抗ウイルス組成物及び使用方法
本発明は、ライノウイルス感染症の治療又は予防用の抗ウイルス組成物の製造におけるイオタ−、カッパ−、ラムダ−カラゲナンの使用に関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、免疫、及び、抗ウイルス剤に関し、抗ウイルス成分としてカラゲナン（carrageenan）を含む医薬組成物、及び、前記医薬組成物のライノウイルス感染症（rhinovirus infection）の治療又は予防的使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
ピコルナウイルス（Picornavirus）は、人間及び動物における深刻は疾病の多くにかかわる小さいリボ核酸含有ウイルス科を代表する。ピコルナウイルスは、４つの属を含む。それは、エンテロウイルス属（enteroviruses）、ライノウイルス属（rhinoviruses）、カルディオウイルス属（cardioviruses）、及び、アフトウイルス属（aphtoviruses）である。
【０００３】
ヒトライノウイルスは、１００以上のセロタイプ（serotype）からなり、風邪の原因物質でもある。そのセロタイプが多いがゆえに、ワクチンの開発が問題となる。したがって、その治療には抗ウイルス剤の使用がベストであり得る。ライノウイルスは、４つのウイルスたんぱく質、ＶＰ１，ＶＰ２、ＶＰ３、及び、ＶＰ４からなる周囲カプシドで構成されている。たんぱく質ＶＰ１，ＶＰ２，及び、ＶＰ３は、６０個の繰り返しプロタメリック（protameric）正二十面体ユニットを構成している。これらは、ライノウイルスに関連する抗原多様性の原因となるものと考えられている。
【０００４】
ライノウイルス（ＨＲＶ）感染症は、発熱、咳、及び、鼻腔内うっ血といった症状を伴う風邪を引き起こす。次に、ＨＲＶ感染症は、乳幼児などにおいて肺炎及び気管支炎を引き起こすものとして知られ、そして、喘息、慢性閉塞性肺疾患、又は、膵臓繊維症を患っている者の病状を悪化させることも少なくない。ＨＲＶ感染症は、年齢によっては喘息を悪化させるケースの３分の１又は２分の１に関係し、（大人及び子供における）喘息による入院に深く関係するものである。
【０００５】
現時点における治療法の１つに、ライノウイルス特異的ＲＮＡを供給すること（ＤＥ１９８２５３９５に記載されている。）がある。このＲＮＡは、カプシドのキャニオン（canyon）領域に結合する。かかる領域は、宿主の受容体（例えば、ＩＣＡＭ−１；細胞間接着分子−１）の結合、及び、細胞感染に必要なものである。別の方法として、可溶性ＩＣＡＭ−１たんぱく質又はＩＣＡＭ−１の誘導体（例えば、米国特許６，３２６，００４号及び米国特許６，０９６、８６２号に記載されたもの）（ｔＩＣＡＭ−１、切断型ＩＣＡＭ−１）を投与してウイルス粒子（ビリオン）を中和するものがある。
【０００６】
ライノウイルスに対し抗ウイルス活性を有する化合物がＥＰ０５２３８０３号に記載されている。
【０００７】
ライノウイルス症候は、免疫系の過度な反応又は非特異的反応に起因する。したがって、ライノウイルス感染症に対する通常の治療法は、アスピリン、又は、アセトアミノフェン／パラセタモールのような鎮痛剤、その他咽喉用局所剤（主に、口内錠）、鼻腔のうっ血除去薬、咳止め（脳の咳反射を抑制するか、又は、肺粘膜を拡張させることによっては効く。）、及び、第１世代抗ヒスタミン剤（例えば、ブロムフェニラミン、クロルフェニラミン、及び、クレマスチンなど）を投与することを含む。ここで、第１世代抗ヒスタミン剤は、粘液腺分泌（量）を減少させ、鼻詰まりを解消するものであるが、それを使用したときに眠くなることもある。）
【０００８】
カラゲナンを含む硫酸化多糖類が抗ウイルス活性を有することが当業者に知られている。Gonzalez M. Eらは、文献［1987, Antimicrob. Agents Chemother.31,1388-1393］において、幾つかの動物ウイルスに対しイオタ−カラゲナンを含む様々な硫酸化多糖類が抗ウイルス活性を有することを報告している。イオタ−カラゲナンは、エンベロープを有するウイルス類、ＨＳＶ−１，ＨＳＶ−２，ＳＦＶ（Semliki Forest virus），ＡＳＦ（African swine fever virus），種痘ウイルス（vaccina virus）、及び、裸のＥＭＣウイルス（naked encephalomyocarditis virus）に対し抗ウイルス活性を有する。イオタ−カラゲナンは、エンベロープを有するウイルス類、ＶＳＶ（vesicular stomatitis virus），及び、はしかウイルス、並びに、裸のポリオウイルスタイプ１及びアデノウイルスタイプ５には効果がなかった。
【０００９】
米国公開公報２００３／１８１４１５Ａ号には、硫酸化されたセルロースのような硫酸化多糖類が、エンベロープを有するウイルス類、特に、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、パピローマウイルス、及び、ＨＩＶに対し抗ウイルス活性を有することが記載されている。ＷＯ２００５／００４８８２Ａ号には、カラゲナンのような硫酸化多糖類を用いたライノウイルス感染症を除くウイルス感染症の治療について記載されている。
【００１０】
米国公開公報２００５／１７１０５３Ａ１号には、ＨＩＶ−１感染症を含む性感染症の拡散を阻害するためにラムダ−カラゲナンを使用することが記載されている。
【００１１】
Yamadaらは、文献［1997, Carbohydrate Polymers, Appl. Scien. Publishers 32, 51 -55］において、ラムダ−、カッパ−、及び、イオタ−カラゲナンの抗ＨＩＶ−１活性、及び、それらの硫酸化誘導体の抗ＨＩＶ−１活性について報告している。
【００１２】
S.F.Tischer らは、文献［2006, Carbohydrate Polymers, Appl. Scien. Publishers 63, 459-465］において、Meristiella gelidiumから断離されたカラゲナンが単純ヘルペスウイルス及びデングウイルスに対し抗ウイルス活性を有することを報告している。
【００１３】
Carlucciらは、文献［2004, Antiviral Research, Elsevier Science BV. 64, 137-141］において、マウスにおける性器ヘルペスウイルス感染症に対しラムダ−カラゲナンの保護効果について報告している。
【００１４】
Pujol らは、文献［2006, Planta Medica 72, 121 -125］において、Gigartina skottsbergiiから単離されたカラゲナンがマウスにおける単純ヘルペスウイルス感染症に対し抗ウイルス活性を有することについて報告している。
【００１５】
用語“カラゲナン”は、海藻（紅藻類）から抽出した直鎖硫酸化ガラクトース系多糖類（linear sulphated galactose-based polysaccharide）に対する集合的な用語である。これは、医薬品、及び、食品などにおいて主に安定化剤、ゲル化剤乳酸剤、乳化剤、又は、増粘剤として用いられる。カラゲナンは、それが抽出された海藻属によって１０種以上の異なるカラゲナンが存在する。３つの主なるタイプは、イオタ−、カッパ−、及び、ラムダ−カラゲナンである。これらのカラゲナンは、その構造及び硫酸化度において微妙に異なっている。イオタ−カラゲナンは、主に紅藻類であるGigartina stellata及びChondrus crispusから抽出された硫酸化カラクタンを形成する軟質ゲルである。カッパ−カラゲナンは、主にKappaphycus cottoniiから得られたもので、より硬質のゲルを形成する。ラムダ−カラゲナンは、最も一般的な形態で、増粘剤として頻繁に使用される物である。ＨＩＶ又はＨＳＶなどのウイルスに対する一部のカラゲナン類の抗ウイルス活性は古くから知られていたにもかかわらず、カラゲナンがどうやって抗ウイルス活性を示すことがきるのかについての詳細なメカニズムは未だに不明のままである。
【００１６】
前述した内容に照らして、本発明は、ライノウイルス感染症（鼻炎）の治療又は予防に適したカラゲナン系抗ウイルス組成物を提供する。
【００１７】
本発明に至った実験では、選択されたカラゲナンがライノウイルス感染症（鼻炎）に対して抗ウイルス活性を表し、そのうちイオタ−カラゲナンの方が最も優れた効果を示すということが分かった。それは、今までの技術水準から見て驚くべきものであった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１８】
【特許文献１】米国公開公報２００３／１８１４１５Ａ号
【特許文献２】ＷＯ２００５／００４８８２Ａ号
【特許文献３】米国公開公報２００５／１７１０５３Ａ１号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１９】
したがって、本発明に係る第１の実施形態は、ライノウイルス感染症の治療及び予防用医薬組成物の製造において、抗ウイルス成分としてカラゲナンを使用することに関する。
【課題を解決するための手段】
【００２０】
本明細書に使用された用語“抗ウイルス成分（抗ウイルス有効成分）”とは、直接或いは間接的に、又は、直間接的にその有効量が適用された場合に、真核細胞におけるライノウイルス感染サイクル、具体的に、真核細胞へのウイルスの浸透、真核細胞におけるウイルスの複製、ウイルスアセンブリ、及び、感染された細胞からのウイルスの放出からなる群から選ばれるライノウイルス感染サイクルのうち少なくとも一部を阻害するカラゲナン化合物をいう。それは、真核又は哺乳類宿主系においてウイルス力価レベルを非特異的に減少させ、又は、ウイルス力価の増加を非特異的に阻害するに寄与する任意の効果を含む。
【００２１】
よって、本発明に係る医薬組成物は、ウイルス感染症の発症前後に投与され得る。本明細書に使用された用語“予防”又は“予防的処置”は、ウイルス感染症から少なくともある程度保護し、又は、ウイルス感染症にかかるリスクを減少させるために、本発明に係る医薬組成物を投与することに関する。本明細書に使用された用語“治療”又は“治療的処置”は、前記感染症の病的症状を軽減するために、ウイルスに感染された個体に本発明に係る医薬組成物を投与することに関する。ここで、“病的症状の軽減”は、現れる症状を頻度及び／又は重症度を減少させること、或いは、かかる症状を除去すること、かかるウイルス感染症に伴って発生し得る損傷を治療すること、又は、二次的ウイルス、細菌、真菌、又は、その他の微生物感染症の発症を予防或いは阻害することを含む。
【００２２】
本明細書に使用された“カラゲナン”とは、（明記されない限り）イオタ−、カッパ−、及び、ラムダ−カラゲナンホモポリマー又はヘテロポリマーのうち少なくとも２種の混合物、即ち、イオタ−及びラムダ−カラゲナンの混合物、イオタ−及びカッパ−カラゲナンの混合物、カッパ−及びラムダ−カラゲナンの混合物、又は、イオタ−、カッパ−、及び、ラムダ−カラゲナンホモ又はヘテロポリマーの混合物を意味する。
【００２３】
カラゲナンホモポリマーは、イオタ−、カッパ−、又は、ラムダ−カラゲナンのいずれか１種からなる純粋なカラゲナンである。カラゲナンへテロポリマーは、２種以上のカラゲナンのサブユニットを含む。ここで、カラゲナンのサブユニットは、イオタ−、カッパ−、及び、ラムダ−カラゲナンサブユニットからなる群から選ばれるのが好ましい。
【００２４】
本明細書に使用される用語カラゲナンの“混合物”は、抗ウイルス成分として、少なくとも１種以上のカラゲナンへテロポリマーを含む組成物を指す。したがって、“混合物”は主に、組成物中に存在する１種以上のヘテロポリマーカラゲナンの一部を構成する異なるカラゲナンサブユニットからなる混合物を意味する。
【００２５】
本発明に係る別の実施例は、治療又は予防の用に供される抗ライノウイルス組成物に関する。ここで、ライノウイルス感染症は、急性又は慢性ライノウイルス感染症を含む。
【００２６】
本発明に係るカラゲナン系組成物は、皮膚又は粘膜における炎症を治療するための局所剤に適している。しかしながら、経口又は非経口による全身的用途に使用することも可能であるが、それは、特に低分子量カラゲナン分画を主に含有するように適合された場合である。本発明に有用なカラゲナンは、約１５０００〜約５００００００Ｄａの平均分子量を有する。低分子量分画は約１５０００〜約５００００Ｄａの平均分子量を有するカラゲナンを含む。中分子量分画は約５００００〜約５０００００Ｄａの平均分子量を有するカラゲナンを含む。高分子量分画は約５０００００〜約５００００００Ｄａの平均分子量を有するカラゲナンを含む。
【００２７】
好ましい実施例において、医薬組成物は、局所用、又は、粘膜用に適合されている。使える状態（ready-for-use）のガレヌス製剤として、クリーム、ゲル、軟膏、粉末（吸入用の粉末を含む。）、スプレー、泡沫、又は、液剤（例えば、ローション剤、うがい薬、又は、点鼻剤など）などがある。その他のガレヌス製剤は、当業者の技術水準から明らかであり、例えば、米国特許６、３９１、４５２号に記載されたような鼻腔用薬物伝達システムなどがある。
【００２８】
抗ウイルス成分のほか、本発明に係る組成物は、医薬的に許容される担体、又は、その他の添加剤、又は、成分を含み得る。
【００２９】
適当な担体として、有効成分の投与に適当な、又は、有用な稀釈剤（例えば、水、食塩水など）、賦形剤、又は、その他の媒体（vehicle）などが挙げられる。最適な添加剤として、ＳｉＯ2，ＴｉＯ2，バインダ（例えば、微小結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、ガントラガカント、ゲラチン、スターチ、ラクトース、ラクトース一水和物、アルギン酸、又は、トウモロコシなど）；ステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウムなどの界面活性剤又は滑剤;コロイド性二酸化ケイ素などの流動促進剤;ショ糖やサッカリンなどの甘味剤などが挙げられる。更なる添加剤として、バッファー、または、ｐＨ調整剤などが挙げられる。ここで、ｐＨ調整剤は、酢酸、フマル酸、塩化水素酸、リンゴ酸、硝酸、リン酸、プロピオン酸、硫酸、酒石酸、クエン酸、またはこれらの混合物から選択され得る。
【００３０】
更なる成分、例えば、非カラゲナン系薬物、又は、薬効成分を存在し得る。
【００３１】
カラゲナンは医薬的に許容される塩の形態で使用され得る。例えば、カラゲナンのナトリウム塩が使用され得る。その他の医薬的に許容される塩として、カラゲナンのカリウム、リチウム、及び、アンモニウム塩などがある。別の実施例によれば、本発明の組成物は、局所剤に適しており、０．０１〜２０％（ｗ／ｗ）、好ましくは、０．１〜１０％（ｗ／ｗ）、最も好ましくは０．５〜５％（ｗ／ｗ）（製剤の重量に基づく。）のカラゲナンを含有する。
【００３２】
通常、本発明に係る組成物は、非発熱性の滅菌製剤の形態で製造される。液体製剤の場合、例えば、適当なメンブレーンフィルタを用いたろ過によって滅菌処理が施され得る。滅菌、又は、無菌組成物を製造するための方法については当業者によく知られているため、本明細書においてはあえて言及を避けたものである。
【００３３】
しかしながら、本発明に係る医薬組成物は、衛生用品又は衛生物品、例えば、鼻（鼻腔）部位、及び／又は口（口腔）部位に通常使用される顔面衛生用品又は顔面衛生物品（例えば、鼻ティッシュ又はペーパー）、又は、ハンカチの（固体）表面上に被覆され得る。具体的に、医薬組成物は、例えば、消毒剤のように、手袋、鼻（腔）用ティッシュのような衛生ティッシュ又はペーパー上に噴霧されて、所定の抗ウイルス効果を奏するものであり、それにより、汚染された指先により繰り返される自己感染といった現象を減らすと共に、近接している個体の手から手へのウイルスの拡散を減らすことができる。衛生用品又は衛生物品の特性に沿って、これらの物品（用品）は、医薬組成物で被覆し、医薬組成物でぬらし、又は、医薬組成物で含浸させたものであり得る。
【００３４】
こうしたカラゲナン含有製品は、綿棒（cotton swab）、マスク（dust mask）、又は、顔面マスク（facial mask）を含み得るが、それらに制限されない。口紅も有効量のカラゲナンを含有するように処方され得る。これらの衛生用品又は衛生物品は、ウイルス感染に対する治療，又は、予防のために用いられ、そしてまた、感染のリスクを減らし、或いは、防止するにも役立つ。
【００３５】
したがって、本発明の一実施例は前述した使用に関するが、ここで抗ウイルス組成物は、被覆（coating）又は含浸（impregnation）といった方法によって、衛生手袋（hygiene or sanitary glove）、鼻ティッシュ（nasal tissue）又はペーパーなどのティッシュ又はペーパーのような衛生用品（hygiene article）または衛生物品（sanitation article）の固体表面に途布され得る。本発明に有用なイオタ−、カッパ−、及び、ラムダ−カラゲナンは、市販されるものであっても、当業者に知られている抽出方法に沿って海藻類から抽出・製造したものであってもよい。
【００３６】
好ましい実施例において、本発明は、イオタ−、カッパ−、及び、ラムダ−カラゲナンのホモ−及びヘテロポリマーからなる群から選ばれた１以上のものを使用することに関する。
【００３７】
具体的に、本発明に係る抗ウイルス性組成物（医薬組成物）は、イオタ−、カッパ−、及び、ラムダ−カラゲナン以外のカラゲナンを実質的に含まないものであってもよい。この場合であっても、その他のカラゲナンが微量に含まれている可能性は排除できない。様々な用途において、医薬組成物中に実質的にイオタ−カラゲナンだけが存在するものであってもよい。
【００３８】
別の実施例において、本発明は、抗ウイルス組成物の製造においてカラゲナンを使用することに関する。ここで、前記組成物は、イオタ−、カッパ−、又は、ラムダ−カラゲナンのいずれか、又は、前記カラゲナンのうち２以上を含有する混合物を、前記組成物中に存在する全カラゲナンの８０％以上、９０％以上、９５％以上、又は、９９％以上となるように含み得る。この百分率（％）は、前記カラゲナンの乾燥重量に対する重量％（ｗ／ｗ％）である。
【００３９】
別の実施例において、本発明は、組成物中に存在する全カラゲナンの総乾燥重量に対して、イオタ−カラゲナンが、（その乾燥重量に基づいて）５０％以上、７０％以上、８０％以上、好ましくは、９５％以上（ｗ／ｗ％）含まれている組成物を使用することに関する。
【００４０】
前述したカラゲナンの濃度は、ホモ−及びヘテロポリマーカラゲナンにも同様に適用されうる。
【００４１】
カラゲナンは、経口投与又は皮膚投与の際に、或いは、吸入投与の際に、超高容量で投与される場合であっても、“非毒性”であることが知られている。したがって、食品医薬品安全局（ＦＤＡ）によって“一般的に安全なもの”として分類されている。別の実施例において、本発明は、抗ウイルス組成物の製造においてカラゲナンを使用することに関する。この組成物は、１以上の更なる抗ウイルス化合物（有効成分）、好ましくは、硫酸化セルロースを含み得る。
【００４２】
別の実施例において、本発明は、微生物感染症、炎症性疾患、アレルギー、免疫低下症、免疫系損傷といった状態又は症状の治療又は予防のための医薬組成物を製造するに当たり、カラゲナン、好ましくは、イオタ−カラゲナンを用いることに関する。ここで、カラゲナンは、１以上の別の薬理活性化合物又は薬物と組み合わせることができる。かかる組成物において、カラゲナンンは、抗ライノウイルス性補助機能（作用・効果）を奏し得る。前記１以上の別の薬理活性化合物又は薬物はステロイド、例えば、コルチゾン、及び、抗ヒスタミン剤からなる群から選ばれたものであり得る。
【００４３】
別の実施例において、抗ウイルス性医薬組成物は、ライノウイルス感染症にかかり易い個体、又は、ライノ感染症のリスクが高まった個体においてその治療および予防のために用いられる。ここで、前記個体は、喘息患者、アレルギーを有する個体、及び、炎症性疾患を有する個体からなる群から選ばれたいわゆる高リスク患者を含む。
【００４４】
前述した本発明に関する理解を助けるために、その実施例を後述する。この実施例は、本発明を制限する意味で解釈されてはいけない。本発明は当然、当業者によって容易になし得る程度の変形例などを含むものと解される。
【発明の効果】
【００４５】
本発明の医薬組成物は、ライノウイルス感染症に対する予防及び治療に有効である。また、本発明の医薬組成物は、耐性獲得の心配もなく長期間にわたっての治療などに使用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００４６】
【図１】図１は、ＨＲＶによって誘発された細胞死阻害分析（ＸＴＴ−分析）の結果を示したものである。ここで、縦座標は４９２ｎｍで測定されたＯＤを表し、横座標は異なるテストサンプルを表す。“１”は非感染細胞を表し、“２”は“未処理・感染細胞”を表し、“３”は処理（イオタ−カラゲナン）・感染細胞を表し、“４”は処理（カッパ−カラゲナン）・感染細胞を表し、“５”は処理（ラムダ−カラゲナン）・感染細胞を表す。図１Ａは、ＨＲＶ−２で感染された細胞を示し、そして、図１ＢはＨＲＶ−１４で感染された細胞を示す。
【図２】図２は、ＴＣＩＤ５０分析によって、感染されたＨｅｌａ細胞から得た上清のピーク力価を測定した結果を示す。ここで、縦座標はＴＣＩＤ５０力価を表し、横座標はイオタ−カラゲナンの濃度（[mu]g/ml）を表す。“Ｕ”は未処理細胞を表す。“Ｔ（処理）”では、細胞を１時間感染させ、処理後１時間経過した時点で、所定濃度のイオタ−カラゲナンを加えた。“Ｐ（予防）”では、感染させる前に、所定濃度のイオタ−カラゲナンを用いて１時間プレインキュベートした。その後の処理は、Ｔと同様に行った。細胞を感染多重度０．０１で感染させた。ピーク力価は、ＨＲＶ−２（図２Ａ）に対しては三日目に現れ、ＨＲＶ−１４（図２Ｂ）に対しては四日目に現れた。
【図３】図３は、感染されたヒト鼻上皮細胞に対するライノウイルスの複製に対するイオタ−カラゲナンの有効性（阻害効果）を示すもの（ＴＣＩＤＳＯ分析によって測定したもの）である。ここで、縦座標はＴＣＩＤ５０力価（ログ値）を表し、縦座標はイオタ−カラゲナンの濃度（[mu]g/ml）を表す。ＭＯＣＫは非処理対照群細胞を表し、図３ＡはＨＲＶ−１Ａで感染させた細胞を表し、図３ＢはＨＲＶ−２で感染させた細胞を表し、図３ＣはＨＲＶ−８で感染させた細胞を表し、図３ＤはＨＲＶ−１６で感染させた細胞を表し、図３はＨＲＶ−３９で感染させた細胞を表し、そして、図３ＦはＨＲＶ−８３で感染させた細胞を表す。
【図４】図４は、ＣＰＥ減少分析（CPE reduction assay）によって測定された、処理を繰り返し行った後におけるライノウイルスに対するイオタ−カラゲナンの有効性を示したものである。ここで、縦座標はＣＰＥ減少率（％）を表し、横座標はイオタ−カラゲナンの濃度（[mu]g/ml）を表す。菌株ＨＲＶ２Ｐ０はもとのライノウイルス菌株（複製過程を経ていないもの）を表し、菌株ＨＲＶ２Ｐ１０は、ＨｅＬａ細胞において１０回の選別的複製（selective replication）を経たライノウイルス菌株ＨＲＶ２Ｐ０を表す。
【発明を実施するための形態】
【００４７】
［実施例１］
ヒトライノウイルスタイプ２（ＨＲＶ−２）及びタイプ１４（ＨＲＶ−１４）に対する異なる種のカラゲナンの効果（抗ウイルス効果）
準密集（subconfluent）ＨｅＬａ細胞をウイルス懸濁液を用いてインキュベートした。ここで、ウイルス懸濁液は、図１に示したポリマー１２５［ｍｕ］ｇ／ｍｌで５分間プレインキュベートしたものであった。４８時間経過後、T0X2 XTT分析装置（シグマ社製）を用いて、細胞の生存率を測定した。
【００４８】
図１に示したとおり、最も有効なポリマーはイオタ−カラゲナンであった（カラム３）。それは、両方のライノウイルスに対し有効であっが、ラムダ−カラゲナン（カラム５）及びカッパ−カラゲナン（カラム４）は、ＨＲＶ−２に対しては有効であったが、ＨＲＶ−１４に対しては有効でなかった。エラーバーは６個の独立したウェル間の標準偏差を示す。
【００４９】
［実施例２］
表１に示したポリマー（１００／ｖｇ／ｍｌの濃度）を、ＨＲＶ−２、及び、ＨＲＶ−１４によって誘発された細胞死阻害分析（ＸＴＴ−分析）においてテストした。
【００５０】
表１に示したとおり、イオタ−カラゲナンは両方のライノウイルスタイプに対し保護活性を示した。ここで、“+”は、感染されない対照群細胞に比べて９５％以上の保護（効果）を有することを表す。ポリマーキトサン、カルボキシメチルセルロース、及び、カルボキシメチルキトサンでは全く阻害効果が得られなかった。表１は、テストされたポリマーの抗ウイルス活性を示す。
【００５１】
【表１】
【００５２】
［実施例３］
イオタ−カラゲナンは、治療及び予防ウイルス複製モデルにおいてＨＲＶ−２及びＨＲＶ−１４に対し有効であった。６．２５［ｍｕ］ｇ／ｍｌ以上の濃度において、ピークウイルス力価（peak viral titer）が著しく減少された。しかしながら、イオタ−カラゲナンは、ＨＲＶ−２に対する予防モデルにおいて最も有効であった。ここでは、ピークウイルス力価における減少が９９．９％超であった。
【００５３】
［実施例４］
ヒトライノウイルスサブタイプの選別に対するイオタ−カラゲナンの効果
９６ウェルプレート中の準合流ＨｅＬａ細胞を、ＭＯＩ（感染多重度）０．５のウイルス懸濁液を用いてインキュベートした。
【００５４】
ウイルス懸濁液で用いて感染させてから２０分経過後、３倍希釈したポリマーを含有する栄養培地を加えた。４８〜７２時間経過後、T0X2 XTT分析装置（シグマ社製）を用いて、細胞の生存率を測定した。ソフトウェアＥｘｃｅｌ−Ｆｉｔを用いて、ＥＣ５０値を計算した。
【００５５】
【表２】
イオタ−カラゲナンは、テストされた全ヒトライノウイルス（予め感染されたＨｅＬａ細胞）に対して有効であった。細胞変性効果の５０％を阻害するに必要とされるカラゲナンの濃度は、ＨＲＶ−８に対しては、０．５［ｍｕ］ｇ／ｍｌ未満であり、ＨＲＶ−１４に対しては、４００／ｖｇ／ｍｌであった。この結果は、イオタ−カラゲナンが、感染されたＨｅＬａ細胞に対し広範囲に及ぶライノウイルスサブタイプの複製を阻害するということを意味する。
【００５６】
［実施例５］
イオタ−カラゲナンによるヒト鼻上皮細胞に対するライノウイルス複製の阻害
主なるヒト鼻上皮細胞（Ｐｒｏｍｏｃｅｌｌ）を２４ウェルプレートに植えた（ウェルあたり２．９×１０4個の細胞）。それを、５％ＣＯ2、３７℃、及び、９５％の湿度の下で三日間培養した。この細胞を、ライノウイルス菌株ＨＲＶ−１Ａ，ＨＲＶ−２，ＨＲＶ−８，ＨＲＶ−１４，ＨＲＶ−１６，ＨＲＶ−３９，ＨＲＶ−８３，及び、ＨＲＶ−８４を用いて密集度（confluency）６０％で感染させた。ライノウイルスＨＲＶ−１Ａ，ＨＲＶ−２，ＨＲＶ−８，ＨＲＶ−１６，ＨＲＶ−３９，及び、ＨＲＶ−８３は、ヒト鼻上皮細胞において溶解性複製（lytic replication）を示した。ＨＲＶ−１４，及び、ＨＲＶ−８４は、細胞を溶解させなかったために、それについては更なるテストを実施しなかった。
【００５７】
４，４０、及び４００［ｍｕ］ｇ／ｍｌ濃度のイオタ−カラゲナン，及び、ＭＯＣＫ対照群を用いて、ウイルスをプレインキュベートした。そのＭＯＩは０．３４であった。感染後４８〜７２時間以内に上清を得て、ＴＣＩ５０力価を測定した。図３に示したとおり、イオタ−カラゲナンによる処理の結果、ＭＯＣＫで処理した対照群細胞に比べて、上精中に存在する全ウイルスのウイルス力価が４０［ｍｕ］ｇ／ｍｌ濃度で少なくとも２ログステップ減少された。Ｙ軸は、ウイルス力価のログ値を示す。これらのデータより、イオタ−カラゲナンが、ヒト上皮細胞におけるウイルス複製を阻害するということが明らかであった。現時点においてはインビボテストに利用可能なヒトライノウイルスの動物モデルが存在しないために、ここで使用されたヒト鼻上皮細胞は現に利用可能なインビトロモデルで最も重要なものであった。エラーバーは、独立してテストされた３つのサンプル間における標準偏差を表す。
【００５８】
［実施例６］
処理を繰り返し行った後におけるライノウイルス感染に対するイオタ−カラゲナンの有効性の測定（ウイルス耐性獲得のいかん）
もとのウイルスＨＲＶ２Ｐ０、及び、ＨＲＶ２Ｐ１０（ＨｅＬａ細胞において１０回選別的複製（selective replication）を経て得たもの）をＣＰＥ（細胞変性効果）減少分析においてテストした。ＨｅＬａ細胞（ウェルあたり８×１０4個の細胞）を６つのウェルに植えた。カラゲナンポリマー、及び、ウイルス（ＭＯＩは０．１であった。）を補充した適当な栄養培地（カラゲナンの最終濃度は１．６、５．３、１７、５０、１５０、及び、４５０[mu]g/mlであった。）を用いて、それらの細胞を感染させた。対照群として、１つのウェルには、ウイルスを含んでないカラゲナン補充栄養培地で感染させたＭＯＣＫがあり、もう１つのウェルは、ウイルス懸濁液で処理したＭＯＣＫで感染させた。ここで、ウイルス懸濁液には、栄養培地は含まれていたが、カラゲナンは含まれていなかった。感染後２０分間インキュベートし、そのプレートを２回洗浄し、対照用培地（選択された濃度のカラゲナンで補充されたウイルスを含まないもの）を前記全てのウェル（ＭＯＣＫで処理された陰性の対照群を除く。）に加えた。ここで、ＭＯＣＫで処理された陰性の対照群は、「純粋な非阻害感染」を表した。保護されない陰性の対照群ウェルにおいて明確な細胞変性効果が見られたら直ぐに、各実験ウェルからサンプルを取った。次の選別過程のために、これらのカラゲナン処理ウェル（非感染対照群に比べて明確に検出可能なＣＰＥを示す。）から取ったウイルス含有上清を用いてＨｅＬａ細胞の感染を行った。カラゲナンの濃度が最も低い２つの実験サンプル（即ち、１．６及び５．３[mu]g/mlの濃度）においてはＣＰＥ応答が検出されなかった。
【００５９】
この過程を１０回繰り返して、その結果得られたウイルスサンプルを、もとのウイルスストックを用いて行ったＣＰＥ阻害テストの結果と比較してみた。簡単に言えば、ＴＯＸ２試薬（シグマ社製）を加えてから４８時間経過後、非感染対照群におけるＯＤ４５０ｎｍ値、及び、ＣＰＥ減少率（％）を測定した。
【００６０】
カラゲナン処理に対するウイルスの耐性獲得の可能性を調べるために、最終接種に使用されたウイルス（図４、ウイルス２＿００１）、及び、１０回の選別的複製から得たウイルス（図４、ウイルス２０ ００１）に対し、ＨｅＬａ細胞を用いたＣＰＥ減少分析を行った。ここで、ＨｅＬａ細胞を用いた点を除く、その後の実験プロトコールは前述したものと少し異なるものであった。簡単に言えば、前記各ウイルスで用いてＨｅＬａ細胞を感染させ（ＭＯＩは０．１であった。）、感染後２０分経過した時点において、接種物（種菌）を取り除き、カラゲナンポリマーを含有する栄養培地（最終濃度は１．６、５．３、１．７、５０、１５０、４５０[mu]g/mlであった。）を加えた（図４の横座標を参考）。感染後４８時間が経過した時点において、ＴＯＸ２試薬（シグマ社製）を加えて、非感染対照群におけるＯＤ４５０ｎｍ値、及び、ＣＰＥ減少率（％）を測定した（図４の縦座標を参照）。エラーバーは、独立した６個のウェル間における標準偏差を表す。
【００６１】
図４に示したとおり、第１回、及び、第１０回のサイクルの上清から得たサンプルでは、カラゲナン処理に対するウイルス感受性（virus susceptibility）における有意な差異は見出されなかった。これは、選別過程においてそれを逃れた突然変異が現れなかったことを意味する。これらのデータは、イオタ−カラゲナンを用いたインビボ治療の際にライノウイルスの変異が現れる可能性ほとんどないこと（たとえその治療が長期間にわたって繰り返され、又は、持続される場合であっても）を示唆するものであった。
【図１Ａ】
【図１Ｂ】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図３Ａ】
【図３Ｂ】
【図３Ｃ】
【図３Ｄ】
【図３Ｅ】
【図３Ｆ】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、免疫、及び、抗ウイルス剤に関し、抗ウイルス成分としてカラゲナン（carrageenan）を含む医薬組成物、及び、前記医薬組成物のライノウイルス感染症（rhinovirus infection）の治療又は予防的使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
ピコルナウイルス（Picornavirus）は、人間及び動物における深刻は疾病の多くにかかわる小さいリボ核酸含有ウイルス科を代表する。ピコルナウイルスは、４つの属を含む。それは、エンテロウイルス属（enteroviruses）、ライノウイルス属（rhinoviruses）、カルディオウイルス属（cardioviruses）、及び、アフトウイルス属（aphtoviruses）である。
【０００３】
ヒトライノウイルスは、１００以上のセロタイプ（serotype）からなり、風邪の原因物質でもある。そのセロタイプが多いがゆえに、ワクチンの開発が問題となる。したがって、その治療には抗ウイルス剤の使用がベストであり得る。ライノウイルスは、４つのウイルスたんぱく質、ＶＰ１，ＶＰ２、ＶＰ３、及び、ＶＰ４からなる周囲カプシドで構成されている。たんぱく質ＶＰ１，ＶＰ２，及び、ＶＰ３は、６０個の繰り返しプロタメリック（protameric）正二十面体ユニットを構成している。これらは、ライノウイルスに関連する抗原多様性の原因となるものと考えられている。
【０００４】
ライノウイルス（ＨＲＶ）感染症は、発熱、咳、及び、鼻腔内うっ血といった症状を伴う風邪を引き起こす。次に、ＨＲＶ感染症は、乳幼児などにおいて肺炎及び気管支炎を引き起こすものとして知られ、そして、喘息、慢性閉塞性肺疾患、又は、膵臓繊維症を患っている者の病状を悪化させることも少なくない。ＨＲＶ感染症は、年齢によっては喘息を悪化させるケースの３分の１又は２分の１に関係し、（大人及び子供における）喘息による入院に深く関係するものである。
【０００５】
現時点における治療法の１つに、ライノウイルス特異的ＲＮＡを供給すること（ＤＥ１９８２５３９５に記載されている。）がある。このＲＮＡは、カプシドのキャニオン（canyon）領域に結合する。かかる領域は、宿主の受容体（例えば、ＩＣＡＭ−１；細胞間接着分子−１）の結合、及び、細胞感染に必要なものである。別の方法として、可溶性ＩＣＡＭ−１たんぱく質又はＩＣＡＭ−１の誘導体（例えば、米国特許６，３２６，００４号及び米国特許６，０９６、８６２号に記載されたもの）（ｔＩＣＡＭ−１、切断型ＩＣＡＭ−１）を投与してウイルス粒子（ビリオン）を中和するものがある。
【０００６】
ライノウイルスに対し抗ウイルス活性を有する化合物がＥＰ０５２３８０３号に記載されている。
【０００７】
ライノウイルス症候は、免疫系の過度な反応又は非特異的反応に起因する。したがって、ライノウイルス感染症に対する通常の治療法は、アスピリン、又は、アセトアミノフェン／パラセタモールのような鎮痛剤、その他咽喉用局所剤（主に、口内錠）、鼻腔のうっ血除去薬、咳止め（脳の咳反射を抑制するか、又は、肺粘膜を拡張させることによっては効く。）、及び、第１世代抗ヒスタミン剤（例えば、ブロムフェニラミン、クロルフェニラミン、及び、クレマスチンなど）を投与することを含む。ここで、第１世代抗ヒスタミン剤は、粘液腺分泌（量）を減少させ、鼻詰まりを解消するものであるが、それを使用したときに眠くなることもある。）
【０００８】
カラゲナンを含む硫酸化多糖類が抗ウイルス活性を有することが当業者に知られている。Gonzalez M. Eらは、文献［1987, Antimicrob. Agents Chemother.31,1388-1393］において、幾つかの動物ウイルスに対しイオタ−カラゲナンを含む様々な硫酸化多糖類が抗ウイルス活性を有することを報告している。イオタ−カラゲナンは、エンベロープを有するウイルス類、ＨＳＶ−１，ＨＳＶ−２，ＳＦＶ（Semliki Forest virus），ＡＳＦ（African swine fever virus），種痘ウイルス（vaccina virus）、及び、裸のＥＭＣウイルス（naked encephalomyocarditis virus）に対し抗ウイルス活性を有する。イオタ−カラゲナンは、エンベロープを有するウイルス類、ＶＳＶ（vesicular stomatitis virus），及び、はしかウイルス、並びに、裸のポリオウイルスタイプ１及びアデノウイルスタイプ５には効果がなかった。
【０００９】
米国公開公報２００３／１８１４１５Ａ号には、硫酸化されたセルロースのような硫酸化多糖類が、エンベロープを有するウイルス類、特に、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、パピローマウイルス、及び、ＨＩＶに対し抗ウイルス活性を有することが記載されている。ＷＯ２００５／００４８８２Ａ号には、カラゲナンのような硫酸化多糖類を用いたライノウイルス感染症を除くウイルス感染症の治療について記載されている。
【００１０】
米国公開公報２００５／１７１０５３Ａ１号には、ＨＩＶ−１感染症を含む性感染症の拡散を阻害するためにラムダ−カラゲナンを使用することが記載されている。
【００１１】
Yamadaらは、文献［1997, Carbohydrate Polymers, Appl. Scien. Publishers 32, 51 -55］において、ラムダ−、カッパ−、及び、イオタ−カラゲナンの抗ＨＩＶ−１活性、及び、それらの硫酸化誘導体の抗ＨＩＶ−１活性について報告している。
【００１２】
S.F.Tischer らは、文献［2006, Carbohydrate Polymers, Appl. Scien. Publishers 63, 459-465］において、Meristiella gelidiumから断離されたカラゲナンが単純ヘルペスウイルス及びデングウイルスに対し抗ウイルス活性を有することを報告している。
【００１３】
Carlucciらは、文献［2004, Antiviral Research, Elsevier Science BV. 64, 137-141］において、マウスにおける性器ヘルペスウイルス感染症に対しラムダ−カラゲナンの保護効果について報告している。
【００１４】
Pujol らは、文献［2006, Planta Medica 72, 121 -125］において、Gigartina skottsbergiiから単離されたカラゲナンがマウスにおける単純ヘルペスウイルス感染症に対し抗ウイルス活性を有することについて報告している。
【００１５】
用語“カラゲナン”は、海藻（紅藻類）から抽出した直鎖硫酸化ガラクトース系多糖類（linear sulphated galactose-based polysaccharide）に対する集合的な用語である。これは、医薬品、及び、食品などにおいて主に安定化剤、ゲル化剤乳酸剤、乳化剤、又は、増粘剤として用いられる。カラゲナンは、それが抽出された海藻属によって１０種以上の異なるカラゲナンが存在する。３つの主なるタイプは、イオタ−、カッパ−、及び、ラムダ−カラゲナンである。これらのカラゲナンは、その構造及び硫酸化度において微妙に異なっている。イオタ−カラゲナンは、主に紅藻類であるGigartina stellata及びChondrus crispusから抽出された硫酸化カラクタンを形成する軟質ゲルである。カッパ−カラゲナンは、主にKappaphycus cottoniiから得られたもので、より硬質のゲルを形成する。ラムダ−カラゲナンは、最も一般的な形態で、増粘剤として頻繁に使用される物である。ＨＩＶ又はＨＳＶなどのウイルスに対する一部のカラゲナン類の抗ウイルス活性は古くから知られていたにもかかわらず、カラゲナンがどうやって抗ウイルス活性を示すことがきるのかについての詳細なメカニズムは未だに不明のままである。
【００１６】
前述した内容に照らして、本発明は、ライノウイルス感染症（鼻炎）の治療又は予防に適したカラゲナン系抗ウイルス組成物を提供する。
【００１７】
本発明に至った実験では、選択されたカラゲナンがライノウイルス感染症（鼻炎）に対して抗ウイルス活性を表し、そのうちイオタ−カラゲナンの方が最も優れた効果を示すということが分かった。それは、今までの技術水準から見て驚くべきものであった。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１８】
【特許文献１】米国公開公報２００３／１８１４１５Ａ号
【特許文献２】ＷＯ２００５／００４８８２Ａ号
【特許文献３】米国公開公報２００５／１７１０５３Ａ１号
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１９】
したがって、本発明に係る第１の実施形態は、ライノウイルス感染症の治療及び予防用医薬組成物の製造において、抗ウイルス成分としてカラゲナンを使用することに関する。
【課題を解決するための手段】
【００２０】
本明細書に使用された用語“抗ウイルス成分（抗ウイルス有効成分）”とは、直接或いは間接的に、又は、直間接的にその有効量が適用された場合に、真核細胞におけるライノウイルス感染サイクル、具体的に、真核細胞へのウイルスの浸透、真核細胞におけるウイルスの複製、ウイルスアセンブリ、及び、感染された細胞からのウイルスの放出からなる群から選ばれるライノウイルス感染サイクルのうち少なくとも一部を阻害するカラゲナン化合物をいう。それは、真核又は哺乳類宿主系においてウイルス力価レベルを非特異的に減少させ、又は、ウイルス力価の増加を非特異的に阻害するに寄与する任意の効果を含む。
【００２１】
よって、本発明に係る医薬組成物は、ウイルス感染症の発症前後に投与され得る。本明細書に使用された用語“予防”又は“予防的処置”は、ウイルス感染症から少なくともある程度保護し、又は、ウイルス感染症にかかるリスクを減少させるために、本発明に係る医薬組成物を投与することに関する。本明細書に使用された用語“治療”又は“治療的処置”は、前記感染症の病的症状を軽減するために、ウイルスに感染された個体に本発明に係る医薬組成物を投与することに関する。ここで、“病的症状の軽減”は、現れる症状を頻度及び／又は重症度を減少させること、或いは、かかる症状を除去すること、かかるウイルス感染症に伴って発生し得る損傷を治療すること、又は、二次的ウイルス、細菌、真菌、又は、その他の微生物感染症の発症を予防或いは阻害することを含む。
【００２２】
本明細書に使用された“カラゲナン”とは、（明記されない限り）イオタ−、カッパ−、及び、ラムダ−カラゲナンホモポリマー又はヘテロポリマーのうち少なくとも２種の混合物、即ち、イオタ−及びラムダ−カラゲナンの混合物、イオタ−及びカッパ−カラゲナンの混合物、カッパ−及びラムダ−カラゲナンの混合物、又は、イオタ−、カッパ−、及び、ラムダ−カラゲナンホモ又はヘテロポリマーの混合物を意味する。
【００２３】
カラゲナンホモポリマーは、イオタ−、カッパ−、又は、ラムダ−カラゲナンのいずれか１種からなる純粋なカラゲナンである。カラゲナンへテロポリマーは、２種以上のカラゲナンのサブユニットを含む。ここで、カラゲナンのサブユニットは、イオタ−、カッパ−、及び、ラムダ−カラゲナンサブユニットからなる群から選ばれるのが好ましい。
【００２４】
本明細書に使用される用語カラゲナンの“混合物”は、抗ウイルス成分として、少なくとも１種以上のカラゲナンへテロポリマーを含む組成物を指す。したがって、“混合物”は主に、組成物中に存在する１種以上のヘテロポリマーカラゲナンの一部を構成する異なるカラゲナンサブユニットからなる混合物を意味する。
【００２５】
本発明に係る別の実施例は、治療又は予防の用に供される抗ライノウイルス組成物に関する。ここで、ライノウイルス感染症は、急性又は慢性ライノウイルス感染症を含む。
【００２６】
本発明に係るカラゲナン系組成物は、皮膚又は粘膜における炎症を治療するための局所剤に適している。しかしながら、経口又は非経口による全身的用途に使用することも可能であるが、それは、特に低分子量カラゲナン分画を主に含有するように適合された場合である。本発明に有用なカラゲナンは、約１５０００〜約５００００００Ｄａの平均分子量を有する。低分子量分画は約１５０００〜約５００００Ｄａの平均分子量を有するカラゲナンを含む。中分子量分画は約５００００〜約５０００００Ｄａの平均分子量を有するカラゲナンを含む。高分子量分画は約５０００００〜約５００００００Ｄａの平均分子量を有するカラゲナンを含む。
【００２７】
好ましい実施例において、医薬組成物は、局所用、又は、粘膜用に適合されている。使える状態（ready-for-use）のガレヌス製剤として、クリーム、ゲル、軟膏、粉末（吸入用の粉末を含む。）、スプレー、泡沫、又は、液剤（例えば、ローション剤、うがい薬、又は、点鼻剤など）などがある。その他のガレヌス製剤は、当業者の技術水準から明らかであり、例えば、米国特許６、３９１、４５２号に記載されたような鼻腔用薬物伝達システムなどがある。
【００２８】
抗ウイルス成分のほか、本発明に係る組成物は、医薬的に許容される担体、又は、その他の添加剤、又は、成分を含み得る。
【００２９】
適当な担体として、有効成分の投与に適当な、又は、有用な稀釈剤（例えば、水、食塩水など）、賦形剤、又は、その他の媒体（vehicle）などが挙げられる。最適な添加剤として、ＳｉＯ2，ＴｉＯ2，バインダ（例えば、微小結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、ガントラガカント、ゲラチン、スターチ、ラクトース、ラクトース一水和物、アルギン酸、又は、トウモロコシなど）；ステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウムなどの界面活性剤又は滑剤;コロイド性二酸化ケイ素などの流動促進剤;ショ糖やサッカリンなどの甘味剤などが挙げられる。更なる添加剤として、バッファー、または、ｐＨ調整剤などが挙げられる。ここで、ｐＨ調整剤は、酢酸、フマル酸、塩化水素酸、リンゴ酸、硝酸、リン酸、プロピオン酸、硫酸、酒石酸、クエン酸、またはこれらの混合物から選択され得る。
【００３０】
更なる成分、例えば、非カラゲナン系薬物、又は、薬効成分を存在し得る。
【００３１】
カラゲナンは医薬的に許容される塩の形態で使用され得る。例えば、カラゲナンのナトリウム塩が使用され得る。その他の医薬的に許容される塩として、カラゲナンのカリウム、リチウム、及び、アンモニウム塩などがある。別の実施例によれば、本発明の組成物は、局所剤に適しており、０．０１〜２０％（ｗ／ｗ）、好ましくは、０．１〜１０％（ｗ／ｗ）、最も好ましくは０．５〜５％（ｗ／ｗ）（製剤の重量に基づく。）のカラゲナンを含有する。
【００３２】
通常、本発明に係る組成物は、非発熱性の滅菌製剤の形態で製造される。液体製剤の場合、例えば、適当なメンブレーンフィルタを用いたろ過によって滅菌処理が施され得る。滅菌、又は、無菌組成物を製造するための方法については当業者によく知られているため、本明細書においてはあえて言及を避けたものである。
【００３３】
しかしながら、本発明に係る医薬組成物は、衛生用品又は衛生物品、例えば、鼻（鼻腔）部位、及び／又は口（口腔）部位に通常使用される顔面衛生用品又は顔面衛生物品（例えば、鼻ティッシュ又はペーパー）、又は、ハンカチの（固体）表面上に被覆され得る。具体的に、医薬組成物は、例えば、消毒剤のように、手袋、鼻（腔）用ティッシュのような衛生ティッシュ又はペーパー上に噴霧されて、所定の抗ウイルス効果を奏するものであり、それにより、汚染された指先により繰り返される自己感染といった現象を減らすと共に、近接している個体の手から手へのウイルスの拡散を減らすことができる。衛生用品又は衛生物品の特性に沿って、これらの物品（用品）は、医薬組成物で被覆し、医薬組成物でぬらし、又は、医薬組成物で含浸させたものであり得る。
【００３４】
こうしたカラゲナン含有製品は、綿棒（cotton swab）、マスク（dust mask）、又は、顔面マスク（facial mask）を含み得るが、それらに制限されない。口紅も有効量のカラゲナンを含有するように処方され得る。これらの衛生用品又は衛生物品は、ウイルス感染に対する治療，又は、予防のために用いられ、そしてまた、感染のリスクを減らし、或いは、防止するにも役立つ。
【００３５】
したがって、本発明の一実施例は前述した使用に関するが、ここで抗ウイルス組成物は、被覆（coating）又は含浸（impregnation）といった方法によって、衛生手袋（hygiene or sanitary glove）、鼻ティッシュ（nasal tissue）又はペーパーなどのティッシュ又はペーパーのような衛生用品（hygiene article）または衛生物品（sanitation article）の固体表面に途布され得る。本発明に有用なイオタ−、カッパ−、及び、ラムダ−カラゲナンは、市販されるものであっても、当業者に知られている抽出方法に沿って海藻類から抽出・製造したものであってもよい。
【００３６】
好ましい実施例において、本発明は、イオタ−、カッパ−、及び、ラムダ−カラゲナンのホモ−及びヘテロポリマーからなる群から選ばれた１以上のものを使用することに関する。
【００３７】
具体的に、本発明に係る抗ウイルス性組成物（医薬組成物）は、イオタ−、カッパ−、及び、ラムダ−カラゲナン以外のカラゲナンを実質的に含まないものであってもよい。この場合であっても、その他のカラゲナンが微量に含まれている可能性は排除できない。様々な用途において、医薬組成物中に実質的にイオタ−カラゲナンだけが存在するものであってもよい。
【００３８】
別の実施例において、本発明は、抗ウイルス組成物の製造においてカラゲナンを使用することに関する。ここで、前記組成物は、イオタ−、カッパ−、又は、ラムダ−カラゲナンのいずれか、又は、前記カラゲナンのうち２以上を含有する混合物を、前記組成物中に存在する全カラゲナンの８０％以上、９０％以上、９５％以上、又は、９９％以上となるように含み得る。この百分率（％）は、前記カラゲナンの乾燥重量に対する重量％（ｗ／ｗ％）である。
【００３９】
別の実施例において、本発明は、組成物中に存在する全カラゲナンの総乾燥重量に対して、イオタ−カラゲナンが、（その乾燥重量に基づいて）５０％以上、７０％以上、８０％以上、好ましくは、９５％以上（ｗ／ｗ％）含まれている組成物を使用することに関する。
【００４０】
前述したカラゲナンの濃度は、ホモ−及びヘテロポリマーカラゲナンにも同様に適用されうる。
【００４１】
カラゲナンは、経口投与又は皮膚投与の際に、或いは、吸入投与の際に、超高容量で投与される場合であっても、“非毒性”であることが知られている。したがって、食品医薬品安全局（ＦＤＡ）によって“一般的に安全なもの”として分類されている。別の実施例において、本発明は、抗ウイルス組成物の製造においてカラゲナンを使用することに関する。この組成物は、１以上の更なる抗ウイルス化合物（有効成分）、好ましくは、硫酸化セルロースを含み得る。
【００４２】
別の実施例において、本発明は、微生物感染症、炎症性疾患、アレルギー、免疫低下症、免疫系損傷といった状態又は症状の治療又は予防のための医薬組成物を製造するに当たり、カラゲナン、好ましくは、イオタ−カラゲナンを用いることに関する。ここで、カラゲナンは、１以上の別の薬理活性化合物又は薬物と組み合わせることができる。かかる組成物において、カラゲナンンは、抗ライノウイルス性補助機能（作用・効果）を奏し得る。前記１以上の別の薬理活性化合物又は薬物はステロイド、例えば、コルチゾン、及び、抗ヒスタミン剤からなる群から選ばれたものであり得る。
【００４３】
別の実施例において、抗ウイルス性医薬組成物は、ライノウイルス感染症にかかり易い個体、又は、ライノ感染症のリスクが高まった個体においてその治療および予防のために用いられる。ここで、前記個体は、喘息患者、アレルギーを有する個体、及び、炎症性疾患を有する個体からなる群から選ばれたいわゆる高リスク患者を含む。
【００４４】
前述した本発明に関する理解を助けるために、その実施例を後述する。この実施例は、本発明を制限する意味で解釈されてはいけない。本発明は当然、当業者によって容易になし得る程度の変形例などを含むものと解される。
【発明の効果】
【００４５】
本発明の医薬組成物は、ライノウイルス感染症に対する予防及び治療に有効である。また、本発明の医薬組成物は、耐性獲得の心配もなく長期間にわたっての治療などに使用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００４６】
【図１】図１は、ＨＲＶによって誘発された細胞死阻害分析（ＸＴＴ−分析）の結果を示したものである。ここで、縦座標は４９２ｎｍで測定されたＯＤを表し、横座標は異なるテストサンプルを表す。“１”は非感染細胞を表し、“２”は“未処理・感染細胞”を表し、“３”は処理（イオタ−カラゲナン）・感染細胞を表し、“４”は処理（カッパ−カラゲナン）・感染細胞を表し、“５”は処理（ラムダ−カラゲナン）・感染細胞を表す。図１Ａは、ＨＲＶ−２で感染された細胞を示し、そして、図１ＢはＨＲＶ−１４で感染された細胞を示す。
【図２】図２は、ＴＣＩＤ５０分析によって、感染されたＨｅｌａ細胞から得た上清のピーク力価を測定した結果を示す。ここで、縦座標はＴＣＩＤ５０力価を表し、横座標はイオタ−カラゲナンの濃度（[mu]g/ml）を表す。“Ｕ”は未処理細胞を表す。“Ｔ（処理）”では、細胞を１時間感染させ、処理後１時間経過した時点で、所定濃度のイオタ−カラゲナンを加えた。“Ｐ（予防）”では、感染させる前に、所定濃度のイオタ−カラゲナンを用いて１時間プレインキュベートした。その後の処理は、Ｔと同様に行った。細胞を感染多重度０．０１で感染させた。ピーク力価は、ＨＲＶ−２（図２Ａ）に対しては三日目に現れ、ＨＲＶ−１４（図２Ｂ）に対しては四日目に現れた。
【図３】図３は、感染されたヒト鼻上皮細胞に対するライノウイルスの複製に対するイオタ−カラゲナンの有効性（阻害効果）を示すもの（ＴＣＩＤＳＯ分析によって測定したもの）である。ここで、縦座標はＴＣＩＤ５０力価（ログ値）を表し、縦座標はイオタ−カラゲナンの濃度（[mu]g/ml）を表す。ＭＯＣＫは非処理対照群細胞を表し、図３ＡはＨＲＶ−１Ａで感染させた細胞を表し、図３ＢはＨＲＶ−２で感染させた細胞を表し、図３ＣはＨＲＶ−８で感染させた細胞を表し、図３ＤはＨＲＶ−１６で感染させた細胞を表し、図３はＨＲＶ−３９で感染させた細胞を表し、そして、図３ＦはＨＲＶ−８３で感染させた細胞を表す。
【図４】図４は、ＣＰＥ減少分析（CPE reduction assay）によって測定された、処理を繰り返し行った後におけるライノウイルスに対するイオタ−カラゲナンの有効性を示したものである。ここで、縦座標はＣＰＥ減少率（％）を表し、横座標はイオタ−カラゲナンの濃度（[mu]g/ml）を表す。菌株ＨＲＶ２Ｐ０はもとのライノウイルス菌株（複製過程を経ていないもの）を表し、菌株ＨＲＶ２Ｐ１０は、ＨｅＬａ細胞において１０回の選別的複製（selective replication）を経たライノウイルス菌株ＨＲＶ２Ｐ０を表す。
【発明を実施するための形態】
【００４７】
［実施例１］
ヒトライノウイルスタイプ２（ＨＲＶ−２）及びタイプ１４（ＨＲＶ−１４）に対する異なる種のカラゲナンの効果（抗ウイルス効果）
準密集（subconfluent）ＨｅＬａ細胞をウイルス懸濁液を用いてインキュベートした。ここで、ウイルス懸濁液は、図１に示したポリマー１２５［ｍｕ］ｇ／ｍｌで５分間プレインキュベートしたものであった。４８時間経過後、T0X2 XTT分析装置（シグマ社製）を用いて、細胞の生存率を測定した。
【００４８】
図１に示したとおり、最も有効なポリマーはイオタ−カラゲナンであった（カラム３）。それは、両方のライノウイルスに対し有効であっが、ラムダ−カラゲナン（カラム５）及びカッパ−カラゲナン（カラム４）は、ＨＲＶ−２に対しては有効であったが、ＨＲＶ−１４に対しては有効でなかった。エラーバーは６個の独立したウェル間の標準偏差を示す。
【００４９】
［実施例２］
表１に示したポリマー（１００／ｖｇ／ｍｌの濃度）を、ＨＲＶ−２、及び、ＨＲＶ−１４によって誘発された細胞死阻害分析（ＸＴＴ−分析）においてテストした。
【００５０】
表１に示したとおり、イオタ−カラゲナンは両方のライノウイルスタイプに対し保護活性を示した。ここで、“+”は、感染されない対照群細胞に比べて９５％以上の保護（効果）を有することを表す。ポリマーキトサン、カルボキシメチルセルロース、及び、カルボキシメチルキトサンでは全く阻害効果が得られなかった。表１は、テストされたポリマーの抗ウイルス活性を示す。
【００５１】
【表１】
【００５２】
［実施例３］
イオタ−カラゲナンは、治療及び予防ウイルス複製モデルにおいてＨＲＶ−２及びＨＲＶ−１４に対し有効であった。６．２５［ｍｕ］ｇ／ｍｌ以上の濃度において、ピークウイルス力価（peak viral titer）が著しく減少された。しかしながら、イオタ−カラゲナンは、ＨＲＶ−２に対する予防モデルにおいて最も有効であった。ここでは、ピークウイルス力価における減少が９９．９％超であった。
【００５３】
［実施例４］
ヒトライノウイルスサブタイプの選別に対するイオタ−カラゲナンの効果
９６ウェルプレート中の準合流ＨｅＬａ細胞を、ＭＯＩ（感染多重度）０．５のウイルス懸濁液を用いてインキュベートした。
【００５４】
ウイルス懸濁液で用いて感染させてから２０分経過後、３倍希釈したポリマーを含有する栄養培地を加えた。４８〜７２時間経過後、T0X2 XTT分析装置（シグマ社製）を用いて、細胞の生存率を測定した。ソフトウェアＥｘｃｅｌ−Ｆｉｔを用いて、ＥＣ５０値を計算した。
【００５５】
【表２】
イオタ−カラゲナンは、テストされた全ヒトライノウイルス（予め感染されたＨｅＬａ細胞）に対して有効であった。細胞変性効果の５０％を阻害するに必要とされるカラゲナンの濃度は、ＨＲＶ−８に対しては、０．５［ｍｕ］ｇ／ｍｌ未満であり、ＨＲＶ−１４に対しては、４００／ｖｇ／ｍｌであった。この結果は、イオタ−カラゲナンが、感染されたＨｅＬａ細胞に対し広範囲に及ぶライノウイルスサブタイプの複製を阻害するということを意味する。
【００５６】
［実施例５］
イオタ−カラゲナンによるヒト鼻上皮細胞に対するライノウイルス複製の阻害
主なるヒト鼻上皮細胞（Ｐｒｏｍｏｃｅｌｌ）を２４ウェルプレートに植えた（ウェルあたり２．９×１０4個の細胞）。それを、５％ＣＯ2、３７℃、及び、９５％の湿度の下で三日間培養した。この細胞を、ライノウイルス菌株ＨＲＶ−１Ａ，ＨＲＶ−２，ＨＲＶ−８，ＨＲＶ−１４，ＨＲＶ−１６，ＨＲＶ−３９，ＨＲＶ−８３，及び、ＨＲＶ−８４を用いて密集度（confluency）６０％で感染させた。ライノウイルスＨＲＶ−１Ａ，ＨＲＶ−２，ＨＲＶ−８，ＨＲＶ−１６，ＨＲＶ−３９，及び、ＨＲＶ−８３は、ヒト鼻上皮細胞において溶解性複製（lytic replication）を示した。ＨＲＶ−１４，及び、ＨＲＶ−８４は、細胞を溶解させなかったために、それについては更なるテストを実施しなかった。
【００５７】
４，４０、及び４００［ｍｕ］ｇ／ｍｌ濃度のイオタ−カラゲナン，及び、ＭＯＣＫ対照群を用いて、ウイルスをプレインキュベートした。そのＭＯＩは０．３４であった。感染後４８〜７２時間以内に上清を得て、ＴＣＩ５０力価を測定した。図３に示したとおり、イオタ−カラゲナンによる処理の結果、ＭＯＣＫで処理した対照群細胞に比べて、上精中に存在する全ウイルスのウイルス力価が４０［ｍｕ］ｇ／ｍｌ濃度で少なくとも２ログステップ減少された。Ｙ軸は、ウイルス力価のログ値を示す。これらのデータより、イオタ−カラゲナンが、ヒト上皮細胞におけるウイルス複製を阻害するということが明らかであった。現時点においてはインビボテストに利用可能なヒトライノウイルスの動物モデルが存在しないために、ここで使用されたヒト鼻上皮細胞は現に利用可能なインビトロモデルで最も重要なものであった。エラーバーは、独立してテストされた３つのサンプル間における標準偏差を表す。
【００５８】
［実施例６］
処理を繰り返し行った後におけるライノウイルス感染に対するイオタ−カラゲナンの有効性の測定（ウイルス耐性獲得のいかん）
もとのウイルスＨＲＶ２Ｐ０、及び、ＨＲＶ２Ｐ１０（ＨｅＬａ細胞において１０回選別的複製（selective replication）を経て得たもの）をＣＰＥ（細胞変性効果）減少分析においてテストした。ＨｅＬａ細胞（ウェルあたり８×１０4個の細胞）を６つのウェルに植えた。カラゲナンポリマー、及び、ウイルス（ＭＯＩは０．１であった。）を補充した適当な栄養培地（カラゲナンの最終濃度は１．６、５．３、１７、５０、１５０、及び、４５０[mu]g/mlであった。）を用いて、それらの細胞を感染させた。対照群として、１つのウェルには、ウイルスを含んでないカラゲナン補充栄養培地で感染させたＭＯＣＫがあり、もう１つのウェルは、ウイルス懸濁液で処理したＭＯＣＫで感染させた。ここで、ウイルス懸濁液には、栄養培地は含まれていたが、カラゲナンは含まれていなかった。感染後２０分間インキュベートし、そのプレートを２回洗浄し、対照用培地（選択された濃度のカラゲナンで補充されたウイルスを含まないもの）を前記全てのウェル（ＭＯＣＫで処理された陰性の対照群を除く。）に加えた。ここで、ＭＯＣＫで処理された陰性の対照群は、「純粋な非阻害感染」を表した。保護されない陰性の対照群ウェルにおいて明確な細胞変性効果が見られたら直ぐに、各実験ウェルからサンプルを取った。次の選別過程のために、これらのカラゲナン処理ウェル（非感染対照群に比べて明確に検出可能なＣＰＥを示す。）から取ったウイルス含有上清を用いてＨｅＬａ細胞の感染を行った。カラゲナンの濃度が最も低い２つの実験サンプル（即ち、１．６及び５．３[mu]g/mlの濃度）においてはＣＰＥ応答が検出されなかった。
【００５９】
この過程を１０回繰り返して、その結果得られたウイルスサンプルを、もとのウイルスストックを用いて行ったＣＰＥ阻害テストの結果と比較してみた。簡単に言えば、ＴＯＸ２試薬（シグマ社製）を加えてから４８時間経過後、非感染対照群におけるＯＤ４５０ｎｍ値、及び、ＣＰＥ減少率（％）を測定した。
【００６０】
カラゲナン処理に対するウイルスの耐性獲得の可能性を調べるために、最終接種に使用されたウイルス（図４、ウイルス２＿００１）、及び、１０回の選別的複製から得たウイルス（図４、ウイルス２０ ００１）に対し、ＨｅＬａ細胞を用いたＣＰＥ減少分析を行った。ここで、ＨｅＬａ細胞を用いた点を除く、その後の実験プロトコールは前述したものと少し異なるものであった。簡単に言えば、前記各ウイルスで用いてＨｅＬａ細胞を感染させ（ＭＯＩは０．１であった。）、感染後２０分経過した時点において、接種物（種菌）を取り除き、カラゲナンポリマーを含有する栄養培地（最終濃度は１．６、５．３、１．７、５０、１５０、４５０[mu]g/mlであった。）を加えた（図４の横座標を参考）。感染後４８時間が経過した時点において、ＴＯＸ２試薬（シグマ社製）を加えて、非感染対照群におけるＯＤ４５０ｎｍ値、及び、ＣＰＥ減少率（％）を測定した（図４の縦座標を参照）。エラーバーは、独立した６個のウェル間における標準偏差を表す。
【００６１】
図４に示したとおり、第１回、及び、第１０回のサイクルの上清から得たサンプルでは、カラゲナン処理に対するウイルス感受性（virus susceptibility）における有意な差異は見出されなかった。これは、選別過程においてそれを逃れた突然変異が現れなかったことを意味する。これらのデータは、イオタ−カラゲナンを用いたインビボ治療の際にライノウイルスの変異が現れる可能性ほとんどないこと（たとえその治療が長期間にわたって繰り返され、又は、持続される場合であっても）を示唆するものであった。
【図１Ａ】
【図１Ｂ】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図３Ａ】
【図３Ｂ】
【図３Ｃ】
【図３Ｄ】
【図３Ｅ】
【図３Ｆ】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ライノウイルス感染症の治療及び予防用の医薬組成物の製造における抗ウイルス成分としてのカラゲナンの使用。
【請求項２】
前記ライノウイルス感染症が、急性又は慢性ライノウイルス感染症であることを特徴とする請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記医薬組成物が、局所又は粘膜への使用に適したものであり、好ましくは、鼻腔スプレー、吸入用粉末のような粉末、ゲル、軟膏、泡沫、又は、ローション剤、うがい薬、或いは、点滴液のような液剤として使用されるものであることを特徴とする請求項１又は２に記載の使用。
【請求項４】
前記医薬組成物が、１以上の医薬的に許容される担体又は添加剤を含むことを特徴とする請求項１〜３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５】
前記医薬組成物が、前記組成物に基づいてカラゲナンを０．０１％〜２０％、好ましくは０．１％〜１０％、最も好ましくは０．５％〜５％の量（Ｗ／ｖ）で含む局所剤であることを特徴とする請求項１〜４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６】
前記カラゲナンが、イオタ−、カッパ−、及び、ラムダ−カラゲナンのホモ−及びヘテロポリマーからなる群から選ばれた１以上の成分を含むことを特徴とする請求項１〜５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項７】
前記医薬組成物が、ラムダ−、カッパ−、或いは、イオタ−カラゲナン、又は、前記カラゲナンのうち２以上を含有する混合物を、前記医薬組成物中に存在する全カラゲナンの乾燥重量に基づいて８０％以上、９０％以上、９５％以上、好ましくは９９％以上の量（ｗ／ｗ）で含むことを特徴とする請求項１〜６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項８】
前記医薬組成物が、前記医薬組成物中に存在する全カラゲナンの総量に対してイオタ−カラゲナンを５０％以上、７０％以上、８０％以上、好ましくは９５％の量（ｗ／ｗ）で含むことを特徴とする請求項１〜７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項９】
前記医薬組成物が、１以上の別の抗ウイルス成分、好ましくは、硫酸化セルロースを更に含むことを特徴とする請求項１〜８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１０】
前記医薬組成物が、衛生手袋、鼻ティッシュ或いはペーパーなどのティッシュ又はペーパーのような衛生用品又は衛生物品の固体表面に被覆されることを特徴とする請求項１〜９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１１】
前記医薬組成物が、ステロイド又は抗ヒスタミン剤のような薬理活性化合物を１以上含むことを特徴とする請求項１〜１０のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１２】
前記ライノウイルス感染症が、喘息患者、アレルギーを有する個体、及び、炎症性疾患を患っている個体からなる群から選ばれた高リスク患者で発生していることを特徴とする請求項１〜１１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１３】
請求項１〜９に記載の医薬組成物で被覆又は含浸されたことを特徴とする固体衛生用品又は衛生物品。
【請求項１４】
前記衛生用品又は衛生物品が、鼻ティッシュ又はペーパーのように口及び／又は鼻部位に使用するための顔面衛生物品或いは顔面衛生用品、手袋、衛生ティッシュ、衛生ペーパー、及び、ハンカチからなる群から選ばれることを特徴とする請求項１３に記載の衛生用品及び衛生物品。
【請求項１】
ライノウイルス感染症の治療及び予防用の医薬組成物の製造における抗ウイルス成分としてのカラゲナンの使用。
【請求項２】
前記ライノウイルス感染症が、急性又は慢性ライノウイルス感染症であることを特徴とする請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記医薬組成物が、局所又は粘膜への使用に適したものであり、好ましくは、鼻腔スプレー、吸入用粉末のような粉末、ゲル、軟膏、泡沫、又は、ローション剤、うがい薬、或いは、点滴液のような液剤として使用されるものであることを特徴とする請求項１又は２に記載の使用。
【請求項４】
前記医薬組成物が、１以上の医薬的に許容される担体又は添加剤を含むことを特徴とする請求項１〜３のいずれか一項に記載の使用。
【請求項５】
前記医薬組成物が、前記組成物に基づいてカラゲナンを０．０１％〜２０％、好ましくは０．１％〜１０％、最も好ましくは０．５％〜５％の量（Ｗ／ｖ）で含む局所剤であることを特徴とする請求項１〜４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項６】
前記カラゲナンが、イオタ−、カッパ−、及び、ラムダ−カラゲナンのホモ−及びヘテロポリマーからなる群から選ばれた１以上の成分を含むことを特徴とする請求項１〜５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項７】
前記医薬組成物が、ラムダ−、カッパ−、或いは、イオタ−カラゲナン、又は、前記カラゲナンのうち２以上を含有する混合物を、前記医薬組成物中に存在する全カラゲナンの乾燥重量に基づいて８０％以上、９０％以上、９５％以上、好ましくは９９％以上の量（ｗ／ｗ）で含むことを特徴とする請求項１〜６のいずれか一項に記載の使用。
【請求項８】
前記医薬組成物が、前記医薬組成物中に存在する全カラゲナンの総量に対してイオタ−カラゲナンを５０％以上、７０％以上、８０％以上、好ましくは９５％の量（ｗ／ｗ）で含むことを特徴とする請求項１〜７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項９】
前記医薬組成物が、１以上の別の抗ウイルス成分、好ましくは、硫酸化セルロースを更に含むことを特徴とする請求項１〜８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１０】
前記医薬組成物が、衛生手袋、鼻ティッシュ或いはペーパーなどのティッシュ又はペーパーのような衛生用品又は衛生物品の固体表面に被覆されることを特徴とする請求項１〜９のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１１】
前記医薬組成物が、ステロイド又は抗ヒスタミン剤のような薬理活性化合物を１以上含むことを特徴とする請求項１〜１０のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１２】
前記ライノウイルス感染症が、喘息患者、アレルギーを有する個体、及び、炎症性疾患を患っている個体からなる群から選ばれた高リスク患者で発生していることを特徴とする請求項１〜１１のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１３】
請求項１〜９に記載の医薬組成物で被覆又は含浸されたことを特徴とする固体衛生用品又は衛生物品。
【請求項１４】
前記衛生用品又は衛生物品が、鼻ティッシュ又はペーパーのように口及び／又は鼻部位に使用するための顔面衛生物品或いは顔面衛生用品、手袋、衛生ティッシュ、衛生ペーパー、及び、ハンカチからなる群から選ばれることを特徴とする請求項１３に記載の衛生用品及び衛生物品。
【図４】
【公表番号】特表２０１０−５１２３０７（Ｐ２０１０−５１２３０７Ａ）
【公表日】平成２２年４月２２日（２０１０．４．２２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５３９６５４（Ｐ２００９−５３９６５４）
【出願日】平成１９年１２月４日（２００７．１２．４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００７／０１０５１２
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０６７９８２
【国際公開日】平成２０年６月１２日（２００８．６．１２）
【出願人】（５０９１４２８６３）マリノメド バイオテクノロジー ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング (2)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年４月２２日（２０１０．４．２２）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年１２月４日（２００７．１２．４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００７／０１０５１２
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０６７９８２
【国際公開日】平成２０年６月１２日（２００８．６．１２）
【出願人】（５０９１４２８６３）マリノメド バイオテクノロジー ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング (2)
【Ｆターム（参考）】
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