医薬化合物
【課題】 エラスターゼ阻害活性を有する特定化合物の結晶を得ることを目的とする。
【解決手段】 Ｎ−［（１Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−｛Ｎ−［（１Ｓ）−３，３，３−トリフルオロ−２，２−ジヒドロキシ−１−（メチルエチル）プロピル］カルバモイル｝ピロリジニル）−１−（メチルエチル）−２−オキソエチル］−（１−ｔｅｒｔ−ブチル−５−メチルピラゾル−４−イル）カルボキサミドの結晶、その製造方法および該結晶を有効成分として含む医薬。
【解決手段】 Ｎ−［（１Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−｛Ｎ−［（１Ｓ）−３，３，３−トリフルオロ−２，２−ジヒドロキシ−１−（メチルエチル）プロピル］カルバモイル｝ピロリジニル）−１−（メチルエチル）−２−オキソエチル］−（１−ｔｅｒｔ−ブチル−５−メチルピラゾル−４−イル）カルボキサミドの結晶、その製造方法および該結晶を有効成分として含む医薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は医薬、特にエラスターゼ阻害作用を有する複素環式化合物の結晶多形、その製造方法およびその複素環式化合物を有効成分とする医薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
次式で示される構造を有する、Ｎ−［（１Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−｛Ｎ−［（１Ｓ）−３，３，３−トリフルオロ−１−（メチルエチル）−２−オキソプロピル］カルバモイル｝ピロリジニル）−１−（メチルエチル）−２−オキソエチル］−（１−ｔｅｒｔ−ブチル−５−メチルピラゾル−４−イル）カルボキサミド（以下、「化合物Ｂ」または「ケトン体」ということもある）
【０００３】
【化１】
【０００４】
は、エラスターゼ阻害剤として有用な化合物であり、特許文献１の実施例３２に記載されている。
【０００５】
通常、医薬品の有効成分となる化合物は、強い薬理作用を有し、且つ低毒性であるとともに品質が一定であることが条件となる。そのためには結晶状態の化合物を原薬として用いることが求められている。しかしながら、特許文献１には上記化合物Ｂのみならずそこに記載の他の化合物群がすべて結晶ではなく非晶質であり、さらに結晶を得るための製造方法も記載されていない。
【特許文献１】国際公開第０３／０６６６７１号パンフレット
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、エラスターゼ阻害活性を有する化合物の結晶を得ることを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記化合物Ｂ、即ち、ケトン体の結晶を得る為に、鋭意検討を試みた。しかし、通常使用される種々の有機溶媒をもってしてもこの化合物を結晶化させることができなかった。ところが、化合物Ｂを特定の有機溶媒に溶解し、容器を開口状態にして放置したところ結晶化させることに成功した。しかし、分析の結果、得られた結晶は、大気中の水を吸って、水分子１個分の重量が増えていることが判明した。そこで、さらに検討を進めた結果、得られた結晶は、ケトン体のトリフルオロメチルケトン部位に１分子の水が附加したジオール体の結晶であること、およびこの結晶のエラスターゼ阻害活性は、ケトン体のそれがそのまま維持されているとの知見をえて、本発明を完成した。
【０００８】
即ち、本発明は、
項１：Ｎ−［（１Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−｛Ｎ−［（１Ｓ）−３，３，３−トリフルオロ−２，２−ジヒドロキシ−１−（メチルエチル）プロピル］カルバモイル｝ピロリジニル）−１−（メチルエチル）−２−オキソエチル］−（１−ｔｅｒｔ−ブチル−５−メチルピラゾル−４−イル）カルボキサミド（以下「化合物Ａ」または「ジオール体」ということもある）
【０００９】
【化２】
【００１０】
の結晶を提供するものである。具体的には以下の発明を提供する。
【００１１】
項２： 回折角２θで表して、約７．５°〜９．０°の位置にピークを有するＸ線粉末回折パターンを示す項１に記載の結晶。
【００１２】
項３： 回折角２θで表して、約７．５°〜９．０°の位置に２本の強いピークを有するＸ線粉末回折パターンを示す項２に記載の結晶。
【００１３】
項４： 回折角２θで表して、約１３．０°〜１４．０°の位置にピークを有するＸ線粉末回折パターンを示す項２または項３に記載の結晶。
【００１４】
項５： 回折角２θで表して、ほぼ８．０°、８．６°、９．２°、１０．６°、１１．９°、１３．６°、１４．５°および２０．４°の位置にピークを有するＸ線粉末回折パターンを示す項１〜４のいずれかに記載の化合物Ａの１型結晶。
【００１５】
項６： 示差走査熱量測定において、約１６１℃に脱水吸熱ピークを有する項５に記載の化合物Ａの１型結晶。
【００１６】
項７： 回折角２θで表して、ほぼ５．０°、７．６°、８．１°、８．７°、９．６°、１０．２°、１０．６°、１３．５°、１４．９°および１９．９°の位置にピークを有するＸ線粉末回折パターンを示す項１〜４のいずれかに記載の化合物Ａの２型結晶。
【００１７】
項８： 示差走査熱量測定において、約１２６℃に脱水吸熱ピークを有する項７に記載の化合物Ａの２型結晶。
【００１８】
項９： 項１〜８のいずれかに記載の結晶を有効成分として含む医薬。
【００１９】
項１０： 項１〜８のいずれかに記載の結晶を含む医薬組成物。
【００２０】
項１１： 化合物Ａの１型結晶の製造方法であって、化合物Ｂを以下のいずれかの有機溶媒：
（１）ギ酸エチル、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸ｎ−プロピル、酢酸イソプロピル、酢酸イソブチル、酢酸ｎ−ブチルおよび酢酸イソアミルからなる群から選択されるエステル類、（２）メチルイソブチルケトン、ジイソプロピルケトンおよび２−ヘキサノンからなる群から選択されるケトン類、（３）ジエチルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、シクロペンチルメチルエーテルおよびジフェニルエーテルからなる群から選択されるエーテル類、および（４）アセトニトリルからなる群から選ばれる単一溶媒；
酢酸ｎ−プロピル、酢酸イソプロピル、酢酸イソブチル、酢酸イソアミル、メチルイソブチルケトン、ジイソプロピルケトン、シクロペンチルメチルエーテルおよび２−ヘキサノンからなる群から選ばれる１種の有機溶媒と、ジエチルエーテルまたはシクロヘキサンとの混合溶媒；
酢酸イソプロピル、酢酸イソブチル、酢酸イソアミル、メチルイソブチルケトン、ジイソプロピルケトン、シクロペンチルメチルエーテルおよび２−ヘキサノンからなる群から選ばれる１種の有機溶媒と、ｎ−ヘキサン、ジメトキシエタンおよびメチルシクロヘキサンからなる群から選ばれる１種の有機溶媒との混合溶媒；または
酢酸エチルとシクロヘキサンとの混合溶媒
に溶解させ、これに水を添加した溶液から化合物Ａの１型結晶を晶析させることを特徴とする製造方法。
【００２１】
項１２： 化合物Ａの２型結晶の製造方法であって、化合物Ｂを以下のいずれかの有機溶媒：
ジクロロメタン、クロロホルム、クロロベンゼン、トルエン、キシレン、アニソール、ｎ−ヘキサン、メチルシクロヘキサンおよびｎ−ヘプタンからなる群から選ばれる単一溶媒；トルエン、キシレンおよびアニソールからなる群から選ばれる１種の有機溶媒とジエチルエーテル、シクロヘキサン、ｎ−ヘキサンおよびメチルシクロヘキサンからなる群から選ばれる１種の有機溶媒との混合溶媒；またはトルエンとジメトキシエタンとの混合溶媒
に溶解させ、これに水を添加した溶液から化合物Ａの２型結晶を晶析させることを特徴とする製造方法。
【発明の効果】
【００２２】
本発明によれば、品質が安定している化合物の結晶を医薬品の原薬として供給することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２３】
本発明の化合物Ａの結晶は．化合物Ｂ，即ち、ケトン体を出発物質として製造することができる。このケトン体は、特許文献１に記載の方法によって製造することができる。
【００２４】
本発明者らの研究によって、化合物Ａの結晶として、少なくとも２種類の異なる結晶形が存在することが判明した。この２種類の結晶形を、以下、１型および２型という。
【００２５】
化合物Ａの結晶は、Ｘ線粉末回折パターンにおいて、特徴的なピークを示す。即ち、該結晶は、回折角２θで表して、約７．５°〜９．０°の位置にピーク、具体的には、２本の強いピークを有するＸ線粉末回折パターンを示す。また、回折角２θで表して、約１３．０°〜１４．０°の位置にピークも有する。
【００２６】
以下の実施例で示す装置、条件下で測定したときの１型、２型各結晶形の特徴的な主ピークの回折角（２θ）は以下のとおりである。
【００２７】
【表１】
【００２８】
また、１型、２型各結晶形の示差走査熱量測定（ＤＳＣ）における特徴および熱重量分析（ＴＧ）における特徴は以下のとおりである。
【００２９】
【表２】
【００３０】
本発明の化合物Ａの１型結晶及び２型結晶は、本明細書に記載の物理化学的性質によって特定されるものであるが、上記データは、測定方法や測定器具によって多少変わるものであるから、厳密に解されるべきではない。また、１型結晶及び２型結晶は、純粋な結晶に限られず、他の結晶形が混在していてもよい。
【００３１】
１型結晶
化合物Ａの１型結晶は、実施例または以下に記載した方法によって製造することができる。即ち、１型結晶は、化合物Ｂを特定溶媒に溶解し、水を添加したのち放置することにより製造できる。「放置」は、通常、ゆっくりと攪拌しながら数時間ないし数日間、通常、室温において行われる。
【００３２】
ここにおける、特定溶媒としては、例えば、次の（１）〜（４）に示される単一溶媒が挙げられる。
（１）ギ酸エチル、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸ｎ−プロピル、酢酸イソプロピル、酢酸イソブチル、酢酸ｎ−ブチルおよび酢酸イソアミルからなる群から選択されるエステル類
（２）メチルイソブチルケトン、ジイソプロピルケトンおよび２−ヘキサノンからなる群から選択されるケトン類
（３）ジエチルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、シクロペンチルメチルエーテルおよびジフェニルエーテルからなる群から選択されるエーテル類
（４）アセトニトリル。
【００３３】
または、以下の組み合わせの混合溶媒であってもよい。
【００３４】
【表３】
【００３５】
【表４】
【００３６】
上記混合溶媒の他に、下記実施例に示す酢酸エチルとシクロヘキサンとの混合溶媒も例示できる。
【００３７】
これらの溶媒の使用量は、化合物Ｂを溶解するに必要な最小量が好ましい。また、水の添加量は、ジオール体を形成するに必要な量であり、収率を上げるために化合物Ｂと当モルないしはやや過剰量の範囲から選択するのが好ましい。なお、水の添加は、人為的に行わず、大気中の水分を吸収させることによって行える場合もある。混合溶媒を用いる場合には、例えば、混合溶媒に化合物Ｂを溶解させて放置してもよいし、一方の有機溶媒に化合物Ｂを溶解させて放置し、これに他の有機溶媒を添加して放置してもよい。かくして析出した結晶は、通常、濾取後、適当な溶媒で洗浄し、乾燥される。
【００３８】
また、１型結晶は下記で得られる２型結晶を上記特定溶媒に溶解させ、晶析させることによって得ることもできる。
【００３９】
２型結晶
化合物Ａの２型結晶は、実施例または以下に記載した方法によって製造することができる。即ち、特定溶媒として次の単一溶媒または混合溶媒を用いるほかは、前記の１型結晶の場合と同様にして製造することができる。
【００４０】
単一溶媒としては、以下のものが例示できる。
・ジクロロメタン、クロロホルム、クロロベンゼン、トルエン、キシレン、アニソール、ｎ−ヘキサン、メチルシクロヘキサン、ｎ−ヘプタン。
【００４１】
混合溶媒としては以下の組み合わせが例示できる。
【００４２】
【表５】
【００４３】
上記例のほかに、トルエンとジメトキシエタンとの混合溶媒も例示できる。
【００４４】
また、２型結晶は、上記で得られる１型結晶を上記特定溶媒に溶解させ、晶析させることによって得ることもできる。
【００４５】
上記製法によって得られる本発明の結晶は、出発物質のトリフルオロメチルケトン部分のケトン部分がジオールに変換されている。このことは、後記に示す単結晶のＸ線結晶回折及び１３Ｃ固体核磁気共鳴スペクトルによって確認されている。
【００４６】
本発明の結晶化された化合物は、エラスターゼ阻害活性を有し、好中球エラスターゼが病態発症に関与していると考えられている疾患、例えば、慢性閉塞性肺疾患（肺気腫および慢性気管支炎を含む）、慢性および急性間質性肺炎、特発性間質性肺炎(IIP)、びまん性汎細気管支炎、嚢胞性肺線維症、急性肺傷害(ALI)／急性呼吸促迫症候群(ARDS)、気管支拡張症、喘息、膵炎、腎炎、肝炎（肝不全）、慢性関節リウマチ、関節硬化症、変形性関節炎、乾癬、歯周病、アテローム性動脈硬化症、臓器移植における拒絶反応、虚血・再灌流時の組織傷害、ショック、敗血症、播種性血管内凝固症(DIC)や深部静脈血栓症等を含む血液凝固異常、結膜炎、角膜炎、角膜潰瘍、クローン病、全身性エリテマトーデスの治療／または予防剤として有用であると考えられる。
【００４７】
本発明の化合物Ａの結晶は、好ましくは経口投与される。その投与量は、患者の症状、体重および年齢などにより大いに変動し得る。例えば、経口投与の場合、化合物Ａの用量は、通常１日につき体重60 kg当たり約 0.5 〜約 5000 mgの範囲内であり、好ましくは 1日につき体重60 kg当たり約5 〜 約 2000 mgの範囲内であり、最も好ましくは1日につき体重60 kg当たり15 〜 300 mgの範囲内にある。
【００４８】
本発明の化合物Ａの結晶は、通常の製剤の形で投与される。かかる通常の製剤としては、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、水性もしくは油性の液剤などが挙げられる。これらの製剤は、化合物Ａを０．０１重量％以上、好ましくは０．１〜７０重量％の割合で含有することができる。これらの製剤はまた、治療上有効な他の成分を含有していてもよい。
【００４９】
これらの薬学上の製剤は、通常の薬学的に許容しうる製剤化成分を用い、通常の手法にて調合、製剤され得る。製剤化成分としては、製剤分野において常用され、かつ有効成分と反応しない物質が用いられる。
【実施例】
【００５０】
以下、参考例および実施例を挙げて本発明の新規な結晶形について説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
【００５１】
参考例１ Ｎ−［（１Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−｛Ｎ−［（１Ｓ）−３，３，３−トリフルオロ−１−（メチルエチル）−２−オキソプロピル］カルバモイル｝ピロリジニル）−１−（メチルエチル）−２−オキソエチル］−（１−ｔｅｒｔ−ブチル−５−メチルピラゾル−４−イル）カルボキサミド（化合物Ｂ）の製造
【００５２】
【化３】
【００５３】
工程１: Ｎ−[(１Ｓ)−２−((２Ｓ)−２−｛Ｎ−[(１Ｓ,２Ｓ)−３,３,３−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−１−(メチルエチル)プロピル]カルバモイル｝ピロリジニル)−１−(メチルエチル)−２−オキソエチル]−（１−ｔｅｒｔ−ブチル−５−メチルピラゾル−４−イル）カルボキサミド（化合物２）の製造：
工程１の出発物質である[(２Ｓ)−１−((２Ｓ)−２−アミノ−３−メチルブタノイル)ピロリジン−２−イル]−N−[(１Ｓ,２Ｓ)−３,３,３−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−１−(メチルエチル)プロピル]カルボキサミドトシル酸塩（化合物１）は、国際公開公報ＷＯ00/52032に記載の方法に準じて製造した。
【００５４】
得られた化合物１を２２．８ｇ(４２．３mmol)および１−ｔｅｒｔ−ブチル−５−メチルピラゾール−４−カルボン酸を７．０ｇ(３８．４mmol)含むピリジン溶液(１５０ｍｌ)に、１−エチル−３−(３−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩を８．８ｇ(４６．１mmol)加え、室温にて１４時間攪拌したのち反応液を減圧濃縮した。
【００５５】
残渣に酢酸エチルを加え、１０％クエン酸水溶液で２回、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、次いで飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧留去し、標題化合物（化合物２）１８．８ｇ(９２％)を得た。
ＡＰＣＩ−ＭＳ：５３２（ＭＨ＋）。
【００５６】
工程２：Ｎ−［（１Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−｛Ｎ−［（１Ｓ）−３，３，３−トリフルオロ−１−（メチルエチル）−２−オキソプロピル］カルバモイル｝ピロリジニル）−１−（メチルエチル）−２−オキソエチル］−（１−ｔｅｒｔ−ブチル−５−メチルピラゾル−４−イル）カルボキサミド（化合物Ｂ）の製造：
１８．７ｇ(３５．２mmol)の工程１で得た化合物２を塩化メチレン(１４０ｍｌ)とジメチルスルホキシド(３５ｍｌ)の混合溶媒に溶解し、１−エチル−３−(３−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩を２７．０ｇ(１４０．１mmol)加え、氷冷下で懸濁したところにジクロロ酢酸を２．９ｍｌ(３５．２mmol)滴下し、氷冷下で１５分間撹拌した。反応完了後、反応液に氷水を加え酢酸エチルで抽出し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、氷水、次いで飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(溶出液：酢酸エチル−ｎ−ヘキサン)で精製した。目的物を含む画分を減圧濃縮乾固し、非晶質である標題化合物（化合物Ｂ）１６．４ｇ(８８％)を得た。
ＡＰＣＩ−ＭＳ：５３０（ＭＨ＋）
元素分析： Ｃ２５Ｈ３８Ｆ３Ｎ５Ｏ４・０．７５Ｈ２Ｏとして
計算値 Ｃ ５５．２９ Ｈ ７．３３ Ｆ １０．４９ Ｎ １２．８９
実験値 Ｃ ５５．４１ Ｈ ７．３１ Ｆ １０．２８ Ｎ １２．８０。
【００５７】
実施例１ １型結晶の製造
酢酸エチル４１ｍｌに化合物Ｂ １０．４ｇ(１９．６mmol)を加えて室温で溶解し、蒸留水０．３６ｍｌ(１９．６mmol)を加え室温で一晩緩やかに攪拌した。結晶が析出したが、シクロヘキサン１０ｍｌを追加し、さらに一晩攪拌した。析出した結晶を濾取し、結晶を少量の酢酸エチル：シクロヘキサン＝４：１で洗浄した後、５０℃で一晩送風乾燥して１型結晶を得た。収量６．５５ｇ（収率６１％）
元素分析：Ｃ２５Ｈ４０Ｆ３Ｎ５Ｏ５として
計算値 Ｃ ５４．８３、Ｈ ７．３６、Ｆ １０．４１、Ｎ １２．７９
測定値 Ｃ ５４．７９、Ｈ ７．３６、Ｆ １０．２６、Ｎ １２．８２。
【００５８】
実施例２ ２型結晶の製造
トルエン２０ｍｌに化合物Ｂ １２．１ｇ(２２．８mmol)を加えて室温で溶解し、撹拌しながらジエチルエーテル２０ｍｌを加えた。容器口を開口したまま室温で２晩撹拌し、析出した結晶を濾取した。得られた結晶を少量のジエチルエーテルで洗浄した後、５０℃で一晩送風乾燥して、２型結晶を得た。収量１０．６ｇ（収率８４％）
元素分析：Ｃ２５Ｈ４０Ｆ３Ｎ５Ｏ５として
計算値 Ｃ ５４．８３、Ｈ ７．３６、Ｆ １０．４１、Ｎ １２．７９
測定値 Ｃ ５４．６５、Ｈ ７．３３、Ｆ １０．２９、Ｎ １２．８１。
【００５９】
実施例３ ２型結晶の製造
トルエン５０ｍｌに化合物Ｂ １３．０ｇ(２４．５mmol)を加えて室温で溶解し、蒸留水０．４４ｇ(２４．５mmol)を加え室温で一晩撹拌した。析出した結晶を濾取し、得られた結晶をジエチルエーテル２０ｍｌで洗浄した後、４５℃で４日間送風乾燥して、２型結晶を得た。収量１０．０ｇ（収率７７％）
元素分析：Ｃ２５Ｈ４０Ｆ３Ｎ５Ｏ５として
計算値 Ｃ ５４．８３、Ｈ ７．３６、Ｆ １０．４１、Ｎ １２．７９
測定値 Ｃ ５４．６５、Ｈ ７．３０、Ｆ １０．３３、Ｎ １２．７５。
【００６０】
実施例４ １型結晶の製造
酢酸エチル３３．６ｍｌに実施例３で得られた２型結晶５．６０ｇ(１０．２mmol)を加えて１２０℃のホットプレート上で溶解し、徐々に室温に戻しながら一晩撹拌した。析出した結晶を濾取し、室温で一晩送風乾燥して１型結晶を得た。収量３．３４ｇ（収率６０％）。
【００６１】
実施例５ 単結晶（１型結晶）の製造およびその単結晶Ｘ線回折
実施例１で得た１型結晶５ｍｇを２００μｌの２−ヘキサノンに溶解させ、室温下ヘキサン蒸気中に一日間静置して保存することによって単結晶（single crystal(０．４×０．２×０．２ｍｍ)）を得た。得られた単結晶を用いて、単結晶Ｘ線結晶回折をおこなった。条件は以下のとおりである。
装置：ブルカー エイエックスエス（Bruker AXS）社製 単結晶Ｘ線回折装置SMART APEX CCD
ターゲット：モリブデン（波長 0.71073 Å ）
電圧：50 kV
電流：90 mA
測定温度：−173℃
結晶学的データは表６に示す。また、原子座標と等方性温度因子データ及び結合距離と結合角データを表７及び表８に示す。併せて、特定の原子間の距離を表９に示す。そのデータに基づいて得られた単結晶構造データおよび単結晶パッキングデータを各々図１及び図２に示す。尚、表７〜９に記載の原子の番号は、図１に記載の番号である。
【００６２】
【表６】
【００６３】
【表７】
【００６４】
【表８】
【００６５】
【表９】
【００６６】
これらデータから、トリフルオロメチルケトン部分に2個の酸素原子（Ｏ1及びＯ2）が存在し、これら酸素原子が結合している炭素原子（Ｃ2）との距離はそれぞれ1.397Åと等しいこと、2個の酸素原子の温度因子の値は個々に正常値を示しており、1個の酸素原子が振動して2個に観測されるといったゆらぎではなかったこと、及びこれら基が分子内で水素結合を形成し、結晶構造の安定化に寄与していることが判明した。この結果、当該ケトンは２本の水酸基、即ち、ジオールに変換されていることが確認できた。
【００６７】
１３Ｃ固体核磁気共鳴スペクトル
２型結晶を用いて１３ＣＮＭＲ測定を行った。
【００６８】
測定条件は以下のとおりである。
装置：バリアン（Varian）社製 マーキュリープラス（mercury plus）
磁場：４００ＭＨｚ
図３に固体状態の１３Ｃ核磁気共鳴スペクトルを示す。
【００６９】
この結果、アミド結合のカルボニル炭素に由来する３本のピーク（163.5〜175.7ppm付近）及びジオールの４級炭素に由来する１本のピーク（95.4ppm）が検出され、トリフルオロメチルケトン部分が２本の水酸基、即ち、ジオールに変換されていることが確認できた。
【００７０】
粉末Ｘ線結晶回折および熱分析
実施例で得た１型結晶および２型結晶について、以下の条件により、粉末Ｘ線回折測定、示差走査熱量計（ＤＳＣ）および熱重量分析計（ＴＧ）による熱分析を行った。それぞれの結果を１型結晶については図４〜図６に、２型結晶については図７〜図９に示す。
【００７１】
（１）粉末Ｘ線回折
装置：スペクトリス（Ｓｐｅｃｔｒｉｓ）社製 Ｘ’Ｐｅｒｔ Ａｌｐｈａ １
線源：ＣｕＫα １線
管電圧： ４５ ｋＶ
管電流： ４０ ｍＡ
検出器：Ｘ’Ｃｅｌｅｒａｔｏｒ
ステップ：０．０１６７°
各ステップにおける積算時間：１００秒／ステップ
ソーラースリット：０．０１°。
【００７２】
（２）ＤＳＣによる熱分析
装置：パーキンエルマー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）社製 Ｐｙｒｉｓ １
試料量： ３〜４ ｍｇ、
試料セル： アルミニウムセル
窒素ガス流量： ２０ ml/分
昇温温度： １０℃／分。
【００７３】
（３）ＴＧによる熱分析
装置：パーキンエルマー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）社製 ＴＧＡ ７
試料量： ５〜１０ ｍｇ、
試料セル： プラチナパン
窒素ガス流量： ７０ ml/分
昇温温度： １０℃／分。
【００７４】
試験例１ 本発明の結晶のヒト好中球エラスターゼ(HNE)誘発肺出血に対する抑制活性
ハムスターにヒト好中球エラスターゼを気管支内投与すると肺において出血が誘発される。このため、エラスターゼ投与の一定時間後に経気道的に肺を洗浄して得られる気管支肺胞洗浄液中にはヘモグロビンが検出される。本実験は、このヘモグロビン濃度を測定することにより、本発明の結晶によってこの出血がどの程度抑制するか試験した。
【００７５】
ハムスタ−（Syrian系、7−10週齢の雄性）を一群あたり７〜１８匹に分け、各群について以下の処理を行った。
【００７６】
（Ａ）本発明の結晶の非投与群（病態対照群）：
25 単位のヒト好中球エラスターゼ(エラスチンプロダクト社（Elastin Product Co., Inc.）)を溶解した生理食塩水0.2 mlをハムスターの気管支内に投与して肺出血を誘発せしめた。エラスターゼ投与の１時間後、ハムスターを脱血により屠殺し、生理食塩液2.5 mlで経気道的に肺胞を２回洗浄し、その肺胞洗浄液５ml中のヘモグロビン濃度（414 nmの吸光度（Ａ４１４））を測定した。
【００７７】
（Ｂ）本発明の結晶投与群：
所定量の本発明の２型結晶に、0.5% トラガント溶液を加えて懸濁し、ヒト好中球エラスターゼ（HNE）投与の９０分前にハムスターに経口投与した（投与量：１０ mg/kg）。さらに前記（Ａ）と同様の方法によりヒト好中球エラスターゼを投与した。そして、その１時間後に（Ａ）と同様にして肺胞洗浄液中のヘモグロビン濃度を測定した。
【００７８】
出血抑制率（％）は、｛１−（(Ｂ)でのＡ４１４値／(Ａ)でのＡ４１４値）｝×１００により算出した。その結果、本発明の結晶は、７２％の出血抑制率を有していた。
【産業上の利用可能性】
【００７９】
本発明の結晶化された化合物は、エラスターゼ阻害活性を有することにより好中球エラスターゼが病態発症に関与していると考えられている疾患の治療／または予防剤の原薬として有用である。
【図面の簡単な説明】
【００８０】
【図１】本発明の１型結晶の単結晶構造データである。
【図２】本発明の１型結晶の単結晶構造パッキングデータである
【図３】本発明の２型結晶の１３Ｃ固体ＮＭＲスペクトルチャートである。
【図４】本発明の１型結晶の粉末Ｘ線回折スペクトルチャートである。
【図５】本発明の１型結晶の示差走査熱量測定（ＤＳＣ）チャートである。
【図６】本発明の１型結晶の熱重量分析測定（ＴＧ）チャートである。
【図７】本発明の２型結晶の粉末Ｘ線回折スペクトルチャートである。
【図８】本発明の２型結晶の示差走査熱量測定（ＤＳＣ）チャートである。
【図９】本発明の２型結晶の熱重量分析測定（ＴＧ）チャートである。
【技術分野】
【０００１】
本発明は医薬、特にエラスターゼ阻害作用を有する複素環式化合物の結晶多形、その製造方法およびその複素環式化合物を有効成分とする医薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
次式で示される構造を有する、Ｎ−［（１Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−｛Ｎ−［（１Ｓ）−３，３，３−トリフルオロ−１−（メチルエチル）−２−オキソプロピル］カルバモイル｝ピロリジニル）−１−（メチルエチル）−２−オキソエチル］−（１−ｔｅｒｔ−ブチル−５−メチルピラゾル−４−イル）カルボキサミド（以下、「化合物Ｂ」または「ケトン体」ということもある）
【０００３】
【化１】
【０００４】
は、エラスターゼ阻害剤として有用な化合物であり、特許文献１の実施例３２に記載されている。
【０００５】
通常、医薬品の有効成分となる化合物は、強い薬理作用を有し、且つ低毒性であるとともに品質が一定であることが条件となる。そのためには結晶状態の化合物を原薬として用いることが求められている。しかしながら、特許文献１には上記化合物Ｂのみならずそこに記載の他の化合物群がすべて結晶ではなく非晶質であり、さらに結晶を得るための製造方法も記載されていない。
【特許文献１】国際公開第０３／０６６６７１号パンフレット
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、エラスターゼ阻害活性を有する化合物の結晶を得ることを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、上記化合物Ｂ、即ち、ケトン体の結晶を得る為に、鋭意検討を試みた。しかし、通常使用される種々の有機溶媒をもってしてもこの化合物を結晶化させることができなかった。ところが、化合物Ｂを特定の有機溶媒に溶解し、容器を開口状態にして放置したところ結晶化させることに成功した。しかし、分析の結果、得られた結晶は、大気中の水を吸って、水分子１個分の重量が増えていることが判明した。そこで、さらに検討を進めた結果、得られた結晶は、ケトン体のトリフルオロメチルケトン部位に１分子の水が附加したジオール体の結晶であること、およびこの結晶のエラスターゼ阻害活性は、ケトン体のそれがそのまま維持されているとの知見をえて、本発明を完成した。
【０００８】
即ち、本発明は、
項１：Ｎ−［（１Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−｛Ｎ−［（１Ｓ）−３，３，３−トリフルオロ−２，２−ジヒドロキシ−１−（メチルエチル）プロピル］カルバモイル｝ピロリジニル）−１−（メチルエチル）−２−オキソエチル］−（１−ｔｅｒｔ−ブチル−５−メチルピラゾル−４−イル）カルボキサミド（以下「化合物Ａ」または「ジオール体」ということもある）
【０００９】
【化２】
【００１０】
の結晶を提供するものである。具体的には以下の発明を提供する。
【００１１】
項２： 回折角２θで表して、約７．５°〜９．０°の位置にピークを有するＸ線粉末回折パターンを示す項１に記載の結晶。
【００１２】
項３： 回折角２θで表して、約７．５°〜９．０°の位置に２本の強いピークを有するＸ線粉末回折パターンを示す項２に記載の結晶。
【００１３】
項４： 回折角２θで表して、約１３．０°〜１４．０°の位置にピークを有するＸ線粉末回折パターンを示す項２または項３に記載の結晶。
【００１４】
項５： 回折角２θで表して、ほぼ８．０°、８．６°、９．２°、１０．６°、１１．９°、１３．６°、１４．５°および２０．４°の位置にピークを有するＸ線粉末回折パターンを示す項１〜４のいずれかに記載の化合物Ａの１型結晶。
【００１５】
項６： 示差走査熱量測定において、約１６１℃に脱水吸熱ピークを有する項５に記載の化合物Ａの１型結晶。
【００１６】
項７： 回折角２θで表して、ほぼ５．０°、７．６°、８．１°、８．７°、９．６°、１０．２°、１０．６°、１３．５°、１４．９°および１９．９°の位置にピークを有するＸ線粉末回折パターンを示す項１〜４のいずれかに記載の化合物Ａの２型結晶。
【００１７】
項８： 示差走査熱量測定において、約１２６℃に脱水吸熱ピークを有する項７に記載の化合物Ａの２型結晶。
【００１８】
項９： 項１〜８のいずれかに記載の結晶を有効成分として含む医薬。
【００１９】
項１０： 項１〜８のいずれかに記載の結晶を含む医薬組成物。
【００２０】
項１１： 化合物Ａの１型結晶の製造方法であって、化合物Ｂを以下のいずれかの有機溶媒：
（１）ギ酸エチル、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸ｎ−プロピル、酢酸イソプロピル、酢酸イソブチル、酢酸ｎ−ブチルおよび酢酸イソアミルからなる群から選択されるエステル類、（２）メチルイソブチルケトン、ジイソプロピルケトンおよび２−ヘキサノンからなる群から選択されるケトン類、（３）ジエチルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、シクロペンチルメチルエーテルおよびジフェニルエーテルからなる群から選択されるエーテル類、および（４）アセトニトリルからなる群から選ばれる単一溶媒；
酢酸ｎ−プロピル、酢酸イソプロピル、酢酸イソブチル、酢酸イソアミル、メチルイソブチルケトン、ジイソプロピルケトン、シクロペンチルメチルエーテルおよび２−ヘキサノンからなる群から選ばれる１種の有機溶媒と、ジエチルエーテルまたはシクロヘキサンとの混合溶媒；
酢酸イソプロピル、酢酸イソブチル、酢酸イソアミル、メチルイソブチルケトン、ジイソプロピルケトン、シクロペンチルメチルエーテルおよび２−ヘキサノンからなる群から選ばれる１種の有機溶媒と、ｎ−ヘキサン、ジメトキシエタンおよびメチルシクロヘキサンからなる群から選ばれる１種の有機溶媒との混合溶媒；または
酢酸エチルとシクロヘキサンとの混合溶媒
に溶解させ、これに水を添加した溶液から化合物Ａの１型結晶を晶析させることを特徴とする製造方法。
【００２１】
項１２： 化合物Ａの２型結晶の製造方法であって、化合物Ｂを以下のいずれかの有機溶媒：
ジクロロメタン、クロロホルム、クロロベンゼン、トルエン、キシレン、アニソール、ｎ−ヘキサン、メチルシクロヘキサンおよびｎ−ヘプタンからなる群から選ばれる単一溶媒；トルエン、キシレンおよびアニソールからなる群から選ばれる１種の有機溶媒とジエチルエーテル、シクロヘキサン、ｎ−ヘキサンおよびメチルシクロヘキサンからなる群から選ばれる１種の有機溶媒との混合溶媒；またはトルエンとジメトキシエタンとの混合溶媒
に溶解させ、これに水を添加した溶液から化合物Ａの２型結晶を晶析させることを特徴とする製造方法。
【発明の効果】
【００２２】
本発明によれば、品質が安定している化合物の結晶を医薬品の原薬として供給することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２３】
本発明の化合物Ａの結晶は．化合物Ｂ，即ち、ケトン体を出発物質として製造することができる。このケトン体は、特許文献１に記載の方法によって製造することができる。
【００２４】
本発明者らの研究によって、化合物Ａの結晶として、少なくとも２種類の異なる結晶形が存在することが判明した。この２種類の結晶形を、以下、１型および２型という。
【００２５】
化合物Ａの結晶は、Ｘ線粉末回折パターンにおいて、特徴的なピークを示す。即ち、該結晶は、回折角２θで表して、約７．５°〜９．０°の位置にピーク、具体的には、２本の強いピークを有するＸ線粉末回折パターンを示す。また、回折角２θで表して、約１３．０°〜１４．０°の位置にピークも有する。
【００２６】
以下の実施例で示す装置、条件下で測定したときの１型、２型各結晶形の特徴的な主ピークの回折角（２θ）は以下のとおりである。
【００２７】
【表１】
【００２８】
また、１型、２型各結晶形の示差走査熱量測定（ＤＳＣ）における特徴および熱重量分析（ＴＧ）における特徴は以下のとおりである。
【００２９】
【表２】
【００３０】
本発明の化合物Ａの１型結晶及び２型結晶は、本明細書に記載の物理化学的性質によって特定されるものであるが、上記データは、測定方法や測定器具によって多少変わるものであるから、厳密に解されるべきではない。また、１型結晶及び２型結晶は、純粋な結晶に限られず、他の結晶形が混在していてもよい。
【００３１】
１型結晶
化合物Ａの１型結晶は、実施例または以下に記載した方法によって製造することができる。即ち、１型結晶は、化合物Ｂを特定溶媒に溶解し、水を添加したのち放置することにより製造できる。「放置」は、通常、ゆっくりと攪拌しながら数時間ないし数日間、通常、室温において行われる。
【００３２】
ここにおける、特定溶媒としては、例えば、次の（１）〜（４）に示される単一溶媒が挙げられる。
（１）ギ酸エチル、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸ｎ−プロピル、酢酸イソプロピル、酢酸イソブチル、酢酸ｎ−ブチルおよび酢酸イソアミルからなる群から選択されるエステル類
（２）メチルイソブチルケトン、ジイソプロピルケトンおよび２−ヘキサノンからなる群から選択されるケトン類
（３）ジエチルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、シクロペンチルメチルエーテルおよびジフェニルエーテルからなる群から選択されるエーテル類
（４）アセトニトリル。
【００３３】
または、以下の組み合わせの混合溶媒であってもよい。
【００３４】
【表３】
【００３５】
【表４】
【００３６】
上記混合溶媒の他に、下記実施例に示す酢酸エチルとシクロヘキサンとの混合溶媒も例示できる。
【００３７】
これらの溶媒の使用量は、化合物Ｂを溶解するに必要な最小量が好ましい。また、水の添加量は、ジオール体を形成するに必要な量であり、収率を上げるために化合物Ｂと当モルないしはやや過剰量の範囲から選択するのが好ましい。なお、水の添加は、人為的に行わず、大気中の水分を吸収させることによって行える場合もある。混合溶媒を用いる場合には、例えば、混合溶媒に化合物Ｂを溶解させて放置してもよいし、一方の有機溶媒に化合物Ｂを溶解させて放置し、これに他の有機溶媒を添加して放置してもよい。かくして析出した結晶は、通常、濾取後、適当な溶媒で洗浄し、乾燥される。
【００３８】
また、１型結晶は下記で得られる２型結晶を上記特定溶媒に溶解させ、晶析させることによって得ることもできる。
【００３９】
２型結晶
化合物Ａの２型結晶は、実施例または以下に記載した方法によって製造することができる。即ち、特定溶媒として次の単一溶媒または混合溶媒を用いるほかは、前記の１型結晶の場合と同様にして製造することができる。
【００４０】
単一溶媒としては、以下のものが例示できる。
・ジクロロメタン、クロロホルム、クロロベンゼン、トルエン、キシレン、アニソール、ｎ−ヘキサン、メチルシクロヘキサン、ｎ−ヘプタン。
【００４１】
混合溶媒としては以下の組み合わせが例示できる。
【００４２】
【表５】
【００４３】
上記例のほかに、トルエンとジメトキシエタンとの混合溶媒も例示できる。
【００４４】
また、２型結晶は、上記で得られる１型結晶を上記特定溶媒に溶解させ、晶析させることによって得ることもできる。
【００４５】
上記製法によって得られる本発明の結晶は、出発物質のトリフルオロメチルケトン部分のケトン部分がジオールに変換されている。このことは、後記に示す単結晶のＸ線結晶回折及び１３Ｃ固体核磁気共鳴スペクトルによって確認されている。
【００４６】
本発明の結晶化された化合物は、エラスターゼ阻害活性を有し、好中球エラスターゼが病態発症に関与していると考えられている疾患、例えば、慢性閉塞性肺疾患（肺気腫および慢性気管支炎を含む）、慢性および急性間質性肺炎、特発性間質性肺炎(IIP)、びまん性汎細気管支炎、嚢胞性肺線維症、急性肺傷害(ALI)／急性呼吸促迫症候群(ARDS)、気管支拡張症、喘息、膵炎、腎炎、肝炎（肝不全）、慢性関節リウマチ、関節硬化症、変形性関節炎、乾癬、歯周病、アテローム性動脈硬化症、臓器移植における拒絶反応、虚血・再灌流時の組織傷害、ショック、敗血症、播種性血管内凝固症(DIC)や深部静脈血栓症等を含む血液凝固異常、結膜炎、角膜炎、角膜潰瘍、クローン病、全身性エリテマトーデスの治療／または予防剤として有用であると考えられる。
【００４７】
本発明の化合物Ａの結晶は、好ましくは経口投与される。その投与量は、患者の症状、体重および年齢などにより大いに変動し得る。例えば、経口投与の場合、化合物Ａの用量は、通常１日につき体重60 kg当たり約 0.5 〜約 5000 mgの範囲内であり、好ましくは 1日につき体重60 kg当たり約5 〜 約 2000 mgの範囲内であり、最も好ましくは1日につき体重60 kg当たり15 〜 300 mgの範囲内にある。
【００４８】
本発明の化合物Ａの結晶は、通常の製剤の形で投与される。かかる通常の製剤としては、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、水性もしくは油性の液剤などが挙げられる。これらの製剤は、化合物Ａを０．０１重量％以上、好ましくは０．１〜７０重量％の割合で含有することができる。これらの製剤はまた、治療上有効な他の成分を含有していてもよい。
【００４９】
これらの薬学上の製剤は、通常の薬学的に許容しうる製剤化成分を用い、通常の手法にて調合、製剤され得る。製剤化成分としては、製剤分野において常用され、かつ有効成分と反応しない物質が用いられる。
【実施例】
【００５０】
以下、参考例および実施例を挙げて本発明の新規な結晶形について説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
【００５１】
参考例１ Ｎ−［（１Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−｛Ｎ−［（１Ｓ）−３，３，３−トリフルオロ−１−（メチルエチル）−２−オキソプロピル］カルバモイル｝ピロリジニル）−１−（メチルエチル）−２−オキソエチル］−（１−ｔｅｒｔ−ブチル−５−メチルピラゾル−４−イル）カルボキサミド（化合物Ｂ）の製造
【００５２】
【化３】
【００５３】
工程１: Ｎ−[(１Ｓ)−２−((２Ｓ)−２−｛Ｎ−[(１Ｓ,２Ｓ)−３,３,３−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−１−(メチルエチル)プロピル]カルバモイル｝ピロリジニル)−１−(メチルエチル)−２−オキソエチル]−（１−ｔｅｒｔ−ブチル−５−メチルピラゾル−４−イル）カルボキサミド（化合物２）の製造：
工程１の出発物質である[(２Ｓ)−１−((２Ｓ)−２−アミノ−３−メチルブタノイル)ピロリジン−２−イル]−N−[(１Ｓ,２Ｓ)−３,３,３−トリフルオロ−２−ヒドロキシ−１−(メチルエチル)プロピル]カルボキサミドトシル酸塩（化合物１）は、国際公開公報ＷＯ00/52032に記載の方法に準じて製造した。
【００５４】
得られた化合物１を２２．８ｇ(４２．３mmol)および１−ｔｅｒｔ−ブチル−５−メチルピラゾール−４−カルボン酸を７．０ｇ(３８．４mmol)含むピリジン溶液(１５０ｍｌ)に、１−エチル−３−(３−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩を８．８ｇ(４６．１mmol)加え、室温にて１４時間攪拌したのち反応液を減圧濃縮した。
【００５５】
残渣に酢酸エチルを加え、１０％クエン酸水溶液で２回、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、次いで飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧留去し、標題化合物（化合物２）１８．８ｇ(９２％)を得た。
ＡＰＣＩ−ＭＳ：５３２（ＭＨ＋）。
【００５６】
工程２：Ｎ−［（１Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−｛Ｎ−［（１Ｓ）−３，３，３−トリフルオロ−１−（メチルエチル）−２−オキソプロピル］カルバモイル｝ピロリジニル）−１−（メチルエチル）−２−オキソエチル］−（１−ｔｅｒｔ−ブチル−５−メチルピラゾル−４−イル）カルボキサミド（化合物Ｂ）の製造：
１８．７ｇ(３５．２mmol)の工程１で得た化合物２を塩化メチレン(１４０ｍｌ)とジメチルスルホキシド(３５ｍｌ)の混合溶媒に溶解し、１−エチル−３−(３−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩を２７．０ｇ(１４０．１mmol)加え、氷冷下で懸濁したところにジクロロ酢酸を２．９ｍｌ(３５．２mmol)滴下し、氷冷下で１５分間撹拌した。反応完了後、反応液に氷水を加え酢酸エチルで抽出し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、氷水、次いで飽和食塩水で洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー(溶出液：酢酸エチル−ｎ−ヘキサン)で精製した。目的物を含む画分を減圧濃縮乾固し、非晶質である標題化合物（化合物Ｂ）１６．４ｇ(８８％)を得た。
ＡＰＣＩ−ＭＳ：５３０（ＭＨ＋）
元素分析： Ｃ２５Ｈ３８Ｆ３Ｎ５Ｏ４・０．７５Ｈ２Ｏとして
計算値 Ｃ ５５．２９ Ｈ ７．３３ Ｆ １０．４９ Ｎ １２．８９
実験値 Ｃ ５５．４１ Ｈ ７．３１ Ｆ １０．２８ Ｎ １２．８０。
【００５７】
実施例１ １型結晶の製造
酢酸エチル４１ｍｌに化合物Ｂ １０．４ｇ(１９．６mmol)を加えて室温で溶解し、蒸留水０．３６ｍｌ(１９．６mmol)を加え室温で一晩緩やかに攪拌した。結晶が析出したが、シクロヘキサン１０ｍｌを追加し、さらに一晩攪拌した。析出した結晶を濾取し、結晶を少量の酢酸エチル：シクロヘキサン＝４：１で洗浄した後、５０℃で一晩送風乾燥して１型結晶を得た。収量６．５５ｇ（収率６１％）
元素分析：Ｃ２５Ｈ４０Ｆ３Ｎ５Ｏ５として
計算値 Ｃ ５４．８３、Ｈ ７．３６、Ｆ １０．４１、Ｎ １２．７９
測定値 Ｃ ５４．７９、Ｈ ７．３６、Ｆ １０．２６、Ｎ １２．８２。
【００５８】
実施例２ ２型結晶の製造
トルエン２０ｍｌに化合物Ｂ １２．１ｇ(２２．８mmol)を加えて室温で溶解し、撹拌しながらジエチルエーテル２０ｍｌを加えた。容器口を開口したまま室温で２晩撹拌し、析出した結晶を濾取した。得られた結晶を少量のジエチルエーテルで洗浄した後、５０℃で一晩送風乾燥して、２型結晶を得た。収量１０．６ｇ（収率８４％）
元素分析：Ｃ２５Ｈ４０Ｆ３Ｎ５Ｏ５として
計算値 Ｃ ５４．８３、Ｈ ７．３６、Ｆ １０．４１、Ｎ １２．７９
測定値 Ｃ ５４．６５、Ｈ ７．３３、Ｆ １０．２９、Ｎ １２．８１。
【００５９】
実施例３ ２型結晶の製造
トルエン５０ｍｌに化合物Ｂ １３．０ｇ(２４．５mmol)を加えて室温で溶解し、蒸留水０．４４ｇ(２４．５mmol)を加え室温で一晩撹拌した。析出した結晶を濾取し、得られた結晶をジエチルエーテル２０ｍｌで洗浄した後、４５℃で４日間送風乾燥して、２型結晶を得た。収量１０．０ｇ（収率７７％）
元素分析：Ｃ２５Ｈ４０Ｆ３Ｎ５Ｏ５として
計算値 Ｃ ５４．８３、Ｈ ７．３６、Ｆ １０．４１、Ｎ １２．７９
測定値 Ｃ ５４．６５、Ｈ ７．３０、Ｆ １０．３３、Ｎ １２．７５。
【００６０】
実施例４ １型結晶の製造
酢酸エチル３３．６ｍｌに実施例３で得られた２型結晶５．６０ｇ(１０．２mmol)を加えて１２０℃のホットプレート上で溶解し、徐々に室温に戻しながら一晩撹拌した。析出した結晶を濾取し、室温で一晩送風乾燥して１型結晶を得た。収量３．３４ｇ（収率６０％）。
【００６１】
実施例５ 単結晶（１型結晶）の製造およびその単結晶Ｘ線回折
実施例１で得た１型結晶５ｍｇを２００μｌの２−ヘキサノンに溶解させ、室温下ヘキサン蒸気中に一日間静置して保存することによって単結晶（single crystal(０．４×０．２×０．２ｍｍ)）を得た。得られた単結晶を用いて、単結晶Ｘ線結晶回折をおこなった。条件は以下のとおりである。
装置：ブルカー エイエックスエス（Bruker AXS）社製 単結晶Ｘ線回折装置SMART APEX CCD
ターゲット：モリブデン（波長 0.71073 Å ）
電圧：50 kV
電流：90 mA
測定温度：−173℃
結晶学的データは表６に示す。また、原子座標と等方性温度因子データ及び結合距離と結合角データを表７及び表８に示す。併せて、特定の原子間の距離を表９に示す。そのデータに基づいて得られた単結晶構造データおよび単結晶パッキングデータを各々図１及び図２に示す。尚、表７〜９に記載の原子の番号は、図１に記載の番号である。
【００６２】
【表６】
【００６３】
【表７】
【００６４】
【表８】
【００６５】
【表９】
【００６６】
これらデータから、トリフルオロメチルケトン部分に2個の酸素原子（Ｏ1及びＯ2）が存在し、これら酸素原子が結合している炭素原子（Ｃ2）との距離はそれぞれ1.397Åと等しいこと、2個の酸素原子の温度因子の値は個々に正常値を示しており、1個の酸素原子が振動して2個に観測されるといったゆらぎではなかったこと、及びこれら基が分子内で水素結合を形成し、結晶構造の安定化に寄与していることが判明した。この結果、当該ケトンは２本の水酸基、即ち、ジオールに変換されていることが確認できた。
【００６７】
１３Ｃ固体核磁気共鳴スペクトル
２型結晶を用いて１３ＣＮＭＲ測定を行った。
【００６８】
測定条件は以下のとおりである。
装置：バリアン（Varian）社製 マーキュリープラス（mercury plus）
磁場：４００ＭＨｚ
図３に固体状態の１３Ｃ核磁気共鳴スペクトルを示す。
【００６９】
この結果、アミド結合のカルボニル炭素に由来する３本のピーク（163.5〜175.7ppm付近）及びジオールの４級炭素に由来する１本のピーク（95.4ppm）が検出され、トリフルオロメチルケトン部分が２本の水酸基、即ち、ジオールに変換されていることが確認できた。
【００７０】
粉末Ｘ線結晶回折および熱分析
実施例で得た１型結晶および２型結晶について、以下の条件により、粉末Ｘ線回折測定、示差走査熱量計（ＤＳＣ）および熱重量分析計（ＴＧ）による熱分析を行った。それぞれの結果を１型結晶については図４〜図６に、２型結晶については図７〜図９に示す。
【００７１】
（１）粉末Ｘ線回折
装置：スペクトリス（Ｓｐｅｃｔｒｉｓ）社製 Ｘ’Ｐｅｒｔ Ａｌｐｈａ １
線源：ＣｕＫα １線
管電圧： ４５ ｋＶ
管電流： ４０ ｍＡ
検出器：Ｘ’Ｃｅｌｅｒａｔｏｒ
ステップ：０．０１６７°
各ステップにおける積算時間：１００秒／ステップ
ソーラースリット：０．０１°。
【００７２】
（２）ＤＳＣによる熱分析
装置：パーキンエルマー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）社製 Ｐｙｒｉｓ １
試料量： ３〜４ ｍｇ、
試料セル： アルミニウムセル
窒素ガス流量： ２０ ml/分
昇温温度： １０℃／分。
【００７３】
（３）ＴＧによる熱分析
装置：パーキンエルマー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）社製 ＴＧＡ ７
試料量： ５〜１０ ｍｇ、
試料セル： プラチナパン
窒素ガス流量： ７０ ml/分
昇温温度： １０℃／分。
【００７４】
試験例１ 本発明の結晶のヒト好中球エラスターゼ(HNE)誘発肺出血に対する抑制活性
ハムスターにヒト好中球エラスターゼを気管支内投与すると肺において出血が誘発される。このため、エラスターゼ投与の一定時間後に経気道的に肺を洗浄して得られる気管支肺胞洗浄液中にはヘモグロビンが検出される。本実験は、このヘモグロビン濃度を測定することにより、本発明の結晶によってこの出血がどの程度抑制するか試験した。
【００７５】
ハムスタ−（Syrian系、7−10週齢の雄性）を一群あたり７〜１８匹に分け、各群について以下の処理を行った。
【００７６】
（Ａ）本発明の結晶の非投与群（病態対照群）：
25 単位のヒト好中球エラスターゼ(エラスチンプロダクト社（Elastin Product Co., Inc.）)を溶解した生理食塩水0.2 mlをハムスターの気管支内に投与して肺出血を誘発せしめた。エラスターゼ投与の１時間後、ハムスターを脱血により屠殺し、生理食塩液2.5 mlで経気道的に肺胞を２回洗浄し、その肺胞洗浄液５ml中のヘモグロビン濃度（414 nmの吸光度（Ａ４１４））を測定した。
【００７７】
（Ｂ）本発明の結晶投与群：
所定量の本発明の２型結晶に、0.5% トラガント溶液を加えて懸濁し、ヒト好中球エラスターゼ（HNE）投与の９０分前にハムスターに経口投与した（投与量：１０ mg/kg）。さらに前記（Ａ）と同様の方法によりヒト好中球エラスターゼを投与した。そして、その１時間後に（Ａ）と同様にして肺胞洗浄液中のヘモグロビン濃度を測定した。
【００７８】
出血抑制率（％）は、｛１−（(Ｂ)でのＡ４１４値／(Ａ)でのＡ４１４値）｝×１００により算出した。その結果、本発明の結晶は、７２％の出血抑制率を有していた。
【産業上の利用可能性】
【００７９】
本発明の結晶化された化合物は、エラスターゼ阻害活性を有することにより好中球エラスターゼが病態発症に関与していると考えられている疾患の治療／または予防剤の原薬として有用である。
【図面の簡単な説明】
【００８０】
【図１】本発明の１型結晶の単結晶構造データである。
【図２】本発明の１型結晶の単結晶構造パッキングデータである
【図３】本発明の２型結晶の１３Ｃ固体ＮＭＲスペクトルチャートである。
【図４】本発明の１型結晶の粉末Ｘ線回折スペクトルチャートである。
【図５】本発明の１型結晶の示差走査熱量測定（ＤＳＣ）チャートである。
【図６】本発明の１型結晶の熱重量分析測定（ＴＧ）チャートである。
【図７】本発明の２型結晶の粉末Ｘ線回折スペクトルチャートである。
【図８】本発明の２型結晶の示差走査熱量測定（ＤＳＣ）チャートである。
【図９】本発明の２型結晶の熱重量分析測定（ＴＧ）チャートである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｎ−［（１Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−｛Ｎ−［（１Ｓ）−３，３，３−トリフルオロ−２，２−ジヒドロキシ−１−（メチルエチル）プロピル］カルバモイル｝ピロリジニル）−１−（メチルエチル）−２−オキソエチル］−（１−ｔｅｒｔ−ブチル−５−メチルピラゾル−４−イル）カルボキサミド（以下「化合物Ａ」という。）の結晶。
【請求項２】
回折角２θで表して、約７．５°〜９．０°の位置にピークを有するＸ線粉末回折パターンを示す請求項１に記載の結晶。
【請求項３】
回折角２θで表して、約７．５°〜９．０°の位置に２本の強いピークを有するＸ線粉末回折パターンを示す請求項２に記載の結晶。
【請求項４】
回折角２θで表して、約１３．０°〜１４．０°の位置にピークを有するＸ線粉末回折パターンを示す請求項２または３に記載の結晶。
【請求項５】
回折角２θで表して、ほぼ８．０°、８．６°、９．２°、１０．６°、１１．９°、１３．６°、１４．５°および２０．４°の位置にピークを有するＸ線粉末回折パターンを示す請求項１〜４のいずれかに記載の化合物Ａの１型結晶。
【請求項６】
示差走査熱量測定において、約１６１℃に脱水吸熱ピークを有する請求項５に記載の化合物Ａの１型結晶。
【請求項７】
回折角２θで表して、ほぼ５．０°、７．６°、８．１°、８．７°、９．６°、１０．２°、１０．６°、１３．５°、１４．９°および１９．９°の位置にピークを有するＸ線粉末回折パターンを示す請求項１〜４のいずれかに記載の化合物Ａの２型結晶。
【請求項８】
示差走査熱量測定において、約１２６℃に脱水吸熱ピークを有する請求項７に記載の化合物Ａの２型結晶。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれかに記載の結晶を有効成分として含む医薬。
【請求項１０】
請求項１〜８のいずれかに記載の結晶を含む医薬組成物。
【請求項１１】
化合物Ａの１型結晶の製造方法であって、Ｎ−［（１Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−｛Ｎ−［（１Ｓ）−３，３，３−トリフルオロ−１−（メチルエチル）−２−オキソプロピル］カルバモイル｝ピロリジニル）−１−（メチルエチル）−２−オキソエチル］−（１−ｔｅｒｔ−ブチル−５−メチルピラゾル−４−イル）カルボキサミド（以下、「化合物Ｂ」という。）を、以下のいずれかの有機溶媒：
（１）ギ酸エチル、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸ｎ−プロピル、酢酸イソプロピル、酢酸イソブチル、酢酸ｎ−ブチルおよび酢酸イソアミルからなる群から選択されるエステル類、
（２）メチルイソブチルケトン、ジイソプロピルケトンおよび２−ヘキサノンからなる群から選択されるケトン類、
（３）ジエチルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、シクロペンチルメチルエーテルおよびジフェニルエーテルからなる群から選択されるエーテル類、および
（４）アセトニトリル
からなる群から選ばれる単一溶媒；
酢酸ｎ−プロピル、酢酸イソプロピル、酢酸イソブチル、酢酸イソアミル、メチルイソブチルケトン、ジイソプロピルケトン、シクロペンチルメチルエーテルおよび２−ヘキサノンからなる群から選ばれる１種の有機溶媒と、ジエチルエーテルまたはシクロヘキサンとの混合溶媒；
酢酸イソプロピル、酢酸イソブチル、酢酸イソアミル、メチルイソブチルケトン、ジイソプロピルケトン、シクロペンチルメチルエーテルおよび２−ヘキサノンからなる群から選ばれる１種の有機溶媒と、ｎ−ヘキサン、ジメトキシエタンおよびメチルシクロヘキサンからなる群から選ばれる１種の有機溶媒との混合溶媒；または
酢酸エチルとシクロヘキサンとの混合溶媒
に溶解させ、これに水を添加した溶液から化合物Ａの１型結晶を晶析させることを特徴とする製造方法。
【請求項１２】
化合物Ａの２型結晶の製造方法であって、化合物Ｂを以下のいずれかの有機溶媒：
ジクロロメタン、クロロホルム、クロロベンゼン、トルエン、キシレン、アニソール、ｎ−ヘキサン、メチルシクロヘキサンおよびｎ−ヘプタンからなる群から選ばれる単一溶媒；
トルエン、キシレンおよびアニソールからなる群から選ばれる１種の有機溶媒とジエチルエーテル、シクロヘキサン、ｎ−ヘキサンおよびメチルシクロヘキサンからなる群から選ばれる１種の有機溶媒との混合溶媒；または
トルエンとジメトキシエタンとの混合溶媒
に溶解させ、これに水を添加した溶液から化合物Ａの２型結晶を晶析させることを特徴とする製造方法。
【請求項１】
Ｎ−［（１Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−｛Ｎ−［（１Ｓ）−３，３，３−トリフルオロ−２，２−ジヒドロキシ−１−（メチルエチル）プロピル］カルバモイル｝ピロリジニル）−１−（メチルエチル）−２−オキソエチル］−（１−ｔｅｒｔ−ブチル−５−メチルピラゾル−４−イル）カルボキサミド（以下「化合物Ａ」という。）の結晶。
【請求項２】
回折角２θで表して、約７．５°〜９．０°の位置にピークを有するＸ線粉末回折パターンを示す請求項１に記載の結晶。
【請求項３】
回折角２θで表して、約７．５°〜９．０°の位置に２本の強いピークを有するＸ線粉末回折パターンを示す請求項２に記載の結晶。
【請求項４】
回折角２θで表して、約１３．０°〜１４．０°の位置にピークを有するＸ線粉末回折パターンを示す請求項２または３に記載の結晶。
【請求項５】
回折角２θで表して、ほぼ８．０°、８．６°、９．２°、１０．６°、１１．９°、１３．６°、１４．５°および２０．４°の位置にピークを有するＸ線粉末回折パターンを示す請求項１〜４のいずれかに記載の化合物Ａの１型結晶。
【請求項６】
示差走査熱量測定において、約１６１℃に脱水吸熱ピークを有する請求項５に記載の化合物Ａの１型結晶。
【請求項７】
回折角２θで表して、ほぼ５．０°、７．６°、８．１°、８．７°、９．６°、１０．２°、１０．６°、１３．５°、１４．９°および１９．９°の位置にピークを有するＸ線粉末回折パターンを示す請求項１〜４のいずれかに記載の化合物Ａの２型結晶。
【請求項８】
示差走査熱量測定において、約１２６℃に脱水吸熱ピークを有する請求項７に記載の化合物Ａの２型結晶。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれかに記載の結晶を有効成分として含む医薬。
【請求項１０】
請求項１〜８のいずれかに記載の結晶を含む医薬組成物。
【請求項１１】
化合物Ａの１型結晶の製造方法であって、Ｎ−［（１Ｓ）−２−（（２Ｓ）−２−｛Ｎ−［（１Ｓ）−３，３，３−トリフルオロ−１−（メチルエチル）−２−オキソプロピル］カルバモイル｝ピロリジニル）−１−（メチルエチル）−２−オキソエチル］−（１−ｔｅｒｔ−ブチル−５−メチルピラゾル−４−イル）カルボキサミド（以下、「化合物Ｂ」という。）を、以下のいずれかの有機溶媒：
（１）ギ酸エチル、酢酸メチル、酢酸エチル、酢酸ｎ−プロピル、酢酸イソプロピル、酢酸イソブチル、酢酸ｎ−ブチルおよび酢酸イソアミルからなる群から選択されるエステル類、
（２）メチルイソブチルケトン、ジイソプロピルケトンおよび２−ヘキサノンからなる群から選択されるケトン類、
（３）ジエチルエーテル、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、シクロペンチルメチルエーテルおよびジフェニルエーテルからなる群から選択されるエーテル類、および
（４）アセトニトリル
からなる群から選ばれる単一溶媒；
酢酸ｎ−プロピル、酢酸イソプロピル、酢酸イソブチル、酢酸イソアミル、メチルイソブチルケトン、ジイソプロピルケトン、シクロペンチルメチルエーテルおよび２−ヘキサノンからなる群から選ばれる１種の有機溶媒と、ジエチルエーテルまたはシクロヘキサンとの混合溶媒；
酢酸イソプロピル、酢酸イソブチル、酢酸イソアミル、メチルイソブチルケトン、ジイソプロピルケトン、シクロペンチルメチルエーテルおよび２−ヘキサノンからなる群から選ばれる１種の有機溶媒と、ｎ−ヘキサン、ジメトキシエタンおよびメチルシクロヘキサンからなる群から選ばれる１種の有機溶媒との混合溶媒；または
酢酸エチルとシクロヘキサンとの混合溶媒
に溶解させ、これに水を添加した溶液から化合物Ａの１型結晶を晶析させることを特徴とする製造方法。
【請求項１２】
化合物Ａの２型結晶の製造方法であって、化合物Ｂを以下のいずれかの有機溶媒：
ジクロロメタン、クロロホルム、クロロベンゼン、トルエン、キシレン、アニソール、ｎ−ヘキサン、メチルシクロヘキサンおよびｎ−ヘプタンからなる群から選ばれる単一溶媒；
トルエン、キシレンおよびアニソールからなる群から選ばれる１種の有機溶媒とジエチルエーテル、シクロヘキサン、ｎ−ヘキサンおよびメチルシクロヘキサンからなる群から選ばれる１種の有機溶媒との混合溶媒；または
トルエンとジメトキシエタンとの混合溶媒
に溶解させ、これに水を添加した溶液から化合物Ａの２型結晶を晶析させることを特徴とする製造方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【公開番号】特開２００７−３０２５５９（Ｐ２００７−３０２５５９Ａ）
【公開日】平成１９年１１月２２日（２００７．１１．２２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００４−２３４５３８（Ｐ２００４−２３４５３８）
【出願日】平成１６年８月１１日（２００４．８．１１）
【出願人】（０００００２９１２）大日本住友製薬株式会社 (332)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成１９年１１月２２日（２００７．１１．２２）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年８月１１日（２００４．８．１１）
【出願人】（０００００２９１２）大日本住友製薬株式会社 (332)
【Ｆターム（参考）】
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