嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子のモジュレーターを調製するためのプロセス
本発明は、化合物１形態Ａ、化合物１形態Ａ−ＨＣｌ、化合物１形態Ｂおよび化合物１形態Ｂ−ＨＣｌを含むＮ−（４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）フェニル）−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミドの固体状態形態を調製するプロセス、これらの形態の任意の組合せ、その医薬組成物、ならびにそれらを用いる治療方法に関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連する出願への相互参照
本願は、２００９年１０月２３日に出願された米国仮特許出願第６１／２５４，６３４号の優先権を主張する。米国仮特許出願第６１／２５４，６３４号の内容は、本明細書中に参考として援用される。
【０００２】
発明の技術分野
本発明は、嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子（「ＣＦＴＲ」）のモジュレーターを作製するプロセスに関する。
【背景技術】
【０００３】
嚢胞性線維症（ＣＦ）は、米国においておよそ３０，０００人の小児および成人、ならびに欧州においておよそ３０，０００人の小児および成人が冒されている劣性遺伝病である。ＣＦの治療は進歩しているにもかかわらず、治癒法はない。
【０００４】
ＣＦは、種々の組織における塩および水の吸収および分泌の制御の補助を司る上皮クロライドイオンチャネルをコードする嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子（ＣＦＴＲ）遺伝子における変異によって引き起こされる。ＣＦＴＲチャネル開口の確率を増大させる増強物質として公知である低分子薬物は、ＣＦを治療するための１つの潜在的治療戦略を表す。
【０００５】
具体的には、ＣＦＴＲはｃＡＭＰ／ＡＴＰ媒介性アニオンチャネルであり、これは、吸収細胞および分泌上皮細胞を包含する様々な細胞型において発現され、ここで、膜を横断するアニオンフラックス、ならびに他のイオンチャネルおよびタンパク質の活性を制御する。上皮細胞において、ＣＦＴＲの正常機能は、呼吸および消化組織を包含する体全体にわたる電解質輸送の維持のために重大である。ＣＦＴＲは、６つの膜貫通ヘリックスと１つのヌクレオチド結合ドメインとをそれぞれ含有する膜貫通ドメインの縦列反復でできているタンパク質をコードする、およそ１４８０個のアミノ酸から構成される。２つの膜貫通ドメインは、チャネル活性および細胞トラフィッキングを制御する多数のリン酸化部位を持つ大きな極性制御（Ｒ）−ドメインによって連結されている。
【０００６】
ＣＦＴＲをコードする遺伝子が同定され配列決定されている（非特許文献１；非特許文献２；非特許文献３を参照）。この遺伝子における欠損は、ＣＦＴＲにおける変異を引き起こし、ヒトの最も一般的な致死的遺伝病である嚢胞性線維症（「ＣＦ」）をもたらす。米国では、およそ２，５００人に１人の乳幼児が嚢胞性線維症に冒されている。米国の総人口のうち、最大１，０００万人が、明白な病的影響なしに、欠陥遺伝子の単一コピーを有している。対照的に、ＣＦ関連遺伝子の２つのコピーを持つ個体は、慢性肺疾患を包含する、ＣＦの衰弱性の影響および致死的影響を被っている。
【０００７】
ＣＦ患者において、呼吸上皮中に内因的に発現したＣＦＴＲにおける変異は、イオンおよび流体輸送における不均衡を引き起こす頂端アニオン分泌の低減につながる。結果として生じるアニオン輸送の減少は、肺における粘液貯留の強化および付随する微生物感染に寄与し、これが最終的にＣＦ患者の死を引き起こす。ＣＦ患者は、呼吸器疾患に加えて、典型的に、胃腸の問題および治療しないまま放置すると死をもたらす膵機能不全に罹患する。加えて、嚢胞性線維症の男性の大多数は不妊であり、嚢胞性線維症の女性の間では受胎能が低下する。ＣＦ関連遺伝子の２つのコピーの深刻な影響とは対照的に、ＣＦ関連遺伝子の単一コピーを持つ個体は、コレラに対して、および下痢によって生じる脱水症に対して、抵抗性の増大を示す。おそらくこれにより、集団内の比較的高度数のＣＦ遺伝子の説明がつくであろう。
【０００８】
ＣＦ染色体のＣＦＴＲ遺伝子の配列分析は、変異を引き起こす様々な疾患を明らかにした（非特許文献４；非特許文献５；および非特許文献６；非特許文献７）。これまでに、ＣＦ遺伝子において変異を引き起こす１０００を超える疾患が同定されている（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｅｎｅｔ．ｓｉｃｋｋｉｄｓ．ｏｎ．ｃａ／ｃｆｔｒ／ａｐｐ）。最もよく見られる変異は、ＣＦＴＲアミノ酸配列の５０８位におけるフェニルアラニンの欠失であり、一般にΔＦ５０８−ＣＦＴＲと称される。この変異は、嚢胞性線維症の症例のおよそ７０％に生じ、重症疾患に関連する。
【０００９】
ΔＦ５０８−ＣＦＴＲにおける残基５０８の欠失は、新生タンパク質の正しいフォールディングを妨げる。この結果、変異タンパク質はＥＲから出ることができず、原形質膜へ出入りすることができなくなる。結果として、膜中に存在するチャネル数は、野生型ＣＦＴＲを発現している細胞において観察されるものよりもはるかに少ない。変異は、トラフィッキング障害（ｉｍｐａｉｒｅｄ ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ）に加えて、チャネルゲーティングの欠陥をもたらす。それと同時に、膜中のチャネル数の低減およびゲーティングの欠陥は、上皮を横断するアニオン輸送の低減を招き、イオンおよび流体輸送の欠陥につながる（非特許文献８）。しかしながら、研究は、膜中のΔＦ５０８−ＣＦＴＲ数の低減が、野生型ＣＦＴＲに満たないとはいえ機能的であることを示した（非特許文献９；Ｄｅｎｎｉｎｇら、上記を参照；非特許文献１０）。ΔＦ５０８−ＣＦＴＲに加えて、トラフィッキング、合成および／またはチャネルゲーティングの欠陥をもたらすＣＦＴＲにおける変異を引き起こす他の疾患を上方または下方制御して、アニオン分泌を変化させ、疾患の進行および／または重症度を変更することができる場合がある。
【００１０】
ＣＦＴＲはアニオンに加えて様々な分子を輸送するが、この役割（アニオンの輸送）が、上皮を横断してイオンおよび水を輸送する重要な機序における１つの要素を表すことは明瞭である。他の要素は、細胞へのクロライドの取込みを司る、上皮Ｎａ＋チャネル、ＥＮａＣ、Ｎａ＋／２Ｃｌ−／Ｋ＋共輸送体、Ｎａ＋−Ｋ＋−ＡＴＰアーゼポンプおよび側底膜Ｋ＋チャネルを包含する。
【００１１】
これらの要素が協働して、細胞内におけるそれらの選択的発現および局在により、上皮を横断する指向性輸送を達成する。クロライドの吸収は、頂端膜上に存在するＥＮａＣおよびＣＦＴＲならびに細胞の側底面上で発現されるＮａ＋−Ｋ＋−ＡＴＰアーゼポンプおよびＣｌ−イオンチャネルの協調活性によって起こる。腔側からのクロライドの二次能動輸送は、細胞内クロライドの蓄積を招き、次いでこれがＣｌ−チャネルを介して細胞から受動的に離れ、ベクトル輸送をもたらし得る。側底面上のＮａ＋／２Ｃｌ−／Ｋ＋共輸送体、Ｎａ＋−Ｋ＋−ＡＴＰアーゼポンプおよび側底膜Ｋ＋チャネルならびに腔側のＣＦＴＲの配置は、腔側のＣＦＴＲを介するクロライドの分泌を加減する。おそらく水自体が能動的に輸送されることはないため、上皮を横断するその流量は、ナトリウムおよびクロライドのバルク流によって生成される極めて小さな経上皮浸透圧勾配によって決まる。
【００１２】
上で論じた通り、ΔＦ５０８−ＣＦＴＲにおける残基５０８の欠失は、新生タンパク質が正しくフォールディングするのを妨げ、この変異タンパク質のＥＲからの退出不能および原形質膜への出入り不能をもたらすと考えられている。結果として、不十分な量の成熟タンパク質が原形質膜に存在し、上皮組織内におけるクロライド輸送は有意に低減される。実際に、このＥＲ機構によるＡＢＣ輸送体のＥＲプロセシングの欠陥の細胞現象は、ＣＦ疾患だけでなく、広範な他の孤立性および遺伝性疾患の基礎となることが示された。
【００１３】
したがって、ヒトＣＦＴＲの野生型および変異型形態の、強力かつ選択的なＣＦＴＲ増強物質が必要である。これらの変異型ＣＦＴＲ形態は、ΔＦ５０８ｄｅｌ、Ｇ５５１Ｄ、Ｒ１１７Ｈ、２７８９＋５Ｇ→Ａを包含するがこれらに限定されない。
【００１４】
哺乳動物の細胞膜におけるＣＦＴＲの活性を調節するために使用され得る、ＣＦＴＲ活性のモジュレーターおよびその組成物も必要である。
【００１５】
そのようなＣＦＴＲ活性のモジュレーターを使用して、ＣＦＴＲにおける変異によって引き起こされる疾患を治療する方法が必要である。
【００１６】
哺乳動物のエクスビボ細胞膜におけるＣＦＴＲ活性を調節する方法が必要である。
【００１７】
加えて、治療薬として使用するのに適切な医薬組成物において容易に使用され得る、前記化合物の安定な固体形態が必要である。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１８】
【非特許文献１】Ｇｒｅｇｏｒｙ， Ｒ． Ｊ．ら（１９９０年）、Ｎａｔｕｒｅ、３４７巻：３８２〜３８６頁
【非特許文献２】Ｒｉｃｈ， Ｄ． Ｐ．ら（１９９０年）、Ｎａｔｕｒｅ、３４７巻：３５８〜３６２頁
【非特許文献３】Ｒｉｏｒｄａｎ， Ｊ． Ｒ．ら（１９８９年）、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４５巻：１０６６〜１０７３頁
【非特許文献４】Ｃｕｔｔｉｎｇ， Ｇ． Ｒ．ら（１９９０年）、Ｎａｔｕｒｅ、３４６巻：３６６〜３６９頁
【非特許文献５】Ｄｅａｎ， Ｍ．ら（１９９０年）、Ｃｅｌｌ、６１巻：８６３号：８７０頁
【非特許文献６】Ｋｅｒｅｍ， Ｂ−Ｓ．ら（１９８９年）、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４５巻：１０７３〜１０８０頁
【非特許文献７】Ｋｅｒｅｍ， Ｂ−Ｓ．ら（１９９０年）、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ、８７巻：８４４７〜８４５１頁
【非特許文献８】Ｑｕｉｎｔｏｎ， Ｐ． Ｍ．（１９９０年）、ＦＡＳＥＢ Ｊ．、４巻：２７０９〜２７２７頁
【非特許文献９】Ｄａｌｍａｎｓら（１９９１年）、Ｎａｔｕｒｅ Ｌｏｎｄ．、３５４巻：５２６〜５２８頁
【非特許文献１０】ＰａｓｙｋおよびＦｏｓｋｅｔｔ（１９９５年）、Ｊ． Ｃｅｌｌ． Ｂｉｏｃｈｅｍ．、２７０巻：１２３４７〜５０頁
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１９】
本発明は、ＣＦＴＲのモジュレーターとして有用な化合物の合成のためのプロセスに関する。
【００２０】
一態様において、本発明は、化合物１の結晶性の形態：
【００２１】
【化１】
を作製するためのプロセスであって、
（ａ）カップリング剤の存在下で、化合物２を化合物３と反応させるステップ
【００２２】
【化２】
を含み、
カップリング剤が、２−クロロ−１，３−ジメチル−２−イミダゾリウムテトラフルオロボレート、ＨＢＴＵ、ＨＣＴＵ、２−クロロ−４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン、ＨＡＴＵ、ＨＯＢＴ／ＥＤＣおよびＴ３Ｐ（登録商標）からなる群から選択される、プロセスを提供する。
【００２３】
式Ｉの化合物および薬学的に許容されるその組成物は、嚢胞性線維症、喘息、喫煙誘発性ＣＯＰＤ、慢性気管支炎、鼻副鼻腔炎、便秘、膵炎、膵機能不全、精管の先天性両側欠損（ＣＢＡＶＤ）によって引き起こされる男性不妊、軽度肺疾患、特発性膵炎、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症（ＡＢＰＡ）、肝疾患、遺伝性肺気腫、遺伝性ヘモクロマトーシス、プロテインＣ欠乏症等の凝固−繊維素溶解（ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ−ｆｉｂｒｉｎｏｌｙｓｉｓ）欠乏症、１型遺伝性血管浮腫、家族性高コレステロール血症等の脂質プロセシング欠乏症、１型乳び血症、無βリポタンパク質血症、Ｉ細胞疾患／偽性ハーラー症候群等のリソソーム蓄積症、ムコ多糖症、サンドホフ／テイ・サックス病、クリグラー・ナジャーＩＩ型、多腺性内分泌障害／高インスリン血症、真性糖尿病、ラロン型小人症、ミエロペルオキシダーゼ欠損症、原発性副甲状腺機能低下症、黒色腫、グリカノーシス（Ｇｌｙｃａｎｏｓｉｓ）ＣＤＧ１型、先天性甲状腺機能亢進症、骨形成不全症、遺伝性低フィブリノゲン血症、ＡＣＴ欠損症、尿崩症（ＤＩ）、ニューロフィシン性（ｎｅｕｒｏｐｈｙｓｅａｌ）ＤＩ、腎性ＤＩ、シャルコー・マリー・トゥース症候群、ペリツェーウス‐メルツバッハー病、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、進行性核上麻痺、ピック病等の神経変性疾患、ハンチントン病、脊髄小脳失調Ｉ型、球脊髄性筋萎縮症、歯状核赤核淡蒼球ルイ体および筋強直性ジストロフィー等の数種のポリグルタミン神経障害、ならびに遺伝性クロイツフェルト・ヤコブ病（プリオンタンパク質プロセシング欠損による）等の海綿状脳症、ファブリー病、シュトロイスラー‐シャインカー症候群、ＣＯＰＤ、ドライアイ疾患、またはシェーグレン病、骨粗しょう症、骨減少症、骨折治癒機転および骨成長（骨修復、骨再生、骨吸収を低減させることおよび骨沈着を増大させることを包含する）、ゴーラム病、先天性筋強直症（トムゼン型およびベッカー型）等のクロライドチャネル病、バーター症候群ＩＩＩ型、デント病、驚愕過剰症、てんかん、びっくり病、脂肪蓄積症、アンジェルマン症候群、ならびに、逆位を伴うＰＣＤ（カルタゲナー症候群としても公知である）、逆位および線毛形成不全を伴わないＰＣＤを包含する線毛の構造および／または機能の遺伝障害を表す用語である先天性線毛運動不全症（ＰＣＤ）を包含するがこれらに限定されない様々な疾患、障害または状態を治療するまたはその重症度を下げるのに有用である。
【００２４】
一態様において、化合物１は、形態Ａと称される結晶性形態である。
【００２５】
別の態様において、化合物１は、形態Ｂと称される結晶性形態である。
【００２６】
さらなる態様において、化合物１は、形態Ａ−ＨＣｌと称される結晶性形態である。
【００２７】
追加の態様において、化合物１は、形態Ｂ−ＨＣｌと称される結晶性形態である。
【００２８】
本明細書において記述されるプロセスを使用して、形態Ａ、形態Ａ−ＨＣｌ、形態Ｂ、形態Ｂ−ＨＣｌ、またはこれらの形態の任意の組合せを含む本発明の組成物を調製することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２９】
【図１】図１は、化合物１形態Ａの代表的試料のＸ線粉末回折パターンである。
【図２】図２は、化合物１形態Ａの代表的試料のＦＴＩＲスペクトルである。
【図３】図３は、単一Ｘ線分析に基づく化合物１形態Ａの立体配座構造の例示である。
【図４】図４は、化合物１形態Ａ−ＨＣｌの例示的試料のＸ線粉末回折パターンである。
【図５】図５は、化合物１形態Ａ−ＨＣｌの代表的試料についてのＤＳＣ曲線である。
【図６】図６は、試料重量を温度の関数として提示する、化合物１形態Ａ−ＨＣｌの代表的試料の熱重量分析によって生成される曲線である。
【図７】図７は、化合物１形態Ａ−ＨＣｌの代表的試料のＦＴＩＲスペクトルである。
【図８】図８は、化合物１形態Ａ−ＨＣｌの代表的試料の固相１３Ｃ ＮＭＲスペクトルである。
【図９】図９は、化合物１形態Ａ−ＨＣｌの代表的試料の固相１９Ｆ ＮＭＲスペクトルである。
【図１０Ａ】図１０Ａは、機器１を用いて記録された、化合物１形態Ｂの代表的試料についてのＸ線粉末回折パターンである。
【図１０Ｂ】図１０Ｂは、機器２を用いて記録された、化合物１形態Ｂの代表的試料についてのＸ線粉末回折パターンである。
【図１１】図１１は、化合物１形態Ｂの代表的試料についてのＤＳＣ曲線である。
【図１２】図１２は、試料重量を温度の関数として提示する、化合物１形態Ｂの代表的試料の熱重量分析によって生成される曲線である。
【図１３】図１３は、化合物１形態Ｂの代表的試料のＦＴＩＲスペクトルである。
【図１４】図１４は、化合物１形態Ｂの代表的試料の固相１３Ｃ ＮＭＲスペクトルである。
【図１５】図１５は、化合物１形態Ｂの代表的試料の固相１９Ｆ ＮＭＲスペクトルである。
【図１６】図１６は、化合物１形態Ｂ−ＨＣｌのＸ線粉末回折パターンである。
【図１７】図１７は、化合物１形態Ｂ−ＨＣｌの代表的試料についてのＤＳＣ曲線である。
【図１８】図１８は、試料重量を温度の関数として提示する、化合物１形態Ｂ−ＨＣｌの代表的試料の熱重量分析によって生成される曲線である。
【図１９】図１９は、化合物１形態Ｂ−ＨＣｌの代表的試料のＦＴＩＲスペクトルである。
【図２０】図２０は、化合物１形態Ｂ−ＨＣｌの代表的試料の固相１３Ｃ ＮＭＲスペクトルである。
【図２１】図２１は、化合物１形態Ｂ−ＨＣｌの代表的試料の固相１９Ｆ ＮＭＲスペクトルである。
【発明を実施するための形態】
【００３０】
発明の詳細な説明
定義
本明細書において使用される場合、別段の指示がない限り、下記の定義が当てはまるものとする。
【００３１】
用語「ＡＢＣ輸送体」は、本明細書において使用される場合、少なくとも１つの結合ドメインを含むＡＢＣ輸送体タンパク質またはその断片を意味し、ここで、前記タンパク質またはその断片は、インビボまたはインビトロで存在する。用語「結合ドメイン」は、本明細書において使用される場合、モジュレーターと結合することができるＡＢＣ輸送体上のドメインを意味する。例えば、Ｈｗａｎｇ， Ｔ． Ｃ．ら、Ｊ． Ｇｅｎ． Ｐｈｙｓｉｏｌ．（１９９８年）：１１１巻（３号）、４７７〜９０頁を参照されたい。
【００３２】
用語「ＣＦＴＲ」は、本明細書において使用される場合、ΔＦ５０８ ＣＦＴＲ、Ｒ１１７Ｈ ＣＦＴＲおよびＧ５５１Ｄ ＣＦＴＲを包含するがこれらに限定されない、制御因子活性の能力がある嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子またはその変異を意味する（例えば、ＣＦＴＲ変異については、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｅｎｅｔ．ｓｉｃｋｋｉｄｓ．ｏｎ．ｃａ／ｃｆｔｒ／ａｐｐを参照されたい）。
【００３３】
用語「調節すること」は、本明細書において使用される場合、測定可能な量だけ増大または減少させることを意味する。
【００３４】
用語「正常なＣＦＴＲ」または「正常なＣＦＴＲ機能」は、本明細書において使用される場合、喫煙、汚染、または肺において炎症を生じさせる何か等の環境要因によるいかなる機能障害もない、野生型様ＣＦＴＲを意味する。
【００３５】
用語「ＣＦＴＲの低減」または「ＣＦＴＲ機能の低減」は、本明細書において使用される場合、正常未満のＣＦＴＲまたは正常未満のＣＦＴＲ機能を意味する。
【００３６】
用語「結晶性」は、構造単位が固定された幾何パターンまたは格子状に配置されているため、結晶性固体が厳格な長距離秩序を有する化合物または組成物を指す。結晶構造を構成している構造単位は、原子、分子またはイオンであってよい。結晶性固体は、一定の融点を示す。
【００３７】
用語「実質的に結晶性」は、厳格な長距離秩序を有する固定された幾何パターンまたは格子状に主に配置されている固体材料を指す。例えば、実質的に結晶性の材料は、約８５％超の結晶化度（例えば、約９０％超の結晶化度、約９５％超の結晶化度、または約９９％超の結晶化度）を有する。用語「実質的に結晶性」は、前項において定義されている記述子「結晶性」を包含することにも留意されたい。
【００３８】
本発明の目的のために、化学元素は、Ｐｅｒｉｏｄｉｃ Ｔａｂｌｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｅｌｅｍｅｎｔｓ、ＣＡＳ版、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｃｓ、第７５版に従って定義されている。加えて、有機化学の一般原理は、「Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」、Ｔｈｏｍａｓ Ｓｏｒｒｅｌｌ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｂｏｏｋｓ、Ｓａｕｓａｌｉｔｏ：１９９９年、ならびに「Ｍａｒｃｈ’ｓ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」、第５版、Ｓｍｉｔｈ， Ｍ．Ｂ．およびＭａｒｃｈ， Ｊ．編、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：２００１年において記述されており、それらの全内容が参照により本明細書に組み込まれる。
【００３９】
用語「安定な」は、本明細書において使用される場合、化合物の生成、検出、ならびに好ましくは、本明細書において開示されている目的の１つまたは複数のためのそれらの回収、精製および使用を可能にする条件に供された際に、実質的に変化しない化合物を指す。いくつかの実施形態において、安定な化合物または化学的に実現可能な化合物は、水分が存在しない場合および他の化学反応条件でもない場合、少なくとも１週間４０℃以下の温度に保った際に、実質的に変化しないものである。
【００４０】
本発明において使用され得る適切な溶媒の例は、水、メタノール、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、アセトニトリル、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、酢酸メチル（ＭｅＯＡｃ）、酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）、酢酸イソプロピル（ＩＰＡｃ）、酢酸ｔ−ブチル（ｔ−ＢｕＯＡｃ）、イソプロピルアルコール（ＩＰＡ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、メチルエチルケトン（ＭＥＫ）、ｔ−ブタノール、ジエチルエーテル（Ｅｔ２Ｏ）、メチル−ｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）、１，４−ジオキサンおよびＮ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）であるがこれらに限定されない。
【００４１】
本発明において使用され得る適切なカップリング剤の例は、１−（３−（ジメチルアミノ）プロピル）−３−エチル−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣＩ）、２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ）、２−（１Ｈ−７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）、２−クロロ−１，３−ジメチル−２−イミダゾリウムテトラフルオロボレート、１−Ｈ−ベンゾトリアゾリウム−１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−５−クロロヘキサフルオロホスフェート（ＨＣＴＵ）、２−クロロ−４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジンおよび２−プロパンホスホン酸無水物（Ｔ３Ｐ（登録商標））であるがこれらに限定されない。
【００４２】
本発明において使用され得る適切な塩基の例は、炭酸カリウム（Ｋ２ＣＯ３）、Ｎ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）、トリエチルアミン（Ｅｔ３Ｎ；ＴＥＡ）、ジイソプロピル−エチルアミン（ｉ−Ｐｒ２ＥｔＮ；ＤＩＥＡ）、ピリジン、水酸化カリウム（ＫＯＨ）、水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）およびナトリウムメトキシド（ＮａＯＭｅ；ＮａＯＣＨ３）であるがこれらに限定されない。
【００４３】
加えて、別段の規定がない限り、本明細書において描写されている構造は、１種または複数種の同位体富化された原子が存在するという点でのみ異なる化合物を包含するようにも意味付けられている。例えば、重水素もしくは三重水素による水素の置換、または１３Ｃもしくは１４Ｃによる炭素の置換を除いて本構造を有する化合物は、本発明の範囲内である。そのような化合物は、例えば、生物学的アッセイにおける分析ツールまたはプローブとして有用である。
【００４４】
本発明のプロセス
概して、本発明は、ＣＦＴＲのモジュレーターとして有用な化合物の合成のためのプロセスを提供する。
【００４５】
化合物１の調製
一態様において、本発明は、化合物１の結晶性の形態：
【００４６】
【化３】
を作製するためのプロセスであって、
（ａ）カップリング剤の存在下で、化合物２を化合物３と反応させるステップ
【００４７】
【化４】
を含み、
カップリング剤が、２−クロロ−１，３−ジメチル−２−イミダゾリウムテトラフルオロボレート、ＨＢＴＵ、ＨＣＴＵ、２−クロロ−４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン、ＨＡＴＵ、ＨＯＢＴ／ＥＤＣおよびＴ３Ｐ（登録商標）からなる群から選択される、プロセスを提供する。
【００４８】
この実施形態の別の態様において、化合物３はＨＣｌ塩であってよい。
【００４９】
この実施形態の一態様において、化合物２と化合物３とのカップリングは、Ｋ２ＣＯ３、Ｅｔ３Ｎ、Ｎ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）、ピリジンまたはジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）等の塩基の存在下で実施される。
【００５０】
この実施形態の別の態様において、化合物２と化合物３とのカップリングは、ピリジンまたはＤＩＥＡの存在下で実施される。
【００５１】
この実施形態の別の態様において、化合物２と化合物３とのカップリングは、ピリジンの存在下で実施される。
【００５２】
この実施形態の別の態様において、化合物２と化合物３とのカップリングは、溶媒の存在下で実施される。一態様において、溶媒は極性非プロトン性溶媒である。例えば、溶媒は、酢酸エチル、酢酸イソプロピル、テトラヒドロフラン、メチルエチルケトン、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドまたは２−メチルテトラヒドロフランからなる群から選択される。より詳細には、溶媒は２−メチルテトラヒドロフランである。
【００５３】
この実施形態の別の態様において、化合物２と化合物３とのカップリングは、３０℃から８０℃の間に維持される反応温度で実施される。さらなる態様において、化合物２と式３のアニリンとのカップリングは、３０℃から８０℃の間（例えば、約４０℃から７８℃の間、約４５℃から７５℃の間、約５０℃から７０℃の間、約６２℃から６８℃の間、または約６５℃）に維持される反応温度で実施される。例えば、化合物２と化合物３とのカップリングは、約６５℃に維持される反応温度で実施される。
【００５４】
この実施形態の別の態様において、化合物１は固体形態Ａである。
【００５５】
別の実施形態において、本発明は、前項において記述されているプロセスによって調製される化合物１を提供する。
【００５６】
【化５】
化合物１形態Ａの調製
別の実施形態において、本発明は、固体形態Ａを有する化合物１：
【００５７】
【化６】
を生成するためのプロセスであって、
カップリング剤の存在下で、化合物２を化合物３と反応させるステップ
【００５８】
【化７】
を含み、
カップリング剤が、２−クロロ−１，３−ジメチル−２−イミダゾリウムテトラフルオロボレート、ＨＢＴＵ、ＨＣＴＵ、２−クロロ−４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン、ＨＡＴＵ、ＨＯＢＴ／ＥＤＣおよびＴ３Ｐ（登録商標）からなる群から選択される、プロセスを提供する。
【００５９】
この実施形態の別のいくつかの態様において、化合物３はＨＣｌ塩であってよい。
【００６０】
この実施形態の一態様において、化合物２と化合物３とのカップリングは、Ｋ２ＣＯ３、Ｅｔ３Ｎ、Ｎ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）、ピリジンまたはジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）等の塩基の存在下で実施される。
【００６１】
この実施形態の別の態様において、化合物２と化合物３とは、ピリジンまたはＤＩＥＡの存在下で実施される。
【００６２】
この実施形態の別の態様において、化合物２と化合物３とのカップリングは、ピリジンの存在下で実施される。
【００６３】
この実施形態の別の態様において、化合物２と化合物３とのカップリングは、極性非プロトン性溶媒の存在下で実施される。例えば、極性非プロトン性溶媒は、酢酸エチル、酢酸イソプロピル、テトラヒドロフラン、メチルエチルケトン、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドまたは２−メチルテトラヒドロフランからなる群から選択される。より詳細には、化合物２と化合物３とのカップリングは、２−メチルテトラヒドロフランの存在下で実施される。
【００６４】
この実施形態の別の態様において、化合物２と化合物３とのカップリングは、３０℃から８０℃の間に維持される反応温度で実施される。さらなる態様において、化合物２と式３のアニリンとのカップリングは、３０℃から８０℃の間（例えば、約４０℃から７８℃の間、約４５℃から７５℃の間、約５０℃から７０℃の間、約６２℃から６８℃の間、または約６５℃）に維持される反応温度で実施される。例えば、化合物２と化合物３とのカップリングは、約６５℃に維持される反応温度で実施される。
【００６５】
別の実施形態において、本発明は、前述の項において記述されているプロセスによって調製される化合物１形態Ａを提供する。
【００６６】
【化８】
一実施形態において、本発明は、化合物１形態Ａを調製するためのプロセスであって、化合物２を化合物３と、Ｔ３Ｐ（登録商標）およびピリジンの存在下、約６５℃の温度で、溶媒２−ＭｅＴＨＦ中、約１０時間にわたって反応させるステップを含むプロセスを提供する。
【００６７】
【化９】
化合物１形態Ｂの調製
別の実施形態において、本発明は、固体形態の形態Ｂを有する化合物１：
【００６８】
【化１０】
を生成するためのプロセスであって、
（ａ）化合物２を化合物３の塩酸塩（３−ＨＣｌ）と、２−クロロ−１，３−ジメチル−２−イミダゾリウムテトラフルオロボレート、ＨＢＴＵ、ＨＣＴＵ、２−クロロ−４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン、ＨＡＴＵ、ＨＯＢＴ／ＥＤＣおよびＴ３Ｐ（登録商標）からなる群から選択されるカップリング剤の存在下で反応させるステップ
【００６９】
【化１１】
を含むプロセスを提供する。
【００７０】
この実施形態の一態様において、化合物２と塩酸塩３−ＨＣｌとのカップリングは、Ｋ２ＣＯ３、Ｅｔ３Ｎ、Ｎ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）、ピリジンまたはＤＩＥＡ等の塩基の存在下で実施される。
【００７１】
この実施形態の別のいくつかの態様において、塩酸塩３−ＨＣｌは化合物３であってよい。
【００７２】
この実施形態の別の態様において、化合物２と塩酸塩３−ＨＣｌとのカップリングは、ピリジンまたはＤＩＥＡの存在下で実施される。
【００７３】
この実施形態の別の態様において、化合物２と塩酸塩３−ＨＣｌとのカップリングは、ピリジンの存在下で実施される。
【００７４】
この実施形態の別の態様において、化合物２と塩酸塩３−ＨＣｌとのカップリングは、ＥｔＯＡｃ、ＩＰＡｃ、ＴＨＦ、ＭＥＫ、ＮＭＰ、アセトニトリル、ＤＭＦまたは２−メチルテトラヒドロフラン等の溶媒の存在下で実施される。より詳細には、化合物２と塩酸塩３−ＨＣｌとのカップリングは、２−メチルテトラヒドロフランの存在下で実施される。
【００７５】
この実施形態の別の態様において、化合物２と塩酸塩３−ＨＣｌとのカップリングは、１５℃から７０℃の間に維持される反応温度で実施される。さらなる態様において、化合物２と塩酸塩３−ＨＣｌとのカップリングは、１５℃から７０℃の間（例えば、約２０℃から６５℃の間、約２５℃から６０℃の間、約３０℃から５５℃の間、約３５℃から５０℃の間、または約４５℃）に維持される反応温度で実施される。この実施形態の好ましい態様において、化合物２と化合物３のＨＣｌ塩とのカップリングは、約４５℃に維持される反応温度で実施される。
【００７６】
別の態様において、カップリング反応物は、約１．５時間から約１０時間までの継続期間にわたって撹拌される。さらなる態様において、カップリング反応物は、約１．５時間から約１０時間まで（例えば、約２時間から約７時間まで、約３時間から約６時間まで、約４時間から約５．５時間まで、または約５時間）の継続期間にわたって撹拌される。
【００７７】
別の実施形態において、本発明は、前述の項において記述されているプロセスによって調製される化合物１形態Ｂを提供する。
【００７８】
【化１２】
一実施形態において、本発明は、化合物１形態Ｂを調製するためのプロセスであって、化合物２を化合物３−ＨＣｌと、Ｔ３Ｐ（登録商標）およびピリジンの存在下、約４５℃の温度で、溶媒２−ＭｅＴＨＦ中、約５〜６時間にわたって反応させるステップを含むプロセスを提供する。
【００７９】
【化１３】
化合物１形態Ａ−ＨＣｌの調製
別の実施形態において、本発明は、固体形態Ａ−ＨＣｌを有する化合物１の塩酸塩：
【００８０】
【化１４】
を生成するためのプロセスであって、
（ａ）化合物２を化合物３の塩酸塩（３−ＨＣｌ）と、２−クロロ−１，３−ジメチル−２−イミダゾリウムテトラフルオロボレート、ＨＢＴＵ、ＨＣＴＵ、２−クロロ−４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン、ＨＡＴＵ、ＨＯＢＴ／ＥＤＣおよびＴ３Ｐ（登録商標）からなる群から選択されるカップリング剤の存在下で反応させるステップ
【００８１】
【化１５】
と、
（ｂ）ステップ（ａ）の生成物の混合物をＨＣｌで処理するステップと
を含むプロセスを提供する。
【００８２】
この実施形態の一態様において、ステップ（ａ）は、Ｋ２ＣＯ３、Ｅｔ３Ｎ、Ｎ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）、ピリジンまたはジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）等の塩基の存在下で実施される。
【００８３】
この実施形態の別の態様において、ステップ（ａ）は、ピリジンまたはＤＩＥＡの存在下で実施される。
【００８４】
この実施形態の別の態様において、ステップ（ａ）は、ピリジンの存在下で実施される。
【００８５】
この実施形態の別の態様において、ステップ（ａ）は、極性非プロトン性溶媒の存在下で実施される。例えば、極性非プロトン性溶媒は、酢酸エチル、酢酸イソプロピル、テトラヒドロフラン、メチルエチルケトン、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドまたは２−メチルテトラヒドロフランからなる群から選択される。より詳細には、化合物２と３−ＨＣｌとのカップリングは、２−メチルテトラヒドロフランの存在下で実施される。
【００８６】
この実施形態の別の態様において、ステップ（ａ）は、１０℃から８０℃の間に維持される反応温度で実施される。この実施形態の別の態様において、ステップ（ａ）は、１５℃から７０℃の間に維持される反応温度で実施される。さらなる態様において、化合物２と化合物３のＨＣｌ塩とのカップリングは、１５℃から７０℃の間（例えば、約２０℃から６５℃の間、約２５℃から６０℃の間、約３０℃から５５℃の間、約３５℃から５０℃の間、または約４５℃）に維持される反応温度で実施される。例えば、化合物２と３−ＨＣｌとのカップリングは、約４５℃に維持される反応温度で実施される。
【００８７】
この実施形態の別の態様において、ステップ（ａ）の時間は、約１．５時間から約７２時間までである。さらなる態様において、カップリング反応物は、約１．５時間から約７２時間以上の時間まで（例えば、約２時間から約４８時間まで、約３時間から約２４時間まで、約５時間から約２０時間まで、または約１２時間から約１５時間まで）の継続期間にわたって撹拌される。
【００８８】
この実施形態のさらなる態様において、ステップ（ａ）におけるカップリング生成物は、ステップ（ｂ）において塩化水素（ＨＣｌ）で処理される。例えば、ＨＣｌガスを、ステップ（ａ）のカップリング反応の生成物と２−メチルテトラヒドロフラン等の非極性（ａｐｏｌａｒ）非プロトン性溶媒とを含む混合物中に吹き込んで泡立たせる。
【００８９】
典型的には、少なくとも約１当量のＨＣｌガス、かつ最大約５０当量のＨＣｌガスを混合物中に吹き込んで泡立たせる。より典型的には、約２当量（ｅｑ．）から約２０当量まで（約５当量から約１５当量まで、約８当量から約１２当量まで、または約１０当量）のＨＣｌガスを、ステップ（ａ）のカップリング生成物を含む反応混合物中に吹き込んで泡立たせる。
【００９０】
典型的には、ＨＣｌガスを、ステップ（ａ）の生成物と非プロトン性溶媒等の溶媒との混合物中に、約０．５時間から約５時間までの期間にわたって、より典型的には、約０．５時間から約５時間まで（例えば、約０．７５時間から約３時間まで、または約２時間）の期間にわたって吹き込んで泡立たせる。
【００９１】
別の実施形態において、本発明は、前述の項において記述されているプロセスによって調製される化合物１形態Ａ−ＨＣｌを提供する。
【００９２】
【化１６】
一実施形態において、本発明は、化合物１形態Ａ−ＨＣｌを調製するためのプロセスであって、化合物２を化合物３−ＨＣｌと、Ｔ３Ｐ（登録商標）およびピリジンの存在下、約４５℃の温度で、溶媒２−ＭｅＴＨＦ中、約１２〜１５時間にわたって反応させ、続いてガス状ＨＣｌで処理するステップを含むプロセスを提供する。
【００９３】
【化１７】
化合物１形態Ｂ−ＨＣｌの調製
別の態様において、本発明は、固体形態の形態Ｂ−ＨＣｌを有する化合物１の塩酸塩：
【００９４】
【化１８】
を生成するためのプロセスであって、
（ａ）本明細書において記述されている通りの化合物１形態Ａ−ＨＣｌの塩酸塩を、有機溶媒および水と混合して、混合物を生成するステップ：
【００９５】
【化１９】
と、
（ｂ）該混合物を加熱するステップと
を含むプロセスを提供する。
【００９６】
この実施形態の一態様において、有機溶媒は、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、ジオキサン、ヘキサメチルホスホロトリアミド、テトラヒドロフラン、ＥｔＯＡｃ、ＩＰＡｃ、ＴＨＦ、ＭＥＫ、ＮＭＰ、アセトニトリル、ＤＭＦ、ＥｔＯＨ、ＭｅＯＨ、イソプロピルアルコールまたは２−メチルテトラヒドロフランを含む。より詳細には、非プロトン性溶媒は２−メチルテトラヒドロフランを含む。
【００９７】
別の態様において、ステップ（ａ）における混合に続いて、ステップ（ｂ）で、混合物を約３０℃から約８０℃まで（例えば、約４０℃から約７０℃まで、約５０℃から約６５℃まで、または約６０℃）の温度に維持する。該混合物が、約１２時間から約７２時間までの期間にわたって、３０℃から約８０℃の温度に維持される、請求項４０から４３に記載のプロセス。
【００９８】
別の態様において、ステップ（ｂ）における加熱後、混合物を濾過してフィルターケーキを生成する。
【００９９】
別の態様において、濾過するステップの後、フィルターケーキを２−メチルテトラヒドロフラン等の非プロトン性溶媒で洗浄するステップが続く。
【０１００】
別の実施形態において、本発明は、前述の項において記述されているプロセスによって調製される化合物１形態Ｂ−ＨＣｌを提供する。
【０１０１】
【化２０】
一実施形態において、本発明は、化合物１形態Ｂ−ＨＣｌを調製するためのプロセスであって、化合物１形態Ａ−ＨＣｌを、２−ＭｅＴＨＦおよび水の混合物中、６０℃の温度で４８時間加熱するステップと；室温に冷却し、沈殿した生成物を濾過するステップと；産生物を６０℃の温度で真空乾燥するステップとを含むプロセスを提供する。
【０１０２】
【化２１】
別の実施形態において、本発明は、化合物１形態Ｂ−ＨＣｌを調製するためのプロセスであって、化合物１形態Ａ−ＨＣｌを、ＥｔＯＨおよび水の混合物中、還流温度に加熱するステップと；２０℃に冷却し、３時間撹拌するステップと；沈殿した生成物を濾過するステップと；産生物を４５℃の温度で真空乾燥するステップとを含むプロセスを提供する。
【０１０３】
【化２２】
化合物２、３および３−ＨＣｌの調製
別の実施形態において、本発明は、化合物２：
【０１０４】
【化２３】
を調製するための方法であって、
（ａ）化合物４をジエチル２−（エトキシメチレン）マロネート５と反応させて、エステル６Ａを生成するステップ
【０１０５】
【化２４】
と、
（ｂ）エステル６Ａを、別個のステップにおいて、触媒および塩基の存在下、水素ガスまたはホルメート等の原子状水素源で処理して、化合物２を生成するステップと
【０１０６】
【化２５】
を含む方法を提供する。
【０１０７】
一態様において、化合物６Ａを、触媒の存在下、水素ガスまたはホルメート等の原子状水素源で処理して化合物６Ｃ
【０１０８】
【化２６】
を生成し、次いでこれを塩基で処理して、化合物２を生成する。
【０１０９】
別の態様において、化合物６Ａを塩基で処理して化合物６Ｄ
【０１１０】
【化２７】
を生成し、次いでこれを、触媒の存在下、水素ガスまたはホルメート等の原子状水素源で処理して、化合物２を生成する。
【０１１１】
いくつかの態様において、水素源は水素ガスである。他の態様において、水素源はホルメートである。
【０１１２】
いくつかの態様において、触媒はパラジウム触媒である。
【０１１３】
いくつかの態様において、塩基は水酸化ナトリウム水溶液または水酸化カリウム水溶液である。例えば、塩基は水酸化ナトリウム水溶液である。
【０１１４】
一実施形態において、本発明は、化合物２を調製するためのプロセスであって、
ａ）化合物４を化合物５と、トルエン中、還流温度にてディーン・スターク装置内で反応させて、化合物６Ｂを形成するステップと、
ｂ）化合物６Ｂを、Ｄｏｗｔｈｅｒｍ中、約２６０℃の温度で加熱して、環化生成物である化合物６Ａを生成するステップと、
ｃ）化合物６Ａを、ＥｔＯＨ中、Ｐｄ／Ｃを触媒として使用し、水素ガスおよびトリエチルアミンの存在下で水素化して、化合物６Ｃを生成するステップと、
ｄ）化合物６Ｃを、５ＭのＮａＯＨを使用して加水分解して、化合物２を生成するステップ
【０１１５】
【化２８】
を含むプロセスを提供する。
【０１１６】
一実施形態において、本発明は、化合物２を調製するためのプロセスであって、
ａ）化合物４を化合物５と、トルエン中、還流温度にてディーン・スターク装置内で反応させて、化合物６Ｂを形成するステップと、
ｂ）化合物６Ｂを、Ｄｏｗｔｈｅｒｍ中、約２６０℃の温度で加熱して、環化生成物である化合物６Ａを生成するステップと、
ｃ）化合物６Ａを、イソプロパノールおよび水の混合物中、ＮａＯＨを使用して加水分解して、化合物６Ｄを生成するステップと、
ｄ）化合物６Ｄを、ＥｔＯＨ中、Ｐｄ／Ｃを触媒として使用し、ホルメート、ナトリウムメトキシドおよびメタノールの存在下で水素化するステップと、
ｅ）該溶液を酢酸で酸性化して、化合物２を生成するステップ
【０１１７】
【化２９】
を含むプロセスを提供する。
【０１１８】
別の実施形態において、本発明は、化合物３
【０１１９】
【化３０】
を調製するための方法であって、
（ａ）化合物７［式中、Ｈａｌは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩである］を７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン８またはその塩と反応させて、化合物９を生成するステップ
【０１２０】
【化３１】
と、
（ｂ）化合物９中のニトロ部分を還元して、アニリン３を提供するステップ
【０１２１】
【化３２】
を含む方法を提供する。
【０１２２】
この実施形態の一態様において、ステップ（ａ）は、極性非プロトン性溶媒中、塩基の存在下で実施される。例えば、塩基は、トリエチルアミンまたはジイソプロピルエチルアミン等の第三級アミン塩基等であり、溶媒はアセトニトリル等である。
【０１２３】
この実施形態の別の態様において、ステップ（ｂ）は、アルコール溶媒中、水素ガスおよび遷移金属触媒を使用して実施される。例えば、触媒は、Ｐｔ、ＰｄまたはＮｉに由来する９族または１０族遷移金属触媒を含む。より詳細には、触媒はＰｄを含む。アルコール溶媒は、イソプロパノール、エタノール、メタノール等のアルコールを含む。例えば、該溶媒はエタノールを含む。
【０１２４】
別の実施形態において、本発明は、化合物３：
【０１２５】
【化３３】
を調製するための方法であって、
（ａ）化合物７［式中、Ｈａｌは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩである］を７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタンの塩酸塩（８−ＨＣｌ）と反応させて、化合物９を生成するステップ
【０１２６】
【化３４】
と、
（ｂ）化合物９中のニトロ部分を還元して、化合物３を提供するステップ
【０１２７】
【化３５】
を含む方法を提供する。
【０１２８】
この実施形態の一態様において、ステップ（ａ）は、炭酸ナトリウム等の無機炭酸塩塩基およびＤＭＳＯ等の極性非プロトン性溶媒の存在下で実施される。
【０１２９】
この実施形態の別の態様において、ステップ（ｂ）は、アルコール溶媒中、水素ガスおよび遷移金属触媒を使用して実施される。例えば、触媒は、Ｐｔ、ＰｄまたはＮｉに由来する９族または１０族遷移金属触媒を含む。より詳細には、触媒はＰｄを含む。アルコール溶媒は、イソプロパノール、エタノール、メタノール等のアルコールを含む。例えば、該溶媒はエタノールを含む。
【０１３０】
別の実施形態において、本発明は、塩酸塩３−ＨＣｌ：
【０１３１】
【化３６】
を調製するための方法であって、
（ａ）化合物７［式中、Ｈａｌは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩである］を７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン塩酸塩８−ＨＣｌと反応させて、化合物９を生成するステップ
【０１３２】
【化３７】
と、
（ｂ）化合物９中のニトロ部分を還元して、アニリン３を提供するステップ
【０１３３】
【化３８】
と、
（ｃ）ステップ（ｃ）の生成物をＨＣｌガスで処理して、３−ＨＣｌを提供するステップ
を含む方法を提供する。
【０１３４】
この実施形態の一態様において、ステップ（ａ）は、炭酸ナトリウム等の無機炭酸塩塩基およびＤＭＳＯ等の極性非プロトン性溶媒の存在下で実施される。
【０１３５】
この実施形態の別の態様において、ステップ（ｂ）は、アルコール溶媒中、水素ガスおよび遷移金属触媒を使用して実施される。例えば、触媒は、Ｐｔ、ＰｄまたはＮｉに由来する９族または１０族遷移金属触媒を含む。より詳細には、触媒はＰｄを含む。アルコール溶媒は、イソプロパノール、エタノール、メタノール等のアルコールを含む。例えば、該溶媒はエタノールを含む。
【０１３６】
別の実施形態において、本発明は、化合物８
【０１３７】
【化３９】
または薬学的に許容されるその塩を調製するための方法であって、ｔｒａｎｓ−４−アミノシクロヘキサノールをＢｏｃ無水物と接触させて、式Ａの化合物
【０１３８】
【化４０】
を生成するステップと、
式Ａの化合物をメタンスルホン酸と接触させて、式Ｂの化合物
【０１３９】
【化４１】
を生成するステップと、
式Ｂの化合物をトリフルオロ酢酸と接触させて、式Ｃの化合物
【０１４０】
【化４２】
を生成するステップと、
式Ｃの化合物を水酸化物と接触させて、式８の化合物を生成するステップ
を含む方法を包含する。
【０１４１】
別の実施形態において、本発明は、式８−ＨＣｌの化合物
【０１４２】
【化４３】
を生成する方法であって、式８の化合物を塩酸と接触させるステップを含む方法を包含する。
【０１４３】
一実施形態において、本発明は、化合物３を生成するためのプロセスであって、
ａ）化合物７を化合物８−ＨＣｌと、アセトニトリル中、トリエチルアミンの存在下、約８０℃で約１６時間反応させて、化合物９を生成するステップと、
ｂ）化合物９を、エタノール中、Ｐｄ／Ｃを触媒として使用し、水素ガスの存在下で水素化するステップ
【０１４４】
【化４４】
を含むプロセスを提供する。
【０１４５】
一実施形態において、本発明は、化合物３を生成するためのプロセスであって、
ａ）化合物７を化合物８−ＨＣｌと、ＤＭＳＯ中、炭酸ナトリウムの存在下、約５５℃で反応させて、化合物９を生成するステップと、
ｂ）化合物９を、エタノール中、Ｐｄ／Ｃを触媒として使用し、水素ガスの存在下で水素化するステップ
【０１４６】
【化４５】
を含むプロセスを提供する。
【０１４７】
一実施形態において、本発明は、化合物３を生成するためのプロセスであって、
ａ）化合物７を化合物８−ＨＣｌと、ジクロロメタン中、水酸化ナトリウムおよびテトラブチルアンモニウムブロミドの存在下で反応させて、化合物９を生成するステップと、
ｂ）化合物９を、エタノール中、Ｐｄ／Ｃを触媒として使用し、水素ガスの存在下で水素化するステップ
【０１４８】
【化４６】
を含むプロセスを提供する。
【０１４９】
一実施形態において、本発明は、化合物３−ＨＣｌを生成するためのプロセスであって、化合物９の塩酸塩を、２−ＭｅＴＨＦ中、Ｐｄ／Ｃを触媒として使用し、水素ガスの存在下で水素化するステップ
【０１５０】
【化４７】
を含むプロセスを提供する。
【０１５１】
本発明の他の態様
一態様において、本発明は、化合物１形態Ａ、化合物１形態Ａ−ＨＣｌ、化合物１形態Ｂ、化合物１形態Ｂ−ＨＣｌ、またはそれらの任意の組合せと、薬学的に許容されるアジュバントまたは担体とを含む、医薬組成物を取り上げる。
【０１５２】
一態様において、本発明は、ヒトにおけるＣＦＴＲ媒介性疾患を治療する方法であって、該ヒトに、有効量の化合物１形態Ａ、化合物１形態Ａ−ＨＣｌ、化合物１形態Ｂ、化合物１形態Ｂ−ＨＣｌ、またはそれらの任意の組合せを投与するステップを含む方法を取り上げる。
【０１５３】
いくつかの実施形態において、該方法は、追加の治療剤を投与するステップを含む。
【０１５４】
ある特定の実施形態において、ＣＦＴＲをコードする遺伝子における変異または環境要因（例えば煙）によるＣＦＴＲ機能の低減に関連する疾患を治療する方法を提供する。これらの疾患は、嚢胞性線維症、喘息、喫煙誘発性ＣＯＰＤ、慢性気管支炎、鼻副鼻腔炎、便秘、膵炎、膵機能不全、精管の先天性両側欠損（ＣＢＡＶＤ）によって引き起こされる男性不妊、軽度肺疾患、特発性膵炎、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症（ＡＢＰＡ）、肝疾患、遺伝性肺気腫、遺伝性ヘモクロマトーシス、プロテインＣ欠乏症等の凝固−繊維素溶解欠乏症、１型遺伝性血管浮腫、家族性高コレステロール血症等の脂質プロセシング欠乏症、１型乳び血症、無βリポタンパク質血症、Ｉ細胞疾患／偽性ハーラー症候群等のリソソーム蓄積症、ムコ多糖症、サンドホフ／テイ・サックス病、クリグラー・ナジャーＩＩ型、多腺性内分泌障害／高インスリン血症、真性糖尿病、ラロン型小人症、ミエロペルオキシダーゼ欠損症、原発性副甲状腺機能低下症、黒色腫、グリカノーシスＣＤＧ１型、先天性甲状腺機能亢進症、骨形成不全症、遺伝性低フィブリノゲン血症、ＡＣＴ欠損症、尿崩症（ＤＩ）、ニューロフィシン性ＤＩ、腎性ＤＩ、シャルコー・マリー・トゥース症候群、ペリツェーウス‐メルツバッハー病、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、進行性核上麻痺、ピック病等の神経変性疾患、ハンチントン病、脊髄小脳失調Ｉ型、球脊髄性筋萎縮症、歯状核赤核淡蒼球ルイ体および筋強直性ジストロフィー等の数種のポリグルタミン神経障害、ならびに遺伝性クロイツフェルト・ヤコブ病（プリオンタンパク質プロセシング欠損による）等の海綿状脳症、ファブリー病、シュトロイスラー‐シャインカー症候群、ＣＯＰＤ、ドライアイ疾患、またはシェーグレン病、骨粗しょう症、骨減少症、骨折治癒機転および骨成長（骨修復、骨再生、骨吸収を低減させることおよび骨沈着を増大させることを包含する）、ゴーラム病、先天性筋強直症（トムゼン型およびベッカー型）等のクロライドチャネル病、バーター症候群ＩＩＩ型、デント病、驚愕過剰症、てんかん、びっくり病、脂肪蓄積症、アンジェルマン症候群、ならびに、逆位を伴うＰＣＤ（カルタゲナー症候群としても公知である）、逆位および線毛形成不全を伴わないＰＣＤを包含する線毛の構造および／または機能の遺伝障害を表す用語である先天性線毛運動不全症（ＰＣＤ）を包含する。
【０１５５】
いくつかの実施形態において、方法は、患者に、本明細書において定義されている通りの組成物の１つを投与するステップを含む、前記患者における嚢胞性線維症を治療するまたはその重症度を下げることを包含する。ある特定の実施形態において、患者は、ヒトＣＦＴＲの変異型形態を保有する。他の実施形態において、患者は、ヒトＣＦＴＲの下記の変異ΔＦ５０８、Ｒ１１７ＨおよびＧ５５１Ｄの１つまたは複数を保有する。一実施形態において、方法は、ヒトＣＦＴＲのΔＦ５０８変異を保有する患者に、本明細書において定義されている通りの組成物の１つを投与するステップを含む、前記患者における嚢胞性線維症を治療するまたはその重症度を下げることを包含する。一実施形態において、方法は、ヒトＣＦＴＲのＧ５５１Ｄ変異を保有する患者に、本明細書において定義されている通りの組成物の１つを投与するステップを含む、前記患者における嚢胞性線維症を治療するまたはその重症度を下げることを包含する。一実施形態において、方法は、少なくとも一方の対立遺伝子上にヒトＣＦＴＲのΔＦ５０８変異を保有する患者に、本明細書において定義されている通りの組成物の１つを投与するステップを含む、前記患者における嚢胞性線維症を治療するまたはその重症度を下げることを包含する。一実施形態において、方法は、両方の対立遺伝子上にヒトＣＦＴＲのΔＦ５０８変異を保有する患者に、本明細書において定義されている通りの組成物の１つを投与するステップを含む、前記患者における嚢胞性線維症を治療するまたはその重症度を下げることを包含する。一実施形態において、方法は、少なくとも一方の対立遺伝子上にヒトＣＦＴＲのＧ５５１Ｄ変異を保有する患者に、本明細書において定義されている通りの組成物の１つを投与するステップを含む、前記患者における嚢胞性線維症を治療するまたはその重症度を下げることを包含する。一実施形態において、方法は、両方の対立遺伝子上にヒトＣＦＴＲのＧ５５１Ｄ変異を保有する患者に、本明細書において定義されている通りの組成物の１つを投与するステップを含む、前記患者における嚢胞性線維症を治療するまたはその重症度を下げることを包含する。
【０１５６】
いくつかの実施形態において、方法は、患者に、本明細書において定義されている通りの組成物の１つを投与するステップを含む、前記患者における嚢胞性線維症の重症度を下げることを包含する。ある特定の実施形態において、患者は、ヒトＣＦＴＲの変異型形態を保有する。他の実施形態において、患者は、ヒトＣＦＴＲの下記の変異ΔＦ５０８、Ｒ１１７ＨおよびＧ５５１Ｄの１つまたは複数を保有する。一実施形態において、方法は、ヒトＣＦＴＲのΔＦ５０８変異を保有する患者に、本明細書において定義されている通りの組成物の１つを投与するステップを含む、前記患者における嚢胞性線維症の重症度を下げることを包含する。一実施形態において、方法は、ヒトＣＦＴＲのＧ５５１Ｄ変異を保有する患者に、本明細書において定義されている通りの組成物の１つを投与するステップを含む、前記患者における嚢胞性線維症の重症度を下げることを包含する。一実施形態において、方法は、少なくとも一方の対立遺伝子上にヒトＣＦＴＲのΔＦ５０８変異を保有する患者に、本明細書において定義されている通りの組成物の１つを投与するステップを含む、前記患者における嚢胞性線維症の重症度を下げることを包含する。一実施形態において、方法は、両方の対立遺伝子上にヒトＣＦＴＲのΔＦ５０８変異を保有する患者に、本明細書において定義されている通りの組成物の１つを投与するステップを含む、前記患者における嚢胞性線維症の重症度を下げることを包含する。一実施形態において、方法は、少なくとも一方の対立遺伝子上にヒトＣＦＴＲのＧ５５１Ｄ変異を保有する患者に、本明細書において定義されている通りの組成物の１つを投与するステップを含む、前記患者における嚢胞性線維症の重症度を下げることを包含する。一実施形態において、方法は、両方の対立遺伝子上にヒトＣＦＴＲのＧ５５１Ｄ変異を保有する患者に、本明細書において定義されている通りの組成物の１つを投与するステップを含む、前記患者における嚢胞性線維症の重症度を下げることを包含する。
【０１５７】
いくつかの態様において、本発明は、患者における骨粗しょう症を治療するまたはその重症度を下げる方法であって、前記患者に、本明細書において記述されている通りの化合物１を投与するステップを含む方法を提供する。
【０１５８】
ある特定の実施形態において、患者における骨粗しょう症を治療するまたはその重症度を下げる方法は、前記患者に、本明細書において記述されている通りの医薬組成物を投与するステップを含む。
【０１５９】
いくつかの態様において、本発明は、患者における骨減少症を治療するまたはその重症度を下げる方法であって、前記患者に、本明細書において記述されている通りの化合物１を投与するステップを含む方法を提供する。
【０１６０】
ある特定の実施形態において、患者における骨減少症を治療するまたはその重症度を下げる方法は、前記患者に、本明細書において記述されている通りの医薬組成物を投与するステップを含む。
【０１６１】
いくつかの態様において、本発明は、患者における骨折治癒機転および／または骨修復の方法であって、前記患者に、本明細書において記述されている通りの化合物１を投与するステップを含む方法を提供する。
【０１６２】
ある特定の実施形態において、患者における骨折治癒機転および／または骨修復の方法は、前記患者に、本明細書において記述されている通りの医薬組成物を投与するステップを含む。
【０１６３】
いくつかの態様において、本発明は、患者における骨吸収を低減させる方法であって、前記患者に、本明細書において記述されている通りの化合物１を投与するステップを含む方法を提供する。
【０１６４】
ある特定の実施形態において、患者における骨吸収を低減させる方法は、前記患者に、本明細書において記述されている通りの医薬組成物を投与するステップを含む。
【０１６５】
いくつかの態様において、本発明は、患者における骨沈着を増大させる方法であって、前記患者に、本明細書において記述されている通りの化合物１を投与するステップを含む方法を提供する。
【０１６６】
ある特定の実施形態において、患者における骨沈着を増大させる方法は、前記患者に、本明細書において記述されている通りの医薬組成物を投与するステップを含む。
【０１６７】
いくつかの態様において、本発明は、患者におけるＣＯＰＤを治療するまたはその重症度を下げる方法であって、前記患者に、本明細書において記述されている通りの化合物１を投与するステップを含む方法を提供する。
【０１６８】
ある特定の実施形態において、患者におけるＣＯＰＤを治療するまたはその重症度を下げる方法は、前記患者に、本明細書において記述されている通りの医薬組成物を投与するステップを含む。
【０１６９】
いくつかの態様において、本発明は、患者における喫煙誘発性ＣＯＰＤを治療するまたはその重症度を下げる方法であって、前記患者に、本明細書において記述されている通りの化合物１を投与するステップを含む方法を提供する。
【０１７０】
ある特定の実施形態において、患者における喫煙誘発性ＣＯＰＤを治療するまたはその重症度を下げる方法は、前記患者に、本明細書において記述されている通りの医薬組成物を投与するステップを含む。
【０１７１】
いくつかの態様において、本発明は、患者における慢性気管支炎を治療するまたはその重症度を下げる方法であって、前記患者に、本明細書において記述されている通りの化合物１を投与するステップを含む方法を提供する。
【０１７２】
ある特定の実施形態において、患者における慢性気管支炎を治療するまたはその重症度を下げる方法は、前記患者に、本明細書において記述されている通りの医薬組成物を投与するステップを含む。
【０１７３】
一実施形態において、本発明は、ヒトにおける嚢胞性線維症を治療する方法であって、前記ヒトに、有効量の化合物１形態Ａ、形態Ａ−ＨＣｌ、形態Ｂ、形態Ｂ−ＨＣｌ、またはそれらの任意の組合せを投与するステップを含む方法を提供する。
【０１７４】
一態様において、本発明は、化合物１形態Ａ、形態Ａ−ＨＣｌ、形態Ｂ、形態Ｂ−ＨＣｌ、またはこれらの形態の任意の組合せと、薬学的に許容される担体とを含む、医薬パックまたはキットを取り上げる。
【０１７５】
一態様において、本発明は、三方晶系、Ｒ−３空間群、ならびに下記の単位格子寸法：ａ＝１９．１６７０（４）Å、ｂ＝１９．１６７０（４）Å、ｃ＝３３．６５７２（１２）Å、α＝９０°、β＝９０°およびγ＝１２０°を有する、Ｎ−（４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）フェニル）−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミドの結晶形態を取り上げる。
【０１７６】
一実施形態において、本発明は、単斜晶系、Ｐ２１／ｃ空間群、ならびに下記の単位格子寸法：ａ＝１３．５４２９（４）Å、ｂ＝１３．４５５７（４）Å、ｃ＝１２．０５９２（４）Å、α＝９０°、β＝１０１．１９３°およびγ＝９０°を有する、形態ＢのＮ−（４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）フェニル）−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミドの結晶を提供する。
【０１７７】
使用、製剤および投与
本発明の一態様において、薬学的に許容される組成物が提供され、ここで、これらの組成物は、本明細書において記述されている通りの形態Ａを含み、場合により、薬学的に許容される担体、アジュバントまたはビヒクルを含む。ある特定の実施形態において、これらの組成物は、場合により、１種または複数種の追加の治療剤をさらに含む。
【０１７８】
上述した通り、本発明の薬学的に許容される組成物は、薬学的に許容される担体、アジュバントまたはビヒクルを追加で含み、これは、本明細書において使用される場合、所望される特定の剤形に適するような、ありとあらゆる溶媒、賦形剤または他の液体ビヒクル、分散助剤または懸濁助剤、表面活性剤、等張剤、増粘剤または乳化剤、保存剤、固体結合剤、滑沢剤等を包含する。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１６版、Ｅ． Ｗ． Ｍａｒｔｉｎ（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐａ．、１９８０年）は、薬学的に許容される組成物を製剤化する際に使用される種々の担体およびその調製のための公知の技術を開示している。何らかの望ましくない生物学的効果を生じさせる、または、薬学的に許容される組成物の任意の他の成分（複数可）と有害性の様式で相互作用する等によって、任意の従来の担体媒質が本発明の化合物と配合禁忌でない限り、その使用は本発明の範囲内であることを企図されている。薬学的に許容される担体としての役割を果たすことができる材料のいくつかの例は、イオン交換体；アルミナ；ステアリン酸アルミニウム；レシチン；ヒト血清アルブミン等の血清タンパク質；ホスフェート、グリシン、ソルビン酸またはソルビン酸カリウム等の緩衝物質；植物性飽和脂肪酸の部分グリセリド混合物；水、塩、または、硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩等の電解質；コロイド状シリカ；三ケイ酸マグネシウム；ポリビニルピロリドン；ポリアクリレート；蝋；ポリエチレンポリオキシプロピレンブロックポリマー；羊毛脂；ラクトース、グルコースおよびスクロース等の糖類；コーンスターチおよびジャガイモデンプン等のデンプン類；セルロース、ならびにカルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロース等のその誘導体；トラガカント末；麦芽；ゼラチン；タルク；ココアバターおよび坐剤蝋等の添加剤；ピーナッツ油、綿実油、サフラワー油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油および大豆油等の油；プロピレングリコールまたはポリエチレングリコール等のグリコール類；オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチル等のエステル類；寒天；水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウム等の緩衝剤；アルギン酸；発熱性物質を含まない水；等張食塩水；リンゲル液；エチルアルコール；およびリン酸緩衝液；ならびに、ラウリル硫酸ナトリウムおよびステアリン酸マグネシウム等の他の非毒性の適合する滑沢剤を包含するがこれらに限定されず、さらに、調合者の判断により、着色剤、離型剤、コーティング剤、甘味剤、香味剤および着香剤、保存剤、ならびに酸化防止剤が組成物中に存在してもよい。
【０１７９】
化合物および薬学的に許容される組成物の使用
また別の態様において、本発明は、ＣＦＴＲ変異が関与する状態、疾患または障害を治療するまたはその重症度を下げる方法を提供する。ある特定の実施形態において、本発明は、ＣＦＴＲ活性の欠損が関与する状態、疾患または障害を治療する方法であって、化合物１形態Ａ、形態Ａ−ＨＣｌ、形態Ｂ、形態Ｂ−ＨＣｌ、またはこれらの形態の任意の組合せを含む組成物を、それを必要としている被験体、好ましくは哺乳動物に投与するステップを含む方法を提供する。
【０１８０】
ある特定の実施形態において、本発明は、ＣＦＴＲをコードする遺伝子における変異または環境要因（例えば煙）によるＣＦＴＲ機能の低減に関連する疾患を治療する方法を提供する。これらの疾患は、嚢胞性線維症、慢性気管支炎、反復性気管支炎、急性気管支炎、精管の先天性両側欠損（ＣＢＡＶＤ）によって引き起こされる男性不妊、子宮および膣の先天性欠損（ＣＡＵＶ）によって引き起こされる女性不妊、特発性慢性膵炎（ＩＣＰ）、特発性再発性膵炎、特発性急性膵炎、慢性鼻副鼻腔炎、原発性硬化性胆管炎、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、糖尿病、ドライアイ、便秘、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症（ＡＢＰＡ）、骨疾患（例えば骨粗しょう症）、ならびに喘息を包含する。
【０１８１】
ある特定の実施形態において、本発明は、正常なＣＦＴＲ機能に関連する疾患を治療するための方法を提供する。これらの疾患は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性気管支炎、反復性気管支炎、急性気管支炎、鼻副鼻腔炎、便秘、慢性膵炎、再発性膵炎および急性膵炎を包含する膵炎、膵機能不全、精管の先天性両側欠損（ＣＢＡＶＤ）によって引き起こされる男性不妊、軽度肺疾患、特発性膵炎、肝疾患、遺伝性肺気腫、胆石、胃食道（ｇａｓｇｔｒｏ）逆流性疾患、胃腸悪性腫瘍、炎症性腸疾患、便秘、糖尿病、関節炎、骨粗しょう症、ならびに骨減少症を包含する。
【０１８２】
ある特定の実施形態において、本発明は、遺伝性ヘモクロマトーシス、プロテインＣ欠乏症等の凝固−繊維素溶解欠乏症、１型遺伝性血管浮腫、家族性高コレステロール血症等の脂質プロセシング欠乏症、１型乳び血症、無βリポタンパク質血症、Ｉ細胞疾患／偽性ハーラー等のリソソーム蓄積症、ムコ多糖症、サンドホフ／テイ・サックス病、クリグラー・ナジャーＩＩ型、多腺性内分泌障害／高インスリン血症、真性糖尿病、ラロン型小人症、ミエロペルオキシダーゼ欠損症、原発性副甲状腺機能低下症、黒色腫、グリカノーシス（ｇｌｙｃａｎｏｓｉｓ）ＣＤＧ１型、先天性甲状腺機能亢進症、骨形成不全症、遺伝性低フィブリノゲン血症、ＡＣＴ欠損症、尿崩症（ＤＩ）、ニューロフィシン性（ｎｅｕｒｏｐｈｙｓｅａｌ）ＤＩ、腎性（ｎｅｐｒｏｇｅｎｉｃ）ＤＩ、シャルコー・マリー・トゥース症候群、ペリツェーウス‐メルツバッハー病、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、進行性核上麻痺、ピック病等の神経変性疾患、ハンチントン病、脊髄小脳失調Ｉ型、球脊髄性筋萎縮症、歯状核赤核淡蒼球ルイ体および筋強直性ジストロフィー等の数種のポリグルタミン神経障害、ならびに、遺伝性クロイツフェルト・ヤコブ病（プリオンタンパク質プロセシング欠損による）等の海綿状脳症、ファブリー病、シュトロイスラー‐シャインカー症候群、ゴーラム病、クロライドチャネル病、先天性筋強直症（トムゼン型およびベッカー型）、バーター症候群ＩＩＩ型、デント病、驚愕過剰症、てんかん、びっくり病、脂肪蓄積症、アンジェルマン症候群、先天性線毛運動不全症（ＰＣＤ）、逆位を伴うＰＣＤ（カルタゲナー症候群としても公知である）、逆位および線毛形成不全を伴わないＰＣＤ、またはシェーグレン病を包含する正常なＣＦＴＲ機能に関連する疾患を治療するための方法であって、前記哺乳動物に、本明細書において記述されている化合物１形態Ａ、化合物１形態Ａ−ＨＣｌ、化合物１形態Ｂ、化合物１形態Ｂ−ＨＣｌ、またはこれらの形態の任意の組合せを含む有効量の組成物を投与するステップを含む方法を提供する。
【０１８３】
代替的な好ましい実施形態によれば、本発明は、前記哺乳動物に組成物を投与するステップを含む嚢胞性線維症を治療する方法であって、前記哺乳動物に、本明細書において記述されている化合物１形態Ａ、化合物１形態Ａ−ＨＣｌ、化合物１形態Ｂ、化合物１形態Ｂ−ＨＣｌ、またはこれらの形態の任意の組合せを含む有効量の組成物を投与するステップを含む方法を提供する。
【０１８４】
本発明によれば、化合物１形態Ａ、化合物１形態Ａ−ＨＣｌ、化合物１形態Ｂ、化合物１形態Ｂ−ＨＣｌ、これらの形態の任意の組合せ、または薬学的に許容されるその組成物の「有効量」は、上記で列挙した通りの疾患、障害または状態の１つまたは複数を治療するまたはその重症度を下げるために有効な量である。
【０１８５】
化合物１形態Ａ、化合物１形態Ａ−ＨＣｌ、化合物１形態Ｂ、化合物１形態Ｂ−ＨＣｌもしくはこれらの形態の任意の組合せ、または薬学的に許容されるその組成物は、上記で列挙した通りの疾患、障害または状態の１つまたは複数を治療するまたはその重症度を下げるために有効な任意の量および任意の投与経路を使用して投与され得る。
【０１８６】
ある特定の実施形態において、化合物１形態Ａ、化合物１形態Ａ−ＨＣｌ、化合物１形態Ｂ、化合物１形態Ｂ−ＨＣｌ、これらの形態の任意の組合せ、または薬学的に許容されるその組成物は、呼吸および非呼吸上皮の頂端膜中に残留ＣＦＴＲ活性を呈する患者における、嚢胞性線維症を治療するまたはその重症度を下げるのに有用である。上皮表面における残留ＣＦＴＲ活性の存在は、当技術分野において公知の方法、例えば、標準的な電気生理学的、生化学的または組織化学的技術を使用して容易に検出できる。そのような方法は、インビボもしくはエクスビボ電気生理学的技術、汗もしくは唾液Ｃｌ−濃度の測定、またはエクスビボ生化学的もしくは組織化学的技術を使用してＣＦＴＲ活性を同定し、細胞表面密度をモニターする。そのような方法を使用して、最も一般的な変異ΔＦ５０８が同型接合または異型接合の患者を包含する、様々な異なる変異が異型接合または同型接合の患者において、残留ＣＦＴＲ活性が容易に検出され得る。
【０１８７】
別の実施形態において、本明細書において記述されている化合物１形態Ａ、化合物１形態Ａ−ＨＣｌ、化合物１形態Ｂ、化合物１形態Ｂ−ＨＣｌもしくはこれらの形態の任意の組合せ、または薬学的に許容されるその組成物は、薬理学的方法または遺伝子療法を使用して、残留ＣＦＴＲ活性が誘発または増進された患者における、嚢胞性線維症を治療するまたはその重症度を下げるのに有用である。そのような方法は、細胞表面に存在するＣＦＴＲの量を増大させ、それにより、患者においてそれまで存在しなかったＣＦＴＲ活性を誘発する、または患者において残留ＣＦＴＲ活性の既存レベルを増進させる。
【０１８８】
一実施形態において、本明細書において記述されている化合物１形態Ａ、化合物１形態Ａ−ＨＣｌ、化合物１形態Ｂ、化合物１形態Ｂ−ＨＣｌもしくはこれらの形態の任意の組合せ、または薬学的に許容されるその組成物は、残留ＣＦＴＲ活性を呈するある特定の遺伝子型、例えば、クラスＩＩＩ変異（制御またはゲーティングの障害）、クラスＩＶ変異（コンダクタンスの変化）またはクラスＶ変異（合成の低減）内の患者における、嚢胞性線維症を治療するまたはその重症度を下げるのに有用である（Ｌｅｅ Ｒ． Ｃｈｏｏ−Ｋａｎｇ、Ｐａｍｅｌａ Ｌ．， Ｚｅｉｔｌｉｎ、Ｔｙｐｅ Ｉ， ＩＩ， ＩＩＩ， ＩＶ， ａｎｄ Ｖ ｃｙｓｔｉｃ ｆｉｂｒｏｓｉｓ Ｔａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ Ｃｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ Ｄｅｆｅｃｔｓ ａｎｄ Ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｔｉｅｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｙ； Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、６巻：５２１〜５２９頁、２０００年）。残留ＣＦＴＲ活性を呈する他の患者遺伝子型は、これらのクラスの１つが同型接合の、または、クラスＩ変異、クラスＩＩ変異もしくは分類のない変異を包含する、任意の他のクラスの変異と異型接合の患者を包含する。
【０１８９】
一実施形態において、本明細書において記述されている化合物１形態Ａ、化合物１形態Ａ−ＨＣｌ、化合物１形態Ｂ、化合物１形態Ｂ−ＨＣｌもしくはこれらの形態の任意の組合せ、または薬学的に許容されるその組成物は、ある特定の臨床表現型、例えば、典型的には上皮の頂端膜中の残留ＣＦＴＲ活性の量と相関する中等度から軽度の臨床表現型内の患者における、嚢胞性線維症を治療するまたはその重症度を下げるのに有用である。そのような表現型は、膵機能不全を呈する患者、または、特発性膵炎および精管の先天性両側欠損、もしくは軽度肺疾患と診断された患者を包含する。
【０１９０】
要求される正確な量は、被験体の種、年齢および全身状態、感染の重症度、特定の作用物質、その投与様式等に応じ、被験体によって変わることになる。本発明の化合物は、好ましくは、投与の容易性および投薬量の均一性のために投薬量単位形態で製剤化される。表現「投薬量単位形態」は、本明細書において使用される場合、治療される患者に適した作用物質の物理的に不連続な単位を指す。しかしながら、本発明の化合物および組成物の１日の総使用量は、妥当な医学的判断の範囲内で、担当医によって決定されることも理解されよう。任意の特定の患者または有機体に対する特異的に有効な用量レベルは、治療されている障害および該障害の重症度；用いられている特定化合物の活性：用いられている特定組成物；患者の年齢、体重、全身の健康状態、性別および食生活；用いられている特定化合物の、投与時間、投与経路および排泄速度；治療の持続時間；用いられている特定化合物と組み合わせて、または同時に使用される薬物；ならびに、医療分野において周知である類似の要因を包含する、様々な要因によって決まることになる。用語「患者」は、本明細書において使用される場合、動物、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトを意味する。
【０１９１】
本発明の薬学的に許容される組成物は、治療されている感染の重症度に応じて、経口で、直腸内に、非経口で、槽内に、膣内に、腹腔内に、局所的に（散剤、軟膏剤、点滴剤またはパッチ剤によって等）、口腔内に、経口または鼻腔用スプレー等として、ヒトおよび他の動物に投与され得る。ある特定の実施形態において、本発明の化合物は、所望の治療効果を得るために、被験体の体重１ｋｇ当たり約０．０１ｍｇから約５０ｍｇ、好ましくは約０．５ｍｇから約２５ｍｇまでの投薬量レベルで、１日１回または複数回、経口でまたは非経口で投与され得る。
【０１９２】
経口投与用の液体剤形は、薬学的に許容される乳剤、マイクロ乳剤、液剤、懸濁剤、シロップ剤およびエリキシル剤を包含するがこれらに限定されない。液体剤形は、活性化合物に加えて、例えば、水または他の溶媒、可溶化剤、ならびにエチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油（特に、綿実油、ラッカセイ油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコール、およびソルビタンの脂肪酸エステル等の乳化剤、ならびにそれらの混合物等、当技術分野において一般に使用される不活性賦形剤を含有し得る。経口組成物は、不活性賦形剤のほかに、湿潤剤、乳化剤および懸濁化剤等のアジュバント、甘味剤、香味剤、ならびに着香剤も包含し得る。
【０１９３】
注射用調製物、例えば無菌注射用の水性または油性懸濁液は、適切な分散剤または湿潤剤と懸濁化剤とを使用する公知の技術によって製剤化され得る。無菌注射用調製物は、例えば１，３−ブタンジオール中の溶液等、非毒性で非経口的に許容される賦形剤または溶媒中の無菌注射用の溶液、懸濁液またはエマルションであってもよい。許容されるビヒクルおよび溶媒のうち、用いられ得るのは、水、リンゲル液、Ｕ．Ｓ．Ｐ．および生理食塩液である。加えて、無菌固定油は、溶媒または懸濁媒として慣行的に用いられる。この目的のために、合成モノグリセリドまたは合成ジグリセリドを包含する任意の無刺激性固定油が用いられ得る。加えて、オレイン酸等の脂肪酸が注射剤の調製において使用される。
【０１９４】
注射用製剤は、例えば、細菌保持フィルターを通す濾過によって、または、使用前に、滅菌水もしくは他の無菌注射用媒体中に溶解もしくは分散され得る無菌の固体組成物の形態で滅菌剤を組み込むことによって、滅菌できる。
【０１９５】
本発明の化合物の効果を延長するためには、多くの場合、皮下または筋肉内注射からの化合物の吸収を遅らせることが望ましい。これは、難水溶性である結晶性または非結晶性材料の液体懸濁液を使用することによって実現され得る。その結果、化合物の吸収の速度はその溶解の速度に依存し、この速度は同様に、結晶サイズおよび結晶性形態に依存する場合がある。代替として、非経口投与された化合物形態の遅延吸収は、化合物を油ビヒクルに溶解または懸濁することによって実現される。注射用デポー形態は、ポリラクチド−ポリグリコリド等の生分解性ポリマー中に化合物のマイクロカプセル化マトリクスを形成することによって作製される。化合物とポリマーとの比率および用いられる特定のポリマーの性質に応じて、化合物放出の速度を制御することができる。他の生分解性ポリマーの例は、ポリ（オルトエステル）およびポリ（酸無水物）を包含する。デポー注射用製剤は、生体組織に適合するリポソームまたはマイクロエマルションに化合物を封入することによっても調製される。
【０１９６】
直腸または膣内投与用の組成物は、好ましくは、本発明の化合物を、常温では固体だが体温では液体となり、したがって直腸または膣腔内で融解して活性化合物を放出する、ココアバター、ポリエチレングリコールまたは坐剤蝋等の適切な非刺激性の添加剤または担体と混合することによって調製できる、坐剤である。
【０１９７】
経口投与用の固形剤形は、カプセル剤、錠剤、丸剤、散剤および顆粒剤を包含する。そのような固形剤形において、活性化合物は、少なくとも１種の、不活性で薬学的に許容される、クエン酸ナトリウムまたはリン酸カルシウム等の添加剤または担体、ならびに／あるいは、ａ）デンプン類、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトールおよびケイ酸等の充填剤または増量剤、ｂ）例えば、カルボキシメチルセルロース、アルジネート、ゼラチン、ポリビニルピロリジノン、スクロースおよびアカシア等の結合剤、ｃ）グリセロール等の保湿剤、ｄ）寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモデンプンまたはタピオカデンプン、アルギン酸、ある特定のシリケート、および炭酸ナトリウム等の崩壊剤、ｅ）パラフィン等の溶液遅延剤、ｆ）第四級アンモニウム化合物等の吸収加速剤、ｇ）例えば、セチルアルコールおよびグリセロールモノステアレート等の湿潤剤、ｈ）カオリンおよびベントナイト粘土等の吸収剤、ならびに、ｉ）タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、およびそれらの混合物等の滑沢剤と混合される。カプセル剤、錠剤および丸剤の事例において、剤形は緩衝剤も含み得る。
【０１９８】
同様の種類の固体組成物は、ラクトースまたは乳糖等の添加剤、および高分子量ポリエチレングリコール等を使用して、軟質および硬質充填ゼラチンカプセル内の充填剤として用いることもできる。錠剤、糖衣錠剤、カプセル剤、丸剤および顆粒剤の固形剤形は、腸溶性コーティングおよび医薬製剤分野において周知である他のコーティング等、コーティングおよび外殻（ｓｈｅｌｌ）を伴って調製され得る。それらは、不透明化剤を場合により含有してよく、消化管のある特定の部分において、場合により遅延様式で、有効成分（複数可）のみを、またはそれを優先的に放出する組成物のものであってもよい。使用され得る包埋組成物の例は、ポリマー性物質および蝋を包含する。同様の種類の固体組成物は、ラクトースまたは乳糖等の添加剤、および高分子量ポリエチレングリコール等を使用して、軟質および硬質充填ゼラチンカプセル内の充填剤として用いることもできる。
【０１９９】
活性化合物は、１種または複数種の上記した通りの添加剤を加えたマイクロカプセル化形態であってもよい。錠剤、糖衣錠剤、カプセル剤、丸剤および顆粒剤の固形剤形は、腸溶性コーティング、放出制御コーティング、および医薬製剤分野において周知である他のコーティング等、コーティングおよび外殻を伴って調製され得る。そのような固形剤形において、活性化合物は、スクロース、ラクトースまたはデンプン等、少なくとも１種の不活性賦形剤と混和され得る。そのような剤形は、通常の実務と同様に、不活性賦形剤以外の追加物質、例えば、錠剤化滑沢剤、ならびにステアリン酸マグネシウムおよび微結晶性セルロース等の他の錠剤化助剤も含み得る。カプセル剤、錠剤および丸剤の事例において、剤形は、緩衝剤も含み得る。それらは、不透明化剤を場合により含有してよく、消化管のある特定の部分において、場合により遅延様式で、有効成分（複数可）のみを、またはそれを優先的に放出する組成物のものであってもよい。使用され得る包埋組成物の例は、ポリマー性物質および蝋を包含する。
【０２００】
本発明の化合物の局所または経皮投与用の剤形は、軟膏剤、ペースト剤、クリーム剤、ローション剤、ゲル剤、散剤、液剤、スプレー剤、吸入剤またはパッチ剤を包含する。活性成分は、無菌条件下で、薬学的に許容される担体および必要とされる任意の保存剤または緩衝剤と、要求され得る通りに混和される。眼科用製剤、点耳剤および点眼剤も本発明の範囲内であると企図されている。加えて、本発明は、体内への化合物の制御送達を提供するという付加的な利点を有する、経皮パッチ剤の使用を企図している。そのような剤形は、化合物を適正な媒質に溶解または分注することによって調製される。皮膚を横断する化合物のフラックスを増大させるために、吸収エンハンサーを使用してもよい。速度は、速度制御膜を提供すること、または化合物をポリマーマトリクスもしくはゲルに分散させることのいずれかによって制御できる。
【０２０１】
本明細書において記述されている形態Ａ、形態Ａ−ＨＣｌ、形態Ｂ、形態Ｂ−ＨＣｌもしくはそれらの任意の組合せ、または薬学的に許容されるその組成物を、併用療法において用いてよいこと、すなわち、本明細書において記述されている形態Ａ、形態Ａ−ＨＣｌ、形態Ｂ、形態Ｂ−ＨＣｌもしくはそれらの任意の組合せ、または薬学的に許容されるその組成物を、１種または複数種の他の所望の治療薬または医療処置と同時に、その前に、またはその後に投与してよいことも理解されよう。併用レジメンにおいて用いるための療法（治療薬または処置）の特定の組合せでは、所望の治療薬および／または処置と達成される所望の治療効果との適合性を考慮することになる。用いられる療法が、同じ障害について所望の効果を達成し得る（例えば、発明化合物を、同じ障害を治療するために使用される別の作用物質と同時に投与してよい）こと、または該療法が異なる効果を達成し得る（例えば、あらゆる副作用の制御）ことも理解されよう。本明細書において使用される場合、特定の疾患または状態を治療または予防するために通常投与される追加の治療剤は、「治療されている疾患または状態に適している」ことが公知である。
【０２０２】
一実施形態において、追加の作用物質は、粘液溶解剤、気管支拡張剤、抗生物質、抗感染剤、抗炎症剤、本発明の化合物以外のＣＦＴＲモジュレーター、または栄養剤から選択される。
【０２０３】
一実施形態において、追加の作用物質は抗生物質である。本明細書において有用である例示的な抗生物質は、トブラマイシン吸入パウダー（ＴＩＰ）を包含するトブラマイシン、アジスロマイシン、エアゾール化形態のアズトレオナムを包含するアズトレオナム、アミカシンのリポソーム製剤を包含するアミカシン、吸入による投与に適切なシプロフロキサシンの製剤を包含するシプロフロキサシン、レボフロキサシンのエアゾール化製剤を包含するレボフロキサシン（ｌｅｖｏｆｌａｘａｃｉｎ）、ならびに２種の抗生物質、例えばホスホマイシンおよびトブラマイシンの組合せを包含する。
【０２０４】
別の実施形態において、追加の作用物質は粘液溶解剤（ｍｕｃｏｌｙｔｅ）である。本明細書において有用である例示的な粘液溶解剤は、Ｐｕｌｍｏｚｙｍｅ（登録商標）を包含する。
【０２０５】
別の実施形態において、追加の作用物質は気管支拡張剤である。例示的な気管支拡張剤は、アルブテロール、硫酸メタプロテレノール（ｍｅｔａｐｒｏｔｅｎｅｒｏｌ）、酢酸ピルブテロール、サルメテロールまたは硫酸テルブタリン（ｔｅｔｒａｂｕｌｉｎｅ）を包含する。
【０２０６】
別の実施形態において、追加の作用物質は、肺気道表面の液体を修復する際に有効である。そのような作用物質は、細胞内外での塩の動きを改善し、肺気道中の粘液がより水和され、したがってより簡単に浄化されることを可能にする。例示的なそのような作用物質は、高張食塩水、デヌホソル四ナトリウム（［［（３Ｓ，５Ｒ）−５−（４−アミノ−２−オキソピリミジン−１−イル）−３−ヒドロキシオキソラン−２−イル］メトキシ−ヒドロキシホスホリル］［［［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２，４−ジオキソピリミジン−１−イル）−３，４−ジヒドロキシオキソラン−２−イル］メトキシ−ヒドロキシホスホリル］オキシ−ヒドロキシホスホリル］ハイドロジェンホスフェート）、またはブロンキトール（マンニトールの吸入製剤）を包含する。
【０２０７】
別の実施形態において、追加の作用物質は、抗炎症剤、すなわち、肺における炎症を低減させることができる作用物質である。本明細書において有用である例示的なそのような作用物質は、イブプロフェン、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、シルデナフィル、吸入グルタチオン、ピオグリタゾン、ヒドロキシクロロキンまたはシンバスタチンを包含する。
【０２０８】
別の実施形態において、追加の作用物質は、チャネルを遮断することによって直接的に、またはＥＮａＣ活性の増大を招くプロテアーゼ（例えば、セリンプロテアーゼ、チャネル活性化プロテアーゼ）の調節によって間接的にのいずれかで、上皮型ナトリウムチャネル遮断薬（ＥＮａＣ）の活性を低減させる。例示的なそのような作用物質は、カモスタット（トリプシン様プロテアーゼ阻害剤）、ＱＡＵ１４５、５５２−０２、ＧＳ−９４１１、ＩＮＯ−４９９５、エーロライト（Ａｅｒｏｌｙｔｉｃ）およびアミロライドを包含する。上皮型ナトリウムチャネル遮断薬（ＥＮａＣ）の活性を低減させる追加の作用物質は、例えばＰＣＴ公開第ＷＯ２００９／０７４５７５号において見られ、その全内容はその全体が本明細書に組み込まれる。
【０２０９】
本明細書において記述されている他の疾患の中で、本明細書において記述されているＣＦＴＲモジュレーター等のＣＦＴＲモジュレーターと、ＥＮａＣの活性を低減させる作用物質との組合せは、リドル症候群；嚢胞性線維症、先天性線毛運動不全症、慢性気管支炎、慢性閉塞性肺疾患、喘息、呼吸器感染症、肺癌、口内乾燥および乾性角結膜炎（ｋｅｒａｔｏｃｏｎｊｕｎｃｔｉｖｉｔｉｓ ｓｉｒｅ）、呼吸器感染症（急性および慢性；ウイルス性および細菌性）ならびに肺癌を包含する炎症性またはアレルギー性状態を治療するために使用される。
【０２１０】
形態Ｂ、本明細書において記述されているＣＦＴＲモジュレーター等のＣＦＴＲモジュレーターと、ＥＮａＣの活性を低減させる作用物質との組合せは、上皮の表面上の表面保護液の生理機能の異常をおそらく伴う、上皮全体にわたる体液調節の異常に関連する呼吸器疾患以外の疾患、例えば、口内乾燥（ドライマウス）または乾性角結膜炎（ドライアイ）も包含する、上皮型ナトリウムチャネルの遮断によって媒介される疾患を治療するのにも有用である。さらに、腎臓における上皮型ナトリウムチャネルの遮断を使用して利尿を促進し、それにより血圧低下作用を誘発することができる。
【０２１１】
喘息は、内因性（非アレルギー性）喘息および外因性（アレルギー性）喘息の両方、軽度喘息、中等度喘息、重度喘息、気管支炎喘息、運動誘発性喘息、職業性喘息および細菌感染後に誘発される喘息を包含する。喘息の治療はまた、例えば、４または５歳未満で、喘鳴症状を呈し、かつ、主要な医学的関心事である確立された患者カテゴリーであり、現在は多くの場合、初期型または早期喘息患者として同定されている、「喘鳴乳幼児」として診断されたまたは診断可能な被験体の治療を包括するものとして理解されている。（便宜上、この特定の喘息状態を「喘鳴乳幼児症候群」と称する。）喘息の治療における予防的効果は、症候性発作の、例えば急性喘息発作もしくは気管支収縮発作の頻度もしくは重症度の低減、肺機能の改善、または気道過敏性の改善によって証明されるであろう。該効果は、他の対症療法、すなわち、症候性発作が発生した際にそれを制限するまたは中断させるための、またはそのように意図された療法、例えば抗炎症（例えばコルチコステロイド）または気管支拡張の必要性が低減することによってさらに証明され得る。喘息における予防的利益は、特に、「モーニングディップ」を起こしやすい被験体において明白となり得る。「モーニングディップ」は、喘息患者のかなりの割合に共通しており、かつ、例えば、午前４時〜６時頃の間、すなわち、通常、先に施したいかなる喘息対症療法からも実質的に離れた時刻における喘息発作を特徴とする、認定された喘息症候群である。
【０２１２】
慢性閉塞性肺疾患は、慢性気管支炎またはそれに関連する呼吸困難、肺気腫、ならびに、他の薬物療法、特に他の吸入薬物療法の結果としての気道過敏性の増悪を包含する。いくつかの実施形態において、本明細書において記述されているＣＦＴＲモジュレーター等のＣＦＴＲモジュレーターと、ＥＮａＣの活性を低減させる作用物質との組合せは、例えば、急性、アラキジン酸性（ａｒａｃｈｉｄｉｃ）、カタル性、クループ性（ｃｒｏｕｐｕｓ）、慢性または結核性気管支炎を包含する、種類または起源を問わない気管支炎の治療に有用である。
【０２１３】
別の実施形態において、追加の作用物質は、形態Ａ、形態Ｂ、形態Ｂ−ＨＣｌおよび形態Ａ−ＨＣｌ以外のＣＦＴＲモジュレーター、すなわち、ＣＦＴＲ活性を調節する効果を有する作用物質である。例示的なそのような作用物質は、アタルレン（「ＰＴＣ１２４（登録商標）」；３−［５−（２−フルオロフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］安息香酸）、シナプルチド、ランコブチド（ｌａｎｃｏｖｕｔｉｄｅ）、デペレスタット（ヒト組換え好中球エラスターゼ阻害剤）、コビプロストン（７−｛（２Ｒ，４ａＲ，５Ｒ，７ａＲ）−２−［（３Ｓ）−１，１−ジフルオロ−３−メチルペンチル］−２−ヒドロキシ−６−オキソオクタヒドロシクロペンタ［ｂ］ピラン−５−イル｝ヘプタン酸）、または（３−（６−（１−（２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）シクロプロパンカルボキサミド）−３−メチルピリジン−２−イル）安息香酸を包含する。別の実施形態において、追加の作用物質は、（３−（６−（１−（２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）シクロプロパンカルボキサミド）−３−メチルピリジン−２−イル）安息香酸である。
【０２１４】
別の実施形態において、追加の作用物質は栄養剤である。例示的なそのような作用物質は、Ｐａｎｃｒｅａｓｅ（登録商標）、Ｐａｎｃｒｅａｃａｒｂ（登録商標）、Ｕｌｔｒａｓｅ（登録商標）もしくはＣｒｅｏｎ（登録商標）を包含するパンクレリパーゼ（パンクレアチン（ｐａｎｃｒｅａｔｉｎｇ）酵素補充）；Ｌｉｐｒｏｔｏｍａｓｅ（登録商標）（旧Ｔｒｉｚｙｔｅｋ（登録商標））、Ａｑｕａｄｅｋｓ（登録商標）、またはグルタチオン吸入を包含する。一実施形態において、追加栄養剤はパンクレリパーゼである。
【０２１５】
一実施形態において、追加の作用物質は、本発明の化合物以外のＣＦＴＲモジュレーターである。
【０２１６】
本発明の組成物中に存在する追加の治療剤の量は、その治療剤を唯一の活性剤として含む組成物中で通常投与されるであろう量以下となる。好ましくは、現在開示されている組成物中における追加の治療剤の量は、その作用物質を唯一の治療活性剤として含む組成物中に通常存在する量の約５０％から１００％までの範囲となる。
【０２１７】
本明細書において記述されている化合物１形態Ａ、形態Ａ−ＨＣｌ、形態Ｂ、形態Ｂ−ＨＣｌもしくはそれらの任意の組合せ、または薬学的に許容されるその組成物は、プロテーゼ、人工弁、血管移植片、ステントおよびカテーテル等の移植可能な医療デバイスをコーティングするための組成物に組み込まれてもよい。したがって、本発明は、別の態様において、概して上述した通りの、ならびに本明細書におけるクラスおよびサブクラス内の本発明の化合物と、移植可能なデバイスをコーティングするのに適切な担体とを含む、前記移植可能なデバイスをコーティングするための組成物を包含する。さらに別の態様において、本発明は、概して上述した通りの、ならびに本明細書におけるクラスおよびサブクラス内の本発明の化合物と、移植可能なデバイスをコーティングするのに適切な担体とを含む組成物でコーティングされた、前記移植可能なデバイスを包含する。適切なコーティングおよびコーティングされた移植可能なデバイスの一般的調製は、米国特許第６，０９９，５６２号、同第５，８８６，０２６号および同第５，３０４，１２１号において記述されている。コーティングは、典型的には、ヒドロゲルポリマー、ポリメチルジシロキサン、ポリカプロラクトン、ポリエチレングリコール、ポリ乳酸、エチレン酢酸ビニル、およびそれらの混合物等の生体適合性ポリマー材料である。コーティングは、場合により、組成物において制御放出特徴を付与するために、フルオロシリコーン、多糖、ポリエチレングリコール、リン脂質またはそれらの組合せの適切なトップコートによってさらに被覆され得る。
【０２１８】
本発明の別の態様は、生物学的試料または患者におけるＣＦＴＲ活性を（例えばインビトロまたはインビボで）調節することに関し、その方法は、本明細書において記述されている化合物２０形態Ａ、形態Ａ−ＨＣｌ、形態Ｂ、形態Ｂ−ＨＣｌもしくはそれらの任意の組合せ、または薬学的に許容されるその組成物を、該患者に投与する、または前記生物学的試料と接触させるステップを含む。用語「生物学的試料」は、本明細書において使用される場合、細胞培養物またはその抽出物；哺乳動物から得た生検材料またはその抽出物；および血液、唾液、尿、糞便、精液、涙もしくは他の体液、またはその抽出物を包含するがこれらに限定されない。
【０２１９】
生物学的試料におけるＣＦＴＲの調節は、当業者に公知である様々な目的で有用である。そのような目的の例は、生物学的および病理学的現象におけるＣＦＴＲの研究；ならびにＣＦＴＲの新たなモジュレーターの比較評価を包含するがこれらに限定されない。
【０２２０】
また別の実施形態において、アニオンチャネルの活性をインビトロまたはインビボで調節する方法であって、前記チャネルを、本明細書において記述されている化合物２０形態Ａ、形態Ａ−ＨＣｌ、形態Ｂ、形態Ｂ−ＨＣｌもしくはそれらの任意の組合せ、または薬学的に許容されるその組成物と接触させるステップを含む方法が提供される。好ましい実施形態において、アニオンチャネルは、クロライドチャネルまたは重炭酸塩チャネルである。他の好ましい実施形態において、アニオンチャネルはクロライドチャネルである。
【０２２１】
代替的な実施形態によれば、本発明は、細胞の膜中の機能的ＣＦＴＲの数を増大させる方法であって、前記細胞を、本明細書において記述されている化合物２０形態Ａ、形態Ａ−ＨＣｌ、形態Ｂ、形態Ｂ−ＨＣｌもしくはそれらの任意の組合せ、または薬学的に許容されるその組成物と接触させるステップを含む方法を提供する。
【０２２２】
別の好ましい実施形態によれば、ＣＦＴＲの活性は、膜貫通電位を測定することによって測定される。生物学的試料において膜を横断する電位を測定するための手段は、光学的膜電位アッセイまたは他の電気生理学的方法等、当技術分野において公知の方法のいずれかを用い得る。
【０２２３】
光学的膜電位アッセイでは、ＧｏｎｚａｌｅｚおよびＴｓｉｅｎによって記述されている電圧感受性ＦＲＥＴセンサー（Ｇｏｎｚａｌｅｚ， Ｊ． Ｅ．およびＲ． Ｙ． Ｔｓｉｅｎ（１９９５年）、「Ｖｏｌｔａｇｅ ｓｅｎｓｉｎｇ ｂｙ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ ｅｎｅｒｇｙ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｉｎ ｓｉｎｇｌｅ ｃｅｌｌｓ．」、Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｊ、６９巻（４号）：１２７２〜８０頁、ならびにＧｏｎｚａｌｅｚ， Ｊ． Ｅ．およびＲ． Ｙ． Ｔｓｉｅｎ（１９９７年）、「Ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｉｎｄｉｃａｔｏｒｓ ｏｆ ｃｅｌｌ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｔｈａｔ ｕｓｅ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ ｅｎｅｒｇｙ ｔｒａｎｓｆｅｒ」、Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ、４巻（４号）：２６９〜７７頁を参照）を、電圧／イオンプローブリーダー（ＶＩＰＲ）等の蛍光変化を測定するための機器使用（Ｇｏｎｚａｌｅｚ， Ｊ． Ｅ．、Ｋ． Ｏａｄｅｓら（１９９９年）、「Ｃｅｌｌ−ｂａｓｅｄ ａｓｓａｙｓ ａｎｄ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｉｏｎ−ｃｈａｎｎｅｌ ｔａｒｇｅｔｓ」、Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ Ｔｏｄａｙ、４巻（９号）：４３１〜４３９頁を参照）と組み合わせて利用する。
【０２２４】
これらの電圧感受性アッセイは、膜可溶性の電圧感受性染料ＤｉＳＢＡＣ２（３）と、原形質膜の外葉に付着しており、蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）ドナーとして作用する蛍光リン脂質ＣＣ２−ＤＭＰＥとの間のＦＲＥＴにおける変化に基づく。膜電位（Ｖｍ）における変化は、負に帯電したＤｉＳＢＡＣ２（３）を原形質膜全体にわたって再分配させ、それに応じてＣＣ２−ＤＭＰＥからのエネルギー移動の量が変化する。蛍光発光における変化は、９６または３８４ウェルマイクロタイタープレート中で細胞ベースのスクリーニングを行うように設計されて統合された液体ハンドラーおよび蛍光検出器であるＶＩＰＲ（商標）ＩＩを使用してモニターできる。
【０２２５】
別の態様において、本発明は、生物学的試料におけるＣＦＴＲまたはその断片の活性をインビトロまたはインビボで測定する際に使用するためのキットであって、（ｉ）化合物２０形態Ａ、形態Ａ−ＨＣｌ、形態Ｂ、形態Ｂ−ＨＣｌもしくはそれらの任意の組合せ、または上記実施形態のいずれかを含む組成物と、（ｉｉ）ａ）組成物を生物学的試料と接触させ、ｂ）前記ＣＦＴＲまたはその断片の活性を測定するための取扱説明書とを含むキットを提供する。一実施形態において、キットは、ａ）追加組成物を生物学的試料と接触させ、ｂ）前記追加化合物の存在下で、前記ＣＦＴＲまたはその断片の活性を測定し、ｃ）追加化合物の存在下におけるＣＦＴＲの活性を、本明細書において記述されている形態Ａ、形態Ａ−ＨＣｌ、形態Ｂ、形態Ｂ−ＨＣｌ、またはそれらの任意の組合せの存在下でのＣＦＴＲの密度と比較するための取扱説明書をさらに含む。好ましい実施形態において、キットは、ＣＦＴＲの密度を測定するために使用される。
【０２２６】
本明細書において記述されている発明をより完全に理解できるように、下記実施例を示す。これらの実施例は、例示のみを目的とし、本発明をいかようにも限定するものとして解釈されるべきではないことを理解すべきである。
【実施例】
【０２２７】
方法および材料
ＸＲＰＤ（Ｘ線粉末回折）
機器１
Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）データは、リガク／ＭＳＣミニフレックスデスクトップ粉末Ｘ線回折装置（Ｒｉｇａｋｕ、Ｔｈｅ Ｗｏｏｄｌａｎｄｓ、ＴＸ）を使用して、室温で記録する。Ｘ線は、Ｋβ抑制フィルターを用い、３０ｋＶおよび１５ｍＡで操作されるＣｕ管を使用して生成する。発散スリットは、それぞれ４．２度およびスリット０．３ｍｍに設定された散乱および受光スリットと共に可変である。スキャンモードは、０．０２度の刻み幅および２．０秒のカウント時間を用いる固定時間（ＦＴ）である。参照標準物質：７５％方ソーダ石（Ｎａ３Ａｌ４Ｓｉ４Ｏ１２Ｃｌ）および２５％シリコン（Ｒｉｇａｋｕ、カタログ番号２１００／ＡＬＳ）を使用して、粉末Ｘ線回折装置を較正する。ゼロバックグラウンド試料ホルダー（ＳＨ−ＬＢＳＩ５１１−ＲＮＤＢ）付きの６試料台を使用する。粉末試料を凹部に置き、スライドガラスで平らにする。
【０２２８】
機器２
代替として、粉末Ｘ線回折測定は、室温で銅放射線（１．５４０６０Ａ）を用いるＰＡＮａｌｙｔｉｃａｌのエキスパートプロ回折装置を使用して実施した。入射ビーム光学は、試料上および回折ビーム側における一定の照射長を確実にするための可変発散スリットで構成されたものであった。高速線形固体状態検出器は、スキャンモードにおいて測定された２．１２度２θの有効長で使用した。粉末試料をゼロバックグラウンドシリコンホルダーの凹部上に詰め、回転を実施してより良好な統計を達成した。対称スキャンは、０．０１７度の刻みサイズおよび１５．５秒のスキャンステップ時間を用い、４〜４０度２θで測定した。
【０２２９】
機器３
代替として、高分解能データは、ビームラインＩＤ３１（Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｓｙｎｃｈｒｏｔｒｏｎ Ｒａｄｉａｔｉｏｎ Ｆａｃｉｌｉｔｙ、Ｇｒｅｎｏｂｌｅ、フランス）にて室温で収集した。Ｘ線は、３つの１１ｍｍギャップ真空外アンジュレーター（ｅｘ−ｖａｃｕｕｍ ｕｎｄｕｌａｔｏｒ）によって生じさせる。極低温に冷却した二結晶モノクロメーター（Ｓｉ（１１１）結晶）によってビームを単色化する。水冷式スリットは、モノクロメーターへの入射ビームおよび試料に伝達される単色ビームのサイズを、０．５〜２．５ｍｍ（水平方向）×０．１〜１．５ｍｍ（垂直方向）の範囲内で限定する。実験に使用した波長は１．２９９８４（３）Åであった。回折装置は、回折強度を２θの関数として測定するために垂直にスキャンされる９の検出器の列からなる。各検出器の前にＳｉ（１１１）アナライザー結晶を置き、検出器チャネルはおよそ２°間隔とする。この回折装置は、ピーク幅が０．００３°の狭さである極めて精密な高分解能回折パターンを生じさせることができ、ピーク位置の精度は０．０００１°程度である。マテリアルズスタジオ（Ｍａｔｅｒｉａｌｓ Ｓｔｕｄｉｏ）（Ｒｅｆｌｅｘ ｍｏｄｕｌｅ）を使用して粉末回折データを処理し、インデックスを付けた。マテリアルズスタジオの粉末解析モジュールを使用して構造を解析した。得られた溶液を構造的実現可能性について評定し、その後、リートベルトの精密化手順を使用して精密化した。
【０２３０】
形態Ａおよび形態Ｂについての実施例において記述されているＸＰＲＤスペクトルは、機器１（図１０Ａ）または機器２（図１０Ｂ）を上述した設定で使用して記録した。形態Ｂ−ＨＣｌおよび形態Ａ−ＨＣｌについての実施例において記述されているＸＰＲＤスペクトルは、機器２を上述した設定で使用して記録した。形態Ａ−ＨＣｌおよび形態Ｂ−ＨＣｌについての結晶系、空間群および単位格子寸法は、機器３を使用して決定した。
【０２３１】
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）は、ＴＡ ＤＳＣ Ｑ２０００示差走査熱量計（ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｎｅｗ Ｃａｓｔｌｅ，ＤＥ）を使用して実施した。機器をインジウムで較正した。１つ穴の開いた蓋を使用して圧着された密封皿に、およそ２〜３ｍｇの試料を秤量して入れた。ＤＳＣ試料を、２５℃から３１５℃まで、１０℃／分の加熱速度でスキャンした。Ｔｈｅｒｍａｌ Ａｄｖａｎｔａｇｅ Ｑ Ｓｅｒｉｅｓ（商標）ソフトウェアによってデータを収集し、ユニバーサルアナリシスソフトウェア（ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｎｅｗ Ｃａｓｔｌｅ、ＤＥ）によって分析した。
【０２３２】
熱重量分析（ＴＧＡ）
熱重量分析（ＴＧＡ）データは、ＴＡ Ｑ５００熱重量分析器（ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｎｅｗ Ｃａｓｔｌｅ，ＤＥ）で収集した。およそ３〜５ｍｇの重量を持つ試料を、２５℃から３５０℃まで、１０℃／分の加熱速度でスキャンした。Ｔｈｅｒｍａｌ Ａｄｖａｎｔａｇｅ Ｑ Ｓｅｒｉｅｓ（商標）ソフトウェアによってデータを収集し、ユニバーサルアナリシスソフトウェア（ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｎｅｗ Ｃａｓｔｌｅ、ＤＥ）によって分析した。
【０２３３】
ＦＴＩＲ分光法
ＦＴＩＲスペクトルは、スマートオービットサンプリングコンパートメント（多重反射型減衰全反射アクセサリー）、４５度のダイヤモンド窓を用いて、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ニコレット６７００ ＦＴ−ＩＲ光度計から収集した。データ収集および分析に使用されるソフトウェアは、オムニック７．４である。収集設定は下記の通りであった：
検出器：ＤＴＧＳ ＫＢｒ、
ビームスプリッター：Ｇｅ／ＫＢｒ、
光源：エバーグローＩＲ、
スキャン範囲：４０００〜４００ｃｍ−１、
ゲイン：８．０、
光学的速度：０．６３２９ｃｍ／秒、
開口：１００、
スキャン数：３２、および
分解能：４ｃｍ−１。
【０２３４】
粉末試料をダイヤモンド結晶に直接置き、圧力を加え、試料の表面をダイヤモンド結晶の表面と一致させた。バックグラウンドスペクトルを収集し、次いで、試料スペクトルを収集した。
【０２３５】
固体状態核磁気分光法
固体状態核磁気分光法（ＳＳＮＭＲ）スペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ４００ＭＨｚプロトン周波数広口径分光計で得た。プロトン緩和縦緩和時間（１Ｈ Ｔ１）は、プロトン検出したプロトン飽和回復データを指数関数に当てはめることによって得た。これらの値を使用して、炭素交差分極マジック角回転実験の最適なリサイクル遅延（１３Ｃ ＣＰＭＡＳ）を設定し、典型的には、１．２×１Ｈ Ｔ１から１．５×１Ｈ Ｔ１の間に設定した。炭素スペクトルは、プロトンチャネル上の線形振幅ランプ（５０％から１００％まで）および１００ｋＨｚ ＴＰＰＭデカップリングを使用し、２ｍｓの接触時間で得た。典型的なマジック角回転（ＭＡＳ）スピードは１５．０ｋＨｚであった。フッ素スペクトルは、プロトンデカップリングした直接分極ＭＡＳ実験を使用して得た。１００ｋＨｚ ＴＰＰＭデカップリングを使用した。リサイクル遅延は、≧５×１９Ｆ Ｔ１に設定した。フッ素縦緩和時間（１９Ｆ Ｔ１）は、フッ素検出しプロトンデカップリングした飽和回復データを指数関数に当てはめることによって得た。２９．５ｐｐｍに設定した固相アダマンタンの高磁場共鳴を使用して、炭素およびフッ素スペクトルを外部参照した。この手順を使用して、炭素スペクトルは０ｐｐｍのテトラメチルシランを間接的に参照し、フッ素スペクトルは０ｐｐｍのニトロメタンを間接的に参照した。
【０２３６】
合成実施例
調製実施例：７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン塩酸塩（８−ＨＣｌ）
【０２３７】
【化４８】
ｔｒａｎｓ−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）シクロヘキサノール（Ａ）の調製、方法１
炭酸ナトリウム（９２０．２ｇ、８．６８２ｍｏｌ、２当量）を反応容器に添加し、続いて水（３．０００Ｌ、６体積）を添加し、撹拌した。ジクロロメタン（ＤＣＭ、４．０００Ｌ、４体積）、続いてｔｒａｎｓ−４−アミノシクロヘキサノール（５００．０ｇ、４．３４１ｍｏｌ）を添加して、二相反応混合物を生成し、これを室温で激しく撹拌した。次いで、ＤＣＭ（２体積）中のＢｏｃ２Ｏ（９４７．４ｇ、９９７．３ｍＬ、４．３４１ｍｏｌ、１当量）の溶液を容器に迅速に滴下添加し、得られた反応混合物を室温で終夜撹拌した。次いで、反応混合物を濾過し、フィルターケーキを水（２×８体積）で洗浄した。生成物が圧縮ケーキになるまで真空乾燥した。次いで、ケーキを真空オーブン中３５℃で２４時間乾燥させて、８３０ｇのｔｒａｎｓ−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）シクロヘキサノール（Ａ）を結晶性固体として得た。
【０２３８】
ｔｒａｎｓ−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）シクロヘキサノール（Ａ）の調製、方法２
２つの５０Ｌ三つ口丸底フラスコは、それぞれ機械的撹拌器および熱電対を備えたものであった。フラスコを冷却槽に入れ、次いで、各フラスコに水（８．８７Ｌ）およびｔｒａｎｓ−４−アミノシクロヘキサノール（１４７９ｇ）を入れた。約１０から３０分後、ｔｒａｎｓ−４−アミノシクロヘキサノールが溶解し、炭酸カリウム（１７７４．６ｇ）を各フラスコに加えた。約１０から２０分後、炭酸カリウムが溶解し、ＤＣＭ（２．９６Ｌ）を各フラスコに入れた。次いで、温度を２０から３０℃に維持するような速度で、ＤＣＭ（１４７９ｍＬ）中のＢｏｃ無水物（３０８２．６ｇ）を各フラスコに加えた。氷／水浴を使用して、発熱を制御し、添加を加速させ、これにはおよそ１から２時間を要した。添加中に懸濁液が形成され、反応混合物を室温に加温させ、Ｂｏｃ無水物の消失に基づいて反応が完了するまで終夜撹拌した。次いで、ヘプタン（６Ｌ）を各フラスコに入れ、混合物をおよそ０から５℃に冷却した。同じフィルターを使用する濾過によって各フラスコから固体を収集した。合わせた固体を、ヘプタン（６Ｌ）、続いて水（８Ｌ）で洗浄した。機械的撹拌器を備えた適正サイズの鉢に固体を入れた。水（１２Ｌ）およびヘプタン（６Ｌ）を添加し、得られた懸濁液を３０から６０分間機械的に撹拌した。固体を濾過によって収集し、次いで、フィルター上、水（８Ｌ）およびヘプタン（８Ｌ）で洗浄し、フィルター上で３日間風乾させ、その後、３０から３５℃で一定重量に真空乾燥して、生成物を白色固体として得た。
【０２３９】
ｔｒａｎｓ−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）シクロヘキシルメタンスルホネート（Ｂ）の調製、方法１
１２Ｌフラスコは、窒素流および機械的撹拌器を備えたものであった。ｔｒａｎｓ−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）シクロヘキサノール（７５０ｇ、３．４８４ｍｏｌ）、続いてテトラヒドロフラン（ＴＨＦ、６．０００Ｌ、８体積）を導入し、混合物を撹拌した。トリエチルアミン（３７０．２ｇ、５０９．９ｍＬ、３．６５８ｍｏｌ、１．０５当量）を添加し、混合物を０℃に冷却した。混合物の温度を５℃未満に保ちながら、塩化メタンスルホニル（４１９．０ｇ、２８３．１ｍＬ、３．６５８ｍｏｌ、１．０５当量）を慎重に滴下添加した。添加後、混合物を０℃で３時間撹拌し、次いで、次第に室温（１７℃）に加温し、終夜（約１５時間）撹拌した。混合物を水（６体積）でクエンチし、１５分間撹拌した。酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ、９．０００Ｌ、１２体積）を添加し、撹拌を１５分間続けた。撹拌を停止し、混合物を１０分間静置させ、水相を除去した。１ＮのＨＣｌ（６体積、４．５Ｌ）を添加し、撹拌を１５分間続けた。撹拌を停止し、水相を除去した。１０％ｗ／ｖのＮａＨＣＯ３（４．５Ｌ、６体積）を添加し、混合物を１０分間撹拌した。撹拌を停止し、水相を除去した。水（６体積、４．５Ｌ）を添加し、混合物を１０分間撹拌した。水層を除去し、有機層をポリッシュ濾過し、４体積に濃縮した。ヘプタン（５．５体積、４Ｌ）を添加し、混合物を再度濃縮乾固させて、９８８ｇのｔｒａｎｓ−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）シクロヘキシルメタンスルホネートを結果として生じさせた。
【０２４０】
ｔｒａｎｓ−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）シクロヘキシルメタンスルホネート（Ｂ）の調製、方法２
機械的撹拌器、添加漏斗、窒素入口、熱電対および乾燥管を備えた三つ口丸底フラスコを、冷却槽に入れた。ｔｒａｎｓ−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）シクロヘキサノール（２５９９ｇ、１２．０７ｍｏｌ、１．０当量）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（２０．８Ｌ）およびトリエチルアミン（１４６６ｇ、１４．４９ｍｏｌ、１．２当量）をフラスコに加えた。混合物を氷水浴で冷却し、撹拌した。塩化メタンスルホニル（１４６６ｇ、１２．８０ｍｏｌ、１．０６当量）を、添加漏斗により１時間かけて滴下添加した。添加が完了したら、冷却浴を除去し、出発材料が消費されたことをＴＬＣが示すまで（約３０分）反応混合物を撹拌した。次いで、反応混合物を、塩化水素酸水溶液（６．７Ｌの水中２２３ｍＬのＨＣｌ）およびＥｔＯＡｃ（１０．４Ｌ）でクエンチした。混合物を常温でおよそ１０から２０分間撹拌し、次いで、分液漏斗に移した。層を分離し、水層を廃棄した。有機層を、水（２×４．５Ｌ）、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１×４．５Ｌ）で洗浄し、５から１０分間撹拌しながら、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。混合物を濾過し、フィルターケーキをＥｔＯＡｃ（２×６００ｍＬ）で洗浄した。合わせた洗浄液および濾液を減圧下４０℃で濃縮すると、白色固体が残った。固体をヘプタン（３Ｌ）に溶かし、氷／メタノール冷却槽中で冷却した。さらなるヘプタン（５Ｌ）を添加し、混合物を０から５℃で１時間以上撹拌した。次いで、固体を濾過によって収集し、冷ヘプタン（０から５℃、２×１．３Ｌ）で洗浄し、４０℃で一定重量に真空乾燥して、表題化合物を得た。
【０２４１】
注記：冷却槽および氷浴付きの丸底フラスコの代わりにジャケット型反応器を使用してよい。
【０２４２】
ｔｒａｎｓ−４−アミノシクロヘキシルメタンスルホネート（Ｃ）の調製、方法１
ｔｒａｎｓ−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）シクロヘキシルメタンスルホネート（９８５ｇ、３．３５７ｍｏｌ）を、撹拌器を備えた三つ口１２Ｌフラスコに、窒素雰囲気下で換気しながら導入した。ＤＣＭ（１．９７０Ｌ、２体積）を室温で添加し、撹拌を開始した。トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）（２．８４４ｋｇ、１．９２２Ｌ、２４．９４ｍｏｌ、２体積）を混合物に、各１Ｌの分量を２回ゆっくり添加した。１回目の添加後、混合物を３０分間撹拌し、続いて２回目の添加をした。混合物を室温で終夜（１５時間）撹拌して、透明溶液を結果として生じさせた。次いで、２−メチルテトラヒドロフラン（４体積）を反応混合物に添加し、これを１時間撹拌した。次いで、混合物をドラフト中で慎重に濾過し、真空乾燥して、１１００ｇのｔｒａｎｓ−４−アミノシクロヘキシルメタンスルホネートのＴＦＡ塩を過剰なＴＦＡとともに得た。
【０２４３】
ｔｒａｎｓ−４−アミノシクロヘキシルメタンスルホネート（Ｃ）の調製、方法２
５０Ｌ三つ口丸底フラスコは、機械的撹拌器、添加漏斗および熱電対を備えたものであり、これを冷却槽に入れた。ｔｒａｎｓ−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）シクロヘキシルメタンスルホネート（３４７４ｇ、１．０当量）およびＤＣＭ（５．９Ｌ）をフラスコに加えた。得られた懸濁液を常温で５から１０分間撹拌し、次いで、添加漏斗を介しトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ、５．９Ｌ）を２．５時間かけてゆっくり添加して、結果として生じる発熱およびガス発生速度を制御した。反応混合物を室温で終夜撹拌し、次いで、氷水浴を使用して１５℃から２０℃に冷却した。次いで、添加漏斗を介し、内部温度を２５℃未満に維持する速度で（およそ１．５時間）、２−メチルテトラヒドロフラン（２−ＭｅＴＨＦ、１１．８Ｌ）を添加した。最初の４〜５Ｌの２−ＭｅＴＨＦの添加は発熱性であった。得られた懸濁液を１時間撹拌した。固体を濾過によって収集し、次いで、２−ＭｅＴＨＦ（２×２．２Ｌ）で洗浄し、その後、常温で一定重量に真空乾燥して、表題化合物を白色固体として得た。
【０２４４】
７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン塩酸塩（８−ＨＣｌ）の調製、方法１
ｔｒａｎｓ−４−アミノシクロヘキシルメタンスルホネート（２００ｇ、６５０．９ｍｍｏｌ）のＴＦＡ塩を、三つ口フラスコに導入し、続いて水（２．２００Ｌ、１１体積）を添加した。反応混合物の温度を２５℃未満に保ちながらＮａＯＨ（７８．１１ｇ、１．９５３ｍｏｌ、３当量）をゆっくり添加し、混合物を終夜撹拌した。次いで、ＤＣＭ（１．４Ｌ、７体積）を添加し、混合物を撹拌し、有機層を分離した。次いで、水層を２回目のＤＣＭ（１．４Ｌ、７体積）で抽出し、ＤＣＭ層を合わせた。次いで、ＨＣｌ（１０８．５ｍＬ、１２Ｍ、１．３０２０ｍｏｌ、２当量）を添加し、混合物を３０分間撹拌し、その後、ロータリーエバポレーターで乾固するまで濃縮した。アセトニトリル（１０体積）を添加し、混合物を濃縮した。微量の水がすべて共沸的に除去されるまでこれを３回繰り返して、７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン塩酸塩を得た。粗生成物をアセトニトリル（１０体積）から再結晶させて、７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン塩酸塩８−ＨＣｌを無色の結晶性固体として得た。１ＨＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ６） ｐｐｍ ８．０２−８．０４ （ｄ）； ７．２３−７．３１ （ｍ）； ４．５９ （ｓ）； ３．３１ （ｓ）； ２．５１−３．３ （ｍ）； １．６３−１．７５ （ｍ）； １．４５−１．６２ （ｍ）．
注記として、抽出のためにＤＣＭを添加する代わりに、粗生成物を約９５℃から９７℃で蒸留し、さらに再結晶させてもよい。
【０２４５】
７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン塩酸塩（８−ＨＣｌ）の調製、方法２
５０Ｌ三つ口丸底フラスコは、機械的撹拌器、添加漏斗および熱電対を備えたものであり、これを加熱マントルに入れた。水（３０Ｌ）中のｔｒａｎｓ−４−アミノシクロヘキシルメタンスルホネートトリフルオロ酢酸塩（３０００ｇ、１当量）をフラスコに加えた。この添加は弱発熱性であることから、混合物を撹拌しながら、温度を２５℃未満に維持するような速度で、５０％ＮａＯＨ（２３４３ｇ、２９．２９ｍｏｌ、３当量）を添加漏斗により添加した。ＮａＯＨ添加が完了したら、反応混合物を室温で終夜撹拌した。ヘッド温度を９５℃から９８℃とし、還流温度（およそ１００℃）での分別蒸留によって生成物を回収した。ＨＣｌを添加することによって各画分のｐＨを２に調整し、減圧下５５℃で濃縮すると、濃厚なペーストが残った。アセトニトリル（ＡＣＮ１．５Ｌ）を添加し、得られた懸濁液を３０分間撹拌し、次いで、０℃から５℃に１時間冷却した。固体を濾過によって収集し、冷（０から５℃）ＡＣＮ（２×６００ｍＬ）で洗浄し、５０℃で一定重量に真空乾燥した。
【０２４６】
２２Ｌ三つ口丸底フラスコは、機械的撹拌器、熱電対およびコンデンサーを備えたものであり、これを加熱マントルに入れた。収集した固体（２３８２ｇ）、メタノール（４．７Ｌ）および２−ＭｅＴＨＦ（４．７Ｌ）をフラスコに加えた。得られた懸濁液を撹拌し、加熱還流した（およそ６５℃）。反応フラスコを冷却槽に移し、混合物を撹拌した。次いで、添加漏斗を介し２−ＭｅＴＨＦ（４．７Ｌ）を３０分間かけて添加した。得られた懸濁液を０から５℃に冷却し、この温度で３０分間撹拌した。固体を濾過によって収集し、冷（０から５℃）２−ＭｅＴＨＦ（２×６００ｍＬ）で洗浄し、次いで、５５℃で一定重量に真空乾燥した。
【０２４７】
機械的撹拌器、熱電対、窒素入口およびコンデンサーを備えた１２Ｌ三つ口丸底フラスコを、加熱マントルに入れた。粗生成物（２０７９ｇ）およびＡＣＮ（６．２Ｌ）をフラスコに加えた。得られた懸濁液を撹拌し、３０分間加熱還流した（およそ８２℃）。フラスコを冷却槽に移し、懸濁液を０から５℃にゆっくり冷却し、この温度で１時間維持した。固体を濾過によって収集し、冷（０から５℃）ＡＣＮ（３×６００ｍＬ）で洗浄し、５５℃で一定重量に真空乾燥して、表題生成物を得た。
【０２４８】
（実施例１Ａ）
４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸（２）の調製
【０２４９】
【化４９】
ジエチル２−（（２−クロロ−５−（トリフルオロメチル）フェニルアミノ）メチレン）マロネート（６Ｂ）の調製
２−クロロ−５−（トリフルオロメチル）アニリン４（２００ｇ、１．０２３ｍｏｌ）、ジエチル２−（エトキシメチレン）マロネート（５）（２７６ｇ、１．３ｍｏｌ）およびトルエン（１００ｍＬ）を、窒素雰囲気下、ディーンスタークコンデンサーを備えた三つ口１Ｌ丸底フラスコ中で合わせた。溶液を撹拌しながら１４０℃に加熱し、その温度を４時間維持した。反応混合物を７０℃に冷却し、ヘキサン（６００ｍＬ）をゆっくり添加した。得られたスラリーを撹拌し、室温に加温させた。固体を濾過によって収集し、ヘキサン中１０％の酢酸エチル（２×４００ｍＬ）で洗浄し、次いで、真空乾燥して、所望の縮合物ジエチル２−（（２−クロロ−５−（トリフルオロメチル）フェニルアミノ）メチレン）マロネート（６Ｂ）として白色固体（３５０ｇ、収率９４％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６） δ １１．２８ （ｄ， Ｊ ＝ １３．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．６３ （ｄ， Ｊ ＝ １３．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．１０ （ｓ， １Ｈ）， ７．８０ （ｄ， Ｊ ＝ ８．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５０ （ｄｄ， Ｊ ＝ １．５， ８．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．２４ （ｑ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．１７ （ｑ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ，２ Ｈ），１．２７ （ｍ， ６Ｈ）．
エチル８−クロロ−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキシレート（６Ａ）の調製、方法１
三つ口１Ｌフラスコに、Ｄｏｗｔｈｅｒｍ（登録商標）（２００ｍＬ、８ｍＬ／ｇ）を入れ、２００℃で１時間脱気した。溶媒を２６０℃に加熱し、ジエチル２−（（２−クロロ−５−（トリフルオロメチル）フェニルアミノ）メチレン）マロネート（６Ｂ）（２５ｇ、０．０７ｍｏｌ）とともに１０分間かけて小分けにして入れた。得られた混合物を２６０℃で６．５時間（ｈ）撹拌し、得られたエタノール副産物を蒸留によって除去した。混合物を８０℃にゆっくり冷却させた。ヘキサン（１５０ｍＬ）を３０分間（ｍｉｎ）かけてゆっくり添加し、続いて追加で２００ｍＬのヘキサンを一度に添加した。スラリーが室温に達するまで撹拌した。固体を濾過し、ヘキサン（３×１５０ｍＬ）で洗浄し、次いで、真空乾燥して、エチル８−クロロ−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキシレート（６Ａ）を黄褐色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６） δ １１．９１ （ｓ， １Ｈ）， ８．３９ （ｓ， １Ｈ）， ８．０６ （ｄ， Ｊ ＝ ８．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．８１ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．２４ （ｑ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．２９ （ｔ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ， ３Ｈ）．
エチル８−クロロ−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキシレート（６Ａ）の調製、方法２
化合物６Ｂ（２０００ｇ、５．４６８ｍｏｌ）を反応器に導入した。Ｄｏｗｔｈｅｒｍ（４．０００Ｌ）を反応器に入れ、窒素パージによって室温で終夜脱気した。次いでこれを撹拌し、２６０℃に加温した。生じたＥｔＯＨを留去した。反応をモニターし、５．５時間後に完了し、反応が実質的に完了した。熱源を除去し、反応混合物を８０℃に冷却し、ヘプタン（２．０００Ｌ）を入れた。混合物を３０分間撹拌した。ヘプタン（６．０００Ｌ）を撹拌混合物に入れ、撹拌を終夜続けた。固体を濾過除去し、ヘプタン（４．０００Ｌ）で洗浄し、真空オーブン中５０℃で乾燥させて、化合物６Ａを得た。
【０２５０】
エチル４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−キノリン−３−カルボキシレート（６Ｃ）の調製
三つ口５Ｌフラスコに、エチル８−クロロ−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキシレート（６Ａ）（１００ｇ、０．３ｍｏｌ）、エタノール（１２５０ｍＬ、１２．５ｍＬ／ｇ）およびトリエチルアミン（２２０ｍＬ、１．６ｍｏｌ）を入れた。次いで、容器に１０ｇの１０％Ｐｄ／Ｃ（５０％湿式）を５℃で入れた。反応物を水素雰囲気下５℃で２０時間激しく撹拌し、この時間の後、反応混合物をおよそ１５０ｍＬの体積に濃縮した。生成物エチル４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−キノリン−３−カルボキシレート（６Ｃ）を、Ｐｄ／Ｃ入りスラリーとして次のステップに直接持ち込んだ。
【０２５１】
４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸（２）の調製
エチル４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−キノリン−３−カルボキシレート（６Ｃ）（５８ｇ、０．２ｍｏｌ、Ｐｄ／Ｃを含有する粗反応物スラリー）を、還流コンデンサー付きの１Ｌフラスコ中、ＮａＯＨ（８１４ｍＬ、５Ｍ、４．１ｍｏｌ）に懸濁させ、８０℃で１８時間加熱し、続いて１００℃で５時間さらに加熱した。反応物をパックセライトに通して温かいうちに濾過してＰｄ／Ｃを除去し、セライトを１ＮのＮａＯＨですすいだ。濾液をｐＨ約１に酸性化して、濃厚な白色沈殿物を得た。沈殿物を濾過し、次いで、水および冷アセトニトリルですすいだ。次いで、固体を真空乾燥して、４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸（２）を白色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００．０ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６） δ １５．２６ （ｓ， １Ｈ）， １３．６６ （ｓ， １Ｈ）， ８．９８ （ｓ， １Ｈ）， ８．１３ （ｄｄ， Ｊ ＝ １．６， ７．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．０６ − ７．９９ （ｍ， ２Ｈ）．
（実施例１Ｂ）
４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸（２）の代替的調製
【０２５２】
【化５０】
８−クロロ−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸（６Ｄ）の調製
エチル８−クロロ−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキシレート（６Ｂ）（１２００ｇ、３．７５４ｍｏｌ）を容器に入れ、続いて、２−プロパノール（１．２００Ｌ）および水（７．２００Ｌ）を添加し、撹拌した。ＮａＯＨ（６００．６ｇ、７．５０８ｍｏｌ）および水（１．２００Ｌ）を混合し、室温に冷却させた。得られたＮａＯＨ溶液を反応容器に入れた。反応混合物を、８０℃に加熱して３．５時間撹拌し、暗色の均質混合物を得た。さらに１時間後、滴下漏斗を介し４５分間かけて酢酸（９．５９９Ｌ、［２０％ｗ／ｖ溶液］、３１．９７ｍｏｌ）を添加した。反応混合物を撹拌しながら、６℃／時の速度で２２℃に冷却した。得られた固体を濾過し、水（３Ｌ）で洗浄して、湿ったケーキ（１４３６ｇ）を得た。濾液を、真空オーブン中、窒素を抜きながらＤｒｉｅｒｉｔｅ（登録商標）で乾燥させて、８−クロロ−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸を褐色固体として得た。８−クロロ−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸を、１．５Ｌのメタノール中でスラリー化し、６時間撹拌することによって精製した。次いでこれを濾過し、乾燥させて、９６８．８ｇの精製された８−クロロ−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸（６Ｄ）を得た。
【０２５３】
４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸（２）の調製
８−クロロ−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸（６Ｄ）（１８．５ｇ、１．００当量、限定試薬）を反応容器に入れ、ＭｅＯＨ（１１８ｍＬ、６．４体積）を不活性雰囲気下でかき混ぜながら添加した。ＮａＯＭｅ（３．５３ｇ、１．００当量）を１０分間かけて少量ずつ反応器に添加した。すべての固体が溶液中にある状態になるまで（５〜１０分）、混合物を撹拌した。次いで、パラジウム炭素（２．７ｇ、０．０３当量）を反応混合物に添加した。ＭｅＯＨ（６７ｍＬ、３．６体積）に溶解させたギ酸カリウム（１０．７８ｇ、２当量）を、反応混合物に３０分間かけて添加し、常温で約４．５時間撹拌した。８−クロロ−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸が、４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸に対して１．０％以下となった際に、反応は完了したと判断した。反応が完了したら、混合物をセライトのパッド（３７ｇ［出発物質６Ｄの質量のおよそ２倍］）に通して濾過して、固体を除去した。セライトケーキをＭｅＯＨ（３７ｍＬ、２体積）で洗浄した。濾液をきれいな反応容器に入れ、撹拌した。酢酸（７．２２ｍＬ、２当量）を、撹拌溶液に少なくとも４５分間かけて連続的に入れ、得られたスラリーを５〜１６時間の間撹拌した。固体を濾過し、ケーキをＭｅＯＨ（５６ｍＬ、３体積）で洗浄し、減圧して乾燥させ、次いで真空乾燥して、表題カルボン酸２を得た。
【０２５４】
代替として、ギ酸カリウム試薬を水素ガスに置き換えてもよい。
【０２５５】
（実施例２Ａ）
４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）アニリン（３）の調製
【０２５６】
【化５１】
７−［４−ニトロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン（９）の調製、方法１
窒素雰囲気下で得た７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン塩酸塩（８−ＨＣｌ）（４．６ｇ、３４．４３ｍｍｏｌ）を含有するフラスコに、アセトニトリル（５０ｍＬ）中の４−フルオロ−１−ニトロ−２−（トリフルオロメチル）ベンゼン（７）（６．０ｇ、２８．６９ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（８．７ｇ、１２．００ｍＬ、８６．０７ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。反応フラスコを、窒素雰囲気下８０℃で１６時間加熱した。反応混合物を冷却させ、次いで水とジクロロメタンとに分配した。有機層を１ＭのＨＣｌで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、乾固するまで濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中０〜１０％酢酸エチル）による精製により、７−［４−ニトロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン（９）を黄色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００．０ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６） δ ８．０３ （ｄ， Ｊ ＝ ９．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．３１ （ｄ， Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２５ （ｄｄ， Ｊ ＝ ２．６， ９．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．５９ （ｓ， ２Ｈ）， １．６９ − １．６７ （ｍ， ４Ｈ）， １．５０ （ｄ， Ｊ ＝ ７．０ Ｈｚ， ４Ｈ）．
７−［４−ニトロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン（９）の調製、方法２
４−フルオロ−１−ニトロ−２−（トリフルオロメチル）ベンゼン（７）（９０１ｇ、４．３０９ｍｏｌ）を、３０Ｌジャケット型容器に、窒素雰囲気下、撹拌しながら、Ｎａ２ＣＯ３（９５９．１ｇ、９．０４９ｍｏｌ）およびＤＭＳＯ（５Ｌ、５．５体積）とともに導入した。次いで、７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン塩酸塩（８−ＨＣｌ）（６３３．４ｇ、４．７４０ｍｏｌ）を小分けにして容器に添加した。温度を次第に５５℃に上昇させた。反応が実質的に完了したら、混合物を１０体積のＥｔＯＡｃで希釈し、水（５．５体積）で３回、または水層中のＤＭＳＯが消失する（ＨＰＬＣ）まで洗浄した。すべてのＥｔＯＡｃが除去されるまで、有機層を４体積に濃縮し、次いで溶媒をシクロヘキサンと交換し、フラスコ中の総体積を、シクロヘキサンを含めて約４体積とした。反応混合物を、ロータリーエバポレーターで３０分間、６０℃に加熱した。次いで、溶液を撹拌または回転させながら室温に３時間冷却した。すべての固体が結晶化したら、溶液を乾固するまで濃縮して、７−［４−ニトロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン（９）を得た。
【０２５７】
７−［４−ニトロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン（９）の調製、方法３
４−フルオロ−１−ニトロ−２−（トリフルオロメチル）ベンゼンを、３体積のＤＣＭに溶解させた。テトラブチルアンモニウムブロミド（０．０５当量）およびＫＯＨ（５０ｗｔ％、３．６当量）を添加した。次いで、７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン塩酸塩（８−ＨＣｌ）を０〜５℃で添加した。反応物を常温に加温し、ＨＰＬＣによってモニターした。反応が実質的に完了したら、層を分離し、有機層を１ＭのＨＣｌで洗浄した。層を分離し、水層を廃棄した。有機層を水で１回、ブラインで１回洗浄し、蒸発させた。得られた材料を、還流でシクロヘキサンから再結晶させた。固体を濾過し、シクロヘキサンで洗浄し、真空オーブン中、Ｎ２ガスを抜きながら４５℃で乾燥させて、７−［４−ニトロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン（９）を得た。
【０２５８】
４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）アニリン（３）の調製
７−［４−ニトロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン（２６）（７．０７ｇ、２４．７０ｍｍｏｌ）および１０％Ｐｄ／Ｃ（０．７１ｇ、６．６４ｍｍｏｌ）で満たしたフラスコを排気し、次いで窒素を流した。エタノール（２２ｍＬ）を添加し、反応フラスコに水素バルーンを装着した。１２時間激しく撹拌後、反応混合物を窒素でパージし、Ｐｄ／Ｃを濾過によって除去した。濾液を減圧下で濃縮して暗色油とし、残基をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中０〜１５％酢酸エチル）によって精製して、４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）アニリン（３）を紫色固体（５．７６ｇ、収率９１％）として得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００．０ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６） δ ６．９５ （ｄｄ， Ｊ ＝ ２．３， ８．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．７９ （ｄ， Ｊ ＝ ２．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．７２ （ｄ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．８９ （ｓ， ２Ｈ）， ４．０９ （ｓ， ２Ｈ）， １．６１ − １．５９ （ｍ， ４Ｈ）および１．３５ （ｄ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ４Ｈ）．
（実施例２Ｂ）
４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）アニリン（３−ＨＣｌ）の塩酸塩の調製
【０２５９】
【化５２】
４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）アニリンの塩酸塩（３−ＨＣｌ）の調製、方法１
パラジウム炭素（１５０ｇ、５％ｗ／ｗ）を、窒素雰囲気下、Ｂｕｅｃｈｉ水素化装置（ｈｙｄｒｏｇｅｎａｔｏｒ）（２０Ｌ容量）に入れ、続いて、７−［４−ニトロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン（９）の塩酸塩（１５００ｇ）、および２−メチルテトラヒドロフラン（１０．５Ｌ、７体積）を添加した。水素ガスを、密閉容器に＋０．５バール大気圧を上回る圧力で充填した。約２分間減圧にし、続いて、水素ガスを導入して０．５バールの圧力とした。この過程を２回繰り返した。次いで、水素ガスを、＋０．５バールだけ大気圧を上回る圧力で連続的に充填した。容器ジャケットを冷却することにより、混合物を撹拌し、温度を１８℃から２３℃の間に維持した。反応において水素ガスがそれ以上消費されなくなり、さらなる発熱が起こらなくなったら、再び減圧にした。窒素ガスを０．５バールで容器に充填し、再び減圧にし、続いて０．５バールの窒素ガスの２回目の充填をした。反応が実質的に完了したら、窒素雰囲気下、セライトフィルターを使用する濾過漏斗を介して、反応混合物を受け入れフラスコ（ｒｅｃｅｉｖｉｎｇ ｆｌａｓｋ）に移した。セライトフィルターケーキを２−メチルテトラヒドロフラン（３Ｌ、２体積）で洗浄した。撹拌機構、温度制御および窒素雰囲気を備えた容器に、洗浄液および濾液を入れた。１，４−ジオキサン（１体積）中４ＭのＨＣｌを、２０℃で１時間かけて連続的に容器中に添加した。混合物を追加で１０時間（または終夜）撹拌し、濾過し、２−メチルテトラヒドロフラン（２体積）で洗浄し、乾燥させて、１５１９ｇの４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）アニリン塩酸塩（３−ＨＣｌ）を白色結晶性固体として得た。
【０２６０】
この実施例において、代替的な溶媒を代わりに使用してもよい。例えば、２−ＭｅＴＨＦの代わりにＭｅＯＨおよび／またはＥｔＯＨが使用され得る。
【０２６１】
（実施例３Ａ）
形態ＡとしてのＮ−（４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）フェニル）−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミド（化合物１形態Ａ）の調製
【０２６２】
【化５３】
２−メチルテトラヒドロフラン（９１．００ｍＬ）中の４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−キノリン−３−カルボン酸（２）（９．１ｇ、３５．３９ｍｍｏｌ）および４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）アニリン（３）（９．２ｇ、３５．７４ｍｍｏｌ）の溶液に、プロピルホスホン酸環状無水物（酢酸エチル中５０％溶液、５２．６８ｍＬ、８８．４８ｍｍｏｌ）およびピリジン（５．６ｇ、５．７３ｍＬ、７０．７８ｍｍｏｌ）を室温で添加した。反応フラスコを、窒素雰囲気下６５℃で１０時間加熱した。室温に冷却後、次いで反応混合物を酢酸エチルで希釈し、飽和Ｎａ２ＣＯ３溶液（５０ｍＬ）でクエンチした。層を分離し、水層を酢酸エチルで２回以上抽出した。合わせた有機層を水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して黄褐色固体とした。粗固体生成物を、酢酸エチル／ジエチルエーテル中でスラリー化し（２：１）、減圧濾過によって収集し、酢酸エチル／ジエチルエーテルで２回以上洗浄して（２：１）、粗生成物を淡黄色結晶性粉末として得た。粉末を温酢酸エチルに溶解させ、セライトに吸着させた。シリカゲルクロマトグラフィー（ジクロロメタン中０〜５０％酢酸エチル）による精製により、Ｎ−（４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）フェニル）−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミドの形態Ａ（化合物１形態Ａ）を白色結晶性固体として得た。ＬＣ／ＭＳ ｍ／ｚ ４９６．０［Ｍ＋Ｈ］＋、保持時間１．４８分（ＲＰ−Ｃ１８、３分間かけて１０〜９９％ＣＨ３ＣＮ／０．０５％ＴＦＡ）。１Ｈ ＮＭＲ （４００．０ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６） δ １３．０８ （ｓ， １Ｈ）， １２．１６ （ｓ， １Ｈ）， ８．８８ （ｓ， １Ｈ）， ８．０４ （ｄｄ， Ｊ ＝ ２．１， ７．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．９５ − ７．８８ （ｍ， ３Ｈ）， ７．２２ （ｄｄ， ２．５， ８．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．１６ （ｄ， Ｊ ＝ ２．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．３３ （ｓ， ２Ｈ）， １．６７ （ｄ， Ｊ ＝ ６．９ Ｈｚ， ４Ｈ）， １．４４ （ｄ， Ｊ ＝ ６．９ Ｈｚ， ４Ｈ）．
化合物１形態Ａの粉末ディフラクトグラム（ｄｉｆｆｒａｃｔｏｇｒａｍ）を図１に示す。
【０２６３】
表１は、化合物１形態Ａの代表的なＸＲＰＤピークの一覧を提供するものである。
表１：化合物１形態Ａの代表的なＸＰＲＤピーク
【０２６４】
【表１】
化合物１形態Ａの代表的試料は、図２において提供されるＦＴＩＲスペクトルを示した。
【０２６５】
単一Ｘ線分析に基づく化合物１形態Ａの立体配座画像を図３に示す。回折データは、シールド管ＣｕＫ−アルファ源およびアペックスＩＩ ＣＣＤ検出器を備えたＢｒｕｋｅｒアペックスＩＩ回折装置で得た。ＳＨＥＬＸプログラムを使用して構造を解析し、精密化した（Ｓｈｅｌｄｒｉｃｋ， Ｇ．Ｍ．、Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔ．、Ａ６４巻、１１２〜１２２頁（２００８年））。強度、統計および対称性に基づいて、三方晶系およびＲ−３空間群において構造を解析し、精密化した。化合物１形態Ａは、下記の単位格子寸法：ａ＝１９．１６７０（４）Å、ｂ＝１９．１６７０（４）Å、ｃ＝３３．６５７２（１２）Å、α＝９０°、β＝９０°およびγ＝１２０°を有する。
【０２６６】
（実施例３Ｂ）
形態Ａ−ＨＣｌとしてのＮ−（４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）フェニル）−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミド（化合物１形態Ａ−ＨＣｌ）の調製
【０２６７】
【化５４】
２−メチルテトラヒドロフラン（０．５７Ｌ、１．０体積）を３０Ｌジャケット型反応容器に入れ、続いて、４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）アニリン（３−ＨＣｌ）の塩酸塩（７９１ｇ、２．６７４ｍｏｌ）および４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸（２）（５７３ｇ、２．２２７８ｍｏｌ）、ならびに追加で５．２Ｌ（９．０体積）の２−メチルテトラヒドロフランを添加した。撹拌を開始し、２−メチルテトラヒドロフラン中のＴ３Ｐ（２．８３６ｋｇ、４．４５６ｍｏｌ）を反応混合物に１５分間かけて添加した。次いで、添加漏斗を介しピリジン（５３４．０ｇ、５４６．０ｍＬ、６．６８４ｍｏｌ）を３０分間かけて滴下添加した。混合物を約３０分間かけて４５℃に加温し、１２〜１５時間撹拌した。ＨＰＬＣ分析は、４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸が２％未満の量で存在することを示した。次いで、混合物を室温に冷却した。２−メチルテトラヒドロフラン（４体積、２．２９２Ｌ）、続いて水（６．９体積、４Ｌ）を添加し、その間、温度を３０℃未満に維持した。水層を除去し、有機層をＮａＨＣＯ３飽和水溶液で慎重に２回洗浄した。次いで、有機層を１０％ｗ／ｗクエン酸（５体積）で、最後に水（７体積）で洗浄した。混合物をポリッシュ濾過し、別の乾燥した容器に移した。Ｎ−（４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）フェニル）−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミド塩酸塩の形態Ａ−ＨＣｌの種晶（化合物１形態Ａ−ＨＣｌ）（３．２８１ｇ、５．５７０ｍｍｏｌ）を添加した。ＨＣｌ（ｇ）（１０当量）を吹き込んで２時間にわたって泡立たせ、混合物を終夜撹拌した。得られた懸濁液を濾過し、２−メチルテトラヒドロフラン（４体積）で洗浄し、一定重量まで真空乾燥させ、６０℃でオーブン乾燥させて、化合物１形態Ａ−ＨＣｌとして得た。
【０２６８】
化合物１形態Ａ−ＨＣｌの粉末ディフラクトグラムを図４に示す。
【０２６９】
表２は、化合物１形態Ａ−ＨＣｌの代表的なＸＲＰＤピークを提供するものである。
表２．化合物１形態Ａ−ＨＣｌの代表的なＸＰＲＤピーク
【０２７０】
【表２−１】
【０２７１】
【表２−２】
化合物１形態Ａ−ＨＣｌの単結晶は、単斜晶系、Ｐ２１／ｃ空間群、ならびに下記の単位格子寸法：ａ＝１３．６１７５（４）Å、ｂ＝２１．６１４（３）Å、ｃ＝８．３９４１（４）Å、α＝９０°、β＝１１２．３０３°およびγ＝９０°を保有することが判明した。
【０２７２】
化合物１形態Ａ−ＨＣｌの試料を、顕微鏡も使用して評価した。
【０２７３】
化合物１形態Ａ−ＨＣｌの試料についてのＤＳＣ曲線を、図５において提供し、化合物１形態Ａ−ＨＣｌの代表的試料についてのＴＧＡ曲線を、図６において提供する。
【０２７４】
化合物１形態Ａ−ＨＣｌの代表的試料は、図７において提供されるＦＴＩＲスペクトルを示した。
【０２７５】
化合物１形態Ａ−ＨＣｌを、固体状態１３Ｃおよび１９Ｆ ＮＭＲも使用して分析した。それぞれのＮＭＲスペクトルを図８および９において提供する。１３Ｃ ＳＳＮＭＲおよび１９Ｆ ＳＳＮＭＲスペクトルにおいて見られた数個のピークを、表３および４に記載する。
表３：化合物１形態Ａ−ＨＣｌの１３Ｃ ＳＳＮＭＲピーク
【０２７６】
【表３】
表４：化合物１形態Ａ−ＨＣｌの１９Ｆ ＳＳＮＭＲピーク
【０２７７】
【表４】
（実施例４Ａ）
形態ＢとしてのＮ−（４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）フェニル）−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミド（化合物１形態Ｂ）の調製
【０２７８】
【化５５】
２−メチルテトラヒドロフラン（１体積）を３０Ｌジャケット型反応容器に入れ、続いて４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）アニリン（３−ＨＣｌ）の塩酸塩（１．２当量）および４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸（２）（５７３ｇ、２．２２８ｍｏｌ）を添加した。追加の２−メチルテトラヒドロフラン（９体積）を容器に入れ、撹拌を開始した。２−メチルテトラヒドロフラン中のＴ３Ｐ（２当量）を反応混合物に１５分間かけて添加した。添加漏斗を使用し、ピリジン（３当量）を滴下して迅速に添加した。次いで、撹拌下で、混合物を約３０分間かけて４５℃に加熱し、この温度を約５時間維持した。混合物を室温に冷却した。２−メチルテトラヒドロフラン（４体積）を添加し、続いて水（６．９体積）をゆっくり添加し、反応物の温度を３０℃未満に保った。水層を除去し、有機層をＮａＨＣＯ３飽和水溶液で２回洗浄した。次いで、有機層を１０％ｗ／ｗクエン酸（５体積）で慎重に洗浄し、水（７体積）で洗浄し、ポリッシュ濾過し、別の乾燥した容器に移した。２−メチルテトラヒドロフラン（１０体積）を添加し、撹拌を開始した。ヘプタン（１０体積）を撹拌しながら滴下して迅速に添加した。混合物を約１２時間にわたって撹拌し、次いで減圧濾過した。固体フィルターケーキを別の容器に導入した。水（１５体積）を容器に入れ、懸濁液を４８時間激しく撹拌し、次いで濾過した。固体ケーキを水（５体積）で洗浄し、４５℃で一定重量に乾燥させて、化合物１形態Ｂを得た。
【０２７９】
機器１および２を使用して記録した化合物１形態Ｂの粉末ディフラクトグラムを、それぞれ図１０Ａおよび１０Ｂにおいて示す。
【０２８０】
表５は、化合物１形態Ｂの代表的なＸＲＰＤピークを含む。
表５．化合物１形態Ｂの代表的なＸＰＲＤピーク
【０２８１】
【表５】
化合物１形態Ｂの試料についてのＤＳＣ曲線を、図１１において提供し、化合物１形態Ｂの代表的試料についてのＴＧＡ曲線を、図１２において提供する。
【０２８２】
化合物１形態Ｂの代表的試料は、図１３において提供されるＦＴＩＲスペクトルを示した。
【０２８３】
化合物１形態Ｂを、固体状態１３Ｃおよび１９Ｆ ＮＭＲも使用して分析した。それぞれのＮＭＲスペクトルを図１４および１５において提供する。１３Ｃ ＳＳＮＭＲおよび１９Ｆ ＳＳＮＭＲスペクトルにおいて見られた数個のピークを、表６および７に記載する。
表６：化合物１形態Ｂの１３Ｃ ＳＳＮＭＲピーク
【０２８４】
【表６】
表７：化合物１形態Ｂの１９Ｆ ＳＳＮＭＲピーク
【０２８５】
【表７】
化合物１形態Ｂの単結晶をマイクロマウントループに載せ、密閉した銅Ｘ線管およびアペックスＩＩ ＣＣＤ検出器を備えたＢｒｏｋｅｒアペックスＩＩ回折装置の中心に据えた。最初に、４０フレームの３セットを収集して、予備的単位格子を決定した。その後、１５スキャンおよび６０８４フレームからなる完全データセットを得た。データ収集は室温で実施した。データを統合し、Ｂｒｕｋｅｒ ＡＸＳ製のアペックスＩＩソフトウェアを使用して測った。統合およびスケーリングは、６１７６の反射をもたらし、このうちの２２５０が固有のものであった。ＳＨＥＬＸＴＬソフトウェアを使用し、空間群Ｐ２１／ｃにおける直接的方法によって構造を解析した。精密化は、同じくＳＨＥＬＸＴＬソフトウェアを使用するＦ２についての完全行列最小二乗法を用いて実施した。３９２の全部のパラメーターを精密化に使用して、５．７４の対パラメーター反射比をもたらした。最終精密化指数は、ｗＲ２＝０．０９６２およびＲｌ＝０．０６８２（Ｉ＞２シグマ（Ｉ）である反射についてはｗＲ２＝０．０８５０およびＲｌ＝０．０４１２であった。
【０２８６】
化合物１形態ＢのＮ−（４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）フェニル）−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミドの単結晶は、単斜晶系、Ｐ２１／ｃ空間群、ならびに下記の単位格子寸法：ａ＝１３．５４２９（４）Å、ｂ＝１３．４５５７（４）Å、ｃ＝１２．０５９２（４）Å、α＝９０°、β＝１０１．１９３°およびγ＝９０°を保有することが判明した。
【０２８７】
（実施例４Ｂ）
形態Ｂ−ＨＣｌとしてのＮ−（４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）フェニル）−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミド（化合物１形態Ｂ−ＨＣｌ）の調製
【０２８８】
【化５６】
方法１
１００ｍＬの２−メチルテトラヒドロフランを、撹拌器を備えた窒素雰囲気を有する三つ口フラスコに入れた。化合物１形態Ａ−ＨＣｌ（５５ｇ、０．１０３ｍｏｌ）、続いて３４９ｍＬの２−メチルテトラヒドロフランをフラスコに加え、撹拌を開始した。２８ｍＬの水をフラスコに加え、フラスコを６０℃の内部温度に加温し、４８時間撹拌した。フラスコを室温に冷却し、１時間撹拌した。フィルターケーキが乾燥するまで、反応混合物を減圧濾過した。固体フィルターケーキを２−メチルテトラヒドロフラン（４体積）で２回洗浄した。固体フィルターケーキを約３０分間にわたって吸引して減圧にしたままにしておき、乾燥トレイに移した。フィルターケーキを６０℃で一定重量に真空乾燥した。これにより、化合物１形態Ｂ−ＨＣｌを白色結晶性固体として得た。
【０２８９】
方法２
化合物１形態Ａ−ＨＣｌ（１４．６３８ｇ、２７．５２ｍｍｏｌ）を１００ｍＬ丸底フラスコに入れた。ＥｔＯＨ（２４８．９ｍＬ）および水（２７．８２ｍＬ）を添加した。白色スラリーを加熱還流した。透明溶液が７７℃で取得された。反応物を４５℃に冷却し、３０分間撹拌させ、次いで、２０℃に冷却した。混合物を追加で３時間、２０℃で撹拌させた。生成物を濾過し、ケーキをＥｔＯＨで洗浄した。固体を、真空オーブン中４５℃で、窒素を抜きながら乾燥させて、化合物１形態Ｂ−ＨＣｌを白色固体として得た。
【０２９０】
注記として、この例において記述されている通りのＥｔＯＨ／Ｈ２Ｏの代わりに、ＭｅＯＨ／Ｈ２ＯおよびＩＰＡ／Ｈ２Ｏ等の他の溶媒組合せを使用してもよい。
【０２９１】
代替的な溶媒組合せの例を、表８において提供する。
表８．形態Ｂ−ＨＣｌを作製するために使用され得る他の溶媒
【０２９２】
【表８】
化合物１形態Ｂ−ＨＣｌの粉末ディフラクトグラムを、図１６において示す。
表９：化合物１形態Ｂ−ＨＣｌの代表的なＸＲＰＤピーク
【０２９３】
【表９−１】
【０２９４】
【表９−２】
化合物１形態Ｂ−ＨＣｌの単結晶は、単斜晶系、Ｐ２１／ａ空間群、ならびに下記の単位格子寸法：ａ＝１２．５７３３４（５）Å、ｂ＝１９．６８６３４（５）Å、ｃ＝８．３９３９９（５）Å、α＝９０°、β＝９０．０５５４°およびγ＝９０°を保有することが判明した。
【０２９５】
化合物形態Ｂ−ＨＣｌの試料を、顕微鏡も使用して評価した。
【０２９６】
化合物１形態Ｂ−ＨＣｌについてのＤＳＣ曲線を、図１７において提供し、化合物１形態Ｂ−ＨＣｌの代表的試料についてのＴＧＡ曲線を、図１８において提供する。
【０２９７】
化合物１形態Ｂ−ＨＣｌの代表的試料は、図１９において提供されるＦＴＩＲスペクトルを示した。
【０２９８】
化合物１形態Ｂ−ＨＣｌを、固体状態１３Ｃおよび１９Ｆ ＮＭＲも使用して分析した。それぞれのＮＭＲスペクトルを図２０および２１において提供する。１３Ｃ ＳＳＮＭＲおよび１９Ｆ ＳＳＮＭＲスペクトルにおいて見られた数個のピークを、表１０および１１に記載する。
表９：化合物１形態Ｂ−ＨＣｌの１３Ｃ ＳＳＮＭＲピーク
【０２９９】
【表９−３】
表１０：化合物１形態Ｂ−ＨＣｌの１９Ｆ ＳＳＮＭＲピーク
【０３００】
【表１０】
注記として、実施例３Ａ、３Ｂおよび４Ａ〜４Ｃにおいて、２−ＭｅＴＨＦの代わりにＥｔＯＡＣが溶媒として使用され得る。
【０３０１】
化合物のΔＦ５０８−ＣＦＴＲ増強特性を検出および測定するためのアッセイ
化合物のΔＦ５０８−ＣＦＴＲ調節特性を評価するための膜電位光学法
アッセイでは、蛍光電圧感知染料を利用して、ＮＩＨ ３Ｔ３細胞における機能的ΔＦ５０８−ＣＦＴＲの増大の読み出しとして蛍光プレートリーダー（例えば、ＦＬＩＰＲ ＩＩＩ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ，Ｉｎｃ．）を使用し、膜電位の変化を測定する。応答のための駆動力は、細胞を先に化合物で処理し、その後電圧感知染料を充填した後の単一液体添加ステップによるチャネル活性化と連動する、クロライドイオン勾配の生成である。
【０３０２】
増強物質化合物の同定
ΔＦ５０８−ＣＦＴＲの増強物質を同定するために、二重添加ＨＴＳアッセイフォーマットを開発した。このＨＴＳアッセイでは、蛍光電圧感知染料を利用して、温度補正されたΔＦ５０８ ＣＦＴＲ ＮＩＨ ３Ｔ３細胞中におけるΔＦ５０８ ＣＦＴＲのゲーティング（コンダクタンス）の増大の測定として、膜電位の変化をＦＬＩＰＲ ＩＩＩで測定する。応答のための駆動力は、細胞を先に増強物質化合物（またはＤＭＳＯビヒクル対照）で処理し、その後再分布染料を加えた後の、ＦＬＩＰＲ ＩＩＩ等の蛍光プレートリーダーを使用する単一液体添加ステップ中のホルスコリンによるチャネル活性化と連動する、Ｃｌ−イオン勾配である。
【０３０３】
溶液
浴溶液番号１：（ｍＭ単位で）ＮａＣｌ １６０、ＫＣｌ ４．５、ＣａＣｌ２ ２、ＭｇＣｌ２ １、ＨＥＰＥＳ １０、そしてＮａＯＨでｐＨ７．４にした。
【０３０４】
浴溶液番号１の代替物は、塩化物塩をグルコン酸塩で代用した浴溶液を包含する。
【０３０５】
細胞培養
ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを安定発現するＮＩＨ３Ｔ３マウス線維芽細胞を、膜電位の光学的測定に使用する。１７５ｃｍ２培養フラスコ内、２ｍＭのグルタミン、１０％のウシ胎仔血清、１×ＮＥＡＡ、β−ＭＥ、１×ペニシリン／ストレプトマイシンおよび２５ｍＭのＨＥＰＥＳを補充したダルベッコ変法イーグル培地中、３７℃、５％ＣＯ２および９０％湿度で細胞を維持する。すべての光学的アッセイのために、細胞を３８４ウェルマトリゲルコーティングプレートに約２０，０００／ウェルで播種し、３７℃で２時間培養した後、増強物質アッセイのために２７℃で２４時間培養した。補正アッセイのために、細胞を、２７℃または３７℃、化合物有りおよび無しで１６〜２４時間培養する。
【０３０６】
化合物のΔＦ５０８−ＣＦＴＲ調節特性を評価するための電気生理学的アッセイ
１．ウッシングチャンバーアッセイ
ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを発現している分極した気道上皮細胞についてウッシングチャンバー実験を実施して、光学的アッセイにおいて同定されたΔＦ５０８−ＣＦＴＲモジュレーターをさらに特徴付けた。非ＣＦおよびＣＦ気道上皮を気管支組織から単離し、以前に記述されている通りに培養し（Ｇａｌｉｅｔｔａ， Ｌ．Ｊ．Ｖ．、Ｌａｎｔｅｒｏ， Ｓ．、Ｇａｚｚｏｌｏ， Ａ．、Ｓａｃｃｏ， Ｏ．、Ｒｏｍａｎｏ， Ｌ．、Ｒｏｓｓｉ， Ｇ．Ａ．およびＺｅｇａｒｒａ−Ｍｏｒａｎ， Ｏ．、（１９９８年）、Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ｃｅｌｌ． Ｄｅｖ． Ｂｉｏｌ．、３４巻、４７８〜４８１頁）、ＮＩＨ３Ｔ３馴化培地でプレコーティングしたＣｏｓｔａｒ（登録商標）Ｓｎａｐｗｅｌｌ（商標）フィルターに平板培養した。４日後、頂端の培地を除去し、細胞を使用前に１４日を超える期間、気液界面で成長させた。これは、気道上皮に特徴的な特色である、線毛のある完全に分化した円柱細胞の単層をもたらした。いかなる公知の肺疾患も有さない非喫煙者から、非ＣＦ ＨＢＥを単離した。ΔＦ５０８−ＣＦＴＲが同型接合の患者から、ＣＦ−ＨＢＥを単離した。
【０３０７】
Ｃｏｓｔａｒ（登録商標）Ｓｎａｐｗｅｌｌ（商標）細胞培養インサート上で成長させたＨＢＥを、ウッシングチャンバー（Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）内に載置し、電圧クランプシステム（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｉｏｗａ、ＩＡ）を使用して、経上皮抵抗と基底外側から頂端のＣｌ−勾配の存在下での短絡回路電流（ＩＳＣ）とを測定した。手短に述べると、ＨＢＥを電圧クランプ記録条件下（Ｖｈｏｌｄ＝０ｍＶ）３７℃で検査した。基底外側溶液は、（ｍＭ単位で）１４５ ＮａＣｌ、０．８３ Ｋ２ＨＰＯ４、３．３ ＫＨ２ＰＯ４、１．２ ＭｇＣｌ２、１．２ ＣａＣｌ２、１０ グルコース、１０ ＨＥＰＥＳ（ＮａＯＨでｐＨを７．３５に調整した）を含有しており、頂端溶液は、（ｍＭ単位で）１４５ Ｎａグルコネート、１．２ ＭｇＣｌ２、１．２ ＣａＣｌ２、１０ グルコース、１０ ＨＥＰＥＳ（ＮａＯＨでｐＨを７．３５に調整した）を含有していた。
【０３０８】
増強物質化合物の同定
典型的なプロトコールでは、基底外側から頂端膜のＣｌ−濃度勾配を利用した。この勾配を準備するために、側底膜上では通常のリンゲル液を使用したのに対し、頂端ＮａＣｌは等モル濃度のグルコン酸ナトリウム（ＮａＯＨで滴定してｐＨ７．４にした）によって置き換えて、上皮を横断する大きなＣｌ−濃度勾配を得た。ホルスコリン（１０μＭ）およびすべての試験化合物を、細胞培養インサートの頂端側に添加した。推定上のΔＦ５０８−ＣＦＴＲ増強物質の効果を、公知の増強物質であるゲニステインの効果と比較した。
【０３０９】
パッチクランプ記録
以前に記述されている通りの穿孔パッチ記録コンフィギュレーションを使用して、ΔＦ５０８−ＮＩＨ３Ｔ３細胞における全Ｃｌ−電流をモニターした（Ｒａｅ， Ｊ．、Ｃｏｏｐｅｒ， Ｋ．、Ｇａｔｅｓ， Ｐ．およびＷａｔｓｋｙ， Ｍ．（１９９１年）、Ｊ． Ｎｅｕｒｏｓｃｉ． Ｍｅｔｈｏｄｓ、３７巻、１５〜２６頁）。電圧クランプ記録は、アキソパッチ２００Ｂパッチクランプ増幅器（Ａｘｏｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｉｎｃ．、Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ、ＣＡ）を使用し、２２℃で実施した。ピペット溶液は、（ｍＭ単位で）１５０ Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン（ＮＭＤＧ）−Ｃｌ、２ ＭｇＣｌ２、２ ＣａＣｌ２、１０ ＥＧＴＡ、１０ ＨＥＰＥＳおよび２４０μｇ／ｍＬのアンホテリシン−Ｂ（ＨＣｌでｐＨを７．３５に調整した）を含有していた。細胞外培地は、（ｍＭ単位で）１５０ ＮＭＤＧ−Ｃｌ、２ ＭｇＣｌ２、２ ＣａＣｌ２、１０ ＨＥＰＥＳ（ＨＣｌでｐＨを７．３５に調整した）を含有していた。パルス発生、データ獲得および分析は、Ｃｌａｍｐｅｘ ８（Ａｘｏｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｉｎｃ．）と連動するＤｉｇｉｄａｔａ １３２０Ａ／Ｄインターフェースを備えたＰＣを使用して実施した。ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを活性化するために、１０μＭのホルスコリンおよび２０μＭのゲニステインを浴に添加し、電流電圧関係を３０秒毎にモニターした。
【０３１０】
増強物質化合物の同定
穿孔パッチ記録技術を使用して、ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを安定発現しているＮＩＨ３Ｔ３細胞において巨視的ΔＦ５０８−ＣＦＴＲ Ｃｌ−電流（ＩΔＦ５０８）を増大させるΔＦ５０８−ＣＦＴＲ増強物質の能力も調査した。光学的アッセイにより同定された増強物質は、ＩΔＦ５０８の用量依存的な増大を誘起し、光学的アッセイで同様の効力および効果が観察された。検査したすべての細胞において、増強物質適用の前および最中の逆転電位は、算出されたＥＣｌ（−２８ｍＶ）である−３０ｍＶ前後であった。
【０３１１】
細胞培養
ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを安定発現するＮＩＨ３Ｔ３マウス線維芽細胞を、ホールセル記録に使用する。１７５ｃｍ２培養フラスコ内、２ｍＭのグルタミン、１０％のウシ胎仔血清、１×ＮＥＡＡ、β−ＭＥ、１×ペニシリン／ストレプトマイシンおよび２５ｍＭのＨＥＰＥＳを補充したダルベッコ変法イーグル培地中、３７℃、５％ＣＯ２および９０％湿度で細胞を維持する。ホールセル記録のために、２，５００〜５，０００細胞をポリ−Ｌ−リジンコーティングされたガラスカバースリップ上に播種し、増強物質の活性を試験するために、使用前に２７℃で２４〜２８時間培養し、補正剤（ｃｏｒｒｅｃｔｏｒ）の活性を測定するために、３７℃、補正化合物（ｃｏｒｒｅｃｔｉｏｎ ｃｏｍｐｏｕｎｄ）有りおよび無しで培養した。
【０３１２】
単一チャネル記録
アキソパッチ２００Ｂパッチクランプ増幅器（Ａｘｏｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｉｎｃ．）を使用する、以前に記述されている通りの切除された反転膜パッチ記録（ｅｘｃｉｓｅｄ ｉｎｓｉｄｅ−ｏｕｔ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐａｔｃｈ ｒｅｃｏｒｄｉｎｇｓ）（Ｄａｌｅｍａｎｓ， Ｗ．、Ｂａｒｂｒｙ， Ｐ．、Ｃｈａｍｐｉｇｎｙ， Ｇ．、Ｊａｌｌａｔ， Ｓ．、Ｄｏｔｔ， Ｋ．、Ｄｒｅｙｅｒ， Ｄ．、Ｃｒｙｓｔａｌ， Ｒ．Ｇ．、Ｐａｖｉｒａｎｉ， Ａ．、Ｌｅｃｏｃｑ， Ｊ−Ｐ．、Ｌａｚｄｕｎｓｋｉ， Ｍ．（１９９１年）、Ｎａｔｕｒｅ、３５４巻、５２６〜５２８頁）を使用して、ＮＩＨ３Ｔ３細胞において発現された野生型ＣＦＴＲおよび温度補正されたΔＦ５０８−ＣＦＴＲのゲーティング活性を観察した。ピペットは、（ｍＭ単位で）：１５０ ＮＭＤＧ、１５０ アスパラギン酸、５ ＣａＣｌ２、２ ＭｇＣｌ２および１０ ＨＥＰＥＳ（トリス塩基でｐＨを７．３５に調整した）を含有していた。浴は、（ｍＭ単位で）：１５０ ＮＭＤＧ−Ｃｌ、２ ＭｇＣｌ２、５ ＥＧＴＡ、１０ ＴＥＳおよび１４ トリス塩基（ＨＣｌでｐＨを７．３５に調整した）を含有していた。切除後、１ｍＭのＭｇ−ＡＴＰ、７５ｎＭのｃＡＭＰ依存性タンパク質キナーゼ触媒サブユニット（ＰＫＡ；Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）、および１０ｍＭのＮａＦを添加することにより、野生型およびΔＦ５０８−ＣＦＴＲ両方を活性化させてタンパク質ホスファターゼを阻害し、これによって電流消耗を防止した。ピペット電位は８０ｍＶに維持した。２つ以下の活性チャネルを含有する膜パッチによりチャネル活性を分析した。同時開口の最大数によって、実験経過中の活性チャネル数を決定した。単一チャネル電流振幅を決定するために、１２０秒のΔＦ５０８−ＣＦＴＲ活性から記録されたデータを１００Ｈｚで「オフライン」フィルター処理し、次いで全点振幅ヒストグラムを構築するために使用し、これを、バイオパッチ分析ソフトウェア（Ｂｉｏ−Ｌｏｇｉｃ Ｃｏｍｐ．、フランス）を使用して多重ガウス分布関数に当てはめた。総微視的電流および開確率（Ｐｏ）を、１２０秒のチャネル活性から決定した。Ｐｏは、バイオパッチソフトウェアを使用して、または関係式Ｐｏ＝Ｉ／ｉ（Ｎ）［ここで、Ｉ＝平均電流、ｉ＝単一チャネル電流振幅、かつＮ＝パッチ中の活性チャネル数である］から決定した。
【０３１３】
細胞培養
ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを安定発現するＮＩＨ３Ｔ３マウス線維芽細胞を、切除膜パッチクランプ記録に使用する。１７５ｃｍ２培養フラスコ内、２ｍＭのグルタミン、１０％のウシ胎仔血清、１×ＮＥＡＡ、β−ＭＥ、１×ペニシリン／ストレプトマイシンおよび２５ｍＭのＨＥＰＥＳを補充したダルベッコ変法イーグル培地中、３７℃、５％ＣＯ２および９０％湿度で細胞を維持する。単一チャネル記録のために、２，５００〜５，０００細胞をポリ−Ｌ−リジンコーティングされたガラスカバースリップ上に播種し、使用前に２７℃で２４〜４８時間培養した。
【０３１４】
化合物１は、ＡＴＰ結合カセット輸送体のモジュレーターとして有用である。化合物１、形態ＡのＥＣ５０（μｍ）を測定すると、２．０μＭ未満であった。化合物１、形態Ａの効果は、１００％から２５％までであることが算出された。１００％効果は、４−メチル−２−（５−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノールを用いて得られる最大応答であることに留意すべきである。
【０３１５】
他の実施形態
本開示において言及されるすべての刊行物および特許は、各個々の刊行物または特許出願が参照により組み込まれることを具体的かつ個別に指示されている場合と同程度まで、参照により本明細書に組み込まれる。参照により組み込まれる特許または刊行物のいずれかにおける用語の意味が、本開示において使用されている用語の意味と矛盾するようなことがあれば、本開示における用語の意味を優先するものとする。さらに、先述の考察は、本発明の例示的な実施形態を開示し記述しているに過ぎない。当業者であれば、そのような考察から、ならびに添付の図面および請求項から、下記の請求項において定義される本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく、種々の変更、修正および変形がその中で為され得ることを容易に認識するであろう。
【技術分野】
【０００１】
関連する出願への相互参照
本願は、２００９年１０月２３日に出願された米国仮特許出願第６１／２５４，６３４号の優先権を主張する。米国仮特許出願第６１／２５４，６３４号の内容は、本明細書中に参考として援用される。
【０００２】
発明の技術分野
本発明は、嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子（「ＣＦＴＲ」）のモジュレーターを作製するプロセスに関する。
【背景技術】
【０００３】
嚢胞性線維症（ＣＦ）は、米国においておよそ３０，０００人の小児および成人、ならびに欧州においておよそ３０，０００人の小児および成人が冒されている劣性遺伝病である。ＣＦの治療は進歩しているにもかかわらず、治癒法はない。
【０００４】
ＣＦは、種々の組織における塩および水の吸収および分泌の制御の補助を司る上皮クロライドイオンチャネルをコードする嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子（ＣＦＴＲ）遺伝子における変異によって引き起こされる。ＣＦＴＲチャネル開口の確率を増大させる増強物質として公知である低分子薬物は、ＣＦを治療するための１つの潜在的治療戦略を表す。
【０００５】
具体的には、ＣＦＴＲはｃＡＭＰ／ＡＴＰ媒介性アニオンチャネルであり、これは、吸収細胞および分泌上皮細胞を包含する様々な細胞型において発現され、ここで、膜を横断するアニオンフラックス、ならびに他のイオンチャネルおよびタンパク質の活性を制御する。上皮細胞において、ＣＦＴＲの正常機能は、呼吸および消化組織を包含する体全体にわたる電解質輸送の維持のために重大である。ＣＦＴＲは、６つの膜貫通ヘリックスと１つのヌクレオチド結合ドメインとをそれぞれ含有する膜貫通ドメインの縦列反復でできているタンパク質をコードする、およそ１４８０個のアミノ酸から構成される。２つの膜貫通ドメインは、チャネル活性および細胞トラフィッキングを制御する多数のリン酸化部位を持つ大きな極性制御（Ｒ）−ドメインによって連結されている。
【０００６】
ＣＦＴＲをコードする遺伝子が同定され配列決定されている（非特許文献１；非特許文献２；非特許文献３を参照）。この遺伝子における欠損は、ＣＦＴＲにおける変異を引き起こし、ヒトの最も一般的な致死的遺伝病である嚢胞性線維症（「ＣＦ」）をもたらす。米国では、およそ２，５００人に１人の乳幼児が嚢胞性線維症に冒されている。米国の総人口のうち、最大１，０００万人が、明白な病的影響なしに、欠陥遺伝子の単一コピーを有している。対照的に、ＣＦ関連遺伝子の２つのコピーを持つ個体は、慢性肺疾患を包含する、ＣＦの衰弱性の影響および致死的影響を被っている。
【０００７】
ＣＦ患者において、呼吸上皮中に内因的に発現したＣＦＴＲにおける変異は、イオンおよび流体輸送における不均衡を引き起こす頂端アニオン分泌の低減につながる。結果として生じるアニオン輸送の減少は、肺における粘液貯留の強化および付随する微生物感染に寄与し、これが最終的にＣＦ患者の死を引き起こす。ＣＦ患者は、呼吸器疾患に加えて、典型的に、胃腸の問題および治療しないまま放置すると死をもたらす膵機能不全に罹患する。加えて、嚢胞性線維症の男性の大多数は不妊であり、嚢胞性線維症の女性の間では受胎能が低下する。ＣＦ関連遺伝子の２つのコピーの深刻な影響とは対照的に、ＣＦ関連遺伝子の単一コピーを持つ個体は、コレラに対して、および下痢によって生じる脱水症に対して、抵抗性の増大を示す。おそらくこれにより、集団内の比較的高度数のＣＦ遺伝子の説明がつくであろう。
【０００８】
ＣＦ染色体のＣＦＴＲ遺伝子の配列分析は、変異を引き起こす様々な疾患を明らかにした（非特許文献４；非特許文献５；および非特許文献６；非特許文献７）。これまでに、ＣＦ遺伝子において変異を引き起こす１０００を超える疾患が同定されている（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｅｎｅｔ．ｓｉｃｋｋｉｄｓ．ｏｎ．ｃａ／ｃｆｔｒ／ａｐｐ）。最もよく見られる変異は、ＣＦＴＲアミノ酸配列の５０８位におけるフェニルアラニンの欠失であり、一般にΔＦ５０８−ＣＦＴＲと称される。この変異は、嚢胞性線維症の症例のおよそ７０％に生じ、重症疾患に関連する。
【０００９】
ΔＦ５０８−ＣＦＴＲにおける残基５０８の欠失は、新生タンパク質の正しいフォールディングを妨げる。この結果、変異タンパク質はＥＲから出ることができず、原形質膜へ出入りすることができなくなる。結果として、膜中に存在するチャネル数は、野生型ＣＦＴＲを発現している細胞において観察されるものよりもはるかに少ない。変異は、トラフィッキング障害（ｉｍｐａｉｒｅｄ ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ）に加えて、チャネルゲーティングの欠陥をもたらす。それと同時に、膜中のチャネル数の低減およびゲーティングの欠陥は、上皮を横断するアニオン輸送の低減を招き、イオンおよび流体輸送の欠陥につながる（非特許文献８）。しかしながら、研究は、膜中のΔＦ５０８−ＣＦＴＲ数の低減が、野生型ＣＦＴＲに満たないとはいえ機能的であることを示した（非特許文献９；Ｄｅｎｎｉｎｇら、上記を参照；非特許文献１０）。ΔＦ５０８−ＣＦＴＲに加えて、トラフィッキング、合成および／またはチャネルゲーティングの欠陥をもたらすＣＦＴＲにおける変異を引き起こす他の疾患を上方または下方制御して、アニオン分泌を変化させ、疾患の進行および／または重症度を変更することができる場合がある。
【００１０】
ＣＦＴＲはアニオンに加えて様々な分子を輸送するが、この役割（アニオンの輸送）が、上皮を横断してイオンおよび水を輸送する重要な機序における１つの要素を表すことは明瞭である。他の要素は、細胞へのクロライドの取込みを司る、上皮Ｎａ＋チャネル、ＥＮａＣ、Ｎａ＋／２Ｃｌ−／Ｋ＋共輸送体、Ｎａ＋−Ｋ＋−ＡＴＰアーゼポンプおよび側底膜Ｋ＋チャネルを包含する。
【００１１】
これらの要素が協働して、細胞内におけるそれらの選択的発現および局在により、上皮を横断する指向性輸送を達成する。クロライドの吸収は、頂端膜上に存在するＥＮａＣおよびＣＦＴＲならびに細胞の側底面上で発現されるＮａ＋−Ｋ＋−ＡＴＰアーゼポンプおよびＣｌ−イオンチャネルの協調活性によって起こる。腔側からのクロライドの二次能動輸送は、細胞内クロライドの蓄積を招き、次いでこれがＣｌ−チャネルを介して細胞から受動的に離れ、ベクトル輸送をもたらし得る。側底面上のＮａ＋／２Ｃｌ−／Ｋ＋共輸送体、Ｎａ＋−Ｋ＋−ＡＴＰアーゼポンプおよび側底膜Ｋ＋チャネルならびに腔側のＣＦＴＲの配置は、腔側のＣＦＴＲを介するクロライドの分泌を加減する。おそらく水自体が能動的に輸送されることはないため、上皮を横断するその流量は、ナトリウムおよびクロライドのバルク流によって生成される極めて小さな経上皮浸透圧勾配によって決まる。
【００１２】
上で論じた通り、ΔＦ５０８−ＣＦＴＲにおける残基５０８の欠失は、新生タンパク質が正しくフォールディングするのを妨げ、この変異タンパク質のＥＲからの退出不能および原形質膜への出入り不能をもたらすと考えられている。結果として、不十分な量の成熟タンパク質が原形質膜に存在し、上皮組織内におけるクロライド輸送は有意に低減される。実際に、このＥＲ機構によるＡＢＣ輸送体のＥＲプロセシングの欠陥の細胞現象は、ＣＦ疾患だけでなく、広範な他の孤立性および遺伝性疾患の基礎となることが示された。
【００１３】
したがって、ヒトＣＦＴＲの野生型および変異型形態の、強力かつ選択的なＣＦＴＲ増強物質が必要である。これらの変異型ＣＦＴＲ形態は、ΔＦ５０８ｄｅｌ、Ｇ５５１Ｄ、Ｒ１１７Ｈ、２７８９＋５Ｇ→Ａを包含するがこれらに限定されない。
【００１４】
哺乳動物の細胞膜におけるＣＦＴＲの活性を調節するために使用され得る、ＣＦＴＲ活性のモジュレーターおよびその組成物も必要である。
【００１５】
そのようなＣＦＴＲ活性のモジュレーターを使用して、ＣＦＴＲにおける変異によって引き起こされる疾患を治療する方法が必要である。
【００１６】
哺乳動物のエクスビボ細胞膜におけるＣＦＴＲ活性を調節する方法が必要である。
【００１７】
加えて、治療薬として使用するのに適切な医薬組成物において容易に使用され得る、前記化合物の安定な固体形態が必要である。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００１８】
【非特許文献１】Ｇｒｅｇｏｒｙ， Ｒ． Ｊ．ら（１９９０年）、Ｎａｔｕｒｅ、３４７巻：３８２〜３８６頁
【非特許文献２】Ｒｉｃｈ， Ｄ． Ｐ．ら（１９９０年）、Ｎａｔｕｒｅ、３４７巻：３５８〜３６２頁
【非特許文献３】Ｒｉｏｒｄａｎ， Ｊ． Ｒ．ら（１９８９年）、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４５巻：１０６６〜１０７３頁
【非特許文献４】Ｃｕｔｔｉｎｇ， Ｇ． Ｒ．ら（１９９０年）、Ｎａｔｕｒｅ、３４６巻：３６６〜３６９頁
【非特許文献５】Ｄｅａｎ， Ｍ．ら（１９９０年）、Ｃｅｌｌ、６１巻：８６３号：８７０頁
【非特許文献６】Ｋｅｒｅｍ， Ｂ−Ｓ．ら（１９８９年）、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４５巻：１０７３〜１０８０頁
【非特許文献７】Ｋｅｒｅｍ， Ｂ−Ｓ．ら（１９９０年）、Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ、８７巻：８４４７〜８４５１頁
【非特許文献８】Ｑｕｉｎｔｏｎ， Ｐ． Ｍ．（１９９０年）、ＦＡＳＥＢ Ｊ．、４巻：２７０９〜２７２７頁
【非特許文献９】Ｄａｌｍａｎｓら（１９９１年）、Ｎａｔｕｒｅ Ｌｏｎｄ．、３５４巻：５２６〜５２８頁
【非特許文献１０】ＰａｓｙｋおよびＦｏｓｋｅｔｔ（１９９５年）、Ｊ． Ｃｅｌｌ． Ｂｉｏｃｈｅｍ．、２７０巻：１２３４７〜５０頁
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１９】
本発明は、ＣＦＴＲのモジュレーターとして有用な化合物の合成のためのプロセスに関する。
【００２０】
一態様において、本発明は、化合物１の結晶性の形態：
【００２１】
【化１】
を作製するためのプロセスであって、
（ａ）カップリング剤の存在下で、化合物２を化合物３と反応させるステップ
【００２２】
【化２】
を含み、
カップリング剤が、２−クロロ−１，３−ジメチル−２−イミダゾリウムテトラフルオロボレート、ＨＢＴＵ、ＨＣＴＵ、２−クロロ−４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン、ＨＡＴＵ、ＨＯＢＴ／ＥＤＣおよびＴ３Ｐ（登録商標）からなる群から選択される、プロセスを提供する。
【００２３】
式Ｉの化合物および薬学的に許容されるその組成物は、嚢胞性線維症、喘息、喫煙誘発性ＣＯＰＤ、慢性気管支炎、鼻副鼻腔炎、便秘、膵炎、膵機能不全、精管の先天性両側欠損（ＣＢＡＶＤ）によって引き起こされる男性不妊、軽度肺疾患、特発性膵炎、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症（ＡＢＰＡ）、肝疾患、遺伝性肺気腫、遺伝性ヘモクロマトーシス、プロテインＣ欠乏症等の凝固−繊維素溶解（ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ−ｆｉｂｒｉｎｏｌｙｓｉｓ）欠乏症、１型遺伝性血管浮腫、家族性高コレステロール血症等の脂質プロセシング欠乏症、１型乳び血症、無βリポタンパク質血症、Ｉ細胞疾患／偽性ハーラー症候群等のリソソーム蓄積症、ムコ多糖症、サンドホフ／テイ・サックス病、クリグラー・ナジャーＩＩ型、多腺性内分泌障害／高インスリン血症、真性糖尿病、ラロン型小人症、ミエロペルオキシダーゼ欠損症、原発性副甲状腺機能低下症、黒色腫、グリカノーシス（Ｇｌｙｃａｎｏｓｉｓ）ＣＤＧ１型、先天性甲状腺機能亢進症、骨形成不全症、遺伝性低フィブリノゲン血症、ＡＣＴ欠損症、尿崩症（ＤＩ）、ニューロフィシン性（ｎｅｕｒｏｐｈｙｓｅａｌ）ＤＩ、腎性ＤＩ、シャルコー・マリー・トゥース症候群、ペリツェーウス‐メルツバッハー病、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、進行性核上麻痺、ピック病等の神経変性疾患、ハンチントン病、脊髄小脳失調Ｉ型、球脊髄性筋萎縮症、歯状核赤核淡蒼球ルイ体および筋強直性ジストロフィー等の数種のポリグルタミン神経障害、ならびに遺伝性クロイツフェルト・ヤコブ病（プリオンタンパク質プロセシング欠損による）等の海綿状脳症、ファブリー病、シュトロイスラー‐シャインカー症候群、ＣＯＰＤ、ドライアイ疾患、またはシェーグレン病、骨粗しょう症、骨減少症、骨折治癒機転および骨成長（骨修復、骨再生、骨吸収を低減させることおよび骨沈着を増大させることを包含する）、ゴーラム病、先天性筋強直症（トムゼン型およびベッカー型）等のクロライドチャネル病、バーター症候群ＩＩＩ型、デント病、驚愕過剰症、てんかん、びっくり病、脂肪蓄積症、アンジェルマン症候群、ならびに、逆位を伴うＰＣＤ（カルタゲナー症候群としても公知である）、逆位および線毛形成不全を伴わないＰＣＤを包含する線毛の構造および／または機能の遺伝障害を表す用語である先天性線毛運動不全症（ＰＣＤ）を包含するがこれらに限定されない様々な疾患、障害または状態を治療するまたはその重症度を下げるのに有用である。
【００２４】
一態様において、化合物１は、形態Ａと称される結晶性形態である。
【００２５】
別の態様において、化合物１は、形態Ｂと称される結晶性形態である。
【００２６】
さらなる態様において、化合物１は、形態Ａ−ＨＣｌと称される結晶性形態である。
【００２７】
追加の態様において、化合物１は、形態Ｂ−ＨＣｌと称される結晶性形態である。
【００２８】
本明細書において記述されるプロセスを使用して、形態Ａ、形態Ａ−ＨＣｌ、形態Ｂ、形態Ｂ−ＨＣｌ、またはこれらの形態の任意の組合せを含む本発明の組成物を調製することができる。
【図面の簡単な説明】
【００２９】
【図１】図１は、化合物１形態Ａの代表的試料のＸ線粉末回折パターンである。
【図２】図２は、化合物１形態Ａの代表的試料のＦＴＩＲスペクトルである。
【図３】図３は、単一Ｘ線分析に基づく化合物１形態Ａの立体配座構造の例示である。
【図４】図４は、化合物１形態Ａ−ＨＣｌの例示的試料のＸ線粉末回折パターンである。
【図５】図５は、化合物１形態Ａ−ＨＣｌの代表的試料についてのＤＳＣ曲線である。
【図６】図６は、試料重量を温度の関数として提示する、化合物１形態Ａ−ＨＣｌの代表的試料の熱重量分析によって生成される曲線である。
【図７】図７は、化合物１形態Ａ−ＨＣｌの代表的試料のＦＴＩＲスペクトルである。
【図８】図８は、化合物１形態Ａ−ＨＣｌの代表的試料の固相１３Ｃ ＮＭＲスペクトルである。
【図９】図９は、化合物１形態Ａ−ＨＣｌの代表的試料の固相１９Ｆ ＮＭＲスペクトルである。
【図１０Ａ】図１０Ａは、機器１を用いて記録された、化合物１形態Ｂの代表的試料についてのＸ線粉末回折パターンである。
【図１０Ｂ】図１０Ｂは、機器２を用いて記録された、化合物１形態Ｂの代表的試料についてのＸ線粉末回折パターンである。
【図１１】図１１は、化合物１形態Ｂの代表的試料についてのＤＳＣ曲線である。
【図１２】図１２は、試料重量を温度の関数として提示する、化合物１形態Ｂの代表的試料の熱重量分析によって生成される曲線である。
【図１３】図１３は、化合物１形態Ｂの代表的試料のＦＴＩＲスペクトルである。
【図１４】図１４は、化合物１形態Ｂの代表的試料の固相１３Ｃ ＮＭＲスペクトルである。
【図１５】図１５は、化合物１形態Ｂの代表的試料の固相１９Ｆ ＮＭＲスペクトルである。
【図１６】図１６は、化合物１形態Ｂ−ＨＣｌのＸ線粉末回折パターンである。
【図１７】図１７は、化合物１形態Ｂ−ＨＣｌの代表的試料についてのＤＳＣ曲線である。
【図１８】図１８は、試料重量を温度の関数として提示する、化合物１形態Ｂ−ＨＣｌの代表的試料の熱重量分析によって生成される曲線である。
【図１９】図１９は、化合物１形態Ｂ−ＨＣｌの代表的試料のＦＴＩＲスペクトルである。
【図２０】図２０は、化合物１形態Ｂ−ＨＣｌの代表的試料の固相１３Ｃ ＮＭＲスペクトルである。
【図２１】図２１は、化合物１形態Ｂ−ＨＣｌの代表的試料の固相１９Ｆ ＮＭＲスペクトルである。
【発明を実施するための形態】
【００３０】
発明の詳細な説明
定義
本明細書において使用される場合、別段の指示がない限り、下記の定義が当てはまるものとする。
【００３１】
用語「ＡＢＣ輸送体」は、本明細書において使用される場合、少なくとも１つの結合ドメインを含むＡＢＣ輸送体タンパク質またはその断片を意味し、ここで、前記タンパク質またはその断片は、インビボまたはインビトロで存在する。用語「結合ドメイン」は、本明細書において使用される場合、モジュレーターと結合することができるＡＢＣ輸送体上のドメインを意味する。例えば、Ｈｗａｎｇ， Ｔ． Ｃ．ら、Ｊ． Ｇｅｎ． Ｐｈｙｓｉｏｌ．（１９９８年）：１１１巻（３号）、４７７〜９０頁を参照されたい。
【００３２】
用語「ＣＦＴＲ」は、本明細書において使用される場合、ΔＦ５０８ ＣＦＴＲ、Ｒ１１７Ｈ ＣＦＴＲおよびＧ５５１Ｄ ＣＦＴＲを包含するがこれらに限定されない、制御因子活性の能力がある嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子またはその変異を意味する（例えば、ＣＦＴＲ変異については、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｅｎｅｔ．ｓｉｃｋｋｉｄｓ．ｏｎ．ｃａ／ｃｆｔｒ／ａｐｐを参照されたい）。
【００３３】
用語「調節すること」は、本明細書において使用される場合、測定可能な量だけ増大または減少させることを意味する。
【００３４】
用語「正常なＣＦＴＲ」または「正常なＣＦＴＲ機能」は、本明細書において使用される場合、喫煙、汚染、または肺において炎症を生じさせる何か等の環境要因によるいかなる機能障害もない、野生型様ＣＦＴＲを意味する。
【００３５】
用語「ＣＦＴＲの低減」または「ＣＦＴＲ機能の低減」は、本明細書において使用される場合、正常未満のＣＦＴＲまたは正常未満のＣＦＴＲ機能を意味する。
【００３６】
用語「結晶性」は、構造単位が固定された幾何パターンまたは格子状に配置されているため、結晶性固体が厳格な長距離秩序を有する化合物または組成物を指す。結晶構造を構成している構造単位は、原子、分子またはイオンであってよい。結晶性固体は、一定の融点を示す。
【００３７】
用語「実質的に結晶性」は、厳格な長距離秩序を有する固定された幾何パターンまたは格子状に主に配置されている固体材料を指す。例えば、実質的に結晶性の材料は、約８５％超の結晶化度（例えば、約９０％超の結晶化度、約９５％超の結晶化度、または約９９％超の結晶化度）を有する。用語「実質的に結晶性」は、前項において定義されている記述子「結晶性」を包含することにも留意されたい。
【００３８】
本発明の目的のために、化学元素は、Ｐｅｒｉｏｄｉｃ Ｔａｂｌｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｅｌｅｍｅｎｔｓ、ＣＡＳ版、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｃｓ、第７５版に従って定義されている。加えて、有機化学の一般原理は、「Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」、Ｔｈｏｍａｓ Ｓｏｒｒｅｌｌ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｂｏｏｋｓ、Ｓａｕｓａｌｉｔｏ：１９９９年、ならびに「Ｍａｒｃｈ’ｓ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」、第５版、Ｓｍｉｔｈ， Ｍ．Ｂ．およびＭａｒｃｈ， Ｊ．編、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：２００１年において記述されており、それらの全内容が参照により本明細書に組み込まれる。
【００３９】
用語「安定な」は、本明細書において使用される場合、化合物の生成、検出、ならびに好ましくは、本明細書において開示されている目的の１つまたは複数のためのそれらの回収、精製および使用を可能にする条件に供された際に、実質的に変化しない化合物を指す。いくつかの実施形態において、安定な化合物または化学的に実現可能な化合物は、水分が存在しない場合および他の化学反応条件でもない場合、少なくとも１週間４０℃以下の温度に保った際に、実質的に変化しないものである。
【００４０】
本発明において使用され得る適切な溶媒の例は、水、メタノール、ジクロロメタン（ＤＣＭ）、アセトニトリル、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、酢酸メチル（ＭｅＯＡｃ）、酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）、酢酸イソプロピル（ＩＰＡｃ）、酢酸ｔ−ブチル（ｔ−ＢｕＯＡｃ）、イソプロピルアルコール（ＩＰＡ）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、メチルエチルケトン（ＭＥＫ）、ｔ−ブタノール、ジエチルエーテル（Ｅｔ２Ｏ）、メチル−ｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）、１，４−ジオキサンおよびＮ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）であるがこれらに限定されない。
【００４１】
本発明において使用され得る適切なカップリング剤の例は、１−（３−（ジメチルアミノ）プロピル）−３−エチル−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣＩ）、２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ）、２−（１Ｈ−７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）、２−クロロ−１，３−ジメチル−２−イミダゾリウムテトラフルオロボレート、１−Ｈ−ベンゾトリアゾリウム−１−［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］−５−クロロヘキサフルオロホスフェート（ＨＣＴＵ）、２−クロロ−４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジンおよび２−プロパンホスホン酸無水物（Ｔ３Ｐ（登録商標））であるがこれらに限定されない。
【００４２】
本発明において使用され得る適切な塩基の例は、炭酸カリウム（Ｋ２ＣＯ３）、Ｎ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）、トリエチルアミン（Ｅｔ３Ｎ；ＴＥＡ）、ジイソプロピル−エチルアミン（ｉ−Ｐｒ２ＥｔＮ；ＤＩＥＡ）、ピリジン、水酸化カリウム（ＫＯＨ）、水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ）およびナトリウムメトキシド（ＮａＯＭｅ；ＮａＯＣＨ３）であるがこれらに限定されない。
【００４３】
加えて、別段の規定がない限り、本明細書において描写されている構造は、１種または複数種の同位体富化された原子が存在するという点でのみ異なる化合物を包含するようにも意味付けられている。例えば、重水素もしくは三重水素による水素の置換、または１３Ｃもしくは１４Ｃによる炭素の置換を除いて本構造を有する化合物は、本発明の範囲内である。そのような化合物は、例えば、生物学的アッセイにおける分析ツールまたはプローブとして有用である。
【００４４】
本発明のプロセス
概して、本発明は、ＣＦＴＲのモジュレーターとして有用な化合物の合成のためのプロセスを提供する。
【００４５】
化合物１の調製
一態様において、本発明は、化合物１の結晶性の形態：
【００４６】
【化３】
を作製するためのプロセスであって、
（ａ）カップリング剤の存在下で、化合物２を化合物３と反応させるステップ
【００４７】
【化４】
を含み、
カップリング剤が、２−クロロ−１，３−ジメチル−２−イミダゾリウムテトラフルオロボレート、ＨＢＴＵ、ＨＣＴＵ、２−クロロ−４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン、ＨＡＴＵ、ＨＯＢＴ／ＥＤＣおよびＴ３Ｐ（登録商標）からなる群から選択される、プロセスを提供する。
【００４８】
この実施形態の別の態様において、化合物３はＨＣｌ塩であってよい。
【００４９】
この実施形態の一態様において、化合物２と化合物３とのカップリングは、Ｋ２ＣＯ３、Ｅｔ３Ｎ、Ｎ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）、ピリジンまたはジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）等の塩基の存在下で実施される。
【００５０】
この実施形態の別の態様において、化合物２と化合物３とのカップリングは、ピリジンまたはＤＩＥＡの存在下で実施される。
【００５１】
この実施形態の別の態様において、化合物２と化合物３とのカップリングは、ピリジンの存在下で実施される。
【００５２】
この実施形態の別の態様において、化合物２と化合物３とのカップリングは、溶媒の存在下で実施される。一態様において、溶媒は極性非プロトン性溶媒である。例えば、溶媒は、酢酸エチル、酢酸イソプロピル、テトラヒドロフラン、メチルエチルケトン、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドまたは２−メチルテトラヒドロフランからなる群から選択される。より詳細には、溶媒は２−メチルテトラヒドロフランである。
【００５３】
この実施形態の別の態様において、化合物２と化合物３とのカップリングは、３０℃から８０℃の間に維持される反応温度で実施される。さらなる態様において、化合物２と式３のアニリンとのカップリングは、３０℃から８０℃の間（例えば、約４０℃から７８℃の間、約４５℃から７５℃の間、約５０℃から７０℃の間、約６２℃から６８℃の間、または約６５℃）に維持される反応温度で実施される。例えば、化合物２と化合物３とのカップリングは、約６５℃に維持される反応温度で実施される。
【００５４】
この実施形態の別の態様において、化合物１は固体形態Ａである。
【００５５】
別の実施形態において、本発明は、前項において記述されているプロセスによって調製される化合物１を提供する。
【００５６】
【化５】
化合物１形態Ａの調製
別の実施形態において、本発明は、固体形態Ａを有する化合物１：
【００５７】
【化６】
を生成するためのプロセスであって、
カップリング剤の存在下で、化合物２を化合物３と反応させるステップ
【００５８】
【化７】
を含み、
カップリング剤が、２−クロロ−１，３−ジメチル−２−イミダゾリウムテトラフルオロボレート、ＨＢＴＵ、ＨＣＴＵ、２−クロロ−４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン、ＨＡＴＵ、ＨＯＢＴ／ＥＤＣおよびＴ３Ｐ（登録商標）からなる群から選択される、プロセスを提供する。
【００５９】
この実施形態の別のいくつかの態様において、化合物３はＨＣｌ塩であってよい。
【００６０】
この実施形態の一態様において、化合物２と化合物３とのカップリングは、Ｋ２ＣＯ３、Ｅｔ３Ｎ、Ｎ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）、ピリジンまたはジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）等の塩基の存在下で実施される。
【００６１】
この実施形態の別の態様において、化合物２と化合物３とは、ピリジンまたはＤＩＥＡの存在下で実施される。
【００６２】
この実施形態の別の態様において、化合物２と化合物３とのカップリングは、ピリジンの存在下で実施される。
【００６３】
この実施形態の別の態様において、化合物２と化合物３とのカップリングは、極性非プロトン性溶媒の存在下で実施される。例えば、極性非プロトン性溶媒は、酢酸エチル、酢酸イソプロピル、テトラヒドロフラン、メチルエチルケトン、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドまたは２−メチルテトラヒドロフランからなる群から選択される。より詳細には、化合物２と化合物３とのカップリングは、２−メチルテトラヒドロフランの存在下で実施される。
【００６４】
この実施形態の別の態様において、化合物２と化合物３とのカップリングは、３０℃から８０℃の間に維持される反応温度で実施される。さらなる態様において、化合物２と式３のアニリンとのカップリングは、３０℃から８０℃の間（例えば、約４０℃から７８℃の間、約４５℃から７５℃の間、約５０℃から７０℃の間、約６２℃から６８℃の間、または約６５℃）に維持される反応温度で実施される。例えば、化合物２と化合物３とのカップリングは、約６５℃に維持される反応温度で実施される。
【００６５】
別の実施形態において、本発明は、前述の項において記述されているプロセスによって調製される化合物１形態Ａを提供する。
【００６６】
【化８】
一実施形態において、本発明は、化合物１形態Ａを調製するためのプロセスであって、化合物２を化合物３と、Ｔ３Ｐ（登録商標）およびピリジンの存在下、約６５℃の温度で、溶媒２−ＭｅＴＨＦ中、約１０時間にわたって反応させるステップを含むプロセスを提供する。
【００６７】
【化９】
化合物１形態Ｂの調製
別の実施形態において、本発明は、固体形態の形態Ｂを有する化合物１：
【００６８】
【化１０】
を生成するためのプロセスであって、
（ａ）化合物２を化合物３の塩酸塩（３−ＨＣｌ）と、２−クロロ−１，３−ジメチル−２−イミダゾリウムテトラフルオロボレート、ＨＢＴＵ、ＨＣＴＵ、２−クロロ−４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン、ＨＡＴＵ、ＨＯＢＴ／ＥＤＣおよびＴ３Ｐ（登録商標）からなる群から選択されるカップリング剤の存在下で反応させるステップ
【００６９】
【化１１】
を含むプロセスを提供する。
【００７０】
この実施形態の一態様において、化合物２と塩酸塩３−ＨＣｌとのカップリングは、Ｋ２ＣＯ３、Ｅｔ３Ｎ、Ｎ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）、ピリジンまたはＤＩＥＡ等の塩基の存在下で実施される。
【００７１】
この実施形態の別のいくつかの態様において、塩酸塩３−ＨＣｌは化合物３であってよい。
【００７２】
この実施形態の別の態様において、化合物２と塩酸塩３−ＨＣｌとのカップリングは、ピリジンまたはＤＩＥＡの存在下で実施される。
【００７３】
この実施形態の別の態様において、化合物２と塩酸塩３−ＨＣｌとのカップリングは、ピリジンの存在下で実施される。
【００７４】
この実施形態の別の態様において、化合物２と塩酸塩３−ＨＣｌとのカップリングは、ＥｔＯＡｃ、ＩＰＡｃ、ＴＨＦ、ＭＥＫ、ＮＭＰ、アセトニトリル、ＤＭＦまたは２−メチルテトラヒドロフラン等の溶媒の存在下で実施される。より詳細には、化合物２と塩酸塩３−ＨＣｌとのカップリングは、２−メチルテトラヒドロフランの存在下で実施される。
【００７５】
この実施形態の別の態様において、化合物２と塩酸塩３−ＨＣｌとのカップリングは、１５℃から７０℃の間に維持される反応温度で実施される。さらなる態様において、化合物２と塩酸塩３−ＨＣｌとのカップリングは、１５℃から７０℃の間（例えば、約２０℃から６５℃の間、約２５℃から６０℃の間、約３０℃から５５℃の間、約３５℃から５０℃の間、または約４５℃）に維持される反応温度で実施される。この実施形態の好ましい態様において、化合物２と化合物３のＨＣｌ塩とのカップリングは、約４５℃に維持される反応温度で実施される。
【００７６】
別の態様において、カップリング反応物は、約１．５時間から約１０時間までの継続期間にわたって撹拌される。さらなる態様において、カップリング反応物は、約１．５時間から約１０時間まで（例えば、約２時間から約７時間まで、約３時間から約６時間まで、約４時間から約５．５時間まで、または約５時間）の継続期間にわたって撹拌される。
【００７７】
別の実施形態において、本発明は、前述の項において記述されているプロセスによって調製される化合物１形態Ｂを提供する。
【００７８】
【化１２】
一実施形態において、本発明は、化合物１形態Ｂを調製するためのプロセスであって、化合物２を化合物３−ＨＣｌと、Ｔ３Ｐ（登録商標）およびピリジンの存在下、約４５℃の温度で、溶媒２−ＭｅＴＨＦ中、約５〜６時間にわたって反応させるステップを含むプロセスを提供する。
【００７９】
【化１３】
化合物１形態Ａ−ＨＣｌの調製
別の実施形態において、本発明は、固体形態Ａ−ＨＣｌを有する化合物１の塩酸塩：
【００８０】
【化１４】
を生成するためのプロセスであって、
（ａ）化合物２を化合物３の塩酸塩（３−ＨＣｌ）と、２−クロロ−１，３−ジメチル−２−イミダゾリウムテトラフルオロボレート、ＨＢＴＵ、ＨＣＴＵ、２−クロロ−４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン、ＨＡＴＵ、ＨＯＢＴ／ＥＤＣおよびＴ３Ｐ（登録商標）からなる群から選択されるカップリング剤の存在下で反応させるステップ
【００８１】
【化１５】
と、
（ｂ）ステップ（ａ）の生成物の混合物をＨＣｌで処理するステップと
を含むプロセスを提供する。
【００８２】
この実施形態の一態様において、ステップ（ａ）は、Ｋ２ＣＯ３、Ｅｔ３Ｎ、Ｎ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）、ピリジンまたはジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）等の塩基の存在下で実施される。
【００８３】
この実施形態の別の態様において、ステップ（ａ）は、ピリジンまたはＤＩＥＡの存在下で実施される。
【００８４】
この実施形態の別の態様において、ステップ（ａ）は、ピリジンの存在下で実施される。
【００８５】
この実施形態の別の態様において、ステップ（ａ）は、極性非プロトン性溶媒の存在下で実施される。例えば、極性非プロトン性溶媒は、酢酸エチル、酢酸イソプロピル、テトラヒドロフラン、メチルエチルケトン、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドまたは２−メチルテトラヒドロフランからなる群から選択される。より詳細には、化合物２と３−ＨＣｌとのカップリングは、２−メチルテトラヒドロフランの存在下で実施される。
【００８６】
この実施形態の別の態様において、ステップ（ａ）は、１０℃から８０℃の間に維持される反応温度で実施される。この実施形態の別の態様において、ステップ（ａ）は、１５℃から７０℃の間に維持される反応温度で実施される。さらなる態様において、化合物２と化合物３のＨＣｌ塩とのカップリングは、１５℃から７０℃の間（例えば、約２０℃から６５℃の間、約２５℃から６０℃の間、約３０℃から５５℃の間、約３５℃から５０℃の間、または約４５℃）に維持される反応温度で実施される。例えば、化合物２と３−ＨＣｌとのカップリングは、約４５℃に維持される反応温度で実施される。
【００８７】
この実施形態の別の態様において、ステップ（ａ）の時間は、約１．５時間から約７２時間までである。さらなる態様において、カップリング反応物は、約１．５時間から約７２時間以上の時間まで（例えば、約２時間から約４８時間まで、約３時間から約２４時間まで、約５時間から約２０時間まで、または約１２時間から約１５時間まで）の継続期間にわたって撹拌される。
【００８８】
この実施形態のさらなる態様において、ステップ（ａ）におけるカップリング生成物は、ステップ（ｂ）において塩化水素（ＨＣｌ）で処理される。例えば、ＨＣｌガスを、ステップ（ａ）のカップリング反応の生成物と２−メチルテトラヒドロフラン等の非極性（ａｐｏｌａｒ）非プロトン性溶媒とを含む混合物中に吹き込んで泡立たせる。
【００８９】
典型的には、少なくとも約１当量のＨＣｌガス、かつ最大約５０当量のＨＣｌガスを混合物中に吹き込んで泡立たせる。より典型的には、約２当量（ｅｑ．）から約２０当量まで（約５当量から約１５当量まで、約８当量から約１２当量まで、または約１０当量）のＨＣｌガスを、ステップ（ａ）のカップリング生成物を含む反応混合物中に吹き込んで泡立たせる。
【００９０】
典型的には、ＨＣｌガスを、ステップ（ａ）の生成物と非プロトン性溶媒等の溶媒との混合物中に、約０．５時間から約５時間までの期間にわたって、より典型的には、約０．５時間から約５時間まで（例えば、約０．７５時間から約３時間まで、または約２時間）の期間にわたって吹き込んで泡立たせる。
【００９１】
別の実施形態において、本発明は、前述の項において記述されているプロセスによって調製される化合物１形態Ａ−ＨＣｌを提供する。
【００９２】
【化１６】
一実施形態において、本発明は、化合物１形態Ａ−ＨＣｌを調製するためのプロセスであって、化合物２を化合物３−ＨＣｌと、Ｔ３Ｐ（登録商標）およびピリジンの存在下、約４５℃の温度で、溶媒２−ＭｅＴＨＦ中、約１２〜１５時間にわたって反応させ、続いてガス状ＨＣｌで処理するステップを含むプロセスを提供する。
【００９３】
【化１７】
化合物１形態Ｂ−ＨＣｌの調製
別の態様において、本発明は、固体形態の形態Ｂ−ＨＣｌを有する化合物１の塩酸塩：
【００９４】
【化１８】
を生成するためのプロセスであって、
（ａ）本明細書において記述されている通りの化合物１形態Ａ−ＨＣｌの塩酸塩を、有機溶媒および水と混合して、混合物を生成するステップ：
【００９５】
【化１９】
と、
（ｂ）該混合物を加熱するステップと
を含むプロセスを提供する。
【００９６】
この実施形態の一態様において、有機溶媒は、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、ジオキサン、ヘキサメチルホスホロトリアミド、テトラヒドロフラン、ＥｔＯＡｃ、ＩＰＡｃ、ＴＨＦ、ＭＥＫ、ＮＭＰ、アセトニトリル、ＤＭＦ、ＥｔＯＨ、ＭｅＯＨ、イソプロピルアルコールまたは２−メチルテトラヒドロフランを含む。より詳細には、非プロトン性溶媒は２−メチルテトラヒドロフランを含む。
【００９７】
別の態様において、ステップ（ａ）における混合に続いて、ステップ（ｂ）で、混合物を約３０℃から約８０℃まで（例えば、約４０℃から約７０℃まで、約５０℃から約６５℃まで、または約６０℃）の温度に維持する。該混合物が、約１２時間から約７２時間までの期間にわたって、３０℃から約８０℃の温度に維持される、請求項４０から４３に記載のプロセス。
【００９８】
別の態様において、ステップ（ｂ）における加熱後、混合物を濾過してフィルターケーキを生成する。
【００９９】
別の態様において、濾過するステップの後、フィルターケーキを２−メチルテトラヒドロフラン等の非プロトン性溶媒で洗浄するステップが続く。
【０１００】
別の実施形態において、本発明は、前述の項において記述されているプロセスによって調製される化合物１形態Ｂ−ＨＣｌを提供する。
【０１０１】
【化２０】
一実施形態において、本発明は、化合物１形態Ｂ−ＨＣｌを調製するためのプロセスであって、化合物１形態Ａ−ＨＣｌを、２−ＭｅＴＨＦおよび水の混合物中、６０℃の温度で４８時間加熱するステップと；室温に冷却し、沈殿した生成物を濾過するステップと；産生物を６０℃の温度で真空乾燥するステップとを含むプロセスを提供する。
【０１０２】
【化２１】
別の実施形態において、本発明は、化合物１形態Ｂ−ＨＣｌを調製するためのプロセスであって、化合物１形態Ａ−ＨＣｌを、ＥｔＯＨおよび水の混合物中、還流温度に加熱するステップと；２０℃に冷却し、３時間撹拌するステップと；沈殿した生成物を濾過するステップと；産生物を４５℃の温度で真空乾燥するステップとを含むプロセスを提供する。
【０１０３】
【化２２】
化合物２、３および３−ＨＣｌの調製
別の実施形態において、本発明は、化合物２：
【０１０４】
【化２３】
を調製するための方法であって、
（ａ）化合物４をジエチル２−（エトキシメチレン）マロネート５と反応させて、エステル６Ａを生成するステップ
【０１０５】
【化２４】
と、
（ｂ）エステル６Ａを、別個のステップにおいて、触媒および塩基の存在下、水素ガスまたはホルメート等の原子状水素源で処理して、化合物２を生成するステップと
【０１０６】
【化２５】
を含む方法を提供する。
【０１０７】
一態様において、化合物６Ａを、触媒の存在下、水素ガスまたはホルメート等の原子状水素源で処理して化合物６Ｃ
【０１０８】
【化２６】
を生成し、次いでこれを塩基で処理して、化合物２を生成する。
【０１０９】
別の態様において、化合物６Ａを塩基で処理して化合物６Ｄ
【０１１０】
【化２７】
を生成し、次いでこれを、触媒の存在下、水素ガスまたはホルメート等の原子状水素源で処理して、化合物２を生成する。
【０１１１】
いくつかの態様において、水素源は水素ガスである。他の態様において、水素源はホルメートである。
【０１１２】
いくつかの態様において、触媒はパラジウム触媒である。
【０１１３】
いくつかの態様において、塩基は水酸化ナトリウム水溶液または水酸化カリウム水溶液である。例えば、塩基は水酸化ナトリウム水溶液である。
【０１１４】
一実施形態において、本発明は、化合物２を調製するためのプロセスであって、
ａ）化合物４を化合物５と、トルエン中、還流温度にてディーン・スターク装置内で反応させて、化合物６Ｂを形成するステップと、
ｂ）化合物６Ｂを、Ｄｏｗｔｈｅｒｍ中、約２６０℃の温度で加熱して、環化生成物である化合物６Ａを生成するステップと、
ｃ）化合物６Ａを、ＥｔＯＨ中、Ｐｄ／Ｃを触媒として使用し、水素ガスおよびトリエチルアミンの存在下で水素化して、化合物６Ｃを生成するステップと、
ｄ）化合物６Ｃを、５ＭのＮａＯＨを使用して加水分解して、化合物２を生成するステップ
【０１１５】
【化２８】
を含むプロセスを提供する。
【０１１６】
一実施形態において、本発明は、化合物２を調製するためのプロセスであって、
ａ）化合物４を化合物５と、トルエン中、還流温度にてディーン・スターク装置内で反応させて、化合物６Ｂを形成するステップと、
ｂ）化合物６Ｂを、Ｄｏｗｔｈｅｒｍ中、約２６０℃の温度で加熱して、環化生成物である化合物６Ａを生成するステップと、
ｃ）化合物６Ａを、イソプロパノールおよび水の混合物中、ＮａＯＨを使用して加水分解して、化合物６Ｄを生成するステップと、
ｄ）化合物６Ｄを、ＥｔＯＨ中、Ｐｄ／Ｃを触媒として使用し、ホルメート、ナトリウムメトキシドおよびメタノールの存在下で水素化するステップと、
ｅ）該溶液を酢酸で酸性化して、化合物２を生成するステップ
【０１１７】
【化２９】
を含むプロセスを提供する。
【０１１８】
別の実施形態において、本発明は、化合物３
【０１１９】
【化３０】
を調製するための方法であって、
（ａ）化合物７［式中、Ｈａｌは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩである］を７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン８またはその塩と反応させて、化合物９を生成するステップ
【０１２０】
【化３１】
と、
（ｂ）化合物９中のニトロ部分を還元して、アニリン３を提供するステップ
【０１２１】
【化３２】
を含む方法を提供する。
【０１２２】
この実施形態の一態様において、ステップ（ａ）は、極性非プロトン性溶媒中、塩基の存在下で実施される。例えば、塩基は、トリエチルアミンまたはジイソプロピルエチルアミン等の第三級アミン塩基等であり、溶媒はアセトニトリル等である。
【０１２３】
この実施形態の別の態様において、ステップ（ｂ）は、アルコール溶媒中、水素ガスおよび遷移金属触媒を使用して実施される。例えば、触媒は、Ｐｔ、ＰｄまたはＮｉに由来する９族または１０族遷移金属触媒を含む。より詳細には、触媒はＰｄを含む。アルコール溶媒は、イソプロパノール、エタノール、メタノール等のアルコールを含む。例えば、該溶媒はエタノールを含む。
【０１２４】
別の実施形態において、本発明は、化合物３：
【０１２５】
【化３３】
を調製するための方法であって、
（ａ）化合物７［式中、Ｈａｌは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩである］を７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタンの塩酸塩（８−ＨＣｌ）と反応させて、化合物９を生成するステップ
【０１２６】
【化３４】
と、
（ｂ）化合物９中のニトロ部分を還元して、化合物３を提供するステップ
【０１２７】
【化３５】
を含む方法を提供する。
【０１２８】
この実施形態の一態様において、ステップ（ａ）は、炭酸ナトリウム等の無機炭酸塩塩基およびＤＭＳＯ等の極性非プロトン性溶媒の存在下で実施される。
【０１２９】
この実施形態の別の態様において、ステップ（ｂ）は、アルコール溶媒中、水素ガスおよび遷移金属触媒を使用して実施される。例えば、触媒は、Ｐｔ、ＰｄまたはＮｉに由来する９族または１０族遷移金属触媒を含む。より詳細には、触媒はＰｄを含む。アルコール溶媒は、イソプロパノール、エタノール、メタノール等のアルコールを含む。例えば、該溶媒はエタノールを含む。
【０１３０】
別の実施形態において、本発明は、塩酸塩３−ＨＣｌ：
【０１３１】
【化３６】
を調製するための方法であって、
（ａ）化合物７［式中、Ｈａｌは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩである］を７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン塩酸塩８−ＨＣｌと反応させて、化合物９を生成するステップ
【０１３２】
【化３７】
と、
（ｂ）化合物９中のニトロ部分を還元して、アニリン３を提供するステップ
【０１３３】
【化３８】
と、
（ｃ）ステップ（ｃ）の生成物をＨＣｌガスで処理して、３−ＨＣｌを提供するステップ
を含む方法を提供する。
【０１３４】
この実施形態の一態様において、ステップ（ａ）は、炭酸ナトリウム等の無機炭酸塩塩基およびＤＭＳＯ等の極性非プロトン性溶媒の存在下で実施される。
【０１３５】
この実施形態の別の態様において、ステップ（ｂ）は、アルコール溶媒中、水素ガスおよび遷移金属触媒を使用して実施される。例えば、触媒は、Ｐｔ、ＰｄまたはＮｉに由来する９族または１０族遷移金属触媒を含む。より詳細には、触媒はＰｄを含む。アルコール溶媒は、イソプロパノール、エタノール、メタノール等のアルコールを含む。例えば、該溶媒はエタノールを含む。
【０１３６】
別の実施形態において、本発明は、化合物８
【０１３７】
【化３９】
または薬学的に許容されるその塩を調製するための方法であって、ｔｒａｎｓ−４−アミノシクロヘキサノールをＢｏｃ無水物と接触させて、式Ａの化合物
【０１３８】
【化４０】
を生成するステップと、
式Ａの化合物をメタンスルホン酸と接触させて、式Ｂの化合物
【０１３９】
【化４１】
を生成するステップと、
式Ｂの化合物をトリフルオロ酢酸と接触させて、式Ｃの化合物
【０１４０】
【化４２】
を生成するステップと、
式Ｃの化合物を水酸化物と接触させて、式８の化合物を生成するステップ
を含む方法を包含する。
【０１４１】
別の実施形態において、本発明は、式８−ＨＣｌの化合物
【０１４２】
【化４３】
を生成する方法であって、式８の化合物を塩酸と接触させるステップを含む方法を包含する。
【０１４３】
一実施形態において、本発明は、化合物３を生成するためのプロセスであって、
ａ）化合物７を化合物８−ＨＣｌと、アセトニトリル中、トリエチルアミンの存在下、約８０℃で約１６時間反応させて、化合物９を生成するステップと、
ｂ）化合物９を、エタノール中、Ｐｄ／Ｃを触媒として使用し、水素ガスの存在下で水素化するステップ
【０１４４】
【化４４】
を含むプロセスを提供する。
【０１４５】
一実施形態において、本発明は、化合物３を生成するためのプロセスであって、
ａ）化合物７を化合物８−ＨＣｌと、ＤＭＳＯ中、炭酸ナトリウムの存在下、約５５℃で反応させて、化合物９を生成するステップと、
ｂ）化合物９を、エタノール中、Ｐｄ／Ｃを触媒として使用し、水素ガスの存在下で水素化するステップ
【０１４６】
【化４５】
を含むプロセスを提供する。
【０１４７】
一実施形態において、本発明は、化合物３を生成するためのプロセスであって、
ａ）化合物７を化合物８−ＨＣｌと、ジクロロメタン中、水酸化ナトリウムおよびテトラブチルアンモニウムブロミドの存在下で反応させて、化合物９を生成するステップと、
ｂ）化合物９を、エタノール中、Ｐｄ／Ｃを触媒として使用し、水素ガスの存在下で水素化するステップ
【０１４８】
【化４６】
を含むプロセスを提供する。
【０１４９】
一実施形態において、本発明は、化合物３−ＨＣｌを生成するためのプロセスであって、化合物９の塩酸塩を、２−ＭｅＴＨＦ中、Ｐｄ／Ｃを触媒として使用し、水素ガスの存在下で水素化するステップ
【０１５０】
【化４７】
を含むプロセスを提供する。
【０１５１】
本発明の他の態様
一態様において、本発明は、化合物１形態Ａ、化合物１形態Ａ−ＨＣｌ、化合物１形態Ｂ、化合物１形態Ｂ−ＨＣｌ、またはそれらの任意の組合せと、薬学的に許容されるアジュバントまたは担体とを含む、医薬組成物を取り上げる。
【０１５２】
一態様において、本発明は、ヒトにおけるＣＦＴＲ媒介性疾患を治療する方法であって、該ヒトに、有効量の化合物１形態Ａ、化合物１形態Ａ−ＨＣｌ、化合物１形態Ｂ、化合物１形態Ｂ−ＨＣｌ、またはそれらの任意の組合せを投与するステップを含む方法を取り上げる。
【０１５３】
いくつかの実施形態において、該方法は、追加の治療剤を投与するステップを含む。
【０１５４】
ある特定の実施形態において、ＣＦＴＲをコードする遺伝子における変異または環境要因（例えば煙）によるＣＦＴＲ機能の低減に関連する疾患を治療する方法を提供する。これらの疾患は、嚢胞性線維症、喘息、喫煙誘発性ＣＯＰＤ、慢性気管支炎、鼻副鼻腔炎、便秘、膵炎、膵機能不全、精管の先天性両側欠損（ＣＢＡＶＤ）によって引き起こされる男性不妊、軽度肺疾患、特発性膵炎、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症（ＡＢＰＡ）、肝疾患、遺伝性肺気腫、遺伝性ヘモクロマトーシス、プロテインＣ欠乏症等の凝固−繊維素溶解欠乏症、１型遺伝性血管浮腫、家族性高コレステロール血症等の脂質プロセシング欠乏症、１型乳び血症、無βリポタンパク質血症、Ｉ細胞疾患／偽性ハーラー症候群等のリソソーム蓄積症、ムコ多糖症、サンドホフ／テイ・サックス病、クリグラー・ナジャーＩＩ型、多腺性内分泌障害／高インスリン血症、真性糖尿病、ラロン型小人症、ミエロペルオキシダーゼ欠損症、原発性副甲状腺機能低下症、黒色腫、グリカノーシスＣＤＧ１型、先天性甲状腺機能亢進症、骨形成不全症、遺伝性低フィブリノゲン血症、ＡＣＴ欠損症、尿崩症（ＤＩ）、ニューロフィシン性ＤＩ、腎性ＤＩ、シャルコー・マリー・トゥース症候群、ペリツェーウス‐メルツバッハー病、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、進行性核上麻痺、ピック病等の神経変性疾患、ハンチントン病、脊髄小脳失調Ｉ型、球脊髄性筋萎縮症、歯状核赤核淡蒼球ルイ体および筋強直性ジストロフィー等の数種のポリグルタミン神経障害、ならびに遺伝性クロイツフェルト・ヤコブ病（プリオンタンパク質プロセシング欠損による）等の海綿状脳症、ファブリー病、シュトロイスラー‐シャインカー症候群、ＣＯＰＤ、ドライアイ疾患、またはシェーグレン病、骨粗しょう症、骨減少症、骨折治癒機転および骨成長（骨修復、骨再生、骨吸収を低減させることおよび骨沈着を増大させることを包含する）、ゴーラム病、先天性筋強直症（トムゼン型およびベッカー型）等のクロライドチャネル病、バーター症候群ＩＩＩ型、デント病、驚愕過剰症、てんかん、びっくり病、脂肪蓄積症、アンジェルマン症候群、ならびに、逆位を伴うＰＣＤ（カルタゲナー症候群としても公知である）、逆位および線毛形成不全を伴わないＰＣＤを包含する線毛の構造および／または機能の遺伝障害を表す用語である先天性線毛運動不全症（ＰＣＤ）を包含する。
【０１５５】
いくつかの実施形態において、方法は、患者に、本明細書において定義されている通りの組成物の１つを投与するステップを含む、前記患者における嚢胞性線維症を治療するまたはその重症度を下げることを包含する。ある特定の実施形態において、患者は、ヒトＣＦＴＲの変異型形態を保有する。他の実施形態において、患者は、ヒトＣＦＴＲの下記の変異ΔＦ５０８、Ｒ１１７ＨおよびＧ５５１Ｄの１つまたは複数を保有する。一実施形態において、方法は、ヒトＣＦＴＲのΔＦ５０８変異を保有する患者に、本明細書において定義されている通りの組成物の１つを投与するステップを含む、前記患者における嚢胞性線維症を治療するまたはその重症度を下げることを包含する。一実施形態において、方法は、ヒトＣＦＴＲのＧ５５１Ｄ変異を保有する患者に、本明細書において定義されている通りの組成物の１つを投与するステップを含む、前記患者における嚢胞性線維症を治療するまたはその重症度を下げることを包含する。一実施形態において、方法は、少なくとも一方の対立遺伝子上にヒトＣＦＴＲのΔＦ５０８変異を保有する患者に、本明細書において定義されている通りの組成物の１つを投与するステップを含む、前記患者における嚢胞性線維症を治療するまたはその重症度を下げることを包含する。一実施形態において、方法は、両方の対立遺伝子上にヒトＣＦＴＲのΔＦ５０８変異を保有する患者に、本明細書において定義されている通りの組成物の１つを投与するステップを含む、前記患者における嚢胞性線維症を治療するまたはその重症度を下げることを包含する。一実施形態において、方法は、少なくとも一方の対立遺伝子上にヒトＣＦＴＲのＧ５５１Ｄ変異を保有する患者に、本明細書において定義されている通りの組成物の１つを投与するステップを含む、前記患者における嚢胞性線維症を治療するまたはその重症度を下げることを包含する。一実施形態において、方法は、両方の対立遺伝子上にヒトＣＦＴＲのＧ５５１Ｄ変異を保有する患者に、本明細書において定義されている通りの組成物の１つを投与するステップを含む、前記患者における嚢胞性線維症を治療するまたはその重症度を下げることを包含する。
【０１５６】
いくつかの実施形態において、方法は、患者に、本明細書において定義されている通りの組成物の１つを投与するステップを含む、前記患者における嚢胞性線維症の重症度を下げることを包含する。ある特定の実施形態において、患者は、ヒトＣＦＴＲの変異型形態を保有する。他の実施形態において、患者は、ヒトＣＦＴＲの下記の変異ΔＦ５０８、Ｒ１１７ＨおよびＧ５５１Ｄの１つまたは複数を保有する。一実施形態において、方法は、ヒトＣＦＴＲのΔＦ５０８変異を保有する患者に、本明細書において定義されている通りの組成物の１つを投与するステップを含む、前記患者における嚢胞性線維症の重症度を下げることを包含する。一実施形態において、方法は、ヒトＣＦＴＲのＧ５５１Ｄ変異を保有する患者に、本明細書において定義されている通りの組成物の１つを投与するステップを含む、前記患者における嚢胞性線維症の重症度を下げることを包含する。一実施形態において、方法は、少なくとも一方の対立遺伝子上にヒトＣＦＴＲのΔＦ５０８変異を保有する患者に、本明細書において定義されている通りの組成物の１つを投与するステップを含む、前記患者における嚢胞性線維症の重症度を下げることを包含する。一実施形態において、方法は、両方の対立遺伝子上にヒトＣＦＴＲのΔＦ５０８変異を保有する患者に、本明細書において定義されている通りの組成物の１つを投与するステップを含む、前記患者における嚢胞性線維症の重症度を下げることを包含する。一実施形態において、方法は、少なくとも一方の対立遺伝子上にヒトＣＦＴＲのＧ５５１Ｄ変異を保有する患者に、本明細書において定義されている通りの組成物の１つを投与するステップを含む、前記患者における嚢胞性線維症の重症度を下げることを包含する。一実施形態において、方法は、両方の対立遺伝子上にヒトＣＦＴＲのＧ５５１Ｄ変異を保有する患者に、本明細書において定義されている通りの組成物の１つを投与するステップを含む、前記患者における嚢胞性線維症の重症度を下げることを包含する。
【０１５７】
いくつかの態様において、本発明は、患者における骨粗しょう症を治療するまたはその重症度を下げる方法であって、前記患者に、本明細書において記述されている通りの化合物１を投与するステップを含む方法を提供する。
【０１５８】
ある特定の実施形態において、患者における骨粗しょう症を治療するまたはその重症度を下げる方法は、前記患者に、本明細書において記述されている通りの医薬組成物を投与するステップを含む。
【０１５９】
いくつかの態様において、本発明は、患者における骨減少症を治療するまたはその重症度を下げる方法であって、前記患者に、本明細書において記述されている通りの化合物１を投与するステップを含む方法を提供する。
【０１６０】
ある特定の実施形態において、患者における骨減少症を治療するまたはその重症度を下げる方法は、前記患者に、本明細書において記述されている通りの医薬組成物を投与するステップを含む。
【０１６１】
いくつかの態様において、本発明は、患者における骨折治癒機転および／または骨修復の方法であって、前記患者に、本明細書において記述されている通りの化合物１を投与するステップを含む方法を提供する。
【０１６２】
ある特定の実施形態において、患者における骨折治癒機転および／または骨修復の方法は、前記患者に、本明細書において記述されている通りの医薬組成物を投与するステップを含む。
【０１６３】
いくつかの態様において、本発明は、患者における骨吸収を低減させる方法であって、前記患者に、本明細書において記述されている通りの化合物１を投与するステップを含む方法を提供する。
【０１６４】
ある特定の実施形態において、患者における骨吸収を低減させる方法は、前記患者に、本明細書において記述されている通りの医薬組成物を投与するステップを含む。
【０１６５】
いくつかの態様において、本発明は、患者における骨沈着を増大させる方法であって、前記患者に、本明細書において記述されている通りの化合物１を投与するステップを含む方法を提供する。
【０１６６】
ある特定の実施形態において、患者における骨沈着を増大させる方法は、前記患者に、本明細書において記述されている通りの医薬組成物を投与するステップを含む。
【０１６７】
いくつかの態様において、本発明は、患者におけるＣＯＰＤを治療するまたはその重症度を下げる方法であって、前記患者に、本明細書において記述されている通りの化合物１を投与するステップを含む方法を提供する。
【０１６８】
ある特定の実施形態において、患者におけるＣＯＰＤを治療するまたはその重症度を下げる方法は、前記患者に、本明細書において記述されている通りの医薬組成物を投与するステップを含む。
【０１６９】
いくつかの態様において、本発明は、患者における喫煙誘発性ＣＯＰＤを治療するまたはその重症度を下げる方法であって、前記患者に、本明細書において記述されている通りの化合物１を投与するステップを含む方法を提供する。
【０１７０】
ある特定の実施形態において、患者における喫煙誘発性ＣＯＰＤを治療するまたはその重症度を下げる方法は、前記患者に、本明細書において記述されている通りの医薬組成物を投与するステップを含む。
【０１７１】
いくつかの態様において、本発明は、患者における慢性気管支炎を治療するまたはその重症度を下げる方法であって、前記患者に、本明細書において記述されている通りの化合物１を投与するステップを含む方法を提供する。
【０１７２】
ある特定の実施形態において、患者における慢性気管支炎を治療するまたはその重症度を下げる方法は、前記患者に、本明細書において記述されている通りの医薬組成物を投与するステップを含む。
【０１７３】
一実施形態において、本発明は、ヒトにおける嚢胞性線維症を治療する方法であって、前記ヒトに、有効量の化合物１形態Ａ、形態Ａ−ＨＣｌ、形態Ｂ、形態Ｂ−ＨＣｌ、またはそれらの任意の組合せを投与するステップを含む方法を提供する。
【０１７４】
一態様において、本発明は、化合物１形態Ａ、形態Ａ−ＨＣｌ、形態Ｂ、形態Ｂ−ＨＣｌ、またはこれらの形態の任意の組合せと、薬学的に許容される担体とを含む、医薬パックまたはキットを取り上げる。
【０１７５】
一態様において、本発明は、三方晶系、Ｒ−３空間群、ならびに下記の単位格子寸法：ａ＝１９．１６７０（４）Å、ｂ＝１９．１６７０（４）Å、ｃ＝３３．６５７２（１２）Å、α＝９０°、β＝９０°およびγ＝１２０°を有する、Ｎ−（４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）フェニル）−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミドの結晶形態を取り上げる。
【０１７６】
一実施形態において、本発明は、単斜晶系、Ｐ２１／ｃ空間群、ならびに下記の単位格子寸法：ａ＝１３．５４２９（４）Å、ｂ＝１３．４５５７（４）Å、ｃ＝１２．０５９２（４）Å、α＝９０°、β＝１０１．１９３°およびγ＝９０°を有する、形態ＢのＮ−（４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）フェニル）−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミドの結晶を提供する。
【０１７７】
使用、製剤および投与
本発明の一態様において、薬学的に許容される組成物が提供され、ここで、これらの組成物は、本明細書において記述されている通りの形態Ａを含み、場合により、薬学的に許容される担体、アジュバントまたはビヒクルを含む。ある特定の実施形態において、これらの組成物は、場合により、１種または複数種の追加の治療剤をさらに含む。
【０１７８】
上述した通り、本発明の薬学的に許容される組成物は、薬学的に許容される担体、アジュバントまたはビヒクルを追加で含み、これは、本明細書において使用される場合、所望される特定の剤形に適するような、ありとあらゆる溶媒、賦形剤または他の液体ビヒクル、分散助剤または懸濁助剤、表面活性剤、等張剤、増粘剤または乳化剤、保存剤、固体結合剤、滑沢剤等を包含する。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１６版、Ｅ． Ｗ． Ｍａｒｔｉｎ（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐａ．、１９８０年）は、薬学的に許容される組成物を製剤化する際に使用される種々の担体およびその調製のための公知の技術を開示している。何らかの望ましくない生物学的効果を生じさせる、または、薬学的に許容される組成物の任意の他の成分（複数可）と有害性の様式で相互作用する等によって、任意の従来の担体媒質が本発明の化合物と配合禁忌でない限り、その使用は本発明の範囲内であることを企図されている。薬学的に許容される担体としての役割を果たすことができる材料のいくつかの例は、イオン交換体；アルミナ；ステアリン酸アルミニウム；レシチン；ヒト血清アルブミン等の血清タンパク質；ホスフェート、グリシン、ソルビン酸またはソルビン酸カリウム等の緩衝物質；植物性飽和脂肪酸の部分グリセリド混合物；水、塩、または、硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩等の電解質；コロイド状シリカ；三ケイ酸マグネシウム；ポリビニルピロリドン；ポリアクリレート；蝋；ポリエチレンポリオキシプロピレンブロックポリマー；羊毛脂；ラクトース、グルコースおよびスクロース等の糖類；コーンスターチおよびジャガイモデンプン等のデンプン類；セルロース、ならびにカルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロース等のその誘導体；トラガカント末；麦芽；ゼラチン；タルク；ココアバターおよび坐剤蝋等の添加剤；ピーナッツ油、綿実油、サフラワー油、ゴマ油、オリーブ油、トウモロコシ油および大豆油等の油；プロピレングリコールまたはポリエチレングリコール等のグリコール類；オレイン酸エチルおよびラウリン酸エチル等のエステル類；寒天；水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウム等の緩衝剤；アルギン酸；発熱性物質を含まない水；等張食塩水；リンゲル液；エチルアルコール；およびリン酸緩衝液；ならびに、ラウリル硫酸ナトリウムおよびステアリン酸マグネシウム等の他の非毒性の適合する滑沢剤を包含するがこれらに限定されず、さらに、調合者の判断により、着色剤、離型剤、コーティング剤、甘味剤、香味剤および着香剤、保存剤、ならびに酸化防止剤が組成物中に存在してもよい。
【０１７９】
化合物および薬学的に許容される組成物の使用
また別の態様において、本発明は、ＣＦＴＲ変異が関与する状態、疾患または障害を治療するまたはその重症度を下げる方法を提供する。ある特定の実施形態において、本発明は、ＣＦＴＲ活性の欠損が関与する状態、疾患または障害を治療する方法であって、化合物１形態Ａ、形態Ａ−ＨＣｌ、形態Ｂ、形態Ｂ−ＨＣｌ、またはこれらの形態の任意の組合せを含む組成物を、それを必要としている被験体、好ましくは哺乳動物に投与するステップを含む方法を提供する。
【０１８０】
ある特定の実施形態において、本発明は、ＣＦＴＲをコードする遺伝子における変異または環境要因（例えば煙）によるＣＦＴＲ機能の低減に関連する疾患を治療する方法を提供する。これらの疾患は、嚢胞性線維症、慢性気管支炎、反復性気管支炎、急性気管支炎、精管の先天性両側欠損（ＣＢＡＶＤ）によって引き起こされる男性不妊、子宮および膣の先天性欠損（ＣＡＵＶ）によって引き起こされる女性不妊、特発性慢性膵炎（ＩＣＰ）、特発性再発性膵炎、特発性急性膵炎、慢性鼻副鼻腔炎、原発性硬化性胆管炎、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、糖尿病、ドライアイ、便秘、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症（ＡＢＰＡ）、骨疾患（例えば骨粗しょう症）、ならびに喘息を包含する。
【０１８１】
ある特定の実施形態において、本発明は、正常なＣＦＴＲ機能に関連する疾患を治療するための方法を提供する。これらの疾患は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性気管支炎、反復性気管支炎、急性気管支炎、鼻副鼻腔炎、便秘、慢性膵炎、再発性膵炎および急性膵炎を包含する膵炎、膵機能不全、精管の先天性両側欠損（ＣＢＡＶＤ）によって引き起こされる男性不妊、軽度肺疾患、特発性膵炎、肝疾患、遺伝性肺気腫、胆石、胃食道（ｇａｓｇｔｒｏ）逆流性疾患、胃腸悪性腫瘍、炎症性腸疾患、便秘、糖尿病、関節炎、骨粗しょう症、ならびに骨減少症を包含する。
【０１８２】
ある特定の実施形態において、本発明は、遺伝性ヘモクロマトーシス、プロテインＣ欠乏症等の凝固−繊維素溶解欠乏症、１型遺伝性血管浮腫、家族性高コレステロール血症等の脂質プロセシング欠乏症、１型乳び血症、無βリポタンパク質血症、Ｉ細胞疾患／偽性ハーラー等のリソソーム蓄積症、ムコ多糖症、サンドホフ／テイ・サックス病、クリグラー・ナジャーＩＩ型、多腺性内分泌障害／高インスリン血症、真性糖尿病、ラロン型小人症、ミエロペルオキシダーゼ欠損症、原発性副甲状腺機能低下症、黒色腫、グリカノーシス（ｇｌｙｃａｎｏｓｉｓ）ＣＤＧ１型、先天性甲状腺機能亢進症、骨形成不全症、遺伝性低フィブリノゲン血症、ＡＣＴ欠損症、尿崩症（ＤＩ）、ニューロフィシン性（ｎｅｕｒｏｐｈｙｓｅａｌ）ＤＩ、腎性（ｎｅｐｒｏｇｅｎｉｃ）ＤＩ、シャルコー・マリー・トゥース症候群、ペリツェーウス‐メルツバッハー病、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、進行性核上麻痺、ピック病等の神経変性疾患、ハンチントン病、脊髄小脳失調Ｉ型、球脊髄性筋萎縮症、歯状核赤核淡蒼球ルイ体および筋強直性ジストロフィー等の数種のポリグルタミン神経障害、ならびに、遺伝性クロイツフェルト・ヤコブ病（プリオンタンパク質プロセシング欠損による）等の海綿状脳症、ファブリー病、シュトロイスラー‐シャインカー症候群、ゴーラム病、クロライドチャネル病、先天性筋強直症（トムゼン型およびベッカー型）、バーター症候群ＩＩＩ型、デント病、驚愕過剰症、てんかん、びっくり病、脂肪蓄積症、アンジェルマン症候群、先天性線毛運動不全症（ＰＣＤ）、逆位を伴うＰＣＤ（カルタゲナー症候群としても公知である）、逆位および線毛形成不全を伴わないＰＣＤ、またはシェーグレン病を包含する正常なＣＦＴＲ機能に関連する疾患を治療するための方法であって、前記哺乳動物に、本明細書において記述されている化合物１形態Ａ、化合物１形態Ａ−ＨＣｌ、化合物１形態Ｂ、化合物１形態Ｂ−ＨＣｌ、またはこれらの形態の任意の組合せを含む有効量の組成物を投与するステップを含む方法を提供する。
【０１８３】
代替的な好ましい実施形態によれば、本発明は、前記哺乳動物に組成物を投与するステップを含む嚢胞性線維症を治療する方法であって、前記哺乳動物に、本明細書において記述されている化合物１形態Ａ、化合物１形態Ａ−ＨＣｌ、化合物１形態Ｂ、化合物１形態Ｂ−ＨＣｌ、またはこれらの形態の任意の組合せを含む有効量の組成物を投与するステップを含む方法を提供する。
【０１８４】
本発明によれば、化合物１形態Ａ、化合物１形態Ａ−ＨＣｌ、化合物１形態Ｂ、化合物１形態Ｂ−ＨＣｌ、これらの形態の任意の組合せ、または薬学的に許容されるその組成物の「有効量」は、上記で列挙した通りの疾患、障害または状態の１つまたは複数を治療するまたはその重症度を下げるために有効な量である。
【０１８５】
化合物１形態Ａ、化合物１形態Ａ−ＨＣｌ、化合物１形態Ｂ、化合物１形態Ｂ−ＨＣｌもしくはこれらの形態の任意の組合せ、または薬学的に許容されるその組成物は、上記で列挙した通りの疾患、障害または状態の１つまたは複数を治療するまたはその重症度を下げるために有効な任意の量および任意の投与経路を使用して投与され得る。
【０１８６】
ある特定の実施形態において、化合物１形態Ａ、化合物１形態Ａ−ＨＣｌ、化合物１形態Ｂ、化合物１形態Ｂ−ＨＣｌ、これらの形態の任意の組合せ、または薬学的に許容されるその組成物は、呼吸および非呼吸上皮の頂端膜中に残留ＣＦＴＲ活性を呈する患者における、嚢胞性線維症を治療するまたはその重症度を下げるのに有用である。上皮表面における残留ＣＦＴＲ活性の存在は、当技術分野において公知の方法、例えば、標準的な電気生理学的、生化学的または組織化学的技術を使用して容易に検出できる。そのような方法は、インビボもしくはエクスビボ電気生理学的技術、汗もしくは唾液Ｃｌ−濃度の測定、またはエクスビボ生化学的もしくは組織化学的技術を使用してＣＦＴＲ活性を同定し、細胞表面密度をモニターする。そのような方法を使用して、最も一般的な変異ΔＦ５０８が同型接合または異型接合の患者を包含する、様々な異なる変異が異型接合または同型接合の患者において、残留ＣＦＴＲ活性が容易に検出され得る。
【０１８７】
別の実施形態において、本明細書において記述されている化合物１形態Ａ、化合物１形態Ａ−ＨＣｌ、化合物１形態Ｂ、化合物１形態Ｂ−ＨＣｌもしくはこれらの形態の任意の組合せ、または薬学的に許容されるその組成物は、薬理学的方法または遺伝子療法を使用して、残留ＣＦＴＲ活性が誘発または増進された患者における、嚢胞性線維症を治療するまたはその重症度を下げるのに有用である。そのような方法は、細胞表面に存在するＣＦＴＲの量を増大させ、それにより、患者においてそれまで存在しなかったＣＦＴＲ活性を誘発する、または患者において残留ＣＦＴＲ活性の既存レベルを増進させる。
【０１８８】
一実施形態において、本明細書において記述されている化合物１形態Ａ、化合物１形態Ａ−ＨＣｌ、化合物１形態Ｂ、化合物１形態Ｂ−ＨＣｌもしくはこれらの形態の任意の組合せ、または薬学的に許容されるその組成物は、残留ＣＦＴＲ活性を呈するある特定の遺伝子型、例えば、クラスＩＩＩ変異（制御またはゲーティングの障害）、クラスＩＶ変異（コンダクタンスの変化）またはクラスＶ変異（合成の低減）内の患者における、嚢胞性線維症を治療するまたはその重症度を下げるのに有用である（Ｌｅｅ Ｒ． Ｃｈｏｏ−Ｋａｎｇ、Ｐａｍｅｌａ Ｌ．， Ｚｅｉｔｌｉｎ、Ｔｙｐｅ Ｉ， ＩＩ， ＩＩＩ， ＩＶ， ａｎｄ Ｖ ｃｙｓｔｉｃ ｆｉｂｒｏｓｉｓ Ｔａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ Ｃｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ Ｄｅｆｅｃｔｓ ａｎｄ Ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｔｉｅｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｙ； Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、６巻：５２１〜５２９頁、２０００年）。残留ＣＦＴＲ活性を呈する他の患者遺伝子型は、これらのクラスの１つが同型接合の、または、クラスＩ変異、クラスＩＩ変異もしくは分類のない変異を包含する、任意の他のクラスの変異と異型接合の患者を包含する。
【０１８９】
一実施形態において、本明細書において記述されている化合物１形態Ａ、化合物１形態Ａ−ＨＣｌ、化合物１形態Ｂ、化合物１形態Ｂ−ＨＣｌもしくはこれらの形態の任意の組合せ、または薬学的に許容されるその組成物は、ある特定の臨床表現型、例えば、典型的には上皮の頂端膜中の残留ＣＦＴＲ活性の量と相関する中等度から軽度の臨床表現型内の患者における、嚢胞性線維症を治療するまたはその重症度を下げるのに有用である。そのような表現型は、膵機能不全を呈する患者、または、特発性膵炎および精管の先天性両側欠損、もしくは軽度肺疾患と診断された患者を包含する。
【０１９０】
要求される正確な量は、被験体の種、年齢および全身状態、感染の重症度、特定の作用物質、その投与様式等に応じ、被験体によって変わることになる。本発明の化合物は、好ましくは、投与の容易性および投薬量の均一性のために投薬量単位形態で製剤化される。表現「投薬量単位形態」は、本明細書において使用される場合、治療される患者に適した作用物質の物理的に不連続な単位を指す。しかしながら、本発明の化合物および組成物の１日の総使用量は、妥当な医学的判断の範囲内で、担当医によって決定されることも理解されよう。任意の特定の患者または有機体に対する特異的に有効な用量レベルは、治療されている障害および該障害の重症度；用いられている特定化合物の活性：用いられている特定組成物；患者の年齢、体重、全身の健康状態、性別および食生活；用いられている特定化合物の、投与時間、投与経路および排泄速度；治療の持続時間；用いられている特定化合物と組み合わせて、または同時に使用される薬物；ならびに、医療分野において周知である類似の要因を包含する、様々な要因によって決まることになる。用語「患者」は、本明細書において使用される場合、動物、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトを意味する。
【０１９１】
本発明の薬学的に許容される組成物は、治療されている感染の重症度に応じて、経口で、直腸内に、非経口で、槽内に、膣内に、腹腔内に、局所的に（散剤、軟膏剤、点滴剤またはパッチ剤によって等）、口腔内に、経口または鼻腔用スプレー等として、ヒトおよび他の動物に投与され得る。ある特定の実施形態において、本発明の化合物は、所望の治療効果を得るために、被験体の体重１ｋｇ当たり約０．０１ｍｇから約５０ｍｇ、好ましくは約０．５ｍｇから約２５ｍｇまでの投薬量レベルで、１日１回または複数回、経口でまたは非経口で投与され得る。
【０１９２】
経口投与用の液体剤形は、薬学的に許容される乳剤、マイクロ乳剤、液剤、懸濁剤、シロップ剤およびエリキシル剤を包含するがこれらに限定されない。液体剤形は、活性化合物に加えて、例えば、水または他の溶媒、可溶化剤、ならびにエチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油（特に、綿実油、ラッカセイ油、トウモロコシ油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコール、およびソルビタンの脂肪酸エステル等の乳化剤、ならびにそれらの混合物等、当技術分野において一般に使用される不活性賦形剤を含有し得る。経口組成物は、不活性賦形剤のほかに、湿潤剤、乳化剤および懸濁化剤等のアジュバント、甘味剤、香味剤、ならびに着香剤も包含し得る。
【０１９３】
注射用調製物、例えば無菌注射用の水性または油性懸濁液は、適切な分散剤または湿潤剤と懸濁化剤とを使用する公知の技術によって製剤化され得る。無菌注射用調製物は、例えば１，３−ブタンジオール中の溶液等、非毒性で非経口的に許容される賦形剤または溶媒中の無菌注射用の溶液、懸濁液またはエマルションであってもよい。許容されるビヒクルおよび溶媒のうち、用いられ得るのは、水、リンゲル液、Ｕ．Ｓ．Ｐ．および生理食塩液である。加えて、無菌固定油は、溶媒または懸濁媒として慣行的に用いられる。この目的のために、合成モノグリセリドまたは合成ジグリセリドを包含する任意の無刺激性固定油が用いられ得る。加えて、オレイン酸等の脂肪酸が注射剤の調製において使用される。
【０１９４】
注射用製剤は、例えば、細菌保持フィルターを通す濾過によって、または、使用前に、滅菌水もしくは他の無菌注射用媒体中に溶解もしくは分散され得る無菌の固体組成物の形態で滅菌剤を組み込むことによって、滅菌できる。
【０１９５】
本発明の化合物の効果を延長するためには、多くの場合、皮下または筋肉内注射からの化合物の吸収を遅らせることが望ましい。これは、難水溶性である結晶性または非結晶性材料の液体懸濁液を使用することによって実現され得る。その結果、化合物の吸収の速度はその溶解の速度に依存し、この速度は同様に、結晶サイズおよび結晶性形態に依存する場合がある。代替として、非経口投与された化合物形態の遅延吸収は、化合物を油ビヒクルに溶解または懸濁することによって実現される。注射用デポー形態は、ポリラクチド−ポリグリコリド等の生分解性ポリマー中に化合物のマイクロカプセル化マトリクスを形成することによって作製される。化合物とポリマーとの比率および用いられる特定のポリマーの性質に応じて、化合物放出の速度を制御することができる。他の生分解性ポリマーの例は、ポリ（オルトエステル）およびポリ（酸無水物）を包含する。デポー注射用製剤は、生体組織に適合するリポソームまたはマイクロエマルションに化合物を封入することによっても調製される。
【０１９６】
直腸または膣内投与用の組成物は、好ましくは、本発明の化合物を、常温では固体だが体温では液体となり、したがって直腸または膣腔内で融解して活性化合物を放出する、ココアバター、ポリエチレングリコールまたは坐剤蝋等の適切な非刺激性の添加剤または担体と混合することによって調製できる、坐剤である。
【０１９７】
経口投与用の固形剤形は、カプセル剤、錠剤、丸剤、散剤および顆粒剤を包含する。そのような固形剤形において、活性化合物は、少なくとも１種の、不活性で薬学的に許容される、クエン酸ナトリウムまたはリン酸カルシウム等の添加剤または担体、ならびに／あるいは、ａ）デンプン類、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトールおよびケイ酸等の充填剤または増量剤、ｂ）例えば、カルボキシメチルセルロース、アルジネート、ゼラチン、ポリビニルピロリジノン、スクロースおよびアカシア等の結合剤、ｃ）グリセロール等の保湿剤、ｄ）寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモデンプンまたはタピオカデンプン、アルギン酸、ある特定のシリケート、および炭酸ナトリウム等の崩壊剤、ｅ）パラフィン等の溶液遅延剤、ｆ）第四級アンモニウム化合物等の吸収加速剤、ｇ）例えば、セチルアルコールおよびグリセロールモノステアレート等の湿潤剤、ｈ）カオリンおよびベントナイト粘土等の吸収剤、ならびに、ｉ）タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、およびそれらの混合物等の滑沢剤と混合される。カプセル剤、錠剤および丸剤の事例において、剤形は緩衝剤も含み得る。
【０１９８】
同様の種類の固体組成物は、ラクトースまたは乳糖等の添加剤、および高分子量ポリエチレングリコール等を使用して、軟質および硬質充填ゼラチンカプセル内の充填剤として用いることもできる。錠剤、糖衣錠剤、カプセル剤、丸剤および顆粒剤の固形剤形は、腸溶性コーティングおよび医薬製剤分野において周知である他のコーティング等、コーティングおよび外殻（ｓｈｅｌｌ）を伴って調製され得る。それらは、不透明化剤を場合により含有してよく、消化管のある特定の部分において、場合により遅延様式で、有効成分（複数可）のみを、またはそれを優先的に放出する組成物のものであってもよい。使用され得る包埋組成物の例は、ポリマー性物質および蝋を包含する。同様の種類の固体組成物は、ラクトースまたは乳糖等の添加剤、および高分子量ポリエチレングリコール等を使用して、軟質および硬質充填ゼラチンカプセル内の充填剤として用いることもできる。
【０１９９】
活性化合物は、１種または複数種の上記した通りの添加剤を加えたマイクロカプセル化形態であってもよい。錠剤、糖衣錠剤、カプセル剤、丸剤および顆粒剤の固形剤形は、腸溶性コーティング、放出制御コーティング、および医薬製剤分野において周知である他のコーティング等、コーティングおよび外殻を伴って調製され得る。そのような固形剤形において、活性化合物は、スクロース、ラクトースまたはデンプン等、少なくとも１種の不活性賦形剤と混和され得る。そのような剤形は、通常の実務と同様に、不活性賦形剤以外の追加物質、例えば、錠剤化滑沢剤、ならびにステアリン酸マグネシウムおよび微結晶性セルロース等の他の錠剤化助剤も含み得る。カプセル剤、錠剤および丸剤の事例において、剤形は、緩衝剤も含み得る。それらは、不透明化剤を場合により含有してよく、消化管のある特定の部分において、場合により遅延様式で、有効成分（複数可）のみを、またはそれを優先的に放出する組成物のものであってもよい。使用され得る包埋組成物の例は、ポリマー性物質および蝋を包含する。
【０２００】
本発明の化合物の局所または経皮投与用の剤形は、軟膏剤、ペースト剤、クリーム剤、ローション剤、ゲル剤、散剤、液剤、スプレー剤、吸入剤またはパッチ剤を包含する。活性成分は、無菌条件下で、薬学的に許容される担体および必要とされる任意の保存剤または緩衝剤と、要求され得る通りに混和される。眼科用製剤、点耳剤および点眼剤も本発明の範囲内であると企図されている。加えて、本発明は、体内への化合物の制御送達を提供するという付加的な利点を有する、経皮パッチ剤の使用を企図している。そのような剤形は、化合物を適正な媒質に溶解または分注することによって調製される。皮膚を横断する化合物のフラックスを増大させるために、吸収エンハンサーを使用してもよい。速度は、速度制御膜を提供すること、または化合物をポリマーマトリクスもしくはゲルに分散させることのいずれかによって制御できる。
【０２０１】
本明細書において記述されている形態Ａ、形態Ａ−ＨＣｌ、形態Ｂ、形態Ｂ−ＨＣｌもしくはそれらの任意の組合せ、または薬学的に許容されるその組成物を、併用療法において用いてよいこと、すなわち、本明細書において記述されている形態Ａ、形態Ａ−ＨＣｌ、形態Ｂ、形態Ｂ−ＨＣｌもしくはそれらの任意の組合せ、または薬学的に許容されるその組成物を、１種または複数種の他の所望の治療薬または医療処置と同時に、その前に、またはその後に投与してよいことも理解されよう。併用レジメンにおいて用いるための療法（治療薬または処置）の特定の組合せでは、所望の治療薬および／または処置と達成される所望の治療効果との適合性を考慮することになる。用いられる療法が、同じ障害について所望の効果を達成し得る（例えば、発明化合物を、同じ障害を治療するために使用される別の作用物質と同時に投与してよい）こと、または該療法が異なる効果を達成し得る（例えば、あらゆる副作用の制御）ことも理解されよう。本明細書において使用される場合、特定の疾患または状態を治療または予防するために通常投与される追加の治療剤は、「治療されている疾患または状態に適している」ことが公知である。
【０２０２】
一実施形態において、追加の作用物質は、粘液溶解剤、気管支拡張剤、抗生物質、抗感染剤、抗炎症剤、本発明の化合物以外のＣＦＴＲモジュレーター、または栄養剤から選択される。
【０２０３】
一実施形態において、追加の作用物質は抗生物質である。本明細書において有用である例示的な抗生物質は、トブラマイシン吸入パウダー（ＴＩＰ）を包含するトブラマイシン、アジスロマイシン、エアゾール化形態のアズトレオナムを包含するアズトレオナム、アミカシンのリポソーム製剤を包含するアミカシン、吸入による投与に適切なシプロフロキサシンの製剤を包含するシプロフロキサシン、レボフロキサシンのエアゾール化製剤を包含するレボフロキサシン（ｌｅｖｏｆｌａｘａｃｉｎ）、ならびに２種の抗生物質、例えばホスホマイシンおよびトブラマイシンの組合せを包含する。
【０２０４】
別の実施形態において、追加の作用物質は粘液溶解剤（ｍｕｃｏｌｙｔｅ）である。本明細書において有用である例示的な粘液溶解剤は、Ｐｕｌｍｏｚｙｍｅ（登録商標）を包含する。
【０２０５】
別の実施形態において、追加の作用物質は気管支拡張剤である。例示的な気管支拡張剤は、アルブテロール、硫酸メタプロテレノール（ｍｅｔａｐｒｏｔｅｎｅｒｏｌ）、酢酸ピルブテロール、サルメテロールまたは硫酸テルブタリン（ｔｅｔｒａｂｕｌｉｎｅ）を包含する。
【０２０６】
別の実施形態において、追加の作用物質は、肺気道表面の液体を修復する際に有効である。そのような作用物質は、細胞内外での塩の動きを改善し、肺気道中の粘液がより水和され、したがってより簡単に浄化されることを可能にする。例示的なそのような作用物質は、高張食塩水、デヌホソル四ナトリウム（［［（３Ｓ，５Ｒ）−５−（４−アミノ−２−オキソピリミジン−１−イル）−３−ヒドロキシオキソラン−２−イル］メトキシ−ヒドロキシホスホリル］［［［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２，４−ジオキソピリミジン−１−イル）−３，４−ジヒドロキシオキソラン−２−イル］メトキシ−ヒドロキシホスホリル］オキシ−ヒドロキシホスホリル］ハイドロジェンホスフェート）、またはブロンキトール（マンニトールの吸入製剤）を包含する。
【０２０７】
別の実施形態において、追加の作用物質は、抗炎症剤、すなわち、肺における炎症を低減させることができる作用物質である。本明細書において有用である例示的なそのような作用物質は、イブプロフェン、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、シルデナフィル、吸入グルタチオン、ピオグリタゾン、ヒドロキシクロロキンまたはシンバスタチンを包含する。
【０２０８】
別の実施形態において、追加の作用物質は、チャネルを遮断することによって直接的に、またはＥＮａＣ活性の増大を招くプロテアーゼ（例えば、セリンプロテアーゼ、チャネル活性化プロテアーゼ）の調節によって間接的にのいずれかで、上皮型ナトリウムチャネル遮断薬（ＥＮａＣ）の活性を低減させる。例示的なそのような作用物質は、カモスタット（トリプシン様プロテアーゼ阻害剤）、ＱＡＵ１４５、５５２−０２、ＧＳ−９４１１、ＩＮＯ−４９９５、エーロライト（Ａｅｒｏｌｙｔｉｃ）およびアミロライドを包含する。上皮型ナトリウムチャネル遮断薬（ＥＮａＣ）の活性を低減させる追加の作用物質は、例えばＰＣＴ公開第ＷＯ２００９／０７４５７５号において見られ、その全内容はその全体が本明細書に組み込まれる。
【０２０９】
本明細書において記述されている他の疾患の中で、本明細書において記述されているＣＦＴＲモジュレーター等のＣＦＴＲモジュレーターと、ＥＮａＣの活性を低減させる作用物質との組合せは、リドル症候群；嚢胞性線維症、先天性線毛運動不全症、慢性気管支炎、慢性閉塞性肺疾患、喘息、呼吸器感染症、肺癌、口内乾燥および乾性角結膜炎（ｋｅｒａｔｏｃｏｎｊｕｎｃｔｉｖｉｔｉｓ ｓｉｒｅ）、呼吸器感染症（急性および慢性；ウイルス性および細菌性）ならびに肺癌を包含する炎症性またはアレルギー性状態を治療するために使用される。
【０２１０】
形態Ｂ、本明細書において記述されているＣＦＴＲモジュレーター等のＣＦＴＲモジュレーターと、ＥＮａＣの活性を低減させる作用物質との組合せは、上皮の表面上の表面保護液の生理機能の異常をおそらく伴う、上皮全体にわたる体液調節の異常に関連する呼吸器疾患以外の疾患、例えば、口内乾燥（ドライマウス）または乾性角結膜炎（ドライアイ）も包含する、上皮型ナトリウムチャネルの遮断によって媒介される疾患を治療するのにも有用である。さらに、腎臓における上皮型ナトリウムチャネルの遮断を使用して利尿を促進し、それにより血圧低下作用を誘発することができる。
【０２１１】
喘息は、内因性（非アレルギー性）喘息および外因性（アレルギー性）喘息の両方、軽度喘息、中等度喘息、重度喘息、気管支炎喘息、運動誘発性喘息、職業性喘息および細菌感染後に誘発される喘息を包含する。喘息の治療はまた、例えば、４または５歳未満で、喘鳴症状を呈し、かつ、主要な医学的関心事である確立された患者カテゴリーであり、現在は多くの場合、初期型または早期喘息患者として同定されている、「喘鳴乳幼児」として診断されたまたは診断可能な被験体の治療を包括するものとして理解されている。（便宜上、この特定の喘息状態を「喘鳴乳幼児症候群」と称する。）喘息の治療における予防的効果は、症候性発作の、例えば急性喘息発作もしくは気管支収縮発作の頻度もしくは重症度の低減、肺機能の改善、または気道過敏性の改善によって証明されるであろう。該効果は、他の対症療法、すなわち、症候性発作が発生した際にそれを制限するまたは中断させるための、またはそのように意図された療法、例えば抗炎症（例えばコルチコステロイド）または気管支拡張の必要性が低減することによってさらに証明され得る。喘息における予防的利益は、特に、「モーニングディップ」を起こしやすい被験体において明白となり得る。「モーニングディップ」は、喘息患者のかなりの割合に共通しており、かつ、例えば、午前４時〜６時頃の間、すなわち、通常、先に施したいかなる喘息対症療法からも実質的に離れた時刻における喘息発作を特徴とする、認定された喘息症候群である。
【０２１２】
慢性閉塞性肺疾患は、慢性気管支炎またはそれに関連する呼吸困難、肺気腫、ならびに、他の薬物療法、特に他の吸入薬物療法の結果としての気道過敏性の増悪を包含する。いくつかの実施形態において、本明細書において記述されているＣＦＴＲモジュレーター等のＣＦＴＲモジュレーターと、ＥＮａＣの活性を低減させる作用物質との組合せは、例えば、急性、アラキジン酸性（ａｒａｃｈｉｄｉｃ）、カタル性、クループ性（ｃｒｏｕｐｕｓ）、慢性または結核性気管支炎を包含する、種類または起源を問わない気管支炎の治療に有用である。
【０２１３】
別の実施形態において、追加の作用物質は、形態Ａ、形態Ｂ、形態Ｂ−ＨＣｌおよび形態Ａ−ＨＣｌ以外のＣＦＴＲモジュレーター、すなわち、ＣＦＴＲ活性を調節する効果を有する作用物質である。例示的なそのような作用物質は、アタルレン（「ＰＴＣ１２４（登録商標）」；３−［５−（２−フルオロフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］安息香酸）、シナプルチド、ランコブチド（ｌａｎｃｏｖｕｔｉｄｅ）、デペレスタット（ヒト組換え好中球エラスターゼ阻害剤）、コビプロストン（７−｛（２Ｒ，４ａＲ，５Ｒ，７ａＲ）−２−［（３Ｓ）−１，１−ジフルオロ−３−メチルペンチル］−２−ヒドロキシ−６−オキソオクタヒドロシクロペンタ［ｂ］ピラン−５−イル｝ヘプタン酸）、または（３−（６−（１−（２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）シクロプロパンカルボキサミド）−３−メチルピリジン−２−イル）安息香酸を包含する。別の実施形態において、追加の作用物質は、（３−（６−（１−（２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）シクロプロパンカルボキサミド）−３−メチルピリジン−２−イル）安息香酸である。
【０２１４】
別の実施形態において、追加の作用物質は栄養剤である。例示的なそのような作用物質は、Ｐａｎｃｒｅａｓｅ（登録商標）、Ｐａｎｃｒｅａｃａｒｂ（登録商標）、Ｕｌｔｒａｓｅ（登録商標）もしくはＣｒｅｏｎ（登録商標）を包含するパンクレリパーゼ（パンクレアチン（ｐａｎｃｒｅａｔｉｎｇ）酵素補充）；Ｌｉｐｒｏｔｏｍａｓｅ（登録商標）（旧Ｔｒｉｚｙｔｅｋ（登録商標））、Ａｑｕａｄｅｋｓ（登録商標）、またはグルタチオン吸入を包含する。一実施形態において、追加栄養剤はパンクレリパーゼである。
【０２１５】
一実施形態において、追加の作用物質は、本発明の化合物以外のＣＦＴＲモジュレーターである。
【０２１６】
本発明の組成物中に存在する追加の治療剤の量は、その治療剤を唯一の活性剤として含む組成物中で通常投与されるであろう量以下となる。好ましくは、現在開示されている組成物中における追加の治療剤の量は、その作用物質を唯一の治療活性剤として含む組成物中に通常存在する量の約５０％から１００％までの範囲となる。
【０２１７】
本明細書において記述されている化合物１形態Ａ、形態Ａ−ＨＣｌ、形態Ｂ、形態Ｂ−ＨＣｌもしくはそれらの任意の組合せ、または薬学的に許容されるその組成物は、プロテーゼ、人工弁、血管移植片、ステントおよびカテーテル等の移植可能な医療デバイスをコーティングするための組成物に組み込まれてもよい。したがって、本発明は、別の態様において、概して上述した通りの、ならびに本明細書におけるクラスおよびサブクラス内の本発明の化合物と、移植可能なデバイスをコーティングするのに適切な担体とを含む、前記移植可能なデバイスをコーティングするための組成物を包含する。さらに別の態様において、本発明は、概して上述した通りの、ならびに本明細書におけるクラスおよびサブクラス内の本発明の化合物と、移植可能なデバイスをコーティングするのに適切な担体とを含む組成物でコーティングされた、前記移植可能なデバイスを包含する。適切なコーティングおよびコーティングされた移植可能なデバイスの一般的調製は、米国特許第６，０９９，５６２号、同第５，８８６，０２６号および同第５，３０４，１２１号において記述されている。コーティングは、典型的には、ヒドロゲルポリマー、ポリメチルジシロキサン、ポリカプロラクトン、ポリエチレングリコール、ポリ乳酸、エチレン酢酸ビニル、およびそれらの混合物等の生体適合性ポリマー材料である。コーティングは、場合により、組成物において制御放出特徴を付与するために、フルオロシリコーン、多糖、ポリエチレングリコール、リン脂質またはそれらの組合せの適切なトップコートによってさらに被覆され得る。
【０２１８】
本発明の別の態様は、生物学的試料または患者におけるＣＦＴＲ活性を（例えばインビトロまたはインビボで）調節することに関し、その方法は、本明細書において記述されている化合物２０形態Ａ、形態Ａ−ＨＣｌ、形態Ｂ、形態Ｂ−ＨＣｌもしくはそれらの任意の組合せ、または薬学的に許容されるその組成物を、該患者に投与する、または前記生物学的試料と接触させるステップを含む。用語「生物学的試料」は、本明細書において使用される場合、細胞培養物またはその抽出物；哺乳動物から得た生検材料またはその抽出物；および血液、唾液、尿、糞便、精液、涙もしくは他の体液、またはその抽出物を包含するがこれらに限定されない。
【０２１９】
生物学的試料におけるＣＦＴＲの調節は、当業者に公知である様々な目的で有用である。そのような目的の例は、生物学的および病理学的現象におけるＣＦＴＲの研究；ならびにＣＦＴＲの新たなモジュレーターの比較評価を包含するがこれらに限定されない。
【０２２０】
また別の実施形態において、アニオンチャネルの活性をインビトロまたはインビボで調節する方法であって、前記チャネルを、本明細書において記述されている化合物２０形態Ａ、形態Ａ−ＨＣｌ、形態Ｂ、形態Ｂ−ＨＣｌもしくはそれらの任意の組合せ、または薬学的に許容されるその組成物と接触させるステップを含む方法が提供される。好ましい実施形態において、アニオンチャネルは、クロライドチャネルまたは重炭酸塩チャネルである。他の好ましい実施形態において、アニオンチャネルはクロライドチャネルである。
【０２２１】
代替的な実施形態によれば、本発明は、細胞の膜中の機能的ＣＦＴＲの数を増大させる方法であって、前記細胞を、本明細書において記述されている化合物２０形態Ａ、形態Ａ−ＨＣｌ、形態Ｂ、形態Ｂ−ＨＣｌもしくはそれらの任意の組合せ、または薬学的に許容されるその組成物と接触させるステップを含む方法を提供する。
【０２２２】
別の好ましい実施形態によれば、ＣＦＴＲの活性は、膜貫通電位を測定することによって測定される。生物学的試料において膜を横断する電位を測定するための手段は、光学的膜電位アッセイまたは他の電気生理学的方法等、当技術分野において公知の方法のいずれかを用い得る。
【０２２３】
光学的膜電位アッセイでは、ＧｏｎｚａｌｅｚおよびＴｓｉｅｎによって記述されている電圧感受性ＦＲＥＴセンサー（Ｇｏｎｚａｌｅｚ， Ｊ． Ｅ．およびＲ． Ｙ． Ｔｓｉｅｎ（１９９５年）、「Ｖｏｌｔａｇｅ ｓｅｎｓｉｎｇ ｂｙ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ ｅｎｅｒｇｙ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｉｎ ｓｉｎｇｌｅ ｃｅｌｌｓ．」、Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｊ、６９巻（４号）：１２７２〜８０頁、ならびにＧｏｎｚａｌｅｚ， Ｊ． Ｅ．およびＲ． Ｙ． Ｔｓｉｅｎ（１９９７年）、「Ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｉｎｄｉｃａｔｏｒｓ ｏｆ ｃｅｌｌ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｔｈａｔ ｕｓｅ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ ｅｎｅｒｇｙ ｔｒａｎｓｆｅｒ」、Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ、４巻（４号）：２６９〜７７頁を参照）を、電圧／イオンプローブリーダー（ＶＩＰＲ）等の蛍光変化を測定するための機器使用（Ｇｏｎｚａｌｅｚ， Ｊ． Ｅ．、Ｋ． Ｏａｄｅｓら（１９９９年）、「Ｃｅｌｌ−ｂａｓｅｄ ａｓｓａｙｓ ａｎｄ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｉｏｎ−ｃｈａｎｎｅｌ ｔａｒｇｅｔｓ」、Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ Ｔｏｄａｙ、４巻（９号）：４３１〜４３９頁を参照）と組み合わせて利用する。
【０２２４】
これらの電圧感受性アッセイは、膜可溶性の電圧感受性染料ＤｉＳＢＡＣ２（３）と、原形質膜の外葉に付着しており、蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）ドナーとして作用する蛍光リン脂質ＣＣ２−ＤＭＰＥとの間のＦＲＥＴにおける変化に基づく。膜電位（Ｖｍ）における変化は、負に帯電したＤｉＳＢＡＣ２（３）を原形質膜全体にわたって再分配させ、それに応じてＣＣ２−ＤＭＰＥからのエネルギー移動の量が変化する。蛍光発光における変化は、９６または３８４ウェルマイクロタイタープレート中で細胞ベースのスクリーニングを行うように設計されて統合された液体ハンドラーおよび蛍光検出器であるＶＩＰＲ（商標）ＩＩを使用してモニターできる。
【０２２５】
別の態様において、本発明は、生物学的試料におけるＣＦＴＲまたはその断片の活性をインビトロまたはインビボで測定する際に使用するためのキットであって、（ｉ）化合物２０形態Ａ、形態Ａ−ＨＣｌ、形態Ｂ、形態Ｂ−ＨＣｌもしくはそれらの任意の組合せ、または上記実施形態のいずれかを含む組成物と、（ｉｉ）ａ）組成物を生物学的試料と接触させ、ｂ）前記ＣＦＴＲまたはその断片の活性を測定するための取扱説明書とを含むキットを提供する。一実施形態において、キットは、ａ）追加組成物を生物学的試料と接触させ、ｂ）前記追加化合物の存在下で、前記ＣＦＴＲまたはその断片の活性を測定し、ｃ）追加化合物の存在下におけるＣＦＴＲの活性を、本明細書において記述されている形態Ａ、形態Ａ−ＨＣｌ、形態Ｂ、形態Ｂ−ＨＣｌ、またはそれらの任意の組合せの存在下でのＣＦＴＲの密度と比較するための取扱説明書をさらに含む。好ましい実施形態において、キットは、ＣＦＴＲの密度を測定するために使用される。
【０２２６】
本明細書において記述されている発明をより完全に理解できるように、下記実施例を示す。これらの実施例は、例示のみを目的とし、本発明をいかようにも限定するものとして解釈されるべきではないことを理解すべきである。
【実施例】
【０２２７】
方法および材料
ＸＲＰＤ（Ｘ線粉末回折）
機器１
Ｘ線粉末回折（ＸＲＰＤ）データは、リガク／ＭＳＣミニフレックスデスクトップ粉末Ｘ線回折装置（Ｒｉｇａｋｕ、Ｔｈｅ Ｗｏｏｄｌａｎｄｓ、ＴＸ）を使用して、室温で記録する。Ｘ線は、Ｋβ抑制フィルターを用い、３０ｋＶおよび１５ｍＡで操作されるＣｕ管を使用して生成する。発散スリットは、それぞれ４．２度およびスリット０．３ｍｍに設定された散乱および受光スリットと共に可変である。スキャンモードは、０．０２度の刻み幅および２．０秒のカウント時間を用いる固定時間（ＦＴ）である。参照標準物質：７５％方ソーダ石（Ｎａ３Ａｌ４Ｓｉ４Ｏ１２Ｃｌ）および２５％シリコン（Ｒｉｇａｋｕ、カタログ番号２１００／ＡＬＳ）を使用して、粉末Ｘ線回折装置を較正する。ゼロバックグラウンド試料ホルダー（ＳＨ−ＬＢＳＩ５１１−ＲＮＤＢ）付きの６試料台を使用する。粉末試料を凹部に置き、スライドガラスで平らにする。
【０２２８】
機器２
代替として、粉末Ｘ線回折測定は、室温で銅放射線（１．５４０６０Ａ）を用いるＰＡＮａｌｙｔｉｃａｌのエキスパートプロ回折装置を使用して実施した。入射ビーム光学は、試料上および回折ビーム側における一定の照射長を確実にするための可変発散スリットで構成されたものであった。高速線形固体状態検出器は、スキャンモードにおいて測定された２．１２度２θの有効長で使用した。粉末試料をゼロバックグラウンドシリコンホルダーの凹部上に詰め、回転を実施してより良好な統計を達成した。対称スキャンは、０．０１７度の刻みサイズおよび１５．５秒のスキャンステップ時間を用い、４〜４０度２θで測定した。
【０２２９】
機器３
代替として、高分解能データは、ビームラインＩＤ３１（Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｓｙｎｃｈｒｏｔｒｏｎ Ｒａｄｉａｔｉｏｎ Ｆａｃｉｌｉｔｙ、Ｇｒｅｎｏｂｌｅ、フランス）にて室温で収集した。Ｘ線は、３つの１１ｍｍギャップ真空外アンジュレーター（ｅｘ−ｖａｃｕｕｍ ｕｎｄｕｌａｔｏｒ）によって生じさせる。極低温に冷却した二結晶モノクロメーター（Ｓｉ（１１１）結晶）によってビームを単色化する。水冷式スリットは、モノクロメーターへの入射ビームおよび試料に伝達される単色ビームのサイズを、０．５〜２．５ｍｍ（水平方向）×０．１〜１．５ｍｍ（垂直方向）の範囲内で限定する。実験に使用した波長は１．２９９８４（３）Åであった。回折装置は、回折強度を２θの関数として測定するために垂直にスキャンされる９の検出器の列からなる。各検出器の前にＳｉ（１１１）アナライザー結晶を置き、検出器チャネルはおよそ２°間隔とする。この回折装置は、ピーク幅が０．００３°の狭さである極めて精密な高分解能回折パターンを生じさせることができ、ピーク位置の精度は０．０００１°程度である。マテリアルズスタジオ（Ｍａｔｅｒｉａｌｓ Ｓｔｕｄｉｏ）（Ｒｅｆｌｅｘ ｍｏｄｕｌｅ）を使用して粉末回折データを処理し、インデックスを付けた。マテリアルズスタジオの粉末解析モジュールを使用して構造を解析した。得られた溶液を構造的実現可能性について評定し、その後、リートベルトの精密化手順を使用して精密化した。
【０２３０】
形態Ａおよび形態Ｂについての実施例において記述されているＸＰＲＤスペクトルは、機器１（図１０Ａ）または機器２（図１０Ｂ）を上述した設定で使用して記録した。形態Ｂ−ＨＣｌおよび形態Ａ−ＨＣｌについての実施例において記述されているＸＰＲＤスペクトルは、機器２を上述した設定で使用して記録した。形態Ａ−ＨＣｌおよび形態Ｂ−ＨＣｌについての結晶系、空間群および単位格子寸法は、機器３を使用して決定した。
【０２３１】
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）
示差走査熱量測定（ＤＳＣ）は、ＴＡ ＤＳＣ Ｑ２０００示差走査熱量計（ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｎｅｗ Ｃａｓｔｌｅ，ＤＥ）を使用して実施した。機器をインジウムで較正した。１つ穴の開いた蓋を使用して圧着された密封皿に、およそ２〜３ｍｇの試料を秤量して入れた。ＤＳＣ試料を、２５℃から３１５℃まで、１０℃／分の加熱速度でスキャンした。Ｔｈｅｒｍａｌ Ａｄｖａｎｔａｇｅ Ｑ Ｓｅｒｉｅｓ（商標）ソフトウェアによってデータを収集し、ユニバーサルアナリシスソフトウェア（ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｎｅｗ Ｃａｓｔｌｅ、ＤＥ）によって分析した。
【０２３２】
熱重量分析（ＴＧＡ）
熱重量分析（ＴＧＡ）データは、ＴＡ Ｑ５００熱重量分析器（ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｎｅｗ Ｃａｓｔｌｅ，ＤＥ）で収集した。およそ３〜５ｍｇの重量を持つ試料を、２５℃から３５０℃まで、１０℃／分の加熱速度でスキャンした。Ｔｈｅｒｍａｌ Ａｄｖａｎｔａｇｅ Ｑ Ｓｅｒｉｅｓ（商標）ソフトウェアによってデータを収集し、ユニバーサルアナリシスソフトウェア（ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｎｅｗ Ｃａｓｔｌｅ、ＤＥ）によって分析した。
【０２３３】
ＦＴＩＲ分光法
ＦＴＩＲスペクトルは、スマートオービットサンプリングコンパートメント（多重反射型減衰全反射アクセサリー）、４５度のダイヤモンド窓を用いて、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ニコレット６７００ ＦＴ−ＩＲ光度計から収集した。データ収集および分析に使用されるソフトウェアは、オムニック７．４である。収集設定は下記の通りであった：
検出器：ＤＴＧＳ ＫＢｒ、
ビームスプリッター：Ｇｅ／ＫＢｒ、
光源：エバーグローＩＲ、
スキャン範囲：４０００〜４００ｃｍ−１、
ゲイン：８．０、
光学的速度：０．６３２９ｃｍ／秒、
開口：１００、
スキャン数：３２、および
分解能：４ｃｍ−１。
【０２３４】
粉末試料をダイヤモンド結晶に直接置き、圧力を加え、試料の表面をダイヤモンド結晶の表面と一致させた。バックグラウンドスペクトルを収集し、次いで、試料スペクトルを収集した。
【０２３５】
固体状態核磁気分光法
固体状態核磁気分光法（ＳＳＮＭＲ）スペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ４００ＭＨｚプロトン周波数広口径分光計で得た。プロトン緩和縦緩和時間（１Ｈ Ｔ１）は、プロトン検出したプロトン飽和回復データを指数関数に当てはめることによって得た。これらの値を使用して、炭素交差分極マジック角回転実験の最適なリサイクル遅延（１３Ｃ ＣＰＭＡＳ）を設定し、典型的には、１．２×１Ｈ Ｔ１から１．５×１Ｈ Ｔ１の間に設定した。炭素スペクトルは、プロトンチャネル上の線形振幅ランプ（５０％から１００％まで）および１００ｋＨｚ ＴＰＰＭデカップリングを使用し、２ｍｓの接触時間で得た。典型的なマジック角回転（ＭＡＳ）スピードは１５．０ｋＨｚであった。フッ素スペクトルは、プロトンデカップリングした直接分極ＭＡＳ実験を使用して得た。１００ｋＨｚ ＴＰＰＭデカップリングを使用した。リサイクル遅延は、≧５×１９Ｆ Ｔ１に設定した。フッ素縦緩和時間（１９Ｆ Ｔ１）は、フッ素検出しプロトンデカップリングした飽和回復データを指数関数に当てはめることによって得た。２９．５ｐｐｍに設定した固相アダマンタンの高磁場共鳴を使用して、炭素およびフッ素スペクトルを外部参照した。この手順を使用して、炭素スペクトルは０ｐｐｍのテトラメチルシランを間接的に参照し、フッ素スペクトルは０ｐｐｍのニトロメタンを間接的に参照した。
【０２３６】
合成実施例
調製実施例：７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン塩酸塩（８−ＨＣｌ）
【０２３７】
【化４８】
ｔｒａｎｓ−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）シクロヘキサノール（Ａ）の調製、方法１
炭酸ナトリウム（９２０．２ｇ、８．６８２ｍｏｌ、２当量）を反応容器に添加し、続いて水（３．０００Ｌ、６体積）を添加し、撹拌した。ジクロロメタン（ＤＣＭ、４．０００Ｌ、４体積）、続いてｔｒａｎｓ−４−アミノシクロヘキサノール（５００．０ｇ、４．３４１ｍｏｌ）を添加して、二相反応混合物を生成し、これを室温で激しく撹拌した。次いで、ＤＣＭ（２体積）中のＢｏｃ２Ｏ（９４７．４ｇ、９９７．３ｍＬ、４．３４１ｍｏｌ、１当量）の溶液を容器に迅速に滴下添加し、得られた反応混合物を室温で終夜撹拌した。次いで、反応混合物を濾過し、フィルターケーキを水（２×８体積）で洗浄した。生成物が圧縮ケーキになるまで真空乾燥した。次いで、ケーキを真空オーブン中３５℃で２４時間乾燥させて、８３０ｇのｔｒａｎｓ−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）シクロヘキサノール（Ａ）を結晶性固体として得た。
【０２３８】
ｔｒａｎｓ−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）シクロヘキサノール（Ａ）の調製、方法２
２つの５０Ｌ三つ口丸底フラスコは、それぞれ機械的撹拌器および熱電対を備えたものであった。フラスコを冷却槽に入れ、次いで、各フラスコに水（８．８７Ｌ）およびｔｒａｎｓ−４−アミノシクロヘキサノール（１４７９ｇ）を入れた。約１０から３０分後、ｔｒａｎｓ−４−アミノシクロヘキサノールが溶解し、炭酸カリウム（１７７４．６ｇ）を各フラスコに加えた。約１０から２０分後、炭酸カリウムが溶解し、ＤＣＭ（２．９６Ｌ）を各フラスコに入れた。次いで、温度を２０から３０℃に維持するような速度で、ＤＣＭ（１４７９ｍＬ）中のＢｏｃ無水物（３０８２．６ｇ）を各フラスコに加えた。氷／水浴を使用して、発熱を制御し、添加を加速させ、これにはおよそ１から２時間を要した。添加中に懸濁液が形成され、反応混合物を室温に加温させ、Ｂｏｃ無水物の消失に基づいて反応が完了するまで終夜撹拌した。次いで、ヘプタン（６Ｌ）を各フラスコに入れ、混合物をおよそ０から５℃に冷却した。同じフィルターを使用する濾過によって各フラスコから固体を収集した。合わせた固体を、ヘプタン（６Ｌ）、続いて水（８Ｌ）で洗浄した。機械的撹拌器を備えた適正サイズの鉢に固体を入れた。水（１２Ｌ）およびヘプタン（６Ｌ）を添加し、得られた懸濁液を３０から６０分間機械的に撹拌した。固体を濾過によって収集し、次いで、フィルター上、水（８Ｌ）およびヘプタン（８Ｌ）で洗浄し、フィルター上で３日間風乾させ、その後、３０から３５℃で一定重量に真空乾燥して、生成物を白色固体として得た。
【０２３９】
ｔｒａｎｓ−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）シクロヘキシルメタンスルホネート（Ｂ）の調製、方法１
１２Ｌフラスコは、窒素流および機械的撹拌器を備えたものであった。ｔｒａｎｓ−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）シクロヘキサノール（７５０ｇ、３．４８４ｍｏｌ）、続いてテトラヒドロフラン（ＴＨＦ、６．０００Ｌ、８体積）を導入し、混合物を撹拌した。トリエチルアミン（３７０．２ｇ、５０９．９ｍＬ、３．６５８ｍｏｌ、１．０５当量）を添加し、混合物を０℃に冷却した。混合物の温度を５℃未満に保ちながら、塩化メタンスルホニル（４１９．０ｇ、２８３．１ｍＬ、３．６５８ｍｏｌ、１．０５当量）を慎重に滴下添加した。添加後、混合物を０℃で３時間撹拌し、次いで、次第に室温（１７℃）に加温し、終夜（約１５時間）撹拌した。混合物を水（６体積）でクエンチし、１５分間撹拌した。酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ、９．０００Ｌ、１２体積）を添加し、撹拌を１５分間続けた。撹拌を停止し、混合物を１０分間静置させ、水相を除去した。１ＮのＨＣｌ（６体積、４．５Ｌ）を添加し、撹拌を１５分間続けた。撹拌を停止し、水相を除去した。１０％ｗ／ｖのＮａＨＣＯ３（４．５Ｌ、６体積）を添加し、混合物を１０分間撹拌した。撹拌を停止し、水相を除去した。水（６体積、４．５Ｌ）を添加し、混合物を１０分間撹拌した。水層を除去し、有機層をポリッシュ濾過し、４体積に濃縮した。ヘプタン（５．５体積、４Ｌ）を添加し、混合物を再度濃縮乾固させて、９８８ｇのｔｒａｎｓ−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）シクロヘキシルメタンスルホネートを結果として生じさせた。
【０２４０】
ｔｒａｎｓ−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）シクロヘキシルメタンスルホネート（Ｂ）の調製、方法２
機械的撹拌器、添加漏斗、窒素入口、熱電対および乾燥管を備えた三つ口丸底フラスコを、冷却槽に入れた。ｔｒａｎｓ−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）シクロヘキサノール（２５９９ｇ、１２．０７ｍｏｌ、１．０当量）、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（２０．８Ｌ）およびトリエチルアミン（１４６６ｇ、１４．４９ｍｏｌ、１．２当量）をフラスコに加えた。混合物を氷水浴で冷却し、撹拌した。塩化メタンスルホニル（１４６６ｇ、１２．８０ｍｏｌ、１．０６当量）を、添加漏斗により１時間かけて滴下添加した。添加が完了したら、冷却浴を除去し、出発材料が消費されたことをＴＬＣが示すまで（約３０分）反応混合物を撹拌した。次いで、反応混合物を、塩化水素酸水溶液（６．７Ｌの水中２２３ｍＬのＨＣｌ）およびＥｔＯＡｃ（１０．４Ｌ）でクエンチした。混合物を常温でおよそ１０から２０分間撹拌し、次いで、分液漏斗に移した。層を分離し、水層を廃棄した。有機層を、水（２×４．５Ｌ）、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１×４．５Ｌ）で洗浄し、５から１０分間撹拌しながら、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。混合物を濾過し、フィルターケーキをＥｔＯＡｃ（２×６００ｍＬ）で洗浄した。合わせた洗浄液および濾液を減圧下４０℃で濃縮すると、白色固体が残った。固体をヘプタン（３Ｌ）に溶かし、氷／メタノール冷却槽中で冷却した。さらなるヘプタン（５Ｌ）を添加し、混合物を０から５℃で１時間以上撹拌した。次いで、固体を濾過によって収集し、冷ヘプタン（０から５℃、２×１．３Ｌ）で洗浄し、４０℃で一定重量に真空乾燥して、表題化合物を得た。
【０２４１】
注記：冷却槽および氷浴付きの丸底フラスコの代わりにジャケット型反応器を使用してよい。
【０２４２】
ｔｒａｎｓ−４−アミノシクロヘキシルメタンスルホネート（Ｃ）の調製、方法１
ｔｒａｎｓ−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）シクロヘキシルメタンスルホネート（９８５ｇ、３．３５７ｍｏｌ）を、撹拌器を備えた三つ口１２Ｌフラスコに、窒素雰囲気下で換気しながら導入した。ＤＣＭ（１．９７０Ｌ、２体積）を室温で添加し、撹拌を開始した。トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）（２．８４４ｋｇ、１．９２２Ｌ、２４．９４ｍｏｌ、２体積）を混合物に、各１Ｌの分量を２回ゆっくり添加した。１回目の添加後、混合物を３０分間撹拌し、続いて２回目の添加をした。混合物を室温で終夜（１５時間）撹拌して、透明溶液を結果として生じさせた。次いで、２−メチルテトラヒドロフラン（４体積）を反応混合物に添加し、これを１時間撹拌した。次いで、混合物をドラフト中で慎重に濾過し、真空乾燥して、１１００ｇのｔｒａｎｓ−４−アミノシクロヘキシルメタンスルホネートのＴＦＡ塩を過剰なＴＦＡとともに得た。
【０２４３】
ｔｒａｎｓ−４−アミノシクロヘキシルメタンスルホネート（Ｃ）の調製、方法２
５０Ｌ三つ口丸底フラスコは、機械的撹拌器、添加漏斗および熱電対を備えたものであり、これを冷却槽に入れた。ｔｒａｎｓ−４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）シクロヘキシルメタンスルホネート（３４７４ｇ、１．０当量）およびＤＣＭ（５．９Ｌ）をフラスコに加えた。得られた懸濁液を常温で５から１０分間撹拌し、次いで、添加漏斗を介しトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ、５．９Ｌ）を２．５時間かけてゆっくり添加して、結果として生じる発熱およびガス発生速度を制御した。反応混合物を室温で終夜撹拌し、次いで、氷水浴を使用して１５℃から２０℃に冷却した。次いで、添加漏斗を介し、内部温度を２５℃未満に維持する速度で（およそ１．５時間）、２−メチルテトラヒドロフラン（２−ＭｅＴＨＦ、１１．８Ｌ）を添加した。最初の４〜５Ｌの２−ＭｅＴＨＦの添加は発熱性であった。得られた懸濁液を１時間撹拌した。固体を濾過によって収集し、次いで、２−ＭｅＴＨＦ（２×２．２Ｌ）で洗浄し、その後、常温で一定重量に真空乾燥して、表題化合物を白色固体として得た。
【０２４４】
７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン塩酸塩（８−ＨＣｌ）の調製、方法１
ｔｒａｎｓ−４−アミノシクロヘキシルメタンスルホネート（２００ｇ、６５０．９ｍｍｏｌ）のＴＦＡ塩を、三つ口フラスコに導入し、続いて水（２．２００Ｌ、１１体積）を添加した。反応混合物の温度を２５℃未満に保ちながらＮａＯＨ（７８．１１ｇ、１．９５３ｍｏｌ、３当量）をゆっくり添加し、混合物を終夜撹拌した。次いで、ＤＣＭ（１．４Ｌ、７体積）を添加し、混合物を撹拌し、有機層を分離した。次いで、水層を２回目のＤＣＭ（１．４Ｌ、７体積）で抽出し、ＤＣＭ層を合わせた。次いで、ＨＣｌ（１０８．５ｍＬ、１２Ｍ、１．３０２０ｍｏｌ、２当量）を添加し、混合物を３０分間撹拌し、その後、ロータリーエバポレーターで乾固するまで濃縮した。アセトニトリル（１０体積）を添加し、混合物を濃縮した。微量の水がすべて共沸的に除去されるまでこれを３回繰り返して、７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン塩酸塩を得た。粗生成物をアセトニトリル（１０体積）から再結晶させて、７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン塩酸塩８−ＨＣｌを無色の結晶性固体として得た。１ＨＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ６） ｐｐｍ ８．０２−８．０４ （ｄ）； ７．２３−７．３１ （ｍ）； ４．５９ （ｓ）； ３．３１ （ｓ）； ２．５１−３．３ （ｍ）； １．６３−１．７５ （ｍ）； １．４５−１．６２ （ｍ）．
注記として、抽出のためにＤＣＭを添加する代わりに、粗生成物を約９５℃から９７℃で蒸留し、さらに再結晶させてもよい。
【０２４５】
７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン塩酸塩（８−ＨＣｌ）の調製、方法２
５０Ｌ三つ口丸底フラスコは、機械的撹拌器、添加漏斗および熱電対を備えたものであり、これを加熱マントルに入れた。水（３０Ｌ）中のｔｒａｎｓ−４−アミノシクロヘキシルメタンスルホネートトリフルオロ酢酸塩（３０００ｇ、１当量）をフラスコに加えた。この添加は弱発熱性であることから、混合物を撹拌しながら、温度を２５℃未満に維持するような速度で、５０％ＮａＯＨ（２３４３ｇ、２９．２９ｍｏｌ、３当量）を添加漏斗により添加した。ＮａＯＨ添加が完了したら、反応混合物を室温で終夜撹拌した。ヘッド温度を９５℃から９８℃とし、還流温度（およそ１００℃）での分別蒸留によって生成物を回収した。ＨＣｌを添加することによって各画分のｐＨを２に調整し、減圧下５５℃で濃縮すると、濃厚なペーストが残った。アセトニトリル（ＡＣＮ１．５Ｌ）を添加し、得られた懸濁液を３０分間撹拌し、次いで、０℃から５℃に１時間冷却した。固体を濾過によって収集し、冷（０から５℃）ＡＣＮ（２×６００ｍＬ）で洗浄し、５０℃で一定重量に真空乾燥した。
【０２４６】
２２Ｌ三つ口丸底フラスコは、機械的撹拌器、熱電対およびコンデンサーを備えたものであり、これを加熱マントルに入れた。収集した固体（２３８２ｇ）、メタノール（４．７Ｌ）および２−ＭｅＴＨＦ（４．７Ｌ）をフラスコに加えた。得られた懸濁液を撹拌し、加熱還流した（およそ６５℃）。反応フラスコを冷却槽に移し、混合物を撹拌した。次いで、添加漏斗を介し２−ＭｅＴＨＦ（４．７Ｌ）を３０分間かけて添加した。得られた懸濁液を０から５℃に冷却し、この温度で３０分間撹拌した。固体を濾過によって収集し、冷（０から５℃）２−ＭｅＴＨＦ（２×６００ｍＬ）で洗浄し、次いで、５５℃で一定重量に真空乾燥した。
【０２４７】
機械的撹拌器、熱電対、窒素入口およびコンデンサーを備えた１２Ｌ三つ口丸底フラスコを、加熱マントルに入れた。粗生成物（２０７９ｇ）およびＡＣＮ（６．２Ｌ）をフラスコに加えた。得られた懸濁液を撹拌し、３０分間加熱還流した（およそ８２℃）。フラスコを冷却槽に移し、懸濁液を０から５℃にゆっくり冷却し、この温度で１時間維持した。固体を濾過によって収集し、冷（０から５℃）ＡＣＮ（３×６００ｍＬ）で洗浄し、５５℃で一定重量に真空乾燥して、表題生成物を得た。
【０２４８】
（実施例１Ａ）
４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸（２）の調製
【０２４９】
【化４９】
ジエチル２−（（２−クロロ−５−（トリフルオロメチル）フェニルアミノ）メチレン）マロネート（６Ｂ）の調製
２−クロロ−５−（トリフルオロメチル）アニリン４（２００ｇ、１．０２３ｍｏｌ）、ジエチル２−（エトキシメチレン）マロネート（５）（２７６ｇ、１．３ｍｏｌ）およびトルエン（１００ｍＬ）を、窒素雰囲気下、ディーンスタークコンデンサーを備えた三つ口１Ｌ丸底フラスコ中で合わせた。溶液を撹拌しながら１４０℃に加熱し、その温度を４時間維持した。反応混合物を７０℃に冷却し、ヘキサン（６００ｍＬ）をゆっくり添加した。得られたスラリーを撹拌し、室温に加温させた。固体を濾過によって収集し、ヘキサン中１０％の酢酸エチル（２×４００ｍＬ）で洗浄し、次いで、真空乾燥して、所望の縮合物ジエチル２−（（２−クロロ−５−（トリフルオロメチル）フェニルアミノ）メチレン）マロネート（６Ｂ）として白色固体（３５０ｇ、収率９４％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６） δ １１．２８ （ｄ， Ｊ ＝ １３．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．６３ （ｄ， Ｊ ＝ １３．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．１０ （ｓ， １Ｈ）， ７．８０ （ｄ， Ｊ ＝ ８．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５０ （ｄｄ， Ｊ ＝ １．５， ８．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．２４ （ｑ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ， ２Ｈ）， ４．１７ （ｑ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ，２ Ｈ），１．２７ （ｍ， ６Ｈ）．
エチル８−クロロ−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキシレート（６Ａ）の調製、方法１
三つ口１Ｌフラスコに、Ｄｏｗｔｈｅｒｍ（登録商標）（２００ｍＬ、８ｍＬ／ｇ）を入れ、２００℃で１時間脱気した。溶媒を２６０℃に加熱し、ジエチル２−（（２−クロロ−５−（トリフルオロメチル）フェニルアミノ）メチレン）マロネート（６Ｂ）（２５ｇ、０．０７ｍｏｌ）とともに１０分間かけて小分けにして入れた。得られた混合物を２６０℃で６．５時間（ｈ）撹拌し、得られたエタノール副産物を蒸留によって除去した。混合物を８０℃にゆっくり冷却させた。ヘキサン（１５０ｍＬ）を３０分間（ｍｉｎ）かけてゆっくり添加し、続いて追加で２００ｍＬのヘキサンを一度に添加した。スラリーが室温に達するまで撹拌した。固体を濾過し、ヘキサン（３×１５０ｍＬ）で洗浄し、次いで、真空乾燥して、エチル８−クロロ−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキシレート（６Ａ）を黄褐色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６） δ １１．９１ （ｓ， １Ｈ）， ８．３９ （ｓ， １Ｈ）， ８．０６ （ｄ， Ｊ ＝ ８．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．８１ （ｄ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．２４ （ｑ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ， ２Ｈ）， １．２９ （ｔ， Ｊ ＝ ７．１ Ｈｚ， ３Ｈ）．
エチル８−クロロ−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキシレート（６Ａ）の調製、方法２
化合物６Ｂ（２０００ｇ、５．４６８ｍｏｌ）を反応器に導入した。Ｄｏｗｔｈｅｒｍ（４．０００Ｌ）を反応器に入れ、窒素パージによって室温で終夜脱気した。次いでこれを撹拌し、２６０℃に加温した。生じたＥｔＯＨを留去した。反応をモニターし、５．５時間後に完了し、反応が実質的に完了した。熱源を除去し、反応混合物を８０℃に冷却し、ヘプタン（２．０００Ｌ）を入れた。混合物を３０分間撹拌した。ヘプタン（６．０００Ｌ）を撹拌混合物に入れ、撹拌を終夜続けた。固体を濾過除去し、ヘプタン（４．０００Ｌ）で洗浄し、真空オーブン中５０℃で乾燥させて、化合物６Ａを得た。
【０２５０】
エチル４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−キノリン−３−カルボキシレート（６Ｃ）の調製
三つ口５Ｌフラスコに、エチル８−クロロ−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキシレート（６Ａ）（１００ｇ、０．３ｍｏｌ）、エタノール（１２５０ｍＬ、１２．５ｍＬ／ｇ）およびトリエチルアミン（２２０ｍＬ、１．６ｍｏｌ）を入れた。次いで、容器に１０ｇの１０％Ｐｄ／Ｃ（５０％湿式）を５℃で入れた。反応物を水素雰囲気下５℃で２０時間激しく撹拌し、この時間の後、反応混合物をおよそ１５０ｍＬの体積に濃縮した。生成物エチル４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−キノリン−３−カルボキシレート（６Ｃ）を、Ｐｄ／Ｃ入りスラリーとして次のステップに直接持ち込んだ。
【０２５１】
４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸（２）の調製
エチル４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−キノリン−３−カルボキシレート（６Ｃ）（５８ｇ、０．２ｍｏｌ、Ｐｄ／Ｃを含有する粗反応物スラリー）を、還流コンデンサー付きの１Ｌフラスコ中、ＮａＯＨ（８１４ｍＬ、５Ｍ、４．１ｍｏｌ）に懸濁させ、８０℃で１８時間加熱し、続いて１００℃で５時間さらに加熱した。反応物をパックセライトに通して温かいうちに濾過してＰｄ／Ｃを除去し、セライトを１ＮのＮａＯＨですすいだ。濾液をｐＨ約１に酸性化して、濃厚な白色沈殿物を得た。沈殿物を濾過し、次いで、水および冷アセトニトリルですすいだ。次いで、固体を真空乾燥して、４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸（２）を白色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００．０ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６） δ １５．２６ （ｓ， １Ｈ）， １３．６６ （ｓ， １Ｈ）， ８．９８ （ｓ， １Ｈ）， ８．１３ （ｄｄ， Ｊ ＝ １．６， ７．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．０６ − ７．９９ （ｍ， ２Ｈ）．
（実施例１Ｂ）
４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸（２）の代替的調製
【０２５２】
【化５０】
８−クロロ−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸（６Ｄ）の調製
エチル８−クロロ−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキシレート（６Ｂ）（１２００ｇ、３．７５４ｍｏｌ）を容器に入れ、続いて、２−プロパノール（１．２００Ｌ）および水（７．２００Ｌ）を添加し、撹拌した。ＮａＯＨ（６００．６ｇ、７．５０８ｍｏｌ）および水（１．２００Ｌ）を混合し、室温に冷却させた。得られたＮａＯＨ溶液を反応容器に入れた。反応混合物を、８０℃に加熱して３．５時間撹拌し、暗色の均質混合物を得た。さらに１時間後、滴下漏斗を介し４５分間かけて酢酸（９．５９９Ｌ、［２０％ｗ／ｖ溶液］、３１．９７ｍｏｌ）を添加した。反応混合物を撹拌しながら、６℃／時の速度で２２℃に冷却した。得られた固体を濾過し、水（３Ｌ）で洗浄して、湿ったケーキ（１４３６ｇ）を得た。濾液を、真空オーブン中、窒素を抜きながらＤｒｉｅｒｉｔｅ（登録商標）で乾燥させて、８−クロロ−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸を褐色固体として得た。８−クロロ−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸を、１．５Ｌのメタノール中でスラリー化し、６時間撹拌することによって精製した。次いでこれを濾過し、乾燥させて、９６８．８ｇの精製された８−クロロ−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸（６Ｄ）を得た。
【０２５３】
４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸（２）の調製
８−クロロ−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸（６Ｄ）（１８．５ｇ、１．００当量、限定試薬）を反応容器に入れ、ＭｅＯＨ（１１８ｍＬ、６．４体積）を不活性雰囲気下でかき混ぜながら添加した。ＮａＯＭｅ（３．５３ｇ、１．００当量）を１０分間かけて少量ずつ反応器に添加した。すべての固体が溶液中にある状態になるまで（５〜１０分）、混合物を撹拌した。次いで、パラジウム炭素（２．７ｇ、０．０３当量）を反応混合物に添加した。ＭｅＯＨ（６７ｍＬ、３．６体積）に溶解させたギ酸カリウム（１０．７８ｇ、２当量）を、反応混合物に３０分間かけて添加し、常温で約４．５時間撹拌した。８−クロロ−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸が、４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸に対して１．０％以下となった際に、反応は完了したと判断した。反応が完了したら、混合物をセライトのパッド（３７ｇ［出発物質６Ｄの質量のおよそ２倍］）に通して濾過して、固体を除去した。セライトケーキをＭｅＯＨ（３７ｍＬ、２体積）で洗浄した。濾液をきれいな反応容器に入れ、撹拌した。酢酸（７．２２ｍＬ、２当量）を、撹拌溶液に少なくとも４５分間かけて連続的に入れ、得られたスラリーを５〜１６時間の間撹拌した。固体を濾過し、ケーキをＭｅＯＨ（５６ｍＬ、３体積）で洗浄し、減圧して乾燥させ、次いで真空乾燥して、表題カルボン酸２を得た。
【０２５４】
代替として、ギ酸カリウム試薬を水素ガスに置き換えてもよい。
【０２５５】
（実施例２Ａ）
４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）アニリン（３）の調製
【０２５６】
【化５１】
７−［４−ニトロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン（９）の調製、方法１
窒素雰囲気下で得た７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン塩酸塩（８−ＨＣｌ）（４．６ｇ、３４．４３ｍｍｏｌ）を含有するフラスコに、アセトニトリル（５０ｍＬ）中の４−フルオロ−１−ニトロ−２−（トリフルオロメチル）ベンゼン（７）（６．０ｇ、２８．６９ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（８．７ｇ、１２．００ｍＬ、８６．０７ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。反応フラスコを、窒素雰囲気下８０℃で１６時間加熱した。反応混合物を冷却させ、次いで水とジクロロメタンとに分配した。有機層を１ＭのＨＣｌで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、乾固するまで濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中０〜１０％酢酸エチル）による精製により、７−［４−ニトロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン（９）を黄色固体として得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００．０ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６） δ ８．０３ （ｄ， Ｊ ＝ ９．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．３１ （ｄ， Ｊ ＝ ２．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．２５ （ｄｄ， Ｊ ＝ ２．６， ９．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．５９ （ｓ， ２Ｈ）， １．６９ − １．６７ （ｍ， ４Ｈ）， １．５０ （ｄ， Ｊ ＝ ７．０ Ｈｚ， ４Ｈ）．
７−［４−ニトロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン（９）の調製、方法２
４−フルオロ−１−ニトロ−２−（トリフルオロメチル）ベンゼン（７）（９０１ｇ、４．３０９ｍｏｌ）を、３０Ｌジャケット型容器に、窒素雰囲気下、撹拌しながら、Ｎａ２ＣＯ３（９５９．１ｇ、９．０４９ｍｏｌ）およびＤＭＳＯ（５Ｌ、５．５体積）とともに導入した。次いで、７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン塩酸塩（８−ＨＣｌ）（６３３．４ｇ、４．７４０ｍｏｌ）を小分けにして容器に添加した。温度を次第に５５℃に上昇させた。反応が実質的に完了したら、混合物を１０体積のＥｔＯＡｃで希釈し、水（５．５体積）で３回、または水層中のＤＭＳＯが消失する（ＨＰＬＣ）まで洗浄した。すべてのＥｔＯＡｃが除去されるまで、有機層を４体積に濃縮し、次いで溶媒をシクロヘキサンと交換し、フラスコ中の総体積を、シクロヘキサンを含めて約４体積とした。反応混合物を、ロータリーエバポレーターで３０分間、６０℃に加熱した。次いで、溶液を撹拌または回転させながら室温に３時間冷却した。すべての固体が結晶化したら、溶液を乾固するまで濃縮して、７−［４−ニトロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン（９）を得た。
【０２５７】
７−［４−ニトロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン（９）の調製、方法３
４−フルオロ−１−ニトロ−２−（トリフルオロメチル）ベンゼンを、３体積のＤＣＭに溶解させた。テトラブチルアンモニウムブロミド（０．０５当量）およびＫＯＨ（５０ｗｔ％、３．６当量）を添加した。次いで、７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン塩酸塩（８−ＨＣｌ）を０〜５℃で添加した。反応物を常温に加温し、ＨＰＬＣによってモニターした。反応が実質的に完了したら、層を分離し、有機層を１ＭのＨＣｌで洗浄した。層を分離し、水層を廃棄した。有機層を水で１回、ブラインで１回洗浄し、蒸発させた。得られた材料を、還流でシクロヘキサンから再結晶させた。固体を濾過し、シクロヘキサンで洗浄し、真空オーブン中、Ｎ２ガスを抜きながら４５℃で乾燥させて、７−［４−ニトロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン（９）を得た。
【０２５８】
４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）アニリン（３）の調製
７−［４−ニトロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン（２６）（７．０７ｇ、２４．７０ｍｍｏｌ）および１０％Ｐｄ／Ｃ（０．７１ｇ、６．６４ｍｍｏｌ）で満たしたフラスコを排気し、次いで窒素を流した。エタノール（２２ｍＬ）を添加し、反応フラスコに水素バルーンを装着した。１２時間激しく撹拌後、反応混合物を窒素でパージし、Ｐｄ／Ｃを濾過によって除去した。濾液を減圧下で濃縮して暗色油とし、残基をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中０〜１５％酢酸エチル）によって精製して、４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）アニリン（３）を紫色固体（５．７６ｇ、収率９１％）として得た。１Ｈ ＮＭＲ （４００．０ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６） δ ６．９５ （ｄｄ， Ｊ ＝ ２．３， ８．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．７９ （ｄ， Ｊ ＝ ２．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．７２ （ｄ， Ｊ ＝ ８．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．８９ （ｓ， ２Ｈ）， ４．０９ （ｓ， ２Ｈ）， １．６１ − １．５９ （ｍ， ４Ｈ）および１．３５ （ｄ， Ｊ ＝ ６．８ Ｈｚ， ４Ｈ）．
（実施例２Ｂ）
４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）アニリン（３−ＨＣｌ）の塩酸塩の調製
【０２５９】
【化５２】
４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）アニリンの塩酸塩（３−ＨＣｌ）の調製、方法１
パラジウム炭素（１５０ｇ、５％ｗ／ｗ）を、窒素雰囲気下、Ｂｕｅｃｈｉ水素化装置（ｈｙｄｒｏｇｅｎａｔｏｒ）（２０Ｌ容量）に入れ、続いて、７−［４−ニトロ−３−（トリフルオロメチル）フェニル］−７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン（９）の塩酸塩（１５００ｇ）、および２−メチルテトラヒドロフラン（１０．５Ｌ、７体積）を添加した。水素ガスを、密閉容器に＋０．５バール大気圧を上回る圧力で充填した。約２分間減圧にし、続いて、水素ガスを導入して０．５バールの圧力とした。この過程を２回繰り返した。次いで、水素ガスを、＋０．５バールだけ大気圧を上回る圧力で連続的に充填した。容器ジャケットを冷却することにより、混合物を撹拌し、温度を１８℃から２３℃の間に維持した。反応において水素ガスがそれ以上消費されなくなり、さらなる発熱が起こらなくなったら、再び減圧にした。窒素ガスを０．５バールで容器に充填し、再び減圧にし、続いて０．５バールの窒素ガスの２回目の充填をした。反応が実質的に完了したら、窒素雰囲気下、セライトフィルターを使用する濾過漏斗を介して、反応混合物を受け入れフラスコ（ｒｅｃｅｉｖｉｎｇ ｆｌａｓｋ）に移した。セライトフィルターケーキを２−メチルテトラヒドロフラン（３Ｌ、２体積）で洗浄した。撹拌機構、温度制御および窒素雰囲気を備えた容器に、洗浄液および濾液を入れた。１，４−ジオキサン（１体積）中４ＭのＨＣｌを、２０℃で１時間かけて連続的に容器中に添加した。混合物を追加で１０時間（または終夜）撹拌し、濾過し、２−メチルテトラヒドロフラン（２体積）で洗浄し、乾燥させて、１５１９ｇの４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）アニリン塩酸塩（３−ＨＣｌ）を白色結晶性固体として得た。
【０２６０】
この実施例において、代替的な溶媒を代わりに使用してもよい。例えば、２−ＭｅＴＨＦの代わりにＭｅＯＨおよび／またはＥｔＯＨが使用され得る。
【０２６１】
（実施例３Ａ）
形態ＡとしてのＮ−（４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）フェニル）−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミド（化合物１形態Ａ）の調製
【０２６２】
【化５３】
２−メチルテトラヒドロフラン（９１．００ｍＬ）中の４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−キノリン−３−カルボン酸（２）（９．１ｇ、３５．３９ｍｍｏｌ）および４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）アニリン（３）（９．２ｇ、３５．７４ｍｍｏｌ）の溶液に、プロピルホスホン酸環状無水物（酢酸エチル中５０％溶液、５２．６８ｍＬ、８８．４８ｍｍｏｌ）およびピリジン（５．６ｇ、５．７３ｍＬ、７０．７８ｍｍｏｌ）を室温で添加した。反応フラスコを、窒素雰囲気下６５℃で１０時間加熱した。室温に冷却後、次いで反応混合物を酢酸エチルで希釈し、飽和Ｎａ２ＣＯ３溶液（５０ｍＬ）でクエンチした。層を分離し、水層を酢酸エチルで２回以上抽出した。合わせた有機層を水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して黄褐色固体とした。粗固体生成物を、酢酸エチル／ジエチルエーテル中でスラリー化し（２：１）、減圧濾過によって収集し、酢酸エチル／ジエチルエーテルで２回以上洗浄して（２：１）、粗生成物を淡黄色結晶性粉末として得た。粉末を温酢酸エチルに溶解させ、セライトに吸着させた。シリカゲルクロマトグラフィー（ジクロロメタン中０〜５０％酢酸エチル）による精製により、Ｎ−（４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）フェニル）−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミドの形態Ａ（化合物１形態Ａ）を白色結晶性固体として得た。ＬＣ／ＭＳ ｍ／ｚ ４９６．０［Ｍ＋Ｈ］＋、保持時間１．４８分（ＲＰ−Ｃ１８、３分間かけて１０〜９９％ＣＨ３ＣＮ／０．０５％ＴＦＡ）。１Ｈ ＮＭＲ （４００．０ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ−ｄ６） δ １３．０８ （ｓ， １Ｈ）， １２．１６ （ｓ， １Ｈ）， ８．８８ （ｓ， １Ｈ）， ８．０４ （ｄｄ， Ｊ ＝ ２．１， ７．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．９５ − ７．８８ （ｍ， ３Ｈ）， ７．２２ （ｄｄ， ２．５， ８．９ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．１６ （ｄ， Ｊ ＝ ２．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．３３ （ｓ， ２Ｈ）， １．６７ （ｄ， Ｊ ＝ ６．９ Ｈｚ， ４Ｈ）， １．４４ （ｄ， Ｊ ＝ ６．９ Ｈｚ， ４Ｈ）．
化合物１形態Ａの粉末ディフラクトグラム（ｄｉｆｆｒａｃｔｏｇｒａｍ）を図１に示す。
【０２６３】
表１は、化合物１形態Ａの代表的なＸＲＰＤピークの一覧を提供するものである。
表１：化合物１形態Ａの代表的なＸＰＲＤピーク
【０２６４】
【表１】
化合物１形態Ａの代表的試料は、図２において提供されるＦＴＩＲスペクトルを示した。
【０２６５】
単一Ｘ線分析に基づく化合物１形態Ａの立体配座画像を図３に示す。回折データは、シールド管ＣｕＫ−アルファ源およびアペックスＩＩ ＣＣＤ検出器を備えたＢｒｕｋｅｒアペックスＩＩ回折装置で得た。ＳＨＥＬＸプログラムを使用して構造を解析し、精密化した（Ｓｈｅｌｄｒｉｃｋ， Ｇ．Ｍ．、Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔ．、Ａ６４巻、１１２〜１２２頁（２００８年））。強度、統計および対称性に基づいて、三方晶系およびＲ−３空間群において構造を解析し、精密化した。化合物１形態Ａは、下記の単位格子寸法：ａ＝１９．１６７０（４）Å、ｂ＝１９．１６７０（４）Å、ｃ＝３３．６５７２（１２）Å、α＝９０°、β＝９０°およびγ＝１２０°を有する。
【０２６６】
（実施例３Ｂ）
形態Ａ−ＨＣｌとしてのＮ−（４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）フェニル）−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミド（化合物１形態Ａ−ＨＣｌ）の調製
【０２６７】
【化５４】
２−メチルテトラヒドロフラン（０．５７Ｌ、１．０体積）を３０Ｌジャケット型反応容器に入れ、続いて、４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）アニリン（３−ＨＣｌ）の塩酸塩（７９１ｇ、２．６７４ｍｏｌ）および４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸（２）（５７３ｇ、２．２２７８ｍｏｌ）、ならびに追加で５．２Ｌ（９．０体積）の２−メチルテトラヒドロフランを添加した。撹拌を開始し、２−メチルテトラヒドロフラン中のＴ３Ｐ（２．８３６ｋｇ、４．４５６ｍｏｌ）を反応混合物に１５分間かけて添加した。次いで、添加漏斗を介しピリジン（５３４．０ｇ、５４６．０ｍＬ、６．６８４ｍｏｌ）を３０分間かけて滴下添加した。混合物を約３０分間かけて４５℃に加温し、１２〜１５時間撹拌した。ＨＰＬＣ分析は、４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸が２％未満の量で存在することを示した。次いで、混合物を室温に冷却した。２−メチルテトラヒドロフラン（４体積、２．２９２Ｌ）、続いて水（６．９体積、４Ｌ）を添加し、その間、温度を３０℃未満に維持した。水層を除去し、有機層をＮａＨＣＯ３飽和水溶液で慎重に２回洗浄した。次いで、有機層を１０％ｗ／ｗクエン酸（５体積）で、最後に水（７体積）で洗浄した。混合物をポリッシュ濾過し、別の乾燥した容器に移した。Ｎ−（４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）フェニル）−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミド塩酸塩の形態Ａ−ＨＣｌの種晶（化合物１形態Ａ−ＨＣｌ）（３．２８１ｇ、５．５７０ｍｍｏｌ）を添加した。ＨＣｌ（ｇ）（１０当量）を吹き込んで２時間にわたって泡立たせ、混合物を終夜撹拌した。得られた懸濁液を濾過し、２−メチルテトラヒドロフラン（４体積）で洗浄し、一定重量まで真空乾燥させ、６０℃でオーブン乾燥させて、化合物１形態Ａ−ＨＣｌとして得た。
【０２６８】
化合物１形態Ａ−ＨＣｌの粉末ディフラクトグラムを図４に示す。
【０２６９】
表２は、化合物１形態Ａ−ＨＣｌの代表的なＸＲＰＤピークを提供するものである。
表２．化合物１形態Ａ−ＨＣｌの代表的なＸＰＲＤピーク
【０２７０】
【表２−１】
【０２７１】
【表２−２】
化合物１形態Ａ−ＨＣｌの単結晶は、単斜晶系、Ｐ２１／ｃ空間群、ならびに下記の単位格子寸法：ａ＝１３．６１７５（４）Å、ｂ＝２１．６１４（３）Å、ｃ＝８．３９４１（４）Å、α＝９０°、β＝１１２．３０３°およびγ＝９０°を保有することが判明した。
【０２７２】
化合物１形態Ａ−ＨＣｌの試料を、顕微鏡も使用して評価した。
【０２７３】
化合物１形態Ａ−ＨＣｌの試料についてのＤＳＣ曲線を、図５において提供し、化合物１形態Ａ−ＨＣｌの代表的試料についてのＴＧＡ曲線を、図６において提供する。
【０２７４】
化合物１形態Ａ−ＨＣｌの代表的試料は、図７において提供されるＦＴＩＲスペクトルを示した。
【０２７５】
化合物１形態Ａ−ＨＣｌを、固体状態１３Ｃおよび１９Ｆ ＮＭＲも使用して分析した。それぞれのＮＭＲスペクトルを図８および９において提供する。１３Ｃ ＳＳＮＭＲおよび１９Ｆ ＳＳＮＭＲスペクトルにおいて見られた数個のピークを、表３および４に記載する。
表３：化合物１形態Ａ−ＨＣｌの１３Ｃ ＳＳＮＭＲピーク
【０２７６】
【表３】
表４：化合物１形態Ａ−ＨＣｌの１９Ｆ ＳＳＮＭＲピーク
【０２７７】
【表４】
（実施例４Ａ）
形態ＢとしてのＮ−（４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）フェニル）−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミド（化合物１形態Ｂ）の調製
【０２７８】
【化５５】
２−メチルテトラヒドロフラン（１体積）を３０Ｌジャケット型反応容器に入れ、続いて４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）アニリン（３−ＨＣｌ）の塩酸塩（１．２当量）および４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸（２）（５７３ｇ、２．２２８ｍｏｌ）を添加した。追加の２−メチルテトラヒドロフラン（９体積）を容器に入れ、撹拌を開始した。２−メチルテトラヒドロフラン中のＴ３Ｐ（２当量）を反応混合物に１５分間かけて添加した。添加漏斗を使用し、ピリジン（３当量）を滴下して迅速に添加した。次いで、撹拌下で、混合物を約３０分間かけて４５℃に加熱し、この温度を約５時間維持した。混合物を室温に冷却した。２−メチルテトラヒドロフラン（４体積）を添加し、続いて水（６．９体積）をゆっくり添加し、反応物の温度を３０℃未満に保った。水層を除去し、有機層をＮａＨＣＯ３飽和水溶液で２回洗浄した。次いで、有機層を１０％ｗ／ｗクエン酸（５体積）で慎重に洗浄し、水（７体積）で洗浄し、ポリッシュ濾過し、別の乾燥した容器に移した。２−メチルテトラヒドロフラン（１０体積）を添加し、撹拌を開始した。ヘプタン（１０体積）を撹拌しながら滴下して迅速に添加した。混合物を約１２時間にわたって撹拌し、次いで減圧濾過した。固体フィルターケーキを別の容器に導入した。水（１５体積）を容器に入れ、懸濁液を４８時間激しく撹拌し、次いで濾過した。固体ケーキを水（５体積）で洗浄し、４５℃で一定重量に乾燥させて、化合物１形態Ｂを得た。
【０２７９】
機器１および２を使用して記録した化合物１形態Ｂの粉末ディフラクトグラムを、それぞれ図１０Ａおよび１０Ｂにおいて示す。
【０２８０】
表５は、化合物１形態Ｂの代表的なＸＲＰＤピークを含む。
表５．化合物１形態Ｂの代表的なＸＰＲＤピーク
【０２８１】
【表５】
化合物１形態Ｂの試料についてのＤＳＣ曲線を、図１１において提供し、化合物１形態Ｂの代表的試料についてのＴＧＡ曲線を、図１２において提供する。
【０２８２】
化合物１形態Ｂの代表的試料は、図１３において提供されるＦＴＩＲスペクトルを示した。
【０２８３】
化合物１形態Ｂを、固体状態１３Ｃおよび１９Ｆ ＮＭＲも使用して分析した。それぞれのＮＭＲスペクトルを図１４および１５において提供する。１３Ｃ ＳＳＮＭＲおよび１９Ｆ ＳＳＮＭＲスペクトルにおいて見られた数個のピークを、表６および７に記載する。
表６：化合物１形態Ｂの１３Ｃ ＳＳＮＭＲピーク
【０２８４】
【表６】
表７：化合物１形態Ｂの１９Ｆ ＳＳＮＭＲピーク
【０２８５】
【表７】
化合物１形態Ｂの単結晶をマイクロマウントループに載せ、密閉した銅Ｘ線管およびアペックスＩＩ ＣＣＤ検出器を備えたＢｒｏｋｅｒアペックスＩＩ回折装置の中心に据えた。最初に、４０フレームの３セットを収集して、予備的単位格子を決定した。その後、１５スキャンおよび６０８４フレームからなる完全データセットを得た。データ収集は室温で実施した。データを統合し、Ｂｒｕｋｅｒ ＡＸＳ製のアペックスＩＩソフトウェアを使用して測った。統合およびスケーリングは、６１７６の反射をもたらし、このうちの２２５０が固有のものであった。ＳＨＥＬＸＴＬソフトウェアを使用し、空間群Ｐ２１／ｃにおける直接的方法によって構造を解析した。精密化は、同じくＳＨＥＬＸＴＬソフトウェアを使用するＦ２についての完全行列最小二乗法を用いて実施した。３９２の全部のパラメーターを精密化に使用して、５．７４の対パラメーター反射比をもたらした。最終精密化指数は、ｗＲ２＝０．０９６２およびＲｌ＝０．０６８２（Ｉ＞２シグマ（Ｉ）である反射についてはｗＲ２＝０．０８５０およびＲｌ＝０．０４１２であった。
【０２８６】
化合物１形態ＢのＮ−（４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）フェニル）−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミドの単結晶は、単斜晶系、Ｐ２１／ｃ空間群、ならびに下記の単位格子寸法：ａ＝１３．５４２９（４）Å、ｂ＝１３．４５５７（４）Å、ｃ＝１２．０５９２（４）Å、α＝９０°、β＝１０１．１９３°およびγ＝９０°を保有することが判明した。
【０２８７】
（実施例４Ｂ）
形態Ｂ−ＨＣｌとしてのＮ−（４−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）フェニル）−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミド（化合物１形態Ｂ−ＨＣｌ）の調製
【０２８８】
【化５６】
方法１
１００ｍＬの２−メチルテトラヒドロフランを、撹拌器を備えた窒素雰囲気を有する三つ口フラスコに入れた。化合物１形態Ａ−ＨＣｌ（５５ｇ、０．１０３ｍｏｌ）、続いて３４９ｍＬの２−メチルテトラヒドロフランをフラスコに加え、撹拌を開始した。２８ｍＬの水をフラスコに加え、フラスコを６０℃の内部温度に加温し、４８時間撹拌した。フラスコを室温に冷却し、１時間撹拌した。フィルターケーキが乾燥するまで、反応混合物を減圧濾過した。固体フィルターケーキを２−メチルテトラヒドロフラン（４体積）で２回洗浄した。固体フィルターケーキを約３０分間にわたって吸引して減圧にしたままにしておき、乾燥トレイに移した。フィルターケーキを６０℃で一定重量に真空乾燥した。これにより、化合物１形態Ｂ−ＨＣｌを白色結晶性固体として得た。
【０２８９】
方法２
化合物１形態Ａ−ＨＣｌ（１４．６３８ｇ、２７．５２ｍｍｏｌ）を１００ｍＬ丸底フラスコに入れた。ＥｔＯＨ（２４８．９ｍＬ）および水（２７．８２ｍＬ）を添加した。白色スラリーを加熱還流した。透明溶液が７７℃で取得された。反応物を４５℃に冷却し、３０分間撹拌させ、次いで、２０℃に冷却した。混合物を追加で３時間、２０℃で撹拌させた。生成物を濾過し、ケーキをＥｔＯＨで洗浄した。固体を、真空オーブン中４５℃で、窒素を抜きながら乾燥させて、化合物１形態Ｂ−ＨＣｌを白色固体として得た。
【０２９０】
注記として、この例において記述されている通りのＥｔＯＨ／Ｈ２Ｏの代わりに、ＭｅＯＨ／Ｈ２ＯおよびＩＰＡ／Ｈ２Ｏ等の他の溶媒組合せを使用してもよい。
【０２９１】
代替的な溶媒組合せの例を、表８において提供する。
表８．形態Ｂ−ＨＣｌを作製するために使用され得る他の溶媒
【０２９２】
【表８】
化合物１形態Ｂ−ＨＣｌの粉末ディフラクトグラムを、図１６において示す。
表９：化合物１形態Ｂ−ＨＣｌの代表的なＸＲＰＤピーク
【０２９３】
【表９−１】
【０２９４】
【表９−２】
化合物１形態Ｂ−ＨＣｌの単結晶は、単斜晶系、Ｐ２１／ａ空間群、ならびに下記の単位格子寸法：ａ＝１２．５７３３４（５）Å、ｂ＝１９．６８６３４（５）Å、ｃ＝８．３９３９９（５）Å、α＝９０°、β＝９０．０５５４°およびγ＝９０°を保有することが判明した。
【０２９５】
化合物形態Ｂ−ＨＣｌの試料を、顕微鏡も使用して評価した。
【０２９６】
化合物１形態Ｂ−ＨＣｌについてのＤＳＣ曲線を、図１７において提供し、化合物１形態Ｂ−ＨＣｌの代表的試料についてのＴＧＡ曲線を、図１８において提供する。
【０２９７】
化合物１形態Ｂ−ＨＣｌの代表的試料は、図１９において提供されるＦＴＩＲスペクトルを示した。
【０２９８】
化合物１形態Ｂ−ＨＣｌを、固体状態１３Ｃおよび１９Ｆ ＮＭＲも使用して分析した。それぞれのＮＭＲスペクトルを図２０および２１において提供する。１３Ｃ ＳＳＮＭＲおよび１９Ｆ ＳＳＮＭＲスペクトルにおいて見られた数個のピークを、表１０および１１に記載する。
表９：化合物１形態Ｂ−ＨＣｌの１３Ｃ ＳＳＮＭＲピーク
【０２９９】
【表９−３】
表１０：化合物１形態Ｂ−ＨＣｌの１９Ｆ ＳＳＮＭＲピーク
【０３００】
【表１０】
注記として、実施例３Ａ、３Ｂおよび４Ａ〜４Ｃにおいて、２−ＭｅＴＨＦの代わりにＥｔＯＡＣが溶媒として使用され得る。
【０３０１】
化合物のΔＦ５０８−ＣＦＴＲ増強特性を検出および測定するためのアッセイ
化合物のΔＦ５０８−ＣＦＴＲ調節特性を評価するための膜電位光学法
アッセイでは、蛍光電圧感知染料を利用して、ＮＩＨ ３Ｔ３細胞における機能的ΔＦ５０８−ＣＦＴＲの増大の読み出しとして蛍光プレートリーダー（例えば、ＦＬＩＰＲ ＩＩＩ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ，Ｉｎｃ．）を使用し、膜電位の変化を測定する。応答のための駆動力は、細胞を先に化合物で処理し、その後電圧感知染料を充填した後の単一液体添加ステップによるチャネル活性化と連動する、クロライドイオン勾配の生成である。
【０３０２】
増強物質化合物の同定
ΔＦ５０８−ＣＦＴＲの増強物質を同定するために、二重添加ＨＴＳアッセイフォーマットを開発した。このＨＴＳアッセイでは、蛍光電圧感知染料を利用して、温度補正されたΔＦ５０８ ＣＦＴＲ ＮＩＨ ３Ｔ３細胞中におけるΔＦ５０８ ＣＦＴＲのゲーティング（コンダクタンス）の増大の測定として、膜電位の変化をＦＬＩＰＲ ＩＩＩで測定する。応答のための駆動力は、細胞を先に増強物質化合物（またはＤＭＳＯビヒクル対照）で処理し、その後再分布染料を加えた後の、ＦＬＩＰＲ ＩＩＩ等の蛍光プレートリーダーを使用する単一液体添加ステップ中のホルスコリンによるチャネル活性化と連動する、Ｃｌ−イオン勾配である。
【０３０３】
溶液
浴溶液番号１：（ｍＭ単位で）ＮａＣｌ １６０、ＫＣｌ ４．５、ＣａＣｌ２ ２、ＭｇＣｌ２ １、ＨＥＰＥＳ １０、そしてＮａＯＨでｐＨ７．４にした。
【０３０４】
浴溶液番号１の代替物は、塩化物塩をグルコン酸塩で代用した浴溶液を包含する。
【０３０５】
細胞培養
ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを安定発現するＮＩＨ３Ｔ３マウス線維芽細胞を、膜電位の光学的測定に使用する。１７５ｃｍ２培養フラスコ内、２ｍＭのグルタミン、１０％のウシ胎仔血清、１×ＮＥＡＡ、β−ＭＥ、１×ペニシリン／ストレプトマイシンおよび２５ｍＭのＨＥＰＥＳを補充したダルベッコ変法イーグル培地中、３７℃、５％ＣＯ２および９０％湿度で細胞を維持する。すべての光学的アッセイのために、細胞を３８４ウェルマトリゲルコーティングプレートに約２０，０００／ウェルで播種し、３７℃で２時間培養した後、増強物質アッセイのために２７℃で２４時間培養した。補正アッセイのために、細胞を、２７℃または３７℃、化合物有りおよび無しで１６〜２４時間培養する。
【０３０６】
化合物のΔＦ５０８−ＣＦＴＲ調節特性を評価するための電気生理学的アッセイ
１．ウッシングチャンバーアッセイ
ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを発現している分極した気道上皮細胞についてウッシングチャンバー実験を実施して、光学的アッセイにおいて同定されたΔＦ５０８−ＣＦＴＲモジュレーターをさらに特徴付けた。非ＣＦおよびＣＦ気道上皮を気管支組織から単離し、以前に記述されている通りに培養し（Ｇａｌｉｅｔｔａ， Ｌ．Ｊ．Ｖ．、Ｌａｎｔｅｒｏ， Ｓ．、Ｇａｚｚｏｌｏ， Ａ．、Ｓａｃｃｏ， Ｏ．、Ｒｏｍａｎｏ， Ｌ．、Ｒｏｓｓｉ， Ｇ．Ａ．およびＺｅｇａｒｒａ−Ｍｏｒａｎ， Ｏ．、（１９９８年）、Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ｃｅｌｌ． Ｄｅｖ． Ｂｉｏｌ．、３４巻、４７８〜４８１頁）、ＮＩＨ３Ｔ３馴化培地でプレコーティングしたＣｏｓｔａｒ（登録商標）Ｓｎａｐｗｅｌｌ（商標）フィルターに平板培養した。４日後、頂端の培地を除去し、細胞を使用前に１４日を超える期間、気液界面で成長させた。これは、気道上皮に特徴的な特色である、線毛のある完全に分化した円柱細胞の単層をもたらした。いかなる公知の肺疾患も有さない非喫煙者から、非ＣＦ ＨＢＥを単離した。ΔＦ５０８−ＣＦＴＲが同型接合の患者から、ＣＦ−ＨＢＥを単離した。
【０３０７】
Ｃｏｓｔａｒ（登録商標）Ｓｎａｐｗｅｌｌ（商標）細胞培養インサート上で成長させたＨＢＥを、ウッシングチャンバー（Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）内に載置し、電圧クランプシステム（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｉｏｗａ、ＩＡ）を使用して、経上皮抵抗と基底外側から頂端のＣｌ−勾配の存在下での短絡回路電流（ＩＳＣ）とを測定した。手短に述べると、ＨＢＥを電圧クランプ記録条件下（Ｖｈｏｌｄ＝０ｍＶ）３７℃で検査した。基底外側溶液は、（ｍＭ単位で）１４５ ＮａＣｌ、０．８３ Ｋ２ＨＰＯ４、３．３ ＫＨ２ＰＯ４、１．２ ＭｇＣｌ２、１．２ ＣａＣｌ２、１０ グルコース、１０ ＨＥＰＥＳ（ＮａＯＨでｐＨを７．３５に調整した）を含有しており、頂端溶液は、（ｍＭ単位で）１４５ Ｎａグルコネート、１．２ ＭｇＣｌ２、１．２ ＣａＣｌ２、１０ グルコース、１０ ＨＥＰＥＳ（ＮａＯＨでｐＨを７．３５に調整した）を含有していた。
【０３０８】
増強物質化合物の同定
典型的なプロトコールでは、基底外側から頂端膜のＣｌ−濃度勾配を利用した。この勾配を準備するために、側底膜上では通常のリンゲル液を使用したのに対し、頂端ＮａＣｌは等モル濃度のグルコン酸ナトリウム（ＮａＯＨで滴定してｐＨ７．４にした）によって置き換えて、上皮を横断する大きなＣｌ−濃度勾配を得た。ホルスコリン（１０μＭ）およびすべての試験化合物を、細胞培養インサートの頂端側に添加した。推定上のΔＦ５０８−ＣＦＴＲ増強物質の効果を、公知の増強物質であるゲニステインの効果と比較した。
【０３０９】
パッチクランプ記録
以前に記述されている通りの穿孔パッチ記録コンフィギュレーションを使用して、ΔＦ５０８−ＮＩＨ３Ｔ３細胞における全Ｃｌ−電流をモニターした（Ｒａｅ， Ｊ．、Ｃｏｏｐｅｒ， Ｋ．、Ｇａｔｅｓ， Ｐ．およびＷａｔｓｋｙ， Ｍ．（１９９１年）、Ｊ． Ｎｅｕｒｏｓｃｉ． Ｍｅｔｈｏｄｓ、３７巻、１５〜２６頁）。電圧クランプ記録は、アキソパッチ２００Ｂパッチクランプ増幅器（Ａｘｏｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｉｎｃ．、Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ、ＣＡ）を使用し、２２℃で実施した。ピペット溶液は、（ｍＭ単位で）１５０ Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン（ＮＭＤＧ）−Ｃｌ、２ ＭｇＣｌ２、２ ＣａＣｌ２、１０ ＥＧＴＡ、１０ ＨＥＰＥＳおよび２４０μｇ／ｍＬのアンホテリシン−Ｂ（ＨＣｌでｐＨを７．３５に調整した）を含有していた。細胞外培地は、（ｍＭ単位で）１５０ ＮＭＤＧ−Ｃｌ、２ ＭｇＣｌ２、２ ＣａＣｌ２、１０ ＨＥＰＥＳ（ＨＣｌでｐＨを７．３５に調整した）を含有していた。パルス発生、データ獲得および分析は、Ｃｌａｍｐｅｘ ８（Ａｘｏｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｉｎｃ．）と連動するＤｉｇｉｄａｔａ １３２０Ａ／Ｄインターフェースを備えたＰＣを使用して実施した。ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを活性化するために、１０μＭのホルスコリンおよび２０μＭのゲニステインを浴に添加し、電流電圧関係を３０秒毎にモニターした。
【０３１０】
増強物質化合物の同定
穿孔パッチ記録技術を使用して、ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを安定発現しているＮＩＨ３Ｔ３細胞において巨視的ΔＦ５０８−ＣＦＴＲ Ｃｌ−電流（ＩΔＦ５０８）を増大させるΔＦ５０８−ＣＦＴＲ増強物質の能力も調査した。光学的アッセイにより同定された増強物質は、ＩΔＦ５０８の用量依存的な増大を誘起し、光学的アッセイで同様の効力および効果が観察された。検査したすべての細胞において、増強物質適用の前および最中の逆転電位は、算出されたＥＣｌ（−２８ｍＶ）である−３０ｍＶ前後であった。
【０３１１】
細胞培養
ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを安定発現するＮＩＨ３Ｔ３マウス線維芽細胞を、ホールセル記録に使用する。１７５ｃｍ２培養フラスコ内、２ｍＭのグルタミン、１０％のウシ胎仔血清、１×ＮＥＡＡ、β−ＭＥ、１×ペニシリン／ストレプトマイシンおよび２５ｍＭのＨＥＰＥＳを補充したダルベッコ変法イーグル培地中、３７℃、５％ＣＯ２および９０％湿度で細胞を維持する。ホールセル記録のために、２，５００〜５，０００細胞をポリ−Ｌ−リジンコーティングされたガラスカバースリップ上に播種し、増強物質の活性を試験するために、使用前に２７℃で２４〜２８時間培養し、補正剤（ｃｏｒｒｅｃｔｏｒ）の活性を測定するために、３７℃、補正化合物（ｃｏｒｒｅｃｔｉｏｎ ｃｏｍｐｏｕｎｄ）有りおよび無しで培養した。
【０３１２】
単一チャネル記録
アキソパッチ２００Ｂパッチクランプ増幅器（Ａｘｏｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｉｎｃ．）を使用する、以前に記述されている通りの切除された反転膜パッチ記録（ｅｘｃｉｓｅｄ ｉｎｓｉｄｅ−ｏｕｔ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐａｔｃｈ ｒｅｃｏｒｄｉｎｇｓ）（Ｄａｌｅｍａｎｓ， Ｗ．、Ｂａｒｂｒｙ， Ｐ．、Ｃｈａｍｐｉｇｎｙ， Ｇ．、Ｊａｌｌａｔ， Ｓ．、Ｄｏｔｔ， Ｋ．、Ｄｒｅｙｅｒ， Ｄ．、Ｃｒｙｓｔａｌ， Ｒ．Ｇ．、Ｐａｖｉｒａｎｉ， Ａ．、Ｌｅｃｏｃｑ， Ｊ−Ｐ．、Ｌａｚｄｕｎｓｋｉ， Ｍ．（１９９１年）、Ｎａｔｕｒｅ、３５４巻、５２６〜５２８頁）を使用して、ＮＩＨ３Ｔ３細胞において発現された野生型ＣＦＴＲおよび温度補正されたΔＦ５０８−ＣＦＴＲのゲーティング活性を観察した。ピペットは、（ｍＭ単位で）：１５０ ＮＭＤＧ、１５０ アスパラギン酸、５ ＣａＣｌ２、２ ＭｇＣｌ２および１０ ＨＥＰＥＳ（トリス塩基でｐＨを７．３５に調整した）を含有していた。浴は、（ｍＭ単位で）：１５０ ＮＭＤＧ−Ｃｌ、２ ＭｇＣｌ２、５ ＥＧＴＡ、１０ ＴＥＳおよび１４ トリス塩基（ＨＣｌでｐＨを７．３５に調整した）を含有していた。切除後、１ｍＭのＭｇ−ＡＴＰ、７５ｎＭのｃＡＭＰ依存性タンパク質キナーゼ触媒サブユニット（ＰＫＡ；Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）、および１０ｍＭのＮａＦを添加することにより、野生型およびΔＦ５０８−ＣＦＴＲ両方を活性化させてタンパク質ホスファターゼを阻害し、これによって電流消耗を防止した。ピペット電位は８０ｍＶに維持した。２つ以下の活性チャネルを含有する膜パッチによりチャネル活性を分析した。同時開口の最大数によって、実験経過中の活性チャネル数を決定した。単一チャネル電流振幅を決定するために、１２０秒のΔＦ５０８−ＣＦＴＲ活性から記録されたデータを１００Ｈｚで「オフライン」フィルター処理し、次いで全点振幅ヒストグラムを構築するために使用し、これを、バイオパッチ分析ソフトウェア（Ｂｉｏ−Ｌｏｇｉｃ Ｃｏｍｐ．、フランス）を使用して多重ガウス分布関数に当てはめた。総微視的電流および開確率（Ｐｏ）を、１２０秒のチャネル活性から決定した。Ｐｏは、バイオパッチソフトウェアを使用して、または関係式Ｐｏ＝Ｉ／ｉ（Ｎ）［ここで、Ｉ＝平均電流、ｉ＝単一チャネル電流振幅、かつＮ＝パッチ中の活性チャネル数である］から決定した。
【０３１３】
細胞培養
ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを安定発現するＮＩＨ３Ｔ３マウス線維芽細胞を、切除膜パッチクランプ記録に使用する。１７５ｃｍ２培養フラスコ内、２ｍＭのグルタミン、１０％のウシ胎仔血清、１×ＮＥＡＡ、β−ＭＥ、１×ペニシリン／ストレプトマイシンおよび２５ｍＭのＨＥＰＥＳを補充したダルベッコ変法イーグル培地中、３７℃、５％ＣＯ２および９０％湿度で細胞を維持する。単一チャネル記録のために、２，５００〜５，０００細胞をポリ−Ｌ−リジンコーティングされたガラスカバースリップ上に播種し、使用前に２７℃で２４〜４８時間培養した。
【０３１４】
化合物１は、ＡＴＰ結合カセット輸送体のモジュレーターとして有用である。化合物１、形態ＡのＥＣ５０（μｍ）を測定すると、２．０μＭ未満であった。化合物１、形態Ａの効果は、１００％から２５％までであることが算出された。１００％効果は、４−メチル−２−（５−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノールを用いて得られる最大応答であることに留意すべきである。
【０３１５】
他の実施形態
本開示において言及されるすべての刊行物および特許は、各個々の刊行物または特許出願が参照により組み込まれることを具体的かつ個別に指示されている場合と同程度まで、参照により本明細書に組み込まれる。参照により組み込まれる特許または刊行物のいずれかにおける用語の意味が、本開示において使用されている用語の意味と矛盾するようなことがあれば、本開示における用語の意味を優先するものとする。さらに、先述の考察は、本発明の例示的な実施形態を開示し記述しているに過ぎない。当業者であれば、そのような考察から、ならびに添付の図面および請求項から、下記の請求項において定義される本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく、種々の変更、修正および変形がその中で為され得ることを容易に認識するであろう。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
化合物１の実質的に結晶性の形態：
【化５７】
を作製するためのプロセスであって、
（ａ）カップリング剤の存在下で、化合物２を化合物３と反応させるステップ
【化５８】
を含み、
前記カップリング剤が、２−クロロ−１，３−ジメチル−２−イミダゾリウムテトラフルオロボレート、ＨＢＴＵ、ＨＣＴＵ、２−クロロ−４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン、ＨＡＴＵ、ＨＯＢＴ／ＥＤＣおよびＴ３Ｐ（登録商標）からなる群から選択される、プロセス。
【請求項２】
化合物２と化合物３とのカップリングが、Ｋ２ＣＯ３、Ｅｔ３Ｎ、Ｎ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）、ピリジンまたはジイソプロピルエチルアニリン（ＤＩＥＡ）等の塩基の存在下で実施される、請求項１に記載のプロセス。
【請求項３】
化合物２と化合物３とのカップリングが、ピリジンまたはＤＩＥＡの存在下で実施される、請求項１または２に記載のプロセス。
【請求項４】
化合物２と化合物３とのカップリングが、ピリジンの存在下で実施される、請求項１から３のいずれかに記載のプロセス。
【請求項５】
化合物２と化合物３とのカップリングが、極性非プロトン性溶媒の存在下で実施される、請求項１から４のいずれかに記載のプロセス。
【請求項６】
前記極性非プロトン性溶媒が、酢酸エチル、酢酸イソプロピル、テトラヒドロフラン、メチルエチルケトン、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドまたは２−メチルテトラヒドロフランからなる群から選択される、請求項１から５のいずれかに記載のプロセス。
【請求項７】
化合物２と化合物３とのカップリングが、２−メチルテトラヒドロフランの存在下で実施される、請求項１から６のいずれかに記載のプロセス。
【請求項８】
化合物２と化合物３とのカップリングが、３０℃から８０℃の間に維持される反応温度で実施される、請求項１から７のいずれかに記載のプロセス。
【請求項９】
化合物１が固体形態Ａである、請求項１から８のいずれかに記載のプロセス。
【請求項１０】
化合物２と化合物３とのカップリングが、Ｋ２ＣＯ３、Ｅｔ３Ｎ、Ｎ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）、ピリジンまたはジイソプロピルエチルアニリン（ＤＩＥＡ）等の塩基の存在下で実施される、請求項１から９のいずれかに記載のプロセス。
【請求項１１】
化合物２と化合物３とのカップリングが、ピリジンまたはＤＩＥＡの存在下で実施される、請求項１から１０のいずれかに記載のプロセス。
【請求項１２】
化合物２と化合物３とのカップリングが、ピリジンの存在下で実施される、請求項１から１１のいずれかに記載のプロセス。
【請求項１３】
化合物２と化合物３とのカップリングが、極性非プロトン性溶媒の存在下で実施される、請求項１から１２のいずれかに記載のプロセス。
【請求項１４】
前記極性非プロトン性溶媒が、酢酸エチル、酢酸イソプロピル、テトラヒドロフラン、メチルエチルケトン、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドまたは２−メチルテトラヒドロフランからなる群から選択される、請求項１から１３のいずれかに記載のプロセス。
【請求項１５】
化合物２と化合物３とのカップリングが、２−メチルテトラヒドロフランの存在下で実施される、請求項１から１４のいずれかに記載のプロセス。
【請求項１６】
化合物２と化合物３とのカップリングが、３０℃から８０℃の間に維持される反応温度で実施される、請求項１から１５のいずれかに記載のプロセス。
【請求項１７】
化合物２：
【化５９】
を調製するためのプロセスであって、
（ａ）化合物４をジエチル２−（エトキシメチレン）マロネート５と反応させて、エステル６Ａを生成するステップ
【化６０】
と、
（ｂ）エステル６Ａを塩基で処理して、化合物６Ｄ
【化６１】
を生成するステップと、
（ｃ）化合物６Ｄを、触媒の存在下、原子状水素源で処理して、化合物２
【化６２】
を生成するステップと
を含むプロセス。
【請求項１８】
前記原子状水素源が水素ガスを含む、請求項１７に記載のプロセス。
【請求項１９】
前記原子状水素源がホルメートを含む、請求項１７または１８に記載のプロセス。
【請求項２０】
前記触媒がパラジウム触媒を含む、請求項１７から１９のいずれかに記載のプロセス。
【請求項２１】
前記塩基が水酸化ナトリウム水溶液または水酸化カリウム水溶液を含む、請求項１７から２０のいずれかに記載のプロセス。
【請求項２２】
化合物３
【化６３】
を調製するためのプロセスであって、
（ａ）化合物７［式中、Ｈａｌは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩである］を７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン８またはその塩と反応させて、化合物９を生成するステップ
【化６４】
と、
（ｂ）化合物９中のニトロ部分を還元して、アニリン３を提供するステップと
【化６５】
を含むプロセス。
【請求項２３】
ステップ（ａ）が、極性非プロトン性溶媒中、塩基の存在下で実施される、請求項２２に記載のプロセス。
【請求項２４】
前記塩基がトリエチルアミンまたはジイソプロピルエチルアミンであり、前記溶媒がアセトニトリルである、請求項２２または２３に記載のプロセス。
【請求項２５】
ステップ（ｂ）が、アルコール溶媒中、水素ガスおよび遷移金属触媒を使用して実施される、請求項２２から２４のいずれかに記載のプロセス。
【請求項２６】
前記触媒が、Ｐｔ、ＰｄまたはＮｉから選択される９族または１０族遷移金属を含む、請求項２２から２５のいずれかに記載のプロセス。
【請求項２７】
前記触媒がＰｄを含む、請求項２２から２６のいずれかに記載のプロセス。
【請求項２８】
前記溶媒が、イソプロパノール、エタノールまたはメタノールを含む、請求項２２から２７のいずれかに記載のプロセス。
【請求項２９】
前記溶媒がエタノールを含む、請求項２２から２８のいずれかに記載のプロセス。
【請求項３０】
化合物８が、塩形態である、化合物８−ＨＣｌ：
【化６６】
である、請求項２２から２９のいずれかに記載のプロセス。
【請求項３１】
化合物３をＨＣｌと接触させて、塩酸塩３−ＨＣｌ：
【化６７】
を提供するステップをさらに含む、請求項２２から３０のいずれかに記載のプロセス。
【請求項３２】
ステップ（ａ）が、炭酸ナトリウム等の無機炭酸塩塩基およびＤＭＳＯ等の極性非プロトン性溶媒の存在下で実施される、請求項２２から３１のいずれかに記載のプロセス。
【請求項３３】
ステップ（ｂ）が、アルコール溶媒中、水素ガスおよび遷移金属触媒を使用して実施される、請求項２２から３２のいずれかに記載のプロセス。
【請求項３４】
前記触媒が、Ｐｔ、ＰｄまたはＮｉに由来する９族または１０族遷移金属触媒を含み、前記溶媒が、イソプロパノール、エタノールまたはメタノールを含む、請求項２２から３３のいずれかに記載のプロセス。
【請求項３５】
前記触媒がＰｄを含み、前記溶媒がエタノールを含む、請求項２２から３４のいずれかに記載のプロセス。
【請求項３６】
固体形態Ｂを有する化合物１：
【化６８】
を生成するためのプロセスであって、
（ａ）化合物２を化合物３の塩酸塩（３−ＨＣｌ）と、２−クロロ−１，３−ジメチル−２−イミダゾリウムテトラフルオロボレート、ＨＢＴＵ、ＨＣＴＵ、２−クロロ−４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン、ＨＡＴＵ、ＨＯＢＴ／ＥＤＣおよびＴ３Ｐ（登録商標）からなる群から選択されるカップリング剤の存在下で反応させるステップ
【化６９】
を含むプロセス。
【請求項３７】
化合物２と塩酸塩３−ＨＣｌとのカップリングが、Ｋ２ＣＯ３、Ｅｔ３Ｎ、Ｎ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）、ピリジンまたはＤＩＥＡ等の塩基の存在下で実施される、請求項３６に記載のプロセス。
【請求項３８】
化合物２と塩酸塩３−ＨＣｌとのカップリングが、ピリジンまたはＤＩＥＡの存在下で実施される、請求項３６または３７に記載のプロセス。
【請求項３９】
化合物２と塩酸塩３−ＨＣｌとのカップリングが、ピリジンの存在下で実施される、請求項３６から３８のいずれかに記載のプロセス。
【請求項４０】
化合物２と塩酸塩３−ＨＣｌとのカップリングが、ＥｔＯＡｃ、ＩＰＡｃ、ＴＨＦ、ＭＥＫ、ＮＭＰ、アセトニトリル、ＤＭＦまたは２−メチルテトラヒドロフラン等の溶媒の存在下で実施される、請求項３６から３９のいずれかに記載のプロセス。
【請求項４１】
化合物２と塩酸塩３−ＨＣｌとのカップリングが、２−メチルテトラヒドロフランの存在下で実施される、請求項３６から４０のいずれかに記載のプロセス。
【請求項４２】
化合物２と塩酸塩３−ＨＣｌとのカップリングが、１５℃から７０℃の間に維持される反応温度で実施される、請求項３６から４１のいずれかに記載のプロセス。
【請求項４３】
前記カップリング反応物が、約１．５時間から約１０時間までの継続期間にわたって撹拌される、請求項３６から４２のいずれかに記載のプロセス。
【請求項４４】
固体形態Ａ−ＨＣｌを有する化合物１の塩酸塩：
【化７０】
を生成するためのプロセスであって、
（ａ）化合物２を式３の塩酸塩（３−ＨＣｌ）と、２−クロロ−１，３−ジメチル−２−イミダゾリウムテトラフルオロボレート、ＨＢＴＵ、ＨＣＴＵ、２−クロロ−４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン、ＨＡＴＵ、ＨＯＢＴ／ＥＤＣおよびＴ３Ｐ（登録商標）からなる群から選択されるカップリング剤の存在下で反応させるステップ
【化７１】
と、
（ｂ）ステップ（ａ）の生成物の混合物をＨＣｌで処理するステップと
を含むプロセス。
【請求項４５】
ステップ（ａ）が、Ｋ２ＣＯ３、Ｅｔ３Ｎ、Ｎ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）、ピリジンまたはジイソプロピルエチルアニリン（ＤＩＥＡ）等の塩基の存在下で実施される、請求項４４に記載のプロセス。
【請求項４６】
ステップ（ａ）が、ピリジンまたはＤＩＥＡの存在下で実施される、請求項４４または４５に記載のプロセス。
【請求項４７】
ステップ（ａ）が、ピリジンの存在下で実施される、請求項４４から４６のいずれかに記載のプロセス。
【請求項４８】
ステップ（ａ）が、極性非プロトン性溶媒の存在下で実施される、請求項４４から４７のいずれかに記載のプロセス。
【請求項４９】
前記極性非プロトン性溶媒が、酢酸エチル、酢酸イソプロピル、テトラヒドロフラン、メチルエチルケトン、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドまたは２−メチルテトラヒドロフランからなる群から選択される、請求項４４から４８のいずれかに記載のプロセス。
【請求項５０】
化合物２と３−ＨＣｌとのカップリングが、２−メチルテトラヒドロフランの存在下で実施される、請求項４４から４９のいずれかに記載のプロセス。
【請求項５１】
ステップ（ａ）が、１０℃から８０℃の間に維持される反応温度で実施される、請求項４４から５０のいずれかに記載のプロセス。
【請求項５２】
ステップ（ａ）が、１５℃から７０℃の間に維持される反応温度で実施される、請求項４４から５１のいずれかに記載のプロセス。
【請求項５３】
ステップ（ａ）の時間が、約１．５時間から約７２時間までである、請求項４４から５２のいずれかに記載のプロセス。
【請求項５４】
ＨＣｌガスがステップ（ｂ）において使用される、請求項４４から５３のいずれかに記載のプロセス。
【請求項５５】
ＨＣｌガスを、ステップ（ａ）の生成物と極性非プロトン性溶媒とを含む混合物に吹き込んで泡立たせる、請求項４４から５４のいずれかに記載のプロセス。
【請求項５６】
前記極性非プロトン性溶媒が２−メチルテトラヒドロフランである、請求項４４から５５のいずれかに記載のプロセス。
【請求項５７】
ＨＣｌガスを、ステップ（ａ）の生成物と極性非プロトン性溶媒との混合物に、約０．５時間から約５時間までの期間にわたって吹き込んで泡立たせる、請求項４４から５６のいずれかに記載のプロセス。
【請求項５８】
固体形態Ｂ−ＨＣｌを有する化合物１の塩酸塩
【化７２】
を生成するためのプロセスであって、
（ａ）化合物１形態Ａ−ＨＣｌの塩酸塩を、有機溶媒および水と混合して、混合物を生成するステップ
【化７３】
と、
（ｂ）前記混合物を加熱するステップと
を含むプロセス。
【請求項５９】
前記有機溶媒が、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、ジオキサン、ヘキサメチルホスホロトリアミド、テトラヒドロフラン、ＥｔＯＡｃ、ＩＰＡｃ、ＴＨＦ、ＭＥＫ、ＮＭＰ、アセトニトリル、ＤＭＦ、ＥｔＯＨ、ＭｅＯＨ、イソプロピルアルコールまたは２−メチルテトラヒドロフランを含む、請求項５８に記載のプロセス。
【請求項６０】
前記非プロトン性溶媒が２−メチルテトラヒドロフランを含む、請求項５８または５９に記載のプロセス。
【請求項６１】
前記温度が、約３０℃から約８０℃までに維持される、請求項５８から６０のいずれかに記載のプロセス。
【請求項６２】
前記混合物が、約１２時間から約７２時間までの期間にわたって、約３０℃から約８０℃の温度に維持される、請求項５８から６１のいずれかに記載のプロセス。
【請求項６３】
前記混合物を濾過してフィルターケーキを生成する、請求項５８から６２のいずれかに記載のプロセス。
【請求項６４】
濾過するステップの後、前記フィルターケーキを非プロトン性溶媒で洗浄するステップが続く、請求項５８から６３のいずれかに記載のプロセス。
【請求項６５】
請求項１に記載のプロセスによって調製される化合物１。
【化７４】
【請求項６６】
請求項９に記載のプロセスによって調製される化合物１形態Ａ。
【化７５】
【請求項６７】
請求項３６に記載のプロセスによって調製される化合物１形態Ｂ。
【化７６】
【請求項６８】
請求項４４に記載のプロセスによって調製される化合物１形態Ａ−ＨＣｌ。
【化７７】
【請求項６９】
請求項５８に記載のプロセスによって調製される化合物１形態Ｂ−ＨＣｌ。
【化７８】
【請求項１】
化合物１の実質的に結晶性の形態：
【化５７】
を作製するためのプロセスであって、
（ａ）カップリング剤の存在下で、化合物２を化合物３と反応させるステップ
【化５８】
を含み、
前記カップリング剤が、２−クロロ−１，３−ジメチル−２−イミダゾリウムテトラフルオロボレート、ＨＢＴＵ、ＨＣＴＵ、２−クロロ−４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン、ＨＡＴＵ、ＨＯＢＴ／ＥＤＣおよびＴ３Ｐ（登録商標）からなる群から選択される、プロセス。
【請求項２】
化合物２と化合物３とのカップリングが、Ｋ２ＣＯ３、Ｅｔ３Ｎ、Ｎ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）、ピリジンまたはジイソプロピルエチルアニリン（ＤＩＥＡ）等の塩基の存在下で実施される、請求項１に記載のプロセス。
【請求項３】
化合物２と化合物３とのカップリングが、ピリジンまたはＤＩＥＡの存在下で実施される、請求項１または２に記載のプロセス。
【請求項４】
化合物２と化合物３とのカップリングが、ピリジンの存在下で実施される、請求項１から３のいずれかに記載のプロセス。
【請求項５】
化合物２と化合物３とのカップリングが、極性非プロトン性溶媒の存在下で実施される、請求項１から４のいずれかに記載のプロセス。
【請求項６】
前記極性非プロトン性溶媒が、酢酸エチル、酢酸イソプロピル、テトラヒドロフラン、メチルエチルケトン、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドまたは２−メチルテトラヒドロフランからなる群から選択される、請求項１から５のいずれかに記載のプロセス。
【請求項７】
化合物２と化合物３とのカップリングが、２−メチルテトラヒドロフランの存在下で実施される、請求項１から６のいずれかに記載のプロセス。
【請求項８】
化合物２と化合物３とのカップリングが、３０℃から８０℃の間に維持される反応温度で実施される、請求項１から７のいずれかに記載のプロセス。
【請求項９】
化合物１が固体形態Ａである、請求項１から８のいずれかに記載のプロセス。
【請求項１０】
化合物２と化合物３とのカップリングが、Ｋ２ＣＯ３、Ｅｔ３Ｎ、Ｎ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）、ピリジンまたはジイソプロピルエチルアニリン（ＤＩＥＡ）等の塩基の存在下で実施される、請求項１から９のいずれかに記載のプロセス。
【請求項１１】
化合物２と化合物３とのカップリングが、ピリジンまたはＤＩＥＡの存在下で実施される、請求項１から１０のいずれかに記載のプロセス。
【請求項１２】
化合物２と化合物３とのカップリングが、ピリジンの存在下で実施される、請求項１から１１のいずれかに記載のプロセス。
【請求項１３】
化合物２と化合物３とのカップリングが、極性非プロトン性溶媒の存在下で実施される、請求項１から１２のいずれかに記載のプロセス。
【請求項１４】
前記極性非プロトン性溶媒が、酢酸エチル、酢酸イソプロピル、テトラヒドロフラン、メチルエチルケトン、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドまたは２−メチルテトラヒドロフランからなる群から選択される、請求項１から１３のいずれかに記載のプロセス。
【請求項１５】
化合物２と化合物３とのカップリングが、２−メチルテトラヒドロフランの存在下で実施される、請求項１から１４のいずれかに記載のプロセス。
【請求項１６】
化合物２と化合物３とのカップリングが、３０℃から８０℃の間に維持される反応温度で実施される、請求項１から１５のいずれかに記載のプロセス。
【請求項１７】
化合物２：
【化５９】
を調製するためのプロセスであって、
（ａ）化合物４をジエチル２−（エトキシメチレン）マロネート５と反応させて、エステル６Ａを生成するステップ
【化６０】
と、
（ｂ）エステル６Ａを塩基で処理して、化合物６Ｄ
【化６１】
を生成するステップと、
（ｃ）化合物６Ｄを、触媒の存在下、原子状水素源で処理して、化合物２
【化６２】
を生成するステップと
を含むプロセス。
【請求項１８】
前記原子状水素源が水素ガスを含む、請求項１７に記載のプロセス。
【請求項１９】
前記原子状水素源がホルメートを含む、請求項１７または１８に記載のプロセス。
【請求項２０】
前記触媒がパラジウム触媒を含む、請求項１７から１９のいずれかに記載のプロセス。
【請求項２１】
前記塩基が水酸化ナトリウム水溶液または水酸化カリウム水溶液を含む、請求項１７から２０のいずれかに記載のプロセス。
【請求項２２】
化合物３
【化６３】
を調製するためのプロセスであって、
（ａ）化合物７［式中、Ｈａｌは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩである］を７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン８またはその塩と反応させて、化合物９を生成するステップ
【化６４】
と、
（ｂ）化合物９中のニトロ部分を還元して、アニリン３を提供するステップと
【化６５】
を含むプロセス。
【請求項２３】
ステップ（ａ）が、極性非プロトン性溶媒中、塩基の存在下で実施される、請求項２２に記載のプロセス。
【請求項２４】
前記塩基がトリエチルアミンまたはジイソプロピルエチルアミンであり、前記溶媒がアセトニトリルである、請求項２２または２３に記載のプロセス。
【請求項２５】
ステップ（ｂ）が、アルコール溶媒中、水素ガスおよび遷移金属触媒を使用して実施される、請求項２２から２４のいずれかに記載のプロセス。
【請求項２６】
前記触媒が、Ｐｔ、ＰｄまたはＮｉから選択される９族または１０族遷移金属を含む、請求項２２から２５のいずれかに記載のプロセス。
【請求項２７】
前記触媒がＰｄを含む、請求項２２から２６のいずれかに記載のプロセス。
【請求項２８】
前記溶媒が、イソプロパノール、エタノールまたはメタノールを含む、請求項２２から２７のいずれかに記載のプロセス。
【請求項２９】
前記溶媒がエタノールを含む、請求項２２から２８のいずれかに記載のプロセス。
【請求項３０】
化合物８が、塩形態である、化合物８−ＨＣｌ：
【化６６】
である、請求項２２から２９のいずれかに記載のプロセス。
【請求項３１】
化合物３をＨＣｌと接触させて、塩酸塩３−ＨＣｌ：
【化６７】
を提供するステップをさらに含む、請求項２２から３０のいずれかに記載のプロセス。
【請求項３２】
ステップ（ａ）が、炭酸ナトリウム等の無機炭酸塩塩基およびＤＭＳＯ等の極性非プロトン性溶媒の存在下で実施される、請求項２２から３１のいずれかに記載のプロセス。
【請求項３３】
ステップ（ｂ）が、アルコール溶媒中、水素ガスおよび遷移金属触媒を使用して実施される、請求項２２から３２のいずれかに記載のプロセス。
【請求項３４】
前記触媒が、Ｐｔ、ＰｄまたはＮｉに由来する９族または１０族遷移金属触媒を含み、前記溶媒が、イソプロパノール、エタノールまたはメタノールを含む、請求項２２から３３のいずれかに記載のプロセス。
【請求項３５】
前記触媒がＰｄを含み、前記溶媒がエタノールを含む、請求項２２から３４のいずれかに記載のプロセス。
【請求項３６】
固体形態Ｂを有する化合物１：
【化６８】
を生成するためのプロセスであって、
（ａ）化合物２を化合物３の塩酸塩（３−ＨＣｌ）と、２−クロロ−１，３−ジメチル−２−イミダゾリウムテトラフルオロボレート、ＨＢＴＵ、ＨＣＴＵ、２−クロロ−４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン、ＨＡＴＵ、ＨＯＢＴ／ＥＤＣおよびＴ３Ｐ（登録商標）からなる群から選択されるカップリング剤の存在下で反応させるステップ
【化６９】
を含むプロセス。
【請求項３７】
化合物２と塩酸塩３−ＨＣｌとのカップリングが、Ｋ２ＣＯ３、Ｅｔ３Ｎ、Ｎ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）、ピリジンまたはＤＩＥＡ等の塩基の存在下で実施される、請求項３６に記載のプロセス。
【請求項３８】
化合物２と塩酸塩３−ＨＣｌとのカップリングが、ピリジンまたはＤＩＥＡの存在下で実施される、請求項３６または３７に記載のプロセス。
【請求項３９】
化合物２と塩酸塩３−ＨＣｌとのカップリングが、ピリジンの存在下で実施される、請求項３６から３８のいずれかに記載のプロセス。
【請求項４０】
化合物２と塩酸塩３−ＨＣｌとのカップリングが、ＥｔＯＡｃ、ＩＰＡｃ、ＴＨＦ、ＭＥＫ、ＮＭＰ、アセトニトリル、ＤＭＦまたは２−メチルテトラヒドロフラン等の溶媒の存在下で実施される、請求項３６から３９のいずれかに記載のプロセス。
【請求項４１】
化合物２と塩酸塩３−ＨＣｌとのカップリングが、２−メチルテトラヒドロフランの存在下で実施される、請求項３６から４０のいずれかに記載のプロセス。
【請求項４２】
化合物２と塩酸塩３−ＨＣｌとのカップリングが、１５℃から７０℃の間に維持される反応温度で実施される、請求項３６から４１のいずれかに記載のプロセス。
【請求項４３】
前記カップリング反応物が、約１．５時間から約１０時間までの継続期間にわたって撹拌される、請求項３６から４２のいずれかに記載のプロセス。
【請求項４４】
固体形態Ａ−ＨＣｌを有する化合物１の塩酸塩：
【化７０】
を生成するためのプロセスであって、
（ａ）化合物２を式３の塩酸塩（３−ＨＣｌ）と、２−クロロ−１，３−ジメチル−２−イミダゾリウムテトラフルオロボレート、ＨＢＴＵ、ＨＣＴＵ、２−クロロ−４，６−ジメトキシ−１，３，５−トリアジン、ＨＡＴＵ、ＨＯＢＴ／ＥＤＣおよびＴ３Ｐ（登録商標）からなる群から選択されるカップリング剤の存在下で反応させるステップ
【化７１】
と、
（ｂ）ステップ（ａ）の生成物の混合物をＨＣｌで処理するステップと
を含むプロセス。
【請求項４５】
ステップ（ａ）が、Ｋ２ＣＯ３、Ｅｔ３Ｎ、Ｎ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）、ピリジンまたはジイソプロピルエチルアニリン（ＤＩＥＡ）等の塩基の存在下で実施される、請求項４４に記載のプロセス。
【請求項４６】
ステップ（ａ）が、ピリジンまたはＤＩＥＡの存在下で実施される、請求項４４または４５に記載のプロセス。
【請求項４７】
ステップ（ａ）が、ピリジンの存在下で実施される、請求項４４から４６のいずれかに記載のプロセス。
【請求項４８】
ステップ（ａ）が、極性非プロトン性溶媒の存在下で実施される、請求項４４から４７のいずれかに記載のプロセス。
【請求項４９】
前記極性非プロトン性溶媒が、酢酸エチル、酢酸イソプロピル、テトラヒドロフラン、メチルエチルケトン、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドまたは２−メチルテトラヒドロフランからなる群から選択される、請求項４４から４８のいずれかに記載のプロセス。
【請求項５０】
化合物２と３−ＨＣｌとのカップリングが、２−メチルテトラヒドロフランの存在下で実施される、請求項４４から４９のいずれかに記載のプロセス。
【請求項５１】
ステップ（ａ）が、１０℃から８０℃の間に維持される反応温度で実施される、請求項４４から５０のいずれかに記載のプロセス。
【請求項５２】
ステップ（ａ）が、１５℃から７０℃の間に維持される反応温度で実施される、請求項４４から５１のいずれかに記載のプロセス。
【請求項５３】
ステップ（ａ）の時間が、約１．５時間から約７２時間までである、請求項４４から５２のいずれかに記載のプロセス。
【請求項５４】
ＨＣｌガスがステップ（ｂ）において使用される、請求項４４から５３のいずれかに記載のプロセス。
【請求項５５】
ＨＣｌガスを、ステップ（ａ）の生成物と極性非プロトン性溶媒とを含む混合物に吹き込んで泡立たせる、請求項４４から５４のいずれかに記載のプロセス。
【請求項５６】
前記極性非プロトン性溶媒が２−メチルテトラヒドロフランである、請求項４４から５５のいずれかに記載のプロセス。
【請求項５７】
ＨＣｌガスを、ステップ（ａ）の生成物と極性非プロトン性溶媒との混合物に、約０．５時間から約５時間までの期間にわたって吹き込んで泡立たせる、請求項４４から５６のいずれかに記載のプロセス。
【請求項５８】
固体形態Ｂ−ＨＣｌを有する化合物１の塩酸塩
【化７２】
を生成するためのプロセスであって、
（ａ）化合物１形態Ａ−ＨＣｌの塩酸塩を、有機溶媒および水と混合して、混合物を生成するステップ
【化７３】
と、
（ｂ）前記混合物を加熱するステップと
を含むプロセス。
【請求項５９】
前記有機溶媒が、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド、ジオキサン、ヘキサメチルホスホロトリアミド、テトラヒドロフラン、ＥｔＯＡｃ、ＩＰＡｃ、ＴＨＦ、ＭＥＫ、ＮＭＰ、アセトニトリル、ＤＭＦ、ＥｔＯＨ、ＭｅＯＨ、イソプロピルアルコールまたは２−メチルテトラヒドロフランを含む、請求項５８に記載のプロセス。
【請求項６０】
前記非プロトン性溶媒が２−メチルテトラヒドロフランを含む、請求項５８または５９に記載のプロセス。
【請求項６１】
前記温度が、約３０℃から約８０℃までに維持される、請求項５８から６０のいずれかに記載のプロセス。
【請求項６２】
前記混合物が、約１２時間から約７２時間までの期間にわたって、約３０℃から約８０℃の温度に維持される、請求項５８から６１のいずれかに記載のプロセス。
【請求項６３】
前記混合物を濾過してフィルターケーキを生成する、請求項５８から６２のいずれかに記載のプロセス。
【請求項６４】
濾過するステップの後、前記フィルターケーキを非プロトン性溶媒で洗浄するステップが続く、請求項５８から６３のいずれかに記載のプロセス。
【請求項６５】
請求項１に記載のプロセスによって調製される化合物１。
【化７４】
【請求項６６】
請求項９に記載のプロセスによって調製される化合物１形態Ａ。
【化７５】
【請求項６７】
請求項３６に記載のプロセスによって調製される化合物１形態Ｂ。
【化７６】
【請求項６８】
請求項４４に記載のプロセスによって調製される化合物１形態Ａ−ＨＣｌ。
【化７７】
【請求項６９】
請求項５８に記載のプロセスによって調製される化合物１形態Ｂ−ＨＣｌ。
【化７８】
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０Ａ】
【図１０Ｂ】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０Ａ】
【図１０Ｂ】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１】
【公表番号】特表２０１３−５０８４０６（Ｐ２０１３−５０８４０６Ａ）
【公表日】平成２５年３月７日（２０１３．３．７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５３５３９２（Ｐ２０１２−５３５３９２）
【出願日】平成２２年１０月２１日（２０１０．１０．２１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０５３６２８
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０５０２１５
【国際公開日】平成２３年４月２８日（２０１１．４．２８）
【出願人】（５９８０３２１０６）バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド (414)
【氏名又は名称原語表記】ＶＥＲＴＥＸ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ ＩＮＣＯＲＰＯＲＡＴＥＤ
【住所又は居所原語表記】１３０ Ｗａｖｅｒｌｙ Ｓｔｒｅｅｔ， Ｃａｍｒｉｄｇｅ， Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ ０２１３９−４２４２， Ｕ．Ｓ．Ａ．
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２５年３月７日（２０１３．３．７）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年１０月２１日（２０１０．１０．２１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０５３６２８
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０５０２１５
【国際公開日】平成２３年４月２８日（２０１１．４．２８）
【出願人】（５９８０３２１０６）バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド (414)
【氏名又は名称原語表記】ＶＥＲＴＥＸ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ ＩＮＣＯＲＰＯＲＡＴＥＤ
【住所又は居所原語表記】１３０ Ｗａｖｅｒｌｙ Ｓｔｒｅｅｔ， Ｃａｍｒｉｄｇｅ， Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ ０２１３９−４２４２， Ｕ．Ｓ．Ａ．
【Ｆターム（参考）】
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