが、濃縮は蒸留、減圧蒸留、精留、薄膜蒸留、膜濃縮等により行うことが可能である。また、濃縮前又は濃縮後において、必要によりろ過及び／又は遠心分離処理により夾雑物を分離してもよい。ポリフェノール組成物の形態としては、固体、半固体、液体、スラリー等の種々のものが例示される。
【００２５】
また、本発明においては、上記ポリフェノール画分に、カメリアシネンシス抽出物、その濃縮物及びそれらの精製物、並びに他のポリフェノール組成物から選ばれる少なくとも１種を配合して所望の質量比［（Ｂ）／（Ａ）］及び（Ｃ）ルチン含有量に調整してもよい。ここで、カメリアシネンシス抽出物の精製物とは、溶剤やカラムを用いてカメリアシネンシス抽出物又はその濃縮物から沈殿物等を除去したものをいう。カメリアシネンシス抽出物、その濃縮物及びそれらの精製物の形態としては、固体、水溶液、スラリー状等の種々のものが例示される。なお、ポリフェノール画分に配合する「カメリアシネンシス抽出物、その濃縮物及びそれらの精製物」は、ポリフェノール画分と同種及び異種の何れのカメリアシネンシスから得られたものであってもよい。一方、「他のポリフェノール組成物」としては、例えば、異なる分画条件で得られたポリフェノール画分や、異種のポリフェノール含有植物から得られたポリフェノール画分が例示される。
【００２６】
本発明のポリフェノール組成物は、高濃度のポリフェノールを含有するにも拘らず、ポリフェノール特有のエグ味が低減されている。また、本発明のポリフェノール組成物は、非重合体カテキン類やフラボノール類単独では味わえない嗜好性の高い苦味を有しているが、甘味料や調味料で苦味を緩和しても後味に違和感が生じない。したがって、本発明のポリフェノール組成物は、飲食品に配合して使用することができる。
【００２７】
本発明の飲食品中のポリフェノール組成物の含有量は、食品の種類や形態により適宜選択することができるが、通常固形分換算で０．１〜１０質量％である。
【００２８】
本発明の飲料としては、例えば、茶飲料、非茶系飲料が挙げられる。茶飲料としては、例えば、緑茶飲料、烏龍茶飲料、紅茶飲料が挙げられる。また、非茶系飲料としては、清涼飲料（例えば、果汁ジュース、野菜ジュース、スポーツ飲料、アイソトニック飲料、炭酸飲料）、コーヒー飲料、栄養ドリンク剤、美容ドリンク剤等の非アルコール飲料、ビール、ワイン、清酒、梅酒、発泡酒、ウィスキー、ブランデー、焼酎、ラム、ジン、リキュール類等のアルコール飲料が例示される。
【００２９】
本発明の飲料は、ポリフェノール組成物をそのまま又は希釈して容器詰飲料とすることが可能であるが、ポリフェノール組成物の水溶解性を改善するために、有機酸及び／又はその塩を配合してもよい。
【００３０】
有機酸としては、分子中に１個以上のカルボキシル基を有すれば、芳香族でも、脂肪族でも、ラクトンでもよいが、ヒドロキシカルボン酸又はそのラクトンが好ましい。具体的には、アスコルビン酸、エリソルビン酸、クエン酸、グルコン酸、コハク酸、酒石酸、乳酸、アジピン酸、フマル酸、リンゴ酸等が例示され、中でもアスコルビン酸、クエン酸、グルコン酸、酒石酸、乳酸、リンゴ酸が好ましい。なお、塩としては、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、アミノ酸塩が挙げられ、中でもアルカリ金属塩が好ましく、特にナトリウム塩、カリウム塩が好ましい。
【００３１】
有機酸及び／又はその塩は、本発明の飲料中の有機酸イオン濃度が１〜１００ｍｍｏｌ／Ｌとなるように配合することが好ましい。有機酸イオン濃度は、溶解性向上及び外観改善の観点から、好ましくは２〜９５ｍｍｏｌ／Ｌ、より好ましくは５〜９０ｍｍｏｌ／Ｌ、より好ましくは１０〜８５ｍｍｏｌ／Ｌ、より好ましくは１５〜８０ｍｍｏｌ／Ｌ、更に好ましくは１８〜７０ｍｍｏｌ／Ｌ、特に好ましくは２０〜６０ｍｍｏｌ／Ｌである。なお、有機酸イオン濃度は、例えば、有機酸がｎ価の多価カルボン酸である場合、第１段〜第ｎ段まで解離状態にあるカルボキシルアニオン（ＣＯＯ−）の合計濃度である。
【００３２】
本発明の飲料には、飲食品を調製する際に用いられる一般的な添加物、例えば、酸化防止剤、苦渋味抑制剤、ビタミン、香料、各種エステル類、無機酸類、無機酸塩類、無機塩類、色素類、乳化剤、保存料、調味料、甘味料、酸味料、果汁エキス類、野菜エキス類、花蜜エキス類、ｐＨ調整剤、品質安定剤等の他、コーヒー抽出物等の植物エキスを単独で又は併用して配合することができる。
【００３３】
本発明の飲料は、ｐＨ（２５℃）が２〜９であることが好ましく、風味及び外観の観点から、２．５〜８、更に３〜７．０、特に３．５〜６．５であることが好ましい。
【００３４】
本発明の飲料を充填する容器としては、一般の飲料と同様にポリエチレンテレフタレートを主成分とする成形容器（いわゆるＰＥＴボトル）、金属缶、金属箔やプラスチックフィルムと複合化した紙容器、瓶等の通常の包装容器が挙げられる。
【００３５】
また、容器詰飲料は、例えば、金属缶のような容器に充填後、加熱殺菌できる場合にあっては適用されるべき法規（日本にあっては食品衛生法）に定められた殺菌条件で製造できる。ＰＥＴボトル、紙容器のようにレトルト殺菌できないものについては、あらかじめ上記と同等の殺菌条件、例えばプレート式熱交換器などで高温短時間殺菌後、一定の温度迄冷却して容器に充填する等の方法が採用できる。また無菌下で、充填された容器に別の成分を配合して充填してもよい。さらに、酸性下で加熱殺菌後、無菌下でｐＨを中性に戻すことや、中性下で加熱殺菌後、無菌下でｐＨを酸性に戻すなどの操作も可能である。
【００３６】
本発明の食品の形態としては、摂取しやすい形態であれば特に限定されるものではなく、例えば、ペースト状、粉末、液体、ゲル状、スラリー状、造粒物、顆粒、錠剤、カプセル剤等の固形状物が例示される。また、食品の形態に応じて、本発明のポリフェノール組成物を減圧濃縮や薄膜濃縮などにより溶媒を除去しても、噴霧乾燥や凍結乾燥等により粉体化してもよい。
【００３７】
本発明の食品としては、例えば、菓子類（例えば、パン、ケーキ、クッキー、ビスケット等の焼菓子、チューインガム、チョコレート、キャンデー）、デザート類（例えば、ゼリー、ヨーグルト、アイスクリーム）、レトルト食品、調味料（例えば、ソース、スープ、ドレッシング、マヨネーズ、クリーム）が例示される。
【００３８】
本発明の食品には、食品を調製する際に用いられる一般的な食品添加物、例えば、ミネラル、ビタミン、アミノ酸、甘味料、酸味料、香料、果実又は野菜の乾燥品、果汁、野菜汁又はそれらの粉末乾燥品等を配合することができる。さらに、賦形剤、滑沢剤、被覆剤等の成形助剤を配合してもよい。
【実施例】
【００３９】
１．非重合体カテキン類及びカフェインの測定
試料溶液をフィルター（０．４５μｍ）で濾過し、高速液体クロマトグラフ（型式ＳＣＬ−１０ＡＶＰ、島津製作所製）を用い、オクタデシル基導入液体クロマトグラフ用パックドカラム（Ｌ−カラムＴＭ ＯＤＳ、４．６ｍｍφ×２５０ｍｍ：財団法人 化学物質評価研究機構製）を装着し、カラム温度３５℃でグラディエント法により分析した。移動相Ａ液は酢酸を０．１ｍｏｌ／Ｌ含有する蒸留水溶液、Ｂ液は酢酸を０．１ｍｏｌ／Ｌ含有するアセトニトリル溶液とし、試料注入量は２０μＬ、ＵＶ検出器波長は２８０ｎｍの条件で行った。なお、グラディエントの条件は、以下のとおりである。
【００４０】
時間（分） Ａ液濃度（体積％） Ｂ液濃度（体積％）
０．０ ９７ ３
５．０ ９７ ３
３７．０ ８０ ２０
４３．０ ８０ ２０
４３．５ ０ １００
４８．５ ０ １００
４９．０ ９７ ３
６０．０ ９７ ３
【００４１】
２．ルチンの測定
試料溶液をフィルター（０．４５μｍ）で濾過し、高速液体クロマトグラフ（型式Ｗａｔｅｒｓ２６９５、ＷＡＴＥＲＳ製）を用い、カラム（Ｓｈｉｍｐａｃｈ ＶＰ ＯＤＳ、１５０×４．６ｍｍＩ．Ｄ．）を装着し、カラム温度４０℃でグラディエント法により分析した。移動相Ａ液はリン酸を０．０５質量％含有する蒸留水溶液、Ｂ液はメタノール溶液とし、流速は１ｍＬ／分、試料注入量は１０μＬ、ＵＶ検出器波長は３６８ｎｍの条件で行った。なお、グラディエントの条件は、以下のとおりである。
【００４２】
時間（分） Ａ液濃度（体積％） Ｂ液濃度（体積％）
０．０ ９５ ５
２０．０ ８０ ２０
４０．０ ３０ ７０
４１．０ ０ １００
４６．０ ０ １００
４７．０ ９５ ５
６０．０ ９５ ５
【００４３】
３．フラボノールアグリコン（ミリセチン、ケルセチン及びケンフェロール）の測定
（１）試料の加水分解
固形分濃度０．２質量％に調整した試料溶液５ｍＬにメルカプトエタノール２００μＬ、２Ｎ塩酸５００μＬを添加した。その後、ドライブロックバス（アズワン株式会社製）にて設定温度１２０℃で４０分間加熱し試料中のフラボノール配糖体を加水分解してフラボノールアグリコン（ミリセチン、ケルセチン、ケンフェロール）を生成させた後に、冷却した。
【００４４】
（２）分析
加水分解後の試料溶液中に存在しているミリセチン、ケルセチン及びケンフェロールを、高速液体クロマトグラフィーにより定量した。なお、定量はグラディエント法により行ったが、その分析方法は上記「ルチンの測定」と同じである。
【００４５】
（３）フラボノールアグリコンの総量
上記分析により定量されたミリセチン量、ケルセチン量及びケンフェロール量の総和として求めた。
【００４６】
４．ポリフェノールの測定
（１）試薬の調製
１）酒石酸鉄試薬の調製
５００ｍＬメスフラスコに硫酸第一鉄七水塩０．５０ｇと（＋）酒石酸ナトリウム・カリウム四水和物２．５０ｇを採取し、イオン交換水でメスアップした。
【００４７】
２）リン酸バッファーの調製
２０００ｍＬメスフラスコにリン酸水素二ナトリウム・二水和物２０．００ｇとリン酸二水素カリウム２．９０ｇを採取し、イオン交換水でメスアップした。この溶液のｐＨが７．５〜７．６になるように調整した。ｐＨ７．６を超える場合、リン酸二水素カリウム・二水和物０．９ｇ／１００ｍＬ水溶液を添加し、ｐＨ７．５未満の場合、リン酸二水素カリウム１．２ｇ／１００ｍＬ水溶液を添加し調整した。
【００４８】
（２）装置及び器具
１）分光光度計（Ｕ−２０１０；日立製作所製）
２）石英製セル（１０ｍｍ×１０ｍｍ）
３）２５ｍＬ、１００ｍＬ、２００ｍＬ、５００ｍＬ、２０００ｍＬのメスフラスコ
４）１ｍＬ、５ｍＬ、１０ｍＬ、２０ｍＬ、３０ｍＬのホールピペット
５）１ｍＬ、３ｍＬ、５ｍＬのマイクロピペット
【００４９】
（３）分析条件
１）測定波長：５４０ｎｍ
２）温度 ：２０℃±２℃
【００５０】
（４）操作：
１）検量線作成
ｉ）没食子酸エチル約０．５ｇを使用前に２〜３時間乾燥させた。
ii）２００ｍＬメスフラスコに乾燥した没食子酸エチル０．２ｇを採取し、イオン交換水でメスアップした。（１００ｍｇ／１００ｍＬ標準液）
iii）１００ｍＬメスフラスコに、ii）の標準液を用い、５ｍｇ／１００ｍＬ、１０ｍｇ／１００ｍＬ、２０ｍｇ／１００ｍＬ、３０ｍｇ／１００ｍＬの各標準液を調製した。
iv）２５ｍＬメスフラスコに、iii）の標準液をそれぞれ５ｍＬ採取し、酒石酸鉄試薬５ｍＬを加えリン酸バッファーでメスアップした。また、ブランクとして標準液を加えないものを調製した。
ｖ）分光光度計にて吸光度を測定し検量線を作成した。
なお、検量線については下記を目安にし、逸脱した時は再調整した。
Ｒ２ ：０．９９９５〜１．００００
検量線傾き：３４．５±０．４
切片 ：０．３以下
【００５１】
２）試料測定
ｉ）イオン交換水にて分光光度計をゼロ補正した。
ii）２５ｍＬメスフラスコに試料を所定量採取し、酒石酸鉄試薬５ｍＬを加えリン酸バッファーでメスアップした後、吸光度を測定した。なお、吸光度の測定は、発色後４０分以内とした。
【００５２】
実施例１
ポリフェノール組成物Ａ
緑茶葉（大葉種）を熱水で抽出した後、噴霧乾燥により緑茶抽出物Ａを得た。『緑茶抽出物Ａ』は、非重合体カテキン類濃度３０．８質量％、カフェイン濃度５．５質量％であった。
次いで、『緑茶抽出物Ａ』の非重合体カテキン類濃度が１質量％になるようにイオン交換水で希釈した。次いで、『緑茶抽出物Ａ』の希釈液８００ｇをカラム（内径５０ｍｍ×高さ１８０ｍｍ、容積３５３．３ｍＬ）に充填した合成吸着剤（ＳＰ−７０、三菱化学（株）製）２００ｍＬに吸着させた。次いで、イオン交換水３００ｍＬ、３０質量％エタノール水溶液４００ｍＬを順次合成吸着剤に通液して非重合体カテキン類を溶出させた。次いで、合成吸着剤に５０質量％エタノール水溶液を４００ｍＬ通液してポリフェノール組成物を溶出させた。なお、本分画操作はすべて、通液速度ＳＶ＝０．８〜１．２［ｈ-1］、通液倍数（ＢＶ）＝２．０［ｖ／ｖ］になるように流量調整して行った。次いで、得られた溶出液を減圧濃縮によりエタノールを留去しつつ不溶物を除去した後、凍結乾燥により水分を除去して『ポリフェノール組成物Ａ』を得た。
『ポリフェノール組成物Ａ』は、（Ａ）フラボノールアグリコン総量が１９．２質量％、（Ｂ）ポリフェノール総量が３３．１質量％、質量比［（Ｂ）／（Ａ）］が１．７２、（Ｃ）ルチン含有量が１０．６質量％であった。なお、『ポリフェノール組成物Ａ』は、後掲の本発明品１〜５に使用した。
【００５３】
実施例２
ポリフェノール組成物Ｂ
緑茶葉（大葉種）を熱水で抽出した後、噴霧乾燥により緑茶抽出物Ｂを得た。『緑茶抽出物Ｂ』は、非重合体カテキン類濃度３０．３質量％、カフェイン濃度５．５質量％であった。
次いで『緑茶抽出物Ｂ』の非重合体カテキン類濃度が１質量％になるようにイオン交換水で希釈した。次いで、『緑茶抽出物Ｂ』の希釈液８０００ｇをカラム（内径８９．２ｍｍ×高さ６００ｍｍ、容積３７４８ｍＬ）に充填した合成吸着剤（ＳＰ−７０、三菱化学（株）製）２０００ｍＬに吸着させた。次いで、イオン交換水３０００ｍＬ、２５質量％エタノール水溶液９０００ｍＬを順次合成吸着剤に通液して非重合体カテキン類を溶出させた。次いで、合成吸着剤に９２．５質量％エタノール水溶液を４０００ｍＬ通液してポリフェノール組成物を溶出させた。なお、本分画操作はすべて、流速ＳＶ＝０．５〜２．１［ｈ-1］、通液倍数（ＢＶ）＝２．０［ｖ／ｖ］になるように流量調整して行った。次いで、得られた溶出液を減圧濃縮によりエタノールを留去した後、凍結乾燥により水分を除去して『ポリフェノール組成物Ｂ』を得た。
『ポリフェノール組成物Ｂ』は、（Ａ）フラボノールアグリコン総量が１８．３質量％、（Ｂ）ポリフェノール総量が３４．０質量％、質量比［（Ｂ）／（Ａ）］が１．８６、（Ｃ）ルチン含有量が９．３質量％であった。なお、『ポリフェノール組成物Ｂ』は、後掲の本発明品６に使用した。
【００５４】
実施例３
ポリフェノール組成物Ｃ
実施例２で得た『緑茶抽出物Ｂ』の非重合体カテキン類濃度が１質量％になるようにイオン交換水で希釈した。次いで、『緑茶抽出物Ｂ』の希釈液２４００ｇをカラム（内径６０．６ｍｍ×高さ３３０ｍｍ、容積９５１ｍＬ）に充填した合成吸着剤（ＳＰ−７０、三菱化学（株）製）６００ｍＬに吸着させた。次いで、イオン交換水９００ｍＬ、２５質量％エタノール２７００ｍＬを順次合成吸着剤に通液して非重合体カテキン類を溶出させた。次いで、合成吸着剤に９２．５質量％エタノール水溶液を１２００ｍＬ通液してポリフェノール組成物を溶出させた。なお、本分画操作はすべて、流速ＳＶ＝０．７〜１．８［ｈ-1］、通液倍数（ＢＶ）＝２．０［ｖ／ｖ］になるように流量調整して行った。次いで、得られた溶出液を減圧濃縮によりエタノールを留去した後、凍結乾燥により水分を除去して『ポリフェノール組成物Ｃ』を得た。
『ポリフェノール組成物Ｃ』は、（Ａ）フラボノールアグリコン総量が２３．３質量％、（Ｂ）ポリフェノール総量が３４．１質量％、質量比［（Ｂ）／（Ａ）］が１．４６、（Ｃ）ルチン含有量が７．４質量％であった。なお、『ポリフェノール組成物Ｃ』は、後掲の本発明品７に使用した。
【００５５】
実施例４
ポリフェノール組成物Ｄ
実施例１で得られたポリフェノール組成物Ａ ０．０８質量部と、市販の緑茶抽出物（ＥＧＣｇ製剤、DSM Nutritional Products社製、以下『緑茶抽出物ａ』という）０．１２質量部を混合して『ポリフェノール組成物Ｄ』を得た。なお、『緑茶抽出物ａ』は、（Ａ）フラボノールアグリコンの総量が０．０質量％、（Ｂ）ポリフェノールの総量が１１０．５質量％※（※酒石酸鉄法の分析値）である。
『ポリフェノール組成物Ｄ』は、（Ａ）フラボノールアグリコン総量が７．７質量％、（Ｂ）ポリフェノール総量が７９．５質量％、質量比［（Ｂ）／（Ａ）］が１０．３２、（Ｃ）ルチン含有量が４．２質量％であった。なお、『ポリフェノール組成物Ｄ』は、後掲の本発明品８に使用した。
【００５６】
実施例５
ポリフェノール組成物Ｅ
市販の紅茶葉（ヌワラエリア、ブルックボンドハウス社製）５ｇを沸騰水５００ｇに添加し、１５０ｒｐｍで５分間攪拌抽出した。次いで、２号ろ紙で吸引ろ過し採液量を測定後、氷冷（液温２５℃以下）した。その後、水分を凍結乾燥で除いて紅茶抽出物を得た。得られた紅茶抽出物を、以下『紅茶抽出物ａ』という。
紅茶抽出物ａ ０．４２質量部と、実施例１で得られたポリフェノール組成物Ａ ０．０２５質量部とを混合して『ポリフェノール組成物Ｅ』を得た。
『ポリフェノール組成物Ｅ』は、（Ａ）フラボノールアグリコン総量が１．９質量％、（Ｂ）ポリフェノール総量が１７．７質量％、質量比［（Ｂ）／（Ａ）］が９．３２、（Ｃ）ルチン含有量が１．３質量％であった。なお、『ポリフェノール組成物Ｅ』は、後掲の本発明品９に使用した。
【００５７】
実施例６
ポリフェノール組成物Ｆ
市販の紅茶葉（ＡＳ ＣＴＣ、ブルックボンドハウス社製）茶葉５ｇを沸騰水５００ｇに添加し、１５０ｒｐｍで５分間攪拌抽出した。次いで、２号ろ紙で吸引ろ過し採液量を測定後、氷冷（液温２５℃以下）した。その後、水分を凍結乾燥で除いて紅茶抽出物を得た。得られた紅茶抽出物を、以下『紅茶抽出物ｂ』という。
紅茶抽出物ｂ ０．３９質量部と、実施例１で得られたポリフェノール組成物Ａ ０．０２５質量部とを混合して『ポリフェノール組成物Ｆ』を得た。
『ポリフェノール組成物Ｆ』は、（Ａ）フラボノールアグリコン総量が１．４質量％、（Ｂ）ポリフェノール総量が１３．３質量％、質量比［（Ｂ）／（Ａ）］が９．５、（Ｃ）ルチン含有量が０．９質量％であった。なお、『ポリフェノール組成物Ｆ』は、後掲の本発明品１０に使用した。
【００５８】
実施例７
ポリフェノール組成物Ｇ
市販の烏龍茶葉（ウーロン茶、国太楼社製）５ｇを沸騰水５００ｇに添加し、１５０ｒｐｍで５分間攪拌抽出し、２号ろ紙で吸引ろ過し採液量を測定後、氷冷（液温２５℃以下）した。その後、水分を凍結乾燥で除いて烏龍茶抽出物を得た。得られた烏龍茶抽出物を、以下『烏龍茶抽出物ａ』という。
烏龍茶抽出物ａ ０．３９質量部と、実施例１で得られたポリフェノール組成物Ａ ０．０２５質量部とを混合して『ポリフェノール組成物Ｇ』を得た。
『ポリフェノール組成物Ｇ』は、（Ａ）フラボノールアグリコン総量が１．６質量％、（Ｂ）ポリフェノール総量が１４．７質量％、質量比［（Ｂ）／（Ａ）］が９．１９、（Ｃ）ルチン含有量が０．８質量％であった。なお、『ポリフェノール組成物Ｇ』は、後掲の本発明品１１に使用した。
【００５９】
実施例８
ポリフェノール組成物Ｈ
実施例１で得られたポリフェノール組成物Ａ ０．０５質量部と、緑茶抽出物ａ ０．１３８質量部を混合して『ポリフェノール組成物Ｈ』を得た。
『ポリフェノール組成物Ｈ』は、（Ａ）フラボノールアグリコン総量が５．１質量％、（Ｂ）ポリフェノール総量が８９．９質量％、質量比［（Ｂ）／（Ａ）］が１７．６３、（Ｃ）ルチン含有量が２．８質量％であった。なお、『ポリフェノール組成物Ｈ』は、後掲の本発明品１２に使用した。
【００６０】
実施例９
ポリフェノール組成物Ｉ
実施例１で得られたポリフェノール組成物Ａ ０．０１質量部と、紅茶抽出物ａ ０．４３質量部を混合して『ポリフェノール組成物Ｉ』を得た。
『ポリフェノール組成物Ｉ』は、（Ａ）フラボノールアグリコン総量が１．３質量％、（Ｂ）ポリフェノール総量が１７．２質量％、質量比［（Ｂ）／（Ａ）］が１３．２３、（Ｃ）ルチン含有量が０．９質量％であった。なお、『ポリフェノール組成物Ｉ』は、後掲の本発明品１３に使用した。
【００６１】
実施例１０
ポリフェノール組成物Ｊ
実施例１で得られたポリフェノール組成物Ａ ０．０１質量部と、紅茶抽出物ｂ ０．４４質量部を混合して『ポリフェノール組成物Ｊ』を得た。
『ポリフェノール組成物Ｊ』は、（Ａ）フラボノール量アグリコン総が０．７質量％、（Ｂ）ポリフェノール総量が１２．５質量％、質量比［（Ｂ）／（Ａ）］が１７．８５、（Ｃ）ルチン含有量が０．５質量％であった。なお、『ポリフェノール組成物Ｊ』は、後掲の本発明品１４に使用した。
【００６２】
実施例１１
ポリフェノール組成物Ｋ
実施例１で得られたポリフェノール組成物Ａ ０．０１質量部と、烏龍茶抽出物ａ ０．４１質量部を混合して『ポリフェノール組成物Ｋ』を得た。
『ポリフェノール組成物Ｋ』は、（Ａ）フラボノールアグリコン総量が０．９質量％、（Ｂ）ポリフェノール総量が１４．０質量％、質量比［（Ｂ）／（Ａ）］が１５．５６、（Ｃ）ルチン含有量が０．４質量％であった。なお、『ポリフェノール組成物Ｋ』は、後掲の本発明品１５に使用した。
【００６３】
比較例１
市販の緑茶抽出物（ポリフェノン７０Ａ、三井農林社製、以下『緑茶抽出物ｂ』という）を用いた。
緑茶抽出物ｂは、（Ａ）フラボノールアグリコン総量が１．１質量％、（Ｂ）ポリフェノール総量が９９．０質量％、質量比［（Ｂ）／（Ａ）］が９０．００、（Ｃ）ルチン含有量が０．１質量％であった。なお、『緑茶抽出物ｂ』は、後掲の比較品１に使用した。
【００６４】
比較例２
紅茶抽出物ａを用いた。
紅茶抽出物ａは、（Ａ）フラボノールアグリコン総量が０．９質量％、（Ｂ）ポリフェノール総量が１６．８質量％、質量比［（Ｂ）／（Ａ）］が１８．６７、（Ｃ）ルチン含有量が０．７質量％であった。なお、『紅茶抽出物ａ』は、後掲の比較品２に使用した。
【００６５】
比較例３
紅茶抽出物ｂを用いた。
紅茶抽出物ｂは、（Ａ）フラボノールアグリコン総量が０．３質量％、（Ｂ）ポリフェノール総量が１２．０質量％、質量比［（Ｂ）／（Ａ）］が４０．００、（Ｃ）ルチン含有量が０．２質量％であった。なお、『紅茶抽出物ｂ』は、後掲の比較品３に使用した。
【００６６】
比較例４
烏龍茶抽出物ａを用いた。
烏龍茶抽出物ａは、（Ａ）フラボノールアグリコン総量が０．５質量％、（Ｂ）ポリフェノール総量が１３．５質量％、質量比［（Ｂ）／（Ａ）］が２７．００、（Ｃ）ルチン含有量が０．１質量％であった。なお、『烏龍茶抽出物ａ』は、後掲の比較品４に使用した。
【００６７】
比較例５
０．１５質量％の重曹水溶液（９５℃）で６００ｇのウーロン茶葉をカラム法で抽出し、抽出物約６０００ｇを得た。液温を６０〜６５℃に保ち、４００ｇの粒状活性炭（クラレ社製、GW-H32/60）に通液し、非重合カテキン類及びカフェインを選択的に除去した。この通過液を減圧下で濃縮し、Ｂｒｉｘ１０以上の茶抽出物約９００ｇを調製し『烏龍茶抽出物ｂ』を得た。
『烏龍茶抽出物ｂ』は、（Ａ）フラボノールアグリコン総量が０．８４質量％、（Ｂ）ポリフェノール総量が１９．４質量％、質量比［（Ｂ）／（Ａ）］が２３．１、（Ｃ）ルチン含有量が０．１８質量％であった。なお、『烏龍茶抽出物ｂ』は、後掲の比較品５に使用した。
【００６８】
比較例６
緑茶抽出物ｃの製造
緑茶抽出液の濃縮物（ポリフェノンＨＧ、三井農林（株）製）２００ｇを、２５℃にて２５０ｒ／ｍｉｎ攪拌条件下の４０質量％エタノール水溶液８００ｇ中に分散させ、酸性白土（ミズカエース＃６００、水澤化学社製）８０ｇを投入後、約１０分間攪拌を続けた。次に、２号ろ紙で濾過した後、濾液に活性炭８ｇを添加し再び２号ろ紙で濾過した。次に、０．２μｍメンブランフィルターによって再濾過した。次に、４０℃、減圧下にて濾液からエタノールを留去し、イオン交換水で非重合体カテキン類濃度を調整して「緑茶抽出物ｃ」を得た。
「緑茶抽出物ｃ」は、（Ａ）フラボノールアグリコン総量が１．５質量％、（Ｂ）ポリフェノール総量が４７．７質量％、質量比［（Ｂ）／（Ａ）］が３２．４９、（Ｃ）ルチン含有量が０．９６質量％であった。なお、『緑茶抽出物ｃ』は、後掲の比較品６に使用した。
【００６９】
（１）風味の評価
表１及び２に示す各成分をサンプル瓶中にて各配合量に秤量し、その中にイオン交換水を投入して分散させた。その後、６０℃のウォーターバス中で溶解してから、室温（２５℃）で２時間静置し、飲料を調製した。各飲料が室温に調温したところで官能試験を下記の基準で行った。その結果を表１及び２に示す。
【００７０】
（２）評価基準
５：大変良好（嗜好性の高い苦味があり、エグ味が少ない）
４：良好（エグ味は感じるが気にならない）
３：やや良好（エグ味が若干気にかかる）
２：やや不良（エグ味がやや強い）
１：不良（エグ味が強い）
【００７１】
【表１】
【００７２】
【表２】
【００７３】
表１及び２から、（Ａ）フラボノールアグリコン総量と、（Ｂ）ポリフェノール総量との質量比［（Ｂ）／（Ａ）］が０．０１〜１８であるポリフェノール組成物は、従来のカメリアシネンシス抽出物に比べてポリフェノール特有のエグ味が顕著に低減されており、風味が良好で口当たりのよいことが確認された。
【００７４】
焼き菓子の評価
実施例１のポリフェノール組成物Ａを用いて焼き菓子を作製した。
材料α（脱脂粉乳２５質量部、無塩バター２５質量部、白砂糖２９質量部、マーガリン４５質量部）を秤量し、ミキサー［Hobart社製 Ｎ５０ ＭＩＸＥＲ（５コートミキサー）］に入れ、ビーターを用いて低速３０秒で攪拌後、さらに中速にて攪拌し比重０．９の生地を調製した。
次に、材料αに低速で３０秒攪拌しながら、卵を溶いたものを３分割して加えた。１回目の卵を添加後、低速で３０秒撹拌を行った。２回目の添加時に食塩を溶解させた卵水と、ポリフェノール組成物Ａを同時にミキサーに直接投入し、低速にて３０秒撹拌を行った。上記終了後、ミキサーの壁に付着した油をかき落とした後、最後の卵を加え、低速３０秒撹拌後、さらに均一なクリーム状になるまで中速にて２分間撹拌を行った。
次に、薄力粉を入れ、低速で４５秒間撹拌した。攪拌により得られた原料を２０ｇ秤量し、縦７２mm×横２２mm×高さ１４mmの長方形の焼き型に詰め、剥離紙を敷いた展板にならべ、型に詰めた生地表面に６個の穴をつまようじで開けた。展板１枚当たり、４個／４個／４個ずつ３列に並べ、計１２個を並べた。次に、上記展板の下にさらに２枚の展板を重ね、表面にアルミホイルをかけた。焼成はオーブン中、１６０℃にて行った。アルミホイルをかぶせて２０分間焼成、アルミを外した後１８分間焼成を行い、焼き菓子を調製した。焼成後、網の上で室温下２０分冷却後、チャック付きポリエチレン袋に入れ、２０℃恒温室にて１晩放置した。食感評価の結果、食感上の問題を意識することなく食べることができた。
【００７５】
試験例１
食後の血糖値上昇抑制効果
雄性マウスＣ５７ＢＬ/６Ｊ（７週齢）を６日間予備飼育し、試験開始前に１６時間絶食させてから４群（実施例１群、比較例６群、比較例５群、対照群（水）、各群ｎ＝５）に分け、血液を採取した。
実施例１群には実施例１で得られた製剤を２０質量％エタノール水溶液に溶解し、これを０．５７ｍｇ／ｇ体重として経口投与した。また、比較例６群には比較例６で得られた製剤を２０質量％エタノール水溶液に溶解し、これを０．３９ｍｇ／ｇ体重として経口投与した。更に、比較例５群には比較例５で得られた製剤を２０質量％エタノール水溶液に溶解し、これを１．００ｍｇ／ｇ体重として経口投与した。一方、対照群には２０質量％エタノールを経口投与した。そして、各試料を投与直後のマウスに、表３に示す組成の脂肪乳剤を４０ｍｇ／ｇ体重となるように経口投与した。
【００７６】
【表３】
【００７７】
乳剤投与から１０分、３０分、６０分、１２０分経過ごとに各マウスから血液を採取し、グルコースＣII‐テストワコー（和光純薬社製）により血糖値を分析した。食後の血糖値の推移を図１に示す。ａ，ｂ，ｃは、グラフ間で有意差があることを示す。
【００７８】
図１から、次のことが確認された。すなわち、対照群は脂肪乳剤の投与により食後の血糖値が上昇するのに対し、比較例５群は対照群と同等の値をとり、実施例１群、比較例６群はともに食後の血糖値上昇が抑制されるが、実施例１群の方が比較例６群よりも食後の血糖値上昇が極めて抑制されることが確認された。
【００７９】
試験例２
α−アミラーゼ活性阻害効果
α−アミラーゼ活性の測定は、下記の方法により行った。
酵素 ：50U/mL ブタ膵臓由来アミラーゼ(dissolved in buffer)
基質 ：20mg Starch Azure(in 80 μL buffer)
緩衝液：40mMリン酸緩衝液（20mM NaClを含む）（pH7.0）
阻害剤：実施例１で得た製剤（被験試料）又は比較例５及び６で得た製剤（対照試料）
(dissolved in 20%EtOH)
手順：
（１）基質20mg/80μLと阻害剤10μLを等量混和し、37℃5分間プレインキュベート
（２）酵素溶液10μLを加え、37℃15分間反応
（３）100 mM リン酸緩衝液（pH4.3）900μLを添加
（４）反応液を遠心分離し、上清を波長595 nmで測定
【００８０】
測定結果を図２に示す。図２から、実施例１群は比較例６群及び比較例５群に比較してα−アミラーゼ活性を強く阻害することが確認された。
【００８１】
試験例３
リパーゼ活性阻害効果
リパーゼ活性の測定は、下記の方法により行った。
酵素 ：50U/mL ブタ膵臓由来リパーゼ(Sigma type II dissolved in buffer)
基質 ：0.1M 4-Methylumbelliferyl oleate(dissolved in DMSO)
緩衝液：150 mM NaCl、1.36mM CaCl2を含む 13 mM Tris-HCl (pH 8.0)
阻害剤：実施例１で得た製剤又は比較例５及び６で得た製剤(dissolved in 20%EtOH)
手順 ：
（１）25℃でマイクロプレートに、緩衝液60μL、基質20μLを添加し混合
（２）阻害剤10μLを添加
（３）酵素10μLを添加
（４）25℃で30分間インキュベート
（５）停止液（クエン酸緩衝液pH4.2）100μLを添加
（６）励起波長355nmで波長460nmの蛍光を測定
【００８２】
蛍光測定の結果を図３に示す。図３から、実施例１群は比較例６群及び比較例５群に比較してリパーゼ活性を強く阻害することが確認された。
【００８３】
これら試験例により、本発明のポリフェノール組成物は、優れた、食後の血糖値上昇抑制作用、α−アミラーゼ活性阻害作用及びリパーゼ活性阻害作用を有することが確認されたことから、食事由来の脂肪吸収の抑制、血中中性脂肪の上昇抑制、肥満防止等のための医薬の有効成分として有用である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
カメリアシネンシス由来のフラボノールアグリコン及びフラボノール配糖体を含有するポリフェノール組成物であって、
次の（Ａ）及び（Ｂ）：
（Ａ）高速液体クロマトグラフィーにより測定される、加水分解後の当該ポリフェノール組成物の固形分中に含有されるフラボノールアグリコン総量。
（Ｂ）酒石酸鉄法により測定される、当該ポリフェノール組成物の固形分中に含有されるポリフェノール総量。
の質量比［（Ｂ）／（Ａ）］が０．０１〜１８である、ポリフェノール組成物。
【請求項２】
前記（Ａ）フラボノールアグリコン総量が０．７〜５０質量％である、請求項１記載のポリフェノール組成物。
【請求項３】
前記（Ｂ）ポリフェノール総量が５〜９５質量％である、請求項１又は２記載のポリフェノール組成物。
【請求項４】
当該ポリフェノール組成物がルチンを含有し、（Ｃ）当該ポリフェノール組成物の固形分中に含有されるルチンの含有量が０．４〜３０質量％である、請求項１〜３のいずれか１項に記載のポリフェノール組成物。
【請求項５】
前記カメリアシネンシスが緑茶である、請求項１〜４のいずれか１項に記載のポリフェノール組成物。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか１項に記載のポリフェノール組成物を含有する、飲食品。
【請求項７】
請求項１〜５のいずれか１項に記載のポリフェノール組成物の製造方法であって、
カメリアシネンシス抽出物を合成吸着剤に吸着させる工程と、
前記合成吸着剤に第１の有機溶媒水溶液を接触させて、第１の画分を溶出させる工程と、
前記第１の画分を溶出した後の合成吸着剤に、前記第１の有機溶媒水溶液よりも疎水性の高い第２の有機溶媒水溶液を接触させて、ポリフェノール組成物を含む第２の画分を溶出させる工程を含む、製造方法。
【請求項１】
カメリアシネンシス由来のフラボノールアグリコン及びフラボノール配糖体を含有するポリフェノール組成物であって、
次の（Ａ）及び（Ｂ）：
（Ａ）高速液体クロマトグラフィーにより測定される、加水分解後の当該ポリフェノール組成物の固形分中に含有されるフラボノールアグリコン総量。
（Ｂ）酒石酸鉄法により測定される、当該ポリフェノール組成物の固形分中に含有されるポリフェノール総量。
の質量比［（Ｂ）／（Ａ）］が０．０１〜１８である、ポリフェノール組成物。
【請求項２】
前記（Ａ）フラボノールアグリコン総量が０．７〜５０質量％である、請求項１記載のポリフェノール組成物。
【請求項３】
前記（Ｂ）ポリフェノール総量が５〜９５質量％である、請求項１又は２記載のポリフェノール組成物。
【請求項４】
当該ポリフェノール組成物がルチンを含有し、（Ｃ）当該ポリフェノール組成物の固形分中に含有されるルチンの含有量が０．４〜３０質量％である、請求項１〜３のいずれか１項に記載のポリフェノール組成物。
【請求項５】
前記カメリアシネンシスが緑茶である、請求項１〜４のいずれか１項に記載のポリフェノール組成物。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか１項に記載のポリフェノール組成物を含有する、飲食品。
【請求項７】
請求項１〜５のいずれか１項に記載のポリフェノール組成物の製造方法であって、
カメリアシネンシス抽出物を合成吸着剤に吸着させる工程と、
前記合成吸着剤に第１の有機溶媒水溶液を接触させて、第１の画分を溶出させる工程と、
前記第１の画分を溶出した後の合成吸着剤に、前記第１の有機溶媒水溶液よりも疎水性の高い第２の有機溶媒水溶液を接触させて、ポリフェノール組成物を含む第２の画分を溶出させる工程を含む、製造方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図２】
【図３】
【公開番号】特開２０１０−２４６５３０（Ｐ２０１０−２４６５３０Ａ）
【公開日】平成２２年１１月４日（２０１０．１１．４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−６０４０８（Ｐ２０１０−６０４０８）
【出願日】平成２２年３月１７日（２０１０．３．１７）
【出願人】（００００００９１８）花王株式会社 (8,290)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２２年１１月４日（２０１０．１１．４）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年３月１７日（２０１０．３．１７）
【出願人】（００００００９１８）花王株式会社 (8,290)
【Ｆターム（参考）】
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