本発明は、細胞内での負の免疫調節因子の阻害を用いて免疫細胞の免疫能力を増強させるための組成物及び方法を含む。本発明は、負の免疫調節因子の阻害を通して抗原提示が増強されるワクチン及び療法を提供する。本発明はまた、自己腫瘍抗原の提示に依存する腫瘍ワクチン接種方法における自己寛容を破壊するための機序をも提供している。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
負の免疫調節因子のインヒビターを含んでなる、免疫細胞の免疫能力を増強させるための組成物であって、前記インヒビターが前記細胞内の前記負の免疫調節因子に干渉し、前記負の免疫調節因子が分子安定性に関与するタンパク質及びＮＦκＢのインヒビターの発現を誘発するか又はＮＦκＢ標的遺伝子の転写を抑制する転写因子、又はその任意の組合せよりなる群から選択される、上記組成物。
【請求項２】
分子安定性に関与するタンパク質がＡ２０、ＳＵＭＯ（ＳＵＭＯ１、ＳＵＭＯ２、ＳＵＭＯ３、ＳＵＭＯ４）及びその任意の変異体よりなる群から選択される請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
ＮＦκＢ標的遺伝子の転写を抑制するか又はＮＦκＢのインヒビターの発現を誘発する前記転写因子が、Ｔｗｉｓｔ−１、Ｔｗｉｓｔ−２、Ｆｏｘｊ１、Ｆｏｘｏ３ａ及びその任意の変異体よりなる群から選択される請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記インヒビターが、小分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ、アンチセンス核酸、リボザイム、トランス優性負突然変異体をコードする発現ベクター、細胞内抗体、ペプチド及び小分子よりなる群から選択される請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記インヒビターがｓｉＲＮＡである請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記ｓｉＲＮＡが２本鎖オリゴヌクレオチド、１本鎖オリゴヌクレオチド及びポリヌクレオチドよりなる群から選択される請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
前記ｓｉＲＮＡが化学的に合成される請求項５に記載の組成物。
【請求項８】
生理学的に許容可能な担体をさらに含んでなる請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
前記生理学的に許容可能な担体がリポソームである請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記インヒビターが、発現ベクター内にクローニングされた単離ポリヌクレオチドによりコードされる請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
前記発現ベクターが、プラスミドＤＮＡ、ウイルスベクター、細菌ベクター及び哺乳動物ベクターよりなる群から選択される請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記発現ベクターが、宿主細胞のゲノム内への前記単離ポリヌクレオチドの組込みを容易にする組込みシグナル配列をさらに含んでなる請求項１０に記載の組成物。
【請求項１３】
エピトープが哺乳動物の体内で免疫応答を惹起する能力を有する、少なくとも１つのエピトープを有する抗原をさらに含んでなる請求項１に記載の組成物。
【請求項１４】
前記抗原が発現ベクターにより発現される請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
前記抗原が単離ポリペプチドである請求項１３に記載の組成物。
【請求項１６】
前記少なくとも１つのエピトープが哺乳動物体内のＣＤ４＋Ｔ細胞応答を誘発する請求項１３に記載の組成物。
【請求項１７】
前記少なくとも１つのエピトープが哺乳動物体内のＣＤ８＋Ｔ細胞応答を誘発する請求項１３に記載の組成物。
【請求項１８】
前記少なくとも１つのエピトープが哺乳動物体内でＢ細胞応答を誘発する請求項１３に記載の組成物。
【請求項１９】
前記抗原が１つの疾患に関連している請求項１３に記載の組成物。
【請求項２０】
前記疾患が、感染性疾患、癌及び自己免疫疾患よりなる群から選択される請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
前記抗原が感染性疾患に関連している請求項１３に記載の組成物。
【請求項２２】
前記感染性疾患がウイルス、細菌、真菌及び原生動物よりなる群から選択された病原性微生物によってひき起こされる請求項２１に記載の組成物。
【請求項２３】
前記抗原がウイルス遺伝子によりコードされる請求項１３に記載の組成物。
【請求項２４】
前記ウイルス遺伝子が、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス、乳頭腫ウイルス及びヘルペスウイルスよりなる群から選択されたウイルスから誘導される請求項２３に記載の組成物。
【請求項２５】
前記抗原が、Ｂ型肝炎ウイルスｅ抗原遺伝子、Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原遺伝子及びＢ型肝炎ウイルスコア抗原遺伝子よりなる群から選択されたウイルス遺伝子によりコードされる請求項２３に記載の組成物。
【請求項２６】
前記抗原が、ヒト免疫不全ウイルスＥｎｖ ｇｐ１６０遺伝子、Ｇａｇ遺伝子、Ｐｏｌ遺伝子、Ｒｅｖ遺伝子、Ｔａｔ遺伝子、Ｖｉｆ遺伝子及びＮｅｆ遺伝子よりなる群から選択されたウイルス遺伝子によりコードされる請求項２３に記載の組成物。
【請求項２７】
前記抗原が、乳頭腫ウイルスＥ７遺伝子及び乳頭腫ウイルスＥ６よりなる群から選択されたウイルス遺伝子によりコードされる請求項２３に記載の組成物。
【請求項２８】
前記抗原が、１型単純ヘルペスウイルス、２型単純ヘルペスウイルス、エプスタイン・バーウイルス、サイトメガロウイルス、ヒトヘルペスウイルス６型、ヒトヘルペスウイルス７型及びヒトヘルペスウイルス８型よりなる群から選択されたヘルペスウイルスから誘導されたウイルス遺伝子によりコードされる請求項２３に記載の組成物。
【請求項２９】
前記抗原が癌に関連している請求項１３に記載の組成物。
【請求項３０】
前記癌が、乳癌、子宮頸癌、黒色腫、腎臓癌及び前立腺癌よりなる群から選択される請求項２９に記載の組成物。
【請求項３１】
前記抗原が、過剰発現された腫瘍関連抗原、睾丸腫瘍抗原、突然変異腫瘍関連抗原、分化腫瘍関連抗原チロシナーゼ、ＭＡＲＴ、ｔｒｐ、ＭＡＧＥ−１、ＭＡＧＥ−２、ＭＡＧＥ−３、ｇｐ１００、ＨＥＲ−２、Ｒａｓ及びＰＳＡよりなる群から選択された腫瘍関連抗原である請求項２９に記載の組成物。
【請求項３２】
前記腫瘍関連抗原がＢＣＲ−ＡＢＬ、ＣＡＳＰ、ＣＤＫ、Ｒａｓ、ｐ５３、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ、ＣＥＡ、ＭＵＣ、ＴＷ１、ＰＡＰ、スルビビン、テロメラーゼ、ＥＧＦＲ、Ｐ
ＳＭＡ、ＰＳＡ、ＰＳＣＡ、チロシナーゼ、ＭＡＲＴ、ＴＲＰ、ｇｐ１００、ＭＡＲＴ、ＭＡＧＥ、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥ、ＬＡＧＥ／ＮＹ−ＥＳＯ、ＲＡＧＥ、ＳＳＸ−２、ＣＤ１９及びＣＤ２０よりなる群から選択される請求項３１に記載の組成物。
【請求項３３】
前記疾患が、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、多発性硬化症、乾癬及びクローン病よりなる群から選択される請求項１３に記載の組成物。
【請求項３４】
サイトカインをさらに含んでなる請求項１３に記載の組成物。
【請求項３５】
前記サイトカインが、ＩＬ−１２、ＴＮＦα、ＩＦＮα、ＩＦＮβ、ＩＦＮγ、ＩＬ−７、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１及びＩＬ−２３よりなる群から選択される請求項３４に記載の組成物。
【請求項３６】
さらにＴｏｌｌ様レセプタ（ＴＬＲ）アゴニストである請求項１３に記載の組成物。
【請求項３７】
さらに前記インヒビターが抗原レセプタシグナリングの阻害を抑制する請求項１に記載の組成物。
【請求項３８】
細胞の免疫能力を増強させるための組成物であって、前記細胞内の負の免疫調節因子に干渉するインヒビターをコードし、前記負の調節因子が分子安定性に関与するタンパク質及びＮＦκＢのインヒビターの発現を誘発するか又はＮＦκＢ標的遺伝子の転写を抑制する転写因子、又は任意の組合せよりなる群から選択される第１のポリヌクレオチドと、少なくとも１つのエピトープをもつ抗原をコードし前記少なくとも１つのエピトープが哺乳動物体内で免疫応答を誘発する第２のポリヌクレオチドとを含んでなるベクターを含んでなる組成物。
【請求項３９】
分子安定性に関与する前記タンパク質がＡ２０、ＳＵＭＯ（ＳＵＭＯ１、ＳＵＭＯ２、ＳＵＭＯ３、ＳＵＭＯ４）及びその任意の変異体よりなる群から選択される請求項３８に記載の組成物。
【請求項４０】
ＮＦκＢ標的遺伝子の転写を抑制するか又はＮＦκＢのインヒビターの発現を誘発しＮＦκＢ標的遺伝子の転写を抑制する前記転写因子が、Ｔｗｉｓｔ−１、Ｔｗｉｓｔ−２、Ｆｏｘｊ１、Ｆｏｘｏ３ａ及びその任意の変異体よりなる群から選択される請求項３８に記載の組成物。
【請求項４１】
前記インヒビターが、小分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ、アンチセンス核酸、リボザイム、トランス優性負突然変異体をコードする発現ベクター、細胞内抗体、ペプチド及び小分子よりなる群から選択される請求項４０に記載の組成物。
【請求項４２】
前記ベクターが、プラスミドＤＮＡ、ウイルスベクター、細菌ベクター及び哺乳動物ベクターよりなる群から選択される請求項４０に記載の組成物。
【請求項４３】
細胞の免疫能力を増強させるための組成物であって、前記細胞内の負の免疫調節因子に干渉するインヒビターをコードし、前記負の調節因子が分子安定性に関与するタンパク質及びＮＦκＢのインヒビターの発現を誘発するか又はＮＦκＢ標的遺伝子の転写を抑制する転写因子、又はその任意の組合せよりなる群から選択される第１のポリヌクレオチドと、少なくとも１つのサイトカイン又はＴｏｌｌ様レセプタ（ＴＬＲ）アゴニストをコードする第２のポリヌクレオチドとを含んでなるベクターを含んでなる組成物。
【請求項４４】
分子安定性に関与する前記タンパク質がＡ２０及びＳＵＭＯ（ＳＵＭＯ１、ＳＵＭＯ２
、ＳＵＭＯ３、ＳＵＭＯ４）よりなる群から選択される請求項４３に記載の組成物。
【請求項４５】
ＮＦκＢ標的遺伝子の転写を抑制するか又はＮＦκＢのインヒビターの発現を誘発しＮＦκＢ標的遺伝子の転写を抑制する前記転写因子が、Ｔｗｉｓｔ−１、Ｔｗｉｓｔ−２、Ｆｏｘｊ１及びＦｏｘｏ３ａよりなる群から選択される請求項４３に記載の組成物。
【請求項４６】
前記インヒビターが、小分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ、アンチセンス核酸、リボザイム、トランス優性負突然変異体をコードする発現ベクター、細胞内抗体、ペプチド及び小分子よりなる群から選択される請求項４３に記載の組成物。
【請求項４７】
サイトカインをコードする前記第２のポリヌクレオチドが、ＩＬ−１２、ＴＮＦα、ＩＦＮα、ＩＦＮβ、ＩＦＮγ、ＩＬ−７、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１５、ＩＬ−２１及びＩＬ−２３よりなる群から選択される請求項４３に記載の組成物。
【請求項４８】
負の免疫調節因子のインヒビターを含んでなる細胞であって、前記負の免疫調節因子が分子安定性に関与するタンパク質及びＮＦκＢのインヒビターの発現を誘発するか又はＮＦκＢ標的遺伝子の転写を抑制する転写因子、又は任意の組合せよりなる群から選択される細胞。
【請求項４９】
分子安定性に関与する前記タンパク質がＡ２０、ＳＵＭＯ（ＳＵＭＯ１、ＳＵＭＯ２、ＳＵＭＯ３、ＳＵＭＯ４）及びその任意の変異体よりなる群から選択される請求項４８に記載の細胞。
【請求項５０】
ＮＦκＢ標的遺伝子の転写を抑制するか又はＮＦκＢのインヒビターの発現を誘発しＮＦκＢ標的遺伝子の転写を抑制する前記転写因子が、Ｔｗｉｓｔ−１、Ｔｗｉｓｔ−２、Ｆｏｘｊ１、Ｆｏｘｏ３ａ及びその任意の変異体よりなる群から選択される請求項４８に記載の細胞。
【請求項５１】
前記インヒビターが、小分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ、アンチセンス核酸、リボザイム、トランス優性負突然変異体をコードする発現ベクター、細胞内抗体、ペプチド及び小分子よりなる群から選択される請求項４８に記載の細胞。
【請求項５２】
前記細胞がＡＰＣ、樹状細胞、単球／マクロファージ、Ｔ細胞及びＢ細胞よりなる群から選択された免疫細胞である請求項４８に記載の細胞。
【請求項５３】
前記Ｔ細胞が、細胞傷害性Ｔ細胞、ヘルパーＴ細胞及び調節Ｔ細胞である請求項５２に記載の細胞。
【請求項５４】
エピトープが哺乳動物の体内で免疫応答を惹起する能力を有する、少なくとも１つのエピトープを有する抗原をさらに含んでなる請求項４８に記載の細胞。
【請求項５５】
サイトカインをコードするポリヌクレオチドを含んでなる発現ベクターをさらに含んでなる請求項４８に記載の細胞。
【請求項５６】
負の免疫調節因子のインヒビターと細胞を接触させる工程を含んでなる、サイレンシング化された細胞を生成する方法であって、前記負の免疫調節因子が分子安定性に関与するタンパク質及びＮＦκＢのインヒビターの発現を誘発するか又はＮＦκＢ標的遺伝子の転写を抑制する転写因子又は任意の組合せよりなる群から選択される、上記方法。
【請求項５７】
分子安定性に関与する前記タンパク質がＡ２０、ＳＵＭＯ（ＳＵＭＯ１、ＳＵＭＯ２、
ＳＵＭＯ３、ＳＵＭＯ４）及びその任意の変異体よりなる群から選択される請求項５６に記載の方法。
【請求項５８】
ＮＦκＢのインヒビターの発現を誘発するか又はＮＦκＢ標的遺伝子の転写を抑制する前記転写因子が、Ｔｗｉｓｔ−１、Ｔｗｉｓｔ−２、Ｆｏｘｊ１、Ｆｏｘｏ３ａ及びその任意の変異体よりなる群から選択される請求項５６に記載の方法。
【請求項５９】
前記インヒビターが、小分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ、アンチセンス核酸、リボザイム、トランス優性負突然変異体をコードする発現ベクター、細胞内抗体、ペプチド及び小分子よりなる群から選択される請求項５６に記載の方法。
【請求項６０】
サイレンシング化及びパルスを受けた細胞を生成する方法において、ｉ）負の免疫調節因子のインヒビターと細胞を接触させる工程であって、前記負の免疫調節因子が分子安定性に関与するタンパク質及びＮＦκＢのインヒビター発現を誘発するか又はＮＦκＢ標的遺伝子の転写を抑制する転写因子又はその任意の組合せよりなる群から選択される工程と、ｉｉ）少なくとも１つのエピトープを有する抗原と前記細胞をさらに接触させる工程であって、前記エピトープが哺乳動物体内で免疫応答を惹起させる能力を有している工程とを含んでなる、上記方法。
【請求項６１】
哺乳動物の体内で免疫応答を惹起させる方法であって、それを必要とする哺乳動物の体内に前記負の免疫調節因子のインヒビターを含んでなる組成物を投与する工程を含んでなり、前記負の免疫調節因子が分子安定性に関与するタンパク質、ＮＦκＢのインヒビターの発現を誘発するか又はＮＦκＢ標的遺伝子の転写を抑制する転写因子、又はその任意の組合せよりなる群から選択される、上記方法。
【請求項６２】
哺乳動物の体内で免疫応答を惹起させる方法であって、その哺乳動物の体内の腫瘍中に前記負の免疫調節因子のインヒビターを含んでなる組成物を投与する工程を含んでなり、前記負の免疫調節因子が分子安定性に関与するタンパク質、ＮＦκＢのインヒビターの発現を誘発するか又はＮＦκＢ標的遺伝子の転写を抑制する転写因子、又はその任意の組合せよりなる群から選択される、上記方法。
【請求項６３】
哺乳動物の体内の免疫応答を惹起する方法であって、負の免疫調節因子のインヒビターをコードし、前記負の免疫調節因子が分子安定性に関与するタンパク質及びＮＦκＢのインヒビターの発現を誘発するか又はＮＦκＢ標的遺伝子の転写を抑制する転写因子、又は任意の組合せよりなる群から選択される第１のポリヌクレオチドと、少なくとも１つのエピトープをもつ抗原をコードし前記少なくとも１つのエピトープが哺乳動物体内で免疫応答を誘発する第２のポリヌクレオチドとを含んでなるベクターを含んでなる組成物を投与する工程を含んでなる、上記方法。
【請求項６４】
哺乳動物の体内で免疫応答を惹起させる方法であって、それを必要とする哺乳動物の体内にサイレンシング化された細胞を含んでなる組成物を投与する工程を含んでなり、前記サイレンシング化された細胞が負の免疫調節因子のインヒビターを含んでなり、前記負の免疫調節因子が分子安定性に関与するタンパク質、ＮＦκＢのインヒビターの発現を誘発するか又はＮＦκＢ標的遺伝子の転写を抑制する転写因子、又はその任意の組合せよりなる群から選択される、上記方法。
【請求項６５】
それを必要とする哺乳動物の体内に前記サイレンシング化された細胞を投与する前にインビトロで抗原と前記サイレンシング化された細胞を接触させる請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
それを必要とする哺乳動物の体内に前記サイレンシング化された細胞を投与した後でインビボで抗原と前記サイレンシング化された細胞を接触させる請求項６４に記載の方法。

【図２】

【図３】

【図４Ａ】

【図４Ｂ】

【図５Ａ】

【図５Ｂ】

【図５Ｃ】

【図６Ａ】

【図６Ｂ】

【図６Ｃ】

【図６Ｄ】

【図６Ｅ】

【図７Ａ】

【図７Ｂ】

【図７Ｃ】

【図７Ｄ】

【図７Ｅ】

【図８Ａ】

【図８Ｂ】

【図８Ｃ】

【図９Ａ】

【図９Ｂ】

【図９Ｃ】

【図１０Ａ】

【図１０Ｂ】

【図１０Ｃ】

【図１０Ｄ】

【図１１Ａ−１】

【図１１Ａ−２】

【図１１Ｂ】

【図１１Ｃ】

【図１２Ａ】

【図１２Ｂ】

【図１２Ｃ】

【図１２Ｄ】

【図１３Ａ】

【図１３Ｂ】

【図１３Ｃ】

【図１３Ｄ】

【図１４Ａ】

【図１４Ｂ】

【図１５Ａ】

【図１５Ｂ】

【図１５Ｃ】

【図１５Ｄ】

【図１６Ａ−１】

【図１６Ａ−２】

【図１６Ｂ】

【図１６Ｃ】

【図１６Ｄ】

【図１７Ａ】

【図１７Ｂ】

【図１７Ｃ】

【図１７Ｄ】

【図１８Ａ】

【図１８Ｂ】

【図１８Ｃ】

【図１８Ｄ】

【図１９Ａ】

【図１９Ｂ】

【図１９Ｃ】

【図１９Ｄ】

【図１９Ｅ】

【図２０Ａ】

【図２０Ｂ】

【図２０Ｃ】

【図２０Ｄ】

【図２１Ａ】

【図２１Ｂ】

【図２１Ｃ】

【図２２Ａ】

【図２２Ｂ】

【図２２Ｃ】

【図２３Ａ】

【図２３Ｂ】

【図２３Ｃ】

【図２４】

【図２５Ａ】

【図２５Ｂ】

【図２６Ａ】

【図２６Ｂ】

【図２７Ａ】

【図２７Ｂ】

【図２８】

【図２９】

【図３０】

【図３１】

【図３２】

【図３３Ａ】

【図３３Ｂ】

【図３４Ａ】

【図３４Ｂ】

【図３５Ａ】

【図３５Ｂ】

【図３６】

【図３７】

【図３８】

【図３９】

【図４０】

【図４１】

【図４２】

【図４３】

【図４４】

【図４５】

【図４６】

【図４７】

【図４８】

【図４９】

【図５０】

【図５１】

【図５２】

【図５３−１】

【図５３−２】

【図５３−３】

【図５３−４】

【公表番号】特表２００８−５４６７７５（Ｐ２００８−５４６７７５Ａ）
【公表日】平成２０年１２月２５日（２００８．１２．２５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５１８１２３（Ｐ２００８−５１８１２３）
【出願日】平成１８年１月１９日（２００６．１．１９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００６／００１７５１
【国際公開番号】ＷＯ２００７／００１４８７
【国際公開日】平成１９年１月４日（２００７．１．４）
【出願人】（５０７０２１３００）
【Ｆターム（参考）】