二本鎖ＲＮＡ依存性タンパク質キナーゼの活性化を阻害し腫瘍成長を阻害する組成物及び方法
本発明は、治療に先立ち、又は治療と同時に、二本鎖ＲＮＡ依存性タンパク質キナーゼ（ＰＫＲ−Ｉ）の少なくとも１つの阻害物質を含んでいる、哺乳動物対象における病気を防止及び治療するための組成物及び方法であって、治療の結果、二本鎖ＲＮＡ依存性タンパク質キナーゼの活性化が阻害される組成物及び方法に関する。本発明の組成物及び方法は、ＰＫＲ−Ｉによるリン酸化の阻害をさらに促進する少なくとも１つの増強物質をさらに含んでいる。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
［技術分野］
[0001]本発明は、治療に先立ち、又は治療と同時に、二本鎖ＲＮＡ依存性タンパク質キナーゼ（ＰＫＲ−Ｉ）の少なくとも１つの阻害物質を含んでいる、哺乳動物対象における病気を防止及び治療するための組成物及び方法であって、治療の結果、二本鎖ＲＮＡ依存性タンパク質キナーゼの活性化が阻害される組成物及び方法に関する。本発明の組成物及び方法は、ＰＫＲ−Ｉによるリン酸化の阻害をさらに促進する少なくとも１つの増強物質をさらに含んでいる。
【０００２】
［発明の背景］
[0002]悪液質は、普通、癌、敗血症、うっ血性心不全、関節リウマチ、慢性閉塞性肺疾患及びヒト免疫不全ウイルス感染症など、重症及び慢性の炎症性疾患に伴う急性炎症過程を包含するいくつかの疾患状態を伴う。悪液質は、さらに、筋肉が消耗する他の公知の疾患及び障害（例えば、筋肉減少症、加齢に伴う筋肉量の減少）を伴う。全癌患者の死亡の１０％〜２２％、並びに最初の外傷性事象後、数日から数週間にわたる敗血症性臓器不全及び栄養不良により起きる外傷死のおよそ１５％は、悪液質が原因である。
【０００３】
[0003]癌患者、とりわけ消化管癌患者は、進行性の骨格筋萎縮又は悪液質を呈し、これは、その結果として、患者の生活の質及び生存時間を低減する。患者における癌性悪液質は、食欲不振症、体重減少、早期満腹感、無力症（実際には力は低下していなくても脱力感を感じること）、除脂肪体重の減少及び多臓器不全を特徴とする。癌性悪液質に伴う除脂肪体重の減少は、個体を衰弱させて毎日の生活活動を困難にするだけでなく、化学療法及び／又は放射線療法を受ける力をもたないほどまで患者を衰弱させることがある。
【０００４】
[0004]悪液質は、タンパク質合成の低下（同化低下）と内因性タンパク質の分解（異化）の上昇とが組み合わさり、その結果生じるアミノ酸が酸化することが原因である（Ｏ’Ｋｅｅｆｅ，Ｓ．Ｊ．Ｄ．ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、５０、１２２６〜１２３０、１９９０）。タンパク質分解増加の機序は、ユビキチン−プロテアソームタンパク質分解経路の発現増加に起因している。Ｋｈａｌ，Ｊ．ら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．、３７、２１９６〜２２０６、２００５。癌性悪液質においてタンパク質合成の維持ができないことの根底にある機序は未だ解明されていない。しかし、悪液質におけるタンパク質合成の低下及び筋原繊維タンパク質分解の増加を説明し得る機序が提案されたのは最近までである。この機序には、自己リン酸化による二本鎖ＲＮＡ依存性タンパク質キナーゼ（ＰＫＲ）の活性化が関わっている。ＰＩＦ（タンパク質分解誘導因子）及びＡｎｇ ＩＩ（アンギオテンシンＩＩ）などの薬剤によりＰＫＲが活性化されると真核開始因子２α（ｅＩＦ２α）のリン酸化が引き起こされ、その結果、ＧＤＰ結合状態から活性なＧＴＰ結合形態へのｅＩＦ２の変換の変換を防止するグアニンヌクレオチド交換因子ｅＩＦ２Ｂとの競合により、翻訳開始が阻害される。Ｒｕｓｓｅｌｌ，Ｓ．Ｔ．ら、Ｃｅｌｌ．Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ、１９、１７９７〜１８０６、２００７。
【０００５】
[0005]翻訳開始を介したタンパク質合成の制御
翻訳開始の制御には、（ｉ）開始メチオニルトランファーＲＮＡ（ｍｅｔ−ｔＲＮＡ）をリボソームの４０ｓサブユニットに結合させること及び（ｉｉ）ｍＲＮＡを４３ｓ開始前複合体に結合させることが関与している。第１段階中に、ｍｅｔ−ｔＲＮＡは、真核開始因子２（ｅＩＦ２）及びグアノシン三リン酸（ＧＴＰ）との三元複合体としてリボソームの４０ｓサブユニットに結合する。この段階に次いで、ＧＴＰが加水分解してグアノシン二リン酸（ＧＤＰ）となり、三元複合体からｅＩＦ２が放出される。ｅＩＦ２は、開始ラウンドにもう１回関与するには、ＧＤＰをＧＴＰに交換しなければならない。この交換は、ｅＩＦ２上でのグアニンヌクレオチド交換を媒介する別の真核開始因子２、ｅＩＦ２Ｂの作用により行われる。ｅＩＦ２Ｂは、ｅＩＦ２のαサブユニットにおけるｅＩＦ２のｅＩＦ２Ｂリン酸化により制御され、これによりｅＩＦ２は、基質からｅＩＦ２Ｂの競合阻害物質に変換される。
【０００６】
[0006]第２段階では、４３ｓ開始前複合体へのｍＲＮＡの結合は、ｅＩＦ４Ｆと総称される一群のタンパク質、すなわちｅＩＦ４Ａ（ＲＮＡヘリカーゼ）、ｅＩＦ４Ｂ（ｅＩＦ４Ａと連動して機能してｍＲＮＡの５’非翻訳領域における二次構造をほどく）、ｅＩＦ４Ｅ（ｍＲＮＡの５’末端に存在するｍ７ＧＴＰキャップに結合する）及びｅＩＦ４Ｇ（ｅＩＦ４Ｅ、ｅＩＦ４Ａ及びｍＲＮＡのための足場として機能する）から成るマルチサブユニット複合体が必要である。ｅＩＦ４Ｆ複合体は一体となって、ｍＲＮＡを、認識し、ほどき、４３ｓ開始前複合体に誘導するように働く。ｅＩＦ４ＥがｅＩＦ４Ｆ複合体の形成に使われる状態にあるかどうかは、翻訳抑制因子ｅＩＦ４Ｅ結合タンパク質１（４Ｅ−ＢＰ１）により制御されるようである。今度は、４Ｅ−ＢＰ１が、ｅＩＦ４Ｇと競合してｅＩＦ４Ｅに結合し、ｅＩＦ４Ｅを不活性な複合体中へ捕捉できる。４Ｅ−ＢＰ１の結合は、ラパマイシンの哺乳動物標的（ｍＴＯＲ）というキナーゼによるリン酸化を通じて制御され、このとき、リン酸化が増加していると、ｅＩＦ４Ｅに対する４Ｅ−ＢＰ１の親和性が低下する結果となる。
【０００７】
[0007]ＰＩＦ及びＡｎｇ ＩＩによるユビキチン−プロテアソーム経路の誘導には、転写因子である核因子−κＢ（ＮＦ−κＢ）の活性化が必要である。Ｗｙｋｅ，Ｓ．Ｍ．及びＴｉｓｄａｌｅ，Ｍ．Ｊ．、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、９２、７１１〜７２１、２００５。ＰＫＲは、阻害タンパク質ＩκＢの分解を結果としてもたらすであろう上流のキナーゼであるＩκＢキナーゼを活性化することが示されている。ＩκＢが分解されると、今度はＮＦ−κＢの放出がもたされるであろう。放出されたＮＦ−κＢは核に移動し、その結果、特定の遺伝子が転写活性化されるであろう（Ｚａｍａｎｉａｎ−Ｄａｒｙｏｕｓｈ，Ｍ．ら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．、２０、１２７８〜１２９０、２０００）。変異体のＰＫＲを含有する筋管は、ＰＩＦ又はＡｎｇ ＩＩのいずれかに応答してＮＦ−κＢを活性化することはなく、ユビキチン−プロテアソーム経路を誘導することもなかった。こうした結果から、ＰＫＲによるユビキチン−プロテアソーム経路の誘導にはＮＦ−κＢ活性が必要であることが示唆された。
【０００８】
[0008]アミノ酸
２０種のアミノ酸のうち９種はヒトにおいて必須と見なされるが、その理由は、こうしたアミノ酸を体は作ることができないからである。この９種のアミノ酸は、個体の食餌を通じて得なければならない。１種又は複数種のアミノ酸が欠乏すると、負の窒素バランスが生じる可能性があり、この状態では、タンパク質は作られているより速く分解するので、摂取されるより多くの窒素が排泄されることにより、酵素活性の破壊及び筋肉量の減少が生じることがある。
【０００９】
[0009]インスリン、インスリン様成長因子及びアミノ酸などの同化因子は、タンパク質合成を増やし筋肉の肥大の原因となることが知られている。分枝鎖アミノ酸、とりわけロイシンは、翻訳開始を調節するシグナル伝達経路（ｍＴＯＲ及びｅＩＦ２が含まれることが多い）を開始させることができる。一例として、アミノ酸欠乏は、ｅＩＦ２−αリン酸化の増加及びタンパク質合成の低下につながると考えられる。
【００１０】
[0010]悪液質を有する患者においては、遊離アミノ酸の血漿レベルが一般に低下している。最大の低下は、ロイシン、イソロイシン及びバリンなどの分枝鎖アミノ酸（ＢＣＡＡ）について見られることが多い。筋タンパク質中の全アミノ酸の１４〜１８％を構成するＢＣＡＡは、タンパク質合成の構成要素及び調節因子として機能する。本明細書中で言及する３つのＢＣＡＡのうち、ロイシンは、筋タンパク質合成の刺激因子において最も強力であり、残りの２つの有効性はそれより低い。Ａｎｔｈｏｎｙ，Ｊ．Ｃ．ら（Ｊ．Ｎｕｔｒ．、１３０、１３９〜１４５、２０００）により報告されているように、タンパク質合成を刺激する機序は、４Ｅ−ＢＰ１（ｅＩＦ４Ｅ結合タンパク質１）の過剰リン酸化による、翻訳開始におけるｍＲＮＡ結合段階の活性化を経ており、この結果、今度は、不活性な４Ｅ−ＢＰＩ−ｅＩＦ４Ｅ複合体からｅＩＦ４Ｅが放出される。次に、放出されたｅＩＦ４ＥはｅＩＦ４Ｇと結合して活性のあるｅＩＦ４Ｆ複合体を形成する。ｅＩＦ４Ｆ複合体の形成が増加すると、ｍＲＮＡへの４３Ｓ開始前複合体の移動及び動員が促進され、これによりペプチド鎖開始が促進される。
【００１１】
[0011]ＰＫＲ活性化に及ぼすＢＣＡＡの効果は未だ完全に研究されてはいないものの、Ｅｌｅｙらは、最近、ロイシン及びバリンなどのＢＣＡＡは、悪液質誘導性の腫瘍（ＭＡＣ−１６）を保有するマウスの体重減少を顕著に抑制し、その結果、タンパク質合成の増加及び分解の減少により骨格筋の湿重量が顕著に増加すると報告した。Ｅｌｅｙ，Ｈ．Ｌ．ら、Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．、４０７（１）、１１３〜１２０、２００７。ＰＫＲリン酸化に及ぼすロイシンのこの効果は、ＰＰＩ（タンパク質ホスファターゼＩ）の発現増加によるものと思われ、ＰＰＩは、ＰＫＲのＮ末端制御領域に結合し自己リン酸化を阻害することが示されている（Ｔａｎ，Ｓ．Ｌ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７７、３６１０９〜３６１１７、２００２。Ｅｌｅｙらによるこの研究は、ＭＡＣ−１６腫瘍保有マウスの骨格筋中及びＰＩＦに暴露されたマウス筋管中のＰＫＲ及びｅＩＦ２αのリン酸化をロイシンが低減できることを示す初めての報告である。ｉｎ ｖｉｔｒｏで用いられたロイシンの濃度（２ｍｍｏｌｅ／ｌ）は、Ａｎｔｈｏｎｙら（Ｊ．Ｎｕｔｒ．、１３０、２４１３〜２４１９、２０００）により以前報告された、体重１ｋｇ当たり１．３５ｇでロイシンを投与した際のラットの血清中の濃度と同じである。
【００１２】
[0012]一方、ＭＡＣ−１６腫瘍保有マウスにおける体重減少は、Ｅｌｅｙらにより報告されたように、ｅＩＦ４Ｅの結合タンパク質である４Ｅ−ＢＰＩに結合しているｅＩＦ４Ｅの量の増加、及び４Ｅ−ＢＰＩの低リン酸化による活性なｅＩＦ４Ｇ−ｅＩＦ４Ｅ複合体の進行性の減少と関連があった。これは、ｍＴＯＲ（ラパマイシンの哺乳動物標的）のリン酸化の低下に起因し得る。ｍＴＯＲリン酸化の低下は、ｐ７０Ｓ６ｋ（７０ｋＤａリボソームＳ６キナーゼ）のリン酸化の減少の原因であり得る。ｅＥＦ２（真核伸長因子２）が５倍増加することが認められ、そのような増加により、翻訳伸長の減少を通じてタンパク質合成も減少する。ロイシン処置は、この効果を、（１）ｍＴＯＲ及びｐ７０Ｓ６ｋを増加させること、（２）４Ｅ−ＢＰＩの過剰リン酸化を引き起こすこと、（３）ｅＩＦ４Ｅと結合する４Ｅ−ＢＰＩの量を減らすこと、（４）ｅＩＦ４Ｇ−ｅＩＦ４Ｅ複合体の形成の増加を引き起こすこと、並びに（５）それぞれタンパク質合成の増加及びタンパク質分解の増加の低減の原因となるｅｌＦ２αリン酸化及びＰＫＲ活性化を低下させることにより、逆転させる。
【００１３】
[0013]上記に基づき、ＰＫＲに対する阻害物質と分枝鎖アミノ酸などの栄養補助食品との組合せを一緒に用いて、癌性悪液質、又は他の疾患に伴う悪液質を治療及び防止できる。
【００１４】
[0014]一方、本発明者らは最近、国際公開第２００７／０６４６１８号パンフレット中で、哺乳動物における筋肉減少の治療において１つ又は複数の分枝鎖アミノ酸（ＢＣＡＡ）、ＢＣＡＡ前駆体、ＢＣＡＡ代謝産物、ＢＣＡＡの豊富なタンパク質、ＢＣＡＡ含有量が豊富になるように操作されたタンパク質又はその任意の組合せの投与に関する研究について記載している。そのような投与に適した栄養製剤についても記載した。
【００１５】
[0015]悪液質及び食欲不振症の防止及び治療は、未だ、医学界にとって現存する問題である。癌又は任意の疾患を保有する宿主において十分な筋肉量減少に対する栄養補助食品による補給は、ほとんど効果がないままである。したがって、化学療法、又は栄養及び化学療法を組み合わせて施す任意の形態の細胞傷害性の抗新生物療法の有効性を高めるための臨床的アプローチの改良の必要性が残っている。
【００１６】
［発明の概要］
[0016]本発明は、治療に先立ち、又は治療と同時に、哺乳動物における二本鎖ＲＮＡ依存性タンパク質キナーゼ（ＰＫＲ−Ｉ）の少なくとも１つの阻害物質を含んでいる、病気を治療するための組成物及び方法であって、治療の結果、二本鎖ＲＮＡ依存性タンパク質キナーゼの活性化が阻害される組成物及び方法に関する。加えて、本発明の組成物及び方法は、哺乳動物において、ＰＫＲ−Ｉによるリン酸化の阻害を促進する少なくとも１つの増強物質をさらに含んでいる。さらに、本発明は、化学療法剤を使用する癌症状、自己免疫又は他の障害を治療又は改善するうえで化学療法剤の有効性を高めるための組成物及び方法であって、少なくとも１つのＰＫＲ−Ｉを、少なくとも１つの栄養化合物を伴い又は伴わずに使用する組成物及び方法に関する。
【００１７】
[0017]本発明の一特徴では、病気としては、癌、炎症性疾患、敗血症、うっ血性心不全、リウマチ性障害（強直性脊椎炎を非限定的に含む）、線維筋痛症、リウマチ性の臓器疾患（すなわち、心臓、肺、腎臓及び血管炎）、ループス（全身性エリテマトーデスなど）、側頭動脈炎及びリウマチ性多発筋痛症、シェーグレン症候群、関節リウマチ、慢性閉塞性肺疾患、神経変性疾患、自己免疫疾患、ヒト免疫不全ウイルス感染症、免疫関連の病気（アレルギー状態を非限定的に含む）、喘息状態、及び臓器移植、移植又は輸血に関わる状態、糖尿病、乾癬性障害、皮膚疾患、細胞の老化、クッシング病、リウマチ熱及び早老症を挙げることができるが、これらに限定されない。
【００１８】
[0018]本発明の別の特徴では、少なくとも１つの増強物質は、ＰＫＲ−Ｉと一緒に、罹患した哺乳動物における前述の病気の１つの重症度の改善又は軽減を促進する。
【００１９】
[0019]本発明のまた別の特徴では、ＰＫＲ−Ｉは、天然のものでも合成のものでもよく、単独、又は少なくとも１つの増強物質との組合せのいずれかで、経腸的又は非経口的に投与されてもよい。非経口投与経路は、皮下、静脈内、筋肉内又は局所の経路である。経腸投与に関しては、鼻腔内、口腔内、経鼻胃、経口胃、又は胃ポート、空腸ポート若しくは回腸ポートを経由するかいずれかによる投与であってもよい。
【００２０】
[0020]本発明の別の特徴では、この組成物は栄養組成物である。増強物質は、ＰＫＲに対する阻害物質、ＰＫＲ−Ｉ類似体、ＰＫＲのリン酸化阻害物質、化学療法剤、血管新生剤、血管拡張剤、カテキン−フラバノール、生物活性タンパク質、分枝鎖アミノ酸、必須アミノ酸、アミノ酸、アミノ酸類似体、ヌクレオチド、ビタミン、グルタミン、シアル酸オリゴ糖、Ｌ−テアニン、プレバイオティック、プロバイオティック、シンバイオティック、必須脂肪酸、ＰＵＦＡ、ＭＵＦＡ及び抗酸化物質であってもよい。増強物質は、少なくとも１つのＬ−グルタミン作動薬、例えばＬ−テアニンであってもよい。ヌクレオチドは、ＲＮＡ、例えば、アデニン、グアニン、ウラシル又はシトシンであってもよい。化学療法剤の例は、５−フロウロウラシル（Ｆｌｏｕｒｏｕｒａｃｉｌ）又はゲムシタビンである。アミノ酸の例は、ノルロイシン、アルギニン、Ｌ−シトルリン、Ｌ−テアニン又はグルタミンであってもよい。生物活性剤は、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２、ＴＧＦ−β３、ＴＧＦ−β４又はＴＧＦ−β５であってもよい。
【００２１】
[0021]ＰＫＲ−Ｉは、哺乳動物における細胞成長又は細胞複製の阻害物質として機能できる。治療は、放射線療法又は化学療法の形態のいずれかであってもよい。
【００２２】
[0022]本発明の組成物は、タンパク質ホスファターゼ−１α（ＰＰ１−Ａ）の少なくとも１つの修飾物質をさらに含んでいてもよく、その際、ＰＰ１−Ａは、リン酸化された形態のＰＫＲを脱リン酸化する。加えて、少なくとも１つの修飾物質は分枝鎖アミノ酸であり、そのようなアミノ酸は、ロイシン、イソロイシン又はバリンである。
【００２３】
[0023]さらに、本発明は、哺乳動物における病気を治療する方法であり、本明細書中に前述した組成物を哺乳動物に投与することを包含し、治療の結果、治療対象の哺乳動物における二本鎖ＲＮＡ依存性タンパク質キナーゼの活性化が阻害される方法も包含する。
【００２４】
[0024]本発明の他の特徴及び利点は、この後の詳細な説明において明らかである。しかし、この詳細な説明は、本発明の実施形態を示すものではあるとはいえ、限定ではなく例証のためにのみ記載するものであることは理解されるべきである。当業者であれば、本発明の範囲内の多様な変化形及び改変形が、この詳細な説明から明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
[0025]本発明のこれらの特徴及び他の特徴は、本発明の多様な実施形態を示す添付の図面と併せて、以下の本発明の多様な態様の説明から、より容易に理解されよう。
【００２６】
【図１】ＰＫＲ活性化を介した、骨格筋中のタンパク質合成の低下及びタンパク質分解の増加に至る経路を示す図である。
【図２】ＰＫＲ阻害物質の濃度増加が、ＭＡＣ１６腫瘍（黒ダイヤモンド）及びＭＡＣ１３腫瘍（黒四角）のｉｎ ｖｉｔｒｏでの成長に及ぼす効果を示すグラフである。実験は３回繰り返した。対照との差をｃ（ｐ＜０．００１）として示す。
【図３Ａ−３Ｂ】ＭＡＣ１６腫瘍（レーン１〜３）及びＭＡＣ１３の腫瘍（レーン４〜６）におけるリン酸化形態及び全形態のＰＫＲ（３Ａ）及びｅｌＦ２α（３Ｂ）の発現を示すウエスタンブロッティングである。濃度測定分析は、リン酸化形態（ｐＨ）対全形態（ｔｏｔ）の比率を示し、３つの別々のウェスタンブロットの平均を表す。ＭＡＣ１６腫瘍との差をｂ（ｐ＜０．０１）又はｃ（ｐ＜０．００１）として示す。
【図４Ａ−４Ｂ】溶媒（ＤＭＳＯ：ＰＢＳが１：２０）対照（レーン１〜３）、又は１ｍｇｋｇ−１（レーン４〜６）若しくは５ｍｇｋｇ−１（レーン７〜９）の濃度のＰＫＲ阻害物質のいずれかをｓａｃ．注射により毎日投与する形でのＭＡＣ１６腫瘍保有マウスの処置（Ｅｌｅｙら、２００７）が、ＰＫＲ（４Ａ）及びｅＩＦ２α（４Ｂ）のリン酸化に及ぼす効果を示す図である。各群におけるマウスの数：ｎ＝６。濃度測定分析は、リン酸化形態（ｐＨ）対全形態（ｔｏｔ）の比率を示し、３つのウェスタンブロットの平均を表す。対照との差をｃ（ｐ＜０．００１）として示す。
【図５Ａ−５Ｅ】ＭＡＣ１６（５Ａ及び５Ｃ）細胞及びＭＡＣ１３（５Ｂ及び５Ｄ）細胞中でのＰＫＲ（５Ａ及び５Ｂ）の自己リン酸化及び２０Ｓプロテアーゼのαサブユニット（５Ｃ及び５Ｄ）の発現に対するＰＫＲ阻害物質の濃度の効果を示すグラフである。濃度測定分析は、リン酸化形態（ｐＨ）対全形態（ｔｏｔ）の比率を示し、３つの別々のウェスタンブロットの平均を表す。対照との差をａ（ｐ＜０．０５）、ｂ（ｐ＜０．０１）又はｃ（ｐ＜０．００１）として示す。（５Ｅ）は、（５Ｃ）に示すＰＫＲ阻害物質の濃度で処置したＭＡＣ１６細胞中で濃度測定により測定した２０Ｓプロテアーゼのαサブユニットの発現と、（５Ａ）中に示すリン酸化ＰＫＲのレベルとの間の関係。相関係数は０．９５７である。
【図６】方法の項に記載する、ＭＡＣ１３細胞及びＭＡＣ１６細胞中における４時間の期間にわたるｉｎ ｖｉｔｒｏでのタンパク質合成を示すグラフである。ＭＡＣ１６腫瘍との差をｃ（ｐ＜０．００１）として示す。
【図７Ａ−７Ｂ】ＥＭＳＡにより定量された、ＭＡＣ１６腫瘍中及びＭＡＣ１３腫瘍中（７Ａ）、並びに５ｍｇｋｇ−１のＰＫＲ阻害物質で４日間処置したマウス又は溶媒対照で処置したマウスから得たＭＡＣ１６腫瘍中（７Ｂ）におけるＮＦ−κＢの核蓄積を示す図である。濃度測定分析は、３つの別々のブロットの平均を表す。（７Ａ）におけるＭＡＣ１６腫瘍との差はｂ（ｐ＜０．０１）として示し、（７Ｂ）における溶媒対照との差はｃ（ｐ＜０．００１）として示す。
【図８】５ＦＵが、
【数１】
にて、単独で、又は１００ｎＭ及び２００ｎＭのＰＫＲ阻害物質（ＰＫＲ）と組み合わせた場合にｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるＭＡＣ１６細胞の成長に及ぼす効果、並びにゲムシタビンが、
【数２】
にて、単独で、又はＰＫＲ阻害物質と組み合わせた場合にＭＡＣ１６細胞の成長に及ぼす効果を示すグラフである。１００ｎＭ及び２００ｎＭでのＰＫＲ阻害物質単独の効果も示す。対照との差をｂ（ｐ＜０．０１）又はｃ（ｐ＜０．００１）として示し、ＰＫＲ阻害物質の存在下での差をｅ（ｐ＜０．０１）又はｆ（ｐ＜０．００１）として示す。
【００２７】
［好ましい実施形態の詳細な説明］
[0034]本発明は、二本鎖ＲＮＡタンパク質キナーゼ（ＰＫＲ−Ｉ）の阻害物質を使用して癌を治療するうえで化学療法剤の有効性を高めるための方法であって、栄養化合物を伴う又は伴わない方法に関する。
【００２８】
[0035]ＰＫＲ阻害物質を使用することにより、タンパク質合成の低下は完全に低減し、ｅＩＦ２αリン酸化の誘導が防止された（図１も参照）。ＰＫＲ阻害物質は、ＰＩＦ及びＡｎｇ ＩＩの両方により誘導されるタンパク質合成の低下も低減させ、マウス及びヒトの悪液質モデル両方におけるプロテアソームの発現及び活性の増加が防止された。ＰＫＲの自己リン酸化を介した、筋の悪液質におけるタンパク質合成の低下及びタンパク質分解の増加を明らかにする、提唱されている機序を図１にまとめる。Ｅｌｅｙ，Ｈ．Ｌ．及びＴｉｓｄａｌｅ，Ｍ．Ｊ．、Ｊ．Ｂｉｏｌ．、２８２、７０８７〜７０９７、２００７；Ｅｌｅｙ，Ｈ．Ｌ．及びＴｉｓｄａｌｅ，Ｍ．Ｊ．、Ｂｒ，Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、９６、１２１６〜１２２２、２００７；及びＥｌｅｙ，Ｈ．Ｌ．ら、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、９８（２）、４４３〜４４９、２００８。このような知見に基づき、ＰＫＲ阻害物質は、癌患者における、さらには悪液質を伴う他の疾患における筋萎縮を治療的に防止するために使用してもよい。
【００２９】
[0036]例えば、本発明者らにより観察されたように、ＰＫＲ及びｅＩＦ２α両方のリン酸化された形態のレベルは、ＰＫＲ及びｅＩＦ２αの量に関わらず体重が減少しているヒト癌患者の筋肉において大きく高まった。ＰＫＲのリン酸化とｅＩＦ２αのリン酸化との間には線形関係が認められ、このことから、ＰＫＲがリン酸化した結果、ｅＩＦ２αがリン酸化したことが示唆された。しかし、体重減少のレベルが増すにつれミオシンのレベルは減少した。ミオシン発現とｅＩＦ２αのリン酸化の程度との間における同様の線形関係。こうした知見から、ＰＫＲのリン酸化は癌患者における筋萎縮の重要な発動因子である可能性が示唆される。Ｅｌｅｙ，Ｈ．Ｌ．ら、Ｂｒ．Ｊ．、Ｃａｎｃｅｒ、９８（２）、４４３〜４４９、２００８。
【００３０】
[0037]本発明を何ら特定の機序に限定するものではないが、本発明の発明者らは、ＰＫＲ−Ｉの投与は、化学療法剤（例えば、５−フルオロウラシル又はゲムシタビン）と組み合わせたほうが、どちらかを単独で使用した場合より有効に腫瘍細胞の成長を低下させることを見出している。結果として、ＰＫＲ−Ｉの投与は、それが化学療法を増強することにおいては、直接的又は間接的であってもよい。５−フルオロウラシル又はゲムシタビンは両方とも、新生物の成長（例えば大腸癌）の治療に一般的に使用される化学療法化合物である。理論に拘束されるものではないが、極めて特定の濃度（最大効果は２００ｎＭにおいてであり、それより低濃度及びそれより高濃度では効果は低下する）で導入すると、ＰＫＲ−Ｉは癌細胞の成長を低下させると考えられる。加えて、ＰＫＲを阻害すると、化学療法薬に暴露された癌細胞の増殖がさらに減少した。細胞の阻害は、いずれかの化合物単独の場合に観察される阻害と比較して相乗効果であるように思われる（図８を参照）。ＰＫＲＩ化合物と構造的に無関係の特定の栄養化合物を投与した場合も、癌細胞の成長を低下させ癌性悪液質を防止すると考えられる。しかし、栄養化合物は、Ｊａｍｍｉら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．、３０８、５０〜５７、２００３により以前記載されたＰＫＲ−Ｉ化合物とは異なる機序により振舞う。
【００３１】
[0038]本明細書中で使用する場合、用語「増強物質」又は「増強する」は、別の薬剤及び／又は栄養化合物と組み合わせて使用した場合に両方の薬剤／化合物の相乗効果を生み、その相乗効果がそれぞれ単独で使用した場合の効果の合計を超える化合物又は薬剤に関する。本発明によれば、増強物質としては、ＰＫＲに対する阻害物質、ＰＫＲ−Ｉ類似体、ＰＫＲのリン酸化阻害物質、栄養補助食品又は栄養化合物、化学療法剤、血管新生剤、血管拡張剤、カテキンフラバノール、生物活性タンパク質、分枝鎖アミノ酸、必須アミノ酸、アミノ酸又はアミノ酸類似体、ヌクレオチド又はＲＮＡ、ビタミン、グルタミン、シアル酸オリゴ糖、Ｌ−テアニン、プレバイオティック、プロバイオティック又はシンバイオティック、必須脂肪酸、ＰＵＦＡ及び／又はＭＵＦＡ並びに抗酸化物質を挙げることができるが、これらに限定されない。
【００３２】
[0039]本明細書中で使用する場合、用語「治療」及び「治療する」は、予防的又は防止的な治療及び治癒的又は疾患緩和的な治療の両方を指し、これには、疾患に罹患するリスクがあるか、又は疾患に罹患している疑いのある患者、並びに病的状態であるか、又は疾患若しくは病態を有していると診断されている患者の治療が含まれる。これらの用語は、さらに、疾患に罹患してはいないが、窒素アンバランス又は筋肉減少などの不健康状態を生じやすい可能性のある個体における健康の維持及び／又は促進も指す。したがって、「有効量」は、個体における疾患若しくは病態を治療する量、又はより一般的には、個体に栄養的、生理的又は医学的な利益をもたらす量である。加えて、用語「個体」及び「患者」は、本明細書中ではヒトを指すために使用することが多いが、本発明を限定するものではない。したがって、用語「個体」及び「患者」は、当該治療から利益を得ることのできる一切の動物を指す。
【００３３】
[0040]悪液質
悪液質又は消耗は、貧血（ヘモグロビン量の落込み）、食欲不振症（食欲の欠如又は重度の減退）、体重減少及び筋萎縮を特徴とする重度の栄養不良及び負の窒素バランスの状態である。悪液質における生理的変化、代謝的変化及び行動上の変化は、脱力感、疲労、胃腸障害、睡眠／覚醒障害、疼痛、だるさ、息切れ、嗜眠、鬱、倦怠感、並びに家族及び友人の負担になっているという不安といった患者の愁訴を伴う。悪液質は、いくつかの疾患において見られ、そのような疾患としては、ＡＩＤＳ、癌、股関節骨折後、慢性心不全、慢性閉塞性肺疾患及び慢性閉塞性肺性疾患などの慢性肺疾患、肝硬変、腎不全、関節リウマチ及び全身性ループスなどの自己免疫疾患、敗血症、結核、嚢胞性線維症、クローン病及び重度の感染症が挙げられるが、これらに限定されない。このような慢性の感染症及び悪性疾患に加え、悪液質は、広範な外傷受傷後の患者及び成長障害症候群を有する高齢者においても確認されている。
【００３４】
[0041]癌性悪液質は、（１）食欲減退及び（２）栄養摂取不足のみから予測されるであろうより高速で優先的に筋肉減少を引き起こすストレスへの代謝応答という２つの主要素が原因である。したがって、癌患者における筋肉量の減少の速度を改善するための栄養補助食品があれば、そうした食品は重要な臨床的影響をもつことになろう。
【００３５】
[0042]癌性悪液質は、腫瘍の局所的効果であるだけではない。タンパク質、脂肪及び炭水化物の代謝の変化が一般に生じる。例えば、炭水化物代謝の異常としては、総グルコースの代謝回転速度の増加、肝臓の糖新生増加、耐糖能障害及び血糖値高値が挙げられる。脂肪分解の増加、遊離脂肪酸及びグリセロールの代謝回転の増加、高脂血症、及びリポタンパク質リパーゼ活性の低下が観察されることが多い。０ 癌性悪液質に伴う体重減少は、体脂肪貯蔵の低下によるだけでなく、広範な骨格筋消耗を伴う全身のタンパク質量の減少によっても引き起こされる。タンパク質代謝回転の増加、及びアミノ酸酸化の制御が不十分であることも重要である可能性がある。癌に応答して産生される宿主由来因子、例えば、腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）又はカケクチン、インターロイキン−１（ＩＬ−１）、ＩＬ−６、γ−インターフェロン（γ−ＩＦＮ）及びプロスタグランジン（ＰＧ、例えばＰＧＥ２など）の存在が悪液質の原因因子として関係付けられている。
【００３６】
[0043]体重減少は、肺及び消化管の上皮性悪性腫瘍に罹患している患者においては普通であり、それが原因で体脂肪及び筋タンパク質の両方が大量に減少しても、筋肉以外のタンパク質は影響を受けないままである。エネルギー貯蔵の観点からは体脂肪の減少は重要であるが、動けなくなり、最終的に呼吸筋機能障害が生じて、沈下性肺炎から死に至る結果をもたらすのは、骨格筋タンパク質の減少である。悪液質は、食欲不振症を伴うことが多いが、栄養補給のみでは安定体重を維持できず、体重が増えたとしても、それは除脂肪体重ではなく、脂肪組織及び水の増加によるものである。
【００３７】
[0044]二本鎖（ｄｓ）ＲＮＡ依存性タンパク質キナーゼ（ＰＫＲ）
本明細書中で使用する場合、用語「ＰＫＲ」は、タンパク質の機能を有し、以下のタンパク質の名で呼ばれることもあるタンパク質を指す：「二本鎖ＲＮＡ依存性タンパク質キナーゼ」、二本鎖ＲＮＡ依存性ｅＩＦ−２αキナーゼ」、「ＤＡＩ」（Ｊｉｍｅｎｅｚ−Ｇａｒｃｉａら、Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｓｃｉ．、１０６、１１〜１２、１９９３）、「ｄＳＩ」、「ｐ６８（ヒト）又はｐ６５（マウス）キナーゼ」（Ｌｅｅら、Ｊ．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｒｅｓ．１６、１０７３〜１０７８、１９９６）又はｄｓＲＮＡ−ＰＫ。Ｃｌｅｍｅｎｓら、Ｊ．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ｒｅｓ．、１３、２４１、１９９３も参照のこと。ＰＫＲは、キナーゼ活性を有することが知られる唯一同定された二本鎖ＲＮＡ結合タンパク質である。ＰＫＲは、セリン／トレオニンキナーゼであり、その酵素的な活性化には、二本鎖ＲＮＡ結合及びその結果生じる自己リン酸化が必要である（Ｇａｌａｂｒｕ，Ｊ．＆Ｈｏｖａｎｅｓｓｉａｎ，Ａ．、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２６２、１５５３８〜１５５４４、１９８７；Ｍｅｕｒｓ，Ｅ．ら、Ｃｅｌｌ、６２、３７９〜３９０、１９９０）。最もよく特徴付けされたＰＫＲのｉｎ ｖｉｖｏでの基質は、真核開始因子−２（ｅＩＦ−２α）のαサブユニットであり、これは一旦リン酸化されると、最終的には細胞及びウイルスのタンパク質合成を阻害することになる（Ｈｅｒｓｈｅｙ，Ｊ．Ｗ．Ｂ．、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、６０、７１７〜７５５、１９９１）。ＰＫＲのこの特定の機能は、ＩＦＮ−α及びＩＦＮ−βの抗ウイルス活性及び抗増殖活性の媒介に関与する機序の１つとして提唱されている。ＰＫＲについての追加的な生物学的機能は、シグナル伝達物質としての推定される役割である。Ｋｕｍａｒらは、ＰＫＲはＩκＢαをリン酸化することができ、その結果、核因子κＢ（ＮＦ−κＢ）の放出及び活性化がもたらされることを実証した（Ｋｕｍａｒ，Ａ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９１、６２８８〜６２９２、１９９４）。ＩＦＮ−ｂプロモーター中のよく特徴付けられたＮＦ−κＢ部位であれば、この部位は、ＰＫＲがＩＦＮ−ｂ転写の二本鎖ＲＮＡ活性化を媒介する機序を表すことができる（Ｖｉｓｖａｎａｔｈａｎ，Ｋ．Ｖ．＆Ｇｏｏｄｂｏｕｒｎｅ，Ｓ．、ＥＭＢＯ Ｊ．、８、１１２９〜１１３８、１９８９）。
【００３８】
[0045]ＰＫＲの活性化には、二本鎖ＲＮＡに縦並びで結合する２つの分子が関わっており、次に、分子内の事象において互いにリン酸化する。（Ｗｕら、１９９７、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ、２７２、１２９１〜１２９６）。ＰＫＲは、ｉｎ ｖｉｖｏでの制御機序としてアポトーシスに依存する過程（抗ウイルス薬活性、細胞成長制御及び腫瘍形成など）において関係があるとされている（Ｄｏｎｚｅら、ＥＭＢＯ Ｊ．、１４、３８２８〜３８３４、１９９５；Ｌｅｅら、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、１９９、４９１〜４９６、１９９４；Ｊａｇｕｓら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．、１９８９、第９巻、１５７６〜８６）。
【００３９】
[0046]ＰＫＲ阻害物質（ＰＫＲ−Ｉ）
ＰＫＲは、さまざまな細胞過程に関与しており、そのような過程としては、シグナル伝達、分化及びアポトーシスが挙げられる。ＰＫＲ阻害物質（ＰＫＲ−Ｉ）は、本発明によれば、異常な細胞応答、例えば、神経変性障害（例えば、ハンチントン病、アルツハイマー病及びパーキンソン病）に伴う障害を治療するために使用してもよい。本発明の組成物、キット及び方法における使用に適していると考えられるＰＫＲ阻害物質には、以下の中に記載のものが含まれる：Ｓｈｉｍａｚａｗａら、Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｌｅｔｔ．、４０９、１９２〜１９５、２００６、Ｐｅｅｌ、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．Ｅｘｐ．Ｎｅｕｒｏｌ．、６３、９７〜１０５、２００４、Ｂａｎｄｏら、Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．、４６、１１〜１８、２００５、Ｐｅｅｌら、Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．、１０、１５３１〜１５３８、２００１、及びＣｈａｎｇら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．、８３、１２１５〜１２２５、２００２。
【００４０】
[0047]ＰＫＲ−Ｉ類似体としては以下を挙げることもできるが、これらに限定されない：２−アミノプリン（２−ＡＰ）、９−（４−ブロモ−３，５−ジメチルピリジン−２−イル）−６−クロロ−９Ｈ−プリン−２−イルアミン、９−（４−ブロモ−３，５−ジメチルピリジン−２−イルメチル）−６−クロロ−９Ｈ−プリン−２−イルアミン、リン酸塩、９−（４−ブロモ−３，５−ジメチルピリジン−２−イルメチル）−６−クロロ−９Ｈ−プリン−２−イルアミン、塩化水素塩、６−ブロモ−９−（４−ブロモ−３，５−ジメチルピリジン−２−イルメチル）−９Ｈ−プリン−２−イルアミン、６−ブロモ−９−（４−ブロモ−３，５−ジメチル−１−オキシピリジン−２−イルメチル）−９Ｈ−プリン−２−イルアミン、２−（２−アミノ−６−クロロプリン−９−イルメチル）−３，５−ジメチルピリジン−４−オール、９−（４−アリルオキシ−３，５−ジメチルピリジン−２−イルメチル）−６−クロロ−９Ｈ−プリン−２−イルアミン、６−クロロ−９−［４−（２−エトキシエトキシ）−３，５−ジメチルピリジン−２−イルメチル］−９Ｈ−プリン−２−イルアミン、６−クロロ−９−（４−シクロプロピルメトキシ−３，５−ジメチルピリジン−２−イルメチル）−９Ｈ−プリン−２−イルアミン、６−クロロ−９−（４−イソブトキシ−３，５−ジメチルピリジン−２−イルメチル）−９Ｈ−プリン−２−イルアミン、６−クロロ−９−（４−クロロ−３，５−ジメチルピリジン−２−イルメチル）−９Ｈ−プリン−２−イルアミン、６−クロロ−９−（３，５−ジメチルピリジン−２−イルメチル）−９Ｈ−プリン−２−イルアミン及び６−ブロモ−９−（４−メトキシ−３，５−ジメチルピリジン−２−イルメチル）−９Ｈ−プリン−２−イルアミン、リン酸塩。ＰＫＲ阻害物質類似体は、Ｊａｍｍｉら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．、３０８、５０〜５７、２００３中に記載がある（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ Ｃａｔ．Ｎｏ．５２７４５０）。
【００４１】
[0048]用語「ＰＫＲ発現」は、ＰＫＲコード核酸配列の転写及び翻訳を指し、その産物としては、前駆体ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ポリペプチド、翻訳後処理されたポリペプチド及びそれらの誘導体が挙げられ、マウス又はサルの酵素など、他の種に由来するＰＫＲも含まれる。例として、ＰＫＲ発現のためのアッセイとしては、自己リン酸化アッセイ（Ｄｅｒ及びＬａｕ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９２、８８４１〜８８４５、１９９５）、ｅＩＦ２αリン酸化のためのアッセイ（Ｚａｍａｎｉａｎ−Ｄａｒｙｏｕｓｈ，Ｍ．ら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅｓ、１８、３１５〜３２６、１９９９）、ＰＫＲの免疫沈降により実施するキナーゼアッセイ及びキナーゼのためのｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ（Ｚａｍａｎｉａｎ Ｄａｒｙｏｕｓｈ，Ｍ．ら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．、２０、１２７８〜１２９０、２０００）が挙げられる。ＰＫＲの発現及び／又は産生のための例示的なアッセイとしては、ウェスタンブロット等のタンパク質アッセイ、及び、逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）アッセイ、ノーザンブロット分析、ドットブロット分析、又はＰＫＲコード核酸配列に基づき適切に標識されたプローブを使用するｉｎ ｓｉｔｕでのハイブリダイゼーション分析などのＰＫＲ ｍＲＮＡのためのアッセイが挙げられる。
【００４２】
[0049]先に述べたように、ＰＫＲは、体内又は細胞内でタンパク質の分解に関与する一連の他の細胞タンパク質をリン酸化するタンパク質である。分解標的となるこれらのタンパク質は横紋筋タンパク質に限定されず、構造タンパク質又は制御タンパク質のいずれかである細胞タンパク質（例えば、酵素及びシグナル伝達タンパク質、アクチンフィラメントなど）も含まれる。その結果、ＰＫＲタンパク質を阻害すると、細胞タンパク質の分解を制御する機序が変質することが示されている。ＰＫＲを阻害すると正常なタンパク質代謝が妨げられ、新しいタンパク質の分解及び合成が両方とも制限されると考えられる。
【００４３】
[0050]本発明によるＰＫＲ−Ｉの投与から得られる用途及び利益について、以下に検討する。
【００４４】
[0051]癌療法適用において：ＰＫＲ阻害物質（ＰＫＲ−Ｉ）は、ユビキチンが介在するプロテオソーム経路に関連するタンパク質分解を阻害することが示されていることから、ＰＫＲ−Ｉは、本明細書中に記載の実施例により実証するように、腫瘍細胞の複製を減らし、それにより腫瘍成長を遅らせると考えられる。ＰＫＲ−Ｉを使用すると、腫瘍細胞数の減少も促進できる。腫瘍阻害の機序は、完全には解明されていないが、細胞の完全性を維持するために必要な細胞複製サイクルを制御するタンパク質並びに細胞内タンパク質の妨害を挙げることができる。
【００４５】
[0052]先に報告したように、ＰＫＲ−Ｉは、癌性悪液質において上方制御されていることの多い骨格筋のタンパク質分解を阻害するために使用できる。癌性悪液質は、典型的には、痩せた筋組織を非常に急速に減少させ、ひいては患者が死亡するリスクを高める結果となる。
【００４６】
[0053]全身投与に対し、腫瘍の中へのＰＫＲ−Ｉの局所注射は、細胞内のタンパク質代謝の制限を通じて腫瘍細胞の成長を制限しながら、正常な骨格筋代謝（タンパク質分解を含む）を保持すると考えられる。
【００４７】
[0054]自己免疫疾患において：過剰炎症の結果、炎症応答を制御する過剰なタンパク質が産生されることが多い。過剰炎症は筋肉減少、及び外傷からの回復遅延化に直接関係があることから、炎症応答を調節することが望ましい。その結果、ＰＫＲ−Ｉの投与により利益がもたらされて炎症調節タンパク質（例えば、急性期タンパク質（ＣＲＰ）、インターロイキン（ＩＬ−６、ＩＬ−１など））を産生する細胞の過剰な生成が制限されると考えられる。
【００４８】
[0055]バランスがとれ制御された様式での自己免疫は、可能性のある新生物細胞の免疫監視にとって必要である。自己免疫は、いくらか副作用を有するが、それでもやはり、重要で自然な過程である。したがって、タンパク質性のサイトカインの産生に関与する免疫細胞が過剰に作られることを防止すれば、免疫応答が制限され、自己免疫疾患が防止されると予想される。
【００４９】
[0056]例えば、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）においては、活性化したＳＬＥ Ｔ細胞中でＰＫＲが過剰発現し、それに相関してｅＩＦ２αリン酸化が増加する。ＰＫＲの高度な発現、それに次ぐｅＩＦ２αのリン酸化は、少なくとも部分的には、ＳＬＥ患者のＴ細胞におけるマイトジェンに対する翻訳性及び増殖性の応答障害の原因になりがちと考えられる。Ｇｒｏｌｌｅａｕ，Ａ．ら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．、１０６（１２）、１５６１〜１５６８、２０００。
【００５０】
[0057]アレルギーにおいて：多様な抗原又はエフェクターに対するアレルギー反応には、タンパク質性の免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）が介在するが、ＩｇＥは、Ｂ細胞が抗原（例えば花粉）に接触したときにＢ細胞により産生される。したがって、ＰＫＲ−Ｉを使用すると、Ｂ細胞の制限を通じてＩｇＥの産生を減らすことによりその者に利益がもたらされると考えられる。このことは、オマリズマブ（ゾレア（Ｘｏｌａｉｒ）（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）と呼ばれる異なる型の化合物によりもたらされる機能に類似している。タンパク質分解阻害物質と対照的に、オマリズマブは、アレルギー性過敏症を軽減させる目的で行われるアレルギー関連の喘息療法において使用されるモノクローナル抗体である。
【００５１】
[0058]慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）において：ＣＯＰＤ（「慢性気管支炎」を含む）に伴う状態は、粘液を産生する気道の杯細胞の過形成及び肥大に関連する場合が多いことから、ＰＫＲ−Ｉを使用するとＣＯＰＤに伴う症状が軽減されると考えられる。したがって、気道閉塞の原因となる粘液の分泌を減らせば、ＰＫＲ−Ｉによる治療を受ける者に有益と考えられる。加えて、ＣＯＰＤは炎症を伴い、それに次ぎ、気道を狭める組織の瘢痕化及びリモデリングが生じる。
【００５２】
[0059]局所施用において：ＰＫＲ−Ｉは、さまざまな皮膚疾患にとって有益であると考えられ、そのような疾患としては、アトピー性皮膚炎、湿疹及び乾癬が挙げられるが、これらに限定してはならない。アトピー性皮膚炎では、炎症を起こし、刺激され及び荒れた皮膚を生じさせる免疫系による過剰な反応があるが、これをＰＫＲ−Ｉ投与により制御できる。
【００５３】
[0060]免疫栄養において：セカンドジェネレーションインパクト（Ｓｅｃｏｎｄ Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ Ｉｍｐａｃｔ）（登録商標）などの免疫栄養を使用して炎症を調節し感染症を低減させることは、癌の外科手術を受ける患者においては普通である。ＰＫＲ−Ｉによりサイトカイン産生をさらに制御すると、炎症性サイトカインの過剰発現が低下すると予想される。
【００５４】
[0061]化学療法において：最近の調査から、乳から単離された特定の生物活性ペプチドは、Ｇ０期（細胞老化）において細胞周期が停止すると細胞保護特性を有することが示唆されている。ＰＫＲ−Ｉは、細胞周期を制御するタンパク質の分解を変化させると考えられる。結果として、能動的な化学療法及び放射線療法中の細胞複製を制限すると、健康な細胞が保護されると考えられる。
【００５５】
[0062]糖尿病において：Ｉ型の場合は、自己免疫の場合と同様、前述のとおりである。ＩＩ型の場合は、完全にインスリン依存性の成人発症型糖尿病の最終段階の前に、膵臓のβ細胞が過剰なインスリンを分泌する。その結果、ＰＫＲ−Ｉは、インスリンの過剰分泌を防止するための限局投与において有用であろうと考えられる。
【００５６】
[0063]クッシング病において：クッシング病は、過剰なコルチゾールの分泌を促進する脳下垂体中に腫瘍が存在することにより生じる。その結果、ＰＫＲ−Ｉを局所投与及び／又は全身投与すると、腫瘍成長が防止され、恐らくコルチゾールの合成が減るであろうと考えられる。追加的な利点は、コルチゾールが除脂肪体重減少を促進する他の慢性のストレス応答においても見ることができる。
【００５７】
[0064]臓器移植において：ＰＫＲ−Ｉを使用すると、異質な抗原提示に反応することにより臓器拒絶反応を誘発する免疫タンパク質の発現が低下する。
【００５８】
[0065]リウマチ熱及びリウマチ性の臓器疾患において：リウマチ熱及びリウマチ性の臓器疾患は、Ａ群レンサ球菌への感染により生じる未治療又は治療が不十分な連鎖球菌感染症の稀な合併症として生じることがある炎症性疾患である。リウマチ熱及びリウマチ性の臓器疾患の正確な原因は解明されていないが、医学研究では、特定の型の連鎖球菌により産生される抗原に対する異常な免疫系応答に注目してきた。感染症により生じる抗原応答の結果、臓器、筋肉及び関節を誤って攻撃する抗体が産生される。リウマチ熱及びリウマチ性の臓器疾患には治療法がないが、この疾患に対する医学的治療には、レンサ球菌感染症を治療し、将来的な感染を防止するための抗生物質投薬が含まれ、他の薬物は疾患の症状を緩和する。したがって、抗体の産生を一時的に減少させて抗生物質療法のための時間を作ることが、ＰＫＲ−Ｉを介したタンパク質合成の阻害により達成されると考えられる。
【００５９】
[0066]早老症において：早老症（Ｐｒｏｇｅｒｉａ）（ギリシャ語で「高齢」）は、具体的には、ハッチンソン−ギルフォード早老症症候群、又は全般には、他の老化加速疾患を指す。早老症は、老化のいくつかの側面が全般に加速する極めて稀な疾患で、この疾患に罹患して１３歳を超えて生存する子供はほとんどいない。この疾患は遺伝子疾患であるが、散発的に起こり、家族内で遺伝しない。早老症の公知の治療法はないが、いくつか発見はあった。成長ホルモン（Ｓａｄｅｇｈｉ−Ｎｅｊａｄ，Ａ．ら、Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．、２０（５）、６３３〜６３７、２００７）及びファルネシル転移酵素阻害物質（Ｍｅｔａ，Ｍ．ら、Ｔｒｅｎｄｓ Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．、１２（１０）、４８０〜４８７、２００６）を用いた治療が提案されている。２００３年には、Ｍ．Ｅｒｉｋｓｓｏｎらにより、早老症は新規の優性形質であり、新しく宿った子供における、又は両親のうち一方の配偶子における細胞分裂中に生じる可能性があることが報告された。この疾患の原因は、染色体１上のＬＭＮＡ（ラミンＡ）遺伝子における突然変異である。早老症では、プレラミンＡを切断してラミンＡにするのに酵素（プロテアーゼ）が必要な認識部位が突然変異する。ラミンＡは、産生できず、プレラミンＡは核膜上に蓄積し、それが原因で、特徴的な、核の小疱形成が生じる（Ｌａｎｓ，Ｈ．ら、Ｎａｔｕｒｅ、４４０（７０８０）、３２〜３４、２００６）。この結果、早老症の早期老化症状となる。早老症患者の細胞をＬＭＮＡの若年及び高齢のヒト対象の皮膚細胞と比較した試験では、一定の核タンパク質の下方制御、ＤＮＡ損傷の増加、及びヘテロクロマチンの減少の原因となるヒストンの脱メチル化など、早老症及び高齢者の細胞においては同様の欠陥が見出された。核ラミナの機能異常に関与するタンパク質（例えばプレラミンＡ）などのタンパク質の発現を低下させるためにＰＫＲ阻害物質を使用すると、結果として早期老化が生じることが報告されている。
【００６０】
[0067]用語「アミノ酸」は、本明細書中で使用する場合、特に明記しない限り、少なくとも１つの必須アミノ酸、例えば、イソロイシン、ロイシン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、トレオニン、トリプトファン、バリン若しくはヒスチジン；条件付きで必須アミノ酸、例えば、チロシン、システイン、アルギニン若しくはグルタミン；又は非必須アミノ酸、例えば、グリシン、アラニン、プロリン、セリン、グルタミン酸、アスパラギン酸、アスパラギン、タウリン若しくはカルニチンを指す。
【００６１】
[0068]用語「必須アミノ酸」（ＥＡＡ）は、本明細書中で使用する場合、特に明記しない限り、以下のアミノ酸のうち１つの少なくとも源を指す：イソロイシン、ロイシン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、トレオニン、トリプトファン、バリン及びヒスチジン。
【００６２】
[0069]加えて、アミノ酸の、アルギニン、システイン、グリシン、グルタミン及びチロシンは、条件付きで必須と考えられるが、その意味は、これらのアミノ酸は食餌中では普通必要ではないが、十分な量で合成されない特定の集団には外因的に補給しなければならないということである。
【００６３】
[0070]本明細書中で使用する場合、「分枝鎖アミノ酸」は、例えば、ロイシン、イソロイシン又はバリンなどのアミノ酸のうちの少なくとも１つを指す。
【００６４】
[0071]Ｌ−テアニン又はγ−エチルアミノ−Ｌ−グルタミン酸（サンテアニン（Ｓｕｎｔｈｅａｎｉｎｅ）（商標）としても知られる）は、茶の葉、例えば、紅茶、ウーロン茶及び緑茶（茶の煎じ汁）中においてのみ見出される独特のアミノ酸である。テアニンは、グルタミンに関連があり、血液脳関門を通過できる。テアニンは、脳に入ることができるので、精神活性特性を有する。テアニンは、精神的及び身体的なストレスを低下させることが示されており、くつろぎの感情を生じさせることができ、カフェインと組み合わせて摂取すると認知及び気分が改善される。Ｌ−テアニンは、くつろぎの指標であるα脳波の発生を促進することが示されている。微生物感染症及び恐らくさらには腫瘍に対する自然な抵抗力を高める可能性もある。５０〜２００ｍｇの用量により、くつろぎ効果をもたらすことができる。免疫系機能促進のためのＬ−テアニンの用量は提案されていないが、予備研究におけるボランティアは、１日およそ６００ｍＬの茶を摂取した。
【００６５】
[0072]本明細書中で使用する場合、「プレバイオティック」は、宿主又は対象の消化管に供給されると、病原性の細菌種に対し１つ若しくは限定数の有益な細菌種の成長及び／又は活性を選択的に刺激する非消化性の食品成分である。プレバイオティックとしては、酵母、酵母培養物、真菌培養物、並びに多糖及びオリゴ糖（フルクトオリゴ糖（ＦＯＳ）など）などの公知の食物繊維並びにグアーゴム、特に部分的に加水分解されたグアームゴム（ＰＨＧＧ）及びペクチンが挙げられる。「プロバイオティック」は、宿主又は対象の消化管に導入されると、事実上コロニー形成し有益な効果をもたらす実際の細菌種である。好ましくは、プロバイオティックは、乳酸菌及びビフィズス菌のうち１つ又は複数を包含する。用語「シンバイオティック」は、プレバイオティックとプロバイオティックとの混合物で、宿主又は対象の消化管中で、生きた微生物性の栄養補助食品の生着及び植付けを向上させることにより宿主に有益に作用するものを指す。
【００６６】
[0073]「必須脂肪酸」又は「ＥＦＡ」は、体が使用でき、飽和脂肪酸、多価不飽和脂肪酸又は一不飽和脂肪酸のいずれかに分類できる任意の脂肪酸で、自然において見出すことができるか、又は合成により作製できるものを指し得る。ＥＦＡとしては、コレステロール、プロスタグランジン、レシチン、コリン、イノシトール、共役リノレン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、α−リノレン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサペンタエン酸、ドコサヘキサン酸（ｄｏｃｏｓａｈｅｘａｎｏｉｃ ａｃｉｄ）、リノレン酸、γ−リノレン酸、ω−３脂肪酸、ω−６脂肪酸、ω−９脂肪酸、多価不飽和脂肪酸、長鎖多価不飽和脂肪酸、アラキドン酸、一不飽和脂肪酸、脂肪酸前駆体及び脂肪酸誘導体を挙げることができるが、これらに限定されない。本発明による、悪液質又は食欲不振症を防止又は治療するための有用な組成物としては、少なくとも１つのＥＦＡの混合物の組合せを挙げることができる。
【００６７】
[0074]前述した栄養分の毎日の投与量は、個体又は対象の体重、性別、年齢及び／又は病態に応じて変化させてもよい。
【００６８】
[0075]栄養介入
能動的な放射線療法及び／又は化学療法による治療の間に、又は本発明によるＰＫＲ−Ｉと組み合わせて使用して所望の効果を得る間に細胞傷害性を高めるための標的の栄養分の使用は、以下のとおりである。
【００６９】
[0076]細胞傷害性において：フリーラジカルを誘導する栄養分は、疾患に罹った細胞及び腫瘍細胞への損傷を増加させると考えられる。例としては、
ａ．鉄、亜硝酸塩／硝酸塩
ｂ．低濃度のビタミンＥ、Ｃ、Ｂの複合体及びセレン及び他の抗酸化物質
ｃ．グルタミンの取込みを遮断するための高フィチン酸塩（二価のキレート剤）、Ｌ−テアニン
が挙げられる。
【００７０】
[0077]細胞保護においては、以下の栄養分は、化学療法中の免疫攻撃並びに細胞の損傷及び傷害から正常な細胞を守ると考えられる：
ａ．抗酸化物質：グルタミン、システイン、ビタミンＡ、Ｃ、Ｅ及びセレン
ｂ．同化のためのリシン→ノルロイシン（ＢＣＡＡ類似体）
ｃ．同化のためのヌクレオチド（又は循環しているヌクレオチド断片）
ｄ．高多価不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）／一不飽和脂肪酸（ＭＵＦＡ）：膜の流動性を高め、反応性オキシダントによる損傷を防止する
ｅ．シアル酸オリゴ糖：腸細胞の健康を改善し病原性の生物及び化合物の侵入を減らす。
【００７１】
[0078]プロバイオティック、プレバイオティック及びシンバイオティックなどの製品の使用については十分実証されている。例えば、プロバイオティックは、（ａ）抗生物質、ロタウイルス感染、化学療法に伴う下痢、及びより低い程度の旅行者の下痢の頻度及び持続期間を低下させること、（ｂ）細胞性免疫及び体液性免疫を刺激すること並びに（ｃ）アンモニウム及び発癌促進性の酵素など、大腸中の望ましくない代謝産物を減少させることが知られている。プロバイオティックは、癌防止において役割を有する可能性がある。Ｓｃｈｒｅｚｅｎｍｅｉｒ，Ｊ．ら、Ａｍ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｎｕｔｒ．、７３（付録）、３６１Ｓ〜３６４Ｓ、２００１を参照。本明細書中で使用する場合、用語「プロバイオティック」は、宿主の区画中の微生物叢を変化させ（植付け又はコロニー形成により）、それによりこの宿主において有益な効果を発揮する十分な数で生存可能な規定微生物を含有する調製物又は製品を指す。用語「プレバイオティック」は、１つ若しくは限定数の細菌の、大腸中での成長及び／又は活性を選択的に刺激することにより、宿主に有益に作用する非消化性の食品成分を指す。例えば、ビフィズス菌であれば、フルクトオリゴ糖、イヌリン、トランスガラクトシル化オリゴ糖及び大豆オリゴ糖などの物質の摂取により促進されると考えられる。製品がプロバイオティックとプレバイオティックとを含有する場合は、用語「シンバイオティック」を使用する。「シンバイオティック」という用語は相乗作用の意味を感じさせるので、プレバイオティック化合物がプロバイオティック化合物に選択的に有利に働く製品については、その用語の使用を控える。厳密に言うと、シンバイオティックは、オリゴフルクトースと、ビフィズス菌を増殖させるプロバイオティック菌とを含有する製品のことである。Ｓｃｈｒｅｚｅｎｍｅｉｒ，Ｊ．ら、２００１、上記を参照。
【００７２】
[0079]栄養化合物と共に用いるか否かに関わらず、キナーゼ阻害物質を使用すると、癌腫瘍の治療における化学療法剤の有効性は増強される。追加的な利点としては、筋肉減少、具体的には癌性悪液質を制御する代謝経路の栄養調節が挙げられる。
【００７３】
[0080]ＰＫＲ−Ｉの投与時には、二本鎖ＲＮＡタンパク質キナーゼをリン酸化すると、細胞（ＭＡＣ１６固形腫瘍）の成長は、化学療法剤（例えば、５−フルオロウラシル又はゲムシタビン）と組み合わせたほうが、いずれかを単独で使用した場合より有効に低下する結果となった。
【００７４】
[0081]加えて、ＰＫＲ阻害物質の投与は、炎症促進性サイトカインである核因子−κ−Ｂ（ＮＦ−κＢ）の活性型を減らすために用いてもよい。ＮＦ−κＢは、化学療法薬、例えばゲムシタビン（Ａｒｌｔ，Ａ．ら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、２２（２１）、３２４３〜３２５１、２００３）及び５−ＦＵ（Ｕｅｔｓｕｋａ，Ｈ．ら、Ｅｘｐ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ．、２８９（１）、２７〜３５、２００３）に対するある種の腫瘍細胞による抵抗性に関連があると考えられる。結果として、ＰＫＲ阻害物質の投与は、それが化学療法を増強する能力においては直接的又は間接的的であってもよい。前述の化学療法薬は両方とも、新生物の成長（例えば大腸癌）の治療において普通に使用される化合物である。
【００７５】
[0082]本発明者らは、ＰＫＲ阻害物質は極めて特定の濃度（最大効果は２００ｎＭにおいてであり、それより低濃度及びそれより高濃度では効果は低下する）で導入すると、癌細胞の成長を低下させることを示した。加えて、ＰＫＲを阻害すると、化学療法薬に暴露された癌細胞の増殖がさらに減少した。細胞の阻害は、いずれかの化合物単独の場合に観察される阻害と比較して相乗効果であったように思われる（図８を参照）。ＰＫＲ阻害物質化合物と構造的に無関係の特定の栄養化合物の投与によっても、癌細胞の成長は低下し癌性悪液質は防止されると考えられる。しかし、栄養化合物は、以前記載されたＰＫＲ阻害物質（複数可）化合物（Ｊａｍｍｉら、２００３）とは異なる機序により作用する。
【００７６】
[0083]化学療法による免疫抑制の栄養的緩和
免疫抑制を生じさせるいくつかの化学療法剤が知られており、２つの例として、５−フロウロウラシル及びゲムシタビンが挙げられる。
【００７７】
[0084]５−フロウロウラシル（５−ＦＵ）は、腸、胸、胃及び食道の癌などいくつかの型の癌の治療薬として提供される一般的な化学療法薬である。５−ＦＵの使用に伴う合併症は、感染症に対する抵抗性の低下である。５−ＦＵは、骨髄による白血球の産生を減少させ、患者の感染症へのかかりやすさを増す可能性がある。
【００７８】
[0085]ゲムシタビンは、非小細胞肺癌、膵臓癌、膀胱癌及び乳癌の治療薬として提供される化学療法薬である。ゲムシタビンも、骨髄による白血球の産生を減少させ、感染症に対する患者の感受性を高める可能性がある。免疫機能の顕著な低下は、典型的には治療薬投薬の７日後に始まり、感染症に対する抵抗性は、典型的には、化学療法の１０〜１４日後の間が最も低い。血球は、多くの場合、着実に増加し、化学療法の次回のコース予定の前に正常レベルに戻ることになる。
【００７９】
[0086]グルタミンは、免疫機能を支えることにより、化学療法を受けている患者に利益をもたらすと考えられる。栄養分と化学療法との相互作用は、これまでに提唱されている。抗酸化薬は、細胞内の薬物を早すぎる段階で分解することにより化学療法の有効性を低下させるが、このことは、健康な細胞には有益であるが腫瘍細胞中では望ましくない。アミノ酸のグルタミンは、細胞間の抗酸化薬グルタチオン（ＧＳＨ）の成分であることから、化学療法薬の分解を促進することがある（Ｒｏｕｓｅ，Ｋ．ら、Ａｎｎａｌｓ Ｓｕｒｇｅ．、２２１（４）、４２０〜４２６、１９９５）。したがって、アミノ酸のＬ−テアニンを用いての細胞によるグルタミンの取込み遮断が、ドキソルビシンの場合における化学療法を増強するための方法として提案されている（Ｓｕｇｉｙａｍａ，Ｔ．及びＡｄｚｕｋｉ，Ｙ．、Ｂｉｏｃｈｉｐ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔ、１６５３（２）、４７〜５９、２００３）。しかし、全ての調査がグルタミンに対するこの主張を支持するわけではない（Ｒｕｂｉｏ，Ｉ．Ｔ．ら、Ａｎｎ Ｓｕｒｇ．、２２７（５）、７７２〜７７８、１９９８）。ＧＳＨは、細胞を保護しようとして化学療法化合物の分解を促進することがあるが、グルタミンは適切な免疫細胞機能の重要な構成要素でもある。グルタミンの減少を示唆すると思われる証拠に関わらず、免疫機能の効果は患者の健康及び回復を損なうと考えられる。
【００８０】
[0087]免疫栄養：化学療法の有効性（ＰＫＲ阻害物質を用いた場合の）を誇示しようとすると、患者に対する感染症のリスクを高めがちである。感染症及び感染症リスクにより、首尾よい治療に必要な積極的な用量の化学療法を施したいという癌専門医の意向は低下するかもしれない。加えて、感染症は、患者の、強力な治療レジメンに耐える能力、並びに治療に関連する並存症又は外科手術の創傷からの回復／治癒をも損なう可能性がある。抗炎症性の脂肪酸（例えば、エイコサペンタン酸（ｅｉｃｏｓａｐｅｎｔａｎｏｉｃ ａｃｉｄ）及びドコサヘキサン酸）、アミノ酸Ｌ−アルギニン及びその前駆体、Ｌ−シトルリン及びリボ核酸などの成分入りの栄養分の補給は、Ｔ細胞の活性化、成熟、及び炎症低下により、免疫健康を促進できる。
【００８１】
[0088]生物活性乳由来タンパク質：生物活性乳由来タンパク質は、健康な細胞における細胞周期の各時期を減速又は一時的に停止させる生物活性ペプチド（例えば、形質転換成長因子−β（アイソフォーム１〜３）源を供給する。こうした生物活性タンパク質は、酸性化などの加工により活性化させる必要があることから、標準的な乳は適さない。乳由来のこうした生物活性タンパク質の投与により、口腔、食道及び胃腸の上皮などのタンパク質と接触する細胞が保護されると考えられる。生物活性ペプチドは、化学療法剤（ＰＫＲ阻害物質と共に使用するか否かを問わない）による損傷に対し急速に分裂する細胞の感受性を低下させることにより働く。
【００８２】
[0089]ヌクレオチド（例えばリボ核酸）：この化合物（例えば、アデニン、グアニン、シトシン）は、化学療法を受けている癌患者、特に、化学療法レジメンがＰＫＲ阻害物質（複数可）などの増強物質と組み合わせて提供される場合に免疫系を支えると考えられる。ヌクレオチドは、赤血球及びＴ細胞（免疫細胞）の両方の成熟を包含する、骨髄の造血活動及びその産生物を支える。加えて、ヌクレオチドは、薬剤の吸収を促進する可能性について調査されていることから、ヌクレオチドの栄養補給は、腫瘍細胞による化学療法剤の取込みを増やし免疫機能を支える点で有益なことと考えられる。
【００８３】
[0090]血管新生及び血管拡張する栄養分：血管新生及び血流を促進する栄養分も、代謝活性組織への化学療法剤の送達を増やす。アミノ酸Ｌ−アルギニン及び／又はＬ−シトルリン並びにカテキンフラバノール化合物（癌の化学予防剤と見なされる）の栄養投与は、癌患者においては推奨されないが、その理由は、こうした化合物は血管新生、急速な成長を伴う浸潤性腫瘍の特性を促進する可能性があるからである。しかし、特異的に腫瘍への血液送達が増えれば、細胞傷害性の化学療法剤の取込みも増すと考えられる。
【００８４】
[0091]癌性悪液質の軽減に向けたＰＫＲ阻害物質の投与（特定の栄養分と併用するか否かを問わない）。
癌性悪液質、心臓の悪液質、及び恐らくは、筋肉減少症、ＨＩＶ／ＡＩＤＳなど他の疾患における筋タンパク質減少は、サブユニットの結合、及び／又はプロテオソーム産生の上方制御により制御される。この過程における段階の１つには、真核開始因子２−α（ｅＩＦ２ａ）の活性化が含まれる。リン酸化を介したｅＩＦ２ａの活性化により、プロテオソームのタンパク質分解が促進される。ＰＫＲ阻害物質を投与すると、ｅＩＦ２ａ分子の活性化（リン酸化）が減少し、それによりプロテオソームの活性化が低下し、筋タンパク質の分解が低下する。
【００８５】
[0092]化学療法の強度を高め、ＰＫＲ阻害物質の投与（追加的な栄養分と共に投与するか否かを問わない）により癌性悪液質の過程を阻害すると、腫瘍細胞に及ぶ化学療法薬の効果を高めることが示されている。本発明の利点は、臨床関連の効果を引き出すのに必要な時間の長さ又は用量数を低減できることである。ＰＫＲを阻害する化合物を評価するための調査は以前行われたが、ＰＫＲを阻害すれば癌治療の利益が得られることは、これまでに実証されていない。追加的な利益は、ＰＫＲ阻害物質、及びアミノ酸、脂肪酸、核酸など、化学療法をさらに増強し、毒性を伴う療法を軽減するための特定の栄養化合物を投与する場合にも得ることができる。
【００８６】
[0093]ＰＫＲ阻害物質は、癌性悪液質、及び療法に対する腫瘍抵抗性に関与するＰＫＲのリン酸化を遮断する。本発明者らの結果から、癌療法におけるこのような化合物の心躍る可能性が実証される。加えて、ＰＫＲのリン酸化を低下させるために別々のタンパク質（ＰＰＩ）又はＰＫＲに直接作用する特定の栄養分の使用により、そのような栄養分が癌治療において補助治療剤としての可能性を有することも示唆される。医薬用の化合物と比較した場合の栄養分（アミノ酸、ポリフェノール類）の利点は以下のとおりである：代替性のある作用機序、価格、安全性、及び代替性のある小売販路による入手しやすさ。
【００８７】
[0094]本明細書中で使用する場合、用語「活性剤」、「活性成分」、「活性化合物」又は場合により「化合物」の意味は、同等であると理解されたい。
【００８８】
[0095]用語「ＰＫＲの生物活性」及び「生物学的に活性のあるＰＫＲ」は、ＰＫＲ、又はＰＫＲの断片、誘導体若しくは類似体に付随する任意の生物活性（酵素活性など）を指し、具体的には、真核翻訳開始因子２（ｅｌＦ−２）などの基質、及びＮＦ−κＢなどの転写因子のリン酸化を含む自己リン酸化活性及びキナーゼ活性が挙げられることになる。
【００８９】
[0096]「ｅｘ ｖｉｖｏ」とは、生物の体の外側であって、そこから細胞若しくは複数の細胞が得られるか、又はそこから細胞系統が単離される場所を意味する。ｅｘ ｖｉｖｏ施用は、完全な細胞の使用を含んでもよく、又は溶菌液などの無細胞系（すなわち、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの）を用いてもよい。
【００９０】
[0097]「ｉｎ ｖｉｖｏ」とは、生物の体内であって、そこから細胞が得られたか、又はそこから細胞系統が単離される場所を意味する。
【００９１】
[0098]「ヒト細胞」とは、発達の任意の段階でヒトから単離される細胞を意味する。
【００９２】
[0099]「患者又は対象」とは、任意の動物を意味する。
【００９３】
[00100]動物としては鳥類及び哺乳動物が挙げられるがこれらに限定されず、哺乳動物としては、齧歯動物（ネズミ科の動物）、水棲哺乳動物、イヌ、オオカミ、ウサギ及びネコなどの飼育動物、ヒツジ、ブタ、ウシ、ヤギ（ヒルクリン（ｈｉｒｃｒｉｎｅ）及びウマなどの家畜、並びにヒトが挙げられるが、これらに限定されない。動物又は哺乳動物又はその複数形の用語を使用する場合、その内容が、一節の文脈により表され又は表されることを意図した効果を得ることができる任意の動物にも適用されることを企図している。本発明の方法、組成物及びキットを用いて治療できる他の動物としては、トカゲ、ヘビ、魚及び鳥が挙げられる。
【００９４】
[00101]「哺乳動物」とは以下を意味するが、これらに限定されない：齧歯動物（ネズミ科の動物）、水棲哺乳動物、イヌ、オオカミ、ウサギ及びネコなどの飼育動物、ヒツジ、ブタ、ウシ、ヤギ（ヒルクリン）及びウマなどの家畜、並びにヒト。哺乳動物という用語を使用する場合、その内容が、「哺乳動物」により表され又は表されることを意図した効果を得ることができる他の動物にも適用されることを企図している。
【００９５】
[00102]用語「残基」又は「アミノ酸残基」又は「アミノ酸」は、本明細書中で使用する場合、タンパク質、ポリペプチド又はペプチド（集合的には「ペプチド」）中に組み込まれるアミノ酸を指す。アミノ酸は、天然に存在するアミノ酸であってもよく、特に限定しない限り、天然に存在するアミノ酸と同様の様式で機能できる天然のアミノ酸の公知の類似体を包含することがある。
【００９６】
[00103]用語「癌」は、多様な型の悪性の新生物を指し、その大部分は周囲組織に浸潤でき、異なる部位に転移することがある（ＰＤＲ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ第１版（１９９５））。
【００９７】
[00104]用語「新生物」及び「腫瘍」は、細胞増殖により正常なものと比較して急速に成長し、増殖を開始させた刺激を取り除いた後も成長し続ける異常な組織を指す（ＰＤＲ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ第１版（１９９５））。そのような異常な組織は、構造機構の、及び正常な組織との機能的な協調の部分的又は完全な欠如を示し、良性（すなわち良性腫瘍）又は悪性（すなわち悪性腫瘍）のいずれであってもよい。
【００９８】
[00105]「異常な細胞増殖に伴う障害を治療する」という言い回しは、対象における新生物の成長の防止、又は対象における既存の新生物の成長の低下を包含することを意図したものである。阻害は、１つの部位から別の部位への新生物の転移の阻害であってもよい。一態様では、新生物は、本明細書中に記載の１つ又は複数の翻訳開始阻害物質に感受性がある。本発明が包含することを意図する新生物の型の例としては、胸部、皮膚、骨（骨髄及び造血組織を含む）、前立腺、卵巣、子宮、子宮頸部、肝臓、肺、脳、喉頭、胆嚢、膵臓、直腸、副甲状腺、甲状腺、副腎、免疫系、神経組織、頭部及び頸部、大腸、胃、気管支及び／又は腎臓の癌に関連するような新生物が挙げられるが、これらに限定されない。
【００９９】
[00106]本明細書中で使用する場合、「テスト試料」は、関心対象から得た生体試料を指す。例えば、テスト試料は、生体液試料（例えば、血清、痰、尿）、組織試料（例えば生検）又は細胞試料（例えば、頬擦過）であってもよい。本明細書中で使用する場合、「正常試料」又は「標準試料」は、健康な（すなわち非悪性の）生体液試料、組織試料又は細胞試料から得た生体試料を指す。本明細書中で使用する場合、用語「生体試料」は、対象から単離された組織、細胞及び生体液、並びに対象において存在する組織、細胞及び体液を包含することを意図したものである。生体試料は、任意の生体組織又は体液又は細胞のものであってもよい。典型的な生体試料としては、痰、リンパ液、血液、血球（例えば白血球）、脂肪細胞、子宮頸部細胞、頬細胞、咽頭細胞、乳房細胞、筋細胞、皮膚細胞、肝細胞、脊髄細胞、骨髄細胞、組織（例えば、筋組織、子宮頸部組織、皮膚組織、脊髄組織、肝組織など）、細針生検試料、尿、脳脊髄液、腹水及び胸水、又はそれらから得られた細胞が挙げられるが、これらに限定されない。生体試料は、組織学的な目的のために採取した凍結切片などの組織片を包含することもある。生体試料は哺乳動物から得てもよく、哺乳動物としては、ウマ、ウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウサギ、モルモット、ラット、マウス、スナネズミ、非ヒト霊長動物及びヒトが挙げられるが、これらに限定されない。生体試料は、微生物（例えば、細菌細胞、ウイルス性細胞、酵母細胞など）由来の細胞及びその一部を包含することもある。
【０１００】
[00107]ＭＡＣ１６腫瘍は、確立されたシリーズ（ＭＡＣ）の、化学的に誘導され移植可能な大腸腺癌に由来し、１９８９年３月８日付でＰｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｅｒｖｉｃｅ Ｃｅｎｔｒｅ ｆｏｒ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ ＲｅｓｅａｒｃｈのＥｕｒｏｐｅａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ＥＣＡＣＣ）、Ｐｏｒｔｏｎ Ｄｏｗｎ、Ｓａｌｉｓｂｕｒｙ、Ｗｉｌｔｓｈｉｒｅ、英国に仮受託番号８９０３０１６として現時点で寄託されている特定の細胞株により作製されている。
【０１０１】
[00108]ＭＡＣ１６腫瘍は、中程度に高分化の腺癌であり、マウスにおいて何年にもわたり連続継代されてきたものである。この腫瘍は、特に、少ない腫瘍量で（１％体重未満）、食物又は水のいずれの摂取も減らさずに相当な体重減少を生じることがよく見られた限りでは、ヒト患者において悪液質を引き起こす腫瘍についてのより満足な実験モデルとなりそうなことが見出されている。
【０１０２】
[00109]医薬組成物
本明細書中に記載の本発明の化合物又は薬剤は、例えば、ｅＩＦ２α又はＰＫＲリン酸化の阻害により、ｅＩＦ２α若しくはＰＫＲリン酸化に影響するか、又はｅＩＦ２α若しくはＰＫＲリン酸化に影響する化合物又は薬剤を増強する化合物又は薬剤である。本発明の化合物又は薬剤は、投与に適した医薬組成物中に組み込むことができる。
【０１０３】
[00110]少なくとも１つのＰＫＲ−Ｉ阻害物質、少なくとも１つのＰＫＲ−Ｉリン酸化阻害物質及び／又はＰＫＲ−Ｉ増強物質を包含する本発明の化合物は、経腸的又は非経口的に投与してもよい。非経口投与は、皮下投与、静脈内投与、筋肉内投与及び局所投与から成る群から選択してもよい。経腸投与は、錠剤、液体、ゲル、サシェ、粉末、ドロップ、フィルム、ガム及びカプセルの形態で行ってもよい。加えて、経腸投与法の経路は、鼻腔内、内部、経鼻胃、経口胃、胃ポート、空腸ポート及び回腸ポートから成る群から選択してもよい。
[00111]本発明の化合物は、前述の化合物（複数可）及び薬学上許容される担体を典型的に含んでもよい。本明細書中で使用する場合、用語「薬学上許容される担体」は、ありとあらゆる溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤など、医薬の投与に適合するものを包含することを意図したものである。薬学的活性のある物質用にそのような媒体及び薬剤を使用することは、当技術分野では周知である。従来の任意の媒体又は薬剤が活性剤に適合しない場合を除き、組成物中でのその使用を企図する。本発明の組成物中に栄養補給剤を組み込むこともできる。
【０１０４】
[00112]本発明の医薬組成物は、意図された投与経路に適合するように製剤される。例えば、非経口、皮内又は皮下の施用に使用される溶液又は懸濁液としては、以下の成分を挙げることができる：注射用水、生理食塩溶液、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール又は他の合成溶媒などの滅菌済み希釈剤；ベンジルアルコール又はメチルパラベンなどの抗菌剤；アスコルビン酸又は亜硫酸水素ナトリウムなどの抗酸化薬；エチレンジアミン四酢酸などのキレート化剤；酢酸塩、クエン酸塩又はリン酸塩などの緩衝液、及び塩化ナトリウム又はデキストロースなど張性調節用の薬剤。ｐＨは、塩酸又は水酸化ナトリウムなどの酸又は塩基で調節できる。非経口調製物は、ガラス製又はプラスチック製のアンプル、使い捨ての注射器又は複数用量バイアル中に封入できる。
【０１０５】
[00113]注射剤の用途に適した医薬組成物としては、滅菌済みの水溶液（水溶性の場合）又は分散系、及び滅菌済みの注射溶液又は分散系を即席で調製するための滅菌済み粉末が挙げられる。静脈内投与の場合、適当な担体としては、生理食塩水、静菌水、クレモホル（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ）ＥＬ（商標）（ＢＡＳＦ、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ、Ｎ．Ｊ．）又はリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。全ての場合において、組成物は滅菌済みでなくてはならず、容易な注射可能性が存在する程度まで流動性のあるものであるべきである。組成物は、製造条件及び保管条件下で安定でなくてはならず、細菌及び真菌などの微生物が混入しようとする動きに対して保護されなくてはならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール及び液体ポリエテイレン（ｐｏｌｙｅｔｈｅｙｌｅｎｅ）グリコールなど）を含有する溶媒又は分散媒、並びにその適当な混合物であってもよい。妥当な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用、分散系の場合における必要な粒子サイズの維持及び界面活性剤の使用により維持できる。微生物の作用の防止は、多様な抗菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどにより達成できる。多くの場合、組成物中に、等張剤、例えば、糖、マニトール（ｍａｎｉｔｏｌ）、ソルビトールなどのポリアルコール、塩化ナトリウムが含まれることが好ましいと考えられる。注射用組成物の持続的吸収は、吸収を遅らせる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンを組成物中に含ませることにより実現できる。
【０１０６】
[00114]滅菌済みの注射用溶液は、適切な溶媒中に、必要に応じ、上に列挙した１つの成分又は複数成分の組合せと共に、必要な量で活性剤を組み込み、次いで濾過滅菌を行うことにより調製できる。一般に、分散系は、基礎分散媒と、上に列挙したもののうち必要な他の成分とを含有する滅菌済みのビヒクル中に活性剤を組み込むことにより調製する。滅菌済みの注射用溶液を調製するための滅菌済み粉末の場合、好ましい調製方法は真空乾燥及び凍結乾燥であり、こうした方法を用いると、先に滅菌濾過しておいた溶液から、活性成分に所望の任意の追加成分が加わった粉末が得られる。
【０１０７】
[00115]経口組成物は、一般に、不活性な希釈剤又は食用担体を含んでいる。こうした組成物は、ゼラチンカプセル内に封入するか、又は圧縮して錠剤にすることができる。経口での治療的投与の目的のために、活性剤は、賦形剤と共に組み込み、錠剤、トローチ又はカプセルの形態で使用することができる。経口組成物は、洗口液として使用するために液体担体を用いて調製することもでき、こうした洗口液では、液体担体中の薬剤を経口施用し激しく動かしてから吐き出し又は飲み込む。薬学的に適合する結合剤及び／又は補助物質を組成物の一部として含ませることができる。錠剤、丸剤、カプセル、トローチなどは、以下の原料又は同様の性質の薬剤のいずれかを含有できる：微結晶性セルロース、トラガカントゴム又はゼラチンなどの結合剤；デンプン又は乳糖などの賦形剤、アルギン酸、プリモゲル（Ｐｒｉｍｏｇｅｌ）又はトウモロコシデンプンなどの崩壊剤；ステアリン酸マグネシウム又はステローツ（Ｓｔｅｒｏｔｅｓ）などの滑沢剤；コロイド状二酸化ケイ素などの流動促進剤；ショ糖又はサッカリンなどの甘味剤；又はペパーミント、サリチル酸メチル若しくはオレンジ香味料などの香味剤。
【０１０８】
[00116]一実施形態では、本発明の化合物は、制御放出製剤（インプラント及びマイクロカプセル化した送達系を含む）など、体からの急速な排出に対し薬剤を保護することになる担体を用いて調製する。酢酸エチレンビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル及びポリ乳酸など、生分解性の生体適合性ポリマーを使用できる。そのような製剤の調製方法は、当業者には自明であろう。材料は、Ａｌｚａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ及びＮｏｖａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．から商業的に入手することもできる。リポソーム懸濁液（ウイルス抗原に対するモノクローナル抗体を有する、感染細胞を標的としたリポソームを含んでいる）を薬学上許容される担体として使用することもできる。こうした製剤は、当業者に公知の方法、例えば、米国特許第４，５２２，８１１号明細書に記載のような方法により調製してもよく、同文献は参照によりその全体が本明細書中に組み込まれる。
【０１０９】
[00117]栄養組成物
化学療法及び放射線療法は、癌細胞を破壊するうえで有効なだけでなく、こうした細胞の成熟前の死亡を引き起こすことから非癌細胞にとっても有害である。加えて、本発明の化合物は、ＰＫＲのリン酸化を阻害することにより腫瘍細胞の成長を阻害できるだけでなく、癌患者において化学療法剤の有効性を高めることもできる。これまでに論じたように、本発明の化合物は、少なくとも１つのＰＫＲＩを、単独又は少なくとも１つの増強物質との組合せのいずれかで含んでいる。医薬目的で製剤される以外に、こうした化合物は、これまでに論じたように、所望の目的を達成するために栄養製品として製剤できる。
【０１１０】
[00118]本発明による栄養組成物は、食餌の手段、例えば、栄養補助食品の形態、又は栄養製剤、例えば、医療用の食品又は飲料製品の形態、例えば、完全食の形態、食品添加物又は溶解用粉末として食事の一部の形態をとっていてもよい。粉末は、液体、例えば、水又は乳若しくはフルーツジュースなど他の液体と組み合わせてもよい。
【０１１１】
[00119]場合により、栄養製剤は、本発明の化合物を含んでいるだけでなく、栄養的に完全であってもよく、すなわち、１日に必要な量のビタミン、ミネラル、炭水化物、脂肪及び／又は脂肪酸、タンパク質などを本質的に全て供給する単一の栄養源として使用できるように、ミネラル、ビタミン、微量元素及び脂肪及び／又は脂肪酸源を含んでいてもよい。
【０１１２】
[00120]したがって、本発明の栄養組成物は、例えば、経口又は経管栄養補給に適した栄養的にバランスのとれた完全食の形態で、例えば、経鼻胃、経鼻十二指腸、食道瘻造設術、胃瘻造設術又は空腸瘻造設術による管、又は末梢若しくは全身用の非経口栄養を用いて供給してもよい。好ましくは、本発明の組成物は、経口投与用である。
【０１１３】
[00121]本発明の栄養組成物は、筋タンパク質合成の促進、又は悪液質（例えば癌性悪液質）など腫瘍により引き起こされる体重減少の制御に有用と考えられる。この組成物は、化学療法剤を使用する自己免疫疾患又は他の障害に罹患している患者のための栄養補助食品としても有用と考えられる。
【０１１４】
[00122]本発明の一特徴では、栄養組成物は以下をさらに含んでいてもよいが、これらに限定されない：生物活性タンパク質、分枝鎖アミノ酸、必須アミノ酸、アミノ酸又はアミノ酸類似体、ヌクレオチド又はＲＮＡ、ビタミン、グルタミン、シアル酸オリゴ糖、Ｌ−テアニン、プレバイオティック、プロバイオティック又はシンバイオティック、必須脂肪酸、ＰＵＦＡ及び／又はＭＵＦＡ、食用油及び抗酸化物質。
【０１１５】
[00123]食用油は、本発明の栄養組成物の調製において使用してもよい。食用油としては、キャノーラ油、中鎖トリグリセリド油（ＭＣＴ）、魚油、大豆油、大豆レシチン油、トウモロコシ油、ベニバナ油、ヒマワリ油、高オレイン酸ヒマワリ油、高オレイン酸ベニバナ油、オリーブ油、ルリヂサ油、クロスグリ油、月見草油及び亜麻仁油が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１６】
[00124]本発明の栄養組成物は、例えば、寒天、アルギン酸塩、カルビン、ペクチン及びその誘導体（例えば、果物及び野菜に由来するペクチン、並びにより好ましくは柑橘類の果物及びリンゴに由来するペクチン）、β−グルカン（オーツ麦のβ−グルカンなど）、カラギーナン（例えば、κ、λ及びιカラギーナン）、フルセララン、イヌリン、アラビノガラクタン、セルロース及びその誘導体、スクレログルカン、オオバコ（オオバコの種子殻など）、粘液及びゴムといった可溶性繊維をさらに含んでいてもよい。本発明によれば、ゴム及び粘液は、好ましくは植物の浸出物である。とりわけ、用語「ゴム」は、本明細書中で使用する場合、普通に入手できる植物性のゴム、より詳細には、コンニャクゴム、キサンタンゴム、グアーゴム（グアランゴム）、イナゴマメゴム、タラマメゴム、トラガカントゴム、アラビアゴム、カラヤゴム、ガッティゴム、ジェランゴム及び他の関連するステルクリアゴム、アルファルファ、クローバー、コロハ、タマリンドの細粉を指す。天然及び改変された（例えば加水分解された）可溶性繊維を、本発明により使用してもよい。本発明によれば、好ましくはグアーゴム（例えば加水分解グアーゴム）を使用してもよい。
【０１１７】
[00125]これまでに述べた任意選択的な栄養分の毎日の投与量は、個体の体重、性別、年齢及び／又は病態により変化させてもよい。
【０１１８】
[00126]本発明の栄養組成物は、１つ又は複数の脂肪酸（例えば多価不飽和脂肪酸）、プレバイオティック又はプロバイオティック、又はプレバイオティックとプロバイオティックとの組合せ（シンバイオティック）及び生物活性のある化合物又は抽出物を含んでいてもよい。
【０１１９】
[00127]この栄養組成物は、ビタミン及びミネラルについては、１日用量当たり、米国ＲＤＡの少なくとも１００％（例えば１００％）の、例えば、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、リン、ビタミンＤ、ビタミンＫを供給してもよい。この組成物は、抗酸化物質を含有してもよく、こうした物質としてはグルタミン、システイン、ビタミンＡ、Ｃ、Ｅ及びセレンが挙げられるが、これらに限定されない。この組成物は、とりわけ、大量のビタミンＥを含有してもよく、ビタミンＥは、筋タンパク質合成の促進又は悪液質（例えば癌性悪液質）など腫瘍により引き起こされる体重減少の制御のために、組成物中で有用である。
【０１２０】
[00128]本発明による栄養組成物は、医療用の食品又は飲料製品として（例えば経口栄養の形態で）、例えば健康飲料として、そのまま飲める飲料として、場合により清涼飲料（ジュース、ミルクセーキ、ヨーグルト飲料、スムージー又は大豆ベース飲料など）として、バーに入った形で、又は焼いた製品、シリアルバー、乳製品のバー、スナックフード、スープ、朝食用シリアル、ミューズリー、キャンディー、タブ、クッキー、ビスケット、クラッカー（煎餅など）及び乳製品など任意の種類の食品中に分散した形で提供されてもよい。
【０１２１】
[00129]好ましくは、本発明の組成物は、栄養製剤として、例えば、食事の一部として、例えば健康飲料の形態で、例えば即時使用可能な飲料として、投与してもよい。
【０１２２】
[00130]経口用の固形剤形は、それ自体が公知の様式で、例えば、従来の混合、造粒、糖衣加工、溶解又は凍結乾燥のプロセスを用いて調製する。
【０１２３】
[00131]本明細書中で言及又は引用した論文、特許及び特許出願及び他の全ての文書並びに電子的に入手可能な情報の内容は、それぞれ個々の刊行物が参照により組み組まれるものと具体的且つ個別に指示がある場合と同程度に、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。出願人は、そのような任意の論文、特許、特許出願又は他の文書からのありとあらゆる資料及び情報を本明細書中に物理的に組み込む権利を留保する。
【０１２４】
[00132]本明細書中に例証的に記載された本発明は、本明細書中で具体的に開示されない、１つ又は複数の要素、１つ又は複数の制限が一切なくても適切に実行される場合がある。したがって、例えば、用語「含む」、「包含する」、「含有する」などは、拡張的に、制限を加えずに読まれるべきである。加えて、本明細書中で用いる用語及び表現は、制限ではなく説明の用語として用いてあり、そのような用語及び表現の使用においては、示し説明した特徴又はその部分に相当するもの一切を除外する意図はなく、特許請求した本発明の範囲内で多様な改変形が可能であることは認識される。したがって、本発明は好ましい実施形態及び任意選択的な特徴により具体的に開示してはあるものの、本明細書中に開示された当該箇所中に包含される本発明の改変及び変形が当業者により用いられることがあり、そのような改変形及び変形は本発明の範囲内にあると見なされることは理解されるべきである。
【０１２５】
[00133]本発明は、本明細書中で広く包括的に説明してある。包括的な開示内に属する、より狭い種、及び類の下位に当たる分類のそれぞれも、本発明の一部を形成する。本明細書は、類から任意の対象を除外する条件又は消極的限定を有する本発明の包括的な説明を包含し、除かれる構成要素が本明細書中で具体的に列挙されているか否かを問わない。
【０１２６】
[00134]加えて、本発明の特徴又は態様がマーカッシュ群について説明されている箇所では、本発明がそれによりマーカッシュ群の任意の個々の構成要素又は構成要素の下位群についても説明していることが当業者には認識されるであろう。
【実施例】
【０１２７】
[00135]以下の実施例中で、本開示をさらに明確にする。この実施例は、好ましい実施形態を示してはいるものの、例証目的のみで記載するものであることは理解されるべきである。前述の論考及びこの実施例から、当業者は本開示の好ましい特徴を確認でき、本開示の精神及び範囲から逸脱することなく、多様な変更及び改変を行って、同開示を多様な用途及び条件に適合させることができる。
【０１２８】
[00136]材料：
ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）及びＲＰＭＩ１６４０組織培養培地をＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｐａｉｓｌｅｙ、スコットランド）から購入した。Ｌ−［２，６−３Ｈ］フェニルアラニン（比活性度２．００ＴＢｑｍｍｏｌ−１）、ハイボンド（Ｈｙｂｏｎｄ）Ａニトロセルロース膜及び増強化学発光（ＥＣＬ）発生キットは、Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｂｕｃｋｓ、ＵＫ）製であった。リン酸化ＰＫＲ及び全ＰＫＲに対するウサギモノクローナル抗体は、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ（Ｈｅｒｔｓ、ＵＫ）から購入した。リン酸ｅＩＦ２αに対するウサギポリクローナル抗血清は、Ａｂｃａｍ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＵＫ）製、全ｅＩＦ２αに対するウサギポリクローナル抗血清はＳａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＣＡ）製であった。ペルオキシダーゼ結合ヤギ抗ウサギ抗体は、Ｄａｋｏ Ｌｔｄ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＵＫ）から購入した。ＰＫＲ阻害物質及びホスホセーフ（ＰｈｏｓｐｈｏＳａｆｅ）（商標）抽出試薬はＭｅｒｃｋ Ｅｕｒｏｌａｂ Ｌｔｄ（Ｌｅｉｃｓ、ＵＫ）製であった。ＥＭＳＡ（電気泳動移動度シフトアッセイ）のゲルシフトアッセイキットは、Ｐａｎｏｍｉｃｓ（ＣＡ、ＵＳＡ）製であった。ゲムシタビン（ゲムザール（Ｇｅｍｚａｒ）（登録商標））は、Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ ａｎｄ Ｃｏ（Ｂａｓｉｎｇｓｔｏｋｅ、ＵＫ）からの寄贈品であった。５−フルロウラシル（Ｆｌｕｒｏｕｒａｃｉｌ）は、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｄｇｅ（Ｄｏｒｓｅｔ、ＵＫ）から購入した。
【０１２９】
[00137]腫瘍の維持
ＭＡＣ１６は、Ｃｏｗｅｎら（Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．、６４、６７５〜６８１、１９８０）により最初に記載されたものであり、確立されたシリーズ（ＭＡＣ）の、化学的に誘導された移植可能な大腸腺癌を保有する純粋なＮＭＲＩマウス系である。ＭＡＣ１６腫瘍は、中程度に高分化の腺癌であり、マウスにおいて何年にもわたり連続継代されてきたものである。ＭＡＣ１６は、特に、少ない腫瘍量（１％体重未満）で、食物又は水のいずれの摂取も減らさずに相当な体重減少を生じさせることがよく見られた限りでは、ヒト患者において悪液質を引き起こす腫瘍についてのより満足な実験モデルとなる（Ｂｉｂｂｙ，Ｍ．Ｃ．ら、Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．、７８、５３９〜５４６、１９８７）。
【０１３０】
[00138]ＭＡＣ１６腫瘍及びＭＡＣ１３腫瘍は、１０％ＦＣＳを含有するＲＰＭＩ１６４０培地中で、空気中５％ＣＯ２の雰囲気下で３７℃にてｉｎ ｖｉｔｒｏ増殖させた。細胞成長アッセイ用に、１ウェル当たり０．５×１０５細胞（ＭＡＣ１３）又は１ウェル当たり１×１０５細胞（ＭＡＣ１６）のいずれかで２４ウェルのマルチウェルの皿の中に細胞を播種し、薬物の添加に先立ち２４時間蓄積させた。細胞数を３日後に定量したところ、細胞は指数関数的に成長していた。
【０１３１】
[00139]ＭＡＣ１６腫瘍及びＭＡＣ１３腫瘍は両方とも、Ｂｉｂｂｙら、Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．、７８（３）、５３９〜５４６、１９８７に記載の要領で、断片を側腹部中に皮下移植（皮下注射）することによりＮＭＲＩマウスにおいてｉｎ ｖｉｖｏ継代させた。悪液質を維持するため、体重減少が確認されたドナー動物から継代用のＭＡＣ１６腫瘍を選別し、平均体重減少が５％の時点で処置を開始した。動物を無作為に６匹の群とし、溶媒（ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）：ＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）が１：２０）又は１ｍｇ／ｋｇ及び５ｍｇ／ｋｇのＰＫＲ阻害物質を皮下注射により毎日投与した。体重減少が２０％に達した時点で、子宮頸部の除去により動物を屠殺した。全ての動物実験は英国内務省に認可された厳密なプロトコールに従っており、従った倫理的ガイドラインは、ＵＫＣＣＲガイドライン（Ｗｏｒｋｍａｎ，Ｐ．ら、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、７７、１〜１０、１９９８）に要求される基準を満たす。
【０１３２】
[00140]タンパク質合成の測定
Ｅｌｅｙ，Ｈ．Ｌ．及びＴｉｓｄａｌｅ，Ｍ．Ｊ．、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２８２（１０）、７０８７〜７０９７、２００７に記載の要領で、Ｌ−［２，６−３Ｈ］フェニルアラニンをタンパク質中に組み込むことにより、ＭＡＣ１６細胞及びＭＡＣ１３細胞におけるタンパク質合成を４時間の期間にわたり定量した。組織培養培地の除去により反応を終わらせ、氷冷の滅菌済みＰＢＳで３回洗浄した。ＰＢＳを除去し、氷冷の０．２Ｍ過塩素酸を加え、次いで４℃で２０分間インキュベーションした。過塩素酸の除去に次いで、０．３Ｍ ＮａＯＨを加えてから、次いで４℃で３０分間インキュベーションした。３７℃で２０分間のさらなるインキュベーションにより反応を進行させてから、０．２Ｍ過塩素酸を加えた。この混合物をさらに２０分間氷上に放置した。４℃で５分間の７００ｇでの遠心分離に次いで、タンパク質を含有するペレットを０．３Ｍ ＮａＯＨ中で溶解させ、放射能を定量した。標準的な比色定量タンパク質アッセイ（Ｓｉｇｍａ）を用いて、タンパク質含有量を分析した。
【０１３３】
[00141]ウェスタンブロット分析
腫瘍の試料（およそ１０ｍｇ）は、ホスホセーフ（商標）抽出試薬５００μｌ中でホモジナイズし、４℃で１５分間、１５，０００ｇで遠心分離した。細胞質タンパク質の一部（１０μｇ）を１０％ドデシル硫酸ナトリウム／ポリアクリルアミドゲル（ＳＤＳ／ＰＡＧＥはｅＩＦ２αの場合６％）上で分離させた。分離したタンパク質を、０．４５μｍのニトロセルロース膜上に転写した後、ｐＨ７．５、４℃のトリス緩衝生理食塩水中の５％マーヴェル（Ｍａｒｖｅｌ）で一晩ブロッキングした。次に、一次抗体の添加に先立ち、０．５％ツィーン（Ｔｗｅｅｎ）緩衝生理食塩水又はＴＢＳツィーン中で膜を１５分間洗浄した。希釈率１：１０００で一次抗体を使用したが、リン酸ｅＩＦ２αは例外で、１：５００で使用した。緩衝液を５分毎に交換しながら、一次抗体を１５分間、０．１％ＴＢＳツィーンを用いて膜から洗い落とした。希釈率１：１０００で二次抗体を使用し、４５分後に洗い落とした。現像はＥＣＬにより行い、３〜６分間フィルムを現像した。濃度計によりブロットを走査して、差を定量化した。
【０１３４】
[00142]電気泳動移動度シフトアッセイ（ＥＭＳＡ）
ＤＮＡ結合タンパク質を低張溶解により腫瘍試料から単離し、次いで、Ａｎｄｒｅｗｓ及びＦａｌｌｅｒの方法により核の高塩抽出を行った（Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．、１９（９）、２４９９、１９９１）。Ｐａｎｏｍｉｃｓ ＥＭＳＡ「ゲルシフト」キットを使用し、製造者による取扱い説明に従ってＥＭＳＡを実施した。
【０１３５】
[00143]統計分析
少なくとも３回の反復実験について、平均値±ＳＥＭで結果を表す。一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）により群間の平均値の差を定量し、次いで、Ｔｕｋｅｙ−Ｋｒａｍｅｒ多重比較検定を行った。０．０５未満のＰ値を有意と見なした。
【０１３６】
[00144]結果
癌患者においては、体重減少は、生存時間短期化の独立した予測因子であるだけでなく、治療への応答も低下させ、同時に、治療に由来する毒性があることを予測させるものでもある（Ｒｏｓｓ，Ｐ．Ｊ．ら、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、９０（１０）、１９０５〜１９１１、２００４）。体重減少は、サイトカイン、並びにタンパク質分解誘導因子（ＰＩＦ）及び脂質動員因子（ＬＭＦ）などの腫瘍因子により誘導される骨格筋及び脂肪組織の進行性萎縮によるものである（Ｔｉｓｄａｌｅ，Ｍ．Ｊ．、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｌｉｎ．Ｎｕｔｒ．Ｍｅｔａｂ．Ｃａｒｅ、５（４）、４０１〜４０５、２００２）。そのような因子は、宿主の組織中だけでなく、原発腫瘍及び転移において代謝に影響することがある。したがって、ＬＭＦは、腫瘍中の、フリーラジカルの解毒に関与していると考えられる脱共役タンパク質（ＵＣＰ）２の発現を誘導し、このタンパク質が、フリーラジカルによる損傷を生じさせる細胞傷害薬から腫瘍細胞を保護する（Ｓａｎｄｅｒｓ，Ｐ．Ｍ．及びＴｉｓｄａｌｅ，Ｍ．Ｊ．、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、９０（６）、１２７４〜１２７８、２００４）。乳癌細胞中のＰＩＦコアペプチドであるデルミシジン（ｄｅｒｍｉｃｉｄｉｎ）の発現は、細胞の成長及び生存を促進し、血清依存性を低下させる（Ｐｏｒｔｅｒ，Ｄ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１００、１０９３１〜１０９３６、２００３）。ＰＩＦは、自己リン酸化による二本鎖ＲＮＡ依存性タンパク質キナーゼＰＫＲの活性化が関与する機序により、転写因子である核因子−κＢ（ＮＦ−κＢ）の活性化を通じて筋萎縮を促進することが示されている（Ｅｌｅｙ及びＴｉｓｄａｌｅ、２００７）。悪液質誘導性のＭＡＣ１６腫瘍を保有するマウスにおいて低分子量のＰＫＲ阻害物質を使用する最近の研究（Ｅｌｅｙら、２００７）により、ＰＫＲ阻害物質は筋萎縮を軽減するだけでなく、腫瘍成長も阻害することが示された。これは驚くべきことであったが、その理由は、悪液質を誘導するヒト腫瘍と同様、ＭＡＣ１６腫瘍は高度に化学療法抵抗性だからである（Ｄｏｕｂｌｅ，Ｊ．Ａ．及びＢｉｂｂｙ，Ｍ．Ｃ．、Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．、８１（１３）、９８８〜９９４、１９８９）。これは、ＰＫＲを阻害すると腫瘍成長阻害が誘導され、この効果の機序に迫る研究により、化学療法抵抗性の腫瘍の治療につながる深い理解が得られる可能性があることを示す最初の報告である。
【０１３７】
[00145]ＰＫＲと腫瘍成長との間を結び付ける１つの可能性には、ＮＦ−κＢの活性化が含まれる。ＮＦ−κＢの活性化は、腫瘍細胞の生存及び増殖、並びに浸潤及び血管新生、腫瘍転移にとっての決定的に重要な事象と結び付いていた（Ｋａｒｉｎ，Ｍ．、Ｎａｔｕｒｅ、４４１（７０９２）、４３１〜４３６、２００６）。ＮＦ−κＢは、直腸結腸の上皮性悪性腫瘍（Ｋｏｊｉｍａ，Ｍ．ら、Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、２４（２Ｂ）、６７５〜６８１、２００４）、膵臓腺癌（Ｗａｎｇ，Ｗ．ら、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、５、１１９〜１２７、１９９９）及び肝細胞癌（Ｔａｉ，Ｄ．Ｉ．ら、Ｃａｎｃｅｒ、８９、２２７４〜２２８１、２０００）などいくつかの腫瘍型において構成的に活性化されることが報告されている。ＮＦ−κＢの構成的活性化の原因となる因子としては、腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）、インターロイキン−１（ＩＬ−１）、ｐＨ及び低酸素症が挙げられる（Ｂａｌｄｗｉｎ，Ａ．Ｓ．、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．、１０７（３）、２４１〜２４３、２００１）。悪液質誘導性の腫瘍によるＰＩＦの産生は、悪液質の動物の骨格筋中で起きることから、ＮＦ−κＢの構成的な活性化にもつながりかねない可能性がある（Ｗｙｋｅ，Ｓ．Ｍ．ら、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、９１（９）、１７４２〜１７５０、２００４）。レスベラトロールにより骨格筋中でのＮＦ−κＢ活性化を阻害すると、ＭＡＣ１６腫瘍保有マウスにおける腫瘍成長も阻害されたが、この機序については調査されなかった。ＮＦ−κＢは、カスパーゼ活性の制御を通じて、アポトーシスを抑制する遺伝子の転写を活性化できる（Ｋａｒｉｎ，Ｍ．ら、Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、３（３）、２２１〜２２７、２００２）。ＮＦ−κＢによりアポトーシスを阻害すると、化学療法及び放射線照射に対し腫瘍が抵抗性になる（Ｂｈａｒｔｉ，Ａ．Ｃ．及びＡｇｇａｒｗａｌ，Ｂ．Ｂ．、Ａｎｎ．ＮＹ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、９７３、３９２〜３９５、２００２）ので、悪液質を生じさせる腫瘍が療法に対してなぜそれほど抵抗性であるかを説明できるであろう。
【０１３８】
[00146]この試験は、ＭＡＣ１６腫瘍の成長に対するＰＫＲ阻害物質の有効性を、ＭＡＣ１６腫瘍と組織学的に類似しているが悪液質を誘導しないＭＡＣ１３腫瘍に対する有効性と比較し（Ｂｅｃｋ，Ｓ．Ａ．及びＴｉｓｄａｌｅ，Ｍ．Ｊ．、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、４７、５９１９〜５９２３、１９８７）、腫瘍成長阻害の機序を調査するものである。
【０１３９】
[00147]以前の研究（Ｅｌｅｙ，Ｈ．Ｌ．及びＴｉｓｄａｌｅ，Ｍ．Ｊ．、Ｊ．Ｂｉｏｌ．、２８２、７０８７〜７０９７、２００７）では、マウスにおける悪液質誘導性のＭＡＣ１６腫瘍の成長を低減させるための低分子量のＰＫＲ阻害物質（８−［１−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）メト−（Ｚ）−イリデン］−６，８−ジヒドロチアゾール［５，４−ｅ］インドール−７−オン）を示した。図２に示す結果は、この阻害物質はｉｎ ｖｉｔｒｏでのＭＡＣ１６腫瘍の成長も阻害し２００ｎＭで最大効果が得られたが、ＭＡＣ１３腫瘍の成長に対しては最大１０００ｎＭの濃度であっても効果がなかったことを示すものである。両方の腫瘍は、１，２−ジメチルヒドラジンの長期投与により誘導されたマウスの大腸の腺癌である（Ｃｏｗｅｎ，Ｄ．Ｍ．ら、Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．、６４（３）、６７５〜６８１、１９８０）が、ＭＡＣ１６は悪液質を誘導する（Ｂｉｂｂｙ，Ｍ．Ｃ．ら、Ｊ Ｎａｔｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．、７８（３）、５３９〜５４６、１９８７）一方、ＭＡＣ１３は誘導しない。図２の結果は、ＭＡＣ１６腫瘍ではリン酸化ＰＫＲ（図３Ａ）及びリン酸ｅＩＦ２α（図３Ｂ）は両方とも高レベルで発現するが、ＭＡＣ１３腫瘍では発現しないことを示すものである。しかし、ＰＫＲ及びｅＩＦ２αの両方の総量値は２つの腫瘍型において同様であった。ＰＫＲ阻害物質を用いてＭＡＣ１６腫瘍保有マウスを処置すると、ＰＫＲ（図４Ａ）及びｅＩＦ２α（図４Ｂ）の両方のリン酸化の増加が完全に低減する結果となったが、ＰＫＲ及びｅＩＦ２αの総量値には影響がなかった。ＰＫＲ阻害物質でＭＡＣ１６細胞を処置すると、２００ｎＭの濃度で細胞成長が最大に阻害され、濃度が高くなるほど阻害の有効性は低下した（図２）。この効果がＰＫＲの自己リン酸化の阻害と相関するかどうかを見るために、阻害物質がリン酸化ＰＫＲ及び全ＰＫＲに及ぼす効果を、ＭＡＣ１６細胞及びＭＡＣ１３細胞の両方において定量した（図５）。マウスにおける固形腫瘍と同様、ＭＡＣ１６細胞は高レベルのリン酸化ＰＫＲを示したが、ＭＡＣ１３は非常に低レベルを示した。ＰＫＲ阻害物質は、ＭＡＣ１６細胞中のＰＫＲの自己リン酸化を阻害し２００〜３００ｎＭの間で最大効果が得られたが、それより高い濃度では有効性は低下した（図５Ａ）。ＭＡＣ１３細胞におけるＰＫＲの低レベルの自己リン酸化に対してはＰＫＲ阻害物質の効果はなかった（図５Ｂ）。いずれの細胞株においても、細胞における全ＰＫＲに対して阻害物質の効果はなかった。ＰＫＲ活性化は骨格筋における２０Ｓプロテアソームの発現を誘導することが示されていることから（Ｅｌｅｙ，Ｈ．Ｌ．及びＴｉｓｄａｌｅ，Ｍ．Ｊ．、Ｊ．Ｂｉｏｌ．、２８２、７０８７〜７０９７、２００７）、阻害物質の効果を定量した。ＭＡＣ１６（図５Ｃ）及びＭＡＣ１３（図５Ｄ）の細胞は両方とも２０Ｓプロテアソームを発現したが、発現は、ＭＡＣ１３細胞におけるよりもＭＡＣ１６細胞において高かった。さらに、ＰＫＲ阻害物質は、ＭＡＣ１６細胞における２０Ｓプロテアソームの発現を低減させた（図５Ｃ）が、ＭＡＣ１３細胞においては低減させなかった（図５Ｄ）。そのうえ、異なる濃度のＰＫＲ阻害物質では、２０Ｓプロテアソームの発現（図５Ｃ）とＰＫＲの発現（図５Ａ）との間に線形相関（相関係数０．９５７）があり（図５Ｅ）、このことから、ＭＡＣ１６細胞においては、２０Ｓプロテアソームの発現はＰＫＲの発現によっても制御される可能性が示唆される。
【０１４０】
[00148]ＭＡＣ１６腫瘍におけるタンパク質合成は、ＭＡＣ１３腫瘍と比較すると有意に抑制された（図６）が、恐らくそれは、ｅＩＦ２αのリン酸化の増加によるものである。このことから、ＰＫＲのリン酸化はＭＡＣ１６腫瘍の生存にとって重要である可能性が示唆される。ＰＫＲの機能の１つは、ＮＦ−κＢの活性化の能力を有することである（Ｚａｍａｎｉａｎ−Ｄａｒｙｏｕｓｈ，Ｍ．ら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．、２０、１２７８〜１２９０、２０００）。図７Ａ中のデータは、ＭＡＣ１６腫瘍においてＮＦ−κＢは高レベルに構成的に活性化されるがＭＡＣ１３腫瘍においては活性化されないことを示す。ＭＡＣ１６腫瘍保有マウスをＰＫＲ阻害物質で処置すると腫瘍におけるＮＦ−κＢの構成的な活性化が低減するが、このことから、ＮＦ−κＢの構成的な活性化はＰＫＲの活性化から生じたことが示唆される。
【０１４１】
[00149]ＮＦ−κＢの活性化は、ゲムシタビンに対する膵臓癌の化学療法抵抗性（Ａｒｌｔ，Ａ．ら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、２２（２１）、３２４３〜３２５１、２００３）、及び５−フルロウラシル（５−ＦＵ）に対する胃癌の化学療法抵抗性（Ｕｅｔｓｕｋａ，Ｈ．ら、Ｅｘｐ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ．、２８９（１）、２７〜３５、２００３）において重要な役割を果たすことが示されている。ＰＫＲ阻害物質によるＮＦ−κＢの下方制御がゲムシタビン及び５ＦＵに対するＭＡＣ１６細胞の感受性を増加させるか否かを確認するために、単独、又はＰＫＲ阻害物質（１００ｎＭ又は２００ｎＭで）との組合せで薬剤が細胞成長に及ぼす効果を定量した（図８）。５ＦＵ単独では、１〜１０μＭの間の濃度でＭＡＣ１６細胞の成長が有意に阻害され、この効果は、両方の濃度のＰＫＲ阻害物質により有意に増強された。同様に、ゲムシタビンに誘導されるＭＡＣ１６細胞成長阻害も、両方の濃度のＰＫＲ阻害物質により増強された。この結果から、ＰＫＲ阻害物質は細胞傷害剤に対するヒト腫瘍の化学感作において有用となる可能性が示唆される。
【０１４２】
[00150]考察
初期の研究により、ＰＫＲは腫瘍抑制因子として作用することが示唆されたが、その理由は、触媒的に不活性な突然変異型のＰＫＲを３Ｔ３細胞に形質移入すると、細胞の形質転換がもたらされた（Ｋｏｒｏｍｉｌａｓ，Ａ．Ｅ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２５７、１６８５〜１６８９、１９９２）が、Ｍ１骨髄性白血病細胞において野生型ＰＫＲの活性を上方制御した結果、形質転換された表現型の逆転又はアポトーシスが生じた（Ｒａｖｅｈ，Ｔ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７１（４１）、２５４７９〜２５４８４、１９９６）からである。しかし、最近の研究（Ｋｉｍ，Ｓ．Ｈ．ら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、１９（２７）、３０８６〜３０９４、２０００；Ｙａｎｇ，Ｙ．Ｌ．ら、ＥＭＢＯ Ｊ．、１４（２４）、６０９５〜６１０６、１９９５）は、この仮説に疑問を投げかけている。例えば、ＰＫＲが欠損している遺伝子導入マウスは正常であり、腫瘍発生率の増加を示さない（Ｙａｎｇら、１９９５）。加えて、ＰＫＲの自己リン酸化及びｅＩＦ２αのリン酸化は、胸部の上皮性悪性腫瘍細胞株に由来する溶菌液中では、形質転換されていない上皮細胞株に由来するものと比較して 〜４０倍高く（Ｋｉｍ，Ｓ．Ｈ．ら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、１９（２７）、３０８６〜３０９４、２０００）、培養物中においても、形質移入されていないメラニン形成細胞と比較してメラノーマ細胞中におけるほうが高い（Ｋｉｍ，Ｓ．Ｈ．ら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、２１（５７）、８７４１〜８７４８、２００２）。加えて、大腸の正常な粘膜から腺腫及び上皮性悪性腫瘍への形質転換は、ＰＫＲ発現の増加と同時に生じた（Ｋｉｍら、２００２）。非形質転換細胞株におけるＰＫＲ活性のほうが低いのは、一部はＰＫＲタンパク質レベルがより低いことによるものであり、一部は、細胞のＰＫＲ阻害物質として公知のＰ５８の存在によるものであった（Ｋｉｍ，Ｓ．Ｈ．ら、２０００）。
【０１４３】
[00151]本試験は、悪液質を有するマウスの腫瘍における自己リン酸化ＰＫＲの発現が上方制御されていることを示すものである。ＰＫＲの活性化はＮＦ−κＢの核結合の増加と関連があり、ＮＦ−κＢの核結合の増加はＰＫＲ活性化の阻害により低減した。そのような腫瘍におけるＮＦ−κＢの活性化は、悪液質が炎症促進状態であることを示す臨床データと相関すると考えられる（ＭｃＭｉｌｌａｎ，Ｄ．Ｃ．ら、Ｎｕｔｒ．Ｃａｎｃｅｒ、３１（２）、１０１〜１０５、１９９８）。マウスの腫瘍対（ＭＡＣ１６／ＭＡＣ１３）においては、低分子量のＰＫＲ阻害物質で処置すると、ＭＡＣ１６の増殖速度が阻害され、これにより、ＰＫＲリン酸化が上方制御されることが示されたが、ＭＡＣ１３腫瘍には効果がなく、ＭＡＣ１３はＰＫＲの活性化を示さなかった。この結果から、ＰＫＲの活性化を示す悪液質誘導性の腫瘍のほうがＰＫＲ阻害物質の抗腫瘍効果を受けやすい可能性が示唆される。驚くべき観察は、ＰＫＲ阻害物質はＰＫＲを阻害するうえでは２００ｎＭの濃度で最大に有効であり、濃度が高くなると阻害効果が低下することであった。同様のことが、ＰＩＦの存在下でのマウスの筋管において観察された（Ｅｌｅｙ及びＴｉｓｄａｌｅ、２００７）。ＰＫＲ阻害物質は、ＰＫＲにおけるＡＴＰ結合部位に向かい、同様のことは、無細胞翻訳アッセイにおいて別のＡＴＰ結合部位に向けた阻害物質２−アミノプリンを用いた場合にも観察されている（Ｊａｍｍｉら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．、３０８、５０〜５７、２００３）。この効果は、翻訳機構の他の構成要素の非特異的な阻害に起因するものであった。しかし、より高い濃度の阻害物質は、立体配座の変化を開始するＰＫＲに結合し、これにより、ＡＴＰにより誘導される場合と同じように自己リン酸化が誘導される可能性がある（Ｌｅｍａｉｒｅ，Ｐ．Ａ．ら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、３４５（１）、８１〜９０、２００５）。
【０１４４】
[00152]以前の研究（Ｚａｍａｎｉａｎ−Ｄａｒｙｏｕｓｈら、２０００）により、ＰＫＲはＮＦ−κＢを活性化できることが示されている。ＰＫＲは、物理的に、その触媒ドメインを通じて、上流のキナーゼＩＫＫと相互作用し、それによりＩκＢにおける決定的に重要なセリン残基がリン酸化される結果、セリン残基が分解されて遊離ＮＦ−κＢが放出され、次いで、遊離ＮＦ−κＢが、核中のＤＮＡ上の特異的な結合部位に移動できる。ＰＫＲによるＩＫＫの活性化は、直接的なリン酸化によってではなく、ＩＫＫβの自己リン酸化を刺激するタンパク質−タンパク質相互作用により生じるようである（Ｂｏｎｎｅｔ，Ｍ．Ｃ．ら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．、２０（１３）、４５３２〜４５４２、２０００）。しかし、αサブユニット上でのｅＩＦ２のリン酸化はＮＦ−κＢを活性化することも示されている（Ｊｉａｎｇ，Ｊ．Ｙ．ら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．、２３（１６）、５６５１〜５６６３、２００３）。これにより、ＰＫＲの阻害がＮＦ−κＢの活性化を下方制御するのに役立つ可能性があると考えられる別の機序が示唆される。ＰＫＲ阻害物質によるＮＦ−κＢの構成的な活性化の阻害は、少なくとも部分的には腫瘍成長速度の阻害に関与しているようである。ＰＫＲは、ｅＩＦ２αのリン酸化及びＮＦ−κＢの活性化を通じて多くの異なる刺激により誘導されるアポトーシスを媒介する（Ｇｉｌ，Ｊ．及びＥｓｔｅｂａｎ，Ｍ．、Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ．、５（２）、１０７〜１１４、２０００）。しかし、ＰＫＲは、やはりＮＦ−κＢが介在する、アポトーシスを遅らせる生存経路も活性化する（Ｄｏｎｚｅ，Ｏ．ら、ＥＭＢＯ Ｊ、２３、５６４〜５７１、２００４）。したがって、ＮＦ−κＢと同様、ＰＫＲは腫瘍細胞の生存又は死亡を促進すると考えられる。成長を促進することに加え、ＮＦ−κＢは、血管内皮成長因子などの血管新生促進因子の発現を増加させることにより、腫瘍の血管新生の可能性を高め（Ｘｉｏｎｇ，Ｈ．Ｑ．ら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、１０８（２）、１８１〜１８８、２００４）、ＮＦ−κＢにより制御された遺伝子産物は、癌細胞の遊走及び浸潤を促進する（Ｙｅｂｒａ，Ｍ．ら、Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｃｅｌｌ、６、８４１〜８５０、１９９５）。ＮＦ−κＢは１５０を超える標的遺伝子の制御に関与しているが、ＰＫＲ自己リン酸化の阻害によりその活性化を阻害するとマウスにおいて毒性は生じず、このことから、癌治療のための新しい治療レジメが示唆された。最近の研究（Ｋｕｎｎｕｍａｋｋａｒａ，Ａ．Ｂ．ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、６７（８）、３８５３〜６８６１、２００７）では、ＮＦ−κＢ活性化の阻害物質であるクルクミンは、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのヒト膵臓癌細胞株の成長を阻害し、ｉｎ ｖｉｖｏでのゲムシタビンの抗腫瘍活性を増強することが示されている。ＮＦ−κＢは、膵臓癌におけるゲムシタビン抵抗性を促進するうえで（Ａｒｌｔら、２００３）、並びにヒト胃癌細胞株における５−ＦＵ及びゲムシタビンに対する化学療法抵抗性において（Ｕｅｔｓｕｋａら、２００３）中心的役割を果たすことが示されている。このことから、ＰＫＲ阻害物質は、化学療法薬に対する化学療法抵抗性の腫瘍を感作するうえで有用である可能性が示唆される。本試験では、ＰＫＲ阻害物質は５−ＦＵ及びゲムシタビン両方の細胞傷害効果に対しＭＡＣ１６細胞を感作することが示されており、このことから、そのような薬剤の別の治療的役割の可能性が示唆される。
【０１４５】
[00153]一部の腫瘍の増殖速度が遅く、この場合こうした腫瘍は化学療法及び放射線照射に対し非感受性になる理由を、ＰＫＲの活性化から明らかにできる。ＮＦ−κＢの活性化に加え、ＰＫＲは、ｅＩＦ２αのリン酸化も誘導し、これにより、ｅＩＦ２．ＧＤＰをｅＩＦ２．ＧＴＰに変換するグアニンヌクレオチド交換因子ｅＩＦ２Ｂの競合的阻害により翻訳開始が阻害される（Ｒｏｗｌａｎｄｓ，Ａ．Ｇ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２６３（１２）、５５２６〜５５３３、１９８８）。しかし、ヒト乳癌細胞においては、タンパク質合成は高度のｅＩＦ２αリン酸化によっては阻害されず、その理由は恐らく、この細胞が、より高レベルのｅＩＦ２Ｂを含有しているからである（Ｋｉｍら、２０００）。
【０１４６】
[00154]本試験の結果から、ＰＫＲ阻害物質の存在下におけるＰＫＲのリン酸化レベルと２０Ｓプロテアソームのαサブユニットの発現レベルとの間の直接的な関係が示される。このことから、腫瘍成長阻害の別の機序が得られると考えられる。２つの１９Ｓ制御サブユニットと２０Ｓのαサブユニットとの組合せにより形成される２６Ｓプロテアソームは、ｐ２７及びｐ２１など細胞周期制御に関与するタンパク質を分解する（Ｂｌａｇｏｓｋｌｏｎｎｙ，Ｍ．Ｖ．ら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．、２２７（２）、５６４〜５６９、１９９６）。ジペプチドであるボロン酸類似体ＰＳ−３４１（ベルケード（Ｖｅｌｃａｄｅ））で２６Ｓプロテアソームを標的化阻害すると、ヒト膵臓癌細胞及び異種移植片において、増殖が遮断され、アポトーシスが誘導されることが示されている（Ｓｈａｈ，Ｓ．Ａ．ら、Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ．、８２（１）、１１０〜１２２、２００１）。ＰＳ−３４１は、ゲムシタビンに対しヒト膵臓癌細胞を感作させることも示されている（Ｂｏｌｄ，Ｒ．Ｊ．ら、Ｊ．Ｓｕｒｇｅ．Ｒｅｓ．、１００（１）、１１〜１７、２００１）。したがって、ＰＫＲ自己リン酸化阻害物質による腫瘍中でのプロテアソーム発現の阻害は、腫瘍成長の低減、及び標準的な化学療法剤に対する感受性の増加に関与している可能性がある。
【０１４７】
[00155]用語「約」は、本明細書中で使用する場合、数の範囲における両方の数を指すことは一般に理解されるべきである。さらに、本明細書中の全ての数的範囲には、その範囲内の全整数それぞれが含まれると理解されるべきである。
【０１４８】
[00156]本発明が、本明細書中で例証及び記載されたとおりの正確な構成に限定されるものでないことは理解されたい。したがって、本明細書中に記載の開示内容から、又はその内容から慣例的な実験法により当業者が容易に達成できる好都合な改変形は全て、添付の特許請求の範囲により規定されるとおり、本発明の精神及び範囲内にあるものと見なされる。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
［技術分野］
[0001]本発明は、治療に先立ち、又は治療と同時に、二本鎖ＲＮＡ依存性タンパク質キナーゼ（ＰＫＲ−Ｉ）の少なくとも１つの阻害物質を含んでいる、哺乳動物対象における病気を防止及び治療するための組成物及び方法であって、治療の結果、二本鎖ＲＮＡ依存性タンパク質キナーゼの活性化が阻害される組成物及び方法に関する。本発明の組成物及び方法は、ＰＫＲ−Ｉによるリン酸化の阻害をさらに促進する少なくとも１つの増強物質をさらに含んでいる。
【０００２】
［発明の背景］
[0002]悪液質は、普通、癌、敗血症、うっ血性心不全、関節リウマチ、慢性閉塞性肺疾患及びヒト免疫不全ウイルス感染症など、重症及び慢性の炎症性疾患に伴う急性炎症過程を包含するいくつかの疾患状態を伴う。悪液質は、さらに、筋肉が消耗する他の公知の疾患及び障害（例えば、筋肉減少症、加齢に伴う筋肉量の減少）を伴う。全癌患者の死亡の１０％〜２２％、並びに最初の外傷性事象後、数日から数週間にわたる敗血症性臓器不全及び栄養不良により起きる外傷死のおよそ１５％は、悪液質が原因である。
【０００３】
[0003]癌患者、とりわけ消化管癌患者は、進行性の骨格筋萎縮又は悪液質を呈し、これは、その結果として、患者の生活の質及び生存時間を低減する。患者における癌性悪液質は、食欲不振症、体重減少、早期満腹感、無力症（実際には力は低下していなくても脱力感を感じること）、除脂肪体重の減少及び多臓器不全を特徴とする。癌性悪液質に伴う除脂肪体重の減少は、個体を衰弱させて毎日の生活活動を困難にするだけでなく、化学療法及び／又は放射線療法を受ける力をもたないほどまで患者を衰弱させることがある。
【０００４】
[0004]悪液質は、タンパク質合成の低下（同化低下）と内因性タンパク質の分解（異化）の上昇とが組み合わさり、その結果生じるアミノ酸が酸化することが原因である（Ｏ’Ｋｅｅｆｅ，Ｓ．Ｊ．Ｄ．ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、５０、１２２６〜１２３０、１９９０）。タンパク質分解増加の機序は、ユビキチン−プロテアソームタンパク質分解経路の発現増加に起因している。Ｋｈａｌ，Ｊ．ら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．、３７、２１９６〜２２０６、２００５。癌性悪液質においてタンパク質合成の維持ができないことの根底にある機序は未だ解明されていない。しかし、悪液質におけるタンパク質合成の低下及び筋原繊維タンパク質分解の増加を説明し得る機序が提案されたのは最近までである。この機序には、自己リン酸化による二本鎖ＲＮＡ依存性タンパク質キナーゼ（ＰＫＲ）の活性化が関わっている。ＰＩＦ（タンパク質分解誘導因子）及びＡｎｇ ＩＩ（アンギオテンシンＩＩ）などの薬剤によりＰＫＲが活性化されると真核開始因子２α（ｅＩＦ２α）のリン酸化が引き起こされ、その結果、ＧＤＰ結合状態から活性なＧＴＰ結合形態へのｅＩＦ２の変換の変換を防止するグアニンヌクレオチド交換因子ｅＩＦ２Ｂとの競合により、翻訳開始が阻害される。Ｒｕｓｓｅｌｌ，Ｓ．Ｔ．ら、Ｃｅｌｌ．Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ、１９、１７９７〜１８０６、２００７。
【０００５】
[0005]翻訳開始を介したタンパク質合成の制御
翻訳開始の制御には、（ｉ）開始メチオニルトランファーＲＮＡ（ｍｅｔ−ｔＲＮＡ）をリボソームの４０ｓサブユニットに結合させること及び（ｉｉ）ｍＲＮＡを４３ｓ開始前複合体に結合させることが関与している。第１段階中に、ｍｅｔ−ｔＲＮＡは、真核開始因子２（ｅＩＦ２）及びグアノシン三リン酸（ＧＴＰ）との三元複合体としてリボソームの４０ｓサブユニットに結合する。この段階に次いで、ＧＴＰが加水分解してグアノシン二リン酸（ＧＤＰ）となり、三元複合体からｅＩＦ２が放出される。ｅＩＦ２は、開始ラウンドにもう１回関与するには、ＧＤＰをＧＴＰに交換しなければならない。この交換は、ｅＩＦ２上でのグアニンヌクレオチド交換を媒介する別の真核開始因子２、ｅＩＦ２Ｂの作用により行われる。ｅＩＦ２Ｂは、ｅＩＦ２のαサブユニットにおけるｅＩＦ２のｅＩＦ２Ｂリン酸化により制御され、これによりｅＩＦ２は、基質からｅＩＦ２Ｂの競合阻害物質に変換される。
【０００６】
[0006]第２段階では、４３ｓ開始前複合体へのｍＲＮＡの結合は、ｅＩＦ４Ｆと総称される一群のタンパク質、すなわちｅＩＦ４Ａ（ＲＮＡヘリカーゼ）、ｅＩＦ４Ｂ（ｅＩＦ４Ａと連動して機能してｍＲＮＡの５’非翻訳領域における二次構造をほどく）、ｅＩＦ４Ｅ（ｍＲＮＡの５’末端に存在するｍ７ＧＴＰキャップに結合する）及びｅＩＦ４Ｇ（ｅＩＦ４Ｅ、ｅＩＦ４Ａ及びｍＲＮＡのための足場として機能する）から成るマルチサブユニット複合体が必要である。ｅＩＦ４Ｆ複合体は一体となって、ｍＲＮＡを、認識し、ほどき、４３ｓ開始前複合体に誘導するように働く。ｅＩＦ４ＥがｅＩＦ４Ｆ複合体の形成に使われる状態にあるかどうかは、翻訳抑制因子ｅＩＦ４Ｅ結合タンパク質１（４Ｅ−ＢＰ１）により制御されるようである。今度は、４Ｅ−ＢＰ１が、ｅＩＦ４Ｇと競合してｅＩＦ４Ｅに結合し、ｅＩＦ４Ｅを不活性な複合体中へ捕捉できる。４Ｅ−ＢＰ１の結合は、ラパマイシンの哺乳動物標的（ｍＴＯＲ）というキナーゼによるリン酸化を通じて制御され、このとき、リン酸化が増加していると、ｅＩＦ４Ｅに対する４Ｅ−ＢＰ１の親和性が低下する結果となる。
【０００７】
[0007]ＰＩＦ及びＡｎｇ ＩＩによるユビキチン−プロテアソーム経路の誘導には、転写因子である核因子−κＢ（ＮＦ−κＢ）の活性化が必要である。Ｗｙｋｅ，Ｓ．Ｍ．及びＴｉｓｄａｌｅ，Ｍ．Ｊ．、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、９２、７１１〜７２１、２００５。ＰＫＲは、阻害タンパク質ＩκＢの分解を結果としてもたらすであろう上流のキナーゼであるＩκＢキナーゼを活性化することが示されている。ＩκＢが分解されると、今度はＮＦ−κＢの放出がもたされるであろう。放出されたＮＦ−κＢは核に移動し、その結果、特定の遺伝子が転写活性化されるであろう（Ｚａｍａｎｉａｎ−Ｄａｒｙｏｕｓｈ，Ｍ．ら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．、２０、１２７８〜１２９０、２０００）。変異体のＰＫＲを含有する筋管は、ＰＩＦ又はＡｎｇ ＩＩのいずれかに応答してＮＦ−κＢを活性化することはなく、ユビキチン−プロテアソーム経路を誘導することもなかった。こうした結果から、ＰＫＲによるユビキチン−プロテアソーム経路の誘導にはＮＦ−κＢ活性が必要であることが示唆された。
【０００８】
[0008]アミノ酸
２０種のアミノ酸のうち９種はヒトにおいて必須と見なされるが、その理由は、こうしたアミノ酸を体は作ることができないからである。この９種のアミノ酸は、個体の食餌を通じて得なければならない。１種又は複数種のアミノ酸が欠乏すると、負の窒素バランスが生じる可能性があり、この状態では、タンパク質は作られているより速く分解するので、摂取されるより多くの窒素が排泄されることにより、酵素活性の破壊及び筋肉量の減少が生じることがある。
【０００９】
[0009]インスリン、インスリン様成長因子及びアミノ酸などの同化因子は、タンパク質合成を増やし筋肉の肥大の原因となることが知られている。分枝鎖アミノ酸、とりわけロイシンは、翻訳開始を調節するシグナル伝達経路（ｍＴＯＲ及びｅＩＦ２が含まれることが多い）を開始させることができる。一例として、アミノ酸欠乏は、ｅＩＦ２−αリン酸化の増加及びタンパク質合成の低下につながると考えられる。
【００１０】
[0010]悪液質を有する患者においては、遊離アミノ酸の血漿レベルが一般に低下している。最大の低下は、ロイシン、イソロイシン及びバリンなどの分枝鎖アミノ酸（ＢＣＡＡ）について見られることが多い。筋タンパク質中の全アミノ酸の１４〜１８％を構成するＢＣＡＡは、タンパク質合成の構成要素及び調節因子として機能する。本明細書中で言及する３つのＢＣＡＡのうち、ロイシンは、筋タンパク質合成の刺激因子において最も強力であり、残りの２つの有効性はそれより低い。Ａｎｔｈｏｎｙ，Ｊ．Ｃ．ら（Ｊ．Ｎｕｔｒ．、１３０、１３９〜１４５、２０００）により報告されているように、タンパク質合成を刺激する機序は、４Ｅ−ＢＰ１（ｅＩＦ４Ｅ結合タンパク質１）の過剰リン酸化による、翻訳開始におけるｍＲＮＡ結合段階の活性化を経ており、この結果、今度は、不活性な４Ｅ−ＢＰＩ−ｅＩＦ４Ｅ複合体からｅＩＦ４Ｅが放出される。次に、放出されたｅＩＦ４ＥはｅＩＦ４Ｇと結合して活性のあるｅＩＦ４Ｆ複合体を形成する。ｅＩＦ４Ｆ複合体の形成が増加すると、ｍＲＮＡへの４３Ｓ開始前複合体の移動及び動員が促進され、これによりペプチド鎖開始が促進される。
【００１１】
[0011]ＰＫＲ活性化に及ぼすＢＣＡＡの効果は未だ完全に研究されてはいないものの、Ｅｌｅｙらは、最近、ロイシン及びバリンなどのＢＣＡＡは、悪液質誘導性の腫瘍（ＭＡＣ−１６）を保有するマウスの体重減少を顕著に抑制し、その結果、タンパク質合成の増加及び分解の減少により骨格筋の湿重量が顕著に増加すると報告した。Ｅｌｅｙ，Ｈ．Ｌ．ら、Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｊ．、４０７（１）、１１３〜１２０、２００７。ＰＫＲリン酸化に及ぼすロイシンのこの効果は、ＰＰＩ（タンパク質ホスファターゼＩ）の発現増加によるものと思われ、ＰＰＩは、ＰＫＲのＮ末端制御領域に結合し自己リン酸化を阻害することが示されている（Ｔａｎ，Ｓ．Ｌ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７７、３６１０９〜３６１１７、２００２。Ｅｌｅｙらによるこの研究は、ＭＡＣ−１６腫瘍保有マウスの骨格筋中及びＰＩＦに暴露されたマウス筋管中のＰＫＲ及びｅＩＦ２αのリン酸化をロイシンが低減できることを示す初めての報告である。ｉｎ ｖｉｔｒｏで用いられたロイシンの濃度（２ｍｍｏｌｅ／ｌ）は、Ａｎｔｈｏｎｙら（Ｊ．Ｎｕｔｒ．、１３０、２４１３〜２４１９、２０００）により以前報告された、体重１ｋｇ当たり１．３５ｇでロイシンを投与した際のラットの血清中の濃度と同じである。
【００１２】
[0012]一方、ＭＡＣ−１６腫瘍保有マウスにおける体重減少は、Ｅｌｅｙらにより報告されたように、ｅＩＦ４Ｅの結合タンパク質である４Ｅ−ＢＰＩに結合しているｅＩＦ４Ｅの量の増加、及び４Ｅ−ＢＰＩの低リン酸化による活性なｅＩＦ４Ｇ−ｅＩＦ４Ｅ複合体の進行性の減少と関連があった。これは、ｍＴＯＲ（ラパマイシンの哺乳動物標的）のリン酸化の低下に起因し得る。ｍＴＯＲリン酸化の低下は、ｐ７０Ｓ６ｋ（７０ｋＤａリボソームＳ６キナーゼ）のリン酸化の減少の原因であり得る。ｅＥＦ２（真核伸長因子２）が５倍増加することが認められ、そのような増加により、翻訳伸長の減少を通じてタンパク質合成も減少する。ロイシン処置は、この効果を、（１）ｍＴＯＲ及びｐ７０Ｓ６ｋを増加させること、（２）４Ｅ−ＢＰＩの過剰リン酸化を引き起こすこと、（３）ｅＩＦ４Ｅと結合する４Ｅ−ＢＰＩの量を減らすこと、（４）ｅＩＦ４Ｇ−ｅＩＦ４Ｅ複合体の形成の増加を引き起こすこと、並びに（５）それぞれタンパク質合成の増加及びタンパク質分解の増加の低減の原因となるｅｌＦ２αリン酸化及びＰＫＲ活性化を低下させることにより、逆転させる。
【００１３】
[0013]上記に基づき、ＰＫＲに対する阻害物質と分枝鎖アミノ酸などの栄養補助食品との組合せを一緒に用いて、癌性悪液質、又は他の疾患に伴う悪液質を治療及び防止できる。
【００１４】
[0014]一方、本発明者らは最近、国際公開第２００７／０６４６１８号パンフレット中で、哺乳動物における筋肉減少の治療において１つ又は複数の分枝鎖アミノ酸（ＢＣＡＡ）、ＢＣＡＡ前駆体、ＢＣＡＡ代謝産物、ＢＣＡＡの豊富なタンパク質、ＢＣＡＡ含有量が豊富になるように操作されたタンパク質又はその任意の組合せの投与に関する研究について記載している。そのような投与に適した栄養製剤についても記載した。
【００１５】
[0015]悪液質及び食欲不振症の防止及び治療は、未だ、医学界にとって現存する問題である。癌又は任意の疾患を保有する宿主において十分な筋肉量減少に対する栄養補助食品による補給は、ほとんど効果がないままである。したがって、化学療法、又は栄養及び化学療法を組み合わせて施す任意の形態の細胞傷害性の抗新生物療法の有効性を高めるための臨床的アプローチの改良の必要性が残っている。
【００１６】
［発明の概要］
[0016]本発明は、治療に先立ち、又は治療と同時に、哺乳動物における二本鎖ＲＮＡ依存性タンパク質キナーゼ（ＰＫＲ−Ｉ）の少なくとも１つの阻害物質を含んでいる、病気を治療するための組成物及び方法であって、治療の結果、二本鎖ＲＮＡ依存性タンパク質キナーゼの活性化が阻害される組成物及び方法に関する。加えて、本発明の組成物及び方法は、哺乳動物において、ＰＫＲ−Ｉによるリン酸化の阻害を促進する少なくとも１つの増強物質をさらに含んでいる。さらに、本発明は、化学療法剤を使用する癌症状、自己免疫又は他の障害を治療又は改善するうえで化学療法剤の有効性を高めるための組成物及び方法であって、少なくとも１つのＰＫＲ−Ｉを、少なくとも１つの栄養化合物を伴い又は伴わずに使用する組成物及び方法に関する。
【００１７】
[0017]本発明の一特徴では、病気としては、癌、炎症性疾患、敗血症、うっ血性心不全、リウマチ性障害（強直性脊椎炎を非限定的に含む）、線維筋痛症、リウマチ性の臓器疾患（すなわち、心臓、肺、腎臓及び血管炎）、ループス（全身性エリテマトーデスなど）、側頭動脈炎及びリウマチ性多発筋痛症、シェーグレン症候群、関節リウマチ、慢性閉塞性肺疾患、神経変性疾患、自己免疫疾患、ヒト免疫不全ウイルス感染症、免疫関連の病気（アレルギー状態を非限定的に含む）、喘息状態、及び臓器移植、移植又は輸血に関わる状態、糖尿病、乾癬性障害、皮膚疾患、細胞の老化、クッシング病、リウマチ熱及び早老症を挙げることができるが、これらに限定されない。
【００１８】
[0018]本発明の別の特徴では、少なくとも１つの増強物質は、ＰＫＲ−Ｉと一緒に、罹患した哺乳動物における前述の病気の１つの重症度の改善又は軽減を促進する。
【００１９】
[0019]本発明のまた別の特徴では、ＰＫＲ−Ｉは、天然のものでも合成のものでもよく、単独、又は少なくとも１つの増強物質との組合せのいずれかで、経腸的又は非経口的に投与されてもよい。非経口投与経路は、皮下、静脈内、筋肉内又は局所の経路である。経腸投与に関しては、鼻腔内、口腔内、経鼻胃、経口胃、又は胃ポート、空腸ポート若しくは回腸ポートを経由するかいずれかによる投与であってもよい。
【００２０】
[0020]本発明の別の特徴では、この組成物は栄養組成物である。増強物質は、ＰＫＲに対する阻害物質、ＰＫＲ−Ｉ類似体、ＰＫＲのリン酸化阻害物質、化学療法剤、血管新生剤、血管拡張剤、カテキン−フラバノール、生物活性タンパク質、分枝鎖アミノ酸、必須アミノ酸、アミノ酸、アミノ酸類似体、ヌクレオチド、ビタミン、グルタミン、シアル酸オリゴ糖、Ｌ−テアニン、プレバイオティック、プロバイオティック、シンバイオティック、必須脂肪酸、ＰＵＦＡ、ＭＵＦＡ及び抗酸化物質であってもよい。増強物質は、少なくとも１つのＬ−グルタミン作動薬、例えばＬ−テアニンであってもよい。ヌクレオチドは、ＲＮＡ、例えば、アデニン、グアニン、ウラシル又はシトシンであってもよい。化学療法剤の例は、５−フロウロウラシル（Ｆｌｏｕｒｏｕｒａｃｉｌ）又はゲムシタビンである。アミノ酸の例は、ノルロイシン、アルギニン、Ｌ−シトルリン、Ｌ−テアニン又はグルタミンであってもよい。生物活性剤は、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２、ＴＧＦ−β３、ＴＧＦ−β４又はＴＧＦ−β５であってもよい。
【００２１】
[0021]ＰＫＲ−Ｉは、哺乳動物における細胞成長又は細胞複製の阻害物質として機能できる。治療は、放射線療法又は化学療法の形態のいずれかであってもよい。
【００２２】
[0022]本発明の組成物は、タンパク質ホスファターゼ−１α（ＰＰ１−Ａ）の少なくとも１つの修飾物質をさらに含んでいてもよく、その際、ＰＰ１−Ａは、リン酸化された形態のＰＫＲを脱リン酸化する。加えて、少なくとも１つの修飾物質は分枝鎖アミノ酸であり、そのようなアミノ酸は、ロイシン、イソロイシン又はバリンである。
【００２３】
[0023]さらに、本発明は、哺乳動物における病気を治療する方法であり、本明細書中に前述した組成物を哺乳動物に投与することを包含し、治療の結果、治療対象の哺乳動物における二本鎖ＲＮＡ依存性タンパク質キナーゼの活性化が阻害される方法も包含する。
【００２４】
[0024]本発明の他の特徴及び利点は、この後の詳細な説明において明らかである。しかし、この詳細な説明は、本発明の実施形態を示すものではあるとはいえ、限定ではなく例証のためにのみ記載するものであることは理解されるべきである。当業者であれば、本発明の範囲内の多様な変化形及び改変形が、この詳細な説明から明らかになるであろう。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
[0025]本発明のこれらの特徴及び他の特徴は、本発明の多様な実施形態を示す添付の図面と併せて、以下の本発明の多様な態様の説明から、より容易に理解されよう。
【００２６】
【図１】ＰＫＲ活性化を介した、骨格筋中のタンパク質合成の低下及びタンパク質分解の増加に至る経路を示す図である。
【図２】ＰＫＲ阻害物質の濃度増加が、ＭＡＣ１６腫瘍（黒ダイヤモンド）及びＭＡＣ１３腫瘍（黒四角）のｉｎ ｖｉｔｒｏでの成長に及ぼす効果を示すグラフである。実験は３回繰り返した。対照との差をｃ（ｐ＜０．００１）として示す。
【図３Ａ−３Ｂ】ＭＡＣ１６腫瘍（レーン１〜３）及びＭＡＣ１３の腫瘍（レーン４〜６）におけるリン酸化形態及び全形態のＰＫＲ（３Ａ）及びｅｌＦ２α（３Ｂ）の発現を示すウエスタンブロッティングである。濃度測定分析は、リン酸化形態（ｐＨ）対全形態（ｔｏｔ）の比率を示し、３つの別々のウェスタンブロットの平均を表す。ＭＡＣ１６腫瘍との差をｂ（ｐ＜０．０１）又はｃ（ｐ＜０．００１）として示す。
【図４Ａ−４Ｂ】溶媒（ＤＭＳＯ：ＰＢＳが１：２０）対照（レーン１〜３）、又は１ｍｇｋｇ−１（レーン４〜６）若しくは５ｍｇｋｇ−１（レーン７〜９）の濃度のＰＫＲ阻害物質のいずれかをｓａｃ．注射により毎日投与する形でのＭＡＣ１６腫瘍保有マウスの処置（Ｅｌｅｙら、２００７）が、ＰＫＲ（４Ａ）及びｅＩＦ２α（４Ｂ）のリン酸化に及ぼす効果を示す図である。各群におけるマウスの数：ｎ＝６。濃度測定分析は、リン酸化形態（ｐＨ）対全形態（ｔｏｔ）の比率を示し、３つのウェスタンブロットの平均を表す。対照との差をｃ（ｐ＜０．００１）として示す。
【図５Ａ−５Ｅ】ＭＡＣ１６（５Ａ及び５Ｃ）細胞及びＭＡＣ１３（５Ｂ及び５Ｄ）細胞中でのＰＫＲ（５Ａ及び５Ｂ）の自己リン酸化及び２０Ｓプロテアーゼのαサブユニット（５Ｃ及び５Ｄ）の発現に対するＰＫＲ阻害物質の濃度の効果を示すグラフである。濃度測定分析は、リン酸化形態（ｐＨ）対全形態（ｔｏｔ）の比率を示し、３つの別々のウェスタンブロットの平均を表す。対照との差をａ（ｐ＜０．０５）、ｂ（ｐ＜０．０１）又はｃ（ｐ＜０．００１）として示す。（５Ｅ）は、（５Ｃ）に示すＰＫＲ阻害物質の濃度で処置したＭＡＣ１６細胞中で濃度測定により測定した２０Ｓプロテアーゼのαサブユニットの発現と、（５Ａ）中に示すリン酸化ＰＫＲのレベルとの間の関係。相関係数は０．９５７である。
【図６】方法の項に記載する、ＭＡＣ１３細胞及びＭＡＣ１６細胞中における４時間の期間にわたるｉｎ ｖｉｔｒｏでのタンパク質合成を示すグラフである。ＭＡＣ１６腫瘍との差をｃ（ｐ＜０．００１）として示す。
【図７Ａ−７Ｂ】ＥＭＳＡにより定量された、ＭＡＣ１６腫瘍中及びＭＡＣ１３腫瘍中（７Ａ）、並びに５ｍｇｋｇ−１のＰＫＲ阻害物質で４日間処置したマウス又は溶媒対照で処置したマウスから得たＭＡＣ１６腫瘍中（７Ｂ）におけるＮＦ−κＢの核蓄積を示す図である。濃度測定分析は、３つの別々のブロットの平均を表す。（７Ａ）におけるＭＡＣ１６腫瘍との差はｂ（ｐ＜０．０１）として示し、（７Ｂ）における溶媒対照との差はｃ（ｐ＜０．００１）として示す。
【図８】５ＦＵが、
【数１】
にて、単独で、又は１００ｎＭ及び２００ｎＭのＰＫＲ阻害物質（ＰＫＲ）と組み合わせた場合にｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるＭＡＣ１６細胞の成長に及ぼす効果、並びにゲムシタビンが、
【数２】
にて、単独で、又はＰＫＲ阻害物質と組み合わせた場合にＭＡＣ１６細胞の成長に及ぼす効果を示すグラフである。１００ｎＭ及び２００ｎＭでのＰＫＲ阻害物質単独の効果も示す。対照との差をｂ（ｐ＜０．０１）又はｃ（ｐ＜０．００１）として示し、ＰＫＲ阻害物質の存在下での差をｅ（ｐ＜０．０１）又はｆ（ｐ＜０．００１）として示す。
【００２７】
［好ましい実施形態の詳細な説明］
[0034]本発明は、二本鎖ＲＮＡタンパク質キナーゼ（ＰＫＲ−Ｉ）の阻害物質を使用して癌を治療するうえで化学療法剤の有効性を高めるための方法であって、栄養化合物を伴う又は伴わない方法に関する。
【００２８】
[0035]ＰＫＲ阻害物質を使用することにより、タンパク質合成の低下は完全に低減し、ｅＩＦ２αリン酸化の誘導が防止された（図１も参照）。ＰＫＲ阻害物質は、ＰＩＦ及びＡｎｇ ＩＩの両方により誘導されるタンパク質合成の低下も低減させ、マウス及びヒトの悪液質モデル両方におけるプロテアソームの発現及び活性の増加が防止された。ＰＫＲの自己リン酸化を介した、筋の悪液質におけるタンパク質合成の低下及びタンパク質分解の増加を明らかにする、提唱されている機序を図１にまとめる。Ｅｌｅｙ，Ｈ．Ｌ．及びＴｉｓｄａｌｅ，Ｍ．Ｊ．、Ｊ．Ｂｉｏｌ．、２８２、７０８７〜７０９７、２００７；Ｅｌｅｙ，Ｈ．Ｌ．及びＴｉｓｄａｌｅ，Ｍ．Ｊ．、Ｂｒ，Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、９６、１２１６〜１２２２、２００７；及びＥｌｅｙ，Ｈ．Ｌ．ら、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、９８（２）、４４３〜４４９、２００８。このような知見に基づき、ＰＫＲ阻害物質は、癌患者における、さらには悪液質を伴う他の疾患における筋萎縮を治療的に防止するために使用してもよい。
【００２９】
[0036]例えば、本発明者らにより観察されたように、ＰＫＲ及びｅＩＦ２α両方のリン酸化された形態のレベルは、ＰＫＲ及びｅＩＦ２αの量に関わらず体重が減少しているヒト癌患者の筋肉において大きく高まった。ＰＫＲのリン酸化とｅＩＦ２αのリン酸化との間には線形関係が認められ、このことから、ＰＫＲがリン酸化した結果、ｅＩＦ２αがリン酸化したことが示唆された。しかし、体重減少のレベルが増すにつれミオシンのレベルは減少した。ミオシン発現とｅＩＦ２αのリン酸化の程度との間における同様の線形関係。こうした知見から、ＰＫＲのリン酸化は癌患者における筋萎縮の重要な発動因子である可能性が示唆される。Ｅｌｅｙ，Ｈ．Ｌ．ら、Ｂｒ．Ｊ．、Ｃａｎｃｅｒ、９８（２）、４４３〜４４９、２００８。
【００３０】
[0037]本発明を何ら特定の機序に限定するものではないが、本発明の発明者らは、ＰＫＲ−Ｉの投与は、化学療法剤（例えば、５−フルオロウラシル又はゲムシタビン）と組み合わせたほうが、どちらかを単独で使用した場合より有効に腫瘍細胞の成長を低下させることを見出している。結果として、ＰＫＲ−Ｉの投与は、それが化学療法を増強することにおいては、直接的又は間接的であってもよい。５−フルオロウラシル又はゲムシタビンは両方とも、新生物の成長（例えば大腸癌）の治療に一般的に使用される化学療法化合物である。理論に拘束されるものではないが、極めて特定の濃度（最大効果は２００ｎＭにおいてであり、それより低濃度及びそれより高濃度では効果は低下する）で導入すると、ＰＫＲ−Ｉは癌細胞の成長を低下させると考えられる。加えて、ＰＫＲを阻害すると、化学療法薬に暴露された癌細胞の増殖がさらに減少した。細胞の阻害は、いずれかの化合物単独の場合に観察される阻害と比較して相乗効果であるように思われる（図８を参照）。ＰＫＲＩ化合物と構造的に無関係の特定の栄養化合物を投与した場合も、癌細胞の成長を低下させ癌性悪液質を防止すると考えられる。しかし、栄養化合物は、Ｊａｍｍｉら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．、３０８、５０〜５７、２００３により以前記載されたＰＫＲ−Ｉ化合物とは異なる機序により振舞う。
【００３１】
[0038]本明細書中で使用する場合、用語「増強物質」又は「増強する」は、別の薬剤及び／又は栄養化合物と組み合わせて使用した場合に両方の薬剤／化合物の相乗効果を生み、その相乗効果がそれぞれ単独で使用した場合の効果の合計を超える化合物又は薬剤に関する。本発明によれば、増強物質としては、ＰＫＲに対する阻害物質、ＰＫＲ−Ｉ類似体、ＰＫＲのリン酸化阻害物質、栄養補助食品又は栄養化合物、化学療法剤、血管新生剤、血管拡張剤、カテキンフラバノール、生物活性タンパク質、分枝鎖アミノ酸、必須アミノ酸、アミノ酸又はアミノ酸類似体、ヌクレオチド又はＲＮＡ、ビタミン、グルタミン、シアル酸オリゴ糖、Ｌ−テアニン、プレバイオティック、プロバイオティック又はシンバイオティック、必須脂肪酸、ＰＵＦＡ及び／又はＭＵＦＡ並びに抗酸化物質を挙げることができるが、これらに限定されない。
【００３２】
[0039]本明細書中で使用する場合、用語「治療」及び「治療する」は、予防的又は防止的な治療及び治癒的又は疾患緩和的な治療の両方を指し、これには、疾患に罹患するリスクがあるか、又は疾患に罹患している疑いのある患者、並びに病的状態であるか、又は疾患若しくは病態を有していると診断されている患者の治療が含まれる。これらの用語は、さらに、疾患に罹患してはいないが、窒素アンバランス又は筋肉減少などの不健康状態を生じやすい可能性のある個体における健康の維持及び／又は促進も指す。したがって、「有効量」は、個体における疾患若しくは病態を治療する量、又はより一般的には、個体に栄養的、生理的又は医学的な利益をもたらす量である。加えて、用語「個体」及び「患者」は、本明細書中ではヒトを指すために使用することが多いが、本発明を限定するものではない。したがって、用語「個体」及び「患者」は、当該治療から利益を得ることのできる一切の動物を指す。
【００３３】
[0040]悪液質
悪液質又は消耗は、貧血（ヘモグロビン量の落込み）、食欲不振症（食欲の欠如又は重度の減退）、体重減少及び筋萎縮を特徴とする重度の栄養不良及び負の窒素バランスの状態である。悪液質における生理的変化、代謝的変化及び行動上の変化は、脱力感、疲労、胃腸障害、睡眠／覚醒障害、疼痛、だるさ、息切れ、嗜眠、鬱、倦怠感、並びに家族及び友人の負担になっているという不安といった患者の愁訴を伴う。悪液質は、いくつかの疾患において見られ、そのような疾患としては、ＡＩＤＳ、癌、股関節骨折後、慢性心不全、慢性閉塞性肺疾患及び慢性閉塞性肺性疾患などの慢性肺疾患、肝硬変、腎不全、関節リウマチ及び全身性ループスなどの自己免疫疾患、敗血症、結核、嚢胞性線維症、クローン病及び重度の感染症が挙げられるが、これらに限定されない。このような慢性の感染症及び悪性疾患に加え、悪液質は、広範な外傷受傷後の患者及び成長障害症候群を有する高齢者においても確認されている。
【００３４】
[0041]癌性悪液質は、（１）食欲減退及び（２）栄養摂取不足のみから予測されるであろうより高速で優先的に筋肉減少を引き起こすストレスへの代謝応答という２つの主要素が原因である。したがって、癌患者における筋肉量の減少の速度を改善するための栄養補助食品があれば、そうした食品は重要な臨床的影響をもつことになろう。
【００３５】
[0042]癌性悪液質は、腫瘍の局所的効果であるだけではない。タンパク質、脂肪及び炭水化物の代謝の変化が一般に生じる。例えば、炭水化物代謝の異常としては、総グルコースの代謝回転速度の増加、肝臓の糖新生増加、耐糖能障害及び血糖値高値が挙げられる。脂肪分解の増加、遊離脂肪酸及びグリセロールの代謝回転の増加、高脂血症、及びリポタンパク質リパーゼ活性の低下が観察されることが多い。０ 癌性悪液質に伴う体重減少は、体脂肪貯蔵の低下によるだけでなく、広範な骨格筋消耗を伴う全身のタンパク質量の減少によっても引き起こされる。タンパク質代謝回転の増加、及びアミノ酸酸化の制御が不十分であることも重要である可能性がある。癌に応答して産生される宿主由来因子、例えば、腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）又はカケクチン、インターロイキン−１（ＩＬ−１）、ＩＬ−６、γ−インターフェロン（γ−ＩＦＮ）及びプロスタグランジン（ＰＧ、例えばＰＧＥ２など）の存在が悪液質の原因因子として関係付けられている。
【００３６】
[0043]体重減少は、肺及び消化管の上皮性悪性腫瘍に罹患している患者においては普通であり、それが原因で体脂肪及び筋タンパク質の両方が大量に減少しても、筋肉以外のタンパク質は影響を受けないままである。エネルギー貯蔵の観点からは体脂肪の減少は重要であるが、動けなくなり、最終的に呼吸筋機能障害が生じて、沈下性肺炎から死に至る結果をもたらすのは、骨格筋タンパク質の減少である。悪液質は、食欲不振症を伴うことが多いが、栄養補給のみでは安定体重を維持できず、体重が増えたとしても、それは除脂肪体重ではなく、脂肪組織及び水の増加によるものである。
【００３７】
[0044]二本鎖（ｄｓ）ＲＮＡ依存性タンパク質キナーゼ（ＰＫＲ）
本明細書中で使用する場合、用語「ＰＫＲ」は、タンパク質の機能を有し、以下のタンパク質の名で呼ばれることもあるタンパク質を指す：「二本鎖ＲＮＡ依存性タンパク質キナーゼ」、二本鎖ＲＮＡ依存性ｅＩＦ−２αキナーゼ」、「ＤＡＩ」（Ｊｉｍｅｎｅｚ−Ｇａｒｃｉａら、Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｓｃｉ．、１０６、１１〜１２、１９９３）、「ｄＳＩ」、「ｐ６８（ヒト）又はｐ６５（マウス）キナーゼ」（Ｌｅｅら、Ｊ．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｒｅｓ．１６、１０７３〜１０７８、１９９６）又はｄｓＲＮＡ−ＰＫ。Ｃｌｅｍｅｎｓら、Ｊ．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ｒｅｓ．、１３、２４１、１９９３も参照のこと。ＰＫＲは、キナーゼ活性を有することが知られる唯一同定された二本鎖ＲＮＡ結合タンパク質である。ＰＫＲは、セリン／トレオニンキナーゼであり、その酵素的な活性化には、二本鎖ＲＮＡ結合及びその結果生じる自己リン酸化が必要である（Ｇａｌａｂｒｕ，Ｊ．＆Ｈｏｖａｎｅｓｓｉａｎ，Ａ．、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２６２、１５５３８〜１５５４４、１９８７；Ｍｅｕｒｓ，Ｅ．ら、Ｃｅｌｌ、６２、３７９〜３９０、１９９０）。最もよく特徴付けされたＰＫＲのｉｎ ｖｉｖｏでの基質は、真核開始因子−２（ｅＩＦ−２α）のαサブユニットであり、これは一旦リン酸化されると、最終的には細胞及びウイルスのタンパク質合成を阻害することになる（Ｈｅｒｓｈｅｙ，Ｊ．Ｗ．Ｂ．、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、６０、７１７〜７５５、１９９１）。ＰＫＲのこの特定の機能は、ＩＦＮ−α及びＩＦＮ−βの抗ウイルス活性及び抗増殖活性の媒介に関与する機序の１つとして提唱されている。ＰＫＲについての追加的な生物学的機能は、シグナル伝達物質としての推定される役割である。Ｋｕｍａｒらは、ＰＫＲはＩκＢαをリン酸化することができ、その結果、核因子κＢ（ＮＦ−κＢ）の放出及び活性化がもたらされることを実証した（Ｋｕｍａｒ，Ａ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９１、６２８８〜６２９２、１９９４）。ＩＦＮ−ｂプロモーター中のよく特徴付けられたＮＦ−κＢ部位であれば、この部位は、ＰＫＲがＩＦＮ−ｂ転写の二本鎖ＲＮＡ活性化を媒介する機序を表すことができる（Ｖｉｓｖａｎａｔｈａｎ，Ｋ．Ｖ．＆Ｇｏｏｄｂｏｕｒｎｅ，Ｓ．、ＥＭＢＯ Ｊ．、８、１１２９〜１１３８、１９８９）。
【００３８】
[0045]ＰＫＲの活性化には、二本鎖ＲＮＡに縦並びで結合する２つの分子が関わっており、次に、分子内の事象において互いにリン酸化する。（Ｗｕら、１９９７、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ、２７２、１２９１〜１２９６）。ＰＫＲは、ｉｎ ｖｉｖｏでの制御機序としてアポトーシスに依存する過程（抗ウイルス薬活性、細胞成長制御及び腫瘍形成など）において関係があるとされている（Ｄｏｎｚｅら、ＥＭＢＯ Ｊ．、１４、３８２８〜３８３４、１９９５；Ｌｅｅら、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、１９９、４９１〜４９６、１９９４；Ｊａｇｕｓら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．、１９８９、第９巻、１５７６〜８６）。
【００３９】
[0046]ＰＫＲ阻害物質（ＰＫＲ−Ｉ）
ＰＫＲは、さまざまな細胞過程に関与しており、そのような過程としては、シグナル伝達、分化及びアポトーシスが挙げられる。ＰＫＲ阻害物質（ＰＫＲ−Ｉ）は、本発明によれば、異常な細胞応答、例えば、神経変性障害（例えば、ハンチントン病、アルツハイマー病及びパーキンソン病）に伴う障害を治療するために使用してもよい。本発明の組成物、キット及び方法における使用に適していると考えられるＰＫＲ阻害物質には、以下の中に記載のものが含まれる：Ｓｈｉｍａｚａｗａら、Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｌｅｔｔ．、４０９、１９２〜１９５、２００６、Ｐｅｅｌ、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ．Ｅｘｐ．Ｎｅｕｒｏｌ．、６３、９７〜１０５、２００４、Ｂａｎｄｏら、Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．、４６、１１〜１８、２００５、Ｐｅｅｌら、Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．、１０、１５３１〜１５３８、２００１、及びＣｈａｎｇら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．、８３、１２１５〜１２２５、２００２。
【００４０】
[0047]ＰＫＲ−Ｉ類似体としては以下を挙げることもできるが、これらに限定されない：２−アミノプリン（２−ＡＰ）、９−（４−ブロモ−３，５−ジメチルピリジン−２−イル）−６−クロロ−９Ｈ−プリン−２−イルアミン、９−（４−ブロモ−３，５−ジメチルピリジン−２−イルメチル）−６−クロロ−９Ｈ−プリン−２−イルアミン、リン酸塩、９−（４−ブロモ−３，５−ジメチルピリジン−２−イルメチル）−６−クロロ−９Ｈ−プリン−２−イルアミン、塩化水素塩、６−ブロモ−９−（４−ブロモ−３，５−ジメチルピリジン−２−イルメチル）−９Ｈ−プリン−２−イルアミン、６−ブロモ−９−（４−ブロモ−３，５−ジメチル−１−オキシピリジン−２−イルメチル）−９Ｈ−プリン−２−イルアミン、２−（２−アミノ−６−クロロプリン−９−イルメチル）−３，５−ジメチルピリジン−４−オール、９−（４−アリルオキシ−３，５−ジメチルピリジン−２−イルメチル）−６−クロロ−９Ｈ−プリン−２−イルアミン、６−クロロ−９−［４−（２−エトキシエトキシ）−３，５−ジメチルピリジン−２−イルメチル］−９Ｈ−プリン−２−イルアミン、６−クロロ−９−（４−シクロプロピルメトキシ−３，５−ジメチルピリジン−２−イルメチル）−９Ｈ−プリン−２−イルアミン、６−クロロ−９−（４−イソブトキシ−３，５−ジメチルピリジン−２−イルメチル）−９Ｈ−プリン−２−イルアミン、６−クロロ−９−（４−クロロ−３，５−ジメチルピリジン−２−イルメチル）−９Ｈ−プリン−２−イルアミン、６−クロロ−９−（３，５−ジメチルピリジン−２−イルメチル）−９Ｈ−プリン−２−イルアミン及び６−ブロモ−９−（４−メトキシ−３，５−ジメチルピリジン−２−イルメチル）−９Ｈ−プリン−２−イルアミン、リン酸塩。ＰＫＲ阻害物質類似体は、Ｊａｍｍｉら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．、３０８、５０〜５７、２００３中に記載がある（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ Ｃａｔ．Ｎｏ．５２７４５０）。
【００４１】
[0048]用語「ＰＫＲ発現」は、ＰＫＲコード核酸配列の転写及び翻訳を指し、その産物としては、前駆体ＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ポリペプチド、翻訳後処理されたポリペプチド及びそれらの誘導体が挙げられ、マウス又はサルの酵素など、他の種に由来するＰＫＲも含まれる。例として、ＰＫＲ発現のためのアッセイとしては、自己リン酸化アッセイ（Ｄｅｒ及びＬａｕ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９２、８８４１〜８８４５、１９９５）、ｅＩＦ２αリン酸化のためのアッセイ（Ｚａｍａｎｉａｎ−Ｄａｒｙｏｕｓｈ，Ｍ．ら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅｓ、１８、３１５〜３２６、１９９９）、ＰＫＲの免疫沈降により実施するキナーゼアッセイ及びキナーゼのためのｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ（Ｚａｍａｎｉａｎ Ｄａｒｙｏｕｓｈ，Ｍ．ら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．、２０、１２７８〜１２９０、２０００）が挙げられる。ＰＫＲの発現及び／又は産生のための例示的なアッセイとしては、ウェスタンブロット等のタンパク質アッセイ、及び、逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）アッセイ、ノーザンブロット分析、ドットブロット分析、又はＰＫＲコード核酸配列に基づき適切に標識されたプローブを使用するｉｎ ｓｉｔｕでのハイブリダイゼーション分析などのＰＫＲ ｍＲＮＡのためのアッセイが挙げられる。
【００４２】
[0049]先に述べたように、ＰＫＲは、体内又は細胞内でタンパク質の分解に関与する一連の他の細胞タンパク質をリン酸化するタンパク質である。分解標的となるこれらのタンパク質は横紋筋タンパク質に限定されず、構造タンパク質又は制御タンパク質のいずれかである細胞タンパク質（例えば、酵素及びシグナル伝達タンパク質、アクチンフィラメントなど）も含まれる。その結果、ＰＫＲタンパク質を阻害すると、細胞タンパク質の分解を制御する機序が変質することが示されている。ＰＫＲを阻害すると正常なタンパク質代謝が妨げられ、新しいタンパク質の分解及び合成が両方とも制限されると考えられる。
【００４３】
[0050]本発明によるＰＫＲ−Ｉの投与から得られる用途及び利益について、以下に検討する。
【００４４】
[0051]癌療法適用において：ＰＫＲ阻害物質（ＰＫＲ−Ｉ）は、ユビキチンが介在するプロテオソーム経路に関連するタンパク質分解を阻害することが示されていることから、ＰＫＲ−Ｉは、本明細書中に記載の実施例により実証するように、腫瘍細胞の複製を減らし、それにより腫瘍成長を遅らせると考えられる。ＰＫＲ−Ｉを使用すると、腫瘍細胞数の減少も促進できる。腫瘍阻害の機序は、完全には解明されていないが、細胞の完全性を維持するために必要な細胞複製サイクルを制御するタンパク質並びに細胞内タンパク質の妨害を挙げることができる。
【００４５】
[0052]先に報告したように、ＰＫＲ−Ｉは、癌性悪液質において上方制御されていることの多い骨格筋のタンパク質分解を阻害するために使用できる。癌性悪液質は、典型的には、痩せた筋組織を非常に急速に減少させ、ひいては患者が死亡するリスクを高める結果となる。
【００４６】
[0053]全身投与に対し、腫瘍の中へのＰＫＲ−Ｉの局所注射は、細胞内のタンパク質代謝の制限を通じて腫瘍細胞の成長を制限しながら、正常な骨格筋代謝（タンパク質分解を含む）を保持すると考えられる。
【００４７】
[0054]自己免疫疾患において：過剰炎症の結果、炎症応答を制御する過剰なタンパク質が産生されることが多い。過剰炎症は筋肉減少、及び外傷からの回復遅延化に直接関係があることから、炎症応答を調節することが望ましい。その結果、ＰＫＲ−Ｉの投与により利益がもたらされて炎症調節タンパク質（例えば、急性期タンパク質（ＣＲＰ）、インターロイキン（ＩＬ−６、ＩＬ−１など））を産生する細胞の過剰な生成が制限されると考えられる。
【００４８】
[0055]バランスがとれ制御された様式での自己免疫は、可能性のある新生物細胞の免疫監視にとって必要である。自己免疫は、いくらか副作用を有するが、それでもやはり、重要で自然な過程である。したがって、タンパク質性のサイトカインの産生に関与する免疫細胞が過剰に作られることを防止すれば、免疫応答が制限され、自己免疫疾患が防止されると予想される。
【００４９】
[0056]例えば、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）においては、活性化したＳＬＥ Ｔ細胞中でＰＫＲが過剰発現し、それに相関してｅＩＦ２αリン酸化が増加する。ＰＫＲの高度な発現、それに次ぐｅＩＦ２αのリン酸化は、少なくとも部分的には、ＳＬＥ患者のＴ細胞におけるマイトジェンに対する翻訳性及び増殖性の応答障害の原因になりがちと考えられる。Ｇｒｏｌｌｅａｕ，Ａ．ら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．、１０６（１２）、１５６１〜１５６８、２０００。
【００５０】
[0057]アレルギーにおいて：多様な抗原又はエフェクターに対するアレルギー反応には、タンパク質性の免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）が介在するが、ＩｇＥは、Ｂ細胞が抗原（例えば花粉）に接触したときにＢ細胞により産生される。したがって、ＰＫＲ−Ｉを使用すると、Ｂ細胞の制限を通じてＩｇＥの産生を減らすことによりその者に利益がもたらされると考えられる。このことは、オマリズマブ（ゾレア（Ｘｏｌａｉｒ）（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ）と呼ばれる異なる型の化合物によりもたらされる機能に類似している。タンパク質分解阻害物質と対照的に、オマリズマブは、アレルギー性過敏症を軽減させる目的で行われるアレルギー関連の喘息療法において使用されるモノクローナル抗体である。
【００５１】
[0058]慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）において：ＣＯＰＤ（「慢性気管支炎」を含む）に伴う状態は、粘液を産生する気道の杯細胞の過形成及び肥大に関連する場合が多いことから、ＰＫＲ−Ｉを使用するとＣＯＰＤに伴う症状が軽減されると考えられる。したがって、気道閉塞の原因となる粘液の分泌を減らせば、ＰＫＲ−Ｉによる治療を受ける者に有益と考えられる。加えて、ＣＯＰＤは炎症を伴い、それに次ぎ、気道を狭める組織の瘢痕化及びリモデリングが生じる。
【００５２】
[0059]局所施用において：ＰＫＲ−Ｉは、さまざまな皮膚疾患にとって有益であると考えられ、そのような疾患としては、アトピー性皮膚炎、湿疹及び乾癬が挙げられるが、これらに限定してはならない。アトピー性皮膚炎では、炎症を起こし、刺激され及び荒れた皮膚を生じさせる免疫系による過剰な反応があるが、これをＰＫＲ−Ｉ投与により制御できる。
【００５３】
[0060]免疫栄養において：セカンドジェネレーションインパクト（Ｓｅｃｏｎｄ Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ Ｉｍｐａｃｔ）（登録商標）などの免疫栄養を使用して炎症を調節し感染症を低減させることは、癌の外科手術を受ける患者においては普通である。ＰＫＲ−Ｉによりサイトカイン産生をさらに制御すると、炎症性サイトカインの過剰発現が低下すると予想される。
【００５４】
[0061]化学療法において：最近の調査から、乳から単離された特定の生物活性ペプチドは、Ｇ０期（細胞老化）において細胞周期が停止すると細胞保護特性を有することが示唆されている。ＰＫＲ−Ｉは、細胞周期を制御するタンパク質の分解を変化させると考えられる。結果として、能動的な化学療法及び放射線療法中の細胞複製を制限すると、健康な細胞が保護されると考えられる。
【００５５】
[0062]糖尿病において：Ｉ型の場合は、自己免疫の場合と同様、前述のとおりである。ＩＩ型の場合は、完全にインスリン依存性の成人発症型糖尿病の最終段階の前に、膵臓のβ細胞が過剰なインスリンを分泌する。その結果、ＰＫＲ−Ｉは、インスリンの過剰分泌を防止するための限局投与において有用であろうと考えられる。
【００５６】
[0063]クッシング病において：クッシング病は、過剰なコルチゾールの分泌を促進する脳下垂体中に腫瘍が存在することにより生じる。その結果、ＰＫＲ−Ｉを局所投与及び／又は全身投与すると、腫瘍成長が防止され、恐らくコルチゾールの合成が減るであろうと考えられる。追加的な利点は、コルチゾールが除脂肪体重減少を促進する他の慢性のストレス応答においても見ることができる。
【００５７】
[0064]臓器移植において：ＰＫＲ−Ｉを使用すると、異質な抗原提示に反応することにより臓器拒絶反応を誘発する免疫タンパク質の発現が低下する。
【００５８】
[0065]リウマチ熱及びリウマチ性の臓器疾患において：リウマチ熱及びリウマチ性の臓器疾患は、Ａ群レンサ球菌への感染により生じる未治療又は治療が不十分な連鎖球菌感染症の稀な合併症として生じることがある炎症性疾患である。リウマチ熱及びリウマチ性の臓器疾患の正確な原因は解明されていないが、医学研究では、特定の型の連鎖球菌により産生される抗原に対する異常な免疫系応答に注目してきた。感染症により生じる抗原応答の結果、臓器、筋肉及び関節を誤って攻撃する抗体が産生される。リウマチ熱及びリウマチ性の臓器疾患には治療法がないが、この疾患に対する医学的治療には、レンサ球菌感染症を治療し、将来的な感染を防止するための抗生物質投薬が含まれ、他の薬物は疾患の症状を緩和する。したがって、抗体の産生を一時的に減少させて抗生物質療法のための時間を作ることが、ＰＫＲ−Ｉを介したタンパク質合成の阻害により達成されると考えられる。
【００５９】
[0066]早老症において：早老症（Ｐｒｏｇｅｒｉａ）（ギリシャ語で「高齢」）は、具体的には、ハッチンソン−ギルフォード早老症症候群、又は全般には、他の老化加速疾患を指す。早老症は、老化のいくつかの側面が全般に加速する極めて稀な疾患で、この疾患に罹患して１３歳を超えて生存する子供はほとんどいない。この疾患は遺伝子疾患であるが、散発的に起こり、家族内で遺伝しない。早老症の公知の治療法はないが、いくつか発見はあった。成長ホルモン（Ｓａｄｅｇｈｉ−Ｎｅｊａｄ，Ａ．ら、Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．、２０（５）、６３３〜６３７、２００７）及びファルネシル転移酵素阻害物質（Ｍｅｔａ，Ｍ．ら、Ｔｒｅｎｄｓ Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．、１２（１０）、４８０〜４８７、２００６）を用いた治療が提案されている。２００３年には、Ｍ．Ｅｒｉｋｓｓｏｎらにより、早老症は新規の優性形質であり、新しく宿った子供における、又は両親のうち一方の配偶子における細胞分裂中に生じる可能性があることが報告された。この疾患の原因は、染色体１上のＬＭＮＡ（ラミンＡ）遺伝子における突然変異である。早老症では、プレラミンＡを切断してラミンＡにするのに酵素（プロテアーゼ）が必要な認識部位が突然変異する。ラミンＡは、産生できず、プレラミンＡは核膜上に蓄積し、それが原因で、特徴的な、核の小疱形成が生じる（Ｌａｎｓ，Ｈ．ら、Ｎａｔｕｒｅ、４４０（７０８０）、３２〜３４、２００６）。この結果、早老症の早期老化症状となる。早老症患者の細胞をＬＭＮＡの若年及び高齢のヒト対象の皮膚細胞と比較した試験では、一定の核タンパク質の下方制御、ＤＮＡ損傷の増加、及びヘテロクロマチンの減少の原因となるヒストンの脱メチル化など、早老症及び高齢者の細胞においては同様の欠陥が見出された。核ラミナの機能異常に関与するタンパク質（例えばプレラミンＡ）などのタンパク質の発現を低下させるためにＰＫＲ阻害物質を使用すると、結果として早期老化が生じることが報告されている。
【００６０】
[0067]用語「アミノ酸」は、本明細書中で使用する場合、特に明記しない限り、少なくとも１つの必須アミノ酸、例えば、イソロイシン、ロイシン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、トレオニン、トリプトファン、バリン若しくはヒスチジン；条件付きで必須アミノ酸、例えば、チロシン、システイン、アルギニン若しくはグルタミン；又は非必須アミノ酸、例えば、グリシン、アラニン、プロリン、セリン、グルタミン酸、アスパラギン酸、アスパラギン、タウリン若しくはカルニチンを指す。
【００６１】
[0068]用語「必須アミノ酸」（ＥＡＡ）は、本明細書中で使用する場合、特に明記しない限り、以下のアミノ酸のうち１つの少なくとも源を指す：イソロイシン、ロイシン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、トレオニン、トリプトファン、バリン及びヒスチジン。
【００６２】
[0069]加えて、アミノ酸の、アルギニン、システイン、グリシン、グルタミン及びチロシンは、条件付きで必須と考えられるが、その意味は、これらのアミノ酸は食餌中では普通必要ではないが、十分な量で合成されない特定の集団には外因的に補給しなければならないということである。
【００６３】
[0070]本明細書中で使用する場合、「分枝鎖アミノ酸」は、例えば、ロイシン、イソロイシン又はバリンなどのアミノ酸のうちの少なくとも１つを指す。
【００６４】
[0071]Ｌ−テアニン又はγ−エチルアミノ−Ｌ−グルタミン酸（サンテアニン（Ｓｕｎｔｈｅａｎｉｎｅ）（商標）としても知られる）は、茶の葉、例えば、紅茶、ウーロン茶及び緑茶（茶の煎じ汁）中においてのみ見出される独特のアミノ酸である。テアニンは、グルタミンに関連があり、血液脳関門を通過できる。テアニンは、脳に入ることができるので、精神活性特性を有する。テアニンは、精神的及び身体的なストレスを低下させることが示されており、くつろぎの感情を生じさせることができ、カフェインと組み合わせて摂取すると認知及び気分が改善される。Ｌ−テアニンは、くつろぎの指標であるα脳波の発生を促進することが示されている。微生物感染症及び恐らくさらには腫瘍に対する自然な抵抗力を高める可能性もある。５０〜２００ｍｇの用量により、くつろぎ効果をもたらすことができる。免疫系機能促進のためのＬ−テアニンの用量は提案されていないが、予備研究におけるボランティアは、１日およそ６００ｍＬの茶を摂取した。
【００６５】
[0072]本明細書中で使用する場合、「プレバイオティック」は、宿主又は対象の消化管に供給されると、病原性の細菌種に対し１つ若しくは限定数の有益な細菌種の成長及び／又は活性を選択的に刺激する非消化性の食品成分である。プレバイオティックとしては、酵母、酵母培養物、真菌培養物、並びに多糖及びオリゴ糖（フルクトオリゴ糖（ＦＯＳ）など）などの公知の食物繊維並びにグアーゴム、特に部分的に加水分解されたグアームゴム（ＰＨＧＧ）及びペクチンが挙げられる。「プロバイオティック」は、宿主又は対象の消化管に導入されると、事実上コロニー形成し有益な効果をもたらす実際の細菌種である。好ましくは、プロバイオティックは、乳酸菌及びビフィズス菌のうち１つ又は複数を包含する。用語「シンバイオティック」は、プレバイオティックとプロバイオティックとの混合物で、宿主又は対象の消化管中で、生きた微生物性の栄養補助食品の生着及び植付けを向上させることにより宿主に有益に作用するものを指す。
【００６６】
[0073]「必須脂肪酸」又は「ＥＦＡ」は、体が使用でき、飽和脂肪酸、多価不飽和脂肪酸又は一不飽和脂肪酸のいずれかに分類できる任意の脂肪酸で、自然において見出すことができるか、又は合成により作製できるものを指し得る。ＥＦＡとしては、コレステロール、プロスタグランジン、レシチン、コリン、イノシトール、共役リノレン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、α−リノレン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサペンタエン酸、ドコサヘキサン酸（ｄｏｃｏｓａｈｅｘａｎｏｉｃ ａｃｉｄ）、リノレン酸、γ−リノレン酸、ω−３脂肪酸、ω−６脂肪酸、ω−９脂肪酸、多価不飽和脂肪酸、長鎖多価不飽和脂肪酸、アラキドン酸、一不飽和脂肪酸、脂肪酸前駆体及び脂肪酸誘導体を挙げることができるが、これらに限定されない。本発明による、悪液質又は食欲不振症を防止又は治療するための有用な組成物としては、少なくとも１つのＥＦＡの混合物の組合せを挙げることができる。
【００６７】
[0074]前述した栄養分の毎日の投与量は、個体又は対象の体重、性別、年齢及び／又は病態に応じて変化させてもよい。
【００６８】
[0075]栄養介入
能動的な放射線療法及び／又は化学療法による治療の間に、又は本発明によるＰＫＲ−Ｉと組み合わせて使用して所望の効果を得る間に細胞傷害性を高めるための標的の栄養分の使用は、以下のとおりである。
【００６９】
[0076]細胞傷害性において：フリーラジカルを誘導する栄養分は、疾患に罹った細胞及び腫瘍細胞への損傷を増加させると考えられる。例としては、
ａ．鉄、亜硝酸塩／硝酸塩
ｂ．低濃度のビタミンＥ、Ｃ、Ｂの複合体及びセレン及び他の抗酸化物質
ｃ．グルタミンの取込みを遮断するための高フィチン酸塩（二価のキレート剤）、Ｌ−テアニン
が挙げられる。
【００７０】
[0077]細胞保護においては、以下の栄養分は、化学療法中の免疫攻撃並びに細胞の損傷及び傷害から正常な細胞を守ると考えられる：
ａ．抗酸化物質：グルタミン、システイン、ビタミンＡ、Ｃ、Ｅ及びセレン
ｂ．同化のためのリシン→ノルロイシン（ＢＣＡＡ類似体）
ｃ．同化のためのヌクレオチド（又は循環しているヌクレオチド断片）
ｄ．高多価不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）／一不飽和脂肪酸（ＭＵＦＡ）：膜の流動性を高め、反応性オキシダントによる損傷を防止する
ｅ．シアル酸オリゴ糖：腸細胞の健康を改善し病原性の生物及び化合物の侵入を減らす。
【００７１】
[0078]プロバイオティック、プレバイオティック及びシンバイオティックなどの製品の使用については十分実証されている。例えば、プロバイオティックは、（ａ）抗生物質、ロタウイルス感染、化学療法に伴う下痢、及びより低い程度の旅行者の下痢の頻度及び持続期間を低下させること、（ｂ）細胞性免疫及び体液性免疫を刺激すること並びに（ｃ）アンモニウム及び発癌促進性の酵素など、大腸中の望ましくない代謝産物を減少させることが知られている。プロバイオティックは、癌防止において役割を有する可能性がある。Ｓｃｈｒｅｚｅｎｍｅｉｒ，Ｊ．ら、Ａｍ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｎｕｔｒ．、７３（付録）、３６１Ｓ〜３６４Ｓ、２００１を参照。本明細書中で使用する場合、用語「プロバイオティック」は、宿主の区画中の微生物叢を変化させ（植付け又はコロニー形成により）、それによりこの宿主において有益な効果を発揮する十分な数で生存可能な規定微生物を含有する調製物又は製品を指す。用語「プレバイオティック」は、１つ若しくは限定数の細菌の、大腸中での成長及び／又は活性を選択的に刺激することにより、宿主に有益に作用する非消化性の食品成分を指す。例えば、ビフィズス菌であれば、フルクトオリゴ糖、イヌリン、トランスガラクトシル化オリゴ糖及び大豆オリゴ糖などの物質の摂取により促進されると考えられる。製品がプロバイオティックとプレバイオティックとを含有する場合は、用語「シンバイオティック」を使用する。「シンバイオティック」という用語は相乗作用の意味を感じさせるので、プレバイオティック化合物がプロバイオティック化合物に選択的に有利に働く製品については、その用語の使用を控える。厳密に言うと、シンバイオティックは、オリゴフルクトースと、ビフィズス菌を増殖させるプロバイオティック菌とを含有する製品のことである。Ｓｃｈｒｅｚｅｎｍｅｉｒ，Ｊ．ら、２００１、上記を参照。
【００７２】
[0079]栄養化合物と共に用いるか否かに関わらず、キナーゼ阻害物質を使用すると、癌腫瘍の治療における化学療法剤の有効性は増強される。追加的な利点としては、筋肉減少、具体的には癌性悪液質を制御する代謝経路の栄養調節が挙げられる。
【００７３】
[0080]ＰＫＲ−Ｉの投与時には、二本鎖ＲＮＡタンパク質キナーゼをリン酸化すると、細胞（ＭＡＣ１６固形腫瘍）の成長は、化学療法剤（例えば、５−フルオロウラシル又はゲムシタビン）と組み合わせたほうが、いずれかを単独で使用した場合より有効に低下する結果となった。
【００７４】
[0081]加えて、ＰＫＲ阻害物質の投与は、炎症促進性サイトカインである核因子−κ−Ｂ（ＮＦ−κＢ）の活性型を減らすために用いてもよい。ＮＦ−κＢは、化学療法薬、例えばゲムシタビン（Ａｒｌｔ，Ａ．ら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、２２（２１）、３２４３〜３２５１、２００３）及び５−ＦＵ（Ｕｅｔｓｕｋａ，Ｈ．ら、Ｅｘｐ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ．、２８９（１）、２７〜３５、２００３）に対するある種の腫瘍細胞による抵抗性に関連があると考えられる。結果として、ＰＫＲ阻害物質の投与は、それが化学療法を増強する能力においては直接的又は間接的的であってもよい。前述の化学療法薬は両方とも、新生物の成長（例えば大腸癌）の治療において普通に使用される化合物である。
【００７５】
[0082]本発明者らは、ＰＫＲ阻害物質は極めて特定の濃度（最大効果は２００ｎＭにおいてであり、それより低濃度及びそれより高濃度では効果は低下する）で導入すると、癌細胞の成長を低下させることを示した。加えて、ＰＫＲを阻害すると、化学療法薬に暴露された癌細胞の増殖がさらに減少した。細胞の阻害は、いずれかの化合物単独の場合に観察される阻害と比較して相乗効果であったように思われる（図８を参照）。ＰＫＲ阻害物質化合物と構造的に無関係の特定の栄養化合物の投与によっても、癌細胞の成長は低下し癌性悪液質は防止されると考えられる。しかし、栄養化合物は、以前記載されたＰＫＲ阻害物質（複数可）化合物（Ｊａｍｍｉら、２００３）とは異なる機序により作用する。
【００７６】
[0083]化学療法による免疫抑制の栄養的緩和
免疫抑制を生じさせるいくつかの化学療法剤が知られており、２つの例として、５−フロウロウラシル及びゲムシタビンが挙げられる。
【００７７】
[0084]５−フロウロウラシル（５−ＦＵ）は、腸、胸、胃及び食道の癌などいくつかの型の癌の治療薬として提供される一般的な化学療法薬である。５−ＦＵの使用に伴う合併症は、感染症に対する抵抗性の低下である。５−ＦＵは、骨髄による白血球の産生を減少させ、患者の感染症へのかかりやすさを増す可能性がある。
【００７８】
[0085]ゲムシタビンは、非小細胞肺癌、膵臓癌、膀胱癌及び乳癌の治療薬として提供される化学療法薬である。ゲムシタビンも、骨髄による白血球の産生を減少させ、感染症に対する患者の感受性を高める可能性がある。免疫機能の顕著な低下は、典型的には治療薬投薬の７日後に始まり、感染症に対する抵抗性は、典型的には、化学療法の１０〜１４日後の間が最も低い。血球は、多くの場合、着実に増加し、化学療法の次回のコース予定の前に正常レベルに戻ることになる。
【００７９】
[0086]グルタミンは、免疫機能を支えることにより、化学療法を受けている患者に利益をもたらすと考えられる。栄養分と化学療法との相互作用は、これまでに提唱されている。抗酸化薬は、細胞内の薬物を早すぎる段階で分解することにより化学療法の有効性を低下させるが、このことは、健康な細胞には有益であるが腫瘍細胞中では望ましくない。アミノ酸のグルタミンは、細胞間の抗酸化薬グルタチオン（ＧＳＨ）の成分であることから、化学療法薬の分解を促進することがある（Ｒｏｕｓｅ，Ｋ．ら、Ａｎｎａｌｓ Ｓｕｒｇｅ．、２２１（４）、４２０〜４２６、１９９５）。したがって、アミノ酸のＬ−テアニンを用いての細胞によるグルタミンの取込み遮断が、ドキソルビシンの場合における化学療法を増強するための方法として提案されている（Ｓｕｇｉｙａｍａ，Ｔ．及びＡｄｚｕｋｉ，Ｙ．、Ｂｉｏｃｈｉｐ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔ、１６５３（２）、４７〜５９、２００３）。しかし、全ての調査がグルタミンに対するこの主張を支持するわけではない（Ｒｕｂｉｏ，Ｉ．Ｔ．ら、Ａｎｎ Ｓｕｒｇ．、２２７（５）、７７２〜７７８、１９９８）。ＧＳＨは、細胞を保護しようとして化学療法化合物の分解を促進することがあるが、グルタミンは適切な免疫細胞機能の重要な構成要素でもある。グルタミンの減少を示唆すると思われる証拠に関わらず、免疫機能の効果は患者の健康及び回復を損なうと考えられる。
【００８０】
[0087]免疫栄養：化学療法の有効性（ＰＫＲ阻害物質を用いた場合の）を誇示しようとすると、患者に対する感染症のリスクを高めがちである。感染症及び感染症リスクにより、首尾よい治療に必要な積極的な用量の化学療法を施したいという癌専門医の意向は低下するかもしれない。加えて、感染症は、患者の、強力な治療レジメンに耐える能力、並びに治療に関連する並存症又は外科手術の創傷からの回復／治癒をも損なう可能性がある。抗炎症性の脂肪酸（例えば、エイコサペンタン酸（ｅｉｃｏｓａｐｅｎｔａｎｏｉｃ ａｃｉｄ）及びドコサヘキサン酸）、アミノ酸Ｌ−アルギニン及びその前駆体、Ｌ−シトルリン及びリボ核酸などの成分入りの栄養分の補給は、Ｔ細胞の活性化、成熟、及び炎症低下により、免疫健康を促進できる。
【００８１】
[0088]生物活性乳由来タンパク質：生物活性乳由来タンパク質は、健康な細胞における細胞周期の各時期を減速又は一時的に停止させる生物活性ペプチド（例えば、形質転換成長因子−β（アイソフォーム１〜３）源を供給する。こうした生物活性タンパク質は、酸性化などの加工により活性化させる必要があることから、標準的な乳は適さない。乳由来のこうした生物活性タンパク質の投与により、口腔、食道及び胃腸の上皮などのタンパク質と接触する細胞が保護されると考えられる。生物活性ペプチドは、化学療法剤（ＰＫＲ阻害物質と共に使用するか否かを問わない）による損傷に対し急速に分裂する細胞の感受性を低下させることにより働く。
【００８２】
[0089]ヌクレオチド（例えばリボ核酸）：この化合物（例えば、アデニン、グアニン、シトシン）は、化学療法を受けている癌患者、特に、化学療法レジメンがＰＫＲ阻害物質（複数可）などの増強物質と組み合わせて提供される場合に免疫系を支えると考えられる。ヌクレオチドは、赤血球及びＴ細胞（免疫細胞）の両方の成熟を包含する、骨髄の造血活動及びその産生物を支える。加えて、ヌクレオチドは、薬剤の吸収を促進する可能性について調査されていることから、ヌクレオチドの栄養補給は、腫瘍細胞による化学療法剤の取込みを増やし免疫機能を支える点で有益なことと考えられる。
【００８３】
[0090]血管新生及び血管拡張する栄養分：血管新生及び血流を促進する栄養分も、代謝活性組織への化学療法剤の送達を増やす。アミノ酸Ｌ−アルギニン及び／又はＬ−シトルリン並びにカテキンフラバノール化合物（癌の化学予防剤と見なされる）の栄養投与は、癌患者においては推奨されないが、その理由は、こうした化合物は血管新生、急速な成長を伴う浸潤性腫瘍の特性を促進する可能性があるからである。しかし、特異的に腫瘍への血液送達が増えれば、細胞傷害性の化学療法剤の取込みも増すと考えられる。
【００８４】
[0091]癌性悪液質の軽減に向けたＰＫＲ阻害物質の投与（特定の栄養分と併用するか否かを問わない）。
癌性悪液質、心臓の悪液質、及び恐らくは、筋肉減少症、ＨＩＶ／ＡＩＤＳなど他の疾患における筋タンパク質減少は、サブユニットの結合、及び／又はプロテオソーム産生の上方制御により制御される。この過程における段階の１つには、真核開始因子２−α（ｅＩＦ２ａ）の活性化が含まれる。リン酸化を介したｅＩＦ２ａの活性化により、プロテオソームのタンパク質分解が促進される。ＰＫＲ阻害物質を投与すると、ｅＩＦ２ａ分子の活性化（リン酸化）が減少し、それによりプロテオソームの活性化が低下し、筋タンパク質の分解が低下する。
【００８５】
[0092]化学療法の強度を高め、ＰＫＲ阻害物質の投与（追加的な栄養分と共に投与するか否かを問わない）により癌性悪液質の過程を阻害すると、腫瘍細胞に及ぶ化学療法薬の効果を高めることが示されている。本発明の利点は、臨床関連の効果を引き出すのに必要な時間の長さ又は用量数を低減できることである。ＰＫＲを阻害する化合物を評価するための調査は以前行われたが、ＰＫＲを阻害すれば癌治療の利益が得られることは、これまでに実証されていない。追加的な利益は、ＰＫＲ阻害物質、及びアミノ酸、脂肪酸、核酸など、化学療法をさらに増強し、毒性を伴う療法を軽減するための特定の栄養化合物を投与する場合にも得ることができる。
【００８６】
[0093]ＰＫＲ阻害物質は、癌性悪液質、及び療法に対する腫瘍抵抗性に関与するＰＫＲのリン酸化を遮断する。本発明者らの結果から、癌療法におけるこのような化合物の心躍る可能性が実証される。加えて、ＰＫＲのリン酸化を低下させるために別々のタンパク質（ＰＰＩ）又はＰＫＲに直接作用する特定の栄養分の使用により、そのような栄養分が癌治療において補助治療剤としての可能性を有することも示唆される。医薬用の化合物と比較した場合の栄養分（アミノ酸、ポリフェノール類）の利点は以下のとおりである：代替性のある作用機序、価格、安全性、及び代替性のある小売販路による入手しやすさ。
【００８７】
[0094]本明細書中で使用する場合、用語「活性剤」、「活性成分」、「活性化合物」又は場合により「化合物」の意味は、同等であると理解されたい。
【００８８】
[0095]用語「ＰＫＲの生物活性」及び「生物学的に活性のあるＰＫＲ」は、ＰＫＲ、又はＰＫＲの断片、誘導体若しくは類似体に付随する任意の生物活性（酵素活性など）を指し、具体的には、真核翻訳開始因子２（ｅｌＦ−２）などの基質、及びＮＦ−κＢなどの転写因子のリン酸化を含む自己リン酸化活性及びキナーゼ活性が挙げられることになる。
【００８９】
[0096]「ｅｘ ｖｉｖｏ」とは、生物の体の外側であって、そこから細胞若しくは複数の細胞が得られるか、又はそこから細胞系統が単離される場所を意味する。ｅｘ ｖｉｖｏ施用は、完全な細胞の使用を含んでもよく、又は溶菌液などの無細胞系（すなわち、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの）を用いてもよい。
【００９０】
[0097]「ｉｎ ｖｉｖｏ」とは、生物の体内であって、そこから細胞が得られたか、又はそこから細胞系統が単離される場所を意味する。
【００９１】
[0098]「ヒト細胞」とは、発達の任意の段階でヒトから単離される細胞を意味する。
【００９２】
[0099]「患者又は対象」とは、任意の動物を意味する。
【００９３】
[00100]動物としては鳥類及び哺乳動物が挙げられるがこれらに限定されず、哺乳動物としては、齧歯動物（ネズミ科の動物）、水棲哺乳動物、イヌ、オオカミ、ウサギ及びネコなどの飼育動物、ヒツジ、ブタ、ウシ、ヤギ（ヒルクリン（ｈｉｒｃｒｉｎｅ）及びウマなどの家畜、並びにヒトが挙げられるが、これらに限定されない。動物又は哺乳動物又はその複数形の用語を使用する場合、その内容が、一節の文脈により表され又は表されることを意図した効果を得ることができる任意の動物にも適用されることを企図している。本発明の方法、組成物及びキットを用いて治療できる他の動物としては、トカゲ、ヘビ、魚及び鳥が挙げられる。
【００９４】
[00101]「哺乳動物」とは以下を意味するが、これらに限定されない：齧歯動物（ネズミ科の動物）、水棲哺乳動物、イヌ、オオカミ、ウサギ及びネコなどの飼育動物、ヒツジ、ブタ、ウシ、ヤギ（ヒルクリン）及びウマなどの家畜、並びにヒト。哺乳動物という用語を使用する場合、その内容が、「哺乳動物」により表され又は表されることを意図した効果を得ることができる他の動物にも適用されることを企図している。
【００９５】
[00102]用語「残基」又は「アミノ酸残基」又は「アミノ酸」は、本明細書中で使用する場合、タンパク質、ポリペプチド又はペプチド（集合的には「ペプチド」）中に組み込まれるアミノ酸を指す。アミノ酸は、天然に存在するアミノ酸であってもよく、特に限定しない限り、天然に存在するアミノ酸と同様の様式で機能できる天然のアミノ酸の公知の類似体を包含することがある。
【００９６】
[00103]用語「癌」は、多様な型の悪性の新生物を指し、その大部分は周囲組織に浸潤でき、異なる部位に転移することがある（ＰＤＲ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ第１版（１９９５））。
【００９７】
[00104]用語「新生物」及び「腫瘍」は、細胞増殖により正常なものと比較して急速に成長し、増殖を開始させた刺激を取り除いた後も成長し続ける異常な組織を指す（ＰＤＲ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ第１版（１９９５））。そのような異常な組織は、構造機構の、及び正常な組織との機能的な協調の部分的又は完全な欠如を示し、良性（すなわち良性腫瘍）又は悪性（すなわち悪性腫瘍）のいずれであってもよい。
【００９８】
[00105]「異常な細胞増殖に伴う障害を治療する」という言い回しは、対象における新生物の成長の防止、又は対象における既存の新生物の成長の低下を包含することを意図したものである。阻害は、１つの部位から別の部位への新生物の転移の阻害であってもよい。一態様では、新生物は、本明細書中に記載の１つ又は複数の翻訳開始阻害物質に感受性がある。本発明が包含することを意図する新生物の型の例としては、胸部、皮膚、骨（骨髄及び造血組織を含む）、前立腺、卵巣、子宮、子宮頸部、肝臓、肺、脳、喉頭、胆嚢、膵臓、直腸、副甲状腺、甲状腺、副腎、免疫系、神経組織、頭部及び頸部、大腸、胃、気管支及び／又は腎臓の癌に関連するような新生物が挙げられるが、これらに限定されない。
【００９９】
[00106]本明細書中で使用する場合、「テスト試料」は、関心対象から得た生体試料を指す。例えば、テスト試料は、生体液試料（例えば、血清、痰、尿）、組織試料（例えば生検）又は細胞試料（例えば、頬擦過）であってもよい。本明細書中で使用する場合、「正常試料」又は「標準試料」は、健康な（すなわち非悪性の）生体液試料、組織試料又は細胞試料から得た生体試料を指す。本明細書中で使用する場合、用語「生体試料」は、対象から単離された組織、細胞及び生体液、並びに対象において存在する組織、細胞及び体液を包含することを意図したものである。生体試料は、任意の生体組織又は体液又は細胞のものであってもよい。典型的な生体試料としては、痰、リンパ液、血液、血球（例えば白血球）、脂肪細胞、子宮頸部細胞、頬細胞、咽頭細胞、乳房細胞、筋細胞、皮膚細胞、肝細胞、脊髄細胞、骨髄細胞、組織（例えば、筋組織、子宮頸部組織、皮膚組織、脊髄組織、肝組織など）、細針生検試料、尿、脳脊髄液、腹水及び胸水、又はそれらから得られた細胞が挙げられるが、これらに限定されない。生体試料は、組織学的な目的のために採取した凍結切片などの組織片を包含することもある。生体試料は哺乳動物から得てもよく、哺乳動物としては、ウマ、ウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウサギ、モルモット、ラット、マウス、スナネズミ、非ヒト霊長動物及びヒトが挙げられるが、これらに限定されない。生体試料は、微生物（例えば、細菌細胞、ウイルス性細胞、酵母細胞など）由来の細胞及びその一部を包含することもある。
【０１００】
[00107]ＭＡＣ１６腫瘍は、確立されたシリーズ（ＭＡＣ）の、化学的に誘導され移植可能な大腸腺癌に由来し、１９８９年３月８日付でＰｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｅｒｖｉｃｅ Ｃｅｎｔｒｅ ｆｏｒ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ ＲｅｓｅａｒｃｈのＥｕｒｏｐｅａｎ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ａｎｉｍａｌ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ＥＣＡＣＣ）、Ｐｏｒｔｏｎ Ｄｏｗｎ、Ｓａｌｉｓｂｕｒｙ、Ｗｉｌｔｓｈｉｒｅ、英国に仮受託番号８９０３０１６として現時点で寄託されている特定の細胞株により作製されている。
【０１０１】
[00108]ＭＡＣ１６腫瘍は、中程度に高分化の腺癌であり、マウスにおいて何年にもわたり連続継代されてきたものである。この腫瘍は、特に、少ない腫瘍量で（１％体重未満）、食物又は水のいずれの摂取も減らさずに相当な体重減少を生じることがよく見られた限りでは、ヒト患者において悪液質を引き起こす腫瘍についてのより満足な実験モデルとなりそうなことが見出されている。
【０１０２】
[00109]医薬組成物
本明細書中に記載の本発明の化合物又は薬剤は、例えば、ｅＩＦ２α又はＰＫＲリン酸化の阻害により、ｅＩＦ２α若しくはＰＫＲリン酸化に影響するか、又はｅＩＦ２α若しくはＰＫＲリン酸化に影響する化合物又は薬剤を増強する化合物又は薬剤である。本発明の化合物又は薬剤は、投与に適した医薬組成物中に組み込むことができる。
【０１０３】
[00110]少なくとも１つのＰＫＲ−Ｉ阻害物質、少なくとも１つのＰＫＲ−Ｉリン酸化阻害物質及び／又はＰＫＲ−Ｉ増強物質を包含する本発明の化合物は、経腸的又は非経口的に投与してもよい。非経口投与は、皮下投与、静脈内投与、筋肉内投与及び局所投与から成る群から選択してもよい。経腸投与は、錠剤、液体、ゲル、サシェ、粉末、ドロップ、フィルム、ガム及びカプセルの形態で行ってもよい。加えて、経腸投与法の経路は、鼻腔内、内部、経鼻胃、経口胃、胃ポート、空腸ポート及び回腸ポートから成る群から選択してもよい。
[00111]本発明の化合物は、前述の化合物（複数可）及び薬学上許容される担体を典型的に含んでもよい。本明細書中で使用する場合、用語「薬学上許容される担体」は、ありとあらゆる溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤及び吸収遅延剤など、医薬の投与に適合するものを包含することを意図したものである。薬学的活性のある物質用にそのような媒体及び薬剤を使用することは、当技術分野では周知である。従来の任意の媒体又は薬剤が活性剤に適合しない場合を除き、組成物中でのその使用を企図する。本発明の組成物中に栄養補給剤を組み込むこともできる。
【０１０４】
[00112]本発明の医薬組成物は、意図された投与経路に適合するように製剤される。例えば、非経口、皮内又は皮下の施用に使用される溶液又は懸濁液としては、以下の成分を挙げることができる：注射用水、生理食塩溶液、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール又は他の合成溶媒などの滅菌済み希釈剤；ベンジルアルコール又はメチルパラベンなどの抗菌剤；アスコルビン酸又は亜硫酸水素ナトリウムなどの抗酸化薬；エチレンジアミン四酢酸などのキレート化剤；酢酸塩、クエン酸塩又はリン酸塩などの緩衝液、及び塩化ナトリウム又はデキストロースなど張性調節用の薬剤。ｐＨは、塩酸又は水酸化ナトリウムなどの酸又は塩基で調節できる。非経口調製物は、ガラス製又はプラスチック製のアンプル、使い捨ての注射器又は複数用量バイアル中に封入できる。
【０１０５】
[00113]注射剤の用途に適した医薬組成物としては、滅菌済みの水溶液（水溶性の場合）又は分散系、及び滅菌済みの注射溶液又は分散系を即席で調製するための滅菌済み粉末が挙げられる。静脈内投与の場合、適当な担体としては、生理食塩水、静菌水、クレモホル（Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ）ＥＬ（商標）（ＢＡＳＦ、Ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ、Ｎ．Ｊ．）又はリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が挙げられる。全ての場合において、組成物は滅菌済みでなくてはならず、容易な注射可能性が存在する程度まで流動性のあるものであるべきである。組成物は、製造条件及び保管条件下で安定でなくてはならず、細菌及び真菌などの微生物が混入しようとする動きに対して保護されなくてはならない。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール及び液体ポリエテイレン（ｐｏｌｙｅｔｈｅｙｌｅｎｅ）グリコールなど）を含有する溶媒又は分散媒、並びにその適当な混合物であってもよい。妥当な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用、分散系の場合における必要な粒子サイズの維持及び界面活性剤の使用により維持できる。微生物の作用の防止は、多様な抗菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどにより達成できる。多くの場合、組成物中に、等張剤、例えば、糖、マニトール（ｍａｎｉｔｏｌ）、ソルビトールなどのポリアルコール、塩化ナトリウムが含まれることが好ましいと考えられる。注射用組成物の持続的吸収は、吸収を遅らせる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンを組成物中に含ませることにより実現できる。
【０１０６】
[00114]滅菌済みの注射用溶液は、適切な溶媒中に、必要に応じ、上に列挙した１つの成分又は複数成分の組合せと共に、必要な量で活性剤を組み込み、次いで濾過滅菌を行うことにより調製できる。一般に、分散系は、基礎分散媒と、上に列挙したもののうち必要な他の成分とを含有する滅菌済みのビヒクル中に活性剤を組み込むことにより調製する。滅菌済みの注射用溶液を調製するための滅菌済み粉末の場合、好ましい調製方法は真空乾燥及び凍結乾燥であり、こうした方法を用いると、先に滅菌濾過しておいた溶液から、活性成分に所望の任意の追加成分が加わった粉末が得られる。
【０１０７】
[00115]経口組成物は、一般に、不活性な希釈剤又は食用担体を含んでいる。こうした組成物は、ゼラチンカプセル内に封入するか、又は圧縮して錠剤にすることができる。経口での治療的投与の目的のために、活性剤は、賦形剤と共に組み込み、錠剤、トローチ又はカプセルの形態で使用することができる。経口組成物は、洗口液として使用するために液体担体を用いて調製することもでき、こうした洗口液では、液体担体中の薬剤を経口施用し激しく動かしてから吐き出し又は飲み込む。薬学的に適合する結合剤及び／又は補助物質を組成物の一部として含ませることができる。錠剤、丸剤、カプセル、トローチなどは、以下の原料又は同様の性質の薬剤のいずれかを含有できる：微結晶性セルロース、トラガカントゴム又はゼラチンなどの結合剤；デンプン又は乳糖などの賦形剤、アルギン酸、プリモゲル（Ｐｒｉｍｏｇｅｌ）又はトウモロコシデンプンなどの崩壊剤；ステアリン酸マグネシウム又はステローツ（Ｓｔｅｒｏｔｅｓ）などの滑沢剤；コロイド状二酸化ケイ素などの流動促進剤；ショ糖又はサッカリンなどの甘味剤；又はペパーミント、サリチル酸メチル若しくはオレンジ香味料などの香味剤。
【０１０８】
[00116]一実施形態では、本発明の化合物は、制御放出製剤（インプラント及びマイクロカプセル化した送達系を含む）など、体からの急速な排出に対し薬剤を保護することになる担体を用いて調製する。酢酸エチレンビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル及びポリ乳酸など、生分解性の生体適合性ポリマーを使用できる。そのような製剤の調製方法は、当業者には自明であろう。材料は、Ａｌｚａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ及びＮｏｖａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．から商業的に入手することもできる。リポソーム懸濁液（ウイルス抗原に対するモノクローナル抗体を有する、感染細胞を標的としたリポソームを含んでいる）を薬学上許容される担体として使用することもできる。こうした製剤は、当業者に公知の方法、例えば、米国特許第４，５２２，８１１号明細書に記載のような方法により調製してもよく、同文献は参照によりその全体が本明細書中に組み込まれる。
【０１０９】
[00117]栄養組成物
化学療法及び放射線療法は、癌細胞を破壊するうえで有効なだけでなく、こうした細胞の成熟前の死亡を引き起こすことから非癌細胞にとっても有害である。加えて、本発明の化合物は、ＰＫＲのリン酸化を阻害することにより腫瘍細胞の成長を阻害できるだけでなく、癌患者において化学療法剤の有効性を高めることもできる。これまでに論じたように、本発明の化合物は、少なくとも１つのＰＫＲＩを、単独又は少なくとも１つの増強物質との組合せのいずれかで含んでいる。医薬目的で製剤される以外に、こうした化合物は、これまでに論じたように、所望の目的を達成するために栄養製品として製剤できる。
【０１１０】
[00118]本発明による栄養組成物は、食餌の手段、例えば、栄養補助食品の形態、又は栄養製剤、例えば、医療用の食品又は飲料製品の形態、例えば、完全食の形態、食品添加物又は溶解用粉末として食事の一部の形態をとっていてもよい。粉末は、液体、例えば、水又は乳若しくはフルーツジュースなど他の液体と組み合わせてもよい。
【０１１１】
[00119]場合により、栄養製剤は、本発明の化合物を含んでいるだけでなく、栄養的に完全であってもよく、すなわち、１日に必要な量のビタミン、ミネラル、炭水化物、脂肪及び／又は脂肪酸、タンパク質などを本質的に全て供給する単一の栄養源として使用できるように、ミネラル、ビタミン、微量元素及び脂肪及び／又は脂肪酸源を含んでいてもよい。
【０１１２】
[00120]したがって、本発明の栄養組成物は、例えば、経口又は経管栄養補給に適した栄養的にバランスのとれた完全食の形態で、例えば、経鼻胃、経鼻十二指腸、食道瘻造設術、胃瘻造設術又は空腸瘻造設術による管、又は末梢若しくは全身用の非経口栄養を用いて供給してもよい。好ましくは、本発明の組成物は、経口投与用である。
【０１１３】
[00121]本発明の栄養組成物は、筋タンパク質合成の促進、又は悪液質（例えば癌性悪液質）など腫瘍により引き起こされる体重減少の制御に有用と考えられる。この組成物は、化学療法剤を使用する自己免疫疾患又は他の障害に罹患している患者のための栄養補助食品としても有用と考えられる。
【０１１４】
[00122]本発明の一特徴では、栄養組成物は以下をさらに含んでいてもよいが、これらに限定されない：生物活性タンパク質、分枝鎖アミノ酸、必須アミノ酸、アミノ酸又はアミノ酸類似体、ヌクレオチド又はＲＮＡ、ビタミン、グルタミン、シアル酸オリゴ糖、Ｌ−テアニン、プレバイオティック、プロバイオティック又はシンバイオティック、必須脂肪酸、ＰＵＦＡ及び／又はＭＵＦＡ、食用油及び抗酸化物質。
【０１１５】
[00123]食用油は、本発明の栄養組成物の調製において使用してもよい。食用油としては、キャノーラ油、中鎖トリグリセリド油（ＭＣＴ）、魚油、大豆油、大豆レシチン油、トウモロコシ油、ベニバナ油、ヒマワリ油、高オレイン酸ヒマワリ油、高オレイン酸ベニバナ油、オリーブ油、ルリヂサ油、クロスグリ油、月見草油及び亜麻仁油が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１１６】
[00124]本発明の栄養組成物は、例えば、寒天、アルギン酸塩、カルビン、ペクチン及びその誘導体（例えば、果物及び野菜に由来するペクチン、並びにより好ましくは柑橘類の果物及びリンゴに由来するペクチン）、β−グルカン（オーツ麦のβ−グルカンなど）、カラギーナン（例えば、κ、λ及びιカラギーナン）、フルセララン、イヌリン、アラビノガラクタン、セルロース及びその誘導体、スクレログルカン、オオバコ（オオバコの種子殻など）、粘液及びゴムといった可溶性繊維をさらに含んでいてもよい。本発明によれば、ゴム及び粘液は、好ましくは植物の浸出物である。とりわけ、用語「ゴム」は、本明細書中で使用する場合、普通に入手できる植物性のゴム、より詳細には、コンニャクゴム、キサンタンゴム、グアーゴム（グアランゴム）、イナゴマメゴム、タラマメゴム、トラガカントゴム、アラビアゴム、カラヤゴム、ガッティゴム、ジェランゴム及び他の関連するステルクリアゴム、アルファルファ、クローバー、コロハ、タマリンドの細粉を指す。天然及び改変された（例えば加水分解された）可溶性繊維を、本発明により使用してもよい。本発明によれば、好ましくはグアーゴム（例えば加水分解グアーゴム）を使用してもよい。
【０１１７】
[00125]これまでに述べた任意選択的な栄養分の毎日の投与量は、個体の体重、性別、年齢及び／又は病態により変化させてもよい。
【０１１８】
[00126]本発明の栄養組成物は、１つ又は複数の脂肪酸（例えば多価不飽和脂肪酸）、プレバイオティック又はプロバイオティック、又はプレバイオティックとプロバイオティックとの組合せ（シンバイオティック）及び生物活性のある化合物又は抽出物を含んでいてもよい。
【０１１９】
[00127]この栄養組成物は、ビタミン及びミネラルについては、１日用量当たり、米国ＲＤＡの少なくとも１００％（例えば１００％）の、例えば、カルシウム、マグネシウム、鉄、亜鉛、リン、ビタミンＤ、ビタミンＫを供給してもよい。この組成物は、抗酸化物質を含有してもよく、こうした物質としてはグルタミン、システイン、ビタミンＡ、Ｃ、Ｅ及びセレンが挙げられるが、これらに限定されない。この組成物は、とりわけ、大量のビタミンＥを含有してもよく、ビタミンＥは、筋タンパク質合成の促進又は悪液質（例えば癌性悪液質）など腫瘍により引き起こされる体重減少の制御のために、組成物中で有用である。
【０１２０】
[00128]本発明による栄養組成物は、医療用の食品又は飲料製品として（例えば経口栄養の形態で）、例えば健康飲料として、そのまま飲める飲料として、場合により清涼飲料（ジュース、ミルクセーキ、ヨーグルト飲料、スムージー又は大豆ベース飲料など）として、バーに入った形で、又は焼いた製品、シリアルバー、乳製品のバー、スナックフード、スープ、朝食用シリアル、ミューズリー、キャンディー、タブ、クッキー、ビスケット、クラッカー（煎餅など）及び乳製品など任意の種類の食品中に分散した形で提供されてもよい。
【０１２１】
[00129]好ましくは、本発明の組成物は、栄養製剤として、例えば、食事の一部として、例えば健康飲料の形態で、例えば即時使用可能な飲料として、投与してもよい。
【０１２２】
[00130]経口用の固形剤形は、それ自体が公知の様式で、例えば、従来の混合、造粒、糖衣加工、溶解又は凍結乾燥のプロセスを用いて調製する。
【０１２３】
[00131]本明細書中で言及又は引用した論文、特許及び特許出願及び他の全ての文書並びに電子的に入手可能な情報の内容は、それぞれ個々の刊行物が参照により組み組まれるものと具体的且つ個別に指示がある場合と同程度に、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。出願人は、そのような任意の論文、特許、特許出願又は他の文書からのありとあらゆる資料及び情報を本明細書中に物理的に組み込む権利を留保する。
【０１２４】
[00132]本明細書中に例証的に記載された本発明は、本明細書中で具体的に開示されない、１つ又は複数の要素、１つ又は複数の制限が一切なくても適切に実行される場合がある。したがって、例えば、用語「含む」、「包含する」、「含有する」などは、拡張的に、制限を加えずに読まれるべきである。加えて、本明細書中で用いる用語及び表現は、制限ではなく説明の用語として用いてあり、そのような用語及び表現の使用においては、示し説明した特徴又はその部分に相当するもの一切を除外する意図はなく、特許請求した本発明の範囲内で多様な改変形が可能であることは認識される。したがって、本発明は好ましい実施形態及び任意選択的な特徴により具体的に開示してはあるものの、本明細書中に開示された当該箇所中に包含される本発明の改変及び変形が当業者により用いられることがあり、そのような改変形及び変形は本発明の範囲内にあると見なされることは理解されるべきである。
【０１２５】
[00133]本発明は、本明細書中で広く包括的に説明してある。包括的な開示内に属する、より狭い種、及び類の下位に当たる分類のそれぞれも、本発明の一部を形成する。本明細書は、類から任意の対象を除外する条件又は消極的限定を有する本発明の包括的な説明を包含し、除かれる構成要素が本明細書中で具体的に列挙されているか否かを問わない。
【０１２６】
[00134]加えて、本発明の特徴又は態様がマーカッシュ群について説明されている箇所では、本発明がそれによりマーカッシュ群の任意の個々の構成要素又は構成要素の下位群についても説明していることが当業者には認識されるであろう。
【実施例】
【０１２７】
[00135]以下の実施例中で、本開示をさらに明確にする。この実施例は、好ましい実施形態を示してはいるものの、例証目的のみで記載するものであることは理解されるべきである。前述の論考及びこの実施例から、当業者は本開示の好ましい特徴を確認でき、本開示の精神及び範囲から逸脱することなく、多様な変更及び改変を行って、同開示を多様な用途及び条件に適合させることができる。
【０１２８】
[00136]材料：
ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）及びＲＰＭＩ１６４０組織培養培地をＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｐａｉｓｌｅｙ、スコットランド）から購入した。Ｌ−［２，６−３Ｈ］フェニルアラニン（比活性度２．００ＴＢｑｍｍｏｌ−１）、ハイボンド（Ｈｙｂｏｎｄ）Ａニトロセルロース膜及び増強化学発光（ＥＣＬ）発生キットは、Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｂｕｃｋｓ、ＵＫ）製であった。リン酸化ＰＫＲ及び全ＰＫＲに対するウサギモノクローナル抗体は、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｂｉｏｌａｂｓ（Ｈｅｒｔｓ、ＵＫ）から購入した。リン酸ｅＩＦ２αに対するウサギポリクローナル抗血清は、Ａｂｃａｍ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＵＫ）製、全ｅＩＦ２αに対するウサギポリクローナル抗血清はＳａｎｔａ Ｃｒｕｚ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＣＡ）製であった。ペルオキシダーゼ結合ヤギ抗ウサギ抗体は、Ｄａｋｏ Ｌｔｄ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＵＫ）から購入した。ＰＫＲ阻害物質及びホスホセーフ（ＰｈｏｓｐｈｏＳａｆｅ）（商標）抽出試薬はＭｅｒｃｋ Ｅｕｒｏｌａｂ Ｌｔｄ（Ｌｅｉｃｓ、ＵＫ）製であった。ＥＭＳＡ（電気泳動移動度シフトアッセイ）のゲルシフトアッセイキットは、Ｐａｎｏｍｉｃｓ（ＣＡ、ＵＳＡ）製であった。ゲムシタビン（ゲムザール（Ｇｅｍｚａｒ）（登録商標））は、Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ ａｎｄ Ｃｏ（Ｂａｓｉｎｇｓｔｏｋｅ、ＵＫ）からの寄贈品であった。５−フルロウラシル（Ｆｌｕｒｏｕｒａｃｉｌ）は、Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｄｇｅ（Ｄｏｒｓｅｔ、ＵＫ）から購入した。
【０１２９】
[00137]腫瘍の維持
ＭＡＣ１６は、Ｃｏｗｅｎら（Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．、６４、６７５〜６８１、１９８０）により最初に記載されたものであり、確立されたシリーズ（ＭＡＣ）の、化学的に誘導された移植可能な大腸腺癌を保有する純粋なＮＭＲＩマウス系である。ＭＡＣ１６腫瘍は、中程度に高分化の腺癌であり、マウスにおいて何年にもわたり連続継代されてきたものである。ＭＡＣ１６は、特に、少ない腫瘍量（１％体重未満）で、食物又は水のいずれの摂取も減らさずに相当な体重減少を生じさせることがよく見られた限りでは、ヒト患者において悪液質を引き起こす腫瘍についてのより満足な実験モデルとなる（Ｂｉｂｂｙ，Ｍ．Ｃ．ら、Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．、７８、５３９〜５４６、１９８７）。
【０１３０】
[00138]ＭＡＣ１６腫瘍及びＭＡＣ１３腫瘍は、１０％ＦＣＳを含有するＲＰＭＩ１６４０培地中で、空気中５％ＣＯ２の雰囲気下で３７℃にてｉｎ ｖｉｔｒｏ増殖させた。細胞成長アッセイ用に、１ウェル当たり０．５×１０５細胞（ＭＡＣ１３）又は１ウェル当たり１×１０５細胞（ＭＡＣ１６）のいずれかで２４ウェルのマルチウェルの皿の中に細胞を播種し、薬物の添加に先立ち２４時間蓄積させた。細胞数を３日後に定量したところ、細胞は指数関数的に成長していた。
【０１３１】
[00139]ＭＡＣ１６腫瘍及びＭＡＣ１３腫瘍は両方とも、Ｂｉｂｂｙら、Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．、７８（３）、５３９〜５４６、１９８７に記載の要領で、断片を側腹部中に皮下移植（皮下注射）することによりＮＭＲＩマウスにおいてｉｎ ｖｉｖｏ継代させた。悪液質を維持するため、体重減少が確認されたドナー動物から継代用のＭＡＣ１６腫瘍を選別し、平均体重減少が５％の時点で処置を開始した。動物を無作為に６匹の群とし、溶媒（ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）：ＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）が１：２０）又は１ｍｇ／ｋｇ及び５ｍｇ／ｋｇのＰＫＲ阻害物質を皮下注射により毎日投与した。体重減少が２０％に達した時点で、子宮頸部の除去により動物を屠殺した。全ての動物実験は英国内務省に認可された厳密なプロトコールに従っており、従った倫理的ガイドラインは、ＵＫＣＣＲガイドライン（Ｗｏｒｋｍａｎ，Ｐ．ら、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、７７、１〜１０、１９９８）に要求される基準を満たす。
【０１３２】
[00140]タンパク質合成の測定
Ｅｌｅｙ，Ｈ．Ｌ．及びＴｉｓｄａｌｅ，Ｍ．Ｊ．、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２８２（１０）、７０８７〜７０９７、２００７に記載の要領で、Ｌ−［２，６−３Ｈ］フェニルアラニンをタンパク質中に組み込むことにより、ＭＡＣ１６細胞及びＭＡＣ１３細胞におけるタンパク質合成を４時間の期間にわたり定量した。組織培養培地の除去により反応を終わらせ、氷冷の滅菌済みＰＢＳで３回洗浄した。ＰＢＳを除去し、氷冷の０．２Ｍ過塩素酸を加え、次いで４℃で２０分間インキュベーションした。過塩素酸の除去に次いで、０．３Ｍ ＮａＯＨを加えてから、次いで４℃で３０分間インキュベーションした。３７℃で２０分間のさらなるインキュベーションにより反応を進行させてから、０．２Ｍ過塩素酸を加えた。この混合物をさらに２０分間氷上に放置した。４℃で５分間の７００ｇでの遠心分離に次いで、タンパク質を含有するペレットを０．３Ｍ ＮａＯＨ中で溶解させ、放射能を定量した。標準的な比色定量タンパク質アッセイ（Ｓｉｇｍａ）を用いて、タンパク質含有量を分析した。
【０１３３】
[00141]ウェスタンブロット分析
腫瘍の試料（およそ１０ｍｇ）は、ホスホセーフ（商標）抽出試薬５００μｌ中でホモジナイズし、４℃で１５分間、１５，０００ｇで遠心分離した。細胞質タンパク質の一部（１０μｇ）を１０％ドデシル硫酸ナトリウム／ポリアクリルアミドゲル（ＳＤＳ／ＰＡＧＥはｅＩＦ２αの場合６％）上で分離させた。分離したタンパク質を、０．４５μｍのニトロセルロース膜上に転写した後、ｐＨ７．５、４℃のトリス緩衝生理食塩水中の５％マーヴェル（Ｍａｒｖｅｌ）で一晩ブロッキングした。次に、一次抗体の添加に先立ち、０．５％ツィーン（Ｔｗｅｅｎ）緩衝生理食塩水又はＴＢＳツィーン中で膜を１５分間洗浄した。希釈率１：１０００で一次抗体を使用したが、リン酸ｅＩＦ２αは例外で、１：５００で使用した。緩衝液を５分毎に交換しながら、一次抗体を１５分間、０．１％ＴＢＳツィーンを用いて膜から洗い落とした。希釈率１：１０００で二次抗体を使用し、４５分後に洗い落とした。現像はＥＣＬにより行い、３〜６分間フィルムを現像した。濃度計によりブロットを走査して、差を定量化した。
【０１３４】
[00142]電気泳動移動度シフトアッセイ（ＥＭＳＡ）
ＤＮＡ結合タンパク質を低張溶解により腫瘍試料から単離し、次いで、Ａｎｄｒｅｗｓ及びＦａｌｌｅｒの方法により核の高塩抽出を行った（Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．、１９（９）、２４９９、１９９１）。Ｐａｎｏｍｉｃｓ ＥＭＳＡ「ゲルシフト」キットを使用し、製造者による取扱い説明に従ってＥＭＳＡを実施した。
【０１３５】
[00143]統計分析
少なくとも３回の反復実験について、平均値±ＳＥＭで結果を表す。一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）により群間の平均値の差を定量し、次いで、Ｔｕｋｅｙ−Ｋｒａｍｅｒ多重比較検定を行った。０．０５未満のＰ値を有意と見なした。
【０１３６】
[00144]結果
癌患者においては、体重減少は、生存時間短期化の独立した予測因子であるだけでなく、治療への応答も低下させ、同時に、治療に由来する毒性があることを予測させるものでもある（Ｒｏｓｓ，Ｐ．Ｊ．ら、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、９０（１０）、１９０５〜１９１１、２００４）。体重減少は、サイトカイン、並びにタンパク質分解誘導因子（ＰＩＦ）及び脂質動員因子（ＬＭＦ）などの腫瘍因子により誘導される骨格筋及び脂肪組織の進行性萎縮によるものである（Ｔｉｓｄａｌｅ，Ｍ．Ｊ．、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｌｉｎ．Ｎｕｔｒ．Ｍｅｔａｂ．Ｃａｒｅ、５（４）、４０１〜４０５、２００２）。そのような因子は、宿主の組織中だけでなく、原発腫瘍及び転移において代謝に影響することがある。したがって、ＬＭＦは、腫瘍中の、フリーラジカルの解毒に関与していると考えられる脱共役タンパク質（ＵＣＰ）２の発現を誘導し、このタンパク質が、フリーラジカルによる損傷を生じさせる細胞傷害薬から腫瘍細胞を保護する（Ｓａｎｄｅｒｓ，Ｐ．Ｍ．及びＴｉｓｄａｌｅ，Ｍ．Ｊ．、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、９０（６）、１２７４〜１２７８、２００４）。乳癌細胞中のＰＩＦコアペプチドであるデルミシジン（ｄｅｒｍｉｃｉｄｉｎ）の発現は、細胞の成長及び生存を促進し、血清依存性を低下させる（Ｐｏｒｔｅｒ，Ｄ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１００、１０９３１〜１０９３６、２００３）。ＰＩＦは、自己リン酸化による二本鎖ＲＮＡ依存性タンパク質キナーゼＰＫＲの活性化が関与する機序により、転写因子である核因子−κＢ（ＮＦ−κＢ）の活性化を通じて筋萎縮を促進することが示されている（Ｅｌｅｙ及びＴｉｓｄａｌｅ、２００７）。悪液質誘導性のＭＡＣ１６腫瘍を保有するマウスにおいて低分子量のＰＫＲ阻害物質を使用する最近の研究（Ｅｌｅｙら、２００７）により、ＰＫＲ阻害物質は筋萎縮を軽減するだけでなく、腫瘍成長も阻害することが示された。これは驚くべきことであったが、その理由は、悪液質を誘導するヒト腫瘍と同様、ＭＡＣ１６腫瘍は高度に化学療法抵抗性だからである（Ｄｏｕｂｌｅ，Ｊ．Ａ．及びＢｉｂｂｙ，Ｍ．Ｃ．、Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．、８１（１３）、９８８〜９９４、１９８９）。これは、ＰＫＲを阻害すると腫瘍成長阻害が誘導され、この効果の機序に迫る研究により、化学療法抵抗性の腫瘍の治療につながる深い理解が得られる可能性があることを示す最初の報告である。
【０１３７】
[00145]ＰＫＲと腫瘍成長との間を結び付ける１つの可能性には、ＮＦ−κＢの活性化が含まれる。ＮＦ−κＢの活性化は、腫瘍細胞の生存及び増殖、並びに浸潤及び血管新生、腫瘍転移にとっての決定的に重要な事象と結び付いていた（Ｋａｒｉｎ，Ｍ．、Ｎａｔｕｒｅ、４４１（７０９２）、４３１〜４３６、２００６）。ＮＦ−κＢは、直腸結腸の上皮性悪性腫瘍（Ｋｏｊｉｍａ，Ｍ．ら、Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、２４（２Ｂ）、６７５〜６８１、２００４）、膵臓腺癌（Ｗａｎｇ，Ｗ．ら、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、５、１１９〜１２７、１９９９）及び肝細胞癌（Ｔａｉ，Ｄ．Ｉ．ら、Ｃａｎｃｅｒ、８９、２２７４〜２２８１、２０００）などいくつかの腫瘍型において構成的に活性化されることが報告されている。ＮＦ−κＢの構成的活性化の原因となる因子としては、腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）、インターロイキン−１（ＩＬ−１）、ｐＨ及び低酸素症が挙げられる（Ｂａｌｄｗｉｎ，Ａ．Ｓ．、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．、１０７（３）、２４１〜２４３、２００１）。悪液質誘導性の腫瘍によるＰＩＦの産生は、悪液質の動物の骨格筋中で起きることから、ＮＦ−κＢの構成的な活性化にもつながりかねない可能性がある（Ｗｙｋｅ，Ｓ．Ｍ．ら、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、９１（９）、１７４２〜１７５０、２００４）。レスベラトロールにより骨格筋中でのＮＦ−κＢ活性化を阻害すると、ＭＡＣ１６腫瘍保有マウスにおける腫瘍成長も阻害されたが、この機序については調査されなかった。ＮＦ−κＢは、カスパーゼ活性の制御を通じて、アポトーシスを抑制する遺伝子の転写を活性化できる（Ｋａｒｉｎ，Ｍ．ら、Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、３（３）、２２１〜２２７、２００２）。ＮＦ−κＢによりアポトーシスを阻害すると、化学療法及び放射線照射に対し腫瘍が抵抗性になる（Ｂｈａｒｔｉ，Ａ．Ｃ．及びＡｇｇａｒｗａｌ，Ｂ．Ｂ．、Ａｎｎ．ＮＹ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、９７３、３９２〜３９５、２００２）ので、悪液質を生じさせる腫瘍が療法に対してなぜそれほど抵抗性であるかを説明できるであろう。
【０１３８】
[00146]この試験は、ＭＡＣ１６腫瘍の成長に対するＰＫＲ阻害物質の有効性を、ＭＡＣ１６腫瘍と組織学的に類似しているが悪液質を誘導しないＭＡＣ１３腫瘍に対する有効性と比較し（Ｂｅｃｋ，Ｓ．Ａ．及びＴｉｓｄａｌｅ，Ｍ．Ｊ．、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、４７、５９１９〜５９２３、１９８７）、腫瘍成長阻害の機序を調査するものである。
【０１３９】
[00147]以前の研究（Ｅｌｅｙ，Ｈ．Ｌ．及びＴｉｓｄａｌｅ，Ｍ．Ｊ．、Ｊ．Ｂｉｏｌ．、２８２、７０８７〜７０９７、２００７）では、マウスにおける悪液質誘導性のＭＡＣ１６腫瘍の成長を低減させるための低分子量のＰＫＲ阻害物質（８−［１−（１Ｈ−イミダゾール−４−イル）メト−（Ｚ）−イリデン］−６，８−ジヒドロチアゾール［５，４−ｅ］インドール−７−オン）を示した。図２に示す結果は、この阻害物質はｉｎ ｖｉｔｒｏでのＭＡＣ１６腫瘍の成長も阻害し２００ｎＭで最大効果が得られたが、ＭＡＣ１３腫瘍の成長に対しては最大１０００ｎＭの濃度であっても効果がなかったことを示すものである。両方の腫瘍は、１，２−ジメチルヒドラジンの長期投与により誘導されたマウスの大腸の腺癌である（Ｃｏｗｅｎ，Ｄ．Ｍ．ら、Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．、６４（３）、６７５〜６８１、１９８０）が、ＭＡＣ１６は悪液質を誘導する（Ｂｉｂｂｙ，Ｍ．Ｃ．ら、Ｊ Ｎａｔｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．、７８（３）、５３９〜５４６、１９８７）一方、ＭＡＣ１３は誘導しない。図２の結果は、ＭＡＣ１６腫瘍ではリン酸化ＰＫＲ（図３Ａ）及びリン酸ｅＩＦ２α（図３Ｂ）は両方とも高レベルで発現するが、ＭＡＣ１３腫瘍では発現しないことを示すものである。しかし、ＰＫＲ及びｅＩＦ２αの両方の総量値は２つの腫瘍型において同様であった。ＰＫＲ阻害物質を用いてＭＡＣ１６腫瘍保有マウスを処置すると、ＰＫＲ（図４Ａ）及びｅＩＦ２α（図４Ｂ）の両方のリン酸化の増加が完全に低減する結果となったが、ＰＫＲ及びｅＩＦ２αの総量値には影響がなかった。ＰＫＲ阻害物質でＭＡＣ１６細胞を処置すると、２００ｎＭの濃度で細胞成長が最大に阻害され、濃度が高くなるほど阻害の有効性は低下した（図２）。この効果がＰＫＲの自己リン酸化の阻害と相関するかどうかを見るために、阻害物質がリン酸化ＰＫＲ及び全ＰＫＲに及ぼす効果を、ＭＡＣ１６細胞及びＭＡＣ１３細胞の両方において定量した（図５）。マウスにおける固形腫瘍と同様、ＭＡＣ１６細胞は高レベルのリン酸化ＰＫＲを示したが、ＭＡＣ１３は非常に低レベルを示した。ＰＫＲ阻害物質は、ＭＡＣ１６細胞中のＰＫＲの自己リン酸化を阻害し２００〜３００ｎＭの間で最大効果が得られたが、それより高い濃度では有効性は低下した（図５Ａ）。ＭＡＣ１３細胞におけるＰＫＲの低レベルの自己リン酸化に対してはＰＫＲ阻害物質の効果はなかった（図５Ｂ）。いずれの細胞株においても、細胞における全ＰＫＲに対して阻害物質の効果はなかった。ＰＫＲ活性化は骨格筋における２０Ｓプロテアソームの発現を誘導することが示されていることから（Ｅｌｅｙ，Ｈ．Ｌ．及びＴｉｓｄａｌｅ，Ｍ．Ｊ．、Ｊ．Ｂｉｏｌ．、２８２、７０８７〜７０９７、２００７）、阻害物質の効果を定量した。ＭＡＣ１６（図５Ｃ）及びＭＡＣ１３（図５Ｄ）の細胞は両方とも２０Ｓプロテアソームを発現したが、発現は、ＭＡＣ１３細胞におけるよりもＭＡＣ１６細胞において高かった。さらに、ＰＫＲ阻害物質は、ＭＡＣ１６細胞における２０Ｓプロテアソームの発現を低減させた（図５Ｃ）が、ＭＡＣ１３細胞においては低減させなかった（図５Ｄ）。そのうえ、異なる濃度のＰＫＲ阻害物質では、２０Ｓプロテアソームの発現（図５Ｃ）とＰＫＲの発現（図５Ａ）との間に線形相関（相関係数０．９５７）があり（図５Ｅ）、このことから、ＭＡＣ１６細胞においては、２０Ｓプロテアソームの発現はＰＫＲの発現によっても制御される可能性が示唆される。
【０１４０】
[00148]ＭＡＣ１６腫瘍におけるタンパク質合成は、ＭＡＣ１３腫瘍と比較すると有意に抑制された（図６）が、恐らくそれは、ｅＩＦ２αのリン酸化の増加によるものである。このことから、ＰＫＲのリン酸化はＭＡＣ１６腫瘍の生存にとって重要である可能性が示唆される。ＰＫＲの機能の１つは、ＮＦ−κＢの活性化の能力を有することである（Ｚａｍａｎｉａｎ−Ｄａｒｙｏｕｓｈ，Ｍ．ら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．、２０、１２７８〜１２９０、２０００）。図７Ａ中のデータは、ＭＡＣ１６腫瘍においてＮＦ−κＢは高レベルに構成的に活性化されるがＭＡＣ１３腫瘍においては活性化されないことを示す。ＭＡＣ１６腫瘍保有マウスをＰＫＲ阻害物質で処置すると腫瘍におけるＮＦ−κＢの構成的な活性化が低減するが、このことから、ＮＦ−κＢの構成的な活性化はＰＫＲの活性化から生じたことが示唆される。
【０１４１】
[00149]ＮＦ−κＢの活性化は、ゲムシタビンに対する膵臓癌の化学療法抵抗性（Ａｒｌｔ，Ａ．ら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、２２（２１）、３２４３〜３２５１、２００３）、及び５−フルロウラシル（５−ＦＵ）に対する胃癌の化学療法抵抗性（Ｕｅｔｓｕｋａ，Ｈ．ら、Ｅｘｐ Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ．、２８９（１）、２７〜３５、２００３）において重要な役割を果たすことが示されている。ＰＫＲ阻害物質によるＮＦ−κＢの下方制御がゲムシタビン及び５ＦＵに対するＭＡＣ１６細胞の感受性を増加させるか否かを確認するために、単独、又はＰＫＲ阻害物質（１００ｎＭ又は２００ｎＭで）との組合せで薬剤が細胞成長に及ぼす効果を定量した（図８）。５ＦＵ単独では、１〜１０μＭの間の濃度でＭＡＣ１６細胞の成長が有意に阻害され、この効果は、両方の濃度のＰＫＲ阻害物質により有意に増強された。同様に、ゲムシタビンに誘導されるＭＡＣ１６細胞成長阻害も、両方の濃度のＰＫＲ阻害物質により増強された。この結果から、ＰＫＲ阻害物質は細胞傷害剤に対するヒト腫瘍の化学感作において有用となる可能性が示唆される。
【０１４２】
[00150]考察
初期の研究により、ＰＫＲは腫瘍抑制因子として作用することが示唆されたが、その理由は、触媒的に不活性な突然変異型のＰＫＲを３Ｔ３細胞に形質移入すると、細胞の形質転換がもたらされた（Ｋｏｒｏｍｉｌａｓ，Ａ．Ｅ．ら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２５７、１６８５〜１６８９、１９９２）が、Ｍ１骨髄性白血病細胞において野生型ＰＫＲの活性を上方制御した結果、形質転換された表現型の逆転又はアポトーシスが生じた（Ｒａｖｅｈ，Ｔ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７１（４１）、２５４７９〜２５４８４、１９９６）からである。しかし、最近の研究（Ｋｉｍ，Ｓ．Ｈ．ら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、１９（２７）、３０８６〜３０９４、２０００；Ｙａｎｇ，Ｙ．Ｌ．ら、ＥＭＢＯ Ｊ．、１４（２４）、６０９５〜６１０６、１９９５）は、この仮説に疑問を投げかけている。例えば、ＰＫＲが欠損している遺伝子導入マウスは正常であり、腫瘍発生率の増加を示さない（Ｙａｎｇら、１９９５）。加えて、ＰＫＲの自己リン酸化及びｅＩＦ２αのリン酸化は、胸部の上皮性悪性腫瘍細胞株に由来する溶菌液中では、形質転換されていない上皮細胞株に由来するものと比較して 〜４０倍高く（Ｋｉｍ，Ｓ．Ｈ．ら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、１９（２７）、３０８６〜３０９４、２０００）、培養物中においても、形質移入されていないメラニン形成細胞と比較してメラノーマ細胞中におけるほうが高い（Ｋｉｍ，Ｓ．Ｈ．ら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、２１（５７）、８７４１〜８７４８、２００２）。加えて、大腸の正常な粘膜から腺腫及び上皮性悪性腫瘍への形質転換は、ＰＫＲ発現の増加と同時に生じた（Ｋｉｍら、２００２）。非形質転換細胞株におけるＰＫＲ活性のほうが低いのは、一部はＰＫＲタンパク質レベルがより低いことによるものであり、一部は、細胞のＰＫＲ阻害物質として公知のＰ５８の存在によるものであった（Ｋｉｍ，Ｓ．Ｈ．ら、２０００）。
【０１４３】
[00151]本試験は、悪液質を有するマウスの腫瘍における自己リン酸化ＰＫＲの発現が上方制御されていることを示すものである。ＰＫＲの活性化はＮＦ−κＢの核結合の増加と関連があり、ＮＦ−κＢの核結合の増加はＰＫＲ活性化の阻害により低減した。そのような腫瘍におけるＮＦ−κＢの活性化は、悪液質が炎症促進状態であることを示す臨床データと相関すると考えられる（ＭｃＭｉｌｌａｎ，Ｄ．Ｃ．ら、Ｎｕｔｒ．Ｃａｎｃｅｒ、３１（２）、１０１〜１０５、１９９８）。マウスの腫瘍対（ＭＡＣ１６／ＭＡＣ１３）においては、低分子量のＰＫＲ阻害物質で処置すると、ＭＡＣ１６の増殖速度が阻害され、これにより、ＰＫＲリン酸化が上方制御されることが示されたが、ＭＡＣ１３腫瘍には効果がなく、ＭＡＣ１３はＰＫＲの活性化を示さなかった。この結果から、ＰＫＲの活性化を示す悪液質誘導性の腫瘍のほうがＰＫＲ阻害物質の抗腫瘍効果を受けやすい可能性が示唆される。驚くべき観察は、ＰＫＲ阻害物質はＰＫＲを阻害するうえでは２００ｎＭの濃度で最大に有効であり、濃度が高くなると阻害効果が低下することであった。同様のことが、ＰＩＦの存在下でのマウスの筋管において観察された（Ｅｌｅｙ及びＴｉｓｄａｌｅ、２００７）。ＰＫＲ阻害物質は、ＰＫＲにおけるＡＴＰ結合部位に向かい、同様のことは、無細胞翻訳アッセイにおいて別のＡＴＰ結合部位に向けた阻害物質２−アミノプリンを用いた場合にも観察されている（Ｊａｍｍｉら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．、３０８、５０〜５７、２００３）。この効果は、翻訳機構の他の構成要素の非特異的な阻害に起因するものであった。しかし、より高い濃度の阻害物質は、立体配座の変化を開始するＰＫＲに結合し、これにより、ＡＴＰにより誘導される場合と同じように自己リン酸化が誘導される可能性がある（Ｌｅｍａｉｒｅ，Ｐ．Ａ．ら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、３４５（１）、８１〜９０、２００５）。
【０１４４】
[00152]以前の研究（Ｚａｍａｎｉａｎ−Ｄａｒｙｏｕｓｈら、２０００）により、ＰＫＲはＮＦ−κＢを活性化できることが示されている。ＰＫＲは、物理的に、その触媒ドメインを通じて、上流のキナーゼＩＫＫと相互作用し、それによりＩκＢにおける決定的に重要なセリン残基がリン酸化される結果、セリン残基が分解されて遊離ＮＦ−κＢが放出され、次いで、遊離ＮＦ−κＢが、核中のＤＮＡ上の特異的な結合部位に移動できる。ＰＫＲによるＩＫＫの活性化は、直接的なリン酸化によってではなく、ＩＫＫβの自己リン酸化を刺激するタンパク質−タンパク質相互作用により生じるようである（Ｂｏｎｎｅｔ，Ｍ．Ｃ．ら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．、２０（１３）、４５３２〜４５４２、２０００）。しかし、αサブユニット上でのｅＩＦ２のリン酸化はＮＦ−κＢを活性化することも示されている（Ｊｉａｎｇ，Ｊ．Ｙ．ら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．、２３（１６）、５６５１〜５６６３、２００３）。これにより、ＰＫＲの阻害がＮＦ−κＢの活性化を下方制御するのに役立つ可能性があると考えられる別の機序が示唆される。ＰＫＲ阻害物質によるＮＦ−κＢの構成的な活性化の阻害は、少なくとも部分的には腫瘍成長速度の阻害に関与しているようである。ＰＫＲは、ｅＩＦ２αのリン酸化及びＮＦ−κＢの活性化を通じて多くの異なる刺激により誘導されるアポトーシスを媒介する（Ｇｉｌ，Ｊ．及びＥｓｔｅｂａｎ，Ｍ．、Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ．、５（２）、１０７〜１１４、２０００）。しかし、ＰＫＲは、やはりＮＦ−κＢが介在する、アポトーシスを遅らせる生存経路も活性化する（Ｄｏｎｚｅ，Ｏ．ら、ＥＭＢＯ Ｊ、２３、５６４〜５７１、２００４）。したがって、ＮＦ−κＢと同様、ＰＫＲは腫瘍細胞の生存又は死亡を促進すると考えられる。成長を促進することに加え、ＮＦ−κＢは、血管内皮成長因子などの血管新生促進因子の発現を増加させることにより、腫瘍の血管新生の可能性を高め（Ｘｉｏｎｇ，Ｈ．Ｑ．ら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、１０８（２）、１８１〜１８８、２００４）、ＮＦ−κＢにより制御された遺伝子産物は、癌細胞の遊走及び浸潤を促進する（Ｙｅｂｒａ，Ｍ．ら、Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｃｅｌｌ、６、８４１〜８５０、１９９５）。ＮＦ−κＢは１５０を超える標的遺伝子の制御に関与しているが、ＰＫＲ自己リン酸化の阻害によりその活性化を阻害するとマウスにおいて毒性は生じず、このことから、癌治療のための新しい治療レジメが示唆された。最近の研究（Ｋｕｎｎｕｍａｋｋａｒａ，Ａ．Ｂ．ら、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、６７（８）、３８５３〜６８６１、２００７）では、ＮＦ−κＢ活性化の阻害物質であるクルクミンは、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのヒト膵臓癌細胞株の成長を阻害し、ｉｎ ｖｉｖｏでのゲムシタビンの抗腫瘍活性を増強することが示されている。ＮＦ−κＢは、膵臓癌におけるゲムシタビン抵抗性を促進するうえで（Ａｒｌｔら、２００３）、並びにヒト胃癌細胞株における５−ＦＵ及びゲムシタビンに対する化学療法抵抗性において（Ｕｅｔｓｕｋａら、２００３）中心的役割を果たすことが示されている。このことから、ＰＫＲ阻害物質は、化学療法薬に対する化学療法抵抗性の腫瘍を感作するうえで有用である可能性が示唆される。本試験では、ＰＫＲ阻害物質は５−ＦＵ及びゲムシタビン両方の細胞傷害効果に対しＭＡＣ１６細胞を感作することが示されており、このことから、そのような薬剤の別の治療的役割の可能性が示唆される。
【０１４５】
[00153]一部の腫瘍の増殖速度が遅く、この場合こうした腫瘍は化学療法及び放射線照射に対し非感受性になる理由を、ＰＫＲの活性化から明らかにできる。ＮＦ−κＢの活性化に加え、ＰＫＲは、ｅＩＦ２αのリン酸化も誘導し、これにより、ｅＩＦ２．ＧＤＰをｅＩＦ２．ＧＴＰに変換するグアニンヌクレオチド交換因子ｅＩＦ２Ｂの競合的阻害により翻訳開始が阻害される（Ｒｏｗｌａｎｄｓ，Ａ．Ｇ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２６３（１２）、５５２６〜５５３３、１９８８）。しかし、ヒト乳癌細胞においては、タンパク質合成は高度のｅＩＦ２αリン酸化によっては阻害されず、その理由は恐らく、この細胞が、より高レベルのｅＩＦ２Ｂを含有しているからである（Ｋｉｍら、２０００）。
【０１４６】
[00154]本試験の結果から、ＰＫＲ阻害物質の存在下におけるＰＫＲのリン酸化レベルと２０Ｓプロテアソームのαサブユニットの発現レベルとの間の直接的な関係が示される。このことから、腫瘍成長阻害の別の機序が得られると考えられる。２つの１９Ｓ制御サブユニットと２０Ｓのαサブユニットとの組合せにより形成される２６Ｓプロテアソームは、ｐ２７及びｐ２１など細胞周期制御に関与するタンパク質を分解する（Ｂｌａｇｏｓｋｌｏｎｎｙ，Ｍ．Ｖ．ら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．、２２７（２）、５６４〜５６９、１９９６）。ジペプチドであるボロン酸類似体ＰＳ−３４１（ベルケード（Ｖｅｌｃａｄｅ））で２６Ｓプロテアソームを標的化阻害すると、ヒト膵臓癌細胞及び異種移植片において、増殖が遮断され、アポトーシスが誘導されることが示されている（Ｓｈａｈ，Ｓ．Ａ．ら、Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ．、８２（１）、１１０〜１２２、２００１）。ＰＳ−３４１は、ゲムシタビンに対しヒト膵臓癌細胞を感作させることも示されている（Ｂｏｌｄ，Ｒ．Ｊ．ら、Ｊ．Ｓｕｒｇｅ．Ｒｅｓ．、１００（１）、１１〜１７、２００１）。したがって、ＰＫＲ自己リン酸化阻害物質による腫瘍中でのプロテアソーム発現の阻害は、腫瘍成長の低減、及び標準的な化学療法剤に対する感受性の増加に関与している可能性がある。
【０１４７】
[00155]用語「約」は、本明細書中で使用する場合、数の範囲における両方の数を指すことは一般に理解されるべきである。さらに、本明細書中の全ての数的範囲には、その範囲内の全整数それぞれが含まれると理解されるべきである。
【０１４８】
[00156]本発明が、本明細書中で例証及び記載されたとおりの正確な構成に限定されるものでないことは理解されたい。したがって、本明細書中に記載の開示内容から、又はその内容から慣例的な実験法により当業者が容易に達成できる好都合な改変形は全て、添付の特許請求の範囲により規定されるとおり、本発明の精神及び範囲内にあるものと見なされる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
二本鎖ＲＮＡ依存性タンパク質キナーゼ（ＰＫＲ）の少なくとも１つの阻害物質の組成物であって、治療が前記組成物により促進される組成物。
【請求項２】
二本鎖ＲＮＡ依存性タンパク質キナーゼ（ＰＫＲ）の前記少なくとも１つの阻害物質がリン酸化阻害物質である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
二本鎖ＲＮＡ依存性タンパク質キナーゼ（ＰＫＲ）の阻害物質を増強する少なくとも１つの化合物の組成物であって、治療が前記組成物により促進される組成物。
【請求項４】
二本鎖ＲＮＡ依存性タンパク質キナーゼ（ＰＫＲ）の阻害物質を増強する前記化合物が、二本鎖ＲＮＡ依存性タンパク質キナーゼ（ＰＫＲ）のリン酸化阻害物質を増強する化合物である、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記促進が前記治療の増強である、請求項１及び３に記載の組成物。
【請求項６】
前記促進が、前記治療の少なくとも１つの副作用の発生及び／又は重症度の低減である、請求項１及び３に記載の組成物。
【請求項７】
前記阻害物質が経腸的又は非経口的に投与される、請求項１及び３に記載の組成物。
【請求項８】
前記阻害物質が栄養組成物である、請求項１及び３に記載の組成物。
【請求項９】
前記阻害物質が細胞成長阻害物質である、請求項１及び３に記載の組成物。
【請求項１０】
前記阻害物質が細胞複製阻害物質である、請求項１及び３に記載の組成物。
【請求項１１】
タンパク質ホスファターゼ１α（ＰＰ１ａ）の少なくとも１つの修飾物質をさらに含む、請求項１及び３に記載の組成物。
【請求項１２】
前記ＰＰ１ａが、リン酸化されたＰＫＲを脱リン酸化する、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記ＰＰ１ａが分枝鎖アミノ酸である、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１４】
前記ＰＰ１ａがロイシンである、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１５】
前記ＰＰ１ａが少なくとも１つの栄養化合物である、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１６】
代謝活性組織への治療の送達を促進する薬剤をさらに含む、請求項１及び３に記載の組成物。
【請求項１７】
前記薬剤が、アルギニン及びシトルリンのうち少なくとも１つである、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
細胞複製阻害物質の組成物をさらに含む、請求項１及び３に記載の組成物。
【請求項１９】
栄養組成物が形質転換成長因子−β（ＴＧＦ−β）を含む、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
前記治療が化学療法である、請求項１及び３に記載の組成物。
【請求項２１】
前記治療が放射線療法である、請求項１及び３に記載の組成物。
【請求項２２】
請求項１、２、３又は４のいずれか一項に記載の組成物の使用。
【請求項２３】
前記治療が悪性腫瘍の治療である、請求項２２に記載の使用。
【請求項２４】
前記治療が自己免疫疾患の治療である、請求項２２に記載の使用。
【請求項２５】
前記促進が前記治療の増強である、請求項２２に記載の使用。
【請求項２６】
前記促進が、前記治療の少なくとも１つの副作用の発生及び／又は重症度の低減である、請求項２２に記載の使用。
【請求項２７】
前記阻害物質が栄養組成物である、請求項２２に記載の使用。
【請求項２８】
タンパク質ホスファターゼ１α（ＰＰ１ａ）の少なくとも１つの修飾物質をさらに含む、請求項２２に記載の使用。
【請求項２９】
前記ＰＰ１ａが分枝鎖アミノ酸である、請求項２８に記載の使用。
【請求項３０】
代謝活性組織への治療の送達を促進する薬剤をさらに含む、請求項１に記載の使用。
【請求項３１】
前記薬剤が、アルギニン及びシトルリンのうち少なくとも１つである、請求項３０に記載の使用。
【請求項３２】
細胞複製阻害物質の使用をさらに含む、請求項２２に記載の使用。
【請求項３３】
前記細胞複製阻害物質が形質転換成長因子−β（ＴＧＦ−β）を含む、請求項３２に記載の使用。
【請求項３４】
前記治療が化学療法である、請求項２２に記載の使用。
【請求項３５】
前記治療が放射線療法である、請求項２２に記載の使用。
【請求項３６】
請求項１、２、３又は４のいずれか一項に記載の組成物の製造。
【請求項３７】
二本鎖ＲＮＡ依存性タンパク質キナーゼ（ＰＫＲ−Ｉ）の少なくとも１つのリン酸化阻害物質を含む、病気を治療するための組成物であって、治療が前記病気のためである組成物。
【請求項３８】
前記哺乳動物にて前記ＰＫＲ−Ｉによるリン酸化の阻害をさらに促進する少なくとも１つの増強物質をさらに含む、請求項３７に記載の組成物。
【請求項３９】
前記病気が、癌、癌性悪液質、食欲不振症、炎症性疾患、敗血症、うっ血性心不全、関節リウマチ、慢性閉塞性肺疾患、神経変性疾患、自己免疫疾患、ヒト免疫不全ウイルス感染症、糖尿病、皮膚疾患、細胞の老化、クッシング病、リウマチ熱及び早老症から成る群から選択される、請求項３７に記載の組成物。
【請求項４０】
前記促進が、前記病気の重症度の改善又は軽減である、請求項３７に記載の組成物。
【請求項４１】
前記少なくとも１つの増強物質が、ＰＫＲに対する阻害物質、ＰＫＲ−Ｉ類似体、ＰＫＲリン酸化阻害物質、化学療法剤、血管新生剤、血管拡張剤、カテキンフラバノール、生物活性タンパク質、分枝鎖アミノ酸、必須アミノ酸、アミノ酸、アミノ酸類似体、ヌクレオチド、ビタミン、グルタミン、シアル酸オリゴ糖、Ｌ−テアニン、プレバイオティック、プロバイオティック、シンバイオティック、必須脂肪酸、ＰＵＦＡ、ＭＵＦＡ及び抗酸化物質から成る群から選択される、請求項３７に記載の組成物。
【請求項１】
二本鎖ＲＮＡ依存性タンパク質キナーゼ（ＰＫＲ）の少なくとも１つの阻害物質の組成物であって、治療が前記組成物により促進される組成物。
【請求項２】
二本鎖ＲＮＡ依存性タンパク質キナーゼ（ＰＫＲ）の前記少なくとも１つの阻害物質がリン酸化阻害物質である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
二本鎖ＲＮＡ依存性タンパク質キナーゼ（ＰＫＲ）の阻害物質を増強する少なくとも１つの化合物の組成物であって、治療が前記組成物により促進される組成物。
【請求項４】
二本鎖ＲＮＡ依存性タンパク質キナーゼ（ＰＫＲ）の阻害物質を増強する前記化合物が、二本鎖ＲＮＡ依存性タンパク質キナーゼ（ＰＫＲ）のリン酸化阻害物質を増強する化合物である、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記促進が前記治療の増強である、請求項１及び３に記載の組成物。
【請求項６】
前記促進が、前記治療の少なくとも１つの副作用の発生及び／又は重症度の低減である、請求項１及び３に記載の組成物。
【請求項７】
前記阻害物質が経腸的又は非経口的に投与される、請求項１及び３に記載の組成物。
【請求項８】
前記阻害物質が栄養組成物である、請求項１及び３に記載の組成物。
【請求項９】
前記阻害物質が細胞成長阻害物質である、請求項１及び３に記載の組成物。
【請求項１０】
前記阻害物質が細胞複製阻害物質である、請求項１及び３に記載の組成物。
【請求項１１】
タンパク質ホスファターゼ１α（ＰＰ１ａ）の少なくとも１つの修飾物質をさらに含む、請求項１及び３に記載の組成物。
【請求項１２】
前記ＰＰ１ａが、リン酸化されたＰＫＲを脱リン酸化する、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記ＰＰ１ａが分枝鎖アミノ酸である、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１４】
前記ＰＰ１ａがロイシンである、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１５】
前記ＰＰ１ａが少なくとも１つの栄養化合物である、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１６】
代謝活性組織への治療の送達を促進する薬剤をさらに含む、請求項１及び３に記載の組成物。
【請求項１７】
前記薬剤が、アルギニン及びシトルリンのうち少なくとも１つである、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
細胞複製阻害物質の組成物をさらに含む、請求項１及び３に記載の組成物。
【請求項１９】
栄養組成物が形質転換成長因子−β（ＴＧＦ−β）を含む、請求項１８に記載の組成物。
【請求項２０】
前記治療が化学療法である、請求項１及び３に記載の組成物。
【請求項２１】
前記治療が放射線療法である、請求項１及び３に記載の組成物。
【請求項２２】
請求項１、２、３又は４のいずれか一項に記載の組成物の使用。
【請求項２３】
前記治療が悪性腫瘍の治療である、請求項２２に記載の使用。
【請求項２４】
前記治療が自己免疫疾患の治療である、請求項２２に記載の使用。
【請求項２５】
前記促進が前記治療の増強である、請求項２２に記載の使用。
【請求項２６】
前記促進が、前記治療の少なくとも１つの副作用の発生及び／又は重症度の低減である、請求項２２に記載の使用。
【請求項２７】
前記阻害物質が栄養組成物である、請求項２２に記載の使用。
【請求項２８】
タンパク質ホスファターゼ１α（ＰＰ１ａ）の少なくとも１つの修飾物質をさらに含む、請求項２２に記載の使用。
【請求項２９】
前記ＰＰ１ａが分枝鎖アミノ酸である、請求項２８に記載の使用。
【請求項３０】
代謝活性組織への治療の送達を促進する薬剤をさらに含む、請求項１に記載の使用。
【請求項３１】
前記薬剤が、アルギニン及びシトルリンのうち少なくとも１つである、請求項３０に記載の使用。
【請求項３２】
細胞複製阻害物質の使用をさらに含む、請求項２２に記載の使用。
【請求項３３】
前記細胞複製阻害物質が形質転換成長因子−β（ＴＧＦ−β）を含む、請求項３２に記載の使用。
【請求項３４】
前記治療が化学療法である、請求項２２に記載の使用。
【請求項３５】
前記治療が放射線療法である、請求項２２に記載の使用。
【請求項３６】
請求項１、２、３又は４のいずれか一項に記載の組成物の製造。
【請求項３７】
二本鎖ＲＮＡ依存性タンパク質キナーゼ（ＰＫＲ−Ｉ）の少なくとも１つのリン酸化阻害物質を含む、病気を治療するための組成物であって、治療が前記病気のためである組成物。
【請求項３８】
前記哺乳動物にて前記ＰＫＲ−Ｉによるリン酸化の阻害をさらに促進する少なくとも１つの増強物質をさらに含む、請求項３７に記載の組成物。
【請求項３９】
前記病気が、癌、癌性悪液質、食欲不振症、炎症性疾患、敗血症、うっ血性心不全、関節リウマチ、慢性閉塞性肺疾患、神経変性疾患、自己免疫疾患、ヒト免疫不全ウイルス感染症、糖尿病、皮膚疾患、細胞の老化、クッシング病、リウマチ熱及び早老症から成る群から選択される、請求項３７に記載の組成物。
【請求項４０】
前記促進が、前記病気の重症度の改善又は軽減である、請求項３７に記載の組成物。
【請求項４１】
前記少なくとも１つの増強物質が、ＰＫＲに対する阻害物質、ＰＫＲ−Ｉ類似体、ＰＫＲリン酸化阻害物質、化学療法剤、血管新生剤、血管拡張剤、カテキンフラバノール、生物活性タンパク質、分枝鎖アミノ酸、必須アミノ酸、アミノ酸、アミノ酸類似体、ヌクレオチド、ビタミン、グルタミン、シアル酸オリゴ糖、Ｌ−テアニン、プレバイオティック、プロバイオティック、シンバイオティック、必須脂肪酸、ＰＵＦＡ、ＭＵＦＡ及び抗酸化物質から成る群から選択される、請求項３７に記載の組成物。
【図１】
【図２】
【図３Ａ】
【図３Ｂ】
【図４Ａ】
【図４Ｂ】
【図５Ａ】
【図５Ｂ】
【図５Ｃ】
【図５Ｄ】
【図５Ｅ】
【図６】
【図７Ａ】
【図７Ｂ】
【図８】
【図２】
【図３Ａ】
【図３Ｂ】
【図４Ａ】
【図４Ｂ】
【図５Ａ】
【図５Ｂ】
【図５Ｃ】
【図５Ｄ】
【図５Ｅ】
【図６】
【図７Ａ】
【図７Ｂ】
【図８】
【公表番号】特表２０１１−５０４８７９（Ｐ２０１１−５０４８７９Ａ）
【公表日】平成２３年２月１７日（２０１１．２．１７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５３４９９０（Ｐ２０１０−５３４９９０）
【出願日】平成２０年１０月３日（２００８．１０．３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０７８６６７
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０７０３７８
【国際公開日】平成２１年６月４日（２００９．６．４）
【出願人】（５９９１３２９０４）ネステク ソシエテ アノニム (637)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２３年２月１７日（２０１１．２．１７）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年１０月３日（２００８．１０．３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０７８６６７
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０７０３７８
【国際公開日】平成２１年６月４日（２００９．６．４）
【出願人】（５９９１３２９０４）ネステク ソシエテ アノニム (637)
【Ｆターム（参考）】
[ Back to top ]