本発明は一般に、ヒトステロイド５α−レダクターゼ遺伝子の発現を調節し、かくしてジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）のレベルを調節させるためのアンチセンスオリゴヌクレオチド、低分子干渉ＲＮＡ及びリボザイムの使用に関する。ＤＨＴの上昇したレベルは、限定されるわけではないが、皮膚病、脱毛、多毛症（ｈｉｒｓｕｉｔｉｓｍ）及び良性前立腺肥大を含むさまざまな障害と結びつけられる。本発明は、具体的には、障害を治療及び予防するための投与のためのこれらのアンチセンスオリゴヌクレオチド、低分子干渉ＲＮＡ及びリボザイムの製剤に関する。

【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
１．関連特許出願
本出願は、その各々の全体が本明細書に参照して援用される２００３年１０月２１日出願の米国仮出願第６０／５１２，６８９号及び２００４年２月１８日出願の米国仮出願第６０／５４５，１４６号の利益を享受するものである。
【０００２】
２．技術分野
本発明は一般に、ヒトステロイド５α−レダクターゼ遺伝子の発現を調節しかくしてジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）のレベルを調節させるためのアンチセンスオリゴヌクレオチド、低分子干渉ＲＮＡ及びリボザイムの使用に関する。高レベルのＤＨＴは、限定されるわけではないが、皮膚病、脱毛、多毛症（ｈｉｒｓｕｉｔｉｓｍ）及び良性前立腺肥大を含むさまざまな障害に関連する。本発明は、具体的には、障害を治療及び予防するための投与のためのこれらのアンチセンスオリゴヌクレオチド、低分子干渉ＲＮＡ及びリボザイムの製剤に関する。
【背景技術】
【０００３】
３．背景技術
３．１ ヒトステロイド５α−レダクターゼ
１型及び２型という２つの５α−レダクターゼのイソ酵素が人間の場合において記述されてきた（１型及び２型という呼称は、遺伝子が単離された年代順を反映している）（例えばアンダーソン（Ａｎｄｅｒｓｓｏｎ）及びラッセル（Ｒｕｓｓｅｌｌ）、「Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ａｎｄ ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｃｌｏｎｅｄ ａｎｄ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｈｕｍａｎ ａｎｄ ｒａｔ ｓｔｅｒｏｉｄ ５α−ｒｅｄｕｃｔａｓｅｓ」、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ．ＵＳＡ、第８７巻、３６４０−４頁、１９９０年を参照のこと。同様にアンダーソンら、「Ｄｅｌｅｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｔｅｒｏｉｄ ５ ａｌｐｈａ−Ｒｅｄｕｃｔａｓｅ ２ Ｇｅｎｅ ｉｎ Ｍａｌｅ Ｐｓｅｕｄｏｈｅｒｍａｐｈｒｏｄｉｔｉｓｍ」、Ｎａｔｕｒｅ、第３５４巻、１５９−６１頁、１９９１年も参照のこと）。構造的差異に加えて、２つのイソ酵素は、その生化学的特性、発現パターン、遺伝的特徴及び薬理学に関して異なっている（例えばアンダーソンら、１９９１年、前掲を参照のこと；同様にジェンキンス（Ｊｅｎｋｉｎｓ）ら、「Ｇｅｎｅｔｉｃ ａｎｄ Ｐａｒａｍａｃｏｌｏｇｉｃ Ｅｖｉｄｅｎｃｅ Ｆｏｒ Ｍｏｒｅ Ｔｈａｎ Ｏｎｅ Ｈｕｍａｎ Ｓｔｅｒｏｉｄ ５α−Ｒｅｄｕｃｔａｓｅ」、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖ．、第８９巻、２９３−３００頁、１９９２年も参照のこと）。例えば５α−レダクターゼ１型は脂腺（例えば前立腺及び皮膚）の中に見られ、５α−レダクターゼ２型は例えば前立腺及び毛嚢中に見られる。組織分布及びアンドロゲン作用において２つのステロイド５α−レダクターゼイソ酵素が果たす役割を解明することが現在、熱心な研究の主題となっている。
【０００４】
ステロイド５α−レダクターゼ１型の遺伝子座名はＳＲＤ５α１である。この遺伝子はｐ１５バンド内の染色体５の短腕に対してマップされる。ステロイド５α−レダクターゼ２型についての遺伝子座名はＳＲＤ５α２であり、染色体２の２ｐ２３バンドにマッピングする。これらの遺伝子に加えて、Ｘ染色体のｑ２４−ｑｔｅｒ領域にマッピングするＳＲＤ５αＰ１と呼ばれるステロイド５α−レダクターゼ１型についての不活性処理済み偽遺伝子が存在するとも思われる（ジェンキンスら、「Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈｒｏｍａｓｏｍａｌ Ｍａｐｐｉｎｇ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｓｔｅｒｏｉｄ ５α−Ｒｅｄｕｃｔａｓｅ Ｇｅｎｅ ａｎｄ Ｐｓｅｕｄｏｇｅｎｅ ａｎｄ Ｍａｐｐｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ Ｍｏｕｓｅ Ｈｏｍｏｌｏｇｕｅ」、Ｇｅｎｏｍｉｃｓ、第１１巻、１１０２−１１１２頁、１９９１年；シグペン（Ｔｈｉｇｐｅｎ）及びラッセル、「Ｆｏｕｒ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄ Ｓｅｇｍｅｎｔ ｉｎ Ｓｔｅｒｏｉｄ ５α−Ｒｅｄｕｃｔａｓｅ １ Ｃｏｎｆｅｒｓ Ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｔｏ Ｆｉｎａｓｔｅｒｉｄｅ、Ａ Ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ」、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、第２６７巻、８５７７−８５８３頁、１９９２年）。
【０００５】
ステロイド５α−レダクターゼ１型及びステロイド５α−レダクターゼ２型の重複部分を含むゲノムクローンが単離され配列決定されてきた。配列分析に基づいて、両方の遺伝子共少なくとも２０Ｋｂの長さを有し正確に同じ位置で４つのイントロンにより中断された５つのエクソンを有するように思われる。遺伝子構造の類似性から、２つの遺伝子が祖先遺伝子の重複とそれに続く発散から発生しかくして別々の生理学的役割を導くことになるということが示唆された（ジェンキンスら、１９９１年、前掲；シグペン及びラッセル、１９９２年、前掲）。
【０００６】
２つのステロイド５α−レダクターゼ遺伝子は類似のプロモータを有し同じ転写因子に応答すると思われるが、２つのイソ型が全ての生理学的条件下で同時に調節されるか否かは明確でない。現在の証拠から、２つのイソ酵素の発現は異なる組織及び細胞型において変動することが示唆されている。最近の薬理学的証拠は、１つのイソ酵素の阻害がもう一方のイソ酵素のアップレギュレーションを導くような形でステロイド５α−レダクターゼの発現を調節することが可能であるということを示唆している（ヒルシュ（Ｈｉｒｓｃｈ）ら、「Ａ Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ、Ｎｏｎ−ｓｔｅｒｏｉｄａｌ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｓｔｅｒｏｉｄ ５α−Ｒｅｄｕｃｔａｓｅ Ｔｙｐｅ １」、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、ＵＳＡ、第９０巻（１１）：５２７７−８１頁、１９９３年）。酵素ステロイド５α−レダクターゼ１型はステロイド５α−レダクターゼ２型に対し一次アミノ酸配列において約５０％の相同性を示す。しかしながらそれらのハイドロパシープロットはほぼ同一であり、より高次の構造が高い保存度を示すことを意味している（アンダーソンら、１９９１年、前掲）。２つのイソ酵素間の構造的類似性は、恐らく触媒活性にとって必要な制約を反映している。
【０００７】
酵素活性には、テストステロンのジヒドロテストステロンへの還元のための補因子としてＮＡＤＰＨの存在が必要である。最近の報告は、ＮＡＤＰＨと酵素の会合がアロステリックとして作用してタンパク質の３次元構造の立体配座の変化を誘発し、かくして基質が触媒部位にアクセスできるようにする、ということを示唆している（メトカーフ（Ｍｅｔｃａｌｆ）ら、「Ｐｏｔｅｎｔ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ Ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｓｔｅｒｏｉｄ ５α−Ｒｅｄｕｃｔａｓｅ（ＥＣ１．３．１．３０）ｂｙ ３−Ａｎｄｒｏｓｔｅｎｅ−３−Ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ Ａｃｉｄｓ」、Ｂｉｏｏｇｒａｎｉｃ Ｃｈｅｍ．、第1巻、３７２−３７６頁、１９８９年）。ステロイド５α−レダクターゼ１型に最適なｐＨは、比較的広く（ｐＨ６〜８）、これはｐＨ５．５でインビトロでの最大活性を示すステロイド５α−レダクターゼ２型と明確な対照をなす（ジェンキンスら、１９９２年、前掲）。薬理学的研究により２つのイソ酵素が阻害物質に対する異なる感応性を示すということが、示された（ジェンキンスら、１９９２年、前掲）。
【０００８】
３．１．１． ５α−レダクターゼ１型
ステロイド５α−レダクターゼ１型遺伝子（配列番号１）は、約２９ｋＤａの分子量をもつタンパク質をコードする。該酵素は疎水性が非常に高く、１３％の荷電アミノ酸残基しか含まない（アンダーソン及びラッセル、１９９０年、前掲；アンダーソンら、１９９１年、前掲；アンダーソンら、「Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ａｎｄ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ Ｏｆ Ｓｔｅｒｏｉｄ ５ Ａｌｐｈａ−Ｒｅｄｕｃｔａｓｅ、Ａｎ Ｅｎｚｙｍｅ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｆｏｒ Ｍａｌｅ Ｓｅｘｕａｌ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ」、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ、第２６４巻、１６２４９−５５頁、１９８９年）。ステロイド５α−レダクターゼ１型の転写は、約２．１ｋｂのメッセンジャＲＮＡを産生する。当初、遺伝子は発現クローニング及びＰＣＲによりｃＤＮＡコピーからクローニングされた。結果として得られたクローンは完全に配列決定されており、ゲノムクローンに由来するエクソンの配列に対し完全な同一性を示す（アンダーソンら、１９９１年、前掲；ジェンキンスら、１９９１年、前掲；シグペン及びラッセル、１９９２年、前掲；アンダーソンら、１９８９年、前掲）。ステロイド５α−レダクターゼ１型遺伝子についてのメッセージは５’末端でキャッピングされ、３’末端でポリアデニル化される。推定ポリアデニル化部位は、ポリＡテールの部分を含有するｃＤＮＡクローンの配列に基づいて同定された。
【０００９】
３．１．２ ５α−レダクターゼ２型
ステロイド５α−レダクターゼ２型（配列番号２８）の機能は、男性仮性半陰陽（ｐｓｅｕｄｏｈｅｒｍａｐｈｒｏｄｉｓｍ）におけるその欠乏によって規定されるが、ステロイド５α−レダクターゼ１型の、アンドロゲンの生理機能における正確な役割は、はっきりと分かっていない（同上参照；ジェンキンスら、１９９２年、前掲も参照のこと）。最近の分子遺伝学の証拠は、ステロイド５α−レダクターゼ２型が胚性外生殖器及び前立腺の分化を担当することを示唆した（アンダーソンら、１９９１年、前掲）。生化学研究も又、ステロイド５α−レダクターゼ２型が成人前立腺における酵素の主要な形態を表わしていることを示した（アンダーソン及びラッセル、１９９０年、前掲；ジェンキンスら、１９９２年、前掲）。しかしながら、最近の研究からの証拠は、前立腺がステロイド５α−レダクターゼレダクターゼ１型を発現する能力をも有することを示唆した（ヒルシュら、１９９３年、前掲）。４−アザステロイド、フィナステリド（ＭＫ−９０６、Ｐｒｏｓｃａｒ（登録商標））は、ステロイド５α−レダクターゼ１型の比較的弱い阻害物質（Ｋｉ≧３００ｎＭ）である（アンダーソン及びラッセル、１９９０年、前掲）。対照的に、フィナステリドは、低いナノモル濃度（Ｋｉ＝３〜５ｎＭ）でステロイド５α−レダクターゼ２型を阻害する。最近になって、〜１１ｎＭのＫｉでステロイド５α−レダクターゼ１を選択的に阻害する新しい一連の阻害物質が同定された。（ノイバウアー（Ｎｅｕｂａｕｅｒ）ら、「ＬＹ１９１７０４ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｔｙｐｅ Ｉ ｓｔｅｒｏｉｄ ５ ａｌｐｈａ−ｒｅｄｕｃｔａｓｅ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｓｃａｌｐ」、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｅｎｄｏｃｒｉｎａｌ Ｍｅｔａｂ、（１９９６年）第８１巻（６）、２０５５−６０頁）。
【００１０】
３．２ 尋常性座瘡
座瘡の発生には、脂腺のアンドロゲン刺激が必要とされる（シーハン・デアー（Ｓｈｅｅｈａｎ−Ｄａｒｅ）ら、１９８８年、前掲）。座瘡の重症度は、ホルモンの制御下にあると報告されている皮脂排出速度に関係する。座瘡に関与する脂腺毛包は、共に微小面皰を形成する異常に落屑を呈する角質細胞及び過剰皮脂の蓄積により特徴づけされる。この環境は、Ｐｒｏｐｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ａｃｎｅｓにとって理想的生育条件を提供する。微小面皰中に見られるＰ．ａｃｎｅｓのレベルは、低から非常に高までの範囲内にある。皮脂レベルの低減は徴環境を改変しかくしてＰ．ａｃｎｅｓの繁栄能力を低減させる。疾病についてのアンドロゲン原理は、座瘡の治療に抗アンドロゲン療法が有効に利用されてきたという観察事実によって裏づけされる。座瘡の発生は、循環するアンドロゲンレベルの上昇と関係しないことから、ＤＨＴの局所的産生が座瘡の発生における病因的要素でありうるということが仮定された。具体的には、疾症の重症度は、ＴをＤＨＴに代謝させる皮膚の能力に関係すると思われる。この観察事実は、皮膚の中のステロイド５α−レダクターゼ活性が座瘡対象において上昇することが報告されているという発見事実と一貫性をもつ（ヘイ（Ｈａｙ）及び（ホッギンス）Ｈｏｄｇｉｎｓ、「Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ Ｏｆ Ａｎｄｒｏｇｅｎｓ Ｂｙ Ｈｕｍａｎ Ｓｋｉｎ Ｉｎ Ａｃｎｅ」、Ｂｒ．Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．、第９１巻：１２３−１３３頁、１９７４年；ルッキングビル（Ｌｏｏｋｉｎｇｂｉｌｌ）ら、「Ｔｉｓｓｕｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｏｆ Ａｎｄｒｏｇｅｎｓ Ｉｎ Ｗｏｍｅｎ Ｗｉｔｈ Ａｃｎｅ」、Ｊ．Ａｍ．Ａｃａｄ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．、第１２巻、１９８５年；サンソン（Ｓａｎｓｏｎｅ）及びライズナー（Ｒｅｉｓｎｅｒ）、「Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ Ｒａｔｅｓ Ｏｆ Ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ Ｏｆ Ｔｅｓｔｏｓｔｅｒｏｎｅ Ｔｏ Ｄｉｈｙｄｒｏｔｅｓｔｏｓｔｅｒｏｎｅ Ｉｎ Ａｃｎｅ Ａｎｄ Ｉｎ Ｎｏｒｍａｌ Ｈｕｍａｎ Ｓｋｉｎ−Ａ Ｐｏｓｓｉｂｌｅ Ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ Ｆａｃｔｏｒ Ｉｎ Ａｃｎｅ」、Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．、第５６号、３６６−７２頁、１９７１年）。その他のアンドロゲン依存性障害と同様、ステロイド５α−レダクターゼ生合成の阻害は、座瘡を治療するための安全かつ有効な手段であるはずである。
【００１１】
３．３ 良性前立腺肥大（ＢＰＨ）
ヒトにおいては、前立腺は、加齢に伴って頻度を増す肥大及び新生物変化を受ける（デュロシェ（Ｄｕｒｏｃｈｅｒ）ら、「Ｔｙｒｏｓｉｎｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｋｉｎａｓｅ Ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｈｙｐｅｒｐｌａｓｔｉｃ Ｐｒｏｓｔａｔｅ Ａｎｄ Ｃａｒｃｉｎｏｍａ Ｃｅｌｌ Ｌｉｎｅｓ ＰＣ３ Ａｎｄ ＤＵ１４５」、Ｃａｎｃｅｒ、第４９巻、４８１８−４８２３頁、１９８９年；ウォルシュ（Ｗａｌｓｈ）、「Ｂｅｎｉｇｎ Ｐｒｏｓｔａｔｉｃ Ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ：Ｅｔｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｏｎｓｉｄｅｒａｔｉｏｎｓ（編）」、Ｐｒｏｓｔａｔｉｃ Ｄｉｓｅａｓｅｓ、１−６頁、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ニューヨーク州、Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ Ｉｎｃ、１９７６年）。思春期に起こる成長期の後、前立腺の重量は、約７５〜８０パーセントの男性において腺が第２期成長する５０才代まで比較的一定（約２０グラムで）にとどまる（クラーク（Ｃｌａｒｋ）ら、「Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ Ｏｆ Ｓｔｅｒｏｉｄ Ｈｏｒｍｏｎｅ Ａｃｔｉｏｎ」Ｉｎ：Ｊ．Ｄ．ウイルソン（Ｗｉｌｓｏｎ）及びＤ．Ｗ．フォスター（Ｆｏｓｔｅｒ）（編）、Ｔｅｘｔｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ、６７−６８頁、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ペンシルバニア州、Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ Ｃｏｍｐａｎｙ、１９８５年）。結果としてもたらされる非悪性前立腺肥大（ＢＰＨ）は、腺の拡大を導き、その結果、尿管感染の疾病素質と共に閉塞性及び刺激性放尿症状が発生することになる（デュロッシェら、１９８９年、前掲；スミス（Ｓｍｉｔｈ）ら、「Ｂｅｎｉｇｎ Ｐｒｏｓｔａｔｉｃ Ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ」、Ｐｒｏｓｔｇｒａｄ．Ｍｅｄ．、第８３巻、７９−８５頁、１９８８年）。
【００１２】
１００年以上の間、良性前立腺肥大は外科的に治療されてきており、その結果前立腺摘除術は６５才以上の男性において実施された最も一般的な外科手術となっている（スティムソン（Ｓｔｉｍｓｏｎ）及びフィン（Ｆｉｎｎ）、「Ｂｅｎｉｇｎ Ｐｒｏｓｔａｔｉｃ Ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ Ａｎｄ Ｉｔｓ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ」、Ｊ．Ｇｅｎ．Ｉｎｔ．Ｍｅｄ．、第５巻、１５３−１６５頁、１９９０年）。１９８５年だけで、米国では約３０億ドルのコストで３６７，０００件の前立腺摘除術が実施された。さらに、最近の証拠から、８０才まで生きている男性の２０パーセント超が前立腺の外科的切除を受けていることになるということが示唆されている。前立腺外科手術は大幅に洗練されてきたが、それでもなお高齢者における病的状態の主たる原因であり続けている（マツキン（Ｍａｔｚｋｉｎ）及びブラフ（Ｂｒａｆ）、「Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ Ｏｆ Ｂｅｎｉｇｎ Ｐｒｏｓｔａｔｉｃ Ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｙ：Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｃｏｎｃｅｐｔｓ」、Ｕｒｏｌｏｇｙ、第３７巻、１−１６頁、１９９１年）。前立腺の経尿道的電気切除術（ＴＵＲＰ）は通常脊椎麻酔下で行なわれ、約１パーセントの死亡率を示す。尿路閉塞の再発は、外科手術を受けた患者の最高２０％において発生し得る。
【００１３】
良性前立腺肥大患者由来の前立腺組織の組織学的検査は、腺の収縮、慢性的炎症及び間質線維症を特徴とする局所性萎縮の領域を顕示する。該疾病は、複数の形態で存在するが、最も一般的なものは、前立腺間質の５倍の増大及び腺組織の２倍の増大によって特徴づけされる（マキンドー（ＭａｃＩｎｄｏｅ）ら、「Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ Ｓｔｕｄｉｅｓ Ｏｆ ５ Ａｌｐｈａ−Ｒｅｄｕｃｔａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ Ｗｉｔｈｉｎ ＭＣＦ−７ Ｈｕｍａｎ Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌｓ」、Ｊ Ｓｔｅｒｏｉｄ Ｂｉｏｃｈｅｍ、第２０巻、１０９５−１００頁、１９８４年；マックニール（ＭｃＮｅａｌ）、「Ｔｈｅ Ａｎａｔｏｍｉｃ Ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｉｔｙ Ｏｆ Ｔｈｅ Ｐｒｏｓｔａｔｅ、Ｍｏｄｅｌｓ ｆｏｒ Ｐｒｏｓｔａｔｅ Ｃａｎｃｅｒ」、１４９−１６０頁、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ニューショーク州、Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ、１９８０年；マックニール、「Ｎｏｒｍａｌ Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ Ｏｆ Ｔｈｅ Ｐｒｏｓｔａｔｅ」、Ａｍ．Ｊ．Ｓｕｒｇ．Ｐａｔｈｏｌ．、第１２巻、６１９頁、１９８８年）間質の内部には、同様に結合組織の蓄積及び平滑筋要素の活性化も存在する（ブルエンガー（Ｂｒｕｅｎｇｇｅｒ）ら、「Ｓｍｏｏｔｈ Ｍｕｓｃｌｅ Ｃｅｌｌ Ｏｆ Ｔｈｅ Ｃａｎｉｎｅ Ｐｒｏｓｔａｔｅ Ｉｎ Ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ Ｂｅｎｉｇｎ Ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ、Ｓｔｅｒｏｉｄ Ｉｎｄｕｃｅｄ Ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ Ａｎｄ Ｅｓｔｒｏｇｅｎ Ｏｒ Ｔａｍｏｘｉｆｅｎ Ｔｒｅａｔｅｄ Ｄｏｇｓ」Ｊ．Ｕｒｏｌ．、第１３０巻、１２０８−１２１０頁、１９８３年）。
【００１４】
良性前立腺肥大の病因は不明瞭であるが、前立腺肥大の発生におけるアンドロゲンの役割を裏づける強力な証拠が存在する（ウォルシュ、１９７６、前掲）。男性の生殖組織は、正常に成長し機能するためにアンドロゲンの連続的存在に大きく依存している（ウォルシュ、１９７６年、前掲；ジョゼランド（Ｄｊｏｓｅｌａｎｄ）ら、「５α−Ｒｅｄｕｃｔａｓｅ Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｉｎ Ｓｔｒｏｍａｌ Ａｎｄ Ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ Ｏｆ Ｒａｔ Ｐｒｏｓｔａｔｅ Ａｎｄ Ｅｐｉｄｉｄｙｍｉｓ．Ａ Ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎ Ｔｏ Ｅｌｕｃｉｄａｔｉｏｎ Ｏｆ Ｔｈｅ Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ Ｆｏｒ Ｔｈｅ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｏｆ Ｈｙｐｅｒｐｌａｓｔｉｃ Ｇｒｏｗｔｈ Ｏｆ Ｐｒｏｓｔａｔｉｃ Ｔｉｓｓｕｅ」Ａｃｔａ Ｅｎｄｏ．、第１０３巻、２７３−２８１頁、１９８３年；ヒエロウスキ（Ｈｉｅｒｏｗｓｋｉ）ら、「Ｔｈｅ Ｐａｒｔｉａｌ Ｄｅｐｅｎｄｅｎｃｙ Ｏｆ Ｈｙｍａｎ Ｐｒｏｓｔａｔｉｃ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒｓ Ｏｎ Ｓｔｅｒｏｉｄ Ｈｏｒｍｏｎｅｓ Ｉｎ Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ Ｔｈｙｍｉｄｉｎｅ Ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ Ｉｎｔｏ ＤＮＡ」Ｊ．Ｕｒｏｌ．第１３８巻、９０９−９１２頁、１９８７年； キプリアヌ（Ｋｙｐｒｉａｎｏｕ）及びアイザック（Ｉｓａａｃｓ）、「Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｏｆ Ａ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｆｏｒ Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｉｎ Ｒａｔ Ｖｅｎｔｒａｌ Ｐｒｏｓｔａｔｅ Ａｎｄ Ｉｔｓ Ｎｅｇａｔｉｖｅ Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ Ｂｙ Ａｎｄｒｏｇｅｎｓ」、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ、第１２３巻、２１２４−２１３１頁、１９８８年）。テストステロン（Ｔ）は、こう丸により産生され広く分配されるが、一方ジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）は、膜結合酵素（Ｉ）によって触媒されるＮＡＤＰＨ依存性反応を通してテストステロンから局所的に産生される（ＥＣ．１．３．９９５）（ウイルソン、「Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ：Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ」、第５巻、４９１−５０８頁、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ、Ａｍ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｓｏｃ．、１９７５年）。テストステロン及びＤＨＴは、アンドロゲン生理学において重複する役割と全く異なる役割の両方を有する。胚の中では、Ｔはウイルス管の男性化を促進するように作用して、輸精管、副こう丸及び精のうの形成を導く。ＤＨＴは外生殖器及び前立腺の形成を誘発するように作用する（グリフィン（Ｇｒｉｆｆｉｎ）及びウイルソン編）、「Ｔｈｅ Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｉｎｈｅｒｉｔｅｄ Ｄｉｓｅａｓｅｓ」、１９１９−１９４４頁、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ、１９８９年）。
【００１５】
大部分の哺乳動物種では、ＤＨＴの産生はアンドロゲン応答性組織の細胞内で局所的に発生する。初期の研究は、過形成の腺において、アンドロゲンジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）の濃度が正常な前立腺組織で観察されるものよりも大きいということを明らかにした（シッテーリ（Ｓｉｉｔｅｒｉ）ら、「Ｄｉｈｙｄｒｏｔｅｓｔｏｓｔｅｒｏｎｅ Ｉｎ Ｐｒｏｓｔａｔｉｃ Ｈｙｐｅｒｔｒｏｐｈｙ」、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖ．、第４９号、１７３７−１７４５頁、１９７０年)。さらに、最高のＤＨＴ濃度は尿道周囲領域内に発生すると思われる。細胞過形成が最も多く観察されるのはこの領域内においてである。前立腺ＤＨＴ濃度の上昇は、前立腺ステロイド５α−レダクターゼ活性の増加に原因があるとされてきた（ブルショブスキー（Ｂｒｕｃｈｏｖｓｋｙ）及びリースコブスキー（Ｌｉｅｓｋｏｖｓｋｙ）、「Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ Ｒａｔｉｏ Ｏｆ ５ａｌｐｈａ−Ｒｅｄｕｃｔａｓｅ：３ａｌｐｈａ（Ｂｅｔａ）−Ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ Ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ Ｉｎ Ｔｈｅ Ｈｙｐｅｒｐｌａｓｔｉｃ Ｈｕｍａｎ Ｐｒｏｓｔａｔｅ」、Ｊ．Ｅｎｄｏ．、第８０巻、２８９−３０１頁、１９７９年）。正常な前立腺組織と良性前立腺肥大由来の前立腺組織により発現されるステロイド５α−レダクターゼ活性の検査は、過形成組織内のＫｍの変化はなかったものの酵素のＶ_maxは約１０倍増大し、これは病気がタンパク質の発現の増大と関連づけられることを示唆している、ということを明らかにした（ハドソン（Ｈｕｄｓｏｎ）ら、「Ｓｔｕｄｉｅｓ Ｏｎ Ｔｈｅ Ｎｕｃｌｅａｒ ５α−Ｒｅｄｕｃｔａｓｅ Ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｐｒｏｓｔａｔｉｃ Ｔｉｓｓｕｅ：Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ Ｏｆ Ｅｎｚｙｍｅ Ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ Ｉｎ Ｈｙｐｅｒｐｌａｓｔｉｃ、Ｍａｌｉｇｎａｎｔ、Ａｎｄ Ｎｏｒｍａｌ Ｔｉｓｓｕｅ」Ｃａｎ．Ｊ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏ．、第６１巻、７５０−７５５頁、１９８２年）。間質ステロイド５α−レダクターゼ活性の増大は、年令に関係する現象であるように思われる（ホシュストラット（Ｈｏｃｈｓｔｒａｔｅ）ら、「Ｅｆｆｅｃｔｓ Ｏｆ Ａｇｉｎｇ Ｏｎ Ｋｉｎｅｔｉｃ Ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ Ｏｆ ５α−Ｒｅｄｕｃｔａｓｅ Ｉｎ Ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ Ａｎｄ Ｓｔｒｏｍａ Ｏｆ Ｎｏｒｍａｌ Ａｎｄ Ｈｙｐｅｒｐｌａｓｔｉｃ Ｈｕｍａｎ Ｐｒｏｓｔａｔｅ」Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．、第６７巻、９７９−９８５頁、１９８８年）。
【００１６】
アンドロゲン特にＤＨＴの前立腺生理学における重要性に基づいて、最近の良性前立腺肥大治療の試みは、ステロイド５α−レダクターゼ活性の阻害を通してアンドロゲンの活動を遮断しようと努めてきた（米国特許第４，７６０，０７１号明細書）。この治療的アプローチは、前立腺肥大の発生を導く発症機序を治療する試みを表わしている。これまで、数多くのステロイド５α−レダクターゼ阻害物質が記述されてきた（メトカーフら、「Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ Ｏｆ Ｓｔｅｒｏｉｄ ５ Ａｌｐｈａ−Ｒｅｄｕｃｔａｓｅ Ｉｎ Ｂｅｎｉｇｎ Ｐｒｏｓｔａｔｉｃ Ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ、Ｍａｌｅ Ｐａｔｔｅｒｎ Ｂａｌｄｎｅｓｓ Ａｎｄ Ａｃｎｅ」、Ｔｒｅｎｄｓ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｓｃｉ、第１０巻、４９１−５頁、１９８９年；メタカーフら、１９８９年、前掲；ペトロー（Ｐｅｔｒｏｗ）ら、「Ｐｒｏｓｔａｔｉｃ Ｃａｎｃｅｒ．Ｉ．６−Ｍｅｔｈｙｌｅｎｅ−４−Ｐｒｅｇｎｅｎ−３−Ｏｎｅｓ Ａｓ Ｉｒｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ Ｏｆ Ｒａｔ Ｐｒｏｓｔａｔｉｃ Ｄｅｌｔａ ４−３ Ｋｅｔｏｓｔｅｒｏｉｄ ５ Ａｌｐｈａ−Ｒｅｄｕｃｔａｓｅ」、Ｓｔｅｒｏｉｄｓ、第３８巻、１２１−４０頁、１９８１年；ペトローら、「Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ Ｏｆ Ｐｒｏｓｔａｔｉｃ Ｇｒｏｗｔｈ Ｉｎ Ｒａｔｓ Ｂｙ ６−Ｍｅｔｈｙｌｅｎｅ−４−３，２０−Ｄｉｏｎｅ」、Ｊ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ、第９５巻、３１１−３頁、１９８２年；マーツ（Ｍａｒｔｓ）ら、「Ａ Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ Ｏｆ Ｔｈｅ Ｅｆｆｅｃｔｓ Ｏｆ Ｃａｓｔｒａｔｉｏｎ Ａｎｄ ６−Ｍｅｔｈｙｌｅｎｅ Ｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅ、Ａ ５ Ａｌｐｈａ−Ｒｅｄｕｃｔａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ、Ｏｎ Ｔｈｅ Ｒａｔ Ｖｅｎｔｒａｌ Ｐｒｏｓｔａｔｅ」、Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ、第６５巻、６２６−３４頁、１９８７年；ストーナー（Ｓｔｏｎｅｒ）、「Ｔｈｅ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｏｆ Ａ ５α−Ｒｅｄｕｃｔａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ、Ｆｉｎａｓｔｅｒｉｄｅ」、Ｊ．Ｓｔｅｒｏｉｄ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ、第３７巻、３７５−８頁、１９９０年）。既存の化合物のうち、フィナステリド（ＭＫ−９０６、プロペシア（Ｐｒｏｐｅｃｉａ）（登録商標）、プロスカール（Ｐｒｏｓｃａｒ）（登録商標））は良性前立腺肥大患者において最も広範な臨床試験を受けてきた。これらの試験の結果は、該化合物が血漿ＤＨＴレベルの６５パーセントの減少をひき起こす一方、Ｔの循環レベルは維持される又はわずかだけ増大する、ということを示している（ストーナー、１９９０年、前掲）。その結果、性欲及び筋力及びその他の推定上テストステロン依存性の特徴はステロイド５α−レダクターゼの阻害による影響を受けない。フィナステリドによるステロイド５α−レダクターゼの阻害には、良性前立腺肥大患者の約３０パーセントにおける前立腺体積の減少及び最大尿道流速の増大が随伴する（ストーナー、１９９０年、前掲）。
【００１７】
前立腺内のステロイド５α−レダクターゼの優勢な形態は、２型であると思われるが、最近の薬理学的証拠は、培養された前立腺細胞がステロイド５α−レダクターゼ１型を発現する能力を有することを実証している（ヒルシュら、１９９３年）。
【００１８】
３．４ 男性ホルモン性脱毛症
顔面及び体の毛の成長の大部分はアンドロゲンにより刺激される。しかしながら、頭髪の成長は、禿頭症の遺伝的素因を示す個体においてＤＨＴにより阻害されることが示されてきた（エブリング（Ｅｂｌｉｎｇ）、「Ｓｔｅｒｏｉｄｓ Ａｎｄ Ｔｈｅ Ｓｋｉｎ：Ａ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｒｅｖｉｅｗ」、Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｓｏｃ Ｔｒａｎｓ、第４巻、５９７−６０２頁、１９７６年；ラッキー（Ｌｕｃｋｙ）、「Ｔｈｅ Ｐａｒａｄｏｘ Ｏｆ Ａｎｄｒｏｇｅｎｓ Ａｎｄ Ｂａｌｄｉｎｇ：Ｗｈｅｒｅ Ａｒｅ Ｗｅ Ｎｏｗ？」、Ｊ Ｉｎｖｅｓｔ Ｄｅｒｍａｔｏｌ、第９１巻、９９−１００頁、１９８８年；ブロッドランド（Ｂｒｏｄｌａｎｄ）及びミュラー（Ｍｕｌｌｅｒ）、「Ａｎｄｒｏｇｅｎｅｔｉｃ Ａｌｏｐｅｃｉａ （Ｃｏｍｍｏｎ Ｂａｌｄｎｅｓｓ）」、Ｃｕｔｉｓ、第４７号：１７３−６頁，１９９１年）。禿頭症の表現型発現はアンドロゲンが存在しないと発生しない。男性ホルモン性脱毛症又は一般的な禿頭症は毛髪喪失の症例全ての９９パーセントを占めている（ブロッドランド及びミュラー、１９９１年、前掲）。３０代〜５０代の男性における罹患率は約４７パーセントであり、年令と共に増大する。更年期前の女性では、罹患率は比較的低い（９パーセント）。しかしながら、６０才代までには、女性における禿頭症の発生は３９パーセントと推定されてきた。
【００１９】
アンドロゲン特にＤＨＴが毛髪の生物学を調節するように機能する機序は、発毛サイクルの調節によるものである（エブリング、１９７６年、前掲；ベルグフェルド（Ｂｅｒｇｆｅｌｄ）及びレドモンド（Ｒｅｄｍｏｎｄ）、「Ａｎｄｒｏｇｅｎｉｃ Ａｌｏｐｅｃｉａ」、Ｄｅｒｍａｔｏｌ Ｃｌｉｎ、第５巻：４９１−５００頁、１９８７年)。発毛に対するＤＨＴの効果は、禿かかっている個体からの頭皮でＴをＤＨＴに変換させる能力は、禿かけていない個体の頭皮に見られるものよりも大きいという点で、ホルモンの全身的レベルよりもむしろ局所的レベルに関係しているように思われる（エブリング、１９７６年、前掲；ラッキー、１９８８年、前掲；シュワイケルト（Ｓｃｈｗｅｉｋｅｒｔ）及びウイルソン、１９７４年、「Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ Ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｈａｉｒ Ｇｒｏｗｔｈ Ｂｙ Ｓｔｅｒｏｉｄ Ｈｏｒｍｏｎｅｓ．Ｉ．Ｔｅｓｔｅｒｏｎｅ Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ Ｉｎ Ｉｓｏｌａｔｅｄ Ｈａｉｒｓ」、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ、第３８巻、８１１−９頁、１９７４年）。禿頭症が頭皮内のＤＨＴの過剰産生に関係するという概念を裏づけるさらなる証拠は、ベニガオザルにおけるアザ−ステロイド４−ＭＡ（１７β−Ｎ，Ｎ，−ジエチルカルバモイル−４−メチル−４−アザ−５ａ−アンドロスタン−３−オン）での研究によって提供されている。これらのサルは人間において観察されるものと類似の年令関連性脱毛を経験する（リットマスター（Ｒｉｔｔｍａｓｔｅｒ）ら、「Ｔｈｅ Ｅｆｆｅｃｔｓ Ｏｆ Ｎ，Ｎ−Ｄｉｅｔｈｙｌ−４−Ｍｅｔｈｙｌ−３−Ｏｘｏ−４−Ａｚａ−５Ａｌｐｈａ−Ａｎｄｒｏｓｔａｎｅ−１７Ｂｅｔａ−Ｃａｒｂｏｘａｍｉｄｅ、Ａ ５Ａｌｐｈａ−Ｒｅｄｕｃｔａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ Ａｎｄ Ａｎｔｉａｎｄｏｒｏｇｅｎ、Ｏｎ Ｔｈｅ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｏｆ Ｂａｌｄｎｅｓｓ Ｉｎ Ｔｈｅ Ｓｔｕｍｐｔａｉｌ Ｍａｃａｑｕｅ」、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ、第６５巻、１８８−９３頁、１９８７年）。このモデル系では、化合物で治療したサルは未治療のサル又はビヒクル単独で処置されたサルよりも著しく多くの毛を成長させた（リットマスターら、１９８７年、前掲）。予備的な生化学的証拠は、ヒトにおいて頭皮が主にステロイド５α−レダクターゼ１を発現することを示唆している（イタミ（Ｉｔａｍｉ）、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｖｅ Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ、第９５巻、５７−６０頁、１９９１年）。最近の報告書は、４−ＭＡが両方のステロイド５α−レダクターゼイソ酵素を阻害する能力をもつことを示唆した（アンダーソン及びラッセル、１９９０年、前掲）。
【００２０】
３．５ 多毛症
多毛症は、女性の１１パーセントに発生し、男性の発毛パターンでの粗い硬毛の過剰成長を特徴とする（ベルグフェルド及びレドモンド、Ｈｉｒｓｕｔｉｓｍ．Ｄｅｒｍａｔｏｌｏ．Ｃｌｉｎ．、第５巻、５０１−５０７頁、１９８７年；エーアマン（Ｅｈｒｍａｎｎ）及びローゼンフィールド（Ｒｏｓｅｎｆｉｅｌｄ）、「Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗ １０：Ａｎ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｉｃ Ａｐｐｒｏａｃｈ Ｔｏ Ｔｈｅ Ｐａｔｉｅｎｔ Ｗｉｔｈ Ｈｉｒｓｕｔｉｓｍ」、Ｊ Ｃｌｉｎ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ、第７１巻、１−４頁、１９９０年）。特異的には、胸、顔面、肩、背中及び腹部に細かい軟毛から粗い硬毛への変換が存在する。男性においてそうであるように、この発毛パターンは、アンドロゲン依存性であることが報告されている。多毛症の女性は往々にして（５０〜８５％）、頭髪の早期脱毛及び薄化を伴う或る種の形態のアンドロゲン過剰を示す。
【００２１】
その他のアンドロゲン依存性条件においてそうであるように、多毛症における発毛パターンに対するアンドロゲンの効果は、ＤＨＴの局所的産生の増加に関係すると思われる。さらに、該症状を発現する女性においてはＴからＤＨＴへの変換がアンドロゲン標的組織内で増大しているということを示唆する証拠が存在する（ロボ（Ｌｏｂｏ）ら、「Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ３ａｌｐｈａ−Ａｎｄｒｏｓｔｅｎｅｄｉｏｌ Ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄｅ Ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｉｔａｌ Ｓｋｉｎ」、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ、第６５巻、７１１−７１４頁、１９８７年）。皮膚では、ステロイド５α−レダクターゼ活性は、アンドロゲン応答性である脂腺及び汗腺に局在化されていた（エーアマン及びローゼンフィールド、１９９０年、前掲）。最近の報告書は、アンドロゲン依存性組織において、ステロイド５α−レダクターゼ活性の発現がアンドロゲンにより調節されることを示唆している（ジョージ（Ｇｅｏｒｇｅ）ら、「Ｆｅｅｄ−Ｆｏｒｗａｒｄ Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｏｆ Ｐｒｏｓｔａｔｅ Ｇｒｏｗｔｈ：Ｄｉｈｙｄｒｏｔｅｓｔｏｓｔｅｒｏｎｅ Ｉｎｄｕｃｅｓ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｏｆ Ｉｔｓ Ｏｗｎ Ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｅｎｚｙｍｅ、Ｓｔｅｒｏｉｄ ５ Ａｌｐｈａ−Ｒｅｄｕｃｔａｓｅ」、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ、第８８巻、８０４４−７頁、１９９１年）。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００２２】
４．発明の要約
本発明は、５α−レダクターゼ１型及び２型に関係する障害を治療し予防するための組成物及び方法に関する。
【００２３】
１実施態様においては、本発明は、テステロンからジヒドロテストステロンへの変換を阻害又は緩和する能力をもつ治療上又は予防上有効な量のアンチセンスオリゴヌクレオチド、低分子干渉ＲＮＡ（「ｓｉＲＮＡ」）又はリボザイムを含む組成物を包含する。
【００２４】
もう１つの実施態様においては、本発明は、ヒトステロイド５α−レダクターゼ１型ｍＲＮＡの発現を削除するか又は動物におけるヒトステロイド５α−レダクターゼ１型のためのｍＲＮＡにハイブリダイズする能力をもつ本発明の治療上又は予防上有効な量の１つ以上のアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む組成物を包含する。さらにもう１つの実施態様において、本発明は、ヒトステロイド５α−レダクターゼ２型ｍＲＮＡの発現を削除するか又は動物におけるヒトステロイド５α−レダクターゼ２型のためのｍＲＮＡにハイブリダイズする能力をもつ本発明の治療上又は予防上有効な量の１つ以上のアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む組成物を包含する。さらにもう１つの実施態様において、本発明は、動物におけるヒトステロイド５α−レダクターゼ１型の酵素活性を削減する本発明の治療上又は予防上有効な量の１つ以上のアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む組成物を包含する。もう１つの実施態様において、本発明は、動物におけるヒトステロイド５α−レダクターゼ２型の酵素活性を削減する本発明の治療上又は予防上有効な量の１つ以上のアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む組成物を包含する。
【００２５】
さらにもう１つの実施態様においては、本発明は、ヒトステロイド５α−レダクターゼ１型ｍＲＮＡの発現を削除するか又は動物におけるヒトステロイド５α−レダクターゼ１型のためのｍＲＮＡにハイブリダイズする能力をもつ本発明の治療上又は予防上有効な量の低分子干渉ＲＮＡを含む組成物を包含する。もう１つの実施態様において、本発明は、ヒトステロイド５α−レダクターゼ２型ｍＲＮＡの発現を削除するか又は動物におけるヒトステロイド５α−レダクターゼ２型のためのｍＲＮＡにハイブリダイズする能力をもつ本発明の治療上又は予防上有効な量のｓｉＲＮＡを含む組成物を包含する。さらにもう１つの実施態様において、本発明は、動物におけるヒトステロイド５α−レダクターゼ１型の酵素活性を削減する本発明の治療上又は予防上有効な量のｓｉＲＮＡを含む組成物を包含する。もう１つの実施態様において、本発明は、動物におけるヒトステロイド５α−レダクターゼ２型の酵素活性を削減する本発明の治療上又は予防上有効な量のｓｉＲＮＡを含む組成物を包含する。
【００２６】
さらにもう１つの実施態様においては、本発明は、ヒトステロイド５α−レダクターゼ１型ｍＲＮＡの発現を削除するか又は動物におけるヒトステロイド５α−レダクターゼ１型のためのｍＲＮＡにハイブリダイズする能力をもつ本発明の治療上又は予防上有効な量のリボザイムを含む組成物を包含する。さらにもう１つの実施態様において、本発明は、ヒトステロイド５α−レダクターゼ２型ｍＲＮＡの発現を削除するか又は動物におけるヒトステロイド５α−レダクターゼ２型のためのｍＲＮＡにハイブリダイズする能力をもつ本発明の治療上又は予防上有効な量のリボザイムを含む組成物を包含する。さらにもう１つの実施態様において、本発明は、動物におけるヒトステロイド５α−レダクターゼ１型の酵素活性を削減する本発明の治療上又は予防上有効な量のリボザイムを含む組成物を包含する。もう１つの実施態様において、本発明は、動物におけるヒトステロイド５α−レダクターゼ２型の酵素活性を削減する本発明の治療上又は予防上有効な量のリボザイムを含む組成物を包含する。
【００２７】
本発明の治療上又は予防上有効な量のオリゴヌクレオチド又はリボザイムを含む組成物は、皮膚の炎症、皮脂分泌又は皮脂分泌過剰に関係する障害、皮脂産生又は過剰皮脂産生に関係する障害、ステアトーマ（ｓｔｅａｔｏｍａ）、嚢腫性座瘡、過剰ケラチン産生、面皰、丘疹、膿疱、稗粒腫、脂漏性皮膚炎、ふけ、脂漏性湿疹、乳児脂漏性湿疹、脂漏性角化症、酒さ、口囲皮膚炎、皮脂嚢胞、尋常性座瘡、油性肌、脂漏性いぼ、老人性いぼ、基底細胞乳頭腫、多毛症、黒色丘疹性皮膚症、良性前立腺肥大、前立腺癌、尿失禁、男性ホルモン性脱毛症及び男性型禿頭症を含む（ただしこれらに制限されるわけではない）障害を治療又は予防する上で有用である。理論によって制限されることなく、１つの作用様式において、本発明の組成物は、テストステロンのジヒドロテストステロンへの変換を阻害する上で有用であると考えられている。
【００２８】
もう１つの実施態様においては、本発明は、それを必要とする患者の体内でのテストステロンのジヒドロテストステロンへの変換を阻害する方法において、本発明の治療上又は予防上有効な量の１つ以上のアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む組成物を前記患者に対し投与することを含有する方法を包含する。
【００２９】
もう１つの実施態様において、本発明は、必要とする患者において皮膚の炎症、皮脂分泌又は皮脂分泌過剰に関係する障害、皮脂産生又は過剰皮脂産生に関係する障害、ステアトーマ、嚢腫性座瘡、過剰ケラチン産生、面皰、丘疹、小膿疱、稗粒腫、脂漏性皮膚炎、ふけ、脂漏性湿疹、乳児脂漏性湿疹、脂漏性角化症、酒さ、口囲皮膚炎、皮脂嚢胞、尋常性座瘡、油性肌、脂漏性いぼ、老人性いぼ、基底細胞乳頭腫、多毛症、黒色丘疹性皮膚症、良性前立腺肥大、前立腺癌、尿失禁、男性ホルモン性脱毛症及び男性型禿頭症を治療又は予防する方法において、前記患者に対して、本発明の治療上又は予防上有効な量の１つ以上のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ又はリボザイムを含む組成物を投与することを含有する方法を包含している。
【００３０】
もう１つの実施態様においては、本発明は、１つ以上の付加的な治療剤と組合わせて治療上又は予防上有効な量の１つ以上のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ又はリボザイムを含む組成物を包含している。その他の治療剤は、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ又はリボザイムを単独で投与した場合に比べて付加的な又は相乗的な価値を提供する。
【００３１】
本発明はさらに、エチルアルコール、プロピレングリコール、グリセリン、ジメチルイソソルビド、ポリエチレングリコールエステル、ＥＤＴＡ、パンテチン及び亜鉛などの二価カチオンを含むが、これらに制限されるわけではない浸透性エンハンサの取込みにより皮膚へのこれらの組成物の浸透の増強を提供する送達用ビヒクルを包含する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３２】
６．詳細な説明
６．１ 定義
本明細書で使用される通り、別途指示ある場合を除き、「動物」という語は哺乳動物特にヒトを意味する。
【００３３】
本明細書で使用されている通り、別途指示ある場合を除き、「アンチセンス」又は「アンチセンスオリゴヌクレオチド」という語は、ステロイド５α−レダクターゼ１型遺伝子のｐｒｅ−ｍＲＮＡ又はｍＲＮＡに対して又はステロイド５α−レダクターゼ２型遺伝子のｐｒｅ−ｍＲＮＡ又はｍＲＮＡに対して配列特異的な形で結合するオリゴヌクレオチド又は修飾済みオリゴヌクレオチドを意味する。アンチセンス組成物にはさらにＤＮＡ；ＲＮＡ；ペプチド核酸（ＰＮＡ）；ホスホロチオアート、メチルホスホナート、又はベンジルホスホナートなどの修飾済み主鎖連結を有するオリゴヌクレオチド；２’−メトキシエチル糖又は２’−メトキシエトキシ糖などの修飾された糖類を有するオリゴヌクレオチド；又は５−メチルシトシン、２’−デオキシウラシル又は７−デアザ−２’−デオキシグアノシンなどの修飾された塩基をもつオリゴヌクレオチドが含まれる可能性がある。アンチセンス分子は、化学合成又は転写を内含するあらゆる方法により産生され得る。ひとたび細胞内に導入されたならば、相補的アンチセンス分子は、該細胞により産生された天然に発生する核酸と塩基対合して、転写又は翻訳のいずれかを遮断する２重鎖を形成する。
【００３４】
本明細書で使用される通り、別途指示ある場合を除き、「本発明のオリゴヌクレオチド」という語句には、「アンチセンスオリゴヌクレオチド」、「オリゴヌクレオチド」、「オリゴデオキシヌクレオチド」、「オリゴデオキシリボヌクレオチド」、「核酸系化合物（ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄ−ｂａｓｅｄ ｃｏｍｐｏｕｎｄ）」、「核酸分子」、「ｓｉＲＮＡ」、「リボザイム」及び「アプタマー」といった用語が含まれ、生物学的に有意なヌクレオチド、アデニン、デオキシアデニン、グアニン、デオキシグアニン、チミジン、ウリジン、シトシン及びデオキシシトシンのオリゴマ及び重合体、ならびにその他の新規のヌクレオチドを含有するオリゴマ及び重合体が含まれる。これらの用語には同様に、化学的に修飾された１つ以上のプリン又はピリミジン部分、糖部分又はヌクレオチド間連結を有するオリゴマ及び重合体も含まれる。これらの用語には、（当該技術分野において「アルファアノマー」として知られている）ベータ形態でなくアルファ形態で糖部分に接合されている塩基又は修飾済み塩基をも含有する以上で列挙されている任意の修飾を含むヌクレオチド又はこれらの修飾のうちの１つ以上のものを含有する任意のオリゴヌクレオチド又はポリヌクレオチドで構成されたあらゆるオリゴマ及び重合体が含まれる。該オリゴヌクレオチドは線状又は環状であり得、５’末端、３’末端又は鎖の中央のどこかにおいて修飾されるオリゴマを含む。修飾には同様に主鎖が関与するか又は、修飾はレポータ基を伴う核酸塩基を通して発生するかもしれない。これらのレポータ基は、脂質、リン脂質、糖脂質、エーテル脂質、ペプチド、既知の又は未知のレセプタに対するリガンド、又は、細胞膜を横断する浸透を増強するべくオリゴヌクレオチドに付着される担体基を含む特定の細胞型に対するオリゴヌクレオチドのターゲティング又は細胞摂取を増強又は調節できるその他のあらゆる疎水性部分であり得、ここで前記担体には、脂質、ペプチド、脂肪族基（例えばメチレン、エチレン、プロピレン）又は非極性基が含まれるがこれらに制限されるわけではない。レポータ基は同様に、生物学的又は化学的活性化を伴って又は伴わずオリゴヌクレオチドとターゲティングされたｍＲＮＡとの間の共有結合による連結を形成することのできる架橋基でもあり得る。糖−リン酸塩主鎖は、３’−５’又は２’−５’連結によって接合され得る。オリゴヌクレオチドの主鎖修飾には、ホスホトリエステル、メチルホスホナート、ホスホジエステル又はホスホロチオアートを含めた当該技術分野において既知のもののみならず、現在利用されているか又は当業者により使用される可能性のあるペプチド又はその他のあらゆる非リン酸塩連結に基づくこのような主鎖修飾も含まれる可能性がある。これらの用語は、同様に、天然のものであれ修飾を含むものであれ、２’−３’ホスホジエステル、２’−５’ホスホジエステル又はホスホロチオアート連結などの３’−５’でない連結内で互いに接合されるヌクレオシドを有するあらゆるオリゴマ又は重合体をも内含する。
【００３５】
「本発明のオリゴヌクレオチド」という用語は、同様にその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、クラスレート、多形体及びプロドラッグをも内含する。さらに、本発明のオリゴヌクレオチドは、１つ以上のキラル中心及び／又は２重結合を含有する可能性があり、従って２重結合異性体（すなわち幾何異性体）、鏡像異性体又はジアステレオマーなどの立体異性体として存在する。本発明に従うと、本明細書で記述された化学的構造、ひいては本発明のオリゴヌクレオチドは、対応するオリゴヌクレオチドの鏡像異性体及び立体異性体の全て、すなわちステレオマーとして純粋（例えば幾何学的に純粋、鏡像異性体的に純粋又はジアステレオマー的に純粋）な形態及び鏡像異性的及び立体異性体の混合物の両方を包含する。鏡像異性体及び立体異性体混合物は、キラル相ガスクロマトグラフィ、キラル相高性能液体クロマトグラフィ、キラル塩複合体としての化合物の結晶化又はキラル溶媒中での化合物の結晶化などの周知の方法によりその成分鏡像異性体又は立体異性体へと分解され得る。鏡像異性体及び立体異性体は同様に、ステレオマー的又は鏡像異性体的に純粋な中間体、試薬及び触媒から、周知の非対称合成方法により得ることができる。「本発明のオリゴヌクレオチド」及び「アンチセンスオリゴヌクレオチド」という用語は、全体を通して互換的に使用され、互いに包含し合う。
【００３６】
本明細書で使用される通り、別途指示ある場合を除き、「本発明の組成物」という用語は、本発明のオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ又はリボザイム又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、クラスレート、多形体及びプロドラッグ及び薬学的に許容されるビヒクルを意味する。
【００３７】
本明細書で使用される通り、別途指示ある場合を除き、「薬学的に許容される」という用語は、動物、より具体的にはヒトにおいて使用する目的で連邦又は州政府の規制当局により承認された又は、米国薬局方又はその他の一般的に認識された薬局方の中で列挙されている、ということを意味する。「ビヒクル」という用語は、本発明の化合物がそれと共に投与される希釈剤、アジュバント、賦形剤又は担体を意味する。かかる薬学的ビヒクルは、ピーナッツ油、ダイズ油、鉱油、ゴマ油などの、石油、動物、植物又は合成由来のものを含めた油及び水といった液体であり得る。薬学ビヒクルは、生理食塩水、メチラッセルロース、アラビアゴム、ゼラチン、でんぷんペースト、タルク、ケラチン、コロイドシリカ、尿などであり得る。さらに、助剤、安定化剤、増粘剤、潤滑剤及び着色剤を使用することができる。患者に投与された場合、本発明の組成物及び薬学的に許容されるビヒクルは好ましくは無菌である。本発明の組成物が静脈内投与される場合、水が好ましいビヒクルである。特に注射用溶液のためには、液体ビヒクルとして食塩溶液及び水性デキストロース及びグリセロール溶液も利用可能である。適切な薬学ビヒクルには同様に、でんぷん、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦、胡粉、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノールなどといった賦形剤も含まれる。望ましい場合、本組成物は、少量の湿潤剤又は乳化剤又はｐＨ緩衝剤を含有することもできる。
【００３８】
本明細書で使用される通り、別途指示ある場合を除き、「薬学的に許容される塩（単複）」という文言は、本組成物内で使用される化合物中に存在し得る酸性又は塩基性基が含まれるがこれらに制限されるわけではない。事実上塩基性である本組成物内に含まれるオリゴヌクレオチドは、さまざまな無機及び有機酸とさまざまな塩を形成する能力を有する。かかる塩基性化合物の薬学的に許容される酸付加塩を調製するために使用可能な酸は、硫酸、クエン酸、マレイン酸、酢酸、シュウ酸、塩化水素酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硝酸塩、硫酸塩、亜硫酸塩、リン酸塩、過リン酸塩、イソニコチン酸塩、酢酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、クエン酸塩、過クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、重酒石酸塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチアニン酸塩（ｇｅｎｔｉｓｉｎａｔｅ）、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルカロン酸塩、サッカリン酸塩、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩及びパモ酸塩（例えば、１，１’−メチレン−ビス−（２−ヒドロキシ−３−ナフトアート））塩を含む（ただしこれらに制限されるわけではない）非毒性酸付加塩（すなわち薬学的に許容されるアニオンを含有する塩）を形成するものである。アミノ部分を内含する本組成物の中に含まれるオリゴヌクレオチドは、上述の酸に加えてさまざまなアミノ酸と薬学的に許容される塩を形成し得る。事実上酸性である本組成物内に含まれるオリゴヌクレオチドは、さまざまな薬理学的に許容されるカチオンと塩基塩を形成する能力をもつ。かかる塩の例としては、アルカリ金属又はアルカリ土類金属塩、及び特にカルシウム、マグネシウム、ナトリウム、リチウム、亜鉛、カリウム及び鉄塩がある。
【００３９】
本明細書で使用される通り、別途指示ある場合を除き、「薬学的に許容される溶媒和物」という用語は、非共有分子間力によって結合された溶媒を化学量論量又は非化学量論量だけさらに含む本発明のオリゴヌクレオチドを意味する。好ましい溶媒は揮発性、非毒性でかつ／又は微量でヒトに対するａｉ ｓｔｒａｔｉｏｎのために許容されるものである。
【００４０】
本明細書で使用される通り、別途指示ある場合を除き、「薬学的に許容される水和物」という用語は、非共有分子間力によって結合された水を化学量論量又は非化学量論量だけさらに含む本発明のオリゴヌクレオチドを意味する。
【００４１】
本明細書で使用される通り、別途指示ある場合を除き、「薬学的に許容されるクラスレート」という用語は、内部に捕捉されたゲスト分子（例えば溶媒又は水）を有する空間（例えばチャンネル）を含む結晶格子の形をした本発明のオリゴヌクレオチドを意味する。
【００４２】
本明細書で使用される通り、別途指示ある場合を除き、「薬学的に許容される多形体」という用語は、複数の全く異なる形態（例えば結晶質、非結晶質）で存在する本発明のオリゴヌクレオチドを意味し、本発明はこれらの形態全てを包含する。多形体はその名が示す通り、結晶格子内の分子の順序の結果として異なる物理的特性を有する同じ分子の結晶である。多形体が示す物理的特性の差異は、貯蔵安定性、圧縮性及び密度（処方及び製品製造において重要）及び溶解速度（生物学的利用能を判定する上で重要な要因）などの薬学的パラメータに影響を及ぼす。安定性の差異は、化学反応性の変化（例えば１つの多形体で構成されている場合にもう１つの多形体で構成されている場合よりも急速に剤形が変色するような酸化差）又は機械的変化（例えば、反応速度的に有利な多形体が熱力学的により安定した多形体へと変換するにつれて錠剤が貯蔵時に粉々になる）又はその両方（例えば１つの多形体の錠剤が高湿度でより崩壊しやすい）の結果としてもたらされる可能性がある。溶解度／溶解差の結果、極端なケースでは、一部の多形転移は効能の欠如を結果としてもたらし、もう一方の極端においては毒性さえもたらされる。さらに、結晶の物理的特性はプロセッシングにおいて重要でありうる。すなわち例えば、１つの多形体は溶媒和物を形成する確率がより高い場合に考えられ、そうでなければ不純物が無くなるようろ過及び洗浄するのが困難であるかもしれない（すなわち、粒子形状及び粒度分布は、多形体によって異なる可能性がある。
【００４３】
本明細書で使用される通り、別途指示ある場合を除き、「薬学的に許容されるプロドラッグ」という用語は、生物学的条件（インビトロ又はインビボ）下で加水分解、酸化又はその他の形で反応してその化合物を提供できる化合物誘導体を意味する。プロドラッグの例としては、生物加水分解可能なアミド、生物加水分解可能なエステル、生物加水分解可能なカルバミン酸塩、生物加水分解可能な炭酸塩、生物加水分解可能なウレイド及び生物加水分解可能なリン酸塩類似体などの生物加水分解可能な部分を含む化合物が含まれるが、ただしこれらに制限されるわけではない。プロドラッグのその他の例としては、オリゴヌクレオチド、ペプチド、脂質、脂肪族及び芳香族基又はＮＯ、ＮＯ₂、ＯＮＯ及びＯＮＯ₂部分を含む化合物が含まれる。プロドラッグは、標準的には、「Ｂｕｒｇｅｒ’ｓ Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ」、１７２、１７８、９４９、９８２頁（Ｍａｎｆｒｅｄ Ｅ．Ｗｏｌｆｆ編、第５版、１９９５年）、及び「Ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ Ｐｒｏｄｒｕｇｓ」（Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ編、Ｅｌｓｅｌｖｉｅｒ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ １９８５年）内で記述されているものなどの周知の方法を用いて調製可能である。
【００４４】
本明細書で使用される通り、別途指示ある場合を除き、「生物加水分解可能なアミド」、「生物加水分解可能なエステル」、「生物加水分解可能なカルバミン酸塩」、「生物加水分解可能な炭酸塩」、「生物加水分解可能なウレイド」、「生物加水分解可能なリン酸塩」という用語は、１）該化合物の生物学的活性と干渉しないがその化合物に対し、摂取、作用持続時間又は作用の開始といったインビボで有利な特性を付与することのできるか；又は２）生物学的に不活性であるもののインビボで生物学的に活性な化合物に変換されるかのいずれかである化合物のそれぞれアミド、エステル、カルバミン酸塩、炭酸塩、ウレイド又はリン酸塩を意味する。生物加水分解可能なエステルの例としては、低級アルキルエステル、低級アシルオキシアルキルエステル（例えばアセトキシメチル、アセトキシエチル、アミノカルボニルオキシ−メチル、ピバロイルオキシメチル及びピバロイルオキシエチルエステル）、ラクトニルエステル（例えばフタリジル及びチオフタリジルエステル）、低級アルコキシアシルオキシアルキルエステル（例えばメトキシカルボニルオキシ−メチル、エトキシカルボニルオキシエチル及びイソプロポキシカルボニルオキシエチルエステル）、アルコキシアルキルエステル、コリンエステル、及びアシルアミノアルキルエステル（例えばアセタミドメチルエステル）が含まれるがこれらに制限されるわけではない。生物加水分解可能アミドの例としては、低級アルキルアミド、アミノ酸アミド、アルコキシアシルアミド及びアルキルアミノアルキル−カルボニルアミドが含まれるがこれらに制限されるわけではない。生物加水分解可能カルバミン酸塩の例としては低級アルキルアミン、置換エチレンジアミン、アミノ酸、ヒドロキシアルキルアミン、複素環及び複素芳香族アミン、及びポリエーテルアミンが含まれるがこれらに制限されるわけではない。
【００４５】
本明細書で使用される通り、別途指示ある場合を除き、「治療上有効な」という用語は、疾病又は障害又は少なくとも１つのその識別可能な症候の改善をひき起こすことのできる、本発明のオリゴヌクレオチド、本発明のｓｉＲＮＡ又は本発明のリボザイム又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、クラスレート、多形体又はプロドラッグの量を意味する。「治療上有効な」という用語は、必ずしも患者が識別できるわけではない少なくとも１つの測定可能な物理的パラメータの改善を結果としてもたらすための、本発明のオリゴヌクレオチド、本発明のｓｉＲＮＡ又は本発明のリボザイム又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、クラスレート、多形体又はプロドラッグの量を意味する。さらにもう１つの実施態様では、「治療上有効な」という用語は、疾病又は障害の進行を物理的に（例えば識別可能な症候の安定化）又は生理学的に（例えば物理的パラメータの安定化）、又はその両方の形で阻害するための、本発明のオリゴヌクレオチド、本発明のｓｉＲＮＡ又は本発明のリボザイム又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、クラスレート、多形体又はプロドラッグの量を意味する。さらにもう１つの実施態様においては、「治療上有効な」という用語は、疾病又は障害の発症を遅らせる結果となる、本発明のオリゴヌクレオチド、本発明のｓｉＲＮＡ又は本発明のリボザイム又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、クラスレート、多形体又はプロドラッグの量を意味する。
【００４６】
本明細書で使用される通り、別途指示ある場合を除き、「予防上有効な」という用語は、一定の与えられた疾病又は障害を獲得する危険性の低減をひき起こす、本発明のオリゴヌクレオチド、本発明のｓｉＲＮＡ又は本発明のリボザイム又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、クラスレート、多形体又はプロドラッグの量を意味する。１つの実施態様においては、本発明の組成物は、本明細書で記述する障害に対する遺伝的素因を有する動物、好ましくはヒトに対して予防措置として投与される。本発明のもう１つの実施態様においては、本発明のオリゴヌクレオチド、本発明のｓｉＲＮＡ又は本発明のリボザイム又は、オリゴヌクレオチド、本発明のｓｉＲＮＡ又は本発明のリボザイムを含む組成物は、本明細書で開示されている障害に対する非遺伝的素因をもつ患者に対して予防措置として投与される。従って、本発明の組成物は、１つの疾病又は障害を予防し同時にもう１つの疾病又は障害を治療する（例えば尿失禁を治療しながら良性前立腺肥大（ｂｅｎｉｇｎ ｐｒｏｔａｔｉｃ ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ）を予防する）ために使用可能である。
【００４７】
本明細書で使用される通り、別途指示ある場合を除き、「下流側」という用語は、本明細書ではヌクレオチド配列内の５’−３’方向を表わすために使用される。同様にして、「上流側」という用語は、３’−５’方向を表わす。
【００４８】
本明細書で使用される通り、別途指示ある場合を除き、「実質的に相補的な」という用語は、本明細書ではオリゴヌクレオチドがそのｍＲＮＡ標的配列に対しハイブリダイズする能力をもつことを表わすために使用される。
【００４９】
本明細書で使用される通り、別途指示ある場合を除き、「ｍＲＮＡ」という語は、本明細書において、ヒトステロイド５α−レダクターゼ１型又はヒトステロイド５α−レダクターゼ２型をコードする成熟又はプロセッシング済みメッセンジャ−ＲＮＡ、又は未プロセッシングの核ｐｒｅ−ｍＲＮＡのいずれかを表わすべく使用されている。
【００５０】
本明細書で使用される通り、別途指示ある場合を除き、「ヒトステロイド５α−レダクターゼ１型」又は「ヒトステロイド５α−レダクターゼ１」という用語は本明細書では、５位においてテストステロンなどのアンドロゲンの還元を担当するヒトステロイド５α−レダクターゼのイソ酵素の１つを表わすべく使用されている（アンダーソン、Ｓ．及びラッセル、Ｄ．Ｗ．、１９９０年、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ、第８７巻、３６４０−３６４４頁；ジェンキンス、Ｅ．Ｐ．ら、１９９２年、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖ．、第８９巻、２９３−３００頁）。テストステロンに対するヒトステロイド５α−レダクターゼ１型の活性は、テストステロンから５α還元型テストステロン又はジヒドロテストステロンつまりＤＨＴへの酵素的変換を結果としてもたらす。
【００５１】
本明細書で使用される通り、別途指示ある場合を除き、「ヒトステロイド５α−レダクターゼ２型」又は「ヒトステロイド５α−レダクターゼ２」という用語は本明細書では、５位においてテストステロンなどのアンドロゲンの還元を担当するヒトステロイド５α−レダクターゼのイソ酵素の１つを表わすべく使用されている（アンダーソン、Ｓ．及びラッセル、Ｄ．Ｗ．、１９９０年、Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ、第８７巻、３６４０−３６４４頁；ジェンキンス、Ｅ．Ｐ．ら、１９９２年、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖ．第８９巻、２９３−３００頁）。テストステロンに対するヒトステロイド５α−レダクターゼ２型の活性は、テストステロンから５α還元型テストステロン又はジヒドロテストステロンつまりＤＨＴへの酵素的変換を結果としてもたらす。
【００５２】
本明細書で使用される通り、別途指示ある場合を除き、「皮脂分泌を低減させる」という用語は、本明細書では本発明の組成物によりもたらされる皮脂分泌速度の検出可能な低減を表わすべく使用される。本発明の組成物は、約１０％、約１０〜２０％、約２０〜３０％、約３０〜４０％、約４０〜５０％、約５０〜６０％、約６０〜７０％、約７０〜８０％又はそれ以上だけ皮脂分泌速度を実質的に低減させることができる。
【００５３】
本明細書で使用される通り、別途指示ある場合を除き、「発現を実質的に阻害する」という用語は、本明細書では、本発明の組成物によってもたらされる核酸分子からのコード化された酵素の発現（翻訳）レベルの検出可能な低減を表わすべく使用される。本発明の組成物は、約１０％、約１０〜２０％、約２０〜３０％、約３０〜４０％、約４０〜５０％以上だけ、ヒトステロイド５α−レダクターゼ１型又は２型の発現を実質的に阻害することができる。
【００５４】
本明細書で使用される通り、別途指示ある場合を除き、「特異的に結合する」という用語は、本明細書では、５α−レダクターゼ１型又は２型の発現の実質的阻害が、関係のない細胞核酸に対する結合に起因する実質的な効果なく示されるような形で、インビボ又はインビトロの細胞環境で起こる核酸分子の結合を意味する。
【００５５】
本明細書で使用される通り、別途指示ある場合を除き、「発現」という語は、本発明の核酸フラグメントから誘導されたセンス（ｍＲＮＡ）又はアンチセンスＲＮＡの転写及び安定した蓄積を意味する。発現は同様に、ポリペプチドへのｍＲＮＡの翻訳をも意味する。「アンチセンス阻害」というのは、標的タンパク質の発現を抑制する能力をもつアンチセンスＲＮＡ転写物の産生を意味する。「過剰発現」というのは、正常な又は形質転換されていない生体の産生レベルを超過するトランスジェニック生体における遺伝子産物の産生を意味する。「共抑制」というのは、同一の又は実質的に類似の外来の又は内因性遺伝子の発現を抑制する能力をもつセンスＲＮＡ転写物の産生を意味する（例えば本明細書に参照により援用されている米国特許第５，２３１，０２０号を参照のこと）。
【００５６】
本明細書で使用される通り、別途指示ある場合を除き、「ハイブリダイズする」又は「ハイブリダイゼーション」という用語は、ポリヌクレオチドストランドが既定のハイブリダイゼーション条件下で塩基対合を通して相補性ストランドとアニールするプロセスを意味する。特異的ハイブリダイゼーションは、２つの核酸配列が高度の相補性又は逆相補性（すなわち極性が逆転されている；例えば５’→３’は３’→５’オリゴヌクレオチドの逆相補体である）を共有することを表わしている。特異的なハイブリダイゼーション複合体は許容アニーリング条件下で形成し、「洗浄」ステップの後ハイブリダイズした状態にとどまる。洗浄ステップは、ハイブリダイゼーションプロセスのストリンジェンシーを判定する上で特に重要であり、よりストリンジェントな条件は非特異的結合（すなわち完全に整合されていない核酸ストランド対間の結合）を可能にすることが少ない。核酸配列のアニーリングのための許容条件は、当業者が日常的に判定でき、複数のハイブリダイゼーション実験間で一貫性のあるものであり得るが、一方、洗浄条件は、所望のストリンジェンシーひいてはハイブリダイゼーション特異性を達成するべく複数の実験間で変動し得る。許容アニーリング条件は、例えば、約６×ＳＳＣ、約１％（ｗ／ｖ）のＳＤＳ及び約１００ｍｕ・ｇ／ｍｌのせん断された変性サケ精子ＤＮＡの存在下で６８℃で発生する。一般に、ハイブリダイゼーションのストリンジェンシーは、一部には洗浄ステップが実施される温度を基準にして表現され、かかる洗浄温度は、標準的に規定のイオン強度及びｐＨにおける特定の配列についての熱融点（Ｔｍ）によりも約５℃〜２０℃低くなるように選択される。Ｔｍは、標的配列の５０％が完全に整合されたプローブにハイブリダイズする（規定のイオン強度及びｐＨ下の）温度である。Ｔｍ及び核酸ハイブリダイゼーションのための条件は周知であり、サンブルック（Ｓａｍｂｒｏｏｋ）Ｊ．ら、（１９８９年）、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ」、２．ｓｕｐ．ｎｄ ｅｄ．、第１−３巻、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ、Ｐｌａｉｎｖｉｅｗ Ｎ．Ｙ．の中に見い出すことができる。詳細には第２巻、第９章を参照のこと。
【００５７】
本明細書で使用される通り、「ベクター」という用語は、広く、外因性核酸をコードするあらゆるプラスミド又はウイルスを意味する。該用語は、同様に、例えばポリリジン化合物などの、核酸のビリオン又は細胞内への移送を容易にする非プラスミド、非ファージミド及び非ウイルス化合物を内含するものとみなされる。ベクターは、１つの細胞に対する核酸又はその突然変異体の送達のための送達用ビヒクルとして適切であるウイルスベクターであり得、そうでなければベクターは、同じ目的に適した非ウイルスベクターであり得る。細胞及び組織へのＤＮＡの送達用のウイルス及び非ウイルスベクターの例は当該技術分野において周知であり、例えばマー（Ｍａ）ら、（１９９７年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、Ｕ．Ｓ．Ａ．第９４巻、１２７４４−１２７４６頁）の中で記述されている。ウイルスベクターの例としては、組換え型ワクチンウイルス、組換え型アデノウイルス、組換え型レトロウイルス、組換え型アデノ関連ウイルス、組換え型鶏痘ウイルスなどが含まれるがこれらに制限されるわけではない（クラナージュ（Ｃｒａｎａｇｅ）ら、１９８６年、ＥＭＢＯ Ｊ．第５巻、３０５７−３０６３頁；１９９４年８月１８日付けの国際公開第９４／１７８１０号パンフレット；１９９４年１０月２７日付けの国際公開第９４／２３７４４号パンフレット）。非ウイルスベクターの例としてはリポゾーム、ＤＮＡのポリアミン誘導体などが含まれるがこれらに制限されるわけではない。
【００５８】
６．２． 一般的説明
本発明は、患者のヒトステロイド５α−レダクターゼ１型の発現を実質的に阻害する治療上又は予防上有効な量の少なくとも１つのアンチセンスオリゴヌクレオチドｓｉＲＮＡ又はリボザイム又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、クラスレート、多形体又はプロドラッグを含む医薬組成物を包含する。特定の実施態様においてはアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヒトステロイド５α−レダクターゼ１型と呼称されるタンパク質をコードするヌクレオチド配列の少なくとも一部分と相補的であり、それと特異的にハイブリダイズする。もう１つの特定の実施態様においてはｓｉＲＮＡは、ヒトステロイド５α−レダクターゼ１型と呼称されるタンパク質をコードするヌクレオチド配列の少なくとも一部分と相補的であり、それと特異的にハイブリダイズする。もう１つの特定の実施態様においてはリボザイムは、ヒトステロイド５α−レダクターゼ１型と呼称されるタンパク質をコードするヌクレオチド配列の少なくとも一部分と相補的であり、それと特異的にハイブリダイズする。
【００５９】
もう１つの実施態様においては、本発明は、患者のヒトステロイド５α−レダクターゼ２型の発現を実質的に阻害する治療上有効な量の少なくとも１つのアンチセンスオリゴヌクレオチドｓｉＲＮＡ又はリボザイム又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、クラスレート、多形体又はプロドラッグを含む医薬組成物を包含する。特定の実施態様においては、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヒトステロイド５α−レダクターゼ２型と呼称されるタンパク質をコードするヌクレオチド配列の少なくとも一部分と相補的であり、それと特異的にハイブリダイズする。もう１つの特定の実施態様においてはｓｉＲＮＡは、ヒトステロイド５α−レダクターゼ２型と呼称されるタンパク質をコードするヌクレオチド配列の少なくとも一部分と相補的であり、それと特異的にハイブリダイズする。もう１つの特定の実施態様においてはリボザイムは、ヒトステロイド５α−レダクターゼ２型と呼称されるタンパク質をコードするヌクレオチド配列の少なくとも一部分と相補的であり、それと特異的にハイブリダイズする。
【００６０】
もう１つの実施態様においては、該医薬組成物は、局所、静脈内、経口又は鼻腔内投与に適している。もう１つの実施態様においては、該医薬組成物は、皮膚の角質層を通してのアンチセンスオリゴヌクレオチドの浸透を増強させる送達用製剤をさらに含む。特定の実施態様においては、送達用製剤は、エチルアルコール、プロピレングリコール、グリセリン、メチルセルロース、ジメチルイソソルビド、ポリエチレングリコールエステル、ＥＤＴＡ、パンテチン及び二価カチオンを含む。より特定の実施態様においては、送達用製剤は約１５〜約４０％のエチルアルコール；約０．５〜約５．０％のプロピレングリコール；約０．５〜約５．０％のグリセリン；約０．１〜約２．０％のジメチルイソソルビド；約０．１〜約２．０％のポリエチレングリコールエステル；約０．０１〜約０．５％のＥＤＴＡ二ナトリウム；約０．０１〜約０．２％のパンテチン及び約０．００１〜約２％の二価カチオンを含む。もう１つの実施態様においては、該医薬組成物は、少なくとも４週間の局所投与向けに処方されている。もう１つの実施態様においては、該医薬組成物は、およそ１日１回、約１日２回又は最高１日約４回の投与向けに処方されている。もう１つの実施態様においては、送達用製剤は同様に、例えばポリ（オルトエステル）ミクロスフェアを含む（ただしこれらに制限されるわけではない）重合体ミクロスフェアの形で本発明のプラスミドのオリゴヌクレオチドと共に包埋された重合体の形を取り得る。
【００６１】
もう１つの実施態様においては、該医薬組成物は、皮膚の炎症、皮脂分泌又は皮脂分泌過剰に関係する障害、皮脂産生又は過剰皮脂産生に関係する障害、ステアトーマ、嚢腫性座瘡、過剰ケラチン産生、面皰、丘疹、小膿疱、稗粒腫、脂漏性皮膚炎、ふけ、脂漏性湿疹、乳児脂漏性湿疹、脂漏性角化症、酒さ、口囲皮膚炎、皮脂嚢胞、尋常性座瘡、油性肌、脂漏性いぼ、老人性いぼ、基底細胞乳頭腫、多毛症、黒色丘疹性皮膚症、良性前立腺肥大、前立腺癌、尿失禁、男性ホルモン性脱毛症及び男性型禿頭症を治療又は予防する上で有用である。
【００６２】
もう１つの実施態様においては、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヒトステロイド５α−レダクターゼ１型と呼称されるタンパク質をコードするｍＲＮＡ転写物に特異的にハイブリダイズする。もう１つの実施態様においては、ｓｉＲＮＡ、ヒトステロイド５α−レダクターゼ１型と呼称されるタンパク質をコードするｍＲＮＡ転写物に特異的にハイブリダイズする。もう１つの実施態様においては、リボザイムは、ヒトステロイド５α−レダクターゼ１型と呼称されるタンパク質をコードするｍＲＮＡ転写物に特異的にハイブリダイズする。
【００６３】
もう１つの実施態様においては、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヒトステロイド５α−レダクターゼ１型によりコードされる前記ｍＲＮＡ転写物の翻訳開始部位、５’−非翻訳配列、３’−非翻訳配列、イントロン／エキソンジャンクションのいずれか、又は介在配列に特異的にハイブリダイズする。もう１つの実施態様においては、ｓｉＲＮＡは、ヒトステロイド５α−レダクターゼ１型によりコードされる前記ｍＲＮＡ転写物の翻訳開始部位、５’−非翻訳配列、３’−非翻訳配列、イントロン／エキソンジャンクションのいずれか、又は介在配列に特異的にハイブリダイズする。もう１つの実施態様においては、リボザイムは、ヒトステロイド５α−レダクターゼ１型によりコードされる前記ｍＲＮＡ転写物の翻訳開始部位、５’−非翻訳配列、３’−非翻訳配列、イントロン／エキソンジャンクションのいずれか、又は介在配列に特異的にハイブリダイズする。
【００６４】
もう１つの実施態様においては、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヒトステロイド５α−レダクターゼ１型転写物の５’ｃａｐ部位又は５’ｃａｐ部位に隣接する領域に特異的にハイブリダイズする。もう１つの実施態様においては、ｓｉＲＮＡは、ヒトステロイド５α−レダクターゼ１型転写物の５’ｃａｐ部位又は５’ｃａｐ部位に隣接する領域に特異的にハイブリダイズする。もう１つの実施態様においては、リボザイムは、ヒトステロイド５α−レダクターゼ１型転写物の５’ｃａｐ部位又は５’ｃａｐ部位に隣接する領域に特異的にハイブリダイズする。
【００６５】
もう１つの実施態様においては、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヒトステロイド５α−レダクターゼ１型ｍＲＮＡ転写物内のコード配列の一部分に特異的にハイブリダイズする。もう１つの実施態様においては、ｓｉＲＮＡは、ヒトステロイド５α−レダクターゼ１型ｍＲＮＡ転写物内のコード配列の一部分に特異的にハイブリダイズする。もう１つの実施態様においては、リボザイムは、ヒトステロイド５α−レダクターゼ１型ｍＲＮＡ転写物内のコード配列の一部分に特異的にハイブリダイズする。
【００６６】
もう１つの実施態様においては、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヒトステロイド５α−レダクターゼ２型と呼称されるタンパク質をコードするヌクレオチド配列の少なくとも一部分に相補的であり、それと特異的にハイブリダイズする。もう１つの実施態様においては、ｓｉＲＮＡは、ヒトステロイド５α−レダクターゼ２型と呼称されるタンパク質をコードするヌクレオチド配列の少なくとも一部分に相補的であり、それと特異的にハイブリダイズする。もう１つの実施態様においては、リボザイムは、ヒトステロイド５α−レダクターゼ２型と呼称されるタンパク質をコードするヌクレオチド配列の少なくとも一部分に相補的であり、それと特異的にハイブリダイズする。
【００６７】
もう１つの実施態様においては、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヒトステロイド５α−レダクターゼ２型と呼称されるタンパク質をコードするｍＲＮＡ転写物に特異的にハイブリダイズする。もう１つの実施態様においては、ｓｉＲＮＡは、ヒトステロイド５α−レダクターゼ２型と呼称されるタンパク質をコードするｍＲＮＡ転写物に特異的にハイブリダイズする。もう１つの実施態様においては、リボザイムは、ヒトステロイド５α−レダクターゼ２型と呼称されるタンパク質をコードするｍＲＮＡ転写物に特異的にハイブリダイズする。
【００６８】
もう１つの実施態様においては、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヒトステロイド５α−レダクターゼ２型によりコードされる前記ｍＲＮＡ転写物の翻訳開始部位、５’−非翻訳配列、３’−非翻訳配列、イントロン／エキソンジャンクションのいずれか、又は介在配列に特異的にハイブリダイズする。もう１つの実施態様においては、ｓｉＲＮＡは、ヒトステロイド５α−レダクターゼ２型によりコードされる前記ｍＲＮＡ転写物の翻訳開始部位、５’−非翻訳配列、３’−非翻訳配列、イントロン／エキソンジャンクションのいずれか、又は介在配列に特異的にハイブリダイズする。もう１つの実施態様においては、リボザイムは、ヒトステロイド５α−レダクターゼ２型によりコードされる前記ｍＲＮＡ転写物の翻訳開始部位、５’−非翻訳配列、３’−非翻訳配列、イントロン／エキソンジャンクションのいずれか、又は介在配列に特異的にハイブリダイズする。
【００６９】
もう１つの実施態様においては、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヒトステロイド５α−レダクターゼ２型転写物の５’ｃａｐ部位又は５’ｃａｐ部位に隣接する領域に特異的にハイブリダイズする。もう１つの実施態様においては、ｓｉＲＮＡは、ヒトステロイド５α−レダクターゼ２型転写物の５’ｃａｐ部位又は５’ｃａｐ部位に隣接する領域に特異的にハイブリダイズする。もう１つの実施態様においては、リボザイムは、ヒトステロイド５α−レダクターゼ２型転写物の５’ｃａｐ部位又は５’ｃａｐ部位に隣接する領域に特異的にハイブリダイズする。
【００７０】
もう１つの実施態様においては、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ヒトステロイド５α−レダクターゼ２型ｍＲＮＡ転写物内のコード配列の一部分に特異的にハイブリダイズする。もう１つの実施態様においては、ｓｉＲＮＡは、ヒトステロイド５α−レダクターゼ２型ｍＲＮＡ転写物内のコード配列の一部分に特異的にハイブリダイズする。もう１つの実施態様においては、リボザイムは、ヒトステロイド５α−レダクターゼ２型ｍＲＮＡ転写物内のコード配列の一部分に特異的にハイブリダイズする。
【００７１】
もう１つの実施態様においては、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号１のヌクレオチド１〜７５の相補体、配列番号１のヌクレオチド６２０〜６８２の相補体及び配列番号１のヌクレオチド１１７５〜１２５０の相補体からなる群から選択された少なくとも８個の連続するヌクレオチドの配列を含む。
【００７２】
もう１つの実施態様においては、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号２８のヌクレオチド１〜４２の相補体、配列番号２８のヌクレオチド１０〜３０の相補体及び配列番号２８のヌクレオチド２１〜２３０の相補体からなる群から選択された少なくとも８個の連続するヌクレオチドの配列を含む。
【００７３】
もう１つの実施態様においては、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号２、３、４、５、６、７、８、９、１０及び１１からなる群から選択された少なくとも８個の連続するヌクレオチドの配列を含む。
【００７４】
もう１つの実施態様においては、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５及び４６からなる群から選択された少なくとも８個の連続するヌクレオチドの配列を含む。
【００７５】
もう１つの実施態様においては、該医薬組成物は、第２の活性作用物質をさらに含み、該第２の活性作用物質は抗真菌剤、Ｈ¹受容体拮抗薬、レチノイド、抗肥満薬、ホルモン、ホスホジエステラーゼ−５阻害物質、抗生物質、抗癌剤、局所ステロイド又は収斂薬である。
【００７６】
もう１つの実施態様においては、本発明は、テストステロンからジヒドロテストステロンへの変換を阻害することによって治療又は予防できる障害を治療又は予防する方法において、それを必要とする患者に対し、患者のヒトステロイド５α−レダクターゼ１型の発現を実質的に阻害する治療上有効な量の少なくとも１つのアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ又はリボザイム又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、クラスレート、多形体又はプロドラッグを投与することを含有する方法を包含する。
【００７７】
もう１つの実施態様においては、本発明は、必要とする患者において皮膚の炎症、皮脂分泌又は皮脂分泌過剰に関係する障害、皮脂産生又は過剰皮脂産生に関係する障害、ステアトーマ、嚢腫性座瘡、過剰ケラチン産生、面皰、丘疹、小膿疱、稗粒腫、脂漏性皮膚炎、ふけ、脂漏性湿疹、乳児脂漏性湿疹、脂漏性角化症、酒さ、口囲皮膚炎、皮脂嚢胞、尋常性座瘡、油性肌、脂漏性いぼ、老人性いぼ、基底細胞乳頭腫、多毛症、黒色丘疹性皮膚症、良性前立腺肥大、前立腺癌、尿失禁、男性ホルモン性脱毛症及び男性型禿頭症を治療又は予防する方法であって、前記患者に対し、患者のヒトステロイド５α−レダクターゼ１型の発現を実質的に阻害する治療上有効な量の少なくとも１つのアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ又はリボザイム又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、クラスレート、多形体又はプロドラッグを投与することを含有する方法を包含する。
【００７８】
もう１つの実施態様においては、本発明は、テストステロンからジヒドロテストステロンへの変換を阻害することによって治療又は予防できる障害を治療又は予防する方法であって、それを必要とする患者に対し、患者のヒトステロイド５α−レダクターゼ２型の発現を実質的に阻害する治療上有効な量の少なくとも１つのアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ又はリボザイム又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、クラスレート、多形体又はプロドラッグを投与することを含有する方法を包含する。
【００７９】
もう１つの実施態様においては、本発明は、必要とする患者において皮膚の炎症、皮脂分泌又は皮脂分泌過剰に関係する障害、皮脂産生又は過剰皮脂産生に関係する障害、ステアトーマ、嚢腫性座瘡、過剰ケラチン産生、面皰、丘疹、小膿疱、稗粒腫、脂漏性皮膚炎、ふけ、脂漏性湿疹、乳児脂漏性湿疹、脂漏性角化症、酒さ、口囲皮膚炎、皮脂嚢胞、尋常性座瘡、油性肌、脂漏性いぼ、老人性いぼ、基底細胞乳頭腫、多毛症、黒色丘疹性皮膚症、良性前立腺肥大、前立腺癌、尿失禁、男性ホルモン性脱毛症及び男性型禿頭症を治療又は予防する方法であって、前記患者に対し、患者のヒトステロイド５α−レダクターゼ２型の発現を実質的に阻害する治療上有効な量の少なくとも１つのアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ又はリボザイム又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、クラスレート、多形体又はプロドラッグを投与することを含有する方法を包含する。
【００８０】
もう１つの実施態様においては、本発明は、ヒトステロイド５α−レダクターゼ１型又は２型の発現を実質的に阻害する少なくとも１つのアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ又はリボザイムを含み、さらに角質層を通してのアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ又はリボザイムの浸透を増強するための作用物質を含む、皮膚の障害を治療又は予防するための皮膚科用組成物を包含する。特定の実施態様においては、浸透を増強する作用物質は、エチルアルコール、プロピレングリコール、グリセリン、ジメチルイソソルビド、ポリエチレングリコールエステル、ＥＤＴＡ、パンテチン及び二価カチオンを含む。特定の実施態様においては、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号１のヌクレオチド１〜７５の相補体、配列番号１のヌクレオチド６２０〜６８２の相補体及び配列番号１のヌクレオチド１１７５〜１２５０の相補体からなる群から選択された少なくとも８個の連続するヌクレオチドの配列を含む。特定の実施態様においては、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号２、３、４、５、６、７、８、９、１０及び１１からなる群から選択された少なくとも８個の連続するヌクレオチドの配列を含む。もう１つの特定の実施態様においては、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号２８のヌクレオチド１０〜３０の相補体、配列番号２８のヌクレオチド６２０〜６８２の相補体及び配列番号２８のヌクレオチド１１７５〜１２５０の相補体からなる群から選択された少なくとも８個の連続するヌクレオチドの配列を含む。特定の実施態様においては、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５及び４６からなる群から選択された少なくとも８個の連続するヌクレオチドの配列を含む。
【００８１】
もう１つの実施態様においては、皮膚科用組成物は、脂肪質物質による皮膚の毛穴の閉塞を阻害する第２の作用物質をさらに含む。特定の実施態様においては、第２の分子はレチノイン酸、トレチノイン、又はレチン−Ａである。
【００８２】
６．３ アンチセンスオリゴヌクレオチド
１つの実施態様においては、本発明のオリゴヌクレオチドはアンチセンスオリゴヌクレオチドである。本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは当該技術分野において既知の標準的な合成方法を用いて調製され、Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｉｎｃ．、Ｂｅｃｋｍａｎ、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、ＢｉｏＳｅｒｖｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｌｔｄ．、Ｂｉｏｓｓｅｔ、Ｇｅｎｅｍａｃｈｉｎｅｓなどから入手可能なものといったＤＮＡ合成装置で合成され得る。本発明のオリゴヌクレオチドは以下で論述するように化学的に修飾可能でもある。本発明のオリゴヌクレオチドは、当該技術分野において既知の方法により構築され精製され得る。特定のオリゴヌクレオチドは、ヒトステロイド５α−レダクターゼ１型又はヒトステロイド５α−レダクターゼ２型をコードする遺伝子の一部分を含むヌクレオチド配列に相補的であるヌクレオチド配列を有するように構築される。本発明のオリゴヌクレオチドは標準的には長さ２１塩基であるが約３塩基という少ないもの及び約１００塩基という多いものを含むこともできる。ターゲティングされた配列は、それがステロイド５α−レダクターゼ１型転写物又はステロイド５α−レダクターゼ２型転写物のいずれかの翻訳にとって不可欠であることから選択されてきた。
【００８３】
例示的実施態様においては、本発明のオリゴヌクレオチドは、ヒトステロイド５α−レダクターゼ１型転写物又はヒトステロイド５α−レダクターゼ２型転写物内でユニーク配列を規定するのに充分である約８塩基から約１００塩基までのサイズ範囲のＤＮＡの予め定められた配列を含む。８個未満の塩基を使用することもできるが、ヒトステロイド５α−レダクターゼ１型又はヒトステロイド５α−レダクターゼ２型をコードするｍＲＮＡ転写物に対する配列特異性度はオリゴヌクレオチドの長さが短縮するにつれて低下し得る。反対に、約１００塩基超のオリゴヌクレオチド配列は、細胞による摂取の低下の対象となり得る。一つの実施態様においては、オリゴヌクレオチドは約８〜約５０の塩基を含む。もう１つの実施態様においては、オリゴヌクレオチドは約１２〜約２０の塩基を含む。さらにもう１つの実施態様においては、オリゴヌクレオチドは約１５〜２５塩基を含む。
【００８４】
本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、医薬組成物の中で使用することを意図されており、治療的利益を提供するような形で標的ｍＲＮＡ又はタンパク質の発現を低下させるのに必要な充分な濃度を達成する。本発明で考慮されているオリゴヌクレオチドは、さまざまな分解性酵素（例えばヌクレアーゼ）に対する耐性を増強することによりその安定性を増大させるように構築されるか又はその他の形で修飾されている。かかる修飾は、オリゴヌクレオチド療法薬の濃度を、治療上有効な利益を実現するのに充分ではあるもののその標的配列に対するオリゴヌクレオチドの特異性を実質的に改変し得ないようなレベルで維持できるように機能する。オリゴヌクレオチドの安定性又は有効性を改善する修飾としては、リン酸塩主鎖、末端、糖部分及び個々の核酸塩基に対する修飾が含まれるがこれらに制限されるわけではない。ペプチド、タンパク質、炭水化物、脂質、ビタミンに対する抱合又は治療上の効能又は有効性を増大させるその他の抱合も同様に使用可能である。同じく、オリゴヌクレオチド及び標的配列の環化を含む安定した二次構造を結果としてもたらすあらゆる修飾及びｍＲＮＡに対する共有結合又はハイブリダイゼーション及び３本鎖結合を通した５’末端に対する３’末端のストランド内接合も行なうこともできる。親和性及び基質を特異的に維持し未修飾のオリゴヌクレオチドが示す溶解度を実質的に維持しながらヌクレアーゼの感応性を削減するあらゆる修飾も、本発明の範囲内に入る。本発明のオリゴヌクレオチドに対するその他の修飾には、ＤＮＡインターカレーター、光化学活性化された架橋又は分割剤、アルキル化剤及び酸化還元活性核酸分割基が含まれるがこれらに制限されるわけではない。細胞に対しベクターを導入し転写時点で長いＲＮＡ分子を産生することができる。本発明で使用するためのこのような発現単位は一般に、５’→３’の配向で操作可能な形で連結された、転写プロモータ、分泌シグナル配列、アンチセンスオリゴヌクレオチドをコードするＤＮＡ配列といった要素を含む。本発明のベクターにおいては、アンチセンスオリゴヌクレオチドのあらゆる配置を使用することができる。適切なプロモータ、シグナル配列及びターミネータの選択は、選択された宿主細胞によって決定され、当業者には明白であろう。
【００８５】
ヌクレアーゼ活性に対する耐性を実質的に遮断又は改善する複数の化学的に修飾されたオリゴヌクレオチドが開発されてきた。これらのオリゴヌクレオチド修飾には、リン酸塩の１つが硫黄によって置換される、ホスホロチオアートオリゴヌクレオチドが含まれる。もう１つのタイプのオリゴヌクレオチド修飾は、電荷リン酸酸素をメチル基又はその他のアルキル基で置換することによって達成される。これらの非イオンＤＮＡ類似体には例えばリン酸メチル、アルキルホスホロチオアート及びＯ−アルキルホスホトリエステルが含まれる。本発明の１つの例示的Ｏ−アルキルホスホトリエステルがＯ−メチルホスホトリエステルである。リン酸塩基におけるその他のＤＮＡ主鎖修飾には例えば、ホスホロジチオアート及びホスホトリエステルオリゴヌクレオチド又はタンパク質−核酸構造又はモルフォリノ様構造に基づくオリゴヌクレオチドが含まれる。
【００８６】
３’−又は５’−末端及び個々の核酸塩基のいずれか又は両方に対するさまざまな化学的修飾が、ヌクレアーゼに対するオリゴヌクレオチドの安定性を改善し、その特異的標的分子とのオリゴヌクレオチドの相互作用を安定化するか又は細胞によるオリゴヌクレオチドの摂取を増強するものとして知られている。その上、３’−又は５’−末端に対する化学的修飾又はオリゴヌクレオチド内部の修飾も同様に例えばオリゴヌクレオチドのトラッキングを可能にするためのレポータ分子として、又は細胞の摂取を増強するための脂肪親和性部分として導入することができる。かかる分子は、未修飾及び主鎖修飾済みの合成オリゴヌクレオチドの両方に対して導入可能である。これらの部分は例えば、末端ヒドロキシル又はリン酸塩基又は特異的塩基に対するチオ又はアミノ連結を通して導入可能である。
【００８７】
本発明において考慮されているオリゴヌクレオチドに対するその他の修飾には例えばＤＮＡインターカレーター、光化学活性化された架橋又は分割剤、アルキル化剤及び酸化還元核酸分割基が含まれる。
【００８８】
利用された修飾の如何に関わらず、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド又はステロイド５α−レダクターゼ１型又はステロイド５α−レダクターゼ２型の発現を阻害し、非力学ベースの毒性の潜在的可能性を低減させるのに充分な特異性でハイブリダイズするように設計されている。その他のアンチセンスオリゴヌクレオチドの毒性の調査から、細胞に対する多大な損傷又は致死性は明らかにならなかった。これまでのところ、アンチセンスオリゴヌクレオチドの毒性を調査するインビトロ研究は、ヌクレオシドの間のホスホジエステル連結かホスホロチオアート又はメチルホスホナートのいずれかと置換されている修飾済みオリゴマに主として制限されてきた。テストされた条件の下で、ホスホロチオアートオリゴマに対するさまざまな細胞系の曝露は、結果としていかなる有意な毒性ももたらさなかった（ガオ（Ｇａｏ）ら、１９９０年；リード（Ｒｅｅｄ）ら、１９９０年）。
【００８９】
６．４．リボザイム
酵素的ＲＮＡ分子であるリボザイムも同様に、特異的ＲＮＡ分割を触媒するのに使用可能である。本発明のリボザイムの作用メカニズムには、相補的標的ＲＮＡに対するリボザイム分子の配列特異的ハイブリダイゼーションとそれに続くエンドヌクレアーゼ的分割が関与する。一例示的実施態様においては、本発明の工学処理されたハンマーヘッド型モチーフのリボザイムは、５α−レダクターゼ１型又は５α−レダクターゼ２型をコードする配列のエンドヌクレアーゼ的分割を特異的かつ効率的に触媒することができる。
【００９０】
あらゆる潜在的ＲＮＡ標的内の特異的リボザイム分割部位は、当初、ＧＵＡ、ＧＵＵ及びＧＵＣという配列を含む（ただしこれらに制限されるわけではない）リボザイム分割部位について標的分子を走査することにより同定される。ひとたび同定されたならば、例えば分割部位を含有する標的遺伝子の領域に対応する約１５〜約２０個のリボヌクレオチドの短かいＲＮＡ配列を、オリゴヌクレオチドを操作不能にし得る二次的な構造的特長について評価することができる。候補標的の適切さをリボヌクレアーゼ保護検定を用いて相補的オリゴヌクレオチドとのハイブリダイゼーションに対するアクセス可能性をテストすることによって評価することが可能である。
【００９１】
本発明のリボザイムは、核酸分子の合成のため、当該技術分野において既知のあらゆる方法によって調製可能である。これらには、固相ホスホラミダイト化学合成などのオリゴヌクレオチドを化学的に合成するための技術が含まれるが、これらに制限されるわけではない。代替的には、５α−レダクターゼ１型又は５α−レダクターゼ２型をコードするＤＮＡ配列のインビトロ及びインビボ転写により、ＲＮＡ分子を生成することができる。かかるＤＮＡ配列は、Ｔ７又はＳＰ６などの適切なＲＮＡポリメラーゼプロモータと共に広範なベクター内に取込むことが可能である。代替的には、構成的又は誘発的に相補的ＲＮＡを合成するこれらのｃＤＮＡ構成体を、細胞系、細胞又は組織内に導入することができる。
【００９２】
ヒト５ａ−レダクターゼＩ型及びＩＩ型の両方のための例示的ハンマーヘッドリボザイム設計が表１に例示されている。リボザイムは、３’→５’の要領で読むよう線形的に列挙されている（すなわち、５ａＲｍＲＮＡ配列に対する逆相補体）。
【００９３】
【表１】

【００９４】
全ての配列内でリボザイム配列ＣＡＡＡＧＣＡＧＧＡＧＵＧＣＣＵＧＡＧＵＡＧＵＣ（ｎｔｓ４〜２６）が保存されている。最初の３つの塩基及び最後の６つは、そのそれぞれのｍＲＮＡにおいて各々のターゲティングされた配列について特異的である（すなわち逆相補体）。分割部位は、リボザイムの４／５位にあるＣＡのすぐ後の標的ｍＲＮＡストランド内に位置づけされている。
【００９５】
６．５ 低分子干渉ＲＮＡ
本発明は同様に、遺伝子サイレンシング用の低分子干渉ＲＮＡ（「ｓｉＲＮＡ」）を含む組成物及び方法をも包含する。本発明のｓｉＲＮＡは、化学的合成、インビトロ転写、ｓｉＲＮＡ発現ベクター及びＰＣＲ発現カセットを含む複数の方法により調製可能であるが、これらに制限されるわけではない。
【００９６】
本発明のｓｉＲＮＡは約１０〜約５０、好ましくは約１２〜約４０、より好ましくは約１５〜約３０そして最も好ましくは約１９〜約２２個のヌクレオチド（「ｎｔ」）２本鎖ＲＮＡである。
【００９７】
理論によって制限されることなく、本発明のｓｉＲＮＡはその同起源ＲＮＡを分割し破壊することによって働くと考えられている。ｓｉＲＮＡはまず第１にＲＮＡ誘発されたサイレンシング複合体の形に集合し、次にそのＲＮＡストランドをほどくことにより複合体を活性化させる。ほどかれたＲＮＡストランドは次に複合体を相補的ＲＮＡ分子まで導き、そこで複合体は同起源ＲＮＡを分割し破壊し、その結果ＲＮＡ干渉がもたらされる。「ＲＮＡ干渉」（ＲＮＡｉ）というのは、ｓｉＲＮＡにより開始される配列特異的な翻訳後遺伝子サイレンシングのプロセスである。ＲＮＡｉは、ショウジョウバエ、線虫、真菌、植物、及びヒトを含む（ただしこれらに制限されるわけではない）数多くの生体内で見られ、遺伝子発現の抗ウイルス防御、トランスポゾン活性の調節及び遺伝子発現の調節に関与すると考えられている。ＲＮＡｉの間、ｓｉＲＮＡは、標的ｍＲＮＡの分解を誘発し、その結果遺伝子発現が配列特異的に阻害される。
【００９８】
本明細書で使用される通り、「低分子干渉ＲＮＡ」、「短かい干渉ＲＮＡ」又は「ｓｉＲＮＡ」という用語は、遺伝子の利益にターゲティングされているヌクレオチドのＲＮＡ２重鎖である。「ＲＮＡ２重鎖」というのは、ＲＮＡ分子の２つの領域の間の相補性対合によって形成される構造を意味する。ｓｉＲＮＡは、その２重鎖部分のヌクレオチド配列がターゲティングされた遺伝子又はｍＲＮＡのヌクレオチド配列に相補的であるという点で遺伝子（例えば５α−レダクターゼ（ｒｅｄｃｕｔａｓｅ）についてコードする遺伝子）に「ターゲティング」されている。
【００９９】
本発明の１実施態様においては、ｓｉＲＮＡの２重鎖の長さは約３０ヌクレオチドである。もう１つの実施態様においては、２重鎖は長さが約２９、２８、２７、２６、２５、２４、２３、２２、２１、２０、１９、１８、１７、１６、１５、１４、１３、１２、１１又は１０ヌクレオチドであり得る。もう１つの実施態様においては、２重鎖の長さは約１９〜２５ヌクレオチドである。ｓｉＲＮＡのＲＮＡ２重鎖部分は、ヘヤピン構造の一部であり得る。２重鎖部分に加えて、ヘヤピン構造は、２重鎖を形成する２つの配列の間に位置づけされたループ部分を含有し得る。ループの長さは変動し得る。一部の実施態様においては、ループの長さは約５、６、７、８、９、１０、１１、１２又は１３ヌクレオチドである。ヘヤピン構造は同様に３’又は５’のオーバーハング部分を含むこともできる。一部の実施態様では、オーバーハングは、長さが０、１、２、３、４又は５ヌクレオチドの３’又は５’オーバーハングである。
【０１００】
もう１つの実施態様においては、ｓｉＲＮＡは核酸配列によってコードされ、核酸配列は同様にプロモータをも内含し得る。核酸配列は同様にポリアデニル化シグナルも内含し得る。一部の実施態様では、ポリアデニル化シグナルは合成最小ポリアデニル化シグナルである。
【０１０１】
もう１つの実施態様においては、本発明のｓｉＲＮＡは過渡的トランスフェクションによって導入され、配列特異的な要領で哺乳動物の培養細胞内でＲＮＡ干渉を有効に誘発する。特定の実施態様においては、ｓｉＲＮＡは、標的ＲＮＡ及びタンパク質レベルの８０％超、好ましくは９０％超、より好ましくは９５％超、そして最も好ましくは９９％超の減少を結果としてもたらす。もう１つの特定の実施態様においては、本発明のｓｉＲＮＡは、２ｎｔの３’オーバーハングを伴う２１ｎｔのｄｓＲＮＡである。特定の実施態様においては、ｓｉＲＮＡの配列特異性は、ｓｉＲＮＡとその標的ｍＲＮＡとの間の単一の塩基対不整合がサイレンシングを劇的に削減することから、ストリンジェンドである。もう１つの特定の実施態様では、ｓｉＲＮＡ配列特異性は非ストリンジェントである。
【０１０２】
ｓｉＲＮＡは小さい２重鎖ＲＮＡ分子として使用され得、そうでなければ、インビトロ又はインビボで２本鎖ＲＮＡ分子を産生するべく発現ベクター内で使用可能である。ｓｉＲＮＡ分子は、天然に発生するＲＮＡ分子で構成され得、そうでなければ、複素環、糖、リン酸塩主鎖、或る種の化学的に付着されたペンダント基に対する修飾で構成され得又、インビトロ及びインビボで遺伝子サイレンサとしてのその機能をｓｉＲＮＡが維持することになるようなその他の要領で改変可能である。
【０１０３】
ヒトステロイド５α−レダクターゼイソ型Ｉ型及びＩＩ型をターゲティングするｓｉＲＮＡ阻害物質の例が表２に列挙されている。例示的ｓｉＲＮＡはステロイド５α−レダクターゼＩ型及びＩＩ型タンパク質の発現をサイレンシングし、従って、ヒトにおいて該タンパク質の存在を削減するためにインビボで用いることができる。
【０１０４】
【表２】


【０１０５】
６．６ 本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ及びリボザイムによるヒトステロイド５α−レダクターゼ１型及び２型の阻害
本発明は、５α−レダクターゼ１型及び５α−レダクターゼ２型をコードするヌクレオチド配列の少なくとも一部分と相補的でありかつ、それとハイブリダイズする能力を有し、かつｍＲＮＡ転写物の翻訳又は遺伝子の転写を阻害し、かくして５α−レダクターゼ１型又は５α−レダクターゼ２型の濃度を減少させる能力をもつヌクレオチド配列を有するアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ及びリボザイムを包含する。干渉を受けるべきＲＮＡの機能としては、タンパク質翻訳部位へのＲＮＡの転座、ＲＮＡからのタンパク質の翻訳、１つ以上のｍＲＮＡ種を生成するためのＲＮＡのスプライシング及びＲＮＡ内に携わる又はＲＮＡにより容易になる可能性のある触媒活性が含まれるが、これらに制限されるわけではない。標的核酸機能とのこのような干渉の全体的効果は、ヒトステロイド５α−レダクターゼ１又はヒトステロイド５α−レダクターゼ２の発現の調節である。特に、単独で又は、ステロイド５α−レダクターゼ活性を減少させるか又はその他のステロイド５α−レダクターゼ遺伝子の発現を実質的に阻害するその他の作用物質（例えばフィナステリド）との組合せの形で投与された場合にヒトステロイド５α−レダクターゼ１型及びヒトステロイド５α−レダクターゼ２型のｍＲＮＡ転写物にハイブリダイズする能力をもつ塩基配列を有するオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ及びリボザイムが提供されている。ステロイド５α−レダクターゼ１型ｍＲＮＡ又は５α−レダクターゼ２型ｍＲＮＡに対するオリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーションは、実質的にｍＲＮＡ転写物の翻訳を遮断する。理論によって制限されることなく、酵素ステロイド５α−レダクターゼがテストステロン（Ｔ）からジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）への変換にとって不可欠であることから、ＤＨＴのレベルはアンドロゲン応答性の組織内で減少し、ＤＨＴの過剰産生を特徴とする症状を示す患者にとって治療上の利益を結果としてもたらす、と考えられている。
【０１０６】
本発明のオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ及びリボザイムは、それらが、翻訳開始部位に対する配列５’又は３’と共に、翻訳開始部位を含む転写物の領域に対して高い特異性でハイブリダイズする能力を有するという理由で、選択されてきた。ｍＲＮＡの５’ｃａｐ領域又はｃａｐ部位に対する配列３’又は５’にハイブリダイズするその他のオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ及びリボザイムが選択されてきている。本発明の付加的なオリゴヌクレオチド配列は、ステロイド５α−レダクターゼ１型遺伝子の３’非翻訳領域内に見い出される配列に対し相補的であり、ステロイド５α−レダクターゼ１型遺伝子に対してユニークである。このような配列は、ステロイド５α−レダクターゼ１型ｍＲＮＡ転写物の３’−非翻訳領域内に見られる配列に対し特異的にハイブリダイズする能力をもつ。上述の配列に加えて、５α−レダクターゼ１型転写物の中に含まれるその他の配列がターゲティングされる。その上、本発明は、ステロイド５α−レダクターゼ１型遺伝子のいずれかの部分に相補的でかつＤＮＡを架橋するか、ＤＮＡをインターカレートするか又は例えば３重ストランド形成などの機序により、より密に結合する能力をもつアンチセンスオリゴヌクレオチドを考慮している。
【０１０７】
さらに、本発明の付加的なオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ及びリボザイム配列は、ステロイド５α−レダクターゼ２型遺伝子の３’非翻訳領域内に見られる配列と相補的であり、ステロイド５α−レダクターゼ２型遺伝子にユニークである。ステロイド５α−レダクターゼ２型遺伝子の３’非翻訳領域内に見い出され、ステロイド５α−レダクターゼ２型遺伝子にユニークである本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ及びリボザイムも同様に開発された。かかる配列は、ステロイド５α−レダクターゼ２型ｍＲＮＡ転写物の３’非翻訳領域内に見い出される配列に特異的にハイブリダイズする能力をもつ。上述の配列に加えて、５α−レダクターゼ２型転写物内に含まれるその他の配列がターゲティングされる。その上、本発明はさらに、ステロイド５α−レダクターゼ２型遺伝子のいずれかの部分に相補的でかつＤＮＡを架橋するか、ＤＮＡをインターカレートするか例えば３重ストランド形成などの機序によりさらに密に結合する能力をもつアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ及びリボザイムを考慮している。
【０１０８】
かくして、本発明は、ステロイド５α−レダクターゼ１型及び５α−レダクターゼ２型の発現を実質的に阻害する能力をもつアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ及びリボザイムを考慮する。
【０１０９】
アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ及びリボザイムが有効な療法となるためには、オリゴヌクレオチド又は修飾済みオリゴヌクレオチドは、標的遺伝子、ｐｒｅ−ｍＲＮＡ又はｍＲＮＡを発現する細胞によって摂取されるか又は細胞内で発現されなくてはならない。本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ及びリボザイムは、オリゴヌクレオチドが血漿膜を通過し、ステロイド５α−レダクターゼ１型又はステロイド５α−レダクターゼ１型の発現を実質的に減少させるのに充分である細胞内濃度を達成することを保証するように構築される。ステロイド５α−レダクターゼ１型又はステロイド５α−レダクターゼ２型遺伝子又はｍＲＮＡに結合するように構築された本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ及びリボザイムは、必要とあらば、転写を低減させるのに充分なレベルにある核膜をそれらが通過できるようにさらに修飾され得る。アンチセンスオリゴヌクレオチドの細胞摂取を増強させようとする最近の試みでは、リポタンパク（ド・シュミット（ｄｅ Ｓｃｈｍｉｄｔ）ら、１９９１年）及びポリ−Ｌ−リジン及びコレステロールなどのさまざまな抱合（グッドチャイルド（Ｇｏｏｄｃｈｉｌｄ）、１９９０年）の使用を含めたさまざまな技術が利用されてきた。オリゴヌクレオチドの５’末端に対するコレステロールの抱合は、対照のオリゴ−デオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）で見られるものに比べ腎臓排泄物の減少に起因する血清クリアランスの減少を示す分子を結果としてもたらすことが報告されてきた（ド・シュミットら、１９９１年）。その結果、ＯＤＮに対するコレステロールの抱合は、ＬＤＬ輸送機序を介した肝細胞への薬物の送達の増加を可能にし得る。細胞特異的抗体の添加により、アンチセンスオリゴヌクレオチドを含有するリポゾームを特定の細胞型にターゲティングすることも可能である（レオネッティ（Ｌｅｏｎｅｔｔｉ）ら、１９９０年；ミズノ（Ｍｉｚｕｎｏ）ら、１９９０年）。本明細書に規定されている通りのプロドラッグの製造を含めた、オリゴヌクレオチドの適切な細胞内濃度を達成し維持するこれらの及びその他の方法が本発明によって考慮されており、これには、内在化されたオリゴヌクレオチドの流出を減少させるか又は細胞摂取を増強させる能力をもつその他の方法及び組成物が含まれる。かかる修飾が、その標的配列に対するオリゴヌクレオチドの特異性を改変することはない。
【０１１０】
６．７ 本発明の組成物の治療的使用
本発明に従うと、該オリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ又はリボザイム、その薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、クラスレート、多形体又はプロドラッグは、皮膚の炎症、皮脂分泌又は皮脂分泌過剰に関係する障害、皮脂産生又は過剰皮脂産生に関係する障害、ステアトーマ、嚢腫性座瘡、過剰ケラチン産生、面皰、丘疹、小膿疱、稗粒腫、脂漏性皮膚炎、ふけ、脂漏性湿疹、乳児脂漏性湿疹、脂漏性角化症、酒さ、口囲皮膚炎、皮脂嚢胞、尋常性座瘡、油性肌、脂漏性いぼ、老人性いぼ、基底細胞乳頭腫、多毛症、黒色丘疹性皮膚症、良性前立腺肥大、前立腺癌、尿失禁、男性ホルモン性脱毛症及び男性型禿頭症を患う又はそのリスクの高い患者好ましくはヒトに対する投与のために有用である。一実施態様において、「治療」又は「治療用」という用語は、疾病又は障害、又は少なくとも１つのその認識可能な症状の改善を意味する。もう１つの実施態様において、「治療」又は「治療用」という用語は、物理的（例えば識別可能な症候の安定化）、又は生理学的（例えば物理的パラメータの安定化）又はその両方の形で１つの疾病又は障害の発症を遅らせる又はその進行を阻害することを意味する。
【０１１１】
いくつかの実施態様においては、本発明の化合物又は本発明の組成物は、かかる障害又は疾病に対する予防的措置として患者好ましくはヒトに対し投与される。本明細書で使用される、「予防」又は「予防用」という用語は、一定の与えられた疾病又は障害を獲得するリスクの低減を意味する。１つの実施態様においては、本発明の組成物は、皮膚の炎症、皮脂分泌又は皮脂分泌過剰に関係する障害、皮脂産生又は過剰皮脂産生に関係する障害、ステアトーマ、嚢腫性座瘡、過剰ケラチン産生、面皰、丘疹、小膿疱、稗粒腫、脂漏性皮膚炎、ふけ、脂漏性湿疹、乳児脂漏性湿疹、脂漏性角化症、酒さ、口囲皮膚炎、皮脂嚢胞、尋常性座瘡、油性肌、脂漏性いぼ、老人性いぼ、基底細胞乳頭腫、多毛症、黒色丘疹性皮膚症、良性前立腺肥大、前立腺癌、尿失禁、男性ホルモン性脱毛症及び男性型禿頭症に対する遺伝的素因を有する患者、好ましくはヒトに対して予防的措置として投与される。
【０１１２】
もう１つの実施態様においては、本発明の組成物は、皮膚の炎症、皮脂分泌又は皮脂分泌過剰に関係する障害、皮脂産生又は過剰皮脂産生に関係する障害、ステアトーマ、嚢腫性座瘡、過剰ケラチン産生、面皰、丘疹、小膿疱、稗粒腫、脂漏性皮膚炎、ふけ、脂漏性湿疹、乳児脂漏性湿疹、脂漏性角化症、酒さ、口囲皮膚炎、皮脂嚢胞、尋常性座瘡、油性肌、脂漏性いぼ、老人性いぼ、基底細胞乳頭腫、多毛症、黒色丘疹性皮膚症、良性前立腺肥大、前立腺癌、尿失禁、男性ホルモン性脱毛症及び男性型禿頭症に対する非遺伝的素因を有する患者に対し予防的措置として投与される。
【０１１３】
６．７．１ 皮膚の炎症の治療又は予防
本発明は、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ又はリボザイム或いは本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ又はリボザイム及び薬学的に許容されるビヒクルを含む組成物を治療上又は予防上有効な量だけ患者に投与するステップを含む皮膚の炎症の治療又は予防のための方法を提供する。本明細書で使用されている通り、「皮膚の炎症」という用語には、臨床的に小嚢を特徴とする表皮浮腫辺縁が不完全な赤み、浮腫、滲出、痂皮、落屑、通常は引掻き又は擦過によりひき起こされるかゆみ及び苔癬化が含まれるがこれらに制限されるわけではない。
【０１１４】
６．７．２ ステアトーマの治療又は予防
本発明は、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ又はリボザイム又は本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ又はリボザイム及び薬学的に許容されるビヒクルを含む組成物を治療上又は予防上有効な量だけ患者に投与するステップを含むステアトーマの治療又は予防のための方法を提供する。本明細書で使用されている通り、「ステアトーマ」という用語には、脂などの物質を含む嚢胞又は、頭皮、耳、顔面、背中又は陰嚢上に頻繁に見られる濾胞性及び角質性物質を含む成長の遅い良性嚢胞が含まれるがこれらに制限されるわけではない。
【０１１５】
６．７．３ 嚢腫性座瘡の治療又は予防
本発明は、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ又はリボザイム又は本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ又はリボザイム及び薬学的に許容されるビヒクルを含む組成物を治療上又は予防上有効な量だけ患者に投与するステップを含む嚢腫性座瘡の治療又は予防のための方法を提供する。本明細書で使用されている通り、「嚢腫性座瘡」という用語は、皮膚の内部の奥深くにある嚢腫の細菌感染の結果としてもたらされる座瘡の一形態を意味する。治療しないでおくと、嚢腫性座瘡は瘢痕化をもたらす。
【０１１６】
６．７．４ 面皰の治療又は予防
本発明は、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ又はリボザイム又は本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ又はリボザイム及び薬学的に許容されるビヒクルを含む組成物を治療上又は予防上有効な量だけ患者に投与するステップを含む面皰の治療又は予防のための方法を提供する。本明細書で使用されている通り、「面皰」という用語は、開放、非炎症性面皰（例えば黒面皰）又は閉鎖面皰（例えば白面皰）を含む（ただしこれらに制限されるわけではない）座瘡病変を意味する。
【０１１７】
６．７．５ 丘疹の治療又は予防
本発明は、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ又はリボザイム又は本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ又はリボザイム及び薬学的に許容されるビヒクルを含む組成物を治療上又は予防上有効な量だけ患者に投与するステップを含む丘疹の治療又は予防のための方法を提供する。本明細書で使用されている通り、「丘疹」という用語は、非化膿性である皮膚の小さい炎症を起こした持ち上りを意味する。
【０１１８】
６．７．６ 稗粒腫の治療又は予防
本発明は、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ又はリボザイム又は本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ又はリボザイム及び薬学的に許容されるビヒクルを含む組成物を治療上又は予防上有効な量だけ患者に投与するステップを含む稗粒腫の治療又は予防のための方法を提供する。本明細書で使用されている通り、「稗粒腫」という用語は、顔面の皮膚の腺内のわずかなケラチン栓を意味する。結果としての隆起は、新生児の顔面の一般的の特長である。稗粒腫の小さな隆起は１ミリ又は２ミリメートル以下である。これらは大方の場合鼻又はあごの先端にあるのが一般的であり、頬及び額にも頻繁に見られる。さらに稀には、体幹上半部又は手足さらには陰茎にさえ見受けられる。
【０１１９】
６．７ 脂漏性皮膚炎の治療又は予防
本発明は、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ又はリボザイム又は本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ又はリボザイム及び薬学的に許容されるビヒクルを含む組成物を治療上又は予防上有効な量だけ患者に投与するステップを含む脂漏性皮膚炎の治療又は予防のための方法を提供する。本明細書で使用されている通り、「脂漏性皮膚炎」という用語は、頭皮、鼻の側面、まゆ毛、まぶた、耳の後ろの皮膚及び胸の中央によく見られる赤く、うろこ状のかゆみを伴う発疹を意味する。へそ、臀部、腕の下の皮膚のひだ、腋窩部、胸部及びそけい部といったその他の部域も同様に関与し得る。この症状は、幼年期（このときそれは、「新生児頭部皮膚炎」と呼ばれる）、壮年期及び初老という３つの年令群において最も一般的である。新生児頭部皮膚炎は通常生後８〜１２ヵ月までに治療しないでも治る。一部の幼児では、脂漏性皮膚炎は、おむつの部域内のみに発生する可能性があり、ここではそれはおむつかぶれの他の形態と混同され得る。脂漏性皮膚炎がその他の年令で発生する場合、それは現われてはすぐに消える可能性がある。脂漏性皮膚炎は、北方気候において特に季節的に悪化し得る。これは油性の肌又は毛髪をもつ人において一般的であるが、座瘡又は乾癬と合わせて見うけられる。酵母様の生体が脂漏性皮膚炎の原因として関与している可能性がある。
【０１２０】
脂漏性皮膚炎は、パーキンソン病といった神経系の疾病をもつ患者において発生し得る。心臓発作などのストレスの大きい病状から回復中の患者もこの問題を発生させる可能性がある。病院又は高齢者福祉施設にいる人々及び免疫系障害をもつ人々もこの障害により陥りやすいと思われる。かくしてこれらの障害を治療する上で有用な薬物を本発明の組成物と組合せることが可能である。
【０１２１】
６．７．８ 脂漏性湿疹の治療又は予防
本発明は、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ又はリボザイム或いは本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ又はリボザイム及び薬学的に許容されるビヒクルを含む組成物を治療上又は予防上有効な量だけ患者に投与するステップを含む脂漏性湿疹の治療又は予防のための方法を提供する。本明細書で使用されている通り、「脂漏性湿疹」という用語は、成人と同様幼児も罹患する頭皮の湿疹を意味する。両方の症状共、一般に頭皮から始まるが、体のその他の場所に広がる能力がある。１才未満の幼児における脂漏性湿疹は、新生児頭部皮膚炎として知られる。それは頭皮上に皮殻質の黄味がかった又は赤味がかった皮膚として現われる。それはまさに、このようなかわいい子供の肌には魅力なく見えるが、幼児にとって痛みやかゆみをひき起こすものではないと思われる。この症状は、罹患した幼児におけるビオチン欠乏に結びつけられるものと考えられている。それは数ヵ月で消えるが、バスオイル及び保湿クリームを用いることが一助となり得る。２０才から４０才までの成人がこのタイプの湿疹を患う可能性がある。脂漏性湿疹は、ふけという穏やかな症例として頭皮に発生する。この症状は、赤く炎症したパサパサした状態になり、急速に顔面、耳、首及び胸までひろがる可能性がある。この症状はストレスにより強まることがわかっており、かつ脂腺の閉塞に関係すると思われている。
【０１２２】
６．７．９ 脂漏性角化症の治療又は予防
本発明は、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ又はリボザイム或いは本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ又はリボザイム及び薬学的に許容されるビヒクルを含む組成物を治療上又は予防上有効な量だけ患者に投与するステップを含む脂漏性角化症の治療又は予防のための方法を提供する。本明細書で使用されている通り、「脂漏性角化症」という用語は、皮膚の外部層の非癌性腫瘍を意味する。１つの腫瘍しか無い場合もあれば、クラスタ状に数多く発生する場合もある。これらは通常褐色であるが、明るい黄褐色から黒色まで色が変化し得る。そのサイズは、直径数分の１インチから１／２ドル以上まで変動する。脂漏性角化症の主要な特長は、そのろう質で「貼り付いた」又は「粘着した」ような外観にある。それらは時として皮膚上に落下した温かい褐色のろうそくのろうの一塗りのように見える。脂漏性角化症は胸や背中に見られることが最も多いが、頭皮、顔面、首又は体のほぼ至るところに見受けられる。ウエストより下に見られることは稀である。これは日光によってひき起こされるわけではないことから、日光に露出された部域又は被覆された部域にも見られる。最初に現われた時、該腫瘍は通常小さい、粗いかゆみのある隆起として一度に１つずつ開始する。最終的に、これらは肥厚して、粗いいぼ状表面を発生させる。
【０１２３】
６．７．１０ 酒さの治療又は予防
本発明は、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ又はリボザイム或いは本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ又はリボザイム及び薬学的に許容されるビヒクルを含む組成物を治療上又は予防上有効な量だけ患者に投与するステップを含む酒さの治療又は予防のための方法を提供する。本明細書で使用されている通り、「酒さ」という用語は、顔面上の赤み及び膨れをひき起こす皮膚疾患を意味する。往々にして「成人座瘡」と呼ばれる酒さは、紅潮する傾向又は容易に赤面する傾向として始まり、徐々にほお、額、あご及び鼻が関与しうる顔面中心の持続する赤味へと進行し得る。同様にこれには耳、胸及び背中も関与し得る。疾病が進行するにつれて、小さい血管及び小さな吹き出物が赤くなった部域の上及び周囲に現われ始める。しかし、座瘡とは異なり、黒面皰は無い。酒さの吹き出物は、小さい赤色の隆起として顔面に現われ、その一部は膿汁を含み得る。これらには、皮膚の表面上の数多くの小さな血管の発達及び顔面の持続的赤みが随伴しうる。酒さのより進行した症例では、鼻瘤（ｒｙｎｏ−ｆｉ−ｍａ）と呼ばれる症状が発生し得る。脂肪分泌腺は拡大し、球根状の拡大した赤鼻及び膨れぼったい頬をひき起こす。ぶ厚い隆起が鼻の下半分及び近くのほおに発生し得る。鼻瘤の発生は女性では比較的少ない。
【０１２４】
６．７．１１ 口囲皮膚炎の治療又は予防
本発明は、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ又はリボザイム或いは本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ又はリボザイム及び薬学的に許容されるビヒクルを含む組成物を治療上又は予防上有効な量だけ患者に投与するステップを含む口囲皮膚炎の治療又は予防のための方法を提供する。本明細書で使用されている通り、「口囲皮膚炎」という用語は、口のまわりの部域における小さな赤色隆起さらには膿隆起及び穏やかな剥離を意味する。時として、隆起は最も明白な特長であり、該疾患は座瘡にきわめて似ている可能性がある。最も罹患しやすい部域は鼻から唇の側面にかけてのラインの辺縁内部及びあごである。唇を縁取る皮膚の小帯域の割愛が頻繁にみられる。時に、鼻、眼及びほおのまわりの部域も罹患し得る。穏やかな痒み及び／又は灼熱感を感じる場合がある。
【０１２５】
６．７．１２ 尋常性座瘡の治療又は予防
本発明は、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ又はリボザイム或いは本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ又はリボザイム及び薬学的に許容されるビヒクルを含む組成物を治療上又は予防上有効な量だけ患者に投与するステップを含む尋常性座瘡の治療又は予防のための方法を提供する。本明細書で使用されている通り、「尋常性座瘡」という用語は、皮膚の脂腺の炎症性症状を意味する。それは、小膿疱、そしてさらには瘢痕化をひき起こしうる嚢腫へと発達しうる皮膚上の赤く持上った部域からなる。尋常性座瘡は大部分の場合、最も一般的には１０代の若者そしてそれよりは少ないが若手成人の顔面、首及び背中に発生する。該症状は、一部には、アンドロゲン（男性ホルモン）による皮膚の過度の刺激の結果である。皮膚の細菌感染も１つの役割を果たすと思われる。
【０１２６】
６．７．１３ 皮脂嚢胞の治療又は予防
本発明は、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ又はリボザイム或いは本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ又はリボザイム及び薬学的に許容されるビヒクルを含む組成物を治療上又は予防上有効な量だけ患者に投与するステップを含む皮脂嚢胞の治療又は予防のための方法を提供する。本明細書で使用されている通り、「皮脂嚢胞」という用語は、「ペースト状」又は「チーズ状」に見える物質を含有する皮膚のすぐ下に発生する閉鎖嚢を意味する。皮脂嚢胞を満たす該物質中には往々にして腐敗臭も存在する。ケラチンは、皮脂嚢胞と呼ばれる細胞の嚢を作り出すタンパク質である。これらの小さな塊又は隆起は、膣、生殖器、胸部、腹部、顔面、首又は体のその他の場所の皮膚のすぐ下に発生し得る。
【０１２７】
６．７．１４ 基底細胞乳頭腫の治療又は予防
本発明は、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ又はリボザイム或いは本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ又はリボザイム及び薬学的に許容されるビヒクルを含む組成物を治療上又は予防上有効な量だけ患者に投与するステップを含む基底細胞乳頭腫の治療又は予防のための方法を提供する。本明細書で使用されている通り、「基底細胞乳頭腫」という用語は、まぶたのへり又はまぶたの皮膚上に小さな塊として一般に見られるいぼ様の腫瘍を意味する。
【０１２８】
６．７．１５ マイボーム嚢胞の治療又は予防
本発明は、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ又はリボザイム或いは本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ又はリボザイム及び薬学的に許容されるビヒクルを含む組成物を治療上又は予防上有効な量だけ患者に投与するステップを含むマイボーム嚢胞の治療又は予防のための方法を提供する。本明細書で使用されている通り、「マイボーム嚢胞」という用語は、まぶたの表面上に目に見える塊を結果としてもたらすまぶたの脂肪分泌腺内の塊を意味する。これらは、感染してまぶた内の痛み及び膨れを結果としてもたらす可能性がある。
【０１２９】
６．７．１６ 多毛症の治療又は予防
本発明は、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ又はリボザイム或いは本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ又はリボザイム及び薬学的に許容されるビヒクルを含む組成物を治療上又は予防上有効な量だけ患者に投与するステップを含む多毛症の治療又は予防のための方法を提供する。本明細書で使用されている通り、「多毛症」という用語は、女性における発毛増加を意味する。これは、男性型の毛（すなわち口ひげ及びあごひげ部域）又は手足上に通常以上に濃く発生する毛を意味する。胸毛又は腹部及び大腿部までの恥毛の拡張が存在しうる。多毛症は元来ほとんどが遺伝的である。
【０１３０】
６．７．１７ 黒色丘疹性皮膚症の治療又は予防
本発明は、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ又はリボザイム或いは本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ又はリボザイム及び薬学的に許容されるビヒクルを含む組成物を治療上又は予防上有効な量だけ患者に投与するステップを含む黒色丘疹性皮膚症の治療又は予防のための方法を提供する。本明細書で使用されている通り、「黒色丘疹性皮膚症」という用語は、通常顔面上の多数の小さな色素が増加した無症状の血疹を特徴とする良性皮膚状態を意味する。
【０１３１】
６．７．１８ 良性前立腺肥大の治療又は予防
本発明は、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ又はリボザイム或いは本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ又はリボザイム及び薬学的に許容されるビヒクルを含む組成物を治療上又は予防上有効な量だけ患者に投与するステップを含む良性前立腺肥大の治療又は予防のための方法を提供する。本明細書で使用されている通り、「良性前立腺肥大」という用語は、男性における良性の新生物（前立腺の非癌性拡大）を意味し、年令と共に増大する高い有病率を示す。前立腺のその嚢内部でのサイズの増大はこの嚢を通過する尿道を圧迫し、その結果尿流を閉塞する。
【０１３２】
６．７．１９ 前立腺癌の治療又は予防
本発明は、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ又はリボザイム或いは本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ又はリボザイム及び薬学的に許容されるビヒクルを含む組成物を治療上又は予防上有効な量だけ患者に投与するステップを含む前立腺癌の治療又は予防のための方法を提供する。本明細書で使用されている通り、「前立腺癌」という用語は、前立腺中の癌細胞の成長を意味する。正常な前立腺細胞のものと同様、それは男性ホルモン特にテストステロンにより刺激される。
【０１３３】
６．７．２０ 男性ホルモン性脱毛症の治療又は予防
本発明は、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ又はリボザイム或いは本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ又はリボザイム及び薬学的に許容されるビヒクルを含む組成物を治療上又は予防上有効な量だけ患者に投与するステップを含む男性ホルモン性脱毛症の治療又は予防のための方法を提供する。本明細書で使用されている通り、「男性ホルモン性脱毛症」という用語は、男性及び女性型禿頭症を意味する。男性ホルモン性脱毛症では、長年にわたり脱毛がゆっくりと起こる。それは２０才を過ぎるといつでも起こり得る。脱毛の家族歴が通常存在する。女性においては、毛髪は頭皮全体にわたり痩せ細り、通常は、禿は発生しない。男性の最初にこめかみで脱毛が発生し、その後頭の頂部に禿が拡大する。男性ホルモン性脱毛症はホルモンに対する発毛組織の感応性に起因すると思われている。男性における男性ホルモン性脱毛症は同様に、男性型禿頭症とも呼ばれる。
【０１３４】
６．７．２１ 尿失禁の治療又は予防
本発明は、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ又はリボザイム又は本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ又はリボザイム及び薬学的に許容されるビヒクルを含む組成物を治療上又は予防上有効な量だけ患者に投与するステップを含む尿失禁の治療又は予防のための方法を提供する。本明細書で使用されている通り、「尿失禁」という用語は、無意識の尿もれを意味する。尿失禁の大部分のケースは、以下の６つの主たる亜型、つまり、緊張性尿失禁、過活動膀胱、混合型尿失禁、溢流性尿失禁、連続性欠如又は変形性、又は機能性尿失禁のうちの１つに入る。
【０１３５】
６．８．治療的／予防的投与及び組成物
本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ及びリボザイムは、標的組織内で効果的なレベルを達成するために投与される。かくして、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ及びリボザイムは、局所、皮膚、皮下、経皮、非経口、経口、直腸を含む（ただしこれらに制限されるわけではない）任意の数の経路を通って、或いはオリゴヌクレオチド又はリボザイム含有ポンプの外科的移植又はその他の徐放性製剤を含めたその他の手段によって投与可能である。組成物は通常、適切な薬学的担体と共にヒトステロイド５α−レダクターゼ１型遺伝子又はヒトステロイド５α−レダクターゼ２型遺伝子のｍＲＮＡ転写物の一部分に対し少なくとも実質的に相補的であるヌクレオチド配列を有する医薬組成物の形で利用される。
【０１３６】
本発明の化合物及び組成物の活性に起因して、これらは、動物及び人間の医療において有用である。上述の通り、本発明の組成物は、皮膚の炎症、皮脂分泌又は皮脂分泌過剰に関係する障害、皮脂産生又は過剰皮脂産生に関係する障害、ステアトーマ、嚢腫性座瘡、過剰ケラチン産生、面皰、丘疹、小膿疱、稗粒腫、脂漏性皮膚炎、ふけ、脂漏性湿疹、乳児脂漏性湿疹、脂漏性角化症、酒さ、口囲皮膚炎、皮脂嚢胞、尋常性座瘡、油性肌、脂漏性いぼ、老人性いぼ、基底細胞乳頭腫、多毛症、黒色丘疹性皮膚症、良性前立腺肥大、前立腺癌、尿失禁、男性ホルモン性脱毛症及び男性型禿頭症の治療又は予防において有用である。
【０１３７】
本発明は、本発明のオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ又はリボザイムを含む組成物を治療上有効な量だけ患者に対して投与することによる治療及び予防方法を提供する。患者は、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ニワトリ、七面鳥、ウズラ、ネコ、イヌ、マウス、ラット、ウサギ、モルモットなどの動物を含む（ただしこれらに制限されるわけではない）動物であり、より好ましくは哺乳動物、そして最も好ましくはヒトである。
【０１３８】
本発明の組成物は、例えば経口、局所のいずれの適切な経路でも、静脈内注射又はボーラス注入法によってでも、上皮又は粘膜皮膚裏層（例えば口腔粘膜、直腸及び腸粘膜など）を通した吸収によってでも投与可能であり、生物学的に活性なもう１つの作用物質と共に投与することができる。本発明の組成物は好ましくは局所投与される。投与は全身的であっても局所的であってもよい。例えばリポソーム、微粒子、マイクロカプセル、カプセルなどの中への封入といったさまざまな送達系が知られており、本発明の組成物を投与するために使用可能である。或る種の実施態様においては、本発明の２つ以上の組成物が一人の患者に投与される。投与方法には、皮内、筋内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、経口、舌下、鼻腔内、大脳内、膣内、経皮、直腸投与、吸入又は局所特に耳、鼻、眼、頭皮又は皮膚への局所投与が含まれるが、これらに制限されるわけではない。好ましい投与様式は、医師の裁量に委ねられ、一部には病状の部位により左右される。大部分のケースで、投与は、細胞による最大の摂取のための本発明の組成物の放出を結果としてもたらすことになる。
【０１３９】
特定の実施態様においては、治療を必要とする部域に対し局所的に本発明の１つ以上の組成物を投与することが望ましい可能性がある。これは、例えば制限的な意味なく、局所的塗布（例えばクリームとして）によって；外科手術中の局所的輸液によって（例えば外科手術後の創傷包帯と併用して）；カテーテルを用いて；座薬を用いて；又は移植片（なお該移植片は、サイアラスティック（ｓｉａｌａｓｔｉｃ）膜といった膜又はファイバを含む多孔質、非多孔質又はゼリー状材料のものである）を用いて達成可能である。１つの実施態様においては、投与は、動脈硬化性プラーク組織の部位（又は前部位）における直接注入によるものであり得る。
【０１４０】
一部の実施態様、例えば皮膚の炎症、男性ホルモン性脱毛症、尋常性座瘡の治療のための実施態様においては、局所、鞘内又は硬膜外注射を含めたあらゆる適切な経路により皮膚又は頭皮に直接本発明の１つ以上の化合物を導入することが望ましい可能性がある。本発明の組成物は、座瘡に罹患した皮膚又は油性肌に対してのみならず、座瘡、その他のしみ及び局所的炎症を導く皮脂の蓄積及び座瘡を予防するため皮膚に対し予防的に塗布することができる。本発明の組成物での治療の利益を特に受けるのは、十代の若者、若年成人そして、月経周期の或る段階にある女性であると思われる。
【０１４１】
もう１つの実施態様においては、組成物は、罹患した部域に対する直接的塗布のため体の表面部域に直接的に又は間接的に投与するのに適した形態で調製される。この処方には、乾燥防止剤（例えばパンテテイン）、浸透増強剤（例えばジメチルイソソルビド）、加速剤（例えばイソプロピルミリスタート）又は業界では既知であり局所施用に用いられているその他の一般的な添加剤（例えばグリセリン、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、エチルアルコール、リポソーム、脂質、オイル、クリーム又は皮膚軟化剤）が含まれるがこれらに制限されるわけではない。さらに、本発明の送達ビヒクルには、毛穴から皮脂栓をとり除くレチノイン酸（すなわちレチン−Ａ）などの皮膚の毛穴に対し有利な効果を有する化合物；抗酸化剤（例えばブチル化ヒドロキシアニソール）、又はキレート防腐剤（例えばＥＤＴＡ二ナトリウム）が含まれ得る。さらに、本発明の送達ビヒクルは、治療中の体の皮膚の部域及び／又は局所施用のために用いられている核酸のサイズ又は性質（すなわち１本鎖又は２本鎖）を考慮に入れるべく調整可能である。
【０１４２】
角質層を通して組成物を送達する局所製剤の有効性をさらに改善するため、ホスホロチオアートオリゴヌクレオチドを使用することができる。ホスホロチオアート修飾済みオリゴヌクレオチドは、アンチセンス応用分野での使用にとって多大な将来性を示した。ホスホロチオアート修飾済みオリゴヌクレオチドは、これらの修飾が未修飾オリゴヌクレオチドに比べた場合にオリゴヌクレオチドの生物学的半減期の著しい改善を示すものとして知られているという理由から使用される。標準的には、ホスホロチオアート修飾済みオリゴヌクレオチドは、天然に発生するＤＮＡ分子と同じ特性を示す。同じ長さをもつ天然及びホスホロチオアートベースのＤＮＡオリゴヌクレオチドは両方共ほぼ同じサイズであり、同じ二次的及び三次的構造を形成し、各々のヌクレオシド間連結において１つの負の電荷を伴って大きい正味負電荷を有する。しかしながら、ホスホロチオアート修飾されたオリゴヌクレオチドは、ホスホジエステルヌクレオシド間連結の非架橋酸素原子のうちの１つの置換された硫黄原子の存在のため、核酸分解性分解に対しさらに大きな耐性を有する。
【０１４３】
角質層を通してＤＮＡを送達することに関する研究作業がいくつか存在していたものの、応用可能と思われる。その他のアプローチが存在する。主要な制約は、分子のサイズにあると思われる数多くの製剤が角質層を通して化合物を搬送する能力を実証してきたが、これらの化合物はＤＮＡ分子ほど大きくない。例えば、２０個のヌクレオチドからなるアンチセンスオリゴマについて予想される分子量は約６２００ダルトンであろう。しかしながら角質層の抵抗は、裸ＤＮＡ、オリゴヌクレオチド、リボザイム、アプタマーさらにはｃＤＮＡ構成体の送達を達成することができるような形で特異的製剤により調節可能である。
【０１４４】
大部分の薬物は、角質層を横断することができない。しかしながら、集合的に「浸透増強剤」として知られている１クラスの化合物を使用して浸透の増強を達成することができる。アルコール、スルホキシド、脂肪酸、エステル、アゾン、ピロリドン、尿素及びポリオールは、この化合物クラスの成員のほんの一部にすぎない（カルビッツ（Ｋａｌｂｉｔｚ）ら、１９９６年）。これらの浸透増強剤の目的は、角質層内の薬物の拡散率及び溶解度を変更することにあり、かくして一部は脂質経路を通してその効果を調節し、一部は極性経路を介して拡散を調節させる。
【０１４５】
増強剤グリセリンのさまざまな濃度での添加が、サイクロスポリンの浸透を増強することが示されてきた（ナカシマ（Ｎａｋａｓｈｉｍａ）ら、１９９６年）。水性プロピレングリコールと併せたテルペンベースの浸透増強剤の使用も同じく、５−フルオロウリシルの局所送達速度を増強する能力を示した（ヤマネ（Ｙａｍａｎｅ）ら、１９９５年）。５−フルオロウリシル、５−ＦＵは、経皮透過研究における親水性化合物の特性を検査するためのモデル化合物である。かくして、ポリレングリコール内のテルペンの添加（最高８０％）は、皮膚内への流入速度を増強させることができた。
【０１４６】
ジメチルイソソルビド（ＤＭＩ）は、薬学製剤としての将来性を示したもう１つの浸透増強剤である。ＤＭＩは、比較的低い粘度をもつ水混和性液体である（ジア（Ｚｉａ）ら、１９９１年）。ＤＭＩは、水及びポリレングリコールとの錯化を受けるがポリエチレングリコールとは錯化しない。さまざまなステロイドの浸透を増強する能力をビヒクルに提供するのは、水と錯化するＤＭＩの能力である。１：２というＤＭＩ：水比で最大の効果が見られた。文献中の証拠から、ＤＭＩに対するｐＨの効果は、さまざまな製剤の中でＤＭＩを使用する場合に重要な考慮事項であることが示唆されている（ブリセート（Ｂｒｉｓａｅｒｔ）ら、１９９６年）。
【０１４７】
（吸入器又はネブライザーを用いることなどにより）、そしてエアロゾル化剤を伴う処方又はフルオロカーボン又は合成肺界面活性剤中での灌流を介して、肺投与も同様に利用可能である。いくつかの実施態様においては、本発明の化合物を、従来の結合剤及びトリグリセリドといったビヒクルと共に座薬として処方することができる。
【０１４８】
もう１つの実施態様においては、本発明の組成物を小嚢特にリポソーム内に送達することができる（ランゲル（Ｌａｎｇｅｒ）、１９９０年、Ｓｃｉｅｎｃｅ第２４９巻、１５２７−１５３３頁；トリート（Ｔｒｅａｔ）ら、「Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ」中、ロペス・ベレスタイン（Ｌｏｐｅｚ−Ｂｅｒｅｓｔｅｉｎ）及びフィドラー（Ｆｉｄｌｅｒ）（編）、Ｌｉｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、３５３−３６５頁（１９８９年）；ロペス・ベレスタイン、同書、３１７−３２７頁参照；同書全体を参照のこと）。
【０１４９】
さらにもう１つの実施態様においては、本発明の組成物は、制御型放出系で送達され得る。１実施態様においては、ポンプを使用することができる（ランゲル、前掲；セフトン（Ｓｅｆｔｏｎ）、１９８７年、ＣＲＣ Ｃｒｉｔ．Ｒｅｆ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｅｎｇ．第１４巻、２０１頁；ブッシュワルド（Ｂｕｃｈｗａｌｄ）ら、１９８０年、Ｓｕｒｇｅｒｙ、第８８巻、５０７頁、ソーデック（Ｓａｕｄｅｋ）ら、１９８９年、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．第３２１巻、５７４頁を参照のこと）。もう１つの実施態様においては、重合体材料を使用することができる（「Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ」、ランゲル及びワイズ（Ｗｉｓｅ）（編）、ＣＲＣ Ｐｒｅｓ．、Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ、Ｆｌａ．（１９７４年）；「Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ、Ｄｒｕｇ Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ」、スモーレン（Ｓｍｏｌｅｎ）及びボール（Ｂａｌｌ）（編）、Ｗｉｌｅｙ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９８４年）；ランゲル及びペパス（Ｐｅｐｐａｓ）、１９８３年、Ｊ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｓｃｉ．Ｒｅｖ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｃｈｅｍ．第２３巻、６１頁参照；レビー（Ｌｅｖｙ）、１９８５年、Ｓｃｉｅｎｃｅ第２２８巻、１９０頁；ドュアリング（Ｄｕｒｉｎｇ）ら、１９８９年、Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．第２５巻３５１頁；ハワード（Ｈｏｗａｒｄ）ら、１９８９年、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．第７１巻、１０５頁も同じく参照のこと）。さらにもう１つの実施態様においては、治療すべき標的部域（例えば肝臓）の近くに、制御型放出系を置くことができ、かくして全身的用量の数分の１しか必要でなくなる（例えばグッドソン（Ｇｏｏｄｓｏｎ）、「Ｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ」、前掲、第２巻、１１５−１３８頁（１９８４年）中を参照）。ランゲル、１９９０年、Ｓｃｉｅｎｃｅ第２４９巻：１５２７−１５３３頁）による論評の中で論述されているその他の制御型放出系も使用可能である。
【０１５０】
この組成物は、治療上有効な量の本発明の組成物、任意には２つ以上の本発明の組成物を好ましくは精製された形で、適切な量の薬学的に許容されるビヒクルと共に含み、かくして患者に対する適切な投与のための形態を提供することになる。
【０１５１】
「ビヒクル」という用語は、本発明の組成物が共に投与される希釈剤、アジュバント、賦形剤又は担体を意味する。かかる薬学的ビヒクルは、落花生油、大豆油、鉱油、ゴマ油などの石油、動物、植物又は合成由来のものを含めた油及び水といった液体であり得る。該薬学ビヒクルは、生理食塩水、アラビアゴム、ゼラチン、でんぷんペースト、タルク、ケラチン、コロイドシリカ、尿素などであり得る。さらに、助剤、安定化剤、増粘剤、潤滑剤及び着色剤を使用することができる。患者に投与する時点で、本発明の組成物及び薬学的に許容されるビヒクルは、好ましくは無菌である。本発明の化合物が静脈内投与される場合、水が好ましいビヒクルである。特に注射溶液のための液体ビヒクルとして、生理食塩水溶液及び水性デキストロース及びグリセロール溶液も利用可能である。適切な薬学的ビヒクルとしては同様に、でんぷん、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、コメ、小麦、胡粉、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、ドライスキムミルク、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどの賦形剤も含まれる。本組成物は、望ましい場合、湿潤剤又は乳化剤又はｐＨ緩衝剤を少量含むこともできる。核酸ベースの化合物のための有効な送達ビヒクルの上述の組成物用の好ましい濃度範囲は以下の通りである： エチルアルコール１５〜４０％；プロピレングリコール０．５〜５．０％；グリセリン０．５〜５．０％；ジメチルイソソルビド０．１〜２．０％；ポリエチレングルコールエステル（Ｌａｕｒｅｔｈ−４のようなもの）０．１〜２．０％；ＥＤＴＡ二ナトリウム０．０１〜０．５％；パンテチン０．０１〜０．２％、２価陽イオン（銅、マグネシウム、マンガン、亜鉛、銅リチウムなど）０．０１〜２％及び１００％充分量の水。
【０１５２】
本組成物は、溶液、懸濁液、エマルジョン、錠剤、丸薬、小丸薬、液体の入ったカプセル、粉末、持続放出型製剤、座薬、エマルジョン、エアゾル、スプレー、懸濁液、又はその他の使用に適した形態といった形をとり得る。１実施態様においては、薬学的に許容されるビヒクルはカプセルである（例えば米国特許第５，６９８，１５５号明細書を参照のこと）。適切な薬学的ビヒクルのその他の例は、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、Ｅ．Ｗ．マーチン（Ｍａｒｔｉｎ）著の中で記述されている。一実施例においては、本発明の組成物は、ヒトへの静脈内投与に適合された医薬組成物として日常的手順に従って処方される。標準的には、静脈内投与のための本発明の組成物は、無菌等張水性緩衝液中の溶液である。必要な場合、該組成物は同様に可溶化剤を内含し得る。静脈内投与するための組成物には任意には、注射の部位における疼痛を緩和させるためリグノカインなどの局所麻酔薬を内含し得る。一般に、成分は、例えば活性作用物質の数量を示すアンプル又は小袋などの密封されたコンテナの中の乾燥した凍結乾燥済み粉末又は無水濃縮物として単位剤形の形に混和されて又は別々に供給される。本発明の組成物が静脈内注射により投与される場合、これは例えば、無菌の薬学グレードの水又は生理食塩水の入った輸液びんを用いて送り出すことができる。本発明の化合物が注射により投与される場合、投与前に成分を混合できるように、注射用無菌水又は生理食塩水のアンプルが具備され得る。
【０１５３】
経口送達のための本発明の組成物は、錠剤、トローチ剤、水性又は油性懸濁液、顆粒、粉末、エマルジョン、カプセル、シロップ又はエレキシル剤の形をしていてよい。経口送達用の本発明の化合物及び組成物は、食品及び食品ミックスの形でも処方可能である。経口投与される組成物は、薬学的に味が良い調製物を提供するべく例えばフルクトース、アスパルテーム又はサッカリンなどの甘味剤；ペパーミント、ウィンターグリーン油又はチェリーなどの芳香剤；着色剤；及び保存剤などの１つ以上の任意の作用物質を含有していてよい。その上、錠剤又は丸薬の形をしている場合、組成物は胃腸管内での崩壊及び吸収を遅延させかくして長時間にわたり持続した作用を提供するべく、コーティングを受けていてもよい。浸透活性駆動化合物をとり囲む選択的に浸透性ある膜も同様に、本発明の経口投与される組成物に適している。これらの後者のプラットフォームでは、カプセルをとり囲む環境からの流体は駆動化合物により吸収され、この化合物は膨らんで作用物質又は作用物質組成物をアパーチャを通って変位させる。これらの送達プラットフォームは、即時放出型製剤の急上昇プロファイルと異なり基本的にゼロ次送達プロファイルを提供し得る。モノステアリン酸グリセロール又はステアリン酸グリセロールなどの時間遅延材料も同様に使用可能である。経口組成物はマンニトール、ラクトース、でんぷん、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどといった標準ビヒクルを内含できる。かかるビヒクルは好ましくは薬学グレードのものである。
【０１５４】
本明細書で開示されている特定の障害又は症状の治療において有効となる本発明の組成物の量は、障害又は身体の性質によって左右されることになり、標準的臨床技術によって決定可能である。さらに、最適な投薬量範囲を同定する一助となるように、インビトロ又はインビボ検定も任意に利用できる。組成物中で利用すべき精確な用量は、同様に投与経路及び疾病又は障害の重症度によっても左右され、医師の判断及び核各患者の状況に従って決定されるべきである。しかしながら、経口投与のための適切な投薬量範囲は、体重１ｋｇあたり一般に約０．０１ナノモル（「ｎＭ」）から２００ミリモル（「ｍＭ」）の本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ又はリボザイムである。本発明の特定の好ましい実施態様においては、経口用量は、体重１キログラムあたり０．０１ｎｍから７０ｍＭ、より好ましくは０．１ｎＭ〜５０ｍＭ、さらに好ましくは０．５ｎＭ〜２０ｍＭ、さらに一層好ましくは１ｍＭ〜１０ｍＭである。最も好ましい実施態様においては、経口用量は、体重１キログラムあたり５ｎＭの本発明の組成物である。本明細書で記述されている投薬量は、投与される合計量を意味する。すなわち、本発明の組成物が２つ以上投与される場合、好ましい投薬量は、投与される本発明の化合物の合計量に対応する。経口組成物は好ましくは重量で１０％〜９５％の活性成分を含有する。
【０１５５】
静脈内（ｉ．ｖ．）投与のための適切な投薬量範囲は、体重１キログラムあたり０．０１ｎＭ〜１００ｍＭ、０．１ｎＭ〜３５ｍＭそして１ｎＭ〜１０ｎＭである。鼻腔内投与のための適切な投薬量範囲は一般に、体重１ｋｇにつき約０．０１ｎＭ〜１ｎＭである。座薬は一般に体重１キログラムあたり０．０１ｎＭ〜５０ｍＭの本発明の組成物を含有し、０．５重量％〜１０重量％の範囲内の活性成分を含む。皮内、筋内、腹腔内、皮下、硬膜外、舌下、脳内、膣内、経皮投与又は吸入による投与のための推奨される投薬量は、体重１キログラムあたり０．００１ｎＭ〜２００ｍＭの範囲内である。局所投与のための本発明の化合物の適切な用量は、その化合物を投与する部域に応じて０．００１ｎＭ〜１ｍＭの範囲内である。有効用量は、インビトロ又は動物モデル試験系から導出された用量−応答曲線から外挿され得る。このような動物モデル及び系は、当該技術分野において周知である。
【０１５６】
非経口投与の場合（例えば良性前立腺肥大の治療用）、本発明の組成物は、標的細胞の選択性を提供するべくヒト前立腺特異的タンパク質に対して向けられた抗体にカップリングされるリポソーム「外皮」内に封入され得る。製剤の特定的性質は、例えば局所、非経口、経口、直腸、外科移植といった所望の投与経路によって、又はその他の局所的（前立腺内）送達手段によって決定される。投薬量はその投与経路に関して決定される。組成物中のオリゴヌクレオチド又はリボザイムの量は、組成物の約０．０１〜９９重量％の範囲であり得る。前立腺の直接的治療には、超音波検査器による検査下での少なくとも１つのアンチセンスオリゴヌクレオチドの適切な調製物の腹腔内投与が関与する可能性がある。注射は、過形成ゾーン内又は外部腺内のいずれかで行なうことができる。抗生物質の前立腺内注射を通しての慢性前立腺炎の治療のためにも類似のアプローチが報告されてきた（ジーメンス（Ｊｉｍｅｎｅｚ）ら、１９８８年）。これらの研究においては、注射中又は注射後の疼痛と合わせた一過性の注射後血精液症が、この療法で見られる唯一の有害事象であった。
【０１５７】
直腸投与のための組成物は、例えば結合剤、潤滑剤及び崩壊剤を含む通常の有用な薬学的賦形剤のいずれかを用いて調製される。組成物は同様に、脂肪族スルホキシドなどの細胞浸透増強剤をも内含し得る。好ましい実施態様においては、本発明の組成物は座薬の形をしている。
【０１５８】
本発明は同様に、本発明の１つ以上の化合物が充てんされた１つ以上のコンテナを含む薬学的パック又はキットをも提供する。場合によってはかかるコンテナには、ヒトへの投与のための製造、使用又は販売についての政府機関による承認を反映する、医薬品又は生物学的製品の製造、使用又は販売を規制する該政府機関によって規定された形態の通告が付随している。或る実施態様においては、該キットは、本発明の化合物を２つ以上を収納している。もう１つの実施態様では、該キットは、本発明の化合物そしてレチン−Ａ、アロエ、酸化防止剤、エッセンシャルオイル、グリセリン、カモミール、グリコール酸、キンセンカ、アンズ、アボガド、アスコルビン酸、抗癌剤、過酸化ベンゾイル、アルファブロッカー、抗−アンドロゲン、非ペプチドホルモン、抗生物質などを含む（ただしこれらに制限されるわけではない）もう１つの脂質媒介化合物を含んでいる。
【０１５９】
本発明の化合物は、好ましくは、ヒトにおける使用に先立ち、所望の治療上又は予防上の活性について、インビトロ及びインビボで検定される。例えば、本発明の特定の組成物又は本発明の組成物の組合せの投与が５α−レダクターゼのレベルを阻害するために好ましいか否かを決定するのにインビトロ検定を使用することができる。本発明の組成物は同様に、動物モデル系を用いて有効かつ安全であることを実証することもできる。
【０１６０】
その他の方法が当業者にとって既知のものとなると思われ、これらは本発明の範囲内に入る。
【０１６１】
６．９ 組合せ療法
本発明の一部の実施態様においては、本発明の組成物は、少なくとも１つのその他の治療薬との組合せ療法において使用可能である。本発明の組成物と該治療薬は、付加的に又はより好ましくは相乗的に作用することができる。好ましい実施態様においては、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド又はリボザイムは、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド又はリボザイムと同じ組成物の一部でもあり得るし又異なる組成物でもあり得るもう１つの治療薬の投与と同時に投与される。もう１つの実施態様においては、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド又はリボザイムを含む組成物は、もう１つの治療薬の投与に先立って又はその後に投与される。本発明の組成物が治療上有用である障害の多くが慢性障害であることから、１つの実施態様において組合せ療法には、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド又はリボザイムを含む組成物及びもう１つの治療薬を含む組成物の投与を交互に行なうこと（例えば特定の薬物に付随する毒性を最小限にするため）が関与する。各薬物又は治療薬の投与の長さは例えば、一ヵ月、三ヵ月、六ヶ月又は一年であり得る。或る実施態様においては、本発明の組成物が、毒性を含む（ただしこれらに制限されるわけではない）不利な副作用を生成する潜在的可能性のあるもう１つの治療薬と同時に投与される場合、該治療薬は、不利な副作用が惹起される閾値より低くなる用量で投与されるのが有利であり得る。
【０１６２】
本組成物は、抗真菌薬と共に投与され得る。本発明の組成物と組合せて使用するための抗真菌薬（ａｎｔｉｇｕｎｇａｌｓ）としてはアンフォＢ、クロトリマゾール、フルコナゾール、フルシトシン、イタラコナゾール、ケトコナゾール、ナイスタチン、テリビナフィン、ブテナフィン、シクロピロックス、エンコナゾール、ナフチフィン、ミコナゾール、オキシコナゾール及びトルナフタートが含まれるがこれらに制限されるわけではない。
【０１６３】
本組成物は、Ｈ¹受容体拮抗薬と共に投与することもできる。本発明の組成物と組合せて使用するためのＨ¹受容体拮抗薬にはジフェニンヒドラミン、ピリラミン、プロメタジン、クロルフェニラミン、クロルシクリジン、ロラタジン、デスカルボエトキシロラチジン、フェニラミン、トリペレナミン及びシクリジンが含まれるがこれらに制限されるわけではない。
【０１６４】
本組成物は、レチノイドのビタミンＡファミリー由来の化合物と共に投与することもできる。本発明の組成物と組合せて使用するためのレチノイドにはレチノール、オール−トランス−レチノール、オール−トランス−１４−ヒドロキシレトロレチノール、オール−トランス−レチナール、オール−トランス−レチノイン酸、オール−トランス−３，４−ジデヒドロレチノイン酸、９−シス−レチノイン酸、１１−シス−レチナール、１３−シス−レチナール及び１３−シス−レチノイン酸が含まれるがこれらに制限されるわけではない。
【０１６５】
本組成物は、抗肥満薬と共に投与することもできる。本発明の化合物と組合わせて使用するための抗肥満薬にはベータ−アドレナリン受容体アゴニスト、好ましくはベータ−３受容体アゴニスト、フェンフルラミン、デクスフェンフルラミン、シブトラミン、ブプロピオン、フクオキセチン、及びフェンテルミンが含まれるがこれらに制限されるわけではない。
【０１６６】
本組成物は同様にホルモンと共に投与することもできる。本発明の化合物と組合わせて使用するためのホルモンとしては、甲状腺ホルモン、エストロゲン及びインシュリンが含まれるがこれらに制限されるわけではない。好ましいインシュリンには、注射用インシュリン、経皮用インシュリン、吸入用インシュリン又はそれらの任意の組合せが含まれるがこれらに制限されるわけではない。インシュリンの代用として、インシュリン誘導体、分泌促進薬、増感体又は模倣薬を使用することができる。本発明の化合物と組合わせて使用するためのインシュリン分泌促進薬にはフォルスコリン、ジブトリルｃＡＭＰ又はイソブチルメチルキサンチン（ＩＢＭＸ）が含まれるがこれらに制限されるわけではない。
【０１６７】
本組成物は同様にホスホジエステラーゼ−５−阻害物質と共に投与することもできる。本発明の化合物と組合わせて使用するためのホスホジエステラーゼ−５阻害物質薬物にはシルデナフィル、ヴァルデナフィル及びタダラフィルが含まれるがこれらに制限されるわけではない。
【０１６８】
本組成物は抗生物質製剤と共に投与することができる。本発明の化合物と組合わせて使用するための抗生物質製剤にはアミノグリコシド、ストレプトマイシン、ネオマイシン、アナマイシン、アミカシン、ゲンタマイシン、トブラマイシン、ストレプトマイシンＢ、ジヒドロストレプトマイシン、スペクチノマイシン、ペニシリン、アンピシリン、ヘタシリン、アモキシシリン、カルベニシリン、セファロスポリン、セファロリジン、セファロチンナトリウム、セファログリシンジヒドラテム、セファレキシン一水和物、テトラサイクリン、テトラサイクリンヒドロクロリド、オキシテトラサイクリンヒドロクロリド、クロロテトラサイクリンヒドロクロリド、ドキソサイクリン一水和物、メタシジンヒドロクロリド、７−クロロ−６−ジメチルテトラサイクリン、エリタマイシン、スルホンアミド、カルボマイシン、オレアノドマイシン、トロレアノドマイシン、ポリミキシン、Ｂコリスチン及びクロラムフェニコールが含まれるがこれらに制限されるわけではない。
【０１６９】
本組成物は、抗癌剤と共に投与することもできる。本発明の化合物と組合せて使用するための抗癌薬には、メトトレキセート、タキソール、メルカプトプリン、チオグアニン、ヒドロキシ尿素、シタラビン、シクロホスファミド、イフォスファミド、ニトロソウレア、シスプラチン、カルボプラチン、マイトマイシン、ダカルバジン、プロカルビジン、エトポシド、カンパテシン、ブレオマイシン、ドキソルビシン、イダルビシン、タウノルビシン、ダクチノマイシン、プリカマイシン、ミトキサントロン、アスパラギナーゼ、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、パクリタキセル及びドセタキセルが含まれるがこれらに制限されるわけではない。
【０１７０】
本組成物は、局所的ステロイドと共に投与することもできる。本発明の化合物と組合わせて使用するための局所的ステロイドにはメチルプレドニゾロン及びプレドニゾンなどのコルチコステロイド（ただしこれらに制限されるわけではない）及び３−フェナントリジノン及び１７−Ｎ，Ｎ−ジエチルカルバモイル−４−メチル−４−アザ−５−アンドロスタン−３−オン（例えば、４−ＭＡ）などの（ただしこれらに制限されるわけではない）改質ステロイドが含まれる。
【０１７１】
本組成物は、収斂薬と共に投与することもできる。本発明の化合物と組合わせて使用するための収斂薬にはマンサク、酢酸アルミニウム、硫酸アルミニウム、酸化亜鉛、酢酸亜鉛、重炭酸ナトリウム及びカラミンが含まれるがこれらに制限されるわけではない。
【０１７２】
本組成物は、ＨＳ５αＲ１型の酵素活性を阻害する第２の作用物質と合わせて投与することもできる。かかる作用物質は、テストステロンからジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）の酵素的変換を阻害することから、組成物へのその内含により、ＤＨＴの局所的濃度を低下させるための第２の機序が提供される。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ｍＲＮＡレベルでのさらなるＨＳ５αＲ産生を阻害するのに役立ち、一方酵素阻害物質は、残りのＨＳ５αＲ酵素の活性を阻害するのに役立つ。
【０１７３】
本組成物は同様に、皮膚の毛穴を塞ぎ座瘡細菌の生長を促進する環境を作り上げる皮脂物質の形成を阻害する第２の作用物質と共に投与することもできる。１つの作用物質例としては、皮脂腺内の皮脂細胞の増殖を予防することによって機能すると考えられるレチン−Ａ（レチノイン酸、トレチノイン）がある。皮脂細胞は、成熟するにつれて皮脂を蓄積させ、皮脂導管に向かって移動し、ここでそれらは破断し皮脂と細胞破片を毛嚢脂腺流路内に放出する。これらの廃棄物は次に栓を形成する（ダウニング（Ｄｏｗｎｉｎｇ）ら、１９８２年）。毛穴が閉塞されなくなると、皮脂は自由に流れる。これら２つの作用物質を組合わせることで、皮膚の毛穴を開いた状態に保ち皮脂の流れを低減させ皮膚の条件を改変してそれらが細菌の成長及び感染にとってさほど有利でなくなるようにする組成物が生み出される。毛穴内の細菌は皮脂を遊離酸に変換できこれが炎症を開始させることから、Ｐ．ａｃｎｅｓレベルの低減は結果として座瘡及び炎症を低減させることになる。
【０１７４】
本組成物は、ミノキソジルを含む（ただしこれらに制限されるわけではない）毛髪再成長を促進する作用物質と共に投与することもできる。
【０１７５】
さらなる記述はなくとも、当業者であれば、以上の説明及び以下の実施例を用いて本発明の化合物を製造、利用しかつ請求対象の方法を実践することができると考えられる。従って以下の作業例は、本発明の好ましい実施態様を特定的に指摘するものであり、開示の残りの部分をいかなる形であれ制限するものとしてみなされるべきものではない。
【０１７６】
７．標的遺伝子及び標的配列の例
１つの実施態様に従うと、本発明は、酵素５α−レダクターゼ１型及び２型の発現又はアンドロゲン受容体自体と干渉する本発明のオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ及びリボザイムを用いて障害を治療又は予防する方法に向けられている。適切なオリゴヌクレオチドには、アンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ、リボザイム、第３ストランドオリゴヌクレオチド及び３重鎖オリゴヌクレオチドが含まれている。適切なオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ及びリボザイムがアンチセンスオリゴヌクレオチド、ｓｉＲＮＡ又はリボザイムであることが好ましい。
【０１７７】
本発明の１実施例に従うと、ヒトステロイド５α−レダクターゼについてコードするＤＮＡ上の標的配列又はそこから転写されたｍＲＮＡに対して又は該ｍＲＮＡについての転写開始部位からすぐ上流側にある配列に対して相補的である本発明のオリゴヌクレオチド又はリボザイムの投与によってヒトステロイド５α−レダクターゼ酵素の発現を予防するか又はこれと干渉することによって、皮膚の炎症、皮脂分泌過剰に関係する障害、ステアトーマ、嚢腫性座瘡、過剰ケラチン産生、面皰、丘疹、稗粒腫、脂漏性皮膚炎、脂漏性湿疹、乳児脂漏性湿疹、脂漏性角化症、酒さ、口囲皮膚炎、皮脂嚢胞、尋常性座瘡、油性肌、脂漏性いぼ、老人性いぼ、基底細胞乳頭腫、多毛症、黒色丘疹性皮膚症、良性前立腺肥大、前立腺癌、尿失禁、男性ホルモン性脱毛症及び男性型禿頭症を治療し予防する方法が提供されている。投与されるオリゴヌクレオチドは、アンチセンスオリゴヌクレオチド、第３ストランドオリゴマ−又は３重鎖オリゴマ−対であり得る。アンチセンスオリゴマは、標的遺伝子から転写されたＲＮＡの配列に対して、又は、１本鎖ＤＮＡ標的配列に対して、又は２重鎖内に収納された単一のＲＮＡ又はＤＮＡストランドに対し相補的である。第３ストランドオリゴヌクレオチドは、２本鎖核酸の１配列と水素結合しそれと３重らせん複合体を形成する能力をもつような形で選択された塩基配列を有する。３重鎖オリゴマ−対の第１及び第２のオリゴマは、標的遺伝子又はその転写産物のターゲティングされた１本鎖核酸配列に対して又は２重鎖の１本鎖に対して相補的でかつそれらと水素結合する能力をもちかつ１本鎖核酸と共に３重らせん複合体を形成するような形で選択された配列を有する。
【０１７８】
標的遺伝子は酵素５−アルファ−レダクターゼ１型及び２型をコードする遺伝子から選択され、その遺伝子の転写開始部位からすぐ上流側に標的配列を内含するものとみなされる。好ましくは標的配列は５−アルファレダクターゼ遺伝子の−５００から＋２０（転写開始部位との関係において）までの配列を含むことになる。より好ましくは、適切な配列は５−アルファレダクターゼ遺伝子の−１００から＋２０まで（転写開始部位との関係において）の部域内の標的配列を含むことになる。
【０１７９】
約８〜１００ヌクレオチド、より好ましくは約１２〜約４０ヌクレオチド、そして最も好ましくは約１５〜約２５ヌクレオチドの適切な長さのオリゴマが、部分的又は全体的に標的に対しハイブリダイズされた時点でこれらの部位に隣接するか又はこれらの部位を網羅するべく選択される。標的配列がｍＲＮＡである場合の好ましい部位は、５−アルファレダクターゼ遺伝子内において、５’−非翻訳領域、（好ましくはＡＵＧ開始コドンから下流側に最高約２０ヌクレオチドのところまでの）ＡＵＧ開始コドンのわずかに下流側にある領域を含む翻訳開始領域、スプライスアクセプタ、スプライスドナー及び３’非翻訳領域を内含する。
【０１８０】
かくして、本発明の好ましい１態様に従うと、５−アルファ−レダクターゼ及びアンドロゲン受容体について以上に含まれるヌクレオチド位により定義される通り、部分的又は全体的にこれらの部位とハイブリダイズしかつそれらを網羅するか又はこれらの部位にすぐ隣接する部位とハイブリダイズする配列を有するように、好ましくは約８〜４０ヌクレオシド、そしてより好ましくは約１２〜約２３ヌクレオシド、特に約１５〜約２５ヌクレオシドという適切な長さの本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドが選択される。
【０１８１】
アンチセンスオリゴヌクレオチドが使用される場合、オリゴヌクレオチドの配列は、ターゲティングされた領域に対しハイブリダイズできるようにターゲティングされた領域の配列の逆相補体である。
【０１８２】
第３ストランドオリゴヌクレオチドが使用される場合、該オリゴヌクレオチドは、２本鎖核酸標的と配列特異的水素結合相互作用を形成するように選択される。
【０１８３】
３重鎖オリゴマ対が使用される場合、第１及び第２のオリゴマは、１本鎖核酸と配列特異的水素結合相互作用を形成し、共に３重らせん構造で形成するように選択される。
【０１８４】
本発明の理解を助ける目的で、一連の実験の結果を記述する以下の実施例が含まれている。この発明に関する以下の実施例は、当然のことながら本発明を特異的に制限するものとしてみなされるべきではなく、当業者の視野の中に入る現在既知の又は将来開発される本発明の変形形態は、以上で請求されている本発明の範囲内に入るものとみなされる。
【実施例】
【０１８５】
８．例示的な実施例
８．１ 実施例１： アンチセンスオリゴヌクレオチドの調製
ヒトステロイド５α−レダクターゼ１型及び２型ｍＲＮＡ転写物（それぞれ配列番号１及び配列番号２８）に含まれる特異的なヌクレオチド配列に対し実質的に相補的な塩基配列をもつ一連のオリゴヌクレオチドは、以下のように調製される。当該技術分野において実践されている標準的技術を用いて、自動化された固相ＤＮＡ合成装置上でアンチセンスオリゴヌクレオチドが合成される。対応するホスホロチオアート・オリゴデオキシリボヌクレオチドは、標準的手順を用いて合成される（アイヤー（Ｉｙｅｒ）ら、１９９０年）。ヒトステロイド５α−レダクターゼ１型生合成を阻害するように設計されているオリゴヌクレオチドの配列は表３に列挙されており、ヒトステロイド５α−レダクターゼ２型生合成を阻害するように設計されているオリゴヌクレオチドの配列は表４中に列挙されている。本発明のオリゴヌクレオチドは、同様に溶液相合成又は逆転写酵素技術によっても調製可能である。オリゴヌクレオチドは同様に例えば遺伝子工学技術又はその他の合成方法によっても調製可能である。
【０１８６】
【表３】

【０１８７】
【表４】

【０１８８】
８．２ 実施例２： アンチセンスオリゴヌクレオチドを用いた治療の効果
ステロイド５α−レダクターゼ１型の発現に対するアンチセンスオリゴヌクレオチドの効果を判定するために、ヒト生殖器皮膚線維芽細胞系Ｈｓ６８（ＣＲＬ１６３５、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ、Ｍａｎａｓｓａｓ、バージニア州）といった酵素を正常に発現する培養細胞か又は所望のステロイド５α−レダクターゼｃＤＮＡをトランスフェクトされた培養ヒト前立腺細胞又は細胞系のいずれかを用いて酵素活性を測定する。この目的のための適切な細胞には、サルＣＯＳ細胞及びヒト胎児性腎２９３細胞（ＣＲＬ１５７３）が含まれるが、これらに制限されるわけではない。ヒトステロイド５α−レダクターゼ１型ｃＤＮＡを含む発現プラスミドについては、以前に記述されている（アンダーソン及びラッセル、１９９０年）。サルＣＯＳ細胞（ＣＲＬ１６５１）を生育し、ＤＥＡＥデキストランプロトコルを用いてトランスフェクトする（エッサー（Ｅｓｓｅｒ）ら、１９８８年）。細胞を、Ｏ₂９５％、ＣＯ₂５％の雰囲気で３７℃に維持し、前述の方法に従ってひろげる（ジェンキンスら、１９９２年；シグペン及びラッセル、１９９２年）。
【０１８９】
ステロイド５α−レダクターゼを構成的に発現する細胞内でオリゴヌクレオチドを０．００１〜１０．０μＭの濃度で培地に添加する。一過性トランスフェクションアッセイにおいて、オリゴヌクレオチドをステロイド５α−レダクターゼｃＤＮＡでコトランスフェクトするか又はトランスフェクションの後０．００１〜１０．０μＭの濃度で培地に添加する。細胞をマルチウェル組織培養プレートに播種する。特定のアッセイに使用するウェルのサイズは、既定の細胞系により発現されるステロイド５α−レダクターゼのレベルによって決定される。
【０１９０】
基質は、無水エタノール中に未標識テストステロン（シグマケミカル（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．）、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ミズーリ州）を溶解し、その後〔７−³Ｈ（Ｎ）〕−テストステロン（２３．３Ｃｉ／ｍｍｏｌ）又は〔¹⁴Ｃ〕−テストステロン（５０ｍＣｉ／ｍｍｏｌ）（ニューイングランドニュークリア（Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｎｕｃｌｅａｒ）、Ｂｏｓｔｏｎ、マサチューセッツ州）を添加することにより調製される。溶媒は、窒素の流れの下で蒸発させ、ステロイドが適当な培地中で再構築される。
【０１９１】
試料ウェル中の培地を吸引し、放射性標識済み基質を含む新鮮な培地と交換する。培地と基質を含むが細胞を含まないさらに３つのウェルも、該基質の非酵素的代謝を説明する目的で含み入れる。その後プレートをインキュベータに戻し、該細胞系が発現するステロイド５α−レダクターゼのレベルに応じた長さの時間インキュベートする。
【０１９２】
インキュベーションの最後に、培地を収集し、未標識キャリアステロイド（エストリオール、エストラジオール、エストロン、５α−アンドロスタン−３ａ，１７β−ジオール、５α−アンドロスタン−３β，１７β−ジオール、４−アンドロステン−３，１７−ジオン、５α−アンドロスタン−３，１７−ジオン、テストステロン及び５α−ジヒドロテストステロン（ステロイド（Ｓｔｅｒａｌｏｉｄｓ、Ｉｎｃ．）、Ｗｉｌｔｏｎ、ニューハンプシャー州）の各々を４０〜２５０μｇずつ添加したトルエン−エタノール（９：１）が５ｍｌ入った抽出管へ移す。放射性標識されたステロイドを検出するために用いられる方法に応じて、抽出溶媒は１，０００及び１０，０００ｄｐｍの〔４−¹⁴Ｃ〕−ジヒドロテストステロン（ステロイド５０〜６０ｍＣｉ／ｍｍｏｌ）及び〔４−¹⁴Ｃ〕−テストステロン〔５０ｍＣｉ／ｍｍｏｌ〕（ニューイングランドニュークリア、Ｂｏｓｔｏｎ、マサチューセッツ州）をそれぞれ含んでいてもいなくてもよい。基質として〔７−³Ｈ（Ｎ）〕−テストステロンを利用するアッセイにおいて、手順上の損失を定量するべく回収標準として〔¹⁴Ｃ〕−ステロイドが含み入れられる。発泡を防ぐための抽出管に少量のＮａＣｌも添加する。試料を約３０秒間ボルテックスし、次に５００×ｇで１０分間遠心する。有機相を収集し、溶媒を蒸発させる。その後ステロイドをジクロロメタン−メタノール（９：１）で再構築させ、薄層クロマトグラフィにより分析する。
【０１９３】
シリカゲル６０Ｆ₂₅₄、厚み０．２５ｍｍの薄層クロマトグラフィプレート（ＥＭサイエンス（ＥＭ Ｓｃｉｅｎｃｅ）、Ｃｉｎｃｉｎｎａｔｉ、オハイオ州）に、抽出試料を適用する。クロロホルム：酢酸エチル（３：１、マリンクロッド（Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ Ｉｎｃ．）、Ｐａｒｉｓ、ケンタッキー州）の溶媒系内でプレートを展開する。溶媒先端がプレートの上面から２．０ｃｍ以内に移動するまで、プレートを展開する。展開槽から取り出した後、プレートを風乾させる。その後、プレートを２５４ｎｍのＵＶ光の下で検分し、可視スポットをマークする。その後プレートにプリムリンを噴霧し（ライト（Ｗｒｉｇｈｔ）、１９７１年）の方法に従ってアセトン−水（４：１）中０．００１％）、これにより３６５ｎｍのＵＶ光の下で付加的なステロイドの同定が可能となる。真空ラインに取付けられたグラスウールの栓付きパスツールピペットを用いてプレートからスポットを剥ぎ取る。０．２ｍｌのジクロロメタンの添加とそれに続く２．０ｍｌのメタノールの２回の洗浄により、シンチレーションバイアル内に直接ステロイドを溶離させる。有機溶媒を蒸発させ、１０．０ｍｌのシンチレーション液（レディーオーガニック（Ｒｅａｄｙ Ｏｒｇａｎｉｃ）、ベックマン・インスツルメント（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｉｎｃ．）、Ｆｕｌｌｅｒｔｏｎ、カリフォルニア州）を添加する。試料を液体シンチレーション分光分析によって分析する。基質として〔¹⁴Ｃ〕テストステロンを利用するアッセイにおいて、ホスホイメージャ（Ｐｈｏｓｐｈｏｒ Ｉｍａｇｅｒ）イメージングシステム（モレキュラーダイナミックス（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｙｎａｍｉｃｓ，Ｉｎｃ．）、Ｓａｎ Ｊｏｓｅ、カリフォルニア州）を用いて直接ステロイド代謝を分析する。
【０１９４】
抽出用媒質の除去後、細胞をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ、ｐＨ７．４）で洗浄し、次にトリプシン−ＥＤＴＡ溶液（０．０２５％のトリプシン、０．２６５ｍＭのＥＤＴＡ）に曝露することによりこれを収獲する。細胞を収集し１４００×ｇで５分間遠心分離する。上清を傾潟し、細胞をＰＢＳ中で再懸濁させる。細胞懸濁液のアリコートをコールターカウンター（Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｃｏｕｎｔｅｒ）ＺＭ型（コールターエレクトロニクス（Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ、Ｌｔｄ．）、Ｌｕｔｏｎ Ｂｅｄｓ、英国）を用いて計数する。残った細胞を超音波処理し、ブラッドフォードの方法（ブラッドフォード（Ｂｒａｄｆｏｒｄ）、１９７６年）に従ってタンパク質を定量する。手順上の損失について補正を行ない、細胞１０⁵個あたりのピコモル又はタンパク質１ｍｇあたりのピコモル単位で、ステロイド濃度を基準にして阻害パーセントとしてデータを表す。
【０１９５】
８．３： 実施例３：皮脂分泌に対する効果を査定するためのアンチセンスオリゴヌクレオチドによる被験者の治療
４週間にわたり１日２回局所的にヒトの被験者を治療し、その皮脂産生レベルを測定した。（短期間にわたり産生された皮脂の量を定量する）セブテープ（ＳｅｂｕＴａｐｅ）を用いることにより、皮脂産生の基底レベルを決定し、その後、該被験者の額を、１０μＭの濃度でアンチセンス阻害物質（配列番号５）を伴うビヒクル又はビヒクル単独のいずれかを含有する消毒綿でふいた。５人の被験者はビヒクル単独の処置を受け、５人は同じビヒクル中にアンチセンスオリゴヌクレオチドを含有する組成物の処置を受けた。アンチセンス阻害が再現可能となるように、該研究を反復した。結果は、両方の研究においてアンチセンス化合物が有効で、４週間後に基線皮脂産生に比べ約３７％及び約２７％の減少を生み出すということを示した。
【０１９６】
８．４ 実施例４：皮脂分泌に対する効果を査定するためのアンチセンスオリゴヌクレオチドによる被験者の治療
各５人の被験者からなる３つのグループを抗ヒトステロイド５α−レダクターゼ（抗−ＨＳ５αＲ）アンチセンスオリゴヌクレオチド（１μＭＤＰＣ１５２８）又はミス−センス又はスクランブルアンチセンスオリゴヌクレオチドを含有する局所製剤又は対照製剤で４週間治療した。治療に先立ち、セブメーター（Ｓｅｂｕ Ｍａｔｅｒ）ＳＭ８１０（カレッジアンドカザカエレクトロニクス（Ｃｏｕｒａｇｅ ＆ Ｋｈａｚａｋａ Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ））を用いて、各被験者の皮脂分泌速度をモニターした。セブメーターの読取りのために、被験者を環境制御された部屋（温度及び湿度）の中に３０分間入れた。まず最初にその額をふいて、既存の皮脂を除去し、新たに分泌された皮脂の量を測定した。被験者はその額に４週間毎日２回３つの溶液のうちの１つを約０．５ｍｌ塗布し、その皮脂分泌速度を次にセブメーターで再度測定した。ＤＰＣ１５２８は、皮脂産生の２５％の減少を生み出し、一方スクランブル配列を伴うミスセンス対照は、皮脂産生を改変しなかった（図１参照）。ｎ＝５で、ＴＴｅｓｔ（両側検定）を用いて有意性を判定した。
【０１９７】
８．５ 実施例５： 皮脂分泌に対する効果を査定するためのアンチセンスオリゴヌクレオチドによる被験者の治療
各５人の被験者からなる３つのグループを用いて、１μＭ（研究１及び２）又は５μＭ（研究３）の抗−ＨＳ５αＲアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＤＰＣ１５２８）を含有する製剤での１日２回の治療が皮脂分泌速度に対する効果を評価した。治療に先立ち、セブメーターＳＭ８１０（カレッジアンドカザカエレクトロニクス）を用いて、各被験者の皮脂分泌速度をモニターした。セブメーターの読取りのために、被験者を環境制御された部屋（温度及び湿度）の中に３０分間入れた。まず最初にその額をふいて、既存の皮脂を除去し、新たに分泌された皮脂の量を測定した。被験者はその額に４週間にわたり毎日２回テスト製剤が約０．５ｍｌ塗布され、その皮脂分泌速度を次にセブメーターで再度測定した。ＤＰＣ１５２８は、皮脂産生の２４〜２７％の低下を生じ、５μＭでは３３％の低下を生じた（図２参照）。
【０１９８】
８．６ 実施例６： 皮脂分泌に対する効果を査定するためのアンチセンスオリゴヌクレオチドによる被験者の治療
１μＭのＤＰＣ１５２８での毎日２回の治療２ラウンドがもたらす効果を評価するために、５人の被験者を使用した。治療に先立ち、セブメーターＳＭ８１０（カレッジアンドカザカエレクトロニクス）を用いて、各被験者の皮脂分泌速度をモニターした。セブメーターの読取りのために、被験者を環境制御された部屋（温度及び湿度）の中に３０分間入れた。まず最初にその額をふいて、既存の皮脂を除去し、その後新たに分泌された皮脂の量を測定した。被験者はその額に４週間にわたり毎日２回ＤＰＣ１５２８溶液を約０．５ｍｌ塗布し、次にその皮脂分泌速度をセブメーターで再度測定した。１μＭのＤＰＣ１５２８は、最初の４週間後に皮脂分泌速度の２４％の低下をもたらした。皮脂分泌は、治療の中止後２週間でその治療前レベルに戻り、２回目の治療周期は、４週間の治療後に２０％の皮脂分泌速度の低下をもたらした（図３参照）。
【０１９９】
８．７ 実施例７： 脱毛症に対する効果を査定するためのアンチセンスオリゴヌクレオチドによる被験者の治療
１μＭのＤＰＣ１６７６での毎日２回の治療の２ラウンドの効果を評価するために５人の被験者を使用する。治療に先立ち、各被験者の脱毛症度を、手で計数して又は顕微鏡写真内での計数を通して毛嚢の数、長さ及び密度をモニターすることによって測定する。被験者はその頭皮に、４週間にわたり１日２回ＤＰＣ１６７６溶液を約０．５ｍｌ塗布し、その後、マニュアルでの計数によって又は顕微鏡写真内での計数を通して毛嚢の数、長さ及び密度により毛密度が再度モニターされ、これは、毛髪喪失に対するＤＰＣ１６７６の投与による影響が存在することを示す。
【０２００】
８．８ 実施例８： 局所送達ビヒクルの査定
本発明の局所送達ビヒクルを評価するため、局所施用後に角質層を通してのオリゴヌクレオチドの浸透を増強させるビヒクルの能力を評価するべくヒトの死体の皮膚外植片を用いて研究を実施した。この研究のためには、テスト化合物として１５のヌクレオチドからなるホスホロチオアートオリゴヌクレオチドをテスト化合物として選択した。標準ホスホン酸水素化学を用いた合成の後、各々の糖間結合を各結合において放射性硫黄分子を含有するオリゴヌクレオチドを生ずる元素〔³⁵Ｓ₈〕と反応させた。このオリゴヌクレオチドを用いて、皮膚のさまざまな層内のオリゴヌクレオチドの量を定量し、さまざまな層内へのその浸透を査定することができる。放射性標識が放射活性の代謝性崩壊及び放出に由来するか否かも同様に判定可能である。〔³⁵Ｓ〕−標識されたオリゴヌクレオチドの原液を、７μＭの濃度でリポフェクチンＴＭ（ＬＴＩ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、メリーランド州）中で調製した。リポフェクチンは、カチオン脂質Ｎ−［１−（２，３−ジオレイオキシル）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎトリメチルアンモニウム（ｔｒｉｅｔｈｌｙａｍｍｏｎｉｕｍ）クロリド（ＤＯＴＭＡ）及び中性脂質ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）の１：１（ｗ／ｗ）の混合物で構成されている。正電荷及び中性脂質が、核酸と錯化し細胞内への核酸の送達を容易にするリポソームを形成する。リポフェクチン混合物に加えて、１００％となるように、水中の２０％のエチルアルコール、２％のプロピレングリコール、０．５％のジメチルイソソルビド、１％のＬａｕｒｅｔｈ−４、０．１５％のＥＤＴＡ二ナトリウム、０．０３％のパンテチンの中で類似の濃度（７μＭ）を調製した。
【０２０１】
６２才の白人男性からの低温保存されたヒトの頭皮をキーストンスキンバンク（Ｋｅｙｓｔｏｎｅ Ｓｋｉｎ Ｂａｎｋ）臓器獲得センターから入手した。このドナーについての血清検査は陰性であった。ヒトの皮膚を切り取り、毛を剃り、脂肪を皮膚表面から除去した。その後、番号１１の穿孔具（直径９ｍｍ又は６３．６ｍｍ²の曝露面積を提供する）でヒトの皮膚から全層ディスクを作り、氷冷ハンクの平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ）の中に保存した。皮膚試料をブロノー（Ｂｒｏｎａｕｇｈ）貫流拡散セルの中に表皮表面を上部チャンバに向けて入れた。各々の皮膚試料のバリア機能を、２０分にわたりトリチウム化水の浸透を測定することによって判定した。各試料は、テスト化合物の適用に先立って適切なバリア機能を示した。
【０２０２】
２４時間上述のビヒクルの１つの中の放射性標識されたオリゴヌクレオチドを塗布することによって、実験を実施した（Ｎ＝６）。充分なバリア機能をもつ皮膚試料を単離した後、全ての皮膚試料の表皮表面にテスト化合物（７μＭのオリゴヌクレオチド５０マイクロリットル）を添加した。インキュベーションの最後に、各皮膚表面を複数の乾燥した消毒綿で拭い、洗浄剤（１％）で２回洗浄した。次に皮膚を各々のブロノーセルから除去し、乾燥ぶきした。消毒綿及び皮膚表面から収集した溶液を１ＮのＮａＯＨ中に少なくとも２４時間溶解させてから放射定量法を行なった。洗浄後、浸透実験内で使用された皮膚試料を取り出し、成分層へと分離させた。完全なヒトの皮膚の角質層をテープ剥離により除去し、表皮と真皮をブロノー及びメイバック（Ｍａｉｂａｃｈ）（１９９１年）に従って熱処理により分離した。ヒトの皮膚の分離した層及び皮膚試料全体を少なくとも２４時間１ＮのＮａＯＨ中で消化させ、その後試料に対してシンチレーション液を添加し、少なくとも２４時間室温で暗所に置いて化学ルミネセンスを崩壊させた。これらの画分（消毒綿、洗液、皮膚層、及び受容体流体収集物からの残りの供試体）の全てを液体シンチレーション分光分析により評価して、各画分内の放射活性パーセンテージ及び皮膚表面を通して吸収された化学物質の量（合計回収用量のパーセンテージとして表現されたもの）を決定した。全ての皮膚層から回収した化学物質の量に対し受容体流体の合計放射活性を付加することによって、合計吸収量を計算した。システムから回収した全塗布用量で合計吸収値を除することによって表皮及び真皮内に吸収されたパーセンテージを計算した。結果は、リポフェクチン内のオリゴヌクレオチドが角質層を横断する能力を実際わずかにしか示さなかったのに対し、７２時間後塗布されたオリゴヌクレオチドの１３％が表皮内に浸透し１１％超が真皮に達した（下表５参照）ことから、ジメチルイソソルビドビヒクルが結果としてオリゴヌクレオチドの浸透を増強させたということを示していた。
【０２０３】
【表５】

【０２０４】
８．９ 実施例９：送達ビヒクル中のジメチルイソソルビドの効果
ジメチルイソソルビド含有ビヒクル中のオリゴヌクレオチドの一回の塗布が表皮内への浸透の増加を示したことから、反復的塗布での研究を実施して局所送達ビヒクル中でのその使用をさらに評価した。皮膚浸透の増強に対するジメチルイソソルビドビヒクルの複数回投与の効果を特徴づけするため、６０μＭの濃度で水中で〔³⁵Ｓ〕標識されたオリゴヌクレオチドの原液を調製した。最終濃度７μＭのオリゴヌクレオチドを生成するように、３００マイクロリットルの原液オリゴヌクレオチドを、水中の２０％のエチルアルコール、２％のプロピレングリコール、０．５％のジメチルイソソルビド、１％のラウレス（Ｌａｕｒｅｔｈ）−４、０．１５％のＥＤＴＡ二ナトリウム、０．０３％のパンテチンからなる２．４ｍｌのビヒクルと合わせた。皮膚外植片に対する塗布のために用いるべき希釈溶液５０マイクロリットルは、液体シンチレーション計数を介して８３，７５１．６４ｄｐｍを含有することが示された。
【０２０５】
実験は、各々分析のためのディスクＮ＝６でそれぞれ２４、４８及び７２時間で収獲される３アッセイセットとして実施された。上述した同じ個体からの皮膚をバリア機能について特徴づけし、その後持続する実験で使用した。充分なバリア機能をもつ皮膚試料を単離した後、全ての皮膚試料の表皮表面に対してテスト化合物（７μＭのオリゴヌクレオチド５０マイクロリットル）を添加した。受容体流体（４％のアルブミンを含有するハンクの平衡塩類溶液からなる皮膚の下部表面を通して流れる培地）をＴ＝１２時間及び２４時間で収集し、アッセイセット１をそれぞれの分析のため２４時間で収獲した。残りの２セットを水で洗浄して残留テスト組成物を除去し、その後テスト組成物を再び塗布した。受容体流体をＴ＝３６及び４８時間で全ての残りの試料から収集し、アッセイセット２を、それぞれの分析のため４８時間で収獲した。アッセイセット３を水で洗浄して残渣残留テスト組成物を除去し、その後テスト組成物を再度塗布した。受容体流体をＴ＝６０及び７２時間で全ての残りの試料から収集し、アッセイセット３をそれぞれの分析のために７２時間で収獲した。
【０２０６】
インキュベーション期間の終りで、各皮膚表面を複数の乾燥した消毒綿で拭い、洗浄剤（１％）で２回洗浄した。次に皮膚を各々のブロノーセルから除去し、乾燥ぶきした。消毒綿及び皮膚表面から収集した溶液を１ＮのＮａＯＨ中に少なくとも２４時間溶解させてから放射定量法を行なった。洗浄後、浸透実験内で使用された皮膚試料を取り出し、成分層へと分離させた。完全なヒトの皮膚の角質層をテープ剥離により除去し、表皮と真皮をブロノーメイバック（１９９１年）に従って熱処理により分離した。ヒトの皮膚の分離した層及び皮膚試料全体を少なくとも２４時間１ＮのＮａＯＨ中で消化させ、その後試料に対してシンチレーション流体を添加し、少なくとも２４時間室温で暗所に置いて化学ルミネセンスを崩壊させた。これらの画分（消毒綿、洗液、皮膚層、及び受容体流体収集物からの残りの供試体）の全てを液体シンチレーション分光分析により評価して、各画分内の放射活性パーセンテージ及び皮膚表面を通して吸収された化学物質の量（合計回収用量のパーセンテージとして表現されたもの）を決定した。全ての皮膚層から回収した化学物質の量に対し受容体流体の合計放射活性を付加することによって、合計吸収量を計算した。システムから回収した全塗布用量で合計吸収値を除することによって吸収されたパーセンテージを計算した。
【０２０７】
結果（図４）は、時間の増加につれて、角質層を横断するオリゴヌクレオチドの量の増加があり、表皮を飽和させること、そしてこのとき化合物は有意な濃度で真皮層に浸透できることを示した。ヒトの皮膚外植体に対する７２時間の塗布の後、皮膚内のさまざまな層に達する塗布済み化合物のパーセンテージは、角質層まで４．１％、表皮まで１３．９％、そして真皮まで１１．６％であった。化合物の大部分（６８．７％）は外植体内に吸収されず、さまざまな皮膚層の分析に先立ち洗浄ステップにおいて回収された。塗布済み化合物のうち、わずか１．７％だけが皮膚外植体を通って浸透し、支持貫流流体に入った。
【０２０８】
テスト化合物での処理の後、２つの皮膚栓を成分部分に分離し、真皮層をその中に見い出される放射性標識の特性について分析した。試料をプロテアーゼで消化させ、次に当該技術分野において既知の手順に従って核酸をフェノールで抽出し、エタノールを沈殿させた。変性ポリアクリルアミド電気泳動（７Ｍの尿中２０％のポリアクリルアミド）を用いて核酸試料を分析し、４週間の曝露後にオートラジオグラフを撮った。オートラジオグラフィのデンシトメーターによる分析は、真皮から抽出されたオリゴヌクレオチド化合物の大部分が、類似の長さの化合物のラダー及び出発材料と比較した場合に全長であったことを示した。全長であったパーセンテージは、ヒトヌクレアーゼの存在下でのホスホロチオアート修飾済みオリゴヌクレオチドについて予想されるように、２４時間後に約９１％、４８時間後に約８４％そして７２時間後に約７９％であった。かくして、放射性標識の浸透は、角質層下の層内へのオリゴヌクレオチドの浸透を反映している。
【０２０９】
各々の収集間隔についてテスト流入速度を計算し、各２４時間インキュベーション期間について吸収されたパーセンテージの値を計算し、これを使用して表皮及び真皮内に被着した化合物の濃度を計算した（下表６参照）。最終的流入データ（流入についてのｎｇ／ｃｍ²／時単位）を分析して、値が９０％の信頼限界外にある(シェルフラー（Ｓｃｈｅｌｆｌｅｒ）、ＷＣ １９９１年）複数である「外れ値」を決定し、これらを削除した。外れ値として除外されなかった全ての複製の記述統計学（平均及び標準偏差）を次に計算した。結果は、わずかな量の化合物しか貫流内へと横断しないことそしてこの被着が真皮内の量の増大に従って時間依存型であることを示した。
【０２１０】
【表６】

【０２１１】
上述の実験から、角質層を通してのオリゴヌクレオチドの浸透がカチオン性リポソーム製剤、リポフェクチンの使用によって大幅に増強されないことを判定することが可能である。しかしながらジメチルイソソルビド、エチルアルコール、グリセリン、ポリエチレングリコールエステル、プロピレングリコール、パンテチン、亜鉛及びＥＤＴＡ二ナトリウムを含有するビヒクルとオリゴヌクレオチドを組合わせると、角質層を横断する浸透の有意な増加が生成される。このビヒクルを用いて塗布されたオリゴヌクレオチドは、真皮内で約３３０ｎＭの濃度を生成することができた。治療的応用分野で使用される核酸ベースの化合物については、これは、最も忠実なアンチセンス又はリボザイムアプローチについてのＩＣ₅₀が３０のＭ未満であることから、効果を惹起するのに充分な濃度であろう。
【０２１２】
本発明は、以上の実施例を参考にして詳細に記述されてきたが、本発明の精神から逸脱することなくさまざまな変更を加えることが可能であるのは当然である。従って、本発明は上述のクレームによってのみ制限される。本出願中に参考指示された全ての引用特許、特許出願、特許公報及び文献論文は、明示的にその全体が本明細書に参照して援用される。
【図面の簡単な説明】
【０２１３】
【図１】抗ヒトステロイド５α−レダクターゼ１型（抗−ＨＳ５αＲ）アンチセンスオリゴヌクレオチド（１μＭ ＤＰＣ１５２８）又はミスセンス又はスクランブルアンチセンスオリゴヌクレオチド又は対照製剤を含有する局所製剤で４週間、５人の被験者からなるグループを１日２回ずつ治療した試験の結果を示す。アンチセンスオリゴヌクレオチドを含有する製剤は、ミスセンス及びビヒクル対照と比較して皮脂産生の２５％の低下を生じた。
【図２】１μＭ（研究１及び２）又は５μＭ（研究３）抗−ＨＳ５αＲアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＤＰＣ１５２８）を含む製剤で毎日２回ずつ４週間治療した後の皮脂産生の阻害を示す。１μＭのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含有する製剤は、皮脂産生の２４〜２７％の低下をもたらし、５μＭを含有する製剤は３３％の低下を生じた。
【図３】抗−ＨＳ５αＲアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＤＰＣ１５２８）での断続的治療後の皮脂産生の減少を示す。１μＭのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含有する製剤を、各々２週間の介在期間治療無しで、４週間の期間２回にわたり局所的に２回塗布した。アンチセンスオリゴヌクレオチドを含有する製剤は最初の４週間にわたり皮脂産生の２４％の低下を、又次の４週間にわたり２０％の低下を生じた。
【図４】ヒトの皮膚外植体内のジメチルイソソルビドを含有するビヒクルによる〔³⁵Ｓ〕−ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドの送達の増強を示す。ジメチルイソソルビドを含有する処方中の７μＭ濃度のオリゴヌクレオチドで１回、２回又は３回処置されたヒトの皮膚外植体を、皮膚の角質層下層内に輸送される該化合物の能力についてテストした。オリゴヌクレオチド含有化合物を２４時間皮膚に浸透させ、その後浸透を増強させる処方の能力を測定した。
【図５】ＤＰＣ１６７６、ホスホロチオアート修飾済み２１−ヌクレオチドアンチセンス阻害物質によるヒト５−α−レダクターゼＩＩ型を発現するＣＯＳ細胞内でのステロイド５α−レダクターゼＩＩ型の阻害、及び組成は類似であるが線形配列の異なる３つのスクランブル又は非アンチセンスホスホロチオアート修飾済み配列の発現阻害不良を示している。
【図６】２１−マ−・ホスホＤＰＣ１６７６によるヒトステロイド５α−レダクターゼＩＩ型投与応答の投与応答阻害及びＤＰＣ１６７６から誘導されたスクランブル配列であるＤＰＣ１５３３による投与応答の欠如を示している。ＤＰＣ１６７６についてのＩＣ₅₀は、約３ｎＭであり、約１０ｎＭで最大の阻害が見られる。
【図７】ヒトステロイド５α−レダクターゼＩＩ型を標的とするアンチセンスオリゴヌクレオチドＤＰＣ１６７６が、ヒト５ａＲＩＩ型を発現するＣＯＳ細胞に対し１００ｎＭで塗布した場合ビヒクル処置された対照細胞と比較して８０％だけ５α−レダクターゼＩＩ型イソ型の発現を阻害することを示す。スクランブル対照ホスホロチオアートオリゴマ−ＰＤＣ５２６５もＤＰＣ１６７６、ＤＰＣ５２７７に対する逆相補型ホスホロチオアートオリゴヌクレオチドも発現を減少させなかった。しかしながら、ＤＰＣ１６７６及びＤＰＣ５２７７の同時投与は、これらの２つのホスホロチオアートオリゴマ同士の結合を結果としてもたらし、５−α−レダクターゼ型ＩＩについてｍＲＮＡに対し結合するＤＰＣ１６７６の能力を減少させ、ひいては、ＤＰＣ１６７６が単独で投与された場合に標準的に見られるタンパク質の発現阻害を減少させた。このデータは、ＤＰＣ１６７６がアンチセンス機序によりヒトステロイド５−α−レダクターゼＩＩ型の発現を阻害する能力をもつことを示している。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者のヒトステロイド５α−レダクターゼ１型の発現を実質的に阻害する治療上有効な量の少なくとも１つのアンチセンスオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、クラスレート、多形体又はプロドラッグを含有する医薬組成物であって、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、ヒトステロイド５α−レダクターゼ１型と呼称されるタンパク質をコードするヌクレオチド配列の少なくとも一部分と相補的であり、それと特異的にハイブリダイズする、医薬組成物。
【請求項２】
患者のヒトステロイド５α−レダクターゼ２型の発現を実質的に阻害する治療上有効な量の少なくとも１つのアンチセンスオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、クラスレート、多形体又はプロドラッグを含有する医薬組成物であって、前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、ヒトステロイド５α−レダクターゼ２型と呼称されるタンパク質をコードするヌクレオチド配列の少なくとも一部分と相補的であり、それと特異的にハイブリダイズする、医薬組成物。
【請求項３】
薬学的に許容される担体、ビヒクル又は賦形剤をさらに含有する請求項１又は２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
局所、静脈内、経口又は鼻腔内投与に適している、請求項１又は２に記載の医薬組成物。
【請求項５】
投与が局所投与である、請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項６】
皮膚の角質層を通してのアンチセンスオリゴヌクレオチドの浸透を増強させる送達用製剤をさらに含有する請求項１又は２に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記送達用製剤がエチルアルコール、プロピレングリコール、グリセリン、ジメチルイソソルビド、ポリエチレングリコールエステル、ＥＤＴＡ、パンテチン及び二価カチオンを含む、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記送達用製剤が約１５〜約４０％のエチルアルコール；約０．５〜約５．０％のプロピレングリコール；約０．５〜約５．０％のグリセリン；約０．１〜約２．０％のジメチルイソソルビド；約０．１〜約２．０％のポリエチレングリコールエステル；約０．０１〜約０．５％のＥＤＴＡ二ナトリウム；約０．０１〜約０．２％のパンテチン及び約０．０１〜約２％の二価カチオンを含有する、請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記組成物が約１週間の局所投与向けに処方されている、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記組成物がおよそ１日１回の投与向けに処方されている、請求項９に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
皮膚の炎症、皮脂分泌過剰に関係する障害、ステアトーマ、嚢腫性座瘡、過剰ケラチン産生、面皰、丘疹、稗粒腫、脂漏性皮膚炎、ふけ、脂漏性湿疹、乳児脂漏性湿疹、脂漏性角化症、酒さ、口囲皮膚炎、皮脂嚢胞、尋常性座瘡、油性肌、脂漏性いぼ、老人性いぼ、基底細胞乳頭腫、多毛症、黒色丘疹性皮膚症を治療又は予防するのに有用である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
良性前立腺肥大、前立腺癌、尿失禁、男性ホルモン性脱毛症及び男性型禿頭症を治療又は予防する上で有用である、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、ヒトステロイド５α−レダクターゼ１型と呼称されるタンパク質をコードするｍＲＮＡ転写物に特異的にハイブリダイズする、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドがヒトステロイド５α−レダクターゼ１型によりコードされる前記ｍＲＮＡ転写物の翻訳開始部位、５’−非翻訳配列、３’−非翻訳配列、イントロン／エキソンジャンクションのいずれか、又は介在配列に特異的にハイブリダイズする、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが前記ヒトステロイド５α−レダクターゼ１型転写物の５’ｃａｐ部位又は５’ｃａｐ部位に隣接する領域に特異的にハイブリダイズする、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが前記ヒトステロイド５α−レダクターゼ１型ｍＲＮＡ転写物内のコード配列の一部分に特異的にハイブリダイズする、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、ヒトステロイド５α−レダクターゼ２型と呼称されるタンパク質をコードするヌクレオチド配列の少なくとも一部分に相補的であり、それと特異的にハイブリダイズする、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドがヒトステロイド５α−レダクターゼ２型と呼称されるタンパク質をコードするｍＲＮＡ転写物に特異的にハイブリダイズする、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドがヒトステロイド５α−レダクターゼ２型によりコードされる前記ｍＲＮＡ転写物の翻訳開始部位、５’−非翻訳配列、３’−非翻訳配列、イントロン／エキソンジャンクションのいずれか、又は介在配列に特異的にハイブリダイズする、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが前記ヒトステロイド５α−レダクターゼ２型転写物の５’ｃａｐ部位又は５’ｃａｐ部位に隣接する領域に特異的にハイブリダイズする、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが前記ヒトステロイド５α−レダクターゼ２型ｍＲＮＡ転写物内のコード配列の一部分に特異的にハイブリダイズする、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、配列番号１のヌクレオチド１〜７５の相補体、配列番号１のヌクレオチド６２０〜６８２の相補体及び配列番号１のヌクレオチド１１７５〜１２５０の相補体からなる群から選択された少なくとも８個の連続するヌクレオチドの配列を含有する、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが配列番号２、３、４、５、６、７、８、９、１０及び１１からなる群から選択された少なくとも８個の連続するヌクレオチドの配列を含有する、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが配列番号３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５及び４６からなる群から選択された少なくとも８個の連続するヌクレオチドの配列を含有する、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
第２の活性作用物質をさらに含む医薬組成物であって、前記第２の活性作用物質が抗真菌剤、Ｈ¹受容体拮抗薬、レチノイド、抗肥満薬、ホルモン、ホスホジエステラーゼ−５阻害物質、抗生物質、抗癌剤、局所ステロイド又は収斂薬である、請求項１又は２に記載の医薬組成物。
【請求項２６】
テストステロンのジヒドロテストステロンへの変換を阻害することによって治療又は予防できる障害を治療又は予防する方法であって、それを必要とする患者に対し、患者のヒトステロイド５α−レダクターゼ１型の発現を実質的に阻害する治療上有効な量の少なくとも１つのアンチセンスオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、クラスレート、多形体又はプロドラッグを投与することを含有する方法。
【請求項２７】
必要とする患者における、皮膚の炎症、皮脂分泌過剰に関係する障害、ステアトーマ、嚢腫性座瘡、過剰ケラチン産生、面皰、丘疹、稗粒腫、脂漏性皮膚炎、脂漏性湿疹、乳児脂漏性湿疹、脂漏性角化症、酒さ、口囲皮膚炎、皮脂嚢胞、尋常性座瘡、油性肌、脂漏性いぼ、老人性いぼ、基底細胞乳頭腫、多毛症、黒色丘疹性皮膚症、良性前立腺肥大、前立腺癌、尿失禁、男性ホルモン性脱毛症及び男性型禿頭症を治療又は予防する方法において、前記患者に対し、患者のヒトステロイド５α−レダクターゼ１型の発現を実質的に阻害する治療上有効な量の少なくとも１つのアンチセンスオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、クラスレート、多形体又はプロドラッグを投与することを含有する方法。
【請求項２８】
テストステロンのジヒドロテストステロンへの変換を阻害することによって治療又は予防できる障害を治療又は予防する方法であって、それを必要とする患者に対し、患者のヒトステロイド５α−レダクターゼ２型の発現を実質的に阻害する治療上有効な量の少なくとも１つのアンチセンスオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、クラスレート、多形体又はプロドラッグを投与することを含有する方法。
【請求項２９】
必要とする患者において皮膚の炎症、皮脂分泌過剰に関係する障害、ステアトーマ、嚢腫性座瘡、過剰ケラチン産生、面皰、丘疹、稗粒腫、脂漏性皮膚炎、脂漏性湿疹、乳児脂漏性湿疹、脂漏性角化症、酒さ、口囲皮膚炎、皮脂嚢胞、尋常性座瘡、油性肌、脂漏性いぼ、老人性いぼ、基底細胞乳頭腫、多毛症、黒色丘疹性皮膚症、良性前立腺肥大、前立腺癌、尿失禁、男性ホルモン性脱毛症及び男性型禿頭症を治療又は予防する方法であって、前記患者に対し、患者のヒトステロイド５α−レダクターゼ２型の発現を実質的に阻害する治療上有効な量の少なくとも１つのアンチセンスオリゴヌクレオチド又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、クラスレート、多形体又はプロドラッグを投与することを含有する方法。
【請求項３０】
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが翻訳開始部位、前記翻訳開始部位に対する領域５’、前記翻訳開始部位に対する領域３’、前記ｍＲＮＡの前記５’ｃａｐ領域、前記ｍＲＮＡの前記ｃａｐ領域に対する領域５’、前記ｍＲＮＡの前記ｃａｐ領域に対する領域３’及び前記３’非翻訳領域からなる群から選択されている前記ヒトステロイド５α−レダクターゼ１型転写物の領域に結合する、請求項２６、２７、２８又は２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、配列番号１のヌクレオチド１〜７５の相補体、配列番号１のヌクレオチド６２０〜６８２の相補体及び配列番号１のヌクレオチド１１７５〜１２５０の相補体からなる群から選択された少なくとも約８個の連続するヌクレオチドの配列を含む、請求項２６、２７、２８又は２９に記載の方法。
【請求項３２】
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドの長さが約８〜約５０ヌクレオチドである、請求項２６、２７、２８又は２９に記載の方法。
【請求項３３】
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが配列番号２、３、４、５、６、７、８、９、１０及び１１からなる群から選択された少なくとも約８個の連続するヌクレオチドの配列を含む、請求項２６、２７、２８又は２９に記載の方法。
【請求項３４】
前記組成物がさらに、ヒトステロイド５α−レダクターゼ１型の活性を実質的に阻害する第２の分子を含んでなる、請求項２６、２７、２８又は２９に記載の方法。
【請求項３５】
前記組成物が約１週間にわたり皮膚に塗布される請求項２６、２７、２８又は２９に記載の方法。
【請求項３６】
前記組成物が１日約１回皮膚に塗布される、請求項１５に記載の方法。
【請求項３７】
ヒトステロイド５α−レダクターゼ１型の発現を実質的に阻害する少なくとも１つのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含み、さらに角質層を通しての前記アンチセンスオリゴヌクレオチドの浸透を増強するための作用物質を含有する、皮膚の障害を治療又は予防するための皮膚科用組成物。
【請求項３８】
前記浸透を増強する作用物質がエチルアルコール、プロピレングリコール、グリセリン、ジメチルイソソルビド、ポリエチレングリコールエステル、ＥＤＴＡ、パンテチン及び二価カチオンである、請求項３７に記載の皮膚科用組成物。
【請求項３９】
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、配列番号１のヌクレオチド１〜７５の相補体、配列番号１のヌクレオチド６２０〜６８２の相補体及び配列番号１のヌクレオチド１１７５〜１２５０の相補体からなる群から選択された少なくとも８個の連続するヌクレオチドの配列を含む、請求項３８に記載の皮膚科用組成物。
【請求項４０】
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが配列番号２、３、４、５、６、７、８、９、１０及び１１からなる群から選択された少なくとも８個の連続するヌクレオチドの配列を含有する、請求項３８に記載の皮膚科用組成物。
【請求項４１】
前記組成物が皮脂性物質による皮膚の毛穴の閉塞を阻害する第２の作用物質をさらに含有する、請求項３８に記載の皮膚科用組成物。
【請求項４２】
前記第２の分子がレチノイン酸、トレチノイン、又はレチン−Ａである、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
患者のヒトステロイド５α−レダクターゼ１型の発現を実質的に阻害する治療上有効な量の少なくとも１つのリボザイム又はｓｉＲＮＡ又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、クラスレート、多形体又はプロドラッグを含有する医薬組成物。
【請求項４４】
患者のヒトステロイド５α−レダクターゼ２型の発現を実質的に阻害する治療上有効な量の少なくとも１つのリボザイム又はｓｉＲＮＡ又はその薬学的に許容される塩、溶媒和物、水和物、クラスレート、多形体又はプロドラッグを含有する医薬組成物。
【請求項４５】
薬学的に許容される担体、ビヒクル又は賦形剤をさらに含有する請求項４３又は４４に記載の医薬組成物。
【請求項４６】
局所、静脈内、経口又は鼻腔内投与に適している、請求項４３又は４４に記載の医薬組成物。
【請求項４７】
前記投与が局所投与である、請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項４８】
皮膚の角質層を通してのアンチセンスオリゴヌクレオチドの浸透を増強させる送達用製剤をさらに含有する請求項４３又は４４に記載の医薬組成物。
【請求項４９】
前記送達用製剤がエチルアルコール、プロピレングリコール、グリセリン、ジメチルイソソルビド、ポリエチレングリコールエステル、ＥＤＴＡ、パンテチン及び二価カチオンを含有する、請求項４８に記載の医薬組成物。
【請求項５０】
前記送達用製剤が約１５〜約４０％のエチルアルコール；約０．５〜約５．０％のプロピレングリコール；約０．５〜約５．０％のグリセリン；約０．１〜約２．０％のジメチルイソソルビド；約０．１〜約２．０％のポリエチレングリコールエステル；約０．０１〜約０．５％のＥＤＴＡ二ナトリウム；約０．０１〜約０．２％のパンテチン及び約０．０１〜約２％の二価カチオンを含有する、請求項４９に記載の医薬組成物。
【請求項５１】
前記組成物が少なくとも約４週間の局所投与向けに処方されている、請求項４８に記載の医薬組成物。
【請求項５２】
前記組成物が１日２回の投与向けに処方されている、請求項５１に記載の医薬組成物。
【請求項５３】
皮膚の炎症、皮脂分泌過剰に関係する障害、ステアトーマ、嚢腫性座瘡、過剰ケラチン産生、面皰、丘疹、稗粒腫、脂漏性皮膚炎、ふけ、脂漏性湿疹、乳児脂漏性湿疹、脂漏性角化症、酒さ、口囲皮膚炎、皮脂嚢胞、尋常性座瘡、油性肌、脂漏性いぼ、老人性いぼ、基底細胞乳頭腫、多毛症、黒色丘疹性皮膚症を治療又は予防するのに有用である、請求項４３に記載の医薬組成物。
【請求項５４】
良性前立腺肥大、前立腺癌、尿失禁、男性ホルモン性脱毛症及び男性型禿頭症を治療又は予防する上で有用である、請求項４４に記載の医薬組成物。
【請求項５５】
前記リボザイムが、ヒトステロイド５α−レダクターゼ１型と呼称されるタンパク質をコードするｍＲＮＡ転写物に特異的にハイブリダイズする、請求項４３に記載の医薬組成物。
【請求項５６】
前記リボザイムがヒトステロイド５α−レダクターゼ１型によりコードされる前記ｍＲＮＡ転写物の翻訳開始部位、５’−非翻訳配列、３’−非翻訳配列、イントロン／エキソンジャンクションのいずれか、又は介在配列に特異的にハイブリダイズする、請求項４３に記載の医薬組成物。
【請求項５７】
前記リボザイムが前記ヒトステロイド５α−レダクターゼ１型転写物の５’ｃａｐ部位又は５’ｃａｐ部位に隣接する領域に特異的にハイブリダイズする、請求項４３に記載の医薬組成物。
【請求項５８】
前記リボザイムが前記ヒトステロイド５α−レダクターゼ１型ｍＲＮＡ転写物内のコード配列の一部分に特異的にハイブリダイズする、請求項４４に記載の医薬組成物。
【請求項５９】
前記リボザイムが、ヒトステロイド５α−レダクターゼ２型と呼称されるタンパク質をコードするヌクレオチド配列の少なくとも一部分に相補的であり、それと特異的にハイブリダイズする、請求項４４に記載の医薬組成物。
【請求項６０】
前記リボザイムがヒトステロイド５α−レダクターゼ２型と呼称されるタンパク質をコードするｍＲＮＡ転写物に特異的にハイブリダイズする、請求項４４に記載の医薬組成物。
【請求項６１】
前記リボザイムがヒトステロイド５α−レダクターゼ２型によりコードされる前記ｍＲＮＡ転写物の翻訳開始部位、５’−非翻訳配列、３’−非翻訳配列、イントロン／エキソンジャンクションのいずれか、又は介在配列に特異的にハイブリダイズする、請求項４４に記載の医薬組成物。
【請求項６２】
前記リボザイムが前記ヒトステロイド５α−レダクターゼ２型転写物の５’ｃａｐ部位又は５’ｃａｐ部位に隣接する領域に特異的にハイブリダイズする、請求項４４に記載の医薬組成物。
【請求項６３】
前記リボザイムが前記ヒトステロイド５α−レダクターゼ２型ｍＲＮＡ転写物内のコード配列の一部分に特異的にハイブリダイズする、請求項４４に記載の医薬組成物。
【請求項６４】
第２の活性作用物質をさらに含有する請求項４３又は４４に記載の医薬組成物。
【請求項６５】
前記第２の活性物質が、抗真菌剤、Ｈ¹受容体拮抗薬、レチノイド、抗肥満薬、ホルモン、ホスホジエステラーゼ−５阻害物質、抗生物質、抗癌剤、局所ステロイド又は収斂薬である、請求項４３又は４４に記載の医薬組成物。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【公表番号】特表２００７−５０９１５１（Ｐ２００７−５０９１５１Ａ）
【公表日】平成１９年４月１２日（２００７．４．１２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５３６７０３（Ｐ２００６−５３６７０３）
【出願日】平成１６年１０月２０日（２００４．１０．２０）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０３４５１０
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０４２７４１
【国際公開日】平成１７年５月１２日（２００５．５．１２）
【出願人】（５０６１３７６４２）ダイアド　ファーマシューティカル　コーポレーション (1)
【Ｆターム（参考）】