自己免疫疾患又は脱髄疾患を処置するための方法
本発明は、ヒト患者における新規な治療処置又は予防処置に関する。本発明は、ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストが疾患を処置するのにｉｎ ｖｉｖｏで有効であるという発見から部分的にもたらされたものである。したがって、本発明は、患者、好ましくはヒト患者における自己免疫疾患又は脱髄疾患（多発性硬化症等）の症状を処置する、予防する、又は寛解させる方法であって、患者に、治療的有効量のＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストを投与することを含む方法を提供する。本発明は、さらに、自己免疫疾患又は脱髄疾患（多発性硬化症等）の処置のための医薬の製造における、ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストの使用に関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒト患者における新規な治療処置又は予防処置に関する。本発明は、ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストが疾患を処置するのにｉｎ ｖｉｖｏで有効であるという発見から部分的にもたらされたものである。
【０００２】
したがって、本発明は、患者、好ましくはヒト患者における自己免疫疾患又は脱髄疾患（多発性硬化症等）の症状を処置する、予防する、又は寛解させる方法であって、患者に、治療的有効量のＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストを投与することを含む方法を提供する。本発明は、さらに、自己免疫疾患又は脱髄疾患（多発性硬化症等）の処置のための医薬の製造における、ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストの使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
脱髄疾患は、神経系の髄鞘における異常を伴う病状のグループである。多くの先天性代謝障害は、主にＣＮＳにおける発達中の髄鞘を冒し、脱髄は、多くの神経障害の特徴となる。
【０００４】
ヒトにおける中枢神経系の最も知られている慢性炎症性脱髄疾患は、多発性硬化症である。多発性硬化症（ＭＳ）の発症は、２０歳〜４０歳の間に典型的に起こる。女性は、男性よりも約２倍の頻度で冒される。長い間にわたって、ＭＳは、様々な神経障害の蓄積をもたらす可能性がある。ＭＳにおける臨床的障害は、ミエリン及び軸索の続く損失を伴い、組織萎縮につながる、度重なる炎症性損傷の結果であると推定される。
【０００５】
ＭＳは、身体症状（再発及び障害進行）、中枢神経系（ＣＮＳ）炎症、脳萎縮、及び認知機能障害において顕在化される。主症状は、限局性の感覚消失、限局性の脱力、視覚的問題、平衡失調、及び疲労を含む。性機能障害及び括約筋機能不全が起こる可能性がある。ＭＳを有する患者の約半分は、認知機能障害又はうつ病を経験する可能性がある。
【０００６】
ＭＳは、現在、多面的な疾患であると考えられており、臨床的な静止状態（寛解）の期間は、増悪の間に起こる。寛解は、長さが変動し、数年間続く可能性があるが、まれに永久的となる。
【０００７】
疾患の４つの経過は、個別に扱われる：再発寛解型（ＲＲ）多発性硬化症、二次進行型（ＳＰ）多発性硬化症、一次進行型（ＰＰ）多発性硬化症、及び進行再発型（ＰＲ）多発性硬化症。ＭＳを有する８０％を超える患者は、最初は、神経症状の臨床的増悪と共にＲＲ経過を呈し、完全である可能性のある又は完全でない可能性のある回復が後に続く（Ｌｕｂｌｉｎ及びＲｅｉｎｇｏｌｄ，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，１９９６，４６：９０７−９１１）。
【０００８】
ＲＲＭＳの間、障害の蓄積は、再発からの不完全な回復に起因する。ＲＲＭＳを有する患者の約半分は、病気の発症の１０年後に、ＳＰＭＳと呼ばれる進行型経過に移る。ＳＰ期の間、障害の悪化は、増悪の後の残存症状の蓄積に起因するが、増悪の間の潜行性の進行にも起因する（上記のＬｕｂｌｉｎ及びＲｅｉｎｇｏｌｄ）。ＭＳ患者の１０％は、疾患発症からの、症状の潜行性の進行によって特徴づけられるＰＰＭＳを有する。患者の５％未満は、ＰＲＭＳを有し、ＰＰＭＳと同じ予後を有すると考えられることが多い。別の病原性機構が、異なる患者サブグループに関与する可能性があり、疾患分類に対して広範な影響を有することが示唆されている（Ｌａｓｓｍａｎｎら，２００１，Ｔｒｅｎｄｓ Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．，７，１１５−１２１；Ｌｕｃｃｈｉｎｅｔｔｉら，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．，２００１，１４，２５９−２６９）。
【０００９】
ＭＳ発症は、ＣＮＳ機能不全といった第１の神経症状の出現によって定義される。脳脊髄液（ＣＳＦ）分析及び磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）における進歩は、診断プロセスを単純化し、早期診断を容易にした（Ｎｏｓｅｗｏｒｔｈｙら，Ｔｈｅ Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２０００，３４３，１３，９３８−９５２）。ＭＳの診断に関する国際パネルは、ＭＳの診断を容易にし、且つ臨床診断法及び臨床外診断法と共にＭＲＩを含む改訂基準を発行した（Ｍｃ Ｄｏｎａｌｄら，２００１，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．，５０：１２１−１２７）。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
多発性硬化症の処置のための今のところ利用可能な処置は、疾患の症状に対して実際のところ作用するものである。その結果として、患者への、改善された臨床的利点を提供する代替治療に対する強い要望がある。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明は、ヒト患者における新規な治療処置又は予防処置に関する。本発明は、ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストが疾患を処置するのにｉｎ ｖｉｖｏで有効であるという発見から部分的にもたらされたものである。
【００１２】
したがって、本発明は、患者、好ましくはヒト患者における自己免疫疾患又は脱髄疾患の症状を処置する、予防する、又は寛解させる方法であって、患者に、治療的有効量のＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストを投与することを含む方法を提供する。特定の態様では、脱髄疾患は多発性硬化症である。本発明は、さらに、自己免疫疾患又は脱髄疾患の処置のための医薬の製造における、ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストの使用に関する。特定の態様では、脱髄疾患は多発性硬化症である。
【００１３】
特定の態様では、本発明は、上記に定義される方法又は使用に関し、患者は、再発寛解型（ＲＲ）多発性硬化症、二次進行型（ＳＰ）多発性硬化症、一次進行型（ＰＰ）多発性硬化症、又は進行再発型（ＰＲ）多発性硬化症に冒されている。
【００１４】
他の態様では、本発明は、上記に定義される方法又は使用に関し、アンタゴニストは、ＩＬ−１８Ｒαの産生を低下させる又は予防する、又はアンタゴニストは、部分的に、実質的に、又は完全にＩＬ−１８Ｒαの活性をブロックする。
【００１５】
本発明は、上記に定義される方法又は使用にさらに関し、アンタゴニストは、低分子、抗体、ｓｉＲＮＡ、アンチセンス核酸、及びリボザイムからなる群から選択される。
【００１６】
特定の態様では、アンタゴニストは、ＩＬ１８−Ｒα、特に、ＩＬ１８−Ｒαの細胞外ドメインに選択的に結合する抗体である。より具体的には、抗体は、配列番号２のポリペプチドに選択的に結合し、さらに具体的には、抗体は、配列番号２の残基１〜３２９又は配列番号２の残基１９〜３２９又は配列番号２の残基３３０〜３５０又は配列番号２の残基３５１〜５４１に選択的に結合する。特定の態様では、抗体は、配列番号２の残基１９〜２１９又は配列番号２の残基１２２〜３２９に選択的に結合する。他の特定の態様では、抗体は、配列番号２の残基１９〜１３２又は配列番号２の残基１２２〜２１９又は配列番号２の残基２１３〜３２９に選択的に結合する。
【００１７】
本発明の他の対象は、上記に定義される方法又は使用に関し、抗体は、ヒトＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに位置するエピトープに選択的に結合する。特定の態様では、エピトープは、配列番号２のアミノ酸１９〜３２９に又は配列番号２のアミノ酸残基１９〜２１９に又は配列番号２のアミノ酸残基１２２〜３２９に位置する。他の特定の態様では、エピトープは、配列番号２のアミノ酸１９〜１３２又は配列番号２の１２２〜２１９又は配列番号２の２１３〜３２９に位置する。
【００１８】
本発明のさらなる対象は、上記に定義される方法又は使用に関し、抗体は、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、及び配列番号１０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１、２、３、４、５、又は６個のＣＤＲを含む抗原結合ドメインを有する。特定の態様では、抗体は、配列番号３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号４のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。より具体的には、抗体は、配列番号３のアミノ酸配列にあるＶＨドメイン及び配列番号４のアミノ酸配列にあるＶＬドメインを含む。さらに具体的には、抗体は、Ｉｇ定常重鎖領域、ヒトＩｇカッパ定常ドメイン及びヒトＩｇラムダ定常ドメインからなる群から選択されるＩｇ定常軽鎖領域、配列番号３のアミノ酸配列を有するＩｇ可変重鎖領域、並びに配列番号４のアミノ酸配列を有するＩｇ可変軽鎖領域としてヒトＩｇＧ１を含む。
【００１９】
特定の態様では、本発明は、上記に定義される方法又は使用に関し、抗体は、モノクローナル抗ヒトＩＬ−１８Ｒαクローン７０６１４、モノクローナル抗ヒトＩＬ−１８Ｒαクローン７０６２５、モノクローナル抗ヒトＩＬ−１８ＲαクローンＢ−Ｅ４３、及びモノクローナル抗ヒトＩＬ−１８ＲαクローンＨ４４からなる群から選択される。
【００２０】
本発明は、上記に定義される方法又は使用にさらに関し、抗体は、Ａｂ１、モノクローナル抗ヒトＩＬ−１８Ｒαクローン７０６１４、モノクローナル抗ヒトＩＬ−１８Ｒαクローン７０６２５、モノクローナル抗ヒトＩＬ−１８ＲαクローンＢ−Ｅ４３、及び／又はモノクローナル抗ヒトＩＬ−１８ＲαクローンＨ４４と、ヒトＩＬ−１８Ｒαへの結合について競合する抗体である。
【００２１】
本発明は、さらに、上記に定義される方法又は使用に関し、抗体は、
− 配列番号２の残基１９〜３２９又は配列番号２の残基１９〜２１９又は配列番号２の残基１２２〜３２９又は配列番号２の残基１９〜１３２又は配列番号２の残基１２２〜２１９又は配列番号２の残基２１３〜３２９を含む免疫剤を用いて宿主動物を免疫するステップ、
− 上述の宿主動物によって産生されたリンパ球を不死化細胞系と融合させてハイブリドーマ細胞を形成するステップ、
− 免疫ペプチドに対する抗体を産生するハイブリドーマ細胞のクローンを選択するステップ、
− ＥＡＥ動物モデル中のハイブリドーマ細胞の異なるクローンによって産生された抗体の活性を試験し、上述の動物モデルにおけるＥＡＥの進行を阻害する抗体を選択するステップ、
− 分泌されたモノクローナル抗体を産生するステップ
を含むプロセスによって得ることができる。
【００２２】
より具体的には、免疫剤は、配列番号２の残基１９〜３２９又は配列番号２の残基１９〜２１９又は配列番号２の残基１２２〜３２９又は配列番号２の残基１９〜１３２又は配列番号２の残基１２２〜２１９又は配列番号２の残基２１３〜３２９又はその融合タンパク質からなるものであってもよい。
【００２３】
本発明は、上記に定義される方法又は使用にさらに関し、抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、又はその断片である。
【００２４】
本発明の他の対象は、上記に定義される方法又は使用に関し、アンタゴニストは、配列番号１の配列の１８〜２５個の連続したヌクレオチドに対して１００％相補的なｓｉＲＮＡであり、ヒトＩＬ−１８Ｒαの発現又は生物活性を低下させる又は阻害することができる。
【００２５】
本発明の他の対象は、上記に定義される方法又は使用に関し、アンタゴニストは、長さが１５〜３５個のヌクレオチドの範囲のアンチセンスオリゴヌクレオチドであり、配列番号１に記載される核酸配列に対して相補的である。
【００２６】
本発明の他の対象は、上記に定義される方法又は使用に関し、アンタゴニストは、それぞれが配列番号１の長さが少なくとも５個の隣接したヌクレオチドである１又は２個の領域に対して相補的なハイブリダイズ領域を含有するリボザイムである。
【００２７】
本発明は、上記に定義される方法又は使用にさらに関し、アンタゴニストは、抗原提示細胞中のＩＬ１８Ｒαの活性を阻害する。特定の態様では、抗原提示細胞は、単核食細胞、多核食細胞、樹状細胞、及びナチュラルキラー細胞からなる群から選択される。
【００２８】
本発明は、上記に定義される方法又は使用にさらに関し、ＩＬ−１８Ｒαの阻害は、ＩＬ−１７産生ヘルパーＴ細胞の減少をもたらす。
【００２９】
本発明は、さらに、上記に定義される方法又は使用に関し、ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストは、ＭＳを処置する又は予防するための第２の治療薬と共に投与される。特定の態様では、ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストは、コルチコステロイド、免疫抑制剤、神経保護薬、免疫調節剤、又はインターフェロンと共に投与される。
【００３０】
本発明の他の態様は、哺乳動物患者、好ましくはヒト患者のＭＳの治療における同時の、別個の、又は順次の使用のための、ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニスト及び併用調製物としてのコルチコステロイド、免疫抑制剤、神経保護薬、免疫調節剤、又はインターフェロンを含む産物を含む。ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストは、医薬としての使用のためのものである。また、ＩＬ１８−Ｒα、特に、ＩＬ１８−Ｒαの細胞外ドメインに選択的に結合する抗体は、医薬としての使用のためのものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３１】
本発明は、ＩＬ−１８Ｒαにアンタゴナイズする作用物質を用いて動物を処置することにより、ＭＳについて動物モデルにおける症状が低下するという発見に部分的に基づく。したがって、本発明は、患者に、治療的有効量のＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストを投与することにより、ヒト患者における自己免疫疾患又は脱髄疾患（ＭＳ等）の症状を処置する、予防する、又は寛解させる方法を提供する。
【００３２】
ＩＬ−１８受容体は、リガンド結合ＩＬ−１８Ｒαサブユニット（文献中ではＩＬ−１Ｒｒｐ又はＩＬ−１ Ｒ５とも命名されている）及びシグナル伝達ＩＬ−１８Ｒβサブユニットからなるヘテロ二量体として記載されてきた。ＩＬ−１８Ｒの下流シグナル伝達は、ＴＬＲ経路の下流シグナル伝達と同様に、ＩＲＡＫ４及びＭｙＤ８８を活性化する。ＩＬ−１８Ｒαは、リンパ球上に発現し、より最近では、アクセサリー細胞上に発現することが発見された（Ｋａｓｅｒ，Ａ．ら Ｂｌｏｏｄ １０３，６４８−６５５（２００４），Ｔｏｍｕｒａ，Ｍ．ら Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０，３７５９−３７６５（１９９８），Ｘｕ，Ｄ．ら Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８８，１４８５−１４９２（１９９８），Ｙｏｓｈｉｍｏｔｏ，Ｔ．ら Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１，３４００−３４０７（１９９８））。
【００３３】
ＩＬ−１８がＩＬ−１８Ｒ複合体に結合することができることが確証されているが、ＩＬ−１８Ｒαのみへのその親和性は、弱い親和性にすぎない（Ｂｏｒａｓｃｈｉ，Ｄ．ら Ｅｕｒ．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｎｅｔｗ．９，２０５−２１２（１９９８），Ｔｏｒｉｇｏｅ，Ｋ．ら Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２，２５７３７−２５７４２（１９９７））。ＩＬ−１８は、Ｔ細胞によるＩＦＮ−γの産生を刺激するようＩＬ−１２と共に共同して働き、またＮＫ細胞の細胞傷害性活性を単独で刺激することができる。ＩＬ−１８及びＩＬ−１２は、ＴＨ１サイトカイン応答に向けてＴ細胞を極性化するために相乗的に作用し、これは、脳炎誘発に対する必要条件であると考えられた。
【００３４】
ＩＬ−１８−／−マウスは、ＥＡＥ抵抗性であるとして記載されてきた、またＩＬ−１８−／−マウスにおける不十分なＮＫ細胞活性化は、脳炎誘発性の免疫応答を生成することができない原因であると考えられた（Ｓｈｉ，Ｆ．Ｄ．，ら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６５，３０９９−３１０４（２０００））。それにもかかわらず、ＩＬ−１２の明らかな防御活性を考慮すれば、ＥＡＥにおけるＩＬ−１８の提唱された役割は、ジレンマを引き起こす（Ｃｕａ，Ｄ．Ｊ．ら Ｎａｔｕｒｅ ４２１，７４４−７４８（２００３），Ｂｅｃｈｅｒ，Ｂ．ら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ １１０，４９３−４９７（２００２））。
【００３５】
本発明者は、ＥＡＥに対するＩＬ−１８−／−マウスの感受性によって推定されるように、以前に公表されたデータとは対照的に、ＩＬ−１８が、ＥＡＥにおいて明白な病原性の影響を及ぼさないことをこれから実証する。しかしながら、その提唱される受容体（ＩＬ−１８Ｒα）の欠失は、ＥＡＥ誘発に対する完全な抵抗性をもたらし、これは、脳炎誘発性の特性を有する代替リガンド（ＩＬ−１８ＲＬ）の存在を示唆する。ＩＬ−１８Ｒαに対するＩＬ−１８の親和性は、かなり乏しく、親和性の増加のためにＩＬ−１８Ｒβとのヘテロ三量体化を必要とするので、ＩＬ−１８Ｒαに対するより高い親和性を有する他のリガンドがある可能性は非常に強い。ＩＬ−１Ｒスーパーファミリー内には多くのオーファン受容体があり、これらの受容体サブユニットが互いにヘテロ二量体を形成する事実を考慮すれば、おそらく、ＩＬ−１８Ｒαは、異なる結合パートナーを有するだけではなく、異なるリガンドもまた有していそうである。
【００３６】
本発明者は、抗ＩＬ−１８Ｒα抗体を使用して、ＩＬ−１８−／−マウスにおける疾患発生を著しく減衰させることにより、本明細書でこの推定上のリガンドの性能を実証する。承認されているＩＬ−１８ＲαリガンドであるＩＬ−１８は、これらのマウス中に存在せず、それらの細胞構成要素は、抗体の注射の結果として冒されなかったことを考慮すれば、これらの結果は、上記代替ＩＬ−１８Ｒαリガンドの実在についての実質的証拠を提供する。
【００３７】
ＥＡＥの間のＴ細胞の重要性にもかかわらず、本発明者は、ＩＬ−１８Ｒαの欠失が、増大に関するＴ細胞プライミング及びＴｈ１極性化に影響を及ぼさないことを本明細書で示す。その代わりに、マイトジェンＣｏｎＡを用いて刺激した場合、ＩＬ−１８及びＩＬ−１８Ｒαは、共に、効率的なＴ細胞活性化に必要であり、これは、様々な細菌及びウイルス感染モデルにおいて観察されるように、ＩＬ−１８−／−マウスがＩＦＮγ分泌の刺激に欠陥を有するという発見に一致する。Ｔ細胞活性化のレベルでの障害の欠如に一致して、本発明者は、ｗｔ（野生型）樹状細胞、ＩＬ−１８−／−樹状細胞、又はＩＬ−１８Ｒα−／−樹状細胞（ＤＣ）と共に培養された場合にＴｃＲ Ｔｇ Ｔ細胞が同じ程度まで増殖したように、ＩＬ−１８Ｒα破壊が、抗原提示細胞（ＡＰＣ）の活性化機能に影響を及ぼさないことを本明細書で示す。
【００３８】
ＥＡＥの終点でのＣＮＳ中の炎症細胞の不在とは対照的に、本発明者は、疾患の発症の前に、ＩＬ−１８Ｒα−／−ＣＮＳ中で、比較に値するＣＤ４＋Ｔ細胞浸潤を検出することができた。他の炎症細胞もまた、ｗｔマウス及びＩＬ−１８−／−マウスと同じ程度までＣＮＳを浸潤した。したがって、ＩＬ−１８Ｒα欠損は、ＣＮＳ中への免疫細胞の侵入に影響を及ぼさないが、存続するためのそれらの能力に影響を及ぼすにちがいない。興味深いことには、随伴性ＥＡＥ感受性を伴わない、ＩＬ−１８Ｒα−／−ＣＮＳ中の炎症性浸潤物の存在は、ＩＬ−２３−／−マウスにおいて起こる応答に似ている。
【００３９】
本発明者は、ＩＬ−１８Ｒα−／−ＫＬＨリコールリンパ球によるＩＬ−１７産生を分析し、ＲＮＡ及びタンパク質の両レベルでＩＬ−１７の産生における著しい減少が実際にあることを実証する。したがって、ＩＬ−１８Ｒα−／−マウスのＥＡＥに対する抵抗性は、ＴＨＩＬ−１７発生が不十分である結果として説明することができるかもしれない。
【００４０】
ＴＨＩＬ−１７細胞の欠如は、Ｔ細胞のこの亜集団上のＩＬ−１８Ｒα発現の不在に起因したように思われた。しかしながら、ＢＭ−キメラの生成により、ＲＡＧ−／−ＢＭ細胞の存在下でのみ、ＩＬ−１８Ｒα−／−マウス（ＲＡＧ−／−＋ＩＬ−１８Ｒα−／−＞ｗｔ）のＥＡＥに対する感受性をよみがえらせることができたことを実証したように、これは事実ではなかった。ＩＬ−１８Ｒα−／−＞ｗｔマウスは、他方、疾患誘発に対して抵抗性であった。したがって、ＩＬ−１８Ｒαの存在は、非リンパ球白血球上で必要とされ、前ＴＨＩＬ−１７細胞上に直接位置しない。さらに、アクセサリー細胞上のＩＬ−１８Ｒαの重要性は、脳炎誘発性ｗｔ Ｔ細胞が、ＩＬ−１８Ｒα−／−マウスにおいてＥＡＥを誘発することができなかった養子移入実験において強められた。
【００４１】
要約すると、本発明者は、ＥＡＥにおけるＩＬ−１８の非病原性の役割を実証することにより、ＭＳ及びＥＡＥのＴＨ１仮説を反駁する証拠を示す。しかしながら、対照的に、いわゆるＩＬ−１８Ｒαは、ＥＡＥの発生にとって決定的であり、したがって代替ＩＬ−１８Ｒα結合リガンドの存在を暗示するものであり、これを、本発明者は、抗ＩＬ−１８Ｒα抗体を用いてＩＬ−１８−／−マウスを処置し、それによってＥＡＥ重症度を減じることにより、確認することができた。あるいは、本発明者は、ＩＬ−１８Ｒαシグナル伝達が脳炎誘発性ＴＨＩＬ−１７細胞の発生にとって決定的なことを示し、それによって、ＭＯＧ３５−５５に誘発されるＥＡＥに対するＩＬ−１８Ｒα−／−マウスの抵抗性を説明する。
【００４２】
上記本明細書及び本出願の実施例で開示される結果は、本発明にとって、部分的に基礎となる。本明細書に説明されるように、本発明の発明者は、ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストが疾患を処置するのにｉｎ ｖｉｖｏで有効であることを発見した。具体的には、ＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに結合する抗体は、この疾患のマウスモデルにおける実験的に誘発されたＭＳを予防するのに有用であることが分かった。さらに、ＩＬ−１８Ｒαアンタゴニストはまた、同じ動物モデルにおいて既に確立された疾患の進行をも阻害した。したがって、これらのｉｎ ｖｉｖｏデータは、ＩＬ−１８Ｒαの阻害がＭＳを処置するのに有効であることを示す。ＩＬ−１８Ｒα活性を中和する又はＩＬ−１８Ｒα遺伝子の発現を阻害する（転写又は翻訳のいずれか）任意の方法は、ＭＳの症状を低下させるために使用することができる。
【００４３】
したがって、本発明は、患者、特にヒト患者における自己免疫疾患又は脱髄疾患（特にＭＳ）の症状を処置する、予防する、又は寛解させる方法であって、患者に、治療的有効量のＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストを投与することを含む方法を提供する。本明細書に使用されるように、化合物の「治療的有効量」は、自己免疫疾患若しくは脱髄疾患（特にＭＳ）又はその症状を処置する、寛解させる、又は予防するのに有効な化合物の最小限の量を意味する。本発明は、さらに、自己免疫疾患又は脱髄疾患（特にＭＳ）の処置のための医薬の製造における、ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストの使用に関する。
【００４４】
本発明のいくつかの実施形態では、処置するための疾患は、再発寛解型（ＲＲ）ＭＳ、二次進行型（ＳＰ）ＭＳ、一次進行型（ＰＰ）ＭＳ、又は進行再発型（ＰＲ）ＭＳである。
【００４５】
本発明の文脈内の用語「ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニスト」は、ＩＬ−１８Ｒαの産生及び／又は作用が減衰する、低下する、又は部分的に、実質的に、若しくは完全にブロックされるように、ＩＬ−１８Ｒαの産生及び／又は作用を調整する任意の分子を指す。特定の実施形態では、アンタゴニストは、ＩＬ−１８Ｒαの産生を低下させる又は予防する。他の特定の実施形態では、アンタゴニストは、部分的に、実質的に、又は完全にＩＬ−１８Ｒαの活性をブロックする。
【００４６】
ＩＬ−１８Ｒαの産生及び／又は作用が減衰する、低下する、又は部分的に、実質的に、若しくは完全にブロックされるように、ＩＬ−１８Ｒαの産生及び／又は作用を阻害する任意のアンタゴニストは、本発明の方法に従って自己免疫疾患又は脱髄疾患（特にＭＳ）を処置するために使用されてもよい。たとえば、ＩＬ−１８Ｒαに選択的に結合する抗体、ＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに選択的に結合する抗体、又はＩＬ−１８Ｒαの生物活性を阻害する低分子は、自己免疫疾患又は脱髄疾患（特にＭＳ）を処置する又は予防するために使用することができる。さらに、ＩＬ−１８Ｒαの発現を阻害する産物（たとえばｓｉＲＮＡ分子、アンチセンス分子、リボザイム等）は、自己免疫疾患又は脱髄疾患（特にＭＳ）を処置する又は予防するために使用することができる。
【００４７】
したがって、本発明は、患者、特にヒト患者における自己免疫疾患又は脱髄疾患（特にＭＳ）の症状を処置する、予防する、又は寛解させる方法であって、患者に、低分子、抗体、ｓｉＲＮＡ、アンチセンス核酸、及びリボザイムからなる群から選択される、治療的有効量のＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストを投与することを含む方法を提供する。本発明は、さらに、自己免疫疾患又は脱髄疾患（特にＭＳ）の処置のための医薬の製造における、低分子、抗体、ｓｉＲＮＡ、アンチセンス核酸、及びリボザイムからなる群から選択される、ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストの使用に関する。
【００４８】
本明細書に説明されるように、本発明の発明者は、ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストが疾患を処置するのにｉｎ ｖｉｖｏで有効であることを発見した。本発明者によって得られたデータは、ＩＬ−１８Ｒαの阻害がＩＬ−１８に無関係の様式でＭＳの処置に有効であることを示す。したがって、本発明の一実施形態では、自己免疫疾患又は脱髄疾患（特にＭＳ）を処置するために使用されるＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストは、ＩＬ−１８活性を単に阻害するものではない。好ましくは、本発明で使用されるＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストは、ＩＬ−１８（たとえばヒトＩＬ−１８）に選択的に結合する抗体ではない。
【００４９】
ＩＬ−１８結合タンパク質（ＩＬ−１８ＢＰ、ＰＣＴ国際公開第９９／０９０６３号に記載される）は、本発明によるＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストと考えられない。
【００５０】
本発明は、さらに、医薬としての使用のための上記又は下記のＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストのいずれかに関する。
【００５１】
本発明の特定の実施形態では、アンタゴニストは、抗原提示細胞中の、より具体的には単核食細胞、多核食細胞、樹状細胞、及びナチュラルキラー細胞からなる群から選択される抗原提示細胞中のＩＬ−１８Ｒαの活性を阻害することができる。
【００５２】
本発明の実施形態では、ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストは、ＩＬ−１７産生ＴＨ細胞の発生を阻害することができる。
【００５３】
ヒトＩＬ−１８ＲαをコードするｃＤＮＡは、配列番号１に示される。このｃＤＮＡは、５４１個のアミノ酸長のタンパク質（配列番号２）をコードし、このタンパク質は、１８個のアミノ酸のシグナルペプチド（配列番号２の残基１〜１８）を含む、３２９個のアミノ酸の細胞外ドメイン（配列番号２の残基１〜３２９）、２１個のアミノ酸の膜貫通領域（配列番号２の残基３３０〜３５０）、及び配列番号２のアミノ酸３５１〜５４１からの細胞質ドメインを含む。
【００５４】
１）低分子：
一実施形態では、本発明の方法での使用のためのアンタゴニストは低分子である。ＩＬ−１８Ｒαの任意の低分子アンタゴニストは、ＭＳを処置する又は予防するために本発明の方法に従って使用することができる。一般に、低分子は、質量が１０００ダルトン未満であろう、また５００ダルトン未満であることが多いであろう。典型的に、低分子は、自然発生のもの又は人工的に作り出されたもの（たとえば化学合成を介して）にかかわらず、有機化合物を指し、タンパク質、ポリペプチド、又は核酸ではなく、複数の炭素−炭素結合を有する。
【００５５】
２）抗体：
本発明の好ましい実施形態では、本発明の方法での使用のためのアンタゴニストは、ＩＬ−１８Ｒαに選択的に結合する抗体である。上記抗体は、患者、好ましくはヒト患者における自己免疫疾患又は脱髄疾患（特にＭＳ）の症状を処置する、予防する、又は寛解させるために使用される。適した抗体は、後に本明細書で記載されるポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、ヒト抗体又はヒト化抗体、免疫抱合体、並びに抗体断片（Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、及びＦｖ断片、抗体断片から形成される二特異性抗体、直鎖状抗体、一本鎖抗体分子、一特異性抗体、並びに多特異性抗体等）を含む。好ましい実施形態では、抗体は、ＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに結合する。
【００５６】
特定の実施形態では、本発明の方法で使用される抗体は、配列番号２のポリペプチド、より具体的には配列番号２の残基１〜３２９、配列番号２の残基１９〜３２９、配列番号２の残基３３０〜３５０、又は配列番号２の残基３５１〜５４１に選択的に結合する。特定の態様では、抗体は、配列番号２の残基１９〜２１９又は配列番号２の残基１２２〜３２９に選択的に結合する。他の特定の態様では、抗体は、配列番号２の残基１９〜１３２又は配列番号２の残基１２２〜２１９又は配列番号２の残基２１３〜３２９に選択的に結合する。好ましい実施形態では、抗体は、ヒトＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに位置するエピトープに選択的に結合する。さらに好ましくは、このエピトープは、配列番号２のアミノ酸１９〜３２９に位置する。他の実施形態では、このエピトープは、配列番号２のアミノ酸残基１９〜２１９に又は配列番号２のアミノ酸残基１２２〜３２９に位置する。他の特定の態様では、エピトープは、配列番号２のアミノ酸１９〜１３２又は配列番号２の１２２〜２１９又は配列番号２の２１３〜３２９に位置する。
【００５７】
本発明の文脈内で、用語「選択的に」結合するは、抗体が、標的ポリペプチド又はエピトープに優先的に、つまり他のいかなる抗原又はエピトープに対するいかなる結合よりも高度な親和性で結合することを示す。言い換えれば、標的ポリペプチドへの結合は、他の抗原への非特異的結合と区別することができる。本発明による抗体は、標的ポリペプチド又はエピトープに対して、１０６Ｍ−１以上、好ましくは１０７Ｍ−１以上、より好ましくは１０８Ｍ−１以上、最も好ましくは１０９Ｍ−１以上の結合親和性（Ｋａ）を示すことが好ましい。抗体の結合親和性は、たとえばＳｃａｔｃｈａｒｄ解析によって当業者によって容易に決定することができる（Ｓｃａｔｃｈａｒｄ Ｇ．，Ａｎｎ ＮＹ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．５１：６６０−６７２，１９４９）。
【００５８】
本発明の方法での使用に適した抗体は、後に本明細書で記載されるポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、ヒト抗体又はヒト化抗体、免疫抱合体、並びに抗体断片（Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、及びＦｖ断片、抗体断片から形成される二特異性抗体、直鎖状抗体、一本鎖抗体分子、一特異性抗体、並びに多特異性抗体等）を含む。
【００５９】
Ａ．ポリクローナル抗体：
げっ歯類、霊長類、及びウマを含む様々な種からのポリクローナル抗体を調製する方法は、たとえばＶａｉｔｕｋａｉｔｉｓらに記載されている（Ｊ Ｃｌｉｎ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ．３３（１９７１）ｐ．９８８）。ポリクローナル抗体は、たとえば免疫剤及び所望であればアジュバントの１回又は複数回の注射によって哺乳動物中で産生することができる。典型的に、免疫剤及び／又はアジュバントは、複数回の皮下注射又は腹腔内注射によって哺乳動物に注射されるであろう。免疫剤は、配列番号２のポリペプチド又はより具体的には、配列番号２の残基１〜３２９若しくは配列番号２の残基１９〜３２９若しくは配列番号２の残基３３０〜３５０若しくは配列番号２の残基３５１〜５４１若しくはその融合タンパク質、さらに具体的には、配列番号２の残基１９〜２１９若しくは配列番号２の残基１２２〜３２９若しくは配列番号２の残基１９〜１３２若しくは配列番号２の残基１２２〜２１９若しくは配列番号２の残基２１３〜３２９若しくはその融合タンパク質を含んでいてもよい。免疫されている哺乳動物中で免疫原性であることが知られているタンパク質に免疫剤を抱合することは有用である可能性がある。上記免疫原性タンパク質の例は、キーホールリンペットヘモシニアン、血清アルブミン、ウシチログロブリン、及び大豆トリプシンインヒビターを含むが、これらに限定されない。用いられてもよいアジュバントの例は、フロインド完全アジュバント及びＭＰＬ−ＴＤＭアジュバント（モノホスホリル脂質Ａ、合成トレハロースジコリノミコレート）を含む。繰り返し注射が行われてもよい。血液サンプルは収集され、免疫グロブリン又は血清は分離される。
【００６０】
Ｂ．モノクローナル抗体
あるいは、抗体は、モノクローナル抗体であってもよい。本明細書で使用される用語「モノクローナル抗体」は、実質的に均質の抗体の集団から得られた抗体を指す、つまり集団を含む個々の抗体は、微量で存在する可能性のある、起こり得る自然発生の突然変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一の抗原部位に対して作られる。修飾語「モノクローナル」は、抗体の実質的に均質の集団から得られた抗体の特徴を示し、何らかの特定の方法による抗体の産生を必要とするとして解釈されるものではない。
【００６１】
モノクローナル抗体を産生する方法は、参照によって本明細書に組み込まれるたとえばＨａｒｌｏｗら（Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，ＣＳＨ Ｐｒｅｓｓ，１９８８）又はＫｏｈｌｅｒら（Ｎａｔｕｒｅ ２５６（１９７５）４９５）に見出されてもよい。
【００６２】
ハイブリドーマ法では、マウス、ハムスター、又は他の適切な宿主動物は、免疫剤に特異的に結合する抗体を産生する又は産生することができるリンパ球を誘発するために免疫剤を用いて典型的に免疫される（免疫剤は、配列番号２のポリペプチド又はより具体的には、配列番号２の残基１〜３２９若しくは配列番号２の残基１９〜３２９若しくは配列番号２の残基３３０〜３５０若しくは配列番号２の残基３５１〜５４１若しくはその融合タンパク質、さらに具体的には、配列番号２の残基１９〜２１９若しくは配列番号２の残基１２２〜３２９若しくは配列番号２の残基１９〜１３２若しくは配列番号２の残基１２２〜２１９若しくは配列番号２の残基２１３〜３２９若しくはその融合タンパク質を典型的に含むであろう）。あるいは、リンパ球は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで免疫されてもよい。一般に、ヒト起源の細胞が所望であれば、末梢血リンパ球（「ＰＢＬ」）が使用される、又は非ヒト哺乳動物源が所望であれば、脾臓細胞又はリンパ節細胞が使用される。次いで、リンパ球は、ハイブリドーマ細胞を形成するために、ポリエチレングリコール等の適した融合剤を使用して不死化細胞系と融合される（Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，（１９８６）ｐｐ．５９−１０３）。不死化細胞系は、普通、形質転換された哺乳動物細胞、詳細にはげっ歯類、ウシ、及びヒト起源の骨髄腫細胞である。普通、ラット又はマウスの骨髄腫細胞系が用いられる。ハイブリドーマ細胞は、非融合不死化細胞の成長又は生存を阻害する１つ又は複数の物質を好ましくは含有する適した培地中で培養されてもよい。たとえば、親細胞が、酵素であるヒポキサンチングアニンホスホリボシル転移酵素（ＨＧＰＲＴ又はＨＰＲＴ）を欠く場合、ハイブリドーマのための培地は、ヒポキサンチン、アミノプテリン、及びチミジンを典型的に含むであろう（「ＨＡＴ培地」）、またこれらの物質は、ＨＧＰＲＴ欠損の細胞の成長を予防する。好ましい不死化細胞系は、効率的に融合し、選択された抗体産生細胞による抗体の安定した高度なレベルの発現を維持し、且つＨＡＴ培地等の培地に敏感である不死化細胞系である。より好ましい不死化細胞系はネズミ骨髄腫系であり、これらは、たとえばＳａｌｋ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ、サンディエゴ、カリフォルニア及びＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、マナッサス、バージニアから得ることができる。ヒト骨髄腫細胞系及びマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞系は、さらに、ヒトモノクローナル抗体の産生について記載されている（Ｋｏｚｂｏｒ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）；Ｂｒｏｄｅｕｒら，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，（１９８７）ｐｐ．５１−６３）。
【００６３】
次いで、ハイブリドーマ細胞が培養される培地は、免疫ペプチドに対するモノクローナル抗体の存在についてアッセイすることができる。好ましくは、ハイブリドーマ細胞によって産生されたモノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降又は放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）若しくは酵素連結免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）等のｉｎ ｖｉｔｒｏ結合アッセイによって決定される。上記技術及びアッセイは、当技術分野で知られている。モノクローナル抗体の結合親和性は、たとえば、Ｍｕｎｓｏｎ及びＰｏｌｌａｒｄ，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１０７：２２０（１９８０）のＳｃａｔｃｈａｒｄ解析によって決定することができる。
【００６４】
所望のハイブリドーマ細胞を同定した後、クローンは、限界希釈手順によってサブクローニングし、標準の方法（Ｇｏｄｉｎｇ，前掲）によって成長させてもよい。この目的に適した培養液は、たとえば、ダルベッコ修飾イーグル培地及びＲＰＭＩ−１６４０培地を含む。あるいは、ハイブリドーマ細胞は、哺乳動物中の腹水としてｉｎ ｖｉｖｏで成長させてもよい。
【００６５】
サブクローンによって分泌されたモノクローナル抗体は、たとえばプロテインＡセファロース、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、又はアフィニティークロマトグラフィー等の従来の免疫グロブリン精製手順によって培養液又は腹水から単離されてもよい又は精製されてもよい。
【００６６】
モノクローナル抗体はまた、米国特許第４８１６５６７号に記載される方法等の組換えＤＮＡ方法によって作製されてもよい。本発明のモノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して、容易に単離し、配列決定することができる（たとえば、ネズミ抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブの使用によって）。本発明のハイブリドーマ細胞は、上記ＤＮＡの好ましい源として役立つ。ＤＮＡは、一度単離されると、発現ベクター中に配置されてもよく、次いで、発現ベクターは、組換え宿主細胞におけるモノクローナル抗体の合成を達成するために、他の状態では免疫グロブリンタンパク質を産生しないサルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、又は骨髄腫細胞等の宿主細胞中に形質移入される。
【００６７】
「モノクローナル抗体」はまた、たとえばＣｌａｃｋｓｏｎら，Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８［１９９１］及びＭａｒｋｓら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１−５９７（１９９１）に記載される技術を使用してファージ抗体ライブラリーから単離されてもよい。
【００６８】
抗体は、一価抗体であってもよい。一価抗体を調製する方法は、当技術分野でよく知られている。たとえば、ある方法は、免疫グロブリンの軽鎖及び修飾重鎖の組換え発現を含む。重鎖は、重鎖架橋を予防するために、Ｆｃ領域の任意のポイントで一般に切断される。あるいは、関連するシステイン残基は、架橋を予防するために他のアミノ酸残基と置換される又は取り除かれる。
【００６９】
ｉｎ ｖｉｔｒｏ方法もまた一価抗体を調製するのに適している。抗体の断片、詳細にはＦａｂ断片を産生するための抗体の消化は、当技術分野で知られているルーチン的な技術を使用して達成することができる。
【００７０】
抗体は、たとえばＷａｒｄら（Ｎａｔｕｒｅ ３４１（１９８９）５４４）に開示されるように、免疫グロブリンのコンビナトリアルライブラリーの選択によって産生されてもよい。
【００７１】
Ｃ．ヒト抗体及びヒト化抗体：
好ましくは、本発明での使用のための抗体は、ヒト化抗体又はヒト抗体である。非ヒト（たとえばネズミ）抗体のヒト化形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小の配列を含有するキメラ免疫グロブリン、キメラ免疫グロブリン鎖、又はその断片（Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、又は抗体の他の抗原結合部分配列等）である。ヒト化抗体は、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）からの残基が、所望の特異性、親和性、及び性能を有する、マウス、ラット、又はウサギ等の非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲからの残基と交換されたヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）を含む。いくつかの場合では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基は対応する非ヒト残基と交換される。
【００７２】
非ヒト抗体をヒト化する方法は、当技術分野でよく知られている。ヒト化は、ヒト抗体の対応する配列の代わりにげっ歯類のＣＤＲ又はＣＤＲ配列を用いることによって、Ｗｉｎｔｅｒ及び共同研究者らの方法に従って本質的に行うことができる（Ｊｏｎｅｓら，Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３−３２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：１５３４−１５３６（１９８８））。したがって、上記「ヒト化」抗体は、キメラ抗体であり（米国特許第４８１６５６７号）、実質的に無処置ではないヒト可変ドメインは、非ヒト種からの対応する配列によって置換されている。
【００７３】
いくつかの場合では、ヒトフレームワークへのＣＤＲの移入は、ヒト化抗体の特異性の損失をもたらす。これらの場合では、復帰突然変異を、抗体のヒト部分のフレームワーク領域中に導入することができる。復帰突然変異を作製する方法は、当技術分野でよく知られており、たとえばＣｏら，ＰＮＡＳ ＵＳＡ ８８；２２６９−２２７３（１９９１）及び国際公開第９０／０７８６１号に記載される。
【００７４】
ヒト抗体はまた、ファージディスプレイライブラリーを含む、当技術分野で知られている様々な技術を使用して産生することもできる（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ及びＷｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ，２２７：３８１（１９９１）；Ｍａｒｋｓら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ，２２２：５８１（１９９１））。Ｃｏｌｅら及びＢｏｅｒｎｅｒらの技術もまたヒトモノクローナル抗体の調製に利用可能である（Ｃｏｌｅら，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，ｐ．７７（１９８５）及びＢｏｅｒｎｅｒら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７（１）：８６−９５（１９９１））。同様に、ヒト抗体は、トランスジェニック動物、たとえば内在性免疫グロブリン遺伝子が部分的に又は完全に不活性化されたマウス中へのヒト免疫グロブリン座の導入によって作製することができる。抗原投与に際して、ヒト抗体産生は、観察され、遺伝子の再構成、構築、及び抗体レパートリーを含むすべての点でヒトで見られるものに非常によく似ている。このアプローチは、たとえば米国特許第５５４５８０７号；第５５４５８０６号；第５５６９８２５号；第５６２５１２６号；第５６３３４２５号；第５６６１０１６号；並びに以下の科学刊行物：Ｍａｒｋｓら，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１０：７７９−７８３（１９９２）；Ｌｏｎｂｅｒｇら，Ｎａｔｕｒｅ，３６８：８５６−８５９（１９９４）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ，３６８：８１２−１３（１９９４）；Ｆｉｓｈｗｉｌｄら，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１４：８４５−５１（１９９６）；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１４：８２６（１９９６）；Ｌｏｎｂｅｒｇ及びＨｕｓｚａｒ，Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３：６５−９３（１９９５）に記載される。
【００７５】
Ｄ．免疫抱合体：
本発明は、さらに、共有結合で又は非共有結合で、直接又はカップリング剤若しくはリンカーの使用を通して細胞毒、標識、薬剤、又は他の治療薬等の異種の部分に抱合された抗体を含む免疫抱合体の使用に関する。細胞毒は、化学療法剤、毒素（たとえば細菌、菌類、植物、又は動物起源の酵素活性毒素又はその断片）又は放射性同位体（つまり放射性抱合体）を含む。
【００７６】
使用することができる酵素活性毒素及びその断片は、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、外毒素Ａ鎖（緑膿菌からの）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデクシンＡ鎖、アルファ−サルシン、シナアブラギリタンパク質、ジアンシン（ｄｉａｎｔｈｉｎ）タンパク質、ヨウシュヤマゴボウタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、及びＰＡＰ−Ｓ）、ニガウリインヒビター、クルシン、クロチン、サパオナリアオフィシナリス（ｓａｐａｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）インヒビター、ゲロニン、ミトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、リストリクトシン（ｒｅｓｔｒｉｃｔｏｃｉｎ）、フェノマイシン（ｐｈｅｎｏｍｙｃｉｎ）、エノマイシン（ｅｎｏｍｙｃｉｎ）、及びトリコテセネス（ｔｒｉｃｏｔｈｅｃｅｎｅｓ）を含む。種々の放射性核種は、放射性抱合抗体の産生に利用可能である。例として２１２Ｂｉ、１３１Ｉ、１３１Ｉｎ、９０Ｙ、及び１８６Ｒｅを含む。
【００７７】
他の実施形態では、抗体は、細胞プリターゲッティングにおける利用のために「受容体」（ストレプトアビジン等）に抱合させてもよく、抗体−受容体抱合体は、患者に投与され、その後、除去剤を使用して血行路から結合していない抱合体を除去し、次いで、細胞毒（たとえば放射性ヌクレオチド）に抱合されている「リガンド」（たとえばアビジン）を投与する。
【００７８】
さらに、本発明の抗体又は抗体断片は、当技術分野の又は本明細書に記載される方法を使用してペグ化することができる。本明細書に開示される抗体はまた、免疫リポソームとして製剤されてもよい。抗体を含有するリポソームは、Ｅｐｓｔｅｉｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８２：３６８８（１９８５）；Ｈｗａｎｇら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７７：４０３０（１９８０）；並びに米国特許第４４８５０４５号及び第４５４４５４５号に記載される等の、当技術分野で知られている方法によって調製される。循環時間が増強されたリポソームは米国特許第５０１３５５６号に開示される。
【００７９】
Ｅ．抗体断片：
本発明は、さらに、無処置抗体の一部分、好ましくは無処置抗体の抗原結合領域又は可変領域を含む「抗体断片」の使用に関する。抗体断片の例は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片、抗体断片から形成される二特異性抗体、直鎖状抗体（Ｚａｐａｔａら，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．，８（１０）：１０５７−１０６２［１９９５］）、一本鎖抗体分子、一特異性抗体、並びに多特異性抗体を含む。
【００８０】
「Ｆｖ」は、完全抗原認識部位及び完全抗原結合部位を含有する最小限の抗体断片である。この領域は、密接に、非共有的に結びつけられた１つの重鎖可変ドメイン及び１つの軽鎖可変ドメインの二量体からなる。それぞれの可変ドメインの３つのＣＤＲが相互作用するのはこの立体配置においてであり、ＶＨ−ＶＬ二量体の表面上の抗原結合部位を定義している。共同して、６個のＣＤＲは、抗原結合特異性を抗体に付与する。しかしながら、全結合部位よりも親和性が低いが、単一の可変ドメインでさえ（又は抗原に特異的な３つのＣＤＲしか含まない半分のＦｖ）抗原を認識し、且つ結合する能力を有する。
【００８１】
Ｆａｂ断片は、さらに、軽鎖の定常ドメイン及び重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）を含有する。Ｆａｂ断片は、Ｆａｂ’断片と異なり、Ｆａｂ’断片は、抗体ヒンジ領域からの１つ又は複数のシステインを含むごくわずかな残基が重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端に追加されている。Ｆａｂ’−ＳＨは、Ｆａｂ’に対する本明細書での呼称であり、定常領域のシステイン残基（複数可）が遊離チオール基を持つ。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は、Ｆａｂ’断片の間にヒンジシステインを有する、Ｆａｂ’断片のペアとしてもともとは産生された。抗体断片の他の化学的カップリングもまた知られている。任意の脊椎動物種からの抗体（免疫グロブリン）の「軽鎖」は、それらの定常領域のアミノ酸配列に基づき、カッパ及びラムダと呼ばれる２つの明確に別とされる種類のうちの一方に指定することができる。
【００８２】
「一本鎖抗体分子」は、上述の抗体のＶＨドメイン及びＶＬドメインを含む抗体の断片であり、これらのドメインは単一のポリペプチド鎖中に存在する。好ましくは、Ｆｖポリペプチドは、一本鎖抗体分子が抗原結合のための所望の構造を形成することを可能にする、ＶＨドメイン及びＶＬドメイン間のポリペプチドリンカーをさらに含む。一本鎖抗体分子の検討については、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ及びＭｏｏｒｅ編，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）を参照されたい。
【００８３】
用語「二特異性抗体」は、２つの抗原結合部位を有する低分子抗体断片を指し、これらの断片は、同じポリペプチド鎖中に、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に対してつながれた重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む（ＶＨ−ＶＬ）。好ましくは、同じ鎖上の２つのドメイン間でペア形成させるには短すぎるリンカーを使用することにより、ドメインは、他の鎖のうちの相補的ドメインとペア形成するように強いられ、２つの抗原結合部位を作り出す。二特異性抗体は、たとえば、欧州特許第４０４０９７号；国際公開第９３／１１１６１号；及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８（１９９３）に、より十分に記載される。
【００８４】
本明細書で使用される用語「一特異性抗体」は、重鎖可変ドメインを有し、且つ軽鎖可変ドメインを有していない抗原結合分子を指す。一特異性抗体は、軽鎖がない状態で抗原に結合することができ、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３と示される３つのＣＤＲ領域を典型的に有する。一特異性抗体は、２本の足指及び強靭な足底を有する足を有する動物を含む、ラクダ科の動物源から得られた「ラクダ科動物一特異性抗体」を含む。ラクダ科の動物は、ラクダ、ラマ、及びアルパカを含む。ラクダ（ヒトコブラクダ及びフタコブラクダ）は、それらの血清からの物質を分析すると可変軽鎖ドメインを欠くことが多いことが報告されており、十分な抗体特異性及び親和性は、ＶＨドメイン（３つのＣＤＲループ）のみに由来し得ることを示唆する。一特異性抗体はまた、様々な動物源、特に哺乳動物（たとえばマウス、ラット、ウサギ、ウマ、ロバ、ウシ、又はヒト）からの修飾ＶＨも含み、ＶＬがない状態で抗原に結合することができる。好ましくは、ＶＨは、ＶＬがない状態で抗原にＶＨが結合するために、ＶＬとの接合点の位置で修飾される。Ｄａｖｉｅｓ及びＲｉｅｃｈｍａｎｎは、たとえば、高度な親和性（１０７Ｍ−１以上の、標的ポリペプチドに対する結合親和性（Ｋａ））及び高度な特異性を有する「ラクダ化一特異性抗体」を生成することができることを実証した（Ｄａｖｉｅｓ＆Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ，１９９５，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＮＹ），１３（５）：４７５−９）。軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に対するその接合点を通したＶＨの非特異的結合は、この接合点における３つの突然変異（Ｇ４４Ｅ、Ｌ４５Ｒ、及びＷ４７Ｇ）によって予防された。これらの突然変異は、軽鎖パートナーが自然で欠けているラクダ科動物抗体重鎖を模倣するよう導入された。
【００８５】
Ｆ．本発明の方法での使用のための他の抗体：
本発明の好ましい実施形態では、本発明の方法での使用のためのアンタゴニストは、ＩＬ−１８Ｒαに選択的に結合する本明細書で上記に記載される抗体である。本発明の方法での使用のための抗体は、たとえばＰＣＴ出願国際公開第９７／３１０１０号又は欧州出願第０８５０９５２号に記載され、それらの全体が本出願に参照により組み込まれる。
【００８６】
好ましくは、本発明の方法での使用のための抗体は、ヒトＩＬ−１８Ｒαに、さらに好ましくはヒトＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに位置するエピトープに選択的に結合する。上記抗体は、ヒト患者における自己免疫疾患又は脱髄疾患（ＭＳ等）の症状を処置する、予防する、又は寛解させるために使用される。
【００８７】
特定の実施形態では、上記抗体は、本明細書で上記に記載されるモノクローナル抗体、ヒト抗体若しくはヒト化抗体、免疫抱合体、又は抗体断片（Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、及びＦｖ断片、抗体断片から形成される二特異性抗体、直鎖状抗体、一本鎖抗体分子、一特異性抗体、並びに多特異性抗体等）である。
【００８８】
本発明の特定の一態様では、上記抗体は、ヒトＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに選択的に結合する。より具体的には、上述の抗体は、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、及び配列番号１０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１、２、３、４、５、又は６個のＣＤＲを含む抗原結合ドメインを有する。好ましくは、上述の抗体の抗原結合ドメインは、配列番号５、配列番号６、及び配列番号７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１、２、又は３個のＣＤＲ並びに配列番号８、配列番号９、及び配列番号１０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１、２、又は３個のＣＤＲを含む。より好ましくは、上述の抗体の抗原結合ドメインは、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、及び配列番号１０のアミノ酸配列を有する６個のＣＤＲを含む。
【００８９】
本発明の他の実施形態では、上述の抗体はＶＨドメインを含む。好ましくは、ＶＨドメインは、配列番号３のアミノ酸配列を含む又はそこにある。他の実施形態では、抗体はＶＬドメインを含む。好ましくは、ＶＬドメインは、配列番号４のアミノ酸配列を含む又はそこにある。好ましい実施形態では、抗体は、ＶＨドメイン及びＶＬドメインを含む。より好ましくは、抗体は、配列番号３のアミノ酸配列を含む又はそこにあるＶＨドメイン及び配列番号４のアミノ酸配列を含む又はそこにあるＶＬドメインを含む。
【００９０】
他の実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ１定常ドメイン、ヒトＩｇＧ２定常ドメイン、ヒトＩｇＧ３定常ドメイン、ヒトＩｇＧ４定常ドメイン、ヒトＩｇＭ定常ドメイン、ヒトＩｇＥ定常ドメイン、及びヒトＩｇＡ定常ドメインからなる群から選択される重鎖免疫グロブリン定常ドメインを含む。好ましくは、重鎖免疫グロブリン定常領域ドメインはヒトＩｇＧ１定常ドメインである。他の実施形態では、抗体は、ヒトＩｇカッパ定常ドメイン及びヒトＩｇラムダ定常ドメインからなる群から選択される軽鎖免疫グロブリン定常ドメインをさらに含む。
【００９１】
他の実施形態では、抗体は、Ｉｇ定常重鎖領域、ヒトＩｇカッパ定常ドメイン及びヒトＩｇラムダ定常ドメインからなる群から選択されるＩｇ定常軽鎖領域、配列番号３のアミノ酸配列を有するＩｇ可変重鎖領域、並びに配列番号４のアミノ酸配列を有するＩｇ可変軽鎖領域としてヒトＩｇＧ１を含む（後にＡｂ１と命名される）。
【００９２】
詳細には、本明細書に開示される抗体の好ましい実施形態は、本明細書で上記に定義されるヒト抗体若しくはヒト化抗体、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、抗体断片から形成される二特異性抗体、直鎖状抗体、一本鎖抗体、一特異性抗体、又は多特異性抗体等の抗体断片である。最も好ましくは、抗体は、ヒト抗体又はヒト化抗体である。
【００９３】
本発明の方法での使用に適した他の抗体は、以下のモノクローナル抗体を含む：モノクローナル抗ヒトＩＬ−１８Ｒαクローン７０６１４（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社、ミネアポリス、ＭＮ、米国、カタログ番号：ＭＡＢ８４０１によって市販化）、モノクローナル抗ヒトＩＬ−１８Ｒαクローン７０６２５（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社、ミネアポリス、ＭＮ、米国、カタログ番号：ＭＡＢ８４０によって市販化）、モノクローナル抗ヒトＩＬ−１８ＲαクローンＢ−Ｅ４３（抗体番号８０２３２（Ｄｉａｃｌｏｎｅ社、ブザンソン、フランス、カタログ番号８５４ ９００ ０００によって市販化））、モノクローナル抗ヒトＩＬ−１８ＲαクローンＨ４４（抗体番号８０４３８（Ｄｉａｃｌｏｎｅ社、ブザンソン、フランスによって市販化））。上述の抗体のヒト化形態は、好ましい。
【００９４】
一実施形態では、本発明の方法での使用のための抗体は、本明細書で上記に記載されるＡｂ１、クローン７０６１４、クローン７０６２５、クローンＢ−Ｅ４３、及び／又はクローンＨ４４とヒトＩＬ−１８Ｒαへの結合について競合する抗体である。競合結合アッセイは、Ａｂ１、クローン７０６１４、クローン７０６２５、クローンＢ−Ｅ４３、及び／又はクローンＨ４４とヒトＩＬ−１８Ｒαへの結合について競合する抗体を同定するために使用することができる。当技術分野で知られている多くの競合結合アッセイのいずれも、同じ抗原に対する２つの抗体間の競合を測定するために使用することができる。手短に言えば、異なる抗体が他の抗体の結合を阻害する能力が試験される。たとえば、抗体は、サンドイッチＥＬＩＳＡアッセイを使用して、それらが結合するエピトープによって区別することができる。これは、ウェルの表面をコーティングするために捕捉抗体を使用することにより実行される（捕捉抗体は、たとえばＡｂ１、クローン７０６１４、クローン７０６２５、クローンＢ−Ｅ４３、及び／又はクローンＨ４４とすることができる）。次いで、半飽和濃度のタグ付き抗原を、捕捉表面に追加する（たとえばヒトＩＬ−１８７Ｒα又はその一部（たとえばヒトＩＬ−１８７Ｒαの細胞外ドメイン）。このタンパク質は、特異的な抗体：エピトープ相互作用を通して抗体に結合するであろう。洗浄後、検出可能な部分（たとえば、検出抗体として定義される標識抗体に対するＨＲＰ）に連結された二次抗体を、ＥＬＩＳＡに追加する。この抗体が捕捉抗体と同じエピトープを認識する場合、その特定のエピトープはもはや結合するために利用可能ではないので、標的タンパク質に結合することはできないであろう。しかしながら、この二次抗体が標的タンパク質上の異なるエピトープを認識する場合、二次抗体は結合することができるであろう、また、この結合は、関連する基質を使用して、活性（したがって結合した抗体）のレベルを定量することにより検出することができる。バックグラウンドは、捕捉抗体及び検出抗体の両方として単一の抗体を使用することにより定義されるが、最大シグナルは、抗原特異的抗体を用いて抗原上のタグを捕捉し、且つ抗原上のタグに対する抗体を検出することにより確立することができる。参考としてバックグラウンド及び最大シグナルを使用することによって、抗体は、エピトープ特異性を決定するためにペアの様式で評価することができる。上記に記載されるアッセイのいずれかを使用して、第１の抗体の存在下で、抗原への二次抗体の結合が少なくとも３０％、普通少なくとも約４０％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、又は８５％、多くの場合少なくとも約９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％低下した場合、第１の抗体は二次抗体の結合を競合的に阻害すると考えられる。本明細書で上記に開示されるように、上記に記載されるアッセイのいずれかを使用して、Ａｂ１、クローン７０６１４、クローン７０６２５、クローンＢ−Ｅ４３、及び／又はクローンＨ４４の存在下で、少なくとも３０％、普通少なくとも約４０％ ５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、又は８５％、多くの場合少なくとも約９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％低下させる等で、Ａｂ１、クローン７０６１４、クローン７０６２５、クローンＢ−Ｅ４３、及び／又はクローンＨ４４とヒトＩＬ−１８Ｒα、特にヒトＩＬ−１８７Ｒαの細胞外ドメインへの結合について競合する抗体は、本発明の方法での使用のための抗体に相当する。詳細には、これらの競合抗体の好ましい実施形態は、本明細書で上記に定義されるヒト抗体若しくはヒト化抗体、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、抗体断片から形成される二特異性抗体、直鎖状抗体、一本鎖抗体、一特異性抗体、又は多特異性抗体等の抗体断片である。最も好ましくは、これらの競合抗体は、ヒト抗体又はヒト化抗体である。
【００９５】
本発明の一実施形態では、本発明の方法での使用のための抗体は、以下の技術によって得ることができる又は得られた抗体である。宿主動物（たとえばマウス、ハムスター、ウサギ、ヤギ、ロバ、サル、又は他の適切な宿主）は、免疫剤に特異的に結合するであろう抗体を産生するリンパ球を誘発するために、配列番号２のポリペプチド若しくはその融合タンパク質を含む若しくはそれからなる又はより具体的には、配列番号２の残基１９〜３２９若しくはその融合タンパク質、さらに具体的には、配列番号２の残基１９〜２１９若しくは配列番号２の残基１２２〜３２９若しくは配列番号２の残基１９〜１３２若しくは配列番号２の残基１２２〜２１９若しくは配列番号２の残基２１３〜３２９若しくはその融合タンパク質を含む若しくはそれからなる免疫剤を用いて免疫される。あるいは、リンパ球はｉｎ ｖｉｔｒｏで免疫される。その場合、ヒト起源の細胞が所望であれば、末梢血リンパ球（「ＰＢＬ」）が使用される又は非ヒト哺乳動物源が所望であれば、脾臓細胞又はリンパ節細胞が使用される。次いで、リンパ球は、ハイブリドーマ細胞を形成するために、適した融合剤（ポリエチレングリコール等）を使用して不死化細胞系と融合される（Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，（１９８６）ｐｐ．５９−１０３）。次いで、ハイブリドーマ細胞が培養される培地は、免疫ペプチドに対するモノクローナル抗体の存在についてアッセイされる。好ましくは、ハイブリドーマ細胞によって産生されたモノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降又は放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）若しくは酵素連結免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）等のｉｎ ｖｉｔｒｏ結合アッセイによって決定される。ＩＬ−１８Ｒαの結合についてのＥＬＩＳＡ試験は、たとえば、参照により組み込まれるＶｅｒｍｏｔ−Ｄｅｓｒｏｃｈｅｓ Ｃら Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００５．２３６（１−２）：１０１−４に記載されている。所望のハイブリドーマ細胞を同定した後、クローンは、限界希釈手順によってサブクローニングし、標準の方法（Ｇｏｄｉｎｇ，前掲）によって成長させてもよい。この目的に適した培養液は、たとえば、ダルベッコ修飾イーグル培地及びＲＰＭＩ−１６４０培地を含む。あるいは、ハイブリドーマ細胞は、哺乳動物中の腹水としてｉｎ ｖｉｖｏで成長させてもよい。サブクローンによって分泌されたモノクローナル抗体は、たとえばプロテインＡセファロース、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、又はアフィニティークロマトグラフィー等の従来の免疫グロブリン精製手順によって培地又は腹水から単離又は精製されてもよい。
【００９６】
任意選択で、得られた抗体はヒト化されてもよい。非ヒト抗体をヒト化する方法は、当技術分野でよく知られている。ヒト化は、ヒト抗体の対応する配列の代わりにげっ歯類のＣＤＲ又はＣＤＲ配列を用いることによって、Ｗｉｎｔｅｒ及び共同研究者らの方法に従って本質的に行うことができる（Ｊｏｎｅｓら，Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３−３２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：１５３４−１５３６（１９８８））。したがって、上記「ヒト化」抗体は、キメラ抗体であり（米国特許第４８１６５６７号）、実質的に無処置ではないヒト可変ドメインは、非ヒト種からの対応する配列によって置換されている。いくつかの場合では、ヒトフレームワークへのＣＤＲの移入は、ヒト化抗体の特異性の損失をもたらす。これらの場合では、復帰突然変異を、抗体のヒト部分のフレームワーク領域中に導入することができる。復帰突然変異を作製する方法は、当技術分野でよく知られており、たとえばＣｏら，ＰＮＡＳ ＵＳＡ ８８；２２６９−２２７３（１９９１）及び国際公開第９０／０７８６１号に記載される。あるいは、ヒト抗体は、トランスジェニック動物、たとえば内在性免疫グロブリン遺伝子が部分的に又は完全に不活性化されたマウス中へのヒト免疫グロブリン座の導入により作製することができる。抗原投与に際して、ヒト抗体産生は、観察され、遺伝子の再構成、構築、及び抗体レパートリーを含むすべての点でヒトで見られるものに非常によく似ている。このアプローチは、たとえば米国特許第５５４５８０７号；第５５４５８０６号；第５５６９８２５号；第５６２５１２６号；第５６３３４２５号；第５６６１０１６号；並びに以下の科学刊行物：Ｍａｒｋｓら，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１０：７７９−７８３（１９９２）；Ｌｏｎｂｅｒｇら，Ｎａｔｕｒｅ，３６８：８５６−８５９（１９９４）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ，３６８：８１２−１３（１９９４）；Ｆｉｓｈｗｉｌｄら，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１４：８４５−５１（１９９６）；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１４：８２６（１９９６）；Ｌｏｎｂｅｒｇ及びＨｕｓｚａｒ，Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３：６５−９３（１９９５）に記載される。
【００９７】
一実施形態では、本発明は、ヒト患者における自己免疫疾患又は脱髄疾患（多発性硬化症等）の症状を処置する、予防する、又は寛解させる方法であって、患者に、治療的有効量のＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストを投与することを含む方法に関し、アンタゴニストは、ＩＬ１８−Ｒαの細胞外ドメインに選択的に結合する抗体であり、抗体は、
− 配列番号２の残基１９〜３２９を含む（又は配列番号２の残基１９〜３２９若しくは配列番号２の残基１２２〜３２９若しくは配列番号２の残基１９〜１３２若しくは配列番号２の残基１２２〜２１９若しくは配列番号２の残基２１３〜３２９若しくはその融合タンパク質からなる）免疫剤を用いて宿主動物を免疫するステップ、
− 上述の宿主動物によって産生されたリンパ球を不死化細胞系と融合させてハイブリドーマ細胞を形成するステップ、
− 免疫ペプチドに対する抗体を産生するハイブリドーマ細胞のクローンを選択するステップ、
− ＥＡＥ動物モデル中のハイブリドーマ細胞の異なるクローンによって産生された抗体の活性を試験し、上述の動物モデルにおけるＥＡＥの進行を阻害する抗体を選択するステップ、
− 分泌されたモノクローナル抗体を産生するステップ
を含む又はそれらからなるプロセスによって得ることができる。
【００９８】
任意選択で、さらなるステップにおいて、得られた抗体はヒト化されてもよい。あるいは、免疫された宿主動物は、本明細書で上記に開示される、内在性免疫グロブリン遺伝子がヒト免疫グロブリンと交換されたトランスジェニック動物、たとえば、内在性免疫グロブリン遺伝子が部分的に又は完全に不活性化されたマウスである。抗原投与に際して、ヒト抗体産生は、観察され、遺伝子の再構成、構築、及び抗体レパートリーを含むすべての点でヒトで見られるものに非常によく似ている。
【００９９】
本発明の他の実施形態では、本発明の方法での使用のための抗体は、ファージディスプレイによって得ることができる又は得られた抗体である。その場合、「モノクローナル抗体」は、たとえばＣｌａｃｋｓｏｎら，Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８［１９９１］及びＭａｒｋｓら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１−５９７（１９９１）に記載される技術を使用してファージ抗体ライブラリーから単離される。
【０１００】
好ましくは、本明細書で上記に記載され、本発明の方法で使用される抗体は、ヒト抗体又はヒト化抗体であり、上記ヒト抗体又はヒト化抗体を作り出すための技術もまたよく知られており、たとえばＰｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｓｉｇｎ Ｌａｂｓ社（フリーモント、ＣＡ）、Ｍｅｄａｒｅｘ社（プリンストン、ＮＪ）、及びＡｂｇｅｎｎｉｘ社（フリーモント、ＣＡ）から市販されている。
【０１０１】
３）ＩＬ−１８Ｒαの発現の阻害：
上記に論じられるように、本発明は、ＩＬ−１８Ｒαにアンタゴナイズする作用物質を用いて動物を処置することにより、ＭＳについて動物モデルにおける症状が低下するという発見に部分的に基づく。たとえば、下記の実施例２及び３に記載されるように、本本発明者は、ＩＬ−１８Ｒα−／−マウスがＥＡＥに対して抵抗性であること及びＩＬ−１８ＲαのブロックがＩＬ−１８−／−マウスにおいてＥＡＥを予防することを実証した。したがって、転写又は翻訳のレベルでＩＬ−１８Ｒα遺伝子の特異的発現を妨害するヌクレオチド配列は、自己免疫疾患又は脱髄疾患（多発性硬化症等）を処置する又は予防するために使用することができる。このアプローチは、たとえば、ｓｉＲＮＡ及び／若しくはリボザイムを用いてｍＲＮＡの分解を誘発することによって又はアンチセンス核酸を用いてｍＲＮＡをマスクすることによって特異的ｍＲＮＡの転写又は翻訳をブロックするために、ｓｉＲＮＡ及び／若しくはアンチセンスオリゴヌクレオチド並びに／又はリボザイムを利用してもよい。
【０１０２】
Ａ．ｓｉＲＮＡ
本発明の一実施形態では、本発明の方法での使用のためのアンタゴニストはｓｉＲＮＡである。ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）は、興味のある遺伝子又はｍＲＮＡに対応する二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）が生物中に導入され、対応するｍＲＮＡの分解をもたらす転写後遺伝子サイレンシング（ＰＴＧＳ）のメカニズムを指す。哺乳動物細胞の実験的操作のためにこの現象を利用するための最初の試みは、長いｄｓＲＮＡ分子に応じて活性化された頑強で非特異的な抗ウイルス性防御メカニズムにより妨害された（Ｇｉｌら Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ２０００，５：１０７−１１４）。
【０１０３】
ＩＬ−１８Ｒα遺伝子に対応する二本鎖ｓｉＲＮＡは、ＩＬ−１８Ｒα ｍＲＮＡ転写物の分解を誘発することにより、ＩＬ−１８Ｒαの転写及び／又は翻訳をサイレンシングするために使用することができ、したがって、ＩＬ−１８Ｒαの発現を予防することにより自己免疫疾患又は脱髄疾患（多発性硬化症等）を処置する又は予防することができる。ＲＮＡｉ反応では、ｄｓＲＮＡ分子のセンス鎖及びアンチセンス鎖の両方は、典型的に長さが約１０〜約３０個のヌクレオチド、より典型的に長さが１９〜２５個のヌクレオチド（ｎｔ）、好ましくは長さが２１〜２３個のｎｔの範囲の、２個のヌクレオチドの３’末を有する低分子のＲＮＡ断片又はＲＮＡセグメントに処理される。これらのｄｓＲＮＡは、「ガイドＲＮＡ」又は「低分子干渉ＲＮＡ」（ｓｉＲＮＡ）として知られている。ｓｉＲＮＡは、さらに、ｓｉＲＮＡ二重鎖の両方の鎖が単一のＲＮＡ分子内に含まれる、低分子Ｕ字型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）を含むことができる。あるいは、長さが１９〜２５個のｎｔであり、好ましくは長さが２１〜２３個のｎｔであり、２個のヌクレオチドの３’末を有する合成ｄｓＲＮＡは、合成し、精製し、且つ反応において使用することができる。したがって、ＲＮＡｉは、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）によって典型的に媒介され、低分子干渉ＲＮＡは、長さが約１９個のヌクレオチドで、各鎖上に１〜２個のヌクレオチドの３’オーバーハングを有し、全長が約２１〜２３個の間のヌクレオチドの二本鎖領域を典型的に含む。
【０１０４】
次いで、ｓｉＲＮＡ二重鎖は、ｓｉＲＮＡに対して相同性を有する内在性ｍＲＮＡを標的にし、且つ複合体内で破壊するタンパク質から構成されるヌクレアーゼ複合体に結合する。この様式で、特異的ｍＲＮＡを標的にし、分解することができ、それによって、標的にされたｍＲＮＡからのタンパク質発現の損失がもたらされる。ｄｓＲＮＡの特定の条件及び修飾は、ＰＣＴ国際公開第０１／７５１６４号に記載される（参照により本明細書に組み込まれる）。ｄｓＲＮＡ分子は、長さが変動し得るが、長さが１９〜２５個のｎｔ、最も好ましくは長さが２１〜２３個のヌクレオチドであり、特徴的な２〜３個のヌクレオチドの３’オーバーハング端、典型的に（２’−デオキシ）チミジン又はウラシルを有するｓｉＲＮＡ分子を使用することが好ましい。ｓｉＲＮＡは、３’水酸基を典型的に含む。単鎖ｓｉＲＮＡ及びｄｓＲＮＡの平滑末端形態もまた使用することができる。ＲＮＡの安定性をさらに増強するために、３’オーバーハングは、分解に対して安定化することができる。上記一実施形態では、ＲＮＡは、アデノシン又はグアノシン等のプリンヌクレオチドを含むことにより安定化される。あるいは、修飾類似体によるピリミジンヌクレオチドの置換、たとえば（２’−デオキシ）チミジンによるウリジン２−ヌクレオチドオーバーハングの置換は、許容され、ＲＮＡｉの効率に影響を及ぼさない。２’水酸基がないと、組織培養培地における、オーバーハングのヌクレアーゼ抵抗性が著しく増強される。ｓｉＲＮＡは、ＰＣＴ国際公開第０１／７５１６４号に記載される方法を含む、当技術分野で知られている方法のいずれかを使用して又はＲＮＡのｉｎ ｖｉｔｒｏ転写のための標準の手順及びＥｌｂａｓｈｉｒら（Ｇｅｎｅｓ＆Ｄｅｖ．，１５：１８８−２００，２００１）に記載されるｄｓＲＮＡアニーリング手順を使用して調製することができる。
【０１０５】
本発明では、ｄｓＲＮＡ又はｓｉＲＮＡは、ヒトＩＬ−１８ＲαをコードするｍＲＮＡの配列の少なくとも一部に対応し、ヒトＩＬ−１８Ｒαの発現又は生物活性を低下させる又は阻害することができる。好ましくは、ｄｓＲＮＡ又はｓｉＲＮＡは、配列番号１に示されるｃＤＮＡ配列の少なくとも一部に対応し（つまりｓｉＲＮＡは、配列番号１に示されるｃＤＮＡ配列の二本鎖領域である）、ヒトＩＬ−１８Ｒαの発現又は生物活性を低下させる又は阻害することができる。望ましくは、ｓｉＲＮＡは、ヒトＩＬ−１８Ｒαの１８〜２５個の連続したヌクレオチドに１００％相補的であり、ヒトＩＬ−１８Ｒαの発現又は生物活性を低下させる又は阻害することができる。さらに好ましくは、ｓｉＲＮＡは、配列番号１に示される配列の１８〜２５個の連続したヌクレオチドに１００％相補的であり、ヒトＩＬ−１８Ｒαの発現又は生物活性を低下させる又は阻害することができる。好ましい実施形態では、ＩＬ−１８Ｒα生物活性の減少率は、コントロールのｄｓＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、又はｓｉＲＮＡを用いて処置した細胞と比較して、少なくとも５％、より好ましくは少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、又は９０％、最も好ましくは少なくとも９５％である。タンパク質発現のレベルをアッセイする方法は、当技術分野で知られており、ウエスタンブロット、免疫沈降、及びＥＬＩＳＡを含む。ＩＬ−１８Ｒαポリペプチド生物活性をアッセイする方法は、本明細書に記載されるアッセイを含む。
【０１０６】
本発明の状況において、ｓｉＲＮＡ等のＲＮＡｉ誘発剤は、治療目的、たとえば、自己免疫疾患又は脱髄疾患（多発性硬化症等）を処置する又は予防するために有用である。いくつかの実施形態では、処置するための疾患は、再発寛解型（ＲＲ）ＭＳ、二次進行型（ＳＰ）ＭＳ、一次進行型（ＰＰ）ＭＳ、又は進行再発型（ＰＲ）ＭＳである。特に、ＲＮＡｉは、哺乳動物脳において有効であることが示されたこと及びｓｈＲＮＡ分子の転写のための鋳型を提供するベクターは、脳中に導入されると局所的な遺伝子発現をダウンレギュレートすることが示されたことが注目されている（Ｈｏｍｍｅｌ，ＪＤら，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，９（１２）１５３９−１５４４）。干渉ＲＮＡがない状態で検出された症状と比較した、ＭＳ症状の重症度における減少は、ｓｉＲＮＡの効果を監視するために使用することができる。
【０１０７】
ｓｉＲＮＡは、ｓｉＲＮＡの注射、吸入、又は経口摂取を含む、当技術分野で知られている任意の手段を使用して、患者に送達することができる。他のｓｉＲＮＡに適した送達系は、たとえば、高分子複合体、ナノカプセル、マイクロスフェア、ビーズ、並びに水中油型乳剤、ミセル、混合ミセル、及びリポソームを含む脂質ベース系等のコロイド分散系である。本発明の好ましいコロイド系はリポソームである。リポソームは、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏでの送達媒体として有用な人工膜小胞である。リポソーム内のＲＮＡ及びＤＮＡを含む核酸は、生物学的活性形態で細胞に送達される（Ｆｒａｌｅｙら，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．，６：７７，１９８１）。リポソームは、当技術分野で知られている任意の手段を使用して、特定の細胞型又は組織を標的にすることができる。
【０１０８】
多数の化学的修飾は、ｓｉＲＮＡ二重鎖又は一方若しくは両方の鎖の部分及び／又は３’オーバーハング（複数可）に対して成すことができるが、サイレンシング活性を消失させず、またサイレンシング活性を著しく減じないことが多い（Ｄｏｒｓｅｔｔ，Ｙ及びＴｕｓｃｈｌ，Ｔ．，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ．２００４．３（４）：３１８−２９）。上記修飾は、一般に、安定性、細胞取り込み、及び／又はｓｉＲＮＡの細胞内効果を増強する可能性がある。本発明は、任意の上記修飾、たとえばホスホロチオエート、２’−Ｏメチル、２’−Ｏ，４’−メチレンヌクレオチド等及び当技術分野、たとえばアンチセンス分野からの知られている他の修飾を有するｓｉＲＮＡ又はｓｈＲＮＡの使用を包含する。
【０１０９】
Ｂ．アンチセンス
本発明の一実施形態では、本発明の方法での使用のためのアンタゴニストは、完全な又は部分的な長さのアンチセンスＲＮＡ転写物である。アンチセンス核酸は、一般に、標的核酸（たとえばｍＲＮＡ転写物）の一部分に相補的な単鎖核酸（ＤＮＡ、ＲＮＡ、修飾ＤＮＡ、又は修飾ＲＮＡ）であり、したがって、二重鎖を形成するよう標的に結合することができる。典型的に、アンチセンス核酸は、長さが１５〜３５個のヌクレオチド、好ましくは長さが１５〜２５個のヌクレオチドの範囲であるが、長さが１０〜約５０個までのヌクレオチドの範囲であってもよいオリゴヌクレオチドである。結合は、典型的に、標的核酸の機能を低下させる又は阻害する。たとえば、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ゲノムＤＮＡに結合すると転写をブロックし、ｍＲＮＡに結合すると翻訳を阻害し、及び／又は核酸の分解をもたらす可能性がある。細胞中で、アンチセンス核酸は、対応するｍＲＮＡにハイブリダイズし、二本鎖分子を形成する。細胞は二本鎖であるｍＲＮＡを翻訳しないので、アンチセンス核酸はｍＲＮＡの翻訳を妨害する。それほど多くはないが、ＤＮＡに直接結合するアンチセンス分子が使用されてもよい。
【０１１０】
ＩＬ−１８Ｒαの発現における低下は、ポリペプチドをコードするｍＲＮＡの配列に相補的な配列を含むアンチセンス核酸又はペプチド核酸の投与によって達成されてもよい。ヒトＩＬ−１８Ｒαポリペプチドをコードする核酸配列に特異的にハイブリダイズするアンチセンスオリゴヌクレオチドが好ましい。それらは、ＩＬ−１８Ｒαの転写及び／又は翻訳をサイレンシングするために使用することができ、したがって自己免疫疾患又は脱髄疾患（多発性硬化症等）を処置する又は予防することができる。たとえば、配列番号１に記載される核酸配列に特異的にハイブリダイズするアンチセンスオリゴヌクレオチドは、本発明の方法で使用することができる。典型的に、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、長さが１５〜３５個のヌクレオチド、好ましくは長さが１５〜２５個のヌクレオチドの範囲のオリゴヌクレオチドであり、配列番号１に記載される核酸配列に相補的である。アンチセンス核酸がない状態で検出された症状と比較した、ＭＳ症状の重症度における減少は、アンチセンス核酸の効果を監視するために使用することができる。
【０１１１】
アンチセンス核酸は、自然発生ヌクレオチド又は（ｉ）ホスホジエステル骨格の置換（たとえばペプチド核酸、ホスホロチオエートオリゴヌクレオチド、及びホスホロアミダートオリゴヌクレオチド）、（ｉｉ）糖塩基の修飾（たとえば２’−Ｏ−プロピルリボース及び２’−メトキシエトキシリボース）、並びに（ｉｉｉ）ヌクレオシドの修飾（たとえばＣ−５プロピニルＵ、Ｃ−５チアゾールＵ、及びフェノキサジンＣ）を含む修飾ヌクレオチドを含んでいてもよい（Ｗａｇｎｅｒ，Ｎａｔ．Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１：１１１６，１９９５；Ｖａｒｇａら，Ｉｍｍｕｎ．Ｌｅｔｔ．，６９：２１７，１９９９；Ｎｅｉｌｓｅｎ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．，１０：７１，１９９９；Ｗｏｏｌｆ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１８：１７６３，１９９０）。
【０１１２】
ヒトＩＬ−１８Ｒα遺伝子に特異的なアンチセンスポリヌクレオチドの送達は、たとえば、ポリヌクレオチドの直接的な注射、吸入、又は摂取を含む、当技術分野で知られている任意の手段を使用して達成することができる。さらに、アンチセンスポリヌクレオチドは、組換え発現ベクター（たとえばアデノウイルス、ヘルペスウイルス、ワクシニアウイルス、又はレトロウイルスベースのウイルスベクター）又は本明細書に記載されるコロイド分散系（たとえばリポソーム）を使用して送達することができる。
【０１１３】
アンチセンス技術及びその適用は当技術分野でよく知られており、Ｐｈｉｌｌｉｐｓ，Ｍ．Ｉ．（編）Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．，Ｖｏｌｕｍｅｓ ３１３及び３１４，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，２０００並びにそこに言及される参考文献に記載される。Ｃｒｏｏｋｅ，Ｓ．（編）「Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｄｒｕｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ，ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」（第１版），Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ；ＩＳＢＮ：０８２４７０５６６１；第１版（２００１）及びそこに言及される参考文献もまた参照されたい。
【０１１４】
Ｃ．リボザイム
リボザイムは、ＲＮＡの特異的開裂を触媒することができる酵素ＲＮＡ分子である。検討のために、Ｒｏｓｓｉ，１９９４，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｂｉｏｌｏｇｙ ４：４６９−４７１を参照されたい、たとえばＣｏｔｔｅｎ及びＢｉｍｓｔｉｅｌ，ＥＭＢＯ Ｊ．８：３８６１−３８６６，１９８９；Ｕｓｍａｎら，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１０：２４３，１９９６；Ｕｓｍａｎら，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，１：５２７，１９９６；Ｓｕｎら，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｒｅｖ．，５２：３２５，２０００もまた参照されたい。リボザイム作用のメカニズムは、相補的な標的ＲＮＡに対するリボザイム分子の配列特異的ハイブリダイゼーションを含み、その後エンドヌクレアーゼ開裂イベントが続く。リボザイム分子の組成は、標的ｍＲＮＡに相補的な１つ又は複数の配列及びｍＲＮＡの開裂を担う、よく知られている触媒配列又は機能的に等価な配列を好ましくは含む（たとえばその全体が参照によって本明細書に組み込まれる米国特許第５０９３２４６号を参照されたい）。標的ｍＲＮＡ転写物を触媒的に開裂させるよう設計したリボザイム分子はまた、対象となる標的ｍＲＮＡの翻訳を予防するために使用することもできる。
【０１１５】
部位特異的認識配列でｍＲＮＡを開裂させるリボザイムは、標的ｍＲＮＡを破壊するために使用することができるが、ハンマーヘッド型リボザイムの使用が好まれる。ハンマーヘッド型リボザイムは、標的ｍＲＮＡと相補的塩基対を形成するフランキング領域によって決定された位置でｍＲＮＡを開裂する。好ましくは、標的ｍＲＮＡは、２つの塩基の以下の配列を有する：５’−ＵＧ−３’。ハンマーヘッド型リボザイムの構築及び産生は、当技術分野でよく知られており、Ｈａｓｅｌｏｆｆ及びＧｅｒｌａｃｈ，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ ３３４：５８５−５９１；並びにＰＣＴ出願国際公開第８９／０５８５２号に、より十分に記載され、それらの内容は参照により本明細書に組み込まれる。ハンマーヘッド型リボザイム配列は、ｉｎ ｖｉｖｏでの開裂効率を増加させるために、転移ＲＮＡ（ｔＲＮＡ）等の安定したＲＮＡに埋め込むことができる（Ｐｅｒｒｉｍａｎら，１９９５，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９２：６１７５−７９；ｄｅ Ｆｅｙｔｅｒ及びＧａｕｄｒｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．７４，Ｃｈａｐｔｅｒ ４３，「植物におけるリボザイムの発現（Ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ Ｒｉｂｏｚｙｍｅｓ ｉｎ Ｐｌａｎｔｓ）」，Ｔｕｒｎｅｒ，Ｐ．Ｃ編，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ Ｉｎｃ．，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎ．Ｊ．）。特に、ｔＲＮＡ融合リボザイムのＲＮＡポリメラーゼＩＩＩ媒介性の発現は、当技術分野でよく知られている（Ｋａｗａｓａｋｉら，１９９８，Ｎａｔｕｒｅ ３９３：２８４−９；Ｋｕｗａｂａｒａら，１９９８，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１６：９６１−５；及びＫｕｗａｂａｒａら，１９９８，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ ２：６１７−２７；Ｋｏｓｅｋｉら，１９９９，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ ７３：１８６８−７７；Ｋｕｗａｂａｒａら，１９９９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９６：１８８６−９１；Ｔａｎａｂｅら，２０００，Ｎａｔｕｒｅ ４０６：４７３−４を参照されたい）。所与の標的ｃＤＮＡ配列内に多くの潜在的なハンマーヘッド型リボザイム開裂部位が典型的にある。好ましくは、効率を増加させ、且つ機能しないｍＲＮＡ転写物の細胞内蓄積を最小限にするために開裂認識部位が標的ｍＲＮＡの５’端の近くに位置するように、リボザイムは操作される。さらに、標的ｍＲＮＡの異なる部分をコードする標的配列に位置する任意の開裂認識部位の使用により、一方又は他方の標的遺伝子の選択的なターゲティングを可能にすると思われる。
【０１１６】
本発明の遺伝子ターゲティングリボザイムは、それぞれが長さが少なくとも５個、好ましくはそれぞれが６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、又は２０個の隣接したヌクレオチドである、標的ｍＲＮＡの１又は２個の領域に対して相補的なハイブリダイズ領域を含有する（好ましくは、遺伝子ターゲティングリボザイムは、配列番号１に記載される核酸配列の１又は２個の領域に対して相補的である）。さらに、リボザイムは、標的センスｍＲＮＡを自己触媒的に開裂させる高度に特異的なエンドリボヌクレアーゼ活性を持つ。
【０１１７】
本発明のリボザイムはまた、テトラヒメナサーモフィラにおいて自然に生じ（ＩＶＳ又はＬ−１９ ＩＶＳ ＲＮＡとして知られている）、且つＺａｕｇら，１９８４，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２４：５７４−５７８；Ｚａｕｇら，１９８６，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３１：４７０−４７５；Ｚａｕｇら，１９８６，Ｎａｔｕｒｅ ３２４：４２９−４３３；公開国際特許出願国際公開第８８／０４３００号；及びＢｅｅｎら，１９８６，Ｃｅｌｌ ４７：２０７−２１６に広範囲に記載されているＲＮＡエンドリボヌクレアーゼ等のＲＮＡエンドリボヌクレアーゼ（「Ｃｅｃｈ型リボザイム」）も含む。Ｃｅｃｈ型リボザイムは、標的ＲＮＡ配列にハイブリダイズする８つの塩基対活性部位を有し、その後、標的ＲＮＡの開裂は起こる。本発明は、標的遺伝子又は標的核酸配列に存在する８つの塩基対活性部位配列を標的にするそれらのＣｅｃｈ型リボザイムを包含する。
【０１１８】
リボザイムは、修飾オリゴヌクレオチド（たとえば安定性、ターゲティング等の改善ために）から構成することができ、ｉｎ ｖｉｖｏで標的遺伝子を発現させる細胞に送達されるはずである。送達の好ましい方法は、形質移入された細胞が、内在性標的メッセージを破壊し、且つ翻訳を阻害するのに十分な量のリボザイムを産生するように、強力な構成プロモーターの制御下で、リボザイムを「コードする」ＤＮＡ構築物を使用することを含む。
【０１１９】
ＩＬ−１８Ｒαの発現の低下は、本明細書で上記に記載されるリボザイムのいずれかの投与によって達成されてもよい。ヒトＩＬ−１８Ｒαポリペプチドをコードする核酸配列に特異的にハイブリダイズするリボザイムが好ましい。それらは、ＩＬ−１８Ｒαの翻訳をサイレンシングし、したがって、ＭＳを処置する又は予防するために使用することができる。たとえば、配列番号１に記載される核酸配列に特異的にハイブリダイズするリボザイムは本発明の方法で使用することができる。リボザイムがない状態で検出された症状と比較した、ＭＳ症状の重症度における減少は、リボザイムの効果を監視するために使用することができる。
【０１２０】
４）本明細書で上記に開示されるＩＬ−１８Ｒαアンタゴニストの薬学的使用：
本発明は、医薬としての使用のための、上記又は下記に記載される、ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストのいずれかに関する。好ましくは、ＩＬ−１８Ｒαの上記又は下記に記載されるアンタゴニストのいずれかは、自己免疫疾患又は脱髄疾患（多発性硬化症等）の症状を低下させるための能力を有する。したがって、好ましくは、本明細書に記載されるＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストに対するすべての修飾が、ＭＳの症状を低下させるそれらの能力に著しく影響を及ぼすわけではない。さらに好ましくは、本明細書に記載されるＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストに対する修飾は、ＭＳの症状を低下させるそれらの能力を増強する（たとえばそれらの半減期を増強することによって等）。
【０１２１】
本発明は、さらに、患者に、ＩＬ−１８Ｒαの有効量のアンタゴニストを投与することにより、ヒト患者における自己免疫疾患又は脱髄疾患（多発性硬化症等）の症状を処置する、予防する、又は寛解させる方法に関する。ＩＬ−１８Ｒαの産生及び／又は作用が減衰する、低下する、又は部分的に、実質的に、若しくは完全にブロックされるように、ＩＬ−１８Ｒαの産生及び／又は作用を阻害する任意のアンタゴニストは、本発明の方法に従って自己免疫疾患又は脱髄疾患（特に多発性硬化症）を処置するために使用することができる。本発明の方法は、ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストを、ＭＳに罹患した個人に対して、患者の状態における持続性の改善を誘発するのに十分な期間投与することを含む。本発明は、さらに、部分的に、自己免疫疾患又は脱髄疾患（多発性硬化症等）の処置のための医薬の製造における、ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストの使用を提供する。いくつかの実施形態では、アンタゴニストは、本明細書で上記に開示されるアンタゴニストである。たとえば、ＩＬ−１８Ｒαに選択的に結合する抗体、ＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに選択的に結合する抗体、又はＩＬ−１８Ｒαの生物活性を阻害する低分子は、ＭＳを処置する又は予防するために使用することができる。さらに、ＩＬ−１８Ｒαの発現を阻害する産物（たとえばｓｉＲＮＡ分子、アンチセンス分子、リボザイム等）は、ＭＳを処置する又は予防するために使用することができる。いくつかの実施形態では、処置するための疾患は、再発寛解型（ＲＲ）ＭＳ、二次進行型（ＳＰ）ＭＳ、一次進行型（ＰＰ）ＭＳ、又は進行再発型（ＰＲ）ＭＳである。
【０１２２】
ＩＬ−１８Ｒαのインヒビターが疾患を処置するのにｉｎ ｖｉｖｏで有効であるという発見は、本発明にとって、部分的に基礎となる。具体的には、ＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに結合する抗体は、この疾患のマウスモデルにおける実験的に誘発されたＭＳを予防するのに有用であることが分かった。さらに、ＩＬ−１８Ｒαアンタゴニストはまた、同じ動物モデルにおいて既に確立された疾患の進行をも阻害した。したがって、これらのｉｎ ｖｉｖｏデータは、ＩＬ−１８Ｒαの阻害がＭＳを処置するのに有効であることを示す。ＩＬ−１８Ｒα活性を中和する又はＩＬ−１８Ｒα遺伝子の発現を阻害する（転写又は翻訳のいずれか）任意の方法は、ＭＳの症状を低下させるために使用することができる。
【０１２３】
対象となる方法は、産生されるＩＬ−１８Ｒαの量を低下させることによる又はその生物活性を予防することによる等で、有効量の内在性生物学的活性ＩＬ−１８Ｒαを低下させることができるＩＬ−１８Ｒαアンタゴニストを患者に対して投与することを含む。上記アンタゴニストは、本明細書で上記に開示されるアンタゴニストを含む。
【０１２４】
好ましい態様では、タンパク質ベースの治療剤は、ＩＬ−１８Ｒαタンパク質の活性を阻害するために使用することができる。たとえば、本発明の好ましい方法は、本明細書で上記に定義される、ＩＬ−１８Ｒαに選択的に結合する抗体又はＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに選択的に結合する抗体を利用する。
【０１２５】
本発明の好ましい一実施形態では、本明細書で上記に記載される、ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニスト、特に本明細書で上記に記載される、ＩＬ−１８Ｒαに選択的に結合する抗体、ＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに選択的に結合する抗体の徐放性形態が使用される。開示される方法での使用に適した徐放性形態は、上記ポリマーと混合された、徐々に溶解する生体適合性ポリマー中にカプセル化された及び／又は生体適合性半浸透性インプラント中に包まれたＩＬ−１８Ｒαアンタゴニストを含むが、これらに限定されない。分解性ポリマーマイクロスフェアは、治療用タンパク質の高度な全身性のレベルを維持するよう設計されてきた。マイクロスフェアは、ポリ（ラクチドコグリコリド）（ＰＬＧ）、ポリ無水物、ポリ（オルトエステル）、非生物分解性酢酸エチルビニルポリマー等の分解性ポリマーから調製され、タンパク質は、ポリマー中に閉じ込められる（Ｇｏｍｂｏｔｚ及びＰｅｔｔｉｔ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．６：３３２（１９９５）；Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｒａｎａｄｅ及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒ（編），ｐａｇｅｓ ５１−９３（ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ １９９５）中のＲａｎａｄｅ，「薬物送達におけるポリマーの役割（Ｒｏｌｅ ｏｆ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ）」；Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ：Ｐｈｙｓｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｓａｎｄｅｒｓ及びＨｅｎｄｒｅｎ（編），ｐａｇｅｓ ４５−９２（Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ １９９７）中のＲｏｓｋｏｓ及びＭａｓｋｉｅｗｉｃｚ，「タンパク質送達に有用な分解性放出制御系（Ｄｅｇｒａｄａｂｌｅ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｕｓｅｆｕｌ ｆｏｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ）」；Ｂａｒｔｕｓら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８１：１１６１（１９９８）；Ｐｕｔｎｅｙ及びＢｕｒｋｅ，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １６：１５３（１９９８）；Ｐｕｔｎｅｙ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．２：５４８（１９９８））。ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）にコーティングされたナノスフェアもまた、治療用タンパク質の静脈内投与のためのキャリアを提供することができる。（たとえばＧｒｅｆら，Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１０：１６７（１９９７）を参照されたい）。さらに、ＩＬ−１８Ｒαアンタゴニストは、その血清半減期を延長する又はタンパク質送達を増強するために、ポリエチレングリコールと抱合することができる（ペグ化）。
【０１２６】
ＭＳを処置するために、ＩＬ−１８Ｒαアンタゴニスト、好ましくはＩＬ−１８Ｒαに選択的に結合する抗体、又はＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに選択的に結合する抗体は、疾患の重症度を反映する少なくとも１つの指標において持続性の改善を誘発するのに十分な量及び時間で、患者に対して投与される。改善度は、徴候又は症状に基づいて決定され、クオリティオブライフ質問表等の、患者に対して行われる質問表を用いてもよい。ＩＬ−１８Ｒαアンタゴニストの治療的有効量は、上記持続性の改善を達成するのに十分な量である。
【０１２７】
改善は、患者が、選ばれた１つ又は複数の指標についてのベースラインに対する改善を顕在化させるまで、ある用量のＩＬ−１８Ｒαアンタゴニストを繰り返し投与することにより誘発されるかもしれない。処置の後の、患者の病気の程度は、１つ又は複数の指標に従って改善されたように思われる可能性があるが、処置は、同じレベルで又は用量若しくは頻度を低下させて、無期限に継続してもよい。一度処置が減らされ又は中止され、症状が再発すれば、処置は、後に、最初のレベルで再開されてもよい。
【０１２８】
本発明の方法で使用される医薬組成物は、活性成分としてのＩＬ−１８Ｒαアンタゴニストと組み合わせて、動物に対する投与に適した、適した薬学的に許容し得る希釈剤、キャリア、生物学的適合性媒体、及び添加剤（たとえば生理食塩水）を含有していてもよく、薬学的に使用することができる調製物中への活性化合物の処理を容易にする助剤（賦形剤、安定剤、又はアジュバントのような）を任意選択で含んでいてもよい。医薬組成物は、投与のモードの必要性を満たすために、任意の許容し得る方法で製剤されてもよい。たとえば、薬剤送達のための生体材料及び他のポリマーの使用、その上、投与の特定のモードを有効にするための異なる技術及びモデルが文献に開示されている（Ｌｕｏ Ｂ及びＰｒｅｓｔｗｉｃｈ ＧＤ，２００１；Ｃｌｅｌａｎｄ ＪＬら，Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．（２００１），１２（２）：２１２−９）。「薬学的に許容し得る」は、活性成分の生物活性の有効性を妨害せず、且つ投与される宿主にとって有毒ではない任意のキャリアを包含することを意味する。たとえば非経口投与については、上記の活性成分は、食塩水、デキストロース溶液、血清アルブミン、及びリンゲル液等の媒体中での注射のために、単位剤形で製剤されてもよい。キャリアはまた、デンプン、セルロース、タルク、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム、グリセロールモノステアレート、塩化ナトリウム、脱脂粉乳、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノール、及び石油、動物、植物、又は合成起源の油を含む様々な油（落花生油、大豆油、鉱油、ゴマ油）から選択することができる。
【０１２９】
医薬組成物は、液体形態又は凍結乾燥形態であってもよく、様々なｐＨ価及びイオン強度を有する希釈剤（Ｔｒｉｓ、クエン酸塩、酢酸塩、又はリン酸緩衝液）、Ｔｗｅｅｎ又はポリソルベート等の可溶化剤、ヒト血清アルブミン又はゼラチン等のキャリア、チメロサール、パラベン、ベンジルアルコニウムクロリド、又はベンジルアルコール等の防腐剤、アスコルビン酸又はメタ重亜硫酸ナトリウム等の酸化防止剤、及びリシン又はグリシン等の他の成分を含む。特定の組成物の選択は、処置されている状態、投与の経路、及び所望される薬物動態パラメータを含む多くの因子に依存するであろう。医薬組成物に適した成分に関するより大規模な調査は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第１８版 Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ編 Ｍａｃｋ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ（１９８０）に見い出される。
【０１３０】
好ましい実施形態では、タンパク質ベースの治療剤は、ＩＬ−１８Ｒαタンパク質の活性を阻害するために使用される。本発明の好ましい方法は、本明細書で上記に定義される、ＩＬ−１８Ｒαに選択的に結合する抗体、又はＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに選択的に結合する抗体を利用する。このようなタンパク質は、精製された組換えタンパク質を含む生理学的に許容し得る組成物の形態で、生理学的に許容し得るキャリア、賦形剤、又は希釈剤と共に投与される。上記キャリアは、用いられる投与量及び濃度で、レシピエントにとって有毒でない。通常、上記組成物の調製は、緩衝液、アスコルビン酸等の酸化防止剤、低分子量ポリペプチド（１０個未満のアミノ酸を有するポリペプチド等）、タンパク質、アミノ酸、グルコース、スクロース、又はデキストリン等の炭水化物、ＥＤＴＡ、グルタチオン、及び他の安定剤等のキレート剤、並びに賦形剤とＩＬ−１８Ｒαアンタゴニストを組み合わせることを要する。中性緩衝食塩水又は同種の血清アルブミンと混合した食塩水は、例示的な適切な希釈剤である。ＩＬ−１８Ｒαアンタゴニストは、希釈剤としての適切な賦形剤溶液（たとえばスクロース）を使用して、凍結乾燥物として好ましくは製剤される。適切な投与量は、標準の投薬試験で決定することができ、投与の選ばれた経路に従って変動してもよい。適切な業界基準に従って、ベンジルアルコール等の防腐剤もまた追加されてもよい。もちろん、投与の量及び頻度は、処置されている徴候の重症度、所望の応答、患者の年齢及び状態等のような因子に依存するであろう。
【０１３１】
投与の任意の承認されたモードは、活性成分の所望の血中濃度を確立するために当業者によって使用し、且つ決定することができる。たとえば、投与は、皮下経路、静脈内経路、皮内経路、筋肉内経路、腹腔内経路、鼻腔内経路、経皮的経路、直腸経路、口腔経路、又は頬側経路等の様々な非経口経路によるものであってもよい。好ましくは、本発明の医薬組成物は、皮下又は静脈内に注射によって投与される。最終的に選ばれた投与の経路は、多くの因子に依存するであろう、そして当業者によって確認されてもよい。
【０１３２】
本発明の方法で使用される医薬組成物はまた、蓄積注射、浸透圧ポンプ等を含む徐放性剤形態又は放出制御剤形態で、ＩＬ−１８Ｒαアンタゴニストの長期投与について、所定の速度で、好ましくは正確な投与量の単一の投与に適した単位剤形で投与することができる。
【０１３３】
非経口投与は、大量注射又は長い間にわたっての緩やかな灌流によるものとすることができる。非経口投与のための調製物は、無菌の水性溶液又は非水性溶液、懸濁液、及び乳濁液を含み、これらは、当技術分野で知られている補助的作用物質又は賦形剤を含有していてもよく、ルーチン的な方法に従って調製することができる。さらに、適切な油性注射懸濁液としての活性化合物の懸濁液が投与されてもよい。適した親油性の溶媒又は媒体は、脂肪油、たとえばゴマ油又は合成脂肪酸エステル、たとえばゴマ油又は合成脂肪酸エステル、たとえばオレイン酸エチル又はトリグリセリドを含む。懸濁液の粘度を増加させる物質を含有していてもよい水性注射懸濁液は、たとえば、カルボキシルメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、及び／又はデキストランを含む。任意選択で、懸濁液はまた、安定剤を含有していてもよい。医薬組成物は、注射による投与に適した溶液を含み、約０．０１〜９９．９９パーセント、好ましくは約２０〜７５パーセントの活性化合物を賦形剤と共に含有する。
【０１３４】
投与される投与量は、レシピエントの年齢、性別、健康状態、及び体重、併用処置の種類、それがもしあれば処置の頻度、並びに所望される効果の性質に依存性であろうということが理解される。投与量は、当業者によって理解され、決定できるように、個々の患者に適合されるであろう。各処置に必要な全用量は、複数回用量によって又は単一用量で投与されてもよい。
【０１３５】
本発明の一実施形態では、本明細書で上記に開示されるＩＬ−１８Ｒαアンタゴニストは、ＭＳを処置するために１週間当たり１回投与され、他の実施形態では、１週間当たり少なくとも２回投与され、他の実施形態では、１日当たり少なくとも１回投与される。ＩＬ−１８Ｒαアンタゴニストが抗体（つまり、本明細書で上記に開示される、ＩＬ−１８Ｒαに選択的に結合する抗体又は好ましくは、ＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに選択的に結合する抗体）である場合、用量は、０．１〜１０ｍｇ／ｋｇとすることができ、好ましくは１５分〜３時間の注入として静脈内に与えられる。この用量は、二週間に１回、毎週、又は数週間（２〜８週間）間隔をあけて繰り返し投与される。
【０１３６】
注射以外のＩＬ−１８Ｒαアンタゴニストの投与の経路が使用される場合、用量は、標準の医療行為に合わせて適切に合わせられる。たとえば、投与の経路が吸入である場合、投薬は、１０ｍｇ／用量〜１用量当たり５０ｍｇの用量範囲で、１週間当たり１〜７回であってもよい。
【０１３７】
多くの場合、より長い期間の処置が、所望の改善度を誘発するのに必要である可能性があるが、患者の状態における改善は、少なくとも３週間の期間にわたり１週間当たり１〜３回、本明細書で上記に開示されるＩＬ−１８Ｒαに選択的に結合する抗体、又はＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに選択的に結合する抗体の約１００ｍｇまでの用量を注射することにより得られるであろう。レジメンは無期限に継続されてもよい。
【０１３８】
５）併用治療：
いくつかの実施形態では、本明細書で上記に定義されるＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストは、ＭＳを処置する又は予防するための第２の治療薬と共に投与される。たとえば、ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニスト（たとえば、本明細書で上記に開示される、ＩＬ−１８Ｒαに選択的に結合する抗体、又はＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに選択的に結合する抗体）は、たとえばコルチコステロイド、免疫抑制剤、神経保護薬、免疫調節剤、又はインターフェロンを含む、ＭＳに対する標準の処置薬のいずれかと共にも投与されてもよい。
【０１３９】
本発明の一実施形態では、ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニスト（たとえば、本明細書で上記に開示される、ＩＬ−１８Ｒαに選択的に結合する抗体、又はＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに選択的に結合する抗体）は、コルチコステロイドと共に投与される。「コルチコステロイド」は、コレステロールに由来し、水素化されたシクロペンタノペルヒドロフェナントレン環構造によって特徴づけられ得る任意の自然発生ステロイドホルモン又は合成ステロイドホルモンが意味される。自然発生コルチコステロイドは、副腎皮質によって一般に産生される。合成コルチコステロイドは、ハロゲン化されてもよい。コルチコステロイドは、グルココルチコイド活性及び／又は鉱質コルチコイド活性を有していてもよい。
【０１４０】
例示的なコルチコステロイドは、たとえばデキサメタゾン、ベータメタゾン、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニド、酢酸トリアムシノロン、トリアムシノロンヘキサアセトニド、ベクロメタゾン、ジプロピオナート、ジプロピオン酸ベクロメタゾン一水化物、フルメタゾンピバレート、酢酸ジフロラゾン、フルオシノロンアセトニド、フルオロメトロン、酢酸フルオロメトロン、プロピオン酸クロベタゾール、デソキシメタゾン、フルオキシメステロン、フルプレドニソロン、ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、酪酸ヒドロコルチゾン、リン酸ヒドロコルチゾンナトリウム、コハク酸ヒドロコルチゾンナトリウム、ヒドロコルチゾンシピオネート、ヒドロコルチゾンプロブテート（ｈｙｄｒｏｃｏｒｔｉｓｏｎｅ ｐｒｏｂｕｔａｔｅ）、吉草酸ヒドロコルチゾン、酢酸コルチゾン、酢酸パラメタゾン、メチルプレドニソロン、酢酸メチルプレドニゾロン、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、プレドニゾロン、酢酸プレドニゾロン、リン酸プレドニゾロンナトリウム、プレドニゾロンテブテート、ピバル酸クロコルトロン、フルオシノロン、酢酸デキサメタゾン２１、吉草酸ベータメタゾン１７、イソフルプレドン、９−フロオロコルチゾン、６−ヒドロキシデキサメタゾン、ジクロリゾン、メクロリゾン（ｍｅｃｌｏｒｉｓｏｎｅ）、フルプレジデン、ドキシベタソール、ハロプレドン、ハロメタゾン、クロベタゾン、ジフルコルトロン、イソフルプレドンアセテート、フルオロヒドロキシアンドロステンジオン、ベクロメタゾン、フルメタゾン、ジフロラゾン、フルオシノロン、クロベタゾール、コルチゾン、パラメタゾン、クロコルトロン、プレドニゾロン２１−ヘミスクシネート遊離酸、メタスルホ安息香酸プレドニゾロン、プレドニゾロンテルブテート（ｐｒｅｄｎｉｓｏｌｏｎｅ ｔｅｒｂｕｔａｔｅ）、及びトリアムシノロンアセトニド２１−パルミテートを含む。
【０１４１】
ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニスト（たとえば、本明細書で上記に開示される、ＩＬ−１８Ｒαに選択的に結合する抗体、又はＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに選択的に結合する抗体）と共に投与されるコルチコステロイドの好ましい例は、プレドニゾン及び／又はＩＶメチルプレドニソロンである。
【０１４２】
本発明の一実施形態では、ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニスト（たとえば、本明細書で上記に開示される、ＩＬ−１８Ｒαに選択的に結合する抗体、又はＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに選択的に結合する抗体）は、免疫抑制剤と共に投与される。本発明の実施形態では、免疫抑制剤は、メトトレキセート、アザチオプリン、シクロホスファミド、及びクラドリビンからなる群から選ばれ、これらは、脱髄疾患の重篤な進行型形態に一般に使用される。
【０１４３】
本発明の他の実施形態では、ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニスト（たとえば、本明細書で上記に開示される、ＩＬ−１８Ｒαに選択的に結合する抗体、又はＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに選択的に結合する抗体）は、神経保護薬と共に投与される。本発明の一実施形態では、神経保護薬は、経口ミエリン、コパクソン（Ｔｅｖａ社製の酢酸グラチラマー）、タイサブリ（Ｂｉｏｇｅｎ社／Ｅｌａｎ社）、ノバントロン（Ｓｅｒｏｎｏ社）、テリフルノミド（Ａｖｅｎｔｉｓ社）、クラドリビン（Ｓｅｒｏｎｏ社／ＩＶＡＸ社）、ＧＳＫ社／田辺製薬の６８３６９９（Ｔ−００４７）、ダクリズマブ（Ｒｏｃｈｅ社）、ラキニモド（Ａｃｔｉｖｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ社）、及びＺＫ−１１７１３７（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ ＡＧ社）からなる群から選ばれる。これらの化合物はすべて、販売されている又はＭＳを処置するための臨床試験の最中である。
【０１４４】
本発明の他の実施形態では、ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニスト（たとえば、本明細書で上記に開示される、ＩＬ−１８Ｒαに選択的に結合する抗体、又はＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに選択的に結合する抗体）は、免疫調節剤と共に投与される。この点で、本発明での使用のための特定の免疫調節剤は、ＦＴＹ７２０（２−アミノ−２−［２−（４−オクチルフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、フィンゴリモド）を含む。ＭＳを処置するためのＩＩ期でのＦＴＹ７２０（Ｎｏｖａｒｔｉｓ社）は、以下の化学式を有する。
【化１】
【０１４５】
ＦＴＹ７２０は、ミリオシンの化学的修飾によって得られた、経口的に活性の免疫抑制剤（たとえば国際公開第９４／０８９４３号；国際公開第９９／３６０６５号を参照されたい）として同定された。本発明での使用のための他の免疫調節剤は、ＦＴＹ７２０の誘導体を含む。ＦＴＹ７２０の誘導体は、国際公開第９４／０８９４３号に記載される、以下の化学式を有する２−アミノ−１，３−プロパンジオール化合物及びその任意の薬学的に許容し得る塩を含み、
【化２】
Ｒは、二重結合、三重結合、酸素、硫黄、スルフィニル基、スルホニル基、−Ｎ（Ｒ６）−からなる群から選択される結合、ヘテロ原子、又は基を鎖中で有していてもよく、Ｒ６は、水素、アルキル、アラルキル、アシル、又はアルコキシカルボニル、カルボニル、任意選択で置換されたアリーレン、任意選択で置換されたシクロアルキルエン、任意選択で置換されたヘテロアリーレン、及びその脂環式化合物（ａｌｉｃｙｃｌｅ）であり、且つ二重結合、三重結合、任意選択で置換されたアリル、任意選択で置換されたシクロアルキル、任意選択で置換されたヘテロアリル、又はその脂環式化合物；任意選択で置換されたアリル、任意選択で置換されたシクロアルキル、任意選択で置換されたヘテロアリル、又はその脂環式化合物によってその鎖端で置換されていてもよい任意選択で置換された直鎖状炭素鎖又は分枝炭素鎖であり、
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５は、同じ又は異なり、それぞれは、水素、アルキル、アラルキル、アシル、又はアルコキシカルボニルを表し、又はＲ４及びＲ５は、アルキル、アリル、又はアラルキルによって置換されていてもよいアルキレン鎖を形成するよう結合していてもよい。
【０１４６】
上記の任意選択で置換された直鎖状炭素鎖又は分枝炭素鎖は、アルコキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、アラルキルオキシ、アルキルエンジオキシ、アシル、アルキルアミノ、アルキルチオ、アシルアミノ、アルコキシカルボニル、アルコキシカルボニルアミノ、アシルオキシ、アルキルカルバモイル、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ニトロ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシイミノ、ヒドロキシ、カルボキシ、任意選択で置換されたアリル、任意選択で置換されたアリールオキシ、任意選択で置換されたシクロアルキル、任意選択で置換されたヘテロアリル、及びその脂環式化合物からなる群から選択される置換基を有してもよく、前述の任意選択で置換されたアリーレン、任意選択で置換されたシクロアルキレン、任意選択で置換されたヘテロアリーレン、及びその脂環式化合物は、アルコキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、アラルキルオキシ、アルキルエンジオキシ、アシル、アルキルアミノ、アルキルチオ、アシルアミノ、アルコキシカルボニル、アルコキシカルボニルアミノ、アシルオキシ、アルキルカルバモイル、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ニトロ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシ、及びカルボキシからなる群から選択される置換基を有してもよく、任意選択で置換されたアリル、任意選択で置換されたアリールオキシ、任意選択で置換されたシクロアルキル、任意選択で置換されたヘテロアリル、及びその脂環式化合物は、アルキル、アルコキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、アラルキルオキシ、アルキルエンジオキシ、アシル、アルキルアミノ、アルキルチオ、アシルアミノ、アルコキシカルボニル、アルコキシカルボニルアミノ、アシルオキシ、アルキルカルバモイル、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ニトロ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシ、及びカルボキシからなる群から選択される置換基を有していてもよい。
【０１４７】
上記２−アミノ−１，３−プロパンジオール化合物の特定の例は、２−アミノ−２−［２−（４−ヘプチルフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−オクチルフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−ノニルフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール ２−アミノ−２−［２−（４−デシルフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−ウンデシルフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−ドデシルフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−トリデシルフェニル）−エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−テトラデシルフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−ヘキシルオキシフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−ヘプチルオキシフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−オクチルオキシフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−ノニルオキシフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−デシルオキシフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−ウンデシルオキシフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−ドデシルオキシフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−トリデシルオキシフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−（８−フルオロオクチル）フェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−（１２−フルオロドデシル）フェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−（７−フルオロヘプチルオキシ）フェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−（１１−フルオロウンデシルオキシ）フェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−（７−オクテニルオキシ）フェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−ヘプチルフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−オクチルフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−ノニルフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−デシルフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−ウンデシルフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−ドデシルフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−ヘプチルオキシフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−オクチルオキシフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−ノニルオキシフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−ウンデシルオキシフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、又は２−アミノ−２−［２−（４−（７−オクテニルオキシ）フェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、及びその任意の薬学的に許容し得る塩を含む。
【０１４８】
本発明の他の実施形態では、ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニスト（たとえば、本明細書で上記に開示される、ＩＬ−１８Ｒαに選択的に結合する抗体、又はＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに選択的に結合する抗体）は、インターフェロンと共に投与される。この点で、本発明での使用のための特定のインターフェロンは、インターフェロン−ベータである。用語「インターフェロン（ＩＦＮ）」及び「インターフェロン−ベータ（ＩＦＮ−ベータ）」は、本明細書で使用されるように、体液からの単離によって得られた又は原核生物若しくは真核生物の宿主細胞からのＤＮＡ組換え技術によって得られた特にヒト起源の線維芽細胞インターフェロン並びにその塩、機能的誘導体、変異体、類似体、及び活性断片を含むことが意図される。特定の種類のインターフェロンベータは、インターフェロンベータ−１ａである。
【０１４９】
ヒト起源のインターフェロンの使用は、本発明で使用するのに好ましい。本発明で使用する適したＩＦＮ−ベータは、たとえばＲｅｂｉｆ（登録商標）（Ｓｅｒｏｎｏ社）、Ａｖｏｎｅｘ（登録商標）（Ｂｉｏｇｅｎ社）、又はＢｅｒｔａｓｅｒｏｎ／Ｂｅｔａｆｅｒｏｎ（登録商標）（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ社）として市販で入手可能である。Ｒｅｂｉｆ（登録商標）（組換えヒトインターフェロン）は、多発性硬化症（ＭＳ）のためのインターフェロン治療において最近開発されたものであり、これは処置における著しい進歩を表す。Ｒｅｂｉｆ（登録商標）は、哺乳動物細胞系から産生されたインターフェロン（ＩＦＮ）−ベータ１ａである。皮下に１週間当たり３回与えられたインターフェロンベータ−１ａは、再発寛解型多発性硬化症（ＲＲＡＭＳ）の処置において効果的であることが確立された。インターフェロンベータ−１ａは、再発の数及び重症度を低下させ、且つＭＲＩによって測定される疾患の負担及び疾患活性を低下させることによって、ＭＳの長期的経過にプラスの効果を有し得る。したがって本発明の方法での使用のためのＩＬ−１８Ｒαアンタゴニストと共に投与されるインターフェロンの特定の例は、Ｒｅｂｉｆ（登録商標）（Ｓｅｒｏｎｏ社）、Ａｖｏｎｅｘ（登録商標）（Ｂｉｏｇｅｎ社）、又はＢｅｒｔａｓｅｒｏｎ／Ｂｅｔａｆｅｒｏｎ（登録商標）（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ社）である。
【０１５０】
本発明の特定の態様は、上記処置を必要とする患者におけるＭＳ、特に再発寛解型（ＲＲ）ＭＳ、二次進行型（ＳＰ）ＭＳ、一次進行型（ＰＰ）ＭＳ、又は進行再発型（ＰＲ）ＭＳを処置する方法に関し、患者に、本明細書で上記に開示されるＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニスト及び本明細書で上記に開示されるコルチコステロイド、免疫抑制剤、神経保護薬、免疫調節剤、又はインターフェロンの組み合わせの治療的有効量を投与することを含む。ある実施形態では、コルチコステロイドは、プレドニゾン又はＩＶメチルプレドニソロンである。ある実施形態では、免疫抑制剤は、メトトレキセート、アザチオプリン、シクロホスファミド、又はクラドリビンである。ある実施形態では、神経保護薬は、経口ミエリン、コパクソン、タイサブリ、ノバントロン、テリフルノミド、クラドリビン、６８３６９９（Ｔ−００４７）、ダクリズマブ、ラキニモド、又はＺＫ−１１７１３７である。ある実施形態では、免疫調節剤は、２−アミノ−２−［２−（４−オクチルフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール（ＦＴＹ７２０）である。ある実施形態では、インターフェロンは、インターフェロンベータ−１ａ（特にＲｅｂｉｆ（登録商標）（Ｓｅｒｏｎｏ社））である。
【０１５１】
ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニスト（たとえば、本明細書で上記に開示される、ＩＬ−１８Ｒαに選択的に結合する抗体、又はＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに選択的に結合する抗体）及び本明細書で上記に開示される第２の治療薬は、同時に、別々に、又は連続して投与されてもよい。たとえば、ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストが最初に投与され、その後に第２の治療薬が投与されてもよい。その代わりに、第２の治療薬が最初に投与され、その後にＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストが投与されてもよい。いくつかの場合では、ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニスト及び第２の治療薬は、同じ製剤中で投与される。他の場合では、ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニスト及び第２の治療薬は、異なる製剤中で投与される。ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニスト及び第２の治療薬が異なる製剤中で投与される場合、それらの投与は、同時であってもよく又は順次であってもよい。
【０１５２】
本発明は、哺乳動物患者、好ましくはヒト患者におけるＭＳの治療での同時の、別個の、又は順次の使用のための、上記又は下記に記載されるＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストのいずれか及び併用調製物としての本明細書で上記に開示されるコルチコステロイド、免疫抑制剤、神経保護薬、免疫調節剤、又はインターフェロンを含む産物にさらに関する。
【０１５３】
本明細書に引用されたすべての特許及び参考文献は、それらの全体が参照によって本明細書に含まれる。
【０１５４】
本発明の他の態様及び利点は、以下の実施例に開示されることとなり、説明的なものとしてのみ考えられるべきであり、本出願の範囲を限定しない。
【実施例】
【０１５５】
（実施例１）
ｐ３５−／−ＩＬ−１８−／−二重ノックアウトマウスはＥＡＥに対して感受性である
ＩＬ−１２ｐ３５の欠失は、マウスにおいて、ＭＯＧ（ミエリン乏突起膠細胞糖タンパク質）ペプチド誘発性実験的自己免疫脳脊髄炎（ＥＡＥ）に対してマウスを感受性過度にすることが以前に示された（Ｂｅｃｈｅｒ，Ｂ．ら Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ １１０，４９３−４９７（２００２））。ＩＬ−１８は、Ｔｈ１細胞（１型ヘルパーＴ細胞）を極性化するようＩＬ−１２と相乗作用で作用し、またＳｈｉらは、ＩＬ−１８が欠損したマウスはＥＡＥに対して抵抗性であることを実証する証拠を提示した（Ｓｈｉ，Ｆ．Ｄ．ら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６５，３０９９−３１０４（２０００））。
【０１５６】
ＩＬ−１８がｐ３５−／−マウスにおけるＩＬ−１２の損失を代償し、したがってそれらのＥＡＥ感受性につながり得るかどうかを評価するために、我々は、ＩＬ−１２ｐ３５及びＩＬ−１８の両方が欠損したマウスを生成した（ｐ３５−／−×ＩＬ−１８−／−）。
【０１５７】
マウス（ｎ＝５マウス／グループ）を、ＣＦＡ（ＤＩＦＣＯ社、デトロイト、ＭＩ）中で乳化した、ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ社から得たＭＯＧ３５−５５ペプチド（アミノ酸配列：ＭＥＶＧＷＹＲＳＰＦＳＲＶＶＨＬＹＲＮＧＫ（配列番号１１））の２００μｇを用いて皮下に免疫した。マウスは、免疫時に及び４８時間後に、２００ｎｇ百日咳毒素（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社）を腹腔内に受けた。
【０１５８】
マウスは、以下のように毎日スコア化した：０）検出可能なＥＡＥの徴候なし；０．５）末端の尾部がぐったりしている；１）全尾部がぐったりしている；２）片側の部分的な後肢の麻痺；２．５）両側の部分的な肢の麻痺；３）両側の全後肢の麻痺；３．５）全後肢の麻痺及び片側の前肢の麻痺；４）前肢及び後肢の全麻痺（スコア＞４は安楽死させる）；５）死。各時点で、各グループの平均疾患スコアを示す。統計的有意差は、独立スチューデントｔ検定を使用して評価した。
【０１５９】
ＣＦＡ中で乳化したＭＯＧ３５−５５を用いた免疫は、ｐ３５−／−×ＩＬ−１８−／−マウスがＥＡＥに対して完全に感受性であり、ｗｔで産生されるものに類似する疾患スコア及び疾患発生を有することを示した（図１ａを参照されたい）。したがって、ｐ３５−／−マウスにおけるＩＬ−１８欠失によって生成された、保護の欠如は、ＩＬ−１８が、ｐ３５−／−マウスにおけるＥＡＥ感受性を誘発する原因ではないことを示すが、ＩＬ−１８自体が、ＥＡＥ病因にほとんど又はまったく効果を有していないサイトカインであることをも示唆する。
【０１６０】
（実施例２）
ＩＬ−１８Ｒα−／−マウスではなくＩＬ−１８−／−マウスがＥＡＥに対して感受性である
ｐ３５−／−×ＩＬ−１８−／−マウスにおける我々の実験は、ＥＡＥにおけるＩＬ−１８の、以前に提唱された病原性の役割に矛盾するように思われたので、我々は、ＭＯＧペプチド（実施例１に記載される）を用いてｗｔマウス及びＩＬ−１８−／−マウスを能動免疫し、ＩＬ−１８−／−マウスがＥＡＥに対して完全に感受性であり、実際に、ｗｔマウスに匹敵する臨床スコア及び疾患進行を有することを見い出した（図１ｂ及び表１を参照されたい）。
【０１６１】
ＩＬ−１８Ｒαが欠損したマウスは、ＩＦＮγ産生が低下するという点で、ＩＬ−１８−／−マウスに類似する表現型を有するとして記載された。興味深いことには、ｗｔマウス及びＩＬ−１８−／−マウスの両方と著しい対照をなして、ＩＬ−１８Ｒα−／−マウスは、ＥＡＥ誘発に対して完全に抵抗性であった（図１ｂ及び表１を参照されたい）。
【０１６２】
ＥＡＥ誘発後に得られたｗｔマウス、ＩＬ−１８−／−マウス、及びＩＬ−１８Ｒα−／−マウスからの脊髄の組織学的分析は、ＣＮＳ中への白血球浸潤が、疾患の臨床的な重症度と十分に相互に関連することを実証した。
【０１６３】
そうするために、マウスを、ＣＯ２を用いて安楽死させ、その後、ＰＢＳを用いて灌流し、続いてＰＢＳ中４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）を用いて灌流した。脊柱を摘出し、ＰＢＳ中４％ＰＦＡ中で固定した。次いで、炎症細胞の浸潤を評価するためのヘマトキシリン＆エオシン又はＣＤ３抗体、Ｂ２２０抗体、及びＭＡＣ−３抗体（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ社）又は脱髄の程度を決定するためのルクソールファストブルーを用いて染色する前に、脊髄を解剖し、パラフィン包埋した。
【０１６４】
ＥＡＥ感受性のｗｔマウス及びＩＬ−１８−／−マウスは、Ｔ細胞（図２ｃ）、マクロファージ（図２ｅ）、及びＢ細胞（図２ｄ）等の炎症細胞の浸潤（図２ａ）及び脱髄（図２ｂ）によって特徴づけられる著しい炎症を有したが、ＥＡＥ抵抗性のＩＬ−１８Ｒα−／−マウスの脊髄中に炎症性浸潤物又は脱髄は存在しなかった（図２ａ〜ｅ）。
【０１６５】
ＩＬ−１８−／−マウスがＩＬ−１８を分泌することができないことを確認するために、我々は、ターゲティング戦略及びマウスの遺伝子型について広範囲に確認し、ＩＬ−１８−／−マウスがＩＬ−１８ｍＲＮＡ又はＩＬ−１８タンパク質を含有しないことを明確に立証することができた。我々はまた、我々が、ｗｔマウス及びＩＬ−１８−／−マウスに由来する活性化脾細胞から分泌されたＩＬ−１８を検出することができるかどうかを分析し、ＩＬ−１８−／−マウスが、ｗｔマウスとは対照的に、実際に、完全に、ＩＬ−１８欠損であることを示した（図３を参照されたい）。
【０１６６】
ＩＬ−１８の欠失がＩＦＮγ応答の不足を一貫してもたらすことが多くの実験系で観察されたので（Ｗｅｉ，Ｘ．Ｑ．ら Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６３，２８２１−２８２８（１９９９），Ｋｉｎｊｏ，Ｙ．ら Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９，３２３−３２９（２００２））、我々は、１６時間、レクチンコンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）を用いて、ｉｎ ｖｉｔｒｏで、未処置ｗｔマウス、ＩＬ−１８−／−マウス、及びＩＬ−１８Ｒα−／−マウスに由来するリンパ球を刺激し、ＩＦＮ−γ産生を、ＥＬＩＳＡによって続いて測定した。
【０１６７】
そうするために、腋窩リンパ節及び鼠径リンパ節（ＬＮ）を未処置マウスから単離した。２×１０５細胞を三通り、９６ウェルプレート中に配置した。５μｇ／ｍｌ ＣｏｎＡを１６時間の刺激のために使用し、ＩＦＮ−γ産生を、ＥＬＩＳＡ（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ社、ラホーヤ、ＣＡ）によって続いて測定した。
【０１６８】
ＩＬ−１８がＩＦＮγ産生に影響を有するという原理と一致して、ＩＬ−１８−／−マウス及びＩＬ−１８Ｒα−／−マウスの両方からのＬＮ細胞は、ｗｔ ＬＮ細胞とは対照的にＩＦＮγを分泌しなかった（図４ａ）。
【０１６９】
（実施例３）
ＩＬ−１８Ｒαのブロックは、ＩＬ−１８−／−マウスにおけるＥＡＥを予防する
ＥＡＥに関してのＩＬ−１８欠損マウス及びＩＬ−１８Ｒα欠損マウスの性質の不一致は、強力な脳炎誘発性特性を有するさらなるＩＬ−１８Ｒαリガンドを強く示すものである。ＩＬ−１８Ｒα及びＩＬ−１８が、無関係の生物学的機能を有するかどうかを評価するために、我々は、ＥＡＥ感受性のＩＬ−１８−／−マウスにおいてＩＬ−１８Ｒαをブロックした。
【０１７０】
マウス（ｎ＝５マウス／グループ）を、ＣＦＡ（ＤＩＦＣＯ社、デトロイト、ＭＩ）中で乳化した、ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ社から得たＭＯＧ３５−５５ペプチド（アミノ酸配列：ＭＥＶＧＷＹＲＳＰＦＳＲＶＶＨＬＹＲＮＧＫ（配列番号１１））の２００μｇを用いて皮下に免疫した。マウスは、免疫時に及び４８時間後に、２００ｎｇ百日咳毒素（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社）を腹腔内に受けた。モノクローナル抗ＩＬ−１８Ｒα抗体（クローン１１２６２４）（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社）を、免疫の１日前に（４５０μｇ／マウス）及びその後３日ごと（３００μｇ／マウス）若しくは疾患発症から始めて３日ごと（３００μｇ／マウス）投与した又はしなかった。
【０１７１】
マウスは、以下のように毎日スコア化した：０）検出可能なＥＡＥの徴候なし；０．５）末端の尾部がぐったりしている；１）全尾部がぐったりしている；２）片側の部分的な後肢の麻痺；２．５）両側の部分的な肢の麻痺；３）両側の全後肢の麻痺；３．５）全後肢の麻痺及び片側の前肢の麻痺；４）前肢及び後肢の全麻痺（スコア＞４は安楽死させる）；５）死。
【０１７２】
各時点で、各グループの平均疾患スコアを示す。統計的有意差は、独立スチューデントｔ検定を使用して評価した。
【０１７３】
免疫の１日前及びその後、実験の終了まで３日ごとに与えた抗ＩＬ−１８Ｒα ｍＡｂを用いたＩＬ−１８−／−マウスの処置は、疾患発生を著しく低下させた（図５ａ）。抗ＩＬ−１８Ｒα ｍＡｂの投与は、ＩＬ−１８Ｒα発現細胞の欠失につながりもせず、血液、ＬＮ、又は脾臓中の末梢白血球の組成を変えもしなかった（図１１を参照されたい）。
【０１７４】
ＩＬ−１８Ｒαアンタゴニストは、そのリガンドが遺伝子ターゲティングによって完全に除去されたマウスにおいてでさえＥＡＥを予防するという事実及びＩＬ−１８は、報告によれば、ＩＬ−１８Ｒαに対するほんの低い親和性しか有していないという事実を組み合わせて、我々は、他のリガンドが、ＩＬ−１８Ｒαによって媒介される結合、シグナル伝達、及び免疫発生の原因にちがいないと提唱する。
【０１７５】
興味深いことには、免疫後（ｐ．ｉ．１０日目）にアンタゴニストｍＡｂを用いた、ＩＬ−１８−／−マウスの処置もまた、ＥＡＥ進行を抑止し（図５ｂ）、これは、免疫前に投与されたＡｂと同じ程度まで起こり、ＩＬ−１８Ｒα結合は、ＥＡＥのエフェクター期の間の重要なイベントであることを示唆する。
【０１７６】
（実施例４）
Ａｇ駆動性ではなくマイトジェン駆動性の活性化は、Ｔｈ１極性化のためにＩＬ−１８を必要とする
ＥＡＥ感受性に関する、ＩＬ−１８−／−マウス及びＩＬ−１８Ｒα−／−マウス間の対立的な分裂を考慮すれば、我々は、エフェクター表現型に向けて、未処置Ｔ細胞を正しくプライムし、且つ極性化する両マウスの能力を決定することを望んだ。ｗｔマウス、ＩＬ−１８−／−マウス、及びＩＬ−１８Ｒα−／−マウスを、ＫＬＨを用いて皮下で免疫し、７日後、リンパ球を、単離し、続いて、ＫＬＨを用いてｉｎ ｖｉｔｒｏで再刺激した。
【０１７７】
そうするために、ＣＦＡ中で乳化した１００μｇ／側腹部のキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）（Ｓｉｇｍａ社）を７日前に注射によってプライムしたマウスから腋窩リンパ節及び鼠径リンパ節を単離した。２×１０５細胞を三通り、９６ウェルプレート中に配置した。ＫＬＨリコール細胞を、５０μｇ／ｍｌ ＫＬＨ、５μｇ／ｍｌ ＣｏｎＡ、又は培地を用いて４８時間刺激し、０．５μＣｉ／ｍｌ ３［Ｈ］−チミジンを、増殖応答を観察するために２４時間後に追加した。チミジン取り込みは、Ｆｉｌｔｅｒｍａｔｅ Ｈａｒｖｅｓｔｅｒ及びシンチレーション発光カウンターを使用して評価した。サイトカイン分析については、姉妹培養物の培養上清を、４８時間後に採取し、ＥＬＩＳＡ（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ社、ラホーヤ、ＣＡ）によってＩＦＮγ産生を及びサイトカインアレイ（Ｒａｙｂｉｏｔｅｃｈ社）によって全体的なサイトカイン／ケモカイン分泌を分析した。
【０１７８】
驚いたことに、我々は、ＩＬ−１８−／−マウス及びＩＬ−１８Ｒα−／−マウスのＩＦＮγ産生能力においていかなる有意差をも観察しなかった、そして、ＩＬ−１８−／−マウス又はＩＬ−１８Ｒα−／−マウスに由来するリンパ球によって産生されたＩＦＮγのレベルは、ｗｔマウスから得られた細胞と同一であった（図４ｂ）。さらに、異なるマウス株間のＡｇ駆動性リンパ球の増殖能は、同一であった（図４ｃ）。ＩＬ−１８は、多クローン性に活性化された直後のＴ細胞の早期ＩＦＮγ応答のための決定的な共同因子である（図４ａ）が、Ａｇ駆動性Ｔｈ１極性化は、ＩＬ−１２に単独で、より依存性であり、したがってＩＬ−１８とは無関係であるという考えを我々のデータは支持する。
【０１７９】
ＴＨ１発生は、ＩＬ−１８Ｒα−／−マウスにおいて影響されないように思われたが、我々は、次に、ＩＬ−１８Ｒα欠損抗原提示細胞（ＡＰＣ）が未処置Ｔ細胞をプライムする性能を評価することを望んだ。
【０１８０】
そうするために、我々は、成熟ＳＭＡＲＴＡペプチド（ｐ１１）パルスｗｔ、ＩＬ−１８−／−、及びＩＬ−１８Ｒα−／−ＢＭ（骨髄）由来樹状細胞（ＤＣ）をＳＭＡＲＴＡ−ＴｃＲトランスジェニックＣＤ４＋Ｔ細胞と同時培養し、チミジン取り込みによって増殖を測定した（図４ｄ）。
【０１８１】
使用したプロトコールは以下のとおりであった。
ＢＭ由来ＤＣの生成：ＢＭドナーマウスを、ＣＯ２を使用して安楽死させ、大腿骨及び脛骨を摘出した。ＢＭ細胞は、ＰＢＳを用いて骨を洗い流すことにより単離し、１００μｍ細胞濾過器を通して濾過した。細胞（１０ｍｌ中２〜２．５ｘ１０６）を、１０％ＧＭ−ＣＳＦを追加した完全ＲＰＭＩ中で培養した。少なくとも６日後に、ＢＭ由来ＤＣを、１０μｇ／ｍｌリポ多糖（ＬＰＳ）を用いて一晩成熟させたが、未成熟ＢＭ由来ＤＣは、ＧＭ−ＣＳＦ含有培地中に維持した。少なくとも７日目に、ＢＭ由来ＤＣを実験的に使用した。
トランスジェニック（Ｔｇ）Ｔ細胞増殖：トランスジェニックＴ細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ増殖については、脾臓を、未処置ＴｃＲ Ｔｇマウスから単離し、ＣＤ４＋Ｔ細胞を、ＢＤ Ｂｉｏｍａｇ磁気ビーズを使用して精製した。Ｔ細胞単離の純度をＦＡＣＳ分析によって確認した。１×１０５ Ｓｍａｒｔａ Ｔ細胞を、３００〜３０，０００の未成熟の又は成熟した骨髄由来の樹状細胞と共に９６ウェルプレート中で培養した。同時培養前に、ＢＭ由来ＤＣを、３時間、ＲＰＭＩ中で１μｇ／ｍｌ ＳＭＡＲＴＡ ｐ１１ペプチド（ＧＰＤＩＹＫＧＶＹＱＦＫＳＶＥＦＤ（配列番号１２））（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ社）を用いてパルスし、その後洗浄し、２０００ラドで照射した。非パルスＤＣは、単独で培養したＴ細胞と同様にコントロールとして使用した。細胞を４日間培養し、そして３［Ｈ］−チミジンを培養の最後の１８時間追加した。
【０１８２】
未成熟ＤＣがＳＭＡＲＴＡ Ｔ細胞を活性化するために使用された場合でさえ、Ｔ細胞プライミングにおける有意差は観察されなかった。
【０１８３】
たとえＩＬ−１８Ｒα−／−ＤＣ及びＴ細胞が活性化される能力に欠損がないということを上記のデータが示唆しても、我々は、活性化マーカー発現のレベルで、両細胞型の活性化ステータスを確認することに決めた。我々は、ＦＡＣＳによって、ＬＰＳ成熟ＤＣ及びＫＬＨ再刺激Ｔ細胞上の発現マーカーを調べ、ＩＬ−１８Ｒα−／−ＤＣ上のＣＤ８０、ＣＤ８６、及びＣＤ４０のアップレギュレーションに差異がないこと、さらにＩＬ−１８Ｒα−／−Ｔ細胞によるＣＤ５、ＣＤ６２Ｌ、及びＣＤ４４の発現に、ｗｔ細胞及びＩＬ−１８−／−細胞と比較して差異がないことを示した（図６）。したがって、ＩＬ−１８Ｒα破壊は、Ｔ細胞又はＤＣの活性化に、少なくとも、適切な刺激に必要な表面マーカーのアップレギュレーションのレベルでは、影響を及ぼさない。
【０１８４】
（実施例５）
ＩＬ−１８Ｒα−／− ＣＤ４＋Ｔ細胞は、ＥＡＥの間、ＣＮＳに侵入する
ＥＡＥは、疾患のピークでの、ＣＮＳ中への炎症細胞の大量の流入によって特徴づけられるが、免疫細胞はまた、臨床症状の発症前にもＣＮＳに侵入する（Ｈｉｃｋｅｙ，Ｗ．Ｆ．Ｂｒａｉｎ Ｐａｔｈｏｌ．１，９７−１０５（１９９１），Ｗｅｋｅｒｌｅ，Ｈ．ら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．１３２，４３−５７（１９８７））。たとえば、ＣＮＳ中へのＣＤ４＋Ｔ細胞の動員は、ＥＡＥのエフェクター期の開始に決定的であるが、ＣＮＳ中への多形核白血球の浸潤は、これらのイベントを組織化することにおける役割を有するように思われる（ＭｃＣｏｌｌ，Ｓ．Ｒ．ら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１，６４２１−６４２６（１９９８））。したがって、ＩＬ−１８Ｒα−／−炎症細胞が、症状発現前の疾患の時点でのＣＮＳに完全に不在であるかどうかを立証するために、我々は、マウスを免疫し、免疫後の５、７、及び９日目に炎症性浸潤物についてＣＮＳを分析した。
【０１８５】
ＩＬ−１８Ｒα−／−マウスにおける疾患の終点での免疫細胞の欠如とは対照的に（図２ａ〜ｅ）、ＩＬ−１８Ｒα−／− ＣＤ４＋Ｔ細胞は、フローサイトメトリーによって分析されたように、免疫後の５、７、及び９日目に、ｗｔマウス及びＩＬ−１８−／−マウスと同じ程度までＣＮＳ浸潤が可能であった（図７）。ＣＮＳ中に存在する、匹敵する数の顆粒球、マクロファージ、及びＢ細胞もあった。しかしながら、図２に見られるように、臨床的な疾患の時点での、ＣＮＳ中のＩＬ−１８Ｒα−／−炎症細胞の存在に有意差があり、したがって、それらが、ＥＡＥのエフェクター期中に存続することができないことを実証する。興味深いことには、これらの結果は、ＩＬ−２３ｐ１９−／−マウスで得られたデータを反映し、このマウスは、ＭＯＧ３５−５５誘発性ＥＡＥに対して抵抗性であり、このマウスにおいて、欠損は、免疫後７日目に観察されたように、ＣＮＳ中への炎症細胞の浸潤を予防するものではない（Ｌａｎｇｒｉｓｈ，Ｃ．Ｌ．ら，Ｊ Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０１，２３３−２４０（２００５））。
【０１８６】
（実施例６）
ＩＬ−１８Ｒαの欠如がＩＬ−１７産生を予防する
ＣＮＳ中への随伴性炎症細胞侵入を伴う、ＥＡＥ抵抗性に関するＩＬ−１８Ｒα−／−マウス及びＩＬ−２３−／−マウス間の類似性は、我々のマウスにおける、ＩＬ−１７産生へのＩＬ−１８Ｒαの影響を評価するよう我々を駆り立てた。ＩＬ−１７産生ＴＨ細胞（ＴＨＩＬ−１７）は、自己免疫炎症の間の主な病原性集団であることが現在承認されている。サイトカイン分泌に関する、ＥＡＥ感受性ＩＬ−１８−／−マウス及びＥＡＥ抵抗性ＩＬ−１８Ｒα−／−マウスの間の差異を定義するために、我々は、同系統のリコールＡｇに出会った際にリンパ球によって分泌された６２種の異なるサイトカインの同時分析を可能にするサイトカインタンパク質アレイ（Ｒａｙｂｉｏｔｅｃｈ社）を使用した。
【０１８７】
ｗｔマウス、ＩＬ−１８−／−マウス、及びＩＬ−１８Ｒα−／−マウスをＫＬＨを用いて免疫し、７日後に、リンパ球を単離し、５０μｇ／ｍｌ ＫＬＨを用いて再刺激した（図８を参照されたい）。
【０１８８】
ＩＬ−１８−／−リンパ球と比較して、ＩＬ−１８Ｒα−／−リンパ球は、ＩＬ−１７の産生が非常に少なかった。この調査結果を確かめるために、我々は、ＲＮＡレベル及びタンパク質レベルの両方でこのサイトカインのレベルを分析した。ＫＬＨを用いた再刺激の際にリンパ球から得られたＲＮＡのリアルタイムＰＣＲは、両方のＩＬ−１７ ｍＲＮＡの発現が、ｗｔ細胞及びＩＬ−１８−／−細胞と比較して、ＩＬ−１８Ｒα−／−細胞中で著しく減少することを示した（図８ａ）。これらの調査結果は、同じＫＬＨ再刺激細胞の上清を使用したＩＬ−１７ ＥＬＩＳＡによって確証を与えられた（図８ｂ）。
【０１８９】
（実施例７）
ＩＬ−１８Ｒα破壊は、アクセサリー細胞免疫区画中の細胞に影響を及ぼす
ＩＬ−１８Ｒαの欠如は、ＴＨＩＬ−１７発生の予防を介してＥＡＥの発生を完全に予防するが、その推定上のリガンドＩＬ−１８は無関係のように思われる。
【０１９０】
ＩＬ−１８Ｒαがその主要な影響を及ぼす細胞型は知られていないままである。これは、主に、ＩＬ−１８Ｒｓが様々な細胞型及び組織によって発現されるという事実によるものである。しかしながら、ＣＤ４＋Ｔ細胞上のＩＬ−１８Ｒαの存在が、ＴＨＩＬ−１７細胞の続く極性化に対して絶対的に決定的であると推定されそうである。ＥＡＥにおける、ＩＬ−１８Ｒα破壊の、細胞及び組織の位置を同定するために、我々は、照射骨髄（ＢＭ）キメラを使用して、白血球区画の細胞上にＩＬ−１８Ｒαを選択的に発現させた。
【０１９１】
照射骨髄（ＢＭ）キメラマウス：
ＢＭドナーマウスを、ＣＯ２を使用して安楽死させ、ＢＭ細胞を、リン酸塩緩衝液（ＰＢＳ）を用いて、大腿骨、脛骨、とう骨、及び寛骨を洗い流すことにより単離した。次いで、ＢＭ細胞を１００μｍ細胞濾過器に通過させ、細胞をＰＢＳを用いて洗浄した。レシピエントマウスを、１１００ラド（分割線量）で致死的に照射し、１２〜２５×１０６ＢＭ細胞をｉ．ｖ．注射する。移植は、８週間の回復の間に起こる。
【０１９２】
照射及び再形成の後で、レシピエントマウスの第２のリンパ組織中のＡＰＣ区画は、ドナーマウスに由来するＢＭ細胞で全体的に構成される（Ｂｅｃｈｅｒ，Ｂ．ら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９３，９６７−９７４（２００１））。
【０１９３】
我々は、４：１の比のＲＡＧ−／−ＢＭ及びＩＬ−１８Ｒα−／−ＢＭをｗｔレシピエント中に（ＲＡＧ−／−＋ＩＬ−１８Ｒα−／−→ｗｔ）又はＩＬ−１８Ｒα−／−ＢＭのみをｗｔレシピエント中に（ＩＬ−１８Ｒα−／−→ｗｔ）移入することによりＢＭキメラを生成した。ｗｔ−ＢＭは、コントロールとしてｗｔレシピエント中に移入した（ｗｔ→ｗｔ）（表２）。
【０１９４】
ＲＡＧ−／−マウスは、リンパ球を有さず、したがって、結果として生じるキメラ（ＲＡＧ−／−＋ＩＬ−１８Ｒα−／−→ｗｔ）は、ＩＬ−１８Ｒα欠損リンパ球区画を有するが、大多数の他のすべての白血球は、非破壊ＩＬ−１８Ｒα対立遺伝子を有する。
【０１９５】
予想どおり、ＩＬ−１８Ｒα−／−→ｗｔマウスは、ＭＯＧペプチドを用いた免疫の際にＥＡＥに対して抵抗性であった。その代わりに、Ｔ細胞又はＢ細胞を有さず、したがってリンパ球上ではなくアクセサリー細胞上のみにＩＬ−１８Ｒαを発現させる、ＲＡＧ−／−マウスからのＢＭの追加により、ＥＡＥに対するＩＬ−１８Ｒα−／−マウスの抵抗性を弱らせることができた（図９）。したがって、ＩＬ−１８Ｒαは、アクセサリー細胞（単核食細胞及び多核食細胞、ＤＣ＆ＮＫ細胞）区画中でその主要な影響を及ぼすにちがいない。さらに、ＩＬ−１８がＴ細胞及びＮＫ細胞にその影響を及ぼすと考えられていることを考慮すれば、この発見は、非常に予期せぬことであるが、これまでのところ我々の観察と完全に一致している。
【０１９６】
（実施例８）
宿主細胞上のＩＬ−１８Ｒαの欠如は、ＭＯＧ反応性Ｔ細胞の養子移入によって誘発されたＥＡＥ発生を予防する
上記のデータは、アクセサリー細胞上のＩＬ−１８Ｒαの欠如が、ＴＨ細胞のプライミング及び増大に影響を及ぼさないことを示す。さらに、ＲＡＧ−／−＋ＩＬ−１８Ｒα−／−→ｗｔ混合ＢＭキメラは（図９）、ＩＬ−１８Ｒαの欠損が、ＥＡＥの発生に不可欠なアクセサリー細胞機能に障害を生じさせることを明確に実証する。我々は、ＥＡＥの間のアクセサリー細胞のＩＬ−１８Ｒシグナル伝達の役割及び機能を明らかにするために養子移入実験を続いて行った。そうするために、我々は、ｗｔレシピエントマウス及びＩＬ−１８Ｒα−／−レシピエントマウスの両方のグループ中にｗｔドナーマウスに由来する脳炎誘発性ＭＯＧ反応性Ｔ細胞を養子移入した。予想どおり、ｗｔマウスに由来する、十分にプライムされ、且つ活性化された脳炎誘発性Ｔ細胞は、ｗｔレシピエントマウスにおいてＥＡＥを誘発したが、それらは、ＩＬ−１８Ｒα欠損宿主において臨床的なＥＡＥを誘発することができなかった（図１０）。この発見は、ＩＬ−１８Ｒαの欠損が、ＥＡＥの発生に必須の、宿主の非リンパ球の白血球に、Ｔ細胞活性と無関係に障害を生じさせるということをさらに強調する。
【表１】
【表２】
【図面の簡単な説明】
【０１９７】
【図１】ＩＬ−１８Ｒシグナル伝達は、ＩＬ−１８と無関係に、ＥＡＥ誘発に必要である。マウスは、ＣＦＡ中のＭＯＧ３５−５５を用いて能動免疫し、０日目及び２日目に百日咳毒素をｉ．ｐ．注射した。（ａ）ｐ３５−／−×ＩＬ−１８−／−二重ノックアウトマウス及びｗｔマウスにおけるＥＡＥ進行を示す図である。２回の実験のうちの一方の代表的実験を示す（ｎ＝５マウス／グループ）。（ｂ）ｗｔマウス、ＩＬ−１８−／−マウス、及びＩＬ−１８Ｒα−／−マウスにおけるＥＡＥ進行を示す図である。３回の実験のうちの１つの代表的実験を示す（ｎ＝５マウス／グループ）。
【図２】ＩＬ−１８Ｒシグナル伝達は、ＩＬ−１８と無関係に、ＥＡＥ誘発に必要である。マウスは、ＣＦＡ中のＭＯＧ３５−５５を用いて能動免疫し、０日目及び２日目に百日咳毒素をｉ．ｐ．注射した。疾患に関する浸潤のスコアを示すｗｔ（スコア２）ＥＡＥマウス、ＩＬ−１８−／−（スコア２）ＥＡＥマウス、ＩＬ−１８Ｒα−／−（スコア０）ＥＡＥマウス、及び未処置マウスからのＰＦＡ固定脊髄の（ａ）Ｈ＆Ｅ染色、（ｂ）ＬＦＢ染色、（ｃ）ＣＤ３染色、（ｄ）ＭＡＣ３染色、及び（ｅ）Ｂ２２０染色を示す図である。
【図３】ＩＬ−１８−／−ＬＮ細胞は、それらの提唱される遺伝子型に一致してＩＬ−１８を産生しない。１μｇ／ｍｌ ＬＰＳ、１００ユニット／ｍｌ ＩＦＮγ、５μｇ／ｍｌコンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）、及び２．５ｎｇ／ｍｌ ＩＬ−１２の示す混合物を用いて１６時間刺激した未処置ｗｔ ＬＮ細胞並びにＩＬ−１８−／−ＬＮ細胞によるＩＬ−１８分泌を評価するＥＬＩＳＡを示す図である。
【図４】ＩＬ−１８及びＩＬ−１８Ｒαは、マイトジェンに刺激されたＴ細胞活性化に必要であるが、Ｔｈ１発生に必要でない。（ａ）５μｇ／ｍｌコンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）を用いて１６時間刺激した未処置ｗｔ ＬＮ細胞、ＩＬ−１８−／−ＬＮ細胞、及びＩＬ−１８Ｒα−／−ＬＮ細胞によるＩＦＮγ分泌を評価するＥＬＩＳＡを示す図である。（ｂ、ｃ）マウスを２００μｇ ＫＬＨで免疫し、７日後、ＬＮを単離して再刺激した。（ｂ）４８時間、５０μｇ／ｍｌ ＫＬＨ又は５μｇ／ｍｌ ＣｏｎＡを用いて二通り再刺激したＫＬＨ免疫マウスからの上清中のＩＦＮγのＥＬＩＳＡを示す図である。（ｃ）４８時間、５０μｇ／ｍｌ ＫＬＨ、５μｇ／ｍｌ ＣｏｎＡ、又は培地を用いて三通り再刺激したＫＬＨ免疫マウスからのＬＮ細胞の増殖アッセイを示す図である。３Ｈ−チミジンを、カウント毎分（ＣＰＭ）で増殖を測定する２４時間前に培養物に追加した。（ｄ）ＢＭ由来ＤＣを、ｗｔマウス、ＩＬ−１８−／−マウス、及びＩＬ１８Ｒ−／−マウスから生成し、ＬＰＳを用いて成熟させ、続いて１μｇ／ｍｌ ＳＭＡＲＴＡペプチド、ｐ１１を用いてパルスした。ｐ１１特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞を、未処置ＳＭＡＲＴＡ−Ｔｇマウスから得、増殖が、カウント毎分（ＣＰＭ）でチミジン取り込みによって評価された場合に、ペプチドパルスし、且つ照射（２０００ラド）したＤＣと共に７２時間同時培養した。
【図５】代替ＩＬ−１８Ｒα結合リガンドは、ＩＬ−１８−／−マウスにおいてＥＡＥを誘発する。（ａ）ＩＬ−１８−／−は、ＭＯＧ３５−５５を用いる免疫の１日前に、４５０μｇ抗ＩＬ−１８Ｒα抗体（白色の正方形）又はコントロールＩｇＧ（黒色の菱形）を用いて処置し、その後の３日ごとに３００μｇ抗体を用いて処置した。２回の実験のうちの一方の代表的実験を示す（ｎ＝５マウス／グループ）。（ｂ）ＩＬ−１８−／−マウス（ｎ＝６マウス／グループ）は、ＭＯＧ３５−５５を用いて免疫し、疾患の第１の徴候の時点で、３００μｇ抗ＩＬ−１８Ｒα抗体（白色の正方形）又はコントロールＩｇＧ（黒色の菱形）を用いて処置した。
【図６】ＩＬ−１８Ｒ−／−ＣＤ４＋Ｔ細胞は、ｗｔ ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＩＬ−１８−／−ＣＤ４＋Ｔ細胞に類似して活性化される。５０μｇ／ｍｌ ＫＬＨ又は培地を用いて２日間、ｉｎ ｖｉｔｒｏで再刺激したＫＬＨ免疫ｗｔマウス、ＩＬ−１８−／−マウス、及びＩＬ−１８Ｒ−／−マウスに由来する脾細胞のＦＡＣＳを示す図である。２日後に、脾臓細胞を、ＣＤ４−ＦＩＴＣ及び（ａ）ＣＤ５−ＡＰＣ、（ｂ）ＣＤ６２Ｌ−ｂｉｏ−ＳＡ−ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５、又は（ｃ）ＣＤ４４−ＰＥを用いて染色した。
【図７】ＩＬ−１８Ｒα−／−ＣＤ４＋Ｔ細胞は、疾患発症前に、ｗｔ ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＩＬ−１８−／−ＣＤ４＋Ｔ細胞と同じ程度までＣＮＳを浸潤する。ｗｔマウス、ＩＬ−１８−／−マウス、及びＩＬ−１８Ｒα−／−マウスを、ＭＯＧ３５−５５を用いて能動免疫し、免疫７日後に、マウスをＰＢＳを用いて灌流し、ＣＮＳを単離した。勾配により小膠細胞を単離し、この部分における炎症細胞の浸潤をフローサイトメトリーによって評価した。細胞は、ＣＤ４５−ＰｅｒＣＰ及びＣＤ４−ＡＰＣを用いて染色した。ＩＬ−１８Ｒα−／−ＣＤ４＋Ｔ細胞は、ＣＮＳに侵入し、免疫７日後に、ｗｔ ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＩＬ−１８−／−ＣＤ４＋Ｔ細胞と同じように侵入する。
【図８】ＩＬ−１８Ｒα破壊は、ＩＬ−１７の産生及びＴＨＩＬ−１７細胞の発生に影響を及ぼす。ｗｔマウス、ＩＬ−１８−／−マウス、及びＩＬ−１８Ｒα−／−マウスを、ＫＬＨを用いて免疫し、７日後に、脾細胞を単離し、５０μｇ／ｍｌ ＫＬＨを用いて再刺激した。（ａ）ＫＬＨを用いたｉｎ ｖｉｔｒｏ再刺激の２日後の、ｗｔリンパ球、ＩＬ−１８−／−リンパ球、及びＩＬ−１８Ｒα−／−リンパ球によるＩＬ−１７ ｍＲＮＡ発現のリアルタイムＰＣＲ比較を示す図である。結果は、β−アクチン発現を基準に合わせ、二通り分析した。（ｂ）二通りｉｎ ｖｉｔｒｏでＫＬＨを用いて２日間再刺激したリンパ球によるＩＬ−１７タンパク質発現のＥＬＩＳＡを示す図である。データは、１グループ当たり少なくとも２匹のマウスを組み合わせたものである。
【図９】ＩＬ−１８Ｒαの不在はＴ細胞又はＢ細胞に障害を生じさせない。ＢＭキメラマウスは、致死的に照射したｗｔマウス中に１２〜２５ｘ１０６ＢＭ細胞を移入することにより生成した。６週間後に、再形成したＩＬ−１８Ｒα−／−→ｗｔ（灰色の三角形）、ＩＬ−１８Ｒα−／−＋ＲＡＧ−／−→ｗｔ（白色の正方形）、及びｗｔ→ｗｔ（黒色の菱形）骨髄キメラマウスは、ＭＯＧ３５−５５ペプチドを用いて能動免疫し、臨床スコアを評価した。ＲＡＧ−／−骨髄に由来する非Ｔ細胞及び非Ｂ細胞上のＩＬ−１８Ｒαの存在は、ＥＡＥに対する、ＩＬ−１８Ｒα−／−→ｗｔマウスの感受性をよみがえらせた。
【図１０】ＩＬ−１８Ｒα−／−マウスは、ＥＡＥの受身移入に対して抵抗性である。ＭＯＧ反応性リンパ球は、ｗｔマウスを能動免疫することにより生成し、１１日後に脾臓及びＬＮ細胞を単離し、それらを、４日間、ｉｎ ｖｉｔｒｏで、２０μｇ／ｍｌ ＭＯＧ３５−５５及び２．５ｎｇ／ｍｌ ＩＬ−１２を用いて再刺激した。ＥＡＥは、ＩＬ−１８Ｒα−／−（灰色の三角形）マウス及びｗｔ（黒色の菱形）マウス中への２０〜３０×１０６ＭＯＧ反応性リンパ球の養子移入によってレシピエントマウスにおいて誘発された。２回の実験のうちの一方の代表的実験を示す（ｎ＝５マウス／グループ）。
【図１１】抗ＩＬ−１８ＲαＡｂ処置は、周辺の免疫細胞の組成を変えない。ＩＬ−１８−／−マウスは、ＭＯＧ３５−５５を用いる免疫の１日前に、３００μｇ抗ＩＬ−１８Ｒα抗体又はコントロールＩｇＧを用いて処置し、７日後に、脾臓を単離し、均質化して、免疫細胞組成をフローサイトメトリーによって評価した。細胞は、ＣＤ８−ＦＩＴＣ、ＣＤ４−ＡＰＣ、ＮＫ１．１−ｂｉｏ−ＳＡ−ＰｅｒＣＰ、及びＢ２２０−ＰＥ又はＣＤ１１ｂ−ＦＩＴＣ、ＣＤ１１ｃ−ＡＰＣ、及びＧＲ１−ｂｉｏ−ＳＡ−ＰｅｒＣＰについて染色した。抗ＩＬ−１８ＲαＡｂ処置ＩＬ−１８−／−マウスにおいて免疫細胞組成に差異はない。２匹のマウス／グループの一方の代表的なＦＡＣＳを示す。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒト患者における新規な治療処置又は予防処置に関する。本発明は、ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストが疾患を処置するのにｉｎ ｖｉｖｏで有効であるという発見から部分的にもたらされたものである。
【０００２】
したがって、本発明は、患者、好ましくはヒト患者における自己免疫疾患又は脱髄疾患（多発性硬化症等）の症状を処置する、予防する、又は寛解させる方法であって、患者に、治療的有効量のＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストを投与することを含む方法を提供する。本発明は、さらに、自己免疫疾患又は脱髄疾患（多発性硬化症等）の処置のための医薬の製造における、ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストの使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
脱髄疾患は、神経系の髄鞘における異常を伴う病状のグループである。多くの先天性代謝障害は、主にＣＮＳにおける発達中の髄鞘を冒し、脱髄は、多くの神経障害の特徴となる。
【０００４】
ヒトにおける中枢神経系の最も知られている慢性炎症性脱髄疾患は、多発性硬化症である。多発性硬化症（ＭＳ）の発症は、２０歳〜４０歳の間に典型的に起こる。女性は、男性よりも約２倍の頻度で冒される。長い間にわたって、ＭＳは、様々な神経障害の蓄積をもたらす可能性がある。ＭＳにおける臨床的障害は、ミエリン及び軸索の続く損失を伴い、組織萎縮につながる、度重なる炎症性損傷の結果であると推定される。
【０００５】
ＭＳは、身体症状（再発及び障害進行）、中枢神経系（ＣＮＳ）炎症、脳萎縮、及び認知機能障害において顕在化される。主症状は、限局性の感覚消失、限局性の脱力、視覚的問題、平衡失調、及び疲労を含む。性機能障害及び括約筋機能不全が起こる可能性がある。ＭＳを有する患者の約半分は、認知機能障害又はうつ病を経験する可能性がある。
【０００６】
ＭＳは、現在、多面的な疾患であると考えられており、臨床的な静止状態（寛解）の期間は、増悪の間に起こる。寛解は、長さが変動し、数年間続く可能性があるが、まれに永久的となる。
【０００７】
疾患の４つの経過は、個別に扱われる：再発寛解型（ＲＲ）多発性硬化症、二次進行型（ＳＰ）多発性硬化症、一次進行型（ＰＰ）多発性硬化症、及び進行再発型（ＰＲ）多発性硬化症。ＭＳを有する８０％を超える患者は、最初は、神経症状の臨床的増悪と共にＲＲ経過を呈し、完全である可能性のある又は完全でない可能性のある回復が後に続く（Ｌｕｂｌｉｎ及びＲｅｉｎｇｏｌｄ，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，１９９６，４６：９０７−９１１）。
【０００８】
ＲＲＭＳの間、障害の蓄積は、再発からの不完全な回復に起因する。ＲＲＭＳを有する患者の約半分は、病気の発症の１０年後に、ＳＰＭＳと呼ばれる進行型経過に移る。ＳＰ期の間、障害の悪化は、増悪の後の残存症状の蓄積に起因するが、増悪の間の潜行性の進行にも起因する（上記のＬｕｂｌｉｎ及びＲｅｉｎｇｏｌｄ）。ＭＳ患者の１０％は、疾患発症からの、症状の潜行性の進行によって特徴づけられるＰＰＭＳを有する。患者の５％未満は、ＰＲＭＳを有し、ＰＰＭＳと同じ予後を有すると考えられることが多い。別の病原性機構が、異なる患者サブグループに関与する可能性があり、疾患分類に対して広範な影響を有することが示唆されている（Ｌａｓｓｍａｎｎら，２００１，Ｔｒｅｎｄｓ Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．，７，１１５−１２１；Ｌｕｃｃｈｉｎｅｔｔｉら，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．，２００１，１４，２５９−２６９）。
【０００９】
ＭＳ発症は、ＣＮＳ機能不全といった第１の神経症状の出現によって定義される。脳脊髄液（ＣＳＦ）分析及び磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）における進歩は、診断プロセスを単純化し、早期診断を容易にした（Ｎｏｓｅｗｏｒｔｈｙら，Ｔｈｅ Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２０００，３４３，１３，９３８−９５２）。ＭＳの診断に関する国際パネルは、ＭＳの診断を容易にし、且つ臨床診断法及び臨床外診断法と共にＭＲＩを含む改訂基準を発行した（Ｍｃ Ｄｏｎａｌｄら，２００１，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．，５０：１２１−１２７）。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
多発性硬化症の処置のための今のところ利用可能な処置は、疾患の症状に対して実際のところ作用するものである。その結果として、患者への、改善された臨床的利点を提供する代替治療に対する強い要望がある。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明は、ヒト患者における新規な治療処置又は予防処置に関する。本発明は、ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストが疾患を処置するのにｉｎ ｖｉｖｏで有効であるという発見から部分的にもたらされたものである。
【００１２】
したがって、本発明は、患者、好ましくはヒト患者における自己免疫疾患又は脱髄疾患の症状を処置する、予防する、又は寛解させる方法であって、患者に、治療的有効量のＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストを投与することを含む方法を提供する。特定の態様では、脱髄疾患は多発性硬化症である。本発明は、さらに、自己免疫疾患又は脱髄疾患の処置のための医薬の製造における、ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストの使用に関する。特定の態様では、脱髄疾患は多発性硬化症である。
【００１３】
特定の態様では、本発明は、上記に定義される方法又は使用に関し、患者は、再発寛解型（ＲＲ）多発性硬化症、二次進行型（ＳＰ）多発性硬化症、一次進行型（ＰＰ）多発性硬化症、又は進行再発型（ＰＲ）多発性硬化症に冒されている。
【００１４】
他の態様では、本発明は、上記に定義される方法又は使用に関し、アンタゴニストは、ＩＬ−１８Ｒαの産生を低下させる又は予防する、又はアンタゴニストは、部分的に、実質的に、又は完全にＩＬ−１８Ｒαの活性をブロックする。
【００１５】
本発明は、上記に定義される方法又は使用にさらに関し、アンタゴニストは、低分子、抗体、ｓｉＲＮＡ、アンチセンス核酸、及びリボザイムからなる群から選択される。
【００１６】
特定の態様では、アンタゴニストは、ＩＬ１８−Ｒα、特に、ＩＬ１８−Ｒαの細胞外ドメインに選択的に結合する抗体である。より具体的には、抗体は、配列番号２のポリペプチドに選択的に結合し、さらに具体的には、抗体は、配列番号２の残基１〜３２９又は配列番号２の残基１９〜３２９又は配列番号２の残基３３０〜３５０又は配列番号２の残基３５１〜５４１に選択的に結合する。特定の態様では、抗体は、配列番号２の残基１９〜２１９又は配列番号２の残基１２２〜３２９に選択的に結合する。他の特定の態様では、抗体は、配列番号２の残基１９〜１３２又は配列番号２の残基１２２〜２１９又は配列番号２の残基２１３〜３２９に選択的に結合する。
【００１７】
本発明の他の対象は、上記に定義される方法又は使用に関し、抗体は、ヒトＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに位置するエピトープに選択的に結合する。特定の態様では、エピトープは、配列番号２のアミノ酸１９〜３２９に又は配列番号２のアミノ酸残基１９〜２１９に又は配列番号２のアミノ酸残基１２２〜３２９に位置する。他の特定の態様では、エピトープは、配列番号２のアミノ酸１９〜１３２又は配列番号２の１２２〜２１９又は配列番号２の２１３〜３２９に位置する。
【００１８】
本発明のさらなる対象は、上記に定義される方法又は使用に関し、抗体は、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、及び配列番号１０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１、２、３、４、５、又は６個のＣＤＲを含む抗原結合ドメインを有する。特定の態様では、抗体は、配列番号３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号４のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。より具体的には、抗体は、配列番号３のアミノ酸配列にあるＶＨドメイン及び配列番号４のアミノ酸配列にあるＶＬドメインを含む。さらに具体的には、抗体は、Ｉｇ定常重鎖領域、ヒトＩｇカッパ定常ドメイン及びヒトＩｇラムダ定常ドメインからなる群から選択されるＩｇ定常軽鎖領域、配列番号３のアミノ酸配列を有するＩｇ可変重鎖領域、並びに配列番号４のアミノ酸配列を有するＩｇ可変軽鎖領域としてヒトＩｇＧ１を含む。
【００１９】
特定の態様では、本発明は、上記に定義される方法又は使用に関し、抗体は、モノクローナル抗ヒトＩＬ−１８Ｒαクローン７０６１４、モノクローナル抗ヒトＩＬ−１８Ｒαクローン７０６２５、モノクローナル抗ヒトＩＬ−１８ＲαクローンＢ−Ｅ４３、及びモノクローナル抗ヒトＩＬ−１８ＲαクローンＨ４４からなる群から選択される。
【００２０】
本発明は、上記に定義される方法又は使用にさらに関し、抗体は、Ａｂ１、モノクローナル抗ヒトＩＬ−１８Ｒαクローン７０６１４、モノクローナル抗ヒトＩＬ−１８Ｒαクローン７０６２５、モノクローナル抗ヒトＩＬ−１８ＲαクローンＢ−Ｅ４３、及び／又はモノクローナル抗ヒトＩＬ−１８ＲαクローンＨ４４と、ヒトＩＬ−１８Ｒαへの結合について競合する抗体である。
【００２１】
本発明は、さらに、上記に定義される方法又は使用に関し、抗体は、
− 配列番号２の残基１９〜３２９又は配列番号２の残基１９〜２１９又は配列番号２の残基１２２〜３２９又は配列番号２の残基１９〜１３２又は配列番号２の残基１２２〜２１９又は配列番号２の残基２１３〜３２９を含む免疫剤を用いて宿主動物を免疫するステップ、
− 上述の宿主動物によって産生されたリンパ球を不死化細胞系と融合させてハイブリドーマ細胞を形成するステップ、
− 免疫ペプチドに対する抗体を産生するハイブリドーマ細胞のクローンを選択するステップ、
− ＥＡＥ動物モデル中のハイブリドーマ細胞の異なるクローンによって産生された抗体の活性を試験し、上述の動物モデルにおけるＥＡＥの進行を阻害する抗体を選択するステップ、
− 分泌されたモノクローナル抗体を産生するステップ
を含むプロセスによって得ることができる。
【００２２】
より具体的には、免疫剤は、配列番号２の残基１９〜３２９又は配列番号２の残基１９〜２１９又は配列番号２の残基１２２〜３２９又は配列番号２の残基１９〜１３２又は配列番号２の残基１２２〜２１９又は配列番号２の残基２１３〜３２９又はその融合タンパク質からなるものであってもよい。
【００２３】
本発明は、上記に定義される方法又は使用にさらに関し、抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、又はその断片である。
【００２４】
本発明の他の対象は、上記に定義される方法又は使用に関し、アンタゴニストは、配列番号１の配列の１８〜２５個の連続したヌクレオチドに対して１００％相補的なｓｉＲＮＡであり、ヒトＩＬ−１８Ｒαの発現又は生物活性を低下させる又は阻害することができる。
【００２５】
本発明の他の対象は、上記に定義される方法又は使用に関し、アンタゴニストは、長さが１５〜３５個のヌクレオチドの範囲のアンチセンスオリゴヌクレオチドであり、配列番号１に記載される核酸配列に対して相補的である。
【００２６】
本発明の他の対象は、上記に定義される方法又は使用に関し、アンタゴニストは、それぞれが配列番号１の長さが少なくとも５個の隣接したヌクレオチドである１又は２個の領域に対して相補的なハイブリダイズ領域を含有するリボザイムである。
【００２７】
本発明は、上記に定義される方法又は使用にさらに関し、アンタゴニストは、抗原提示細胞中のＩＬ１８Ｒαの活性を阻害する。特定の態様では、抗原提示細胞は、単核食細胞、多核食細胞、樹状細胞、及びナチュラルキラー細胞からなる群から選択される。
【００２８】
本発明は、上記に定義される方法又は使用にさらに関し、ＩＬ−１８Ｒαの阻害は、ＩＬ−１７産生ヘルパーＴ細胞の減少をもたらす。
【００２９】
本発明は、さらに、上記に定義される方法又は使用に関し、ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストは、ＭＳを処置する又は予防するための第２の治療薬と共に投与される。特定の態様では、ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストは、コルチコステロイド、免疫抑制剤、神経保護薬、免疫調節剤、又はインターフェロンと共に投与される。
【００３０】
本発明の他の態様は、哺乳動物患者、好ましくはヒト患者のＭＳの治療における同時の、別個の、又は順次の使用のための、ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニスト及び併用調製物としてのコルチコステロイド、免疫抑制剤、神経保護薬、免疫調節剤、又はインターフェロンを含む産物を含む。ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストは、医薬としての使用のためのものである。また、ＩＬ１８−Ｒα、特に、ＩＬ１８−Ｒαの細胞外ドメインに選択的に結合する抗体は、医薬としての使用のためのものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３１】
本発明は、ＩＬ−１８Ｒαにアンタゴナイズする作用物質を用いて動物を処置することにより、ＭＳについて動物モデルにおける症状が低下するという発見に部分的に基づく。したがって、本発明は、患者に、治療的有効量のＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストを投与することにより、ヒト患者における自己免疫疾患又は脱髄疾患（ＭＳ等）の症状を処置する、予防する、又は寛解させる方法を提供する。
【００３２】
ＩＬ−１８受容体は、リガンド結合ＩＬ−１８Ｒαサブユニット（文献中ではＩＬ−１Ｒｒｐ又はＩＬ−１ Ｒ５とも命名されている）及びシグナル伝達ＩＬ−１８Ｒβサブユニットからなるヘテロ二量体として記載されてきた。ＩＬ−１８Ｒの下流シグナル伝達は、ＴＬＲ経路の下流シグナル伝達と同様に、ＩＲＡＫ４及びＭｙＤ８８を活性化する。ＩＬ−１８Ｒαは、リンパ球上に発現し、より最近では、アクセサリー細胞上に発現することが発見された（Ｋａｓｅｒ，Ａ．ら Ｂｌｏｏｄ １０３，６４８−６５５（２００４），Ｔｏｍｕｒａ，Ｍ．ら Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０，３７５９−３７６５（１９９８），Ｘｕ，Ｄ．ら Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８８，１４８５−１４９２（１９９８），Ｙｏｓｈｉｍｏｔｏ，Ｔ．ら Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１，３４００−３４０７（１９９８））。
【００３３】
ＩＬ−１８がＩＬ−１８Ｒ複合体に結合することができることが確証されているが、ＩＬ−１８Ｒαのみへのその親和性は、弱い親和性にすぎない（Ｂｏｒａｓｃｈｉ，Ｄ．ら Ｅｕｒ．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｎｅｔｗ．９，２０５−２１２（１９９８），Ｔｏｒｉｇｏｅ，Ｋ．ら Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２，２５７３７−２５７４２（１９９７））。ＩＬ−１８は、Ｔ細胞によるＩＦＮ−γの産生を刺激するようＩＬ−１２と共に共同して働き、またＮＫ細胞の細胞傷害性活性を単独で刺激することができる。ＩＬ−１８及びＩＬ−１２は、ＴＨ１サイトカイン応答に向けてＴ細胞を極性化するために相乗的に作用し、これは、脳炎誘発に対する必要条件であると考えられた。
【００３４】
ＩＬ−１８−／−マウスは、ＥＡＥ抵抗性であるとして記載されてきた、またＩＬ−１８−／−マウスにおける不十分なＮＫ細胞活性化は、脳炎誘発性の免疫応答を生成することができない原因であると考えられた（Ｓｈｉ，Ｆ．Ｄ．，ら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６５，３０９９−３１０４（２０００））。それにもかかわらず、ＩＬ−１２の明らかな防御活性を考慮すれば、ＥＡＥにおけるＩＬ−１８の提唱された役割は、ジレンマを引き起こす（Ｃｕａ，Ｄ．Ｊ．ら Ｎａｔｕｒｅ ４２１，７４４−７４８（２００３），Ｂｅｃｈｅｒ，Ｂ．ら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ １１０，４９３−４９７（２００２））。
【００３５】
本発明者は、ＥＡＥに対するＩＬ−１８−／−マウスの感受性によって推定されるように、以前に公表されたデータとは対照的に、ＩＬ−１８が、ＥＡＥにおいて明白な病原性の影響を及ぼさないことをこれから実証する。しかしながら、その提唱される受容体（ＩＬ−１８Ｒα）の欠失は、ＥＡＥ誘発に対する完全な抵抗性をもたらし、これは、脳炎誘発性の特性を有する代替リガンド（ＩＬ−１８ＲＬ）の存在を示唆する。ＩＬ−１８Ｒαに対するＩＬ−１８の親和性は、かなり乏しく、親和性の増加のためにＩＬ−１８Ｒβとのヘテロ三量体化を必要とするので、ＩＬ−１８Ｒαに対するより高い親和性を有する他のリガンドがある可能性は非常に強い。ＩＬ−１Ｒスーパーファミリー内には多くのオーファン受容体があり、これらの受容体サブユニットが互いにヘテロ二量体を形成する事実を考慮すれば、おそらく、ＩＬ−１８Ｒαは、異なる結合パートナーを有するだけではなく、異なるリガンドもまた有していそうである。
【００３６】
本発明者は、抗ＩＬ−１８Ｒα抗体を使用して、ＩＬ−１８−／−マウスにおける疾患発生を著しく減衰させることにより、本明細書でこの推定上のリガンドの性能を実証する。承認されているＩＬ−１８ＲαリガンドであるＩＬ−１８は、これらのマウス中に存在せず、それらの細胞構成要素は、抗体の注射の結果として冒されなかったことを考慮すれば、これらの結果は、上記代替ＩＬ−１８Ｒαリガンドの実在についての実質的証拠を提供する。
【００３７】
ＥＡＥの間のＴ細胞の重要性にもかかわらず、本発明者は、ＩＬ−１８Ｒαの欠失が、増大に関するＴ細胞プライミング及びＴｈ１極性化に影響を及ぼさないことを本明細書で示す。その代わりに、マイトジェンＣｏｎＡを用いて刺激した場合、ＩＬ−１８及びＩＬ−１８Ｒαは、共に、効率的なＴ細胞活性化に必要であり、これは、様々な細菌及びウイルス感染モデルにおいて観察されるように、ＩＬ−１８−／−マウスがＩＦＮγ分泌の刺激に欠陥を有するという発見に一致する。Ｔ細胞活性化のレベルでの障害の欠如に一致して、本発明者は、ｗｔ（野生型）樹状細胞、ＩＬ−１８−／−樹状細胞、又はＩＬ−１８Ｒα−／−樹状細胞（ＤＣ）と共に培養された場合にＴｃＲ Ｔｇ Ｔ細胞が同じ程度まで増殖したように、ＩＬ−１８Ｒα破壊が、抗原提示細胞（ＡＰＣ）の活性化機能に影響を及ぼさないことを本明細書で示す。
【００３８】
ＥＡＥの終点でのＣＮＳ中の炎症細胞の不在とは対照的に、本発明者は、疾患の発症の前に、ＩＬ−１８Ｒα−／−ＣＮＳ中で、比較に値するＣＤ４＋Ｔ細胞浸潤を検出することができた。他の炎症細胞もまた、ｗｔマウス及びＩＬ−１８−／−マウスと同じ程度までＣＮＳを浸潤した。したがって、ＩＬ−１８Ｒα欠損は、ＣＮＳ中への免疫細胞の侵入に影響を及ぼさないが、存続するためのそれらの能力に影響を及ぼすにちがいない。興味深いことには、随伴性ＥＡＥ感受性を伴わない、ＩＬ−１８Ｒα−／−ＣＮＳ中の炎症性浸潤物の存在は、ＩＬ−２３−／−マウスにおいて起こる応答に似ている。
【００３９】
本発明者は、ＩＬ−１８Ｒα−／−ＫＬＨリコールリンパ球によるＩＬ−１７産生を分析し、ＲＮＡ及びタンパク質の両レベルでＩＬ−１７の産生における著しい減少が実際にあることを実証する。したがって、ＩＬ−１８Ｒα−／−マウスのＥＡＥに対する抵抗性は、ＴＨＩＬ−１７発生が不十分である結果として説明することができるかもしれない。
【００４０】
ＴＨＩＬ−１７細胞の欠如は、Ｔ細胞のこの亜集団上のＩＬ−１８Ｒα発現の不在に起因したように思われた。しかしながら、ＢＭ−キメラの生成により、ＲＡＧ−／−ＢＭ細胞の存在下でのみ、ＩＬ−１８Ｒα−／−マウス（ＲＡＧ−／−＋ＩＬ−１８Ｒα−／−＞ｗｔ）のＥＡＥに対する感受性をよみがえらせることができたことを実証したように、これは事実ではなかった。ＩＬ−１８Ｒα−／−＞ｗｔマウスは、他方、疾患誘発に対して抵抗性であった。したがって、ＩＬ−１８Ｒαの存在は、非リンパ球白血球上で必要とされ、前ＴＨＩＬ−１７細胞上に直接位置しない。さらに、アクセサリー細胞上のＩＬ−１８Ｒαの重要性は、脳炎誘発性ｗｔ Ｔ細胞が、ＩＬ−１８Ｒα−／−マウスにおいてＥＡＥを誘発することができなかった養子移入実験において強められた。
【００４１】
要約すると、本発明者は、ＥＡＥにおけるＩＬ−１８の非病原性の役割を実証することにより、ＭＳ及びＥＡＥのＴＨ１仮説を反駁する証拠を示す。しかしながら、対照的に、いわゆるＩＬ−１８Ｒαは、ＥＡＥの発生にとって決定的であり、したがって代替ＩＬ−１８Ｒα結合リガンドの存在を暗示するものであり、これを、本発明者は、抗ＩＬ−１８Ｒα抗体を用いてＩＬ−１８−／−マウスを処置し、それによってＥＡＥ重症度を減じることにより、確認することができた。あるいは、本発明者は、ＩＬ−１８Ｒαシグナル伝達が脳炎誘発性ＴＨＩＬ−１７細胞の発生にとって決定的なことを示し、それによって、ＭＯＧ３５−５５に誘発されるＥＡＥに対するＩＬ−１８Ｒα−／−マウスの抵抗性を説明する。
【００４２】
上記本明細書及び本出願の実施例で開示される結果は、本発明にとって、部分的に基礎となる。本明細書に説明されるように、本発明の発明者は、ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストが疾患を処置するのにｉｎ ｖｉｖｏで有効であることを発見した。具体的には、ＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに結合する抗体は、この疾患のマウスモデルにおける実験的に誘発されたＭＳを予防するのに有用であることが分かった。さらに、ＩＬ−１８Ｒαアンタゴニストはまた、同じ動物モデルにおいて既に確立された疾患の進行をも阻害した。したがって、これらのｉｎ ｖｉｖｏデータは、ＩＬ−１８Ｒαの阻害がＭＳを処置するのに有効であることを示す。ＩＬ−１８Ｒα活性を中和する又はＩＬ−１８Ｒα遺伝子の発現を阻害する（転写又は翻訳のいずれか）任意の方法は、ＭＳの症状を低下させるために使用することができる。
【００４３】
したがって、本発明は、患者、特にヒト患者における自己免疫疾患又は脱髄疾患（特にＭＳ）の症状を処置する、予防する、又は寛解させる方法であって、患者に、治療的有効量のＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストを投与することを含む方法を提供する。本明細書に使用されるように、化合物の「治療的有効量」は、自己免疫疾患若しくは脱髄疾患（特にＭＳ）又はその症状を処置する、寛解させる、又は予防するのに有効な化合物の最小限の量を意味する。本発明は、さらに、自己免疫疾患又は脱髄疾患（特にＭＳ）の処置のための医薬の製造における、ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストの使用に関する。
【００４４】
本発明のいくつかの実施形態では、処置するための疾患は、再発寛解型（ＲＲ）ＭＳ、二次進行型（ＳＰ）ＭＳ、一次進行型（ＰＰ）ＭＳ、又は進行再発型（ＰＲ）ＭＳである。
【００４５】
本発明の文脈内の用語「ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニスト」は、ＩＬ−１８Ｒαの産生及び／又は作用が減衰する、低下する、又は部分的に、実質的に、若しくは完全にブロックされるように、ＩＬ−１８Ｒαの産生及び／又は作用を調整する任意の分子を指す。特定の実施形態では、アンタゴニストは、ＩＬ−１８Ｒαの産生を低下させる又は予防する。他の特定の実施形態では、アンタゴニストは、部分的に、実質的に、又は完全にＩＬ−１８Ｒαの活性をブロックする。
【００４６】
ＩＬ−１８Ｒαの産生及び／又は作用が減衰する、低下する、又は部分的に、実質的に、若しくは完全にブロックされるように、ＩＬ−１８Ｒαの産生及び／又は作用を阻害する任意のアンタゴニストは、本発明の方法に従って自己免疫疾患又は脱髄疾患（特にＭＳ）を処置するために使用されてもよい。たとえば、ＩＬ−１８Ｒαに選択的に結合する抗体、ＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに選択的に結合する抗体、又はＩＬ−１８Ｒαの生物活性を阻害する低分子は、自己免疫疾患又は脱髄疾患（特にＭＳ）を処置する又は予防するために使用することができる。さらに、ＩＬ−１８Ｒαの発現を阻害する産物（たとえばｓｉＲＮＡ分子、アンチセンス分子、リボザイム等）は、自己免疫疾患又は脱髄疾患（特にＭＳ）を処置する又は予防するために使用することができる。
【００４７】
したがって、本発明は、患者、特にヒト患者における自己免疫疾患又は脱髄疾患（特にＭＳ）の症状を処置する、予防する、又は寛解させる方法であって、患者に、低分子、抗体、ｓｉＲＮＡ、アンチセンス核酸、及びリボザイムからなる群から選択される、治療的有効量のＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストを投与することを含む方法を提供する。本発明は、さらに、自己免疫疾患又は脱髄疾患（特にＭＳ）の処置のための医薬の製造における、低分子、抗体、ｓｉＲＮＡ、アンチセンス核酸、及びリボザイムからなる群から選択される、ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストの使用に関する。
【００４８】
本明細書に説明されるように、本発明の発明者は、ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストが疾患を処置するのにｉｎ ｖｉｖｏで有効であることを発見した。本発明者によって得られたデータは、ＩＬ−１８Ｒαの阻害がＩＬ−１８に無関係の様式でＭＳの処置に有効であることを示す。したがって、本発明の一実施形態では、自己免疫疾患又は脱髄疾患（特にＭＳ）を処置するために使用されるＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストは、ＩＬ−１８活性を単に阻害するものではない。好ましくは、本発明で使用されるＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストは、ＩＬ−１８（たとえばヒトＩＬ−１８）に選択的に結合する抗体ではない。
【００４９】
ＩＬ−１８結合タンパク質（ＩＬ−１８ＢＰ、ＰＣＴ国際公開第９９／０９０６３号に記載される）は、本発明によるＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストと考えられない。
【００５０】
本発明は、さらに、医薬としての使用のための上記又は下記のＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストのいずれかに関する。
【００５１】
本発明の特定の実施形態では、アンタゴニストは、抗原提示細胞中の、より具体的には単核食細胞、多核食細胞、樹状細胞、及びナチュラルキラー細胞からなる群から選択される抗原提示細胞中のＩＬ−１８Ｒαの活性を阻害することができる。
【００５２】
本発明の実施形態では、ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストは、ＩＬ−１７産生ＴＨ細胞の発生を阻害することができる。
【００５３】
ヒトＩＬ−１８ＲαをコードするｃＤＮＡは、配列番号１に示される。このｃＤＮＡは、５４１個のアミノ酸長のタンパク質（配列番号２）をコードし、このタンパク質は、１８個のアミノ酸のシグナルペプチド（配列番号２の残基１〜１８）を含む、３２９個のアミノ酸の細胞外ドメイン（配列番号２の残基１〜３２９）、２１個のアミノ酸の膜貫通領域（配列番号２の残基３３０〜３５０）、及び配列番号２のアミノ酸３５１〜５４１からの細胞質ドメインを含む。
【００５４】
１）低分子：
一実施形態では、本発明の方法での使用のためのアンタゴニストは低分子である。ＩＬ−１８Ｒαの任意の低分子アンタゴニストは、ＭＳを処置する又は予防するために本発明の方法に従って使用することができる。一般に、低分子は、質量が１０００ダルトン未満であろう、また５００ダルトン未満であることが多いであろう。典型的に、低分子は、自然発生のもの又は人工的に作り出されたもの（たとえば化学合成を介して）にかかわらず、有機化合物を指し、タンパク質、ポリペプチド、又は核酸ではなく、複数の炭素−炭素結合を有する。
【００５５】
２）抗体：
本発明の好ましい実施形態では、本発明の方法での使用のためのアンタゴニストは、ＩＬ−１８Ｒαに選択的に結合する抗体である。上記抗体は、患者、好ましくはヒト患者における自己免疫疾患又は脱髄疾患（特にＭＳ）の症状を処置する、予防する、又は寛解させるために使用される。適した抗体は、後に本明細書で記載されるポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、ヒト抗体又はヒト化抗体、免疫抱合体、並びに抗体断片（Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、及びＦｖ断片、抗体断片から形成される二特異性抗体、直鎖状抗体、一本鎖抗体分子、一特異性抗体、並びに多特異性抗体等）を含む。好ましい実施形態では、抗体は、ＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに結合する。
【００５６】
特定の実施形態では、本発明の方法で使用される抗体は、配列番号２のポリペプチド、より具体的には配列番号２の残基１〜３２９、配列番号２の残基１９〜３２９、配列番号２の残基３３０〜３５０、又は配列番号２の残基３５１〜５４１に選択的に結合する。特定の態様では、抗体は、配列番号２の残基１９〜２１９又は配列番号２の残基１２２〜３２９に選択的に結合する。他の特定の態様では、抗体は、配列番号２の残基１９〜１３２又は配列番号２の残基１２２〜２１９又は配列番号２の残基２１３〜３２９に選択的に結合する。好ましい実施形態では、抗体は、ヒトＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに位置するエピトープに選択的に結合する。さらに好ましくは、このエピトープは、配列番号２のアミノ酸１９〜３２９に位置する。他の実施形態では、このエピトープは、配列番号２のアミノ酸残基１９〜２１９に又は配列番号２のアミノ酸残基１２２〜３２９に位置する。他の特定の態様では、エピトープは、配列番号２のアミノ酸１９〜１３２又は配列番号２の１２２〜２１９又は配列番号２の２１３〜３２９に位置する。
【００５７】
本発明の文脈内で、用語「選択的に」結合するは、抗体が、標的ポリペプチド又はエピトープに優先的に、つまり他のいかなる抗原又はエピトープに対するいかなる結合よりも高度な親和性で結合することを示す。言い換えれば、標的ポリペプチドへの結合は、他の抗原への非特異的結合と区別することができる。本発明による抗体は、標的ポリペプチド又はエピトープに対して、１０６Ｍ−１以上、好ましくは１０７Ｍ−１以上、より好ましくは１０８Ｍ−１以上、最も好ましくは１０９Ｍ−１以上の結合親和性（Ｋａ）を示すことが好ましい。抗体の結合親和性は、たとえばＳｃａｔｃｈａｒｄ解析によって当業者によって容易に決定することができる（Ｓｃａｔｃｈａｒｄ Ｇ．，Ａｎｎ ＮＹ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．５１：６６０−６７２，１９４９）。
【００５８】
本発明の方法での使用に適した抗体は、後に本明細書で記載されるポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、ヒト抗体又はヒト化抗体、免疫抱合体、並びに抗体断片（Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、及びＦｖ断片、抗体断片から形成される二特異性抗体、直鎖状抗体、一本鎖抗体分子、一特異性抗体、並びに多特異性抗体等）を含む。
【００５９】
Ａ．ポリクローナル抗体：
げっ歯類、霊長類、及びウマを含む様々な種からのポリクローナル抗体を調製する方法は、たとえばＶａｉｔｕｋａｉｔｉｓらに記載されている（Ｊ Ｃｌｉｎ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ．３３（１９７１）ｐ．９８８）。ポリクローナル抗体は、たとえば免疫剤及び所望であればアジュバントの１回又は複数回の注射によって哺乳動物中で産生することができる。典型的に、免疫剤及び／又はアジュバントは、複数回の皮下注射又は腹腔内注射によって哺乳動物に注射されるであろう。免疫剤は、配列番号２のポリペプチド又はより具体的には、配列番号２の残基１〜３２９若しくは配列番号２の残基１９〜３２９若しくは配列番号２の残基３３０〜３５０若しくは配列番号２の残基３５１〜５４１若しくはその融合タンパク質、さらに具体的には、配列番号２の残基１９〜２１９若しくは配列番号２の残基１２２〜３２９若しくは配列番号２の残基１９〜１３２若しくは配列番号２の残基１２２〜２１９若しくは配列番号２の残基２１３〜３２９若しくはその融合タンパク質を含んでいてもよい。免疫されている哺乳動物中で免疫原性であることが知られているタンパク質に免疫剤を抱合することは有用である可能性がある。上記免疫原性タンパク質の例は、キーホールリンペットヘモシニアン、血清アルブミン、ウシチログロブリン、及び大豆トリプシンインヒビターを含むが、これらに限定されない。用いられてもよいアジュバントの例は、フロインド完全アジュバント及びＭＰＬ−ＴＤＭアジュバント（モノホスホリル脂質Ａ、合成トレハロースジコリノミコレート）を含む。繰り返し注射が行われてもよい。血液サンプルは収集され、免疫グロブリン又は血清は分離される。
【００６０】
Ｂ．モノクローナル抗体
あるいは、抗体は、モノクローナル抗体であってもよい。本明細書で使用される用語「モノクローナル抗体」は、実質的に均質の抗体の集団から得られた抗体を指す、つまり集団を含む個々の抗体は、微量で存在する可能性のある、起こり得る自然発生の突然変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は、高度に特異的であり、単一の抗原部位に対して作られる。修飾語「モノクローナル」は、抗体の実質的に均質の集団から得られた抗体の特徴を示し、何らかの特定の方法による抗体の産生を必要とするとして解釈されるものではない。
【００６１】
モノクローナル抗体を産生する方法は、参照によって本明細書に組み込まれるたとえばＨａｒｌｏｗら（Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，ＣＳＨ Ｐｒｅｓｓ，１９８８）又はＫｏｈｌｅｒら（Ｎａｔｕｒｅ ２５６（１９７５）４９５）に見出されてもよい。
【００６２】
ハイブリドーマ法では、マウス、ハムスター、又は他の適切な宿主動物は、免疫剤に特異的に結合する抗体を産生する又は産生することができるリンパ球を誘発するために免疫剤を用いて典型的に免疫される（免疫剤は、配列番号２のポリペプチド又はより具体的には、配列番号２の残基１〜３２９若しくは配列番号２の残基１９〜３２９若しくは配列番号２の残基３３０〜３５０若しくは配列番号２の残基３５１〜５４１若しくはその融合タンパク質、さらに具体的には、配列番号２の残基１９〜２１９若しくは配列番号２の残基１２２〜３２９若しくは配列番号２の残基１９〜１３２若しくは配列番号２の残基１２２〜２１９若しくは配列番号２の残基２１３〜３２９若しくはその融合タンパク質を典型的に含むであろう）。あるいは、リンパ球は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで免疫されてもよい。一般に、ヒト起源の細胞が所望であれば、末梢血リンパ球（「ＰＢＬ」）が使用される、又は非ヒト哺乳動物源が所望であれば、脾臓細胞又はリンパ節細胞が使用される。次いで、リンパ球は、ハイブリドーマ細胞を形成するために、ポリエチレングリコール等の適した融合剤を使用して不死化細胞系と融合される（Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，（１９８６）ｐｐ．５９−１０３）。不死化細胞系は、普通、形質転換された哺乳動物細胞、詳細にはげっ歯類、ウシ、及びヒト起源の骨髄腫細胞である。普通、ラット又はマウスの骨髄腫細胞系が用いられる。ハイブリドーマ細胞は、非融合不死化細胞の成長又は生存を阻害する１つ又は複数の物質を好ましくは含有する適した培地中で培養されてもよい。たとえば、親細胞が、酵素であるヒポキサンチングアニンホスホリボシル転移酵素（ＨＧＰＲＴ又はＨＰＲＴ）を欠く場合、ハイブリドーマのための培地は、ヒポキサンチン、アミノプテリン、及びチミジンを典型的に含むであろう（「ＨＡＴ培地」）、またこれらの物質は、ＨＧＰＲＴ欠損の細胞の成長を予防する。好ましい不死化細胞系は、効率的に融合し、選択された抗体産生細胞による抗体の安定した高度なレベルの発現を維持し、且つＨＡＴ培地等の培地に敏感である不死化細胞系である。より好ましい不死化細胞系はネズミ骨髄腫系であり、これらは、たとえばＳａｌｋ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ Ｃｅｎｔｅｒ、サンディエゴ、カリフォルニア及びＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、マナッサス、バージニアから得ることができる。ヒト骨髄腫細胞系及びマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞系は、さらに、ヒトモノクローナル抗体の産生について記載されている（Ｋｏｚｂｏｒ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）；Ｂｒｏｄｅｕｒら，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，（１９８７）ｐｐ．５１−６３）。
【００６３】
次いで、ハイブリドーマ細胞が培養される培地は、免疫ペプチドに対するモノクローナル抗体の存在についてアッセイすることができる。好ましくは、ハイブリドーマ細胞によって産生されたモノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降又は放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）若しくは酵素連結免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）等のｉｎ ｖｉｔｒｏ結合アッセイによって決定される。上記技術及びアッセイは、当技術分野で知られている。モノクローナル抗体の結合親和性は、たとえば、Ｍｕｎｓｏｎ及びＰｏｌｌａｒｄ，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１０７：２２０（１９８０）のＳｃａｔｃｈａｒｄ解析によって決定することができる。
【００６４】
所望のハイブリドーマ細胞を同定した後、クローンは、限界希釈手順によってサブクローニングし、標準の方法（Ｇｏｄｉｎｇ，前掲）によって成長させてもよい。この目的に適した培養液は、たとえば、ダルベッコ修飾イーグル培地及びＲＰＭＩ−１６４０培地を含む。あるいは、ハイブリドーマ細胞は、哺乳動物中の腹水としてｉｎ ｖｉｖｏで成長させてもよい。
【００６５】
サブクローンによって分泌されたモノクローナル抗体は、たとえばプロテインＡセファロース、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、又はアフィニティークロマトグラフィー等の従来の免疫グロブリン精製手順によって培養液又は腹水から単離されてもよい又は精製されてもよい。
【００６６】
モノクローナル抗体はまた、米国特許第４８１６５６７号に記載される方法等の組換えＤＮＡ方法によって作製されてもよい。本発明のモノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して、容易に単離し、配列決定することができる（たとえば、ネズミ抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブの使用によって）。本発明のハイブリドーマ細胞は、上記ＤＮＡの好ましい源として役立つ。ＤＮＡは、一度単離されると、発現ベクター中に配置されてもよく、次いで、発現ベクターは、組換え宿主細胞におけるモノクローナル抗体の合成を達成するために、他の状態では免疫グロブリンタンパク質を産生しないサルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、又は骨髄腫細胞等の宿主細胞中に形質移入される。
【００６７】
「モノクローナル抗体」はまた、たとえばＣｌａｃｋｓｏｎら，Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８［１９９１］及びＭａｒｋｓら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１−５９７（１９９１）に記載される技術を使用してファージ抗体ライブラリーから単離されてもよい。
【００６８】
抗体は、一価抗体であってもよい。一価抗体を調製する方法は、当技術分野でよく知られている。たとえば、ある方法は、免疫グロブリンの軽鎖及び修飾重鎖の組換え発現を含む。重鎖は、重鎖架橋を予防するために、Ｆｃ領域の任意のポイントで一般に切断される。あるいは、関連するシステイン残基は、架橋を予防するために他のアミノ酸残基と置換される又は取り除かれる。
【００６９】
ｉｎ ｖｉｔｒｏ方法もまた一価抗体を調製するのに適している。抗体の断片、詳細にはＦａｂ断片を産生するための抗体の消化は、当技術分野で知られているルーチン的な技術を使用して達成することができる。
【００７０】
抗体は、たとえばＷａｒｄら（Ｎａｔｕｒｅ ３４１（１９８９）５４４）に開示されるように、免疫グロブリンのコンビナトリアルライブラリーの選択によって産生されてもよい。
【００７１】
Ｃ．ヒト抗体及びヒト化抗体：
好ましくは、本発明での使用のための抗体は、ヒト化抗体又はヒト抗体である。非ヒト（たとえばネズミ）抗体のヒト化形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小の配列を含有するキメラ免疫グロブリン、キメラ免疫グロブリン鎖、又はその断片（Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、又は抗体の他の抗原結合部分配列等）である。ヒト化抗体は、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）からの残基が、所望の特異性、親和性、及び性能を有する、マウス、ラット、又はウサギ等の非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲからの残基と交換されたヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）を含む。いくつかの場合では、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基は対応する非ヒト残基と交換される。
【００７２】
非ヒト抗体をヒト化する方法は、当技術分野でよく知られている。ヒト化は、ヒト抗体の対応する配列の代わりにげっ歯類のＣＤＲ又はＣＤＲ配列を用いることによって、Ｗｉｎｔｅｒ及び共同研究者らの方法に従って本質的に行うことができる（Ｊｏｎｅｓら，Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３−３２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：１５３４−１５３６（１９８８））。したがって、上記「ヒト化」抗体は、キメラ抗体であり（米国特許第４８１６５６７号）、実質的に無処置ではないヒト可変ドメインは、非ヒト種からの対応する配列によって置換されている。
【００７３】
いくつかの場合では、ヒトフレームワークへのＣＤＲの移入は、ヒト化抗体の特異性の損失をもたらす。これらの場合では、復帰突然変異を、抗体のヒト部分のフレームワーク領域中に導入することができる。復帰突然変異を作製する方法は、当技術分野でよく知られており、たとえばＣｏら，ＰＮＡＳ ＵＳＡ ８８；２２６９−２２７３（１９９１）及び国際公開第９０／０７８６１号に記載される。
【００７４】
ヒト抗体はまた、ファージディスプレイライブラリーを含む、当技術分野で知られている様々な技術を使用して産生することもできる（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ及びＷｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ，２２７：３８１（１９９１）；Ｍａｒｋｓら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ，２２２：５８１（１９９１））。Ｃｏｌｅら及びＢｏｅｒｎｅｒらの技術もまたヒトモノクローナル抗体の調製に利用可能である（Ｃｏｌｅら，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，ｐ．７７（１９８５）及びＢｏｅｒｎｅｒら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７（１）：８６−９５（１９９１））。同様に、ヒト抗体は、トランスジェニック動物、たとえば内在性免疫グロブリン遺伝子が部分的に又は完全に不活性化されたマウス中へのヒト免疫グロブリン座の導入によって作製することができる。抗原投与に際して、ヒト抗体産生は、観察され、遺伝子の再構成、構築、及び抗体レパートリーを含むすべての点でヒトで見られるものに非常によく似ている。このアプローチは、たとえば米国特許第５５４５８０７号；第５５４５８０６号；第５５６９８２５号；第５６２５１２６号；第５６３３４２５号；第５６６１０１６号；並びに以下の科学刊行物：Ｍａｒｋｓら，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１０：７７９−７８３（１９９２）；Ｌｏｎｂｅｒｇら，Ｎａｔｕｒｅ，３６８：８５６−８５９（１９９４）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ，３６８：８１２−１３（１９９４）；Ｆｉｓｈｗｉｌｄら，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１４：８４５−５１（１９９６）；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１４：８２６（１９９６）；Ｌｏｎｂｅｒｇ及びＨｕｓｚａｒ，Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３：６５−９３（１９９５）に記載される。
【００７５】
Ｄ．免疫抱合体：
本発明は、さらに、共有結合で又は非共有結合で、直接又はカップリング剤若しくはリンカーの使用を通して細胞毒、標識、薬剤、又は他の治療薬等の異種の部分に抱合された抗体を含む免疫抱合体の使用に関する。細胞毒は、化学療法剤、毒素（たとえば細菌、菌類、植物、又は動物起源の酵素活性毒素又はその断片）又は放射性同位体（つまり放射性抱合体）を含む。
【００７６】
使用することができる酵素活性毒素及びその断片は、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合活性断片、外毒素Ａ鎖（緑膿菌からの）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデクシンＡ鎖、アルファ−サルシン、シナアブラギリタンパク質、ジアンシン（ｄｉａｎｔｈｉｎ）タンパク質、ヨウシュヤマゴボウタンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、及びＰＡＰ−Ｓ）、ニガウリインヒビター、クルシン、クロチン、サパオナリアオフィシナリス（ｓａｐａｏｎａｒｉａ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）インヒビター、ゲロニン、ミトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、リストリクトシン（ｒｅｓｔｒｉｃｔｏｃｉｎ）、フェノマイシン（ｐｈｅｎｏｍｙｃｉｎ）、エノマイシン（ｅｎｏｍｙｃｉｎ）、及びトリコテセネス（ｔｒｉｃｏｔｈｅｃｅｎｅｓ）を含む。種々の放射性核種は、放射性抱合抗体の産生に利用可能である。例として２１２Ｂｉ、１３１Ｉ、１３１Ｉｎ、９０Ｙ、及び１８６Ｒｅを含む。
【００７７】
他の実施形態では、抗体は、細胞プリターゲッティングにおける利用のために「受容体」（ストレプトアビジン等）に抱合させてもよく、抗体−受容体抱合体は、患者に投与され、その後、除去剤を使用して血行路から結合していない抱合体を除去し、次いで、細胞毒（たとえば放射性ヌクレオチド）に抱合されている「リガンド」（たとえばアビジン）を投与する。
【００７８】
さらに、本発明の抗体又は抗体断片は、当技術分野の又は本明細書に記載される方法を使用してペグ化することができる。本明細書に開示される抗体はまた、免疫リポソームとして製剤されてもよい。抗体を含有するリポソームは、Ｅｐｓｔｅｉｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８２：３６８８（１９８５）；Ｈｗａｎｇら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７７：４０３０（１９８０）；並びに米国特許第４４８５０４５号及び第４５４４５４５号に記載される等の、当技術分野で知られている方法によって調製される。循環時間が増強されたリポソームは米国特許第５０１３５５６号に開示される。
【００７９】
Ｅ．抗体断片：
本発明は、さらに、無処置抗体の一部分、好ましくは無処置抗体の抗原結合領域又は可変領域を含む「抗体断片」の使用に関する。抗体断片の例は、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖ断片、抗体断片から形成される二特異性抗体、直鎖状抗体（Ｚａｐａｔａら，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．，８（１０）：１０５７−１０６２［１９９５］）、一本鎖抗体分子、一特異性抗体、並びに多特異性抗体を含む。
【００８０】
「Ｆｖ」は、完全抗原認識部位及び完全抗原結合部位を含有する最小限の抗体断片である。この領域は、密接に、非共有的に結びつけられた１つの重鎖可変ドメイン及び１つの軽鎖可変ドメインの二量体からなる。それぞれの可変ドメインの３つのＣＤＲが相互作用するのはこの立体配置においてであり、ＶＨ−ＶＬ二量体の表面上の抗原結合部位を定義している。共同して、６個のＣＤＲは、抗原結合特異性を抗体に付与する。しかしながら、全結合部位よりも親和性が低いが、単一の可変ドメインでさえ（又は抗原に特異的な３つのＣＤＲしか含まない半分のＦｖ）抗原を認識し、且つ結合する能力を有する。
【００８１】
Ｆａｂ断片は、さらに、軽鎖の定常ドメイン及び重鎖の第１の定常ドメイン（ＣＨ１）を含有する。Ｆａｂ断片は、Ｆａｂ’断片と異なり、Ｆａｂ’断片は、抗体ヒンジ領域からの１つ又は複数のシステインを含むごくわずかな残基が重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端に追加されている。Ｆａｂ’−ＳＨは、Ｆａｂ’に対する本明細書での呼称であり、定常領域のシステイン残基（複数可）が遊離チオール基を持つ。Ｆ（ａｂ’）２抗体断片は、Ｆａｂ’断片の間にヒンジシステインを有する、Ｆａｂ’断片のペアとしてもともとは産生された。抗体断片の他の化学的カップリングもまた知られている。任意の脊椎動物種からの抗体（免疫グロブリン）の「軽鎖」は、それらの定常領域のアミノ酸配列に基づき、カッパ及びラムダと呼ばれる２つの明確に別とされる種類のうちの一方に指定することができる。
【００８２】
「一本鎖抗体分子」は、上述の抗体のＶＨドメイン及びＶＬドメインを含む抗体の断片であり、これらのドメインは単一のポリペプチド鎖中に存在する。好ましくは、Ｆｖポリペプチドは、一本鎖抗体分子が抗原結合のための所望の構造を形成することを可能にする、ＶＨドメイン及びＶＬドメイン間のポリペプチドリンカーをさらに含む。一本鎖抗体分子の検討については、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ及びＭｏｏｒｅ編，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）を参照されたい。
【００８３】
用語「二特異性抗体」は、２つの抗原結合部位を有する低分子抗体断片を指し、これらの断片は、同じポリペプチド鎖中に、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に対してつながれた重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む（ＶＨ−ＶＬ）。好ましくは、同じ鎖上の２つのドメイン間でペア形成させるには短すぎるリンカーを使用することにより、ドメインは、他の鎖のうちの相補的ドメインとペア形成するように強いられ、２つの抗原結合部位を作り出す。二特異性抗体は、たとえば、欧州特許第４０４０９７号；国際公開第９３／１１１６１号；及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８（１９９３）に、より十分に記載される。
【００８４】
本明細書で使用される用語「一特異性抗体」は、重鎖可変ドメインを有し、且つ軽鎖可変ドメインを有していない抗原結合分子を指す。一特異性抗体は、軽鎖がない状態で抗原に結合することができ、ＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２、及びＣＤＲＨ３と示される３つのＣＤＲ領域を典型的に有する。一特異性抗体は、２本の足指及び強靭な足底を有する足を有する動物を含む、ラクダ科の動物源から得られた「ラクダ科動物一特異性抗体」を含む。ラクダ科の動物は、ラクダ、ラマ、及びアルパカを含む。ラクダ（ヒトコブラクダ及びフタコブラクダ）は、それらの血清からの物質を分析すると可変軽鎖ドメインを欠くことが多いことが報告されており、十分な抗体特異性及び親和性は、ＶＨドメイン（３つのＣＤＲループ）のみに由来し得ることを示唆する。一特異性抗体はまた、様々な動物源、特に哺乳動物（たとえばマウス、ラット、ウサギ、ウマ、ロバ、ウシ、又はヒト）からの修飾ＶＨも含み、ＶＬがない状態で抗原に結合することができる。好ましくは、ＶＨは、ＶＬがない状態で抗原にＶＨが結合するために、ＶＬとの接合点の位置で修飾される。Ｄａｖｉｅｓ及びＲｉｅｃｈｍａｎｎは、たとえば、高度な親和性（１０７Ｍ−１以上の、標的ポリペプチドに対する結合親和性（Ｋａ））及び高度な特異性を有する「ラクダ化一特異性抗体」を生成することができることを実証した（Ｄａｖｉｅｓ＆Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ，１９９５，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＮＹ），１３（５）：４７５−９）。軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に対するその接合点を通したＶＨの非特異的結合は、この接合点における３つの突然変異（Ｇ４４Ｅ、Ｌ４５Ｒ、及びＷ４７Ｇ）によって予防された。これらの突然変異は、軽鎖パートナーが自然で欠けているラクダ科動物抗体重鎖を模倣するよう導入された。
【００８５】
Ｆ．本発明の方法での使用のための他の抗体：
本発明の好ましい実施形態では、本発明の方法での使用のためのアンタゴニストは、ＩＬ−１８Ｒαに選択的に結合する本明細書で上記に記載される抗体である。本発明の方法での使用のための抗体は、たとえばＰＣＴ出願国際公開第９７／３１０１０号又は欧州出願第０８５０９５２号に記載され、それらの全体が本出願に参照により組み込まれる。
【００８６】
好ましくは、本発明の方法での使用のための抗体は、ヒトＩＬ−１８Ｒαに、さらに好ましくはヒトＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに位置するエピトープに選択的に結合する。上記抗体は、ヒト患者における自己免疫疾患又は脱髄疾患（ＭＳ等）の症状を処置する、予防する、又は寛解させるために使用される。
【００８７】
特定の実施形態では、上記抗体は、本明細書で上記に記載されるモノクローナル抗体、ヒト抗体若しくはヒト化抗体、免疫抱合体、又は抗体断片（Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、及びＦｖ断片、抗体断片から形成される二特異性抗体、直鎖状抗体、一本鎖抗体分子、一特異性抗体、並びに多特異性抗体等）である。
【００８８】
本発明の特定の一態様では、上記抗体は、ヒトＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに選択的に結合する。より具体的には、上述の抗体は、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、及び配列番号１０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１、２、３、４、５、又は６個のＣＤＲを含む抗原結合ドメインを有する。好ましくは、上述の抗体の抗原結合ドメインは、配列番号５、配列番号６、及び配列番号７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１、２、又は３個のＣＤＲ並びに配列番号８、配列番号９、及び配列番号１０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１、２、又は３個のＣＤＲを含む。より好ましくは、上述の抗体の抗原結合ドメインは、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、及び配列番号１０のアミノ酸配列を有する６個のＣＤＲを含む。
【００８９】
本発明の他の実施形態では、上述の抗体はＶＨドメインを含む。好ましくは、ＶＨドメインは、配列番号３のアミノ酸配列を含む又はそこにある。他の実施形態では、抗体はＶＬドメインを含む。好ましくは、ＶＬドメインは、配列番号４のアミノ酸配列を含む又はそこにある。好ましい実施形態では、抗体は、ＶＨドメイン及びＶＬドメインを含む。より好ましくは、抗体は、配列番号３のアミノ酸配列を含む又はそこにあるＶＨドメイン及び配列番号４のアミノ酸配列を含む又はそこにあるＶＬドメインを含む。
【００９０】
他の実施形態では、抗体は、ヒトＩｇＧ１定常ドメイン、ヒトＩｇＧ２定常ドメイン、ヒトＩｇＧ３定常ドメイン、ヒトＩｇＧ４定常ドメイン、ヒトＩｇＭ定常ドメイン、ヒトＩｇＥ定常ドメイン、及びヒトＩｇＡ定常ドメインからなる群から選択される重鎖免疫グロブリン定常ドメインを含む。好ましくは、重鎖免疫グロブリン定常領域ドメインはヒトＩｇＧ１定常ドメインである。他の実施形態では、抗体は、ヒトＩｇカッパ定常ドメイン及びヒトＩｇラムダ定常ドメインからなる群から選択される軽鎖免疫グロブリン定常ドメインをさらに含む。
【００９１】
他の実施形態では、抗体は、Ｉｇ定常重鎖領域、ヒトＩｇカッパ定常ドメイン及びヒトＩｇラムダ定常ドメインからなる群から選択されるＩｇ定常軽鎖領域、配列番号３のアミノ酸配列を有するＩｇ可変重鎖領域、並びに配列番号４のアミノ酸配列を有するＩｇ可変軽鎖領域としてヒトＩｇＧ１を含む（後にＡｂ１と命名される）。
【００９２】
詳細には、本明細書に開示される抗体の好ましい実施形態は、本明細書で上記に定義されるヒト抗体若しくはヒト化抗体、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、抗体断片から形成される二特異性抗体、直鎖状抗体、一本鎖抗体、一特異性抗体、又は多特異性抗体等の抗体断片である。最も好ましくは、抗体は、ヒト抗体又はヒト化抗体である。
【００９３】
本発明の方法での使用に適した他の抗体は、以下のモノクローナル抗体を含む：モノクローナル抗ヒトＩＬ−１８Ｒαクローン７０６１４（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社、ミネアポリス、ＭＮ、米国、カタログ番号：ＭＡＢ８４０１によって市販化）、モノクローナル抗ヒトＩＬ−１８Ｒαクローン７０６２５（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社、ミネアポリス、ＭＮ、米国、カタログ番号：ＭＡＢ８４０によって市販化）、モノクローナル抗ヒトＩＬ−１８ＲαクローンＢ−Ｅ４３（抗体番号８０２３２（Ｄｉａｃｌｏｎｅ社、ブザンソン、フランス、カタログ番号８５４ ９００ ０００によって市販化））、モノクローナル抗ヒトＩＬ−１８ＲαクローンＨ４４（抗体番号８０４３８（Ｄｉａｃｌｏｎｅ社、ブザンソン、フランスによって市販化））。上述の抗体のヒト化形態は、好ましい。
【００９４】
一実施形態では、本発明の方法での使用のための抗体は、本明細書で上記に記載されるＡｂ１、クローン７０６１４、クローン７０６２５、クローンＢ−Ｅ４３、及び／又はクローンＨ４４とヒトＩＬ−１８Ｒαへの結合について競合する抗体である。競合結合アッセイは、Ａｂ１、クローン７０６１４、クローン７０６２５、クローンＢ−Ｅ４３、及び／又はクローンＨ４４とヒトＩＬ−１８Ｒαへの結合について競合する抗体を同定するために使用することができる。当技術分野で知られている多くの競合結合アッセイのいずれも、同じ抗原に対する２つの抗体間の競合を測定するために使用することができる。手短に言えば、異なる抗体が他の抗体の結合を阻害する能力が試験される。たとえば、抗体は、サンドイッチＥＬＩＳＡアッセイを使用して、それらが結合するエピトープによって区別することができる。これは、ウェルの表面をコーティングするために捕捉抗体を使用することにより実行される（捕捉抗体は、たとえばＡｂ１、クローン７０６１４、クローン７０６２５、クローンＢ−Ｅ４３、及び／又はクローンＨ４４とすることができる）。次いで、半飽和濃度のタグ付き抗原を、捕捉表面に追加する（たとえばヒトＩＬ−１８７Ｒα又はその一部（たとえばヒトＩＬ−１８７Ｒαの細胞外ドメイン）。このタンパク質は、特異的な抗体：エピトープ相互作用を通して抗体に結合するであろう。洗浄後、検出可能な部分（たとえば、検出抗体として定義される標識抗体に対するＨＲＰ）に連結された二次抗体を、ＥＬＩＳＡに追加する。この抗体が捕捉抗体と同じエピトープを認識する場合、その特定のエピトープはもはや結合するために利用可能ではないので、標的タンパク質に結合することはできないであろう。しかしながら、この二次抗体が標的タンパク質上の異なるエピトープを認識する場合、二次抗体は結合することができるであろう、また、この結合は、関連する基質を使用して、活性（したがって結合した抗体）のレベルを定量することにより検出することができる。バックグラウンドは、捕捉抗体及び検出抗体の両方として単一の抗体を使用することにより定義されるが、最大シグナルは、抗原特異的抗体を用いて抗原上のタグを捕捉し、且つ抗原上のタグに対する抗体を検出することにより確立することができる。参考としてバックグラウンド及び最大シグナルを使用することによって、抗体は、エピトープ特異性を決定するためにペアの様式で評価することができる。上記に記載されるアッセイのいずれかを使用して、第１の抗体の存在下で、抗原への二次抗体の結合が少なくとも３０％、普通少なくとも約４０％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、又は８５％、多くの場合少なくとも約９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％低下した場合、第１の抗体は二次抗体の結合を競合的に阻害すると考えられる。本明細書で上記に開示されるように、上記に記載されるアッセイのいずれかを使用して、Ａｂ１、クローン７０６１４、クローン７０６２５、クローンＢ−Ｅ４３、及び／又はクローンＨ４４の存在下で、少なくとも３０％、普通少なくとも約４０％ ５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、又は８５％、多くの場合少なくとも約９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％低下させる等で、Ａｂ１、クローン７０６１４、クローン７０６２５、クローンＢ−Ｅ４３、及び／又はクローンＨ４４とヒトＩＬ−１８Ｒα、特にヒトＩＬ−１８７Ｒαの細胞外ドメインへの結合について競合する抗体は、本発明の方法での使用のための抗体に相当する。詳細には、これらの競合抗体の好ましい実施形態は、本明細書で上記に定義されるヒト抗体若しくはヒト化抗体、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片、抗体断片から形成される二特異性抗体、直鎖状抗体、一本鎖抗体、一特異性抗体、又は多特異性抗体等の抗体断片である。最も好ましくは、これらの競合抗体は、ヒト抗体又はヒト化抗体である。
【００９５】
本発明の一実施形態では、本発明の方法での使用のための抗体は、以下の技術によって得ることができる又は得られた抗体である。宿主動物（たとえばマウス、ハムスター、ウサギ、ヤギ、ロバ、サル、又は他の適切な宿主）は、免疫剤に特異的に結合するであろう抗体を産生するリンパ球を誘発するために、配列番号２のポリペプチド若しくはその融合タンパク質を含む若しくはそれからなる又はより具体的には、配列番号２の残基１９〜３２９若しくはその融合タンパク質、さらに具体的には、配列番号２の残基１９〜２１９若しくは配列番号２の残基１２２〜３２９若しくは配列番号２の残基１９〜１３２若しくは配列番号２の残基１２２〜２１９若しくは配列番号２の残基２１３〜３２９若しくはその融合タンパク質を含む若しくはそれからなる免疫剤を用いて免疫される。あるいは、リンパ球はｉｎ ｖｉｔｒｏで免疫される。その場合、ヒト起源の細胞が所望であれば、末梢血リンパ球（「ＰＢＬ」）が使用される又は非ヒト哺乳動物源が所望であれば、脾臓細胞又はリンパ節細胞が使用される。次いで、リンパ球は、ハイブリドーマ細胞を形成するために、適した融合剤（ポリエチレングリコール等）を使用して不死化細胞系と融合される（Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，（１９８６）ｐｐ．５９−１０３）。次いで、ハイブリドーマ細胞が培養される培地は、免疫ペプチドに対するモノクローナル抗体の存在についてアッセイされる。好ましくは、ハイブリドーマ細胞によって産生されたモノクローナル抗体の結合特異性は、免疫沈降又は放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）若しくは酵素連結免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）等のｉｎ ｖｉｔｒｏ結合アッセイによって決定される。ＩＬ−１８Ｒαの結合についてのＥＬＩＳＡ試験は、たとえば、参照により組み込まれるＶｅｒｍｏｔ−Ｄｅｓｒｏｃｈｅｓ Ｃら Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００５．２３６（１−２）：１０１−４に記載されている。所望のハイブリドーマ細胞を同定した後、クローンは、限界希釈手順によってサブクローニングし、標準の方法（Ｇｏｄｉｎｇ，前掲）によって成長させてもよい。この目的に適した培養液は、たとえば、ダルベッコ修飾イーグル培地及びＲＰＭＩ−１６４０培地を含む。あるいは、ハイブリドーマ細胞は、哺乳動物中の腹水としてｉｎ ｖｉｖｏで成長させてもよい。サブクローンによって分泌されたモノクローナル抗体は、たとえばプロテインＡセファロース、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、又はアフィニティークロマトグラフィー等の従来の免疫グロブリン精製手順によって培地又は腹水から単離又は精製されてもよい。
【００９６】
任意選択で、得られた抗体はヒト化されてもよい。非ヒト抗体をヒト化する方法は、当技術分野でよく知られている。ヒト化は、ヒト抗体の対応する配列の代わりにげっ歯類のＣＤＲ又はＣＤＲ配列を用いることによって、Ｗｉｎｔｅｒ及び共同研究者らの方法に従って本質的に行うことができる（Ｊｏｎｅｓら，Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３−３２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：１５３４−１５３６（１９８８））。したがって、上記「ヒト化」抗体は、キメラ抗体であり（米国特許第４８１６５６７号）、実質的に無処置ではないヒト可変ドメインは、非ヒト種からの対応する配列によって置換されている。いくつかの場合では、ヒトフレームワークへのＣＤＲの移入は、ヒト化抗体の特異性の損失をもたらす。これらの場合では、復帰突然変異を、抗体のヒト部分のフレームワーク領域中に導入することができる。復帰突然変異を作製する方法は、当技術分野でよく知られており、たとえばＣｏら，ＰＮＡＳ ＵＳＡ ８８；２２６９−２２７３（１９９１）及び国際公開第９０／０７８６１号に記載される。あるいは、ヒト抗体は、トランスジェニック動物、たとえば内在性免疫グロブリン遺伝子が部分的に又は完全に不活性化されたマウス中へのヒト免疫グロブリン座の導入により作製することができる。抗原投与に際して、ヒト抗体産生は、観察され、遺伝子の再構成、構築、及び抗体レパートリーを含むすべての点でヒトで見られるものに非常によく似ている。このアプローチは、たとえば米国特許第５５４５８０７号；第５５４５８０６号；第５５６９８２５号；第５６２５１２６号；第５６３３４２５号；第５６６１０１６号；並びに以下の科学刊行物：Ｍａｒｋｓら，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１０：７７９−７８３（１９９２）；Ｌｏｎｂｅｒｇら，Ｎａｔｕｒｅ，３６８：８５６−８５９（１９９４）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ，３６８：８１２−１３（１９９４）；Ｆｉｓｈｗｉｌｄら，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１４：８４５−５１（１９９６）；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１４：８２６（１９９６）；Ｌｏｎｂｅｒｇ及びＨｕｓｚａｒ，Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３：６５−９３（１９９５）に記載される。
【００９７】
一実施形態では、本発明は、ヒト患者における自己免疫疾患又は脱髄疾患（多発性硬化症等）の症状を処置する、予防する、又は寛解させる方法であって、患者に、治療的有効量のＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストを投与することを含む方法に関し、アンタゴニストは、ＩＬ１８−Ｒαの細胞外ドメインに選択的に結合する抗体であり、抗体は、
− 配列番号２の残基１９〜３２９を含む（又は配列番号２の残基１９〜３２９若しくは配列番号２の残基１２２〜３２９若しくは配列番号２の残基１９〜１３２若しくは配列番号２の残基１２２〜２１９若しくは配列番号２の残基２１３〜３２９若しくはその融合タンパク質からなる）免疫剤を用いて宿主動物を免疫するステップ、
− 上述の宿主動物によって産生されたリンパ球を不死化細胞系と融合させてハイブリドーマ細胞を形成するステップ、
− 免疫ペプチドに対する抗体を産生するハイブリドーマ細胞のクローンを選択するステップ、
− ＥＡＥ動物モデル中のハイブリドーマ細胞の異なるクローンによって産生された抗体の活性を試験し、上述の動物モデルにおけるＥＡＥの進行を阻害する抗体を選択するステップ、
− 分泌されたモノクローナル抗体を産生するステップ
を含む又はそれらからなるプロセスによって得ることができる。
【００９８】
任意選択で、さらなるステップにおいて、得られた抗体はヒト化されてもよい。あるいは、免疫された宿主動物は、本明細書で上記に開示される、内在性免疫グロブリン遺伝子がヒト免疫グロブリンと交換されたトランスジェニック動物、たとえば、内在性免疫グロブリン遺伝子が部分的に又は完全に不活性化されたマウスである。抗原投与に際して、ヒト抗体産生は、観察され、遺伝子の再構成、構築、及び抗体レパートリーを含むすべての点でヒトで見られるものに非常によく似ている。
【００９９】
本発明の他の実施形態では、本発明の方法での使用のための抗体は、ファージディスプレイによって得ることができる又は得られた抗体である。その場合、「モノクローナル抗体」は、たとえばＣｌａｃｋｓｏｎら，Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８［１９９１］及びＭａｒｋｓら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１−５９７（１９９１）に記載される技術を使用してファージ抗体ライブラリーから単離される。
【０１００】
好ましくは、本明細書で上記に記載され、本発明の方法で使用される抗体は、ヒト抗体又はヒト化抗体であり、上記ヒト抗体又はヒト化抗体を作り出すための技術もまたよく知られており、たとえばＰｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｓｉｇｎ Ｌａｂｓ社（フリーモント、ＣＡ）、Ｍｅｄａｒｅｘ社（プリンストン、ＮＪ）、及びＡｂｇｅｎｎｉｘ社（フリーモント、ＣＡ）から市販されている。
【０１０１】
３）ＩＬ−１８Ｒαの発現の阻害：
上記に論じられるように、本発明は、ＩＬ−１８Ｒαにアンタゴナイズする作用物質を用いて動物を処置することにより、ＭＳについて動物モデルにおける症状が低下するという発見に部分的に基づく。たとえば、下記の実施例２及び３に記載されるように、本本発明者は、ＩＬ−１８Ｒα−／−マウスがＥＡＥに対して抵抗性であること及びＩＬ−１８ＲαのブロックがＩＬ−１８−／−マウスにおいてＥＡＥを予防することを実証した。したがって、転写又は翻訳のレベルでＩＬ−１８Ｒα遺伝子の特異的発現を妨害するヌクレオチド配列は、自己免疫疾患又は脱髄疾患（多発性硬化症等）を処置する又は予防するために使用することができる。このアプローチは、たとえば、ｓｉＲＮＡ及び／若しくはリボザイムを用いてｍＲＮＡの分解を誘発することによって又はアンチセンス核酸を用いてｍＲＮＡをマスクすることによって特異的ｍＲＮＡの転写又は翻訳をブロックするために、ｓｉＲＮＡ及び／若しくはアンチセンスオリゴヌクレオチド並びに／又はリボザイムを利用してもよい。
【０１０２】
Ａ．ｓｉＲＮＡ
本発明の一実施形態では、本発明の方法での使用のためのアンタゴニストはｓｉＲＮＡである。ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）は、興味のある遺伝子又はｍＲＮＡに対応する二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）が生物中に導入され、対応するｍＲＮＡの分解をもたらす転写後遺伝子サイレンシング（ＰＴＧＳ）のメカニズムを指す。哺乳動物細胞の実験的操作のためにこの現象を利用するための最初の試みは、長いｄｓＲＮＡ分子に応じて活性化された頑強で非特異的な抗ウイルス性防御メカニズムにより妨害された（Ｇｉｌら Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ２０００，５：１０７−１１４）。
【０１０３】
ＩＬ−１８Ｒα遺伝子に対応する二本鎖ｓｉＲＮＡは、ＩＬ−１８Ｒα ｍＲＮＡ転写物の分解を誘発することにより、ＩＬ−１８Ｒαの転写及び／又は翻訳をサイレンシングするために使用することができ、したがって、ＩＬ−１８Ｒαの発現を予防することにより自己免疫疾患又は脱髄疾患（多発性硬化症等）を処置する又は予防することができる。ＲＮＡｉ反応では、ｄｓＲＮＡ分子のセンス鎖及びアンチセンス鎖の両方は、典型的に長さが約１０〜約３０個のヌクレオチド、より典型的に長さが１９〜２５個のヌクレオチド（ｎｔ）、好ましくは長さが２１〜２３個のｎｔの範囲の、２個のヌクレオチドの３’末を有する低分子のＲＮＡ断片又はＲＮＡセグメントに処理される。これらのｄｓＲＮＡは、「ガイドＲＮＡ」又は「低分子干渉ＲＮＡ」（ｓｉＲＮＡ）として知られている。ｓｉＲＮＡは、さらに、ｓｉＲＮＡ二重鎖の両方の鎖が単一のＲＮＡ分子内に含まれる、低分子Ｕ字型ＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）を含むことができる。あるいは、長さが１９〜２５個のｎｔであり、好ましくは長さが２１〜２３個のｎｔであり、２個のヌクレオチドの３’末を有する合成ｄｓＲＮＡは、合成し、精製し、且つ反応において使用することができる。したがって、ＲＮＡｉは、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）によって典型的に媒介され、低分子干渉ＲＮＡは、長さが約１９個のヌクレオチドで、各鎖上に１〜２個のヌクレオチドの３’オーバーハングを有し、全長が約２１〜２３個の間のヌクレオチドの二本鎖領域を典型的に含む。
【０１０４】
次いで、ｓｉＲＮＡ二重鎖は、ｓｉＲＮＡに対して相同性を有する内在性ｍＲＮＡを標的にし、且つ複合体内で破壊するタンパク質から構成されるヌクレアーゼ複合体に結合する。この様式で、特異的ｍＲＮＡを標的にし、分解することができ、それによって、標的にされたｍＲＮＡからのタンパク質発現の損失がもたらされる。ｄｓＲＮＡの特定の条件及び修飾は、ＰＣＴ国際公開第０１／７５１６４号に記載される（参照により本明細書に組み込まれる）。ｄｓＲＮＡ分子は、長さが変動し得るが、長さが１９〜２５個のｎｔ、最も好ましくは長さが２１〜２３個のヌクレオチドであり、特徴的な２〜３個のヌクレオチドの３’オーバーハング端、典型的に（２’−デオキシ）チミジン又はウラシルを有するｓｉＲＮＡ分子を使用することが好ましい。ｓｉＲＮＡは、３’水酸基を典型的に含む。単鎖ｓｉＲＮＡ及びｄｓＲＮＡの平滑末端形態もまた使用することができる。ＲＮＡの安定性をさらに増強するために、３’オーバーハングは、分解に対して安定化することができる。上記一実施形態では、ＲＮＡは、アデノシン又はグアノシン等のプリンヌクレオチドを含むことにより安定化される。あるいは、修飾類似体によるピリミジンヌクレオチドの置換、たとえば（２’−デオキシ）チミジンによるウリジン２−ヌクレオチドオーバーハングの置換は、許容され、ＲＮＡｉの効率に影響を及ぼさない。２’水酸基がないと、組織培養培地における、オーバーハングのヌクレアーゼ抵抗性が著しく増強される。ｓｉＲＮＡは、ＰＣＴ国際公開第０１／７５１６４号に記載される方法を含む、当技術分野で知られている方法のいずれかを使用して又はＲＮＡのｉｎ ｖｉｔｒｏ転写のための標準の手順及びＥｌｂａｓｈｉｒら（Ｇｅｎｅｓ＆Ｄｅｖ．，１５：１８８−２００，２００１）に記載されるｄｓＲＮＡアニーリング手順を使用して調製することができる。
【０１０５】
本発明では、ｄｓＲＮＡ又はｓｉＲＮＡは、ヒトＩＬ−１８ＲαをコードするｍＲＮＡの配列の少なくとも一部に対応し、ヒトＩＬ−１８Ｒαの発現又は生物活性を低下させる又は阻害することができる。好ましくは、ｄｓＲＮＡ又はｓｉＲＮＡは、配列番号１に示されるｃＤＮＡ配列の少なくとも一部に対応し（つまりｓｉＲＮＡは、配列番号１に示されるｃＤＮＡ配列の二本鎖領域である）、ヒトＩＬ−１８Ｒαの発現又は生物活性を低下させる又は阻害することができる。望ましくは、ｓｉＲＮＡは、ヒトＩＬ−１８Ｒαの１８〜２５個の連続したヌクレオチドに１００％相補的であり、ヒトＩＬ−１８Ｒαの発現又は生物活性を低下させる又は阻害することができる。さらに好ましくは、ｓｉＲＮＡは、配列番号１に示される配列の１８〜２５個の連続したヌクレオチドに１００％相補的であり、ヒトＩＬ−１８Ｒαの発現又は生物活性を低下させる又は阻害することができる。好ましい実施形態では、ＩＬ−１８Ｒα生物活性の減少率は、コントロールのｄｓＲＮＡ、ｓｈＲＮＡ、又はｓｉＲＮＡを用いて処置した細胞と比較して、少なくとも５％、より好ましくは少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、又は９０％、最も好ましくは少なくとも９５％である。タンパク質発現のレベルをアッセイする方法は、当技術分野で知られており、ウエスタンブロット、免疫沈降、及びＥＬＩＳＡを含む。ＩＬ−１８Ｒαポリペプチド生物活性をアッセイする方法は、本明細書に記載されるアッセイを含む。
【０１０６】
本発明の状況において、ｓｉＲＮＡ等のＲＮＡｉ誘発剤は、治療目的、たとえば、自己免疫疾患又は脱髄疾患（多発性硬化症等）を処置する又は予防するために有用である。いくつかの実施形態では、処置するための疾患は、再発寛解型（ＲＲ）ＭＳ、二次進行型（ＳＰ）ＭＳ、一次進行型（ＰＰ）ＭＳ、又は進行再発型（ＰＲ）ＭＳである。特に、ＲＮＡｉは、哺乳動物脳において有効であることが示されたこと及びｓｈＲＮＡ分子の転写のための鋳型を提供するベクターは、脳中に導入されると局所的な遺伝子発現をダウンレギュレートすることが示されたことが注目されている（Ｈｏｍｍｅｌ，ＪＤら，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，９（１２）１５３９−１５４４）。干渉ＲＮＡがない状態で検出された症状と比較した、ＭＳ症状の重症度における減少は、ｓｉＲＮＡの効果を監視するために使用することができる。
【０１０７】
ｓｉＲＮＡは、ｓｉＲＮＡの注射、吸入、又は経口摂取を含む、当技術分野で知られている任意の手段を使用して、患者に送達することができる。他のｓｉＲＮＡに適した送達系は、たとえば、高分子複合体、ナノカプセル、マイクロスフェア、ビーズ、並びに水中油型乳剤、ミセル、混合ミセル、及びリポソームを含む脂質ベース系等のコロイド分散系である。本発明の好ましいコロイド系はリポソームである。リポソームは、ｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏでの送達媒体として有用な人工膜小胞である。リポソーム内のＲＮＡ及びＤＮＡを含む核酸は、生物学的活性形態で細胞に送達される（Ｆｒａｌｅｙら，Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．，６：７７，１９８１）。リポソームは、当技術分野で知られている任意の手段を使用して、特定の細胞型又は組織を標的にすることができる。
【０１０８】
多数の化学的修飾は、ｓｉＲＮＡ二重鎖又は一方若しくは両方の鎖の部分及び／又は３’オーバーハング（複数可）に対して成すことができるが、サイレンシング活性を消失させず、またサイレンシング活性を著しく減じないことが多い（Ｄｏｒｓｅｔｔ，Ｙ及びＴｕｓｃｈｌ，Ｔ．，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ．２００４．３（４）：３１８−２９）。上記修飾は、一般に、安定性、細胞取り込み、及び／又はｓｉＲＮＡの細胞内効果を増強する可能性がある。本発明は、任意の上記修飾、たとえばホスホロチオエート、２’−Ｏメチル、２’−Ｏ，４’−メチレンヌクレオチド等及び当技術分野、たとえばアンチセンス分野からの知られている他の修飾を有するｓｉＲＮＡ又はｓｈＲＮＡの使用を包含する。
【０１０９】
Ｂ．アンチセンス
本発明の一実施形態では、本発明の方法での使用のためのアンタゴニストは、完全な又は部分的な長さのアンチセンスＲＮＡ転写物である。アンチセンス核酸は、一般に、標的核酸（たとえばｍＲＮＡ転写物）の一部分に相補的な単鎖核酸（ＤＮＡ、ＲＮＡ、修飾ＤＮＡ、又は修飾ＲＮＡ）であり、したがって、二重鎖を形成するよう標的に結合することができる。典型的に、アンチセンス核酸は、長さが１５〜３５個のヌクレオチド、好ましくは長さが１５〜２５個のヌクレオチドの範囲であるが、長さが１０〜約５０個までのヌクレオチドの範囲であってもよいオリゴヌクレオチドである。結合は、典型的に、標的核酸の機能を低下させる又は阻害する。たとえば、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ゲノムＤＮＡに結合すると転写をブロックし、ｍＲＮＡに結合すると翻訳を阻害し、及び／又は核酸の分解をもたらす可能性がある。細胞中で、アンチセンス核酸は、対応するｍＲＮＡにハイブリダイズし、二本鎖分子を形成する。細胞は二本鎖であるｍＲＮＡを翻訳しないので、アンチセンス核酸はｍＲＮＡの翻訳を妨害する。それほど多くはないが、ＤＮＡに直接結合するアンチセンス分子が使用されてもよい。
【０１１０】
ＩＬ−１８Ｒαの発現における低下は、ポリペプチドをコードするｍＲＮＡの配列に相補的な配列を含むアンチセンス核酸又はペプチド核酸の投与によって達成されてもよい。ヒトＩＬ−１８Ｒαポリペプチドをコードする核酸配列に特異的にハイブリダイズするアンチセンスオリゴヌクレオチドが好ましい。それらは、ＩＬ−１８Ｒαの転写及び／又は翻訳をサイレンシングするために使用することができ、したがって自己免疫疾患又は脱髄疾患（多発性硬化症等）を処置する又は予防することができる。たとえば、配列番号１に記載される核酸配列に特異的にハイブリダイズするアンチセンスオリゴヌクレオチドは、本発明の方法で使用することができる。典型的に、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、長さが１５〜３５個のヌクレオチド、好ましくは長さが１５〜２５個のヌクレオチドの範囲のオリゴヌクレオチドであり、配列番号１に記載される核酸配列に相補的である。アンチセンス核酸がない状態で検出された症状と比較した、ＭＳ症状の重症度における減少は、アンチセンス核酸の効果を監視するために使用することができる。
【０１１１】
アンチセンス核酸は、自然発生ヌクレオチド又は（ｉ）ホスホジエステル骨格の置換（たとえばペプチド核酸、ホスホロチオエートオリゴヌクレオチド、及びホスホロアミダートオリゴヌクレオチド）、（ｉｉ）糖塩基の修飾（たとえば２’−Ｏ−プロピルリボース及び２’−メトキシエトキシリボース）、並びに（ｉｉｉ）ヌクレオシドの修飾（たとえばＣ−５プロピニルＵ、Ｃ−５チアゾールＵ、及びフェノキサジンＣ）を含む修飾ヌクレオチドを含んでいてもよい（Ｗａｇｎｅｒ，Ｎａｔ．Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１：１１１６，１９９５；Ｖａｒｇａら，Ｉｍｍｕｎ．Ｌｅｔｔ．，６９：２１７，１９９９；Ｎｅｉｌｓｅｎ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．，１０：７１，１９９９；Ｗｏｏｌｆ，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１８：１７６３，１９９０）。
【０１１２】
ヒトＩＬ−１８Ｒα遺伝子に特異的なアンチセンスポリヌクレオチドの送達は、たとえば、ポリヌクレオチドの直接的な注射、吸入、又は摂取を含む、当技術分野で知られている任意の手段を使用して達成することができる。さらに、アンチセンスポリヌクレオチドは、組換え発現ベクター（たとえばアデノウイルス、ヘルペスウイルス、ワクシニアウイルス、又はレトロウイルスベースのウイルスベクター）又は本明細書に記載されるコロイド分散系（たとえばリポソーム）を使用して送達することができる。
【０１１３】
アンチセンス技術及びその適用は当技術分野でよく知られており、Ｐｈｉｌｌｉｐｓ，Ｍ．Ｉ．（編）Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．，Ｖｏｌｕｍｅｓ ３１３及び３１４，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，２０００並びにそこに言及される参考文献に記載される。Ｃｒｏｏｋｅ，Ｓ．（編）「Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｄｒｕｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ，ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」（第１版），Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ；ＩＳＢＮ：０８２４７０５６６１；第１版（２００１）及びそこに言及される参考文献もまた参照されたい。
【０１１４】
Ｃ．リボザイム
リボザイムは、ＲＮＡの特異的開裂を触媒することができる酵素ＲＮＡ分子である。検討のために、Ｒｏｓｓｉ，１９９４，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｂｉｏｌｏｇｙ ４：４６９−４７１を参照されたい、たとえばＣｏｔｔｅｎ及びＢｉｍｓｔｉｅｌ，ＥＭＢＯ Ｊ．８：３８６１−３８６６，１９８９；Ｕｓｍａｎら，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１０：２４３，１９９６；Ｕｓｍａｎら，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，１：５２７，１９９６；Ｓｕｎら，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｒｅｖ．，５２：３２５，２０００もまた参照されたい。リボザイム作用のメカニズムは、相補的な標的ＲＮＡに対するリボザイム分子の配列特異的ハイブリダイゼーションを含み、その後エンドヌクレアーゼ開裂イベントが続く。リボザイム分子の組成は、標的ｍＲＮＡに相補的な１つ又は複数の配列及びｍＲＮＡの開裂を担う、よく知られている触媒配列又は機能的に等価な配列を好ましくは含む（たとえばその全体が参照によって本明細書に組み込まれる米国特許第５０９３２４６号を参照されたい）。標的ｍＲＮＡ転写物を触媒的に開裂させるよう設計したリボザイム分子はまた、対象となる標的ｍＲＮＡの翻訳を予防するために使用することもできる。
【０１１５】
部位特異的認識配列でｍＲＮＡを開裂させるリボザイムは、標的ｍＲＮＡを破壊するために使用することができるが、ハンマーヘッド型リボザイムの使用が好まれる。ハンマーヘッド型リボザイムは、標的ｍＲＮＡと相補的塩基対を形成するフランキング領域によって決定された位置でｍＲＮＡを開裂する。好ましくは、標的ｍＲＮＡは、２つの塩基の以下の配列を有する：５’−ＵＧ−３’。ハンマーヘッド型リボザイムの構築及び産生は、当技術分野でよく知られており、Ｈａｓｅｌｏｆｆ及びＧｅｒｌａｃｈ，１９８８，Ｎａｔｕｒｅ ３３４：５８５−５９１；並びにＰＣＴ出願国際公開第８９／０５８５２号に、より十分に記載され、それらの内容は参照により本明細書に組み込まれる。ハンマーヘッド型リボザイム配列は、ｉｎ ｖｉｖｏでの開裂効率を増加させるために、転移ＲＮＡ（ｔＲＮＡ）等の安定したＲＮＡに埋め込むことができる（Ｐｅｒｒｉｍａｎら，１９９５，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９２：６１７５−７９；ｄｅ Ｆｅｙｔｅｒ及びＧａｕｄｒｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．７４，Ｃｈａｐｔｅｒ ４３，「植物におけるリボザイムの発現（Ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ Ｒｉｂｏｚｙｍｅｓ ｉｎ Ｐｌａｎｔｓ）」，Ｔｕｒｎｅｒ，Ｐ．Ｃ編，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ Ｉｎｃ．，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎ．Ｊ．）。特に、ｔＲＮＡ融合リボザイムのＲＮＡポリメラーゼＩＩＩ媒介性の発現は、当技術分野でよく知られている（Ｋａｗａｓａｋｉら，１９９８，Ｎａｔｕｒｅ ３９３：２８４−９；Ｋｕｗａｂａｒａら，１９９８，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１６：９６１−５；及びＫｕｗａｂａｒａら，１９９８，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ ２：６１７−２７；Ｋｏｓｅｋｉら，１９９９，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ ７３：１８６８−７７；Ｋｕｗａｂａｒａら，１９９９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９６：１８８６−９１；Ｔａｎａｂｅら，２０００，Ｎａｔｕｒｅ ４０６：４７３−４を参照されたい）。所与の標的ｃＤＮＡ配列内に多くの潜在的なハンマーヘッド型リボザイム開裂部位が典型的にある。好ましくは、効率を増加させ、且つ機能しないｍＲＮＡ転写物の細胞内蓄積を最小限にするために開裂認識部位が標的ｍＲＮＡの５’端の近くに位置するように、リボザイムは操作される。さらに、標的ｍＲＮＡの異なる部分をコードする標的配列に位置する任意の開裂認識部位の使用により、一方又は他方の標的遺伝子の選択的なターゲティングを可能にすると思われる。
【０１１６】
本発明の遺伝子ターゲティングリボザイムは、それぞれが長さが少なくとも５個、好ましくはそれぞれが６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、又は２０個の隣接したヌクレオチドである、標的ｍＲＮＡの１又は２個の領域に対して相補的なハイブリダイズ領域を含有する（好ましくは、遺伝子ターゲティングリボザイムは、配列番号１に記載される核酸配列の１又は２個の領域に対して相補的である）。さらに、リボザイムは、標的センスｍＲＮＡを自己触媒的に開裂させる高度に特異的なエンドリボヌクレアーゼ活性を持つ。
【０１１７】
本発明のリボザイムはまた、テトラヒメナサーモフィラにおいて自然に生じ（ＩＶＳ又はＬ−１９ ＩＶＳ ＲＮＡとして知られている）、且つＺａｕｇら，１９８４，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２４：５７４−５７８；Ｚａｕｇら，１９８６，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３１：４７０−４７５；Ｚａｕｇら，１９８６，Ｎａｔｕｒｅ ３２４：４２９−４３３；公開国際特許出願国際公開第８８／０４３００号；及びＢｅｅｎら，１９８６，Ｃｅｌｌ ４７：２０７−２１６に広範囲に記載されているＲＮＡエンドリボヌクレアーゼ等のＲＮＡエンドリボヌクレアーゼ（「Ｃｅｃｈ型リボザイム」）も含む。Ｃｅｃｈ型リボザイムは、標的ＲＮＡ配列にハイブリダイズする８つの塩基対活性部位を有し、その後、標的ＲＮＡの開裂は起こる。本発明は、標的遺伝子又は標的核酸配列に存在する８つの塩基対活性部位配列を標的にするそれらのＣｅｃｈ型リボザイムを包含する。
【０１１８】
リボザイムは、修飾オリゴヌクレオチド（たとえば安定性、ターゲティング等の改善ために）から構成することができ、ｉｎ ｖｉｖｏで標的遺伝子を発現させる細胞に送達されるはずである。送達の好ましい方法は、形質移入された細胞が、内在性標的メッセージを破壊し、且つ翻訳を阻害するのに十分な量のリボザイムを産生するように、強力な構成プロモーターの制御下で、リボザイムを「コードする」ＤＮＡ構築物を使用することを含む。
【０１１９】
ＩＬ−１８Ｒαの発現の低下は、本明細書で上記に記載されるリボザイムのいずれかの投与によって達成されてもよい。ヒトＩＬ−１８Ｒαポリペプチドをコードする核酸配列に特異的にハイブリダイズするリボザイムが好ましい。それらは、ＩＬ−１８Ｒαの翻訳をサイレンシングし、したがって、ＭＳを処置する又は予防するために使用することができる。たとえば、配列番号１に記載される核酸配列に特異的にハイブリダイズするリボザイムは本発明の方法で使用することができる。リボザイムがない状態で検出された症状と比較した、ＭＳ症状の重症度における減少は、リボザイムの効果を監視するために使用することができる。
【０１２０】
４）本明細書で上記に開示されるＩＬ−１８Ｒαアンタゴニストの薬学的使用：
本発明は、医薬としての使用のための、上記又は下記に記載される、ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストのいずれかに関する。好ましくは、ＩＬ−１８Ｒαの上記又は下記に記載されるアンタゴニストのいずれかは、自己免疫疾患又は脱髄疾患（多発性硬化症等）の症状を低下させるための能力を有する。したがって、好ましくは、本明細書に記載されるＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストに対するすべての修飾が、ＭＳの症状を低下させるそれらの能力に著しく影響を及ぼすわけではない。さらに好ましくは、本明細書に記載されるＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストに対する修飾は、ＭＳの症状を低下させるそれらの能力を増強する（たとえばそれらの半減期を増強することによって等）。
【０１２１】
本発明は、さらに、患者に、ＩＬ−１８Ｒαの有効量のアンタゴニストを投与することにより、ヒト患者における自己免疫疾患又は脱髄疾患（多発性硬化症等）の症状を処置する、予防する、又は寛解させる方法に関する。ＩＬ−１８Ｒαの産生及び／又は作用が減衰する、低下する、又は部分的に、実質的に、若しくは完全にブロックされるように、ＩＬ−１８Ｒαの産生及び／又は作用を阻害する任意のアンタゴニストは、本発明の方法に従って自己免疫疾患又は脱髄疾患（特に多発性硬化症）を処置するために使用することができる。本発明の方法は、ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストを、ＭＳに罹患した個人に対して、患者の状態における持続性の改善を誘発するのに十分な期間投与することを含む。本発明は、さらに、部分的に、自己免疫疾患又は脱髄疾患（多発性硬化症等）の処置のための医薬の製造における、ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストの使用を提供する。いくつかの実施形態では、アンタゴニストは、本明細書で上記に開示されるアンタゴニストである。たとえば、ＩＬ−１８Ｒαに選択的に結合する抗体、ＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに選択的に結合する抗体、又はＩＬ−１８Ｒαの生物活性を阻害する低分子は、ＭＳを処置する又は予防するために使用することができる。さらに、ＩＬ−１８Ｒαの発現を阻害する産物（たとえばｓｉＲＮＡ分子、アンチセンス分子、リボザイム等）は、ＭＳを処置する又は予防するために使用することができる。いくつかの実施形態では、処置するための疾患は、再発寛解型（ＲＲ）ＭＳ、二次進行型（ＳＰ）ＭＳ、一次進行型（ＰＰ）ＭＳ、又は進行再発型（ＰＲ）ＭＳである。
【０１２２】
ＩＬ−１８Ｒαのインヒビターが疾患を処置するのにｉｎ ｖｉｖｏで有効であるという発見は、本発明にとって、部分的に基礎となる。具体的には、ＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに結合する抗体は、この疾患のマウスモデルにおける実験的に誘発されたＭＳを予防するのに有用であることが分かった。さらに、ＩＬ−１８Ｒαアンタゴニストはまた、同じ動物モデルにおいて既に確立された疾患の進行をも阻害した。したがって、これらのｉｎ ｖｉｖｏデータは、ＩＬ−１８Ｒαの阻害がＭＳを処置するのに有効であることを示す。ＩＬ−１８Ｒα活性を中和する又はＩＬ−１８Ｒα遺伝子の発現を阻害する（転写又は翻訳のいずれか）任意の方法は、ＭＳの症状を低下させるために使用することができる。
【０１２３】
対象となる方法は、産生されるＩＬ−１８Ｒαの量を低下させることによる又はその生物活性を予防することによる等で、有効量の内在性生物学的活性ＩＬ−１８Ｒαを低下させることができるＩＬ−１８Ｒαアンタゴニストを患者に対して投与することを含む。上記アンタゴニストは、本明細書で上記に開示されるアンタゴニストを含む。
【０１２４】
好ましい態様では、タンパク質ベースの治療剤は、ＩＬ−１８Ｒαタンパク質の活性を阻害するために使用することができる。たとえば、本発明の好ましい方法は、本明細書で上記に定義される、ＩＬ−１８Ｒαに選択的に結合する抗体又はＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに選択的に結合する抗体を利用する。
【０１２５】
本発明の好ましい一実施形態では、本明細書で上記に記載される、ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニスト、特に本明細書で上記に記載される、ＩＬ−１８Ｒαに選択的に結合する抗体、ＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに選択的に結合する抗体の徐放性形態が使用される。開示される方法での使用に適した徐放性形態は、上記ポリマーと混合された、徐々に溶解する生体適合性ポリマー中にカプセル化された及び／又は生体適合性半浸透性インプラント中に包まれたＩＬ−１８Ｒαアンタゴニストを含むが、これらに限定されない。分解性ポリマーマイクロスフェアは、治療用タンパク質の高度な全身性のレベルを維持するよう設計されてきた。マイクロスフェアは、ポリ（ラクチドコグリコリド）（ＰＬＧ）、ポリ無水物、ポリ（オルトエステル）、非生物分解性酢酸エチルビニルポリマー等の分解性ポリマーから調製され、タンパク質は、ポリマー中に閉じ込められる（Ｇｏｍｂｏｔｚ及びＰｅｔｔｉｔ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．６：３３２（１９９５）；Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｒａｎａｄｅ及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒ（編），ｐａｇｅｓ ５１−９３（ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ １９９５）中のＲａｎａｄｅ，「薬物送達におけるポリマーの役割（Ｒｏｌｅ ｏｆ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ）」；Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ：Ｐｈｙｓｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｓａｎｄｅｒｓ及びＨｅｎｄｒｅｎ（編），ｐａｇｅｓ ４５−９２（Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ １９９７）中のＲｏｓｋｏｓ及びＭａｓｋｉｅｗｉｃｚ，「タンパク質送達に有用な分解性放出制御系（Ｄｅｇｒａｄａｂｌｅ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｕｓｅｆｕｌ ｆｏｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ）」；Ｂａｒｔｕｓら，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８１：１１６１（１９９８）；Ｐｕｔｎｅｙ及びＢｕｒｋｅ，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １６：１５３（１９９８）；Ｐｕｔｎｅｙ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．２：５４８（１９９８））。ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）にコーティングされたナノスフェアもまた、治療用タンパク質の静脈内投与のためのキャリアを提供することができる。（たとえばＧｒｅｆら，Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１０：１６７（１９９７）を参照されたい）。さらに、ＩＬ−１８Ｒαアンタゴニストは、その血清半減期を延長する又はタンパク質送達を増強するために、ポリエチレングリコールと抱合することができる（ペグ化）。
【０１２６】
ＭＳを処置するために、ＩＬ−１８Ｒαアンタゴニスト、好ましくはＩＬ−１８Ｒαに選択的に結合する抗体、又はＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに選択的に結合する抗体は、疾患の重症度を反映する少なくとも１つの指標において持続性の改善を誘発するのに十分な量及び時間で、患者に対して投与される。改善度は、徴候又は症状に基づいて決定され、クオリティオブライフ質問表等の、患者に対して行われる質問表を用いてもよい。ＩＬ−１８Ｒαアンタゴニストの治療的有効量は、上記持続性の改善を達成するのに十分な量である。
【０１２７】
改善は、患者が、選ばれた１つ又は複数の指標についてのベースラインに対する改善を顕在化させるまで、ある用量のＩＬ−１８Ｒαアンタゴニストを繰り返し投与することにより誘発されるかもしれない。処置の後の、患者の病気の程度は、１つ又は複数の指標に従って改善されたように思われる可能性があるが、処置は、同じレベルで又は用量若しくは頻度を低下させて、無期限に継続してもよい。一度処置が減らされ又は中止され、症状が再発すれば、処置は、後に、最初のレベルで再開されてもよい。
【０１２８】
本発明の方法で使用される医薬組成物は、活性成分としてのＩＬ−１８Ｒαアンタゴニストと組み合わせて、動物に対する投与に適した、適した薬学的に許容し得る希釈剤、キャリア、生物学的適合性媒体、及び添加剤（たとえば生理食塩水）を含有していてもよく、薬学的に使用することができる調製物中への活性化合物の処理を容易にする助剤（賦形剤、安定剤、又はアジュバントのような）を任意選択で含んでいてもよい。医薬組成物は、投与のモードの必要性を満たすために、任意の許容し得る方法で製剤されてもよい。たとえば、薬剤送達のための生体材料及び他のポリマーの使用、その上、投与の特定のモードを有効にするための異なる技術及びモデルが文献に開示されている（Ｌｕｏ Ｂ及びＰｒｅｓｔｗｉｃｈ ＧＤ，２００１；Ｃｌｅｌａｎｄ ＪＬら，Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．（２００１），１２（２）：２１２−９）。「薬学的に許容し得る」は、活性成分の生物活性の有効性を妨害せず、且つ投与される宿主にとって有毒ではない任意のキャリアを包含することを意味する。たとえば非経口投与については、上記の活性成分は、食塩水、デキストロース溶液、血清アルブミン、及びリンゲル液等の媒体中での注射のために、単位剤形で製剤されてもよい。キャリアはまた、デンプン、セルロース、タルク、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム、グリセロールモノステアレート、塩化ナトリウム、脱脂粉乳、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノール、及び石油、動物、植物、又は合成起源の油を含む様々な油（落花生油、大豆油、鉱油、ゴマ油）から選択することができる。
【０１２９】
医薬組成物は、液体形態又は凍結乾燥形態であってもよく、様々なｐＨ価及びイオン強度を有する希釈剤（Ｔｒｉｓ、クエン酸塩、酢酸塩、又はリン酸緩衝液）、Ｔｗｅｅｎ又はポリソルベート等の可溶化剤、ヒト血清アルブミン又はゼラチン等のキャリア、チメロサール、パラベン、ベンジルアルコニウムクロリド、又はベンジルアルコール等の防腐剤、アスコルビン酸又はメタ重亜硫酸ナトリウム等の酸化防止剤、及びリシン又はグリシン等の他の成分を含む。特定の組成物の選択は、処置されている状態、投与の経路、及び所望される薬物動態パラメータを含む多くの因子に依存するであろう。医薬組成物に適した成分に関するより大規模な調査は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第１８版 Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ編 Ｍａｃｋ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ（１９８０）に見い出される。
【０１３０】
好ましい実施形態では、タンパク質ベースの治療剤は、ＩＬ−１８Ｒαタンパク質の活性を阻害するために使用される。本発明の好ましい方法は、本明細書で上記に定義される、ＩＬ−１８Ｒαに選択的に結合する抗体、又はＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに選択的に結合する抗体を利用する。このようなタンパク質は、精製された組換えタンパク質を含む生理学的に許容し得る組成物の形態で、生理学的に許容し得るキャリア、賦形剤、又は希釈剤と共に投与される。上記キャリアは、用いられる投与量及び濃度で、レシピエントにとって有毒でない。通常、上記組成物の調製は、緩衝液、アスコルビン酸等の酸化防止剤、低分子量ポリペプチド（１０個未満のアミノ酸を有するポリペプチド等）、タンパク質、アミノ酸、グルコース、スクロース、又はデキストリン等の炭水化物、ＥＤＴＡ、グルタチオン、及び他の安定剤等のキレート剤、並びに賦形剤とＩＬ−１８Ｒαアンタゴニストを組み合わせることを要する。中性緩衝食塩水又は同種の血清アルブミンと混合した食塩水は、例示的な適切な希釈剤である。ＩＬ−１８Ｒαアンタゴニストは、希釈剤としての適切な賦形剤溶液（たとえばスクロース）を使用して、凍結乾燥物として好ましくは製剤される。適切な投与量は、標準の投薬試験で決定することができ、投与の選ばれた経路に従って変動してもよい。適切な業界基準に従って、ベンジルアルコール等の防腐剤もまた追加されてもよい。もちろん、投与の量及び頻度は、処置されている徴候の重症度、所望の応答、患者の年齢及び状態等のような因子に依存するであろう。
【０１３１】
投与の任意の承認されたモードは、活性成分の所望の血中濃度を確立するために当業者によって使用し、且つ決定することができる。たとえば、投与は、皮下経路、静脈内経路、皮内経路、筋肉内経路、腹腔内経路、鼻腔内経路、経皮的経路、直腸経路、口腔経路、又は頬側経路等の様々な非経口経路によるものであってもよい。好ましくは、本発明の医薬組成物は、皮下又は静脈内に注射によって投与される。最終的に選ばれた投与の経路は、多くの因子に依存するであろう、そして当業者によって確認されてもよい。
【０１３２】
本発明の方法で使用される医薬組成物はまた、蓄積注射、浸透圧ポンプ等を含む徐放性剤形態又は放出制御剤形態で、ＩＬ−１８Ｒαアンタゴニストの長期投与について、所定の速度で、好ましくは正確な投与量の単一の投与に適した単位剤形で投与することができる。
【０１３３】
非経口投与は、大量注射又は長い間にわたっての緩やかな灌流によるものとすることができる。非経口投与のための調製物は、無菌の水性溶液又は非水性溶液、懸濁液、及び乳濁液を含み、これらは、当技術分野で知られている補助的作用物質又は賦形剤を含有していてもよく、ルーチン的な方法に従って調製することができる。さらに、適切な油性注射懸濁液としての活性化合物の懸濁液が投与されてもよい。適した親油性の溶媒又は媒体は、脂肪油、たとえばゴマ油又は合成脂肪酸エステル、たとえばゴマ油又は合成脂肪酸エステル、たとえばオレイン酸エチル又はトリグリセリドを含む。懸濁液の粘度を増加させる物質を含有していてもよい水性注射懸濁液は、たとえば、カルボキシルメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、及び／又はデキストランを含む。任意選択で、懸濁液はまた、安定剤を含有していてもよい。医薬組成物は、注射による投与に適した溶液を含み、約０．０１〜９９．９９パーセント、好ましくは約２０〜７５パーセントの活性化合物を賦形剤と共に含有する。
【０１３４】
投与される投与量は、レシピエントの年齢、性別、健康状態、及び体重、併用処置の種類、それがもしあれば処置の頻度、並びに所望される効果の性質に依存性であろうということが理解される。投与量は、当業者によって理解され、決定できるように、個々の患者に適合されるであろう。各処置に必要な全用量は、複数回用量によって又は単一用量で投与されてもよい。
【０１３５】
本発明の一実施形態では、本明細書で上記に開示されるＩＬ−１８Ｒαアンタゴニストは、ＭＳを処置するために１週間当たり１回投与され、他の実施形態では、１週間当たり少なくとも２回投与され、他の実施形態では、１日当たり少なくとも１回投与される。ＩＬ−１８Ｒαアンタゴニストが抗体（つまり、本明細書で上記に開示される、ＩＬ−１８Ｒαに選択的に結合する抗体又は好ましくは、ＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに選択的に結合する抗体）である場合、用量は、０．１〜１０ｍｇ／ｋｇとすることができ、好ましくは１５分〜３時間の注入として静脈内に与えられる。この用量は、二週間に１回、毎週、又は数週間（２〜８週間）間隔をあけて繰り返し投与される。
【０１３６】
注射以外のＩＬ−１８Ｒαアンタゴニストの投与の経路が使用される場合、用量は、標準の医療行為に合わせて適切に合わせられる。たとえば、投与の経路が吸入である場合、投薬は、１０ｍｇ／用量〜１用量当たり５０ｍｇの用量範囲で、１週間当たり１〜７回であってもよい。
【０１３７】
多くの場合、より長い期間の処置が、所望の改善度を誘発するのに必要である可能性があるが、患者の状態における改善は、少なくとも３週間の期間にわたり１週間当たり１〜３回、本明細書で上記に開示されるＩＬ−１８Ｒαに選択的に結合する抗体、又はＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに選択的に結合する抗体の約１００ｍｇまでの用量を注射することにより得られるであろう。レジメンは無期限に継続されてもよい。
【０１３８】
５）併用治療：
いくつかの実施形態では、本明細書で上記に定義されるＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストは、ＭＳを処置する又は予防するための第２の治療薬と共に投与される。たとえば、ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニスト（たとえば、本明細書で上記に開示される、ＩＬ−１８Ｒαに選択的に結合する抗体、又はＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに選択的に結合する抗体）は、たとえばコルチコステロイド、免疫抑制剤、神経保護薬、免疫調節剤、又はインターフェロンを含む、ＭＳに対する標準の処置薬のいずれかと共にも投与されてもよい。
【０１３９】
本発明の一実施形態では、ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニスト（たとえば、本明細書で上記に開示される、ＩＬ−１８Ｒαに選択的に結合する抗体、又はＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに選択的に結合する抗体）は、コルチコステロイドと共に投与される。「コルチコステロイド」は、コレステロールに由来し、水素化されたシクロペンタノペルヒドロフェナントレン環構造によって特徴づけられ得る任意の自然発生ステロイドホルモン又は合成ステロイドホルモンが意味される。自然発生コルチコステロイドは、副腎皮質によって一般に産生される。合成コルチコステロイドは、ハロゲン化されてもよい。コルチコステロイドは、グルココルチコイド活性及び／又は鉱質コルチコイド活性を有していてもよい。
【０１４０】
例示的なコルチコステロイドは、たとえばデキサメタゾン、ベータメタゾン、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニド、酢酸トリアムシノロン、トリアムシノロンヘキサアセトニド、ベクロメタゾン、ジプロピオナート、ジプロピオン酸ベクロメタゾン一水化物、フルメタゾンピバレート、酢酸ジフロラゾン、フルオシノロンアセトニド、フルオロメトロン、酢酸フルオロメトロン、プロピオン酸クロベタゾール、デソキシメタゾン、フルオキシメステロン、フルプレドニソロン、ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、酪酸ヒドロコルチゾン、リン酸ヒドロコルチゾンナトリウム、コハク酸ヒドロコルチゾンナトリウム、ヒドロコルチゾンシピオネート、ヒドロコルチゾンプロブテート（ｈｙｄｒｏｃｏｒｔｉｓｏｎｅ ｐｒｏｂｕｔａｔｅ）、吉草酸ヒドロコルチゾン、酢酸コルチゾン、酢酸パラメタゾン、メチルプレドニソロン、酢酸メチルプレドニゾロン、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、プレドニゾロン、酢酸プレドニゾロン、リン酸プレドニゾロンナトリウム、プレドニゾロンテブテート、ピバル酸クロコルトロン、フルオシノロン、酢酸デキサメタゾン２１、吉草酸ベータメタゾン１７、イソフルプレドン、９−フロオロコルチゾン、６−ヒドロキシデキサメタゾン、ジクロリゾン、メクロリゾン（ｍｅｃｌｏｒｉｓｏｎｅ）、フルプレジデン、ドキシベタソール、ハロプレドン、ハロメタゾン、クロベタゾン、ジフルコルトロン、イソフルプレドンアセテート、フルオロヒドロキシアンドロステンジオン、ベクロメタゾン、フルメタゾン、ジフロラゾン、フルオシノロン、クロベタゾール、コルチゾン、パラメタゾン、クロコルトロン、プレドニゾロン２１−ヘミスクシネート遊離酸、メタスルホ安息香酸プレドニゾロン、プレドニゾロンテルブテート（ｐｒｅｄｎｉｓｏｌｏｎｅ ｔｅｒｂｕｔａｔｅ）、及びトリアムシノロンアセトニド２１−パルミテートを含む。
【０１４１】
ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニスト（たとえば、本明細書で上記に開示される、ＩＬ−１８Ｒαに選択的に結合する抗体、又はＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに選択的に結合する抗体）と共に投与されるコルチコステロイドの好ましい例は、プレドニゾン及び／又はＩＶメチルプレドニソロンである。
【０１４２】
本発明の一実施形態では、ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニスト（たとえば、本明細書で上記に開示される、ＩＬ−１８Ｒαに選択的に結合する抗体、又はＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに選択的に結合する抗体）は、免疫抑制剤と共に投与される。本発明の実施形態では、免疫抑制剤は、メトトレキセート、アザチオプリン、シクロホスファミド、及びクラドリビンからなる群から選ばれ、これらは、脱髄疾患の重篤な進行型形態に一般に使用される。
【０１４３】
本発明の他の実施形態では、ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニスト（たとえば、本明細書で上記に開示される、ＩＬ−１８Ｒαに選択的に結合する抗体、又はＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに選択的に結合する抗体）は、神経保護薬と共に投与される。本発明の一実施形態では、神経保護薬は、経口ミエリン、コパクソン（Ｔｅｖａ社製の酢酸グラチラマー）、タイサブリ（Ｂｉｏｇｅｎ社／Ｅｌａｎ社）、ノバントロン（Ｓｅｒｏｎｏ社）、テリフルノミド（Ａｖｅｎｔｉｓ社）、クラドリビン（Ｓｅｒｏｎｏ社／ＩＶＡＸ社）、ＧＳＫ社／田辺製薬の６８３６９９（Ｔ−００４７）、ダクリズマブ（Ｒｏｃｈｅ社）、ラキニモド（Ａｃｔｉｖｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ社）、及びＺＫ−１１７１３７（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ ＡＧ社）からなる群から選ばれる。これらの化合物はすべて、販売されている又はＭＳを処置するための臨床試験の最中である。
【０１４４】
本発明の他の実施形態では、ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニスト（たとえば、本明細書で上記に開示される、ＩＬ−１８Ｒαに選択的に結合する抗体、又はＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに選択的に結合する抗体）は、免疫調節剤と共に投与される。この点で、本発明での使用のための特定の免疫調節剤は、ＦＴＹ７２０（２−アミノ−２−［２−（４−オクチルフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、フィンゴリモド）を含む。ＭＳを処置するためのＩＩ期でのＦＴＹ７２０（Ｎｏｖａｒｔｉｓ社）は、以下の化学式を有する。
【化１】
【０１４５】
ＦＴＹ７２０は、ミリオシンの化学的修飾によって得られた、経口的に活性の免疫抑制剤（たとえば国際公開第９４／０８９４３号；国際公開第９９／３６０６５号を参照されたい）として同定された。本発明での使用のための他の免疫調節剤は、ＦＴＹ７２０の誘導体を含む。ＦＴＹ７２０の誘導体は、国際公開第９４／０８９４３号に記載される、以下の化学式を有する２−アミノ−１，３−プロパンジオール化合物及びその任意の薬学的に許容し得る塩を含み、
【化２】
Ｒは、二重結合、三重結合、酸素、硫黄、スルフィニル基、スルホニル基、−Ｎ（Ｒ６）−からなる群から選択される結合、ヘテロ原子、又は基を鎖中で有していてもよく、Ｒ６は、水素、アルキル、アラルキル、アシル、又はアルコキシカルボニル、カルボニル、任意選択で置換されたアリーレン、任意選択で置換されたシクロアルキルエン、任意選択で置換されたヘテロアリーレン、及びその脂環式化合物（ａｌｉｃｙｃｌｅ）であり、且つ二重結合、三重結合、任意選択で置換されたアリル、任意選択で置換されたシクロアルキル、任意選択で置換されたヘテロアリル、又はその脂環式化合物；任意選択で置換されたアリル、任意選択で置換されたシクロアルキル、任意選択で置換されたヘテロアリル、又はその脂環式化合物によってその鎖端で置換されていてもよい任意選択で置換された直鎖状炭素鎖又は分枝炭素鎖であり、
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５は、同じ又は異なり、それぞれは、水素、アルキル、アラルキル、アシル、又はアルコキシカルボニルを表し、又はＲ４及びＲ５は、アルキル、アリル、又はアラルキルによって置換されていてもよいアルキレン鎖を形成するよう結合していてもよい。
【０１４６】
上記の任意選択で置換された直鎖状炭素鎖又は分枝炭素鎖は、アルコキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、アラルキルオキシ、アルキルエンジオキシ、アシル、アルキルアミノ、アルキルチオ、アシルアミノ、アルコキシカルボニル、アルコキシカルボニルアミノ、アシルオキシ、アルキルカルバモイル、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ニトロ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシイミノ、ヒドロキシ、カルボキシ、任意選択で置換されたアリル、任意選択で置換されたアリールオキシ、任意選択で置換されたシクロアルキル、任意選択で置換されたヘテロアリル、及びその脂環式化合物からなる群から選択される置換基を有してもよく、前述の任意選択で置換されたアリーレン、任意選択で置換されたシクロアルキレン、任意選択で置換されたヘテロアリーレン、及びその脂環式化合物は、アルコキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、アラルキルオキシ、アルキルエンジオキシ、アシル、アルキルアミノ、アルキルチオ、アシルアミノ、アルコキシカルボニル、アルコキシカルボニルアミノ、アシルオキシ、アルキルカルバモイル、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ニトロ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシ、及びカルボキシからなる群から選択される置換基を有してもよく、任意選択で置換されたアリル、任意選択で置換されたアリールオキシ、任意選択で置換されたシクロアルキル、任意選択で置換されたヘテロアリル、及びその脂環式化合物は、アルキル、アルコキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、アラルキルオキシ、アルキルエンジオキシ、アシル、アルキルアミノ、アルキルチオ、アシルアミノ、アルコキシカルボニル、アルコキシカルボニルアミノ、アシルオキシ、アルキルカルバモイル、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ニトロ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシ、及びカルボキシからなる群から選択される置換基を有していてもよい。
【０１４７】
上記２−アミノ−１，３−プロパンジオール化合物の特定の例は、２−アミノ−２−［２−（４−ヘプチルフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−オクチルフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−ノニルフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール ２−アミノ−２−［２−（４−デシルフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−ウンデシルフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−ドデシルフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−トリデシルフェニル）−エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−テトラデシルフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−ヘキシルオキシフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−ヘプチルオキシフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−オクチルオキシフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−ノニルオキシフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−デシルオキシフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−ウンデシルオキシフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−ドデシルオキシフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−トリデシルオキシフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−（８−フルオロオクチル）フェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−（１２−フルオロドデシル）フェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−（７−フルオロヘプチルオキシ）フェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−（１１−フルオロウンデシルオキシ）フェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−（７−オクテニルオキシ）フェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−ヘプチルフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−オクチルフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−ノニルフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−デシルフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−ウンデシルフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−ドデシルフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−ヘプチルオキシフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−オクチルオキシフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−ノニルオキシフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−ウンデシルオキシフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、又は２−アミノ−２−［２−（４−（７−オクテニルオキシ）フェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、及びその任意の薬学的に許容し得る塩を含む。
【０１４８】
本発明の他の実施形態では、ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニスト（たとえば、本明細書で上記に開示される、ＩＬ−１８Ｒαに選択的に結合する抗体、又はＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに選択的に結合する抗体）は、インターフェロンと共に投与される。この点で、本発明での使用のための特定のインターフェロンは、インターフェロン−ベータである。用語「インターフェロン（ＩＦＮ）」及び「インターフェロン−ベータ（ＩＦＮ−ベータ）」は、本明細書で使用されるように、体液からの単離によって得られた又は原核生物若しくは真核生物の宿主細胞からのＤＮＡ組換え技術によって得られた特にヒト起源の線維芽細胞インターフェロン並びにその塩、機能的誘導体、変異体、類似体、及び活性断片を含むことが意図される。特定の種類のインターフェロンベータは、インターフェロンベータ−１ａである。
【０１４９】
ヒト起源のインターフェロンの使用は、本発明で使用するのに好ましい。本発明で使用する適したＩＦＮ−ベータは、たとえばＲｅｂｉｆ（登録商標）（Ｓｅｒｏｎｏ社）、Ａｖｏｎｅｘ（登録商標）（Ｂｉｏｇｅｎ社）、又はＢｅｒｔａｓｅｒｏｎ／Ｂｅｔａｆｅｒｏｎ（登録商標）（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ社）として市販で入手可能である。Ｒｅｂｉｆ（登録商標）（組換えヒトインターフェロン）は、多発性硬化症（ＭＳ）のためのインターフェロン治療において最近開発されたものであり、これは処置における著しい進歩を表す。Ｒｅｂｉｆ（登録商標）は、哺乳動物細胞系から産生されたインターフェロン（ＩＦＮ）−ベータ１ａである。皮下に１週間当たり３回与えられたインターフェロンベータ−１ａは、再発寛解型多発性硬化症（ＲＲＡＭＳ）の処置において効果的であることが確立された。インターフェロンベータ−１ａは、再発の数及び重症度を低下させ、且つＭＲＩによって測定される疾患の負担及び疾患活性を低下させることによって、ＭＳの長期的経過にプラスの効果を有し得る。したがって本発明の方法での使用のためのＩＬ−１８Ｒαアンタゴニストと共に投与されるインターフェロンの特定の例は、Ｒｅｂｉｆ（登録商標）（Ｓｅｒｏｎｏ社）、Ａｖｏｎｅｘ（登録商標）（Ｂｉｏｇｅｎ社）、又はＢｅｒｔａｓｅｒｏｎ／Ｂｅｔａｆｅｒｏｎ（登録商標）（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ社）である。
【０１５０】
本発明の特定の態様は、上記処置を必要とする患者におけるＭＳ、特に再発寛解型（ＲＲ）ＭＳ、二次進行型（ＳＰ）ＭＳ、一次進行型（ＰＰ）ＭＳ、又は進行再発型（ＰＲ）ＭＳを処置する方法に関し、患者に、本明細書で上記に開示されるＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニスト及び本明細書で上記に開示されるコルチコステロイド、免疫抑制剤、神経保護薬、免疫調節剤、又はインターフェロンの組み合わせの治療的有効量を投与することを含む。ある実施形態では、コルチコステロイドは、プレドニゾン又はＩＶメチルプレドニソロンである。ある実施形態では、免疫抑制剤は、メトトレキセート、アザチオプリン、シクロホスファミド、又はクラドリビンである。ある実施形態では、神経保護薬は、経口ミエリン、コパクソン、タイサブリ、ノバントロン、テリフルノミド、クラドリビン、６８３６９９（Ｔ−００４７）、ダクリズマブ、ラキニモド、又はＺＫ−１１７１３７である。ある実施形態では、免疫調節剤は、２−アミノ−２−［２−（４−オクチルフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール（ＦＴＹ７２０）である。ある実施形態では、インターフェロンは、インターフェロンベータ−１ａ（特にＲｅｂｉｆ（登録商標）（Ｓｅｒｏｎｏ社））である。
【０１５１】
ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニスト（たとえば、本明細書で上記に開示される、ＩＬ−１８Ｒαに選択的に結合する抗体、又はＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに選択的に結合する抗体）及び本明細書で上記に開示される第２の治療薬は、同時に、別々に、又は連続して投与されてもよい。たとえば、ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストが最初に投与され、その後に第２の治療薬が投与されてもよい。その代わりに、第２の治療薬が最初に投与され、その後にＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストが投与されてもよい。いくつかの場合では、ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニスト及び第２の治療薬は、同じ製剤中で投与される。他の場合では、ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニスト及び第２の治療薬は、異なる製剤中で投与される。ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニスト及び第２の治療薬が異なる製剤中で投与される場合、それらの投与は、同時であってもよく又は順次であってもよい。
【０１５２】
本発明は、哺乳動物患者、好ましくはヒト患者におけるＭＳの治療での同時の、別個の、又は順次の使用のための、上記又は下記に記載されるＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストのいずれか及び併用調製物としての本明細書で上記に開示されるコルチコステロイド、免疫抑制剤、神経保護薬、免疫調節剤、又はインターフェロンを含む産物にさらに関する。
【０１５３】
本明細書に引用されたすべての特許及び参考文献は、それらの全体が参照によって本明細書に含まれる。
【０１５４】
本発明の他の態様及び利点は、以下の実施例に開示されることとなり、説明的なものとしてのみ考えられるべきであり、本出願の範囲を限定しない。
【実施例】
【０１５５】
（実施例１）
ｐ３５−／−ＩＬ−１８−／−二重ノックアウトマウスはＥＡＥに対して感受性である
ＩＬ−１２ｐ３５の欠失は、マウスにおいて、ＭＯＧ（ミエリン乏突起膠細胞糖タンパク質）ペプチド誘発性実験的自己免疫脳脊髄炎（ＥＡＥ）に対してマウスを感受性過度にすることが以前に示された（Ｂｅｃｈｅｒ，Ｂ．ら Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ １１０，４９３−４９７（２００２））。ＩＬ−１８は、Ｔｈ１細胞（１型ヘルパーＴ細胞）を極性化するようＩＬ−１２と相乗作用で作用し、またＳｈｉらは、ＩＬ−１８が欠損したマウスはＥＡＥに対して抵抗性であることを実証する証拠を提示した（Ｓｈｉ，Ｆ．Ｄ．ら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６５，３０９９−３１０４（２０００））。
【０１５６】
ＩＬ−１８がｐ３５−／−マウスにおけるＩＬ−１２の損失を代償し、したがってそれらのＥＡＥ感受性につながり得るかどうかを評価するために、我々は、ＩＬ−１２ｐ３５及びＩＬ−１８の両方が欠損したマウスを生成した（ｐ３５−／−×ＩＬ−１８−／−）。
【０１５７】
マウス（ｎ＝５マウス／グループ）を、ＣＦＡ（ＤＩＦＣＯ社、デトロイト、ＭＩ）中で乳化した、ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ社から得たＭＯＧ３５−５５ペプチド（アミノ酸配列：ＭＥＶＧＷＹＲＳＰＦＳＲＶＶＨＬＹＲＮＧＫ（配列番号１１））の２００μｇを用いて皮下に免疫した。マウスは、免疫時に及び４８時間後に、２００ｎｇ百日咳毒素（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社）を腹腔内に受けた。
【０１５８】
マウスは、以下のように毎日スコア化した：０）検出可能なＥＡＥの徴候なし；０．５）末端の尾部がぐったりしている；１）全尾部がぐったりしている；２）片側の部分的な後肢の麻痺；２．５）両側の部分的な肢の麻痺；３）両側の全後肢の麻痺；３．５）全後肢の麻痺及び片側の前肢の麻痺；４）前肢及び後肢の全麻痺（スコア＞４は安楽死させる）；５）死。各時点で、各グループの平均疾患スコアを示す。統計的有意差は、独立スチューデントｔ検定を使用して評価した。
【０１５９】
ＣＦＡ中で乳化したＭＯＧ３５−５５を用いた免疫は、ｐ３５−／−×ＩＬ−１８−／−マウスがＥＡＥに対して完全に感受性であり、ｗｔで産生されるものに類似する疾患スコア及び疾患発生を有することを示した（図１ａを参照されたい）。したがって、ｐ３５−／−マウスにおけるＩＬ−１８欠失によって生成された、保護の欠如は、ＩＬ−１８が、ｐ３５−／−マウスにおけるＥＡＥ感受性を誘発する原因ではないことを示すが、ＩＬ−１８自体が、ＥＡＥ病因にほとんど又はまったく効果を有していないサイトカインであることをも示唆する。
【０１６０】
（実施例２）
ＩＬ−１８Ｒα−／−マウスではなくＩＬ−１８−／−マウスがＥＡＥに対して感受性である
ｐ３５−／−×ＩＬ−１８−／−マウスにおける我々の実験は、ＥＡＥにおけるＩＬ−１８の、以前に提唱された病原性の役割に矛盾するように思われたので、我々は、ＭＯＧペプチド（実施例１に記載される）を用いてｗｔマウス及びＩＬ−１８−／−マウスを能動免疫し、ＩＬ−１８−／−マウスがＥＡＥに対して完全に感受性であり、実際に、ｗｔマウスに匹敵する臨床スコア及び疾患進行を有することを見い出した（図１ｂ及び表１を参照されたい）。
【０１６１】
ＩＬ−１８Ｒαが欠損したマウスは、ＩＦＮγ産生が低下するという点で、ＩＬ−１８−／−マウスに類似する表現型を有するとして記載された。興味深いことには、ｗｔマウス及びＩＬ−１８−／−マウスの両方と著しい対照をなして、ＩＬ−１８Ｒα−／−マウスは、ＥＡＥ誘発に対して完全に抵抗性であった（図１ｂ及び表１を参照されたい）。
【０１６２】
ＥＡＥ誘発後に得られたｗｔマウス、ＩＬ−１８−／−マウス、及びＩＬ−１８Ｒα−／−マウスからの脊髄の組織学的分析は、ＣＮＳ中への白血球浸潤が、疾患の臨床的な重症度と十分に相互に関連することを実証した。
【０１６３】
そうするために、マウスを、ＣＯ２を用いて安楽死させ、その後、ＰＢＳを用いて灌流し、続いてＰＢＳ中４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）を用いて灌流した。脊柱を摘出し、ＰＢＳ中４％ＰＦＡ中で固定した。次いで、炎症細胞の浸潤を評価するためのヘマトキシリン＆エオシン又はＣＤ３抗体、Ｂ２２０抗体、及びＭＡＣ−３抗体（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ社）又は脱髄の程度を決定するためのルクソールファストブルーを用いて染色する前に、脊髄を解剖し、パラフィン包埋した。
【０１６４】
ＥＡＥ感受性のｗｔマウス及びＩＬ−１８−／−マウスは、Ｔ細胞（図２ｃ）、マクロファージ（図２ｅ）、及びＢ細胞（図２ｄ）等の炎症細胞の浸潤（図２ａ）及び脱髄（図２ｂ）によって特徴づけられる著しい炎症を有したが、ＥＡＥ抵抗性のＩＬ−１８Ｒα−／−マウスの脊髄中に炎症性浸潤物又は脱髄は存在しなかった（図２ａ〜ｅ）。
【０１６５】
ＩＬ−１８−／−マウスがＩＬ−１８を分泌することができないことを確認するために、我々は、ターゲティング戦略及びマウスの遺伝子型について広範囲に確認し、ＩＬ−１８−／−マウスがＩＬ−１８ｍＲＮＡ又はＩＬ−１８タンパク質を含有しないことを明確に立証することができた。我々はまた、我々が、ｗｔマウス及びＩＬ−１８−／−マウスに由来する活性化脾細胞から分泌されたＩＬ−１８を検出することができるかどうかを分析し、ＩＬ−１８−／−マウスが、ｗｔマウスとは対照的に、実際に、完全に、ＩＬ−１８欠損であることを示した（図３を参照されたい）。
【０１６６】
ＩＬ−１８の欠失がＩＦＮγ応答の不足を一貫してもたらすことが多くの実験系で観察されたので（Ｗｅｉ，Ｘ．Ｑ．ら Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６３，２８２１−２８２８（１９９９），Ｋｉｎｊｏ，Ｙ．ら Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９，３２３−３２９（２００２））、我々は、１６時間、レクチンコンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）を用いて、ｉｎ ｖｉｔｒｏで、未処置ｗｔマウス、ＩＬ−１８−／−マウス、及びＩＬ−１８Ｒα−／−マウスに由来するリンパ球を刺激し、ＩＦＮ−γ産生を、ＥＬＩＳＡによって続いて測定した。
【０１６７】
そうするために、腋窩リンパ節及び鼠径リンパ節（ＬＮ）を未処置マウスから単離した。２×１０５細胞を三通り、９６ウェルプレート中に配置した。５μｇ／ｍｌ ＣｏｎＡを１６時間の刺激のために使用し、ＩＦＮ−γ産生を、ＥＬＩＳＡ（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ社、ラホーヤ、ＣＡ）によって続いて測定した。
【０１６８】
ＩＬ−１８がＩＦＮγ産生に影響を有するという原理と一致して、ＩＬ−１８−／−マウス及びＩＬ−１８Ｒα−／−マウスの両方からのＬＮ細胞は、ｗｔ ＬＮ細胞とは対照的にＩＦＮγを分泌しなかった（図４ａ）。
【０１６９】
（実施例３）
ＩＬ−１８Ｒαのブロックは、ＩＬ−１８−／−マウスにおけるＥＡＥを予防する
ＥＡＥに関してのＩＬ−１８欠損マウス及びＩＬ−１８Ｒα欠損マウスの性質の不一致は、強力な脳炎誘発性特性を有するさらなるＩＬ−１８Ｒαリガンドを強く示すものである。ＩＬ−１８Ｒα及びＩＬ−１８が、無関係の生物学的機能を有するかどうかを評価するために、我々は、ＥＡＥ感受性のＩＬ−１８−／−マウスにおいてＩＬ−１８Ｒαをブロックした。
【０１７０】
マウス（ｎ＝５マウス／グループ）を、ＣＦＡ（ＤＩＦＣＯ社、デトロイト、ＭＩ）中で乳化した、ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ社から得たＭＯＧ３５−５５ペプチド（アミノ酸配列：ＭＥＶＧＷＹＲＳＰＦＳＲＶＶＨＬＹＲＮＧＫ（配列番号１１））の２００μｇを用いて皮下に免疫した。マウスは、免疫時に及び４８時間後に、２００ｎｇ百日咳毒素（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社）を腹腔内に受けた。モノクローナル抗ＩＬ−１８Ｒα抗体（クローン１１２６２４）（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ社）を、免疫の１日前に（４５０μｇ／マウス）及びその後３日ごと（３００μｇ／マウス）若しくは疾患発症から始めて３日ごと（３００μｇ／マウス）投与した又はしなかった。
【０１７１】
マウスは、以下のように毎日スコア化した：０）検出可能なＥＡＥの徴候なし；０．５）末端の尾部がぐったりしている；１）全尾部がぐったりしている；２）片側の部分的な後肢の麻痺；２．５）両側の部分的な肢の麻痺；３）両側の全後肢の麻痺；３．５）全後肢の麻痺及び片側の前肢の麻痺；４）前肢及び後肢の全麻痺（スコア＞４は安楽死させる）；５）死。
【０１７２】
各時点で、各グループの平均疾患スコアを示す。統計的有意差は、独立スチューデントｔ検定を使用して評価した。
【０１７３】
免疫の１日前及びその後、実験の終了まで３日ごとに与えた抗ＩＬ−１８Ｒα ｍＡｂを用いたＩＬ−１８−／−マウスの処置は、疾患発生を著しく低下させた（図５ａ）。抗ＩＬ−１８Ｒα ｍＡｂの投与は、ＩＬ−１８Ｒα発現細胞の欠失につながりもせず、血液、ＬＮ、又は脾臓中の末梢白血球の組成を変えもしなかった（図１１を参照されたい）。
【０１７４】
ＩＬ−１８Ｒαアンタゴニストは、そのリガンドが遺伝子ターゲティングによって完全に除去されたマウスにおいてでさえＥＡＥを予防するという事実及びＩＬ−１８は、報告によれば、ＩＬ−１８Ｒαに対するほんの低い親和性しか有していないという事実を組み合わせて、我々は、他のリガンドが、ＩＬ−１８Ｒαによって媒介される結合、シグナル伝達、及び免疫発生の原因にちがいないと提唱する。
【０１７５】
興味深いことには、免疫後（ｐ．ｉ．１０日目）にアンタゴニストｍＡｂを用いた、ＩＬ−１８−／−マウスの処置もまた、ＥＡＥ進行を抑止し（図５ｂ）、これは、免疫前に投与されたＡｂと同じ程度まで起こり、ＩＬ−１８Ｒα結合は、ＥＡＥのエフェクター期の間の重要なイベントであることを示唆する。
【０１７６】
（実施例４）
Ａｇ駆動性ではなくマイトジェン駆動性の活性化は、Ｔｈ１極性化のためにＩＬ−１８を必要とする
ＥＡＥ感受性に関する、ＩＬ−１８−／−マウス及びＩＬ−１８Ｒα−／−マウス間の対立的な分裂を考慮すれば、我々は、エフェクター表現型に向けて、未処置Ｔ細胞を正しくプライムし、且つ極性化する両マウスの能力を決定することを望んだ。ｗｔマウス、ＩＬ−１８−／−マウス、及びＩＬ−１８Ｒα−／−マウスを、ＫＬＨを用いて皮下で免疫し、７日後、リンパ球を、単離し、続いて、ＫＬＨを用いてｉｎ ｖｉｔｒｏで再刺激した。
【０１７７】
そうするために、ＣＦＡ中で乳化した１００μｇ／側腹部のキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）（Ｓｉｇｍａ社）を７日前に注射によってプライムしたマウスから腋窩リンパ節及び鼠径リンパ節を単離した。２×１０５細胞を三通り、９６ウェルプレート中に配置した。ＫＬＨリコール細胞を、５０μｇ／ｍｌ ＫＬＨ、５μｇ／ｍｌ ＣｏｎＡ、又は培地を用いて４８時間刺激し、０．５μＣｉ／ｍｌ ３［Ｈ］−チミジンを、増殖応答を観察するために２４時間後に追加した。チミジン取り込みは、Ｆｉｌｔｅｒｍａｔｅ Ｈａｒｖｅｓｔｅｒ及びシンチレーション発光カウンターを使用して評価した。サイトカイン分析については、姉妹培養物の培養上清を、４８時間後に採取し、ＥＬＩＳＡ（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ社、ラホーヤ、ＣＡ）によってＩＦＮγ産生を及びサイトカインアレイ（Ｒａｙｂｉｏｔｅｃｈ社）によって全体的なサイトカイン／ケモカイン分泌を分析した。
【０１７８】
驚いたことに、我々は、ＩＬ−１８−／−マウス及びＩＬ−１８Ｒα−／−マウスのＩＦＮγ産生能力においていかなる有意差をも観察しなかった、そして、ＩＬ−１８−／−マウス又はＩＬ−１８Ｒα−／−マウスに由来するリンパ球によって産生されたＩＦＮγのレベルは、ｗｔマウスから得られた細胞と同一であった（図４ｂ）。さらに、異なるマウス株間のＡｇ駆動性リンパ球の増殖能は、同一であった（図４ｃ）。ＩＬ−１８は、多クローン性に活性化された直後のＴ細胞の早期ＩＦＮγ応答のための決定的な共同因子である（図４ａ）が、Ａｇ駆動性Ｔｈ１極性化は、ＩＬ−１２に単独で、より依存性であり、したがってＩＬ−１８とは無関係であるという考えを我々のデータは支持する。
【０１７９】
ＴＨ１発生は、ＩＬ−１８Ｒα−／−マウスにおいて影響されないように思われたが、我々は、次に、ＩＬ−１８Ｒα欠損抗原提示細胞（ＡＰＣ）が未処置Ｔ細胞をプライムする性能を評価することを望んだ。
【０１８０】
そうするために、我々は、成熟ＳＭＡＲＴＡペプチド（ｐ１１）パルスｗｔ、ＩＬ−１８−／−、及びＩＬ−１８Ｒα−／−ＢＭ（骨髄）由来樹状細胞（ＤＣ）をＳＭＡＲＴＡ−ＴｃＲトランスジェニックＣＤ４＋Ｔ細胞と同時培養し、チミジン取り込みによって増殖を測定した（図４ｄ）。
【０１８１】
使用したプロトコールは以下のとおりであった。
ＢＭ由来ＤＣの生成：ＢＭドナーマウスを、ＣＯ２を使用して安楽死させ、大腿骨及び脛骨を摘出した。ＢＭ細胞は、ＰＢＳを用いて骨を洗い流すことにより単離し、１００μｍ細胞濾過器を通して濾過した。細胞（１０ｍｌ中２〜２．５ｘ１０６）を、１０％ＧＭ−ＣＳＦを追加した完全ＲＰＭＩ中で培養した。少なくとも６日後に、ＢＭ由来ＤＣを、１０μｇ／ｍｌリポ多糖（ＬＰＳ）を用いて一晩成熟させたが、未成熟ＢＭ由来ＤＣは、ＧＭ−ＣＳＦ含有培地中に維持した。少なくとも７日目に、ＢＭ由来ＤＣを実験的に使用した。
トランスジェニック（Ｔｇ）Ｔ細胞増殖：トランスジェニックＴ細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ増殖については、脾臓を、未処置ＴｃＲ Ｔｇマウスから単離し、ＣＤ４＋Ｔ細胞を、ＢＤ Ｂｉｏｍａｇ磁気ビーズを使用して精製した。Ｔ細胞単離の純度をＦＡＣＳ分析によって確認した。１×１０５ Ｓｍａｒｔａ Ｔ細胞を、３００〜３０，０００の未成熟の又は成熟した骨髄由来の樹状細胞と共に９６ウェルプレート中で培養した。同時培養前に、ＢＭ由来ＤＣを、３時間、ＲＰＭＩ中で１μｇ／ｍｌ ＳＭＡＲＴＡ ｐ１１ペプチド（ＧＰＤＩＹＫＧＶＹＱＦＫＳＶＥＦＤ（配列番号１２））（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ社）を用いてパルスし、その後洗浄し、２０００ラドで照射した。非パルスＤＣは、単独で培養したＴ細胞と同様にコントロールとして使用した。細胞を４日間培養し、そして３［Ｈ］−チミジンを培養の最後の１８時間追加した。
【０１８２】
未成熟ＤＣがＳＭＡＲＴＡ Ｔ細胞を活性化するために使用された場合でさえ、Ｔ細胞プライミングにおける有意差は観察されなかった。
【０１８３】
たとえＩＬ−１８Ｒα−／−ＤＣ及びＴ細胞が活性化される能力に欠損がないということを上記のデータが示唆しても、我々は、活性化マーカー発現のレベルで、両細胞型の活性化ステータスを確認することに決めた。我々は、ＦＡＣＳによって、ＬＰＳ成熟ＤＣ及びＫＬＨ再刺激Ｔ細胞上の発現マーカーを調べ、ＩＬ−１８Ｒα−／−ＤＣ上のＣＤ８０、ＣＤ８６、及びＣＤ４０のアップレギュレーションに差異がないこと、さらにＩＬ−１８Ｒα−／−Ｔ細胞によるＣＤ５、ＣＤ６２Ｌ、及びＣＤ４４の発現に、ｗｔ細胞及びＩＬ−１８−／−細胞と比較して差異がないことを示した（図６）。したがって、ＩＬ−１８Ｒα破壊は、Ｔ細胞又はＤＣの活性化に、少なくとも、適切な刺激に必要な表面マーカーのアップレギュレーションのレベルでは、影響を及ぼさない。
【０１８４】
（実施例５）
ＩＬ−１８Ｒα−／− ＣＤ４＋Ｔ細胞は、ＥＡＥの間、ＣＮＳに侵入する
ＥＡＥは、疾患のピークでの、ＣＮＳ中への炎症細胞の大量の流入によって特徴づけられるが、免疫細胞はまた、臨床症状の発症前にもＣＮＳに侵入する（Ｈｉｃｋｅｙ，Ｗ．Ｆ．Ｂｒａｉｎ Ｐａｔｈｏｌ．１，９７−１０５（１９９１），Ｗｅｋｅｒｌｅ，Ｈ．ら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．１３２，４３−５７（１９８７））。たとえば、ＣＮＳ中へのＣＤ４＋Ｔ細胞の動員は、ＥＡＥのエフェクター期の開始に決定的であるが、ＣＮＳ中への多形核白血球の浸潤は、これらのイベントを組織化することにおける役割を有するように思われる（ＭｃＣｏｌｌ，Ｓ．Ｒ．ら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１，６４２１−６４２６（１９９８））。したがって、ＩＬ−１８Ｒα−／−炎症細胞が、症状発現前の疾患の時点でのＣＮＳに完全に不在であるかどうかを立証するために、我々は、マウスを免疫し、免疫後の５、７、及び９日目に炎症性浸潤物についてＣＮＳを分析した。
【０１８５】
ＩＬ−１８Ｒα−／−マウスにおける疾患の終点での免疫細胞の欠如とは対照的に（図２ａ〜ｅ）、ＩＬ−１８Ｒα−／− ＣＤ４＋Ｔ細胞は、フローサイトメトリーによって分析されたように、免疫後の５、７、及び９日目に、ｗｔマウス及びＩＬ−１８−／−マウスと同じ程度までＣＮＳ浸潤が可能であった（図７）。ＣＮＳ中に存在する、匹敵する数の顆粒球、マクロファージ、及びＢ細胞もあった。しかしながら、図２に見られるように、臨床的な疾患の時点での、ＣＮＳ中のＩＬ−１８Ｒα−／−炎症細胞の存在に有意差があり、したがって、それらが、ＥＡＥのエフェクター期中に存続することができないことを実証する。興味深いことには、これらの結果は、ＩＬ−２３ｐ１９−／−マウスで得られたデータを反映し、このマウスは、ＭＯＧ３５−５５誘発性ＥＡＥに対して抵抗性であり、このマウスにおいて、欠損は、免疫後７日目に観察されたように、ＣＮＳ中への炎症細胞の浸潤を予防するものではない（Ｌａｎｇｒｉｓｈ，Ｃ．Ｌ．ら，Ｊ Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０１，２３３−２４０（２００５））。
【０１８６】
（実施例６）
ＩＬ−１８Ｒαの欠如がＩＬ−１７産生を予防する
ＣＮＳ中への随伴性炎症細胞侵入を伴う、ＥＡＥ抵抗性に関するＩＬ−１８Ｒα−／−マウス及びＩＬ−２３−／−マウス間の類似性は、我々のマウスにおける、ＩＬ−１７産生へのＩＬ−１８Ｒαの影響を評価するよう我々を駆り立てた。ＩＬ−１７産生ＴＨ細胞（ＴＨＩＬ−１７）は、自己免疫炎症の間の主な病原性集団であることが現在承認されている。サイトカイン分泌に関する、ＥＡＥ感受性ＩＬ−１８−／−マウス及びＥＡＥ抵抗性ＩＬ−１８Ｒα−／−マウスの間の差異を定義するために、我々は、同系統のリコールＡｇに出会った際にリンパ球によって分泌された６２種の異なるサイトカインの同時分析を可能にするサイトカインタンパク質アレイ（Ｒａｙｂｉｏｔｅｃｈ社）を使用した。
【０１８７】
ｗｔマウス、ＩＬ−１８−／−マウス、及びＩＬ−１８Ｒα−／−マウスをＫＬＨを用いて免疫し、７日後に、リンパ球を単離し、５０μｇ／ｍｌ ＫＬＨを用いて再刺激した（図８を参照されたい）。
【０１８８】
ＩＬ−１８−／−リンパ球と比較して、ＩＬ−１８Ｒα−／−リンパ球は、ＩＬ−１７の産生が非常に少なかった。この調査結果を確かめるために、我々は、ＲＮＡレベル及びタンパク質レベルの両方でこのサイトカインのレベルを分析した。ＫＬＨを用いた再刺激の際にリンパ球から得られたＲＮＡのリアルタイムＰＣＲは、両方のＩＬ−１７ ｍＲＮＡの発現が、ｗｔ細胞及びＩＬ−１８−／−細胞と比較して、ＩＬ−１８Ｒα−／−細胞中で著しく減少することを示した（図８ａ）。これらの調査結果は、同じＫＬＨ再刺激細胞の上清を使用したＩＬ−１７ ＥＬＩＳＡによって確証を与えられた（図８ｂ）。
【０１８９】
（実施例７）
ＩＬ−１８Ｒα破壊は、アクセサリー細胞免疫区画中の細胞に影響を及ぼす
ＩＬ−１８Ｒαの欠如は、ＴＨＩＬ−１７発生の予防を介してＥＡＥの発生を完全に予防するが、その推定上のリガンドＩＬ−１８は無関係のように思われる。
【０１９０】
ＩＬ−１８Ｒαがその主要な影響を及ぼす細胞型は知られていないままである。これは、主に、ＩＬ−１８Ｒｓが様々な細胞型及び組織によって発現されるという事実によるものである。しかしながら、ＣＤ４＋Ｔ細胞上のＩＬ−１８Ｒαの存在が、ＴＨＩＬ−１７細胞の続く極性化に対して絶対的に決定的であると推定されそうである。ＥＡＥにおける、ＩＬ−１８Ｒα破壊の、細胞及び組織の位置を同定するために、我々は、照射骨髄（ＢＭ）キメラを使用して、白血球区画の細胞上にＩＬ−１８Ｒαを選択的に発現させた。
【０１９１】
照射骨髄（ＢＭ）キメラマウス：
ＢＭドナーマウスを、ＣＯ２を使用して安楽死させ、ＢＭ細胞を、リン酸塩緩衝液（ＰＢＳ）を用いて、大腿骨、脛骨、とう骨、及び寛骨を洗い流すことにより単離した。次いで、ＢＭ細胞を１００μｍ細胞濾過器に通過させ、細胞をＰＢＳを用いて洗浄した。レシピエントマウスを、１１００ラド（分割線量）で致死的に照射し、１２〜２５×１０６ＢＭ細胞をｉ．ｖ．注射する。移植は、８週間の回復の間に起こる。
【０１９２】
照射及び再形成の後で、レシピエントマウスの第２のリンパ組織中のＡＰＣ区画は、ドナーマウスに由来するＢＭ細胞で全体的に構成される（Ｂｅｃｈｅｒ，Ｂ．ら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９３，９６７−９７４（２００１））。
【０１９３】
我々は、４：１の比のＲＡＧ−／−ＢＭ及びＩＬ−１８Ｒα−／−ＢＭをｗｔレシピエント中に（ＲＡＧ−／−＋ＩＬ−１８Ｒα−／−→ｗｔ）又はＩＬ−１８Ｒα−／−ＢＭのみをｗｔレシピエント中に（ＩＬ−１８Ｒα−／−→ｗｔ）移入することによりＢＭキメラを生成した。ｗｔ−ＢＭは、コントロールとしてｗｔレシピエント中に移入した（ｗｔ→ｗｔ）（表２）。
【０１９４】
ＲＡＧ−／−マウスは、リンパ球を有さず、したがって、結果として生じるキメラ（ＲＡＧ−／−＋ＩＬ−１８Ｒα−／−→ｗｔ）は、ＩＬ−１８Ｒα欠損リンパ球区画を有するが、大多数の他のすべての白血球は、非破壊ＩＬ−１８Ｒα対立遺伝子を有する。
【０１９５】
予想どおり、ＩＬ−１８Ｒα−／−→ｗｔマウスは、ＭＯＧペプチドを用いた免疫の際にＥＡＥに対して抵抗性であった。その代わりに、Ｔ細胞又はＢ細胞を有さず、したがってリンパ球上ではなくアクセサリー細胞上のみにＩＬ−１８Ｒαを発現させる、ＲＡＧ−／−マウスからのＢＭの追加により、ＥＡＥに対するＩＬ−１８Ｒα−／−マウスの抵抗性を弱らせることができた（図９）。したがって、ＩＬ−１８Ｒαは、アクセサリー細胞（単核食細胞及び多核食細胞、ＤＣ＆ＮＫ細胞）区画中でその主要な影響を及ぼすにちがいない。さらに、ＩＬ−１８がＴ細胞及びＮＫ細胞にその影響を及ぼすと考えられていることを考慮すれば、この発見は、非常に予期せぬことであるが、これまでのところ我々の観察と完全に一致している。
【０１９６】
（実施例８）
宿主細胞上のＩＬ−１８Ｒαの欠如は、ＭＯＧ反応性Ｔ細胞の養子移入によって誘発されたＥＡＥ発生を予防する
上記のデータは、アクセサリー細胞上のＩＬ−１８Ｒαの欠如が、ＴＨ細胞のプライミング及び増大に影響を及ぼさないことを示す。さらに、ＲＡＧ−／−＋ＩＬ−１８Ｒα−／−→ｗｔ混合ＢＭキメラは（図９）、ＩＬ−１８Ｒαの欠損が、ＥＡＥの発生に不可欠なアクセサリー細胞機能に障害を生じさせることを明確に実証する。我々は、ＥＡＥの間のアクセサリー細胞のＩＬ−１８Ｒシグナル伝達の役割及び機能を明らかにするために養子移入実験を続いて行った。そうするために、我々は、ｗｔレシピエントマウス及びＩＬ−１８Ｒα−／−レシピエントマウスの両方のグループ中にｗｔドナーマウスに由来する脳炎誘発性ＭＯＧ反応性Ｔ細胞を養子移入した。予想どおり、ｗｔマウスに由来する、十分にプライムされ、且つ活性化された脳炎誘発性Ｔ細胞は、ｗｔレシピエントマウスにおいてＥＡＥを誘発したが、それらは、ＩＬ−１８Ｒα欠損宿主において臨床的なＥＡＥを誘発することができなかった（図１０）。この発見は、ＩＬ−１８Ｒαの欠損が、ＥＡＥの発生に必須の、宿主の非リンパ球の白血球に、Ｔ細胞活性と無関係に障害を生じさせるということをさらに強調する。
【表１】
【表２】
【図面の簡単な説明】
【０１９７】
【図１】ＩＬ−１８Ｒシグナル伝達は、ＩＬ−１８と無関係に、ＥＡＥ誘発に必要である。マウスは、ＣＦＡ中のＭＯＧ３５−５５を用いて能動免疫し、０日目及び２日目に百日咳毒素をｉ．ｐ．注射した。（ａ）ｐ３５−／−×ＩＬ−１８−／−二重ノックアウトマウス及びｗｔマウスにおけるＥＡＥ進行を示す図である。２回の実験のうちの一方の代表的実験を示す（ｎ＝５マウス／グループ）。（ｂ）ｗｔマウス、ＩＬ−１８−／−マウス、及びＩＬ−１８Ｒα−／−マウスにおけるＥＡＥ進行を示す図である。３回の実験のうちの１つの代表的実験を示す（ｎ＝５マウス／グループ）。
【図２】ＩＬ−１８Ｒシグナル伝達は、ＩＬ−１８と無関係に、ＥＡＥ誘発に必要である。マウスは、ＣＦＡ中のＭＯＧ３５−５５を用いて能動免疫し、０日目及び２日目に百日咳毒素をｉ．ｐ．注射した。疾患に関する浸潤のスコアを示すｗｔ（スコア２）ＥＡＥマウス、ＩＬ−１８−／−（スコア２）ＥＡＥマウス、ＩＬ−１８Ｒα−／−（スコア０）ＥＡＥマウス、及び未処置マウスからのＰＦＡ固定脊髄の（ａ）Ｈ＆Ｅ染色、（ｂ）ＬＦＢ染色、（ｃ）ＣＤ３染色、（ｄ）ＭＡＣ３染色、及び（ｅ）Ｂ２２０染色を示す図である。
【図３】ＩＬ−１８−／−ＬＮ細胞は、それらの提唱される遺伝子型に一致してＩＬ−１８を産生しない。１μｇ／ｍｌ ＬＰＳ、１００ユニット／ｍｌ ＩＦＮγ、５μｇ／ｍｌコンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）、及び２．５ｎｇ／ｍｌ ＩＬ−１２の示す混合物を用いて１６時間刺激した未処置ｗｔ ＬＮ細胞並びにＩＬ−１８−／−ＬＮ細胞によるＩＬ−１８分泌を評価するＥＬＩＳＡを示す図である。
【図４】ＩＬ−１８及びＩＬ−１８Ｒαは、マイトジェンに刺激されたＴ細胞活性化に必要であるが、Ｔｈ１発生に必要でない。（ａ）５μｇ／ｍｌコンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）を用いて１６時間刺激した未処置ｗｔ ＬＮ細胞、ＩＬ−１８−／−ＬＮ細胞、及びＩＬ−１８Ｒα−／−ＬＮ細胞によるＩＦＮγ分泌を評価するＥＬＩＳＡを示す図である。（ｂ、ｃ）マウスを２００μｇ ＫＬＨで免疫し、７日後、ＬＮを単離して再刺激した。（ｂ）４８時間、５０μｇ／ｍｌ ＫＬＨ又は５μｇ／ｍｌ ＣｏｎＡを用いて二通り再刺激したＫＬＨ免疫マウスからの上清中のＩＦＮγのＥＬＩＳＡを示す図である。（ｃ）４８時間、５０μｇ／ｍｌ ＫＬＨ、５μｇ／ｍｌ ＣｏｎＡ、又は培地を用いて三通り再刺激したＫＬＨ免疫マウスからのＬＮ細胞の増殖アッセイを示す図である。３Ｈ−チミジンを、カウント毎分（ＣＰＭ）で増殖を測定する２４時間前に培養物に追加した。（ｄ）ＢＭ由来ＤＣを、ｗｔマウス、ＩＬ−１８−／−マウス、及びＩＬ１８Ｒ−／−マウスから生成し、ＬＰＳを用いて成熟させ、続いて１μｇ／ｍｌ ＳＭＡＲＴＡペプチド、ｐ１１を用いてパルスした。ｐ１１特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞を、未処置ＳＭＡＲＴＡ−Ｔｇマウスから得、増殖が、カウント毎分（ＣＰＭ）でチミジン取り込みによって評価された場合に、ペプチドパルスし、且つ照射（２０００ラド）したＤＣと共に７２時間同時培養した。
【図５】代替ＩＬ−１８Ｒα結合リガンドは、ＩＬ−１８−／−マウスにおいてＥＡＥを誘発する。（ａ）ＩＬ−１８−／−は、ＭＯＧ３５−５５を用いる免疫の１日前に、４５０μｇ抗ＩＬ−１８Ｒα抗体（白色の正方形）又はコントロールＩｇＧ（黒色の菱形）を用いて処置し、その後の３日ごとに３００μｇ抗体を用いて処置した。２回の実験のうちの一方の代表的実験を示す（ｎ＝５マウス／グループ）。（ｂ）ＩＬ−１８−／−マウス（ｎ＝６マウス／グループ）は、ＭＯＧ３５−５５を用いて免疫し、疾患の第１の徴候の時点で、３００μｇ抗ＩＬ−１８Ｒα抗体（白色の正方形）又はコントロールＩｇＧ（黒色の菱形）を用いて処置した。
【図６】ＩＬ−１８Ｒ−／−ＣＤ４＋Ｔ細胞は、ｗｔ ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＩＬ−１８−／−ＣＤ４＋Ｔ細胞に類似して活性化される。５０μｇ／ｍｌ ＫＬＨ又は培地を用いて２日間、ｉｎ ｖｉｔｒｏで再刺激したＫＬＨ免疫ｗｔマウス、ＩＬ−１８−／−マウス、及びＩＬ−１８Ｒ−／−マウスに由来する脾細胞のＦＡＣＳを示す図である。２日後に、脾臓細胞を、ＣＤ４−ＦＩＴＣ及び（ａ）ＣＤ５−ＡＰＣ、（ｂ）ＣＤ６２Ｌ−ｂｉｏ−ＳＡ−ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５、又は（ｃ）ＣＤ４４−ＰＥを用いて染色した。
【図７】ＩＬ−１８Ｒα−／−ＣＤ４＋Ｔ細胞は、疾患発症前に、ｗｔ ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＩＬ−１８−／−ＣＤ４＋Ｔ細胞と同じ程度までＣＮＳを浸潤する。ｗｔマウス、ＩＬ−１８−／−マウス、及びＩＬ−１８Ｒα−／−マウスを、ＭＯＧ３５−５５を用いて能動免疫し、免疫７日後に、マウスをＰＢＳを用いて灌流し、ＣＮＳを単離した。勾配により小膠細胞を単離し、この部分における炎症細胞の浸潤をフローサイトメトリーによって評価した。細胞は、ＣＤ４５−ＰｅｒＣＰ及びＣＤ４−ＡＰＣを用いて染色した。ＩＬ−１８Ｒα−／−ＣＤ４＋Ｔ細胞は、ＣＮＳに侵入し、免疫７日後に、ｗｔ ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＩＬ−１８−／−ＣＤ４＋Ｔ細胞と同じように侵入する。
【図８】ＩＬ−１８Ｒα破壊は、ＩＬ−１７の産生及びＴＨＩＬ−１７細胞の発生に影響を及ぼす。ｗｔマウス、ＩＬ−１８−／−マウス、及びＩＬ−１８Ｒα−／−マウスを、ＫＬＨを用いて免疫し、７日後に、脾細胞を単離し、５０μｇ／ｍｌ ＫＬＨを用いて再刺激した。（ａ）ＫＬＨを用いたｉｎ ｖｉｔｒｏ再刺激の２日後の、ｗｔリンパ球、ＩＬ−１８−／−リンパ球、及びＩＬ−１８Ｒα−／−リンパ球によるＩＬ−１７ ｍＲＮＡ発現のリアルタイムＰＣＲ比較を示す図である。結果は、β−アクチン発現を基準に合わせ、二通り分析した。（ｂ）二通りｉｎ ｖｉｔｒｏでＫＬＨを用いて２日間再刺激したリンパ球によるＩＬ−１７タンパク質発現のＥＬＩＳＡを示す図である。データは、１グループ当たり少なくとも２匹のマウスを組み合わせたものである。
【図９】ＩＬ−１８Ｒαの不在はＴ細胞又はＢ細胞に障害を生じさせない。ＢＭキメラマウスは、致死的に照射したｗｔマウス中に１２〜２５ｘ１０６ＢＭ細胞を移入することにより生成した。６週間後に、再形成したＩＬ−１８Ｒα−／−→ｗｔ（灰色の三角形）、ＩＬ−１８Ｒα−／−＋ＲＡＧ−／−→ｗｔ（白色の正方形）、及びｗｔ→ｗｔ（黒色の菱形）骨髄キメラマウスは、ＭＯＧ３５−５５ペプチドを用いて能動免疫し、臨床スコアを評価した。ＲＡＧ−／−骨髄に由来する非Ｔ細胞及び非Ｂ細胞上のＩＬ−１８Ｒαの存在は、ＥＡＥに対する、ＩＬ−１８Ｒα−／−→ｗｔマウスの感受性をよみがえらせた。
【図１０】ＩＬ−１８Ｒα−／−マウスは、ＥＡＥの受身移入に対して抵抗性である。ＭＯＧ反応性リンパ球は、ｗｔマウスを能動免疫することにより生成し、１１日後に脾臓及びＬＮ細胞を単離し、それらを、４日間、ｉｎ ｖｉｔｒｏで、２０μｇ／ｍｌ ＭＯＧ３５−５５及び２．５ｎｇ／ｍｌ ＩＬ−１２を用いて再刺激した。ＥＡＥは、ＩＬ−１８Ｒα−／−（灰色の三角形）マウス及びｗｔ（黒色の菱形）マウス中への２０〜３０×１０６ＭＯＧ反応性リンパ球の養子移入によってレシピエントマウスにおいて誘発された。２回の実験のうちの一方の代表的実験を示す（ｎ＝５マウス／グループ）。
【図１１】抗ＩＬ−１８ＲαＡｂ処置は、周辺の免疫細胞の組成を変えない。ＩＬ−１８−／−マウスは、ＭＯＧ３５−５５を用いる免疫の１日前に、３００μｇ抗ＩＬ−１８Ｒα抗体又はコントロールＩｇＧを用いて処置し、７日後に、脾臓を単離し、均質化して、免疫細胞組成をフローサイトメトリーによって評価した。細胞は、ＣＤ８−ＦＩＴＣ、ＣＤ４−ＡＰＣ、ＮＫ１．１−ｂｉｏ−ＳＡ−ＰｅｒＣＰ、及びＢ２２０−ＰＥ又はＣＤ１１ｂ−ＦＩＴＣ、ＣＤ１１ｃ−ＡＰＣ、及びＧＲ１−ｂｉｏ−ＳＡ−ＰｅｒＣＰについて染色した。抗ＩＬ−１８ＲαＡｂ処置ＩＬ−１８−／−マウスにおいて免疫細胞組成に差異はない。２匹のマウス／グループの一方の代表的なＦＡＣＳを示す。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者における自己免疫疾患又は脱髄疾患の症状を処置する、予防する、又は寛解させる方法であって、前記患者に、治療的有効量のＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストを投与することを含む方法。
【請求項２】
前記脱髄疾患は多発性硬化症である請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記患者はヒトである請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
自己免疫疾患又は脱髄疾患の処置のための医薬の製造における、ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストの使用。
【請求項５】
前記脱髄疾患は多発性硬化症である請求項４に記載の使用。
【請求項６】
前記患者は、再発寛解型（ＲＲ）多発性硬化症、二次進行型（ＳＰ）多発性硬化症、一次進行型（ＰＰ）多発性硬化症、又は進行再発型（ＰＲ）多発性硬化症に冒されている請求項１から５までのいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項７】
前記アンタゴニストは、ＩＬ−１８Ｒαの産生を低下させる又は予防する、又は前記アンタゴニストは、部分的に、実質的に、又は完全にＩＬ−１８Ｒαの活性をブロックする請求項１から６までのいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項８】
前記アンタゴニストは、低分子、抗体、ｓｉＲＮＡ、アンチセンス核酸、及びリボザイムからなる群から選択される請求項１から７までのいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項９】
前記アンタゴニストは、ＩＬ１８−Ｒα、特にＩＬ１８−Ｒαの細胞外ドメインに選択的に結合する抗体である請求項８に記載の方法又は使用。
【請求項１０】
前記抗体は、配列番号２のポリペプチドに選択的に結合する請求項９に記載の方法又は使用。
【請求項１１】
前記抗体は、配列番号２の残基１〜３２９又は配列番号２の残基１９〜３２９又は配列番号２の残基３３０〜３５０又は配列番号２の残基３５１〜５４１に選択的に結合する請求項１０に記載の方法又は使用。
【請求項１２】
前記抗体は、配列番号２の残基１９〜２１９又は配列番号２の残基１２２〜３２９に選択的に結合する請求項１０に記載の方法又は使用。
【請求項１３】
前記抗体は、配列番号２の残基１９〜１３２又は配列番号２の残基１２２〜２１９又は配列番号２の残基２１３〜３２９に選択的に結合する請求項１０に記載の方法又は使用。
【請求項１４】
前記抗体は、ヒトＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに位置するエピトープに選択的に結合する請求項９に記載の方法又は使用。
【請求項１５】
前記エピトープは、配列番号２のアミノ酸１９〜３２９に位置する請求項１４に記載の方法又は使用。
【請求項１６】
前記エピトープは、配列番号２のアミノ酸残基１９〜２１９に又は配列番号２のアミノ酸残基１２２〜３２９に位置する請求項１４に記載の方法又は使用。
【請求項１７】
前記エピトープは、配列番号２のアミノ酸１９〜１３２又は配列番号２の１２２〜２１９又は配列番号２の２１３〜３２９に位置する請求項１４に記載の方法又は使用。
【請求項１８】
前記抗体は、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、及び配列番号１０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１、２、３、４、５、又は６個のＣＤＲを含む抗原結合ドメインを有する請求項９に記載の方法又は使用。
【請求項１９】
前記抗体は、配列番号３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号４のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む請求項９に記載の方法又は使用。
【請求項２０】
前記抗体は、配列番号３のアミノ酸配列にあるＶＨドメイン及び配列番号４のアミノ酸配列にあるＶＬドメインを含む請求項１９に記載の方法又は使用。
【請求項２１】
前記抗体は、Ｉｇ定常重鎖領域、ヒトＩｇカッパ定常ドメイン及びヒトＩｇラムダ定常ドメインからなる群から選択されるＩｇ定常軽鎖領域、配列番号３のアミノ酸配列を有するＩｇ可変重鎖領域、並びに配列番号４のアミノ酸配列を有するＩｇ可変軽鎖領域としてヒトＩｇＧ１を含む請求項２０に記載の方法又は使用。
【請求項２２】
前記抗体は、モノクローナル抗ヒトＩＬ−１８Ｒαクローン７０６１４、モノクローナル抗ヒトＩＬ−１８Ｒαクローン７０６２５、モノクローナル抗ヒトＩＬ−１８ＲαクローンＢ−Ｅ４３、及びモノクローナル抗ヒトＩＬ−１８ＲαクローンＨ４４からなる群から選択される請求項９に記載の方法又は使用。
【請求項２３】
前記抗体は、Ａｂ１、モノクローナル抗ヒトＩＬ−１８Ｒαクローン７０６１４、モノクローナル抗ヒトＩＬ−１８Ｒαクローン７０６２５、モノクローナル抗ヒトＩＬ−１８ＲαクローンＢ−Ｅ４３、及び／又はモノクローナル抗ヒトＩＬ−１８ＲαクローンＨ４４と、ヒトＩＬ−１８Ｒαへの結合について競合する抗体である請求項９に記載の方法又は使用。
【請求項２４】
前記抗体は、
− 配列番号２の残基１９〜３２９又は配列番号２の残基１９〜２１９又は配列番号２の残基１２２〜３２９又は配列番号２の残基１９〜１３２又は配列番号２の残基１２２〜２１９又は配列番号２の残基２１３〜３２９を含む免疫剤を用いて宿主動物を免疫するステップ、
− 前記宿主動物によって産生されたリンパ球を不死化細胞系と融合させてハイブリドーマ細胞を形成するステップ、
− 免疫ペプチドに対する抗体を産生するハイブリドーマ細胞のクローンを選択するステップ、
− ＥＡＥ動物モデル中のハイブリドーマ細胞の異なるクローンによって産生された抗体の活性を試験し、前記動物モデルにおけるＥＡＥの進行を阻害する抗体を選択するステップ、
− 分泌されたモノクローナル抗体を産生するステップ
を含むプロセスによって得ることができる請求項９に記載の方法又は使用。
【請求項２５】
前記免疫剤は、配列番号２の残基１９〜３２９又は配列番号２の残基１９〜２１９又は配列番号２の残基１２２〜３２９又は配列番号２の残基１９〜１３２又は配列番号２の残基１２２〜２１９又は配列番号２の残基２１３〜３２９又はその融合タンパク質からなる請求項２４に記載の方法又は使用。
【請求項２６】
前記抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、又はその断片である請求項９から２５までのいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項２７】
前記アンタゴニストは、配列番号１の配列の１８〜２５個の連続したヌクレオチドに対して１００％相補的なｓｉＲＮＡであり、ヒトＩＬ−１８Ｒαの発現又は生物活性を低下させる又は阻害することができる請求項８に記載の方法又は使用。
【請求項２８】
前記アンタゴニストは、長さが１５〜３５個のヌクレオチドの範囲のアンチセンスオリゴヌクレオチドであり、配列番号１に記載される核酸配列に対して相補的である請求項８に記載の方法又は使用。
【請求項２９】
前記アンタゴニストは、それぞれが配列番号１の長さが少なくとも５個の隣接したヌクレオチドである１又は２個の領域に対して相補的なハイブリダイズ領域を含有するリボザイムである請求項８に記載の方法又は使用。
【請求項３０】
前記アンタゴニストは、抗原提示細胞中のＩＬ１８Ｒαの活性を阻害する請求項１から２９までのいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項３１】
前記抗原提示細胞は、単核食細胞、多核食細胞、樹状細胞、及びナチュラルキラー細胞からなる群から選択される請求項３０に記載の方法又は使用。
【請求項３２】
ＩＬ−１８Ｒαの阻害は、ＩＬ−１７産生ヘルパーＴ細胞の減少をもたらす請求項１から３１までのいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項３３】
前記ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストは、ＭＳを処置する又は予防するための第２の治療薬と共に投与される請求項１から３２までのいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項３４】
前記ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストは、コルチコステロイド、免疫抑制剤、神経保護薬、免疫調節剤、又はインターフェロンと共に投与される請求項３３に記載の方法又は使用。
【請求項３５】
前記ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストは、インターフェロン−ベータと、好ましくはインターフェロンベータ−１ａと、より好ましくはＲｅｂｉｆ（登録商標）（Ｓｅｒｏｎｏ社）と共に投与される請求項３４に記載の方法又は使用。
【請求項３６】
哺乳動物患者、好ましくはヒト患者の多発性硬化症の治療における同時の、別個の、又は順次の使用のための、ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニスト及び併用調製物としてコルチコステロイド、免疫抑制剤、神経保護薬、免疫調節剤、又はインターフェロンを含む製品。
【請求項３７】
前記インターフェロンは、インターフェロン−ベータ、好ましくはインターフェロンベータ−１ａ、より好ましくはＲｅｂｉｆ（登録商標）（Ｓｅｒｏｎｏ社）である請求項３６に記載の製品。
【請求項３８】
医薬としての使用のための、ＩＬ１８−Ｒα、特に、ＩＬ１８−Ｒαの細胞外ドメインに選択的に結合する抗体。
【請求項１】
患者における自己免疫疾患又は脱髄疾患の症状を処置する、予防する、又は寛解させる方法であって、前記患者に、治療的有効量のＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストを投与することを含む方法。
【請求項２】
前記脱髄疾患は多発性硬化症である請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記患者はヒトである請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
自己免疫疾患又は脱髄疾患の処置のための医薬の製造における、ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストの使用。
【請求項５】
前記脱髄疾患は多発性硬化症である請求項４に記載の使用。
【請求項６】
前記患者は、再発寛解型（ＲＲ）多発性硬化症、二次進行型（ＳＰ）多発性硬化症、一次進行型（ＰＰ）多発性硬化症、又は進行再発型（ＰＲ）多発性硬化症に冒されている請求項１から５までのいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項７】
前記アンタゴニストは、ＩＬ−１８Ｒαの産生を低下させる又は予防する、又は前記アンタゴニストは、部分的に、実質的に、又は完全にＩＬ−１８Ｒαの活性をブロックする請求項１から６までのいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項８】
前記アンタゴニストは、低分子、抗体、ｓｉＲＮＡ、アンチセンス核酸、及びリボザイムからなる群から選択される請求項１から７までのいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項９】
前記アンタゴニストは、ＩＬ１８−Ｒα、特にＩＬ１８−Ｒαの細胞外ドメインに選択的に結合する抗体である請求項８に記載の方法又は使用。
【請求項１０】
前記抗体は、配列番号２のポリペプチドに選択的に結合する請求項９に記載の方法又は使用。
【請求項１１】
前記抗体は、配列番号２の残基１〜３２９又は配列番号２の残基１９〜３２９又は配列番号２の残基３３０〜３５０又は配列番号２の残基３５１〜５４１に選択的に結合する請求項１０に記載の方法又は使用。
【請求項１２】
前記抗体は、配列番号２の残基１９〜２１９又は配列番号２の残基１２２〜３２９に選択的に結合する請求項１０に記載の方法又は使用。
【請求項１３】
前記抗体は、配列番号２の残基１９〜１３２又は配列番号２の残基１２２〜２１９又は配列番号２の残基２１３〜３２９に選択的に結合する請求項１０に記載の方法又は使用。
【請求項１４】
前記抗体は、ヒトＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに位置するエピトープに選択的に結合する請求項９に記載の方法又は使用。
【請求項１５】
前記エピトープは、配列番号２のアミノ酸１９〜３２９に位置する請求項１４に記載の方法又は使用。
【請求項１６】
前記エピトープは、配列番号２のアミノ酸残基１９〜２１９に又は配列番号２のアミノ酸残基１２２〜３２９に位置する請求項１４に記載の方法又は使用。
【請求項１７】
前記エピトープは、配列番号２のアミノ酸１９〜１３２又は配列番号２の１２２〜２１９又は配列番号２の２１３〜３２９に位置する請求項１４に記載の方法又は使用。
【請求項１８】
前記抗体は、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、及び配列番号１０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する少なくとも１、２、３、４、５、又は６個のＣＤＲを含む抗原結合ドメインを有する請求項９に記載の方法又は使用。
【請求項１９】
前記抗体は、配列番号３のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号４のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む請求項９に記載の方法又は使用。
【請求項２０】
前記抗体は、配列番号３のアミノ酸配列にあるＶＨドメイン及び配列番号４のアミノ酸配列にあるＶＬドメインを含む請求項１９に記載の方法又は使用。
【請求項２１】
前記抗体は、Ｉｇ定常重鎖領域、ヒトＩｇカッパ定常ドメイン及びヒトＩｇラムダ定常ドメインからなる群から選択されるＩｇ定常軽鎖領域、配列番号３のアミノ酸配列を有するＩｇ可変重鎖領域、並びに配列番号４のアミノ酸配列を有するＩｇ可変軽鎖領域としてヒトＩｇＧ１を含む請求項２０に記載の方法又は使用。
【請求項２２】
前記抗体は、モノクローナル抗ヒトＩＬ−１８Ｒαクローン７０６１４、モノクローナル抗ヒトＩＬ−１８Ｒαクローン７０６２５、モノクローナル抗ヒトＩＬ−１８ＲαクローンＢ−Ｅ４３、及びモノクローナル抗ヒトＩＬ−１８ＲαクローンＨ４４からなる群から選択される請求項９に記載の方法又は使用。
【請求項２３】
前記抗体は、Ａｂ１、モノクローナル抗ヒトＩＬ−１８Ｒαクローン７０６１４、モノクローナル抗ヒトＩＬ−１８Ｒαクローン７０６２５、モノクローナル抗ヒトＩＬ−１８ＲαクローンＢ−Ｅ４３、及び／又はモノクローナル抗ヒトＩＬ−１８ＲαクローンＨ４４と、ヒトＩＬ−１８Ｒαへの結合について競合する抗体である請求項９に記載の方法又は使用。
【請求項２４】
前記抗体は、
− 配列番号２の残基１９〜３２９又は配列番号２の残基１９〜２１９又は配列番号２の残基１２２〜３２９又は配列番号２の残基１９〜１３２又は配列番号２の残基１２２〜２１９又は配列番号２の残基２１３〜３２９を含む免疫剤を用いて宿主動物を免疫するステップ、
− 前記宿主動物によって産生されたリンパ球を不死化細胞系と融合させてハイブリドーマ細胞を形成するステップ、
− 免疫ペプチドに対する抗体を産生するハイブリドーマ細胞のクローンを選択するステップ、
− ＥＡＥ動物モデル中のハイブリドーマ細胞の異なるクローンによって産生された抗体の活性を試験し、前記動物モデルにおけるＥＡＥの進行を阻害する抗体を選択するステップ、
− 分泌されたモノクローナル抗体を産生するステップ
を含むプロセスによって得ることができる請求項９に記載の方法又は使用。
【請求項２５】
前記免疫剤は、配列番号２の残基１９〜３２９又は配列番号２の残基１９〜２１９又は配列番号２の残基１２２〜３２９又は配列番号２の残基１９〜１３２又は配列番号２の残基１２２〜２１９又は配列番号２の残基２１３〜３２９又はその融合タンパク質からなる請求項２４に記載の方法又は使用。
【請求項２６】
前記抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、又はその断片である請求項９から２５までのいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項２７】
前記アンタゴニストは、配列番号１の配列の１８〜２５個の連続したヌクレオチドに対して１００％相補的なｓｉＲＮＡであり、ヒトＩＬ−１８Ｒαの発現又は生物活性を低下させる又は阻害することができる請求項８に記載の方法又は使用。
【請求項２８】
前記アンタゴニストは、長さが１５〜３５個のヌクレオチドの範囲のアンチセンスオリゴヌクレオチドであり、配列番号１に記載される核酸配列に対して相補的である請求項８に記載の方法又は使用。
【請求項２９】
前記アンタゴニストは、それぞれが配列番号１の長さが少なくとも５個の隣接したヌクレオチドである１又は２個の領域に対して相補的なハイブリダイズ領域を含有するリボザイムである請求項８に記載の方法又は使用。
【請求項３０】
前記アンタゴニストは、抗原提示細胞中のＩＬ１８Ｒαの活性を阻害する請求項１から２９までのいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項３１】
前記抗原提示細胞は、単核食細胞、多核食細胞、樹状細胞、及びナチュラルキラー細胞からなる群から選択される請求項３０に記載の方法又は使用。
【請求項３２】
ＩＬ−１８Ｒαの阻害は、ＩＬ−１７産生ヘルパーＴ細胞の減少をもたらす請求項１から３１までのいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項３３】
前記ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストは、ＭＳを処置する又は予防するための第２の治療薬と共に投与される請求項１から３２までのいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項３４】
前記ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストは、コルチコステロイド、免疫抑制剤、神経保護薬、免疫調節剤、又はインターフェロンと共に投与される請求項３３に記載の方法又は使用。
【請求項３５】
前記ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストは、インターフェロン−ベータと、好ましくはインターフェロンベータ−１ａと、より好ましくはＲｅｂｉｆ（登録商標）（Ｓｅｒｏｎｏ社）と共に投与される請求項３４に記載の方法又は使用。
【請求項３６】
哺乳動物患者、好ましくはヒト患者の多発性硬化症の治療における同時の、別個の、又は順次の使用のための、ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニスト及び併用調製物としてコルチコステロイド、免疫抑制剤、神経保護薬、免疫調節剤、又はインターフェロンを含む製品。
【請求項３７】
前記インターフェロンは、インターフェロン−ベータ、好ましくはインターフェロンベータ−１ａ、より好ましくはＲｅｂｉｆ（登録商標）（Ｓｅｒｏｎｏ社）である請求項３６に記載の製品。
【請求項３８】
医薬としての使用のための、ＩＬ１８−Ｒα、特に、ＩＬ１８−Ｒαの細胞外ドメインに選択的に結合する抗体。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【公表番号】特表２００９−５３１２９５（Ｐ２００９−５３１２９５Ａ）
【公表日】平成２１年９月３日（２００９．９．３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５５５７９１（Ｐ２００８−５５５７９１）
【出願日】平成１９年２月２１日（２００７．２．２１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００７／０５１６９２
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０９６３９６
【国際公開日】平成１９年８月３０日（２００７．８．３０）
【出願人】（５０８２４９３８７）ユニバーシティ オブ チューリッヒ (2)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２１年９月３日（２００９．９．３）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年２月２１日（２００７．２．２１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００７／０５１６９２
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０９６３９６
【国際公開日】平成１９年８月３０日（２００７．８．３０）
【出願人】（５０８２４９３８７）ユニバーシティ オブ チューリッヒ (2)
【Ｆターム（参考）】
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