血液分析装置、血液分析方法、及びコンピュータプログラム
【課題】 異常リンパ球、芽球、及び異型リンパ球を区別して検出可能な血液分析装置、血液分析方法、及びコンピュータプログラムを提供する。
【解決手段】
血液分析装置１は、試料調製部２２において、溶血剤を含有する第１試薬と蛍光色素を含有する第２試薬と血液検体とを混合して第１測定試料を調製し、溶血剤を含有する第３試薬と蛍光色素を含有する第４試薬と血液検体とを混合して第２測定試料を調製し、それぞれの測定試料を検出部２３によって測定し、検出部２３から出力される測定データを情報処理ユニット５において処理することにより、血液検体中に異常リンパ球、芽球、及び異型リンパ球のそれぞれが存在するか否かを判定可能である。
【解決手段】
血液分析装置１は、試料調製部２２において、溶血剤を含有する第１試薬と蛍光色素を含有する第２試薬と血液検体とを混合して第１測定試料を調製し、溶血剤を含有する第３試薬と蛍光色素を含有する第４試薬と血液検体とを混合して第２測定試料を調製し、それぞれの測定試料を検出部２３によって測定し、検出部２３から出力される測定データを情報処理ユニット５において処理することにより、血液検体中に異常リンパ球、芽球、及び異型リンパ球のそれぞれが存在するか否かを判定可能である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血液検体を光学的に測定し、血液検体に含まれる血球を分類する血液分析装置及び血液分析方法、並びにコンピュータに血液を分析させるためのコンピュータプログラムに関する。
【背景技術】
【０００２】
正常な末梢血液中にはリンパ球、単球、好塩基球、好酸球、及び好中球の５種類の白血球が存在し、多くの血球計数装置は血液検体中の白血球をかかる５つの種類に分類する機能を有している。一方、ウイルス感染症又は造血器腫瘍等の疾患においては、正常な末梢血液中には存在しない細胞が出現する。末梢血液中に出現する異常な白血球には、異常な単核球が含まれ、この異常単核球は、反応性のものと腫瘍性のものに大別できる。反応性の異常単核球としては、ウイルス感染又は薬物アレルギー等で見られる「異型リンパ球（atypical lymphocyte）」がある。腫瘍性の異常単核球は、成熟したものと幼若なものとにさらに分類される。腫瘍性の成熟単核球としては、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）で見られる「異常リンパ球（abnormal lymphocyte）」がある。また、腫瘍性の幼若単核球としては、急性白血病で見られる「芽球（blast）」がある。末梢血液中から異型リンパ球、異常リンパ球、及び芽球を区別して検出することは、上記のような疾患のスクリーニング又は診断を行う上で極めて有用である。
【０００３】
特許文献１には、白血球を４つ又は５つに分類する試薬を用いて異型リンパ球及び骨髄芽球を正常白血球と区別して検出することが開示されている（図１２、１４を参照）。また、特許文献２には、白血球を５つに分類する試薬を用いて、異常リンパ球及び芽球からなる細胞群を、正常白血球と区別して検出することが開示されている（図２参照）。特許文献１及び２に開示されている技術は、白血球を分類するための試薬として、カチオン性界面活性剤及びノニオン性界面活性剤を含む溶血剤と、核酸を染める蛍光色素を含む染色液とを用いる点において共通している。
【０００４】
また、特許文献３には、所定の試薬を用いて、骨髄芽球を成熟白血球及び幼若顆粒球と区別して検出することが開示されている（図１、２、５参照）。この文献には、上記の試薬として、ノニオン性界面活性剤及び可溶化剤を含む溶血剤と、核酸を染める蛍光色素とが開示されている。また、特許文献４には、所定の試薬を用いて、リンパ芽球と骨髄芽球と成熟白血球と幼若顆粒球とを区別して検出することが開示されている（図１３Ａ、１３Ｂ参照）。この文献には、上記の試薬として、ノニオン性界面活性剤及び可溶化剤を含む溶血剤と、核酸を染める蛍光色素とが開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２００６−９１０２４号公報
【特許文献２】米国特許出願公開第２００９／００２３１２９号明細書
【特許文献３】特開２００７−２６３８９４号公報
【特許文献４】特開２０１０−２３７１４７号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかしながら、特許文献１及び特許文献２においては、異型リンパ球、異常リンパ球、及び芽球が蛍光強度及び散乱光強度においてほぼ同じ領域に出現するため、これらを区別することはできない。また、特許文献３及び４の何れにおいても、異型リンパ球と異常リンパ球とを区別して検出することは記載されていない。
【０００７】
本発明は斯かる事情に鑑みてなされたものであり、その一の目的は、異常リンパ球、芽球、及び異型リンパ球を区別して検出可能な血液分析装置、血液分析方法、及びコンピュータプログラムを提供することにある。また、本発明の他の目的は、反応性の異常単核球および腫瘍性の異常単核球を区別して検出することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上述した課題を解決するために、本発明の一の態様の血液分析装置は、血液検体から第１血液検体と第２血液検体とを分注する分注部と、前記分注部によって分注された第１血液検体と、核酸を染める第１蛍光色素と、カチオン性界面活性剤を含む第１溶血剤とを混合して第１測定試料を調製し、前記分注部によって分注された第２血液検体と、核酸を染める第２蛍光色素と、カチオン性界面活性剤を含まず他の界面活性剤を含む第２溶血剤とを混合して第２測定試料を調製する試料調製部と、前記試料調製部によって調製された第１測定試料及び第２測定試料のそれぞれに光を照射する光源と、前記光源により光が前記第１測定試料に照射されたときに生じる蛍光及び散乱光を受光して、受光された蛍光に関する第１蛍光信号及び受光された散乱光に関する第１散乱光信号を出力し、前記光源により光が前記第２測定試料に照射されたときに生じる蛍光及び散乱光を受光して、受光された蛍光に関する第２蛍光信号及び受光された散乱光に関する第２散乱光信号を出力する受光部と、前記第１蛍光信号及び前記第１散乱光信号、並びに前記第２蛍光信号及び前記第２散乱光信号に基づいて、前記血液検体から異型リンパ球、異常リンパ球、及び芽球を区別して検出する情報処理部と、前記情報処理部による検出結果に基づく出力を行う出力部と、を備える。
【０００９】
この態様において、前記情報処理部は、前記第１蛍光信号及び前記第１散乱光信号に基づいて、前記血液検体から、異型リンパ球、異常リンパ球、及び芽球のいずれかである細胞を検出し、前記血液検体から前記細胞を検出した場合に、前記第２蛍光信号及び前記第２散乱光信号に基づいて、前記血液検体から、異型リンパ球、異常リンパ球、及び芽球を区別して検出するように構成されていてもよい。
【００１０】
上記態様において、前記情報処理部は、前記血液検体から、異型リンパ球、異常リンパ球、及び芽球のいずれかである細胞を検出した場合に、血液検体から第２血液検体を分注し、第２測定試料を調製するように前記分注部及び前記試料調製部を制御するように構成されていてもよい。
【００１１】
上記態様において、前記情報処理部は、前記第１蛍光信号及び前記第１散乱光信号に基づいて、前記血液検体に含まれる白血球を複数の種類に分類すると共に、前記血液検体から、異型リンパ球、異常リンパ球、及び芽球のいずれかである細胞を検出するように構成されていてもよい。
【００１２】
上記態様において、前記情報処理部は、前記第１蛍光信号及び前記第１散乱光信号に基づき、所定範囲の蛍光強度及び散乱光強度を示す細胞を、異型リンパ球、異常リンパ球、及び芽球のいずれかである細胞として検出するように構成されていてもよい。
【００１３】
上記態様において、前記所定範囲の蛍光強度は、正常リンパ球から得られる蛍光強度よりも大きくてもよい。
【００１４】
上記態様において、前記情報処理部は、前記所定範囲の蛍光強度及び散乱光強度を示す細胞の数を反映した値を取得し、取得した値と所定の閾値とを比較することにより、前記所定範囲の蛍光強度及び散乱光強度を示す細胞を検出するように構成されていてもよい。
【００１５】
上記態様において、前記情報処理部は、前記第２蛍光信号に基づき、所定範囲の蛍光強度を示す細胞を、異常リンパ球として検出するように構成されていてもよい。
【００１６】
上記態様において、前記所定範囲の蛍光強度は、正常リンパ球から得られる蛍光強度よりも大きくてもよい。
【００１７】
上記態様において、前記情報処理部は、前記所定範囲の蛍光強度を示す細胞の数を反映した値を取得し、取得した値と所定の閾値とを比較することにより、前記所定範囲の蛍光強度を示す細胞を検出するように構成されていてもよい。
【００１８】
上記態様において、前記受光部は、前記光源により光が前記第２測定試料に照射されたときに生じる前方散乱光及び側方散乱光を受光して、受光された前方散乱光に関する前方散乱光信号及び受光された側方散乱光に関する側方散乱光信号を含む前記第２散乱光信号を出力するように構成されており、前記情報処理部は、前記前方散乱光信号及び前記側方散乱光信号に基づき、所定範囲の前方散乱光強度及び側方散乱光強度を示す細胞を、芽球として検出するように構成されていてもよい。
【００１９】
上記態様において、前記情報処理部は、前記第２蛍光信号及び前記第２散乱光信号に基づいて、前記血液検体から異常リンパ球及び芽球が検出されなかった場合に、前記血液検体から異型リンパ球を検出するように構成されていてもよい。
【００２０】
本発明の他の態様の血液分析装置は、血液検体から第１血液検体と第２血液検体とを分注する分注部と、前記分注部によって分注された第１血液検体と、核酸を染める第１蛍光色素と、カチオン性界面活性剤を含む第１溶血剤とを混合して第１測定試料を調製し、前記分注部によって分注された第２血液検体と、核酸を染める第２蛍光色素と、カチオン性界面活性剤を含まず他の界面活性剤を含む第２溶血剤とを混合して第２測定試料を調製する試料調製部と、前記試料調製部によって調製された第１測定試料及び第２測定試料のそれぞれに光を照射する光源と、前記光源により光が前記第１測定試料に照射されたときに生じる蛍光及び散乱光を受光して、受光された蛍光に関する第１蛍光信号及び受光された散乱光に関する第１散乱光信号を出力し、前記光源により光が前記第２測定試料に照射されたときに生じる蛍光及び散乱光を受光して、受光された蛍光に関する第２蛍光信号及び受光された散乱光に関する第２散乱光信号を出力する受光部と、前記第１蛍光信号及び前記第１散乱光信号、並びに前記第２蛍光信号及び前記第２散乱光信号に基づいて、前記血液検体から反応性の異常単核球及び腫瘍性の異常単核球を区別して検出する情報処理部と、前記情報処理部による検出結果に基づく出力を行う出力部と、を備える。
【００２１】
上記態様において、前記情報処理部は、前記第１蛍光信号及び前記第１散乱光信号に基づいて、前記血液検体から異常単核球を検出し、前記血液検体から前記異常単核球を検出した場合に、前記第２蛍光信号及び前記第２散乱光信号に基づいて、前記血液検体から反応性の異常単核球及び腫瘍性の異常単核球を区別して検出するように構成されていてもよい。
【００２２】
上記態様において、前記情報処理部は、前記第１蛍光信号及び前記第１散乱光信号に基づいて、前記血液検体に含まれる白血球を複数の種類に分類すると共に、前記血液検体から異常単核球を検出するように構成されていてもよい。
【００２３】
上記態様において、前記情報処理部は、前記第１蛍光信号及び前記第１散乱光信号に基づき、所定範囲の蛍光強度及び散乱光強度を示す細胞を、異常単核球として検出するように構成されていてもよい。
【００２４】
本発明の一の態様の血液分析方法は、血液検体から第１血液検体と第２血液検体とを分注するステップと、分注された第１血液検体と、核酸を染める第１蛍光色素と、カチオン性界面活性剤を含む第１溶血剤とを混合して第１測定試料を調製するステップと、調製された第１測定試料に光を照射するステップと、光が前記第１測定試料に照射されたときに生じる蛍光及び散乱光を受光して、受光された蛍光に関する第１蛍光信号及び受光された散乱光に関する第１散乱光信号を取得するステップと、分注された第２血液検体と、核酸を染める第２蛍光色素と、カチオン性界面活性剤を含まず他の界面活性剤を含む第２溶血剤とを混合して第２測定試料を調製するステップと、調製された第２測定試料に光を照射するステップと、光が前記第２測定試料に照射されたときに生じる蛍光及び散乱光を受光して、受光された蛍光に関する第２蛍光信号及び受光された散乱光に関する第２散乱光信号を取得するステップと、前記第１蛍光信号及び前記第１散乱光信号並びに前記第２蛍光信号及び前記第２散乱光信号に基づいて、前記血液検体から異型リンパ球、異常リンパ球、及び芽球を区別して検出するステップと、検出結果に基づく出力を行うステップと、を有する。
【００２５】
本発明の一の態様のコンピュータプログラムは、通信部と、出力部とを備えるコンピュータに、血液検体から分注された第１血液検体と、核酸を染める第１蛍光色素と、カチオン性界面活性剤を含む第１溶血剤とを混合して調製された第１測定試料に光を照射したときに生じる蛍光及び散乱光に関する第１蛍光信号及び第１散乱光信号を、前記通信部に受信させるステップと、血液検体から分注された第２血液検体と、核酸を染める第２蛍光色素と、カチオン性界面活性剤を含まず他の界面活性剤を含む第２溶血剤とを混合して調製された第２測定試料に光を照射したときに生じる蛍光及び散乱光に関する第２蛍光信号及び第２散乱光信号を、前記通信部に受信させるステップと、前記通信部により受信された前記第１蛍光信号及び前記第１散乱光信号、並びに前記第２蛍光信号及び前記第２散乱光信号に基づいて、前記血液検体から異型リンパ球、異常リンパ球、及び芽球を区別して検出するステップと、検出結果に基づく情報を、前記出力部に出力させるステップと、を実行させる。
【発明の効果】
【００２６】
本発明に係る血液分析装置、血液分析方法、及びコンピュータプログラムによれば、異常リンパ球、芽球、及び異型リンパ球を区別して検出することが可能となる。また、本発明に係る血液分析装置によれば、反応性の異常単核球および腫瘍性の異常単核球を区別して検出することが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】実施の形態に係る血液分析装置の外観を示す斜視図。
【図２】実施の形態に係る測定ユニットの構成を示すブロック図。
【図３】光学検出器の概要構成を示す模式図。
【図４】実施の形態に係る情報処理ユニットの構成を示すブロック図。
【図５】実施の形態に係る血液分析装置の検体分析動作の手順を示すフローチャート。
【図６】実施の形態に係る血液分析装置の第１測定工程での動作手順を示すフローチャート。
【図７】実施の形態に係る血液分析装置の第１データ処理の手順を示すフローチャート。
【図８】第１測定データにおける側方散乱光強度及び蛍光強度のスキャッタグラム。
【図９】実施の形態に係る血液分析装置の第２測定工程での動作手順を示すフローチャート。
【図１０】実施の形態に係る血液分析装置の第２データ処理の手順を示すフローチャート。
【図１１】第２測定データにおける前方散乱光強度及び蛍光強度のスキャッタグラム。
【図１２】第２測定データにおける側方散乱光強度及び蛍光強度のスキャッタグラム。
【図１３】第２測定データにおける前方散乱光強度及び側方散乱光強度のスキャッタグラム。
【図１４Ａ】急性骨髄性白血病患者から採取した血液検体を測定したときのスキャッタグラムの例。
【図１４Ｂ】慢性リンパ性白血病患者から採取した血液検体を測定したときのスキャッタグラムの例。
【図１４Ｃ】異型リンパ球を含有する血液検体を測定したときのスキャッタグラムの例。
【図１４Ｄ】正常な血液検体を測定したときのスキャッタグラムの例。
【図１５】実施の形態に係る血液分析装置の分析結果画面の一例を示す図。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
以下、本発明の好ましい実施の形態を、図面を参照しながら説明する。
【００２９】
［血液分析装置の構成］
図１は、本実施の形態に係る血液分析装置の外観を示す斜視図である。本実施の形態に係る血液分析装置１は、血液検体に含まれる白血球、赤血球、血小板等を検出し、各血球を計数する多項目血球分析装置である。図１に示すように、血液分析装置１は、測定ユニット２と、測定ユニット２の前面側に配置された検体搬送ユニット４と、測定ユニット２及び検体搬送ユニット４を制御可能な情報処理ユニット５とを備えている。
【００３０】
患者から採取された末梢血である血液検体は、検体容器（採血管）に収容される。複数の検体容器がサンプルラックに保持され、このサンプルラックが検体搬送ユニット４により搬送されて、血液検体が測定ユニット２へ供給される。
【００３１】
＜測定ユニットの構成＞
測定ユニットの構成について説明する。図２は、測定ユニットの構成を示すブロック図である。図２に示すように、測定ユニット２は、検体である血液を検体容器（採血管）Ｔから吸引する検体吸引部２１と、検体吸引部２１により吸引した血液から測定に用いられる測定試料を調製する試料調製部２２と、試料調製部２２により調製された測定試料から血球を検出する検出部２３とを有している。また、測定ユニット２は、検体搬送ユニット４のラック搬送部４３によって搬送されたサンプルラックＬに収容された検体容器Ｔを測定ユニット２の内部に取り込むための取込口（図１参照）と、サンプルラックＬから検体容器Ｔを測定ユニット２の内部に取り込み、検体吸引部２１による吸引位置まで検体容器Ｔを搬送する検体容器搬送部２５とをさらに有している。
【００３２】
図２に示すように、検体吸引部２１は、吸引管２１１を有している。また、検体吸引部２１はシリンジポンプを備えている。また、吸引管２１１は、鉛直方向に移動可能であり、下方に移動されることにより、吸引位置まで搬送された検体容器Ｔ内の血液を吸引するように構成されている。
【００３３】
試料調製部２２は、第１混合チャンバＭＣ１及び第２混合チャンバＭＣ２を備えている。吸引管２１１は、シリンジポンプによって検体容器Ｔから所定量の全血検体を吸引し、吸引された検体は、第１混合チャンバＭＣ１と第２混合チャンバＭＣ２の位置へ移送され、前記シリンジポンプによって、それぞれのチャンバＭＣ１，ＭＣ２へ所定量の全血検体を分配供給する。また、試料調製部２２は、第１混合チャンバＭＣ１及び第２混合チャンバＭＣ２を加温するためのヒータＨを備えている。
【００３４】
試料調製部２２は、第１試薬を収容する試薬容器２２１ａ、第２試薬を収容する試薬容器２２１ｂ、第３試薬を収容する試薬容器２２２ａ、第４試薬を収容する試薬容器２２２ｂ、及びシース液（希釈液）を収容する試薬容器２２３にチューブを介して接続されている。また、試料調製部２２はコンプレッサに接続されており、当該コンプレッサにより発生される圧力により試薬容器２２１ａ，２２１ｂ，２２２ａ，２２２ｂ，２２３からそれぞれの試薬を分取することが可能となっている。
【００３５】
第１試薬は、白血球を少なくとも４つのサブクラスに分類するための溶血剤である。この溶血剤としては、界面活性剤の中でも特に溶血力が強いといわれているカチオン性界面活性剤を含むものを使用する。この溶血剤を使用することで、赤血球を溶血させ、正常な白血球及び異常単核球（異型リンパ球、異常リンパ球、及び芽球）の細胞膜に損傷を与えることができる。このため、正常白血球及び異常単核球は、後述する蛍光色素により染色されやすくなる。
【００３６】
ここで、カチオン性界面活性剤としては、４級アンモニウム塩型界面活性剤又はピリジニウム塩型界面活性剤が好ましい。より具体的には、構造式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表される全炭素数９〜３０の界面活性剤が挙げられる。
【化１】
【化２】
（式（Ｉ）及び（ＩＩ）において、Ｒ１は炭素数６〜１８のアルキル基又はアルケニル基、Ｒ２およびＲ３は炭素数１〜４のアルキル基又はアルケニル基、Ｒ４は炭素数１〜４のアルキルおよびアルケニル基又はベンジル基、Ｘはハロゲン原子である。）
【００３７】
Ｒ１としては、炭素数が６、８、１０、１２及び１４のアルキル基又はアルケニル基が好ましく、特に直鎖のアルキル基が好ましい。より具体的なＲ１としてはオクチル基、デシル基、及びドデシル基が挙げられる。また、Ｒ２およびＲ３としては、特にメチル基、エチル基、及びプロピル基が好ましい。また、Ｒ４としては、メチル基、エチル基、及びプロピル基が好ましい。
【００３８】
また、第１試薬にはノニオン性界面活性剤をさらに含んでもよい。ノニオン性界面活性剤としては、以下の構造式（ＩＩＩ）で示されるポリオキシエチレン系ノニオン界面活性剤が好ましい。
【化３】
（式中、Ｒ１は炭素数８〜２５のアルキル、アルケニル又はアルキニル基；Ｒ２はＯ、
【化４】
またはＣＯＯ；ｎは１０〜５０の整数を表す。）で表されるポリオキシエチレン系ノニオン界面活性剤を用いるのが、好ましい。
【００３９】
なお、第１試薬は、上述のカチオン性界面活性剤及びノニオン性界面活性剤以外の成分を含むことができる。溶血剤に含むことができるその他の成分としては、例えば、有機酸、緩衝剤等が挙げられる。
【００４０】
ここで、有機酸としては、分子内に少なくとも１つの芳香環を有する有機酸又はその塩が好ましい。より具体的には、安息香酸、フタル酸、馬尿酸、サリチル酸、p-アミノベンゼンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、及びそれらのその塩等が挙げられる。
【００４１】
また、緩衝剤としては、例えば、クエン酸塩、ＨＥＰＥＳ及びリン酸塩等が挙げられる。なお、緩衝剤としては、溶血剤のｐＨを、４．５〜１１．０、好ましくは５．０〜１０．０に保つ緩衝剤が好ましい。
【００４２】
上述した第１試薬を使用することで、正常白血球及び異常単核球は、後述する蛍光色素により染色されやすくなり、さらに正常白血球は、リンパ球、単球、好酸球、好酸球以外の顆粒球の間で大きさ等に差異が生じるようになる。このため、血球由来の蛍光信号（蛍光強度）と散乱光信号（散乱光強度）に基づいて、正常白血球を少なくとも４つのサブクラスに分類すると共に、異常単核球を検出することができる。
【００４３】
また、第１試薬としては、市販の白血球分類用の溶血試薬を用いることもできる。市販の白血球分類用の溶血試薬としては、例えば、シスメックス（株）製のストマトライザー４ＤＬが挙げられる。ストマトライザー４ＤＬは、上述のカチオン性界面活性剤とノニオン性界面活性剤と有機酸とを含み、上述のｐＨ範囲内の溶血剤である。
【００４４】
第２試薬は、血液試料中の有核細胞を蛍光染色するための試薬である。かかる第２試薬には、核酸を染色するための蛍光色素が含有されている。このような色素を用いることにより、核酸を持たない赤血球はほとんど染色されず、核酸を有する白血球及び有核赤血球等の有核の血球が染色される。なお、核酸を染色できる蛍光色素は、光源から照射される光によって適宜選択することができる。
【００４５】
具体的な核酸を染色できる蛍光色素としては、例えば、プロピジウムアイオダイド、エチジウムブロマイド、エチジウム−アクリジンヘテロダイマー、エチジウムジアジド、エチジウムホモダイマー−１、エチジウムホモダイマー−２、エチジウムモノアジド、トリメチレンビス［［３‐［［４‐［［（３‐メチルベンゾチアゾール‐３‐イウム）‐２‐イル］メチレン］‐１，４‐ジヒドロキノリン］‐１‐イル］プロピル］ジメチルアミニウム］・テトラヨージド（ＴＯＴＯ−１）、４‐［（３‐メチルベンゾチアゾール‐２（３Ｈ）‐イリデン）メチル］‐１‐［３‐（トリメチルアミニオ）プロピル］キノリニウム・ジヨージド（ＴＯ−ＰＲＯ−１）、Ｎ，Ｎ，Ｎ'，Ｎ'‐テトラメチル‐Ｎ，Ｎ'‐ビス［３‐［４‐［３‐［（３‐メチルベンゾチアゾール‐３‐イウム）‐２‐イル］‐２‐プロペニリデン］‐１，４‐ジヒドロキノリン‐１‐イル］プロピル］‐１，３‐プロパンジアミニウム・テトラヨージド（ＴＯＴＯ−３）、又は２‐［３‐［［１‐［３‐（トリメチルアミニオ）プロピル］‐１，４‐ジヒドロキノリン］‐４‐イリデン］‐１‐プロペニル］‐３‐メチルベンゾチアゾール‐３‐イウム・ジヨージド（ＴＯ−ＰＲＯ−３）、及び以下の構造式（ＩＶ）で示される蛍光色素が挙げられる。この中でも、以下構造式（ＩＶ）で示される蛍光色素が好ましい。
【００４６】
【化５】
（式中、Ｒ１及びＲ４は、水素原子、アルキル基、ヒドロキシ基を有するアルキル基、エーテル基を有するアルキル基、エステル基を有するアルキル基、又は置換基を有しても良いベンジル基であり、；Ｒ２及びＲ３は、水素原子、ヒドロキシル基、ハロゲン、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、又はアルコキシ基であり；Ｚは硫黄原子、酸素原子、又はメチル基を有する炭素原子であり；ｎは０，１，２又は３であり；Ｘ−はアニオンである。）
【００４７】
ここで、構造式（ＩＶ）中、Ｒ１及びＲ４のいずれか一方が炭素数６〜１８のアルキル基の場合、他方は水素原子又は炭素数６未満のアルキル基であることが好ましい。炭素数が６〜１８のアルキル基としては、炭素数６、８又は１０のアルキル基が好ましい。Ｒ１及びＲ４のベンジル基の置換基としては、炭素数１〜２０のアルキル基、炭素数２〜２０のアルケニル基、又は炭素数２〜２０のアルキニル基が挙げられ、特にメチル基又はエチル基が好ましい。Ｒ２及びＲ３のアルケニル基としては、炭素数２〜２０のアルケニル基が挙げられる。Ｒ２及びＲ３のアルコキシ基としては、炭素数１〜２０のアルコキシ基が挙げられ、特にメトキシ基又はエトキシ基が好ましい。Ｘ−におけるアニオンとしては、Ｆ−、Ｃｌ−、Ｂｒ−、Ｉ−のようなハロゲンイオン、ＣＦ３ＳＯ３−、ＢＦ４−などが挙げられる。
【００４８】
上記の核酸を染色できる蛍光色素の第２試薬中での濃度は、蛍光色素の種類により適宜設定することができる。例えば、構造式（ＩＶ）で示される蛍光色素の濃度としては、０．２〜０．６ｐｇ／μＬが好ましく、特に０．３〜０．５ｐｇ／μＬが好ましい。なお、第２試薬は、核酸を染色できる蛍光色素を１種類又は２種類以上含むこともできる。
【００４９】
また、第２試薬としては、市販の白血球分類用の染色試薬を用いることもできる。市販の白血球分類用の染色試薬としては、例えば、シスメックス（株）製のストマトライザー４ＤＳが挙げられる。ストマトライザー４ＤＳは、上述の構造式（ＩＶ）で示される蛍光色素を含む染色試薬である。
【００５０】
シース液は後述するシースフローセルへと供給される液体である。かかるシース液は、希釈液としても使用される。このシース液としては、例えばシスメックス（株）製セルパック（ＩＩ）が挙げられる。
【００５１】
第３試薬は、異常リンパ球、異型リンパ球、及び芽球を区別して検出するため溶血剤である。第３試薬としては、ノニオン性界面活性剤を含み、カチオン性界面活性剤を実質的に含まないものが使用できる。この溶血剤を使用することで、赤血球を溶血し、正常白血球及び異常単核球（異型リンパ球、異常リンパ球、及び芽球）の細胞膜に損傷を与えることができる。このため、正常白血球及び異常単核球は後述する蛍光色素により染色されやすくなる。
【００５２】
なお、「異常リンパ球（abnormal lymphocyte）」とは腫瘍性の成熟リンパ球を指す。この異常リンパ球は、慢性リンパ性白血病、悪性リンパ腫等の疾患のある患者の末梢血中に出現する。また、「異型リンパ球（atypical lymphocyte）」とは、抗原刺激により活性化したリンパ球で、刺激に反応して形態変化したものを指す。この異型リンパ球は、ウイルス感染症、薬物アレルギー等の疾患のある患者の末梢血中に出現する。異型リンパ球は反応性の異常単核球である。
【００５３】
また、「芽球」とは、骨髄芽球（myeloblast）及びリンパ芽球（lymphblast）等の未成熟な白血球である腫瘍性の幼若単核球を指す。骨髄芽球は、急性骨髄性白血病の患者の末梢血中に出現し、リンパ芽球は、急性リンパ性白血病の患者の末梢血中に出現する。なお、異常リンパ球および芽球を含む腫瘍性の異常単核球は、造血器官の腫瘍に起因する異常単核球である。
【００５４】
ここで、ノニオン性界面活性剤としては、ポリオキシエチレン系ノニオン界面活性剤が好ましい。具体的なポリオキシエチレン系ノニオン界面活性剤としては、以下の構造式（Ｖ）
Ｒ１−Ｒ２−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｈ （Ｖ）
（式中、Ｒ１は炭素数９〜２５のアルキル基、アルケニル基又はアルキニル基であり、Ｒ２は−Ｏ−、−ＣＯＯ−又は
【化６】
であり、ｎは１０〜４０の整数である）
で示されるものが挙げられる。
【００５５】
上記の構造式（Ｖ）で表される具体的な界面活性剤としては、ポリオキシエチレン（１５）オレイルエーテル、ポリオキシエチレン（１５）セチルエーテル、ポリオキシエチレン（１６）オレイルエーテル、ポリオキシエチレン（２０）オレイルエーテル、ポリオキシエチレン（２０）ラウリルエーテル、ポリオキシエチレン（２０）ステアリルエーテル、ポリオキシエチレン（２０）セチルエーテルなど挙げられ、ポリオキシエチレン（２０）オレイルエーテルが好ましい。なお、第３試薬は、界面活性剤を１種類又は２種類以上含むことができる。
【００５６】
第３試薬に含まれる界面活性剤の濃度は、界面活性剤の種類、溶血剤の浸透圧等に応じて適宜選択できる。例えば、界面活性剤がポリオキシエチレンオレイルエーテルである場合、第３試薬に含まれる界面活性剤の濃度は、０．５〜５０．０ｇ／Ｌであり、好ましくは１．０〜２０．０ｇ／Ｌである。
【００５７】
なお、第３試薬は、溶血した赤血球を十分に収縮させて測定に影響をおよぼさないゴースト集団にするために、上述のノニオン性界面活性剤以外に可溶化剤を含むことができる。この可溶化剤は、ノニオン性界面活性剤による赤血球の溶血作用を補助するために用いられる。第３試薬に含まれる可溶化剤としてはアニオン性界面活性剤を用いることができ、サルコシン誘導体、コール酸誘導体、メチルグルカンアミド、ｎ−オクチルβ−グルコシド、シュークロースモノカプレート、Ｎ−ホルミルメチルロイシルアラニンなどが挙げられ、特にサルコシン誘導体が好ましい。なお、第３試薬は、可溶化剤を１種類又は２種類以上含むことができる。
【００５８】
サルコシン誘導体としては、以下の構造式（ＶＩ）
【化７】
（式中、Ｒ１はＣ１０−２２のアルキル基であり、ｎは１〜５である。）
で示される化合物及びその塩が挙げられる。具体的なサルコシン誘導体としては、Ｎ−ラウロイルサルコシン酸ナトリウム、ラウロイルメチルβ−アラニンナトリウム、ラウロイルサルコシンなどが挙げられ、特にＮ−ラウロイルサルコシン酸ナトリウムが好ましい。
【００５９】
コール酸誘導体としては、以下の構造式（ＶＩＩ）
【化８】
（式中、Ｒ１は水素原子又は水酸基である。）
で示される化合物及びその塩が挙げられる。具体的なコール酸誘導体としては、ＣＨＡＰＳ（３−［（３−コールアミドプロピル）ジメチルアンモニオ］−１−プロパンスルホネート）、ＣＨＡＰＳＯ（［（３−コールアミドプロピル）ジメチルアンモニオ］−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホネート）などが挙げられる。
【００６０】
メチルグルカンアミドとしては、以下の構造式（ＶＩＩＩ）
【化９】
（式中、ｎは５〜７である。）
で示される化合物が挙げられる。具体的なメチルグルカンアミドとしては、ＭＥＧＡ８（オクタノイル−Ｎ−メチルグルカミド）、ＭＥＧＡ９（ノナノイル−Ｎ−メチルグルカミド）、ＭＥＧＡ１０（デカノイル−Ｎ−メチルグルカミド）などが挙げられる。
【００６１】
第３試薬に含まれる可溶化剤の濃度は、用いる可溶化剤の種類に応じて適宜選択できる。例えば、可溶化剤としてサルコシン誘導体を用いる場合、第３試薬に含まれる可溶化剤の濃度は、０．０５〜３．０ｇ／Ｌであり、好ましくは０．１〜１．０ｇ／Ｌである。コール酸誘導体を用いる場合、第３試薬に含まれる可溶化剤の濃度は、０．１〜１０．０ｇ／Ｌであり、好ましくは０．２〜２．０ｇ／Ｌである。メチルグルカンアミドを用いる場合、第３試薬に含まれる可溶化剤の濃度は、１．０〜８．０ｇ／Ｌであり、好ましくは２．０〜６．０ｇ／Ｌである。ｎ−オクチルβ−グルコシド、シュークロースモノカプレート、Ｎ−ホルミルメチルロイシルアラニンを用いる場合、第３試薬に含まれる可溶化剤の濃度は、０．０１〜５０．０ｇ／Ｌであり、好ましくは０．０５〜３０．０ｇ／Ｌである。
【００６２】
第３試薬のｐＨは、５．０〜９．０が好ましく、より好ましくは６．５〜７．５、さらに好ましくは６．８〜７．３である。第３試薬のｐＨは、緩衝剤又はｐＨ調整剤で調整できる。緩衝剤としては、例えばＨＥＰＥＳ、ＭＯＰＳ（3-morpholinopropanesulfonic acid）又はＭＯＰＳＯ（2-Hydroxy-3-morpholinopropanesulfonic acid）などのグッド緩衝剤、リン酸緩衝剤などが挙げられる。ｐＨ調整剤としては、水酸化ナトリウム、塩酸などが挙げられる。
【００６３】
第３試薬の浸透圧は、上述の界面活性剤の種類及び第３試薬中の濃度に応じて、適宜設定することができる。具体的な第３試薬の浸透圧としては、１０〜６００ｍＯｓｍ／ｋｇが挙げられる。また、第３試薬の浸透圧は、糖類、アミノ酸、塩化ナトリウムなどを第３試薬に添加することにより調整してもよい。具体的な糖類としては、単糖類、多糖類、糖アルコールなどが挙げられる。単糖類としては、グルコース、フルクトースが好ましい。多糖類としては、アラビノースが好ましい。糖アルコールとしては、キシリトール、ソルビトール、マンニトール、リビトールが好ましい。ここで、第３試薬に添加する糖類としては、糖アルコールが好ましく、特にキシリトールが好ましい。キシリトールを第３試薬に添加する場合、キシリトールの第３試薬中の濃度は、１．０〜７５．０ｇ／Ｌ、特に２０．０〜５０．０ｇ／Ｌが好ましい。具体的なアミノ酸としては、バリン、プロリン、グリシン、アラニンなどが挙げられ、特にグリシン、アラニンが好ましい。グリシンを第３試薬に添加する場合、グリシンの第３試薬中の濃度は、１．０〜５０．０ｇ／Ｌ、特に１０．０〜３０．０ｇ／Ｌが好ましい。
【００６４】
また、第３試薬の電気伝導度は、０．０１〜３ｍＳ／ｃｍが好ましく、特に０．１〜２ｍＳ／ｃｍが好ましい。さらに第３試薬には、キレート剤又は防腐剤などを添加することもできる。キレート剤としては、ＥＤＴＡ−２Ｋ、ＥＤＴＡ−３Ｎａなどが挙げられる。防腐剤としては、Ｐｒｏｘｅｌ ＧＸＬ（Avecia社製）、マテリアルＴＫＭ−Ａ（株式会社エーピーアイ コーポレーション）などが挙げられる。
【００６５】
上述した第３試薬を使用することで、正常白血球及び異常単核球は、後述する蛍光色素により染色されやすくなり、さらに異常単核球は、異常リンパ球、異型リンパ球、芽球の間で染色の度合い及び細胞の大きさ等に差異が生じる。このため、血球由来の蛍光信号（蛍光強度）と散乱光信号（散乱光強度）に基づいて、異常単核球を異常リンパ球、異型リンパ球、芽球に区別して検出することができる。
【００６６】
第４試薬は、血液試料中の有核細胞を蛍光染色するための試薬である。かかる第４試薬には、核酸を染色できる蛍光色素が含有されている。この蛍光色素としては、核酸を蛍光染色できるものであれば特に限定されない。このような色素を用いることにより、核酸を持たない赤血球はほとんど染色されず、核酸を有する異常リンパ球等の有核の血球は染色される。なお、核酸を染色できる蛍光色素は、光源から照射される光によって適宜選択することができる。核酸を染色できる蛍光色素としては、例えば、プロピジウムアイオダイド、エチジウムブロマイド、エチジウム−アクリジンヘテロダイマー、エチジウムジアジド、エチジウムホモダイマー−１、エチジウムホモダイマー−２、エチジウムモノアジド、トリメチレンビス［［３‐［［４‐［［（３‐メチルベンゾチアゾール‐３‐イウム）‐２‐イル］メチレン］‐１，４‐ジヒドロキノリン］‐１‐イル］プロピル］ジメチルアミニウム］・テトラヨージド（ＴＯＴＯ−１）、４‐［（３‐メチルベンゾチアゾール‐２（３Ｈ）‐イリデン）メチル］‐１‐［３‐（トリメチルアミニオ）プロピル］キノリニウム・ジヨージド（ＴＯ−ＰＲＯ−１）、Ｎ，Ｎ，Ｎ'，Ｎ'‐テトラメチル‐Ｎ，Ｎ'‐ビス［３‐［４‐［３‐［（３‐メチルベンゾチアゾール‐３‐イウム）‐２‐イル］‐２‐プロペニリデン］‐１，４‐ジヒドロキノリン‐１‐イル］プロピル］‐１，３‐プロパンジアミニウム・テトラヨージド（ＴＯＴＯ−３）、又は２‐［３‐［［１‐［３‐（トリメチルアミニオ）プロピル］‐１，４‐ジヒドロキノリン］‐４‐イリデン］‐１‐プロペニル］‐３‐メチルベンゾチアゾール‐３‐イウム・ジヨージド（ＴＯ−ＰＲＯ−３）、及び以下の構造式（ＩＸ）〜（ＸＸＩＩ）で示される蛍光色素が挙げられる。
【００６７】
＜構造式（ＩＸ）＞
【化１０】
（式中、Ｒ１及びＲ２は、低級アルキル基であり；ｎは１又は２であり；Ｘ−はアニオンであり；Ｚは硫黄原子、酸素原子、又は低級アルキル基で置換された炭素原子である）。
【００６８】
構造式（ＩＸ）中、低級アルキル基とは炭素数１〜６の直鎖又は分枝のアルキル基である。具体的な低級アルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、イソブチル基、sec-ブチル基、tert-ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基などが挙げられ、メチル基、エチル基が好ましい。また、Ｚとしては、硫黄原子が好ましい。Ｘ−におけるアニオンは、ハロゲンイオン（フッ素、塩素、臭素又はヨウ素イオン）、ハロゲン化ホウ素イオン（ＢＦ４−、ＢＣｌ４−、ＢＢｒ４−など）、リン化合物イオン、ハロゲン酸素酸イオン、フルオロ硫酸イオン、メチル硫酸イオン、芳香環ハロゲン或いはハロゲンをもつアルキル基を置換基として有するテトラフェニルホウ素化合物イオンなどが挙げられ、ヨウ素イオンが好ましい。
【００６９】
構造式（ＩＸ）で示されるもののうち、特に好ましい核酸を染色できる蛍光色素は、次の構造式（Ｘ）で示されるＮＫ−３２１である。
【化１１】
【００７０】
＜構造式（ＸＩ）＞
【化１２】
（式中、Ｒ１及びＲ２は、低級アルキル基であり；ｎは１又は２であり；Ｘ−はアニオンである）。
【００７１】
構造式（ＸＩ）における低級アルキル基、並びにＸ−のアニオンは、構造式（IＸ）と同様である。
【００７２】
構造式（ＸＩ）で示されるもののうち、特に好ましい核酸を染色できる蛍光色素は、次の構造式（ＸＩＩ）により示される。
【化１３】
【００７３】
＜構造式（ＸＩＩＩ）＞
【化１４】
（式中、Ｒ１は水素原子又は低級アルキル基であり；Ｒ２及びＲ３は水素原子、低級アルキル基又は低級アルコキシ基であり；Ｒ４は水素原子、アシル基又は低級アルキル基であり；Ｒ５は水素原子又は置換されていてもよい低級アルキル基であり；Ｚは硫黄原子、酸素原子、又は低級アルキル基で置換された炭素原子であり；ｎは１又は２であり；Ｘ−はアニオンである）。
【００７４】
構造式（ＸＩＩＩ）における低級アルキル基、並びにＸ−のアニオンは、構造式（ＩＸ）と同様である。低級アルコキシ基は、炭素数１〜６のアルコキシ基を示す。具体的な低級アルコキシ基としては、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基等が挙げられ、特にメトキシ基、エトキシ基が好ましい。アシル基としては、脂肪族カルボン酸から誘導されたアシル基が好ましい。具体的なアシル基としては、アセチル基、プロピオニル基等が挙げられ、特にアセチル基が好ましい。置換されていてもよい低級アルキル基の置換基としては、水酸基及びハロゲン原子（フッ素、塩素、臭素又はヨウ素）が挙げられる。置換されていてもよい低級アルキル基は、１〜３個の置換基で置換されることができる。置換されていてもよい低級アルキル基としては、特に１個の水酸基で置換された低級アルキル基が好ましい。なお、Ｚとしては硫黄原子が好ましく、Ｘ−は、臭素イオン又はＢＦ４−が好ましい。
【００７５】
構造式（ＸＩＩＩ）で示されるもののうち、特に好ましい核酸を染色できる蛍光色素は、以下の３つの構造式（ＸＩＶ）〜（ＸＶＩ）により示される。
【化１５】
【００７６】
【化１６】
【００７７】
【化１７】
【００７８】
＜構造式（ＸＶＩＩ）＞
【化１８】
（式中、Ｘ１及びＸ２は、独立してＣｌ又はＩである）
【００７９】
＜構造式（ＸＶＩＩＩ）＞
【化１９】
【００８０】
＜構造式（ＸＩＸ）＞（ＮＫ−１５７０）
【化２０】
【００８１】
＜構造式（ＸＸ）＞（ＮＫ−１０４９）
【化２１】
【００８２】
＜構造式（ＸＸＩ）＞（ＮＫ−９８）
【化２２】
【００８３】
＜構造式（ＸＸＩＩ）＞（ＮＫ−１４１）。
【化２３】
【００８４】
上記の核酸を染色できる蛍光色素のうち、第４試薬に含まれる特に好ましい蛍光色素は、次の構造式（ＸＸＩＩＩ）で示されるＮＫ−３２１である。
【化２４】
【００８５】
上記の核酸を染色できる蛍光色素の第４試薬中の濃度は、１０〜５００ｍｇ／Ｌが好ましく、特に３０〜１００ｍｇ／Ｌが好ましい。なお、第４試薬は、核酸を染色できる蛍光色素を１種類又は２種類以上含むことができる。
【００８６】
検出部２３は、第１測定及び第２測定を行うことができる光学検出器Ｄを有している。第１測定では、血液検体中に存在する白血球（正常白血球）がＬＹＭＰＨ（リンパ球）、ＥＯ（好酸球）、ＮＥＵＴ（好中球）とＢＡＳＯ（好塩基球）とによってなる血球群、及びＭＯＮＯ（単球）の４つのサブクラスに分類される。かかる第１測定においては、血液検体、第１試薬、及び第２試薬が混合された測定試料（第１測定試料）が光学検出器Ｄに供給され、このときに光学検出器Ｄによって光学情報（蛍光強度、前方散乱光強度及び側方散乱光強度）が検出される。第１測定によって得られた光学情報は情報処理ユニット５に供給され、これによって血液検体中の正常白血球が４分類される。また、情報処理ユニット３は、第１測定によって得られた光学情報に基づいて、後述するように血液検体中に異常単核球（異常リンパ球、異型リンパ球、及び芽球からなるグループ）を検出することができる。
【００８７】
第２測定では、血液検体中の異常リンパ球及び芽球が検出される。かかる第２測定においては、血液検体、第３試薬、及び第４試薬が混合された測定試料（第２測定試料）が光学検出器Ｄに供給され、このときに光学検出器Ｄによって光学情報（蛍光強度、前方散乱光強度及び側方散乱光強度）が検出される。第２測定によって得られた光学情報は情報処理ユニット５に供給され、これによって第１測定によって検出された血液検体中の異常単核球が異常リンパ球、異型リンパ球、及び芽球の何れであるかが特定される。
【００８８】
図３は、光学検出器Ｄの概要構成を示している。この光学検出器Ｄは、フローセル２３１に測定試料及びシース液を送り込み、フローセル２３１中に液流を発生させ、フローセル２３１内を通過する液流に含まれる血球に半導体レーザ光を照射して測定するものであり、シースフロー系２３２、ビームスポット形成系２３３、前方散乱光受光系２３４、側方散乱光受光系２３５、蛍光受光系２３６を有している。
【００８９】
シースフロー系２３２は、フローセル２３１内に測定試料をシース液に包まれた状態で流すように構成されている。ビームスポット形成系２３３は、半導体レーザ２３７から照射された光が、コリメータレンズ２３８とコンデンサレンズ２３９とを通って、フローセル２３１に照射されるよう構成されている。また、ビームスポット形成系２３３は、ビームストッパ２４０も備えている。
【００９０】
前方散乱光受光系２３４は、前方への散乱光を前方集光レンズ２４１によって集光し、ピンホール２４２を通った光をフォトダイオード（前方散乱光受光部）２４３で受光するように構成されている。
【００９１】
側方散乱光受光系２３５は、側方への散乱光を側方集光レンズ２４４にて集光するとともに、一部の光をダイクロイックミラー２４５で反射させ、フォトダイオード（側方散乱光受光部）２４６で受光するよう構成されている。
【００９２】
光散乱は、光の進行方向に血球のような粒子が障害物として存在すると、粒子により光がその進行方向を変えることによって生じる現象である。この散乱光を検出することによって、粒子の大きさ及び材質に関する情報を得ることができる。特に、前方散乱光からは、粒子（血球）の大きさに関する情報を得ることができる。また、側方散乱光からは、粒子内部の情報を得ることができる。血球粒子にレーザ光が照射された場合、側方散乱光強度は細胞内部の複雑さ（核の形状、大きさ、密度及び顆粒の量）に依存する。したがって、これら散乱光強度は、白血球の分類、異常単核球の検出、及び芽球の検出その他の測定に利用することができる。
【００９３】
蛍光受光系２３６は、ダイクロイックミラー２４５を透過した光をさらに分光フィルタ２４７に通し、アバランシェフォトダイオード（蛍光受光部）２４８で受光するよう構成されている。
【００９４】
蛍光物質により染色された血球に光を照射すると、照射した光の波長より長い波長の光を発する。蛍光の強度はよく染色されていれば強くなり、この蛍光強度を測定することによって血球の染色度合いに関する情報を得ることができる。したがって、蛍光強度の差は、白血球の分類、異常単核球の検出、異常リンパ球の検出、芽球の検出等に利用することができる。
【００９５】
次に、図２に戻って、検体容器搬送部２５の構成について説明する。検体容器搬送部２５は、検体容器Ｔを把持可能なハンド部２５ａを備えている。ハンド部２５ａは、互いに対向して配置された一対の把持部材を備えており、この把持部材を互いに近接及び離反させることが可能である。かかる把持部材を、検体容器Ｔを挟んだ状態で近接させることにより、検体容器Ｔを把持することができる。また、検体容器搬送部２５は、ハンド部２５ａを上下方向及び前後方向（Ｙ方向）に移動させることができ、さらに、ハンド部２５ａを揺動させることができる。これにより、サンプルラックＬに収容され、検体供給位置４３ａに位置した検体容器Ｔをハンド部２５ａにより把持し、その状態でハンド部２５ａを上方に移動させることによりサンプルラックＬから検体容器Ｔを抜き出し、ハンド部２５ａを揺動させることにより、検体容器Ｔ内の検体を撹拌することができる。
【００９６】
また、検体容器搬送部２５は、検体容器Ｔを挿入可能な穴部を有する検体容器セット部２５ｂを備えている。上述したハンド部２５ａによって把持された検体容器Ｔは、撹拌完了後移動され、把持した検体容器Ｔを検体容器セット部２５ｂの穴部に挿入する。その後、把持部材を離反させることにより、ハンド部２５ａから検体容器Ｔが開放され、検体容器セット部２５ｂに検体容器Ｔがセットされる。かかる検体容器セット部２５ｂは、ステッピングモータの動力によって、図中Ｙ１及びＹ２方向へ水平移動可能である。
【００９７】
測定ユニット２の内部には、バーコード読取部２６が設けられている。検体容器セット部２５ｂは、バーコード読取部２６の近傍のバーコード読取位置２６ａ及び検体吸引部２１による吸引位置へ移動可能である。検体容器セット部２５ｂがバーコード読取位置２６ａへ移動したときには、バーコード読取部２６により検体バーコードが読み取られる。また、検体容器セット部２５ｂが吸引位置へ移動したときには、検体吸引部２１により、セットされた検体容器Ｔから検体が吸引される。
【００９８】
＜情報処理ユニットの構成＞
次に、情報処理ユニット５の構成について説明する。情報処理ユニット５は、コンピュータにより構成されている。図４は、情報処理ユニット５の構成を示すブロック図である。情報処理ユニット５は、コンピュータ５ａによって実現される。図４に示すように、コンピュータ５ａは、本体５１と、画像表示部５２と、入力部５３とを備えている。本体５１は、ＣＰＵ５１ａ、ＲＯＭ５１ｂ、ＲＡＭ５１ｃ、ハードディスク５１ｄ、読出装置５１ｅ、入出力インタフェース５１ｆ、通信インタフェース５１ｇ、及び画像出力インタフェース５１ｈを備えており、ＣＰＵ５１ａ、ＲＯＭ５１ｂ、ＲＡＭ５１ｃ、ハードディスク５１ｄ、読出装置５１ｅ、入出力インタフェース５１ｆ、通信インタフェース５１ｇ、及び画像出力インタフェース５１ｈは、バス５１ｊによって接続されている。
【００９９】
ＣＰＵ５１ａは、ＲＡＭ５１ｃにロードされたコンピュータプログラムを実行することが可能である。そして、後述するような血液分析用並びに測定ユニット２及び検体搬送ユニット４の制御用のコンピュータプログラム５４ａを当該ＣＰＵ５１ａが実行することにより、コンピュータ５ａが情報処理ユニット５として機能する。
【０１００】
ハードディスク５１ｄは、オペレーティングシステム及びアプリケーションプログラム等、ＣＰＵ５１ａに実行させるための種々のコンピュータプログラム及び当該コンピュータプログラムの実行に用いられるデータがインストールされている。後述する処理をＣＰＵ５１ａに実行させるためのコンピュータプログラム５４ａも、このハードディスク５１ｄにインストールされている。また、このコンピュータプログラム５４ａは、イベントドリブン型のコンピュータプログラムである。
【０１０１】
読出装置５１ｅは、フレキシブルディスクドライブ、ＣＤ−ＲＯＭドライブ、またはＤＶＤ−ＲＯＭドライブ等によって構成されており、可搬型記録媒体５４に記録されたコンピュータプログラムまたはデータを読み出すことができる。また、可搬型記録媒体５４には、コンピュータを情報処理ユニット５として機能させるためのコンピュータプログラム５４ａが格納されており、コンピュータ５ａが当該可搬型記録媒体５４からコンピュータプログラム５４ａを読み出し、当該コンピュータプログラム５４ａをハードディスク５１ｄにインストールすることが可能である。
【０１０２】
また、ハードディスク５１ｄには、例えば米マイクロソフト社が製造販売するWindows（登録商標）等のマルチタスクオペレーティングシステムがインストールされている。以下の説明においては、本実施の形態に係るコンピュータプログラム５４ａは当該オペレーティングシステム上で動作するものとしている。
【０１０３】
入出力インタフェース５１ｆは、例えばUSB，IEEE1394，又はRS-232C等のシリアルインタフェース、SCSI，IDE，又は IEEE1284等のパラレルインタフェース、及びＤ／Ａ変換器、Ａ／Ｄ変換器等からなるアナログインタフェース等から構成されている。入出力インタフェース５１ｆには、キーボード及びマウスからなる入力部５３が接続されており、ユーザが当該入力部５３を使用することにより、コンピュータ５ａにデータを入力することが可能である。また、入出力インタフェース５１ｆは、測定ユニット２及び検体搬送ユニット４に接続されている。これにより、情報処理ユニット５は、測定ユニット２及び検体搬送ユニット４のそれぞれを制御可能となっている。
【０１０４】
通信インタフェース５１ｇは、Ethernet（登録商標）インタフェースである。通信インタフェース５１ｇはＬＡＮを介してホストコンピュータ６に接続されている（図２参照）。コンピュータ５ａは、通信インタフェース５１ｇにより、所定の通信プロトコルを使用して当該ＬＡＮに接続されたホストコンピュータ６との間でデータの送受信が可能である。
【０１０５】
［血液分析装置の測定動作］
以下、本実施の形態に係る血液分析装置１の動作について説明する。血液分析装置１は、以下に示すような検体分析動作を実行する。図５は、血液分析装置１による検体分析動作の手順を示すフローチャートである。
【０１０６】
図５に示すように、検体分析動作においては、まず、検体の初検（１回目の測定）が行われる。初検は、測定ユニット２により第１測定試料を測定する第１測定工程（ステップＳ１）と、第１測定工程によって得られた測定データを情報処理ユニット５により解析処理する第１データ処理（ステップＳ２）とによって構成される。
【０１０７】
まず、検体容器Ｔを保持したサンプルラックＬがオペレータによって検体搬送ユニット４に載置される。検体搬送ユニット４によってサンプルラックＬが搬送され、測定対象の検体が収容されている検体容器Ｔが検体供給位置４３ａに位置する。次に、測定ユニット２のハンド部２５ａにより、当該検体容器Ｔが把持され、サンプルラックＬからこの検体容器Ｔが取り出される。ハンド部２５ａはその後揺動運動を行い、検体容器Ｔの内部の検体が撹拌される。次に、検体容器セット部２５ｂにこの検体容器Ｔが挿入され、Ｙ方向へと検体容器セット部２５ｂが移動し、バーコード読取部２６による検体バーコード読み取りを行った後、吸引位置に到達する。その後、以下の第１測定工程が実行される。
【０１０８】
第１測定工程
まず、第１測定工程について説明する。血液分析装置１は、第１測定工程では、全血検体（１７μＬ）と第１試薬（１ｍＬ）と第２試薬（２０μＬ）とを混合して第１測定試料を作成し、この第１測定試料を光学検出器Ｄにてフローサイトメトリー法によって測定する。ここで第１試薬としては、上述のストマトライザー４ＤＬを使用し、第２試薬としては、上述のストマトライザー４ＤＳを用いる。
【０１０９】
図６は、第１測定工程での血液分析装置１の動作手順を示すフローチャートである。まず、ＣＰＵ５１ａは、検体吸引部２１を制御して、吸引管２１１により検体容器Ｔの全血検体を定量吸引する（ステップＳ１０１）。ステップＳ１０１の処理は、具体的には、吸引管２１１が検体容器Ｔの中に挿入され、シリンジポンプの駆動によって、全血検体が定量（８０．０μＬ）吸引される。
【０１１０】
次に、ＣＰＵ５１ａは、測定ユニット２を制御することにより、試薬容器２２１ａから第１試薬（１ｍＬ）を、試薬容器２２１ｂから第２試薬（２０μＬ）を、吸引管２１１から全血検体（１７μＬ）を第１混合チャンバＭＣ１にそれぞれ供給する（ステップ１０２）。
【０１１１】
次に、ＣＰＵ５１ａは、第１混合チャンバＭＣ１への第１試薬、第２試薬及び全血検体の供給から２１．８秒間経過したか否かを判定し（ステップＳ１０３）、２１．８秒間待機する。ここで、ヒータにより第１混合チャンバＭＣ１は４１℃に加温されており、これにより、第１試薬と第２試薬と血液検体との混合液が４１℃で２１．８秒加温され、第１測定試料が調製される。
【０１１２】
そして、第１測定試料を対象に光学検出器Ｄにて光学測定が行われる（ステップＳ１０４）。ステップＳ１０４の処理においては、具体的には、第１測定試料とシース液とが同時に光学検出器Ｄのフローセル２３１に供給され、そのときの前方散乱光がフォトダイオード２４３で受光され、側方散乱光がフォトダイオード２４６で受光され、蛍光がアバランシェフォトダイオード２４８で受光される。このような光学検出器Ｄの各受光素子により出力される出力信号（アナログ信号）は、Ａ／Ｄ変換器によりデジタル信号に変換され、所定の信号処理が施されてデジタルデータである第１測定データに変換され、情報処理ユニット５にこの第１測定データが送信される。この信号処理においては、第１測定データに含まれる特徴パラメータとして、前方散乱光信号（前方散乱光強度）、側方散乱光信号（側方散乱光強度）、及び蛍光信号（蛍光強度）が得られる。これにより、第１測定工程が終了する。また、後述するように、情報処理ユニット５のＣＰＵ５１ａは、第１測定データに対して所定の解析処理を実行することにより、ＮＥＵＴ、ＬＹＭＰＨ、ＥＯ、ＢＡＳＯ、ＭＯＮＯ、及びＷＢＣ等の数値データを含む分析結果データを生成し、ハードディスク５１ｄに分析結果データを記憶する。
【０１１３】
第１データ処理
次に、第１データ処理について説明する。図７は、本実施の形態に係る血液分析装置の第１データ処理の手順を示すフローチャートである。血液分析装置１の情報処理ユニット５は、測定ユニット２から第１測定データを受信する（ステップＳ１５１）。ＣＰＵ５１ａによって実行されるコンピュータプログラム５４ａはイベントドリブン型のプログラムであり、第１測定データを受信するイベントが発生すると、ステップＳ１５２の処理が呼び出される。
【０１１４】
ＣＰＵ５１ａは、第１測定データを用いて正常白血球を複数のサブクラスに分類し、各サブクラスに属する血球の数を計数する（ステップＳ１５２）。また、ＣＰＵ５１ａは、第１測定データを用いて異常単核球の細胞群（以下、「異常単核球群」という。）を検出し、検出された異常単核球群に含まれる血球数ＣＮ１を計数する（ステップＳ１５３）。
【０１１５】
ステップＳ１５２及びＳ１５３の処理について詳しく説明する。図８は、第１測定データにおける側方散乱光強度及び蛍光強度のスキャッタグラムである。図８に示す第１測定データにおける側方散乱光強度及び蛍光強度のスキャッタグラムでは、幼若顆粒球のクラスター、好酸球のクラスター、好中球と好塩基球とによってなる血球群のクラスター、リンパ球のクラスター、及び単球のクラスターが現れる。図８のスキャッタグラムに示されるように、第１測定データの側方散乱光強度及び蛍光強度を利用することにより、正常白血球を、好酸球、好中球と好塩基球とによってなる血球群、リンパ球、及び単球に分類することができる。また、ここでは説明を省略するが、血液分析装置１は、血液検体を所定の試薬と混合して好中球と好塩基球とを個別に検出するための測定試料を調整し、この測定試料を光学検出器Ｄで測定することによって得られた測定データを用いて、好中球と好塩基球とを個別に検出することができる。血液分析装置１は、こうして得られた好中球及び好塩基球の検出結果と、上記の第１測定データの解析によって得られた４つのサブクラスの検出結果とを用いて、血液検体に含まれる正常白血球を５つのサブクラス（好酸球、好中球、好塩基球、リンパ球、及び単球）に分類する。ステップＳ１５２の処理においては、ＣＰＵ５１ａは、第１測定データの前方散乱光強度、側方散乱光強度及び蛍光強度を用いて、成熟した白血球をサブクラスに分類し、それぞれのサブクラスに属する血球数を計数する。
【０１１６】
また、本実施の形態においては、図８において破線で示す側方散乱光強度及び蛍光強度の範囲を、異常単核球群の検出領域Ａ１として定める。図８に示すように、検出領域Ａ１は、リンパ球の出現領域よりも蛍光強度が高い部分に設けられる。本願発明者らは、臨床検体を使用した実験を行い、実験結果の詳細な検討を実施した結果、この検出領域Ａ１において、異型リンパ球、異常リンパ球、リンパ芽球及び骨髄芽球の何れもが出現することを見出した。したがって、この検出領域Ａ１を用いることで、異常単核球の有無を精度良く検出することができるが、検出領域Ａ１では、検出された異常単核球が異常リンパ球、芽球、及び異型リンパ球の何れであるかを特定することはできないことが分かった。ステップＳ１５３においては、上述した検出領域Ａ１の内部に出現する細胞群が異常単核球群として検出され、血球数ＣＮ１が計数される。
【０１１７】
次にＣＰＵ５１ａは、ＣＮ１が所定の閾値Ｔ１より大きいか否かを判定する（ステップＳ１５４）。閾値Ｔ１は、血液検体中に異常単核球が存在するか否かを判定するための基準値である。ＣＮ１が閾値Ｔ１よりも大きい場合には、血液検体中に異常単核球が存在すると判定され、ＣＮ１が閾値Ｔ１以下の場合には、血液検体中に異常単核球が存在しないと判定される。
【０１１８】
ステップＳ１５４において、ＣＮ１≦Ｔ１の場合には（ステップＳ１５４においてＮＯ）、ＣＰＵ５１ａは、ＲＡＭ５１ｃに設けられた再検フラグに「０」をセットする（ステップＳ１５５）。ここで、再検フラグは再検（血液分析装置１による２回目の検体測定）の要否を示す情報であり、「１」がセットされている場合には再検が必要であることを示し、「０」がセットされている場合には再検が不要であることを示す。その後、ＣＰＵ５１ａは、ステップＳ１５７へ処理を移す。
【０１１９】
一方、ステップＳ１５４において、ＣＮ１＞Ｔ１の場合には（ステップＳ１５４においてＹＥＳ）、ＣＰＵ５１ａは、再検が必要と判断し、ＲＡＭ５１ｃに設けられた再検フラグに「１」をセットする（ステップＳ１５６）。その後、ＣＰＵ５１ａは、ステップＳ１５７へ処理を移す。
【０１２０】
ＣＰＵ５１ａは、上述のようにして得た分析結果（再検フラグを含む）をハードディスク５１ｄに格納する（ステップＳ１５７）。次にＣＰＵ５１ａは、ハードディスク５１ｄに記憶した分析結果を示す分析結果画面を画像表示部５２に表示させ（ステップＳ１５８）、第１データ処理を終了する。
【０１２１】
図５を参照し、検体分析動作について説明する。上記のような初検を終了した後、血液分析装置１のＣＰＵ５１ａは、再検の要否結果を確認する（ステップＳ３）。検体の再検が不要な場合、即ち、再検フラグに「０」がセットされている場合には（ステップＳ３においてＮＯ）、血液分析装置１は検体分析動作を終了する。一方、検体の再検が必要な場合、即ち、再検フラグに「１」がセットされている場合には（ステップＳ３においてＹＥＳ）、血液分析装置１は、検体の再検を実行する。再検は、初検が実施された血液検体が、異常リンパ球を含んでいるか否か、芽球を含んでいるか否か、及び異型リンパ球を含んでいるか否かを判定するための動作である。かかる再検は、ステップＳ１と同様の第１測定工程（ステップＳ４）と、測定ユニット２により第２測定試料を測定する第２測定工程（ステップＳ５）と、第１測定工程及び第２測定工程によって得られた測定データを情報処理ユニット５により解析処理する第２データ処理（ステップＳ６）とによって構成される。なお、再検における第１測定工程は、初検における第１測定工程と同様であるので、その説明を省略する。
【０１２２】
第２測定工程
次に、第２測定工程について説明する。この第２測定工程は、第１測定工程と時間的に一部重複して実行される。血液分析装置１は、第２測定工程では、全血検体（１７．０μＬ）と第３試薬（１０００μＬ）と第４試薬（２０μＬ）とを混合して第２測定試料を作成し、この第２測定試料を光学検出器Ｄにてフローサイトメトリー法によって測定する。
【０１２３】
ここで、本実施の形態においては、第３試薬として、以下に示される試薬が用いられる。
＜第３試薬＞
ＭＯＰＳ ２．０９ｇ／Ｌ
ポリオキシエチレン（２０）オレイルエーテル １．２５ｇ／Ｌ
Ｎ−ラウロイルサルコシン酸ナトリウム ０．２６８ｇ／Ｌ
ＥＤＴＡ−２Ｋ ０．５ｇ／Ｌ
上記各成分を混合しさらにＮａＯＨを添加してｐＨを７．３に調製した。第３試薬の浸透圧は３７ｍＯｓｍ／Ｋｇ、電気伝導度は０．７４５ｍＳ／ｃｍであった。
＜第４試薬＞
ＮＫ−３２１
５０ｍｇ／Ｌ
エチレングリコールに溶解されたＮＫ−３２１（５０ｍｇ／Ｌ）を第４試薬とした。
【０１２４】
図９は、第２測定工程での血液分析装置１の動作手順を示すフローチャートである。まず、ＣＰＵ５１ａは測定ユニット２を制御することにより、試薬容器２２２ａから第３試薬（１０００μＬ）を、試薬容器２２２ｂから第４試薬（２０μＬ）を、吸引管２１１から全血検体（１７．０μＬ）を、第１混合チャンバＭＣ１にそれぞれ供給する（ステップＳ２０１）。このステップＳ２０１において第１混合チャンバＭＣ１に供給される検体は、上述したステップＳ１０１において吸引管２１１により吸引された全血検体の一部である。つまり、ステップＳ１０１においては、第１混合チャンバＭＣ１に供給する検体と、第２混合チャンバＭＣ２に供給される検体とが一度に検体容器Ｔから吸引される。
【０１２５】
次に、ＣＰＵ５１ａは、第１混合チャンバＭＣ１への第３試薬、第４試薬及び全血検体の供給から１８．５秒間経過したか否かを判定し（ステップＳ２０２）、１８．５秒間待機する。ここで、ヒータにより第１混合チャンバＭＣ１は３４．０℃に加温されており、これにより、第３試薬と第４試薬と血液検体との混合液が３４．０℃で１８．５秒加温され、第２測定試料が調製される。
【０１２６】
そして、第２測定試料を対象に光学検出器Ｄにて光学測定が行われる（ステップＳ２０３）。ステップＳ２０３の処理においては、具体的には、第２測定試料とシース液とが同時に光学検出器Ｄのフローセル２３１に供給され、そのときの前方散乱光がフォトダイオード２４３で受光され、側方散乱光がフォトダイオード２４６で受光され、蛍光がアバランシェフォトダイオード２４８で受光される。このような光学検出器Ｄの各受光素子により出力される出力信号（アナログ信号）は、上述した第１測定工程と同じくデジタル信号に変換され、所定の信号処理が施されてデジタルデータである第２測定データに変換され、情報処理ユニット５にこの第２測定データが送信される。この信号処理においては、第２測定データに含まれる特徴パラメータとして、前方散乱光信号（前方散乱光強度）、側方散乱光信号（側方散乱光強度）、及び蛍光信号（蛍光強度）が得られる。これにより、第２測定工程が終了する。また、後述するように、情報処理ユニット５のＣＰＵ５１ａは、第２測定データに対して所定の解析処理を実行することにより、異常リンパ球、芽球、又は異型リンパ球を検出し、この検出結果を含む分析結果データを生成し、ハードディスク５１ｄに分析結果データを記憶する。
【０１２７】
第２データ処理
次に、第２データ処理について説明する。図１０は、本実施の形態に係る血液分析装置の第２データ処理の手順を示すフローチャートである。血液分析装置１の情報処理ユニット５は、測定ユニット２から第１測定データを受信し（ステップＳ３０１）、また第２測定データを受信する（ステップＳ３０２）。ＣＰＵ５１ａによって実行されるコンピュータプログラム５４ａはイベントドリブン型のプログラムであり、第１測定データ及び第２測定データを受信するイベントが発生すると、ステップＳ３０３の処理が呼び出される。
【０１２８】
ＣＰＵ５１ａは、第１測定データを用いて正常白血球を複数のサブクラスに分類し、各サブクラスに属する血球の数を計数する（ステップＳ３０３）。また、ＣＰＵ５１ａは、第１測定データを用いて異常単核球の細胞群（以下、「異常単核球群」という。）を検出し、検出された異常単核球群に含まれる血球数ＣＮ１を計数する（ステップＳ３０４）。ステップＳ３０３の処理は上述したステップＳ１５２の処理と同様であり、ステップＳ３０４の処理は上述したステップＳ１５３の処理と同様であるので、その説明を省略する。
【０１２９】
次にＣＰＵ５１ａは、ＣＮ１が所定の閾値Ｔ１より大きいか否かを判定する（ステップＳ３０５）。閾値Ｔ１は、上述したステップＳ１５４における閾値Ｔ１と同じ基準値である。ＣＮ１が閾値Ｔ１よりも大きい場合には、血液検体中に異常単核球が存在すると判定され、ＣＮ１が閾値Ｔ１以下の場合には、血液検体中に異常単核球が存在しないと判定される。
【０１３０】
ステップＳ３０５において、ＣＮ１≦Ｔ１の場合には（ステップＳ３０５においてＮＯ）、ＣＰＵ５１ａは、ＲＡＭ５１ｃに設けられた異常リンパ球フラグ、異型リンパ球フラグ、及び芽球フラグのそれぞれに「０」をセットする（ステップＳ３０６）。ここで、異常リンパ球フラグは血液検体における異常リンパ球の有無を示すフラグであり、「１」がセットされている場合には異常リンパ球が存在していることを示し、「０」がセットされている場合には異常リンパ球が存在していないことを示す。また、異型リンパ球フラグは血液検体における異型リンパ球の有無を示すフラグであり、「１」がセットされている場合には異型リンパ球が存在していることを示し、「０」がセットされている場合には異型リンパ球が存在していないことを示す。同じく、芽球フラグは血液検体における芽球の有無を示すフラグであり、「１」がセットされている場合には芽球が存在していることを示し、「０」がセットされている場合には芽球が存在していないことを示す。その後、ＣＰＵ５１ａは、ステップＳ３１４へ処理を移す。
【０１３１】
一方、ステップＳ３０５において、ＣＮ１＞Ｔ１の場合には（ステップＳ３０５においてＹＥＳ）、ＣＰＵ５１ａは、第２測定データを用いて異常リンパ球の細胞群（以下、「異常リンパ球群」という。）を検出し、検出された異常リンパ球群に含まれる血球数ＣＮ２を計数する（ステップＳ３０７）。
【０１３２】
ステップＳ３０７の処理について詳しく説明する。図１１は、第２測定データにおける前方散乱光強度及び蛍光強度のスキャッタグラムであり、図１２は、第２測定データにおける側方散乱光強度及び蛍光強度のスキャッタグラムである。図１１に示す第２測定データにおける前方散乱光強度及び蛍光強度のスキャッタグラムでは、芽球のクラスター、顆粒球（好中球と好酸球と好塩基球とからなる血球群）のクラスター、リンパ球のクラスター、及び単球のクラスターが現れる。また、図１２に示す第２測定データにおける側方散乱光強度及び蛍光強度のスキャッタグラムでも、芽球のクラスター、顆粒球のクラスター、リンパ球のクラスター、及び単球のクラスターが現れる。
【０１３３】
本実施の形態においては、図１１において破線で示す前方散乱光強度及び蛍光強度の範囲を、異常リンパ球群の検出領域Ａ２として定める。図１１に示すように、検出領域Ａ２は、リンパ球及び単球の出現領域よりも蛍光強度が高い部分に設けられる。本願発明者らは、臨床検体を使用した実験を行い、実験結果の詳細な検討を実施した結果、この検出領域Ａ２及び図１２に示す領域Ａ２１において異常リンパ球が出現し、図１１に示す領域Ａ３１及び図１２に示す領域Ａ３２において芽球が出現することを見出した。また、発明者らは、詳細に実験結果を評価した結果、第２測定データにおける前方散乱光強度及び蛍光強度のスキャッタグラム並びに側方散乱光強度及び蛍光強度のスキャッタグラムにおいては、異型リンパ球は、上述した領域Ａ２、Ａ２１、Ａ３１、及びＡ３２の何れにも出現せず、正常白血球の出現領域に出現することを見出した。したがって、図１１に示す領域Ａ２または図１２に示す領域Ａ２１を用いることで、異常リンパ球を異型リンパ球及び芽球と区別して検出できることが分かった。ステップＳ３０７においては、上述した検出領域Ａ２の内部に出現する細胞群が異常リンパ球群として検出され、血球数ＣＮ２が計数される。なお、ステップＳ３０７においては、図１２に示す検出領域Ａ２１の内部に出現する細胞群を異常リンパ球群として検出してもよい。
【０１３４】
次にＣＰＵ５１ａは、ＣＮ２が所定の閾値Ｔ２より大きいか否かを判定する（ステップＳ３０８）。閾値Ｔ２は、血液検体中に異常リンパ球が存在するか否かを判定するための基準値である。ステップＳ３０８では、ＣＮ２が閾値Ｔ２よりも大きい場合には、血液検体中に異常リンパ球が存在すると判定され、ＣＮ２が閾値Ｔ２以下の場合には、血液検体中に異常リンパ球が存在しないと判定される。
【０１３５】
ステップＳ３０８において、ＣＮ２＞Ｔ２の場合には（ステップＳ３０８においてＹＥＳ）、ＣＰＵ５１ａは、ＲＡＭ５１ｃに設けられた異常リンパ球フラグに「１」をセットし、異型リンパ球フラグ、及び芽球フラグのそれぞれに「０」をセットする（ステップＳ３０９）。その後、ＣＰＵ５１ａは、ステップＳ３１４へ処理を移す。
【０１３６】
一方、ステップＳ３０８において、ＣＮ２≦Ｔ２の場合には（ステップＳ３０８においてＮＯ）、ＣＰＵ５１ａは、第２測定データを用いて芽球の細胞群（以下、「芽球群」という。）を検出し、検出された芽球群に含まれる血球数ＣＮ３を計数する（ステップＳ３１０）。
【０１３７】
ステップＳ３１０の処理について詳しく説明する。図１３は、第２測定データにおける前方散乱光強度及び側方散乱光強度のスキャッタグラムである。図１３に示す第２測定データにおける前方散乱光強度及び側方散乱光強度のスキャッタグラムでは、顆粒球のクラスター、リンパ球のクラスター、及び単球のクラスターが現れる。また、本実施の形態においては、図１３において破線で示す前方散乱光強度及び側方散乱光強度の範囲を、芽球群の検出領域Ａ３として定める。図１３に示すように、検出領域Ａ３は、リンパ球の出現領域よりも前方散乱光強度が高い部分に設けられる。本願発明者らは、臨床検体を使用した実験を行い、実験結果の詳細な検討を実施した結果、この検出領域Ａ３において芽球が出現し、異常リンパ球及び異型リンパ球が出現しないことを見出した。したがって、検出領域Ａ３を用いることで、芽球を異常リンパ球及び異型リンパ球と区別して検出できることが分かった。ステップＳ３１０においては、上述した検出領域Ａ３の内部に出現する細胞群が芽球群として検出され、血球数ＣＮ３が計数される。なお、上述したように、図１１に示す領域Ａ３１および図１２に示す領域Ａ３２において芽球が出現し、これらの領域には異常リンパ球および異型リンパ球が出現しないことも本願発明者らは見出している。そのため、領域Ａ３１または領域Ａ３２を用いて、芽球を異常リンパ球および異型リンパ球と区別して検出してもよい。
【０１３８】
次にＣＰＵ５１ａは、ＣＮ３が所定の閾値Ｔ３より大きいか否かを判定する（ステップＳ３１１）。閾値Ｔ３は、血液検体中に芽球が存在するか否かを判定するための基準値である。ステップＳ３１１では、ＣＮ３が閾値Ｔ３よりも大きい場合には、血液検体中に芽球が存在すると判定され、ＣＮ３が閾値Ｔ３以下の場合には、血液検体中に芽球が存在しないと判定される。また、ステップＳ３１１の処理を実行する場合には、既にステップＳ３０５において血液検体中に異常単核球が存在すると判定されており、しかもステップＳ３０８において血液検体中に異常リンパ球が存在しないと判定されている。このため、ステップＳ３１１においてＣＮ３が閾値Ｔ３以下の場合には、血液検体中に異型リンパ球が存在すると判定される。
【０１３９】
換言すれば、ステップＳ３０５において血液検体中に異常単核球が存在すると判定された上で、ステップＳ３０８又はステップＳ３１１において、ＣＮ２＞Ｔ２又はＣＮ３＞Ｔ３と判定された場合には、血液検体中に存在する異常単核球が腫瘍性の異常単核球（造血器官の腫瘍に起因する異常単核球）であると判定されたことになる。また、ステップＳ３０５において血液検体中に異常単核球が存在すると判定された上で、ステップＳ３０８及びステップＳ３１１において、ＣＮ２≦Ｔ２であり、且つＣＮ３≦Ｔ３と判定された場合には、血液検体中に存在する異常単核球が反応性のものであると判定されたことになる。
【０１４０】
ステップＳ３１１において、ＣＮ３＞Ｔ３の場合には（ステップＳ３１１においてＹＥＳ）、ＣＰＵ５１ａは、ＲＡＭ５１ｃに設けられた芽球フラグに「１」をセットし、異常リンパ球フラグ及び異型リンパ球フラグのそれぞれに「０」をセットする（ステップＳ３１２）。その後、ＣＰＵ５１ａは、ステップＳ３１４へ処理を移す。
【０１４１】
一方、ステップＳ３１１において、ＣＮ３≦Ｔ３の場合には（ステップＳ３１１においてＮＯ）、ＣＰＵ５１ａは、ＲＡＭ５１ｃに設けられた異型リンパ球フラグに「１」をセットし、異常リンパ球フラグ及び芽球フラグのそれぞれに「０」をセットする（ステップＳ３１３）。その後、ＣＰＵ５１ａは、ステップＳ３１４へ処理を移す。
【０１４２】
ＣＰＵ５１ａは、上述のようにして得た分析結果（異常リンパ球フラグ、異型リンパ球フラグ、及び芽球フラグを含む）をハードディスク５１ｄに格納する（ステップＳ３１４）。次にＣＰＵ５１ａは、ハードディスク５１ｄに記憶した分析結果を示す分析結果画面を画像表示部５２に表示させ（ステップＳ３１５）、第２データ処理を終了する。
【０１４３】
以上の再検が終了すると、検体分析動作が終了する。
【０１４４】
次に、具体的な血液検体を上記の再検で測定したときのスキャッタグラムの例を示し、本実施の形態に係る血液分析装置１による測定データの分析について説明する。図１４Ａ〜図１４Ｄは、血液分析装置１のスキャッタグラムの例を示す図である。図１４Ａは、急性骨髄性白血病患者から採取した血液検体Ａを測定したときのスキャッタグラムの例を示している。図１４Ｂは、慢性リンパ性白血病患者から採取した血液検体Ｂを測定したときのスキャッタグラムの例を示している。図１４Ｃは、異型リンパ球を含有する血液検体Ｃを測定したときのスキャッタグラムの例を示している。また、図１４Ｄは、正常な血液検体Ｄを測定したときのスキャッタグラムの例を示している。
【０１４５】
急性骨髄性白血病患者の末梢血には、骨髄芽球が出現する。図１４Ａに示すように、この血液検体Ａの第１測定データにおける側方散乱光強度及び蛍光強度のスキャッタグラム（白血球分類用のスキャッタグラム）ＳＧ１１では、異常単核球群の検出領域Ａ１に、検出された血球に対応する粒子が存在している。つまり、このスキャッタグラムＳＧ１１から分かるように、血液検体Ａからは異常単核球群が検出される。また、血液検体Ａの第２測定データにおける前方散乱光強度及び蛍光強度のスキャッタグラム（異常リンパ球検出用のスキャッタグラム）ＳＧ１２では、異常リンパ球の検出領域Ａ２に、検出された血球に対応する粒子が実質的に存在していない（ごく僅かだけ存在しているが、血球数が閾値Ｔ２を超えていない）。図１４Ａには、血液検体Ａの第２測定データにおける側方散乱光強度及び蛍光強度のスキャッタグラムＳＧ１３も参考として示している。このスキャッタグラムＳＧ１３においても、異常リンパ球の出現領域Ａ２１には、実質的に血球が存在していないことが分かる。さらに、血液検体Ａの第２測定データにおける前方散乱光強度及び側方散乱光強度のスキャッタグラム（芽球検出用のスキャッタグラム）ＳＧ１４では、芽球の検出領域Ａ３に、検出された血球に対応する粒子が存在している。つまり、このスキャッタグラムＳＧ１４から分かるように、血液検体Ａからは芽球群が検出される。よって、本実施の形態に係る血液分析装置１が血液検体Ａを分析したときには、ＣＮ１＞Ｔ１且つＣＮ２≦Ｔ２且つＣＮ３＞Ｔ３となり、芽球が存在すると判定される。
【０１４６】
慢性リンパ性白血病患者の末梢血には、成熟したリンパ性白血病細胞である異常リンパ球が出現する。図１４Ｂに示すように、血液検体Ｂの白血球分類用のスキャッタグラムＳＧ２１では、異常単核球群の検出領域Ａ１に、検出された血球に対応する粒子が存在している。つまり、このスキャッタグラムＳＧ２１から分かるように、血液検体Ｂからは異常単核球群が検出される。また、血液検体Ｂの第２測定データにおける異常リンパ球検出用のスキャッタグラムＳＧ２２では、異常リンパ球の検出領域Ａ２に、検出された血球に対応する粒子が存在している。図１４Ｂには、血液検体Ｂの第２測定データにおける側方散乱光強度及び蛍光強度のスキャッタグラムＳＧ２３も参考として示している。このスキャッタグラムＳＧ２３においても、異常リンパ球の出現領域Ａ２１には、血球が存在していることが分かる。さらに、血液検体Ｂの第２測定データにおける芽球検出用のスキャッタグラムＳＧ２４では、芽球の検出領域Ａ３に、検出された血球に対応する粒子が実質的に存在していない。つまり、スキャッタグラムＳＧ２２から分かるように、血液検体Ｂからは異常リンパ球群が検出される。よって、本実施の形態に係る血液分析装置１が血液検体Ｂを分析したときには、ＣＮ１＞Ｔ１且つＣＮ２＞Ｔ２となり、異常リンパ球が存在すると判定される。
【０１４７】
図１４Ｃに示すように、異型リンパ球を含有する血液検体Ｃの白血球分類用のスキャッタグラムＳＧ３１では、異常単核球群の検出領域Ａ１に、検出された血球に対応する粒子が存在している。つまり、このスキャッタグラムＳＧ３１から分かるように、血液検体Ｃからは異常単核球群が検出される。また、血液検体Ｃの第２測定データにおける異常リンパ球検出用のスキャッタグラムＳＧ３２では、異常リンパ球の検出領域Ａ２に、検出された血球に対応する粒子が実質的に存在していない。図１４Ｃには、血液検体Ｃの第２測定データにおける側方散乱光強度及び蛍光強度のスキャッタグラムＳＧ３３も参考として示している。このスキャッタグラムＳＧ３３においても、異常リンパ球の出現領域Ａ２１には、血球が実質的に存在していないことが分かる。さらに、血液検体Ｃの第２測定データにおける芽球検出用のスキャッタグラムＳＧ３４では、芽球の検出領域Ａ３に、検出された血球に対応する粒子が実質的に存在していない。つまり、スキャッタグラムＳＧ３２及びＳＧ３４から分かるように、血液検体Ｃからは異常リンパ球群及び芽球群の何れも検出されない。よって、本実施の形態に係る血液分析装置１が血液検体Ｃを分析したときには、ＣＮ１＞Ｔ１且つＣＮ２≦Ｔ２且つＣＮ３≦Ｔ３となり、異型リンパ球が存在すると判定される。
【０１４８】
正常な末梢血には、異常単核球は出現しない。図１４Ｄに示すように、血液検体Ｄの白血球分類用のスキャッタグラムＳＧ４１では、異常単核球群の検出領域Ａ１に、検出された血球に対応する粒子が実質的に存在していない。つまり、このスキャッタグラムＳＧ４１から分かるように、血液検体Ｄからは異常単核球群が検出されない。また、血液検体Ｄの第２測定データにおける異常リンパ球検出用のスキャッタグラムＳＧ４２では、異常リンパ球の検出領域Ａ２に、検出された血球に対応する粒子が実質的に存在していない。図１４Ｄには、血液検体Ｄの第２測定データにおける側方散乱光強度及び蛍光強度のスキャッタグラムＳＧ４３も参考として示している。このスキャッタグラムＳＧ４３においても、異常リンパ球の出現領域Ａ２１には、血球が実質的に存在していないことが分かる。さらに、血液検体Ｄの第２測定データにおける芽球検出用のスキャッタグラムＳＧ４４では、芽球の検出領域Ａ３に、検出された血球に対応する粒子が実質的に存在していない。スキャッタグラムＳＧ４２及びＳＧ４４から分かるように、血液検体Ｄからは異常リンパ球群及び芽球群の何れも検出されない。よって、本実施の形態に係る血液分析装置１が血液検体Ｄを分析したときには、ＣＮ１≦Ｔ１となり、異常単核球が存在しないと判定される。
【０１４９】
図１５は、血液分析装置１の分析結果画面を示す図である。図１５は、血液検体Ｂの分析結果画面を示している。図１５に示すように、分析結果画面Ｒ１においては、測定された測定項目（ＷＢＣ、ＲＢＣ、ＰＬＴ等）の数値データが表示される。血液検体Ｂには異常リンパ球が含まれており、この血液検体Ｂに係る分析結果データでは、異常リンパ球フラグが「１」に、芽球フラグ及び異型リンパ球フラグが「０」にそれぞれセットされている。したがって、血液検体Ｂの分析結果画面Ｒ１では、図１５に示すように、異常リンパ球が存在している可能性を示す情報である「Ａｂｎ Ｌｙｍｐｈｏ？」の表示が、Ｆｌａｇの欄ＦＬＧに付される。また、ここでは図示しないが、芽球フラグが「１」にセットされており、異常リンパ球フラグ及び異型リンパ球フラグがそれぞれ「０」にセットされている場合には、フラグ表示欄ＦＬＧに「Ｂｌａｓｔｓ？」が表示される。異型リンパ球フラグが「１」にセットされており、異常リンパ球フラグ及び芽球フラグがそれぞれ「０」にセットされている場合には、フラグ表示欄ＦＬＧに「Ａｔｙｐｉｃａｌ Ｌｙｍｐｈｏ？」が表示される。さらに、異常リンパ球フラグ、芽球フラグ及び異型リンパ球フラグの全てに「０」がセットされている場合には、上記の「Ａｂｎ Ｌｙｍｐｈｏ？」、「Ｂｌａｓｔｓ？」及び「Ａｔｙｐｉｃａｌ Ｌｙｍｐｈｏ？」の何れも分析結果画面に表示されない。これによって、オペレータは分析結果画面を見るだけで、その血液検体において異常リンパ球が検出されたか否か、芽球が検出されたか否か、及び異型リンパ球が検出されたか否かを把握することができる。また、この分析結果画面Ｒ１には、第１測定データの側方散乱光強度及び蛍光強度のスキャッタグラムＳＧ２１が表示される。さらに、この分析結果画面Ｒ１には、第２測定データの側方散乱光強度及び蛍光強度のスキャッタグラムＳＧ２３が表示される。オペレータはこれらのスキャッタグラムを参照することによって、血液分析装置１による異常リンパ球、芽球、異型リンパ球の検出結果の根拠を把握することができ、また血液分析装置１による異常リンパ球、芽球、異型リンパ球の検出結果の妥当性を判断することができる。
【０１５０】
以上のような構成とすることにより、血液分析装置１は、血液検体と、溶血剤が含有された第１試薬と、核酸を染色する蛍光色素が含有された第２試薬とを混合して調製した第１測定試料を光学検出器Ｄにより測定することにより、異常単核球を検出することができる。また、血液分析装置１は、異常単核球が検出された場合において、血液検体と、溶血剤が含有された第３試薬と、核酸を染色する蛍光色素が含有された第４試薬とを混合して調製した第２測定試料を光学検出器Ｄにより測定することにより、異常単核球が異常リンパ球であるか、芽球であるか、異型リンパ球であるかを判定することができる。
【０１５１】
（その他の実施の形態）
なお、試料調製部２２における、血液検体と第１試薬と第２試薬との混合及び血液検体と第３試薬と第４試薬との混合の際のそれぞれの反応温度及び反応時間は、血液検体中の血球の損傷及び染色の状態により適宜設定すればよく、特に制限されない。具体的には、反応温度が高いときは反応時間を短くし、反応温度が低いときは反応時間を長くするように調整することができる。より具体的には、血液検体と試薬の混合は、２０℃〜４５℃の温度において、３〜４０秒間行うことが好ましい。
【０１５２】
また、上述した実施の形態においては、溶血剤を含む第３試薬及び核酸を染色できる蛍光色素を含む第４試薬を用いて、第２測定工程を行う構成について述べたが、これに限定されるものではない。溶血剤及び核酸染色色素を含む１つの試薬を血液検体と混合して第２測定試料を調製し、異常リンパ球、芽球、及び異型リンパ球の検出を行う構成としてもよい。この場合、界面活性剤、可溶化剤及び蛍光色素の濃度は、上記試薬を混合した際に、上述の濃度になるように調整される。
【０１５３】
また、上述した実施の形態においては、第１測定データにおける側方散乱光強度及び蛍光強度に基づいて異常単核球の検出を行っているが、前方散乱光強度及び蛍光強度に基づいて異常単核球の検出を行ってもよい。
【０１５４】
また、上述した実施の形態においては、第１測定データにおける側方散乱光強度及び蛍光強度において、異常単核球の検出領域Ａ１の内部に出現した血球数ＣＮ１が閾値Ｔ１より大きいか否かによって、血液検体中に異常単核球が存在するか否かが判定される構成について述べたが、これに限定されるものではない。第１測定データにおける側方散乱光強度及び蛍光強度において、異常単核球の検出領域Ａ１の内部に出現した血球数の全白血球数に対する割合を求め、この割合が所定の基準値よりも大きいか否かを判定することで、異常単核球が存在するか否かを判定する構成としてもよい。また、異常リンパ球の検出においても、第２測定データにおける前方散乱光強度及び蛍光強度において、異常リンパ球の検出領域Ａ２の内部に出現した血球数の全白血球数に対する割合を求め、この割合が所定の基準値よりも大きいか否かを判定することで、異常リンパ球が存在するか否かを判定する構成としてもよい。同様に、芽球の検出においても、第２測定データにおける前方散乱光強度及び側方散乱光強度において、芽球の検出領域Ａ３の内部に出現した血球数の全白血球数に対する割合を求め、この割合が所定の基準値よりも大きいか否かを判定することで、芽球が存在するか否かを判定する構成としてもよい。
【０１５５】
また、上述した実施の形態においては、第２測定試料をフローサイトメータにて光学測定し、蛍光強度、前方散乱光強度、及び側方散乱光強度を含む光学信号を取得し、かかる光学信号を用いて血液検体中に異常リンパ球が存在するか否か、芽球が存在するか否か、異型リンパ球が存在するか否かを判定する構成について述べたが、これに限定されるものではない。蛍光強度と共に、前方散乱光強度及び側方散乱光強度以外の散乱光情報（前方広角散乱光強度等）を取得し、当該散乱光情報と蛍光強度とを用いて、血液検体中に異常リンパ球が存在するか否か、芽球が存在するか否か、異型リンパ球が存在するか否かを判定する構成としてもよい。同じく、第１測定試料の光学測定においても、蛍光強度と共に、前方散乱光強度及び側方散乱光強度以外の散乱光情報（前方広角散乱光強度等）を取得し、当該散乱光情報と蛍光強度とを用いて、白血球の分類及び異常単核球の検出を行う構成としてもよい。
【０１５６】
また、上述した実施の形態においては、ＣＰＵ５１ａが上記のコンピュータプログラム５４ａを実行することにより、測定ユニット２の制御及び測定データの処理を行う構成について述べたがこれに限定されるものではない。上記コンピュータプログラム５４ａと同様の処理を実行することが可能なＦＰＧＡ又はＡＳＩＣ等の専用ハードウェアにより、測定ユニット２の制御及び測定データの処理を実行する構成としてもよい。
【０１５７】
また、上述した実施の形態においては、単一のコンピュータ５ａによりコンピュータプログラム５４ａの全ての処理を実行する構成について述べたが、これに限定されるものではなく、上述したコンピュータプログラム５４ａと同様の処理を、複数の装置（コンピュータ）により分散して実行する分散システムとすることも可能である。
【０１５８】
また、上述した実施の形態においては、血液検体中に異常リンパ球が存在するか否かを判定し、異常リンパ球が存在しないと判定した後に、血液検体中に芽球が存在するか否かを判定しているが、本発明はこれに限られない。まず血液検体中に芽球が存在するか否かを判定し、芽球が存在しないと判定した後に、血液検体中に異常リンパ球が存在するか否かを判定するようにしてもよい。これによっても、異常単核球が異常リンパ球であるか、芽球であるか、異型リンパ球であるかを判定することができる。
【０１５９】
また、上述した実施の形態においては、初検において第１測定試料を測定し、血液検体中に異常単核球が存在するか否かを判定し、異常単核球が存在すると判定された場合に、再検において第２測定試料を測定し、これによって血液検体中に異常リンパ球が存在するか否か、芽球が存在するか否か、及び異型リンパ球が存在するか否かを判定する構成について述べたが、これに限定されるものではない。１回目の検体測定（初検）において、第１測定工程と第２測定工程を実行し、第１測定工程によって得られた第１測定データに基づいて、血液検体中に異常単核球が存在するか否かを判定し、異常単核球が存在すると判定された場合に、第２測定工程によって得られた第２測定データに基づいて、血液検体中に異常リンパ球が存在するか否か、芽球が存在するか否か、及び異型リンパ球が存在するか否かを判定する構成（つまり、上記の実施の形態の再検に相当する動作を初検において実行する構成）としてもよい。また、上記の実施の形態においては、再検においても第１測定工程を実行し、血液検体中に異常単核球が存在するか否かを判定する構成について述べたが、これに限定されるものではない。再検においては第２測定工程のみを実行し、これによって得られた第２測定データを用いて、血液検体中に異常リンパ球が存在するか否か、芽球が存在するか否か、及び異型リンパ球が存在するか否かを判定する構成としてもよい。
【符号の説明】
【０１６０】
１ 血液分析装置
２ 測定ユニット
２２ 試料調製部
２２１ａ，２２１ｂ，２２２ａ，２２２ｂ，２２３ 試薬容器
２３ 検出部
２３１ フローセル
２３７ 半導体レーザ
２４３ フォトダイオード
２４６ フォトダイオード
２４８ アバランシェフォトダイオード
５ 情報処理ユニット
５ａ コンピュータ
５１ 本体
５１ａ ＣＰＵ
５１ｂ ＲＯＭ
５１ｃ ＲＡＭ
５１ｄ ハードディスク
５１ｈ 画像出力インタフェース
５２ 画像表示部
５４ａ コンピュータプログラム
ＭＣ１，ＭＣ２ 混合チャンバ
Ｈ ヒータ
Ｄ 光学検出器
Ｒ１ 分析結果画面
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血液検体を光学的に測定し、血液検体に含まれる血球を分類する血液分析装置及び血液分析方法、並びにコンピュータに血液を分析させるためのコンピュータプログラムに関する。
【背景技術】
【０００２】
正常な末梢血液中にはリンパ球、単球、好塩基球、好酸球、及び好中球の５種類の白血球が存在し、多くの血球計数装置は血液検体中の白血球をかかる５つの種類に分類する機能を有している。一方、ウイルス感染症又は造血器腫瘍等の疾患においては、正常な末梢血液中には存在しない細胞が出現する。末梢血液中に出現する異常な白血球には、異常な単核球が含まれ、この異常単核球は、反応性のものと腫瘍性のものに大別できる。反応性の異常単核球としては、ウイルス感染又は薬物アレルギー等で見られる「異型リンパ球（atypical lymphocyte）」がある。腫瘍性の異常単核球は、成熟したものと幼若なものとにさらに分類される。腫瘍性の成熟単核球としては、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）で見られる「異常リンパ球（abnormal lymphocyte）」がある。また、腫瘍性の幼若単核球としては、急性白血病で見られる「芽球（blast）」がある。末梢血液中から異型リンパ球、異常リンパ球、及び芽球を区別して検出することは、上記のような疾患のスクリーニング又は診断を行う上で極めて有用である。
【０００３】
特許文献１には、白血球を４つ又は５つに分類する試薬を用いて異型リンパ球及び骨髄芽球を正常白血球と区別して検出することが開示されている（図１２、１４を参照）。また、特許文献２には、白血球を５つに分類する試薬を用いて、異常リンパ球及び芽球からなる細胞群を、正常白血球と区別して検出することが開示されている（図２参照）。特許文献１及び２に開示されている技術は、白血球を分類するための試薬として、カチオン性界面活性剤及びノニオン性界面活性剤を含む溶血剤と、核酸を染める蛍光色素を含む染色液とを用いる点において共通している。
【０００４】
また、特許文献３には、所定の試薬を用いて、骨髄芽球を成熟白血球及び幼若顆粒球と区別して検出することが開示されている（図１、２、５参照）。この文献には、上記の試薬として、ノニオン性界面活性剤及び可溶化剤を含む溶血剤と、核酸を染める蛍光色素とが開示されている。また、特許文献４には、所定の試薬を用いて、リンパ芽球と骨髄芽球と成熟白血球と幼若顆粒球とを区別して検出することが開示されている（図１３Ａ、１３Ｂ参照）。この文献には、上記の試薬として、ノニオン性界面活性剤及び可溶化剤を含む溶血剤と、核酸を染める蛍光色素とが開示されている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】特開２００６−９１０２４号公報
【特許文献２】米国特許出願公開第２００９／００２３１２９号明細書
【特許文献３】特開２００７−２６３８９４号公報
【特許文献４】特開２０１０−２３７１４７号公報
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
しかしながら、特許文献１及び特許文献２においては、異型リンパ球、異常リンパ球、及び芽球が蛍光強度及び散乱光強度においてほぼ同じ領域に出現するため、これらを区別することはできない。また、特許文献３及び４の何れにおいても、異型リンパ球と異常リンパ球とを区別して検出することは記載されていない。
【０００７】
本発明は斯かる事情に鑑みてなされたものであり、その一の目的は、異常リンパ球、芽球、及び異型リンパ球を区別して検出可能な血液分析装置、血液分析方法、及びコンピュータプログラムを提供することにある。また、本発明の他の目的は、反応性の異常単核球および腫瘍性の異常単核球を区別して検出することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上述した課題を解決するために、本発明の一の態様の血液分析装置は、血液検体から第１血液検体と第２血液検体とを分注する分注部と、前記分注部によって分注された第１血液検体と、核酸を染める第１蛍光色素と、カチオン性界面活性剤を含む第１溶血剤とを混合して第１測定試料を調製し、前記分注部によって分注された第２血液検体と、核酸を染める第２蛍光色素と、カチオン性界面活性剤を含まず他の界面活性剤を含む第２溶血剤とを混合して第２測定試料を調製する試料調製部と、前記試料調製部によって調製された第１測定試料及び第２測定試料のそれぞれに光を照射する光源と、前記光源により光が前記第１測定試料に照射されたときに生じる蛍光及び散乱光を受光して、受光された蛍光に関する第１蛍光信号及び受光された散乱光に関する第１散乱光信号を出力し、前記光源により光が前記第２測定試料に照射されたときに生じる蛍光及び散乱光を受光して、受光された蛍光に関する第２蛍光信号及び受光された散乱光に関する第２散乱光信号を出力する受光部と、前記第１蛍光信号及び前記第１散乱光信号、並びに前記第２蛍光信号及び前記第２散乱光信号に基づいて、前記血液検体から異型リンパ球、異常リンパ球、及び芽球を区別して検出する情報処理部と、前記情報処理部による検出結果に基づく出力を行う出力部と、を備える。
【０００９】
この態様において、前記情報処理部は、前記第１蛍光信号及び前記第１散乱光信号に基づいて、前記血液検体から、異型リンパ球、異常リンパ球、及び芽球のいずれかである細胞を検出し、前記血液検体から前記細胞を検出した場合に、前記第２蛍光信号及び前記第２散乱光信号に基づいて、前記血液検体から、異型リンパ球、異常リンパ球、及び芽球を区別して検出するように構成されていてもよい。
【００１０】
上記態様において、前記情報処理部は、前記血液検体から、異型リンパ球、異常リンパ球、及び芽球のいずれかである細胞を検出した場合に、血液検体から第２血液検体を分注し、第２測定試料を調製するように前記分注部及び前記試料調製部を制御するように構成されていてもよい。
【００１１】
上記態様において、前記情報処理部は、前記第１蛍光信号及び前記第１散乱光信号に基づいて、前記血液検体に含まれる白血球を複数の種類に分類すると共に、前記血液検体から、異型リンパ球、異常リンパ球、及び芽球のいずれかである細胞を検出するように構成されていてもよい。
【００１２】
上記態様において、前記情報処理部は、前記第１蛍光信号及び前記第１散乱光信号に基づき、所定範囲の蛍光強度及び散乱光強度を示す細胞を、異型リンパ球、異常リンパ球、及び芽球のいずれかである細胞として検出するように構成されていてもよい。
【００１３】
上記態様において、前記所定範囲の蛍光強度は、正常リンパ球から得られる蛍光強度よりも大きくてもよい。
【００１４】
上記態様において、前記情報処理部は、前記所定範囲の蛍光強度及び散乱光強度を示す細胞の数を反映した値を取得し、取得した値と所定の閾値とを比較することにより、前記所定範囲の蛍光強度及び散乱光強度を示す細胞を検出するように構成されていてもよい。
【００１５】
上記態様において、前記情報処理部は、前記第２蛍光信号に基づき、所定範囲の蛍光強度を示す細胞を、異常リンパ球として検出するように構成されていてもよい。
【００１６】
上記態様において、前記所定範囲の蛍光強度は、正常リンパ球から得られる蛍光強度よりも大きくてもよい。
【００１７】
上記態様において、前記情報処理部は、前記所定範囲の蛍光強度を示す細胞の数を反映した値を取得し、取得した値と所定の閾値とを比較することにより、前記所定範囲の蛍光強度を示す細胞を検出するように構成されていてもよい。
【００１８】
上記態様において、前記受光部は、前記光源により光が前記第２測定試料に照射されたときに生じる前方散乱光及び側方散乱光を受光して、受光された前方散乱光に関する前方散乱光信号及び受光された側方散乱光に関する側方散乱光信号を含む前記第２散乱光信号を出力するように構成されており、前記情報処理部は、前記前方散乱光信号及び前記側方散乱光信号に基づき、所定範囲の前方散乱光強度及び側方散乱光強度を示す細胞を、芽球として検出するように構成されていてもよい。
【００１９】
上記態様において、前記情報処理部は、前記第２蛍光信号及び前記第２散乱光信号に基づいて、前記血液検体から異常リンパ球及び芽球が検出されなかった場合に、前記血液検体から異型リンパ球を検出するように構成されていてもよい。
【００２０】
本発明の他の態様の血液分析装置は、血液検体から第１血液検体と第２血液検体とを分注する分注部と、前記分注部によって分注された第１血液検体と、核酸を染める第１蛍光色素と、カチオン性界面活性剤を含む第１溶血剤とを混合して第１測定試料を調製し、前記分注部によって分注された第２血液検体と、核酸を染める第２蛍光色素と、カチオン性界面活性剤を含まず他の界面活性剤を含む第２溶血剤とを混合して第２測定試料を調製する試料調製部と、前記試料調製部によって調製された第１測定試料及び第２測定試料のそれぞれに光を照射する光源と、前記光源により光が前記第１測定試料に照射されたときに生じる蛍光及び散乱光を受光して、受光された蛍光に関する第１蛍光信号及び受光された散乱光に関する第１散乱光信号を出力し、前記光源により光が前記第２測定試料に照射されたときに生じる蛍光及び散乱光を受光して、受光された蛍光に関する第２蛍光信号及び受光された散乱光に関する第２散乱光信号を出力する受光部と、前記第１蛍光信号及び前記第１散乱光信号、並びに前記第２蛍光信号及び前記第２散乱光信号に基づいて、前記血液検体から反応性の異常単核球及び腫瘍性の異常単核球を区別して検出する情報処理部と、前記情報処理部による検出結果に基づく出力を行う出力部と、を備える。
【００２１】
上記態様において、前記情報処理部は、前記第１蛍光信号及び前記第１散乱光信号に基づいて、前記血液検体から異常単核球を検出し、前記血液検体から前記異常単核球を検出した場合に、前記第２蛍光信号及び前記第２散乱光信号に基づいて、前記血液検体から反応性の異常単核球及び腫瘍性の異常単核球を区別して検出するように構成されていてもよい。
【００２２】
上記態様において、前記情報処理部は、前記第１蛍光信号及び前記第１散乱光信号に基づいて、前記血液検体に含まれる白血球を複数の種類に分類すると共に、前記血液検体から異常単核球を検出するように構成されていてもよい。
【００２３】
上記態様において、前記情報処理部は、前記第１蛍光信号及び前記第１散乱光信号に基づき、所定範囲の蛍光強度及び散乱光強度を示す細胞を、異常単核球として検出するように構成されていてもよい。
【００２４】
本発明の一の態様の血液分析方法は、血液検体から第１血液検体と第２血液検体とを分注するステップと、分注された第１血液検体と、核酸を染める第１蛍光色素と、カチオン性界面活性剤を含む第１溶血剤とを混合して第１測定試料を調製するステップと、調製された第１測定試料に光を照射するステップと、光が前記第１測定試料に照射されたときに生じる蛍光及び散乱光を受光して、受光された蛍光に関する第１蛍光信号及び受光された散乱光に関する第１散乱光信号を取得するステップと、分注された第２血液検体と、核酸を染める第２蛍光色素と、カチオン性界面活性剤を含まず他の界面活性剤を含む第２溶血剤とを混合して第２測定試料を調製するステップと、調製された第２測定試料に光を照射するステップと、光が前記第２測定試料に照射されたときに生じる蛍光及び散乱光を受光して、受光された蛍光に関する第２蛍光信号及び受光された散乱光に関する第２散乱光信号を取得するステップと、前記第１蛍光信号及び前記第１散乱光信号並びに前記第２蛍光信号及び前記第２散乱光信号に基づいて、前記血液検体から異型リンパ球、異常リンパ球、及び芽球を区別して検出するステップと、検出結果に基づく出力を行うステップと、を有する。
【００２５】
本発明の一の態様のコンピュータプログラムは、通信部と、出力部とを備えるコンピュータに、血液検体から分注された第１血液検体と、核酸を染める第１蛍光色素と、カチオン性界面活性剤を含む第１溶血剤とを混合して調製された第１測定試料に光を照射したときに生じる蛍光及び散乱光に関する第１蛍光信号及び第１散乱光信号を、前記通信部に受信させるステップと、血液検体から分注された第２血液検体と、核酸を染める第２蛍光色素と、カチオン性界面活性剤を含まず他の界面活性剤を含む第２溶血剤とを混合して調製された第２測定試料に光を照射したときに生じる蛍光及び散乱光に関する第２蛍光信号及び第２散乱光信号を、前記通信部に受信させるステップと、前記通信部により受信された前記第１蛍光信号及び前記第１散乱光信号、並びに前記第２蛍光信号及び前記第２散乱光信号に基づいて、前記血液検体から異型リンパ球、異常リンパ球、及び芽球を区別して検出するステップと、検出結果に基づく情報を、前記出力部に出力させるステップと、を実行させる。
【発明の効果】
【００２６】
本発明に係る血液分析装置、血液分析方法、及びコンピュータプログラムによれば、異常リンパ球、芽球、及び異型リンパ球を区別して検出することが可能となる。また、本発明に係る血液分析装置によれば、反応性の異常単核球および腫瘍性の異常単核球を区別して検出することが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００２７】
【図１】実施の形態に係る血液分析装置の外観を示す斜視図。
【図２】実施の形態に係る測定ユニットの構成を示すブロック図。
【図３】光学検出器の概要構成を示す模式図。
【図４】実施の形態に係る情報処理ユニットの構成を示すブロック図。
【図５】実施の形態に係る血液分析装置の検体分析動作の手順を示すフローチャート。
【図６】実施の形態に係る血液分析装置の第１測定工程での動作手順を示すフローチャート。
【図７】実施の形態に係る血液分析装置の第１データ処理の手順を示すフローチャート。
【図８】第１測定データにおける側方散乱光強度及び蛍光強度のスキャッタグラム。
【図９】実施の形態に係る血液分析装置の第２測定工程での動作手順を示すフローチャート。
【図１０】実施の形態に係る血液分析装置の第２データ処理の手順を示すフローチャート。
【図１１】第２測定データにおける前方散乱光強度及び蛍光強度のスキャッタグラム。
【図１２】第２測定データにおける側方散乱光強度及び蛍光強度のスキャッタグラム。
【図１３】第２測定データにおける前方散乱光強度及び側方散乱光強度のスキャッタグラム。
【図１４Ａ】急性骨髄性白血病患者から採取した血液検体を測定したときのスキャッタグラムの例。
【図１４Ｂ】慢性リンパ性白血病患者から採取した血液検体を測定したときのスキャッタグラムの例。
【図１４Ｃ】異型リンパ球を含有する血液検体を測定したときのスキャッタグラムの例。
【図１４Ｄ】正常な血液検体を測定したときのスキャッタグラムの例。
【図１５】実施の形態に係る血液分析装置の分析結果画面の一例を示す図。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
以下、本発明の好ましい実施の形態を、図面を参照しながら説明する。
【００２９】
［血液分析装置の構成］
図１は、本実施の形態に係る血液分析装置の外観を示す斜視図である。本実施の形態に係る血液分析装置１は、血液検体に含まれる白血球、赤血球、血小板等を検出し、各血球を計数する多項目血球分析装置である。図１に示すように、血液分析装置１は、測定ユニット２と、測定ユニット２の前面側に配置された検体搬送ユニット４と、測定ユニット２及び検体搬送ユニット４を制御可能な情報処理ユニット５とを備えている。
【００３０】
患者から採取された末梢血である血液検体は、検体容器（採血管）に収容される。複数の検体容器がサンプルラックに保持され、このサンプルラックが検体搬送ユニット４により搬送されて、血液検体が測定ユニット２へ供給される。
【００３１】
＜測定ユニットの構成＞
測定ユニットの構成について説明する。図２は、測定ユニットの構成を示すブロック図である。図２に示すように、測定ユニット２は、検体である血液を検体容器（採血管）Ｔから吸引する検体吸引部２１と、検体吸引部２１により吸引した血液から測定に用いられる測定試料を調製する試料調製部２２と、試料調製部２２により調製された測定試料から血球を検出する検出部２３とを有している。また、測定ユニット２は、検体搬送ユニット４のラック搬送部４３によって搬送されたサンプルラックＬに収容された検体容器Ｔを測定ユニット２の内部に取り込むための取込口（図１参照）と、サンプルラックＬから検体容器Ｔを測定ユニット２の内部に取り込み、検体吸引部２１による吸引位置まで検体容器Ｔを搬送する検体容器搬送部２５とをさらに有している。
【００３２】
図２に示すように、検体吸引部２１は、吸引管２１１を有している。また、検体吸引部２１はシリンジポンプを備えている。また、吸引管２１１は、鉛直方向に移動可能であり、下方に移動されることにより、吸引位置まで搬送された検体容器Ｔ内の血液を吸引するように構成されている。
【００３３】
試料調製部２２は、第１混合チャンバＭＣ１及び第２混合チャンバＭＣ２を備えている。吸引管２１１は、シリンジポンプによって検体容器Ｔから所定量の全血検体を吸引し、吸引された検体は、第１混合チャンバＭＣ１と第２混合チャンバＭＣ２の位置へ移送され、前記シリンジポンプによって、それぞれのチャンバＭＣ１，ＭＣ２へ所定量の全血検体を分配供給する。また、試料調製部２２は、第１混合チャンバＭＣ１及び第２混合チャンバＭＣ２を加温するためのヒータＨを備えている。
【００３４】
試料調製部２２は、第１試薬を収容する試薬容器２２１ａ、第２試薬を収容する試薬容器２２１ｂ、第３試薬を収容する試薬容器２２２ａ、第４試薬を収容する試薬容器２２２ｂ、及びシース液（希釈液）を収容する試薬容器２２３にチューブを介して接続されている。また、試料調製部２２はコンプレッサに接続されており、当該コンプレッサにより発生される圧力により試薬容器２２１ａ，２２１ｂ，２２２ａ，２２２ｂ，２２３からそれぞれの試薬を分取することが可能となっている。
【００３５】
第１試薬は、白血球を少なくとも４つのサブクラスに分類するための溶血剤である。この溶血剤としては、界面活性剤の中でも特に溶血力が強いといわれているカチオン性界面活性剤を含むものを使用する。この溶血剤を使用することで、赤血球を溶血させ、正常な白血球及び異常単核球（異型リンパ球、異常リンパ球、及び芽球）の細胞膜に損傷を与えることができる。このため、正常白血球及び異常単核球は、後述する蛍光色素により染色されやすくなる。
【００３６】
ここで、カチオン性界面活性剤としては、４級アンモニウム塩型界面活性剤又はピリジニウム塩型界面活性剤が好ましい。より具体的には、構造式（Ｉ）又は（ＩＩ）で表される全炭素数９〜３０の界面活性剤が挙げられる。
【化１】
【化２】
（式（Ｉ）及び（ＩＩ）において、Ｒ１は炭素数６〜１８のアルキル基又はアルケニル基、Ｒ２およびＲ３は炭素数１〜４のアルキル基又はアルケニル基、Ｒ４は炭素数１〜４のアルキルおよびアルケニル基又はベンジル基、Ｘはハロゲン原子である。）
【００３７】
Ｒ１としては、炭素数が６、８、１０、１２及び１４のアルキル基又はアルケニル基が好ましく、特に直鎖のアルキル基が好ましい。より具体的なＲ１としてはオクチル基、デシル基、及びドデシル基が挙げられる。また、Ｒ２およびＲ３としては、特にメチル基、エチル基、及びプロピル基が好ましい。また、Ｒ４としては、メチル基、エチル基、及びプロピル基が好ましい。
【００３８】
また、第１試薬にはノニオン性界面活性剤をさらに含んでもよい。ノニオン性界面活性剤としては、以下の構造式（ＩＩＩ）で示されるポリオキシエチレン系ノニオン界面活性剤が好ましい。
【化３】
（式中、Ｒ１は炭素数８〜２５のアルキル、アルケニル又はアルキニル基；Ｒ２はＯ、
【化４】
またはＣＯＯ；ｎは１０〜５０の整数を表す。）で表されるポリオキシエチレン系ノニオン界面活性剤を用いるのが、好ましい。
【００３９】
なお、第１試薬は、上述のカチオン性界面活性剤及びノニオン性界面活性剤以外の成分を含むことができる。溶血剤に含むことができるその他の成分としては、例えば、有機酸、緩衝剤等が挙げられる。
【００４０】
ここで、有機酸としては、分子内に少なくとも１つの芳香環を有する有機酸又はその塩が好ましい。より具体的には、安息香酸、フタル酸、馬尿酸、サリチル酸、p-アミノベンゼンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、及びそれらのその塩等が挙げられる。
【００４１】
また、緩衝剤としては、例えば、クエン酸塩、ＨＥＰＥＳ及びリン酸塩等が挙げられる。なお、緩衝剤としては、溶血剤のｐＨを、４．５〜１１．０、好ましくは５．０〜１０．０に保つ緩衝剤が好ましい。
【００４２】
上述した第１試薬を使用することで、正常白血球及び異常単核球は、後述する蛍光色素により染色されやすくなり、さらに正常白血球は、リンパ球、単球、好酸球、好酸球以外の顆粒球の間で大きさ等に差異が生じるようになる。このため、血球由来の蛍光信号（蛍光強度）と散乱光信号（散乱光強度）に基づいて、正常白血球を少なくとも４つのサブクラスに分類すると共に、異常単核球を検出することができる。
【００４３】
また、第１試薬としては、市販の白血球分類用の溶血試薬を用いることもできる。市販の白血球分類用の溶血試薬としては、例えば、シスメックス（株）製のストマトライザー４ＤＬが挙げられる。ストマトライザー４ＤＬは、上述のカチオン性界面活性剤とノニオン性界面活性剤と有機酸とを含み、上述のｐＨ範囲内の溶血剤である。
【００４４】
第２試薬は、血液試料中の有核細胞を蛍光染色するための試薬である。かかる第２試薬には、核酸を染色するための蛍光色素が含有されている。このような色素を用いることにより、核酸を持たない赤血球はほとんど染色されず、核酸を有する白血球及び有核赤血球等の有核の血球が染色される。なお、核酸を染色できる蛍光色素は、光源から照射される光によって適宜選択することができる。
【００４５】
具体的な核酸を染色できる蛍光色素としては、例えば、プロピジウムアイオダイド、エチジウムブロマイド、エチジウム−アクリジンヘテロダイマー、エチジウムジアジド、エチジウムホモダイマー−１、エチジウムホモダイマー−２、エチジウムモノアジド、トリメチレンビス［［３‐［［４‐［［（３‐メチルベンゾチアゾール‐３‐イウム）‐２‐イル］メチレン］‐１，４‐ジヒドロキノリン］‐１‐イル］プロピル］ジメチルアミニウム］・テトラヨージド（ＴＯＴＯ−１）、４‐［（３‐メチルベンゾチアゾール‐２（３Ｈ）‐イリデン）メチル］‐１‐［３‐（トリメチルアミニオ）プロピル］キノリニウム・ジヨージド（ＴＯ−ＰＲＯ−１）、Ｎ，Ｎ，Ｎ'，Ｎ'‐テトラメチル‐Ｎ，Ｎ'‐ビス［３‐［４‐［３‐［（３‐メチルベンゾチアゾール‐３‐イウム）‐２‐イル］‐２‐プロペニリデン］‐１，４‐ジヒドロキノリン‐１‐イル］プロピル］‐１，３‐プロパンジアミニウム・テトラヨージド（ＴＯＴＯ−３）、又は２‐［３‐［［１‐［３‐（トリメチルアミニオ）プロピル］‐１，４‐ジヒドロキノリン］‐４‐イリデン］‐１‐プロペニル］‐３‐メチルベンゾチアゾール‐３‐イウム・ジヨージド（ＴＯ−ＰＲＯ−３）、及び以下の構造式（ＩＶ）で示される蛍光色素が挙げられる。この中でも、以下構造式（ＩＶ）で示される蛍光色素が好ましい。
【００４６】
【化５】
（式中、Ｒ１及びＲ４は、水素原子、アルキル基、ヒドロキシ基を有するアルキル基、エーテル基を有するアルキル基、エステル基を有するアルキル基、又は置換基を有しても良いベンジル基であり、；Ｒ２及びＲ３は、水素原子、ヒドロキシル基、ハロゲン、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、又はアルコキシ基であり；Ｚは硫黄原子、酸素原子、又はメチル基を有する炭素原子であり；ｎは０，１，２又は３であり；Ｘ−はアニオンである。）
【００４７】
ここで、構造式（ＩＶ）中、Ｒ１及びＲ４のいずれか一方が炭素数６〜１８のアルキル基の場合、他方は水素原子又は炭素数６未満のアルキル基であることが好ましい。炭素数が６〜１８のアルキル基としては、炭素数６、８又は１０のアルキル基が好ましい。Ｒ１及びＲ４のベンジル基の置換基としては、炭素数１〜２０のアルキル基、炭素数２〜２０のアルケニル基、又は炭素数２〜２０のアルキニル基が挙げられ、特にメチル基又はエチル基が好ましい。Ｒ２及びＲ３のアルケニル基としては、炭素数２〜２０のアルケニル基が挙げられる。Ｒ２及びＲ３のアルコキシ基としては、炭素数１〜２０のアルコキシ基が挙げられ、特にメトキシ基又はエトキシ基が好ましい。Ｘ−におけるアニオンとしては、Ｆ−、Ｃｌ−、Ｂｒ−、Ｉ−のようなハロゲンイオン、ＣＦ３ＳＯ３−、ＢＦ４−などが挙げられる。
【００４８】
上記の核酸を染色できる蛍光色素の第２試薬中での濃度は、蛍光色素の種類により適宜設定することができる。例えば、構造式（ＩＶ）で示される蛍光色素の濃度としては、０．２〜０．６ｐｇ／μＬが好ましく、特に０．３〜０．５ｐｇ／μＬが好ましい。なお、第２試薬は、核酸を染色できる蛍光色素を１種類又は２種類以上含むこともできる。
【００４９】
また、第２試薬としては、市販の白血球分類用の染色試薬を用いることもできる。市販の白血球分類用の染色試薬としては、例えば、シスメックス（株）製のストマトライザー４ＤＳが挙げられる。ストマトライザー４ＤＳは、上述の構造式（ＩＶ）で示される蛍光色素を含む染色試薬である。
【００５０】
シース液は後述するシースフローセルへと供給される液体である。かかるシース液は、希釈液としても使用される。このシース液としては、例えばシスメックス（株）製セルパック（ＩＩ）が挙げられる。
【００５１】
第３試薬は、異常リンパ球、異型リンパ球、及び芽球を区別して検出するため溶血剤である。第３試薬としては、ノニオン性界面活性剤を含み、カチオン性界面活性剤を実質的に含まないものが使用できる。この溶血剤を使用することで、赤血球を溶血し、正常白血球及び異常単核球（異型リンパ球、異常リンパ球、及び芽球）の細胞膜に損傷を与えることができる。このため、正常白血球及び異常単核球は後述する蛍光色素により染色されやすくなる。
【００５２】
なお、「異常リンパ球（abnormal lymphocyte）」とは腫瘍性の成熟リンパ球を指す。この異常リンパ球は、慢性リンパ性白血病、悪性リンパ腫等の疾患のある患者の末梢血中に出現する。また、「異型リンパ球（atypical lymphocyte）」とは、抗原刺激により活性化したリンパ球で、刺激に反応して形態変化したものを指す。この異型リンパ球は、ウイルス感染症、薬物アレルギー等の疾患のある患者の末梢血中に出現する。異型リンパ球は反応性の異常単核球である。
【００５３】
また、「芽球」とは、骨髄芽球（myeloblast）及びリンパ芽球（lymphblast）等の未成熟な白血球である腫瘍性の幼若単核球を指す。骨髄芽球は、急性骨髄性白血病の患者の末梢血中に出現し、リンパ芽球は、急性リンパ性白血病の患者の末梢血中に出現する。なお、異常リンパ球および芽球を含む腫瘍性の異常単核球は、造血器官の腫瘍に起因する異常単核球である。
【００５４】
ここで、ノニオン性界面活性剤としては、ポリオキシエチレン系ノニオン界面活性剤が好ましい。具体的なポリオキシエチレン系ノニオン界面活性剤としては、以下の構造式（Ｖ）
Ｒ１−Ｒ２−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−Ｈ （Ｖ）
（式中、Ｒ１は炭素数９〜２５のアルキル基、アルケニル基又はアルキニル基であり、Ｒ２は−Ｏ−、−ＣＯＯ−又は
【化６】
であり、ｎは１０〜４０の整数である）
で示されるものが挙げられる。
【００５５】
上記の構造式（Ｖ）で表される具体的な界面活性剤としては、ポリオキシエチレン（１５）オレイルエーテル、ポリオキシエチレン（１５）セチルエーテル、ポリオキシエチレン（１６）オレイルエーテル、ポリオキシエチレン（２０）オレイルエーテル、ポリオキシエチレン（２０）ラウリルエーテル、ポリオキシエチレン（２０）ステアリルエーテル、ポリオキシエチレン（２０）セチルエーテルなど挙げられ、ポリオキシエチレン（２０）オレイルエーテルが好ましい。なお、第３試薬は、界面活性剤を１種類又は２種類以上含むことができる。
【００５６】
第３試薬に含まれる界面活性剤の濃度は、界面活性剤の種類、溶血剤の浸透圧等に応じて適宜選択できる。例えば、界面活性剤がポリオキシエチレンオレイルエーテルである場合、第３試薬に含まれる界面活性剤の濃度は、０．５〜５０．０ｇ／Ｌであり、好ましくは１．０〜２０．０ｇ／Ｌである。
【００５７】
なお、第３試薬は、溶血した赤血球を十分に収縮させて測定に影響をおよぼさないゴースト集団にするために、上述のノニオン性界面活性剤以外に可溶化剤を含むことができる。この可溶化剤は、ノニオン性界面活性剤による赤血球の溶血作用を補助するために用いられる。第３試薬に含まれる可溶化剤としてはアニオン性界面活性剤を用いることができ、サルコシン誘導体、コール酸誘導体、メチルグルカンアミド、ｎ−オクチルβ−グルコシド、シュークロースモノカプレート、Ｎ−ホルミルメチルロイシルアラニンなどが挙げられ、特にサルコシン誘導体が好ましい。なお、第３試薬は、可溶化剤を１種類又は２種類以上含むことができる。
【００５８】
サルコシン誘導体としては、以下の構造式（ＶＩ）
【化７】
（式中、Ｒ１はＣ１０−２２のアルキル基であり、ｎは１〜５である。）
で示される化合物及びその塩が挙げられる。具体的なサルコシン誘導体としては、Ｎ−ラウロイルサルコシン酸ナトリウム、ラウロイルメチルβ−アラニンナトリウム、ラウロイルサルコシンなどが挙げられ、特にＮ−ラウロイルサルコシン酸ナトリウムが好ましい。
【００５９】
コール酸誘導体としては、以下の構造式（ＶＩＩ）
【化８】
（式中、Ｒ１は水素原子又は水酸基である。）
で示される化合物及びその塩が挙げられる。具体的なコール酸誘導体としては、ＣＨＡＰＳ（３−［（３−コールアミドプロピル）ジメチルアンモニオ］−１−プロパンスルホネート）、ＣＨＡＰＳＯ（［（３−コールアミドプロピル）ジメチルアンモニオ］−２−ヒドロキシ−１−プロパンスルホネート）などが挙げられる。
【００６０】
メチルグルカンアミドとしては、以下の構造式（ＶＩＩＩ）
【化９】
（式中、ｎは５〜７である。）
で示される化合物が挙げられる。具体的なメチルグルカンアミドとしては、ＭＥＧＡ８（オクタノイル−Ｎ−メチルグルカミド）、ＭＥＧＡ９（ノナノイル−Ｎ−メチルグルカミド）、ＭＥＧＡ１０（デカノイル−Ｎ−メチルグルカミド）などが挙げられる。
【００６１】
第３試薬に含まれる可溶化剤の濃度は、用いる可溶化剤の種類に応じて適宜選択できる。例えば、可溶化剤としてサルコシン誘導体を用いる場合、第３試薬に含まれる可溶化剤の濃度は、０．０５〜３．０ｇ／Ｌであり、好ましくは０．１〜１．０ｇ／Ｌである。コール酸誘導体を用いる場合、第３試薬に含まれる可溶化剤の濃度は、０．１〜１０．０ｇ／Ｌであり、好ましくは０．２〜２．０ｇ／Ｌである。メチルグルカンアミドを用いる場合、第３試薬に含まれる可溶化剤の濃度は、１．０〜８．０ｇ／Ｌであり、好ましくは２．０〜６．０ｇ／Ｌである。ｎ−オクチルβ−グルコシド、シュークロースモノカプレート、Ｎ−ホルミルメチルロイシルアラニンを用いる場合、第３試薬に含まれる可溶化剤の濃度は、０．０１〜５０．０ｇ／Ｌであり、好ましくは０．０５〜３０．０ｇ／Ｌである。
【００６２】
第３試薬のｐＨは、５．０〜９．０が好ましく、より好ましくは６．５〜７．５、さらに好ましくは６．８〜７．３である。第３試薬のｐＨは、緩衝剤又はｐＨ調整剤で調整できる。緩衝剤としては、例えばＨＥＰＥＳ、ＭＯＰＳ（3-morpholinopropanesulfonic acid）又はＭＯＰＳＯ（2-Hydroxy-3-morpholinopropanesulfonic acid）などのグッド緩衝剤、リン酸緩衝剤などが挙げられる。ｐＨ調整剤としては、水酸化ナトリウム、塩酸などが挙げられる。
【００６３】
第３試薬の浸透圧は、上述の界面活性剤の種類及び第３試薬中の濃度に応じて、適宜設定することができる。具体的な第３試薬の浸透圧としては、１０〜６００ｍＯｓｍ／ｋｇが挙げられる。また、第３試薬の浸透圧は、糖類、アミノ酸、塩化ナトリウムなどを第３試薬に添加することにより調整してもよい。具体的な糖類としては、単糖類、多糖類、糖アルコールなどが挙げられる。単糖類としては、グルコース、フルクトースが好ましい。多糖類としては、アラビノースが好ましい。糖アルコールとしては、キシリトール、ソルビトール、マンニトール、リビトールが好ましい。ここで、第３試薬に添加する糖類としては、糖アルコールが好ましく、特にキシリトールが好ましい。キシリトールを第３試薬に添加する場合、キシリトールの第３試薬中の濃度は、１．０〜７５．０ｇ／Ｌ、特に２０．０〜５０．０ｇ／Ｌが好ましい。具体的なアミノ酸としては、バリン、プロリン、グリシン、アラニンなどが挙げられ、特にグリシン、アラニンが好ましい。グリシンを第３試薬に添加する場合、グリシンの第３試薬中の濃度は、１．０〜５０．０ｇ／Ｌ、特に１０．０〜３０．０ｇ／Ｌが好ましい。
【００６４】
また、第３試薬の電気伝導度は、０．０１〜３ｍＳ／ｃｍが好ましく、特に０．１〜２ｍＳ／ｃｍが好ましい。さらに第３試薬には、キレート剤又は防腐剤などを添加することもできる。キレート剤としては、ＥＤＴＡ−２Ｋ、ＥＤＴＡ−３Ｎａなどが挙げられる。防腐剤としては、Ｐｒｏｘｅｌ ＧＸＬ（Avecia社製）、マテリアルＴＫＭ−Ａ（株式会社エーピーアイ コーポレーション）などが挙げられる。
【００６５】
上述した第３試薬を使用することで、正常白血球及び異常単核球は、後述する蛍光色素により染色されやすくなり、さらに異常単核球は、異常リンパ球、異型リンパ球、芽球の間で染色の度合い及び細胞の大きさ等に差異が生じる。このため、血球由来の蛍光信号（蛍光強度）と散乱光信号（散乱光強度）に基づいて、異常単核球を異常リンパ球、異型リンパ球、芽球に区別して検出することができる。
【００６６】
第４試薬は、血液試料中の有核細胞を蛍光染色するための試薬である。かかる第４試薬には、核酸を染色できる蛍光色素が含有されている。この蛍光色素としては、核酸を蛍光染色できるものであれば特に限定されない。このような色素を用いることにより、核酸を持たない赤血球はほとんど染色されず、核酸を有する異常リンパ球等の有核の血球は染色される。なお、核酸を染色できる蛍光色素は、光源から照射される光によって適宜選択することができる。核酸を染色できる蛍光色素としては、例えば、プロピジウムアイオダイド、エチジウムブロマイド、エチジウム−アクリジンヘテロダイマー、エチジウムジアジド、エチジウムホモダイマー−１、エチジウムホモダイマー−２、エチジウムモノアジド、トリメチレンビス［［３‐［［４‐［［（３‐メチルベンゾチアゾール‐３‐イウム）‐２‐イル］メチレン］‐１，４‐ジヒドロキノリン］‐１‐イル］プロピル］ジメチルアミニウム］・テトラヨージド（ＴＯＴＯ−１）、４‐［（３‐メチルベンゾチアゾール‐２（３Ｈ）‐イリデン）メチル］‐１‐［３‐（トリメチルアミニオ）プロピル］キノリニウム・ジヨージド（ＴＯ−ＰＲＯ−１）、Ｎ，Ｎ，Ｎ'，Ｎ'‐テトラメチル‐Ｎ，Ｎ'‐ビス［３‐［４‐［３‐［（３‐メチルベンゾチアゾール‐３‐イウム）‐２‐イル］‐２‐プロペニリデン］‐１，４‐ジヒドロキノリン‐１‐イル］プロピル］‐１，３‐プロパンジアミニウム・テトラヨージド（ＴＯＴＯ−３）、又は２‐［３‐［［１‐［３‐（トリメチルアミニオ）プロピル］‐１，４‐ジヒドロキノリン］‐４‐イリデン］‐１‐プロペニル］‐３‐メチルベンゾチアゾール‐３‐イウム・ジヨージド（ＴＯ−ＰＲＯ−３）、及び以下の構造式（ＩＸ）〜（ＸＸＩＩ）で示される蛍光色素が挙げられる。
【００６７】
＜構造式（ＩＸ）＞
【化１０】
（式中、Ｒ１及びＲ２は、低級アルキル基であり；ｎは１又は２であり；Ｘ−はアニオンであり；Ｚは硫黄原子、酸素原子、又は低級アルキル基で置換された炭素原子である）。
【００６８】
構造式（ＩＸ）中、低級アルキル基とは炭素数１〜６の直鎖又は分枝のアルキル基である。具体的な低級アルキル基としては、メチル基、エチル基、プロピル基、ブチル基、イソブチル基、sec-ブチル基、tert-ブチル基、ペンチル基、ヘキシル基などが挙げられ、メチル基、エチル基が好ましい。また、Ｚとしては、硫黄原子が好ましい。Ｘ−におけるアニオンは、ハロゲンイオン（フッ素、塩素、臭素又はヨウ素イオン）、ハロゲン化ホウ素イオン（ＢＦ４−、ＢＣｌ４−、ＢＢｒ４−など）、リン化合物イオン、ハロゲン酸素酸イオン、フルオロ硫酸イオン、メチル硫酸イオン、芳香環ハロゲン或いはハロゲンをもつアルキル基を置換基として有するテトラフェニルホウ素化合物イオンなどが挙げられ、ヨウ素イオンが好ましい。
【００６９】
構造式（ＩＸ）で示されるもののうち、特に好ましい核酸を染色できる蛍光色素は、次の構造式（Ｘ）で示されるＮＫ−３２１である。
【化１１】
【００７０】
＜構造式（ＸＩ）＞
【化１２】
（式中、Ｒ１及びＲ２は、低級アルキル基であり；ｎは１又は２であり；Ｘ−はアニオンである）。
【００７１】
構造式（ＸＩ）における低級アルキル基、並びにＸ−のアニオンは、構造式（IＸ）と同様である。
【００７２】
構造式（ＸＩ）で示されるもののうち、特に好ましい核酸を染色できる蛍光色素は、次の構造式（ＸＩＩ）により示される。
【化１３】
【００７３】
＜構造式（ＸＩＩＩ）＞
【化１４】
（式中、Ｒ１は水素原子又は低級アルキル基であり；Ｒ２及びＲ３は水素原子、低級アルキル基又は低級アルコキシ基であり；Ｒ４は水素原子、アシル基又は低級アルキル基であり；Ｒ５は水素原子又は置換されていてもよい低級アルキル基であり；Ｚは硫黄原子、酸素原子、又は低級アルキル基で置換された炭素原子であり；ｎは１又は２であり；Ｘ−はアニオンである）。
【００７４】
構造式（ＸＩＩＩ）における低級アルキル基、並びにＸ−のアニオンは、構造式（ＩＸ）と同様である。低級アルコキシ基は、炭素数１〜６のアルコキシ基を示す。具体的な低級アルコキシ基としては、メトキシ基、エトキシ基、プロポキシ基等が挙げられ、特にメトキシ基、エトキシ基が好ましい。アシル基としては、脂肪族カルボン酸から誘導されたアシル基が好ましい。具体的なアシル基としては、アセチル基、プロピオニル基等が挙げられ、特にアセチル基が好ましい。置換されていてもよい低級アルキル基の置換基としては、水酸基及びハロゲン原子（フッ素、塩素、臭素又はヨウ素）が挙げられる。置換されていてもよい低級アルキル基は、１〜３個の置換基で置換されることができる。置換されていてもよい低級アルキル基としては、特に１個の水酸基で置換された低級アルキル基が好ましい。なお、Ｚとしては硫黄原子が好ましく、Ｘ−は、臭素イオン又はＢＦ４−が好ましい。
【００７５】
構造式（ＸＩＩＩ）で示されるもののうち、特に好ましい核酸を染色できる蛍光色素は、以下の３つの構造式（ＸＩＶ）〜（ＸＶＩ）により示される。
【化１５】
【００７６】
【化１６】
【００７７】
【化１７】
【００７８】
＜構造式（ＸＶＩＩ）＞
【化１８】
（式中、Ｘ１及びＸ２は、独立してＣｌ又はＩである）
【００７９】
＜構造式（ＸＶＩＩＩ）＞
【化１９】
【００８０】
＜構造式（ＸＩＸ）＞（ＮＫ−１５７０）
【化２０】
【００８１】
＜構造式（ＸＸ）＞（ＮＫ−１０４９）
【化２１】
【００８２】
＜構造式（ＸＸＩ）＞（ＮＫ−９８）
【化２２】
【００８３】
＜構造式（ＸＸＩＩ）＞（ＮＫ−１４１）。
【化２３】
【００８４】
上記の核酸を染色できる蛍光色素のうち、第４試薬に含まれる特に好ましい蛍光色素は、次の構造式（ＸＸＩＩＩ）で示されるＮＫ−３２１である。
【化２４】
【００８５】
上記の核酸を染色できる蛍光色素の第４試薬中の濃度は、１０〜５００ｍｇ／Ｌが好ましく、特に３０〜１００ｍｇ／Ｌが好ましい。なお、第４試薬は、核酸を染色できる蛍光色素を１種類又は２種類以上含むことができる。
【００８６】
検出部２３は、第１測定及び第２測定を行うことができる光学検出器Ｄを有している。第１測定では、血液検体中に存在する白血球（正常白血球）がＬＹＭＰＨ（リンパ球）、ＥＯ（好酸球）、ＮＥＵＴ（好中球）とＢＡＳＯ（好塩基球）とによってなる血球群、及びＭＯＮＯ（単球）の４つのサブクラスに分類される。かかる第１測定においては、血液検体、第１試薬、及び第２試薬が混合された測定試料（第１測定試料）が光学検出器Ｄに供給され、このときに光学検出器Ｄによって光学情報（蛍光強度、前方散乱光強度及び側方散乱光強度）が検出される。第１測定によって得られた光学情報は情報処理ユニット５に供給され、これによって血液検体中の正常白血球が４分類される。また、情報処理ユニット３は、第１測定によって得られた光学情報に基づいて、後述するように血液検体中に異常単核球（異常リンパ球、異型リンパ球、及び芽球からなるグループ）を検出することができる。
【００８７】
第２測定では、血液検体中の異常リンパ球及び芽球が検出される。かかる第２測定においては、血液検体、第３試薬、及び第４試薬が混合された測定試料（第２測定試料）が光学検出器Ｄに供給され、このときに光学検出器Ｄによって光学情報（蛍光強度、前方散乱光強度及び側方散乱光強度）が検出される。第２測定によって得られた光学情報は情報処理ユニット５に供給され、これによって第１測定によって検出された血液検体中の異常単核球が異常リンパ球、異型リンパ球、及び芽球の何れであるかが特定される。
【００８８】
図３は、光学検出器Ｄの概要構成を示している。この光学検出器Ｄは、フローセル２３１に測定試料及びシース液を送り込み、フローセル２３１中に液流を発生させ、フローセル２３１内を通過する液流に含まれる血球に半導体レーザ光を照射して測定するものであり、シースフロー系２３２、ビームスポット形成系２３３、前方散乱光受光系２３４、側方散乱光受光系２３５、蛍光受光系２３６を有している。
【００８９】
シースフロー系２３２は、フローセル２３１内に測定試料をシース液に包まれた状態で流すように構成されている。ビームスポット形成系２３３は、半導体レーザ２３７から照射された光が、コリメータレンズ２３８とコンデンサレンズ２３９とを通って、フローセル２３１に照射されるよう構成されている。また、ビームスポット形成系２３３は、ビームストッパ２４０も備えている。
【００９０】
前方散乱光受光系２３４は、前方への散乱光を前方集光レンズ２４１によって集光し、ピンホール２４２を通った光をフォトダイオード（前方散乱光受光部）２４３で受光するように構成されている。
【００９１】
側方散乱光受光系２３５は、側方への散乱光を側方集光レンズ２４４にて集光するとともに、一部の光をダイクロイックミラー２４５で反射させ、フォトダイオード（側方散乱光受光部）２４６で受光するよう構成されている。
【００９２】
光散乱は、光の進行方向に血球のような粒子が障害物として存在すると、粒子により光がその進行方向を変えることによって生じる現象である。この散乱光を検出することによって、粒子の大きさ及び材質に関する情報を得ることができる。特に、前方散乱光からは、粒子（血球）の大きさに関する情報を得ることができる。また、側方散乱光からは、粒子内部の情報を得ることができる。血球粒子にレーザ光が照射された場合、側方散乱光強度は細胞内部の複雑さ（核の形状、大きさ、密度及び顆粒の量）に依存する。したがって、これら散乱光強度は、白血球の分類、異常単核球の検出、及び芽球の検出その他の測定に利用することができる。
【００９３】
蛍光受光系２３６は、ダイクロイックミラー２４５を透過した光をさらに分光フィルタ２４７に通し、アバランシェフォトダイオード（蛍光受光部）２４８で受光するよう構成されている。
【００９４】
蛍光物質により染色された血球に光を照射すると、照射した光の波長より長い波長の光を発する。蛍光の強度はよく染色されていれば強くなり、この蛍光強度を測定することによって血球の染色度合いに関する情報を得ることができる。したがって、蛍光強度の差は、白血球の分類、異常単核球の検出、異常リンパ球の検出、芽球の検出等に利用することができる。
【００９５】
次に、図２に戻って、検体容器搬送部２５の構成について説明する。検体容器搬送部２５は、検体容器Ｔを把持可能なハンド部２５ａを備えている。ハンド部２５ａは、互いに対向して配置された一対の把持部材を備えており、この把持部材を互いに近接及び離反させることが可能である。かかる把持部材を、検体容器Ｔを挟んだ状態で近接させることにより、検体容器Ｔを把持することができる。また、検体容器搬送部２５は、ハンド部２５ａを上下方向及び前後方向（Ｙ方向）に移動させることができ、さらに、ハンド部２５ａを揺動させることができる。これにより、サンプルラックＬに収容され、検体供給位置４３ａに位置した検体容器Ｔをハンド部２５ａにより把持し、その状態でハンド部２５ａを上方に移動させることによりサンプルラックＬから検体容器Ｔを抜き出し、ハンド部２５ａを揺動させることにより、検体容器Ｔ内の検体を撹拌することができる。
【００９６】
また、検体容器搬送部２５は、検体容器Ｔを挿入可能な穴部を有する検体容器セット部２５ｂを備えている。上述したハンド部２５ａによって把持された検体容器Ｔは、撹拌完了後移動され、把持した検体容器Ｔを検体容器セット部２５ｂの穴部に挿入する。その後、把持部材を離反させることにより、ハンド部２５ａから検体容器Ｔが開放され、検体容器セット部２５ｂに検体容器Ｔがセットされる。かかる検体容器セット部２５ｂは、ステッピングモータの動力によって、図中Ｙ１及びＹ２方向へ水平移動可能である。
【００９７】
測定ユニット２の内部には、バーコード読取部２６が設けられている。検体容器セット部２５ｂは、バーコード読取部２６の近傍のバーコード読取位置２６ａ及び検体吸引部２１による吸引位置へ移動可能である。検体容器セット部２５ｂがバーコード読取位置２６ａへ移動したときには、バーコード読取部２６により検体バーコードが読み取られる。また、検体容器セット部２５ｂが吸引位置へ移動したときには、検体吸引部２１により、セットされた検体容器Ｔから検体が吸引される。
【００９８】
＜情報処理ユニットの構成＞
次に、情報処理ユニット５の構成について説明する。情報処理ユニット５は、コンピュータにより構成されている。図４は、情報処理ユニット５の構成を示すブロック図である。情報処理ユニット５は、コンピュータ５ａによって実現される。図４に示すように、コンピュータ５ａは、本体５１と、画像表示部５２と、入力部５３とを備えている。本体５１は、ＣＰＵ５１ａ、ＲＯＭ５１ｂ、ＲＡＭ５１ｃ、ハードディスク５１ｄ、読出装置５１ｅ、入出力インタフェース５１ｆ、通信インタフェース５１ｇ、及び画像出力インタフェース５１ｈを備えており、ＣＰＵ５１ａ、ＲＯＭ５１ｂ、ＲＡＭ５１ｃ、ハードディスク５１ｄ、読出装置５１ｅ、入出力インタフェース５１ｆ、通信インタフェース５１ｇ、及び画像出力インタフェース５１ｈは、バス５１ｊによって接続されている。
【００９９】
ＣＰＵ５１ａは、ＲＡＭ５１ｃにロードされたコンピュータプログラムを実行することが可能である。そして、後述するような血液分析用並びに測定ユニット２及び検体搬送ユニット４の制御用のコンピュータプログラム５４ａを当該ＣＰＵ５１ａが実行することにより、コンピュータ５ａが情報処理ユニット５として機能する。
【０１００】
ハードディスク５１ｄは、オペレーティングシステム及びアプリケーションプログラム等、ＣＰＵ５１ａに実行させるための種々のコンピュータプログラム及び当該コンピュータプログラムの実行に用いられるデータがインストールされている。後述する処理をＣＰＵ５１ａに実行させるためのコンピュータプログラム５４ａも、このハードディスク５１ｄにインストールされている。また、このコンピュータプログラム５４ａは、イベントドリブン型のコンピュータプログラムである。
【０１０１】
読出装置５１ｅは、フレキシブルディスクドライブ、ＣＤ−ＲＯＭドライブ、またはＤＶＤ−ＲＯＭドライブ等によって構成されており、可搬型記録媒体５４に記録されたコンピュータプログラムまたはデータを読み出すことができる。また、可搬型記録媒体５４には、コンピュータを情報処理ユニット５として機能させるためのコンピュータプログラム５４ａが格納されており、コンピュータ５ａが当該可搬型記録媒体５４からコンピュータプログラム５４ａを読み出し、当該コンピュータプログラム５４ａをハードディスク５１ｄにインストールすることが可能である。
【０１０２】
また、ハードディスク５１ｄには、例えば米マイクロソフト社が製造販売するWindows（登録商標）等のマルチタスクオペレーティングシステムがインストールされている。以下の説明においては、本実施の形態に係るコンピュータプログラム５４ａは当該オペレーティングシステム上で動作するものとしている。
【０１０３】
入出力インタフェース５１ｆは、例えばUSB，IEEE1394，又はRS-232C等のシリアルインタフェース、SCSI，IDE，又は IEEE1284等のパラレルインタフェース、及びＤ／Ａ変換器、Ａ／Ｄ変換器等からなるアナログインタフェース等から構成されている。入出力インタフェース５１ｆには、キーボード及びマウスからなる入力部５３が接続されており、ユーザが当該入力部５３を使用することにより、コンピュータ５ａにデータを入力することが可能である。また、入出力インタフェース５１ｆは、測定ユニット２及び検体搬送ユニット４に接続されている。これにより、情報処理ユニット５は、測定ユニット２及び検体搬送ユニット４のそれぞれを制御可能となっている。
【０１０４】
通信インタフェース５１ｇは、Ethernet（登録商標）インタフェースである。通信インタフェース５１ｇはＬＡＮを介してホストコンピュータ６に接続されている（図２参照）。コンピュータ５ａは、通信インタフェース５１ｇにより、所定の通信プロトコルを使用して当該ＬＡＮに接続されたホストコンピュータ６との間でデータの送受信が可能である。
【０１０５】
［血液分析装置の測定動作］
以下、本実施の形態に係る血液分析装置１の動作について説明する。血液分析装置１は、以下に示すような検体分析動作を実行する。図５は、血液分析装置１による検体分析動作の手順を示すフローチャートである。
【０１０６】
図５に示すように、検体分析動作においては、まず、検体の初検（１回目の測定）が行われる。初検は、測定ユニット２により第１測定試料を測定する第１測定工程（ステップＳ１）と、第１測定工程によって得られた測定データを情報処理ユニット５により解析処理する第１データ処理（ステップＳ２）とによって構成される。
【０１０７】
まず、検体容器Ｔを保持したサンプルラックＬがオペレータによって検体搬送ユニット４に載置される。検体搬送ユニット４によってサンプルラックＬが搬送され、測定対象の検体が収容されている検体容器Ｔが検体供給位置４３ａに位置する。次に、測定ユニット２のハンド部２５ａにより、当該検体容器Ｔが把持され、サンプルラックＬからこの検体容器Ｔが取り出される。ハンド部２５ａはその後揺動運動を行い、検体容器Ｔの内部の検体が撹拌される。次に、検体容器セット部２５ｂにこの検体容器Ｔが挿入され、Ｙ方向へと検体容器セット部２５ｂが移動し、バーコード読取部２６による検体バーコード読み取りを行った後、吸引位置に到達する。その後、以下の第１測定工程が実行される。
【０１０８】
第１測定工程
まず、第１測定工程について説明する。血液分析装置１は、第１測定工程では、全血検体（１７μＬ）と第１試薬（１ｍＬ）と第２試薬（２０μＬ）とを混合して第１測定試料を作成し、この第１測定試料を光学検出器Ｄにてフローサイトメトリー法によって測定する。ここで第１試薬としては、上述のストマトライザー４ＤＬを使用し、第２試薬としては、上述のストマトライザー４ＤＳを用いる。
【０１０９】
図６は、第１測定工程での血液分析装置１の動作手順を示すフローチャートである。まず、ＣＰＵ５１ａは、検体吸引部２１を制御して、吸引管２１１により検体容器Ｔの全血検体を定量吸引する（ステップＳ１０１）。ステップＳ１０１の処理は、具体的には、吸引管２１１が検体容器Ｔの中に挿入され、シリンジポンプの駆動によって、全血検体が定量（８０．０μＬ）吸引される。
【０１１０】
次に、ＣＰＵ５１ａは、測定ユニット２を制御することにより、試薬容器２２１ａから第１試薬（１ｍＬ）を、試薬容器２２１ｂから第２試薬（２０μＬ）を、吸引管２１１から全血検体（１７μＬ）を第１混合チャンバＭＣ１にそれぞれ供給する（ステップ１０２）。
【０１１１】
次に、ＣＰＵ５１ａは、第１混合チャンバＭＣ１への第１試薬、第２試薬及び全血検体の供給から２１．８秒間経過したか否かを判定し（ステップＳ１０３）、２１．８秒間待機する。ここで、ヒータにより第１混合チャンバＭＣ１は４１℃に加温されており、これにより、第１試薬と第２試薬と血液検体との混合液が４１℃で２１．８秒加温され、第１測定試料が調製される。
【０１１２】
そして、第１測定試料を対象に光学検出器Ｄにて光学測定が行われる（ステップＳ１０４）。ステップＳ１０４の処理においては、具体的には、第１測定試料とシース液とが同時に光学検出器Ｄのフローセル２３１に供給され、そのときの前方散乱光がフォトダイオード２４３で受光され、側方散乱光がフォトダイオード２４６で受光され、蛍光がアバランシェフォトダイオード２４８で受光される。このような光学検出器Ｄの各受光素子により出力される出力信号（アナログ信号）は、Ａ／Ｄ変換器によりデジタル信号に変換され、所定の信号処理が施されてデジタルデータである第１測定データに変換され、情報処理ユニット５にこの第１測定データが送信される。この信号処理においては、第１測定データに含まれる特徴パラメータとして、前方散乱光信号（前方散乱光強度）、側方散乱光信号（側方散乱光強度）、及び蛍光信号（蛍光強度）が得られる。これにより、第１測定工程が終了する。また、後述するように、情報処理ユニット５のＣＰＵ５１ａは、第１測定データに対して所定の解析処理を実行することにより、ＮＥＵＴ、ＬＹＭＰＨ、ＥＯ、ＢＡＳＯ、ＭＯＮＯ、及びＷＢＣ等の数値データを含む分析結果データを生成し、ハードディスク５１ｄに分析結果データを記憶する。
【０１１３】
第１データ処理
次に、第１データ処理について説明する。図７は、本実施の形態に係る血液分析装置の第１データ処理の手順を示すフローチャートである。血液分析装置１の情報処理ユニット５は、測定ユニット２から第１測定データを受信する（ステップＳ１５１）。ＣＰＵ５１ａによって実行されるコンピュータプログラム５４ａはイベントドリブン型のプログラムであり、第１測定データを受信するイベントが発生すると、ステップＳ１５２の処理が呼び出される。
【０１１４】
ＣＰＵ５１ａは、第１測定データを用いて正常白血球を複数のサブクラスに分類し、各サブクラスに属する血球の数を計数する（ステップＳ１５２）。また、ＣＰＵ５１ａは、第１測定データを用いて異常単核球の細胞群（以下、「異常単核球群」という。）を検出し、検出された異常単核球群に含まれる血球数ＣＮ１を計数する（ステップＳ１５３）。
【０１１５】
ステップＳ１５２及びＳ１５３の処理について詳しく説明する。図８は、第１測定データにおける側方散乱光強度及び蛍光強度のスキャッタグラムである。図８に示す第１測定データにおける側方散乱光強度及び蛍光強度のスキャッタグラムでは、幼若顆粒球のクラスター、好酸球のクラスター、好中球と好塩基球とによってなる血球群のクラスター、リンパ球のクラスター、及び単球のクラスターが現れる。図８のスキャッタグラムに示されるように、第１測定データの側方散乱光強度及び蛍光強度を利用することにより、正常白血球を、好酸球、好中球と好塩基球とによってなる血球群、リンパ球、及び単球に分類することができる。また、ここでは説明を省略するが、血液分析装置１は、血液検体を所定の試薬と混合して好中球と好塩基球とを個別に検出するための測定試料を調整し、この測定試料を光学検出器Ｄで測定することによって得られた測定データを用いて、好中球と好塩基球とを個別に検出することができる。血液分析装置１は、こうして得られた好中球及び好塩基球の検出結果と、上記の第１測定データの解析によって得られた４つのサブクラスの検出結果とを用いて、血液検体に含まれる正常白血球を５つのサブクラス（好酸球、好中球、好塩基球、リンパ球、及び単球）に分類する。ステップＳ１５２の処理においては、ＣＰＵ５１ａは、第１測定データの前方散乱光強度、側方散乱光強度及び蛍光強度を用いて、成熟した白血球をサブクラスに分類し、それぞれのサブクラスに属する血球数を計数する。
【０１１６】
また、本実施の形態においては、図８において破線で示す側方散乱光強度及び蛍光強度の範囲を、異常単核球群の検出領域Ａ１として定める。図８に示すように、検出領域Ａ１は、リンパ球の出現領域よりも蛍光強度が高い部分に設けられる。本願発明者らは、臨床検体を使用した実験を行い、実験結果の詳細な検討を実施した結果、この検出領域Ａ１において、異型リンパ球、異常リンパ球、リンパ芽球及び骨髄芽球の何れもが出現することを見出した。したがって、この検出領域Ａ１を用いることで、異常単核球の有無を精度良く検出することができるが、検出領域Ａ１では、検出された異常単核球が異常リンパ球、芽球、及び異型リンパ球の何れであるかを特定することはできないことが分かった。ステップＳ１５３においては、上述した検出領域Ａ１の内部に出現する細胞群が異常単核球群として検出され、血球数ＣＮ１が計数される。
【０１１７】
次にＣＰＵ５１ａは、ＣＮ１が所定の閾値Ｔ１より大きいか否かを判定する（ステップＳ１５４）。閾値Ｔ１は、血液検体中に異常単核球が存在するか否かを判定するための基準値である。ＣＮ１が閾値Ｔ１よりも大きい場合には、血液検体中に異常単核球が存在すると判定され、ＣＮ１が閾値Ｔ１以下の場合には、血液検体中に異常単核球が存在しないと判定される。
【０１１８】
ステップＳ１５４において、ＣＮ１≦Ｔ１の場合には（ステップＳ１５４においてＮＯ）、ＣＰＵ５１ａは、ＲＡＭ５１ｃに設けられた再検フラグに「０」をセットする（ステップＳ１５５）。ここで、再検フラグは再検（血液分析装置１による２回目の検体測定）の要否を示す情報であり、「１」がセットされている場合には再検が必要であることを示し、「０」がセットされている場合には再検が不要であることを示す。その後、ＣＰＵ５１ａは、ステップＳ１５７へ処理を移す。
【０１１９】
一方、ステップＳ１５４において、ＣＮ１＞Ｔ１の場合には（ステップＳ１５４においてＹＥＳ）、ＣＰＵ５１ａは、再検が必要と判断し、ＲＡＭ５１ｃに設けられた再検フラグに「１」をセットする（ステップＳ１５６）。その後、ＣＰＵ５１ａは、ステップＳ１５７へ処理を移す。
【０１２０】
ＣＰＵ５１ａは、上述のようにして得た分析結果（再検フラグを含む）をハードディスク５１ｄに格納する（ステップＳ１５７）。次にＣＰＵ５１ａは、ハードディスク５１ｄに記憶した分析結果を示す分析結果画面を画像表示部５２に表示させ（ステップＳ１５８）、第１データ処理を終了する。
【０１２１】
図５を参照し、検体分析動作について説明する。上記のような初検を終了した後、血液分析装置１のＣＰＵ５１ａは、再検の要否結果を確認する（ステップＳ３）。検体の再検が不要な場合、即ち、再検フラグに「０」がセットされている場合には（ステップＳ３においてＮＯ）、血液分析装置１は検体分析動作を終了する。一方、検体の再検が必要な場合、即ち、再検フラグに「１」がセットされている場合には（ステップＳ３においてＹＥＳ）、血液分析装置１は、検体の再検を実行する。再検は、初検が実施された血液検体が、異常リンパ球を含んでいるか否か、芽球を含んでいるか否か、及び異型リンパ球を含んでいるか否かを判定するための動作である。かかる再検は、ステップＳ１と同様の第１測定工程（ステップＳ４）と、測定ユニット２により第２測定試料を測定する第２測定工程（ステップＳ５）と、第１測定工程及び第２測定工程によって得られた測定データを情報処理ユニット５により解析処理する第２データ処理（ステップＳ６）とによって構成される。なお、再検における第１測定工程は、初検における第１測定工程と同様であるので、その説明を省略する。
【０１２２】
第２測定工程
次に、第２測定工程について説明する。この第２測定工程は、第１測定工程と時間的に一部重複して実行される。血液分析装置１は、第２測定工程では、全血検体（１７．０μＬ）と第３試薬（１０００μＬ）と第４試薬（２０μＬ）とを混合して第２測定試料を作成し、この第２測定試料を光学検出器Ｄにてフローサイトメトリー法によって測定する。
【０１２３】
ここで、本実施の形態においては、第３試薬として、以下に示される試薬が用いられる。
＜第３試薬＞
ＭＯＰＳ ２．０９ｇ／Ｌ
ポリオキシエチレン（２０）オレイルエーテル １．２５ｇ／Ｌ
Ｎ−ラウロイルサルコシン酸ナトリウム ０．２６８ｇ／Ｌ
ＥＤＴＡ−２Ｋ ０．５ｇ／Ｌ
上記各成分を混合しさらにＮａＯＨを添加してｐＨを７．３に調製した。第３試薬の浸透圧は３７ｍＯｓｍ／Ｋｇ、電気伝導度は０．７４５ｍＳ／ｃｍであった。
＜第４試薬＞
ＮＫ−３２１
５０ｍｇ／Ｌ
エチレングリコールに溶解されたＮＫ−３２１（５０ｍｇ／Ｌ）を第４試薬とした。
【０１２４】
図９は、第２測定工程での血液分析装置１の動作手順を示すフローチャートである。まず、ＣＰＵ５１ａは測定ユニット２を制御することにより、試薬容器２２２ａから第３試薬（１０００μＬ）を、試薬容器２２２ｂから第４試薬（２０μＬ）を、吸引管２１１から全血検体（１７．０μＬ）を、第１混合チャンバＭＣ１にそれぞれ供給する（ステップＳ２０１）。このステップＳ２０１において第１混合チャンバＭＣ１に供給される検体は、上述したステップＳ１０１において吸引管２１１により吸引された全血検体の一部である。つまり、ステップＳ１０１においては、第１混合チャンバＭＣ１に供給する検体と、第２混合チャンバＭＣ２に供給される検体とが一度に検体容器Ｔから吸引される。
【０１２５】
次に、ＣＰＵ５１ａは、第１混合チャンバＭＣ１への第３試薬、第４試薬及び全血検体の供給から１８．５秒間経過したか否かを判定し（ステップＳ２０２）、１８．５秒間待機する。ここで、ヒータにより第１混合チャンバＭＣ１は３４．０℃に加温されており、これにより、第３試薬と第４試薬と血液検体との混合液が３４．０℃で１８．５秒加温され、第２測定試料が調製される。
【０１２６】
そして、第２測定試料を対象に光学検出器Ｄにて光学測定が行われる（ステップＳ２０３）。ステップＳ２０３の処理においては、具体的には、第２測定試料とシース液とが同時に光学検出器Ｄのフローセル２３１に供給され、そのときの前方散乱光がフォトダイオード２４３で受光され、側方散乱光がフォトダイオード２４６で受光され、蛍光がアバランシェフォトダイオード２４８で受光される。このような光学検出器Ｄの各受光素子により出力される出力信号（アナログ信号）は、上述した第１測定工程と同じくデジタル信号に変換され、所定の信号処理が施されてデジタルデータである第２測定データに変換され、情報処理ユニット５にこの第２測定データが送信される。この信号処理においては、第２測定データに含まれる特徴パラメータとして、前方散乱光信号（前方散乱光強度）、側方散乱光信号（側方散乱光強度）、及び蛍光信号（蛍光強度）が得られる。これにより、第２測定工程が終了する。また、後述するように、情報処理ユニット５のＣＰＵ５１ａは、第２測定データに対して所定の解析処理を実行することにより、異常リンパ球、芽球、又は異型リンパ球を検出し、この検出結果を含む分析結果データを生成し、ハードディスク５１ｄに分析結果データを記憶する。
【０１２７】
第２データ処理
次に、第２データ処理について説明する。図１０は、本実施の形態に係る血液分析装置の第２データ処理の手順を示すフローチャートである。血液分析装置１の情報処理ユニット５は、測定ユニット２から第１測定データを受信し（ステップＳ３０１）、また第２測定データを受信する（ステップＳ３０２）。ＣＰＵ５１ａによって実行されるコンピュータプログラム５４ａはイベントドリブン型のプログラムであり、第１測定データ及び第２測定データを受信するイベントが発生すると、ステップＳ３０３の処理が呼び出される。
【０１２８】
ＣＰＵ５１ａは、第１測定データを用いて正常白血球を複数のサブクラスに分類し、各サブクラスに属する血球の数を計数する（ステップＳ３０３）。また、ＣＰＵ５１ａは、第１測定データを用いて異常単核球の細胞群（以下、「異常単核球群」という。）を検出し、検出された異常単核球群に含まれる血球数ＣＮ１を計数する（ステップＳ３０４）。ステップＳ３０３の処理は上述したステップＳ１５２の処理と同様であり、ステップＳ３０４の処理は上述したステップＳ１５３の処理と同様であるので、その説明を省略する。
【０１２９】
次にＣＰＵ５１ａは、ＣＮ１が所定の閾値Ｔ１より大きいか否かを判定する（ステップＳ３０５）。閾値Ｔ１は、上述したステップＳ１５４における閾値Ｔ１と同じ基準値である。ＣＮ１が閾値Ｔ１よりも大きい場合には、血液検体中に異常単核球が存在すると判定され、ＣＮ１が閾値Ｔ１以下の場合には、血液検体中に異常単核球が存在しないと判定される。
【０１３０】
ステップＳ３０５において、ＣＮ１≦Ｔ１の場合には（ステップＳ３０５においてＮＯ）、ＣＰＵ５１ａは、ＲＡＭ５１ｃに設けられた異常リンパ球フラグ、異型リンパ球フラグ、及び芽球フラグのそれぞれに「０」をセットする（ステップＳ３０６）。ここで、異常リンパ球フラグは血液検体における異常リンパ球の有無を示すフラグであり、「１」がセットされている場合には異常リンパ球が存在していることを示し、「０」がセットされている場合には異常リンパ球が存在していないことを示す。また、異型リンパ球フラグは血液検体における異型リンパ球の有無を示すフラグであり、「１」がセットされている場合には異型リンパ球が存在していることを示し、「０」がセットされている場合には異型リンパ球が存在していないことを示す。同じく、芽球フラグは血液検体における芽球の有無を示すフラグであり、「１」がセットされている場合には芽球が存在していることを示し、「０」がセットされている場合には芽球が存在していないことを示す。その後、ＣＰＵ５１ａは、ステップＳ３１４へ処理を移す。
【０１３１】
一方、ステップＳ３０５において、ＣＮ１＞Ｔ１の場合には（ステップＳ３０５においてＹＥＳ）、ＣＰＵ５１ａは、第２測定データを用いて異常リンパ球の細胞群（以下、「異常リンパ球群」という。）を検出し、検出された異常リンパ球群に含まれる血球数ＣＮ２を計数する（ステップＳ３０７）。
【０１３２】
ステップＳ３０７の処理について詳しく説明する。図１１は、第２測定データにおける前方散乱光強度及び蛍光強度のスキャッタグラムであり、図１２は、第２測定データにおける側方散乱光強度及び蛍光強度のスキャッタグラムである。図１１に示す第２測定データにおける前方散乱光強度及び蛍光強度のスキャッタグラムでは、芽球のクラスター、顆粒球（好中球と好酸球と好塩基球とからなる血球群）のクラスター、リンパ球のクラスター、及び単球のクラスターが現れる。また、図１２に示す第２測定データにおける側方散乱光強度及び蛍光強度のスキャッタグラムでも、芽球のクラスター、顆粒球のクラスター、リンパ球のクラスター、及び単球のクラスターが現れる。
【０１３３】
本実施の形態においては、図１１において破線で示す前方散乱光強度及び蛍光強度の範囲を、異常リンパ球群の検出領域Ａ２として定める。図１１に示すように、検出領域Ａ２は、リンパ球及び単球の出現領域よりも蛍光強度が高い部分に設けられる。本願発明者らは、臨床検体を使用した実験を行い、実験結果の詳細な検討を実施した結果、この検出領域Ａ２及び図１２に示す領域Ａ２１において異常リンパ球が出現し、図１１に示す領域Ａ３１及び図１２に示す領域Ａ３２において芽球が出現することを見出した。また、発明者らは、詳細に実験結果を評価した結果、第２測定データにおける前方散乱光強度及び蛍光強度のスキャッタグラム並びに側方散乱光強度及び蛍光強度のスキャッタグラムにおいては、異型リンパ球は、上述した領域Ａ２、Ａ２１、Ａ３１、及びＡ３２の何れにも出現せず、正常白血球の出現領域に出現することを見出した。したがって、図１１に示す領域Ａ２または図１２に示す領域Ａ２１を用いることで、異常リンパ球を異型リンパ球及び芽球と区別して検出できることが分かった。ステップＳ３０７においては、上述した検出領域Ａ２の内部に出現する細胞群が異常リンパ球群として検出され、血球数ＣＮ２が計数される。なお、ステップＳ３０７においては、図１２に示す検出領域Ａ２１の内部に出現する細胞群を異常リンパ球群として検出してもよい。
【０１３４】
次にＣＰＵ５１ａは、ＣＮ２が所定の閾値Ｔ２より大きいか否かを判定する（ステップＳ３０８）。閾値Ｔ２は、血液検体中に異常リンパ球が存在するか否かを判定するための基準値である。ステップＳ３０８では、ＣＮ２が閾値Ｔ２よりも大きい場合には、血液検体中に異常リンパ球が存在すると判定され、ＣＮ２が閾値Ｔ２以下の場合には、血液検体中に異常リンパ球が存在しないと判定される。
【０１３５】
ステップＳ３０８において、ＣＮ２＞Ｔ２の場合には（ステップＳ３０８においてＹＥＳ）、ＣＰＵ５１ａは、ＲＡＭ５１ｃに設けられた異常リンパ球フラグに「１」をセットし、異型リンパ球フラグ、及び芽球フラグのそれぞれに「０」をセットする（ステップＳ３０９）。その後、ＣＰＵ５１ａは、ステップＳ３１４へ処理を移す。
【０１３６】
一方、ステップＳ３０８において、ＣＮ２≦Ｔ２の場合には（ステップＳ３０８においてＮＯ）、ＣＰＵ５１ａは、第２測定データを用いて芽球の細胞群（以下、「芽球群」という。）を検出し、検出された芽球群に含まれる血球数ＣＮ３を計数する（ステップＳ３１０）。
【０１３７】
ステップＳ３１０の処理について詳しく説明する。図１３は、第２測定データにおける前方散乱光強度及び側方散乱光強度のスキャッタグラムである。図１３に示す第２測定データにおける前方散乱光強度及び側方散乱光強度のスキャッタグラムでは、顆粒球のクラスター、リンパ球のクラスター、及び単球のクラスターが現れる。また、本実施の形態においては、図１３において破線で示す前方散乱光強度及び側方散乱光強度の範囲を、芽球群の検出領域Ａ３として定める。図１３に示すように、検出領域Ａ３は、リンパ球の出現領域よりも前方散乱光強度が高い部分に設けられる。本願発明者らは、臨床検体を使用した実験を行い、実験結果の詳細な検討を実施した結果、この検出領域Ａ３において芽球が出現し、異常リンパ球及び異型リンパ球が出現しないことを見出した。したがって、検出領域Ａ３を用いることで、芽球を異常リンパ球及び異型リンパ球と区別して検出できることが分かった。ステップＳ３１０においては、上述した検出領域Ａ３の内部に出現する細胞群が芽球群として検出され、血球数ＣＮ３が計数される。なお、上述したように、図１１に示す領域Ａ３１および図１２に示す領域Ａ３２において芽球が出現し、これらの領域には異常リンパ球および異型リンパ球が出現しないことも本願発明者らは見出している。そのため、領域Ａ３１または領域Ａ３２を用いて、芽球を異常リンパ球および異型リンパ球と区別して検出してもよい。
【０１３８】
次にＣＰＵ５１ａは、ＣＮ３が所定の閾値Ｔ３より大きいか否かを判定する（ステップＳ３１１）。閾値Ｔ３は、血液検体中に芽球が存在するか否かを判定するための基準値である。ステップＳ３１１では、ＣＮ３が閾値Ｔ３よりも大きい場合には、血液検体中に芽球が存在すると判定され、ＣＮ３が閾値Ｔ３以下の場合には、血液検体中に芽球が存在しないと判定される。また、ステップＳ３１１の処理を実行する場合には、既にステップＳ３０５において血液検体中に異常単核球が存在すると判定されており、しかもステップＳ３０８において血液検体中に異常リンパ球が存在しないと判定されている。このため、ステップＳ３１１においてＣＮ３が閾値Ｔ３以下の場合には、血液検体中に異型リンパ球が存在すると判定される。
【０１３９】
換言すれば、ステップＳ３０５において血液検体中に異常単核球が存在すると判定された上で、ステップＳ３０８又はステップＳ３１１において、ＣＮ２＞Ｔ２又はＣＮ３＞Ｔ３と判定された場合には、血液検体中に存在する異常単核球が腫瘍性の異常単核球（造血器官の腫瘍に起因する異常単核球）であると判定されたことになる。また、ステップＳ３０５において血液検体中に異常単核球が存在すると判定された上で、ステップＳ３０８及びステップＳ３１１において、ＣＮ２≦Ｔ２であり、且つＣＮ３≦Ｔ３と判定された場合には、血液検体中に存在する異常単核球が反応性のものであると判定されたことになる。
【０１４０】
ステップＳ３１１において、ＣＮ３＞Ｔ３の場合には（ステップＳ３１１においてＹＥＳ）、ＣＰＵ５１ａは、ＲＡＭ５１ｃに設けられた芽球フラグに「１」をセットし、異常リンパ球フラグ及び異型リンパ球フラグのそれぞれに「０」をセットする（ステップＳ３１２）。その後、ＣＰＵ５１ａは、ステップＳ３１４へ処理を移す。
【０１４１】
一方、ステップＳ３１１において、ＣＮ３≦Ｔ３の場合には（ステップＳ３１１においてＮＯ）、ＣＰＵ５１ａは、ＲＡＭ５１ｃに設けられた異型リンパ球フラグに「１」をセットし、異常リンパ球フラグ及び芽球フラグのそれぞれに「０」をセットする（ステップＳ３１３）。その後、ＣＰＵ５１ａは、ステップＳ３１４へ処理を移す。
【０１４２】
ＣＰＵ５１ａは、上述のようにして得た分析結果（異常リンパ球フラグ、異型リンパ球フラグ、及び芽球フラグを含む）をハードディスク５１ｄに格納する（ステップＳ３１４）。次にＣＰＵ５１ａは、ハードディスク５１ｄに記憶した分析結果を示す分析結果画面を画像表示部５２に表示させ（ステップＳ３１５）、第２データ処理を終了する。
【０１４３】
以上の再検が終了すると、検体分析動作が終了する。
【０１４４】
次に、具体的な血液検体を上記の再検で測定したときのスキャッタグラムの例を示し、本実施の形態に係る血液分析装置１による測定データの分析について説明する。図１４Ａ〜図１４Ｄは、血液分析装置１のスキャッタグラムの例を示す図である。図１４Ａは、急性骨髄性白血病患者から採取した血液検体Ａを測定したときのスキャッタグラムの例を示している。図１４Ｂは、慢性リンパ性白血病患者から採取した血液検体Ｂを測定したときのスキャッタグラムの例を示している。図１４Ｃは、異型リンパ球を含有する血液検体Ｃを測定したときのスキャッタグラムの例を示している。また、図１４Ｄは、正常な血液検体Ｄを測定したときのスキャッタグラムの例を示している。
【０１４５】
急性骨髄性白血病患者の末梢血には、骨髄芽球が出現する。図１４Ａに示すように、この血液検体Ａの第１測定データにおける側方散乱光強度及び蛍光強度のスキャッタグラム（白血球分類用のスキャッタグラム）ＳＧ１１では、異常単核球群の検出領域Ａ１に、検出された血球に対応する粒子が存在している。つまり、このスキャッタグラムＳＧ１１から分かるように、血液検体Ａからは異常単核球群が検出される。また、血液検体Ａの第２測定データにおける前方散乱光強度及び蛍光強度のスキャッタグラム（異常リンパ球検出用のスキャッタグラム）ＳＧ１２では、異常リンパ球の検出領域Ａ２に、検出された血球に対応する粒子が実質的に存在していない（ごく僅かだけ存在しているが、血球数が閾値Ｔ２を超えていない）。図１４Ａには、血液検体Ａの第２測定データにおける側方散乱光強度及び蛍光強度のスキャッタグラムＳＧ１３も参考として示している。このスキャッタグラムＳＧ１３においても、異常リンパ球の出現領域Ａ２１には、実質的に血球が存在していないことが分かる。さらに、血液検体Ａの第２測定データにおける前方散乱光強度及び側方散乱光強度のスキャッタグラム（芽球検出用のスキャッタグラム）ＳＧ１４では、芽球の検出領域Ａ３に、検出された血球に対応する粒子が存在している。つまり、このスキャッタグラムＳＧ１４から分かるように、血液検体Ａからは芽球群が検出される。よって、本実施の形態に係る血液分析装置１が血液検体Ａを分析したときには、ＣＮ１＞Ｔ１且つＣＮ２≦Ｔ２且つＣＮ３＞Ｔ３となり、芽球が存在すると判定される。
【０１４６】
慢性リンパ性白血病患者の末梢血には、成熟したリンパ性白血病細胞である異常リンパ球が出現する。図１４Ｂに示すように、血液検体Ｂの白血球分類用のスキャッタグラムＳＧ２１では、異常単核球群の検出領域Ａ１に、検出された血球に対応する粒子が存在している。つまり、このスキャッタグラムＳＧ２１から分かるように、血液検体Ｂからは異常単核球群が検出される。また、血液検体Ｂの第２測定データにおける異常リンパ球検出用のスキャッタグラムＳＧ２２では、異常リンパ球の検出領域Ａ２に、検出された血球に対応する粒子が存在している。図１４Ｂには、血液検体Ｂの第２測定データにおける側方散乱光強度及び蛍光強度のスキャッタグラムＳＧ２３も参考として示している。このスキャッタグラムＳＧ２３においても、異常リンパ球の出現領域Ａ２１には、血球が存在していることが分かる。さらに、血液検体Ｂの第２測定データにおける芽球検出用のスキャッタグラムＳＧ２４では、芽球の検出領域Ａ３に、検出された血球に対応する粒子が実質的に存在していない。つまり、スキャッタグラムＳＧ２２から分かるように、血液検体Ｂからは異常リンパ球群が検出される。よって、本実施の形態に係る血液分析装置１が血液検体Ｂを分析したときには、ＣＮ１＞Ｔ１且つＣＮ２＞Ｔ２となり、異常リンパ球が存在すると判定される。
【０１４７】
図１４Ｃに示すように、異型リンパ球を含有する血液検体Ｃの白血球分類用のスキャッタグラムＳＧ３１では、異常単核球群の検出領域Ａ１に、検出された血球に対応する粒子が存在している。つまり、このスキャッタグラムＳＧ３１から分かるように、血液検体Ｃからは異常単核球群が検出される。また、血液検体Ｃの第２測定データにおける異常リンパ球検出用のスキャッタグラムＳＧ３２では、異常リンパ球の検出領域Ａ２に、検出された血球に対応する粒子が実質的に存在していない。図１４Ｃには、血液検体Ｃの第２測定データにおける側方散乱光強度及び蛍光強度のスキャッタグラムＳＧ３３も参考として示している。このスキャッタグラムＳＧ３３においても、異常リンパ球の出現領域Ａ２１には、血球が実質的に存在していないことが分かる。さらに、血液検体Ｃの第２測定データにおける芽球検出用のスキャッタグラムＳＧ３４では、芽球の検出領域Ａ３に、検出された血球に対応する粒子が実質的に存在していない。つまり、スキャッタグラムＳＧ３２及びＳＧ３４から分かるように、血液検体Ｃからは異常リンパ球群及び芽球群の何れも検出されない。よって、本実施の形態に係る血液分析装置１が血液検体Ｃを分析したときには、ＣＮ１＞Ｔ１且つＣＮ２≦Ｔ２且つＣＮ３≦Ｔ３となり、異型リンパ球が存在すると判定される。
【０１４８】
正常な末梢血には、異常単核球は出現しない。図１４Ｄに示すように、血液検体Ｄの白血球分類用のスキャッタグラムＳＧ４１では、異常単核球群の検出領域Ａ１に、検出された血球に対応する粒子が実質的に存在していない。つまり、このスキャッタグラムＳＧ４１から分かるように、血液検体Ｄからは異常単核球群が検出されない。また、血液検体Ｄの第２測定データにおける異常リンパ球検出用のスキャッタグラムＳＧ４２では、異常リンパ球の検出領域Ａ２に、検出された血球に対応する粒子が実質的に存在していない。図１４Ｄには、血液検体Ｄの第２測定データにおける側方散乱光強度及び蛍光強度のスキャッタグラムＳＧ４３も参考として示している。このスキャッタグラムＳＧ４３においても、異常リンパ球の出現領域Ａ２１には、血球が実質的に存在していないことが分かる。さらに、血液検体Ｄの第２測定データにおける芽球検出用のスキャッタグラムＳＧ４４では、芽球の検出領域Ａ３に、検出された血球に対応する粒子が実質的に存在していない。スキャッタグラムＳＧ４２及びＳＧ４４から分かるように、血液検体Ｄからは異常リンパ球群及び芽球群の何れも検出されない。よって、本実施の形態に係る血液分析装置１が血液検体Ｄを分析したときには、ＣＮ１≦Ｔ１となり、異常単核球が存在しないと判定される。
【０１４９】
図１５は、血液分析装置１の分析結果画面を示す図である。図１５は、血液検体Ｂの分析結果画面を示している。図１５に示すように、分析結果画面Ｒ１においては、測定された測定項目（ＷＢＣ、ＲＢＣ、ＰＬＴ等）の数値データが表示される。血液検体Ｂには異常リンパ球が含まれており、この血液検体Ｂに係る分析結果データでは、異常リンパ球フラグが「１」に、芽球フラグ及び異型リンパ球フラグが「０」にそれぞれセットされている。したがって、血液検体Ｂの分析結果画面Ｒ１では、図１５に示すように、異常リンパ球が存在している可能性を示す情報である「Ａｂｎ Ｌｙｍｐｈｏ？」の表示が、Ｆｌａｇの欄ＦＬＧに付される。また、ここでは図示しないが、芽球フラグが「１」にセットされており、異常リンパ球フラグ及び異型リンパ球フラグがそれぞれ「０」にセットされている場合には、フラグ表示欄ＦＬＧに「Ｂｌａｓｔｓ？」が表示される。異型リンパ球フラグが「１」にセットされており、異常リンパ球フラグ及び芽球フラグがそれぞれ「０」にセットされている場合には、フラグ表示欄ＦＬＧに「Ａｔｙｐｉｃａｌ Ｌｙｍｐｈｏ？」が表示される。さらに、異常リンパ球フラグ、芽球フラグ及び異型リンパ球フラグの全てに「０」がセットされている場合には、上記の「Ａｂｎ Ｌｙｍｐｈｏ？」、「Ｂｌａｓｔｓ？」及び「Ａｔｙｐｉｃａｌ Ｌｙｍｐｈｏ？」の何れも分析結果画面に表示されない。これによって、オペレータは分析結果画面を見るだけで、その血液検体において異常リンパ球が検出されたか否か、芽球が検出されたか否か、及び異型リンパ球が検出されたか否かを把握することができる。また、この分析結果画面Ｒ１には、第１測定データの側方散乱光強度及び蛍光強度のスキャッタグラムＳＧ２１が表示される。さらに、この分析結果画面Ｒ１には、第２測定データの側方散乱光強度及び蛍光強度のスキャッタグラムＳＧ２３が表示される。オペレータはこれらのスキャッタグラムを参照することによって、血液分析装置１による異常リンパ球、芽球、異型リンパ球の検出結果の根拠を把握することができ、また血液分析装置１による異常リンパ球、芽球、異型リンパ球の検出結果の妥当性を判断することができる。
【０１５０】
以上のような構成とすることにより、血液分析装置１は、血液検体と、溶血剤が含有された第１試薬と、核酸を染色する蛍光色素が含有された第２試薬とを混合して調製した第１測定試料を光学検出器Ｄにより測定することにより、異常単核球を検出することができる。また、血液分析装置１は、異常単核球が検出された場合において、血液検体と、溶血剤が含有された第３試薬と、核酸を染色する蛍光色素が含有された第４試薬とを混合して調製した第２測定試料を光学検出器Ｄにより測定することにより、異常単核球が異常リンパ球であるか、芽球であるか、異型リンパ球であるかを判定することができる。
【０１５１】
（その他の実施の形態）
なお、試料調製部２２における、血液検体と第１試薬と第２試薬との混合及び血液検体と第３試薬と第４試薬との混合の際のそれぞれの反応温度及び反応時間は、血液検体中の血球の損傷及び染色の状態により適宜設定すればよく、特に制限されない。具体的には、反応温度が高いときは反応時間を短くし、反応温度が低いときは反応時間を長くするように調整することができる。より具体的には、血液検体と試薬の混合は、２０℃〜４５℃の温度において、３〜４０秒間行うことが好ましい。
【０１５２】
また、上述した実施の形態においては、溶血剤を含む第３試薬及び核酸を染色できる蛍光色素を含む第４試薬を用いて、第２測定工程を行う構成について述べたが、これに限定されるものではない。溶血剤及び核酸染色色素を含む１つの試薬を血液検体と混合して第２測定試料を調製し、異常リンパ球、芽球、及び異型リンパ球の検出を行う構成としてもよい。この場合、界面活性剤、可溶化剤及び蛍光色素の濃度は、上記試薬を混合した際に、上述の濃度になるように調整される。
【０１５３】
また、上述した実施の形態においては、第１測定データにおける側方散乱光強度及び蛍光強度に基づいて異常単核球の検出を行っているが、前方散乱光強度及び蛍光強度に基づいて異常単核球の検出を行ってもよい。
【０１５４】
また、上述した実施の形態においては、第１測定データにおける側方散乱光強度及び蛍光強度において、異常単核球の検出領域Ａ１の内部に出現した血球数ＣＮ１が閾値Ｔ１より大きいか否かによって、血液検体中に異常単核球が存在するか否かが判定される構成について述べたが、これに限定されるものではない。第１測定データにおける側方散乱光強度及び蛍光強度において、異常単核球の検出領域Ａ１の内部に出現した血球数の全白血球数に対する割合を求め、この割合が所定の基準値よりも大きいか否かを判定することで、異常単核球が存在するか否かを判定する構成としてもよい。また、異常リンパ球の検出においても、第２測定データにおける前方散乱光強度及び蛍光強度において、異常リンパ球の検出領域Ａ２の内部に出現した血球数の全白血球数に対する割合を求め、この割合が所定の基準値よりも大きいか否かを判定することで、異常リンパ球が存在するか否かを判定する構成としてもよい。同様に、芽球の検出においても、第２測定データにおける前方散乱光強度及び側方散乱光強度において、芽球の検出領域Ａ３の内部に出現した血球数の全白血球数に対する割合を求め、この割合が所定の基準値よりも大きいか否かを判定することで、芽球が存在するか否かを判定する構成としてもよい。
【０１５５】
また、上述した実施の形態においては、第２測定試料をフローサイトメータにて光学測定し、蛍光強度、前方散乱光強度、及び側方散乱光強度を含む光学信号を取得し、かかる光学信号を用いて血液検体中に異常リンパ球が存在するか否か、芽球が存在するか否か、異型リンパ球が存在するか否かを判定する構成について述べたが、これに限定されるものではない。蛍光強度と共に、前方散乱光強度及び側方散乱光強度以外の散乱光情報（前方広角散乱光強度等）を取得し、当該散乱光情報と蛍光強度とを用いて、血液検体中に異常リンパ球が存在するか否か、芽球が存在するか否か、異型リンパ球が存在するか否かを判定する構成としてもよい。同じく、第１測定試料の光学測定においても、蛍光強度と共に、前方散乱光強度及び側方散乱光強度以外の散乱光情報（前方広角散乱光強度等）を取得し、当該散乱光情報と蛍光強度とを用いて、白血球の分類及び異常単核球の検出を行う構成としてもよい。
【０１５６】
また、上述した実施の形態においては、ＣＰＵ５１ａが上記のコンピュータプログラム５４ａを実行することにより、測定ユニット２の制御及び測定データの処理を行う構成について述べたがこれに限定されるものではない。上記コンピュータプログラム５４ａと同様の処理を実行することが可能なＦＰＧＡ又はＡＳＩＣ等の専用ハードウェアにより、測定ユニット２の制御及び測定データの処理を実行する構成としてもよい。
【０１５７】
また、上述した実施の形態においては、単一のコンピュータ５ａによりコンピュータプログラム５４ａの全ての処理を実行する構成について述べたが、これに限定されるものではなく、上述したコンピュータプログラム５４ａと同様の処理を、複数の装置（コンピュータ）により分散して実行する分散システムとすることも可能である。
【０１５８】
また、上述した実施の形態においては、血液検体中に異常リンパ球が存在するか否かを判定し、異常リンパ球が存在しないと判定した後に、血液検体中に芽球が存在するか否かを判定しているが、本発明はこれに限られない。まず血液検体中に芽球が存在するか否かを判定し、芽球が存在しないと判定した後に、血液検体中に異常リンパ球が存在するか否かを判定するようにしてもよい。これによっても、異常単核球が異常リンパ球であるか、芽球であるか、異型リンパ球であるかを判定することができる。
【０１５９】
また、上述した実施の形態においては、初検において第１測定試料を測定し、血液検体中に異常単核球が存在するか否かを判定し、異常単核球が存在すると判定された場合に、再検において第２測定試料を測定し、これによって血液検体中に異常リンパ球が存在するか否か、芽球が存在するか否か、及び異型リンパ球が存在するか否かを判定する構成について述べたが、これに限定されるものではない。１回目の検体測定（初検）において、第１測定工程と第２測定工程を実行し、第１測定工程によって得られた第１測定データに基づいて、血液検体中に異常単核球が存在するか否かを判定し、異常単核球が存在すると判定された場合に、第２測定工程によって得られた第２測定データに基づいて、血液検体中に異常リンパ球が存在するか否か、芽球が存在するか否か、及び異型リンパ球が存在するか否かを判定する構成（つまり、上記の実施の形態の再検に相当する動作を初検において実行する構成）としてもよい。また、上記の実施の形態においては、再検においても第１測定工程を実行し、血液検体中に異常単核球が存在するか否かを判定する構成について述べたが、これに限定されるものではない。再検においては第２測定工程のみを実行し、これによって得られた第２測定データを用いて、血液検体中に異常リンパ球が存在するか否か、芽球が存在するか否か、及び異型リンパ球が存在するか否かを判定する構成としてもよい。
【符号の説明】
【０１６０】
１ 血液分析装置
２ 測定ユニット
２２ 試料調製部
２２１ａ，２２１ｂ，２２２ａ，２２２ｂ，２２３ 試薬容器
２３ 検出部
２３１ フローセル
２３７ 半導体レーザ
２４３ フォトダイオード
２４６ フォトダイオード
２４８ アバランシェフォトダイオード
５ 情報処理ユニット
５ａ コンピュータ
５１ 本体
５１ａ ＣＰＵ
５１ｂ ＲＯＭ
５１ｃ ＲＡＭ
５１ｄ ハードディスク
５１ｈ 画像出力インタフェース
５２ 画像表示部
５４ａ コンピュータプログラム
ＭＣ１，ＭＣ２ 混合チャンバ
Ｈ ヒータ
Ｄ 光学検出器
Ｒ１ 分析結果画面
【特許請求の範囲】
【請求項１】
血液検体から第１血液検体と第２血液検体とを分注する分注部と、
前記分注部によって分注された第１血液検体と、核酸を染める第１蛍光色素と、カチオン性界面活性剤を含む第１溶血剤とを混合して第１測定試料を調製し、前記分注部によって分注された第２血液検体と、核酸を染める第２蛍光色素と、カチオン性界面活性剤を含まず他の界面活性剤を含む第２溶血剤とを混合して第２測定試料を調製する試料調製部と、
前記試料調製部によって調製された第１測定試料及び第２測定試料のそれぞれに光を照射する光源と、
前記光源により光が前記第１測定試料に照射されたときに生じる蛍光及び散乱光を受光して、受光された蛍光に関する第１蛍光信号及び受光された散乱光に関する第１散乱光信号を出力し、前記光源により光が前記第２測定試料に照射されたときに生じる蛍光及び散乱光を受光して、受光された蛍光に関する第２蛍光信号及び受光された散乱光に関する第２散乱光信号を出力する受光部と、
前記第１蛍光信号及び前記第１散乱光信号、並びに前記第２蛍光信号及び前記第２散乱光信号に基づいて、前記血液検体から異型リンパ球、異常リンパ球、及び芽球を区別して検出する情報処理部と、
前記情報処理部による検出結果に基づく出力を行う出力部と、
を備える、
血液分析装置。
【請求項２】
前記情報処理部は、前記第１蛍光信号及び前記第１散乱光信号に基づいて、前記血液検体から、異型リンパ球、異常リンパ球、及び芽球のいずれかである細胞を検出し、前記血液検体から前記細胞を検出した場合に、前記第２蛍光信号及び前記第２散乱光信号に基づいて、前記血液検体から、異型リンパ球、異常リンパ球、及び芽球を区別して検出するように構成されている、
請求項１に記載の血液分析装置。
【請求項３】
前記情報処理部は、前記血液検体から、異型リンパ球、異常リンパ球、及び芽球のいずれかである細胞を検出した場合に、血液検体から第２血液検体を分注し、第２測定試料を調製するように前記分注部及び前記試料調製部を制御するように構成されている、
請求項２に記載の血液分析装置。
【請求項４】
前記情報処理部は、前記第１蛍光信号及び前記第１散乱光信号に基づいて、前記血液検体に含まれる白血球を複数の種類に分類すると共に、前記血液検体から、異型リンパ球、異常リンパ球、及び芽球のいずれかである細胞を検出するように構成されている、
請求項２又は３に記載の血液分析装置。
【請求項５】
前記情報処理部は、前記第１蛍光信号及び前記第１散乱光信号に基づき、所定範囲の蛍光強度及び散乱光強度を示す細胞を、異型リンパ球、異常リンパ球、及び芽球のいずれかである細胞として検出するように構成されている、
請求項２乃至４の何れか１項に記載の血液分析装置。
【請求項６】
前記所定範囲の蛍光強度は、正常リンパ球から得られる蛍光強度よりも大きい、
請求項５に記載の血液分析装置。
【請求項７】
前記情報処理部は、前記所定範囲の蛍光強度及び散乱光強度を示す細胞の数を反映した値を取得し、取得した値と所定の閾値とを比較することにより、前記所定範囲の蛍光強度及び散乱光強度を示す細胞を検出するように構成されている、
請求項５又は６に記載の血液分析装置。
【請求項８】
前記情報処理部は、前記第２蛍光信号に基づき、所定範囲の蛍光強度を示す細胞を、異常リンパ球として検出するように構成されている、
請求項２乃至７の何れか１項に記載の血液分析装置。
【請求項９】
前記所定範囲の蛍光強度は、正常リンパ球から得られる蛍光強度よりも大きい、
請求項８に記載の血液分析装置。
【請求項１０】
前記情報処理部は、前記所定範囲の蛍光強度を示す細胞の数を反映した値を取得し、取得した値と所定の閾値とを比較することにより、前記所定範囲の蛍光強度を示す細胞を検出するように構成されている、
請求項８又は９に記載の血液分析装置。
【請求項１１】
前記受光部は、前記光源により光が前記第２測定試料に照射されたときに生じる前方散乱光及び側方散乱光を受光して、受光された前方散乱光に関する前方散乱光信号及び受光された側方散乱光に関する側方散乱光信号を含む前記第２散乱光信号を出力するように構成されており、
前記情報処理部は、前記前方散乱光信号及び前記側方散乱光信号に基づき、所定範囲の前方散乱光強度及び側方散乱光強度を示す細胞を、芽球として検出するように構成されている、
請求項２乃至１０の何れか１項に記載の血液分析装置。
【請求項１２】
前記情報処理部は、前記第２蛍光信号及び前記第２散乱光信号に基づいて、前記血液検体から異常リンパ球及び芽球が検出されなかった場合に、前記血液検体から異型リンパ球を検出するように構成されている、
請求項２乃至１１の何れか１項に記載の血液分析装置。
【請求項１３】
血液検体から第１血液検体と第２血液検体とを分注する分注部と、
前記分注部によって分注された第１血液検体と、核酸を染める第１蛍光色素と、カチオン性界面活性剤を含む第１溶血剤とを混合して第１測定試料を調製し、前記分注部によって分注された第２血液検体と、核酸を染める第２蛍光色素と、カチオン性界面活性剤を含まず他の界面活性剤を含む第２溶血剤とを混合して第２測定試料を調製する試料調製部と、
前記試料調製部によって調製された第１測定試料及び第２測定試料のそれぞれに光を照射する光源と、
前記光源により光が前記第１測定試料に照射されたときに生じる蛍光及び散乱光を受光して、受光された蛍光に関する第１蛍光信号及び受光された散乱光に関する第１散乱光信号を出力し、前記光源により光が前記第２測定試料に照射されたときに生じる蛍光及び散乱光を受光して、受光された蛍光に関する第２蛍光信号及び受光された散乱光に関する第２散乱光信号を出力する受光部と、
前記第１蛍光信号及び前記第１散乱光信号、並びに前記第２蛍光信号及び前記第２散乱光信号に基づいて、前記血液検体から反応性の異常単核球及び腫瘍性の異常単核球を区別して検出する情報処理部と、
前記情報処理部による検出結果に基づく出力を行う出力部と、
を備える、
血液分析装置。
【請求項１４】
前記情報処理部は、前記第１蛍光信号及び前記第１散乱光信号に基づいて、前記血液検体から異常単核球を検出し、前記血液検体から前記異常単核球を検出した場合に、前記第２蛍光信号及び前記第２散乱光信号に基づいて、前記血液検体から反応性の異常単核球及び腫瘍性の異常単核球を区別して検出するように構成されている、
請求項１３に記載の血液分析装置。
【請求項１５】
前記情報処理部は、前記第１蛍光信号及び前記第１散乱光信号に基づいて、前記血液検体に含まれる白血球を複数の種類に分類すると共に、前記血液検体から異常単核球を検出するように構成されている、
請求項１４に記載の血液分析装置。
【請求項１６】
前記情報処理部は、前記第１蛍光信号及び前記第１散乱光信号に基づき、所定範囲の蛍光強度及び散乱光強度を示す細胞を、異常単核球として検出するように構成されている、
請求項１４又は１５に記載の血液分析装置。
【請求項１７】
血液検体から第１血液検体と第２血液検体とを分注するステップと、
分注された第１血液検体と、核酸を染める第１蛍光色素と、カチオン性界面活性剤を含む第１溶血剤とを混合して第１測定試料を調製するステップと、
調製された第１測定試料に光を照射するステップと、
光が前記第１測定試料に照射されたときに生じる蛍光及び散乱光を受光して、受光された蛍光に関する第１蛍光信号及び受光された散乱光に関する第１散乱光信号を取得するステップと、
分注された第２血液検体と、核酸を染める第２蛍光色素と、カチオン性界面活性剤を含まず他の界面活性剤を含む第２溶血剤とを混合して第２測定試料を調製するステップと、
調製された第２測定試料に光を照射するステップと、
光が前記第２測定試料に照射されたときに生じる蛍光及び散乱光を受光して、受光された蛍光に関する第２蛍光信号及び受光された散乱光に関する第２散乱光信号を取得するステップと、
前記第１蛍光信号及び前記第１散乱光信号並びに前記第２蛍光信号及び前記第２散乱光信号に基づいて、前記血液検体から異型リンパ球、異常リンパ球、及び芽球を区別して検出するステップと、
検出結果に基づく出力を行うステップと、
を有する、
血液分析方法。
【請求項１８】
通信部と、出力部とを備えるコンピュータに、
血液検体から分注された第１血液検体と、核酸を染める第１蛍光色素と、カチオン性界面活性剤を含む第１溶血剤とを混合して調製された第１測定試料に光を照射したときに生じる蛍光及び散乱光に関する第１蛍光信号及び第１散乱光信号を、前記通信部に受信させるステップと、
血液検体から分注された第２血液検体と、核酸を染める第２蛍光色素と、カチオン性界面活性剤を含まず他の界面活性剤を含む第２溶血剤とを混合して調製された第２測定試料に光を照射したときに生じる蛍光及び散乱光に関する第２蛍光信号及び第２散乱光信号を、前記通信部に受信させるステップと、
前記通信部により受信された前記第１蛍光信号及び前記第１散乱光信号、並びに前記第２蛍光信号及び前記第２散乱光信号に基づいて、前記血液検体から異型リンパ球、異常リンパ球、及び芽球を区別して検出するステップと、
検出結果に基づく情報を、前記出力部に出力させるステップと、
を実行させるためのコンピュータプログラム。
【請求項１】
血液検体から第１血液検体と第２血液検体とを分注する分注部と、
前記分注部によって分注された第１血液検体と、核酸を染める第１蛍光色素と、カチオン性界面活性剤を含む第１溶血剤とを混合して第１測定試料を調製し、前記分注部によって分注された第２血液検体と、核酸を染める第２蛍光色素と、カチオン性界面活性剤を含まず他の界面活性剤を含む第２溶血剤とを混合して第２測定試料を調製する試料調製部と、
前記試料調製部によって調製された第１測定試料及び第２測定試料のそれぞれに光を照射する光源と、
前記光源により光が前記第１測定試料に照射されたときに生じる蛍光及び散乱光を受光して、受光された蛍光に関する第１蛍光信号及び受光された散乱光に関する第１散乱光信号を出力し、前記光源により光が前記第２測定試料に照射されたときに生じる蛍光及び散乱光を受光して、受光された蛍光に関する第２蛍光信号及び受光された散乱光に関する第２散乱光信号を出力する受光部と、
前記第１蛍光信号及び前記第１散乱光信号、並びに前記第２蛍光信号及び前記第２散乱光信号に基づいて、前記血液検体から異型リンパ球、異常リンパ球、及び芽球を区別して検出する情報処理部と、
前記情報処理部による検出結果に基づく出力を行う出力部と、
を備える、
血液分析装置。
【請求項２】
前記情報処理部は、前記第１蛍光信号及び前記第１散乱光信号に基づいて、前記血液検体から、異型リンパ球、異常リンパ球、及び芽球のいずれかである細胞を検出し、前記血液検体から前記細胞を検出した場合に、前記第２蛍光信号及び前記第２散乱光信号に基づいて、前記血液検体から、異型リンパ球、異常リンパ球、及び芽球を区別して検出するように構成されている、
請求項１に記載の血液分析装置。
【請求項３】
前記情報処理部は、前記血液検体から、異型リンパ球、異常リンパ球、及び芽球のいずれかである細胞を検出した場合に、血液検体から第２血液検体を分注し、第２測定試料を調製するように前記分注部及び前記試料調製部を制御するように構成されている、
請求項２に記載の血液分析装置。
【請求項４】
前記情報処理部は、前記第１蛍光信号及び前記第１散乱光信号に基づいて、前記血液検体に含まれる白血球を複数の種類に分類すると共に、前記血液検体から、異型リンパ球、異常リンパ球、及び芽球のいずれかである細胞を検出するように構成されている、
請求項２又は３に記載の血液分析装置。
【請求項５】
前記情報処理部は、前記第１蛍光信号及び前記第１散乱光信号に基づき、所定範囲の蛍光強度及び散乱光強度を示す細胞を、異型リンパ球、異常リンパ球、及び芽球のいずれかである細胞として検出するように構成されている、
請求項２乃至４の何れか１項に記載の血液分析装置。
【請求項６】
前記所定範囲の蛍光強度は、正常リンパ球から得られる蛍光強度よりも大きい、
請求項５に記載の血液分析装置。
【請求項７】
前記情報処理部は、前記所定範囲の蛍光強度及び散乱光強度を示す細胞の数を反映した値を取得し、取得した値と所定の閾値とを比較することにより、前記所定範囲の蛍光強度及び散乱光強度を示す細胞を検出するように構成されている、
請求項５又は６に記載の血液分析装置。
【請求項８】
前記情報処理部は、前記第２蛍光信号に基づき、所定範囲の蛍光強度を示す細胞を、異常リンパ球として検出するように構成されている、
請求項２乃至７の何れか１項に記載の血液分析装置。
【請求項９】
前記所定範囲の蛍光強度は、正常リンパ球から得られる蛍光強度よりも大きい、
請求項８に記載の血液分析装置。
【請求項１０】
前記情報処理部は、前記所定範囲の蛍光強度を示す細胞の数を反映した値を取得し、取得した値と所定の閾値とを比較することにより、前記所定範囲の蛍光強度を示す細胞を検出するように構成されている、
請求項８又は９に記載の血液分析装置。
【請求項１１】
前記受光部は、前記光源により光が前記第２測定試料に照射されたときに生じる前方散乱光及び側方散乱光を受光して、受光された前方散乱光に関する前方散乱光信号及び受光された側方散乱光に関する側方散乱光信号を含む前記第２散乱光信号を出力するように構成されており、
前記情報処理部は、前記前方散乱光信号及び前記側方散乱光信号に基づき、所定範囲の前方散乱光強度及び側方散乱光強度を示す細胞を、芽球として検出するように構成されている、
請求項２乃至１０の何れか１項に記載の血液分析装置。
【請求項１２】
前記情報処理部は、前記第２蛍光信号及び前記第２散乱光信号に基づいて、前記血液検体から異常リンパ球及び芽球が検出されなかった場合に、前記血液検体から異型リンパ球を検出するように構成されている、
請求項２乃至１１の何れか１項に記載の血液分析装置。
【請求項１３】
血液検体から第１血液検体と第２血液検体とを分注する分注部と、
前記分注部によって分注された第１血液検体と、核酸を染める第１蛍光色素と、カチオン性界面活性剤を含む第１溶血剤とを混合して第１測定試料を調製し、前記分注部によって分注された第２血液検体と、核酸を染める第２蛍光色素と、カチオン性界面活性剤を含まず他の界面活性剤を含む第２溶血剤とを混合して第２測定試料を調製する試料調製部と、
前記試料調製部によって調製された第１測定試料及び第２測定試料のそれぞれに光を照射する光源と、
前記光源により光が前記第１測定試料に照射されたときに生じる蛍光及び散乱光を受光して、受光された蛍光に関する第１蛍光信号及び受光された散乱光に関する第１散乱光信号を出力し、前記光源により光が前記第２測定試料に照射されたときに生じる蛍光及び散乱光を受光して、受光された蛍光に関する第２蛍光信号及び受光された散乱光に関する第２散乱光信号を出力する受光部と、
前記第１蛍光信号及び前記第１散乱光信号、並びに前記第２蛍光信号及び前記第２散乱光信号に基づいて、前記血液検体から反応性の異常単核球及び腫瘍性の異常単核球を区別して検出する情報処理部と、
前記情報処理部による検出結果に基づく出力を行う出力部と、
を備える、
血液分析装置。
【請求項１４】
前記情報処理部は、前記第１蛍光信号及び前記第１散乱光信号に基づいて、前記血液検体から異常単核球を検出し、前記血液検体から前記異常単核球を検出した場合に、前記第２蛍光信号及び前記第２散乱光信号に基づいて、前記血液検体から反応性の異常単核球及び腫瘍性の異常単核球を区別して検出するように構成されている、
請求項１３に記載の血液分析装置。
【請求項１５】
前記情報処理部は、前記第１蛍光信号及び前記第１散乱光信号に基づいて、前記血液検体に含まれる白血球を複数の種類に分類すると共に、前記血液検体から異常単核球を検出するように構成されている、
請求項１４に記載の血液分析装置。
【請求項１６】
前記情報処理部は、前記第１蛍光信号及び前記第１散乱光信号に基づき、所定範囲の蛍光強度及び散乱光強度を示す細胞を、異常単核球として検出するように構成されている、
請求項１４又は１５に記載の血液分析装置。
【請求項１７】
血液検体から第１血液検体と第２血液検体とを分注するステップと、
分注された第１血液検体と、核酸を染める第１蛍光色素と、カチオン性界面活性剤を含む第１溶血剤とを混合して第１測定試料を調製するステップと、
調製された第１測定試料に光を照射するステップと、
光が前記第１測定試料に照射されたときに生じる蛍光及び散乱光を受光して、受光された蛍光に関する第１蛍光信号及び受光された散乱光に関する第１散乱光信号を取得するステップと、
分注された第２血液検体と、核酸を染める第２蛍光色素と、カチオン性界面活性剤を含まず他の界面活性剤を含む第２溶血剤とを混合して第２測定試料を調製するステップと、
調製された第２測定試料に光を照射するステップと、
光が前記第２測定試料に照射されたときに生じる蛍光及び散乱光を受光して、受光された蛍光に関する第２蛍光信号及び受光された散乱光に関する第２散乱光信号を取得するステップと、
前記第１蛍光信号及び前記第１散乱光信号並びに前記第２蛍光信号及び前記第２散乱光信号に基づいて、前記血液検体から異型リンパ球、異常リンパ球、及び芽球を区別して検出するステップと、
検出結果に基づく出力を行うステップと、
を有する、
血液分析方法。
【請求項１８】
通信部と、出力部とを備えるコンピュータに、
血液検体から分注された第１血液検体と、核酸を染める第１蛍光色素と、カチオン性界面活性剤を含む第１溶血剤とを混合して調製された第１測定試料に光を照射したときに生じる蛍光及び散乱光に関する第１蛍光信号及び第１散乱光信号を、前記通信部に受信させるステップと、
血液検体から分注された第２血液検体と、核酸を染める第２蛍光色素と、カチオン性界面活性剤を含まず他の界面活性剤を含む第２溶血剤とを混合して調製された第２測定試料に光を照射したときに生じる蛍光及び散乱光に関する第２蛍光信号及び第２散乱光信号を、前記通信部に受信させるステップと、
前記通信部により受信された前記第１蛍光信号及び前記第１散乱光信号、並びに前記第２蛍光信号及び前記第２散乱光信号に基づいて、前記血液検体から異型リンパ球、異常リンパ球、及び芽球を区別して検出するステップと、
検出結果に基づく情報を、前記出力部に出力させるステップと、
を実行させるためのコンピュータプログラム。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１５】
【図１４Ａ】
【図１４Ｂ】
【図１４Ｃ】
【図１４Ｄ】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１５】
【図１４Ａ】
【図１４Ｂ】
【図１４Ｃ】
【図１４Ｄ】
【公開番号】特開２０１２−２３３８８９（Ｐ２０１２−２３３８８９Ａ）
【公開日】平成２４年１１月２９日（２０１２．１１．２９）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−９６２２３（Ｐ２０１２−９６２２３）
【出願日】平成２４年４月２０日（２０１２．４．２０）
【出願人】（３９００１４９６０）シスメックス株式会社 (810)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２４年１１月２９日（２０１２．１１．２９）
【国際特許分類】
【出願日】平成２４年４月２０日（２０１２．４．２０）
【出願人】（３９００１４９６０）シスメックス株式会社 (810)
【Ｆターム（参考）】
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