ローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａｒｅｇｉａ）果実由来の薬剤組成物並びに前立腺肥大および前立腺炎を治療および予防する方法
本発明は前立腺肥大（ＢＰＨ）および前立腺炎ならびに脱毛および多毛を予防および／または治療するためのローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）の果実から得た新規な薬剤組成物およびその製造方法に関する。本発明の組成物は炭素原子数８〜２８、特に８〜１８の範囲にある遊離脂肪酸および／またはそれらのエステルの混合物、より具体的には、炭素原子数８、１０、１２、１４、１６および１８の飽和直鎖遊離脂肪酸および炭素原子数１６：１および１８：１を有する不飽和遊離脂肪酸を含む。本発明の前記組成物の製造方法は、果実の乾燥および粉砕、任意の塩基性加水分解、続いての有機溶媒による選択的抽出を含む。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は製薬産業に関連し、特に良性前立腺肥大（ＢＰＨ）および前立腺炎を予防および／または治療するためのローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）果実由来の新規な薬剤組成物およびその製造方法に関する。本発明の組成物は、遊離脂肪酸および／またはそのエステルの混合物からなる。脂肪酸および／またはそのエステルの両者は、炭素原子数８〜２８、特に炭素原子数８〜１８である。特に、混合物は炭素原子数８、１０、１２、１４、１６および１８の飽和直鎖脂肪酸および炭素原子数１６：１および１８：１のモノ不飽和脂肪酸からなる。遊離脂肪酸はエステル加水分解により増加される。
【０００２】
前記組成物はローヤル・パーム果実をまず乾燥し、粉砕して得られる。当該植物性原料は鹸化生成物を得るまで中等度の塩基性加水分解に付し、かつ、有機溶媒による選択的抽出を行うか、または脂肪酸の混合物を選択的に抽出する。両方法は鹸化前処理を行わずして得られた抽出物と同様な薬理学的性質を有する組成物をもたらす。
【０００３】
かくして得られた混合物は、ＢＰＨおよび前立腺炎、ならびに脱毛および多毛などの他の疾患の治療のための薬学的に異なった製剤中に含まれる活性成分に類似している。
【０００４】
本発明は、得られる薬学的組成物がＢＰＨ、前立腺炎、脱毛および多毛に対して使用される医薬と同様に、あるいは医薬製剤として使用され得ることから、製薬産業に関連している。
【背景技術】
【０００５】
前立腺は膀胱の真下に位置する腺であり、ＢＰＨは５０歳以上の男性の５０％以上に現われる疾患である。ＢＰＨは筋肉線維および腺の上皮構造の増大からなり、夜間頻尿症を含む排尿障害などの尿路閉塞を引き起こし、これらは尿閉の症状を改善するために外科手術をしばしば必要とする（非特許文献１）。ところで、外科手術、特に経尿道はこの症状を患う患者には平均的な治療であり、近年、多くの他の選択肢が出現している（非特許文献２及び３）。これらは非侵襲外科手術手法および５α−レダクターゼ酵素の阻害剤（非特許文献４）、α−アドレナリン受容体および植物療法抽出物などの別の薬剤治療を含む。
【０００６】
男性性ホルモン、主にテストステロンは前記疾患の病理学的原因として非常に重要な役割を果たす。これは５α−レダクターゼを経由して、そのより活性な誘導体、ジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）に転換され、アンドロゲン受容体に結合して、タンパク合成、およびその結果として細胞増殖を促進する。それ故、このような症状を患う患者が４〜６倍に増加したＤＨＴ濃度を示すことから、５α−レダクターゼの増大する活性がＢＰＨを生じるのであろう。
【０００７】
ＢＰＨの正確な原因は知られていないが、明らかに精巣の存在に依存し、かつ、その頻度は年齢とともに増加する。前立腺成長に関与するアンドロゲンはＤＨＴであり、５α−レダクターゼ酵素による触媒反応により、テストステロンから前立腺中に形成される。前立腺成長はＤＨＴ濃度の増加に直接に関係していることをこれまでに実施された研究が示している。他方、５０歳以上の男性ではエストラジオール産生がアンドロゲンに比べて増加し、実験モデルではエストロゲンがＤＨＴと相乗的に作用して、前立腺肥大を誘発することが見出されている。
【０００８】
ＢＰＨの症状は、患者を困惑させる尿道閉塞および尿道過敏に関与している。これらの症状の中には、夜間多尿症、排尿困難、尿流量および強度の減少、残尿感、および尿閉などが含まれる。大部分の症状は徐々に始まり、障害が進むにつれて、その症状が悪くなり、薬理学的治療を施すことが必要となる。
【０００９】
したがって、アルフゾシン、ドキサゾシン、テラゾシンなどのα−アドレナリン拮抗薬（非特許文献５）および数種の植物抽出物がＢＰＨを治療するために広く使用されている。目下、植物治療製品は、ヨーロッパおよび米国において一般的であり、ＢＰＨの治療のために処方される全薬剤の８０％を占める。
【００１０】
特に、ノコギリパルメット［サバル・セルラータ（Ｓａｂａｌ ｓｅｒｒｕｌａｔａ）、同義語、セレノア・レペンス（Ｓｅｒｅｎｏａ ｒｅｐｅｎｓ）］の果実および西洋イラクサ（Ｕｒｔｉｃａｄｉｏｉｃａ）の根の抽出物が一般的である。二重盲検の管理臨床試験がノコギリパルメット抽出物とフィナステライド、すなわち、５α−レダクターゼのタンパク阻害剤の効果を比較するために実施された。この試験では、６ケ月間の治療において両治療間には同様の効果があることが示された（非特許文献６及び７）。他方、西洋イラクサ（Ｕｒｔｉｃａｄｉｏｉｃａ）の根の抽出物はＢＰＨを治療するために臨床的に使用されている。いくつかの組織学的および生物学的データは、アンドロゲン依存性前立腺細胞の増殖における根抽出物の効果を証明した。
【００１１】
ノコギリパルメット（Ｓａｗ ｐａｌｍｅｔｔｏ）の作用機構は、全体的に解明されておらず、１つ以上の作用機構が含まれるようである。すなわち、これはα−アドレナリン受容体の非競合阻害を発揮することができると治験により証明され、タムスロシンに類似した作用機構が示唆される。他の著者達は、ノコギリパルメット（Ｓａｗ ｐａｌｍｅｔｔｏ）はおそらく腺破裂による上皮収縮を可能とすることを検討し、５α−レダクターゼ酵素の阻害に関与するフィナステライドと同様の作用機構を示唆した。これが基本的な作用機構のようである（非特許文献８）。
【００１２】
アンドロゲン脱毛症は男女に共通していて、アンドロゲン依存性である。この理由は、無毛は５α−レダクターゼ酵素の濃度の直接に関係しており、ＤＨＴである無毛関連アンドロゲンは、当該酵素の作用によりテストステロンから産生するためである。したがって、５α−レダクターゼ酵素の濃度の増加が無毛の男性の前頭部領域で検出されている（非特許文献９）が、５α−レダクターゼ酵素欠損症候群の男性は脱毛に悩んでいない（非特許文献１０）。
【００１３】
脱毛は、思春期の後に直ちに始まり得る、広く分布する特徴として実証されていて、男女両者における無毛を予防するための製品を開発することが必要である。
【００１４】
既に知られているように、ノコギリパルメット（Ｓａｗ ｐａｌｍｅｔｔｏ）の脂質抽出物は、受容体に対するＤＨＴの結合部位の５０％をブロックし、前立腺細胞核への侵入をブロックし、５α−レダクターゼ酵素活性を強く阻害して、ＤＨＴホルモンの産生を抑制する。したがって、このような種の果実抽出物は脱毛症の治療に使用されている（特許文献１〜３）。
【００１５】
ＢＰＨを治療するために商業的に使用されているノコギリパルメット（Ｓａｗ ｐａｌｍｅｔｔｏ）の抽出物は、別の既報方法により植物果実から得られたステロールと高分子量アルコールを含む脂肪酸の混合物である（特許文献４〜７、非特許文献１１及び１２）。しかしながら、本発明のヤシ科（Ａｒｅｃａｃｅｅ）の果実、すなわち、ローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）の果実に到達するために、本発明においてクレームするような単純でかつ経済的な方法を報告している著者はほとんどいない。
【００１６】
【非特許文献１】マドセン（Ｍａｄｓｅｎ）とブルスケビッツ（Ｂｒｕｓｋｅｗｉｔｚ）、Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｎｅｐｈｒｏｌ Ｈｉｐｅｒｔ４：４５５−４５９，１９９５
【非特許文献２】オースターリング（Ｏｅｓｔｅｒｌｉｎｇ）、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ． Ｊ． Ｍｅｄ３３２： ９９−１０９，１９９５
【非特許文献３】ゲラー（Ｇｅｌｌｅｒ）ら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ．８０， ７４５−７５６，１９９５
【非特許文献４】ボイル（Ｂｏｙｌｅ）ら、Ｕｒｏｌｏｇｙ；４８：３９８−４０５， １９９６
【非特許文献５】チャップル（Ｃｈａｐｐｌｅ）、Ｅｕｒ．Ｕｒｏｌ．２９，１２９−１４４， １９９６
【非特許文献６】カッラロ（Ｃａｒｒａｒｏ）ら、Ｐｒｏｓｔａｔｅ２９，２３１−２４０， １９９６
【非特許文献７】マークス（Ｍａｒｋｓ）ら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｕｒｏｌｏｇｙ１６３：１４５１−１４５６， ２０００
【非特許文献８】ニーダープルム（Ｎｉｅｄｅｒｐｒｕｍ）ら、Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，７６８，２２７−３０，１９９５
【非特許文献９】ビングハム（Ｂｉｎｇｈａｍ）ＫＤら、Ｊ．Ｅｎｄｒｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ５７， １１１，１９７３
【非特許文献１０】エブリング（Ｅｂｌｉｎｇ）ＦＪ，Ｃｌｉｎ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ３１９，１９８６
【非特許文献１１】クリストニ（Ｃｒｉｓｔｏｎｉ）， Ｆｉｔｏｔｅｒａｐｉａ６８，３５５，１９９７
【非特許文献１２】デュスワーフ（ＤｅＳｗａｅｆ）Ｎａｔ Ｐｒｏｄ Ｌｅｔｔｅｒｓ７，２２３，１９９６
【特許文献１】ＷＯ９７０２０４１
【特許文献２】ＵＳＡ６，０１９，９７６
【特許文献３】ＷＯ９８３３４７２
【特許文献４】ＥＰＯ５４１８５３
【特許文献５】ＥＰＯ４９２３０５
【特許文献６】ＥＰＯ２５０９５３
【特許文献７】ＵＳＡ特許６，０３９，９５０
【発明の開示】
【００１７】
本発明の組成物を製造する方法は、ローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）の果実を乾燥することに基づく。乾燥果実は粉砕して、粒径５０００μｍ未満の微細な粉末を得る。この粉末はその後、アルカリ水酸化物、アルカリ土類金属水酸化物および有機水酸化物、特に低分子量水酸化物、さらに具体的には、水酸化ナトリウム、カリウム、カルシウムまたはアンモニウムによる塩基性加水分解に付すか、あるいは付さない。続いて有機溶媒中での選択的抽出またはＣＯ２による超臨界抽出を行う。
【００１８】
加水分解された、あるいはされなかった植物性材料は、従来の固液抽出機中で抽出する。その際、脂肪酸および／またはそのエステルは炭素原子数１〜３のアルコールおよび炭素原子数５〜８の炭化水素などの適切な溶媒中で選択的に抽出して、果実中に存在する他の成分から分離する。このような溶媒として、メタノール、エタノール、２−プロパノール、ヘキサン、ペンタン、イソペンタン、ヘプタンおよびオクタンが挙げられる。
【００１９】
得られる収量は５〜２０％である。得られる酸混合物の組成は、炭素原子数１２、１４、１６および１８の飽和酸、ならびに炭素原子数１６：１または１８：１を有する不飽和酸を含む。これらの定性的および定量的組成は、表１に示される。
【００２０】
［表１］
ローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）の脂質抽出物に存在する脂肪酸の組成
成分 酸混合物中の相対的パーセント
カプリル酸（Ｃ８：０） ＜３．０
カプリン酸（Ｃ１０：０） ＜３．０
ラウリン酸（Ｃ１２：０） ３．０〜４０．０
ミリスチン酸（Ｃ１４：０） ４．０〜１５．０
パルミチン酸（Ｃ１６：０） １０．０〜８０．０
パルミトレイン酸（Ｃ１６：１） ０．１５〜２０．０、
ステアリン酸（Ｃ１８：０） ０．１〜５．０
オレイン酸（Ｃ１８：１） ３．０〜５０．０＊
＊ クロマトグラフィーのピークの全量として定量した。ここで、オレイン酸溶出物（ピークの６０〜７０％）、リノレン酸（ピークの２５〜４０％）、およびリノレン酸（クロマトグラフィーのピークの１０％未満）である。
【００２１】
本発明のローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）果実から得られた物質の全体的評価は、このような組成物が非常に安全であり、かつ、十分に耐性があることを示す。ゲッ歯類動物にて実施された毒性試験の結果から支持される信頼性ある利点は、物質に関連する毒性を示さなかった。
本発明の目的は、以下の実施例により詳細に説明され、参照されるが、これらに限定されない。
【実施例】
【００２２】
実施例１
ローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）の新鮮な果実５ｋｇを採取し、制御された温度４５℃のオーブン中に７日間、置いた。粉砕機中で乾燥果実を１５００〜２０００μｍの粒子径に粉砕し、このような粉末から１０００ｇを採取し、攪拌反応器中に置き、アルカリ加水分解に付した。その後、生成物をヘキサン１０ｌにて抽出し、５５℃まで加熱し、３６時間、絶えず、攪拌した。その後、生成物を濾過し、真空下で５０℃にて蒸発乾燥させた。得られた抽出物の重量は９８．５ｇであり、ガスクロマトグラフィーにより測定された組成物を表２に示す。
【００２３】
［表２］
ローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）の脂質抽出物中に存在する脂肪酸の組成
成分 酸混合物中の相対的パーセント
カプリル酸（Ｃ８：０） １．０
カプリン酸（Ｃ１０：０） １．０
ラウリン酸（Ｃ１２：０） ５．７
ミリスチン酸（Ｃ１４：０） ４．４
パルミチン酸（Ｃ１６：０） ７５．１
パルミトレイン酸（Ｃ１６：１） １．９
ステアリン酸（Ｃ１８：０） １．９
オレイン酸（Ｃ１８：１） ９．１
【００２４】
実施例２
ローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）の新鮮な果実１０ｋｇを制御された温度４５℃のオーブン中に７日間、置いた。粉砕機中で乾燥果実を１５００μｍ未満の粒子径にまで粉砕し、このような粉末から１５００ｇを採取し、アルカリ加水分解に付した。その後、エタノール１０ｌを入れたソックスレー抽出器中で、生成物を６０℃で、４８時間、抽出した。次いで、有機溶液を除去し、濾過し、真空下に５０℃で蒸発乾燥させた。得られた抽出物を重量測定し、ガスクロマトグラフィーにより分析した。その組成を表３に示す。
【００２５】
［表３］
ローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）の脂質抽出物中に存在する脂肪酸の組成
成分 酸混合物中の相対的パーセント
カプリル酸（Ｃ８：０） １．０
カプリン酸（Ｃ１０：０） １．０
ラウリン酸（Ｃ１２：０） ３．２
ミリスチン酸（Ｃ１４：０） ５．５
パルミチン酸（Ｃ１６：０） ２７．１
パルミトレイン酸（Ｃ１６：１） １８．５
ステアリン酸（Ｃ１８：０） ０．３
オレイン酸（Ｃ１８：１） ４３．３
【００２６】
実施例３
ローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）の新鮮な果実５ｋｇを採取し、制御された温度４５℃のオーブン中に７日間、置いた。粉砕機中で乾燥果実を１５００μｍ〜１８００μｍの粒子径にまで粉砕し、このような粉末から１０００ｇを採取し、アルカリ加水分解に付した。その後、ヘプタン１０ｌを入れた攪拌反応器中で、生成物を６０℃で、攪拌しながら、５０時間、抽出した。次いで、溶媒を除去し、濾過し、真空下に６５℃で蒸発乾燥させた。得られた抽出物を重量測定し、ガスクロマトグラフィーにより分析した。表４に要約した組成を示す。
【００２７】
［表４］
ローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）の脂質抽出物中に存在する脂肪酸の組成
成分 酸混合物中の相対的パーセント
カプリル酸（Ｃ８：０） １．０
カプリン酸（Ｃ１０：０） １．０
ラウリン酸（Ｃ１２：０） ３．１６
ミリスチン酸（Ｃ１４：０） １２．７
パルミチン酸（Ｃ１６：０） １３．０
パルミトレイン酸（Ｃ１６：１） １．７
ステアリン酸（Ｃ１８：０） ２．３
オレイン酸（Ｃ１８：１） ３６．６
【００２８】
実施例４
ローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）の新鮮な果実５ｋｇを採取し、制御された温度４５℃のオーブン中に７日間、置いた。粉砕機中で乾燥果実を１０００μｍ〜１８００μｍの粒子径にまで粉砕し、このような粉末から１０００ｇを採取し、水酸化アンモニウムで処理して、粉末全てを湿潤化させた。その後、ヘキサン１０ｌを入れた攪拌反応器中で、粉末を５５℃で、攪拌しながら、３６時間、抽出した。次いで、溶媒を除去し、真空下に５０℃で蒸発乾燥させた。得られた抽出物を重量測定し、ガスクロマトグラフィーにより分析した。表５に要約した組成を示す。
【００２９】
［表５］
ローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）の脂質抽出物中に存在する脂肪酸の組成
成分 酸混合物中の相対的パーセント
カプリル酸（Ｃ８：０） １．０
カプリン酸（Ｃ１０：０） １．０
ラウリン酸（Ｃ１２：０） １９．７
ミリスチン酸（Ｃ１４：０） ９．７
パルミチン酸（Ｃ１６：０） １４．８
パルミトレイン酸（Ｃ１６：１） ０．２
ステアリン酸（Ｃ１８：０） ３．８
オレイン酸（Ｃ１８：１） ４９．８
【００３０】
実施例５
ローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）の果実から得られた脂質抽出物の効果を評価するために、体重３０〜４０ｇのＯＦ１雄白色種マウスを制御された温度（２５±２℃）と湿度の実験室条件に７日間、適応させた。適応期間後、この動物を無作為に別々な実験群に分けた。ローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）の抽出物をツイーン−２０／Ｈ２Ｏ賦形剤中に懸濁させ、懸濁液を経口投与した（５ｍｌ／ｋｇ）。コントロール動物は賦形剤を投与した。貯蔵テストステロンを植物油中に溶解し、１回投与量として１００ｍｇ／ｋｇを筋肉内（ｉｍ）へ注射した。動物を無作為に次の群に分けた：１）陰性コントロール、２）陽性コントロール（テストステロンを注射し、賦形剤を経口投与した動物）、３）、４）および５）テストステロンを筋肉内（ｉｍ）経路から注射し、ローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）果実の抽出物、２００、４００および８００ｍｇ／ｋｇをそれぞれ経口から投与した動物、および６）テストステロンを注射し、ノコギリパルメット（Ｓａｗ ｐａｌｍｅｔｔｏ）果実の抽出物４００ｍｇ／ｋｇを経口投与した動物。
【００３１】
投与期間（１４日間）を終了するとすぐにマウスを屠殺し、その腹部を切開術により腹面中間線にそって開き、前立腺を分離し、重量測定した。処置群とコントロール群との対比は、マン・ホイットニー（Ｍａｎｎ Ｗｈｉｔｎｅｙ）Ｕテストにより行った。その結果を表６に示す。
【００３２】
観察されたように、貯蔵テストステロン（１００ｍｇ／ｋｇ）を筋肉内（ｉｍ）注射したものは、陰性コントロール群に比べて、前立腺の重量および体重に対する前立腺の割合が有意に増加した。
【００３３】
【表６】
ＢＷ：体重（ｇ）、ＰＷ：前立腺重量（ｍｇ）、％Ｉ：阻害パーセント、＋＋＋：ｐ＜０．００１、マン・ホイットニーＵテスト、見かけ対コントロール、＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１、＊＊＊：ｐ＜０．００１、比較対コントロール
【００３４】
本発明の組成物（２００〜８００ｍｇ／ｋｇ）を２週間、経口投与すると、テストステロンで誘発した前立腺の増加を有意に、かつ用量依存的に阻害して、最高用量（８００ｍｇ／ｋｇ）で９２．７％の阻害パーセントを達成した。本発明の組成物はまた、前立腺重量／体重の割合の増加を有意に、かつ用量依存的に阻害して、８００ｍｇ／ｋｇで９６．６％の阻害パーセントを達成した。他方、ノコギリパルメット（Ｓａｗ ｐａｌｍｅｔｔｏ）（４００ｍｇ／ｋｇ）を繰り返し投与する処置では、前立腺の増大を６２％阻害し、ＰＷ／ＢＷの割合を５９％まで低下させ、同様な用量で阻害がそれぞれ７７％と７２％であったローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）果実の抽出物よりも効果が小さかった。
【００３５】
この実験で得られた結果は、マウスのＢＰＨにおけるローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）果実の脂質抽出物の効果を立証し、前立腺の大きさの用量依存的な低下を示し、４００ｍｇ／ｋｇで９６．６％の阻害パーセントを達成し、同様な用量のノコギリパルメット（Ｓａｗ ｐａｌｍｅｔｔｏ）により誘導されたものよりもより大きな阻害パーセントに達した。
【００３６】
実施例６
ローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）果実からの脂質抽出物の効果を評価するために、体重２５０〜２７０ｇのスプラーク・ドーリー（Ｓｐｒａｑｕｅ Ｄａｗｌｅｙ）雄ラットを制御された温度（２５±２℃）と湿度の実験室条件に７日間、適応させた。適応後、動物を無作為に別々な実験群に分けた。
【００３７】
ローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）の抽出物をツイーン−２０／Ｈ２Ｏ賦形剤中に懸濁させ、治療薬を経口投与した（５ｍｌ／ｋｇ）。コントロール動物には賦形剤を投与した。テストステロンプロピオネートを植物油中に溶解し、１４日間、４ｍｇ／ｋｇを皮下（ｓｃ）経路から注射した。
【００３８】
ラットを無作為に６つの実験群に分けた：１）陰性コントロール＋（植物油）、２）コントロール（賦形剤）＋テストステロン、３）、４）および５）ローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）果実の抽出物、５０、２００および４００ｍｇ／ｋｇ＋テストステロン。投与期間（２週間）を終了するとすぐにラットを屠殺し、過度に出血させ、その腹部を切開術により腹面中間線にそって開き、前立腺を分離し、重量測定した。処置群とコントロール群の対比は、マン・ホイットニー（Ｍａｎｎ Ｗｈｉｔｎｅｙ）Ｕテストにより行った。その結果を表７に示す。
【００３９】
【表７】
ＢＷ：体重（ｇ）、ＰＷ：前立腺重量（ｍｇ）、％Ｉ：阻害パーセント、＋＋＋＋：ｐ＜０．０００１、見かけ対コントロール、＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１、＊＊＊：ｐ＜０．００１、比較対コントロール、マン・ホイットニーＵテスト
【００４０】
観察されるように、テストステロン４ｍｇ／ｋｇを１４日間、皮下注射したところ、陰性コントロールに比べて、前立腺重量および前立腺重量と体重の割合は有意に増加した。ローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）とノコギリパルメット（Ｓａｗ ｐａｌｍｅｔｔｏ）（４００ｍｇ／ｋｇ）果実の抽出物を２週間、経口投与すると、テストステロン注射により誘発した前立腺の大きさの増加を有意に阻害し、それぞれ阻害パーセント４１および５８％を達成した。ローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）果実の抽出物もまた４００ｍｇ／ｋｇで前立腺重量と体重の割合を有意に減少させ、４５％の阻害を達成した。
【００４１】
この研究で得られた結果は、テストステロンで処置したラットに１４日間、４００ｍｇ／ｋｇのローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）果実の抽出物による治療効果を示し、両治療において、体重に対する前立腺の大きさの増加を同様に阻害した（４５％）。このことはローヤル・パーム果実の抽出物の潜在的治療用途にとって好ましいものである。
【００４２】
実施例７
ローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）果実の抽出物の効果を評価するために、体重２５０〜２７０ｇのスプラーク・ドーリー（Ｓｐｒａｑｕｅ Ｄａｗｌｅｙ）雄ラットを制御された温度（２５±２℃）と湿度の実験室条件に７日間、適応させた。適応後、動物を無作為に別々な実験群に分けた。テストステロンプロピオネートを植物油に溶解し、１４日間、一日投与量３〜４ｍｇ／ｋｇを皮下経路から投与した。
【００４３】
ローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）の抽出物をツイーン−２０／Ｈ２Ｏ賦形剤中に懸濁させ、治療薬を経口投与した（５ｍｌ／ｋｇ）。コントロール動物は賦形剤を投与した。
【００４４】
テストステロン３ｍｇ／ｋｇで処置したラットを５つの実験群に分けた：１）陰性コントロール＋（植物油）、２）陽性コントロール（賦形剤）＋テストステロン、３）、４）Ｄ−００４、５０および２００ｍｇ／ｋｇ＋テストステロン；５）ノコギリパルメット（Ｓａｗ ｐａｌｍｅｔｔｏ）２００ｍｇ／ｋｇ＋テストステロン。同様に、テストステロン４ｍｇ／ｋｇで処置した動物を６つの実験群に分けた：１）陰性コントロール＋（植物油）、２）コントロール（賦形剤）＋テストステロン；３、４、５）ローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）抽出物５０、２００および４００ｍｇ／ｋｇ＋テストステロン；６）ノコギリパルメット（Ｓａｗ ｐａｌｍｅｔｔｏ）４００ｍｇ／ｋｇ＋テストステロン。全ての経口治療薬を１４日間、投与した。表８および９に結果を示す。
【００４５】
【表８】
ＢＷ：体重（ｇ）、ＰＷ：前立腺重量（ｇ）、＋＋：ｐ＜０．０１、＋＋＋：ｐ＜０．００１、比較対見かけ；＊：ｐ＜０．０５、ａ：ｐ＝０．０５比較対コントロール（マン・ホイットニーＵテスト）
【００４６】
【表９】
ＢＷ：体重（ｇ）、ＰＷ：前立腺重量（ｍｇ）、％Ｉ：阻害パーセント、＋＋：ｐ＜０．０１、＋＋＋：ｐ＜０．００１比較対見かけ、＊：ｐ＜０．０５、ｔ：ｐ＝０．０６比較対コントロール（マン・ホイットニーＵテスト）
【００４７】
実施例８
体重４〜５ｋｇのラビットを研究に使用した。処置前とローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）果実の脂質抽出物で処置した後に、各ラビットの毛の成長を測定した。毛の測定は、ローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）果実の抽出物による経口処置前、処置中および処置後に、各測定間に４週間の間隔をおいて、行った。各動物を鎮静させた後、約１平方インチの背部領域を剪毛し、この領域の毛を重量測定した。
【００４８】
剪毛したラビットをそれぞれ５羽の４群へ分け、群１のラビットにローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）の抽出物４００ｍｇを１日に１回、毎日投与し、群２のラビットに賦形剤を１日に１回、毎日投与し、群３のラビットにローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）の抽出物４００ｍｇを２００ｍｇの２回にわけて、毎日投与し、そして、群４のラビットに群３のように、賦形剤を２回にわけて投与した。
【００４９】
群間の対比による差異分析および集団内についての対試料によるウィルコクソン（Ｗｉｌｃｏｘｏｎ）テストを使用して、生じた領域での毛成長の重量変化を比較した。当該変化は有意差、ｐ＜０．０５として考察された。
【００５０】
この研究の結果は、群１と群３のラビットの毛成長は群２および群４のラビットの毛成長よりも有意に優れていて、初期の毛重量においても優れていたことを立証し、ローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）の抽出物が脱毛症を治療するために使用され得ることを立証する。
【技術分野】
【０００１】
本発明は製薬産業に関連し、特に良性前立腺肥大（ＢＰＨ）および前立腺炎を予防および／または治療するためのローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）果実由来の新規な薬剤組成物およびその製造方法に関する。本発明の組成物は、遊離脂肪酸および／またはそのエステルの混合物からなる。脂肪酸および／またはそのエステルの両者は、炭素原子数８〜２８、特に炭素原子数８〜１８である。特に、混合物は炭素原子数８、１０、１２、１４、１６および１８の飽和直鎖脂肪酸および炭素原子数１６：１および１８：１のモノ不飽和脂肪酸からなる。遊離脂肪酸はエステル加水分解により増加される。
【０００２】
前記組成物はローヤル・パーム果実をまず乾燥し、粉砕して得られる。当該植物性原料は鹸化生成物を得るまで中等度の塩基性加水分解に付し、かつ、有機溶媒による選択的抽出を行うか、または脂肪酸の混合物を選択的に抽出する。両方法は鹸化前処理を行わずして得られた抽出物と同様な薬理学的性質を有する組成物をもたらす。
【０００３】
かくして得られた混合物は、ＢＰＨおよび前立腺炎、ならびに脱毛および多毛などの他の疾患の治療のための薬学的に異なった製剤中に含まれる活性成分に類似している。
【０００４】
本発明は、得られる薬学的組成物がＢＰＨ、前立腺炎、脱毛および多毛に対して使用される医薬と同様に、あるいは医薬製剤として使用され得ることから、製薬産業に関連している。
【背景技術】
【０００５】
前立腺は膀胱の真下に位置する腺であり、ＢＰＨは５０歳以上の男性の５０％以上に現われる疾患である。ＢＰＨは筋肉線維および腺の上皮構造の増大からなり、夜間頻尿症を含む排尿障害などの尿路閉塞を引き起こし、これらは尿閉の症状を改善するために外科手術をしばしば必要とする（非特許文献１）。ところで、外科手術、特に経尿道はこの症状を患う患者には平均的な治療であり、近年、多くの他の選択肢が出現している（非特許文献２及び３）。これらは非侵襲外科手術手法および５α−レダクターゼ酵素の阻害剤（非特許文献４）、α−アドレナリン受容体および植物療法抽出物などの別の薬剤治療を含む。
【０００６】
男性性ホルモン、主にテストステロンは前記疾患の病理学的原因として非常に重要な役割を果たす。これは５α−レダクターゼを経由して、そのより活性な誘導体、ジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）に転換され、アンドロゲン受容体に結合して、タンパク合成、およびその結果として細胞増殖を促進する。それ故、このような症状を患う患者が４〜６倍に増加したＤＨＴ濃度を示すことから、５α−レダクターゼの増大する活性がＢＰＨを生じるのであろう。
【０００７】
ＢＰＨの正確な原因は知られていないが、明らかに精巣の存在に依存し、かつ、その頻度は年齢とともに増加する。前立腺成長に関与するアンドロゲンはＤＨＴであり、５α−レダクターゼ酵素による触媒反応により、テストステロンから前立腺中に形成される。前立腺成長はＤＨＴ濃度の増加に直接に関係していることをこれまでに実施された研究が示している。他方、５０歳以上の男性ではエストラジオール産生がアンドロゲンに比べて増加し、実験モデルではエストロゲンがＤＨＴと相乗的に作用して、前立腺肥大を誘発することが見出されている。
【０００８】
ＢＰＨの症状は、患者を困惑させる尿道閉塞および尿道過敏に関与している。これらの症状の中には、夜間多尿症、排尿困難、尿流量および強度の減少、残尿感、および尿閉などが含まれる。大部分の症状は徐々に始まり、障害が進むにつれて、その症状が悪くなり、薬理学的治療を施すことが必要となる。
【０００９】
したがって、アルフゾシン、ドキサゾシン、テラゾシンなどのα−アドレナリン拮抗薬（非特許文献５）および数種の植物抽出物がＢＰＨを治療するために広く使用されている。目下、植物治療製品は、ヨーロッパおよび米国において一般的であり、ＢＰＨの治療のために処方される全薬剤の８０％を占める。
【００１０】
特に、ノコギリパルメット［サバル・セルラータ（Ｓａｂａｌ ｓｅｒｒｕｌａｔａ）、同義語、セレノア・レペンス（Ｓｅｒｅｎｏａ ｒｅｐｅｎｓ）］の果実および西洋イラクサ（Ｕｒｔｉｃａｄｉｏｉｃａ）の根の抽出物が一般的である。二重盲検の管理臨床試験がノコギリパルメット抽出物とフィナステライド、すなわち、５α−レダクターゼのタンパク阻害剤の効果を比較するために実施された。この試験では、６ケ月間の治療において両治療間には同様の効果があることが示された（非特許文献６及び７）。他方、西洋イラクサ（Ｕｒｔｉｃａｄｉｏｉｃａ）の根の抽出物はＢＰＨを治療するために臨床的に使用されている。いくつかの組織学的および生物学的データは、アンドロゲン依存性前立腺細胞の増殖における根抽出物の効果を証明した。
【００１１】
ノコギリパルメット（Ｓａｗ ｐａｌｍｅｔｔｏ）の作用機構は、全体的に解明されておらず、１つ以上の作用機構が含まれるようである。すなわち、これはα−アドレナリン受容体の非競合阻害を発揮することができると治験により証明され、タムスロシンに類似した作用機構が示唆される。他の著者達は、ノコギリパルメット（Ｓａｗ ｐａｌｍｅｔｔｏ）はおそらく腺破裂による上皮収縮を可能とすることを検討し、５α−レダクターゼ酵素の阻害に関与するフィナステライドと同様の作用機構を示唆した。これが基本的な作用機構のようである（非特許文献８）。
【００１２】
アンドロゲン脱毛症は男女に共通していて、アンドロゲン依存性である。この理由は、無毛は５α−レダクターゼ酵素の濃度の直接に関係しており、ＤＨＴである無毛関連アンドロゲンは、当該酵素の作用によりテストステロンから産生するためである。したがって、５α−レダクターゼ酵素の濃度の増加が無毛の男性の前頭部領域で検出されている（非特許文献９）が、５α−レダクターゼ酵素欠損症候群の男性は脱毛に悩んでいない（非特許文献１０）。
【００１３】
脱毛は、思春期の後に直ちに始まり得る、広く分布する特徴として実証されていて、男女両者における無毛を予防するための製品を開発することが必要である。
【００１４】
既に知られているように、ノコギリパルメット（Ｓａｗ ｐａｌｍｅｔｔｏ）の脂質抽出物は、受容体に対するＤＨＴの結合部位の５０％をブロックし、前立腺細胞核への侵入をブロックし、５α−レダクターゼ酵素活性を強く阻害して、ＤＨＴホルモンの産生を抑制する。したがって、このような種の果実抽出物は脱毛症の治療に使用されている（特許文献１〜３）。
【００１５】
ＢＰＨを治療するために商業的に使用されているノコギリパルメット（Ｓａｗ ｐａｌｍｅｔｔｏ）の抽出物は、別の既報方法により植物果実から得られたステロールと高分子量アルコールを含む脂肪酸の混合物である（特許文献４〜７、非特許文献１１及び１２）。しかしながら、本発明のヤシ科（Ａｒｅｃａｃｅｅ）の果実、すなわち、ローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）の果実に到達するために、本発明においてクレームするような単純でかつ経済的な方法を報告している著者はほとんどいない。
【００１６】
【非特許文献１】マドセン（Ｍａｄｓｅｎ）とブルスケビッツ（Ｂｒｕｓｋｅｗｉｔｚ）、Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｎｅｐｈｒｏｌ Ｈｉｐｅｒｔ４：４５５−４５９，１９９５
【非特許文献２】オースターリング（Ｏｅｓｔｅｒｌｉｎｇ）、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ． Ｊ． Ｍｅｄ３３２： ９９−１０９，１９９５
【非特許文献３】ゲラー（Ｇｅｌｌｅｒ）ら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ．８０， ７４５−７５６，１９９５
【非特許文献４】ボイル（Ｂｏｙｌｅ）ら、Ｕｒｏｌｏｇｙ；４８：３９８−４０５， １９９６
【非特許文献５】チャップル（Ｃｈａｐｐｌｅ）、Ｅｕｒ．Ｕｒｏｌ．２９，１２９−１４４， １９９６
【非特許文献６】カッラロ（Ｃａｒｒａｒｏ）ら、Ｐｒｏｓｔａｔｅ２９，２３１−２４０， １９９６
【非特許文献７】マークス（Ｍａｒｋｓ）ら、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｕｒｏｌｏｇｙ１６３：１４５１−１４５６， ２０００
【非特許文献８】ニーダープルム（Ｎｉｅｄｅｒｐｒｕｍ）ら、Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，７６８，２２７−３０，１９９５
【非特許文献９】ビングハム（Ｂｉｎｇｈａｍ）ＫＤら、Ｊ．Ｅｎｄｒｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ５７， １１１，１９７３
【非特許文献１０】エブリング（Ｅｂｌｉｎｇ）ＦＪ，Ｃｌｉｎ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ３１９，１９８６
【非特許文献１１】クリストニ（Ｃｒｉｓｔｏｎｉ）， Ｆｉｔｏｔｅｒａｐｉａ６８，３５５，１９９７
【非特許文献１２】デュスワーフ（ＤｅＳｗａｅｆ）Ｎａｔ Ｐｒｏｄ Ｌｅｔｔｅｒｓ７，２２３，１９９６
【特許文献１】ＷＯ９７０２０４１
【特許文献２】ＵＳＡ６，０１９，９７６
【特許文献３】ＷＯ９８３３４７２
【特許文献４】ＥＰＯ５４１８５３
【特許文献５】ＥＰＯ４９２３０５
【特許文献６】ＥＰＯ２５０９５３
【特許文献７】ＵＳＡ特許６，０３９，９５０
【発明の開示】
【００１７】
本発明の組成物を製造する方法は、ローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）の果実を乾燥することに基づく。乾燥果実は粉砕して、粒径５０００μｍ未満の微細な粉末を得る。この粉末はその後、アルカリ水酸化物、アルカリ土類金属水酸化物および有機水酸化物、特に低分子量水酸化物、さらに具体的には、水酸化ナトリウム、カリウム、カルシウムまたはアンモニウムによる塩基性加水分解に付すか、あるいは付さない。続いて有機溶媒中での選択的抽出またはＣＯ２による超臨界抽出を行う。
【００１８】
加水分解された、あるいはされなかった植物性材料は、従来の固液抽出機中で抽出する。その際、脂肪酸および／またはそのエステルは炭素原子数１〜３のアルコールおよび炭素原子数５〜８の炭化水素などの適切な溶媒中で選択的に抽出して、果実中に存在する他の成分から分離する。このような溶媒として、メタノール、エタノール、２−プロパノール、ヘキサン、ペンタン、イソペンタン、ヘプタンおよびオクタンが挙げられる。
【００１９】
得られる収量は５〜２０％である。得られる酸混合物の組成は、炭素原子数１２、１４、１６および１８の飽和酸、ならびに炭素原子数１６：１または１８：１を有する不飽和酸を含む。これらの定性的および定量的組成は、表１に示される。
【００２０】
［表１］
ローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）の脂質抽出物に存在する脂肪酸の組成
成分 酸混合物中の相対的パーセント
カプリル酸（Ｃ８：０） ＜３．０
カプリン酸（Ｃ１０：０） ＜３．０
ラウリン酸（Ｃ１２：０） ３．０〜４０．０
ミリスチン酸（Ｃ１４：０） ４．０〜１５．０
パルミチン酸（Ｃ１６：０） １０．０〜８０．０
パルミトレイン酸（Ｃ１６：１） ０．１５〜２０．０、
ステアリン酸（Ｃ１８：０） ０．１〜５．０
オレイン酸（Ｃ１８：１） ３．０〜５０．０＊
＊ クロマトグラフィーのピークの全量として定量した。ここで、オレイン酸溶出物（ピークの６０〜７０％）、リノレン酸（ピークの２５〜４０％）、およびリノレン酸（クロマトグラフィーのピークの１０％未満）である。
【００２１】
本発明のローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）果実から得られた物質の全体的評価は、このような組成物が非常に安全であり、かつ、十分に耐性があることを示す。ゲッ歯類動物にて実施された毒性試験の結果から支持される信頼性ある利点は、物質に関連する毒性を示さなかった。
本発明の目的は、以下の実施例により詳細に説明され、参照されるが、これらに限定されない。
【実施例】
【００２２】
実施例１
ローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）の新鮮な果実５ｋｇを採取し、制御された温度４５℃のオーブン中に７日間、置いた。粉砕機中で乾燥果実を１５００〜２０００μｍの粒子径に粉砕し、このような粉末から１０００ｇを採取し、攪拌反応器中に置き、アルカリ加水分解に付した。その後、生成物をヘキサン１０ｌにて抽出し、５５℃まで加熱し、３６時間、絶えず、攪拌した。その後、生成物を濾過し、真空下で５０℃にて蒸発乾燥させた。得られた抽出物の重量は９８．５ｇであり、ガスクロマトグラフィーにより測定された組成物を表２に示す。
【００２３】
［表２］
ローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）の脂質抽出物中に存在する脂肪酸の組成
成分 酸混合物中の相対的パーセント
カプリル酸（Ｃ８：０） １．０
カプリン酸（Ｃ１０：０） １．０
ラウリン酸（Ｃ１２：０） ５．７
ミリスチン酸（Ｃ１４：０） ４．４
パルミチン酸（Ｃ１６：０） ７５．１
パルミトレイン酸（Ｃ１６：１） １．９
ステアリン酸（Ｃ１８：０） １．９
オレイン酸（Ｃ１８：１） ９．１
【００２４】
実施例２
ローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）の新鮮な果実１０ｋｇを制御された温度４５℃のオーブン中に７日間、置いた。粉砕機中で乾燥果実を１５００μｍ未満の粒子径にまで粉砕し、このような粉末から１５００ｇを採取し、アルカリ加水分解に付した。その後、エタノール１０ｌを入れたソックスレー抽出器中で、生成物を６０℃で、４８時間、抽出した。次いで、有機溶液を除去し、濾過し、真空下に５０℃で蒸発乾燥させた。得られた抽出物を重量測定し、ガスクロマトグラフィーにより分析した。その組成を表３に示す。
【００２５】
［表３］
ローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）の脂質抽出物中に存在する脂肪酸の組成
成分 酸混合物中の相対的パーセント
カプリル酸（Ｃ８：０） １．０
カプリン酸（Ｃ１０：０） １．０
ラウリン酸（Ｃ１２：０） ３．２
ミリスチン酸（Ｃ１４：０） ５．５
パルミチン酸（Ｃ１６：０） ２７．１
パルミトレイン酸（Ｃ１６：１） １８．５
ステアリン酸（Ｃ１８：０） ０．３
オレイン酸（Ｃ１８：１） ４３．３
【００２６】
実施例３
ローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）の新鮮な果実５ｋｇを採取し、制御された温度４５℃のオーブン中に７日間、置いた。粉砕機中で乾燥果実を１５００μｍ〜１８００μｍの粒子径にまで粉砕し、このような粉末から１０００ｇを採取し、アルカリ加水分解に付した。その後、ヘプタン１０ｌを入れた攪拌反応器中で、生成物を６０℃で、攪拌しながら、５０時間、抽出した。次いで、溶媒を除去し、濾過し、真空下に６５℃で蒸発乾燥させた。得られた抽出物を重量測定し、ガスクロマトグラフィーにより分析した。表４に要約した組成を示す。
【００２７】
［表４］
ローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）の脂質抽出物中に存在する脂肪酸の組成
成分 酸混合物中の相対的パーセント
カプリル酸（Ｃ８：０） １．０
カプリン酸（Ｃ１０：０） １．０
ラウリン酸（Ｃ１２：０） ３．１６
ミリスチン酸（Ｃ１４：０） １２．７
パルミチン酸（Ｃ１６：０） １３．０
パルミトレイン酸（Ｃ１６：１） １．７
ステアリン酸（Ｃ１８：０） ２．３
オレイン酸（Ｃ１８：１） ３６．６
【００２８】
実施例４
ローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）の新鮮な果実５ｋｇを採取し、制御された温度４５℃のオーブン中に７日間、置いた。粉砕機中で乾燥果実を１０００μｍ〜１８００μｍの粒子径にまで粉砕し、このような粉末から１０００ｇを採取し、水酸化アンモニウムで処理して、粉末全てを湿潤化させた。その後、ヘキサン１０ｌを入れた攪拌反応器中で、粉末を５５℃で、攪拌しながら、３６時間、抽出した。次いで、溶媒を除去し、真空下に５０℃で蒸発乾燥させた。得られた抽出物を重量測定し、ガスクロマトグラフィーにより分析した。表５に要約した組成を示す。
【００２９】
［表５］
ローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）の脂質抽出物中に存在する脂肪酸の組成
成分 酸混合物中の相対的パーセント
カプリル酸（Ｃ８：０） １．０
カプリン酸（Ｃ１０：０） １．０
ラウリン酸（Ｃ１２：０） １９．７
ミリスチン酸（Ｃ１４：０） ９．７
パルミチン酸（Ｃ１６：０） １４．８
パルミトレイン酸（Ｃ１６：１） ０．２
ステアリン酸（Ｃ１８：０） ３．８
オレイン酸（Ｃ１８：１） ４９．８
【００３０】
実施例５
ローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）の果実から得られた脂質抽出物の効果を評価するために、体重３０〜４０ｇのＯＦ１雄白色種マウスを制御された温度（２５±２℃）と湿度の実験室条件に７日間、適応させた。適応期間後、この動物を無作為に別々な実験群に分けた。ローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）の抽出物をツイーン−２０／Ｈ２Ｏ賦形剤中に懸濁させ、懸濁液を経口投与した（５ｍｌ／ｋｇ）。コントロール動物は賦形剤を投与した。貯蔵テストステロンを植物油中に溶解し、１回投与量として１００ｍｇ／ｋｇを筋肉内（ｉｍ）へ注射した。動物を無作為に次の群に分けた：１）陰性コントロール、２）陽性コントロール（テストステロンを注射し、賦形剤を経口投与した動物）、３）、４）および５）テストステロンを筋肉内（ｉｍ）経路から注射し、ローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）果実の抽出物、２００、４００および８００ｍｇ／ｋｇをそれぞれ経口から投与した動物、および６）テストステロンを注射し、ノコギリパルメット（Ｓａｗ ｐａｌｍｅｔｔｏ）果実の抽出物４００ｍｇ／ｋｇを経口投与した動物。
【００３１】
投与期間（１４日間）を終了するとすぐにマウスを屠殺し、その腹部を切開術により腹面中間線にそって開き、前立腺を分離し、重量測定した。処置群とコントロール群との対比は、マン・ホイットニー（Ｍａｎｎ Ｗｈｉｔｎｅｙ）Ｕテストにより行った。その結果を表６に示す。
【００３２】
観察されたように、貯蔵テストステロン（１００ｍｇ／ｋｇ）を筋肉内（ｉｍ）注射したものは、陰性コントロール群に比べて、前立腺の重量および体重に対する前立腺の割合が有意に増加した。
【００３３】
【表６】
ＢＷ：体重（ｇ）、ＰＷ：前立腺重量（ｍｇ）、％Ｉ：阻害パーセント、＋＋＋：ｐ＜０．００１、マン・ホイットニーＵテスト、見かけ対コントロール、＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１、＊＊＊：ｐ＜０．００１、比較対コントロール
【００３４】
本発明の組成物（２００〜８００ｍｇ／ｋｇ）を２週間、経口投与すると、テストステロンで誘発した前立腺の増加を有意に、かつ用量依存的に阻害して、最高用量（８００ｍｇ／ｋｇ）で９２．７％の阻害パーセントを達成した。本発明の組成物はまた、前立腺重量／体重の割合の増加を有意に、かつ用量依存的に阻害して、８００ｍｇ／ｋｇで９６．６％の阻害パーセントを達成した。他方、ノコギリパルメット（Ｓａｗ ｐａｌｍｅｔｔｏ）（４００ｍｇ／ｋｇ）を繰り返し投与する処置では、前立腺の増大を６２％阻害し、ＰＷ／ＢＷの割合を５９％まで低下させ、同様な用量で阻害がそれぞれ７７％と７２％であったローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）果実の抽出物よりも効果が小さかった。
【００３５】
この実験で得られた結果は、マウスのＢＰＨにおけるローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）果実の脂質抽出物の効果を立証し、前立腺の大きさの用量依存的な低下を示し、４００ｍｇ／ｋｇで９６．６％の阻害パーセントを達成し、同様な用量のノコギリパルメット（Ｓａｗ ｐａｌｍｅｔｔｏ）により誘導されたものよりもより大きな阻害パーセントに達した。
【００３６】
実施例６
ローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）果実からの脂質抽出物の効果を評価するために、体重２５０〜２７０ｇのスプラーク・ドーリー（Ｓｐｒａｑｕｅ Ｄａｗｌｅｙ）雄ラットを制御された温度（２５±２℃）と湿度の実験室条件に７日間、適応させた。適応後、動物を無作為に別々な実験群に分けた。
【００３７】
ローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）の抽出物をツイーン−２０／Ｈ２Ｏ賦形剤中に懸濁させ、治療薬を経口投与した（５ｍｌ／ｋｇ）。コントロール動物には賦形剤を投与した。テストステロンプロピオネートを植物油中に溶解し、１４日間、４ｍｇ／ｋｇを皮下（ｓｃ）経路から注射した。
【００３８】
ラットを無作為に６つの実験群に分けた：１）陰性コントロール＋（植物油）、２）コントロール（賦形剤）＋テストステロン、３）、４）および５）ローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）果実の抽出物、５０、２００および４００ｍｇ／ｋｇ＋テストステロン。投与期間（２週間）を終了するとすぐにラットを屠殺し、過度に出血させ、その腹部を切開術により腹面中間線にそって開き、前立腺を分離し、重量測定した。処置群とコントロール群の対比は、マン・ホイットニー（Ｍａｎｎ Ｗｈｉｔｎｅｙ）Ｕテストにより行った。その結果を表７に示す。
【００３９】
【表７】
ＢＷ：体重（ｇ）、ＰＷ：前立腺重量（ｍｇ）、％Ｉ：阻害パーセント、＋＋＋＋：ｐ＜０．０００１、見かけ対コントロール、＊：ｐ＜０．０５、＊＊：ｐ＜０．０１、＊＊＊：ｐ＜０．００１、比較対コントロール、マン・ホイットニーＵテスト
【００４０】
観察されるように、テストステロン４ｍｇ／ｋｇを１４日間、皮下注射したところ、陰性コントロールに比べて、前立腺重量および前立腺重量と体重の割合は有意に増加した。ローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）とノコギリパルメット（Ｓａｗ ｐａｌｍｅｔｔｏ）（４００ｍｇ／ｋｇ）果実の抽出物を２週間、経口投与すると、テストステロン注射により誘発した前立腺の大きさの増加を有意に阻害し、それぞれ阻害パーセント４１および５８％を達成した。ローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）果実の抽出物もまた４００ｍｇ／ｋｇで前立腺重量と体重の割合を有意に減少させ、４５％の阻害を達成した。
【００４１】
この研究で得られた結果は、テストステロンで処置したラットに１４日間、４００ｍｇ／ｋｇのローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）果実の抽出物による治療効果を示し、両治療において、体重に対する前立腺の大きさの増加を同様に阻害した（４５％）。このことはローヤル・パーム果実の抽出物の潜在的治療用途にとって好ましいものである。
【００４２】
実施例７
ローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）果実の抽出物の効果を評価するために、体重２５０〜２７０ｇのスプラーク・ドーリー（Ｓｐｒａｑｕｅ Ｄａｗｌｅｙ）雄ラットを制御された温度（２５±２℃）と湿度の実験室条件に７日間、適応させた。適応後、動物を無作為に別々な実験群に分けた。テストステロンプロピオネートを植物油に溶解し、１４日間、一日投与量３〜４ｍｇ／ｋｇを皮下経路から投与した。
【００４３】
ローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）の抽出物をツイーン−２０／Ｈ２Ｏ賦形剤中に懸濁させ、治療薬を経口投与した（５ｍｌ／ｋｇ）。コントロール動物は賦形剤を投与した。
【００４４】
テストステロン３ｍｇ／ｋｇで処置したラットを５つの実験群に分けた：１）陰性コントロール＋（植物油）、２）陽性コントロール（賦形剤）＋テストステロン、３）、４）Ｄ−００４、５０および２００ｍｇ／ｋｇ＋テストステロン；５）ノコギリパルメット（Ｓａｗ ｐａｌｍｅｔｔｏ）２００ｍｇ／ｋｇ＋テストステロン。同様に、テストステロン４ｍｇ／ｋｇで処置した動物を６つの実験群に分けた：１）陰性コントロール＋（植物油）、２）コントロール（賦形剤）＋テストステロン；３、４、５）ローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）抽出物５０、２００および４００ｍｇ／ｋｇ＋テストステロン；６）ノコギリパルメット（Ｓａｗ ｐａｌｍｅｔｔｏ）４００ｍｇ／ｋｇ＋テストステロン。全ての経口治療薬を１４日間、投与した。表８および９に結果を示す。
【００４５】
【表８】
ＢＷ：体重（ｇ）、ＰＷ：前立腺重量（ｇ）、＋＋：ｐ＜０．０１、＋＋＋：ｐ＜０．００１、比較対見かけ；＊：ｐ＜０．０５、ａ：ｐ＝０．０５比較対コントロール（マン・ホイットニーＵテスト）
【００４６】
【表９】
ＢＷ：体重（ｇ）、ＰＷ：前立腺重量（ｍｇ）、％Ｉ：阻害パーセント、＋＋：ｐ＜０．０１、＋＋＋：ｐ＜０．００１比較対見かけ、＊：ｐ＜０．０５、ｔ：ｐ＝０．０６比較対コントロール（マン・ホイットニーＵテスト）
【００４７】
実施例８
体重４〜５ｋｇのラビットを研究に使用した。処置前とローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）果実の脂質抽出物で処置した後に、各ラビットの毛の成長を測定した。毛の測定は、ローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）果実の抽出物による経口処置前、処置中および処置後に、各測定間に４週間の間隔をおいて、行った。各動物を鎮静させた後、約１平方インチの背部領域を剪毛し、この領域の毛を重量測定した。
【００４８】
剪毛したラビットをそれぞれ５羽の４群へ分け、群１のラビットにローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）の抽出物４００ｍｇを１日に１回、毎日投与し、群２のラビットに賦形剤を１日に１回、毎日投与し、群３のラビットにローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）の抽出物４００ｍｇを２００ｍｇの２回にわけて、毎日投与し、そして、群４のラビットに群３のように、賦形剤を２回にわけて投与した。
【００４９】
群間の対比による差異分析および集団内についての対試料によるウィルコクソン（Ｗｉｌｃｏｘｏｎ）テストを使用して、生じた領域での毛成長の重量変化を比較した。当該変化は有意差、ｐ＜０．０５として考察された。
【００５０】
この研究の結果は、群１と群３のラビットの毛成長は群２および群４のラビットの毛成長よりも有意に優れていて、初期の毛重量においても優れていたことを立証し、ローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）の抽出物が脱毛症を治療するために使用され得ることを立証する。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の脂肪酸：カプリル酸（Ｃ８：０）、カプリン酸（Ｃ１０：０）、ラウリン酸（Ｃ１２：０）、ミリスチン酸（Ｃ１４：０）、パルミチン酸（Ｃ１６：０）、パルミトレイン酸（Ｃ１６：１）、ステアリン酸（Ｃ１８：０）およびオレイン酸（Ｃ１８：１）（オレイン酸自体、リノール酸およびリノレン酸を含む）ならびにこれらの脂肪酸のエステル混合物を含み、遊離脂肪酸はエステル加水分解により増加された炭素原子数８〜２８を有する１級脂肪酸の混合物を含むローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）の未成熟または成熟果実から得られた薬剤組成物。
【請求項２】
下記組成の脂肪酸を特徴とする、請求項１に記載の１級脂肪酸およびそのエステルの混合物を含む薬剤組成物。
ローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）果実の脂質抽出物中に存在する脂肪酸の混合物
カプリル酸（Ｃ８：０） ＜３．０
カプリン酸（Ｃ１０：０） ＜３．０
ラウリン酸（Ｃ１２：０） ３．０〜４０．０％
ミリスチン酸（Ｃ１４：０） ４．０〜１５．０％
パルミチン酸（Ｃ１６：０） １０．０〜８０．０％
パルミトレイン酸（Ｃ１６：１） １．５〜２０．０％、
ステアリン酸（Ｃ１８：０） ０．１〜５．０％
オレイン酸（Ｃ１８：１） ３．０〜５０．０％
【請求項３】
ＢＰＨ、前立腺炎、脱毛および多毛の治療のための請求項１または２に記載の脂肪酸混合物を含む薬剤組成物。
【請求項４】
ローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）果実の乾燥、粉砕および篩分け（ｓｉｅｖｉｎｇ）、さらに、水酸化物またはアルカリを使用する塩基性加水分解前処理の有無にかかわらず、炭素原子数５〜８の炭化水素、炭素原子数１〜３のアルコールならびにこれらの混合物などの有機溶媒中での固体／液体抽出による他成分からの抽出物の分離を含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載のローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）から得られた薬剤組成物の製造方法。
【請求項５】
温度１０〜１００℃、時間１〜１０００時間でローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）果実を乾燥し、さらに、粒子径６０００μｍ未満を得ることを可能とする適当な破砕機で粉砕する製造方法であって、活性抽出成分の抽出時間が１〜５０時間、温度０〜７０℃である、請求項４記載の製造方法。
【請求項６】
アルカリ水酸化物またはアルカリ土類水酸化物および塩基性加水分解のための有機物、特に低分子量有機物およびより具体的には水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウムまたは水酸化アンモニウムの使用を特徴とする、請求項４または５に記載の製造方法。
【請求項７】
脂肪酸の混合物を含む抽出物の製造のために、ペンタン、ヘキサン、ヘプタンまたはオクタンなどの炭化水素を使用することを特徴とする、請求項４または５に記載の製造方法。
【請求項８】
脂肪酸の混合物を含む抽出物の製造のために、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノールまたは２−プロパノールなどのアルコールを使用することを特徴とする、請求項４または５に記載の製造方法。
【請求項９】
ＢＰＨ、前立腺炎、脱毛および多毛の治療において、薬剤として使用される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の薬剤組成物。
【請求項１０】
ＢＰＨ、前立腺炎、脱毛および多毛の治療および／または予防において使用されることを特徴とする、請求項１または２に記載の鹸化を伴うまたは伴わない薬剤組成物。
【請求項１１】
ＢＰＨ、前立腺炎、脱毛および多毛の治療において、薬剤として使用される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の薬剤組成物。
【請求項１２】
ＢＰＨ、前立腺炎、脱毛および多毛の治療および／または予防において、使用されることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１項に記載の鹸化を伴うまたは伴わない薬剤組成物。
【請求項１３】
ＢＰＨ、前立腺炎、脱毛および多毛の治療および／または予防において局所作用を有する固体経口剤（カプセル、軟ゲルカプセル、錠剤）または液剤（乳化液）、座薬またはチンキ剤、ローションまたはシャンプーなどとして投与されるために、１日量５０〜１０００ｍｇにて使用され、特に１日量１５０〜１０００ｍｇにて処方されることを特徴とする、請求項１、２、３、１０、１１および１２のいずれか１項に記載の鹸化を伴うまたは伴わない薬剤組成物。
【請求項１】
次の脂肪酸：カプリル酸（Ｃ８：０）、カプリン酸（Ｃ１０：０）、ラウリン酸（Ｃ１２：０）、ミリスチン酸（Ｃ１４：０）、パルミチン酸（Ｃ１６：０）、パルミトレイン酸（Ｃ１６：１）、ステアリン酸（Ｃ１８：０）およびオレイン酸（Ｃ１８：１）（オレイン酸自体、リノール酸およびリノレン酸を含む）ならびにこれらの脂肪酸のエステル混合物を含み、遊離脂肪酸はエステル加水分解により増加された炭素原子数８〜２８を有する１級脂肪酸の混合物を含むローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）の未成熟または成熟果実から得られた薬剤組成物。
【請求項２】
下記組成の脂肪酸を特徴とする、請求項１に記載の１級脂肪酸およびそのエステルの混合物を含む薬剤組成物。
ローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）果実の脂質抽出物中に存在する脂肪酸の混合物
カプリル酸（Ｃ８：０） ＜３．０
カプリン酸（Ｃ１０：０） ＜３．０
ラウリン酸（Ｃ１２：０） ３．０〜４０．０％
ミリスチン酸（Ｃ１４：０） ４．０〜１５．０％
パルミチン酸（Ｃ１６：０） １０．０〜８０．０％
パルミトレイン酸（Ｃ１６：１） １．５〜２０．０％、
ステアリン酸（Ｃ１８：０） ０．１〜５．０％
オレイン酸（Ｃ１８：１） ３．０〜５０．０％
【請求項３】
ＢＰＨ、前立腺炎、脱毛および多毛の治療のための請求項１または２に記載の脂肪酸混合物を含む薬剤組成物。
【請求項４】
ローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）果実の乾燥、粉砕および篩分け（ｓｉｅｖｉｎｇ）、さらに、水酸化物またはアルカリを使用する塩基性加水分解前処理の有無にかかわらず、炭素原子数５〜８の炭化水素、炭素原子数１〜３のアルコールならびにこれらの混合物などの有機溶媒中での固体／液体抽出による他成分からの抽出物の分離を含む、請求項１〜３のいずれか１項に記載のローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）から得られた薬剤組成物の製造方法。
【請求項５】
温度１０〜１００℃、時間１〜１０００時間でローヤル・パーム（Ｒｏｙｓｔｏｎｅａ ｒｅｇｉａ）果実を乾燥し、さらに、粒子径６０００μｍ未満を得ることを可能とする適当な破砕機で粉砕する製造方法であって、活性抽出成分の抽出時間が１〜５０時間、温度０〜７０℃である、請求項４記載の製造方法。
【請求項６】
アルカリ水酸化物またはアルカリ土類水酸化物および塩基性加水分解のための有機物、特に低分子量有機物およびより具体的には水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウムまたは水酸化アンモニウムの使用を特徴とする、請求項４または５に記載の製造方法。
【請求項７】
脂肪酸の混合物を含む抽出物の製造のために、ペンタン、ヘキサン、ヘプタンまたはオクタンなどの炭化水素を使用することを特徴とする、請求項４または５に記載の製造方法。
【請求項８】
脂肪酸の混合物を含む抽出物の製造のために、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノールまたは２−プロパノールなどのアルコールを使用することを特徴とする、請求項４または５に記載の製造方法。
【請求項９】
ＢＰＨ、前立腺炎、脱毛および多毛の治療において、薬剤として使用される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の薬剤組成物。
【請求項１０】
ＢＰＨ、前立腺炎、脱毛および多毛の治療および／または予防において使用されることを特徴とする、請求項１または２に記載の鹸化を伴うまたは伴わない薬剤組成物。
【請求項１１】
ＢＰＨ、前立腺炎、脱毛および多毛の治療において、薬剤として使用される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の薬剤組成物。
【請求項１２】
ＢＰＨ、前立腺炎、脱毛および多毛の治療および／または予防において、使用されることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１項に記載の鹸化を伴うまたは伴わない薬剤組成物。
【請求項１３】
ＢＰＨ、前立腺炎、脱毛および多毛の治療および／または予防において局所作用を有する固体経口剤（カプセル、軟ゲルカプセル、錠剤）または液剤（乳化液）、座薬またはチンキ剤、ローションまたはシャンプーなどとして投与されるために、１日量５０〜１０００ｍｇにて使用され、特に１日量１５０〜１０００ｍｇにて処方されることを特徴とする、請求項１、２、３、１０、１１および１２のいずれか１項に記載の鹸化を伴うまたは伴わない薬剤組成物。
【公表番号】特表２００６−５２０３３１（Ｐ２００６−５２０３３１Ａ）
【公表日】平成１８年９月７日（２００６．９．７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５０４２１６（Ｐ２００６−５０４２１６）
【出願日】平成１６年３月１５日（２００４．３．１５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＣＵ２００４／０００００４
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０８２６９６
【国際公開日】平成１６年９月３０日（２００４．９．３０）
【出願人】（５０５３５１０２７）ラボラトリオス ダルマー エセ．アー． (1)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１８年９月７日（２００６．９．７）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年３月１５日（２００４．３．１５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＣＵ２００４／０００００４
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０８２６９６
【国際公開日】平成１６年９月３０日（２００４．９．３０）
【出願人】（５０５３５１０２７）ラボラトリオス ダルマー エセ．アー． (1)
【Ｆターム（参考）】
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