経口摂取物
【課題】自然界に存在するアミノ酸の一種であるγ−アミノ酪酸は、降圧剤としての効果が認められており、今後も期待される素材である。これに加え、γ−アミノ酪酸以外の組成物をさらに含有させることにより、血圧降下作用をより効果的に得ることができる、高血圧の治療に有効な組成物が求められている。
【解決手段】清酒醸造副産物を原料に、乳酸菌を作用させ、γ−アミノ酪酸を含有する組成物を得た。原料に米糠、及び／又はグルタミン酸又はその塩を加えてもよい。
この組成物は、γ−アミノ酪酸を単独摂取した場合よりも強い血圧降下作用を示した。さらにこの組成物とＡＣＥ阻害ペプチドを併用した場合それぞれ少量でも、相乗的な効果が得られ、強い血圧降下作用を示すことを見出した。
【解決手段】清酒醸造副産物を原料に、乳酸菌を作用させ、γ−アミノ酪酸を含有する組成物を得た。原料に米糠、及び／又はグルタミン酸又はその塩を加えてもよい。
この組成物は、γ−アミノ酪酸を単独摂取した場合よりも強い血圧降下作用を示した。さらにこの組成物とＡＣＥ阻害ペプチドを併用した場合それぞれ少量でも、相乗的な効果が得られ、強い血圧降下作用を示すことを見出した。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、清酒醸造副産物を原料とした組成物に関するものであり、特に高血圧を予防・治療・改善する組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
高血圧は生活習慣病の一つに挙げられているが、高血圧はある程度まで進行しないと特別な自覚症状がない。このため、高血圧はサイレントキラーとも呼ばれ、自覚症状がないままに密かに病状が進行し、数々の合併症を引き起こす可能性がある。血管の壁は本来弾力性があるが、高血圧状態が長く続くと動脈硬化を引き起こし脳出血や脳梗塞、大動脈瘤、心筋梗塞、眼底出血などの原因となる。また、細小動脈の硬化が進むと腎硬化症を発症することにより腎臓の機能が低下し、腎不全や尿毒症になる場合もある。また、心臓に負担がかかることにより心臓肥大や心不全を引き起こすこともある。
【０００３】
日本高血圧学会の高血圧治療ガイドラインでは、血圧値に基づいて至適血圧、正常血圧、正常高値血圧、高血圧に分類されており、収縮期血圧（最高血圧）１４０ｍｍＨｇ以上、又は拡張期血圧（最低血圧）９０ｍｍＨｇ以上を高血圧と定義している。血圧は年齢と共に上がる傾向にあり、２００５年現在、高血圧患者は全国で３０００万人から３５００万人と言われており、そのうち約７００万人が治療を受けている。
【０００４】
高血圧患者の数は非常に多いが、現在の医学検査では高血圧の明らかな原因が見つからないものを本態性高血圧と言い、高血圧の９０％以上を占めている。残りの１０％程度の高血圧は二次性高血圧あるいは症候性高血圧と言い、血圧を上げる原因が見つかっている。二次性高血圧としては、大動脈縮窄症、腎血管性高血圧、腎実質性高血圧、原発性アルドステロン症、クッシング症候群、褐色細胞腫、大動脈炎症候群、甲状腺機能異常などが挙げられ、それぞれの原因疾患の治療を行うことが血圧の低下に有効である。
【０００５】
一方、本態性高血圧は遺伝的な因子や生活習慣などの環境因子が関与しており、例えば過剰な塩分摂取・肥満・過度の飲酒・喫煙・精神的ストレス・自律神経の調節異常・過剰の肉体労働・タンパク質や脂質の不適切な摂取などがある。これらの要因は複雑に影響を及ぼしあっているため高血圧の原因となっている因子を特定することは難しい。従って、本態性高血圧を治療する有効な方法は降圧剤で血圧を下げるということ以外にはあまりないのが現状である。
【０００６】
高血圧の治療薬としての降圧剤としては、現在主に次のようなものが挙げられる。体内のナトリウムや水分を排泄して血液量を減らすことで血圧を下げる利尿剤、心臓や血管の緊張を和らげ血圧を下げる交感神経抑制剤であるβブロッカーあるいはαブロッカー、血管を拡張させて血圧を下げるカルシウム拮抗剤、血管を収縮させて血圧を上げるホルモン（アンジオテンシンII）が作られるのを抑えて血圧を下げるアンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、アンジオテンシンIIが血管に働きかけるのを抑えて血管の収縮を抑えて血圧を下げるアンジオテンシンII受容体拮抗剤などである。
【０００７】
しかしながら、これら降圧剤の投与にはそれぞれ禁忌が存在し、例えばサイアザイド系利尿剤は痛風に対し、抗アルドステロン利尿剤は腎不全や高カリウム血症に対し、βブロッカーは気管支喘息や慢性閉塞性肺疾患に対し、αブロッカーは起立性低血圧症に対し、カルシウム拮抗剤はうっ血性心不全に対し、ＡＣＥ阻害剤は妊娠や高カリウム血症や両側腎動脈狭窄に対し、アンジオテンシンII受容体拮抗剤は妊娠や高カリウム血症や両側腎動脈狭窄に対してそれぞれ禁忌である。
【０００８】
また、これらの降圧剤の服用によって、副作用を生じることもある。利尿剤では低カリウム血症や高尿酸血症や血液濃縮など、βブロッカーでは気管支喘息の誘発や慢性閉塞性肺疾患の悪化や徐脈や抹消循環障害や脂質代謝異常など、αブロッカーではめまいなど、カルシウム拮抗剤では顔面紅潮や頭痛や動悸や上下肢の浮腫や便秘など、ＡＣＥ阻害剤では空咳や血管浮腫や腎機能低下など、アンジオテンシンII受容体拮抗剤では血管浮腫や腎機能低下などである。
【０００９】
ところで、近年、アミノ酸の一種であるγ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ：Ｇａｍｍａ−Ａｍｉｎｏ Ｂｕｔｙｒｉｃ Ａｃｉｄ）が天然の降圧素材として注目されている。γ−アミノ酪酸は生体内ではグルタミン酸から生成され、主に海馬、小脳、脊髄などに存在する抑制性の神経伝達物質である。主に中枢神経系に存在するが、抹消組織にも存在することが知られている。薬理作用として、脳代謝促進作用、成長ホルモン分泌促進作用などと共に、血圧降下作用が認められている。γ−アミノ酪酸の降圧作用機作については完全には明らかにされていないが、γ−アミノ酪酸が末梢交感神経の亢進を抑え、血管収縮作用のあるノルアドレナリンの分泌を抑えることにより、降圧作用を示す、と考えられている。
【００１０】
γ−アミノ酪酸は玄米など、種子の胚芽などに多く含まれる。また、市販の食品中では、ヨーグルトの一部、清酒・ワイン・ビール等の酒類、酢、漬物、キムチ、野菜ジュース等、多くの食品に含有されている。特にキムチでの含量が多く、これはキムチ中の乳酸菌によりγ−アミノ酪酸が生産されているものと考えられている。γ−アミノ酪酸は非タンパク質アミノ酸であり、微生物に広く分布するグルタミン酸デカルボキシラーゼ（ＧＡＤ）の作用によりグルタミン酸が脱炭酸されて生成する。このため、高価であるγ−アミノ酪酸を得るために、安価なグルタミン酸又はその塩を原料とする方法は有効である。γ−アミノ酪酸を高生産させる方法として、米糠、又は発芽玄米糠などにグルタミン酸ナトリウムを加え、これを乳酸菌で発酵させたところ、γ−アミノ酪酸が高生産したという報告がある（特許文献１、特許文献２）。
【００１１】
このように、自然界に存在するアミノ酸の一種であるγ−アミノ酪酸は、近年降圧剤としての利用が期待されている。しかし、γ−アミノ酪酸は、その投与量をある程度以上増やしても降圧作用にある程度限界があるという問題がある。
【００１２】
そこで、γ−アミノ酪酸とＡＣＥ阻害ペプチドを組み合わせて投与することにより、降圧効果を上げたという報告がある（特許文献３）。特許文献３では、ＡＣＥ阻害ペプチドとして、イワシ由来ペプチド又は発酵乳のペプチドを用いているが、呈味性の問題があり、ヨーグルト香料を用いて調整をして高血圧の被験者に投与している。また、γ−アミノ酪酸の投与量は、１００μｇ／ｋｇで、投与後８時間後の血圧降下を測定しており、ＡＣＥ阻害ペプチドとの組み合わせの結果、約２０ｍｍＨｇの血圧降下が見られている。
【００１３】
ＡＣＥ阻害ペプチドを得る方法として、従来牛乳カゼイン、大豆タンパク質、イワシタンパク質、トウモロコシ、小麦、卵白アルブミンなどの加水分解物からの単離が報告されているが、その他には醤油粕からＡＣＥ阻害ペプチドを単離したという報告もある（特許文献４）。
【００１４】
また、他には麦若葉とγ−アミノ酪酸含有物を組み合わせることで降圧効果を上げたという報告もある（特許文献５）。特許文献５によれば、麦若葉にγ−アミノ酪酸富化処理を施し、これにγ−アミノ酪酸を含有する組成物である糸状菌培養物又は胚芽を加えることにより、相乗的な抗高血圧効果が得られたとされている。特許文献５の実験系では９週齢の高血圧自然発症ラットに食餌に大麦若葉及びγ−アミノ酪酸を含有する組成物として糸状菌培養物、米胚芽などを８週間投与しているが、１日の食餌摂取量から計算されるγ−アミノ酪酸投与量は２〜７ｍｇ程度と考えられる。
【００１５】
【特許文献１】特開平１１−５６２７６号公報
【特許文献２】特開２００５−６５６９１号公報
【特許文献３】特開２００２−２４１３０５号公報
【特許文献４】特開平５−２７９２６３号公報
【特許文献５】特開２００２−２２７号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１６】
このように自然界に存在するアミノ酸の一種であるγ−アミノ酪酸は降圧剤としての効果が注目を集めている素材であり、γ−アミノ酪酸含量が少なくてもγ−アミノ酪酸の降圧効果をより高め、高血圧の治療に有効で副作用がない自然原料の組成物の提供が求められている。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
そこで、本発明者らは鋭意検討の結果、清酒醸造過程で生じる副産物に乳酸菌を加えて作用させることにより、γ−アミノ酪酸を含有する発酵組成物が得られること、更に清酒醸造副産物に米糠、及び／又はグルタミン酸又はその塩を加えたものに乳酸菌を作用させることにより、より効率よくγ−アミノ酪酸を含有する発酵組成物が得られること、更にこのようにして得られた組成物は同量のγ−アミノ酪酸を単独で摂取した場合よりも強い血圧降下作用を示すことを見出し、高血圧の予防・治療・改善により効果的な天然原料の組成物を得るに至った。
【００１８】
さらに、これらの発酵組成物にさらにＡＣＥ阻害ペプチドを添加したものは、相乗的な血圧降下効果が得られ、発酵組成物単独またはＡＣＥ阻害ペプチド単独を摂取した場合よりも強い血圧降下作用を示すことを見出した。
【００１９】
本発明は、上記知見に基づき完成されたもので、以下、降圧効果のある組成物、その組成物を有効成分とする高血圧の予防・治療・改善剤、その組成物を含有し、高血圧を予防または改善するために用いられる旨の表示を付した飲食品などを提供すること、及びそれらの製造方法に関する。
【００２０】
項１． 清酒醸造過程で生じる副産物に乳酸菌を作用させたγ-アミノ酪酸を含有することを特徴とする組成物。
項２． 清酒醸造過程で生じる副産物が液化仕込清酒の醸造により得られる酒粕であることを特徴とする項１に記載の組成物。
項３． 更に、米糠を配合してなることを特徴とする、項１又は２に記載の組成物。
項４． 更に、グルタミン酸及び／又はその塩を添加してなることを特徴とする、項１〜３のいずれか1項に記載の組成物。
項５． 乳酸菌がラクトバチルス ブレビス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ）に属する乳酸菌である項１〜４のいずれか1項に記載の組成物。
項６． 項１〜５のいずれか1項に記載の組成物を有効成分とする高血圧予防・治療・改善剤。
項７． 項１〜５のいずれか1項に記載の組成物を含有し、高血圧を予防または改善するために用いられる旨の表示を付した飲食品。
項８． 項１〜５のいずれか1項に記載の組成物及びＡＣＥ阻害ペプチドを含有することを特徴とする組成物。
項９． 項８に記載の組成物を有効成分とする高血圧予防・治療・改善剤。
項１０． 項８に記載の組成物を含有し、高血圧を予防または改善するために用いられる旨の表示を付した飲食品。
項１１． 項１〜５のいずれか1項に記載の組成物、及び／又は項８に記載の組成物の製造法。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
以下、本発明を詳細に記述する。
【００２２】
（１）清酒醸造副産物を原料とする組成物
【００２３】
本発明に使用する清酒醸造副産物とは、清酒醸造過程で得られる清酒以外のものであれば特に限定はなく、液状の物、固形状の物であってもよい。例えば、液状の物として、清酒醪を挙げることができる。また、固形状の物として、清酒醪から清酒を分離した残りの不溶性残渣である酒粕を挙げることができる。清酒からの分離方法はどのようなものであっても構わない。酒粕の種類はいかなるものであっても構わないが、原料米の液化液を掛米として使用することを特徴とする清酒の醸造法である、いわゆる液化仕込みによって得られる酒粕（以下、液化粕と称する）は、通常の酒粕と比べてタンパク質・ペプチドを多く含むなどの特徴があり、特に好ましい。また、醸造副産物に含まれるアルコール除去は常法に従って行えばよい。
【００２４】
本発明においては、醸造副産物を原料として単用するほか、醸造副産物に更に米糠、及び／またはグルタミン酸又はその塩を添加することでγ−アミノ酪酸を効率よく含有することができ、血圧降下効果が高まる。これらの原料を単独、または混合した組成物に乳酸菌を作用させて発酵組成物を得る。組成物の混合比率に特に規定はないが、醸造副産物に対する米糠の添加量は０〜５０重量％が好ましく、より好ましくは２〜２０重量％であることが望ましい。グルタミン酸又はその塩の添加量は０〜３０重量％が好ましく、より好ましくは１〜１５重量％であることが望ましい。水分は乳酸菌が生育できる環境であれば特に制限されないが、醸造副産物が酒粕である場合は酒粕の０．５〜１０倍が好ましく、より好ましくは１〜５倍であることが望ましい。更に、乳酸菌の生育のためにグルコースを添加してもよい。グルコースの添加量は０〜１０重量％が好ましく、より好ましくは０．５〜５重量％であることが望ましい。これらを添加した後、ミキサー又はグラインダーを用いて粉砕懸濁する。この混合組成物に前培養をしておいた乳酸菌を添加するが、乳酸菌の添加量は混合組成物中、１０５〜１０９ｃｅｌｌｓ／ｍｌであることが好ましく、より好ましく１０６〜１０８ｃｅｌｌｓ／ｍｌであることが望ましい。発酵温度は１５〜４５℃が好ましく、より好ましくは３０〜４０℃が望ましい。また、発酵時間は１６〜７２時間が好ましく、より好ましくは２０〜５０時間が望ましい。
【００２５】
乳酸菌発酵を行うにあたっては、混合組成物より得られる発酵組成物の香気・味覚を良好にするために発酵条件を好気条件にすることが望ましい。例えば発酵容器の蓋に複数の小さな通気孔を設けることにより、乳酸菌発酵を好気条件で行うことができ、その結果、良好な香気を有しており味覚にも優れた発酵組成物が得られる。
【００２６】
このようにして得られた発酵組成物を遠心分離、フィルター濾過などの方法により固液分離を行い、液体部分を凍結乾燥、スプレードライなどの方法を用いて発酵組成物上清粉末を得る。又は、得られた発酵組成物を固液分離せずにそのまま凍結乾燥、スプレードライなどの方法を用いて発酵組成物粉末を得ることもできる。
【００２７】
このようにして得られた発酵組成物上清粉末又は発酵組成物粉末を以後、発酵組成物と呼ぶこともある。
【００２８】
（２）乳酸発酵に用いる乳酸菌
【００２９】
本発明で用いる乳酸菌はγ−アミノ酪酸生成能を有するものであれば特に限定はないが、例としてＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属、Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ属、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ属、及びＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属等に属するものを挙げることができる。これらの中でもＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属に属するものが好ましく、この例として、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｅｉｃｈｍａｎｎｉｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｌａｃｔｉｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ、及びＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ等を挙げることができる。これらの中でもＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓに属するものがより好ましい。
【００３０】
また、発明者らは、γ-アミノ酪酸生成能の高い数十種類の乳酸菌を食品から単離した。これらの乳酸菌をそれぞれ用いて液化粕の発酵試験、及び発酵した液化粕の味覚官能試験を行った。その中から発酵力に優れ、かつ発酵後の液化粕が味覚に優れていた１株の乳酸菌を選択した。選択した菌株の同定試験を行ったところ、本菌株はＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓと同定された。
【００３１】
（３）血圧降下試験
【００３２】
高血圧自然発症ラット（Ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｌｙ Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅ Ｒａｔ：ＳＨＲ）は京都大学医学部病理学教室において、正常血圧ウィスター京都ラット（Ｗｉｓｔａｒ Ｋｙｏｔｏ Ｒａｔ：ＷＫＹ）から選択交配によって確立された近交系で、加齢に伴って遺伝的に高血圧を発症する。遺伝性高血圧を発症するラットは世界中で確立されているが、確実に高血圧を発症するのはＳＨＲのみで、このモデル動物は高血圧の研究や新薬の開発に世界中で一番多く使用されている。
【００３３】
本発明においては、血圧降下の評価において、上記のＳＨＲを用いた。ＳＨＲは生後３ヶ月頃より次第に高血圧を発症し、ヒトの本態性高血圧と同じ症状と病変を生じる。このため、試験に用いるＳＨＲは、高血圧が発症した後の２０週齢から３０週齢のものを用いるのが好ましい。このＳＨＲに、各サンプルを投与後、ＳＨＲの血圧を尾部カフ圧で測定し、血圧降下の評価を行った。
【００３４】
（４）ＡＣＥ阻害ペプチド
【００３５】
本発明で用いたＡＣＥ阻害ペプチドは次のようにして調製した。清酒の酒粕に適量の水を加えて、これにプロテアーゼを添加して酒粕中のタンパク質の分解処理をし、遠心分離後の上清を濃縮乾燥させた。分解に用いるプロテアーゼは、酸性プロテアーゼ、中性プロテアーゼ、アルカリ性プロテアーゼのいずれでもよく、例えば、コクラーゼ、サモアーゼ、レンネット、プロテアーゼＡ「アマノ」Ｇ、プロテアーゼＭ「アマノ」Ｇ、プロテアーゼＮ「アマノ」Ｇ、ニューラーゼＦ３Ｇ、パパインＷ−４０、ウマミザイムＧ、プロメラインＦ、サモアーゼＰＣ１０Ｆ、ペプチダーゼＲ、サーモリシン、モルシンＦ、スミチームＡＰ、ニュートラーゼ、アクチナーゼＡＳなどの、市販の食品工業用酵素を広く使用できる。
【００３６】
こうして得られた組成物のＡＣＥ阻害活性を測定したところ、ＡＣＥ阻害活性が見られたため、この酒粕プロテアーゼ分解物をＡＣＥ阻害ペプチドとして用いた。本発明において、この組成物を以後ＡＣＥ阻害ペプチドと表記するが、本発明においては、この組成物に関してこれ以上の精製などは行っていない。
【００３７】
（５）発酵組成物を有効成分とする高血圧予防・治療剤
【００３８】
本発明の発酵組成物を用いた高血圧予防・治療剤は、そのまま又は薬学的に許容される各種担体（賦形剤、増量剤、結合剤、崩壊剤、潤沢剤、付湿剤、着色剤、矯味矯臭剤らが含まれる）と配合して、適当な製剤とされる。また、この製剤には慣用の添加剤などを混合して医薬組成物として調製できる。
【００３９】
製剤形態は、特に限定されず、例えばこの医薬組成物は、調製する形態（錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、シロップ剤等の経口投与剤；注射剤、点滴剤、外用剤、座剤等の非経口投与剤などの各種製剤形態）を挙げることができる。経口投与剤の方が、非経口投与剤に比べて患者への負担が小さいために、使用し易い。
【００４０】
賦形剤としては、公知のものを広く使用でき、例えば、乳糖、ショ糖、ブドウ糖等の各種の糖類、バレイショデンプン、コムギデンプン、トウモロコシデンプン等の各種デンプン類、結晶セルロース等の各種セルロース類、無水リン酸水素カルシウム、炭酸カルシウム等の各種無機塩類等が挙げられる。
【００４１】
結合剤としては、公知のものを広く使用でき、例えば、結晶セルロース、プルラン、アラビアゴム、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、マクロゴール等が挙げられる。
【００４２】
崩壊剤としては、公知のものを広く使用でき、例えば、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、デンプン、アルギン酸ナトリウム等が挙げられる。
【００４３】
潤沢剤としては、ステアリン酸マグネシウム、タルク、硬化油などが挙げられる。
【００４４】
付湿剤としては、公知のものを広く使用でき、例えば、ココナッツ油、オリーブ油、ゴマ油、落花生油、大豆リン脂質、グリセリン、ソルビトールなどが挙げられる。
【００４５】
矯味矯臭剤としては、通常使用される甘味料、酸味料、香料など公知のものを広く使用でき、例えば、白糖、グルコース、フルクトース、キシリトール、ソルビトール、マンニトール、ケイヒ油、ハッカ油、メントールなどが挙げられる。
【００４６】
（６）高血圧予防・治療剤を含む飲食品組成物
【００４７】
本発明の高血圧予防・治療剤は食品添加剤として用いることができる。食品添加剤には、本発明の高血圧予防・治療剤の他に、糖類、デンプン類、セルロース、ステアリン酸マグネシウム、植物油などの担体や、添加剤が含まれていてもよい。食品添加剤の剤形は、特に限定されないが、例えば、粉状、顆粒状、液体状のような剤形とすることができる。
【００４８】
本発明の組成物は、食品の風味を損ねるような味や匂いを有さない。従って、食品の種類は特に限定されない。例えば、飴、ガム、ケーキ、パイ、クッキー、クラッカー、ゼリー、チョコレート、プディング、アイスクリーム、ポテトチップス、羊羹、煎餅、饅頭、中華饅頭のような菓子；酒類、茶類、コーヒー類、スポーツドリンク類、清涼飲料水、スープ、乳飲料のような飲料；ヨーグルト、バター、チーズのような乳製品；ハム、ソーセージ、蒲鉾、竹輪のような練り物；ソース、ドレッシング、マヨネーズ、醤油、味噌、酢、味醂、トマト加工品（ケチャップ、トマトペースト、トマトピューレ）、カレールウ、酒粕、顆粒だしのような調味料；ふりかけ、漬物、佃煮、塩昆布のような常備惣菜類；惣菜；麺、米飯、粥のような主食類などが挙げられる。
【００４９】
また、本発明の液体部分のみの粉末組成物は、高い水溶性を有しているため、飲料や、ソース、ドレッシング、醤油、酢、味醂のような液状調味料のような液状食品が好ましく、酒類、茶類、コーヒー類、スポーツドリンク類、及び清涼飲料水がより好ましい。また低ｐＨ条件下でも高い水溶性を示すため、マヨネーズやドレッシングのような液状酸性食品の添加剤としても好適に使用できるという利点がある。また、固液分離せずに粉末化した組成物は、上記液体食品のうち、透明性を必要としないタイプのソース、ドレッシングやマヨネーズなどの調味料に利用できる。さらに高温高圧処理に耐えるため、本発明の組成物を添加した食品の加熱加圧滅菌を行えるとともに、レトルト処理のような特殊な製造工程を経ることもできるという利点もある。加えて本組成物は、清酒製造原料を用いたものに含まれていることから、その安全性が歴史的に確認されている点でも、食品添加物として好適である。
【００５０】
本発明の食品組成物には、その他に、加工食品に通常添加される各種の添加剤が含まれていてもよい。食品組成物の調製に当たり慣用されている各種添加剤を添加配合することができる。添加剤としては、例えば、安定化剤、ｐＨ調整剤、糖類、甘味料、香料、各種ビタミン類、ミネラル類、抗酸化剤、賦形剤、可溶化剤、結合剤、滑沢剤、懸濁剤、湿潤剤、皮膜形成物質、矯味剤、矯臭剤、着色料、保存剤等を例示することができる。
【００５１】
また、本発明の食品組成物は、高血圧の予防若しくは改善のための栄養補助食品、即ちサプリメントとしても好適に使用できる。この場合の食品組成物中には、本発明の組成物の他に、サプリメントの担体として公知の成分が含まれていればよい。このような担体として、例えば糖類、デンプン類、セルロース、ステアリン酸マグネシウム、植物油が挙げられる。
【００５２】
サプリメントの形状は特に限定されないが、例えば、錠剤状、粉状、顆粒状などの形状が挙げられる。
【００５３】
以下、実施例を示して本発明をより詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【実施例１】
【００５４】
γ−アミノ酪酸高含有発酵組成物の製造（１）
【００５５】
液化粕５０ｇに対し米糠を０、５、１０、２０％添加した組成物に水１５０ｍｌを加え、１００℃で１０分間加熱し、室温まで冷ました。これに前培養しておいた食品単離乳酸菌Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓを１０７ｃｅｌｌｓ/ｍｌを１ｍｌ接種して、３６℃で７０時間乳酸発酵させた。遠心分離した上清をアミノ酸分析（日立ハイテクノロジーズ製Ｌ−８８００形高速アミノ酸分析計）に供し、グルタミン酸（Ｇｌｕ）とγ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）の濃度を計測した。
【００５６】
その結果を表１に示す。米糠を添加しなかった場合と比較して米糠を添加した発酵組成物のγ−アミノ酪酸濃度は、極めて高く、グルタミン酸からγ−アミノ酪酸への転換率は、米糠を０、５、１０、２０％添加した場合、それぞれ２１、８８、９４、９４％であった。以上の結果より米糠を添加することでγ−アミノ酪酸の生産効率が飛躍的に向上することが分かった。
【００５７】
【表１】
【００５８】
さらに、原料にグルタミン酸又はその塩を添加する場合でも、米糠を配合することで、γ−アミノ酪酸の生成効率が向上する現象が認められ、γ−アミノ酪酸高含有発酵組成物を得た。
【実施例２】
【００５９】
γ−アミノ酪酸高含有発酵組成物の製造（２）
【００６０】
液化粕３００ｇと、米糠１５ｇと、グルタミン酸ナトリウム１５ｇ、グルコース６ｇを加え、さらに水７５０ｍｌを加えてこれをミキサーで粉砕懸濁した。これに前培養しておいた食品単離乳酸菌Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓを１０７ｃｅｌｌｓ/ｍｌを１０ｍｌ接種して、３６℃で４８時間乳酸発酵させた。この時、発酵が嫌気条件にならないように、発酵容器の蓋に通気孔を設けた。発酵を好気条件にすることにより、香気が良好で、味覚も優れた発酵物を得ることができた。これを３０００ｇで１５分間遠心分離し、その上清を凍結乾燥して、粉末約５０ｇを得た。この粉末のγ−アミノ酪酸含量を測定したところ、全重量の２０％がγ−アミノ酪酸であった。このようにしてγ−アミノ酪酸高含有の発酵組成物の粉末を得た。
【実施例３】
【００６１】
ＳＨＲ血圧降下試験
【００６２】
サンプル溶液をラットに経口投与し、数時間後の血圧を測定した。この時の短期的な血圧の降下をもって、サンプルの即効的な作用とみなした。ラットはＳＨＲ／Ｉｚｍ（清水実験材料）のオス、２２週齢から２４週齢のものを用い、サンプルの投与は、これに胃ゾンデを用いてサンプルを体重１ｋｇ当たり１０ｍｌを単回、強制経口投与した。サンプルが固体状のものは、サンプルを水に溶解し、水溶液１０ｍｌとなるように調製した。血圧の測定はサンプル投与直前と投与６時間後の２回、ラットの尾部カフ圧を測定した。血圧測定にはＵＲ−５０００（ウエダ製作所製）を用い、収縮期血圧（ＳＢＰ）、中間値血圧（ＭＢＰ）、弛緩期血圧（ＤＢＰ）の３点を記録した。一つの群あたりの個体数は６で試験を行った。また、統計処理はｔ検定を行い、ｐ＜０．０５で有意差ありとした。
【００６３】
以下の実施例ではこの方法を用いて血圧を測定して、血圧降下の効果を評価した。
【実施例４】
【００６４】
発酵液化粕組成物の降圧作用
【００６５】
実施例１で得た発酵液化粕組成物の降圧作用を調べた。２２週齢のオスのＳＨＲに発酵液化粕組成物２０μｇ／ｋｇを投与した。この発酵液化粕には２０％のγ−アミノ酪酸が含まれているため、γ−アミノ酪酸投与量としては、４μｇ／ｋｇに当たる。また、ブランクとして水１０ｍｌを投与し、対照として、市販のγ−アミノ酪酸(純度９８％；和光純薬工業製）２０μｇ／ｋｇを投与した。それぞれ投与の前後で、実施例３の方法に準じて血圧を測定した。
【００６６】
その結果を表２に示す。ブランクの水の投与の前後では血圧にはほとんど変化はなかった。また、市販γ−アミノ酪酸２０μｇ／ｋｇの投与で投与の前後で血圧には変化が見られなかった。しかしながら、本発明である発酵液化粕組成物の投与により、投与後にはＳＢＰ、ＭＢＰにおいて有意差（ｐ＜０．０５）のある血圧の降下が見られた。この試験で投与した本発明の発酵液化粕組成物のγ−アミノ酪酸含量は４μｇ／ｋｇと、対照の市販γ−アミノ酪酸投与区の１／５量であるにも関わらず、本発明の発酵液化粕組成物投与区のみに血圧降下作用が見られた。このことから、本発明の発酵液化粕組成物は、γ−アミノ酪酸の効果以外に血圧を降下させる作用があり、同量のγ−アミノ酪酸を投与した時よりも強い血圧降下作用を持つことが分かった。
【００６７】
【表２】
【実施例５】
【００６８】
発酵液化粕組成物とＡＣＥ阻害ペプチドの相乗作用
【００６９】
発酵液化粕組成物とＡＣＥ阻害ペプチドの血圧降下作用を、ラットへのそれぞれの単独投与、又はその組み合わせの投与で調べた。ＡＣＥ阻害ペプチドは、前述した酒粕由来の未精製のＡＣＥ阻害ペプチド含有物を用いた。ラットは２４週齢のＳＨＲのオスで、投与方法は実施例３の方法に従った。投与群は次の３群とした。投与群１：本発明の発酵液化粕組成物１０μｇ／ｋｇ、投与群２：ＡＣＥ阻害ペプチド１０ｍｇ／ｋｇ、投与群３：本発明の発酵液化粕組成物５μｇ／ｋｇ＋ＡＣＥ阻害ペプチド５ｍｇ／ｋｇ。実施例３の方法に従って投与前後の血圧の測定を行い、それぞれの投与群の投与前後の血圧の変化、及び投与後の投与群間の血圧の差異を調べた。
【００７０】
まず、それぞれの投与群の投与前後の血圧の変化の結果を表３に示す。その結果、投与群１の本発明の発酵液化粕組成物単独投与（１０μｇ／ｋｇ）では、血圧はＳＢＰ、ＭＢＰ、ＤＢＰ共に降下が見られたが、実施例４で２０μｇ／ｋｇの投与時に見られたような有意差を認めるには至らなかった。投与群２のＡＣＥ阻害ペプチド単独投与（１０ｍｇ／ｋｇ）でもＳＢＰではいくらかの血圧降下が見られたが、ＭＢＰ、ＤＢＰでは血圧の降下はほとんど見られなかった。これに対し、投与群３の本発明の発酵液化粕組成物とＡＣＥ阻害ペプチドの併用投与（発酵液化粕５μｇ／ｋｇ、ＡＣＥ阻害ペプチド５ｍｇ／ｋｇ）では、ＳＢＰ、ＭＢＰ、ＤＢＰの全てで血圧の降下が見られ、特にＳＢＰ、ＭＢＰではｐ＜０．０１の有意差のある血圧降下が見られた。また、投与群３のＳＢＰの血圧降下値は２７ｍｍＨｇと、３群の中で最も大きかった。
【００７１】
【表３】
【００７２】
続いて、それぞれの投与群の投与後の血圧を表４に示す。投与群１と投与群３、投与群２と投与群３を比較した。その結果、投与後の血圧は、投与群１よりも投与群３の方が、投与群２よりも投与群３の方がＳＢＰとＭＢＰでいずれも低くなっていた。特にＳＢＰにおいては、投与群１と３の比較ではｐ＜０．０５の有意差が見られ、投与群２と投与群３の比較ではｐ＜０．０１の有意差が見られた。このことから、本発明の発酵液化粕組成物とＡＣＥ阻害ペプチドを併用した群では、発酵液化粕組成物単独、及びＡＣＥ阻害ペプチド単独のいずれよりも優れた血圧降下の効果が見られ、本発明の発酵液化粕組成物に、さらにＡＣＥ阻害ペプチドを併用した場合、相乗的な血圧降下作用が得られることが分かった。
【００７３】
【表４】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、清酒醸造副産物を原料とした組成物に関するものであり、特に高血圧を予防・治療・改善する組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
高血圧は生活習慣病の一つに挙げられているが、高血圧はある程度まで進行しないと特別な自覚症状がない。このため、高血圧はサイレントキラーとも呼ばれ、自覚症状がないままに密かに病状が進行し、数々の合併症を引き起こす可能性がある。血管の壁は本来弾力性があるが、高血圧状態が長く続くと動脈硬化を引き起こし脳出血や脳梗塞、大動脈瘤、心筋梗塞、眼底出血などの原因となる。また、細小動脈の硬化が進むと腎硬化症を発症することにより腎臓の機能が低下し、腎不全や尿毒症になる場合もある。また、心臓に負担がかかることにより心臓肥大や心不全を引き起こすこともある。
【０００３】
日本高血圧学会の高血圧治療ガイドラインでは、血圧値に基づいて至適血圧、正常血圧、正常高値血圧、高血圧に分類されており、収縮期血圧（最高血圧）１４０ｍｍＨｇ以上、又は拡張期血圧（最低血圧）９０ｍｍＨｇ以上を高血圧と定義している。血圧は年齢と共に上がる傾向にあり、２００５年現在、高血圧患者は全国で３０００万人から３５００万人と言われており、そのうち約７００万人が治療を受けている。
【０００４】
高血圧患者の数は非常に多いが、現在の医学検査では高血圧の明らかな原因が見つからないものを本態性高血圧と言い、高血圧の９０％以上を占めている。残りの１０％程度の高血圧は二次性高血圧あるいは症候性高血圧と言い、血圧を上げる原因が見つかっている。二次性高血圧としては、大動脈縮窄症、腎血管性高血圧、腎実質性高血圧、原発性アルドステロン症、クッシング症候群、褐色細胞腫、大動脈炎症候群、甲状腺機能異常などが挙げられ、それぞれの原因疾患の治療を行うことが血圧の低下に有効である。
【０００５】
一方、本態性高血圧は遺伝的な因子や生活習慣などの環境因子が関与しており、例えば過剰な塩分摂取・肥満・過度の飲酒・喫煙・精神的ストレス・自律神経の調節異常・過剰の肉体労働・タンパク質や脂質の不適切な摂取などがある。これらの要因は複雑に影響を及ぼしあっているため高血圧の原因となっている因子を特定することは難しい。従って、本態性高血圧を治療する有効な方法は降圧剤で血圧を下げるということ以外にはあまりないのが現状である。
【０００６】
高血圧の治療薬としての降圧剤としては、現在主に次のようなものが挙げられる。体内のナトリウムや水分を排泄して血液量を減らすことで血圧を下げる利尿剤、心臓や血管の緊張を和らげ血圧を下げる交感神経抑制剤であるβブロッカーあるいはαブロッカー、血管を拡張させて血圧を下げるカルシウム拮抗剤、血管を収縮させて血圧を上げるホルモン（アンジオテンシンII）が作られるのを抑えて血圧を下げるアンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、アンジオテンシンIIが血管に働きかけるのを抑えて血管の収縮を抑えて血圧を下げるアンジオテンシンII受容体拮抗剤などである。
【０００７】
しかしながら、これら降圧剤の投与にはそれぞれ禁忌が存在し、例えばサイアザイド系利尿剤は痛風に対し、抗アルドステロン利尿剤は腎不全や高カリウム血症に対し、βブロッカーは気管支喘息や慢性閉塞性肺疾患に対し、αブロッカーは起立性低血圧症に対し、カルシウム拮抗剤はうっ血性心不全に対し、ＡＣＥ阻害剤は妊娠や高カリウム血症や両側腎動脈狭窄に対し、アンジオテンシンII受容体拮抗剤は妊娠や高カリウム血症や両側腎動脈狭窄に対してそれぞれ禁忌である。
【０００８】
また、これらの降圧剤の服用によって、副作用を生じることもある。利尿剤では低カリウム血症や高尿酸血症や血液濃縮など、βブロッカーでは気管支喘息の誘発や慢性閉塞性肺疾患の悪化や徐脈や抹消循環障害や脂質代謝異常など、αブロッカーではめまいなど、カルシウム拮抗剤では顔面紅潮や頭痛や動悸や上下肢の浮腫や便秘など、ＡＣＥ阻害剤では空咳や血管浮腫や腎機能低下など、アンジオテンシンII受容体拮抗剤では血管浮腫や腎機能低下などである。
【０００９】
ところで、近年、アミノ酸の一種であるγ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ：Ｇａｍｍａ−Ａｍｉｎｏ Ｂｕｔｙｒｉｃ Ａｃｉｄ）が天然の降圧素材として注目されている。γ−アミノ酪酸は生体内ではグルタミン酸から生成され、主に海馬、小脳、脊髄などに存在する抑制性の神経伝達物質である。主に中枢神経系に存在するが、抹消組織にも存在することが知られている。薬理作用として、脳代謝促進作用、成長ホルモン分泌促進作用などと共に、血圧降下作用が認められている。γ−アミノ酪酸の降圧作用機作については完全には明らかにされていないが、γ−アミノ酪酸が末梢交感神経の亢進を抑え、血管収縮作用のあるノルアドレナリンの分泌を抑えることにより、降圧作用を示す、と考えられている。
【００１０】
γ−アミノ酪酸は玄米など、種子の胚芽などに多く含まれる。また、市販の食品中では、ヨーグルトの一部、清酒・ワイン・ビール等の酒類、酢、漬物、キムチ、野菜ジュース等、多くの食品に含有されている。特にキムチでの含量が多く、これはキムチ中の乳酸菌によりγ−アミノ酪酸が生産されているものと考えられている。γ−アミノ酪酸は非タンパク質アミノ酸であり、微生物に広く分布するグルタミン酸デカルボキシラーゼ（ＧＡＤ）の作用によりグルタミン酸が脱炭酸されて生成する。このため、高価であるγ−アミノ酪酸を得るために、安価なグルタミン酸又はその塩を原料とする方法は有効である。γ−アミノ酪酸を高生産させる方法として、米糠、又は発芽玄米糠などにグルタミン酸ナトリウムを加え、これを乳酸菌で発酵させたところ、γ−アミノ酪酸が高生産したという報告がある（特許文献１、特許文献２）。
【００１１】
このように、自然界に存在するアミノ酸の一種であるγ−アミノ酪酸は、近年降圧剤としての利用が期待されている。しかし、γ−アミノ酪酸は、その投与量をある程度以上増やしても降圧作用にある程度限界があるという問題がある。
【００１２】
そこで、γ−アミノ酪酸とＡＣＥ阻害ペプチドを組み合わせて投与することにより、降圧効果を上げたという報告がある（特許文献３）。特許文献３では、ＡＣＥ阻害ペプチドとして、イワシ由来ペプチド又は発酵乳のペプチドを用いているが、呈味性の問題があり、ヨーグルト香料を用いて調整をして高血圧の被験者に投与している。また、γ−アミノ酪酸の投与量は、１００μｇ／ｋｇで、投与後８時間後の血圧降下を測定しており、ＡＣＥ阻害ペプチドとの組み合わせの結果、約２０ｍｍＨｇの血圧降下が見られている。
【００１３】
ＡＣＥ阻害ペプチドを得る方法として、従来牛乳カゼイン、大豆タンパク質、イワシタンパク質、トウモロコシ、小麦、卵白アルブミンなどの加水分解物からの単離が報告されているが、その他には醤油粕からＡＣＥ阻害ペプチドを単離したという報告もある（特許文献４）。
【００１４】
また、他には麦若葉とγ−アミノ酪酸含有物を組み合わせることで降圧効果を上げたという報告もある（特許文献５）。特許文献５によれば、麦若葉にγ−アミノ酪酸富化処理を施し、これにγ−アミノ酪酸を含有する組成物である糸状菌培養物又は胚芽を加えることにより、相乗的な抗高血圧効果が得られたとされている。特許文献５の実験系では９週齢の高血圧自然発症ラットに食餌に大麦若葉及びγ−アミノ酪酸を含有する組成物として糸状菌培養物、米胚芽などを８週間投与しているが、１日の食餌摂取量から計算されるγ−アミノ酪酸投与量は２〜７ｍｇ程度と考えられる。
【００１５】
【特許文献１】特開平１１−５６２７６号公報
【特許文献２】特開２００５−６５６９１号公報
【特許文献３】特開２００２−２４１３０５号公報
【特許文献４】特開平５−２７９２６３号公報
【特許文献５】特開２００２−２２７号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１６】
このように自然界に存在するアミノ酸の一種であるγ−アミノ酪酸は降圧剤としての効果が注目を集めている素材であり、γ−アミノ酪酸含量が少なくてもγ−アミノ酪酸の降圧効果をより高め、高血圧の治療に有効で副作用がない自然原料の組成物の提供が求められている。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
そこで、本発明者らは鋭意検討の結果、清酒醸造過程で生じる副産物に乳酸菌を加えて作用させることにより、γ−アミノ酪酸を含有する発酵組成物が得られること、更に清酒醸造副産物に米糠、及び／又はグルタミン酸又はその塩を加えたものに乳酸菌を作用させることにより、より効率よくγ−アミノ酪酸を含有する発酵組成物が得られること、更にこのようにして得られた組成物は同量のγ−アミノ酪酸を単独で摂取した場合よりも強い血圧降下作用を示すことを見出し、高血圧の予防・治療・改善により効果的な天然原料の組成物を得るに至った。
【００１８】
さらに、これらの発酵組成物にさらにＡＣＥ阻害ペプチドを添加したものは、相乗的な血圧降下効果が得られ、発酵組成物単独またはＡＣＥ阻害ペプチド単独を摂取した場合よりも強い血圧降下作用を示すことを見出した。
【００１９】
本発明は、上記知見に基づき完成されたもので、以下、降圧効果のある組成物、その組成物を有効成分とする高血圧の予防・治療・改善剤、その組成物を含有し、高血圧を予防または改善するために用いられる旨の表示を付した飲食品などを提供すること、及びそれらの製造方法に関する。
【００２０】
項１． 清酒醸造過程で生じる副産物に乳酸菌を作用させたγ-アミノ酪酸を含有することを特徴とする組成物。
項２． 清酒醸造過程で生じる副産物が液化仕込清酒の醸造により得られる酒粕であることを特徴とする項１に記載の組成物。
項３． 更に、米糠を配合してなることを特徴とする、項１又は２に記載の組成物。
項４． 更に、グルタミン酸及び／又はその塩を添加してなることを特徴とする、項１〜３のいずれか1項に記載の組成物。
項５． 乳酸菌がラクトバチルス ブレビス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ）に属する乳酸菌である項１〜４のいずれか1項に記載の組成物。
項６． 項１〜５のいずれか1項に記載の組成物を有効成分とする高血圧予防・治療・改善剤。
項７． 項１〜５のいずれか1項に記載の組成物を含有し、高血圧を予防または改善するために用いられる旨の表示を付した飲食品。
項８． 項１〜５のいずれか1項に記載の組成物及びＡＣＥ阻害ペプチドを含有することを特徴とする組成物。
項９． 項８に記載の組成物を有効成分とする高血圧予防・治療・改善剤。
項１０． 項８に記載の組成物を含有し、高血圧を予防または改善するために用いられる旨の表示を付した飲食品。
項１１． 項１〜５のいずれか1項に記載の組成物、及び／又は項８に記載の組成物の製造法。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
以下、本発明を詳細に記述する。
【００２２】
（１）清酒醸造副産物を原料とする組成物
【００２３】
本発明に使用する清酒醸造副産物とは、清酒醸造過程で得られる清酒以外のものであれば特に限定はなく、液状の物、固形状の物であってもよい。例えば、液状の物として、清酒醪を挙げることができる。また、固形状の物として、清酒醪から清酒を分離した残りの不溶性残渣である酒粕を挙げることができる。清酒からの分離方法はどのようなものであっても構わない。酒粕の種類はいかなるものであっても構わないが、原料米の液化液を掛米として使用することを特徴とする清酒の醸造法である、いわゆる液化仕込みによって得られる酒粕（以下、液化粕と称する）は、通常の酒粕と比べてタンパク質・ペプチドを多く含むなどの特徴があり、特に好ましい。また、醸造副産物に含まれるアルコール除去は常法に従って行えばよい。
【００２４】
本発明においては、醸造副産物を原料として単用するほか、醸造副産物に更に米糠、及び／またはグルタミン酸又はその塩を添加することでγ−アミノ酪酸を効率よく含有することができ、血圧降下効果が高まる。これらの原料を単独、または混合した組成物に乳酸菌を作用させて発酵組成物を得る。組成物の混合比率に特に規定はないが、醸造副産物に対する米糠の添加量は０〜５０重量％が好ましく、より好ましくは２〜２０重量％であることが望ましい。グルタミン酸又はその塩の添加量は０〜３０重量％が好ましく、より好ましくは１〜１５重量％であることが望ましい。水分は乳酸菌が生育できる環境であれば特に制限されないが、醸造副産物が酒粕である場合は酒粕の０．５〜１０倍が好ましく、より好ましくは１〜５倍であることが望ましい。更に、乳酸菌の生育のためにグルコースを添加してもよい。グルコースの添加量は０〜１０重量％が好ましく、より好ましくは０．５〜５重量％であることが望ましい。これらを添加した後、ミキサー又はグラインダーを用いて粉砕懸濁する。この混合組成物に前培養をしておいた乳酸菌を添加するが、乳酸菌の添加量は混合組成物中、１０５〜１０９ｃｅｌｌｓ／ｍｌであることが好ましく、より好ましく１０６〜１０８ｃｅｌｌｓ／ｍｌであることが望ましい。発酵温度は１５〜４５℃が好ましく、より好ましくは３０〜４０℃が望ましい。また、発酵時間は１６〜７２時間が好ましく、より好ましくは２０〜５０時間が望ましい。
【００２５】
乳酸菌発酵を行うにあたっては、混合組成物より得られる発酵組成物の香気・味覚を良好にするために発酵条件を好気条件にすることが望ましい。例えば発酵容器の蓋に複数の小さな通気孔を設けることにより、乳酸菌発酵を好気条件で行うことができ、その結果、良好な香気を有しており味覚にも優れた発酵組成物が得られる。
【００２６】
このようにして得られた発酵組成物を遠心分離、フィルター濾過などの方法により固液分離を行い、液体部分を凍結乾燥、スプレードライなどの方法を用いて発酵組成物上清粉末を得る。又は、得られた発酵組成物を固液分離せずにそのまま凍結乾燥、スプレードライなどの方法を用いて発酵組成物粉末を得ることもできる。
【００２７】
このようにして得られた発酵組成物上清粉末又は発酵組成物粉末を以後、発酵組成物と呼ぶこともある。
【００２８】
（２）乳酸発酵に用いる乳酸菌
【００２９】
本発明で用いる乳酸菌はγ−アミノ酪酸生成能を有するものであれば特に限定はないが、例としてＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属、Ｌｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ属、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ属、Ｐｅｄｉｏｃｏｃｃｕｓ属、及びＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属等に属するものを挙げることができる。これらの中でもＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ属に属するものが好ましく、この例として、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｅｉｃｈｍａｎｎｉｉ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｐｌａｎｔａｒｕｍ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｌａｃｔｉｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｈｅｌｖｅｔｉｃｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ、及びＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ等を挙げることができる。これらの中でもＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓに属するものがより好ましい。
【００３０】
また、発明者らは、γ-アミノ酪酸生成能の高い数十種類の乳酸菌を食品から単離した。これらの乳酸菌をそれぞれ用いて液化粕の発酵試験、及び発酵した液化粕の味覚官能試験を行った。その中から発酵力に優れ、かつ発酵後の液化粕が味覚に優れていた１株の乳酸菌を選択した。選択した菌株の同定試験を行ったところ、本菌株はＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓと同定された。
【００３１】
（３）血圧降下試験
【００３２】
高血圧自然発症ラット（Ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｌｙ Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｖｅ Ｒａｔ：ＳＨＲ）は京都大学医学部病理学教室において、正常血圧ウィスター京都ラット（Ｗｉｓｔａｒ Ｋｙｏｔｏ Ｒａｔ：ＷＫＹ）から選択交配によって確立された近交系で、加齢に伴って遺伝的に高血圧を発症する。遺伝性高血圧を発症するラットは世界中で確立されているが、確実に高血圧を発症するのはＳＨＲのみで、このモデル動物は高血圧の研究や新薬の開発に世界中で一番多く使用されている。
【００３３】
本発明においては、血圧降下の評価において、上記のＳＨＲを用いた。ＳＨＲは生後３ヶ月頃より次第に高血圧を発症し、ヒトの本態性高血圧と同じ症状と病変を生じる。このため、試験に用いるＳＨＲは、高血圧が発症した後の２０週齢から３０週齢のものを用いるのが好ましい。このＳＨＲに、各サンプルを投与後、ＳＨＲの血圧を尾部カフ圧で測定し、血圧降下の評価を行った。
【００３４】
（４）ＡＣＥ阻害ペプチド
【００３５】
本発明で用いたＡＣＥ阻害ペプチドは次のようにして調製した。清酒の酒粕に適量の水を加えて、これにプロテアーゼを添加して酒粕中のタンパク質の分解処理をし、遠心分離後の上清を濃縮乾燥させた。分解に用いるプロテアーゼは、酸性プロテアーゼ、中性プロテアーゼ、アルカリ性プロテアーゼのいずれでもよく、例えば、コクラーゼ、サモアーゼ、レンネット、プロテアーゼＡ「アマノ」Ｇ、プロテアーゼＭ「アマノ」Ｇ、プロテアーゼＮ「アマノ」Ｇ、ニューラーゼＦ３Ｇ、パパインＷ−４０、ウマミザイムＧ、プロメラインＦ、サモアーゼＰＣ１０Ｆ、ペプチダーゼＲ、サーモリシン、モルシンＦ、スミチームＡＰ、ニュートラーゼ、アクチナーゼＡＳなどの、市販の食品工業用酵素を広く使用できる。
【００３６】
こうして得られた組成物のＡＣＥ阻害活性を測定したところ、ＡＣＥ阻害活性が見られたため、この酒粕プロテアーゼ分解物をＡＣＥ阻害ペプチドとして用いた。本発明において、この組成物を以後ＡＣＥ阻害ペプチドと表記するが、本発明においては、この組成物に関してこれ以上の精製などは行っていない。
【００３７】
（５）発酵組成物を有効成分とする高血圧予防・治療剤
【００３８】
本発明の発酵組成物を用いた高血圧予防・治療剤は、そのまま又は薬学的に許容される各種担体（賦形剤、増量剤、結合剤、崩壊剤、潤沢剤、付湿剤、着色剤、矯味矯臭剤らが含まれる）と配合して、適当な製剤とされる。また、この製剤には慣用の添加剤などを混合して医薬組成物として調製できる。
【００３９】
製剤形態は、特に限定されず、例えばこの医薬組成物は、調製する形態（錠剤、丸剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、シロップ剤等の経口投与剤；注射剤、点滴剤、外用剤、座剤等の非経口投与剤などの各種製剤形態）を挙げることができる。経口投与剤の方が、非経口投与剤に比べて患者への負担が小さいために、使用し易い。
【００４０】
賦形剤としては、公知のものを広く使用でき、例えば、乳糖、ショ糖、ブドウ糖等の各種の糖類、バレイショデンプン、コムギデンプン、トウモロコシデンプン等の各種デンプン類、結晶セルロース等の各種セルロース類、無水リン酸水素カルシウム、炭酸カルシウム等の各種無機塩類等が挙げられる。
【００４１】
結合剤としては、公知のものを広く使用でき、例えば、結晶セルロース、プルラン、アラビアゴム、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、マクロゴール等が挙げられる。
【００４２】
崩壊剤としては、公知のものを広く使用でき、例えば、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、デンプン、アルギン酸ナトリウム等が挙げられる。
【００４３】
潤沢剤としては、ステアリン酸マグネシウム、タルク、硬化油などが挙げられる。
【００４４】
付湿剤としては、公知のものを広く使用でき、例えば、ココナッツ油、オリーブ油、ゴマ油、落花生油、大豆リン脂質、グリセリン、ソルビトールなどが挙げられる。
【００４５】
矯味矯臭剤としては、通常使用される甘味料、酸味料、香料など公知のものを広く使用でき、例えば、白糖、グルコース、フルクトース、キシリトール、ソルビトール、マンニトール、ケイヒ油、ハッカ油、メントールなどが挙げられる。
【００４６】
（６）高血圧予防・治療剤を含む飲食品組成物
【００４７】
本発明の高血圧予防・治療剤は食品添加剤として用いることができる。食品添加剤には、本発明の高血圧予防・治療剤の他に、糖類、デンプン類、セルロース、ステアリン酸マグネシウム、植物油などの担体や、添加剤が含まれていてもよい。食品添加剤の剤形は、特に限定されないが、例えば、粉状、顆粒状、液体状のような剤形とすることができる。
【００４８】
本発明の組成物は、食品の風味を損ねるような味や匂いを有さない。従って、食品の種類は特に限定されない。例えば、飴、ガム、ケーキ、パイ、クッキー、クラッカー、ゼリー、チョコレート、プディング、アイスクリーム、ポテトチップス、羊羹、煎餅、饅頭、中華饅頭のような菓子；酒類、茶類、コーヒー類、スポーツドリンク類、清涼飲料水、スープ、乳飲料のような飲料；ヨーグルト、バター、チーズのような乳製品；ハム、ソーセージ、蒲鉾、竹輪のような練り物；ソース、ドレッシング、マヨネーズ、醤油、味噌、酢、味醂、トマト加工品（ケチャップ、トマトペースト、トマトピューレ）、カレールウ、酒粕、顆粒だしのような調味料；ふりかけ、漬物、佃煮、塩昆布のような常備惣菜類；惣菜；麺、米飯、粥のような主食類などが挙げられる。
【００４９】
また、本発明の液体部分のみの粉末組成物は、高い水溶性を有しているため、飲料や、ソース、ドレッシング、醤油、酢、味醂のような液状調味料のような液状食品が好ましく、酒類、茶類、コーヒー類、スポーツドリンク類、及び清涼飲料水がより好ましい。また低ｐＨ条件下でも高い水溶性を示すため、マヨネーズやドレッシングのような液状酸性食品の添加剤としても好適に使用できるという利点がある。また、固液分離せずに粉末化した組成物は、上記液体食品のうち、透明性を必要としないタイプのソース、ドレッシングやマヨネーズなどの調味料に利用できる。さらに高温高圧処理に耐えるため、本発明の組成物を添加した食品の加熱加圧滅菌を行えるとともに、レトルト処理のような特殊な製造工程を経ることもできるという利点もある。加えて本組成物は、清酒製造原料を用いたものに含まれていることから、その安全性が歴史的に確認されている点でも、食品添加物として好適である。
【００５０】
本発明の食品組成物には、その他に、加工食品に通常添加される各種の添加剤が含まれていてもよい。食品組成物の調製に当たり慣用されている各種添加剤を添加配合することができる。添加剤としては、例えば、安定化剤、ｐＨ調整剤、糖類、甘味料、香料、各種ビタミン類、ミネラル類、抗酸化剤、賦形剤、可溶化剤、結合剤、滑沢剤、懸濁剤、湿潤剤、皮膜形成物質、矯味剤、矯臭剤、着色料、保存剤等を例示することができる。
【００５１】
また、本発明の食品組成物は、高血圧の予防若しくは改善のための栄養補助食品、即ちサプリメントとしても好適に使用できる。この場合の食品組成物中には、本発明の組成物の他に、サプリメントの担体として公知の成分が含まれていればよい。このような担体として、例えば糖類、デンプン類、セルロース、ステアリン酸マグネシウム、植物油が挙げられる。
【００５２】
サプリメントの形状は特に限定されないが、例えば、錠剤状、粉状、顆粒状などの形状が挙げられる。
【００５３】
以下、実施例を示して本発明をより詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
【実施例１】
【００５４】
γ−アミノ酪酸高含有発酵組成物の製造（１）
【００５５】
液化粕５０ｇに対し米糠を０、５、１０、２０％添加した組成物に水１５０ｍｌを加え、１００℃で１０分間加熱し、室温まで冷ました。これに前培養しておいた食品単離乳酸菌Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓを１０７ｃｅｌｌｓ/ｍｌを１ｍｌ接種して、３６℃で７０時間乳酸発酵させた。遠心分離した上清をアミノ酸分析（日立ハイテクノロジーズ製Ｌ−８８００形高速アミノ酸分析計）に供し、グルタミン酸（Ｇｌｕ）とγ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）の濃度を計測した。
【００５６】
その結果を表１に示す。米糠を添加しなかった場合と比較して米糠を添加した発酵組成物のγ−アミノ酪酸濃度は、極めて高く、グルタミン酸からγ−アミノ酪酸への転換率は、米糠を０、５、１０、２０％添加した場合、それぞれ２１、８８、９４、９４％であった。以上の結果より米糠を添加することでγ−アミノ酪酸の生産効率が飛躍的に向上することが分かった。
【００５７】
【表１】
【００５８】
さらに、原料にグルタミン酸又はその塩を添加する場合でも、米糠を配合することで、γ−アミノ酪酸の生成効率が向上する現象が認められ、γ−アミノ酪酸高含有発酵組成物を得た。
【実施例２】
【００５９】
γ−アミノ酪酸高含有発酵組成物の製造（２）
【００６０】
液化粕３００ｇと、米糠１５ｇと、グルタミン酸ナトリウム１５ｇ、グルコース６ｇを加え、さらに水７５０ｍｌを加えてこれをミキサーで粉砕懸濁した。これに前培養しておいた食品単離乳酸菌Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓを１０７ｃｅｌｌｓ/ｍｌを１０ｍｌ接種して、３６℃で４８時間乳酸発酵させた。この時、発酵が嫌気条件にならないように、発酵容器の蓋に通気孔を設けた。発酵を好気条件にすることにより、香気が良好で、味覚も優れた発酵物を得ることができた。これを３０００ｇで１５分間遠心分離し、その上清を凍結乾燥して、粉末約５０ｇを得た。この粉末のγ−アミノ酪酸含量を測定したところ、全重量の２０％がγ−アミノ酪酸であった。このようにしてγ−アミノ酪酸高含有の発酵組成物の粉末を得た。
【実施例３】
【００６１】
ＳＨＲ血圧降下試験
【００６２】
サンプル溶液をラットに経口投与し、数時間後の血圧を測定した。この時の短期的な血圧の降下をもって、サンプルの即効的な作用とみなした。ラットはＳＨＲ／Ｉｚｍ（清水実験材料）のオス、２２週齢から２４週齢のものを用い、サンプルの投与は、これに胃ゾンデを用いてサンプルを体重１ｋｇ当たり１０ｍｌを単回、強制経口投与した。サンプルが固体状のものは、サンプルを水に溶解し、水溶液１０ｍｌとなるように調製した。血圧の測定はサンプル投与直前と投与６時間後の２回、ラットの尾部カフ圧を測定した。血圧測定にはＵＲ−５０００（ウエダ製作所製）を用い、収縮期血圧（ＳＢＰ）、中間値血圧（ＭＢＰ）、弛緩期血圧（ＤＢＰ）の３点を記録した。一つの群あたりの個体数は６で試験を行った。また、統計処理はｔ検定を行い、ｐ＜０．０５で有意差ありとした。
【００６３】
以下の実施例ではこの方法を用いて血圧を測定して、血圧降下の効果を評価した。
【実施例４】
【００６４】
発酵液化粕組成物の降圧作用
【００６５】
実施例１で得た発酵液化粕組成物の降圧作用を調べた。２２週齢のオスのＳＨＲに発酵液化粕組成物２０μｇ／ｋｇを投与した。この発酵液化粕には２０％のγ−アミノ酪酸が含まれているため、γ−アミノ酪酸投与量としては、４μｇ／ｋｇに当たる。また、ブランクとして水１０ｍｌを投与し、対照として、市販のγ−アミノ酪酸(純度９８％；和光純薬工業製）２０μｇ／ｋｇを投与した。それぞれ投与の前後で、実施例３の方法に準じて血圧を測定した。
【００６６】
その結果を表２に示す。ブランクの水の投与の前後では血圧にはほとんど変化はなかった。また、市販γ−アミノ酪酸２０μｇ／ｋｇの投与で投与の前後で血圧には変化が見られなかった。しかしながら、本発明である発酵液化粕組成物の投与により、投与後にはＳＢＰ、ＭＢＰにおいて有意差（ｐ＜０．０５）のある血圧の降下が見られた。この試験で投与した本発明の発酵液化粕組成物のγ−アミノ酪酸含量は４μｇ／ｋｇと、対照の市販γ−アミノ酪酸投与区の１／５量であるにも関わらず、本発明の発酵液化粕組成物投与区のみに血圧降下作用が見られた。このことから、本発明の発酵液化粕組成物は、γ−アミノ酪酸の効果以外に血圧を降下させる作用があり、同量のγ−アミノ酪酸を投与した時よりも強い血圧降下作用を持つことが分かった。
【００６７】
【表２】
【実施例５】
【００６８】
発酵液化粕組成物とＡＣＥ阻害ペプチドの相乗作用
【００６９】
発酵液化粕組成物とＡＣＥ阻害ペプチドの血圧降下作用を、ラットへのそれぞれの単独投与、又はその組み合わせの投与で調べた。ＡＣＥ阻害ペプチドは、前述した酒粕由来の未精製のＡＣＥ阻害ペプチド含有物を用いた。ラットは２４週齢のＳＨＲのオスで、投与方法は実施例３の方法に従った。投与群は次の３群とした。投与群１：本発明の発酵液化粕組成物１０μｇ／ｋｇ、投与群２：ＡＣＥ阻害ペプチド１０ｍｇ／ｋｇ、投与群３：本発明の発酵液化粕組成物５μｇ／ｋｇ＋ＡＣＥ阻害ペプチド５ｍｇ／ｋｇ。実施例３の方法に従って投与前後の血圧の測定を行い、それぞれの投与群の投与前後の血圧の変化、及び投与後の投与群間の血圧の差異を調べた。
【００７０】
まず、それぞれの投与群の投与前後の血圧の変化の結果を表３に示す。その結果、投与群１の本発明の発酵液化粕組成物単独投与（１０μｇ／ｋｇ）では、血圧はＳＢＰ、ＭＢＰ、ＤＢＰ共に降下が見られたが、実施例４で２０μｇ／ｋｇの投与時に見られたような有意差を認めるには至らなかった。投与群２のＡＣＥ阻害ペプチド単独投与（１０ｍｇ／ｋｇ）でもＳＢＰではいくらかの血圧降下が見られたが、ＭＢＰ、ＤＢＰでは血圧の降下はほとんど見られなかった。これに対し、投与群３の本発明の発酵液化粕組成物とＡＣＥ阻害ペプチドの併用投与（発酵液化粕５μｇ／ｋｇ、ＡＣＥ阻害ペプチド５ｍｇ／ｋｇ）では、ＳＢＰ、ＭＢＰ、ＤＢＰの全てで血圧の降下が見られ、特にＳＢＰ、ＭＢＰではｐ＜０．０１の有意差のある血圧降下が見られた。また、投与群３のＳＢＰの血圧降下値は２７ｍｍＨｇと、３群の中で最も大きかった。
【００７１】
【表３】
【００７２】
続いて、それぞれの投与群の投与後の血圧を表４に示す。投与群１と投与群３、投与群２と投与群３を比較した。その結果、投与後の血圧は、投与群１よりも投与群３の方が、投与群２よりも投与群３の方がＳＢＰとＭＢＰでいずれも低くなっていた。特にＳＢＰにおいては、投与群１と３の比較ではｐ＜０．０５の有意差が見られ、投与群２と投与群３の比較ではｐ＜０．０１の有意差が見られた。このことから、本発明の発酵液化粕組成物とＡＣＥ阻害ペプチドを併用した群では、発酵液化粕組成物単独、及びＡＣＥ阻害ペプチド単独のいずれよりも優れた血圧降下の効果が見られ、本発明の発酵液化粕組成物に、さらにＡＣＥ阻害ペプチドを併用した場合、相乗的な血圧降下作用が得られることが分かった。
【００７３】
【表４】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
清酒醸造過程で生じる副産物に乳酸菌を作用させたγ-アミノ酪酸を含有することを特徴とする組成物。
【請求項２】
清酒醸造過程で生じる副産物が液化仕込清酒の醸造により得られる酒粕であることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
更に、米糠を配合してなることを特徴とする、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
更に、グルタミン酸及び／又はその塩を添加してなることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項５】
乳酸菌がラクトバチルス ブレビス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ）に属する乳酸菌である請求項１〜４のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか1項に記載の組成物を有効成分とする高血圧予防・治療・改善剤。
【請求項７】
請求項１〜５のいずれか1項に記載の組成物を含有し、高血圧を予防または改善するために用いられる旨の表示を付した飲食品。
【請求項８】
請求項１〜５のいずれか1項に記載の組成物及びＡＣＥ阻害ペプチドを含有することを特徴とする組成物。
【請求項９】
請求項８に記載の組成物を有効成分とする高血圧予防・治療・改善剤。
【請求項１０】
請求項８に記載の組成物を含有し、高血圧を予防または改善するために用いられる旨の表示を付した飲食品。
【請求項１１】
請求項１〜５のいずれか1項に記載の組成物、及び／又は請求項８に記載の組成物の製造法。
【請求項１】
清酒醸造過程で生じる副産物に乳酸菌を作用させたγ-アミノ酪酸を含有することを特徴とする組成物。
【請求項２】
清酒醸造過程で生じる副産物が液化仕込清酒の醸造により得られる酒粕であることを特徴とする請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
更に、米糠を配合してなることを特徴とする、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
更に、グルタミン酸及び／又はその塩を添加してなることを特徴とする、請求項１〜３のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項５】
乳酸菌がラクトバチルス ブレビス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｂｒｅｖｉｓ）に属する乳酸菌である請求項１〜４のいずれか1項に記載の組成物。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか1項に記載の組成物を有効成分とする高血圧予防・治療・改善剤。
【請求項７】
請求項１〜５のいずれか1項に記載の組成物を含有し、高血圧を予防または改善するために用いられる旨の表示を付した飲食品。
【請求項８】
請求項１〜５のいずれか1項に記載の組成物及びＡＣＥ阻害ペプチドを含有することを特徴とする組成物。
【請求項９】
請求項８に記載の組成物を有効成分とする高血圧予防・治療・改善剤。
【請求項１０】
請求項８に記載の組成物を含有し、高血圧を予防または改善するために用いられる旨の表示を付した飲食品。
【請求項１１】
請求項１〜５のいずれか1項に記載の組成物、及び／又は請求項８に記載の組成物の製造法。
【公開番号】特開２００８−５０２６９（Ｐ２００８−５０２６９Ａ）
【公開日】平成２０年３月６日（２００８．３．６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−２２４９９９（Ｐ２００６−２２４９９９）
【出願日】平成１８年８月２２日（２００６．８．２２）
【出願人】（０００１６５２５１）月桂冠株式会社 (88)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２０年３月６日（２００８．３．６）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年８月２２日（２００６．８．２２）
【出願人】（０００１６５２５１）月桂冠株式会社 (88)
【Ｆターム（参考）】
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