【課題】 非胚細胞もしくは生後動物細胞または組織から多能性幹細胞であって、単離された細胞もしくは組織の系統に制限されず分化できる多能性幹細胞
を提供すること。
【解決手段】 （ａ）生後動物供給源から細胞を入手する工程と、
（ｂ）-80℃の最終温度に到達するまで、7.5％（v/v）ジメチルスルホキシドを含有する培地中で前記細胞を緩徐に凍結する工程と、
（ｃ）前記細胞を培養する工程と、
を含む、自己再生可能ならびに内胚葉、外胚葉および中胚葉系統の細胞に分化可能な多能性胚様幹細胞を非胚細胞もしくは生後動物細胞または組織から単離し、分化可能な状態にする。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
非胚もしくは生後動物細胞または組織から誘導される、自己再生可能ならびに内胚葉、外胚葉および中胚葉系統の細胞に分化可能な多能性胚様幹細胞。
【請求項２】
ヒト細胞である、請求項１に記載の幹細胞。
【請求項３】
筋肉、真皮、脂肪、腱、靭帯、軟骨膜、骨膜、心臓、大動脈、心内膜、心筋層、心外膜、大動静脈、肉芽組織、末梢神経、末梢神経節、脊髄、硬膜、軟髄膜、気管、食道、骨髄、胃、小腸、大腸、肝臓、脾臓、膵臓、壁側腹膜、臓側腹膜、壁側胸膜、肺胸膜、膀胱、胆嚢、腎臓、関連結合組織、または骨髄の群より選択される非胚組織から単離される、請求項１に記載の幹細胞。
【請求項４】
請求項１に記載の幹細胞から誘導される多能性内胚葉幹細胞。
【請求項５】
請求項１に記載の幹細胞から誘導される多能性中胚葉幹細胞。
【請求項６】
請求項１に記載の幹細胞から誘導される多能性外胚葉幹細胞。
【請求項７】
請求項１に記載の幹細胞から誘導される内胚葉、外胚葉または中胚葉系統前駆細胞。
【請求項８】
（ａ）生後動物細胞または組織から誘導され、自己再生可能ならびに内胚葉、外胚葉および中胚葉系統の細胞に分化可能な多能性胚様幹細胞；および
（ｂ）前記幹細胞の増殖を支持し得る培地、
を含む培養物。
【請求項９】
増殖因子または分化決定因子をさらに含む、請求項８に記載の培養物。
【請求項１０】
前記幹細胞がヒト細胞である、請求項８に記載の培養物。
【請求項１１】
多能性胚様幹細胞を単離する方法であって、
（ａ）生後動物供給源から細胞を入手する工程と、
（ｂ）-80℃の最終温度に到達するまで、7.5％（v/v）ジメチルスルホキシド
を含有する培地中で前記細胞を緩徐に凍結する工程と、
（ｃ）前記細胞を培養する工程と、
を含む方法。
【請求項１２】
クローン性多能性胚様幹細胞株を単離する方法であって、
（ａ）生後動物供給源から細胞を入手する工程と、
（ｂ）-80℃の最終温度に到達するまで、7.5％（v/v）ジメチルスルホキシド
を含有する培地中で前記細胞を緩徐に凍結する工程と、
（ｃ）前記細胞を培養する工程と、
（ｄ）前記培養された細胞をクローン密度に希釈する工程と、
（ｅ）前記希釈された細胞を培養する工程と、
（ｅ）単一細胞を有するそれらの培養物を増殖させる工程と、
を含む方法。
【請求項１３】
請求項１２に記載の方法によって発生するクローン性多能性胚様幹細胞株。
【請求項１４】
目的の遺伝子またはタンパク質を発現するために遺伝子操作された請求項１に記載の幹
細胞。
【請求項１５】
遺伝子操作された多能性胚様幹細胞を産生する方法であって、
（ａ）少なくとも１つのマーカー遺伝子または目的の遺伝子を含むDNA構築物で多能性胚様幹細胞をトランスフェクトする工程と、
（ｂ）前記多能性胚様幹細胞において前記マーカー遺伝子または目的の遺伝子の発現を選択する工程と、
（ｃ）工程（ｂ）において選択された幹細胞を培養する工程と、
を含む方法。
【請求項１６】
請求項１５に記載の方法によって産生される遺伝子操作された多能性胚様幹細胞株。
【請求項１７】
ヒト細胞である、請求項１６に記載の幹細胞。
【請求項１８】
分化決定因子である作用物質の存在または活性を検出する方法であって、
Ａ．請求項１に記載の幹細胞と分化決定因子である作用物質を含有することが疑わしいサンプルとを接触させる工程と、
Ｂ．mRNA発現、抗原発現または他の手段によってそのようにして接触された前記細胞の系統を決定する工程と、を含み、
ここで、前記接触された細胞の系統は、前記サンプルにおける分化決定因子の存在または活性を示す、方法。
【請求項１９】
作用物質、化合物または因子が分化決定されていない細胞の分化決定を変調する能力を試験する方法であって、
Ａ．分化決定されていない細胞として幹細胞を維持する増殖培地において請求項１に記載の幹細胞を培養する工程と、
Ｂ．試験下で前記作用物質、化合物または因子を添加する工程と、
Ｃ．mRNA発現、抗原発現または他の手段によってそのようにして接触された前記細胞の系統を決定する工程と、
を含む方法。
【請求項２０】
分化決定されていない細胞の分化決定を変調する能力について作用物質、化合物または因子をスクリーニングするためのアッセイシステムであって、
Ａ．分化決定されていない細胞として幹細胞を維持する増殖培地において請求項１に記載の幹細胞を培養する工程と、
Ｂ．試験下で前記作用物質、化合物または因子を添加する工程と、
Ｃ．mRNA発現、抗原発現または他の手段によってそのようにして接触された前記細胞の系統を決定する工程と、
を含むアッセイシステム。
【請求項２１】
増殖因子である作用物質の存在または活性を検出する方法であって、
Ａ．請求項１に記載の幹細胞と増殖因子である作用物質を含有することが疑わしいサンプルとを接触させる工程と、
Ｂ．mRNA発現、抗原発現または他の手段によってそのようにして接触された前記細胞の増殖および系統を決定する工程と、を含み、
ここで、分化決定を伴わない前記接触された細胞の増殖は、前記サンプルにおける増殖因子の存在または活性を示す、方法。
【請求項２２】
作用物質、化合物または因子が分化決定されていない細胞の増殖を変調する能力を試験する方法であって、
Ａ．分化決定されていない細胞として幹細胞を維持する増殖培地において請求項１に記載の幹細胞を培養する工程と、
Ｂ．試験下で前記作用物質、化合物または因子を添加する工程と、
Ｃ．mRNA発現、抗原発現または他の手段によってそのようにして接触された前記細胞の増殖および系統を決定する工程と、
を含む方法。
【請求項２３】
分化決定されていない細胞の増殖を変調する能力について作用物質、化合物または因子をスクリーニングするためのアッセイシステムであって、
Ａ．分化決定されていない細胞として幹細胞を維持する増殖培地において請求項１に記載の幹細胞を培養する工程と、
Ｂ．試験下で前記作用物質、化合物または因子を添加する工程と、
Ｃ．mRNA発現、抗原発現または他の手段によってそのようにして接触された前記細胞の増殖および系統を決定する工程と、
を含むアッセイシステム。
【請求項２４】
請求項１に記載の幹細胞を、ヒトを除く宿主に導入する工程を含む、前記宿主に多能性胚様幹細胞を移植する方法。
【請求項２５】
請求項１に記載の多能性胚様幹細胞を、ヒトを除く宿主に導入する工程を含む、前記宿主に精製された多能性胚様幹細胞を提供する方法。
【請求項２６】
請求項１に記載の多能性胚様幹細胞に目的のタンパク質もしくは遺伝子を発現するDNAもしくはRNAを含むベクターをトランスフェクトする工程を含む、目的のタンパク質または遺伝子を、ヒトを除く哺乳動物にin vivo投与する方法。
【請求項２７】
治療有効量の多能性胚様幹細胞またはそれから誘導される細胞もしくは組織を、ヒトを除く哺乳動物に投与する工程を含む、前記哺乳動物の細胞衰弱、障害および／または機能不全および／または他の疾患状態を予防ならびに／あるいは治療する方法。
【請求項２８】
治療有効量の多能性胚様幹細胞またはそれから誘導される細胞もしくは組織を、ヒトを除く哺乳動物に投与する工程を含む、前記哺乳動物において組織修復または移植する方法。
【請求項２９】
請求項１に記載の幹細胞から誘導される治療有効量の内胚葉、外胚葉または中胚葉分化決定された細胞を、ヒトを除く哺乳動物に投与する工程を含む、前記哺乳動物の細胞衰弱、障害および／または機能不全および／または他の疾患状態を予防ならびに／あるいは治療する方法。
【請求項３０】
請求項１に記載の幹細胞から誘導される治療有効量の内胚葉、外胚葉または中胚葉分化決定された細胞を、ヒトを除く哺乳動物に投与する工程を含む、前記哺乳動物において組織修復または移植する方法。
【請求項３１】
哺乳動物の細胞衰弱、障害および／または機能不全を治療するための薬学的組成物であって、
Ａ．治療有効量の多能性胚葉幹細胞またはそれから誘導される細胞もしくは組織と、
Ｂ．薬学的に受容可能な媒体またはキャリアと、
を含む薬学的組成物。
【請求項３２】
増殖因子または分化決定因子をさらに含む、請求項３１に記載の薬学的組成物。
【請求項３３】
非胚もしくは生後動物細胞または組織から誘導される、自己再生可能ならびに内胚葉、外胚葉および中胚葉系統の細胞に分化可能な多能性胚様幹細胞であって、前記細胞は段階特異的胚抗原ＳＳＥＡ−４細胞表面マーカーを発現することを特徴とする多能性胚様幹細胞。
【請求項３４】
非胚もしくは生後動物細胞または組織から誘導される、自己再生可能ならびに内胚葉、外胚葉および中胚葉系統の細胞に分化可能な多能性胚様幹細胞であって、前記細胞は段階特異的胚抗原ＳＳＥＡ−４細胞表面マーカーおよびＣＤ１０を発現することを特徴とする多能性胚様幹細胞。
【請求項３５】
非胚もしくは生後動物細胞または組織から誘導される、自己再生可能ならびに内胚葉、外胚葉および中胚葉系統の細胞に分化可能な多能性胚様幹細胞であって、前記細胞は段階特異的胚抗原ＳＳＥＡ−４細胞表面マーカー、ＣＤ１０およびＣＤ９０を発現することを特徴とする多能性胚様幹細胞。

【図１Ａ】

【図１Ｂ】

【図２Ａ】

【図２Ｂ】

【図２Ｃ】

【図３Ａ】

【図３Ｂ】

【図３Ｃ】

【図４Ａ】

【図４Ｂ】

【図４Ｃ】

【図５Ａ】

【図５Ｂ】

【図６Ａ】

【図６Ｂ】

【図７Ａ】

【図７Ｂ】

【図７Ｃ】

【図８Ａ】

【図８Ｂ】

【図８Ｃ】

【図９Ａ】

【図９Ｂ】

【図１０Ａ】

【図１０Ｂ】

【図１１Ａ】

【図１１Ｂ】

【図１１Ｃ】

【図１２Ａ】

【図１２Ｂ】

【図１２Ｃ】

【図１３Ａ】

【図１３Ｂ】

【図１３Ｃ】

【図１３Ｄ】

【図１４Ａ】

【図１４Ｂ】

【図１４Ｃ】

【図１５Ａ】

【図１５Ｂ】

【図１６Ａ】

【図１６Ｂ】

【図１７Ａ】

【図１７Ｂ】

【図１７Ｃ】

【図１８Ａ】

【図１８Ｂ】

【図１８Ｃ】

【図１９Ａ】

【図１９Ｂ】

【図１９Ｃ】

【図２０Ａ】

【図２０Ｂ】

【図２１Ａ】

【図２１Ｂ】

【図２１Ｃ】

【図２２Ａ】

【図２２Ｂ】

【図２２Ｃ】

【図２２Ｄ】

【図２３】

【図２４】

【図２５】

【図２６Ａ】

【図２６Ｂ】

【図２６Ｃ】

【図２６Ｄ】

【図２７】

【図２８】

【図２９】

【図３０】

【図３１Ａ】

【図３１Ｂ】

【図３１Ｃ】

【図３２Ａ】

【図３２Ｂ】

【図３２Ｃ】

【図３２Ｄ】

【図３２Ｅ】

【図３２Ｆ】

【図３２Ｇ】

【図３２Ｈ】

【図３２Ｉ】

【図３２Ｊ】

【図３２Ｋ】

【図３２Ｌ】

【図３２Ｍ】

【図３２Ｎ】

【図３２Ｏ】

【図３２Ｐ】

【図３２Ｑ】

【図３２Ｒ】

【図３２Ｓ】

【図３２Ｔ】

【図３２Ｕ】

【図３２Ｖ】

【図３２Ｗ】

【図３２Ｘ】

【図３２Ｙ】

【図３３Ａ】

【図３３Ｂ】

【図３３Ｃ】

【図３３Ｄ】

【図３３Ｅ】

【図３３Ｆ】

【図３３Ｇ】

【図３３Ｈ】

【図３３Ｉ】

【図３３Ｊ】

【図３３Ｋ】

【図３３Ｌ】

【図３３Ｍ】

【図３３Ｎ】

【図３３Ｏ】

【図３３Ｐ】

【図３３Ｑ】

【図３３Ｒ】

【図３４Ａ】

【図３４Ｂ】

【図３４Ｃ】

【図３４Ｄ】

【図３４Ｅ】

【図３４Ｆ】

【図３４Ｇ】

【図３４Ｈ】

【図３４Ｉ】

【図３４Ｊ】

【図３４Ｋ】

【図３４Ｌ】

【図３４Ｍ】

【図３４Ｎ】

【図３４Ｏ】

【図３４Ｐ】

【図３４Ｑ】

【図３４Ｒ】

【図３５】

【図３６】

【図３７】

【図３８】

【図３９】

【図４０】

【図４１】

【図４２】

【図４３】

【図４４】

【公開番号】特開２０１１−１０３８８５（Ｐ２０１１−１０３８８５Ａ）
【公開日】平成２３年６月２日（２０１１．６．２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−２７２０４５（Ｐ２０１０−２７２０４５）
【出願日】平成２２年１２月６日（２０１０．１２．６）
【分割の表示】特願２００１−５２５３２６（Ｐ２００１−５２５３２６）の分割
【原出願日】平成１２年９月２５日（２０００．９．２５）
【出願人】（５１００１２６５８）エイビーティー　ホールディング　カンパニー (5)
【Ｆターム（参考）】