高ホモシステイン血症の治療へのプロバイオティクス細菌の使用
本発明は、高ホモシステイン血症治療へのプロバイオティクス細菌の使用に関する。
本発明は、さらに、ビタミンＢ群からなる群から選択される少なくとも一つのビタミンとともに、プロバイオティクス細菌を含む血漿高ホモシステイン血症治療用の組成物に関する。
本発明は、さらに、ビタミンＢ群からなる群から選択される少なくとも一つのビタミンとともに、プロバイオティクス細菌を含む血漿高ホモシステイン血症治療用の組成物に関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、高ホモシステイン血症の治療へのプロバイオティクス細菌の使用に関する。本発明は、さらに、血漿高ホモシステイン血症の治療用のビタミンＢ群からなる群から選択される少なくとも一つのビタミンとともにプロバイオティクス細菌を含む組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
イタリアをはじめとする先進国においては、肥満、糖尿病、動脈性高血圧症、循環器疾患、および全身性変性・神経変性疾患等の特定の代謝性疾患が、急速に増加しつつある。
【０００３】
トリガー因子は、遺伝的素因のほか、飽和脂肪および精製食品の大量摂取、水溶性・不溶性繊維の摂取低下、デスクワーク中心の生活習慣、喫煙および環境汚染に加えて、一般にストレスの多い生活環境などを伴う、栄養状態（ａｌｉｍｅｎｔａｒｙ ｒｅｇｉｍｅｓ）と「先進」社会のライフスタイルに見られる。
【０００４】
統計学的には、代謝性疾患に罹る人は、平均余命が低下するのみならず、生活の質も下がる。
【０００５】
これらの疾患のなかには、アルツハイマー病およびパーキンソン病などのように、人々の平均余命の上昇に平行してさらに増加することになるものもある。この現象は、患者の家族のみならず、国の保険医療サービスにとっても、既に深刻な社会的・経済的損害となりつつある。
【０００６】
循環器疾患および神経変性疾患の場合、科学界は、ホモシステインという警告パラメータの存在を注目してきた。ホモシステインの血中濃度が高いことは、発作、閉塞性動脈病変、静脈血栓症、アテローム性動脈硬化心疾患の立証済みの危険因子であるとともに、おそらくはアルツハイマー病および血管性認知症の危険因子でもある。高濃度のホモシステインは、ほとんどの場合において、バランスの悪い食事および／または不完全な食事に起因する栄養欠乏症に原因がある。
【０００７】
したがって、高ホモシステイン血症などの代謝性疾患に罹った人々の生活の質を向上するためには、高濃度の血漿ホモシステインに起因する病状に取り組む必要がある。
【０００８】
特に、重篤な疾患および病状の原因となる血漿ホモシステイン濃度を低減する必要性がある。
【０００９】
最終的には、血漿中の高濃度のホモシステインを低減する目的のある製剤を得る必要がある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本出願人は、現在の技術水準でこうした必要性に対して効果的な回答を提供することが可能な多くの細菌株を選び出した。
【００１１】
本発明の第一の目的は、ビフィドバクテリウム アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ） Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９４、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９５、ビフィドバクテリウム ブレーベ（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ） Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９６、ビフィドバクテリウム シュードカテニュレイタム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｓｅｕｄｏｃａｔｅｎｕｌａｔｕｍ） Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９７、ビフィドバクテリウム シュードカテニュレイタム ＤＳＭ １６５９８、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５０、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５２、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５３およびビフィドバクテリウム シュードカテニュレイタム Ｎｏ． ＤＳＭ ２１４４４からなる群から選択される、血漿高ホモシステイン血症治療に使用される細菌株に関する。
【００１２】
また、本発明は、血漿高ホモシステイン血症治療用の医薬組成物の調製への上述の菌株の少なくとも一つの使用を目的とする。
【００１３】
本出願人は、ビタミンＢ群からなる群から選択される少なくとも一つのビタミンと、少なくとも一つの特定細菌株との組合せが、血漿高ホモシステイン血症のレベルを低減するとともに正常化できることを見出した。
【００１４】
ビタミンＢ群（生命体に直ちに利用可能なビタミン類）からなる群から選択される一つのビタミンと、選択された細菌株によりｉｎ ｓｉｔｕ生成される葉酸との組合せにより、より高効率で、血漿ホモシステインのレベルの低減および正常化が行われる。
【００１５】
したがって、本発明の目的は、ビタミンＢ群からなる群から選択される少なくとも一つのビタミンとともに、上述した細菌株のうちの少なくとも一つを含む、血漿高ホモシステイン血症治療用の組成物に関する。
【００１６】
また、本発明は、血漿高ホモシステイン血症治療用の医薬組成物の調製への、ビタミンＢ群からなる群から選択される少なくとも一つのビタミンを伴う、上述した細菌株のうちの少なくとも一つの使用を目的とする。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明のその他の好適な実施形態について、以下に記載するとともに、添付の特許請求の範囲において従属請求項とした。
【００１８】
好適な実施形態において、ビタミンＢ群は、ビタミンＢ２（リボフラビン５−リン酸ナトリウム；ｒｉｂｏｆｌａｖｉｎ ５−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｓｏｄｉｕｍ）、ビタミンＢ６（塩酸ピリドキシン）、ビタミンＢ９（葉酸）およびビタミンＢ１２（シアノコバラミン；ｃｙａｎｏｃｏｂａｌａｍｉｎｅ）からなる群から選択される。
【００１９】
本発明において、葉酸および葉酸塩は、同義語として用いられることがあり、共通のビタミン活性を有し、かつ一分子のプテロイン酸および一分子以上のグルタミン酸からなる同一の基本的な化学式（プテロイルモノグルタミン酸葉酸またはプテロイルポリグルタミン酸葉酸）を有する一連の化合物を示す。
【００２０】
本出願人は、ＧＲＡＳ（Ｇｅｎｅｒａｌｌｙ Ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ ａｓ Ｓａｆｅ；一般に安全と認められる）菌株に属する葉酸生成株を分離、同定した。本出願人は、葉酸を「インビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）」生成可能な特定のビフィズス菌株を確認・同定した。
【００２１】
「インビトロ」試験
比濁的に他の細菌株（エンテロコッカス ヒラエ；Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｈｉｒａｅ ＡＴＣＣ ８０４３等）の成長を評価することにより、微生物学的測定法を用いて、試験対象の菌株が生成した葉酸のスクリーニングおよび定量を行った。なお、他の細菌株の成長は、使用するブロス培地に存在する葉酸の量を示す関数となる。
【００２２】
本出願人は、この研究の第一フェーズから、葉酸を生成可能な細菌株９株を同定し、ドイツ国際微生物細胞培養コレクション（ＤＳＭＺ）に寄託した。
【００２３】
【表１】
【００２４】
菌株ＤＳＭ ２１４４４については、培養条件は以下のとおりである：トリプチケース（ｔｒｙｐｔｉｃａｓｅ）１０ｇ／Ｌ、ファイトン（ｐｈｙｔｏｎｅ）５ｇ／Ｌ、酵母エキス５ｇ／Ｌ、グルコース１０ｇ／Ｌ、トゥイーン（ｔｗｅｅｎ）８０ １ｍｌ／Ｌ、Ｋ２ＨＰＯ４ ２ｇ／Ｌ、ＭｇＣｌ２ ０．５ｇ／Ｌ、ＺｎＳＯ４ ０．２５ｇ／Ｌ、ＣａＣｌ２ ０．１５ｇ／Ｌ、Ｌ−塩酸システイン１水和物０．５ｇ／Ｌを含むＴＰＹ培地。１５分間１２１℃で滅菌する。なお、この際の初期ｐＨは、７．１０±０．１、最終ｐＨは６．６であった。培養温度は３７℃であり、培養時間は１７±１時間であった。長期保存条件−２５℃である。３７℃、強制嫌気状態にてＴＰＹブロス培地中で成長させる。グラム陽性菌株は嫌気性であり、さまざまな形の棒状で存在する。酸消費性はなく、胞子は形成されず、非移動性である。培地に存在するグルコースは、フルクトース−６−リン酸の代謝経路（シャント；ｓｈｕｎｔ）によってのみ分解される。
【００２５】
その後、上述した菌株について、遺伝子型および表現型安定性、後天性および／または遺伝性の抗生物質に対する耐性がないこと、胃液、膵臓分泌物および胆汁塩に対する耐性、および各菌株の工業スケールでの生産可能性を確認した。
【００２６】
上述した菌株は、少数のグルタミル残基（１、２および３分子のグルタミン酸）から構成されるために腸細胞に吸収されやすい葉酸の生成株である。
【００２７】
菌株が４８時間内にブロス培地中で生産可能な葉酸の平均数量は、約１０ｎｇ／ｍｌ以上１００ｎｇ／ｍｌ超であり、好ましくは２５〜１００ｎｇ／ｍｌ、さらにより好ましくは４０〜８５ｎｇ／ｍｌである。また、葉酸の生成は、混合糞便培養でもみられ、複雑な微生物叢の存在する腸内レベルでも起きうることを示す結果となった。なお、多くの場合、腸内の微生物叢は、ラクトバシラス科（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌａｃｅａｅ）、クロストリジウム科（Ｃｌｏｓｔｒｉｌｄｉａｃｅａｅ）、ビフィドバクテリウム科（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）、バクテロイデス属（Ｂａｃｔｅｒｉｏｉｄｅｓ）、エンテロコッカス科（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃａｃｅａｅ）、ストレプトコッカス科（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｃｅａｅ）、フソバクテリウム属（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、エンテロバクター科（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）、プロピオニバクテリウム属（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、マイクロコッカス科（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃａｃｅａｅ）、ブドウ球菌科（Ｓｔａｐｈｉｌｏｃｏｃｃａｃｅａｅ）などの特徴ある属および／または科に属する１，０００以上の異なる種で構成される。
【００２８】
動物モデルを使用した試験
同様に、本出願人は、ウィスター系ラットを使用したインビボ検査も行った。これらのラットには、葉酸塩を完全に欠損した栄養制限食が与えられた。本インビボ検査の目的は、欠損状態を誘引し、同時に上述した葉酸生成ビフィドバクテリウム菌株の投与が、ラット内の葉酸／葉酸塩量を増加させることができるかどうかを確認することである。
【００２９】
ラットを４群に分け、下表に示すとおり餌を与えた。
【表２】
【００３０】
全４群について、試験期間中は葉酸塩を欠損した同じ餌が与えられた。グループ２（ＰＲＯ群）の餌には、葉酸生成プロバイオティック菌株３種（ＤＳＭ １８３５０、ＤＳＭ １８３５２ およびＤＳＭ １８３５３）の混合物が、１菌株、１日当たり２×１０８細胞ずつ添加された。グループ３（ＰＲＥ群）には、１０グラム／リットル水溶液と等量のフラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）が与えられた。グループ４（ＳＹＭ）には、グループ２およびグループ３についての上記の量のプロバイオティック菌株３種およびＦＯＳの両方が与えられた。菌株は、混合比１：１：１で、１菌株、１日当たり２×１０８細胞ずつの量が与えられた。
【００３１】
１４日後に、ラットを屠殺し、血液サンプルおよび生検標本を分析した。試験微生物、カセイ菌亜種ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ ｓｕｂｓｐ． ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）ＡＴＣＣ ７４６９を使用した高感度かつ高精度の生物学的方法により、葉酸を測定した。既存の文献データから、この微生物は葉酸塩存在下、具体的には葉酸存在下でのみ生育可能であるが、この場合の葉酸はそのままの状態（ｎａｔｉｖｅ ｓｔａｔｅ）でもよく、ジヒドロ葉酸（ＤＨＦ）、テトラヒドロ葉酸（ＴＨＦ）およびメチル化または蟻酸化された（ｆｏｒｍｉｌａｔｅｄ）誘導体などのさまざまな還元型でもよい。該菌株は、効果的にモノグルタミン酸型を使用し、効果は劣るものの、ジグルタミン酸型およびトリグルタミン酸型も使用できる。ただし、ポリグルタミン酸型に対しては、若干の感度が示された。
【００３２】
結果を以下の表にまとめた。下表は、異なる栄養状態での１４日後の葉酸濃度を示す。
【表３】
【００３３】
表中の数値は、各群を構成する個体について得られる数値の平均である。
【００３４】
葉酸の血漿内濃度は、グループ２（ＰＲＯ群）で２倍超増加しており、グループ４（ＳＹＭ群）で４倍超増加していた。ＳＹＭ群の場合、菌株が使用するエネルギー源となるプレバイオティック繊維（ｐｒｅｂｉｏｔｉｃ ｆｉｂｒｅ）の重要性が明らかであった。
【００３５】
結論として、動物モデルを用いて実行した試験は、菌株はラットの腸内に短時間定着して、腸上皮を通じて吸収される量で、かつ実質的に血漿の経路を通じて流通されることになる量のビタミンＢ９を合成できることを示した。なお、該ビタミンＢ９は、ヒトにおいても同じ機能を有する臓器である肝臓に蓄積される。
【００３６】
また、本出願人は、「インビボ」試験も実施しており、ビフィドバクテリウム アドレセンティスおよびビフィドバクテリウム シュードカテニュレイタムという２つの種に属するプロバイオティック菌株３種について、ヒトの腸内環境における葉酸塩の生成能力を評価した。本評価は、平均的なさまざまな食生活をとってきた合計２３名の健常者で構成される無作為化試験により行われた。
【００３７】
具体的には、被験者は以下の３群に分けられた。グループＡ（５名）は、プロバイオティック菌株であるビフィドバクテリウム アドレセンティス ＤＳＭ １８３５０が５×１０９ＣＦＵ／日与えられ；グループＢ（１３名）には、プロバイオティック菌株であるビフィドバクテリウム アドレセンティスＤＳＭ １８３５２が５×１０９ＣＦＵ／日与えられ；グループＣ（５名）は、菌株ビフィドバクテリウム シュードカテニュレイタムＤＳＭ １８３５３を５×１０９ＣＦＵ／日摂取した。
【００３８】
これらの菌株の腸内定着能および葉酸生成能は、プロバイオティック菌株による治療前後の４８時間にわたり排泄された便中のビフィドバクテリウム属の微生物数と葉酸塩量とを比較することで評価した。
【００３９】
予備試験として、特に葉酸塩を豊富に含む食品の消費に関し、本試験に参加する被験者らの食習慣の観察調査が行われた。次に、便１ｇあたりの葉酸濃度について基準値が決定され、この基準値は４８時間で排出されるビタミンの総量の計算に使用される。被験者には、治療開始時に、外因性の葉酸の摂取量を変化させないために可能な限り食習慣（ｄｉｅｔａｒｙ ｒｅｇｉｍｅ）を変えないことが求められた。
【００４０】
プロバイオティック菌株の投与の３０日後に、便中の葉酸濃度を新たに分析し、４８時間以内に排泄されたビタミン量を再度計算した。これら２つの数値の差（ｄ３０−ｄ０）は、腸内に定着したビフィドバクテリウム菌株による内因性の葉酸の生成によるものである。
【００４１】
ビタミン定量化は、上述の動物モデルによる試験で採用されたものと同様の手順で行った。ただし、本手順では試験生物としてラクトバチルス ラムノサス ＡＴＣＣ ７４６９が使用された。
【００４２】
下表に、３群において、２４時間にわたり便とともに排泄される葉酸量の平均値を示す。
【表４】
【００４３】
この結果から、葉酸の生成が可能な特定のプロバイオティック菌株を摂取することが、全治療群、特にＢ群に属する群の便中では、当該ビタミン濃度の統計学的に有意な増加に関わることが示された。便中に存在するビフィドバクテリウム類の数値評価により、これら全菌株の腸内環境への定着能、特にＢ．アドレセンティス ＤＳＭ １８３５２の腸内環境への定着能が確認できた。
【００４４】
行った試験から、ヒトの腸環境内に含まれる葉酸塩の合成・分泌のための本発明の細菌類の菌株の有効容量が示され、これらの菌株に基づく製剤が、内因性の補完的なビタミンＢ９源となりうることが裏付けられた。これは、経口でのビタミン摂取時と比較して、大腸の粘膜細胞のホメオスタシスおよびビタミンの一定のバイオアベイラビリティに対し特に有用である。
【００４５】
本発明の別の目的は、血漿高ホモシステイン血症治療に使用する、プロバイオティック成分および前生物的成分からなる共生サプリメント（ｓｙｍｂｉｏｔｉｃ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）である。
【００４６】
プロバイオティック成分には、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９４、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９５、ビフィドバクテリウム ブレーベ Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９６、ビフィドバクテリウムシュードカテニュレイタム Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９７、ビフィドバクテリウムシュードカテニュレイタム ＤＳＭ １６５９８、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５０、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５２、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５３、またはビフィドバクテリウム シュードカテニュレイタム Ｎｏ． ＤＳＭ ２１４４４から構成される群から選択される少なくとも一つの細菌株が含まれる。
【００４７】
前生物的成分には、この分野の専門家に既知の少なくとも一つのプレバイオティック繊維が含まれる。プレバイオティック繊維として、例えば、イヌリン、フラクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、グルコオリゴ糖（ｇｌｕｃｏｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ）、キシロオリゴ糖、アラビノガラクタン、グルコマンナン、ガラクトマンナンおよび／またはそれらの組合せなどが挙げられる。
【００４８】
本出願人は、直接または間接的にホモシステイン回路を統轄する全てのビタミンおよび元素を供給できるビタミンＢ群複合体が、直ちに利用可能な形態で存在することにより、高ホモシステイン血症治療が可能であることを見出した。
【００４９】
共生サプリメントには、０．１〜１００×１０９ＣＦＵ／用量の細菌類と、０．１〜１０ＣＦＵ／用量のプレバイオティック繊維とが含まれる可能性がある。また、このサプリメントには、ＲＤＡの５〜１００％のさまざまな比率で一以上のビタミンＢ群が含まれる可能性がある。
【００５０】
細菌により生成される葉酸は、組成物中に存在するビタミンＢ群とともに、多くの重篤な病状の発現リスクの上昇に関与するホモシステイン濃度の調節に寄与する。
【００５１】
本発明の好ましい実施形態は、栄養補助食品（サプリメント）の形態であり、直ちに利用可能な形態で、ホモシステインサイクルに対して直接的または間接的に統轄する、全ビタミンおよび元素のＲＤＡ（Ｒｅｃｏｍｍｅｎｄｅｄ Ｄｉｅｔａｒｙ Ａｌｌｏｗａｎｃｅ）の５０％に等しい量を確保できるビタミンＢ群の少なくとも一つを含む。また、この栄養補助食品には、葉酸を大腸レベルで合成可能な少なくとも一つの細菌株も含まれ、該細菌株は、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９４、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９５、ビフィドバクテリウム ブレーベ Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９６、ビフィドバクテリウム シュードカテニュレイタム Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９７、ビフィドバクテリウム シュードカテニュレイタム Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９８、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５０、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５２、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５３およびビフィドバクテリウム シュードカテニュレイタム Ｎｏ． ＤＳＭ ２１４４４からなる群から選択される。
【００５２】
好適な一実施形態において、この栄養補助食品には、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５０、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５２およびビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５３などの３つの菌株の混合物が含まれる。
【００５３】
別の実施形態においては、この栄養補助食品には、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５２が含まれる。
【００５４】
ビタミンＢ群および細菌株に加えて、この栄養補助食品は、前生物的ビフィズス菌特異的活性（ｂｉｆｉｄｏｇｅｎｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ）を有する少なくとも一つの繊維を含む。この繊維は、存在する細菌株による迅速かつ継続的な定着を保証するのに十分な量で、重合度（ＤＰ）が９〜１２のイヌリンおよび重合度（ＤＰ）が２〜４のＦＯＳ（フラクトオリゴ糖類）からなる群から選択される。
【００５５】
上述のいずれの繊維も、末端にグルコース単位を有する、さまざまな重合度のフルクトースの線状重合体の混合物からなる多糖類であるフルクタン類に属する。
【００５６】
上述した栄養補助食品の有効性は、局所的な腸レベルにおいても全身性レベルにおいても明示される。局所的な腸レベルでは、前記細菌株、特にＢ．アドレセンティス ＤＳＭ １８３５２により大腸内の腸細胞に分泌される葉酸により誘発される基礎栄養（ｔｒｏｐｈｉｓｍ）のおかげで、全身性レベルでは、５−メチルテトラヒドロ葉酸により引き起こされるメチル化によるホモシステインの血漿濃度の低下により、有効性が明示される。
【００５７】
上述の栄養補助食品の製剤には、以下の利点がある。
１Ａ） 直ちに生物学的に利用可能な形態で適正な量（５０％ＲＤＡ）存在するビタミンＢ成分による血中のホモシステイン濃度の迅速な低減。特に、５−メチルテトラヒドロ葉酸は、Ｌ−グルタミン転移酵素および葉酸／ジヒドロ葉酸−還元酵素が欠乏する個体でさえ利用可能な葉酸の一種を代表する。
１Ｂ） さまざまなプレバイオティック繊維のビフィズス菌特異的活性のおかげで、さまざまな腸部分に定着することができた細菌株により大腸内で達成される葉酸合成によるホモシステインの基準血漿濃度の標準化。
【００５８】
この合成機構が、腸管腔内でのビタミンＢ９の有意な濃度の達成を可能とする。なお、このビタミンＢ９は、限られた数のグルタミン残基を有する構造で構成され、能動輸送のみならず、側底膜を通じた受動拡散により腸細胞に侵入することができる。
【００５９】
外因性の葉酸と同様の経路で代謝される内因性の葉酸の持続的投入により、全身性レベルでの葉酸塩の継続的補給を保証され、ホモシステインの血漿濃度が標準化される。
【００６０】
したがって、動脈硬化症、発作、心筋梗塞、ならびに、血管性認知症、老年期鬱病およびアルツハイマー病などの社会的に非常に重大な神経変性疾患などの重篤な病状の発現リスクが低減する。
【００６１】
下表に、本発明の対象となる栄養補助食品（サプリメント）の処方の非限定的な例を示す。
【表５】
【００６２】
ＲＤＡの５０％に等しい量のビタミンＢ９が存在することで、重篤な病状の発現リスクの低減に有効な量が直ちに保証される。プロバイオティック菌株による生物学的に有意な量の葉酸の生成は、わずか１０〜１５日後に始まるが、これは、これら菌株が増殖および腸内での定着に１０〜１５日を必要とするためである。個体数が特定の閾値を超えた場合に限り、ビタミンの生成が有意かつ重要になり、食品で摂取した量とは無関係に継続的な投入を保証する。
【００６３】
本発明の細菌類の菌株、特にＤＳＭ １８３５０、１８３５２および１８３５３の菌株は、その葉酸生成能故に選択された。
【００６４】
【表６】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、高ホモシステイン血症の治療へのプロバイオティクス細菌の使用に関する。本発明は、さらに、血漿高ホモシステイン血症の治療用のビタミンＢ群からなる群から選択される少なくとも一つのビタミンとともにプロバイオティクス細菌を含む組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
イタリアをはじめとする先進国においては、肥満、糖尿病、動脈性高血圧症、循環器疾患、および全身性変性・神経変性疾患等の特定の代謝性疾患が、急速に増加しつつある。
【０００３】
トリガー因子は、遺伝的素因のほか、飽和脂肪および精製食品の大量摂取、水溶性・不溶性繊維の摂取低下、デスクワーク中心の生活習慣、喫煙および環境汚染に加えて、一般にストレスの多い生活環境などを伴う、栄養状態（ａｌｉｍｅｎｔａｒｙ ｒｅｇｉｍｅｓ）と「先進」社会のライフスタイルに見られる。
【０００４】
統計学的には、代謝性疾患に罹る人は、平均余命が低下するのみならず、生活の質も下がる。
【０００５】
これらの疾患のなかには、アルツハイマー病およびパーキンソン病などのように、人々の平均余命の上昇に平行してさらに増加することになるものもある。この現象は、患者の家族のみならず、国の保険医療サービスにとっても、既に深刻な社会的・経済的損害となりつつある。
【０００６】
循環器疾患および神経変性疾患の場合、科学界は、ホモシステインという警告パラメータの存在を注目してきた。ホモシステインの血中濃度が高いことは、発作、閉塞性動脈病変、静脈血栓症、アテローム性動脈硬化心疾患の立証済みの危険因子であるとともに、おそらくはアルツハイマー病および血管性認知症の危険因子でもある。高濃度のホモシステインは、ほとんどの場合において、バランスの悪い食事および／または不完全な食事に起因する栄養欠乏症に原因がある。
【０００７】
したがって、高ホモシステイン血症などの代謝性疾患に罹った人々の生活の質を向上するためには、高濃度の血漿ホモシステインに起因する病状に取り組む必要がある。
【０００８】
特に、重篤な疾患および病状の原因となる血漿ホモシステイン濃度を低減する必要性がある。
【０００９】
最終的には、血漿中の高濃度のホモシステインを低減する目的のある製剤を得る必要がある。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本出願人は、現在の技術水準でこうした必要性に対して効果的な回答を提供することが可能な多くの細菌株を選び出した。
【００１１】
本発明の第一の目的は、ビフィドバクテリウム アドレセンティス（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｄｏｌｅｓｃｅｎｔｉｓ） Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９４、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９５、ビフィドバクテリウム ブレーベ（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｒｅｖｅ） Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９６、ビフィドバクテリウム シュードカテニュレイタム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐｓｅｕｄｏｃａｔｅｎｕｌａｔｕｍ） Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９７、ビフィドバクテリウム シュードカテニュレイタム ＤＳＭ １６５９８、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５０、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５２、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５３およびビフィドバクテリウム シュードカテニュレイタム Ｎｏ． ＤＳＭ ２１４４４からなる群から選択される、血漿高ホモシステイン血症治療に使用される細菌株に関する。
【００１２】
また、本発明は、血漿高ホモシステイン血症治療用の医薬組成物の調製への上述の菌株の少なくとも一つの使用を目的とする。
【００１３】
本出願人は、ビタミンＢ群からなる群から選択される少なくとも一つのビタミンと、少なくとも一つの特定細菌株との組合せが、血漿高ホモシステイン血症のレベルを低減するとともに正常化できることを見出した。
【００１４】
ビタミンＢ群（生命体に直ちに利用可能なビタミン類）からなる群から選択される一つのビタミンと、選択された細菌株によりｉｎ ｓｉｔｕ生成される葉酸との組合せにより、より高効率で、血漿ホモシステインのレベルの低減および正常化が行われる。
【００１５】
したがって、本発明の目的は、ビタミンＢ群からなる群から選択される少なくとも一つのビタミンとともに、上述した細菌株のうちの少なくとも一つを含む、血漿高ホモシステイン血症治療用の組成物に関する。
【００１６】
また、本発明は、血漿高ホモシステイン血症治療用の医薬組成物の調製への、ビタミンＢ群からなる群から選択される少なくとも一つのビタミンを伴う、上述した細菌株のうちの少なくとも一つの使用を目的とする。
【発明を実施するための形態】
【００１７】
本発明のその他の好適な実施形態について、以下に記載するとともに、添付の特許請求の範囲において従属請求項とした。
【００１８】
好適な実施形態において、ビタミンＢ群は、ビタミンＢ２（リボフラビン５−リン酸ナトリウム；ｒｉｂｏｆｌａｖｉｎ ５−ｐｈｏｓｐｈａｔｅ ｓｏｄｉｕｍ）、ビタミンＢ６（塩酸ピリドキシン）、ビタミンＢ９（葉酸）およびビタミンＢ１２（シアノコバラミン；ｃｙａｎｏｃｏｂａｌａｍｉｎｅ）からなる群から選択される。
【００１９】
本発明において、葉酸および葉酸塩は、同義語として用いられることがあり、共通のビタミン活性を有し、かつ一分子のプテロイン酸および一分子以上のグルタミン酸からなる同一の基本的な化学式（プテロイルモノグルタミン酸葉酸またはプテロイルポリグルタミン酸葉酸）を有する一連の化合物を示す。
【００２０】
本出願人は、ＧＲＡＳ（Ｇｅｎｅｒａｌｌｙ Ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｄ ａｓ Ｓａｆｅ；一般に安全と認められる）菌株に属する葉酸生成株を分離、同定した。本出願人は、葉酸を「インビトロ（ｉｎ ｖｉｔｒｏ）」生成可能な特定のビフィズス菌株を確認・同定した。
【００２１】
「インビトロ」試験
比濁的に他の細菌株（エンテロコッカス ヒラエ；Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｈｉｒａｅ ＡＴＣＣ ８０４３等）の成長を評価することにより、微生物学的測定法を用いて、試験対象の菌株が生成した葉酸のスクリーニングおよび定量を行った。なお、他の細菌株の成長は、使用するブロス培地に存在する葉酸の量を示す関数となる。
【００２２】
本出願人は、この研究の第一フェーズから、葉酸を生成可能な細菌株９株を同定し、ドイツ国際微生物細胞培養コレクション（ＤＳＭＺ）に寄託した。
【００２３】
【表１】
【００２４】
菌株ＤＳＭ ２１４４４については、培養条件は以下のとおりである：トリプチケース（ｔｒｙｐｔｉｃａｓｅ）１０ｇ／Ｌ、ファイトン（ｐｈｙｔｏｎｅ）５ｇ／Ｌ、酵母エキス５ｇ／Ｌ、グルコース１０ｇ／Ｌ、トゥイーン（ｔｗｅｅｎ）８０ １ｍｌ／Ｌ、Ｋ２ＨＰＯ４ ２ｇ／Ｌ、ＭｇＣｌ２ ０．５ｇ／Ｌ、ＺｎＳＯ４ ０．２５ｇ／Ｌ、ＣａＣｌ２ ０．１５ｇ／Ｌ、Ｌ−塩酸システイン１水和物０．５ｇ／Ｌを含むＴＰＹ培地。１５分間１２１℃で滅菌する。なお、この際の初期ｐＨは、７．１０±０．１、最終ｐＨは６．６であった。培養温度は３７℃であり、培養時間は１７±１時間であった。長期保存条件−２５℃である。３７℃、強制嫌気状態にてＴＰＹブロス培地中で成長させる。グラム陽性菌株は嫌気性であり、さまざまな形の棒状で存在する。酸消費性はなく、胞子は形成されず、非移動性である。培地に存在するグルコースは、フルクトース−６−リン酸の代謝経路（シャント；ｓｈｕｎｔ）によってのみ分解される。
【００２５】
その後、上述した菌株について、遺伝子型および表現型安定性、後天性および／または遺伝性の抗生物質に対する耐性がないこと、胃液、膵臓分泌物および胆汁塩に対する耐性、および各菌株の工業スケールでの生産可能性を確認した。
【００２６】
上述した菌株は、少数のグルタミル残基（１、２および３分子のグルタミン酸）から構成されるために腸細胞に吸収されやすい葉酸の生成株である。
【００２７】
菌株が４８時間内にブロス培地中で生産可能な葉酸の平均数量は、約１０ｎｇ／ｍｌ以上１００ｎｇ／ｍｌ超であり、好ましくは２５〜１００ｎｇ／ｍｌ、さらにより好ましくは４０〜８５ｎｇ／ｍｌである。また、葉酸の生成は、混合糞便培養でもみられ、複雑な微生物叢の存在する腸内レベルでも起きうることを示す結果となった。なお、多くの場合、腸内の微生物叢は、ラクトバシラス科（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌａｃｅａｅ）、クロストリジウム科（Ｃｌｏｓｔｒｉｌｄｉａｃｅａｅ）、ビフィドバクテリウム科（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）、バクテロイデス属（Ｂａｃｔｅｒｉｏｉｄｅｓ）、エンテロコッカス科（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃａｃｅａｅ）、ストレプトコッカス科（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｃｅａｅ）、フソバクテリウム属（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、エンテロバクター科（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）、プロピオニバクテリウム属（Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、マイクロコッカス科（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃａｃｅａｅ）、ブドウ球菌科（Ｓｔａｐｈｉｌｏｃｏｃｃａｃｅａｅ）などの特徴ある属および／または科に属する１，０００以上の異なる種で構成される。
【００２８】
動物モデルを使用した試験
同様に、本出願人は、ウィスター系ラットを使用したインビボ検査も行った。これらのラットには、葉酸塩を完全に欠損した栄養制限食が与えられた。本インビボ検査の目的は、欠損状態を誘引し、同時に上述した葉酸生成ビフィドバクテリウム菌株の投与が、ラット内の葉酸／葉酸塩量を増加させることができるかどうかを確認することである。
【００２９】
ラットを４群に分け、下表に示すとおり餌を与えた。
【表２】
【００３０】
全４群について、試験期間中は葉酸塩を欠損した同じ餌が与えられた。グループ２（ＰＲＯ群）の餌には、葉酸生成プロバイオティック菌株３種（ＤＳＭ １８３５０、ＤＳＭ １８３５２ およびＤＳＭ １８３５３）の混合物が、１菌株、１日当たり２×１０８細胞ずつ添加された。グループ３（ＰＲＥ群）には、１０グラム／リットル水溶液と等量のフラクトオリゴ糖（ＦＯＳ）が与えられた。グループ４（ＳＹＭ）には、グループ２およびグループ３についての上記の量のプロバイオティック菌株３種およびＦＯＳの両方が与えられた。菌株は、混合比１：１：１で、１菌株、１日当たり２×１０８細胞ずつの量が与えられた。
【００３１】
１４日後に、ラットを屠殺し、血液サンプルおよび生検標本を分析した。試験微生物、カセイ菌亜種ラムノサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ ｃａｓｅｉ ｓｕｂｓｐ． ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）ＡＴＣＣ ７４６９を使用した高感度かつ高精度の生物学的方法により、葉酸を測定した。既存の文献データから、この微生物は葉酸塩存在下、具体的には葉酸存在下でのみ生育可能であるが、この場合の葉酸はそのままの状態（ｎａｔｉｖｅ ｓｔａｔｅ）でもよく、ジヒドロ葉酸（ＤＨＦ）、テトラヒドロ葉酸（ＴＨＦ）およびメチル化または蟻酸化された（ｆｏｒｍｉｌａｔｅｄ）誘導体などのさまざまな還元型でもよい。該菌株は、効果的にモノグルタミン酸型を使用し、効果は劣るものの、ジグルタミン酸型およびトリグルタミン酸型も使用できる。ただし、ポリグルタミン酸型に対しては、若干の感度が示された。
【００３２】
結果を以下の表にまとめた。下表は、異なる栄養状態での１４日後の葉酸濃度を示す。
【表３】
【００３３】
表中の数値は、各群を構成する個体について得られる数値の平均である。
【００３４】
葉酸の血漿内濃度は、グループ２（ＰＲＯ群）で２倍超増加しており、グループ４（ＳＹＭ群）で４倍超増加していた。ＳＹＭ群の場合、菌株が使用するエネルギー源となるプレバイオティック繊維（ｐｒｅｂｉｏｔｉｃ ｆｉｂｒｅ）の重要性が明らかであった。
【００３５】
結論として、動物モデルを用いて実行した試験は、菌株はラットの腸内に短時間定着して、腸上皮を通じて吸収される量で、かつ実質的に血漿の経路を通じて流通されることになる量のビタミンＢ９を合成できることを示した。なお、該ビタミンＢ９は、ヒトにおいても同じ機能を有する臓器である肝臓に蓄積される。
【００３６】
また、本出願人は、「インビボ」試験も実施しており、ビフィドバクテリウム アドレセンティスおよびビフィドバクテリウム シュードカテニュレイタムという２つの種に属するプロバイオティック菌株３種について、ヒトの腸内環境における葉酸塩の生成能力を評価した。本評価は、平均的なさまざまな食生活をとってきた合計２３名の健常者で構成される無作為化試験により行われた。
【００３７】
具体的には、被験者は以下の３群に分けられた。グループＡ（５名）は、プロバイオティック菌株であるビフィドバクテリウム アドレセンティス ＤＳＭ １８３５０が５×１０９ＣＦＵ／日与えられ；グループＢ（１３名）には、プロバイオティック菌株であるビフィドバクテリウム アドレセンティスＤＳＭ １８３５２が５×１０９ＣＦＵ／日与えられ；グループＣ（５名）は、菌株ビフィドバクテリウム シュードカテニュレイタムＤＳＭ １８３５３を５×１０９ＣＦＵ／日摂取した。
【００３８】
これらの菌株の腸内定着能および葉酸生成能は、プロバイオティック菌株による治療前後の４８時間にわたり排泄された便中のビフィドバクテリウム属の微生物数と葉酸塩量とを比較することで評価した。
【００３９】
予備試験として、特に葉酸塩を豊富に含む食品の消費に関し、本試験に参加する被験者らの食習慣の観察調査が行われた。次に、便１ｇあたりの葉酸濃度について基準値が決定され、この基準値は４８時間で排出されるビタミンの総量の計算に使用される。被験者には、治療開始時に、外因性の葉酸の摂取量を変化させないために可能な限り食習慣（ｄｉｅｔａｒｙ ｒｅｇｉｍｅ）を変えないことが求められた。
【００４０】
プロバイオティック菌株の投与の３０日後に、便中の葉酸濃度を新たに分析し、４８時間以内に排泄されたビタミン量を再度計算した。これら２つの数値の差（ｄ３０−ｄ０）は、腸内に定着したビフィドバクテリウム菌株による内因性の葉酸の生成によるものである。
【００４１】
ビタミン定量化は、上述の動物モデルによる試験で採用されたものと同様の手順で行った。ただし、本手順では試験生物としてラクトバチルス ラムノサス ＡＴＣＣ ７４６９が使用された。
【００４２】
下表に、３群において、２４時間にわたり便とともに排泄される葉酸量の平均値を示す。
【表４】
【００４３】
この結果から、葉酸の生成が可能な特定のプロバイオティック菌株を摂取することが、全治療群、特にＢ群に属する群の便中では、当該ビタミン濃度の統計学的に有意な増加に関わることが示された。便中に存在するビフィドバクテリウム類の数値評価により、これら全菌株の腸内環境への定着能、特にＢ．アドレセンティス ＤＳＭ １８３５２の腸内環境への定着能が確認できた。
【００４４】
行った試験から、ヒトの腸環境内に含まれる葉酸塩の合成・分泌のための本発明の細菌類の菌株の有効容量が示され、これらの菌株に基づく製剤が、内因性の補完的なビタミンＢ９源となりうることが裏付けられた。これは、経口でのビタミン摂取時と比較して、大腸の粘膜細胞のホメオスタシスおよびビタミンの一定のバイオアベイラビリティに対し特に有用である。
【００４５】
本発明の別の目的は、血漿高ホモシステイン血症治療に使用する、プロバイオティック成分および前生物的成分からなる共生サプリメント（ｓｙｍｂｉｏｔｉｃ ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）である。
【００４６】
プロバイオティック成分には、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９４、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９５、ビフィドバクテリウム ブレーベ Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９６、ビフィドバクテリウムシュードカテニュレイタム Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９７、ビフィドバクテリウムシュードカテニュレイタム ＤＳＭ １６５９８、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５０、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５２、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５３、またはビフィドバクテリウム シュードカテニュレイタム Ｎｏ． ＤＳＭ ２１４４４から構成される群から選択される少なくとも一つの細菌株が含まれる。
【００４７】
前生物的成分には、この分野の専門家に既知の少なくとも一つのプレバイオティック繊維が含まれる。プレバイオティック繊維として、例えば、イヌリン、フラクトオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、グルコオリゴ糖（ｇｌｕｃｏｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ）、キシロオリゴ糖、アラビノガラクタン、グルコマンナン、ガラクトマンナンおよび／またはそれらの組合せなどが挙げられる。
【００４８】
本出願人は、直接または間接的にホモシステイン回路を統轄する全てのビタミンおよび元素を供給できるビタミンＢ群複合体が、直ちに利用可能な形態で存在することにより、高ホモシステイン血症治療が可能であることを見出した。
【００４９】
共生サプリメントには、０．１〜１００×１０９ＣＦＵ／用量の細菌類と、０．１〜１０ＣＦＵ／用量のプレバイオティック繊維とが含まれる可能性がある。また、このサプリメントには、ＲＤＡの５〜１００％のさまざまな比率で一以上のビタミンＢ群が含まれる可能性がある。
【００５０】
細菌により生成される葉酸は、組成物中に存在するビタミンＢ群とともに、多くの重篤な病状の発現リスクの上昇に関与するホモシステイン濃度の調節に寄与する。
【００５１】
本発明の好ましい実施形態は、栄養補助食品（サプリメント）の形態であり、直ちに利用可能な形態で、ホモシステインサイクルに対して直接的または間接的に統轄する、全ビタミンおよび元素のＲＤＡ（Ｒｅｃｏｍｍｅｎｄｅｄ Ｄｉｅｔａｒｙ Ａｌｌｏｗａｎｃｅ）の５０％に等しい量を確保できるビタミンＢ群の少なくとも一つを含む。また、この栄養補助食品には、葉酸を大腸レベルで合成可能な少なくとも一つの細菌株も含まれ、該細菌株は、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９４、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９５、ビフィドバクテリウム ブレーベ Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９６、ビフィドバクテリウム シュードカテニュレイタム Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９７、ビフィドバクテリウム シュードカテニュレイタム Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９８、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５０、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５２、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５３およびビフィドバクテリウム シュードカテニュレイタム Ｎｏ． ＤＳＭ ２１４４４からなる群から選択される。
【００５２】
好適な一実施形態において、この栄養補助食品には、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５０、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５２およびビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５３などの３つの菌株の混合物が含まれる。
【００５３】
別の実施形態においては、この栄養補助食品には、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５２が含まれる。
【００５４】
ビタミンＢ群および細菌株に加えて、この栄養補助食品は、前生物的ビフィズス菌特異的活性（ｂｉｆｉｄｏｇｅｎｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ）を有する少なくとも一つの繊維を含む。この繊維は、存在する細菌株による迅速かつ継続的な定着を保証するのに十分な量で、重合度（ＤＰ）が９〜１２のイヌリンおよび重合度（ＤＰ）が２〜４のＦＯＳ（フラクトオリゴ糖類）からなる群から選択される。
【００５５】
上述のいずれの繊維も、末端にグルコース単位を有する、さまざまな重合度のフルクトースの線状重合体の混合物からなる多糖類であるフルクタン類に属する。
【００５６】
上述した栄養補助食品の有効性は、局所的な腸レベルにおいても全身性レベルにおいても明示される。局所的な腸レベルでは、前記細菌株、特にＢ．アドレセンティス ＤＳＭ １８３５２により大腸内の腸細胞に分泌される葉酸により誘発される基礎栄養（ｔｒｏｐｈｉｓｍ）のおかげで、全身性レベルでは、５−メチルテトラヒドロ葉酸により引き起こされるメチル化によるホモシステインの血漿濃度の低下により、有効性が明示される。
【００５７】
上述の栄養補助食品の製剤には、以下の利点がある。
１Ａ） 直ちに生物学的に利用可能な形態で適正な量（５０％ＲＤＡ）存在するビタミンＢ成分による血中のホモシステイン濃度の迅速な低減。特に、５−メチルテトラヒドロ葉酸は、Ｌ−グルタミン転移酵素および葉酸／ジヒドロ葉酸−還元酵素が欠乏する個体でさえ利用可能な葉酸の一種を代表する。
１Ｂ） さまざまなプレバイオティック繊維のビフィズス菌特異的活性のおかげで、さまざまな腸部分に定着することができた細菌株により大腸内で達成される葉酸合成によるホモシステインの基準血漿濃度の標準化。
【００５８】
この合成機構が、腸管腔内でのビタミンＢ９の有意な濃度の達成を可能とする。なお、このビタミンＢ９は、限られた数のグルタミン残基を有する構造で構成され、能動輸送のみならず、側底膜を通じた受動拡散により腸細胞に侵入することができる。
【００５９】
外因性の葉酸と同様の経路で代謝される内因性の葉酸の持続的投入により、全身性レベルでの葉酸塩の継続的補給を保証され、ホモシステインの血漿濃度が標準化される。
【００６０】
したがって、動脈硬化症、発作、心筋梗塞、ならびに、血管性認知症、老年期鬱病およびアルツハイマー病などの社会的に非常に重大な神経変性疾患などの重篤な病状の発現リスクが低減する。
【００６１】
下表に、本発明の対象となる栄養補助食品（サプリメント）の処方の非限定的な例を示す。
【表５】
【００６２】
ＲＤＡの５０％に等しい量のビタミンＢ９が存在することで、重篤な病状の発現リスクの低減に有効な量が直ちに保証される。プロバイオティック菌株による生物学的に有意な量の葉酸の生成は、わずか１０〜１５日後に始まるが、これは、これら菌株が増殖および腸内での定着に１０〜１５日を必要とするためである。個体数が特定の閾値を超えた場合に限り、ビタミンの生成が有意かつ重要になり、食品で摂取した量とは無関係に継続的な投入を保証する。
【００６３】
本発明の細菌類の菌株、特にＤＳＭ １８３５０、１８３５２および１８３５３の菌株は、その葉酸生成能故に選択された。
【００６４】
【表６】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ビタミンＢ群から選択される少なくとも一つのビタミンとともに、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ．ＤＳＭ １６５９４、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９５、ビフィドバクテリウム ブレーベ Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９６、ビフィドバクテリウム シュードカテニュレイタム Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９７、ビフィドバクテリウム シュードカテニュレイタム ＤＳＭ １６５９８、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５０、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５２、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５３およびビフィドバクテリウム シュードカテニュレイタム Ｎｏ． ＤＳＭ ２１４４４からなる群から選択される少なくとも一つの細菌株を含む、血漿高ホモシステイン血症の治療用の栄養補助食品用の組成物。
【請求項２】
前記組成物が、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９４、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９５、ビフィドバクテリウム ブレーベ Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９６、ビフィドバクテリウム シュードカテニュレイタム Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９７、ビフィドバクテリウム シュードカテニュレイタム ＤＳＭ １６５９８、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５０、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５３およびビフィドバクテリウム シュードカテニュレイタム Ｎｏ． ＤＳＭ ２１４４４からなる群から選択される少なくとも一つの細菌株とともに、前記ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５２を含む請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記組成物が、前記ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５０、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５２およびビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５３を含む請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記組成物が、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５２からなる請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記ビタミンが、ビタミンＢ２（リボフラビン５−リン酸ナトリウム）、ビタミンＢ６（塩酸ピリドキシン）、ビタミンＢ９（葉酸）およびビタミンＢ１２（シアノコバラミン）からなる群から選択される請求項１〜４のいずれかに記載の組成物。
【請求項６】
前記組成物が、さらに、前生物的ビフィズス菌特異的活性を有する少なくとも一つの繊維を含む請求項１〜５のいずれかに記載の組成物。
【請求項７】
前記繊維が、イヌリンおよびフラクトオリゴ糖類からなる群から選択される請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記イヌリンの重合度は９〜１２であり、前記フラクトオリゴ糖類の重合度は２〜４である請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
前記組成物が、さらに、亜鉛およびセレンからなる群から選択される少なくとも一つの必須元素を含む請求項１〜８のいずれかに記載の組成物。
【請求項１０】
前記亜鉛が、グルコン酸亜鉛等の有機塩由来、または、亜鉛を内在可能な酵母若しくは細菌由来である請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記セレンが、グルコン酸セレン等の有機塩由来、または、セレンを内在可能な酵母若しくは細菌由来である請求項９に記載の組成物。
【請求項１２】
血漿高ホモシステイン血症の治療用の医薬組成物の調製への細菌株の使用であって、前記細菌株は、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９４、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９５、ビフィドバクテリウム ブレーベ Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９６、ビフィドバクテリウム シュードカテニュレイタム Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９７、ビフィドバクテリウム シュードカテニュレイタム ＤＳＭ １６５９８、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５０、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５２、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５３およびビフィドバクテリウム シュードカテニュレイタム Ｎｏ． ＤＳＭ ２１４４４からなる群から選択される少なくとも一つであり、ビタミンＢ群から選択される少なくとも一つのビタミンとともに使用される細菌株の使用。
【請求項１３】
前記組成物は、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９４、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９５、ビフィドバクテリウム ブレーベ Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９６、ビフィドバクテリウム シュードカテニュレイタム Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９７、ビフィドバクテリウム シュードカテニュレイタム ＤＳＭ １６５９８、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５０、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５３およびビフィドバクテリウム シュードカテニュレイタム Ｎｏ． ＤＳＭ ２１４４４からなる群から選択される少なくとも一つの細菌株と、前記細菌株ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５２とを含む請求項１２に記載の使用。
【請求項１４】
前記組成物は、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５０、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５２およびビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５３を含む請求項１３に記載の使用。
【請求項１５】
前記組成物は、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５２からなる請求項１４に記載の使用。
【請求項１６】
前記ビタミンは、ビタミンＢ２（リボフラビン５−リン酸ナトリウム）、ビタミンＢ６（塩酸ピリドキシン）、ビタミンＢ９（葉酸）およびビタミンＢ１２（シアノコバラミン）からなる群から選択される請求項１２〜１５のいずれかに記載の使用。
【請求項１７】
前記組成物は、さらに、前生物的ビフィズス菌特異的活性を有する少なくとも一つの繊維を含む請求項１２〜１６のいずれかに記載の使用。
【請求項１８】
前記繊維は、イヌリンおよびフラクトオリゴ糖類からなる群から選択される請求項１７に記載の使用。
【請求項１９】
前記イヌリンの重合度は、９〜１２であり、前記フラクトオリゴ糖類の重合度は、２〜４である請求項１８に記載の使用。
【請求項２０】
前記組成物は、さらに、亜鉛およびセレンからなる群から選択される少なくとも一つの必須元素を含む請求項１２〜１９に記載の使用。
【請求項２１】
前記亜鉛は、グルコン酸亜鉛等の有機塩由来、または、亜鉛を内在可能な酵母若しくは細菌由来である請求項２０に記載の使用。
【請求項２２】
前記セレンは、セレングルコン酸塩等の有機塩由来、または、セレンを内在可能な酵母若しくは細菌由来である請求項２０に記載の使用。
【請求項２３】
フィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９４、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９５、ビフィドバクテリウム ｊブレーベ Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９６、ビフィドバクテリウム シュードカテニュレイタム Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９７、ビフィドバクテリウム ｐｓｅｕｄｏｃａｔｅｎｕｉａｔｕｍ ＤＳＭ １６５９８、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５０、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５２、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５３およびビフィドバクテリウム シュードカテニュレイタム Ｎｏ． ＤＳＭ ２１４４４からなる群から選択される、血漿高ホモシステイン血症治療に用いられる細菌株。
【請求項２４】
血漿高ホモシステイン血症治療用の医薬組成物の調製への細菌株の使用であって、前記細菌株は、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９４、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９５、ビフィドバクテリウム ブレーベ Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９６、ビフィドバクテリウム シュードカテニュレイタム Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９７、ビフィドバクテリウム シュードカテニュレイタム ＤＳＭ １６５９８、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５０、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５２、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５３およびビフィドバクテリウム シュードカテニュレイタム Ｎｏ． ＤＳＭ ２１４４４ からなる群から選択される少なくとも一つである細菌株の使用。
【請求項２５】
前記医薬組成物は、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９４、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９５、ビフィドバクテリウム ブレーベ Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９６、ビフィドバクテリウム シュードカテニュレイタム Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９７、ビフィドバクテリウム シュードカテニュレイタム ＤＳＭ １６５９８、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５０、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５３およびビフィドバクテリウム シュードカテニュレイタム Ｎｏ． ＤＳＭ ２１４４４からなる群から選択される少なくとも一つの細菌株と、前記ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５２とを含む請求項２４に記載の使用。
【請求項１】
ビタミンＢ群から選択される少なくとも一つのビタミンとともに、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ．ＤＳＭ １６５９４、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９５、ビフィドバクテリウム ブレーベ Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９６、ビフィドバクテリウム シュードカテニュレイタム Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９７、ビフィドバクテリウム シュードカテニュレイタム ＤＳＭ １６５９８、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５０、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５２、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５３およびビフィドバクテリウム シュードカテニュレイタム Ｎｏ． ＤＳＭ ２１４４４からなる群から選択される少なくとも一つの細菌株を含む、血漿高ホモシステイン血症の治療用の栄養補助食品用の組成物。
【請求項２】
前記組成物が、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９４、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９５、ビフィドバクテリウム ブレーベ Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９６、ビフィドバクテリウム シュードカテニュレイタム Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９７、ビフィドバクテリウム シュードカテニュレイタム ＤＳＭ １６５９８、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５０、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５３およびビフィドバクテリウム シュードカテニュレイタム Ｎｏ． ＤＳＭ ２１４４４からなる群から選択される少なくとも一つの細菌株とともに、前記ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５２を含む請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記組成物が、前記ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５０、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５２およびビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５３を含む請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記組成物が、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５２からなる請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記ビタミンが、ビタミンＢ２（リボフラビン５−リン酸ナトリウム）、ビタミンＢ６（塩酸ピリドキシン）、ビタミンＢ９（葉酸）およびビタミンＢ１２（シアノコバラミン）からなる群から選択される請求項１〜４のいずれかに記載の組成物。
【請求項６】
前記組成物が、さらに、前生物的ビフィズス菌特異的活性を有する少なくとも一つの繊維を含む請求項１〜５のいずれかに記載の組成物。
【請求項７】
前記繊維が、イヌリンおよびフラクトオリゴ糖類からなる群から選択される請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記イヌリンの重合度は９〜１２であり、前記フラクトオリゴ糖類の重合度は２〜４である請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
前記組成物が、さらに、亜鉛およびセレンからなる群から選択される少なくとも一つの必須元素を含む請求項１〜８のいずれかに記載の組成物。
【請求項１０】
前記亜鉛が、グルコン酸亜鉛等の有機塩由来、または、亜鉛を内在可能な酵母若しくは細菌由来である請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記セレンが、グルコン酸セレン等の有機塩由来、または、セレンを内在可能な酵母若しくは細菌由来である請求項９に記載の組成物。
【請求項１２】
血漿高ホモシステイン血症の治療用の医薬組成物の調製への細菌株の使用であって、前記細菌株は、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９４、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９５、ビフィドバクテリウム ブレーベ Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９６、ビフィドバクテリウム シュードカテニュレイタム Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９７、ビフィドバクテリウム シュードカテニュレイタム ＤＳＭ １６５９８、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５０、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５２、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５３およびビフィドバクテリウム シュードカテニュレイタム Ｎｏ． ＤＳＭ ２１４４４からなる群から選択される少なくとも一つであり、ビタミンＢ群から選択される少なくとも一つのビタミンとともに使用される細菌株の使用。
【請求項１３】
前記組成物は、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９４、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９５、ビフィドバクテリウム ブレーベ Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９６、ビフィドバクテリウム シュードカテニュレイタム Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９７、ビフィドバクテリウム シュードカテニュレイタム ＤＳＭ １６５９８、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５０、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５３およびビフィドバクテリウム シュードカテニュレイタム Ｎｏ． ＤＳＭ ２１４４４からなる群から選択される少なくとも一つの細菌株と、前記細菌株ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５２とを含む請求項１２に記載の使用。
【請求項１４】
前記組成物は、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５０、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５２およびビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５３を含む請求項１３に記載の使用。
【請求項１５】
前記組成物は、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５２からなる請求項１４に記載の使用。
【請求項１６】
前記ビタミンは、ビタミンＢ２（リボフラビン５−リン酸ナトリウム）、ビタミンＢ６（塩酸ピリドキシン）、ビタミンＢ９（葉酸）およびビタミンＢ１２（シアノコバラミン）からなる群から選択される請求項１２〜１５のいずれかに記載の使用。
【請求項１７】
前記組成物は、さらに、前生物的ビフィズス菌特異的活性を有する少なくとも一つの繊維を含む請求項１２〜１６のいずれかに記載の使用。
【請求項１８】
前記繊維は、イヌリンおよびフラクトオリゴ糖類からなる群から選択される請求項１７に記載の使用。
【請求項１９】
前記イヌリンの重合度は、９〜１２であり、前記フラクトオリゴ糖類の重合度は、２〜４である請求項１８に記載の使用。
【請求項２０】
前記組成物は、さらに、亜鉛およびセレンからなる群から選択される少なくとも一つの必須元素を含む請求項１２〜１９に記載の使用。
【請求項２１】
前記亜鉛は、グルコン酸亜鉛等の有機塩由来、または、亜鉛を内在可能な酵母若しくは細菌由来である請求項２０に記載の使用。
【請求項２２】
前記セレンは、セレングルコン酸塩等の有機塩由来、または、セレンを内在可能な酵母若しくは細菌由来である請求項２０に記載の使用。
【請求項２３】
フィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９４、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９５、ビフィドバクテリウム ｊブレーベ Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９６、ビフィドバクテリウム シュードカテニュレイタム Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９７、ビフィドバクテリウム ｐｓｅｕｄｏｃａｔｅｎｕｉａｔｕｍ ＤＳＭ １６５９８、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５０、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５２、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５３およびビフィドバクテリウム シュードカテニュレイタム Ｎｏ． ＤＳＭ ２１４４４からなる群から選択される、血漿高ホモシステイン血症治療に用いられる細菌株。
【請求項２４】
血漿高ホモシステイン血症治療用の医薬組成物の調製への細菌株の使用であって、前記細菌株は、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９４、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９５、ビフィドバクテリウム ブレーベ Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９６、ビフィドバクテリウム シュードカテニュレイタム Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９７、ビフィドバクテリウム シュードカテニュレイタム ＤＳＭ １６５９８、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５０、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５２、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５３およびビフィドバクテリウム シュードカテニュレイタム Ｎｏ． ＤＳＭ ２１４４４ からなる群から選択される少なくとも一つである細菌株の使用。
【請求項２５】
前記医薬組成物は、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９４、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９５、ビフィドバクテリウム ブレーベ Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９６、ビフィドバクテリウム シュードカテニュレイタム Ｎｏ． ＤＳＭ １６５９７、ビフィドバクテリウム シュードカテニュレイタム ＤＳＭ １６５９８、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５０、ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５３およびビフィドバクテリウム シュードカテニュレイタム Ｎｏ． ＤＳＭ ２１４４４からなる群から選択される少なくとも一つの細菌株と、前記ビフィドバクテリウム アドレセンティス Ｎｏ． ＤＳＭ １８３５２とを含む請求項２４に記載の使用。
【公表番号】特表２０１１−５２０８２１（Ｐ２０１１−５２０８２１Ａ）
【公表日】平成２３年７月２１日（２０１１．７．２１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５０８８５４（Ｐ２０１１−５０８８５４）
【出願日】平成２１年４月８日（２００９．４．８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００９／０５４２２１
【国際公開番号】ＷＯ２００９／１３８３００
【国際公開日】平成２１年１１月１９日（２００９．１１．１９）
【出願人】（３０９０３８７２０）
【氏名又は名称原語表記】ＰＲＯＢＩＯＴＩＣＡＬ Ｓ．Ｐ．Ａ．
【住所又は居所原語表記】Ｖｉａ Ｍａｔｔｅｉ，３，Ｉ−２８１００ Ｎｏｖａｒａ，Ｉｔａｌｙ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２３年７月２１日（２０１１．７．２１）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年４月８日（２００９．４．８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００９／０５４２２１
【国際公開番号】ＷＯ２００９／１３８３００
【国際公開日】平成２１年１１月１９日（２００９．１１．１９）
【出願人】（３０９０３８７２０）
【氏名又は名称原語表記】ＰＲＯＢＩＯＴＩＣＡＬ Ｓ．Ｐ．Ａ．
【住所又は居所原語表記】Ｖｉａ Ｍａｔｔｅｉ，３，Ｉ−２８１００ Ｎｏｖａｒａ，Ｉｔａｌｙ
【Ｆターム（参考）】
[ Back to top ]