縮合複素環化合物及びＭＧＬＵＲ５モジュレーターとしてのその使用
本発明は、新規化合物、その製造方法、その治療における使用及び新規化合物を含む医薬組成物に関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規化合物、治療におけるその使用及び前記の新規化合物を含む医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
グルタミン酸は、哺乳動物の中枢神経系（ＣＮＳ）における主要な興奮性神経伝達物質である。グルタミン酸は、細胞表面の受容体に結合し、これによりそれを活性化することで中枢神経系のニューロンにおいてその効果を生じる。これらの受容体は、受容体タンパク質の構造的特徴、受容体が細胞にシグナルを伝達する手段、及び薬理学的プロファイルに基づいて、２つの主な種類、イオンチャネル型及び代謝調節型のグルタミン酸受容体に分けられている。
【０００３】
代謝調節型グルタミン酸受容体（ｍＧｌｕＲ）は、グルタミン酸の結合後に種々の細胞内セカンドメッセンジャー系を活性化するＧタンパク質共役受容体である。哺乳動物の無損傷のニューロンにおいてｍＧｌｕＲを活性化すると、以下の１つ又はそれ以上の応答が誘発される：ホスホリパーゼＣの活性化；ホスホイノシチド（ＰＩ）の加水分解における増大；細胞内カルシウム放出；ホスホリパーゼＤの活性化；アデニルシクラーゼの活性化又は阻害；環状アデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）の形成における増加又は減少；グアニリルシクラーゼの活性化；環状グアノシン一リン酸（ｃＧＭＰ）の形成における増加；ホスホリパーゼＡ2の活性化；アラキドン酸放出における増加；並びに電位及びリガンド依存性イオンチャネルの活性における増加又は減少。Schoepp et al., Trends Pharmacol. Sci. 14: 13 (1993), Schoepp, Neurochem. Int. 24: 439 (1994), Pin et al., Neuropharmacology 34:1 (1995), Bordi and Ugolini, Prog. Neurobiol. 59:55 (1999)。
【０００４】
分子クローニングでは、ｍＧｌｕＲ１〜ｍＧｌｕＲ８と称する８つの明確なｍＧｌｕＲサブタイプが特定されている。Nakanishi, Neuron 13:1031 (1994), Pin et al., Neuropharmacology 34:1 (1995), Knopfel et al., J. Med. Chem. 38:1417 (1995)。さらなる受容体の多様性は、ある種のｍＧｌｕＲサブタイプの選択的スプライスド・フォーム（alternatively spliced forms）の発現を経て生じる。Pin et al., PNAS 89:10331 (1992), Minakami et al., BBRC 199:1136 (1994), Joly et al., J. Neurosci. 15:3970 (1995)。
【０００５】
代謝調節型グルタミン酸受容体サブタイプは、アミノ酸配列相同性、受容体によって利用されるセカンドメッセンジャー系、及びその薬理学的特性に基づいて、３つのグループ、グループＩ、グループII及びグループIIIのｍＧｌｕＲにさらに分けることができる。グループＩのｍＧｌｕＲには、ｍＧｌｕＲ１、ｍＧｌｕＲ５及びそれらの選択的スプライスド・バリアント（alternatively spliced variants）が含まれる。これらの受容体にアゴニストが結合すると、ホスホリパーゼＣの活性化及びその後の細胞内カルシウムの動員を生じる。
【０００６】
神経学的、精神医学的及び疼痛障害
グループＩ ｍＧｌｕＲの生理学的役割を解明する試みは、この受容体の活性化がニューロンの興奮を誘発することを示唆している。種々の研究は、海馬、大脳皮質、小脳及び視床だけでなく他のＣＮＳ領域においても、グループＩ ｍＧｌｕＲアゴニストがニューロンに適用されるとシナプス後興奮を生じうることを示している。この励起がシナプス後ｍＧｌｕＲの直接活性化のためであることは、証拠により示されているが、また、シナプス前ｍＧｌｕＲの活性化が生じて、神経伝達物質放出が高まることが示唆されている。Baskys, Trends Pharmacol. Sci. 15: 92 (1992), Schoepp, Neurochem. Int. 24: 439 (1994), Pin et al., Neuropharmacology 34:1(1995), Watkins et al., Trends Pharmacol.
Sci. 15: 33 (1994)。
【０００７】
代謝調節型グルタミン酸受容体は、哺乳動物のＣＮＳにおける多くの正常なプロセスに関与している。ｍＧｌｕＲの活性化は、海馬長期増強の誘発及び小脳性の長期的なうつ病に必要であることが示されている。Bashir et al., Nature 363:347 (1993), Bortolotto
et al., Nature 368:740 (1994), Aiba et al., Cell 79:365 (1994), Aiba et al., Cell 79:377 (1994).また、侵害受容及び痛覚脱失におけるｍＧｌｕＲ活性化の役割も示されているMeller et al., Neuroreport 4: 879 (1993), Bordi and Ugolini, Brain Res. 871: 223 (1999)。さらに、ｍＧｌｕＲ活性化は、シナプス伝達、ニューロンの発達、アポトーシスのニューロン死、シナプス可塑性、空間学習、嗅覚の記憶、心臓活動の中枢制御、覚醒、運動調節及び前庭眼球反射の制御を含む種々の他の正常なプロセスにおいて調節的な役割を果たすことが示唆されている。Nakanishi, Neuron 13: 1031 (1994), Pin et al., Neuropharmacology 34:1, Knopfel et al., J. Med. Chem. 38:1417 (1995)。
【０００８】
さらに、グループＩ代謝調節型グルタミン酸受容体及び特にｍＧｌｕＲ５は、種々の病態生理学的プロセス及びＣＮＳに影響を及ぼす障害において役割を果たすことが示唆されている。これらには、脳卒中、頭部外傷、酸素欠乏性及び虚血性損傷、低血糖、てんかん、神経変性障害、例えばアルツハイマー病、並びに疼痛が含まれる。Schoepp et al., Trends Pharmacol. Sci. 14: 13 (1993), Cunningham et al., Life Sci. 54: 135 (1994), Hollman et al., Ann. Rev. Neurosci. 17:31 (1994), Pin et al., Neuropharmacology 34:1 (1995), Knopfel et al., J. Med. Chem. 38:1417 (1995), Spooren et al., Trends Pharmacol. Sci. 22: 331 (2001), Gasparini et al. Curr. Opin. Pharmacol. 2:43 (2002), Neugebauer Pain 98:1 (2002).これらの状態の病理の多くは、過剰のグルタミン酸に誘発されたＣＮＳニューロンの興奮のためであると考えられる。グループＩ ｍＧｌｕＲは、シナプス後機構及び高められたシナプス前グルタミン酸放出を経て、グルタミン酸が介在するニューロンの興奮を高めると考えられるため、それらの活性化がおそらく病理の原因である。従って、グループＩ ｍＧｌｕＲ受容体の選択的アンタゴニストは、具体的には神経保護剤、鎮痛剤又は抗痙攣剤として治療上有益でありうる。
【０００９】
一般に代謝調節型グルタミン酸受容体、そして特にグループＩの神経生理学役割の解明における最近の進歩により、これらの受容体は、急性及び慢性の神経学的及び精神障害並びに慢性及び急性の疼痛障害の治療における将来有望な薬物ターゲットとして確立されている。
【００１０】
胃腸障害
下部食道括約筋（ＬＥＳ）は、断続的に弛緩する傾向がある。その結果、このようなときに一時的に機械的関門（mechanical barrier）が失われて胃からの流動物が食道に移ることがあり、イベントを以下、「逆流」と称する。
【００１１】
胃食道逆流性疾患（ＧＥＲＤ）は、最も一般的な上部消化管疾患である。現在の薬物療法は、胃酸分泌を減少させる又は食道中の酸を中和することを目的としている。逆流の裏にある主な機構は、低緊張の下部食道括約筋によると考えられている。しかしながら、例えばHolloway & Dent (1990) Gastroenterol. Clin. N. Amer. 19, pp. 517-535は、ほとんどの逆流エピソードが、一過性下部食道括約筋弛緩（ＴＬＥＳＲ）、すなわち、嚥下によって誘発されるのではなく弛緩中に生じることを示している。また、ＧＥＲＤの患者では、胃酸分泌は、通常、正常であることがわかっている。
【００１２】
本発明の新規化合物は、一過性下部食道括約筋弛緩（ＴＬＥＳＲ）の阻害、及び従って
胃食道逆流性障害（ＧＥＲＤ）の治療に有用であると考えられる。
【００１３】
ある種の化合物が、ヒトの心再分極において望ましくない効果を生じうることはよく知られており、これは心電図（ＥＣＧ）においてＱＴ間隔の延長として観察される。極端な状況では、この薬剤に誘発されたＱＴ間隔の延長は、トルサード・ド・ポワント(TdP; Vandenberg et al. hERG K+ channels: friend and foe. Trends Pharmacol Sci 2001; 22: 240-246)と称する一種の心不整脈に至り、最終的に心室細動及び突然死に至ることがある。この症候群における第一次イベント（primary event）は、これらの化合物による遅延整流カリウム電流（ＩＫｒ）の速い成分の阻害である。化合物は、ヒト・エーテル・ア・ゴー・ゴー・関連遺伝子（human ether-a-go-go-related gene）（ｈＥＲＧ）をコードする、この電流サブユニットを担持するチャネルタンパク質の開口形成アルファサブユニット（aperture-forming alpha sub-units）に結合する。
【００１４】
ＩＫｒは心臓の活動電位の再分極において重要な役割を果たすため、その阻害は、再分極を遅らせ、そしてこれはＱＴ間隔の延長として現れる。ＱＴ間隔の延長は、それ自体で安全性に対する懸念とはならないが、心血管副作用の危険性を有し、そして少ないパーセンテージの人々においてＴｄＰ及び変性から心室細動に至ることがある。
一般に、本発明の化合物は、ｈＥＲＧをコードするカリウムチャネルに対して低い活性を有する。これに関して、ｈＥＲＧに対する低いインビトロ活性は、低いインビボ活性を示す。
【００１５】
また、薬物の有効性を高めるには薬物が良好な代謝安定性を有することが望ましい。ヒトミクロソームの代謝に対するインビトロ安定性は、代謝に対するインビボ安定性を示す。
【００１６】
ｍＧｌｕＲサブタイプ、特にグループＩ受容体サブタイプ、最も具体的にはｍＧｌｕＲ５について選択性を示す、新しい強力なｍＧｌｕＲアゴニスト及びアンタゴニストは、それらの生理学的及び病態生理学的に重要であるため、必要とされている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１７】
本発明の目的は、代謝調節型グルタミン酸受容体（ｍＧｌｕＲ）、特にｍＧｌｕＲ５受容体で活性を示す化合物を提供することである。特に、本発明の化合物は、主に末梢に作用し、すなわち、血液脳関門を通過する限られた能力を有する。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
本発明は、式Ｉの化合物：
【化１】
（式中、
Ｒ1は、メチル、ハロゲン又はシアノであり；
Ｒ2は、水素又はフルオロであり；
Ｒ3は、水素、フルオロ又はＣ1−Ｃ3アルキルであり；
Ｒ4は、水素又はＣ1−Ｃ3アルキルであり；
Ｘは、
【化２】
であり；
そしてＺは、
【化３】
であり；
Ｒ5は、水素、Ｃ1−Ｃ3アルキル、Ｃ1−Ｃ3ハロアルキル、Ｃ1−Ｃ3アルコキシ；又はＣ1−Ｃ3ハロアルコキシであり；
Ｒ6は、水素、Ｃ1−Ｃ3アルキル、Ｃ1−Ｃ3ハロアルキル、又はＣ1−Ｃ3ハロアルコキシであり；
Ｒ7は、水素、フルオロ又はＣ1−Ｃ3アルキルである）
並びにその医薬上許容しうる塩、水和物、アイソフォーム、互変異性体及び／又は鏡像異性体に関する。
【００１９】
一実施態様においてＲ1は、ハロゲン又はシアノである。
さらなる実施態様において、Ｒ1は、クロロである。さらなる実施態様において、Ｒ1は、シアノである。
さらなる実施態様において、Ｒ2は、水素である。
さらなる実施態様において、Ｒ3は、水素又はフルオロである。
さらなる実施態様において、Ｒ4は、水素又はメチルである。
【００２０】
さらなる実施態様において、Ｒ5は、水素、Ｃ1−Ｃ2アルキル又はＣ1−Ｃ2アルコキシである。
さらなる実施態様において、Ｒ6は、水素、Ｃ1−Ｃ2アルキル又はＣ1−Ｃ2アルコキシである。
さらなる実施態様において、Ｒ7は、Ｃ1−Ｃ2アルキル又はＣ1−Ｃ2アルコキシである。
【００２１】
別の実施態様は、活性成分として治療上有効量の式Ｉの化合物を１つ又はそれ以上の医薬上許容しうる賦形剤、添加剤及び／又は不活性担体と共に含む医薬組成物である。
【００２２】
以下、更に詳細に記載された別の実施態様は、治療において、ｍＧｌｕＲ５が介在する障害の治療において、ｍＧｌｕＲ５が介在する障害を治療する薬剤の製造において使用するための式Ｉの化合物に関する。
【００２３】
さらに他の実施態様は、治療上有効量の式Ｉの化合物を哺乳動物に投与することを含む、ｍＧｌｕＲ５が介在する障害の治療方法に関する。
【００２４】
別の実施態様において、前記受容体を含む細胞を有効量の式Ｉの化合物で治療すること
を含む、ｍＧｌｕＲ５受容体の活性化を阻害する方法が提供される。
【００２５】
本発明の化合物は、治療、特に神経学的、精神医学的、疼痛及び胃腸障害の治療に有用である。
また、本発明のある種の化合物は、非溶媒和形態と同様に溶媒和形態、例えば水和形態で存在することができることは、当業者に理解される。本発明は、式Ｉの化合物の全てのこのような溶媒和形態を包含することが更に理解される。
【００２６】
また、式Ｉの化合物の塩は、本発明の範囲内にある。一般に、本発明の化合物の医薬上許容しうる塩は、当分野でよく知られている標準方法を使用して、例えば、十分に塩基性の化合物、例えばアルキルアミンを適切な酸、例えばＨＣｌ、酢酸又はメタンスルホン酸と反応させて生理学上許容しうるアニオンとの塩を生じることによって得られる。また、カルボン酸又はフェノールのような適切な酸性プロトンを有する本発明の化合物を、水性媒体中で１当量のアルカリ金属若しくはアルカリ土類金属水酸化物若しくはアルコキシド（例えばエトキシド又はメトキシド）、又は適切に塩基性の有機アミン（例えばコリン又はメグルミン）で処理し、続いて慣用の精製技術によって対応するアルカリ金属（例えばナトリウム、カリウム又はリチウム）又はアルカリ土類金属（例えばカルシウム）塩を製造することもできる。さらに、第四級アンモニウム塩は、アルキル化剤を、例えば中性アミンに添加することによって製造することができる。
【００２７】
本発明の一実施態様において、式Ｉの化合物は、その医薬上許容しうる塩又は溶媒和物、特に酸付加塩、例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩、酢酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、酒石酸、クエン酸塩、メタンスルホン酸塩又はｐ−-トルエンスルホン酸塩に変換することができる。
【００２８】
式Ｉの定義に使用される一般的な用語は、以下の意味を有する：
本明細書に使用されるハロゲンは、塩素、フッ素、臭素又はヨウ素から選ばれる。
Ｃ1−Ｃ3アルキルは、１〜３個の炭素原子を有する直鎖又は分枝鎖アルキル基、例えばメチル、エチル、ｎ−プロピル又はイソプロピルである。
Ｃ1−Ｃ3アルコキシは、１〜３個の炭素原子を有するアルコキシ基、例えばメトキシ、エトキシ、イソプロポキシ又はｎ−プロポキシである。
Ｃ1−Ｃ3ハロアルコキシは、少なくとも１個の炭素原子がハロゲン原子によって置換された１〜３個の炭素原子を有するアルコキシ基、例えばメトキシ、エトキシ又はｎ−プロポキシである。
【００２９】
全ての化学名は、ISIS drawを通してアクセスしたAutoNomとして知られているソフトウェアを使用して作成した。
上の式Ｉにおいて、Ｘは、２つの可能な配向性のいずれかで存在することができる。
【００３０】
医薬組成物
本発明の化合物は、式Ｉの化合物、又はその医薬上許容しうる塩若しくは溶媒和物を医薬上許容しうる担体又は添加剤と共に含む慣用の医薬組成物に処方することができる。医薬上許容しうる担体は、固体又は液体のいずれかであることができる。固形製剤には、散剤、錠剤、分散性顆粒剤、カプセル剤、カシェ剤及び坐剤が含まれるが、これらに制限されるわけではない。
【００３１】
固形担体は、賦形剤、着香剤、可溶化剤、滑沢剤、懸濁化剤、結合剤又は錠剤崩壊剤としても作用しうる１つ又はそれ以上の物質であることができる。固形担体は、封入材料であることもできる。
散剤では、担体は微粉砕された固形物であり、これは微粉砕された本発明の化合物又は
活性成分との混合物中にある。錠剤では、活性成分を、適切な比率で必要な結合性を有する担体と混合し、そして所望の形状及びサイズに成形する。
【００３２】
坐剤組成物を製造するには、低融点ワックス、例えば脂肪酸グリセリドとカカオ脂との混合物を最初に融解し、そして例えば撹拌によって活性成分をその中に分散させる。次いで、溶融した均一な混合物を、都合のよいサイズの金型に注ぎ、そして冷却して凝固させる。
【００３３】
適切な担体には、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ラクトース、砂糖、ペクチン、デキストリン、デンプン、トラガント、メチルセルロース、カルボキシルメチルセルロースナトリウム、低融点ワックス、カカオ脂、などが含まれるが、これらに制限されるわけではない。
【００３４】
また、組成物なる用語は、カプセルを供給する担体として封入材料を用いた活性成分の製剤を含むことを意図し、その中で、活性成分は、（他の担体と共に又はなしで）担体によって囲まれており、そのため担体は活性成分と会合している。同様に、カシェ剤が含まれる。
【００３５】
錠剤、散剤、カシェ剤及びカプセル剤は、経口投与に適した固形剤形として使用することができる。
【００３６】
液状組成物には、液剤、懸濁剤及び乳剤が含まれる。例えば活性化合物の滅菌水又は水プロピレングリコール溶液は、非経口投与に適した液体製剤であることができる。液体組成物は、ポリエチレングリコール水溶液中に溶液で処方することもできる。
【００３７】
経口投与のための水性液剤は、水中に活性成分を溶解し、そして所望により、適切な着色剤、着香剤、安定剤及び増粘剤を加えることによって製造することができる。経口使用のための水性懸濁剤は、微粉砕された活性成分を粘稠材料、例えば天然合成ゴム、樹脂、メチルセルロース、カルボキシルメチルセルロースナトリウム、及び医薬製剤分野で知られている他の懸濁化剤と共に水中で分散することによって製造することができる。経口使用を意図する典型的な組成物は、１つ又はそれ以上の着色剤、甘味剤、着香剤及び／又は保存剤を含むことができる。
【００３８】
投薬様式に応じて、医薬組成物は、本発明の化合物約０．０５％ｗ（質量％）〜約９９％ｗを含む、又は約０．１０％ｗ〜５０％ｗを含み、全ての質量パーセントは、組成物の全質量に基づく。
本発明を実施するための治療上有効量は、個々の患者の年齢、体重及び反応を含む、知られている基準を使用して当業者が決定することができ、そして治療又は予防する疾患の枠の中で解釈される。
【００３９】
医学的な使用
本発明の化合物は、ｍＧｌｕＲ５の興奮性活性化と関連する状態の治療及びｍＧｌｕＲ５の興奮性活性化によって生じるニューロン損傷を阻害するのに有用である。化合物は、ヒトを含む哺乳動物においてｍＧｌｕＲ５の阻害作用をもたらすために使用することができる。
【００４０】
ｍＧｌｕＲ５を含むグループＩのｍＧｌｕＲ受容体は、中枢神経系及び末梢神経系並びに他の組織において高度に発現される。従って、本発明の化合物は、ｍＧｌｕＲ５が介在する障害、例えば急性及び慢性の神経学的及び精神医学的障害、胃腸障害並びに慢性及び急性の疼痛障害の治療に十分に適していることが期待される。
【００４１】
本発明は、治療に使用するための上に定義された式Ｉの化合物に関する。
本発明は、ｍＧｌｕＲ５が介在する障害の治療に使用するための上に定義された式Ｉの化合物に関する。
本発明は、アルツハイマー病老年認知症、ＡＩＤＳ−誘発性認知症、パーキンソン病、筋萎縮側索硬化症、ハンチントン舞踏病、片頭痛、てんかん、統合失調症、うつ病、不安、急性不安、眼科的障害、例えば網膜症、糖尿病性網膜症、緑内障、神経性聴覚障害（auditory neuropathic disorders）、例えば耳鳴、化学療法誘発性神経障害、ヘルペス後神経痛及び三叉神経痛、耐性、依存性、脆弱Ｘ、自閉症、精神遅滞、統合失調症及びダウン症候群の治療に使用するための上に定義された式Ｉの化合物に関する。
【００４２】
本発明は、片頭痛、炎症性疼痛、神経因性疼痛障害、例えば糖尿病性神経障害、関節炎及びリウマチ様疾患、腰痛、術後痛並びに癌、アンギナ、腎又は胆石仙痛、月経、片頭痛及び痛風を含む種々の状態に関連する疼痛の治療に使用するための上に定義された式Ｉの化合物に関する。
本発明は、脳卒中、頭部外傷、酸素欠乏性及び虚血性損傷、低血糖、心臓血管疾患並びにてんかんの治療に使用するための上に定義された式Ｉの化合物に関する。
【００４３】
また、本発明は、ｍＧｌｕＲグループＩ受容体が介在する障害及び上記のいずれかの障害を治療する薬剤の製造における上に定義された式Ｉの化合物の使用に関する。
【００４４】
本発明の一実施態様は、胃腸障害の治療における式Ｉの化合物の使用に関する。
本発明の別の実施態様は、一過性下部食道括約筋弛緩の阻害、ＧＥＲＤの治療、胃食道逆流の予防、吐出の治療、喘息の治療、喉頭炎の治療、肺疾患の治療、成長障害の管理、過敏性腸疾患（ＩＢＳ）の治療及び機能性消化不良（ＦＤ）を治療する薬剤を製造するための式Ｉの化合物の使用に関する。
【００４５】
本発明の別の実施態様は、過活動膀胱又は尿失禁を治療するための式Ｉの化合物の使用に関する。
【００４６】
用語「ＴＬＥＳＲ」、一過性下部食道括約筋弛緩は、本明細書において、Mittal, R.K., Holloway, R.H., Penagini, R., Blackshaw, L.A., Dent, J., 1995; Transient lower esophageal sphincter relaxation. Gastroenterology 109, pp. 601-610に従って定義される。
用語「逆流」は、本明細書において、胃からの流動物が食道に入ることができるものとして定義され、このようなときに機械的関門が一時的に失われている。
【００４７】
用語「ＧＥＲＤ」、胃食道逆流性疾患は、本明細書においてvan Heerwarden, M.A., Smout A.J.P.M., 2000; Diagnosis of reflux disease. Bailliere's Clin. Gastroenterol. 14, pp. 759-774に従って定義される。
【００４８】
上の式Ｉの化合物は、肥満又は過体重（例えば体重減少の促進及び体重減少の維持）、体重増加の予防又は逆転（例えば、リバウンド、投薬によって誘発された又は禁煙後の）、食欲及び／又は満腹の調整のため、摂食障害（例えば過食症、食欲不振、過食症及び強迫）及び渇望（薬物、タバコ、アルコール、すべての食欲をそそる主要栄養素又は非必須の食料品）の治療又は予防に有用である。
【００４９】
また、本発明は、上に定義された式Ｉの化合物の有効量を患者に投与することを含む、ｍＧｌｕＲ５が介在する障害及び上記のいずれかの障害にかかっている又は危険にさらされている患者における、ｍＧｌｕＲ５が介在する障害及び上記のいずれかの障害の治療方
法を提供する。
特定の障害の治療的な又は予防的な治療に必要な用量は、治療されるホスト、投与経路及び治療する疾病のひどさに応じて必然的に変化する。
【００５０】
本明細書に関して、用語「治療（therapy）」及び「治療（treatment）」は、特に逆の表示がなければ、予防（prevention）又は予防（prophylaxis）を含む。従って、用語「治療的な（therapieutic）」及び「治療的に（therapeutically）」は、それに応じて解釈すべきである。
本明細書において、特に明記しない限り、用語「アンタゴニスト」及び「阻害剤」は、いずれかの手段によって、リガンドによる応答を生じる伝達経路を部分的に又は完全に阻止する化合物を意味するものとする。
【００５１】
用語「障害」は、特に明記しない限り、代謝調節型グルタミン酸受容体活性に関連するすべての状態及び疾患を意味する。
【００５２】
本発明の一実施態様は、式Ｉの化合物及び酸分泌阻害剤の組み合わせである。本発明の「組み合わせ」は、「固定の組み合わせ（fix combination）」又は「パーツの組み合わせキット（kit of parts combination）」として存在することができる。「固定の組み合わせ」は、(ｉ)少なくとも１つの酸分泌阻害剤；及び(ii)少なくとも１つの式Ｉの化合物が１つの単位中に存在する組み合わせとして定義される。「パーツの組み合わせキット」は、(ｉ)少なくとも１つの酸分泌阻害剤；及び(ii)少なくとも１つの式Ｉの化合物が複数の単位中に存在する組み合わせとして定義される。「パーツの組み合わせキット」の成分は、同時に、順次に、又は別々に投与することができる。本発明に従って使用される酸分泌阻害剤対式Ｉの化合物のモル比は、１：１００から１００：１まで、例えば１：５０から５０：１まで又は１：２０から２０：１まで、又は１：１０から１０：１までの範囲内にある。２つの薬物は、同じ比率で別々に投与することができる。酸分泌阻害剤の例は、Ｈ２遮断剤、例えばシメチジン、ラニチジン；の他にプロトンポンプ阻害剤、例えばピリジニルメチルスルフィニルベンゾイミダゾール、例えばオメプラゾール、エソメプラゾール、ランソプラゾール、パントプラゾール、ラベプラゾール又は関連物質、例えばレミノプラゾールである。
【００５３】
非医学的な使用
式Ｉの化合物と同様にこのような化合物の塩及び水和物は、治療医薬品におけるそれらの使用に加えて、新しい治療剤の調査の一部として、ネコ、イヌ、ウサギ、サル、ラット及びマウスのような実験動物においてｍＧｌｕＲに関連する活性の阻害剤の効果を評価するためのインビトロ及びインビボ試験系の開発及び標準化における薬理学的手段として有用である。
【００５４】
製造方法
本発明の別の態様は、式Ｉの化合物又はその塩若しくは水和物の製造方法を提供する。
このような方法の以下の説明を通して、必要に応じて、有機合成分野の当業者によって容易に理解されるやり方で、種々の反応体及び中間体に適切な保護基が加えられ、続いてそこから除去されることを理解すべきである。このような保護基を使用するための慣用の手法及び適切な保護基の例は、例えば“Protective Groups in Organic Synthesis”, T.W. Green, P.G.M. Wuts, Wiley-Interscience, New York, (1999)に記載されている。このような方法の以下の説明を通して、クロスカップリングは、有機合成の当業者によって容易に理解されるやり方で実施できることを理解すべきである。クロスカップリングの慣用の方法は、例えば“Organometallics in Synthesis”, M. Schlosser (Ed.), John Wiley and Sons (2001)に記載されている。
【００５５】
略語
atm 気圧
aq. 水性
ＢＩＮＡＰ ２,２'−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１,１'−ビナフチル
Ｂｏｃ tert-ブトキシカルボニル
ＣＤＩ Ｎ,Ｎ'−カルボニルジイミダゾール
ＤＣＣ Ｎ,Ｎ−ジシクロヘキシルカルボジイミド
ＤＣＭ ジクロロメタン
ＤＢＵ ジアザ（１,３）ビシクロ[５.４.０]ウンデカン
ＤＥＡ Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ＤＩＢＡＬ−Ｈ ジイソブチルアルミニウムヒドリド
ＤＩＣ Ｎ,Ｎ'−ジイソプロピルカルボジイミド
ＤＭＡＰ Ｎ,Ｎ−ジメチル−４−アミノピリジン
ＤＭＦ ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ ジメチルスルホキシド
ＤＰＰＦ ジフェニルホスフィノフェロセン
ＥＡ 酢酸エチル
ＥＤＣＩ Ｎ−[３−（ジメチルアミノ）プロピル]−Ｎ'−エチルカルボジイミド塩酸塩
ＥＤＣ １−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド
Ｅｔ2Ｏ ジエチルエーテル
ＥｔＯＡｃ 酢酸エチル
ＥｔＯＨ エタノール
ＥｔＩ ヨードエタン
エチル エチル
Ｆｍｏｃ ９−フルオレニルメチルオキシカルボニル
ｈ 時間
ＨｅｔＡｒ ヘテロアリール
ＨＯＢｔ Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＨＢＴＵ Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ,Ｎ,Ｎ',Ｎ'−テトラメチ
ルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＨＰＬＣ 高速液体クロマトグラフィ
ＬＡＨ 水素化アルミニウムリチウム
ＬＣＭＳ ＨＰＬＣ質量スペクトル
ＭＣＰＢＡ ｍ−クロロ安息香酸
ＭｅＣＮ アセトニトリル
ＭｅＯＨ メタノール
min 分
ＭｅＩ ヨードメタン
ＭｅＭｇＣｌ メチルマグネシウムクロリド
Ｍｅ メチル
ｎ-ＢｕＬｉ １−ブチルリチウム
ＮａＯＡｃ 酢酸ナトリウム
ＮＭＲ 核磁気共鳴
ＮＭＰ Ｎ−メチルピロリジノン
ｎＢｕＬｉ １−ブチルリチウム
ｏ.ｎ. 一夜
ＲＴ、ｒｔ、r.t. 室温
ＴＥＡ トリエチルアミン
ＴＨＦ テトラヒドロフラン
ｎＢｕ 直鎖ブチル
ＯＭ メシレート又はメタンスルホナートエステル
ＯＴ トシレート、トルエンスルホナート又は４−メチルベンゼンスルホナートエステル
ＰＣＣ クロロクロム酸ピリジニウム
ＰＰＴＳ ピリジニウムｐ−トルエンスルホナート
ＴＢＡＦ テトラブチルアンモニウムフルオリド
ｐＴｓＯＨ ｐ−トルエンスルホン酸
ＳＰＥ 固相抽出（通常、ミニクロマトグラフィのためのシリカゲルを含む）
sat. 飽和
【００５６】
式Ｉの化合物のイソオキサゾール前駆体の形成
【化４】
【００５７】
式Ｉの化合物は、トルエンのような溶媒中、適切な温度（０℃〜１００℃）で適切な塩基、例えば炭酸水素ナトリウム又はトリエチルアミンを用いて塩基性条件下で式II及びIIIの化合物間で１,３−双極子環付加することによって製造することができる。タイプIIの化合物の合成は、文献、例えばKim, Jae Nyoung; Ryu, Eung K; J. Org. Chem. (1992), 57, 6649-50中に以前に記載されている。また、タイプIIIのアセチレンを用いた１,３−双極子環付加は、タイプIVの置換されたニトロメタンを用いて高められた温度（５０〜１００℃）でトリエチルアミンのような塩基の存在下、ＰｈＮＣＯのような求電子試薬による活性化を経て実施することができる。Li, C-S.; Lacasse, E.; Tetrahedron Lett. (2002) 43; 3565 - 3568.タイプIIIのいくつかの化合物は、商業的に入手可能であるか、又は当業者に知られたような標準的な方法によって合成することができる。
【００５８】
別法として、水素化ナトリウム又はカリウムｔｅｒｔ−ブトキシドのような塩基を使用する塩基性条件を用いてメチルケトンVI及びエステルのクライゼン縮合から入手可能な式Ｉの化合物（Ｘは、イソオキサゾールである）は、上昇した温度（６０〜１２０℃）で、例えば塩酸塩の形態でヒドロキシルアミンを用いて、縮合及びその後の環化を経て式VIIIの化合物を得ることができる。
【化５】
【００５９】
両方の方法について、その後の官能基変換が必要でありうることは理解される。エステル基の場合、これらの変換には、以下の３つの手法のいずれかが含まれうるが、制限されるわけではない：ａ)ＴＨＦのような溶媒中でＬＡＨのような適切な還元剤を用いて完全に還元する。ｂ)ＤＩＢＡＬのような適切な選択的還元剤を用いて部分還元した後、アルキル金属試薬を添加する。ｃ)トルエン又はＴＨＦのような溶媒中でアルキルマグネシウムハライドのようなアルキル金属試薬を添加した後、例えばメタノール中の水素化ホウ素ナトリウムで還元する。
【００６０】
製造を以下に示す非制限的な合成経路による化合物及び対応する中間体は、式Iの化合物のさらなる製造に有用であるか、又は同様でありうる。他の出発物質は、商業的に入手可能であるか、又は文献に記載された方法により製造することができる。
【００６１】
アミノ[１,２,４]トリアゾール中間体の製造
【化６】
【００６２】
スキーム３に関して、アミノ[１,２,４]トリアゾールXIIIは、適切な溶媒、例えばＴＨＦ、ピリジン又はＤＭＦ中、−２０〜１００℃で、カルボノヒドラゾン酸ジアミドXIを、脱離基（ＬＧ）を担持する適当なアシル化剤で処理することによって得られる。反応により、まず開いた中間体XIIとなり、これは自発的にトリアゾール環を形成するか、又は例えばピリジン又はＤＭＦ中、５０〜２００℃で加熱することによってそのように実施する
ことができる。脱離基（ＬＧ）は、例えば対応する酸（ＬＧは、ＯＨである）を、ここで下に記載したような標準活性化試薬によりその場で処理することによって生成された、クロロ又は他のいずれかの適切な脱離基であることができる。カルボノヒドラゾン酸ジアミドXIは、イソチオ尿素IXから生成することができ、その際、Ｓ−アルキル（例えばスキーム４に示したＳ−Ｍｅ）部分は、ピリジン、メタノール、エタノール、２−プロパノール、ＴＨＦ、ＤＭＳＯなどのような溶媒中、−２０〜１８０℃で、ヒドラジンで処理すると脱離基として作用する。また、開いた中間体XIIは、ヒドラジンとの反応について記載された同じ条件下でイソチオ尿素をアシルヒドラジンで処理することによって直接生成することができる。イソチオ尿素は、アセトン、ＥｔＯＨ、ＴＨＦ、ＤＣＭなど中、−１００〜１００℃で、例えばＭｅＩ又はＥｔＩを用いて対応するチオ尿素をＳ−アルキル化することによって得られる。
【００６３】
式VIIIの化合物の官能基変換
【化７】
【００６４】
スキーム４に関して、アルコールXVIは、例えば標準的な方法によって、例えばトリフェニルホスフィンをヨウ素、Ｎ−ブロモスクシンイミド若しくはＮ−クロロスクシンイミドのいずれかと組み合わせて使用することによって、又は別法としてトリブロモホスフィン若しくは塩化チオニルで処理することによって、対応するハライドXVII（例えばＬＧ＝Ｃｌ、Ｂｒなど）に転換することができる。同じようにアルコールXVIは、非求核性塩基の存在下でアルコールと共に適当なスルホニルハライド又はスルホニル無水物を使用して対応するスルホネートを得ることによって他の脱離基、例えばメシレート又はトシレートに変換することができる。クロリド又はスルホネートは、臭化物塩、例えばＬｉＢｒ又はヨウ化物塩で処理することによって対応する臭化物又はヨウ化物に転換することができる。アルコールXVIを得るためのさらなる標準的方法には、一般的な還元剤、ボラン、リチウムボロヒドリド、リチウムアルミニウムヒドリド、又は例えばルテニウム若しくはイリジウムのような遷移金属触媒、若しくは別法として活性炭上のパラジウムの存在下での水素を用いて、XIV及びXV中のような対応するカルボニルを含む基（例えばメチル又はエチルエステル、アルデヒド（Ｒ4はＨである）又はケトン（Ｒ4はＨではない）を還元することが含まれる。
【００６５】
式Ｉの化合物の一般的な合成
続いて記載する最終化合物の非限定的な製造方法を、図面によって説明及び例示し、その際、中間体の一般的な基又は他の構成要素は、式Ｉのものに対応する。式Ｉのものとは
別のいずれかの一般的な基又は構成要素を含む中間体を例示された反応に用いることができることは理解すべきであるが、但し、この基又は要素は反応を妨げず、そしてそれは、当業者に知られている後の段階で式Ｉの対応する基又は要素に化学的に転換することができる。
【００６６】
求核性トリアゾール窒素への結合による
【化８】
【００６７】
スキーム５に関して、式Ｉの化合物は、脱離基（ＬＧ）の求核置換による結合形成によって製造することができ、その際、トリアゾール環外ＮＨ部分は、求核試薬として作用する。トリアゾールのそのアニオン形態の窒素原子は、対応するプロトン化された中性原子を−１００〜１５０℃の温度で、適切な溶媒中の塩基、例えばＴＨＦ、ジエチルエーテル若しくはトルエン中のＬＤＡ若しくはｎＢｕＬｉ、又は例えばＤＭＦ中のＮａＨ若しくはＮａＯｔＢｕ、又はアセトニトリル若しくはケトン、例えば２−ブタノン中のＫ2ＣＯ3で処理することによって生成される。ＬＧは、好ましくはクロロ、ブロモ、ＯＭ及びＯＴである。また、求核反応は、脱離基ＬＧが立体中心に結合した鏡像体的に純粋な又は富んだ出発物質を使用することによって立体選択的なやり方で行うことができる。場合により、触媒量又は化学量論量のアルカリ金属ヨウ化物、例えばＬｉＩは、反応中に存在してその場で脱離基をヨードに置き換えることで反応を促進することができる。
ここで、本発明の実施態様を、以下の非限定的な実施例によって説明する。
【００６８】
一般的な方法
全ての出発物質は、商業的に入手可能であるか又は以前に文献に記載されている。1Ｈ及び13ＣＮＭＲスペクトルは、対照基準としてＴＭＳ又は残留溶媒シグナルを用いて３００ＭＨｚでBruker 300、４００ＭＨｚでBruker, DPX400又は１００ＭＨｚでVarian +400分光計のうちの１つで記録した。ＮＭＲ測定は、デルタスケール（δ）上で行った。質量スペクトルは、QTOF Global Micromass又はAlliance 2795（ＬＣ）及びＺＱ一体型四重極質量分析器からなるWaters ＬＣＭＳで記録した。質量分析器は、陽又は陰イオンモード運転するエレクトロスプレーイオン源を備えていた。イオンスプレー電圧は、±３ｋＶであり、そして質量分析器は走査時間０．８秒で、ｍ／ｚ１００ −７００で走査した。カラム：X-Terra MS, Waters、C8、２．１×５０ｍｍ、３．５μｍ、そしてカラム温度は４０℃に設定した。直線勾配を適用し、流速０．３ｍＬ／分、４分で０％〜１００％アセトニトリルで運転した。移動相：アセトニトリル／MilliQ Water中５％アセトニトリル中１０ｍＭ酢酸アンモニウム。分取クロマトグラフィは、ダイオードアレー検出器付きのGilson自動分取ＨＰＬＣで運転した。カラム：XTerra MS C8、１９×３００ｍｍ、７μｍ。一般に、アセトニトリル／MilliQ Water中５％のアセトニトリル中０．１Ｍ酢酸アンモニウムの勾配を、１３分で２０％〜６０％アセトニトリルで運転した。流速：２０ｍＬ／分。ＭＳ-triggered prep-ＬＣは、ダイオードアレー検出器及びＺＱ質量検出器を有するWaters自動精製ＬＣ―ＭＳ系であった。カラム：XTerra MS C8、１９×１００ｍｍ、５μｍ。アセトニトリル／MilliQ Water中５％アセトニトリル中０．１Ｍ酢酸アンモニウムの勾配を、１０分で０％〜１００％アセトニトリルで運転した。流速：２０ｍＬ／分。いくつかの場合、クロマトロンによる精製は、TC Research 7924Tクロマトロンを用いて、２ｍｍのコーティング層を有する回転しているシリカゲル／セッコウ（Merck、硫酸カルシウム入り60 PF-254）コーティングガラス板上で実施した。別法として、Chem Elut Extraction Column (Varian, cat #1219-8002)及びMega BE-SI (Bond Elut Silica) SPE Columns (Varian, cat # 12256018; 12256026; 12256034)を生成物の精製の際に用いた。マイクロ波加熱は、２４５０ＭＨｚで連続放射線照射をもたらすSmith Synthesizerシングルモードのマイクロ波空洞中で実施した(Personal Chemistry AB, Uppsala, Sweden)。
【実施例】
【００６９】
ここで、本発明を以下の非限定的な実施例によって説明する。
実施例１：４−（３−クロロ−フェニル）−２,４−ジオキソ−酪酸エチルエステル
【化９】
水素化ナトリウム（６０％油分散液，１．２４ｇ，３１．１ｍｍｏｌ）を、０℃でＤＭＦ（３２ｍＬ）中の３−クロロアセトフェノン（４．０ｇ，２５．９ｍｍｏｌ）及びシュウ酸ジエチル（４．５４ｇ，３１．１ｍｍｏｌ）の溶液に少しずつ加えた。混合物を室温で１時間撹拌し、それから８０℃で半時間加熱した。さました後、混合物を３Ｍ ＨＣｌで処理し、それから酢酸エチルで希釈した。有機層を水及び飽和ブラインで３回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、そして濃縮した。次いで、生成した残留物を、ヘキサン中０〜１０％酢酸エチルを用いるシリカ上のフラッシュカラムクロマトグラフィによって精製して表題化合物を得た（４．４３ｇ，６７％，黄色固形物）。
1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ15.12 (br s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.88 (d, 1H), 7.58 (d,
1H), 7.47 (t, 1H), 7.05 (s, 1H), 4.39 (m, 2H), 1.41 (m, 3H).
【００７０】
実施例２：５−（３−クロロ−フェニル）−イソオキサゾール−３−カルボン酸エチルエステル及び５−（３−クロロ−フェニル）−イソオキサゾール−３−カルボン酸メチルエステル
【化１０】
メタノール（６０ｍＬ）中の実施例１の表題化合物（３．００ｇ，１１．８ｍｍｏｌ）及びヒドロキシルアミン塩酸塩（２．４６ｇ，３５．４ｍｍｏｌ）の溶液を８０℃で４時間加熱した。冷却後、混合物を濾過し、そして冷メタノールで洗浄して白色固形物として表題化合物（収率７１％）２．０ｇを得た。メチル及びエチルエステル（主にメチル）の両方の混合物。
1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ7.82 (s, 1H), 7.72 (m, 1H), 7.47 (m, 2H), 4.03 (s, 3H).
【００７１】
実施例３：[５−（３−クロロ−フェニル）−イソオキサゾール−３−イル]−メタノール
【化１１】
水素化アルミニウムリチウム（３２０ｍｇ，８．４ｍｍｏｌ）を室温でＴＨＦ（１００ｍＬ）中の実施例２の表題化合物（２．０ｇ，８．４ｍｍｏｌ）の溶液にゆっくりと加えた。１時間後、反応混合物を水でクエンチし、それから酢酸エチルで抽出した。有機層を水及び飽和ブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、そして濃縮した。次いで生成した残留物を、ヘキサン中１５〜４０％酢酸エチルを用いるフラッシュカラムクロマトグラフィによって精製して黄色固形物として表題化合物（収率７５％）１．３２ｇを得た。
1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ7.78 (s, 1H), 7.68 (m, 1H), 7.43 (m, 2H), 6.63 (s, 1H), 4.84 (d, 2H), 2.23 (t, 1H).
【００７２】
実施例４：メタンスルホン酸５−（３−クロロ−フェニル）−イソオキサゾール−３−イルメチルエステル
【化１２】
トリエチルアミン（９６５ｍｇ，９．５ｍｍｏｌ）及びメタンスルホニルクロリド（８２０ｍｇ，７．２ｍｍｏｌ）を、０℃でジクロロメタン（５０ｍＬ）中の実施例３の表題化合物（１．０ｇ，４．８ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。１時間後、反応混合物を、冷飽和炭酸水素ナトリウムでクエンチし、それから有機層を飽和ブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、そして濃縮した。薄茶色の固形物として表題化合物１．４ｇ（収率１００％）を得た。
1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ7.80 (s, 1H), 7.70 (m, 1H), 7.45 (m, 2H), 6.73 (s, 1H), 5.37 (s, 2H), 3.16 (s, 3H).
【００７３】
実施例５：１−[５−（３−クロロ−フェニル）−イソオキサゾール−３−イル]−エタノン
【化１３】
メチルヨウ化マグネシウム（ジエチルエーテル中３Ｍ）（０．７９ｍＬ，２．３８ｍｍｏｌ）、トルエン（１ｍＬ）、テトラヒドロフラン（０．３９ｍＬ，４．７７ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（１ｍＬ，７．１５ｍｍｏｌ）。溶液を０℃まで冷却し、そしてそれにトルエン（５ｍＬ）中の実施例２の表題化合物（３００ｍｇ，１．１９ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。生成した混合物を０℃で５時間撹拌したままにした。反応混合物を、１Ｍ塩酸（水性，６．５ｍＬ，６．５ｍｍｏｌ）でクエンチし、トルエン（３５ｍＬ）で希釈し、水（５０ｍＬ）、飽和炭酸水素ナトリウム（水性，３０ｍＬ）、水（５０ｍＬ）及びブライン（３０ｍＬ）で、順に洗浄した。有機相を真空で濃縮した。単離した残留物をメ
タノール（８ｍＬ）及び２０％水酸化カリウム（水性，１ｍＬ）に溶解した。混合物を３０分間４５℃で撹拌した。ここで、混合物を真空下で濃縮した。単離した残留物をトルエン（６０ｍＬ）に溶解し、水（５０ｍＬ）、飽和炭酸水素ナトリウム（水性，５０ｍＬ）及び水（５０ｍＬ）で順に洗浄した。有機相を真空中で濃縮し、粗残留物を、ヘキサン中２％酢酸エチルを用いてシリカゲル上で精製して白色固形物として表題化合物を単離した（１５６ｍｇ，収率６０％）。
1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ7.77 (m, 1H), 7.66 (m, 1H), 7.42 (m, 2H), 6.90 (s, 1H), 2.69 (s, 3H).
【００７４】
実施例６：メタンスルホン酸１−[５−（３−クロロ−フェニル）−イソオキサゾール−３−イル]−エチルエステル
【化１４】
工程Ａ，１−[５−（３−クロロ−フェニル）−イソオキサゾール−３−イル]−エタノール
撹拌棒を備えたねじ蓋バイアル中に、実施例５の表題化合物（１００ｍｇ，０．４５ｍｍｏｌ）、水素化ホウ素ナトリウム（３４ｍｇ，０．９０ｍｍｏｌ）及びメタノール（３ｍＬ）を加えた。生成した混合物を室温で３時間撹拌したままにした。反応を水（３０ｍＬ）及びブライン（３０ｍＬ）でクエンチし、ジクロロメタン（３０ｍＬ３回）で抽出した。合わせた有機相を乾燥（硫酸ナトリウム）し、濾過し、そして真空で濃縮して白色固形物として副題化合物を単離した（１１０ｍｇ）。
1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ7.69 (m, 1H), 7.59 (m, 1H), 7.37 (m, 2H), 6.59 (s, 1H), 5.07 (q, 1H), 3.45 (bs, 1H), 1.58 (d, 3H).
【００７５】
工程Ｂ
撹拌棒を備えたねじ蓋バイアル中に、工程６Ａの副題化合物（１１０ｍｇ，０．４９ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（３ｍＬ）及びトリエチルアミン（０．３４ｍＬ，２．４６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を０℃に冷却し、そしてそれにメタンスルホニルクロリド（０．０８０ｍＬ，０．９８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で３０分撹拌したままにした。反応を飽和炭酸水素ナトリウム（水性，４０ｍＬ）でクエンチし、そしてジクロロメタン（３０ｍＬ３回）で抽出した。合わせた有機相をブライン（４０ｍＬ）で洗浄し、乾燥（硫酸ナトリウム）し、濾過し、そして真空で濃縮して褐色の油として副題化合物を単離し、それを次の工程に直接用いた。
【００７６】
実施例７：３−[３−（１−ヒドロキシエチル）イソオキサゾール−５−イル]ベンゾニトリル
【化１５】
【００７７】
工程Ａ：４−（３−ヨード−フェニル）−２,４−ジオキソ−酪酸メチルエステル
【化１６】
水素化ナトリウム（６０％油分散液，４．９ｇ，１２３ｍｍｏｌ）を０℃のＤＭＦ（１２５ｍＬ）中３−ヨードアセトフェノン（２５．１８ｇ，１０２．３ｍｍｏｌ）及びシュウ酸ジメチル（１４．５ｇ，１２３ｍｍｏｌ）の溶液に少しずつ加えた。混合物を室温で１時間撹拌し、それから１１５℃で１時間加熱した。冷却後、混合物を３Ｍ ＨＣｌで処理し、それから酢酸エチルで希釈した。有機層を水及び飽和ブラインで３回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、そして濃縮した。シリカゲル上のクロマトグラフィ、ヘキサン中０〜１０％酢酸エチルにより黄色固形物として副題化合物（収率７１．３％）２４．２ｇを得、それを次の工程に直接用いた。
【００７８】
工程Ｂ：５−（３−ヨード−フェニル）−イソオキサゾール−３−カルボン酸メチルエステル
【化１７】
メタノール（４５０ｍＬ）中の工程７Ａの副題化合物（３３．９ｇ，１０２ｍｍｏｌ）及びヒドロキシルアミン塩酸塩（２１．３ｇ，３０６ｍｍｏｌ）の溶液を還流で４時間加熱した。さました後、混合物を濾過し、そして冷メタノールで洗浄して副題化合物（２４．１ｇ，７２％，褐色の固形物）を得た。
1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ8.18 (m, 1H), 7.82 (t, 2H), 7.26 (t, 1H), 6.97 (s, 1H), 4.03 (s, 3H).
【００７９】
工程Ｃ：[５−（３−ヨードフェニル）イソオキサゾール−３−イル]メタノール
【化１８】
ＤＩＢＡＬ（５５．８ｍＬ，トルエン中１．５Ｍ，８３．７ｍｍｏｌ）を−７８℃でトルエン（６０ｍＬ）及びＴＨＦ（６０ｍＬ）中の工程７Ｂの副題化合物（１２ｇ，３６．５ｍｍｏｌ）に、ゆっくりと加えた。生成した混合物を−７８℃で一夜撹拌し、次いで室温にゆっくりと暖まるのにまかせた。反応を、氷及び飽和塩化アンモニウム（水性）の混合物でクエンチした。生成物を酢酸エチルで抽出し、そして有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、そして真空で濃縮して表題化合物（オフホワイト固形物，１０．５ｇ，９５．６％）を得た。
1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ8.12 (m, 1H), 7.76 (ddm, 2H), 7.21 (t, 1H), 6.62 (s, 1H), 4.83 (s, 2H), 2.45 (br s, 1H).
【００８０】
工程Ｄ：５−（３−ヨードフェニル）イソオキサゾール−３−カルバルデヒド
【化１９】
ジクロロメタン（１５０ｍＬ）中の工程７Ｃの粗反応混合物（８．５ｇ，２８．２ｍｍｏｌ）及びＰＣＣ（９．１３ｇ，４２．３ｍｍｏｌ）を室温で一夜撹拌した。混合物をヘキサン中１５％酢酸エチルで希釈し、そしてヘキサン中さらに１５％酢酸エチルで溶出してシリカゲルの短いプラグを通過させた。溶出液を真空で濃縮し、淡黄色の固形物７．０ｇ（収率８３％）として副題化合物を得た。
1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ10.21 (s, 1H), 8.19 (m, 1H), 7.83 (ddm, 2H), 7.27 (m, 1H), 6.93 (s, 1H).
【００８１】
工程Ｅ：１−[５−（３−ヨード−フェニル）−イソオキサゾール−３−イル]−エタノール
【化２０】
ヨウ化メチルマグネシウム（３３ｍＬ，ジエチルエーテル中３Ｍ，９９ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１００ｍＬ）中の工程７Ｄの副題化合物（７．５ｇ，２５ｍｍｏｌ）の冷（０℃）溶液に加えた。反応混合物を０℃で１時間撹拌し、そして飽和塩化アンモニウムでクエンチした。生成物を酢酸エチルで抽出し、そして有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム及びシリカゲルの混合物で乾燥した。濾液を真空下で濃縮し、そしてクロマトグラフィ（シリカ，ヘキサン中１５〜５０％酢酸エチル）により淡黄色の油、６．５ｇとして粗ヨード−イソオキサゾール−アルコールを得たところ、〜３３％１−（５−フェニルイソオキサゾール−３−イル）エタノールが混入していた。
【００８２】
工程Ｆ：３−[１−（tert−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−エチル]−５−（３−ヨード−フェニル）−イソオキサゾール
【化２１】
tert−ブチルジメチルクロロシラン（２．５ｇ，２．３ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（６０ｍＬ）中の工程７Ｅの粗物質（４．９ｇ，１５．５ｍｍｏｌ）及びＤＢＵ（２．５３ｇ，２．１３ｍｍｏｌ）の溶液に加え、そして反応液を室温で３時間撹拌した。tert−ブチルジメチルクロロシラン（２．５ｇ，２．３ｍｍｏｌ）及びＤＢＵ（２．５３ｇ，２．１３ｍｍｏｌ）を加え、そしてアルコールが消費されたことをＴＬＣが示すまで撹拌を１５分間続けた。生成物を飽和塩化アンモニウムとジクロロメタンとの間で分配し、そして有機層を乾燥し、そして真空で濃縮して淡黄色の固形物として副題化合物を得た（８．４ｇ粗製）。
【００８３】
工程Ｇ：３−｛３−[１−（tert−ブチルジメチルシラニルオキシ）−エチル]−イソオキサゾール−５−イル｝−ベンゾニトリル
【化２２】
ＤＭＦ（１００ｍＬ）中の工程７Ｆの粗生成物、シアン化亜鉛（１．６ｇ，１３．７ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（１．５８ｇ，１．３７ｍｍｏｌ）の混合物を８２℃で１０分間撹拌した。混合物を酢酸エチルで希釈し、そしてセライトを通して濾過した。濾液を真空で濃縮し、そしてジクロロメタンで希釈した。溶液を水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、そして濾過した。クロマトグラフィ（シリカ上に予め吸着させた，ヘキサン中１〜５％酢酸エチル）によりオフホワイト固形物として副題化合物を得た（３．８３ｇ，３工程で４６．５％）。
1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ8.07 (m, 1H), 8.04 (dm, 1H), 7.73 (dm, 1H), 7.62 (t, 1H), 6.66 (s, 1H), 5.09 (q, 1H), 1.54 (d, 3H), 0.93 (s, 9H), 0.13 (s, 3H), 0.06 (s, 3H).
【００８４】
工程Ｈ：３−[３−（１−ヒデロキシ−エチル）−イソオキサゾール−５−イル]−ベンゾニトリル
【化２３】
ＴＢＡＦ（２０ｍＬ，ＴＨＦ中１Ｍ，２０ｍｍｏｌ）を０℃でＴＨＦ（４０ｍＬ）中の純粋なシアノ−イソオキサゾール−シリルエーテル（３．８３ｇ，１１．７ｍｍｏｌ）の溶液に加え、そして混合物を室温で一夜撹拌した。生成物をジクロロメタンと水との間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、そして硫酸マグネシウムで乾燥した。シリカゲルを加え、そして混合物を、ヘキサン中５０％酢酸エチルを用いてシリカゲルのプラグに通過させた。溶出液を真空で濃縮し、そして残留物をヘキサンで磨砕し、オフホワイト固形物２．５ｇ（収率１００％）として表題化合物を得た。
1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ8.07 (m, 1H), 8.03 (dm, 1H), 7.75 (dm, 1H), 7.62 (t, 1H), 6.7 (s, 1H), 5.13 (q, 1H), 1.64 (d, 3H).
【００８５】
実施例８：１−[５−（３−シアノフェニル）イソオキサゾール−３−イル]エチルメタンスルホネート
【化２４】
メタンスルホニルクロリド（１．５ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（２ｍｍｏｌ）を０℃でジクロロメタン（１０〜１５ｍＬ）中の実施例７の表題化合物（１ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。反応混合物を０℃で３０分撹拌し、次いで冷飽和炭酸水素ナトリウムで洗浄した。有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、そして真空で濃縮してオフホワイト固形物として表題化合物３．６５ｇを得、それをさらに精製することなく使用した（収率１００％）。
1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ8.09 (m, 1H), 8.04 (dm, 1H), 7.77 (dm, 1H), 7.65 (t, 1
H), 6.77 (s, 1H), 5.94 (q, 1H), 3.08 (s, 3H), 1.85 (d, 3H)。
【００８６】
実施例９：環式トリアゾール中間体を形成するための一般的な手法
酸塩化物、続いてピリジン（〜０．５ｍＬ／ｍｍｏｌ）をバイアルに加えた。次いで、ヒドラジン（１当量）を溶液に加え、そして１３０℃で一夜還流させた。炭酸カリウムを用いて溶液を塩基性にし、それからＥｔＯＡｃ、水及びブラインを用いて水性後処理を実施した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、そして濃縮した。１０〜２０％ＭｅＯＨ：ＥｔＯＡｃ溶媒系を用いてＳＰＥ／フラッシュカラムを動かした。溶出画分を集め、そして濃縮した。以下の表は、形成されたアミノトリアゾールを示す。
【００８７】
実施例９．１：３−ピリジン−４−イル−５,６,７,８−テトラヒドロ[１,２,４]トリア
ゾロ[４,３−ａ]ピリミジン
【化２５】
ピリジン３ｍＬ中の（１,４,５,６−テトラヒドロ−ピリミジン−２−イル）−ヒドラジンヨウ化水素酸塩７５０ｍｇ（３．１ｍｍｏｌ）（参照 Krezel, Izabella; Pharmazie; EN; 49; 1; 1994; 27-31）及びピリジン３ｍＬ中のイソニコチノイルクロリド塩酸塩５５２ｍｇ（３．１ｍｍｏｌ）の溶液を１２０℃で一夜加熱した。反応混合物を冷却し、そしてＫ2ＣＯ3（飽和）で希釈し、そしてクロロホルム１０ｍＬで３回抽出した。合わせた有機抽出物を乾燥し、そして濃縮した。フラッシュクロマトグラフィ（ＣＨ2Ｃｌ2／ＭｅＯＨ １０:１）により白色固形物８３ｍｇ（１８％）を得た。
1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ8.65 (m, 2 H), 7.67 (m, 2 H), 4.13 (m, 2 H), 3.24 (m, 2 H), 1.91 (m, 2 H).
【００８８】
同様の方法で、以下の化合物を合成した：
【表１】
【００８９】
実施例１０：３−（２−メトキシ−ピリジン−４−イル）−５,６,７,８−テトラヒドロ[１,２,４]トリアゾロ[４,３−ａ]ピリミジン
【化２６】
実施例９．２の表題化合物（２００ｍｇ）及び炭素上のパラジウム触媒１０％（１００
ｍｇ）を合わせた。次いで反応を水素ガスでフラッシュした。また、ＥｔＯＨ（３．２ｍＬ）及びトリエチルアミン（０．６ｍＬ）をバイアルに加えた。溶液を室温で一夜撹拌した。次いで、セライトを通して溶液を濾過した。すべての微量の塩を除去するためシリカフラッシュカラムＣＨ2Ｃｌ2中の１０％１ＭＮＨ3（ＭｅＯＨ中）を動かした。溶液を濃縮し、白色固形粉末として実施例９の表題生成物を得た（１６３ｍｇ，収率７５％）。
1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ8.27 (d, 1H), 7.28 (m, 1H), 6.99 (s, 1H), 6.05 (br, 1H), 4.14 (t, 2H), 4.1 (s, 3H), 3.6 (t, 2H), 2.1 (m, 2H)
【００９０】
実施例１１：イソオキサゾールスルホネート及びスルホニルクロリドをＮ−アルキル化するための一般的な手法
イソオキサゾールメシレート又はクロリドをバイアル中に秤量し、そしてジメチルホルムアミド（３ｍＬ／ｍｍｏｌ）を固形物に加えた。次いでバイアルをアルゴンでフラッシュした。別のバイアル中にアミノトリアゾール（１．０当量）を秤量し、そしてテトラヒドロフラン（６ｍＬ／ｍｍｏｌ）に溶解した。このバイアルにナトリウムtertブトキシド（１．０５当量）又はＮａＨを加え、そしてバイアルを８０℃に加熱した。次いで、メシレートを含むバイアルの内容物を加熱されたバイアルに加え、そして反応物を３〜３０分間撹拌した。次いで、ＥｔＯＡｃ、水及びブラインを用いて水性後処理を実施した。次いで、Ｅｘ管（Ex-Tube）を通して有機層を運転し、そして真空で濃縮した。次いで、１０ｇＳＰＥカラムを用いて、形成された種々の生成物を精製した。以下の表は、各生成物に特異的なカップリング及び反応条件を示す。
【００９１】
以下の化合物は、上記のように合成した：
【表２】
【００９２】
実施例１１．３の表題キラル化合物は、１．０ｍＬ／分の流速（Ｒｔ＝６．４９分）でメタノールによるChiralpak ASを用いた分離によって対応するラセミ化合物から得た。
【００９３】
生物学的評価
ｍＧｌｕＲ５Ｄを発現する細胞系におけるｍＧｌｕＲ５拮抗作用の機能性評価
本発明の化合物の性質は、薬理活性用の標準アッセイを用いて分析することができる。グルタミン酸受容体アッセイの例は、例えばAramori et al., Neuron 8:757 (1992), Tanabe et al., Neuron 8:169 (1992), Miller et al., J. Neuroscience 15: 6103 (1995),
Balazs, et al., J. Neurochemistry 69:151 (1997)に記載されたように当分野でよく知られている。これらの刊行物に記載された方法論は、参照により本明細書に組み込まれる。都合のよいことに、本発明の化合物は、ｍＧｌｕＲ５を発現する細胞における細胞内カルシウム[Ｃａ2+]iの動員を測定するアッセイ（ＦＬＩＰＲ）、又はリン酸イノシトール代謝回転を測定する別のアッセイ（ＩＰ３）によって研究することができる。
【００９４】
ＦＬＩＰＲアッセイ
ＷＯ９７／０５２５２に記載されたようなヒトｍＧｌｕＲ５ｄを発現する細胞を、黒色の側面を有するコラーゲンコーティングされた透明な底面の９６ウェルプレート上でウェル当たり１００，０００細胞の密度で播種し、そして播種の２４時間後に実験を行った。全てのアッセイは、１２７ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＫＣｌ、２ｍＭ ＭｇＣｌ２、０．７ｍＭ ＮａＨ2ＰＯ4、２ｍＭ ＣａＣｌ2、０．４２２ｍｇ／ｍＬ ＮａＨＣＯ3、２．４ｍｇ／ｍＬ ＨＥＰＥＳ、１．８ｍｇ／ｍＬ グルコース及び１ｍｇ／ｍＬ ＢＳＡ画分ＩＶ（ｐＨ７．４）を含む緩衝液中で行った。９６ウェルプレート中の細胞培養液を、０．０１％プルロニック酸（登録商標の非イオン性活性剤ポリオール−ＣＡＳ番号９００３−１１−６）中、蛍光カルシウム指示薬フルオ−３（Molecular Probes, Eugene, Oregon）のアセトキシメチルエステル型４μＭを含む上記の緩衝液中で６０分間装填した。装填期間の後、フルオ−３緩衝液を除去し、そして新たなアッセイ緩衝液で置き換えた。ＦＬＩＰＲ実験は、励起及び放射波長、それぞれ４８８ｎｍ及び５６２ｎｍでレーザー設定０．８００Ｗ及びＣＣＤカメラシャッター速度０．４秒を用いて行った。各実験は、細胞プレートの各ウェル中にある緩衝液１６０μｌで開始した。アンタゴニストプレートから４０μｌ添加した後、アゴニストプレートから５０μＬ添加した。アンタゴニスト及びアゴニストの添加は、９０秒の間隔を離した。蛍光シグナルは、１秒間隔で５０回、続いてそれぞれ２つを添加した直後に５秒間隔で３試料のサンプルをとった。サンプリング期間内でのアゴニストに対する応答のピーク高さとより低いバックグラウンド蛍光との間の差分として応答を測定した。線形最小２乗適合プログラムを用いてＩＣ50測定を行った。
【００９５】
ＩＰ3アッセイ
ｍＧｌｕＲ５ｄのさらなる機能性アッセイは、ＷＯ９７／０５２５２に記載されており、そしてホスファチジルイノシトール代謝回転に基づいている。受容体活性化は、ホスホリパーゼＣ活性を刺激し、そしてイノシトール１,４,５三リン酸（ＩＰ３）の形成を高める。ヒトｍＧｌｕＲ５ｄを安定に発現するＧＨＥＫを１μＣｉ／ウェル[３Ｈ]ミオ−イノシトールを含む培地中、４０×１０4細胞／ウェルで２４ウェルポリ−Ｌ−リジンコーティングされたプレート上へ播種した。細胞を一夜（１６時間）インキュベートし、次いで３回洗浄し、そして１単位／ｍｌのグルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ及び２ｍＭピルビン酸を補足されたＨＥＰＥＳ緩衝食塩水（１４６ｍＭ ＮａＣｌ、４．２ｍＭ ＫＣｌ、０．５ｍＭ ＭｇＣｌ2、０．１％グルコース、２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４）中、３７℃で１時間インキュベートした。細胞をＨＥＰＥＳ緩衝食塩水中で１回洗浄し、そして１０ｍＭ ＬｉＣｌを含むＨＥＰＥＳ緩衝食塩水中で１０分間プレインキュベートした。化合物を、二つ組（in duplicate）で、３７℃で１５分間インキュベートし、次いでグルタミン酸（８０μＭ）又はＤＨＰＧ（３０μＭ）を加え、そしてさらに３０分間インキュベートした。氷上で過塩素酸（５％）０．５ｍＬを添加して反応を終了し、４℃で少なくとも３０分間インキュベートした。試料を１５ｍＬポリプロピレン管中に集め、そしてイオン交換樹脂（Dowex ＡＧ1-Ｘ8ホルメート形態、２００−４００メッシュ、BIORAD）カラムを用いてリン酸イノシトールを分離した。リン酸イノシトールの分離は、最初にグリセロフォスファチジルイノシトールを３０ｍＭギ酸アンモニウム８ｍＬで溶出することによって行った。次に、全リン酸イノシトールを、７００ｍＭギ酸アンモニウム／１００ｍＭギ酸８ｍＬで溶出し、そしてシンチレーションバイアル中に集めた。次いで、この溶出液をシンチラント８ｍＬと混合し、そして[３Ｈ]イノシトール取込みをシンチレーションカウントによって測定した。二つ組試料からｄｐｍのカウントをプロットし、そして線形最小２乗適合プログラムを用いてＩＣ50測定値を得た。
【００９６】
略語
ＢＳＡ ウシ血清アルブミン
ＣＣＤ 電荷結合素子
ＣＲＣ 濃度反応曲線
ＤＨＰＧ ３,５−ジヒドロキシフェニルグリシン
ＤＰＭ 毎分崩壊数
ＥＤＴＡ エチレンジアミン四酢酸
ＦＬＩＰＲ 蛍光定量的イメージングプレート読取装置
ＧＨＥＫ ＧＬＡＳＴを含むヒト胎生腎
ＧＬＡＳＴ グルタミン酸／アスパラギン酸トランスポーター
ＨＥＰＥＳ ４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸（緩衝液）
ＩＰ3 イノシトール三リン酸
【００９７】
一般に、上のアッセイにおいて、１００００ｎＭ未満のＩＣ50値を有する化合物は、活性であった。本発明の１つの態様において、ＩＣ50値は、１０００ｎＭ未満である。本発明のさらなる態様において、ＩＣ50値は、１００ｎＭ未満である。
【００９８】
ラットにおける脳対血漿比率の測定
脳対血漿比率は、雌のSprague Dawleyラットで評価した。化合物を水又は別の適当なビヒクル中に溶解した。脳対血漿比率を測定する際、化合物を皮下若しくは静脈内ボーラス注射、又は静脈内注入、又は経口投与として投与した。投与後の所定の時点で、心臓穿刺により血液試料を採取した。心臓を切開することによってラットを殺し、そして脳を直ちに保持した。血液細胞から血漿を分離するために、血液試料をヘパリン添加した管中に集め、そして３０分以内に遠心分離した。血漿を９６ウェルプレートへ移し、そして分析まで−２０℃で保存した。脳を半分に分割し、そして各半分を予め風袋を量った（pre-ｔarred）管中に置き、そして分析まで−２０℃で保存した。分析前に、脳試料を解凍し、蒸留水の３ｍＬ／ｇ脳組織を管に加えた。試料が均一になるまで、脳試料を氷浴中で超音波処理した。脳及び血漿試料の両方をアセトニトリルで沈殿させた。遠心分離した後、上清を０．２％ギ酸で希釈した。分析は、迅速勾配溶出及びＭＳＭＳ検出による短路逆相ＨＰＬＣカラム上で、エレクトロスプレーイオン化及び選択反応検出（ＳＲＭ）取得（Selected Reaction Monitoring acquisition）を備えた三連四重極機器を用いたＭＳＭＳ検出上で実施した。液−液抽出は、試料洗浄の代替手段として使用することができる。適切な緩衝液を添加した後、振盪により、試料を有機溶媒に抽出する。有機層のアリコートを新しいバイアルへ移し、そして窒素流れ下で蒸発させて乾燥状態にした。残留物を再構成した後、試料はＨＰＬＣカラム上へ注入する準備ができた。
【００９９】
一般に、本発明の化合物は、ラットでの血漿中の薬物／脳内の薬物の比率が＜０．５で外延が制約される。一実施態様において、比率は、０．１５未満である。
【０１００】
インビトロ安定性の測定
ラット肝ミクロソームは、Sprague-Dawleyラット肝試料から調製した。ヒト肝ミクロソームは、ヒト肝試料から調製したか又はBD Gentestから入手した。ｐＨ７．４で０．１mo
l／Ｌリン酸カリウム緩衝液中、補因子、ＮＡＤＰＨ（１．０mmol／ｌ）の存在下、全ミクロソームタンパク質濃度０．５ｍｇ／ｍｌで化合物を３７℃でインキュベートした。化合物の初濃度は、１．０μmol／Ｌであった。分析のため、インキュベーションの開始後、５つの時点０、７、１５、２０及び３０分で試料を採取した。アセトニトリル３．５倍体積を加えることによって、集めた試料中の酵素活性を直ちに停止した。集めた試料のそれぞれの中に残っている化合物の濃度をＬＣ−ＭＳによって測定した。ｍＧｌｕＲ５阻害剤の排出速度定数（ｋ）は、インキュベーション時間（分）に対するＩｎ[ｍＧｌｕＲ５阻害剤]のプロットの勾配として算出した。次いで、排出速度定数を用いてｍＧｌｕＲ５阻害剤の半減期（Ｔ １／２）を算出し、続いてこれを用いて肝ミクロソーム中ｍＧｌｕＲ５阻害剤の固有クリアランス（ＣＬｉｎｔ）を：
ＣＬｉｎｔ.＝（ｌｎ2 ｘ インキュベーション体積）／（Ｔ １／２ ｘ タンパク質濃度）＝μｌ／分／ｍｇ
として算出した。
【０１０１】
ＴＬＥＳＲに対して活性な化合物についてのスクリーニング
パブロフスリング中に立つ訓練をした両性別の成体ラブラドルレトリーバーを使用した。粘膜から皮膚への食道フィステル形成を行い、そしてすべての実験を行う前にイヌを完全に回復させた。
【０１０２】
運動性測定
要約すると、水を自由に供給して約１７時間絶食した後、マルチルーメンスリーブ／サイドホールアッセンブリー（multi lumen sleeve/ sidehole assembly）(Dentsleeve, Adelaide, South Australia)を、食道フィステル形成術によって導入して、胃の下部食道括約筋（ＬＥＳ）及び食道内圧を測定した。低コンプライアンスの圧力計注入ポンプ(Dentsleeve, Adelaide, South Australia)を用いてアッセンブリーに水を灌流させた。空気を灌流させた管を経口方向に通過させて嚥下を測定し、そしてＬＥＳより３ｃｍ上でアンチモン電極によりｐＨをモニターした。全てのシグナルを増幅し、そしてパソコン上、１０Ｈｚで入手した。
【０１０３】
空腹時の胃／ＬＥＳ第三相運動活動性がないベースライン測定が得られたときに、プラセボ（０．９％ＮａＣｌ）又は試験化合物を、前脚静脈中の静脈内に投与した（i.v.、０．５ｍＬ／ｋｇ）。静脈内投与の１０分後、栄養食（１０％ペプトン、５％Ｄ−グルコース、５％イントラリピド、ｐＨ３．０）をアセンブリー中央のルーメンを通して１００ｍＬ／分で最終体積３０ｍＬ／ｋｇまで胃に注入した。栄養食の注入に続いて、胃内圧力１０±１ｍｍＨｇが得られるまで５００ｍＬ／分の速度で空気注入した。次いで、さらに空気注入するため又は胃から空気のガス抜きをするため、注入ポンプを用いて実験中は圧力をこのレベルで維持した。栄養分の注入開始から空気通気の終わりまでの実験時間は、４５分間であった。手法は、ＴＬＥＳＲを誘発する信頼できる手段として有効であった。
【０１０４】
ＴＬＥＳＲは、＞１ｍｍＨｇ／秒の速度で下部食道括約筋圧力（胃内圧力に関して）における低下として定義される。弛緩が嚥下に誘発されたと分類される場合、弛緩発生の≦２秒前に、咽頭シグナルが生じることはないはずである。ＬＥＳと胃との間の圧力差は、２ｍｍＨｇ未満でなければならず、そして完全弛緩の持続時間は１秒より長くなければならない。
【０１０５】
試料の結果を以下の表に示した：
【表３】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規化合物、治療におけるその使用及び前記の新規化合物を含む医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
グルタミン酸は、哺乳動物の中枢神経系（ＣＮＳ）における主要な興奮性神経伝達物質である。グルタミン酸は、細胞表面の受容体に結合し、これによりそれを活性化することで中枢神経系のニューロンにおいてその効果を生じる。これらの受容体は、受容体タンパク質の構造的特徴、受容体が細胞にシグナルを伝達する手段、及び薬理学的プロファイルに基づいて、２つの主な種類、イオンチャネル型及び代謝調節型のグルタミン酸受容体に分けられている。
【０００３】
代謝調節型グルタミン酸受容体（ｍＧｌｕＲ）は、グルタミン酸の結合後に種々の細胞内セカンドメッセンジャー系を活性化するＧタンパク質共役受容体である。哺乳動物の無損傷のニューロンにおいてｍＧｌｕＲを活性化すると、以下の１つ又はそれ以上の応答が誘発される：ホスホリパーゼＣの活性化；ホスホイノシチド（ＰＩ）の加水分解における増大；細胞内カルシウム放出；ホスホリパーゼＤの活性化；アデニルシクラーゼの活性化又は阻害；環状アデノシン一リン酸（ｃＡＭＰ）の形成における増加又は減少；グアニリルシクラーゼの活性化；環状グアノシン一リン酸（ｃＧＭＰ）の形成における増加；ホスホリパーゼＡ2の活性化；アラキドン酸放出における増加；並びに電位及びリガンド依存性イオンチャネルの活性における増加又は減少。Schoepp et al., Trends Pharmacol. Sci. 14: 13 (1993), Schoepp, Neurochem. Int. 24: 439 (1994), Pin et al., Neuropharmacology 34:1 (1995), Bordi and Ugolini, Prog. Neurobiol. 59:55 (1999)。
【０００４】
分子クローニングでは、ｍＧｌｕＲ１〜ｍＧｌｕＲ８と称する８つの明確なｍＧｌｕＲサブタイプが特定されている。Nakanishi, Neuron 13:1031 (1994), Pin et al., Neuropharmacology 34:1 (1995), Knopfel et al., J. Med. Chem. 38:1417 (1995)。さらなる受容体の多様性は、ある種のｍＧｌｕＲサブタイプの選択的スプライスド・フォーム（alternatively spliced forms）の発現を経て生じる。Pin et al., PNAS 89:10331 (1992), Minakami et al., BBRC 199:1136 (1994), Joly et al., J. Neurosci. 15:3970 (1995)。
【０００５】
代謝調節型グルタミン酸受容体サブタイプは、アミノ酸配列相同性、受容体によって利用されるセカンドメッセンジャー系、及びその薬理学的特性に基づいて、３つのグループ、グループＩ、グループII及びグループIIIのｍＧｌｕＲにさらに分けることができる。グループＩのｍＧｌｕＲには、ｍＧｌｕＲ１、ｍＧｌｕＲ５及びそれらの選択的スプライスド・バリアント（alternatively spliced variants）が含まれる。これらの受容体にアゴニストが結合すると、ホスホリパーゼＣの活性化及びその後の細胞内カルシウムの動員を生じる。
【０００６】
神経学的、精神医学的及び疼痛障害
グループＩ ｍＧｌｕＲの生理学的役割を解明する試みは、この受容体の活性化がニューロンの興奮を誘発することを示唆している。種々の研究は、海馬、大脳皮質、小脳及び視床だけでなく他のＣＮＳ領域においても、グループＩ ｍＧｌｕＲアゴニストがニューロンに適用されるとシナプス後興奮を生じうることを示している。この励起がシナプス後ｍＧｌｕＲの直接活性化のためであることは、証拠により示されているが、また、シナプス前ｍＧｌｕＲの活性化が生じて、神経伝達物質放出が高まることが示唆されている。Baskys, Trends Pharmacol. Sci. 15: 92 (1992), Schoepp, Neurochem. Int. 24: 439 (1994), Pin et al., Neuropharmacology 34:1(1995), Watkins et al., Trends Pharmacol.
Sci. 15: 33 (1994)。
【０００７】
代謝調節型グルタミン酸受容体は、哺乳動物のＣＮＳにおける多くの正常なプロセスに関与している。ｍＧｌｕＲの活性化は、海馬長期増強の誘発及び小脳性の長期的なうつ病に必要であることが示されている。Bashir et al., Nature 363:347 (1993), Bortolotto
et al., Nature 368:740 (1994), Aiba et al., Cell 79:365 (1994), Aiba et al., Cell 79:377 (1994).また、侵害受容及び痛覚脱失におけるｍＧｌｕＲ活性化の役割も示されているMeller et al., Neuroreport 4: 879 (1993), Bordi and Ugolini, Brain Res. 871: 223 (1999)。さらに、ｍＧｌｕＲ活性化は、シナプス伝達、ニューロンの発達、アポトーシスのニューロン死、シナプス可塑性、空間学習、嗅覚の記憶、心臓活動の中枢制御、覚醒、運動調節及び前庭眼球反射の制御を含む種々の他の正常なプロセスにおいて調節的な役割を果たすことが示唆されている。Nakanishi, Neuron 13: 1031 (1994), Pin et al., Neuropharmacology 34:1, Knopfel et al., J. Med. Chem. 38:1417 (1995)。
【０００８】
さらに、グループＩ代謝調節型グルタミン酸受容体及び特にｍＧｌｕＲ５は、種々の病態生理学的プロセス及びＣＮＳに影響を及ぼす障害において役割を果たすことが示唆されている。これらには、脳卒中、頭部外傷、酸素欠乏性及び虚血性損傷、低血糖、てんかん、神経変性障害、例えばアルツハイマー病、並びに疼痛が含まれる。Schoepp et al., Trends Pharmacol. Sci. 14: 13 (1993), Cunningham et al., Life Sci. 54: 135 (1994), Hollman et al., Ann. Rev. Neurosci. 17:31 (1994), Pin et al., Neuropharmacology 34:1 (1995), Knopfel et al., J. Med. Chem. 38:1417 (1995), Spooren et al., Trends Pharmacol. Sci. 22: 331 (2001), Gasparini et al. Curr. Opin. Pharmacol. 2:43 (2002), Neugebauer Pain 98:1 (2002).これらの状態の病理の多くは、過剰のグルタミン酸に誘発されたＣＮＳニューロンの興奮のためであると考えられる。グループＩ ｍＧｌｕＲは、シナプス後機構及び高められたシナプス前グルタミン酸放出を経て、グルタミン酸が介在するニューロンの興奮を高めると考えられるため、それらの活性化がおそらく病理の原因である。従って、グループＩ ｍＧｌｕＲ受容体の選択的アンタゴニストは、具体的には神経保護剤、鎮痛剤又は抗痙攣剤として治療上有益でありうる。
【０００９】
一般に代謝調節型グルタミン酸受容体、そして特にグループＩの神経生理学役割の解明における最近の進歩により、これらの受容体は、急性及び慢性の神経学的及び精神障害並びに慢性及び急性の疼痛障害の治療における将来有望な薬物ターゲットとして確立されている。
【００１０】
胃腸障害
下部食道括約筋（ＬＥＳ）は、断続的に弛緩する傾向がある。その結果、このようなときに一時的に機械的関門（mechanical barrier）が失われて胃からの流動物が食道に移ることがあり、イベントを以下、「逆流」と称する。
【００１１】
胃食道逆流性疾患（ＧＥＲＤ）は、最も一般的な上部消化管疾患である。現在の薬物療法は、胃酸分泌を減少させる又は食道中の酸を中和することを目的としている。逆流の裏にある主な機構は、低緊張の下部食道括約筋によると考えられている。しかしながら、例えばHolloway & Dent (1990) Gastroenterol. Clin. N. Amer. 19, pp. 517-535は、ほとんどの逆流エピソードが、一過性下部食道括約筋弛緩（ＴＬＥＳＲ）、すなわち、嚥下によって誘発されるのではなく弛緩中に生じることを示している。また、ＧＥＲＤの患者では、胃酸分泌は、通常、正常であることがわかっている。
【００１２】
本発明の新規化合物は、一過性下部食道括約筋弛緩（ＴＬＥＳＲ）の阻害、及び従って
胃食道逆流性障害（ＧＥＲＤ）の治療に有用であると考えられる。
【００１３】
ある種の化合物が、ヒトの心再分極において望ましくない効果を生じうることはよく知られており、これは心電図（ＥＣＧ）においてＱＴ間隔の延長として観察される。極端な状況では、この薬剤に誘発されたＱＴ間隔の延長は、トルサード・ド・ポワント(TdP; Vandenberg et al. hERG K+ channels: friend and foe. Trends Pharmacol Sci 2001; 22: 240-246)と称する一種の心不整脈に至り、最終的に心室細動及び突然死に至ることがある。この症候群における第一次イベント（primary event）は、これらの化合物による遅延整流カリウム電流（ＩＫｒ）の速い成分の阻害である。化合物は、ヒト・エーテル・ア・ゴー・ゴー・関連遺伝子（human ether-a-go-go-related gene）（ｈＥＲＧ）をコードする、この電流サブユニットを担持するチャネルタンパク質の開口形成アルファサブユニット（aperture-forming alpha sub-units）に結合する。
【００１４】
ＩＫｒは心臓の活動電位の再分極において重要な役割を果たすため、その阻害は、再分極を遅らせ、そしてこれはＱＴ間隔の延長として現れる。ＱＴ間隔の延長は、それ自体で安全性に対する懸念とはならないが、心血管副作用の危険性を有し、そして少ないパーセンテージの人々においてＴｄＰ及び変性から心室細動に至ることがある。
一般に、本発明の化合物は、ｈＥＲＧをコードするカリウムチャネルに対して低い活性を有する。これに関して、ｈＥＲＧに対する低いインビトロ活性は、低いインビボ活性を示す。
【００１５】
また、薬物の有効性を高めるには薬物が良好な代謝安定性を有することが望ましい。ヒトミクロソームの代謝に対するインビトロ安定性は、代謝に対するインビボ安定性を示す。
【００１６】
ｍＧｌｕＲサブタイプ、特にグループＩ受容体サブタイプ、最も具体的にはｍＧｌｕＲ５について選択性を示す、新しい強力なｍＧｌｕＲアゴニスト及びアンタゴニストは、それらの生理学的及び病態生理学的に重要であるため、必要とされている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１７】
本発明の目的は、代謝調節型グルタミン酸受容体（ｍＧｌｕＲ）、特にｍＧｌｕＲ５受容体で活性を示す化合物を提供することである。特に、本発明の化合物は、主に末梢に作用し、すなわち、血液脳関門を通過する限られた能力を有する。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
本発明は、式Ｉの化合物：
【化１】
（式中、
Ｒ1は、メチル、ハロゲン又はシアノであり；
Ｒ2は、水素又はフルオロであり；
Ｒ3は、水素、フルオロ又はＣ1−Ｃ3アルキルであり；
Ｒ4は、水素又はＣ1−Ｃ3アルキルであり；
Ｘは、
【化２】
であり；
そしてＺは、
【化３】
であり；
Ｒ5は、水素、Ｃ1−Ｃ3アルキル、Ｃ1−Ｃ3ハロアルキル、Ｃ1−Ｃ3アルコキシ；又はＣ1−Ｃ3ハロアルコキシであり；
Ｒ6は、水素、Ｃ1−Ｃ3アルキル、Ｃ1−Ｃ3ハロアルキル、又はＣ1−Ｃ3ハロアルコキシであり；
Ｒ7は、水素、フルオロ又はＣ1−Ｃ3アルキルである）
並びにその医薬上許容しうる塩、水和物、アイソフォーム、互変異性体及び／又は鏡像異性体に関する。
【００１９】
一実施態様においてＲ1は、ハロゲン又はシアノである。
さらなる実施態様において、Ｒ1は、クロロである。さらなる実施態様において、Ｒ1は、シアノである。
さらなる実施態様において、Ｒ2は、水素である。
さらなる実施態様において、Ｒ3は、水素又はフルオロである。
さらなる実施態様において、Ｒ4は、水素又はメチルである。
【００２０】
さらなる実施態様において、Ｒ5は、水素、Ｃ1−Ｃ2アルキル又はＣ1−Ｃ2アルコキシである。
さらなる実施態様において、Ｒ6は、水素、Ｃ1−Ｃ2アルキル又はＣ1−Ｃ2アルコキシである。
さらなる実施態様において、Ｒ7は、Ｃ1−Ｃ2アルキル又はＣ1−Ｃ2アルコキシである。
【００２１】
別の実施態様は、活性成分として治療上有効量の式Ｉの化合物を１つ又はそれ以上の医薬上許容しうる賦形剤、添加剤及び／又は不活性担体と共に含む医薬組成物である。
【００２２】
以下、更に詳細に記載された別の実施態様は、治療において、ｍＧｌｕＲ５が介在する障害の治療において、ｍＧｌｕＲ５が介在する障害を治療する薬剤の製造において使用するための式Ｉの化合物に関する。
【００２３】
さらに他の実施態様は、治療上有効量の式Ｉの化合物を哺乳動物に投与することを含む、ｍＧｌｕＲ５が介在する障害の治療方法に関する。
【００２４】
別の実施態様において、前記受容体を含む細胞を有効量の式Ｉの化合物で治療すること
を含む、ｍＧｌｕＲ５受容体の活性化を阻害する方法が提供される。
【００２５】
本発明の化合物は、治療、特に神経学的、精神医学的、疼痛及び胃腸障害の治療に有用である。
また、本発明のある種の化合物は、非溶媒和形態と同様に溶媒和形態、例えば水和形態で存在することができることは、当業者に理解される。本発明は、式Ｉの化合物の全てのこのような溶媒和形態を包含することが更に理解される。
【００２６】
また、式Ｉの化合物の塩は、本発明の範囲内にある。一般に、本発明の化合物の医薬上許容しうる塩は、当分野でよく知られている標準方法を使用して、例えば、十分に塩基性の化合物、例えばアルキルアミンを適切な酸、例えばＨＣｌ、酢酸又はメタンスルホン酸と反応させて生理学上許容しうるアニオンとの塩を生じることによって得られる。また、カルボン酸又はフェノールのような適切な酸性プロトンを有する本発明の化合物を、水性媒体中で１当量のアルカリ金属若しくはアルカリ土類金属水酸化物若しくはアルコキシド（例えばエトキシド又はメトキシド）、又は適切に塩基性の有機アミン（例えばコリン又はメグルミン）で処理し、続いて慣用の精製技術によって対応するアルカリ金属（例えばナトリウム、カリウム又はリチウム）又はアルカリ土類金属（例えばカルシウム）塩を製造することもできる。さらに、第四級アンモニウム塩は、アルキル化剤を、例えば中性アミンに添加することによって製造することができる。
【００２７】
本発明の一実施態様において、式Ｉの化合物は、その医薬上許容しうる塩又は溶媒和物、特に酸付加塩、例えば塩酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩、酢酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、酒石酸、クエン酸塩、メタンスルホン酸塩又はｐ−-トルエンスルホン酸塩に変換することができる。
【００２８】
式Ｉの定義に使用される一般的な用語は、以下の意味を有する：
本明細書に使用されるハロゲンは、塩素、フッ素、臭素又はヨウ素から選ばれる。
Ｃ1−Ｃ3アルキルは、１〜３個の炭素原子を有する直鎖又は分枝鎖アルキル基、例えばメチル、エチル、ｎ−プロピル又はイソプロピルである。
Ｃ1−Ｃ3アルコキシは、１〜３個の炭素原子を有するアルコキシ基、例えばメトキシ、エトキシ、イソプロポキシ又はｎ−プロポキシである。
Ｃ1−Ｃ3ハロアルコキシは、少なくとも１個の炭素原子がハロゲン原子によって置換された１〜３個の炭素原子を有するアルコキシ基、例えばメトキシ、エトキシ又はｎ−プロポキシである。
【００２９】
全ての化学名は、ISIS drawを通してアクセスしたAutoNomとして知られているソフトウェアを使用して作成した。
上の式Ｉにおいて、Ｘは、２つの可能な配向性のいずれかで存在することができる。
【００３０】
医薬組成物
本発明の化合物は、式Ｉの化合物、又はその医薬上許容しうる塩若しくは溶媒和物を医薬上許容しうる担体又は添加剤と共に含む慣用の医薬組成物に処方することができる。医薬上許容しうる担体は、固体又は液体のいずれかであることができる。固形製剤には、散剤、錠剤、分散性顆粒剤、カプセル剤、カシェ剤及び坐剤が含まれるが、これらに制限されるわけではない。
【００３１】
固形担体は、賦形剤、着香剤、可溶化剤、滑沢剤、懸濁化剤、結合剤又は錠剤崩壊剤としても作用しうる１つ又はそれ以上の物質であることができる。固形担体は、封入材料であることもできる。
散剤では、担体は微粉砕された固形物であり、これは微粉砕された本発明の化合物又は
活性成分との混合物中にある。錠剤では、活性成分を、適切な比率で必要な結合性を有する担体と混合し、そして所望の形状及びサイズに成形する。
【００３２】
坐剤組成物を製造するには、低融点ワックス、例えば脂肪酸グリセリドとカカオ脂との混合物を最初に融解し、そして例えば撹拌によって活性成分をその中に分散させる。次いで、溶融した均一な混合物を、都合のよいサイズの金型に注ぎ、そして冷却して凝固させる。
【００３３】
適切な担体には、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、ラクトース、砂糖、ペクチン、デキストリン、デンプン、トラガント、メチルセルロース、カルボキシルメチルセルロースナトリウム、低融点ワックス、カカオ脂、などが含まれるが、これらに制限されるわけではない。
【００３４】
また、組成物なる用語は、カプセルを供給する担体として封入材料を用いた活性成分の製剤を含むことを意図し、その中で、活性成分は、（他の担体と共に又はなしで）担体によって囲まれており、そのため担体は活性成分と会合している。同様に、カシェ剤が含まれる。
【００３５】
錠剤、散剤、カシェ剤及びカプセル剤は、経口投与に適した固形剤形として使用することができる。
【００３６】
液状組成物には、液剤、懸濁剤及び乳剤が含まれる。例えば活性化合物の滅菌水又は水プロピレングリコール溶液は、非経口投与に適した液体製剤であることができる。液体組成物は、ポリエチレングリコール水溶液中に溶液で処方することもできる。
【００３７】
経口投与のための水性液剤は、水中に活性成分を溶解し、そして所望により、適切な着色剤、着香剤、安定剤及び増粘剤を加えることによって製造することができる。経口使用のための水性懸濁剤は、微粉砕された活性成分を粘稠材料、例えば天然合成ゴム、樹脂、メチルセルロース、カルボキシルメチルセルロースナトリウム、及び医薬製剤分野で知られている他の懸濁化剤と共に水中で分散することによって製造することができる。経口使用を意図する典型的な組成物は、１つ又はそれ以上の着色剤、甘味剤、着香剤及び／又は保存剤を含むことができる。
【００３８】
投薬様式に応じて、医薬組成物は、本発明の化合物約０．０５％ｗ（質量％）〜約９９％ｗを含む、又は約０．１０％ｗ〜５０％ｗを含み、全ての質量パーセントは、組成物の全質量に基づく。
本発明を実施するための治療上有効量は、個々の患者の年齢、体重及び反応を含む、知られている基準を使用して当業者が決定することができ、そして治療又は予防する疾患の枠の中で解釈される。
【００３９】
医学的な使用
本発明の化合物は、ｍＧｌｕＲ５の興奮性活性化と関連する状態の治療及びｍＧｌｕＲ５の興奮性活性化によって生じるニューロン損傷を阻害するのに有用である。化合物は、ヒトを含む哺乳動物においてｍＧｌｕＲ５の阻害作用をもたらすために使用することができる。
【００４０】
ｍＧｌｕＲ５を含むグループＩのｍＧｌｕＲ受容体は、中枢神経系及び末梢神経系並びに他の組織において高度に発現される。従って、本発明の化合物は、ｍＧｌｕＲ５が介在する障害、例えば急性及び慢性の神経学的及び精神医学的障害、胃腸障害並びに慢性及び急性の疼痛障害の治療に十分に適していることが期待される。
【００４１】
本発明は、治療に使用するための上に定義された式Ｉの化合物に関する。
本発明は、ｍＧｌｕＲ５が介在する障害の治療に使用するための上に定義された式Ｉの化合物に関する。
本発明は、アルツハイマー病老年認知症、ＡＩＤＳ−誘発性認知症、パーキンソン病、筋萎縮側索硬化症、ハンチントン舞踏病、片頭痛、てんかん、統合失調症、うつ病、不安、急性不安、眼科的障害、例えば網膜症、糖尿病性網膜症、緑内障、神経性聴覚障害（auditory neuropathic disorders）、例えば耳鳴、化学療法誘発性神経障害、ヘルペス後神経痛及び三叉神経痛、耐性、依存性、脆弱Ｘ、自閉症、精神遅滞、統合失調症及びダウン症候群の治療に使用するための上に定義された式Ｉの化合物に関する。
【００４２】
本発明は、片頭痛、炎症性疼痛、神経因性疼痛障害、例えば糖尿病性神経障害、関節炎及びリウマチ様疾患、腰痛、術後痛並びに癌、アンギナ、腎又は胆石仙痛、月経、片頭痛及び痛風を含む種々の状態に関連する疼痛の治療に使用するための上に定義された式Ｉの化合物に関する。
本発明は、脳卒中、頭部外傷、酸素欠乏性及び虚血性損傷、低血糖、心臓血管疾患並びにてんかんの治療に使用するための上に定義された式Ｉの化合物に関する。
【００４３】
また、本発明は、ｍＧｌｕＲグループＩ受容体が介在する障害及び上記のいずれかの障害を治療する薬剤の製造における上に定義された式Ｉの化合物の使用に関する。
【００４４】
本発明の一実施態様は、胃腸障害の治療における式Ｉの化合物の使用に関する。
本発明の別の実施態様は、一過性下部食道括約筋弛緩の阻害、ＧＥＲＤの治療、胃食道逆流の予防、吐出の治療、喘息の治療、喉頭炎の治療、肺疾患の治療、成長障害の管理、過敏性腸疾患（ＩＢＳ）の治療及び機能性消化不良（ＦＤ）を治療する薬剤を製造するための式Ｉの化合物の使用に関する。
【００４５】
本発明の別の実施態様は、過活動膀胱又は尿失禁を治療するための式Ｉの化合物の使用に関する。
【００４６】
用語「ＴＬＥＳＲ」、一過性下部食道括約筋弛緩は、本明細書において、Mittal, R.K., Holloway, R.H., Penagini, R., Blackshaw, L.A., Dent, J., 1995; Transient lower esophageal sphincter relaxation. Gastroenterology 109, pp. 601-610に従って定義される。
用語「逆流」は、本明細書において、胃からの流動物が食道に入ることができるものとして定義され、このようなときに機械的関門が一時的に失われている。
【００４７】
用語「ＧＥＲＤ」、胃食道逆流性疾患は、本明細書においてvan Heerwarden, M.A., Smout A.J.P.M., 2000; Diagnosis of reflux disease. Bailliere's Clin. Gastroenterol. 14, pp. 759-774に従って定義される。
【００４８】
上の式Ｉの化合物は、肥満又は過体重（例えば体重減少の促進及び体重減少の維持）、体重増加の予防又は逆転（例えば、リバウンド、投薬によって誘発された又は禁煙後の）、食欲及び／又は満腹の調整のため、摂食障害（例えば過食症、食欲不振、過食症及び強迫）及び渇望（薬物、タバコ、アルコール、すべての食欲をそそる主要栄養素又は非必須の食料品）の治療又は予防に有用である。
【００４９】
また、本発明は、上に定義された式Ｉの化合物の有効量を患者に投与することを含む、ｍＧｌｕＲ５が介在する障害及び上記のいずれかの障害にかかっている又は危険にさらされている患者における、ｍＧｌｕＲ５が介在する障害及び上記のいずれかの障害の治療方
法を提供する。
特定の障害の治療的な又は予防的な治療に必要な用量は、治療されるホスト、投与経路及び治療する疾病のひどさに応じて必然的に変化する。
【００５０】
本明細書に関して、用語「治療（therapy）」及び「治療（treatment）」は、特に逆の表示がなければ、予防（prevention）又は予防（prophylaxis）を含む。従って、用語「治療的な（therapieutic）」及び「治療的に（therapeutically）」は、それに応じて解釈すべきである。
本明細書において、特に明記しない限り、用語「アンタゴニスト」及び「阻害剤」は、いずれかの手段によって、リガンドによる応答を生じる伝達経路を部分的に又は完全に阻止する化合物を意味するものとする。
【００５１】
用語「障害」は、特に明記しない限り、代謝調節型グルタミン酸受容体活性に関連するすべての状態及び疾患を意味する。
【００５２】
本発明の一実施態様は、式Ｉの化合物及び酸分泌阻害剤の組み合わせである。本発明の「組み合わせ」は、「固定の組み合わせ（fix combination）」又は「パーツの組み合わせキット（kit of parts combination）」として存在することができる。「固定の組み合わせ」は、(ｉ)少なくとも１つの酸分泌阻害剤；及び(ii)少なくとも１つの式Ｉの化合物が１つの単位中に存在する組み合わせとして定義される。「パーツの組み合わせキット」は、(ｉ)少なくとも１つの酸分泌阻害剤；及び(ii)少なくとも１つの式Ｉの化合物が複数の単位中に存在する組み合わせとして定義される。「パーツの組み合わせキット」の成分は、同時に、順次に、又は別々に投与することができる。本発明に従って使用される酸分泌阻害剤対式Ｉの化合物のモル比は、１：１００から１００：１まで、例えば１：５０から５０：１まで又は１：２０から２０：１まで、又は１：１０から１０：１までの範囲内にある。２つの薬物は、同じ比率で別々に投与することができる。酸分泌阻害剤の例は、Ｈ２遮断剤、例えばシメチジン、ラニチジン；の他にプロトンポンプ阻害剤、例えばピリジニルメチルスルフィニルベンゾイミダゾール、例えばオメプラゾール、エソメプラゾール、ランソプラゾール、パントプラゾール、ラベプラゾール又は関連物質、例えばレミノプラゾールである。
【００５３】
非医学的な使用
式Ｉの化合物と同様にこのような化合物の塩及び水和物は、治療医薬品におけるそれらの使用に加えて、新しい治療剤の調査の一部として、ネコ、イヌ、ウサギ、サル、ラット及びマウスのような実験動物においてｍＧｌｕＲに関連する活性の阻害剤の効果を評価するためのインビトロ及びインビボ試験系の開発及び標準化における薬理学的手段として有用である。
【００５４】
製造方法
本発明の別の態様は、式Ｉの化合物又はその塩若しくは水和物の製造方法を提供する。
このような方法の以下の説明を通して、必要に応じて、有機合成分野の当業者によって容易に理解されるやり方で、種々の反応体及び中間体に適切な保護基が加えられ、続いてそこから除去されることを理解すべきである。このような保護基を使用するための慣用の手法及び適切な保護基の例は、例えば“Protective Groups in Organic Synthesis”, T.W. Green, P.G.M. Wuts, Wiley-Interscience, New York, (1999)に記載されている。このような方法の以下の説明を通して、クロスカップリングは、有機合成の当業者によって容易に理解されるやり方で実施できることを理解すべきである。クロスカップリングの慣用の方法は、例えば“Organometallics in Synthesis”, M. Schlosser (Ed.), John Wiley and Sons (2001)に記載されている。
【００５５】
略語
atm 気圧
aq. 水性
ＢＩＮＡＰ ２,２'−ビス（ジフェニルホスフィノ）−１,１'−ビナフチル
Ｂｏｃ tert-ブトキシカルボニル
ＣＤＩ Ｎ,Ｎ'−カルボニルジイミダゾール
ＤＣＣ Ｎ,Ｎ−ジシクロヘキシルカルボジイミド
ＤＣＭ ジクロロメタン
ＤＢＵ ジアザ（１,３）ビシクロ[５.４.０]ウンデカン
ＤＥＡ Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン
ＤＩＢＡＬ−Ｈ ジイソブチルアルミニウムヒドリド
ＤＩＣ Ｎ,Ｎ'−ジイソプロピルカルボジイミド
ＤＭＡＰ Ｎ,Ｎ−ジメチル−４−アミノピリジン
ＤＭＦ ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ ジメチルスルホキシド
ＤＰＰＦ ジフェニルホスフィノフェロセン
ＥＡ 酢酸エチル
ＥＤＣＩ Ｎ−[３−（ジメチルアミノ）プロピル]−Ｎ'−エチルカルボジイミド塩酸塩
ＥＤＣ １−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド
Ｅｔ2Ｏ ジエチルエーテル
ＥｔＯＡｃ 酢酸エチル
ＥｔＯＨ エタノール
ＥｔＩ ヨードエタン
エチル エチル
Ｆｍｏｃ ９−フルオレニルメチルオキシカルボニル
ｈ 時間
ＨｅｔＡｒ ヘテロアリール
ＨＯＢｔ Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＨＢＴＵ Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ,Ｎ,Ｎ',Ｎ'−テトラメチ
ルウロニウムヘキサフルオロホスフェート
ＨＰＬＣ 高速液体クロマトグラフィ
ＬＡＨ 水素化アルミニウムリチウム
ＬＣＭＳ ＨＰＬＣ質量スペクトル
ＭＣＰＢＡ ｍ−クロロ安息香酸
ＭｅＣＮ アセトニトリル
ＭｅＯＨ メタノール
min 分
ＭｅＩ ヨードメタン
ＭｅＭｇＣｌ メチルマグネシウムクロリド
Ｍｅ メチル
ｎ-ＢｕＬｉ １−ブチルリチウム
ＮａＯＡｃ 酢酸ナトリウム
ＮＭＲ 核磁気共鳴
ＮＭＰ Ｎ−メチルピロリジノン
ｎＢｕＬｉ １−ブチルリチウム
ｏ.ｎ. 一夜
ＲＴ、ｒｔ、r.t. 室温
ＴＥＡ トリエチルアミン
ＴＨＦ テトラヒドロフラン
ｎＢｕ 直鎖ブチル
ＯＭ メシレート又はメタンスルホナートエステル
ＯＴ トシレート、トルエンスルホナート又は４−メチルベンゼンスルホナートエステル
ＰＣＣ クロロクロム酸ピリジニウム
ＰＰＴＳ ピリジニウムｐ−トルエンスルホナート
ＴＢＡＦ テトラブチルアンモニウムフルオリド
ｐＴｓＯＨ ｐ−トルエンスルホン酸
ＳＰＥ 固相抽出（通常、ミニクロマトグラフィのためのシリカゲルを含む）
sat. 飽和
【００５６】
式Ｉの化合物のイソオキサゾール前駆体の形成
【化４】
【００５７】
式Ｉの化合物は、トルエンのような溶媒中、適切な温度（０℃〜１００℃）で適切な塩基、例えば炭酸水素ナトリウム又はトリエチルアミンを用いて塩基性条件下で式II及びIIIの化合物間で１,３−双極子環付加することによって製造することができる。タイプIIの化合物の合成は、文献、例えばKim, Jae Nyoung; Ryu, Eung K; J. Org. Chem. (1992), 57, 6649-50中に以前に記載されている。また、タイプIIIのアセチレンを用いた１,３−双極子環付加は、タイプIVの置換されたニトロメタンを用いて高められた温度（５０〜１００℃）でトリエチルアミンのような塩基の存在下、ＰｈＮＣＯのような求電子試薬による活性化を経て実施することができる。Li, C-S.; Lacasse, E.; Tetrahedron Lett. (2002) 43; 3565 - 3568.タイプIIIのいくつかの化合物は、商業的に入手可能であるか、又は当業者に知られたような標準的な方法によって合成することができる。
【００５８】
別法として、水素化ナトリウム又はカリウムｔｅｒｔ−ブトキシドのような塩基を使用する塩基性条件を用いてメチルケトンVI及びエステルのクライゼン縮合から入手可能な式Ｉの化合物（Ｘは、イソオキサゾールである）は、上昇した温度（６０〜１２０℃）で、例えば塩酸塩の形態でヒドロキシルアミンを用いて、縮合及びその後の環化を経て式VIIIの化合物を得ることができる。
【化５】
【００５９】
両方の方法について、その後の官能基変換が必要でありうることは理解される。エステル基の場合、これらの変換には、以下の３つの手法のいずれかが含まれうるが、制限されるわけではない：ａ)ＴＨＦのような溶媒中でＬＡＨのような適切な還元剤を用いて完全に還元する。ｂ)ＤＩＢＡＬのような適切な選択的還元剤を用いて部分還元した後、アルキル金属試薬を添加する。ｃ)トルエン又はＴＨＦのような溶媒中でアルキルマグネシウムハライドのようなアルキル金属試薬を添加した後、例えばメタノール中の水素化ホウ素ナトリウムで還元する。
【００６０】
製造を以下に示す非制限的な合成経路による化合物及び対応する中間体は、式Iの化合物のさらなる製造に有用であるか、又は同様でありうる。他の出発物質は、商業的に入手可能であるか、又は文献に記載された方法により製造することができる。
【００６１】
アミノ[１,２,４]トリアゾール中間体の製造
【化６】
【００６２】
スキーム３に関して、アミノ[１,２,４]トリアゾールXIIIは、適切な溶媒、例えばＴＨＦ、ピリジン又はＤＭＦ中、−２０〜１００℃で、カルボノヒドラゾン酸ジアミドXIを、脱離基（ＬＧ）を担持する適当なアシル化剤で処理することによって得られる。反応により、まず開いた中間体XIIとなり、これは自発的にトリアゾール環を形成するか、又は例えばピリジン又はＤＭＦ中、５０〜２００℃で加熱することによってそのように実施する
ことができる。脱離基（ＬＧ）は、例えば対応する酸（ＬＧは、ＯＨである）を、ここで下に記載したような標準活性化試薬によりその場で処理することによって生成された、クロロ又は他のいずれかの適切な脱離基であることができる。カルボノヒドラゾン酸ジアミドXIは、イソチオ尿素IXから生成することができ、その際、Ｓ−アルキル（例えばスキーム４に示したＳ−Ｍｅ）部分は、ピリジン、メタノール、エタノール、２−プロパノール、ＴＨＦ、ＤＭＳＯなどのような溶媒中、−２０〜１８０℃で、ヒドラジンで処理すると脱離基として作用する。また、開いた中間体XIIは、ヒドラジンとの反応について記載された同じ条件下でイソチオ尿素をアシルヒドラジンで処理することによって直接生成することができる。イソチオ尿素は、アセトン、ＥｔＯＨ、ＴＨＦ、ＤＣＭなど中、−１００〜１００℃で、例えばＭｅＩ又はＥｔＩを用いて対応するチオ尿素をＳ−アルキル化することによって得られる。
【００６３】
式VIIIの化合物の官能基変換
【化７】
【００６４】
スキーム４に関して、アルコールXVIは、例えば標準的な方法によって、例えばトリフェニルホスフィンをヨウ素、Ｎ−ブロモスクシンイミド若しくはＮ−クロロスクシンイミドのいずれかと組み合わせて使用することによって、又は別法としてトリブロモホスフィン若しくは塩化チオニルで処理することによって、対応するハライドXVII（例えばＬＧ＝Ｃｌ、Ｂｒなど）に転換することができる。同じようにアルコールXVIは、非求核性塩基の存在下でアルコールと共に適当なスルホニルハライド又はスルホニル無水物を使用して対応するスルホネートを得ることによって他の脱離基、例えばメシレート又はトシレートに変換することができる。クロリド又はスルホネートは、臭化物塩、例えばＬｉＢｒ又はヨウ化物塩で処理することによって対応する臭化物又はヨウ化物に転換することができる。アルコールXVIを得るためのさらなる標準的方法には、一般的な還元剤、ボラン、リチウムボロヒドリド、リチウムアルミニウムヒドリド、又は例えばルテニウム若しくはイリジウムのような遷移金属触媒、若しくは別法として活性炭上のパラジウムの存在下での水素を用いて、XIV及びXV中のような対応するカルボニルを含む基（例えばメチル又はエチルエステル、アルデヒド（Ｒ4はＨである）又はケトン（Ｒ4はＨではない）を還元することが含まれる。
【００６５】
式Ｉの化合物の一般的な合成
続いて記載する最終化合物の非限定的な製造方法を、図面によって説明及び例示し、その際、中間体の一般的な基又は他の構成要素は、式Ｉのものに対応する。式Ｉのものとは
別のいずれかの一般的な基又は構成要素を含む中間体を例示された反応に用いることができることは理解すべきであるが、但し、この基又は要素は反応を妨げず、そしてそれは、当業者に知られている後の段階で式Ｉの対応する基又は要素に化学的に転換することができる。
【００６６】
求核性トリアゾール窒素への結合による
【化８】
【００６７】
スキーム５に関して、式Ｉの化合物は、脱離基（ＬＧ）の求核置換による結合形成によって製造することができ、その際、トリアゾール環外ＮＨ部分は、求核試薬として作用する。トリアゾールのそのアニオン形態の窒素原子は、対応するプロトン化された中性原子を−１００〜１５０℃の温度で、適切な溶媒中の塩基、例えばＴＨＦ、ジエチルエーテル若しくはトルエン中のＬＤＡ若しくはｎＢｕＬｉ、又は例えばＤＭＦ中のＮａＨ若しくはＮａＯｔＢｕ、又はアセトニトリル若しくはケトン、例えば２−ブタノン中のＫ2ＣＯ3で処理することによって生成される。ＬＧは、好ましくはクロロ、ブロモ、ＯＭ及びＯＴである。また、求核反応は、脱離基ＬＧが立体中心に結合した鏡像体的に純粋な又は富んだ出発物質を使用することによって立体選択的なやり方で行うことができる。場合により、触媒量又は化学量論量のアルカリ金属ヨウ化物、例えばＬｉＩは、反応中に存在してその場で脱離基をヨードに置き換えることで反応を促進することができる。
ここで、本発明の実施態様を、以下の非限定的な実施例によって説明する。
【００６８】
一般的な方法
全ての出発物質は、商業的に入手可能であるか又は以前に文献に記載されている。1Ｈ及び13ＣＮＭＲスペクトルは、対照基準としてＴＭＳ又は残留溶媒シグナルを用いて３００ＭＨｚでBruker 300、４００ＭＨｚでBruker, DPX400又は１００ＭＨｚでVarian +400分光計のうちの１つで記録した。ＮＭＲ測定は、デルタスケール（δ）上で行った。質量スペクトルは、QTOF Global Micromass又はAlliance 2795（ＬＣ）及びＺＱ一体型四重極質量分析器からなるWaters ＬＣＭＳで記録した。質量分析器は、陽又は陰イオンモード運転するエレクトロスプレーイオン源を備えていた。イオンスプレー電圧は、±３ｋＶであり、そして質量分析器は走査時間０．８秒で、ｍ／ｚ１００ −７００で走査した。カラム：X-Terra MS, Waters、C8、２．１×５０ｍｍ、３．５μｍ、そしてカラム温度は４０℃に設定した。直線勾配を適用し、流速０．３ｍＬ／分、４分で０％〜１００％アセトニトリルで運転した。移動相：アセトニトリル／MilliQ Water中５％アセトニトリル中１０ｍＭ酢酸アンモニウム。分取クロマトグラフィは、ダイオードアレー検出器付きのGilson自動分取ＨＰＬＣで運転した。カラム：XTerra MS C8、１９×３００ｍｍ、７μｍ。一般に、アセトニトリル／MilliQ Water中５％のアセトニトリル中０．１Ｍ酢酸アンモニウムの勾配を、１３分で２０％〜６０％アセトニトリルで運転した。流速：２０ｍＬ／分。ＭＳ-triggered prep-ＬＣは、ダイオードアレー検出器及びＺＱ質量検出器を有するWaters自動精製ＬＣ―ＭＳ系であった。カラム：XTerra MS C8、１９×１００ｍｍ、５μｍ。アセトニトリル／MilliQ Water中５％アセトニトリル中０．１Ｍ酢酸アンモニウムの勾配を、１０分で０％〜１００％アセトニトリルで運転した。流速：２０ｍＬ／分。いくつかの場合、クロマトロンによる精製は、TC Research 7924Tクロマトロンを用いて、２ｍｍのコーティング層を有する回転しているシリカゲル／セッコウ（Merck、硫酸カルシウム入り60 PF-254）コーティングガラス板上で実施した。別法として、Chem Elut Extraction Column (Varian, cat #1219-8002)及びMega BE-SI (Bond Elut Silica) SPE Columns (Varian, cat # 12256018; 12256026; 12256034)を生成物の精製の際に用いた。マイクロ波加熱は、２４５０ＭＨｚで連続放射線照射をもたらすSmith Synthesizerシングルモードのマイクロ波空洞中で実施した(Personal Chemistry AB, Uppsala, Sweden)。
【実施例】
【００６９】
ここで、本発明を以下の非限定的な実施例によって説明する。
実施例１：４−（３−クロロ−フェニル）−２,４−ジオキソ−酪酸エチルエステル
【化９】
水素化ナトリウム（６０％油分散液，１．２４ｇ，３１．１ｍｍｏｌ）を、０℃でＤＭＦ（３２ｍＬ）中の３−クロロアセトフェノン（４．０ｇ，２５．９ｍｍｏｌ）及びシュウ酸ジエチル（４．５４ｇ，３１．１ｍｍｏｌ）の溶液に少しずつ加えた。混合物を室温で１時間撹拌し、それから８０℃で半時間加熱した。さました後、混合物を３Ｍ ＨＣｌで処理し、それから酢酸エチルで希釈した。有機層を水及び飽和ブラインで３回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、そして濃縮した。次いで、生成した残留物を、ヘキサン中０〜１０％酢酸エチルを用いるシリカ上のフラッシュカラムクロマトグラフィによって精製して表題化合物を得た（４．４３ｇ，６７％，黄色固形物）。
1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ15.12 (br s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.88 (d, 1H), 7.58 (d,
1H), 7.47 (t, 1H), 7.05 (s, 1H), 4.39 (m, 2H), 1.41 (m, 3H).
【００７０】
実施例２：５−（３−クロロ−フェニル）−イソオキサゾール−３−カルボン酸エチルエステル及び５−（３−クロロ−フェニル）−イソオキサゾール−３−カルボン酸メチルエステル
【化１０】
メタノール（６０ｍＬ）中の実施例１の表題化合物（３．００ｇ，１１．８ｍｍｏｌ）及びヒドロキシルアミン塩酸塩（２．４６ｇ，３５．４ｍｍｏｌ）の溶液を８０℃で４時間加熱した。冷却後、混合物を濾過し、そして冷メタノールで洗浄して白色固形物として表題化合物（収率７１％）２．０ｇを得た。メチル及びエチルエステル（主にメチル）の両方の混合物。
1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ7.82 (s, 1H), 7.72 (m, 1H), 7.47 (m, 2H), 4.03 (s, 3H).
【００７１】
実施例３：[５−（３−クロロ−フェニル）−イソオキサゾール−３−イル]−メタノール
【化１１】
水素化アルミニウムリチウム（３２０ｍｇ，８．４ｍｍｏｌ）を室温でＴＨＦ（１００ｍＬ）中の実施例２の表題化合物（２．０ｇ，８．４ｍｍｏｌ）の溶液にゆっくりと加えた。１時間後、反応混合物を水でクエンチし、それから酢酸エチルで抽出した。有機層を水及び飽和ブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、そして濃縮した。次いで生成した残留物を、ヘキサン中１５〜４０％酢酸エチルを用いるフラッシュカラムクロマトグラフィによって精製して黄色固形物として表題化合物（収率７５％）１．３２ｇを得た。
1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ7.78 (s, 1H), 7.68 (m, 1H), 7.43 (m, 2H), 6.63 (s, 1H), 4.84 (d, 2H), 2.23 (t, 1H).
【００７２】
実施例４：メタンスルホン酸５−（３−クロロ−フェニル）−イソオキサゾール−３−イルメチルエステル
【化１２】
トリエチルアミン（９６５ｍｇ，９．５ｍｍｏｌ）及びメタンスルホニルクロリド（８２０ｍｇ，７．２ｍｍｏｌ）を、０℃でジクロロメタン（５０ｍＬ）中の実施例３の表題化合物（１．０ｇ，４．８ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。１時間後、反応混合物を、冷飽和炭酸水素ナトリウムでクエンチし、それから有機層を飽和ブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、そして濃縮した。薄茶色の固形物として表題化合物１．４ｇ（収率１００％）を得た。
1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ7.80 (s, 1H), 7.70 (m, 1H), 7.45 (m, 2H), 6.73 (s, 1H), 5.37 (s, 2H), 3.16 (s, 3H).
【００７３】
実施例５：１−[５−（３−クロロ−フェニル）−イソオキサゾール−３−イル]−エタノン
【化１３】
メチルヨウ化マグネシウム（ジエチルエーテル中３Ｍ）（０．７９ｍＬ，２．３８ｍｍｏｌ）、トルエン（１ｍＬ）、テトラヒドロフラン（０．３９ｍＬ，４．７７ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（１ｍＬ，７．１５ｍｍｏｌ）。溶液を０℃まで冷却し、そしてそれにトルエン（５ｍＬ）中の実施例２の表題化合物（３００ｍｇ，１．１９ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。生成した混合物を０℃で５時間撹拌したままにした。反応混合物を、１Ｍ塩酸（水性，６．５ｍＬ，６．５ｍｍｏｌ）でクエンチし、トルエン（３５ｍＬ）で希釈し、水（５０ｍＬ）、飽和炭酸水素ナトリウム（水性，３０ｍＬ）、水（５０ｍＬ）及びブライン（３０ｍＬ）で、順に洗浄した。有機相を真空で濃縮した。単離した残留物をメ
タノール（８ｍＬ）及び２０％水酸化カリウム（水性，１ｍＬ）に溶解した。混合物を３０分間４５℃で撹拌した。ここで、混合物を真空下で濃縮した。単離した残留物をトルエン（６０ｍＬ）に溶解し、水（５０ｍＬ）、飽和炭酸水素ナトリウム（水性，５０ｍＬ）及び水（５０ｍＬ）で順に洗浄した。有機相を真空中で濃縮し、粗残留物を、ヘキサン中２％酢酸エチルを用いてシリカゲル上で精製して白色固形物として表題化合物を単離した（１５６ｍｇ，収率６０％）。
1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ7.77 (m, 1H), 7.66 (m, 1H), 7.42 (m, 2H), 6.90 (s, 1H), 2.69 (s, 3H).
【００７４】
実施例６：メタンスルホン酸１−[５−（３−クロロ−フェニル）−イソオキサゾール−３−イル]−エチルエステル
【化１４】
工程Ａ，１−[５−（３−クロロ−フェニル）−イソオキサゾール−３−イル]−エタノール
撹拌棒を備えたねじ蓋バイアル中に、実施例５の表題化合物（１００ｍｇ，０．４５ｍｍｏｌ）、水素化ホウ素ナトリウム（３４ｍｇ，０．９０ｍｍｏｌ）及びメタノール（３ｍＬ）を加えた。生成した混合物を室温で３時間撹拌したままにした。反応を水（３０ｍＬ）及びブライン（３０ｍＬ）でクエンチし、ジクロロメタン（３０ｍＬ３回）で抽出した。合わせた有機相を乾燥（硫酸ナトリウム）し、濾過し、そして真空で濃縮して白色固形物として副題化合物を単離した（１１０ｍｇ）。
1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ7.69 (m, 1H), 7.59 (m, 1H), 7.37 (m, 2H), 6.59 (s, 1H), 5.07 (q, 1H), 3.45 (bs, 1H), 1.58 (d, 3H).
【００７５】
工程Ｂ
撹拌棒を備えたねじ蓋バイアル中に、工程６Ａの副題化合物（１１０ｍｇ，０．４９ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（３ｍＬ）及びトリエチルアミン（０．３４ｍＬ，２．４６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を０℃に冷却し、そしてそれにメタンスルホニルクロリド（０．０８０ｍＬ，０．９８ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で３０分撹拌したままにした。反応を飽和炭酸水素ナトリウム（水性，４０ｍＬ）でクエンチし、そしてジクロロメタン（３０ｍＬ３回）で抽出した。合わせた有機相をブライン（４０ｍＬ）で洗浄し、乾燥（硫酸ナトリウム）し、濾過し、そして真空で濃縮して褐色の油として副題化合物を単離し、それを次の工程に直接用いた。
【００７６】
実施例７：３−[３−（１−ヒドロキシエチル）イソオキサゾール−５−イル]ベンゾニトリル
【化１５】
【００７７】
工程Ａ：４−（３−ヨード−フェニル）−２,４−ジオキソ−酪酸メチルエステル
【化１６】
水素化ナトリウム（６０％油分散液，４．９ｇ，１２３ｍｍｏｌ）を０℃のＤＭＦ（１２５ｍＬ）中３−ヨードアセトフェノン（２５．１８ｇ，１０２．３ｍｍｏｌ）及びシュウ酸ジメチル（１４．５ｇ，１２３ｍｍｏｌ）の溶液に少しずつ加えた。混合物を室温で１時間撹拌し、それから１１５℃で１時間加熱した。冷却後、混合物を３Ｍ ＨＣｌで処理し、それから酢酸エチルで希釈した。有機層を水及び飽和ブラインで３回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、そして濃縮した。シリカゲル上のクロマトグラフィ、ヘキサン中０〜１０％酢酸エチルにより黄色固形物として副題化合物（収率７１．３％）２４．２ｇを得、それを次の工程に直接用いた。
【００７８】
工程Ｂ：５−（３−ヨード−フェニル）−イソオキサゾール−３−カルボン酸メチルエステル
【化１７】
メタノール（４５０ｍＬ）中の工程７Ａの副題化合物（３３．９ｇ，１０２ｍｍｏｌ）及びヒドロキシルアミン塩酸塩（２１．３ｇ，３０６ｍｍｏｌ）の溶液を還流で４時間加熱した。さました後、混合物を濾過し、そして冷メタノールで洗浄して副題化合物（２４．１ｇ，７２％，褐色の固形物）を得た。
1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ8.18 (m, 1H), 7.82 (t, 2H), 7.26 (t, 1H), 6.97 (s, 1H), 4.03 (s, 3H).
【００７９】
工程Ｃ：[５−（３−ヨードフェニル）イソオキサゾール−３−イル]メタノール
【化１８】
ＤＩＢＡＬ（５５．８ｍＬ，トルエン中１．５Ｍ，８３．７ｍｍｏｌ）を−７８℃でトルエン（６０ｍＬ）及びＴＨＦ（６０ｍＬ）中の工程７Ｂの副題化合物（１２ｇ，３６．５ｍｍｏｌ）に、ゆっくりと加えた。生成した混合物を−７８℃で一夜撹拌し、次いで室温にゆっくりと暖まるのにまかせた。反応を、氷及び飽和塩化アンモニウム（水性）の混合物でクエンチした。生成物を酢酸エチルで抽出し、そして有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、そして真空で濃縮して表題化合物（オフホワイト固形物，１０．５ｇ，９５．６％）を得た。
1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ8.12 (m, 1H), 7.76 (ddm, 2H), 7.21 (t, 1H), 6.62 (s, 1H), 4.83 (s, 2H), 2.45 (br s, 1H).
【００８０】
工程Ｄ：５−（３−ヨードフェニル）イソオキサゾール−３−カルバルデヒド
【化１９】
ジクロロメタン（１５０ｍＬ）中の工程７Ｃの粗反応混合物（８．５ｇ，２８．２ｍｍｏｌ）及びＰＣＣ（９．１３ｇ，４２．３ｍｍｏｌ）を室温で一夜撹拌した。混合物をヘキサン中１５％酢酸エチルで希釈し、そしてヘキサン中さらに１５％酢酸エチルで溶出してシリカゲルの短いプラグを通過させた。溶出液を真空で濃縮し、淡黄色の固形物７．０ｇ（収率８３％）として副題化合物を得た。
1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ10.21 (s, 1H), 8.19 (m, 1H), 7.83 (ddm, 2H), 7.27 (m, 1H), 6.93 (s, 1H).
【００８１】
工程Ｅ：１−[５−（３−ヨード−フェニル）−イソオキサゾール−３−イル]−エタノール
【化２０】
ヨウ化メチルマグネシウム（３３ｍＬ，ジエチルエーテル中３Ｍ，９９ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１００ｍＬ）中の工程７Ｄの副題化合物（７．５ｇ，２５ｍｍｏｌ）の冷（０℃）溶液に加えた。反応混合物を０℃で１時間撹拌し、そして飽和塩化アンモニウムでクエンチした。生成物を酢酸エチルで抽出し、そして有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウム及びシリカゲルの混合物で乾燥した。濾液を真空下で濃縮し、そしてクロマトグラフィ（シリカ，ヘキサン中１５〜５０％酢酸エチル）により淡黄色の油、６．５ｇとして粗ヨード−イソオキサゾール−アルコールを得たところ、〜３３％１−（５−フェニルイソオキサゾール−３−イル）エタノールが混入していた。
【００８２】
工程Ｆ：３−[１−（tert−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−エチル]−５−（３−ヨード−フェニル）−イソオキサゾール
【化２１】
tert−ブチルジメチルクロロシラン（２．５ｇ，２．３ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（６０ｍＬ）中の工程７Ｅの粗物質（４．９ｇ，１５．５ｍｍｏｌ）及びＤＢＵ（２．５３ｇ，２．１３ｍｍｏｌ）の溶液に加え、そして反応液を室温で３時間撹拌した。tert−ブチルジメチルクロロシラン（２．５ｇ，２．３ｍｍｏｌ）及びＤＢＵ（２．５３ｇ，２．１３ｍｍｏｌ）を加え、そしてアルコールが消費されたことをＴＬＣが示すまで撹拌を１５分間続けた。生成物を飽和塩化アンモニウムとジクロロメタンとの間で分配し、そして有機層を乾燥し、そして真空で濃縮して淡黄色の固形物として副題化合物を得た（８．４ｇ粗製）。
【００８３】
工程Ｇ：３−｛３−[１−（tert−ブチルジメチルシラニルオキシ）−エチル]−イソオキサゾール−５−イル｝−ベンゾニトリル
【化２２】
ＤＭＦ（１００ｍＬ）中の工程７Ｆの粗生成物、シアン化亜鉛（１．６ｇ，１３．７ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（１．５８ｇ，１．３７ｍｍｏｌ）の混合物を８２℃で１０分間撹拌した。混合物を酢酸エチルで希釈し、そしてセライトを通して濾過した。濾液を真空で濃縮し、そしてジクロロメタンで希釈した。溶液を水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、そして濾過した。クロマトグラフィ（シリカ上に予め吸着させた，ヘキサン中１〜５％酢酸エチル）によりオフホワイト固形物として副題化合物を得た（３．８３ｇ，３工程で４６．５％）。
1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ8.07 (m, 1H), 8.04 (dm, 1H), 7.73 (dm, 1H), 7.62 (t, 1H), 6.66 (s, 1H), 5.09 (q, 1H), 1.54 (d, 3H), 0.93 (s, 9H), 0.13 (s, 3H), 0.06 (s, 3H).
【００８４】
工程Ｈ：３−[３−（１−ヒデロキシ−エチル）−イソオキサゾール−５−イル]−ベンゾニトリル
【化２３】
ＴＢＡＦ（２０ｍＬ，ＴＨＦ中１Ｍ，２０ｍｍｏｌ）を０℃でＴＨＦ（４０ｍＬ）中の純粋なシアノ−イソオキサゾール−シリルエーテル（３．８３ｇ，１１．７ｍｍｏｌ）の溶液に加え、そして混合物を室温で一夜撹拌した。生成物をジクロロメタンと水との間で分配した。有機層をブラインで洗浄し、そして硫酸マグネシウムで乾燥した。シリカゲルを加え、そして混合物を、ヘキサン中５０％酢酸エチルを用いてシリカゲルのプラグに通過させた。溶出液を真空で濃縮し、そして残留物をヘキサンで磨砕し、オフホワイト固形物２．５ｇ（収率１００％）として表題化合物を得た。
1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ8.07 (m, 1H), 8.03 (dm, 1H), 7.75 (dm, 1H), 7.62 (t, 1H), 6.7 (s, 1H), 5.13 (q, 1H), 1.64 (d, 3H).
【００８５】
実施例８：１−[５−（３−シアノフェニル）イソオキサゾール−３−イル]エチルメタンスルホネート
【化２４】
メタンスルホニルクロリド（１．５ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（２ｍｍｏｌ）を０℃でジクロロメタン（１０〜１５ｍＬ）中の実施例７の表題化合物（１ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。反応混合物を０℃で３０分撹拌し、次いで冷飽和炭酸水素ナトリウムで洗浄した。有機層をブラインで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、そして真空で濃縮してオフホワイト固形物として表題化合物３．６５ｇを得、それをさらに精製することなく使用した（収率１００％）。
1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ8.09 (m, 1H), 8.04 (dm, 1H), 7.77 (dm, 1H), 7.65 (t, 1
H), 6.77 (s, 1H), 5.94 (q, 1H), 3.08 (s, 3H), 1.85 (d, 3H)。
【００８６】
実施例９：環式トリアゾール中間体を形成するための一般的な手法
酸塩化物、続いてピリジン（〜０．５ｍＬ／ｍｍｏｌ）をバイアルに加えた。次いで、ヒドラジン（１当量）を溶液に加え、そして１３０℃で一夜還流させた。炭酸カリウムを用いて溶液を塩基性にし、それからＥｔＯＡｃ、水及びブラインを用いて水性後処理を実施した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、そして濃縮した。１０〜２０％ＭｅＯＨ：ＥｔＯＡｃ溶媒系を用いてＳＰＥ／フラッシュカラムを動かした。溶出画分を集め、そして濃縮した。以下の表は、形成されたアミノトリアゾールを示す。
【００８７】
実施例９．１：３−ピリジン−４−イル−５,６,７,８−テトラヒドロ[１,２,４]トリア
ゾロ[４,３−ａ]ピリミジン
【化２５】
ピリジン３ｍＬ中の（１,４,５,６−テトラヒドロ−ピリミジン−２−イル）−ヒドラジンヨウ化水素酸塩７５０ｍｇ（３．１ｍｍｏｌ）（参照 Krezel, Izabella; Pharmazie; EN; 49; 1; 1994; 27-31）及びピリジン３ｍＬ中のイソニコチノイルクロリド塩酸塩５５２ｍｇ（３．１ｍｍｏｌ）の溶液を１２０℃で一夜加熱した。反応混合物を冷却し、そしてＫ2ＣＯ3（飽和）で希釈し、そしてクロロホルム１０ｍＬで３回抽出した。合わせた有機抽出物を乾燥し、そして濃縮した。フラッシュクロマトグラフィ（ＣＨ2Ｃｌ2／ＭｅＯＨ １０:１）により白色固形物８３ｍｇ（１８％）を得た。
1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ8.65 (m, 2 H), 7.67 (m, 2 H), 4.13 (m, 2 H), 3.24 (m, 2 H), 1.91 (m, 2 H).
【００８８】
同様の方法で、以下の化合物を合成した：
【表１】
【００８９】
実施例１０：３−（２−メトキシ−ピリジン−４−イル）−５,６,７,８−テトラヒドロ[１,２,４]トリアゾロ[４,３−ａ]ピリミジン
【化２６】
実施例９．２の表題化合物（２００ｍｇ）及び炭素上のパラジウム触媒１０％（１００
ｍｇ）を合わせた。次いで反応を水素ガスでフラッシュした。また、ＥｔＯＨ（３．２ｍＬ）及びトリエチルアミン（０．６ｍＬ）をバイアルに加えた。溶液を室温で一夜撹拌した。次いで、セライトを通して溶液を濾過した。すべての微量の塩を除去するためシリカフラッシュカラムＣＨ2Ｃｌ2中の１０％１ＭＮＨ3（ＭｅＯＨ中）を動かした。溶液を濃縮し、白色固形粉末として実施例９の表題生成物を得た（１６３ｍｇ，収率７５％）。
1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ8.27 (d, 1H), 7.28 (m, 1H), 6.99 (s, 1H), 6.05 (br, 1H), 4.14 (t, 2H), 4.1 (s, 3H), 3.6 (t, 2H), 2.1 (m, 2H)
【００９０】
実施例１１：イソオキサゾールスルホネート及びスルホニルクロリドをＮ−アルキル化するための一般的な手法
イソオキサゾールメシレート又はクロリドをバイアル中に秤量し、そしてジメチルホルムアミド（３ｍＬ／ｍｍｏｌ）を固形物に加えた。次いでバイアルをアルゴンでフラッシュした。別のバイアル中にアミノトリアゾール（１．０当量）を秤量し、そしてテトラヒドロフラン（６ｍＬ／ｍｍｏｌ）に溶解した。このバイアルにナトリウムtertブトキシド（１．０５当量）又はＮａＨを加え、そしてバイアルを８０℃に加熱した。次いで、メシレートを含むバイアルの内容物を加熱されたバイアルに加え、そして反応物を３〜３０分間撹拌した。次いで、ＥｔＯＡｃ、水及びブラインを用いて水性後処理を実施した。次いで、Ｅｘ管（Ex-Tube）を通して有機層を運転し、そして真空で濃縮した。次いで、１０ｇＳＰＥカラムを用いて、形成された種々の生成物を精製した。以下の表は、各生成物に特異的なカップリング及び反応条件を示す。
【００９１】
以下の化合物は、上記のように合成した：
【表２】
【００９２】
実施例１１．３の表題キラル化合物は、１．０ｍＬ／分の流速（Ｒｔ＝６．４９分）でメタノールによるChiralpak ASを用いた分離によって対応するラセミ化合物から得た。
【００９３】
生物学的評価
ｍＧｌｕＲ５Ｄを発現する細胞系におけるｍＧｌｕＲ５拮抗作用の機能性評価
本発明の化合物の性質は、薬理活性用の標準アッセイを用いて分析することができる。グルタミン酸受容体アッセイの例は、例えばAramori et al., Neuron 8:757 (1992), Tanabe et al., Neuron 8:169 (1992), Miller et al., J. Neuroscience 15: 6103 (1995),
Balazs, et al., J. Neurochemistry 69:151 (1997)に記載されたように当分野でよく知られている。これらの刊行物に記載された方法論は、参照により本明細書に組み込まれる。都合のよいことに、本発明の化合物は、ｍＧｌｕＲ５を発現する細胞における細胞内カルシウム[Ｃａ2+]iの動員を測定するアッセイ（ＦＬＩＰＲ）、又はリン酸イノシトール代謝回転を測定する別のアッセイ（ＩＰ３）によって研究することができる。
【００９４】
ＦＬＩＰＲアッセイ
ＷＯ９７／０５２５２に記載されたようなヒトｍＧｌｕＲ５ｄを発現する細胞を、黒色の側面を有するコラーゲンコーティングされた透明な底面の９６ウェルプレート上でウェル当たり１００，０００細胞の密度で播種し、そして播種の２４時間後に実験を行った。全てのアッセイは、１２７ｍＭ ＮａＣｌ、５ｍＭ ＫＣｌ、２ｍＭ ＭｇＣｌ２、０．７ｍＭ ＮａＨ2ＰＯ4、２ｍＭ ＣａＣｌ2、０．４２２ｍｇ／ｍＬ ＮａＨＣＯ3、２．４ｍｇ／ｍＬ ＨＥＰＥＳ、１．８ｍｇ／ｍＬ グルコース及び１ｍｇ／ｍＬ ＢＳＡ画分ＩＶ（ｐＨ７．４）を含む緩衝液中で行った。９６ウェルプレート中の細胞培養液を、０．０１％プルロニック酸（登録商標の非イオン性活性剤ポリオール−ＣＡＳ番号９００３−１１−６）中、蛍光カルシウム指示薬フルオ−３（Molecular Probes, Eugene, Oregon）のアセトキシメチルエステル型４μＭを含む上記の緩衝液中で６０分間装填した。装填期間の後、フルオ−３緩衝液を除去し、そして新たなアッセイ緩衝液で置き換えた。ＦＬＩＰＲ実験は、励起及び放射波長、それぞれ４８８ｎｍ及び５６２ｎｍでレーザー設定０．８００Ｗ及びＣＣＤカメラシャッター速度０．４秒を用いて行った。各実験は、細胞プレートの各ウェル中にある緩衝液１６０μｌで開始した。アンタゴニストプレートから４０μｌ添加した後、アゴニストプレートから５０μＬ添加した。アンタゴニスト及びアゴニストの添加は、９０秒の間隔を離した。蛍光シグナルは、１秒間隔で５０回、続いてそれぞれ２つを添加した直後に５秒間隔で３試料のサンプルをとった。サンプリング期間内でのアゴニストに対する応答のピーク高さとより低いバックグラウンド蛍光との間の差分として応答を測定した。線形最小２乗適合プログラムを用いてＩＣ50測定を行った。
【００９５】
ＩＰ3アッセイ
ｍＧｌｕＲ５ｄのさらなる機能性アッセイは、ＷＯ９７／０５２５２に記載されており、そしてホスファチジルイノシトール代謝回転に基づいている。受容体活性化は、ホスホリパーゼＣ活性を刺激し、そしてイノシトール１,４,５三リン酸（ＩＰ３）の形成を高める。ヒトｍＧｌｕＲ５ｄを安定に発現するＧＨＥＫを１μＣｉ／ウェル[３Ｈ]ミオ−イノシトールを含む培地中、４０×１０4細胞／ウェルで２４ウェルポリ−Ｌ−リジンコーティングされたプレート上へ播種した。細胞を一夜（１６時間）インキュベートし、次いで３回洗浄し、そして１単位／ｍｌのグルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ及び２ｍＭピルビン酸を補足されたＨＥＰＥＳ緩衝食塩水（１４６ｍＭ ＮａＣｌ、４．２ｍＭ ＫＣｌ、０．５ｍＭ ＭｇＣｌ2、０．１％グルコース、２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４）中、３７℃で１時間インキュベートした。細胞をＨＥＰＥＳ緩衝食塩水中で１回洗浄し、そして１０ｍＭ ＬｉＣｌを含むＨＥＰＥＳ緩衝食塩水中で１０分間プレインキュベートした。化合物を、二つ組（in duplicate）で、３７℃で１５分間インキュベートし、次いでグルタミン酸（８０μＭ）又はＤＨＰＧ（３０μＭ）を加え、そしてさらに３０分間インキュベートした。氷上で過塩素酸（５％）０．５ｍＬを添加して反応を終了し、４℃で少なくとも３０分間インキュベートした。試料を１５ｍＬポリプロピレン管中に集め、そしてイオン交換樹脂（Dowex ＡＧ1-Ｘ8ホルメート形態、２００−４００メッシュ、BIORAD）カラムを用いてリン酸イノシトールを分離した。リン酸イノシトールの分離は、最初にグリセロフォスファチジルイノシトールを３０ｍＭギ酸アンモニウム８ｍＬで溶出することによって行った。次に、全リン酸イノシトールを、７００ｍＭギ酸アンモニウム／１００ｍＭギ酸８ｍＬで溶出し、そしてシンチレーションバイアル中に集めた。次いで、この溶出液をシンチラント８ｍＬと混合し、そして[３Ｈ]イノシトール取込みをシンチレーションカウントによって測定した。二つ組試料からｄｐｍのカウントをプロットし、そして線形最小２乗適合プログラムを用いてＩＣ50測定値を得た。
【００９６】
略語
ＢＳＡ ウシ血清アルブミン
ＣＣＤ 電荷結合素子
ＣＲＣ 濃度反応曲線
ＤＨＰＧ ３,５−ジヒドロキシフェニルグリシン
ＤＰＭ 毎分崩壊数
ＥＤＴＡ エチレンジアミン四酢酸
ＦＬＩＰＲ 蛍光定量的イメージングプレート読取装置
ＧＨＥＫ ＧＬＡＳＴを含むヒト胎生腎
ＧＬＡＳＴ グルタミン酸／アスパラギン酸トランスポーター
ＨＥＰＥＳ ４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸（緩衝液）
ＩＰ3 イノシトール三リン酸
【００９７】
一般に、上のアッセイにおいて、１００００ｎＭ未満のＩＣ50値を有する化合物は、活性であった。本発明の１つの態様において、ＩＣ50値は、１０００ｎＭ未満である。本発明のさらなる態様において、ＩＣ50値は、１００ｎＭ未満である。
【００９８】
ラットにおける脳対血漿比率の測定
脳対血漿比率は、雌のSprague Dawleyラットで評価した。化合物を水又は別の適当なビヒクル中に溶解した。脳対血漿比率を測定する際、化合物を皮下若しくは静脈内ボーラス注射、又は静脈内注入、又は経口投与として投与した。投与後の所定の時点で、心臓穿刺により血液試料を採取した。心臓を切開することによってラットを殺し、そして脳を直ちに保持した。血液細胞から血漿を分離するために、血液試料をヘパリン添加した管中に集め、そして３０分以内に遠心分離した。血漿を９６ウェルプレートへ移し、そして分析まで−２０℃で保存した。脳を半分に分割し、そして各半分を予め風袋を量った（pre-ｔarred）管中に置き、そして分析まで−２０℃で保存した。分析前に、脳試料を解凍し、蒸留水の３ｍＬ／ｇ脳組織を管に加えた。試料が均一になるまで、脳試料を氷浴中で超音波処理した。脳及び血漿試料の両方をアセトニトリルで沈殿させた。遠心分離した後、上清を０．２％ギ酸で希釈した。分析は、迅速勾配溶出及びＭＳＭＳ検出による短路逆相ＨＰＬＣカラム上で、エレクトロスプレーイオン化及び選択反応検出（ＳＲＭ）取得（Selected Reaction Monitoring acquisition）を備えた三連四重極機器を用いたＭＳＭＳ検出上で実施した。液−液抽出は、試料洗浄の代替手段として使用することができる。適切な緩衝液を添加した後、振盪により、試料を有機溶媒に抽出する。有機層のアリコートを新しいバイアルへ移し、そして窒素流れ下で蒸発させて乾燥状態にした。残留物を再構成した後、試料はＨＰＬＣカラム上へ注入する準備ができた。
【００９９】
一般に、本発明の化合物は、ラットでの血漿中の薬物／脳内の薬物の比率が＜０．５で外延が制約される。一実施態様において、比率は、０．１５未満である。
【０１００】
インビトロ安定性の測定
ラット肝ミクロソームは、Sprague-Dawleyラット肝試料から調製した。ヒト肝ミクロソームは、ヒト肝試料から調製したか又はBD Gentestから入手した。ｐＨ７．４で０．１mo
l／Ｌリン酸カリウム緩衝液中、補因子、ＮＡＤＰＨ（１．０mmol／ｌ）の存在下、全ミクロソームタンパク質濃度０．５ｍｇ／ｍｌで化合物を３７℃でインキュベートした。化合物の初濃度は、１．０μmol／Ｌであった。分析のため、インキュベーションの開始後、５つの時点０、７、１５、２０及び３０分で試料を採取した。アセトニトリル３．５倍体積を加えることによって、集めた試料中の酵素活性を直ちに停止した。集めた試料のそれぞれの中に残っている化合物の濃度をＬＣ−ＭＳによって測定した。ｍＧｌｕＲ５阻害剤の排出速度定数（ｋ）は、インキュベーション時間（分）に対するＩｎ[ｍＧｌｕＲ５阻害剤]のプロットの勾配として算出した。次いで、排出速度定数を用いてｍＧｌｕＲ５阻害剤の半減期（Ｔ １／２）を算出し、続いてこれを用いて肝ミクロソーム中ｍＧｌｕＲ５阻害剤の固有クリアランス（ＣＬｉｎｔ）を：
ＣＬｉｎｔ.＝（ｌｎ2 ｘ インキュベーション体積）／（Ｔ １／２ ｘ タンパク質濃度）＝μｌ／分／ｍｇ
として算出した。
【０１０１】
ＴＬＥＳＲに対して活性な化合物についてのスクリーニング
パブロフスリング中に立つ訓練をした両性別の成体ラブラドルレトリーバーを使用した。粘膜から皮膚への食道フィステル形成を行い、そしてすべての実験を行う前にイヌを完全に回復させた。
【０１０２】
運動性測定
要約すると、水を自由に供給して約１７時間絶食した後、マルチルーメンスリーブ／サイドホールアッセンブリー（multi lumen sleeve/ sidehole assembly）(Dentsleeve, Adelaide, South Australia)を、食道フィステル形成術によって導入して、胃の下部食道括約筋（ＬＥＳ）及び食道内圧を測定した。低コンプライアンスの圧力計注入ポンプ(Dentsleeve, Adelaide, South Australia)を用いてアッセンブリーに水を灌流させた。空気を灌流させた管を経口方向に通過させて嚥下を測定し、そしてＬＥＳより３ｃｍ上でアンチモン電極によりｐＨをモニターした。全てのシグナルを増幅し、そしてパソコン上、１０Ｈｚで入手した。
【０１０３】
空腹時の胃／ＬＥＳ第三相運動活動性がないベースライン測定が得られたときに、プラセボ（０．９％ＮａＣｌ）又は試験化合物を、前脚静脈中の静脈内に投与した（i.v.、０．５ｍＬ／ｋｇ）。静脈内投与の１０分後、栄養食（１０％ペプトン、５％Ｄ−グルコース、５％イントラリピド、ｐＨ３．０）をアセンブリー中央のルーメンを通して１００ｍＬ／分で最終体積３０ｍＬ／ｋｇまで胃に注入した。栄養食の注入に続いて、胃内圧力１０±１ｍｍＨｇが得られるまで５００ｍＬ／分の速度で空気注入した。次いで、さらに空気注入するため又は胃から空気のガス抜きをするため、注入ポンプを用いて実験中は圧力をこのレベルで維持した。栄養分の注入開始から空気通気の終わりまでの実験時間は、４５分間であった。手法は、ＴＬＥＳＲを誘発する信頼できる手段として有効であった。
【０１０４】
ＴＬＥＳＲは、＞１ｍｍＨｇ／秒の速度で下部食道括約筋圧力（胃内圧力に関して）における低下として定義される。弛緩が嚥下に誘発されたと分類される場合、弛緩発生の≦２秒前に、咽頭シグナルが生じることはないはずである。ＬＥＳと胃との間の圧力差は、２ｍｍＨｇ未満でなければならず、そして完全弛緩の持続時間は１秒より長くなければならない。
【０１０５】
試料の結果を以下の表に示した：
【表３】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
（式中、
Ｒ1は、メチル、ハロゲン又はシアノであり；
Ｒ2は、水素又はフルオロであり；
Ｒ3は、水素、フルオロ又はＣ1−Ｃ3アルキルであり；
Ｒ4は、水素又はＣ1−Ｃ3アルキルであり；
Ｘは、
【化２】
であり；
そしてＺは、
【化３】
であり；
Ｒ5は、水素、Ｃ1−Ｃ3アルキル、Ｃ1−Ｃ3ハロアルキル、Ｃ1−Ｃ3アルコキシ；又はＣ1−Ｃ3ハロアルコキシであり；
Ｒ6は、水素、Ｃ1−Ｃ3アルキル、Ｃ1−Ｃ3ハロアルキル、又はＣ1−Ｃ3ハロアルコキシであり；
Ｒ7は、水素、フルオロ又はＣ1−Ｃ3アルキルである）
の化合物並びにその医薬上許容しうる塩、水和物、アイソフォーム、互変異性体及び／又は鏡像異性体。
【請求項２】
Ｒ1はハロゲン又はシアノである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ1はクロロである、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ1はシアノである、請求項２に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ2は水素である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ3は水素又はフルオロである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ4は水素又はメチルである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ5は水素、Ｃ1−Ｃ2アルキル又はＣ1−Ｃ2アルコキシである、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ6は水素、Ｃ1−Ｃ2アルキル又はＣ1−Ｃ2アルコキシである、請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ7はＣ1−Ｃ2アルキル又はＣ1−Ｃ2アルコキシである、請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１１】
８−｛［５−（３−クロロフェニル）イソオキサゾール−３−イル］メチル｝−３−ピリジン−４−イル−５,６,７,８−テトラヒドロ［１,２,４］トリアゾロ［４,３−ａ］ピリミジン；
８−｛［５−（３−クロロフェニル）イソオキサゾール−３−イル］メチル｝−３−（２−メトキシピリジン−４−イル）−５,６,７,８−テトラヒドロ［１,２,４］トリアゾロ［４,３−ａ］ピリミジン；及び
３−（３−｛（Ｒ）−メチル［３−（２−メトキシピリジン−４−イル）−６,７−ジヒドロ［１,２,４］トリアゾロ［４,３−ａ］ピリミジン−８（５Ｈ）−イル］メチル｝イソオキサゾール−５−イル）ベンゾニトリル
から選ばれる化合物並びにその医薬上許容しうる塩、水和物、アイソフォーム、互変異性体及び／又は鏡像異性体。
【請求項１２】
治療に使用するための請求項１〜１１のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１３】
活性成分として請求項１〜１１のいずれか１項に記載の化合物を、薬理学上及び医薬上許容しうる担体と共に含む医薬組成物。
【請求項１４】
一過性下部食道括約筋弛緩を阻害する薬剤を製造するための請求項１〜１１のいずれか１項に記載の化合物又はその医薬上許容しうる塩若しくは光学異性体の使用。
【請求項１５】
胃食道逆流性疾患を治療又は予防する薬剤を製造するための請求項１〜１１のいずれか１項に記載の化合物又はその医薬上許容しうる塩若しくは光学異性体の使用。
【請求項１６】
疼痛を治療又は予防する薬剤を製造するための請求項１〜１１のいずれか１項に記載の化合物又はその医薬上許容しうる塩若しくは光学異性体の使用。
【請求項１７】
不安を治療又は予防する薬剤を製造するための請求項１〜１１のいずれか１項に記載の化合物又はその医薬上許容しうる塩若しくは光学異性体の使用。
【請求項１８】
過敏性腸症候群（ＩＢＳ）を治療又は予防する薬剤を製造するための請求項１〜１１のいずれか１項に記載の化合物又はその医薬上許容しうる塩若しくは光学異性体の使用。
【請求項１９】
一過性下部食道括約筋弛緩を阻害する方法であって、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の化合物の有効量をこのような阻害を必要とする被験者に投与することによる該方法。
【請求項２０】
胃食道逆流性疾患を治療又は予防する方法であって、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の化合物の有効量をこのような治療又は予防を必要とする被験者に投与することによ
る該方法。
【請求項２１】
疼痛を治療又は予防する方法であって、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の化合物の有効量をこのような治療又は予防を必要とする被験者に投与することによる該方法。
【請求項２２】
不安を治療又は予防する方法であって、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の化合物の有効量をこのような治療又は予防を必要とする被験者に投与することによる該方法。
【請求項２３】
過敏性腸症候群（ＩＢＳ）を治療又は予防する方法であって、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の化合物の有効量をこのような治療又は予防を必要とする被験者に投与することによる該方法。
【請求項２４】
（ｉ）請求項１〜１１のいずれか１項に記載の少なくとも１つの化合物、及び
（ii）少なくとも１つの酸分泌阻害剤
を含む組み合わせ。
【請求項２５】
酸分泌阻害剤は、シメチジン、ラニチジン、オメプラゾール、エソメプラゾール、ランソプラゾール、パントプラゾール、ラベプラゾール又はレミノプラゾールから選ばれる、請求項２４に記載の組み合わせ。
【請求項２６】
３−［３−（１−ヒドロキシエチル）イソオキサゾール−５−イル］ベンゾニトリル；
１−［５−（３−ヨード−フェニル）−イソオキサゾール−３−イル］−エタノール；
３−［１−（tert−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−エチル］−５−（３−ヨード−フェニル）−イソオキサゾール；
３−｛３−［１−（tert−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−エチル］−イソオキサゾール−５−イル｝−ベンゾニトリル；及び
１−［５−（３−シアノフェニル）イソオキサゾール−３−イル］エチルメタンスルホン酸塩
から選ばれる化合物。
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
（式中、
Ｒ1は、メチル、ハロゲン又はシアノであり；
Ｒ2は、水素又はフルオロであり；
Ｒ3は、水素、フルオロ又はＣ1−Ｃ3アルキルであり；
Ｒ4は、水素又はＣ1−Ｃ3アルキルであり；
Ｘは、
【化２】
であり；
そしてＺは、
【化３】
であり；
Ｒ5は、水素、Ｃ1−Ｃ3アルキル、Ｃ1−Ｃ3ハロアルキル、Ｃ1−Ｃ3アルコキシ；又はＣ1−Ｃ3ハロアルコキシであり；
Ｒ6は、水素、Ｃ1−Ｃ3アルキル、Ｃ1−Ｃ3ハロアルキル、又はＣ1−Ｃ3ハロアルコキシであり；
Ｒ7は、水素、フルオロ又はＣ1−Ｃ3アルキルである）
の化合物並びにその医薬上許容しうる塩、水和物、アイソフォーム、互変異性体及び／又は鏡像異性体。
【請求項２】
Ｒ1はハロゲン又はシアノである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ1はクロロである、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ1はシアノである、請求項２に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ2は水素である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ3は水素又はフルオロである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ4は水素又はメチルである、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ5は水素、Ｃ1−Ｃ2アルキル又はＣ1−Ｃ2アルコキシである、請求項１〜７のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ6は水素、Ｃ1−Ｃ2アルキル又はＣ1−Ｃ2アルコキシである、請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ7はＣ1−Ｃ2アルキル又はＣ1−Ｃ2アルコキシである、請求項１〜９のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１１】
８−｛［５−（３−クロロフェニル）イソオキサゾール−３−イル］メチル｝−３−ピリジン−４−イル−５,６,７,８−テトラヒドロ［１,２,４］トリアゾロ［４,３−ａ］ピリミジン；
８−｛［５−（３−クロロフェニル）イソオキサゾール−３−イル］メチル｝−３−（２−メトキシピリジン−４−イル）−５,６,７,８−テトラヒドロ［１,２,４］トリアゾロ［４,３−ａ］ピリミジン；及び
３−（３−｛（Ｒ）−メチル［３−（２−メトキシピリジン−４−イル）−６,７−ジヒドロ［１,２,４］トリアゾロ［４,３−ａ］ピリミジン−８（５Ｈ）−イル］メチル｝イソオキサゾール−５−イル）ベンゾニトリル
から選ばれる化合物並びにその医薬上許容しうる塩、水和物、アイソフォーム、互変異性体及び／又は鏡像異性体。
【請求項１２】
治療に使用するための請求項１〜１１のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１３】
活性成分として請求項１〜１１のいずれか１項に記載の化合物を、薬理学上及び医薬上許容しうる担体と共に含む医薬組成物。
【請求項１４】
一過性下部食道括約筋弛緩を阻害する薬剤を製造するための請求項１〜１１のいずれか１項に記載の化合物又はその医薬上許容しうる塩若しくは光学異性体の使用。
【請求項１５】
胃食道逆流性疾患を治療又は予防する薬剤を製造するための請求項１〜１１のいずれか１項に記載の化合物又はその医薬上許容しうる塩若しくは光学異性体の使用。
【請求項１６】
疼痛を治療又は予防する薬剤を製造するための請求項１〜１１のいずれか１項に記載の化合物又はその医薬上許容しうる塩若しくは光学異性体の使用。
【請求項１７】
不安を治療又は予防する薬剤を製造するための請求項１〜１１のいずれか１項に記載の化合物又はその医薬上許容しうる塩若しくは光学異性体の使用。
【請求項１８】
過敏性腸症候群（ＩＢＳ）を治療又は予防する薬剤を製造するための請求項１〜１１のいずれか１項に記載の化合物又はその医薬上許容しうる塩若しくは光学異性体の使用。
【請求項１９】
一過性下部食道括約筋弛緩を阻害する方法であって、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の化合物の有効量をこのような阻害を必要とする被験者に投与することによる該方法。
【請求項２０】
胃食道逆流性疾患を治療又は予防する方法であって、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の化合物の有効量をこのような治療又は予防を必要とする被験者に投与することによ
る該方法。
【請求項２１】
疼痛を治療又は予防する方法であって、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の化合物の有効量をこのような治療又は予防を必要とする被験者に投与することによる該方法。
【請求項２２】
不安を治療又は予防する方法であって、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の化合物の有効量をこのような治療又は予防を必要とする被験者に投与することによる該方法。
【請求項２３】
過敏性腸症候群（ＩＢＳ）を治療又は予防する方法であって、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の化合物の有効量をこのような治療又は予防を必要とする被験者に投与することによる該方法。
【請求項２４】
（ｉ）請求項１〜１１のいずれか１項に記載の少なくとも１つの化合物、及び
（ii）少なくとも１つの酸分泌阻害剤
を含む組み合わせ。
【請求項２５】
酸分泌阻害剤は、シメチジン、ラニチジン、オメプラゾール、エソメプラゾール、ランソプラゾール、パントプラゾール、ラベプラゾール又はレミノプラゾールから選ばれる、請求項２４に記載の組み合わせ。
【請求項２６】
３−［３−（１−ヒドロキシエチル）イソオキサゾール−５−イル］ベンゾニトリル；
１−［５−（３−ヨード−フェニル）−イソオキサゾール−３−イル］−エタノール；
３−［１−（tert−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−エチル］−５−（３−ヨード−フェニル）−イソオキサゾール；
３−｛３−［１−（tert−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−エチル］−イソオキサゾール−５−イル｝−ベンゾニトリル；及び
１−［５−（３−シアノフェニル）イソオキサゾール−３−イル］エチルメタンスルホン酸塩
から選ばれる化合物。
【公表番号】特表２００９−５３６２１４（Ｐ２００９−５３６２１４Ａ）
【公表日】平成２１年１０月８日（２００９．１０．８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５０９９５８（Ｐ２００９−５０９９５８）
【出願日】平成１９年４月２５日（２００７．４．２５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０６７３７２
【国際公開番号】ＷＯ２００７／１３０８２５
【国際公開日】平成１９年１１月１５日（２００７．１１．１５）
【出願人】（３９１００８９５１）アストラゼネカ・アクチエボラーグ (625)
【氏名又は名称原語表記】ＡＳＴＲＡＺＥＮＥＣＡ ＡＫＴＩＥＢＯＬＡＧ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２１年１０月８日（２００９．１０．８）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年４月２５日（２００７．４．２５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０６７３７２
【国際公開番号】ＷＯ２００７／１３０８２５
【国際公開日】平成１９年１１月１５日（２００７．１１．１５）
【出願人】（３９１００８９５１）アストラゼネカ・アクチエボラーグ (625)
【氏名又は名称原語表記】ＡＳＴＲＡＺＥＮＥＣＡ ＡＫＴＩＥＢＯＬＡＧ
【Ｆターム（参考）】
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