脂質組成を調節するための組成物および方法
本主題は、薬用植物および油の新規組成物、ならびに動物における脂肪酸組成および代謝を調節するための方法に関する。一態様において、本主題は、ローズマリー抽出物と、オレガノ抽出物と、多価不飽和油とを含む組成物に関与する。特定の実施形態において、多価不飽和油は、魚油またはその誘導体である。いくつかの実施形態において、主題は、リポタンパク質粒子もしくは細胞膜の食餌必須脂肪酸組成を調節するため、必須脂肪酸代謝を調節するため、リポキシゲナーゼおよびシクロオキシゲナーゼの活性を制御するため、心臓血管の健康を向上させるため、ならびに／または細胞増殖性の疾病および疾患を抑制するための方法に関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明の主題は、薬用植物および油の新規組成物、ならびに動物における脂肪酸組成および代謝を調節するための方法に関する。一態様において、本主題は、ローズマリー抽出物と、オレガノ抽出物と、多価不飽和油とを含む組成物に関与する。特定の実施形態において、多価不飽和油は、魚油またはその誘導体である。いくつかの実施形態において、本発明の主題は、リポタンパク質粒子もしくは細胞膜の食餌必須脂肪酸組成を調節するため、必須脂肪酸代謝を調節するため、リポキシゲナーゼ（ＬＯＸ）およびシクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）の活性を制御するため、心血管の健康を向上させるため、ならびに／または細胞増殖性の疾病および疾患を抑制するための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
必須脂肪酸（ＥＦＡ）は、通常、１８、２０、または２２炭素原子の鎖長を有する、自然に発生する不飽和脂肪酸である。脂肪酸の主な自然形態は、トリグリセリド分子の一部としてである。トリグリセリドの形態は、通常、生物の体内で脂肪酸の吸収、貯蔵、および利用を促進するのに役立つ。遊離脂肪酸もまた体内で自然に発生するが、その程度はかなり少ない。
【０００３】
人体は、必要な飽和脂肪酸のほとんどを生成することが可能である。しかしながら、人体は、必要な不飽和脂肪酸の全てを生成することはできない。全てのＥＦＡはヒトの食物源に見出すことができるが、人体は、リノール酸およびαリノレン酸から他の全てのＥＦＡを合成できる酵素を保有するため、これらの２つの脂肪酸のみが本当に必須であると考えられる。また、上記が事実である一方、ヒトの代謝がエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）およびドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）を形成する相対的な能力はそれほど高くはない。この能力の低さが、食餌における健康的なオメガ‐３脂肪酸の相対的な割合を増加させるために、魚油等の補助的な食用油が必要な理由である。ＥＰＡおよびＤＨＡは、最も重要な、いわゆるオメガ‐３脂肪酸を構成する。魚油は、これらのオメガ‐３脂肪酸の一般的な源として知られている。例えば、種油、植物油、藻油、および卵等の、オメガ‐３脂肪酸の追加の源もまた既知である。
【０００４】
疫学的観察は、魚油および哺乳動物宿主内で生成されるそれらに由来する脂質生成物が、血小板凝集および血清トリグリセリドを減少させ（心筋梗塞、高血圧、粥状動脈硬化のリスクを低下させ得る）、特定の種類の癌のリスクを低下させることに関与する可能性があることを示唆している。また、魚油に由来するＥＰＡおよびＤＨＡが、ほとんどの細胞の膜において重要な構造的役割を果たし、全血粘度の低下ならびに赤血球の柔軟性および変形能の増加によって表されるように、細胞膜の流動性に影響を及ぼすことが示されている。さらに、ＥＰＡおよびＤＨＡを含むＥＦＡは、プロスタグランジンおよびトロンボキサン等のプロスタノイド、ロイコトリエン、ならびにヒドロキシ脂肪酸を含む化合物のクラスである、エイコサノイドの既知の前駆体である。エイコサノイドは、血小板凝集、血管壁の透過性および緊張、血圧、ならびに免疫炎症反応に影響を及ぼすことが分かっている。
【０００５】
ｎ‐６系脂肪酸とｎ‐３系脂肪酸の間の食餌による平衡は、膜の脂肪酸組成の制御における有意な要因である。また、ｎ‐３食餌脂肪酸のｎ‐６食餌脂肪酸に対する比率の減少が、健康上の問題、疾患、および病態の発生率の増加に関係してきている。２系統のエイコサノイドの前駆体であるアラキドン酸（ｎ‐６）の過剰な存在、またはその前駆体であるリノール酸（ｎ‐６）の過剰な存在は、血栓形成の増加、出血時間の短縮、多形核単球および白血球の炎症反応における増加、ならびにアレルギーに対する平滑筋の反応性の増加をもたらし得る。対照的に、魚を食べる集団の食餌のように、主にｎ‐３系の長鎖多価不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）に基づく食餌は、出血時間における若干の増加、ならびに、粥状動脈硬化等の循環器疾患、関節炎、喘息、および他の疾病の発生率の低下をもたらす。これは、ｎ‐３系のこれらの長鎖ＰＵＦＡが、３系統のエイコサノイドの前駆体であるという事実に一部起因している。
【０００６】
魚油を摂取することにおける主な目的のうちの１つは、それらに見出される重要な構成成分を組織膜に取り込ませることであり、そこで、構成成分は、細胞シグナル伝達事象を調節し（例えば、炎症を減少させる）、膜の流動性を増加させる役割を果たす。エイコサノイドを形成するためのホスホリパーゼの作用により、細胞膜から脂肪酸を放出するように細胞が活性化されると、ＥＰＡおよびＤＨＡは、ＣＯＸおよびＬＯＸ酵素のためにアラキドン酸と競合する。放出されたアラキドン酸が炎症性のプロスタグランジン生成物（例えば、ＰＧＥ２）を生じさせる一方で、魚油の脂質は、ＡＡ（アラキドン酸）に由来する生成物（例えば、ＰＧＥ２およびＬＴＢ４）よりも有意に炎症を引き起こしにくいプロスタグランジンおよびリポキシゲナーゼ生成物（例えば、ＰＧＥ３およびＬＴＢ５）を生成する。さらに、レゾルビンおよびプロテクチンとして知られる特定の分子は、魚油に由来する多価不飽和脂質ＥＰＡおよびＤＨＡのみから形成される。これらの新しく発見された生成物は、炎症の消散を司る。
【０００７】
前立腺癌、乳癌、および肺癌等の癌の早期診断および治療、ならびに循環器疾患の治療および予防において、目覚しい進歩がなされてきた。しかしながら、循環器疾患および癌は、依然として、米国における疾患と関連する死亡の主要原因である。有益な脂質代謝を改善し、多価不飽和脂質の生化学的経路および生体膜への取り込みを促進する、新規栄養補助食品の必要性が残っている。そのような栄養補助食品は、例えば、心血管の健康を向上させる、ならびに／または、癌等の細胞増殖性の疾病および疾患を治療もしくは予防することを含む、有益な健康への影響を促進する。
【０００８】
出願人は、優良で有益な多価不飽和脂質の有意に増強された取り込みおよび代謝、ならびに健康効果に結果の改善を提供する、新規薬用植物組成物を予期せず発見した
【発明の概要】
【０００９】
本発明の主題は、薬用植物および油の新規組成物、ならびに動物における必須脂肪酸組成および代謝を調節するための方法に関する。一態様において、本主題は、ローズマリー抽出物と、オレガノ抽出物と、多価不飽和油とを含む組成物に関与する。一態様において、多価不飽和油は、魚油等の海洋生物由来の油であり得る。一実施形態において、組成物は、治療的に有効な量のローズマリーの超臨界抽出物と、オレガノの超臨界抽出物と、魚油または多価不飽和食餌性脂肪とを含む油を含む。さらなる実施形態において、魚油または多価不飽和食餌性脂肪を含む油は、野生で捕獲されたアラスカサーモンの油等のサーモン油である。
【００１０】
いくつかの実施形態において、本発明の主題は、リポタンパク質粒子もしくは細胞膜の食餌必須脂肪酸組成を調節するため、必須脂肪酸代謝を調節するため、リポキシゲナーゼおよびシクロオキシゲナーゼの活性を制御するため、心血管の健康を向上させるため、ならびに／または細胞増殖性の疾病および疾患を抑制するための方法に関する。
【００１１】
出願人は、本発明の主題の組成物の投与が、血清および／または細胞膜の脂肪酸含有量の予期せぬ迅速な修正、「善玉脂肪」の「悪玉脂肪」に対する比率の予期せぬ増加、ならびに、ｃ‐ＲＰ（ｃ‐反応性タンパク質）の予期せぬ減少、ＬＤＬ（「悪玉」コレステロール）の予期せぬ減少、およびコレステロール／ＨＤＬ比の予期せぬ減少をもたらすことを思いがけず発見した：それらは全て、ヒトの健康な脂質プロファイルにおける改善を意味する。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】本発明の主題のある例示的な組成物（本明細書において、図面を参照して「ＷｈｏｌｅＭｅｇａ」と示される）（２ｇまたは４ｇ／日）の摂取は、容易に検出可能な血清レベルのＥＰＡ（オメガ‐３ＰＵＦＡに由来する代表的な魚油）を生成する。血清中のＥＰＡの濃度は、摂取される量と相関する。
【図２】ヒトボランティア（ｎ＝８）に用量２ｇのＷｈｏｌｅＭｅｇａを投与し、脂質分析のために連続的に血液試料を採取した。平均ＥＰＡ、オレイン酸、およびパルミトレイン酸（それぞれ、ＷｈｏｌｅＭｅｇａオメガ‐３、‐５、および‐７多価不飽和脂肪酸の代表例である）における時間依存性の変化を図に表す。脂質クラスにおける変化の幅を明らかにするために、オメガ３（ＥＰＡ）、オメガ７（パルミトレイン酸）、およびオメガ９（オレイン酸）における変化をプロットした。破線は、単にベースライン（投与前）レベルを示す。ＷｈｏｌｅＭｅｇａ由来の脂質には、最長２４時間まで持続する変化を見ることができる。
【図３】ＷｈｏｌｅＭｅｇａ（２ｇ）を摂取した後の、オメガ‐３脂質（上）ならびにオメガ‐７およびオメガ‐９脂質（下）の細胞（ＰＢＭＣ）膜含有量における変化。１日２ｇの用量のＷｈｏｌｅＭｅｇａを３日間対象に投与した。投与前と、３回目かつ最終用量の投与後２４時間との間の細胞膜脂質組成における相違を比較した。
【図４】２グラムまたは４グラムのいずれかのＷｈｏｌｅＭｅｇａの摂取は、血中ＡＡ／ＥＰＡ比に容易に検出可能な変化をもたらす。２ｇの用量がこの比率に平均３７％の減少をもたらすのに対し、４ｇの用量は、血清ＡＡ／ＥＰＡ比に平均５０％の減少をもたらす。データは、１度に２ｇのＷｈｏｌｅＭｅｇａを摂取した８人の対象および４ｇのＷｈｏｌｅＭｅｇａを摂取した５人の対象に由来する。データは平均値＋／‐ＳＥで表す。
【図５】ＷｈｏｌｅＭｅｇａを摂取した固体における血清ＡＡ／ＥＰＡ比の変化の例を上のグラフに示す。データは平均値＋／‐ＳＥで表す。全てのＷｈｏｌｅＭｅｇａの値は、処方前の値とは有意に（ｐ＜０．０５）異なる。
【図６】１日当たり２ｇまたは４ｇのいずれかのＷｈｏｌｅＭｅｇａの摂取は、末梢血単核球の膜組成に変化をもたらす。ＷｈｏｌｅＭｅｇａに由来するＥＰＡのより高い取り込みの結果として、膜のアラキドン酸が減少する。このプロットの重要な点は、たとえ２ｇ／日のＷｈｏｌｅＭｅｇａであっても、組織（白血球）の膜組成における健康的な変化を達成し、アラキドン酸に由来する炎症の可能性を減少させることが可能であるということである。上記プロットは、連続３日間、２ｇ／日のＷｈｏｌｅＭｅｇａを摂取した４人の被験者から得たデータに由来する。末梢血単核球は、投与前およびＷｈｏｌｅＭｅｇａを投与した３日後に採取した。重要なオメガ‐３脂肪酸であるＥＰＡの含有量に関しては、細胞膜脂質組成が増加する。
【図７】ホスホリパーゼの作用によって細胞膜から遊離したアラキドン酸の代謝を示す略図。放出されたアラキドン酸は、それを炎症の原因となる脂質生成物（エイコサノイド等）に変換するシクロオキシゲナーゼおよびリポキシゲナーゼ酵素のための基質としての役割を果たす。
【図８】炎症性脂質の減少において、ＥＰＡ等の特定の多価不飽和脂肪酸が有する役割を示す略図。魚由来のＥＰＡ等の油は、細胞膜に取り込まれ、酵素ホスホリパーゼの活性により遊離される。放出されたＥＰＡは、シクロオキシゲナーゼおよびリポキシゲナーゼ酵素のための基質としての役割を果たすが、アラキドン酸によって生成されるものと比較して、生成される生成物の炎症の可能性は大きく減少する。
【図９】ヒト肺癌Ａ５４９異種移植片（ＣＯＸ‐２を過剰発現する）およびＨ１２９９異種移植片（ＣＯＸ‐２を発現しない）において、特別に配合された魚油食餌の抗腫瘍効果を調べた。ＥＰＡは、Ａ５４９細胞の増幅を阻害するが、Ｈ１２９９細胞の増幅は阻害しない。
【図１０】ヒト肺癌Ａ５４９異種移植片（ＣＯＸ‐２を過剰発現する）およびＨ１２９９異種移植片（ＣＯＸ‐２を発現しない）において、特別に配合された魚油食餌の抗腫瘍効果を調べた。ＥＰＡに曝露されたヒト肺癌Ａ５４９およびＨ１２９９細胞におけるＰＧＥ２およびＰＧＥ３の生成（Ｙａｎｇ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．２００４）。
【図１１】ＰＧＥ２は、Ａ５４９細胞の増殖を若干刺激する一方で、ＰＧＥ３は、これらの特定の細胞の増殖を阻害する。
【図１２Ａ】ＥＰＡの抗増殖活性は、Ａ５４９細胞におけるＰＧＥ３の形成と関連する。
【図１２Ｂ】ＥＰＡの抗増殖活性は、Ａ５４９細胞におけるＰＧＥ３の形成と関連する。
【図１３】細胞におけるこの酵素（ＣＯＸ‐２）の発現をブロックするＣＯＸ‐２ ｓｉＲＮＡでトランスフェクトしたＡ５４９細胞において、ＥＰＡの抗増殖効果は減少する。
【図１４】肺癌における魚油由来のＰＧＥ３の代謝の可能な機構の例。
【図１５】３つの異なる魚油生成物、ＷｈｏｌｅＭｅｇａ（本発明の主題の組成物）、Ｎｏｒｄｉｃ Ｎａｔｕｒａｌ Ｕｌｔｉｍａｔｅ Ｏｍｅｇａ、およびＣａｒｌｓｏｎ Ｏｉｌで処理したＡ５４９細胞において、ＰＧＥ２およびＰＧＥ３の形成を調べた。異なる魚油で処理したＡ５４９細胞におけるＰＧＥ２およびＰＧＥ３の形成の比較が示されており、比較は等しい量（μｇ／ｍＬ）のこれらの魚油生成物を使用して行われた。
【図１６】異なる魚油で処理したＡ５４９細胞におけるＰＧＥ２およびＰＧＥ３の形成の比較が示されており、比較は魚油生成物中の異なる量（μｇ／ｍＬ）のＥＰＡを使用して行われた。
【図１７】Ａ５４９およびＨ１２９９ヒト非小細胞肺癌細胞における魚油の抗増殖効果を示す。ＣＯＸ‐２が過剰発現される癌細胞において、本発明の主題の組成物（ＷｈｏｌｅＭｅｇａ）は、予期せずに、他の魚油組成物よりも実質的に優れた結果を提供した。
【図１８Ａ】ヒトＡ５４９肺癌細胞におけるＣＯＸ‐２、５‐および１２‐ＬＯＸならびにＡｋｔ／ｐＡｋｔの発現に対するＷｈｏｌｅＭｅｇａ、Ｕｌｔｉｍａｔｅ Ｏｍｅｇａ、およびＣａｒｌｓｏｎ Ｓｕｐｅｒ Ｆｉｓｈ Ｏｉｌ生成物の効果。関連性のあるタンパク質発現をウエスタンブロット法により測定し、３つの魚油生成物の濃度測定によって定量化した（図１８Ａ）。ＷｈｏｌｅＭｅｇａ（図１８Ｂ）およびＣａｒｌｓｏｎの魚油（図１８Ｃ）について、異なる用量の魚油でのタンパク質発現の変化率を示す。
【図１８Ｂ】ヒトＡ５４９肺癌細胞におけるＣＯＸ‐２、５‐および１２‐ＬＯＸならびにＡｋｔ／ｐＡｋｔの発現に対するＷｈｏｌｅＭｅｇａ、Ｕｌｔｉｍａｔｅ Ｏｍｅｇａ、およびＣａｒｌｓｏｎ Ｓｕｐｅｒ Ｆｉｓｈ Ｏｉｌ生成物の効果。関連性のあるタンパク質発現をウエスタンブロット法により測定し、３つの魚油生成物の濃度測定によって定量化した（図１８Ａ）。ＷｈｏｌｅＭｅｇａ（図１８Ｂ）およびＣａｒｌｓｏｎの魚油（図１８Ｃ）について、異なる用量の魚油でのタンパク質発現の変化率を示す。
【図１８Ｃ】ヒトＡ５４９肺癌細胞におけるＣＯＸ‐２、５‐および１２‐ＬＯＸならびにＡｋｔ／ｐＡｋｔの発現に対するＷｈｏｌｅＭｅｇａ、Ｕｌｔｉｍａｔｅ Ｏｍｅｇａ、およびＣａｒｌｓｏｎ Ｓｕｐｅｒ Ｆｉｓｈ Ｏｉｌ生成物の効果。関連性のあるタンパク質発現をウエスタンブロット法により測定し、３つの魚油生成物の濃度測定によって定量化した（図１８Ａ）。ＷｈｏｌｅＭｅｇａ（図１８Ｂ）およびＣａｒｌｓｏｎの魚油（図１８Ｃ）について、異なる用量の魚油でのタンパク質発現の変化率を示す。
【図１９】Ｗｈｏｌｅｍｅｇａで処理したヒト非小細胞肺癌Ａ５４９細胞における炎症遺伝子アレイの発現。有意に減少したものの２０％未満であった遺伝子を上の図に示し、より高い程度にまで（２０〜５０％）減少したものを下の図に示す。
【図２０】Ｗｈｏｌｅｍｅｇａで処理したＲＡＷマクロファージ細胞における炎症遺伝子アレイの発現。記号（＊）は、ＷｈｏｌｅＭｅｇａにより２０％を超えて減少した発現レベルを示す。ＲＡＷ細胞のＣＯＸおよび５‐ＬＯＸならびにホスホリパーゼと関連する受容体または酵素の発現は、未処理の対照細胞と比較して減少した。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
定義
【００１４】
本明細書で使用される場合、用語「投与者」、「投与すること」、および「投与」は、健全な医療行為において、治療効果を提供するための様式で対象に組成物を送達する任意の方法を指す。
【００１５】
本明細書で使用される句「誘導体」は、特定の化学物質の化合物または分子の任意の水和物、溶媒和化合物、塩、ラセミ体、異性体、鏡像異性体、プロドラッグ、代謝物、エステル、または他の類似体もしくは誘導体を指す。用語「誘導体」はまた、開示される化合物の加水分解、還元、または酸化生成物を含むが、これらに限定されない、開示される化合物に対する修飾も意味する。加水分解、還元、および酸化反応は、当該技術分野において既知である。
【００１６】
用語「調節すること」は、生物の生物学的活性、機能、健康、または状態に影響を及ぼすプロセスを指し、そのような生物学的活性、機能、健康、または状態は、その生物の総体的な健康および福祉と一致する様式において維持、増強、減少、または処置される。生物の生物学的活性、機能、健康、または状態を「増強する」という用語は、増大させること、強化すること、補強すること、または改善するプロセスを指す。
【００１７】
本明細書で使用される場合、活性薬剤もしくは成分、または薬学的に活性な薬剤もしくは成分（本明細書において同義である）の「有効量」または「治療的な有効量」という句は、投与されると治療効果を有するのに十分な薬学的に活性な薬剤の量を指す。治療的に有効な量の薬学的に活性な薬剤は、症状の緩和をもたらすことができるか、もたらすか、またはもたらすことが予測される。有効量の薬学的に活性な薬剤は、治療される特定の状態（単数または複数）、状態の重症度、治療の期間、使用される組成物の特定の構成要素等の要因によって異なる。
【００１８】
生物の生物学的活性、機能、健康、または状態を「増強する」という用語は、増大させること、強化すること、補強すること、または改善するプロセスを指す。
【００１９】
用語「エイコサノイド」は、アラキドン酸およびリノール酸に由来する等、多価不飽和脂肪酸に由来する化合物のクラスのうちのいずれかを指す。エイコサノイドは、オメガ‐３（ω‐３）またはオメガ‐６（ω‐６）ＥＦＡのいずれかに由来する。ω‐６エイコサノイドは一般に抗炎症性であるが、ω‐３’ｓはその程度が低い。エイコサノイドには、プロスタグランジン、プロスタサイクリン、トロンボキサン、およびロイコトリエンの４つのファミリーが存在する。それぞれに、ω‐３またはω‐６のいずれかのＥＦＡに由来する２つまたは３つの別の系統が存在する。これらの系統の異なる活性は、ω‐３およびω‐６脂肪の特定の健康への影響と相関してきた。本発明の主題の組成物はまた、多価不飽和脂質ＥＰＡおよびＤＨＡから形成されるレゾルビンおよびプロテクチンの生成または代謝を調節することによって、本明細書に記載される生理学的効果を調節するができる。
【００２０】
用語「オキシゲナーゼ」は、酸素分子のその基質内への取り込みを触媒する酵素のクラスのいずれかを指す。
【００２１】
本明細書で使用される用語「超臨界気体」または「超臨界流体」は、温度臨界点まで加熱された気体を指し、その温度を超えると、気体は圧力に関わらず、その気体状態を維持し、液体にならない。その臨界点を超える温度まで加熱された気体は、圧縮されると非常に高密度になるため、その特徴は流体の特徴に似ているが、液体になるであろう。超臨界流体が要求される用途において、二酸化炭素が一般的に使用される。超臨界流体の一般的な特性および抽出プロセスにおける超臨界流体の一般的な使用は、例えば、Ｔａｙｌｏｒ，Ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ Ｆｌｕｉｄ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，Ｗｉｌｅｙ，１９９６；ＭｃＨｕｇｈ ａｎｄ Ｋｒｕｋｏｎｉｓ，Ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ Ｆｌｕｉｄ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，２ｎｄ ｅｄ．，Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈ‐Ｈｅｉｎｅｍａｎｎ，１９９４、およびＷｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｃｌｉｆｆｏｒｄ，Ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ Ｆｌｕｉｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，２０００に記載され、その内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【００２２】
出願人は、多価不飽和油と混合された薬用植物抽出物を含む混合物を開発した。好ましい実施形態において、多価不飽和油は、例えば、野生で捕獲されたアラスカサーモンを含む、野生で捕獲された鮭等の、特有の海洋生物由来の油である。出願人の組成物は、組成物のいくつかの成分が超臨界ＣＯ２抽出プロセスを介して調製されるという点で特有である。従来の溶媒系抽出法とは異なり、超臨界ＣＯ２抽出は、調製物中に化学的残留物を残さずに、薬用植物における天然産物を得ることを可能にする。
【００２３】
本明細書で使用される用語「超臨界抽出」は、超臨界流体を用いて、試料から疎水性化合物を抽出することができる技術を指す。圧力および温度がそれらの臨界点を超えて増加するにつれて、超臨界流体の溶媒和力が増加し、疎水性分子の単離に効果的な溶媒を生成する。用語「超臨界抽出物」または「ＳＣＥ」は、超臨界抽出によって調製される抽出物を指す。
【００２４】
本明細書で使用される場合、用語「脂肪酸」は、遊離形態、モノグリセリド、ジグリセリド、トリグリセリド、それらのエステルもしくは溶媒和物、それらの組み合わせ、またはそれらの薬学的に許容される塩であり得る、炭素原子数６〜２６の飽和または不飽和の脂肪酸を指す。好ましい実施形態において、本発明の主題の組成物中の脂肪酸は、一般に、体内における脂肪酸の吸収、貯蔵、およびの利用を促進するのに役立つトリグリセリド分子の形態で存在する。いくつかの実施形態において、本発明の主題の組成物中の脂肪酸は、遊離脂肪酸として、トリグリセリドの一部として、その塩として、またはそれらの組み合わせとして存在する。
【００２５】
「必須脂肪酸」（ＥＦＡ）は、人体によって製造されないため、食餌において摂取しなければならない脂肪である。ＥＦＡは、リノール酸およびその誘導体を含むオメガ‐６ＥＦＡと、αリノレン酸およびその誘導体を含むオメガ‐３ＥＦＡの２つのグループに分類される。オメガ‐３およびオメガ‐６ＥＦＡはどちらも多価不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）である。この２つの種類を区別するものは、それらの炭化水素鎖における（分子のメチル末端に対して）最初の二重結合の配置である：オメガ‐３ＥＦＡは、３番目の炭素の位置に第１の二重結合を有し、一方、オメガ‐６ＥＦＡは、６番目の炭素の位置に第１の二重結合を有する。全てのＥＦＡはヒトの食物源に見出すことができるが、人体は、リノール酸およびαリノレン酸から他の全てのＥＦＡを合成できる酵素を保有するため、これらの２つの脂肪酸のみが、本当に必須であると考えられる。また、上記は事実であるものの、ヒトの代謝がＥＰＡおよびＤＨＡを形成する相対的な能力はそれほど高くはなく、それが、食餌における健康的なオメガ‐３脂肪酸の相対的な割合を増加させるために、なぜ補助的な魚油が必要であるかの理由である。
【００２６】
好ましいオメガ‐３脂質は、例えば、αリノレン酸（ＡＬＡ）、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、およびドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）を含む。オメガ‐６脂質は、例えば、リノール酸（ＬＡ）、アラキドン酸（ＡＡ）、ジホモ‐リノール酸（ＤＨＧＡ）、およびγ‐リノール酸（ＧＬＡ）を含む。
【００２７】
【表１】
【００２８】
以下は、本明細書に含まれるデータを提供する、本発明の主題の組成物（ＷｈｏｌｅＭｅｇａ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ）の分析において使用する場合、何を「善玉」、「悪玉」、および「中性」脂肪酸の分類であると見なすことができるかの説明である。いくつかの例は、１ｇのカプセル当たり３０ｍｇ以上の濃度でＷｈｏｌｅＭｅｇａに含有される。「Ｃ２０：１Ｗ９」という記号表示は、例えば、「オメガ‐９の位置」において最初の二重結合が（分子のメチル末端に対して）９番目の炭素上に位置する、２０個の炭素（Ｃ２０）および１個の二重結合を有する分子（脂肪酸）として説明される。同様に、ＤＨＡの記号表示はＣ２２：６Ｗ３と記載され、最初の二重結合が分子の末端（オメガの位置）から３番目の炭素で生じる、２２個の炭素および６個の二重結合を有する分子を表す。これは「オメガ‐３脂肪酸」である。
【００２９】
１．「善玉」脂肪
一価不飽和脂肪酸（ＭＵＦＡ）
Ｃ１５：１Ｗ５ＣＩＳ
Ｃ１６：１Ｗ７Ｃパルミトレイン酸
Ｃ１７：１Ｗ７
Ｃ１８：１Ｗ９Ｃオレイン酸
Ｃ２０：１Ｗ９エイコセン酸＝ガドレイン酸
Ｃ２２：１Ｗ９ドコセン酸＝エルカ酸
Ｃ２４：１Ｗ９Ｃ
必須脂肪酸（ＥＦＡ）
Ｃ１８：３Ｗ３α‐リノレン酸
Ｃ１８：２Ｗ６Ｃリノール酸
高度不飽和脂肪酸（ＨＵＦＡ）
Ｃ２０：５Ｗ３エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）
Ｃ２２：６Ｗ３ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）
【００３０】
２．「悪玉」脂肪
飽和脂肪酸
Ｃ１６：０パルミチン酸
Ｃ１７：０ヘプタデカン酸
Ｃ１８：０ステアリン酸
Ｃ２０：０アラキン酸
Ｃ２１：０ヘンエイコサン酸
Ｃ２２：０ベヘン酸
Ｃ２３：０トリコサン酸
Ｃ２４：０リグノセリン酸
トランス脂肪酸（ＴＦＡ）
Ｃ１８：１Ｗ９Ｔ
Ｃ１８：２Ｗ６Ｔ
【００３１】
３．「中性」脂肪
多価不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）
Ｃ２０：３Ｗ３エイコサトリエン酸（ＥＴＡ）
Ｃ１８：３Ｗ６γ‐リノレン酸
Ｃ２０：２Ｗ６エイコサジエン酸
Ｃ２０：３Ｗ６ＤＧＬＡ
Ｃ２０：４Ｗ６アラキドン酸（ＡＡ）
Ｃ２２：２Ｗ６ＤＤＡ
【００３２】
本明細書で使用される場合、「被験者」または「個体」または「動物」または「患者」または「哺乳動物」は、診断、予後、または治療が所望される任意の被験者、特に哺乳類対象、例えば、ヒトである。
【００３３】
本明細書で使用される場合、疾病、疾患、または状態の「治療」または「治療すること」は、それらの少なくとも１つの症状の緩和、それらの重症度の軽減、またはそれらの進行の遅延、阻止、もしくは阻害を包含する。治療は、疾病、疾患、または状態が完全に治癒することを意味する必要はない。本明細書において有用な組成物は、疾病、疾患、または状態の重症度を軽減するため、それらと関連する症状の重症度を軽減するため、患者または被験者の生活の質に改善を提供するため、または疾病、疾患、または状態の発生を遅延、予防、または阻害することのみを必要とする。
【００３４】
本明細書に列挙される任意の濃度範囲、百分率の範囲、または比率の範囲は、別途記載のない限り、整数の１０分の１および１００分の１等、その範囲内の任意の整数およびその分数の濃度、割合、または比率を含むことを理解されたい。
【００３５】
上記および本明細書の他の箇所で使用される場合、用語「ａ」および「ａｎ」は、列挙される構成要素の「１つ以上」を指すことを理解されたい。当業者には、単数形の使用は、別途記載の無い限り、複数形を含むことは明白である。したがって、用語「ａ」、「ａｎ」、および「少なくとも１つ」は、本出願において交換可能に使用される。例えば、「ａ」ポリマーは、１つのポリマーか、または２つ以上のポリマーを含む混合物の両方を指す。
【００３６】
本出願を通して、種々の実施形態の記載は「含む」という文言を使用しているが、当業者は、いくつかの特別な場合において、「本質的に〜からなる」または「からなる」という文言を使用して、代替的に実施形態を記載できることを理解するであろう。
【００３７】
本発明の教示をより理解するため、また教示の範囲を決して制限しないために、別途記載のない限り、本明細書および特許請求の範囲において使用される量、割合または比率、および他の数値を表す全ての数字は、全ての場合において「約」という用語によって修飾されていることを理解されたい。したがって、特に反対の記載がない限り、以下の明細書および添付の特許請求の範囲に記述される数値パラメータは、獲得することが求められる所望の特性に応じて変化し得る近似値である。少なくとも、各数値パラメータは、少なくとも、報告された有効桁の数を考慮して、通常の四捨五入法を適用することによって解釈されるべきである。
【００３８】
本明細書で使用される他の用語は、当該技術分野におけるそれらの一般的に知られる意味によって定義されることが意図される。
【００３９】
主題の組成物
【００４０】
主題の組成物は、抗増殖活性、抗炎症活性、抗酸化活性、抗血管新生、およびアポトーシス活性を示す構成成分を含む、多種薬用植物および多価不飽和油の調製物の類である。主題の治療用組成物は、治療的な有効量の（Ａ）薬用植物組成物および（Ｂ）多価不飽和油組成物を含む。
【００４１】
薬用植物組成物
【００４２】
いくつかの実施形態において、薬用植物組成物は、ローズマリーの抽出物およびオレガノの抽出物からなる群から選択される、治療的に有効な量の少なくとも１つの薬用植物構成要素を含む。一実施形態において、薬用植物組成物は、ローズマリーの超臨界抽出物、オレガノの超臨界抽出物、またはそれらの組み合わせを含む。他の非限定的なローズマリーおよびオレガノの抽出物は、例えばアルコール抽出物を含むことができる。別の実施形態において、薬用植物組成物は、本質的に治療的な有効量のローズマリーの超臨界抽出物およびオレガノの超臨界抽出物からなる。薬用植物組成物はまた、植物油等の１つ以上の追加の構成要素を含むことができ、好適な植物油の非限定的な例は、ヒマワリ油である。一実施形態において、ヒマワリ油は、溶液に抽出物を注入および混合し易くするために、担体としてローズマリー超臨界抽出物に加えられる。一実施形態において、ローズマリー超臨界抽出物２ｍｇごとに０．０４ｍｇのヒマワリ油が加えられる。
【００４３】
いくつかの実施形態において、薬用植物組成物は、本発明の主題の多価不飽和油組成物と組み合わせられると、抗酸化機能および／または配合物安定機能を提供する。特定の実施形態において、薬用植物組成物は、多価不飽和脂質の酸化を阻害し、かつ／または本発明の主題の組成物中の多価不飽和脂質の固有の化学反応性を安定させ、それによって、本発明の主題の組成物のより長期の保存期間および／またはより一貫した化学プロファイルを提供する。
【００４４】
市販の魚油は、通常、トコフェロール等の天然の抗酸化剤を添加することによって加工される。そのような多価不飽和油に加えられるトコフェロールのレベルは、多価不飽和油の過度の酸化を防ぐために一般的に十分であると考えられてきた。本発明の主題の薬用植物油組成物は、最初に油が加工されるときに加えられる抗酸化剤（５００ｐｐｍのα‐トコフェロール等）によって提供されるレベルを超えて多価不飽和油の酸化をさらに抑制するために有用であることが、予期せずして発見された。酸化試験を実施したところ、本発明の主題の薬用植物油組成物は、追加の予想外に有意な酸化からの保護を多価不飽和油に提供することが分かった。
【００４５】
表ＩＩは、本発明の主題の薬用植物組成物を含むおよび含まない多価不飽和油の比較酸化試験を示す。
【００４６】
【表２】
【００４７】
この例では、本発明の主題の組成物の所定レベルの酸化を誘導するために必要とされる時間を測定するために、ランシマット誘導時間法を用いた。Ｍｅｔｒｏｈｍ６７９のランシマット用機器で、試料の酸化レベルおよび酸化安定性を測定した。このテストでは、４グラムの試料を計器内に配置し、８０℃の空気を１時間当たり１０リットルで試料全体に流した。次いで、計器上で十分な酸化ピークが測定されるまで、７．２および７．５時間、対照試料（加工者によって加えられたα‐トコフェロール５００ｐｐｍを含有する加工サーモン油のみ）の実験を行った。測定された酸化レベルに達するまでの時間に「保護値」１．０を割り当てた。次いで、サーモン油組成物に指示されたローズマリーおよびオレガノ油の抽出物を加えた試験試料で実験を行った。次いで、酸化試験を実行したところ、試料は、７．２および７．５時間の終りに対照が到達したのと同じ酸化レベルに達するまでに有意により長くかかったことが分かった。試験試料において同じ酸化レベルに達するまでの時間は、少なくとも２倍かかっており、具体的には、試験試料は、少なくとも２．９倍、そして最大３．５倍で増加した。したがって、薬用植物油組成物を含まないサーモン油の保護値１．０と比較すると、これらの試料の「保護値」は、約２．９〜約３．５の範囲であった。
【００４８】
本発明の主題において使用されるローズマリーおよびオレガノの超臨界抽出物は、例えば、Ｅ．Ｓｔａｈｌ，Ｋ．Ｗ．Ｑｕｉｒｉｎ，Ｄ．Ｇｅｒａｒｄ，Ｄｅｎｓｅ Ｇａｓｅｓ ｆｏｒ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｒｅｆｉｎｉｎｇ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ ４ １９８８（参照により本明細書に組み込まれる）に開示されるような既知の超臨界抽出法にしたがって調製することができる。
【００４９】
別の実施形態において、多価不飽和油を含まない薬用植物組成物は、
（Ａ）多価不飽和油を含まない薬用植物組成物の約５重量％〜約８０重量％、代替として約５０重量％〜約７５重量％のローズマリーの超臨界抽出物と、
（Ｂ）多価不飽和油を含まない薬用植物組成物の約５重量％〜約６０重量％、代替として約１５重量％〜約４０重量％のオレガノの超臨界抽出物と、を含む。
【００５０】
さらなる実施形態において、薬用植物組成物は、約１：１の比率で、より好ましくは約２：１の比率で、ローズマリーＳＣＥ：オレガノＳＣＥの比率を含む。さらなる実施形態において、薬用植物組成物は、多価不飽和油組成物と組み合わせることができる。一実施形態において、２ｍｇのローズマリーＳＣＥおよび１ｍｇのオレガノＳＣＥが、２グラムの多価不飽和油と組み合わせられる。
【００５１】
多価不飽和油組成物
【００５２】
さらなる実施形態において、海洋生物油または多価不飽和油組成物は、ＤＨＡ、ＥＰＡ、およびαリノレン酸からなる群から選択される少なくとも１つの必須脂肪酸を含む。いくつかの実施形態において、多価不飽和油組成物は海洋生物油である。さらなる実施形態において、多価不飽和油組成物は、好ましくは野生で捕獲されたアラスカサーモンからのサーモン油を含む。他の実施形態において、多価不飽和油組成物は、魚油、種油、植物油、および藻油からなる群から選択される１つ以上の油源に由来する多価不飽和脂肪酸を含む。
【００５３】
さらなる実施形態において、海洋生物油または多価不飽和油組成物は、例えば、野生で捕獲された鮭に自然に見られる少なくとも１つの非脂肪酸構成要素等の、少なくとも１つの非脂肪酸構成要素をさらに含む。一実施形態において、少なくとも１つの非脂肪酸構成要素は、非脂肪酸脂質（コレステロール等）、ビタミン（ビタミンＤ等）、抗酸化剤（トコフェロール等）、色素（アスタキサンチン等）、またはそれらの混合物である。一実施形態において、多価不飽和油組成物は、脂肪酸構成要素（トリグリセリド、ジグリセリド、モノグリセリド、リン脂質、遊離脂肪酸、エステル化脂肪酸、その塩、またはそれらの組み合わせの形態等）、コレステロール、ビタミンＤ、およびアスタキサンチンを含む。
【００５４】
ヘキサン等の有機溶媒は、魚または藻等の油源から多価不飽和油を精製または濃縮するために使用されることがあり、精製した油に微量の溶媒が残り、健康への有害な影響の原因となり得る。本発明の主題の一実施形態において、多価不飽和油は、ヘキサン等の有機溶媒を含まず、したがって、そのような健康への有害な影響を及ぼさない。
【００５５】
さらなる実施形態において、多価不飽和油組成物は、約１０重量％〜約６０重量％、代替として約１５重量％〜約３５重量％、さらに代替として約２０重量％のＤＨＡ（ドコサヘキサエン酸）を含む。
【００５６】
さらなる実施形態において、多価不飽和油組成物は、約１０重量％〜約６０重量％、代替として約１０重量％〜約３５重量％、さらに代替として約１０重量％のＥＰＡ（エイコサペンタエン酸）を含む。
【００５７】
さらなる実施形態において、多価不飽和油組成物は、約１．０重量％〜約２．４重量％、代替として約０．８重量％〜約２．２重量％、さらに代替として約２重量％のオクタデカトリエン酸を含む。
【００５８】
さらなる実施形態において、多価不飽和油組成物は、約０．３重量％〜約１．４重量％、代替として約０．８重量％〜約１．２重量％、さらに代替として約１重量％のヘンエイコサペンタエン酸を含む。
【００５９】
さらなる実施形態において、多価不飽和油組成物は、約０．０３重量％〜約０．４重量％、代替として約０．０８重量％〜約０．２重量％、さらに代替として約０．０５重量％のテトラデセン酸を含む。
【００６０】
さらなる実施形態において、多価不飽和油組成物は、約２．６重量％〜約６．４重量％、代替として約１．８重量％〜約８．２重量％、さらに代替として約５％重量％のヘキサデセン酸を含む。
【００６１】
さらなる実施形態において、多価不飽和油組成物は、約１４．０重量％〜約２０．０重量％、代替として約１０．８重量％〜約２０．２重量％、さらに代替として約１５重量％のオクタデセン酸を含む。
【００６２】
さらなる実施形態において、多価不飽和油組成物は、約４．０重量％〜約１０．０重量％、代替として約５．８重量％〜約９．２重量％、さらに代替として約８重量％のエイコセン酸を含む。
【００６３】
さらなる実施形態において、多価不飽和油組成物は、約５．０重量％〜約１０．０重量％、代替として約５．８重量％〜約８．２重量％、さらに代替として約７重量％のドコセン酸を含む。
【００６４】
さらなる実施形態において、多価不飽和油組成物は、約０．４重量％〜約１．４重量％、代替として約０．８重量％〜約２．２重量％、さらに代替として約１重量％のテトラコセン酸を含む。
【００６５】
好ましい組成物は、以下の多価不飽和油を少量（０．０１〜３重量％）含有することができることを認識されたい：オクタデカジエン酸、オクタデカテトラエン酸、エイコサテトラエン酸、エイコサジエン酸、ヘプタデセン酸、およびエイコサトリエン酸。
【００６６】
特定の実施形態において、主題の組成物は、善玉脂肪の悪玉脂肪に対する好ましい比率を有する多価不飽和油組成物を含む。例えば、リン脂質油組成物は、Ｃ１５：１Ｗ５ＣＩＳ；Ｃ１６：１Ｗ７Ｃパルミトレイン酸；Ｃ１７：１Ｗ７；Ｃ１８：１Ｗ９Ｃオレイン酸；Ｃ２０：１Ｗ９エイコセン酸＝ガドレイン酸；Ｃ２２：１Ｗ９ドコセン酸＝エルカ酸；Ｃ２４：１Ｗ９Ｃ；Ｃ１８：３Ｗ３α‐リノレン酸；Ｃ１８：２Ｗ６Ｃリノール酸；Ｃ２０：５Ｗ３エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）；およびＣ２２：６Ｗ３ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）からなる群から選択される、増加した濃度の「善玉脂肪」を含むことができる。また、例えば、リン脂質油組成物は、Ｃ１６：０パルミチン酸；Ｃ１７：０ヘプタデカン酸；Ｃ１８：０ステアリン酸；Ｃ２０：０アラキン酸；Ｃ２１：０ヘンエイコサン酸；Ｃ２２：０ベヘン酸；Ｃ２３：０トリコサン酸；Ｃ２４：０リグノセリン酸；Ｃ１８：１Ｗ９Ｔ；およびＣ１８：２Ｗ６Ｔからなる群から選択される、減少した濃度の「悪玉脂肪」を含むことができる。いくつかの実施形態において、リン脂質油組成物はまた、Ｃ２０：３Ｗ３エイコサトリエン酸（ＥＴＡ）；Ｃ１８：３Ｗ６γ‐リノレン酸；Ｃ２０：２Ｗ６エイコサジエン酸；Ｃ２０：３Ｗ６ＤＧＬＡ；Ｃ２０：４Ｗ６アラキドン酸（ＡＡ）；およびＣ２２：２Ｗ６ＤＤＡからなる群から選択される「中性脂肪」も含むことができる。
【００６７】
いくつかの実施形態において、多価不飽和油組成物は、２：１〜１００：１の範囲、例えば、５：１、７：１、１０：１、１５：１、２０：１、２５：１、または３０：１の善玉脂肪対悪玉脂肪の比率を含む。少なくとも１つの実施形態において、多価不飽和油組成物中には検出可能な悪玉脂肪が存在しない。
【００６８】
治療用組成物
【００６９】
特定の実施形態において、本発明の主題の治療用組成物は、治療的に有効な量のローズマリーの超臨界抽出物およびオレガノの超臨界抽出物を含む。一実施形態において、本発明の主題の治療用組成物は、本質的に治療的な有効量のローズマリーの超臨界抽出物およびオレガノの超臨界抽出物からなる。
【００７０】
他の実施形態において、治療用組成物は、本明細書に記載される薬用植物組成物を、本明細書に記載される多価不飽和油組成物と組み合わせることによって調製される。
【００７１】
別の実施形態において、本発明の主題の治療用組成物は、治療的に有効な量のローズマリーの超臨界抽出物およびオレガノの超臨界抽出物を、多価不飽和油組成物と組み合わせて含む。さらなる実施形態において、多価不飽和油組成物は、魚油、例えば、サーモン油等を含む。一実施形態において、本発明の主題の治療用組成物は、本質的に治療的な有効量のローズマリーの超臨界抽出物と、オレガノの超臨界抽出物と、サーモン油等の魚油とからなる。
【００７２】
一実施形態において、治療用組成物は、１：５〜１：５０００の範囲、例えば、１：５、１：１０、１：２０、１：３０、１：４０、１：５０、１：１００、１：２００、１：３００、１：５００、１：１０００、１：２０００、１：３０００、１：４０００、または１：５０００の薬用植物組成物対多価不飽和油の比率を含む。
【００７３】
代替の態様において、治療用組成物は、抗腫瘍薬、抗酸化剤、成長抑制剤、薬用植物抽出物、および他の栄養素からなる群から選択される追加の薬剤を含む。特定の実施形態において、本発明の主題の治療用組成物は、治療的に有効な量のウコンもしくは生姜の超臨界抽出物、または治療的に有効な量のホーリーバジル、生姜、ウコン、コガネバナ（Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ ｂａｉｃａｌｅｎｓｉｓ）、ローズマリー、緑茶、イタドリ、黄蓮、もしくはメギの含水アルコール抽出物、またはそれらの組み合わせを含有しない。いくつかの好ましい実施形態において、本発明の主題の治療用組成物は、薬用植物組成物Ｚｙｆｌａｍｅｎｄ（登録商標）（ＮｅｗＣｈａｐｔｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｂｒａｔｔｌｅｂｏｒｏ，ＶＴ）を含有しない。
【００７４】
表ＩＩＩに記載するのは、本発明の主題の方法において使用される、不活性成分を除く経口投与組成物の例示的実施形態である。表ＩＩに列挙する量は、記載される成分のカプセル用量を表す。
【００７５】
【表３】
【００７６】
いくつかの実施形態において、組成物は、２グラムの魚油と、２グラムのローズマリーＳＣＥと、１ｍｇのオレガノＳＣＥとを含む。一実施形態において、魚油は、一番絞りの野生のアラスカサーモンの油等のアラスカサーモンの油を含む。さらなる実施形態において、組成物は、本質的に多価不飽和油と、ローズマリーＳＣＥと、オレガノＳＣＥとからなる。
【００７７】
特定の実施形態において、組成物は、野生のアラスカサーモンの油からの１０００〜２０００ｍｇの脂肪、５〜２０ｍｇのコレステロール、２０〜２００ＩＵのビタミンＤ、２〜１０マイクログラムのアスタキサンチン、１〜６ｍｇのローズマリーＳＣＥ、および１〜３ｍｇのオレガノＳＣＥを含む。特定の実施形態において、２０００ｍｇの多価不飽和油は、約４８０ｍｇの飽和脂肪、約８４０ｍｇの一価不飽和脂肪、および約６８０ｍｇの多価不飽和脂肪を含む。さらなる実施形態において、２０００ｍｇの多価不飽和油は、約５００ｍｇのオメガ‐３脂肪酸、約１ｍｇのオメガ‐５脂肪酸、約１４０ｍｇのオメガ‐６脂肪酸、約１００ｍｇのオメガ‐７脂肪酸、および約６６０ｍｇのオメガ‐９脂肪酸を含む。さらに別の実施形態において、多価不飽和油中の５００ｍｇのオメガ‐３脂肪酸は、約１８０ｍｇのＥＰＡ、約２２０ｍｇのＤＨＡ、および１００ｍｇの他のオメガ‐３脂肪酸（ドコサペンタエン酸、リノレン酸、ヘンエイコサペンタエン酸等）を含む。さらなる実施形態において、多価不飽和油は、２：１〜１：１０、２：１〜１：５、１：１〜１：３、１：１．５〜１：３、または１：２〜１：２．５の範囲の比率でＥＰＡ：ＤＨＡを含む。
【００７８】
本明細書で使用される用語「ＷｈｏｌｅＭｅｇａ」は、図および実施例に記載される種々の試験のために使用された本発明の主題の組成物の１つの例示的な配合物を指す。ＷｈｏｌｅＭｅｇａは、本明細書で使用される場合、野生のアラスカサーモンの油からの２０００ｍｇの脂肪、１５ｍｇのコレステロール、１００ＩＵのビタミンＤ、６マイクログラムのアスタキサンチン、２ｍｇのローズマリーＳＣＥ、および１ｍｇのオレガノＳＣＥを含む。Ｗｈｏｌｅｍｅｇａの２０００ｍｇの脂肪は、約４８０ｍｇの飽和脂肪、約８４０ｍｇの一価不飽和脂肪、および約６８０ｍｇの多価不飽和脂肪を含む。さらに、ＷｈｏｌｅＭｅｇａの２０００ｍｇの脂肪は、約５００ｍｇのオメガ‐３脂肪酸、約１ｍｇのオメガ‐５脂肪酸、約１４０ｍｇのオメガ‐６脂肪酸、約１００ｍｇのオメガ‐７脂肪酸、および約６６０ｍｇのオメガ‐９脂肪酸を含む。また、ＷｈｏｌｅＭｅｇａ中の５００ｍｇのオメガ‐３脂肪酸は、約１８０ｍｇのＥＰＡ、約２２０ｍｇのＤＨＡ、および約１００ｍｇの他のオメガ‐３脂肪酸（ドコサペンタエン酸、リノレン酸、ヘンエイコサペンタエン酸等）を含む。ＷｈｏｌｅＭｅｇａ配合物の追加の非限定的な例も企図され、「ＷｈｏｌｅＭｅｇａ」と表示される今後の組成物は、上述した配合における変動を有する可能性があり、今後の変動は、必要に応じて、更新された製品表示に記載される。
【００７９】
本発明の主題の方法
【００８０】
本発明の主題の組成物は、一般に、標準的な超臨界ＣＯ２によるローズマリーおよびオレガノの濃縮抽出物と、任意で多価不飽和油組成物とを含む。
【００８１】
組織膜に多価不飽和脂質を取り込む能力について主題の組成物を調べたところ、それらは、細胞シグナル伝達事象を調節し（例えば、炎症を減少させる）、膜の流動性を増加させる役割を果たす。対象組成物の投与後の血清脂質含有量における変化は、ＥＰＡ等の健康的なオメガ‐３油の増加、およびオメガ‐６油アラキドン酸（ＡＡ）に相対的な減少をもたらした。この変化は、用量依存性であることが示されており、有益であると考えることができ、炎症の可能性を減少させる。
【００８２】
いくつかの実施形態において、治療的な有効投与量の本発明の主題の組成物は、酸化した低密度リポタンパク質による動脈プラークの蓄積に起因する循環器疾患を治療するために有用である。また、さらなる実施形態において、治療的な有効投与量の本発明の主題の組成物は、体内の高密度リポタンパク質ＨＤＬ）の存在を促進し、有益な健康への影響を有すると考えられる。例えば、ＨＤＬは、リポタンパク質のより可溶性の形態として知られており、したがって、その存在は、動脈プラークの形成に有意に寄与しない。また、ＨＤＬは、プラーク物質を吸収することが可能であることが分かっており、よって、動脈プラークの量を直接的に減少させる。
【００８３】
一実施形態において、本発明の主題の組成物は、血小板凝集および血清トリグリセリドを減少させるために効果的であり、心筋梗塞、高血圧、粥状動脈硬化、および特定の種類の癌のリスクを低下させることができる。別の実施形態において、本発明の主題の組成物は、健康のために有益なエイコサノイドの合成および調節を促進するために効果的である。
【００８４】
一実施形態において、本発明の主題の組成物は、糖原病、脳卒中、糖尿病、関節リウマチ、脊椎痛、変形性関節症、炎症性大腸炎、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、喘息、黄斑変性症、湿疹、乾癬、産後の鬱病、月経痛、アルツハイマー病、パーキンソン病、鬱病、双極性障害、統合失調症、高リポタンパク血症、または高コレステロール血症を治療するために効果的である。
【００８５】
さらに他の実施形態において、本発明の主題の組成物は、過剰増殖疾患、癌、白血病、およびリンパ腫のリスクを防止、治療、または低下するために効果的である。
【００８６】
本発明の主題の組成物を使用するためのさらなる方法は、特定の不飽和脂質の補充と関連し得る有益な健康への影響を促進することを含む。本発明の主題のいくつかの実施形態は、以下の例の不飽和脂質を含むことができ、それによって、それらの有益な健康への影響を促進することができる。表ＩＶは、本発明の主題のいくつかの実施形態におけるサーモン油の不飽和脂肪酸組成物の例を提供する。いくつかの実施形態において、海洋生物油または本発明の主題の多価不飽和油組成物は、表ＩＶに記載される脂質のうちの１つ以上、またはそれらの組み合わせを含んでもよい。
【００８７】
【表４】
【００８８】
本発明の主題はまた、本明細書に記載される薬用植物組成物のうちの１つを本明細書に記載される多価不飽和油組成物のうちの１つと組み合わせることを含む、薬用植物および多価不飽和油を組み合わせた組成物を作成するプロセスも提供する。プロセスの一実施形態において、薬用植物油は、ローズマリーＳＣＥ２ｍｇおよびオレガノＳＣＥ１ｍｇを含み、多価不飽和油は、野生で捕獲されたアラスカサーモンの油等の魚油２０００ｍｇを含み、薬用植物油と多価不飽和油が一緒に合わせられ、任意でカプセル等の剤形に調製される。
【００８９】
１．ＥＰＡおよびＤＨＡ
【００９０】
オメガ‐６（例えば、アラキドン酸）の摂取量に対してＥＰＡおよびＤＨＡ等のオメガ‐３脂肪酸の摂取量を増加させることの健康効果について、多くのことが明らかになっている。例えば、Ｄｒ．Ｊｏｓｅｐｈ Ｃ．Ｍａｒｏｏｎが２００６年に出版した「Ｆｉｓｈ Ｏｉｌ． Ｔｈｅ Ｎａｔｕｒａｌ Ａｎｔｉ‐Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ」という標題の本を参照のこと。
【００９１】
２．オレイン酸
【００９２】
オレイン酸は、体内における主要な一価不飽和脂肪酸である。身体の主なオレイン酸源は動物の食餌によって提供されるが、δ９‐デサチュラーゼの作用によりステアリン酸から限られた量で合成することもできる。最も注目すべき食物源は、７０〜８０％がオレイン酸からなるオリーブ油である。他の良好な源は、ブドウ種子油、シーバックソーン油、およびブラジル産のヤシ科のベリーであるアサイの果肉を含む。多数の研究が、オリーブ油を豊富に含む食餌は、酸化ストレスおよび炎症性メディエータを抑制することにより、粥状動脈硬化の発生を減少させ、血清コレステロールを低下させることを示している。オリーブ油の健康効果は存在するフェノール化合物によるものであることが多いが、最近の研究では、オレイン酸自体がその血圧を低下させる効果に寄与することが示唆されている。また、オレイン酸は、抗腫瘍活性を示す。オレイン酸は、乳癌患者の約３０パーセントに存在するＨＥＲ‐２／ｎｅｕと呼ばれる癌の原因となる癌遺伝子の作用をブロックするだけでなく、乳癌治療薬ハーセプチンの有効性を向上させることが分かっている。
【００９３】
オレイン酸は、副腎白質ジストロフィーと呼ばれる稀有な神経生物学的疾患のための実験的治療薬ロレンツォのオイルの成分である。Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．２００８ Ｓｅｐ １６；１０５（３７）：１３８１１‐６．Ｅｐｕｂ ２００８ Ｓｅｐ ４．Ｏｌｅｉｃ ａｃｉｄ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｓ ｒｅｓｐｏｎｓｉｂｌｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ｂｌｏｏｄ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｏｌｉｖｅ ｏｉｌ．Ｔｅｒeｓ Ｓ，Ｂａｒｃｅｌo‐Ｃｏｂｌｉｊｎ Ｇ，Ｂｅｎｅｔ Ｍ，Ａｌｖａｒｅｚ Ｒ，Ｂｒｅｓｓａｎｉ Ｒ，Ｈａｌｖｅｒ ＪＥ，Ｅｓｃｒｉｂa ＰＶ．Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｉｎｓｔｉｔｕｔ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔａｒｉ ｄ’Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｃｉｏｎｓ ｅｎ Ｃｉeｎｃｉｅｓ ｄｅ ｌａ Ｓａｌｕｔ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｂａｌｅａｒｉｃ Ｉｓｌａｎｄｓ，Ｃａｒｒｅｔｅｒａ ｄｅ Ｖａｌｌｄｅｍｏｓｓａ Ｋｍ ７．５，Ｅ‐０７１２２ Ｐａｌｍａ ｄｅ Ｍａｌｌｏｒｃａ，Ｓｐａｉｎ。
【００９４】
多数の研究が、オリーブ油の高摂取量が血圧（ＢＰ）を低下させることを示している。オリーブ油のこれらの好ましい効果は、他の油には存在しないα‐トコフェロール、ポリフェノール、および他のフェノール化合物等、その微量の構成要素が原因であるとされることが多かった。しかしながら、最近、オリーブ油の降圧効果は、オレイン酸（ＯＡ）の含有量が高い（約７０〜８０％）ことによるものであることが明らかになった。オリーブ油の摂取が膜のＯＡレベルを増加させ、Ｇタンパク質媒介性シグナル伝達をコントロールするような様式で膜脂質構造（Ｈ（ＩＩ）相の性質）を制御し、ＢＰの低下を引き起こすことが提案されている。この効果は、一部には、アデニリルシクラーゼおよびホスホリパーゼＣを制御するＧタンパク質関連カスケードに対するその制御作用によるものである。また、ＯＡ類似体、エライジン酸およびステアリン酸は降圧活性を有さないことから、膜脂質構造とＢＰ制御を関連付ける分子機構は非常に特殊であることが示唆される。同様に、大豆油（ＯＡ含有量が低い）はＢＰを低下させない。オリーブ油が、ＯＡの作用によって降圧効果を誘導することが実証されている。
【００９５】
Ａｎｎ Ｏｎｃｏｌ．２００５ Ｍａｒ；１６（３）：３５９‐７１．Ｅｐｕｂ ２００５ Ｊａｎ １０．Ｏｌｅｉｃ ａｃｉｄ，ｔｈｅ ｍａｉｎ ｍｏｎｏｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｏｆ ｏｌｉｖｅ ｏｉｌ，ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ Ｈｅｒ−２／ｎｅｕ（ｅｒｂＢ−２）ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃａｌｌｙ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）ｉｎ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ ｗｉｔｈ Ｈｅｒ−２／ｎｅｕ ｏｎｃｏｇｅｎｅ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ．Ｍｅｎｅｎｄｅｚ ＪＡ，Ｖｅｌｌｏｎ Ｌ，Ｃｏｌｏｍｅｒ Ｒ，Ｌｕｐｕ Ｒ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｅｖａｎｓｔｏｎ Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔｅｒｎ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，１００１ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｌａｃｅ，Ｅｖａｎｓｔｏｎ，ＩＬ ６０２０１，ＵＳＡ．
【００９６】
一価不飽和脂肪酸であるオレイン酸（ＯＡ、１８：１ｎ‐９）の最も豊富な食物源であるオリーブ油の摂取と、乳癌のリスクおよび進行との間の関係は、議論の余地を残す問題となっている。さらに、乳癌に対するオリーブ油の保護効果は、ＯＡの直接的な効果ではなく、油の何か他の構成要素が原因であるかもしれないと提案されている。
【００９７】
方法
【００９８】
フローサイトメトリー、ウエスタンブロット法、免疫蛍光顕微鏡法、代謝状態（ＭＴＴ）、軟寒天コロニー形成法、アポトーシス誘導性ＤＮＡ二本鎖切断のインサイツ酵素標識化（ＴＵＮＥＬアッセイ分析）、およびカスパーゼ‐３依存性ポリＡＤＰリボースポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）切断アッセイを用いて、ＯＡの外的補給がＨｅｒ‐２／ｎｅｕ癌遺伝子の発現に与える影響を明らかにした。Ｈｅｒ‐２／ｎｅｕ癌遺伝子の発現は、乳癌の病因および促進に能動的に関与する。また、Ｈｅｒ‐２／ｎｅｕでコードされたｐ１８５（Ｈｅｒ‐２／ｎｅｕ）腫瘍性タンパク質の細胞外ドメインに高親和性で結合するヒト化モノクローナル抗体であるトラスツズマブ（ハーセプチン）の有効性にＯＡが与える影響を調べた。これらの問題を検討するために、Ｈｅｒ‐２／ｎｅｕ癌遺伝子の増幅を自然に示す乳癌細胞ＢＴ‐４７４およびＳＫＢｒ‐３を使用した。
【００９９】
結果
【０１００】
フローサイトメトリー分析により、Ｈｅｒ‐２／ｎｅｕ過剰発現体ＢＴ‐４７４およびＳＫ‐Ｂｒ３をＯＡで処理した後に、細胞表面関連連ｐ１８５（Ｈｅｒ‐２／ｎｅｕ）の劇的な減少（最大４６％）が示された。実際に、この効果は、最適濃度のトラスツズマブへの曝露後に見られる効果に匹敵するものであった（２０マイクログラム／ｍＬのトラスツズマブで最大４８％の減少）。注目すべきは、フローサイトメトリー（最大７０％の減少）、免疫ブロット法、および免疫蛍光顕微鏡試験によって測定されたように、ＯＡおよび準最適濃度のトラスツズマブ（５マイクログラム／ｍＬ）への同時曝露が、Ｈｅｒ‐２／ｎｅｕの発現を相乗的に下方制御したことである。ＭＴＴに基づく細胞生存率および足場非依存性軟寒天コロニー形成アッセイによって評価されたように、ＯＡとトラスツズマブとの間の細胞傷害性相互作用の性質は、強い相乗作用を示した。さらに、ＴＵＮＥＬおよびカスパーゼ‐３依存性ＰＡＲＰ切断によって確認されたように、ＯＡの同時曝露は、アポトーシス性細胞死と関連するＤＮＡ断片化を促進することにより、Ｈｅｒ‐２／ｎｅｕ過剰発現体に対するトラスツズマブの有効性を相乗的に強化した。また、ＯＡおよびトラスツズマブを用いた処置は、Ｈｅｒ‐２／ｎｅｕに関連する乳癌の発症および進行において重要な役割を果たすサイクリン依存性キナーゼ阻害因子であるｐ２７（Ｋｉｐ１）の発現および核集積の両方を劇的に増加させた。最後に、ＯＡの共曝露は、ＡＫＴおよびＭＡＰＫ等のリン酸化タンパク質を含む、Ｈｅｒ‐２／ｎｅｕの下流のシグナル伝達経路を阻害するトラスツズマブの能力を有意に増強した。結論：これらの知見は、オリーブ油の主な一価不飽和脂肪酸であるＯＡが、Ｈｅｒ‐２／ｎｅｕ癌遺伝子の増幅を伴う乳癌細胞のアポトーシス性細胞死を促進することにより、Ｈｅｒ‐２／ｎｅｕの過剰発現を抑制し、同時に、抗Ｈｅｒ‐２／ｎｅｕ免疫療法と相乗的に相互作用することを示すものである。この、以前には認識されていなかったＯＡの特性は、個々の脂肪酸、および本発明の主題の組成物が乳癌細胞の悪性挙動を制御することが可能であり、したがって、将来の疫学的試験のデザイン、また最終的には食生活に関するカウンセリングにおいて有用である新規分子機構を提供する。
【０１０１】
Ａｍ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｎｕｔｒ．１９９８ Ｊｕｌ；６８（１）：１３４‐４１．Ｔｉｓｓｕｅ ｓｔｏｒｅｓ ｏｆ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ ｍｏｎｏ ｍｏｎｏｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ ａｎｄ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ：ｔｈｅ ＥＵＲＡＭＩＣ ｓｔｕｄｙ．Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ Ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒ Ｓｔｕｄｙ ｏｎ Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ，Ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ Ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ．Ｓｉｍｏｎｓｅｎ ＮＲ，Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ‐Ｃｒｅｈｕｅｔ Ｎａｖａｊａｓ Ｊ，Ｍａｒｔｉｎ‐Ｍｏｒｅｎｏ ＪＭ，Ｓｔｒａｉｎ ＪＪ，Ｈｕｔｔｕｎｅｎ ＪＫ，Ｍａｒｔｉｎ ＢＣ，Ｔｈａｍｍ Ｍ，Ｋａｒｄｉｎａａｌ ＡＦ，ｖａｎ’ｔ Ｖｅｅｒ Ｐ，Ｋｏｋ ＦＪ，Ｋｏｈｌｍｅｉｅｒ Ｌ．Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｎｏｒｔｈ Ｃａｒｏｌｉｎａ，Ｃｈａｐｅｌ Ｈｉｌｌ，２７５９９，ＵＳＡ．
【０１０２】
一価不飽和脂肪が乳癌のリスクに影響を及ぼし得るという最も有力な証拠は、南欧の集団の試験に由来しており、オレイン酸源、とりわけオリーブ油の摂取が保護的であると考えられる。そのような集団において、脂肪組織の脂肪酸含有量と乳癌との関係について以前に調査が行われたことはなかった。南欧（Ｍａｌａｇａ，Ｓｐａｉｎ）を含む欧州の５ヶ所の施設で収集された多様な脂肪摂取パターンの脂肪生検を用いて、オレイン酸または他の一価不飽和脂肪の蓄積が乳癌と逆相関関係にあるという仮説を検証した。閉経後に発生した乳癌患者２９１人と、対照の対象３５１人から臀部脂肪吸引物を採取した（年齢および診療圏に対して頻度を一致させた）。一価不飽和脂肪による乳癌をモデル化するために、確立された危険因子を補正したロジスティック回帰を使用した。スペインの施設において、オレイン酸が乳癌との強い逆相関を示した。７５パーセンタイルと２５パーセンタイルとの間のオッズ比は、Ｍａｌａｇａにおいて０．４０（９５％ＣＩ：０．２８、０．５８）、他の全ての施設を統合すると１．２７（０．８８、１．８５）であり、Ｚｅｉｓｔのピークは２．３６（１．０１、５．５０）であった。パルミトレイン酸およびミリストレイン酸はスペイン以外で逆相関の証拠を示し、ｃｉｓ‐バクセン酸は３ヶ所の施設で明確な関連性を示した。これらのデータは、スペイン以外の集団において、オレイン酸の組織蓄積量の増加が乳癌に対して保護的であるという仮説を支持しなかった。この知見は、食餌試験においてオリーブ油の摂取量について報告されている強い保護的関連性が、油の何か他の保護的な構成要素に起因するものであって、オレイン酸摂取の直接的な効果ではない可能性を暗示するものである。代替として、オリーブ油の高摂取量が、これらの女性の生活様式の何か他の保護的態様を示唆するものである可能性がある。
【０１０３】
３．エルカ酸
【０１０４】
エルカ酸は、菜種、アラセイトウの種子、カラシの種子を含むアブラナ科の顕花植物の種子（それらは全て４０〜５０％のエルカ酸を含有する）によく見られる一価不飽和脂肪酸である。通常、エルカ酸は、体脂肪中には微量も見られないかまたは生じないが、食餌が菜種油を含む場合、貯蔵脂肪、臓器脂肪、および乳脂肪にエルカ酸が見られる。エルカ酸およびオレイン酸の４対１の混合物は、稀有な神経生物学的疾患である副腎白質ジストロフィーのための実験的治療薬、ロレンツォのオイルを構成する。
【０１０５】
ヒトにおける健康への悪影響は記録されていないものの、高エルカ酸菜種油の長期摂取が、ラットにおいて心臓病変および成長遅延を引き起こすことが示されているため、一般に、エルカ酸は好ましい脂肪酸とは見なされない。科学者達は、ラットはヒトと同じようには脂肪を代謝しないので、それらはヒトにおけるエルカ酸の影響を理解するための良好なモデルを提供しないと指摘している。それにも関わらず、１９９１年には、欧州連合が大量のエルカ酸を含有する食物を禁止した。菜種の低エルカ酸形態としてカノーラ油が販売されている。
【０１０６】
Ｃａｎ Ｊ Ｃｏｍｐ Ｍｅｄ．１９７５ Ｊｕｌ；３９（３）：２６１‐９．Ｃａｒｄｉａｃ ｌｅｓｉｏｎｓ ｉｎ ｒａｔｓ ｆｅｄ ｒａｐｅｓｅｅｄ ｏｉｌｓ．Ｃｈａｒｌｔｏｎ ＫＭ，Ｃｏｒｎｅｒ ＡＨ，Ｄａｖｅｙ Ｋ，Ｋｒａｍｅｒ ＪＫ，Ｍａｈａｄｅｖａｎ Ｓ，Ｓａｕｅｒ ＦＤ．
【０１０７】
乳離れしたばかりのオスおよびメスのＳＤ系ラットに、異なる量のエルカ酸（１．６％、４．３％、および２２．３％）を含有する完全に精製した菜種油を、食餌の２０重量％で最長１１２日間の期間給餌した。心筋繊維における脂肪滴の蓄積を特徴とする一過性の心筋リピドーシスが、２２．３％のエルカ酸を含有する酸化および未酸化の菜種油を給餌したオスおよびメスのラットにおいて著しく、４．３％のエルカ酸を含有する菜種油では中程度、１．６％のエルカ酸を含有する菜種油を給餌したラットにおいて非常にわずかに見られた。心筋リピドーシスのピーク強度は３〜７日で現れ、その後は元に戻った。異なるレベルのエルカ酸を含有する菜種油を１１２日間給餌したオスのラットに、局所的な心筋壊死および線維症が見られた。心筋壊死および線維症の発生率はメスのラットにおいて顕著に低く、これらの病変の発生率は、いずれの性別においても、これらの油の酸化状態による影響を受けなかった。第２の実験において、未精製か、部分的に精製したか、または完全に精製した菜種油を含有する食餌をオスのラットに給餌した。心筋壊死および線維症の病巣数と油の精製状態との間に相関関係は見られなかったが、全体的に、最も低いレベルのエルカ酸を有する油を給餌したラットに病変が少なかった。
【０１０８】
Ａｃｔａ Ｍｅｄ Ｓｃａｎｄ Ｓｕｐｐｌ．１９７５；５８５：５‐１３．Ｐｈｙｓｉｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｒａｐｅｓｅｅｄ ｏｉｌ：ａ ｒｅｖｉｅｗ．Ｂｏｒｇ Ｋ．菜種油は、動物において成長遅延作用を有する。研究者の中には、菜種油中のエルカ酸含有量が高いことが単独でこの影響を引き起こすと主張する者もあれば、菜種油における飽和／一価不飽和脂肪酸の比率が低いことが要因であると見なす者もある。通常、エルカ酸は、体脂肪中には微量も見られないかまたは生じないが、食餌が菜種油を含む場合、貯蔵脂肪、臓器脂肪、および乳脂肪にエルカ酸が見られる。エルカ酸は、体内で代謝されてオレイン酸になる。菜種油が、生殖器および副腎、睾丸、卵巣、肝臓、脾臓、腎臓、血液、心臓、および骨格筋に及ぼす影響について調査されてきた。心筋細胞における脂肪浸潤が調査した種に観察されている。ラットにおける長期実験では、エルカ酸が心筋の線維症を引き起こす。エルカ酸は、心臓のミトコンドリアの呼吸能を低下させる。呼吸能の低下は、食餌中のエルカ酸含有量と大体比例しており、エルカ酸の持続投与でさらに弱まる。ラットの寿命は、トウモロコシ油、大豆油、ヤシ油、鯨油、および菜種油の食餌で同じである。エルカ酸または他のドコセン酸を含む食餌を給餌したラットは、低温ストレス（＋４℃）に対する耐性の低下を示した。スウェーデンでは、現在の約０．４％と比較して、１９７０年までは、エルカ酸がカロリーの平均摂取量の３〜４％を占めていた。
【０１０９】
４．ガドレイン酸
【０１１０】
ガドレイン酸は、植物油および魚油に存在するｃｉｓ‐不飽和脂肪酸である。Ｄｒ．Ｊｉｍ Ｄｕｋｅによれば、それに関する生物学的活性は記録されていない。
【０１１１】
５．パルミトレイン酸
【０１１２】
パルミトレイン酸は、ヒトの食餌および血液中に見られる微量の一価不飽和のオメガ７脂肪酸である。食物源は、特に魚由来の動物脂肪、ならびにマカダミアナッツおよびシーバックソーンベリーを含む。δ９‐デサチュラーゼの酵素活性によって、食餌中に含まれる最も一般的な飽和脂肪酸であるパルミチン酸から体内で生成することができる。パルミトレイン酸は、ヒト脂肪組織を構成するトリグリセリドの一般的な構成成分である。このため、血清レベルは、トリグリセリド血症および腹部肥満の独立したマーカーであると考えられる。
【０１１３】
パルミトレイン酸は、脂肪組織および膵臓における脂肪代謝および血糖代謝の制御において重要な役割を果たすと考えられる。パルミトレイン酸は、マウスの筋肉において、インスリン作用を強く刺激し、脂肪肝を抑制するリポカイン（ホルモン）として機能することが示された。脂肪組織は、リポカインを使用して、離れた器官と連絡し、全身の代謝恒常性を制御する。また、パルミトレイン酸は、膵臓でインスリンを生成するβ細胞の健康を維持するために重要である可能性がある。生体外試験により、パルミトレイン酸は、パルミチン酸のβ細胞に対する細胞傷害効果を相殺することができると同時に、β細胞の機能を向上させことができることが示されている。
【０１１４】
パルミトレイン酸は、皮膚、血管、および粘膜を構成するような上皮細胞の細胞膜における主要な脂肪酸であり、そこで保護的な役割を果たすと考えられる。ヒトの皮脂に存在する全ての脂肪酸のうち、パルミトレイン酸が、グラム陽性菌に対する最も強い抗菌作用を有することが示された。同じ研究により、パルミトレイン酸が、カンジダアルビカンス病原株のブタ角質層への付着をブロックしたことが分かった。
【０１１５】
パルミトレイン酸は、ＬＤＬコレステロール中の飽和脂肪のように挙動すると非難されてきたが、最近の動物実験により、パルミトレイン酸が血漿リポタンパク質プロファイルまたは大動脈コレステロール蓄積に悪影響を及ぼすことはなく、不飽和脂肪酸を豊富に含む他の油と同様に挙動すると結論付けられた。Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ．２００４ Ｄｅｃ；３１ Ｓｕｐｐｌ ２：Ｓ３７‐８．Ｓｅｒｕｍ ｌｉｐｉｄ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ａ ｍｏｎｏｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄ（ｐａｌｍｉｔｏｌｅｉｃ）ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ‐ｒｉｃｈ ｄｉｅｔ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｍａｃａｄａｍｉａ ｎｕｔｓ ｉｎ ｈｅａｌｔｈｙ，ｙｏｕｎｇ Ｊａｐａｎｅｓｅ ｗｏｍｅｎ．Ｈｉｒａｏｋａ‐Ｙａｍａｍｏｔｏ Ｊ，Ｉｋｅｄａ Ｋ，Ｎｅｇｉｓｈｉ Ｈ，Ｍｏｒｉ Ｍ，Ｈｉｒｏｓｅ Ａ，Ｓａｗａｄａ Ｓ，Ｏｎｏｂａｙａｓｈｉ Ｙ，Ｋｉｔａｍｏｒｉ Ｋ，Ｋｉｔａｎｏ Ｓ，Ｔａｓｈｉｒｏ Ｍ，Ｍｉｋｉ Ｔ，Ｙａｍｏｒｉ Ｙ．Ｆｒｏｎｔｉｅｒ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｍｕｋｏｇａｗａ Ｗｏｍｅｎ’ｓ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎｉｓｈｉｎｏｍｉｙａ，Ｊａｐａｎ．ｊｕｎｋｏ＠ｍｗｕ．ｍｕｋｏｇａｗａ‐ｕ．ａｃ．ｊｐ
【０１１６】
最近の研究により、ナッツ類（それらのほとんどが相当量の一価不飽和脂肪酸（ＭＵＦＡ）を有する）を食べることの潜在的な有益な効果が同定されている。マカダミアナッツは、７５重量％が脂肪からなり、その８０％がＭＵＦＡ（パルミトレイン酸）である。２．マカダミアナッツに基づく高ＭＵＦＡ食に応じた血清脂質レベルにおける変化を調べるために、若年の健康な日本人女子学生において、マカダミアナッツ、ココナッツ、およびバターを用いた３週間の介入が決定された。３．３週間の介入後、総コレステロールおよび低密度リポタンパク質‐コレステロールの血清濃度が、マカダミアナッツおよびココナッツ食において有意に減少し、体重および肥満度指数がマカダミアナッツ給餌群において減少したが、バター給餌群には統計的に有意な変化は見られなかった。
【０１１７】
Ｊ Ｎｕｔｒ． ２００９ Ｆｅｂ；１３９（２）：２１５‐２１．Ｅｐｕｂ ２００８ Ｄｅｃ ２３．Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｅｔａｒｙ ｐａｌｍｉｔｏｌｅｉｃ ａｃｉｄ ｏｎ ｐｌａｓｍａ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ｐｒｏｆｉｌｅ ａｎｄ ａｏｒｔｉｃ ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ａｒｅ ｓｉｍｉｌａｒ ｔｏ ｔｈｏｓｅ ｏｆ ｏｔｈｅｒ ｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｆ１Ｂ ｇｏｌｄｅｎ Ｓｙｒｉａｎ ｈａｍｓｔｅｒ．Ｍａｔｔｈａｎ ＮＲ，Ｄｉｌｌａｒｄ Ａ，Ｌｅｃｋｅｒ ＪＬ，Ｉｐ Ｂ，Ｌｉｃｈｔｅｎｓｔｅｉｎ ＡＨ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｊｅａｎ Ｍａｙｅｒ ＵＳＤＡ Ｈｕｍａｎ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｎ Ａｇｉｎｇ ａｔ Ｔｕｆｔｓ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ ０２１１１，ＵＳＡ．
【０１１８】
ＰＵＦＡと比較したパルミトレイン酸の酸化に対する低感受性（１６：１）は、半硬化脂肪の許容可能な代替品を見つけることに関して機能的な利点を付与し得るが、心血管系リスク因子に与えるその影響に関する利用可能なデータが限られている。この試験は、マカダミア油［一価不飽和脂肪酸（ＭＵＦＡ）１６：１］、ヤシ油（ＳＦＡ，１６：０）、カノーラ油（ＭＵＦＡ，１８：１）、またはヒマワリ油（ＰＵＦＡ，１８：２）を豊富に含む食餌（１０％脂肪、０．１％コレステロール、ｗｔ：ｗｔ）が、Ｆ１Ｂゴールデンシリアンハムスター（ｎ＝１６／群）のリポタンパク質プロファイルおよび大動脈コレステロール蓄積に及ぼす影響を調査した。１２週間後、各群の８匹のハムスターを屠殺した（第１相）。ヤシ油を給餌した残りのハムスターは、ココナッツ油を含有する食餌に変更し、他の食餌群のハムスターは、さらに６週間、元の食餌を継続した（第２相）。わずかな例外はあったものの、時間的経過および食餌性ＳＦＡ源は、試験の結果を変化させなかった。マカダミア油を給餌したハムスターは、ヤシ油およびココナッツ油を給餌したハムスターと比較すると、より低い非ＨＤＬコレステロールおよびトリグリセリド濃度を有し、ココナッツ油、カノーラ油、およびヒマワリ油を給餌したハムスターと比較すると、より高いＨＤＬ‐コレステロールを有していた。大動脈コレステロール濃度は、食餌の脂肪の種類による影響を受けなかった。肝臓コレステロール濃度は、飽和油を給餌したハムスターと比較して、不飽和においてより高かった。ＲＢＣ膜および大動脈コレステロールエステル、トリグリセリド、ならびにリン脂質脂肪酸プロファイルは、食餌性油のプロファイルを反映するものであった。これらのデータは、パルミトレイン酸を比較的多く含む油は、血漿リポタンパク質プロファイルまたは大動脈コレステロール蓄積に有害な影響を及ぼすことはなく、不飽和脂肪酸を豊富に含む他の油と同様であったことを示唆するものである。
【０１１９】
Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ．２００６ Ｊｕｌ；１１（７）：１２３１‐８．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｐａｌｍｉｔｏｌｅｉｃ ａｃｉｄ ａｎｄ ｃＡＭＰ ｏｎ ｃａｓｐａｓｅ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｅｌｌ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ ｉｎ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｂｅｔａ−ｃｅｌｌｓ ｅｘｐｏｓｅｄ ｔｏ ｐａｌｍｉｔａｔｅ．Ｗｅｌｔｅｒｓ ＨＪ，Ｄｉａｋｏｇｉａｎｎａｋｉ Ｅ，Ｍｏｒｄｕｅ ＪＭ，Ｔａｄａｙｙｏｎ Ｍ，Ｓｍｉｔｈ ＳＡ，Ｍｏｒｇａｎ ＮＧ．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｐｅｎｉｎｓｕｌａ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｈｏｏｌ，Ｄｅｖｏｎ，Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｗａｙ，Ｐｌｙｍｏｕｔｈ，ＰＬ６ ８ＢＵ，ＵＫ．
【０１２０】
飽和および一価不飽和脂肪酸は、慢性曝露の間に、膵臓のβ細胞生存率に異なる影響を及ぼす。長鎖飽和分子（例えば、パルミチン酸）は、β細胞に細胞傷害性であり、これはカスパーゼの活性化およびアポトーシスの誘導に関連している。それとは対照的に、一価不飽和脂肪酸（例えば、パルミトレイン酸）は毒性がなく、パルミチン酸の有害な影響から保護することができる。本研究において、我々は、ＢＲＩＮ‐ＢＤ１１β細胞におけるパルミトレイン酸の保護作用が、パルミチン酸に曝露した後にカスパーゼ活性化を減弱させることと、上昇したｃＡＭＰレベルを有する細胞で同様の応答が起こることを示している。しかしながら、パルミトレイン酸とは異なり、ｃＡＭＰの上昇は、アポトーシスから壊死への細胞死経路の変更を引き起こしたため、パルミチン酸の細胞傷害作用を防止することはできなかった。パルミトレイン酸がＢＲＩＮ‐ＢＤ１１細胞のｃＡＭＰレベルを変動させることはなく、その結果は、ｃＡＭＰにおける変化が、この脂肪酸の保護効果を媒介することに関与していないことを示唆するものである。さらに、それらの結果から、カスパーゼの活性化が減弱されることは、培養β細胞における細胞生存率の変動と常に相関しているわけではないことが明らかになり、一価不飽和脂肪酸は、ｃＡＭＰによって及ぼされた影響とは異なるアポトーシス経路における段階を制御することによって細胞生存率をコントロールすることが示唆される。
【０１２１】
Ｄｉａｂｅｔｅｓ．２００１ Ｊａｎ；５０（１）：６９‐７６．Ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｓａｔｕｒａｔｅｄ ａｎｄ ｍｏｎｏｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ ｏｎ ｂｅｔａ−ｃｅｌｌ ｔｕｒｎｏｖｅｒ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｍａｅｄｌｅｒ Ｋ，Ｓｐｉｎａｓ ＧＡ，Ｄｙｎｔａｒ Ｄ，Ｍｏｒｉｔｚ Ｗ，Ｋａｉｓｅｒ Ｎ，Ｄｏｎａｔｈ ＭＹ．Ｄｉｖｉｓｉｏｎ ｏｆ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｄｉａｂｅｔｅｓ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｚｕｒｉｃｈ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ．
【０１２２】
糖毒性および脂肪毒性は、２型糖尿病において観察されるβ細胞機能障害の原因となる。ここで、我々は、異なるグルコース濃度の飽和および不飽和脂肪酸がβ細胞の増殖およびアポトーシスに及ぼす影響を調べる。ウシ角膜内皮細胞由来の細胞外マトリックスでコーティングしたプレート上で、成獣ラットの膵島を培養した。５．５、１１．１、または３３．３ｍｍｏｌ／Ｌのグルコースを含む培地で飽和脂肪酸（０．５ｍｍｏｌ／Ｌパルミチン酸）に膵島を４日間曝露した結果、β細胞ＤＮＡ断片化に５〜９倍の増加が見られた。対照的に、一価不飽和パルミトレイン酸のみ（０．５ｍｍｏｌ／Ｌ）、またはパルミチン酸（それぞれ０．２５または０．５ｍｍｏｌ／Ｌ）との組み合わせは、ＤＮＡ断片化に影響を及ぼさなかった。グルコース濃度の増加は、パルミチン酸によって劇的に減少されたβ細胞の増殖を促進した。パルミトレイン酸は、５．５ｍｍｏｌ／Ｌのグルコースを含む培地において増殖活性を強化したが、より高いグルコース濃度（１１．１および３３．３ｍｍｏｌ／Ｌ）ではさらなる影響は見られなかった。細胞透過性のセラミド類似体であるＣ２セラミドは、パルミチン酸誘導によるβ細胞のアポトーシスおよび増殖の減少の両方を模倣した。さらに、セラミド合成酵素阻害剤フモニシンＢ１は、パルミチン酸がβ細胞の生存率に及ぼす悪影響をブロックした。また、パルミトレイン酸ではなく、パルミチン酸が、ミトコンドリアのアデニンヌクレオチドトランスロケーターの発現を減少させ、ミトコンドリアから細胞質ゾル内へのシトクロムｃの放出を誘導した。最後に、パルミトレイン酸は、パルミチン酸によって減少されたβ細胞分泌機能を向上させた。総合すると、これらの結果から、飽和パルミチン酸の脂肪毒性効果は、β細胞の増殖能の低下に加えてアポトーシス速度の増加に関与し、インスリンの分泌の障害となったことが示唆される。パルミチン酸がβ細胞のターンオーバーに及ぼす有害な影響は、セラミドの形成およびアポトーシスのミトコンドリア経路の活性化によって媒介される。対照的に、一価不飽和パルミトレイン酸は、β細胞のアポトーシスに影響を及ぼさないが、低グルコース濃度でβ細胞の増殖を促進し、パルミチン酸の悪影響を相殺するとともに、β細胞の機能を向上させる。
【０１２３】
Ｓｋｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ａｐｐｌ Ｓｋｉｎ Ｐｈｙｓｉｏｌ．２００３ Ｍａｙ‐Ｊｕｎ；１６（３）：１７６‐８７．Ｐａｌｍｉｔｏｌｅｉｃ ａｃｉｄ ｉｓｏｍｅｒ（Ｃ１６：１ｄｅｌｔａ６）ｉｎ ｈｕｍａｎ ｓｋｉｎ ｓｅｂｕｍ ｉｓ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ａｇａｉｎｓｔ ｇｒａｍ‐ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｂａｃｔｅｒｉａ．Ｗｉｌｌｅ ＪＪ，Ｋｙｄｏｎｉｅｕｓ Ａ．ＣｏｎｖａＴｅｃ，Ｂｒｉｓｔｏｌ‐Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏ．，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，ＮＪ，ＵＳＡ．
【０１２４】
プールしたヒト皮脂の薄層クロマトグラフィーによって分析された脂質組成の割合：セラミド（１３％）、脂肪酸（４７％）、コレステロール（７％）、コレステロールエステル（２％）、スクワレン（１１％）、トリグリセリド（３％）、およびワックスエステル（１７％）。全皮脂脂質（２〜４ｍｇ／ｍＬ）を細菌培養培地で超音波処理したところ、グラム陽性菌、黄色ブドウ球菌、唾液連鎖球菌および嫌気性フソバクテリウム・ヌクレアタムの成長に４〜５倍のｌｏｇの減少を引き起こしたが、ほとんどのグラム陽性菌に対しては無効であった。皮脂脂質の分画は、飽和および不飽和脂肪酸の両方が高い抗菌活性を保持していたことを示した。ラウリン酸（Ｃ１２：０）は、最も活性な飽和脂肪酸であった。不飽和脂肪酸であるパルミトレイン酸（Ｃ１６：１δ６、ｃＰＡ）は、最も優勢なモノエンであると同時に最も活性な抗菌脂肪酸であった。精製したｃＰＡ（＞９９％）は、グラム陽性菌に対して１０〜２０マイクログラム／ｍＬという典型的な最小抑制濃度（ＭＩＣ）値をもたらした。有機的に合成されたｃＰＡ異性体では、天然の物質に匹敵するＭＩＣ値が得られた。天然および合成ｃＰＡの両方が、カンジダアルビカンスの病原株のブタ角質層への付着をブロックする上で最も活性な皮脂の脂質分画であることが分かった。エタノールをｃＰＡと合わせると、緑膿菌、アクネ菌、大腸菌、および黄色ブドウ球菌のうちのいくつかのメチシリン耐性菌株を含むグラム陽性病原菌に対する相乗的な殺菌活性を発揮する。パルミトレイン酸は、創傷被覆材におけるグラム陽性菌抗菌剤として、またスキンケアおよびヘアケア製品における天然グラム陽性の抗菌性保存剤として、二次的なグラム陽性菌感染の治療のための局所用製剤において有用であり得る。Ｃｏｐｙｒｉｇｈｔ ２００３ Ｓ．Ｋａｒｇｅｒ ＡＧ，Ｂａｓｅｌ Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎｓ ｓ Ｌｅｕｋｏｔ Ｅｓｓｅｎｔ Ｆａｔｔｙ Ａｃｉｄｓ．２００６ Ｆｅｂ；７４（２）：１４９‐５６．Ｅｐｕｂ ２００５ Ｄｅｃ １５．Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ ａｎｄ ｐｓｙｃｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ ｉｎ ｄｅｐｒｅｓｓｉｖｅ ｉｎｐａｔｉｅｎｔｓ ｕｎｄｅｒ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｌｙ ｉｎｄｕｃｅｄ ｓｔｒｅｓｓ． Ｉｒｍｉｓｃｈ Ｇ，Ｓｃｈｌaｆｋｅ Ｄ，Ｒｉｃｈｔｅｒ Ｊ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ ａｎｄ Ｐｓｙｃｈｏｔｈｅｒａｐｙ，Ｒｏｓｔｏｃｋ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｅｈｌｓｈｅｉｍｅｒ Ｓｔｒ．２０，Ｄ‐１８１４７，Ｒｏｓｔｏｃｋ，Ｇｅｒｍａｎｙ．
【０１２５】
脂肪酸は、体内における重要な細胞およびホルモンのプロセスに影響を与えることができる。例えば血中の脂肪酸含有量が十分でないと、種々の疾病の原因となるか、および／または種々の疾病をもたらす。鬱病患者において脂肪酸濃度における変化が見られた（特にオメガ３‐脂肪酸の欠乏）。この論文は、精神心理学的パラメータと脂肪酸組成における変化との間に何らかの関係が存在するかどうかという疑問を提起している。実験的に誘導された約１時間のストレスの前および後に直接測定された１１８人の精神病入院患者の血清中の脂肪酸濃度を、入院時、退院時、および３ヶ月後の経過観察の間に持続的に記録した精神心理学的パラメータと関連付けて分析した。収縮期および拡張期血圧、指尖脈波振幅、前額温（ＦＤ）、および頬骨筋のＥＭＧ活性が、単一不飽和オレイン酸（１８：１ｎ‐９）およびエルカ酸（２２：１）ならびに飽和ミリスチン酸（１４：０）およびラウリン酸（１２：０）の濃度と一貫して相関していた。ＦＤと、アラキドン酸（２０：４ｎ‐６）およびパルミトレイン酸（１６：１）の濃度との間に逆相関が見られた。さらに、退院時のエルカ酸濃度が高いほど、ベック鬱病評価尺度（ＢＤＩ）によって評価される鬱病スコアが高かった。パルミトレイン酸およびラウリン酸の高い濃度は、鬱病の低いレベルと関連していた（ＢＤＩおよびハミルトンスコア）。鬱病における追加の治療計画のために、これらの知見の意義が検討される。
【０１２６】
Ｃｅｌｌ．２００８ Ｓｅｐ １９；１３４（６）：９３３‐４４．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｌｉｐｏｋｉｎｅ，ａ ｌｉｐｉｄ ｈｏｒｍｏｎｅ ｌｉｎｋｉｎｇ ａｄｉｐｏｓｅ ｔｉｓｓｕｅ ｔｏ ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ．Ｃａｏ Ｈ，Ｇｅｒｈｏｌｄ Ｋ，Ｍａｙｅｒｓ ＪＲ，Ｗｉｅｓｔ ＭＭ，Ｗａｔｋｉｎｓ ＳＭ，Ｈｏｔａｍｉｓｌｉｇｉｌ ＧＳ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｃｏｍｐｌｅｘ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｈａｒｖａｒｄ Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ ０２１１５，ＵＳＡ．
【０１２７】
個々の組織における脂質代謝の調節不全は、インスリン作用およびグルコース代謝の全身性の破壊を引き起こす。定量的なリピドミクス解析と、脂肪組織の脂質シャペロンａＰ２およびｍａｌ１を欠損するマウスを用いて、我々は、脂肪組織における代謝の変動が、どのように脂質シグナルを介して全身代謝と関連しているのかを調査した。新規脂質生成における堅調な増加は、これらのマウスの脂肪組織を、食餌性脂質曝露の有害な影響に対して耐性にした。全身脂質プロファイルはまた、筋肉のインスリン作用を強く刺激し、脂肪肝を抑制する、脂肪組織に由来する脂質ホルモンとしてのＣ１６：１ｎ７‐パルミトレイン酸の同定へと結びついた。我々のデータは、脂質媒介性の内分泌ネットワークを明らかにし、脂肪組織が、離れた器官と連絡して全身の代謝恒常性を制御するために、Ｃ１６：１ｎ７‐パルミトレイン酸等のリポカインを使用することを示している。
【０１２８】
６．ミリストレイン酸
【０１２９】
ミリストレイン酸、または９‐テトラデセン酸は、酵素δ９デサチュラーゼによってミリスチン酸から生合成されるオメガ‐５脂肪酸である。自然に見られることは稀であり、ヒトにおける生物学的有意性は不確かである。この脂肪酸の主要な源のうちの１つは、時にはその最も名の知れたメンバーにちなんで「ナツメグ科」と呼ばれることのある顕花植物の科の、ニクズク属の植物の種油である。いくつかの種において、ミリストレイン酸は油の最大３０パーセントを構成することができる。ミリストレイン酸はまた、海洋動物、ビーバー、およびウシの脂肪の天然の構成要素である。
【０１３０】
ノコギリヤシから抽出されるミリストレイン酸は、ヒト前立腺癌ＬＮＣａＰ細胞においてアポトーシスおよび壊死を誘導することが分かっている。さらに、チーズを製造する際の副産物に見出されるミリストレイン酸は、カンジダアルビカンスの発芽の阻害において最も活性な３つの脂肪酸のうちの１つである。最後に、ミリストレイン酸は、歯周病を罹患する患者において大量に見られる細菌であるセレノモナス・アルテミジス（Ｓｅｌｅｎｏｍｏｎａｓ ａｒｔｅｍｉｄｉｓ）の成長を阻害することが分かっている。
【０１３１】
Ｐｒｏｓｔａｔｅ．２００１ Ａｐｒ；４７（１）：５９‐６５．Ｍｙｒｉｓｔｏｌｅｉｃ ａｃｉｄ，ａ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ ｉｎ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔ ｆｒｏｍ Ｓｅｒｅｎｏａ ｒｅｐｅｎｓ，ｉｎｄｕｃｅｓ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ａｎｄ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｐｒｏｓｔａｔｉｃ ＬＮＣａＰ ｃｅｌｌｓ．Ｉｇｕｃｈｉ Ｋ，Ｏｋｕｍｕｒａ Ｎ，Ｕｓｕｉ Ｓ，Ｓａｊｉｋｉ Ｈ，Ｈｉｒｏｔａ Ｋ，Ｈｉｒａｎｏ Ｋ．Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，Ｇｉｆｕ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｉｆｕ，Ｊａｐａｎ．
【０１３２】
背景
【０１３３】
前立腺腫瘍は、ホルモン療法に抵抗性を示す末期状態に進行することは周知である。この段階では、臨床成績に影響を及ぼすような化学療法薬は存在しない。これらの前立腺細胞のための効果的な細胞死誘導剤が、魅力的な抗腫瘍剤としての候補であり得る。ノコギリヤシの抽出物は、前立腺疾患の状態を向上させるために使用されてきており、我々は、その抽出物から有効な構成要素を同定することを試みた。
【０１３４】
方法
【０１３５】
ホルモン療法抵抗性前立腺腫瘍の生体外モデルであるＬＮＣａＰ細胞において細胞生存率を調べた。
【０１３６】
結果
【０１３７】
ノコギリヤシの抽出物への曝露が、ＬＮＣａＰ細胞の細胞死をもたらしたことが判明した。ミリストレイン酸はまた、抽出物中の細胞傷害性構成要素のうちの１つとしても同定された。Ｈｏｅｃｈｓｔ３３３４２染色によって判定したところ、細胞死は、アポトーシス性および壊死性の両方の核形態を呈していた。細胞死はまた、カスパーゼの活性化とも一部関連していた。
【０１３８】
結論
【０１３９】
ノコギリヤシの抽出物およびミリストレイン酸が、ＬＮＣａＰ細胞においてアポトーシスと壊死の混合した細胞死を誘導することが示された。これらの結果は、抽出物およびミリストレイン酸から前立腺癌の治療のための魅力的な新規ツールを開発できることを示唆するものである。
【０１４０】
ＦＥＭＳ Ｙｅａｓｔ Ｒｅｓ．２００７ Ｍａｒ；７（２）：２７６‐８５．Ｅｐｕｂ ２００６ Ｏｃｔ １０．Ｗｈｅｙ‐ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒｅｅ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ ｓｕｐｐｒｅｓｓ ｔｈｅ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ．Ｃｌeｍｅｎｔ Ｍ，Ｔｒｅｍｂｌａｙ Ｊ，Ｌａｎｇｅ Ｍ，Ｔｈｉｂｏｄｅａｕ Ｊ，Ｂｅｌｈｕｍｅｕｒ Ｐ．Ｄeｐａｒｔｍｅｎｔ ｄｅ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｅ ｅｔ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｅ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔe ｄｅ Ｍｏｎｔｒeａｌ，Ｃ．Ｐ． ６１２８，ｓｕｃｃ．Ｃｅｎｔｒｅ‐ｖｉｌｌｅ，Ｍｏｎｔｒeａｌ，ＱＣ，Ｃａｎａｄａ．
【０１４１】
チーズ製造産業からのウシ乳清は、健康を促進し、疾患を予防するいくつかの生理活性因子を含む。乳清中に存在する免疫グロブリン、ラクトペルオキシダーゼ、ラクトフェリン、リゾチーム、および小ペプチドが、いくつかの病原微生物に対する抗菌活性を有することを示すための努力は、何年にもわたって行われてきたが、乳清の脂質分画については、今までそのような活性が調査されてなかった。そこで、我々は、生体外アッセイに基づく分画手順を使用して、乳清クリームに由来する遊離脂肪酸が、病原性と関連する形態変化であるカンジダアルビカンスの発芽を特異的に阻害することを示した。ＨＰＬＣによるさらなる分画により、これらの活性は、主にラウリン酸、ミリストレイン酸、リノール酸、およびアラキドン酸に起因し得ることが明らかになった。
【０１４２】
Ｏｒａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９６ Ｏｃｔ；１１（５）：３５０‐５．Ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ ｏｎ ｏｒａｌ ｂａｃｔｅｒｉａ．Ｓｈａｐｉｒｏ Ｓ．Ｉｎｓｔｉｔｕｔ ｆuｒ ｏｒａｌｅ Ｍｉｋｒｏｂｉｏｌｏｇｉｅ ｕｎｄ ａｌｌｇｅｍｅｉｎｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｅ，Ｚｅｎｔｒｕｍ ｆuｒ Ｚａｈｎ‐，Ｍｕｎｄ‐ｕｎｄ Ｋｉｅｆｅｒｈｅｉｌｋｕｎｄｅ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔaｔ Ｚuｒｉｃｈ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ．
【０１４３】
選択された３つの口腔細菌、ポルフィロモナス・ジンジバリス、セレノモナス・アルテミジス、およびストレプトコッカス・ソブリナスに対する成長阻害効果について、飽和および不飽和脂肪酸ならびに脂肪酸誘導体を調べた。調査した４５個の化合物のうち、唯一、ミリストレイン酸だけが、＜１００マイクログラム／ｍＬの濃度でＳ．アルテミジスに対して阻害性であった。ｃｉｓ‐ヘキサデセン酸およびｃｉｓ‐オクタデセン酸は、通常、Ｐ．ジンジバリスおよびＳ．ソブリナスに対して阻害性であるが、二重結合の位置と最小抑制濃度との間に相関性は存在しなかった。パルミトレイン酸の最小抑制濃度を超える濃度では、Ｐ．ジンジバリスもしくはＳ．ソブリナスのいずれかからの細胞内物質の漏出、または阻害されたＳ．ソブリナスによるＬ‐イソロイシンの取り込みも促進しなかった。試験株の成長抑制に対する、予期されるチモールとの相乗的または拮抗的な相互作用についても脂肪酸および誘導体を調べた。ラウリン酸およびミリスチン酸は、各々、チモールと相乗的に挙動して、少なくとも１つの試験株の成長を抑制したのに対し、ｃｉｓ‐１０‐ヘプタデセン酸およびチモールは、Ｓ．ソブリナスの成長に対して著しく拮抗的であった。
【０１４４】
上に開示した本発明の主題の方法の全てにおける動物または個体は、マウス、ラット、ネコ、イヌ、ウマ、ウシ、もしくは他の家畜、またはヒト等の哺乳動物であり得る。特定の実施形態において、動物はヒトである。ヒトの疾病、疾患、および状態を治療するための使用に加えて、本発明の主題の方法は、獣医学的用途を有し得る。したがって、特定の脂肪酸を含有する本発明の主題の組成物は、上記の状態を治療または予防するために有用であり得、上記疾病および疾患の発症または重症度を回避することに関して固体の健康を向上することができる。
【０１４５】
投与経路
【０１４６】
特定の実施形態において、経口投与組成物は、１つ以上のカプセル、１つ以上の錠剤、または１つ以上の丸薬の形態である。
【０１４７】
主題の組成物は、薬学的に許容される担体によって患者に送達される。そのような担体は、当該技術分野において周知であり、通常、固体または液体のいずれかの形態である。本発明の主題にしたがって調製することができる固体形態の薬用植物調製物は、散剤、錠剤、分散性顆粒剤、カプセル剤、カシェ剤、および座剤を含む。一般に、固体形態の調製物は、活性薬剤の約５％〜約９０重量％を占める。
【０１４８】
固体担体は、希釈剤、香味剤、可溶化剤、滑沢剤、懸濁剤、結合剤、または錠剤崩壊剤としても作用することができる１つ以上の物質であり得、また、カプセル化材料であってもよい。散剤において、担体は、粘性の活性化合物と混合された微粉化固体である。錠剤において、活性化合物は、必要な結合特性を有する担体と好適な割合で混合され、所望の形状およびサイズに圧縮される。好適な固体担体は、炭酸マグネシウム、タルク、砂糖、乳糖、ペクチン、デキストリン、澱粉、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、低融点ワックス、カカオバター等を含む。用語「調製物」は、担体としてカプセル化材料を含む活性化合物の配合物を含むことが意図され、担体はカプセルを提供し、活性構成要素（他の担体を含むかまたは含まない）が担体に包囲されている、すなわち、活性構成要素が担体に関連している。同様に、カシェ剤が含まれる。錠剤、散剤、カシェ剤、およびカプセル剤は、経口投与に好適な固体剤形として使用することができる。簡便性または患者の承諾の理由から必要である場合には、本発明の主題にしたがって調製される薬学的錠剤は、当該技術分野において周知の技術を用いて咀嚼可能な形態で提供されてもよい。
【０１４９】
座剤を調製するためには、脂肪酸グリセリドまたはカカオバターの混合物等の低融点ワックスを最初に溶解させ、撹拌によって有効成分をその中に均質に分散させる。次いで、溶融均質混合物を都合のよい寸法の型に注入し、冷却することによって固化させる。
【０１５０】
液体形態の調製物は、非経口注入用の溶液、懸濁液、および乳濁液を含み、この液体調製物は、水または水／プロピレングリコール溶液を含むことができる。液体調製物はまた、ポリエチレングリコール水溶液中の溶液として配合されてもよい。経口的使用に好適な水溶液は、活性構成要素を水に溶解させ、必要に応じて好適な着色剤、香味料、安定剤、および増粘剤を加えることによって調製することができる。経口的使用に好適な水性懸濁液は、微粉化した活性構成要素を、粘性材料、すなわち、天然または合成のガム、樹脂、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムと、他の周知の懸濁剤とともに、水に分散させることによって作製することができる。液体薬学的調製物は、主題の活性剤の１００重量％まで占めることができる。
【０１５１】
経口または非経口投与のいずれかのために、使用する直前に液体形態の調製物に変換されることが意図される固体形態の調製物もまた、好適な担体として企図される。そのような液体形態は、溶液、懸濁液、および乳濁液を含む。このような特定の固体形態の調製物は、単位用量形態で最も簡便に提供され、したがって、単一の液体投与単位を提供するために使用される。代替として、液体形態に変換された後に、注射器、茶さじ、または他の体積測定用の容器で液体形態の調製物の所定の体積を測定することによって、複数の個々の液体用量を得ることができるように、十分な固体が提供されてもよい。そのようにして複数の液体用量が調製される場合、可能な分解を遅延させるために、上記液体用量の未使用分を低温（すなわち冷蔵）で維持することが好ましい。液体形態に変換されることが意図される固体形態の調製物は、活性材料に加えて、香味料、着色剤、安定剤、緩衝剤、人工および天然の甘味料、分散剤、増粘剤、可溶化剤等を含有することができる。有用な液体形態の調製物を調製するために用いられる液体は、水、等張水、エタノール、グリセリン、プロピレングリコール等、およびそれらの混合物であり得る。一実施形態において、液体形態は、合わせた多価不飽和油および薬用植物組成物を含有する、グリセリンと水を含むゼラチンカプセル等のカプセルの形態で調製することができる。
【０１５２】
当然のことながら、用いられる液体は、投与経路を考慮して選択される。例えば、大量のエタノールを含有する液体調製物は経口的使用には適さない。
【０１５３】
本発明の主題の薬用植物調製物は、安息香酸、ソルビン酸、メチルパラベン、プロピルパラベン、およびエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）等の、当該技術分野で周知の１つ以上の保存剤を含むことができる。保存剤は、通常、薬学的組成物の最大約１重量％、好ましくは約０．０５〜約０．５重量％の量で存在する。
【０１５４】
本発明の主題の目的のために有用な緩衝剤は、薬学的組成物の最大約１重量％、好ましくは約０．０５〜約０．５重量％の量のクエン酸‐クエン酸ナトリウム、リン酸‐リン酸ナトリウム、および酢酸‐酢酸ナトリウムを含む。有用な懸濁剤または増粘剤は、薬学的組成物の最大約２０重量％、好ましくは約１％〜約１５重量％の量のメチルセルロース等のセルロース、アルギン酸等のカラギーナンおよびその誘導体、キサンタンガム、ゼラチン、アカシア、ならびに微結晶性セルロースを含む。
【０１５５】
利用することのできる甘味料は、当該技術分野で周知の天然および人工の両方の甘味料である。キシロース、リボース、グルコース、マンノース、ガラクトース、フルクトース、ブドウ糖、スクロース、マルトース、部分的に加水分解した澱粉またはコーンシロップ固形分等の単糖類、二糖類および多糖類等、ならびにソルビトール、キシリトール、マンニトール、およびそれらの混合物等の糖アルコール等の甘味料が、薬学的組成物の約１０重量％〜約６０重量％、好ましくは約２０重量％〜約５０重量％の量で用いられてもよい。サッカリンおよびサッカリン塩（ナトリウムまたはカルシウム等）、チクロ塩、アセサルフェーム‐Ｋ、アスパルテーム等、ならびにそれらの混合物等の水溶性人工甘味料が、組成物の約０．００１重量％〜約５重量％の量で用いられてもよい。
【０１５６】
本発明の主題の薬用植物生成物に用いることのできる香味料は、天然および人工の両方の香味料、ならびにペパーミント等のミント、メントール、バニラ、人工バニラ、チョコレート、人工チョコレート、シナモン、種々のフルーツ香味料を、個別におよび混合された状態の両方で、薬学的組成物の約０．５重量％〜約５重量％の量で含む。
【０１５７】
本発明の主題において有用な着色剤は、組成物の最大約６重量％の量で組み込まれてもよい色素を含む。好ましい色素である二酸化チタンは、最大約１重量％の量で組み込まれてもよい。また、着色剤は、ＦＤ＆Ｃ染料として知られる食品、医薬品、および化粧品の用途に好適な他の染料等を含むことができる。そのような染料は、通常、薬学的組成物の最大約０．２５重量％、好ましくは約０．０５重量％〜約０．２重量％の量で存在する。全てのＦＤ＆ＣおよびＤ＆Ｃ染料、ならびにそれらの対応する化学構造の完全な記述はＫｉｒｋ‐Ｏｔｈｍｅｒ Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｕｍｅ５の８５７〜８８４ページに見出すことができ、その記述は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１５８】
有用な可溶化剤は、アルコール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等を含み、香味料を可溶化するために使用されてもよい。可溶化剤は、通常、薬学的組成物の最大約１０重量％、好ましくは約２重量％〜約５重量％の量で存在する。
【０１５９】
必要に応じて本組成物中に使用することのできる滑沢剤は、シリコーン油、または置換および非置換ポリシロキサン、例えば、ジメチコンとしても知られるジメチルポリシロキサン等の流体を含む。他の周知の滑沢剤が用いられてもよい。
【０１６０】
薬用植物調製物はまた、単位投与量形態で調製することもできる。そのような形態において、調製物は適切な量の活性構成要素を含有する単位用量に細分化される。単位投与量形態は包装された調製物であってもよく、その包装が個別の量の調製物、例えば、小型包装された錠剤、カプセル剤、およびバイアルまたはアンプル中の散剤を含有する。単位投与量形態はまた、カプセル剤、カシェ剤、もしくは錠剤自体であってもよいか、または適切な数のこれらのうちのいずれかが包装形態になっていてもよい。
【０１６１】
本発明の主題の化合物が、他の合成のまたは天然に発生する物質と有意に有害な相互作用を示すことは予想されない。したがって、本発明の主題の化合物は、例えば、癌を治療するための他の有用な化合物および組成物と併用投与することができる。特に、本発明の主題の化合物は、本発明の主題の他の化合物、化学療法剤等と併用投与されてもよい。
【０１６２】
所望の薬用植物配合物は、投与経路および所望の投与量等の考慮すべき事柄に依存して、当業者により決定される。例えば、“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ”，１８ｔｈ ｅｄ．（１９９０，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ １８０４２），ｐｐ．１４３５‐１７１２（その開示は、参照により本明細書に組み込まれる）を参照のこと。そのような配合物は、本発明の主題の本治療剤の物理的状態、安定性、生体内での放出速度、および生体内でのクリアランス速度に影響を及ぼし得る。
【０１６３】
投与量
【０１６４】
体重１キログラム当たり約０．００１ｍｇ〜約１００ｍｇ程の有効成分の化合物または組成物の投与量レベルが、本明細書に記載される状態の治療において有用である。一実施形態において、好ましい全投与量は、個体当たり２００ｍｇ／１日〜２０００ｍｇ／１日の範囲である。他の実施形態は、個体当たり＞２０００ｍｇ／１日の１日用量を含む。本発明の主題の化合物および組成物は、１日に２回または３回の用量で投与することができる。１日２回の低用量（２００〜３００ｍｇ）から開始して、必要に応じて、徐々により高い用量に増加させることが、企図されるストラテジーである。単一剤形を生成するために担体材料と組み合わせることのできる有効成分の量は、治療される宿主および特定の投与様式によって異なる。一実施形態において、単一の投与単位は、単一カプセル中に１０００ｍｇの本発明の主題の組成物を含み、単一カプセルは、１日当たり２０００ｍｇの合計用量で１日２回投与される。
【０１６５】
しかしながら、任意の特定の患者のための特定の用量レベルは、用いられる特定の化合物の活性；患者の年齢、体重、総体的な健康、性別および食生活；投与期間；排泄率；薬剤の併用；治療される特定の疾患の重症度；および投与形態を含む、多様な要因に依存することを理解されたい。当業者は、そのような要因の変異性を認識し、予期しない結果が示される場合を除いて、単なるルーチン実験を用いて特定の用量レベルを確立することが可能であろう。
【実施例】
【０１６６】
以下の実施例は、本発明の主題を例示するものであって、それを制限することを意図するものではない。別途記載のない限り、全ての割合は最終組成物の１００重量％に基づく。用語「ＷｈｏｌｅＭｅｇａ」の使用は、本発明の主題の組成物である、多価不飽和油組成物と組み合わせた、治療的に有効な量のローズマリーの超臨界抽出物およびオレガノの超臨界抽出物を含む組成物を指す。
【０１６７】
実施例１：本発明の組成物（ＷｈｏｌｅＭｅｇａ組成物）を用いた臨床試験：サーモン油の脂質の吸収
【０１６８】
本発明の主題の組成物であるＷｈｏｌｅＭｅｇａサーモン油生成物を２ｇまたは４ｇ摂取したヒトボランティアにおいて臨床試験を行った。血清中の主な魚油の脂質の存在を経時的に測定した。結果は、ＷｈｏｌｅＭｅｇａの脂質は、消化管膜を通過して吸収され、血清中で検出可能であったことを示した。
【０１６９】
結果は、ＷｈｏｌｅＭｅｇａサーモン油の脂質の吸収および血液中にそれらが出現したことを明白に示すものであった。図１および２に示すように、用量２ｇまたは４ｇのＷｈｏｌｅＭｅｇａの摂取は、ＥＰＡオメガ‐３の血清含有量に濃度依存性および時間依存性の変化をもたらす。本発明の主題の組成物はまた、図２に示される平均ＥＰＡ、オレイン酸、およびパルミトレイン酸（それぞれ、ＷｈｏｌｅＭｅｇａオメガ‐３、‐５、および‐７多価不飽和脂肪酸の代表例である）における時間依存性の変化をもたらす。オメガ３（ＥＰＡ）、オメガ７パルミトレイン酸）、およびオメガ９（オレイン酸）における変化は、脂質クラスにおける変化の幅を表す。破線は、単にベースライン（投与前）のレベルを示す。ＷｈｏｌｅＭｅｇａに由来する脂質には、最長２４時間までの持続する変化を見ることができる。他の実施形態において、本発明の主題の他の組成物もまた、脂質組成におけるこれらの変化を実現するために有用である。
【０１７０】
実施例２：多価不飽和脂質の細胞膜への取り込み
【０１７１】
本発明の主題の組成物の摂取後に、細胞膜脂質組成が改変されたかどうかを評価するために、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）の試料を投与前および投与後に採取し、膜脂質含有量をＧＣ／ＭＳによって測定した。下の図３に示すように、たとえ用量２ｇのＷｈｏｌｅＭｅｇａの単回投与であっても、ＷｈｏｌｅＭｅｇａに由来する脂質の膜組成に容易に確認可能な増加をもたらした。データは、連続３日間ＷｈｏｌｅＭｅｇａ（２ｇ／日）を摂取した４人のボランティアから得た。投与前と投与後３日との膜脂質組成における違いを判定した。
【０１７２】
いくつかの実施形態において、本発明の主題の組成物を摂取することにおける目的は、多価不飽和脂肪酸を組織膜に取り込むことであり、そこで、脂肪酸は、細胞シグナル伝達事象を調節（例えば、炎症を減少させる）し、膜の流動性を増加させる役割を果たす。エイコサノイドを形成するためのホスホリパーゼの作用により、細胞膜から脂肪酸を放出するように細胞が活性化されると、ＥＰＡおよびＤＨＡは、ＣＯＸおよびＬＯＸ酵素のためにアラキドン酸と競合する。放出されたアラキドン酸が、炎症性のプロスタグランジン生成物（例えば、ＰＧＥ２）を生じさせる一方で、魚油の脂質は、ＡＡに由来する生成物（例えば、ＰＧＥ２およびＬＴＢ４）よりも有意に炎症を引き起こしにくいプロスタグランジンおよびリポキシゲナーゼ生成物（例えば、ＰＧＥ３およびＬＴＢ５）を生成する。他の実施形態では、本発明の主題の他の組成物もまた、脂質組成におけるこれらの変化を実現するため、また、同じ細胞シグナル伝達事象を調節するために有用である。
【０１７３】
実施例３：ＷｈｏｌｅＭｅｇａは「善玉脂肪」の「悪玉脂肪」に対する比率を改善する
【０１７４】
ＷｈｏｌｅＭｅｇａの後の血清脂質含有量における変化は、ＥＰＡ等の健康的なオメガ‐３油の増加、およびオメガ‐６油アラキドン酸（ＡＡ）に相対的な減少をもたらした。オメガ‐６対オメガ‐３の比率、またはＡＡ／ＥＰＡ比におけるこの変化は、図４および５に示すように用量依存性であった。そのような変化は、健康のために有益であると考えられ、炎症の可能性を減少させる。
【０１７５】
同様に、図６は、１日当たり２ｇまたは４ｇのいずれかのＷｈｏｌｅＭｅｇａの摂取が、末梢血単核球の膜組成に変化をもたらすことを示す。ＷｈｏｌｅＭｅｇａに由来するＥＰＡのより高い取り込みの結果として、膜のアラキドン酸が減少する。このプロットの重要な点は、たとえ２ｇ／日のＷｈｏｌｅＭｅｇａであっても、組織（白血球）の膜組成における健康的な変化を達成し、アラキドン酸に由来する炎症の可能性を減少させることが可能であるということである。上記プロットは、連続３日間、２ｇ／日のＷｈｏｌｅＭｅｇａを摂取した４人の対象から得たデータに由来する。末梢血単核球は、投与前およびＷｈｏｌｅＭｅｇａを投与した３日後に採取した。重要なオメガ‐３脂肪酸であるＥＰＡの含有量に関しては、細胞膜脂質組成が増加する。
【０１７６】
魚油等の栄養補助剤の影響を評価するための別の方法は、血清および組織膜における「善玉脂肪」の「悪玉脂肪」に対する変化を測定することである。「善玉」および「悪玉」脂肪の分類は、これらの特定の脂肪酸の影響について分かっていることに基づいている。脂肪の相対的な分類については上記考察を参照のこと。
【０１７７】
善玉脂肪／悪玉脂肪の比率における相対的変化を調べることにより、用量２ｇのＷｈｏｌｅＭｅｇａを摂取した固体において、小規模ではあるが、血清および組織膜組成の両方に関して、この比率における変化が明らかになった。比率における５〜１０％の変化は数字的には小さいものであるが、「善玉脂肪」／「悪玉脂肪」の比率におけるこの小さな変化の結果であっても、重要な健康への影響がある。
【０１７８】
【表５】
【０１７９】
表Ｖのデータは、２ｇのＷｈｏｌｅＭｅｇａを摂取した８人のボランティアのデータの分析から記録された「善玉脂肪」／「悪玉脂肪」の比率における変化を反映している。ＰＢＭＣ膜組成における「善玉脂肪」／「悪玉脂肪」の変化は、連続３日間ＷｈｏｌｅＭｅｇａ（２ｇ／日）を摂取した４人の個体のデータに由来する。データは平均値＋／‐ＳＥで表す。別の実施形態において、本発明の主題の組成物は、「善玉脂肪」／「悪玉脂肪」の比率を、血清中で少なくとも５．０、少なくとも６．０、少なくとも６．５％、少なくとも７．５％、少なくとも８．０％、または少なくとも８．５％増加させるか、または組織中で、少なくとも５．０％、少なくとも６．０％、少なくとも６．５％、少なくとも７．５％、少なくとも８．０％、少なくとも８．５％、また少なくとも９．２％増加させる。
【０１８０】
実施例４：ＷｈｏｌｅＭｅｇａは、良好な心血管の健康と関連する血液脂質化学を改善する
【０１８１】
血液化学分析は、変化するものについてだけではなく、変化しないもの（例えば、魚油のＩｇＥ）についても重要である。ＷｈｏｌｅＭｅｇａに起因する血液化学における重要な違いの評価をここに記載する。データは、連続３日間、２ｇ／日のＷｈｏｌｅＭｅｇａを摂取した４人の個体に由来する。限定的なデータセットは、統計分析のための十分な情報を提供することはできないが、これらは、良好な健康と関連する血清の血液化学における有益な変化の傾向を明白に示している。より長期の投与期間（例えば、２〜４週間）にわたってそのような血液脂質化学を調べると興味深いものになるであろう。
【０１８２】
【表６】
【０１８３】
トリグリセリド、コレステロール、およびＬＤＬにおける変化は、高用量の魚油の投与を用いて、他者により以前に指摘されている。しかしながら、この実施例では、２ｇｍ／日という比較的低い用量の投与後にのみ、トリグリセリドおよびＬＤＬの変化が予期せずに得られた。魚油に関する以前の研究は、いずれの用量においてもコレステロールにおける変化は報告していないため、これは予想外である。総コレステロールレベルにおいて、少ないながらも意義のある減少が観察された。これはまた、できる限り低いことが望ましいコレステロール／ＨＤＬ比がわずかに減少したことにも反映されている。
【０１８４】
最近、Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ（実際の出版に先駆けたｅｐｕｂ）において、筆者Ｍ．Ａ．Ｍｉｃａｌｌｅｆ ｅｔ ａｌは、炎症のマーカーであり、循環器関連事象の独立した予測因子であると報告されているＣ‐反応性タンパク質（ＣＲＰ）のレベルが、ＤＨＡおよびＥＰＡの血中レベルに反比例する関係にあると報告している。本発明の主題の組成物を用いたデータは、この報告と一致している。
【０１８５】
実施例５：ＷｈｏｌｅＭｅｇａは、サイトカインおよび／またはケモカインのレベルを有意に変化させない
【０１８６】
サイトカインおよびケモカインのデータの初期の分析は、ＷｈｏｌｅＭｅｇａの単回用量またはさらには複数回用量の投与に起因し得る有意な変化を示していない。後になってみれば分かるように、これは、魚油の正確な投与によって起こることが知られていないため、予想できないことではない。いくつかの実施形態において、魚油は、本試験において測定されたサイトカインを有意に変化させることなく、一旦炎症が起こると、それを調節することができ、また、炎症を引き起こす刺激に対する応答を緩和（すなわち、阻止）することができる。
【０１８７】
実施例６：ＷｈｏｌｅＭｅｇａはヒトの摂取に対する認容性を有する
【０１８８】
ＳＴＴ（我々のＣＲＯ）によるＷｈｏｌｅＭｅｇａ生成物のヒトにおける認容性の評価は、良好であると見なされた。少数の脱落者が存在し、そのうち１人のみが、魚臭いげっぷが出る現象について不満を述べた。
【０１８９】
実施例７：魚油食餌および肺癌
【０１９０】
要約すると、本明細書に記載する生体外試験は、ｎ‐６多価不飽和脂肪酸が腫瘍細胞の成長を促進させ、ｎ‐３多価不飽和脂質（ＥＰＡ等）がヒト肺癌細胞の増殖を阻害することを示した。この効果は、一部、ＣＯＸ‐２の代謝によって媒介されるものであると考えられる。シクロオキシゲナーゼ、リポキシゲナーゼ、脂質メッセンジャー、および膜組成に関与する種々の脂質代謝経路の代表例については、図７および８を参照のこと。
【０１９１】
魚油ｎ‐３の食餌は、抗炎症性効果を有し、心血管の保護を提供し、免疫調節を提供し、化学療法の細胞傷害効果を増大させることが分かっている。
【０１９２】
ｎ‐３脂肪酸の抗癌活性の原因となる、可能な分子機構が仮定されている（Ｈａｒｄｍａｎ，Ｅ．Ｊ．Ｎｕｔｒ．１３２：３５０８Ｓ，２００２）。これらは、例えば、癌細胞の分化を誘導し、ＮＦ‐κＢの活性化およびＢｃｌ‐２の発現を抑制し、ＡＰ‐１およびＲａｓの発現を減少させ、癌に関連する悪液質を減少させ、エイコサノイド代謝を改変し、ＰＧＥ２の生成を阻害する、ｎ‐３脂質および代謝によってそれらから得られる脂質を含む。
【０１９３】
実施例８：前立腺癌臨床試験
【０１９４】
実験計画：浸潤性前立腺癌であると診断された４６６人の男性と、４７８人の年齢および人種を一致させた対照を用いた症例対照研究
【０１９５】
遺伝子型分析：９つのＣＯＸ‐２タグ一塩基多型（ＳＮＰ）
【０１９６】
結果：ＬＣ ｎ‐３の取り込み量の増加は、浸潤性前立腺癌のリスクの低下と強い関連性があった（ｐ＜０．０００１）。この逆の関連性は、特定のＣＯＸ‐２変異体ＳＮＰ（ＳＮＰ ｒｓ４６４８３１０）を有する男性においてさらに強かった。
【０１９７】
結論：食餌によるＬＣ ｎ‐３脂肪酸の摂取は、炎症を減少させ、代わりに、前立腺癌の発生および進行のリスクを低下させることが可能である。この潜在的効果は、脂肪酸代謝および炎症における重要な酵素であるＣＯＸ‐２の遺伝的変異体によって修正され得る。
【０１９８】
実施例９：シクロオキシゲナーゼ‐２と肺癌
【０１９９】
ＣＯＸ‐２の発現上昇およびＰＧＥ２の形成が、前浸潤性前駆病変および浸潤性肺癌を含むほとんどの非小細胞肺癌に見られている。ＰＧＥ２は、ＢＣｌ‐２、Ｓｒｃ、ＭＡＰＫ、ＶＥＧＦ、ＥＧＦの上方制御およびＢＡＸシグナル伝達経路の下方制御により、増殖および血管新生を促進し、ＮＳＣＬＣ細胞のアポトーシスを防止する。選択的なＣＯＸ‐２阻害剤セレコキシブまたはＮＳＡＩＤを用いたヒトの治療は、非小細胞肺癌に罹患する患者における化学療法の抗腫瘍効果を増大させる。
【０２００】
ＰＧＥ２がＡ５４９細胞の増殖を若干刺激するのに対し、ＰＧＥ３は、これらの特定の細胞の増殖を阻害する。ＥＰＡの抗増殖活性は、非小細胞肺癌（ＮＳＬＣ）細胞株Ａ５４９におけるＰＧＥ３の形成と関連している。ＰＧＥ２は、「悪玉脂肪」であるアラキドン酸に由来する。ＰＧＥ３は、「善玉脂肪」であるＥＰＡに由来する。善玉脂肪の悪玉脂肪に対する比率を変更した食餌が、ヒト肺癌に異なる影響を及ぼすかどうかを判定するために実験を行った。
【０２０１】
実施例１０：癌におけるＣＯＸ‐２発現系の比較
【０２０２】
ヒト肺癌Ａ５４９異種移植片（ＣＯＸ‐２を過剰発現する）およびＨ１２９９異種移植片（ＣＯＸ‐２を発現しない）において、特別に配合された魚油食餌の抗腫瘍効果を調べた。
【０２０３】
ＥＰＡは、Ａ５４９細胞の増幅を阻害するが、Ｈ１２９９細胞の増幅は阻害しない。図９を参照のこと。
【０２０４】
ＥＰＡに曝露されたヒト肺癌Ａ５４９およびＨ１２９９細胞におけるＰＧＥ２およびＰＧＥ３の生成（Ｙａｎｇ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．２００４）。ＥＰＡは、ＣＯＸ‐２を含有するＡ５４９細胞においてＣＯＸ‐２が媒介するＰＧＥ２の合成を阻害するが、有意なＣＯＸ‐２の発現が見られないＨ１２９９細胞では阻害しない。ＥＰＡはまた、Ａ５４９細胞中において、また、より低い程度ではあるがＨ１２９９ヒト非小細胞肺癌細胞において、比較的炎症性の低いＰＧＥ３の生成を引き起こす。図１０を参照のこと。
【０２０５】
ＰＧＥ２がＡ５４９細胞の増殖を若干刺激するのに対し、ＰＧＥ３（魚油ＥＰＡに由来）は、これらの特定の細胞の増殖を阻害する。図１１を参照のこと。
【０２０６】
ＥＰＡの抗増殖活性は、Ａ５４９細胞におけるＰＧＥ３の形成と関連している。図１２の矢印は、魚油ＥＰＡを用いたインキュベーションによってこれらのヒト非小細胞肺癌細胞内にもたらされた効果である、アポトーシス性の死滅細胞を指している。データはまた、この効果が、ＣＯＸ‐１ではなく、ＣＯＸ‐２の阻害によるものであることも示している。選択的なＣＯＸ‐２阻害剤セレコキシブの使用は、ＥＰＡの抗増殖効果を概ね無効にする。図１２を参照のこと。
【０２０７】
ＣＯＸ‐２ ｓｉＲＮＡでトランスフェクトしたＡ５４９細胞において、ＥＰＡの抗増殖効果が減少した。すなわち、ＣＯＸ‐２の生成および発現をブロックすることにより、ｅｐａ ｄｅｒｇｅ３の形成、ひいては、この魚油の抗増殖効果がブロックされたことになる。図１３を参照のこと。
【０２０８】
要約すると、これらの生体外試験は、ＣＯＸ‐２の代謝によって媒介されるヒト肺癌細胞の増殖を阻害することを示唆している。
【０２０９】
実施例１１：異なる魚油生成物の効果の比較
【０２１０】
魚油に由来するＰＧＥ３の肺癌における代謝の可能な機構の例を図１４に示す。３つの異なる魚油に由来する生成物、ＷｈｏｌｅＭｅｇａ（本発明の主題の組成物）、Ｕｌｔｉｍａｔｅ Ｏｍｅｇａ、およびＣａｒｌｓｏｎ Ｏｉｌで処理したＡ５４９細胞において、ＰＧＥ２およびＰＧＥ３の形成を調べた。図１５を参照すると、等量（μｇ／ｍＬ）の各油を使用して、異なる油組成物で処理したＡ５４９細胞におけるＰＧＥ２およびＰＧＥ３の形成の比較を行った。
【０２１１】
魚油中の異なる量（μｇ／ｍＬ）のＥＰＡを使用して、異なる魚油生成物で処理したＡ５４９細胞におけるＰＧＥ２およびＰＧＥ３の形成の比較を行った。抗炎症性ＰＧＥ３の形成に関して、ＷｈｏｌｅＭｅｇａが他の２つの市販の魚油よりも高い効力を持つことは明白である。図１６を参照のこと。
【０２１２】
図１７は、ＷｈｏｌｅＭｅｇａおよび２つの市販の魚油生成物が、ヒトＡ５４９非小細胞肺癌細胞（上の図）およびヒト１２９９非小細胞肺癌細胞（下の図）の増殖を阻害する相対的効果を示す。多くの癌細胞がそうであると言われるように、Ａ５４９細胞はＣＯＸ‐２を過剰発現する。Ｈ１２９９細胞はＣＯＸ‐２を過剰発現しないため、ＣＯＸ‐２を過剰発現しない癌細胞のための対照を提供する。ＷｈｏｌｅＭｅｇａは、Ａ５４９細胞に対して他の２つの生成物よりも強力な効果を有する。下の図では、Ｈ１２９９細胞がＣＯＸ‐２を過剰発現しておらず、３つの魚油が細胞の増殖に対して同様の阻害効果を示した。Ａ５４９細胞はＣＯＸ‐２を過剰発現しており、そのため、通常、ＰＧＥ２の過剰発現／過剰生成がもたらされる。しかしながら、魚油ＥＰＡ等の代替の基質が提供される場合、得られる生成物はＰＧＥ２ではなくＰＧＥ３である。この変化が、増殖能を遅延させ、したがって、Ａ５４９細胞の増殖が低下する。検査した３つ全ての魚油組成物はＥＰＡを含むため、このＷｈｏｌｅＭｅｇａのより強力な効果は、驚きであり、予期しないものであった。なぜＷｈｏｌｅｍｅｇａが、他の２つの油よりもかなり効果的であるかの正確な機構は未知である。明らかに、ＷｈｏｌｅＭｅｇａ組成物に特有の少なくとも１つの構造的特徴が、さらなる抗腫瘍効果に寄与している。１つの可能性は、他の２つの魚油には存在しないＷｈｏｌｅｍｅｇａ中の他の油（オメガ‐５、オメガ‐７およびオメガ‐９油）が、癌細胞の成長に対するさらなる阻害効果に寄与しているということである。別の可能性としては、特定の油の相互に対する相対的な分画であろう。さらに別の可能性は、薬用植物油組成物、例えば、ローズマリーＳＣＥおよびオレガノＳＣＥが、癌細胞の成長に対する追加の阻害効果に寄与しているということであろう。他の考えられる非限定的な機構もまた、ＣＯＸ‐２を過剰発現する腫瘍細胞を含む腫瘍細胞の成長を阻害するＷｈｏｌｅＭｅｇａの予期せぬ能力の一因となっている可能性がある。一実施形態において、薬用植物および多価不飽和油の本発明の主題の組成物は、治療的に有効な用量が動物に投与されると、癌細胞の成長を阻害する。一実施形態において、薬用植物および多価不飽和油の本発明の主題の組成物は、ＣＯＸ‐２を過剰発現する癌細胞の成長を阻害する。
【０２１３】
ＣＯＸおよびＬＯＸ経路の変更に対する３つの魚油生成物の効果：Ａ５４９細胞中のＣＯＸ‐２、５‐ＬＯＸおよび１２‐ＬＯＸのタンパク質発現に対するこれらの３つの魚油の効果を調べた。図１８に示すように、１２‐ＬＯＸの発現は、Ｕｌｔｉｍａｔｅ ＯｍｅｇａおよびＷｈｏｌｅＭｅｇａ（１０００ｕｇ／ｍＬ）で処理したＡ５４９細胞において、それぞれ、２０％および１５％と若干減少した。Ａ５４９細胞において、ＣＯＸ‐２または５‐ＬＯＸのいずれのタンパク質発現も変更されなかった。
【０２１４】
ヒトＡ５４９肺癌細胞におけるＣＯＸ‐２、５‐および１２‐ＬＯＸ、ならびにＡｋｔ／ｐＡｋｔの発現に対するＷｈｏｌｅＭｅｇａ、Ｕｌｔｉｍａｔｅ Ｏｍｅｇａ、およびＣａｒｌｓｏｎ Ｓｕｐｅｒ Ｆｉｓｈ Ｏｉｌ生成物の効果。細胞（１×１０６）を組織培養皿に一晩接着させ、次いで、異なる濃度の魚油で２４時間処理した。次いで、細胞を採取して溶解させ、ウエスタンブロット法によりタンパク質発現を測定し、濃度測定によって定量化した。図１８のデータは、ＷｈｏｌｅＭｅｇａがＣＯＸ‐２または５‐ＬＯＸの発現を阻害しなかったこと、そして、１２‐ＬＯＸの発現をわずかに阻害したのみであったことをを示唆している。対照的に、ＷｈｏｌｅＭｅｇａ（５００ｕｇ／ｍＬ）は、ＡｋｔおよびｐＡｋｔの両方の発現を阻害（３０％）した。Ｃａｒｌｓｏｎの魚油で処理したＡ５４９細胞中のリン酸化Ａｋｔのレベルに同程度の阻害が観察されたが、全Ａｋｔには観察されなかった。Ｕｌｔｉｍａｔｅ Ｏｍｅｇａで処理したＡ５４９細胞にはそのような効果は観察されなかった。
【０２１５】
３つの異なる魚油生成物で処理した細胞において、Ａｋｔの発現およびＡｋｔのリン酸化を測定した。オメガ‐３脂肪酸の抗増殖活性と関連している可能性がある機構のうちの１つは、全Ａｋｔの阻害およびＡｋｔのリン酸化である。３つの魚油生成物がＡｋｔおよびｐＡｋｔのタンパク質レベルに与える影響を、魚油によって誘導されるヒト肺癌細胞における細胞成長の抑制に一部寄与する潜在的な分子機構として測定した。図１８（ＡおよびＢ）に示すように、ＷｈｏｌｅＭｅｇａで処理したＡ５４９細胞において、全Ａｋｔのレベルは３０％減少した。さらに、Ａ５４９細胞においてｐＡｋｔの発現が減少したこと（３２％の減少）からも明らかなように、ＷｈｏｌｅＭｅｇａはＡｋｔのリン酸化も抑制した。この抑制効果は、濃度依存性であった。対照的に、Ｃａｒｌｓｏｎ Ｓｕｐｅｒ Ｆｉｓｈ Ｏｉｌは、Ａｋｔのリン酸化のみを抑制したが、全Ａｋｔのリン酸化は抑制しなかった（図１８＿Ｃ）。同様の量のＮｏｒｄｉｃ ＮａｔｕｒａｌのＵｌｔｉｍａｔｅ Ｏｍｅｇａで処理した細胞には、ＡｋｔまたはｐＡｋｔレベルのいずれにおいても変化が見られなかった（データは表示せず）。これらのデータは、Ａｋｔ経路の阻害は、ＷｈｏｌｅＭｅｇａの抗増殖活性に寄与する一部の機構であるかもしれないことを示唆している。
【０２１６】
実施例１２：Ｗｈｏｌｅｍｅｇａで処理したＲＡＷマクロファージ細胞における炎症遺伝子の発現
【０２１７】
ＷｈｏｌｅＭｅｇａが炎症経路にどのように影響を及ぼし得るかをさらに説明するために、Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ Ａｒｒａｙ分析およびリアルタイムＰＣＲによって、ＷｈｏｌｅＭｅｇａが炎症性サイトカインおよび炎症に関連する遺伝子に与える影響を調べた。簡潔に述べると、１００ｍｍプレート上に細胞を播種し、無血清条件において２４時間ＷｈｏｌｅＭｅｇａ（２５０〜５００ｕｇ／ｍＬ）で処理した。標準的なＴｒｉｚｏｌ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して、製造者の指示にしたがって細胞からＮＡを抽出した。次いで、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ（登録商標）ＩＩ Ｆｉｒｓｔ‐Ｓｔｒａｎｄ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｋｉｔを使用してＲＮＡを逆転写した。産生されたｃＤＮＡをＴａｑｍａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して調製した。Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ Ａｒｒａｙ Ｍｉｃｒｏ Ｆｌｕｉｄｉｃ Ｃａｒｄ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）の各ウェルにアリコート（１００ｕＬ）を充填し、遠心分離にかけてから密封した。Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ Ａｒｒａｙ用のソフトウェアを７９００ ＨＴ Ｆａｓｔ Ｒｅａｌ‐Ｔｉｍｅ ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）にダウンロードした。カードをロードし、遺伝子発現の相対的なレベルとの相関性としてＣｔ値を評価した。図１９に示すように、検査した９５個の炎症関連遺伝子のうち、全てのアネキシン遺伝子が下方制御され、アネキシンＡ１が最も強力に阻害された。
【０２１８】
炎症促進性生成物ロイコトリエンＬＴＢ４、すなわちＬＴＡ４加水分解酵素を異化することに寄与する遺伝子の発現も、対照群の発現と比較して減少した。これは、ＷｈｏｌｅＭｅｇａ（５００ｕｇ／ｍＬ）で処理したＡ５４９細胞における酵素生成物ＬＴＢ４の減少と一致する。セロトニン受容体、ＭＡＰキナーゼ、および血管接着の発現と関連する遺伝子もまた、対照細胞の遺伝子と比較すると２０％を超えて下方制御された。別個のマクロファージ様細胞株に同様の変化が生じるかどうかを確認するために、ＲＡＷ細胞を使用した。前述したように細胞を処理し、ラット炎症遺伝子のアレイ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）解析を行った。ヒトＮＳＣＬＣ Ａ５４９細胞における炎症関連遺伝子の発現との比較において、ＷｈｏｌｅＭｅｇａで処理したＲＡＷ細胞で最も影響を受けた遺伝子は、ホスホリパーゼ活性と関連する遺伝子であった。Ａ５４９およびＲａｗ細胞の両方で、広くＷｈｏｌｅＭｅｇａの影響を受けた遺伝子は、アネキシンＡ３、ＭＡＰキナーゼ、ホスホリパーゼＡおよびＣであった。これらのデータは、ＷｈｏｌｅＭｅｇａが、ロイコトリエンＡ４加水分解酵素（ロイコトリエン合成、Ａ５４９細胞）、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ、細胞増殖）、および悪性疾患の病因に関与する細胞表面等タンパク質である血管細胞接着分子（ＶＣＡＭ‐１）を含む、一連の重要な炎症関連遺伝子を下方制御する能力を有することを提案するものである。
【０２１９】
図１９は、Ｗｈｏｌｅｍｅｇａで処理したヒト非小細胞肺癌Ａ５４９細胞における炎症遺伝子アレイの発現の結果を示す。Ｗｈｏｌｅｍｅｇａの処理により２０％未満の減少が見られた遺伝子を上の図に示し、さらに高い程度（２０〜５０％）まで減少した遺伝子を下の図に示す。一実施形態において、本発明の主題の組成物は、アンドロゲン表面受容体β２（ＡＤＢＲ２）、アネキシンＡ１（ＡＮＸＡ１）、セロトニン受容体３（ＨＴＲ３）、ロイコトリエンＡ４加水分解酵素（ＬＴＡ４Ｈ）、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ８（ＭＡＰＫ８）、血管細胞接着分子１（ＶＣＡＭ１）、アネキシンＡ３、アネキシンＡ５、β２‐マイクログロブリン、Ｂ１ブラジキニン受容体、Ｌ型カルシウムチャネルα１Ｄサブユニット、カルシウムチャネルβ４サブユニット、ＣＤ４０抗原（ＴＮＦ受容体スーパーファミリー）、インテグリンαＬ、インテグリンβ１、血漿カリクレインＢ（フレッチャー因子）１、核因子κＢ、ホスホリパーゼＡ２ＩＢ群（膵臓）、ホスホリパーゼＣδ１、腫瘍壊死因子（リガンド）スーパーファミリーＮｏ．１３ｂ、およびグリセルアルデヒド‐３‐リン酸デヒドロゲナーゼからなる群から選択される、少なくとも１つの受容体または酵素の発現を阻害するために使用することができる。別の実施形態において、本発明の主題の組成物は、アンドロゲン表面受容体β２（ＡＤＢＲ２）、アネキシンＡ１（ＡＮＸＡ１）、セロトニン受容体３（ＨＴＲ３）、ロイコトリエンＡ４加水分解酵素（ＬＴＡ４Ｈ）、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ８（ＭＡＰＫ８）、および血管細胞接着分子１（ＶＣＡＭ１）からなる群から選択される少なくとも１つの受容体または酵素の発現を阻害するために使用することができる。さらなる実施形態において、少なくとも１つの受容体または酵素の発現のレベルは、約３％〜約２０％減少する。さらに別の実施形態において、少なくとも１つの受容体または酵素の発現のレベルは、少なくとも約２０％、例えば、約２０％〜約５０％減少する。
【０２２０】
図２０＿は、ＷｈｏｌｅＭｅｇａ（２５０および５００ｕｇ／ｍＬ）で処理したＲＡＷ細胞における炎症遺伝子アレイの発現の結果を、未処理の対照と比較して示したものである。記号（＊）は、ＷｈｏｌｅＭｅｇａのために２０％を超える減少を示した発現のレベルを示す。ＲＡＷ細胞におけるＣＯＸおよび５‐ＬＯＸならびにホスホリパーゼの発現と関連する受容体または酵素の発現は、未処理の対照細胞の発現と比較すると減少した。
【０２２１】
これらのデータは、（１）より強い抗増殖活性、（２）ヒトＮＳＣＬＣ Ａ５４９およびラットマクロファージＲａｗ細胞の両方において、抗増殖性脂質メディエータＰＧＥ３およびＬＴＢ５を形成する能力、ならびに（３）Ａ５４９細胞におけるＡｋｔおよびｐＡｋｔタンパク質の両方の抑制からも明らかなように、ＷｈｏｌｅＭｅｇａの魚油が、他の２つの市販の魚油生成物、Ｕｌｔｉｍａｔｅ ＯｍｅｇａおよびＣａｒｌｓｏｎ Ｓｕｐｅｒ Ｆｉｓｈ Ｏｉｌよりも予想外に優れていることを示している。Ｗｈｏｌｅｍｅｇａにおけるオメガ‐３脂肪酸の相対濃度はＵｌｔｉｍａｔｅ ＯｍｅｇａおよびＣａｒｌｓｏｎ Ｓｕｐｅｒ Ｆｉｓｈ Ｏｉｌにおける相対濃度よりも低いため、このことは特に興味深い。このデータは、本発明の主題の精製された組成物中に存在するＷｈｏｌｅｍｅｇａに特有の少なくとも１つの構成要素が、ＷｈｏｌｅＭｅｇａの抗癌活性に起因している可能性があることを示唆するものである。一実施形態において、これらの予測されなかった効果の原因となる、本発明の主題の組成物中のこの少なくとも１つの特有の構成要素は、脂肪酸、脂肪酸の組み合わせ、薬用植物構成要素、他の非脂肪酸非薬用植物構成要素、およびそれらの組み合わせからなる群から選択することができる。また、炎症と関連する幅広い遺伝子の抑制からも明らかなように、炎症アレイのデータは、本発明の主題の組成物の抗炎症性活性をさらに実証するものである。
【０２２２】
一実施形態において、本発明の主題の組成物は、α２‐マクログロブリン、β２アドレナリン受容体、アネキシンＡ３、酸性リボゾームリンタンパク質Ｐ０、システイニルロイコトリエン受容体１、ヒドロキシプロスタグランジンデヒドロゲナーゼ１５、ヒスタミン受容体Ｈ２、細胞間接着分子１、インターロイキン１受容体、ロイコトリエンＢ４受容体、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ３、ホスホリパーゼＡ２群Ｖ、ホスホリパーゼＣβ２、ホスホリパーゼＣδ１、ホスホリパーゼＣγ２、プロスタグランジンＥ受容体３、プロスタグランジン‐エンドペルオキシド合成酵素１、およびカスパーゼ１からなる群から選択される、少なくとも１つの受容体または酵素の発現を阻害するために使用することができる。好ましい実施形態において、本発明の主題の組成物は、α２‐マクログロブリン、β２アドレナリン受容体、酸性リボゾームリンタンパク質Ｐ０、ヒスタミン受容体Ｈ２、細胞間接着分子１、およびプロスタグランジンＥ受容体３からなる群から選択される、少なくとも１つの受容体または酵素の発現を阻害するために使用することができる。この好ましい実施形態の別の実施形態において、受容体および／または酵素の２つもしくは３つ、または３つもしくはそれ以上、または４つもしくはそれ以上が、少なくとも２０％減少した発現のレベルを有する。さらなる実施形態において、受容体または酵素の少なくとも１つの発現のレベルは、約３％〜約２０％減少する。さらに別の実施形態において、少なくとも１つの受容体または酵素の発現のレベルには、２０％を超えて減少する。
【０２２３】
参考文献
以下の参考文献は、本発明の主題を、関連技術分野における位置に照らして理解するために有用であると考えられる。本明細書における引用は、引用されるいずれの参考文献も、本発明の主題の特許性に関わるという主張または承認であると見なされるべきではない。出願人は、情報開示陳述書において、特許性に関わる重要な情報を適切に開示する。各参考文献の内容は、その全体が本明細書に組み込まれる。
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【０２２４】
本発明の主題について記載したが、多くの様式において本発明の主題が修正または変更され得ることは明白であろう。そのような修正または変更は、本発明の主題の主旨および範囲からの逸脱であると見なされるべきではなく、全てのそのような修正または変更は、以下の特許請求項の範囲内に含まれることが意図される。
【０２２５】
関連出願の相互参照
本出願は、２００９年５月２９日に出願された米国特許仮出願第６１／２１３，３３４号、および２００９年８月１９日に出願された同第６１／２７２，１３０号の利益を主張するものであり、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【技術分野】
【０００１】
本発明の主題は、薬用植物および油の新規組成物、ならびに動物における脂肪酸組成および代謝を調節するための方法に関する。一態様において、本主題は、ローズマリー抽出物と、オレガノ抽出物と、多価不飽和油とを含む組成物に関与する。特定の実施形態において、多価不飽和油は、魚油またはその誘導体である。いくつかの実施形態において、本発明の主題は、リポタンパク質粒子もしくは細胞膜の食餌必須脂肪酸組成を調節するため、必須脂肪酸代謝を調節するため、リポキシゲナーゼ（ＬＯＸ）およびシクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）の活性を制御するため、心血管の健康を向上させるため、ならびに／または細胞増殖性の疾病および疾患を抑制するための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
必須脂肪酸（ＥＦＡ）は、通常、１８、２０、または２２炭素原子の鎖長を有する、自然に発生する不飽和脂肪酸である。脂肪酸の主な自然形態は、トリグリセリド分子の一部としてである。トリグリセリドの形態は、通常、生物の体内で脂肪酸の吸収、貯蔵、および利用を促進するのに役立つ。遊離脂肪酸もまた体内で自然に発生するが、その程度はかなり少ない。
【０００３】
人体は、必要な飽和脂肪酸のほとんどを生成することが可能である。しかしながら、人体は、必要な不飽和脂肪酸の全てを生成することはできない。全てのＥＦＡはヒトの食物源に見出すことができるが、人体は、リノール酸およびαリノレン酸から他の全てのＥＦＡを合成できる酵素を保有するため、これらの２つの脂肪酸のみが本当に必須であると考えられる。また、上記が事実である一方、ヒトの代謝がエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）およびドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）を形成する相対的な能力はそれほど高くはない。この能力の低さが、食餌における健康的なオメガ‐３脂肪酸の相対的な割合を増加させるために、魚油等の補助的な食用油が必要な理由である。ＥＰＡおよびＤＨＡは、最も重要な、いわゆるオメガ‐３脂肪酸を構成する。魚油は、これらのオメガ‐３脂肪酸の一般的な源として知られている。例えば、種油、植物油、藻油、および卵等の、オメガ‐３脂肪酸の追加の源もまた既知である。
【０００４】
疫学的観察は、魚油および哺乳動物宿主内で生成されるそれらに由来する脂質生成物が、血小板凝集および血清トリグリセリドを減少させ（心筋梗塞、高血圧、粥状動脈硬化のリスクを低下させ得る）、特定の種類の癌のリスクを低下させることに関与する可能性があることを示唆している。また、魚油に由来するＥＰＡおよびＤＨＡが、ほとんどの細胞の膜において重要な構造的役割を果たし、全血粘度の低下ならびに赤血球の柔軟性および変形能の増加によって表されるように、細胞膜の流動性に影響を及ぼすことが示されている。さらに、ＥＰＡおよびＤＨＡを含むＥＦＡは、プロスタグランジンおよびトロンボキサン等のプロスタノイド、ロイコトリエン、ならびにヒドロキシ脂肪酸を含む化合物のクラスである、エイコサノイドの既知の前駆体である。エイコサノイドは、血小板凝集、血管壁の透過性および緊張、血圧、ならびに免疫炎症反応に影響を及ぼすことが分かっている。
【０００５】
ｎ‐６系脂肪酸とｎ‐３系脂肪酸の間の食餌による平衡は、膜の脂肪酸組成の制御における有意な要因である。また、ｎ‐３食餌脂肪酸のｎ‐６食餌脂肪酸に対する比率の減少が、健康上の問題、疾患、および病態の発生率の増加に関係してきている。２系統のエイコサノイドの前駆体であるアラキドン酸（ｎ‐６）の過剰な存在、またはその前駆体であるリノール酸（ｎ‐６）の過剰な存在は、血栓形成の増加、出血時間の短縮、多形核単球および白血球の炎症反応における増加、ならびにアレルギーに対する平滑筋の反応性の増加をもたらし得る。対照的に、魚を食べる集団の食餌のように、主にｎ‐３系の長鎖多価不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）に基づく食餌は、出血時間における若干の増加、ならびに、粥状動脈硬化等の循環器疾患、関節炎、喘息、および他の疾病の発生率の低下をもたらす。これは、ｎ‐３系のこれらの長鎖ＰＵＦＡが、３系統のエイコサノイドの前駆体であるという事実に一部起因している。
【０００６】
魚油を摂取することにおける主な目的のうちの１つは、それらに見出される重要な構成成分を組織膜に取り込ませることであり、そこで、構成成分は、細胞シグナル伝達事象を調節し（例えば、炎症を減少させる）、膜の流動性を増加させる役割を果たす。エイコサノイドを形成するためのホスホリパーゼの作用により、細胞膜から脂肪酸を放出するように細胞が活性化されると、ＥＰＡおよびＤＨＡは、ＣＯＸおよびＬＯＸ酵素のためにアラキドン酸と競合する。放出されたアラキドン酸が炎症性のプロスタグランジン生成物（例えば、ＰＧＥ２）を生じさせる一方で、魚油の脂質は、ＡＡ（アラキドン酸）に由来する生成物（例えば、ＰＧＥ２およびＬＴＢ４）よりも有意に炎症を引き起こしにくいプロスタグランジンおよびリポキシゲナーゼ生成物（例えば、ＰＧＥ３およびＬＴＢ５）を生成する。さらに、レゾルビンおよびプロテクチンとして知られる特定の分子は、魚油に由来する多価不飽和脂質ＥＰＡおよびＤＨＡのみから形成される。これらの新しく発見された生成物は、炎症の消散を司る。
【０００７】
前立腺癌、乳癌、および肺癌等の癌の早期診断および治療、ならびに循環器疾患の治療および予防において、目覚しい進歩がなされてきた。しかしながら、循環器疾患および癌は、依然として、米国における疾患と関連する死亡の主要原因である。有益な脂質代謝を改善し、多価不飽和脂質の生化学的経路および生体膜への取り込みを促進する、新規栄養補助食品の必要性が残っている。そのような栄養補助食品は、例えば、心血管の健康を向上させる、ならびに／または、癌等の細胞増殖性の疾病および疾患を治療もしくは予防することを含む、有益な健康への影響を促進する。
【０００８】
出願人は、優良で有益な多価不飽和脂質の有意に増強された取り込みおよび代謝、ならびに健康効果に結果の改善を提供する、新規薬用植物組成物を予期せず発見した
【発明の概要】
【０００９】
本発明の主題は、薬用植物および油の新規組成物、ならびに動物における必須脂肪酸組成および代謝を調節するための方法に関する。一態様において、本主題は、ローズマリー抽出物と、オレガノ抽出物と、多価不飽和油とを含む組成物に関与する。一態様において、多価不飽和油は、魚油等の海洋生物由来の油であり得る。一実施形態において、組成物は、治療的に有効な量のローズマリーの超臨界抽出物と、オレガノの超臨界抽出物と、魚油または多価不飽和食餌性脂肪とを含む油を含む。さらなる実施形態において、魚油または多価不飽和食餌性脂肪を含む油は、野生で捕獲されたアラスカサーモンの油等のサーモン油である。
【００１０】
いくつかの実施形態において、本発明の主題は、リポタンパク質粒子もしくは細胞膜の食餌必須脂肪酸組成を調節するため、必須脂肪酸代謝を調節するため、リポキシゲナーゼおよびシクロオキシゲナーゼの活性を制御するため、心血管の健康を向上させるため、ならびに／または細胞増殖性の疾病および疾患を抑制するための方法に関する。
【００１１】
出願人は、本発明の主題の組成物の投与が、血清および／または細胞膜の脂肪酸含有量の予期せぬ迅速な修正、「善玉脂肪」の「悪玉脂肪」に対する比率の予期せぬ増加、ならびに、ｃ‐ＲＰ（ｃ‐反応性タンパク質）の予期せぬ減少、ＬＤＬ（「悪玉」コレステロール）の予期せぬ減少、およびコレステロール／ＨＤＬ比の予期せぬ減少をもたらすことを思いがけず発見した：それらは全て、ヒトの健康な脂質プロファイルにおける改善を意味する。
【図面の簡単な説明】
【００１２】
【図１】本発明の主題のある例示的な組成物（本明細書において、図面を参照して「ＷｈｏｌｅＭｅｇａ」と示される）（２ｇまたは４ｇ／日）の摂取は、容易に検出可能な血清レベルのＥＰＡ（オメガ‐３ＰＵＦＡに由来する代表的な魚油）を生成する。血清中のＥＰＡの濃度は、摂取される量と相関する。
【図２】ヒトボランティア（ｎ＝８）に用量２ｇのＷｈｏｌｅＭｅｇａを投与し、脂質分析のために連続的に血液試料を採取した。平均ＥＰＡ、オレイン酸、およびパルミトレイン酸（それぞれ、ＷｈｏｌｅＭｅｇａオメガ‐３、‐５、および‐７多価不飽和脂肪酸の代表例である）における時間依存性の変化を図に表す。脂質クラスにおける変化の幅を明らかにするために、オメガ３（ＥＰＡ）、オメガ７（パルミトレイン酸）、およびオメガ９（オレイン酸）における変化をプロットした。破線は、単にベースライン（投与前）レベルを示す。ＷｈｏｌｅＭｅｇａ由来の脂質には、最長２４時間まで持続する変化を見ることができる。
【図３】ＷｈｏｌｅＭｅｇａ（２ｇ）を摂取した後の、オメガ‐３脂質（上）ならびにオメガ‐７およびオメガ‐９脂質（下）の細胞（ＰＢＭＣ）膜含有量における変化。１日２ｇの用量のＷｈｏｌｅＭｅｇａを３日間対象に投与した。投与前と、３回目かつ最終用量の投与後２４時間との間の細胞膜脂質組成における相違を比較した。
【図４】２グラムまたは４グラムのいずれかのＷｈｏｌｅＭｅｇａの摂取は、血中ＡＡ／ＥＰＡ比に容易に検出可能な変化をもたらす。２ｇの用量がこの比率に平均３７％の減少をもたらすのに対し、４ｇの用量は、血清ＡＡ／ＥＰＡ比に平均５０％の減少をもたらす。データは、１度に２ｇのＷｈｏｌｅＭｅｇａを摂取した８人の対象および４ｇのＷｈｏｌｅＭｅｇａを摂取した５人の対象に由来する。データは平均値＋／‐ＳＥで表す。
【図５】ＷｈｏｌｅＭｅｇａを摂取した固体における血清ＡＡ／ＥＰＡ比の変化の例を上のグラフに示す。データは平均値＋／‐ＳＥで表す。全てのＷｈｏｌｅＭｅｇａの値は、処方前の値とは有意に（ｐ＜０．０５）異なる。
【図６】１日当たり２ｇまたは４ｇのいずれかのＷｈｏｌｅＭｅｇａの摂取は、末梢血単核球の膜組成に変化をもたらす。ＷｈｏｌｅＭｅｇａに由来するＥＰＡのより高い取り込みの結果として、膜のアラキドン酸が減少する。このプロットの重要な点は、たとえ２ｇ／日のＷｈｏｌｅＭｅｇａであっても、組織（白血球）の膜組成における健康的な変化を達成し、アラキドン酸に由来する炎症の可能性を減少させることが可能であるということである。上記プロットは、連続３日間、２ｇ／日のＷｈｏｌｅＭｅｇａを摂取した４人の被験者から得たデータに由来する。末梢血単核球は、投与前およびＷｈｏｌｅＭｅｇａを投与した３日後に採取した。重要なオメガ‐３脂肪酸であるＥＰＡの含有量に関しては、細胞膜脂質組成が増加する。
【図７】ホスホリパーゼの作用によって細胞膜から遊離したアラキドン酸の代謝を示す略図。放出されたアラキドン酸は、それを炎症の原因となる脂質生成物（エイコサノイド等）に変換するシクロオキシゲナーゼおよびリポキシゲナーゼ酵素のための基質としての役割を果たす。
【図８】炎症性脂質の減少において、ＥＰＡ等の特定の多価不飽和脂肪酸が有する役割を示す略図。魚由来のＥＰＡ等の油は、細胞膜に取り込まれ、酵素ホスホリパーゼの活性により遊離される。放出されたＥＰＡは、シクロオキシゲナーゼおよびリポキシゲナーゼ酵素のための基質としての役割を果たすが、アラキドン酸によって生成されるものと比較して、生成される生成物の炎症の可能性は大きく減少する。
【図９】ヒト肺癌Ａ５４９異種移植片（ＣＯＸ‐２を過剰発現する）およびＨ１２９９異種移植片（ＣＯＸ‐２を発現しない）において、特別に配合された魚油食餌の抗腫瘍効果を調べた。ＥＰＡは、Ａ５４９細胞の増幅を阻害するが、Ｈ１２９９細胞の増幅は阻害しない。
【図１０】ヒト肺癌Ａ５４９異種移植片（ＣＯＸ‐２を過剰発現する）およびＨ１２９９異種移植片（ＣＯＸ‐２を発現しない）において、特別に配合された魚油食餌の抗腫瘍効果を調べた。ＥＰＡに曝露されたヒト肺癌Ａ５４９およびＨ１２９９細胞におけるＰＧＥ２およびＰＧＥ３の生成（Ｙａｎｇ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．２００４）。
【図１１】ＰＧＥ２は、Ａ５４９細胞の増殖を若干刺激する一方で、ＰＧＥ３は、これらの特定の細胞の増殖を阻害する。
【図１２Ａ】ＥＰＡの抗増殖活性は、Ａ５４９細胞におけるＰＧＥ３の形成と関連する。
【図１２Ｂ】ＥＰＡの抗増殖活性は、Ａ５４９細胞におけるＰＧＥ３の形成と関連する。
【図１３】細胞におけるこの酵素（ＣＯＸ‐２）の発現をブロックするＣＯＸ‐２ ｓｉＲＮＡでトランスフェクトしたＡ５４９細胞において、ＥＰＡの抗増殖効果は減少する。
【図１４】肺癌における魚油由来のＰＧＥ３の代謝の可能な機構の例。
【図１５】３つの異なる魚油生成物、ＷｈｏｌｅＭｅｇａ（本発明の主題の組成物）、Ｎｏｒｄｉｃ Ｎａｔｕｒａｌ Ｕｌｔｉｍａｔｅ Ｏｍｅｇａ、およびＣａｒｌｓｏｎ Ｏｉｌで処理したＡ５４９細胞において、ＰＧＥ２およびＰＧＥ３の形成を調べた。異なる魚油で処理したＡ５４９細胞におけるＰＧＥ２およびＰＧＥ３の形成の比較が示されており、比較は等しい量（μｇ／ｍＬ）のこれらの魚油生成物を使用して行われた。
【図１６】異なる魚油で処理したＡ５４９細胞におけるＰＧＥ２およびＰＧＥ３の形成の比較が示されており、比較は魚油生成物中の異なる量（μｇ／ｍＬ）のＥＰＡを使用して行われた。
【図１７】Ａ５４９およびＨ１２９９ヒト非小細胞肺癌細胞における魚油の抗増殖効果を示す。ＣＯＸ‐２が過剰発現される癌細胞において、本発明の主題の組成物（ＷｈｏｌｅＭｅｇａ）は、予期せずに、他の魚油組成物よりも実質的に優れた結果を提供した。
【図１８Ａ】ヒトＡ５４９肺癌細胞におけるＣＯＸ‐２、５‐および１２‐ＬＯＸならびにＡｋｔ／ｐＡｋｔの発現に対するＷｈｏｌｅＭｅｇａ、Ｕｌｔｉｍａｔｅ Ｏｍｅｇａ、およびＣａｒｌｓｏｎ Ｓｕｐｅｒ Ｆｉｓｈ Ｏｉｌ生成物の効果。関連性のあるタンパク質発現をウエスタンブロット法により測定し、３つの魚油生成物の濃度測定によって定量化した（図１８Ａ）。ＷｈｏｌｅＭｅｇａ（図１８Ｂ）およびＣａｒｌｓｏｎの魚油（図１８Ｃ）について、異なる用量の魚油でのタンパク質発現の変化率を示す。
【図１８Ｂ】ヒトＡ５４９肺癌細胞におけるＣＯＸ‐２、５‐および１２‐ＬＯＸならびにＡｋｔ／ｐＡｋｔの発現に対するＷｈｏｌｅＭｅｇａ、Ｕｌｔｉｍａｔｅ Ｏｍｅｇａ、およびＣａｒｌｓｏｎ Ｓｕｐｅｒ Ｆｉｓｈ Ｏｉｌ生成物の効果。関連性のあるタンパク質発現をウエスタンブロット法により測定し、３つの魚油生成物の濃度測定によって定量化した（図１８Ａ）。ＷｈｏｌｅＭｅｇａ（図１８Ｂ）およびＣａｒｌｓｏｎの魚油（図１８Ｃ）について、異なる用量の魚油でのタンパク質発現の変化率を示す。
【図１８Ｃ】ヒトＡ５４９肺癌細胞におけるＣＯＸ‐２、５‐および１２‐ＬＯＸならびにＡｋｔ／ｐＡｋｔの発現に対するＷｈｏｌｅＭｅｇａ、Ｕｌｔｉｍａｔｅ Ｏｍｅｇａ、およびＣａｒｌｓｏｎ Ｓｕｐｅｒ Ｆｉｓｈ Ｏｉｌ生成物の効果。関連性のあるタンパク質発現をウエスタンブロット法により測定し、３つの魚油生成物の濃度測定によって定量化した（図１８Ａ）。ＷｈｏｌｅＭｅｇａ（図１８Ｂ）およびＣａｒｌｓｏｎの魚油（図１８Ｃ）について、異なる用量の魚油でのタンパク質発現の変化率を示す。
【図１９】Ｗｈｏｌｅｍｅｇａで処理したヒト非小細胞肺癌Ａ５４９細胞における炎症遺伝子アレイの発現。有意に減少したものの２０％未満であった遺伝子を上の図に示し、より高い程度にまで（２０〜５０％）減少したものを下の図に示す。
【図２０】Ｗｈｏｌｅｍｅｇａで処理したＲＡＷマクロファージ細胞における炎症遺伝子アレイの発現。記号（＊）は、ＷｈｏｌｅＭｅｇａにより２０％を超えて減少した発現レベルを示す。ＲＡＷ細胞のＣＯＸおよび５‐ＬＯＸならびにホスホリパーゼと関連する受容体または酵素の発現は、未処理の対照細胞と比較して減少した。
【発明を実施するための形態】
【００１３】
定義
【００１４】
本明細書で使用される場合、用語「投与者」、「投与すること」、および「投与」は、健全な医療行為において、治療効果を提供するための様式で対象に組成物を送達する任意の方法を指す。
【００１５】
本明細書で使用される句「誘導体」は、特定の化学物質の化合物または分子の任意の水和物、溶媒和化合物、塩、ラセミ体、異性体、鏡像異性体、プロドラッグ、代謝物、エステル、または他の類似体もしくは誘導体を指す。用語「誘導体」はまた、開示される化合物の加水分解、還元、または酸化生成物を含むが、これらに限定されない、開示される化合物に対する修飾も意味する。加水分解、還元、および酸化反応は、当該技術分野において既知である。
【００１６】
用語「調節すること」は、生物の生物学的活性、機能、健康、または状態に影響を及ぼすプロセスを指し、そのような生物学的活性、機能、健康、または状態は、その生物の総体的な健康および福祉と一致する様式において維持、増強、減少、または処置される。生物の生物学的活性、機能、健康、または状態を「増強する」という用語は、増大させること、強化すること、補強すること、または改善するプロセスを指す。
【００１７】
本明細書で使用される場合、活性薬剤もしくは成分、または薬学的に活性な薬剤もしくは成分（本明細書において同義である）の「有効量」または「治療的な有効量」という句は、投与されると治療効果を有するのに十分な薬学的に活性な薬剤の量を指す。治療的に有効な量の薬学的に活性な薬剤は、症状の緩和をもたらすことができるか、もたらすか、またはもたらすことが予測される。有効量の薬学的に活性な薬剤は、治療される特定の状態（単数または複数）、状態の重症度、治療の期間、使用される組成物の特定の構成要素等の要因によって異なる。
【００１８】
生物の生物学的活性、機能、健康、または状態を「増強する」という用語は、増大させること、強化すること、補強すること、または改善するプロセスを指す。
【００１９】
用語「エイコサノイド」は、アラキドン酸およびリノール酸に由来する等、多価不飽和脂肪酸に由来する化合物のクラスのうちのいずれかを指す。エイコサノイドは、オメガ‐３（ω‐３）またはオメガ‐６（ω‐６）ＥＦＡのいずれかに由来する。ω‐６エイコサノイドは一般に抗炎症性であるが、ω‐３’ｓはその程度が低い。エイコサノイドには、プロスタグランジン、プロスタサイクリン、トロンボキサン、およびロイコトリエンの４つのファミリーが存在する。それぞれに、ω‐３またはω‐６のいずれかのＥＦＡに由来する２つまたは３つの別の系統が存在する。これらの系統の異なる活性は、ω‐３およびω‐６脂肪の特定の健康への影響と相関してきた。本発明の主題の組成物はまた、多価不飽和脂質ＥＰＡおよびＤＨＡから形成されるレゾルビンおよびプロテクチンの生成または代謝を調節することによって、本明細書に記載される生理学的効果を調節するができる。
【００２０】
用語「オキシゲナーゼ」は、酸素分子のその基質内への取り込みを触媒する酵素のクラスのいずれかを指す。
【００２１】
本明細書で使用される用語「超臨界気体」または「超臨界流体」は、温度臨界点まで加熱された気体を指し、その温度を超えると、気体は圧力に関わらず、その気体状態を維持し、液体にならない。その臨界点を超える温度まで加熱された気体は、圧縮されると非常に高密度になるため、その特徴は流体の特徴に似ているが、液体になるであろう。超臨界流体が要求される用途において、二酸化炭素が一般的に使用される。超臨界流体の一般的な特性および抽出プロセスにおける超臨界流体の一般的な使用は、例えば、Ｔａｙｌｏｒ，Ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ Ｆｌｕｉｄ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，Ｗｉｌｅｙ，１９９６；ＭｃＨｕｇｈ ａｎｄ Ｋｒｕｋｏｎｉｓ，Ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ Ｆｌｕｉｄ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，２ｎｄ ｅｄ．，Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈ‐Ｈｅｉｎｅｍａｎｎ，１９９４、およびＷｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｃｌｉｆｆｏｒｄ，Ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ Ｆｌｕｉｄ Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，２０００に記載され、その内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【００２２】
出願人は、多価不飽和油と混合された薬用植物抽出物を含む混合物を開発した。好ましい実施形態において、多価不飽和油は、例えば、野生で捕獲されたアラスカサーモンを含む、野生で捕獲された鮭等の、特有の海洋生物由来の油である。出願人の組成物は、組成物のいくつかの成分が超臨界ＣＯ２抽出プロセスを介して調製されるという点で特有である。従来の溶媒系抽出法とは異なり、超臨界ＣＯ２抽出は、調製物中に化学的残留物を残さずに、薬用植物における天然産物を得ることを可能にする。
【００２３】
本明細書で使用される用語「超臨界抽出」は、超臨界流体を用いて、試料から疎水性化合物を抽出することができる技術を指す。圧力および温度がそれらの臨界点を超えて増加するにつれて、超臨界流体の溶媒和力が増加し、疎水性分子の単離に効果的な溶媒を生成する。用語「超臨界抽出物」または「ＳＣＥ」は、超臨界抽出によって調製される抽出物を指す。
【００２４】
本明細書で使用される場合、用語「脂肪酸」は、遊離形態、モノグリセリド、ジグリセリド、トリグリセリド、それらのエステルもしくは溶媒和物、それらの組み合わせ、またはそれらの薬学的に許容される塩であり得る、炭素原子数６〜２６の飽和または不飽和の脂肪酸を指す。好ましい実施形態において、本発明の主題の組成物中の脂肪酸は、一般に、体内における脂肪酸の吸収、貯蔵、およびの利用を促進するのに役立つトリグリセリド分子の形態で存在する。いくつかの実施形態において、本発明の主題の組成物中の脂肪酸は、遊離脂肪酸として、トリグリセリドの一部として、その塩として、またはそれらの組み合わせとして存在する。
【００２５】
「必須脂肪酸」（ＥＦＡ）は、人体によって製造されないため、食餌において摂取しなければならない脂肪である。ＥＦＡは、リノール酸およびその誘導体を含むオメガ‐６ＥＦＡと、αリノレン酸およびその誘導体を含むオメガ‐３ＥＦＡの２つのグループに分類される。オメガ‐３およびオメガ‐６ＥＦＡはどちらも多価不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）である。この２つの種類を区別するものは、それらの炭化水素鎖における（分子のメチル末端に対して）最初の二重結合の配置である：オメガ‐３ＥＦＡは、３番目の炭素の位置に第１の二重結合を有し、一方、オメガ‐６ＥＦＡは、６番目の炭素の位置に第１の二重結合を有する。全てのＥＦＡはヒトの食物源に見出すことができるが、人体は、リノール酸およびαリノレン酸から他の全てのＥＦＡを合成できる酵素を保有するため、これらの２つの脂肪酸のみが、本当に必須であると考えられる。また、上記は事実であるものの、ヒトの代謝がＥＰＡおよびＤＨＡを形成する相対的な能力はそれほど高くはなく、それが、食餌における健康的なオメガ‐３脂肪酸の相対的な割合を増加させるために、なぜ補助的な魚油が必要であるかの理由である。
【００２６】
好ましいオメガ‐３脂質は、例えば、αリノレン酸（ＡＬＡ）、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）、およびドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）を含む。オメガ‐６脂質は、例えば、リノール酸（ＬＡ）、アラキドン酸（ＡＡ）、ジホモ‐リノール酸（ＤＨＧＡ）、およびγ‐リノール酸（ＧＬＡ）を含む。
【００２７】
【表１】
【００２８】
以下は、本明細書に含まれるデータを提供する、本発明の主題の組成物（ＷｈｏｌｅＭｅｇａ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ）の分析において使用する場合、何を「善玉」、「悪玉」、および「中性」脂肪酸の分類であると見なすことができるかの説明である。いくつかの例は、１ｇのカプセル当たり３０ｍｇ以上の濃度でＷｈｏｌｅＭｅｇａに含有される。「Ｃ２０：１Ｗ９」という記号表示は、例えば、「オメガ‐９の位置」において最初の二重結合が（分子のメチル末端に対して）９番目の炭素上に位置する、２０個の炭素（Ｃ２０）および１個の二重結合を有する分子（脂肪酸）として説明される。同様に、ＤＨＡの記号表示はＣ２２：６Ｗ３と記載され、最初の二重結合が分子の末端（オメガの位置）から３番目の炭素で生じる、２２個の炭素および６個の二重結合を有する分子を表す。これは「オメガ‐３脂肪酸」である。
【００２９】
１．「善玉」脂肪
一価不飽和脂肪酸（ＭＵＦＡ）
Ｃ１５：１Ｗ５ＣＩＳ
Ｃ１６：１Ｗ７Ｃパルミトレイン酸
Ｃ１７：１Ｗ７
Ｃ１８：１Ｗ９Ｃオレイン酸
Ｃ２０：１Ｗ９エイコセン酸＝ガドレイン酸
Ｃ２２：１Ｗ９ドコセン酸＝エルカ酸
Ｃ２４：１Ｗ９Ｃ
必須脂肪酸（ＥＦＡ）
Ｃ１８：３Ｗ３α‐リノレン酸
Ｃ１８：２Ｗ６Ｃリノール酸
高度不飽和脂肪酸（ＨＵＦＡ）
Ｃ２０：５Ｗ３エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）
Ｃ２２：６Ｗ３ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）
【００３０】
２．「悪玉」脂肪
飽和脂肪酸
Ｃ１６：０パルミチン酸
Ｃ１７：０ヘプタデカン酸
Ｃ１８：０ステアリン酸
Ｃ２０：０アラキン酸
Ｃ２１：０ヘンエイコサン酸
Ｃ２２：０ベヘン酸
Ｃ２３：０トリコサン酸
Ｃ２４：０リグノセリン酸
トランス脂肪酸（ＴＦＡ）
Ｃ１８：１Ｗ９Ｔ
Ｃ１８：２Ｗ６Ｔ
【００３１】
３．「中性」脂肪
多価不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）
Ｃ２０：３Ｗ３エイコサトリエン酸（ＥＴＡ）
Ｃ１８：３Ｗ６γ‐リノレン酸
Ｃ２０：２Ｗ６エイコサジエン酸
Ｃ２０：３Ｗ６ＤＧＬＡ
Ｃ２０：４Ｗ６アラキドン酸（ＡＡ）
Ｃ２２：２Ｗ６ＤＤＡ
【００３２】
本明細書で使用される場合、「被験者」または「個体」または「動物」または「患者」または「哺乳動物」は、診断、予後、または治療が所望される任意の被験者、特に哺乳類対象、例えば、ヒトである。
【００３３】
本明細書で使用される場合、疾病、疾患、または状態の「治療」または「治療すること」は、それらの少なくとも１つの症状の緩和、それらの重症度の軽減、またはそれらの進行の遅延、阻止、もしくは阻害を包含する。治療は、疾病、疾患、または状態が完全に治癒することを意味する必要はない。本明細書において有用な組成物は、疾病、疾患、または状態の重症度を軽減するため、それらと関連する症状の重症度を軽減するため、患者または被験者の生活の質に改善を提供するため、または疾病、疾患、または状態の発生を遅延、予防、または阻害することのみを必要とする。
【００３４】
本明細書に列挙される任意の濃度範囲、百分率の範囲、または比率の範囲は、別途記載のない限り、整数の１０分の１および１００分の１等、その範囲内の任意の整数およびその分数の濃度、割合、または比率を含むことを理解されたい。
【００３５】
上記および本明細書の他の箇所で使用される場合、用語「ａ」および「ａｎ」は、列挙される構成要素の「１つ以上」を指すことを理解されたい。当業者には、単数形の使用は、別途記載の無い限り、複数形を含むことは明白である。したがって、用語「ａ」、「ａｎ」、および「少なくとも１つ」は、本出願において交換可能に使用される。例えば、「ａ」ポリマーは、１つのポリマーか、または２つ以上のポリマーを含む混合物の両方を指す。
【００３６】
本出願を通して、種々の実施形態の記載は「含む」という文言を使用しているが、当業者は、いくつかの特別な場合において、「本質的に〜からなる」または「からなる」という文言を使用して、代替的に実施形態を記載できることを理解するであろう。
【００３７】
本発明の教示をより理解するため、また教示の範囲を決して制限しないために、別途記載のない限り、本明細書および特許請求の範囲において使用される量、割合または比率、および他の数値を表す全ての数字は、全ての場合において「約」という用語によって修飾されていることを理解されたい。したがって、特に反対の記載がない限り、以下の明細書および添付の特許請求の範囲に記述される数値パラメータは、獲得することが求められる所望の特性に応じて変化し得る近似値である。少なくとも、各数値パラメータは、少なくとも、報告された有効桁の数を考慮して、通常の四捨五入法を適用することによって解釈されるべきである。
【００３８】
本明細書で使用される他の用語は、当該技術分野におけるそれらの一般的に知られる意味によって定義されることが意図される。
【００３９】
主題の組成物
【００４０】
主題の組成物は、抗増殖活性、抗炎症活性、抗酸化活性、抗血管新生、およびアポトーシス活性を示す構成成分を含む、多種薬用植物および多価不飽和油の調製物の類である。主題の治療用組成物は、治療的な有効量の（Ａ）薬用植物組成物および（Ｂ）多価不飽和油組成物を含む。
【００４１】
薬用植物組成物
【００４２】
いくつかの実施形態において、薬用植物組成物は、ローズマリーの抽出物およびオレガノの抽出物からなる群から選択される、治療的に有効な量の少なくとも１つの薬用植物構成要素を含む。一実施形態において、薬用植物組成物は、ローズマリーの超臨界抽出物、オレガノの超臨界抽出物、またはそれらの組み合わせを含む。他の非限定的なローズマリーおよびオレガノの抽出物は、例えばアルコール抽出物を含むことができる。別の実施形態において、薬用植物組成物は、本質的に治療的な有効量のローズマリーの超臨界抽出物およびオレガノの超臨界抽出物からなる。薬用植物組成物はまた、植物油等の１つ以上の追加の構成要素を含むことができ、好適な植物油の非限定的な例は、ヒマワリ油である。一実施形態において、ヒマワリ油は、溶液に抽出物を注入および混合し易くするために、担体としてローズマリー超臨界抽出物に加えられる。一実施形態において、ローズマリー超臨界抽出物２ｍｇごとに０．０４ｍｇのヒマワリ油が加えられる。
【００４３】
いくつかの実施形態において、薬用植物組成物は、本発明の主題の多価不飽和油組成物と組み合わせられると、抗酸化機能および／または配合物安定機能を提供する。特定の実施形態において、薬用植物組成物は、多価不飽和脂質の酸化を阻害し、かつ／または本発明の主題の組成物中の多価不飽和脂質の固有の化学反応性を安定させ、それによって、本発明の主題の組成物のより長期の保存期間および／またはより一貫した化学プロファイルを提供する。
【００４４】
市販の魚油は、通常、トコフェロール等の天然の抗酸化剤を添加することによって加工される。そのような多価不飽和油に加えられるトコフェロールのレベルは、多価不飽和油の過度の酸化を防ぐために一般的に十分であると考えられてきた。本発明の主題の薬用植物油組成物は、最初に油が加工されるときに加えられる抗酸化剤（５００ｐｐｍのα‐トコフェロール等）によって提供されるレベルを超えて多価不飽和油の酸化をさらに抑制するために有用であることが、予期せずして発見された。酸化試験を実施したところ、本発明の主題の薬用植物油組成物は、追加の予想外に有意な酸化からの保護を多価不飽和油に提供することが分かった。
【００４５】
表ＩＩは、本発明の主題の薬用植物組成物を含むおよび含まない多価不飽和油の比較酸化試験を示す。
【００４６】
【表２】
【００４７】
この例では、本発明の主題の組成物の所定レベルの酸化を誘導するために必要とされる時間を測定するために、ランシマット誘導時間法を用いた。Ｍｅｔｒｏｈｍ６７９のランシマット用機器で、試料の酸化レベルおよび酸化安定性を測定した。このテストでは、４グラムの試料を計器内に配置し、８０℃の空気を１時間当たり１０リットルで試料全体に流した。次いで、計器上で十分な酸化ピークが測定されるまで、７．２および７．５時間、対照試料（加工者によって加えられたα‐トコフェロール５００ｐｐｍを含有する加工サーモン油のみ）の実験を行った。測定された酸化レベルに達するまでの時間に「保護値」１．０を割り当てた。次いで、サーモン油組成物に指示されたローズマリーおよびオレガノ油の抽出物を加えた試験試料で実験を行った。次いで、酸化試験を実行したところ、試料は、７．２および７．５時間の終りに対照が到達したのと同じ酸化レベルに達するまでに有意により長くかかったことが分かった。試験試料において同じ酸化レベルに達するまでの時間は、少なくとも２倍かかっており、具体的には、試験試料は、少なくとも２．９倍、そして最大３．５倍で増加した。したがって、薬用植物油組成物を含まないサーモン油の保護値１．０と比較すると、これらの試料の「保護値」は、約２．９〜約３．５の範囲であった。
【００４８】
本発明の主題において使用されるローズマリーおよびオレガノの超臨界抽出物は、例えば、Ｅ．Ｓｔａｈｌ，Ｋ．Ｗ．Ｑｕｉｒｉｎ，Ｄ．Ｇｅｒａｒｄ，Ｄｅｎｓｅ Ｇａｓｅｓ ｆｏｒ Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｒｅｆｉｎｉｎｇ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ ４ １９８８（参照により本明細書に組み込まれる）に開示されるような既知の超臨界抽出法にしたがって調製することができる。
【００４９】
別の実施形態において、多価不飽和油を含まない薬用植物組成物は、
（Ａ）多価不飽和油を含まない薬用植物組成物の約５重量％〜約８０重量％、代替として約５０重量％〜約７５重量％のローズマリーの超臨界抽出物と、
（Ｂ）多価不飽和油を含まない薬用植物組成物の約５重量％〜約６０重量％、代替として約１５重量％〜約４０重量％のオレガノの超臨界抽出物と、を含む。
【００５０】
さらなる実施形態において、薬用植物組成物は、約１：１の比率で、より好ましくは約２：１の比率で、ローズマリーＳＣＥ：オレガノＳＣＥの比率を含む。さらなる実施形態において、薬用植物組成物は、多価不飽和油組成物と組み合わせることができる。一実施形態において、２ｍｇのローズマリーＳＣＥおよび１ｍｇのオレガノＳＣＥが、２グラムの多価不飽和油と組み合わせられる。
【００５１】
多価不飽和油組成物
【００５２】
さらなる実施形態において、海洋生物油または多価不飽和油組成物は、ＤＨＡ、ＥＰＡ、およびαリノレン酸からなる群から選択される少なくとも１つの必須脂肪酸を含む。いくつかの実施形態において、多価不飽和油組成物は海洋生物油である。さらなる実施形態において、多価不飽和油組成物は、好ましくは野生で捕獲されたアラスカサーモンからのサーモン油を含む。他の実施形態において、多価不飽和油組成物は、魚油、種油、植物油、および藻油からなる群から選択される１つ以上の油源に由来する多価不飽和脂肪酸を含む。
【００５３】
さらなる実施形態において、海洋生物油または多価不飽和油組成物は、例えば、野生で捕獲された鮭に自然に見られる少なくとも１つの非脂肪酸構成要素等の、少なくとも１つの非脂肪酸構成要素をさらに含む。一実施形態において、少なくとも１つの非脂肪酸構成要素は、非脂肪酸脂質（コレステロール等）、ビタミン（ビタミンＤ等）、抗酸化剤（トコフェロール等）、色素（アスタキサンチン等）、またはそれらの混合物である。一実施形態において、多価不飽和油組成物は、脂肪酸構成要素（トリグリセリド、ジグリセリド、モノグリセリド、リン脂質、遊離脂肪酸、エステル化脂肪酸、その塩、またはそれらの組み合わせの形態等）、コレステロール、ビタミンＤ、およびアスタキサンチンを含む。
【００５４】
ヘキサン等の有機溶媒は、魚または藻等の油源から多価不飽和油を精製または濃縮するために使用されることがあり、精製した油に微量の溶媒が残り、健康への有害な影響の原因となり得る。本発明の主題の一実施形態において、多価不飽和油は、ヘキサン等の有機溶媒を含まず、したがって、そのような健康への有害な影響を及ぼさない。
【００５５】
さらなる実施形態において、多価不飽和油組成物は、約１０重量％〜約６０重量％、代替として約１５重量％〜約３５重量％、さらに代替として約２０重量％のＤＨＡ（ドコサヘキサエン酸）を含む。
【００５６】
さらなる実施形態において、多価不飽和油組成物は、約１０重量％〜約６０重量％、代替として約１０重量％〜約３５重量％、さらに代替として約１０重量％のＥＰＡ（エイコサペンタエン酸）を含む。
【００５７】
さらなる実施形態において、多価不飽和油組成物は、約１．０重量％〜約２．４重量％、代替として約０．８重量％〜約２．２重量％、さらに代替として約２重量％のオクタデカトリエン酸を含む。
【００５８】
さらなる実施形態において、多価不飽和油組成物は、約０．３重量％〜約１．４重量％、代替として約０．８重量％〜約１．２重量％、さらに代替として約１重量％のヘンエイコサペンタエン酸を含む。
【００５９】
さらなる実施形態において、多価不飽和油組成物は、約０．０３重量％〜約０．４重量％、代替として約０．０８重量％〜約０．２重量％、さらに代替として約０．０５重量％のテトラデセン酸を含む。
【００６０】
さらなる実施形態において、多価不飽和油組成物は、約２．６重量％〜約６．４重量％、代替として約１．８重量％〜約８．２重量％、さらに代替として約５％重量％のヘキサデセン酸を含む。
【００６１】
さらなる実施形態において、多価不飽和油組成物は、約１４．０重量％〜約２０．０重量％、代替として約１０．８重量％〜約２０．２重量％、さらに代替として約１５重量％のオクタデセン酸を含む。
【００６２】
さらなる実施形態において、多価不飽和油組成物は、約４．０重量％〜約１０．０重量％、代替として約５．８重量％〜約９．２重量％、さらに代替として約８重量％のエイコセン酸を含む。
【００６３】
さらなる実施形態において、多価不飽和油組成物は、約５．０重量％〜約１０．０重量％、代替として約５．８重量％〜約８．２重量％、さらに代替として約７重量％のドコセン酸を含む。
【００６４】
さらなる実施形態において、多価不飽和油組成物は、約０．４重量％〜約１．４重量％、代替として約０．８重量％〜約２．２重量％、さらに代替として約１重量％のテトラコセン酸を含む。
【００６５】
好ましい組成物は、以下の多価不飽和油を少量（０．０１〜３重量％）含有することができることを認識されたい：オクタデカジエン酸、オクタデカテトラエン酸、エイコサテトラエン酸、エイコサジエン酸、ヘプタデセン酸、およびエイコサトリエン酸。
【００６６】
特定の実施形態において、主題の組成物は、善玉脂肪の悪玉脂肪に対する好ましい比率を有する多価不飽和油組成物を含む。例えば、リン脂質油組成物は、Ｃ１５：１Ｗ５ＣＩＳ；Ｃ１６：１Ｗ７Ｃパルミトレイン酸；Ｃ１７：１Ｗ７；Ｃ１８：１Ｗ９Ｃオレイン酸；Ｃ２０：１Ｗ９エイコセン酸＝ガドレイン酸；Ｃ２２：１Ｗ９ドコセン酸＝エルカ酸；Ｃ２４：１Ｗ９Ｃ；Ｃ１８：３Ｗ３α‐リノレン酸；Ｃ１８：２Ｗ６Ｃリノール酸；Ｃ２０：５Ｗ３エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）；およびＣ２２：６Ｗ３ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）からなる群から選択される、増加した濃度の「善玉脂肪」を含むことができる。また、例えば、リン脂質油組成物は、Ｃ１６：０パルミチン酸；Ｃ１７：０ヘプタデカン酸；Ｃ１８：０ステアリン酸；Ｃ２０：０アラキン酸；Ｃ２１：０ヘンエイコサン酸；Ｃ２２：０ベヘン酸；Ｃ２３：０トリコサン酸；Ｃ２４：０リグノセリン酸；Ｃ１８：１Ｗ９Ｔ；およびＣ１８：２Ｗ６Ｔからなる群から選択される、減少した濃度の「悪玉脂肪」を含むことができる。いくつかの実施形態において、リン脂質油組成物はまた、Ｃ２０：３Ｗ３エイコサトリエン酸（ＥＴＡ）；Ｃ１８：３Ｗ６γ‐リノレン酸；Ｃ２０：２Ｗ６エイコサジエン酸；Ｃ２０：３Ｗ６ＤＧＬＡ；Ｃ２０：４Ｗ６アラキドン酸（ＡＡ）；およびＣ２２：２Ｗ６ＤＤＡからなる群から選択される「中性脂肪」も含むことができる。
【００６７】
いくつかの実施形態において、多価不飽和油組成物は、２：１〜１００：１の範囲、例えば、５：１、７：１、１０：１、１５：１、２０：１、２５：１、または３０：１の善玉脂肪対悪玉脂肪の比率を含む。少なくとも１つの実施形態において、多価不飽和油組成物中には検出可能な悪玉脂肪が存在しない。
【００６８】
治療用組成物
【００６９】
特定の実施形態において、本発明の主題の治療用組成物は、治療的に有効な量のローズマリーの超臨界抽出物およびオレガノの超臨界抽出物を含む。一実施形態において、本発明の主題の治療用組成物は、本質的に治療的な有効量のローズマリーの超臨界抽出物およびオレガノの超臨界抽出物からなる。
【００７０】
他の実施形態において、治療用組成物は、本明細書に記載される薬用植物組成物を、本明細書に記載される多価不飽和油組成物と組み合わせることによって調製される。
【００７１】
別の実施形態において、本発明の主題の治療用組成物は、治療的に有効な量のローズマリーの超臨界抽出物およびオレガノの超臨界抽出物を、多価不飽和油組成物と組み合わせて含む。さらなる実施形態において、多価不飽和油組成物は、魚油、例えば、サーモン油等を含む。一実施形態において、本発明の主題の治療用組成物は、本質的に治療的な有効量のローズマリーの超臨界抽出物と、オレガノの超臨界抽出物と、サーモン油等の魚油とからなる。
【００７２】
一実施形態において、治療用組成物は、１：５〜１：５０００の範囲、例えば、１：５、１：１０、１：２０、１：３０、１：４０、１：５０、１：１００、１：２００、１：３００、１：５００、１：１０００、１：２０００、１：３０００、１：４０００、または１：５０００の薬用植物組成物対多価不飽和油の比率を含む。
【００７３】
代替の態様において、治療用組成物は、抗腫瘍薬、抗酸化剤、成長抑制剤、薬用植物抽出物、および他の栄養素からなる群から選択される追加の薬剤を含む。特定の実施形態において、本発明の主題の治療用組成物は、治療的に有効な量のウコンもしくは生姜の超臨界抽出物、または治療的に有効な量のホーリーバジル、生姜、ウコン、コガネバナ（Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａ ｂａｉｃａｌｅｎｓｉｓ）、ローズマリー、緑茶、イタドリ、黄蓮、もしくはメギの含水アルコール抽出物、またはそれらの組み合わせを含有しない。いくつかの好ましい実施形態において、本発明の主題の治療用組成物は、薬用植物組成物Ｚｙｆｌａｍｅｎｄ（登録商標）（ＮｅｗＣｈａｐｔｅｒ，Ｉｎｃ．、Ｂｒａｔｔｌｅｂｏｒｏ，ＶＴ）を含有しない。
【００７４】
表ＩＩＩに記載するのは、本発明の主題の方法において使用される、不活性成分を除く経口投与組成物の例示的実施形態である。表ＩＩに列挙する量は、記載される成分のカプセル用量を表す。
【００７５】
【表３】
【００７６】
いくつかの実施形態において、組成物は、２グラムの魚油と、２グラムのローズマリーＳＣＥと、１ｍｇのオレガノＳＣＥとを含む。一実施形態において、魚油は、一番絞りの野生のアラスカサーモンの油等のアラスカサーモンの油を含む。さらなる実施形態において、組成物は、本質的に多価不飽和油と、ローズマリーＳＣＥと、オレガノＳＣＥとからなる。
【００７７】
特定の実施形態において、組成物は、野生のアラスカサーモンの油からの１０００〜２０００ｍｇの脂肪、５〜２０ｍｇのコレステロール、２０〜２００ＩＵのビタミンＤ、２〜１０マイクログラムのアスタキサンチン、１〜６ｍｇのローズマリーＳＣＥ、および１〜３ｍｇのオレガノＳＣＥを含む。特定の実施形態において、２０００ｍｇの多価不飽和油は、約４８０ｍｇの飽和脂肪、約８４０ｍｇの一価不飽和脂肪、および約６８０ｍｇの多価不飽和脂肪を含む。さらなる実施形態において、２０００ｍｇの多価不飽和油は、約５００ｍｇのオメガ‐３脂肪酸、約１ｍｇのオメガ‐５脂肪酸、約１４０ｍｇのオメガ‐６脂肪酸、約１００ｍｇのオメガ‐７脂肪酸、および約６６０ｍｇのオメガ‐９脂肪酸を含む。さらに別の実施形態において、多価不飽和油中の５００ｍｇのオメガ‐３脂肪酸は、約１８０ｍｇのＥＰＡ、約２２０ｍｇのＤＨＡ、および１００ｍｇの他のオメガ‐３脂肪酸（ドコサペンタエン酸、リノレン酸、ヘンエイコサペンタエン酸等）を含む。さらなる実施形態において、多価不飽和油は、２：１〜１：１０、２：１〜１：５、１：１〜１：３、１：１．５〜１：３、または１：２〜１：２．５の範囲の比率でＥＰＡ：ＤＨＡを含む。
【００７８】
本明細書で使用される用語「ＷｈｏｌｅＭｅｇａ」は、図および実施例に記載される種々の試験のために使用された本発明の主題の組成物の１つの例示的な配合物を指す。ＷｈｏｌｅＭｅｇａは、本明細書で使用される場合、野生のアラスカサーモンの油からの２０００ｍｇの脂肪、１５ｍｇのコレステロール、１００ＩＵのビタミンＤ、６マイクログラムのアスタキサンチン、２ｍｇのローズマリーＳＣＥ、および１ｍｇのオレガノＳＣＥを含む。Ｗｈｏｌｅｍｅｇａの２０００ｍｇの脂肪は、約４８０ｍｇの飽和脂肪、約８４０ｍｇの一価不飽和脂肪、および約６８０ｍｇの多価不飽和脂肪を含む。さらに、ＷｈｏｌｅＭｅｇａの２０００ｍｇの脂肪は、約５００ｍｇのオメガ‐３脂肪酸、約１ｍｇのオメガ‐５脂肪酸、約１４０ｍｇのオメガ‐６脂肪酸、約１００ｍｇのオメガ‐７脂肪酸、および約６６０ｍｇのオメガ‐９脂肪酸を含む。また、ＷｈｏｌｅＭｅｇａ中の５００ｍｇのオメガ‐３脂肪酸は、約１８０ｍｇのＥＰＡ、約２２０ｍｇのＤＨＡ、および約１００ｍｇの他のオメガ‐３脂肪酸（ドコサペンタエン酸、リノレン酸、ヘンエイコサペンタエン酸等）を含む。ＷｈｏｌｅＭｅｇａ配合物の追加の非限定的な例も企図され、「ＷｈｏｌｅＭｅｇａ」と表示される今後の組成物は、上述した配合における変動を有する可能性があり、今後の変動は、必要に応じて、更新された製品表示に記載される。
【００７９】
本発明の主題の方法
【００８０】
本発明の主題の組成物は、一般に、標準的な超臨界ＣＯ２によるローズマリーおよびオレガノの濃縮抽出物と、任意で多価不飽和油組成物とを含む。
【００８１】
組織膜に多価不飽和脂質を取り込む能力について主題の組成物を調べたところ、それらは、細胞シグナル伝達事象を調節し（例えば、炎症を減少させる）、膜の流動性を増加させる役割を果たす。対象組成物の投与後の血清脂質含有量における変化は、ＥＰＡ等の健康的なオメガ‐３油の増加、およびオメガ‐６油アラキドン酸（ＡＡ）に相対的な減少をもたらした。この変化は、用量依存性であることが示されており、有益であると考えることができ、炎症の可能性を減少させる。
【００８２】
いくつかの実施形態において、治療的な有効投与量の本発明の主題の組成物は、酸化した低密度リポタンパク質による動脈プラークの蓄積に起因する循環器疾患を治療するために有用である。また、さらなる実施形態において、治療的な有効投与量の本発明の主題の組成物は、体内の高密度リポタンパク質ＨＤＬ）の存在を促進し、有益な健康への影響を有すると考えられる。例えば、ＨＤＬは、リポタンパク質のより可溶性の形態として知られており、したがって、その存在は、動脈プラークの形成に有意に寄与しない。また、ＨＤＬは、プラーク物質を吸収することが可能であることが分かっており、よって、動脈プラークの量を直接的に減少させる。
【００８３】
一実施形態において、本発明の主題の組成物は、血小板凝集および血清トリグリセリドを減少させるために効果的であり、心筋梗塞、高血圧、粥状動脈硬化、および特定の種類の癌のリスクを低下させることができる。別の実施形態において、本発明の主題の組成物は、健康のために有益なエイコサノイドの合成および調節を促進するために効果的である。
【００８４】
一実施形態において、本発明の主題の組成物は、糖原病、脳卒中、糖尿病、関節リウマチ、脊椎痛、変形性関節症、炎症性大腸炎、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、喘息、黄斑変性症、湿疹、乾癬、産後の鬱病、月経痛、アルツハイマー病、パーキンソン病、鬱病、双極性障害、統合失調症、高リポタンパク血症、または高コレステロール血症を治療するために効果的である。
【００８５】
さらに他の実施形態において、本発明の主題の組成物は、過剰増殖疾患、癌、白血病、およびリンパ腫のリスクを防止、治療、または低下するために効果的である。
【００８６】
本発明の主題の組成物を使用するためのさらなる方法は、特定の不飽和脂質の補充と関連し得る有益な健康への影響を促進することを含む。本発明の主題のいくつかの実施形態は、以下の例の不飽和脂質を含むことができ、それによって、それらの有益な健康への影響を促進することができる。表ＩＶは、本発明の主題のいくつかの実施形態におけるサーモン油の不飽和脂肪酸組成物の例を提供する。いくつかの実施形態において、海洋生物油または本発明の主題の多価不飽和油組成物は、表ＩＶに記載される脂質のうちの１つ以上、またはそれらの組み合わせを含んでもよい。
【００８７】
【表４】
【００８８】
本発明の主題はまた、本明細書に記載される薬用植物組成物のうちの１つを本明細書に記載される多価不飽和油組成物のうちの１つと組み合わせることを含む、薬用植物および多価不飽和油を組み合わせた組成物を作成するプロセスも提供する。プロセスの一実施形態において、薬用植物油は、ローズマリーＳＣＥ２ｍｇおよびオレガノＳＣＥ１ｍｇを含み、多価不飽和油は、野生で捕獲されたアラスカサーモンの油等の魚油２０００ｍｇを含み、薬用植物油と多価不飽和油が一緒に合わせられ、任意でカプセル等の剤形に調製される。
【００８９】
１．ＥＰＡおよびＤＨＡ
【００９０】
オメガ‐６（例えば、アラキドン酸）の摂取量に対してＥＰＡおよびＤＨＡ等のオメガ‐３脂肪酸の摂取量を増加させることの健康効果について、多くのことが明らかになっている。例えば、Ｄｒ．Ｊｏｓｅｐｈ Ｃ．Ｍａｒｏｏｎが２００６年に出版した「Ｆｉｓｈ Ｏｉｌ． Ｔｈｅ Ｎａｔｕｒａｌ Ａｎｔｉ‐Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ」という標題の本を参照のこと。
【００９１】
２．オレイン酸
【００９２】
オレイン酸は、体内における主要な一価不飽和脂肪酸である。身体の主なオレイン酸源は動物の食餌によって提供されるが、δ９‐デサチュラーゼの作用によりステアリン酸から限られた量で合成することもできる。最も注目すべき食物源は、７０〜８０％がオレイン酸からなるオリーブ油である。他の良好な源は、ブドウ種子油、シーバックソーン油、およびブラジル産のヤシ科のベリーであるアサイの果肉を含む。多数の研究が、オリーブ油を豊富に含む食餌は、酸化ストレスおよび炎症性メディエータを抑制することにより、粥状動脈硬化の発生を減少させ、血清コレステロールを低下させることを示している。オリーブ油の健康効果は存在するフェノール化合物によるものであることが多いが、最近の研究では、オレイン酸自体がその血圧を低下させる効果に寄与することが示唆されている。また、オレイン酸は、抗腫瘍活性を示す。オレイン酸は、乳癌患者の約３０パーセントに存在するＨＥＲ‐２／ｎｅｕと呼ばれる癌の原因となる癌遺伝子の作用をブロックするだけでなく、乳癌治療薬ハーセプチンの有効性を向上させることが分かっている。
【００９３】
オレイン酸は、副腎白質ジストロフィーと呼ばれる稀有な神経生物学的疾患のための実験的治療薬ロレンツォのオイルの成分である。Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．２００８ Ｓｅｐ １６；１０５（３７）：１３８１１‐６．Ｅｐｕｂ ２００８ Ｓｅｐ ４．Ｏｌｅｉｃ ａｃｉｄ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｓ ｒｅｓｐｏｎｓｉｂｌｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ｂｌｏｏｄ ｐｒｅｓｓｕｒｅ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｏｌｉｖｅ ｏｉｌ．Ｔｅｒeｓ Ｓ，Ｂａｒｃｅｌo‐Ｃｏｂｌｉｊｎ Ｇ，Ｂｅｎｅｔ Ｍ，Ａｌｖａｒｅｚ Ｒ，Ｂｒｅｓｓａｎｉ Ｒ，Ｈａｌｖｅｒ ＪＥ，Ｅｓｃｒｉｂa ＰＶ．Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｉｎｓｔｉｔｕｔ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔａｒｉ ｄ’Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｃｉｏｎｓ ｅｎ Ｃｉeｎｃｉｅｓ ｄｅ ｌａ Ｓａｌｕｔ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｂａｌｅａｒｉｃ Ｉｓｌａｎｄｓ，Ｃａｒｒｅｔｅｒａ ｄｅ Ｖａｌｌｄｅｍｏｓｓａ Ｋｍ ７．５，Ｅ‐０７１２２ Ｐａｌｍａ ｄｅ Ｍａｌｌｏｒｃａ，Ｓｐａｉｎ。
【００９４】
多数の研究が、オリーブ油の高摂取量が血圧（ＢＰ）を低下させることを示している。オリーブ油のこれらの好ましい効果は、他の油には存在しないα‐トコフェロール、ポリフェノール、および他のフェノール化合物等、その微量の構成要素が原因であるとされることが多かった。しかしながら、最近、オリーブ油の降圧効果は、オレイン酸（ＯＡ）の含有量が高い（約７０〜８０％）ことによるものであることが明らかになった。オリーブ油の摂取が膜のＯＡレベルを増加させ、Ｇタンパク質媒介性シグナル伝達をコントロールするような様式で膜脂質構造（Ｈ（ＩＩ）相の性質）を制御し、ＢＰの低下を引き起こすことが提案されている。この効果は、一部には、アデニリルシクラーゼおよびホスホリパーゼＣを制御するＧタンパク質関連カスケードに対するその制御作用によるものである。また、ＯＡ類似体、エライジン酸およびステアリン酸は降圧活性を有さないことから、膜脂質構造とＢＰ制御を関連付ける分子機構は非常に特殊であることが示唆される。同様に、大豆油（ＯＡ含有量が低い）はＢＰを低下させない。オリーブ油が、ＯＡの作用によって降圧効果を誘導することが実証されている。
【００９５】
Ａｎｎ Ｏｎｃｏｌ．２００５ Ｍａｒ；１６（３）：３５９‐７１．Ｅｐｕｂ ２００５ Ｊａｎ １０．Ｏｌｅｉｃ ａｃｉｄ，ｔｈｅ ｍａｉｎ ｍｏｎｏｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ ｏｆ ｏｌｉｖｅ ｏｉｌ，ｓｕｐｐｒｅｓｓｅｓ Ｈｅｒ−２／ｎｅｕ（ｅｒｂＢ−２）ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃａｌｌｙ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｒａｓｔｕｚｕｍａｂ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ）ｉｎ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ ｗｉｔｈ Ｈｅｒ−２／ｎｅｕ ｏｎｃｏｇｅｎｅ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ．Ｍｅｎｅｎｄｅｚ ＪＡ，Ｖｅｌｌｏｎ Ｌ，Ｃｏｌｏｍｅｒ Ｒ，Ｌｕｐｕ Ｒ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｅｖａｎｓｔｏｎ Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔｅｒｎ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，１００１ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｌａｃｅ，Ｅｖａｎｓｔｏｎ，ＩＬ ６０２０１，ＵＳＡ．
【００９６】
一価不飽和脂肪酸であるオレイン酸（ＯＡ、１８：１ｎ‐９）の最も豊富な食物源であるオリーブ油の摂取と、乳癌のリスクおよび進行との間の関係は、議論の余地を残す問題となっている。さらに、乳癌に対するオリーブ油の保護効果は、ＯＡの直接的な効果ではなく、油の何か他の構成要素が原因であるかもしれないと提案されている。
【００９７】
方法
【００９８】
フローサイトメトリー、ウエスタンブロット法、免疫蛍光顕微鏡法、代謝状態（ＭＴＴ）、軟寒天コロニー形成法、アポトーシス誘導性ＤＮＡ二本鎖切断のインサイツ酵素標識化（ＴＵＮＥＬアッセイ分析）、およびカスパーゼ‐３依存性ポリＡＤＰリボースポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）切断アッセイを用いて、ＯＡの外的補給がＨｅｒ‐２／ｎｅｕ癌遺伝子の発現に与える影響を明らかにした。Ｈｅｒ‐２／ｎｅｕ癌遺伝子の発現は、乳癌の病因および促進に能動的に関与する。また、Ｈｅｒ‐２／ｎｅｕでコードされたｐ１８５（Ｈｅｒ‐２／ｎｅｕ）腫瘍性タンパク質の細胞外ドメインに高親和性で結合するヒト化モノクローナル抗体であるトラスツズマブ（ハーセプチン）の有効性にＯＡが与える影響を調べた。これらの問題を検討するために、Ｈｅｒ‐２／ｎｅｕ癌遺伝子の増幅を自然に示す乳癌細胞ＢＴ‐４７４およびＳＫＢｒ‐３を使用した。
【００９９】
結果
【０１００】
フローサイトメトリー分析により、Ｈｅｒ‐２／ｎｅｕ過剰発現体ＢＴ‐４７４およびＳＫ‐Ｂｒ３をＯＡで処理した後に、細胞表面関連連ｐ１８５（Ｈｅｒ‐２／ｎｅｕ）の劇的な減少（最大４６％）が示された。実際に、この効果は、最適濃度のトラスツズマブへの曝露後に見られる効果に匹敵するものであった（２０マイクログラム／ｍＬのトラスツズマブで最大４８％の減少）。注目すべきは、フローサイトメトリー（最大７０％の減少）、免疫ブロット法、および免疫蛍光顕微鏡試験によって測定されたように、ＯＡおよび準最適濃度のトラスツズマブ（５マイクログラム／ｍＬ）への同時曝露が、Ｈｅｒ‐２／ｎｅｕの発現を相乗的に下方制御したことである。ＭＴＴに基づく細胞生存率および足場非依存性軟寒天コロニー形成アッセイによって評価されたように、ＯＡとトラスツズマブとの間の細胞傷害性相互作用の性質は、強い相乗作用を示した。さらに、ＴＵＮＥＬおよびカスパーゼ‐３依存性ＰＡＲＰ切断によって確認されたように、ＯＡの同時曝露は、アポトーシス性細胞死と関連するＤＮＡ断片化を促進することにより、Ｈｅｒ‐２／ｎｅｕ過剰発現体に対するトラスツズマブの有効性を相乗的に強化した。また、ＯＡおよびトラスツズマブを用いた処置は、Ｈｅｒ‐２／ｎｅｕに関連する乳癌の発症および進行において重要な役割を果たすサイクリン依存性キナーゼ阻害因子であるｐ２７（Ｋｉｐ１）の発現および核集積の両方を劇的に増加させた。最後に、ＯＡの共曝露は、ＡＫＴおよびＭＡＰＫ等のリン酸化タンパク質を含む、Ｈｅｒ‐２／ｎｅｕの下流のシグナル伝達経路を阻害するトラスツズマブの能力を有意に増強した。結論：これらの知見は、オリーブ油の主な一価不飽和脂肪酸であるＯＡが、Ｈｅｒ‐２／ｎｅｕ癌遺伝子の増幅を伴う乳癌細胞のアポトーシス性細胞死を促進することにより、Ｈｅｒ‐２／ｎｅｕの過剰発現を抑制し、同時に、抗Ｈｅｒ‐２／ｎｅｕ免疫療法と相乗的に相互作用することを示すものである。この、以前には認識されていなかったＯＡの特性は、個々の脂肪酸、および本発明の主題の組成物が乳癌細胞の悪性挙動を制御することが可能であり、したがって、将来の疫学的試験のデザイン、また最終的には食生活に関するカウンセリングにおいて有用である新規分子機構を提供する。
【０１０１】
Ａｍ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｎｕｔｒ．１９９８ Ｊｕｌ；６８（１）：１３４‐４１．Ｔｉｓｓｕｅ ｓｔｏｒｅｓ ｏｆ ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ ｍｏｎｏ ｍｏｎｏｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ ａｎｄ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ：ｔｈｅ ＥＵＲＡＭＩＣ ｓｔｕｄｙ．Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ Ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒ Ｓｔｕｄｙ ｏｎ Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ，Ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ Ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ．Ｓｉｍｏｎｓｅｎ ＮＲ，Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ‐Ｃｒｅｈｕｅｔ Ｎａｖａｊａｓ Ｊ，Ｍａｒｔｉｎ‐Ｍｏｒｅｎｏ ＪＭ，Ｓｔｒａｉｎ ＪＪ，Ｈｕｔｔｕｎｅｎ ＪＫ，Ｍａｒｔｉｎ ＢＣ，Ｔｈａｍｍ Ｍ，Ｋａｒｄｉｎａａｌ ＡＦ，ｖａｎ’ｔ Ｖｅｅｒ Ｐ，Ｋｏｋ ＦＪ，Ｋｏｈｌｍｅｉｅｒ Ｌ．Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｎｏｒｔｈ Ｃａｒｏｌｉｎａ，Ｃｈａｐｅｌ Ｈｉｌｌ，２７５９９，ＵＳＡ．
【０１０２】
一価不飽和脂肪が乳癌のリスクに影響を及ぼし得るという最も有力な証拠は、南欧の集団の試験に由来しており、オレイン酸源、とりわけオリーブ油の摂取が保護的であると考えられる。そのような集団において、脂肪組織の脂肪酸含有量と乳癌との関係について以前に調査が行われたことはなかった。南欧（Ｍａｌａｇａ，Ｓｐａｉｎ）を含む欧州の５ヶ所の施設で収集された多様な脂肪摂取パターンの脂肪生検を用いて、オレイン酸または他の一価不飽和脂肪の蓄積が乳癌と逆相関関係にあるという仮説を検証した。閉経後に発生した乳癌患者２９１人と、対照の対象３５１人から臀部脂肪吸引物を採取した（年齢および診療圏に対して頻度を一致させた）。一価不飽和脂肪による乳癌をモデル化するために、確立された危険因子を補正したロジスティック回帰を使用した。スペインの施設において、オレイン酸が乳癌との強い逆相関を示した。７５パーセンタイルと２５パーセンタイルとの間のオッズ比は、Ｍａｌａｇａにおいて０．４０（９５％ＣＩ：０．２８、０．５８）、他の全ての施設を統合すると１．２７（０．８８、１．８５）であり、Ｚｅｉｓｔのピークは２．３６（１．０１、５．５０）であった。パルミトレイン酸およびミリストレイン酸はスペイン以外で逆相関の証拠を示し、ｃｉｓ‐バクセン酸は３ヶ所の施設で明確な関連性を示した。これらのデータは、スペイン以外の集団において、オレイン酸の組織蓄積量の増加が乳癌に対して保護的であるという仮説を支持しなかった。この知見は、食餌試験においてオリーブ油の摂取量について報告されている強い保護的関連性が、油の何か他の保護的な構成要素に起因するものであって、オレイン酸摂取の直接的な効果ではない可能性を暗示するものである。代替として、オリーブ油の高摂取量が、これらの女性の生活様式の何か他の保護的態様を示唆するものである可能性がある。
【０１０３】
３．エルカ酸
【０１０４】
エルカ酸は、菜種、アラセイトウの種子、カラシの種子を含むアブラナ科の顕花植物の種子（それらは全て４０〜５０％のエルカ酸を含有する）によく見られる一価不飽和脂肪酸である。通常、エルカ酸は、体脂肪中には微量も見られないかまたは生じないが、食餌が菜種油を含む場合、貯蔵脂肪、臓器脂肪、および乳脂肪にエルカ酸が見られる。エルカ酸およびオレイン酸の４対１の混合物は、稀有な神経生物学的疾患である副腎白質ジストロフィーのための実験的治療薬、ロレンツォのオイルを構成する。
【０１０５】
ヒトにおける健康への悪影響は記録されていないものの、高エルカ酸菜種油の長期摂取が、ラットにおいて心臓病変および成長遅延を引き起こすことが示されているため、一般に、エルカ酸は好ましい脂肪酸とは見なされない。科学者達は、ラットはヒトと同じようには脂肪を代謝しないので、それらはヒトにおけるエルカ酸の影響を理解するための良好なモデルを提供しないと指摘している。それにも関わらず、１９９１年には、欧州連合が大量のエルカ酸を含有する食物を禁止した。菜種の低エルカ酸形態としてカノーラ油が販売されている。
【０１０６】
Ｃａｎ Ｊ Ｃｏｍｐ Ｍｅｄ．１９７５ Ｊｕｌ；３９（３）：２６１‐９．Ｃａｒｄｉａｃ ｌｅｓｉｏｎｓ ｉｎ ｒａｔｓ ｆｅｄ ｒａｐｅｓｅｅｄ ｏｉｌｓ．Ｃｈａｒｌｔｏｎ ＫＭ，Ｃｏｒｎｅｒ ＡＨ，Ｄａｖｅｙ Ｋ，Ｋｒａｍｅｒ ＪＫ，Ｍａｈａｄｅｖａｎ Ｓ，Ｓａｕｅｒ ＦＤ．
【０１０７】
乳離れしたばかりのオスおよびメスのＳＤ系ラットに、異なる量のエルカ酸（１．６％、４．３％、および２２．３％）を含有する完全に精製した菜種油を、食餌の２０重量％で最長１１２日間の期間給餌した。心筋繊維における脂肪滴の蓄積を特徴とする一過性の心筋リピドーシスが、２２．３％のエルカ酸を含有する酸化および未酸化の菜種油を給餌したオスおよびメスのラットにおいて著しく、４．３％のエルカ酸を含有する菜種油では中程度、１．６％のエルカ酸を含有する菜種油を給餌したラットにおいて非常にわずかに見られた。心筋リピドーシスのピーク強度は３〜７日で現れ、その後は元に戻った。異なるレベルのエルカ酸を含有する菜種油を１１２日間給餌したオスのラットに、局所的な心筋壊死および線維症が見られた。心筋壊死および線維症の発生率はメスのラットにおいて顕著に低く、これらの病変の発生率は、いずれの性別においても、これらの油の酸化状態による影響を受けなかった。第２の実験において、未精製か、部分的に精製したか、または完全に精製した菜種油を含有する食餌をオスのラットに給餌した。心筋壊死および線維症の病巣数と油の精製状態との間に相関関係は見られなかったが、全体的に、最も低いレベルのエルカ酸を有する油を給餌したラットに病変が少なかった。
【０１０８】
Ａｃｔａ Ｍｅｄ Ｓｃａｎｄ Ｓｕｐｐｌ．１９７５；５８５：５‐１３．Ｐｈｙｓｉｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｒａｐｅｓｅｅｄ ｏｉｌ：ａ ｒｅｖｉｅｗ．Ｂｏｒｇ Ｋ．菜種油は、動物において成長遅延作用を有する。研究者の中には、菜種油中のエルカ酸含有量が高いことが単独でこの影響を引き起こすと主張する者もあれば、菜種油における飽和／一価不飽和脂肪酸の比率が低いことが要因であると見なす者もある。通常、エルカ酸は、体脂肪中には微量も見られないかまたは生じないが、食餌が菜種油を含む場合、貯蔵脂肪、臓器脂肪、および乳脂肪にエルカ酸が見られる。エルカ酸は、体内で代謝されてオレイン酸になる。菜種油が、生殖器および副腎、睾丸、卵巣、肝臓、脾臓、腎臓、血液、心臓、および骨格筋に及ぼす影響について調査されてきた。心筋細胞における脂肪浸潤が調査した種に観察されている。ラットにおける長期実験では、エルカ酸が心筋の線維症を引き起こす。エルカ酸は、心臓のミトコンドリアの呼吸能を低下させる。呼吸能の低下は、食餌中のエルカ酸含有量と大体比例しており、エルカ酸の持続投与でさらに弱まる。ラットの寿命は、トウモロコシ油、大豆油、ヤシ油、鯨油、および菜種油の食餌で同じである。エルカ酸または他のドコセン酸を含む食餌を給餌したラットは、低温ストレス（＋４℃）に対する耐性の低下を示した。スウェーデンでは、現在の約０．４％と比較して、１９７０年までは、エルカ酸がカロリーの平均摂取量の３〜４％を占めていた。
【０１０９】
４．ガドレイン酸
【０１１０】
ガドレイン酸は、植物油および魚油に存在するｃｉｓ‐不飽和脂肪酸である。Ｄｒ．Ｊｉｍ Ｄｕｋｅによれば、それに関する生物学的活性は記録されていない。
【０１１１】
５．パルミトレイン酸
【０１１２】
パルミトレイン酸は、ヒトの食餌および血液中に見られる微量の一価不飽和のオメガ７脂肪酸である。食物源は、特に魚由来の動物脂肪、ならびにマカダミアナッツおよびシーバックソーンベリーを含む。δ９‐デサチュラーゼの酵素活性によって、食餌中に含まれる最も一般的な飽和脂肪酸であるパルミチン酸から体内で生成することができる。パルミトレイン酸は、ヒト脂肪組織を構成するトリグリセリドの一般的な構成成分である。このため、血清レベルは、トリグリセリド血症および腹部肥満の独立したマーカーであると考えられる。
【０１１３】
パルミトレイン酸は、脂肪組織および膵臓における脂肪代謝および血糖代謝の制御において重要な役割を果たすと考えられる。パルミトレイン酸は、マウスの筋肉において、インスリン作用を強く刺激し、脂肪肝を抑制するリポカイン（ホルモン）として機能することが示された。脂肪組織は、リポカインを使用して、離れた器官と連絡し、全身の代謝恒常性を制御する。また、パルミトレイン酸は、膵臓でインスリンを生成するβ細胞の健康を維持するために重要である可能性がある。生体外試験により、パルミトレイン酸は、パルミチン酸のβ細胞に対する細胞傷害効果を相殺することができると同時に、β細胞の機能を向上させことができることが示されている。
【０１１４】
パルミトレイン酸は、皮膚、血管、および粘膜を構成するような上皮細胞の細胞膜における主要な脂肪酸であり、そこで保護的な役割を果たすと考えられる。ヒトの皮脂に存在する全ての脂肪酸のうち、パルミトレイン酸が、グラム陽性菌に対する最も強い抗菌作用を有することが示された。同じ研究により、パルミトレイン酸が、カンジダアルビカンス病原株のブタ角質層への付着をブロックしたことが分かった。
【０１１５】
パルミトレイン酸は、ＬＤＬコレステロール中の飽和脂肪のように挙動すると非難されてきたが、最近の動物実験により、パルミトレイン酸が血漿リポタンパク質プロファイルまたは大動脈コレステロール蓄積に悪影響を及ぼすことはなく、不飽和脂肪酸を豊富に含む他の油と同様に挙動すると結論付けられた。Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ．２００４ Ｄｅｃ；３１ Ｓｕｐｐｌ ２：Ｓ３７‐８．Ｓｅｒｕｍ ｌｉｐｉｄ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ａ ｍｏｎｏｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄ（ｐａｌｍｉｔｏｌｅｉｃ）ｆａｔｔｙ ａｃｉｄ‐ｒｉｃｈ ｄｉｅｔ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｍａｃａｄａｍｉａ ｎｕｔｓ ｉｎ ｈｅａｌｔｈｙ，ｙｏｕｎｇ Ｊａｐａｎｅｓｅ ｗｏｍｅｎ．Ｈｉｒａｏｋａ‐Ｙａｍａｍｏｔｏ Ｊ，Ｉｋｅｄａ Ｋ，Ｎｅｇｉｓｈｉ Ｈ，Ｍｏｒｉ Ｍ，Ｈｉｒｏｓｅ Ａ，Ｓａｗａｄａ Ｓ，Ｏｎｏｂａｙａｓｈｉ Ｙ，Ｋｉｔａｍｏｒｉ Ｋ，Ｋｉｔａｎｏ Ｓ，Ｔａｓｈｉｒｏ Ｍ，Ｍｉｋｉ Ｔ，Ｙａｍｏｒｉ Ｙ．Ｆｒｏｎｔｉｅｒ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｍｕｋｏｇａｗａ Ｗｏｍｅｎ’ｓ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎｉｓｈｉｎｏｍｉｙａ，Ｊａｐａｎ．ｊｕｎｋｏ＠ｍｗｕ．ｍｕｋｏｇａｗａ‐ｕ．ａｃ．ｊｐ
【０１１６】
最近の研究により、ナッツ類（それらのほとんどが相当量の一価不飽和脂肪酸（ＭＵＦＡ）を有する）を食べることの潜在的な有益な効果が同定されている。マカダミアナッツは、７５重量％が脂肪からなり、その８０％がＭＵＦＡ（パルミトレイン酸）である。２．マカダミアナッツに基づく高ＭＵＦＡ食に応じた血清脂質レベルにおける変化を調べるために、若年の健康な日本人女子学生において、マカダミアナッツ、ココナッツ、およびバターを用いた３週間の介入が決定された。３．３週間の介入後、総コレステロールおよび低密度リポタンパク質‐コレステロールの血清濃度が、マカダミアナッツおよびココナッツ食において有意に減少し、体重および肥満度指数がマカダミアナッツ給餌群において減少したが、バター給餌群には統計的に有意な変化は見られなかった。
【０１１７】
Ｊ Ｎｕｔｒ． ２００９ Ｆｅｂ；１３９（２）：２１５‐２１．Ｅｐｕｂ ２００８ Ｄｅｃ ２３．Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｅｔａｒｙ ｐａｌｍｉｔｏｌｅｉｃ ａｃｉｄ ｏｎ ｐｌａｓｍａ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ ｐｒｏｆｉｌｅ ａｎｄ ａｏｒｔｉｃ ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ａｒｅ ｓｉｍｉｌａｒ ｔｏ ｔｈｏｓｅ ｏｆ ｏｔｈｅｒ ｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｆ１Ｂ ｇｏｌｄｅｎ Ｓｙｒｉａｎ ｈａｍｓｔｅｒ．Ｍａｔｔｈａｎ ＮＲ，Ｄｉｌｌａｒｄ Ａ，Ｌｅｃｋｅｒ ＪＬ，Ｉｐ Ｂ，Ｌｉｃｈｔｅｎｓｔｅｉｎ ＡＨ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｊｅａｎ Ｍａｙｅｒ ＵＳＤＡ Ｈｕｍａｎ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｅｎｔｅｒ ｏｎ Ａｇｉｎｇ ａｔ Ｔｕｆｔｓ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ ０２１１１，ＵＳＡ．
【０１１８】
ＰＵＦＡと比較したパルミトレイン酸の酸化に対する低感受性（１６：１）は、半硬化脂肪の許容可能な代替品を見つけることに関して機能的な利点を付与し得るが、心血管系リスク因子に与えるその影響に関する利用可能なデータが限られている。この試験は、マカダミア油［一価不飽和脂肪酸（ＭＵＦＡ）１６：１］、ヤシ油（ＳＦＡ，１６：０）、カノーラ油（ＭＵＦＡ，１８：１）、またはヒマワリ油（ＰＵＦＡ，１８：２）を豊富に含む食餌（１０％脂肪、０．１％コレステロール、ｗｔ：ｗｔ）が、Ｆ１Ｂゴールデンシリアンハムスター（ｎ＝１６／群）のリポタンパク質プロファイルおよび大動脈コレステロール蓄積に及ぼす影響を調査した。１２週間後、各群の８匹のハムスターを屠殺した（第１相）。ヤシ油を給餌した残りのハムスターは、ココナッツ油を含有する食餌に変更し、他の食餌群のハムスターは、さらに６週間、元の食餌を継続した（第２相）。わずかな例外はあったものの、時間的経過および食餌性ＳＦＡ源は、試験の結果を変化させなかった。マカダミア油を給餌したハムスターは、ヤシ油およびココナッツ油を給餌したハムスターと比較すると、より低い非ＨＤＬコレステロールおよびトリグリセリド濃度を有し、ココナッツ油、カノーラ油、およびヒマワリ油を給餌したハムスターと比較すると、より高いＨＤＬ‐コレステロールを有していた。大動脈コレステロール濃度は、食餌の脂肪の種類による影響を受けなかった。肝臓コレステロール濃度は、飽和油を給餌したハムスターと比較して、不飽和においてより高かった。ＲＢＣ膜および大動脈コレステロールエステル、トリグリセリド、ならびにリン脂質脂肪酸プロファイルは、食餌性油のプロファイルを反映するものであった。これらのデータは、パルミトレイン酸を比較的多く含む油は、血漿リポタンパク質プロファイルまたは大動脈コレステロール蓄積に有害な影響を及ぼすことはなく、不飽和脂肪酸を豊富に含む他の油と同様であったことを示唆するものである。
【０１１９】
Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ．２００６ Ｊｕｌ；１１（７）：１２３１‐８．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｐａｌｍｉｔｏｌｅｉｃ ａｃｉｄ ａｎｄ ｃＡＭＰ ｏｎ ｃａｓｐａｓｅ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｅｌｌ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ ｉｎ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｂｅｔａ−ｃｅｌｌｓ ｅｘｐｏｓｅｄ ｔｏ ｐａｌｍｉｔａｔｅ．Ｗｅｌｔｅｒｓ ＨＪ，Ｄｉａｋｏｇｉａｎｎａｋｉ Ｅ，Ｍｏｒｄｕｅ ＪＭ，Ｔａｄａｙｙｏｎ Ｍ，Ｓｍｉｔｈ ＳＡ，Ｍｏｒｇａｎ ＮＧ．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｐｅｎｉｎｓｕｌａ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｈｏｏｌ，Ｄｅｖｏｎ，Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｗａｙ，Ｐｌｙｍｏｕｔｈ，ＰＬ６ ８ＢＵ，ＵＫ．
【０１２０】
飽和および一価不飽和脂肪酸は、慢性曝露の間に、膵臓のβ細胞生存率に異なる影響を及ぼす。長鎖飽和分子（例えば、パルミチン酸）は、β細胞に細胞傷害性であり、これはカスパーゼの活性化およびアポトーシスの誘導に関連している。それとは対照的に、一価不飽和脂肪酸（例えば、パルミトレイン酸）は毒性がなく、パルミチン酸の有害な影響から保護することができる。本研究において、我々は、ＢＲＩＮ‐ＢＤ１１β細胞におけるパルミトレイン酸の保護作用が、パルミチン酸に曝露した後にカスパーゼ活性化を減弱させることと、上昇したｃＡＭＰレベルを有する細胞で同様の応答が起こることを示している。しかしながら、パルミトレイン酸とは異なり、ｃＡＭＰの上昇は、アポトーシスから壊死への細胞死経路の変更を引き起こしたため、パルミチン酸の細胞傷害作用を防止することはできなかった。パルミトレイン酸がＢＲＩＮ‐ＢＤ１１細胞のｃＡＭＰレベルを変動させることはなく、その結果は、ｃＡＭＰにおける変化が、この脂肪酸の保護効果を媒介することに関与していないことを示唆するものである。さらに、それらの結果から、カスパーゼの活性化が減弱されることは、培養β細胞における細胞生存率の変動と常に相関しているわけではないことが明らかになり、一価不飽和脂肪酸は、ｃＡＭＰによって及ぼされた影響とは異なるアポトーシス経路における段階を制御することによって細胞生存率をコントロールすることが示唆される。
【０１２１】
Ｄｉａｂｅｔｅｓ．２００１ Ｊａｎ；５０（１）：６９‐７６．Ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｓａｔｕｒａｔｅｄ ａｎｄ ｍｏｎｏｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ ｏｎ ｂｅｔａ−ｃｅｌｌ ｔｕｒｎｏｖｅｒ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｍａｅｄｌｅｒ Ｋ，Ｓｐｉｎａｓ ＧＡ，Ｄｙｎｔａｒ Ｄ，Ｍｏｒｉｔｚ Ｗ，Ｋａｉｓｅｒ Ｎ，Ｄｏｎａｔｈ ＭＹ．Ｄｉｖｉｓｉｏｎ ｏｆ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｄｉａｂｅｔｅｓ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｚｕｒｉｃｈ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ．
【０１２２】
糖毒性および脂肪毒性は、２型糖尿病において観察されるβ細胞機能障害の原因となる。ここで、我々は、異なるグルコース濃度の飽和および不飽和脂肪酸がβ細胞の増殖およびアポトーシスに及ぼす影響を調べる。ウシ角膜内皮細胞由来の細胞外マトリックスでコーティングしたプレート上で、成獣ラットの膵島を培養した。５．５、１１．１、または３３．３ｍｍｏｌ／Ｌのグルコースを含む培地で飽和脂肪酸（０．５ｍｍｏｌ／Ｌパルミチン酸）に膵島を４日間曝露した結果、β細胞ＤＮＡ断片化に５〜９倍の増加が見られた。対照的に、一価不飽和パルミトレイン酸のみ（０．５ｍｍｏｌ／Ｌ）、またはパルミチン酸（それぞれ０．２５または０．５ｍｍｏｌ／Ｌ）との組み合わせは、ＤＮＡ断片化に影響を及ぼさなかった。グルコース濃度の増加は、パルミチン酸によって劇的に減少されたβ細胞の増殖を促進した。パルミトレイン酸は、５．５ｍｍｏｌ／Ｌのグルコースを含む培地において増殖活性を強化したが、より高いグルコース濃度（１１．１および３３．３ｍｍｏｌ／Ｌ）ではさらなる影響は見られなかった。細胞透過性のセラミド類似体であるＣ２セラミドは、パルミチン酸誘導によるβ細胞のアポトーシスおよび増殖の減少の両方を模倣した。さらに、セラミド合成酵素阻害剤フモニシンＢ１は、パルミチン酸がβ細胞の生存率に及ぼす悪影響をブロックした。また、パルミトレイン酸ではなく、パルミチン酸が、ミトコンドリアのアデニンヌクレオチドトランスロケーターの発現を減少させ、ミトコンドリアから細胞質ゾル内へのシトクロムｃの放出を誘導した。最後に、パルミトレイン酸は、パルミチン酸によって減少されたβ細胞分泌機能を向上させた。総合すると、これらの結果から、飽和パルミチン酸の脂肪毒性効果は、β細胞の増殖能の低下に加えてアポトーシス速度の増加に関与し、インスリンの分泌の障害となったことが示唆される。パルミチン酸がβ細胞のターンオーバーに及ぼす有害な影響は、セラミドの形成およびアポトーシスのミトコンドリア経路の活性化によって媒介される。対照的に、一価不飽和パルミトレイン酸は、β細胞のアポトーシスに影響を及ぼさないが、低グルコース濃度でβ細胞の増殖を促進し、パルミチン酸の悪影響を相殺するとともに、β細胞の機能を向上させる。
【０１２３】
Ｓｋｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ａｐｐｌ Ｓｋｉｎ Ｐｈｙｓｉｏｌ．２００３ Ｍａｙ‐Ｊｕｎ；１６（３）：１７６‐８７．Ｐａｌｍｉｔｏｌｅｉｃ ａｃｉｄ ｉｓｏｍｅｒ（Ｃ１６：１ｄｅｌｔａ６）ｉｎ ｈｕｍａｎ ｓｋｉｎ ｓｅｂｕｍ ｉｓ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ａｇａｉｎｓｔ ｇｒａｍ‐ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｂａｃｔｅｒｉａ．Ｗｉｌｌｅ ＪＪ，Ｋｙｄｏｎｉｅｕｓ Ａ．ＣｏｎｖａＴｅｃ，Ｂｒｉｓｔｏｌ‐Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏ．，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，ＮＪ，ＵＳＡ．
【０１２４】
プールしたヒト皮脂の薄層クロマトグラフィーによって分析された脂質組成の割合：セラミド（１３％）、脂肪酸（４７％）、コレステロール（７％）、コレステロールエステル（２％）、スクワレン（１１％）、トリグリセリド（３％）、およびワックスエステル（１７％）。全皮脂脂質（２〜４ｍｇ／ｍＬ）を細菌培養培地で超音波処理したところ、グラム陽性菌、黄色ブドウ球菌、唾液連鎖球菌および嫌気性フソバクテリウム・ヌクレアタムの成長に４〜５倍のｌｏｇの減少を引き起こしたが、ほとんどのグラム陽性菌に対しては無効であった。皮脂脂質の分画は、飽和および不飽和脂肪酸の両方が高い抗菌活性を保持していたことを示した。ラウリン酸（Ｃ１２：０）は、最も活性な飽和脂肪酸であった。不飽和脂肪酸であるパルミトレイン酸（Ｃ１６：１δ６、ｃＰＡ）は、最も優勢なモノエンであると同時に最も活性な抗菌脂肪酸であった。精製したｃＰＡ（＞９９％）は、グラム陽性菌に対して１０〜２０マイクログラム／ｍＬという典型的な最小抑制濃度（ＭＩＣ）値をもたらした。有機的に合成されたｃＰＡ異性体では、天然の物質に匹敵するＭＩＣ値が得られた。天然および合成ｃＰＡの両方が、カンジダアルビカンスの病原株のブタ角質層への付着をブロックする上で最も活性な皮脂の脂質分画であることが分かった。エタノールをｃＰＡと合わせると、緑膿菌、アクネ菌、大腸菌、および黄色ブドウ球菌のうちのいくつかのメチシリン耐性菌株を含むグラム陽性病原菌に対する相乗的な殺菌活性を発揮する。パルミトレイン酸は、創傷被覆材におけるグラム陽性菌抗菌剤として、またスキンケアおよびヘアケア製品における天然グラム陽性の抗菌性保存剤として、二次的なグラム陽性菌感染の治療のための局所用製剤において有用であり得る。Ｃｏｐｙｒｉｇｈｔ ２００３ Ｓ．Ｋａｒｇｅｒ ＡＧ，Ｂａｓｅｌ Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎｓ ｓ Ｌｅｕｋｏｔ Ｅｓｓｅｎｔ Ｆａｔｔｙ Ａｃｉｄｓ．２００６ Ｆｅｂ；７４（２）：１４９‐５６．Ｅｐｕｂ ２００５ Ｄｅｃ １５．Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ ａｎｄ ｐｓｙｃｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ ｉｎ ｄｅｐｒｅｓｓｉｖｅ ｉｎｐａｔｉｅｎｔｓ ｕｎｄｅｒ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｌｙ ｉｎｄｕｃｅｄ ｓｔｒｅｓｓ． Ｉｒｍｉｓｃｈ Ｇ，Ｓｃｈｌaｆｋｅ Ｄ，Ｒｉｃｈｔｅｒ Ｊ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ ａｎｄ Ｐｓｙｃｈｏｔｈｅｒａｐｙ，Ｒｏｓｔｏｃｋ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｅｈｌｓｈｅｉｍｅｒ Ｓｔｒ．２０，Ｄ‐１８１４７，Ｒｏｓｔｏｃｋ，Ｇｅｒｍａｎｙ．
【０１２５】
脂肪酸は、体内における重要な細胞およびホルモンのプロセスに影響を与えることができる。例えば血中の脂肪酸含有量が十分でないと、種々の疾病の原因となるか、および／または種々の疾病をもたらす。鬱病患者において脂肪酸濃度における変化が見られた（特にオメガ３‐脂肪酸の欠乏）。この論文は、精神心理学的パラメータと脂肪酸組成における変化との間に何らかの関係が存在するかどうかという疑問を提起している。実験的に誘導された約１時間のストレスの前および後に直接測定された１１８人の精神病入院患者の血清中の脂肪酸濃度を、入院時、退院時、および３ヶ月後の経過観察の間に持続的に記録した精神心理学的パラメータと関連付けて分析した。収縮期および拡張期血圧、指尖脈波振幅、前額温（ＦＤ）、および頬骨筋のＥＭＧ活性が、単一不飽和オレイン酸（１８：１ｎ‐９）およびエルカ酸（２２：１）ならびに飽和ミリスチン酸（１４：０）およびラウリン酸（１２：０）の濃度と一貫して相関していた。ＦＤと、アラキドン酸（２０：４ｎ‐６）およびパルミトレイン酸（１６：１）の濃度との間に逆相関が見られた。さらに、退院時のエルカ酸濃度が高いほど、ベック鬱病評価尺度（ＢＤＩ）によって評価される鬱病スコアが高かった。パルミトレイン酸およびラウリン酸の高い濃度は、鬱病の低いレベルと関連していた（ＢＤＩおよびハミルトンスコア）。鬱病における追加の治療計画のために、これらの知見の意義が検討される。
【０１２６】
Ｃｅｌｌ．２００８ Ｓｅｐ １９；１３４（６）：９３３‐４４．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｌｉｐｏｋｉｎｅ，ａ ｌｉｐｉｄ ｈｏｒｍｏｎｅ ｌｉｎｋｉｎｇ ａｄｉｐｏｓｅ ｔｉｓｓｕｅ ｔｏ ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ．Ｃａｏ Ｈ，Ｇｅｒｈｏｌｄ Ｋ，Ｍａｙｅｒｓ ＪＲ，Ｗｉｅｓｔ ＭＭ，Ｗａｔｋｉｎｓ ＳＭ，Ｈｏｔａｍｉｓｌｉｇｉｌ ＧＳ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｃｏｍｐｌｅｘ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｈａｒｖａｒｄ Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ ０２１１５，ＵＳＡ．
【０１２７】
個々の組織における脂質代謝の調節不全は、インスリン作用およびグルコース代謝の全身性の破壊を引き起こす。定量的なリピドミクス解析と、脂肪組織の脂質シャペロンａＰ２およびｍａｌ１を欠損するマウスを用いて、我々は、脂肪組織における代謝の変動が、どのように脂質シグナルを介して全身代謝と関連しているのかを調査した。新規脂質生成における堅調な増加は、これらのマウスの脂肪組織を、食餌性脂質曝露の有害な影響に対して耐性にした。全身脂質プロファイルはまた、筋肉のインスリン作用を強く刺激し、脂肪肝を抑制する、脂肪組織に由来する脂質ホルモンとしてのＣ１６：１ｎ７‐パルミトレイン酸の同定へと結びついた。我々のデータは、脂質媒介性の内分泌ネットワークを明らかにし、脂肪組織が、離れた器官と連絡して全身の代謝恒常性を制御するために、Ｃ１６：１ｎ７‐パルミトレイン酸等のリポカインを使用することを示している。
【０１２８】
６．ミリストレイン酸
【０１２９】
ミリストレイン酸、または９‐テトラデセン酸は、酵素δ９デサチュラーゼによってミリスチン酸から生合成されるオメガ‐５脂肪酸である。自然に見られることは稀であり、ヒトにおける生物学的有意性は不確かである。この脂肪酸の主要な源のうちの１つは、時にはその最も名の知れたメンバーにちなんで「ナツメグ科」と呼ばれることのある顕花植物の科の、ニクズク属の植物の種油である。いくつかの種において、ミリストレイン酸は油の最大３０パーセントを構成することができる。ミリストレイン酸はまた、海洋動物、ビーバー、およびウシの脂肪の天然の構成要素である。
【０１３０】
ノコギリヤシから抽出されるミリストレイン酸は、ヒト前立腺癌ＬＮＣａＰ細胞においてアポトーシスおよび壊死を誘導することが分かっている。さらに、チーズを製造する際の副産物に見出されるミリストレイン酸は、カンジダアルビカンスの発芽の阻害において最も活性な３つの脂肪酸のうちの１つである。最後に、ミリストレイン酸は、歯周病を罹患する患者において大量に見られる細菌であるセレノモナス・アルテミジス（Ｓｅｌｅｎｏｍｏｎａｓ ａｒｔｅｍｉｄｉｓ）の成長を阻害することが分かっている。
【０１３１】
Ｐｒｏｓｔａｔｅ．２００１ Ａｐｒ；４７（１）：５９‐６５．Ｍｙｒｉｓｔｏｌｅｉｃ ａｃｉｄ，ａ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ ｉｎ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔ ｆｒｏｍ Ｓｅｒｅｎｏａ ｒｅｐｅｎｓ，ｉｎｄｕｃｅｓ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ａｎｄ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｐｒｏｓｔａｔｉｃ ＬＮＣａＰ ｃｅｌｌｓ．Ｉｇｕｃｈｉ Ｋ，Ｏｋｕｍｕｒａ Ｎ，Ｕｓｕｉ Ｓ，Ｓａｊｉｋｉ Ｈ，Ｈｉｒｏｔａ Ｋ，Ｈｉｒａｎｏ Ｋ．Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，Ｇｉｆｕ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｉｆｕ，Ｊａｐａｎ．
【０１３２】
背景
【０１３３】
前立腺腫瘍は、ホルモン療法に抵抗性を示す末期状態に進行することは周知である。この段階では、臨床成績に影響を及ぼすような化学療法薬は存在しない。これらの前立腺細胞のための効果的な細胞死誘導剤が、魅力的な抗腫瘍剤としての候補であり得る。ノコギリヤシの抽出物は、前立腺疾患の状態を向上させるために使用されてきており、我々は、その抽出物から有効な構成要素を同定することを試みた。
【０１３４】
方法
【０１３５】
ホルモン療法抵抗性前立腺腫瘍の生体外モデルであるＬＮＣａＰ細胞において細胞生存率を調べた。
【０１３６】
結果
【０１３７】
ノコギリヤシの抽出物への曝露が、ＬＮＣａＰ細胞の細胞死をもたらしたことが判明した。ミリストレイン酸はまた、抽出物中の細胞傷害性構成要素のうちの１つとしても同定された。Ｈｏｅｃｈｓｔ３３３４２染色によって判定したところ、細胞死は、アポトーシス性および壊死性の両方の核形態を呈していた。細胞死はまた、カスパーゼの活性化とも一部関連していた。
【０１３８】
結論
【０１３９】
ノコギリヤシの抽出物およびミリストレイン酸が、ＬＮＣａＰ細胞においてアポトーシスと壊死の混合した細胞死を誘導することが示された。これらの結果は、抽出物およびミリストレイン酸から前立腺癌の治療のための魅力的な新規ツールを開発できることを示唆するものである。
【０１４０】
ＦＥＭＳ Ｙｅａｓｔ Ｒｅｓ．２００７ Ｍａｒ；７（２）：２７６‐８５．Ｅｐｕｂ ２００６ Ｏｃｔ １０．Ｗｈｅｙ‐ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒｅｅ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ ｓｕｐｐｒｅｓｓ ｔｈｅ ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃａｎｄｉｄａ ａｌｂｉｃａｎｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ．Ｃｌeｍｅｎｔ Ｍ，Ｔｒｅｍｂｌａｙ Ｊ，Ｌａｎｇｅ Ｍ，Ｔｈｉｂｏｄｅａｕ Ｊ，Ｂｅｌｈｕｍｅｕｒ Ｐ．Ｄeｐａｒｔｍｅｎｔ ｄｅ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｅ ｅｔ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｅ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔe ｄｅ Ｍｏｎｔｒeａｌ，Ｃ．Ｐ． ６１２８，ｓｕｃｃ．Ｃｅｎｔｒｅ‐ｖｉｌｌｅ，Ｍｏｎｔｒeａｌ，ＱＣ，Ｃａｎａｄａ．
【０１４１】
チーズ製造産業からのウシ乳清は、健康を促進し、疾患を予防するいくつかの生理活性因子を含む。乳清中に存在する免疫グロブリン、ラクトペルオキシダーゼ、ラクトフェリン、リゾチーム、および小ペプチドが、いくつかの病原微生物に対する抗菌活性を有することを示すための努力は、何年にもわたって行われてきたが、乳清の脂質分画については、今までそのような活性が調査されてなかった。そこで、我々は、生体外アッセイに基づく分画手順を使用して、乳清クリームに由来する遊離脂肪酸が、病原性と関連する形態変化であるカンジダアルビカンスの発芽を特異的に阻害することを示した。ＨＰＬＣによるさらなる分画により、これらの活性は、主にラウリン酸、ミリストレイン酸、リノール酸、およびアラキドン酸に起因し得ることが明らかになった。
【０１４２】
Ｏｒａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９６ Ｏｃｔ；１１（５）：３５０‐５．Ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｆａｔｔｙ ａｃｉｄｓ ｏｎ ｏｒａｌ ｂａｃｔｅｒｉａ．Ｓｈａｐｉｒｏ Ｓ．Ｉｎｓｔｉｔｕｔ ｆuｒ ｏｒａｌｅ Ｍｉｋｒｏｂｉｏｌｏｇｉｅ ｕｎｄ ａｌｌｇｅｍｅｉｎｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｅ，Ｚｅｎｔｒｕｍ ｆuｒ Ｚａｈｎ‐，Ｍｕｎｄ‐ｕｎｄ Ｋｉｅｆｅｒｈｅｉｌｋｕｎｄｅ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔaｔ Ｚuｒｉｃｈ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ．
【０１４３】
選択された３つの口腔細菌、ポルフィロモナス・ジンジバリス、セレノモナス・アルテミジス、およびストレプトコッカス・ソブリナスに対する成長阻害効果について、飽和および不飽和脂肪酸ならびに脂肪酸誘導体を調べた。調査した４５個の化合物のうち、唯一、ミリストレイン酸だけが、＜１００マイクログラム／ｍＬの濃度でＳ．アルテミジスに対して阻害性であった。ｃｉｓ‐ヘキサデセン酸およびｃｉｓ‐オクタデセン酸は、通常、Ｐ．ジンジバリスおよびＳ．ソブリナスに対して阻害性であるが、二重結合の位置と最小抑制濃度との間に相関性は存在しなかった。パルミトレイン酸の最小抑制濃度を超える濃度では、Ｐ．ジンジバリスもしくはＳ．ソブリナスのいずれかからの細胞内物質の漏出、または阻害されたＳ．ソブリナスによるＬ‐イソロイシンの取り込みも促進しなかった。試験株の成長抑制に対する、予期されるチモールとの相乗的または拮抗的な相互作用についても脂肪酸および誘導体を調べた。ラウリン酸およびミリスチン酸は、各々、チモールと相乗的に挙動して、少なくとも１つの試験株の成長を抑制したのに対し、ｃｉｓ‐１０‐ヘプタデセン酸およびチモールは、Ｓ．ソブリナスの成長に対して著しく拮抗的であった。
【０１４４】
上に開示した本発明の主題の方法の全てにおける動物または個体は、マウス、ラット、ネコ、イヌ、ウマ、ウシ、もしくは他の家畜、またはヒト等の哺乳動物であり得る。特定の実施形態において、動物はヒトである。ヒトの疾病、疾患、および状態を治療するための使用に加えて、本発明の主題の方法は、獣医学的用途を有し得る。したがって、特定の脂肪酸を含有する本発明の主題の組成物は、上記の状態を治療または予防するために有用であり得、上記疾病および疾患の発症または重症度を回避することに関して固体の健康を向上することができる。
【０１４５】
投与経路
【０１４６】
特定の実施形態において、経口投与組成物は、１つ以上のカプセル、１つ以上の錠剤、または１つ以上の丸薬の形態である。
【０１４７】
主題の組成物は、薬学的に許容される担体によって患者に送達される。そのような担体は、当該技術分野において周知であり、通常、固体または液体のいずれかの形態である。本発明の主題にしたがって調製することができる固体形態の薬用植物調製物は、散剤、錠剤、分散性顆粒剤、カプセル剤、カシェ剤、および座剤を含む。一般に、固体形態の調製物は、活性薬剤の約５％〜約９０重量％を占める。
【０１４８】
固体担体は、希釈剤、香味剤、可溶化剤、滑沢剤、懸濁剤、結合剤、または錠剤崩壊剤としても作用することができる１つ以上の物質であり得、また、カプセル化材料であってもよい。散剤において、担体は、粘性の活性化合物と混合された微粉化固体である。錠剤において、活性化合物は、必要な結合特性を有する担体と好適な割合で混合され、所望の形状およびサイズに圧縮される。好適な固体担体は、炭酸マグネシウム、タルク、砂糖、乳糖、ペクチン、デキストリン、澱粉、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、低融点ワックス、カカオバター等を含む。用語「調製物」は、担体としてカプセル化材料を含む活性化合物の配合物を含むことが意図され、担体はカプセルを提供し、活性構成要素（他の担体を含むかまたは含まない）が担体に包囲されている、すなわち、活性構成要素が担体に関連している。同様に、カシェ剤が含まれる。錠剤、散剤、カシェ剤、およびカプセル剤は、経口投与に好適な固体剤形として使用することができる。簡便性または患者の承諾の理由から必要である場合には、本発明の主題にしたがって調製される薬学的錠剤は、当該技術分野において周知の技術を用いて咀嚼可能な形態で提供されてもよい。
【０１４９】
座剤を調製するためには、脂肪酸グリセリドまたはカカオバターの混合物等の低融点ワックスを最初に溶解させ、撹拌によって有効成分をその中に均質に分散させる。次いで、溶融均質混合物を都合のよい寸法の型に注入し、冷却することによって固化させる。
【０１５０】
液体形態の調製物は、非経口注入用の溶液、懸濁液、および乳濁液を含み、この液体調製物は、水または水／プロピレングリコール溶液を含むことができる。液体調製物はまた、ポリエチレングリコール水溶液中の溶液として配合されてもよい。経口的使用に好適な水溶液は、活性構成要素を水に溶解させ、必要に応じて好適な着色剤、香味料、安定剤、および増粘剤を加えることによって調製することができる。経口的使用に好適な水性懸濁液は、微粉化した活性構成要素を、粘性材料、すなわち、天然または合成のガム、樹脂、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムと、他の周知の懸濁剤とともに、水に分散させることによって作製することができる。液体薬学的調製物は、主題の活性剤の１００重量％まで占めることができる。
【０１５１】
経口または非経口投与のいずれかのために、使用する直前に液体形態の調製物に変換されることが意図される固体形態の調製物もまた、好適な担体として企図される。そのような液体形態は、溶液、懸濁液、および乳濁液を含む。このような特定の固体形態の調製物は、単位用量形態で最も簡便に提供され、したがって、単一の液体投与単位を提供するために使用される。代替として、液体形態に変換された後に、注射器、茶さじ、または他の体積測定用の容器で液体形態の調製物の所定の体積を測定することによって、複数の個々の液体用量を得ることができるように、十分な固体が提供されてもよい。そのようにして複数の液体用量が調製される場合、可能な分解を遅延させるために、上記液体用量の未使用分を低温（すなわち冷蔵）で維持することが好ましい。液体形態に変換されることが意図される固体形態の調製物は、活性材料に加えて、香味料、着色剤、安定剤、緩衝剤、人工および天然の甘味料、分散剤、増粘剤、可溶化剤等を含有することができる。有用な液体形態の調製物を調製するために用いられる液体は、水、等張水、エタノール、グリセリン、プロピレングリコール等、およびそれらの混合物であり得る。一実施形態において、液体形態は、合わせた多価不飽和油および薬用植物組成物を含有する、グリセリンと水を含むゼラチンカプセル等のカプセルの形態で調製することができる。
【０１５２】
当然のことながら、用いられる液体は、投与経路を考慮して選択される。例えば、大量のエタノールを含有する液体調製物は経口的使用には適さない。
【０１５３】
本発明の主題の薬用植物調製物は、安息香酸、ソルビン酸、メチルパラベン、プロピルパラベン、およびエチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）等の、当該技術分野で周知の１つ以上の保存剤を含むことができる。保存剤は、通常、薬学的組成物の最大約１重量％、好ましくは約０．０５〜約０．５重量％の量で存在する。
【０１５４】
本発明の主題の目的のために有用な緩衝剤は、薬学的組成物の最大約１重量％、好ましくは約０．０５〜約０．５重量％の量のクエン酸‐クエン酸ナトリウム、リン酸‐リン酸ナトリウム、および酢酸‐酢酸ナトリウムを含む。有用な懸濁剤または増粘剤は、薬学的組成物の最大約２０重量％、好ましくは約１％〜約１５重量％の量のメチルセルロース等のセルロース、アルギン酸等のカラギーナンおよびその誘導体、キサンタンガム、ゼラチン、アカシア、ならびに微結晶性セルロースを含む。
【０１５５】
利用することのできる甘味料は、当該技術分野で周知の天然および人工の両方の甘味料である。キシロース、リボース、グルコース、マンノース、ガラクトース、フルクトース、ブドウ糖、スクロース、マルトース、部分的に加水分解した澱粉またはコーンシロップ固形分等の単糖類、二糖類および多糖類等、ならびにソルビトール、キシリトール、マンニトール、およびそれらの混合物等の糖アルコール等の甘味料が、薬学的組成物の約１０重量％〜約６０重量％、好ましくは約２０重量％〜約５０重量％の量で用いられてもよい。サッカリンおよびサッカリン塩（ナトリウムまたはカルシウム等）、チクロ塩、アセサルフェーム‐Ｋ、アスパルテーム等、ならびにそれらの混合物等の水溶性人工甘味料が、組成物の約０．００１重量％〜約５重量％の量で用いられてもよい。
【０１５６】
本発明の主題の薬用植物生成物に用いることのできる香味料は、天然および人工の両方の香味料、ならびにペパーミント等のミント、メントール、バニラ、人工バニラ、チョコレート、人工チョコレート、シナモン、種々のフルーツ香味料を、個別におよび混合された状態の両方で、薬学的組成物の約０．５重量％〜約５重量％の量で含む。
【０１５７】
本発明の主題において有用な着色剤は、組成物の最大約６重量％の量で組み込まれてもよい色素を含む。好ましい色素である二酸化チタンは、最大約１重量％の量で組み込まれてもよい。また、着色剤は、ＦＤ＆Ｃ染料として知られる食品、医薬品、および化粧品の用途に好適な他の染料等を含むことができる。そのような染料は、通常、薬学的組成物の最大約０．２５重量％、好ましくは約０．０５重量％〜約０．２重量％の量で存在する。全てのＦＤ＆ＣおよびＤ＆Ｃ染料、ならびにそれらの対応する化学構造の完全な記述はＫｉｒｋ‐Ｏｔｈｍｅｒ Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｕｍｅ５の８５７〜８８４ページに見出すことができ、その記述は、参照により本明細書に組み込まれる。
【０１５８】
有用な可溶化剤は、アルコール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール等を含み、香味料を可溶化するために使用されてもよい。可溶化剤は、通常、薬学的組成物の最大約１０重量％、好ましくは約２重量％〜約５重量％の量で存在する。
【０１５９】
必要に応じて本組成物中に使用することのできる滑沢剤は、シリコーン油、または置換および非置換ポリシロキサン、例えば、ジメチコンとしても知られるジメチルポリシロキサン等の流体を含む。他の周知の滑沢剤が用いられてもよい。
【０１６０】
薬用植物調製物はまた、単位投与量形態で調製することもできる。そのような形態において、調製物は適切な量の活性構成要素を含有する単位用量に細分化される。単位投与量形態は包装された調製物であってもよく、その包装が個別の量の調製物、例えば、小型包装された錠剤、カプセル剤、およびバイアルまたはアンプル中の散剤を含有する。単位投与量形態はまた、カプセル剤、カシェ剤、もしくは錠剤自体であってもよいか、または適切な数のこれらのうちのいずれかが包装形態になっていてもよい。
【０１６１】
本発明の主題の化合物が、他の合成のまたは天然に発生する物質と有意に有害な相互作用を示すことは予想されない。したがって、本発明の主題の化合物は、例えば、癌を治療するための他の有用な化合物および組成物と併用投与することができる。特に、本発明の主題の化合物は、本発明の主題の他の化合物、化学療法剤等と併用投与されてもよい。
【０１６２】
所望の薬用植物配合物は、投与経路および所望の投与量等の考慮すべき事柄に依存して、当業者により決定される。例えば、“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ”，１８ｔｈ ｅｄ．（１９９０，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ １８０４２），ｐｐ．１４３５‐１７１２（その開示は、参照により本明細書に組み込まれる）を参照のこと。そのような配合物は、本発明の主題の本治療剤の物理的状態、安定性、生体内での放出速度、および生体内でのクリアランス速度に影響を及ぼし得る。
【０１６３】
投与量
【０１６４】
体重１キログラム当たり約０．００１ｍｇ〜約１００ｍｇ程の有効成分の化合物または組成物の投与量レベルが、本明細書に記載される状態の治療において有用である。一実施形態において、好ましい全投与量は、個体当たり２００ｍｇ／１日〜２０００ｍｇ／１日の範囲である。他の実施形態は、個体当たり＞２０００ｍｇ／１日の１日用量を含む。本発明の主題の化合物および組成物は、１日に２回または３回の用量で投与することができる。１日２回の低用量（２００〜３００ｍｇ）から開始して、必要に応じて、徐々により高い用量に増加させることが、企図されるストラテジーである。単一剤形を生成するために担体材料と組み合わせることのできる有効成分の量は、治療される宿主および特定の投与様式によって異なる。一実施形態において、単一の投与単位は、単一カプセル中に１０００ｍｇの本発明の主題の組成物を含み、単一カプセルは、１日当たり２０００ｍｇの合計用量で１日２回投与される。
【０１６５】
しかしながら、任意の特定の患者のための特定の用量レベルは、用いられる特定の化合物の活性；患者の年齢、体重、総体的な健康、性別および食生活；投与期間；排泄率；薬剤の併用；治療される特定の疾患の重症度；および投与形態を含む、多様な要因に依存することを理解されたい。当業者は、そのような要因の変異性を認識し、予期しない結果が示される場合を除いて、単なるルーチン実験を用いて特定の用量レベルを確立することが可能であろう。
【実施例】
【０１６６】
以下の実施例は、本発明の主題を例示するものであって、それを制限することを意図するものではない。別途記載のない限り、全ての割合は最終組成物の１００重量％に基づく。用語「ＷｈｏｌｅＭｅｇａ」の使用は、本発明の主題の組成物である、多価不飽和油組成物と組み合わせた、治療的に有効な量のローズマリーの超臨界抽出物およびオレガノの超臨界抽出物を含む組成物を指す。
【０１６７】
実施例１：本発明の組成物（ＷｈｏｌｅＭｅｇａ組成物）を用いた臨床試験：サーモン油の脂質の吸収
【０１６８】
本発明の主題の組成物であるＷｈｏｌｅＭｅｇａサーモン油生成物を２ｇまたは４ｇ摂取したヒトボランティアにおいて臨床試験を行った。血清中の主な魚油の脂質の存在を経時的に測定した。結果は、ＷｈｏｌｅＭｅｇａの脂質は、消化管膜を通過して吸収され、血清中で検出可能であったことを示した。
【０１６９】
結果は、ＷｈｏｌｅＭｅｇａサーモン油の脂質の吸収および血液中にそれらが出現したことを明白に示すものであった。図１および２に示すように、用量２ｇまたは４ｇのＷｈｏｌｅＭｅｇａの摂取は、ＥＰＡオメガ‐３の血清含有量に濃度依存性および時間依存性の変化をもたらす。本発明の主題の組成物はまた、図２に示される平均ＥＰＡ、オレイン酸、およびパルミトレイン酸（それぞれ、ＷｈｏｌｅＭｅｇａオメガ‐３、‐５、および‐７多価不飽和脂肪酸の代表例である）における時間依存性の変化をもたらす。オメガ３（ＥＰＡ）、オメガ７パルミトレイン酸）、およびオメガ９（オレイン酸）における変化は、脂質クラスにおける変化の幅を表す。破線は、単にベースライン（投与前）のレベルを示す。ＷｈｏｌｅＭｅｇａに由来する脂質には、最長２４時間までの持続する変化を見ることができる。他の実施形態において、本発明の主題の他の組成物もまた、脂質組成におけるこれらの変化を実現するために有用である。
【０１７０】
実施例２：多価不飽和脂質の細胞膜への取り込み
【０１７１】
本発明の主題の組成物の摂取後に、細胞膜脂質組成が改変されたかどうかを評価するために、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）の試料を投与前および投与後に採取し、膜脂質含有量をＧＣ／ＭＳによって測定した。下の図３に示すように、たとえ用量２ｇのＷｈｏｌｅＭｅｇａの単回投与であっても、ＷｈｏｌｅＭｅｇａに由来する脂質の膜組成に容易に確認可能な増加をもたらした。データは、連続３日間ＷｈｏｌｅＭｅｇａ（２ｇ／日）を摂取した４人のボランティアから得た。投与前と投与後３日との膜脂質組成における違いを判定した。
【０１７２】
いくつかの実施形態において、本発明の主題の組成物を摂取することにおける目的は、多価不飽和脂肪酸を組織膜に取り込むことであり、そこで、脂肪酸は、細胞シグナル伝達事象を調節（例えば、炎症を減少させる）し、膜の流動性を増加させる役割を果たす。エイコサノイドを形成するためのホスホリパーゼの作用により、細胞膜から脂肪酸を放出するように細胞が活性化されると、ＥＰＡおよびＤＨＡは、ＣＯＸおよびＬＯＸ酵素のためにアラキドン酸と競合する。放出されたアラキドン酸が、炎症性のプロスタグランジン生成物（例えば、ＰＧＥ２）を生じさせる一方で、魚油の脂質は、ＡＡに由来する生成物（例えば、ＰＧＥ２およびＬＴＢ４）よりも有意に炎症を引き起こしにくいプロスタグランジンおよびリポキシゲナーゼ生成物（例えば、ＰＧＥ３およびＬＴＢ５）を生成する。他の実施形態では、本発明の主題の他の組成物もまた、脂質組成におけるこれらの変化を実現するため、また、同じ細胞シグナル伝達事象を調節するために有用である。
【０１７３】
実施例３：ＷｈｏｌｅＭｅｇａは「善玉脂肪」の「悪玉脂肪」に対する比率を改善する
【０１７４】
ＷｈｏｌｅＭｅｇａの後の血清脂質含有量における変化は、ＥＰＡ等の健康的なオメガ‐３油の増加、およびオメガ‐６油アラキドン酸（ＡＡ）に相対的な減少をもたらした。オメガ‐６対オメガ‐３の比率、またはＡＡ／ＥＰＡ比におけるこの変化は、図４および５に示すように用量依存性であった。そのような変化は、健康のために有益であると考えられ、炎症の可能性を減少させる。
【０１７５】
同様に、図６は、１日当たり２ｇまたは４ｇのいずれかのＷｈｏｌｅＭｅｇａの摂取が、末梢血単核球の膜組成に変化をもたらすことを示す。ＷｈｏｌｅＭｅｇａに由来するＥＰＡのより高い取り込みの結果として、膜のアラキドン酸が減少する。このプロットの重要な点は、たとえ２ｇ／日のＷｈｏｌｅＭｅｇａであっても、組織（白血球）の膜組成における健康的な変化を達成し、アラキドン酸に由来する炎症の可能性を減少させることが可能であるということである。上記プロットは、連続３日間、２ｇ／日のＷｈｏｌｅＭｅｇａを摂取した４人の対象から得たデータに由来する。末梢血単核球は、投与前およびＷｈｏｌｅＭｅｇａを投与した３日後に採取した。重要なオメガ‐３脂肪酸であるＥＰＡの含有量に関しては、細胞膜脂質組成が増加する。
【０１７６】
魚油等の栄養補助剤の影響を評価するための別の方法は、血清および組織膜における「善玉脂肪」の「悪玉脂肪」に対する変化を測定することである。「善玉」および「悪玉」脂肪の分類は、これらの特定の脂肪酸の影響について分かっていることに基づいている。脂肪の相対的な分類については上記考察を参照のこと。
【０１７７】
善玉脂肪／悪玉脂肪の比率における相対的変化を調べることにより、用量２ｇのＷｈｏｌｅＭｅｇａを摂取した固体において、小規模ではあるが、血清および組織膜組成の両方に関して、この比率における変化が明らかになった。比率における５〜１０％の変化は数字的には小さいものであるが、「善玉脂肪」／「悪玉脂肪」の比率におけるこの小さな変化の結果であっても、重要な健康への影響がある。
【０１７８】
【表５】
【０１７９】
表Ｖのデータは、２ｇのＷｈｏｌｅＭｅｇａを摂取した８人のボランティアのデータの分析から記録された「善玉脂肪」／「悪玉脂肪」の比率における変化を反映している。ＰＢＭＣ膜組成における「善玉脂肪」／「悪玉脂肪」の変化は、連続３日間ＷｈｏｌｅＭｅｇａ（２ｇ／日）を摂取した４人の個体のデータに由来する。データは平均値＋／‐ＳＥで表す。別の実施形態において、本発明の主題の組成物は、「善玉脂肪」／「悪玉脂肪」の比率を、血清中で少なくとも５．０、少なくとも６．０、少なくとも６．５％、少なくとも７．５％、少なくとも８．０％、または少なくとも８．５％増加させるか、または組織中で、少なくとも５．０％、少なくとも６．０％、少なくとも６．５％、少なくとも７．５％、少なくとも８．０％、少なくとも８．５％、また少なくとも９．２％増加させる。
【０１８０】
実施例４：ＷｈｏｌｅＭｅｇａは、良好な心血管の健康と関連する血液脂質化学を改善する
【０１８１】
血液化学分析は、変化するものについてだけではなく、変化しないもの（例えば、魚油のＩｇＥ）についても重要である。ＷｈｏｌｅＭｅｇａに起因する血液化学における重要な違いの評価をここに記載する。データは、連続３日間、２ｇ／日のＷｈｏｌｅＭｅｇａを摂取した４人の個体に由来する。限定的なデータセットは、統計分析のための十分な情報を提供することはできないが、これらは、良好な健康と関連する血清の血液化学における有益な変化の傾向を明白に示している。より長期の投与期間（例えば、２〜４週間）にわたってそのような血液脂質化学を調べると興味深いものになるであろう。
【０１８２】
【表６】
【０１８３】
トリグリセリド、コレステロール、およびＬＤＬにおける変化は、高用量の魚油の投与を用いて、他者により以前に指摘されている。しかしながら、この実施例では、２ｇｍ／日という比較的低い用量の投与後にのみ、トリグリセリドおよびＬＤＬの変化が予期せずに得られた。魚油に関する以前の研究は、いずれの用量においてもコレステロールにおける変化は報告していないため、これは予想外である。総コレステロールレベルにおいて、少ないながらも意義のある減少が観察された。これはまた、できる限り低いことが望ましいコレステロール／ＨＤＬ比がわずかに減少したことにも反映されている。
【０１８４】
最近、Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ（実際の出版に先駆けたｅｐｕｂ）において、筆者Ｍ．Ａ．Ｍｉｃａｌｌｅｆ ｅｔ ａｌは、炎症のマーカーであり、循環器関連事象の独立した予測因子であると報告されているＣ‐反応性タンパク質（ＣＲＰ）のレベルが、ＤＨＡおよびＥＰＡの血中レベルに反比例する関係にあると報告している。本発明の主題の組成物を用いたデータは、この報告と一致している。
【０１８５】
実施例５：ＷｈｏｌｅＭｅｇａは、サイトカインおよび／またはケモカインのレベルを有意に変化させない
【０１８６】
サイトカインおよびケモカインのデータの初期の分析は、ＷｈｏｌｅＭｅｇａの単回用量またはさらには複数回用量の投与に起因し得る有意な変化を示していない。後になってみれば分かるように、これは、魚油の正確な投与によって起こることが知られていないため、予想できないことではない。いくつかの実施形態において、魚油は、本試験において測定されたサイトカインを有意に変化させることなく、一旦炎症が起こると、それを調節することができ、また、炎症を引き起こす刺激に対する応答を緩和（すなわち、阻止）することができる。
【０１８７】
実施例６：ＷｈｏｌｅＭｅｇａはヒトの摂取に対する認容性を有する
【０１８８】
ＳＴＴ（我々のＣＲＯ）によるＷｈｏｌｅＭｅｇａ生成物のヒトにおける認容性の評価は、良好であると見なされた。少数の脱落者が存在し、そのうち１人のみが、魚臭いげっぷが出る現象について不満を述べた。
【０１８９】
実施例７：魚油食餌および肺癌
【０１９０】
要約すると、本明細書に記載する生体外試験は、ｎ‐６多価不飽和脂肪酸が腫瘍細胞の成長を促進させ、ｎ‐３多価不飽和脂質（ＥＰＡ等）がヒト肺癌細胞の増殖を阻害することを示した。この効果は、一部、ＣＯＸ‐２の代謝によって媒介されるものであると考えられる。シクロオキシゲナーゼ、リポキシゲナーゼ、脂質メッセンジャー、および膜組成に関与する種々の脂質代謝経路の代表例については、図７および８を参照のこと。
【０１９１】
魚油ｎ‐３の食餌は、抗炎症性効果を有し、心血管の保護を提供し、免疫調節を提供し、化学療法の細胞傷害効果を増大させることが分かっている。
【０１９２】
ｎ‐３脂肪酸の抗癌活性の原因となる、可能な分子機構が仮定されている（Ｈａｒｄｍａｎ，Ｅ．Ｊ．Ｎｕｔｒ．１３２：３５０８Ｓ，２００２）。これらは、例えば、癌細胞の分化を誘導し、ＮＦ‐κＢの活性化およびＢｃｌ‐２の発現を抑制し、ＡＰ‐１およびＲａｓの発現を減少させ、癌に関連する悪液質を減少させ、エイコサノイド代謝を改変し、ＰＧＥ２の生成を阻害する、ｎ‐３脂質および代謝によってそれらから得られる脂質を含む。
【０１９３】
実施例８：前立腺癌臨床試験
【０１９４】
実験計画：浸潤性前立腺癌であると診断された４６６人の男性と、４７８人の年齢および人種を一致させた対照を用いた症例対照研究
【０１９５】
遺伝子型分析：９つのＣＯＸ‐２タグ一塩基多型（ＳＮＰ）
【０１９６】
結果：ＬＣ ｎ‐３の取り込み量の増加は、浸潤性前立腺癌のリスクの低下と強い関連性があった（ｐ＜０．０００１）。この逆の関連性は、特定のＣＯＸ‐２変異体ＳＮＰ（ＳＮＰ ｒｓ４６４８３１０）を有する男性においてさらに強かった。
【０１９７】
結論：食餌によるＬＣ ｎ‐３脂肪酸の摂取は、炎症を減少させ、代わりに、前立腺癌の発生および進行のリスクを低下させることが可能である。この潜在的効果は、脂肪酸代謝および炎症における重要な酵素であるＣＯＸ‐２の遺伝的変異体によって修正され得る。
【０１９８】
実施例９：シクロオキシゲナーゼ‐２と肺癌
【０１９９】
ＣＯＸ‐２の発現上昇およびＰＧＥ２の形成が、前浸潤性前駆病変および浸潤性肺癌を含むほとんどの非小細胞肺癌に見られている。ＰＧＥ２は、ＢＣｌ‐２、Ｓｒｃ、ＭＡＰＫ、ＶＥＧＦ、ＥＧＦの上方制御およびＢＡＸシグナル伝達経路の下方制御により、増殖および血管新生を促進し、ＮＳＣＬＣ細胞のアポトーシスを防止する。選択的なＣＯＸ‐２阻害剤セレコキシブまたはＮＳＡＩＤを用いたヒトの治療は、非小細胞肺癌に罹患する患者における化学療法の抗腫瘍効果を増大させる。
【０２００】
ＰＧＥ２がＡ５４９細胞の増殖を若干刺激するのに対し、ＰＧＥ３は、これらの特定の細胞の増殖を阻害する。ＥＰＡの抗増殖活性は、非小細胞肺癌（ＮＳＬＣ）細胞株Ａ５４９におけるＰＧＥ３の形成と関連している。ＰＧＥ２は、「悪玉脂肪」であるアラキドン酸に由来する。ＰＧＥ３は、「善玉脂肪」であるＥＰＡに由来する。善玉脂肪の悪玉脂肪に対する比率を変更した食餌が、ヒト肺癌に異なる影響を及ぼすかどうかを判定するために実験を行った。
【０２０１】
実施例１０：癌におけるＣＯＸ‐２発現系の比較
【０２０２】
ヒト肺癌Ａ５４９異種移植片（ＣＯＸ‐２を過剰発現する）およびＨ１２９９異種移植片（ＣＯＸ‐２を発現しない）において、特別に配合された魚油食餌の抗腫瘍効果を調べた。
【０２０３】
ＥＰＡは、Ａ５４９細胞の増幅を阻害するが、Ｈ１２９９細胞の増幅は阻害しない。図９を参照のこと。
【０２０４】
ＥＰＡに曝露されたヒト肺癌Ａ５４９およびＨ１２９９細胞におけるＰＧＥ２およびＰＧＥ３の生成（Ｙａｎｇ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．２００４）。ＥＰＡは、ＣＯＸ‐２を含有するＡ５４９細胞においてＣＯＸ‐２が媒介するＰＧＥ２の合成を阻害するが、有意なＣＯＸ‐２の発現が見られないＨ１２９９細胞では阻害しない。ＥＰＡはまた、Ａ５４９細胞中において、また、より低い程度ではあるがＨ１２９９ヒト非小細胞肺癌細胞において、比較的炎症性の低いＰＧＥ３の生成を引き起こす。図１０を参照のこと。
【０２０５】
ＰＧＥ２がＡ５４９細胞の増殖を若干刺激するのに対し、ＰＧＥ３（魚油ＥＰＡに由来）は、これらの特定の細胞の増殖を阻害する。図１１を参照のこと。
【０２０６】
ＥＰＡの抗増殖活性は、Ａ５４９細胞におけるＰＧＥ３の形成と関連している。図１２の矢印は、魚油ＥＰＡを用いたインキュベーションによってこれらのヒト非小細胞肺癌細胞内にもたらされた効果である、アポトーシス性の死滅細胞を指している。データはまた、この効果が、ＣＯＸ‐１ではなく、ＣＯＸ‐２の阻害によるものであることも示している。選択的なＣＯＸ‐２阻害剤セレコキシブの使用は、ＥＰＡの抗増殖効果を概ね無効にする。図１２を参照のこと。
【０２０７】
ＣＯＸ‐２ ｓｉＲＮＡでトランスフェクトしたＡ５４９細胞において、ＥＰＡの抗増殖効果が減少した。すなわち、ＣＯＸ‐２の生成および発現をブロックすることにより、ｅｐａ ｄｅｒｇｅ３の形成、ひいては、この魚油の抗増殖効果がブロックされたことになる。図１３を参照のこと。
【０２０８】
要約すると、これらの生体外試験は、ＣＯＸ‐２の代謝によって媒介されるヒト肺癌細胞の増殖を阻害することを示唆している。
【０２０９】
実施例１１：異なる魚油生成物の効果の比較
【０２１０】
魚油に由来するＰＧＥ３の肺癌における代謝の可能な機構の例を図１４に示す。３つの異なる魚油に由来する生成物、ＷｈｏｌｅＭｅｇａ（本発明の主題の組成物）、Ｕｌｔｉｍａｔｅ Ｏｍｅｇａ、およびＣａｒｌｓｏｎ Ｏｉｌで処理したＡ５４９細胞において、ＰＧＥ２およびＰＧＥ３の形成を調べた。図１５を参照すると、等量（μｇ／ｍＬ）の各油を使用して、異なる油組成物で処理したＡ５４９細胞におけるＰＧＥ２およびＰＧＥ３の形成の比較を行った。
【０２１１】
魚油中の異なる量（μｇ／ｍＬ）のＥＰＡを使用して、異なる魚油生成物で処理したＡ５４９細胞におけるＰＧＥ２およびＰＧＥ３の形成の比較を行った。抗炎症性ＰＧＥ３の形成に関して、ＷｈｏｌｅＭｅｇａが他の２つの市販の魚油よりも高い効力を持つことは明白である。図１６を参照のこと。
【０２１２】
図１７は、ＷｈｏｌｅＭｅｇａおよび２つの市販の魚油生成物が、ヒトＡ５４９非小細胞肺癌細胞（上の図）およびヒト１２９９非小細胞肺癌細胞（下の図）の増殖を阻害する相対的効果を示す。多くの癌細胞がそうであると言われるように、Ａ５４９細胞はＣＯＸ‐２を過剰発現する。Ｈ１２９９細胞はＣＯＸ‐２を過剰発現しないため、ＣＯＸ‐２を過剰発現しない癌細胞のための対照を提供する。ＷｈｏｌｅＭｅｇａは、Ａ５４９細胞に対して他の２つの生成物よりも強力な効果を有する。下の図では、Ｈ１２９９細胞がＣＯＸ‐２を過剰発現しておらず、３つの魚油が細胞の増殖に対して同様の阻害効果を示した。Ａ５４９細胞はＣＯＸ‐２を過剰発現しており、そのため、通常、ＰＧＥ２の過剰発現／過剰生成がもたらされる。しかしながら、魚油ＥＰＡ等の代替の基質が提供される場合、得られる生成物はＰＧＥ２ではなくＰＧＥ３である。この変化が、増殖能を遅延させ、したがって、Ａ５４９細胞の増殖が低下する。検査した３つ全ての魚油組成物はＥＰＡを含むため、このＷｈｏｌｅＭｅｇａのより強力な効果は、驚きであり、予期しないものであった。なぜＷｈｏｌｅｍｅｇａが、他の２つの油よりもかなり効果的であるかの正確な機構は未知である。明らかに、ＷｈｏｌｅＭｅｇａ組成物に特有の少なくとも１つの構造的特徴が、さらなる抗腫瘍効果に寄与している。１つの可能性は、他の２つの魚油には存在しないＷｈｏｌｅｍｅｇａ中の他の油（オメガ‐５、オメガ‐７およびオメガ‐９油）が、癌細胞の成長に対するさらなる阻害効果に寄与しているということである。別の可能性としては、特定の油の相互に対する相対的な分画であろう。さらに別の可能性は、薬用植物油組成物、例えば、ローズマリーＳＣＥおよびオレガノＳＣＥが、癌細胞の成長に対する追加の阻害効果に寄与しているということであろう。他の考えられる非限定的な機構もまた、ＣＯＸ‐２を過剰発現する腫瘍細胞を含む腫瘍細胞の成長を阻害するＷｈｏｌｅＭｅｇａの予期せぬ能力の一因となっている可能性がある。一実施形態において、薬用植物および多価不飽和油の本発明の主題の組成物は、治療的に有効な用量が動物に投与されると、癌細胞の成長を阻害する。一実施形態において、薬用植物および多価不飽和油の本発明の主題の組成物は、ＣＯＸ‐２を過剰発現する癌細胞の成長を阻害する。
【０２１３】
ＣＯＸおよびＬＯＸ経路の変更に対する３つの魚油生成物の効果：Ａ５４９細胞中のＣＯＸ‐２、５‐ＬＯＸおよび１２‐ＬＯＸのタンパク質発現に対するこれらの３つの魚油の効果を調べた。図１８に示すように、１２‐ＬＯＸの発現は、Ｕｌｔｉｍａｔｅ ＯｍｅｇａおよびＷｈｏｌｅＭｅｇａ（１０００ｕｇ／ｍＬ）で処理したＡ５４９細胞において、それぞれ、２０％および１５％と若干減少した。Ａ５４９細胞において、ＣＯＸ‐２または５‐ＬＯＸのいずれのタンパク質発現も変更されなかった。
【０２１４】
ヒトＡ５４９肺癌細胞におけるＣＯＸ‐２、５‐および１２‐ＬＯＸ、ならびにＡｋｔ／ｐＡｋｔの発現に対するＷｈｏｌｅＭｅｇａ、Ｕｌｔｉｍａｔｅ Ｏｍｅｇａ、およびＣａｒｌｓｏｎ Ｓｕｐｅｒ Ｆｉｓｈ Ｏｉｌ生成物の効果。細胞（１×１０６）を組織培養皿に一晩接着させ、次いで、異なる濃度の魚油で２４時間処理した。次いで、細胞を採取して溶解させ、ウエスタンブロット法によりタンパク質発現を測定し、濃度測定によって定量化した。図１８のデータは、ＷｈｏｌｅＭｅｇａがＣＯＸ‐２または５‐ＬＯＸの発現を阻害しなかったこと、そして、１２‐ＬＯＸの発現をわずかに阻害したのみであったことをを示唆している。対照的に、ＷｈｏｌｅＭｅｇａ（５００ｕｇ／ｍＬ）は、ＡｋｔおよびｐＡｋｔの両方の発現を阻害（３０％）した。Ｃａｒｌｓｏｎの魚油で処理したＡ５４９細胞中のリン酸化Ａｋｔのレベルに同程度の阻害が観察されたが、全Ａｋｔには観察されなかった。Ｕｌｔｉｍａｔｅ Ｏｍｅｇａで処理したＡ５４９細胞にはそのような効果は観察されなかった。
【０２１５】
３つの異なる魚油生成物で処理した細胞において、Ａｋｔの発現およびＡｋｔのリン酸化を測定した。オメガ‐３脂肪酸の抗増殖活性と関連している可能性がある機構のうちの１つは、全Ａｋｔの阻害およびＡｋｔのリン酸化である。３つの魚油生成物がＡｋｔおよびｐＡｋｔのタンパク質レベルに与える影響を、魚油によって誘導されるヒト肺癌細胞における細胞成長の抑制に一部寄与する潜在的な分子機構として測定した。図１８（ＡおよびＢ）に示すように、ＷｈｏｌｅＭｅｇａで処理したＡ５４９細胞において、全Ａｋｔのレベルは３０％減少した。さらに、Ａ５４９細胞においてｐＡｋｔの発現が減少したこと（３２％の減少）からも明らかなように、ＷｈｏｌｅＭｅｇａはＡｋｔのリン酸化も抑制した。この抑制効果は、濃度依存性であった。対照的に、Ｃａｒｌｓｏｎ Ｓｕｐｅｒ Ｆｉｓｈ Ｏｉｌは、Ａｋｔのリン酸化のみを抑制したが、全Ａｋｔのリン酸化は抑制しなかった（図１８＿Ｃ）。同様の量のＮｏｒｄｉｃ ＮａｔｕｒａｌのＵｌｔｉｍａｔｅ Ｏｍｅｇａで処理した細胞には、ＡｋｔまたはｐＡｋｔレベルのいずれにおいても変化が見られなかった（データは表示せず）。これらのデータは、Ａｋｔ経路の阻害は、ＷｈｏｌｅＭｅｇａの抗増殖活性に寄与する一部の機構であるかもしれないことを示唆している。
【０２１６】
実施例１２：Ｗｈｏｌｅｍｅｇａで処理したＲＡＷマクロファージ細胞における炎症遺伝子の発現
【０２１７】
ＷｈｏｌｅＭｅｇａが炎症経路にどのように影響を及ぼし得るかをさらに説明するために、Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ Ａｒｒａｙ分析およびリアルタイムＰＣＲによって、ＷｈｏｌｅＭｅｇａが炎症性サイトカインおよび炎症に関連する遺伝子に与える影響を調べた。簡潔に述べると、１００ｍｍプレート上に細胞を播種し、無血清条件において２４時間ＷｈｏｌｅＭｅｇａ（２５０〜５００ｕｇ／ｍＬ）で処理した。標準的なＴｒｉｚｏｌ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を使用して、製造者の指示にしたがって細胞からＮＡを抽出した。次いで、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ（登録商標）ＩＩ Ｆｉｒｓｔ‐Ｓｔｒａｎｄ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｋｉｔを使用してＲＮＡを逆転写した。産生されたｃＤＮＡをＴａｑｍａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ ＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して調製した。Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ Ａｒｒａｙ Ｍｉｃｒｏ Ｆｌｕｉｄｉｃ Ｃａｒｄ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）の各ウェルにアリコート（１００ｕＬ）を充填し、遠心分離にかけてから密封した。Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ Ａｒｒａｙ用のソフトウェアを７９００ ＨＴ Ｆａｓｔ Ｒｅａｌ‐Ｔｉｍｅ ＰＣＲ Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）にダウンロードした。カードをロードし、遺伝子発現の相対的なレベルとの相関性としてＣｔ値を評価した。図１９に示すように、検査した９５個の炎症関連遺伝子のうち、全てのアネキシン遺伝子が下方制御され、アネキシンＡ１が最も強力に阻害された。
【０２１８】
炎症促進性生成物ロイコトリエンＬＴＢ４、すなわちＬＴＡ４加水分解酵素を異化することに寄与する遺伝子の発現も、対照群の発現と比較して減少した。これは、ＷｈｏｌｅＭｅｇａ（５００ｕｇ／ｍＬ）で処理したＡ５４９細胞における酵素生成物ＬＴＢ４の減少と一致する。セロトニン受容体、ＭＡＰキナーゼ、および血管接着の発現と関連する遺伝子もまた、対照細胞の遺伝子と比較すると２０％を超えて下方制御された。別個のマクロファージ様細胞株に同様の変化が生じるかどうかを確認するために、ＲＡＷ細胞を使用した。前述したように細胞を処理し、ラット炎症遺伝子のアレイ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）解析を行った。ヒトＮＳＣＬＣ Ａ５４９細胞における炎症関連遺伝子の発現との比較において、ＷｈｏｌｅＭｅｇａで処理したＲＡＷ細胞で最も影響を受けた遺伝子は、ホスホリパーゼ活性と関連する遺伝子であった。Ａ５４９およびＲａｗ細胞の両方で、広くＷｈｏｌｅＭｅｇａの影響を受けた遺伝子は、アネキシンＡ３、ＭＡＰキナーゼ、ホスホリパーゼＡおよびＣであった。これらのデータは、ＷｈｏｌｅＭｅｇａが、ロイコトリエンＡ４加水分解酵素（ロイコトリエン合成、Ａ５４９細胞）、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ、細胞増殖）、および悪性疾患の病因に関与する細胞表面等タンパク質である血管細胞接着分子（ＶＣＡＭ‐１）を含む、一連の重要な炎症関連遺伝子を下方制御する能力を有することを提案するものである。
【０２１９】
図１９は、Ｗｈｏｌｅｍｅｇａで処理したヒト非小細胞肺癌Ａ５４９細胞における炎症遺伝子アレイの発現の結果を示す。Ｗｈｏｌｅｍｅｇａの処理により２０％未満の減少が見られた遺伝子を上の図に示し、さらに高い程度（２０〜５０％）まで減少した遺伝子を下の図に示す。一実施形態において、本発明の主題の組成物は、アンドロゲン表面受容体β２（ＡＤＢＲ２）、アネキシンＡ１（ＡＮＸＡ１）、セロトニン受容体３（ＨＴＲ３）、ロイコトリエンＡ４加水分解酵素（ＬＴＡ４Ｈ）、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ８（ＭＡＰＫ８）、血管細胞接着分子１（ＶＣＡＭ１）、アネキシンＡ３、アネキシンＡ５、β２‐マイクログロブリン、Ｂ１ブラジキニン受容体、Ｌ型カルシウムチャネルα１Ｄサブユニット、カルシウムチャネルβ４サブユニット、ＣＤ４０抗原（ＴＮＦ受容体スーパーファミリー）、インテグリンαＬ、インテグリンβ１、血漿カリクレインＢ（フレッチャー因子）１、核因子κＢ、ホスホリパーゼＡ２ＩＢ群（膵臓）、ホスホリパーゼＣδ１、腫瘍壊死因子（リガンド）スーパーファミリーＮｏ．１３ｂ、およびグリセルアルデヒド‐３‐リン酸デヒドロゲナーゼからなる群から選択される、少なくとも１つの受容体または酵素の発現を阻害するために使用することができる。別の実施形態において、本発明の主題の組成物は、アンドロゲン表面受容体β２（ＡＤＢＲ２）、アネキシンＡ１（ＡＮＸＡ１）、セロトニン受容体３（ＨＴＲ３）、ロイコトリエンＡ４加水分解酵素（ＬＴＡ４Ｈ）、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ８（ＭＡＰＫ８）、および血管細胞接着分子１（ＶＣＡＭ１）からなる群から選択される少なくとも１つの受容体または酵素の発現を阻害するために使用することができる。さらなる実施形態において、少なくとも１つの受容体または酵素の発現のレベルは、約３％〜約２０％減少する。さらに別の実施形態において、少なくとも１つの受容体または酵素の発現のレベルは、少なくとも約２０％、例えば、約２０％〜約５０％減少する。
【０２２０】
図２０＿は、ＷｈｏｌｅＭｅｇａ（２５０および５００ｕｇ／ｍＬ）で処理したＲＡＷ細胞における炎症遺伝子アレイの発現の結果を、未処理の対照と比較して示したものである。記号（＊）は、ＷｈｏｌｅＭｅｇａのために２０％を超える減少を示した発現のレベルを示す。ＲＡＷ細胞におけるＣＯＸおよび５‐ＬＯＸならびにホスホリパーゼの発現と関連する受容体または酵素の発現は、未処理の対照細胞の発現と比較すると減少した。
【０２２１】
これらのデータは、（１）より強い抗増殖活性、（２）ヒトＮＳＣＬＣ Ａ５４９およびラットマクロファージＲａｗ細胞の両方において、抗増殖性脂質メディエータＰＧＥ３およびＬＴＢ５を形成する能力、ならびに（３）Ａ５４９細胞におけるＡｋｔおよびｐＡｋｔタンパク質の両方の抑制からも明らかなように、ＷｈｏｌｅＭｅｇａの魚油が、他の２つの市販の魚油生成物、Ｕｌｔｉｍａｔｅ ＯｍｅｇａおよびＣａｒｌｓｏｎ Ｓｕｐｅｒ Ｆｉｓｈ Ｏｉｌよりも予想外に優れていることを示している。Ｗｈｏｌｅｍｅｇａにおけるオメガ‐３脂肪酸の相対濃度はＵｌｔｉｍａｔｅ ＯｍｅｇａおよびＣａｒｌｓｏｎ Ｓｕｐｅｒ Ｆｉｓｈ Ｏｉｌにおける相対濃度よりも低いため、このことは特に興味深い。このデータは、本発明の主題の精製された組成物中に存在するＷｈｏｌｅｍｅｇａに特有の少なくとも１つの構成要素が、ＷｈｏｌｅＭｅｇａの抗癌活性に起因している可能性があることを示唆するものである。一実施形態において、これらの予測されなかった効果の原因となる、本発明の主題の組成物中のこの少なくとも１つの特有の構成要素は、脂肪酸、脂肪酸の組み合わせ、薬用植物構成要素、他の非脂肪酸非薬用植物構成要素、およびそれらの組み合わせからなる群から選択することができる。また、炎症と関連する幅広い遺伝子の抑制からも明らかなように、炎症アレイのデータは、本発明の主題の組成物の抗炎症性活性をさらに実証するものである。
【０２２２】
一実施形態において、本発明の主題の組成物は、α２‐マクログロブリン、β２アドレナリン受容体、アネキシンＡ３、酸性リボゾームリンタンパク質Ｐ０、システイニルロイコトリエン受容体１、ヒドロキシプロスタグランジンデヒドロゲナーゼ１５、ヒスタミン受容体Ｈ２、細胞間接着分子１、インターロイキン１受容体、ロイコトリエンＢ４受容体、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ３、ホスホリパーゼＡ２群Ｖ、ホスホリパーゼＣβ２、ホスホリパーゼＣδ１、ホスホリパーゼＣγ２、プロスタグランジンＥ受容体３、プロスタグランジン‐エンドペルオキシド合成酵素１、およびカスパーゼ１からなる群から選択される、少なくとも１つの受容体または酵素の発現を阻害するために使用することができる。好ましい実施形態において、本発明の主題の組成物は、α２‐マクログロブリン、β２アドレナリン受容体、酸性リボゾームリンタンパク質Ｐ０、ヒスタミン受容体Ｈ２、細胞間接着分子１、およびプロスタグランジンＥ受容体３からなる群から選択される、少なくとも１つの受容体または酵素の発現を阻害するために使用することができる。この好ましい実施形態の別の実施形態において、受容体および／または酵素の２つもしくは３つ、または３つもしくはそれ以上、または４つもしくはそれ以上が、少なくとも２０％減少した発現のレベルを有する。さらなる実施形態において、受容体または酵素の少なくとも１つの発現のレベルは、約３％〜約２０％減少する。さらに別の実施形態において、少なくとも１つの受容体または酵素の発現のレベルには、２０％を超えて減少する。
【０２２３】
参考文献
以下の参考文献は、本発明の主題を、関連技術分野における位置に照らして理解するために有用であると考えられる。本明細書における引用は、引用されるいずれの参考文献も、本発明の主題の特許性に関わるという主張または承認であると見なされるべきではない。出願人は、情報開示陳述書において、特許性に関わる重要な情報を適切に開示する。各参考文献の内容は、その全体が本明細書に組み込まれる。
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【０２２４】
本発明の主題について記載したが、多くの様式において本発明の主題が修正または変更され得ることは明白であろう。そのような修正または変更は、本発明の主題の主旨および範囲からの逸脱であると見なされるべきではなく、全てのそのような修正または変更は、以下の特許請求項の範囲内に含まれることが意図される。
【０２２５】
関連出願の相互参照
本出願は、２００９年５月２９日に出願された米国特許仮出願第６１／２１３，３３４号、および２００９年８月１９日に出願された同第６１／２７２，１３０号の利益を主張するものであり、その内容は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ローズマリーの超臨界抽出物（ＳＣＥ）と、オレガノの超臨界抽出物と、多価不飽和油と、を含む、治療用組成物。
【請求項２】
前記多価不飽和油は、サーモン油である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
ローズマリーＳＣＥ：オレガノＳＣＥの比率は、約２：１である、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
多価不飽和油に対する前記ローズマリーＳＣＥ：オレガノＳＣＥの比率は、１：５〜１：２０００である、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記組成物の全重量パーセントの約０．１〜１重量％のローズマリーＳＣＥと、約０．１〜１重量％のオレガノＳＣＥと、９７〜９９．８重量％の多価不飽和油と、を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
約２ｍｇのローズマリーＳＣＥと、約１ｍｇのオレガノＳＣＥと、１００ｍｇ〜２０００ｍｇの範囲の多価不飽和油と、を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
約２ｍｇのローズマリーＳＣＥと、約１ｍｇのオレガノＳＣＥと、約５００ｍｇ〜約１０００ｍｇの範囲のサーモン油と、を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
動物における細胞増殖性疾患を治療するための方法であって、請求項１〜７に記載の組成物の治療的な有効量を、それを必要とする動物に投与することを含む、方法。
【請求項９】
前記細胞増殖性疾患は、前立腺癌細胞、乳癌、肺癌、大腸癌、またはそれらの組み合わせである、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記細胞増殖性疾患は、細胞の癌への形質転換、癌細胞の増殖、癌細胞の転移、癌細胞の侵襲性、癌細胞によって調節される血管新生、癌細胞によって調節されるアポトーシス抑制、またはそれらの組み合わせと関連する異常なエイコサノイド代謝プロセスに関与し、前記組成物の投与は、細胞の癌への形質転換、癌細胞の増殖、癌細胞の転移、癌細胞の侵襲性、癌細胞によって調節される血管新生、癌細胞によって調節されるアポトーシス抑制と関連する前記異常なエイコサノイド代謝プロセスのうちの少なくとも１つを阻害する、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
前記組成物の前記投与は、エイコサノイドオキシゲナーゼまたはＮＦ‐κＢのいずれかの活性を阻害する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記組成物の前記投与は、全Ａｋｔの発現およびＡｋｔのリン酸化の両方を阻害する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
前記動物は、ヒトである、請求項８に記載の方法。
【請求項１４】
減少を必要とする動物において、血清ＬＤＬ、血清コレステロール、または血清コレステロール／ＨＤＬの量を減少させるための方法であって、１日当たり少なくとも２ｇの請求項１〜７に記載の組成物を少なくとも３日間前記動物に投与することを含み、血清ＬＤＬが少なくとも５％（例えば、１０％もしくは１３％）減少するか、血清コレステロールが少なくとも５％（例えば、８％）減少するか、コレステロール／ＨＤＬが少なくとも５％（例えば、７％）減少するか、またはそれらの組み合わせである、方法。
【請求項１５】
血清ＬＤＬが、少なくとも１０％減少する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記動物は、ヒトである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
増加を必要とする動物の、血清中の「善玉脂肪」の「悪玉脂肪」に対する比率を増加させるための方法であって、１日当たり少なくとも２ｇの請求項１〜７に記載の組成物を少なくとも３日間前記動物に投与することを含み、前記動物の前記血清中の前記善玉脂肪の悪玉脂肪に対する比率が、少なくとも５％（例えば、８％）増加する、方法。
【請求項１８】
増加を必要とする動物の、血清中の細胞膜における善玉脂肪の悪玉脂肪に対する比率を増加させるための方法であって、１日当たり少なくとも２ｇの請求項１〜７に記載の組成物を少なくとも３日間前記動物に投与することを含み、前記動物の前記血清中の前記細胞膜における前記善玉脂肪の悪玉脂肪に対する比率が、少なくとも５％（例えば、８％）増加する、方法。
【請求項１９】
前記善玉脂肪の悪玉脂肪に対する比率が、前記血清中の末梢血単核球の前記細胞膜において増加する、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
減少を必要とする動物における、癌細胞の増殖を減少させるための方法であって、１日当たり少なくとも２ｇの請求項１〜７に記載の組成物を少なくとも３日間前記動物に投与することを含み、前記動物における前記癌細胞の前記増殖が、少なくとも１５％（例えば、２０％または２５％）減少する、方法。
【請求項２１】
前記動物は、ヒトである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記癌細胞は、ＣＯＸ‐２を過剰発現する、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
減少を必要とする動物における、癌細胞の増殖を減少させるための方法であって、
１日当たり少なくとも２ｇの請求項１〜７に記載の組成物を少なくとも３日間前記動物に投与することと、
アンドロゲン表面受容体β２（ＡＤＢＲ２）、アネキシンＡ１（ＡＮＸＡ１）、セロトニン受容体３（ＨＴＲ３）、ロイコトリエンＡ４加水分解酵素（ＬＴＡ４Ｈ）、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ８（ＭＡＰＫ８）、血管細胞接着分子１（ＶＣＡＭ１）、α２‐マクログロブリン、β２アドレナリン受容体、酸性リボゾームリンタンパク質Ｐ０、ヒスタミン受容体Ｈ２、細胞間接着分子１、およびプロスタグランジンＥ受容体３からなる群から選択される、少なくとも１つの受容体または酵素の発現を少なくとも２０％阻害することと、を含む、方法。
【請求項２４】
少なくとも２０％阻害される受容体または酵素の数は、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、および１２からなる群から選択され、前記受容体または酵素は、アンドロゲン表面受容体β２（ＡＤＢＲ２）、アネキシンＡ１（ＡＮＸＡ１）、セロトニン受容体３（ＨＴＲ３）、ロイコトリエンＡ４加水分解酵素（ＬＴＡ４Ｈ）、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ８（ＭＡＰＫ８）、血管細胞接着分子１（ＶＣＡＭ１）、α２‐マクログロブリン、β２アドレナリン受容体、酸性リボゾームリンタンパク質Ｐ０、ヒスタミン受容体Ｈ２、細胞間接着分子１、およびプロスタグランジンＥ受容体３からなる群から選択される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
多価不飽和油の酸化を阻害するための方法であって、
多価不飽和脂肪を含む油を得ることと、
前記油に、ローズマリー油の抽出物およびオレガノ油の抽出物を含む薬用植物組成物を加えることと、を含む、方法。
【請求項２６】
前記ローズマリー油の抽出物は、油の０．１重量％〜０．３重量％の範囲の濃度で存在し、オレガノ油の抽出物は、油の０．１重量％〜０．３重量％の範囲の濃度で存在する、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記ローズマリー油の抽出物および前記オレガノ油の抽出物は、１：１〜３：１の範囲の比率で存在する、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
前記ローズマリー油の抽出物および前記オレガノ油の抽出物を加えた後、酸化保護値が少なくとも２倍になる、請求項２５に記載の方法。
【請求項２９】
前記ローズマリー油の抽出物は、ローズマリーＳＣＥであり、前記オレガノ油の抽出物は、オレガノＳＣＥである、請求項２５に記載の方法。
【請求項３０】
前記薬用植物組成物は、ローズマリー油の抽出物と、オレガノ油の抽出物と、好適な担体と、から本質的になる、請求項２５に記載の方法。
【請求項１】
ローズマリーの超臨界抽出物（ＳＣＥ）と、オレガノの超臨界抽出物と、多価不飽和油と、を含む、治療用組成物。
【請求項２】
前記多価不飽和油は、サーモン油である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
ローズマリーＳＣＥ：オレガノＳＣＥの比率は、約２：１である、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
多価不飽和油に対する前記ローズマリーＳＣＥ：オレガノＳＣＥの比率は、１：５〜１：２０００である、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記組成物の全重量パーセントの約０．１〜１重量％のローズマリーＳＣＥと、約０．１〜１重量％のオレガノＳＣＥと、９７〜９９．８重量％の多価不飽和油と、を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
約２ｍｇのローズマリーＳＣＥと、約１ｍｇのオレガノＳＣＥと、１００ｍｇ〜２０００ｍｇの範囲の多価不飽和油と、を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
約２ｍｇのローズマリーＳＣＥと、約１ｍｇのオレガノＳＣＥと、約５００ｍｇ〜約１０００ｍｇの範囲のサーモン油と、を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
動物における細胞増殖性疾患を治療するための方法であって、請求項１〜７に記載の組成物の治療的な有効量を、それを必要とする動物に投与することを含む、方法。
【請求項９】
前記細胞増殖性疾患は、前立腺癌細胞、乳癌、肺癌、大腸癌、またはそれらの組み合わせである、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記細胞増殖性疾患は、細胞の癌への形質転換、癌細胞の増殖、癌細胞の転移、癌細胞の侵襲性、癌細胞によって調節される血管新生、癌細胞によって調節されるアポトーシス抑制、またはそれらの組み合わせと関連する異常なエイコサノイド代謝プロセスに関与し、前記組成物の投与は、細胞の癌への形質転換、癌細胞の増殖、癌細胞の転移、癌細胞の侵襲性、癌細胞によって調節される血管新生、癌細胞によって調節されるアポトーシス抑制と関連する前記異常なエイコサノイド代謝プロセスのうちの少なくとも１つを阻害する、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
前記組成物の前記投与は、エイコサノイドオキシゲナーゼまたはＮＦ‐κＢのいずれかの活性を阻害する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記組成物の前記投与は、全Ａｋｔの発現およびＡｋｔのリン酸化の両方を阻害する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
前記動物は、ヒトである、請求項８に記載の方法。
【請求項１４】
減少を必要とする動物において、血清ＬＤＬ、血清コレステロール、または血清コレステロール／ＨＤＬの量を減少させるための方法であって、１日当たり少なくとも２ｇの請求項１〜７に記載の組成物を少なくとも３日間前記動物に投与することを含み、血清ＬＤＬが少なくとも５％（例えば、１０％もしくは１３％）減少するか、血清コレステロールが少なくとも５％（例えば、８％）減少するか、コレステロール／ＨＤＬが少なくとも５％（例えば、７％）減少するか、またはそれらの組み合わせである、方法。
【請求項１５】
血清ＬＤＬが、少なくとも１０％減少する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記動物は、ヒトである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
増加を必要とする動物の、血清中の「善玉脂肪」の「悪玉脂肪」に対する比率を増加させるための方法であって、１日当たり少なくとも２ｇの請求項１〜７に記載の組成物を少なくとも３日間前記動物に投与することを含み、前記動物の前記血清中の前記善玉脂肪の悪玉脂肪に対する比率が、少なくとも５％（例えば、８％）増加する、方法。
【請求項１８】
増加を必要とする動物の、血清中の細胞膜における善玉脂肪の悪玉脂肪に対する比率を増加させるための方法であって、１日当たり少なくとも２ｇの請求項１〜７に記載の組成物を少なくとも３日間前記動物に投与することを含み、前記動物の前記血清中の前記細胞膜における前記善玉脂肪の悪玉脂肪に対する比率が、少なくとも５％（例えば、８％）増加する、方法。
【請求項１９】
前記善玉脂肪の悪玉脂肪に対する比率が、前記血清中の末梢血単核球の前記細胞膜において増加する、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
減少を必要とする動物における、癌細胞の増殖を減少させるための方法であって、１日当たり少なくとも２ｇの請求項１〜７に記載の組成物を少なくとも３日間前記動物に投与することを含み、前記動物における前記癌細胞の前記増殖が、少なくとも１５％（例えば、２０％または２５％）減少する、方法。
【請求項２１】
前記動物は、ヒトである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記癌細胞は、ＣＯＸ‐２を過剰発現する、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
減少を必要とする動物における、癌細胞の増殖を減少させるための方法であって、
１日当たり少なくとも２ｇの請求項１〜７に記載の組成物を少なくとも３日間前記動物に投与することと、
アンドロゲン表面受容体β２（ＡＤＢＲ２）、アネキシンＡ１（ＡＮＸＡ１）、セロトニン受容体３（ＨＴＲ３）、ロイコトリエンＡ４加水分解酵素（ＬＴＡ４Ｈ）、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ８（ＭＡＰＫ８）、血管細胞接着分子１（ＶＣＡＭ１）、α２‐マクログロブリン、β２アドレナリン受容体、酸性リボゾームリンタンパク質Ｐ０、ヒスタミン受容体Ｈ２、細胞間接着分子１、およびプロスタグランジンＥ受容体３からなる群から選択される、少なくとも１つの受容体または酵素の発現を少なくとも２０％阻害することと、を含む、方法。
【請求項２４】
少なくとも２０％阻害される受容体または酵素の数は、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、および１２からなる群から選択され、前記受容体または酵素は、アンドロゲン表面受容体β２（ＡＤＢＲ２）、アネキシンＡ１（ＡＮＸＡ１）、セロトニン受容体３（ＨＴＲ３）、ロイコトリエンＡ４加水分解酵素（ＬＴＡ４Ｈ）、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ８（ＭＡＰＫ８）、血管細胞接着分子１（ＶＣＡＭ１）、α２‐マクログロブリン、β２アドレナリン受容体、酸性リボゾームリンタンパク質Ｐ０、ヒスタミン受容体Ｈ２、細胞間接着分子１、およびプロスタグランジンＥ受容体３からなる群から選択される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
多価不飽和油の酸化を阻害するための方法であって、
多価不飽和脂肪を含む油を得ることと、
前記油に、ローズマリー油の抽出物およびオレガノ油の抽出物を含む薬用植物組成物を加えることと、を含む、方法。
【請求項２６】
前記ローズマリー油の抽出物は、油の０．１重量％〜０．３重量％の範囲の濃度で存在し、オレガノ油の抽出物は、油の０．１重量％〜０．３重量％の範囲の濃度で存在する、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記ローズマリー油の抽出物および前記オレガノ油の抽出物は、１：１〜３：１の範囲の比率で存在する、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
前記ローズマリー油の抽出物および前記オレガノ油の抽出物を加えた後、酸化保護値が少なくとも２倍になる、請求項２５に記載の方法。
【請求項２９】
前記ローズマリー油の抽出物は、ローズマリーＳＣＥであり、前記オレガノ油の抽出物は、オレガノＳＣＥである、請求項２５に記載の方法。
【請求項３０】
前記薬用植物組成物は、ローズマリー油の抽出物と、オレガノ油の抽出物と、好適な担体と、から本質的になる、請求項２５に記載の方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２Ａ】
【図１２Ｂ】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８Ａ】
【図１８Ｂ】
【図１８Ｃ】
【図１９】
【図２０】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２Ａ】
【図１２Ｂ】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８Ａ】
【図１８Ｂ】
【図１８Ｃ】
【図１９】
【図２０】
【公表番号】特表２０１２−５２８７９３（Ｐ２０１２−５２８７９３Ａ）
【公表日】平成２４年１１月１５日（２０１２．１１．１５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５１３３２８（Ｐ２０１２−５１３３２８）
【出願日】平成２２年５月２８日（２０１０．５．２８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０３６７１２
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／１３８９０２
【国際公開日】平成２２年１２月２日（２０１０．１２．２）
【出願人】（５０６３８４２３５）ニュー チャプター，インコーポレイテッド (2)
【出願人】（５０７４１０１１３）ボード オブ リージェンツ， ザ ユニヴァーシティー オブ テキサス システム (2)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２４年１１月１５日（２０１２．１１．１５）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年５月２８日（２０１０．５．２８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２０１０／０３６７１２
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／１３８９０２
【国際公開日】平成２２年１２月２日（２０１０．１２．２）
【出願人】（５０６３８４２３５）ニュー チャプター，インコーポレイテッド (2)
【出願人】（５０７４１０１１３）ボード オブ リージェンツ， ザ ユニヴァーシティー オブ テキサス システム (2)
【Ｆターム（参考）】
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