改善されたペルヒドロラーゼ活性を有するスブチリシン変異体
本発明は、１１、１５、２１、３８、５０、５４、５８、７７、８３、８９、９３、９６、１０７、１１７、１２０、１３４、１３５、１３６、１４０、１４７、１５０、１５４、１５５、１６０、１６１、１７１、１７９、１８０、１８１、１９４、２０５、２０８、２１３、２１６、２１７、２３８、２３９、２５１、２５３、２５７および／または２６１位におけるアミノ酸交換によってプロテアーゼ カールスバーグ(Carlsberg)から導かれた新規なペルヒドロラーゼに関する。また、本発明は、該新規なペルヒドロラーゼの製造方法、該新規なペルヒドロラーゼを含有する物品、特に、身体ケア、毛髪ケア、シャンプー、毛髪染色、毛髪漂白、口腔ケア、歯ケア、義歯ケア、化粧用、治療用、(織物)洗浄用、浄化用、濯ぎ用、手洗い用、洗濯用および食器洗浄用物品、ならびに、該新規なペルヒドロラーゼの対応する使用に関する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号２２に記載したアミノ酸配列に対応するが、１１、１５、２１、３８、５０、５４、５８、７７、８３、８９、９３、９６、１０７、１１７、１２０、１３４、１３５、１３６、１４０、１４７、１５０、１５４、１５５、１６０、１６１、１７１、１７９、１８０、１８１、１９４、２０５、２０８、２１３、２１６、２１７、２３８、２３９、２５１、２５３、２５７、２６１の中から選択される配列位置に１つまたはそれ以上のアミノ酸交換を保持するアミノ酸配列を有するペルヒドロラーゼ。
【請求項２】
配列番号２２に記載したアミノ酸配列に対応するが、１１、５８、７７、８９、９６、１１７、１２０、１３４、１３５、１３６、１４０、１４７、１５０、１６１、２０８、２１６、２１７、２３８の中から選択される配列位置に１つまたはそれ以上のアミノ酸交換を保持するアミノ酸配列を有する、請求項１に記載のペルヒドロラーゼ。
【請求項３】
配列番号２２に記載したアミノ酸配列に対応するが、５８、８９、９６、１１７、２１６、２１７の中から選択される配列位置に１つまたはそれ以上のアミノ酸交換を保持するアミノ酸配列を有する、請求項１または２に記載のペルヒドロラーゼ。
【請求項４】
１つまたはそれ以上のアミノ酸交換 Ｔ５８ＡまたはＴ５８Ｑ、Ｌ８９Ｓ、Ｎ９６Ｄ、Ｇ１１７Ｄ、Ｌ２１６ＷおよびＮ２１７Ｄを特徴とする、請求項１〜３のいずれかに記載のペルヒドロラーゼ。
【請求項５】
配列番号２(Ｌ８９Ｓ／Ｌ２１６Ｗ／Ｎ２１７Ｄ)、配列番号４(Ｌ２１６Ｗ／Ｎ２１７Ｄ)、配列番号６(Ｔ５８Ａ／Ｌ８９Ｓ／Ｌ２１６Ｗ／Ｎ２１７Ｄ)、配列番号８(Ｔ５８Ａ／Ｇ１１７Ｄ／Ｌ２１６Ｗ／Ｎ２１７Ｄ)、配列番号１０(Ｔ５８Ａ／Ｌ８９Ｓ／Ｌ２１６Ｗ)、配列番号１２(Ｔ５８Ａ／Ｌ８９Ｓ／Ｎ９６Ｄ／Ｌ２１６Ｗ)、配列番号１４(Ｔ５８Ａ／Ｌ２１６Ｗ)、配列番号１６(Ｔ５８Ｑ／Ｌ８９Ｓ／Ｌ２１６Ｗ)および配列番号１８(Ｌ８９Ｓ／Ｌ２１６Ｗ)に記載したアミノ酸配列のいずれかを有する、請求項１〜４のいずれかに記載のペルヒドロラーゼ。
【請求項６】
アミノ酸配列が、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６または１８に記載したアミノ酸配列のいずれかに、順に増大して好ましくはそれぞれ少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、非常に特に好ましくは１００％対合しているペルヒドロラーゼ。
【請求項７】
配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５または１７に記載したヌクレオチド配列のいずれかに、それぞれ順に増大して好ましくは少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、非常に特に好ましくは１００％同一である部分を含有するヌクレオチド配列を有する、ペルヒドロラーゼをコードしている核酸。
【請求項８】
請求項１〜６のいずれかに記載のペルヒドロラーゼから１つまたはそれ以上の保存性アミノ酸交換によって得られるペルヒドロラーゼ。
【請求項９】
請求項１〜６のいずれかに記載のペルヒドロラーゼの誘導体化、断片化、欠失突然変異または挿入突然変異によって得られるペルヒドロラーゼ。
【請求項１０】
配列番号１９〜２１のいずれかに記載の配列を有するオリゴヌクレオチド。
【請求項１１】
ＰＣＲプライマーとしての、特に、新規なペルヒドロラーゼを同定および／または単離するための、請求項１０に記載のオリゴヌクレオチドの使用。
【請求項１２】
別のタンパク質との融合または結合のための、特に新規な酵素の開発のための、請求項１〜６、８または９のいずれかに記載のペルヒドロラーゼの使用。
【請求項１３】
別の核酸との融合のための、特に新規な酵素の開発のための、請求項７〜１０のいずれかに記載の核酸の使用。
【請求項１４】
請求項７〜１０に記載した核酸ドメインのいずれかを含有するベクター、特にクローニングベクターまたは発現ベクター。
【請求項１５】
好ましくは請求項１４に記載の発現ベクターを用いて、請求項１〜６、８または９に記載したタンパク質または誘導体のいずれかを発現するか、または発現するように刺激しうる宿主細胞。
【請求項１６】
細菌、特に、生成したタンパク質または誘導体を周囲培地中に分泌する細菌である請求項１５に記載の宿主細胞。
【請求項１７】
Bacillus属、好ましくは、Bacillus licheniformis種、Bacillus amyloliquefaciens種、Bacillus subtilis種またはBacillus alcalophilus種に属する請求項１６に記載の宿主細胞。
【請求項１８】
真核細胞、好ましくはSaccharomyces属の細胞、特に生成したタンパク質を翻訳後修飾する細胞である請求項１５に記載の宿主細胞。
【請求項１９】
その場で過カルボン酸を生成する製剤としての、請求項１〜６、８または９のいずれかに記載のペルヒドロラーゼの使用。
【請求項２０】
漂白または殺菌のための、特に、殺菌剤あるいはフィルター媒体、織物、毛皮、紙、皮膚または皮革の漂白または殺菌処理のための製剤における請求項１９に記載の使用。
【請求項２１】
洗剤または浄化剤、特に、織物洗剤、浄化剤、濯ぎ剤、手洗浄洗剤、手食器洗浄洗剤または機械食器洗浄洗剤における、特に、織物洗剤における染料移行抑制のための請求項１９に記載の使用。
【請求項２２】
化粧品調製物、特に、身体ケア製品、シャンプー、毛髪ケア製品、毛髪染色剤もしくは漂白剤、口腔ケア、歯ケアもしくは義歯ケア製品における請求項１９に記載の使用。
【請求項２３】
請求項１〜６、８または９のいずれかに記載のペルヒドロラーゼを含有する製剤、特に、身体ケア製品、シャンプー、毛髪ケア製品、毛髪染色剤もしくは漂白剤、口腔ケア、歯ケアもしくは義歯ケア製品、化粧品調製物、織物洗剤、浄化剤、濯ぎ剤、手洗浄洗剤、手食器洗浄洗剤、機械食器洗浄洗剤、殺菌剤、ならびに、フィルター媒体、織物、毛皮、紙、皮膚または皮革の漂白または殺菌処理のための製剤。
【請求項２４】
製剤の使用条件下で過カルボン酸を生成しうる漂白系、ならびに所望により、合成界面活性剤、有機および／または無機ビルダー、および漂白剤または洗剤の他の通常の構成成分を含有する洗剤または漂白剤であって、該漂白系が、請求項１〜６、８または９のいずれかに記載のペルヒドロラーゼ、過酸化水素供給源および該ペルヒドロラーゼのための基質からなる洗剤または漂白剤。
【請求項２５】
基質が、酪酸、カプロン酸またはオクタン酸のメチル、エチルまたはグリセロールエステル、好ましくは酪酸メチル、カプロン酸メチル、オクタン酸メチルおよびトリオクタニン、特に好ましくは酪酸メチルから選択される請求項２４に記載の製剤。
【請求項２６】
過酸化水素供給源が、過炭酸ナトリウム、過ホウ酸ナトリウムまたはモノ過硫酸カリウム三重塩、過炭酸塩／過硫酸カリウム(１：３の比；ｐＨ５.５)、過炭酸塩／過硫酸カリウム(１：１の比；ｐＨ７.５)、過炭酸塩／過硫酸カリウム(３：１の比；＞ｐＨ９)の塩混合物、特に好ましくはＨ2Ｏ2から選択される請求項２４または２５に記載の製剤。
【請求項２７】
０.０５〜５ｐｐｍ ＡＯ／μｇ、好ましくは０.２〜１.２ｐｐｍ ＡＯ／μｇの過加水分解活性を示す請求項２４〜２６のいずれかに記載の製剤。
【請求項２８】
タブレット、ペレットまたは流動性粉末(３００〜１２００ｇ／Ｌ、特に５００〜９００ｇ／Ｌの嵩密度を有する)の形態にある請求項２４〜２７のいずれかに記載の製剤。
【請求項２９】
ペーストまたは液体製剤の形態にある請求項２４〜２７のいずれかに記載の製剤。
【請求項３０】
非水性形態にある請求項２９に記載の製剤。
【請求項３１】
ペルヒドロラーゼおよび／またはこの酵素のための基質および／または過酸化水素供給源が、室温でまたは水の不存在下で該酵素および／またはその基質に対して不透過性である物質中に封入され、該物質が、製剤の使用条件下で該酵素および／またはその基質に対して透過性になる請求項２３〜３０のいずれかに記載の製剤。
【請求項３２】
漂白系に加えて、
・５〜７０重量％、特に１０〜５０重量％の界面活性剤、
・１０〜６５重量％、特に１２〜６０重量％の水溶性、水分散性の無機ビルダー物質、
・１〜１０重量％、特に２〜８重量％の水溶性の有機ビルダー物質、
・１５重量％以下の固体の無機および／または有機酸または酸性塩、
・５重量％以下の重金属錯化剤、
・５重量％以下の灰色化抑制剤、
・５重量％以下の染料移行抑制剤、
・５重量％以下の発泡抑制剤、および
・所望により他の成分、
を含有する請求項２４〜３１のいずれかに記載の製剤。
【請求項３３】
請求項１〜６、８または９のいずれかに記載のペルヒドロラーゼを含有するシャンプーおよび／または毛髪ケア製品。
【請求項３４】
請求項１〜６、８または９のいずれかに記載のペルヒドロラーゼ、過酸化水素供給源および該ペルヒドロラーゼのための基質を含有する、ケラチン繊維、特に毛髪を染色するための酸化染料または毛髪着色剤。
【請求項３５】
請求項１〜６、８または９のいずれかに記載のペルヒドロラーゼ、過酸化水素供給源および該ペルヒドロラーゼのための基質を含有する、義歯ケアのための製剤、特に義歯浄化剤。
【請求項１】
配列番号２２に記載したアミノ酸配列に対応するが、１１、１５、２１、３８、５０、５４、５８、７７、８３、８９、９３、９６、１０７、１１７、１２０、１３４、１３５、１３６、１４０、１４７、１５０、１５４、１５５、１６０、１６１、１７１、１７９、１８０、１８１、１９４、２０５、２０８、２１３、２１６、２１７、２３８、２３９、２５１、２５３、２５７、２６１の中から選択される配列位置に１つまたはそれ以上のアミノ酸交換を保持するアミノ酸配列を有するペルヒドロラーゼ。
【請求項２】
配列番号２２に記載したアミノ酸配列に対応するが、１１、５８、７７、８９、９６、１１７、１２０、１３４、１３５、１３６、１４０、１４７、１５０、１６１、２０８、２１６、２１７、２３８の中から選択される配列位置に１つまたはそれ以上のアミノ酸交換を保持するアミノ酸配列を有する、請求項１に記載のペルヒドロラーゼ。
【請求項３】
配列番号２２に記載したアミノ酸配列に対応するが、５８、８９、９６、１１７、２１６、２１７の中から選択される配列位置に１つまたはそれ以上のアミノ酸交換を保持するアミノ酸配列を有する、請求項１または２に記載のペルヒドロラーゼ。
【請求項４】
１つまたはそれ以上のアミノ酸交換 Ｔ５８ＡまたはＴ５８Ｑ、Ｌ８９Ｓ、Ｎ９６Ｄ、Ｇ１１７Ｄ、Ｌ２１６ＷおよびＮ２１７Ｄを特徴とする、請求項１〜３のいずれかに記載のペルヒドロラーゼ。
【請求項５】
配列番号２(Ｌ８９Ｓ／Ｌ２１６Ｗ／Ｎ２１７Ｄ)、配列番号４(Ｌ２１６Ｗ／Ｎ２１７Ｄ)、配列番号６(Ｔ５８Ａ／Ｌ８９Ｓ／Ｌ２１６Ｗ／Ｎ２１７Ｄ)、配列番号８(Ｔ５８Ａ／Ｇ１１７Ｄ／Ｌ２１６Ｗ／Ｎ２１７Ｄ)、配列番号１０(Ｔ５８Ａ／Ｌ８９Ｓ／Ｌ２１６Ｗ)、配列番号１２(Ｔ５８Ａ／Ｌ８９Ｓ／Ｎ９６Ｄ／Ｌ２１６Ｗ)、配列番号１４(Ｔ５８Ａ／Ｌ２１６Ｗ)、配列番号１６(Ｔ５８Ｑ／Ｌ８９Ｓ／Ｌ２１６Ｗ)および配列番号１８(Ｌ８９Ｓ／Ｌ２１６Ｗ)に記載したアミノ酸配列のいずれかを有する、請求項１〜４のいずれかに記載のペルヒドロラーゼ。
【請求項６】
アミノ酸配列が、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１４、１６または１８に記載したアミノ酸配列のいずれかに、順に増大して好ましくはそれぞれ少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、非常に特に好ましくは１００％対合しているペルヒドロラーゼ。
【請求項７】
配列番号１、３、５、７、９、１１、１３、１５または１７に記載したヌクレオチド配列のいずれかに、それぞれ順に増大して好ましくは少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、非常に特に好ましくは１００％同一である部分を含有するヌクレオチド配列を有する、ペルヒドロラーゼをコードしている核酸。
【請求項８】
請求項１〜６のいずれかに記載のペルヒドロラーゼから１つまたはそれ以上の保存性アミノ酸交換によって得られるペルヒドロラーゼ。
【請求項９】
請求項１〜６のいずれかに記載のペルヒドロラーゼの誘導体化、断片化、欠失突然変異または挿入突然変異によって得られるペルヒドロラーゼ。
【請求項１０】
配列番号１９〜２１のいずれかに記載の配列を有するオリゴヌクレオチド。
【請求項１１】
ＰＣＲプライマーとしての、特に、新規なペルヒドロラーゼを同定および／または単離するための、請求項１０に記載のオリゴヌクレオチドの使用。
【請求項１２】
別のタンパク質との融合または結合のための、特に新規な酵素の開発のための、請求項１〜６、８または９のいずれかに記載のペルヒドロラーゼの使用。
【請求項１３】
別の核酸との融合のための、特に新規な酵素の開発のための、請求項７〜１０のいずれかに記載の核酸の使用。
【請求項１４】
請求項７〜１０に記載した核酸ドメインのいずれかを含有するベクター、特にクローニングベクターまたは発現ベクター。
【請求項１５】
好ましくは請求項１４に記載の発現ベクターを用いて、請求項１〜６、８または９に記載したタンパク質または誘導体のいずれかを発現するか、または発現するように刺激しうる宿主細胞。
【請求項１６】
細菌、特に、生成したタンパク質または誘導体を周囲培地中に分泌する細菌である請求項１５に記載の宿主細胞。
【請求項１７】
Bacillus属、好ましくは、Bacillus licheniformis種、Bacillus amyloliquefaciens種、Bacillus subtilis種またはBacillus alcalophilus種に属する請求項１６に記載の宿主細胞。
【請求項１８】
真核細胞、好ましくはSaccharomyces属の細胞、特に生成したタンパク質を翻訳後修飾する細胞である請求項１５に記載の宿主細胞。
【請求項１９】
その場で過カルボン酸を生成する製剤としての、請求項１〜６、８または９のいずれかに記載のペルヒドロラーゼの使用。
【請求項２０】
漂白または殺菌のための、特に、殺菌剤あるいはフィルター媒体、織物、毛皮、紙、皮膚または皮革の漂白または殺菌処理のための製剤における請求項１９に記載の使用。
【請求項２１】
洗剤または浄化剤、特に、織物洗剤、浄化剤、濯ぎ剤、手洗浄洗剤、手食器洗浄洗剤または機械食器洗浄洗剤における、特に、織物洗剤における染料移行抑制のための請求項１９に記載の使用。
【請求項２２】
化粧品調製物、特に、身体ケア製品、シャンプー、毛髪ケア製品、毛髪染色剤もしくは漂白剤、口腔ケア、歯ケアもしくは義歯ケア製品における請求項１９に記載の使用。
【請求項２３】
請求項１〜６、８または９のいずれかに記載のペルヒドロラーゼを含有する製剤、特に、身体ケア製品、シャンプー、毛髪ケア製品、毛髪染色剤もしくは漂白剤、口腔ケア、歯ケアもしくは義歯ケア製品、化粧品調製物、織物洗剤、浄化剤、濯ぎ剤、手洗浄洗剤、手食器洗浄洗剤、機械食器洗浄洗剤、殺菌剤、ならびに、フィルター媒体、織物、毛皮、紙、皮膚または皮革の漂白または殺菌処理のための製剤。
【請求項２４】
製剤の使用条件下で過カルボン酸を生成しうる漂白系、ならびに所望により、合成界面活性剤、有機および／または無機ビルダー、および漂白剤または洗剤の他の通常の構成成分を含有する洗剤または漂白剤であって、該漂白系が、請求項１〜６、８または９のいずれかに記載のペルヒドロラーゼ、過酸化水素供給源および該ペルヒドロラーゼのための基質からなる洗剤または漂白剤。
【請求項２５】
基質が、酪酸、カプロン酸またはオクタン酸のメチル、エチルまたはグリセロールエステル、好ましくは酪酸メチル、カプロン酸メチル、オクタン酸メチルおよびトリオクタニン、特に好ましくは酪酸メチルから選択される請求項２４に記載の製剤。
【請求項２６】
過酸化水素供給源が、過炭酸ナトリウム、過ホウ酸ナトリウムまたはモノ過硫酸カリウム三重塩、過炭酸塩／過硫酸カリウム(１：３の比；ｐＨ５.５)、過炭酸塩／過硫酸カリウム(１：１の比；ｐＨ７.５)、過炭酸塩／過硫酸カリウム(３：１の比；＞ｐＨ９)の塩混合物、特に好ましくはＨ2Ｏ2から選択される請求項２４または２５に記載の製剤。
【請求項２７】
０.０５〜５ｐｐｍ ＡＯ／μｇ、好ましくは０.２〜１.２ｐｐｍ ＡＯ／μｇの過加水分解活性を示す請求項２４〜２６のいずれかに記載の製剤。
【請求項２８】
タブレット、ペレットまたは流動性粉末(３００〜１２００ｇ／Ｌ、特に５００〜９００ｇ／Ｌの嵩密度を有する)の形態にある請求項２４〜２７のいずれかに記載の製剤。
【請求項２９】
ペーストまたは液体製剤の形態にある請求項２４〜２７のいずれかに記載の製剤。
【請求項３０】
非水性形態にある請求項２９に記載の製剤。
【請求項３１】
ペルヒドロラーゼおよび／またはこの酵素のための基質および／または過酸化水素供給源が、室温でまたは水の不存在下で該酵素および／またはその基質に対して不透過性である物質中に封入され、該物質が、製剤の使用条件下で該酵素および／またはその基質に対して透過性になる請求項２３〜３０のいずれかに記載の製剤。
【請求項３２】
漂白系に加えて、
・５〜７０重量％、特に１０〜５０重量％の界面活性剤、
・１０〜６５重量％、特に１２〜６０重量％の水溶性、水分散性の無機ビルダー物質、
・１〜１０重量％、特に２〜８重量％の水溶性の有機ビルダー物質、
・１５重量％以下の固体の無機および／または有機酸または酸性塩、
・５重量％以下の重金属錯化剤、
・５重量％以下の灰色化抑制剤、
・５重量％以下の染料移行抑制剤、
・５重量％以下の発泡抑制剤、および
・所望により他の成分、
を含有する請求項２４〜３１のいずれかに記載の製剤。
【請求項３３】
請求項１〜６、８または９のいずれかに記載のペルヒドロラーゼを含有するシャンプーおよび／または毛髪ケア製品。
【請求項３４】
請求項１〜６、８または９のいずれかに記載のペルヒドロラーゼ、過酸化水素供給源および該ペルヒドロラーゼのための基質を含有する、ケラチン繊維、特に毛髪を染色するための酸化染料または毛髪着色剤。
【請求項３５】
請求項１〜６、８または９のいずれかに記載のペルヒドロラーゼ、過酸化水素供給源および該ペルヒドロラーゼのための基質を含有する、義歯ケアのための製剤、特に義歯浄化剤。
【図１】
【図２】
【図２】
【公表番号】特表２００６−５１０３８３（Ｐ２００６−５１０３８３Ａ）
【公表日】平成１８年３月３０日（２００６．３．３０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００４−５６２７３４（Ｐ２００４−５６２７３４）
【出願日】平成１５年１２月１２日（２００３．１２．１２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００３／０１４１２７
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０５８９６１
【国際公開日】平成１６年７月１５日（２００４．７．１５）
【出願人】（３９１００８８２５）ヘンケル・コマンディットゲゼルシャフト・アウフ・アクチエン (309)
【氏名又は名称原語表記】ＨＥＮＫＥＬ ＫＯＭＭＡＮＤＩＴＧＥＳＥＬＬＳＣＨＡＦＴ ＡＵＦ ＡＫＴＩＥＮ
【住所又は居所原語表記】４０１９１ Ｄｕｓｓｅｌｄｏｒｆ，Ｈｅｎｋｅｌｓｔｒａｓｓｅ ６７，Ｇｅｒｍａｎｙ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１８年３月３０日（２００６．３．３０）
【国際特許分類】
【出願日】平成１５年１２月１２日（２００３．１２．１２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００３／０１４１２７
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０５８９６１
【国際公開日】平成１６年７月１５日（２００４．７．１５）
【出願人】（３９１００８８２５）ヘンケル・コマンディットゲゼルシャフト・アウフ・アクチエン (309)
【氏名又は名称原語表記】ＨＥＮＫＥＬ ＫＯＭＭＡＮＤＩＴＧＥＳＥＬＬＳＣＨＡＦＴ ＡＵＦ ＡＫＴＩＥＮ
【住所又は居所原語表記】４０１９１ Ｄｕｓｓｅｌｄｏｒｆ，Ｈｅｎｋｅｌｓｔｒａｓｓｅ ６７，Ｇｅｒｍａｎｙ
【Ｆターム（参考）】
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