免疫刺激性乳児用栄養
本発明は、脂肪成分、タンパク質成分および炭水化物成分を含みかつホエーおよびカゼインを含む栄養または薬剤組成物を提供するものである。当該組成物は、ホエーに対するカゼインの重量比が１：１〜１：２．４であり、さらに前記組成物が、ａ）１００ｇのタンパク質当たり、少なくとも３ｇのアルギニン；ｂ）全脂肪酸に対して、少なくとも１０ｗｔ％のリノール酸；ｃ）全脂肪酸に対して、少なくとも１ｗｔ％のα−リノレン酸；ｄ）全脂肪酸に対して、０．１ｗｔ％を超える量の少なくとも一の長鎖多価不飽和脂肪酸、この際、前記長鎖多価不飽和脂肪酸は、ドコサヘキサエン酸、アラキドン酸及びエイコサペンタエン酸からなる群より選択される；ｅ）全脂肪酸に対して、５〜２５ｗｔ％の少なくとも一の多価不飽和脂肪酸；およびｆ）乾燥重量１００ｇの組成物当たり、２〜１２ｇの、重合度が２〜１００の難消化性オリゴ糖を含むことを特徴とする。本発明の組成物は、他に比べて、ホエー主要特殊調製粉乳を与えることに伴うリスクを抑える。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
技術分野
本発明は、脂肪成分、タンパク質成分及び炭水化物成分を含みかつホエーおよびカゼインを含む栄養または薬剤組成物に、ならびに当該組成物の使用に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
授乳は、乳児の発育を最適に支持し、感染から身を守る。しかしながら、乳児全員が人乳をもらえる立場にあるわけではない。このため、人乳の機能を模倣する、特殊調製粉乳を提供するという目的が現在も続いている。特殊調製粉乳と人乳との望ましい組成上の類似に加えて、人乳の保護作用をまねることが特に望ましい。人乳は、例えば、感染症やアレルギーから身を守ることが示された。
【０００３】
最新の調乳では、ホエーに対するカゼインの割合が可能な限り人乳に近い。この割合により乳児が最適に成長できると考えられる。しかしながら、ウシホエー主要タンパク質源の使用に付随したマイナス面が幾つか依然として存在する。これらのホエー主要調乳は、感染症から身を守るには最適ではない。このような調乳を与えると、特に最初の３〜４週齢では、人乳を与えた乳児に比して、乳児の腸内細菌叢の発達が悪い。ホエー主要調乳を与えた乳児の細菌叢は、人乳を与えた乳児と同じ細菌属をおよそ含んでいるが、有益な細菌数は、人乳をもらっている乳児に比べてホエー主要調乳をもらっている乳児では少ない。さらに、ホエー主要ウシタンパク質源を含む調乳を与えた乳児の細菌叢は、クロストリジウムや腸内細菌等の異常な細菌の量が増える。ゆえに、ホエー主要調乳を乳児に与えると、「次善最適な腸内細菌叢」が形成される。
【０００４】
非常に幼い乳児は免疫系が未熟で腸管も未熟であるため、次善最適な腸内細菌叢が発達すると、感染症、下痢、アレルギー及び炎症が起こる。特に、０〜３０日齢でかつウシホエー主要タンパク質を含む調乳が与えられた乳児は、大便の細菌叢が人乳を与えられた乳児とは最も異なるため、これらのリスクをおいやすい。
【発明の開示】
【０００５】
発明の要約
本発明の目的は、ホエー主要特殊調製粉乳を与えることに付随したリスクを抑える栄養または薬剤組成物を提供することである。
【０００６】
上記目的は、請求項１に記載の組成物によって解決される。
【０００７】
本発明の組成物は、
ホエーに対するカゼインの重量比が１：１〜１：２．４であり、さらに
前記組成物が、
ａ）１００ｇのタンパク質当たり、少なくとも３ｇのアルギニン；
ｂ）全脂肪酸に対して、少なくとも１０ｗｔ％のリノール酸（ＬＡ）；
ｃ）全脂肪酸に対して、少なくとも１ｗｔ％のα−リノレン酸（ＡＬＡ）；
ｄ）全脂肪酸に対して、０．１ｗｔ％を超える量の少なくとも一の長鎖多価不飽和脂肪酸（ＬＣＰＵＦＡ）、この際、前記長鎖多価不飽和脂肪酸（ＬＣＰＵＦＡ）は、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、アラキドン酸（ＡＲＡ）及びエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）からなる群より選択される；
ｅ）全脂肪酸に対して、５〜２５ｗｔ％の少なくとも一の多価不飽和脂肪酸；および
ｆ）乾燥重量１００ｇの組成物当たり、２〜１２ｇの重合度が２〜１００の難消化性オリゴ糖
を含むことを特徴とする。
【０００８】
本発明の組成物は、免疫系の成熟及び腸管の成熟を刺激する。本発明の組成物は、感染症、下痢及びアレルギー等の、乳児の炎症性疾患を予防するおよび／または治療するのに特に適切である。本発明の組成物は：
・「最適な腸内細菌叢」（即ち、人乳を与えることによって得られる細菌叢と同様の細菌叢）の発達を刺激する；
・胃腸管の成熟を刺激することにより、異常な細菌、毒素及び食物アレルゲン等のアレルゲンが体循環に入るのを予防する；
・免疫系の成熟を刺激することにより、アレルゲン、病原または毒素が腸バリアを通るおよび／または体循環に入る際に、より良好に防御する；
・同時に乳児に最適な栄養を提供する。
【０００９】
「リスクの低い腸内細菌叢」の発達の根底にある生理学的過程である、腸の成熟及び免疫系の成熟は、非常に相関性があり、共依存していると考えられる。ゆえに、特殊調製粉乳は、腸の成熟、免疫系の成熟及びリスクの低い腸内細菌叢の発達を刺激する、適当なバランスで、すべてのこれらの成分を含む必要がある。成分を最適に組合わせると、乳児はアレルゲンからより良好に保護される。本発明の組成物は、このような成分の最適な組み合わせを提供する。成分はしばしば異なるメカニズムで作用するため、本発明の組成物の成分は相乗的に作用し、乳児によりよい耐性を与え、炎症性疾患、特にアレルギーの発症率を低減する。
【００１０】
本発明の組成物は、重合度の低いオリゴ糖を含む。このようなオリゴ糖は、リスクの低い腸内細菌叢の形成を刺激して、特にクロストリジウム、腸内細菌および／または腸球菌等の異常である（可能性のある）腸内細菌の数を減らし；さらにビフィドバクテリウムや乳酸菌によるコロニー形成を刺激する。ビフィドバクテリウムや乳酸菌は、例えば、腸上皮細胞によるフコ−オリゴ糖の合成を刺激することにより、腸の成熟を刺激する。最適な刺激は、異なるオリゴ糖の混合物、特に中性及び酸性オリゴ糖双方を含むオリゴ糖の混合物を含ませることによって達成される。また、オリゴ糖は、Ｔｈ２応答を低減し、Ｔｈ１応答を向上することにより免疫系に「直接的な」効果を及ぼす。オリゴ糖を含む本発明の組成物はＴｈ１／Ｔｈ２応答の不均衡を回復し、自己免疫及びアレルギー等の、Ｔｈ１／Ｔｈ２不均衡に関連する疾患の治療および予防に好ましく使用されうることが判明した。
【００１１】
しかしながら、たとえオリゴ糖を非ヒトホエー主要タンパク質とを組合わせたとしても、このような組成物が与えられる乳児は、最初の１ヶ月間は感染症のリスクが高くなる。ゆえに、免疫系および／または腸の成熟度をさらに改善することが望ましい。
【００１２】
驚くべきことに、ＬＣＰＵＦＡが上皮傍細胞の透過性を効果的に抑制することが判明した。Ｕｓａｍｉ ｅｔ ａｌ（Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ ２００１，２０（４）：３５１−３５９）が報告したこととは反対に、Ｃ１８及びＣ２０多価不飽和脂肪酸、特にエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ；Ｃ２０：５ ｎ３）ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ；Ｃ２２：５６ ｎ３）及びアラキドン酸（ＡＡ；Ｃ２０：４）が腸密着結合部の透過性を有効に抑制し、これにより腸の成熟を刺激することができることを見出した。ゆえに、本発明の組成物は、ＬＣＰＵＦＡを含むことが好ましい。加えて、必須脂肪酸であるリノール酸（Ｃ１８：２ ｎ６）及びα−リノレン酸（Ｃ１８：３ ｎ３）は、腸管の成熟に加えて免疫系の成熟双方に不可欠である。さらに特に好ましい実施形態においては、本発明の組成物はまた、γ−リノレン酸（ＧＬＡ；Ｃ１８：３ （ｎ−６））を含む。したがって、本発明の組成物は、リノール酸及びα−リノレン酸を含む。
【００１３】
必要であれば、しかし、非常に好ましくは、本発明の組成物はまた、ヌクレオチドおよび／またはヌクレオシドを含む。ヌクレオチドは、腸管の成熟を刺激し、下痢の発症を抑制し、さらに免疫系を刺激する。ヌクレオチドが補足されない調乳に対してヌクレオチドが補足された調乳が与えられた乳児は、抗原に対して発現した後の抗体価が上昇し、抗原ナチュラルキラー細胞活性を刺激した（Ｃａｒｖｅｒ ｅｔ ａｌ Ａｃｔａ Ｐａｅｄｉａｔｒｉｃａ，（１９９９） Ｖｏｌ．８８， Ｎｏ． Ｓｕｐ ４３０，ｐｐ．８３−８８）。
【００１４】
詳細な説明
本発明の組成物は、ホエー主要非ヒトタンパク質源、長鎖多価不飽和脂肪酸およびオリゴ糖を含む。
【００１５】
上述したように、本発明は、ホエーに対するカゼインの重量比が１：１〜１：２．４であり、１００ｇのタンパク質当たり、少なくとも３ｇのアルギニンを含む組成物を提供する。
【００１６】
このカゼイン／ホエー比に関する１：１〜１：２．４という範囲は、この範囲に含まれるすべての値を含み、ゆえに、例えば、下記のホエーに対するカゼインの割合を含む：１：１、１：１．１、１：１．２、１：１．３、１：１．４、１：１．５、１：１．６、１：１．７、１：１．７、１：１．９、１：１．２、１：１．３、１：１．４、１：１．５、１：１．６、１：１．７、１：１．８、１：１．９、１：２．０、１：２．１、１：２．２、１：２．３、及び１：２．４。好ましい実施形態においては、カゼイン：ホエー比は、１：１．４〜１．６であり、より好ましくは約１：１．５（４０：６０）である。
【００１７】
アルギニンは、好ましくは、１００ｇのタンパク質成分当たり、３〜８ｇの量で存在する。この範囲は、すべての値を開示しており、特に、３、４、５、６、７、及び８ｇなどのこの範囲に含まれるすべての整数値を含む。本組成物は、好ましくは、１００ｇのタンパク質当たり、４〜５ｇのアルギニンを含む。
【００１８】
本組成物中に存在するＬＣＰＵＦＡは、ＤＨＡ、ＡＡ及びＥＰＡからなる群より選択される。これは、１または２または３種の当該長鎖多価不飽和脂肪酸が存在しうることを意味する。
【００１９】
多価不飽和脂肪酸に関して記載される５〜２５ｗｔ％という範囲は、この範囲に含まれるすべての値を開示する。
【００２０】
本組成物は、人乳から構成される組成物を含まない。本方法は、人乳から構成される組成物の投与を有する方法を包含しない。ゆえに、好ましくは、本方法は、非ヒト由来の物質、好ましくは、非ヒト由来の、好ましくは植物、動物、細菌または合成物由来の、炭水化物繊維、脂肪および／またはタンパク質を含む組成物の投与を包含する。好ましくは、本発明の組成物を調製するもととなる成分及び構成成分はすべて非ヒト源由来である。
【００２１】
主要栄養素
本組成物は、特殊調製粉乳として好ましく使用されうる。このような特殊調製粉乳は、好ましくは、脂質成分、タンパク質成分および炭水化物成分を含み、液状で乳児に投与されることが好ましい。
【００２２】
好ましい実施形態において、本発明は、３０〜６０ｅｎ％の脂質；５〜１５ｅｎ％のタンパク質；および２５〜７５ｅｎ％の炭水化物を含む組成物、特に特殊調製粉乳に関するものである。好ましくは、本組成物は、５〜１５ｅｎ％のタンパク質、３０〜６０ｅｎ％の脂肪および２５〜６５ｅｎ％の炭水化物を含む。より好ましくは、本組成物は、４３〜５３ｅｎ％の脂質；７〜１１ｅｎ％のタンパク質；および４３〜５３ｅｎ％の炭水化物を含む（ｅｎ％は、エネルギーパーセントの略称であり、各構成成分が調製物の全カロリー値に寄与する相対量を表わす）。
【００２３】
本発明の特殊調製粉乳のタンパク質成分は、上記した重量比でカゼイン及びホエーを含む。カゼイン／ホエーは、好ましくは、非ヒト哺乳動物のミルク由来である。乳児に最適な栄養を提供するためには、本組成物は、特定量のアルギニンを含む。本明細書において、「タンパク質」またはタンパク質成分ということばは、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド及びアミノ酸の累積である。アルギニンは、本組成物では不可欠である。アルギニンは、腸の炎症の症状の発症を抑制する（Ａｍｉｎ ｅｔ ａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ，（２００２） Ｖｏｌ．１４０，Ｎｏ．４，ｐｐ．４２５−４３１）。さらに、アルギニンは、免疫系を刺激し、健常な免疫系の維持に必要である（Ｎｉｅｖｅｒ ｅｔ ａｌ，Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ＆ Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ，（２００２） Ｖｏｌ．５６，Ｎｏ．１０，ｐｐ．４７１−４８２）。カゼイン及びホエーは、アルギニンを含むが、ほとんどのミルク源（例えば、ウシホエー及びカゼイン）では、カゼイン及びホエーは、不十分なアルギニンを提供する。好ましくは、少なくとも一部のアルギニンを、遊離アミノ酸ベース、例えば、Ｌ−アルギニン、の形態で、または遊離アミノ酸が好ましい塩もしくはエステルの形態で、組成物に補足される。本発明の組成物は、好ましくは、乾燥特殊調製粉乳１００ｇ当たり、７５〜５００ｍｇの遊離アミノ酸形態のアルギニン、より好ましくは乾燥特殊調製粉乳１００ｇ当たり、１５０〜４００ｍｇの遊離アミノ酸形態のアルギニンを含む。
【００２４】
本発明の組成物中の炭水化物は、ほとんどラクトースによって供給されることが好ましく、すなわち、好ましくは全可消化炭水化物の少なくとも７５ｗｔ％がラクトースによって提供され、好ましくは少なくとも９０ｗｔ％である。
【００２５】
低トレオニンタンパク質
非ヒトタンパク質源由来のホエー主要特殊調製粉乳は、一般的に、人乳に比して生物学的に利用可能なトレオニン含量が高い。人乳は、比較的少量の生物学的に利用可能なトレオニンを含む。ゆえに、ホエー主要調乳のトレオニン含量の低減方法が当該分野において提供される（例えば、ＥＰ １０４８２２６、ＷＯ ０１１１９９０及びＥＰ ７４１５２２を参照）。トレオニンが低減されたホエー主要特殊調製粉乳を投与すると、母乳を与えられた乳児に匹敵する、インビボでのトレオニンプロフィールが得られる。本発明の組成物は、低トレオニン組成物、即ち、１００ｇのタンパク質当たり、２〜６ｇのトレオニンを含む組成物であることが好ましい。低トレオニン含量は、限外濾過によって調製されるホエー製品または特定の酸性ホエー製品を用いることによって達成されうる。
【００２６】
必須脂肪酸含量
本発明の組成物は、全脂肪酸に対して、少なくとも１０ｗｔ％のリノール酸（ＬＡ）を含み、好ましくは１１〜２０ｗｔ％、より好ましくは１２〜１５ｗｔ％である。本発明の組成物は、好ましくは、全脂肪酸に対して、少なくとも１ｗｔ％のα−リノレン酸（ＡＬＡ）を含み、好ましくは１．５〜４ｗｔ％のＡＬＡ、より好ましくは２〜２．５ｗｔ％である。腸のストレスを抑えるために、ＬＡ／ＡＬＡの重量比は、好ましくは２〜１０、好ましくは５〜７．５である。
【００２７】
本発明の組成物は、好ましくは、全脂肪酸に対して、０．０５〜５ｗｔ％のγ−リノレン酸（ＧＬＡ）を含み、好ましくは０．１〜１ｗｔ％である。
【００２８】
長鎖多価不飽和脂肪酸含量
本発明の組成物は、全脂肪酸に対して、０．１ｗｔ％を超える量の少なくとも一の２０〜２２炭素原子を有する長鎖多価不飽和脂肪酸（ＬＣＰＵＦＡ）を含み、この際、前記長鎖多価不飽和脂肪酸は、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、アラキドン酸（ＡＡ）及びエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）からなる群より選択される。好ましくは、本組成物は、全脂肪酸に対して、０．１ｗｔ％を超える量のＤＨＡ；および全脂肪酸に対して、０．１ｗｔ％を超える量のＡＡを含む。
【００２９】
好ましくは、この群の少なくとも一のＬＣＰＵＦＡが、本組成物の全脂肪酸含量に対して、０．１５〜１ｗｔ％の量で含まれる。好ましくは、これらのＬＣＰＵＦＡの少なくとも２種が、本組成物の全脂肪酸含量に対して、０．１５〜１ｗｔ％の量で存在する。好ましくは、本組成物は、ＡＡ及びＤＨＡを、さらにより好ましくはＡＡ、ＤＨＡ及びＥＰＡを含む。
【００３０】
ＡＡ含量は、全脂肪酸の、好ましくは５ｗｔ％以下であり、より好ましくは１ｗｔ％以下であり、最も好ましくは０．１〜０．６ｗｔ％である。本組成物では、ＥＰＡおよび／またはＤＨＡが、ＡＡの作用のバランスをとるために、例えば、ＡＡ代謝産物の潜在的な炎症誘発効果を抑制するために、添加されることが好ましい。ＡＡ由来の過剰な代謝産物は、炎症を引き起こす可能性がある。ゆえに、本発明の組成物は、好ましくは、ＡＡ、ＥＰＡおよび／またはＤＨＡを含み、この際、ＡＡ／ＤＨＡの重量比は、好ましくは０．２５超であり、好ましくは０．５超であり、さらにより好ましくは１超である。ＡＡ／ＤＨＡの比は、好ましくは２５未満であり、好ましくは１０未満である。ＡＡ／ＥＰＡの重量比は、好ましくは１〜１００であり、より好ましくは５〜２０である。ＥＰＡ／ＤＨＡの重量比は、好ましくは１以下であり、より好ましくは０．５未満である。
【００３１】
好ましい実施形態においては、可能な限り人乳に模倣することが望ましいため、ＬＣＰＵＦＡの含量は、全脂肪酸の３ｗｔ％以下である。同様の理由により、本発明の組成物は、１００ｇの脂肪酸当たり、好ましくは１ｇ未満のオメガ−３ ＬＣＰＵＦＡを含み、より好ましくは、１００ｇの脂肪酸当たり、０．１〜０．７５ｇである。オメガ−６ ＬＣＰＵＦＡ含量は、１００ｇの脂肪酸当たり、好ましくは２ｇ以下であり、１００ｇの脂肪酸当たり、好ましくは０．１〜０．７５ｇである。
【００３２】
ＬＣＰＵＦＡ及び他の脂肪酸は、遊離脂肪酸として、トリグリセリドの形態で、リン脂質の形態で、または上記一以上の混合物として提供されてもよい。本発明の組成物は、腸の炎症性疾患の発症を抑制するため、好ましくはリン脂質形態のＡＡ及びＤＨＡの少なくとも一方を含むことが好ましい。本発明の組成物は、全脂肪１ｇ当たり、０．１〜５ｍｇのリン脂質由来のＡＡ及び全脂肪１ｇ当たり、０．１〜５ｍｇのリン脂質由来のＤＨＡを含むことが好ましい。好ましくは、ＡＡおよび／またはＤＨＡは、少なくとも一部がホスファチジルコリン（ＰＣ）および／またはホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）の形態で存在し、例えば、ＰＥおよび／またはＰＣを含むＡＡおよび／またはＤＨＡがある。
【００３３】
単不飽和脂肪酸
本発明の栄養組成物はまた、十分な栄養を提供するために、オメガ−９（ｎ−９）脂肪酸（好ましくは、オレイン酸、１８：１）を含むことが好ましい。好ましくは、本発明の組成物は、全脂肪酸の重量に対して、少なくとも１５ｗｔ％のｎ−９脂肪酸を提供し、より好ましくは少なくとも２５ｗｔ％である。ｎ−９脂肪酸の含量は、全脂肪酸の重量に対して、８０ｗｔ％未満であることが好ましい。十分な栄養を提供するために、本発明の組成物は、飽和脂肪酸／多価不飽和脂肪酸の重量比が２〜５であることが好ましい。単飽和脂肪酸／飽和脂肪酸の重量比が０．５〜２であることが好ましい。
【００３４】
本発明の組成物は、全脂肪酸に対して、５〜２５ｗｔ％の多価不飽和脂肪酸を含み、好ましくは１０〜２０ｗｔ％である。
【００３５】
本発明の組成物は、ステアリドン酸（Ｃ１８：４ｎ３）を含ませることによってさらに改善されうる。本組成物は、好ましくは、全脂肪酸に対して、０．０５〜２ｗｔ％のステアリドン酸を含み、より好ましくは０．１〜１ｗｔ％である。
【００３６】
オリゴ糖
本発明の組成物は、乾燥重量１００ｇの組成物当たり、２〜１２ｇの重合度（ＤＰ）が２〜１００の難消化性オリゴ糖を含み、好ましくは３〜８ｇであり、より好ましくは５〜７．５ｇである。粉末を液体に再構成し、液状調乳を乳児に投与すると、これらの量の難消化性オリゴ糖は、腸に不快感を与えることなく所望の効果を奏する。適当な難消化性オリゴ糖は、ヒトの上部消化管（小腸及び胃）中に存在する酸または消化酵素の作用によって腸では消化されないまたは一部のみが消化されるが、ヒトの腸内細菌叢によって発酵可能である。オリゴ糖は水溶性であることが好ましい（１リットルの水当たり、１ｇオリゴ糖の溶解度を超える）。存在するオリゴ糖の平均ＤＰは、好ましくは４０未満であり、より好ましくは２０未満である。必要であれば、本発明の組成物は、ＤＰが２〜６０の、より好ましくはＤＰが２〜１０の２〜１２ｇ（即ち、ＤＰが２、３、４、５、６、７、８、９及び１０であるこれらのオリゴ糖の重量の合計）のオリゴ糖を含む。
【００３７】
さらなる実施形態によると、本発明の組成物の少なくとも一のオリゴ糖は、イヌリン、フルクトオリゴ糖、難消化性デキストリン、ガラクトオリゴ糖（トランスガラクトオリゴ糖（ｔｒａｎｓｇａｌａｃｔｏｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ）を含む）、キシロオリゴ糖、アラビノオリゴ糖、グルコオリゴ糖、マンノオリゴ糖、ラクト−Ｎ−ネオテトラオース、フコオリゴ糖（少なくとも一のフコースサッカリド単位を含む）、酸性オリゴ糖（下記参照、例えば、ペクチン加水分解物等のウロン酸オリゴ糖）およびこれらの混合物からなる群より選択される。
【００３８】
好ましくは、本発明の組成物は、イヌリン及びフルクトオリゴ糖からなる群より選択される少なくとも一種ならびにガラクトオリゴ糖（トランスガラクトオリゴ糖を含む）及びペクチン加水分解物からなる群より選択される少なくとも一種を含む。特に好ましい実施形態においては、本発明の組成物は、２〜１２ｇの、ＤＰが２〜１０のオリゴ糖ならびにβ−結合したガラクトースおよびグルコースサッカリド、より好ましくはトランスガラクトオリゴ糖（即ち、［ｇａｌ］ｎ−ｇｌｕ、この際、ｎは２〜１０である）を含む。特に好ましい実施形態においては、本発明の組成物は、トランスガラクトオリゴ糖（即ち、［ｇａｌ］ｎ−ｇｌｕ、この際、ｎは２〜１０である）、ペクチン加水分解物ならびにフルクトオリゴ糖及びイヌリンからなる群より選択される少なくとも一種を含む。本発明のオリゴ糖はまた、動物ミルク由来のオリゴ糖、動物ミルク由来のオリゴ糖の混合物またはフコシル化オリゴ糖（少なくとも一のフコースサッカリド単位を含むオリゴ糖）であってもよい。
【００３９】
結腸の全域にわたって腸の成熟のさらなる改善を目的として、好ましくは本発明の組成物における少なくとも１０ｗｔ％のオリゴ糖は、２〜５のＤＰ（即ち、２、３、４および／または５）を有し、および少なくとも５ｗｔ％が１０〜１００のＤＰを有する。回腸ならびに結腸の近位及び中位にわたって働くと考えられ、さらに所望の効果を達成するのに組成物中に含ませる必要のあるオリゴ糖の重量パーセントが減少するため、好ましくは、少なくとも５０ｗｔ％、より好ましくは少なくとも７５ｗｔ％のオリゴ糖が２〜１０のＤＰ（即ち、２、３、４、５、６、７、８、９および／または１０）を有する。
【００４０】
好ましい重量比は、下記の通りである：
（ＤＰが２〜５のオリゴ糖）：（ＤＰが６〜９のオリゴ糖）；および
（ＤＰが１０〜１００のオリゴ糖）：（ＤＰが６〜９のオリゴ糖）
が双方とも１超である。
【００４１】
好ましくは、双方の重量比が２超であり、さらにより好ましくは５超である。
【００４２】
本発明の組成物は、乾燥重量１００ｇの組成物当たり、０．５〜１０ｇの、ＤＰが２〜１０のガラクトオリゴ糖を含むことが好ましく、より好ましくは１〜５ｇである。最も良好に人乳のオリゴ糖を模倣するため、好ましいガラクトオリゴ糖はトランスガラクトオリゴ糖である。本発明は、好ましくは、乾燥重量１００ｇの組成物当たり、０．５〜１０ｇの、ＤＰが１０〜６０のフルクト多糖を含み、より好ましくは１〜５ｇである。「フルクト多糖」ということばは、少なくとも１０個のβ−結合したフルクトース単位の鎖を有する多糖炭水化物を意味する。
【００４３】
酸性オリゴ糖
バリア完全性をさらに改善するために、本発明の組成物は、ＤＰが２〜１００、好ましくは２〜６０の酸性オリゴ糖を含むことが好ましい。酸または酸性オリゴ糖ということばは、Ｎ−アセチルノイラミン酸、Ｎ−グリコロイルノイラミン酸、遊離またはエステル化カルボン酸、硫酸基およびリン酸基からなる群より選択される少なくとも一の酸基を有するオリゴ糖を意味する。酸性オリゴ糖は、好ましくは、ウロン酸単位（即ち、ウロン酸ポリマー）を含み、より好ましくはガラクトウロン酸単位を含む。本発明の組成物は、好ましくは、乾燥重量１００ｇの本発明の組成物当たり、０．１〜１０ｇの酸性オリゴ糖を含み、より好ましくは乾燥重量１００ｇ当たり、１〜６ｇである。
【００４４】
【化１】
【００４５】
この際、Ｒは、好ましくは、水素、ヒドロキシまたは酸基からなる群より選択され、好ましくはヒドロキシ基であり；および
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５からなる群より選択される少なくとも一は、Ｎ−アセチルノイラミン酸、Ｎ−グリコロイルノイラミン酸、遊離またはエステル化カルボン酸、硫酸基およびリン酸基を表わし、残りのＲ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は、ヒドロキシおよび／または水素を表わす。好ましくは、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５からなる群より選択される一は、Ｎ−アセチルノイラミン酸、Ｎ−グリコロイルノイラミン酸、遊離もしくはエステル化カルボン酸、硫酸基またはリン酸基を表わし、残りのＲ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は、ヒドロキシおよび／または水素を表わす。さらにより好ましくは、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５からなる群より選択される一は、遊離またはエステル化カルボン酸を表わし、残りのＲ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は、ヒドロキシおよび／または水素を表わし；さらに
ｎは、整数であり、いずれのヘキソース単位であってもよい、ヘキソース単位の数（また、下記重合度をも参照）を意味する。適切には、ｎは１〜５０００の整数である。好ましくは、ヘキソース単位は、ウロン酸単位である。
【００４６】
最も好ましくは、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、ヒドロキシを表わし、Ｒ４は、水素を表わし、Ｒ５は、カルボン酸を表わし、ｎは、１〜２５０、好ましくは１〜１０の数であり、ヘキソース単位は、ガラクトウロン酸である。
【００４７】
本発明の方法に使用される好ましい酸性オリゴ糖の検出、測定および分析は、酸性オリゴ糖に関連する本願出願人による先の特許出願である、ＷＯ ０／１６０３７８に記載されている。
【００４８】
好ましくは、酸性オリゴ糖は、１個、好ましくは２個の、末端ウロン酸単位を有し、この際、末端ウロン酸単位は遊離していてもあるいはエステル化されていてもよい。好ましくは、末端ウロン酸単位は、ガラクツロン酸、グルクロン酸、グルロン酸、イズロン酸、マンヌロン酸、リボウロン酸およびアルツウロン酸からなる群より選択される。これらの単位は、遊離していてもあるいはエステル化されていてもよい。さらにより好ましい実施形態においては、末端ヘキソース単位は二重結合を有し、この際、二重結合は末端ヘキソース単位のＣ４及びＣ５位置の間に位置することが好ましい。好ましくは、末端ヘキソース単位の一方は二重結合を有する。末端ヘキソース（例えば、ウロン酸）は下記構造ＩＩによる構造を有することが好ましい：
【００４９】
【化２】
【００５０】
この際、Ｒは、好ましくは、水素、ヒドロキシまたは酸基からなる群より選択され、好ましくはヒドロキシ基（上記参照）であり；および
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５からなる群より選択される少なくとも一は、Ｎ−アセチルノイラミン酸、Ｎ−グリコロイルノイラミン酸、遊離またはエステル化カルボン酸、硫酸基およびリン酸基を表わし、残りのＲ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は、ヒドロキシおよび／または水素を表わす。好ましくは、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５からなる群より選択される一は、Ｎ−アセチルノイラミン酸、Ｎ−グリコロイルノイラミン酸、遊離またはエステル化カルボン酸、硫酸基およびリン酸基を表わし、残りのＲ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は、ヒドロキシおよび／または水素を表わす。さらにより好ましくは、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５からなる群より選択される一は、遊離またはエステル化カルボン酸を表わし、残りのＲ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は、ヒドロキシおよび／または水素を表わし；ならびに、ｎは、整数であり、いずれのヘキソース単位であってもよい、ヘキソース単位の数（また、下記重合度をも参照）を意味する。適切には、ｎは１〜５０００の整数であり、ヘキソース単位の数を表わし、当該ヘキソースは好ましくはウロン酸であり、さらにより好ましくはガラクトウロン酸単位である。これらの単位のカルボン酸基は、遊離していてもあるいは（一部が）エステル化されていてもよく、好ましくは少なくとも一部がメチル化している。
【００５１】
最も好ましくは、Ｒ２及びＲ３がヒドロキシを表わし、Ｒ４が水素を表わし、およびＲ５が遊離またはエステル化されたカルボン酸を表わす。
【００５２】
本発明で使用される酸性オリゴ糖は、好ましくは、ペクチン、ペクチン酸塩、アルギン酸塩、コンドロイチン、ヒアルロン酸、ヘパリン、ヘパラン、細菌性炭水化物、シアログリカン、フコイダン、フコオリゴ糖またはカラギーナンから調製され、より好ましくはペクチンおよび／またはアルギン酸塩から調製される。好ましくは、ペクチン加水分解物が使用される。
【００５３】
ヌクレオチド
本発明の組成物はまた、乾燥重量１００ｇの組成物当たり、５〜１００ｍｇのヌクレオチドおよび／または５〜１００ｍｇのヌクレオシドを含むことが好ましく、より好ましくは５〜５０ｍｇである。ヌクレオチドおよび／またはヌクレオシドは、さらに免疫系を刺激し、本発明の組成物の他の成分と相乗的に作用する。
【００５４】
亜鉛
亜鉛は、成長および免疫反応の発達に必須の微量栄養素である。亜鉛が欠乏すると、全身の免疫機能および感染に対する耐性が損なわれる。ゆえに、本発明の組成物は、乾燥重量１００ｇの本発明の組成物当たり、２〜１００ｍｇ、さらにより好ましくは、乾燥重量１００ｇの本発明の組成物当たり、少なくとも４〜２５ｍｇ、の量の亜鉛を含むことが好ましい。亜鉛の重量は、亜鉛元素として算出される。
【００５５】
液体
本発明の組成物は、粉末もしくは液体形態または錠剤形態であることが好ましく、この際、錠剤は５〜２５ｇの重量を有する。好ましくは、本発明の組成物は、保存寿命が延びるため、粉末形態で提供される。本発明の組成物は、液状で経口投与されることが好ましい。本発明の組成物を投与する前に、液体、好ましくは水と混合されることが好ましい。液体組成物は３５〜４０℃（好ましくは、約３７℃）の温度を保ちつつ投与されることが好ましいので、液状調乳は、下記によって調製されることが好ましい：
方法ａ：１〜１０：１の水：組成物の重量比で、３０℃未満の温度の水および請求項１〜１０のいずれか１項に記載の組成物を混合し；さらに段階ａ）で得られた混合物を３５〜５０℃の温度に加熱する；または
方法ｂ：１〜１０：１の水：組成物の重量比で、６０℃未満の温度の水および請求項１〜１０のいずれか１項に記載の組成物を混合し；さらに段階ａ）で得られた混合物を３５〜４０℃の温度にまで冷却する。方法ａ）の方が粉末から液状調乳の調製には適しており、一方で、方法ｂ）の方が錠剤から液状調乳を調製するには適している。
【００５６】
便秘（例えば、硬い便、不十分な便容積、下痢）は、液状食物を摂取する多くの幼児や病気の患者には主だった問題である。便の問題は、５０〜５００ｍＯｓｍ／ｋｇ、より好ましくは１００〜４００ｍＯｓｍ／ｋｇ、最も好ましくは２２０〜３００ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧を有する、液状の本発明の組成物を投与することによって、抑えられる可能性があることが判明した。
【００５７】
上記下痢の問題を考慮すると、液状食物は、顕著な腸へのストレスを引き起こすので、過剰なカロリー密度を持たないこともまた重要である。しかしながら、調乳は、乳児に食物を与えるのに十分なカロリーを供給する必要がある。ゆえに、液状食物は、０．５〜０．９ｋｃａｌ／ｍｌ、好ましくは０．６〜０．８ｋｃａｌ／ｍｌのカロリー密度を有することが好ましい。
【００５８】
用途
本発明の組成物は、０〜２歳の乳児に投与されることが好ましい。本発明の組成物はまた、早産児（３７週の妊娠期間前に生まれた乳児）の栄養必要量を提供する方法に好ましく使用されうる。好ましい実施形態においては、本発明は、０〜３０日齢の乳児に食物を与える方法を提供する。
【００５９】
本発明の組成物は、構成される免疫系および／または腸バリアの未熟が病気の経過の発達の根底にある病気を治療するまたは予防するのに好ましく使用できる。ゆえに、本発明の組成物は、特に０〜２歳の乳児の、下痢またはアレルギーを治療するまたは予防するのに好ましく使用できる。本発明の組成物は、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、アレルギー性皮膚炎、アトピー性皮膚炎および／または食物アレルギーの治療および／または予防に特に適切である。
【００６０】
本発明の組成物は、包装粉末または包装された食事の与え易い調乳として提供されることが好ましい。製品の腐敗を防止するために、食事の与え易い調乳の包装サイズは、一人分を超えない、例えば、５００ｍｌ以下であることが好ましく；さらに、粉末形態の本発明の組成物の包装サイズは、２５０回分以下であることが好ましい。粉末での適当な包装サイズは、２０００ｇ以下、好ましくは１０００ｇ以下である。
【００６１】
上記または下記の目的の一以上に従った製品の使用に関して消費者に陰に陽に示唆するラベルのついた包装製品は、本発明に包含される。このようなラベルは、例えば、「腸および／または免疫系の成熟化を刺激する」、「アレルギー反応を低減する」、「少ないストレス」、「改善された耐性」または「低い感受性」または同様の表現のような表現を含んでもよい。
【００６２】
したがって、炎症疾患、下痢、湿疹および／またはアトピー性皮膚炎の治療および／または予防を目的として哺乳動物に投与される粉ミルク食品もしくは薬剤の製造を目的とする本明細書に記載される組成物の使用が本発明の対象である。
【００６３】
さらに、哺乳動物および特にヒト乳児に経腸管的にまたは経口的に本組成物を投与することを含む、炎症疾患、下痢、湿疹および／またはアトピー性皮膚炎の治療および／または予防方法に使用される薬剤の製造を目的とする本明細書に記載される組成物の使用が本発明の対象である。
【００６４】
本発明を、下記実施例によってさらに説明する。
【００６５】
実施例１：乳児用栄養
液状乳児用栄養は、最終産物が１００ｍｌになるように、１３．９ｇの粉末を水と混合することによって調製され、この際、当該液状製品は、１００ｍｌ当たり、下記を含む：
【００６６】
【表１】
【００６７】
本組成物は、さらに、コリン（６ｍｇ／１００ｍｌ）及びタウリン（６．３ｍｇ／１００ｍｌ）；ミネラル及び微量元素（２ｍｇ亜鉛／１００ｍｌを含む）ならびに乳児用調乳に関する国際ガイドラインに従った量のビタミン類を含む。
【００６８】
実施例２：
実施例１に記載の包装された乳児用調乳。この際、包装には、調乳がアレルギーを予防または治療するのに適切に使用できることを示すラベルがついている。
【００６９】
実施例３：
実験準備
必要であれば中性オリゴ糖を合わせた、酸性オリゴ糖を含む、食べ物の効果を、遅延型過敏症（ＤＴＨ）応答について試験した。ここで、遅延型過敏症（ＤＴＨ）応答は、Ｔｈ１免疫応答のパラメーターであり、局所的な抗原チャレンジ後の耳の腫れの増加を測定することによって測定される。
【００７０】
使用される酸性オリゴ糖（ＡｃＯｌ）は、平均ＤＰが２〜１０であり、ＷＯ ０２／４２４８４（実施例１参照）に記載される方法によって得られた。食べ物の総重量に対して１ｗｔ％、２．５ｗｔ％、５ｗｔ％及び１０％ｗｔ％ ＡｃＯｌを含む食べ物を試験した。ガラクトオリゴ糖（ＧＯＳ）（Ｖｉｖｉｎａｌ−ＧＯＳＴＭ（Ｂｏｒｃｕｌｏ Ｄｏｍｏ Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ，Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）及びフルクトオリゴ糖（ＦＯＳ）（Ｒａｆｔｉｌｉｎｅ ＨＰTM，Ｏｒａｆｔｉ，Ｔｉｅｎｅｎ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）を含む中性オリゴ糖混合物（ＧＦ）を、ＧＯＳ：ＦＯＳの重量比が９：１で使用した。食べ物の総重量に対して１、２．５及び５ｗｔ％のＧＦを含む食べ物を試験した。酸性及び中性オリゴ糖（ＧＦ及びＡｃＯｌ）の組合わせの効果を、食べ物の総重量に対して１ｗｔ％ＧＦ及び１ｗｔ％ＡｃＯｌを含む食べ物で試験した。
【００７１】
すべてのデータは、コントロール値に対する百分率、即ち、（オリゴ糖を含まない）コントロールの食べ物を摂取した群と比較した、オリゴ糖を補足した群の相対値として示す。
【００７２】
動物および食べ物
メスの、６週齢のＣ５７Ｂｌ／６マウス（Ｈａｒｌａｎ Ｎｅｄｅｒｌａｎｄ ＢＶ，Ｈｏｒｓｔ，ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を、規則的に１２時間毎に明るく／暗くしたレジメでグループ毎に飼育した。グループの大きさは、１群１０匹の動物であり、ネガティブコントロール群は３匹の動物であった。動物に、半合成食（Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｄｉｅｔ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｗｉｊｋ ｂｉｊ Ｄｕｕｒｓｔｅｄｅ，ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を与えた。コントロール食は、ＡＩＮ９３Ｇ仕様（Ｒｅｅｖｅｓ ｅｔ ａｌ（１９９３） Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ Ｔｅｓｔｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ ＡＩＮ９３ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ｄｉｅｔｓ ｆｏｒ ｒｏｄｅｎｔｓ： ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｎ ｇｒｏｗｔｈ ｋｉｄｎｅｙ ｃａｌｃｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｂｏｎｅ ｍｉｎｅｒａｌｉｓａｔｉｏｎ ｉｎ ｒａｔｓ ａｎｄ ｍｉｃｅ． Ｊ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ １２３（１１）：１９２３−３１）、で作製し、オリゴ糖を補足した食事は、これらの仕様に基づいた。補足食の炭水化物含量は、重量に基づいてオリゴ糖を全炭水化物に換算することによって一定に維持した。別の炭水化物成分は、食事中の各正常値になるように置換した。通常の食事の炭水化物は、コーンスターチ（全重量の４０％）、デキストリン化コーンスターチ（１３．２％）、スクロース（１０％）及びセルロース（５％）から構成される。
【００７３】
ワクチン接種プロトコル
ワクチン接種を、新しい家と餌に適応させてから２〜４週間後に開始した。０日目に、ワクチン接種前に、血液サンプルを集めた。１日目に、１回目のワクチン接種を皮下に投与した。３週間後、血液サンプルを集め（２１日目）、追加ワクチン接種を行なった（２２日目）。追加の注射から９日目（３１日目）に、基底耳の厚みを、Ｄｉｇｉｍａｔｉｃ外側マクロメーター（Ｍｉｔｕｔｏｙｏ，Ｖｅｅｎｅｎｄａａｌ，ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を用いて測定し、遅延型過敏症（ＤＴＨ）応答を、マウスの耳介のｉ．ｃ．に（皮内に）抗原溶液を注射することによって誘導した。２４時間後（３２日目）に、ＤＴＨ応答を測定し、血液サンプルを採取し、マウスを剖検した。脾臓を単離し、ｅｘ ｖｉｖｏ再刺激用に調製した。
【００７４】
ワクチン接種液は、抗原溶液及びＳｔｉｍｕｎｅアジュバント（Ｓｐｅｃｏｌ，Ｃｅｄｉ−ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ ＢＶ，Ｌｅｌｙｓｔａｄ，ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）の１：１混合液の１００μｌのｉ．ｃ．用（皮内用）注射液から構成された。抗原溶液は、Ｉｎｆｌｕｖａｃ ２００２／２００３（Ｓｏｌｖａｙ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｗｅｅｓｐ，ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）のＰＢＳによる１：１００希釈液であった。Ｉｎｆｌｕｖａｃは、３種の異なるインフルエンザ株の３×３０μｇ／ｍｌのヘマグルチニンを含む、３価タンパク質ワクチンである。
【００７５】
ＤＴＨ応答に関しては、マウスの双方の耳に、２５μｌの透析したＩｎｆｌｕｖａｃをＤＴＨチャレンジとして皮内注射した。
【００７６】
細胞培養物
脾細胞を、細かいメッシュの細胞ストレーナー（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｅｒｅｍｂｏｄｅｇｅｍ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）を用いて脾臓から単離した。赤血球を、氷上で５分間インキュベーションすることによって溶解した。フェノールレッドを含まない培養液で洗浄した後、細胞を計測し（Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｃｏｕｎｔｅｒ，Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ，ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）、氷上に保持した。培養物を、０．１μｇ／ｍｌの透析したＩｎｆｌｕｖａｃを刺激剤として用いて誘導した。細胞を、１ウェル当たり１×１０６細胞で９６ウェルの培養プレートに播種した。培養液は、１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）を含むＨＥＰＥＳ緩衝液及び２ｍＭ Ｌ−グルタミン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｍｅｒｅｌｂｅｋｅ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）を含むＲＰＭＩ−１６４０から構成された。培養物を、５％ ＣＯ２で３７℃で５日間インキュベートした。その後、上清を集めて、分析するまでは−８０℃で冷凍した。細胞の増殖を、最後の１８時間、０．４μＣｕ／ウェルで培養物に添加した、３Ｈ−チミジンの取り込みによって並列培養物で測定した。５日後、細胞をＦｉｌｔｅｒｍａｔｅハーベスター（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ，Ｚａｖｅｎｔｅｍ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）を用いて集め、Ｍｉｃｒｏ−Ｂｅｔａカウンター（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ，Ｚａｖｅｎｔｅｍ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）で計測した。放射性崩壊を、１ウェル当たり１分間測定し、１分当たりの計測数（ｃｐｍ）を増殖速度の指標として記録した。
【００７７】
サイトカインを、Ｉｎｆｌｕｖａｃで刺激した培養物の上清において分析した。ＩＬ−２、ＩＬ−５、ＩＬ−１０及びＩＦＮ−ガンマを、上記サイトカイン用のカスタム混合ビーズセット（ｃｕｓｔｏｍ ｍｉｘｅｄ ｂｅａｄｓｅｔ）を有するＢｉｏ−Ｐｌｅｘシステム（Ｂｉｏ−Ｒａｄ，Ｖｅｅｎｅｎｄａａｌ，ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を用いて測定した。サイトカインを、製造社の仕様に従って測定した。ＩＬ−４を、製造社の仕様に従って、Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ ＯｐｔＥＩＡマウスＩＬ−４キット（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｅｒｅｍｂｏｄｅｇｅｍ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）を用いてＥＬＩＳＡによって測定した。
【００７８】
結果
ＤＴＨ応答酸性オリゴ糖
１ｗｔ％、２．５ｗｔ％及び５ｗｔ％ ＡｃＯｌの量を含む食べ物は、ＤＴＨ応答の統計学的に有意な増加を誘導し、用量依存的な増加を示した（表１参照）。観察された効果は、本方法に酸性オリゴ糖を使用することが好ましいことを示す。
【００７９】
【表２】
【００８０】
ＤＴＨ応答酸性及び中性オリゴ糖
１ｗｔ％ＧＦ、２．５ｗｔ％ＧＦの組合わせならびに１ｗｔ％ＧＦ及び１ｗｔ％ＡｃＯｌの混合物は、ＤＴＨの統計学的に有意な増加を誘導した（表２参照）。観察された結果は、本発明の方法に、難消化性オリゴ糖、特に酸性及び中性オリゴ糖の組合わせが好ましく使用されることを示す。
【００８１】
【表３】
【００８２】
酸性オリゴ糖のＩｎｆｌｕｖａｃ特異的増殖
２．５ｗｔ％及び５ｗｔ％酸性オリゴ糖（ＡｃＯｌ）を含む食べ物を投与すると、ｅｘ ｖｉｖｏでのＩｎｆｌｕｖａｃに特異的な増殖に対して有意な低減効果を誘導した（表３参照）。観察された効果は、本発明の方法に酸性オリゴ糖が好ましく使用されることを示す。
【００８３】
酸性及び中性オリゴ糖の組合わせのＩｎｆｌｕｖａｃ特異的増殖
１ｗｔ％ＧＦ及び１ｗｔ％ＡｃＯｌの組み合わせを投与すると、抗原に特異的な増殖に対して有意な低減効果を誘導した（表３参照）。この効果は酸性または中性オリゴ糖単独を含む食べ物によるＤＴＨ応答に比して有意に向上するため、これらの結果は、酸性及び中性オリゴ糖を投与することによって相乗効果が得られることを示す。観察された効果は、本発明の方法に酸性および中性オリゴ糖を組合わせて使用することが好ましいことを示す。増殖が抑制されることから、Ｔｈ２応答の低減、および本発明の方法のＴｈ１／Ｔｈ２バランス効果が示される。
【００８４】
【表４】
【００８５】
Ｔｈ１／Ｔｈ２バランス：酸性オリゴ糖の投与後のサイトカインプロフィール
サイトカインプロフィールを、Ｉｎｆｌｕｖａｃに特異的な脾細胞の培養上清で測定した。データは、ワクチン接種したコントロール群（即ち、オリゴ糖を投与しない）の値に対する百分率として表わす。コントロールに比べて、２．５ｗｔ％及び５ｗｔ％ＡｃＯｌを含む食べ物は、Ｔｈ２−関連サイトカインであるＩＬ−４、ＩＬ−５及びＩＬ−１０を減少させるが、Ｔｈ１−関連サイトカインであるＩＬ−２は増加し、ＩＦＮ−γは有意には低下しなかった（表４参照）。これらの結果は、酸性オリゴ糖のＴｈ１／Ｔｈ２バランス効果を示すものであり、また、本発明の方法、例えば、Ｔｈ１免疫力が比較的低い病気の治療および／または予防方法に酸性オリゴ糖が好ましく使用されることを示す。
【００８６】
Ｔｈ１／Ｔｈ２バランス：酸性及び中性オリゴ糖の投与後のサイトカインプロフィール
コントロールに比べて、１ｗｔ％ＧＴ及び１ｗｔ％ＡｃＯｌの組み合わせを投与すると、Ｔｈ２−関連サイトカインであるＩＬ−４、ＩＬ−５及びＩＬ−１０は減少するが、Ｔｈ１−関連サイトカインであるＩＬ−２及びＩＦＮ−γは低下しなかった（表４参照、ここで、データは、ワクチン接種したコントロール群（即ち、オリゴ糖を投与しない）の値に対する百分率として表わす）。これらの結果は、酸性及び中性オリゴ糖の組合わせのＴｈ１／Ｔｈ２バランス効果を示すものであり、また、本発明の方法、例えば、Ｔｈ１免疫力が比較的低い病気の治療および／または予防方法に酸性オリゴ糖が好ましく使用されることを示す。特に、ＩＬ−４／ＩＦＮ比は、Ｔｈ１／Ｔｈ２バランスに反映する。換言すると、ＩＬ−４／ＩＦＮ比が低いことは、Ｔｈ１の刺激および／またはＴｈ２の阻害を示し、いずれにしても、本発明に係るオリゴ糖のＴｈ１−Ｔｈ２バランス効果が示される。
【００８７】
【表５】
【技術分野】
【０００１】
技術分野
本発明は、脂肪成分、タンパク質成分及び炭水化物成分を含みかつホエーおよびカゼインを含む栄養または薬剤組成物に、ならびに当該組成物の使用に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
授乳は、乳児の発育を最適に支持し、感染から身を守る。しかしながら、乳児全員が人乳をもらえる立場にあるわけではない。このため、人乳の機能を模倣する、特殊調製粉乳を提供するという目的が現在も続いている。特殊調製粉乳と人乳との望ましい組成上の類似に加えて、人乳の保護作用をまねることが特に望ましい。人乳は、例えば、感染症やアレルギーから身を守ることが示された。
【０００３】
最新の調乳では、ホエーに対するカゼインの割合が可能な限り人乳に近い。この割合により乳児が最適に成長できると考えられる。しかしながら、ウシホエー主要タンパク質源の使用に付随したマイナス面が幾つか依然として存在する。これらのホエー主要調乳は、感染症から身を守るには最適ではない。このような調乳を与えると、特に最初の３〜４週齢では、人乳を与えた乳児に比して、乳児の腸内細菌叢の発達が悪い。ホエー主要調乳を与えた乳児の細菌叢は、人乳を与えた乳児と同じ細菌属をおよそ含んでいるが、有益な細菌数は、人乳をもらっている乳児に比べてホエー主要調乳をもらっている乳児では少ない。さらに、ホエー主要ウシタンパク質源を含む調乳を与えた乳児の細菌叢は、クロストリジウムや腸内細菌等の異常な細菌の量が増える。ゆえに、ホエー主要調乳を乳児に与えると、「次善最適な腸内細菌叢」が形成される。
【０００４】
非常に幼い乳児は免疫系が未熟で腸管も未熟であるため、次善最適な腸内細菌叢が発達すると、感染症、下痢、アレルギー及び炎症が起こる。特に、０〜３０日齢でかつウシホエー主要タンパク質を含む調乳が与えられた乳児は、大便の細菌叢が人乳を与えられた乳児とは最も異なるため、これらのリスクをおいやすい。
【発明の開示】
【０００５】
発明の要約
本発明の目的は、ホエー主要特殊調製粉乳を与えることに付随したリスクを抑える栄養または薬剤組成物を提供することである。
【０００６】
上記目的は、請求項１に記載の組成物によって解決される。
【０００７】
本発明の組成物は、
ホエーに対するカゼインの重量比が１：１〜１：２．４であり、さらに
前記組成物が、
ａ）１００ｇのタンパク質当たり、少なくとも３ｇのアルギニン；
ｂ）全脂肪酸に対して、少なくとも１０ｗｔ％のリノール酸（ＬＡ）；
ｃ）全脂肪酸に対して、少なくとも１ｗｔ％のα−リノレン酸（ＡＬＡ）；
ｄ）全脂肪酸に対して、０．１ｗｔ％を超える量の少なくとも一の長鎖多価不飽和脂肪酸（ＬＣＰＵＦＡ）、この際、前記長鎖多価不飽和脂肪酸（ＬＣＰＵＦＡ）は、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、アラキドン酸（ＡＲＡ）及びエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）からなる群より選択される；
ｅ）全脂肪酸に対して、５〜２５ｗｔ％の少なくとも一の多価不飽和脂肪酸；および
ｆ）乾燥重量１００ｇの組成物当たり、２〜１２ｇの重合度が２〜１００の難消化性オリゴ糖
を含むことを特徴とする。
【０００８】
本発明の組成物は、免疫系の成熟及び腸管の成熟を刺激する。本発明の組成物は、感染症、下痢及びアレルギー等の、乳児の炎症性疾患を予防するおよび／または治療するのに特に適切である。本発明の組成物は：
・「最適な腸内細菌叢」（即ち、人乳を与えることによって得られる細菌叢と同様の細菌叢）の発達を刺激する；
・胃腸管の成熟を刺激することにより、異常な細菌、毒素及び食物アレルゲン等のアレルゲンが体循環に入るのを予防する；
・免疫系の成熟を刺激することにより、アレルゲン、病原または毒素が腸バリアを通るおよび／または体循環に入る際に、より良好に防御する；
・同時に乳児に最適な栄養を提供する。
【０００９】
「リスクの低い腸内細菌叢」の発達の根底にある生理学的過程である、腸の成熟及び免疫系の成熟は、非常に相関性があり、共依存していると考えられる。ゆえに、特殊調製粉乳は、腸の成熟、免疫系の成熟及びリスクの低い腸内細菌叢の発達を刺激する、適当なバランスで、すべてのこれらの成分を含む必要がある。成分を最適に組合わせると、乳児はアレルゲンからより良好に保護される。本発明の組成物は、このような成分の最適な組み合わせを提供する。成分はしばしば異なるメカニズムで作用するため、本発明の組成物の成分は相乗的に作用し、乳児によりよい耐性を与え、炎症性疾患、特にアレルギーの発症率を低減する。
【００１０】
本発明の組成物は、重合度の低いオリゴ糖を含む。このようなオリゴ糖は、リスクの低い腸内細菌叢の形成を刺激して、特にクロストリジウム、腸内細菌および／または腸球菌等の異常である（可能性のある）腸内細菌の数を減らし；さらにビフィドバクテリウムや乳酸菌によるコロニー形成を刺激する。ビフィドバクテリウムや乳酸菌は、例えば、腸上皮細胞によるフコ−オリゴ糖の合成を刺激することにより、腸の成熟を刺激する。最適な刺激は、異なるオリゴ糖の混合物、特に中性及び酸性オリゴ糖双方を含むオリゴ糖の混合物を含ませることによって達成される。また、オリゴ糖は、Ｔｈ２応答を低減し、Ｔｈ１応答を向上することにより免疫系に「直接的な」効果を及ぼす。オリゴ糖を含む本発明の組成物はＴｈ１／Ｔｈ２応答の不均衡を回復し、自己免疫及びアレルギー等の、Ｔｈ１／Ｔｈ２不均衡に関連する疾患の治療および予防に好ましく使用されうることが判明した。
【００１１】
しかしながら、たとえオリゴ糖を非ヒトホエー主要タンパク質とを組合わせたとしても、このような組成物が与えられる乳児は、最初の１ヶ月間は感染症のリスクが高くなる。ゆえに、免疫系および／または腸の成熟度をさらに改善することが望ましい。
【００１２】
驚くべきことに、ＬＣＰＵＦＡが上皮傍細胞の透過性を効果的に抑制することが判明した。Ｕｓａｍｉ ｅｔ ａｌ（Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ ２００１，２０（４）：３５１−３５９）が報告したこととは反対に、Ｃ１８及びＣ２０多価不飽和脂肪酸、特にエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ；Ｃ２０：５ ｎ３）ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ；Ｃ２２：５６ ｎ３）及びアラキドン酸（ＡＡ；Ｃ２０：４）が腸密着結合部の透過性を有効に抑制し、これにより腸の成熟を刺激することができることを見出した。ゆえに、本発明の組成物は、ＬＣＰＵＦＡを含むことが好ましい。加えて、必須脂肪酸であるリノール酸（Ｃ１８：２ ｎ６）及びα−リノレン酸（Ｃ１８：３ ｎ３）は、腸管の成熟に加えて免疫系の成熟双方に不可欠である。さらに特に好ましい実施形態においては、本発明の組成物はまた、γ−リノレン酸（ＧＬＡ；Ｃ１８：３ （ｎ−６））を含む。したがって、本発明の組成物は、リノール酸及びα−リノレン酸を含む。
【００１３】
必要であれば、しかし、非常に好ましくは、本発明の組成物はまた、ヌクレオチドおよび／またはヌクレオシドを含む。ヌクレオチドは、腸管の成熟を刺激し、下痢の発症を抑制し、さらに免疫系を刺激する。ヌクレオチドが補足されない調乳に対してヌクレオチドが補足された調乳が与えられた乳児は、抗原に対して発現した後の抗体価が上昇し、抗原ナチュラルキラー細胞活性を刺激した（Ｃａｒｖｅｒ ｅｔ ａｌ Ａｃｔａ Ｐａｅｄｉａｔｒｉｃａ，（１９９９） Ｖｏｌ．８８， Ｎｏ． Ｓｕｐ ４３０，ｐｐ．８３−８８）。
【００１４】
詳細な説明
本発明の組成物は、ホエー主要非ヒトタンパク質源、長鎖多価不飽和脂肪酸およびオリゴ糖を含む。
【００１５】
上述したように、本発明は、ホエーに対するカゼインの重量比が１：１〜１：２．４であり、１００ｇのタンパク質当たり、少なくとも３ｇのアルギニンを含む組成物を提供する。
【００１６】
このカゼイン／ホエー比に関する１：１〜１：２．４という範囲は、この範囲に含まれるすべての値を含み、ゆえに、例えば、下記のホエーに対するカゼインの割合を含む：１：１、１：１．１、１：１．２、１：１．３、１：１．４、１：１．５、１：１．６、１：１．７、１：１．７、１：１．９、１：１．２、１：１．３、１：１．４、１：１．５、１：１．６、１：１．７、１：１．８、１：１．９、１：２．０、１：２．１、１：２．２、１：２．３、及び１：２．４。好ましい実施形態においては、カゼイン：ホエー比は、１：１．４〜１．６であり、より好ましくは約１：１．５（４０：６０）である。
【００１７】
アルギニンは、好ましくは、１００ｇのタンパク質成分当たり、３〜８ｇの量で存在する。この範囲は、すべての値を開示しており、特に、３、４、５、６、７、及び８ｇなどのこの範囲に含まれるすべての整数値を含む。本組成物は、好ましくは、１００ｇのタンパク質当たり、４〜５ｇのアルギニンを含む。
【００１８】
本組成物中に存在するＬＣＰＵＦＡは、ＤＨＡ、ＡＡ及びＥＰＡからなる群より選択される。これは、１または２または３種の当該長鎖多価不飽和脂肪酸が存在しうることを意味する。
【００１９】
多価不飽和脂肪酸に関して記載される５〜２５ｗｔ％という範囲は、この範囲に含まれるすべての値を開示する。
【００２０】
本組成物は、人乳から構成される組成物を含まない。本方法は、人乳から構成される組成物の投与を有する方法を包含しない。ゆえに、好ましくは、本方法は、非ヒト由来の物質、好ましくは、非ヒト由来の、好ましくは植物、動物、細菌または合成物由来の、炭水化物繊維、脂肪および／またはタンパク質を含む組成物の投与を包含する。好ましくは、本発明の組成物を調製するもととなる成分及び構成成分はすべて非ヒト源由来である。
【００２１】
主要栄養素
本組成物は、特殊調製粉乳として好ましく使用されうる。このような特殊調製粉乳は、好ましくは、脂質成分、タンパク質成分および炭水化物成分を含み、液状で乳児に投与されることが好ましい。
【００２２】
好ましい実施形態において、本発明は、３０〜６０ｅｎ％の脂質；５〜１５ｅｎ％のタンパク質；および２５〜７５ｅｎ％の炭水化物を含む組成物、特に特殊調製粉乳に関するものである。好ましくは、本組成物は、５〜１５ｅｎ％のタンパク質、３０〜６０ｅｎ％の脂肪および２５〜６５ｅｎ％の炭水化物を含む。より好ましくは、本組成物は、４３〜５３ｅｎ％の脂質；７〜１１ｅｎ％のタンパク質；および４３〜５３ｅｎ％の炭水化物を含む（ｅｎ％は、エネルギーパーセントの略称であり、各構成成分が調製物の全カロリー値に寄与する相対量を表わす）。
【００２３】
本発明の特殊調製粉乳のタンパク質成分は、上記した重量比でカゼイン及びホエーを含む。カゼイン／ホエーは、好ましくは、非ヒト哺乳動物のミルク由来である。乳児に最適な栄養を提供するためには、本組成物は、特定量のアルギニンを含む。本明細書において、「タンパク質」またはタンパク質成分ということばは、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド及びアミノ酸の累積である。アルギニンは、本組成物では不可欠である。アルギニンは、腸の炎症の症状の発症を抑制する（Ａｍｉｎ ｅｔ ａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ，（２００２） Ｖｏｌ．１４０，Ｎｏ．４，ｐｐ．４２５−４３１）。さらに、アルギニンは、免疫系を刺激し、健常な免疫系の維持に必要である（Ｎｉｅｖｅｒ ｅｔ ａｌ，Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ＆ Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ，（２００２） Ｖｏｌ．５６，Ｎｏ．１０，ｐｐ．４７１−４８２）。カゼイン及びホエーは、アルギニンを含むが、ほとんどのミルク源（例えば、ウシホエー及びカゼイン）では、カゼイン及びホエーは、不十分なアルギニンを提供する。好ましくは、少なくとも一部のアルギニンを、遊離アミノ酸ベース、例えば、Ｌ−アルギニン、の形態で、または遊離アミノ酸が好ましい塩もしくはエステルの形態で、組成物に補足される。本発明の組成物は、好ましくは、乾燥特殊調製粉乳１００ｇ当たり、７５〜５００ｍｇの遊離アミノ酸形態のアルギニン、より好ましくは乾燥特殊調製粉乳１００ｇ当たり、１５０〜４００ｍｇの遊離アミノ酸形態のアルギニンを含む。
【００２４】
本発明の組成物中の炭水化物は、ほとんどラクトースによって供給されることが好ましく、すなわち、好ましくは全可消化炭水化物の少なくとも７５ｗｔ％がラクトースによって提供され、好ましくは少なくとも９０ｗｔ％である。
【００２５】
低トレオニンタンパク質
非ヒトタンパク質源由来のホエー主要特殊調製粉乳は、一般的に、人乳に比して生物学的に利用可能なトレオニン含量が高い。人乳は、比較的少量の生物学的に利用可能なトレオニンを含む。ゆえに、ホエー主要調乳のトレオニン含量の低減方法が当該分野において提供される（例えば、ＥＰ １０４８２２６、ＷＯ ０１１１９９０及びＥＰ ７４１５２２を参照）。トレオニンが低減されたホエー主要特殊調製粉乳を投与すると、母乳を与えられた乳児に匹敵する、インビボでのトレオニンプロフィールが得られる。本発明の組成物は、低トレオニン組成物、即ち、１００ｇのタンパク質当たり、２〜６ｇのトレオニンを含む組成物であることが好ましい。低トレオニン含量は、限外濾過によって調製されるホエー製品または特定の酸性ホエー製品を用いることによって達成されうる。
【００２６】
必須脂肪酸含量
本発明の組成物は、全脂肪酸に対して、少なくとも１０ｗｔ％のリノール酸（ＬＡ）を含み、好ましくは１１〜２０ｗｔ％、より好ましくは１２〜１５ｗｔ％である。本発明の組成物は、好ましくは、全脂肪酸に対して、少なくとも１ｗｔ％のα−リノレン酸（ＡＬＡ）を含み、好ましくは１．５〜４ｗｔ％のＡＬＡ、より好ましくは２〜２．５ｗｔ％である。腸のストレスを抑えるために、ＬＡ／ＡＬＡの重量比は、好ましくは２〜１０、好ましくは５〜７．５である。
【００２７】
本発明の組成物は、好ましくは、全脂肪酸に対して、０．０５〜５ｗｔ％のγ−リノレン酸（ＧＬＡ）を含み、好ましくは０．１〜１ｗｔ％である。
【００２８】
長鎖多価不飽和脂肪酸含量
本発明の組成物は、全脂肪酸に対して、０．１ｗｔ％を超える量の少なくとも一の２０〜２２炭素原子を有する長鎖多価不飽和脂肪酸（ＬＣＰＵＦＡ）を含み、この際、前記長鎖多価不飽和脂肪酸は、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、アラキドン酸（ＡＡ）及びエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）からなる群より選択される。好ましくは、本組成物は、全脂肪酸に対して、０．１ｗｔ％を超える量のＤＨＡ；および全脂肪酸に対して、０．１ｗｔ％を超える量のＡＡを含む。
【００２９】
好ましくは、この群の少なくとも一のＬＣＰＵＦＡが、本組成物の全脂肪酸含量に対して、０．１５〜１ｗｔ％の量で含まれる。好ましくは、これらのＬＣＰＵＦＡの少なくとも２種が、本組成物の全脂肪酸含量に対して、０．１５〜１ｗｔ％の量で存在する。好ましくは、本組成物は、ＡＡ及びＤＨＡを、さらにより好ましくはＡＡ、ＤＨＡ及びＥＰＡを含む。
【００３０】
ＡＡ含量は、全脂肪酸の、好ましくは５ｗｔ％以下であり、より好ましくは１ｗｔ％以下であり、最も好ましくは０．１〜０．６ｗｔ％である。本組成物では、ＥＰＡおよび／またはＤＨＡが、ＡＡの作用のバランスをとるために、例えば、ＡＡ代謝産物の潜在的な炎症誘発効果を抑制するために、添加されることが好ましい。ＡＡ由来の過剰な代謝産物は、炎症を引き起こす可能性がある。ゆえに、本発明の組成物は、好ましくは、ＡＡ、ＥＰＡおよび／またはＤＨＡを含み、この際、ＡＡ／ＤＨＡの重量比は、好ましくは０．２５超であり、好ましくは０．５超であり、さらにより好ましくは１超である。ＡＡ／ＤＨＡの比は、好ましくは２５未満であり、好ましくは１０未満である。ＡＡ／ＥＰＡの重量比は、好ましくは１〜１００であり、より好ましくは５〜２０である。ＥＰＡ／ＤＨＡの重量比は、好ましくは１以下であり、より好ましくは０．５未満である。
【００３１】
好ましい実施形態においては、可能な限り人乳に模倣することが望ましいため、ＬＣＰＵＦＡの含量は、全脂肪酸の３ｗｔ％以下である。同様の理由により、本発明の組成物は、１００ｇの脂肪酸当たり、好ましくは１ｇ未満のオメガ−３ ＬＣＰＵＦＡを含み、より好ましくは、１００ｇの脂肪酸当たり、０．１〜０．７５ｇである。オメガ−６ ＬＣＰＵＦＡ含量は、１００ｇの脂肪酸当たり、好ましくは２ｇ以下であり、１００ｇの脂肪酸当たり、好ましくは０．１〜０．７５ｇである。
【００３２】
ＬＣＰＵＦＡ及び他の脂肪酸は、遊離脂肪酸として、トリグリセリドの形態で、リン脂質の形態で、または上記一以上の混合物として提供されてもよい。本発明の組成物は、腸の炎症性疾患の発症を抑制するため、好ましくはリン脂質形態のＡＡ及びＤＨＡの少なくとも一方を含むことが好ましい。本発明の組成物は、全脂肪１ｇ当たり、０．１〜５ｍｇのリン脂質由来のＡＡ及び全脂肪１ｇ当たり、０．１〜５ｍｇのリン脂質由来のＤＨＡを含むことが好ましい。好ましくは、ＡＡおよび／またはＤＨＡは、少なくとも一部がホスファチジルコリン（ＰＣ）および／またはホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）の形態で存在し、例えば、ＰＥおよび／またはＰＣを含むＡＡおよび／またはＤＨＡがある。
【００３３】
単不飽和脂肪酸
本発明の栄養組成物はまた、十分な栄養を提供するために、オメガ−９（ｎ−９）脂肪酸（好ましくは、オレイン酸、１８：１）を含むことが好ましい。好ましくは、本発明の組成物は、全脂肪酸の重量に対して、少なくとも１５ｗｔ％のｎ−９脂肪酸を提供し、より好ましくは少なくとも２５ｗｔ％である。ｎ−９脂肪酸の含量は、全脂肪酸の重量に対して、８０ｗｔ％未満であることが好ましい。十分な栄養を提供するために、本発明の組成物は、飽和脂肪酸／多価不飽和脂肪酸の重量比が２〜５であることが好ましい。単飽和脂肪酸／飽和脂肪酸の重量比が０．５〜２であることが好ましい。
【００３４】
本発明の組成物は、全脂肪酸に対して、５〜２５ｗｔ％の多価不飽和脂肪酸を含み、好ましくは１０〜２０ｗｔ％である。
【００３５】
本発明の組成物は、ステアリドン酸（Ｃ１８：４ｎ３）を含ませることによってさらに改善されうる。本組成物は、好ましくは、全脂肪酸に対して、０．０５〜２ｗｔ％のステアリドン酸を含み、より好ましくは０．１〜１ｗｔ％である。
【００３６】
オリゴ糖
本発明の組成物は、乾燥重量１００ｇの組成物当たり、２〜１２ｇの重合度（ＤＰ）が２〜１００の難消化性オリゴ糖を含み、好ましくは３〜８ｇであり、より好ましくは５〜７．５ｇである。粉末を液体に再構成し、液状調乳を乳児に投与すると、これらの量の難消化性オリゴ糖は、腸に不快感を与えることなく所望の効果を奏する。適当な難消化性オリゴ糖は、ヒトの上部消化管（小腸及び胃）中に存在する酸または消化酵素の作用によって腸では消化されないまたは一部のみが消化されるが、ヒトの腸内細菌叢によって発酵可能である。オリゴ糖は水溶性であることが好ましい（１リットルの水当たり、１ｇオリゴ糖の溶解度を超える）。存在するオリゴ糖の平均ＤＰは、好ましくは４０未満であり、より好ましくは２０未満である。必要であれば、本発明の組成物は、ＤＰが２〜６０の、より好ましくはＤＰが２〜１０の２〜１２ｇ（即ち、ＤＰが２、３、４、５、６、７、８、９及び１０であるこれらのオリゴ糖の重量の合計）のオリゴ糖を含む。
【００３７】
さらなる実施形態によると、本発明の組成物の少なくとも一のオリゴ糖は、イヌリン、フルクトオリゴ糖、難消化性デキストリン、ガラクトオリゴ糖（トランスガラクトオリゴ糖（ｔｒａｎｓｇａｌａｃｔｏｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ）を含む）、キシロオリゴ糖、アラビノオリゴ糖、グルコオリゴ糖、マンノオリゴ糖、ラクト−Ｎ−ネオテトラオース、フコオリゴ糖（少なくとも一のフコースサッカリド単位を含む）、酸性オリゴ糖（下記参照、例えば、ペクチン加水分解物等のウロン酸オリゴ糖）およびこれらの混合物からなる群より選択される。
【００３８】
好ましくは、本発明の組成物は、イヌリン及びフルクトオリゴ糖からなる群より選択される少なくとも一種ならびにガラクトオリゴ糖（トランスガラクトオリゴ糖を含む）及びペクチン加水分解物からなる群より選択される少なくとも一種を含む。特に好ましい実施形態においては、本発明の組成物は、２〜１２ｇの、ＤＰが２〜１０のオリゴ糖ならびにβ−結合したガラクトースおよびグルコースサッカリド、より好ましくはトランスガラクトオリゴ糖（即ち、［ｇａｌ］ｎ−ｇｌｕ、この際、ｎは２〜１０である）を含む。特に好ましい実施形態においては、本発明の組成物は、トランスガラクトオリゴ糖（即ち、［ｇａｌ］ｎ−ｇｌｕ、この際、ｎは２〜１０である）、ペクチン加水分解物ならびにフルクトオリゴ糖及びイヌリンからなる群より選択される少なくとも一種を含む。本発明のオリゴ糖はまた、動物ミルク由来のオリゴ糖、動物ミルク由来のオリゴ糖の混合物またはフコシル化オリゴ糖（少なくとも一のフコースサッカリド単位を含むオリゴ糖）であってもよい。
【００３９】
結腸の全域にわたって腸の成熟のさらなる改善を目的として、好ましくは本発明の組成物における少なくとも１０ｗｔ％のオリゴ糖は、２〜５のＤＰ（即ち、２、３、４および／または５）を有し、および少なくとも５ｗｔ％が１０〜１００のＤＰを有する。回腸ならびに結腸の近位及び中位にわたって働くと考えられ、さらに所望の効果を達成するのに組成物中に含ませる必要のあるオリゴ糖の重量パーセントが減少するため、好ましくは、少なくとも５０ｗｔ％、より好ましくは少なくとも７５ｗｔ％のオリゴ糖が２〜１０のＤＰ（即ち、２、３、４、５、６、７、８、９および／または１０）を有する。
【００４０】
好ましい重量比は、下記の通りである：
（ＤＰが２〜５のオリゴ糖）：（ＤＰが６〜９のオリゴ糖）；および
（ＤＰが１０〜１００のオリゴ糖）：（ＤＰが６〜９のオリゴ糖）
が双方とも１超である。
【００４１】
好ましくは、双方の重量比が２超であり、さらにより好ましくは５超である。
【００４２】
本発明の組成物は、乾燥重量１００ｇの組成物当たり、０．５〜１０ｇの、ＤＰが２〜１０のガラクトオリゴ糖を含むことが好ましく、より好ましくは１〜５ｇである。最も良好に人乳のオリゴ糖を模倣するため、好ましいガラクトオリゴ糖はトランスガラクトオリゴ糖である。本発明は、好ましくは、乾燥重量１００ｇの組成物当たり、０．５〜１０ｇの、ＤＰが１０〜６０のフルクト多糖を含み、より好ましくは１〜５ｇである。「フルクト多糖」ということばは、少なくとも１０個のβ−結合したフルクトース単位の鎖を有する多糖炭水化物を意味する。
【００４３】
酸性オリゴ糖
バリア完全性をさらに改善するために、本発明の組成物は、ＤＰが２〜１００、好ましくは２〜６０の酸性オリゴ糖を含むことが好ましい。酸または酸性オリゴ糖ということばは、Ｎ−アセチルノイラミン酸、Ｎ−グリコロイルノイラミン酸、遊離またはエステル化カルボン酸、硫酸基およびリン酸基からなる群より選択される少なくとも一の酸基を有するオリゴ糖を意味する。酸性オリゴ糖は、好ましくは、ウロン酸単位（即ち、ウロン酸ポリマー）を含み、より好ましくはガラクトウロン酸単位を含む。本発明の組成物は、好ましくは、乾燥重量１００ｇの本発明の組成物当たり、０．１〜１０ｇの酸性オリゴ糖を含み、より好ましくは乾燥重量１００ｇ当たり、１〜６ｇである。
【００４４】
【化１】
【００４５】
この際、Ｒは、好ましくは、水素、ヒドロキシまたは酸基からなる群より選択され、好ましくはヒドロキシ基であり；および
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５からなる群より選択される少なくとも一は、Ｎ−アセチルノイラミン酸、Ｎ−グリコロイルノイラミン酸、遊離またはエステル化カルボン酸、硫酸基およびリン酸基を表わし、残りのＲ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は、ヒドロキシおよび／または水素を表わす。好ましくは、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５からなる群より選択される一は、Ｎ−アセチルノイラミン酸、Ｎ−グリコロイルノイラミン酸、遊離もしくはエステル化カルボン酸、硫酸基またはリン酸基を表わし、残りのＲ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は、ヒドロキシおよび／または水素を表わす。さらにより好ましくは、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５からなる群より選択される一は、遊離またはエステル化カルボン酸を表わし、残りのＲ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は、ヒドロキシおよび／または水素を表わし；さらに
ｎは、整数であり、いずれのヘキソース単位であってもよい、ヘキソース単位の数（また、下記重合度をも参照）を意味する。適切には、ｎは１〜５０００の整数である。好ましくは、ヘキソース単位は、ウロン酸単位である。
【００４６】
最も好ましくは、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は、ヒドロキシを表わし、Ｒ４は、水素を表わし、Ｒ５は、カルボン酸を表わし、ｎは、１〜２５０、好ましくは１〜１０の数であり、ヘキソース単位は、ガラクトウロン酸である。
【００４７】
本発明の方法に使用される好ましい酸性オリゴ糖の検出、測定および分析は、酸性オリゴ糖に関連する本願出願人による先の特許出願である、ＷＯ ０／１６０３７８に記載されている。
【００４８】
好ましくは、酸性オリゴ糖は、１個、好ましくは２個の、末端ウロン酸単位を有し、この際、末端ウロン酸単位は遊離していてもあるいはエステル化されていてもよい。好ましくは、末端ウロン酸単位は、ガラクツロン酸、グルクロン酸、グルロン酸、イズロン酸、マンヌロン酸、リボウロン酸およびアルツウロン酸からなる群より選択される。これらの単位は、遊離していてもあるいはエステル化されていてもよい。さらにより好ましい実施形態においては、末端ヘキソース単位は二重結合を有し、この際、二重結合は末端ヘキソース単位のＣ４及びＣ５位置の間に位置することが好ましい。好ましくは、末端ヘキソース単位の一方は二重結合を有する。末端ヘキソース（例えば、ウロン酸）は下記構造ＩＩによる構造を有することが好ましい：
【００４９】
【化２】
【００５０】
この際、Ｒは、好ましくは、水素、ヒドロキシまたは酸基からなる群より選択され、好ましくはヒドロキシ基（上記参照）であり；および
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５からなる群より選択される少なくとも一は、Ｎ−アセチルノイラミン酸、Ｎ−グリコロイルノイラミン酸、遊離またはエステル化カルボン酸、硫酸基およびリン酸基を表わし、残りのＲ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は、ヒドロキシおよび／または水素を表わす。好ましくは、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５からなる群より選択される一は、Ｎ−アセチルノイラミン酸、Ｎ−グリコロイルノイラミン酸、遊離またはエステル化カルボン酸、硫酸基およびリン酸基を表わし、残りのＲ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は、ヒドロキシおよび／または水素を表わす。さらにより好ましくは、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５からなる群より選択される一は、遊離またはエステル化カルボン酸を表わし、残りのＲ２、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は、ヒドロキシおよび／または水素を表わし；ならびに、ｎは、整数であり、いずれのヘキソース単位であってもよい、ヘキソース単位の数（また、下記重合度をも参照）を意味する。適切には、ｎは１〜５０００の整数であり、ヘキソース単位の数を表わし、当該ヘキソースは好ましくはウロン酸であり、さらにより好ましくはガラクトウロン酸単位である。これらの単位のカルボン酸基は、遊離していてもあるいは（一部が）エステル化されていてもよく、好ましくは少なくとも一部がメチル化している。
【００５１】
最も好ましくは、Ｒ２及びＲ３がヒドロキシを表わし、Ｒ４が水素を表わし、およびＲ５が遊離またはエステル化されたカルボン酸を表わす。
【００５２】
本発明で使用される酸性オリゴ糖は、好ましくは、ペクチン、ペクチン酸塩、アルギン酸塩、コンドロイチン、ヒアルロン酸、ヘパリン、ヘパラン、細菌性炭水化物、シアログリカン、フコイダン、フコオリゴ糖またはカラギーナンから調製され、より好ましくはペクチンおよび／またはアルギン酸塩から調製される。好ましくは、ペクチン加水分解物が使用される。
【００５３】
ヌクレオチド
本発明の組成物はまた、乾燥重量１００ｇの組成物当たり、５〜１００ｍｇのヌクレオチドおよび／または５〜１００ｍｇのヌクレオシドを含むことが好ましく、より好ましくは５〜５０ｍｇである。ヌクレオチドおよび／またはヌクレオシドは、さらに免疫系を刺激し、本発明の組成物の他の成分と相乗的に作用する。
【００５４】
亜鉛
亜鉛は、成長および免疫反応の発達に必須の微量栄養素である。亜鉛が欠乏すると、全身の免疫機能および感染に対する耐性が損なわれる。ゆえに、本発明の組成物は、乾燥重量１００ｇの本発明の組成物当たり、２〜１００ｍｇ、さらにより好ましくは、乾燥重量１００ｇの本発明の組成物当たり、少なくとも４〜２５ｍｇ、の量の亜鉛を含むことが好ましい。亜鉛の重量は、亜鉛元素として算出される。
【００５５】
液体
本発明の組成物は、粉末もしくは液体形態または錠剤形態であることが好ましく、この際、錠剤は５〜２５ｇの重量を有する。好ましくは、本発明の組成物は、保存寿命が延びるため、粉末形態で提供される。本発明の組成物は、液状で経口投与されることが好ましい。本発明の組成物を投与する前に、液体、好ましくは水と混合されることが好ましい。液体組成物は３５〜４０℃（好ましくは、約３７℃）の温度を保ちつつ投与されることが好ましいので、液状調乳は、下記によって調製されることが好ましい：
方法ａ：１〜１０：１の水：組成物の重量比で、３０℃未満の温度の水および請求項１〜１０のいずれか１項に記載の組成物を混合し；さらに段階ａ）で得られた混合物を３５〜５０℃の温度に加熱する；または
方法ｂ：１〜１０：１の水：組成物の重量比で、６０℃未満の温度の水および請求項１〜１０のいずれか１項に記載の組成物を混合し；さらに段階ａ）で得られた混合物を３５〜４０℃の温度にまで冷却する。方法ａ）の方が粉末から液状調乳の調製には適しており、一方で、方法ｂ）の方が錠剤から液状調乳を調製するには適している。
【００５６】
便秘（例えば、硬い便、不十分な便容積、下痢）は、液状食物を摂取する多くの幼児や病気の患者には主だった問題である。便の問題は、５０〜５００ｍＯｓｍ／ｋｇ、より好ましくは１００〜４００ｍＯｓｍ／ｋｇ、最も好ましくは２２０〜３００ｍＯｓｍ／ｋｇの浸透圧を有する、液状の本発明の組成物を投与することによって、抑えられる可能性があることが判明した。
【００５７】
上記下痢の問題を考慮すると、液状食物は、顕著な腸へのストレスを引き起こすので、過剰なカロリー密度を持たないこともまた重要である。しかしながら、調乳は、乳児に食物を与えるのに十分なカロリーを供給する必要がある。ゆえに、液状食物は、０．５〜０．９ｋｃａｌ／ｍｌ、好ましくは０．６〜０．８ｋｃａｌ／ｍｌのカロリー密度を有することが好ましい。
【００５８】
用途
本発明の組成物は、０〜２歳の乳児に投与されることが好ましい。本発明の組成物はまた、早産児（３７週の妊娠期間前に生まれた乳児）の栄養必要量を提供する方法に好ましく使用されうる。好ましい実施形態においては、本発明は、０〜３０日齢の乳児に食物を与える方法を提供する。
【００５９】
本発明の組成物は、構成される免疫系および／または腸バリアの未熟が病気の経過の発達の根底にある病気を治療するまたは予防するのに好ましく使用できる。ゆえに、本発明の組成物は、特に０〜２歳の乳児の、下痢またはアレルギーを治療するまたは予防するのに好ましく使用できる。本発明の組成物は、アレルギー性鼻炎、アレルギー性結膜炎、アレルギー性皮膚炎、アトピー性皮膚炎および／または食物アレルギーの治療および／または予防に特に適切である。
【００６０】
本発明の組成物は、包装粉末または包装された食事の与え易い調乳として提供されることが好ましい。製品の腐敗を防止するために、食事の与え易い調乳の包装サイズは、一人分を超えない、例えば、５００ｍｌ以下であることが好ましく；さらに、粉末形態の本発明の組成物の包装サイズは、２５０回分以下であることが好ましい。粉末での適当な包装サイズは、２０００ｇ以下、好ましくは１０００ｇ以下である。
【００６１】
上記または下記の目的の一以上に従った製品の使用に関して消費者に陰に陽に示唆するラベルのついた包装製品は、本発明に包含される。このようなラベルは、例えば、「腸および／または免疫系の成熟化を刺激する」、「アレルギー反応を低減する」、「少ないストレス」、「改善された耐性」または「低い感受性」または同様の表現のような表現を含んでもよい。
【００６２】
したがって、炎症疾患、下痢、湿疹および／またはアトピー性皮膚炎の治療および／または予防を目的として哺乳動物に投与される粉ミルク食品もしくは薬剤の製造を目的とする本明細書に記載される組成物の使用が本発明の対象である。
【００６３】
さらに、哺乳動物および特にヒト乳児に経腸管的にまたは経口的に本組成物を投与することを含む、炎症疾患、下痢、湿疹および／またはアトピー性皮膚炎の治療および／または予防方法に使用される薬剤の製造を目的とする本明細書に記載される組成物の使用が本発明の対象である。
【００６４】
本発明を、下記実施例によってさらに説明する。
【００６５】
実施例１：乳児用栄養
液状乳児用栄養は、最終産物が１００ｍｌになるように、１３．９ｇの粉末を水と混合することによって調製され、この際、当該液状製品は、１００ｍｌ当たり、下記を含む：
【００６６】
【表１】
【００６７】
本組成物は、さらに、コリン（６ｍｇ／１００ｍｌ）及びタウリン（６．３ｍｇ／１００ｍｌ）；ミネラル及び微量元素（２ｍｇ亜鉛／１００ｍｌを含む）ならびに乳児用調乳に関する国際ガイドラインに従った量のビタミン類を含む。
【００６８】
実施例２：
実施例１に記載の包装された乳児用調乳。この際、包装には、調乳がアレルギーを予防または治療するのに適切に使用できることを示すラベルがついている。
【００６９】
実施例３：
実験準備
必要であれば中性オリゴ糖を合わせた、酸性オリゴ糖を含む、食べ物の効果を、遅延型過敏症（ＤＴＨ）応答について試験した。ここで、遅延型過敏症（ＤＴＨ）応答は、Ｔｈ１免疫応答のパラメーターであり、局所的な抗原チャレンジ後の耳の腫れの増加を測定することによって測定される。
【００７０】
使用される酸性オリゴ糖（ＡｃＯｌ）は、平均ＤＰが２〜１０であり、ＷＯ ０２／４２４８４（実施例１参照）に記載される方法によって得られた。食べ物の総重量に対して１ｗｔ％、２．５ｗｔ％、５ｗｔ％及び１０％ｗｔ％ ＡｃＯｌを含む食べ物を試験した。ガラクトオリゴ糖（ＧＯＳ）（Ｖｉｖｉｎａｌ−ＧＯＳＴＭ（Ｂｏｒｃｕｌｏ Ｄｏｍｏ Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓ，Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）及びフルクトオリゴ糖（ＦＯＳ）（Ｒａｆｔｉｌｉｎｅ ＨＰTM，Ｏｒａｆｔｉ，Ｔｉｅｎｅｎ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）を含む中性オリゴ糖混合物（ＧＦ）を、ＧＯＳ：ＦＯＳの重量比が９：１で使用した。食べ物の総重量に対して１、２．５及び５ｗｔ％のＧＦを含む食べ物を試験した。酸性及び中性オリゴ糖（ＧＦ及びＡｃＯｌ）の組合わせの効果を、食べ物の総重量に対して１ｗｔ％ＧＦ及び１ｗｔ％ＡｃＯｌを含む食べ物で試験した。
【００７１】
すべてのデータは、コントロール値に対する百分率、即ち、（オリゴ糖を含まない）コントロールの食べ物を摂取した群と比較した、オリゴ糖を補足した群の相対値として示す。
【００７２】
動物および食べ物
メスの、６週齢のＣ５７Ｂｌ／６マウス（Ｈａｒｌａｎ Ｎｅｄｅｒｌａｎｄ ＢＶ，Ｈｏｒｓｔ，ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を、規則的に１２時間毎に明るく／暗くしたレジメでグループ毎に飼育した。グループの大きさは、１群１０匹の動物であり、ネガティブコントロール群は３匹の動物であった。動物に、半合成食（Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｄｉｅｔ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，Ｗｉｊｋ ｂｉｊ Ｄｕｕｒｓｔｅｄｅ，ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を与えた。コントロール食は、ＡＩＮ９３Ｇ仕様（Ｒｅｅｖｅｓ ｅｔ ａｌ（１９９３） Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ Ｔｅｓｔｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ ＡＩＮ９３ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ｄｉｅｔｓ ｆｏｒ ｒｏｄｅｎｔｓ： ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｎ ｇｒｏｗｔｈ ｋｉｄｎｅｙ ｃａｌｃｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｂｏｎｅ ｍｉｎｅｒａｌｉｓａｔｉｏｎ ｉｎ ｒａｔｓ ａｎｄ ｍｉｃｅ． Ｊ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ １２３（１１）：１９２３−３１）、で作製し、オリゴ糖を補足した食事は、これらの仕様に基づいた。補足食の炭水化物含量は、重量に基づいてオリゴ糖を全炭水化物に換算することによって一定に維持した。別の炭水化物成分は、食事中の各正常値になるように置換した。通常の食事の炭水化物は、コーンスターチ（全重量の４０％）、デキストリン化コーンスターチ（１３．２％）、スクロース（１０％）及びセルロース（５％）から構成される。
【００７３】
ワクチン接種プロトコル
ワクチン接種を、新しい家と餌に適応させてから２〜４週間後に開始した。０日目に、ワクチン接種前に、血液サンプルを集めた。１日目に、１回目のワクチン接種を皮下に投与した。３週間後、血液サンプルを集め（２１日目）、追加ワクチン接種を行なった（２２日目）。追加の注射から９日目（３１日目）に、基底耳の厚みを、Ｄｉｇｉｍａｔｉｃ外側マクロメーター（Ｍｉｔｕｔｏｙｏ，Ｖｅｅｎｅｎｄａａｌ，ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を用いて測定し、遅延型過敏症（ＤＴＨ）応答を、マウスの耳介のｉ．ｃ．に（皮内に）抗原溶液を注射することによって誘導した。２４時間後（３２日目）に、ＤＴＨ応答を測定し、血液サンプルを採取し、マウスを剖検した。脾臓を単離し、ｅｘ ｖｉｖｏ再刺激用に調製した。
【００７４】
ワクチン接種液は、抗原溶液及びＳｔｉｍｕｎｅアジュバント（Ｓｐｅｃｏｌ，Ｃｅｄｉ−ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ ＢＶ，Ｌｅｌｙｓｔａｄ，ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）の１：１混合液の１００μｌのｉ．ｃ．用（皮内用）注射液から構成された。抗原溶液は、Ｉｎｆｌｕｖａｃ ２００２／２００３（Ｓｏｌｖａｙ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｗｅｅｓｐ，ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）のＰＢＳによる１：１００希釈液であった。Ｉｎｆｌｕｖａｃは、３種の異なるインフルエンザ株の３×３０μｇ／ｍｌのヘマグルチニンを含む、３価タンパク質ワクチンである。
【００７５】
ＤＴＨ応答に関しては、マウスの双方の耳に、２５μｌの透析したＩｎｆｌｕｖａｃをＤＴＨチャレンジとして皮内注射した。
【００７６】
細胞培養物
脾細胞を、細かいメッシュの細胞ストレーナー（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｅｒｅｍｂｏｄｅｇｅｍ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）を用いて脾臓から単離した。赤血球を、氷上で５分間インキュベーションすることによって溶解した。フェノールレッドを含まない培養液で洗浄した後、細胞を計測し（Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｃｏｕｎｔｅｒ，Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ，ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）、氷上に保持した。培養物を、０．１μｇ／ｍｌの透析したＩｎｆｌｕｖａｃを刺激剤として用いて誘導した。細胞を、１ウェル当たり１×１０６細胞で９６ウェルの培養プレートに播種した。培養液は、１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）を含むＨＥＰＥＳ緩衝液及び２ｍＭ Ｌ−グルタミン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｍｅｒｅｌｂｅｋｅ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）を含むＲＰＭＩ−１６４０から構成された。培養物を、５％ ＣＯ２で３７℃で５日間インキュベートした。その後、上清を集めて、分析するまでは−８０℃で冷凍した。細胞の増殖を、最後の１８時間、０．４μＣｕ／ウェルで培養物に添加した、３Ｈ−チミジンの取り込みによって並列培養物で測定した。５日後、細胞をＦｉｌｔｅｒｍａｔｅハーベスター（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ，Ｚａｖｅｎｔｅｍ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）を用いて集め、Ｍｉｃｒｏ−Ｂｅｔａカウンター（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ，Ｚａｖｅｎｔｅｍ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）で計測した。放射性崩壊を、１ウェル当たり１分間測定し、１分当たりの計測数（ｃｐｍ）を増殖速度の指標として記録した。
【００７７】
サイトカインを、Ｉｎｆｌｕｖａｃで刺激した培養物の上清において分析した。ＩＬ−２、ＩＬ−５、ＩＬ−１０及びＩＦＮ−ガンマを、上記サイトカイン用のカスタム混合ビーズセット（ｃｕｓｔｏｍ ｍｉｘｅｄ ｂｅａｄｓｅｔ）を有するＢｉｏ−Ｐｌｅｘシステム（Ｂｉｏ−Ｒａｄ，Ｖｅｅｎｅｎｄａａｌ，ｔｈｅ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を用いて測定した。サイトカインを、製造社の仕様に従って測定した。ＩＬ−４を、製造社の仕様に従って、Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ ＯｐｔＥＩＡマウスＩＬ−４キット（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｅｒｅｍｂｏｄｅｇｅｍ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）を用いてＥＬＩＳＡによって測定した。
【００７８】
結果
ＤＴＨ応答酸性オリゴ糖
１ｗｔ％、２．５ｗｔ％及び５ｗｔ％ ＡｃＯｌの量を含む食べ物は、ＤＴＨ応答の統計学的に有意な増加を誘導し、用量依存的な増加を示した（表１参照）。観察された効果は、本方法に酸性オリゴ糖を使用することが好ましいことを示す。
【００７９】
【表２】
【００８０】
ＤＴＨ応答酸性及び中性オリゴ糖
１ｗｔ％ＧＦ、２．５ｗｔ％ＧＦの組合わせならびに１ｗｔ％ＧＦ及び１ｗｔ％ＡｃＯｌの混合物は、ＤＴＨの統計学的に有意な増加を誘導した（表２参照）。観察された結果は、本発明の方法に、難消化性オリゴ糖、特に酸性及び中性オリゴ糖の組合わせが好ましく使用されることを示す。
【００８１】
【表３】
【００８２】
酸性オリゴ糖のＩｎｆｌｕｖａｃ特異的増殖
２．５ｗｔ％及び５ｗｔ％酸性オリゴ糖（ＡｃＯｌ）を含む食べ物を投与すると、ｅｘ ｖｉｖｏでのＩｎｆｌｕｖａｃに特異的な増殖に対して有意な低減効果を誘導した（表３参照）。観察された効果は、本発明の方法に酸性オリゴ糖が好ましく使用されることを示す。
【００８３】
酸性及び中性オリゴ糖の組合わせのＩｎｆｌｕｖａｃ特異的増殖
１ｗｔ％ＧＦ及び１ｗｔ％ＡｃＯｌの組み合わせを投与すると、抗原に特異的な増殖に対して有意な低減効果を誘導した（表３参照）。この効果は酸性または中性オリゴ糖単独を含む食べ物によるＤＴＨ応答に比して有意に向上するため、これらの結果は、酸性及び中性オリゴ糖を投与することによって相乗効果が得られることを示す。観察された効果は、本発明の方法に酸性および中性オリゴ糖を組合わせて使用することが好ましいことを示す。増殖が抑制されることから、Ｔｈ２応答の低減、および本発明の方法のＴｈ１／Ｔｈ２バランス効果が示される。
【００８４】
【表４】
【００８５】
Ｔｈ１／Ｔｈ２バランス：酸性オリゴ糖の投与後のサイトカインプロフィール
サイトカインプロフィールを、Ｉｎｆｌｕｖａｃに特異的な脾細胞の培養上清で測定した。データは、ワクチン接種したコントロール群（即ち、オリゴ糖を投与しない）の値に対する百分率として表わす。コントロールに比べて、２．５ｗｔ％及び５ｗｔ％ＡｃＯｌを含む食べ物は、Ｔｈ２−関連サイトカインであるＩＬ−４、ＩＬ−５及びＩＬ−１０を減少させるが、Ｔｈ１−関連サイトカインであるＩＬ−２は増加し、ＩＦＮ−γは有意には低下しなかった（表４参照）。これらの結果は、酸性オリゴ糖のＴｈ１／Ｔｈ２バランス効果を示すものであり、また、本発明の方法、例えば、Ｔｈ１免疫力が比較的低い病気の治療および／または予防方法に酸性オリゴ糖が好ましく使用されることを示す。
【００８６】
Ｔｈ１／Ｔｈ２バランス：酸性及び中性オリゴ糖の投与後のサイトカインプロフィール
コントロールに比べて、１ｗｔ％ＧＴ及び１ｗｔ％ＡｃＯｌの組み合わせを投与すると、Ｔｈ２−関連サイトカインであるＩＬ−４、ＩＬ−５及びＩＬ−１０は減少するが、Ｔｈ１−関連サイトカインであるＩＬ−２及びＩＦＮ−γは低下しなかった（表４参照、ここで、データは、ワクチン接種したコントロール群（即ち、オリゴ糖を投与しない）の値に対する百分率として表わす）。これらの結果は、酸性及び中性オリゴ糖の組合わせのＴｈ１／Ｔｈ２バランス効果を示すものであり、また、本発明の方法、例えば、Ｔｈ１免疫力が比較的低い病気の治療および／または予防方法に酸性オリゴ糖が好ましく使用されることを示す。特に、ＩＬ−４／ＩＦＮ比は、Ｔｈ１／Ｔｈ２バランスに反映する。換言すると、ＩＬ−４／ＩＦＮ比が低いことは、Ｔｈ１の刺激および／またはＴｈ２の阻害を示し、いずれにしても、本発明に係るオリゴ糖のＴｈ１−Ｔｈ２バランス効果が示される。
【００８７】
【表５】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
脂肪成分、タンパク質成分および炭水化物成分を含みかつホエーおよびカゼインを含む栄養または薬剤組成物であって、
ホエーに対するカゼインの重量比が１：１〜１：２．４であり、さらに
前記組成物が、
ａ）１００ｇのタンパク質当たり、少なくとも３ｇのアルギニン；
ｂ）全脂肪酸に対して、少なくとも１０ｗｔ％のリノール酸；
ｃ）全脂肪酸に対して、少なくとも１ｗｔ％のα−リノレン酸；
ｄ）全脂肪酸に対して、０．１ｗｔ％を超える量の少なくとも一の長鎖多価不飽和脂肪酸、この際、前記長鎖多価不飽和脂肪酸は、ドコサヘキサエン酸、アラキドン酸及びエイコサペンタエン酸からなる群より選択される；
ｅ）全脂肪酸に対して、５〜２５ｗｔ％の少なくとも一の多価不飽和脂肪酸；および
ｆ）乾燥重量１００ｇの組成物当たり、２〜１２ｇの重合度が２〜１００の難消化性オリゴ糖
を含むことを特徴とする、栄養または薬剤組成物。
【請求項２】
トランスガラクトオリゴ糖、ペクチン加水分解物ならびにフルクトオリゴ糖およびイヌリンからなる群より選択される少なくとも一種を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記組成物は、ドコサヘキサエン酸、アラキドン酸及びエイコサペンタエン酸を含むことを特徴とする、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
前記組成物は、乾燥重量１００ｇの組成物当たり、２〜１００ｍｇの亜鉛を含むことを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５】
前記タンパク質成分は５〜１５ｅｎ％を占め；前記脂肪成分は３０〜６０ｅｎ％を占め；さらに前記炭水化物成分は２５〜７５ｅｎ％を占めることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６】
前記組成物は、乾燥重量１００ｇの組成物当たり、５〜１００ｍｇのヌクレオチドおよび／または５〜１００ｍｇのヌクレオシドをさらに含むことを特徴とする、請求項１〜５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７】
前記組成物は、１００ｇのタンパク質成分当たり、２〜６ｇのトレオニンを含むことを特徴とする、請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８】
前記組成物は、全脂肪酸に対して、０．１ｗｔ％を超える量のドコサヘキサエン酸および全脂肪酸に対して、０．１ｗｔ％を超える量のアラキドン酸を含み、アラキドン酸／ドコサヘキサエン酸の重量比が０．２５〜２５であることを特徴とする、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項９】
特殊調製粉乳として配合されることを特徴とする、請求項１〜８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１０】
薬剤として使用される請求項１〜８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１１】
炎症疾患、下痢、湿疹および／またはアトピー性皮膚炎の治療および／または予防を目的として哺乳動物に投与される粉ミルク食品もしくは薬剤の製造を目的とする請求項１〜８のいずれか１項に記載の組成物の使用。
【請求項１２】
前記炎症疾患がアレルギーである、請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
前記組成物は経腸管的にまたは経口的に投与される、請求項１１または１２に記載の使用。
【請求項１４】
前記哺乳動物はヒト乳児である、請求項１１〜１３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１】
脂肪成分、タンパク質成分および炭水化物成分を含みかつホエーおよびカゼインを含む栄養または薬剤組成物であって、
ホエーに対するカゼインの重量比が１：１〜１：２．４であり、さらに
前記組成物が、
ａ）１００ｇのタンパク質当たり、少なくとも３ｇのアルギニン；
ｂ）全脂肪酸に対して、少なくとも１０ｗｔ％のリノール酸；
ｃ）全脂肪酸に対して、少なくとも１ｗｔ％のα−リノレン酸；
ｄ）全脂肪酸に対して、０．１ｗｔ％を超える量の少なくとも一の長鎖多価不飽和脂肪酸、この際、前記長鎖多価不飽和脂肪酸は、ドコサヘキサエン酸、アラキドン酸及びエイコサペンタエン酸からなる群より選択される；
ｅ）全脂肪酸に対して、５〜２５ｗｔ％の少なくとも一の多価不飽和脂肪酸；および
ｆ）乾燥重量１００ｇの組成物当たり、２〜１２ｇの重合度が２〜１００の難消化性オリゴ糖
を含むことを特徴とする、栄養または薬剤組成物。
【請求項２】
トランスガラクトオリゴ糖、ペクチン加水分解物ならびにフルクトオリゴ糖およびイヌリンからなる群より選択される少なくとも一種を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記組成物は、ドコサヘキサエン酸、アラキドン酸及びエイコサペンタエン酸を含むことを特徴とする、請求項１または２に記載の組成物。
【請求項４】
前記組成物は、乾燥重量１００ｇの組成物当たり、２〜１００ｍｇの亜鉛を含むことを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５】
前記タンパク質成分は５〜１５ｅｎ％を占め；前記脂肪成分は３０〜６０ｅｎ％を占め；さらに前記炭水化物成分は２５〜７５ｅｎ％を占めることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６】
前記組成物は、乾燥重量１００ｇの組成物当たり、５〜１００ｍｇのヌクレオチドおよび／または５〜１００ｍｇのヌクレオシドをさらに含むことを特徴とする、請求項１〜５のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項７】
前記組成物は、１００ｇのタンパク質成分当たり、２〜６ｇのトレオニンを含むことを特徴とする、請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項８】
前記組成物は、全脂肪酸に対して、０．１ｗｔ％を超える量のドコサヘキサエン酸および全脂肪酸に対して、０．１ｗｔ％を超える量のアラキドン酸を含み、アラキドン酸／ドコサヘキサエン酸の重量比が０．２５〜２５であることを特徴とする、請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項９】
特殊調製粉乳として配合されることを特徴とする、請求項１〜８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１０】
薬剤として使用される請求項１〜８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１１】
炎症疾患、下痢、湿疹および／またはアトピー性皮膚炎の治療および／または予防を目的として哺乳動物に投与される粉ミルク食品もしくは薬剤の製造を目的とする請求項１〜８のいずれか１項に記載の組成物の使用。
【請求項１２】
前記炎症疾患がアレルギーである、請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
前記組成物は経腸管的にまたは経口的に投与される、請求項１１または１２に記載の使用。
【請求項１４】
前記哺乳動物はヒト乳児である、請求項１１〜１３のいずれか１項に記載の使用。
【公表番号】特表２００８−５１０６８９（Ｐ２００８−５１０６８９Ａ）
【公表日】平成２０年４月１０日（２００８．４．１０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−５２６３９９（Ｐ２００７−５２６３９９）
【出願日】平成１７年８月１９日（２００５．８．１９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００５／００８９９９
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０１８３１４
【国際公開日】平成１８年２月２３日（２００６．２．２３）
【出願人】（５０２１９１０６６）ナムローゼ フェンノートシャップ ヌトリシア (3)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２０年４月１０日（２００８．４．１０）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年８月１９日（２００５．８．１９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００５／００８９９９
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０１８３１４
【国際公開日】平成１８年２月２３日（２００６．２．２３）
【出願人】（５０２１９１０６６）ナムローゼ フェンノートシャップ ヌトリシア (3)
【Ｆターム（参考）】
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