反応性酸素種の阻害のためのＡＲＮＯＸ阻害物質を含む組成物
本発明は、血清老化因子を封鎖するための物質、および、それを使用する方法に関する。より詳細には、本発明は、数種類の天然ａｒＮＯＸ阻害物質のいずれか１つを表わすために本明細書中で「ナラクチン（Ｎａｒａｃｔｉｎ）」と称する物質であって、フサザキスイセン（Ｎ．ｔａｚｅｔｔａ）粉末中に存在するか、あるいはフサザキスイセン粉末を新鮮なフサザキスイセン抽出物のものに匹敵する阻害レベルまで増強することができる物質に関し、老化関連イソ型ＮＡＤＨオキシダーゼ（ａｇｉｎｇ−ｒｅｌａｔｅｄ ｉｓｏｆｏｒｍ ｏｆ ＮＡＤＨ ｏｘｉｄａｓｅ）（ａｒＮＯＸ）により引き起こされる細胞損傷から生じる障害および障害の合併症を予防または治療するために「ナラクチン類」を使用する方法に関する。１つの例示的態様において、本発明の物質は少なくとも１種類の天然ナラクチンを含む。そのような天然ナラクチンは、他の天然ａｒＮＯＸ阻害物質の抗ａｒＮＯＸ作用を増強することもできる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
[0001] 本発明は、血清老化因子を封鎖するのに有用な天然産物の抽出物であって、体内または局所に投与することができるものに関する。より詳細には、本発明は、老化関連酸化を阻害または改善するために化粧用として使用するための物質およびその組成物、ならびにスキンケア製品としてそれらを使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
[0002] 細胞膜ＮＡＤＨオキシダーゼ（ＮＯＸ）は、ヒドロキノン（ＮＡＤＨ）オキシダーゼ活性およびタンパク質ジスルフィド−チオール交換活性をもつユニークな細胞表面タンパク質であり、普通はホルモンおよび成長因子に応答する。ＮＯＸ（またはＣＬＯＸ）は、老化しつつある細胞に付随する成長関連タンパク質のファミリーである。癌細胞に特異的な、ｔＮＯＸと表示されるホルモン非感受性および薬物応答性の形態のＮＯＸが記載されている。例えば、特許文献１を参照されたい（その全体を本明細書に援用する）。
【０００３】
[0003] 老化関連イソ型ＮＡＤＨオキシダーゼ（ａｇｉｎｇ−ｒｅｌａｔｅｄ ｉｓｏｆｏｒｍ ｏｆ ＮＡＤＨ ｏｘｉｄａｓｅ）（ａｒＮＯＸ）は、このファミリーのタンパク質のメンバーである。循環型ａｒＮＯＸは、特に３０〜６５歳の個体のヒトの血清およびリンパ球中で顕著に増加する。ａｒＮＯＸタンパク質は、スーパーオキシドラジカルを生成する能力によってユニークに特徴づけられる；これは、アテローム発生および他の遠達作用（ａｃｔｉｏｎ−ａｔ−ａ−ｄｉｓｔａｎｃｅ）老化現象を含めた老化関連の変化に有意に関与する可能性がある。老化しつつある細胞中および血清中のａｒＮＯＸの活性がこれまでに記載されている。例えば、特許文献２を参照（その全体を本明細書に援用する）。
【０００４】
[0004] ａｒＮＯＸの作用のこのモデルは、老化のミトコンドリア説と一致する。この説は、老化に際して、ミトコンドリア中の増加した反応性酸素種がミトコンドリアＤＮＡに変異を引き起こし、ミトコンドリアの成分に損傷を与え、その結果、老衰が生じると考える。老化のミトコンドリア説は、ミトコンドリアＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）の体細胞自然突然変異の蓄積がｍｔＤＮＡコードポリペプチド鎖の過誤をもたらすと提唱する(非特許文献１：Manczak M et al., J Neurochem. 2005 Feb; 92(3): 494-504)。ｍｔＤＮＡコードポリペプチド鎖に生じるこれらの過誤は、ミトコンドリアおよび細胞の分裂に際して確率的かつランダムに伝達される。これらの変化の結果が、欠陥オキシダーゼリン酸化である。呼吸鎖欠陥が酸化的ストレス増大に随伴するようになり、これが元の損傷を増幅する可能性がある(非特許文献２：Ozawa, 1995, Biochim. Biophys. Acta 1271 :177-189；非特許文献３：Lenaz, 1998, Biochim. Biophys. Acta 1366: 53-67)。したがって、この見解では、変異ミトコンドリアＤＮＡは体内にごく少量存在するにすぎないにもかかわらず、酸化的ストレスの主要な発生源となる可能性がある。
【０００５】
[0005] ｍｔＤＮＡの体細胞変異の蓄積が酸化的リン酸化の欠陥をもたらす場合、細胞膜オキシド−レダクターゼ（ＰＭＯＲ）系は酸化されたピリジンヌクレオチドの再生によりミトコンドリア欠陥細胞の生存を増強することが示唆されている(非特許文献４：de Grey, 1997, BioEssays 19: 16 1-166；非特許文献５：de Grey, 1998, Anti-Aging Med. 1: 53-66；非特許文献６：Yoneda et al, 1995, Biochem. Biophys. Res. Comm, 209: 723-729；非特許文献７：Schon et al., 1996, Cellular Aging and Cell Death, Wiley and Sons, New York, pp. 19-34；非特許文献８：Ozawa, 1997, Physiol. Rev. 77: 425-464；非特許文献９：Lenaz, 1998, BioFactors 8: 195-204)。ｍｔＤＮＡにおける傷害の蓄積を、細胞外応答、例えば低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）中の脂質の酸化および付随する動脈変化に関連づけるモデルが、ｒｈｏ°細胞について初めて提唱された(非特許文献１０：Larm et al., 1994, Biol. Chem. 269: 30097-30100；非特許文献１１：Lawen et al., 1994, Mol. Aspects. Med. 15: sl3-s27；非特許文献４：de Grey, 1997, BioEssays 19: 161-166；非特許文献５：de Grey, 1998, Anti-Aging Med. 1: 53-66)。形質転換したヒト培養細胞について同様な研究が行われた(非特許文献１２：Vaillant et al., 1996, Bioenerg. Biomemb. 28: 531-540)。
【０００６】
[0006] 細胞膜オキシドレダクターゼ（ＰＭＯＲ）が過剰発現する条件下では、電子は特定の電子伝達鎖によりＮＡＤＨから細胞外受容体へ伝達され、その結果、反応性酸素種（ＲＯＳ）が細胞表面に発生する。細胞表面で発生したそのようなＲＯＳは、次いでミトコンドリアから始まる老化カスケードを隣接細胞および低密度リポタンパク質などの循環血液成分の両方へ伝播する可能性がある。特許文献２を参照（その全体を本明細書に援用する）。
【０００７】
[0007] したがって、結果的に生じる生理的状態、例えば低密度リポタンパク質中の脂質（ＬＤＬ）の酸化および付随する動脈変化を軽減または治療する目的のためには、ａｒＮＯＸが反応性酸素種（ＲＯＳ）を発生する能力を低下させる物質を見いだす必要がある。老化しつつある細胞のａｒＮＯＸ活性は天然物質、例えば補酵素Ｑ（ユビキノン）により阻害されることが示された。特許文献３および４を参照；それらの開示内容全体を本明細書に援用する。しかし、補酵素Ｑの使用は幾つかの理由で必ずしも完全に満足すべきものではない：それは経費がかかり、容易に酸化されてその効力を失い、補酵素Ｑを含有する製品は機能損失を阻止するために特殊な包装をしなければならない。したがって、ａｒＮＯＸ活性を阻害しうる幾つかの物質および方法が現在あるけれども、なお挑戦がなされている。したがって、ａｒＮＯＸを阻害するけれども無毒性でありかつ天然に存在する物質および技術で、これまでに開示された物質および技術を増強するか、あるいはさらにそれらを代替することは、当技術分野における改良となるであろう。
【０００８】
[0008] 皮膚は特に反応性酸素種による損傷を受けやすい。皮膚は２つの主要な層から構成される。角質層または表皮は上層であり、皮膚に対する保護外皮を形成し、水および物質が皮膚に流入流出するのを制御する。真皮は皮膚の最下部であり、皮膚に強度、弾力性および厚みを付与する。真皮の主要な細胞タイプは線維芽細胞であり、これらはすべての皮膚マトリックス成分、例えばコラーゲン、エラスチンおよびグリコサミノグリカンの合成および分泌に関与する。コラーゲンは強度を付与し、エラスチンは弾力性を付与し、グリコサミノグリカンは皮膚の湿潤性およびふくよかさ（ｐｌｕｍｐｎｅｓｓ）を付与する。
【０００９】
[0009] 皮膚は反応性酸素種により損傷を受けるほか、種々の傷害性ストレス要因に曝される。皮膚は環境の多数の要因により損傷または害を受ける可能性がある。あるものは自然に発生する：例えば太陽からの紫外線、風、さらには機械的傷害、例えば切り傷、擦過傷など。他の人工的傷害も日常的に起きる。これらには、石鹸、乳化剤ベースの化粧品、熱湯、有機溶剤、エアコンディショニングおよびセントラルヒーティングの使用が含まれる。さらに、皮膚に対する他の傷害は皮膚障害または普通の老化プロセス（経時老化(ｃｈｒｏｎｏａｇｉｎｇ））により起きるかまたはその一部である可能性があり、それらは皮膚が種々の外的侵襲要因に曝されることによって加速される可能性がある（例えば光老化（ｐｈｏｔｏａｇｉｎｇ））。
【００１０】
[0010] すべての人の皮膚が時間と共に老化する。しかし、現代社会では人々はより長く生存し、普通の老化作用が蓄積する格好の状況がある。そのような作用は純粋に美粧上のもの、例えば皺または「加齢斑」の場合があり、あるいはそれらは紫外線被曝による皮膚癌の発症のように健康に影響を及ぼす場合がある。人々が老化するのに伴って、皮膚はより薄くなり、皮膚の結合組織であるコラーゲンおよびエラスチンが変化して皮膚の強靭性を失わせ、かつ乾燥状態にする。同様に、皮膚の汗腺および脂腺の活性が低下し、これにより皮膚の湿潤性を失なわせ、乾燥し尽くす。さらに、皮膚の血管はより脆くなるため破裂して皮膚へ漏出する。
【００１１】
[0011] 老化しつつある皮膚の症状には下記のものが含まれる：皮膚の乾燥、痒み、菲薄化または肥厚、皺（ｗｒｉｎｋｌｅ）および細かいすじ（ｌｉｎｅ）、一般に肝斑（ｌｉｖｅｒ ｓｐｏｔ）と呼ばれる過色素沈着症（ｈｙｐｅｒｐｉｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ）領域、ならびに血管が破裂した皮膚下領域（末梢血管拡張症（ｔｅｌａｎｇｉｅｔａｓｉａｓ））。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１２】
【特許文献１】米国特許第５６０５８１０号
【特許文献２】ＰＣＴ出願公開ＷＯ００／５７８７１
【特許文献３】ＰＣＴ出願公開ＷＯ０１／７２３１８
【特許文献４】ＰＣＴ出願公開ＷＯ０１／７２３１９
【非特許文献】
【００１３】
【非特許文献１】Manczak M et al., J Neurochem. 2005 Feb; 92(3): 494-504
【非特許文献２】Ozawa, 1995, Biochim. Biophys. Acta 1271 :177-189
【非特許文献３】Lenaz, 1998, Biochim. Biophys. Acta 1366: 53-67
【非特許文献４】de Grey, 1997, BioEssays 19: 16 1-166
【非特許文献５】de Grey, 1998, Anti-Aging Med. 1: 53-66
【非特許文献６】Yoneda et al, 1995, Biochem. Biophys. Res. Comm, 209: 723-729
【非特許文献７】Schon et al., 1996, Cellular Aging and Cell Death, Wiley and Sons, New York, pp. 19-34
【非特許文献８】Ozawa, 1997, Physiol. Rev. 77: 425-464
【非特許文献９】Lenaz, 1998, BioFactors 8: 195-204
【非特許文献１０】Larm et al., 1994, Biol. Chem. 269: 30097-30100
【非特許文献１１】Lawen et al., 1994, Mol. Aspects. Med. 15: sl3-s27
【非特許文献１２】Vaillant et al., 1996, Bioenerg. Biomemb. 28: 531-540
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
[0012] 実際の老化および風化した皮膚の視覚的徴候、例えば皺、すじ、たるみ（ｓａｇｇｉｎｇ）、過色素沈着および加齢斑を治療または遅延する「アンチエージング（抗加齢）」化粧品および医薬品が望まれている。しかし、大部分の化粧品または医薬品はそのような症状の根本、例えばＲＯＳに由来するａｒＮＯＸ関連ラジカルの産生および蓄積に対処するものではない。したがって、効果的な自然の皮膚処置法ならびに予防用組成物およびその使用方法が求められている。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
[0013] 本発明は、血清老化因子を封鎖するための物質、およびそれを使用する方法に関する。より詳細には、本発明は、数種類の天然ａｒＮＯＸ阻害物質のいずれか１つを表わすために本明細書中で「ナラクチン（Ｎａｒａｃｔｉｎ）」と称する物質、すなわちフサザキスイセン（房咲き水仙）（Ｎ．ｔａｚｅｔｔａ）粉末中に存在するか、あるいはフサザキスイセン粉末を新鮮なフサザキスイセン抽出物のものに匹敵する阻害レベルまで増強することができる物質、ならびに老化関連イソ型ＮＡＤＨオキシダーゼ（ａｒＮＯＸ）により引き起こされる細胞損傷から生じる障害および障害の合併症を予防または治療するために「ナラクチン類」を使用する方法に関する。１例示態様において、本発明の物質は少なくとも１種類の天然ナラクチンを含む。そのような天然ナラクチンは、他の天然ａｒＮＯＸ阻害物質の抗ａｒＮＯＸ作用を増強することもできる。
【００１６】
[0014] したがって、１例示態様において本発明には、有効量の少なくとも１種類のａｒＮＯＸ阻害物質を含む、老化作用を改善するために有用な局所組成物が含まれる。この例示態様によれば、ａｒＮＯＸ阻害物質はナラクチンであり、ナラクチンは老化作用を低下させるのに有効である。本発明によるある例示態様において、ナラクチンはフサザキスイセン、ヤナギ（ｗｉｌｌｏｗ）、トウモロコシ（ｍａｉｚｅ）、オニタビラコ（ｃｒｅｐｉｓ）、ポプラ（ｐｏｐｌａｒ）、ガマズミ（ｖｉｂｕｒｎａｍ）、カビ、特にアスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）、ウリノキ（ａｌａｎｇｉｕｍ）、カバ（ｂｉｒｃｈ）、ミシマサイコ（ｂｕｐｌｅｕｒｕｍ）、コルヒクム（ｃｏｌｃｈｉｃｕｍ）、タカトウダイグサ（ｓｐｕｒｇｅ）、シモツケソウ（ｆｉｌｉｐｅｎｄｕｌｕｍ）、クチナシ（ｇａｒｄｅｎｉａ）、ムラサキ（紫根）（ｌｉｔｈｏｓｐｅｒｍｕｍ）、タバコ（ｔｏｂａｃｃｏ）またはヤドリギ（ｍｉｓｔｌｅｔｏｅ）から抽出および／または精製される。
【００１７】
[0015] 他の種々の例示態様において、ナラクチンはサリチレートまたはその誘導体である。ある例示態様において、サリチレートはサリシン、サリチル酸、サリチルヒドロキサメート、その誘導体または組合わせである。種々の例示態様において、ナラクチンは下記のものに由来する：Alangium chinense, A. platanifolium, A. premnifolium, Aspergillus niger, Betula alba, Bupleurum falcatum, Catharanthus roseus, Chosenia bracteosa, Colchicum autumnale, Crepis foetida, C. rhoeadifolia, Datura inoxia, Duboisia myoporoides, Eleutherococcus setchuensis, Euphorbia salicifolia, Filipendula ulmaria, Foeniculum vulgare, Gardenia jasminoides, Lithospermum erythrorhizon, Nicotiana tabacum, Populus alba, P. balsamifera, P. davidiana, P. deltoides, P. euphratica, P. grandidentata, P. heterophylla, P. lasiocarpa, P. maximowiczii, P. nigra, P. sieboldii, P. simonii, P. tacamahaca, P. tomentosa, P. tremula, P. tremuloides, P. trichocarpa, Salix acutifolia, S. alba, S. americana, S. arctica, S. aurita, S. babylonica, S. basfordiana, S. caesia, S. calodendron, S. capitata, S. caprea, S. chaenomeloides, S. cinerea, S. daphnoides, S. fragilis, S. geminata, S. gracilis, S. gracilistyla, S. gracilistyloides, S. gymnolepis, S. hastata, S. herbacea, S. incana, S. koriyanagi, S. lapponum, S. lasiandra, S. lasiolepis, S. matsudana, S. myrsinifolia, S. nigricans, S. orestera, S. pentandra, S. pentandroides, S. petiolaris, S. phylicifolia, S. purpurea, S. repens, S. rubra, S. schwerinii, S. scouleriana, S. smithiana, S. songarica, S. species, S. stipularis, S. tetrasperma, S. tremuloides, S. triandra, S. viminalis, Toisusu urbaniana, Viburnum henryi, V. prunifolium, V. rhytidophyllumまたはViscum album。
【００１８】
[0016] 他の種々の例示態様において、ナラクチンはサリチレートまたはその誘導体である。ある例示態様において、サリチレートはサリシン、サリチル酸、サリチルヒドロキサメート、その誘導体または組合わせである。
【００１９】
[0017] 他の種々の例示態様において、組成物はさらに、化粧用または医薬用として許容できるキャリヤーを含む。ある例示態様において、阻害物質ナラクチンは天然源に由来する他のａｒＮＯＸ阻害物質と共に存在し、これには下記のものが含まれるが、これらに限定されない：ブロッコリ（ｂｒｏｃｃｏｌｉ）、シイタケ（ｓｈｉｔａｋｅ）、コリウス（ｃｏｌｅｕｓ） ローズマリー（ｒｏｓｅｍａｒｙ）、ハス（ｌｏｔｕｓ）、アーティチョーク（ａｒｔｉｃｈｏｋｅ）、シーローズ（ｓｅａ ｒｏｓｅ） タンジェリン（ｔａｎｇｅｒｉｎｅ）、メマツヨイグサ（雌待宵草）（Ｏｅｎｏｔｈｅｒａ ｂｉｅｎｎｉｓ）、アスタキサンチン（ａｓｔａｘａｎｔｈｉｎ）、レッドオレンジ（ブラッドオレンジ）（ｒｅｄ ｏｒａｎｇｅ）、チョウセンゴミシ（朝鮮五味子）（Ｓｃｈｉｓａｎｄｒａ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）、ロニセラ（Ｌｏｎｉｃｅｒａ）、ソバ属（Ｆａｇｏｐｙｒｕｍ）、ニンジン（ｃａｒｒｏｔ）またはオリーブ（ｏｌｉｖｅ）。種々の例示態様において、ナラクチンは他のａｒＮＯＸ阻害物質の作用を増強する。
【００２０】
[0018] 本明細書に記載するａｒＮＯＸ阻害組成物をいずれか好都合な様式で投与しうることは、当業者に認識されるであろう。ある例示態様において、そのような投与形態にはクリーム、乳液（ｍｉｌｋ）、ローション、ゲル、脂質もしくはポリマーのマイクロスフェアもしくはナノスフェアもしくはベシクルの懸濁液、石鹸、シャンプー、またはサンスクリーンが含まれる。種々の例示態様において、本発明によって改善される老化作用には下記のものが含まれるが、これらに限定されない：すじ、皺、過色素沈着症、脱水、弾力性喪失、血管腫、乾燥、痒み、末梢血管拡張症、光線性紫斑病、脂漏性角化症、水分不足、コラーゲン減少、または光線性角化症。本発明のこれらおよび他の例示態様において、ａｒＮＯＸ阻害物質は約５μｇ／ｍｌ〜約５００μｇ／ｍｌの濃度で付与される。
【００２１】
[0019] さらに他の例示態様において、本発明は、老化作用を改善するために老化関連イソ型ＮＡＤＨオキシダーゼによる反応性酸素種の発生を阻害する方法であって、サリシン、サリチル酸、サリチルヒドロキサメートのうち少なくとも１種類を含む療法有効量の組成物を、その必要がある患者に、老化関連イソ型ＮＡＤＨオキシダーゼによる反応性酸素種の発生が阻害されるように投与することを含み、その際、老化作用が改善される方法を含む。種々の例示態様において、本方法はさらに、下記のうち少なくとも１種類からの抽出物または精製した抽出物を含む：ブロッコリ、シイタケ、コリウス ローズマリー、ハス、アーティチョーク、シーローズ タンジェリン、メマツヨイグサ、アスタキサンチン、レッドオレンジ、チョウセンゴミシ、ロニセラ、ソバ属、ニンジン、フサザキスイセン、オリーブ、ヤナギ、エンバクまたはトウモロコシ。本発明による種々の例示態様において、組成物をクリーム、乳液、ローション、ゲル、脂質もしくはポリマーのマイクロスフェアもしくはナノスフェアもしくはベシクルの懸濁液、石鹸、シャンプー、またはサンスクリーンとして適用する。これらの例示態様において、老化作用には下記のものが含まれるが、これらに限定されない：すじ、皺、過色素沈着症、脱水、弾力性喪失、血管腫、乾燥、痒み、末梢血管拡張症、光線性紫斑病、脂漏性角化症、水分不足、コラーゲン減少、または光線性角化症。
【００２２】
[0020] さらに他の例示態様において、本発明は、老化作用を改善するための化粧方法であって、ａｒＮＯＸを阻害するのに十分な有効量のナラクチンを含む化粧用組成物を皮膚に適用することを含み、その際、ａｒＮＯＸ仲介による老化作用の少なくとも１つが阻害される方法を含む。これらの態様において、ナラクチンはサリチレート、その塩または誘導体である。種々の例示態様において、サリチレートはサリシン、サリチルヒドロキサメートまたはサリチル酸である。本発明による他の種々の態様において、化粧用組成物はさらに、下記のものを含む植物抽出物を含有する：ニンジン抽出物、オリーブ抽出物、ブロッコリ抽出物、シイタケ抽出物、コリウス抽出物、ローズマリー抽出物、ハス抽出物、アーティチョーク抽出物、シーローズ抽出物、タンジェリン抽出物、メマツヨイグサ抽出物、レッドオレンジ、チョウセンゴミシ抽出物、ロニセラ抽出物、ソバ属抽出物、ヤナギ抽出物、トウモロコ、エンバクまたはフサザキスイセンの抽出物。これらの例示態様において、ナラクチンを化粧用として許容できるキャリヤーと共に付与する。
【００２３】
[0021] 種々の例示態様において、本発明による方法によって改善される老化作用には、すじ、皺、過色素沈着症、脱水、弾力性喪失、血管腫、乾燥、痒み、末梢血管拡張症、光線性紫斑病、脂漏性角化症、水分不足、コラーゲン減少、または光線性角化症が含まれる。
【００２４】
[0022] 本発明による方法の種々の態様において、ナラクチンを少なくとも１日１回適用する。ある例示態様において、ナラクチンを化粧品中に約５μｇ／ｍｌ〜約５００μｇ／ｍｌの濃度で付与する。これらの例示態様において、本発明による化粧用組成物をクリーム、乳液、ローション、ゲル、脂質もしくはポリマーのマイクロスフェアもしくはナノスフェアもしくはベシクルの懸濁液、石鹸、シャンプー、またはサンスクリーンとして投与する。
【００２５】
[0023] 本発明によるさらに他の態様において、本発明は、老化作用を改善するのに有用な化粧品を適用するためのキットであって、少なくとも１種類のナラクチン；および使用のための指示を含むキットを含む。ある例示態様において、キットはさらに、少なくとも１種類のａｒＮＯＸ阻害性植物抽出物のためのキャリヤーとして適切な、化粧用調製物を含む。
【００２６】
[0024] 本発明のこれらおよび他の特徴および利点は、以下の記述および添付の特許請求の範囲に記載され、あるいはよりさらに明らかになるであろう。これらの特徴および利点は、特許請求の範囲に具体的に指摘した手段および組合わせにより実現および獲得できる。さらに、本発明の特徴および利点は、以下に述べるように本発明の実施により知ることができ、あるいは本明細書から明らかであろう。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
[0025]
[0026] 本発明による組成物および方法の種々の例示態様を、以下の図面を参照して詳細に記載する。
【図１】[0027] 図１ａは、７２歳（ｙ／ｏ）男性の唾液試料からのａｒＮＯＸイソ型の活性パターン（ＢＬ＝ベースライン）、およびフサザキスイセン抽出物粉末を添加した後の部分阻害（中央パネル）を示す。右手のパネルは、フサザキスイセンにサリチルヒドロキサメート（ＳＨＡＭ）（ナラクチン１）成分の添加に伴うほぼ完全な活性阻害を示す。図１ｂは、ＳＨＡＭの代わりにサリシン（ナラクチン３）でフサザキスイセン粉末の阻害作用を増強した以外は１ａと同じである。これらのナラクチン類は鉄と赤色複合体を形成し、これは図２に示すように、ａｒＮＯＸ阻害物質を含有するフサザキスイセンの球根部分および抽出物を特徴づける赤色に類似するスペクトル特性をもつ。
【図２】[0028] 図２ａ〜ｆは、ａｒＮＯＸ活性に対して阻害性の物質を含有するフサザキスイセンの球根領域および抽出物を示す。阻害物質は、赤色または桃色にならない球根部分および／または抽出物には存在しない。図２ａは、葉を構成する領域と茎領域に分けた球根の図である。図２ｂは、ａｒＮＯＸ阻害に関連する赤色化合物が茎領域に局在することを示す写真である。図２ｃは、抽出物を調製した球根の異なる領域を示し、図２ｄ、２ｅおよび２ｆに示すように異なる領域は異なる赤色発色レベルをもつ。発色は速やかである。抽出物がａｒＮＯＸ活性を阻害しない品種のフサザキスイセンの球根は、赤色も発色しない。
【図３】[0029] 図３は、塩化鉄を添加した後のトウモロコシのスティール（ｓｔｅｅｌｅ）の維管束（ｖａｓｃｕｌａｔｕｒｅ）（根の中心の導水組織）の同様な赤色を示す。赤色になる物質は天然のヒドロキサメートである。
【図４】[0030] 図４は、唾液（７２歳の男性）のａｒＮＯＸ活性の阻害を示す：ベースライン（ＢＬ）パネル、およびトウモロコシのスティールから調製したホモジェネートの添加による阻害。トウモロコシの鞘（ｓｈｅａｔｈ）（スティールを取り巻く組織）は鉄を添加しても着色せず、ａｒＮＯＸ活性も阻害しない。
【図５】[0031] 図５は、フサザキスイセン球根のメタノール抽出物（Ｂ）の薄層クロマトグラフィーによる分析例を、市販のフサザキスイセン粉末（Ａ）と比較して示す。青色（ＵＶ）背景をもつプレートは紫外線蛍光を示す。明かるい背景をもつプレート（ＢＢ）はベルリンブルー（Ｂｅｒｌｉｎ ｂｌｕｅ）で着色された。ＴＬＣ系は、ジクロロメタン：メタノール：ＮＨ４ＯＨ（１０：１：０．２）であった。実験室で抽出した試料において、起点の物質の真上にあるけれどもそれとは明瞭に分離しておりヒドロキサメート類の存在を示唆する赤色成分は、市販の粉末より実験室で抽出した試料においてはるかに顕著であった。これは、メタノール（図５ａ）および水（図５ｂ）両方の抽出物について明らかであった。推定ヒドロキサメートは市販の粉末中にもみられたが、実験室で抽出した試料中よりはるかに低いレベルであり、これもａｒＮＯＸ阻害活性のレベルと相関する。
【図６】[0032] 図６は、塩化鉄（ＩＩＩ）を添加して赤色のヒドロキサム酸鉄（ＩＩＩ）を形成した後のフサザキスイセンの球根ならびにトウモロコシのスティールおよび鞘の抽出物のスペクトル分析を、既知のヒドロキサメート（ＳＨＡＭ）と比較して示す。フサザキスイセンの球根のａｒＮＯＸ阻害性抽出物は赤色であり、５５０ｎｍ付近に吸収最大を示した。阻害活性を示さないラッパスイセン（Ｎ．ｐｓｅｕｄｏ ｎａｒｃｉｓｓｕｓ）の球根の抽出物は無色であり、５５０ｎｍに吸収を示さなかった。トウモロコシの根のスティール（活性）およびトウモロコシの根の鞘（不活性）は、塩化鉄（ＩＩＩ）の不存在下（−ＦｅＣｌ２）では大部分が着色しなかった。しかし、塩化鉄（ＩＩＩ）の存在下（＋ＦｅＣｌ２）ではトウモロコシスティール抽出物に約５５０ｎｍに吸収最大をもつ赤色が現われ、これに対しトウモロコシの鞘については５５０ｎｍに吸収最大はなかった。市販の安定なヒドロキサメートであるサリチルヒドロキサメート（ＳＨＡＭ）も約５５０ｎｍに吸収最大をもつ赤色を生じた。陰性対照は着色せず、５５０ｎｍに吸収を示さなかった。
【図７】[0033] 図７は、ＳＨＡＭ希釈度（ｌｏｇ）の関数としてのフェリシトクロムｃのａｒＮＯＸ活性のグラフを示す。このグラフは、市販のＳＨＡＭ製剤（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、ミズーリ州セントルイス）による唾液（７２歳の男性）の用量依存性ａｒＮＯＸ活性阻害を示す。阻害は１１ｍｇ／ｍｌで大部分が完了する。
【図８】[0034] 図８は、サリチル酸希釈度（ｌｏｇ）の関数としてのフェリシトクロムｃのａｒＮＯＸ活性のグラフを示す。このグラフは、唾液（７２歳の男性）の用量依存性ａｒＮＯＸ活性阻害をサリチル酸濃度の関数として示す。ｌｍｇ／ｍｌ濃度のサリチル酸が約５０％阻害する。
【図９】[0035] 図９は、サリシン希釈度（ｌｏｇ）の関数としてのフェリシトクロムｃのａｒＮＯＸ活性のグラフを示す。このグラフは、唾液（７２歳の男性）の用量依存性ａｒＮＯＸ活性阻害をサリシン濃度の関数として示す。ａｒＮＯＸ活性の最大阻害はｌｍｇ／ｍｌの濃度で達成される。
【図１０】[0036] 図１０ａおよび１０ｂは、種々の「ナラクチン」組合わせのａｒＮＯＸ阻害を示すグラフである。図１０ａは、４ｍｇ／ｍｌのチョウセンゴミシ（Ｓｃｈｉｚａｎｄｒａ）粉末＋フサザキスイセン抽出物（２０μｌ）の混合物のａｒＮＯＸ阻害を、１ｍｇ／ｍｌのサリシンの存在下でサリシンが増強することを示す。図１０ｂは、１ｍｇ／ｍｌのサリシンの存在下での、４ｍｇ／ｍｌのチョウセンゴミシ粉末＋１ｍｇ／ｍｌのフサザキスイセン粉末の混合物によるａｒＮＯＸ阻害を示す。この混合物６０μｌを、ａｒＮＯＸ活性源として唾液（７２歳の男性）を含有するアッセイ混合物に合計３ｍｌ添加した。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
[0037] 本発明は、血清老化因子を封鎖するための物質、およびそれを使用する方法に関する。より詳細には、本発明は、数種類の天然ａｒＮＯＸ阻害物質のいずれか１つを表わすために本明細書中で「ナラクチン」と称する物質、すなわちフサザキスイセン粉末中に存在するか、あるいはフサザキスイセン粉末を新鮮なフサザキスイセン抽出物のものに匹敵する阻害レベルまで増強することができる物質、ならびに老化関連イソ型ＮＡＤＨオキシダーゼ（ａｒＮＯＸ）により引き起こされる細胞損傷から生じる障害および障害の合併症を予防または治療するために「ナラクチン類」を使用する方法に関する。１例示態様において、本発明の物質は少なくとも１種類の天然ナラクチンを含む。そのような天然ナラクチンは、他の天然ａｒＮＯＸ阻害物質の抗ａｒＮＯＸ作用を増強することもできる。
【００２９】
[0038] 用語「ナラクチン」は、本明細書中で、フサザキスイセン粉末（例えばＸｉａｎ Ａｏｊｉｎｇ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ ＣＯ．，ＬＴＤ、中国、山西省、西安から市販されている）中に存在する数種類の天然ａｒＮＯＸ阻害物質のいずれか１つ、あるいは市販のフサザキスイセン粉末を新鮮なフサザキスイセン抽出物のものに匹敵する阻害レベルまで増強することができるものを表わすために用いられる。本発明者らは現在、化学的に純粋な「ナラクチン」活性をもつ３種類の既知物質を同定している。さらに、「ナラクチン類」は本明細書中でフサザキスイセン抽出物から同定されたが、それらは他の天然源、例えばヤナギ、トウモロコシおよびエンバク中に存在する可能性があることを留意すべきであり、もちろん本発明はそれらの供給源にかかわらずナラクチン類を包含する。
【００３０】
[0039] 本明細書中で用いる用語「化粧品」は、身体に洗浄、美化、魅力増進、または外観変更のために適用することを意図した物質を表わす。
[0040] 本明細書中で用いる用語「抽出物」は、物質を溶剤に浸煎または浸漬して有効成分を分離することにより得られる溶液を表わす。溶剤はいずれか適切な溶剤であってよく、これにはアルコール、水などが含まれるが、これらに限定されない。ある態様において、抽出物を濃縮し、溶剤を蒸発させ、有効成分を異なる溶剤に再懸濁または溶解することができる。本明細書に記載するように、フサザキスイセン抽出物は茎領域を球根から分離し、１つの茎領域を３ｍｌの蒸留水中でホモジナイズすることにより調製される。
【００３１】
[0041] 本明細書中で用いる用語「障害」は、生存する動物体もしくは植物体またはその部分の１つの正常な機能を損なう何らかの状態を表わし、病気、疾病、疾患（ａｉｌｍｅｎｔ、ｄｉｓｅａｓｅ、ｉｌｌｎｅｓｓ）、臨床状態、病的状態、衰弱した状態、不健全な状態、およびいずれかの異常または望ましくない身体状態を含む。
【００３２】
[0042] 本明細書中で用いる用語「反応性酸素種」は、酸素代謝または自由電子伝達からの、フリーラジカル（例えばスーパーオキシドまたはヒドロキシルラジカル）を形成した酸素誘導体を表わす。
【００３３】
[0043] 本明細書中で用いる用語「抗酸化剤」は、反応性酸素種の活性を中和し、またはそれらの反応性種により生じる細胞損傷を阻害する化合物を表わす。
[0044] 本明細書中で用いる用語「医薬的に許容できるキャリヤー」は、有効成分の生物活性の有効性を妨害せず、化学的に不活性であり、かつそれが投与される患者に対して有毒でないキャリヤー媒質を表わす。
【００３４】
[0045] 本明細書中で用いる用語「医薬的に許容できる誘導体」は、本明細書に記載する配合物に対応するいずれかのホモログ、アナログまたはフラグメントであって、抗酸化活性を示し、かつ対象に対して比較的無毒性であるものを表わす。
【００３５】
[0046] 用語「療法剤」は、反応性酸素種により引き起こされる障害または障害の合併症の予防または治療を補助するいずれかの分子、化合物または処置、好ましくは抗酸化剤を表わす。
【００３６】
[0047] 用語「ａｒＮＯＸを封鎖する物質」という用語は、ａｒＮＯＸを妨害し、これによりａｒＮＯＸと他の物質の反応を低下させ、ａｒＮＯＸが反応性酸素種を発生する能力を阻害するいずれかの分子、化合物または処置を表わす。
【００３７】
[0048] 本明細書中で用いる用語「サリチレート」は、天然源またはデノボ合成のいずれに由来するものであっても、サリシンの塩類、結合体または誘導体を表わす。そのようなサリチレートには、例えばサリチル酸、サリシンヒドロキサメートおよびサリシン自体、それらの誘導体、塩類および結合体が含まれる。
【００３８】
[0049] 本発明者らは、フサザキスイセン抽出物の特定の市販製品が、抗−ａｒＮＯＸ活性をもつ有効物質を含有することを、研究中に見いだした。本発明は、ＩＢＲ−Ｄｏｒｍｉｎ（登録商標）フサザキスイセン球根抽出物（Ｉｓｒａｅｌｉ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｌｔｄ．、イスラエル）のある試料が実質的にａｒＮＯＸに対する阻害活性をもたないのに対し、同じ業者からの他のロットは阻害性が強いという所見によって促された。本発明者らは、ａｒＮＯＸ阻害物質が特定の保存剤の不存在下では不安定であるか、あるいはフサザキスイセン抽出物の精製中にａｒＮＯＸ阻害物質が失われたという仮説を立てた。しかし、ＩＢＲ−Ｄｏｒｍｉｎ（登録商標）の商品名で入手される市販のフサザキスイセン粉末は、特に休眠（ｄｏｒｍａｎｃｙ）中のフサザキスイセン球根を用いて加工されることを留意すべきである。その理論は、生長期には球根が「ドルミン（ｄｏｒｍｉｎ）類」と呼ばれる大量の未同定化合物を産生するということである。そのような「ドルミン類」はさらに、細胞または組織において休眠状態を誘発するという仮説が立てられる。したがって、現在開示されているデータから、フサザキスイセンの「ドルミン類」は本明細書中で「ナラクチン類」と同定するものと同じ物質ではないことが示される。
【００３９】
[0050] これらの可能性を調べるために、本発明者らは少数のニホンスイセン（日本水仙）（ｐａｐｅｒ ｗｈｉｔｅ（Ｎ．ｔａｚｅｔｔａ））球根を入手した。水抽出物およびエタノール抽出物はａｒＮＯＸを阻害した。ラッパスイセン（Ｎ．ｐｓｅｕｄｏ−ｎａｒｃｉｓｓｕｓ）（ｄａｆｆｏｄｉｌ）およびキズイセン（黄水仙）（Ｎ．ｊｏｎｑｕｉｌｌａ）（ｊｏｎｑｕｉｌ）について比較を行なったが、両方とも大部分が活性をもたなかった。活性は、鉄（ＩＩＩ）の添加により増強される赤色の着色と相関していた；これは、同様にａｒＮＯＸを阻害するトウモロコシおよびエンバクの幼植物にみられる天然ヒドロキサメートの特徴である（データは示していない）。ヒドロキサメートはａｒＮＯＸ阻害を助成すると予想できる化学的特性をもつ。評価のために最も入手しやすいヒドロキサメートはサリチルヒドロキサメート（ナラクチン１）であった；これはＳＨＡＭとしても知られ、別のオキシダーゼに対する既知の植物阻害物質である。ＳＨＡＭを試験して、フサザキスイセン粉末のａｒＮＯＸ阻害応答を増強することが見いだされた。低レベルのＳＨＡＭで増強したフサザキスイセン粉末について、９０％を超えるレベルの阻害が得られた。有効成分の特性分析を完了するにはフサザキスイセンの球根が不十分であったが、フサザキスイセン粉末（抽出物）（Ｘｉ’ａｎ Ａｏｊｉｎｇ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ Ｃｏ．，ＬＴＤ．、中国、山西省、西安；２０：１；球根と花の両方の抽出物で入手できる）を用いて研究を行なった。フサザキスイセン粉末は実際に低レベルの天然ヒドロキサメートを含有すると思われるが、フサザキスイセン球根から調製した抽出物よりはるかに低いレベルである。
【００４０】
[0051] 生じた疑問は、ヒドロキサメートまたはサリチル酸のいずれの部分がａｒＮＯＸ阻害活性にとって最も重要であるかどうかということであった。結果は、両方が重要であることを示唆する。サリチル酸（ナラクチン２）自身がきわめて有効な阻害物質であり、これも鉄（ＩＩＩ）と反応した際に赤色を生じる。サリチル酸のエステルまたはアスピリンは、ａｒＮＯＸを阻害しない。サリチレートの天然源であるヤナギ樹皮の水抽出物を試験して、同様にａｒＮＯＸを阻害することが見いだされた。ヤナギ樹皮の主要なサリチレートであるサリシン、すなわちグリコシドの１種も、阻害物質として有効であった（ナラクチン３）。
【００４１】
[0052] したがって、１例示態様において本発明には、有効量の少なくとも１種類のａｒＮＯＸ阻害物質を含む、老化作用を改善するために有用な局所組成物が含まれる。この例示態様によれば、ａｒＮＯＸ阻害物質はナラクチンであり、ナラクチンは老化作用を低下させるのに有効である。本発明によるある例示態様において、ナラクチンはフサザキスイセン、ヤナギ、トウモロコシ、オニタビラコ、ポプラ、ガマズミ、カビ、特にアスペルギルス属、ウリノキ、カバ、ミシマサイコ、コルヒクム、タカトウダイグサ、シモツケソウ、クチナシ、ムラサキ、タバコまたはヤドリギから抽出および／または精製される。
【００４２】
[0053] 他の種々の例示態様において、ナラクチンはサリチレートまたはその誘導体である。ある例示態様において、サリチレートはサリシン、サリチル酸、サリチルヒドロキサメート、その誘導体または組合わせである。種々の例示態様において、ナラクチンは下記のものに由来する：Alangium chinense, A. platanifolium, A. premnifolium, Aspergillus niger, Betula alba, Bupleurum falcatum, Catharanthus roseus, Chosenia bracteosa, Colchicum autumnale, Crepis foetida, C. rhoeadifolia, Datura inoxia, Duboisia myoporoides, Eleutherococcus setchuensis, Euphorbia salicifolia, Filipendula ulmaria, Foeniculum vulgare, Gardenia jasminoides, Lithospermum erythrorhizon, Nicotiana tabacum, Populus alba, P. balsamifera, P. davidiana, P. deltoides, P. euphratica, P. grandidentata, P. heterophylla, P. lasiocarpa, P. maximowiczii, P. nigra, P. sieboldii, P. simonii, P. tacamahaca, P. tomentosa, P. tremula, P. tremuloides, P. trichocarpa, Salix acutifolia, S. alba, S. americana, S. arctica, S. aurita, S. babylonica, S. basfordiana, S. caesia, S. calodendron, S. capitata, S. caprea, S. chaenomeloides, S. cinerea, S. daphnoides, S. fragilis, S. geminata, S. gracilis, S. gracilistyla, S. gracilistyloides, S. gymnolepis, S. hastata, S. herbacea, S. incana, S. koriyanagi, S. lapponum, S. lasiandra, S. lasiolepis, S. matsudana, S. myrsinifolia, S. nigricans, S. orestera, S. pentandra, S. pentandroides, S. petiolaris, S. phylicifolia, S. purpurea, S. repens, S. rubra, S. schwerinii, S. scouleriana, S. smithiana, S. songarica, S. species, S. stipularis, S. tetrasperma, S. tremuloides, S. triandra, S. viminalis, Toisusu urbaniana, Viburnum henryi, V. prunifolium, V. rhytidophyllumまたはViscum album。
【００４３】
[0054] 他の種々の例示態様において、ナラクチンはサリチレートまたはその誘導体である。ある例示態様において、サリチレートはサリシン、サリチル酸、サリチルヒドロキサメート、その誘導体または組合わせである。
【００４４】
[0055] 他の種々の例示態様において、組成物はさらに、化粧用または医薬用として許容できるキャリヤーを含む。ある例示態様において、ナラクチン阻害物質は天然源に由来する他のａｒＮＯＸ阻害物質と共に存在し、これには下記のものが含まれるが、これらに限定されない：ブロッコリ、シイタケ、コリウス ローズマリー、ハス、アーティチョーク、シーローズ タンジェリン、メマツヨイグサ、アスタキサンチン、レッドオレンジ、チョウセンゴミシ、ロニセラ、ソバ属、ニンジンまたはオリーブ。種々の例示態様において、ナラクチンは他のａｒＮＯＸ阻害物質の作用を増強する。
【００４５】
[0056] 本明細書に記載するａｒＮＯＸ阻害組成物をいずれか好都合な様式で投与しうることは、当業者に認識されるであろう。ある例示態様において、そのような投与形態にはクリーム、乳液、ローション、ゲル、脂質もしくはポリマーのマイクロスフェアもしくはナノスフェアもしくはベシクルの懸濁液、石鹸、シャンプー、またはサンスクリーンが含まれる。種々の例示態様において、本発明によって改善される老化作用には下記のものが含まれるが、これらに限定されない：すじ、皺、過色素沈着症、脱水、弾力性喪失、血管腫、乾燥、痒み、末梢血管拡張症、光線性紫斑病、脂漏性角化症、水分不足、コラーゲン減少、または光線性角化症。本発明のこれらおよび他の例示態様において、ａｒＮＯＸ阻害物質は約５μｇ／ｍｌ〜約５００μｇ／ｍｌの濃度で付与される。
【００４６】
[0057] さらに他の例示態様において、本発明は、老化作用を改善するために老化関連イソ型ＮＡＤＨオキシダーゼによる反応性酸素種の発生を阻害する方法であって、サリシン、サリチル酸、サリチルヒドロキサメートのうち少なくとも１種類を含む療法有効量の組成物を、その必要がある患者に、老化関連イソ型ＮＡＤＨオキシダーゼによる反応性酸素種の発生が阻害されるように投与することを含み、その際、老化作用が改善される方法を含む。種々の例示態様において、本方法はさらに、下記のうち少なくとも１種類からの抽出物または精製した抽出物を含む：ブロッコリ、シイタケ、コリウス ローズマリー、ハス、アーティチョーク、シーローズ タンジェリン、メマツヨイグサ、アスタキサンチン、レッドオレンジ、チョウセンゴミシ、ロニセラ、ソバ属、ニンジン、フサザキスイセン、オリーブ、ヤナギ、エンバク、トウモロコシ、オニタビラコ、ポプラ、ガマズミ、カビ、特にアスペルギルス属、ウリノキ、カバ、ミシマサイコ、コルヒクム、タカトウダイグサ、シモツケソウ、クチナシ、ムラサキ、タバコまたはヤドリギ。本発明による種々の例示態様において、組成物をクリーム、乳液、ローション、ゲル、脂質もしくはポリマーのマイクロスフェアもしくはナノスフェアもしくはベシクルの懸濁液、石鹸、シャンプー、エリキシル剤またはサンスクリーンとして適用する。これらの例示態様において、老化作用には下記のものが含まれるが、これらに限定されない：すじ、皺、過色素沈着症、脱水、弾力性喪失、血管腫、乾燥、痒み、末梢血管拡張症、光線性紫斑病、脂漏性角化症、水分不足、コラーゲン減少、または光線性角化症。
【００４７】
[0058] さらに他の例示態様において、本発明は、老化作用を改善するための化粧方法であって、ａｒＮＯＸを阻害するのに十分な有効量のナラクチンを含む化粧用組成物を皮膚に適用することを含み、その際、ａｒＮＯＸ仲介による老化作用の少なくとも１つが阻害される方法を含む。これらの態様において、ナラクチンはサリチレートまたはその誘導体である。種々の例示態様において、サリチレートはサリシン、サリチルヒドロキサメートまたはサリチル酸である。本発明による他の種々の態様において、化粧用組成物はさらに、下記のものを含む植物抽出物を含有する：ニンジン抽出物、オリーブ抽出物、ブロッコリ抽出物、シイタケ抽出物、コリウス抽出物、ローズマリー抽出物、ハス抽出物、アーティチョーク抽出物、シーローズ抽出物、タンジェリン抽出物、メマツヨイグサ抽出物、レッドオレンジ抽出物、チョウセンゴミシ抽出物、ロニセラ抽出物、ソバ属抽出物、ヤナギ抽出物、トウモロコシ、オニタビラコ、ポプラ、ガマズミ、カビ、特にアスペルギルス属、ウリノキ、カバ、ミシマサイコ、コルヒクム、タカトウダイグサ、シモツケソウ、クチナシ、ムラサキ、タバコ、ヤドリギ、エンバクまたはフサザキスイセンの抽出物。これらの例示態様において、ナラクチンを化粧用として許容できるキャリヤーと共に付与する。
【００４８】
[0059] 種々の例示態様において、本発明による方法によって改善される老化作用には、すじ、皺、過色素沈着症、脱水、弾力性喪失、血管腫、乾燥、痒み、末梢血管拡張症、光線性紫斑病、脂漏性角化症、水分不足、コラーゲン減少、または光線性角化症が含まれる。
【００４９】
[0060] 本発明による方法の種々の態様において、ナラクチンを少なくとも１日１回適用する。ある例示態様において、ナラクチンを化粧品中に約５μｇ／ｍｌ〜約５００μｇ／ｍｌの濃度で付与する。これらの例示態様において、本発明による化粧用組成物をクリーム、乳液、ローション、ゲル、エリキシル剤、脂質もしくはポリマーのマイクロスフェアもしくはナノスフェアもしくはベシクルの懸濁液、石鹸、シャンプー、またはサンスクリーンとして投与する。
【００５０】
[0061] 本発明によるさらに他の態様において、本発明は、老化作用を改善するのに有用な化粧品を適用するためのキットであって、少なくとも１種類のナラクチン；および使用のための指示を含むキットを含む。ある例示態様において、キットはさらに、少なくとも１種類のａｒＮＯＸ阻害性植物抽出物のためのキャリヤーとして適切な、化粧用調製物を含む。
【００５１】
[0062] 本明細書中で定める抗酸化剤、細胞成分および標的タンパク質を下記のように略記する：
【００５２】
【表Ａ】
【００５３】
[0063] 本発明
[0064] 本発明は、フサザキスイセンの球根およびトウモロコシから同定および精製され、体内または局所に投与しうる、天然の物質に関する。これらの物質はａｒＮＯＸを特異的に阻害し、それの老化関連作用のうちあるものを改善する。そのような物質は単離した物質または植物抽出物の形をとることができる。さらに、ａｒＮＯＸ阻害物質は単独で使用できるが、多数のａｒＮＯＸ阻害物質を含む組成物、および／または身体に対して他の有益な作用をもつ化合物を含有する配合物としても使用できる。特に本発明者らは、ａｒＮＯＸ阻害物質を化粧品に添加することにより阻害物質が普通のスキンケア計画を増強する有益な効果をもちうることを見いだした。
【００５４】
[0065] さらに他の例示態様において、本発明は、老化作用を改善するための化粧用組成物であって、化粧用として有効な量の少なくとも１種類のａｒＮＯＸ阻害物質を含み、その際、ａｒＮＯＸ阻害物質は皮膚に対する老化作用を軽減するのに有効である組成物を含む。この例示態様の１形態において、本発明は化粧用として許容できるキャリヤーを含有する。この態様において、キャリヤーには粉末、皮膚軟化剤、ローション、クリーム、液体などを含めることができる。ある例示態様において、ａｒＮＯＸ阻害物質は植物に由来する。具体的な例示態様において、植物は下記のものから選択される：ブロッコリ、シイタケ、コリウス、ローズマリー、ハス、アーティチョーク、シーローズ、タンジェリン、メマツヨイグサ、アスタキサンチン、レッドオレンジ、チョウセンゴミシ、ロニセラ、ソバ属、ニンジン、フサザキスイセン、ヤナギ、トウモロコシ、オニタビラコ、ポプラ、ガマズミ、カビ、特にアスペルギルス属、ウリノキ、カバ、ミシマサイコ、コルヒクム、タカトウダイグサ、シモツケソウ、クチナシ、ムラサキ、タバコ、ヤドリギ、エンバクまたはオリーブ。
【００５５】
[0066] この例示態様による化粧用組成物は例示されるいかなる様式でも投与できることを認識すべきである。例えば、ある例示態様において、本発明による化粧用組成物は局所、経口、非経口、経皮または直腸に投与できる。ある例示態様において、組成物をクリーム、乳液、ローション、ゲル、脂質もしくはポリマーのマイクロスフェアもしくはナノスフェアもしくはベシクルの懸濁液、石鹸またはシャンプーとして配合する。
【００５６】
[0067] さらに他の例示態様において、本発明は、老化作用を改善するための化粧方法であって、有効量のナラクチンを含む化粧用組成物を皮膚に適用することを含み、その際、ａｒＮＯＸ仲介による老化作用の少なくとも１つが阻害される方法を含む。本発明によるある例示態様において、ａｒＮＯＸ阻害物質は植物抽出物である。他の例示態様において、ａｒＮＯＸ阻害物質は植物抽出物から精製されている。本発明による種々の例示態様において、ａｒＮＯＸ阻害物質は約５μｇ／ｍｌ〜約５００μｇ／ｍｌの濃度で存在する。種々の例示態様において、有効成分の濃度は約１５μｇ／ｍｌ〜約１００μｇ／ｍｌの濃度で存在する。ある例示態様において、本発明による化粧用組成物は局所、経口、非経口、経皮、直腸、またはいずれか有効な方法で適用できる。ある例示態様において、組成物をクリーム、乳液、ローション、ゲル、脂質もしくはポリマーのマイクロスフェアもしくはナノスフェアもしくはベシクルの懸濁液、石鹸またはシャンプーとして配合する。
【００５７】
[0068] さらに他の例示態様において、本発明はキットを含む。この態様において、キットはある体積のａｒＮＯＸ阻害物質および使用のための指示を含むことができる。種々の例示態様において、キットはさらに、ａｒＮＯＸ阻害物質を化粧用調製物に使用前に添加することができるように、化粧用調製物を含むことができる。
【００５８】
[0069] 本発明のある例示態様においては１種類のａｒＮＯＸ阻害物質を使用するが、他の例示態様においては１種類より多い抽出物またはａｒＮＯＸ阻害物質を一緒に使用することを認識すべきである。さらに、本発明の種々の例示態様において、１種類または種々のａｒＮＯＸ阻害物質を多様な方法で適用または投与しうることを認識すべきである。例えば、クリーム、乳液、ローション、ゲル、脂質もしくはポリマーのマイクロスフェアもしくはナノスフェアもしくはベシクルの懸濁液、石鹸、シャンプーまたはサンスクリーンの形での局所適用、および茶もしくはカプセルまたは他のいずれかの効果的な様式。
【００５９】
[0070] 細胞膜ヒドロキノン（ＮＡＤＨ）オキシダーゼ（ＮＯＸ）：
[0071] 細胞膜ＮＡＤＨオキシダーゼ（ＮＯＸ）は、ヒドロキノン（ＮＡＤＨ）オキシダーゼ活性およびタンパク質ジスルフィド−チオール交換活性をもつユニークな細胞表面タンパク質であり、これは普通はホルモンおよび成長因子に応答する。癌細胞に特異的な、ｔＮＯＸと表示されるホルモン非感受性および薬物応答性の形態の活性が記載されている。ＮＯＸタンパク質が特定の条件下でＲＯＳを産生しうるという証拠がある。例えば、培養細胞において酸化的ストレス源として紫外線を用いてスーパーオキシド発生を開始している(Morre et al., 1999, Biofactors 9:179-187)(Ｕ．Ｓ．Ｐａｔｅｎｔ Ｎｏ．５，６０５，８１０を参照；それの全体を本明細書に援用する）。
【００６０】
[0072] フサザキスイセンからのａｒＮＯＸ阻害物質の分離および特性分析
[0073] 本発明に至る一連の研究は、市販のフサザキスイセン球根抽出物（ＩＢＲ−Ｄｏｒｍｉｎ（登録商標）として市販、ＩＢＲ，Ｉｎｃ．、イスラエル）のある試料はａｒＮＯＸに対してしばしば強い阻害性であるのに対し、異なるロットではあるが同じタイプの製品の他の試料が阻害性ではないという所見によって促された。本発明者らは、ａｒＮＯＸ阻害が特定の保存剤の不存在下では幾分不安定であるためか、あるいは抽出物の精製中に不活性調製物から有効調製物のａｒＮＯＸ阻害成分が失われたという仮説を立てた。しかし、ＩＢＲ−Ｄｏｒｍｉｎ（登録商標）として知られる製品は植物に由来する抗増殖剤に関連すると最近記載されたことに注目すべきである。米国特許出願公開Ｎｏ．２００６０１６０７０２、出願Ｎｏ．１１／２８９，１５６（’１５６出願）（Ｓｏｕｄａｎｔら）を参照。この’１５６出願によれば、抗増殖剤は、植物器官を休眠状態に誘導することができる植物中にみられる（要約）。したがって、「ドルミン類」と呼ばれる抗増殖剤は、細胞増殖の速度低下を介して老化の速度を低下させることにより機能することが示唆される。「ドルミン類」は休眠期に入った植物の抽出物を調製することにより収穫される。したがって、休眠状態の植物のみがこの特性を得るための「ドルミン類」として使用できる。
【００６１】
[0074] 異なる市販のフサザキスイセン粉末（球根と花の両方とも）（Ｘｉ’ａｎ Ａｏｊｉｎｇ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ ＣＯ．，ＬＴＤ．、中国、山西省、西安）が多様なａｒＮＯＸ阻害度をもつことに本発明者らは気づいたので、ａｒＮＯＸ阻害物質を同定するために一連の実験を行なった。上記の可能性を調べるために、ニホンスイセン（日本水仙）（ｐａｐｅｒ ｗｈｉｔｅ ｎａｒｃｉｓｓｕｓ（Ｎ．ｔａｚｅｔｔａ））の球根を園芸業者（Ｂｒｅｎｔ ａｎｄ Ｂｅｃｋｙ’ｓ ｂｕｌｂｓ、バージニア州グロウセスター)から入手した。ラッパスイセン（Ｎ．ｐｓｅｕｄｏ−ｎａｒｃｉｓｓｕｓ）（ｄａｆｆｏｄｉｌ）およびキズイセン（黄水仙）（Ｎ．ｊｏｎｑｕｉｌｌａ）（ｊｏｎｑｕｉｌ）について比較を行なったが、両方とも大部分が活性をもたなかった。活性は、鉄（ＩＩＩ）の添加により増強される赤色の着色と相関していた；これは、天然ヒドロキサメートの特徴である。評価のために最も入手しやすいヒドロキサメートはサリチルヒドロキサメート（ＳＨＡＭ）（ナラクチン１）であった。水抽出物およびアルコール抽出物を調製し、これらはａｒＮＯＸを阻害し、フサザキスイセンの低活性の花からの粉末と組み合わせた際に阻害を増強した（例えば図１ａ）。図１ｂは１ａと同様であり、水で抽出した球根に由来するフサザキスイセン粉末（Ｘｉａｎ Ａｏｊｉｎｇ，ＬＴＤ）をサリシン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、ミズーリ州セントルイス）（ナラクチン３）で増強した場合の増強を示す。ａｒＮＯＸ阻害活性を全くもたない同様な抽出物であるラッパスイセンおよびキズイセンの抽出物のと比較を行なった。
【００６２】
[0075] 図２に示すように、フサザキスイセン抽出物の活性は鉄（ＩＩＩ）の添加によって増強される赤色の着色と相関していた；これは、例えば同様にａｒＮＯＸを阻害するトウモロコシ（図３）およびエンバク（示していない）の幼植物にみられる天然ヒドロキサメートの特徴である（図４）。フサザキスイセン抽出物の有効成分が天然ヒドロキサメートを含む可能性についての証拠はさらに、薄層クロマトグラフィー分析（図５）により、それらの鉄付加物のスペクトル研究から、トウモロコシの根のスティール（ヒドロキサメートが濃縮されているトウモロコシの根の中心維管束；これは、図２に示すように潜在的にヒドロキサメートに富むフサザキスイセン球根の茎の維管束に対応する）から（図６）、および市販のヒドロキサメート（サリチルヒドロキサメート（ＳＨＡＭ）、例えばＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、ミズーリ州セントルイスから市販されている）との比較により、得られた。
【００６３】
[0076] ＳＨＡＭをａｒＮＯＸ活性阻害について試験して、７２歳の男性からの唾液に対して９０％を超えるａｒＮＯＸ活性阻害が１ｍｇ／ｍｌの濃度で得られた（図７）。ＳＨＡＭは部分活性フサザキスイセン粉末のａｒＮＯＸ活性の阻害を増強することも見いだされた（図１）。市販のフサザキスイセン粉末は、低レベルのおそらくＳＨＡＭに類似する天然ヒドロキサメートを実際に含有すると思われるが、新鮮なフサザキスイセン球根から調製した抽出物中にみられるものよりはるかに低いレベルにおいてである（図５ａおよび５ｂ）。
【００６４】
[0077] 安定化されたサリチルヒドロキサメートのサリチル酸部分がａｒＮＯＸ活性の阻害に重要であるかどうかという疑問に答えるために、サリチル酸（ナラクチン２、例えばＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、ミズーリ州セントルイスから入手できる）を唾液（７２歳の男性）のａｒＮＯＸ活性の阻害物質として試験して、ａｒＮＯＸを阻害することが見いだされた（図８）。サリチル酸も、鉄（ＩＩＩ）と反応した際にヒドロキサメートが生じるのと類似する赤色を生じた。サリチル酸のエステルおよび／またはアスピリンは、ａｒＮＯＸを阻害しなかった。サリチレートの天然源であるヤナギ樹皮の水抽出物を試験して、同様にａｒＮＯＸを阻害することが見いだされた。ヤナギ樹皮の主要なサリチレートであるサリシン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、ミズーリ州セントルイス）（本明細書中でナラクチン３と表示する）を次いで試験して、ＳＨＡＭ（ナラクチン１）またはサリチル酸（ナラクチン２）より１０倍低い濃度で有効であることが見いだされた（図９）。
【００６５】
[0078] サリシンは単独物質として有効である（図９）だけでなく、チョウセンゴミシ粉末およびフサザキスイセン粉末などの天然源に由来する他のａｒＮＯＸ阻害物質の混合物のａｒＮＯＸ阻害を増強するのにも有効であった（図１０ａおよび１０ｂ）。同定および試験した３種類の化学的に純粋なナラクチン類（フサザキスイセン粉末中に存在するか、あるいはフサザキスイセン粉末を最も有効な新鮮なフサザキスイセン抽出物のものに匹敵する阻害レベルまで増強することができる、数種類の天然ａｒＮＯＸ阻害物質のいずれかを標記するために用いる用語）のうち、サリシンは最も有望であると思われた。さらに、サリシンは安定、水溶性、非刺激性、かつ比較的安価である。
【００６６】
[0079] 一般に、老化した細胞の特徴には、ａｒＮＯＸを発現および／または放出するものが含まれ、下記の特性のうち１以上を示すものが含まれるが、これらに限定されない：老化関連ＰＭＯＲ系、活性酸素種を発生する能力、および機能欠損ミトコンドリアの保有。本発明の１態様は、老化しつつある細胞の負の作用を低下させる物質の使用である。
【００６７】
[0080] 老化しつつある皮膚の症状には、乾燥、痒み、皮膚の菲薄化または肥厚、皺および細かいすじ、過色素沈着症（一般に加齢斑または肝斑と呼ばれる）、ならびに斑点のある（ｍｏｔｔｌｅｄ）外観が含まれる。老化しつつある皮膚はコラーゲンが減少し、それに伴って弾力性が低下することが示された。さらに、老化しつつある皮膚は開裂したコラーゲンおよび架橋したタンパク質の量が増加する。これらのプロセスにおけるスーパーオキシドラジカルの関与が指摘されている。皮膚は損傷を受けると治癒するのに多大な時間がかかる。菲薄化した皮膚を通して血管がより見えやすくなり、これは加齢に伴って血管が拡張するからでもある。これらの血管が皮膚上の赤いドーム様の形成物（老年性血管腫）または表面上の破壊された毛細血管（末梢血管拡張）として見える場合がある。多くの人が老化性または光線性の紫斑を発現する；これらは皮膚上の紫色の点または斑であり、皮膚の小さな出血により形成される。メラニン細胞と呼ばれる保護細胞が年齢と共に減少するので、高齢の皮膚ほど太陽光線に対する保護が低下する。老化しつつある皮膚は多様な良性および前癌性の増殖物、例えば脂漏性および光線性の角化症も発現しやすくなる。脂漏性角化症はしばしば粗い褐色の外観をもち、いぼのように見える。それらは良性である。光線性角化症は太陽光線に被曝した領域の皮膚上の小さな鱗状増殖物である。それらは皮膚癌の初期徴候である。
【００６８】
[0081] 本発明は、皮膚の活力を維持するために、天然植物抽出物を単独でまたはクリーム皮膚軟化剤、ローション、ゲル、皮膚軟化剤などの形で局所適用する用途を包含する。本発明の好ましい態様は、皮膚の活力を維持および改善するために、ａｒＮＯＸ阻害性抽出物を含むクリームを患者の皮膚に局所適用することを含む。
【００６９】
[0082] 皮膚の化粧処置
[0083] 本発明は、皮膚の損傷およびそれに付随する状態、特に老化により生じるものおよびａｒＮＯＸに関連するものを予防および／または改善する有効成分（単数または複数）を含む、組成物を提供する。さらに、本発明はそれらの組成物を使用する方法を包含する。角質層は皮膚の最上表面層を形成する層であり、皮膚を保護し、一方では皮膚の湿潤度および物質の流入流出を制御する作用をする。このバリヤー機能が破壊されるのに伴って皮膚は傷害作用を受け、したがってさらに早期老化の一因となる。皮膚の早期老化を引き起こすこれらの傷害作用は、健康で若々しい外観および感触の皮膚を維持したい多くの個人にとっての関心事である。反応性酸素種は、細胞に対して潜在的に致死性である多数の破壊的反応に関与する。反応性酸素種は有害な細胞相互作用の原因の一部であり、これには線維芽細胞が健全なコラーゲンおよびエラスチンを産生する能力の損傷が含まれる。さらに、皮膚は皮膚障害、環境による虐待（風、エアコンディショニング、セントラルヒーティング）、または普通の老化プロセス（経時老化）により劣化を受け、これらは太陽光線への皮膚曝露によって加速する可能性がある（光老化）。
【００７０】
[0084] 本発明の好ましい態様は、組織、特に皮膚に対するａｒＮＯＸ関連の損傷を処置するための、植物に由来する天然の有効成分を提供する。これらの有効成分は、皮膚損傷および／またはそれに付随する状態を予防および／または改善する。本発明の１態様において、加工したこれらの植物産物はａｒＮＯＸ活性を封鎖する。本発明の他の態様において、加工したこれらの植物産物は反応性酸素種を阻害する。他の態様において、本発明の物質および方法は皮膚の健康状態を予防および／または改善する。例えば、これらの物質は、皮膚の緊縮性（ｔａｕｔｎｅｓｓ）、色、および孔の外観、弾力性、水和度を改善し、ならびに／あるいは、細かいすじおよび目に見える老化の徴候の出現を減弱させるのを補助することができる。本発明の他の例示態様において、これらの物質は身体の自然なコラーゲンおよびエラスチンの産生に正の作用を及ぼす。他の態様において、本発明の物質は環境からの撹乱因子、例えば公害、太陽光線、フリーラジカルおよびストレスの作用を最小限に抑える。
【００７１】
[0085] 本発明の１態様は、皮膚障害およびその作用を予防および／または改善するための組成物およびそれを使用する方法を提供する。
[0086] 本発明の１態様は、反応性酸素種の産生の作用を阻止および軽減するための組成物、ならびにそれを使用する方法を提供する。例えば、本発明は、ａｒＮＯＸ活性を少なくとも部分的に封鎖または阻害するための、植物由来の有効成分の使用を包含する。さらに、本発明は、ａｒＮＯＸ活性を封鎖するための、他の合成および天然の化合物の使用を含むものとする。
【００７２】
[0087] 本発明は、皮膚を処置し、実際の老化および風化した皮膚の目に見える徴候、例えば皺、すじ、たるみ、過色素沈着および加齢斑を遅延させる組成物を開示する。本発明は、過敏性、乾燥および／または鱗状の皮膚の外観および状態も軽減し、発赤および／または刺激を生じた皮膚を鎮静する作用をし、ならびに点（ｓｐｏｔ）、丘疹（ｐｉｍｐｌｅ）、斑点（ｂｌｅｍｉｓｈ）その他の皮膚の不整（ｉｒｒｅｇｕｌａｒｉｔｙ）を処置する。
【００７３】
[0088] 本発明は、老化しつつある細胞が血清中に放出する老化関連イソ型ＮＡＤＨオキシダーゼ（ａｒＮＯＸ）をターゲティングすることにより、細胞において老化をもたらす酸化的変化により生じる障害を処置するための、医薬組成物または化粧用組成物、使用方法、および医薬キットまたは化粧用キットを提供する。これらの組成物は、植物から抽出された物質を含有することができる。例えば、本発明組成物は、ａｒＮＯＸ活性を阻害することが示された少なくとも１種類の抽出物を単独でまたは他の阻害物質と共に含み、老化しつつある細胞が血清中に放出する老化関連イソ型ＮＡＤＨオキシダーゼの活性を少なくとも部分的に阻害または遮断することができる。これらの組成物は、ａｒＮＯＸの阻害に有用なことが知られているユビキノン類、天然抽出物またはそれらに由来する物質を、クリーム、ローション、皮膚軟化剤、ゲルなどを調製するための当技術分野で既知の他の化合物と一緒に含むことができる。そのような他の化合物には、ガム、増量剤、保存剤などを含めることができる。
【００７４】
[0089] １態様において、これらの成分のうち一部または全部を、アンチエージングおよび修復用の血清配合物中に一般的にみられる他の成分と組み合わせることができる。水以外の、または水に加えるビヒクルは、液体または固体の皮膚軟化剤、溶剤、保湿剤、増粘剤および粉末を含むことができる。ビヒクルは、組成物の０．１％から９９．９％まで、好ましくは２５％から８０％まで（重量）であってよく、他の化粧補助剤を含まない状態で組成物の残部を形成することができる。１態様において、ビヒクルは、ビヒクルの少なくとも８０重量％が水である。他の態様において、水は組成物の約５０％〜８５％（重量）を構成する。さらに他の態様において、水は組成物の約０．１％〜５５％（重量）存在する。他の態様においては、他のビヒクルが上記の濃度で用いられる。
【００７５】
[0090] 油または油性物質が乳化剤と一緒に存在して、油中水型乳液または水中油型エマルジョンを生成してもよい；これは、用いる乳化剤の平均親水性−親油性バランス（ＨＬＢ）に大きく依存する。
【００７６】
[0091] 本発明の組成物は日焼け止めを含有することもできる。日焼け止めには、紫外線を遮断するために一般的に用いられる物質が含まれる。具体的な化合物は、ＰＡＢＡ誘導体、シンナメートおよびサリチレートである。例えば、メトキシケイ皮酸オクチルおよび２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン（オキシベンゾンとししても知られる）を使用できる。メトキシケイ皮酸オクチルおよび２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノンは、それぞれ商標Ｐａｒｓｏｌ ＭＣＸおよびＢｅｎｚｏｐｈｅｎｏｎｅ−３で市販されている。エマルジョン中に用いる日焼け止めの厳密な量は、希望する太陽光線の紫外線からの保護の程度に応じて変更できる。
【００７７】
[0092] 皮膚軟化剤を本発明の化粧用組成物中にさらに含有させることができる。そのような皮膚軟化剤の量は、組成物全体の０．５％から５０％まで、好ましくは５％〜３０％（重量）の範囲であってよい。皮膚軟化剤は、エステル、脂肪酸およびアルコール類、ポリオールならびに炭化水素などの一般的な化学的カテゴリー下に分類することができる。
【００７８】
[0093] エステルはモノエステルまたはジエステルであってもよい。許容できる脂肪酸エステルの例には、アジピン酸ジブチル、セバシン酸ジエチル、ダイマー酸ジイソプロピルおよびコハク酸ジオクチルが含まれる。許容できる分枝鎖脂肪酸エステルには、ミリスチン酸２−エチル−ヘキシル、ステアリン酸イソプロピルおよびパルミチン酸イソステアリルが含まれる。許容できる三塩基性酸エステルには、トリリノール酸トリイソプロピルおよびクエン酸トリラウリルが含まれる。許容できる直鎖脂肪酸エステルには、パルミチン酸ラウリル、乳酸ミリスチルおよびオレイン酸ステアリルが含まれる。好ましいエステルには、ココ−カプリレート／カプレート（ココ−カプリレートとココ−カプレートのブレンド）、プロピレングリコールミリスチルエーテルアセテート、アジピン酸ジイソプロピルおよびオクタン酸セチルが含まれる。
【００７９】
[0094] 適切な脂肪アルコールおよび脂肪酸には、１０個から２０個までの炭素原子をもつ化合物が含まれる。特に好ましいものは、セチル、ミリスチル、パルミチルおよびステアリルアルコールならびに酸などの化合物である。
【００８０】
[0095] 皮膚軟化剤として使用できるポリオールには、直鎖および分枝鎖アルキルポリヒドロキシ化合物が含まれる。例えば、プロピレングリコール、ソルビトールおよびグリセリンが好ましい。高分子ポリオール、例えばポリ−プロピレングリコールおよびポリエチレングリコールも使用できる。ブチレンおよびプロピレングリコールは透過促進剤としても特に好ましい。
【００８１】
[0096] 皮膚軟化剤として使用できる炭化水素の例は、１２個から３０個までのいずれかの炭素原子をもつものである。具体例には、鉱油、ワセリン、スクアレンおよびイソパラフィンが含まれる。
【００８２】
[0097] 本発明組成物の他の態様は増粘剤を含む。増粘剤は、通常は組成物の０．１％から２０％まで（重量）のいずれか、好ましくは約０．５％から１０％まで（重量）の量で存在するであろう。増粘剤の例は、ＣＡＲＢＯＰＯＬ（登録商標）の商標でＢ．Ｆ．Ｇｏｏｄｒｉｃｈ Ｃｏから入手できる架橋したポリアクリレート材料である。ガム、例えばキサンタン、カラギーナン、ゼラチン、カラヤ、ペクチンおよびローカストビーンガムを使用できる。特定の状況下では、増粘機能はシリコーンまたは皮膚軟化剤としても使用できる材料により達成できる。例えば、１０センチストークを超えるシリコーンゴム、およびエステル、例えばステアリン酸グリセロールは、二重の機能をもつ。
【００８３】
[0098] 粉末を本発明の化粧用組成物に取り込ませることができる。
[0099] これらの粉末には、チョーク、タルク、カオリン、デンプン、スメクタイトクレー、化学修飾したケイ酸アルミニウムマグネシウム、有機修飾したモンモリロナイトクレー、水和ケイ酸アルミニウム、ヒュームドシリカ、アルミニウムデンプンオクテノイルスクシネート、およびその混合物が含まれる。
【００８４】
[0100] 他の補助副成分を化粧用組成物に取り込ませることもできる。これらの成分には、着色剤、不透明化剤および香料を含めることができる。これらの他の補助副成分の量は、組成物の０．００１％から２０％まで（重量）のいずれかの範囲であってもよい。
【００８５】
[0101] 本発明の組成物は、皮膚のコンディショニング、加湿および平滑化、柔軟性（ｆｌｅｘｉｂｉｌｉｔｙ）および弾力性（ｅｌａｓｔｉｃｉｔｙ）の増大、ならびに皺、すじまたは老化した皮膚の外観の予防または軽減のための物質として、ヒトの皮膚に局所適用するのに使用できる。本発明の配合物は、皮膚の張り（ｔｏｎｅ）の喪失に対する応答をもたらし、皮膚の表層の水和度および硬さを効果的に補給する有益性を増進する；これらはすべて、抗酸化剤その他の有益な成分で皮膚の下層を修復して、細かいすじおよび皺の外観を軽減しかつ目に見える張りおよび弾力性を快復するのを補助する作用に伴って生じる。ある例示態様において、そのような抗酸化剤は具体的にはａｒＮＯＸを阻害することを目的とする。
【００８６】
[0102] １態様において、約１ｍｌから１０００ｍｌまでの有効成分を含む少量の組成物を皮膚に適用する。例示態様においては、約１ｍｌから１００ｍｌまでの有効成分を含む少量の組成物を皮膚に適用する。このプロセスを毎日数回、任意期間反復することができる。好ましくは、組成物を朝１回および夕方１回、皮膚に適用する。
【００８７】
[0103] 本発明の局所スキンケア組成物は、ローション、クリーム、ゲルなどとして配合できる。組成物をその粘度および消費者の意図する用途に適した適切な容器にパッケージすることができる。例えば、ローションまたはクリームは、ボトルもしくはロールボールアプリケーター（ｒｏｌｌ−ｂａｌｌ ａｐｐｌｉｃａｔｏｒ）、または噴射剤駆動式エアゾール器具、または手指操作に適切なポンプを備えた容器内にパッケージすることができる。組成物がクリームである場合、それを変形しないボトルまたは絞り出し容器、例えばチューブもしくは蓋付きジャー内に保存するだけでよい。したがって本発明は、本明細書に定めた化粧用として許容できる組成物を収容した密閉容器をも提供する。
【実施例】
【００８８】
[0104] 以下の実施例は説明のために提示するものであり、限定のためのものではない。
[0105] 実施例
[0106] 実施例１：フサザキスイセン抽出物の特性分析
[0107] フサザキスイセン（Ｎａｒｃｉｓｓｕｓ ｔａｚｅｔｔａ）がａｒＮＯＸ阻害物質を含む可能性があるという仮説を調べるために、ニホンスイセン（日本水仙）（ｐａｐｅｒ ｗｈｉｔｅ（Ｎａｒｃｉｓｓｕｓ ｔａｚｅｔｔａ）ｎａｒｃｉｓｓｕｓ）の球根を園芸業者（Ｂｒｅｎｔ ａｎｄ Ｂｅｃｋｙ’ｓ ｂｕｌｂｓ、バージニア州グロウセスター）から入手した。水およびエタノール抽出物を調製し、これらはａｒＮＯＸ活性を阻害し、低活性のフサザキスイセン粉末（Ｘｉａｎ Ａｏｊｉｎｇ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ ＣＯ．、ＬＴＤ、中国、西安）と組み合わせた場合に阻害を増強した。ＳＨＡＭ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、ミズーリ州セントルイス）によるフサザキスイセン球根由来の粉末の増強を図１ａに示す。ナラクチン類がａｒＮＯＸ阻害を増強する能力の確認を同じプロトコルに従って行ない、ただしａｒＮＯＸ阻害を増強するためにサリシン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）、および花に由来するフサザキスイセン粉末（Ｘｉａｎ Ａｏｊｉｎｇ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ ＣＯ．，ＬＴＤ、中国、西安）を用いた；図１ｂ。ａｒＮＯＸ阻害活性をもたないラッパスイセン（Ｎａｒｃｉｓｓｕｓ ｐｓｅｕｄｏ−ｎａｒｃｉｓｓｕｓ）（ｄａｆｆｏｄｉｌ）およびキズイセン（黄水仙）（Ｎａｒｃｉｓｓｕｓ ｊｏｎｑｕｉｌｌａ）（ｊｏｎｑｕｉｌ）の同様な抽出物について比較を行なった。図２に示すように、フサザキスイセン抽出物の活性は、鉄（ＩＩＩ）の添加によって増強される赤色の着色と相関していた；これは、同様にａｒＮＯＸを阻害するトウモロコシ（図３）およびエンバク（示していない）の幼植物にみられる天然ヒドロキサメートの特徴である（図４）。フサザキスイセン抽出物の有効成分が天然ヒドロキサメートを含む可能性についての証拠はさらに、それらの薄層クロマトグラフィー分析（図５）により、ならびにそれらの鉄付加物のスペクトル研究から、およびトウモロコシの根のスティール（ヒドロキサメートが濃縮されているトウモロコシの根の中心維管束；これは、潜在的にヒドロキサメートに富むフサザキスイセン球根の茎の維管束（図２に示す）に対応する）からも（図６）、市販のヒドロキサメート（サリチルヒドロキサメート（ＳＨＡＭ）、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）との比較により、得られた。
【００８９】
[0108] 植物の別のオキシダーゼ活性の既知の阻害物質であるＳＨＡＭをａｒＮＯＸ活性阻害について試験して、７２歳の男性からの唾液に対して９０％を超えるａｒＮＯＸ活性阻害が１ｍｇ／ｍｌの濃度で得られた（図７）。ＳＨＡＭは部分活性フサザキスイセン粉末のａｒＮＯＸ活性の阻害を増強することも見いだされた（図１）。市販のフサザキスイセン粉末（ＩＢＲ−ＤＯＲＭＩＮ（登録商標）、イスラエル）は、低レベルのおそらくＳＨＡＭに類似する天然ヒドロキサメートを実際に含有すると思われるが、新鮮なフサザキスイセン球根から調製した抽出物中にみられるものよりはるかに低いレベルにおいてである（図５ａおよび５ｂ）。
【００９０】
[0109] 実施例２：ａｒＮＯＸ阻害物質の同定
[0110] 安定化されたサリチルヒドロキサメートのサリチル酸部分がａｒＮＯＸ活性の阻害に重要であるかどうかという疑問に答えるために、サリチル酸（ナラクチン２）を唾液（７２歳の男性）のａｒＮＯＸ活性の阻害物質として試験して、ａｒＮＯＸを阻害することが見いだされた（図８）。サリチル酸も、鉄（ＩＩＩ）と反応した際にヒドロキサメートが生じるのと類似する赤色を生じた。サリチル酸のエステルおよび／またはアスピリンは、ａｒＮＯＸを阻害しなかった。サリチレートの天然源であるヤナギ樹皮の水抽出物を試験して、同様にａｒＮＯＸを阻害することが見いだされた。ヤナギ樹皮の主要なサリチレートであるグリコシド、サリシン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、ミズーリ州セントルイス）（ナラクチン３）を次いで試験して、ＳＨＡＭ（ナラクチン１）またはサリチル酸（ナラクチン２）より１０倍低い濃度で有効であることが見いだされた（図９）。
【００９１】
[0111] 実施例３：サリチレート産生植物の同定
サリチレートの天然産生体である植物を同定するための検索を実施した。検索はシカゴのイリノイ大学のNorman Farnsworth教授が作成した天然物データベース(napralert.orgで入手できる）を用いて実施した。この検索により、同定された種々の組織中でサリチレートを産生する下記の植物が同定された：
A. chinense (alangiaceae（ウリノキ科）)乾燥葉、中国，A. chinense (alangiaceae)乾燥葉、日本（栽培（ｃｕｌｔ）），A. platanifolium (alangiaceae)乾燥葉、フランス，A. platanifolium var. platanifolium (alangiaceae)乾燥葉、日本，A. platanifolium var. trilobum (alangiaceae)乾燥葉、日本，A. platanifolium var. trilobum (alangiaceae)乾燥葉、日本，A. premnifolium (alangiaceae)葉、日本，A. premnifolium (alangiaceae)乾燥茎（ｓｔｅｍ）、日本，Aspergillus niger (hyphomycetes（糸状菌類）)培養物濾液、朝鮮，betula alba (betulaceae（カバノキ科）)乾燥樹皮、ドイツ，Bupleurum falctum (apiaceae（繖形科）)幼植物の懸濁培養物、日本，Catharanthus roseus (apocynaceae（キョウチクトウ科）葉の懸濁培養物、日本，Chosenia bracteosa (salicaceae（ヤナギ科）)乾燥樹皮、日本，Colchicum autumnale (liliaceae（ユリ科）)新鮮な球茎、日本，Crepis foetida (asteraceae（キク科）)乾燥根、ポーランド，Crepis rhoeadifolia (asteraceae)乾燥根、ポーランド（栽培），Datura inoxia (solanaceae（ナス科）)葯の懸濁培養物、日本，D. inoxia (solanaceae)根の懸濁培養物、日本，Duboisia myoporoides (solanaceae)葉の懸濁培養物、日本，Eleutherococcus setchuensis (araliaceae（ウコギ科）)乾燥茎、中国，Euphorbia salicifolia (euphorbiaceae（トウダイグサ科）)新鮮な植物全体、ハンガリー，Filipendula ulmaria (rosaceae（バラ科）)乾燥気中部分（ａｅｒｉａｌ ｐａｒｔ）、欧州，F. ulmaria (rosaceae)乾燥植物全体、F. ulmaria (rosaceae)乾燥植物全体、スイス，F. ulmaria (rosaceae)乾燥花、USSR，Foeniculum vulgare (apiaceae)果実の市販試料、中国，Gardenia jasminoides (rubiaceae（アカネ科）)葉の懸濁培養物、日本，Lithospermum erythrorhizon (boraginaceae（ムラサキ科）)幼植物の懸濁培養物、日本，Nicotiana tabacum (solanaceae)根の懸濁培養物、
日本，P. alba (salicaceae)乾燥樹皮、USA, P. balsamifera (salicaceae)乾燥樹皮、USA-WI, P. balsamifera (salicaceae)新鮮な樹皮、USA-WI，P. balsamifera (salicaceae)乾燥樹皮＋小枝（ｔｗｉｇ）、USA-WI，P. balsamifera (salicaceae)乾燥芽、フランス，P. balsamifera (salicaceae)凍結乾燥葉、USA-AK, P. balsamifera (salicaceae)新鮮な葉、USA-WI, P. balsamifera (salicaceae)オーブン乾燥葉、フィンランド（栽培），P. balsamifera (salicaceae)乾燥幹（ｔｒｕｎｋ）樹皮、USA-WI, P. davidiana (salicaceae)乾燥樹皮、中国，P. davidiana (salicaceae)乾燥茎樹皮、朝鮮，P. deltoides (salicaceae)乾燥樹皮、USA-WI, P. deltoides (salicaceae)新鮮な樹皮、USA-WI, P. deltoides (salicaceae)新鮮な葉、USA-WI, P. deltoides var. deltoides (salicaceae)乾燥樹皮、カナダ（栽培），P. deltoides var. occidentalis (salicaceae)乾燥樹皮、カナダ（栽培），P. euphratica (salicaceae)乾燥樹皮、中国，P. euphratica (salicaceae)乾燥芽、トルコ, P. grandidentata (salicaceae)乾燥樹皮、USA-WI, P. grandidentata (salicaceae)乾燥葉、USA-WI, P. heterophylla (salicaceae)乾燥樹皮、USA-WI, P. lasiocarpa (salicaceae)乾燥芽、英国，P. maximowiczii (salicaceae)乾燥樹皮、日本，P. nigra (salicaceae)新鮮な樹皮、ドイツ，P. nigra (salicaceae)乾燥葉、英国（栽培），P. nigra (salicaceae)乾燥葉、ドイツ，P. sieboldii (salicaceae)乾燥芽、日本，P. simonii (salicaceae)乾燥樹皮、中国，P. tacamahaca (salicaceae)乾燥樹皮、USA-WI, P. tomentosa (salicaceae)乾燥樹皮、中国，P. tomentosa (salicaceae)植物全体、中国，P. tomentosa (salicaceae)乾燥葉、中国，P. tremula (salicaceae)乾燥樹皮、ドイツ，P. tremula (salicaceae)乾燥葉、スイス，P. tremula (salicaceae)オーブン乾燥葉、フィンランド，P. tremula (salicaceae)真菌感染した茎の樹皮、フランス，P. tremula (salicaceae)乾燥小枝、フィンランド，P. tremuloides (salicaceae)乾燥樹皮、USA, P. tremuloides (salicaceae)乾燥樹皮、USA-WI, P. tremuloides (salicaceae)若い植物全体, P. tremuloides (salicaceae)凍結乾燥節間（ｉｎｔｅｒｎｏｄｅ）、USA-AK, P. tremuloides (salicaceae)乾燥葉、USA-WI, P. tremuloides triploid (salicaceae)新鮮な葉、USA-WI, P. tremuloides triploid type (salicaceae)乾燥樹皮、USA-WI, P. trichocarpa (salicaceae)乾燥樹皮、USA-WA, P. trichocarpa (salicaceae)乾燥樹皮、USA-WI, P. trichocarpa (salicaceae)新鮮な葉、USA-WI, P. trichocarpax P. deltoides (salicaceae)新鮮な葉、ベルギー（栽培），S. acutifolia (salicaceae)乾燥樹皮、ロシア, S. alba (salicaceae)乾燥樹皮、S. alba (salicaceae)乾燥樹皮、フランス，S. alba (salicaceae)乾燥樹皮、ドイツ，S. alba (salicaceae)乾燥樹皮、USA, S. alba (salicaceae)乾燥樹皮、USA-AR, S. alba (salicaceae)乾燥樹皮、
USA-UT, S. alba (salicaceae)オーブン乾燥葉、英国，S. alba (salicaceae)オーブン乾燥葉、フィンランド（栽培），S. alba cv. cardinalis (salicaceae)乾燥葉、英国，S. alba, 雌性（ｓｅｘ ｆｅｍａｌｅ）(salicaceae)乾燥樹皮、ドイツ，S. alba, 雄性（ｓｅｘ ｍａｌｅ）(salicaceae)乾燥樹皮、ドイツ，S. alba x s. babylonica (s. sepula (salicaceae)オーブン乾燥葉、英国，S. alba x s.fragilis(s. russellia (salicaceae)オーブン乾燥葉、英国，S. alba x s. pentadra (s. ehrhardt (salicaceae)オーブン乾燥葉、英国，S. alba x S. babylonica (salicaceae)植物全体、USSR, S. americana (salicaceae)乾燥葉、英国，S. arctica (salicaceae)乾燥葉、アイスランド, S. aurita (salicaceae)乾燥樹皮、ドイツ，S. aurita (salicaceae)オーブン乾燥葉、フィンランド，S. aurita, 雌性(salicaceae)乾燥樹皮、ドイツ，S. babylonica (salicaceae)乾燥葉、インド, S. babylonica (salicaceae)オーブン乾燥葉、英国，S. babylonica cv. fardon weeping (salicaceae)乾燥葉、英国，S. babylonica x s. fragills (s. blanda) (salicaceae)オーブン乾燥葉、英国，S. basfordiana (salicaceae)新鮮な葉、英国，S. basfordiana (salicaceae)凍結葉、S. caesia (salicaceae)新鮮な枝、フランス，S. caesia (salicaceae)新鮮な葉、フランス，S. caesia (salicaceae)新鮮な茎、フランス，S. calodendron (salicaceae)新鮮な葉、英国，S. calodendron (salicaceae)凍結葉、S. capitata (salicaceae)乾燥葉、中国，S. caprea (salicaceae)乾燥樹皮、フィンランド，S. caprea (salicaceae)乾燥樹皮、ドイツ，S. caprea (salicaceae)乾燥樹皮、メキシコ, S. caprea (salicaceae)乾燥葉、メキシコ, S. caprea (salicaceae)乾燥葉、USSR, S. caprea (salicaceae)オーブン乾燥葉、英国，S. caprea (salicaceae)オーブン乾燥葉、フィンランド，S. caprea, 雌性(salicaceae)乾燥樹皮、ドイツ，S. caprea, 雄性(salicaceae)乾燥樹皮、ドイツ，S. caprea var. lanata (salicaceae)乾燥葉、英国，S. caprea x s. lanata(s. balfourii) (salicaceae)オーブン乾燥葉、英国，S. caprea x s. viminalis (s. serican (salicaceae)オーブン乾燥葉、英国，S. chaenomeloides (salicaceae)乾燥葉、日本，S. cinerea (salicaceae)乾燥樹皮、ドイツ，S. cinerea (salicaceae)乾燥樹皮、スイス，S. cinerea (salicaceae)オーブン乾燥花、フィンランド，S. cinerea (salicaceae)乾燥葉、英国，S. cinerea (salicaceae)オーブン乾燥葉、英国，S. cinerea, 雌性(salicaceae)乾燥樹皮、ドイツ，S. cinerea, 雄性(salicaceae)乾燥樹皮、ドイツ，S. daphnoides (salicaceae)乾燥樹皮、S. daphnoides (salicaceae)乾燥樹皮、スイス，S. daphnoides (salicaceae)新鮮な葉、英国，S. daphnoides (salicaceae)凍結葉、S. daphnoidesクローン1 (salicaceae)乾燥小枝、フィンランド，S. daphnoides クローン2 (salicaceae)乾燥小枝、フィンランド，S. daphnoides ssp. cordaph (salicaceae)乾燥樹皮、マデイラ諸島（Madeira）, S. daphnoides var. acutifolia (salicaceae)乾燥葉、英国，S. fragilis (salicaceae)乾燥樹皮、ドイツ，S. fragilis (salicaceae)乾燥葉、英国，S. fragilis (salicaceae)乾燥葉、ドイツ，S. fragilis (salicaceae)新鮮な葉、英国，S. fragilis (salicaceae)凍結葉、S. fragilis (salicaceae)オーブン乾燥葉、英国，S. fragilis (salicaceae)オーブン乾燥葉、フィンランド（栽培），S. fragilis (salicaceae)乾燥小枝、フィンランド，S. fragilis, 雄性(salicaceae)乾燥樹皮、ドイツ，S. fragilis, 雄性(salicaceae)乾燥葉、ドイツ，S. fragilis var. latifolia (salicaceae)新鮮な葉、英国，S. fragilis var. latifolia (salicaceae)凍結葉、S. fragilis x s. pentandra (s. meyeran (salicaceae)オーブン乾燥葉、英国，S. fragilis x s. triandra (s. decipien (salicaceae)オーブン乾燥葉、英国，S. geminataハイブリッド(salicaceae)乾燥葉、英国，S. geminataハイブリッド(s. cinerea x s.vi (salicaceae)オーブン乾燥葉、英国，S. gracilis var. textoris (salicaceae)オーブン乾燥樹皮、カナダ，S. gracilistyla (salicaceae)乾燥樹皮、日本，S. gracilistyla (salicaceae)乾燥葉、日本，S. gracilistyloides (salicaceae)乾燥樹皮、日本，S. gymnolepis (salicaceae)乾燥樹皮、日本，S. hastata (salicaceae)乾燥樹皮、スイス，S. herbacea x s.phylicifolla (s. moore (salicaceae)オーブン乾燥葉、英国，S. incana (salicaceae)乾燥葉、英国，S. koriyanagi (salicaceae)乾燥樹皮、日本，S. lapponum (salicaceae)オーブン乾燥葉、英国，S. lapponum (salicaceae)オーブン乾燥葉、フィンランド，S. lapponum (salicaceae)乾燥小枝、フィンランド，S. lasiandra (salicaceae)凍結乾燥葉＋茎、USA-AK, S. lasiolepis (salicaceae)乾燥葉、USA-CA, S. matsudana (salicaceae)乾燥葉、中国，S. myrsinifolia (salicaceae)乾燥樹皮、ドイツ，S. myrsinifolia (salicaceae)乾燥葉、フィンランド（栽培），S. myrsinifolia (salicaceae)乾燥葉、ドイツ，S. myrsinifolia (salicaceae)新鮮な葉、フィンランド，S. myrsinifolia (salicaceae)オーブン乾燥葉、フィンランド，S. myrsinifolia (salicaceae)乾燥茎、フィンランド（栽培），S. myrsinifolia (salicaceae)新鮮な茎、フィンランド，S. myrsinifolia (salicaceae)乾燥小枝、フィンランド，S. myrsinifolia, 雄性(salicaceae)乾燥樹皮、ドイツ，S. nigricans (salicaceae)乾燥葉、英国，S. nigricans (salicaceae)乾燥葉、スイス，S. nigricans (salicaceae)新鮮な葉、英国，S. nigricans (salicaceae)凍結葉、S. orestera (salicaceae)乾燥葉、
USA-CA, S. pentandra (salicaceae)乾燥樹皮、ドイツ，S. pentandra (salicaceae)葉、USA, S. pentandra (salicaceae)乾燥葉、ドイツ，S. pentandra (salicaceae)新鮮な葉、英国，S. pentandra (salicaceae)凍結葉、S. pentandra (salicaceae)オーブン乾燥葉、英国，S. pentandra (salicaceae)オーブン乾燥葉、フィンランド，S. pentandra (salicaceae)乾燥小枝、フィンランド，S. pentandra cv. lumley (salicaceae)乾燥葉、英国，S. pentandra, 雌性(salicaceae)乾燥樹皮、ドイツ，S. pentandra x s.fragilis (salicaceae)新鮮な葉、英国，S. pentandra x s.fragilis (salicaceae)凍結葉、S. pentandroides (salicaceae)乾燥葉、USSR, S. pentandroides (salicaceae)新鮮な根の皮、USSR, S. petiolaris (salicaceae)乾燥樹皮、カナダ，S. phylicifolia (salicaceae)乾燥葉、英国，S. phylicifolia (salicaceae)オーブン乾燥葉、英国，S. phylicifolia (salicaceae)オーブン乾燥葉、フィンランド，S. phylicifolia (salicaceae)乾燥小枝、フィンランド，S. phylicifolia x S. myrsinifolia (salicaceae)オーブン乾燥葉、フィンランド，S. purpurea (salicaceae)乾燥樹皮、S. purpurea (salicaceae)乾燥樹皮、ドイツ，S. purpurea (salicaceae)乾燥樹皮、スイス，S. purpurea (salicaceae)乾燥葉、ドイツ，S. purpurea (salicaceae)乾燥葉、ドイツ（栽培），S. purpurea (salicaceae)乾燥葉、スイス，S. purpurea (salicaceae)新鮮な葉、S. purpurea (salicaceae)新鮮な葉、英国，S. purpurea (salicaceae)凍結葉、S. purpurea (salicaceae)オーブン乾燥葉、英国，S. purpurea, 雌性(salicaceae)乾燥樹皮、ドイツ，S. purpurea, 雌性(salicaceae)乾燥葉、ドイツ，S. purpurea, 雄性(salicaceae)乾燥樹皮、ドイツ，S. purpurea var. goldstones (salicaceae)乾燥葉、英国，S. purpurea x s.triandra (s. leiophyl (salicaceae)オーブン乾燥葉、英国，S. repens (salicaceae)乾燥樹皮、フランス，S. repens (salicaceae)乾燥樹皮、ドイツ，S. repens (salicaceae)乾燥葉、ドイツ，S. repens (salicaceae)新鮮な葉、英国，S. repens (salicaceae)凍結葉、S. repens, 雌性(salicaceae)乾燥樹皮、ドイツ，S. repens, 雄性(salicaceae)乾燥樹皮、ドイツ，S. rubraハイブリッド(salicaceae)乾燥葉、英国，S. rubraハイブリッド(s.purpurea x vimi (salicaceae)オーブン乾燥葉、英国，S. schwerinii (salicaceae)乾燥樹皮、USSR, S. scouleriana (salicaceae)乾燥樹皮、USA-UT, S. smithiana (salicaceae)乾燥葉、英国，S. songarica (salicaceae)葉、USSR, S. songarica (salicaceae)乾燥葉、USSR, S. species (salicaceae)乾燥植物全体、スイス，S. species (salicaceae)乾燥茎樹皮、フランス，S. stipularisハイブリッド(s. viminalis x un (salicaceae)オーブン乾燥葉、英国，S. tetrasperma (salicaceae)乾燥根、タイ, S. tetrasperma (salicaceae)乾燥茎樹皮、タイ, S. tremuloides (salicaceae)乾燥樹皮、USA, S. triandra (salicaceae)乾燥樹皮、ドイツ，S. triandra (salicaceae)オーブン乾燥葉、英国，S. triandra cv. black maul (salicaceae)乾燥葉、英国，S. triandra, 雌性(salicaceae)乾燥樹皮、ドイツ，S. triandra, 雄性(salicaceae)乾燥樹皮、ドイツ，S. triandra x. s. viminalls (s. hippopha (salicaceae)オーブン乾燥葉、英国，S. viminalis (salicaceae)乾燥樹皮、ドイツ，S. viminalis (salicaceae)乾燥葉、英国，S. viminalis (salicaceae)オーブン乾燥葉、英国，S. viminalis (salicaceae)オーブン乾燥葉、フィンランド（栽培），S. viminalis (salicaceae)乾燥小枝、フィンランド（栽培），S. viminalis cv. aquatica (salicaceae)オーブン乾燥小枝、フィンランド（栽培），S. viminalis, 雌性(salicaceae)乾燥樹皮、ドイツ，Toisusu urbaniana (salicaceae)乾燥樹皮、日本，Viburnum henryi (caprifoliaceae（スイカズラ科）)葉、Viburnum prunifolium (caprifoliaceae)根の皮、USA, Viburnum rhytidophyllum (caprifoliaceae)乾燥花、エジプト, Viscum album e/S. alba (loranthaceae（ヤドリギ科）)葉茎、フランス。
【００９２】
[0112] 実施例４：ａｒＮＯＸ阻害剤の増強
[0113] サリシンは単独物質として有効である（図９）だけでなく、チョウセンゴミシ（Ｓｃｈｉｚａｎｄｒａ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）粉末およびフサザキスイセン（Ｎ．ｔａｚｅｔｔａ）粉末などの天然源に由来する他のａｒＮＯＸ阻害物質の混合物のａｒＮＯＸ阻害を増強するのにも有効であった（図１０ａおよび１０ｂ）。図１０ａは、４ｍｇ／ｍｌのチョウセンゴミシ粉末＋フサザキスイセン抽出物（２０μｌ）の混合物に１ｍｇ／ｍｌのサリシンを添加したもののａｒＮＯＸ阻害を示す。図１ｂは、１ｍｇ／ｍｌのサリシンの存在下での、４ｍｇ／ｍｌのチョウセンゴミシ粉末＋１ｍｇ／ｍｌのフサザキスイセン粉末の混合物によるａｒＮＯＸ阻害を示す。同定および試験した３種類の化学的に純粋な「ナラクチン類」（フサザキスイセン粉末中に存在するか、あるいはフサザキスイセン粉末を最も有効な新鮮なフサザキスイセン抽出物のものに匹敵する阻害レベルまで増強することができる、数種類の天然ａｒＮＯＸ阻害物質のいずれかを標記するために用いる用語）のうち、サリシンは最も有望であると思われた。サリシンは安定、水溶性、非刺激性、比較的安価であり、かつ多数の業者、例えばＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、ミズーリ州セントルイスから入手できる。さらに、低活性フサザキスイセン粉末の増強は、図１ａおよび１ｂに明瞭に示される；この場合、ＳＨＡＭとサリシンの両方がａｒＮＯＸ活性を顕著に低下させた。
【００９３】
[0114] 実施例５：ａｒＮＯＸの特性分析
[0115] バフィーコート（ｂｕｆｆｙ ｃｏａｔ）によるスーパーオキシド産生：バフィーコートはリンパ球と血小板の混合物。そのようなバフィーコートは、例えばＲｏｃｋｌａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ（ペンシルベニア州ギルバーツスビル）から市販されている。採集およびアッセイ前に血液試料を４℃に保持した。約１０７個の細胞を各アッセイに添加した。細胞数を血球計数器により測定した。
【００９４】
[0116] スーパーオキシドによる鉄（ＩＩＩ）シトクロムｃの還元をスーパーオキシド形成の基準尺度として用いた(Mayo, L. A. and Cumutte, J. (1990) Meth. Enzyme. 186, 567-575. 7.Butler, J, Koppenol, W. H. and Margollash, E. (1982) J. Biol. Chem. 257, 10747)。これは、スーパーオキシドジスムターゼ阻害に連結させてスーパーオキシド発生の測定のために広く採用されている方法である。このアッセイ法は、ＰＢＳＧ緩衝液（８．０６ｇのＮａＣｌ、０．２ｇのＫＣｌ、０．１８ｇのＮａ２ＨＰＯ４、０．２６ｇのＫＨ２ＰＯ４、０．１３ｇのＣａＣｌ２、０．１ｇのＭｇＣｌ２、１．３５ｇのグルコースを１０００ｍｌの脱イオン水に溶解し、ｐＨ７．４に調整し、濾過して４℃に保存したもの）中における１５０μｌの血清または４０μｌのバフィーコートからなる。ＳＬＭ Ａｍｉｎｃｏ ＤＷ−２０００分光光度計（Ｍｉｌｔｏｎ Ｒｏｙ、米国ニューヨーク州ロチェスター）を用いて二重波長モードの操作において１．５分毎に１分間にわたる連続測定で率を決定した。４５分後、被験化合物を添加し、反応を４５分間継続した。４５分後、ミリモル吸光係数１９．１ｃｍ−１を還元フェリシトクロムｃについて用いた。被験化合物の結果を表１に示す。別途指示しない限り、水中の化合物抽出物を調製した。
【００９５】
[0117] 表１は、若干のａｒＮＯＸ阻害実験の結果を示す。
【００９６】
【表１】
【００９７】
[0118] 実施例６：局所化粧用調製物
[0119] ａｒＮＯＸ阻害特性をもつ植物抽出物を含有する４種類の基本型配合物の有効性および耐容性を２種類のビヒクル対照と比較してスクリーニングするために、８週間の顔面分割式（ｓｐｌｉｔ−ｆａｃｅ）対照付き臨床使用試験を実施した。有効性は、臨床グレーディング、バイオ計測器測定（Ｃｈｒｏｍａ Ｍｅｔｅｒ、Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ、Ｃｕｔｏｍｅｔｅｒ）、および自己評価質問表により評価した。耐容性は、刺激性グレーディングおよび有害事象モニタリングにより評価した。
【００９８】
[0120] 合計２３人の被験者が試験参加を完了した。被験者は、目の周りの領域の軽度ないし中等度の細かいすじおよび粗い皺、ならびに顔の右側および左側の過色素沈着をもつことにより試験参加資格を満たした。被験者をランダム化方式で下記の２種類の被験物質（１つは対照、１つは被験物質）に帰属させた：
対照
Ａ．ａｒＮＯＸ対照ゲルＡ（無ラベル）ＡＢ−８７−０４Ａ、無色透明ゲル（１２人の被験者）
Ｂ．ａｒＮＯＸ対照ゲルＢ（赤ラベル）ＪＺ−９１−４０、無色透明ゲル（グリセリンを含有）（１１人の被験者）
被験物質
１．ａｒＮＯＸ対照ゲルＡ／チョウセンゴミシ（Ｓｃｈｉｚａｎｄｒａ）（封入せず）、フサザキスイセン（Ｎ．ｔａｚｅｔｔａ）抽出物、およびサリシン（緑ラベル）ＪＺ ９１−３９、桃色透明ゲル（６人の被験者）
２．ａｒＮＯＸ対照ゲルＡ／チョウセンゴミシ（青ラベル）ＴＬ−９０−５９、無色透明ゲル（６人の被験者）
３．ａｒＮＯＸ対照ゲルＢ／チョウセンゴミシ（封入せず）、フサザキスイセン抽出物、およびサリシン（黄ラベル）ＴＬ−９０−５８（グリセリンを含有）、桃色透明ゲル（６人の被験者）
４．ａｒＮＯＸ対照ゲルＢ／サリシン（半分は黄、半分は黒のラベル）ＫＫ−８９−４９、無色透明ゲル（グリセリンを含有）（５人の被験者）。
【００９９】
[0121] 被験者に、顔を洗った後に１日２回（朝と夕方）、帰属させた被験物質を顔の右側または左側に適用し、かつ帰属させた対照を顔の反対側に適用するように指示した。
[0122] 臨床評価は、ベースライン（来院１）、４週目（来院２）および８週目（来院３）に実施した。被験者は、各来院時に下記の臨床グレーディングおよび計測器測定手順に参加した（別途指示しない限り）。
【０１００】
[0123] 有効性／性能パラメーター
[0124] 被験者を、顔の右側および左側において下記のパラメーターにつき臨床グレーディングした：細かい皺（目の周り）、粗い皺（目の周り）、皮膚のテキスチャー（ｔｅｘｔｕｒｅ）（頬）、全体的な変色（ｄｉｓｃｏｌｏｒａｔｉｏｎ）、明かるさ（ｂｒｉｇｈｔｎｅｓｓ）（頬）、皮膚の透明度（ｃｌａｒｉｔｙ）、孔（ｐｏｒｅ）のサイズ（額および鼻の領域）、孔の分布／構造、および全体的な皮膚の輝き（ｒａｄｉａｎｃｅ）。
【０１０１】
[0125] 刺激性／安全性グレーディング
[0126] 被験者を、顔の右側および左側において客観的刺激性パラメーター（紅斑、浮腫、スケーリング（ｓｃａｌｉｎｇ））および主観的刺激性パラメーター（灼熱感（ｂｕｒｎｉｎｇ）、刺痛（ｓｔｉｎｇｉｎｇ）、痒み（ｉｔｃｈｉｎｇ）、締付け感（ｔｉｇｈｔｎｅｓｓ）、疼き（ｔｉｎｇｌｉｎｇ））につき臨床グレーディングした。
【０１０２】
[0127] 皮膚表面の水和度の測定
[0128] 皮膚表面の水和度の測定を、Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ（登録商標）ＣＭ ８２５（Ｃｏｕｒａｇｅ＋Ｋｈａｚａｋａ、ドイツ）水和度分析計を用いて行なった。測定は、角質層の含水量を定量するために左および右の頬の下中央部について行なわれた（三重に）。
【０１０３】
[0129] 皮膚のルミナンス測定
[0130] 皮膚のルミナンス測定を、Ｃｈｒｏｍａ Ｍｅｔｅｒ ＣＲ４００（Ｋｏｎｉｃａ−Ｍｉｎｏｌｔａ、日本）皮膚ルミナンス分析計を用いて三重に実施し、顔の右側および左側において色素沈着病変部（検査員が選択）について行なって、皮膚の色／色調（ｔｏｎｅ）の変化を計測器により評価した。追加の皮膚ルミナンス測定を、顔の片側の色素沈着していない（正常な）領域について行なった。
【０１０４】
[0131] 皮膚の粘弾性測定
[0132] １回の粘弾性測定を、Ｃｕｔｏｍｅｔｅｒ（登録商標）ＳＥＭ ５７５（Ｃｏｕｒａｇｅ＋Ｋｈａｚａｋａ、ドイツ）粘弾性計測器を用いて行なった。測定は、皮膚の粘弾性を評価するために各被験者の右および左の頬の中央部について行なわれた。
【０１０５】
[0133] 質問表
[0134] 被験者は４週目と８週目に下記の質問表に記入した：
試験開始以来の皮膚の状態パラメーターに関する被験者の皮膚変化の評価質問
現在の皮膚の状態パラメーターならびに被験物質の寄与および耐容性に関する被験者の評価質問
[0135] 全体として、この試験の結果は、細かいすじの外観、触覚による粗さ、皮膚の色調、および全体的な変色／過色素沈着において、すべての被験物質および対照がベースライン評点と比較して有意の改善をもたらしたことを示す；被験物質１．ａｒＮＯＸ対照ゲルＡ／チョウセンゴミシ（封入せず）、フサザキスイセン抽出物、およびサリシン（緑ラベル）ＪＺ ９１−３９、ならびに被験物質３．ａｒＮＯＸ対照ゲルＢ／チョウセンゴミシ（封入せず）、フサザキスイセン抽出物、およびサリシン（黄ラベル）ＴＬ−９０−５８（グリセリンを含有）は、粗い皺の外観を改善した。被験物質または対照のいずれについても、客観的および主観的な刺激性において有意の増大はなかった。
【０１０６】
[0136] 皮膚のルミナンス測定は、被験物質１．ａｒＮＯＸ対照ゲルＡ／チョウセンゴミシ（封入せず）、フサザキスイセン抽出物、およびサリシン（緑ラベル）ＪＺ ９１−３９のみが、色素沈着していない部位で８週目にｂ＊値において有意の低下を生じたことを示す。色素沈着病変部において得た皮膚ルミナンスｂ＊値は、病変部の黒ずみの軽減において、被験物質１．ａｒＮＯＸ対照ゲルＡ／チョウセンゴミシ（封入せず）、フサザキスイセン抽出物、およびサリシン（緑色）ＪＺ ９１−３９が、被験物質２．ａｒＮＯＸ対照ゲルＡ／チョウセンゴミシ（青色）ＴＬ−９０−５９、ならびに被験物質３．ａｒＮＯＸ対照ゲルＢ／チョウセンゴミシ（封入せず）、フサザキスイセン抽出物、およびサリシン（黄色）ＴＬ−９０−５８（グリセリンを含有）より優れていたことを示す。皮膚表面の水和度の測定は、すべての被験物質および対照が４週目に皮膚の水和度を有意に改善したことを示す。粘弾性測定は、被験物質と対照の間で有意差を示さなかった。
【０１０７】
[0137] インフォームドコンセント
[0138] ２１ ＣＦＲ ５０．２５（Ｃｏｄｅ ｏｆ Ｆｅｄｅｒａｌ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｓ）に従った書面によるインフォームドコンセントを各被験者から試験登録前に得た。試験に参加する各被験者についての署名付きインフォームドコンセント同意書原本を試験ファイルに保存する。各被験者は同意書の署名付きコピーを受け取った（書式見本についてはＡｐｐｅｎｄｉｘ ＩＶを参照されたい）。
【０１０８】
[0139] 漸減（Ａｔｔｒｉｔｉｏｎ）
[0140] ２３人の被験者が試験を完了した。２６人の被験者が試験参加のために加入し、３人の被験者は下記の理由で試験参加を中断した：
・任意中断／有害事象：被験者０２１
・予定した来院（１回以上）に不参加：被験者００４および０２６
・任意中断／予定調整不一致：０２０、０２２、０２９
・予定した来院に欠席：００９、０３４
・検査員による判断：０１０
[0141] 被験者の人口統計
[0142] ２３人の女性被験者が試験を完了した。表２は、すべての被験者についての人口統計情報（年齢、人種、およびＦｉｔｚｐａｔｒｉｃｋ皮膚分類）のまとめを示す。人種、およびＦｉｔｚｐａｔｒｉｃｋ皮膚タイプについては、各カテゴリーの被験者の人数を、かっこ内の被験者集団に対するパーセントと共に挙げる。人種情報は各被験者の資格および健康状態に関する質問から得られた。
【０１０９】
【表２】
【０１１０】
[0143] Ｆｉｔｚｐａｔｒｉｃｋ皮膚分類は、太陽光線被曝を受けていない冬季後の最初の３０〜４５分間の太陽光線被曝に対する、保護されていない状態の皮膚の応答に基づく。皮膚タイプのカテゴリーは下記のとおりである：
タイプＩ．常に容易に熱傷を生じる（ｂｕｒｎ）；決して褐変しない；
タイプＩＩ．常に容易に熱傷を生じる；わずかに褐変する；
タイプＩＩＩ．中等度に熱傷を生じる；次第に褐変する；
タイプＩＶ．軽度に熱傷を生じる；常に良好に褐変する；
タイプＶ．稀に熱傷を生じる；十分に褐変する；
タイプＶＩ．決して熱傷を生じない；強く色素沈着する。
【０１１１】
[0144] Ｆｉｔｚｐａｔｒｉｃｋは、口の周り（ｐｅｒｉｏｒａｌ）および目の周り（ｐｅｒｉｏｒｂｉｔａｌ、ｐｅｒｉｏｃｕｌａｒ）の皺（皺皮症（ｒｈｙｔｉｄｏｓｉｓ））の程度を評点するのに有用な別の分類システムを報告した：
クラスＩ−細かい皺；
クラスＩＩ−細かい〜中等度の深さの皺、および中等度の本数の皺；
クラスＩＩＩ−細かい〜深い（粗い）皺、多数本の皺、および余分なひだ（ｆｏｌｄ）が存在する可能性。
【０１１２】
[0145] 実施例７
手順および方法
[0146] 試験の開始前に、予定被験者に３日間のウォッシュアウト期間に参加させ、その間に顔用モイスチャライザーを顔に適用しなかった。
【０１１３】
[0147] ベースライン（来院１）で、予定被験者はクリニック到着の少なくとも３０分前に顔を洗ってすべてのメーキャップを除去した。資格を考慮するために、予定被験者はそれらの日常のスキンケア計画製品を持参した。被験者は資格および健康状態に関する質問表に記入し、インフォームドコンセント同意書、秘密保持同意書、および写真公開書式に署名した。
【０１１４】
[0148] 被験者は下記の臨床グレーディング手順に参加した：
[0149] 有効性/性能パラメーター
[0150] 被験者を顔の右側および左側において下記のパラメーターにつき臨床グレーディングした：
細かい皺−目の周りの領域
粗い皺−目の周りの領域
皮膚のテキスチャー（視覚的外観）−頬
触覚による粗さ−頬
全体的な変色
全体的な皮膚の輝き。
【０１１５】
[0151] 有効性/性能パラメーターのグレーディング結果を下記の１〜１０点スケールで記録した：
１＝陽性（１〜３＝良好／望ましい）
１０＝陰性（８〜１０＝望ましくない）
必要に応じて半点評点を採用した。
【０１１６】
[0152] 被験者は下記の軽度ないし中等度の評点をもつことによって、継続した試験参加の資格があると判定された：目の周りの粗すじについて３〜７の評点；目の周りの細かい皺について２〜５の評点；ならびに顔の右側および左側の過色素沈着について２〜７の評点。
【０１１７】
[0153] 刺激性／安全性パラメーターグレーディング
[0154] 被験者を、顔の右側または左側において客観的パラメーター（紅斑、浮腫、スケーリング）および主観的パラメーター（灼熱感、刺痛、痒み、締付け感、疼き）につき臨床グレーディングした。刺激性グレーディングの結果を、下記のスケールを用いて記録した：
０＝無し
１＝軽度
２＝中等度
３＝重度
必要に応じて半点評点を採用した。
資格があると判定された被験者は、以後の計測器計測に参加した。
【０１１８】
[0155] 実施例８：皮膚表面の水和度の測定
[0156] 皮膚表面の水和度の測定を、Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ（登録商標）ＣＭ ８２５（Ｃｏｕｒａｇｅ＋Ｋｈａｚａｋａ、ドイツ）水和度分析計を用いて行なった。測定は三重に実施され、角質層の含水量を定量するために左および右の頬の下中央部について行なわれた。Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ（登録商標）の測定原理は、誘電媒体のキャパシタンス測定に基づく。誘電定数の何らかの変化は、皮膚表面の水和度の変動が精密測定コンデンサーのキャパシタンスを変化させることによる。これらの測定は、皮膚の水和度レベルのごくわずかな変化をきわめて高い再現性で検出することができる。読みは皮膚の電気的キャパシタンスに正比例し、皮膚がより水和されるのに伴って測定値が上昇する。
【０１１９】
[0157] 実施例９：皮膚のルミナンス測定
[0158] 皮膚のルミナンス測定を、Ｃｈｒｏｍａ Ｍｅｔｅｒ ＣＲ４００（Ｋｏｎｉｃａ−Ｍｉｎｏｌｔａ、日本）皮膚ルミナンス分析計を用いて三重に実施し、顔の右側および左側において色素沈着病変部（検査員が選択）について行なった。Ｃｈｒｏｍａ Ｍｅｔｅｒは、皮膚の色／色調（ｔｏｎｅ）の変化を計測器により（かつ客観的に）評価する。追加のＣｈｒｏｍａ Ｍｅｔｅｒ測定を、顔の片側の色素沈着していない（正常な）領域について行なった。Ｃｈｒｏｍａ Ｍｅｔｅｒは、標的色の色差を設定および検量することが可能な高感度の比色計である。Ｃｈｒｏｍａ Ｍｅｔｅｒは、選択した領域を容易に独立して分析するための着脱式のヘッドを備えている。下記の数値を記録した：
Ｌ＊：黒色から白色までのグレースケール上での相対的輝度（ｂｒｉｇｈｔｎｅｓｓ）を表示する；皮膚の輝きおよび明かるさが強くなるのに伴って数値が上昇する
ａ＊：赤色から緑色までの範囲の色相を表示する；皮膚の血管分布が改善され、血流が増加し、皮膚の色調（ｔｏｎｅ）が改善されるのに伴って数値が上昇する
ｂ＊：青色から黄色までの範囲の色相を表示する；皮膚が明かるくなるのに伴って数値が一般に低下する
追加の皮膚ルミナンス測定を、各被験者について顔の片側の色素沈着していない（正常な）領域について行なった。
【０１２０】
[0159] 実施例１０：皮膚の粘弾性測定
[0160] １回の粘弾性測定を、Ｃｕｔｏｍｅｔｅｒ（登録商標）ＳＥＭ ５７５（Ｃｏｕｒａｇｅ＋Ｋｈａｚａｋａ、ドイツ）粘弾性計測器を用いて行なった。測定は、皮膚の粘弾性を評価するために各被験者の右および左の頬の中央部について行なわれた。測定原理は吸引に基づく。器具内に陰圧を形成し、皮膚をプローブの開口内へ引き込む。プローブ内で、非接触式光学測定システムにより侵入深さを測定する。皮膚の侵入深さにより光の強度が変動する。陰圧による吸引に対する皮膚の抵抗性（硬さ、および皮膚が元の位置に戻る能力（弾力性、ｅｌａｓｔｉｃｉｔｙ））が、各測定の終了時に曲線として計測器上に表示される。８ミリメートル（ｍｍ）のプローブを通して３００ミリバールの陰圧を付加し、そして開放した。吸引の付与および開放に際して皮膚がプローブに出入りする動きを記録し、反発性（ｒｅｓｉｌｉｅｎｃｙ）および伸展性（ｅｘｔｅｎｓｉｂｉｌｉｔｙ）を計算した。
【０１２１】
[0161] 被験者をランダム化方式に従って下記の被験物質グループのひとつに帰属させた：
対照
Ａ．ａｒＮＯＸ対照ゲルＡ（無ラベル）ＡＢ−８７−０４Ａ
Ｂ．ａｒＮＯＸ対照ゲルＢ（赤ラベル）ＪＺ−９１−４０（グリセリンを含有）
被験物質
１．ａｒＮＯＸ対照ゲルＡ／チョウセンゴミシ（Ｓｃｈｉｚａｎｄｒａ）（封入せず）、フサザキスイセン（Ｎ．ｔａｚｅｔｔａ）抽出物、およびサリシン（緑ラベル）ＪＺ ９１−３９
２．ａｒＮＯＸ対照ゲルＡ／チョウセンゴミシ（青ラベル）ＴＬ−９０−５９
３．ａｒＮＯＸ対照ゲルＢ／チョウセンゴミシ（封入せず）、フサザキスイセン抽出物、およびサリシン（黄ラベル）ＴＬ−９０−５８（グリセリンを含有）
４．ａｒＮＯＸ対照ゲルＢ／サリシン（半分は黄色、半分は黒色のラベル）ＫＫ−８９−４９（グリセリンを含有）。
【０１２２】
[0162] 被験者に、帰属させた被験物質を顔の右側または左側に適用し、かつ帰属させた対照を顔の反対側に、下記の使用指示に従って適用するように指示した：
１日２回、朝と夕方に、顔を洗った後に薄い層を適用して下さい
被験物質を適用した後にモイスチャライザーおよびメーキャップ製品を適用してかまいません。
【０１２３】
[0163] 被験者に使用指示書、以後の来院のカレンダー、ならびに被験物質の適用時間およびコメントを記録するための日誌を与えた。
[0164] 被験者は４週目（来院２）および８週目（来院３）に、各来院の少なくとも３０分前に顔を洗ってすべてのメーキャップを除去して再来院した。日誌および被験物質をクリニックに戻し、使用コンプライアンスについて検査を受けた；新しい日誌（および必要ならば被験物質）を４週目に配布した。被験者は、ベースライン手順に従って臨床グレーディングおよびバイオ計測器測定（Ｃｈｒｏｍａ Ｍｅｔｅｒ、Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ、Ｃｕｔｏｍｅｔｅｒ）を受けた。被験者は、顔の右側および左側の皮膚状態における被験物質の寄与、耐容性および改善に関する被験者の皮膚変化評価質問表および被験者の評価質問表にも記入した。
【０１２４】
[0165] 各組成物の処方を下記の表３に提示する。
【０１２５】
【表３−１】
【０１２６】
【表３−２】
【０１２７】
【表３−３】
【０１２８】
[0166] 被験者に使用指示書、以後の来院のカレンダー、ならびに被験物質の適用時間およびコメントを記録するための日誌を与えた。
[0167] 被験者は４週目（来院２）および８週目（来院３）に再来院した。被験者は、各来院について検査施設に来る少なくとも３０分前に顔を洗ってメーキャップを除去した。被験者は、使用コンプライアンス検査のために自分の日誌および被験物質も各来院時に持参した。被験者は、各来院時に下記の手順に参加した：
有効性／性能パラメーターグレーディング
刺激性／安全性パラメーターグレーディング
皮膚表面水和度（Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ（登録商標））測定
皮膚ルミネンス（Ｃｈｒｏｍａ Ｍｅｔｅｒ）測定
皮膚粘弾性（Ｃｕｔｏｍｅｔｅｒ（登録商標））測定
被験者は、顔の右側および左側の皮膚の状態パラメーターにおける被験物質の寄与、耐容性および改善に関する被験者の皮膚変化評価質問表および被験者の評価質問表にも記入した。
【０１２９】
[0168] 各来院時に日誌をクリニックに戻し、来院２に新しい日誌を配布された。被験者は試験の終了時に被験物質ユニットをクリニックに戻した。コンプライアンスを確実にするために、臨床担当者が日誌を調べ、被験物質ユニットを各来院時に秤量した。
【０１３０】
[0169] 実施例１１：生物学的統計およびデータ管理
[0170] ４週目（来院２）および８週目（来院３）の臨床グレーディングおよび計測器測定についての平均値を、対ｔ−検定により有意性レベルｐ≦０．０５で平均ベースライン（来院１）値と統計的に比較した。ベースラインからの平均変化率パーセントおよび改善発生率をすべての性状について計算した。被験物質と対照の間で、対比較を伴う分散分析法（ＡＮＯＶＡ）を用いて比較を行なった（ＦｉｓｈｅｒのＬＳＤ）。
【０１３１】
[0171] 被験者が４週目および８週目に記入した自己評価質問表を表にまとめ、トップボックス分析を実施した。
[0172] 実施例１２：局所適用データ
[0173] ベースライン（来院１）、４週目（来院２）および８週目（来院３）に、被験者は顔について実施する臨床グレーディングおよびバイオ計測器測定（Ｃｈｒｏｍａ Ｍｅｔｅｒ、Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ、Ｃｕｔｏｍｅｔｅｒ）を受けた。表４は、各被験物質および対照についての結果を示す。４週目および８週目の平均値を、有意差について平均ベースライン値と統計的に比較する。ベースラインからの平均変化率パーセントをかっこ内に挙げる。
【０１３２】
【表４−１】
【０１３３】
【表４−２】
【０１３４】
【表４−３】
【０１３５】
【表４−４】
【０１３６】
【表４−５】
【０１３７】
【表４−６】
【０１３８】
[0174] 実施例１３：ベースラインからの平均変化
[0175] 表５は、臨床グレーディングおよび計測器試験についてのベースラインからの平均変化の比較を示す。
【０１３９】
【表５−１】
【０１４０】
【表５−２】
【０１４１】
[0176] 実施例１４：グループ間の比較
[0177] ベースラインからの平均変化に基づく比較を、処置間で（被験物質と対照）、対比較を伴う分散分析法（ＡＮＯＶＡ）を用いて比較を行なった（ＦｉｓｈｅｒのＬＳＤ）。表６に示す下記のランキングは、実験グループ間で統計的に有意の（ｐ≦０．０５）差を示す。最大レベルから最小レベルの改善の順でランキングを示し、有意差の無いパラメーターは挙げていない。ベースラインからの平均変化を各処置の下に挙げる。
【０１４２】
【表６】
【０１４３】
[0178] 実施例１５：計測器測定についての統計的比較の結果
[0179] 被験者を、細かいすじ（ｌｉｎｅ）（目の周り）、粗い皺／皮膚のひだ（ｆｏｌｄ）（目の周り）、触覚による粗さ（頬）、皮膚の張り（ｔｏｎｅ）、全体的な変色／過色素沈着、ならびに顔の右側および左側の全体的な皮膚の輝き（ｒａｄｉａｎｃｅ）についてグレーディングした。この臨床グレーディングの結果により、ベースラインと比較して表７に示す下記の有意な改善が明らかになった。
【０１４４】
【表７】
【０１４５】
[0180] 実施例１６：刺激性／安全性
[0181] 被験者を、顔の右側および左側において紅斑、浮腫、スケーリング、灼熱感、刺痛、痒み、締付け感、疼きにつき臨床グレーディングした。
【０１４６】
[0182] 臨床グレーディングの結果により、例えば表８に示すようにベースラインと比較して有意の改善が明らかになった。
【０１４７】
【表８】
【０１４８】
[0183] 実施例１７：皮膚ルミネンス測定
[0184] 皮膚のルミナンスを、皮膚ルミナンス分析計（Ｃｈｒｏｍａ Ｍｅｔｅｒ ＣＲ４００、Ｋｏｎｉｃａ−Ｍｉｎｏｌｔａ、日本）を用いて三重に測定した。皮膚の色／色調（ｔｏｎｅ）の変化を評価するために、顔の右側および左側において色素沈着病変部（検査員が選択）にわたって測定を行なった。追加の皮膚ルミナンス測定を、顔の片側の色素沈着していない（正常な）領域について行なった。
【０１４９】
[0185] 皮膚のルミナンス測定の結果を表９に示し、例えばベースラインと比較して有意差が明らかになった。
【０１５０】
【表９】
【０１５１】
[0186] 実施例１８：皮膚の表面の水和度測定
[0187] 皮膚表面の水和度の測定を、三重に行なった（Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ ＣＭ ８２５（Ｃｏｕｒａｇｅ＋Ｋｈａｚａｋａ、ドイツ）。測定は、角質層の含水量を定量するために右および左の頬の下中央部について行なわれた。
【０１５２】
[0188] 皮膚表面の水和度の測定結果により、４週目の各処置について、ベースラインと比較して湿潤化における有意の増大（改善）が明らかになった。８週目には有意差はみられなかった。
【０１５３】
[0189] 実施例１９：皮膚の粘弾性測定
[0190] １回の粘弾性測定を、Ｃｕｔｏｍｅｔｅｒ ＳＥＭ ５７５（Ｃｏｕｒａｇｅ＋Ｋｈａｚａｋａ、ドイツ）を用いて行なった。測定は、皮膚の粘弾性を評価するために各被験者の右および左の頬の中央部について行なわれた。
【０１５４】
[0191] 図１０に示す粘弾性測定結果により、例えばベースラインと比較して下記の有意差が明らかになった。
【０１５５】
【表１０】
【０１５６】
[0192] 実施例２０：全体的な結論
[0193] このパイロット試験の結果は、すべての被験物質および対照が、細かいすじ、触覚による粗さ、皮膚の張り（ｔｏｎｅ）、全体的な変色／過色素沈着において、ベースラインと比較して有意の改善をもたらしたことを示す。特に注目すべきことに、被験物質１．ａｒＮＯＸ対照ゲルＡ／チョウセンゴミシ（封入せず）、フサザキスイセン抽出物、およびサリシン（緑ラベル）ＪＺ ９１−３９、ならびに被験物質３．ａｒＮＯＸ対照ゲルＢ／チョウセンゴミシ（封入せず）、フサザキスイセン抽出物、およびサリシン（黄ラベル）ＴＬ−９０−５８（グリセリンを含有）が、粗い皺に対してすら陽性効果をもち、４週目（被験物質３、黄ラベル）および８週目（被験物質１、緑ラベル、および被験物質３、黄ラベル）において有意の改善を示した。いずれの被験物質および対照についても客観的および主観的な刺激性において有意の増大がなかった。
【０１５７】
[0194] 皮膚のルミナンス測定は、被験物質１．ａｒＮＯＸ対照ゲルＡ／チョウセンゴミシ（封入せず）、フサザキスイセン抽出物、およびサリシン（緑ラベル）ＪＺ ９１−３９のみが、色素沈着していない部位で８週目にｂ＊値において有意の低下を生じたことを示す。色素沈着病変部において得た皮膚ルミナンスｂ＊値は、病変部の黒ずみの軽減において、被験物質１．ａｒＮＯＸ対照ゲルＡ／チョウセンゴミシ（封入せず）、フサザキスイセン抽出物、およびサリシン（緑ラベル）ＪＺ ９１−３９が、被験物質２．ａｒＮＯＸ対照ゲルＡ／チョウセンゴミシ（青ラベル）ＴＬ−９０−５９、ならびに被験物質３．ａｒＮＯＸ対照ゲルＢ／チョウセンゴミシ（封入せず）、フサザキスイセン抽出物、およびサリシン（黄ラベル）ＴＬ−９０−５８（グリセリンを含有）より優れていたことを示す。
【０１５８】
[0195] 皮膚表面の水和度の測定は、すべての被験物質および対照が４週目に皮膚の水和度を有意に改善したことを示す。
[0196] 皮膚の粘弾性測定は、被験物質と対照の間で何ら有意差を示さなかった。
【０１５９】
[0197] 被験物質と対照の間のＡＮＯＶＡ比較は、４週目の全体的な変色改善において、被験物質１（ａｒＮＯＸ対照ゲルＡ／チョウセンゴミシ（封入せず）、フサザキスイセン抽出物、およびサリシン（緑ラベル）ＪＺ ９１−３９）および被験物質２（ａｒＮＯＸ対照ゲルＡ／チョウセンゴミシ（青ラベル）ＴＬ−９０−５９）が、対照Ａ（ａｒＮＯＸ対照ゲルＡ（無ラベル）ＡＢ−８７−０４Ａ）および対照Ｂ（ａｒＮＯＸ対照ゲルＢ（赤ラベル）ＪＺ−９１−４０（グリセリンを含有））より優れていたことを示す。さらに被験物質１および２は、８週目に対照Ｂ（ａｒＮＯＸ対照ゲルＢ（赤ラベル）ＪＺ−９１−４０（グリセリンを含有））より優れていた。８週目の外観改善において、被験物質２（ａｒＮＯＸ対照ゲルＡ／チョウセンゴミシ（青ラベル）ＴＬ−９０−５９）、被験物質３（ａｒＮＯＸ対照ゲルＢ／チョウセンゴミシ（封入せず）、フサザキスイセン抽出物、およびサリシン（黄ラベル）ＴＬ−９０−５８（グリセリンを含有））、および被験物質４（ａｒＮＯＸ対照ゲルＢ／サリシン（半分は黄色、半分は黒色のラベル）ＫＫ−８９−４９（グリセリンを含有））は、対照Ａ（ａｒＮＯＸ対照ゲルＡ（無ラベル）ＡＢ−８７−０４Ａ）および対照Ｂ（ａｒＮＯＸ対照ゲルＢ（赤ラベル）ＪＺ−９１−４０（グリセリンを含有））より優れていた。
【技術分野】
【０００１】
[0001] 本発明は、血清老化因子を封鎖するのに有用な天然産物の抽出物であって、体内または局所に投与することができるものに関する。より詳細には、本発明は、老化関連酸化を阻害または改善するために化粧用として使用するための物質およびその組成物、ならびにスキンケア製品としてそれらを使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
[0002] 細胞膜ＮＡＤＨオキシダーゼ（ＮＯＸ）は、ヒドロキノン（ＮＡＤＨ）オキシダーゼ活性およびタンパク質ジスルフィド−チオール交換活性をもつユニークな細胞表面タンパク質であり、普通はホルモンおよび成長因子に応答する。ＮＯＸ（またはＣＬＯＸ）は、老化しつつある細胞に付随する成長関連タンパク質のファミリーである。癌細胞に特異的な、ｔＮＯＸと表示されるホルモン非感受性および薬物応答性の形態のＮＯＸが記載されている。例えば、特許文献１を参照されたい（その全体を本明細書に援用する）。
【０００３】
[0003] 老化関連イソ型ＮＡＤＨオキシダーゼ（ａｇｉｎｇ−ｒｅｌａｔｅｄ ｉｓｏｆｏｒｍ ｏｆ ＮＡＤＨ ｏｘｉｄａｓｅ）（ａｒＮＯＸ）は、このファミリーのタンパク質のメンバーである。循環型ａｒＮＯＸは、特に３０〜６５歳の個体のヒトの血清およびリンパ球中で顕著に増加する。ａｒＮＯＸタンパク質は、スーパーオキシドラジカルを生成する能力によってユニークに特徴づけられる；これは、アテローム発生および他の遠達作用（ａｃｔｉｏｎ−ａｔ−ａ−ｄｉｓｔａｎｃｅ）老化現象を含めた老化関連の変化に有意に関与する可能性がある。老化しつつある細胞中および血清中のａｒＮＯＸの活性がこれまでに記載されている。例えば、特許文献２を参照（その全体を本明細書に援用する）。
【０００４】
[0004] ａｒＮＯＸの作用のこのモデルは、老化のミトコンドリア説と一致する。この説は、老化に際して、ミトコンドリア中の増加した反応性酸素種がミトコンドリアＤＮＡに変異を引き起こし、ミトコンドリアの成分に損傷を与え、その結果、老衰が生じると考える。老化のミトコンドリア説は、ミトコンドリアＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）の体細胞自然突然変異の蓄積がｍｔＤＮＡコードポリペプチド鎖の過誤をもたらすと提唱する(非特許文献１：Manczak M et al., J Neurochem. 2005 Feb; 92(3): 494-504)。ｍｔＤＮＡコードポリペプチド鎖に生じるこれらの過誤は、ミトコンドリアおよび細胞の分裂に際して確率的かつランダムに伝達される。これらの変化の結果が、欠陥オキシダーゼリン酸化である。呼吸鎖欠陥が酸化的ストレス増大に随伴するようになり、これが元の損傷を増幅する可能性がある(非特許文献２：Ozawa, 1995, Biochim. Biophys. Acta 1271 :177-189；非特許文献３：Lenaz, 1998, Biochim. Biophys. Acta 1366: 53-67)。したがって、この見解では、変異ミトコンドリアＤＮＡは体内にごく少量存在するにすぎないにもかかわらず、酸化的ストレスの主要な発生源となる可能性がある。
【０００５】
[0005] ｍｔＤＮＡの体細胞変異の蓄積が酸化的リン酸化の欠陥をもたらす場合、細胞膜オキシド−レダクターゼ（ＰＭＯＲ）系は酸化されたピリジンヌクレオチドの再生によりミトコンドリア欠陥細胞の生存を増強することが示唆されている(非特許文献４：de Grey, 1997, BioEssays 19: 16 1-166；非特許文献５：de Grey, 1998, Anti-Aging Med. 1: 53-66；非特許文献６：Yoneda et al, 1995, Biochem. Biophys. Res. Comm, 209: 723-729；非特許文献７：Schon et al., 1996, Cellular Aging and Cell Death, Wiley and Sons, New York, pp. 19-34；非特許文献８：Ozawa, 1997, Physiol. Rev. 77: 425-464；非特許文献９：Lenaz, 1998, BioFactors 8: 195-204)。ｍｔＤＮＡにおける傷害の蓄積を、細胞外応答、例えば低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）中の脂質の酸化および付随する動脈変化に関連づけるモデルが、ｒｈｏ°細胞について初めて提唱された(非特許文献１０：Larm et al., 1994, Biol. Chem. 269: 30097-30100；非特許文献１１：Lawen et al., 1994, Mol. Aspects. Med. 15: sl3-s27；非特許文献４：de Grey, 1997, BioEssays 19: 161-166；非特許文献５：de Grey, 1998, Anti-Aging Med. 1: 53-66)。形質転換したヒト培養細胞について同様な研究が行われた(非特許文献１２：Vaillant et al., 1996, Bioenerg. Biomemb. 28: 531-540)。
【０００６】
[0006] 細胞膜オキシドレダクターゼ（ＰＭＯＲ）が過剰発現する条件下では、電子は特定の電子伝達鎖によりＮＡＤＨから細胞外受容体へ伝達され、その結果、反応性酸素種（ＲＯＳ）が細胞表面に発生する。細胞表面で発生したそのようなＲＯＳは、次いでミトコンドリアから始まる老化カスケードを隣接細胞および低密度リポタンパク質などの循環血液成分の両方へ伝播する可能性がある。特許文献２を参照（その全体を本明細書に援用する）。
【０００７】
[0007] したがって、結果的に生じる生理的状態、例えば低密度リポタンパク質中の脂質（ＬＤＬ）の酸化および付随する動脈変化を軽減または治療する目的のためには、ａｒＮＯＸが反応性酸素種（ＲＯＳ）を発生する能力を低下させる物質を見いだす必要がある。老化しつつある細胞のａｒＮＯＸ活性は天然物質、例えば補酵素Ｑ（ユビキノン）により阻害されることが示された。特許文献３および４を参照；それらの開示内容全体を本明細書に援用する。しかし、補酵素Ｑの使用は幾つかの理由で必ずしも完全に満足すべきものではない：それは経費がかかり、容易に酸化されてその効力を失い、補酵素Ｑを含有する製品は機能損失を阻止するために特殊な包装をしなければならない。したがって、ａｒＮＯＸ活性を阻害しうる幾つかの物質および方法が現在あるけれども、なお挑戦がなされている。したがって、ａｒＮＯＸを阻害するけれども無毒性でありかつ天然に存在する物質および技術で、これまでに開示された物質および技術を増強するか、あるいはさらにそれらを代替することは、当技術分野における改良となるであろう。
【０００８】
[0008] 皮膚は特に反応性酸素種による損傷を受けやすい。皮膚は２つの主要な層から構成される。角質層または表皮は上層であり、皮膚に対する保護外皮を形成し、水および物質が皮膚に流入流出するのを制御する。真皮は皮膚の最下部であり、皮膚に強度、弾力性および厚みを付与する。真皮の主要な細胞タイプは線維芽細胞であり、これらはすべての皮膚マトリックス成分、例えばコラーゲン、エラスチンおよびグリコサミノグリカンの合成および分泌に関与する。コラーゲンは強度を付与し、エラスチンは弾力性を付与し、グリコサミノグリカンは皮膚の湿潤性およびふくよかさ（ｐｌｕｍｐｎｅｓｓ）を付与する。
【０００９】
[0009] 皮膚は反応性酸素種により損傷を受けるほか、種々の傷害性ストレス要因に曝される。皮膚は環境の多数の要因により損傷または害を受ける可能性がある。あるものは自然に発生する：例えば太陽からの紫外線、風、さらには機械的傷害、例えば切り傷、擦過傷など。他の人工的傷害も日常的に起きる。これらには、石鹸、乳化剤ベースの化粧品、熱湯、有機溶剤、エアコンディショニングおよびセントラルヒーティングの使用が含まれる。さらに、皮膚に対する他の傷害は皮膚障害または普通の老化プロセス（経時老化(ｃｈｒｏｎｏａｇｉｎｇ））により起きるかまたはその一部である可能性があり、それらは皮膚が種々の外的侵襲要因に曝されることによって加速される可能性がある（例えば光老化（ｐｈｏｔｏａｇｉｎｇ））。
【００１０】
[0010] すべての人の皮膚が時間と共に老化する。しかし、現代社会では人々はより長く生存し、普通の老化作用が蓄積する格好の状況がある。そのような作用は純粋に美粧上のもの、例えば皺または「加齢斑」の場合があり、あるいはそれらは紫外線被曝による皮膚癌の発症のように健康に影響を及ぼす場合がある。人々が老化するのに伴って、皮膚はより薄くなり、皮膚の結合組織であるコラーゲンおよびエラスチンが変化して皮膚の強靭性を失わせ、かつ乾燥状態にする。同様に、皮膚の汗腺および脂腺の活性が低下し、これにより皮膚の湿潤性を失なわせ、乾燥し尽くす。さらに、皮膚の血管はより脆くなるため破裂して皮膚へ漏出する。
【００１１】
[0011] 老化しつつある皮膚の症状には下記のものが含まれる：皮膚の乾燥、痒み、菲薄化または肥厚、皺（ｗｒｉｎｋｌｅ）および細かいすじ（ｌｉｎｅ）、一般に肝斑（ｌｉｖｅｒ ｓｐｏｔ）と呼ばれる過色素沈着症（ｈｙｐｅｒｐｉｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ）領域、ならびに血管が破裂した皮膚下領域（末梢血管拡張症（ｔｅｌａｎｇｉｅｔａｓｉａｓ））。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１２】
【特許文献１】米国特許第５６０５８１０号
【特許文献２】ＰＣＴ出願公開ＷＯ００／５７８７１
【特許文献３】ＰＣＴ出願公開ＷＯ０１／７２３１８
【特許文献４】ＰＣＴ出願公開ＷＯ０１／７２３１９
【非特許文献】
【００１３】
【非特許文献１】Manczak M et al., J Neurochem. 2005 Feb; 92(3): 494-504
【非特許文献２】Ozawa, 1995, Biochim. Biophys. Acta 1271 :177-189
【非特許文献３】Lenaz, 1998, Biochim. Biophys. Acta 1366: 53-67
【非特許文献４】de Grey, 1997, BioEssays 19: 16 1-166
【非特許文献５】de Grey, 1998, Anti-Aging Med. 1: 53-66
【非特許文献６】Yoneda et al, 1995, Biochem. Biophys. Res. Comm, 209: 723-729
【非特許文献７】Schon et al., 1996, Cellular Aging and Cell Death, Wiley and Sons, New York, pp. 19-34
【非特許文献８】Ozawa, 1997, Physiol. Rev. 77: 425-464
【非特許文献９】Lenaz, 1998, BioFactors 8: 195-204
【非特許文献１０】Larm et al., 1994, Biol. Chem. 269: 30097-30100
【非特許文献１１】Lawen et al., 1994, Mol. Aspects. Med. 15: sl3-s27
【非特許文献１２】Vaillant et al., 1996, Bioenerg. Biomemb. 28: 531-540
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
[0012] 実際の老化および風化した皮膚の視覚的徴候、例えば皺、すじ、たるみ（ｓａｇｇｉｎｇ）、過色素沈着および加齢斑を治療または遅延する「アンチエージング（抗加齢）」化粧品および医薬品が望まれている。しかし、大部分の化粧品または医薬品はそのような症状の根本、例えばＲＯＳに由来するａｒＮＯＸ関連ラジカルの産生および蓄積に対処するものではない。したがって、効果的な自然の皮膚処置法ならびに予防用組成物およびその使用方法が求められている。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
[0013] 本発明は、血清老化因子を封鎖するための物質、およびそれを使用する方法に関する。より詳細には、本発明は、数種類の天然ａｒＮＯＸ阻害物質のいずれか１つを表わすために本明細書中で「ナラクチン（Ｎａｒａｃｔｉｎ）」と称する物質、すなわちフサザキスイセン（房咲き水仙）（Ｎ．ｔａｚｅｔｔａ）粉末中に存在するか、あるいはフサザキスイセン粉末を新鮮なフサザキスイセン抽出物のものに匹敵する阻害レベルまで増強することができる物質、ならびに老化関連イソ型ＮＡＤＨオキシダーゼ（ａｒＮＯＸ）により引き起こされる細胞損傷から生じる障害および障害の合併症を予防または治療するために「ナラクチン類」を使用する方法に関する。１例示態様において、本発明の物質は少なくとも１種類の天然ナラクチンを含む。そのような天然ナラクチンは、他の天然ａｒＮＯＸ阻害物質の抗ａｒＮＯＸ作用を増強することもできる。
【００１６】
[0014] したがって、１例示態様において本発明には、有効量の少なくとも１種類のａｒＮＯＸ阻害物質を含む、老化作用を改善するために有用な局所組成物が含まれる。この例示態様によれば、ａｒＮＯＸ阻害物質はナラクチンであり、ナラクチンは老化作用を低下させるのに有効である。本発明によるある例示態様において、ナラクチンはフサザキスイセン、ヤナギ（ｗｉｌｌｏｗ）、トウモロコシ（ｍａｉｚｅ）、オニタビラコ（ｃｒｅｐｉｓ）、ポプラ（ｐｏｐｌａｒ）、ガマズミ（ｖｉｂｕｒｎａｍ）、カビ、特にアスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）、ウリノキ（ａｌａｎｇｉｕｍ）、カバ（ｂｉｒｃｈ）、ミシマサイコ（ｂｕｐｌｅｕｒｕｍ）、コルヒクム（ｃｏｌｃｈｉｃｕｍ）、タカトウダイグサ（ｓｐｕｒｇｅ）、シモツケソウ（ｆｉｌｉｐｅｎｄｕｌｕｍ）、クチナシ（ｇａｒｄｅｎｉａ）、ムラサキ（紫根）（ｌｉｔｈｏｓｐｅｒｍｕｍ）、タバコ（ｔｏｂａｃｃｏ）またはヤドリギ（ｍｉｓｔｌｅｔｏｅ）から抽出および／または精製される。
【００１７】
[0015] 他の種々の例示態様において、ナラクチンはサリチレートまたはその誘導体である。ある例示態様において、サリチレートはサリシン、サリチル酸、サリチルヒドロキサメート、その誘導体または組合わせである。種々の例示態様において、ナラクチンは下記のものに由来する：Alangium chinense, A. platanifolium, A. premnifolium, Aspergillus niger, Betula alba, Bupleurum falcatum, Catharanthus roseus, Chosenia bracteosa, Colchicum autumnale, Crepis foetida, C. rhoeadifolia, Datura inoxia, Duboisia myoporoides, Eleutherococcus setchuensis, Euphorbia salicifolia, Filipendula ulmaria, Foeniculum vulgare, Gardenia jasminoides, Lithospermum erythrorhizon, Nicotiana tabacum, Populus alba, P. balsamifera, P. davidiana, P. deltoides, P. euphratica, P. grandidentata, P. heterophylla, P. lasiocarpa, P. maximowiczii, P. nigra, P. sieboldii, P. simonii, P. tacamahaca, P. tomentosa, P. tremula, P. tremuloides, P. trichocarpa, Salix acutifolia, S. alba, S. americana, S. arctica, S. aurita, S. babylonica, S. basfordiana, S. caesia, S. calodendron, S. capitata, S. caprea, S. chaenomeloides, S. cinerea, S. daphnoides, S. fragilis, S. geminata, S. gracilis, S. gracilistyla, S. gracilistyloides, S. gymnolepis, S. hastata, S. herbacea, S. incana, S. koriyanagi, S. lapponum, S. lasiandra, S. lasiolepis, S. matsudana, S. myrsinifolia, S. nigricans, S. orestera, S. pentandra, S. pentandroides, S. petiolaris, S. phylicifolia, S. purpurea, S. repens, S. rubra, S. schwerinii, S. scouleriana, S. smithiana, S. songarica, S. species, S. stipularis, S. tetrasperma, S. tremuloides, S. triandra, S. viminalis, Toisusu urbaniana, Viburnum henryi, V. prunifolium, V. rhytidophyllumまたはViscum album。
【００１８】
[0016] 他の種々の例示態様において、ナラクチンはサリチレートまたはその誘導体である。ある例示態様において、サリチレートはサリシン、サリチル酸、サリチルヒドロキサメート、その誘導体または組合わせである。
【００１９】
[0017] 他の種々の例示態様において、組成物はさらに、化粧用または医薬用として許容できるキャリヤーを含む。ある例示態様において、阻害物質ナラクチンは天然源に由来する他のａｒＮＯＸ阻害物質と共に存在し、これには下記のものが含まれるが、これらに限定されない：ブロッコリ（ｂｒｏｃｃｏｌｉ）、シイタケ（ｓｈｉｔａｋｅ）、コリウス（ｃｏｌｅｕｓ） ローズマリー（ｒｏｓｅｍａｒｙ）、ハス（ｌｏｔｕｓ）、アーティチョーク（ａｒｔｉｃｈｏｋｅ）、シーローズ（ｓｅａ ｒｏｓｅ） タンジェリン（ｔａｎｇｅｒｉｎｅ）、メマツヨイグサ（雌待宵草）（Ｏｅｎｏｔｈｅｒａ ｂｉｅｎｎｉｓ）、アスタキサンチン（ａｓｔａｘａｎｔｈｉｎ）、レッドオレンジ（ブラッドオレンジ）（ｒｅｄ ｏｒａｎｇｅ）、チョウセンゴミシ（朝鮮五味子）（Ｓｃｈｉｓａｎｄｒａ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）、ロニセラ（Ｌｏｎｉｃｅｒａ）、ソバ属（Ｆａｇｏｐｙｒｕｍ）、ニンジン（ｃａｒｒｏｔ）またはオリーブ（ｏｌｉｖｅ）。種々の例示態様において、ナラクチンは他のａｒＮＯＸ阻害物質の作用を増強する。
【００２０】
[0018] 本明細書に記載するａｒＮＯＸ阻害組成物をいずれか好都合な様式で投与しうることは、当業者に認識されるであろう。ある例示態様において、そのような投与形態にはクリーム、乳液（ｍｉｌｋ）、ローション、ゲル、脂質もしくはポリマーのマイクロスフェアもしくはナノスフェアもしくはベシクルの懸濁液、石鹸、シャンプー、またはサンスクリーンが含まれる。種々の例示態様において、本発明によって改善される老化作用には下記のものが含まれるが、これらに限定されない：すじ、皺、過色素沈着症、脱水、弾力性喪失、血管腫、乾燥、痒み、末梢血管拡張症、光線性紫斑病、脂漏性角化症、水分不足、コラーゲン減少、または光線性角化症。本発明のこれらおよび他の例示態様において、ａｒＮＯＸ阻害物質は約５μｇ／ｍｌ〜約５００μｇ／ｍｌの濃度で付与される。
【００２１】
[0019] さらに他の例示態様において、本発明は、老化作用を改善するために老化関連イソ型ＮＡＤＨオキシダーゼによる反応性酸素種の発生を阻害する方法であって、サリシン、サリチル酸、サリチルヒドロキサメートのうち少なくとも１種類を含む療法有効量の組成物を、その必要がある患者に、老化関連イソ型ＮＡＤＨオキシダーゼによる反応性酸素種の発生が阻害されるように投与することを含み、その際、老化作用が改善される方法を含む。種々の例示態様において、本方法はさらに、下記のうち少なくとも１種類からの抽出物または精製した抽出物を含む：ブロッコリ、シイタケ、コリウス ローズマリー、ハス、アーティチョーク、シーローズ タンジェリン、メマツヨイグサ、アスタキサンチン、レッドオレンジ、チョウセンゴミシ、ロニセラ、ソバ属、ニンジン、フサザキスイセン、オリーブ、ヤナギ、エンバクまたはトウモロコシ。本発明による種々の例示態様において、組成物をクリーム、乳液、ローション、ゲル、脂質もしくはポリマーのマイクロスフェアもしくはナノスフェアもしくはベシクルの懸濁液、石鹸、シャンプー、またはサンスクリーンとして適用する。これらの例示態様において、老化作用には下記のものが含まれるが、これらに限定されない：すじ、皺、過色素沈着症、脱水、弾力性喪失、血管腫、乾燥、痒み、末梢血管拡張症、光線性紫斑病、脂漏性角化症、水分不足、コラーゲン減少、または光線性角化症。
【００２２】
[0020] さらに他の例示態様において、本発明は、老化作用を改善するための化粧方法であって、ａｒＮＯＸを阻害するのに十分な有効量のナラクチンを含む化粧用組成物を皮膚に適用することを含み、その際、ａｒＮＯＸ仲介による老化作用の少なくとも１つが阻害される方法を含む。これらの態様において、ナラクチンはサリチレート、その塩または誘導体である。種々の例示態様において、サリチレートはサリシン、サリチルヒドロキサメートまたはサリチル酸である。本発明による他の種々の態様において、化粧用組成物はさらに、下記のものを含む植物抽出物を含有する：ニンジン抽出物、オリーブ抽出物、ブロッコリ抽出物、シイタケ抽出物、コリウス抽出物、ローズマリー抽出物、ハス抽出物、アーティチョーク抽出物、シーローズ抽出物、タンジェリン抽出物、メマツヨイグサ抽出物、レッドオレンジ、チョウセンゴミシ抽出物、ロニセラ抽出物、ソバ属抽出物、ヤナギ抽出物、トウモロコ、エンバクまたはフサザキスイセンの抽出物。これらの例示態様において、ナラクチンを化粧用として許容できるキャリヤーと共に付与する。
【００２３】
[0021] 種々の例示態様において、本発明による方法によって改善される老化作用には、すじ、皺、過色素沈着症、脱水、弾力性喪失、血管腫、乾燥、痒み、末梢血管拡張症、光線性紫斑病、脂漏性角化症、水分不足、コラーゲン減少、または光線性角化症が含まれる。
【００２４】
[0022] 本発明による方法の種々の態様において、ナラクチンを少なくとも１日１回適用する。ある例示態様において、ナラクチンを化粧品中に約５μｇ／ｍｌ〜約５００μｇ／ｍｌの濃度で付与する。これらの例示態様において、本発明による化粧用組成物をクリーム、乳液、ローション、ゲル、脂質もしくはポリマーのマイクロスフェアもしくはナノスフェアもしくはベシクルの懸濁液、石鹸、シャンプー、またはサンスクリーンとして投与する。
【００２５】
[0023] 本発明によるさらに他の態様において、本発明は、老化作用を改善するのに有用な化粧品を適用するためのキットであって、少なくとも１種類のナラクチン；および使用のための指示を含むキットを含む。ある例示態様において、キットはさらに、少なくとも１種類のａｒＮＯＸ阻害性植物抽出物のためのキャリヤーとして適切な、化粧用調製物を含む。
【００２６】
[0024] 本発明のこれらおよび他の特徴および利点は、以下の記述および添付の特許請求の範囲に記載され、あるいはよりさらに明らかになるであろう。これらの特徴および利点は、特許請求の範囲に具体的に指摘した手段および組合わせにより実現および獲得できる。さらに、本発明の特徴および利点は、以下に述べるように本発明の実施により知ることができ、あるいは本明細書から明らかであろう。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
[0025]
[0026] 本発明による組成物および方法の種々の例示態様を、以下の図面を参照して詳細に記載する。
【図１】[0027] 図１ａは、７２歳（ｙ／ｏ）男性の唾液試料からのａｒＮＯＸイソ型の活性パターン（ＢＬ＝ベースライン）、およびフサザキスイセン抽出物粉末を添加した後の部分阻害（中央パネル）を示す。右手のパネルは、フサザキスイセンにサリチルヒドロキサメート（ＳＨＡＭ）（ナラクチン１）成分の添加に伴うほぼ完全な活性阻害を示す。図１ｂは、ＳＨＡＭの代わりにサリシン（ナラクチン３）でフサザキスイセン粉末の阻害作用を増強した以外は１ａと同じである。これらのナラクチン類は鉄と赤色複合体を形成し、これは図２に示すように、ａｒＮＯＸ阻害物質を含有するフサザキスイセンの球根部分および抽出物を特徴づける赤色に類似するスペクトル特性をもつ。
【図２】[0028] 図２ａ〜ｆは、ａｒＮＯＸ活性に対して阻害性の物質を含有するフサザキスイセンの球根領域および抽出物を示す。阻害物質は、赤色または桃色にならない球根部分および／または抽出物には存在しない。図２ａは、葉を構成する領域と茎領域に分けた球根の図である。図２ｂは、ａｒＮＯＸ阻害に関連する赤色化合物が茎領域に局在することを示す写真である。図２ｃは、抽出物を調製した球根の異なる領域を示し、図２ｄ、２ｅおよび２ｆに示すように異なる領域は異なる赤色発色レベルをもつ。発色は速やかである。抽出物がａｒＮＯＸ活性を阻害しない品種のフサザキスイセンの球根は、赤色も発色しない。
【図３】[0029] 図３は、塩化鉄を添加した後のトウモロコシのスティール（ｓｔｅｅｌｅ）の維管束（ｖａｓｃｕｌａｔｕｒｅ）（根の中心の導水組織）の同様な赤色を示す。赤色になる物質は天然のヒドロキサメートである。
【図４】[0030] 図４は、唾液（７２歳の男性）のａｒＮＯＸ活性の阻害を示す：ベースライン（ＢＬ）パネル、およびトウモロコシのスティールから調製したホモジェネートの添加による阻害。トウモロコシの鞘（ｓｈｅａｔｈ）（スティールを取り巻く組織）は鉄を添加しても着色せず、ａｒＮＯＸ活性も阻害しない。
【図５】[0031] 図５は、フサザキスイセン球根のメタノール抽出物（Ｂ）の薄層クロマトグラフィーによる分析例を、市販のフサザキスイセン粉末（Ａ）と比較して示す。青色（ＵＶ）背景をもつプレートは紫外線蛍光を示す。明かるい背景をもつプレート（ＢＢ）はベルリンブルー（Ｂｅｒｌｉｎ ｂｌｕｅ）で着色された。ＴＬＣ系は、ジクロロメタン：メタノール：ＮＨ４ＯＨ（１０：１：０．２）であった。実験室で抽出した試料において、起点の物質の真上にあるけれどもそれとは明瞭に分離しておりヒドロキサメート類の存在を示唆する赤色成分は、市販の粉末より実験室で抽出した試料においてはるかに顕著であった。これは、メタノール（図５ａ）および水（図５ｂ）両方の抽出物について明らかであった。推定ヒドロキサメートは市販の粉末中にもみられたが、実験室で抽出した試料中よりはるかに低いレベルであり、これもａｒＮＯＸ阻害活性のレベルと相関する。
【図６】[0032] 図６は、塩化鉄（ＩＩＩ）を添加して赤色のヒドロキサム酸鉄（ＩＩＩ）を形成した後のフサザキスイセンの球根ならびにトウモロコシのスティールおよび鞘の抽出物のスペクトル分析を、既知のヒドロキサメート（ＳＨＡＭ）と比較して示す。フサザキスイセンの球根のａｒＮＯＸ阻害性抽出物は赤色であり、５５０ｎｍ付近に吸収最大を示した。阻害活性を示さないラッパスイセン（Ｎ．ｐｓｅｕｄｏ ｎａｒｃｉｓｓｕｓ）の球根の抽出物は無色であり、５５０ｎｍに吸収を示さなかった。トウモロコシの根のスティール（活性）およびトウモロコシの根の鞘（不活性）は、塩化鉄（ＩＩＩ）の不存在下（−ＦｅＣｌ２）では大部分が着色しなかった。しかし、塩化鉄（ＩＩＩ）の存在下（＋ＦｅＣｌ２）ではトウモロコシスティール抽出物に約５５０ｎｍに吸収最大をもつ赤色が現われ、これに対しトウモロコシの鞘については５５０ｎｍに吸収最大はなかった。市販の安定なヒドロキサメートであるサリチルヒドロキサメート（ＳＨＡＭ）も約５５０ｎｍに吸収最大をもつ赤色を生じた。陰性対照は着色せず、５５０ｎｍに吸収を示さなかった。
【図７】[0033] 図７は、ＳＨＡＭ希釈度（ｌｏｇ）の関数としてのフェリシトクロムｃのａｒＮＯＸ活性のグラフを示す。このグラフは、市販のＳＨＡＭ製剤（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、ミズーリ州セントルイス）による唾液（７２歳の男性）の用量依存性ａｒＮＯＸ活性阻害を示す。阻害は１１ｍｇ／ｍｌで大部分が完了する。
【図８】[0034] 図８は、サリチル酸希釈度（ｌｏｇ）の関数としてのフェリシトクロムｃのａｒＮＯＸ活性のグラフを示す。このグラフは、唾液（７２歳の男性）の用量依存性ａｒＮＯＸ活性阻害をサリチル酸濃度の関数として示す。ｌｍｇ／ｍｌ濃度のサリチル酸が約５０％阻害する。
【図９】[0035] 図９は、サリシン希釈度（ｌｏｇ）の関数としてのフェリシトクロムｃのａｒＮＯＸ活性のグラフを示す。このグラフは、唾液（７２歳の男性）の用量依存性ａｒＮＯＸ活性阻害をサリシン濃度の関数として示す。ａｒＮＯＸ活性の最大阻害はｌｍｇ／ｍｌの濃度で達成される。
【図１０】[0036] 図１０ａおよび１０ｂは、種々の「ナラクチン」組合わせのａｒＮＯＸ阻害を示すグラフである。図１０ａは、４ｍｇ／ｍｌのチョウセンゴミシ（Ｓｃｈｉｚａｎｄｒａ）粉末＋フサザキスイセン抽出物（２０μｌ）の混合物のａｒＮＯＸ阻害を、１ｍｇ／ｍｌのサリシンの存在下でサリシンが増強することを示す。図１０ｂは、１ｍｇ／ｍｌのサリシンの存在下での、４ｍｇ／ｍｌのチョウセンゴミシ粉末＋１ｍｇ／ｍｌのフサザキスイセン粉末の混合物によるａｒＮＯＸ阻害を示す。この混合物６０μｌを、ａｒＮＯＸ活性源として唾液（７２歳の男性）を含有するアッセイ混合物に合計３ｍｌ添加した。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
[0037] 本発明は、血清老化因子を封鎖するための物質、およびそれを使用する方法に関する。より詳細には、本発明は、数種類の天然ａｒＮＯＸ阻害物質のいずれか１つを表わすために本明細書中で「ナラクチン」と称する物質、すなわちフサザキスイセン粉末中に存在するか、あるいはフサザキスイセン粉末を新鮮なフサザキスイセン抽出物のものに匹敵する阻害レベルまで増強することができる物質、ならびに老化関連イソ型ＮＡＤＨオキシダーゼ（ａｒＮＯＸ）により引き起こされる細胞損傷から生じる障害および障害の合併症を予防または治療するために「ナラクチン類」を使用する方法に関する。１例示態様において、本発明の物質は少なくとも１種類の天然ナラクチンを含む。そのような天然ナラクチンは、他の天然ａｒＮＯＸ阻害物質の抗ａｒＮＯＸ作用を増強することもできる。
【００２９】
[0038] 用語「ナラクチン」は、本明細書中で、フサザキスイセン粉末（例えばＸｉａｎ Ａｏｊｉｎｇ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ ＣＯ．，ＬＴＤ、中国、山西省、西安から市販されている）中に存在する数種類の天然ａｒＮＯＸ阻害物質のいずれか１つ、あるいは市販のフサザキスイセン粉末を新鮮なフサザキスイセン抽出物のものに匹敵する阻害レベルまで増強することができるものを表わすために用いられる。本発明者らは現在、化学的に純粋な「ナラクチン」活性をもつ３種類の既知物質を同定している。さらに、「ナラクチン類」は本明細書中でフサザキスイセン抽出物から同定されたが、それらは他の天然源、例えばヤナギ、トウモロコシおよびエンバク中に存在する可能性があることを留意すべきであり、もちろん本発明はそれらの供給源にかかわらずナラクチン類を包含する。
【００３０】
[0039] 本明細書中で用いる用語「化粧品」は、身体に洗浄、美化、魅力増進、または外観変更のために適用することを意図した物質を表わす。
[0040] 本明細書中で用いる用語「抽出物」は、物質を溶剤に浸煎または浸漬して有効成分を分離することにより得られる溶液を表わす。溶剤はいずれか適切な溶剤であってよく、これにはアルコール、水などが含まれるが、これらに限定されない。ある態様において、抽出物を濃縮し、溶剤を蒸発させ、有効成分を異なる溶剤に再懸濁または溶解することができる。本明細書に記載するように、フサザキスイセン抽出物は茎領域を球根から分離し、１つの茎領域を３ｍｌの蒸留水中でホモジナイズすることにより調製される。
【００３１】
[0041] 本明細書中で用いる用語「障害」は、生存する動物体もしくは植物体またはその部分の１つの正常な機能を損なう何らかの状態を表わし、病気、疾病、疾患（ａｉｌｍｅｎｔ、ｄｉｓｅａｓｅ、ｉｌｌｎｅｓｓ）、臨床状態、病的状態、衰弱した状態、不健全な状態、およびいずれかの異常または望ましくない身体状態を含む。
【００３２】
[0042] 本明細書中で用いる用語「反応性酸素種」は、酸素代謝または自由電子伝達からの、フリーラジカル（例えばスーパーオキシドまたはヒドロキシルラジカル）を形成した酸素誘導体を表わす。
【００３３】
[0043] 本明細書中で用いる用語「抗酸化剤」は、反応性酸素種の活性を中和し、またはそれらの反応性種により生じる細胞損傷を阻害する化合物を表わす。
[0044] 本明細書中で用いる用語「医薬的に許容できるキャリヤー」は、有効成分の生物活性の有効性を妨害せず、化学的に不活性であり、かつそれが投与される患者に対して有毒でないキャリヤー媒質を表わす。
【００３４】
[0045] 本明細書中で用いる用語「医薬的に許容できる誘導体」は、本明細書に記載する配合物に対応するいずれかのホモログ、アナログまたはフラグメントであって、抗酸化活性を示し、かつ対象に対して比較的無毒性であるものを表わす。
【００３５】
[0046] 用語「療法剤」は、反応性酸素種により引き起こされる障害または障害の合併症の予防または治療を補助するいずれかの分子、化合物または処置、好ましくは抗酸化剤を表わす。
【００３６】
[0047] 用語「ａｒＮＯＸを封鎖する物質」という用語は、ａｒＮＯＸを妨害し、これによりａｒＮＯＸと他の物質の反応を低下させ、ａｒＮＯＸが反応性酸素種を発生する能力を阻害するいずれかの分子、化合物または処置を表わす。
【００３７】
[0048] 本明細書中で用いる用語「サリチレート」は、天然源またはデノボ合成のいずれに由来するものであっても、サリシンの塩類、結合体または誘導体を表わす。そのようなサリチレートには、例えばサリチル酸、サリシンヒドロキサメートおよびサリシン自体、それらの誘導体、塩類および結合体が含まれる。
【００３８】
[0049] 本発明者らは、フサザキスイセン抽出物の特定の市販製品が、抗−ａｒＮＯＸ活性をもつ有効物質を含有することを、研究中に見いだした。本発明は、ＩＢＲ−Ｄｏｒｍｉｎ（登録商標）フサザキスイセン球根抽出物（Ｉｓｒａｅｌｉ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｌｔｄ．、イスラエル）のある試料が実質的にａｒＮＯＸに対する阻害活性をもたないのに対し、同じ業者からの他のロットは阻害性が強いという所見によって促された。本発明者らは、ａｒＮＯＸ阻害物質が特定の保存剤の不存在下では不安定であるか、あるいはフサザキスイセン抽出物の精製中にａｒＮＯＸ阻害物質が失われたという仮説を立てた。しかし、ＩＢＲ−Ｄｏｒｍｉｎ（登録商標）の商品名で入手される市販のフサザキスイセン粉末は、特に休眠（ｄｏｒｍａｎｃｙ）中のフサザキスイセン球根を用いて加工されることを留意すべきである。その理論は、生長期には球根が「ドルミン（ｄｏｒｍｉｎ）類」と呼ばれる大量の未同定化合物を産生するということである。そのような「ドルミン類」はさらに、細胞または組織において休眠状態を誘発するという仮説が立てられる。したがって、現在開示されているデータから、フサザキスイセンの「ドルミン類」は本明細書中で「ナラクチン類」と同定するものと同じ物質ではないことが示される。
【００３９】
[0050] これらの可能性を調べるために、本発明者らは少数のニホンスイセン（日本水仙）（ｐａｐｅｒ ｗｈｉｔｅ（Ｎ．ｔａｚｅｔｔａ））球根を入手した。水抽出物およびエタノール抽出物はａｒＮＯＸを阻害した。ラッパスイセン（Ｎ．ｐｓｅｕｄｏ−ｎａｒｃｉｓｓｕｓ）（ｄａｆｆｏｄｉｌ）およびキズイセン（黄水仙）（Ｎ．ｊｏｎｑｕｉｌｌａ）（ｊｏｎｑｕｉｌ）について比較を行なったが、両方とも大部分が活性をもたなかった。活性は、鉄（ＩＩＩ）の添加により増強される赤色の着色と相関していた；これは、同様にａｒＮＯＸを阻害するトウモロコシおよびエンバクの幼植物にみられる天然ヒドロキサメートの特徴である（データは示していない）。ヒドロキサメートはａｒＮＯＸ阻害を助成すると予想できる化学的特性をもつ。評価のために最も入手しやすいヒドロキサメートはサリチルヒドロキサメート（ナラクチン１）であった；これはＳＨＡＭとしても知られ、別のオキシダーゼに対する既知の植物阻害物質である。ＳＨＡＭを試験して、フサザキスイセン粉末のａｒＮＯＸ阻害応答を増強することが見いだされた。低レベルのＳＨＡＭで増強したフサザキスイセン粉末について、９０％を超えるレベルの阻害が得られた。有効成分の特性分析を完了するにはフサザキスイセンの球根が不十分であったが、フサザキスイセン粉末（抽出物）（Ｘｉ’ａｎ Ａｏｊｉｎｇ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ Ｃｏ．，ＬＴＤ．、中国、山西省、西安；２０：１；球根と花の両方の抽出物で入手できる）を用いて研究を行なった。フサザキスイセン粉末は実際に低レベルの天然ヒドロキサメートを含有すると思われるが、フサザキスイセン球根から調製した抽出物よりはるかに低いレベルである。
【００４０】
[0051] 生じた疑問は、ヒドロキサメートまたはサリチル酸のいずれの部分がａｒＮＯＸ阻害活性にとって最も重要であるかどうかということであった。結果は、両方が重要であることを示唆する。サリチル酸（ナラクチン２）自身がきわめて有効な阻害物質であり、これも鉄（ＩＩＩ）と反応した際に赤色を生じる。サリチル酸のエステルまたはアスピリンは、ａｒＮＯＸを阻害しない。サリチレートの天然源であるヤナギ樹皮の水抽出物を試験して、同様にａｒＮＯＸを阻害することが見いだされた。ヤナギ樹皮の主要なサリチレートであるサリシン、すなわちグリコシドの１種も、阻害物質として有効であった（ナラクチン３）。
【００４１】
[0052] したがって、１例示態様において本発明には、有効量の少なくとも１種類のａｒＮＯＸ阻害物質を含む、老化作用を改善するために有用な局所組成物が含まれる。この例示態様によれば、ａｒＮＯＸ阻害物質はナラクチンであり、ナラクチンは老化作用を低下させるのに有効である。本発明によるある例示態様において、ナラクチンはフサザキスイセン、ヤナギ、トウモロコシ、オニタビラコ、ポプラ、ガマズミ、カビ、特にアスペルギルス属、ウリノキ、カバ、ミシマサイコ、コルヒクム、タカトウダイグサ、シモツケソウ、クチナシ、ムラサキ、タバコまたはヤドリギから抽出および／または精製される。
【００４２】
[0053] 他の種々の例示態様において、ナラクチンはサリチレートまたはその誘導体である。ある例示態様において、サリチレートはサリシン、サリチル酸、サリチルヒドロキサメート、その誘導体または組合わせである。種々の例示態様において、ナラクチンは下記のものに由来する：Alangium chinense, A. platanifolium, A. premnifolium, Aspergillus niger, Betula alba, Bupleurum falcatum, Catharanthus roseus, Chosenia bracteosa, Colchicum autumnale, Crepis foetida, C. rhoeadifolia, Datura inoxia, Duboisia myoporoides, Eleutherococcus setchuensis, Euphorbia salicifolia, Filipendula ulmaria, Foeniculum vulgare, Gardenia jasminoides, Lithospermum erythrorhizon, Nicotiana tabacum, Populus alba, P. balsamifera, P. davidiana, P. deltoides, P. euphratica, P. grandidentata, P. heterophylla, P. lasiocarpa, P. maximowiczii, P. nigra, P. sieboldii, P. simonii, P. tacamahaca, P. tomentosa, P. tremula, P. tremuloides, P. trichocarpa, Salix acutifolia, S. alba, S. americana, S. arctica, S. aurita, S. babylonica, S. basfordiana, S. caesia, S. calodendron, S. capitata, S. caprea, S. chaenomeloides, S. cinerea, S. daphnoides, S. fragilis, S. geminata, S. gracilis, S. gracilistyla, S. gracilistyloides, S. gymnolepis, S. hastata, S. herbacea, S. incana, S. koriyanagi, S. lapponum, S. lasiandra, S. lasiolepis, S. matsudana, S. myrsinifolia, S. nigricans, S. orestera, S. pentandra, S. pentandroides, S. petiolaris, S. phylicifolia, S. purpurea, S. repens, S. rubra, S. schwerinii, S. scouleriana, S. smithiana, S. songarica, S. species, S. stipularis, S. tetrasperma, S. tremuloides, S. triandra, S. viminalis, Toisusu urbaniana, Viburnum henryi, V. prunifolium, V. rhytidophyllumまたはViscum album。
【００４３】
[0054] 他の種々の例示態様において、ナラクチンはサリチレートまたはその誘導体である。ある例示態様において、サリチレートはサリシン、サリチル酸、サリチルヒドロキサメート、その誘導体または組合わせである。
【００４４】
[0055] 他の種々の例示態様において、組成物はさらに、化粧用または医薬用として許容できるキャリヤーを含む。ある例示態様において、ナラクチン阻害物質は天然源に由来する他のａｒＮＯＸ阻害物質と共に存在し、これには下記のものが含まれるが、これらに限定されない：ブロッコリ、シイタケ、コリウス ローズマリー、ハス、アーティチョーク、シーローズ タンジェリン、メマツヨイグサ、アスタキサンチン、レッドオレンジ、チョウセンゴミシ、ロニセラ、ソバ属、ニンジンまたはオリーブ。種々の例示態様において、ナラクチンは他のａｒＮＯＸ阻害物質の作用を増強する。
【００４５】
[0056] 本明細書に記載するａｒＮＯＸ阻害組成物をいずれか好都合な様式で投与しうることは、当業者に認識されるであろう。ある例示態様において、そのような投与形態にはクリーム、乳液、ローション、ゲル、脂質もしくはポリマーのマイクロスフェアもしくはナノスフェアもしくはベシクルの懸濁液、石鹸、シャンプー、またはサンスクリーンが含まれる。種々の例示態様において、本発明によって改善される老化作用には下記のものが含まれるが、これらに限定されない：すじ、皺、過色素沈着症、脱水、弾力性喪失、血管腫、乾燥、痒み、末梢血管拡張症、光線性紫斑病、脂漏性角化症、水分不足、コラーゲン減少、または光線性角化症。本発明のこれらおよび他の例示態様において、ａｒＮＯＸ阻害物質は約５μｇ／ｍｌ〜約５００μｇ／ｍｌの濃度で付与される。
【００４６】
[0057] さらに他の例示態様において、本発明は、老化作用を改善するために老化関連イソ型ＮＡＤＨオキシダーゼによる反応性酸素種の発生を阻害する方法であって、サリシン、サリチル酸、サリチルヒドロキサメートのうち少なくとも１種類を含む療法有効量の組成物を、その必要がある患者に、老化関連イソ型ＮＡＤＨオキシダーゼによる反応性酸素種の発生が阻害されるように投与することを含み、その際、老化作用が改善される方法を含む。種々の例示態様において、本方法はさらに、下記のうち少なくとも１種類からの抽出物または精製した抽出物を含む：ブロッコリ、シイタケ、コリウス ローズマリー、ハス、アーティチョーク、シーローズ タンジェリン、メマツヨイグサ、アスタキサンチン、レッドオレンジ、チョウセンゴミシ、ロニセラ、ソバ属、ニンジン、フサザキスイセン、オリーブ、ヤナギ、エンバク、トウモロコシ、オニタビラコ、ポプラ、ガマズミ、カビ、特にアスペルギルス属、ウリノキ、カバ、ミシマサイコ、コルヒクム、タカトウダイグサ、シモツケソウ、クチナシ、ムラサキ、タバコまたはヤドリギ。本発明による種々の例示態様において、組成物をクリーム、乳液、ローション、ゲル、脂質もしくはポリマーのマイクロスフェアもしくはナノスフェアもしくはベシクルの懸濁液、石鹸、シャンプー、エリキシル剤またはサンスクリーンとして適用する。これらの例示態様において、老化作用には下記のものが含まれるが、これらに限定されない：すじ、皺、過色素沈着症、脱水、弾力性喪失、血管腫、乾燥、痒み、末梢血管拡張症、光線性紫斑病、脂漏性角化症、水分不足、コラーゲン減少、または光線性角化症。
【００４７】
[0058] さらに他の例示態様において、本発明は、老化作用を改善するための化粧方法であって、ａｒＮＯＸを阻害するのに十分な有効量のナラクチンを含む化粧用組成物を皮膚に適用することを含み、その際、ａｒＮＯＸ仲介による老化作用の少なくとも１つが阻害される方法を含む。これらの態様において、ナラクチンはサリチレートまたはその誘導体である。種々の例示態様において、サリチレートはサリシン、サリチルヒドロキサメートまたはサリチル酸である。本発明による他の種々の態様において、化粧用組成物はさらに、下記のものを含む植物抽出物を含有する：ニンジン抽出物、オリーブ抽出物、ブロッコリ抽出物、シイタケ抽出物、コリウス抽出物、ローズマリー抽出物、ハス抽出物、アーティチョーク抽出物、シーローズ抽出物、タンジェリン抽出物、メマツヨイグサ抽出物、レッドオレンジ抽出物、チョウセンゴミシ抽出物、ロニセラ抽出物、ソバ属抽出物、ヤナギ抽出物、トウモロコシ、オニタビラコ、ポプラ、ガマズミ、カビ、特にアスペルギルス属、ウリノキ、カバ、ミシマサイコ、コルヒクム、タカトウダイグサ、シモツケソウ、クチナシ、ムラサキ、タバコ、ヤドリギ、エンバクまたはフサザキスイセンの抽出物。これらの例示態様において、ナラクチンを化粧用として許容できるキャリヤーと共に付与する。
【００４８】
[0059] 種々の例示態様において、本発明による方法によって改善される老化作用には、すじ、皺、過色素沈着症、脱水、弾力性喪失、血管腫、乾燥、痒み、末梢血管拡張症、光線性紫斑病、脂漏性角化症、水分不足、コラーゲン減少、または光線性角化症が含まれる。
【００４９】
[0060] 本発明による方法の種々の態様において、ナラクチンを少なくとも１日１回適用する。ある例示態様において、ナラクチンを化粧品中に約５μｇ／ｍｌ〜約５００μｇ／ｍｌの濃度で付与する。これらの例示態様において、本発明による化粧用組成物をクリーム、乳液、ローション、ゲル、エリキシル剤、脂質もしくはポリマーのマイクロスフェアもしくはナノスフェアもしくはベシクルの懸濁液、石鹸、シャンプー、またはサンスクリーンとして投与する。
【００５０】
[0061] 本発明によるさらに他の態様において、本発明は、老化作用を改善するのに有用な化粧品を適用するためのキットであって、少なくとも１種類のナラクチン；および使用のための指示を含むキットを含む。ある例示態様において、キットはさらに、少なくとも１種類のａｒＮＯＸ阻害性植物抽出物のためのキャリヤーとして適切な、化粧用調製物を含む。
【００５１】
[0062] 本明細書中で定める抗酸化剤、細胞成分および標的タンパク質を下記のように略記する：
【００５２】
【表Ａ】
【００５３】
[0063] 本発明
[0064] 本発明は、フサザキスイセンの球根およびトウモロコシから同定および精製され、体内または局所に投与しうる、天然の物質に関する。これらの物質はａｒＮＯＸを特異的に阻害し、それの老化関連作用のうちあるものを改善する。そのような物質は単離した物質または植物抽出物の形をとることができる。さらに、ａｒＮＯＸ阻害物質は単独で使用できるが、多数のａｒＮＯＸ阻害物質を含む組成物、および／または身体に対して他の有益な作用をもつ化合物を含有する配合物としても使用できる。特に本発明者らは、ａｒＮＯＸ阻害物質を化粧品に添加することにより阻害物質が普通のスキンケア計画を増強する有益な効果をもちうることを見いだした。
【００５４】
[0065] さらに他の例示態様において、本発明は、老化作用を改善するための化粧用組成物であって、化粧用として有効な量の少なくとも１種類のａｒＮＯＸ阻害物質を含み、その際、ａｒＮＯＸ阻害物質は皮膚に対する老化作用を軽減するのに有効である組成物を含む。この例示態様の１形態において、本発明は化粧用として許容できるキャリヤーを含有する。この態様において、キャリヤーには粉末、皮膚軟化剤、ローション、クリーム、液体などを含めることができる。ある例示態様において、ａｒＮＯＸ阻害物質は植物に由来する。具体的な例示態様において、植物は下記のものから選択される：ブロッコリ、シイタケ、コリウス、ローズマリー、ハス、アーティチョーク、シーローズ、タンジェリン、メマツヨイグサ、アスタキサンチン、レッドオレンジ、チョウセンゴミシ、ロニセラ、ソバ属、ニンジン、フサザキスイセン、ヤナギ、トウモロコシ、オニタビラコ、ポプラ、ガマズミ、カビ、特にアスペルギルス属、ウリノキ、カバ、ミシマサイコ、コルヒクム、タカトウダイグサ、シモツケソウ、クチナシ、ムラサキ、タバコ、ヤドリギ、エンバクまたはオリーブ。
【００５５】
[0066] この例示態様による化粧用組成物は例示されるいかなる様式でも投与できることを認識すべきである。例えば、ある例示態様において、本発明による化粧用組成物は局所、経口、非経口、経皮または直腸に投与できる。ある例示態様において、組成物をクリーム、乳液、ローション、ゲル、脂質もしくはポリマーのマイクロスフェアもしくはナノスフェアもしくはベシクルの懸濁液、石鹸またはシャンプーとして配合する。
【００５６】
[0067] さらに他の例示態様において、本発明は、老化作用を改善するための化粧方法であって、有効量のナラクチンを含む化粧用組成物を皮膚に適用することを含み、その際、ａｒＮＯＸ仲介による老化作用の少なくとも１つが阻害される方法を含む。本発明によるある例示態様において、ａｒＮＯＸ阻害物質は植物抽出物である。他の例示態様において、ａｒＮＯＸ阻害物質は植物抽出物から精製されている。本発明による種々の例示態様において、ａｒＮＯＸ阻害物質は約５μｇ／ｍｌ〜約５００μｇ／ｍｌの濃度で存在する。種々の例示態様において、有効成分の濃度は約１５μｇ／ｍｌ〜約１００μｇ／ｍｌの濃度で存在する。ある例示態様において、本発明による化粧用組成物は局所、経口、非経口、経皮、直腸、またはいずれか有効な方法で適用できる。ある例示態様において、組成物をクリーム、乳液、ローション、ゲル、脂質もしくはポリマーのマイクロスフェアもしくはナノスフェアもしくはベシクルの懸濁液、石鹸またはシャンプーとして配合する。
【００５７】
[0068] さらに他の例示態様において、本発明はキットを含む。この態様において、キットはある体積のａｒＮＯＸ阻害物質および使用のための指示を含むことができる。種々の例示態様において、キットはさらに、ａｒＮＯＸ阻害物質を化粧用調製物に使用前に添加することができるように、化粧用調製物を含むことができる。
【００５８】
[0069] 本発明のある例示態様においては１種類のａｒＮＯＸ阻害物質を使用するが、他の例示態様においては１種類より多い抽出物またはａｒＮＯＸ阻害物質を一緒に使用することを認識すべきである。さらに、本発明の種々の例示態様において、１種類または種々のａｒＮＯＸ阻害物質を多様な方法で適用または投与しうることを認識すべきである。例えば、クリーム、乳液、ローション、ゲル、脂質もしくはポリマーのマイクロスフェアもしくはナノスフェアもしくはベシクルの懸濁液、石鹸、シャンプーまたはサンスクリーンの形での局所適用、および茶もしくはカプセルまたは他のいずれかの効果的な様式。
【００５９】
[0070] 細胞膜ヒドロキノン（ＮＡＤＨ）オキシダーゼ（ＮＯＸ）：
[0071] 細胞膜ＮＡＤＨオキシダーゼ（ＮＯＸ）は、ヒドロキノン（ＮＡＤＨ）オキシダーゼ活性およびタンパク質ジスルフィド−チオール交換活性をもつユニークな細胞表面タンパク質であり、これは普通はホルモンおよび成長因子に応答する。癌細胞に特異的な、ｔＮＯＸと表示されるホルモン非感受性および薬物応答性の形態の活性が記載されている。ＮＯＸタンパク質が特定の条件下でＲＯＳを産生しうるという証拠がある。例えば、培養細胞において酸化的ストレス源として紫外線を用いてスーパーオキシド発生を開始している(Morre et al., 1999, Biofactors 9:179-187)(Ｕ．Ｓ．Ｐａｔｅｎｔ Ｎｏ．５，６０５，８１０を参照；それの全体を本明細書に援用する）。
【００６０】
[0072] フサザキスイセンからのａｒＮＯＸ阻害物質の分離および特性分析
[0073] 本発明に至る一連の研究は、市販のフサザキスイセン球根抽出物（ＩＢＲ−Ｄｏｒｍｉｎ（登録商標）として市販、ＩＢＲ，Ｉｎｃ．、イスラエル）のある試料はａｒＮＯＸに対してしばしば強い阻害性であるのに対し、異なるロットではあるが同じタイプの製品の他の試料が阻害性ではないという所見によって促された。本発明者らは、ａｒＮＯＸ阻害が特定の保存剤の不存在下では幾分不安定であるためか、あるいは抽出物の精製中に不活性調製物から有効調製物のａｒＮＯＸ阻害成分が失われたという仮説を立てた。しかし、ＩＢＲ−Ｄｏｒｍｉｎ（登録商標）として知られる製品は植物に由来する抗増殖剤に関連すると最近記載されたことに注目すべきである。米国特許出願公開Ｎｏ．２００６０１６０７０２、出願Ｎｏ．１１／２８９，１５６（’１５６出願）（Ｓｏｕｄａｎｔら）を参照。この’１５６出願によれば、抗増殖剤は、植物器官を休眠状態に誘導することができる植物中にみられる（要約）。したがって、「ドルミン類」と呼ばれる抗増殖剤は、細胞増殖の速度低下を介して老化の速度を低下させることにより機能することが示唆される。「ドルミン類」は休眠期に入った植物の抽出物を調製することにより収穫される。したがって、休眠状態の植物のみがこの特性を得るための「ドルミン類」として使用できる。
【００６１】
[0074] 異なる市販のフサザキスイセン粉末（球根と花の両方とも）（Ｘｉ’ａｎ Ａｏｊｉｎｇ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ ＣＯ．，ＬＴＤ．、中国、山西省、西安）が多様なａｒＮＯＸ阻害度をもつことに本発明者らは気づいたので、ａｒＮＯＸ阻害物質を同定するために一連の実験を行なった。上記の可能性を調べるために、ニホンスイセン（日本水仙）（ｐａｐｅｒ ｗｈｉｔｅ ｎａｒｃｉｓｓｕｓ（Ｎ．ｔａｚｅｔｔａ））の球根を園芸業者（Ｂｒｅｎｔ ａｎｄ Ｂｅｃｋｙ’ｓ ｂｕｌｂｓ、バージニア州グロウセスター)から入手した。ラッパスイセン（Ｎ．ｐｓｅｕｄｏ−ｎａｒｃｉｓｓｕｓ）（ｄａｆｆｏｄｉｌ）およびキズイセン（黄水仙）（Ｎ．ｊｏｎｑｕｉｌｌａ）（ｊｏｎｑｕｉｌ）について比較を行なったが、両方とも大部分が活性をもたなかった。活性は、鉄（ＩＩＩ）の添加により増強される赤色の着色と相関していた；これは、天然ヒドロキサメートの特徴である。評価のために最も入手しやすいヒドロキサメートはサリチルヒドロキサメート（ＳＨＡＭ）（ナラクチン１）であった。水抽出物およびアルコール抽出物を調製し、これらはａｒＮＯＸを阻害し、フサザキスイセンの低活性の花からの粉末と組み合わせた際に阻害を増強した（例えば図１ａ）。図１ｂは１ａと同様であり、水で抽出した球根に由来するフサザキスイセン粉末（Ｘｉａｎ Ａｏｊｉｎｇ，ＬＴＤ）をサリシン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、ミズーリ州セントルイス）（ナラクチン３）で増強した場合の増強を示す。ａｒＮＯＸ阻害活性を全くもたない同様な抽出物であるラッパスイセンおよびキズイセンの抽出物のと比較を行なった。
【００６２】
[0075] 図２に示すように、フサザキスイセン抽出物の活性は鉄（ＩＩＩ）の添加によって増強される赤色の着色と相関していた；これは、例えば同様にａｒＮＯＸを阻害するトウモロコシ（図３）およびエンバク（示していない）の幼植物にみられる天然ヒドロキサメートの特徴である（図４）。フサザキスイセン抽出物の有効成分が天然ヒドロキサメートを含む可能性についての証拠はさらに、薄層クロマトグラフィー分析（図５）により、それらの鉄付加物のスペクトル研究から、トウモロコシの根のスティール（ヒドロキサメートが濃縮されているトウモロコシの根の中心維管束；これは、図２に示すように潜在的にヒドロキサメートに富むフサザキスイセン球根の茎の維管束に対応する）から（図６）、および市販のヒドロキサメート（サリチルヒドロキサメート（ＳＨＡＭ）、例えばＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、ミズーリ州セントルイスから市販されている）との比較により、得られた。
【００６３】
[0076] ＳＨＡＭをａｒＮＯＸ活性阻害について試験して、７２歳の男性からの唾液に対して９０％を超えるａｒＮＯＸ活性阻害が１ｍｇ／ｍｌの濃度で得られた（図７）。ＳＨＡＭは部分活性フサザキスイセン粉末のａｒＮＯＸ活性の阻害を増強することも見いだされた（図１）。市販のフサザキスイセン粉末は、低レベルのおそらくＳＨＡＭに類似する天然ヒドロキサメートを実際に含有すると思われるが、新鮮なフサザキスイセン球根から調製した抽出物中にみられるものよりはるかに低いレベルにおいてである（図５ａおよび５ｂ）。
【００６４】
[0077] 安定化されたサリチルヒドロキサメートのサリチル酸部分がａｒＮＯＸ活性の阻害に重要であるかどうかという疑問に答えるために、サリチル酸（ナラクチン２、例えばＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、ミズーリ州セントルイスから入手できる）を唾液（７２歳の男性）のａｒＮＯＸ活性の阻害物質として試験して、ａｒＮＯＸを阻害することが見いだされた（図８）。サリチル酸も、鉄（ＩＩＩ）と反応した際にヒドロキサメートが生じるのと類似する赤色を生じた。サリチル酸のエステルおよび／またはアスピリンは、ａｒＮＯＸを阻害しなかった。サリチレートの天然源であるヤナギ樹皮の水抽出物を試験して、同様にａｒＮＯＸを阻害することが見いだされた。ヤナギ樹皮の主要なサリチレートであるサリシン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、ミズーリ州セントルイス）（本明細書中でナラクチン３と表示する）を次いで試験して、ＳＨＡＭ（ナラクチン１）またはサリチル酸（ナラクチン２）より１０倍低い濃度で有効であることが見いだされた（図９）。
【００６５】
[0078] サリシンは単独物質として有効である（図９）だけでなく、チョウセンゴミシ粉末およびフサザキスイセン粉末などの天然源に由来する他のａｒＮＯＸ阻害物質の混合物のａｒＮＯＸ阻害を増強するのにも有効であった（図１０ａおよび１０ｂ）。同定および試験した３種類の化学的に純粋なナラクチン類（フサザキスイセン粉末中に存在するか、あるいはフサザキスイセン粉末を最も有効な新鮮なフサザキスイセン抽出物のものに匹敵する阻害レベルまで増強することができる、数種類の天然ａｒＮＯＸ阻害物質のいずれかを標記するために用いる用語）のうち、サリシンは最も有望であると思われた。さらに、サリシンは安定、水溶性、非刺激性、かつ比較的安価である。
【００６６】
[0079] 一般に、老化した細胞の特徴には、ａｒＮＯＸを発現および／または放出するものが含まれ、下記の特性のうち１以上を示すものが含まれるが、これらに限定されない：老化関連ＰＭＯＲ系、活性酸素種を発生する能力、および機能欠損ミトコンドリアの保有。本発明の１態様は、老化しつつある細胞の負の作用を低下させる物質の使用である。
【００６７】
[0080] 老化しつつある皮膚の症状には、乾燥、痒み、皮膚の菲薄化または肥厚、皺および細かいすじ、過色素沈着症（一般に加齢斑または肝斑と呼ばれる）、ならびに斑点のある（ｍｏｔｔｌｅｄ）外観が含まれる。老化しつつある皮膚はコラーゲンが減少し、それに伴って弾力性が低下することが示された。さらに、老化しつつある皮膚は開裂したコラーゲンおよび架橋したタンパク質の量が増加する。これらのプロセスにおけるスーパーオキシドラジカルの関与が指摘されている。皮膚は損傷を受けると治癒するのに多大な時間がかかる。菲薄化した皮膚を通して血管がより見えやすくなり、これは加齢に伴って血管が拡張するからでもある。これらの血管が皮膚上の赤いドーム様の形成物（老年性血管腫）または表面上の破壊された毛細血管（末梢血管拡張）として見える場合がある。多くの人が老化性または光線性の紫斑を発現する；これらは皮膚上の紫色の点または斑であり、皮膚の小さな出血により形成される。メラニン細胞と呼ばれる保護細胞が年齢と共に減少するので、高齢の皮膚ほど太陽光線に対する保護が低下する。老化しつつある皮膚は多様な良性および前癌性の増殖物、例えば脂漏性および光線性の角化症も発現しやすくなる。脂漏性角化症はしばしば粗い褐色の外観をもち、いぼのように見える。それらは良性である。光線性角化症は太陽光線に被曝した領域の皮膚上の小さな鱗状増殖物である。それらは皮膚癌の初期徴候である。
【００６８】
[0081] 本発明は、皮膚の活力を維持するために、天然植物抽出物を単独でまたはクリーム皮膚軟化剤、ローション、ゲル、皮膚軟化剤などの形で局所適用する用途を包含する。本発明の好ましい態様は、皮膚の活力を維持および改善するために、ａｒＮＯＸ阻害性抽出物を含むクリームを患者の皮膚に局所適用することを含む。
【００６９】
[0082] 皮膚の化粧処置
[0083] 本発明は、皮膚の損傷およびそれに付随する状態、特に老化により生じるものおよびａｒＮＯＸに関連するものを予防および／または改善する有効成分（単数または複数）を含む、組成物を提供する。さらに、本発明はそれらの組成物を使用する方法を包含する。角質層は皮膚の最上表面層を形成する層であり、皮膚を保護し、一方では皮膚の湿潤度および物質の流入流出を制御する作用をする。このバリヤー機能が破壊されるのに伴って皮膚は傷害作用を受け、したがってさらに早期老化の一因となる。皮膚の早期老化を引き起こすこれらの傷害作用は、健康で若々しい外観および感触の皮膚を維持したい多くの個人にとっての関心事である。反応性酸素種は、細胞に対して潜在的に致死性である多数の破壊的反応に関与する。反応性酸素種は有害な細胞相互作用の原因の一部であり、これには線維芽細胞が健全なコラーゲンおよびエラスチンを産生する能力の損傷が含まれる。さらに、皮膚は皮膚障害、環境による虐待（風、エアコンディショニング、セントラルヒーティング）、または普通の老化プロセス（経時老化）により劣化を受け、これらは太陽光線への皮膚曝露によって加速する可能性がある（光老化）。
【００７０】
[0084] 本発明の好ましい態様は、組織、特に皮膚に対するａｒＮＯＸ関連の損傷を処置するための、植物に由来する天然の有効成分を提供する。これらの有効成分は、皮膚損傷および／またはそれに付随する状態を予防および／または改善する。本発明の１態様において、加工したこれらの植物産物はａｒＮＯＸ活性を封鎖する。本発明の他の態様において、加工したこれらの植物産物は反応性酸素種を阻害する。他の態様において、本発明の物質および方法は皮膚の健康状態を予防および／または改善する。例えば、これらの物質は、皮膚の緊縮性（ｔａｕｔｎｅｓｓ）、色、および孔の外観、弾力性、水和度を改善し、ならびに／あるいは、細かいすじおよび目に見える老化の徴候の出現を減弱させるのを補助することができる。本発明の他の例示態様において、これらの物質は身体の自然なコラーゲンおよびエラスチンの産生に正の作用を及ぼす。他の態様において、本発明の物質は環境からの撹乱因子、例えば公害、太陽光線、フリーラジカルおよびストレスの作用を最小限に抑える。
【００７１】
[0085] 本発明の１態様は、皮膚障害およびその作用を予防および／または改善するための組成物およびそれを使用する方法を提供する。
[0086] 本発明の１態様は、反応性酸素種の産生の作用を阻止および軽減するための組成物、ならびにそれを使用する方法を提供する。例えば、本発明は、ａｒＮＯＸ活性を少なくとも部分的に封鎖または阻害するための、植物由来の有効成分の使用を包含する。さらに、本発明は、ａｒＮＯＸ活性を封鎖するための、他の合成および天然の化合物の使用を含むものとする。
【００７２】
[0087] 本発明は、皮膚を処置し、実際の老化および風化した皮膚の目に見える徴候、例えば皺、すじ、たるみ、過色素沈着および加齢斑を遅延させる組成物を開示する。本発明は、過敏性、乾燥および／または鱗状の皮膚の外観および状態も軽減し、発赤および／または刺激を生じた皮膚を鎮静する作用をし、ならびに点（ｓｐｏｔ）、丘疹（ｐｉｍｐｌｅ）、斑点（ｂｌｅｍｉｓｈ）その他の皮膚の不整（ｉｒｒｅｇｕｌａｒｉｔｙ）を処置する。
【００７３】
[0088] 本発明は、老化しつつある細胞が血清中に放出する老化関連イソ型ＮＡＤＨオキシダーゼ（ａｒＮＯＸ）をターゲティングすることにより、細胞において老化をもたらす酸化的変化により生じる障害を処置するための、医薬組成物または化粧用組成物、使用方法、および医薬キットまたは化粧用キットを提供する。これらの組成物は、植物から抽出された物質を含有することができる。例えば、本発明組成物は、ａｒＮＯＸ活性を阻害することが示された少なくとも１種類の抽出物を単独でまたは他の阻害物質と共に含み、老化しつつある細胞が血清中に放出する老化関連イソ型ＮＡＤＨオキシダーゼの活性を少なくとも部分的に阻害または遮断することができる。これらの組成物は、ａｒＮＯＸの阻害に有用なことが知られているユビキノン類、天然抽出物またはそれらに由来する物質を、クリーム、ローション、皮膚軟化剤、ゲルなどを調製するための当技術分野で既知の他の化合物と一緒に含むことができる。そのような他の化合物には、ガム、増量剤、保存剤などを含めることができる。
【００７４】
[0089] １態様において、これらの成分のうち一部または全部を、アンチエージングおよび修復用の血清配合物中に一般的にみられる他の成分と組み合わせることができる。水以外の、または水に加えるビヒクルは、液体または固体の皮膚軟化剤、溶剤、保湿剤、増粘剤および粉末を含むことができる。ビヒクルは、組成物の０．１％から９９．９％まで、好ましくは２５％から８０％まで（重量）であってよく、他の化粧補助剤を含まない状態で組成物の残部を形成することができる。１態様において、ビヒクルは、ビヒクルの少なくとも８０重量％が水である。他の態様において、水は組成物の約５０％〜８５％（重量）を構成する。さらに他の態様において、水は組成物の約０．１％〜５５％（重量）存在する。他の態様においては、他のビヒクルが上記の濃度で用いられる。
【００７５】
[0090] 油または油性物質が乳化剤と一緒に存在して、油中水型乳液または水中油型エマルジョンを生成してもよい；これは、用いる乳化剤の平均親水性−親油性バランス（ＨＬＢ）に大きく依存する。
【００７６】
[0091] 本発明の組成物は日焼け止めを含有することもできる。日焼け止めには、紫外線を遮断するために一般的に用いられる物質が含まれる。具体的な化合物は、ＰＡＢＡ誘導体、シンナメートおよびサリチレートである。例えば、メトキシケイ皮酸オクチルおよび２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン（オキシベンゾンとししても知られる）を使用できる。メトキシケイ皮酸オクチルおよび２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノンは、それぞれ商標Ｐａｒｓｏｌ ＭＣＸおよびＢｅｎｚｏｐｈｅｎｏｎｅ−３で市販されている。エマルジョン中に用いる日焼け止めの厳密な量は、希望する太陽光線の紫外線からの保護の程度に応じて変更できる。
【００７７】
[0092] 皮膚軟化剤を本発明の化粧用組成物中にさらに含有させることができる。そのような皮膚軟化剤の量は、組成物全体の０．５％から５０％まで、好ましくは５％〜３０％（重量）の範囲であってよい。皮膚軟化剤は、エステル、脂肪酸およびアルコール類、ポリオールならびに炭化水素などの一般的な化学的カテゴリー下に分類することができる。
【００７８】
[0093] エステルはモノエステルまたはジエステルであってもよい。許容できる脂肪酸エステルの例には、アジピン酸ジブチル、セバシン酸ジエチル、ダイマー酸ジイソプロピルおよびコハク酸ジオクチルが含まれる。許容できる分枝鎖脂肪酸エステルには、ミリスチン酸２−エチル−ヘキシル、ステアリン酸イソプロピルおよびパルミチン酸イソステアリルが含まれる。許容できる三塩基性酸エステルには、トリリノール酸トリイソプロピルおよびクエン酸トリラウリルが含まれる。許容できる直鎖脂肪酸エステルには、パルミチン酸ラウリル、乳酸ミリスチルおよびオレイン酸ステアリルが含まれる。好ましいエステルには、ココ−カプリレート／カプレート（ココ−カプリレートとココ−カプレートのブレンド）、プロピレングリコールミリスチルエーテルアセテート、アジピン酸ジイソプロピルおよびオクタン酸セチルが含まれる。
【００７９】
[0094] 適切な脂肪アルコールおよび脂肪酸には、１０個から２０個までの炭素原子をもつ化合物が含まれる。特に好ましいものは、セチル、ミリスチル、パルミチルおよびステアリルアルコールならびに酸などの化合物である。
【００８０】
[0095] 皮膚軟化剤として使用できるポリオールには、直鎖および分枝鎖アルキルポリヒドロキシ化合物が含まれる。例えば、プロピレングリコール、ソルビトールおよびグリセリンが好ましい。高分子ポリオール、例えばポリ−プロピレングリコールおよびポリエチレングリコールも使用できる。ブチレンおよびプロピレングリコールは透過促進剤としても特に好ましい。
【００８１】
[0096] 皮膚軟化剤として使用できる炭化水素の例は、１２個から３０個までのいずれかの炭素原子をもつものである。具体例には、鉱油、ワセリン、スクアレンおよびイソパラフィンが含まれる。
【００８２】
[0097] 本発明組成物の他の態様は増粘剤を含む。増粘剤は、通常は組成物の０．１％から２０％まで（重量）のいずれか、好ましくは約０．５％から１０％まで（重量）の量で存在するであろう。増粘剤の例は、ＣＡＲＢＯＰＯＬ（登録商標）の商標でＢ．Ｆ．Ｇｏｏｄｒｉｃｈ Ｃｏから入手できる架橋したポリアクリレート材料である。ガム、例えばキサンタン、カラギーナン、ゼラチン、カラヤ、ペクチンおよびローカストビーンガムを使用できる。特定の状況下では、増粘機能はシリコーンまたは皮膚軟化剤としても使用できる材料により達成できる。例えば、１０センチストークを超えるシリコーンゴム、およびエステル、例えばステアリン酸グリセロールは、二重の機能をもつ。
【００８３】
[0098] 粉末を本発明の化粧用組成物に取り込ませることができる。
[0099] これらの粉末には、チョーク、タルク、カオリン、デンプン、スメクタイトクレー、化学修飾したケイ酸アルミニウムマグネシウム、有機修飾したモンモリロナイトクレー、水和ケイ酸アルミニウム、ヒュームドシリカ、アルミニウムデンプンオクテノイルスクシネート、およびその混合物が含まれる。
【００８４】
[0100] 他の補助副成分を化粧用組成物に取り込ませることもできる。これらの成分には、着色剤、不透明化剤および香料を含めることができる。これらの他の補助副成分の量は、組成物の０．００１％から２０％まで（重量）のいずれかの範囲であってもよい。
【００８５】
[0101] 本発明の組成物は、皮膚のコンディショニング、加湿および平滑化、柔軟性（ｆｌｅｘｉｂｉｌｉｔｙ）および弾力性（ｅｌａｓｔｉｃｉｔｙ）の増大、ならびに皺、すじまたは老化した皮膚の外観の予防または軽減のための物質として、ヒトの皮膚に局所適用するのに使用できる。本発明の配合物は、皮膚の張り（ｔｏｎｅ）の喪失に対する応答をもたらし、皮膚の表層の水和度および硬さを効果的に補給する有益性を増進する；これらはすべて、抗酸化剤その他の有益な成分で皮膚の下層を修復して、細かいすじおよび皺の外観を軽減しかつ目に見える張りおよび弾力性を快復するのを補助する作用に伴って生じる。ある例示態様において、そのような抗酸化剤は具体的にはａｒＮＯＸを阻害することを目的とする。
【００８６】
[0102] １態様において、約１ｍｌから１０００ｍｌまでの有効成分を含む少量の組成物を皮膚に適用する。例示態様においては、約１ｍｌから１００ｍｌまでの有効成分を含む少量の組成物を皮膚に適用する。このプロセスを毎日数回、任意期間反復することができる。好ましくは、組成物を朝１回および夕方１回、皮膚に適用する。
【００８７】
[0103] 本発明の局所スキンケア組成物は、ローション、クリーム、ゲルなどとして配合できる。組成物をその粘度および消費者の意図する用途に適した適切な容器にパッケージすることができる。例えば、ローションまたはクリームは、ボトルもしくはロールボールアプリケーター（ｒｏｌｌ−ｂａｌｌ ａｐｐｌｉｃａｔｏｒ）、または噴射剤駆動式エアゾール器具、または手指操作に適切なポンプを備えた容器内にパッケージすることができる。組成物がクリームである場合、それを変形しないボトルまたは絞り出し容器、例えばチューブもしくは蓋付きジャー内に保存するだけでよい。したがって本発明は、本明細書に定めた化粧用として許容できる組成物を収容した密閉容器をも提供する。
【実施例】
【００８８】
[0104] 以下の実施例は説明のために提示するものであり、限定のためのものではない。
[0105] 実施例
[0106] 実施例１：フサザキスイセン抽出物の特性分析
[0107] フサザキスイセン（Ｎａｒｃｉｓｓｕｓ ｔａｚｅｔｔａ）がａｒＮＯＸ阻害物質を含む可能性があるという仮説を調べるために、ニホンスイセン（日本水仙）（ｐａｐｅｒ ｗｈｉｔｅ（Ｎａｒｃｉｓｓｕｓ ｔａｚｅｔｔａ）ｎａｒｃｉｓｓｕｓ）の球根を園芸業者（Ｂｒｅｎｔ ａｎｄ Ｂｅｃｋｙ’ｓ ｂｕｌｂｓ、バージニア州グロウセスター）から入手した。水およびエタノール抽出物を調製し、これらはａｒＮＯＸ活性を阻害し、低活性のフサザキスイセン粉末（Ｘｉａｎ Ａｏｊｉｎｇ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ ＣＯ．、ＬＴＤ、中国、西安）と組み合わせた場合に阻害を増強した。ＳＨＡＭ（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、ミズーリ州セントルイス）によるフサザキスイセン球根由来の粉末の増強を図１ａに示す。ナラクチン類がａｒＮＯＸ阻害を増強する能力の確認を同じプロトコルに従って行ない、ただしａｒＮＯＸ阻害を増強するためにサリシン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）、および花に由来するフサザキスイセン粉末（Ｘｉａｎ Ａｏｊｉｎｇ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ ＣＯ．，ＬＴＤ、中国、西安）を用いた；図１ｂ。ａｒＮＯＸ阻害活性をもたないラッパスイセン（Ｎａｒｃｉｓｓｕｓ ｐｓｅｕｄｏ−ｎａｒｃｉｓｓｕｓ）（ｄａｆｆｏｄｉｌ）およびキズイセン（黄水仙）（Ｎａｒｃｉｓｓｕｓ ｊｏｎｑｕｉｌｌａ）（ｊｏｎｑｕｉｌ）の同様な抽出物について比較を行なった。図２に示すように、フサザキスイセン抽出物の活性は、鉄（ＩＩＩ）の添加によって増強される赤色の着色と相関していた；これは、同様にａｒＮＯＸを阻害するトウモロコシ（図３）およびエンバク（示していない）の幼植物にみられる天然ヒドロキサメートの特徴である（図４）。フサザキスイセン抽出物の有効成分が天然ヒドロキサメートを含む可能性についての証拠はさらに、それらの薄層クロマトグラフィー分析（図５）により、ならびにそれらの鉄付加物のスペクトル研究から、およびトウモロコシの根のスティール（ヒドロキサメートが濃縮されているトウモロコシの根の中心維管束；これは、潜在的にヒドロキサメートに富むフサザキスイセン球根の茎の維管束（図２に示す）に対応する）からも（図６）、市販のヒドロキサメート（サリチルヒドロキサメート（ＳＨＡＭ）、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）との比較により、得られた。
【００８９】
[0108] 植物の別のオキシダーゼ活性の既知の阻害物質であるＳＨＡＭをａｒＮＯＸ活性阻害について試験して、７２歳の男性からの唾液に対して９０％を超えるａｒＮＯＸ活性阻害が１ｍｇ／ｍｌの濃度で得られた（図７）。ＳＨＡＭは部分活性フサザキスイセン粉末のａｒＮＯＸ活性の阻害を増強することも見いだされた（図１）。市販のフサザキスイセン粉末（ＩＢＲ−ＤＯＲＭＩＮ（登録商標）、イスラエル）は、低レベルのおそらくＳＨＡＭに類似する天然ヒドロキサメートを実際に含有すると思われるが、新鮮なフサザキスイセン球根から調製した抽出物中にみられるものよりはるかに低いレベルにおいてである（図５ａおよび５ｂ）。
【００９０】
[0109] 実施例２：ａｒＮＯＸ阻害物質の同定
[0110] 安定化されたサリチルヒドロキサメートのサリチル酸部分がａｒＮＯＸ活性の阻害に重要であるかどうかという疑問に答えるために、サリチル酸（ナラクチン２）を唾液（７２歳の男性）のａｒＮＯＸ活性の阻害物質として試験して、ａｒＮＯＸを阻害することが見いだされた（図８）。サリチル酸も、鉄（ＩＩＩ）と反応した際にヒドロキサメートが生じるのと類似する赤色を生じた。サリチル酸のエステルおよび／またはアスピリンは、ａｒＮＯＸを阻害しなかった。サリチレートの天然源であるヤナギ樹皮の水抽出物を試験して、同様にａｒＮＯＸを阻害することが見いだされた。ヤナギ樹皮の主要なサリチレートであるグリコシド、サリシン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、ミズーリ州セントルイス）（ナラクチン３）を次いで試験して、ＳＨＡＭ（ナラクチン１）またはサリチル酸（ナラクチン２）より１０倍低い濃度で有効であることが見いだされた（図９）。
【００９１】
[0111] 実施例３：サリチレート産生植物の同定
サリチレートの天然産生体である植物を同定するための検索を実施した。検索はシカゴのイリノイ大学のNorman Farnsworth教授が作成した天然物データベース(napralert.orgで入手できる）を用いて実施した。この検索により、同定された種々の組織中でサリチレートを産生する下記の植物が同定された：
A. chinense (alangiaceae（ウリノキ科）)乾燥葉、中国，A. chinense (alangiaceae)乾燥葉、日本（栽培（ｃｕｌｔ）），A. platanifolium (alangiaceae)乾燥葉、フランス，A. platanifolium var. platanifolium (alangiaceae)乾燥葉、日本，A. platanifolium var. trilobum (alangiaceae)乾燥葉、日本，A. platanifolium var. trilobum (alangiaceae)乾燥葉、日本，A. premnifolium (alangiaceae)葉、日本，A. premnifolium (alangiaceae)乾燥茎（ｓｔｅｍ）、日本，Aspergillus niger (hyphomycetes（糸状菌類）)培養物濾液、朝鮮，betula alba (betulaceae（カバノキ科）)乾燥樹皮、ドイツ，Bupleurum falctum (apiaceae（繖形科）)幼植物の懸濁培養物、日本，Catharanthus roseus (apocynaceae（キョウチクトウ科）葉の懸濁培養物、日本，Chosenia bracteosa (salicaceae（ヤナギ科）)乾燥樹皮、日本，Colchicum autumnale (liliaceae（ユリ科）)新鮮な球茎、日本，Crepis foetida (asteraceae（キク科）)乾燥根、ポーランド，Crepis rhoeadifolia (asteraceae)乾燥根、ポーランド（栽培），Datura inoxia (solanaceae（ナス科）)葯の懸濁培養物、日本，D. inoxia (solanaceae)根の懸濁培養物、日本，Duboisia myoporoides (solanaceae)葉の懸濁培養物、日本，Eleutherococcus setchuensis (araliaceae（ウコギ科）)乾燥茎、中国，Euphorbia salicifolia (euphorbiaceae（トウダイグサ科）)新鮮な植物全体、ハンガリー，Filipendula ulmaria (rosaceae（バラ科）)乾燥気中部分（ａｅｒｉａｌ ｐａｒｔ）、欧州，F. ulmaria (rosaceae)乾燥植物全体、F. ulmaria (rosaceae)乾燥植物全体、スイス，F. ulmaria (rosaceae)乾燥花、USSR，Foeniculum vulgare (apiaceae)果実の市販試料、中国，Gardenia jasminoides (rubiaceae（アカネ科）)葉の懸濁培養物、日本，Lithospermum erythrorhizon (boraginaceae（ムラサキ科）)幼植物の懸濁培養物、日本，Nicotiana tabacum (solanaceae)根の懸濁培養物、
日本，P. alba (salicaceae)乾燥樹皮、USA, P. balsamifera (salicaceae)乾燥樹皮、USA-WI, P. balsamifera (salicaceae)新鮮な樹皮、USA-WI，P. balsamifera (salicaceae)乾燥樹皮＋小枝（ｔｗｉｇ）、USA-WI，P. balsamifera (salicaceae)乾燥芽、フランス，P. balsamifera (salicaceae)凍結乾燥葉、USA-AK, P. balsamifera (salicaceae)新鮮な葉、USA-WI, P. balsamifera (salicaceae)オーブン乾燥葉、フィンランド（栽培），P. balsamifera (salicaceae)乾燥幹（ｔｒｕｎｋ）樹皮、USA-WI, P. davidiana (salicaceae)乾燥樹皮、中国，P. davidiana (salicaceae)乾燥茎樹皮、朝鮮，P. deltoides (salicaceae)乾燥樹皮、USA-WI, P. deltoides (salicaceae)新鮮な樹皮、USA-WI, P. deltoides (salicaceae)新鮮な葉、USA-WI, P. deltoides var. deltoides (salicaceae)乾燥樹皮、カナダ（栽培），P. deltoides var. occidentalis (salicaceae)乾燥樹皮、カナダ（栽培），P. euphratica (salicaceae)乾燥樹皮、中国，P. euphratica (salicaceae)乾燥芽、トルコ, P. grandidentata (salicaceae)乾燥樹皮、USA-WI, P. grandidentata (salicaceae)乾燥葉、USA-WI, P. heterophylla (salicaceae)乾燥樹皮、USA-WI, P. lasiocarpa (salicaceae)乾燥芽、英国，P. maximowiczii (salicaceae)乾燥樹皮、日本，P. nigra (salicaceae)新鮮な樹皮、ドイツ，P. nigra (salicaceae)乾燥葉、英国（栽培），P. nigra (salicaceae)乾燥葉、ドイツ，P. sieboldii (salicaceae)乾燥芽、日本，P. simonii (salicaceae)乾燥樹皮、中国，P. tacamahaca (salicaceae)乾燥樹皮、USA-WI, P. tomentosa (salicaceae)乾燥樹皮、中国，P. tomentosa (salicaceae)植物全体、中国，P. tomentosa (salicaceae)乾燥葉、中国，P. tremula (salicaceae)乾燥樹皮、ドイツ，P. tremula (salicaceae)乾燥葉、スイス，P. tremula (salicaceae)オーブン乾燥葉、フィンランド，P. tremula (salicaceae)真菌感染した茎の樹皮、フランス，P. tremula (salicaceae)乾燥小枝、フィンランド，P. tremuloides (salicaceae)乾燥樹皮、USA, P. tremuloides (salicaceae)乾燥樹皮、USA-WI, P. tremuloides (salicaceae)若い植物全体, P. tremuloides (salicaceae)凍結乾燥節間（ｉｎｔｅｒｎｏｄｅ）、USA-AK, P. tremuloides (salicaceae)乾燥葉、USA-WI, P. tremuloides triploid (salicaceae)新鮮な葉、USA-WI, P. tremuloides triploid type (salicaceae)乾燥樹皮、USA-WI, P. trichocarpa (salicaceae)乾燥樹皮、USA-WA, P. trichocarpa (salicaceae)乾燥樹皮、USA-WI, P. trichocarpa (salicaceae)新鮮な葉、USA-WI, P. trichocarpax P. deltoides (salicaceae)新鮮な葉、ベルギー（栽培），S. acutifolia (salicaceae)乾燥樹皮、ロシア, S. alba (salicaceae)乾燥樹皮、S. alba (salicaceae)乾燥樹皮、フランス，S. alba (salicaceae)乾燥樹皮、ドイツ，S. alba (salicaceae)乾燥樹皮、USA, S. alba (salicaceae)乾燥樹皮、USA-AR, S. alba (salicaceae)乾燥樹皮、
USA-UT, S. alba (salicaceae)オーブン乾燥葉、英国，S. alba (salicaceae)オーブン乾燥葉、フィンランド（栽培），S. alba cv. cardinalis (salicaceae)乾燥葉、英国，S. alba, 雌性（ｓｅｘ ｆｅｍａｌｅ）(salicaceae)乾燥樹皮、ドイツ，S. alba, 雄性（ｓｅｘ ｍａｌｅ）(salicaceae)乾燥樹皮、ドイツ，S. alba x s. babylonica (s. sepula (salicaceae)オーブン乾燥葉、英国，S. alba x s.fragilis(s. russellia (salicaceae)オーブン乾燥葉、英国，S. alba x s. pentadra (s. ehrhardt (salicaceae)オーブン乾燥葉、英国，S. alba x S. babylonica (salicaceae)植物全体、USSR, S. americana (salicaceae)乾燥葉、英国，S. arctica (salicaceae)乾燥葉、アイスランド, S. aurita (salicaceae)乾燥樹皮、ドイツ，S. aurita (salicaceae)オーブン乾燥葉、フィンランド，S. aurita, 雌性(salicaceae)乾燥樹皮、ドイツ，S. babylonica (salicaceae)乾燥葉、インド, S. babylonica (salicaceae)オーブン乾燥葉、英国，S. babylonica cv. fardon weeping (salicaceae)乾燥葉、英国，S. babylonica x s. fragills (s. blanda) (salicaceae)オーブン乾燥葉、英国，S. basfordiana (salicaceae)新鮮な葉、英国，S. basfordiana (salicaceae)凍結葉、S. caesia (salicaceae)新鮮な枝、フランス，S. caesia (salicaceae)新鮮な葉、フランス，S. caesia (salicaceae)新鮮な茎、フランス，S. calodendron (salicaceae)新鮮な葉、英国，S. calodendron (salicaceae)凍結葉、S. capitata (salicaceae)乾燥葉、中国，S. caprea (salicaceae)乾燥樹皮、フィンランド，S. caprea (salicaceae)乾燥樹皮、ドイツ，S. caprea (salicaceae)乾燥樹皮、メキシコ, S. caprea (salicaceae)乾燥葉、メキシコ, S. caprea (salicaceae)乾燥葉、USSR, S. caprea (salicaceae)オーブン乾燥葉、英国，S. caprea (salicaceae)オーブン乾燥葉、フィンランド，S. caprea, 雌性(salicaceae)乾燥樹皮、ドイツ，S. caprea, 雄性(salicaceae)乾燥樹皮、ドイツ，S. caprea var. lanata (salicaceae)乾燥葉、英国，S. caprea x s. lanata(s. balfourii) (salicaceae)オーブン乾燥葉、英国，S. caprea x s. viminalis (s. serican (salicaceae)オーブン乾燥葉、英国，S. chaenomeloides (salicaceae)乾燥葉、日本，S. cinerea (salicaceae)乾燥樹皮、ドイツ，S. cinerea (salicaceae)乾燥樹皮、スイス，S. cinerea (salicaceae)オーブン乾燥花、フィンランド，S. cinerea (salicaceae)乾燥葉、英国，S. cinerea (salicaceae)オーブン乾燥葉、英国，S. cinerea, 雌性(salicaceae)乾燥樹皮、ドイツ，S. cinerea, 雄性(salicaceae)乾燥樹皮、ドイツ，S. daphnoides (salicaceae)乾燥樹皮、S. daphnoides (salicaceae)乾燥樹皮、スイス，S. daphnoides (salicaceae)新鮮な葉、英国，S. daphnoides (salicaceae)凍結葉、S. daphnoidesクローン1 (salicaceae)乾燥小枝、フィンランド，S. daphnoides クローン2 (salicaceae)乾燥小枝、フィンランド，S. daphnoides ssp. cordaph (salicaceae)乾燥樹皮、マデイラ諸島（Madeira）, S. daphnoides var. acutifolia (salicaceae)乾燥葉、英国，S. fragilis (salicaceae)乾燥樹皮、ドイツ，S. fragilis (salicaceae)乾燥葉、英国，S. fragilis (salicaceae)乾燥葉、ドイツ，S. fragilis (salicaceae)新鮮な葉、英国，S. fragilis (salicaceae)凍結葉、S. fragilis (salicaceae)オーブン乾燥葉、英国，S. fragilis (salicaceae)オーブン乾燥葉、フィンランド（栽培），S. fragilis (salicaceae)乾燥小枝、フィンランド，S. fragilis, 雄性(salicaceae)乾燥樹皮、ドイツ，S. fragilis, 雄性(salicaceae)乾燥葉、ドイツ，S. fragilis var. latifolia (salicaceae)新鮮な葉、英国，S. fragilis var. latifolia (salicaceae)凍結葉、S. fragilis x s. pentandra (s. meyeran (salicaceae)オーブン乾燥葉、英国，S. fragilis x s. triandra (s. decipien (salicaceae)オーブン乾燥葉、英国，S. geminataハイブリッド(salicaceae)乾燥葉、英国，S. geminataハイブリッド(s. cinerea x s.vi (salicaceae)オーブン乾燥葉、英国，S. gracilis var. textoris (salicaceae)オーブン乾燥樹皮、カナダ，S. gracilistyla (salicaceae)乾燥樹皮、日本，S. gracilistyla (salicaceae)乾燥葉、日本，S. gracilistyloides (salicaceae)乾燥樹皮、日本，S. gymnolepis (salicaceae)乾燥樹皮、日本，S. hastata (salicaceae)乾燥樹皮、スイス，S. herbacea x s.phylicifolla (s. moore (salicaceae)オーブン乾燥葉、英国，S. incana (salicaceae)乾燥葉、英国，S. koriyanagi (salicaceae)乾燥樹皮、日本，S. lapponum (salicaceae)オーブン乾燥葉、英国，S. lapponum (salicaceae)オーブン乾燥葉、フィンランド，S. lapponum (salicaceae)乾燥小枝、フィンランド，S. lasiandra (salicaceae)凍結乾燥葉＋茎、USA-AK, S. lasiolepis (salicaceae)乾燥葉、USA-CA, S. matsudana (salicaceae)乾燥葉、中国，S. myrsinifolia (salicaceae)乾燥樹皮、ドイツ，S. myrsinifolia (salicaceae)乾燥葉、フィンランド（栽培），S. myrsinifolia (salicaceae)乾燥葉、ドイツ，S. myrsinifolia (salicaceae)新鮮な葉、フィンランド，S. myrsinifolia (salicaceae)オーブン乾燥葉、フィンランド，S. myrsinifolia (salicaceae)乾燥茎、フィンランド（栽培），S. myrsinifolia (salicaceae)新鮮な茎、フィンランド，S. myrsinifolia (salicaceae)乾燥小枝、フィンランド，S. myrsinifolia, 雄性(salicaceae)乾燥樹皮、ドイツ，S. nigricans (salicaceae)乾燥葉、英国，S. nigricans (salicaceae)乾燥葉、スイス，S. nigricans (salicaceae)新鮮な葉、英国，S. nigricans (salicaceae)凍結葉、S. orestera (salicaceae)乾燥葉、
USA-CA, S. pentandra (salicaceae)乾燥樹皮、ドイツ，S. pentandra (salicaceae)葉、USA, S. pentandra (salicaceae)乾燥葉、ドイツ，S. pentandra (salicaceae)新鮮な葉、英国，S. pentandra (salicaceae)凍結葉、S. pentandra (salicaceae)オーブン乾燥葉、英国，S. pentandra (salicaceae)オーブン乾燥葉、フィンランド，S. pentandra (salicaceae)乾燥小枝、フィンランド，S. pentandra cv. lumley (salicaceae)乾燥葉、英国，S. pentandra, 雌性(salicaceae)乾燥樹皮、ドイツ，S. pentandra x s.fragilis (salicaceae)新鮮な葉、英国，S. pentandra x s.fragilis (salicaceae)凍結葉、S. pentandroides (salicaceae)乾燥葉、USSR, S. pentandroides (salicaceae)新鮮な根の皮、USSR, S. petiolaris (salicaceae)乾燥樹皮、カナダ，S. phylicifolia (salicaceae)乾燥葉、英国，S. phylicifolia (salicaceae)オーブン乾燥葉、英国，S. phylicifolia (salicaceae)オーブン乾燥葉、フィンランド，S. phylicifolia (salicaceae)乾燥小枝、フィンランド，S. phylicifolia x S. myrsinifolia (salicaceae)オーブン乾燥葉、フィンランド，S. purpurea (salicaceae)乾燥樹皮、S. purpurea (salicaceae)乾燥樹皮、ドイツ，S. purpurea (salicaceae)乾燥樹皮、スイス，S. purpurea (salicaceae)乾燥葉、ドイツ，S. purpurea (salicaceae)乾燥葉、ドイツ（栽培），S. purpurea (salicaceae)乾燥葉、スイス，S. purpurea (salicaceae)新鮮な葉、S. purpurea (salicaceae)新鮮な葉、英国，S. purpurea (salicaceae)凍結葉、S. purpurea (salicaceae)オーブン乾燥葉、英国，S. purpurea, 雌性(salicaceae)乾燥樹皮、ドイツ，S. purpurea, 雌性(salicaceae)乾燥葉、ドイツ，S. purpurea, 雄性(salicaceae)乾燥樹皮、ドイツ，S. purpurea var. goldstones (salicaceae)乾燥葉、英国，S. purpurea x s.triandra (s. leiophyl (salicaceae)オーブン乾燥葉、英国，S. repens (salicaceae)乾燥樹皮、フランス，S. repens (salicaceae)乾燥樹皮、ドイツ，S. repens (salicaceae)乾燥葉、ドイツ，S. repens (salicaceae)新鮮な葉、英国，S. repens (salicaceae)凍結葉、S. repens, 雌性(salicaceae)乾燥樹皮、ドイツ，S. repens, 雄性(salicaceae)乾燥樹皮、ドイツ，S. rubraハイブリッド(salicaceae)乾燥葉、英国，S. rubraハイブリッド(s.purpurea x vimi (salicaceae)オーブン乾燥葉、英国，S. schwerinii (salicaceae)乾燥樹皮、USSR, S. scouleriana (salicaceae)乾燥樹皮、USA-UT, S. smithiana (salicaceae)乾燥葉、英国，S. songarica (salicaceae)葉、USSR, S. songarica (salicaceae)乾燥葉、USSR, S. species (salicaceae)乾燥植物全体、スイス，S. species (salicaceae)乾燥茎樹皮、フランス，S. stipularisハイブリッド(s. viminalis x un (salicaceae)オーブン乾燥葉、英国，S. tetrasperma (salicaceae)乾燥根、タイ, S. tetrasperma (salicaceae)乾燥茎樹皮、タイ, S. tremuloides (salicaceae)乾燥樹皮、USA, S. triandra (salicaceae)乾燥樹皮、ドイツ，S. triandra (salicaceae)オーブン乾燥葉、英国，S. triandra cv. black maul (salicaceae)乾燥葉、英国，S. triandra, 雌性(salicaceae)乾燥樹皮、ドイツ，S. triandra, 雄性(salicaceae)乾燥樹皮、ドイツ，S. triandra x. s. viminalls (s. hippopha (salicaceae)オーブン乾燥葉、英国，S. viminalis (salicaceae)乾燥樹皮、ドイツ，S. viminalis (salicaceae)乾燥葉、英国，S. viminalis (salicaceae)オーブン乾燥葉、英国，S. viminalis (salicaceae)オーブン乾燥葉、フィンランド（栽培），S. viminalis (salicaceae)乾燥小枝、フィンランド（栽培），S. viminalis cv. aquatica (salicaceae)オーブン乾燥小枝、フィンランド（栽培），S. viminalis, 雌性(salicaceae)乾燥樹皮、ドイツ，Toisusu urbaniana (salicaceae)乾燥樹皮、日本，Viburnum henryi (caprifoliaceae（スイカズラ科）)葉、Viburnum prunifolium (caprifoliaceae)根の皮、USA, Viburnum rhytidophyllum (caprifoliaceae)乾燥花、エジプト, Viscum album e/S. alba (loranthaceae（ヤドリギ科）)葉茎、フランス。
【００９２】
[0112] 実施例４：ａｒＮＯＸ阻害剤の増強
[0113] サリシンは単独物質として有効である（図９）だけでなく、チョウセンゴミシ（Ｓｃｈｉｚａｎｄｒａ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）粉末およびフサザキスイセン（Ｎ．ｔａｚｅｔｔａ）粉末などの天然源に由来する他のａｒＮＯＸ阻害物質の混合物のａｒＮＯＸ阻害を増強するのにも有効であった（図１０ａおよび１０ｂ）。図１０ａは、４ｍｇ／ｍｌのチョウセンゴミシ粉末＋フサザキスイセン抽出物（２０μｌ）の混合物に１ｍｇ／ｍｌのサリシンを添加したもののａｒＮＯＸ阻害を示す。図１ｂは、１ｍｇ／ｍｌのサリシンの存在下での、４ｍｇ／ｍｌのチョウセンゴミシ粉末＋１ｍｇ／ｍｌのフサザキスイセン粉末の混合物によるａｒＮＯＸ阻害を示す。同定および試験した３種類の化学的に純粋な「ナラクチン類」（フサザキスイセン粉末中に存在するか、あるいはフサザキスイセン粉末を最も有効な新鮮なフサザキスイセン抽出物のものに匹敵する阻害レベルまで増強することができる、数種類の天然ａｒＮＯＸ阻害物質のいずれかを標記するために用いる用語）のうち、サリシンは最も有望であると思われた。サリシンは安定、水溶性、非刺激性、比較的安価であり、かつ多数の業者、例えばＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、ミズーリ州セントルイスから入手できる。さらに、低活性フサザキスイセン粉末の増強は、図１ａおよび１ｂに明瞭に示される；この場合、ＳＨＡＭとサリシンの両方がａｒＮＯＸ活性を顕著に低下させた。
【００９３】
[0114] 実施例５：ａｒＮＯＸの特性分析
[0115] バフィーコート（ｂｕｆｆｙ ｃｏａｔ）によるスーパーオキシド産生：バフィーコートはリンパ球と血小板の混合物。そのようなバフィーコートは、例えばＲｏｃｋｌａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ（ペンシルベニア州ギルバーツスビル）から市販されている。採集およびアッセイ前に血液試料を４℃に保持した。約１０７個の細胞を各アッセイに添加した。細胞数を血球計数器により測定した。
【００９４】
[0116] スーパーオキシドによる鉄（ＩＩＩ）シトクロムｃの還元をスーパーオキシド形成の基準尺度として用いた(Mayo, L. A. and Cumutte, J. (1990) Meth. Enzyme. 186, 567-575. 7.Butler, J, Koppenol, W. H. and Margollash, E. (1982) J. Biol. Chem. 257, 10747)。これは、スーパーオキシドジスムターゼ阻害に連結させてスーパーオキシド発生の測定のために広く採用されている方法である。このアッセイ法は、ＰＢＳＧ緩衝液（８．０６ｇのＮａＣｌ、０．２ｇのＫＣｌ、０．１８ｇのＮａ２ＨＰＯ４、０．２６ｇのＫＨ２ＰＯ４、０．１３ｇのＣａＣｌ２、０．１ｇのＭｇＣｌ２、１．３５ｇのグルコースを１０００ｍｌの脱イオン水に溶解し、ｐＨ７．４に調整し、濾過して４℃に保存したもの）中における１５０μｌの血清または４０μｌのバフィーコートからなる。ＳＬＭ Ａｍｉｎｃｏ ＤＷ−２０００分光光度計（Ｍｉｌｔｏｎ Ｒｏｙ、米国ニューヨーク州ロチェスター）を用いて二重波長モードの操作において１．５分毎に１分間にわたる連続測定で率を決定した。４５分後、被験化合物を添加し、反応を４５分間継続した。４５分後、ミリモル吸光係数１９．１ｃｍ−１を還元フェリシトクロムｃについて用いた。被験化合物の結果を表１に示す。別途指示しない限り、水中の化合物抽出物を調製した。
【００９５】
[0117] 表１は、若干のａｒＮＯＸ阻害実験の結果を示す。
【００９６】
【表１】
【００９７】
[0118] 実施例６：局所化粧用調製物
[0119] ａｒＮＯＸ阻害特性をもつ植物抽出物を含有する４種類の基本型配合物の有効性および耐容性を２種類のビヒクル対照と比較してスクリーニングするために、８週間の顔面分割式（ｓｐｌｉｔ−ｆａｃｅ）対照付き臨床使用試験を実施した。有効性は、臨床グレーディング、バイオ計測器測定（Ｃｈｒｏｍａ Ｍｅｔｅｒ、Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ、Ｃｕｔｏｍｅｔｅｒ）、および自己評価質問表により評価した。耐容性は、刺激性グレーディングおよび有害事象モニタリングにより評価した。
【００９８】
[0120] 合計２３人の被験者が試験参加を完了した。被験者は、目の周りの領域の軽度ないし中等度の細かいすじおよび粗い皺、ならびに顔の右側および左側の過色素沈着をもつことにより試験参加資格を満たした。被験者をランダム化方式で下記の２種類の被験物質（１つは対照、１つは被験物質）に帰属させた：
対照
Ａ．ａｒＮＯＸ対照ゲルＡ（無ラベル）ＡＢ−８７−０４Ａ、無色透明ゲル（１２人の被験者）
Ｂ．ａｒＮＯＸ対照ゲルＢ（赤ラベル）ＪＺ−９１−４０、無色透明ゲル（グリセリンを含有）（１１人の被験者）
被験物質
１．ａｒＮＯＸ対照ゲルＡ／チョウセンゴミシ（Ｓｃｈｉｚａｎｄｒａ）（封入せず）、フサザキスイセン（Ｎ．ｔａｚｅｔｔａ）抽出物、およびサリシン（緑ラベル）ＪＺ ９１−３９、桃色透明ゲル（６人の被験者）
２．ａｒＮＯＸ対照ゲルＡ／チョウセンゴミシ（青ラベル）ＴＬ−９０−５９、無色透明ゲル（６人の被験者）
３．ａｒＮＯＸ対照ゲルＢ／チョウセンゴミシ（封入せず）、フサザキスイセン抽出物、およびサリシン（黄ラベル）ＴＬ−９０−５８（グリセリンを含有）、桃色透明ゲル（６人の被験者）
４．ａｒＮＯＸ対照ゲルＢ／サリシン（半分は黄、半分は黒のラベル）ＫＫ−８９−４９、無色透明ゲル（グリセリンを含有）（５人の被験者）。
【００９９】
[0121] 被験者に、顔を洗った後に１日２回（朝と夕方）、帰属させた被験物質を顔の右側または左側に適用し、かつ帰属させた対照を顔の反対側に適用するように指示した。
[0122] 臨床評価は、ベースライン（来院１）、４週目（来院２）および８週目（来院３）に実施した。被験者は、各来院時に下記の臨床グレーディングおよび計測器測定手順に参加した（別途指示しない限り）。
【０１００】
[0123] 有効性／性能パラメーター
[0124] 被験者を、顔の右側および左側において下記のパラメーターにつき臨床グレーディングした：細かい皺（目の周り）、粗い皺（目の周り）、皮膚のテキスチャー（ｔｅｘｔｕｒｅ）（頬）、全体的な変色（ｄｉｓｃｏｌｏｒａｔｉｏｎ）、明かるさ（ｂｒｉｇｈｔｎｅｓｓ）（頬）、皮膚の透明度（ｃｌａｒｉｔｙ）、孔（ｐｏｒｅ）のサイズ（額および鼻の領域）、孔の分布／構造、および全体的な皮膚の輝き（ｒａｄｉａｎｃｅ）。
【０１０１】
[0125] 刺激性／安全性グレーディング
[0126] 被験者を、顔の右側および左側において客観的刺激性パラメーター（紅斑、浮腫、スケーリング（ｓｃａｌｉｎｇ））および主観的刺激性パラメーター（灼熱感（ｂｕｒｎｉｎｇ）、刺痛（ｓｔｉｎｇｉｎｇ）、痒み（ｉｔｃｈｉｎｇ）、締付け感（ｔｉｇｈｔｎｅｓｓ）、疼き（ｔｉｎｇｌｉｎｇ））につき臨床グレーディングした。
【０１０２】
[0127] 皮膚表面の水和度の測定
[0128] 皮膚表面の水和度の測定を、Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ（登録商標）ＣＭ ８２５（Ｃｏｕｒａｇｅ＋Ｋｈａｚａｋａ、ドイツ）水和度分析計を用いて行なった。測定は、角質層の含水量を定量するために左および右の頬の下中央部について行なわれた（三重に）。
【０１０３】
[0129] 皮膚のルミナンス測定
[0130] 皮膚のルミナンス測定を、Ｃｈｒｏｍａ Ｍｅｔｅｒ ＣＲ４００（Ｋｏｎｉｃａ−Ｍｉｎｏｌｔａ、日本）皮膚ルミナンス分析計を用いて三重に実施し、顔の右側および左側において色素沈着病変部（検査員が選択）について行なって、皮膚の色／色調（ｔｏｎｅ）の変化を計測器により評価した。追加の皮膚ルミナンス測定を、顔の片側の色素沈着していない（正常な）領域について行なった。
【０１０４】
[0131] 皮膚の粘弾性測定
[0132] １回の粘弾性測定を、Ｃｕｔｏｍｅｔｅｒ（登録商標）ＳＥＭ ５７５（Ｃｏｕｒａｇｅ＋Ｋｈａｚａｋａ、ドイツ）粘弾性計測器を用いて行なった。測定は、皮膚の粘弾性を評価するために各被験者の右および左の頬の中央部について行なわれた。
【０１０５】
[0133] 質問表
[0134] 被験者は４週目と８週目に下記の質問表に記入した：
試験開始以来の皮膚の状態パラメーターに関する被験者の皮膚変化の評価質問
現在の皮膚の状態パラメーターならびに被験物質の寄与および耐容性に関する被験者の評価質問
[0135] 全体として、この試験の結果は、細かいすじの外観、触覚による粗さ、皮膚の色調、および全体的な変色／過色素沈着において、すべての被験物質および対照がベースライン評点と比較して有意の改善をもたらしたことを示す；被験物質１．ａｒＮＯＸ対照ゲルＡ／チョウセンゴミシ（封入せず）、フサザキスイセン抽出物、およびサリシン（緑ラベル）ＪＺ ９１−３９、ならびに被験物質３．ａｒＮＯＸ対照ゲルＢ／チョウセンゴミシ（封入せず）、フサザキスイセン抽出物、およびサリシン（黄ラベル）ＴＬ−９０−５８（グリセリンを含有）は、粗い皺の外観を改善した。被験物質または対照のいずれについても、客観的および主観的な刺激性において有意の増大はなかった。
【０１０６】
[0136] 皮膚のルミナンス測定は、被験物質１．ａｒＮＯＸ対照ゲルＡ／チョウセンゴミシ（封入せず）、フサザキスイセン抽出物、およびサリシン（緑ラベル）ＪＺ ９１−３９のみが、色素沈着していない部位で８週目にｂ＊値において有意の低下を生じたことを示す。色素沈着病変部において得た皮膚ルミナンスｂ＊値は、病変部の黒ずみの軽減において、被験物質１．ａｒＮＯＸ対照ゲルＡ／チョウセンゴミシ（封入せず）、フサザキスイセン抽出物、およびサリシン（緑色）ＪＺ ９１−３９が、被験物質２．ａｒＮＯＸ対照ゲルＡ／チョウセンゴミシ（青色）ＴＬ−９０−５９、ならびに被験物質３．ａｒＮＯＸ対照ゲルＢ／チョウセンゴミシ（封入せず）、フサザキスイセン抽出物、およびサリシン（黄色）ＴＬ−９０−５８（グリセリンを含有）より優れていたことを示す。皮膚表面の水和度の測定は、すべての被験物質および対照が４週目に皮膚の水和度を有意に改善したことを示す。粘弾性測定は、被験物質と対照の間で有意差を示さなかった。
【０１０７】
[0137] インフォームドコンセント
[0138] ２１ ＣＦＲ ５０．２５（Ｃｏｄｅ ｏｆ Ｆｅｄｅｒａｌ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｓ）に従った書面によるインフォームドコンセントを各被験者から試験登録前に得た。試験に参加する各被験者についての署名付きインフォームドコンセント同意書原本を試験ファイルに保存する。各被験者は同意書の署名付きコピーを受け取った（書式見本についてはＡｐｐｅｎｄｉｘ ＩＶを参照されたい）。
【０１０８】
[0139] 漸減（Ａｔｔｒｉｔｉｏｎ）
[0140] ２３人の被験者が試験を完了した。２６人の被験者が試験参加のために加入し、３人の被験者は下記の理由で試験参加を中断した：
・任意中断／有害事象：被験者０２１
・予定した来院（１回以上）に不参加：被験者００４および０２６
・任意中断／予定調整不一致：０２０、０２２、０２９
・予定した来院に欠席：００９、０３４
・検査員による判断：０１０
[0141] 被験者の人口統計
[0142] ２３人の女性被験者が試験を完了した。表２は、すべての被験者についての人口統計情報（年齢、人種、およびＦｉｔｚｐａｔｒｉｃｋ皮膚分類）のまとめを示す。人種、およびＦｉｔｚｐａｔｒｉｃｋ皮膚タイプについては、各カテゴリーの被験者の人数を、かっこ内の被験者集団に対するパーセントと共に挙げる。人種情報は各被験者の資格および健康状態に関する質問から得られた。
【０１０９】
【表２】
【０１１０】
[0143] Ｆｉｔｚｐａｔｒｉｃｋ皮膚分類は、太陽光線被曝を受けていない冬季後の最初の３０〜４５分間の太陽光線被曝に対する、保護されていない状態の皮膚の応答に基づく。皮膚タイプのカテゴリーは下記のとおりである：
タイプＩ．常に容易に熱傷を生じる（ｂｕｒｎ）；決して褐変しない；
タイプＩＩ．常に容易に熱傷を生じる；わずかに褐変する；
タイプＩＩＩ．中等度に熱傷を生じる；次第に褐変する；
タイプＩＶ．軽度に熱傷を生じる；常に良好に褐変する；
タイプＶ．稀に熱傷を生じる；十分に褐変する；
タイプＶＩ．決して熱傷を生じない；強く色素沈着する。
【０１１１】
[0144] Ｆｉｔｚｐａｔｒｉｃｋは、口の周り（ｐｅｒｉｏｒａｌ）および目の周り（ｐｅｒｉｏｒｂｉｔａｌ、ｐｅｒｉｏｃｕｌａｒ）の皺（皺皮症（ｒｈｙｔｉｄｏｓｉｓ））の程度を評点するのに有用な別の分類システムを報告した：
クラスＩ−細かい皺；
クラスＩＩ−細かい〜中等度の深さの皺、および中等度の本数の皺；
クラスＩＩＩ−細かい〜深い（粗い）皺、多数本の皺、および余分なひだ（ｆｏｌｄ）が存在する可能性。
【０１１２】
[0145] 実施例７
手順および方法
[0146] 試験の開始前に、予定被験者に３日間のウォッシュアウト期間に参加させ、その間に顔用モイスチャライザーを顔に適用しなかった。
【０１１３】
[0147] ベースライン（来院１）で、予定被験者はクリニック到着の少なくとも３０分前に顔を洗ってすべてのメーキャップを除去した。資格を考慮するために、予定被験者はそれらの日常のスキンケア計画製品を持参した。被験者は資格および健康状態に関する質問表に記入し、インフォームドコンセント同意書、秘密保持同意書、および写真公開書式に署名した。
【０１１４】
[0148] 被験者は下記の臨床グレーディング手順に参加した：
[0149] 有効性/性能パラメーター
[0150] 被験者を顔の右側および左側において下記のパラメーターにつき臨床グレーディングした：
細かい皺−目の周りの領域
粗い皺−目の周りの領域
皮膚のテキスチャー（視覚的外観）−頬
触覚による粗さ−頬
全体的な変色
全体的な皮膚の輝き。
【０１１５】
[0151] 有効性/性能パラメーターのグレーディング結果を下記の１〜１０点スケールで記録した：
１＝陽性（１〜３＝良好／望ましい）
１０＝陰性（８〜１０＝望ましくない）
必要に応じて半点評点を採用した。
【０１１６】
[0152] 被験者は下記の軽度ないし中等度の評点をもつことによって、継続した試験参加の資格があると判定された：目の周りの粗すじについて３〜７の評点；目の周りの細かい皺について２〜５の評点；ならびに顔の右側および左側の過色素沈着について２〜７の評点。
【０１１７】
[0153] 刺激性／安全性パラメーターグレーディング
[0154] 被験者を、顔の右側または左側において客観的パラメーター（紅斑、浮腫、スケーリング）および主観的パラメーター（灼熱感、刺痛、痒み、締付け感、疼き）につき臨床グレーディングした。刺激性グレーディングの結果を、下記のスケールを用いて記録した：
０＝無し
１＝軽度
２＝中等度
３＝重度
必要に応じて半点評点を採用した。
資格があると判定された被験者は、以後の計測器計測に参加した。
【０１１８】
[0155] 実施例８：皮膚表面の水和度の測定
[0156] 皮膚表面の水和度の測定を、Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ（登録商標）ＣＭ ８２５（Ｃｏｕｒａｇｅ＋Ｋｈａｚａｋａ、ドイツ）水和度分析計を用いて行なった。測定は三重に実施され、角質層の含水量を定量するために左および右の頬の下中央部について行なわれた。Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ（登録商標）の測定原理は、誘電媒体のキャパシタンス測定に基づく。誘電定数の何らかの変化は、皮膚表面の水和度の変動が精密測定コンデンサーのキャパシタンスを変化させることによる。これらの測定は、皮膚の水和度レベルのごくわずかな変化をきわめて高い再現性で検出することができる。読みは皮膚の電気的キャパシタンスに正比例し、皮膚がより水和されるのに伴って測定値が上昇する。
【０１１９】
[0157] 実施例９：皮膚のルミナンス測定
[0158] 皮膚のルミナンス測定を、Ｃｈｒｏｍａ Ｍｅｔｅｒ ＣＲ４００（Ｋｏｎｉｃａ−Ｍｉｎｏｌｔａ、日本）皮膚ルミナンス分析計を用いて三重に実施し、顔の右側および左側において色素沈着病変部（検査員が選択）について行なった。Ｃｈｒｏｍａ Ｍｅｔｅｒは、皮膚の色／色調（ｔｏｎｅ）の変化を計測器により（かつ客観的に）評価する。追加のＣｈｒｏｍａ Ｍｅｔｅｒ測定を、顔の片側の色素沈着していない（正常な）領域について行なった。Ｃｈｒｏｍａ Ｍｅｔｅｒは、標的色の色差を設定および検量することが可能な高感度の比色計である。Ｃｈｒｏｍａ Ｍｅｔｅｒは、選択した領域を容易に独立して分析するための着脱式のヘッドを備えている。下記の数値を記録した：
Ｌ＊：黒色から白色までのグレースケール上での相対的輝度（ｂｒｉｇｈｔｎｅｓｓ）を表示する；皮膚の輝きおよび明かるさが強くなるのに伴って数値が上昇する
ａ＊：赤色から緑色までの範囲の色相を表示する；皮膚の血管分布が改善され、血流が増加し、皮膚の色調（ｔｏｎｅ）が改善されるのに伴って数値が上昇する
ｂ＊：青色から黄色までの範囲の色相を表示する；皮膚が明かるくなるのに伴って数値が一般に低下する
追加の皮膚ルミナンス測定を、各被験者について顔の片側の色素沈着していない（正常な）領域について行なった。
【０１２０】
[0159] 実施例１０：皮膚の粘弾性測定
[0160] １回の粘弾性測定を、Ｃｕｔｏｍｅｔｅｒ（登録商標）ＳＥＭ ５７５（Ｃｏｕｒａｇｅ＋Ｋｈａｚａｋａ、ドイツ）粘弾性計測器を用いて行なった。測定は、皮膚の粘弾性を評価するために各被験者の右および左の頬の中央部について行なわれた。測定原理は吸引に基づく。器具内に陰圧を形成し、皮膚をプローブの開口内へ引き込む。プローブ内で、非接触式光学測定システムにより侵入深さを測定する。皮膚の侵入深さにより光の強度が変動する。陰圧による吸引に対する皮膚の抵抗性（硬さ、および皮膚が元の位置に戻る能力（弾力性、ｅｌａｓｔｉｃｉｔｙ））が、各測定の終了時に曲線として計測器上に表示される。８ミリメートル（ｍｍ）のプローブを通して３００ミリバールの陰圧を付加し、そして開放した。吸引の付与および開放に際して皮膚がプローブに出入りする動きを記録し、反発性（ｒｅｓｉｌｉｅｎｃｙ）および伸展性（ｅｘｔｅｎｓｉｂｉｌｉｔｙ）を計算した。
【０１２１】
[0161] 被験者をランダム化方式に従って下記の被験物質グループのひとつに帰属させた：
対照
Ａ．ａｒＮＯＸ対照ゲルＡ（無ラベル）ＡＢ−８７−０４Ａ
Ｂ．ａｒＮＯＸ対照ゲルＢ（赤ラベル）ＪＺ−９１−４０（グリセリンを含有）
被験物質
１．ａｒＮＯＸ対照ゲルＡ／チョウセンゴミシ（Ｓｃｈｉｚａｎｄｒａ）（封入せず）、フサザキスイセン（Ｎ．ｔａｚｅｔｔａ）抽出物、およびサリシン（緑ラベル）ＪＺ ９１−３９
２．ａｒＮＯＸ対照ゲルＡ／チョウセンゴミシ（青ラベル）ＴＬ−９０−５９
３．ａｒＮＯＸ対照ゲルＢ／チョウセンゴミシ（封入せず）、フサザキスイセン抽出物、およびサリシン（黄ラベル）ＴＬ−９０−５８（グリセリンを含有）
４．ａｒＮＯＸ対照ゲルＢ／サリシン（半分は黄色、半分は黒色のラベル）ＫＫ−８９−４９（グリセリンを含有）。
【０１２２】
[0162] 被験者に、帰属させた被験物質を顔の右側または左側に適用し、かつ帰属させた対照を顔の反対側に、下記の使用指示に従って適用するように指示した：
１日２回、朝と夕方に、顔を洗った後に薄い層を適用して下さい
被験物質を適用した後にモイスチャライザーおよびメーキャップ製品を適用してかまいません。
【０１２３】
[0163] 被験者に使用指示書、以後の来院のカレンダー、ならびに被験物質の適用時間およびコメントを記録するための日誌を与えた。
[0164] 被験者は４週目（来院２）および８週目（来院３）に、各来院の少なくとも３０分前に顔を洗ってすべてのメーキャップを除去して再来院した。日誌および被験物質をクリニックに戻し、使用コンプライアンスについて検査を受けた；新しい日誌（および必要ならば被験物質）を４週目に配布した。被験者は、ベースライン手順に従って臨床グレーディングおよびバイオ計測器測定（Ｃｈｒｏｍａ Ｍｅｔｅｒ、Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ、Ｃｕｔｏｍｅｔｅｒ）を受けた。被験者は、顔の右側および左側の皮膚状態における被験物質の寄与、耐容性および改善に関する被験者の皮膚変化評価質問表および被験者の評価質問表にも記入した。
【０１２４】
[0165] 各組成物の処方を下記の表３に提示する。
【０１２５】
【表３−１】
【０１２６】
【表３−２】
【０１２７】
【表３−３】
【０１２８】
[0166] 被験者に使用指示書、以後の来院のカレンダー、ならびに被験物質の適用時間およびコメントを記録するための日誌を与えた。
[0167] 被験者は４週目（来院２）および８週目（来院３）に再来院した。被験者は、各来院について検査施設に来る少なくとも３０分前に顔を洗ってメーキャップを除去した。被験者は、使用コンプライアンス検査のために自分の日誌および被験物質も各来院時に持参した。被験者は、各来院時に下記の手順に参加した：
有効性／性能パラメーターグレーディング
刺激性／安全性パラメーターグレーディング
皮膚表面水和度（Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ（登録商標））測定
皮膚ルミネンス（Ｃｈｒｏｍａ Ｍｅｔｅｒ）測定
皮膚粘弾性（Ｃｕｔｏｍｅｔｅｒ（登録商標））測定
被験者は、顔の右側および左側の皮膚の状態パラメーターにおける被験物質の寄与、耐容性および改善に関する被験者の皮膚変化評価質問表および被験者の評価質問表にも記入した。
【０１２９】
[0168] 各来院時に日誌をクリニックに戻し、来院２に新しい日誌を配布された。被験者は試験の終了時に被験物質ユニットをクリニックに戻した。コンプライアンスを確実にするために、臨床担当者が日誌を調べ、被験物質ユニットを各来院時に秤量した。
【０１３０】
[0169] 実施例１１：生物学的統計およびデータ管理
[0170] ４週目（来院２）および８週目（来院３）の臨床グレーディングおよび計測器測定についての平均値を、対ｔ−検定により有意性レベルｐ≦０．０５で平均ベースライン（来院１）値と統計的に比較した。ベースラインからの平均変化率パーセントおよび改善発生率をすべての性状について計算した。被験物質と対照の間で、対比較を伴う分散分析法（ＡＮＯＶＡ）を用いて比較を行なった（ＦｉｓｈｅｒのＬＳＤ）。
【０１３１】
[0171] 被験者が４週目および８週目に記入した自己評価質問表を表にまとめ、トップボックス分析を実施した。
[0172] 実施例１２：局所適用データ
[0173] ベースライン（来院１）、４週目（来院２）および８週目（来院３）に、被験者は顔について実施する臨床グレーディングおよびバイオ計測器測定（Ｃｈｒｏｍａ Ｍｅｔｅｒ、Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ、Ｃｕｔｏｍｅｔｅｒ）を受けた。表４は、各被験物質および対照についての結果を示す。４週目および８週目の平均値を、有意差について平均ベースライン値と統計的に比較する。ベースラインからの平均変化率パーセントをかっこ内に挙げる。
【０１３２】
【表４−１】
【０１３３】
【表４−２】
【０１３４】
【表４−３】
【０１３５】
【表４−４】
【０１３６】
【表４−５】
【０１３７】
【表４−６】
【０１３８】
[0174] 実施例１３：ベースラインからの平均変化
[0175] 表５は、臨床グレーディングおよび計測器試験についてのベースラインからの平均変化の比較を示す。
【０１３９】
【表５−１】
【０１４０】
【表５−２】
【０１４１】
[0176] 実施例１４：グループ間の比較
[0177] ベースラインからの平均変化に基づく比較を、処置間で（被験物質と対照）、対比較を伴う分散分析法（ＡＮＯＶＡ）を用いて比較を行なった（ＦｉｓｈｅｒのＬＳＤ）。表６に示す下記のランキングは、実験グループ間で統計的に有意の（ｐ≦０．０５）差を示す。最大レベルから最小レベルの改善の順でランキングを示し、有意差の無いパラメーターは挙げていない。ベースラインからの平均変化を各処置の下に挙げる。
【０１４２】
【表６】
【０１４３】
[0178] 実施例１５：計測器測定についての統計的比較の結果
[0179] 被験者を、細かいすじ（ｌｉｎｅ）（目の周り）、粗い皺／皮膚のひだ（ｆｏｌｄ）（目の周り）、触覚による粗さ（頬）、皮膚の張り（ｔｏｎｅ）、全体的な変色／過色素沈着、ならびに顔の右側および左側の全体的な皮膚の輝き（ｒａｄｉａｎｃｅ）についてグレーディングした。この臨床グレーディングの結果により、ベースラインと比較して表７に示す下記の有意な改善が明らかになった。
【０１４４】
【表７】
【０１４５】
[0180] 実施例１６：刺激性／安全性
[0181] 被験者を、顔の右側および左側において紅斑、浮腫、スケーリング、灼熱感、刺痛、痒み、締付け感、疼きにつき臨床グレーディングした。
【０１４６】
[0182] 臨床グレーディングの結果により、例えば表８に示すようにベースラインと比較して有意の改善が明らかになった。
【０１４７】
【表８】
【０１４８】
[0183] 実施例１７：皮膚ルミネンス測定
[0184] 皮膚のルミナンスを、皮膚ルミナンス分析計（Ｃｈｒｏｍａ Ｍｅｔｅｒ ＣＲ４００、Ｋｏｎｉｃａ−Ｍｉｎｏｌｔａ、日本）を用いて三重に測定した。皮膚の色／色調（ｔｏｎｅ）の変化を評価するために、顔の右側および左側において色素沈着病変部（検査員が選択）にわたって測定を行なった。追加の皮膚ルミナンス測定を、顔の片側の色素沈着していない（正常な）領域について行なった。
【０１４９】
[0185] 皮膚のルミナンス測定の結果を表９に示し、例えばベースラインと比較して有意差が明らかになった。
【０１５０】
【表９】
【０１５１】
[0186] 実施例１８：皮膚の表面の水和度測定
[0187] 皮膚表面の水和度の測定を、三重に行なった（Ｃｏｒｎｅｏｍｅｔｅｒ ＣＭ ８２５（Ｃｏｕｒａｇｅ＋Ｋｈａｚａｋａ、ドイツ）。測定は、角質層の含水量を定量するために右および左の頬の下中央部について行なわれた。
【０１５２】
[0188] 皮膚表面の水和度の測定結果により、４週目の各処置について、ベースラインと比較して湿潤化における有意の増大（改善）が明らかになった。８週目には有意差はみられなかった。
【０１５３】
[0189] 実施例１９：皮膚の粘弾性測定
[0190] １回の粘弾性測定を、Ｃｕｔｏｍｅｔｅｒ ＳＥＭ ５７５（Ｃｏｕｒａｇｅ＋Ｋｈａｚａｋａ、ドイツ）を用いて行なった。測定は、皮膚の粘弾性を評価するために各被験者の右および左の頬の中央部について行なわれた。
【０１５４】
[0191] 図１０に示す粘弾性測定結果により、例えばベースラインと比較して下記の有意差が明らかになった。
【０１５５】
【表１０】
【０１５６】
[0192] 実施例２０：全体的な結論
[0193] このパイロット試験の結果は、すべての被験物質および対照が、細かいすじ、触覚による粗さ、皮膚の張り（ｔｏｎｅ）、全体的な変色／過色素沈着において、ベースラインと比較して有意の改善をもたらしたことを示す。特に注目すべきことに、被験物質１．ａｒＮＯＸ対照ゲルＡ／チョウセンゴミシ（封入せず）、フサザキスイセン抽出物、およびサリシン（緑ラベル）ＪＺ ９１−３９、ならびに被験物質３．ａｒＮＯＸ対照ゲルＢ／チョウセンゴミシ（封入せず）、フサザキスイセン抽出物、およびサリシン（黄ラベル）ＴＬ−９０−５８（グリセリンを含有）が、粗い皺に対してすら陽性効果をもち、４週目（被験物質３、黄ラベル）および８週目（被験物質１、緑ラベル、および被験物質３、黄ラベル）において有意の改善を示した。いずれの被験物質および対照についても客観的および主観的な刺激性において有意の増大がなかった。
【０１５７】
[0194] 皮膚のルミナンス測定は、被験物質１．ａｒＮＯＸ対照ゲルＡ／チョウセンゴミシ（封入せず）、フサザキスイセン抽出物、およびサリシン（緑ラベル）ＪＺ ９１−３９のみが、色素沈着していない部位で８週目にｂ＊値において有意の低下を生じたことを示す。色素沈着病変部において得た皮膚ルミナンスｂ＊値は、病変部の黒ずみの軽減において、被験物質１．ａｒＮＯＸ対照ゲルＡ／チョウセンゴミシ（封入せず）、フサザキスイセン抽出物、およびサリシン（緑ラベル）ＪＺ ９１−３９が、被験物質２．ａｒＮＯＸ対照ゲルＡ／チョウセンゴミシ（青ラベル）ＴＬ−９０−５９、ならびに被験物質３．ａｒＮＯＸ対照ゲルＢ／チョウセンゴミシ（封入せず）、フサザキスイセン抽出物、およびサリシン（黄ラベル）ＴＬ−９０−５８（グリセリンを含有）より優れていたことを示す。
【０１５８】
[0195] 皮膚表面の水和度の測定は、すべての被験物質および対照が４週目に皮膚の水和度を有意に改善したことを示す。
[0196] 皮膚の粘弾性測定は、被験物質と対照の間で何ら有意差を示さなかった。
【０１５９】
[0197] 被験物質と対照の間のＡＮＯＶＡ比較は、４週目の全体的な変色改善において、被験物質１（ａｒＮＯＸ対照ゲルＡ／チョウセンゴミシ（封入せず）、フサザキスイセン抽出物、およびサリシン（緑ラベル）ＪＺ ９１−３９）および被験物質２（ａｒＮＯＸ対照ゲルＡ／チョウセンゴミシ（青ラベル）ＴＬ−９０−５９）が、対照Ａ（ａｒＮＯＸ対照ゲルＡ（無ラベル）ＡＢ−８７−０４Ａ）および対照Ｂ（ａｒＮＯＸ対照ゲルＢ（赤ラベル）ＪＺ−９１−４０（グリセリンを含有））より優れていたことを示す。さらに被験物質１および２は、８週目に対照Ｂ（ａｒＮＯＸ対照ゲルＢ（赤ラベル）ＪＺ−９１−４０（グリセリンを含有））より優れていた。８週目の外観改善において、被験物質２（ａｒＮＯＸ対照ゲルＡ／チョウセンゴミシ（青ラベル）ＴＬ−９０−５９）、被験物質３（ａｒＮＯＸ対照ゲルＢ／チョウセンゴミシ（封入せず）、フサザキスイセン抽出物、およびサリシン（黄ラベル）ＴＬ−９０−５８（グリセリンを含有））、および被験物質４（ａｒＮＯＸ対照ゲルＢ／サリシン（半分は黄色、半分は黒色のラベル）ＫＫ−８９−４９（グリセリンを含有））は、対照Ａ（ａｒＮＯＸ対照ゲルＡ（無ラベル）ＡＢ−８７−０４Ａ）および対照Ｂ（ａｒＮＯＸ対照ゲルＢ（赤ラベル）ＪＺ−９１−４０（グリセリンを含有））より優れていた。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
有効量の少なくとも１種類のａｒＮＯＸ阻害物質を含み、該ａｒＮＯＸ阻害物質が、老化作用を低下させるのに有効であるナラクチンである、老化作用を改善するために有用な局所組成物。
【請求項２】
ナラクチンが植物抽出物に由来する、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
ナラクチンがサリチレートまたはその誘導体である、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
ナラクチンが、フサザキスイセン、ヤナギ、トウモロコシ、オニタビラコ、ポプラ、ガマズミ、アスペルギルス、ウリノキ、カバ、ミシマサイコ、コルヒクム、タカトウダイグサ、シモツケソウ、クチナシ、ムラサキ、タバコまたはヤドリギから精製される、請求項２に記載の組成物。
【請求項５】
サリチレートが、サリシン、サリチル酸、サリチルヒドロキサメートまたはその組合わせである、請求項３に記載の組成物。
【請求項６】
化粧用または医薬用として許容できるキャリヤーをさらに含む、請求項１に記載の局所組成物。
【請求項７】
１種類より多いａｒＮＯＸ阻害物質が存在し、これらの１種類より多いａｒＮＯＸ阻害物質が植物抽出物の形である、請求項１に記載の局所組成物。
【請求項８】
植物が、ブロッコリ、シイタケ、コリウス、ローズマリー、ハス（ｌｏｔｕｓ）、アーティチョーク（ａｒｔｉｃｈｏｋｅ）、シーローズ（ｓｅａ ｒｏｓｅ）、タンジェリン（ｔａｎｇｅｒｉｎｅ）、メマツヨイグサ（Ｏｅｎｏｔｈｅｒａ ｂｉｅｎｎｉｓ）、アスタキサンチン（ａｓｔａｘａｎｔｈｉｎ）、レッドオレンジ（ｒｅｄ ｏｒａｎｇｅ）、チョウセンゴミシ（Ｓｃｈｉｓａｎｄｒａ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）、ロニセラ（Ｌｏｎｉｃｅｒａ）、ソバ属（Ｆａｇｏｐｙｒｕｍ）、ニンジン（ｃａｒｒｏｔ）、フサザキスイセン（Ｎａｒｃｉｓｓｕｓ ｔａｚｅｔｔａ）、オリーブ（ｏｌｉｖｅ）、ヤナギ（ｗｉｌｌｏｗ）、エンバク（ｏａｔ）またはトウモロコシ（ｍａｉｚｅ）から選択される、請求項７に記載の局所組成物。
【請求項９】
ロニセラが、ロニセラ・ジャポニカまたはロニセラ・カプリフォリウムである、請求項８に記載の局所組成物。
【請求項１０】
１種類より多いａｒＮＯＸ阻害物質がβ−カロテンまたはアスタキサンチンである、請求項７に記載の局所組成物。
【請求項１１】
ナラクチンが他のａｒＮＯＸ阻害物質の作用を増強する、請求項７に記載の局所組成物。
【請求項１２】
クリーム、乳液、ローション、ゲル、脂質もしくはポリマーのマイクロスフェアもしくはナノスフェアもしくはベシクルの懸濁液、石鹸、シャンプー、またはサンスクリーンとして投与される、請求項１に記載の局所組成物。
【請求項１３】
老化作用が、すじ、皺、過色素沈着症、脱水、弾力性喪失、血管腫、乾燥、痒み、末梢血管拡張症、光線性紫斑病、脂漏性角化症、水分不足、コラーゲン減少、または光線性角化症を含む、請求項１に記載の局所組成物。
【請求項１４】
ａｒＮＯＸ阻害物質が約５μｇ／ｍｌ〜約５００μｇ／ｍｌの濃度で付与される、請求項１に記載の局所組成物。
【請求項１５】
老化関連イソ型ＮＡＤＨオキシダーゼによる反応性酸素種の発生を阻害し、老化作用を改善する方法であって、
サリシン、サリチル酸、サリチルヒドロキサメートのうち少なくとも１種類を含む療法有効量の組成物を、その必要がある患者に、老化関連イソ型ＮＡＤＨオキシダーゼによる反応性酸素種の発生が阻害されるように投与することを含み、老化作用が改善される、上記方法。
【請求項１６】
ブロッコリ、シイタケ、コリウス、ローズマリー、ハス、アーティチョーク、シーローズ、タンジェリン、メマツヨイグサ、アスタキサンチン、レッドオレンジ、チョウセンゴミシ、ロニセラ、ソバ属、ニンジン、フサザキスイセン、オリーブ、ヤナギ、エンバクまたはトウモロコシのうち少なくとも１種類からの抽出物をさらに含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
組成物がクリーム、乳液、ローション、ゲル、脂質もしくはポリマーのマイクロスフェアもしくはナノスフェアもしくはベシクルの懸濁液、石鹸、シャンプー、またはサンスクリーンとして適用される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
老化作用が、すじ、皺、過色素沈着症、脱水、弾力性喪失、血管腫、乾燥、痒み、末梢血管拡張症、光線性紫斑病、脂漏性角化症、水分不足、コラーゲン減少、または光線性角化症を含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１９】
ａｒＮＯＸを阻害するのに十分な有効量のナラクチンを含む化粧用組成物を皮膚に適用することを含み、ａｒＮＯＸ仲介による老化作用の少なくとも１つが阻害される、老化作用を改善するための化粧方法。
【請求項２０】
ナラクチンがサリチレートである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
サリチレートが、サリシン、サリチルヒドロキサメートまたはサリチル酸である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
化粧用組成物がさらに、ニンジン抽出物、オリーブ抽出物、ブロッコリ抽出物、シイタケ抽出物、コリウス抽出物、ローズマリー抽出物、ハス抽出物、アーティチョーク抽出物、シーローズ抽出物、タンジェリン抽出物、メマツヨイグサ抽出物、レッドオレンジ抽出物、チョウセンゴミシ抽出物、ロニセラ抽出物、ソバ属抽出物、ヤナギ抽出物、トウモロコシスティール、エンバクスティールまたはフサザキスイセン抽出物を含む植物抽出物を含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
ナラクチンを化粧用として許容できるキャリヤーと共に付与する、請求項１９に記載の化粧方法。
【請求項２４】
老化作用が、すじ、皺、過色素沈着症、脱水、弾力性喪失、血管腫、乾燥、痒み、末梢血管拡張症、光線性紫斑病、脂漏性角化症、水分不足、コラーゲン減少、または光線性角化症を含む、請求項１９に記載の化粧方法。
【請求項２５】
ナラクチンを少なくとも１日１回適用する、請求項１９に記載の化粧方法。
【請求項２６】
ナラクチンを化粧品中に約５μｇ／ｍｌ〜約５００μｇ／ｍｌの濃度で付与する、請求項１に記載の化粧方法。
【請求項２７】
組成物をクリーム、乳液、ローション、ゲル、脂質もしくはポリマーのマイクロスフェアもしくはナノスフェアもしくはベシクルの懸濁液、石鹸、シャンプー、またはサンスクリーンとして投与する、請求項１９に記載の化粧方法。
【請求項２８】
少なくとも１種類のナラクチン；および
使用上のインストラクション；
を含む、老化作用を改善するのに有用な化粧品を適用するためのキット。
【請求項２９】
少なくとも１種類のａｒＮＯＸ阻害性植物抽出物のためのキャリヤーとして適切な化粧用調製物をさらに含む、請求項２８に記載のキット。
【請求項１】
有効量の少なくとも１種類のａｒＮＯＸ阻害物質を含み、該ａｒＮＯＸ阻害物質が、老化作用を低下させるのに有効であるナラクチンである、老化作用を改善するために有用な局所組成物。
【請求項２】
ナラクチンが植物抽出物に由来する、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
ナラクチンがサリチレートまたはその誘導体である、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
ナラクチンが、フサザキスイセン、ヤナギ、トウモロコシ、オニタビラコ、ポプラ、ガマズミ、アスペルギルス、ウリノキ、カバ、ミシマサイコ、コルヒクム、タカトウダイグサ、シモツケソウ、クチナシ、ムラサキ、タバコまたはヤドリギから精製される、請求項２に記載の組成物。
【請求項５】
サリチレートが、サリシン、サリチル酸、サリチルヒドロキサメートまたはその組合わせである、請求項３に記載の組成物。
【請求項６】
化粧用または医薬用として許容できるキャリヤーをさらに含む、請求項１に記載の局所組成物。
【請求項７】
１種類より多いａｒＮＯＸ阻害物質が存在し、これらの１種類より多いａｒＮＯＸ阻害物質が植物抽出物の形である、請求項１に記載の局所組成物。
【請求項８】
植物が、ブロッコリ、シイタケ、コリウス、ローズマリー、ハス（ｌｏｔｕｓ）、アーティチョーク（ａｒｔｉｃｈｏｋｅ）、シーローズ（ｓｅａ ｒｏｓｅ）、タンジェリン（ｔａｎｇｅｒｉｎｅ）、メマツヨイグサ（Ｏｅｎｏｔｈｅｒａ ｂｉｅｎｎｉｓ）、アスタキサンチン（ａｓｔａｘａｎｔｈｉｎ）、レッドオレンジ（ｒｅｄ ｏｒａｎｇｅ）、チョウセンゴミシ（Ｓｃｈｉｓａｎｄｒａ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）、ロニセラ（Ｌｏｎｉｃｅｒａ）、ソバ属（Ｆａｇｏｐｙｒｕｍ）、ニンジン（ｃａｒｒｏｔ）、フサザキスイセン（Ｎａｒｃｉｓｓｕｓ ｔａｚｅｔｔａ）、オリーブ（ｏｌｉｖｅ）、ヤナギ（ｗｉｌｌｏｗ）、エンバク（ｏａｔ）またはトウモロコシ（ｍａｉｚｅ）から選択される、請求項７に記載の局所組成物。
【請求項９】
ロニセラが、ロニセラ・ジャポニカまたはロニセラ・カプリフォリウムである、請求項８に記載の局所組成物。
【請求項１０】
１種類より多いａｒＮＯＸ阻害物質がβ−カロテンまたはアスタキサンチンである、請求項７に記載の局所組成物。
【請求項１１】
ナラクチンが他のａｒＮＯＸ阻害物質の作用を増強する、請求項７に記載の局所組成物。
【請求項１２】
クリーム、乳液、ローション、ゲル、脂質もしくはポリマーのマイクロスフェアもしくはナノスフェアもしくはベシクルの懸濁液、石鹸、シャンプー、またはサンスクリーンとして投与される、請求項１に記載の局所組成物。
【請求項１３】
老化作用が、すじ、皺、過色素沈着症、脱水、弾力性喪失、血管腫、乾燥、痒み、末梢血管拡張症、光線性紫斑病、脂漏性角化症、水分不足、コラーゲン減少、または光線性角化症を含む、請求項１に記載の局所組成物。
【請求項１４】
ａｒＮＯＸ阻害物質が約５μｇ／ｍｌ〜約５００μｇ／ｍｌの濃度で付与される、請求項１に記載の局所組成物。
【請求項１５】
老化関連イソ型ＮＡＤＨオキシダーゼによる反応性酸素種の発生を阻害し、老化作用を改善する方法であって、
サリシン、サリチル酸、サリチルヒドロキサメートのうち少なくとも１種類を含む療法有効量の組成物を、その必要がある患者に、老化関連イソ型ＮＡＤＨオキシダーゼによる反応性酸素種の発生が阻害されるように投与することを含み、老化作用が改善される、上記方法。
【請求項１６】
ブロッコリ、シイタケ、コリウス、ローズマリー、ハス、アーティチョーク、シーローズ、タンジェリン、メマツヨイグサ、アスタキサンチン、レッドオレンジ、チョウセンゴミシ、ロニセラ、ソバ属、ニンジン、フサザキスイセン、オリーブ、ヤナギ、エンバクまたはトウモロコシのうち少なくとも１種類からの抽出物をさらに含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
組成物がクリーム、乳液、ローション、ゲル、脂質もしくはポリマーのマイクロスフェアもしくはナノスフェアもしくはベシクルの懸濁液、石鹸、シャンプー、またはサンスクリーンとして適用される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
老化作用が、すじ、皺、過色素沈着症、脱水、弾力性喪失、血管腫、乾燥、痒み、末梢血管拡張症、光線性紫斑病、脂漏性角化症、水分不足、コラーゲン減少、または光線性角化症を含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１９】
ａｒＮＯＸを阻害するのに十分な有効量のナラクチンを含む化粧用組成物を皮膚に適用することを含み、ａｒＮＯＸ仲介による老化作用の少なくとも１つが阻害される、老化作用を改善するための化粧方法。
【請求項２０】
ナラクチンがサリチレートである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
サリチレートが、サリシン、サリチルヒドロキサメートまたはサリチル酸である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
化粧用組成物がさらに、ニンジン抽出物、オリーブ抽出物、ブロッコリ抽出物、シイタケ抽出物、コリウス抽出物、ローズマリー抽出物、ハス抽出物、アーティチョーク抽出物、シーローズ抽出物、タンジェリン抽出物、メマツヨイグサ抽出物、レッドオレンジ抽出物、チョウセンゴミシ抽出物、ロニセラ抽出物、ソバ属抽出物、ヤナギ抽出物、トウモロコシスティール、エンバクスティールまたはフサザキスイセン抽出物を含む植物抽出物を含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
ナラクチンを化粧用として許容できるキャリヤーと共に付与する、請求項１９に記載の化粧方法。
【請求項２４】
老化作用が、すじ、皺、過色素沈着症、脱水、弾力性喪失、血管腫、乾燥、痒み、末梢血管拡張症、光線性紫斑病、脂漏性角化症、水分不足、コラーゲン減少、または光線性角化症を含む、請求項１９に記載の化粧方法。
【請求項２５】
ナラクチンを少なくとも１日１回適用する、請求項１９に記載の化粧方法。
【請求項２６】
ナラクチンを化粧品中に約５μｇ／ｍｌ〜約５００μｇ／ｍｌの濃度で付与する、請求項１に記載の化粧方法。
【請求項２７】
組成物をクリーム、乳液、ローション、ゲル、脂質もしくはポリマーのマイクロスフェアもしくはナノスフェアもしくはベシクルの懸濁液、石鹸、シャンプー、またはサンスクリーンとして投与する、請求項１９に記載の化粧方法。
【請求項２８】
少なくとも１種類のナラクチン；および
使用上のインストラクション；
を含む、老化作用を改善するのに有用な化粧品を適用するためのキット。
【請求項２９】
少なくとも１種類のａｒＮＯＸ阻害性植物抽出物のためのキャリヤーとして適切な化粧用調製物をさらに含む、請求項２８に記載のキット。
【図１】
【図４】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図２】
【図３】
【図５】
【図４】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図２】
【図３】
【図５】
【公表番号】特表２０１１−５１５４６６（Ｐ２０１１−５１５４６６Ａ）
【公表日】平成２３年５月１９日（２０１１．５．１９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５０１７６９（Ｐ２０１１−５０１７６９）
【出願日】平成２０年３月２８日（２００８．３．２８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０５８６８３
【国際公開番号】ＷＯ２００９／１２０２１４
【国際公開日】平成２１年１０月１日（２００９．１０．１）
【出願人】（５０４４０３２８６）ニュースキン インターナショナル インコーポレイテッド (5)
【氏名又は名称原語表記】ＮｕＳｋｉｎ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．
【出願人】（５０７２９０２９４）ノックス テクノロジーズ インコーポレイテッド (3)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２３年５月１９日（２０１１．５．１９）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年３月２８日（２００８．３．２８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０５８６８３
【国際公開番号】ＷＯ２００９／１２０２１４
【国際公開日】平成２１年１０月１日（２００９．１０．１）
【出願人】（５０４４０３２８６）ニュースキン インターナショナル インコーポレイテッド (5)
【氏名又は名称原語表記】ＮｕＳｋｉｎ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．
【出願人】（５０７２９０２９４）ノックス テクノロジーズ インコーポレイテッド (3)
【Ｆターム（参考）】
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