新規な硫酸水素塩
本発明は、化合物１の硫酸水素塩及び溶媒和化合物、その結晶の形態及び非晶質の形態、並びにそれらを調製するための方法に関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は、その全文が、この参照により本明細書に組み入れられる、２００５年１２月２１日出願の、米国仮出願第６０／７５２７８１号の優先権を主張するものである。
【０００２】
本発明は、新規な塩に関し、より詳しくは、哺乳動物における、癌などの増殖性の疾患状態の治療及び／又は予防に有用であるＭＥＫ阻害薬である、６−（４−ブロモ−２−クロロ−フェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エトキシ）−アミド（以下「化合物１」と呼ぶ）の新規な塩に関する。より詳しくは、本発明は、化合物１の硫酸水素塩に関し、前記塩を調製するための方法に関する。化合物１の硫酸水素塩を含む薬剤組成物、並びに、ヒト又は動物の身体における、癌などの増殖性の疾患状態を治療及び／又は予防するための薬物の製造におけるその塩の使用、並びに、化合物１の硫酸水素塩の治療有効量を投与することによって哺乳動物における癌などの増殖性の疾患状態を治療する方法も提供する。
【背景技術】
【０００３】
増殖因子受容体及びタンパク質キナーゼによる細胞のシグナル伝達は、細胞成長、増殖及び分化の重要な制御因子である。正常な細胞成長では、増殖因子は、受容体の活性化（即ち、ＰＤＧＦ又はＥＧＦ及びその他）により、ＭＡＰキナーゼ経路を活性化する。正常な及び制御されていない細胞成長に関与する、最も重要且つ最もよく理解されているＭＡＰキナーゼ経路の１つは、Ｒａｓ／Ｒａｆキナーゼ経路である。活性なＧＴＰ結合Ｒａｓは、Ｒａｆキナーゼの活性化及び間接的なリン酸化をもたらす。次いで、Ｒａｆは、２つのセリン残基上で（ＭＥＫ１に対してＳ２１８とＳ２２２、並びにＭＥＫ２に対してＳ２２２とＳ２２６）、ＭＥＫ１及び２をリン酸化する（Ａｈｎら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、２００１年、３３２巻、４１７〜４３１頁）。次いで、活性化されたＭＥＫは、唯一知られているその基質であるＭＡＰキナーゼＥＲＫ１及び２をリン酸化する。ＭＥＫによるＥＲＫのリン酸化は、ＥＲＫ１に対してはＹ２０４及びＴ２０２上で、ＥＲＫ２に対してはＹ１８５及びＴ１８３上で起こる（Ａｈｎら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、２００１年、３３２巻、４１７〜４３１頁）。リン酸化したＥＲＫは二量体化し、次いで核に移動しそこで蓄積する（Ｋｈｏｋｈｌａｔｃｈｅｖら、Ｃｅｌｌ、１９９８年、９３巻、６０５〜６１５頁）。核では、ＥＲＫは、それだけには限定されないが、核の輸送、シグナル伝達、ＤＮＡの修復、ヌクレオソームの構築及び移動、並びにｍＲＮＡのプロセシング及び翻訳を含めた、いくつかの重要な細胞の機能に関与している（Ａｈｎら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｅｌｌ、２０００年、６巻、１３４３〜１３５４頁）。概して、増殖因子で細胞を処理すると、ＥＲＫ１及び２の活性化をもたらし、それは増殖、及び場合により分化をもたらす（Ｌｅｗｉｓら、Ａｄｖ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、１９９８年、７４巻、４９〜１３９頁）。
【０００４】
増殖性疾患では、ＥＲＫキナーゼ経路に関与する、増殖因子受容体、下流のシグナル伝達タンパク質、又はタンパク質キナーゼの遺伝子の突然変異及び／又は過剰発現が、非制御されていない細胞の増殖をもたらし、最終的には腫瘍の形成をもたらす。例えば、いくつかの癌は、増殖因子を持続的に生成することによりこの経路の持続的な活性化をもたらす突然変異を含んでいる。他の突然変異は、活性化したＧＴＰ結合Ｒａｓ複合体の不活性化における欠陥をもたらすことがあり、ＭＡＰキナーゼ経路の活性化を再びもたらす。突然変異した発癌性の形態のＲａｓは、結腸癌の５０％及びすい臓癌の＞９０％、並びに多くの他のタイプの癌に見られる（Ｋｏｈｌら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９９３年、２６０巻、１８３４〜１８３７頁）。最近、ｂＲａｆの突然変異が、６０％を超える悪性メラノーマで同定された（Ｄａｖｉｅｓ，Ｈ．ら、Ｎａｔｕｒｅ、２００２年、４１７巻、９４９〜９５４頁）。ｂＲａｆにおけるこれらの突然変異は、構成的に活性なＭＡＰキナーゼカスケードをもたらす。原発癌のサンプル及び細胞系の研究により、すい臓、結腸、肺、卵巣、及び腎臓の癌における、構成的な、又は過剰活性化したＭＡＰキナーゼ経路も示されている（Ｈｏｓｈｉｎｏ，Ｒ．ら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、１９９９年、１８巻、８１３〜８２２頁）。したがって、癌と、遺伝的突然変異に起因する過剰活性なＭＡＰキナーゼ経路との間に強力な相関が存在する。
【０００５】
構成的な、又は過剰活性化したＭＡＰキナーゼカスケードが細胞の増殖及び分化において中心的役割を果たしているので、これらの経路を阻害することは、過剰増殖性疾患において有益であると考えられている。ＭＥＫは、Ｒａｓ及びＲａｆの下流にあるので、この経路における中心的存在である。さらに、ＭＥＫのリン酸化に対して唯一知られている基質はＭＡＰキナーゼであるＥＲＫ１及び２であるので、ＭＥＫは魅力的な治療の標的である。いくつかの研究では、ＭＥＫの阻害は潜在的な治療上の利点を有することが示されている。例えば、小分子のＭＥＫ阻害薬は、ヌードマウスの異種移植片で、ヒトの腫瘍の成長を阻害し（Ｓｅｂｏｌｔ−Ｌｅｏｐｏｌｄら、Ｎａｔｕｒｅ−Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、１９９９年、５巻（７）、８１０〜８１６頁；Ｔｒａｃｈｅｔら、ＡＡＣＲ、２００２年４月６〜１０日、ポスター番号５４２６；Ｔｅｃｌｅ，Ｈ．、ＩＢＣ、第２回、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｋｉｎａｓｅｓ、２００２年９月９〜１０日）、動物において静的な異痛を阻止し（ＷＯ０１／０５３９０）、急性骨髄性白血病細胞成長を阻害する（Ｍｉｌｅｌｌａら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．、２００１年、１０８巻（６）、８５１〜８５９頁）ことが示されている。
【０００６】
ＭＥＫの小分子阻害薬が開示されている。過去数年に、少なくとも１３の特許出願：米国特許第５５２５６２５号、ＷＯ９８／４３９６０、ＷＯ９９／０１４２１、ＷＯ９９／０１４２６、ＷＯ００／４１５０５、ＷＯ００／４２００２、ＷＯ００／４２００３、ＷＯ００／４１９９４、ＷＯ００／４２０２２、ＷＯ００／４２０２９、ＷＯ００／６８２０１、ＷＯ０１／６８６１９、及びＷＯ０２／０６２１３が現れている。
【０００７】
ＭＥＫの阻害薬は、ＷＯ０３／０７７９１４にも記載されている。６−（４−ブロモ−２−クロロ−フェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エトキシ）−アミド、即ち「化合物１」が、ＷＯ０３／０７７９１４に例示されており、以下の構造式を有している。
【化１】
【０００８】
化合物１は、ＭＥＫに対する阻害作用を有し、したがって、癌などの過剰増殖性疾患の治療に有用であることが示されている。
【０００９】
ＷＯ０３／０７７９１４は、一般的には、本明細書に開示する化合物の、ある種の薬学的に許容できる塩を開示している。特に、これはＷＯ０３／０７７９１４では、十分に塩基性の部分を保有する、そこに開示される化合物の薬学的に許容できる塩は、薬学的に許容できる陰イオンを含む酸付加塩を形成することがあると述べられており、そのような陰イオンが列挙されている。同様に、酸性部分を保有する化合物の適切な塩は、化合物を、塩基性化合物、及び特に無機塩基で処理することによって形成される。
【００１０】
薬物で用いられる薬学的に活性な化合物の形態は、適切には妥当な取扱いの性質をもたらすものであり、そのためにその加工及び製剤が可能になる。しかし、錠剤の溶解速度及び有効成分のバイオアベイラビリティーなど、最終の製剤の生物学的性質が確実に最適化されることも必要であり、これら様々な要求すべてを最もよく満たす特定の形態を選択する上で、しばしばなされるべき妥協が存在する。しかし、いくつかの場合では、おそらくｐＫａ値が低いために、塩は容易に形成せず、且つ／又は安定ではない。ｐＫａ値は、酸及び塩基の強度、即ち酸がプロトンを失い、又は塩基がプロトンを加える傾向を表すものである（Ｂｒｏｎｓｔｅｄ Ｊ．Ｎ．、Ｒｅｃ．Ｔｒａｖ．Ｃｈｉｍ．、（１９２３年）、４７巻、７１８頁）。これは、化合物１に特に当てはまる。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明は、化合物１の硫酸水素塩（薬物：Ｈ２ＳＯ４ １：１）、及びその様々な形態を提供し、そのすべてが本発明の範囲内に含まれる。塩は様々な形態であってよく、そのすべてが本発明の範囲内に含まれる。これらの形態には、無水形態、及び溶媒和化合物が含まれる。さらなる形態は、溶媒和化合物を溶解することによって生成され得る。特定の一実施形態では、塩は無水形態である。
【００１２】
さらなる一態様では、本発明は、過剰増殖性の疾患又は状態を治療するための薬物として、化合物１の硫酸水素塩を使用する方法を提供する。
【００１３】
本発明のさらなる一態様は、過剰増殖性の疾患又は状態を治療又は予防するための薬物の調製における、化合物１の硫酸水素塩の使用である。
【００１４】
本発明のさらなる利点及び新規な特徴を、部分的に以下の記載に述べ、当業者であれば、以下の明細書を検討すれば部分的に明らかになり、本発明を実践することによって習得することができる。本発明の利点は、添付する特許請求の範囲で特に指摘する手段、組合せ、組成物、及び方法によって実現し、達成することができる。
【００１５】
本明細書に組み入れられ、明細書の一部を形成する、添付の図面は、本発明の非限定的な実施形態を例示するものであり、記述とともに、本発明の原理の説明を提供するものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
次に、本発明のある種の実施形態を詳しく言及し、その例は添付の構造及び式に例示する。本発明を、列挙する実施形態と組み合わせて記載するが、これらは、本発明をこれらの実施形態に制限しようとするものではないことは理解されよう。それとは対照的に、本発明は、すべての代替形態、修正形態、及び等価物を網羅することが企図され、これらは特許請求の範囲によって規定される本発明の範囲内に含まれ得る。当業者であれば、本明細書に記載するものと類似し又は等しい、本発明の実践に用いることができる、多くの方法及び材料を認めるであろう。本発明は、記載する方法及び材料に決して限定されるものではない。１つ又は複数の組み入れられる文献、特許、及び類似の材料が、それだけには限定されない、定義される用語、用語の用法、記載される技術などを含めて、本出願とは異なり又は矛盾する場合は、本出願が支配する。
【００１７】
本発明は、化合物１の硫酸水素塩（薬物：Ｈ２ＳＯ４ １：１）、及びその様々な形態を提供し、そのすべてが本発明の範囲内に含まれる。塩は様々な形態であってよく、そのすべてが本発明の範囲内に含まれる。これらの形態には、無水形態、及び溶媒和化合物が含まれる。さらなる形態は、溶媒和化合物を溶解することによって生成され得る。特定の一実施形態では、塩は、化合物１の無水の硫酸水素塩である。さらに、本発明は、薬物における使用に特に適するようにする、独特の物理学的及び薬剤学的性質を示す硫酸水素塩の形態の化合物１を提供する。
【００１８】
ある実施形態では、化合物１の塩は結晶である。結晶の塩は、製造の観点から、特にその静的及び流動の性質において、その取扱いの性質に関して遊離塩基よりも優れていることが見出されている。工程の不純物を分離することができ、塩を遊離塩基から単離するのは一般的に容易であるので、塩の形成により精製の手段がもたらされ得る。
【００１９】
本発明の一実施形態では、化合物１の硫酸水素塩は結晶の塩であり、これは、驚くべきことに化合物１の遊離塩基、及び化合物１のある種の他の塩の形態と比べた場合に、改善された薬剤上の性質を有することが見出されている。特に、この結晶の塩の溶解速度及びそのバイオアベイラビリティーは、以下の実施例に例示するように、遊離塩基及び他の塩に比べて特に高いことが見出されている。遊離塩基を凌ぐ、増強された化合物１の硫酸水素塩のバイオアベイラビリティーは、投与のために用いられる製剤とは独立していることが示されている。遊離塩基及び硫酸水素塩の形態のバイオアベイラビリティーは、本明細書では、同じ分散製剤で投薬した場合に比較したが、バイオアベイラビリティーにおける同様の違いが、簡単な錠剤製剤に対しても観察された。
【００２０】
本発明が、結晶の塩である化合物１の塩に関連することを述べる場合、結晶化度の度合は、好都合には約６０％を超え、より好都合には約８０％を超え、好ましくは約９０％を超え、より好ましくは約９５％を超える。最も好ましくは、結晶化度の度合は約９８％を超える。
【００２１】
硫酸水素塩によってもたらされるバイオアベイラビリティーの増強の度合は驚くほどであり、且つ特に有用である。これは、化合物１の遊離塩基は、ＢＣＳクラス４の化合物と分類されているからである。ＢＣＳクラス４の化合物は、溶解速度及び透過性の両方が低いため、通常低いバイオアベイラビリティーを有し、また、吸収時に透過性が制限されることは、このような塩は、吸収に実質的な影響を及ぼさないことが通常期待されることを意味している（例えば、Ｄｒｅｓｓｍａｎら、（２００１年）、Ｐｈａｒｍ Ｔｅｃｈ．、７月、６８巻を参照されたい）。
【００２２】
化合物１の硫酸水素塩の適切な溶媒和化合物は、広範囲の溶媒、特に、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、アセトニトリル（ＡＣＮ）、エタノール（ＥｔＯＨ）、及びメタノール（ＭｅＯＨ）などの有機溶媒から形成される。適切な有機溶媒には、Ｃ１〜６アルキルエステルなどのエステル、例えば酢酸エチル、及びＣ１〜６アルキルケトンなどのケトン、例えばメチルエチルケトン（２−ブタノン）が含まれる。
【００２３】
塩の調製は、有機溶媒及び水における化合物１のスラリーを、硫酸と反応させることにより行うことができる。１：１の塩を調製するためには、約１当量の硫酸を用いる。したがって、さらなる一態様では、本発明は、化合物１の硫酸水素塩を調製するための方法を提供し、前記方法は、
（ｉ）有機液体及び水における化合物１のスラリーを、約１当量の硫酸と反応させるステップと、
（ｉｉ）得られた溶液から塩を回収するステップと、
（ｉｉｉ）その後、要望又は必要があれば、その溶媒和化合物を形成するステップと
を含む。
【００２４】
化合物１に対する硫酸の量のモル比は、適切には１．００：１から２：１までの範囲であり、例えば、１．０５：１から１．１５：１までの範囲である。用いられる硫酸は、適切には濃硫酸の形態である。特定の一実施形態では、化合物１に対する硫酸のモル比は、１．１０：１．０である。
【００２５】
適切には、ステップ（ｉ）で加える水の量は、確実に塩を形成するのに必要な量に制限される。用いる正確な量は、溶媒の特定の性質、硫酸の濃度などに依存するが、典型的には、水は、存在する液体全体の２０％ｖ／ｖより少ない量で、例えば、１３〜１７％ｖ／ｖの量で存在する。
【００２６】
特定の一実施形態では、ステップ（ｉ）で用いる有機溶媒は２−ブタノン（メチルエチルケトン）であり、水は液体の体積の約１５％であり、化合物１に対して用いられる液体の合計量は、１グラムの化合物１あたり約８ｍＬである。
【００２７】
適切には、ステップ（ｉ）における硫酸の添加は制御されたやり方で、例えば１０℃未満の温度で行い、次いでステップ（ｉ）の残りを、温度を上昇させて、例えば３０〜３９℃から、さらなる例としては５５〜７５℃の間の範囲で、且つさらなる例として約６５℃で行う。
【００２８】
適切な有機の液体には、化合物１及びその塩がやや溶けにくい有機溶媒が含まれる。本明細書で用いられる「やや溶けにくい」の表現は、溶質１グラムあたりの溶媒が１００ｍＬ未満である、例えば、溶質１グラムあたりの溶媒が３０ｍＬと１００ｍＬとの間である溶解度を有することを意味する。これらの溶媒には、アルキルケトン、例えば２−ブタノンなどのＣ１〜６アルキルケトン；Ｃ１〜６アルコールなどのアルコール、例えばメタノール又はエタノール；及びＣ１〜６アルキルエステルなどのエステル、例えば酢酸エチルが含まれる。一実施形態では、有機溶媒はメチルエチルケトン（２−ブタノン）である。
【００２９】
適切には、反応混合液を、ステップ（ｉ）と（ｉｉ）との間にろ過して、あらゆる外来性の材料を除去する。残渣を、例えば有機液体と水との混合液で場合により洗浄し、望ましい塩をろ液から結晶化し、ろ液は洗浄溶液と場合により合わせてもよい。
【００３０】
ある実施形態では、反応混合液を冷却することによって、場合により、硫酸水素塩が沈澱するようにさらなる有機液体を添加して、ステップ（ｉｉ）で硫酸水素塩を回収する。さらなる有機液体は、ステップ（ｉ）で用いたのと同じ有機液体であってもよく、又は、それが化合物１の硫酸水素塩に対する逆溶剤として働くのであれば、異なる有機液体であってもよい。化合物１の硫酸水素塩の結晶で溶液にシード添加することは、沈澱のプロセスにおいて助けとなり得る。
【００３１】
一実施形態では、冷却の前に、ろ液を最初に蒸留のステップにかけて水を除去し、確実に許容できる収量の塩を回収する。特定の一実施形態では、溶媒は２−ブタノンであり、ろ液を大気圧で蒸留する。
【００３２】
冷却時に、例えばろ過によって、得られたスラリーから塩を回収することができる。次いで、回収した材料を、温度を上げて、例えば４０〜６０℃で、また別の一例として約５０℃で、一定の重量を達成するまで乾燥させてもよい。生成物が、メタノールなどの有機液体との溶媒和化合物である場合は、所望によりこの時点で加熱により脱溶媒和してもよい。
【００３３】
硫酸水素塩の物理的性質は研究されたものであり、実施例でさらに記載する。
【００３４】
本発明には、同位体で標識した化合物も含まれ、これらは、通常天然に見出される原子質量又は質量数とは異なる原子質量又は質量数を有する原子によって、１個又は複数個の原子が置換されているという事実以外は、本発明で列挙するものと同一である。本発明の化合物中に組み入れることができる同位体の例には、水素、炭素、窒素、酸素、リン、イオウ、フッ素、及び塩素の同位体、例えば、それぞれ、２Ｈ、３Ｈ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１８Ｏ、１７Ｏ、３１Ｐ、３２Ｐ、３５Ｓ、１８Ｆ、及び３５Ｃｌが含まれる。前述の同位体及び／又は他の原子の他の同位体を含む化合物１の硫酸水素塩及びその多形は、本発明の範囲内である。本発明のある種の同位体標識した化合物、例えば、その中に３Ｈ及び１４Ｃなどの放射性同位元素が組み込まれた化合物は、薬物及び／又は基質の組織分布アッセイに有用である。トリチウム標識、即ち３Ｈ、及び炭素−１４、即ち１４Ｃの同位体は、その調製及び検出性の容易さの結果として、特に広く用いられている。さらに、より重い同位体、例えば重水素、即ち２Ｈでの置換により、より代謝の安定性が大きいことに起因するある種の治療上の有利点、例えば、ｉｎ ｖｉｖｏの半減期の増大、又は投与量の所要量の低減をもたらすことができ、したがって、いくつかの特定の状況で利用することができる。同位体で標識した本発明の塩は、一般的に、調製の間に容易に入手できる同位体標識した試薬を、非同位体標識した試薬の代わりに用いることによって、又は所望により塩の調製において同位体標識した硫酸を用いて、ＷＯ０３／０７７９１４に開示されている手順を実施することによって調製することができる。
【００３５】
組成物は、経口投与に適する形態（例えば、錠剤、トローチ剤、ハードカプセル若しくはソフトカプセル剤、乳剤、分散可能な粉末若しくは顆粒剤、シロップ剤、エリキシル剤、又は油性若しくは即時調製の水性懸濁液剤として）、吸入による投与に適する形態（例えば、微細粉末剤、又は液体のエアロゾル剤として）、インサフレーションによる投与に適する形態（例えば、微細粉末剤として）、非経口投与の注射に適する形態（例えば、静脈内、皮下、筋肉内、血管内、又は注入の投与のための、滅菌の液剤、懸濁液剤、又は乳剤として）、局所投与に適する形態（例えば、クリーム剤、軟膏剤、ゲル剤、油性の溶液剤若しくは懸濁液剤、又は即時調製の水性懸濁液剤として）、或いは直腸投与に適する形態（例えば、坐剤として）であってよい。一実施形態では、化合物１の硫酸水素塩を経口投与する。一般的には、上記の組成物を、従来の賦形剤を用いて、従来のやり方で調製してもよい。
【００３６】
投与する有効化合物の量は、治療する対象、障害又は状態の重症度、投与速度、化合物の体内動態、及び処方する医師の判断に依存する。しかし、有効な投与量は、１回又は分割した投与量で、１日あたり体重１ｋｇあたり約０．０１ｍｇから約１００ｍｇの範囲であり、好ましくは約１から約３５ｍｇ／ｋｇ／日である。７０ｋｇのヒトに対しては、これは約０．７から７０００ｍｇ／日、好ましくは約７０から約２５００ｍｇ／日の量になる。いくつかの場合では、前述の範囲の下限を下回る投与量レベルが非常に適切であることがあるが、他の場合では、１日を通して投与するためにいくつかの小投与量に最初に分割するのであれば、いかなる有害な副作用を引き起こすことなしに、より多い投与量を使用することができる。錠剤又はカプセル剤などの単位投与量形態は、通常、例えば有効成分１〜１０００ｍｇ、好ましくは有効成分５〜４２０ｍｇを含む。好ましくは、０．０３〜６ｍｇ／ｋｇの範囲の１日投与量を用いる。
【００３７】
本発明のさらなる一態様によると、療法によってヒト又は動物の身体を治療又は予防する方法で用いるための、本明細書で規定する化合物１の硫酸水素塩を提供する。本発明のさらなる特徴は、薬物として使用するための、本明細書で規定する化合物１の硫酸水素塩である。さらなる一態様では、本発明は、ＭＥＫによって媒介される疾患状態、特に、ヒトなどの温血の哺乳動物における、癌などの増殖性障害又は異常な細胞成長を治療するための薬物として使用するための、本明細書で規定する化合物の硫酸水素塩を提供する。したがって、本発明のさらなる一態様は、ＭＥＫによって媒介される疾患状態、特に、ヒトなどの温血の哺乳動物における、癌などの増殖性障害又は異常な細胞成長の治療で使用するための薬物の製造における、本明細書で規定する化合物１の硫酸水素塩の使用を提供する。
【００３８】
本発明のさらなる特徴によると、ＭＥＫによって媒介される疾患状態、特に、ヒトなど、そのような治療を必要とする温血の哺乳動物における、癌などの増殖性障害又は異常な細胞成長を治療するための方法を提供し、前記哺乳動物に、有効量の、本明細書の化合物１硫酸水素塩の硫酸水素塩、又は本明細書で規定する薬剤組成物を投与することを含む。
【００３９】
本発明の塩又は組成物を用いて治療することができる増殖性障害の特定の例には、哺乳動物における過剰増殖性障害が含まれる。特定の癌は、脳、肺、扁平上皮細胞、膀胱、胃、すい臓、乳房、頭部、頚部、腎臓（ｒｅｎａｌ）、腎臓（ｋｉｄｎｅｙ）、卵巣、前立腺、結腸直腸、食道、精巣、婦人科、又は甲状腺の癌である。
【００４０】
しかし、本発明の化合物及び組成物を、良性の皮膚の過形成（例えば乾癬）、再狭窄、又は前立腺（例えば、良性の前立腺肥大（ＢＰＨ））などの、非癌性の過剰増殖性の障害の治療にも用いてもよい。
【００４１】
本発明の化合物又は組成物を用いて治療することができるＭＥＫ媒介性疾患の他の例には、すい臓若しくは腎臓の疾患（増殖性の糸球体腎炎、及び糖尿病誘発性の腎疾患を含む）、又は哺乳動物における疼痛の治療が含まれる。
【００４２】
化合物及び組成物を、哺乳動物における胚細胞の埋め込みの防止に、又は哺乳動物における脈管形成若しくは血管形成に関連する疾患の治療に用いてもよい。このような疾患には、腫瘍の血管形成、関節リウマチなどの慢性の炎症性疾患、アテローム性動脈硬化症、炎症性腸疾患、乾癬、湿疹及び強皮症などの皮膚疾患、糖尿病、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症、加齢黄斑変性症、血管腫、神経膠腫、メラノーマ、カポジ肉腫、並びに卵巣、乳房、肺、すい臓、前立腺、結腸、及び類表皮の癌が含まれ得る。
【００４３】
「異常な細胞成長」及び「過剰増殖性障害」の語は、本出願では交換可能に用いられ、正常の調節メカニズムとは無関係の細胞成長を意味する（例えば、接触阻害の喪失）。これには、例えば、（１）突然変異したチロシンキナーゼの発現、又は受容体チロシンキナーゼの過剰発現によって増殖する腫瘍細胞（腫瘍）、（２）異常なチロシンキナーゼの活性化が生じる、他の増殖性疾患の良性及び悪性の細胞、（３）受容体チロシンキナーゼによって増殖するあらゆる腫瘍、（４）異常なセリン／スレオニンキナーゼの活性化によって増殖するあらゆる腫瘍、並びに（５）異常なセリン／スレオニンキナーゼの活性化が生じる他の増殖性疾患の良性及び悪性の細胞が含まれる。
【００４４】
本明細書で用いられる「治療する」の語は、別段の指摘がなければ、そのような語を適用する障害若しくは状態を、又はこのような障害若しくは状態の１つ若しくは複数の症状を、逆行させ、軽減し、進行を阻害し、又は防止することを意味する。本明細書で用いる「治療」の語は、別段の指摘がなければ、すぐ上で「治療する」を定義した治療の行為を意味する。
【００４５】
したがって、本発明の化合物又は組成物で治療することができる患者には、例えば、乾癬、再狭窄、アテローム性動脈硬化症、ＢＰＨ、肺癌、非小細胞肺癌、骨癌、ＣＭＭＬ、すい臓癌、結腸直腸癌、皮膚癌、頭頚部癌、メラノーマ（特に、皮膚又は眼内のメラノーマ）、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門領域の癌、胃癌、結腸癌、乳癌、精巣腫瘍、婦人科の腫瘍（例えば、子宮肉腫、ファロピウス管の癌腫、子宮内膜の癌腫、子宮頚部の癌腫、膣の癌腫、又は外陰部の癌腫）、卵巣癌、多発性骨髄腫、肝細胞腫、ホジキン病、食道癌、小腸癌、内分泌系の癌（例えば、甲状腺、副甲状腺若しくは副腎の癌）、軟組織の肉腫、尿道癌、陰茎癌、前立腺癌、慢性若しくは急性の白血病、特に急性骨髄性白血病、小児の固形腫瘍、リンパ球性リンパ腫、膀胱癌、腎臓若しくは尿管の癌（例えば、腎細胞癌、腎盂の癌腫）、又は中枢神経系の新生物（例えば、原発性ＣＮＳリンパ腫、脊髄軸腫瘍、脳幹のグリオーマ、又は下垂体腺腫）を有すると診断された患者が含まれる。
【００４６】
化合物１の硫酸水素塩を、唯一の治療として適用してもよく、又は、化合物１の硫酸水素塩の他に、１つ又は複数の他の物質及び／若しくは治療を伴ってもよい。このような併用治療は、本発明の個々の化合物の、同時の、逐次の、又は別々の投与によって実現することができる。内科腫瘍学の分野では、各癌患者を治療するために様々な形態の治療の組合せを用いるのは、通常のやり方である。内科腫瘍学では、化合物１の硫酸水素塩の他の、このような結合した治療の他の構成成分は、外科手術でも、放射線治療でも、又は化学療法でもよい。このような化学療法は、以下のような治療物質のカテゴリーを網羅していてよい。
（ｉ）抗血管新生薬、例えば血管内皮増殖因子の作用を阻害するもの（例えば、抗血管内皮細胞増殖因子の抗体であるベバシズマブ［Ａｖａｓｔｉｎ（商標）］、及びＶＥＧＦ受容体チロシンキナーゼ阻害薬、例えば、４−（４−ブロモ−２−フルオロアニリノ）−６−メトキシ−７−（１−メチルピペリジン−４−イルメトキシ）キナゾリン（ＺＤ６４７４、ＷＯ０１／３２６５１中の実施例２）、４−（４−フルオロ−２−メチルインドル−５−イルオキシ）−６−メトキシ−７−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）キナゾリン（ＡＺＤ２１７１、ＷＯ００／４７２１２中の実施例２４０）、バタラニブ（ＰＴＫ７８７、ＷＯ９８／３５９８５）、及びＳＵ１１２４８（スニチニブ、ＷＯ０１／６０８１４）；化合物、例えば、国際特許出願ＷＯ９７／２２５９６、ＷＯ９７／３００３５、ＷＯ９７／３２８５６、及びＷＯ９８／１３３５４に開示されているものなど、並びに本明細書で規定するものと異なるメカニズムによって作用するもの（例えば、リノミド、インテグリンαｖβ３機能の阻害薬、アンジオスタチン、ラゾキシン、サリドマイド、ＭＭＰ−２（マトリックスメタロプロテイナーゼ２）阻害薬、ＭＭＰ−９（マトリックスメタロプロテイナーゼ９）阻害薬、及びＣＯＸ−ＩＩ（シクロオキシゲナーゼＩＩ）阻害薬）、及び
（ｉｉ）血管標的薬（例えば、リン酸コンブレタスタチン、及びＷＯ００／４０５２９、ＷＯ００／４１６６９、ＷＯ０１／９２２２４、ＷＯ０２／０４４３４、及びＷＯ０２／０８２１３に開示されている化合物、及び国際特許出願公開番号ＷＯ９９／０２１６６に記載されている血管損傷薬（例えば、Ｎ−アセチルコルヒノール（ａｃｅｔｙｌｃｏｌｃｈｉｎｏｌ）−Ｏ−リン酸））、
（ｉｉｉ）細胞分裂阻害薬、例えば、抗エストロゲン薬（例えば、タモキシフェン、トレミフェン、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、及びヨードキシフェン）、エストロゲン受容体下方制御薬（例えば、フルベストラント）、プロゲストーゲン（例えば、酢酸メゲストロール）、アロマターゼ阻害薬（例えば、アナストロゾール、レトラゾール、ボラゾール、及びエキセメスタン）、抗プロゲストーゲン、抗アンドロゲン（例えば、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、及び酢酸シプロテロン）、ＬＨＲＨ作用薬並びに拮抗薬（例えば、酢酸ゴセレリン、リュープロレリン、及びブセレリン）、５αレダクターゼの阻害薬（例えば、フィナステリド）、
（ｉｖ）抗侵入薬（例えば、マリマスタットなどのメタロプロテイナーゼ阻害薬、及びウロキナーゼプラスミノーゲン活性化因子受容体機能の阻害薬、又はヘパラナーゼに対する抗体の阻害薬）、
（ｖ）増殖因子機能の阻害薬（このような増殖因子には、例えば、血小板由来増殖因子、及び肝細胞増殖因子が含まれる）、このような阻害薬には、増殖因子の抗体、増殖因子の受容体の抗体（例えば、抗ｅｒｂｂ２抗体であるトラスツズマブ［Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（商標）］、抗ＥＧＦＲ抗体であるパニツムマブ、抗ｅｒｂＢ１抗体であるセツキシマブ［Ｃ２２５］、及びＳｔｅｒｎら、Ｃｒｉｔｉｃａｌ ｒｅｖｉｅｗｓ ｉｎ ｏｎｃｏｌｏｇｙ／ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ、２００５年、５４巻、１１〜２９頁によって公開されているあらゆる増殖因子又は増殖因子の受容体の抗体）が含まれ；このような阻害薬には、上皮成長因子ファミリーの阻害薬（例えば、Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−メトキシ−６−（３−モルホリノプロポキシ）−キナゾリン−４−アミン（ゲフィチニブ、ＡＺＤ１８３９）、Ｎ−（３−エチニルフェニル）−６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）キナゾリン−４−アミン（エルロチニブ、ＯＳＩ−７７４）、及び６−アクリルアミド−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−（３−モルホリノプロポキシ）キナゾリン−４−アミン（ＣＩ１０３３）などのＥＧＦＲファミリーチロシンキナーゼ阻害薬）、並びにラパチニブなどのｅｒｂＢ２チロシンキナーゼ阻害薬、肝細胞増殖因子ファミリーの阻害薬、イマチニブなどの血小板由来増殖因子ファミリーの阻害薬、セリン／スレオニンキナーゼの阻害薬（例えば、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害薬などのＲａｓ／Ｒａｆシグナル伝達阻害薬、例えば、ソラフェニブ（ＢＡＹ４３−９００６））、ＭＥＫ及び／又はＡＫＴキナーゼによる細胞シグナル伝達の阻害薬、ｃ−ｋｉｔ阻害薬、ａｂｌキナーゼ阻害薬、ＩＧＦ受容体（インスリン様増殖因子）キナーゼ阻害薬、オーロラキナーゼ阻害薬（例えば、ＡＺＤ１１５２、ＰＨ７３９３５８、ＶＸ−６８０、ＭＬＮ８０５４、Ｒ７６３、ＭＰ２３５、ＭＰ５２９、ＶＸ−５２８、及びＡＸ３９４５９）、並びに、ＣＤＫ２及び／又はＣＤＫ４阻害薬などのサイクリン依存性キナーゼ阻害因子などのチロシンキナーゼ阻害薬も含まれ、
（ｖｉ）内科腫瘍学で用いられる、抗増殖性／抗悪性腫瘍薬、及びそれらの組合せ、例えば、代謝拮抗薬（例えば、メトトレキセートなどの葉酸代謝拮抗薬、５−フルオロウラシルなどのフルオロピリミジン、テガフール、プリン及びアデノシン類似物質、並びにシトシンアラビノシド、ヒドロキシウレア、又は、例えば、特に、欧州特許出願第２３９３６２号に特に開示されている代謝拮抗物質の１つ、例えば、Ｎ−（５−［Ｎ−（３，４−ジヒドロ−２−メチル−４−オキソキナゾリン−６−イルメチル）−Ｎ−メチルアミノ−２−テノイル）−Ｌ−グルタミン酸；抗腫瘍の抗生物質（例えば、アドリアマイシンなどのアントラサイクリン、ブレオマイシン、ドキソルビシン、ダウノマイシン、エピルビシン、及びイダルビシン、マイトマイシン−Ｃ、ダクチノマイシン、及びミトラマイシン）、白金誘導体（例えば、シスプラチン、及びカルボプラチン）、アルキル化剤（例えば、ナイトロジェンマスタード、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン、シクロホスファミド、イフォスファミド、ニトロソウレア、及びチオテパ）、有糸分裂阻害薬（例えば、ビンカアルカロイド、例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、及びビノレルビン、並びにタキソイド、例えば、タキソール及びタキソテール）、トポイソメラーゼ阻害薬（例えば、エトポシド及びテニポシドなどのエピポドフィロトキシン、アムサクリン、トポテカン、カンプトテシン、並びにイリノテカン）、酵素（例えば、アスパラギナーゼ）、並びにチミジル酸合成酵素阻害薬（例えば、ラルチレキセド（ｒａｌｔｉｔｒｅｘｅｄ））；
並びに、
（ｖｉｉ）生物学的応答調節物質（例えば、インターフェロン）、
（ｖｉｉｉ）抗体（例えば、エドレコロマブ）、
（ｉｘ）アンチセンス療法、例えば、上記に列挙した標的に向けられているもの、例えば、ＩＳＩＳ２５０３、抗ｒａｓアンチセンス、
（ｘ）遺伝子治療の取組み（例えば、異常なｐ５３、又は異常なＢＲＣＡ１若しくはＢＲＣＡ２などの異常な遺伝子を置き換えるための取組み、シトシンデアミナーゼ、チミジンキナーゼ、又は細菌のニトロ還元酵素を用いたものなどのＧＤＥＰＴ（遺伝子指向性酵素プロドラッグ療法）の取組み、多剤耐性遺伝子療法など、化学療法又は放射線療法に対する患者の耐性を増大するための取組みを含む）、及び
（ｘｉ）免疫療法の取組み（例えば、患者の腫瘍細胞の免疫原性を増大するためのｅｘ ｖｉｖｏ及びｉｎ ｖｉｖｏの取組み、例えば、インターロイキン２、インターロイキン４、又は顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子などのサイトカインでのトランスフェクションを含む；Ｔ細胞のアネルギーを低減するための取組み；サイトカインでトランスフェクトした樹状細胞などのトランスフェクトした免疫細胞を用いる取組み；サイトカインでトランスフェクトした腫瘍細胞系を用いた取組み；並びに抗イディオタイプの抗体を用いた取組み）が含まれる。
【００４７】
例えば、化合物１の硫酸水素塩を、有効量の血管新生阻害薬、シグナル伝達阻害薬、及び抗増殖剤から選択される、１つ又は複数の物質と組み合わせて用いてもよい。
【００４８】
特定の一実施形態では、ＭＭＰ−２（マトリックスメタロプロテイナーゼ２）阻害薬、ＭＭＰ−９（マトリックスメタロプロテイナーゼ９）阻害薬、及びＣＯＸ−ＩＩ（シクロオキシゲナーゼ）阻害薬などの血管新生阻害薬を、本発明の化合物１の硫酸水素塩、及び本明細書に記載する薬剤組成物と組み合わせて用いることができる。有用なＣＯＸ−ＩＩ阻害薬の例には、ＣＥＬＥＢＲＥＸ（商標）（アレコキシブ）、バルデコキシブ、及びロフェコキシブが含まれる。有用なマトリックスメタロプロテイナーゼ阻害薬の例は、ＷＯ９６／３３１７２、ＷＯ９６／２７５８３、ＷＯ９８／０７６９７、ＷＯ９８／０３５１６、ＷＯ９８／３４９１８、ＷＯ９８／３４９１５、ＷＯ９８／３３７６８、ＷＯ９８／３０５６６、ＷＯ９０／０５７１９、ＷＯ９９／５２９１０、ＷＯ９９／５２８８９、ＷＯ９９／２９６６７、米国特許第５８６３９４９号、及び米国特許第５８６１５１０号に記載されており、これらはすべてその全文が参照により本明細書に組み入れられる。適切なＭＭＰ−２及びＭＭＰ−９の阻害薬は、ＭＭＰ−１を阻害する活性が殆ど、又はまったくないものである。特に、他のマトリックスメタロプロテイナーゼ（即ち、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−４、ＭＭＰ−５、ＭＭＰ−６、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、及びＭＭＰ−１３）に比べて選択的にＭＭＰ−２及び／又はＭＭＰ−９を阻害するものが用いられる。本発明で有用なＭＭＰ阻害薬の特定の例は、ＡＧ−３３４０、ＲＯ３２−３５５５、及びＲＳ１３−０８３０である。
【００４９】
したがって、本発明のさらなる一態様は、化合物１の硫酸水素塩を、本明細書上述の（ｉ）〜（ｘｉ）の下に列挙した任意の１つの抗腫瘍薬と組み合わせて提供する。本発明のさらなる一態様は、化合物１の硫酸水素塩を、本明細書上述の（ｉ）〜（ｘｉ）の下に列挙した１つ又は複数の抗腫瘍薬と組み合わせて提供する。本発明のさらなる一態様は、化合物１の硫酸水素塩を、本明細書上述の（ｉ）〜（ｘｉ）の下に列挙した抗腫瘍薬のクラスの任意の１つと組み合わせて提供する。
【００５０】
本明細書では、「組合せ」の語を用いる場合、これは同時の、別々の、又は逐次の投与を意味するものと理解されたい。本発明の一態様では、「組合せ」は同時の投与を意味する。本発明の別の一態様では、「組合せ」は別々の投与を意味する。本発明のさらなる一態様では、「組合せ」は逐次の投与を意味する。投与が逐次又は別々である場合、第２の組成物を投与する上での遅延は、組合せの有益な効果を失わないようでなければならない。
【００５１】
本発明のさらなる一態様によると、本明細書上述の（ｉ）〜（ｘｉ）の下に列挙したものから選択された抗腫瘍薬と組み合わせた、化合物１の硫酸水素塩を含むキットが提供される。
【００５２】
本発明のさらなる一態様によると、
ａ）第１の単位投与量形態における化合物１の硫酸水素塩、
ｂ）第２の単位投与量形態における、本明細書で上記（ｉ）〜（ｘｉ）の下に列挙した１つから選択される抗腫瘍薬、及び
ｃ）前記第１及び第２の投与量形態を含むための容器手段
を含むキットが提供される。
【００５３】
化合物１は、以下のアッセイにおいて活性を有することが見出されている。Ｎ末端を６−Ｈｉｓタグ修飾した、恒常的に活性なＭＥＫ１（２−２９３）を大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）で発現させ、タンパク質を従来の方法によって精製する（Ａｈｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９９４年、２６５巻、９６６〜９７０頁）。ＭＥＫ１の活性を、γ−３３Ｐ−ＡＴＰからのγ−３３Ｐ−リン酸の、大腸菌で発現されＭＥＫ１の存在下で従来の方法により精製される、Ｎ末端をＨｉｓタグ付けしたＥＲＫ２上への取り込みを測定することによって評価する。アッセイは、９６ウェルのポリプロピレンプレートで行う。インキュベーション混合液（１００μＬ）は、２５ｍＭのＨｅｐｅｓ、ｐＨ７．４、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、５ｍＭのβ−グリセロリン酸、１００μＭのオルトバナジン酸ナトリウム、５ｍＭのＤＴＴ、５ｎＭのＭＥＫ１、及び１μＭのＥＲＫ２を含む。阻害薬をＤＭＳＯに懸濁し、コントロールを含めて反応すべてを、最終濃度１％のＤＭＳＯで行う。１０μＭのＡＴＰ（０．５μＣｉγ−３３Ｐ−ＡＴＰ／ウェルで）の添加により反応を開始し、周囲の温度で４５分間インキュベートする。等体積の２５％のＴＣＡを加えて反応を停止し、タンパク質を沈澱させる。沈澱したタンパク質を、ガラス繊維Ｂフィルタープレート上に捕捉し、過剰の標識したＡＴＰをＴｏｍｔｅｃ ＭＡＣＨ ＩＩＩハーベスターを用いて洗い流す。プレートを空気乾燥させた後、３０μＬ／ウェルのＰａｃｋａｒｄ Ｍｉｃｒｏｓｃｉｎｔ２０を加え、Ｐａｃｋａｒｄ ＴｏｐＣｏｕｎｔを用いてプレートを計数する。このアッセイでは、化合物１は５０マイクロモル未満のＩＣ５０を示した。
【実施例】
【００５４】
本発明を説明するために、以下の実施例を含める。しかし、これらの実施例は本発明を制限するものではなく、本発明を実践する方法を示唆しようとするにすぎないことを理解されたい。収率は実践した実施例に対して与えられ、さらなる発展により向上する可能性があり得る。１Ｈ ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ）はＴＭＳ（０．００ｐｐｍ）を基準にしており、１３Ｃ ＮＭＲスペクトル（１００ＭＨｚ）はＮＭＲ溶媒（３９．５ｐｐｍ）を基準にしており、１９Ｆ ＮＭＲスペクトルはトリクロロフルオロメタン（０．００ｐｐｍ）を基準にしている。ＦＴＩＲスペクトルは、粉末ＫＢｒ中２％ｗ／ｗからのこの材料の分散を含む様々な方法で、ＤＲＩＦＴＳサンプリング技術を用いて、４０００〜４００ｃｍ−１の中赤外のスペクトルの領域にわたって、Ｎｉｃｏｌｅｔ Ｍａｇｎａ８６０ＥＳＰ ＦＴＩＲ分光計で得た。
【００５５】
（実施例１）
化合物１の硫酸水素塩の調製
【化２】
０〜５℃の２−ブタノン（６８０ｍＬ）及び水（１１５ｍＬ）中の６−（４−ブロモ−２−クロロ−フェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エトキシ）−アミド（１００ｇ、０．２０６ｍｏｌ）（本明細書に参照により組み入れられ、以下に記載するＷＯ０３／０７７９１４の実施例に記載されている通りに入手可能）の懸濁液を攪拌したものに、１０℃以下の温度を維持しながら、硫酸（１２．３ｍＬ、０．２２６ｍｏｌ）を加え、次いで水（５ｍＬ）を加えた。攪拌した混合液を６５℃に加熱し、３０分間保持し、次いでろ過してあらゆる外来の材料を除去した。ろ紙を、２−ブタノン（８５ｍＬ）及び水（１５ｍＬ）の混合液で洗浄した。ろ液を合わせ、７２℃に加熱し、その後、温度を６０〜７２℃の間に維持しながら２−ブタノン（５００ｍＬ）を加えた。得られた混合液を、蒸留液５００ｍＬを回収するまで大気圧で蒸留した（蒸留温度は約７３〜７４℃）。
【００５６】
７０℃を上回る混合液の温度を維持しながら、２−ブタノンの第２のアリコート（５００ｍＬ）を加えた。得られた混合液を、蒸留液２５０ｍＬを回収するまで再び蒸留した。約１時間かけて、混合液を０〜５℃に冷却した。得られたスラリーをろ過し、２−ブタノン（２４０ｍＬ）で洗浄し、一定の重量を達成するまで５０℃の減圧下で乾燥させて、オフホワイトの結晶固体の、６−（４−ブロモ−２−クロロ−フェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エトキシ）−アミド硫酸水素塩（１０３．５ｇ、０．１８６ｍｏｌ、収率９０％）を得た。
【化３】
【００５７】
赤外線分析の結果を、図２に示す。スペクトルの割当てを表１に要約する。
【００５８】
【表１】
【００５９】
（実施例１Ａ）
化合物１の硫酸水素塩の調製
６−（４−ブロモ−２−クロロフェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシエトキシ）−アミド（１０ｇ、０．０２１４ｍｏｌ）（本明細書に参照により組み入れられ、以下に記載するＷＯ０３／０７７９１４の実施例１０に記載されている通りに入手可能）の、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（６２ｍｌ）及び水（８ｍｌ）の懸濁液を攪拌したものに、温度を１０℃又はそれより低く維持しながら、硫酸（１．５２ｍｌ、２７．８６ｍｍｏｌ）を加えた。攪拌した混合液を６５℃に加熱し、３０分間保持した後、ろ過してあらゆる外来性の材料を除去した。次いで、６０℃を上回る温度を維持して、ＴＨＦ（１５０ｍｌ）を混合液に加えた。次いで、混合液を、約２時間かけて０〜５℃に冷却した。得られたスラリーをろ過し、ＴＨＦ（３０ｍｌ）で洗浄し、一定の重量を達成するまで５０℃の減圧下で乾燥させて、オフホワイトの結晶固体の６−（４−ブロモ−２−クロロ−フェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシエトキシ）−アミド硫酸水素塩（９．８１ｇ、０．１７ｍｏｌ、収率８２％）を得た。物質は、上記実施例１で生成したものと同じであった。
【００６０】
（実施例１Ｂ）
６−（４−ブロモ−２−クロロ−フェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エトキシ）−アミドの調製
ステップＡ：２，３，４−トリフルオロ−５−ニトロ安息香酸
３リットルの三頚丸底フラスコに、Ｈ２ＳＯ４１２５ｍｌを充填した。発煙硝酸を加え（８．４ｍｌ、１９９ｍｍｏｌ）、混合液を穏やかに攪拌した。２，３，４−トリフルオロ安息香酸（２５ｇ、１４２ｍｍｏｌ）を、９０分かけて５ｇ部分で加えた。暗褐色がかった黄色の溶液を６０分間攪拌し、その時間に反応は完了した。反応混合液を、氷：水混合液１リットル中に注ぎ、ジエチルエーテルで抽出した（３×６００ｍｌ）。抽出液を合わせて乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、減圧下で濃縮して黄色の固体を得た。固体をヘキサンに懸濁し、３０分間攪拌し、その後それをろ過して、オフイエロー（ｏｆｆ−ｙｅｌｌｏｗ）固体の、混じりけのない所望の生成物２９ｇ（９２％）を得た：ＭＳ ＡＰＣＩ（−）ｍ／ｚ２２０（Ｍ−１）を検出した。
【００６１】
ステップＢ：４−アミノ−２，３−ジフルオロ−５−ニトロ−安息香酸
水酸化アンモニウム溶液（水中約３０％）（３５ｍｌ、２７１ｍｍｏｌ）を、０℃の２，３，４−トリフルオロ−５−ニトロ−安息香酸（１５ｇ、６７．８ｍｍｏｌ）水溶液３０ｍｌに、攪拌しながら加えた。水酸化アンモニウムの添加が完了したら、反応混合液を、攪拌しながら室温に温めた。２．５時間後、反応混合液を０℃に冷却し、反応混合液のｐＨが０になるまで濃ＨＣｌを注意深く加えた。反応混合液を水（３０ｍｌ）で希釈し、ジエチルエーテルで抽出した（３×５０ｍｌ）。有機抽出物を合わせて乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下で濃縮して純粋な所望の生成物１４ｇ（９５％）を得た：ＭＳ ＡＰＣＩ（−）ｍ／ｚ２１７（Ｍ−１）を検出した。
【００６２】
ステップＣ：４−アミノ−２，３−ジフルオロ−５−ニトロ安息香酸メチルエステル
テトラメチルシラン（ＴＭＳ）ジアゾメタンの２Ｍヘキサン溶液（６．８８ｍｌ、１３．７５ｍｍｏｌ）を、０℃の４−アミノ−２，３−ジフルオロ−５−ニトロ安息香酸（２．００ｇ、９．１７ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）：ＭｅＯＨ ４：１懸濁液２５ｍｌに、窒素雰囲気下で加えた。添加が完了したら、反応混合液を室温に温めた。０．５時間後、酢酸を注意深く加えることによって、過剰なＴＭＳジアゾメタンを破壊した。次いで、反応物を減圧下で濃縮し、真空中で乾燥させ、純粋な所望の生成物１．９５ｇ（９２％）を得た：ＭＳ ＡＰＣＩ（−）ｍ／ｚ２３１（Ｍ−１）を検出した。
【００６３】
ステップＤ：４−アミノ−３−フルオロ−５−ニトロ−２−フェニルアミノ−安息香酸メチルエステル
４−アミノ−２，３−ジフルオロ−５−ニトロ安息香酸メチルエステル（２３．４８ｇ、１０１．１ｍｍｏｌ）をキシレン（１２５ｍｌ）に懸濁し、アニリン（９２ｍｌ、１０１１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合液をＮ２下、１２５℃で１６時間攪拌した。反応混合液を室温に冷却し、溶液から固体を沈澱させた。ろ過によって固体を回収し、キシレン、次いでジエチルエーテルで洗浄した。黄色固体の純粋な所望の生成物２２．２２ｇ（７２．７８ｍｍｏｌ）を回収した。ろ液を減圧下で濃縮し、塩化メチレンに再溶解し、シリカゲルのプラグを通して塩化メチレンで溶出することにより流した。所望の分画を減圧下で濃縮して褐色固体を得、これをジエチルエーテルとともに粉砕して、黄色固体の純粋な所望の生成物５．４７ｇ（１７．９１ｍｍｏｌ）を得た。生成物を合わせた収量は２７．６９ｇ（９０％）であった。ＭＳ ＡＰＣＩ（−）ｍ／ｚ３０４（Ｍ−１）を検出した。
【００６４】
ステップＥ：７−フルオロ−６−フェニルアミノ−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸メチルエステル
４−アミノ−３−フルオロ−５−ニトロ−２−フェニルアミノ−安息香酸メチルエステル（１６．７０ｇ、５４．７１ｍｍｏｌ）、ギ酸（２５０ｍｌ、６．６３ｍｏｌ）、及び２０％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃ（９．００ｇ、１６．９１ｍｍｏｌ）のエタノール溶液（２５０ｍＬ）を、Ｎ２下、４０℃で２時間攪拌し、次いで、９５℃で１６時間攪拌した。反応混合液を室温に冷却し、酢酸エチルですすぎながら、セライトを通してろ過した。ろ液を減圧下で濃縮して、黄色固体を得た。固体をジエチルエーテルとともに粉砕して黄褐色固体の所望の生成物１３．４７ｇ（８６％）を得た。ＭＳ ＡＰＣＩ（＋）ｍ／ｚ２８６（Ｍ＋１）を検出した。ＭＳ ＡＰＣＩ（−）Ｍ／Ｚ２８４（Ｍ−１）を検出した。
【００６５】
ステップＦ：６−（４−ブロモ−フェニルアミノ）−７−フルオロ−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸メチルエステル
７−フルオロ−６−フェニルアミノ−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸メチルエステル（４．９９ｇ、１７．５１ｍｍｏｌ）を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２７５ｍｌ）に溶解した。Ｎ−ブロモスクシンイミド（３．１５ｇ、１７．７０ｍｍｏｌ）を固体として加え、反応混合液を、Ｎ２下、室温で攪拌した。３０分後、反応混合液を、飽和亜硫酸水素ナトリウム水溶液を加えることによりクエンチした。次いで、反応混合液を分液漏斗中に注ぎ、水及び酢酸エチルで希釈し、層を分離した。水層を酢酸エチルで抽出した。有機抽出物を合わせて、水で３回、塩水で１回洗浄し、次いで乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、減圧下で濃縮して、収量６．３８ｇ（１００％）の黄褐色固体の純粋な所望の生成物を得た。ＭＳ ＥＳＩ（＋）ｍ／ｚ３６４、３６６（Ｍ＋Ｂｒパターン）を検出した。
【００６６】
ステップＧ：６−（４−ブロモ−２−クロロ−フェニルアミノ）−７−フルオロ−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸メチルエステル
６−（４−ブロモ−フェニルアミノ）−７−フルオロ−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸メチルエステル（６．３８ｇ、１７．５１ｍｍｏｌ）を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２７５ｍＬ）に溶解した。Ｎ−クロロスクシンイミド（２．３６ｇ、１７．７０ｍｍｏｌ）を固体として加え、反応混合液を室温でＮ２下、反応が完了するまで（５〜６日）攪拌した。反応混合液を、飽和亜硫酸水素ナトリウム水溶液を加えることによりクエンチして懸濁液を得た。得られた固体をろ過によって回収し、水及びジエチルエーテルで洗浄し、減圧下で乾燥させて収量６．０７ｇ（８７％）のベージュ色固体の純粋な所望の生成物を得た。ＭＳ ＥＳＩ（＋）ｍ／ｚ３９８、４００（Ｍ＋Ｂｒパターン）を検出した。
【００６７】
ステップＨ：６−（４−ブロモ−２−クロロフェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸メチルエステル、及び６−（４−ブロモ−２−クロロフェニルアミノ）−７−フルオロ−１−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸メチルエステル
６−（４−ブロモ−２−クロロ−フェニルアミノ）−７−フルオロ−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸メチルエステル（１５０ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）、ヨードメタン（２８μＬ、０．４５ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（７８ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド溶液（１．５ｍＬ）を、７５℃で１時間攪拌した。反応混合液を酢酸エチルで希釈し、飽和炭酸カリウム水溶液（２×）、塩水で洗浄し、乾燥させた（Ｎａ２ＳＯ４）。フラッシュカラムクロマトグラフィー（塩化メチレン／酢酸エチル ２０：１）により、より可動性の白色固体の６−（４−ブロモ−２−クロロフェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸メチルエステル５６ｍｇ（３６％）を得た。１９Ｆ ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）−１３３．５（ｓ）。ＭＳ ＡＰＣＩ（＋）ｍ／ｚ４１２、４１４（Ｍ＋、Ｂｒパターン）を検出した。白色固体の６−４（−ブロモ−２−クロロフェニルアミノ）−７−フルオロ−１−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸メチルエステル５４ｍｇ（３５％）も単離した。１９Ｆ ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）−１３９．９（ｓ）。ＭＳ ＡＰＣＩ（＋）ｍ／ｚ４１２、４１４（Ｍ＋、Ｂｒパターン）を検出した。
【００６８】
ステップＩ：６−（４−ブロモ−２−クロロ−フェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸
６−（４−ブロモ−２−クロロ−フェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸メチルエステル（５６ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ／水 ２：１（３ｍＬ）中に溶解し、ＮａＯＨ（０．５５ｍｌ、１．０Ｍ水溶液、０．５５ｍｍｏｌ）を加えた。２時間攪拌後、ロータリーエバポレーションにより反応物を最初の体積の４分の１に減少させ、残渣を水で５０ｍｌに希釈した。１．０ＭのＨＣｌ水溶液を加えることによって、水溶液をｐＨ２に酸性化し、テトラヒドロフラン／酢酸エチル １：１で抽出し（３×）、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、減圧下で濃縮して、オフホワイト固体の純粋なカルボン酸４３ｍｇ（７９％）を得た。ＭＳ ＥＳＩ（＋）ｍ／ｚ３９７、３９８（Ｍ＋、Ｂｒパターン）を検出した。
【００６９】
ステップＪ：６−（４−ブロモ−２−クロロ−フェニルアミノ−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ビニルオキシ−エトキシ）−アミド
６−（４−ブロモ−２−クロロ−フェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２．００ｇ、５．０ｍｍｏｌ）、Ｏ−（２−ビニルオキシ−エチル）−ヒドロキシルアミン（０．７７６ｇ、７．５ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（０．８８ｇ、６．５ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（１．６１ｍＬ、２．３ｍｍｏｌ）及びＥＤＣＩ（１．３ｇ、６．５ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド（５２ｍＬ）に溶解し、室温で４８時間攪拌した。反応混合液を酢酸エチルで希釈し、水（３×）、飽和炭酸カリウム（２×）、飽和塩化アンモニウム（２×）、食塩水で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、減圧下でオフホワイト固体に濃縮した。固体をジエチルエーテルとともに粉砕し、オフホワイト固体の所望の生成物２．１８ｇ（９０％）を得た。ＭＳ ＥＳＩ（＝）ｍ／ｚ４８３、４８５（Ｍ＋Ｂｒパターン）を検出した。
【００７０】
ステップＫ：６−（４−ブロモ−２−クロロ−フェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エトキシ）−アミド
６−（４−ブロモ−２−クロロ−フェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ビニルオキシエトキシ）−アミド（２．１８ｇ、４．５０ｍｍｏｌ）のエタノール懸濁液（５０ｍＬ）に、塩酸（１４ｍＬ、１．０Ｍ水溶液、１４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合液を２４時間攪拌した。反応混合液をロータリーエバポレーションにより濃縮して乾燥させ、固体を酢酸エチル／テトラヒドロフラン ３：１と飽和炭酸カリウムとの間で分配した。水相を酢酸エチル／テトラヒドロフラン ３：１で抽出し（３×）、有機層を合わせて乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮して、オフホワイト固体の６−（４−ブロモ−２−クロロフェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシエトキシ）−アミド２．１１ｇ（１００％）を得た。ＭＳ ＥＳＩ（＋）ｍ／ｚ４５７、４５９（Ｍ＋、Ｂｒパターン）を検出した。
【化４】
【００７１】
（実施例２）
硫酸水素塩の物理的性質の検討
実施例１の生成物を以下の試験にかけて、その物理的性質を決定した。
【００７２】
粉末Ｘ線回折（ＰＸＲＤ）
サンプルをすべて、Ｂｒｕｋｅｒ Ｄ５０００回折計で測定した。結晶塩のサンプルを、Ｓｉｅｍｅｎｓシリコン単結晶（ＳＳＣ）ウェハマウント上に載置し、顕微鏡用スライドの助けでサンプルを薄層に伸ばすことによって、Ｘ線粉末回折のスペクトルを決定した。サンプルを、１分間あたり３０回転で回転させ（計数安定性を向上するため）、波長１．５４０６オングストロームで、４０ｋＶ及び４０ｍＡで操作される銅製ロングファインフォーカス管によって生成されるＸ線を照射した。平行Ｘ線源は、Ｖ２０に設定された自動可変の発散スリットを通過し、反射した放射線は２ｍｍの散乱線除去スリット及び０．２ｍｍの検出スリットを通して向けられた。サンプルを、シータ−シータモードで２度から４０度の２シータの範囲にわたって、０．０２度の２シータの増大につき１秒間曝露した（連続スキャンモード）。操作時間は３１分４１秒であった。機器には、検出器としてシンチレーションカウンターが装備されていた。制御及びデータの取り込みは、Ｄｅｌｌ Ｏｐｔｉｐｌｅｘ６８６ＮＴ４．０ＷｏｒｋｓｔａｔｉｏｎによりＤｉｆｆｒａｃｔ＋ソフトウェアで操作した。
【００７３】
データを、１増大につき４ｓで０．０２°の２シータの増大で、２シータ２〜４０°の範囲にわたって収集し、表２に分類し、相対強度は固定スリットで測定した回折図形に由来する。
【００７４】
【表２】
【００７５】
スキャンの結果を図１に示し、図中、上の灰色線は、化合物１の硫酸水素塩のＸＲＰＤを表し、下の黒色線は遊離の形態を表す。最も強力なピークは、最も強力に始まり、表３に示してある。２４．５９°のピークは特に強い。
【００７６】
【表３】
【００７７】
Ｘ線粉末回折の分野の技術者であれば、ピークの相対強度はサンプルの分析に影響を及ぼすことがある、例えば、サイズ３０ミクロンを超える粒子、及び非ユニタリーアスペクト比の影響を受けることがあることを理解するであろう。当業者であれば、反射の位置は、回折計においてサンプルが位置する正確な高さ、及び回折計のゼロキャリブレーションの影響を受け得ることも、理解するであろう。サンプル表面の平面性にも、少々効果があることがある。したがって、提示される回折パターンのデータは、絶対値として理解してはならない（さらなる情報には、Ｊｅｎｋｉｎｓ，Ｒ．及びＳｎｙｄｅｒ，Ｒ．Ｌ．、「Ｘ線粉末回折序論（Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｘ−Ｒａｙ Ｐｏｗｄｅｒ Ｄｉｆｆｒａｃｔｏｍｅｔｒｙ）」、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、１９９６年を参照されたい）。
【００７８】
（実施例３）
ｉｎ ｖｉｖｏの検討：分散製剤における塩対遊離塩基の試験
化合物１を遊離形態又は硫酸水素塩として含む薬学的に許容できる分散剤中の様々な分散製剤７．５ｍＬで、１５０ｍｇの遊離塩基当量の経口投与量を投与後の、絶食イヌにおける化合物１の血漿レベルを測定する試験をイヌで行った。
【００７９】
投与日３日間各々に、体重１２〜１７ｋｇの約２歳から６歳の絶食したビーグル犬に、１５０ｍｇの単一投与量を経口投与した。各投与日は１週間離れていた。
【００８０】
製剤はすべて、１０ｍＬのディスポーザブルシリンジにより、好適な分散溶液７．５ｍＬを、１５０ｍｇの遊離塩基当量の好適な薬物形態を含むバイアルに加え、キャップを閉め、３０秒間ボルテックス混和して分散液を形成することにより、投与直前に即時調製した。
【００８１】
ディスポーザブルシリンジを用いて分散液をバイアルから取り、胃内に配置した胃管栄養法チューブによって動物に投薬した。２０ｍＬディスポーザブルシリンジによって、別の１５ｍＬのアリコートの水を、２回のすすぎの各々に２回加える（すすぎの全体積＝３０ｍＬ）ことにより、バイアルを２回すすぎ、キャップを閉め、５秒間ボルテックス混和し、ディスポーザブルシリンジを用いてバイアルから洗浄溶液を取り、胃管栄養法チューブによって動物に投薬した。
【００８２】
イヌに、約４００ｇのＳｐｅｃｉａｌ Ｄｉｅｔ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｄｉｅｔ Ａを毎日与え、水は自由摂取させた。投薬直前、及び０．５、１、２、３、４、５、６、８、１２、１８、２４、３６、及び４８時間に、頚動脈から全血（２ｍＬ）をリチウムヘパリンチューブに採血した。血液を３０００ｒｐｍで１５分間遠心し、血漿を単純な血液用チューブ中に取り、血漿を分析まで−２０℃で貯蔵した。
【００８３】
血漿（５０ｍｃＬ）を、化合物１の濃度に対して分析した。２匹のイヌが投薬直後に嘔吐したので、これらは分析から除外した。経口投与後に見られた化合物１に対する平均血漿濃度プロファイルを図３に示し、図中▲によって表される線は化合物１の硫酸水素塩を含む製剤を示し、×によって表される線は同じ製剤における化合物１の遊離塩基の結果を示している。
【００８４】
製剤の変更は、曝露に対して比較的少ない影響を有すると思われる（結果は示さず）。しかし、化合物１を硫酸水素塩として投薬した場合、実質的な約４から８倍の曝露の増大がもたらされた。
【００８５】
以上の記載は、本発明の原理のみを例示するものと考えられる。さらに、当業者であれば多くの修正形態及び変更形態が容易に明らかであるので、本発明を、上記に記載したように示す正確な構成及びプロセスに限定するのは望ましくない。したがって、すべての適切な修正形態及び同等物が、以下の特許請求の範囲によって規定される本発明の範囲内にあると訴えられ得る。
【００８６】
「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「含んでいる（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、及び「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」の語を、本明細書及び以下の特許請求の範囲で用いる場合、指定される特徴、整数、構成成分、又はステップの存在を特定することが企図されるが、１つ又は複数の他の特徴、整数、構成成分、ステップ、又はそれらのグループの存在又は添加を除外するものではない。
【図面の簡単な説明】
【００８７】
【図１】化合物１の硫酸水素塩のＸＲＰＤを示す図である。
【図２】ＤＲＩＦＴＳサンプリング技術を用いて得た化合物１の硫酸水素塩の赤外線スペクトルを示す図である。
【図３】１５０ｍｇ遊離塩基当量の経口用の分散剤の投与量の化合物１（×）及び硫酸水素塩（▲）を絶食したイヌに投与した後の、化合物１の血漿濃度レベルの結果を示す図である。
【技術分野】
【０００１】
本出願は、その全文が、この参照により本明細書に組み入れられる、２００５年１２月２１日出願の、米国仮出願第６０／７５２７８１号の優先権を主張するものである。
【０００２】
本発明は、新規な塩に関し、より詳しくは、哺乳動物における、癌などの増殖性の疾患状態の治療及び／又は予防に有用であるＭＥＫ阻害薬である、６−（４−ブロモ−２−クロロ−フェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エトキシ）−アミド（以下「化合物１」と呼ぶ）の新規な塩に関する。より詳しくは、本発明は、化合物１の硫酸水素塩に関し、前記塩を調製するための方法に関する。化合物１の硫酸水素塩を含む薬剤組成物、並びに、ヒト又は動物の身体における、癌などの増殖性の疾患状態を治療及び／又は予防するための薬物の製造におけるその塩の使用、並びに、化合物１の硫酸水素塩の治療有効量を投与することによって哺乳動物における癌などの増殖性の疾患状態を治療する方法も提供する。
【背景技術】
【０００３】
増殖因子受容体及びタンパク質キナーゼによる細胞のシグナル伝達は、細胞成長、増殖及び分化の重要な制御因子である。正常な細胞成長では、増殖因子は、受容体の活性化（即ち、ＰＤＧＦ又はＥＧＦ及びその他）により、ＭＡＰキナーゼ経路を活性化する。正常な及び制御されていない細胞成長に関与する、最も重要且つ最もよく理解されているＭＡＰキナーゼ経路の１つは、Ｒａｓ／Ｒａｆキナーゼ経路である。活性なＧＴＰ結合Ｒａｓは、Ｒａｆキナーゼの活性化及び間接的なリン酸化をもたらす。次いで、Ｒａｆは、２つのセリン残基上で（ＭＥＫ１に対してＳ２１８とＳ２２２、並びにＭＥＫ２に対してＳ２２２とＳ２２６）、ＭＥＫ１及び２をリン酸化する（Ａｈｎら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、２００１年、３３２巻、４１７〜４３１頁）。次いで、活性化されたＭＥＫは、唯一知られているその基質であるＭＡＰキナーゼＥＲＫ１及び２をリン酸化する。ＭＥＫによるＥＲＫのリン酸化は、ＥＲＫ１に対してはＹ２０４及びＴ２０２上で、ＥＲＫ２に対してはＹ１８５及びＴ１８３上で起こる（Ａｈｎら、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、２００１年、３３２巻、４１７〜４３１頁）。リン酸化したＥＲＫは二量体化し、次いで核に移動しそこで蓄積する（Ｋｈｏｋｈｌａｔｃｈｅｖら、Ｃｅｌｌ、１９９８年、９３巻、６０５〜６１５頁）。核では、ＥＲＫは、それだけには限定されないが、核の輸送、シグナル伝達、ＤＮＡの修復、ヌクレオソームの構築及び移動、並びにｍＲＮＡのプロセシング及び翻訳を含めた、いくつかの重要な細胞の機能に関与している（Ａｈｎら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｅｌｌ、２０００年、６巻、１３４３〜１３５４頁）。概して、増殖因子で細胞を処理すると、ＥＲＫ１及び２の活性化をもたらし、それは増殖、及び場合により分化をもたらす（Ｌｅｗｉｓら、Ａｄｖ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．、１９９８年、７４巻、４９〜１３９頁）。
【０００４】
増殖性疾患では、ＥＲＫキナーゼ経路に関与する、増殖因子受容体、下流のシグナル伝達タンパク質、又はタンパク質キナーゼの遺伝子の突然変異及び／又は過剰発現が、非制御されていない細胞の増殖をもたらし、最終的には腫瘍の形成をもたらす。例えば、いくつかの癌は、増殖因子を持続的に生成することによりこの経路の持続的な活性化をもたらす突然変異を含んでいる。他の突然変異は、活性化したＧＴＰ結合Ｒａｓ複合体の不活性化における欠陥をもたらすことがあり、ＭＡＰキナーゼ経路の活性化を再びもたらす。突然変異した発癌性の形態のＲａｓは、結腸癌の５０％及びすい臓癌の＞９０％、並びに多くの他のタイプの癌に見られる（Ｋｏｈｌら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９９３年、２６０巻、１８３４〜１８３７頁）。最近、ｂＲａｆの突然変異が、６０％を超える悪性メラノーマで同定された（Ｄａｖｉｅｓ，Ｈ．ら、Ｎａｔｕｒｅ、２００２年、４１７巻、９４９〜９５４頁）。ｂＲａｆにおけるこれらの突然変異は、構成的に活性なＭＡＰキナーゼカスケードをもたらす。原発癌のサンプル及び細胞系の研究により、すい臓、結腸、肺、卵巣、及び腎臓の癌における、構成的な、又は過剰活性化したＭＡＰキナーゼ経路も示されている（Ｈｏｓｈｉｎｏ，Ｒ．ら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、１９９９年、１８巻、８１３〜８２２頁）。したがって、癌と、遺伝的突然変異に起因する過剰活性なＭＡＰキナーゼ経路との間に強力な相関が存在する。
【０００５】
構成的な、又は過剰活性化したＭＡＰキナーゼカスケードが細胞の増殖及び分化において中心的役割を果たしているので、これらの経路を阻害することは、過剰増殖性疾患において有益であると考えられている。ＭＥＫは、Ｒａｓ及びＲａｆの下流にあるので、この経路における中心的存在である。さらに、ＭＥＫのリン酸化に対して唯一知られている基質はＭＡＰキナーゼであるＥＲＫ１及び２であるので、ＭＥＫは魅力的な治療の標的である。いくつかの研究では、ＭＥＫの阻害は潜在的な治療上の利点を有することが示されている。例えば、小分子のＭＥＫ阻害薬は、ヌードマウスの異種移植片で、ヒトの腫瘍の成長を阻害し（Ｓｅｂｏｌｔ−Ｌｅｏｐｏｌｄら、Ｎａｔｕｒｅ−Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、１９９９年、５巻（７）、８１０〜８１６頁；Ｔｒａｃｈｅｔら、ＡＡＣＲ、２００２年４月６〜１０日、ポスター番号５４２６；Ｔｅｃｌｅ，Ｈ．、ＩＢＣ、第２回、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｋｉｎａｓｅｓ、２００２年９月９〜１０日）、動物において静的な異痛を阻止し（ＷＯ０１／０５３９０）、急性骨髄性白血病細胞成長を阻害する（Ｍｉｌｅｌｌａら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．、２００１年、１０８巻（６）、８５１〜８５９頁）ことが示されている。
【０００６】
ＭＥＫの小分子阻害薬が開示されている。過去数年に、少なくとも１３の特許出願：米国特許第５５２５６２５号、ＷＯ９８／４３９６０、ＷＯ９９／０１４２１、ＷＯ９９／０１４２６、ＷＯ００／４１５０５、ＷＯ００／４２００２、ＷＯ００／４２００３、ＷＯ００／４１９９４、ＷＯ００／４２０２２、ＷＯ００／４２０２９、ＷＯ００／６８２０１、ＷＯ０１／６８６１９、及びＷＯ０２／０６２１３が現れている。
【０００７】
ＭＥＫの阻害薬は、ＷＯ０３／０７７９１４にも記載されている。６−（４−ブロモ−２−クロロ−フェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エトキシ）−アミド、即ち「化合物１」が、ＷＯ０３／０７７９１４に例示されており、以下の構造式を有している。
【化１】
【０００８】
化合物１は、ＭＥＫに対する阻害作用を有し、したがって、癌などの過剰増殖性疾患の治療に有用であることが示されている。
【０００９】
ＷＯ０３／０７７９１４は、一般的には、本明細書に開示する化合物の、ある種の薬学的に許容できる塩を開示している。特に、これはＷＯ０３／０７７９１４では、十分に塩基性の部分を保有する、そこに開示される化合物の薬学的に許容できる塩は、薬学的に許容できる陰イオンを含む酸付加塩を形成することがあると述べられており、そのような陰イオンが列挙されている。同様に、酸性部分を保有する化合物の適切な塩は、化合物を、塩基性化合物、及び特に無機塩基で処理することによって形成される。
【００１０】
薬物で用いられる薬学的に活性な化合物の形態は、適切には妥当な取扱いの性質をもたらすものであり、そのためにその加工及び製剤が可能になる。しかし、錠剤の溶解速度及び有効成分のバイオアベイラビリティーなど、最終の製剤の生物学的性質が確実に最適化されることも必要であり、これら様々な要求すべてを最もよく満たす特定の形態を選択する上で、しばしばなされるべき妥協が存在する。しかし、いくつかの場合では、おそらくｐＫａ値が低いために、塩は容易に形成せず、且つ／又は安定ではない。ｐＫａ値は、酸及び塩基の強度、即ち酸がプロトンを失い、又は塩基がプロトンを加える傾向を表すものである（Ｂｒｏｎｓｔｅｄ Ｊ．Ｎ．、Ｒｅｃ．Ｔｒａｖ．Ｃｈｉｍ．、（１９２３年）、４７巻、７１８頁）。これは、化合物１に特に当てはまる。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明は、化合物１の硫酸水素塩（薬物：Ｈ２ＳＯ４ １：１）、及びその様々な形態を提供し、そのすべてが本発明の範囲内に含まれる。塩は様々な形態であってよく、そのすべてが本発明の範囲内に含まれる。これらの形態には、無水形態、及び溶媒和化合物が含まれる。さらなる形態は、溶媒和化合物を溶解することによって生成され得る。特定の一実施形態では、塩は無水形態である。
【００１２】
さらなる一態様では、本発明は、過剰増殖性の疾患又は状態を治療するための薬物として、化合物１の硫酸水素塩を使用する方法を提供する。
【００１３】
本発明のさらなる一態様は、過剰増殖性の疾患又は状態を治療又は予防するための薬物の調製における、化合物１の硫酸水素塩の使用である。
【００１４】
本発明のさらなる利点及び新規な特徴を、部分的に以下の記載に述べ、当業者であれば、以下の明細書を検討すれば部分的に明らかになり、本発明を実践することによって習得することができる。本発明の利点は、添付する特許請求の範囲で特に指摘する手段、組合せ、組成物、及び方法によって実現し、達成することができる。
【００１５】
本明細書に組み入れられ、明細書の一部を形成する、添付の図面は、本発明の非限定的な実施形態を例示するものであり、記述とともに、本発明の原理の説明を提供するものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
次に、本発明のある種の実施形態を詳しく言及し、その例は添付の構造及び式に例示する。本発明を、列挙する実施形態と組み合わせて記載するが、これらは、本発明をこれらの実施形態に制限しようとするものではないことは理解されよう。それとは対照的に、本発明は、すべての代替形態、修正形態、及び等価物を網羅することが企図され、これらは特許請求の範囲によって規定される本発明の範囲内に含まれ得る。当業者であれば、本明細書に記載するものと類似し又は等しい、本発明の実践に用いることができる、多くの方法及び材料を認めるであろう。本発明は、記載する方法及び材料に決して限定されるものではない。１つ又は複数の組み入れられる文献、特許、及び類似の材料が、それだけには限定されない、定義される用語、用語の用法、記載される技術などを含めて、本出願とは異なり又は矛盾する場合は、本出願が支配する。
【００１７】
本発明は、化合物１の硫酸水素塩（薬物：Ｈ２ＳＯ４ １：１）、及びその様々な形態を提供し、そのすべてが本発明の範囲内に含まれる。塩は様々な形態であってよく、そのすべてが本発明の範囲内に含まれる。これらの形態には、無水形態、及び溶媒和化合物が含まれる。さらなる形態は、溶媒和化合物を溶解することによって生成され得る。特定の一実施形態では、塩は、化合物１の無水の硫酸水素塩である。さらに、本発明は、薬物における使用に特に適するようにする、独特の物理学的及び薬剤学的性質を示す硫酸水素塩の形態の化合物１を提供する。
【００１８】
ある実施形態では、化合物１の塩は結晶である。結晶の塩は、製造の観点から、特にその静的及び流動の性質において、その取扱いの性質に関して遊離塩基よりも優れていることが見出されている。工程の不純物を分離することができ、塩を遊離塩基から単離するのは一般的に容易であるので、塩の形成により精製の手段がもたらされ得る。
【００１９】
本発明の一実施形態では、化合物１の硫酸水素塩は結晶の塩であり、これは、驚くべきことに化合物１の遊離塩基、及び化合物１のある種の他の塩の形態と比べた場合に、改善された薬剤上の性質を有することが見出されている。特に、この結晶の塩の溶解速度及びそのバイオアベイラビリティーは、以下の実施例に例示するように、遊離塩基及び他の塩に比べて特に高いことが見出されている。遊離塩基を凌ぐ、増強された化合物１の硫酸水素塩のバイオアベイラビリティーは、投与のために用いられる製剤とは独立していることが示されている。遊離塩基及び硫酸水素塩の形態のバイオアベイラビリティーは、本明細書では、同じ分散製剤で投薬した場合に比較したが、バイオアベイラビリティーにおける同様の違いが、簡単な錠剤製剤に対しても観察された。
【００２０】
本発明が、結晶の塩である化合物１の塩に関連することを述べる場合、結晶化度の度合は、好都合には約６０％を超え、より好都合には約８０％を超え、好ましくは約９０％を超え、より好ましくは約９５％を超える。最も好ましくは、結晶化度の度合は約９８％を超える。
【００２１】
硫酸水素塩によってもたらされるバイオアベイラビリティーの増強の度合は驚くほどであり、且つ特に有用である。これは、化合物１の遊離塩基は、ＢＣＳクラス４の化合物と分類されているからである。ＢＣＳクラス４の化合物は、溶解速度及び透過性の両方が低いため、通常低いバイオアベイラビリティーを有し、また、吸収時に透過性が制限されることは、このような塩は、吸収に実質的な影響を及ぼさないことが通常期待されることを意味している（例えば、Ｄｒｅｓｓｍａｎら、（２００１年）、Ｐｈａｒｍ Ｔｅｃｈ．、７月、６８巻を参照されたい）。
【００２２】
化合物１の硫酸水素塩の適切な溶媒和化合物は、広範囲の溶媒、特に、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、アセトニトリル（ＡＣＮ）、エタノール（ＥｔＯＨ）、及びメタノール（ＭｅＯＨ）などの有機溶媒から形成される。適切な有機溶媒には、Ｃ１〜６アルキルエステルなどのエステル、例えば酢酸エチル、及びＣ１〜６アルキルケトンなどのケトン、例えばメチルエチルケトン（２−ブタノン）が含まれる。
【００２３】
塩の調製は、有機溶媒及び水における化合物１のスラリーを、硫酸と反応させることにより行うことができる。１：１の塩を調製するためには、約１当量の硫酸を用いる。したがって、さらなる一態様では、本発明は、化合物１の硫酸水素塩を調製するための方法を提供し、前記方法は、
（ｉ）有機液体及び水における化合物１のスラリーを、約１当量の硫酸と反応させるステップと、
（ｉｉ）得られた溶液から塩を回収するステップと、
（ｉｉｉ）その後、要望又は必要があれば、その溶媒和化合物を形成するステップと
を含む。
【００２４】
化合物１に対する硫酸の量のモル比は、適切には１．００：１から２：１までの範囲であり、例えば、１．０５：１から１．１５：１までの範囲である。用いられる硫酸は、適切には濃硫酸の形態である。特定の一実施形態では、化合物１に対する硫酸のモル比は、１．１０：１．０である。
【００２５】
適切には、ステップ（ｉ）で加える水の量は、確実に塩を形成するのに必要な量に制限される。用いる正確な量は、溶媒の特定の性質、硫酸の濃度などに依存するが、典型的には、水は、存在する液体全体の２０％ｖ／ｖより少ない量で、例えば、１３〜１７％ｖ／ｖの量で存在する。
【００２６】
特定の一実施形態では、ステップ（ｉ）で用いる有機溶媒は２−ブタノン（メチルエチルケトン）であり、水は液体の体積の約１５％であり、化合物１に対して用いられる液体の合計量は、１グラムの化合物１あたり約８ｍＬである。
【００２７】
適切には、ステップ（ｉ）における硫酸の添加は制御されたやり方で、例えば１０℃未満の温度で行い、次いでステップ（ｉ）の残りを、温度を上昇させて、例えば３０〜３９℃から、さらなる例としては５５〜７５℃の間の範囲で、且つさらなる例として約６５℃で行う。
【００２８】
適切な有機の液体には、化合物１及びその塩がやや溶けにくい有機溶媒が含まれる。本明細書で用いられる「やや溶けにくい」の表現は、溶質１グラムあたりの溶媒が１００ｍＬ未満である、例えば、溶質１グラムあたりの溶媒が３０ｍＬと１００ｍＬとの間である溶解度を有することを意味する。これらの溶媒には、アルキルケトン、例えば２−ブタノンなどのＣ１〜６アルキルケトン；Ｃ１〜６アルコールなどのアルコール、例えばメタノール又はエタノール；及びＣ１〜６アルキルエステルなどのエステル、例えば酢酸エチルが含まれる。一実施形態では、有機溶媒はメチルエチルケトン（２−ブタノン）である。
【００２９】
適切には、反応混合液を、ステップ（ｉ）と（ｉｉ）との間にろ過して、あらゆる外来性の材料を除去する。残渣を、例えば有機液体と水との混合液で場合により洗浄し、望ましい塩をろ液から結晶化し、ろ液は洗浄溶液と場合により合わせてもよい。
【００３０】
ある実施形態では、反応混合液を冷却することによって、場合により、硫酸水素塩が沈澱するようにさらなる有機液体を添加して、ステップ（ｉｉ）で硫酸水素塩を回収する。さらなる有機液体は、ステップ（ｉ）で用いたのと同じ有機液体であってもよく、又は、それが化合物１の硫酸水素塩に対する逆溶剤として働くのであれば、異なる有機液体であってもよい。化合物１の硫酸水素塩の結晶で溶液にシード添加することは、沈澱のプロセスにおいて助けとなり得る。
【００３１】
一実施形態では、冷却の前に、ろ液を最初に蒸留のステップにかけて水を除去し、確実に許容できる収量の塩を回収する。特定の一実施形態では、溶媒は２−ブタノンであり、ろ液を大気圧で蒸留する。
【００３２】
冷却時に、例えばろ過によって、得られたスラリーから塩を回収することができる。次いで、回収した材料を、温度を上げて、例えば４０〜６０℃で、また別の一例として約５０℃で、一定の重量を達成するまで乾燥させてもよい。生成物が、メタノールなどの有機液体との溶媒和化合物である場合は、所望によりこの時点で加熱により脱溶媒和してもよい。
【００３３】
硫酸水素塩の物理的性質は研究されたものであり、実施例でさらに記載する。
【００３４】
本発明には、同位体で標識した化合物も含まれ、これらは、通常天然に見出される原子質量又は質量数とは異なる原子質量又は質量数を有する原子によって、１個又は複数個の原子が置換されているという事実以外は、本発明で列挙するものと同一である。本発明の化合物中に組み入れることができる同位体の例には、水素、炭素、窒素、酸素、リン、イオウ、フッ素、及び塩素の同位体、例えば、それぞれ、２Ｈ、３Ｈ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１８Ｏ、１７Ｏ、３１Ｐ、３２Ｐ、３５Ｓ、１８Ｆ、及び３５Ｃｌが含まれる。前述の同位体及び／又は他の原子の他の同位体を含む化合物１の硫酸水素塩及びその多形は、本発明の範囲内である。本発明のある種の同位体標識した化合物、例えば、その中に３Ｈ及び１４Ｃなどの放射性同位元素が組み込まれた化合物は、薬物及び／又は基質の組織分布アッセイに有用である。トリチウム標識、即ち３Ｈ、及び炭素−１４、即ち１４Ｃの同位体は、その調製及び検出性の容易さの結果として、特に広く用いられている。さらに、より重い同位体、例えば重水素、即ち２Ｈでの置換により、より代謝の安定性が大きいことに起因するある種の治療上の有利点、例えば、ｉｎ ｖｉｖｏの半減期の増大、又は投与量の所要量の低減をもたらすことができ、したがって、いくつかの特定の状況で利用することができる。同位体で標識した本発明の塩は、一般的に、調製の間に容易に入手できる同位体標識した試薬を、非同位体標識した試薬の代わりに用いることによって、又は所望により塩の調製において同位体標識した硫酸を用いて、ＷＯ０３／０７７９１４に開示されている手順を実施することによって調製することができる。
【００３５】
組成物は、経口投与に適する形態（例えば、錠剤、トローチ剤、ハードカプセル若しくはソフトカプセル剤、乳剤、分散可能な粉末若しくは顆粒剤、シロップ剤、エリキシル剤、又は油性若しくは即時調製の水性懸濁液剤として）、吸入による投与に適する形態（例えば、微細粉末剤、又は液体のエアロゾル剤として）、インサフレーションによる投与に適する形態（例えば、微細粉末剤として）、非経口投与の注射に適する形態（例えば、静脈内、皮下、筋肉内、血管内、又は注入の投与のための、滅菌の液剤、懸濁液剤、又は乳剤として）、局所投与に適する形態（例えば、クリーム剤、軟膏剤、ゲル剤、油性の溶液剤若しくは懸濁液剤、又は即時調製の水性懸濁液剤として）、或いは直腸投与に適する形態（例えば、坐剤として）であってよい。一実施形態では、化合物１の硫酸水素塩を経口投与する。一般的には、上記の組成物を、従来の賦形剤を用いて、従来のやり方で調製してもよい。
【００３６】
投与する有効化合物の量は、治療する対象、障害又は状態の重症度、投与速度、化合物の体内動態、及び処方する医師の判断に依存する。しかし、有効な投与量は、１回又は分割した投与量で、１日あたり体重１ｋｇあたり約０．０１ｍｇから約１００ｍｇの範囲であり、好ましくは約１から約３５ｍｇ／ｋｇ／日である。７０ｋｇのヒトに対しては、これは約０．７から７０００ｍｇ／日、好ましくは約７０から約２５００ｍｇ／日の量になる。いくつかの場合では、前述の範囲の下限を下回る投与量レベルが非常に適切であることがあるが、他の場合では、１日を通して投与するためにいくつかの小投与量に最初に分割するのであれば、いかなる有害な副作用を引き起こすことなしに、より多い投与量を使用することができる。錠剤又はカプセル剤などの単位投与量形態は、通常、例えば有効成分１〜１０００ｍｇ、好ましくは有効成分５〜４２０ｍｇを含む。好ましくは、０．０３〜６ｍｇ／ｋｇの範囲の１日投与量を用いる。
【００３７】
本発明のさらなる一態様によると、療法によってヒト又は動物の身体を治療又は予防する方法で用いるための、本明細書で規定する化合物１の硫酸水素塩を提供する。本発明のさらなる特徴は、薬物として使用するための、本明細書で規定する化合物１の硫酸水素塩である。さらなる一態様では、本発明は、ＭＥＫによって媒介される疾患状態、特に、ヒトなどの温血の哺乳動物における、癌などの増殖性障害又は異常な細胞成長を治療するための薬物として使用するための、本明細書で規定する化合物の硫酸水素塩を提供する。したがって、本発明のさらなる一態様は、ＭＥＫによって媒介される疾患状態、特に、ヒトなどの温血の哺乳動物における、癌などの増殖性障害又は異常な細胞成長の治療で使用するための薬物の製造における、本明細書で規定する化合物１の硫酸水素塩の使用を提供する。
【００３８】
本発明のさらなる特徴によると、ＭＥＫによって媒介される疾患状態、特に、ヒトなど、そのような治療を必要とする温血の哺乳動物における、癌などの増殖性障害又は異常な細胞成長を治療するための方法を提供し、前記哺乳動物に、有効量の、本明細書の化合物１硫酸水素塩の硫酸水素塩、又は本明細書で規定する薬剤組成物を投与することを含む。
【００３９】
本発明の塩又は組成物を用いて治療することができる増殖性障害の特定の例には、哺乳動物における過剰増殖性障害が含まれる。特定の癌は、脳、肺、扁平上皮細胞、膀胱、胃、すい臓、乳房、頭部、頚部、腎臓（ｒｅｎａｌ）、腎臓（ｋｉｄｎｅｙ）、卵巣、前立腺、結腸直腸、食道、精巣、婦人科、又は甲状腺の癌である。
【００４０】
しかし、本発明の化合物及び組成物を、良性の皮膚の過形成（例えば乾癬）、再狭窄、又は前立腺（例えば、良性の前立腺肥大（ＢＰＨ））などの、非癌性の過剰増殖性の障害の治療にも用いてもよい。
【００４１】
本発明の化合物又は組成物を用いて治療することができるＭＥＫ媒介性疾患の他の例には、すい臓若しくは腎臓の疾患（増殖性の糸球体腎炎、及び糖尿病誘発性の腎疾患を含む）、又は哺乳動物における疼痛の治療が含まれる。
【００４２】
化合物及び組成物を、哺乳動物における胚細胞の埋め込みの防止に、又は哺乳動物における脈管形成若しくは血管形成に関連する疾患の治療に用いてもよい。このような疾患には、腫瘍の血管形成、関節リウマチなどの慢性の炎症性疾患、アテローム性動脈硬化症、炎症性腸疾患、乾癬、湿疹及び強皮症などの皮膚疾患、糖尿病、糖尿病性網膜症、未熟児網膜症、加齢黄斑変性症、血管腫、神経膠腫、メラノーマ、カポジ肉腫、並びに卵巣、乳房、肺、すい臓、前立腺、結腸、及び類表皮の癌が含まれ得る。
【００４３】
「異常な細胞成長」及び「過剰増殖性障害」の語は、本出願では交換可能に用いられ、正常の調節メカニズムとは無関係の細胞成長を意味する（例えば、接触阻害の喪失）。これには、例えば、（１）突然変異したチロシンキナーゼの発現、又は受容体チロシンキナーゼの過剰発現によって増殖する腫瘍細胞（腫瘍）、（２）異常なチロシンキナーゼの活性化が生じる、他の増殖性疾患の良性及び悪性の細胞、（３）受容体チロシンキナーゼによって増殖するあらゆる腫瘍、（４）異常なセリン／スレオニンキナーゼの活性化によって増殖するあらゆる腫瘍、並びに（５）異常なセリン／スレオニンキナーゼの活性化が生じる他の増殖性疾患の良性及び悪性の細胞が含まれる。
【００４４】
本明細書で用いられる「治療する」の語は、別段の指摘がなければ、そのような語を適用する障害若しくは状態を、又はこのような障害若しくは状態の１つ若しくは複数の症状を、逆行させ、軽減し、進行を阻害し、又は防止することを意味する。本明細書で用いる「治療」の語は、別段の指摘がなければ、すぐ上で「治療する」を定義した治療の行為を意味する。
【００４５】
したがって、本発明の化合物又は組成物で治療することができる患者には、例えば、乾癬、再狭窄、アテローム性動脈硬化症、ＢＰＨ、肺癌、非小細胞肺癌、骨癌、ＣＭＭＬ、すい臓癌、結腸直腸癌、皮膚癌、頭頚部癌、メラノーマ（特に、皮膚又は眼内のメラノーマ）、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門領域の癌、胃癌、結腸癌、乳癌、精巣腫瘍、婦人科の腫瘍（例えば、子宮肉腫、ファロピウス管の癌腫、子宮内膜の癌腫、子宮頚部の癌腫、膣の癌腫、又は外陰部の癌腫）、卵巣癌、多発性骨髄腫、肝細胞腫、ホジキン病、食道癌、小腸癌、内分泌系の癌（例えば、甲状腺、副甲状腺若しくは副腎の癌）、軟組織の肉腫、尿道癌、陰茎癌、前立腺癌、慢性若しくは急性の白血病、特に急性骨髄性白血病、小児の固形腫瘍、リンパ球性リンパ腫、膀胱癌、腎臓若しくは尿管の癌（例えば、腎細胞癌、腎盂の癌腫）、又は中枢神経系の新生物（例えば、原発性ＣＮＳリンパ腫、脊髄軸腫瘍、脳幹のグリオーマ、又は下垂体腺腫）を有すると診断された患者が含まれる。
【００４６】
化合物１の硫酸水素塩を、唯一の治療として適用してもよく、又は、化合物１の硫酸水素塩の他に、１つ又は複数の他の物質及び／若しくは治療を伴ってもよい。このような併用治療は、本発明の個々の化合物の、同時の、逐次の、又は別々の投与によって実現することができる。内科腫瘍学の分野では、各癌患者を治療するために様々な形態の治療の組合せを用いるのは、通常のやり方である。内科腫瘍学では、化合物１の硫酸水素塩の他の、このような結合した治療の他の構成成分は、外科手術でも、放射線治療でも、又は化学療法でもよい。このような化学療法は、以下のような治療物質のカテゴリーを網羅していてよい。
（ｉ）抗血管新生薬、例えば血管内皮増殖因子の作用を阻害するもの（例えば、抗血管内皮細胞増殖因子の抗体であるベバシズマブ［Ａｖａｓｔｉｎ（商標）］、及びＶＥＧＦ受容体チロシンキナーゼ阻害薬、例えば、４−（４−ブロモ−２−フルオロアニリノ）−６−メトキシ−７−（１−メチルピペリジン−４−イルメトキシ）キナゾリン（ＺＤ６４７４、ＷＯ０１／３２６５１中の実施例２）、４−（４−フルオロ−２−メチルインドル−５−イルオキシ）−６−メトキシ−７−（３−ピロリジン−１−イルプロポキシ）キナゾリン（ＡＺＤ２１７１、ＷＯ００／４７２１２中の実施例２４０）、バタラニブ（ＰＴＫ７８７、ＷＯ９８／３５９８５）、及びＳＵ１１２４８（スニチニブ、ＷＯ０１／６０８１４）；化合物、例えば、国際特許出願ＷＯ９７／２２５９６、ＷＯ９７／３００３５、ＷＯ９７／３２８５６、及びＷＯ９８／１３３５４に開示されているものなど、並びに本明細書で規定するものと異なるメカニズムによって作用するもの（例えば、リノミド、インテグリンαｖβ３機能の阻害薬、アンジオスタチン、ラゾキシン、サリドマイド、ＭＭＰ−２（マトリックスメタロプロテイナーゼ２）阻害薬、ＭＭＰ−９（マトリックスメタロプロテイナーゼ９）阻害薬、及びＣＯＸ−ＩＩ（シクロオキシゲナーゼＩＩ）阻害薬）、及び
（ｉｉ）血管標的薬（例えば、リン酸コンブレタスタチン、及びＷＯ００／４０５２９、ＷＯ００／４１６６９、ＷＯ０１／９２２２４、ＷＯ０２／０４４３４、及びＷＯ０２／０８２１３に開示されている化合物、及び国際特許出願公開番号ＷＯ９９／０２１６６に記載されている血管損傷薬（例えば、Ｎ−アセチルコルヒノール（ａｃｅｔｙｌｃｏｌｃｈｉｎｏｌ）−Ｏ−リン酸））、
（ｉｉｉ）細胞分裂阻害薬、例えば、抗エストロゲン薬（例えば、タモキシフェン、トレミフェン、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、及びヨードキシフェン）、エストロゲン受容体下方制御薬（例えば、フルベストラント）、プロゲストーゲン（例えば、酢酸メゲストロール）、アロマターゼ阻害薬（例えば、アナストロゾール、レトラゾール、ボラゾール、及びエキセメスタン）、抗プロゲストーゲン、抗アンドロゲン（例えば、フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、及び酢酸シプロテロン）、ＬＨＲＨ作用薬並びに拮抗薬（例えば、酢酸ゴセレリン、リュープロレリン、及びブセレリン）、５αレダクターゼの阻害薬（例えば、フィナステリド）、
（ｉｖ）抗侵入薬（例えば、マリマスタットなどのメタロプロテイナーゼ阻害薬、及びウロキナーゼプラスミノーゲン活性化因子受容体機能の阻害薬、又はヘパラナーゼに対する抗体の阻害薬）、
（ｖ）増殖因子機能の阻害薬（このような増殖因子には、例えば、血小板由来増殖因子、及び肝細胞増殖因子が含まれる）、このような阻害薬には、増殖因子の抗体、増殖因子の受容体の抗体（例えば、抗ｅｒｂｂ２抗体であるトラスツズマブ［Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（商標）］、抗ＥＧＦＲ抗体であるパニツムマブ、抗ｅｒｂＢ１抗体であるセツキシマブ［Ｃ２２５］、及びＳｔｅｒｎら、Ｃｒｉｔｉｃａｌ ｒｅｖｉｅｗｓ ｉｎ ｏｎｃｏｌｏｇｙ／ｈａｅｍａｔｏｌｏｇｙ、２００５年、５４巻、１１〜２９頁によって公開されているあらゆる増殖因子又は増殖因子の受容体の抗体）が含まれ；このような阻害薬には、上皮成長因子ファミリーの阻害薬（例えば、Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−メトキシ−６−（３−モルホリノプロポキシ）−キナゾリン−４−アミン（ゲフィチニブ、ＡＺＤ１８３９）、Ｎ−（３−エチニルフェニル）−６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）キナゾリン−４−アミン（エルロチニブ、ＯＳＩ−７７４）、及び６−アクリルアミド−Ｎ−（３−クロロ−４−フルオロフェニル）−７−（３−モルホリノプロポキシ）キナゾリン−４−アミン（ＣＩ１０３３）などのＥＧＦＲファミリーチロシンキナーゼ阻害薬）、並びにラパチニブなどのｅｒｂＢ２チロシンキナーゼ阻害薬、肝細胞増殖因子ファミリーの阻害薬、イマチニブなどの血小板由来増殖因子ファミリーの阻害薬、セリン／スレオニンキナーゼの阻害薬（例えば、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害薬などのＲａｓ／Ｒａｆシグナル伝達阻害薬、例えば、ソラフェニブ（ＢＡＹ４３−９００６））、ＭＥＫ及び／又はＡＫＴキナーゼによる細胞シグナル伝達の阻害薬、ｃ−ｋｉｔ阻害薬、ａｂｌキナーゼ阻害薬、ＩＧＦ受容体（インスリン様増殖因子）キナーゼ阻害薬、オーロラキナーゼ阻害薬（例えば、ＡＺＤ１１５２、ＰＨ７３９３５８、ＶＸ−６８０、ＭＬＮ８０５４、Ｒ７６３、ＭＰ２３５、ＭＰ５２９、ＶＸ−５２８、及びＡＸ３９４５９）、並びに、ＣＤＫ２及び／又はＣＤＫ４阻害薬などのサイクリン依存性キナーゼ阻害因子などのチロシンキナーゼ阻害薬も含まれ、
（ｖｉ）内科腫瘍学で用いられる、抗増殖性／抗悪性腫瘍薬、及びそれらの組合せ、例えば、代謝拮抗薬（例えば、メトトレキセートなどの葉酸代謝拮抗薬、５−フルオロウラシルなどのフルオロピリミジン、テガフール、プリン及びアデノシン類似物質、並びにシトシンアラビノシド、ヒドロキシウレア、又は、例えば、特に、欧州特許出願第２３９３６２号に特に開示されている代謝拮抗物質の１つ、例えば、Ｎ−（５−［Ｎ−（３，４−ジヒドロ−２−メチル−４−オキソキナゾリン−６−イルメチル）−Ｎ−メチルアミノ−２−テノイル）−Ｌ−グルタミン酸；抗腫瘍の抗生物質（例えば、アドリアマイシンなどのアントラサイクリン、ブレオマイシン、ドキソルビシン、ダウノマイシン、エピルビシン、及びイダルビシン、マイトマイシン−Ｃ、ダクチノマイシン、及びミトラマイシン）、白金誘導体（例えば、シスプラチン、及びカルボプラチン）、アルキル化剤（例えば、ナイトロジェンマスタード、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン、シクロホスファミド、イフォスファミド、ニトロソウレア、及びチオテパ）、有糸分裂阻害薬（例えば、ビンカアルカロイド、例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、及びビノレルビン、並びにタキソイド、例えば、タキソール及びタキソテール）、トポイソメラーゼ阻害薬（例えば、エトポシド及びテニポシドなどのエピポドフィロトキシン、アムサクリン、トポテカン、カンプトテシン、並びにイリノテカン）、酵素（例えば、アスパラギナーゼ）、並びにチミジル酸合成酵素阻害薬（例えば、ラルチレキセド（ｒａｌｔｉｔｒｅｘｅｄ））；
並びに、
（ｖｉｉ）生物学的応答調節物質（例えば、インターフェロン）、
（ｖｉｉｉ）抗体（例えば、エドレコロマブ）、
（ｉｘ）アンチセンス療法、例えば、上記に列挙した標的に向けられているもの、例えば、ＩＳＩＳ２５０３、抗ｒａｓアンチセンス、
（ｘ）遺伝子治療の取組み（例えば、異常なｐ５３、又は異常なＢＲＣＡ１若しくはＢＲＣＡ２などの異常な遺伝子を置き換えるための取組み、シトシンデアミナーゼ、チミジンキナーゼ、又は細菌のニトロ還元酵素を用いたものなどのＧＤＥＰＴ（遺伝子指向性酵素プロドラッグ療法）の取組み、多剤耐性遺伝子療法など、化学療法又は放射線療法に対する患者の耐性を増大するための取組みを含む）、及び
（ｘｉ）免疫療法の取組み（例えば、患者の腫瘍細胞の免疫原性を増大するためのｅｘ ｖｉｖｏ及びｉｎ ｖｉｖｏの取組み、例えば、インターロイキン２、インターロイキン４、又は顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子などのサイトカインでのトランスフェクションを含む；Ｔ細胞のアネルギーを低減するための取組み；サイトカインでトランスフェクトした樹状細胞などのトランスフェクトした免疫細胞を用いる取組み；サイトカインでトランスフェクトした腫瘍細胞系を用いた取組み；並びに抗イディオタイプの抗体を用いた取組み）が含まれる。
【００４７】
例えば、化合物１の硫酸水素塩を、有効量の血管新生阻害薬、シグナル伝達阻害薬、及び抗増殖剤から選択される、１つ又は複数の物質と組み合わせて用いてもよい。
【００４８】
特定の一実施形態では、ＭＭＰ−２（マトリックスメタロプロテイナーゼ２）阻害薬、ＭＭＰ−９（マトリックスメタロプロテイナーゼ９）阻害薬、及びＣＯＸ−ＩＩ（シクロオキシゲナーゼ）阻害薬などの血管新生阻害薬を、本発明の化合物１の硫酸水素塩、及び本明細書に記載する薬剤組成物と組み合わせて用いることができる。有用なＣＯＸ−ＩＩ阻害薬の例には、ＣＥＬＥＢＲＥＸ（商標）（アレコキシブ）、バルデコキシブ、及びロフェコキシブが含まれる。有用なマトリックスメタロプロテイナーゼ阻害薬の例は、ＷＯ９６／３３１７２、ＷＯ９６／２７５８３、ＷＯ９８／０７６９７、ＷＯ９８／０３５１６、ＷＯ９８／３４９１８、ＷＯ９８／３４９１５、ＷＯ９８／３３７６８、ＷＯ９８／３０５６６、ＷＯ９０／０５７１９、ＷＯ９９／５２９１０、ＷＯ９９／５２８８９、ＷＯ９９／２９６６７、米国特許第５８６３９４９号、及び米国特許第５８６１５１０号に記載されており、これらはすべてその全文が参照により本明細書に組み入れられる。適切なＭＭＰ−２及びＭＭＰ−９の阻害薬は、ＭＭＰ−１を阻害する活性が殆ど、又はまったくないものである。特に、他のマトリックスメタロプロテイナーゼ（即ち、ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−４、ＭＭＰ−５、ＭＭＰ−６、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２、及びＭＭＰ−１３）に比べて選択的にＭＭＰ−２及び／又はＭＭＰ−９を阻害するものが用いられる。本発明で有用なＭＭＰ阻害薬の特定の例は、ＡＧ−３３４０、ＲＯ３２−３５５５、及びＲＳ１３−０８３０である。
【００４９】
したがって、本発明のさらなる一態様は、化合物１の硫酸水素塩を、本明細書上述の（ｉ）〜（ｘｉ）の下に列挙した任意の１つの抗腫瘍薬と組み合わせて提供する。本発明のさらなる一態様は、化合物１の硫酸水素塩を、本明細書上述の（ｉ）〜（ｘｉ）の下に列挙した１つ又は複数の抗腫瘍薬と組み合わせて提供する。本発明のさらなる一態様は、化合物１の硫酸水素塩を、本明細書上述の（ｉ）〜（ｘｉ）の下に列挙した抗腫瘍薬のクラスの任意の１つと組み合わせて提供する。
【００５０】
本明細書では、「組合せ」の語を用いる場合、これは同時の、別々の、又は逐次の投与を意味するものと理解されたい。本発明の一態様では、「組合せ」は同時の投与を意味する。本発明の別の一態様では、「組合せ」は別々の投与を意味する。本発明のさらなる一態様では、「組合せ」は逐次の投与を意味する。投与が逐次又は別々である場合、第２の組成物を投与する上での遅延は、組合せの有益な効果を失わないようでなければならない。
【００５１】
本発明のさらなる一態様によると、本明細書上述の（ｉ）〜（ｘｉ）の下に列挙したものから選択された抗腫瘍薬と組み合わせた、化合物１の硫酸水素塩を含むキットが提供される。
【００５２】
本発明のさらなる一態様によると、
ａ）第１の単位投与量形態における化合物１の硫酸水素塩、
ｂ）第２の単位投与量形態における、本明細書で上記（ｉ）〜（ｘｉ）の下に列挙した１つから選択される抗腫瘍薬、及び
ｃ）前記第１及び第２の投与量形態を含むための容器手段
を含むキットが提供される。
【００５３】
化合物１は、以下のアッセイにおいて活性を有することが見出されている。Ｎ末端を６−Ｈｉｓタグ修飾した、恒常的に活性なＭＥＫ１（２−２９３）を大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）で発現させ、タンパク質を従来の方法によって精製する（Ａｈｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９９４年、２６５巻、９６６〜９７０頁）。ＭＥＫ１の活性を、γ−３３Ｐ−ＡＴＰからのγ−３３Ｐ−リン酸の、大腸菌で発現されＭＥＫ１の存在下で従来の方法により精製される、Ｎ末端をＨｉｓタグ付けしたＥＲＫ２上への取り込みを測定することによって評価する。アッセイは、９６ウェルのポリプロピレンプレートで行う。インキュベーション混合液（１００μＬ）は、２５ｍＭのＨｅｐｅｓ、ｐＨ７．４、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、５ｍＭのβ−グリセロリン酸、１００μＭのオルトバナジン酸ナトリウム、５ｍＭのＤＴＴ、５ｎＭのＭＥＫ１、及び１μＭのＥＲＫ２を含む。阻害薬をＤＭＳＯに懸濁し、コントロールを含めて反応すべてを、最終濃度１％のＤＭＳＯで行う。１０μＭのＡＴＰ（０．５μＣｉγ−３３Ｐ−ＡＴＰ／ウェルで）の添加により反応を開始し、周囲の温度で４５分間インキュベートする。等体積の２５％のＴＣＡを加えて反応を停止し、タンパク質を沈澱させる。沈澱したタンパク質を、ガラス繊維Ｂフィルタープレート上に捕捉し、過剰の標識したＡＴＰをＴｏｍｔｅｃ ＭＡＣＨ ＩＩＩハーベスターを用いて洗い流す。プレートを空気乾燥させた後、３０μＬ／ウェルのＰａｃｋａｒｄ Ｍｉｃｒｏｓｃｉｎｔ２０を加え、Ｐａｃｋａｒｄ ＴｏｐＣｏｕｎｔを用いてプレートを計数する。このアッセイでは、化合物１は５０マイクロモル未満のＩＣ５０を示した。
【実施例】
【００５４】
本発明を説明するために、以下の実施例を含める。しかし、これらの実施例は本発明を制限するものではなく、本発明を実践する方法を示唆しようとするにすぎないことを理解されたい。収率は実践した実施例に対して与えられ、さらなる発展により向上する可能性があり得る。１Ｈ ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ）はＴＭＳ（０．００ｐｐｍ）を基準にしており、１３Ｃ ＮＭＲスペクトル（１００ＭＨｚ）はＮＭＲ溶媒（３９．５ｐｐｍ）を基準にしており、１９Ｆ ＮＭＲスペクトルはトリクロロフルオロメタン（０．００ｐｐｍ）を基準にしている。ＦＴＩＲスペクトルは、粉末ＫＢｒ中２％ｗ／ｗからのこの材料の分散を含む様々な方法で、ＤＲＩＦＴＳサンプリング技術を用いて、４０００〜４００ｃｍ−１の中赤外のスペクトルの領域にわたって、Ｎｉｃｏｌｅｔ Ｍａｇｎａ８６０ＥＳＰ ＦＴＩＲ分光計で得た。
【００５５】
（実施例１）
化合物１の硫酸水素塩の調製
【化２】
０〜５℃の２−ブタノン（６８０ｍＬ）及び水（１１５ｍＬ）中の６−（４−ブロモ−２−クロロ−フェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エトキシ）−アミド（１００ｇ、０．２０６ｍｏｌ）（本明細書に参照により組み入れられ、以下に記載するＷＯ０３／０７７９１４の実施例に記載されている通りに入手可能）の懸濁液を攪拌したものに、１０℃以下の温度を維持しながら、硫酸（１２．３ｍＬ、０．２２６ｍｏｌ）を加え、次いで水（５ｍＬ）を加えた。攪拌した混合液を６５℃に加熱し、３０分間保持し、次いでろ過してあらゆる外来の材料を除去した。ろ紙を、２−ブタノン（８５ｍＬ）及び水（１５ｍＬ）の混合液で洗浄した。ろ液を合わせ、７２℃に加熱し、その後、温度を６０〜７２℃の間に維持しながら２−ブタノン（５００ｍＬ）を加えた。得られた混合液を、蒸留液５００ｍＬを回収するまで大気圧で蒸留した（蒸留温度は約７３〜７４℃）。
【００５６】
７０℃を上回る混合液の温度を維持しながら、２−ブタノンの第２のアリコート（５００ｍＬ）を加えた。得られた混合液を、蒸留液２５０ｍＬを回収するまで再び蒸留した。約１時間かけて、混合液を０〜５℃に冷却した。得られたスラリーをろ過し、２−ブタノン（２４０ｍＬ）で洗浄し、一定の重量を達成するまで５０℃の減圧下で乾燥させて、オフホワイトの結晶固体の、６−（４−ブロモ−２−クロロ−フェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エトキシ）−アミド硫酸水素塩（１０３．５ｇ、０．１８６ｍｏｌ、収率９０％）を得た。
【化３】
【００５７】
赤外線分析の結果を、図２に示す。スペクトルの割当てを表１に要約する。
【００５８】
【表１】
【００５９】
（実施例１Ａ）
化合物１の硫酸水素塩の調製
６−（４−ブロモ−２−クロロフェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシエトキシ）−アミド（１０ｇ、０．０２１４ｍｏｌ）（本明細書に参照により組み入れられ、以下に記載するＷＯ０３／０７７９１４の実施例１０に記載されている通りに入手可能）の、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）（６２ｍｌ）及び水（８ｍｌ）の懸濁液を攪拌したものに、温度を１０℃又はそれより低く維持しながら、硫酸（１．５２ｍｌ、２７．８６ｍｍｏｌ）を加えた。攪拌した混合液を６５℃に加熱し、３０分間保持した後、ろ過してあらゆる外来性の材料を除去した。次いで、６０℃を上回る温度を維持して、ＴＨＦ（１５０ｍｌ）を混合液に加えた。次いで、混合液を、約２時間かけて０〜５℃に冷却した。得られたスラリーをろ過し、ＴＨＦ（３０ｍｌ）で洗浄し、一定の重量を達成するまで５０℃の減圧下で乾燥させて、オフホワイトの結晶固体の６−（４−ブロモ−２−クロロ−フェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシエトキシ）−アミド硫酸水素塩（９．８１ｇ、０．１７ｍｏｌ、収率８２％）を得た。物質は、上記実施例１で生成したものと同じであった。
【００６０】
（実施例１Ｂ）
６−（４−ブロモ−２−クロロ−フェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エトキシ）−アミドの調製
ステップＡ：２，３，４−トリフルオロ−５−ニトロ安息香酸
３リットルの三頚丸底フラスコに、Ｈ２ＳＯ４１２５ｍｌを充填した。発煙硝酸を加え（８．４ｍｌ、１９９ｍｍｏｌ）、混合液を穏やかに攪拌した。２，３，４−トリフルオロ安息香酸（２５ｇ、１４２ｍｍｏｌ）を、９０分かけて５ｇ部分で加えた。暗褐色がかった黄色の溶液を６０分間攪拌し、その時間に反応は完了した。反応混合液を、氷：水混合液１リットル中に注ぎ、ジエチルエーテルで抽出した（３×６００ｍｌ）。抽出液を合わせて乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、減圧下で濃縮して黄色の固体を得た。固体をヘキサンに懸濁し、３０分間攪拌し、その後それをろ過して、オフイエロー（ｏｆｆ−ｙｅｌｌｏｗ）固体の、混じりけのない所望の生成物２９ｇ（９２％）を得た：ＭＳ ＡＰＣＩ（−）ｍ／ｚ２２０（Ｍ−１）を検出した。
【００６１】
ステップＢ：４−アミノ−２，３−ジフルオロ−５−ニトロ−安息香酸
水酸化アンモニウム溶液（水中約３０％）（３５ｍｌ、２７１ｍｍｏｌ）を、０℃の２，３，４−トリフルオロ−５−ニトロ−安息香酸（１５ｇ、６７．８ｍｍｏｌ）水溶液３０ｍｌに、攪拌しながら加えた。水酸化アンモニウムの添加が完了したら、反応混合液を、攪拌しながら室温に温めた。２．５時間後、反応混合液を０℃に冷却し、反応混合液のｐＨが０になるまで濃ＨＣｌを注意深く加えた。反応混合液を水（３０ｍｌ）で希釈し、ジエチルエーテルで抽出した（３×５０ｍｌ）。有機抽出物を合わせて乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下で濃縮して純粋な所望の生成物１４ｇ（９５％）を得た：ＭＳ ＡＰＣＩ（−）ｍ／ｚ２１７（Ｍ−１）を検出した。
【００６２】
ステップＣ：４−アミノ−２，３−ジフルオロ−５−ニトロ安息香酸メチルエステル
テトラメチルシラン（ＴＭＳ）ジアゾメタンの２Ｍヘキサン溶液（６．８８ｍｌ、１３．７５ｍｍｏｌ）を、０℃の４−アミノ−２，３−ジフルオロ−５−ニトロ安息香酸（２．００ｇ、９．１７ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（ＴＨＦ）：ＭｅＯＨ ４：１懸濁液２５ｍｌに、窒素雰囲気下で加えた。添加が完了したら、反応混合液を室温に温めた。０．５時間後、酢酸を注意深く加えることによって、過剰なＴＭＳジアゾメタンを破壊した。次いで、反応物を減圧下で濃縮し、真空中で乾燥させ、純粋な所望の生成物１．９５ｇ（９２％）を得た：ＭＳ ＡＰＣＩ（−）ｍ／ｚ２３１（Ｍ−１）を検出した。
【００６３】
ステップＤ：４−アミノ−３−フルオロ−５−ニトロ−２−フェニルアミノ−安息香酸メチルエステル
４−アミノ−２，３−ジフルオロ−５−ニトロ安息香酸メチルエステル（２３．４８ｇ、１０１．１ｍｍｏｌ）をキシレン（１２５ｍｌ）に懸濁し、アニリン（９２ｍｌ、１０１１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合液をＮ２下、１２５℃で１６時間攪拌した。反応混合液を室温に冷却し、溶液から固体を沈澱させた。ろ過によって固体を回収し、キシレン、次いでジエチルエーテルで洗浄した。黄色固体の純粋な所望の生成物２２．２２ｇ（７２．７８ｍｍｏｌ）を回収した。ろ液を減圧下で濃縮し、塩化メチレンに再溶解し、シリカゲルのプラグを通して塩化メチレンで溶出することにより流した。所望の分画を減圧下で濃縮して褐色固体を得、これをジエチルエーテルとともに粉砕して、黄色固体の純粋な所望の生成物５．４７ｇ（１７．９１ｍｍｏｌ）を得た。生成物を合わせた収量は２７．６９ｇ（９０％）であった。ＭＳ ＡＰＣＩ（−）ｍ／ｚ３０４（Ｍ−１）を検出した。
【００６４】
ステップＥ：７−フルオロ−６−フェニルアミノ−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸メチルエステル
４−アミノ−３−フルオロ−５−ニトロ−２−フェニルアミノ−安息香酸メチルエステル（１６．７０ｇ、５４．７１ｍｍｏｌ）、ギ酸（２５０ｍｌ、６．６３ｍｏｌ）、及び２０％Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃ（９．００ｇ、１６．９１ｍｍｏｌ）のエタノール溶液（２５０ｍＬ）を、Ｎ２下、４０℃で２時間攪拌し、次いで、９５℃で１６時間攪拌した。反応混合液を室温に冷却し、酢酸エチルですすぎながら、セライトを通してろ過した。ろ液を減圧下で濃縮して、黄色固体を得た。固体をジエチルエーテルとともに粉砕して黄褐色固体の所望の生成物１３．４７ｇ（８６％）を得た。ＭＳ ＡＰＣＩ（＋）ｍ／ｚ２８６（Ｍ＋１）を検出した。ＭＳ ＡＰＣＩ（−）Ｍ／Ｚ２８４（Ｍ−１）を検出した。
【００６５】
ステップＦ：６−（４−ブロモ−フェニルアミノ）−７−フルオロ−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸メチルエステル
７−フルオロ−６−フェニルアミノ−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸メチルエステル（４．９９ｇ、１７．５１ｍｍｏｌ）を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２７５ｍｌ）に溶解した。Ｎ−ブロモスクシンイミド（３．１５ｇ、１７．７０ｍｍｏｌ）を固体として加え、反応混合液を、Ｎ２下、室温で攪拌した。３０分後、反応混合液を、飽和亜硫酸水素ナトリウム水溶液を加えることによりクエンチした。次いで、反応混合液を分液漏斗中に注ぎ、水及び酢酸エチルで希釈し、層を分離した。水層を酢酸エチルで抽出した。有機抽出物を合わせて、水で３回、塩水で１回洗浄し、次いで乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、減圧下で濃縮して、収量６．３８ｇ（１００％）の黄褐色固体の純粋な所望の生成物を得た。ＭＳ ＥＳＩ（＋）ｍ／ｚ３６４、３６６（Ｍ＋Ｂｒパターン）を検出した。
【００６６】
ステップＧ：６−（４−ブロモ−２−クロロ−フェニルアミノ）−７−フルオロ−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸メチルエステル
６−（４−ブロモ−フェニルアミノ）−７−フルオロ−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸メチルエステル（６．３８ｇ、１７．５１ｍｍｏｌ）を、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２７５ｍＬ）に溶解した。Ｎ−クロロスクシンイミド（２．３６ｇ、１７．７０ｍｍｏｌ）を固体として加え、反応混合液を室温でＮ２下、反応が完了するまで（５〜６日）攪拌した。反応混合液を、飽和亜硫酸水素ナトリウム水溶液を加えることによりクエンチして懸濁液を得た。得られた固体をろ過によって回収し、水及びジエチルエーテルで洗浄し、減圧下で乾燥させて収量６．０７ｇ（８７％）のベージュ色固体の純粋な所望の生成物を得た。ＭＳ ＥＳＩ（＋）ｍ／ｚ３９８、４００（Ｍ＋Ｂｒパターン）を検出した。
【００６７】
ステップＨ：６−（４−ブロモ−２−クロロフェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸メチルエステル、及び６−（４−ブロモ−２−クロロフェニルアミノ）−７−フルオロ−１−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸メチルエステル
６−（４−ブロモ−２−クロロ−フェニルアミノ）−７−フルオロ−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸メチルエステル（１５０ｍｇ、０．３８ｍｍｏｌ）、ヨードメタン（２８μＬ、０．４５ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（７８ｍｇ、０．５６ｍｍｏｌ）のジメチルホルムアミド溶液（１．５ｍＬ）を、７５℃で１時間攪拌した。反応混合液を酢酸エチルで希釈し、飽和炭酸カリウム水溶液（２×）、塩水で洗浄し、乾燥させた（Ｎａ２ＳＯ４）。フラッシュカラムクロマトグラフィー（塩化メチレン／酢酸エチル ２０：１）により、より可動性の白色固体の６−（４−ブロモ−２−クロロフェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸メチルエステル５６ｍｇ（３６％）を得た。１９Ｆ ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）−１３３．５（ｓ）。ＭＳ ＡＰＣＩ（＋）ｍ／ｚ４１２、４１４（Ｍ＋、Ｂｒパターン）を検出した。白色固体の６−４（−ブロモ−２−クロロフェニルアミノ）−７−フルオロ−１−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸メチルエステル５４ｍｇ（３５％）も単離した。１９Ｆ ＮＭＲ（３７６ＭＨｚ、ＣＤ３ＯＤ）−１３９．９（ｓ）。ＭＳ ＡＰＣＩ（＋）ｍ／ｚ４１２、４１４（Ｍ＋、Ｂｒパターン）を検出した。
【００６８】
ステップＩ：６−（４−ブロモ−２−クロロ−フェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸
６−（４−ブロモ−２−クロロ−フェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸メチルエステル（５６ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ／水 ２：１（３ｍＬ）中に溶解し、ＮａＯＨ（０．５５ｍｌ、１．０Ｍ水溶液、０．５５ｍｍｏｌ）を加えた。２時間攪拌後、ロータリーエバポレーションにより反応物を最初の体積の４分の１に減少させ、残渣を水で５０ｍｌに希釈した。１．０ＭのＨＣｌ水溶液を加えることによって、水溶液をｐＨ２に酸性化し、テトラヒドロフラン／酢酸エチル １：１で抽出し（３×）、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、減圧下で濃縮して、オフホワイト固体の純粋なカルボン酸４３ｍｇ（７９％）を得た。ＭＳ ＥＳＩ（＋）ｍ／ｚ３９７、３９８（Ｍ＋、Ｂｒパターン）を検出した。
【００６９】
ステップＪ：６−（４−ブロモ−２−クロロ−フェニルアミノ−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ビニルオキシ−エトキシ）−アミド
６−（４−ブロモ−２−クロロ−フェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２．００ｇ、５．０ｍｍｏｌ）、Ｏ−（２−ビニルオキシ−エチル）−ヒドロキシルアミン（０．７７６ｇ、７．５ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（０．８８ｇ、６．５ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（１．６１ｍＬ、２．３ｍｍｏｌ）及びＥＤＣＩ（１．３ｇ、６．５ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド（５２ｍＬ）に溶解し、室温で４８時間攪拌した。反応混合液を酢酸エチルで希釈し、水（３×）、飽和炭酸カリウム（２×）、飽和塩化アンモニウム（２×）、食塩水で洗浄し、乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、減圧下でオフホワイト固体に濃縮した。固体をジエチルエーテルとともに粉砕し、オフホワイト固体の所望の生成物２．１８ｇ（９０％）を得た。ＭＳ ＥＳＩ（＝）ｍ／ｚ４８３、４８５（Ｍ＋Ｂｒパターン）を検出した。
【００７０】
ステップＫ：６−（４−ブロモ−２−クロロ−フェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エトキシ）−アミド
６−（４−ブロモ−２−クロロ−フェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ビニルオキシエトキシ）−アミド（２．１８ｇ、４．５０ｍｍｏｌ）のエタノール懸濁液（５０ｍＬ）に、塩酸（１４ｍＬ、１．０Ｍ水溶液、１４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合液を２４時間攪拌した。反応混合液をロータリーエバポレーションにより濃縮して乾燥させ、固体を酢酸エチル／テトラヒドロフラン ３：１と飽和炭酸カリウムとの間で分配した。水相を酢酸エチル／テトラヒドロフラン ３：１で抽出し（３×）、有機層を合わせて乾燥させ（Ｎａ２ＳＯ４）、濃縮して、オフホワイト固体の６−（４−ブロモ−２−クロロフェニルアミノ）−７−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシエトキシ）−アミド２．１１ｇ（１００％）を得た。ＭＳ ＥＳＩ（＋）ｍ／ｚ４５７、４５９（Ｍ＋、Ｂｒパターン）を検出した。
【化４】
【００７１】
（実施例２）
硫酸水素塩の物理的性質の検討
実施例１の生成物を以下の試験にかけて、その物理的性質を決定した。
【００７２】
粉末Ｘ線回折（ＰＸＲＤ）
サンプルをすべて、Ｂｒｕｋｅｒ Ｄ５０００回折計で測定した。結晶塩のサンプルを、Ｓｉｅｍｅｎｓシリコン単結晶（ＳＳＣ）ウェハマウント上に載置し、顕微鏡用スライドの助けでサンプルを薄層に伸ばすことによって、Ｘ線粉末回折のスペクトルを決定した。サンプルを、１分間あたり３０回転で回転させ（計数安定性を向上するため）、波長１．５４０６オングストロームで、４０ｋＶ及び４０ｍＡで操作される銅製ロングファインフォーカス管によって生成されるＸ線を照射した。平行Ｘ線源は、Ｖ２０に設定された自動可変の発散スリットを通過し、反射した放射線は２ｍｍの散乱線除去スリット及び０．２ｍｍの検出スリットを通して向けられた。サンプルを、シータ−シータモードで２度から４０度の２シータの範囲にわたって、０．０２度の２シータの増大につき１秒間曝露した（連続スキャンモード）。操作時間は３１分４１秒であった。機器には、検出器としてシンチレーションカウンターが装備されていた。制御及びデータの取り込みは、Ｄｅｌｌ Ｏｐｔｉｐｌｅｘ６８６ＮＴ４．０ＷｏｒｋｓｔａｔｉｏｎによりＤｉｆｆｒａｃｔ＋ソフトウェアで操作した。
【００７３】
データを、１増大につき４ｓで０．０２°の２シータの増大で、２シータ２〜４０°の範囲にわたって収集し、表２に分類し、相対強度は固定スリットで測定した回折図形に由来する。
【００７４】
【表２】
【００７５】
スキャンの結果を図１に示し、図中、上の灰色線は、化合物１の硫酸水素塩のＸＲＰＤを表し、下の黒色線は遊離の形態を表す。最も強力なピークは、最も強力に始まり、表３に示してある。２４．５９°のピークは特に強い。
【００７６】
【表３】
【００７７】
Ｘ線粉末回折の分野の技術者であれば、ピークの相対強度はサンプルの分析に影響を及ぼすことがある、例えば、サイズ３０ミクロンを超える粒子、及び非ユニタリーアスペクト比の影響を受けることがあることを理解するであろう。当業者であれば、反射の位置は、回折計においてサンプルが位置する正確な高さ、及び回折計のゼロキャリブレーションの影響を受け得ることも、理解するであろう。サンプル表面の平面性にも、少々効果があることがある。したがって、提示される回折パターンのデータは、絶対値として理解してはならない（さらなる情報には、Ｊｅｎｋｉｎｓ，Ｒ．及びＳｎｙｄｅｒ，Ｒ．Ｌ．、「Ｘ線粉末回折序論（Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｘ−Ｒａｙ Ｐｏｗｄｅｒ Ｄｉｆｆｒａｃｔｏｍｅｔｒｙ）」、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、１９９６年を参照されたい）。
【００７８】
（実施例３）
ｉｎ ｖｉｖｏの検討：分散製剤における塩対遊離塩基の試験
化合物１を遊離形態又は硫酸水素塩として含む薬学的に許容できる分散剤中の様々な分散製剤７．５ｍＬで、１５０ｍｇの遊離塩基当量の経口投与量を投与後の、絶食イヌにおける化合物１の血漿レベルを測定する試験をイヌで行った。
【００７９】
投与日３日間各々に、体重１２〜１７ｋｇの約２歳から６歳の絶食したビーグル犬に、１５０ｍｇの単一投与量を経口投与した。各投与日は１週間離れていた。
【００８０】
製剤はすべて、１０ｍＬのディスポーザブルシリンジにより、好適な分散溶液７．５ｍＬを、１５０ｍｇの遊離塩基当量の好適な薬物形態を含むバイアルに加え、キャップを閉め、３０秒間ボルテックス混和して分散液を形成することにより、投与直前に即時調製した。
【００８１】
ディスポーザブルシリンジを用いて分散液をバイアルから取り、胃内に配置した胃管栄養法チューブによって動物に投薬した。２０ｍＬディスポーザブルシリンジによって、別の１５ｍＬのアリコートの水を、２回のすすぎの各々に２回加える（すすぎの全体積＝３０ｍＬ）ことにより、バイアルを２回すすぎ、キャップを閉め、５秒間ボルテックス混和し、ディスポーザブルシリンジを用いてバイアルから洗浄溶液を取り、胃管栄養法チューブによって動物に投薬した。
【００８２】
イヌに、約４００ｇのＳｐｅｃｉａｌ Ｄｉｅｔ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｄｉｅｔ Ａを毎日与え、水は自由摂取させた。投薬直前、及び０．５、１、２、３、４、５、６、８、１２、１８、２４、３６、及び４８時間に、頚動脈から全血（２ｍＬ）をリチウムヘパリンチューブに採血した。血液を３０００ｒｐｍで１５分間遠心し、血漿を単純な血液用チューブ中に取り、血漿を分析まで−２０℃で貯蔵した。
【００８３】
血漿（５０ｍｃＬ）を、化合物１の濃度に対して分析した。２匹のイヌが投薬直後に嘔吐したので、これらは分析から除外した。経口投与後に見られた化合物１に対する平均血漿濃度プロファイルを図３に示し、図中▲によって表される線は化合物１の硫酸水素塩を含む製剤を示し、×によって表される線は同じ製剤における化合物１の遊離塩基の結果を示している。
【００８４】
製剤の変更は、曝露に対して比較的少ない影響を有すると思われる（結果は示さず）。しかし、化合物１を硫酸水素塩として投薬した場合、実質的な約４から８倍の曝露の増大がもたらされた。
【００８５】
以上の記載は、本発明の原理のみを例示するものと考えられる。さらに、当業者であれば多くの修正形態及び変更形態が容易に明らかであるので、本発明を、上記に記載したように示す正確な構成及びプロセスに限定するのは望ましくない。したがって、すべての適切な修正形態及び同等物が、以下の特許請求の範囲によって規定される本発明の範囲内にあると訴えられ得る。
【００８６】
「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「含んでいる（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」、及び「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」の語を、本明細書及び以下の特許請求の範囲で用いる場合、指定される特徴、整数、構成成分、又はステップの存在を特定することが企図されるが、１つ又は複数の他の特徴、整数、構成成分、ステップ、又はそれらのグループの存在又は添加を除外するものではない。
【図面の簡単な説明】
【００８７】
【図１】化合物１の硫酸水素塩のＸＲＰＤを示す図である。
【図２】ＤＲＩＦＴＳサンプリング技術を用いて得た化合物１の硫酸水素塩の赤外線スペクトルを示す図である。
【図３】１５０ｍｇ遊離塩基当量の経口用の分散剤の投与量の化合物１（×）及び硫酸水素塩（▲）を絶食したイヌに投与した後の、化合物１の血漿濃度レベルの結果を示す図である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
化合物１の硫酸水素塩。
【請求項２】
無水形態の、請求項１に記載の化合物１の硫酸水素塩。
【請求項３】
溶媒和化合物の形態の、請求項１に記載の化合物１の硫酸水素塩。
【請求項４】
結晶である、請求項１から３までのいずれか一項に記載の、化合物１の硫酸水素塩。
【請求項５】
前記化合物１の硫酸水素塩が、約２４．５９°に少なくとも１つの特異的なピークがあるＸ線粉末回折のパターンを有する、請求項４に記載の化合物１の硫酸水素塩。
【請求項６】
前記化合物１の硫酸水素塩が、２４．５９°、２０．９７°、２３．９９°、２７．６５°、１２．２４°、２３．４９°、２４．３０°、１７．０２°、２５．９１°及び２２．５０°に等しい約２シータに特異的なピークのあるＸ線粉末回折のパターンを有する、請求項５に記載の化合物１の硫酸水素塩。
【請求項７】
図１に示すＸ線粉末回折パターンと実質的に同じ粉末Ｘ線回折パターンを有する、請求項１に記載の化合物１の硫酸水素塩。
【請求項８】
非晶質の形態の、請求項１又は２に記載の化合物１の硫酸水素塩。
【請求項９】
請求項１から８までのいずれか一項に記載の化合物１の硫酸水素塩を調製するための方法であって、
（ｉ）有機液体中の化合物１のスラリーを、少なくとも化学量論的な量の硫酸及び水と反応させるステップと、
（ｉｉ）得られた溶液から塩を回収するステップと、
（ｉｉｉ）その後、要望又は必要があれば、その溶媒和化合物を形成するステップと
を含む上記方法。
【請求項１０】
ステップ（ｉ）で加える水の量が、確実に塩を形成するのに必要な量に制限される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
ステップ（ｉ）を４０〜８０℃の温度で行う、請求項９又は請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
有機液体がＣ１〜６アルキルケトンである、請求項９から１１までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
硫酸水素塩が沈澱するように、場合によりさらなる有機液体を添加して反応混合物を冷却することによって、硫酸水素塩をステップ（ｉｉ）で回収する、請求項９から１２までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
ＭＥＫによって媒介される疾患状態の治療のための薬物として用いるための、請求項１から８までのいずれか一項に記載の化合物１の硫酸水素塩。
【請求項１５】
ＭＥＫによって媒介される疾患状態の治療において使用するための薬物の製造における、請求項１から８までのいずれか一項に記載の化合物１の硫酸水素塩の使用。
【請求項１６】
請求項１から８までのいずれか一項に記載の化合物１の硫酸水素塩の有効量を哺乳動物に投与することを含む、そのような治療を必要とする温血哺乳動物における、ＭＥＫによって媒介される疾患状態を治療するための方法。
【請求項１】
化合物１の硫酸水素塩。
【請求項２】
無水形態の、請求項１に記載の化合物１の硫酸水素塩。
【請求項３】
溶媒和化合物の形態の、請求項１に記載の化合物１の硫酸水素塩。
【請求項４】
結晶である、請求項１から３までのいずれか一項に記載の、化合物１の硫酸水素塩。
【請求項５】
前記化合物１の硫酸水素塩が、約２４．５９°に少なくとも１つの特異的なピークがあるＸ線粉末回折のパターンを有する、請求項４に記載の化合物１の硫酸水素塩。
【請求項６】
前記化合物１の硫酸水素塩が、２４．５９°、２０．９７°、２３．９９°、２７．６５°、１２．２４°、２３．４９°、２４．３０°、１７．０２°、２５．９１°及び２２．５０°に等しい約２シータに特異的なピークのあるＸ線粉末回折のパターンを有する、請求項５に記載の化合物１の硫酸水素塩。
【請求項７】
図１に示すＸ線粉末回折パターンと実質的に同じ粉末Ｘ線回折パターンを有する、請求項１に記載の化合物１の硫酸水素塩。
【請求項８】
非晶質の形態の、請求項１又は２に記載の化合物１の硫酸水素塩。
【請求項９】
請求項１から８までのいずれか一項に記載の化合物１の硫酸水素塩を調製するための方法であって、
（ｉ）有機液体中の化合物１のスラリーを、少なくとも化学量論的な量の硫酸及び水と反応させるステップと、
（ｉｉ）得られた溶液から塩を回収するステップと、
（ｉｉｉ）その後、要望又は必要があれば、その溶媒和化合物を形成するステップと
を含む上記方法。
【請求項１０】
ステップ（ｉ）で加える水の量が、確実に塩を形成するのに必要な量に制限される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
ステップ（ｉ）を４０〜８０℃の温度で行う、請求項９又は請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
有機液体がＣ１〜６アルキルケトンである、請求項９から１１までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
硫酸水素塩が沈澱するように、場合によりさらなる有機液体を添加して反応混合物を冷却することによって、硫酸水素塩をステップ（ｉｉ）で回収する、請求項９から１２までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
ＭＥＫによって媒介される疾患状態の治療のための薬物として用いるための、請求項１から８までのいずれか一項に記載の化合物１の硫酸水素塩。
【請求項１５】
ＭＥＫによって媒介される疾患状態の治療において使用するための薬物の製造における、請求項１から８までのいずれか一項に記載の化合物１の硫酸水素塩の使用。
【請求項１６】
請求項１から８までのいずれか一項に記載の化合物１の硫酸水素塩の有効量を哺乳動物に投与することを含む、そのような治療を必要とする温血哺乳動物における、ＭＥＫによって媒介される疾患状態を治療するための方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図２】
【図３】
【公表番号】特表２００９−５２１４８７（Ｐ２００９−５２１４８７Ａ）
【公表日】平成２１年６月４日（２００９．６．４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５４７６７９（Ｐ２００８−５４７６７９）
【出願日】平成１８年１２月１２日（２００６．１２．１２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０６１８９５
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０７６２４５
【国際公開日】平成１９年７月５日（２００７．７．５）
【出願人】（５０４３４４５０９）アレイ バイオファーマ、インコーポレイテッド (87)
【出願人】（５０７２０７７７５）アストラゼネカ エービー (11)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２１年６月４日（２００９．６．４）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年１２月１２日（２００６．１２．１２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００６／０６１８９５
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０７６２４５
【国際公開日】平成１９年７月５日（２００７．７．５）
【出願人】（５０４３４４５０９）アレイ バイオファーマ、インコーポレイテッド (87)
【出願人】（５０７２０７７７５）アストラゼネカ エービー (11)
【Ｆターム（参考）】
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