腫瘍細胞増殖抑制剤とこれを含有する医薬品組成物、化粧料組成物及び食品組成物
【課題】新規な植物由来の抗腫瘍成分の提供。
【解決手段】乾燥地由来塩生植物であるタマリクス・ガリカ（Ｔａｍａｒｉｘ ｇａｌｌｉｃａ）の抽出物が細胞増殖抑制作用を有することを新規に見出したことから、タマリクス・ガリカ抽出物を有効成分として含有する腫瘍細胞増殖抑制剤と、この腫瘍細胞増殖抑制剤を含有する抗腫瘍医薬品組成物、さらにはタマリクス・ガリカ抽出物を含有する化粧料組成物及び食品組成物を提供する。
【解決手段】乾燥地由来塩生植物であるタマリクス・ガリカ（Ｔａｍａｒｉｘ ｇａｌｌｉｃａ）の抽出物が細胞増殖抑制作用を有することを新規に見出したことから、タマリクス・ガリカ抽出物を有効成分として含有する腫瘍細胞増殖抑制剤と、この腫瘍細胞増殖抑制剤を含有する抗腫瘍医薬品組成物、さらにはタマリクス・ガリカ抽出物を含有する化粧料組成物及び食品組成物を提供する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、腫瘍細胞増殖抑制剤とこれを含有する医薬品組成物、化粧料組成物及び食品組成物に関する。より詳しくは、タマリクス・ガリカの抽出物を有効成分として含有する腫瘍細胞増殖抑制剤等に関する。
【背景技術】
【０００２】
抗腫瘍活性、発癌抑制活性、腫瘍細胞増殖抑制活性等の作用を有する種々の植物が知られており、抗腫瘍剤（抗癌剤、制癌剤とも呼ばれる）、癌の予防用の健康食品等として広く用いられている。
【０００３】
特許文献１には、琉球ヨモギ、ウコンイソマツ及びボタンボウフウの乾燥粉末又はその抽出物を有効成分とする抗腫瘍剤が開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００５−１７９１９３号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、新規な植物由来の抗腫瘍成分を提供することを主な目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、上記課題解決のために鋭意検討した結果、高温、塩及び渇水等の幅広い環境ストレスに対して耐性を有する乾燥地由来塩生植物であるタマリクス・ガリカ（Ｔａｍａｒｉｘ ｇａｌｌｉｃａ）の抽出物が腫瘍細胞増殖抑制作用を有することを新規に見出し、本願発明を完成させるに至った。
すなわち、本発明は、タマリクス・ガリカ（Ｔａｍａｒｉｘ ｇａｌｌｉｃａ）の抽出物を有効成分として含有する腫瘍細胞増殖抑制剤と、この腫瘍細胞増殖抑制剤を含有する抗癌あるいは抗腫瘍医薬品組成物を提供する。
また、本発明は、タマリクス・ガリカ（Ｔａｍａｒｉｘ ｇａｌｌｉｃａ）の抽出物を含有する化粧料組成物及び食品組成物をも提供する。
【０００７】
本発明において、「タマリクス・ガリカ抽出物」には、タマリクス・ガリカの植物体全体、又は葉、茎、花並びにこれらを含む地上部、あるいは果実、種子、根茎、根などから選択される一以上の部位を圧搾または粉砕等することにより得られる液体成分が含まれるものとする。また、「タマリクス・ガリカ抽出物」には、タマリクス・ガリカの植物体全体、又は葉、茎、花並びにこれらを含む地上部、あるいは果実、種子、根茎、根などから選択される一以上の部位から適当な溶媒を用いて抽出される溶出成分も含まれる。
【発明の効果】
【０００８】
本発明により、新規な腫瘍細胞増殖抑制剤が提供される。この腫瘍細胞増殖抑制剤の有効成分は、タマリクス・ガリカ抽出物由来であるため、副作用が少なく安全性に優れたものである可能性が高い。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】タマリクス・ガリカ抽出物の腫瘍細胞増殖抑制活性の評価結果を示す図面代用グラフである（試験例２）。
【図２】タマリクス・ガリカ抽出物の細胞周期制御因子への影響を評価した結果を示す図面代用グラフである（試験例４）。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本発明者らは、実施例において詳しく後述するように、ヒト由来結腸がん細胞を用いた検討により、タマリクス・ガリカ抽出物が腫瘍細胞増殖抑制作用を有することを初めて見出した。このタマリクス・ガリカ抽出物の腫瘍細胞増殖抑制作用は、細胞周期のＧ２／Ｍ期停止を引き起こすことで発現されるものと考えられた。
【００１１】
従って、タマリクス・ガリカ抽出物を有効成分とする本発明に係る腫瘍細胞増殖抑制剤は、癌（特に大腸癌）あるいは腫瘍の治療のため、患者に有効に適用され得る。また、健常者に適用して、癌あるいは腫瘍を予防するためにも用いられ得る。さらに、産業動物に適用して、癌あるいは腫瘍を予防又は治療するためにも用いられ得る。
【００１２】
本発明において、タマリクス・ガリカは、生のままでも乾燥したものでも使用することができる。使用するタマリクス・ガリカの部位は、本発明の目的を損なわなければ特に限定されず、植物体全体、又は葉、茎、花並びにこれらを含む地上部、あるいは果実、種子、根茎、根などから選択される一以上の部位とでき、これらを適宜組み合わせて用いることができる。タマリクス・ガリカの部位は、高い腫瘍細胞増殖抑制活性を示す抽出物を得るため、地上部、花又は葉を用いることが好ましく、花又は葉を用いることが特に好ましい。
【００１３】
タマリクス・ガリカ抽出物は、タマリクス・ガリカを圧搾または粉砕等することにより液体成分として得ることができ、あるいはタマリクス・ガリカを適当な溶媒を用いて抽出することにより溶出成分として得ることもできる。
【００１４】
溶媒抽出は、従来公知の手法によって行うことができる。溶媒抽出は、例えば、タマリクス・ガリカの植物体全体あるいは一以上の部位を低温ないし加温下で溶媒中において所定時間浸漬したり加熱還流したりすることによって行い得る。得られた溶媒抽出物は、必要に応じてろ過や濃縮、イオン交換樹脂や液体クロマトグラフィーなどを用いた精製・分離、凍結乾燥等を行ってもよい。
【００１５】
溶媒には、通常、植物抽出に用いられる溶媒を１種または２種以上選択して用いることができる。溶媒としては、例えば、水、アルコール類、グリコール類、ケトン類、エステル類、エーテル類、ハロゲン化炭素類などを挙げることができる。アルコール類としては、エタノール、メタノールおよびプロパノールなどが挙げられる。グリコール類としては、エチレングリコール、ジエチレングリコール、ブチレングリコールおよびプロピレングリコール等が挙げられる。ケトン類としては、アセトン、メチルエチルケトン等が挙げられる。エステル類としては、酢酸エチル、酢酸プロピル、ギ酸エチルなどが挙げられる。
【００１６】
タマリクス・ガリカ抽出物は、液状（ジュース）、ペースト状、ゲル状等いずれの形態で用いることもできる。タマリクス・ガリカ抽出物は、乾固させて固体状としてもよく、あるいは凍結乾燥やスプレードライ等により乾燥させて粉末状としてもよい。
【００１７】
タマリクス・ガリカ抽出物を有効成分とする本発明に係る腫瘍細胞増殖抑制剤、およびこれを含有する医薬品組成物、化粧料組成物及び食品組成物は、次のような優位性を有する。
【００１８】
すなわち、本発明に係る腫瘍細胞増殖抑制剤は天然物由来成分であるため、その医薬品組成物は長期にわたって連続的に適用できる可能性が高く、副作用も少ない可能性が高い。また、本発明に係る腫瘍細胞増殖抑制剤は、例えば、健康補助食品（機能性食品）や化粧品などとして長期間、連続的に適用することにより、腫瘍細胞の増殖を抑制して癌や腫瘍の発症を予防できる可能性がある。さらに、本発明に係る腫瘍細胞増殖抑制剤を産業動物の飼料に配合すれば、癌や腫瘍の発生を予防できる可能性がある。
【００１９】
本発明に係る医薬品組成物は、例えば、必要に応じて糖衣を施した錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、マイクロカプセル剤などとして経口的に、あるいは水もしくはそれ以外の薬学的に許容し得る液との無菌性溶液または懸濁液剤などの注射剤の形で非経口的に使用できる。医薬品組成物は、上記細胞増殖抑制剤を、生理学的に認められる担体、香味剤、賦形剤、ベヒクル、防腐剤、安定剤、結合剤などとともに一般に認められた製剤実施に要求される単位用量形態で混和することによって製造される。錠剤、カプセル剤などに混和することができる添加剤としては、例えば、ゼラチン、コーンスターチ、トラガント、アラビアゴムのような結合剤、結晶性セルロースのような賦形剤、コーンスターチ、ゼラチン、アルギン酸などのような膨化剤、ステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤、ショ糖、乳糖またはサッカリンのような甘味剤、ペパーミント、アカモノ油またはチェリーのような香味剤などが用いられる。
【００２０】
医薬品組成物の投与量は、剤型の種類、投与方法、投与対象（動物を含む）の年齢や体重、症状等を考慮して決定されるものである。
【００２１】
本発明に係る化粧料組成物は、タマリクス・ガリカ抽出物と公知の化粧品成分とを混合し、例えば、化粧水、ローション、クリーム、パック等として調製ができる。タマリクス・ガリカ抽出物は、腫瘍細胞増殖抑制活性とともに高い抗酸化作用を示したことから、美白作用及び抗老化作用を有する化粧品として利用できる可能性がある。
【００２２】
化粧品成分として、具体的には、流動パラフィン、イソパラフィン、ワセリン、スクワラン、ミツロウ、カルナウバロウ、ラノリン、ミリスチン酸イソプロピル、ミリスチン酸イソパルミチル、ミリスチン酸オクチルドデシル、イソオクチル酸セチル、トリイソオクチル酸グリセリル、トリカプリル酸グリセリル、カプリル酸およびカプリン酸の混合脂肪酸のトリグリセリド、ジイソオクチル酸ネオペンチルグリコールエステル、リンゴ酸ジイソステアリル、イソノナン酸イソノニル、１２−ヒドロキシステアリン酸コレステリル、イソステアリン酸ジペンタエリスリトールエステル、オリーブ油、ホホバ油、月見草油、ユーカリ油、大豆油、菜種油、サフラワー油、パーム油、ゴマ油、米胚芽油、タートル油、ミンク油、ステアリン酸、オレイン酸、ベヘニン酸、ステアリルアルコール、セタノール、ベヘニルアルコール等の油性成分、ポリオキシエチレンセチルエーテル、ポリオキシエチレンオレイルエーテル、ポリオキシエチレンステアリルエーテル、ポリオキシエチレンノニルフェニルエーテル、ポリオキシエチレンラウリルエーテル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンソルビトールテトラオレエート、ソルビタンモノオレエート、ソルビタントリステアレート、グリセリルモノオレエート、グリセリルモノステアレート、レシチン、リゾレシチン、ポリグリセリンやショ糖と前記脂肪酸とのモノ、ジ、トリまたはテトラエステル等の界面活性剤、多価アルコール類、ヒアルロン酸、コラーゲン、エラスチン、天然保湿因子（NMF）、ピロリドンカルボン酸ソーダ、スフィンゴ脂質、リン脂質、コレステロール等の保湿剤、カルボキシビニルポリマー、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルアルコール、カラギーナン等の増粘剤、メチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、ブチルパラベン、安息香酸ナトリウム等の防腐剤、タルク、カオリン、マイカ、ベントナイト、雲母、雲母チタン、酸化チタン、ベンガラ、酸化鉄等の顔料、クエン酸−クエン酸ナトリウム等のpH、BHT、BHA、ビタミンA類およびそれらの誘導体並びにそれらの塩、ビタミンC類およびそれらの誘導体並びにそれらの塩、ビタミンE類およびそれらの誘導体並びにそれらの塩等の抗酸化剤、ベンゾフェノン誘導体、パラアミノ安息香酸誘導体、メトキシケイ皮酸誘導体、ウロカニン酸等の紫外線吸収剤などが挙げられる。タマリクス・ガリカ抽出物にこれらの成分を組み合わせて適量配合し、加温もしくは非加温状態で、混合、分散、乳化あるいは溶解させ、液状、ペースト状、ゲル状、クリーム状（半固形状を含む）または固形状とし、化粧料組成物を得る。
【００２３】
また、本発明に係る食品組成物は、タマリクス・ガリカあるいはその抽出物に、ブドウ糖、果糖、ショ糖、マルトース、ソルビトール、ステビオサイド、ルブソサイド、コーンシロップ、乳糖、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸、乳酸、Ｌ−アスコルビン酸、ｄｌ−α−トコフェロール、エリソルビン酸ナトリウム、グリセリン、プロピレングリコール、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、アラビアガム、カラギーナン、カゼイン、ゼラチン、ペクチン、寒天、ビタミンＢ類、ニコチン酸アミド、パントテン酸カルシウム、アミノ酸類、カルシウム塩類、色素、香料、保存剤等の通常食品原料として使用されているものを適宜配合することにより製造できる。また、一般に食品材料として使用される米、小麦、トウモロコシ、ジャガイモ、スイートポテト、大豆、昆布、ワカメ、テングサなどと混合してもよい。
【００２４】
食品組成物としては、例えば、健康食品、機能性食品、特定保健用食品、栄養補助食品、経腸栄養食品等を挙げることができる。さらに、これらの食品組成物は、動物に給餌するための飼料をも包含する。
【００２５】
飼料は、タマリクス・ガリカあるいはその抽出物と、生草や乾草、青刈飼料作物（青刈トウモロコシ等）、わら類、生草や乾草、青刈飼料作物（青刈トウモロコシ等）、わら類等と混合することにより得ることができる。
【００２６】
一般に、家畜の飼料は、粗飼料、濃厚飼料、および特殊飼料の３種類に大別される。このうち、粗飼料は相対的に粗繊維含量が多く、容積が多い割には可消化栄養分が少ない飼料を指す。粗飼料には、生草や乾草、青刈飼料作物（青刈トウモロコシ等）、根菜類、わら類などが用いられている。また、濃厚飼料は比較的養分含量が高く、水分や粗繊維含量の低い飼料を指す。濃厚飼料には、トウモロコシ、マイロ、大麦、エンバク、米、アワ、ヒエ、キビ、コーリャンなどの穀類や、米糠、ふすま類などの穀物副産物（糠類）、落花生粕、綿実粕、ヒマワリ粕、菜種粕、胡麻粕、亜麻仁粕などの油粕類などが用いられている。
【００２７】
飼料は、これらの飼料に、タマリクス・ガリカの植物体全体、又は葉、茎、花並びにこれらを含む地上部、あるいは果実、種子、根茎、根を、生の状態であるいは乾燥物として添加することにより製造できる。この場合、タマリクス・ガリカは、切断あるいは粉砕して添加すればよい。また、飼料は、市販の飼料に、タマリクス・ガリカ抽出物を添加することによっても製造できる。
【実施例】
【００２８】
＜試験例１＞
１．タマリクス・ガリカ抽出物における抗酸化物質と抗酸化活性の評価
タマリクス・ガリカ抽出物に含まれる抗酸化物質量及び抗酸化活性を明らかにするために、タマリクス・ガリカの異なる器官から各々抽出物を回収し、解析を行った。
【００２９】
まず、本試験例に使用するタマリクス・ガリカ抽出物を得るために、地上部（Ｓｈｏｏｔ）、花及び葉の各器官を生殖生長期に回収した。得られた試料は各々１週間室温に置き、その後１時間５０℃で乾燥させた。抽出は、乾燥物２０ｇに対して８０％メタノール溶液を２００ｍｌ用いて、ソックスレー抽出器を用いて行った。抽出物はフィルターでろ過し、４℃に保存した。
【００３０】
タマリクス・ガリカから得られた抽出物について、抗酸化物質（総ポリフェノール、フラボノイド、タンニン）の濃度を測定した。総ポリフェノール量はフォーリン・チオカルト（Folin ・Ciocalteu）法に従って行い、没食子酸を検量線作成に用い、没食子酸相当量（mg GAE (gallic acid equivalents) /g DW (Dry Weight) として算出した。フラボノイド及びタンニンはカテキンで検量線を作成し、カテキン相当量（mg CE (Catechin equivalents) /g DW）として算出した。
【００３１】
タマリクス・ガリカ抽出物における抗酸化活性の測定は以下の方法で行った。抗ラジカル活性は、ＤＰＰＨ（1,1-Diphenyl-2- Picrylhydrazyl）法に従い、５０％阻害濃度（ＩＣ５０）を算出した。抽出物の抗酸化力については、常法に従いリンモリブデンを用いて没食子酸で検量線を作成し、没食子酸相当量として算出した。抽出物の還元力については、Ｆｅ３+からＦｅ２+への還元を指標に、ＥＣ５０（efficient concentration ５０）として算出した。
【００３２】
地上部由来のタマリクス・ガリカ抽出物における抗酸化物質の濃度及び活性を「表１」及び「表２」に示す。「表１」には、本試験例で得られた地上部由来のタマリクス・ガリカ抽出物について、抗酸化物質として、総ポリフェノール、フラボノイド、タンニンの各濃度を示す。また「表２」には、抗ラジカル活性、抗酸化力、還元力について算出された値を示す。
【００３３】
【表１】
【００３４】
【表２】
【００３５】
「表１」及び「表２」の結果から、タマリクス・ガリカ抽出物には抗酸化物質が含まれ、抗酸化活性を有していることが示された。
【００３６】
＜試験例２＞
２．腫瘍細胞増殖抑制活性の評価
タマリクス・ガリカ抽出物の癌細胞への効果を検証するために、ヒト結腸癌由来のＣａｃｏ‐２細胞を用いて、腫瘍細胞増殖抑制活性について評価を行った。
【００３７】
本試験例では、試験例１に記した方法と同様にタマリクス・ガリカの地上部、花及び葉を乾燥させた。粉末状にした各器官の乾燥物１０ｇに対して８０％メタノール溶液を１００ｍｌ用いて、１週間室温に置いてタマリクス・ガリカ抽出物を得た。抽出物はフィルター滅菌を行い、乾固後ＤＭＳＯに特定の濃度に溶解し、使用まで−８０℃に保存した。
【００３８】
Ｃａｃｏ‐２細胞は、常法に従い培養を行い、一定の細胞密度に達した時点で各器官由来の抽出物を添加し、添加後７２時間においてＭＴＴアッセイを行い細胞の増殖率を測定した。
【００３９】
図１は、タマリクス・ガリカ抽出物を添加していないコントロール（ＣＴＲ）の細胞増殖率を１００として、抽出物を０．０１〜１００μｇ／ｍｌ濃度で添加した細胞の増殖率を相対的に示す。（Ａ）は地上部由来の抽出物、（Ｂ）は花由来の抽出物、（Ｃ）は葉由来の抽出物について示し、各グラフにおいて縦軸は細胞増殖率を、横軸はタマリクス・ガリカ抽出物の各濃度を示す。
【００４０】
Ｃａｃｏ‐２細胞の増殖は、各器官由来のタマリクス・ガリカ抽出物の添加によって抑制されることが示された。また、抑制の効果は何れの器官由来の抽出物についても濃度依存的であったが、特に花と葉由来の抽出物において顕著であった。
【００４１】
＜試験例３＞
３．細胞周期への影響の評価
試験例１において、タマリクス・ガリカ抽出物がヒト直腸癌由来の癌細胞に対し増殖抑制効果を示したことから、癌細胞の細胞周期へ抽出物が与える影響について検証を行った。
【００４２】
一定の細胞密度に達したＣａｃｏ‐２細胞に各器官由来のタマリクス・ガリカ抽出物を１００μｇ／ｍｌの濃度で添加した。添加後７２時間における細胞培養容器内の浮遊状態および接着状態の両方の細胞を回収し、７０％エタノールで固定し、解析に使用するまで−２０℃に保存した。回収した細胞は常法に従い、ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ｒｅａｇｅｎｔ（Ｇｕａｖａ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で処理し、フローサイトメーターを用いて細胞核ＤＮＡ量を指標として、細胞周期を解析した。
【００４３】
【表３】
【００４４】
「表３」は抽出物を添加していないコントロール（ＣＴＲ）及び各器官由来の抽出物添加した細胞の各々の試験群における細胞周期の解析結果を示す。何れの器官由来の抽出物を添加した細胞においても、コントロールに比べＧ２／Ｍ期の細胞の割合が高く、一方で、Ｓ期とＧ０／Ｇ１期の細胞の割合が低かった。この結果から、各器官由来のタマリクス・ガリカ抽出物はいずれも、Ｃａｃｏ‐２細胞をＧ２／Ｍ期に停止させる効果を有し、細胞周期に影響を及ぼすことが確認された。
【００４５】
＜試験例４＞
４．細胞周期制御因子への影響の評価
試験例３の結果から、タマリクス・ガリカ抽出物は、Ｃａｃｏ‐２細胞の細胞周期へ影響を与えることが示された。細胞周期の進行は、プロテインキナーゼ複合体のファミリーとこれらの活性化に関与するＣｙｃｌｉｎや、チェックポイントキナーゼによって調節されている。そこで、タマリクス・ガリカ抽出物を添加後のＣａｃｏ‐２細胞において細胞周期の制御に関連するタンパク質の発現量及び活性化の変化を、ウェスタンブロッティングにより検証した。
【００４６】
一定の細胞密度に達したＣａｃｏ−２細胞を各器官由来の抽出物（濃度：１００μｇ／ｍｌ）の存在下で７２時間培養した。培養後、細胞をＰＢＳで洗浄し、ＲＩＰＡ緩衝液で溶解し、遠心後、上清を回収した。上清のタンパク質濃度を測定し、各試験群について２０μｇをＳＤＳ−ポリアクリルアミド電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）によって分離し、ニトロセルロース膜に転写した。
【００４７】
解析対象であるＣｙｃｌｉｎ Ｂ１、Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｓｉｇｎａｌ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｋｉｎａｓｅ（Ｅｒｋ）１／２、Ｃｈｋ１、Ｃｈｋ２、ｐ３８ ＭＡＰＫ、の各々のタンパク質に対する抗体を用いて、常法に従いウェスタンブロッティングにより各タンパク質の発現量を試験群間で比較した。また前記タンパク質の活性化量を調べるために、リン酸化（ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ、ｐ）修飾を受けたｐＥｒｋ１／２、ｐＣｈｋ１、ｐＣｈｋ２、ｐｐ３８ ＭＡＰＫについてもウェスタンブロッティングによる検出を行い、試験群間で比較した。
【００４８】
図２は、コントロール（ＣＴＲ）及びタマリクス・ガリカ抽出物を添加した各試験群の、ＤＮＡ合成を制御する各タンパク質の発現量及び活性化（リン酸化）量についてのウェスタンブロッティングの結果を示す。花及び葉由来のタマリクス・ガリカ抽出物を添加した試験群においては、腫瘍細胞の成長を促進するＥｒｋ１／２の活性化の抑制と、細胞の成長を阻害するｐ３８ ＭＡＰＫの活性化が認められた。花及び葉由来の抽出物を添加した細胞においては、Ｅｒｋ１／２とｐ３８ ＭＡＰＫの均衡の変化を介して細胞周期の停止が誘導されることが示唆された。
【００４９】
一方、地上部由来の抽出物を添加した試験群においては、Ｃｈｋ２の活性化が認められた。これは、花由来の抽出物を添加した試験群においても同様に認められたが、葉由来の抽出物を添加した試験群では認められなかった。この結果は、同じタマリクス・ガリカ由来の抽出物であっても用いる器官によって、細胞周期へ働く機構が異なることを示している。
【００５０】
なお、Ｇ２期からＭ期への移行に重要なタンパク質であるＣｙｃｌｉｎ Ｂ１の発現量はタマリクス・ガリカ抽出物を添加した各試験群において変化が認められなかった。また、細胞周期においてチェックポイント機構を担い、細胞周期を停止へと導くチェックポイントキナーゼであるＣｈｋ１の活性化についても各試験群間で変化が認められなかった。
【００５１】
以上の各試験例の結果から、タマリクス・ガリカ抽出物には抗酸化物質が含まれ、抗酸化活性を有していることが示された。また、地上部、花及び葉の各器官由来のタマリクス・ガリカ抽出物は、何れも結腸癌由来の癌細胞に対して増殖抑制効果を有し、その効果は癌細胞における細胞周期の停止を介していることが明らかとなった。特に、花と葉由来の抽出物では、濃度依存的な細胞増殖抑制効果が認められた。一方、花及び葉由来の抽出物と地上部由来の抽出物とでは、細胞周期を制御するタンパク質の活性化に差異が認められた。これは、タマリクス・ガリカ抽出物が細胞に効果をもたらす機構は複数であることを示している。
【産業上の利用可能性】
【００５２】
本発明に係る腫瘍細胞増殖抑制剤は、ヒトおよび動物の癌又は腫瘍の治療又は予防のための医薬品組成物、化粧料組成物及び食品組成物として好適に利用できる。特に、本発明に係る腫瘍細胞増殖抑制剤は、ヒト由来結腸がん細胞に対して細胞増殖抑制作用を示すことが確認されていることから、大腸癌の治療又は予防のために利用され得る。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、腫瘍細胞増殖抑制剤とこれを含有する医薬品組成物、化粧料組成物及び食品組成物に関する。より詳しくは、タマリクス・ガリカの抽出物を有効成分として含有する腫瘍細胞増殖抑制剤等に関する。
【背景技術】
【０００２】
抗腫瘍活性、発癌抑制活性、腫瘍細胞増殖抑制活性等の作用を有する種々の植物が知られており、抗腫瘍剤（抗癌剤、制癌剤とも呼ばれる）、癌の予防用の健康食品等として広く用いられている。
【０００３】
特許文献１には、琉球ヨモギ、ウコンイソマツ及びボタンボウフウの乾燥粉末又はその抽出物を有効成分とする抗腫瘍剤が開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００４】
【特許文献１】特開２００５−１７９１９３号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、新規な植物由来の抗腫瘍成分を提供することを主な目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、上記課題解決のために鋭意検討した結果、高温、塩及び渇水等の幅広い環境ストレスに対して耐性を有する乾燥地由来塩生植物であるタマリクス・ガリカ（Ｔａｍａｒｉｘ ｇａｌｌｉｃａ）の抽出物が腫瘍細胞増殖抑制作用を有することを新規に見出し、本願発明を完成させるに至った。
すなわち、本発明は、タマリクス・ガリカ（Ｔａｍａｒｉｘ ｇａｌｌｉｃａ）の抽出物を有効成分として含有する腫瘍細胞増殖抑制剤と、この腫瘍細胞増殖抑制剤を含有する抗癌あるいは抗腫瘍医薬品組成物を提供する。
また、本発明は、タマリクス・ガリカ（Ｔａｍａｒｉｘ ｇａｌｌｉｃａ）の抽出物を含有する化粧料組成物及び食品組成物をも提供する。
【０００７】
本発明において、「タマリクス・ガリカ抽出物」には、タマリクス・ガリカの植物体全体、又は葉、茎、花並びにこれらを含む地上部、あるいは果実、種子、根茎、根などから選択される一以上の部位を圧搾または粉砕等することにより得られる液体成分が含まれるものとする。また、「タマリクス・ガリカ抽出物」には、タマリクス・ガリカの植物体全体、又は葉、茎、花並びにこれらを含む地上部、あるいは果実、種子、根茎、根などから選択される一以上の部位から適当な溶媒を用いて抽出される溶出成分も含まれる。
【発明の効果】
【０００８】
本発明により、新規な腫瘍細胞増殖抑制剤が提供される。この腫瘍細胞増殖抑制剤の有効成分は、タマリクス・ガリカ抽出物由来であるため、副作用が少なく安全性に優れたものである可能性が高い。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１】タマリクス・ガリカ抽出物の腫瘍細胞増殖抑制活性の評価結果を示す図面代用グラフである（試験例２）。
【図２】タマリクス・ガリカ抽出物の細胞周期制御因子への影響を評価した結果を示す図面代用グラフである（試験例４）。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本発明者らは、実施例において詳しく後述するように、ヒト由来結腸がん細胞を用いた検討により、タマリクス・ガリカ抽出物が腫瘍細胞増殖抑制作用を有することを初めて見出した。このタマリクス・ガリカ抽出物の腫瘍細胞増殖抑制作用は、細胞周期のＧ２／Ｍ期停止を引き起こすことで発現されるものと考えられた。
【００１１】
従って、タマリクス・ガリカ抽出物を有効成分とする本発明に係る腫瘍細胞増殖抑制剤は、癌（特に大腸癌）あるいは腫瘍の治療のため、患者に有効に適用され得る。また、健常者に適用して、癌あるいは腫瘍を予防するためにも用いられ得る。さらに、産業動物に適用して、癌あるいは腫瘍を予防又は治療するためにも用いられ得る。
【００１２】
本発明において、タマリクス・ガリカは、生のままでも乾燥したものでも使用することができる。使用するタマリクス・ガリカの部位は、本発明の目的を損なわなければ特に限定されず、植物体全体、又は葉、茎、花並びにこれらを含む地上部、あるいは果実、種子、根茎、根などから選択される一以上の部位とでき、これらを適宜組み合わせて用いることができる。タマリクス・ガリカの部位は、高い腫瘍細胞増殖抑制活性を示す抽出物を得るため、地上部、花又は葉を用いることが好ましく、花又は葉を用いることが特に好ましい。
【００１３】
タマリクス・ガリカ抽出物は、タマリクス・ガリカを圧搾または粉砕等することにより液体成分として得ることができ、あるいはタマリクス・ガリカを適当な溶媒を用いて抽出することにより溶出成分として得ることもできる。
【００１４】
溶媒抽出は、従来公知の手法によって行うことができる。溶媒抽出は、例えば、タマリクス・ガリカの植物体全体あるいは一以上の部位を低温ないし加温下で溶媒中において所定時間浸漬したり加熱還流したりすることによって行い得る。得られた溶媒抽出物は、必要に応じてろ過や濃縮、イオン交換樹脂や液体クロマトグラフィーなどを用いた精製・分離、凍結乾燥等を行ってもよい。
【００１５】
溶媒には、通常、植物抽出に用いられる溶媒を１種または２種以上選択して用いることができる。溶媒としては、例えば、水、アルコール類、グリコール類、ケトン類、エステル類、エーテル類、ハロゲン化炭素類などを挙げることができる。アルコール類としては、エタノール、メタノールおよびプロパノールなどが挙げられる。グリコール類としては、エチレングリコール、ジエチレングリコール、ブチレングリコールおよびプロピレングリコール等が挙げられる。ケトン類としては、アセトン、メチルエチルケトン等が挙げられる。エステル類としては、酢酸エチル、酢酸プロピル、ギ酸エチルなどが挙げられる。
【００１６】
タマリクス・ガリカ抽出物は、液状（ジュース）、ペースト状、ゲル状等いずれの形態で用いることもできる。タマリクス・ガリカ抽出物は、乾固させて固体状としてもよく、あるいは凍結乾燥やスプレードライ等により乾燥させて粉末状としてもよい。
【００１７】
タマリクス・ガリカ抽出物を有効成分とする本発明に係る腫瘍細胞増殖抑制剤、およびこれを含有する医薬品組成物、化粧料組成物及び食品組成物は、次のような優位性を有する。
【００１８】
すなわち、本発明に係る腫瘍細胞増殖抑制剤は天然物由来成分であるため、その医薬品組成物は長期にわたって連続的に適用できる可能性が高く、副作用も少ない可能性が高い。また、本発明に係る腫瘍細胞増殖抑制剤は、例えば、健康補助食品（機能性食品）や化粧品などとして長期間、連続的に適用することにより、腫瘍細胞の増殖を抑制して癌や腫瘍の発症を予防できる可能性がある。さらに、本発明に係る腫瘍細胞増殖抑制剤を産業動物の飼料に配合すれば、癌や腫瘍の発生を予防できる可能性がある。
【００１９】
本発明に係る医薬品組成物は、例えば、必要に応じて糖衣を施した錠剤、カプセル剤、エリキシル剤、マイクロカプセル剤などとして経口的に、あるいは水もしくはそれ以外の薬学的に許容し得る液との無菌性溶液または懸濁液剤などの注射剤の形で非経口的に使用できる。医薬品組成物は、上記細胞増殖抑制剤を、生理学的に認められる担体、香味剤、賦形剤、ベヒクル、防腐剤、安定剤、結合剤などとともに一般に認められた製剤実施に要求される単位用量形態で混和することによって製造される。錠剤、カプセル剤などに混和することができる添加剤としては、例えば、ゼラチン、コーンスターチ、トラガント、アラビアゴムのような結合剤、結晶性セルロースのような賦形剤、コーンスターチ、ゼラチン、アルギン酸などのような膨化剤、ステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤、ショ糖、乳糖またはサッカリンのような甘味剤、ペパーミント、アカモノ油またはチェリーのような香味剤などが用いられる。
【００２０】
医薬品組成物の投与量は、剤型の種類、投与方法、投与対象（動物を含む）の年齢や体重、症状等を考慮して決定されるものである。
【００２１】
本発明に係る化粧料組成物は、タマリクス・ガリカ抽出物と公知の化粧品成分とを混合し、例えば、化粧水、ローション、クリーム、パック等として調製ができる。タマリクス・ガリカ抽出物は、腫瘍細胞増殖抑制活性とともに高い抗酸化作用を示したことから、美白作用及び抗老化作用を有する化粧品として利用できる可能性がある。
【００２２】
化粧品成分として、具体的には、流動パラフィン、イソパラフィン、ワセリン、スクワラン、ミツロウ、カルナウバロウ、ラノリン、ミリスチン酸イソプロピル、ミリスチン酸イソパルミチル、ミリスチン酸オクチルドデシル、イソオクチル酸セチル、トリイソオクチル酸グリセリル、トリカプリル酸グリセリル、カプリル酸およびカプリン酸の混合脂肪酸のトリグリセリド、ジイソオクチル酸ネオペンチルグリコールエステル、リンゴ酸ジイソステアリル、イソノナン酸イソノニル、１２−ヒドロキシステアリン酸コレステリル、イソステアリン酸ジペンタエリスリトールエステル、オリーブ油、ホホバ油、月見草油、ユーカリ油、大豆油、菜種油、サフラワー油、パーム油、ゴマ油、米胚芽油、タートル油、ミンク油、ステアリン酸、オレイン酸、ベヘニン酸、ステアリルアルコール、セタノール、ベヘニルアルコール等の油性成分、ポリオキシエチレンセチルエーテル、ポリオキシエチレンオレイルエーテル、ポリオキシエチレンステアリルエーテル、ポリオキシエチレンノニルフェニルエーテル、ポリオキシエチレンラウリルエーテル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンソルビトールテトラオレエート、ソルビタンモノオレエート、ソルビタントリステアレート、グリセリルモノオレエート、グリセリルモノステアレート、レシチン、リゾレシチン、ポリグリセリンやショ糖と前記脂肪酸とのモノ、ジ、トリまたはテトラエステル等の界面活性剤、多価アルコール類、ヒアルロン酸、コラーゲン、エラスチン、天然保湿因子（NMF）、ピロリドンカルボン酸ソーダ、スフィンゴ脂質、リン脂質、コレステロール等の保湿剤、カルボキシビニルポリマー、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルアルコール、カラギーナン等の増粘剤、メチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、ブチルパラベン、安息香酸ナトリウム等の防腐剤、タルク、カオリン、マイカ、ベントナイト、雲母、雲母チタン、酸化チタン、ベンガラ、酸化鉄等の顔料、クエン酸−クエン酸ナトリウム等のpH、BHT、BHA、ビタミンA類およびそれらの誘導体並びにそれらの塩、ビタミンC類およびそれらの誘導体並びにそれらの塩、ビタミンE類およびそれらの誘導体並びにそれらの塩等の抗酸化剤、ベンゾフェノン誘導体、パラアミノ安息香酸誘導体、メトキシケイ皮酸誘導体、ウロカニン酸等の紫外線吸収剤などが挙げられる。タマリクス・ガリカ抽出物にこれらの成分を組み合わせて適量配合し、加温もしくは非加温状態で、混合、分散、乳化あるいは溶解させ、液状、ペースト状、ゲル状、クリーム状（半固形状を含む）または固形状とし、化粧料組成物を得る。
【００２３】
また、本発明に係る食品組成物は、タマリクス・ガリカあるいはその抽出物に、ブドウ糖、果糖、ショ糖、マルトース、ソルビトール、ステビオサイド、ルブソサイド、コーンシロップ、乳糖、クエン酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸、乳酸、Ｌ−アスコルビン酸、ｄｌ−α−トコフェロール、エリソルビン酸ナトリウム、グリセリン、プロピレングリコール、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、アラビアガム、カラギーナン、カゼイン、ゼラチン、ペクチン、寒天、ビタミンＢ類、ニコチン酸アミド、パントテン酸カルシウム、アミノ酸類、カルシウム塩類、色素、香料、保存剤等の通常食品原料として使用されているものを適宜配合することにより製造できる。また、一般に食品材料として使用される米、小麦、トウモロコシ、ジャガイモ、スイートポテト、大豆、昆布、ワカメ、テングサなどと混合してもよい。
【００２４】
食品組成物としては、例えば、健康食品、機能性食品、特定保健用食品、栄養補助食品、経腸栄養食品等を挙げることができる。さらに、これらの食品組成物は、動物に給餌するための飼料をも包含する。
【００２５】
飼料は、タマリクス・ガリカあるいはその抽出物と、生草や乾草、青刈飼料作物（青刈トウモロコシ等）、わら類、生草や乾草、青刈飼料作物（青刈トウモロコシ等）、わら類等と混合することにより得ることができる。
【００２６】
一般に、家畜の飼料は、粗飼料、濃厚飼料、および特殊飼料の３種類に大別される。このうち、粗飼料は相対的に粗繊維含量が多く、容積が多い割には可消化栄養分が少ない飼料を指す。粗飼料には、生草や乾草、青刈飼料作物（青刈トウモロコシ等）、根菜類、わら類などが用いられている。また、濃厚飼料は比較的養分含量が高く、水分や粗繊維含量の低い飼料を指す。濃厚飼料には、トウモロコシ、マイロ、大麦、エンバク、米、アワ、ヒエ、キビ、コーリャンなどの穀類や、米糠、ふすま類などの穀物副産物（糠類）、落花生粕、綿実粕、ヒマワリ粕、菜種粕、胡麻粕、亜麻仁粕などの油粕類などが用いられている。
【００２７】
飼料は、これらの飼料に、タマリクス・ガリカの植物体全体、又は葉、茎、花並びにこれらを含む地上部、あるいは果実、種子、根茎、根を、生の状態であるいは乾燥物として添加することにより製造できる。この場合、タマリクス・ガリカは、切断あるいは粉砕して添加すればよい。また、飼料は、市販の飼料に、タマリクス・ガリカ抽出物を添加することによっても製造できる。
【実施例】
【００２８】
＜試験例１＞
１．タマリクス・ガリカ抽出物における抗酸化物質と抗酸化活性の評価
タマリクス・ガリカ抽出物に含まれる抗酸化物質量及び抗酸化活性を明らかにするために、タマリクス・ガリカの異なる器官から各々抽出物を回収し、解析を行った。
【００２９】
まず、本試験例に使用するタマリクス・ガリカ抽出物を得るために、地上部（Ｓｈｏｏｔ）、花及び葉の各器官を生殖生長期に回収した。得られた試料は各々１週間室温に置き、その後１時間５０℃で乾燥させた。抽出は、乾燥物２０ｇに対して８０％メタノール溶液を２００ｍｌ用いて、ソックスレー抽出器を用いて行った。抽出物はフィルターでろ過し、４℃に保存した。
【００３０】
タマリクス・ガリカから得られた抽出物について、抗酸化物質（総ポリフェノール、フラボノイド、タンニン）の濃度を測定した。総ポリフェノール量はフォーリン・チオカルト（Folin ・Ciocalteu）法に従って行い、没食子酸を検量線作成に用い、没食子酸相当量（mg GAE (gallic acid equivalents) /g DW (Dry Weight) として算出した。フラボノイド及びタンニンはカテキンで検量線を作成し、カテキン相当量（mg CE (Catechin equivalents) /g DW）として算出した。
【００３１】
タマリクス・ガリカ抽出物における抗酸化活性の測定は以下の方法で行った。抗ラジカル活性は、ＤＰＰＨ（1,1-Diphenyl-2- Picrylhydrazyl）法に従い、５０％阻害濃度（ＩＣ５０）を算出した。抽出物の抗酸化力については、常法に従いリンモリブデンを用いて没食子酸で検量線を作成し、没食子酸相当量として算出した。抽出物の還元力については、Ｆｅ３+からＦｅ２+への還元を指標に、ＥＣ５０（efficient concentration ５０）として算出した。
【００３２】
地上部由来のタマリクス・ガリカ抽出物における抗酸化物質の濃度及び活性を「表１」及び「表２」に示す。「表１」には、本試験例で得られた地上部由来のタマリクス・ガリカ抽出物について、抗酸化物質として、総ポリフェノール、フラボノイド、タンニンの各濃度を示す。また「表２」には、抗ラジカル活性、抗酸化力、還元力について算出された値を示す。
【００３３】
【表１】
【００３４】
【表２】
【００３５】
「表１」及び「表２」の結果から、タマリクス・ガリカ抽出物には抗酸化物質が含まれ、抗酸化活性を有していることが示された。
【００３６】
＜試験例２＞
２．腫瘍細胞増殖抑制活性の評価
タマリクス・ガリカ抽出物の癌細胞への効果を検証するために、ヒト結腸癌由来のＣａｃｏ‐２細胞を用いて、腫瘍細胞増殖抑制活性について評価を行った。
【００３７】
本試験例では、試験例１に記した方法と同様にタマリクス・ガリカの地上部、花及び葉を乾燥させた。粉末状にした各器官の乾燥物１０ｇに対して８０％メタノール溶液を１００ｍｌ用いて、１週間室温に置いてタマリクス・ガリカ抽出物を得た。抽出物はフィルター滅菌を行い、乾固後ＤＭＳＯに特定の濃度に溶解し、使用まで−８０℃に保存した。
【００３８】
Ｃａｃｏ‐２細胞は、常法に従い培養を行い、一定の細胞密度に達した時点で各器官由来の抽出物を添加し、添加後７２時間においてＭＴＴアッセイを行い細胞の増殖率を測定した。
【００３９】
図１は、タマリクス・ガリカ抽出物を添加していないコントロール（ＣＴＲ）の細胞増殖率を１００として、抽出物を０．０１〜１００μｇ／ｍｌ濃度で添加した細胞の増殖率を相対的に示す。（Ａ）は地上部由来の抽出物、（Ｂ）は花由来の抽出物、（Ｃ）は葉由来の抽出物について示し、各グラフにおいて縦軸は細胞増殖率を、横軸はタマリクス・ガリカ抽出物の各濃度を示す。
【００４０】
Ｃａｃｏ‐２細胞の増殖は、各器官由来のタマリクス・ガリカ抽出物の添加によって抑制されることが示された。また、抑制の効果は何れの器官由来の抽出物についても濃度依存的であったが、特に花と葉由来の抽出物において顕著であった。
【００４１】
＜試験例３＞
３．細胞周期への影響の評価
試験例１において、タマリクス・ガリカ抽出物がヒト直腸癌由来の癌細胞に対し増殖抑制効果を示したことから、癌細胞の細胞周期へ抽出物が与える影響について検証を行った。
【００４２】
一定の細胞密度に達したＣａｃｏ‐２細胞に各器官由来のタマリクス・ガリカ抽出物を１００μｇ／ｍｌの濃度で添加した。添加後７２時間における細胞培養容器内の浮遊状態および接着状態の両方の細胞を回収し、７０％エタノールで固定し、解析に使用するまで−２０℃に保存した。回収した細胞は常法に従い、ｃｅｌｌ ｃｙｃｌｅ ｒｅａｇｅｎｔ（Ｇｕａｖａ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）で処理し、フローサイトメーターを用いて細胞核ＤＮＡ量を指標として、細胞周期を解析した。
【００４３】
【表３】
【００４４】
「表３」は抽出物を添加していないコントロール（ＣＴＲ）及び各器官由来の抽出物添加した細胞の各々の試験群における細胞周期の解析結果を示す。何れの器官由来の抽出物を添加した細胞においても、コントロールに比べＧ２／Ｍ期の細胞の割合が高く、一方で、Ｓ期とＧ０／Ｇ１期の細胞の割合が低かった。この結果から、各器官由来のタマリクス・ガリカ抽出物はいずれも、Ｃａｃｏ‐２細胞をＧ２／Ｍ期に停止させる効果を有し、細胞周期に影響を及ぼすことが確認された。
【００４５】
＜試験例４＞
４．細胞周期制御因子への影響の評価
試験例３の結果から、タマリクス・ガリカ抽出物は、Ｃａｃｏ‐２細胞の細胞周期へ影響を与えることが示された。細胞周期の進行は、プロテインキナーゼ複合体のファミリーとこれらの活性化に関与するＣｙｃｌｉｎや、チェックポイントキナーゼによって調節されている。そこで、タマリクス・ガリカ抽出物を添加後のＣａｃｏ‐２細胞において細胞周期の制御に関連するタンパク質の発現量及び活性化の変化を、ウェスタンブロッティングにより検証した。
【００４６】
一定の細胞密度に達したＣａｃｏ−２細胞を各器官由来の抽出物（濃度：１００μｇ／ｍｌ）の存在下で７２時間培養した。培養後、細胞をＰＢＳで洗浄し、ＲＩＰＡ緩衝液で溶解し、遠心後、上清を回収した。上清のタンパク質濃度を測定し、各試験群について２０μｇをＳＤＳ−ポリアクリルアミド電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）によって分離し、ニトロセルロース膜に転写した。
【００４７】
解析対象であるＣｙｃｌｉｎ Ｂ１、Ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｓｉｇｎａｌ−ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｋｉｎａｓｅ（Ｅｒｋ）１／２、Ｃｈｋ１、Ｃｈｋ２、ｐ３８ ＭＡＰＫ、の各々のタンパク質に対する抗体を用いて、常法に従いウェスタンブロッティングにより各タンパク質の発現量を試験群間で比較した。また前記タンパク質の活性化量を調べるために、リン酸化（ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ、ｐ）修飾を受けたｐＥｒｋ１／２、ｐＣｈｋ１、ｐＣｈｋ２、ｐｐ３８ ＭＡＰＫについてもウェスタンブロッティングによる検出を行い、試験群間で比較した。
【００４８】
図２は、コントロール（ＣＴＲ）及びタマリクス・ガリカ抽出物を添加した各試験群の、ＤＮＡ合成を制御する各タンパク質の発現量及び活性化（リン酸化）量についてのウェスタンブロッティングの結果を示す。花及び葉由来のタマリクス・ガリカ抽出物を添加した試験群においては、腫瘍細胞の成長を促進するＥｒｋ１／２の活性化の抑制と、細胞の成長を阻害するｐ３８ ＭＡＰＫの活性化が認められた。花及び葉由来の抽出物を添加した細胞においては、Ｅｒｋ１／２とｐ３８ ＭＡＰＫの均衡の変化を介して細胞周期の停止が誘導されることが示唆された。
【００４９】
一方、地上部由来の抽出物を添加した試験群においては、Ｃｈｋ２の活性化が認められた。これは、花由来の抽出物を添加した試験群においても同様に認められたが、葉由来の抽出物を添加した試験群では認められなかった。この結果は、同じタマリクス・ガリカ由来の抽出物であっても用いる器官によって、細胞周期へ働く機構が異なることを示している。
【００５０】
なお、Ｇ２期からＭ期への移行に重要なタンパク質であるＣｙｃｌｉｎ Ｂ１の発現量はタマリクス・ガリカ抽出物を添加した各試験群において変化が認められなかった。また、細胞周期においてチェックポイント機構を担い、細胞周期を停止へと導くチェックポイントキナーゼであるＣｈｋ１の活性化についても各試験群間で変化が認められなかった。
【００５１】
以上の各試験例の結果から、タマリクス・ガリカ抽出物には抗酸化物質が含まれ、抗酸化活性を有していることが示された。また、地上部、花及び葉の各器官由来のタマリクス・ガリカ抽出物は、何れも結腸癌由来の癌細胞に対して増殖抑制効果を有し、その効果は癌細胞における細胞周期の停止を介していることが明らかとなった。特に、花と葉由来の抽出物では、濃度依存的な細胞増殖抑制効果が認められた。一方、花及び葉由来の抽出物と地上部由来の抽出物とでは、細胞周期を制御するタンパク質の活性化に差異が認められた。これは、タマリクス・ガリカ抽出物が細胞に効果をもたらす機構は複数であることを示している。
【産業上の利用可能性】
【００５２】
本発明に係る腫瘍細胞増殖抑制剤は、ヒトおよび動物の癌又は腫瘍の治療又は予防のための医薬品組成物、化粧料組成物及び食品組成物として好適に利用できる。特に、本発明に係る腫瘍細胞増殖抑制剤は、ヒト由来結腸がん細胞に対して細胞増殖抑制作用を示すことが確認されていることから、大腸癌の治療又は予防のために利用され得る。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
タマリクス・ガリカ（Ｔａｍａｒｉｘ ｇａｌｌｉｃａ）の抽出物を有効成分として含有する腫瘍細胞増殖抑制剤。
【請求項２】
請求項１記載の腫瘍細胞増殖抑制剤を含有する抗癌あるいは抗腫瘍医薬品組成物。
【請求項３】
大腸癌の予防又は治療のために用いられる請求項２記載の医薬品組成物。
【請求項４】
タマリクス・ガリカ（Ｔａｍａｒｉｘ ｇａｌｌｉｃａ）の抽出物を含有する化粧料組成物。
【請求項５】
タマリクス・ガリカ（Ｔａｍａｒｉｘ ｇａｌｌｉｃａ）の抽出物を含有する食品組成物。
【請求項１】
タマリクス・ガリカ（Ｔａｍａｒｉｘ ｇａｌｌｉｃａ）の抽出物を有効成分として含有する腫瘍細胞増殖抑制剤。
【請求項２】
請求項１記載の腫瘍細胞増殖抑制剤を含有する抗癌あるいは抗腫瘍医薬品組成物。
【請求項３】
大腸癌の予防又は治療のために用いられる請求項２記載の医薬品組成物。
【請求項４】
タマリクス・ガリカ（Ｔａｍａｒｉｘ ｇａｌｌｉｃａ）の抽出物を含有する化粧料組成物。
【請求項５】
タマリクス・ガリカ（Ｔａｍａｒｉｘ ｇａｌｌｉｃａ）の抽出物を含有する食品組成物。
【図１】
【図２】
【図２】
【公開番号】特開２０１３−７５８５２（Ｐ２０１３−７５８５２Ａ）
【公開日】平成２５年４月２５日（２０１３．４．２５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−２１６２１４（Ｐ２０１１−２１６２１４）
【出願日】平成２３年９月３０日（２０１１．９．３０）
【国等の委託研究の成果に係る記載事項】（出願人による申告）平成２１年度〜平成２３年度、独立行政法人科学技術振興機構、国際科学技術共同研究推進事業・地球規模課題対応国際科学技術協力プログラム、産業技術力強化法第１９条の適用を受ける特許出願
【出願人】（５０４１７１１３４）国立大学法人 筑波大学 (510)
【出願人】（５０６１２３０９２）センター オブ バイオテクノロジー オブ ボルジュセドリア ザ ミニストリー オブ ハイヤー エデュケーション，サイエンティフィック リサーチ アンド テクノロジー (3)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２５年４月２５日（２０１３．４．２５）
【国際特許分類】
【出願日】平成２３年９月３０日（２０１１．９．３０）
【国等の委託研究の成果に係る記載事項】（出願人による申告）平成２１年度〜平成２３年度、独立行政法人科学技術振興機構、国際科学技術共同研究推進事業・地球規模課題対応国際科学技術協力プログラム、産業技術力強化法第１９条の適用を受ける特許出願
【出願人】（５０４１７１１３４）国立大学法人 筑波大学 (510)
【出願人】（５０６１２３０９２）センター オブ バイオテクノロジー オブ ボルジュセドリア ザ ミニストリー オブ ハイヤー エデュケーション，サイエンティフィック リサーチ アンド テクノロジー (3)
【Ｆターム（参考）】
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