脊椎動物の初期発生における中胚葉形成を支配する新規遺伝子ＢｒａｃｈｙｕｒｙＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｂｙＮｕｃｌｅａｒＩｎｈｉｂｉｔｏｒ，ＢＥＮＩ

【課題】本発明は、アクチビンAに早期に応答する遺伝子を提供することを課題とする。
【解決手段】本発明者は、網羅的マイクロアレイ法を用いて、アフリカツメガエルの胚を検討したところ、アクチビンＡに応答して早期にその発現が大きく低下する遺伝子として、ＵｎｉｇｅｎｅｃｏｄｅＸｌ．７７５６（ＢＥＮＩ，ＢｒａｃｈｙｕｒｙＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｂｙＮｕｃｌｅａｒＩｎｈｉｂｉｔｏｒと命名）を発見し、これが中胚葉特異的な因子であるＢｒａｃｈｙｕｒｙの発現を核の中で抑制しながら、中胚葉の分化誘導を調節することを見出した。

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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＢｒａｃｈｙｕｒｙＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｂｙＮｕｃｌｅａｒＩｎｈｉｂｉｔｏｒ（ＢＥＮＩ）をコードする核酸配列またはその改変体もしくはフラグメント。
【請求項２】
前記ＢＥＮＩは、
（ａ）配列番号２、４、６、８、１０、１２、１８または２０に記載のアミノ酸配列またはそのフラグメントからなる、ポリペプチド；
（ｂ）配列番号２、４、６、８、１０、１２、１８または２０に記載のアミノ酸配列において、１または数個のアミノ酸が置換、付加および欠失からなる群より選択される少なくとも１つの変異を有し、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチド；
（ｃ）配列番号１、３、５、７、９、１１、１７または１９に記載の塩基配列の対立遺伝子変異体またはスプライス変異体によってコードされる、ポリペプチド；
（ｄ）配列番号２、４、６、８、１０、１２、１８または２０に記載のアミノ酸配列の種相同体である、ポリペプチド；または
（ｅ）（ａ）〜（ｄ）のいずれか１つのポリペプチドに対する同一性が少なくとも７０％であるアミノ酸配列を有し、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチド、
をコードする、請求項１に記載の核酸分子またはその改変体もしくはフラグメント。
【請求項３】
前記ＢＥＮＩは、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１８または２０に示される配列をコードする、請求項１に記載の核酸分子またはその改変体もしくはフラグメント。
【請求項４】
前記ＢＥＮＩは、配列番号１、３、５、７、９、１１、１７または１９に示される配列を含む、請求項１に記載の核酸分子またはその改変体もしくはフラグメント。
【請求項５】
前記生物学的活性は、中胚葉の分化誘導の調節活性である、請求項１に記載の核酸分子またはその改変体もしくはフラグメント。
【請求項６】
前記生物学的活性は、中胚葉分化誘導因子Ｂｒａｃｈｙｕｒｙを調節する活性を有する、請求項１に記載の核酸分子またはその改変体もしくはフラグメント。
【請求項７】
ＢｒａｃｈｙｕｒｙＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎｂｙＮｕｃｌｅａｒＩｎｈｉｂｉｔｏｒ（ＢＥＮＩ）ポリペプチドまたはその改変体もしくはフラグメント。
【請求項８】
前記ＢＥＮＩは、
（ａ）配列番号２、４、６、８、１０、１２、１８または２０に記載のアミノ酸配列またはそのフラグメントからなる、ポリペプチド；
（ｂ）配列番号２、４、６、８、１０、１２、１８または２０に記載のアミノ酸配列において、１以上のまたは１もしくは数個のアミノ酸が置換、付加および欠失からなる群より選択される１つの変異を有し、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチド；
（ｃ）配列番号１、３、５、７、９、１１、１７または１９に記載の塩基配列のスプライス変異体または対立遺伝子変異体によってコードされる、ポリペプチド；
（ｄ）配列番号２、４、６、８、１０、１２、１８または２０に記載のアミノ酸配列の種相同体である、ポリペプチド；または
（ｅ）（ａ）〜（ｄ）のいずれか１つのポリペプチドに対する同一性が少なくとも７０％であるアミノ酸配列を有し、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチド
である、請求項７に記載のポリペプチドまたはその改変体もしくはフラグメント。
【請求項９】
前記ＢＥＮＩは、配列番号２、４、６、８、１０、１２、１８または２０に示される配列を有する、請求項７に記載のポリペプチドまたはその改変体もしくはフラグメント。
【請求項１０】
前記ＢＥＮＩは、配列番号１、３、５、７、９、１１、１７または１９に示される配列を含む、請求項７に記載のポリペプチドまたはその改変体もしくはフラグメント。
【請求項１１】
前記生物学的活性は、中胚葉の分化誘導の調節活性である、請求項７に記載のポリペプチドまたはその改変体もしくはフラグメント。
【請求項１２】
前記生物学的活性は、中胚葉分化誘導因子Ｂｒａｃｈｙｕｒｙを調節する活性を有する、請求項７に記載のポリペプチドまたはその改変体もしくはフラグメント。
【請求項１３】
中胚葉分化誘導因子Ｂｒａｃｈｙｕｒｙを調節する活性を調節することができる因子であって、該因子は、請求項１に記載の核酸分子またはその改変体もしくはフラグメント、あるいは請求項７に記載のポリペプチドまたはその改変体もしくはフラグメントの機能を阻害する機能を有する、因子。
【請求項１４】
前記因子は、核酸分子、ポリペプチド、脂質、糖鎖、有機低分子およびそれらの複合分子からなる群より選択される、請求項１３に記載の因子。
【請求項１５】
前記因子は、請求項１に記載の核酸分子またはその改変体もしくはフラグメント、あるいは請求項７に記載のポリペプチドまたはその改変体もしくはフラグメントと相互作用することを特徴とする、請求項１３に記載の因子。
【請求項１６】
前記因子は、請求項１に記載の核酸分子またはその改変体もしくはフラグメントのアンチセンス核酸分子またはＲＮＡｉ分子であるか、あるいは請求項７に記載のポリペプチドまたはその改変体もしくはフラグメントに対する抗体であることを特徴とする、請求項１３に記載の因子。
【請求項１７】
前記因子を特異的部位に送達させる手段をさらに含む、請求項１３に記載の因子。
【請求項１８】
前記手段は、前記特異的部位に特異的に前記核酸分子を発現させるものである、請求項１７に記載の因子。
【請求項１９】
前記手段は、プロモーターである、請求項１８に記載の因子。
【請求項２０】
前記手段は、指向性リポソームである、請求項１７に記載の因子。
【請求項２１】
請求項１に記載の核酸分子を含む、ベクター。
【請求項２２】
請求項１に記載の核酸分子の機能を阻害する阻害核酸分子を含む、ベクター。
【請求項２３】
中胚葉分化誘導の調節因子をスクリーニングする方法であって、
Ａ）候補物質を提供する工程、
Ｂ）該候補物質がＢＥＮＩの活性を調節するかどうかを決定するためのアッセイ系に供する工程；
Ｃ）該候補物質の内、ＢＥＮＩを調節する因子を同定し、該調節する因子を、ＢＥＮＩの調節因子であると決定する工程
を包含する、方法。
【請求項２４】
前記候補物質は、核酸分子、ポリペプチド、脂質、糖鎖、有機低分子およびそれらの複合分子からなる群より選択される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２５】
請求項２３に記載の方法によって同定された、ＢＥＮＩの調節因子。
【請求項２６】
中胚葉分化誘導の調節因子を生産する方法であって、
Ａ）候補物質を提供する工程、
Ｂ）該候補物質がＢＥＮＩの活性を調節するかどうかを決定するためのアッセイ系に供する工程；
Ｃ）該候補物質の内、ＢＥＮＩを調節する因子を同定し、該調節する因子を、ＢＥＮＩの調節因子であると決定する工程；
Ｄ）該ＢＥＮＩの調節因子を生産する工程、
を包含する、方法。
【請求項２７】
前記候補物質が、コンビナトリアルケミストリのライブラリーから選択される、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
請求項２６または２７に記載の方法によって同定された、ＢＥＮＩの調節因子。
【請求項２９】
中胚葉分化に関連する状態の診断方法であって、
Ａ）ＢＥＮＩのレベルを測定する工程
を包含する、方法。
【請求項３０】
さらに、Ｂ）前記ＢＥＮＩのレベルの変化を指標として、中胚葉分化の状態を決定する工程を包含する、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
中胚葉分化に関連する状態の診断試薬であって、ＢＥＮＩに特異的な因子を含む、診断試薬。
【請求項３２】
中胚葉分化に関連する状態の処置または予防の方法であって、
Ａ）ＢＥＮＩのレベルを調節する工程
を包含する、方法。
【請求項３３】
前記調節する工程は、ＢＥＮＩに特異的な因子を用いて達成される、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記ＢＥＮＩに特異的な因子は、ＢＥＮＩまたはその改変体をコードする核酸配列を含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
中胚葉分化に関連する状態の処置または予防のシステムであって、
Ａ）ＢＥＮＩのレベルを調節する手段
を備える、システム。
【請求項３６】
ＢＥＮＩをコードする核酸分子もしくはＢＥＮＩポリペプチドまたはそれらに特異的な因子の、中胚葉分化状態の診断薬の製造のための、使用。
【請求項３７】
ＢＥＮＩをコードする核酸分子もしくはＢＥＮＩポリペプチドまたはそれらに特異的な因子の、中胚葉分化に関連する状態、障害または疾患の処置または予防のための医薬の製造のための、使用。
【請求項３８】
ＢＥＮＩをコードする核酸分子もしくはＢＥＮＩポリペプチドまたはそれらに特異的な因子の、中胚葉分化状態の診断薬の製造のための、使用。

【図１】