骨リモデリングを調節する物質を同定するための方法および材料、ならびにそれによって同定された物質
本発明は、骨石灰化を研究し、骨石灰化を調整する物質を同定するための組成物、化合物、装置、およびそれらの使用方法を開示する。化合物のスクリーニングおよび調査を行うための骨石灰化遺伝子プロファイルおよび識別特性の使用方法も開示する。治療および調査の両方の用途のための、骨石灰化を調節する試薬も提供する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
骨負荷が与えられた骨細胞の遺伝子発現プロファイルであって、該骨負荷がＷｎｔ経路モジュレーターによって調節されている、遺伝子発現プロファイル。
【請求項２】
ＣＯＸ−２、Ｊｕｎ、Ｆｏｓ、ＳＦＲＰ１、コネキシン４３、およびｅＮＯＳの遺伝子を含む、請求項１に記載の遺伝子発現プロファイル。
【請求項３】
表１〜５、１１、または１２の２つ以上の遺伝子を含む、請求項１に記載の遺伝子発現プロファイル。
【請求項４】
前記Ｗｎｔ経路モジュレーターがアゴニストである、請求項１に記載の遺伝子発現プロファイル。
【請求項５】
前記アゴニストがＧＳＫ−３阻害剤である、請求項４に記載の遺伝子発現プロファイル。
【請求項６】
前記アゴニストが、Ｗｎｔ３Ａ、Ｗｎｔ３Ａ変異体、Ｗｎｔ３Ａミメティック、またはＷｎｔ３Ａアゴニストである、請求項４に記載の遺伝子発現プロファイル。
【請求項７】
前記ＧＳＫ−３阻害剤が選択的ＧＳＫ−３阻害剤である、請求項５に記載の遺伝子発現プロファイル。
【請求項８】
前記ＧＳＫ−３阻害剤が、塩化リチウムまたは薬学的に許容されるその塩、マレイミド、ムスカリン様アゴニスト、アロイシン（ａｌｏｉｓｉｎｅ）、ヒメニニジシン（ｈｙｍｅｎｉｎｉｄｉｓｉｎｅ）、あるいはイニジルビン（ｉｎｉｄｉｒｕｂｉｎ）である、請求項５に記載の遺伝子発現プロファイル。
【請求項９】
前記マレイミドが、３−（２，４−ジクロロフェニル）−４−（１−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン、または３−（３−クロロ−４−ヒドロキシフェニルアミノ）−４−（２−ニトロフェニル）−１Ｈピロール−２，５−ジオンである、請求項８に記載の遺伝子発現プロファイル。
【請求項１０】
前記遺伝子発現プロファイルが、培養細胞、または動物組織から得た細胞に由来する、請求項４に記載の遺伝子発現プロファイル。
【請求項１１】
前記骨細胞が、前骨芽細胞、骨幹細胞、骨芽細胞、破骨細胞、骨細胞、または間葉系系幹細胞、あるいはそれらの組み合わせである、請求項１に記載の遺伝子発現プロファイル。
【請求項１２】
Ｗｎｔ経路調節物質を同定し、それによって骨リモデリングを調節する方法であって、
（Ａ）候補物質に曝露した骨細胞の遺伝子発現プロファイルを得るステップと、
（Ｂ）ステップ（Ａ）の前記遺伝子発現プロファイルを、請求項１に記載の遺伝子発現プロファイルと比較し、それによって、Ｗｎｔ経路が調節されたかどうかを決定するステップとを含む、方法。
【請求項１３】
動物に機械的負荷が与えられて、前記骨細胞が前記動物から得られるか、または培養骨細胞に機械的負荷が与えられるかである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
機械的応力およびＷｎｔ経路モジュレーターが与えられたＨＢＭ細胞の遺伝子発現プロファイル。
【請求項１５】
骨荷重遺伝子発現プロファイルを作成する方法であって、
（Ａ）骨負荷に曝露していない骨細胞の第１の遺伝子発現プロファイルと、骨負荷に曝露した骨細胞の第２の遺伝子発現プロファイルと、骨負荷およびＷｎｔ経路モジュレーターに曝露した骨細胞の第３の遺伝子発現プロファイルとを得るステップと、
（Ｂ）前記第１、第２、および第３の遺伝子発現プロファイルを比較することによって、Ｗｎｔ経路モジュレーターによって調節される遺伝子の骨荷重遺伝子発現プロファイルを得るステップとを含む、方法。
【請求項１６】
前記骨細胞が、破骨細胞、骨芽細胞、骨細胞、またはこれらの骨細胞の組み合わせである請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記Ｗｎｔ経路モジュレーターがＷｎｔ経路アゴニストである、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記Ｗｎｔ経路アゴニストが、ＧＳＫ−３阻害剤、Ｗｎｔ３Ａ、Ｗｎｔ３Ａミメティック、Ｗｎｔ３Ａアゴニスト、ＬＲＰ５アゴニスト、ＬＲＰ６アゴニスト、βカテニンアゴニスト、またはＤｋｋ１アンタゴニストである、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
請求項１５に記載の方法によって得られた、Ｗｎｔ経路モジュレーターによって制御される遺伝子を含む骨荷重遺伝子発現プロファイル。
【請求項２０】
骨負荷の関連するリモデリングを増強する物質をスクリーニングする方法であって、
（Ａ）前記物質を加えて培養され骨負荷に曝露された骨細胞の遺伝子発現プロファイルを得るステップと、
（Ｂ）ステップ（Ａ）の前記遺伝子発現プロファイルを、請求項１９に記載の骨荷重遺伝子発現プロファイルと比較するステップであって、前記Ｗｎｔ経路モジュレーターが対照Ｗｎｔ経路モジュレーターであるステップとを含む、方法。
【請求項２１】
前記参照Ｗｎｔ経路モジュレーターが、ＧＳＫ−３阻害剤またはＷｎｔ ３Ａである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
候補物質を使用せずに評価される前記培養骨細胞がＨＢＭ骨細胞である請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
前記骨細胞が、骨芽細胞、前骨芽細胞、骨幹細胞、間葉系系幹細胞、またはそれらの組み合わせである請求項２０に記載の方法。
【請求項２４】
前記骨細胞が骨芽細胞であり、骨芽細胞数および／または増殖に対する前記物質の効果が、［3Ｈ］−チミジンの混入、５−ブロモ−２’−デオキシウリジン（ＢｒｄＵ）の混入、３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−５−（３−カルボキシメトキシフェニル）−２（４−スルホフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム塩（ＭＴＳ）アッセイ、またはアポトーシスアッセイによって測定される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
請求項２０に記載のステップ（Ａ）および（Ｂ）で与えられる前記骨負荷が約５０με〜約５，０００μεの量の機械的負荷である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２６】
請求項２０に記載の方法によって同定された、低骨量状態を治療するための候補物質。
【請求項２７】
治療有効量の請求項２６に記載の候補物質を投与するステップを含む、骨石灰化疾患または障害の治療方法。
【請求項２８】
前記骨疾患または障害が、骨粗鬆症、骨折、軟骨形成異常、薬物性骨障害、高骨代謝回転、高カルシウム血症、骨化過剰症、変形性関節症、骨髄炎、およびパジェット病である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記骨折が、股関節骨折、コーレス骨折、または椎骨粉砕骨折である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記薬物性障害が、グルココルチコイド誘発性骨粗鬆症、ヘパリン誘発性骨粗鬆症、水酸化アルミニウム誘発性骨軟化症、抗痙攣薬誘発性骨軟化症、またはグルテチミド誘発性骨軟化症である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３１】
前記候補物質が、ＧＳＫ−３アンタゴニスト、Ｗｎｔ３Ａ、Ｗｎｔ３Ａミメティック、Ｗｎｔ３Ａアゴニスト、Ｄｋｋ１アンタゴニスト、ＬＲＰ５アゴニスト、βカテニンアゴニスト、またはＬＲＰ６アゴニストである、請求項２５に記載の候補物質。
【請求項３２】
複数のプローブを含む組成物であって、前記プローブが、請求項１９に記載の骨荷重遺伝子発現プロファイルの核酸にアニールする核酸配列を含む、組成物。
【請求項３３】
前記複数のプローブが固体基体に取り付けられている、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３４】
前記固体基体が、ビーズ、プレート、またはスライドである、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３５】
前記複数のプローブが、コネキシン４３、ＣＯＸ−２、ｅＮＯＳ、ＳＦＲＰ１、Ｊｕｎ、およびＦｏｓタンパク質をコードする核酸配列にアニールする核酸配列を含む、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３６】
前記複数のプローブが、表１〜５、１１、または１２の遺伝子または遺伝子転写物の核酸配列にアニールする核酸配列を含む、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３７】
ＰＤＧＦＲＡ、ＭＥＴ、ＯＳＭＲ、ＩＴＧＢＬ１、ＣＴＧＦ、ＷＮＴ６、ＴＩＭＰ３、ＧＪＡ１、ＧＡＳ６、ＬＯＸ、ＭＹＢＬ１、ＴＨＢＳ１、ＩＴＧＢ５、ＣＴＳＫ、ＣＯＬ１Ａ１、ＦＢＬＮ１、ＣＣＮＤ１、ＴＩＭＰ２、ＣＯＬ６Ａ３、ＧＡＤＤ４５Ａ、ＷＩＳＰ２、ＦＺＤ２、ＳＦＲＰ４、ＩＧＦＢＰ６、ＬＲＰ５、ＬＲＰ６、ＬＳＰ１、ＣＸ３ＣＲ１、ＴＲＦＢＲ２、ＶＣＡＭ１、ＩＬ６、ＦＧＦ２、ＦＧＦ７、ＳＴＡＴ１、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、ＩＦＧ２Ｒ、ＩＧＦ２、ＳＰＡＲＣ、ＭＡＰＫＡＰＫ２、ＴＮＦ、ＴＮＦＲＳＦ１１ｂ、ＴＮＦＳＦ１１、ＡＣＰ５、ＦＡＰ、ＭＣＣ、ＤＥＬＴＥＸ、ＥＰＨＢ２、ＣＮＫ１、ＥＲＢＢ３、ＧＲＯ１、ＭＹＣ、およびＷＮＴ１０Ｂの核酸配列にアニールするプローブをさらに含む、請求項３５に記載の組成物。
【請求項３８】
請求項１または１４のいずれかの骨負荷発現プロファイルが得られる物質を投与するステップを含む、細胞中の骨石灰化を調節する方法。
【請求項３９】
前記物質が、Ｗｎｔアゴニスト、Ｗｎｔ３Ａ、Ｗｎｔ３Ａミメティック、Ｗｎｔ３Ａ変異体、Ｗｎｔ３Ａアゴニスト、Ｄｋｋアンタゴニスト、ＣＯＸ−２アンタゴニスト、ＬＲＰ５アゴニスト、ＬＲＰ６アゴニスト、ＧＳＫ−３アンタゴニスト、またはβカテニンアゴニストである、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記ＧＳＫ−３アンタゴニストが、マレイミド、ムスカリン様アゴニスト、アロイシン、ヒメニニジシン、またはイニジルビンである、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記マレイミドが、第２の骨リモデリング調節物質と組み合わせて投与される、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記第２の骨リモデリング調節物質が、副甲状腺ホルモン、エストロゲン、ビタミンＤ、ビタミンＤ類似体、選択的エストロゲン受容体モジュレーター、グルココルチコイド、カルシウム製剤、またはビスホスホネートである、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
骨石灰化および／または骨リモデリングの調節を必要とする被験体の骨石灰化および／または骨リモデリングを調節する方法であって、請求項１９に記載の骨負荷発現プロファイルが得られる化合物を投与するステップを含む、方法。
【請求項４４】
基体と、該基体に付着させた複数の免疫グロブリンとを含む組成物であって、前記免疫グロブリンが、表１〜５、１１、または１２の２種類以上のタンパク質を認識してこれらと結合する、組成物。
【請求項４５】
前記複数の免疫グロブリンが、表１〜５、１１、または１２の前記２種類以上のタンパク質を認識してこれらと結合する２種類以上の免疫グロブリンを含む、請求項４４に記載の組成物。
【請求項４６】
前記２種類以上のタンパク質が、ｅＮＯＳ、コネキシン４３、ＳＦＲＰ１、サイクリンＤ１、Ｗｎｔ１０Ｂ、Ｊｕｎ、Ｆｏｓ、またはＣＯＸ−２である、請求項４５に記載の組成物。
【請求項４７】
前記基体が、マイクロチップ、ビーズ、プレート、スライド、またはチューブである、請求項４４に記載の組成物。
【請求項４８】
骨負荷の調節を研究するための組成物であって、
（Ａ）基体と、
（Ｂ）前記基体に付着された、複数の細胞溶解物とを含み、前記溶解物が、（ｉ）機械的応力を与えていない細胞、（ｉｉ）機械的応力に曝露した細胞、（ｉｉｉ）機械的応力を与えていないＨＢＭ細胞、（ｉｖ）機械的応力に曝露したＨＢＭ細胞、および（ｖ）Ｗｎｔ経路モジュレーターに曝露した前記細胞のいずれかに由来するものである、組成物。
【請求項４９】
前記基体が、マイクロチップ、ビーズ、プレート、スライド、またはチューブである、請求項４８に記載の組成物。
【請求項５０】
骨リモデリングおよび／または骨石灰化を調節するタンパク質と結合する試薬をスクリーニングする方法であって、
（Ａ）候補試薬を請求項４８に記載の組成物に結合させるのに好適な条件下で、候補試薬を請求項４８に記載の組成物に曝露するステップと、
（Ｂ）前記候補試薬が請求項４８に記載の組成物に結合したかどうかを調べ、請求項４８に記載の組成物のタンパク質が前記候補試薬と結合したかどうかをさらに調べるステップとを含む、方法。
【請求項５１】
化合物または組成物が、骨細胞活性／機能、および／または石灰化に対する骨負荷の効果を増強するかどうかを決定する方法であって、
（Ａ）前記化合物または前記組成物を細胞系に投与するステップと、
（Ｂ）その後、機械的刺激を前記細胞系に与えるステップと、
（Ｃ）前記細胞系から細胞溶解物を得るステップと、
（Ｄ）前記細胞溶解物中のタンパク質を請求項４４に記載の組成物と結合させるのに好適な条件下で、前記細胞溶解物を請求項４４に記載の組成物と接触させるステップと、
（Ｅ）ステップ（Ｄ）で得られたパターンを、機械的負荷刺激のみを与えた細胞の細胞溶解物から得られた発現パターンと比較することによって、前記化合物または前記組成物が、骨細胞活性／機能、および／または石灰化に対する骨負荷の効果を増強するかどうかを決定するステップとを含む、方法。
【請求項１】
骨負荷が与えられた骨細胞の遺伝子発現プロファイルであって、該骨負荷がＷｎｔ経路モジュレーターによって調節されている、遺伝子発現プロファイル。
【請求項２】
ＣＯＸ−２、Ｊｕｎ、Ｆｏｓ、ＳＦＲＰ１、コネキシン４３、およびｅＮＯＳの遺伝子を含む、請求項１に記載の遺伝子発現プロファイル。
【請求項３】
表１〜５、１１、または１２の２つ以上の遺伝子を含む、請求項１に記載の遺伝子発現プロファイル。
【請求項４】
前記Ｗｎｔ経路モジュレーターがアゴニストである、請求項１に記載の遺伝子発現プロファイル。
【請求項５】
前記アゴニストがＧＳＫ−３阻害剤である、請求項４に記載の遺伝子発現プロファイル。
【請求項６】
前記アゴニストが、Ｗｎｔ３Ａ、Ｗｎｔ３Ａ変異体、Ｗｎｔ３Ａミメティック、またはＷｎｔ３Ａアゴニストである、請求項４に記載の遺伝子発現プロファイル。
【請求項７】
前記ＧＳＫ−３阻害剤が選択的ＧＳＫ−３阻害剤である、請求項５に記載の遺伝子発現プロファイル。
【請求項８】
前記ＧＳＫ−３阻害剤が、塩化リチウムまたは薬学的に許容されるその塩、マレイミド、ムスカリン様アゴニスト、アロイシン（ａｌｏｉｓｉｎｅ）、ヒメニニジシン（ｈｙｍｅｎｉｎｉｄｉｓｉｎｅ）、あるいはイニジルビン（ｉｎｉｄｉｒｕｂｉｎ）である、請求項５に記載の遺伝子発現プロファイル。
【請求項９】
前記マレイミドが、３−（２，４−ジクロロフェニル）−４−（１−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル）−１Ｈ−ピロール−２，５−ジオン、または３−（３−クロロ−４−ヒドロキシフェニルアミノ）−４−（２−ニトロフェニル）−１Ｈピロール−２，５−ジオンである、請求項８に記載の遺伝子発現プロファイル。
【請求項１０】
前記遺伝子発現プロファイルが、培養細胞、または動物組織から得た細胞に由来する、請求項４に記載の遺伝子発現プロファイル。
【請求項１１】
前記骨細胞が、前骨芽細胞、骨幹細胞、骨芽細胞、破骨細胞、骨細胞、または間葉系系幹細胞、あるいはそれらの組み合わせである、請求項１に記載の遺伝子発現プロファイル。
【請求項１２】
Ｗｎｔ経路調節物質を同定し、それによって骨リモデリングを調節する方法であって、
（Ａ）候補物質に曝露した骨細胞の遺伝子発現プロファイルを得るステップと、
（Ｂ）ステップ（Ａ）の前記遺伝子発現プロファイルを、請求項１に記載の遺伝子発現プロファイルと比較し、それによって、Ｗｎｔ経路が調節されたかどうかを決定するステップとを含む、方法。
【請求項１３】
動物に機械的負荷が与えられて、前記骨細胞が前記動物から得られるか、または培養骨細胞に機械的負荷が与えられるかである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
機械的応力およびＷｎｔ経路モジュレーターが与えられたＨＢＭ細胞の遺伝子発現プロファイル。
【請求項１５】
骨荷重遺伝子発現プロファイルを作成する方法であって、
（Ａ）骨負荷に曝露していない骨細胞の第１の遺伝子発現プロファイルと、骨負荷に曝露した骨細胞の第２の遺伝子発現プロファイルと、骨負荷およびＷｎｔ経路モジュレーターに曝露した骨細胞の第３の遺伝子発現プロファイルとを得るステップと、
（Ｂ）前記第１、第２、および第３の遺伝子発現プロファイルを比較することによって、Ｗｎｔ経路モジュレーターによって調節される遺伝子の骨荷重遺伝子発現プロファイルを得るステップとを含む、方法。
【請求項１６】
前記骨細胞が、破骨細胞、骨芽細胞、骨細胞、またはこれらの骨細胞の組み合わせである請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記Ｗｎｔ経路モジュレーターがＷｎｔ経路アゴニストである、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記Ｗｎｔ経路アゴニストが、ＧＳＫ−３阻害剤、Ｗｎｔ３Ａ、Ｗｎｔ３Ａミメティック、Ｗｎｔ３Ａアゴニスト、ＬＲＰ５アゴニスト、ＬＲＰ６アゴニスト、βカテニンアゴニスト、またはＤｋｋ１アンタゴニストである、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
請求項１５に記載の方法によって得られた、Ｗｎｔ経路モジュレーターによって制御される遺伝子を含む骨荷重遺伝子発現プロファイル。
【請求項２０】
骨負荷の関連するリモデリングを増強する物質をスクリーニングする方法であって、
（Ａ）前記物質を加えて培養され骨負荷に曝露された骨細胞の遺伝子発現プロファイルを得るステップと、
（Ｂ）ステップ（Ａ）の前記遺伝子発現プロファイルを、請求項１９に記載の骨荷重遺伝子発現プロファイルと比較するステップであって、前記Ｗｎｔ経路モジュレーターが対照Ｗｎｔ経路モジュレーターであるステップとを含む、方法。
【請求項２１】
前記参照Ｗｎｔ経路モジュレーターが、ＧＳＫ−３阻害剤またはＷｎｔ ３Ａである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
候補物質を使用せずに評価される前記培養骨細胞がＨＢＭ骨細胞である請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
前記骨細胞が、骨芽細胞、前骨芽細胞、骨幹細胞、間葉系系幹細胞、またはそれらの組み合わせである請求項２０に記載の方法。
【請求項２４】
前記骨細胞が骨芽細胞であり、骨芽細胞数および／または増殖に対する前記物質の効果が、［3Ｈ］−チミジンの混入、５−ブロモ−２’−デオキシウリジン（ＢｒｄＵ）の混入、３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−５−（３−カルボキシメトキシフェニル）−２（４−スルホフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム塩（ＭＴＳ）アッセイ、またはアポトーシスアッセイによって測定される、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
請求項２０に記載のステップ（Ａ）および（Ｂ）で与えられる前記骨負荷が約５０με〜約５，０００μεの量の機械的負荷である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２６】
請求項２０に記載の方法によって同定された、低骨量状態を治療するための候補物質。
【請求項２７】
治療有効量の請求項２６に記載の候補物質を投与するステップを含む、骨石灰化疾患または障害の治療方法。
【請求項２８】
前記骨疾患または障害が、骨粗鬆症、骨折、軟骨形成異常、薬物性骨障害、高骨代謝回転、高カルシウム血症、骨化過剰症、変形性関節症、骨髄炎、およびパジェット病である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記骨折が、股関節骨折、コーレス骨折、または椎骨粉砕骨折である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記薬物性障害が、グルココルチコイド誘発性骨粗鬆症、ヘパリン誘発性骨粗鬆症、水酸化アルミニウム誘発性骨軟化症、抗痙攣薬誘発性骨軟化症、またはグルテチミド誘発性骨軟化症である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３１】
前記候補物質が、ＧＳＫ−３アンタゴニスト、Ｗｎｔ３Ａ、Ｗｎｔ３Ａミメティック、Ｗｎｔ３Ａアゴニスト、Ｄｋｋ１アンタゴニスト、ＬＲＰ５アゴニスト、βカテニンアゴニスト、またはＬＲＰ６アゴニストである、請求項２５に記載の候補物質。
【請求項３２】
複数のプローブを含む組成物であって、前記プローブが、請求項１９に記載の骨荷重遺伝子発現プロファイルの核酸にアニールする核酸配列を含む、組成物。
【請求項３３】
前記複数のプローブが固体基体に取り付けられている、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３４】
前記固体基体が、ビーズ、プレート、またはスライドである、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３５】
前記複数のプローブが、コネキシン４３、ＣＯＸ−２、ｅＮＯＳ、ＳＦＲＰ１、Ｊｕｎ、およびＦｏｓタンパク質をコードする核酸配列にアニールする核酸配列を含む、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３６】
前記複数のプローブが、表１〜５、１１、または１２の遺伝子または遺伝子転写物の核酸配列にアニールする核酸配列を含む、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３７】
ＰＤＧＦＲＡ、ＭＥＴ、ＯＳＭＲ、ＩＴＧＢＬ１、ＣＴＧＦ、ＷＮＴ６、ＴＩＭＰ３、ＧＪＡ１、ＧＡＳ６、ＬＯＸ、ＭＹＢＬ１、ＴＨＢＳ１、ＩＴＧＢ５、ＣＴＳＫ、ＣＯＬ１Ａ１、ＦＢＬＮ１、ＣＣＮＤ１、ＴＩＭＰ２、ＣＯＬ６Ａ３、ＧＡＤＤ４５Ａ、ＷＩＳＰ２、ＦＺＤ２、ＳＦＲＰ４、ＩＧＦＢＰ６、ＬＲＰ５、ＬＲＰ６、ＬＳＰ１、ＣＸ３ＣＲ１、ＴＲＦＢＲ２、ＶＣＡＭ１、ＩＬ６、ＦＧＦ２、ＦＧＦ７、ＳＴＡＴ１、ＴＮＦＲＳＦ１０Ｂ、ＩＦＧ２Ｒ、ＩＧＦ２、ＳＰＡＲＣ、ＭＡＰＫＡＰＫ２、ＴＮＦ、ＴＮＦＲＳＦ１１ｂ、ＴＮＦＳＦ１１、ＡＣＰ５、ＦＡＰ、ＭＣＣ、ＤＥＬＴＥＸ、ＥＰＨＢ２、ＣＮＫ１、ＥＲＢＢ３、ＧＲＯ１、ＭＹＣ、およびＷＮＴ１０Ｂの核酸配列にアニールするプローブをさらに含む、請求項３５に記載の組成物。
【請求項３８】
請求項１または１４のいずれかの骨負荷発現プロファイルが得られる物質を投与するステップを含む、細胞中の骨石灰化を調節する方法。
【請求項３９】
前記物質が、Ｗｎｔアゴニスト、Ｗｎｔ３Ａ、Ｗｎｔ３Ａミメティック、Ｗｎｔ３Ａ変異体、Ｗｎｔ３Ａアゴニスト、Ｄｋｋアンタゴニスト、ＣＯＸ−２アンタゴニスト、ＬＲＰ５アゴニスト、ＬＲＰ６アゴニスト、ＧＳＫ−３アンタゴニスト、またはβカテニンアゴニストである、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記ＧＳＫ−３アンタゴニストが、マレイミド、ムスカリン様アゴニスト、アロイシン、ヒメニニジシン、またはイニジルビンである、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
前記マレイミドが、第２の骨リモデリング調節物質と組み合わせて投与される、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記第２の骨リモデリング調節物質が、副甲状腺ホルモン、エストロゲン、ビタミンＤ、ビタミンＤ類似体、選択的エストロゲン受容体モジュレーター、グルココルチコイド、カルシウム製剤、またはビスホスホネートである、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
骨石灰化および／または骨リモデリングの調節を必要とする被験体の骨石灰化および／または骨リモデリングを調節する方法であって、請求項１９に記載の骨負荷発現プロファイルが得られる化合物を投与するステップを含む、方法。
【請求項４４】
基体と、該基体に付着させた複数の免疫グロブリンとを含む組成物であって、前記免疫グロブリンが、表１〜５、１１、または１２の２種類以上のタンパク質を認識してこれらと結合する、組成物。
【請求項４５】
前記複数の免疫グロブリンが、表１〜５、１１、または１２の前記２種類以上のタンパク質を認識してこれらと結合する２種類以上の免疫グロブリンを含む、請求項４４に記載の組成物。
【請求項４６】
前記２種類以上のタンパク質が、ｅＮＯＳ、コネキシン４３、ＳＦＲＰ１、サイクリンＤ１、Ｗｎｔ１０Ｂ、Ｊｕｎ、Ｆｏｓ、またはＣＯＸ−２である、請求項４５に記載の組成物。
【請求項４７】
前記基体が、マイクロチップ、ビーズ、プレート、スライド、またはチューブである、請求項４４に記載の組成物。
【請求項４８】
骨負荷の調節を研究するための組成物であって、
（Ａ）基体と、
（Ｂ）前記基体に付着された、複数の細胞溶解物とを含み、前記溶解物が、（ｉ）機械的応力を与えていない細胞、（ｉｉ）機械的応力に曝露した細胞、（ｉｉｉ）機械的応力を与えていないＨＢＭ細胞、（ｉｖ）機械的応力に曝露したＨＢＭ細胞、および（ｖ）Ｗｎｔ経路モジュレーターに曝露した前記細胞のいずれかに由来するものである、組成物。
【請求項４９】
前記基体が、マイクロチップ、ビーズ、プレート、スライド、またはチューブである、請求項４８に記載の組成物。
【請求項５０】
骨リモデリングおよび／または骨石灰化を調節するタンパク質と結合する試薬をスクリーニングする方法であって、
（Ａ）候補試薬を請求項４８に記載の組成物に結合させるのに好適な条件下で、候補試薬を請求項４８に記載の組成物に曝露するステップと、
（Ｂ）前記候補試薬が請求項４８に記載の組成物に結合したかどうかを調べ、請求項４８に記載の組成物のタンパク質が前記候補試薬と結合したかどうかをさらに調べるステップとを含む、方法。
【請求項５１】
化合物または組成物が、骨細胞活性／機能、および／または石灰化に対する骨負荷の効果を増強するかどうかを決定する方法であって、
（Ａ）前記化合物または前記組成物を細胞系に投与するステップと、
（Ｂ）その後、機械的刺激を前記細胞系に与えるステップと、
（Ｃ）前記細胞系から細胞溶解物を得るステップと、
（Ｄ）前記細胞溶解物中のタンパク質を請求項４４に記載の組成物と結合させるのに好適な条件下で、前記細胞溶解物を請求項４４に記載の組成物と接触させるステップと、
（Ｅ）ステップ（Ｄ）で得られたパターンを、機械的負荷刺激のみを与えた細胞の細胞溶解物から得られた発現パターンと比較することによって、前記化合物または前記組成物が、骨細胞活性／機能、および／または石灰化に対する骨負荷の効果を増強するかどうかを決定するステップとを含む、方法。
【図１Ａ】
【図１Ｂ】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３Ａ】
【図１３Ｂ】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１Ｂ】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３Ａ】
【図１３Ｂ】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【公表番号】特表２００７−５２５９５３（Ｐ２００７−５２５９５３Ａ）
【公表日】平成１９年９月１３日（２００７．９．１３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５１５２４４（Ｐ２００６−５１５２４４）
【出願日】平成１６年６月７日（２００４．６．７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０１７９５１
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０２８６７８
【国際公開日】平成１７年３月３１日（２００５．３．３１）
【出願人】（３９７０１２９４５）
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１９年９月１３日（２００７．９．１３）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年６月７日（２００４．６．７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０１７９５１
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０２８６７８
【国際公開日】平成１７年３月３１日（２００５．３．３１）
【出願人】（３９７０１２９４５）
【Ｆターム（参考）】
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