抗血管形成薬として有用なキナゾリン誘導体のマレイン酸塩
本発明は、ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩、ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩の具体的な結晶形、それらの製造方法、活性成分としてそれらを含有する医薬組成物、ヒトなどの温血動物での抗血管形成作用および／または血管透過性減少作用の生成に用いるための薬剤の製造におけるそれらの使用、および血管形成および／または増加した血管透過性に関連した疾患状態の処置方法におけるそれらの使用に関する。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩、ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩の具体的な結晶形、それらの製造方法、活性成分としてそれらを含有する医薬組成物、ヒトなどの温血動物での抗血管形成作用および／または血管透過性減少作用の生成に用いるための薬剤の製造におけるそれらの使用、および血管形成および／または増加した血管透過性に関連した疾患状態の処置方法におけるそれらの使用に関する。
【０００２】
正常な血管形成は、胚発生、創傷治癒およびいくつかの雌性生殖機能成分を含めた種々の過程において重要な役割を果たしている。望ましくないまたは病的な血管形成は、糖尿病性網膜症、乾癬、癌、関節リウマチ、アテローム、カポージ肉腫および血管腫を含めた疾患状態に関連していた（Fan et al, 1995, Trends Pharmacol. Sci. 16: 57-66; Folkman, 1995, Nature Medicine 1: 27-31）。血管透過性の変化は、正常および病的双方の生理学的過程においてある役割を果たしていると考えられる（Cullinan-Bove et al, 1993, Endocrinology 133: 829-837; Senger et al, 1993, Cancer and Metastasis Reviews, 12: 303-324）。酸性および塩基性の線維芽細胞増殖因子（ａＦＧＦおよびｂＦＧＦ）および血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）を含めた、in vitro 内皮細胞増殖促進活性を有するいくつかのポリペプチドが識別された。その受容体の制限された発現によって、ＶＥＧＦの増殖因子活性は、ＦＧＦのそれとは対照的に、内皮細胞に対して比較的特異性である。最近の立証は、ＶＥＧＦが、正常および病的双方の血管形成（Jakeman et al, 1993, Endocrinology, 133: 848-859; Kolch et al, 1995, Breast Cancer Research and Treatment, 36:139-155）および血管透過性（Connolly et al, 1989, J. Biol. Chem. 264: 20017-20024）の重要な刺激物質であるということを示している。抗体でのＶＥＧＦの隔離によるＶＥＧＦ作用の拮抗は、腫瘍成長の抑制を引き起こすことがありうる（Kim et al, 1993, Nature 362: 841-844）。
【０００３】
受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）は、細胞の原形質膜を越えた生化学的シグナルの伝達に重要である。これら膜貫通分子は、特徴的に、原形質膜中のセグメントを介して細胞内チロシンキナーゼドメインに連通した細胞外リガンド結合ドメインから成る。受容体へのリガンドの結合は、受容体上および他の細胞内分子上双方のチロシン残基のリン酸化に至る受容体関連チロシンキナーゼ活性の刺激を引き起こす。チロシンリン酸化におけるこれら変化は、種々の細胞応答に至るシグナリングカスケードを開始する。これまでに、アミノ酸配列相同性によって規定された少なくとも１９種類の異なったＲＴＫサブファミリーが識別された。これらサブファミリーの内の一つは、現在のところ、ｆｍｓ様チロシンキナーゼ受容体Ｆｌｔ−１、キナーゼインサートドメイン含有受容体ＫＤＲ（Ｆｌｋ−１とも称される）および別のｆｍｓ様チロシンキナーゼ受容体Ｆｌｔ−４によって構成されている。これら関連したＲＴＫの内のＦｌｔ−１およびＫＤＲの二つは、ＶＥＧＦを高親和性で結合することが分かった（De Vries et al, 1992, Science 255: 989-991; Terman et al, 1992, Biochem. Biophys. Res. Comm. 1992, 187: 1579-1586）。異種細胞中で発現されたこれら受容体へのＶＥＧＦの結合は、細胞タンパク質のチロシンリン酸化状態およびカルシウムフラックスの変化に関連していた。
【０００４】
ＶＥＧＦは、脈管形成（vasculogenesis）および血管形成（angiogenesis）に不可欠な刺激薬である。このサイトカインは、内皮細胞増殖、プロテアーゼ発現および遊走、および引き続きの毛細管を形成する細胞の組織化を誘発することによって血管萌芽性表現型を誘発する（Keck, P.J., Hauser, S.D., Krivi, G., Sanzo, K., Warren, T., Feder, J., and Connolly, D.T., Science (Washington DC), 246: 1309-1312, 1989; Lamoreaux, W.J., Fitzgerald, M.E., Reiner, A., Hasty, K.A., and Charles, S.T., Microvasc. Res., 55: 29-42, 1998; Pepper, M.S., Montesano, R., Mandroita, S.J., Orci, L. and Vassalli, J.D., Enzyme Protein, 49: 138-162, 1996.）。更に、ＶＥＧＦは、有意の血管透過性を誘発して（Dvorak, H.F., Detmar, M., Claffey, K.P., Nagy, J.A., van de Water, L., and Senger, D.R., (Int. Arch. Allergy Immunol., 107: 233-235, 1995; Bates, D.O., Heald, R.I., Curry, F.E. and Williams, B. J. Physiol. (Lond.), 533: 263-272, 2001）、病的血管形成に特徴的である高透過性未成熟血管網の形成を促進する。
【０００５】
ＫＤＲ単独の活性化は、内皮細胞の増殖、遊走および生存を含めたＶＥＧＦへの主要な表現型応答の全ておよび血管透過性の誘発を促進するのに充分であるということが分かった（Meyer, M., Clauss, M., Lepple-Wienhues, A., Waltenberger, J., Augustin, H.G., Ziche, M., Lanz, C., Buttner, M., Rziha, H-J., and Dehio, C., EMBO J., 18: 363-374, 1999; Zeng, H., Sanyal, S. and Mukhopadhyay, D., J. Biol. Chem., 276: 32714-32719, 2001; Gille, H., Kowalski, J., Li, B., LeCouter, J., Moffat, B, Zioncheck, T.F., Pelletier, N. and Ferrara, N., J. Biol. Chem., 276: 3222-3230, 2001）。
【０００６】
ＶＥＧＦの作用を抑制する化合物は、癌（白血病、多発性骨髄腫およびリンパ腫を含めた）、糖尿病、乾癬、関節リウマチ、カポージ肉腫、血管腫、急性および慢性の腎症、アテローム、動脈再狭窄、自己免疫疾患、急性炎症、過度の瘢痕形成および癒着、子宮内膜症、リンパ浮腫、不正子宮出血、および黄斑変性を含めた網膜血管増殖を伴う眼疾患のような、血管形成および／または増加した血管透過性に関連した疾患状態の処置に価値がある。
【０００７】
ＶＥＧＦ受容体チロシンキナーゼの阻害剤であるキナゾリン誘導体は、ＷＯ００／４７２１２号に記載されている。その化合物ＡＺＤ２１７１は、ＷＯ００／４７２１２号に示されるが（実施例２４０を参照されたい）、式Ｉ：
【０００８】
【化１】
【０００９】
を有する４−（（４−フルオロ−２−メチル−１Ｈ−インドール−５−イル）オキシ）−６−メトキシ−７−（３−（ピロリジン−１−イル）プロポキシ）キナゾリンである。
ＡＺＤ２１７１は、ＷＯ００／４７２１２号および以下に記載されている in vitro の（ａ）酵素検定および（ｂ）ＨＵＶＥＣ検定において優れた活性を示す。酵素検定における単離されたＫＤＲ（ＶＥＧＦＲ−２）およびＦｌｔ−１（ＶＥＧＦＲ−１）チロシンキナーゼ活性の阻害についてのＡＺＤ２１７１のＩＣ５０値は、それぞれ、＜２ｎＭおよび５±２ｎＭであった。ＡＺＤ２１７１は、ＶＥＧＦに刺激された内皮細胞増殖を強力に抑制するが（ＨＵＶＥＣ検定において０．４±０．２ｎＭのＩＣ５０値）、基底内皮細胞増殖を、＞１２５０倍を超える濃度においてあまり抑制しない（ＩＣ５０値は＞５００ｎＭである）。以下に記載の in vivo の（ｃ）充実性腫瘍モデルにおけるＣａｌｕ−６腫瘍異種移植片の成長は、１．５ｍｇ／ｋｇ／日、３ｍｇ／ｋｇ／日および６ｍｇ／ｋｇ／日のＡＺＤ２１７１での１日１回経口処置の２８日後に、それぞれ、４９％＊＊、６９％＊＊＊および９１％＊＊＊抑制された（Ｐ＊＊＜０．０１、Ｐ＊＊＊＜０．０００１；片側ｔ検定）。
【００１０】
薬学的に活性な化合物のより安定な形、例えば、より安定な結晶形は、商業規模での製剤化および加工に好適である。これは、用いられる形の安定性が大きいほど、圧縮などの製剤化手順の際にそれが別の形へと変換するリスクが少ないという理由のためである。これは、順次、錠剤の溶解速度、活性成分のバイオアベイラビリティーのような最終製剤の性質についてより大きい予測可能性を与える。より安定な形の活性成分を用いることは、製剤の物理的性質へのより大きい制御を可能にする。
【００１１】
ＡＺＤ２１７１遊離塩基（４−（（４−フルオロ−２−メチル−１Ｈ−インドール−５−イル）オキシ）−６−メトキシ−７−（３−（ピロリジン−１−イル）プロポキシ）キナゾリン）は、周囲条件下において結晶性一水和物である。示差走査熱量測定（ＤＳＣ）分析は、以下に記載の方法にしたがって行われたが、水の減少および融解のために、９５℃〜１７０℃の大きく広範な吸熱を示す（図１）。熱重量測定（ＴＧＡ）分析（詳細は以下に与えられる）は、８０℃〜１１５℃の間に４．０２％の重量減少を示す（図１）。カール・フィッシャー水分分析詳細は以下に与えられる）は、３．９％の数値を生じ、重量減少が全て、水分減少のためであるということを示唆している。
【００１２】
ＤＳＣの開始／ピーク温度値は、試験機毎にまたは試料毎に僅かに異なることがありうるので、引用された値は、絶対値として解釈されるべきではないということは理解されるであろう。
【００１３】
ＡＺＤ２１７１遊離塩基は、ＣｕＫａ放射線を用いて測定された次の２θ値、すなわち、１８．３および２０．８の内の少なくとも一つを与えることを特徴とする。ＡＺＤ２１７１遊離塩基は、図２のようなＸ線粉末回折図形を与えることを特徴とする。１０個の最も顕著なピークを、表１に示す。
【００１４】
【表１】
【００１５】
ＡＺＤ２１７１遊離塩基の試料を、例えば、１００℃に加熱することで脱水する場合、その試料は、非晶質になり（図３）、その後、再水和することはないが、以後、非晶質状態のままであるということが判明した。これは、ＡＺＤ２１７１遊離塩基が医薬組成物として製剤化された場合、ＡＺＤ２１７１遊離塩基は、ある種の工程、例えば、粒度減少（ミリングなど）、バルク薬物の乾燥、製剤化、製造の際に脱水されうるという理由で、問題でありうる。ＡＺＤ２１７１遊離塩基を医薬組成物として製剤化するためには、ある時点で粒度を減少させることが必要であると考えられ、これには、脱水のリスクがあり、したがって、非晶質材料の形成のリスクがあると考えられる。これは、ＡＺＤ２１７１遊離塩基一水和物の試料に、超微粉砕による粒度減少を施した後、それを、非晶質材料を探すために分析することによって調べられた。図４は、非晶質材料が、ＡＺＤ２１７１遊離塩基の粒度減少の際に実際に形成するということを示している。これは、ピークが幅広になること、および非晶質「こぶ（hump）」の形成によって示される。図４を参照されたい。非晶形または半非晶形のＡＺＤ２１７１遊離塩基は、製造上の問題および再現性のないバイオアベイラビリティーを生じることがありうる。
【００１６】
遊離塩基とは異なる形および改善された固体状態性質を有する形である別の形のＡＺＤ２１７１の識別は、本発明の課題である。
異なった形の例は、ＡＺＤ２１７１の塩である。ＷＯ００／４７２１２号において、その発明の化合物の薬学的に許容しうる塩は、このような塩を形成するのに十分に塩基性であるそれら発明の化合物の酸付加塩を包含しうるということが述べられている。このような酸付加塩は、ハロゲン化水素、特に、塩酸または臭化水素酸、または硫酸またはリン酸、またはトリフルオロ酢酸、クエン酸またはマレイン酸のような、薬学的に許容しうる陰イオンを与える無機酸または有機酸との塩を包含すると述べられている。更に、ＷＯ００／４７２１２号は、その発明の化合物が十分に酸性である場合、薬学的に許容しうる塩は、薬学的に許容しうる陽イオンを与える無機塩基または有機塩基で形成されてよいということを続けて述べている。無機塩基または有機塩基でのこのような塩は、ナトリウム塩またはカリウム塩などのアルカリ金属塩、カルシウム塩またはマグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩、アンモニウム塩、または例えば、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、ピペリジン、モルホリンまたはトリス−（２−ヒドロキシエチル）アミンとの塩を包含すると述べられている。
【００１７】
ＷＯ００／４７２１２号にある好適な塩は、塩酸塩および臭化水素酸塩、特に、塩酸塩である。
ＷＯ００／４７２１２号には、その具体的な化合物の具体的な塩が、驚くほど有益な性質を有するであろうということは、どこにも述べられていない。
【００１８】
意外にも且つ驚くべきことに、本発明者は、ここで、ＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩が、遊離塩基にも、調べられた他の塩にもまさる改善された固体状態性質を有する好都合に安定な形のＡＺＤ２１７１であるということを発見した。
【００１９】
ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩は、容易に結晶化され、きわめて結晶性で非吸湿性であり、そして１：１の薬物対対イオンの再現性のある化学量論的比率を有する。
したがって、ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩は、容易に結晶化され、きわめて結晶性で非吸湿性であり、そして約１：１の薬物対対イオンの再現性のある化学量論的比率を有する。
【００２０】
ＡＺＤ２１７１のいくつかの塩を製造したが、７種類、すなわち、マロン酸塩、コハク酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、アジピン酸塩およびリンゴ酸塩は、結晶性であることが判明した。これら７種類の塩の固体状態性質を調べたが、それら結果を表２に示す。
【００２１】
【表２】
【００２２】
「非吸湿性」という用語は、８０％ＲＨにおいて＜１％の水分を吸収することを意味する。
ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩は、驚くべきことに、結晶化することが可能であったそれら７種類の塩の内で、唯一の非吸湿性塩であり、きわめて結晶性であり、そして１：１の薬物対対イオンの再現性のある化学量論的比率を有するということで、他のものより優れていた。
【００２３】
したがって、ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩は、唯一の非吸湿性塩であり、きわめて結晶性であり、そして約１：１の薬物対対イオンの再現性のある化学量論的比率を有するということが判明した。
【００２４】
ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩は、非晶質材料を実質的に含まないので、ＡＺＤ２１７１遊離塩基よりも製剤化するのが容易であり且つ一層再現性のある投与結果を与えると予想されうる。「非晶質材料を実質的に含まない」により、非晶質材料の量が、１０％未満、好ましくは、５％未満、より好ましくは、２％未満であることを意味する。
【００２５】
ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩は、非吸湿性であり、超微粉砕などの手順の際に活性成分の重量変化に関連したいずれかの問題を予防するまたは減少させるべきである。
本発明により、ＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩を提供する。ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩は、Ａ形およびＢ形の二つの結晶形を有する。
【００２６】
本発明により、第一結晶形であるＡ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩を提供する。
ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ａ形は、ＣｕＫａ放射線を用いて測定された次の２θ値、すなわち、２１．５および１６．４の内の少なくとも一つを与えることを特徴とする。ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ａ形は、実質的には図５に示されるようなＸ線粉末回折図形を与えることを特徴とする。１０個の最も顕著なピークを、表３に示す。
【００２７】
【表３】
【００２８】
本発明により、第一結晶形であるＡ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、約２θ＝２１．５°に少なくとも一つの特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する塩を提供する。
【００２９】
本発明により、第一結晶形であるＡ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、約２θ＝１６．４°に少なくとも一つの特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する塩を提供する。
【００３０】
本発明により、第一結晶形であるＡ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、約２θ＝２１．５°および１６．４°に少なくとも二つの特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する塩を提供する。
【００３１】
本発明により、第一結晶形であるＡ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、約２θ＝２１．５°、１６．４°、２４．４°、２０．７°、２５．０°、１６．９°、１２．１°、２２．２°、１７．４°および１７．６°に特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する塩を提供する。
【００３２】
本発明により、第一結晶形であるＡ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、図５に示されるＸ線粉末回折図形と実質的に同じＸ線粉末回折図形を有する塩を提供する。
本発明により、第一結晶形であるＡ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、２θ＝２１．５°プラスまたはマイナス０．５°２θに少なくとも一つの特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する塩を提供する。
【００３３】
本発明により、第一結晶形であるＡ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、２θ＝１６．４°プラスまたはマイナス０．５°２θに少なくとも一つの特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する塩を提供する。
【００３４】
本発明により、第一結晶形であるＡ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、２θ＝２１．５°および１６．４°（これら値は、プラスまたはマイナス０．５°２θであってよい）に少なくとも二つの特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する塩を提供する。
【００３５】
本発明により、第一結晶形であるＡ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、２θ＝２１．５°、１６．４°、２４．４°、２０．７°、２５．０°、１６．９°、１２．１°、２２．２°、１７．４°および１７．６°（これら値は、プラスまたはマイナス０．５°２θであってよい）に特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する塩を提供する。
【００３６】
本発明により、第一結晶形であるＡ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、２θ＝２１．５°に少なくとも一つの特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する塩を提供する。
【００３７】
本発明により、第一結晶形であるＡ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、２θ＝１６．４°に少なくとも一つの特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する塩を提供する。
【００３８】
本発明により、第一結晶形であるＡ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、２θ＝２１．５°および１６．４°に少なくとも二つの特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する塩を提供する。
【００３９】
本発明により、第一結晶形であるＡ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、２θ＝２１．５°、１６．４°、２４．４°、２０．７°、２５．０°、１６．９°、１２．１°、２２．２°、１７．４°および１７．６°に特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する塩を提供する。
【００４０】
本発明により、第一結晶形であるＡ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、図５に示されるようなＸ線粉末回折図形を有する塩を提供する。
ＤＳＣ分析は、ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ａ形が、１９８．３℃に融解開始および２００．０８℃にピークを有する高融点固体であることを示している（図６）。
【００４１】
したがって、ＤＳＣ分析は、ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ａ形が、約１９８．３℃に融解開始および約２００．０８℃にピークを有する高融点固体であることを示している。
本発明により、第二結晶形であるＢ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩を提供する。
【００４２】
ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ｂ形は、ＣｕＫａ放射線を用いて測定された次の２θ値、すなわち、２４．２および２２．７の内の少なくとも一つを与えることを特徴とする。ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ｂ形は、実質的には図８に示されるようなＸ線粉末回折図形を与えることを特徴とする。１０個の最も顕著なピークを、表４に示す。
【００４３】
【表４】
【００４４】
本発明により、第二結晶形であるＢ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、約２θ＝２４．２°に少なくとも一つの特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する塩を提供する。
【００４５】
本発明により、第二結晶形であるＢ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、約２θ＝２２．７°に少なくとも一つの特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する塩を提供する。
【００４６】
本発明により、第二結晶形であるＢ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、約２θ＝２４．２°および２２．７°に少なくとも二つの特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する塩を提供する。
【００４７】
本発明により、第二結晶形であるＢ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、約２θ＝２４．２°、２２．７°、１５．７°、１２．０°、２７．１°、２５．０°、１７．７°、１５．０°、２３．１°および１２．６°に特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する塩を提供する。
【００４８】
本発明により、第二結晶形であるＢ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、図８に示されるＸ線粉末回折図形と実質的に同じＸ線粉末回折図形を有する塩を提供する。
本発明により、第二結晶形であるＢ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、２θ＝２４．２°プラスまたはマイナス０．５°２θに少なくとも一つの特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する塩を提供する。
【００４９】
本発明により、第二結晶形であるＢ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、２θ＝２２．７°プラスまたはマイナス０．５°２θに少なくとも一つの特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する塩を提供する。
【００５０】
本発明により、第二結晶形であるＢ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、２θ＝２４．２°および２２．７°（これら値は、プラスまたはマイナス０．５°２θであってよい）に少なくとも二つの特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する塩を提供する。
【００５１】
本発明により、第二結晶形であるＢ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、２θ＝２４．２°、２２．７°、１５．７°、１２．０°、２７．１°、２５．０°、１７．７°、１５．０°、２３．１°および１２．６°（これら値は、プラスまたはマイナス０．５°２θであってよい）に特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する塩を提供する。
【００５２】
本発明により、第二結晶形であるＢ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、２θ＝２４．２°に少なくとも一つの特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する塩を提供する。
【００５３】
本発明により、第二結晶形であるＢ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、２θ＝２２．７°に少なくとも一つの特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する塩を提供する。
【００５４】
本発明により、第二結晶形であるＢ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、２θ＝２４．２°および２２．７°に少なくとも二つの特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する塩を提供する。
【００５５】
本発明により、第二結晶形であるＢ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、２θ＝２４．２°、２２．７°、１５．７°、１２．０°、２７．１°、２５．０°、１７．７°、１５．０°、２３．１°および１２．６°に特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する塩を提供する。
【００５６】
本発明により、第二結晶形であるＢ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、図８に示されるようなＸ線粉末回折図形を有する塩を提供する。
ＤＳＣ分析は、ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ｂ形が、１９４．４３℃に融解開始および１９５．９７℃にピークを有する高融点固体であることを示している（図９）。
【００５７】
したがって、ＤＳＣ分析は、ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ｂ形が、約１９４．４３℃に融解開始および約１９５．９７℃にピークを有する高融点固体であることを示している。
Ｂ形は、Ａ形に関して準安定性である（Ｂ形の融点および融解熱は、Ａ形のそれらより低い）。Ａ形は、熱力学的に一層安定な形である。Ａ形およびＢ形の混合物は、メタノール中において４０℃で４日間スラリーにすると、Ａ形へと変換する（図１０）。
【００５８】
Ａ形は、Ｂ形より好適である。
ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩は、非吸湿性であり、８０％相対湿度において＜１％の水分を吸収する（図７）。
【００５９】
ＮＭＲ詳細は、実施例１のマレイン酸塩製造後に与えられており、１：１の比率の化学量論データについて示している。
本発明の別の側面により、ＡＺＤ２１７１の二マレイン酸塩を提供する。二マレイン酸塩は、２モルのマレイン酸を１モルのＡＺＤ２１７１遊離塩基に加えることによって形成することができる。
【００６０】
本発明が、ＡＺＤ２１７１遊離塩基、またはＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ａ形またはＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ｂ形の結晶形に関すると述べられている場合、その結晶化度は、好都合には、約６０％を超える、より好都合には、約８０％を超える、好ましくは、約９０％を超える、そしてより好ましくは、約９５％を超える。最も好ましくは、結晶化度は約９８％を超える。
【００６１】
ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ａ形およびＢ形は、図５および図８にそれぞれ示されるＸ線粉末回折図形と実質的に同じＸ線粉末回折図形を与え、そして実質的には、表３および表４にそれぞれ示される１０個の最も顕著なピーク（２θ値角度）を有する。Ｘ線粉末回折図形の２θ値は、試験機毎にまたは試料毎に僅かに異なることがありうるので、引用された値は、絶対値として解釈されるべきではないということは理解されるであろう。
【００６２】
Ｘ線粉末回折図形は、測定条件（用いられる装置または試験機など）に依存して一つまたはそれを超える測定誤差を有するが、入手することができるということが知られている。具体的には、概して、Ｘ線粉末回折図形の強度は、測定条件に依存して変動することがありうるということが知られている。したがって、本発明のＡＺＤ２１７１マレイン酸塩形は、図５および図８に示されるＸ線粉末回折図形と同一のＸ線粉末回折図形を与える結晶、および本発明の範囲内にある図５および図８に示されるのと実質的に同じＸ線粉末回折図形を与えるいずれかの結晶に制限されるわけではない。Ｘ線粉末回折の当業者は、Ｘ線粉末回折図形の実質的同一性を判断することができる。
【００６３】
Ｘ線粉末回折の当業者は、ピークの相対強度が、例えば、試料の分析に影響することがありうる約３０ミクロンを超えるサイズの粒子および統一されていないアスペクト比によって影響されることがありうるということを理解するであろう。当業者は、更に、反射位置が、回折計中の試料がある正確な高さおよび回折計のゼロ検定によって影響されることがありうるということを理解するであろう。試料表面の平坦さも、僅かに作用することがありうる。したがって、提示された回折図形データを、絶対値と見なすことはない。（Jenkins, R & Snyder, R.L. ‘Introduction to X-Ray Powder Diffractometry’ John Wiley & Sons 1996; Bunn, C.W. (1948), Chemical Crystallography, Clarendon Press, London; Klug, H. P. & Alexander, L. E. (1974), X-Ray Diffraction Procedures）。
【００６４】
概して、Ｘ線粉末ディフラクトグラムにおける回折角の測定誤差は、約５％またはそれ未満、具体的には、プラスまたはマイナス０．５°２θであり、このような程度の測定誤差は、図２、図３、図４、図５、図８および図１０のＸ線粉末回折図形を考える場合、および表１、表３および表４を読み取る場合、考慮されるべきである。更に、強度は、実験条件および試料製造（好適な配向）に依存して変動することがありうるということは理解されるはずである。
【００６５】
疑わしさを免れるために、「ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩」および「ＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩」などの用語は、ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩の各々のおよびあらゆる形を意味するが、「ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ａ形」は、Ａ形として知られる具体的な結晶形を意味し、「ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ｂ形」は、Ｂ形として知られる具体的な結晶形を意味する。
【００６６】
本発明のもう一つの側面により、医薬組成物であって、本明細書中の前に定義のＡＺＤ２１７１マレイン酸塩を、薬学的に許容しうる賦形剤または担体と一緒に含む医薬組成物を提供する。
【００６７】
その組成物は、経口投与用に（例えば、錠剤、舐剤、硬または軟カプセル剤、水性または油状の懸濁剤、乳剤、分散性の散剤または顆粒剤、シロップ剤またはエリキシル剤として）、吸入による投与に（例えば、微粉散剤または液状エアゾル剤として）、吹入による投与に（例えば、微粉散剤として）、非経口注射用に（例えば、静脈内、皮下、筋肉内、血管内または注入投与用の滅菌液剤、懸濁剤または乳剤として）、局所投与用に（例えば、クリーム剤、軟膏剤、ゲル剤、または水性または油状の液剤または懸濁剤として）、または直腸投与用に（例えば、坐剤として）適した形であってよい。好ましくは、ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩は経口投与される。概して、上の組成物は、慣用的な賦形剤を用いて慣用的な方式で製造することができる。
【００６８】
本発明のそれら組成物は、好都合には、単位剤形で与えられる。ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩は、通常は、温血動物に、その動物の体表面積１平方メートルにつき１〜５０ｍｇの範囲内、例えば、ヒトの場合、約０．０３〜１．５ｍｇ／ｋｇの単位用量で投与されるであろう。例えば、０．０１〜１．５ｍｇ／ｋｇ、例えば、０．０５〜０．７５ｍｇ／ｋｇ、好ましくは、０．０３〜０．５ｍｇ／ｋｇの範囲内の単位用量が考えられるが、これは、通常は、治療的有効量である。錠剤またはカプセル剤などの単位剤形は、通常、例えば、１〜５０ｍｇの活性成分を含有するであろう。好ましくは、０．０３〜０．５ｍｇ／ｋｇの範囲内の１日用量を用いる。特定の疾患状態の治療的または予防的処置に必要な用量サイズは、必然的に、処置される宿主、投与経路および処置されている疾患の重症度に依存して異なるであろう。したがって、最適投与量は、いずれか特定の患者を処置している医療の実務者が決定してよい。
【００６９】
本発明のもう一つの側面により、療法によるヒトまたは動物体の処置方法で用いるための、本明細書中の前に定義のＡＺＤ２１７１マレイン酸塩を提供する。
本発明のもう一つの特徴は、薬剤として用いるための、本明細書中の前に定義のＡＺＤ２１７１マレイン酸塩、好都合には、ヒトなどの温血動物で抗血管形成作用および／または血管透過性減少作用を生じるための薬剤として用いるための、本明細書中の前に定義のＡＺＤ２１７１マレイン酸塩である。
【００７０】
したがって、本発明のもう一つの側面により、ヒトなどの温血動物での抗血管形成作用および／または血管透過性減少作用の生成に用いるための薬剤の製造における、本明細書中の前に定義のＡＺＤ２１７１マレイン酸塩の使用を提供する。
【００７１】
本発明のもう一つの特徴により、抗血管形成作用および／または血管透過性減少作用を生じる処置を必要としているヒトなどの温血動物において抗血管形成作用および／または血管透過性減少作用を生じる方法であって、その動物に、有効量の本明細書中の前に定義のＡＺＤ２１７１マレイン酸塩を投与することを含む方法を提供する。
【００７２】
ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩は、抗血管形成薬および／または血管透過性減少性薬であり、単独療法として用いることができし、またはＡＺＤ２１７１マレイン酸塩に加えて、一つまたはそれを超える他の物質および／または処置を伴うことができる。このような共同処置は、その処置の個々の成分の同時の、逐次的なまたは別々の投与によって達成することができる。医学腫瘍学の分野において、各々の癌患者を処置するのに、異なった形の処置の組合せを用いることは、通常の慣例である。医学腫瘍学において、ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩に加えたこのような共同処置の一つまたは複数の他の成分は、外科手術、放射線療法または化学療法であってよい。このような化学療法は、次の３種類の主なカテゴリーの治療薬を包含することができる。
【００７３】
（ｉ）他の抗血管形成薬であって、血管内皮増殖因子の作用を抑制するもの（例えば、抗血管内皮細胞増殖因子抗体ベヴァシズマブ（bevacizumab）［AvastinＴＭ］、および本明細書中の前に定義のものとは異なった機構によって作用するもの（例えば、リノマイド（linomide）、インテグリンαｖβ３機能の阻害剤、アンギオスタチン（angiostatin）、ラゾキシン（razoxin）、サリドマイド）、および血管標的指向薬（例えば、リン酸コンブレタスタチン（combretastatin phosphate）、および国際特許出願ＷＯ００／４０５２９号、ＷＯ００／４１６６９号、ＷＯ０１／９２２２４号、ＷＯ０２／０４４３４号およびＷＯ０２／０８２１３号に開示された化合物、および文書の開示がそのまま本明細書中に援用される国際特許出願公開ＷＯ９９／０２１６６号に記載の血管損傷性薬（例えば、Ｎ−アセチルコルチノール−Ｏ−ホスフェート））を含めたものなど；
（ii）細胞分裂抑制薬であって、抗エストロゲン（例えば、タモキシフェン、トレミフェン（toremifene）、ラロキシフェン（raloxifene）、ドロロキシフェン（droloxifene）、ヨードキシフェン（iodoxyfene））、エストロゲン受容体ダウンレギュレーター（例えば、フルヴェストラント（fulvestrant））、プロゲストゲン（例えば、酢酸メゲストロール）、アロマターゼ阻害剤（例えば、アナストロゾール（anastrozole）、レトラゾール（letrazole）、ボラゾール（vorazole）、エクセメスタン（exemestane））、抗プロゲストゲン、抗アンドロゲン（例えば、フルタミド、ニルタミド（nilutamide）、ビカルタミド（bicalutamide）、酢酸シプロテロン）、ＬＨＲＨアゴニストおよびアンタゴニスト（例えば、酢酸ゴセレリン、ルプロリド（luprolide）、ブセレリン（buserelin））、５α−レダクターゼの阻害剤（例えば、フィナステリド）、抗浸潤薬（例えば、マリマスタト（marimastat）のようなメタロプロテイナーゼ阻害剤およびウロキナーゼプラスミノーゲンアクチベーター受容体機能の阻害剤）、および増殖因子機能の阻害剤（このような増殖因子には、例えば、血小板由来増殖因子および肝細胞増殖因子が含まれる）であって、増殖因子抗体、増殖因子受容体抗体（例えば、抗ｅｒｂｂ２抗体トラスツズマブ［HerceptinＴＭ］および抗ｅｒｂｂ１抗体セツキシマブ（cetuximab）［Ｃ２２５］）、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、例えば、上皮増殖因子ファミリーの阻害剤（例えば、Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−メトキシ−６−（３−モルホリノプロポキシ）キナゾリン−４−アミン（ゲフィチニブ（gefitinib），ＡＺＤ１８３９）、Ｎ−（３−エチニルフェニル）−６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）キナゾリン−４−アミン（エルロチニブ（erlotinib），ＯＳＩ−７７４）および６−アクリルアミド−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−（３−モルホリノプロポキシ）キナゾリン−４−アミン（ＣＩ １０３３）などのＥＧＦＲファミリーチロシンキナーゼ阻害剤）およびセリン／トレオニンキナーゼ阻害剤）が含まれるこのような阻害剤など；および
（iii）医学腫瘍学で用いられるような増殖抑制薬／抗腫瘍薬およびそれらの組合せであって、代謝拮抗薬（例えば、メトトレキサートのような葉酸拮抗薬、５−フルオロウラシルのようなフルオロピリミジン類、テガフル、プリンおよびアデノシン類似体、シトシンアラビノシド）；抗腫瘍抗生物質（例えば、アドリアマイシン、ブレオマイシン、ドキソルビシン、ダウノマイシン、エピルビシンおよびイダルビシン（idarubicin）のようなアントラサイクリン系、マイトマイシンＣ、ダクチノマイシン、ミトラマイシン）；白金誘導体（例えば、シスプラチン、カルボプラチン）；アルキル化剤（例えば、ナイトロジェンマスタード、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン、シクロホスファミド、イホスファミド、ニトロソ尿素、チオテパ）；有糸分裂阻止薬（例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、ビノレルビン（vinorelbine）のようなビンカアルカロイド類、およびタキソールおよびタキソテールのようなタキソイド類（taxoids））；トポイソメラーゼ阻害剤（例えば、エトポシドおよびテニポシドのようなエピポドフィロトキシン類、アムサクリン、トポテカン（topotecan）、カンプトテシン、そして更に、イリノテカン（irinotecan））；更に、酵素（例えば、アスパラギナーゼ）；およびチミジル酸シンターゼ阻害剤（例えば、ラルチトレキセド（raltitrexed））のようなもの。
そして追加のタイプの化学療法薬には、次が含まれる。
【００７４】
（iv）生体応答調節剤（例えば、インターフェロン）；
（ｖ）抗体（例えば、エドレコロマブ（edrecolomab））；
（vi）アンチセンス療法、例えば、ＩＳＩＳ２５０３、抗ｒａｓアンチセンスのような、上に挙げられた標的に向けられているもの；
（vii）遺伝子治療アプローチであって、例えば、異常ｐ５３または異常ＢＲＣＡ１またはＢＲＣＡ２のような異常遺伝子を置き換えるアプローチ；シトシンデアミナーゼ、チミジンキナーゼまたは細菌ニトロレダクターゼ酵素を用いたものなどのＧＤＥＰＴ（遺伝子に支配される酵素プロドラッグ療法（gene-directed enzyme pro-drug therapy））アプローチ；および多剤耐性遺伝子治療のような、化学療法または放射線療法への患者耐性を増加させるアプローチを含めたもの；および
（viii）免疫療法アプローチであって、例えば、インターロイキン２、インターロイキン４または顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子などのサイトカインでのトランスフェクションのような、患者腫瘍細胞の免疫原性を増加させる ex-vivo および in vivo アプローチ；Ｔ細胞アネルギーを減少させるアプローチ；サイトカインでトランスフェクションされた樹状細胞のような、トランスフェクションされた免疫細胞を用いたアプローチ；サイトカインでトランスフェクションされた腫瘍細胞系を用いたアプローチ；および抗イディオタイプ抗体を用いたアプローチを含めたもの。
【００７５】
例えば、このような共同処置（conjoint treatment）は、本明細書中の前に定義のＡＺＤ２１７１マレイン酸塩と、ＷＯ９９／０２１６６号に記載のＮ−アセチルコルチノール−Ｏ−ホスフェート（ＷＯ９９／０２１６６号の実施例１）のような血管標的指向薬の、同時の、逐次的なまたは別々の投与によって達成することができる。
【００７６】
ＷＯ０１／７４３６０号により、抗血管形成薬は、抗高血圧症薬と組み合わせることができるということが知られている。本発明の塩も、抗高血圧症薬との組合せで投与することができる。抗高血圧症薬は、血圧を低下させる物質であり、本明細書中に援用されるＷＯ０１／７４３６０号を参照されたい。
【００７７】
したがって、本発明により、血管形成に関連した疾患状態の処置方法であって、ヒトなどの温血動物への、本明細書中の前に定義のＡＺＤ２１７１マレイン酸塩と抗高血圧症薬との組合せの有効量の投与を含む方法を提供する。
【００７８】
本発明のもう一つの特徴により、ヒトなどの温血動物の血管形成に関連した疾患状態の処置用の薬剤の製造に用いるための、本明細書中の前に定義のＡＺＤ２１７１マレイン酸塩と抗高血圧症薬との組合せの使用を提供する。
【００７９】
本発明のもう一つの特徴により、ヒトなどの温血動物の血管形成に関連した疾患状態の処置用の医薬組成物であって、本明細書中の前に定義のＡＺＤ２１７１マレイン酸塩および抗高血圧症薬を含む医薬組成物を提供する。
【００８０】
本発明のもう一つの側面により、ヒトなどの温血動物において抗血管形成作用および／または血管透過性減少作用を生じる方法であって、その動物に、有効量の本明細書中の前に定義のＡＺＤ２１７１マレイン酸塩および抗高血圧症薬を投与することを含む方法を提供する。
【００８１】
本発明のもう一つの側面により、ヒトなどの温血動物で抗血管形成作用および／または血管透過性減少作用を生じる薬剤の製造のための、本明細書中の前に定義のＡＺＤ２１７１マレイン酸塩と抗高血圧症薬との組合せの使用を提供する。
【００８２】
好ましい抗高血圧症薬は、カルシウムチャンネル遮断薬、アンギオテンシン変換酵素阻害剤（ＡＣＥ阻害剤）、アンギオテンシンII受容体アンタゴニスト（Ａ−IIアンタゴニスト）、利尿薬、βアドレナリン受容体遮断薬（β遮断薬）、血管拡張薬およびαアドレナリン受容体遮断薬（α遮断薬）である。具体的な抗高血圧症薬は、カルシウムチャンネル遮断薬、アンギオテンシン変換酵素阻害剤（ＡＣＥ阻害剤）、アンギオテンシンII受容体アンタゴニスト（Ａ−IIアンタゴニスト）およびβアドレナリン受容体遮断薬（β遮断薬）、特に、カルシウムチャンネル遮断薬である。
【００８３】
上述のように、ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩は、その抗血管形成作用および／または血管透過性減少作用について興味深い。ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩は、癌、糖尿病、乾癬、関節リウマチ、カポージ肉腫、血管腫、リンパ浮腫、急性および慢性の腎症、アテローム、動脈再狭窄、自己免疫疾患、急性炎症、過度の瘢痕形成および癒着、子宮内膜症、不正子宮出血、および加齢性黄斑変性を含めた網膜血管増殖を伴う眼疾患を含めた広範囲の疾患状態に有用であると考えられる。癌は、いずれの組織にも影響することがありうるが、それには、白血病、多発性骨髄腫およびリンパ腫が含まれる。具体的には、本発明のこのような化合物は、例えば、結腸、乳房、前立腺、肺および皮膚の原発性および再発性の充実性腫瘍の成長を好都合に遅らせると考えられる。より具体的には、本発明のこのような化合物は、白血病、多発性骨髄腫およびリンパ腫を含めた、ＶＥＧＦに関連したいずれかの形の癌を抑制する、そして更には、例えば、結腸、乳房、前立腺、肺、脳、外陰部および皮膚のある種の腫瘍を含めた、例えば、ＶＥＧＦに関連している原発性および再発性の充実性腫瘍、特に、成長および拡散についてＶＥＧＦに有意に依存している腫瘍の成長を抑制すると考えられる。
【００８４】
治療薬中でのそれらの使用に加えて、本明細書中の前に定義のＡＺＤ２１７１マレイン酸塩は、更に、新しい治療薬の追求の一部分として、ネコ、イヌ、ウサギ、サル、ラットおよびマウスなどの実験動物でのＶＥＧＦ受容体チロシンキナーゼ活性の阻害剤の作用を評価するための in vitro および in vivo 試験システムの開発および規格化において薬理学的手段として有用である。
【００８５】
ＷＯ００／４７２１２号に記載され且つＡＺＤ２１７１を調べるのに用いられた検定は、次の通りである。
（ａ）in vitro 受容体チロシンキナーゼ阻害試験
この検定は、チロシンキナーゼ活性を抑制する試験化合物の能力を決定する。ＶＥＧＦ、ＦＧＦまたはＥＧＦ受容体細胞質ドメインをコードしているＤＮＡは、全遺伝子合成（total gene synthesis）（Edwards M, International Biotechnology Lab 5(3), 19-25, 1987）によってまたはクローニングによって得ることができる。次に、これらを、適する発現系において発現させて、チロシンキナーゼ活性を有するポリペプチドを得ることができる。例えば、ＶＥＧＦ、ＦＧＦおよびＥＧＦ受容体細胞質ドメインを、昆虫細胞中の組換えタンパク質の発現によって得たが、それらは、固有のチロシンキナーゼ活性を示すことが判明した。ＶＥＧＦ受容体Ｆｌｔ−１（Genbank 受託番号Ｘ５１６０２）の場合、Shibuya et al（Oncogene, 1990, 5: 519-524）によって記載された、細胞質ドメインの大部分をコードし、メチオニン７８３で開始し、そして終止コドンを包含している１．７ｋｂ ＤＮＡフラグメントを、ｃＤＮＡより単離し、バキュロウイルストランスプレースメントベクター（transplacement vector）（例えば、ｐＡｃＹＭ１（The Baculovirus Expression System: A Laboratory Guide, L.A. King and R. D. Possee, Chapman and Hall, 1992 を参照されたい）またはｐＡｃ３６０またはｐＢｌｕｅＢａｃＨｉｓ（Invitrogen Corporation より入手可能））中にクローン化した。この組換えコンストラクトを、昆虫細胞（例えば、スポドプテラ・フルジペルダ２１（Spodoptera frugiperda 21）（Ｓｆ２１））中にウイルスＤＮＡ（例えば、Pharmingen BaculoGold）と共トランスフェクションして、組換えバキュロウイルスを製造した。（組換えＤＮＡ分子のアセンブリー方法および組換えバキュロウイルスの製造および使用についての詳細は、標準的な教本、例えば、Sambrook et al, 1989, Molecular cloning - A Laboratory Manual, 2nd edition, Cold Spring Harbour Laboratory Press and O'Reilly et al, 1992, Baculovirus Expression Vectors - A Laboratory Manual, W. H. Freeman and Co, New York に見出されうる）。ＫＤＲ（Genbank 受託番号Ｌ０４９４７）について、メチオニン８０６より開始する細胞質フラグメントを、同様の方式でクローン化し且つ発現させた。
【００８６】
ｃＦｌｔ−１チロシンキナーゼ活性の発現について、Ｓｆ２１細胞に、プラーク純粋（plaque-pure）ｃＦｌｔ−１組換えウイルスを３の感染多重度で感染させ、４８時間後に採取した。採取された細胞を、氷冷リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）（１０ｍＭリン酸ナトリウムｐＨ７．４、１３８ｍＭ塩化ナトリウム、２．７ｍＭ塩化カリウム）で洗浄後、氷冷ＨＮＴＧ／ＰＭＳＦ（２０ｍＭ Hepes ｐＨ７．５、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、１０％ｖ／ｖグリセロール、１％ｖ／ｖ Triton Ｘ１００、１．５ｍＭ塩化マグネシウム、１ｍＭエチレングリコールビス（βアミノエチルエーテル）Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（ＥＧＴＡ）、１ｍＭ ＰＭＳＦ（フェニルメチルスルホニルフルオリド）；ＰＭＳＦは、新たに調製されたメタノール中１００ｍＭ溶液より、使用直前に加える）中に、１０００万個の細胞につき１ｍｌのＨＮＴＧ／ＰＭＳＦを用いて再懸濁させた。その懸濁液を、４℃において１３，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、上澄み（酵素原液）を取り出し、−７０℃においてアリコートで貯蔵した。酵素原液の新しいバッチ各々を、検定において、酵素希釈剤（１００ｍＭ Hepes ｐＨ７．４、０．２ｍＭオルトバナジン酸ナトリウム、０．１％ｖ／ｖ Triton Ｘ１００、０．２ｍＭジチオトレイトール）での稀釈によって滴定した。典型的なバッチについて、原液酵素を酵素希釈剤で１／２０００に稀釈し、そして５０μｌの希薄酵素を、各々の検定ウェルに用いる。
【００８７】
基質溶液の原液を、チロシンを含有するランダムコポリマー、例えば、ポリ（Ｇｌｕ，Ａｌａ，Ｔｙｒ）６：３：１（Sigma Ｐ３８９９）より調製し、ＰＢＳ中の１ｍｇ／ｍｌ原液として−２０℃で貯蔵し、そしてプレートコーティング用にＰＢＳで１／５００に稀釈した。
【００８８】
検定前日に、１００μｌの稀釈された基質溶液を、検定プレート（Nunc maxisorp ９６ウェルイムノプレート）の全ウェル中に分配し、それらを密封し、４℃で一晩放置した。
検定当日に、その基質溶液を捨て、そして検定プレートウェルを、ＰＢＳＴ（０．０５％ｖ／ｖ Tween ２０を含有するＰＢＳ）で１回および５０ｍＭ Hepes ｐＨ７．４で１回洗浄した。
【００８９】
試験化合物を、１０％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）で稀釈し、そして２５μｌの稀釈された化合物を、洗浄された検定プレートのウェルに移した。「全」対照ウェルは、化合物の代わりに１０％ＤＭＳＯを含有した。８μＭアデノシン−５’−三リン酸（ＡＴＰ）を含有する４０ｍＭ塩化マンガン（II）２５マイクロリットルを、ＡＴＰ不含の塩化マンガン（II）が入った「ブランク」対照ウェルを除く全ての試験ウェルに加えた。反応を開始するために、５０μｌの新たに稀釈された酵素を各ウェルに加え、それらプレートを室温で２０分間インキュベートした。次に、液体を捨て、それらウェルをＰＢＳＴで２回洗浄した。０．５％ｗ／ｖウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含有するＰＢＳＴで１／６０００に稀釈されたマウスＩｇＧ抗ホスホチロシン抗体（Upstate Biotechnology Inc. 製品０５−３２１）１００マイクロリットルを、各ウェルに加え、そしてプレートを室温で１時間インキュベート後、液体を捨て、ウェルをＰＢＳＴで２回洗浄した。０．５％ｗ／ｖＢＳＡを含有するＰＢＳＴで１／５００に稀釈された西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）結合ヒツジ抗マウスＩｇ抗体（Amersham 製品ＮＸＡ９３１）１００マイクロリットルを加え、そしてプレートを室温で１時間インキュベート後、液体を捨て、ウェルをＰＢＳＴで２回洗浄した。５０ｍｌの新たに調製された５０ｍＭリン酸・クエン酸緩衝液ｐＨ５．０＋０．０３％過ホウ酸ナトリウム（１００ｍｌの蒸留水につき１個の過ホウ酸ナトリウム含有リン酸・クエン酸緩衝剤（ＰＣＳＢ）カプセル（Sigma Ｐ４９２２）で製造される）中に１個の５０ｍｇＡＢＴＳ錠剤（Boehringer １２０４ ５２１）を用いて新たに調製された２，２’−アジノビス（３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸）（ＡＢＴＳ）溶液１００マイクロリットルを、各ウェルに加えた。次に、プレートを、プレート読み取り用分光光度計を用いて４０５ｎｍで測定される「全」対照ウェルの光学濃度値が約１．０になるまで、室温で２０〜６０分間インキュベートした。「ブランク」（ＡＴＰ不含）および「全」（化合物不含）対照値を用いて、酵素活性の５０％阻害を与える試験化合物の稀釈範囲を決定した。
【００９０】
（ｂ）in vitro ＨＵＶＥＣ増殖検定
この検定は、増殖因子に刺激されたヒト臍静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）の増殖を抑制する試験化合物の能力を決定する。
【００９１】
ＨＵＶＥＣ細胞を、ＭＣＤＢ１３１（Gibco ＢＲＬ）＋７．５％ｖ／ｖウシ胎児血清（ＦＣＳ）中で単離し、９６ウェルプレート中、ＭＣＤＢ１３１＋２％ｖ／ｖＦＣＳ＋３μｇ／ｍｌヘパリン＋１μｇ／ｍｌヒドロコルチゾン中において１０００個／ウェルの細胞濃度で（２〜８継代で）培養した。最低４時間の後、それらに、ＶＥＧＦ（３ｎｇ／ｍｌ）および化合物を投与した。次に、それら培養物を、３７℃において７．５％ＣＯ２で４日間インキュベートした。４日目に、培養物に、１μＣｉ／ウェルのトリチウム化チミジン（Amersham 製品ＴＲＡ６１）を短時間暴露し、そして４時間インキュベートした。細胞を、９６ウェルプレートハーベスター（Tomtek）を用いて採取後、トリチウムの取込みについて Beta プレートカウンターで検定した。ｃｐｍとして表される細胞中への放射能の取込みを用いて、増殖因子に刺激された細胞増殖の化合物による抑制を測定した。この方法を、更に、基礎的ＨＵＶＥＣ成長（すなわち、外因性ＶＥＧＦの添加を伴わない、ＭＣＤＢ１３１＋２％ｖ／ｖＦＣＳ＋３μｇ／ｍｌヘパリン＋１μｇ／ｍｌヒドロコルチゾン中の内皮細胞増殖）に対する化合物作用を評価するのに用いた。
【００９２】
（ｃ）in vivo 充実性腫瘍疾患モデル
この試験は、充実性腫瘍成長を抑制する化合物の能力を測定する。
ＣａＬｕ−６腫瘍異種移植片を、雌無胸腺 Swiss ｎｕ／ｎｕマウスの側腹に、血清不含培地中の５０％（ｖ／ｖ）Matrigel 溶液１００μｌ中に１ｘ１０６個／マウスのＣａｌｕ−６細胞の皮下注射によって樹立した。細胞植込みから１０日後、マウスを８〜１０の群に分けて、同等の群平均体積に達するようにした。腫瘍を、バーニアカリパスを用いて測定し、そして体積を、（ｌｘｗ）ｘO（ｌｘｗ）ｘ（π／６）（式中、ｌは最長径であり、そしてｗは、その最長に垂直の直径である）として計算した。試験化合物を、１日１回、最低２１日間経口投与し、対照動物には、化合物用希釈剤を与えた。腫瘍を週２回測定した。成長阻害レベルを、対照群対被処置群の平均腫瘍体積の比較により、Student Ｔ検定および／または Mann-Whitney Rank Sum Test を用いて計算した。化合物処置の阻害作用は、ｐ＜０．０５の場合に有意とみなした。
【００９３】
本明細書中の前に定義のＡＺＤ２１７１マレイン酸塩は、化学的関連化合物の製造に応用可能であることが知られているいずれかの方法によって製造することができる。このような方法には、例えば、本明細書中に全て援用される国際特許出願ＷＯ００／４７２１２号に示されたものが含まれる。このような方法には、更に、例えば、固相合成が含まれる。このような方法は、本発明のもう一つの特徴として提供され、以下に記載の通りである。必要な出発物質は、有機化学の標準法によって得ることができる。ＡＺＤ２１７１遊離塩基は、ＷＯ００／４７２１２号に記載のいずれかの方法にしたがって製造することができる。ＷＯ００／４７２１２号の具体的な実施例２４０を参照されたい。或いは、必要な出発物質は、有機学者の常套技術の範囲内である、示されたのと同様の手順によって入手可能である。
【００９４】
次の方法（ａ）、（ｂ）および（ｃ）は、本発明の追加の特徴を構成している。
ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ａ形の合成
（ａ）このような方法は、本発明のもう一つの側面を提供し、そして例えば、
（ｉ）ＡＺＤ２１７１遊離塩基を有機溶媒中に溶解させて溶液を形成し；
（ii）マレイン酸の水溶液を加え、またはマレイン酸の有機溶媒中の溶液を加え；
（iii）自然核生成を生じさせ；
（iv）場合により、そのように形成されたＡＺＤ２１７１のＡ形およびＢ形の結晶性混合物を単離し；
（ｖ）その混合物を、溶媒、例えば、メタノール中で、（Ｘ線粉末回折によって確認されうるように）全てのＡＺＤ２１７１マレイン酸塩がＡ形になるまでスラリーにし、例えば、これは４日を要することがあり；そして
（vi）そのように形成された結晶性固体を単離する
工程を含む。
【００９５】
（ｂ）別のこのような方法は、本発明のもう一つの側面を提供し、そして例えば、
（ｉ）ＡＺＤ２１７１遊離塩基を有機溶媒中に溶解させて溶液を形成し；
（ii）マレイン酸の水溶液を加え、またはマレイン酸の有機溶媒中の溶液を加え；
（iii）溶液を、例えば、加熱することまたは追加の溶媒を加えることによって得、そしてＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ａ形の種結晶を加えて、ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ａ形の結晶化を開始させ；そして
（iv）そのように形成された結晶性固体を単離する
工程を含む。
【００９６】
（ａ）および（ｂ）の項目（ｉ）について、混合物は、必要ならば、溶解が達せられるまで加熱して還流させてよい。或いは、混合物は、例えば、溶媒の還流温度未満の温度に加熱してよいが、但し、ほとんど全ての固体材料の溶解が達せられたという条件付きである。少量の不溶性材料は、加温された混合物の濾過によって除去することができるということは理解されるであろう。
【００９７】
（ａ）および（ｂ）の項目（ｉ）について、有機溶媒は、好ましくは、アルコール、例えば、メタノールまたはイソプロパノールである。
（ａ）および（ｂ）の項目（ii）について、有機溶媒は、好ましくは、アルコール、例えば、メタノールである。
【００９８】
（ｃ）ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ｂ形の合成
このような方法は、本発明のもう一つの側面を提供し、そして例えば、
（ｉ）ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩を有機溶媒中に溶解させて溶液を形成し；
（ii）その溶液を、ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩が、ＮＭＰ中の場合より低い溶解度を有する溶媒、例えば、トルエンまたは酢酸エチルに加え；
（iii）次に、ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ｂ形の結晶化を生じ；そして
（iv）そのように形成された結晶性固体を単離する
工程を含む。
【００９９】
（ｃ）において、好ましい有機溶媒は、１−メチル−２−ピロリジノンのような、きわめて可溶性の溶媒である。
（ｃ）の項目（ｉ）について、混合物は、必要ならば、溶解が達せられるまで加熱して還流させてよい。或いは、混合物は、例えば、溶媒の還流温度未満の温度に加熱してよいが、但し、ほとんど全ての固体材料の溶解が達せられたという条件付きである。少量の不溶性材料は、加温された混合物の濾過によって除去することができるということは理解されるであろう。
【０１００】
上の（ａ）、（ｂ）および（ｃ）において、そのように形成された結晶性固体は、いずれかの慣用法によって、例えば、濾過によって単離することができる。
本発明を、次の非制限実施例、データおよび図面によって、以下に詳しく説明するが、ここにおいて、特に断らない限り、
（ｉ）蒸発は、真空中のロータリーエバポレーションによって行ったし、処理手順は、乾燥剤などの残留固体の濾過による除去後に行った；
（ii）収率は、単に例示のために与えられ、必ずしも、達成可能な最大値ではない；
（iii）融点は未補正であるが、Mettler ＤＳＣ８２０ｅを用いて決定した；
（iv）式Ｉの最終生成物の構造は、核（概して、プロトン）磁気共鳴（ＮＭＲ）および質量スペクトル技術によって確認した；プロトン磁気共鳴化学シフト値は、δスケールで測定したが、ピーク多重度は、次のように示している、すなわち、ｓ，一重線；ｄ，二重線；ｔ，三重線；ｍ，多重線；ｂｒ，幅広；ｑ，四重線，ｑｕｉｎ，五重線；全ての試料を、Bruker ＤＰＸ ４００ＭＨｚにおいて、ｄ６−ＤＭＳＯ中の３００Ｋ、１６走査、パルス反復時間１０秒で実験した；
（ｖ）中間体は、概して、十分に特性決定しなかったが、純度は、ＮＭＲ分析によって評価した；そして
（vi）次の略語を用いた。
【０１０１】
ＤＭＳＯ ジメチルスルホキシド
ＮＭＰ １−メチル−２−ピロリジノン
【実施例】
【０１０２】
実施例１：ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ａ形
窒素の不活性雰囲気下において、ＡＺＤ２１７１粗製遊離塩基（４．５２ｇ）（例えば、ＷＯ００／４７２１２号の実施例２４０に記載のように製造される）を、イソプロパノール（５８．８ｍＬ）でスラリーにした。その混合物を、還流しながら１５分間加熱して、透明な暗色溶液を生じた。混合物を７５℃に冷却し、木炭（０．２２６ｇ）を加えた。混合物を再加熱して還流させ、還流しながら１時間保持した。次に、混合物を熱濾過した。木炭濾過ケーキを、熱イソプロパノール（９ｍＬ）で洗浄した。合わせた濾液および洗液の温度を５５℃に調整し、そして水（２．７１ｍＬ）中のマレイン酸（１．１７３ｇ）の予め濾過された溶液を、５分間にわたって滴加した。予め結晶化した粗製遊離塩基を、その添加中に溶解させた。水（０．９ｍＬ）のラインウォッシュ（line wash）を加えた。その混合物を５５℃で１５分間維持し、そしてＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ａ形の種結晶（０．０２３ｇ）を加えた。混合物を５５℃で４時間保持した。４時間の保持中に、結晶化は確定した状態になった。混合物を０℃に８時間にわたって冷却した。混合物を０℃で最低８時間保持した。混合物を濾過した。濾過ケーキをイソプロパノール（９ｍＬ）で洗浄した。固体を真空オーブン中において５０℃で乾燥させて、４−（［４−フルオロ−２−メチル−１Ｈ−インドール−５−イル］オキシ）−６−メトキシ−７−（３−（ピロリジン−１−イル）プロポキシ）キナゾリンマレイン酸塩Ａ形を生じた。
【０１０３】
１Ｈ ＮＭＲスペクトル：(400 MHz, DMSO): 11.36 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.43 (s, 1H), 7.18 (d, 1H), 7.01 (d, 1H), 6.25 (s, 1H), 6.04 (s, 2H), 4.33 (t, 2H), 4.02 (s, 3H), 3.26-3.3.70 (b, 4H), 2.44, (s, 3H), 2.24 (m, 2H), 2.02 (m, 4H)。
【０１０４】
ｍ．ｐ．：ＤＳＣ分析：１９８．３℃で融解開始および２００．０８℃でピーク。
実施例２：ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ａ形
窒素の不活性雰囲気下において、ＡＺＤ２１７１粗製遊離塩基（２３．０ｇ）（例えば、ＷＯ００／４７２１２号の実施例２４０に記載のように製造される）を、容器１においてメタノール（２２３ｍＬ）中でスラリーにした。その混合物を、真空下で保持することによって脱気後、窒素で真空を解除した。これを５回繰り返した。次に、そのスラリーを加熱して還流させ、そこで１５分間保持して、透明な暗褐色溶液を生じた。その溶液を６０℃に冷却後、Celite（登録商標）パッド（４．００ｇ）を介して容器２中へ濾過した。その Celite（登録商標）パッドを、熱（６０℃）メタノール（７８ｍＬ）で洗浄し、濾液を再度、容器２に入れた。
【０１０５】
次に、容器１に、０℃に冷却されたメタノール（１１１ｍＬ）を入れた。次に、容器１に、マレイン酸（５．５０ｇ）を入れ、その混合物を、マレイン酸が全て溶解するまで、０℃で１５分間撹拌した。
【０１０６】
次に、容器１の内容物を、インラインフィルターを介して、５２℃を超える温度を維持しながら容器２に入れた。ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ａ形の種結晶（０．０４５４ｇ）を、容器２に５５℃で加え、その混合物を５５℃で３時間保持した。次に、混合物を４０℃に７時間にわたって冷却後、更に、−５℃に６時間にわたって冷却した。固体を濾過し、そしてメタノール（１００ｍＬ）で−５℃において洗浄した。生成物を真空オーブン中で２４時間乾燥させて、４−（［４−フルオロ−２−メチル−１Ｈ−インドール−５−イル］オキシ）−６−メトキシ−７−（３−（ピロリジン−１−イル）プロポキシ）キナゾリンマレイン酸塩Ａ形を生じた。
【０１０７】
実施例３：ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ｂ形
ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ａ形（２．３１ｇ）を、温（約５０℃）ＮＭＰ中に溶解させた。この溶液を、トルエン（２３ｍＬ）に周囲温度で２分間にわたって滴加した。次に、固体として最初に沈殿した材料は、油状物になった後、再度固体になった。周囲温度で１０分間撹拌後、固体を濾過し、トルエン（１０ｍＬ）で洗浄した。その固体を、真空オーブン中において周囲温度で一晩乾燥させて、４−（（４−フルオロ−２−メチル−１Ｈ−インドール−５−イル）オキシ）−６−メトキシ−７−（３−（ピロリジン−１−イル）プロポキシ）キナゾリンマレイン酸塩Ｂ形を生じた。
【０１０８】
ｍ．ｐ．：ＤＳＣ分析：１９４．４３℃で融解開始および１９５．９７℃でピーク。
用いられた技術の詳細
Ｘ線粉末回折
【０１０９】
【表５】
【０１１０】
分析用計測器：Siemens Ｄ５０００
Ｘ線粉末回折スペクトルは、結晶性塩の試料を、Siemens 単シリコン結晶（ＳＳＣ）ウェファーマウント上に載せ、顕微鏡スライドによってその試料を薄層中に広げることによって決定した。その試料を、３０回転／分で回転させ（計数統計を改善する）、４０ｋＶおよび４０ｍＡにおいて１．５４０６オングストロームの波長で操作される銅ロング・ファインフォーカス管によって発生したＸ線を照射した。平行Ｘ線源を、Ｖ２０で設定された自動可変発散スリットを介して通過させ、そして反射した放射線を、２ｍｍ散乱防止スリットおよび０．２ｍｍ検出器スリットを介して方向づけた。試料を、θ−θモードにおいて２°〜４０°２θの範囲にわたって０．０２°２θ増加分（連続走査モード）につき１秒間暴露した。運転時間は、３１分４１秒であった。その計測器に、シンチレーション計数管を検出器として装備した。制御およびデータ捕捉は、Diffract＋ソフトウェアで操作する Dell Optiplex ６８６ＮＴ４．０ Workstation によった。Ｘ線粉末回折の当業者は、ピークの相対強度が、例えば、試料の分析に影響することがありうる約３０ミクロンを超えるサイズの粒子および統一されていないアスペクト比によって影響されることがありうるということを理解するであろう。当業者は、更に、反射位置が、回折計中の試料がある正確な高さおよび回折計のゼロ検定によって影響されることがありうるということを理解するであろう。試料表面の平坦さも、僅かに作用することがありうる。したがって、提示された回折図形データを、絶対値と見なすことはない。
【０１１１】
篩い分け／超微粉砕
ＡＺＤ２１７１遊離塩基を、篩い分け後、１ｍｍステンレス鋼製篩を用いて超微粉砕し、その塩基を、生成物採集用におよび超微粉砕機中に直接的に手動供給するのに用いた。
【０１１２】
約７．５ｇのＡＺＤ２１７１遊離塩基を篩い分けした。
清浄なＳ／Ｓライン２”超微粉砕機を用いた。
手動供給速度：約２／３ｇ／分。
【０１１３】
粉砕空気圧範囲１０／２０ｐｓｉ（０．６７／１．３３気圧）。
ベンチュリ空気圧範囲２０／２５ｐｓｉ（１．３３／１．６７気圧）。
動的蒸気収着
分析用計測器：Surface Measurements Systems Dynamic Vapour Sorption Analyser。
【０１１４】
２５℃で石英ホルダー中に入った約５ｍｇの材料を、給湿窒素に、次の相対湿度（ＲＨ）：０、２０、４０、６０、８０、９５、８０、６０、４０、２０、０％ＲＨで二重に供した。
【０１１５】
示差走査熱量測定
分析用計測器：Mettler ＤＳＣ８２０ｅ。
典型的に、穴あき蓋を装着した４０μｌアルミニウムパンに入った５ｍｇ未満の材料を、２５℃〜３２５℃の温度範囲にわたって１０℃／分の一定加熱速度で加熱した。窒素を用いたパージガスを、１００ｍｌ／分の流速で用いた。
【０１１６】
熱重量測定分析
分析用計測器：Mettler ＴＧ８５１。
典型的に、７０μｌアロックス（酸化アルミニウム）るつぼ中に入った３〜１２ｍｇの材料を、２５℃〜３２５℃の温度範囲にわたって１０℃／分の一定加熱速度で加熱した。ヘリウムを用いたパージガスを、５０ｍｌ／分の流速で用いた。
【０１１７】
カール・フィッシャー水分
分析用計測器：Mitsubishi Moisture Meter ＣＡ−０５。
典型的に、約５０ｍｇの材料を用いた。
【図面の簡単な説明】
【０１１８】
【図１】図１：ＡＺＤ２１７１遊離塩基一水和物のＤＳＣおよびＴＧＡサーモグラム−℃の温度を水平軸上に、そして熱流／損失重量％を鉛直軸上にプロットしている。
【図２】図２：ＡＺＤ２１７１遊離塩基のＸ線粉末回折図形−２θ値を水平軸上にプロットし、そして相対線強度（カウント）を鉛直軸上にプロットしている。
【図３】図３：１００℃に加熱されたＡＺＤ２１７１遊離塩基一水和物のＸ線粉末回折図形−２θ値を水平軸上にプロットし、そして相対線強度（カウント）を鉛直軸上にプロットしている。
【図４】図４：超微粉ＡＺＤ２１７１遊離塩基のＸ線粉末回折図形−２θ値を水平軸上にプロットし、そして相対線強度（カウント）を鉛直軸上にプロットしている。
【図５】図５：ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ａ形のＸ線粉末回折図形−２θ値を水平軸上にプロットし、そして相対線強度（カウント）を鉛直軸上にプロットしている。
【図６】図６：ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ａ形のＤＳＣサーモグラム−℃の温度を水平軸上にプロットし、そして吸熱熱流（ミリワット（ｍＷ））を鉛直軸上にプロットしている。
【図７】図７：ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ａ形の２５℃での蒸気収着等温線−目標相対湿度（ＲＨ）（％）を水平軸上にプロットし、そして乾燥質量の変化（％）を鉛直軸上にプロットしている。
【図８】図８：ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ｂ形のＸ線粉末回折図形−２θ値を水平軸上にプロットし、そして相対線強度（カウント）を鉛直軸上にプロットしている。
【図９】図９：ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ｂ形のＤＳＣサーモグラム−℃の温度を水平軸上にプロットし、そして吸熱熱流（ミリワット（ｍＷ））を鉛直軸上にプロットしている。
【図１０】図１０：ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩スラリー実験についての、２θ値を水平軸上にプロットし、そして相対線強度（カウント）を鉛直軸上にプロットしているＸ線粉末回折図形。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
本発明は、ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩、ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩の具体的な結晶形、それらの製造方法、活性成分としてそれらを含有する医薬組成物、ヒトなどの温血動物での抗血管形成作用および／または血管透過性減少作用の生成に用いるための薬剤の製造におけるそれらの使用、および血管形成および／または増加した血管透過性に関連した疾患状態の処置方法におけるそれらの使用に関する。
【０００２】
正常な血管形成は、胚発生、創傷治癒およびいくつかの雌性生殖機能成分を含めた種々の過程において重要な役割を果たしている。望ましくないまたは病的な血管形成は、糖尿病性網膜症、乾癬、癌、関節リウマチ、アテローム、カポージ肉腫および血管腫を含めた疾患状態に関連していた（Fan et al, 1995, Trends Pharmacol. Sci. 16: 57-66; Folkman, 1995, Nature Medicine 1: 27-31）。血管透過性の変化は、正常および病的双方の生理学的過程においてある役割を果たしていると考えられる（Cullinan-Bove et al, 1993, Endocrinology 133: 829-837; Senger et al, 1993, Cancer and Metastasis Reviews, 12: 303-324）。酸性および塩基性の線維芽細胞増殖因子（ａＦＧＦおよびｂＦＧＦ）および血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）を含めた、in vitro 内皮細胞増殖促進活性を有するいくつかのポリペプチドが識別された。その受容体の制限された発現によって、ＶＥＧＦの増殖因子活性は、ＦＧＦのそれとは対照的に、内皮細胞に対して比較的特異性である。最近の立証は、ＶＥＧＦが、正常および病的双方の血管形成（Jakeman et al, 1993, Endocrinology, 133: 848-859; Kolch et al, 1995, Breast Cancer Research and Treatment, 36:139-155）および血管透過性（Connolly et al, 1989, J. Biol. Chem. 264: 20017-20024）の重要な刺激物質であるということを示している。抗体でのＶＥＧＦの隔離によるＶＥＧＦ作用の拮抗は、腫瘍成長の抑制を引き起こすことがありうる（Kim et al, 1993, Nature 362: 841-844）。
【０００３】
受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）は、細胞の原形質膜を越えた生化学的シグナルの伝達に重要である。これら膜貫通分子は、特徴的に、原形質膜中のセグメントを介して細胞内チロシンキナーゼドメインに連通した細胞外リガンド結合ドメインから成る。受容体へのリガンドの結合は、受容体上および他の細胞内分子上双方のチロシン残基のリン酸化に至る受容体関連チロシンキナーゼ活性の刺激を引き起こす。チロシンリン酸化におけるこれら変化は、種々の細胞応答に至るシグナリングカスケードを開始する。これまでに、アミノ酸配列相同性によって規定された少なくとも１９種類の異なったＲＴＫサブファミリーが識別された。これらサブファミリーの内の一つは、現在のところ、ｆｍｓ様チロシンキナーゼ受容体Ｆｌｔ−１、キナーゼインサートドメイン含有受容体ＫＤＲ（Ｆｌｋ−１とも称される）および別のｆｍｓ様チロシンキナーゼ受容体Ｆｌｔ−４によって構成されている。これら関連したＲＴＫの内のＦｌｔ−１およびＫＤＲの二つは、ＶＥＧＦを高親和性で結合することが分かった（De Vries et al, 1992, Science 255: 989-991; Terman et al, 1992, Biochem. Biophys. Res. Comm. 1992, 187: 1579-1586）。異種細胞中で発現されたこれら受容体へのＶＥＧＦの結合は、細胞タンパク質のチロシンリン酸化状態およびカルシウムフラックスの変化に関連していた。
【０００４】
ＶＥＧＦは、脈管形成（vasculogenesis）および血管形成（angiogenesis）に不可欠な刺激薬である。このサイトカインは、内皮細胞増殖、プロテアーゼ発現および遊走、および引き続きの毛細管を形成する細胞の組織化を誘発することによって血管萌芽性表現型を誘発する（Keck, P.J., Hauser, S.D., Krivi, G., Sanzo, K., Warren, T., Feder, J., and Connolly, D.T., Science (Washington DC), 246: 1309-1312, 1989; Lamoreaux, W.J., Fitzgerald, M.E., Reiner, A., Hasty, K.A., and Charles, S.T., Microvasc. Res., 55: 29-42, 1998; Pepper, M.S., Montesano, R., Mandroita, S.J., Orci, L. and Vassalli, J.D., Enzyme Protein, 49: 138-162, 1996.）。更に、ＶＥＧＦは、有意の血管透過性を誘発して（Dvorak, H.F., Detmar, M., Claffey, K.P., Nagy, J.A., van de Water, L., and Senger, D.R., (Int. Arch. Allergy Immunol., 107: 233-235, 1995; Bates, D.O., Heald, R.I., Curry, F.E. and Williams, B. J. Physiol. (Lond.), 533: 263-272, 2001）、病的血管形成に特徴的である高透過性未成熟血管網の形成を促進する。
【０００５】
ＫＤＲ単独の活性化は、内皮細胞の増殖、遊走および生存を含めたＶＥＧＦへの主要な表現型応答の全ておよび血管透過性の誘発を促進するのに充分であるということが分かった（Meyer, M., Clauss, M., Lepple-Wienhues, A., Waltenberger, J., Augustin, H.G., Ziche, M., Lanz, C., Buttner, M., Rziha, H-J., and Dehio, C., EMBO J., 18: 363-374, 1999; Zeng, H., Sanyal, S. and Mukhopadhyay, D., J. Biol. Chem., 276: 32714-32719, 2001; Gille, H., Kowalski, J., Li, B., LeCouter, J., Moffat, B, Zioncheck, T.F., Pelletier, N. and Ferrara, N., J. Biol. Chem., 276: 3222-3230, 2001）。
【０００６】
ＶＥＧＦの作用を抑制する化合物は、癌（白血病、多発性骨髄腫およびリンパ腫を含めた）、糖尿病、乾癬、関節リウマチ、カポージ肉腫、血管腫、急性および慢性の腎症、アテローム、動脈再狭窄、自己免疫疾患、急性炎症、過度の瘢痕形成および癒着、子宮内膜症、リンパ浮腫、不正子宮出血、および黄斑変性を含めた網膜血管増殖を伴う眼疾患のような、血管形成および／または増加した血管透過性に関連した疾患状態の処置に価値がある。
【０００７】
ＶＥＧＦ受容体チロシンキナーゼの阻害剤であるキナゾリン誘導体は、ＷＯ００／４７２１２号に記載されている。その化合物ＡＺＤ２１７１は、ＷＯ００／４７２１２号に示されるが（実施例２４０を参照されたい）、式Ｉ：
【０００８】
【化１】
【０００９】
を有する４−（（４−フルオロ−２−メチル−１Ｈ−インドール−５−イル）オキシ）−６−メトキシ−７−（３−（ピロリジン−１−イル）プロポキシ）キナゾリンである。
ＡＺＤ２１７１は、ＷＯ００／４７２１２号および以下に記載されている in vitro の（ａ）酵素検定および（ｂ）ＨＵＶＥＣ検定において優れた活性を示す。酵素検定における単離されたＫＤＲ（ＶＥＧＦＲ−２）およびＦｌｔ−１（ＶＥＧＦＲ−１）チロシンキナーゼ活性の阻害についてのＡＺＤ２１７１のＩＣ５０値は、それぞれ、＜２ｎＭおよび５±２ｎＭであった。ＡＺＤ２１７１は、ＶＥＧＦに刺激された内皮細胞増殖を強力に抑制するが（ＨＵＶＥＣ検定において０．４±０．２ｎＭのＩＣ５０値）、基底内皮細胞増殖を、＞１２５０倍を超える濃度においてあまり抑制しない（ＩＣ５０値は＞５００ｎＭである）。以下に記載の in vivo の（ｃ）充実性腫瘍モデルにおけるＣａｌｕ−６腫瘍異種移植片の成長は、１．５ｍｇ／ｋｇ／日、３ｍｇ／ｋｇ／日および６ｍｇ／ｋｇ／日のＡＺＤ２１７１での１日１回経口処置の２８日後に、それぞれ、４９％＊＊、６９％＊＊＊および９１％＊＊＊抑制された（Ｐ＊＊＜０．０１、Ｐ＊＊＊＜０．０００１；片側ｔ検定）。
【００１０】
薬学的に活性な化合物のより安定な形、例えば、より安定な結晶形は、商業規模での製剤化および加工に好適である。これは、用いられる形の安定性が大きいほど、圧縮などの製剤化手順の際にそれが別の形へと変換するリスクが少ないという理由のためである。これは、順次、錠剤の溶解速度、活性成分のバイオアベイラビリティーのような最終製剤の性質についてより大きい予測可能性を与える。より安定な形の活性成分を用いることは、製剤の物理的性質へのより大きい制御を可能にする。
【００１１】
ＡＺＤ２１７１遊離塩基（４−（（４−フルオロ−２−メチル−１Ｈ−インドール−５−イル）オキシ）−６−メトキシ−７−（３−（ピロリジン−１−イル）プロポキシ）キナゾリン）は、周囲条件下において結晶性一水和物である。示差走査熱量測定（ＤＳＣ）分析は、以下に記載の方法にしたがって行われたが、水の減少および融解のために、９５℃〜１７０℃の大きく広範な吸熱を示す（図１）。熱重量測定（ＴＧＡ）分析（詳細は以下に与えられる）は、８０℃〜１１５℃の間に４．０２％の重量減少を示す（図１）。カール・フィッシャー水分分析詳細は以下に与えられる）は、３．９％の数値を生じ、重量減少が全て、水分減少のためであるということを示唆している。
【００１２】
ＤＳＣの開始／ピーク温度値は、試験機毎にまたは試料毎に僅かに異なることがありうるので、引用された値は、絶対値として解釈されるべきではないということは理解されるであろう。
【００１３】
ＡＺＤ２１７１遊離塩基は、ＣｕＫａ放射線を用いて測定された次の２θ値、すなわち、１８．３および２０．８の内の少なくとも一つを与えることを特徴とする。ＡＺＤ２１７１遊離塩基は、図２のようなＸ線粉末回折図形を与えることを特徴とする。１０個の最も顕著なピークを、表１に示す。
【００１４】
【表１】
【００１５】
ＡＺＤ２１７１遊離塩基の試料を、例えば、１００℃に加熱することで脱水する場合、その試料は、非晶質になり（図３）、その後、再水和することはないが、以後、非晶質状態のままであるということが判明した。これは、ＡＺＤ２１７１遊離塩基が医薬組成物として製剤化された場合、ＡＺＤ２１７１遊離塩基は、ある種の工程、例えば、粒度減少（ミリングなど）、バルク薬物の乾燥、製剤化、製造の際に脱水されうるという理由で、問題でありうる。ＡＺＤ２１７１遊離塩基を医薬組成物として製剤化するためには、ある時点で粒度を減少させることが必要であると考えられ、これには、脱水のリスクがあり、したがって、非晶質材料の形成のリスクがあると考えられる。これは、ＡＺＤ２１７１遊離塩基一水和物の試料に、超微粉砕による粒度減少を施した後、それを、非晶質材料を探すために分析することによって調べられた。図４は、非晶質材料が、ＡＺＤ２１７１遊離塩基の粒度減少の際に実際に形成するということを示している。これは、ピークが幅広になること、および非晶質「こぶ（hump）」の形成によって示される。図４を参照されたい。非晶形または半非晶形のＡＺＤ２１７１遊離塩基は、製造上の問題および再現性のないバイオアベイラビリティーを生じることがありうる。
【００１６】
遊離塩基とは異なる形および改善された固体状態性質を有する形である別の形のＡＺＤ２１７１の識別は、本発明の課題である。
異なった形の例は、ＡＺＤ２１７１の塩である。ＷＯ００／４７２１２号において、その発明の化合物の薬学的に許容しうる塩は、このような塩を形成するのに十分に塩基性であるそれら発明の化合物の酸付加塩を包含しうるということが述べられている。このような酸付加塩は、ハロゲン化水素、特に、塩酸または臭化水素酸、または硫酸またはリン酸、またはトリフルオロ酢酸、クエン酸またはマレイン酸のような、薬学的に許容しうる陰イオンを与える無機酸または有機酸との塩を包含すると述べられている。更に、ＷＯ００／４７２１２号は、その発明の化合物が十分に酸性である場合、薬学的に許容しうる塩は、薬学的に許容しうる陽イオンを与える無機塩基または有機塩基で形成されてよいということを続けて述べている。無機塩基または有機塩基でのこのような塩は、ナトリウム塩またはカリウム塩などのアルカリ金属塩、カルシウム塩またはマグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩、アンモニウム塩、または例えば、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、ピペリジン、モルホリンまたはトリス−（２−ヒドロキシエチル）アミンとの塩を包含すると述べられている。
【００１７】
ＷＯ００／４７２１２号にある好適な塩は、塩酸塩および臭化水素酸塩、特に、塩酸塩である。
ＷＯ００／４７２１２号には、その具体的な化合物の具体的な塩が、驚くほど有益な性質を有するであろうということは、どこにも述べられていない。
【００１８】
意外にも且つ驚くべきことに、本発明者は、ここで、ＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩が、遊離塩基にも、調べられた他の塩にもまさる改善された固体状態性質を有する好都合に安定な形のＡＺＤ２１７１であるということを発見した。
【００１９】
ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩は、容易に結晶化され、きわめて結晶性で非吸湿性であり、そして１：１の薬物対対イオンの再現性のある化学量論的比率を有する。
したがって、ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩は、容易に結晶化され、きわめて結晶性で非吸湿性であり、そして約１：１の薬物対対イオンの再現性のある化学量論的比率を有する。
【００２０】
ＡＺＤ２１７１のいくつかの塩を製造したが、７種類、すなわち、マロン酸塩、コハク酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、アジピン酸塩およびリンゴ酸塩は、結晶性であることが判明した。これら７種類の塩の固体状態性質を調べたが、それら結果を表２に示す。
【００２１】
【表２】
【００２２】
「非吸湿性」という用語は、８０％ＲＨにおいて＜１％の水分を吸収することを意味する。
ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩は、驚くべきことに、結晶化することが可能であったそれら７種類の塩の内で、唯一の非吸湿性塩であり、きわめて結晶性であり、そして１：１の薬物対対イオンの再現性のある化学量論的比率を有するということで、他のものより優れていた。
【００２３】
したがって、ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩は、唯一の非吸湿性塩であり、きわめて結晶性であり、そして約１：１の薬物対対イオンの再現性のある化学量論的比率を有するということが判明した。
【００２４】
ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩は、非晶質材料を実質的に含まないので、ＡＺＤ２１７１遊離塩基よりも製剤化するのが容易であり且つ一層再現性のある投与結果を与えると予想されうる。「非晶質材料を実質的に含まない」により、非晶質材料の量が、１０％未満、好ましくは、５％未満、より好ましくは、２％未満であることを意味する。
【００２５】
ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩は、非吸湿性であり、超微粉砕などの手順の際に活性成分の重量変化に関連したいずれかの問題を予防するまたは減少させるべきである。
本発明により、ＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩を提供する。ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩は、Ａ形およびＢ形の二つの結晶形を有する。
【００２６】
本発明により、第一結晶形であるＡ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩を提供する。
ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ａ形は、ＣｕＫａ放射線を用いて測定された次の２θ値、すなわち、２１．５および１６．４の内の少なくとも一つを与えることを特徴とする。ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ａ形は、実質的には図５に示されるようなＸ線粉末回折図形を与えることを特徴とする。１０個の最も顕著なピークを、表３に示す。
【００２７】
【表３】
【００２８】
本発明により、第一結晶形であるＡ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、約２θ＝２１．５°に少なくとも一つの特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する塩を提供する。
【００２９】
本発明により、第一結晶形であるＡ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、約２θ＝１６．４°に少なくとも一つの特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する塩を提供する。
【００３０】
本発明により、第一結晶形であるＡ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、約２θ＝２１．５°および１６．４°に少なくとも二つの特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する塩を提供する。
【００３１】
本発明により、第一結晶形であるＡ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、約２θ＝２１．５°、１６．４°、２４．４°、２０．７°、２５．０°、１６．９°、１２．１°、２２．２°、１７．４°および１７．６°に特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する塩を提供する。
【００３２】
本発明により、第一結晶形であるＡ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、図５に示されるＸ線粉末回折図形と実質的に同じＸ線粉末回折図形を有する塩を提供する。
本発明により、第一結晶形であるＡ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、２θ＝２１．５°プラスまたはマイナス０．５°２θに少なくとも一つの特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する塩を提供する。
【００３３】
本発明により、第一結晶形であるＡ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、２θ＝１６．４°プラスまたはマイナス０．５°２θに少なくとも一つの特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する塩を提供する。
【００３４】
本発明により、第一結晶形であるＡ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、２θ＝２１．５°および１６．４°（これら値は、プラスまたはマイナス０．５°２θであってよい）に少なくとも二つの特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する塩を提供する。
【００３５】
本発明により、第一結晶形であるＡ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、２θ＝２１．５°、１６．４°、２４．４°、２０．７°、２５．０°、１６．９°、１２．１°、２２．２°、１７．４°および１７．６°（これら値は、プラスまたはマイナス０．５°２θであってよい）に特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する塩を提供する。
【００３６】
本発明により、第一結晶形であるＡ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、２θ＝２１．５°に少なくとも一つの特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する塩を提供する。
【００３７】
本発明により、第一結晶形であるＡ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、２θ＝１６．４°に少なくとも一つの特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する塩を提供する。
【００３８】
本発明により、第一結晶形であるＡ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、２θ＝２１．５°および１６．４°に少なくとも二つの特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する塩を提供する。
【００３９】
本発明により、第一結晶形であるＡ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、２θ＝２１．５°、１６．４°、２４．４°、２０．７°、２５．０°、１６．９°、１２．１°、２２．２°、１７．４°および１７．６°に特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する塩を提供する。
【００４０】
本発明により、第一結晶形であるＡ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、図５に示されるようなＸ線粉末回折図形を有する塩を提供する。
ＤＳＣ分析は、ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ａ形が、１９８．３℃に融解開始および２００．０８℃にピークを有する高融点固体であることを示している（図６）。
【００４１】
したがって、ＤＳＣ分析は、ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ａ形が、約１９８．３℃に融解開始および約２００．０８℃にピークを有する高融点固体であることを示している。
本発明により、第二結晶形であるＢ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩を提供する。
【００４２】
ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ｂ形は、ＣｕＫａ放射線を用いて測定された次の２θ値、すなわち、２４．２および２２．７の内の少なくとも一つを与えることを特徴とする。ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ｂ形は、実質的には図８に示されるようなＸ線粉末回折図形を与えることを特徴とする。１０個の最も顕著なピークを、表４に示す。
【００４３】
【表４】
【００４４】
本発明により、第二結晶形であるＢ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、約２θ＝２４．２°に少なくとも一つの特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する塩を提供する。
【００４５】
本発明により、第二結晶形であるＢ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、約２θ＝２２．７°に少なくとも一つの特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する塩を提供する。
【００４６】
本発明により、第二結晶形であるＢ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、約２θ＝２４．２°および２２．７°に少なくとも二つの特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する塩を提供する。
【００４７】
本発明により、第二結晶形であるＢ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、約２θ＝２４．２°、２２．７°、１５．７°、１２．０°、２７．１°、２５．０°、１７．７°、１５．０°、２３．１°および１２．６°に特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する塩を提供する。
【００４８】
本発明により、第二結晶形であるＢ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、図８に示されるＸ線粉末回折図形と実質的に同じＸ線粉末回折図形を有する塩を提供する。
本発明により、第二結晶形であるＢ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、２θ＝２４．２°プラスまたはマイナス０．５°２θに少なくとも一つの特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する塩を提供する。
【００４９】
本発明により、第二結晶形であるＢ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、２θ＝２２．７°プラスまたはマイナス０．５°２θに少なくとも一つの特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する塩を提供する。
【００５０】
本発明により、第二結晶形であるＢ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、２θ＝２４．２°および２２．７°（これら値は、プラスまたはマイナス０．５°２θであってよい）に少なくとも二つの特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する塩を提供する。
【００５１】
本発明により、第二結晶形であるＢ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、２θ＝２４．２°、２２．７°、１５．７°、１２．０°、２７．１°、２５．０°、１７．７°、１５．０°、２３．１°および１２．６°（これら値は、プラスまたはマイナス０．５°２θであってよい）に特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する塩を提供する。
【００５２】
本発明により、第二結晶形であるＢ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、２θ＝２４．２°に少なくとも一つの特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する塩を提供する。
【００５３】
本発明により、第二結晶形であるＢ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、２θ＝２２．７°に少なくとも一つの特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する塩を提供する。
【００５４】
本発明により、第二結晶形であるＢ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、２θ＝２４．２°および２２．７°に少なくとも二つの特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する塩を提供する。
【００５５】
本発明により、第二結晶形であるＢ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、２θ＝２４．２°、２２．７°、１５．７°、１２．０°、２７．１°、２５．０°、１７．７°、１５．０°、２３．１°および１２．６°に特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する塩を提供する。
【００５６】
本発明により、第二結晶形であるＢ形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、図８に示されるようなＸ線粉末回折図形を有する塩を提供する。
ＤＳＣ分析は、ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ｂ形が、１９４．４３℃に融解開始および１９５．９７℃にピークを有する高融点固体であることを示している（図９）。
【００５７】
したがって、ＤＳＣ分析は、ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ｂ形が、約１９４．４３℃に融解開始および約１９５．９７℃にピークを有する高融点固体であることを示している。
Ｂ形は、Ａ形に関して準安定性である（Ｂ形の融点および融解熱は、Ａ形のそれらより低い）。Ａ形は、熱力学的に一層安定な形である。Ａ形およびＢ形の混合物は、メタノール中において４０℃で４日間スラリーにすると、Ａ形へと変換する（図１０）。
【００５８】
Ａ形は、Ｂ形より好適である。
ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩は、非吸湿性であり、８０％相対湿度において＜１％の水分を吸収する（図７）。
【００５９】
ＮＭＲ詳細は、実施例１のマレイン酸塩製造後に与えられており、１：１の比率の化学量論データについて示している。
本発明の別の側面により、ＡＺＤ２１７１の二マレイン酸塩を提供する。二マレイン酸塩は、２モルのマレイン酸を１モルのＡＺＤ２１７１遊離塩基に加えることによって形成することができる。
【００６０】
本発明が、ＡＺＤ２１７１遊離塩基、またはＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ａ形またはＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ｂ形の結晶形に関すると述べられている場合、その結晶化度は、好都合には、約６０％を超える、より好都合には、約８０％を超える、好ましくは、約９０％を超える、そしてより好ましくは、約９５％を超える。最も好ましくは、結晶化度は約９８％を超える。
【００６１】
ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ａ形およびＢ形は、図５および図８にそれぞれ示されるＸ線粉末回折図形と実質的に同じＸ線粉末回折図形を与え、そして実質的には、表３および表４にそれぞれ示される１０個の最も顕著なピーク（２θ値角度）を有する。Ｘ線粉末回折図形の２θ値は、試験機毎にまたは試料毎に僅かに異なることがありうるので、引用された値は、絶対値として解釈されるべきではないということは理解されるであろう。
【００６２】
Ｘ線粉末回折図形は、測定条件（用いられる装置または試験機など）に依存して一つまたはそれを超える測定誤差を有するが、入手することができるということが知られている。具体的には、概して、Ｘ線粉末回折図形の強度は、測定条件に依存して変動することがありうるということが知られている。したがって、本発明のＡＺＤ２１７１マレイン酸塩形は、図５および図８に示されるＸ線粉末回折図形と同一のＸ線粉末回折図形を与える結晶、および本発明の範囲内にある図５および図８に示されるのと実質的に同じＸ線粉末回折図形を与えるいずれかの結晶に制限されるわけではない。Ｘ線粉末回折の当業者は、Ｘ線粉末回折図形の実質的同一性を判断することができる。
【００６３】
Ｘ線粉末回折の当業者は、ピークの相対強度が、例えば、試料の分析に影響することがありうる約３０ミクロンを超えるサイズの粒子および統一されていないアスペクト比によって影響されることがありうるということを理解するであろう。当業者は、更に、反射位置が、回折計中の試料がある正確な高さおよび回折計のゼロ検定によって影響されることがありうるということを理解するであろう。試料表面の平坦さも、僅かに作用することがありうる。したがって、提示された回折図形データを、絶対値と見なすことはない。（Jenkins, R & Snyder, R.L. ‘Introduction to X-Ray Powder Diffractometry’ John Wiley & Sons 1996; Bunn, C.W. (1948), Chemical Crystallography, Clarendon Press, London; Klug, H. P. & Alexander, L. E. (1974), X-Ray Diffraction Procedures）。
【００６４】
概して、Ｘ線粉末ディフラクトグラムにおける回折角の測定誤差は、約５％またはそれ未満、具体的には、プラスまたはマイナス０．５°２θであり、このような程度の測定誤差は、図２、図３、図４、図５、図８および図１０のＸ線粉末回折図形を考える場合、および表１、表３および表４を読み取る場合、考慮されるべきである。更に、強度は、実験条件および試料製造（好適な配向）に依存して変動することがありうるということは理解されるはずである。
【００６５】
疑わしさを免れるために、「ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩」および「ＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩」などの用語は、ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩の各々のおよびあらゆる形を意味するが、「ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ａ形」は、Ａ形として知られる具体的な結晶形を意味し、「ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ｂ形」は、Ｂ形として知られる具体的な結晶形を意味する。
【００６６】
本発明のもう一つの側面により、医薬組成物であって、本明細書中の前に定義のＡＺＤ２１７１マレイン酸塩を、薬学的に許容しうる賦形剤または担体と一緒に含む医薬組成物を提供する。
【００６７】
その組成物は、経口投与用に（例えば、錠剤、舐剤、硬または軟カプセル剤、水性または油状の懸濁剤、乳剤、分散性の散剤または顆粒剤、シロップ剤またはエリキシル剤として）、吸入による投与に（例えば、微粉散剤または液状エアゾル剤として）、吹入による投与に（例えば、微粉散剤として）、非経口注射用に（例えば、静脈内、皮下、筋肉内、血管内または注入投与用の滅菌液剤、懸濁剤または乳剤として）、局所投与用に（例えば、クリーム剤、軟膏剤、ゲル剤、または水性または油状の液剤または懸濁剤として）、または直腸投与用に（例えば、坐剤として）適した形であってよい。好ましくは、ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩は経口投与される。概して、上の組成物は、慣用的な賦形剤を用いて慣用的な方式で製造することができる。
【００６８】
本発明のそれら組成物は、好都合には、単位剤形で与えられる。ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩は、通常は、温血動物に、その動物の体表面積１平方メートルにつき１〜５０ｍｇの範囲内、例えば、ヒトの場合、約０．０３〜１．５ｍｇ／ｋｇの単位用量で投与されるであろう。例えば、０．０１〜１．５ｍｇ／ｋｇ、例えば、０．０５〜０．７５ｍｇ／ｋｇ、好ましくは、０．０３〜０．５ｍｇ／ｋｇの範囲内の単位用量が考えられるが、これは、通常は、治療的有効量である。錠剤またはカプセル剤などの単位剤形は、通常、例えば、１〜５０ｍｇの活性成分を含有するであろう。好ましくは、０．０３〜０．５ｍｇ／ｋｇの範囲内の１日用量を用いる。特定の疾患状態の治療的または予防的処置に必要な用量サイズは、必然的に、処置される宿主、投与経路および処置されている疾患の重症度に依存して異なるであろう。したがって、最適投与量は、いずれか特定の患者を処置している医療の実務者が決定してよい。
【００６９】
本発明のもう一つの側面により、療法によるヒトまたは動物体の処置方法で用いるための、本明細書中の前に定義のＡＺＤ２１７１マレイン酸塩を提供する。
本発明のもう一つの特徴は、薬剤として用いるための、本明細書中の前に定義のＡＺＤ２１７１マレイン酸塩、好都合には、ヒトなどの温血動物で抗血管形成作用および／または血管透過性減少作用を生じるための薬剤として用いるための、本明細書中の前に定義のＡＺＤ２１７１マレイン酸塩である。
【００７０】
したがって、本発明のもう一つの側面により、ヒトなどの温血動物での抗血管形成作用および／または血管透過性減少作用の生成に用いるための薬剤の製造における、本明細書中の前に定義のＡＺＤ２１７１マレイン酸塩の使用を提供する。
【００７１】
本発明のもう一つの特徴により、抗血管形成作用および／または血管透過性減少作用を生じる処置を必要としているヒトなどの温血動物において抗血管形成作用および／または血管透過性減少作用を生じる方法であって、その動物に、有効量の本明細書中の前に定義のＡＺＤ２１７１マレイン酸塩を投与することを含む方法を提供する。
【００７２】
ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩は、抗血管形成薬および／または血管透過性減少性薬であり、単独療法として用いることができし、またはＡＺＤ２１７１マレイン酸塩に加えて、一つまたはそれを超える他の物質および／または処置を伴うことができる。このような共同処置は、その処置の個々の成分の同時の、逐次的なまたは別々の投与によって達成することができる。医学腫瘍学の分野において、各々の癌患者を処置するのに、異なった形の処置の組合せを用いることは、通常の慣例である。医学腫瘍学において、ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩に加えたこのような共同処置の一つまたは複数の他の成分は、外科手術、放射線療法または化学療法であってよい。このような化学療法は、次の３種類の主なカテゴリーの治療薬を包含することができる。
【００７３】
（ｉ）他の抗血管形成薬であって、血管内皮増殖因子の作用を抑制するもの（例えば、抗血管内皮細胞増殖因子抗体ベヴァシズマブ（bevacizumab）［AvastinＴＭ］、および本明細書中の前に定義のものとは異なった機構によって作用するもの（例えば、リノマイド（linomide）、インテグリンαｖβ３機能の阻害剤、アンギオスタチン（angiostatin）、ラゾキシン（razoxin）、サリドマイド）、および血管標的指向薬（例えば、リン酸コンブレタスタチン（combretastatin phosphate）、および国際特許出願ＷＯ００／４０５２９号、ＷＯ００／４１６６９号、ＷＯ０１／９２２２４号、ＷＯ０２／０４４３４号およびＷＯ０２／０８２１３号に開示された化合物、および文書の開示がそのまま本明細書中に援用される国際特許出願公開ＷＯ９９／０２１６６号に記載の血管損傷性薬（例えば、Ｎ−アセチルコルチノール−Ｏ−ホスフェート））を含めたものなど；
（ii）細胞分裂抑制薬であって、抗エストロゲン（例えば、タモキシフェン、トレミフェン（toremifene）、ラロキシフェン（raloxifene）、ドロロキシフェン（droloxifene）、ヨードキシフェン（iodoxyfene））、エストロゲン受容体ダウンレギュレーター（例えば、フルヴェストラント（fulvestrant））、プロゲストゲン（例えば、酢酸メゲストロール）、アロマターゼ阻害剤（例えば、アナストロゾール（anastrozole）、レトラゾール（letrazole）、ボラゾール（vorazole）、エクセメスタン（exemestane））、抗プロゲストゲン、抗アンドロゲン（例えば、フルタミド、ニルタミド（nilutamide）、ビカルタミド（bicalutamide）、酢酸シプロテロン）、ＬＨＲＨアゴニストおよびアンタゴニスト（例えば、酢酸ゴセレリン、ルプロリド（luprolide）、ブセレリン（buserelin））、５α−レダクターゼの阻害剤（例えば、フィナステリド）、抗浸潤薬（例えば、マリマスタト（marimastat）のようなメタロプロテイナーゼ阻害剤およびウロキナーゼプラスミノーゲンアクチベーター受容体機能の阻害剤）、および増殖因子機能の阻害剤（このような増殖因子には、例えば、血小板由来増殖因子および肝細胞増殖因子が含まれる）であって、増殖因子抗体、増殖因子受容体抗体（例えば、抗ｅｒｂｂ２抗体トラスツズマブ［HerceptinＴＭ］および抗ｅｒｂｂ１抗体セツキシマブ（cetuximab）［Ｃ２２５］）、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、例えば、上皮増殖因子ファミリーの阻害剤（例えば、Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−メトキシ−６−（３−モルホリノプロポキシ）キナゾリン−４−アミン（ゲフィチニブ（gefitinib），ＡＺＤ１８３９）、Ｎ−（３−エチニルフェニル）−６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）キナゾリン−４−アミン（エルロチニブ（erlotinib），ＯＳＩ−７７４）および６−アクリルアミド−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−（３−モルホリノプロポキシ）キナゾリン−４−アミン（ＣＩ １０３３）などのＥＧＦＲファミリーチロシンキナーゼ阻害剤）およびセリン／トレオニンキナーゼ阻害剤）が含まれるこのような阻害剤など；および
（iii）医学腫瘍学で用いられるような増殖抑制薬／抗腫瘍薬およびそれらの組合せであって、代謝拮抗薬（例えば、メトトレキサートのような葉酸拮抗薬、５−フルオロウラシルのようなフルオロピリミジン類、テガフル、プリンおよびアデノシン類似体、シトシンアラビノシド）；抗腫瘍抗生物質（例えば、アドリアマイシン、ブレオマイシン、ドキソルビシン、ダウノマイシン、エピルビシンおよびイダルビシン（idarubicin）のようなアントラサイクリン系、マイトマイシンＣ、ダクチノマイシン、ミトラマイシン）；白金誘導体（例えば、シスプラチン、カルボプラチン）；アルキル化剤（例えば、ナイトロジェンマスタード、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン、シクロホスファミド、イホスファミド、ニトロソ尿素、チオテパ）；有糸分裂阻止薬（例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、ビノレルビン（vinorelbine）のようなビンカアルカロイド類、およびタキソールおよびタキソテールのようなタキソイド類（taxoids））；トポイソメラーゼ阻害剤（例えば、エトポシドおよびテニポシドのようなエピポドフィロトキシン類、アムサクリン、トポテカン（topotecan）、カンプトテシン、そして更に、イリノテカン（irinotecan））；更に、酵素（例えば、アスパラギナーゼ）；およびチミジル酸シンターゼ阻害剤（例えば、ラルチトレキセド（raltitrexed））のようなもの。
そして追加のタイプの化学療法薬には、次が含まれる。
【００７４】
（iv）生体応答調節剤（例えば、インターフェロン）；
（ｖ）抗体（例えば、エドレコロマブ（edrecolomab））；
（vi）アンチセンス療法、例えば、ＩＳＩＳ２５０３、抗ｒａｓアンチセンスのような、上に挙げられた標的に向けられているもの；
（vii）遺伝子治療アプローチであって、例えば、異常ｐ５３または異常ＢＲＣＡ１またはＢＲＣＡ２のような異常遺伝子を置き換えるアプローチ；シトシンデアミナーゼ、チミジンキナーゼまたは細菌ニトロレダクターゼ酵素を用いたものなどのＧＤＥＰＴ（遺伝子に支配される酵素プロドラッグ療法（gene-directed enzyme pro-drug therapy））アプローチ；および多剤耐性遺伝子治療のような、化学療法または放射線療法への患者耐性を増加させるアプローチを含めたもの；および
（viii）免疫療法アプローチであって、例えば、インターロイキン２、インターロイキン４または顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子などのサイトカインでのトランスフェクションのような、患者腫瘍細胞の免疫原性を増加させる ex-vivo および in vivo アプローチ；Ｔ細胞アネルギーを減少させるアプローチ；サイトカインでトランスフェクションされた樹状細胞のような、トランスフェクションされた免疫細胞を用いたアプローチ；サイトカインでトランスフェクションされた腫瘍細胞系を用いたアプローチ；および抗イディオタイプ抗体を用いたアプローチを含めたもの。
【００７５】
例えば、このような共同処置（conjoint treatment）は、本明細書中の前に定義のＡＺＤ２１７１マレイン酸塩と、ＷＯ９９／０２１６６号に記載のＮ−アセチルコルチノール−Ｏ−ホスフェート（ＷＯ９９／０２１６６号の実施例１）のような血管標的指向薬の、同時の、逐次的なまたは別々の投与によって達成することができる。
【００７６】
ＷＯ０１／７４３６０号により、抗血管形成薬は、抗高血圧症薬と組み合わせることができるということが知られている。本発明の塩も、抗高血圧症薬との組合せで投与することができる。抗高血圧症薬は、血圧を低下させる物質であり、本明細書中に援用されるＷＯ０１／７４３６０号を参照されたい。
【００７７】
したがって、本発明により、血管形成に関連した疾患状態の処置方法であって、ヒトなどの温血動物への、本明細書中の前に定義のＡＺＤ２１７１マレイン酸塩と抗高血圧症薬との組合せの有効量の投与を含む方法を提供する。
【００７８】
本発明のもう一つの特徴により、ヒトなどの温血動物の血管形成に関連した疾患状態の処置用の薬剤の製造に用いるための、本明細書中の前に定義のＡＺＤ２１７１マレイン酸塩と抗高血圧症薬との組合せの使用を提供する。
【００７９】
本発明のもう一つの特徴により、ヒトなどの温血動物の血管形成に関連した疾患状態の処置用の医薬組成物であって、本明細書中の前に定義のＡＺＤ２１７１マレイン酸塩および抗高血圧症薬を含む医薬組成物を提供する。
【００８０】
本発明のもう一つの側面により、ヒトなどの温血動物において抗血管形成作用および／または血管透過性減少作用を生じる方法であって、その動物に、有効量の本明細書中の前に定義のＡＺＤ２１７１マレイン酸塩および抗高血圧症薬を投与することを含む方法を提供する。
【００８１】
本発明のもう一つの側面により、ヒトなどの温血動物で抗血管形成作用および／または血管透過性減少作用を生じる薬剤の製造のための、本明細書中の前に定義のＡＺＤ２１７１マレイン酸塩と抗高血圧症薬との組合せの使用を提供する。
【００８２】
好ましい抗高血圧症薬は、カルシウムチャンネル遮断薬、アンギオテンシン変換酵素阻害剤（ＡＣＥ阻害剤）、アンギオテンシンII受容体アンタゴニスト（Ａ−IIアンタゴニスト）、利尿薬、βアドレナリン受容体遮断薬（β遮断薬）、血管拡張薬およびαアドレナリン受容体遮断薬（α遮断薬）である。具体的な抗高血圧症薬は、カルシウムチャンネル遮断薬、アンギオテンシン変換酵素阻害剤（ＡＣＥ阻害剤）、アンギオテンシンII受容体アンタゴニスト（Ａ−IIアンタゴニスト）およびβアドレナリン受容体遮断薬（β遮断薬）、特に、カルシウムチャンネル遮断薬である。
【００８３】
上述のように、ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩は、その抗血管形成作用および／または血管透過性減少作用について興味深い。ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩は、癌、糖尿病、乾癬、関節リウマチ、カポージ肉腫、血管腫、リンパ浮腫、急性および慢性の腎症、アテローム、動脈再狭窄、自己免疫疾患、急性炎症、過度の瘢痕形成および癒着、子宮内膜症、不正子宮出血、および加齢性黄斑変性を含めた網膜血管増殖を伴う眼疾患を含めた広範囲の疾患状態に有用であると考えられる。癌は、いずれの組織にも影響することがありうるが、それには、白血病、多発性骨髄腫およびリンパ腫が含まれる。具体的には、本発明のこのような化合物は、例えば、結腸、乳房、前立腺、肺および皮膚の原発性および再発性の充実性腫瘍の成長を好都合に遅らせると考えられる。より具体的には、本発明のこのような化合物は、白血病、多発性骨髄腫およびリンパ腫を含めた、ＶＥＧＦに関連したいずれかの形の癌を抑制する、そして更には、例えば、結腸、乳房、前立腺、肺、脳、外陰部および皮膚のある種の腫瘍を含めた、例えば、ＶＥＧＦに関連している原発性および再発性の充実性腫瘍、特に、成長および拡散についてＶＥＧＦに有意に依存している腫瘍の成長を抑制すると考えられる。
【００８４】
治療薬中でのそれらの使用に加えて、本明細書中の前に定義のＡＺＤ２１７１マレイン酸塩は、更に、新しい治療薬の追求の一部分として、ネコ、イヌ、ウサギ、サル、ラットおよびマウスなどの実験動物でのＶＥＧＦ受容体チロシンキナーゼ活性の阻害剤の作用を評価するための in vitro および in vivo 試験システムの開発および規格化において薬理学的手段として有用である。
【００８５】
ＷＯ００／４７２１２号に記載され且つＡＺＤ２１７１を調べるのに用いられた検定は、次の通りである。
（ａ）in vitro 受容体チロシンキナーゼ阻害試験
この検定は、チロシンキナーゼ活性を抑制する試験化合物の能力を決定する。ＶＥＧＦ、ＦＧＦまたはＥＧＦ受容体細胞質ドメインをコードしているＤＮＡは、全遺伝子合成（total gene synthesis）（Edwards M, International Biotechnology Lab 5(3), 19-25, 1987）によってまたはクローニングによって得ることができる。次に、これらを、適する発現系において発現させて、チロシンキナーゼ活性を有するポリペプチドを得ることができる。例えば、ＶＥＧＦ、ＦＧＦおよびＥＧＦ受容体細胞質ドメインを、昆虫細胞中の組換えタンパク質の発現によって得たが、それらは、固有のチロシンキナーゼ活性を示すことが判明した。ＶＥＧＦ受容体Ｆｌｔ−１（Genbank 受託番号Ｘ５１６０２）の場合、Shibuya et al（Oncogene, 1990, 5: 519-524）によって記載された、細胞質ドメインの大部分をコードし、メチオニン７８３で開始し、そして終止コドンを包含している１．７ｋｂ ＤＮＡフラグメントを、ｃＤＮＡより単離し、バキュロウイルストランスプレースメントベクター（transplacement vector）（例えば、ｐＡｃＹＭ１（The Baculovirus Expression System: A Laboratory Guide, L.A. King and R. D. Possee, Chapman and Hall, 1992 を参照されたい）またはｐＡｃ３６０またはｐＢｌｕｅＢａｃＨｉｓ（Invitrogen Corporation より入手可能））中にクローン化した。この組換えコンストラクトを、昆虫細胞（例えば、スポドプテラ・フルジペルダ２１（Spodoptera frugiperda 21）（Ｓｆ２１））中にウイルスＤＮＡ（例えば、Pharmingen BaculoGold）と共トランスフェクションして、組換えバキュロウイルスを製造した。（組換えＤＮＡ分子のアセンブリー方法および組換えバキュロウイルスの製造および使用についての詳細は、標準的な教本、例えば、Sambrook et al, 1989, Molecular cloning - A Laboratory Manual, 2nd edition, Cold Spring Harbour Laboratory Press and O'Reilly et al, 1992, Baculovirus Expression Vectors - A Laboratory Manual, W. H. Freeman and Co, New York に見出されうる）。ＫＤＲ（Genbank 受託番号Ｌ０４９４７）について、メチオニン８０６より開始する細胞質フラグメントを、同様の方式でクローン化し且つ発現させた。
【００８６】
ｃＦｌｔ−１チロシンキナーゼ活性の発現について、Ｓｆ２１細胞に、プラーク純粋（plaque-pure）ｃＦｌｔ−１組換えウイルスを３の感染多重度で感染させ、４８時間後に採取した。採取された細胞を、氷冷リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）（１０ｍＭリン酸ナトリウムｐＨ７．４、１３８ｍＭ塩化ナトリウム、２．７ｍＭ塩化カリウム）で洗浄後、氷冷ＨＮＴＧ／ＰＭＳＦ（２０ｍＭ Hepes ｐＨ７．５、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、１０％ｖ／ｖグリセロール、１％ｖ／ｖ Triton Ｘ１００、１．５ｍＭ塩化マグネシウム、１ｍＭエチレングリコールビス（βアミノエチルエーテル）Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−四酢酸（ＥＧＴＡ）、１ｍＭ ＰＭＳＦ（フェニルメチルスルホニルフルオリド）；ＰＭＳＦは、新たに調製されたメタノール中１００ｍＭ溶液より、使用直前に加える）中に、１０００万個の細胞につき１ｍｌのＨＮＴＧ／ＰＭＳＦを用いて再懸濁させた。その懸濁液を、４℃において１３，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、上澄み（酵素原液）を取り出し、−７０℃においてアリコートで貯蔵した。酵素原液の新しいバッチ各々を、検定において、酵素希釈剤（１００ｍＭ Hepes ｐＨ７．４、０．２ｍＭオルトバナジン酸ナトリウム、０．１％ｖ／ｖ Triton Ｘ１００、０．２ｍＭジチオトレイトール）での稀釈によって滴定した。典型的なバッチについて、原液酵素を酵素希釈剤で１／２０００に稀釈し、そして５０μｌの希薄酵素を、各々の検定ウェルに用いる。
【００８７】
基質溶液の原液を、チロシンを含有するランダムコポリマー、例えば、ポリ（Ｇｌｕ，Ａｌａ，Ｔｙｒ）６：３：１（Sigma Ｐ３８９９）より調製し、ＰＢＳ中の１ｍｇ／ｍｌ原液として−２０℃で貯蔵し、そしてプレートコーティング用にＰＢＳで１／５００に稀釈した。
【００８８】
検定前日に、１００μｌの稀釈された基質溶液を、検定プレート（Nunc maxisorp ９６ウェルイムノプレート）の全ウェル中に分配し、それらを密封し、４℃で一晩放置した。
検定当日に、その基質溶液を捨て、そして検定プレートウェルを、ＰＢＳＴ（０．０５％ｖ／ｖ Tween ２０を含有するＰＢＳ）で１回および５０ｍＭ Hepes ｐＨ７．４で１回洗浄した。
【００８９】
試験化合物を、１０％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）で稀釈し、そして２５μｌの稀釈された化合物を、洗浄された検定プレートのウェルに移した。「全」対照ウェルは、化合物の代わりに１０％ＤＭＳＯを含有した。８μＭアデノシン−５’−三リン酸（ＡＴＰ）を含有する４０ｍＭ塩化マンガン（II）２５マイクロリットルを、ＡＴＰ不含の塩化マンガン（II）が入った「ブランク」対照ウェルを除く全ての試験ウェルに加えた。反応を開始するために、５０μｌの新たに稀釈された酵素を各ウェルに加え、それらプレートを室温で２０分間インキュベートした。次に、液体を捨て、それらウェルをＰＢＳＴで２回洗浄した。０．５％ｗ／ｖウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含有するＰＢＳＴで１／６０００に稀釈されたマウスＩｇＧ抗ホスホチロシン抗体（Upstate Biotechnology Inc. 製品０５−３２１）１００マイクロリットルを、各ウェルに加え、そしてプレートを室温で１時間インキュベート後、液体を捨て、ウェルをＰＢＳＴで２回洗浄した。０．５％ｗ／ｖＢＳＡを含有するＰＢＳＴで１／５００に稀釈された西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）結合ヒツジ抗マウスＩｇ抗体（Amersham 製品ＮＸＡ９３１）１００マイクロリットルを加え、そしてプレートを室温で１時間インキュベート後、液体を捨て、ウェルをＰＢＳＴで２回洗浄した。５０ｍｌの新たに調製された５０ｍＭリン酸・クエン酸緩衝液ｐＨ５．０＋０．０３％過ホウ酸ナトリウム（１００ｍｌの蒸留水につき１個の過ホウ酸ナトリウム含有リン酸・クエン酸緩衝剤（ＰＣＳＢ）カプセル（Sigma Ｐ４９２２）で製造される）中に１個の５０ｍｇＡＢＴＳ錠剤（Boehringer １２０４ ５２１）を用いて新たに調製された２，２’−アジノビス（３−エチルベンゾチアゾリン−６−スルホン酸）（ＡＢＴＳ）溶液１００マイクロリットルを、各ウェルに加えた。次に、プレートを、プレート読み取り用分光光度計を用いて４０５ｎｍで測定される「全」対照ウェルの光学濃度値が約１．０になるまで、室温で２０〜６０分間インキュベートした。「ブランク」（ＡＴＰ不含）および「全」（化合物不含）対照値を用いて、酵素活性の５０％阻害を与える試験化合物の稀釈範囲を決定した。
【００９０】
（ｂ）in vitro ＨＵＶＥＣ増殖検定
この検定は、増殖因子に刺激されたヒト臍静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）の増殖を抑制する試験化合物の能力を決定する。
【００９１】
ＨＵＶＥＣ細胞を、ＭＣＤＢ１３１（Gibco ＢＲＬ）＋７．５％ｖ／ｖウシ胎児血清（ＦＣＳ）中で単離し、９６ウェルプレート中、ＭＣＤＢ１３１＋２％ｖ／ｖＦＣＳ＋３μｇ／ｍｌヘパリン＋１μｇ／ｍｌヒドロコルチゾン中において１０００個／ウェルの細胞濃度で（２〜８継代で）培養した。最低４時間の後、それらに、ＶＥＧＦ（３ｎｇ／ｍｌ）および化合物を投与した。次に、それら培養物を、３７℃において７．５％ＣＯ２で４日間インキュベートした。４日目に、培養物に、１μＣｉ／ウェルのトリチウム化チミジン（Amersham 製品ＴＲＡ６１）を短時間暴露し、そして４時間インキュベートした。細胞を、９６ウェルプレートハーベスター（Tomtek）を用いて採取後、トリチウムの取込みについて Beta プレートカウンターで検定した。ｃｐｍとして表される細胞中への放射能の取込みを用いて、増殖因子に刺激された細胞増殖の化合物による抑制を測定した。この方法を、更に、基礎的ＨＵＶＥＣ成長（すなわち、外因性ＶＥＧＦの添加を伴わない、ＭＣＤＢ１３１＋２％ｖ／ｖＦＣＳ＋３μｇ／ｍｌヘパリン＋１μｇ／ｍｌヒドロコルチゾン中の内皮細胞増殖）に対する化合物作用を評価するのに用いた。
【００９２】
（ｃ）in vivo 充実性腫瘍疾患モデル
この試験は、充実性腫瘍成長を抑制する化合物の能力を測定する。
ＣａＬｕ−６腫瘍異種移植片を、雌無胸腺 Swiss ｎｕ／ｎｕマウスの側腹に、血清不含培地中の５０％（ｖ／ｖ）Matrigel 溶液１００μｌ中に１ｘ１０６個／マウスのＣａｌｕ−６細胞の皮下注射によって樹立した。細胞植込みから１０日後、マウスを８〜１０の群に分けて、同等の群平均体積に達するようにした。腫瘍を、バーニアカリパスを用いて測定し、そして体積を、（ｌｘｗ）ｘO（ｌｘｗ）ｘ（π／６）（式中、ｌは最長径であり、そしてｗは、その最長に垂直の直径である）として計算した。試験化合物を、１日１回、最低２１日間経口投与し、対照動物には、化合物用希釈剤を与えた。腫瘍を週２回測定した。成長阻害レベルを、対照群対被処置群の平均腫瘍体積の比較により、Student Ｔ検定および／または Mann-Whitney Rank Sum Test を用いて計算した。化合物処置の阻害作用は、ｐ＜０．０５の場合に有意とみなした。
【００９３】
本明細書中の前に定義のＡＺＤ２１７１マレイン酸塩は、化学的関連化合物の製造に応用可能であることが知られているいずれかの方法によって製造することができる。このような方法には、例えば、本明細書中に全て援用される国際特許出願ＷＯ００／４７２１２号に示されたものが含まれる。このような方法には、更に、例えば、固相合成が含まれる。このような方法は、本発明のもう一つの特徴として提供され、以下に記載の通りである。必要な出発物質は、有機化学の標準法によって得ることができる。ＡＺＤ２１７１遊離塩基は、ＷＯ００／４７２１２号に記載のいずれかの方法にしたがって製造することができる。ＷＯ００／４７２１２号の具体的な実施例２４０を参照されたい。或いは、必要な出発物質は、有機学者の常套技術の範囲内である、示されたのと同様の手順によって入手可能である。
【００９４】
次の方法（ａ）、（ｂ）および（ｃ）は、本発明の追加の特徴を構成している。
ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ａ形の合成
（ａ）このような方法は、本発明のもう一つの側面を提供し、そして例えば、
（ｉ）ＡＺＤ２１７１遊離塩基を有機溶媒中に溶解させて溶液を形成し；
（ii）マレイン酸の水溶液を加え、またはマレイン酸の有機溶媒中の溶液を加え；
（iii）自然核生成を生じさせ；
（iv）場合により、そのように形成されたＡＺＤ２１７１のＡ形およびＢ形の結晶性混合物を単離し；
（ｖ）その混合物を、溶媒、例えば、メタノール中で、（Ｘ線粉末回折によって確認されうるように）全てのＡＺＤ２１７１マレイン酸塩がＡ形になるまでスラリーにし、例えば、これは４日を要することがあり；そして
（vi）そのように形成された結晶性固体を単離する
工程を含む。
【００９５】
（ｂ）別のこのような方法は、本発明のもう一つの側面を提供し、そして例えば、
（ｉ）ＡＺＤ２１７１遊離塩基を有機溶媒中に溶解させて溶液を形成し；
（ii）マレイン酸の水溶液を加え、またはマレイン酸の有機溶媒中の溶液を加え；
（iii）溶液を、例えば、加熱することまたは追加の溶媒を加えることによって得、そしてＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ａ形の種結晶を加えて、ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ａ形の結晶化を開始させ；そして
（iv）そのように形成された結晶性固体を単離する
工程を含む。
【００９６】
（ａ）および（ｂ）の項目（ｉ）について、混合物は、必要ならば、溶解が達せられるまで加熱して還流させてよい。或いは、混合物は、例えば、溶媒の還流温度未満の温度に加熱してよいが、但し、ほとんど全ての固体材料の溶解が達せられたという条件付きである。少量の不溶性材料は、加温された混合物の濾過によって除去することができるということは理解されるであろう。
【００９７】
（ａ）および（ｂ）の項目（ｉ）について、有機溶媒は、好ましくは、アルコール、例えば、メタノールまたはイソプロパノールである。
（ａ）および（ｂ）の項目（ii）について、有機溶媒は、好ましくは、アルコール、例えば、メタノールである。
【００９８】
（ｃ）ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ｂ形の合成
このような方法は、本発明のもう一つの側面を提供し、そして例えば、
（ｉ）ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩を有機溶媒中に溶解させて溶液を形成し；
（ii）その溶液を、ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩が、ＮＭＰ中の場合より低い溶解度を有する溶媒、例えば、トルエンまたは酢酸エチルに加え；
（iii）次に、ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ｂ形の結晶化を生じ；そして
（iv）そのように形成された結晶性固体を単離する
工程を含む。
【００９９】
（ｃ）において、好ましい有機溶媒は、１−メチル−２−ピロリジノンのような、きわめて可溶性の溶媒である。
（ｃ）の項目（ｉ）について、混合物は、必要ならば、溶解が達せられるまで加熱して還流させてよい。或いは、混合物は、例えば、溶媒の還流温度未満の温度に加熱してよいが、但し、ほとんど全ての固体材料の溶解が達せられたという条件付きである。少量の不溶性材料は、加温された混合物の濾過によって除去することができるということは理解されるであろう。
【０１００】
上の（ａ）、（ｂ）および（ｃ）において、そのように形成された結晶性固体は、いずれかの慣用法によって、例えば、濾過によって単離することができる。
本発明を、次の非制限実施例、データおよび図面によって、以下に詳しく説明するが、ここにおいて、特に断らない限り、
（ｉ）蒸発は、真空中のロータリーエバポレーションによって行ったし、処理手順は、乾燥剤などの残留固体の濾過による除去後に行った；
（ii）収率は、単に例示のために与えられ、必ずしも、達成可能な最大値ではない；
（iii）融点は未補正であるが、Mettler ＤＳＣ８２０ｅを用いて決定した；
（iv）式Ｉの最終生成物の構造は、核（概して、プロトン）磁気共鳴（ＮＭＲ）および質量スペクトル技術によって確認した；プロトン磁気共鳴化学シフト値は、δスケールで測定したが、ピーク多重度は、次のように示している、すなわち、ｓ，一重線；ｄ，二重線；ｔ，三重線；ｍ，多重線；ｂｒ，幅広；ｑ，四重線，ｑｕｉｎ，五重線；全ての試料を、Bruker ＤＰＸ ４００ＭＨｚにおいて、ｄ６−ＤＭＳＯ中の３００Ｋ、１６走査、パルス反復時間１０秒で実験した；
（ｖ）中間体は、概して、十分に特性決定しなかったが、純度は、ＮＭＲ分析によって評価した；そして
（vi）次の略語を用いた。
【０１０１】
ＤＭＳＯ ジメチルスルホキシド
ＮＭＰ １−メチル−２−ピロリジノン
【実施例】
【０１０２】
実施例１：ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ａ形
窒素の不活性雰囲気下において、ＡＺＤ２１７１粗製遊離塩基（４．５２ｇ）（例えば、ＷＯ００／４７２１２号の実施例２４０に記載のように製造される）を、イソプロパノール（５８．８ｍＬ）でスラリーにした。その混合物を、還流しながら１５分間加熱して、透明な暗色溶液を生じた。混合物を７５℃に冷却し、木炭（０．２２６ｇ）を加えた。混合物を再加熱して還流させ、還流しながら１時間保持した。次に、混合物を熱濾過した。木炭濾過ケーキを、熱イソプロパノール（９ｍＬ）で洗浄した。合わせた濾液および洗液の温度を５５℃に調整し、そして水（２．７１ｍＬ）中のマレイン酸（１．１７３ｇ）の予め濾過された溶液を、５分間にわたって滴加した。予め結晶化した粗製遊離塩基を、その添加中に溶解させた。水（０．９ｍＬ）のラインウォッシュ（line wash）を加えた。その混合物を５５℃で１５分間維持し、そしてＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ａ形の種結晶（０．０２３ｇ）を加えた。混合物を５５℃で４時間保持した。４時間の保持中に、結晶化は確定した状態になった。混合物を０℃に８時間にわたって冷却した。混合物を０℃で最低８時間保持した。混合物を濾過した。濾過ケーキをイソプロパノール（９ｍＬ）で洗浄した。固体を真空オーブン中において５０℃で乾燥させて、４−（［４−フルオロ−２−メチル−１Ｈ−インドール−５−イル］オキシ）−６−メトキシ−７−（３−（ピロリジン−１−イル）プロポキシ）キナゾリンマレイン酸塩Ａ形を生じた。
【０１０３】
１Ｈ ＮＭＲスペクトル：(400 MHz, DMSO): 11.36 (s, 1H), 8.53 (s, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.43 (s, 1H), 7.18 (d, 1H), 7.01 (d, 1H), 6.25 (s, 1H), 6.04 (s, 2H), 4.33 (t, 2H), 4.02 (s, 3H), 3.26-3.3.70 (b, 4H), 2.44, (s, 3H), 2.24 (m, 2H), 2.02 (m, 4H)。
【０１０４】
ｍ．ｐ．：ＤＳＣ分析：１９８．３℃で融解開始および２００．０８℃でピーク。
実施例２：ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ａ形
窒素の不活性雰囲気下において、ＡＺＤ２１７１粗製遊離塩基（２３．０ｇ）（例えば、ＷＯ００／４７２１２号の実施例２４０に記載のように製造される）を、容器１においてメタノール（２２３ｍＬ）中でスラリーにした。その混合物を、真空下で保持することによって脱気後、窒素で真空を解除した。これを５回繰り返した。次に、そのスラリーを加熱して還流させ、そこで１５分間保持して、透明な暗褐色溶液を生じた。その溶液を６０℃に冷却後、Celite（登録商標）パッド（４．００ｇ）を介して容器２中へ濾過した。その Celite（登録商標）パッドを、熱（６０℃）メタノール（７８ｍＬ）で洗浄し、濾液を再度、容器２に入れた。
【０１０５】
次に、容器１に、０℃に冷却されたメタノール（１１１ｍＬ）を入れた。次に、容器１に、マレイン酸（５．５０ｇ）を入れ、その混合物を、マレイン酸が全て溶解するまで、０℃で１５分間撹拌した。
【０１０６】
次に、容器１の内容物を、インラインフィルターを介して、５２℃を超える温度を維持しながら容器２に入れた。ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ａ形の種結晶（０．０４５４ｇ）を、容器２に５５℃で加え、その混合物を５５℃で３時間保持した。次に、混合物を４０℃に７時間にわたって冷却後、更に、−５℃に６時間にわたって冷却した。固体を濾過し、そしてメタノール（１００ｍＬ）で−５℃において洗浄した。生成物を真空オーブン中で２４時間乾燥させて、４−（［４−フルオロ−２−メチル−１Ｈ−インドール−５−イル］オキシ）−６−メトキシ−７−（３−（ピロリジン−１−イル）プロポキシ）キナゾリンマレイン酸塩Ａ形を生じた。
【０１０７】
実施例３：ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ｂ形
ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ａ形（２．３１ｇ）を、温（約５０℃）ＮＭＰ中に溶解させた。この溶液を、トルエン（２３ｍＬ）に周囲温度で２分間にわたって滴加した。次に、固体として最初に沈殿した材料は、油状物になった後、再度固体になった。周囲温度で１０分間撹拌後、固体を濾過し、トルエン（１０ｍＬ）で洗浄した。その固体を、真空オーブン中において周囲温度で一晩乾燥させて、４−（（４−フルオロ−２−メチル−１Ｈ−インドール−５−イル）オキシ）−６−メトキシ−７−（３−（ピロリジン−１−イル）プロポキシ）キナゾリンマレイン酸塩Ｂ形を生じた。
【０１０８】
ｍ．ｐ．：ＤＳＣ分析：１９４．４３℃で融解開始および１９５．９７℃でピーク。
用いられた技術の詳細
Ｘ線粉末回折
【０１０９】
【表５】
【０１１０】
分析用計測器：Siemens Ｄ５０００
Ｘ線粉末回折スペクトルは、結晶性塩の試料を、Siemens 単シリコン結晶（ＳＳＣ）ウェファーマウント上に載せ、顕微鏡スライドによってその試料を薄層中に広げることによって決定した。その試料を、３０回転／分で回転させ（計数統計を改善する）、４０ｋＶおよび４０ｍＡにおいて１．５４０６オングストロームの波長で操作される銅ロング・ファインフォーカス管によって発生したＸ線を照射した。平行Ｘ線源を、Ｖ２０で設定された自動可変発散スリットを介して通過させ、そして反射した放射線を、２ｍｍ散乱防止スリットおよび０．２ｍｍ検出器スリットを介して方向づけた。試料を、θ−θモードにおいて２°〜４０°２θの範囲にわたって０．０２°２θ増加分（連続走査モード）につき１秒間暴露した。運転時間は、３１分４１秒であった。その計測器に、シンチレーション計数管を検出器として装備した。制御およびデータ捕捉は、Diffract＋ソフトウェアで操作する Dell Optiplex ６８６ＮＴ４．０ Workstation によった。Ｘ線粉末回折の当業者は、ピークの相対強度が、例えば、試料の分析に影響することがありうる約３０ミクロンを超えるサイズの粒子および統一されていないアスペクト比によって影響されることがありうるということを理解するであろう。当業者は、更に、反射位置が、回折計中の試料がある正確な高さおよび回折計のゼロ検定によって影響されることがありうるということを理解するであろう。試料表面の平坦さも、僅かに作用することがありうる。したがって、提示された回折図形データを、絶対値と見なすことはない。
【０１１１】
篩い分け／超微粉砕
ＡＺＤ２１７１遊離塩基を、篩い分け後、１ｍｍステンレス鋼製篩を用いて超微粉砕し、その塩基を、生成物採集用におよび超微粉砕機中に直接的に手動供給するのに用いた。
【０１１２】
約７．５ｇのＡＺＤ２１７１遊離塩基を篩い分けした。
清浄なＳ／Ｓライン２”超微粉砕機を用いた。
手動供給速度：約２／３ｇ／分。
【０１１３】
粉砕空気圧範囲１０／２０ｐｓｉ（０．６７／１．３３気圧）。
ベンチュリ空気圧範囲２０／２５ｐｓｉ（１．３３／１．６７気圧）。
動的蒸気収着
分析用計測器：Surface Measurements Systems Dynamic Vapour Sorption Analyser。
【０１１４】
２５℃で石英ホルダー中に入った約５ｍｇの材料を、給湿窒素に、次の相対湿度（ＲＨ）：０、２０、４０、６０、８０、９５、８０、６０、４０、２０、０％ＲＨで二重に供した。
【０１１５】
示差走査熱量測定
分析用計測器：Mettler ＤＳＣ８２０ｅ。
典型的に、穴あき蓋を装着した４０μｌアルミニウムパンに入った５ｍｇ未満の材料を、２５℃〜３２５℃の温度範囲にわたって１０℃／分の一定加熱速度で加熱した。窒素を用いたパージガスを、１００ｍｌ／分の流速で用いた。
【０１１６】
熱重量測定分析
分析用計測器：Mettler ＴＧ８５１。
典型的に、７０μｌアロックス（酸化アルミニウム）るつぼ中に入った３〜１２ｍｇの材料を、２５℃〜３２５℃の温度範囲にわたって１０℃／分の一定加熱速度で加熱した。ヘリウムを用いたパージガスを、５０ｍｌ／分の流速で用いた。
【０１１７】
カール・フィッシャー水分
分析用計測器：Mitsubishi Moisture Meter ＣＡ−０５。
典型的に、約５０ｍｇの材料を用いた。
【図面の簡単な説明】
【０１１８】
【図１】図１：ＡＺＤ２１７１遊離塩基一水和物のＤＳＣおよびＴＧＡサーモグラム−℃の温度を水平軸上に、そして熱流／損失重量％を鉛直軸上にプロットしている。
【図２】図２：ＡＺＤ２１７１遊離塩基のＸ線粉末回折図形−２θ値を水平軸上にプロットし、そして相対線強度（カウント）を鉛直軸上にプロットしている。
【図３】図３：１００℃に加熱されたＡＺＤ２１７１遊離塩基一水和物のＸ線粉末回折図形−２θ値を水平軸上にプロットし、そして相対線強度（カウント）を鉛直軸上にプロットしている。
【図４】図４：超微粉ＡＺＤ２１７１遊離塩基のＸ線粉末回折図形−２θ値を水平軸上にプロットし、そして相対線強度（カウント）を鉛直軸上にプロットしている。
【図５】図５：ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ａ形のＸ線粉末回折図形−２θ値を水平軸上にプロットし、そして相対線強度（カウント）を鉛直軸上にプロットしている。
【図６】図６：ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ａ形のＤＳＣサーモグラム−℃の温度を水平軸上にプロットし、そして吸熱熱流（ミリワット（ｍＷ））を鉛直軸上にプロットしている。
【図７】図７：ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ａ形の２５℃での蒸気収着等温線−目標相対湿度（ＲＨ）（％）を水平軸上にプロットし、そして乾燥質量の変化（％）を鉛直軸上にプロットしている。
【図８】図８：ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ｂ形のＸ線粉末回折図形−２θ値を水平軸上にプロットし、そして相対線強度（カウント）を鉛直軸上にプロットしている。
【図９】図９：ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ｂ形のＤＳＣサーモグラム−℃の温度を水平軸上にプロットし、そして吸熱熱流（ミリワット（ｍＷ））を鉛直軸上にプロットしている。
【図１０】図１０：ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩スラリー実験についての、２θ値を水平軸上にプロットし、そして相対線強度（カウント）を鉛直軸上にプロットしているＸ線粉末回折図形。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩。
【請求項２】
Ａ形結晶形の、請求項１に記載のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩。
【請求項３】
Ｂ形結晶形の、請求項１に記載のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩。
【請求項４】
Ａ形結晶形の、請求項２に記載のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、約２θ＝２１．５°に少なくとも一つの特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する該塩。
【請求項５】
Ａ形結晶形の、請求項２に記載のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、約２θ＝１６．４°に少なくとも一つの特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する該塩。
【請求項６】
Ａ形結晶形の、請求項２に記載のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、約２θ＝２１．５°および１６．４°に少なくとも二つの特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する該塩。
【請求項７】
Ａ形結晶形の、請求項２に記載のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、約２θ＝２１．５°、１６．４°、２４．４°、２０．７°、２５．０°、１６．９°、１２．１°、２２．２°、１７．４°および１７．６°に特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する該塩。
【請求項８】
Ａ形結晶形の、請求項２に記載のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、図５に示されるＸ線粉末回折図形と実質的に同じＸ線粉末回折図形を有する該塩。
【請求項９】
Ｂ形結晶形の、請求項３に記載のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、約２θ＝２４．２°に少なくとも一つの特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する該塩。
【請求項１０】
Ｂ形結晶形の、請求項３に記載のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、約２θ＝２２．７°に少なくとも一つの特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する該塩。
【請求項１１】
Ｂ形結晶形の、請求項３に記載のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、約２θ＝２４．２°および２２．７°に少なくとも二つの特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する該塩。
【請求項１２】
Ｂ形結晶形の、請求項３に記載のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、約２θ＝２４．２°、２２．７°、１５．７°、１２．０°、２７．１°、２５．０°、１７．７°、１５．０°、２３．１°および１２．６°に特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する該塩。
【請求項１３】
Ｂ形結晶形の、請求項３に記載のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、図８に示されるＸ線粉末回折図形と実質的に同じＸ線粉末回折図形を有する該塩。
【請求項１４】
医薬組成物であって、請求項１に記載のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩を、薬学的に許容しうる賦形剤または担体と一緒に含む医薬組成物。
【請求項１５】
ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩がＡ形結晶形である、請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩がＢ形結晶形である、請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
請求項２に記載のＡ形結晶形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩の製造方法であって、
（ｉ）ＡＺＤ２１７１遊離塩基を有機溶媒中に溶解させて溶液を形成し；
（ii）マレイン酸の水溶液を加え、またはマレイン酸の有機溶媒中の溶液を加え；
（iii）自然核生成を生じさせ；
（iv）その混合物を溶媒中で、全てのＡＺＤ２１７１マレイン酸塩がＡ形になるまでスラリーにし；そして
（ｖ）そのように形成された結晶性固体を単離すること
を含む方法。
【請求項１８】
請求項２に記載のＡ形結晶形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩の製造方法であって、
（ｉ）ＡＺＤ２１７１遊離塩基を有機溶媒中に溶解させて溶液を形成し；
（ii）マレイン酸の水溶液を加え、またはマレイン酸の有機溶媒中の溶液を加え；
（iii）溶液を得、そしてＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ａ形の種結晶を加えて、ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ａ形の結晶化を開始させ；そして
（iv）そのように形成された結晶性固体を単離すること
を含む方法。
【請求項１９】
請求項３に記載のＢ形結晶形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩の製造方法であって、
（ｉ）ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩を有機溶媒中に溶解させて溶液を形成し；
（ii）その溶液を、ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩が、ＮＭＰ中の場合より低い溶解度を有する溶媒に加え；
（iii）次に、ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ｂ形の結晶化を生じ；そして
（iv）そのように形成された結晶性固体を単離すること
を含む方法。
【請求項２０】
ヒトなどの温血動物での抗血管形成作用および／または血管透過性減少作用の生成に用いるための薬剤の製造における、請求項１に記載のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩の使用。
【請求項２１】
抗血管形成作用および／または血管透過性減少作用を生じる処置を必要としているヒトなどの温血動物において抗血管形成作用および／または血管透過性減少作用を生じる方法であって、該動物に、有効量の請求項１に記載のＡＺＤ２１７１マレイン酸塩を投与することを含む方法。
【請求項１】
ＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩。
【請求項２】
Ａ形結晶形の、請求項１に記載のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩。
【請求項３】
Ｂ形結晶形の、請求項１に記載のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩。
【請求項４】
Ａ形結晶形の、請求項２に記載のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、約２θ＝２１．５°に少なくとも一つの特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する該塩。
【請求項５】
Ａ形結晶形の、請求項２に記載のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、約２θ＝１６．４°に少なくとも一つの特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する該塩。
【請求項６】
Ａ形結晶形の、請求項２に記載のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、約２θ＝２１．５°および１６．４°に少なくとも二つの特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する該塩。
【請求項７】
Ａ形結晶形の、請求項２に記載のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、約２θ＝２１．５°、１６．４°、２４．４°、２０．７°、２５．０°、１６．９°、１２．１°、２２．２°、１７．４°および１７．６°に特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する該塩。
【請求項８】
Ａ形結晶形の、請求項２に記載のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、図５に示されるＸ線粉末回折図形と実質的に同じＸ線粉末回折図形を有する該塩。
【請求項９】
Ｂ形結晶形の、請求項３に記載のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、約２θ＝２４．２°に少なくとも一つの特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する該塩。
【請求項１０】
Ｂ形結晶形の、請求項３に記載のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、約２θ＝２２．７°に少なくとも一つの特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する該塩。
【請求項１１】
Ｂ形結晶形の、請求項３に記載のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、約２θ＝２４．２°および２２．７°に少なくとも二つの特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する該塩。
【請求項１２】
Ｂ形結晶形の、請求項３に記載のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、約２θ＝２４．２°、２２．７°、１５．７°、１２．０°、２７．１°、２５．０°、１７．７°、１５．０°、２３．１°および１２．６°に特異的ピークがあるＸ線粉末回折図形を有する該塩。
【請求項１３】
Ｂ形結晶形の、請求項３に記載のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩であって、図８に示されるＸ線粉末回折図形と実質的に同じＸ線粉末回折図形を有する該塩。
【請求項１４】
医薬組成物であって、請求項１に記載のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩を、薬学的に許容しうる賦形剤または担体と一緒に含む医薬組成物。
【請求項１５】
ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩がＡ形結晶形である、請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩がＢ形結晶形である、請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
請求項２に記載のＡ形結晶形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩の製造方法であって、
（ｉ）ＡＺＤ２１７１遊離塩基を有機溶媒中に溶解させて溶液を形成し；
（ii）マレイン酸の水溶液を加え、またはマレイン酸の有機溶媒中の溶液を加え；
（iii）自然核生成を生じさせ；
（iv）その混合物を溶媒中で、全てのＡＺＤ２１７１マレイン酸塩がＡ形になるまでスラリーにし；そして
（ｖ）そのように形成された結晶性固体を単離すること
を含む方法。
【請求項１８】
請求項２に記載のＡ形結晶形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩の製造方法であって、
（ｉ）ＡＺＤ２１７１遊離塩基を有機溶媒中に溶解させて溶液を形成し；
（ii）マレイン酸の水溶液を加え、またはマレイン酸の有機溶媒中の溶液を加え；
（iii）溶液を得、そしてＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ａ形の種結晶を加えて、ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ａ形の結晶化を開始させ；そして
（iv）そのように形成された結晶性固体を単離すること
を含む方法。
【請求項１９】
請求項３に記載のＢ形結晶形のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩の製造方法であって、
（ｉ）ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩を有機溶媒中に溶解させて溶液を形成し；
（ii）その溶液を、ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩が、ＮＭＰ中の場合より低い溶解度を有する溶媒に加え；
（iii）次に、ＡＺＤ２１７１マレイン酸塩Ｂ形の結晶化を生じ；そして
（iv）そのように形成された結晶性固体を単離すること
を含む方法。
【請求項２０】
ヒトなどの温血動物での抗血管形成作用および／または血管透過性減少作用の生成に用いるための薬剤の製造における、請求項１に記載のＡＺＤ２１７１のマレイン酸塩の使用。
【請求項２１】
抗血管形成作用および／または血管透過性減少作用を生じる処置を必要としているヒトなどの温血動物において抗血管形成作用および／または血管透過性減少作用を生じる方法であって、該動物に、有効量の請求項１に記載のＡＺＤ２１７１マレイン酸塩を投与することを含む方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【公表番号】特表２００７−５１７００８（Ｐ２００７−５１７００８Ａ）
【公表日】平成１９年６月２８日（２００７．６．２８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５４６３１１（Ｐ２００６−５４６３１１）
【出願日】平成１６年１２月１８日（２００４．１２．１８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＧＢ２００４／００５３５９
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０６１４８８
【国際公開日】平成１７年７月７日（２００５．７．７）
【出願人】（３０００２２６４１）アストラゼネカ アクチボラグ (581)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１９年６月２８日（２００７．６．２８）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年１２月１８日（２００４．１２．１８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＧＢ２００４／００５３５９
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０６１４８８
【国際公開日】平成１７年７月７日（２００５．７．７）
【出願人】（３０００２２６４１）アストラゼネカ アクチボラグ (581)
【Ｆターム（参考）】
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