Ｃ型肝炎ウイルス阻害剤
一般式（Ｉ）：
（Ｉ）
を有するＣ型肝炎ウイルス阻害剤が開示される。該化合物を含む組成物、および該化合物を使用してＨＣＶを阻害する方法もまた開示される。
（Ｉ）
を有するＣ型肝炎ウイルス阻害剤が開示される。該化合物を含む組成物、および該化合物を使用してＨＣＶを阻害する方法もまた開示される。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本願は、２００８年５月１５日に出願された米国仮出願第６１／０５３，４８９号の利益を主張する。
本開示は一般に、抗ウイルス性化合物を対象とし、さらに具体的にはＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）によりコードされる（本明細書において「セリンプロテアーゼ」とも称される）ＮＳ３プロテアーゼの機能を阻害する化合物、このような化合物を含む組成物、およびＮＳ３プロテアーゼの機能を阻害する方法を対象とする。
【０００２】
ＨＣＶは、主要なヒト病原体であり、世界中で１億７千万人が感染していると推定され、これはヒト免疫不全ウイルス１型の感染数の概ね５倍である。これらのＨＣＶ感染者のかなりの割合が肝硬変および肝細胞癌を含めた重篤な進行性肝疾患を発症させる。
【０００３】
現在、最も有効なＨＣＶ治療は、α−インターフェロンおよびリバビリンの組合せを用い、これは患者の４０％において持続的効果をもたらしている。ペグ化α−インターフェロンは、単独療法としては未修飾α−インターフェロンより優れていることを、最近の臨床結果は示している。しかし、ペグ化α−インターフェロンおよびリバビリンの組合せを伴う試験的な治療計画をもってしても、患者の大部分は、ウイルス量が持続的に減少することがない。したがって、ＨＣＶ感染症の治療のための有効な療法を開発する明確であり、まだ満たされていない必要性が存在する。
【０００４】
ＨＣＶは、プラス鎖ＲＮＡウイルスである。５’非翻訳領域における推定されるアミノ酸配列および広範な類似性の比較に基づいて、ＨＣＶは、フラビウイルス科ファミリーの独立した属として分類されてきた。フラビウイルス科ファミリーの全てのメンバーは、単一の中断されていないオープンリーディングフレームの翻訳を介して全て公知のウイルス特異的タンパク質をコードするプラス鎖ＲＮＡゲノムを含有するエンベロープに包まれたビリオンを有する。
【０００５】
ＨＣＶゲノムに亘ってヌクレオチドおよびコードされたアミノ酸配列内にかなりの多様性が見い出される。６つの主要な遺伝子型が特性決定され、５０を超える亜型が説明されてきた。ＨＣＶの主要な遺伝子型は世界的にその分布が異なっており、病原および治療における遺伝子型の影響の可能性についての多くの研究にも関わらず、ＨＣＶの遺伝的多様性の臨床的意義は依然として捕らえにくい。
【０００６】
一本鎖ＨＣＶ ＲＮＡゲノムは、約９５００ヌクレオチドの長さであり、約３０００個のアミノ酸の単一の大きなポリタンパク質をコードする単一のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を有する。感染細胞において、このポリタンパク質は、細胞プロテアーゼおよびウイルスプロテアーゼによって複数の部位で切断され、構造タンパク質および非構造（ＮＳ）タンパク質を生成する。ＨＣＶの場合、成熟非構造タンパク質（ＮＳ２、ＮＳ３、ＮＳ４Ａ、ＮＳ４Ｂ、ＮＳ５Ａ、およびＮＳ５Ｂ）の生成は、２種のウイルスプロテアーゼによってもたらされる。最初のものは、ＮＳ２−ＮＳ３接合部を切断し；第２のものは、ＮＳ３のＮ末端領域内に含有されるセリンプロテアーゼであり、ＮＳ３の下流、すなわち、ＮＳ３−ＮＳ４Ａ切断部位においてシスで、残りのＮＳ４Ａ−ＮＳ４Ｂ、ＮＳ４Ｂ−ＮＳ５Ａ、ＮＳ５Ａ−ＮＳ５Ｂ部位においてトランスでの両方における以降の切断の全てを仲介する。ＮＳ４Ａタンパク質は、複数の機能を果たしていると思われ、ＮＳ３プロテアーゼの補助因子として作用し、ＮＳ３および他のウイルスレプリカーゼ成分の膜局在性をおそらく補助している。ＮＳ３タンパク質のＮＳ４Ａとの複合体形成は、効率的なポリタンパク質の進行、部位の全てにおけるタンパク分解切断の増強に本質的である。ＮＳ３タンパク質はまた、ヌクレオシドトリホスファターゼおよびＲＮＡヘリカーゼ活性を示す。ＮＳ５Ｂは、ＨＣＶの複製に関与するＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼである。
【０００７】
本開示は、例えば、ＮＳ４Ａプロテアーゼと組み合わせて、ＮＳ３プロテアーゼの機能を阻害することができるペプチド化合物を提供する。さらに、本開示は、患者への併用療法の投与について記載し、それによって、ＨＣＶ ＮＳ３プロテアーゼを阻害するのに効果的な本開示による化合物は、抗ＨＣＶ作用を有する１種または２種のさらなる化合物と共に投与することができる。
【０００８】
第１の態様において、本開示は、式（Ｉ）：
【化１】
（Ｉ）
［式中、
Ｑは、Ｏ、Ｓ（Ｏ）m、およびＮＲ8から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を適宜含んでいてもよいＣ3-9飽和または不飽和鎖であり；その中で、ｍは、０、１、または２であり、並びにＲ8は、水素、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、アルキルスルホニル、アミノカルボニル、アリールスルホニル、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、シクロアルキルオキシ、ジアルキルアミノカルボニル、ジアルキルアミノカルボニルアルキル、ハロアルキル、およびヘテロサイクリルカルボニルから選択され；
Ｒ1は、アルキルカルボニル、アリール、アリールアルキル、アリールアルキルカルボニル、アリールカルボニル、ヘテロサイクリル、ヘテロサイクリルアルキル、ヘテロサイクリルアルキルカルボニル、ヘテロサイクリルカルボニル、および（ＮＲgＲh）カルボニルから選択され、その中で、該アリール；該アリールアルキル、該アリールアルキルカルボニル、および該アリールカルボニルのアリール部分；該ヘテロサイクリル；並びに該ヘテロサイクリルアルキルおよび該ヘテロサイクリルアルキルカルボニルのヘテロサイクリル部分は、各々、１〜６個のＲ7基で適宜置換されていてもよく；
Ｒ2は、アルキル、アリール、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、ヘテロサイクリル、および−ＮＲaＲbから選択され、その中で、該アルキル、該シクロアルキル、および該（シクロアルキル）アルキルのシクロアルキル部分は、アルケニル、アルコキシ、アルコキシアルキル、アルキル、アリールアルキル、アリールカルボニル、シアノ、シクロアルケニル、（シクロアルキル）アルキル、ハロ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、および（ＮＲeＲf）カルボニルから選択される、１つ、２つ、または３つの置換基で適宜置換されていてもよく；
Ｒ3およびＲ4は独立して、水素、アルコキシアルキル、アルキル、ハロアルコキシアルキル、およびハロアルキルから選択され；
Ｒ5は、水素、アルキルおよびハロアルキルから選択され；
Ｒ6は、フェニル、並びに、窒素、酸素、および硫黄から選択される、１つ、２つ、３つ、または４つのヘテロ原子を適宜含んでいてもよい部分的にまたは完全に不飽和な５または６員環から選択され；その中で、該環の各々は、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、アルキルスルファニル、アリール、カルボキシ、シアノ、シクロアルキル、シクロアルキルオキシ、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、−ＮＲcＲd、（ＮＲeＲf）カルボニル、（ＮＲeＲf）スルホニル、およびオキソから独立して選択される、１つ、２つ、３つ、または４つの置換基で適宜置換されていてもよいが；但し、Ｒ6が置換された６員環である場合、該環上のフルオロ以外のすべての置換基は、親分子部分への該環の結合点に対してメタおよび／またはパラ位になければならず；
Ｒ7は各々独立して、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、アリール、カルボキシ、シアノ、シアノアルキル、シクロアルキル、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ヘテロサイクリル、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、ニトロ，−ＮＲcＲd、（ＮＲcＲd）アルキル、（ＮＲcＲd）アルコキシ、（ＮＲeＲf）カルボニル、および（ＮＲeＲf）スルホニルから選択され；あるいは
２つの隣接Ｒ7基は、それらに結合する炭素原子と一緒になって、窒素、酸素、および硫黄から独立して選択される１つまたは２つのヘテロ原子を適宜含んでいてもよい部分的にまたは完全に不飽和な４〜７員環を形成し、その中で、該環は、アルコキシ、アルキル、シアノ、ハロ、ハロアルコキシ、およびハロアルキルから独立して選択される、１つ、２つ、または３つの基で適宜置換されていてもよく；
ＲaおよびＲbは独立して、水素、アルコキシ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、ヘテロサイクリル、およびヘテロサイクリルアルキルから選択されるか；あるいは、ＲaおよびＲbは、それらに結合する窒素原子と一緒になって、４〜７員単環式ヘテロ環を形成し；
ＲcおよびＲdは独立して、水素、アルコキシアルキル、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、アリールアルキル、およびハロアルキルから選択され；
ＲeおよびＲfは独立して、水素、アルキル、アリール、アリールアルキル、およびヘテロサイクリルから選択され；その中で、該アリール、該アリールアルキルのアリール部分、および該ヘテロサイクリルは、アルコキシ、アルキル、およびハロから独立して選択される１つまたは２つの置換基で適宜置換されていてもよく；並びに
ＲgおよびＲhは独立して、水素、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、ヘテロサイクリル、およびヘテロサイクリルから選択されるか；あるいは、ＲgおよびＲhは、それらに結合する窒素原子と一緒になって、単環式ヘテロ環を形成し、その中で、該単環式ヘテロ環は、フェニル環に適宜縮合して、二環式構造を形成してもよく；該単環式ヘテロ環および該二環式構造は、アルコキシ、アルキル、ハロ、ハロアルコキシ、およびハロアルキルから独立して選択される、１つ、２つ、または３つの置換基で適宜置換されていてもよい］
の化合物、またはその医薬的に許容される塩を提供する。
【０００９】
第１の態様の第１の実施形態において、本開示は、Ｒ2が、アルキルおよびシクロアルキルから選択され、その中で、該シクロアルキルは、アルケニル、アルコキシ、アルキル、およびハロから選択される１つの置換基で適宜置換されていてもよい、式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩を提供する。
【００１０】
第１の態様の第２の実施形態において、本開示は、Ｒ1が、ヘテロサイクリルおよび（ＮＲgＲh）カルボニルから選択され、その中で、該ヘテロサイクリルは、１〜６個のＲ7基で適宜置換されていてもよい、式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩を提供する。第３の実施形態において、Ｒ1はヘテロサイクリルである。第４の実施形態において、該ヘテロサイクリルは、１つまたは２つのＲ7基で適宜置換されていてもよいイソキノリニルである
【００１１】
第１の態様の第５の実施形態において、本開示は、Ｒ3およびＲ4が、各々、水素であり、並びにＱが、ヘテロ原子を含まないＣ6不飽和鎖である、式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩を提供する。
【００１２】
第１の態様の第６の実施形態において、本開示は、
Ｑが、ヘテロ原子を含まないＣ6不飽和鎖であり；
Ｒ1がヘテロサイクリルであり、その中で、該ヘテロサイクリルは、１つまたは２つのＲ7基で適宜置換されていてもよいイソキノリニルであり；
Ｒ2が、アルキルおよびシクロアルキルから選択され、その中で、該シクロアルキルは、アルケニル、アルコキシ、アルキル、およびハロから選択される１つの置換基で適宜置換されていてもよく；
Ｒ3およびＲ4が、各々、水素であり；並びに
Ｒ6が、１つの窒素原子を含む完全に不飽和な６員環であり、その中で、該環は、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、アルキルスルファニル、アリール、カルボキシ、シアノ、シクロアルキル、シクロアルキルオキシ、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、−ＮＲcＲd、（ＮＲeＲf）カルボニル、（ＮＲeＲf）スルホニル、およびオキソから独立して選択される、１つ、２つ、３つ、または４つの置換基で適宜置換されていてもよいが；但し、該環上のフルオロ以外のすべての置換基は、親分子部分への該環の結合点に対してメタおよび／またはパラ位になければならない、式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩を提供する。
【００１３】
第２の態様において、本開示は、式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩、並びに医薬的に許容される担体を含む組成物を提供する。第２の態様の第１の実施形態において、該組成物は、抗ＨＣＶ活性を有する少なくとも１つの別の化合物をさらに含む。第２の態様の第２の実施形態において、少なくとも１つの該別の化合物は、インターフェロンまたはリバビリンである。第２の態様の第３の実施形態において、該インターフェロンは、インターフェロンα２Ｂ、ペグ化インターフェロンα、コンセンサスインターフェロン、インターフェロンα２Ａ、およびリンパ芽球様インターフェロンτから選択される。
【００１４】
第２の態様の第４の実施形態において、本開示は、式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩、医薬的に許容される担体、並びに抗ＨＣＶ活性を有する少なくとも１つの別の化合物を含む組成物を提供し；その中で、少なくとも１つの該別の化合物は、インターロイキン２、インターロイキン６、インターロイキン１２、１型ヘルパーＴ細胞応答の発生を亢進する化合物、干渉ＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、イミキモド、リバビリン、イノシン ５'−一リン酸脱水素酵素阻害剤、アマンタジン、およびリマンタジンから選択される。
【００１５】
第２の態様の第５の実施形態において、本開示は、式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩、医薬的に許容される担体、並びに抗ＨＣＶ活性を有する少なくとも１つの別の化合物を含む組成物を提供し；その中で、少なくとも１つの該別の化合物は、ＨＣＶメタロプロテアーゼ、ＨＣＶセリンプロテアーゼ、ＨＣＶポリメラーゼ、ＨＣＶヘリカーゼ、ＨＣＶ ＮＳ４Ｂタンパク質、ＨＣＶエントリー、ＨＣＶアセンブリー、ＨＣＶイグレス、ＨＣＶ ＮＳ５Ａタンパク質、およびＩＭＰＤＨから選択される標的の機能を阻害して、ＨＣＶ感染症の治療に有効である。
【００１６】
第３の態様において、本開示は、治療有効量の式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩を患者に投与することを特徴とする、患者におけるＨＣＶ感染症の治療方法を提供する。第３の態様の第１の実施形態において、該方法は、式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩の、前、後、または同時に、抗ＨＣＶ活性を有する少なくとも１つの別の化合物をさらに投与することを特徴とする。第３の態様の第２の実施形態において、少なくとも１つの該別の化合物は、インターフェロンまたはリバビリンである。第３の態様の第４の実施形態において、該インターフェロンは、インターフェロンα２Ｂ、ペグ化インターフェロンα、コンセンサスインターフェロン、インターフェロンα２Ａ、およびリンパ芽球様インターフェロンτから選択される。
【００１７】
第３の態様の第５の実施形態において、本開示は、式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩の、前、後、または同時に、治療有効量の式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩、並びに抗ＨＣＶ活性を有する少なくとも１つの別の化合物を患者に投与することを特徴とする、患者におけるＨＣＶ感染症の治療方法を提供し、その中で、少なくとも１つの該別の化合物は、インターロイキン２、インターロイキン６、インターロイキン１２、１型ヘルパーＴ細胞応答の発生を亢進する化合物、干渉ＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、イミキモド、リバビリン、イノシン ５'−一リン酸脱水素酵素阻害剤、アマンタジン、およびリマンタジンから選択される。
【００１８】
第３の態様の第６の実施形態において、本開示は、式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩の、前、後、または同時に、治療有効量の式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩、並びに抗ＨＣＶ活性を有する少なくとも１つの別の化合物を患者に投与することを特徴とする、患者におけるＨＣＶ感染症の治療方法を提供し、その中で、少なくとも１つの該別の化合物は、ＨＣＶメタロプロテアーゼ、ＨＣＶセリンプロテアーゼ、ＨＣＶポリメラーゼ、ＨＣＶヘリカーゼ、ＨＣＶ ＮＳ４Ｂタンパク質、ＨＣＶエントリー、ＨＣＶアセンブリー、ＨＣＶイグレス、ＨＣＶ ＮＳ５Ａタンパク質、およびＩＭＰＤＨから選択される標的の機能を阻害して、ＨＣＶ感染症の治療に有効である。
【００１９】
第４の態様において、本開示は、式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩、抗ＨＣＶ活性を有する、１つ、２つ、３つ、４つ、または５つの別の化合物、並びに医薬的に許容される担体を含む組成物を提供する。第４の態様の第１の実施形態において、該組成物は、抗ＨＣＶ活性を有する３つまたは４つの別の化合物を含む。第４の態様の第２の実施形態において、該組成物は、抗ＨＣＶ活性を有する１つまたは２つの別の化合物を含む。
【００２０】
第５の態様において、本開示は、式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩の、前、後、または同時に、治療有効量の式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩、並びに、抗ＨＣＶ活性を有する、１つ、２つ、３つ、４つ、または５つの別の化合物を患者に投与することを特徴とする、患者におけるＨＣＶ感染症の治療方法を提供する。第１の態様の第１の実施形態において、該方法は、抗ＨＣＶ活性を有する３つまたは４つの別の化合物を投与することを特徴とする。第１の態様の第２の実施形態において、該方法は、抗ＨＣＶ活性を有する１つまたは２つの別の化合物を投与することを特徴とする。
【００２１】
本開示の他の態様には、本明細書に開示した実施形態の適当な組合せが含まれうる。
また他の態様および実施形態は、本明細書において提供する説明において見い出すことができる。
本明細書における本開示の説明は、化学結合の法則および原理と適合させて解釈するべきである。場合によっては、任意の所与の場所に置換基を配置するために水素原子を取り除くことが必要な場合がある。
【００２２】
本開示に包含される化合物は、医薬品として使用するために適切に安定的なものであることを理解すべきである。
分子における特定の位置でのいずれの置換基または可変記号(variable)の定義も、該分子における他の位置での定義から独立していることが意図される。
本明細書に引用される全ての特許、特許出願、および文献参照は、その全体が本明細書に引用される。不整合がある場合は、定義を含めた本開示を優先する。
【００２３】
本明細書で使用する場合、以下の用語は、指示された意味を有する：
本明細書で使用する場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」には、特に断りがなければ、複数表示(plural reference)が含まれる。
特に断りがなければ、本開示のすべてのアリール、シクロアルキル、およびヘテロサイクリル基は、その各々の定義に記載したように置換されうる。例えば、アリールアルキル基のアリール部分は、用語「アリール」の定義に記載したように置換されうる。
【００２４】
いくつかの例において、いずれの特定の基における炭素原子の数は、該基の列挙の前に表示される。例えば、用語「Ｃ6アルキル」は、６つの炭素原子を含むアルキル基を示す。これらの記号表示が存在する場合、これらは本明細書に含まれるすべての他の定義に取って代わる。
本明細書で使用する場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」には、特に断りがなければ、複数表示が含まれる。
【００２５】
用語「アルケニル」とは、本明細書で使用する場合、少なくとも１個の炭素−炭素二重結合を含有する２個から６個の炭素原子の直鎖または分岐鎖基をいう。
用語「アルコキシ」とは、本明細書で使用する場合、酸素原子を通して親分子部分に結合しているアルキル基をいう。
用語「アルコキシアルキル」とは、本明細書で使用する場合、１個、２個、または３個のアルコキシ基で置換されているアルキル基をいう。
【００２６】
用語「アルコキシカルボニル」とは、本明細書で使用する場合、カルボニル基を通して親分子部分に結合しているアルコキシ基をいう。
用語「アルキル」とは、本明細書で使用する場合、１〜１０個の炭素原子を含む直鎖または分枝鎖の飽和炭化水素から誘導される基をいう。
用語「アルキルカルボニル」とは、本明細書で使用する場合、カルボニル基を通して親分子部分に結合したアルキル基をいう。
【００２７】
用語「アルキルスルファニル」とは、本明細書で使用する場合、硫黄原子を通して親分子部分に結合したアルキル基をいう。
用語「アルキルスルホニル」とは、本明細書で使用する場合、スルホニル基を通して親分子部分に結合したアルキル基をいう。
用語「アミノカルボニル」とは、本明細書で使用する場合、カルボニル基を通して親分子部分に結合した−ＮＨ2基をいう。
【００２８】
用語「アリール」とは、本明細書で使用する場合、フェニル基、または環の１つもしくは両方がフェニル基である二環式縮合環構造をいう。二環式縮合環構造は、４〜６員の芳香族または非芳香族炭素環に縮合されたフェニル基からなる。本開示のアリール基は、基中の任意の置換可能な炭素原子を通して親分子の部分に結合することができる。アリール基の代表例には、それだけに限らないが、インダニル、インデニル、ナフチル、フェニル、およびテトラヒドロナフチルが挙げられる。本開示のアリール基は、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、カルボキシ、シクロアルキル、シクロアルキルオキシ、シアノ、ハロ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、ニトロ、−ＮＲcＲd、（ＮＲcＲd）カルボニル、およびオキソから独立して選択される、１個、２個、３個、４個、または５個の置換基で適宜置換されていてもよい。
【００２９】
用語「アリールアルキル」とは、本明細書で使用する場合、１個、２個、または３個のアリール基で置換されているアルキル基をいう。
用語「アリールアルキルカルボニル」とは、本明細書で使用する場合、カルボニル基を通して親分子部分に結合したアリールアルキル基をいう。
用語「アリールカルボニル」とは、本明細書で使用する場合、カルボニル基を通して親分子の部分に結合しているアリール基をいう。
【００３０】
用語「アリールスルホニル」とは、本明細書で使用する場合、スルホニル基を通して親分子部分に結合したアリール基をいう。
用語「カルボニル」とは、本明細書で使用する場合、−Ｃ（Ｏ）−をいう。
用語「カルボキシ」とは、本明細書で使用する場合、−ＣＯ2Ｈをいう。
用語「シアノ」とは、本明細書で使用する場合、−ＣＮをいう。
用語「シアノアルキル」とは、本明細書で使用する場合、１個、２個、または３個のシアノ基で置換されているアルキル基をいう。
【００３１】
用語「シクロアルケニル」とは、本明細書で使用する場合、３〜１４個の炭素原子と０個のヘテロ原子とを有する非芳香族で部分不飽和の単環式、二環式、または三環式環系をいう。シクロアルケニル基の代表例には、それだけに限らないが、シクロヘキセニル、オクタヒドロナフタレニル、およびノルボルニレニルが挙げられる。
【００３２】
用語「シクロアルキル」とは、本明細書で使用する場合、３〜１０個の炭素原子と０個のヘテロ原子とを有する飽和単環式または二環式炭化水素環構造をいう。シクロアルキル基の代表例には、それだけに限らないが、シクロプロピル、シクロブチル、およびシクロペンチルが挙げられる。
用語「（シクロアルキル）アルキル」とは、本明細書で使用する場合、１個、２個、または３個のシクロアルキル基で置換されているアルキル基をいう。
【００３３】
用語「シクロアルキルオキシ」とは、本明細書で使用する場合、酸素原子を通して親分子の部分に結合しているシクロアルキル基をいう。
用語「ジアルキルアミノカルボニル」とは、本明細書で使用する場合、カルボニル基を通して親分子部分に結合した−ＮＲ’Ｒ”基をいい、その中で、Ｒ’およびＲ”は、同じであるかまたは異なったアルキル基である。
【００３４】
用語「ジアルキルアミノカルボニルアルキル」とは、本明細書で使用する場合、１つ、２つ、または３つのジアルキルアミノカルボニル基で置換されたアルキル基をいう。
用語「ハロ」および「ハロゲン」とは、本明細書で使用する場合、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、およびＩをいう。
用語「ハロアルコキシ」とは、本明細書で使用する場合、酸素原子を通して親分子の部分に結合しているハロアルキル基をいう。
【００３５】
用語「ハロアルコキシアルキル」は、本明細書で使用する場合、１つ、２つ、または３つのハロアルコキシ基で置換されたアルキル基をいう。
用語「ハロアルキル」とは、本明細書で使用する場合、１個、２個、３個、または４個のハロゲン原子で置換されているアルキル基をいう。
【００３６】
用語「ヘテロサイクリル」とは、本明細書で使用する場合、窒素、酸素、および硫黄から独立して選択される１個、２個、もしくは３個のヘテロ原子を含有する５員、６員、または７員環をいう。５員環は、０から２個の二重結合を有し、６員および７員環は、０から３個の二重結合を有する。用語「ヘテロサイクリル」にはまた、ヘテロサイクリル環が４〜６員の芳香族もしくは非芳香族炭素環に縮合している二環式基、または他の単環式ヘテロサイクリル基も含まれる。本開示のヘテロサイクリル基は、基中の炭素原子または窒素原子を通して親分子の部分に結合している場合がある。ヘテロサイクリル基の例には、それだけに限らないが、ベンゾチエニル、フリル、イミダゾリル、インドリニル、インドリル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、モルホリニル、オキサゾリル、ピペラジニル、ピペリジニル、ピラゾリル、ピリジニル、ピロリジニル、ピロロピリジニル、ピロリル、チアゾリル、チエニル、およびチオモルホリニルが挙げられる。本開示のヘテロサイクリル基は、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、カルボキシ、シクロアルキル、シクロアルキルオキシ、シアノ、ハロ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、ニトロ、−ＮＲcＲd、（ＮＲcＲd）カルボニル、およびオキソから独立して選択される、１個、２個、３個、４個、または５個の置換基で適宜置換されていてもよい。
【００３７】
用語「ヘテロサイクリルアルキル」とは、本明細書で使用する場合、１個、２個、または３個のヘテロサイクリル基で置換されているアルキル基をいう。
用語「ヘテロサイクリルアルキルカルボニル」とは、本明細書で使用する場合、カルボニル基を通して親分子部分に結合したヘテロサイクリルアルキル基をいう。
【００３８】
用語「ヘテロサイクリルカルボニル」とは、本明細書で使用する場合、カルボニル基を通して親分子部分に結合したヘテロサイクリル基をいう。
用語「ヒドロキシ」とは、本明細書で使用する場合、−ＯＨをいう。
用語「ヒドロキシアルキル」とは、本明細書で使用する場合、１つ、２つ、または３つのヒドロキシ基で置換されたアルキル基をいう。
用語「ニトロ」とは、本明細書で使用する場合、−ＮＯ2をいう。
【００３９】
用語「−ＮＲaＲb」とは、本明細書で使用する場合、窒素原子を通して親分子部分に結合した２つの基であるＲaおよびＲbをいう。ＲaおよびＲbは独立して、水素、アルコキシ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、ヘテロサイクリル、およびヘテロサイクリルアルキルから選択されるか；あるいはＲaおよびＲbは、それらに結合する窒素原子と一緒になって、５または６員単環式ヘテロ環を形成する。
【００４０】
用語「−ＮＲcＲd」とは、本明細書で使用する場合、窒素原子を通して親分子部分に結合した２つの基であるＲcおよびＲdをいう。ＲcおよびＲdは独立して、水素、アルコキシカルボニル、アルキル、およびアルキルカルボニルから選択される。
用語「（ＮＲcＲd）アルコキシ」とは、本明細書で使用する場合、酸素原子を通して親分子部分に結合した（ＮＲcＲd）アルキル基をいう。
【００４１】
用語「（ＮＲcＲd）アルキル」とは、本明細書で使用する場合、１つ、２つ、または３つの−ＮＲcＲd基で置換されたアルキル基をいう。
用語「（ＮＲcＲd）カルボニル」とは、本明細書で使用する場合、カルボニル基を通して親分子部分に結合した−ＮＲcＲd基をいう。
【００４２】
用語「−ＮＲeＲf」とは、本明細書で使用する場合、窒素原子を通して親分子部分に結合した２つの基であるＲeおよびＲfをいう。ＲeおよびＲfは独立して、水素、アルキル、アリール、およびアリールアルキルから選択される。
用語「（ＮＲeＲf）カルボニル」とは、本明細書で使用する場合、カルボニル基を通して親分子部分に結合した−ＮＲeＲf基をいう。
用語「（ＮＲeＲf）スルホニル」とは、本明細書で使用する場合、スルホニル基を通して親分子部分に結合した−ＮＲeＲf基をいう。
用語「（ＮＲgＲh）カルボニル」とは、本明細書で使用する場合、カルボニル基を通して親分子部分に結合した−ＮＲgＲh基をいう。
【００４３】
用語「−ＮＲgＲh」とは、本明細書で使用する場合、窒素原子を通して親分子部分に結合した２つの基であるＲgおよびＲhをいう。ＲgおよびＲhは独立して、水素、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、ヘテロサイクリル、およびヘテロサイクリルから選択されるか；あるいは、ＲgおよびＲhは、それらに結合する窒素原子と一緒になって、単環式ヘテロ環を形成し、その中で、該単環式ヘテロ環は、フェニル環に適宜縮合して、二環式構造を形成してもよく；該単環式ヘテロ環および該二環式構造は、アルコキシ、アルキル、ハロ、ハロアルコキシ、およびハロアルキルから独立して選択される、１つ、２つ、または３つの置換基で適宜置換されていてもよい。
【００４４】
用語「オキソ」とは、本明細書で使用する場合、＝Ｏをいう。
用語「スルホニル」とは、本明細書で使用する場合、−ＳＯ2−をいう。
用語「プロドラッグ」とは、本明細書で使用する場合、血液中の加水分解によって親化合物にインビボで急速に変換される化合物を表す。本開示のプロドラッグには、親分子上のヒドロキシ基のエステル、親分子上のカルボキシ基のエステル、および親分子上のアミンのアミドが挙げられる。
【００４５】
本開示の化合物は、医薬的に許容される塩として存在することができる。用語「医薬的に許容される塩」とは、本明細書で使用する場合、妥当な医学的判断の範囲内において、妥当な便益／リスク比に見合った過剰な毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症なしに患者の組織と接触して使用するのに適切であり、それらの使用目的のために効果的である、水溶性もしくは油溶性もしくは分散性の本開示の化合物の塩または双性イオン形態を表す。塩は、化合物の最終単離および精製の間に、または別々に適切な塩基官能基を適切な酸と反応させることによって調製することができる。代表的な酸付加塩には、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、クエン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、ショウノウ酸塩、カンファースルホン酸塩；ジグルコン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メシチレンスルホン酸塩、メタンスルホン酸塩、ナフチレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、シュウ酸塩、パルモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、トリクロロ酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、リン酸塩、グルタミン酸塩、重炭酸塩、パラ−トルエンスルホン酸塩、およびウンデカン酸塩が挙げられる。医薬的に許容される付加塩を形成するために用いることができる酸の例には、無機酸（塩酸、臭化水素酸、硫酸、およびリン酸など）、ならびに有機酸（シュウ酸、マレイン酸、コハク酸、およびクエン酸など）が挙げられる。
【００４６】
塩基付加塩は、酸性基を、適切な塩基（金属カチオンの水酸化物、炭酸塩、または重炭酸塩など）と、あるいはアンモニアまたは有機第一級、第二級、もしくは第三級アミンと反応させることによって、化合物の最終単離および精製の間に調製することができる。医薬的に許容される塩のカチオンには、リチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、およびアルミニウム、ならびに無毒性の四級アミンカチオン（アンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ジエチルアミン、エチルアミン、トリブチルアミン、ピリジン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン、Ｎ−メチルピペリジン、Ｎ−メチルモルホリン、ジシクロヘキシルアミン、プロカイン、ジベンジルアミン、Ｎ，Ｎ−ジベンジルフェネチルアミン、およびＮ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミンなど）が挙げられる。塩基付加塩の形成に有用な他の代表的な有機アミンには、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペリジン、およびピペラジンが挙げられる。
【００４７】
用語「抗ＨＣＶ作用」とは、本明細書で使用する場合、化合物がＨＣＶウイルスの治療に効果的であることをいう。
用語「本開示の化合物」、および同等の表現は、式（Ｉ）の化合物、ならびにその医薬的に許容されるエナンチオマー、ジアステレオマー、および塩を包含することを意味する。同様に、中間体への言及は、文脈上許容される場合、それらの塩を包含することを意味する。
用語「患者」とは、ヒトおよび他の哺乳動物の両方を含む。
【００４８】
用語「医薬組成物」とは、投与方法および剤形の種類によって、少なくとも１種のさらなる医薬担体、すなわち、希釈剤、保存料、充填剤、流動性調整剤、崩壊剤、湿潤剤、乳化剤、懸濁化剤、甘味剤、香味剤、香料剤、抗菌剤、抗真菌剤、滑沢剤および予製剤などの補助剤、賦形剤またはビヒクルと組み合わせた本開示の化合物を含む組成物を意味する。例えばRemington's Pharmaceutical Sciences, 18th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA (1999)において一覧表示された成分を使用することができる。
【００４９】
語句「医薬的に許容される」とは、本明細書において、過度の毒性、刺激作用、アレルギー反応、または妥当な危険性／受益性割合に比例した他の問題もしくは合併症を伴わずに、患者の組織と接触する使用に適した、正しい医療判断の範囲内である化合物、材料、組成物、および／または剤形を意味するために用いられる。
【００５０】
用語「治療有効量」とは、有意義な患者利益、例えば、ウイルス量の持続的減少を示すのに十分なそれぞれの活性物質の総量をいう。単独で投与される個々の活性成分に適用する場合、この用語はその成分単独を意味する。組合せに適用する場合は、この用語は、組合せであれ、連続的であれ、または同時投与であれ、治療効果をもたらす活性成分の組み合わせた量を意味する。
【００５１】
用語「治療」および「治療する」とは、（ｉ）疾患、障害および／または状態にかかりやすい場合があるが、まだその診断を受けていない患者において、疾患、障害または状態が起こることを防止し；（ｉｉ）疾患、障害または状態を阻害、すなわち、その進行を止め；ならびに／あるいは（ｉｉｉ）疾患、障害または状態を軽減、すなわち、疾患、障害および／または状態の退行をもたらすことを意味する。
【００５２】
本開示の化合物の命名に使用する場合、記号Ｐ１’、Ｐ１、Ｐ２*、Ｐ３およびＰ４は、本明細書で使用する場合、天然ペプチド切断基質の結合に対する、結合しているプロテアーゼ阻害剤のアミノ酸残基の相対的位置を表示する。天然基質において、切断はＰ１とＰ１’との間で起こり、ここでノンプライム位置は、ペプチド天然切断部位のＣ末端から始まってＮ末端に向けて伸びているアミノ酸を表し；一方、プライム位置は、指定切断部位のＮ末端から始まり、Ｃ末端に向かって伸びる。例えば、Ｐ１’は、切断部位のＣ末端の右側末端から離れた第１の位置（すなわち、Ｎ末端第１位置）を示し；一方、Ｐ１はＣ末端切断部位の左側から番号付けを始め、Ｐ２はＣ末端からの第２の位置などである）。（Berger A. & Schechter I., Transactions of the Royal Society London series (1970), B257, 249-264を参照されたい］。
【００５３】
下図は、本開示の化合物についてのサブサイトの記号表示を示す。
【化２】
【００５４】
不斉中心は、本開示の化合物において存在する。例えば、化合物は、式
【化３】
のＰ１シクロプロピル要素を含むことができ、式中、Ｃ1およびＣ2はそれぞれ、シクロプロピル環の１位および２位における不斉炭素原子を表す。
【化４】
【００５５】
本開示は、ＨＣＶプロテアーゼを阻害する能力を有する全ての立体化学的形態、またはその混合物を包含することを理解すべきである。
本開示の特定の化合物はまた、分離可能である場合がある異なる安定的な高次構造形態で存在することができる。非対称の単結合の周りの束縛回転に起因するねじれによる不斉は、例えば立体障害または環ひずみによって、異なる配座異性体の分離を可能にすることができる。本開示には、これらの化合物のそれぞれの配座異性体およびこれらの混合物が挙げられる。
【００５６】
本開示の特定の化合物は、双性イオン形態で存在する場合があり、本開示には、これらの化合物のそれぞれの双性イオン形態およびこれらの混合物が含まれる。
【００５７】
治療に使用するために、治療有効量の式（Ｉ）の化合物、ならびにその医薬的に許容される塩を、原化学物質(raw chemical)として投与することが可能である場合、活性成分を医薬組成物として提示することが可能である。したがって、本開示は、治療有効量の式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩と、１種もしくは複数の医薬的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤とを含む医薬組成物をさらに提供する。式（Ｉ）の化合物およびその医薬的に許容される塩は、上記の通りである。担体（複数可）、希釈剤（複数可）、または賦形剤（複数可）は、製剤の他の成分と適合性であり、そのレシピエントに対して有害ではないという意味で許容できるものでなければならない。本開示の他の態様によって、式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩を、１種もしくは複数の医薬的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤と混合する工程を含む、医薬製剤を調製するための方法もまた提供する。
【００５８】
医薬製剤は、単位用量当たり所定の量の活性成分を含有する単位用量形態で存在することができる。１日当たり約０．０１〜約２５０ミリグラム／キログラム（「ｍｇ／ｋｇ」）体重、好ましくは１日当たり約０．０５〜約１００ｍｇ／ｋｇ体重の本開示の化合物の投与量レベルが、ＨＣＶ媒介疾患の予防および治療のための単独療法において典型的である。典型的には、本開示の医薬組成物は、１日当たり約１〜約５回、あるいは持続注入として投与される。このような投与は、長期治療または救急治療として使用することができる。単一の剤形を得るため担体物質と合わせることのできる活性成分の量は、治療される状態、状態の重篤度、投与回数、投与経路、用いる化合物の排せつ率、治療期間、ならびに患者の年齢、性別、体重、および状態によって変化する。好ましい単位製剤は、本明細書において上記のように、活性成分の１日用量もしくは部分用量、またはその適切な画分を含有する製剤である。一般に治療は、実質的に化合物の適量未満の少量の投与量で開始する。その後、この条件の下で最適な効果が得られるまで少しずつ投与量を増加させる。一般に化合物は、有害または害毒を及ぼす副作用をもたらさずに抗ウイルス的に効果的な結果を生じさせるであろう濃度レベルで投与することが最も望ましい。
【００５９】
本開示の組成物が、本開示の化合物と、１種または複数のさらなる治療剤または予防薬との組合せを含む場合、化合物およびさらなる薬剤の両方は通常、単独療法において通常投与される投与量の約１０〜１５０％、さらに好ましくは約１０〜８０％の投与量レベルで存在する。
【００６０】
医薬製剤は、任意の適切な経路による投与、例えば、経口（口腔または舌下を含めた）、直腸、経鼻、局所（口腔、舌下、または経皮を含めた）、経腟、あるいは非経口（皮下、皮内、筋内、関節内、滑液嚢内、胸骨内、くも膜下腔内、病巣内、静脈内、または皮内注射もしくは注入を含めた）経路による投与に適合することができる。このような製剤は、薬学の技術分野において公知の任意の方法によって、例えば活性成分を担体（複数可）または賦形剤（複数可）と結合することによって調製することができる。
【００６１】
経口投与に適合された医薬製剤は、カプセル剤または錠剤；散剤または顆粒剤；水性もしくは非水性液体中の溶液剤または懸濁剤；食用の泡またはホイップ；あるいは水中油型液体乳剤または油中水型乳剤などの個別単位として提示することができる。
【００６２】
例えば、錠剤またはカプセル剤の形態における経口投与のために、活性薬物成分は、エタノール、グリセロール、水などの経口で無毒性の医薬的に許容される不活性担体と合わせることができる。散剤は、化合物を適切な微細なサイズに微粉砕し、食用炭水化物（例えば、デンプンまたはマンニトールなど）などの同様に微粉砕した医薬担体と混合することによって調製される。香味剤、保存剤、分散剤、および着色剤もまた存在することができる。
【００６３】
カプセル剤は、上記のように粉末混合物を調製し、ゼラチンの形成被覆に充填することによって作製される。コロイダルシリカ、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、または固体ポリエチレングリコールなどの流動促進剤および滑沢剤を、充填操作の前に粉末混合物に加えることができる。カプセル剤を摂取する場合に薬物の有効性を向上させるために、寒天、炭酸カルシウム、または炭酸ナトリウムなどの崩壊剤または可溶化剤をまた加えることができる。
【００６４】
さらに、所望であるかまたは必要な場合、適切な結合剤、滑沢剤、崩壊剤、および着色剤もまた、混合物中に組み込むことができる。適切な結合剤には、デンプン、ゼラチン、天然糖（グルコースまたはβラクトースなど）、コーン甘味料、天然および合成のガム（アカシア、トラガカントまたはアルギン酸ナトリウムなど）、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコールなどが挙げられる。これらの剤形において使用される滑沢剤には、オレイン酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどが挙げられる。崩壊剤には、これらだけに限らないが、デンプン、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、キサンタンガムなどが挙げられる。錠剤は、例えば、粉末混合物を調製し、顆粒化またはスラッギングし、滑沢剤および崩壊剤を加え、錠剤に圧入することによって製剤される。粉末混合物は、適切に粉砕した化合物を、上記のような希釈剤または基剤と、および所望により、結合剤（カルボキシメチルセルロース、アルギネート、ゼラチン、またはポリビニルピロリドンなど）、溶解遅延剤（パラフィンなど）、再吸収促進剤（第四級塩など）および／または吸収剤（ベントナイト、カオリン、またはリン酸二カルシウムなど）と混合することによって調製される。粉末混合物は、結合剤（シロップ、デンプン糊、アラビアゴム粘液、またはセルロース系材料もしくは高分子材料の溶液など）で湿らせ、強制的にスクリーンを通過させるによって顆粒化することができる。顆粒化に代わるものとして、粉末混合物を錠剤成形機にかけることができ、その結果は、顆粒剤へと割れる不完全に形成されたスラグとなる。顆粒剤は、ステアリン酸、ステアリン酸塩、タルク、または鉱油を添加することによって潤滑にされ、錠剤成形型に粘着することを防止することができる。次いで、潤滑混合物を錠剤に圧縮する。本開示の化合物はまた、易流動性の不活性担体と合わせ、顆粒化またはスラッギング工程を経ることなく直接錠剤に圧縮することができる。セラックのシーリングコートからなる透明または不透明な保護コーティング、糖または高分子材料のコーティング、およびワックスの光沢コーティングを提供することができる。これらのコーティングに染料を加えて、異なる単位用量を識別することができる。
【００６５】
溶液剤、シロップ剤、およびエリキシル剤などの経口流体は、一定量が所定の量の化合物を含有するように、投与単位形態で調製することができる。シロップ剤は、化合物を適切に香味付けした水溶液に溶解することによって調製することができ、一方エリキシル剤は、無毒性ビヒクルの使用によって調製される。可溶化剤および乳化剤（エトキシ化イソステアリルアルコールおよびポリオキシエチレンソルビトールエーテルなど）、保存剤、香味添加剤（ハッカ油または天然甘味料など）、またはサッカリンもしくは他の人工甘味料などもまた加えることができる。
【００６６】
適切な場合には、経口投与のための投与単位製剤は、マイクロカプセル化することができる。製剤はまた、例えば、粒子材料をポリマー、ワックス、または同種のものでコーティングするか、それらに包埋することによって、放出を延長または維持するように調製することができる。
【００６７】
式（Ｉ）の化合物、およびその医薬的に許容される塩はまた、小さな単膜小胞、大きな単膜小胞、および多重膜小胞などのリポソームデリバリーシステムの形態で投与することができる。リポソームは、コレステロール、ステアリルアミン、またはホスファチジルコリンなどの種々のリン脂質から形成することができる。
【００６８】
式（Ｉ）の化合物およびその医薬的に許容される塩はまた、化合物分子が結合する個々の担体としてモノクローナル抗体を使用することによって送達することができる。化合物はまた、標的可能な薬物担体として可溶性ポリマーに結合することができる。このようなポリマーには、パリトイル残基(palitoyl residue)で置換されているポリビニルピロリドン、ピラン共重合体、ポリヒドロキシプロピルメタクリルアミドフェノール、ポリヒドロキシエチルアスパルタミドフェノール、またはポリエチレンオキシドポリリシンを含むことができる。さらに、化合物は、薬物の制御放出を実現するのに有用な生分解性ポリマーの類（例えば、ポリ乳酸、ポリεカプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリジヒドロピラン、ポリシアノアクリレート、およびヒドロゲルの架橋または両親媒性ブロックコポリマー）に結合することができる。
【００６９】
経皮的投与に適合された医薬製剤は、レシピエントの表皮と長時間密着し続けることを目的とする個別のパッチとして提示することができる。例えば、活性成分は、Pharmaceutical Research, 3(6), 318 (1986)において概ね記載されているようにイオン泳動によってパッチから送達することができる。
【００７０】
局所投与に適合された医薬製剤は、軟膏剤、クリーム剤、懸濁剤、ローション剤、散剤、溶液剤、ペースト剤、ゲル剤、スプレー剤、エアゾール剤、または油剤として製剤することができる。
【００７１】
眼または他の外部組織、例えば口および皮膚の治療のために、製剤は、好ましくは局所軟膏剤またはクリーム剤として施用される。軟膏剤中に配合される場合、活性成分は、パラフィン軟膏基剤または水混和性軟膏基剤と共に用いることができる。あるいは、活性成分は、水中油型クリーム基剤または油中水型基剤と共にクリーム剤中に配合することができる。
【００７２】
眼への局所投与に適合された医薬製剤には、活性成分が適切な担体、特に水性溶媒に溶解または懸濁している点眼薬が挙げられる。
口内の局所投与に適合された医薬製剤には、ロゼンジ、香錠、および口内洗浄剤が挙げられる。
直腸投与に適合された医薬製剤は、坐薬としてまたは浣腸として提示することができる。
【００７３】
担体が固形物である経鼻投与に適合された医薬製剤には、鼻から吸い込む方法、すなわち、鼻の近くに保持した粉末容器から鼻腔を通した急速な吸入によって投与される、例えば２０〜５００ミクロンの範囲の粒径を有する粗粉末が挙げられる。鼻用スプレーまたは点鼻薬として投与するための、担体が液体である適切な製剤には、活性成分の水溶液または油溶液が挙げられる。
【００７４】
吸入による投与に適合された医薬製剤には、様々なタイプの定量加圧式エアロゾル、ネブライザー、または注入器によって生成することができる、微粒子の塵または霧が挙げられる。
膣投与に適合された医薬製剤は、ペッサリー、タンポン、クリーム剤、ゲル剤、ペースト剤、フォーム剤、またはスプレー製剤として提示することができる。
【００７５】
非経口投与に適合された医薬製剤には、抗酸化剤、バッファー、制菌剤、ならびに製剤を対象とするレシピエントの血液と等張にする溶質；ならびに懸濁化剤および増粘剤を含む場合がある水性および非水性の無菌懸濁剤を含有してもよい、水性および非水性の滅菌注射液が挙げられる。製剤は、単位用量または複数用量の容器、例えば密封したアンプルおよびバイアル中に存在してもよく、注射のため使用直前に、無菌の液体担体、例えば水の添加だけを必要とするフリーズドライ（凍結乾燥）した状態で保存してもよい。無菌散剤、顆粒剤、および錠剤から即時調合注射液および懸濁剤を調製することができる。
【００７６】
特に上述した成分に加えて、製剤には、問題の製剤のタイプを考慮して当技術分野で常用の他の薬剤を含むことができ、例えば経口投与に適した薬剤には、香味剤が含まれる場合があることを理解すべきである。
【００７７】
下記の表１では、本開示の化合物と共に投与することができる化合物のいくつかの実例を一覧表示する。本開示の化合物は、一緒にもしくは別々に、または化合物を組成物に合わせることによって、併用療法において他の抗ＨＣＶ作用化合物と共に投与することができる。
表１
【表１】
【００７８】
本開示の化合物はまた、実験用試薬として使用することができる。化合物は、ＨＣＶ疾患の機構の知識をさらに向上させるための、ウイルス複製アッセイの設計、動物アッセイ系の確認および構造生物学研究のための研究道具の提供において有益な場合がある。さらに、本開示の化合物は、例えば拮抗阻害によって、他の抗ウイルス性化合物の結合部位の確立または決定において有用である。
【００７９】
本開示の化合物はまた、物質のウイルス汚染を処理または予防し、したがって実験室、またはこのような物質（例えば、血液、組織、手術器具および手術着、実験器具および実験着、ならびに採血もしくは輸血の装置および材料）と接触する医療関係者もしくは患者のウイルス感染の危険性を減少させるために使用することができる。
【００８０】
本開示は、合成過程によって、あるいは人体もしくは動物体（インビボ）内で生じる過程またはインビトロで生じる過程を含めた代謝過程によって調製される場合、式（Ｉ）を有する化合物を包含することを意図する。
【００８１】
本願で用いられる略語、例えば、特に以下の実例となる反応式および実施例に用いられるものは、当業者によく知られている。用いられるいくつかの略語は以下の通りである：
ＥｔＯＡｃ：酢酸エチル；
ｔ−Ｂｕ：ｔｅｒｔ−ブチル；
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド；
ＨＡＴＵ：Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ'，Ｎ'−テトラメチルウロニウムリン酸塩；
ＤＩＥＡまたはＤＩＰＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン；
ＤＣＭ：ジクロロメタン；
ＣＤＩ：１，１'−カルボニルジイミダゾール；
ＤＢＵ：１，８−ジアザビシクロ［５.４.０］ウンデカ−７−エン；
ｈ：時間；
ｍｉｎ：分；
ＭｅＯＨ：メタノール；
ＮＢＳ：Ｎ−ブロモコハク酸イミド；
ｎ−Ｂｕ−Ｌｉ：ｎ−ブチルリチウム；
ｉ−Ｐｒ：イソプロピル；
ＴＭＳ：トリメチルシリル；
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン；
ＭｅＣＮ：アセトニトリル；並びに
ｒｔ：室温または保持時間（文脈によって決まる）。
【００８２】
本開示の化合物の合成に有用な出発物質は当業者には公知であり、容易に製造することができ、または市販されている。
【００８３】
以下に記載する下記の方法は、例示の目的のために提供するものであり、特許請求の範囲を制限することを意図しない。従来の保護基を使用して官能基を保護し、次いで保護基を除去して本開示の化合物を提供するようにこのような化合物を調製することが必要である場合があることが理解されるであろう。本開示による保護基の使用に関する詳細は、当業者には公知である。
【００８４】
実施例１：化合物１の製造
【化５】
【化６】
段階１：
３−メトキシ桂皮酸（１１.０ｇ、６２ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１２.５ｇ、１２４ｍｍｏｌ）のアセトン溶液（８０ｍＬ）に、０℃で、クロロギ酸エチル（約１.５当量）を滴下して加えた。この温度で１時間撹拌した後、ＮａＮ3水（６.４０ｇ、１００ｍｍｏｌの３５ｍＬ Ｈ2Ｏ溶液）を滴下して加え、反応混合液を周囲温度で１６時間撹拌した。水（１００ｍＬ）を混合液に加え、揮発物を減圧留去した。生じたスラリーをトルエン（３×５０ｍＬ）で抽出し、有機層を合わせて、ＭｇＳＯ4で乾燥し、濾過した。濾液を、ジフェニルメタン（５０ｍＬ）およびトリブチルアミン（３０ｍＬ）の１９０℃で加熱した溶液に滴下して加えた。添加の間、トルエンを蒸留によって除去した。添加の完了後、反応温度を２時間２１０℃に上げた。冷却して、沈澱した生成物を濾過で集め、ヘキサン（２×５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥して、白色固形物として、目的の生成物（５.５３ｇ、５１％）を得た（Nicolas Briet et al, Tetrahedron, 2002, 5761-5766）。
LC-MS, MS m/z 176 (M+ +H).
【００８５】
段階２：
６−メトキシ−２Ｈ−イソキノリン−１−オン（５.０ｇ、２８.４ｍｍｏｌ）のＰＯＣｌ3溶液（１０ｍＬ）を３時間穏やかに還流するまで加熱し、混合液を次いで減圧濃縮した（Nicolas Briet et al, Tetrahedron, 2002, 5761-5766）。残渣を氷水（２０ｍＬ）に注ぎ、ＮａＯＨ（１０.０Ｍ）を加えることによってｐＨ＝１０にした。生じた混合物をＣＨＣｌ3で抽出した。有機層を食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、濾過し、濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィ（１：１ ヘキサン−酢酸エチル）で精製して、白色固形物として、目的の生成物（４.４１ｇ、８０％）を得た。
1H NMR (CD3OD) δ ppm 3.98 (s, 3H), 7.34-7.38 (m, 2H), 7.69 (d, J = 5.5Hz, 1H), 8.10 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 8.23 (d, J = 9.5 Hz, 1H); LC-MS, MS m/z 194 (M+ +H).
【００８６】
【化７】
段階３：
６−メトキシピリジン−３−アミン（０.３７２ｇ、３ｍｍｏｌ）、２−オキソノン(oxonon)−８−エン酸（０.５１１ｇ、３.００ｍｍｏｌ）、およびＮａＨＢ（ＯＡｃ）3（１.９０７ｇ、９.００ｍｍｏｌ）のＣＨ2ＣｌＣＨ2Ｃｌ混合溶液（１０ｍＬ）を２４時間撹拌した。反応液を飽和ＮＨ4Ｃｌ（２０ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で希釈し、食塩水（２０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、濾過し、濃縮した。濃縮によって、目的の粗生成物（８００ｍｇ）を得て、それをさらに精製することなく次の段階に用いた。
【００８７】
【化８】
段階４：
Ｎ−Ｂｏｃ−４−（Ｒ）−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン（０.８９２ｇ、３.８９ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ溶液（４０ｍＬ）に、周囲温度で、固体のカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（１.３４ｇ、１２.０ｍｍｏｌ）を１回で加えた。懸濁液を室温で３０分間撹拌し、次いで１０℃に冷却した。固体としての１−クロロ−６−メトキシ−イソキノリン（実施例１，段階２の生成物）（７８５ｍｇ、４.０５ｍｍｏｌ）を１回で加え、生じた混合物を周囲温度で１２時間撹拌した。混合液を氷冷した５％ クエン酸（水）でクエンチし、次いで酢酸エチル（１００ｍＬ）で抽出した。水相を酢酸エチルでもう一度抽出した。有機層を合わせて、５％ クエン酸（水）および食塩水でそれぞれ洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、濾過した。濾液を乾燥するまで減圧濃縮して、オフホワイトの泡として、目的の生成物（１.４９ｇ、収率９９％）を得た。この粗物質をさらに精製することなく次の反応段階に用いた。
1H NMR (CD3OD) δ 1.42, 1.44 (回転異性体, 9H), 2.38-2.43 (m, 1H), 2.66-2.72 (m, 1H), 3.80-3.87 (m, 2H), 3.92 (s, 3H), 4.44-4.52 (m, 1H), 5.73 (bs, 1H), 7.16-7.18 (m, 2H), 7.24-7.25 (m, 1H), 7.87-7.88 (m, 1H), 8.07 (d, J = 8.5 Hz, 1H); LC-MS, MS m/z 389 (M+ +H).
【００８８】
段階５：
実施例１，段階４の生成物（７.７ｇ、２０ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（１２.９２ｇ、１００ｍｍｏｌ）、および（１Ｒ，２Ｓ）−１−アミノ−Ｎ−（シクロプロピルスルホニル）−２−ビニルシクロプロパンカルボキシアミドＨＣｌ塩（４.６ｇ、２４ｍｍｏｌ）のＣＨ2Ｃｌ2混合溶液（１００ｍＬ）に、室温で４時間、ＨＡＴＵ（１１.４１ｇ、３０ｍｍｏｌ）を加えた。濃縮した後、残渣を３３％ アセトンのヘキサン溶液で溶離するバイオタージ（４０＋Ｓ Ｓｉカラム）で精製して、油として、目的の生成物（９.５ｇ、９０％）を得た。
LC-MS, MS m/z 526 (M+ +H).
【００８９】
段階６：
実施例，段階５の生成物（５.２６ｇ、１０ｍｍｏｌ）に、４Ｍ ＨＣｌ（２５.００ｍＬ、１００ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン溶液を加えた。形成した溶液を２５℃で３時間撹拌した。減圧濃縮した後、残渣に、エーテル（２０ｍＬ）を加え、次いで再び濃縮し、該手順を３回繰り返した。ハウスバキューム乾燥(House vacuum drying)によって、固形物として、粗生成物（４.９８ｇ、１００％）を得て、それをさらに精製することなく次の段階に用いた。
LC-MS, MS m/z 426 (M+ +H).
【００９０】
段階７：
実施例１，段階６の生成物（１５０ｍｇ、０.３ｍｍｏｌ）、実施例１，段階３の生成物（８４ｍｇ、０.３００ｍｍｏｌ）、およびヒューニッヒ塩基（０.５２４ｍＬ、３.００ｍｍｏｌ）のＣＨ2Ｃｌ2溶液（５ｍＬ）に、ＨＡＴＵ（１７１ｍｇ、０.４５０ｍｍｏｌ）を加えた。１６時間撹拌し、濃縮した後、残渣を３３％ アセトンのヘキサン溶液で溶離するバイオタージで精製して、固形物およびジアステレオマーとして、目的の生成物（１７０ｍｇ）を得た。
LC-MS, MS m/z 686 (M+ +H).
【００９１】
段階８：
実施例１，段階７の生成物（１６０ｍｇ、０.２３３ｍｍｏｌ）およびグラブスＩＩ（３０ｍｇ、０.０３５ｍｍｏｌ）のＣＨ2Ｃｌ2溶液（５ｍＬ）を加え、１６時間還流した。濃縮した後、残渣を２５％ アセトンのヘキサン溶液で溶離するバイオタージで精製して、単一のジアステレオマー（５２ｍｇ）を得て、その構造を反応式に示したようにまたは（Ｒ）−異性体とラベルした。
LC-MS, MS m/z 658 (M+ +H).
【００９２】
段階９：
実施例１，段階８の生成物（５０ｍｇ、０.０７６ｍｍｏｌ）および水酸化ナトリウム（３０.４ｍｇ、０.７６０ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（５ｍＬ）および水（２.００ｍＬ）溶液を２時間還流した。濃縮した後、残渣をＨＣｌ（１Ｎ、１ｍＬ）で中和し、ＥｔＯＡｃで抽出し、ＭｇＳＯ4で乾燥した。濃縮によって、目的の生成物（３６ｍｇ）を得て、それをさらに精製することなく次の段階に用いた。
LC-MS, MS m/z 630 (M+ +H).
【００９３】
段階１０：
実施例１，段階９の生成物（３５ｍｇ、０.０５６ｍｍｏｌ）およびＣＤＩ（１２.６２ｍｇ、０.０７８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（１ｍＬ）を１時間還流した。室温に冷却した後、溶液にシクロプロパンスルホンアミド（１０.７７ｍｇ、０.０８９ｍｍｏｌ）を加え、続いてＤＢＵ（０.０１７ｍＬ、０.１１１ｍｍｏｌ）を加え、次いで生じた溶液を終夜撹拌した。濃縮した後、残渣を分取ＨＰＬＣで精製して、白色固形物として、目的の生成物（２５ｍｇ、６１％）を得た。
LC-MS, MS m/z 733 (M+ +H).
【００９４】
実施例２：化合物２の製造
【化９】
【化１０】
段階１：
３−クロロ−６−メチル安息香酸（１７.０ｇ、０.１０ｍｏｌ）の塩化チオニルのスラリー溶液（２３.５ｍｌ、０.３０ｍｏｌ）を穏やかに還流するまでゆっくりと加熱し、この温度で２時間維持した。反応混合物を次いで室温に冷却し、過剰の塩化チオニルを減圧留去した。残渣をＤＣＭ（５０ｍｌ）に溶解し、溶媒を次いで減圧留去した。（この工程を数回繰り返して、残存する塩化チオニルおよびＨＣｌを確実に除去したことに留意すべきである）。生じた生成物を次いでＴＨＦ（８０ｍｌ）に溶解し、それを下記の次の反応に直接用いた。
【００９５】
段階２：
氷塩浴（−１０℃）で冷却した３０％ アンモニア（５８ｍｌ）の水溶液（２４０ｍｌ）に、実施例２，段階１の生成物のＴＨＦ溶液を滴下して加えた。添加が完了した後、生じた反応混合物（スラリー）を−１０℃で１時間撹拌した。反応混合物を次いで室温に加温し、デカントした。反応容器中に残存する固形物を次いで水（５０ｍｌ）でトリチュレートした。このトリチュレーションおよびデカンテーション(decanting)の工程を次いで繰り返した。残存する固形物を次いで濾過し、濾過ケーキを水で洗浄した。固形物を次いで終夜減圧乾燥して、白色結晶性物質として、目的の生成物（１３.８ｇ、８２％）を得た。
1H NMR (DMSO-d6) δ ppm 2.33 (s, 3H), 7.24-7.27 (m, 1H), 7.35-7.38 (m , 2H), 7.44 (b, 1H), 7.80 (b, 1H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 18.87, 126.64, 128.86, 129.81, 132.31, 134.19, 138.65, 169.41; LC-MS, MS m/z 170.
【００９６】
段階３：
実施例２，段階２の生成物（１１.５ｇ、６８ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ−アセタール（１０.９ｍｌ、８２ｍｍｏｌ）の混合物、およびＴＨＦ（１５０ｍｌ）を還流するまで加熱し、この温度で２時間維持した。反応混合物を次いで室温に冷却し、揮発物を減圧留去した。生じた残渣をヘキサン（１５０ｍｌ）から再結晶して、白色針状晶として、目的の生成物（１４.７ｇ、９６％）を得た。
1H NMR (DMSO-d6) δ 2.49-2.51 (m, 3H), 3.09 (s, 3H), 3.20 (s, 3H), 7.24, 7.27 (d, J = 13.5 Hz, 1H), 7.37-7.41 (dd, J1=14 Hz, J2=4.5 Hz, 1H), 7.91, 7.92 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 8.55 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 20.69, 35.09, 40.91, 129.50, 129.72, 132.98, 136.86,138.87, 160.60, 177.04; LC-MS, MS m/z 225.
【００９７】
段階４：
実施例２，段階３の生成物およびＫＯｔＢｕ（１４.７ｇ、１３１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ混合溶液（３００ｍｌ）を還流するまで加熱し、この温度で２時間維持した（加熱すると、反応混合物は暗色溶液となった）。次いで約１００ｍｌの溶媒を留去して、反応混合物の容積を減少させた。生じた溶液を次いで水（１Ｌ）に注意して注ぎ、生じた混合物をＨＣｌ（１Ｍ）で結果としてｐＨ ４に酸性化した。混合液を次いで濾過し、固形物を集めて、水で十分に洗浄し、次いで終夜減圧乾燥して、オフホワイトの粉末として、目的の生成物（７.０ｇ、６０％）を得た。
1H NMR (400 Hz, CD3OD) δ ppm 6.66 (d, J = 7.05 Hz, 1H), 7.18 (d, J = 7.05 Hz, 1H), 7.66 (s, 1H) 7.67 (d, J = 2.01 Hz, 1H), 8.24 (d, J = 2.27 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 104.05, 125.62, 127.21, 128.54, 129.52, 130.77, 132.43, 136.55, 160.72; LC-MS, MS m/z 180.
【００９８】
段階５：
実施例２，段階４の生成物およびＮＢＳ（３９.７４７ｇ、２２３.３ｍｍｏｌ）のＭｅＣＮのスラリー溶液（５００ｍＬ、無水）を、穏やかに還流するまで約２時間かけてゆっくりと加熱し、穏やかな還流で１.５時間維持した。（この反応はＬＣ／ＭＳでモニターされうる）。反応混合物を次いで３時間かけてゆっくりと室温に冷却し、観察された固形物を単純濾過で除去した。固形物を集めて、ＭｅＣＮ（１００ｍＬ×３）で洗浄して、目的の生成物（４７ｇ）を得た。この物質をさらに精製することなく次の段階に用いた。
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7.46(s, 1H), 7.81 (dd, J = 8.40, 2.00 Hz, 1H), 7.88 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.27(d, J = 2.00 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 96.68, 126.34, 127.58, 127.71, 130.73, 132.20, 133.47, 134.46, 159.88; LC-MS, MS m/z 258.
【００９９】
段階６：
実施例２，段階５の生成物（４７ｇ、１８２ｍｍｏｌ）のＰＯＣｌ3不均一溶液（２００ｍＬ、２.１５ｍｏｌ）をゆっくりと１時間かけて還流するまで加熱した。反応混合物を還流で４時間維持した。反応混合物を次いで室温に冷却し、減圧濃縮して、過剰なＰＯＣｌ3を除去した。生じた残渣を次いでＣＨ2Ｃｌ2（６００ｍＬ）に溶解し、−３５℃に冷却し、次いで混合液がわずかに塩基性（ｐＨ＝８）になるまで、ＮａＯＨ（１Ｎ、４００ｍＬ）で注意して中和した。生じた有機層を分離し、水で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、減圧濃縮した。生じた残渣をＥｔＯＡｃ（約５０ｍＬ）から結晶化して、目的の生成物（３２ｇ）を得た。固形物を集めて、１０％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（３×５０ｍｌ）で洗浄した。母液を濃縮し、バイオタージ（１６％ ＥｔＯＡｃのヘキサン溶液で溶離）で精製して、固形物として、目的の生成物（４ｇ）を得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.80 (dd, J = 8.81, 2.01 Hz, 1H), 8.14 (d, J = 9.06 Hz, 1H), 8.34 (d, J = 1.76 Hz, 1H), 8.48 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 118.39, 125.06, 127.59, 128.71, 133.89, 134.14, 134.93, 143.18, 148.98; LC-MS, MS m/z 275.
【０１００】
段階７：
実施例２，段階６の生成物（２２.１６ｇ、８０ｍｍｏｌ）のＴＨＦのスラリー溶液（５００ｍｌ）に、−７８℃で、１００ｍｌの１.６Ｍ ｎ−ＢｕＬｉ（ヘキサン溶液、１６０ｍｍｏｌ）を１５分かけてカニューレで滴下して加えた（内部温度＜−６５℃に維持しながら）。生じた溶液を０.５時間撹拌し、その後、（ｉ−ＰｒＯ）3Ｂ（３７ｍｌ、１６０ｍｍｏｌ）を１０分かけてシリンジで滴下して加えた（内部温度＜−６５℃に維持しながら）。生じた反応混合物を０.５時間撹拌した。ＬＣ／ＭＳで反応の完了をチェックした後、８０ｍＬの３０％ Ｈ2Ｏ2（７７６ｍｍｏｌ）を１０分かけて滴下ロートで滴下して加え（添加の間、内部温度を−６０℃に上げた）、続いて８０ｍｌの１Ｎ ＮａＯＨ（８０ｍｍｏｌ）を加えた。冷却バスを取り除き、反応混合物を室温に加温し、さらに１時間室温で撹拌した。ＬＣ／ＭＳで反応の完了を適合させた後、反応混合物を次いで−４０℃に冷却し、過剰なＨ2Ｏ2を３０分かけてクエンチする手段として、Ｎａ2ＳＯ3（１００ｇ、０.７９３モル）の水溶液（４００ｍｌ）を滴下ロートで滴下して加えた（内部温度を５〜１０℃に維持しながら）。生じたスラリーを次いで０℃でＨＣｌ（６Ｎ、約５０ｍｌ）を用いてｐＨ 〜６まで中和し、次いでＥｔＯＡｃ（５００ｍｌ）で希釈し、２Ｌ 分液漏斗にデカントした。反応容器中に残存する固形物に、水（５００ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（３００ｍｌ）を加え、次いでＨＣｌ（６Ｎ、約２０ｍｌ）で中和した。有機層を合わせて、食塩水（３００ｍｌ×３）、次いで水（２００ｍｌ×３）で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、濃縮して、粗生成物を得て、それをＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）でトリチュレートした。固形物を濾過で集めて、ＥｔＯＡｃ（３×２５ｍｌ）ですすぎ、乾燥して、目的の生成物（２回実行(2 runs)：１２.０ｇ、７０％および１３.８ｇ、８１％）を得た。濾液を合わせて、濃縮し、バイオタージ（３５％ ＥｔＯＡｃのヘキサン溶液で溶離）で精製して、生成物（２.１ｇ）を得た。全体では、４４.４ｇの臭化物によって、４−ＯＨ生成物（２７.９ｇ、８１％）が得られた。
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 4.05 (s, 3H), 7.4 (s, 1H), 7.76 (dd, J = 8.8, 2, Hz, 1H), 8.16 (d, J = 2 Hz, 1H), 8.23 (d, J = 8.8 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 123.78, 124.66, 125.62, 127.03, 127.71, 130.72, 133.80, 137.63; 148.88; LC-MS, MS m/z 213.
【０１０１】
段階８：
実施例２，段階７の生成物（１６ｇ、７５.５ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ−ＭｅＣＮのスラリー溶液（３０ｍＬ／３００ｍＬ）に、０℃で、６０ｍｌの２Ｍ ＴＭＳＣＨＮ2のヘキサン溶液（１２０ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。反応混合物を室温に加温し、次いで１４時間撹拌した。溶液を次いで濃縮し、生じた固形物をＥｔＯＡｃ（約５０ｍＬ）から再結晶して、目的の生成物（８.１ｇ）を得て、それを２５％ ＥｔＯＡｃのヘキサン溶液（２０×３回）で洗浄した。母液を濃縮し、バイオタージ（１６％ ＥｔＯＡｃのヘキサン溶液で溶離）で精製して、固形物として、目的の生成物（３.２ｇ）を得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 4.05 (s, 3H), 7.67 (dd, J = 9.06, 2.01 Hz, 1H), 7.80 (s, 1H), 8.16 (d, J = 8.81 Hz, 1H), 8.23 (d, J = 2.01 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 56.68, 122.70, 123.99, 124.14, 126.67, 127.83, 131.43, 134.10, 139.75, 149.94; LC-MS, MS m/z 229.
【０１０２】
【化１１】
段階９：
１，７−ジクロロ−４−メトキシイソキノリン（４.５２ｇ、２０ｍｍｏｌ）、Ｂｏｃ−Ｌ−Ｈｙｐ−ＯＨ（５.０８ｇ、２２ｍｍｏｌ）およびｔ−ＢｕＯＫ（６.７２ｇ、６０ｍｍｏｌ）の混合物に、１０℃で撹拌しながらＤＭＳＯ（２００ｍＬ）を加え、次いで生じたスラリーを３０分間超音波処理して、室温で、すばやく均一な溶液を得た。生じた溶液を３時間撹拌した。反応混合液を次いで０℃に冷却し、水（５０ｍｌ）でクエンチした。ＨＣｌ（１Ｎ）を加えることによって、生じた混合物を最終的なｐＨ ５に中和／酸性化した。生じた混合物をＥｔＯＡｃ（４００ｍＬ）で抽出し、有機層を次いで食塩水（２００ｍＬ）、水（２００ｍＬ×２）で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、濾過し、次いで減圧濃縮して、クルードの固形物（８.３６ｇ）を得た。この物質をさらに精製することなく次の段階に用いた。
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 2.34 - 2.47 (m, 1 H), 2.62 - 2.77 (m, 1 H), 3.70 - 3.92 (m, 2 H), 4.42 - 4.59 (m, 1 H), 5.65 (brs, 1 H), 7.54 (s, 1 H), 7.68 (dd, J=8.81, 2.01 Hz, 1 H), 8.02 - 8.13 (m, 2 H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) (Ｂｏｃ回転異性体のため、観測されたピークは炭素数よりも多い) δ ppm 13.90, 14.04, 20.71, 22.02, 27.84, 27.98, 30.91, 35.00, 35.87, 51.84, 52.08, 56.21, 57.49, 57.80, 59.70, 73.32, 73.87, 79.14, 79.19, 119.11, 119.77, 122.38, 123.35, 128.50, 130.95, 132.25, 145.70, 151.94, 153.25, 153.71, 173.51, 173.98; LC-MS, MS m/z 423.
【０１０３】
段階１０：
実施例２，段階９の生成物（４.２３ｇ、１０ｍｍｏｌ）、シクロプロパンスルホンアミド（２.３００ｇ、１２.００ｍｍｏｌ）、ヒューニッヒ塩基（６.４６ｇ、５０.０ｍｍｏｌ）、およびＨＡＴＵ（５.７０ｇ、１５.００ｍｍｏｌ）のＣＨ2Ｃｌ2混合溶液（２０ｍＬ）を４時間撹拌した。濃縮した後、残渣を３３％ アセトンのヘキサン溶液で溶離するバイオタージ（４０＋Ｓ Ｓｉカラム）で精製して、固形物として、目的の生成物（４.７ｇ、８４％）を得た。
LC-MS, MS m/z 560.
【０１０４】
段階１１：
実施例２，段階１０の生成物（５.６０ｇ、１０ｍｍｏｌ）に、４Ｍ ＨＣｌ（２５.００ｍＬ、１００ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン溶液を加えた。形成した溶液を２５℃で３時間撹拌した。減圧濃縮した後、残渣にエーテル（２０ｍＬ）を加え、次いで再び濃縮し、該手順を３回繰り返した。ハウスバキューム乾燥によって、固形物として、粗生成物（５.３３ｇ、１００％）を得て、それをさらに精製することなく次の段階に用いた。
【０１０５】
段階１２：
実施例２，段階１１の生成物（５.６０ｇ、１０ｍｍｏｌ）に、４Ｍ ＨＣｌ（２５.００ｍＬ、１００ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン溶液を加えた。形成した溶液を２５℃で３時間撹拌した。減圧濃縮した後、残渣にエーテル（２０ｍＬ）を加え、次いで再び濃縮し、該手順を３回繰り返した。ハウスバキューム乾燥によって、固形物として、粗生成物（５.３３ｇ、１００％）を得て、それをさらに精製することなく次の段階に用いた。
LC-MS, MS m/z 720.
【０１０６】
段階１３：
実施例２，段階１２の生成物（１６０ｍｇ、０.２２２ｍｍｏｌ）およびグラブスＩＩ（３０ｍｇ、０.０３５ｍｍｏｌ）のＣＨ2Ｃｌ2溶液（５ｍＬ）を加え、１６時間還流した。濃縮した後、残渣を２５％ アセトンのヘキサン溶液で溶離するバイオタージで精製して、単一のジアステレオマー（５４ｍｇ）を得て、その構造を反応式に示したようにまたは（Ｒ）−異性体とラベルした。
LC-MS, MS m/z 692.
【０１０７】
段階１４：
実施例２，段階１３の生成物（５０ｍｇ、０.０７２ｍｍｏｌ）および水酸化ナトリウム（２８.９ｍｇ、０.７２２ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（５ｍＬ）および水（２.００ｍＬ）溶液を２時間還流した。濃縮した後、残渣をＨＣｌ（１Ｎ、１ｍＬ）で中和し、ＥｔＯＡｃで抽出し、ＭｇＳＯ4で乾燥した。濾過および濃縮によって、目的の生成物（４６ｍｇ）を得て、それをさらに精製することなく次の段階に用いた。
【０１０８】
段階１５：
実施例２，段階１４の生成物（４５ｍｇ、０.０６８ｍｍｏｌ）およびＣＤＩ（１５.３８ｍｇ、０.０９５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（１ｍＬ）を１時間還流した。室温に冷却した後、溶液に、シクロプロパンスルホンアミド（１３.１３ｍｇ、０.１０８ｍｍｏｌ）を加え、続いてＤＢＵ（０.０２０ｍＬ、０.１３６ｍｍｏｌ）を加え、次いで生じた溶液を終夜撹拌した。濃縮した後、残渣を分取ＨＰＬＣで精製して、白色固形物として、目的の生成物（１５ｍｇ、３０％）を得た。
LC-MS, MS m/z 767.
【０１０９】
実施例３：化合物３の製造
【化１２】
【化１３】
段階１：１−（２（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−ノン−８−エノイル）−４（Ｒ）−ヒドロキシ−ピロリジン−２（Ｓ）−カルボン酸メチルエステルの製造
【化１４】
２（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−８−ノンエン酸（ＲＳＰ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄｓから購入）（３.５ｇ、１２.９ｍｍｏｌ）のＤＣＭ溶液（２００ｍｌ）を、４（Ｒ）−ヒドロキシピロリジン−２（Ｓ）−カルボン酸 メチルエステル塩酸塩（２.１５ｇ、１１.８ｍｍｏｌ）、Ｎ−メチルモルホリン（４.２５ｍＬ、３８.６ｍｍｏｌ）、およびＨＡＴＵ（５.３７ｇ、１４.１ｍｍｏｌ）で連続して処理した。反応混合液をＮ2下、室温で３日間撹拌し、次いで減圧濃縮した。残渣を酢酸エチルとｐＨ ４緩衝液（ビフタレート）の間で分液した。有機相を飽和ＮａＨＣＯ3水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、減圧濃縮して、粗生成物を得た。フラッシュクロマトグラフィ（５０％ 酢酸エチル／ヘキサン〜１００％ 酢酸エチル）によって、無色油として、１−（２（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−ノン−８−エノイル）−４（Ｒ）−ヒドロキシ−ピロリジン−２（Ｓ）−カルボン酸メチルエステル（４.７ｇ、〜１００％）を得た：
1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ 1.33-1.50(m, 8 H), 1.46 (s, 9 H), 1.57 (m, 1 H), 1.72 (m, 1 H) 2.08 (m, 2 H), 2.28 (m, 1 H), 3.72 (s, 3 H,) 3.75-3.87 (m, 2 H), 4.36 (m, 1 H), 4.51 (bs, 1 H), 4.57 (t, J=8.2 Hz, 1 H), 4.95 (d, J=10.4 Hz, 1 H), 5.01 (m, 1 H), 5.83 (m, 1 H). MS m/z 399 (M++1).
【０１１０】
段階２：１−｛［１−（２（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−ノン−８−エノイル）−４（Ｒ）−ヒドロキシ−ピロリジン−２（Ｓ）カルボニル］−（１Ｒ）−アミノ｝−２（Ｓ）−ビニル−シクロプロパンカルボン酸エチルエステルの製造
【化１５】
１−（２（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−ノン−８−エノイル）−４（Ｒ）−ヒドロキシ−ピロリジン−２（Ｓ）−カルボン酸メチルエステル（４.７ｇ、１１.８ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（８０ｍＬ）、メタノール（２０ｍＬ）、および水（４０ｍＬ）に溶解した。粉末状の水酸化リチウム（５.６ｇ、２３３ｍｍｏｌ）を加えた。明黄色スラリーをＮ2下、室温で１６時間撹拌し、次いで減圧濃縮した。残渣をエーテルと水の間で分液した。エーテル相を廃棄し、ｐＨが４になるまで水相をＨＣｌ（１Ｎ）で処理した。酸性溶液をＥｔＯＡｃ（３×）で抽出した。ＥｔＯＡｃ抽出物を合わせて、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、濾過し、減圧濃縮して、白色固形物として、１−（２（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−８−ノンエノイル）−４（Ｒ）−ヒドロキシ−ピロリジン−２（Ｓ）−カルボン酸（４.３６ｇ、９６％）を得た。この酸を次いでＤＭＦ（１５０ｍｌ）に溶解し、（１Ｒ，２Ｓ）−１−アミノ−２−ビニルシクロプロパンカルボン酸エチルエステル塩酸塩（２.６１ｇ、１３.６ｍｍｏｌ）、Ｎ−メチルモルホリン（２.５ｍＬ、２２.６ｍｍｏｌ）、およびＨＡＴＵ（５.２ｇ、１３.７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合液をＮ2下、室温で１６時間撹拌し、次いで減圧濃縮した。残渣を酢酸エチルとｐＨ ４緩衝液（ビフタレート）の間で分液した。有機相を飽和ＮａＨＣＯ3水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、濾過し、減圧濃縮して、粗生成物を得た。フラッシュクロマトグラフィ（６０％〜８０％ 酢酸エチル／ヘキサン）によって、白色固形物として、１−｛［１−（２（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−ノン−８−エノイル）−４（Ｒ）−ヒドロキシ−ピロリジン−２（Ｓ）カルボニル］−（１Ｒ）−アミノ｝−２（Ｓ）−ビニル−シクロプロパンカルボン酸エチルエステル（６.０ｇ、９８％）を得た。
1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ 1.25 (t, J=7.2 Hz, 3 H), 1.33-1.80 (m, 10 H), 1.46 (s, 9 H), 2.09 (m, 3 H), 2.25 (m, 2 H), 3.76 (m, 2 H), 4.14 (m, 2 H), 4.27 (dd, J=8.5, 5.2 Hz, 1 H), 4.50 (m, 2 H), 4.94 (d, J=10.1 Hz, 1 H), 5.01 (dd, J=17.1, 1.8 Hz, 1 H), 5.11 (dd, J=10.4, 1.8 Hz, 1 H), 5.30 (d, J=15.6 Hz, 1 H), 5.80 (m, 2 H), 8.57 (s, 1 H). MS m/z 522 (M++1).
【０１１１】
段階３：１−｛［１−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−ノン−８−エノイル）−４−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−２−ビニルシクロプロパンカルボン酸エチルエステルの製造
【化１６】
１−｛［１−（２（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−ノン−８−エノイル）−４（Ｒ）−ヒドロキシ−ピロリジン−２（Ｓ）カルボニル］−（１Ｒ）−アミノ｝−２（Ｓ）−ビニル−シクロプロパンカルボン酸エチルエステル（１.５ｇ、２.８７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ混合溶液（１０ｍｌ）に、イミダゾール（０.２５ｇ、３.６７ｍｍｏｌ）およびｔｅｒｔ−ブチル−ジメチルシリルクロリド（５１６ｍｇ、３.４４ｍｍｏｌ）を加えた。混合液を室温で２日間撹拌した。それを次いで減圧濃縮し、残渣を酢酸エチルに溶解した。それを次いで水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、減圧濃縮して、固形物を得て、それを次いでフラッシュクロマトグラフィ（２０％ 酢酸エチルのヘキサン溶液で溶離）で精製して、白色固形物（１.４３ｇ、７８％）を単離した。
1H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 0.10 (s,6 H), 0.89 (s, 9 H), 1.22 (m, 3 H), 1.31-1.48 (m, 16 H), 1.50-1.75 (m, 3 H), 2.06 (m, 3 H), 2.11-2.33 (m, 2 H), 3.70 (m, 2 H), 4.03-4.19 (m, 2 H), 4.21 (m, 1 H), 4.45 (t, J=7.87 Hz, 1 H), 4.59 (m, 1 H), 4.91 (d, J=9.15 Hz, 1 H), 4.98 (d, J=17.20 Hz, 1 H), 5.08 (dd, J=10.25, 1.83 Hz, 1 H), 5.27 (dd, J=17.38, 1.65 Hz, 1 H), 5.65-5.87 (m, 2 H). MS m/z 636 (M++1).
【０１１２】
段階４：１４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−１８−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−２，１５−ジオキソ−３，１６−ジアザ−トリシクロ［１４.３.０.０４，６］ノナデカ−７−エン−４−カルボン酸エチルエステルの製造
【化１７】
１−｛［１−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−ノン−８−エノイル）−４−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−２−ビニル−シクロプロパンカルボン酸エチルエステル（１.６３ｇ、２.５６ｍｍｏｌ）の塩化メチレン溶液（６４０ｍｌ）に、トリシクロヘキシルホスフィン［１，３−ビス（２，４，６−トリ［ベンジリデン］ルテニウム（ＩＶ）ジクロリド（２１５ｍｇ、０.２６ｍｍｏｌ）を加えた。混合液を１５分間加熱還流した。残渣を減圧濃縮し、次いで３０％ 酢酸エチル／ヘキサンで溶離するフラッシュクロマトグラフィで精製した。サンプルをさらに脱色するため、粗生成物を５０％ エーテルのヘキサン溶液で溶離する２回目のクロマトグラフィに供して、白色固形物として、生成物（１.５ｇ、９６％）を得た。
1H NMR (500 MHz, CD3Cl) δ 0.06 (s, 3 H), 0.07 (s, 3 H), 0.86 (s, 9 H), 1.18-1.24 (m, 6 H), 1.34-1.64 (m, 14 H), 1.86-1.96 (m, 3 H), 2.02-2.09 (m, 1 H), 2.11-2.17 (m, 1 H), 2.19-2.28 (m, 1 H), 2.57-2.63 (m, 1 H), 3.50-3.54 (m, 1 H), 3.71 (dd, J=10.22, 6.26 Hz, 1 H), 4.06-4.17 (m, 2 H), 4.52-4.58 (m, 2 H), 4.75 (d, J=8.55 Hz, 1 H), 5.21 (t, J=9.92 Hz, 1 H), 5.35 (d, J=7.63 Hz, 1 H), 5.45-5.50 (m, 1 H), 6.94 (s,1 H). MS m/z 608 (M++1).
【０１１３】
段階５：１４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−１８−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−２，１５−ジオキソ−３，１６−ジアザ−トリシクロ［１４.３.０.０４，６］ノナデカ−７−エン−４−カルボン酸の製造
【化１８】
１４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−１８−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−２，１５−ジオキソ−３，１６−ジアザ−トリシクロ［１４.３.０.０４，６］ノナデカ−７−エン−４−カルボン酸エチルエステル（１.５ｇ、２.４７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（４ｍＬ）、メタノール（１ｍＬ）、および水（２ｍＬ）溶液に、粉末状の水酸化リチウム（１.０ｇ、５０ｍｍｏｌ）を加え、明黄色スラリーをＮ2下、室温で４時間撹拌した。混合液を次いで減圧濃縮し、残渣をエーテルと水の間で分液した。エーテル相を廃棄し、ｐＨ ４まで水相をＨＣｌ（１Ｎ）で処理した。この酸性溶液をＥｔＯＡｃで３回抽出した。ＥｔＯＡｃ抽出物を合わせて、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、減圧濃縮して、オフホワイトの固形物（１.２ｇ、８４％）を得た。
1H NMR (300 MHz, CD3OD) δ ppm 0.12 (s, 6 H), 0.89 (s, 9 H), 1.23-1.64 (m, 17 H), 1.70-1.87 (m, 1 H), 1.90-2.49 (m, 6 H), 3.70-3.80 (m,1 H), 3.83-3.90 (m, 1 H), 4.28-4.36 (m, 1 H), 4.47-4.55 (m, 1 H), 4.65 (s, 1 H), 5.30-5.39 (m, 1 H), 5.53-5.62 (m, 1 H). MS m/z 580 (M++1).
【０１１４】
段階６：［１８−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−４−シクロプロパンスルホニルアミノカルボニル−２，１５−ジオキソ−３，１６−ジアザ−トリシクロ［１４.３.０.０４，６］ノナデカ−７−エン−１４−イル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルの製造
【化１９】
１４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−１８−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−２，１５−ジオキソ−３，１６−ジアザ−トリシクロ［１４.３.０.０４，６］ノナデカ−７−エン−４−カルボン酸（５００ｍｇ、０.８６ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２５ｍｌ）に溶解し、ＣＤＩ（１８０ｍｇ、１.１２ｍｍｏｌ）で処理した。（乾燥器で乾燥したガラス製品を用い、乾燥Ｎ2雰囲気を維持することによって、湿気を避けるように注意した）。反応混合液を２時間還流した後、それを室温に冷却し、シクロプロピルスルホンアミド（１３５ｍｇ、１.１２ｍｍｏｌ）およびＤＢＵ（１７０ｍｇ、１.１２ｍｍｏｌ）で連続して処理した。室温で４時間撹拌した後、回転蒸発でＴＨＦを除去した。残渣を酢酸エチルとｐＨ ４緩衝液の間で分液した。有機相を乾燥（ＭｇＳＯ4）し、濾過し、減圧濃縮して、粗生成物を得た。それを次いで、３３％ 酢酸エチルのヘキサン溶液で溶離するフラッシュカラムで精製して、白色固形物（３００ｍｇ、５１％）を単離した。
1H NMR (300 MHz, CD3OD) δ ppm 1H 0.07 (s, 3 H), 0.08 (s, 3 H), 0.85 (s, 9 H), 0.87-1.49 (m, 21 H), 1.73-1.95 (m, 3 H), 2.08-2.16 (m, 1 H), 2.25-2.36 (m, 2 H), 2.42-2.56 (m, 1 H), 2.85-2.93 (m, 1 H), 3.65-3.74(dd, J=10.61, 3.66 Hz, 1 H), 3.89 (d, J=10.25 Hz, 1 H), 4.34 (m, J=9.70, 9.70 Hz, 1 H), 4.43 (t, J=7.87 Hz, 1 H), 4.57 (s, 1 H), 4.94-5.01 (m, 1 H), 5.10 (d, J=8.78 Hz, 1 H), 5.66-5.75 (m, 1 H), 6.55 (s, 1 H), 10.13 (s, 1 H). MS m/z 683 (M++1).
【０１１５】
段階７：（４−シクロプロパンスルホニルアミノカルボニル−１８−ヒドロキシ−２，１５−ジオキソ−３，１６−ジアザ−トリシクロ［１４.３.０.０４，６］ノナデカ−７−エン−１４−イル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化２０】
［１８−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−４−シクロプロパンスルホニルアミノカルボニル−２，１５−ジオキソ−３，１６−ジアザ−トリシクロ［１４.３.０.０４，６］ノナデカ−７−エン−１４−イル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（３３０ｍｇ、０.４８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ混合溶液（２５ｍｌ）に、テトラブチルアンモニウムフルオライド（１５０ｍｇ、０.５４ｍｍｏｌ）を加え、混合液を室温で終夜撹拌した。回転蒸発でＴＨＦを除去した。残渣を酢酸エチルと水の間で分液した。有機相を乾燥（ＭｇＳＯ4）し、減圧濃縮して、粗生成物を得た。それを次いでヘキサンでトリチュレートすることで精製して、白色固形物（２００ｍｇ、７３％）を得た。
1H NMR (500 MHz, CD3Cl) δ ppm 1.87-1.64 (m, 21 H), 1.70-1.98 (m, 3 H), 2.15-2.56 (m, 5 H), 2.85-2.94 (m, 1 H), 3.71 (d, J=13.91 Hz, 1 H), 4.10-4.26 (m, 2 H), 4.51 (t, J=7.87 Hz, 1 H), 4.62 (s, 1 H), 4.98 (m, 1 H), 5.06 (d, J=8.78 Hz, 1 H), 5.64-5.71 (m, 1 H), 6.72 (s, 1 H), 10.24 (s, 1 H). MS m/z 569 (M++1).
【０１１６】
段階８，［４−シクロプロパンスルホニルアミノカルボニル−１８−（６−メトキシ−イソキノリン−１−イルオキシ）−２，１５−ジオキソ−３，１６−ジアザ−トリシクロ［１４.３.０.０４，６］ノナデカ−７−エン−１４−イル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルの製造
【化２１】
４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−１８−ヒドロキシ−２，１５−ジオキソ−３，１６−ジアザ−トリシクロ［１４.３.０.０４，６］ノナデカ−７−エン−４−カルボン酸（２１５ｍｇ、０.４６ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ混合溶液（５ｍＬ）に、ｔ−ＢｕＯＫ（１２５ｍｇ、１.１１ｍｍｏｌ）および１−クロロ−６−メトキシ−イソキノリン（１１０ｍｇ、０.５６ｍｍｏｌ、実施例１ 反応式１より）を加えた。反応液を室温で５時間撹拌した。反応混合液を次いでエーテル（１０ｍＬ）と水（１０ｍＬ）の間で分液した。ＨＣｌ（１Ｎ）を用いて水相をｐＨ ４に酸性化した。生じた溶液をＥｔＯＡｃ（３×２０ｍＬ）で抽出した。ＥｔＯＡｃ抽出物を合わせて、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、濾過し、減圧濃縮して、白色固形物を得た。フラッシュクロマトグラフィ（２％ ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2）によって、白色固形物として、カルボン酸誘導体（１４０ｍｇ、４９％）を得た。
LC-MS (方法 B, 保持時間: 1.80 分), MS m/z 543 (M++1).
上記の一般的な手順に記載したように、上記の固形物（１４０ｍｇ、０.２２ｍｍｏｌ）をシクロプロピルスルホンアミド（３５ｍｇ、０.２８ｍｍｏｌ）で処理して、粗生成物を得た。フラッシュクロマトグラフィ（２％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって、目的の生成物（９０ｍｇ）を得た。プレパラティブＨＰＬＣ（ＹＭＣ ＸＴＥＲＲＡ、Ｓ５、３０×５０ｍｍ、５０％〜１００％Ｂ、グラジエント ９分、１分保持、流速４０ｍＬ／分）でさらに精製して、白色粉末として、生成物（３０ｍｇ、１９％）を得た。
MS m/z 726 (M++1).
【０１１７】
段階９：シクロプロパンスルホン酸［（Ｚ）−（１Ｓ，４Ｒ，１４Ｓ，１８Ｒ）−１４−アミノ−１８−（６−メトキシ−イソキノリン−１−イルオキシ）−２，１５−ジオキソ−３，１６−ジアザ−トリシクロ［１４.３.０.０４，６］ノナデカ−７−エン−４−カルボニル］−アミドの製造
【化２２】
実施例２の生成物（０.９４４ｇ、３.０３ｍｍｏｌ）を４Ｍ ＨＣｌのジオキサン溶液（１５ｍＬ）に溶解した。混合液を室温で４時間撹拌し、次いで減圧濃縮した。残渣を次いでジクロロメタン（２０ｍＬ）に溶解し、再び減圧濃縮した。白色固形物をさらに精製することなく引き続き用いた。
MS m/z 626 (M++1).
【０１１８】
段階１０：中間体１の製造
【化２３】
シクロプロパンスルホン酸［（Ｚ）−（１Ｓ，４Ｒ，１４Ｓ，１８Ｒ）−１４−アミノ−１８−（６−メトキシ−イソキノリン−１−イルオキシ）−２，１５−ジオキソ−３，１６−ジアザ−トリシクロ［１４.３.０.０４，６］ノナデカ−７−エン−４−カルボニル］−アミド（１００ｍｇ、０.１６ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（５ｍｌ）に溶解し、Ｎ2下、室温で、Ｆｍｏｃ−イソチオシアネート（４９.５ｍｇ、０.１７６ｍｍｏｌ、１.１当量）およびＤＩＰＥＡ（０.０８４ｍＬ、０.４７９ｍｍｏｌ、３当量）で連続して処理した。混合液を室温で１時間撹拌した。生じた溶液を次の段階に直接用いた。
【０１１９】
段階１１：シクロプロパンスルホン酸［（Ｚ）−（１Ｓ，４Ｒ，６Ｓ，１４Ｓ，１８Ｒ）−１８−（６−メトキシ−イソキノリン−１−イルオキシ）−２，１５−ジオキソ−１４−チオウレイド−３，１６−ジアザ−トリシクロ［１４.３.０.０４，６］ノナデカ−７−エン−４−カルボニル］−アミドの製造
【化２４】
中間体１（１４５ｍｇ、０.１６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ反応溶液（５ｍｌ）に、ピペリジン（０.５ｍＬ）を加えた。反応混合液を室温で２時間撹拌した。溶媒を濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃに溶解し、ＨＣｌ（１Ｎ）および食塩水溶液で洗浄した。有機層を乾燥し、濃縮した。フラッシュクロマトグラフィ（２％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって、白色固形物として、目的の生成物（５７ｍｇ、０.０８３ｍｍｏｌ、５２％）を得た。
MS m/z 685.4 (M++1).
【０１２０】
段階１２：化合物３の製造
【化２５】
シクロプロパンスルホン酸［（Ｚ）−（１Ｓ，４Ｒ，６Ｓ，１４Ｓ，１８Ｒ）−１８−（６−メトキシ−イソキノリン−１−イルオキシ）−２，１５−ジオキソ−１４−チオウレイド−３，１６−ジアザ−トリシクロ［１４.３.０.０４，６］ノナデカ−７−エン−４−カルボニル］−アミド（２０ｍｇ、０.０２９ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０.０１５ｍＬ、０.０８８ｍｍｏｌ、３当量）のＤＭＦ混合溶液（１ｍＬ）に、Ｎ2下、室温で、２−ブロモ−１−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）エタノン（１６.５３ｍｇ、０.０５８ｍｍｏｌ、２当量）を加えた。混合液を室温で終夜撹拌した。反応混合液をプレパラティブＨＰＬＣで精製して、白色粉末として、生成物（１０.９ｍｇ、０.０１２ｍｍｏｌ、４３％）を得た。
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 0.97 - 1.02 (m, 2 H) 1.04 - 1.11 (m, 4 H) 1.25 - 1.37 (m, 2 H) 1.40 (m, 2 H) 1.57 (m, 2 H) 1.71 (dd, J=8.06, 5.54 Hz, 2 H) 1.92 - 2.03 (m, 2 H) 2.40 (d, J=9.06 Hz, 1 H) 2.52 - 2.64 (m, 2 H) 2.83 - 2.93 (m, 2 H) 3.11 (dt, J=3.21, 1.54 Hz, 2 H) 3.89 (s, 3 H) 4.21 (dd, J=11.71, 3.90 Hz, 1 H) 4.63 (t, J=8.06 Hz, 1 H) 4.75 - 4.81 (m, 2 H) 5.08 (d, J=9.57 Hz, 1 H) 5.70 (d, J=10.07 Hz, 1 H) 6.02 (s, 1 H) 6.73 (s, 1 H, NH) 6.83 - 6.89 (m, 3 H) 7.12 (d, J=2.27 Hz, 1 H) 7.21 (d, J=6.04 Hz, 1 H) 7.60 - 7.67 (m, 2 H) 7.79 (d, J=6.04 Hz, 1 H) 9.00 (s, 1 H, NH). MS m/z 869.3 (M++1).
【０１２１】
実施例４：化合物４の製造
【化２６】
実施例３の製造に記載したものと同じ手順であるが、段階１２での２−ブロモ−１−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）エタノンの代わりに２−ブロモ−１−（２，４−ジフルオロフェニル）エタノンを用いて、実施例４を製造した。
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 0.96 - 1.02 (m, 1 H) 1.04 - 1.11 (m, 2 H) 1.25 - 1.31 (m, 1 H) 1.36 (m, 1 H) 1.58 (dd, J=9.44, 5.41 Hz, 4 H) 1.71 (dd, J=8.06, 5.54 Hz, 2 H) 1.91 - 2.03 (m, 2 H) 2.38 - 2.47 (m, 1 H) 2.50 - 2.61 (m, 1 H) 2.64 (m, 1 H) 2.85 - 2.95 (m, 1 H) 3.64 (s, 2 H) 3.90 (s, 3 H) 4.17 (dd, J=11.33, 3.78 Hz, 1 H) 4.63 (t, J=8.18 Hz, 1 H) 4.74 (dd, J=10.58, 3.27 Hz, 1 H) 4.88 - 4.96 (m, 2 H) 5.04 - 5.10 (m, 1 H) 5.66 - 5.73 (m, 1 H) 6.05 (s, 1 H) 6.45 (td, J=8.31, 2.27 Hz, 1 H) 6.63 (s, 1 H, NH) 6.65 - 6.69 (m, 1 H) 6.89 (dd, J=9.06, 2.52 Hz, 1 H) 7.12 (d, J=2.52 Hz, 1 H) 7.19 (d, J=5.79 Hz, 1 H) 7.58 (d, J=9.06 Hz, 1 H) 7.74 - 7.81 (m, 2 H) 8.98 (s, 1 H, NH) MS m/z 821.6 (M++ H).
【０１２２】
実施例５：化合物５の製造
【化２７】
実施例３の製造に記載したものと同じ手順であるが、段階１２での２−ブロモ−１−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）エタノンの代わりに２−ブロモ−１−フェニルエタノンを用いて、実施例５を製造した。
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 0.98 - 1.03 (m, 1 H) 1.05 - 1.12 (m, 2 H) 1.26 - 1.38 (m, 4 H) 1.47 - 1.59 (m, 2 H) 1.72 (dd, J=8.18, 5.67 Hz, 1 H) 1.81 (s, 1 H) 2.02 (s, 2 H) 2.36 (t, J=8.94 Hz, 1 H) 2.55 (ddd, J=13.85, 8.69, 4.66 Hz, 2 H) 2.63 - 2.71 (m, 1 H) 2.91 (tt, J=7.93, 4.91 Hz, 1 H) 3.64 (s, 3 H) 3.89 (s, 3 H) 4.18 (dd, J=11.58, 3.78 Hz, 1 H) 4.57 (s, 1 H) 4.69 - 4.76 (m, 2 H) 5.01 - 5.11 (m, 2 H) 5.66 - 5.74 (m, 1 H) 5.98 (s, 1 H) 6.63 (s, 1 H, NH) 7.01 (dd, J=9.19, 2.39 Hz, 1 H) 7.16 (d, J=2.52 Hz, 1 H) 7.19 - 7.26 (m, 4 H) 7.53 (dd, J=7.93, 1.64 Hz, 2 H) 7.84 (d, J=6.04 Hz, 2 H) 9.09 (s, 1 H, NH) MS m/z 785.6 (M++ H).
【０１２３】
実施例６：化合物６の製造
【化２８】
実施例３の製造に記載したものと同じ手順であるが、段階８でのイソキノリンクロリドの代わりに１，７−ジクロロ−４−メトキシ−イソキノリン（実施例２ 反応式１より）を用いて、実施例６を製造した。
1H NMR (400 MHz, MCD3OD) δ ppm 0.99 (ddd, J=11.90, 8.25, 3.27 Hz, 1 H) 1.03 - 1.13 (m, 2 H) 1.24 - 1.36 (m, 2 H) 1.58 (dd, J=9.44, 5.16 Hz, 4 H) 1.70 (dd, J=8.18, 5.41 Hz, 2 H) 1.89 - 1.98 (m, 1 H) 2.02 (s, 1 H) 2.41 - 2.52 (m, 3 H) 2.64 (s, 1 H) 2.84 - 2.92 (m, 1 H) 3.31 - 3.34 (m, 2 H) 3.64 (s, 1 H) 3.92 (s, 3 H) 4.15 (dd, J=11.33, 3.78 Hz, 1 H) 4.58 (t, J=8.31 Hz, 1 H) 4.78 (dd, J=10.95, 3.15 Hz, 2 H) 5.03 - 5.13 (m, 2 H) 5.68 (m, 1 H) 6.08 (s, 1 H) 6.68 (m, 2H) 6.75 (s,1 H) 7.40 (s, 1 H, NH) 7.46 (s, 1 H) 7.52 (dd, J=8.81, 2.27 Hz, 1 H) 7.56 - 7.62 (m, 2 H) 7.93 (d, J=8.81 Hz, 1 H) 8.93 (s, 1 H, NH). MS m/z 903.3 (M++ H).
【０１２４】
生物学的研究
ＨＣＶ ＮＳ３／４Ａプロテアーゼ複合体酵素アッセイおよび細胞ベースのＨＣＶレプリコンアッセイを本開示において用い、下記のように調製し、実施し、確認した。
【０１２５】
組換えＨＣＶ ＮＳ３／４Ａプロテアーゼ複合体の産生
ＢＭＳ株、Ｈ７７株またはＪ４Ｌ６Ｓ株由来のＨＣＶ ＮＳ３プロテアーゼ複合体を、下記で説明するように産生した。これらの精製した組換えタンパク質を、均一系アッセイ（下記を参照されたい）において使用するために産生し、ＨＣＶ ＮＳ３タンパク質分解活性の阻害において本開示の化合物がいかに有効であるかを示した。
【０１２６】
ＨＣＶ感染患者からの血清を、サンフランシスコ病院のＴ．Ｗｒｉｇｈｔ医師から得た。ＨＣＶゲノム（ＢＭＳ株）の設計された完全長ｃＤＮＡ（相補デオキシリボ核酸）鋳型を、血清ＲＮＡ（リボ核酸）の逆転写−ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）によって得たＤＮＡフラグメントから、他の遺伝子型１ａ株の間の相同性に基づいて選択したプライマーを使用して作製した。全ゲノム配列の決定から、Ｓｉｍｍｏｎｄｓらの分類によって、ＨＣＶ分離株に対して遺伝子型１ａを割り当てた（P Simmonds, KA Rose, S Graham, SW Chan, F McOmish, BC Dow, EA Follett, PL Yap and H Marsden, J. Clin. Microbiol., 31(6), 1493-1503 (1993)を参照されたい）。非構造領域ＮＳ２−５Ｂのアミノ酸配列は、ＨＣＶ遺伝子型１ａ（Ｈ７７）に＞９７％同一であり、遺伝子型１ｂ（Ｊ４Ｌ６Ｓ）に８７％同一であることが示された。感染性クローンＨ７７（１ａ遺伝子型）およびＪ４Ｌ６Ｓ（１ｂ遺伝子型）は、Ｒ．Ｐｕｒｃｅｌｌ（ＮＩＨ）から得たが、配列はＧｅｎｂａｎｋにおいて公開されている（ＡＡＢ６７０３６、Yanagi,M., Purcell,R.H., Emerson,S.U. and Bukh,J. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 94(16), 8738-8743 (1997); AF054247を参照されたい、Yanagi,M., St Claire,M., Shapiro,M., Emerson,S.U., Purcell,R.H. and Bukh,J, Virology 244 (1), 161-172. (1998)を参照されたい）。
【０１２７】
Ｈ７７およびＪ４Ｌ６Ｓ株を組換えＮＳ３／４Ａプロテアーゼ複合体の産生のために使用した。これらの株について組換えＨＣＶ ＮＳ３／４Ａプロテアーゼ複合体（アミノ酸１０２７〜１７１１）をコードするＤＮＡを、Ｐ．Ｇａｌｌｉｎａｒｉらによって記載されているように操作した（Gallinari P, Paolini C, Brennan D, Nardi C, Steinkuhler C, De Francesco R. Biochemistry. 38(17):5620-32, (1999)を参照されたい）。手短に言えば、３個のリシンの可溶化尾部を、ＮＳ４Ａコード領域の３’末端に添加した。ＮＳ４Ａ−ＮＳ４Ｂ切断部位のＰ１位中のシステイン（アミノ酸１７１１）をグリシンに変更し、リシンタグのタンパク質分解的切断を防止した。さらに、システインからセリンへの変異をアミノ酸位置１４５４でＰＣＲによって導入し、ＮＳ３ヘリカーゼドメインにおける自己分解による切断を防止した。Ｐ．Ｇａｌｌｉｎａｒｉらによって記載されたプロトコルに修正を加えて、変異ＤＮＡフラグメントをｐＥＴ２１ｂ細菌発現ベクター（Ｎｏｖａｇｅｎ）中でクローン化し、ＮＳ３／４Ａ複合体を大腸菌株ＢＬ２１（ＤＥ３）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で発現させた（Gallinari P, Brennan D, Nardi C, Brunetti M, Tomei L, Steinkuhler C, De Francesco R., J Virol. 72(8):6758-69 (1998)を参照されたい）。手短に言えば、ＮＳ３／４Ａプロテアーゼ複合体発現を、０．５ミリモル（ｍＭ）のイソプロピルβ−Ｄ−１−チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）によって２０℃で２２時間（ｈ）誘導した。典型的な発酵（１リットル（Ｌ））によって、約１０グラム（ｇ）の湿細胞ペーストを得た。２５ｍＭのＮ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−Ｎ’−（２−エタンスルホン酸）（ＨＥＰＥＳ）（ｐＨ７．５）、２０％グリセロール、５００ｍＭの塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、０．５％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００、１マイクログラム／ミリリットル（「μｇ／ｍＬ」）のリゾチーム、５ｍＭの塩化マグネシウム（ＭｇＣｌ2）、１μｇ／ｍｌのＤｎａｓｅＩ、５ｍＭのβ−メルカプトエタノール（βＭＥ）、プロテアーゼ阻害剤（エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）非含有）（Ｒｏｃｈｅ）からなる溶解バッファー（１０ｍＬ／ｇ）中で細胞を再懸濁させ、ホモジナイズし、４℃で２０分（分）間インキュベートした。ホモジネートを超音波処理し、４℃にて２３５０００ｇで１時間（ｈ）超遠心分離することによって清澄にした。イミダゾールを１５ｍＭの最終濃度まで上清に加え、ｐＨを８．０に調節した。粗タンパク質抽出物を、バッファーＢ（２５ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ８．０）、２０％グリセロール、５００ｍＭのＮａＣｌ、０．５％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００、１５ｍＭのイミダゾール、５ｍＭのβＭＥ）で予め平衡化させたニッケル−ニトリロ三酢酸（Ｎｉ−ＮＴＡ）カラムに添加した。試料を１ｍＬ／分の流量で添加した。カラムを１５カラム容量のバッファーＣ（０．２％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００以外はバッファーＢと同一）で洗浄した。タンパク質を５カラム容量のバッファーＤ（２００ｍＭのイミダゾール以外はバッファーＣと同一）で溶出した。
【０１２８】
ＮＳ３／４Ａプロテアーゼ複合体含有画分をプールし、バッファーＤ（２５ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）、２０％グリセロール、３００ｍＭのＮａＣｌ、０．２％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００、１０ｍＭβＭＥ）で予め平衡化した脱塩カラムＳｕｐｅｒｄｅｘ−Ｓ２００に添加した。試料を１ｍＬ／分の流量で添加した。ＮＳ３／４Ａプロテアーゼ複合体含有画分をプールし、約０．５ｍｇ／ｍｌまで濃縮した。ＢＭＳ、Ｈ７７およびＪ４Ｌ６Ｓ株由来のＮＳ３／４Ａプロテアーゼ複合体の純度は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよび質量分析法によって９０％超であると判断した。酵素は、アッセイバッファーにおいて使用する前に、−８０℃で貯蔵し、氷上で解凍し、希釈した。
【０１２９】
ＨＣＶ ＮＳ３／４Ａタンパク質分解活性をモニターするためのＦＲＥＴペプチドアッセイ
このインビトロアッセイの目的は、本開示の化合物による上記のようなＢＭＳ株、Ｈ７７株またはＪ４Ｌ６Ｓ株由来のＨＣＶ ＮＳ３プロテアーゼ複合体の阻害を測定することであった。このアッセイは、ＨＣＶ ＮＳ３タンパク質分解活性の阻害において本開示の化合物がいかに有効であるかを示した。
【０１３０】
ＨＣＶ ＮＳ３／４Ａプロテアーゼ活性をモニターするために、ＮＳ３／４Ａペプチド基質を使用した。基質は、Anal. Biochem. 240(2):60-67 (1996)においてＴａｌｉａｎｉらによって記載されたＲＥＴ Ｓ１であった（共鳴エネルギー移動デプシペプチド基質；ＡｎａＳｐｅｃ、Ｉｎｃ．カタログ＃２２９９１）（ＦＲＥＴペプチド）。このペプチドの配列は、切断部位においてアミド結合ではなくエステル結合が存在すること以外は、ＨＣＶ ＮＳ３プロテアーゼについてのＮＳ４Ａ／ＮＳ４Ｂ天然切断部位に大まかに基づいている。ペプチドはまた、ペプチドの一端近くに蛍光供与体ＥＤＡＮＳを、および他端の近くに容体ＤＡＢＣＹＬを含有する。ペプチドの蛍光は、供与体と受容体との間の分子間の共鳴エネルギー移動（ＲＥＴ）によってクエンチされるが、ＮＳ３プロテアーゼがペプチドを切断するにつれ、生成物がＲＥＴ消光から放出され、供与体の蛍光が明らかになる。
【０１３１】
ペプチド基質を、本開示の化合物の非存在下、または存在下で、３種の組換えＮＳ３／４Ａプロテアーゼ複合体の１種と共にインキュベートした。Ｃｙｔｏｆｌｕｏｒ Ｓｅｒｉｅｓ４０００を使用して蛍光性反応生成物の形成をリアルタイムでモニターすることによって化合物の阻害作用を決定した。
【０１３２】
試薬は下記の通りであった。ＨＥＰＥＳおよびグリセロール（Ｕｌｔｒａｐｕｒｅ）は、ＧＩＢＣＯ−ＢＲＬから入手した。ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）は、Ｓｉｇｍａから入手した。β−メルカプトエタノールはＢｉｏ Ｒａｄから入手した。
【０１３３】
アッセイバッファー：５０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）；０．１５ＭのＮａＣｌ；０．１％Ｔｒｉｔｏｎ；１５％グリセロール；１０ｍＭのβＭＥ。基質：２μＭの最終濃度（−２０℃で貯蔵したＤＭＳＯ中の２ｍＭのストック溶液から）。ＨＣＶ ＮＳ３／４Ａプロテアーゼ１ａ（１ｂ）型、２〜３ｎＭの最終濃度（２５ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）、２０％グリセロール、３００ｍＭのＮａＣｌ、０．２％Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ１００、１０ｍＭβＭＥ中の５μＭのストック溶液から）。アッセイ限界に近づいた作用強度を有する化合物については、アッセイバッファーに５０μｇ／ｍｌのウシ血清アルブミン（Ｓｉｇｍａ）を加え、プロテアーゼの最終濃度を３００ｐＭに下げることによって、アッセイをより感応性にした。
【０１３４】
アッセイを、Ｆａｌｃｏｎの９６−ウェルのポリスチレンブラックプレート中で行った。各ウェルは、アッセイバッファー中のＮＳ３／４Ａプロテアーゼ複合体２５μｌ、１０％ＤＭＳＯ／アッセイバッファー中の本開示の化合物５０μｌ、およびアッセイバッファー中の基質２５μｌを含有した。対照（化合物を含有せず）もまた、同一のアッセイプレート上で調製した。基質の添加によって酵素反応が開始する前に、酵素複合体を化合物または対照溶液と１分間混合した。アッセイプレートをＣｙｔｏｆｌｕｏｒ Ｓｅｒｉｅｓ４０００（Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して直ちに読み取った。２５℃にて３４０ｎｍでの発光および４９０ｎｍでの励起を読み取るように装置を設定した。反応は一般に約１５分間続いた。
【０１３５】
下記の式で阻害率を計算した。
１００−［（δＦinh／δＦcon）×１００］
式中、δＦは曲線の線形範囲に亘る蛍光の変化である。非線形曲線の当てはめを阻害−濃度データに適用し、式ｙ＝Ａ＋（（Ｂ−Ａ）／（１＋（（Ｃ／ｘ）＾Ｄ）））を使用してＥｘｃｅｌ ＸＬｆｉｔソフトウェアの使用によって５０％有効濃度（ＩＣ50）を計算した。
【０１３６】
試験したすべての化合物は、７ｎＭ以下のＩＣ50で、ＮＳ３／４Ａプロテアーゼ複合体の活性を阻害することが分かった。さらに、本開示の化合物は、一つより多くのタイプのＮＳ３／４Ａ複合体に対して試験され、該化合物は、１ａ株と比較して、１ｂ株に対してより強い効力を一様に示すが、類似する阻害特性を有することが分かった。
【０１３７】
特異性アッセイ
ＨＣＶ ＮＳ３／４Ａプロテアーゼ複合体の阻害における本開示の化合物のインビトロ選択性を示すために、他のセリンまたはシステインプロテアーゼと比較した、特異性アッセイを行った。
【０１３８】
本開示の化合物の、種々のセリンプロテアーゼに対する特異性を決定した。ヒト好中球エラスターゼ（ＨＮＥ）、ブタ膵エラスターゼ（ＰＰＥ）およびヒト膵臓キモトリプシンおよび１種のシステインプロテアーゼであるヒト肝臓カテプシンＢ。全ての場合において、セリンプロテアーゼアッセイをある程度修正して、従前（ＰＣＴ特許出願第ＷＯ００／０９５４３号）に記載されているように、それぞれの酵素に特異的な蛍光分析のアミノ−メチル−クマリン（ＡＭＣ）基質を使用した９６ウェルプレートフォーマットプロトコルを使用した。全ての酵素はＳｉｇｍａ、ＥＭＤｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから購入し、一方基質はＢａｃｈｅｍ、ＳｉｇｍａおよびＥＭＤｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから購入した。
【０１３９】
化合物濃度は、それらの作用強度によって１００〜０．４μＭで変化した。１０分間プレインキュベートした酵素−阻害剤に室温で基質を加え、ｃｙｔｏｆｌｕｏｒで測定して１５％変換まで加水分解することによって、酵素アッセイをそれぞれ開始した。
【０１４０】
各アッセイについての最終条件は下記の通りであった。
５０ｍＭのトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩酸塩（Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ）（ｐＨ８）、０、５Ｍの硫酸ナトリウム（Ｎａ2ＳＯ4）、５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１ｍＭのＥＤＴＡ、３％ＤＭＳＯ、０．０１％Ｔｗｅｅｎ−２０、５μＭのＬＬＶＹ−ＡＭＣおよび１ｎＭのキモトリプシン。
５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ８．０、５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１ｍＭのＥＤＴＡ、３％ＤＭＳＯ、０．０２％Ｔｗｅｅｎ−２０、５μＭのｓｕｃｃ−ＡＡＰＶ−ＡＭＣおよび２０ｎＭのＨＮＥまたは８ｎＭのＰＰＥ；
１００ｍＭのＮａＯＡＣ（酢酸ナトリウム）（ｐＨ５．５）、３％ＤＭＳＯ、１ｍＭのＴＣＥＰ（トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩）、５ｎＭのカテプシンＢ（酵素ストックは使用前に２０ｍＭのＴＣＥＰを含有するバッファー中で活性化させた）、およびＨ2Ｏで希釈した２μＭのＺ−ＦＲ−ＡＭＣ。
【０１４１】
阻害率は、式を使用して計算した。
［１−（（ＵＶinh−ＵＶblank）／（ＵＶctl−ＵＶblank））］×１００
非線形曲線の当てはめを阻害−濃度データに適用し、Ｅｘｃｅｌ ＸＬｆｉｔソフトウェアを使用して５０％有効濃度（ＩＣ50）を計算した。
【０１４２】
ＨＣＶレプリコンの産生
ＨＣＶレプリコン全細胞系を、Lohmann V, Korner F, Koch J, Herian U, Theilmann L, Bartenschlager R., Science 285(5424):110-3 (1999)によって記載されているように確立した。この系によって、本発明者らは、ＨＣＶ ＲＮＡ複製に対する本発明者らのＨＣＶプロテアーゼ化合物の効果を評価することができた。手短に言えば、Ｌｏｈｍａｎｎの論文に記載されているＨＣＶ株１ｂ配列（登録番号：ＡＪ２３８７９９）を使用して、ＨＣＶ ｃＤＮＡをＯｐｅｒｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｉｎｃ．（Ａｌａｍｅｄａ、ＣＡ）によって合成し、次いで完全長レプリコンをプラスミドｐＧｅｍ９ｚｆ（＋）（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）中で標準的な分子生物学技術を使用して構築した。レプリコンは、（ｉ）キャプシドタンパク質の最初の１２個のアミノ酸に融合したＨＣＶ５’ＵＴＲ、（ｉｉ）ネオマイシンホスホトランスフェラーゼ遺伝子（ネオ）、（ｉｉｉ）脳心筋炎ウイルス（ＥＭＣＶ）からのＩＲＥＳ、および（ｉｖ）ＨＣＶ ＮＳ３からＮＳ５Ｂ遺伝子およびＨＣＶ３’ＵＴＲからなる。メーカーの説明書に従ってＴ７ＭｅｇａＳｃｒｉｐｔ転写キット（Ａｍｂｉｏｎ、Ａｕｓｔｉｎ、ＴＸ）を使用して、プラスミドＤＮＡをＳｃａＩで直線化し、ＲＮＡ転写物をインビトロで合成した。ｃＤＮＡのインビトロ転写物を、ヒト肝臓癌細胞系ＨＵＨ−７にトランスフェクトした。ＨＣＶレプリコンを恒常的に発現している細胞についての選択を、選択マーカーであるネオマイシン（Ｇ４１８）の存在下で行った。このように得られた細胞系を、プラス鎖およびマイナス鎖ＲＮＡ生成、ならびにタンパク質生成について経時で性質決定した。
【０１４３】
ＨＣＶレプリコンＦＲＥＴアッセイ
ＨＣＶレプリコンＦＲＥＴアッセイを、ＨＣＶウイルス複製に対する本開示において記載されている化合物の阻害作用をモニターするために開発した。ＨＣＶレプリコンを恒常的に発現しているＨＵＨ−７細胞を、１０％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）（Ｓｉｇｍａ）および１ｍｇ／ｍｌのＧ４１８（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ）を含有するダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ）中で増殖させた。細胞を、前夜に９６−ウェル組織培養無菌プレート中に（１．５×１０4細胞／ウェル）で播種した。化合物および化合物を含有しない対照を、希釈プレート中で４％ＦＣＳ、１：１００ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ）、１：１００Ｌ−グルタミンおよび５％ＤＭＳＯを含有するＤＭＥＭ中で調製した（アッセイにおいて０．５％のＤＭＳＯ最終濃度）。化合物／ＤＭＳＯ混合物を細胞に添加し、３７℃で４日間インキュベートした。４日後、ＣＣ50読取りのためにアラマーブルー（Ｔｒｅｋ Ｄｉａｇｎｏｔｓｔｉｃ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して最初に細胞毒性について細胞を評価した。細胞をインキュベートしている培地に１０分の１容量のアラマーブルーを加えることによって、化合物の毒性（ＣＣ50）を決定した。４ｈ後、Ｃｙｔｏｆｌｕｏｒ Ｓｅｒｉｅｓ４０００（Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して、各ウェルからの蛍光シグナルを、５３０ｎｍでの励起波長および５８０ｎｍでの発光波長で読み取った。次いで、プレートをリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で完全にすすいだ（３度、１５０μｌ）。ＨＣＶプロテアーゼ基質、蒸溜水で１倍に希釈した５×細胞ルシフェラーゼ細胞培養溶解試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ ＃Ｅ１５３Ａ）、１５０ｍＭの最終濃度まで加えたＮａＣｌ、１００％ＤＭＳＯ中の２ｍＭのストックから１０μＭの最終濃度まで希釈したＦＲＥＴペプチド基質（上記の酵素アッセイについて説明した通り）を含有する２５μｌの溶解アッセイ試薬で細胞を溶解した。次いで、プレートを、３４０ｎｍ励起／４９０ｎｍ発光、２１サイクルの自動モード、運動モードでのプレート読取りに設定してあるＣｙｔｏｆｌｕｏｒ４０００装置中に置いた。ＩＣ50決定について記載したように、ＥＣ50決定を行った。
【０１４４】
ＨＣＶレプリコンルシフェラーゼレポーターアッセイ
二次的アッセイとして、レプリコンＦＲＥＴアッセイからのＥＣ50決定を、レプリコンルシフェラーゼレポーターアッセイにおいて確認した。レプリコンルシフェラーゼレポーターアッセイの利用は、Ｋｒｉｅｇｅｒらによって最初に記載された（Krieger N, Lohmann V, and Bartenschlager R, J. Virol. 75(10):4614-4624 (2001)）。本発明者らのＦＲＥＴアッセイについて記載したレプリコンコンストラクトを、Ｒｅｎｉｌｌａルシフェラーゼ遺伝子のヒト化形態およびルシフェラーゼ遺伝子の３’末端に直接融合しているリンカー配列をコードするｃＤＮＡを挿入することによって改変した。この挿入物は、ネオマイシンマーカー遺伝子の直接上流のコア中に位置するＡｓｃ１制限部位を使用して、レプリコンコンストラクトに導入された。１１７９位での適応的変異（セリンからイソロイシン）もまた導入した（Blight KJ, Kolykhalov, AA, Rice, CM, Science 290(5498):1972-1974）。このＨＣＶレプリコンコンストラクトを恒常的に発現している安定的な細胞系を上記のように産生した。ルシフェラーゼレポーターアッセイを、下記のように修正してＨＣＶレプリコンＦＲＥＴアッセイのために説明したように設定した。３７℃／５％ＣＯ2のインキュベーター中で４日間後、Ｐｒｏｍｅｇａ Ｄｕａｌ−Ｇｌｏルシフェラーゼアッセイシステムを使用して、Ｒｅｎｉｌｌａルシフェラーゼ活性について細胞を分析した。培地（１００μｌ）を、細胞を含有する各ウェルから除去した。残りの５０μｌの培地に、５０μｌのＤｕａｌ−Ｇｌｏルシフェラーゼ試薬を加え、プレートを室温で１０ｍｉｎ〜２ｈ揺動させた。次いで、Ｄｕａｌ−Ｇｌｏ Ｓｔｏｐ ＆ Ｇｌｏ試薬（５０μｌ）を各ウェルに加え、プレートを室温でさらに１０ｍｉｎ〜２ｈ再び揺動させた。発光プログラムを使用してＰａｃｋａｒｄ ＴｏｐＣｏｕｎｔ ＮＸＴ上でプレートを読み取った。
【０１４５】
阻害率を下記の式を使用して計算した。
％対照＝ 実験ウェル（＋化合物）における平均ルシフェラーゼシグナル
ＤＭＳＯ対照ウェル（−化合物）における平均ルシフェラーゼシグナル
ＸＬｆｉｔを使用して値をグラフ化し、分析し、ＥＣ50値を得た。
【０１４６】
本開示の代表的な化合物を、ＨＣＶ酵素アッセイ、ＨＣＶレプリコン細胞アッセイおよび／またはいくつかの概説された特異性アッセイで評価した。例えば、化合物１は、該酵素アッセイにおいて、ＮＳ３／４Ａ ＢＭＳ株に対して８.７ナノモーラー（ｎＭ）のＩＣ50を有することが分かった。公表されたＨ７７（１.９ｎＭのＩＣ50）およびＪ４Ｌ６Ｓ（１.２ｎＭのＩＣ50）株を用いて、類似する効力値を得た。レプリコンＦＲＥＴアッセイにおけるＥＣ50値は２１ｎＭであった。
【０１４７】
特異性アッセイにおいて、同化合物は、以下の活性を有することが分かった：ＨＬＥ＝１.５μＭ；ＰＰＥ＞２５μＭ；キモトリプシン＝２５μＭ；カテプシンＢ＞２５μＭ。これらの結果から、このファミリーの化合物がＮＳ３プロテアーゼに対して非常に特異的であり、これらのメンバーの多くはＨＣＶレプリコン複製を阻害することが示される。
【０１４８】
本開示の化合物を試験し、以下のように活性を有することが分かった：
表２
【表２】
【０１４９】
本開示が前述の実施例に限定されず、その本質的な特性から逸脱することなく他の特定の形態で具体化されうることは、当業者にとって明らかであろう。したがって、実施例があらゆる点で例示的なものであり、限定するものではないと考えられ、前述の実施例に対してではなくむしろ添付の特許請求の範囲に対して参照がなされ、特許請求の範囲と同等の意味および範囲に含まれる全ての変更が、それゆえにその中に含まれるものと意図されるのが望ましい。
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本願は、２００８年５月１５日に出願された米国仮出願第６１／０５３，４８９号の利益を主張する。
本開示は一般に、抗ウイルス性化合物を対象とし、さらに具体的にはＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）によりコードされる（本明細書において「セリンプロテアーゼ」とも称される）ＮＳ３プロテアーゼの機能を阻害する化合物、このような化合物を含む組成物、およびＮＳ３プロテアーゼの機能を阻害する方法を対象とする。
【０００２】
ＨＣＶは、主要なヒト病原体であり、世界中で１億７千万人が感染していると推定され、これはヒト免疫不全ウイルス１型の感染数の概ね５倍である。これらのＨＣＶ感染者のかなりの割合が肝硬変および肝細胞癌を含めた重篤な進行性肝疾患を発症させる。
【０００３】
現在、最も有効なＨＣＶ治療は、α−インターフェロンおよびリバビリンの組合せを用い、これは患者の４０％において持続的効果をもたらしている。ペグ化α−インターフェロンは、単独療法としては未修飾α−インターフェロンより優れていることを、最近の臨床結果は示している。しかし、ペグ化α−インターフェロンおよびリバビリンの組合せを伴う試験的な治療計画をもってしても、患者の大部分は、ウイルス量が持続的に減少することがない。したがって、ＨＣＶ感染症の治療のための有効な療法を開発する明確であり、まだ満たされていない必要性が存在する。
【０００４】
ＨＣＶは、プラス鎖ＲＮＡウイルスである。５’非翻訳領域における推定されるアミノ酸配列および広範な類似性の比較に基づいて、ＨＣＶは、フラビウイルス科ファミリーの独立した属として分類されてきた。フラビウイルス科ファミリーの全てのメンバーは、単一の中断されていないオープンリーディングフレームの翻訳を介して全て公知のウイルス特異的タンパク質をコードするプラス鎖ＲＮＡゲノムを含有するエンベロープに包まれたビリオンを有する。
【０００５】
ＨＣＶゲノムに亘ってヌクレオチドおよびコードされたアミノ酸配列内にかなりの多様性が見い出される。６つの主要な遺伝子型が特性決定され、５０を超える亜型が説明されてきた。ＨＣＶの主要な遺伝子型は世界的にその分布が異なっており、病原および治療における遺伝子型の影響の可能性についての多くの研究にも関わらず、ＨＣＶの遺伝的多様性の臨床的意義は依然として捕らえにくい。
【０００６】
一本鎖ＨＣＶ ＲＮＡゲノムは、約９５００ヌクレオチドの長さであり、約３０００個のアミノ酸の単一の大きなポリタンパク質をコードする単一のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）を有する。感染細胞において、このポリタンパク質は、細胞プロテアーゼおよびウイルスプロテアーゼによって複数の部位で切断され、構造タンパク質および非構造（ＮＳ）タンパク質を生成する。ＨＣＶの場合、成熟非構造タンパク質（ＮＳ２、ＮＳ３、ＮＳ４Ａ、ＮＳ４Ｂ、ＮＳ５Ａ、およびＮＳ５Ｂ）の生成は、２種のウイルスプロテアーゼによってもたらされる。最初のものは、ＮＳ２−ＮＳ３接合部を切断し；第２のものは、ＮＳ３のＮ末端領域内に含有されるセリンプロテアーゼであり、ＮＳ３の下流、すなわち、ＮＳ３−ＮＳ４Ａ切断部位においてシスで、残りのＮＳ４Ａ−ＮＳ４Ｂ、ＮＳ４Ｂ−ＮＳ５Ａ、ＮＳ５Ａ−ＮＳ５Ｂ部位においてトランスでの両方における以降の切断の全てを仲介する。ＮＳ４Ａタンパク質は、複数の機能を果たしていると思われ、ＮＳ３プロテアーゼの補助因子として作用し、ＮＳ３および他のウイルスレプリカーゼ成分の膜局在性をおそらく補助している。ＮＳ３タンパク質のＮＳ４Ａとの複合体形成は、効率的なポリタンパク質の進行、部位の全てにおけるタンパク分解切断の増強に本質的である。ＮＳ３タンパク質はまた、ヌクレオシドトリホスファターゼおよびＲＮＡヘリカーゼ活性を示す。ＮＳ５Ｂは、ＨＣＶの複製に関与するＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼである。
【０００７】
本開示は、例えば、ＮＳ４Ａプロテアーゼと組み合わせて、ＮＳ３プロテアーゼの機能を阻害することができるペプチド化合物を提供する。さらに、本開示は、患者への併用療法の投与について記載し、それによって、ＨＣＶ ＮＳ３プロテアーゼを阻害するのに効果的な本開示による化合物は、抗ＨＣＶ作用を有する１種または２種のさらなる化合物と共に投与することができる。
【０００８】
第１の態様において、本開示は、式（Ｉ）：
【化１】
（Ｉ）
［式中、
Ｑは、Ｏ、Ｓ（Ｏ）m、およびＮＲ8から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を適宜含んでいてもよいＣ3-9飽和または不飽和鎖であり；その中で、ｍは、０、１、または２であり、並びにＲ8は、水素、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、アルキルスルホニル、アミノカルボニル、アリールスルホニル、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、シクロアルキルオキシ、ジアルキルアミノカルボニル、ジアルキルアミノカルボニルアルキル、ハロアルキル、およびヘテロサイクリルカルボニルから選択され；
Ｒ1は、アルキルカルボニル、アリール、アリールアルキル、アリールアルキルカルボニル、アリールカルボニル、ヘテロサイクリル、ヘテロサイクリルアルキル、ヘテロサイクリルアルキルカルボニル、ヘテロサイクリルカルボニル、および（ＮＲgＲh）カルボニルから選択され、その中で、該アリール；該アリールアルキル、該アリールアルキルカルボニル、および該アリールカルボニルのアリール部分；該ヘテロサイクリル；並びに該ヘテロサイクリルアルキルおよび該ヘテロサイクリルアルキルカルボニルのヘテロサイクリル部分は、各々、１〜６個のＲ7基で適宜置換されていてもよく；
Ｒ2は、アルキル、アリール、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、ヘテロサイクリル、および−ＮＲaＲbから選択され、その中で、該アルキル、該シクロアルキル、および該（シクロアルキル）アルキルのシクロアルキル部分は、アルケニル、アルコキシ、アルコキシアルキル、アルキル、アリールアルキル、アリールカルボニル、シアノ、シクロアルケニル、（シクロアルキル）アルキル、ハロ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、および（ＮＲeＲf）カルボニルから選択される、１つ、２つ、または３つの置換基で適宜置換されていてもよく；
Ｒ3およびＲ4は独立して、水素、アルコキシアルキル、アルキル、ハロアルコキシアルキル、およびハロアルキルから選択され；
Ｒ5は、水素、アルキルおよびハロアルキルから選択され；
Ｒ6は、フェニル、並びに、窒素、酸素、および硫黄から選択される、１つ、２つ、３つ、または４つのヘテロ原子を適宜含んでいてもよい部分的にまたは完全に不飽和な５または６員環から選択され；その中で、該環の各々は、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、アルキルスルファニル、アリール、カルボキシ、シアノ、シクロアルキル、シクロアルキルオキシ、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、−ＮＲcＲd、（ＮＲeＲf）カルボニル、（ＮＲeＲf）スルホニル、およびオキソから独立して選択される、１つ、２つ、３つ、または４つの置換基で適宜置換されていてもよいが；但し、Ｒ6が置換された６員環である場合、該環上のフルオロ以外のすべての置換基は、親分子部分への該環の結合点に対してメタおよび／またはパラ位になければならず；
Ｒ7は各々独立して、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、アリール、カルボキシ、シアノ、シアノアルキル、シクロアルキル、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ヘテロサイクリル、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、ニトロ，−ＮＲcＲd、（ＮＲcＲd）アルキル、（ＮＲcＲd）アルコキシ、（ＮＲeＲf）カルボニル、および（ＮＲeＲf）スルホニルから選択され；あるいは
２つの隣接Ｒ7基は、それらに結合する炭素原子と一緒になって、窒素、酸素、および硫黄から独立して選択される１つまたは２つのヘテロ原子を適宜含んでいてもよい部分的にまたは完全に不飽和な４〜７員環を形成し、その中で、該環は、アルコキシ、アルキル、シアノ、ハロ、ハロアルコキシ、およびハロアルキルから独立して選択される、１つ、２つ、または３つの基で適宜置換されていてもよく；
ＲaおよびＲbは独立して、水素、アルコキシ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、ヘテロサイクリル、およびヘテロサイクリルアルキルから選択されるか；あるいは、ＲaおよびＲbは、それらに結合する窒素原子と一緒になって、４〜７員単環式ヘテロ環を形成し；
ＲcおよびＲdは独立して、水素、アルコキシアルキル、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、アリールアルキル、およびハロアルキルから選択され；
ＲeおよびＲfは独立して、水素、アルキル、アリール、アリールアルキル、およびヘテロサイクリルから選択され；その中で、該アリール、該アリールアルキルのアリール部分、および該ヘテロサイクリルは、アルコキシ、アルキル、およびハロから独立して選択される１つまたは２つの置換基で適宜置換されていてもよく；並びに
ＲgおよびＲhは独立して、水素、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、ヘテロサイクリル、およびヘテロサイクリルから選択されるか；あるいは、ＲgおよびＲhは、それらに結合する窒素原子と一緒になって、単環式ヘテロ環を形成し、その中で、該単環式ヘテロ環は、フェニル環に適宜縮合して、二環式構造を形成してもよく；該単環式ヘテロ環および該二環式構造は、アルコキシ、アルキル、ハロ、ハロアルコキシ、およびハロアルキルから独立して選択される、１つ、２つ、または３つの置換基で適宜置換されていてもよい］
の化合物、またはその医薬的に許容される塩を提供する。
【０００９】
第１の態様の第１の実施形態において、本開示は、Ｒ2が、アルキルおよびシクロアルキルから選択され、その中で、該シクロアルキルは、アルケニル、アルコキシ、アルキル、およびハロから選択される１つの置換基で適宜置換されていてもよい、式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩を提供する。
【００１０】
第１の態様の第２の実施形態において、本開示は、Ｒ1が、ヘテロサイクリルおよび（ＮＲgＲh）カルボニルから選択され、その中で、該ヘテロサイクリルは、１〜６個のＲ7基で適宜置換されていてもよい、式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩を提供する。第３の実施形態において、Ｒ1はヘテロサイクリルである。第４の実施形態において、該ヘテロサイクリルは、１つまたは２つのＲ7基で適宜置換されていてもよいイソキノリニルである
【００１１】
第１の態様の第５の実施形態において、本開示は、Ｒ3およびＲ4が、各々、水素であり、並びにＱが、ヘテロ原子を含まないＣ6不飽和鎖である、式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩を提供する。
【００１２】
第１の態様の第６の実施形態において、本開示は、
Ｑが、ヘテロ原子を含まないＣ6不飽和鎖であり；
Ｒ1がヘテロサイクリルであり、その中で、該ヘテロサイクリルは、１つまたは２つのＲ7基で適宜置換されていてもよいイソキノリニルであり；
Ｒ2が、アルキルおよびシクロアルキルから選択され、その中で、該シクロアルキルは、アルケニル、アルコキシ、アルキル、およびハロから選択される１つの置換基で適宜置換されていてもよく；
Ｒ3およびＲ4が、各々、水素であり；並びに
Ｒ6が、１つの窒素原子を含む完全に不飽和な６員環であり、その中で、該環は、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、アルキルスルファニル、アリール、カルボキシ、シアノ、シクロアルキル、シクロアルキルオキシ、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、−ＮＲcＲd、（ＮＲeＲf）カルボニル、（ＮＲeＲf）スルホニル、およびオキソから独立して選択される、１つ、２つ、３つ、または４つの置換基で適宜置換されていてもよいが；但し、該環上のフルオロ以外のすべての置換基は、親分子部分への該環の結合点に対してメタおよび／またはパラ位になければならない、式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩を提供する。
【００１３】
第２の態様において、本開示は、式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩、並びに医薬的に許容される担体を含む組成物を提供する。第２の態様の第１の実施形態において、該組成物は、抗ＨＣＶ活性を有する少なくとも１つの別の化合物をさらに含む。第２の態様の第２の実施形態において、少なくとも１つの該別の化合物は、インターフェロンまたはリバビリンである。第２の態様の第３の実施形態において、該インターフェロンは、インターフェロンα２Ｂ、ペグ化インターフェロンα、コンセンサスインターフェロン、インターフェロンα２Ａ、およびリンパ芽球様インターフェロンτから選択される。
【００１４】
第２の態様の第４の実施形態において、本開示は、式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩、医薬的に許容される担体、並びに抗ＨＣＶ活性を有する少なくとも１つの別の化合物を含む組成物を提供し；その中で、少なくとも１つの該別の化合物は、インターロイキン２、インターロイキン６、インターロイキン１２、１型ヘルパーＴ細胞応答の発生を亢進する化合物、干渉ＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、イミキモド、リバビリン、イノシン ５'−一リン酸脱水素酵素阻害剤、アマンタジン、およびリマンタジンから選択される。
【００１５】
第２の態様の第５の実施形態において、本開示は、式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩、医薬的に許容される担体、並びに抗ＨＣＶ活性を有する少なくとも１つの別の化合物を含む組成物を提供し；その中で、少なくとも１つの該別の化合物は、ＨＣＶメタロプロテアーゼ、ＨＣＶセリンプロテアーゼ、ＨＣＶポリメラーゼ、ＨＣＶヘリカーゼ、ＨＣＶ ＮＳ４Ｂタンパク質、ＨＣＶエントリー、ＨＣＶアセンブリー、ＨＣＶイグレス、ＨＣＶ ＮＳ５Ａタンパク質、およびＩＭＰＤＨから選択される標的の機能を阻害して、ＨＣＶ感染症の治療に有効である。
【００１６】
第３の態様において、本開示は、治療有効量の式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩を患者に投与することを特徴とする、患者におけるＨＣＶ感染症の治療方法を提供する。第３の態様の第１の実施形態において、該方法は、式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩の、前、後、または同時に、抗ＨＣＶ活性を有する少なくとも１つの別の化合物をさらに投与することを特徴とする。第３の態様の第２の実施形態において、少なくとも１つの該別の化合物は、インターフェロンまたはリバビリンである。第３の態様の第４の実施形態において、該インターフェロンは、インターフェロンα２Ｂ、ペグ化インターフェロンα、コンセンサスインターフェロン、インターフェロンα２Ａ、およびリンパ芽球様インターフェロンτから選択される。
【００１７】
第３の態様の第５の実施形態において、本開示は、式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩の、前、後、または同時に、治療有効量の式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩、並びに抗ＨＣＶ活性を有する少なくとも１つの別の化合物を患者に投与することを特徴とする、患者におけるＨＣＶ感染症の治療方法を提供し、その中で、少なくとも１つの該別の化合物は、インターロイキン２、インターロイキン６、インターロイキン１２、１型ヘルパーＴ細胞応答の発生を亢進する化合物、干渉ＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、イミキモド、リバビリン、イノシン ５'−一リン酸脱水素酵素阻害剤、アマンタジン、およびリマンタジンから選択される。
【００１８】
第３の態様の第６の実施形態において、本開示は、式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩の、前、後、または同時に、治療有効量の式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩、並びに抗ＨＣＶ活性を有する少なくとも１つの別の化合物を患者に投与することを特徴とする、患者におけるＨＣＶ感染症の治療方法を提供し、その中で、少なくとも１つの該別の化合物は、ＨＣＶメタロプロテアーゼ、ＨＣＶセリンプロテアーゼ、ＨＣＶポリメラーゼ、ＨＣＶヘリカーゼ、ＨＣＶ ＮＳ４Ｂタンパク質、ＨＣＶエントリー、ＨＣＶアセンブリー、ＨＣＶイグレス、ＨＣＶ ＮＳ５Ａタンパク質、およびＩＭＰＤＨから選択される標的の機能を阻害して、ＨＣＶ感染症の治療に有効である。
【００１９】
第４の態様において、本開示は、式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩、抗ＨＣＶ活性を有する、１つ、２つ、３つ、４つ、または５つの別の化合物、並びに医薬的に許容される担体を含む組成物を提供する。第４の態様の第１の実施形態において、該組成物は、抗ＨＣＶ活性を有する３つまたは４つの別の化合物を含む。第４の態様の第２の実施形態において、該組成物は、抗ＨＣＶ活性を有する１つまたは２つの別の化合物を含む。
【００２０】
第５の態様において、本開示は、式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩の、前、後、または同時に、治療有効量の式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩、並びに、抗ＨＣＶ活性を有する、１つ、２つ、３つ、４つ、または５つの別の化合物を患者に投与することを特徴とする、患者におけるＨＣＶ感染症の治療方法を提供する。第１の態様の第１の実施形態において、該方法は、抗ＨＣＶ活性を有する３つまたは４つの別の化合物を投与することを特徴とする。第１の態様の第２の実施形態において、該方法は、抗ＨＣＶ活性を有する１つまたは２つの別の化合物を投与することを特徴とする。
【００２１】
本開示の他の態様には、本明細書に開示した実施形態の適当な組合せが含まれうる。
また他の態様および実施形態は、本明細書において提供する説明において見い出すことができる。
本明細書における本開示の説明は、化学結合の法則および原理と適合させて解釈するべきである。場合によっては、任意の所与の場所に置換基を配置するために水素原子を取り除くことが必要な場合がある。
【００２２】
本開示に包含される化合物は、医薬品として使用するために適切に安定的なものであることを理解すべきである。
分子における特定の位置でのいずれの置換基または可変記号(variable)の定義も、該分子における他の位置での定義から独立していることが意図される。
本明細書に引用される全ての特許、特許出願、および文献参照は、その全体が本明細書に引用される。不整合がある場合は、定義を含めた本開示を優先する。
【００２３】
本明細書で使用する場合、以下の用語は、指示された意味を有する：
本明細書で使用する場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」には、特に断りがなければ、複数表示(plural reference)が含まれる。
特に断りがなければ、本開示のすべてのアリール、シクロアルキル、およびヘテロサイクリル基は、その各々の定義に記載したように置換されうる。例えば、アリールアルキル基のアリール部分は、用語「アリール」の定義に記載したように置換されうる。
【００２４】
いくつかの例において、いずれの特定の基における炭素原子の数は、該基の列挙の前に表示される。例えば、用語「Ｃ6アルキル」は、６つの炭素原子を含むアルキル基を示す。これらの記号表示が存在する場合、これらは本明細書に含まれるすべての他の定義に取って代わる。
本明細書で使用する場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」には、特に断りがなければ、複数表示が含まれる。
【００２５】
用語「アルケニル」とは、本明細書で使用する場合、少なくとも１個の炭素−炭素二重結合を含有する２個から６個の炭素原子の直鎖または分岐鎖基をいう。
用語「アルコキシ」とは、本明細書で使用する場合、酸素原子を通して親分子部分に結合しているアルキル基をいう。
用語「アルコキシアルキル」とは、本明細書で使用する場合、１個、２個、または３個のアルコキシ基で置換されているアルキル基をいう。
【００２６】
用語「アルコキシカルボニル」とは、本明細書で使用する場合、カルボニル基を通して親分子部分に結合しているアルコキシ基をいう。
用語「アルキル」とは、本明細書で使用する場合、１〜１０個の炭素原子を含む直鎖または分枝鎖の飽和炭化水素から誘導される基をいう。
用語「アルキルカルボニル」とは、本明細書で使用する場合、カルボニル基を通して親分子部分に結合したアルキル基をいう。
【００２７】
用語「アルキルスルファニル」とは、本明細書で使用する場合、硫黄原子を通して親分子部分に結合したアルキル基をいう。
用語「アルキルスルホニル」とは、本明細書で使用する場合、スルホニル基を通して親分子部分に結合したアルキル基をいう。
用語「アミノカルボニル」とは、本明細書で使用する場合、カルボニル基を通して親分子部分に結合した−ＮＨ2基をいう。
【００２８】
用語「アリール」とは、本明細書で使用する場合、フェニル基、または環の１つもしくは両方がフェニル基である二環式縮合環構造をいう。二環式縮合環構造は、４〜６員の芳香族または非芳香族炭素環に縮合されたフェニル基からなる。本開示のアリール基は、基中の任意の置換可能な炭素原子を通して親分子の部分に結合することができる。アリール基の代表例には、それだけに限らないが、インダニル、インデニル、ナフチル、フェニル、およびテトラヒドロナフチルが挙げられる。本開示のアリール基は、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、カルボキシ、シクロアルキル、シクロアルキルオキシ、シアノ、ハロ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、ニトロ、−ＮＲcＲd、（ＮＲcＲd）カルボニル、およびオキソから独立して選択される、１個、２個、３個、４個、または５個の置換基で適宜置換されていてもよい。
【００２９】
用語「アリールアルキル」とは、本明細書で使用する場合、１個、２個、または３個のアリール基で置換されているアルキル基をいう。
用語「アリールアルキルカルボニル」とは、本明細書で使用する場合、カルボニル基を通して親分子部分に結合したアリールアルキル基をいう。
用語「アリールカルボニル」とは、本明細書で使用する場合、カルボニル基を通して親分子の部分に結合しているアリール基をいう。
【００３０】
用語「アリールスルホニル」とは、本明細書で使用する場合、スルホニル基を通して親分子部分に結合したアリール基をいう。
用語「カルボニル」とは、本明細書で使用する場合、−Ｃ（Ｏ）−をいう。
用語「カルボキシ」とは、本明細書で使用する場合、−ＣＯ2Ｈをいう。
用語「シアノ」とは、本明細書で使用する場合、−ＣＮをいう。
用語「シアノアルキル」とは、本明細書で使用する場合、１個、２個、または３個のシアノ基で置換されているアルキル基をいう。
【００３１】
用語「シクロアルケニル」とは、本明細書で使用する場合、３〜１４個の炭素原子と０個のヘテロ原子とを有する非芳香族で部分不飽和の単環式、二環式、または三環式環系をいう。シクロアルケニル基の代表例には、それだけに限らないが、シクロヘキセニル、オクタヒドロナフタレニル、およびノルボルニレニルが挙げられる。
【００３２】
用語「シクロアルキル」とは、本明細書で使用する場合、３〜１０個の炭素原子と０個のヘテロ原子とを有する飽和単環式または二環式炭化水素環構造をいう。シクロアルキル基の代表例には、それだけに限らないが、シクロプロピル、シクロブチル、およびシクロペンチルが挙げられる。
用語「（シクロアルキル）アルキル」とは、本明細書で使用する場合、１個、２個、または３個のシクロアルキル基で置換されているアルキル基をいう。
【００３３】
用語「シクロアルキルオキシ」とは、本明細書で使用する場合、酸素原子を通して親分子の部分に結合しているシクロアルキル基をいう。
用語「ジアルキルアミノカルボニル」とは、本明細書で使用する場合、カルボニル基を通して親分子部分に結合した−ＮＲ’Ｒ”基をいい、その中で、Ｒ’およびＲ”は、同じであるかまたは異なったアルキル基である。
【００３４】
用語「ジアルキルアミノカルボニルアルキル」とは、本明細書で使用する場合、１つ、２つ、または３つのジアルキルアミノカルボニル基で置換されたアルキル基をいう。
用語「ハロ」および「ハロゲン」とは、本明細書で使用する場合、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、およびＩをいう。
用語「ハロアルコキシ」とは、本明細書で使用する場合、酸素原子を通して親分子の部分に結合しているハロアルキル基をいう。
【００３５】
用語「ハロアルコキシアルキル」は、本明細書で使用する場合、１つ、２つ、または３つのハロアルコキシ基で置換されたアルキル基をいう。
用語「ハロアルキル」とは、本明細書で使用する場合、１個、２個、３個、または４個のハロゲン原子で置換されているアルキル基をいう。
【００３６】
用語「ヘテロサイクリル」とは、本明細書で使用する場合、窒素、酸素、および硫黄から独立して選択される１個、２個、もしくは３個のヘテロ原子を含有する５員、６員、または７員環をいう。５員環は、０から２個の二重結合を有し、６員および７員環は、０から３個の二重結合を有する。用語「ヘテロサイクリル」にはまた、ヘテロサイクリル環が４〜６員の芳香族もしくは非芳香族炭素環に縮合している二環式基、または他の単環式ヘテロサイクリル基も含まれる。本開示のヘテロサイクリル基は、基中の炭素原子または窒素原子を通して親分子の部分に結合している場合がある。ヘテロサイクリル基の例には、それだけに限らないが、ベンゾチエニル、フリル、イミダゾリル、インドリニル、インドリル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、モルホリニル、オキサゾリル、ピペラジニル、ピペリジニル、ピラゾリル、ピリジニル、ピロリジニル、ピロロピリジニル、ピロリル、チアゾリル、チエニル、およびチオモルホリニルが挙げられる。本開示のヘテロサイクリル基は、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、カルボキシ、シクロアルキル、シクロアルキルオキシ、シアノ、ハロ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、ニトロ、−ＮＲcＲd、（ＮＲcＲd）カルボニル、およびオキソから独立して選択される、１個、２個、３個、４個、または５個の置換基で適宜置換されていてもよい。
【００３７】
用語「ヘテロサイクリルアルキル」とは、本明細書で使用する場合、１個、２個、または３個のヘテロサイクリル基で置換されているアルキル基をいう。
用語「ヘテロサイクリルアルキルカルボニル」とは、本明細書で使用する場合、カルボニル基を通して親分子部分に結合したヘテロサイクリルアルキル基をいう。
【００３８】
用語「ヘテロサイクリルカルボニル」とは、本明細書で使用する場合、カルボニル基を通して親分子部分に結合したヘテロサイクリル基をいう。
用語「ヒドロキシ」とは、本明細書で使用する場合、−ＯＨをいう。
用語「ヒドロキシアルキル」とは、本明細書で使用する場合、１つ、２つ、または３つのヒドロキシ基で置換されたアルキル基をいう。
用語「ニトロ」とは、本明細書で使用する場合、−ＮＯ2をいう。
【００３９】
用語「−ＮＲaＲb」とは、本明細書で使用する場合、窒素原子を通して親分子部分に結合した２つの基であるＲaおよびＲbをいう。ＲaおよびＲbは独立して、水素、アルコキシ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、ヘテロサイクリル、およびヘテロサイクリルアルキルから選択されるか；あるいはＲaおよびＲbは、それらに結合する窒素原子と一緒になって、５または６員単環式ヘテロ環を形成する。
【００４０】
用語「−ＮＲcＲd」とは、本明細書で使用する場合、窒素原子を通して親分子部分に結合した２つの基であるＲcおよびＲdをいう。ＲcおよびＲdは独立して、水素、アルコキシカルボニル、アルキル、およびアルキルカルボニルから選択される。
用語「（ＮＲcＲd）アルコキシ」とは、本明細書で使用する場合、酸素原子を通して親分子部分に結合した（ＮＲcＲd）アルキル基をいう。
【００４１】
用語「（ＮＲcＲd）アルキル」とは、本明細書で使用する場合、１つ、２つ、または３つの−ＮＲcＲd基で置換されたアルキル基をいう。
用語「（ＮＲcＲd）カルボニル」とは、本明細書で使用する場合、カルボニル基を通して親分子部分に結合した−ＮＲcＲd基をいう。
【００４２】
用語「−ＮＲeＲf」とは、本明細書で使用する場合、窒素原子を通して親分子部分に結合した２つの基であるＲeおよびＲfをいう。ＲeおよびＲfは独立して、水素、アルキル、アリール、およびアリールアルキルから選択される。
用語「（ＮＲeＲf）カルボニル」とは、本明細書で使用する場合、カルボニル基を通して親分子部分に結合した−ＮＲeＲf基をいう。
用語「（ＮＲeＲf）スルホニル」とは、本明細書で使用する場合、スルホニル基を通して親分子部分に結合した−ＮＲeＲf基をいう。
用語「（ＮＲgＲh）カルボニル」とは、本明細書で使用する場合、カルボニル基を通して親分子部分に結合した−ＮＲgＲh基をいう。
【００４３】
用語「−ＮＲgＲh」とは、本明細書で使用する場合、窒素原子を通して親分子部分に結合した２つの基であるＲgおよびＲhをいう。ＲgおよびＲhは独立して、水素、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、ヘテロサイクリル、およびヘテロサイクリルから選択されるか；あるいは、ＲgおよびＲhは、それらに結合する窒素原子と一緒になって、単環式ヘテロ環を形成し、その中で、該単環式ヘテロ環は、フェニル環に適宜縮合して、二環式構造を形成してもよく；該単環式ヘテロ環および該二環式構造は、アルコキシ、アルキル、ハロ、ハロアルコキシ、およびハロアルキルから独立して選択される、１つ、２つ、または３つの置換基で適宜置換されていてもよい。
【００４４】
用語「オキソ」とは、本明細書で使用する場合、＝Ｏをいう。
用語「スルホニル」とは、本明細書で使用する場合、−ＳＯ2−をいう。
用語「プロドラッグ」とは、本明細書で使用する場合、血液中の加水分解によって親化合物にインビボで急速に変換される化合物を表す。本開示のプロドラッグには、親分子上のヒドロキシ基のエステル、親分子上のカルボキシ基のエステル、および親分子上のアミンのアミドが挙げられる。
【００４５】
本開示の化合物は、医薬的に許容される塩として存在することができる。用語「医薬的に許容される塩」とは、本明細書で使用する場合、妥当な医学的判断の範囲内において、妥当な便益／リスク比に見合った過剰な毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症なしに患者の組織と接触して使用するのに適切であり、それらの使用目的のために効果的である、水溶性もしくは油溶性もしくは分散性の本開示の化合物の塩または双性イオン形態を表す。塩は、化合物の最終単離および精製の間に、または別々に適切な塩基官能基を適切な酸と反応させることによって調製することができる。代表的な酸付加塩には、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、クエン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、ショウノウ酸塩、カンファースルホン酸塩；ジグルコン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メシチレンスルホン酸塩、メタンスルホン酸塩、ナフチレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、シュウ酸塩、パルモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、トリクロロ酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、リン酸塩、グルタミン酸塩、重炭酸塩、パラ−トルエンスルホン酸塩、およびウンデカン酸塩が挙げられる。医薬的に許容される付加塩を形成するために用いることができる酸の例には、無機酸（塩酸、臭化水素酸、硫酸、およびリン酸など）、ならびに有機酸（シュウ酸、マレイン酸、コハク酸、およびクエン酸など）が挙げられる。
【００４６】
塩基付加塩は、酸性基を、適切な塩基（金属カチオンの水酸化物、炭酸塩、または重炭酸塩など）と、あるいはアンモニアまたは有機第一級、第二級、もしくは第三級アミンと反応させることによって、化合物の最終単離および精製の間に調製することができる。医薬的に許容される塩のカチオンには、リチウム、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、およびアルミニウム、ならびに無毒性の四級アミンカチオン（アンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ジエチルアミン、エチルアミン、トリブチルアミン、ピリジン、Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン、Ｎ−メチルピペリジン、Ｎ−メチルモルホリン、ジシクロヘキシルアミン、プロカイン、ジベンジルアミン、Ｎ，Ｎ−ジベンジルフェネチルアミン、およびＮ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミンなど）が挙げられる。塩基付加塩の形成に有用な他の代表的な有機アミンには、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペリジン、およびピペラジンが挙げられる。
【００４７】
用語「抗ＨＣＶ作用」とは、本明細書で使用する場合、化合物がＨＣＶウイルスの治療に効果的であることをいう。
用語「本開示の化合物」、および同等の表現は、式（Ｉ）の化合物、ならびにその医薬的に許容されるエナンチオマー、ジアステレオマー、および塩を包含することを意味する。同様に、中間体への言及は、文脈上許容される場合、それらの塩を包含することを意味する。
用語「患者」とは、ヒトおよび他の哺乳動物の両方を含む。
【００４８】
用語「医薬組成物」とは、投与方法および剤形の種類によって、少なくとも１種のさらなる医薬担体、すなわち、希釈剤、保存料、充填剤、流動性調整剤、崩壊剤、湿潤剤、乳化剤、懸濁化剤、甘味剤、香味剤、香料剤、抗菌剤、抗真菌剤、滑沢剤および予製剤などの補助剤、賦形剤またはビヒクルと組み合わせた本開示の化合物を含む組成物を意味する。例えばRemington's Pharmaceutical Sciences, 18th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA (1999)において一覧表示された成分を使用することができる。
【００４９】
語句「医薬的に許容される」とは、本明細書において、過度の毒性、刺激作用、アレルギー反応、または妥当な危険性／受益性割合に比例した他の問題もしくは合併症を伴わずに、患者の組織と接触する使用に適した、正しい医療判断の範囲内である化合物、材料、組成物、および／または剤形を意味するために用いられる。
【００５０】
用語「治療有効量」とは、有意義な患者利益、例えば、ウイルス量の持続的減少を示すのに十分なそれぞれの活性物質の総量をいう。単独で投与される個々の活性成分に適用する場合、この用語はその成分単独を意味する。組合せに適用する場合は、この用語は、組合せであれ、連続的であれ、または同時投与であれ、治療効果をもたらす活性成分の組み合わせた量を意味する。
【００５１】
用語「治療」および「治療する」とは、（ｉ）疾患、障害および／または状態にかかりやすい場合があるが、まだその診断を受けていない患者において、疾患、障害または状態が起こることを防止し；（ｉｉ）疾患、障害または状態を阻害、すなわち、その進行を止め；ならびに／あるいは（ｉｉｉ）疾患、障害または状態を軽減、すなわち、疾患、障害および／または状態の退行をもたらすことを意味する。
【００５２】
本開示の化合物の命名に使用する場合、記号Ｐ１’、Ｐ１、Ｐ２*、Ｐ３およびＰ４は、本明細書で使用する場合、天然ペプチド切断基質の結合に対する、結合しているプロテアーゼ阻害剤のアミノ酸残基の相対的位置を表示する。天然基質において、切断はＰ１とＰ１’との間で起こり、ここでノンプライム位置は、ペプチド天然切断部位のＣ末端から始まってＮ末端に向けて伸びているアミノ酸を表し；一方、プライム位置は、指定切断部位のＮ末端から始まり、Ｃ末端に向かって伸びる。例えば、Ｐ１’は、切断部位のＣ末端の右側末端から離れた第１の位置（すなわち、Ｎ末端第１位置）を示し；一方、Ｐ１はＣ末端切断部位の左側から番号付けを始め、Ｐ２はＣ末端からの第２の位置などである）。（Berger A. & Schechter I., Transactions of the Royal Society London series (1970), B257, 249-264を参照されたい］。
【００５３】
下図は、本開示の化合物についてのサブサイトの記号表示を示す。
【化２】
【００５４】
不斉中心は、本開示の化合物において存在する。例えば、化合物は、式
【化３】
のＰ１シクロプロピル要素を含むことができ、式中、Ｃ1およびＣ2はそれぞれ、シクロプロピル環の１位および２位における不斉炭素原子を表す。
【化４】
【００５５】
本開示は、ＨＣＶプロテアーゼを阻害する能力を有する全ての立体化学的形態、またはその混合物を包含することを理解すべきである。
本開示の特定の化合物はまた、分離可能である場合がある異なる安定的な高次構造形態で存在することができる。非対称の単結合の周りの束縛回転に起因するねじれによる不斉は、例えば立体障害または環ひずみによって、異なる配座異性体の分離を可能にすることができる。本開示には、これらの化合物のそれぞれの配座異性体およびこれらの混合物が挙げられる。
【００５６】
本開示の特定の化合物は、双性イオン形態で存在する場合があり、本開示には、これらの化合物のそれぞれの双性イオン形態およびこれらの混合物が含まれる。
【００５７】
治療に使用するために、治療有効量の式（Ｉ）の化合物、ならびにその医薬的に許容される塩を、原化学物質(raw chemical)として投与することが可能である場合、活性成分を医薬組成物として提示することが可能である。したがって、本開示は、治療有効量の式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩と、１種もしくは複数の医薬的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤とを含む医薬組成物をさらに提供する。式（Ｉ）の化合物およびその医薬的に許容される塩は、上記の通りである。担体（複数可）、希釈剤（複数可）、または賦形剤（複数可）は、製剤の他の成分と適合性であり、そのレシピエントに対して有害ではないという意味で許容できるものでなければならない。本開示の他の態様によって、式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩を、１種もしくは複数の医薬的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤と混合する工程を含む、医薬製剤を調製するための方法もまた提供する。
【００５８】
医薬製剤は、単位用量当たり所定の量の活性成分を含有する単位用量形態で存在することができる。１日当たり約０．０１〜約２５０ミリグラム／キログラム（「ｍｇ／ｋｇ」）体重、好ましくは１日当たり約０．０５〜約１００ｍｇ／ｋｇ体重の本開示の化合物の投与量レベルが、ＨＣＶ媒介疾患の予防および治療のための単独療法において典型的である。典型的には、本開示の医薬組成物は、１日当たり約１〜約５回、あるいは持続注入として投与される。このような投与は、長期治療または救急治療として使用することができる。単一の剤形を得るため担体物質と合わせることのできる活性成分の量は、治療される状態、状態の重篤度、投与回数、投与経路、用いる化合物の排せつ率、治療期間、ならびに患者の年齢、性別、体重、および状態によって変化する。好ましい単位製剤は、本明細書において上記のように、活性成分の１日用量もしくは部分用量、またはその適切な画分を含有する製剤である。一般に治療は、実質的に化合物の適量未満の少量の投与量で開始する。その後、この条件の下で最適な効果が得られるまで少しずつ投与量を増加させる。一般に化合物は、有害または害毒を及ぼす副作用をもたらさずに抗ウイルス的に効果的な結果を生じさせるであろう濃度レベルで投与することが最も望ましい。
【００５９】
本開示の組成物が、本開示の化合物と、１種または複数のさらなる治療剤または予防薬との組合せを含む場合、化合物およびさらなる薬剤の両方は通常、単独療法において通常投与される投与量の約１０〜１５０％、さらに好ましくは約１０〜８０％の投与量レベルで存在する。
【００６０】
医薬製剤は、任意の適切な経路による投与、例えば、経口（口腔または舌下を含めた）、直腸、経鼻、局所（口腔、舌下、または経皮を含めた）、経腟、あるいは非経口（皮下、皮内、筋内、関節内、滑液嚢内、胸骨内、くも膜下腔内、病巣内、静脈内、または皮内注射もしくは注入を含めた）経路による投与に適合することができる。このような製剤は、薬学の技術分野において公知の任意の方法によって、例えば活性成分を担体（複数可）または賦形剤（複数可）と結合することによって調製することができる。
【００６１】
経口投与に適合された医薬製剤は、カプセル剤または錠剤；散剤または顆粒剤；水性もしくは非水性液体中の溶液剤または懸濁剤；食用の泡またはホイップ；あるいは水中油型液体乳剤または油中水型乳剤などの個別単位として提示することができる。
【００６２】
例えば、錠剤またはカプセル剤の形態における経口投与のために、活性薬物成分は、エタノール、グリセロール、水などの経口で無毒性の医薬的に許容される不活性担体と合わせることができる。散剤は、化合物を適切な微細なサイズに微粉砕し、食用炭水化物（例えば、デンプンまたはマンニトールなど）などの同様に微粉砕した医薬担体と混合することによって調製される。香味剤、保存剤、分散剤、および着色剤もまた存在することができる。
【００６３】
カプセル剤は、上記のように粉末混合物を調製し、ゼラチンの形成被覆に充填することによって作製される。コロイダルシリカ、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、または固体ポリエチレングリコールなどの流動促進剤および滑沢剤を、充填操作の前に粉末混合物に加えることができる。カプセル剤を摂取する場合に薬物の有効性を向上させるために、寒天、炭酸カルシウム、または炭酸ナトリウムなどの崩壊剤または可溶化剤をまた加えることができる。
【００６４】
さらに、所望であるかまたは必要な場合、適切な結合剤、滑沢剤、崩壊剤、および着色剤もまた、混合物中に組み込むことができる。適切な結合剤には、デンプン、ゼラチン、天然糖（グルコースまたはβラクトースなど）、コーン甘味料、天然および合成のガム（アカシア、トラガカントまたはアルギン酸ナトリウムなど）、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコールなどが挙げられる。これらの剤形において使用される滑沢剤には、オレイン酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどが挙げられる。崩壊剤には、これらだけに限らないが、デンプン、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、キサンタンガムなどが挙げられる。錠剤は、例えば、粉末混合物を調製し、顆粒化またはスラッギングし、滑沢剤および崩壊剤を加え、錠剤に圧入することによって製剤される。粉末混合物は、適切に粉砕した化合物を、上記のような希釈剤または基剤と、および所望により、結合剤（カルボキシメチルセルロース、アルギネート、ゼラチン、またはポリビニルピロリドンなど）、溶解遅延剤（パラフィンなど）、再吸収促進剤（第四級塩など）および／または吸収剤（ベントナイト、カオリン、またはリン酸二カルシウムなど）と混合することによって調製される。粉末混合物は、結合剤（シロップ、デンプン糊、アラビアゴム粘液、またはセルロース系材料もしくは高分子材料の溶液など）で湿らせ、強制的にスクリーンを通過させるによって顆粒化することができる。顆粒化に代わるものとして、粉末混合物を錠剤成形機にかけることができ、その結果は、顆粒剤へと割れる不完全に形成されたスラグとなる。顆粒剤は、ステアリン酸、ステアリン酸塩、タルク、または鉱油を添加することによって潤滑にされ、錠剤成形型に粘着することを防止することができる。次いで、潤滑混合物を錠剤に圧縮する。本開示の化合物はまた、易流動性の不活性担体と合わせ、顆粒化またはスラッギング工程を経ることなく直接錠剤に圧縮することができる。セラックのシーリングコートからなる透明または不透明な保護コーティング、糖または高分子材料のコーティング、およびワックスの光沢コーティングを提供することができる。これらのコーティングに染料を加えて、異なる単位用量を識別することができる。
【００６５】
溶液剤、シロップ剤、およびエリキシル剤などの経口流体は、一定量が所定の量の化合物を含有するように、投与単位形態で調製することができる。シロップ剤は、化合物を適切に香味付けした水溶液に溶解することによって調製することができ、一方エリキシル剤は、無毒性ビヒクルの使用によって調製される。可溶化剤および乳化剤（エトキシ化イソステアリルアルコールおよびポリオキシエチレンソルビトールエーテルなど）、保存剤、香味添加剤（ハッカ油または天然甘味料など）、またはサッカリンもしくは他の人工甘味料などもまた加えることができる。
【００６６】
適切な場合には、経口投与のための投与単位製剤は、マイクロカプセル化することができる。製剤はまた、例えば、粒子材料をポリマー、ワックス、または同種のものでコーティングするか、それらに包埋することによって、放出を延長または維持するように調製することができる。
【００６７】
式（Ｉ）の化合物、およびその医薬的に許容される塩はまた、小さな単膜小胞、大きな単膜小胞、および多重膜小胞などのリポソームデリバリーシステムの形態で投与することができる。リポソームは、コレステロール、ステアリルアミン、またはホスファチジルコリンなどの種々のリン脂質から形成することができる。
【００６８】
式（Ｉ）の化合物およびその医薬的に許容される塩はまた、化合物分子が結合する個々の担体としてモノクローナル抗体を使用することによって送達することができる。化合物はまた、標的可能な薬物担体として可溶性ポリマーに結合することができる。このようなポリマーには、パリトイル残基(palitoyl residue)で置換されているポリビニルピロリドン、ピラン共重合体、ポリヒドロキシプロピルメタクリルアミドフェノール、ポリヒドロキシエチルアスパルタミドフェノール、またはポリエチレンオキシドポリリシンを含むことができる。さらに、化合物は、薬物の制御放出を実現するのに有用な生分解性ポリマーの類（例えば、ポリ乳酸、ポリεカプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリジヒドロピラン、ポリシアノアクリレート、およびヒドロゲルの架橋または両親媒性ブロックコポリマー）に結合することができる。
【００６９】
経皮的投与に適合された医薬製剤は、レシピエントの表皮と長時間密着し続けることを目的とする個別のパッチとして提示することができる。例えば、活性成分は、Pharmaceutical Research, 3(6), 318 (1986)において概ね記載されているようにイオン泳動によってパッチから送達することができる。
【００７０】
局所投与に適合された医薬製剤は、軟膏剤、クリーム剤、懸濁剤、ローション剤、散剤、溶液剤、ペースト剤、ゲル剤、スプレー剤、エアゾール剤、または油剤として製剤することができる。
【００７１】
眼または他の外部組織、例えば口および皮膚の治療のために、製剤は、好ましくは局所軟膏剤またはクリーム剤として施用される。軟膏剤中に配合される場合、活性成分は、パラフィン軟膏基剤または水混和性軟膏基剤と共に用いることができる。あるいは、活性成分は、水中油型クリーム基剤または油中水型基剤と共にクリーム剤中に配合することができる。
【００７２】
眼への局所投与に適合された医薬製剤には、活性成分が適切な担体、特に水性溶媒に溶解または懸濁している点眼薬が挙げられる。
口内の局所投与に適合された医薬製剤には、ロゼンジ、香錠、および口内洗浄剤が挙げられる。
直腸投与に適合された医薬製剤は、坐薬としてまたは浣腸として提示することができる。
【００７３】
担体が固形物である経鼻投与に適合された医薬製剤には、鼻から吸い込む方法、すなわち、鼻の近くに保持した粉末容器から鼻腔を通した急速な吸入によって投与される、例えば２０〜５００ミクロンの範囲の粒径を有する粗粉末が挙げられる。鼻用スプレーまたは点鼻薬として投与するための、担体が液体である適切な製剤には、活性成分の水溶液または油溶液が挙げられる。
【００７４】
吸入による投与に適合された医薬製剤には、様々なタイプの定量加圧式エアロゾル、ネブライザー、または注入器によって生成することができる、微粒子の塵または霧が挙げられる。
膣投与に適合された医薬製剤は、ペッサリー、タンポン、クリーム剤、ゲル剤、ペースト剤、フォーム剤、またはスプレー製剤として提示することができる。
【００７５】
非経口投与に適合された医薬製剤には、抗酸化剤、バッファー、制菌剤、ならびに製剤を対象とするレシピエントの血液と等張にする溶質；ならびに懸濁化剤および増粘剤を含む場合がある水性および非水性の無菌懸濁剤を含有してもよい、水性および非水性の滅菌注射液が挙げられる。製剤は、単位用量または複数用量の容器、例えば密封したアンプルおよびバイアル中に存在してもよく、注射のため使用直前に、無菌の液体担体、例えば水の添加だけを必要とするフリーズドライ（凍結乾燥）した状態で保存してもよい。無菌散剤、顆粒剤、および錠剤から即時調合注射液および懸濁剤を調製することができる。
【００７６】
特に上述した成分に加えて、製剤には、問題の製剤のタイプを考慮して当技術分野で常用の他の薬剤を含むことができ、例えば経口投与に適した薬剤には、香味剤が含まれる場合があることを理解すべきである。
【００７７】
下記の表１では、本開示の化合物と共に投与することができる化合物のいくつかの実例を一覧表示する。本開示の化合物は、一緒にもしくは別々に、または化合物を組成物に合わせることによって、併用療法において他の抗ＨＣＶ作用化合物と共に投与することができる。
表１
【表１】
【００７８】
本開示の化合物はまた、実験用試薬として使用することができる。化合物は、ＨＣＶ疾患の機構の知識をさらに向上させるための、ウイルス複製アッセイの設計、動物アッセイ系の確認および構造生物学研究のための研究道具の提供において有益な場合がある。さらに、本開示の化合物は、例えば拮抗阻害によって、他の抗ウイルス性化合物の結合部位の確立または決定において有用である。
【００７９】
本開示の化合物はまた、物質のウイルス汚染を処理または予防し、したがって実験室、またはこのような物質（例えば、血液、組織、手術器具および手術着、実験器具および実験着、ならびに採血もしくは輸血の装置および材料）と接触する医療関係者もしくは患者のウイルス感染の危険性を減少させるために使用することができる。
【００８０】
本開示は、合成過程によって、あるいは人体もしくは動物体（インビボ）内で生じる過程またはインビトロで生じる過程を含めた代謝過程によって調製される場合、式（Ｉ）を有する化合物を包含することを意図する。
【００８１】
本願で用いられる略語、例えば、特に以下の実例となる反応式および実施例に用いられるものは、当業者によく知られている。用いられるいくつかの略語は以下の通りである：
ＥｔＯＡｃ：酢酸エチル；
ｔ−Ｂｕ：ｔｅｒｔ−ブチル；
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド；
ＨＡＴＵ：Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ'，Ｎ'−テトラメチルウロニウムリン酸塩；
ＤＩＥＡまたはＤＩＰＥＡ：ジイソプロピルエチルアミン；
ＤＣＭ：ジクロロメタン；
ＣＤＩ：１，１'−カルボニルジイミダゾール；
ＤＢＵ：１，８−ジアザビシクロ［５.４.０］ウンデカ−７−エン；
ｈ：時間；
ｍｉｎ：分；
ＭｅＯＨ：メタノール；
ＮＢＳ：Ｎ−ブロモコハク酸イミド；
ｎ−Ｂｕ−Ｌｉ：ｎ−ブチルリチウム；
ｉ−Ｐｒ：イソプロピル；
ＴＭＳ：トリメチルシリル；
ＴＨＦ：テトラヒドロフラン；
ＭｅＣＮ：アセトニトリル；並びに
ｒｔ：室温または保持時間（文脈によって決まる）。
【００８２】
本開示の化合物の合成に有用な出発物質は当業者には公知であり、容易に製造することができ、または市販されている。
【００８３】
以下に記載する下記の方法は、例示の目的のために提供するものであり、特許請求の範囲を制限することを意図しない。従来の保護基を使用して官能基を保護し、次いで保護基を除去して本開示の化合物を提供するようにこのような化合物を調製することが必要である場合があることが理解されるであろう。本開示による保護基の使用に関する詳細は、当業者には公知である。
【００８４】
実施例１：化合物１の製造
【化５】
【化６】
段階１：
３−メトキシ桂皮酸（１１.０ｇ、６２ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１２.５ｇ、１２４ｍｍｏｌ）のアセトン溶液（８０ｍＬ）に、０℃で、クロロギ酸エチル（約１.５当量）を滴下して加えた。この温度で１時間撹拌した後、ＮａＮ3水（６.４０ｇ、１００ｍｍｏｌの３５ｍＬ Ｈ2Ｏ溶液）を滴下して加え、反応混合液を周囲温度で１６時間撹拌した。水（１００ｍＬ）を混合液に加え、揮発物を減圧留去した。生じたスラリーをトルエン（３×５０ｍＬ）で抽出し、有機層を合わせて、ＭｇＳＯ4で乾燥し、濾過した。濾液を、ジフェニルメタン（５０ｍＬ）およびトリブチルアミン（３０ｍＬ）の１９０℃で加熱した溶液に滴下して加えた。添加の間、トルエンを蒸留によって除去した。添加の完了後、反応温度を２時間２１０℃に上げた。冷却して、沈澱した生成物を濾過で集め、ヘキサン（２×５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥して、白色固形物として、目的の生成物（５.５３ｇ、５１％）を得た（Nicolas Briet et al, Tetrahedron, 2002, 5761-5766）。
LC-MS, MS m/z 176 (M+ +H).
【００８５】
段階２：
６−メトキシ−２Ｈ−イソキノリン−１−オン（５.０ｇ、２８.４ｍｍｏｌ）のＰＯＣｌ3溶液（１０ｍＬ）を３時間穏やかに還流するまで加熱し、混合液を次いで減圧濃縮した（Nicolas Briet et al, Tetrahedron, 2002, 5761-5766）。残渣を氷水（２０ｍＬ）に注ぎ、ＮａＯＨ（１０.０Ｍ）を加えることによってｐＨ＝１０にした。生じた混合物をＣＨＣｌ3で抽出した。有機層を食塩水で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、濾過し、濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィ（１：１ ヘキサン−酢酸エチル）で精製して、白色固形物として、目的の生成物（４.４１ｇ、８０％）を得た。
1H NMR (CD3OD) δ ppm 3.98 (s, 3H), 7.34-7.38 (m, 2H), 7.69 (d, J = 5.5Hz, 1H), 8.10 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 8.23 (d, J = 9.5 Hz, 1H); LC-MS, MS m/z 194 (M+ +H).
【００８６】
【化７】
段階３：
６−メトキシピリジン−３−アミン（０.３７２ｇ、３ｍｍｏｌ）、２−オキソノン(oxonon)−８−エン酸（０.５１１ｇ、３.００ｍｍｏｌ）、およびＮａＨＢ（ＯＡｃ）3（１.９０７ｇ、９.００ｍｍｏｌ）のＣＨ2ＣｌＣＨ2Ｃｌ混合溶液（１０ｍＬ）を２４時間撹拌した。反応液を飽和ＮＨ4Ｃｌ（２０ｍＬ）でクエンチし、ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）で希釈し、食塩水（２０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、濾過し、濃縮した。濃縮によって、目的の粗生成物（８００ｍｇ）を得て、それをさらに精製することなく次の段階に用いた。
【００８７】
【化８】
段階４：
Ｎ−Ｂｏｃ−４−（Ｒ）−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン（０.８９２ｇ、３.８９ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ溶液（４０ｍＬ）に、周囲温度で、固体のカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（１.３４ｇ、１２.０ｍｍｏｌ）を１回で加えた。懸濁液を室温で３０分間撹拌し、次いで１０℃に冷却した。固体としての１−クロロ−６−メトキシ−イソキノリン（実施例１，段階２の生成物）（７８５ｍｇ、４.０５ｍｍｏｌ）を１回で加え、生じた混合物を周囲温度で１２時間撹拌した。混合液を氷冷した５％ クエン酸（水）でクエンチし、次いで酢酸エチル（１００ｍＬ）で抽出した。水相を酢酸エチルでもう一度抽出した。有機層を合わせて、５％ クエン酸（水）および食塩水でそれぞれ洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、濾過した。濾液を乾燥するまで減圧濃縮して、オフホワイトの泡として、目的の生成物（１.４９ｇ、収率９９％）を得た。この粗物質をさらに精製することなく次の反応段階に用いた。
1H NMR (CD3OD) δ 1.42, 1.44 (回転異性体, 9H), 2.38-2.43 (m, 1H), 2.66-2.72 (m, 1H), 3.80-3.87 (m, 2H), 3.92 (s, 3H), 4.44-4.52 (m, 1H), 5.73 (bs, 1H), 7.16-7.18 (m, 2H), 7.24-7.25 (m, 1H), 7.87-7.88 (m, 1H), 8.07 (d, J = 8.5 Hz, 1H); LC-MS, MS m/z 389 (M+ +H).
【００８８】
段階５：
実施例１，段階４の生成物（７.７ｇ、２０ｍｍｏｌ）、ＤＩＰＥＡ（１２.９２ｇ、１００ｍｍｏｌ）、および（１Ｒ，２Ｓ）−１−アミノ−Ｎ−（シクロプロピルスルホニル）−２−ビニルシクロプロパンカルボキシアミドＨＣｌ塩（４.６ｇ、２４ｍｍｏｌ）のＣＨ2Ｃｌ2混合溶液（１００ｍＬ）に、室温で４時間、ＨＡＴＵ（１１.４１ｇ、３０ｍｍｏｌ）を加えた。濃縮した後、残渣を３３％ アセトンのヘキサン溶液で溶離するバイオタージ（４０＋Ｓ Ｓｉカラム）で精製して、油として、目的の生成物（９.５ｇ、９０％）を得た。
LC-MS, MS m/z 526 (M+ +H).
【００８９】
段階６：
実施例，段階５の生成物（５.２６ｇ、１０ｍｍｏｌ）に、４Ｍ ＨＣｌ（２５.００ｍＬ、１００ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン溶液を加えた。形成した溶液を２５℃で３時間撹拌した。減圧濃縮した後、残渣に、エーテル（２０ｍＬ）を加え、次いで再び濃縮し、該手順を３回繰り返した。ハウスバキューム乾燥(House vacuum drying)によって、固形物として、粗生成物（４.９８ｇ、１００％）を得て、それをさらに精製することなく次の段階に用いた。
LC-MS, MS m/z 426 (M+ +H).
【００９０】
段階７：
実施例１，段階６の生成物（１５０ｍｇ、０.３ｍｍｏｌ）、実施例１，段階３の生成物（８４ｍｇ、０.３００ｍｍｏｌ）、およびヒューニッヒ塩基（０.５２４ｍＬ、３.００ｍｍｏｌ）のＣＨ2Ｃｌ2溶液（５ｍＬ）に、ＨＡＴＵ（１７１ｍｇ、０.４５０ｍｍｏｌ）を加えた。１６時間撹拌し、濃縮した後、残渣を３３％ アセトンのヘキサン溶液で溶離するバイオタージで精製して、固形物およびジアステレオマーとして、目的の生成物（１７０ｍｇ）を得た。
LC-MS, MS m/z 686 (M+ +H).
【００９１】
段階８：
実施例１，段階７の生成物（１６０ｍｇ、０.２３３ｍｍｏｌ）およびグラブスＩＩ（３０ｍｇ、０.０３５ｍｍｏｌ）のＣＨ2Ｃｌ2溶液（５ｍＬ）を加え、１６時間還流した。濃縮した後、残渣を２５％ アセトンのヘキサン溶液で溶離するバイオタージで精製して、単一のジアステレオマー（５２ｍｇ）を得て、その構造を反応式に示したようにまたは（Ｒ）−異性体とラベルした。
LC-MS, MS m/z 658 (M+ +H).
【００９２】
段階９：
実施例１，段階８の生成物（５０ｍｇ、０.０７６ｍｍｏｌ）および水酸化ナトリウム（３０.４ｍｇ、０.７６０ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（５ｍＬ）および水（２.００ｍＬ）溶液を２時間還流した。濃縮した後、残渣をＨＣｌ（１Ｎ、１ｍＬ）で中和し、ＥｔＯＡｃで抽出し、ＭｇＳＯ4で乾燥した。濃縮によって、目的の生成物（３６ｍｇ）を得て、それをさらに精製することなく次の段階に用いた。
LC-MS, MS m/z 630 (M+ +H).
【００９３】
段階１０：
実施例１，段階９の生成物（３５ｍｇ、０.０５６ｍｍｏｌ）およびＣＤＩ（１２.６２ｍｇ、０.０７８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（１ｍＬ）を１時間還流した。室温に冷却した後、溶液にシクロプロパンスルホンアミド（１０.７７ｍｇ、０.０８９ｍｍｏｌ）を加え、続いてＤＢＵ（０.０１７ｍＬ、０.１１１ｍｍｏｌ）を加え、次いで生じた溶液を終夜撹拌した。濃縮した後、残渣を分取ＨＰＬＣで精製して、白色固形物として、目的の生成物（２５ｍｇ、６１％）を得た。
LC-MS, MS m/z 733 (M+ +H).
【００９４】
実施例２：化合物２の製造
【化９】
【化１０】
段階１：
３−クロロ−６−メチル安息香酸（１７.０ｇ、０.１０ｍｏｌ）の塩化チオニルのスラリー溶液（２３.５ｍｌ、０.３０ｍｏｌ）を穏やかに還流するまでゆっくりと加熱し、この温度で２時間維持した。反応混合物を次いで室温に冷却し、過剰の塩化チオニルを減圧留去した。残渣をＤＣＭ（５０ｍｌ）に溶解し、溶媒を次いで減圧留去した。（この工程を数回繰り返して、残存する塩化チオニルおよびＨＣｌを確実に除去したことに留意すべきである）。生じた生成物を次いでＴＨＦ（８０ｍｌ）に溶解し、それを下記の次の反応に直接用いた。
【００９５】
段階２：
氷塩浴（−１０℃）で冷却した３０％ アンモニア（５８ｍｌ）の水溶液（２４０ｍｌ）に、実施例２，段階１の生成物のＴＨＦ溶液を滴下して加えた。添加が完了した後、生じた反応混合物（スラリー）を−１０℃で１時間撹拌した。反応混合物を次いで室温に加温し、デカントした。反応容器中に残存する固形物を次いで水（５０ｍｌ）でトリチュレートした。このトリチュレーションおよびデカンテーション(decanting)の工程を次いで繰り返した。残存する固形物を次いで濾過し、濾過ケーキを水で洗浄した。固形物を次いで終夜減圧乾燥して、白色結晶性物質として、目的の生成物（１３.８ｇ、８２％）を得た。
1H NMR (DMSO-d6) δ ppm 2.33 (s, 3H), 7.24-7.27 (m, 1H), 7.35-7.38 (m , 2H), 7.44 (b, 1H), 7.80 (b, 1H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 18.87, 126.64, 128.86, 129.81, 132.31, 134.19, 138.65, 169.41; LC-MS, MS m/z 170.
【００９６】
段階３：
実施例２，段階２の生成物（１１.５ｇ、６８ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ−アセタール（１０.９ｍｌ、８２ｍｍｏｌ）の混合物、およびＴＨＦ（１５０ｍｌ）を還流するまで加熱し、この温度で２時間維持した。反応混合物を次いで室温に冷却し、揮発物を減圧留去した。生じた残渣をヘキサン（１５０ｍｌ）から再結晶して、白色針状晶として、目的の生成物（１４.７ｇ、９６％）を得た。
1H NMR (DMSO-d6) δ 2.49-2.51 (m, 3H), 3.09 (s, 3H), 3.20 (s, 3H), 7.24, 7.27 (d, J = 13.5 Hz, 1H), 7.37-7.41 (dd, J1=14 Hz, J2=4.5 Hz, 1H), 7.91, 7.92 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 8.55 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 20.69, 35.09, 40.91, 129.50, 129.72, 132.98, 136.86,138.87, 160.60, 177.04; LC-MS, MS m/z 225.
【００９７】
段階４：
実施例２，段階３の生成物およびＫＯｔＢｕ（１４.７ｇ、１３１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ混合溶液（３００ｍｌ）を還流するまで加熱し、この温度で２時間維持した（加熱すると、反応混合物は暗色溶液となった）。次いで約１００ｍｌの溶媒を留去して、反応混合物の容積を減少させた。生じた溶液を次いで水（１Ｌ）に注意して注ぎ、生じた混合物をＨＣｌ（１Ｍ）で結果としてｐＨ ４に酸性化した。混合液を次いで濾過し、固形物を集めて、水で十分に洗浄し、次いで終夜減圧乾燥して、オフホワイトの粉末として、目的の生成物（７.０ｇ、６０％）を得た。
1H NMR (400 Hz, CD3OD) δ ppm 6.66 (d, J = 7.05 Hz, 1H), 7.18 (d, J = 7.05 Hz, 1H), 7.66 (s, 1H) 7.67 (d, J = 2.01 Hz, 1H), 8.24 (d, J = 2.27 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 104.05, 125.62, 127.21, 128.54, 129.52, 130.77, 132.43, 136.55, 160.72; LC-MS, MS m/z 180.
【００９８】
段階５：
実施例２，段階４の生成物およびＮＢＳ（３９.７４７ｇ、２２３.３ｍｍｏｌ）のＭｅＣＮのスラリー溶液（５００ｍＬ、無水）を、穏やかに還流するまで約２時間かけてゆっくりと加熱し、穏やかな還流で１.５時間維持した。（この反応はＬＣ／ＭＳでモニターされうる）。反応混合物を次いで３時間かけてゆっくりと室温に冷却し、観察された固形物を単純濾過で除去した。固形物を集めて、ＭｅＣＮ（１００ｍＬ×３）で洗浄して、目的の生成物（４７ｇ）を得た。この物質をさらに精製することなく次の段階に用いた。
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 7.46(s, 1H), 7.81 (dd, J = 8.40, 2.00 Hz, 1H), 7.88 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.27(d, J = 2.00 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 96.68, 126.34, 127.58, 127.71, 130.73, 132.20, 133.47, 134.46, 159.88; LC-MS, MS m/z 258.
【００９９】
段階６：
実施例２，段階５の生成物（４７ｇ、１８２ｍｍｏｌ）のＰＯＣｌ3不均一溶液（２００ｍＬ、２.１５ｍｏｌ）をゆっくりと１時間かけて還流するまで加熱した。反応混合物を還流で４時間維持した。反応混合物を次いで室温に冷却し、減圧濃縮して、過剰なＰＯＣｌ3を除去した。生じた残渣を次いでＣＨ2Ｃｌ2（６００ｍＬ）に溶解し、−３５℃に冷却し、次いで混合液がわずかに塩基性（ｐＨ＝８）になるまで、ＮａＯＨ（１Ｎ、４００ｍＬ）で注意して中和した。生じた有機層を分離し、水で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、減圧濃縮した。生じた残渣をＥｔＯＡｃ（約５０ｍＬ）から結晶化して、目的の生成物（３２ｇ）を得た。固形物を集めて、１０％ ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（３×５０ｍｌ）で洗浄した。母液を濃縮し、バイオタージ（１６％ ＥｔＯＡｃのヘキサン溶液で溶離）で精製して、固形物として、目的の生成物（４ｇ）を得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 7.80 (dd, J = 8.81, 2.01 Hz, 1H), 8.14 (d, J = 9.06 Hz, 1H), 8.34 (d, J = 1.76 Hz, 1H), 8.48 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 118.39, 125.06, 127.59, 128.71, 133.89, 134.14, 134.93, 143.18, 148.98; LC-MS, MS m/z 275.
【０１００】
段階７：
実施例２，段階６の生成物（２２.１６ｇ、８０ｍｍｏｌ）のＴＨＦのスラリー溶液（５００ｍｌ）に、−７８℃で、１００ｍｌの１.６Ｍ ｎ−ＢｕＬｉ（ヘキサン溶液、１６０ｍｍｏｌ）を１５分かけてカニューレで滴下して加えた（内部温度＜−６５℃に維持しながら）。生じた溶液を０.５時間撹拌し、その後、（ｉ−ＰｒＯ）3Ｂ（３７ｍｌ、１６０ｍｍｏｌ）を１０分かけてシリンジで滴下して加えた（内部温度＜−６５℃に維持しながら）。生じた反応混合物を０.５時間撹拌した。ＬＣ／ＭＳで反応の完了をチェックした後、８０ｍＬの３０％ Ｈ2Ｏ2（７７６ｍｍｏｌ）を１０分かけて滴下ロートで滴下して加え（添加の間、内部温度を−６０℃に上げた）、続いて８０ｍｌの１Ｎ ＮａＯＨ（８０ｍｍｏｌ）を加えた。冷却バスを取り除き、反応混合物を室温に加温し、さらに１時間室温で撹拌した。ＬＣ／ＭＳで反応の完了を適合させた後、反応混合物を次いで−４０℃に冷却し、過剰なＨ2Ｏ2を３０分かけてクエンチする手段として、Ｎａ2ＳＯ3（１００ｇ、０.７９３モル）の水溶液（４００ｍｌ）を滴下ロートで滴下して加えた（内部温度を５〜１０℃に維持しながら）。生じたスラリーを次いで０℃でＨＣｌ（６Ｎ、約５０ｍｌ）を用いてｐＨ 〜６まで中和し、次いでＥｔＯＡｃ（５００ｍｌ）で希釈し、２Ｌ 分液漏斗にデカントした。反応容器中に残存する固形物に、水（５００ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（３００ｍｌ）を加え、次いでＨＣｌ（６Ｎ、約２０ｍｌ）で中和した。有機層を合わせて、食塩水（３００ｍｌ×３）、次いで水（２００ｍｌ×３）で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、濃縮して、粗生成物を得て、それをＥｔＯＡｃ（５０ｍｌ）でトリチュレートした。固形物を濾過で集めて、ＥｔＯＡｃ（３×２５ｍｌ）ですすぎ、乾燥して、目的の生成物（２回実行(2 runs)：１２.０ｇ、７０％および１３.８ｇ、８１％）を得た。濾液を合わせて、濃縮し、バイオタージ（３５％ ＥｔＯＡｃのヘキサン溶液で溶離）で精製して、生成物（２.１ｇ）を得た。全体では、４４.４ｇの臭化物によって、４−ＯＨ生成物（２７.９ｇ、８１％）が得られた。
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 4.05 (s, 3H), 7.4 (s, 1H), 7.76 (dd, J = 8.8, 2, Hz, 1H), 8.16 (d, J = 2 Hz, 1H), 8.23 (d, J = 8.8 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 123.78, 124.66, 125.62, 127.03, 127.71, 130.72, 133.80, 137.63; 148.88; LC-MS, MS m/z 213.
【０１０１】
段階８：
実施例２，段階７の生成物（１６ｇ、７５.５ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ−ＭｅＣＮのスラリー溶液（３０ｍＬ／３００ｍＬ）に、０℃で、６０ｍｌの２Ｍ ＴＭＳＣＨＮ2のヘキサン溶液（１２０ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。反応混合物を室温に加温し、次いで１４時間撹拌した。溶液を次いで濃縮し、生じた固形物をＥｔＯＡｃ（約５０ｍＬ）から再結晶して、目的の生成物（８.１ｇ）を得て、それを２５％ ＥｔＯＡｃのヘキサン溶液（２０×３回）で洗浄した。母液を濃縮し、バイオタージ（１６％ ＥｔＯＡｃのヘキサン溶液で溶離）で精製して、固形物として、目的の生成物（３.２ｇ）を得た。
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 4.05 (s, 3H), 7.67 (dd, J = 9.06, 2.01 Hz, 1H), 7.80 (s, 1H), 8.16 (d, J = 8.81 Hz, 1H), 8.23 (d, J = 2.01 Hz, 1H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d6) δ ppm 56.68, 122.70, 123.99, 124.14, 126.67, 127.83, 131.43, 134.10, 139.75, 149.94; LC-MS, MS m/z 229.
【０１０２】
【化１１】
段階９：
１，７−ジクロロ−４−メトキシイソキノリン（４.５２ｇ、２０ｍｍｏｌ）、Ｂｏｃ−Ｌ−Ｈｙｐ−ＯＨ（５.０８ｇ、２２ｍｍｏｌ）およびｔ−ＢｕＯＫ（６.７２ｇ、６０ｍｍｏｌ）の混合物に、１０℃で撹拌しながらＤＭＳＯ（２００ｍＬ）を加え、次いで生じたスラリーを３０分間超音波処理して、室温で、すばやく均一な溶液を得た。生じた溶液を３時間撹拌した。反応混合液を次いで０℃に冷却し、水（５０ｍｌ）でクエンチした。ＨＣｌ（１Ｎ）を加えることによって、生じた混合物を最終的なｐＨ ５に中和／酸性化した。生じた混合物をＥｔＯＡｃ（４００ｍＬ）で抽出し、有機層を次いで食塩水（２００ｍＬ）、水（２００ｍＬ×２）で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、濾過し、次いで減圧濃縮して、クルードの固形物（８.３６ｇ）を得た。この物質をさらに精製することなく次の段階に用いた。
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 2.34 - 2.47 (m, 1 H), 2.62 - 2.77 (m, 1 H), 3.70 - 3.92 (m, 2 H), 4.42 - 4.59 (m, 1 H), 5.65 (brs, 1 H), 7.54 (s, 1 H), 7.68 (dd, J=8.81, 2.01 Hz, 1 H), 8.02 - 8.13 (m, 2 H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) (Ｂｏｃ回転異性体のため、観測されたピークは炭素数よりも多い) δ ppm 13.90, 14.04, 20.71, 22.02, 27.84, 27.98, 30.91, 35.00, 35.87, 51.84, 52.08, 56.21, 57.49, 57.80, 59.70, 73.32, 73.87, 79.14, 79.19, 119.11, 119.77, 122.38, 123.35, 128.50, 130.95, 132.25, 145.70, 151.94, 153.25, 153.71, 173.51, 173.98; LC-MS, MS m/z 423.
【０１０３】
段階１０：
実施例２，段階９の生成物（４.２３ｇ、１０ｍｍｏｌ）、シクロプロパンスルホンアミド（２.３００ｇ、１２.００ｍｍｏｌ）、ヒューニッヒ塩基（６.４６ｇ、５０.０ｍｍｏｌ）、およびＨＡＴＵ（５.７０ｇ、１５.００ｍｍｏｌ）のＣＨ2Ｃｌ2混合溶液（２０ｍＬ）を４時間撹拌した。濃縮した後、残渣を３３％ アセトンのヘキサン溶液で溶離するバイオタージ（４０＋Ｓ Ｓｉカラム）で精製して、固形物として、目的の生成物（４.７ｇ、８４％）を得た。
LC-MS, MS m/z 560.
【０１０４】
段階１１：
実施例２，段階１０の生成物（５.６０ｇ、１０ｍｍｏｌ）に、４Ｍ ＨＣｌ（２５.００ｍＬ、１００ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン溶液を加えた。形成した溶液を２５℃で３時間撹拌した。減圧濃縮した後、残渣にエーテル（２０ｍＬ）を加え、次いで再び濃縮し、該手順を３回繰り返した。ハウスバキューム乾燥によって、固形物として、粗生成物（５.３３ｇ、１００％）を得て、それをさらに精製することなく次の段階に用いた。
【０１０５】
段階１２：
実施例２，段階１１の生成物（５.６０ｇ、１０ｍｍｏｌ）に、４Ｍ ＨＣｌ（２５.００ｍＬ、１００ｍｍｏｌ）の１，４−ジオキサン溶液を加えた。形成した溶液を２５℃で３時間撹拌した。減圧濃縮した後、残渣にエーテル（２０ｍＬ）を加え、次いで再び濃縮し、該手順を３回繰り返した。ハウスバキューム乾燥によって、固形物として、粗生成物（５.３３ｇ、１００％）を得て、それをさらに精製することなく次の段階に用いた。
LC-MS, MS m/z 720.
【０１０６】
段階１３：
実施例２，段階１２の生成物（１６０ｍｇ、０.２２２ｍｍｏｌ）およびグラブスＩＩ（３０ｍｇ、０.０３５ｍｍｏｌ）のＣＨ2Ｃｌ2溶液（５ｍＬ）を加え、１６時間還流した。濃縮した後、残渣を２５％ アセトンのヘキサン溶液で溶離するバイオタージで精製して、単一のジアステレオマー（５４ｍｇ）を得て、その構造を反応式に示したようにまたは（Ｒ）−異性体とラベルした。
LC-MS, MS m/z 692.
【０１０７】
段階１４：
実施例２，段階１３の生成物（５０ｍｇ、０.０７２ｍｍｏｌ）および水酸化ナトリウム（２８.９ｍｇ、０.７２２ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ（５ｍＬ）および水（２.００ｍＬ）溶液を２時間還流した。濃縮した後、残渣をＨＣｌ（１Ｎ、１ｍＬ）で中和し、ＥｔＯＡｃで抽出し、ＭｇＳＯ4で乾燥した。濾過および濃縮によって、目的の生成物（４６ｍｇ）を得て、それをさらに精製することなく次の段階に用いた。
【０１０８】
段階１５：
実施例２，段階１４の生成物（４５ｍｇ、０.０６８ｍｍｏｌ）およびＣＤＩ（１５.３８ｍｇ、０.０９５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（１ｍＬ）を１時間還流した。室温に冷却した後、溶液に、シクロプロパンスルホンアミド（１３.１３ｍｇ、０.１０８ｍｍｏｌ）を加え、続いてＤＢＵ（０.０２０ｍＬ、０.１３６ｍｍｏｌ）を加え、次いで生じた溶液を終夜撹拌した。濃縮した後、残渣を分取ＨＰＬＣで精製して、白色固形物として、目的の生成物（１５ｍｇ、３０％）を得た。
LC-MS, MS m/z 767.
【０１０９】
実施例３：化合物３の製造
【化１２】
【化１３】
段階１：１−（２（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−ノン−８−エノイル）−４（Ｒ）−ヒドロキシ−ピロリジン−２（Ｓ）−カルボン酸メチルエステルの製造
【化１４】
２（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−８−ノンエン酸（ＲＳＰ Ａｍｉｎｏ Ａｃｉｄｓから購入）（３.５ｇ、１２.９ｍｍｏｌ）のＤＣＭ溶液（２００ｍｌ）を、４（Ｒ）−ヒドロキシピロリジン−２（Ｓ）−カルボン酸 メチルエステル塩酸塩（２.１５ｇ、１１.８ｍｍｏｌ）、Ｎ−メチルモルホリン（４.２５ｍＬ、３８.６ｍｍｏｌ）、およびＨＡＴＵ（５.３７ｇ、１４.１ｍｍｏｌ）で連続して処理した。反応混合液をＮ2下、室温で３日間撹拌し、次いで減圧濃縮した。残渣を酢酸エチルとｐＨ ４緩衝液（ビフタレート）の間で分液した。有機相を飽和ＮａＨＣＯ3水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、減圧濃縮して、粗生成物を得た。フラッシュクロマトグラフィ（５０％ 酢酸エチル／ヘキサン〜１００％ 酢酸エチル）によって、無色油として、１−（２（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−ノン−８−エノイル）−４（Ｒ）−ヒドロキシ−ピロリジン−２（Ｓ）−カルボン酸メチルエステル（４.７ｇ、〜１００％）を得た：
1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ 1.33-1.50(m, 8 H), 1.46 (s, 9 H), 1.57 (m, 1 H), 1.72 (m, 1 H) 2.08 (m, 2 H), 2.28 (m, 1 H), 3.72 (s, 3 H,) 3.75-3.87 (m, 2 H), 4.36 (m, 1 H), 4.51 (bs, 1 H), 4.57 (t, J=8.2 Hz, 1 H), 4.95 (d, J=10.4 Hz, 1 H), 5.01 (m, 1 H), 5.83 (m, 1 H). MS m/z 399 (M++1).
【０１１０】
段階２：１−｛［１−（２（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−ノン−８−エノイル）−４（Ｒ）−ヒドロキシ−ピロリジン−２（Ｓ）カルボニル］−（１Ｒ）−アミノ｝−２（Ｓ）−ビニル−シクロプロパンカルボン酸エチルエステルの製造
【化１５】
１−（２（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−ノン−８−エノイル）−４（Ｒ）−ヒドロキシ−ピロリジン−２（Ｓ）−カルボン酸メチルエステル（４.７ｇ、１１.８ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（８０ｍＬ）、メタノール（２０ｍＬ）、および水（４０ｍＬ）に溶解した。粉末状の水酸化リチウム（５.６ｇ、２３３ｍｍｏｌ）を加えた。明黄色スラリーをＮ2下、室温で１６時間撹拌し、次いで減圧濃縮した。残渣をエーテルと水の間で分液した。エーテル相を廃棄し、ｐＨが４になるまで水相をＨＣｌ（１Ｎ）で処理した。酸性溶液をＥｔＯＡｃ（３×）で抽出した。ＥｔＯＡｃ抽出物を合わせて、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、濾過し、減圧濃縮して、白色固形物として、１−（２（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−８−ノンエノイル）−４（Ｒ）−ヒドロキシ−ピロリジン−２（Ｓ）−カルボン酸（４.３６ｇ、９６％）を得た。この酸を次いでＤＭＦ（１５０ｍｌ）に溶解し、（１Ｒ，２Ｓ）−１−アミノ−２−ビニルシクロプロパンカルボン酸エチルエステル塩酸塩（２.６１ｇ、１３.６ｍｍｏｌ）、Ｎ−メチルモルホリン（２.５ｍＬ、２２.６ｍｍｏｌ）、およびＨＡＴＵ（５.２ｇ、１３.７ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合液をＮ2下、室温で１６時間撹拌し、次いで減圧濃縮した。残渣を酢酸エチルとｐＨ ４緩衝液（ビフタレート）の間で分液した。有機相を飽和ＮａＨＣＯ3水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、濾過し、減圧濃縮して、粗生成物を得た。フラッシュクロマトグラフィ（６０％〜８０％ 酢酸エチル／ヘキサン）によって、白色固形物として、１−｛［１−（２（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−ノン−８−エノイル）−４（Ｒ）−ヒドロキシ−ピロリジン−２（Ｓ）カルボニル］−（１Ｒ）−アミノ｝−２（Ｓ）−ビニル−シクロプロパンカルボン酸エチルエステル（６.０ｇ、９８％）を得た。
1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ 1.25 (t, J=7.2 Hz, 3 H), 1.33-1.80 (m, 10 H), 1.46 (s, 9 H), 2.09 (m, 3 H), 2.25 (m, 2 H), 3.76 (m, 2 H), 4.14 (m, 2 H), 4.27 (dd, J=8.5, 5.2 Hz, 1 H), 4.50 (m, 2 H), 4.94 (d, J=10.1 Hz, 1 H), 5.01 (dd, J=17.1, 1.8 Hz, 1 H), 5.11 (dd, J=10.4, 1.8 Hz, 1 H), 5.30 (d, J=15.6 Hz, 1 H), 5.80 (m, 2 H), 8.57 (s, 1 H). MS m/z 522 (M++1).
【０１１１】
段階３：１−｛［１−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−ノン−８−エノイル）−４−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−２−ビニルシクロプロパンカルボン酸エチルエステルの製造
【化１６】
１−｛［１−（２（Ｓ）−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−ノン−８−エノイル）−４（Ｒ）−ヒドロキシ−ピロリジン−２（Ｓ）カルボニル］−（１Ｒ）−アミノ｝−２（Ｓ）−ビニル−シクロプロパンカルボン酸エチルエステル（１.５ｇ、２.８７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ混合溶液（１０ｍｌ）に、イミダゾール（０.２５ｇ、３.６７ｍｍｏｌ）およびｔｅｒｔ−ブチル−ジメチルシリルクロリド（５１６ｍｇ、３.４４ｍｍｏｌ）を加えた。混合液を室温で２日間撹拌した。それを次いで減圧濃縮し、残渣を酢酸エチルに溶解した。それを次いで水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、減圧濃縮して、固形物を得て、それを次いでフラッシュクロマトグラフィ（２０％ 酢酸エチルのヘキサン溶液で溶離）で精製して、白色固形物（１.４３ｇ、７８％）を単離した。
1H NMR (300 MHz, CD3OD) δ 0.10 (s,6 H), 0.89 (s, 9 H), 1.22 (m, 3 H), 1.31-1.48 (m, 16 H), 1.50-1.75 (m, 3 H), 2.06 (m, 3 H), 2.11-2.33 (m, 2 H), 3.70 (m, 2 H), 4.03-4.19 (m, 2 H), 4.21 (m, 1 H), 4.45 (t, J=7.87 Hz, 1 H), 4.59 (m, 1 H), 4.91 (d, J=9.15 Hz, 1 H), 4.98 (d, J=17.20 Hz, 1 H), 5.08 (dd, J=10.25, 1.83 Hz, 1 H), 5.27 (dd, J=17.38, 1.65 Hz, 1 H), 5.65-5.87 (m, 2 H). MS m/z 636 (M++1).
【０１１２】
段階４：１４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−１８−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−２，１５−ジオキソ−３，１６−ジアザ−トリシクロ［１４.３.０.０４，６］ノナデカ−７−エン−４−カルボン酸エチルエステルの製造
【化１７】
１−｛［１−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−ノン−８−エノイル）−４−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−ピロリジン−２−カルボニル］−アミノ｝−２−ビニル−シクロプロパンカルボン酸エチルエステル（１.６３ｇ、２.５６ｍｍｏｌ）の塩化メチレン溶液（６４０ｍｌ）に、トリシクロヘキシルホスフィン［１，３−ビス（２，４，６−トリ［ベンジリデン］ルテニウム（ＩＶ）ジクロリド（２１５ｍｇ、０.２６ｍｍｏｌ）を加えた。混合液を１５分間加熱還流した。残渣を減圧濃縮し、次いで３０％ 酢酸エチル／ヘキサンで溶離するフラッシュクロマトグラフィで精製した。サンプルをさらに脱色するため、粗生成物を５０％ エーテルのヘキサン溶液で溶離する２回目のクロマトグラフィに供して、白色固形物として、生成物（１.５ｇ、９６％）を得た。
1H NMR (500 MHz, CD3Cl) δ 0.06 (s, 3 H), 0.07 (s, 3 H), 0.86 (s, 9 H), 1.18-1.24 (m, 6 H), 1.34-1.64 (m, 14 H), 1.86-1.96 (m, 3 H), 2.02-2.09 (m, 1 H), 2.11-2.17 (m, 1 H), 2.19-2.28 (m, 1 H), 2.57-2.63 (m, 1 H), 3.50-3.54 (m, 1 H), 3.71 (dd, J=10.22, 6.26 Hz, 1 H), 4.06-4.17 (m, 2 H), 4.52-4.58 (m, 2 H), 4.75 (d, J=8.55 Hz, 1 H), 5.21 (t, J=9.92 Hz, 1 H), 5.35 (d, J=7.63 Hz, 1 H), 5.45-5.50 (m, 1 H), 6.94 (s,1 H). MS m/z 608 (M++1).
【０１１３】
段階５：１４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−１８−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−２，１５−ジオキソ−３，１６−ジアザ−トリシクロ［１４.３.０.０４，６］ノナデカ−７−エン−４−カルボン酸の製造
【化１８】
１４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−１８−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−２，１５−ジオキソ−３，１６−ジアザ−トリシクロ［１４.３.０.０４，６］ノナデカ−７−エン−４−カルボン酸エチルエステル（１.５ｇ、２.４７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（４ｍＬ）、メタノール（１ｍＬ）、および水（２ｍＬ）溶液に、粉末状の水酸化リチウム（１.０ｇ、５０ｍｍｏｌ）を加え、明黄色スラリーをＮ2下、室温で４時間撹拌した。混合液を次いで減圧濃縮し、残渣をエーテルと水の間で分液した。エーテル相を廃棄し、ｐＨ ４まで水相をＨＣｌ（１Ｎ）で処理した。この酸性溶液をＥｔＯＡｃで３回抽出した。ＥｔＯＡｃ抽出物を合わせて、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、減圧濃縮して、オフホワイトの固形物（１.２ｇ、８４％）を得た。
1H NMR (300 MHz, CD3OD) δ ppm 0.12 (s, 6 H), 0.89 (s, 9 H), 1.23-1.64 (m, 17 H), 1.70-1.87 (m, 1 H), 1.90-2.49 (m, 6 H), 3.70-3.80 (m,1 H), 3.83-3.90 (m, 1 H), 4.28-4.36 (m, 1 H), 4.47-4.55 (m, 1 H), 4.65 (s, 1 H), 5.30-5.39 (m, 1 H), 5.53-5.62 (m, 1 H). MS m/z 580 (M++1).
【０１１４】
段階６：［１８−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−４−シクロプロパンスルホニルアミノカルボニル−２，１５−ジオキソ−３，１６−ジアザ−トリシクロ［１４.３.０.０４，６］ノナデカ−７−エン−１４−イル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルの製造
【化１９】
１４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−１８−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−２，１５−ジオキソ−３，１６−ジアザ−トリシクロ［１４.３.０.０４，６］ノナデカ−７−エン−４−カルボン酸（５００ｍｇ、０.８６ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（２５ｍｌ）に溶解し、ＣＤＩ（１８０ｍｇ、１.１２ｍｍｏｌ）で処理した。（乾燥器で乾燥したガラス製品を用い、乾燥Ｎ2雰囲気を維持することによって、湿気を避けるように注意した）。反応混合液を２時間還流した後、それを室温に冷却し、シクロプロピルスルホンアミド（１３５ｍｇ、１.１２ｍｍｏｌ）およびＤＢＵ（１７０ｍｇ、１.１２ｍｍｏｌ）で連続して処理した。室温で４時間撹拌した後、回転蒸発でＴＨＦを除去した。残渣を酢酸エチルとｐＨ ４緩衝液の間で分液した。有機相を乾燥（ＭｇＳＯ4）し、濾過し、減圧濃縮して、粗生成物を得た。それを次いで、３３％ 酢酸エチルのヘキサン溶液で溶離するフラッシュカラムで精製して、白色固形物（３００ｍｇ、５１％）を単離した。
1H NMR (300 MHz, CD3OD) δ ppm 1H 0.07 (s, 3 H), 0.08 (s, 3 H), 0.85 (s, 9 H), 0.87-1.49 (m, 21 H), 1.73-1.95 (m, 3 H), 2.08-2.16 (m, 1 H), 2.25-2.36 (m, 2 H), 2.42-2.56 (m, 1 H), 2.85-2.93 (m, 1 H), 3.65-3.74(dd, J=10.61, 3.66 Hz, 1 H), 3.89 (d, J=10.25 Hz, 1 H), 4.34 (m, J=9.70, 9.70 Hz, 1 H), 4.43 (t, J=7.87 Hz, 1 H), 4.57 (s, 1 H), 4.94-5.01 (m, 1 H), 5.10 (d, J=8.78 Hz, 1 H), 5.66-5.75 (m, 1 H), 6.55 (s, 1 H), 10.13 (s, 1 H). MS m/z 683 (M++1).
【０１１５】
段階７：（４−シクロプロパンスルホニルアミノカルボニル−１８−ヒドロキシ−２，１５−ジオキソ−３，１６−ジアザ−トリシクロ［１４.３.０.０４，６］ノナデカ−７−エン−１４−イル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化２０】
［１８−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−４−シクロプロパンスルホニルアミノカルボニル−２，１５−ジオキソ−３，１６−ジアザ−トリシクロ［１４.３.０.０４，６］ノナデカ−７−エン−１４−イル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（３３０ｍｇ、０.４８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ混合溶液（２５ｍｌ）に、テトラブチルアンモニウムフルオライド（１５０ｍｇ、０.５４ｍｍｏｌ）を加え、混合液を室温で終夜撹拌した。回転蒸発でＴＨＦを除去した。残渣を酢酸エチルと水の間で分液した。有機相を乾燥（ＭｇＳＯ4）し、減圧濃縮して、粗生成物を得た。それを次いでヘキサンでトリチュレートすることで精製して、白色固形物（２００ｍｇ、７３％）を得た。
1H NMR (500 MHz, CD3Cl) δ ppm 1.87-1.64 (m, 21 H), 1.70-1.98 (m, 3 H), 2.15-2.56 (m, 5 H), 2.85-2.94 (m, 1 H), 3.71 (d, J=13.91 Hz, 1 H), 4.10-4.26 (m, 2 H), 4.51 (t, J=7.87 Hz, 1 H), 4.62 (s, 1 H), 4.98 (m, 1 H), 5.06 (d, J=8.78 Hz, 1 H), 5.64-5.71 (m, 1 H), 6.72 (s, 1 H), 10.24 (s, 1 H). MS m/z 569 (M++1).
【０１１６】
段階８，［４−シクロプロパンスルホニルアミノカルボニル−１８−（６−メトキシ−イソキノリン−１−イルオキシ）−２，１５−ジオキソ−３，１６−ジアザ−トリシクロ［１４.３.０.０４，６］ノナデカ−７−エン−１４−イル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルの製造
【化２１】
４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−１８−ヒドロキシ−２，１５−ジオキソ−３，１６−ジアザ−トリシクロ［１４.３.０.０４，６］ノナデカ−７−エン−４−カルボン酸（２１５ｍｇ、０.４６ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ混合溶液（５ｍＬ）に、ｔ−ＢｕＯＫ（１２５ｍｇ、１.１１ｍｍｏｌ）および１−クロロ−６−メトキシ−イソキノリン（１１０ｍｇ、０.５６ｍｍｏｌ、実施例１ 反応式１より）を加えた。反応液を室温で５時間撹拌した。反応混合液を次いでエーテル（１０ｍＬ）と水（１０ｍＬ）の間で分液した。ＨＣｌ（１Ｎ）を用いて水相をｐＨ ４に酸性化した。生じた溶液をＥｔＯＡｃ（３×２０ｍＬ）で抽出した。ＥｔＯＡｃ抽出物を合わせて、乾燥（ＭｇＳＯ4）し、濾過し、減圧濃縮して、白色固形物を得た。フラッシュクロマトグラフィ（２％ ＭｅＯＨ／ＣＨ2Ｃｌ2）によって、白色固形物として、カルボン酸誘導体（１４０ｍｇ、４９％）を得た。
LC-MS (方法 B, 保持時間: 1.80 分), MS m/z 543 (M++1).
上記の一般的な手順に記載したように、上記の固形物（１４０ｍｇ、０.２２ｍｍｏｌ）をシクロプロピルスルホンアミド（３５ｍｇ、０.２８ｍｍｏｌ）で処理して、粗生成物を得た。フラッシュクロマトグラフィ（２％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって、目的の生成物（９０ｍｇ）を得た。プレパラティブＨＰＬＣ（ＹＭＣ ＸＴＥＲＲＡ、Ｓ５、３０×５０ｍｍ、５０％〜１００％Ｂ、グラジエント ９分、１分保持、流速４０ｍＬ／分）でさらに精製して、白色粉末として、生成物（３０ｍｇ、１９％）を得た。
MS m/z 726 (M++1).
【０１１７】
段階９：シクロプロパンスルホン酸［（Ｚ）−（１Ｓ，４Ｒ，１４Ｓ，１８Ｒ）−１４−アミノ−１８−（６−メトキシ−イソキノリン−１−イルオキシ）−２，１５−ジオキソ−３，１６−ジアザ−トリシクロ［１４.３.０.０４，６］ノナデカ−７−エン−４−カルボニル］−アミドの製造
【化２２】
実施例２の生成物（０.９４４ｇ、３.０３ｍｍｏｌ）を４Ｍ ＨＣｌのジオキサン溶液（１５ｍＬ）に溶解した。混合液を室温で４時間撹拌し、次いで減圧濃縮した。残渣を次いでジクロロメタン（２０ｍＬ）に溶解し、再び減圧濃縮した。白色固形物をさらに精製することなく引き続き用いた。
MS m/z 626 (M++1).
【０１１８】
段階１０：中間体１の製造
【化２３】
シクロプロパンスルホン酸［（Ｚ）−（１Ｓ，４Ｒ，１４Ｓ，１８Ｒ）−１４−アミノ−１８−（６−メトキシ−イソキノリン−１−イルオキシ）−２，１５−ジオキソ−３，１６−ジアザ−トリシクロ［１４.３.０.０４，６］ノナデカ−７−エン−４−カルボニル］−アミド（１００ｍｇ、０.１６ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（５ｍｌ）に溶解し、Ｎ2下、室温で、Ｆｍｏｃ−イソチオシアネート（４９.５ｍｇ、０.１７６ｍｍｏｌ、１.１当量）およびＤＩＰＥＡ（０.０８４ｍＬ、０.４７９ｍｍｏｌ、３当量）で連続して処理した。混合液を室温で１時間撹拌した。生じた溶液を次の段階に直接用いた。
【０１１９】
段階１１：シクロプロパンスルホン酸［（Ｚ）−（１Ｓ，４Ｒ，６Ｓ，１４Ｓ，１８Ｒ）−１８−（６−メトキシ−イソキノリン−１−イルオキシ）−２，１５−ジオキソ−１４−チオウレイド−３，１６−ジアザ−トリシクロ［１４.３.０.０４，６］ノナデカ−７−エン−４−カルボニル］−アミドの製造
【化２４】
中間体１（１４５ｍｇ、０.１６ｍｍｏｌ）のＤＣＭ反応溶液（５ｍｌ）に、ピペリジン（０.５ｍＬ）を加えた。反応混合液を室温で２時間撹拌した。溶媒を濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃに溶解し、ＨＣｌ（１Ｎ）および食塩水溶液で洗浄した。有機層を乾燥し、濃縮した。フラッシュクロマトグラフィ（２％ ＭｅＯＨ／ＤＣＭ）によって、白色固形物として、目的の生成物（５７ｍｇ、０.０８３ｍｍｏｌ、５２％）を得た。
MS m/z 685.4 (M++1).
【０１２０】
段階１２：化合物３の製造
【化２５】
シクロプロパンスルホン酸［（Ｚ）−（１Ｓ，４Ｒ，６Ｓ，１４Ｓ，１８Ｒ）−１８−（６−メトキシ−イソキノリン−１−イルオキシ）−２，１５−ジオキソ−１４−チオウレイド−３，１６−ジアザ−トリシクロ［１４.３.０.０４，６］ノナデカ−７−エン−４−カルボニル］−アミド（２０ｍｇ、０.０２９ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（０.０１５ｍＬ、０.０８８ｍｍｏｌ、３当量）のＤＭＦ混合溶液（１ｍＬ）に、Ｎ2下、室温で、２−ブロモ−１−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）エタノン（１６.５３ｍｇ、０.０５８ｍｍｏｌ、２当量）を加えた。混合液を室温で終夜撹拌した。反応混合液をプレパラティブＨＰＬＣで精製して、白色粉末として、生成物（１０.９ｍｇ、０.０１２ｍｍｏｌ、４３％）を得た。
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 0.97 - 1.02 (m, 2 H) 1.04 - 1.11 (m, 4 H) 1.25 - 1.37 (m, 2 H) 1.40 (m, 2 H) 1.57 (m, 2 H) 1.71 (dd, J=8.06, 5.54 Hz, 2 H) 1.92 - 2.03 (m, 2 H) 2.40 (d, J=9.06 Hz, 1 H) 2.52 - 2.64 (m, 2 H) 2.83 - 2.93 (m, 2 H) 3.11 (dt, J=3.21, 1.54 Hz, 2 H) 3.89 (s, 3 H) 4.21 (dd, J=11.71, 3.90 Hz, 1 H) 4.63 (t, J=8.06 Hz, 1 H) 4.75 - 4.81 (m, 2 H) 5.08 (d, J=9.57 Hz, 1 H) 5.70 (d, J=10.07 Hz, 1 H) 6.02 (s, 1 H) 6.73 (s, 1 H, NH) 6.83 - 6.89 (m, 3 H) 7.12 (d, J=2.27 Hz, 1 H) 7.21 (d, J=6.04 Hz, 1 H) 7.60 - 7.67 (m, 2 H) 7.79 (d, J=6.04 Hz, 1 H) 9.00 (s, 1 H, NH). MS m/z 869.3 (M++1).
【０１２１】
実施例４：化合物４の製造
【化２６】
実施例３の製造に記載したものと同じ手順であるが、段階１２での２−ブロモ−１−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）エタノンの代わりに２−ブロモ−１−（２，４−ジフルオロフェニル）エタノンを用いて、実施例４を製造した。
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 0.96 - 1.02 (m, 1 H) 1.04 - 1.11 (m, 2 H) 1.25 - 1.31 (m, 1 H) 1.36 (m, 1 H) 1.58 (dd, J=9.44, 5.41 Hz, 4 H) 1.71 (dd, J=8.06, 5.54 Hz, 2 H) 1.91 - 2.03 (m, 2 H) 2.38 - 2.47 (m, 1 H) 2.50 - 2.61 (m, 1 H) 2.64 (m, 1 H) 2.85 - 2.95 (m, 1 H) 3.64 (s, 2 H) 3.90 (s, 3 H) 4.17 (dd, J=11.33, 3.78 Hz, 1 H) 4.63 (t, J=8.18 Hz, 1 H) 4.74 (dd, J=10.58, 3.27 Hz, 1 H) 4.88 - 4.96 (m, 2 H) 5.04 - 5.10 (m, 1 H) 5.66 - 5.73 (m, 1 H) 6.05 (s, 1 H) 6.45 (td, J=8.31, 2.27 Hz, 1 H) 6.63 (s, 1 H, NH) 6.65 - 6.69 (m, 1 H) 6.89 (dd, J=9.06, 2.52 Hz, 1 H) 7.12 (d, J=2.52 Hz, 1 H) 7.19 (d, J=5.79 Hz, 1 H) 7.58 (d, J=9.06 Hz, 1 H) 7.74 - 7.81 (m, 2 H) 8.98 (s, 1 H, NH) MS m/z 821.6 (M++ H).
【０１２２】
実施例５：化合物５の製造
【化２７】
実施例３の製造に記載したものと同じ手順であるが、段階１２での２−ブロモ−１−（４−（トリフルオロメトキシ）フェニル）エタノンの代わりに２−ブロモ−１−フェニルエタノンを用いて、実施例５を製造した。
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 0.98 - 1.03 (m, 1 H) 1.05 - 1.12 (m, 2 H) 1.26 - 1.38 (m, 4 H) 1.47 - 1.59 (m, 2 H) 1.72 (dd, J=8.18, 5.67 Hz, 1 H) 1.81 (s, 1 H) 2.02 (s, 2 H) 2.36 (t, J=8.94 Hz, 1 H) 2.55 (ddd, J=13.85, 8.69, 4.66 Hz, 2 H) 2.63 - 2.71 (m, 1 H) 2.91 (tt, J=7.93, 4.91 Hz, 1 H) 3.64 (s, 3 H) 3.89 (s, 3 H) 4.18 (dd, J=11.58, 3.78 Hz, 1 H) 4.57 (s, 1 H) 4.69 - 4.76 (m, 2 H) 5.01 - 5.11 (m, 2 H) 5.66 - 5.74 (m, 1 H) 5.98 (s, 1 H) 6.63 (s, 1 H, NH) 7.01 (dd, J=9.19, 2.39 Hz, 1 H) 7.16 (d, J=2.52 Hz, 1 H) 7.19 - 7.26 (m, 4 H) 7.53 (dd, J=7.93, 1.64 Hz, 2 H) 7.84 (d, J=6.04 Hz, 2 H) 9.09 (s, 1 H, NH) MS m/z 785.6 (M++ H).
【０１２３】
実施例６：化合物６の製造
【化２８】
実施例３の製造に記載したものと同じ手順であるが、段階８でのイソキノリンクロリドの代わりに１，７−ジクロロ−４−メトキシ−イソキノリン（実施例２ 反応式１より）を用いて、実施例６を製造した。
1H NMR (400 MHz, MCD3OD) δ ppm 0.99 (ddd, J=11.90, 8.25, 3.27 Hz, 1 H) 1.03 - 1.13 (m, 2 H) 1.24 - 1.36 (m, 2 H) 1.58 (dd, J=9.44, 5.16 Hz, 4 H) 1.70 (dd, J=8.18, 5.41 Hz, 2 H) 1.89 - 1.98 (m, 1 H) 2.02 (s, 1 H) 2.41 - 2.52 (m, 3 H) 2.64 (s, 1 H) 2.84 - 2.92 (m, 1 H) 3.31 - 3.34 (m, 2 H) 3.64 (s, 1 H) 3.92 (s, 3 H) 4.15 (dd, J=11.33, 3.78 Hz, 1 H) 4.58 (t, J=8.31 Hz, 1 H) 4.78 (dd, J=10.95, 3.15 Hz, 2 H) 5.03 - 5.13 (m, 2 H) 5.68 (m, 1 H) 6.08 (s, 1 H) 6.68 (m, 2H) 6.75 (s,1 H) 7.40 (s, 1 H, NH) 7.46 (s, 1 H) 7.52 (dd, J=8.81, 2.27 Hz, 1 H) 7.56 - 7.62 (m, 2 H) 7.93 (d, J=8.81 Hz, 1 H) 8.93 (s, 1 H, NH). MS m/z 903.3 (M++ H).
【０１２４】
生物学的研究
ＨＣＶ ＮＳ３／４Ａプロテアーゼ複合体酵素アッセイおよび細胞ベースのＨＣＶレプリコンアッセイを本開示において用い、下記のように調製し、実施し、確認した。
【０１２５】
組換えＨＣＶ ＮＳ３／４Ａプロテアーゼ複合体の産生
ＢＭＳ株、Ｈ７７株またはＪ４Ｌ６Ｓ株由来のＨＣＶ ＮＳ３プロテアーゼ複合体を、下記で説明するように産生した。これらの精製した組換えタンパク質を、均一系アッセイ（下記を参照されたい）において使用するために産生し、ＨＣＶ ＮＳ３タンパク質分解活性の阻害において本開示の化合物がいかに有効であるかを示した。
【０１２６】
ＨＣＶ感染患者からの血清を、サンフランシスコ病院のＴ．Ｗｒｉｇｈｔ医師から得た。ＨＣＶゲノム（ＢＭＳ株）の設計された完全長ｃＤＮＡ（相補デオキシリボ核酸）鋳型を、血清ＲＮＡ（リボ核酸）の逆転写−ＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）によって得たＤＮＡフラグメントから、他の遺伝子型１ａ株の間の相同性に基づいて選択したプライマーを使用して作製した。全ゲノム配列の決定から、Ｓｉｍｍｏｎｄｓらの分類によって、ＨＣＶ分離株に対して遺伝子型１ａを割り当てた（P Simmonds, KA Rose, S Graham, SW Chan, F McOmish, BC Dow, EA Follett, PL Yap and H Marsden, J. Clin. Microbiol., 31(6), 1493-1503 (1993)を参照されたい）。非構造領域ＮＳ２−５Ｂのアミノ酸配列は、ＨＣＶ遺伝子型１ａ（Ｈ７７）に＞９７％同一であり、遺伝子型１ｂ（Ｊ４Ｌ６Ｓ）に８７％同一であることが示された。感染性クローンＨ７７（１ａ遺伝子型）およびＪ４Ｌ６Ｓ（１ｂ遺伝子型）は、Ｒ．Ｐｕｒｃｅｌｌ（ＮＩＨ）から得たが、配列はＧｅｎｂａｎｋにおいて公開されている（ＡＡＢ６７０３６、Yanagi,M., Purcell,R.H., Emerson,S.U. and Bukh,J. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 94(16), 8738-8743 (1997); AF054247を参照されたい、Yanagi,M., St Claire,M., Shapiro,M., Emerson,S.U., Purcell,R.H. and Bukh,J, Virology 244 (1), 161-172. (1998)を参照されたい）。
【０１２７】
Ｈ７７およびＪ４Ｌ６Ｓ株を組換えＮＳ３／４Ａプロテアーゼ複合体の産生のために使用した。これらの株について組換えＨＣＶ ＮＳ３／４Ａプロテアーゼ複合体（アミノ酸１０２７〜１７１１）をコードするＤＮＡを、Ｐ．Ｇａｌｌｉｎａｒｉらによって記載されているように操作した（Gallinari P, Paolini C, Brennan D, Nardi C, Steinkuhler C, De Francesco R. Biochemistry. 38(17):5620-32, (1999)を参照されたい）。手短に言えば、３個のリシンの可溶化尾部を、ＮＳ４Ａコード領域の３’末端に添加した。ＮＳ４Ａ−ＮＳ４Ｂ切断部位のＰ１位中のシステイン（アミノ酸１７１１）をグリシンに変更し、リシンタグのタンパク質分解的切断を防止した。さらに、システインからセリンへの変異をアミノ酸位置１４５４でＰＣＲによって導入し、ＮＳ３ヘリカーゼドメインにおける自己分解による切断を防止した。Ｐ．Ｇａｌｌｉｎａｒｉらによって記載されたプロトコルに修正を加えて、変異ＤＮＡフラグメントをｐＥＴ２１ｂ細菌発現ベクター（Ｎｏｖａｇｅｎ）中でクローン化し、ＮＳ３／４Ａ複合体を大腸菌株ＢＬ２１（ＤＥ３）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で発現させた（Gallinari P, Brennan D, Nardi C, Brunetti M, Tomei L, Steinkuhler C, De Francesco R., J Virol. 72(8):6758-69 (1998)を参照されたい）。手短に言えば、ＮＳ３／４Ａプロテアーゼ複合体発現を、０．５ミリモル（ｍＭ）のイソプロピルβ−Ｄ−１−チオガラクトピラノシド（ＩＰＴＧ）によって２０℃で２２時間（ｈ）誘導した。典型的な発酵（１リットル（Ｌ））によって、約１０グラム（ｇ）の湿細胞ペーストを得た。２５ｍＭのＮ−（２−ヒドロキシエチル）ピペラジン−Ｎ’−（２−エタンスルホン酸）（ＨＥＰＥＳ）（ｐＨ７．５）、２０％グリセロール、５００ｍＭの塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、０．５％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００、１マイクログラム／ミリリットル（「μｇ／ｍＬ」）のリゾチーム、５ｍＭの塩化マグネシウム（ＭｇＣｌ2）、１μｇ／ｍｌのＤｎａｓｅＩ、５ｍＭのβ−メルカプトエタノール（βＭＥ）、プロテアーゼ阻害剤（エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）非含有）（Ｒｏｃｈｅ）からなる溶解バッファー（１０ｍＬ／ｇ）中で細胞を再懸濁させ、ホモジナイズし、４℃で２０分（分）間インキュベートした。ホモジネートを超音波処理し、４℃にて２３５０００ｇで１時間（ｈ）超遠心分離することによって清澄にした。イミダゾールを１５ｍＭの最終濃度まで上清に加え、ｐＨを８．０に調節した。粗タンパク質抽出物を、バッファーＢ（２５ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ８．０）、２０％グリセロール、５００ｍＭのＮａＣｌ、０．５％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００、１５ｍＭのイミダゾール、５ｍＭのβＭＥ）で予め平衡化させたニッケル−ニトリロ三酢酸（Ｎｉ−ＮＴＡ）カラムに添加した。試料を１ｍＬ／分の流量で添加した。カラムを１５カラム容量のバッファーＣ（０．２％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００以外はバッファーＢと同一）で洗浄した。タンパク質を５カラム容量のバッファーＤ（２００ｍＭのイミダゾール以外はバッファーＣと同一）で溶出した。
【０１２８】
ＮＳ３／４Ａプロテアーゼ複合体含有画分をプールし、バッファーＤ（２５ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）、２０％グリセロール、３００ｍＭのＮａＣｌ、０．２％Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００、１０ｍＭβＭＥ）で予め平衡化した脱塩カラムＳｕｐｅｒｄｅｘ−Ｓ２００に添加した。試料を１ｍＬ／分の流量で添加した。ＮＳ３／４Ａプロテアーゼ複合体含有画分をプールし、約０．５ｍｇ／ｍｌまで濃縮した。ＢＭＳ、Ｈ７７およびＪ４Ｌ６Ｓ株由来のＮＳ３／４Ａプロテアーゼ複合体の純度は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥおよび質量分析法によって９０％超であると判断した。酵素は、アッセイバッファーにおいて使用する前に、−８０℃で貯蔵し、氷上で解凍し、希釈した。
【０１２９】
ＨＣＶ ＮＳ３／４Ａタンパク質分解活性をモニターするためのＦＲＥＴペプチドアッセイ
このインビトロアッセイの目的は、本開示の化合物による上記のようなＢＭＳ株、Ｈ７７株またはＪ４Ｌ６Ｓ株由来のＨＣＶ ＮＳ３プロテアーゼ複合体の阻害を測定することであった。このアッセイは、ＨＣＶ ＮＳ３タンパク質分解活性の阻害において本開示の化合物がいかに有効であるかを示した。
【０１３０】
ＨＣＶ ＮＳ３／４Ａプロテアーゼ活性をモニターするために、ＮＳ３／４Ａペプチド基質を使用した。基質は、Anal. Biochem. 240(2):60-67 (1996)においてＴａｌｉａｎｉらによって記載されたＲＥＴ Ｓ１であった（共鳴エネルギー移動デプシペプチド基質；ＡｎａＳｐｅｃ、Ｉｎｃ．カタログ＃２２９９１）（ＦＲＥＴペプチド）。このペプチドの配列は、切断部位においてアミド結合ではなくエステル結合が存在すること以外は、ＨＣＶ ＮＳ３プロテアーゼについてのＮＳ４Ａ／ＮＳ４Ｂ天然切断部位に大まかに基づいている。ペプチドはまた、ペプチドの一端近くに蛍光供与体ＥＤＡＮＳを、および他端の近くに容体ＤＡＢＣＹＬを含有する。ペプチドの蛍光は、供与体と受容体との間の分子間の共鳴エネルギー移動（ＲＥＴ）によってクエンチされるが、ＮＳ３プロテアーゼがペプチドを切断するにつれ、生成物がＲＥＴ消光から放出され、供与体の蛍光が明らかになる。
【０１３１】
ペプチド基質を、本開示の化合物の非存在下、または存在下で、３種の組換えＮＳ３／４Ａプロテアーゼ複合体の１種と共にインキュベートした。Ｃｙｔｏｆｌｕｏｒ Ｓｅｒｉｅｓ４０００を使用して蛍光性反応生成物の形成をリアルタイムでモニターすることによって化合物の阻害作用を決定した。
【０１３２】
試薬は下記の通りであった。ＨＥＰＥＳおよびグリセロール（Ｕｌｔｒａｐｕｒｅ）は、ＧＩＢＣＯ−ＢＲＬから入手した。ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）は、Ｓｉｇｍａから入手した。β−メルカプトエタノールはＢｉｏ Ｒａｄから入手した。
【０１３３】
アッセイバッファー：５０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）；０．１５ＭのＮａＣｌ；０．１％Ｔｒｉｔｏｎ；１５％グリセロール；１０ｍＭのβＭＥ。基質：２μＭの最終濃度（−２０℃で貯蔵したＤＭＳＯ中の２ｍＭのストック溶液から）。ＨＣＶ ＮＳ３／４Ａプロテアーゼ１ａ（１ｂ）型、２〜３ｎＭの最終濃度（２５ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）、２０％グリセロール、３００ｍＭのＮａＣｌ、０．２％Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ１００、１０ｍＭβＭＥ中の５μＭのストック溶液から）。アッセイ限界に近づいた作用強度を有する化合物については、アッセイバッファーに５０μｇ／ｍｌのウシ血清アルブミン（Ｓｉｇｍａ）を加え、プロテアーゼの最終濃度を３００ｐＭに下げることによって、アッセイをより感応性にした。
【０１３４】
アッセイを、Ｆａｌｃｏｎの９６−ウェルのポリスチレンブラックプレート中で行った。各ウェルは、アッセイバッファー中のＮＳ３／４Ａプロテアーゼ複合体２５μｌ、１０％ＤＭＳＯ／アッセイバッファー中の本開示の化合物５０μｌ、およびアッセイバッファー中の基質２５μｌを含有した。対照（化合物を含有せず）もまた、同一のアッセイプレート上で調製した。基質の添加によって酵素反応が開始する前に、酵素複合体を化合物または対照溶液と１分間混合した。アッセイプレートをＣｙｔｏｆｌｕｏｒ Ｓｅｒｉｅｓ４０００（Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して直ちに読み取った。２５℃にて３４０ｎｍでの発光および４９０ｎｍでの励起を読み取るように装置を設定した。反応は一般に約１５分間続いた。
【０１３５】
下記の式で阻害率を計算した。
１００−［（δＦinh／δＦcon）×１００］
式中、δＦは曲線の線形範囲に亘る蛍光の変化である。非線形曲線の当てはめを阻害−濃度データに適用し、式ｙ＝Ａ＋（（Ｂ−Ａ）／（１＋（（Ｃ／ｘ）＾Ｄ）））を使用してＥｘｃｅｌ ＸＬｆｉｔソフトウェアの使用によって５０％有効濃度（ＩＣ50）を計算した。
【０１３６】
試験したすべての化合物は、７ｎＭ以下のＩＣ50で、ＮＳ３／４Ａプロテアーゼ複合体の活性を阻害することが分かった。さらに、本開示の化合物は、一つより多くのタイプのＮＳ３／４Ａ複合体に対して試験され、該化合物は、１ａ株と比較して、１ｂ株に対してより強い効力を一様に示すが、類似する阻害特性を有することが分かった。
【０１３７】
特異性アッセイ
ＨＣＶ ＮＳ３／４Ａプロテアーゼ複合体の阻害における本開示の化合物のインビトロ選択性を示すために、他のセリンまたはシステインプロテアーゼと比較した、特異性アッセイを行った。
【０１３８】
本開示の化合物の、種々のセリンプロテアーゼに対する特異性を決定した。ヒト好中球エラスターゼ（ＨＮＥ）、ブタ膵エラスターゼ（ＰＰＥ）およびヒト膵臓キモトリプシンおよび１種のシステインプロテアーゼであるヒト肝臓カテプシンＢ。全ての場合において、セリンプロテアーゼアッセイをある程度修正して、従前（ＰＣＴ特許出願第ＷＯ００／０９５４３号）に記載されているように、それぞれの酵素に特異的な蛍光分析のアミノ−メチル−クマリン（ＡＭＣ）基質を使用した９６ウェルプレートフォーマットプロトコルを使用した。全ての酵素はＳｉｇｍａ、ＥＭＤｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから購入し、一方基質はＢａｃｈｅｍ、ＳｉｇｍａおよびＥＭＤｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから購入した。
【０１３９】
化合物濃度は、それらの作用強度によって１００〜０．４μＭで変化した。１０分間プレインキュベートした酵素−阻害剤に室温で基質を加え、ｃｙｔｏｆｌｕｏｒで測定して１５％変換まで加水分解することによって、酵素アッセイをそれぞれ開始した。
【０１４０】
各アッセイについての最終条件は下記の通りであった。
５０ｍＭのトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩酸塩（Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ）（ｐＨ８）、０、５Ｍの硫酸ナトリウム（Ｎａ2ＳＯ4）、５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１ｍＭのＥＤＴＡ、３％ＤＭＳＯ、０．０１％Ｔｗｅｅｎ−２０、５μＭのＬＬＶＹ−ＡＭＣおよび１ｎＭのキモトリプシン。
５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ８．０、５０ｍＭのＮａＣｌ、０．１ｍＭのＥＤＴＡ、３％ＤＭＳＯ、０．０２％Ｔｗｅｅｎ−２０、５μＭのｓｕｃｃ−ＡＡＰＶ−ＡＭＣおよび２０ｎＭのＨＮＥまたは８ｎＭのＰＰＥ；
１００ｍＭのＮａＯＡＣ（酢酸ナトリウム）（ｐＨ５．５）、３％ＤＭＳＯ、１ｍＭのＴＣＥＰ（トリス（２−カルボキシエチル）ホスフィン塩酸塩）、５ｎＭのカテプシンＢ（酵素ストックは使用前に２０ｍＭのＴＣＥＰを含有するバッファー中で活性化させた）、およびＨ2Ｏで希釈した２μＭのＺ−ＦＲ−ＡＭＣ。
【０１４１】
阻害率は、式を使用して計算した。
［１−（（ＵＶinh−ＵＶblank）／（ＵＶctl−ＵＶblank））］×１００
非線形曲線の当てはめを阻害−濃度データに適用し、Ｅｘｃｅｌ ＸＬｆｉｔソフトウェアを使用して５０％有効濃度（ＩＣ50）を計算した。
【０１４２】
ＨＣＶレプリコンの産生
ＨＣＶレプリコン全細胞系を、Lohmann V, Korner F, Koch J, Herian U, Theilmann L, Bartenschlager R., Science 285(5424):110-3 (1999)によって記載されているように確立した。この系によって、本発明者らは、ＨＣＶ ＲＮＡ複製に対する本発明者らのＨＣＶプロテアーゼ化合物の効果を評価することができた。手短に言えば、Ｌｏｈｍａｎｎの論文に記載されているＨＣＶ株１ｂ配列（登録番号：ＡＪ２３８７９９）を使用して、ＨＣＶ ｃＤＮＡをＯｐｅｒｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｉｎｃ．（Ａｌａｍｅｄａ、ＣＡ）によって合成し、次いで完全長レプリコンをプラスミドｐＧｅｍ９ｚｆ（＋）（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）中で標準的な分子生物学技術を使用して構築した。レプリコンは、（ｉ）キャプシドタンパク質の最初の１２個のアミノ酸に融合したＨＣＶ５’ＵＴＲ、（ｉｉ）ネオマイシンホスホトランスフェラーゼ遺伝子（ネオ）、（ｉｉｉ）脳心筋炎ウイルス（ＥＭＣＶ）からのＩＲＥＳ、および（ｉｖ）ＨＣＶ ＮＳ３からＮＳ５Ｂ遺伝子およびＨＣＶ３’ＵＴＲからなる。メーカーの説明書に従ってＴ７ＭｅｇａＳｃｒｉｐｔ転写キット（Ａｍｂｉｏｎ、Ａｕｓｔｉｎ、ＴＸ）を使用して、プラスミドＤＮＡをＳｃａＩで直線化し、ＲＮＡ転写物をインビトロで合成した。ｃＤＮＡのインビトロ転写物を、ヒト肝臓癌細胞系ＨＵＨ−７にトランスフェクトした。ＨＣＶレプリコンを恒常的に発現している細胞についての選択を、選択マーカーであるネオマイシン（Ｇ４１８）の存在下で行った。このように得られた細胞系を、プラス鎖およびマイナス鎖ＲＮＡ生成、ならびにタンパク質生成について経時で性質決定した。
【０１４３】
ＨＣＶレプリコンＦＲＥＴアッセイ
ＨＣＶレプリコンＦＲＥＴアッセイを、ＨＣＶウイルス複製に対する本開示において記載されている化合物の阻害作用をモニターするために開発した。ＨＣＶレプリコンを恒常的に発現しているＨＵＨ−７細胞を、１０％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）（Ｓｉｇｍａ）および１ｍｇ／ｍｌのＧ４１８（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ）を含有するダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ）中で増殖させた。細胞を、前夜に９６−ウェル組織培養無菌プレート中に（１．５×１０4細胞／ウェル）で播種した。化合物および化合物を含有しない対照を、希釈プレート中で４％ＦＣＳ、１：１００ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ）、１：１００Ｌ−グルタミンおよび５％ＤＭＳＯを含有するＤＭＥＭ中で調製した（アッセイにおいて０．５％のＤＭＳＯ最終濃度）。化合物／ＤＭＳＯ混合物を細胞に添加し、３７℃で４日間インキュベートした。４日後、ＣＣ50読取りのためにアラマーブルー（Ｔｒｅｋ Ｄｉａｇｎｏｔｓｔｉｃ Ｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して最初に細胞毒性について細胞を評価した。細胞をインキュベートしている培地に１０分の１容量のアラマーブルーを加えることによって、化合物の毒性（ＣＣ50）を決定した。４ｈ後、Ｃｙｔｏｆｌｕｏｒ Ｓｅｒｉｅｓ４０００（Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して、各ウェルからの蛍光シグナルを、５３０ｎｍでの励起波長および５８０ｎｍでの発光波長で読み取った。次いで、プレートをリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で完全にすすいだ（３度、１５０μｌ）。ＨＣＶプロテアーゼ基質、蒸溜水で１倍に希釈した５×細胞ルシフェラーゼ細胞培養溶解試薬（Ｐｒｏｍｅｇａ ＃Ｅ１５３Ａ）、１５０ｍＭの最終濃度まで加えたＮａＣｌ、１００％ＤＭＳＯ中の２ｍＭのストックから１０μＭの最終濃度まで希釈したＦＲＥＴペプチド基質（上記の酵素アッセイについて説明した通り）を含有する２５μｌの溶解アッセイ試薬で細胞を溶解した。次いで、プレートを、３４０ｎｍ励起／４９０ｎｍ発光、２１サイクルの自動モード、運動モードでのプレート読取りに設定してあるＣｙｔｏｆｌｕｏｒ４０００装置中に置いた。ＩＣ50決定について記載したように、ＥＣ50決定を行った。
【０１４４】
ＨＣＶレプリコンルシフェラーゼレポーターアッセイ
二次的アッセイとして、レプリコンＦＲＥＴアッセイからのＥＣ50決定を、レプリコンルシフェラーゼレポーターアッセイにおいて確認した。レプリコンルシフェラーゼレポーターアッセイの利用は、Ｋｒｉｅｇｅｒらによって最初に記載された（Krieger N, Lohmann V, and Bartenschlager R, J. Virol. 75(10):4614-4624 (2001)）。本発明者らのＦＲＥＴアッセイについて記載したレプリコンコンストラクトを、Ｒｅｎｉｌｌａルシフェラーゼ遺伝子のヒト化形態およびルシフェラーゼ遺伝子の３’末端に直接融合しているリンカー配列をコードするｃＤＮＡを挿入することによって改変した。この挿入物は、ネオマイシンマーカー遺伝子の直接上流のコア中に位置するＡｓｃ１制限部位を使用して、レプリコンコンストラクトに導入された。１１７９位での適応的変異（セリンからイソロイシン）もまた導入した（Blight KJ, Kolykhalov, AA, Rice, CM, Science 290(5498):1972-1974）。このＨＣＶレプリコンコンストラクトを恒常的に発現している安定的な細胞系を上記のように産生した。ルシフェラーゼレポーターアッセイを、下記のように修正してＨＣＶレプリコンＦＲＥＴアッセイのために説明したように設定した。３７℃／５％ＣＯ2のインキュベーター中で４日間後、Ｐｒｏｍｅｇａ Ｄｕａｌ−Ｇｌｏルシフェラーゼアッセイシステムを使用して、Ｒｅｎｉｌｌａルシフェラーゼ活性について細胞を分析した。培地（１００μｌ）を、細胞を含有する各ウェルから除去した。残りの５０μｌの培地に、５０μｌのＤｕａｌ−Ｇｌｏルシフェラーゼ試薬を加え、プレートを室温で１０ｍｉｎ〜２ｈ揺動させた。次いで、Ｄｕａｌ−Ｇｌｏ Ｓｔｏｐ ＆ Ｇｌｏ試薬（５０μｌ）を各ウェルに加え、プレートを室温でさらに１０ｍｉｎ〜２ｈ再び揺動させた。発光プログラムを使用してＰａｃｋａｒｄ ＴｏｐＣｏｕｎｔ ＮＸＴ上でプレートを読み取った。
【０１４５】
阻害率を下記の式を使用して計算した。
％対照＝ 実験ウェル（＋化合物）における平均ルシフェラーゼシグナル
ＤＭＳＯ対照ウェル（−化合物）における平均ルシフェラーゼシグナル
ＸＬｆｉｔを使用して値をグラフ化し、分析し、ＥＣ50値を得た。
【０１４６】
本開示の代表的な化合物を、ＨＣＶ酵素アッセイ、ＨＣＶレプリコン細胞アッセイおよび／またはいくつかの概説された特異性アッセイで評価した。例えば、化合物１は、該酵素アッセイにおいて、ＮＳ３／４Ａ ＢＭＳ株に対して８.７ナノモーラー（ｎＭ）のＩＣ50を有することが分かった。公表されたＨ７７（１.９ｎＭのＩＣ50）およびＪ４Ｌ６Ｓ（１.２ｎＭのＩＣ50）株を用いて、類似する効力値を得た。レプリコンＦＲＥＴアッセイにおけるＥＣ50値は２１ｎＭであった。
【０１４７】
特異性アッセイにおいて、同化合物は、以下の活性を有することが分かった：ＨＬＥ＝１.５μＭ；ＰＰＥ＞２５μＭ；キモトリプシン＝２５μＭ；カテプシンＢ＞２５μＭ。これらの結果から、このファミリーの化合物がＮＳ３プロテアーゼに対して非常に特異的であり、これらのメンバーの多くはＨＣＶレプリコン複製を阻害することが示される。
【０１４８】
本開示の化合物を試験し、以下のように活性を有することが分かった：
表２
【表２】
【０１４９】
本開示が前述の実施例に限定されず、その本質的な特性から逸脱することなく他の特定の形態で具体化されうることは、当業者にとって明らかであろう。したがって、実施例があらゆる点で例示的なものであり、限定するものではないと考えられ、前述の実施例に対してではなくむしろ添付の特許請求の範囲に対して参照がなされ、特許請求の範囲と同等の意味および範囲に含まれる全ての変更が、それゆえにその中に含まれるものと意図されるのが望ましい。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
（Ｉ）
［式中、
Ｑは、Ｏ、Ｓ（Ｏ）m、およびＮＲ8から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を適宜含んでいてもよいＣ3-9飽和または不飽和鎖であり；その中で、ｍは、０、１、または２であり、並びにＲ8は、水素、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、アルキルスルホニル、アミノカルボニル、アリールスルホニル、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、シクロアルキルオキシ、ジアルキルアミノカルボニル、ジアルキルアミノカルボニルアルキル、ハロアルキル、およびヘテロサイクリルカルボニルから選択され；
Ｒ1は、アルキルカルボニル、アリール、アリールアルキル、アリールアルキルカルボニル、アリールカルボニル、ヘテロサイクリル、ヘテロサイクリルアルキル、ヘテロサイクリルアルキルカルボニル、ヘテロサイクリルカルボニル、および（ＮＲgＲh）カルボニルから選択され、その中で、該アリール；該アリールアルキル、該アリールアルキルカルボニル、および該アリールカルボニルのアリール部分；該ヘテロサイクリル；並びに該ヘテロサイクリルアルキルおよび該ヘテロサイクリルアルキルカルボニルのヘテロサイクリル部分は、各々、１〜６個のＲ7基で適宜置換されていてもよく；
Ｒ2は、アルキル、アリール、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、ヘテロサイクリル、および−ＮＲaＲbから選択され、その中で、該アルキル、該シクロアルキル、および該（シクロアルキル）アルキルのシクロアルキル部分は、アルケニル、アルコキシ、アルコキシアルキル、アルキル、アリールアルキル、アリールカルボニル、シアノ、シクロアルケニル、（シクロアルキル）アルキル、ハロ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、および（ＮＲeＲf）カルボニルから選択される、１つ、２つ、または３つの置換基で適宜置換されていてもよく；
Ｒ3およびＲ4は独立して、水素、アルコキシアルキル、アルキル、ハロアルコキシアルキル、およびハロアルキルから選択され；
Ｒ5は、水素、アルキルおよびハロアルキルから選択され；
Ｒ6は、フェニル、並びに、窒素、酸素、および硫黄から選択される、１つ、２つ、３つ、または４つのヘテロ原子を適宜含んでいてもよい部分的にまたは完全に不飽和な５または６員環から選択され；その中で、該環の各々は、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、アルキルスルファニル、アリール、カルボキシ、シアノ、シクロアルキル、シクロアルキルオキシ、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、−ＮＲcＲd、（ＮＲeＲf）カルボニル、（ＮＲeＲf）スルホニル、およびオキソから独立して選択される、１つ、２つ、３つ、または４つの置換基で適宜置換されていてもよいが；但し、Ｒ6が置換された６員環である場合、該環上のフルオロ以外のすべての置換基は、親分子部分への該環の結合点に対してメタおよび／またはパラ位になければならず；
Ｒ7は各々独立して、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、アリール、カルボキシ、シアノ、シアノアルキル、シクロアルキル、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ヘテロサイクリル、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、ニトロ，−ＮＲcＲd、（ＮＲcＲd）アルキル、（ＮＲcＲd）アルコキシ、（ＮＲeＲf）カルボニル、および（ＮＲeＲf）スルホニルから選択され；あるいは
２つの隣接Ｒ7基は、それらに結合する炭素原子と一緒になって、窒素、酸素、および硫黄から独立して選択される１つまたは２つのヘテロ原子を適宜含んでいてもよい部分的にまたは完全に不飽和な４〜７員環を形成し、その中で、該環は、アルコキシ、アルキル、シアノ、ハロ、ハロアルコキシ、およびハロアルキルから独立して選択される、１つ、２つ、または３つの基で適宜置換されていてもよく；
ＲaおよびＲbは独立して、水素、アルコキシ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、ヘテロサイクリル、およびヘテロサイクリルアルキルから選択されるか；あるいは、ＲaおよびＲbは、それらに結合する窒素原子と一緒になって、４〜７員単環式ヘテロ環を形成し；
ＲcおよびＲdは独立して、水素、アルコキシアルキル、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、アリールアルキル、およびハロアルキルから選択され；
ＲeおよびＲfは独立して、水素、アルキル、アリール、アリールアルキル、およびヘテロサイクリルから選択され；その中で、該アリール、該アリールアルキルのアリール部分、および該ヘテロサイクリルは、アルコキシ、アルキル、およびハロから独立して選択される１つまたは２つの置換基で適宜置換されていてもよく；並びに
ＲgおよびＲhは独立して、水素、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、ヘテロサイクリル、およびヘテロサイクリルから選択されるか；あるいは、ＲgおよびＲhは、それらに結合する窒素原子と一緒になって、単環式ヘテロ環を形成し、その中で、該単環式ヘテロ環は、フェニル環に適宜縮合して、二環式構造を形成してもよく；該単環式ヘテロ環および該二環式構造は、アルコキシ、アルキル、ハロ、ハロアルコキシ、およびハロアルキルから独立して選択される、１つ、２つ、または３つの置換基で適宜置換されていてもよい］
の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項２】
Ｒ2が、アルキルおよびシクロアルキルから選択され、その中で、該シクロアルキルは、アルケニル、アルコキシ、アルキル、およびハロから選択される１つの置換基で適宜置換されていてもよい、請求項１の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項３】
Ｒ1が、ヘテロサイクリルおよび（ＮＲgＲh）カルボニルから選択され、その中で、該ヘテロサイクリルは、１〜６個のＲ7基で適宜置換されていてもよい、請求項１の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項４】
Ｒ1がヘテロサイクリルである、請求項３の化合物。
【請求項５】
該ヘテロサイクリルが、１つまたは２つのＲ7基で適宜置換されていてもよいイソキノリニルである、請求項４の化合物。
【請求項６】
Ｒ3およびＲ4が、各々、水素であり、並びにＱが、ヘテロ原子を含まないＣ6不飽和鎖である、請求項１の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項７】
Ｑが、ヘテロ原子を含まないＣ6不飽和鎖であり；
Ｒ1がヘテロサイクリルであり、その中で、該ヘテロサイクリルは、１つまたは２つのＲ7基で適宜置換されていてもよいイソキノリニルであり；
Ｒ2が、アルキルおよびシクロアルキルから選択され、その中で、該シクロアルキルは、アルケニル、アルコキシ、アルキル、およびハロから選択される１つの置換基で適宜置換されていてもよく；
Ｒ3およびＲ4が、各々、水素であり；並びに
Ｒ6が、１つの窒素原子を含む完全に不飽和な６員環であり、その中で、該環は、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、アルキルスルファニル、アリール、カルボキシ、シアノ、シクロアルキル、シクロアルキルオキシ、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、−ＮＲcＲd、（ＮＲeＲf）カルボニル、（ＮＲeＲf）スルホニル、およびオキソから独立して選択される、１つ、２つ、３つ、または４つの置換基で適宜置換されていてもよいが；但し、該環上のフルオロ以外のすべての置換基は、親分子部分への該環の結合点に対してメタおよび／またはパラ位になければならない、請求項１の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項８】
【化２−１】
【化２−２】
から選択される化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項９】
請求項１の化合物、またはその医薬的に許容される塩、並びに医薬的に許容される担体を含む組成物。
【請求項１０】
抗ＨＣＶ活性を有する少なくとも１つの別の化合物をさらに含む、請求項９の組成物。
【請求項１１】
少なくとも１つの該別の化合物が、インターフェロンまたはリバビリンである、請求項１０の組成物。
【請求項１２】
該インターフェロンが、インターフェロンα２Ｂ、ペグ化インターフェロンα、コンセンサスインターフェロン、インターフェロンα２Ａ、およびリンパ芽球様インターフェロンτから選択される、請求項１１の組成物。
【請求項１３】
少なくとも１つの該別の化合物が、インターロイキン２、インターロイキン６、インターロイキン１２、１型ヘルパーＴ細胞応答の発生を亢進する化合物、干渉ＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、イミキモド、リバビリン、イノシン ５'−一リン酸脱水素酵素阻害剤、アマンタジン、およびリマンタジンから選択される、請求項１０の組成物。
【請求項１４】
少なくとも１つの該別の化合物が、ＨＣＶメタロプロテアーゼ、ＨＣＶセリンプロテアーゼ、ＨＣＶポリメラーゼ、ＨＣＶヘリカーゼ、ＨＣＶ ＮＳ４Ｂタンパク質、ＨＣＶエントリー、ＨＣＶアセンブリー、ＨＣＶイグレス、ＨＣＶ ＮＳ５Ａタンパク質、およびＩＭＰＤＨから選択される標的の機能を阻害して、ＨＣＶ感染症の治療に有効である、請求項１０の組成物。
【請求項１５】
治療有効量の請求項１の化合物、またはその医薬的に許容される塩を患者に投与することを特徴とする、患者におけるＨＣＶ感染症の治療方法。
【請求項１６】
請求項１の化合物、またはその医薬的に許容される塩の、前、後、または同時に、抗ＨＣＶ活性を有する少なくとも１つの別の化合物をさらに投与することを特徴とする、請求項１５の方法。
【請求項１７】
少なくとも１つの該別の化合物がインターフェロンまたはリバビリンである、請求項１６の方法。
【請求項１８】
該インターフェロンが、インターフェロンα２Ｂ、ペグ化インターフェロンα、コンセンサスインターフェロン、インターフェロンα２Ａ、およびリンパ芽球様インターフェロンτから選択される、請求項１７の方法。
【請求項１９】
少なくとも１つの該別の化合物が、インターロイキン２、インターロイキン６、インターロイキン１２、１型ヘルパーＴ細胞応答の発生を亢進する化合物、干渉ＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、イミキモド、リバビリン、イノシン ５'−一リン酸脱水素酵素阻害剤、アマンタジン、およびリマンタジンから選択される、請求項１６の方法。
【請求項２０】
少なくとも１つの該別の化合物が、ＨＣＶメタロプロテアーゼ、ＨＣＶセリンプロテアーゼ、ＨＣＶポリメラーゼ、ＨＣＶヘリカーゼ、ＨＣＶ ＮＳ４Ｂタンパク質、ＨＣＶエントリー、ＨＣＶアセンブリー、ＨＣＶイグレス、ＨＣＶ ＮＳ５Ａタンパク質、およびＩＭＰＤＨから選択される標的の機能を阻害して、ＨＣＶ感染症の治療に有効である、請求項１６の方法。
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
（Ｉ）
［式中、
Ｑは、Ｏ、Ｓ（Ｏ）m、およびＮＲ8から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を適宜含んでいてもよいＣ3-9飽和または不飽和鎖であり；その中で、ｍは、０、１、または２であり、並びにＲ8は、水素、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、アルキルスルホニル、アミノカルボニル、アリールスルホニル、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、シクロアルキルオキシ、ジアルキルアミノカルボニル、ジアルキルアミノカルボニルアルキル、ハロアルキル、およびヘテロサイクリルカルボニルから選択され；
Ｒ1は、アルキルカルボニル、アリール、アリールアルキル、アリールアルキルカルボニル、アリールカルボニル、ヘテロサイクリル、ヘテロサイクリルアルキル、ヘテロサイクリルアルキルカルボニル、ヘテロサイクリルカルボニル、および（ＮＲgＲh）カルボニルから選択され、その中で、該アリール；該アリールアルキル、該アリールアルキルカルボニル、および該アリールカルボニルのアリール部分；該ヘテロサイクリル；並びに該ヘテロサイクリルアルキルおよび該ヘテロサイクリルアルキルカルボニルのヘテロサイクリル部分は、各々、１〜６個のＲ7基で適宜置換されていてもよく；
Ｒ2は、アルキル、アリール、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、ヘテロサイクリル、および−ＮＲaＲbから選択され、その中で、該アルキル、該シクロアルキル、および該（シクロアルキル）アルキルのシクロアルキル部分は、アルケニル、アルコキシ、アルコキシアルキル、アルキル、アリールアルキル、アリールカルボニル、シアノ、シクロアルケニル、（シクロアルキル）アルキル、ハロ、ハロアルコキシ、ハロアルキル、および（ＮＲeＲf）カルボニルから選択される、１つ、２つ、または３つの置換基で適宜置換されていてもよく；
Ｒ3およびＲ4は独立して、水素、アルコキシアルキル、アルキル、ハロアルコキシアルキル、およびハロアルキルから選択され；
Ｒ5は、水素、アルキルおよびハロアルキルから選択され；
Ｒ6は、フェニル、並びに、窒素、酸素、および硫黄から選択される、１つ、２つ、３つ、または４つのヘテロ原子を適宜含んでいてもよい部分的にまたは完全に不飽和な５または６員環から選択され；その中で、該環の各々は、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、アルキルスルファニル、アリール、カルボキシ、シアノ、シクロアルキル、シクロアルキルオキシ、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、−ＮＲcＲd、（ＮＲeＲf）カルボニル、（ＮＲeＲf）スルホニル、およびオキソから独立して選択される、１つ、２つ、３つ、または４つの置換基で適宜置換されていてもよいが；但し、Ｒ6が置換された６員環である場合、該環上のフルオロ以外のすべての置換基は、親分子部分への該環の結合点に対してメタおよび／またはパラ位になければならず；
Ｒ7は各々独立して、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、アリール、カルボキシ、シアノ、シアノアルキル、シクロアルキル、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ヘテロサイクリル、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、ニトロ，−ＮＲcＲd、（ＮＲcＲd）アルキル、（ＮＲcＲd）アルコキシ、（ＮＲeＲf）カルボニル、および（ＮＲeＲf）スルホニルから選択され；あるいは
２つの隣接Ｒ7基は、それらに結合する炭素原子と一緒になって、窒素、酸素、および硫黄から独立して選択される１つまたは２つのヘテロ原子を適宜含んでいてもよい部分的にまたは完全に不飽和な４〜７員環を形成し、その中で、該環は、アルコキシ、アルキル、シアノ、ハロ、ハロアルコキシ、およびハロアルキルから独立して選択される、１つ、２つ、または３つの基で適宜置換されていてもよく；
ＲaおよびＲbは独立して、水素、アルコキシ、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、ヘテロサイクリル、およびヘテロサイクリルアルキルから選択されるか；あるいは、ＲaおよびＲbは、それらに結合する窒素原子と一緒になって、４〜７員単環式ヘテロ環を形成し；
ＲcおよびＲdは独立して、水素、アルコキシアルキル、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、アリールアルキル、およびハロアルキルから選択され；
ＲeおよびＲfは独立して、水素、アルキル、アリール、アリールアルキル、およびヘテロサイクリルから選択され；その中で、該アリール、該アリールアルキルのアリール部分、および該ヘテロサイクリルは、アルコキシ、アルキル、およびハロから独立して選択される１つまたは２つの置換基で適宜置換されていてもよく；並びに
ＲgおよびＲhは独立して、水素、アルキル、アリール、アリールアルキル、シクロアルキル、（シクロアルキル）アルキル、ヘテロサイクリル、およびヘテロサイクリルから選択されるか；あるいは、ＲgおよびＲhは、それらに結合する窒素原子と一緒になって、単環式ヘテロ環を形成し、その中で、該単環式ヘテロ環は、フェニル環に適宜縮合して、二環式構造を形成してもよく；該単環式ヘテロ環および該二環式構造は、アルコキシ、アルキル、ハロ、ハロアルコキシ、およびハロアルキルから独立して選択される、１つ、２つ、または３つの置換基で適宜置換されていてもよい］
の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項２】
Ｒ2が、アルキルおよびシクロアルキルから選択され、その中で、該シクロアルキルは、アルケニル、アルコキシ、アルキル、およびハロから選択される１つの置換基で適宜置換されていてもよい、請求項１の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項３】
Ｒ1が、ヘテロサイクリルおよび（ＮＲgＲh）カルボニルから選択され、その中で、該ヘテロサイクリルは、１〜６個のＲ7基で適宜置換されていてもよい、請求項１の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項４】
Ｒ1がヘテロサイクリルである、請求項３の化合物。
【請求項５】
該ヘテロサイクリルが、１つまたは２つのＲ7基で適宜置換されていてもよいイソキノリニルである、請求項４の化合物。
【請求項６】
Ｒ3およびＲ4が、各々、水素であり、並びにＱが、ヘテロ原子を含まないＣ6不飽和鎖である、請求項１の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項７】
Ｑが、ヘテロ原子を含まないＣ6不飽和鎖であり；
Ｒ1がヘテロサイクリルであり、その中で、該ヘテロサイクリルは、１つまたは２つのＲ7基で適宜置換されていてもよいイソキノリニルであり；
Ｒ2が、アルキルおよびシクロアルキルから選択され、その中で、該シクロアルキルは、アルケニル、アルコキシ、アルキル、およびハロから選択される１つの置換基で適宜置換されていてもよく；
Ｒ3およびＲ4が、各々、水素であり；並びに
Ｒ6が、１つの窒素原子を含む完全に不飽和な６員環であり、その中で、該環は、アルコキシ、アルコキシカルボニル、アルキル、アルキルカルボニル、アルキルスルファニル、アリール、カルボキシ、シアノ、シクロアルキル、シクロアルキルオキシ、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、−ＮＲcＲd、（ＮＲeＲf）カルボニル、（ＮＲeＲf）スルホニル、およびオキソから独立して選択される、１つ、２つ、３つ、または４つの置換基で適宜置換されていてもよいが；但し、該環上のフルオロ以外のすべての置換基は、親分子部分への該環の結合点に対してメタおよび／またはパラ位になければならない、請求項１の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項８】
【化２−１】
【化２−２】
から選択される化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項９】
請求項１の化合物、またはその医薬的に許容される塩、並びに医薬的に許容される担体を含む組成物。
【請求項１０】
抗ＨＣＶ活性を有する少なくとも１つの別の化合物をさらに含む、請求項９の組成物。
【請求項１１】
少なくとも１つの該別の化合物が、インターフェロンまたはリバビリンである、請求項１０の組成物。
【請求項１２】
該インターフェロンが、インターフェロンα２Ｂ、ペグ化インターフェロンα、コンセンサスインターフェロン、インターフェロンα２Ａ、およびリンパ芽球様インターフェロンτから選択される、請求項１１の組成物。
【請求項１３】
少なくとも１つの該別の化合物が、インターロイキン２、インターロイキン６、インターロイキン１２、１型ヘルパーＴ細胞応答の発生を亢進する化合物、干渉ＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、イミキモド、リバビリン、イノシン ５'−一リン酸脱水素酵素阻害剤、アマンタジン、およびリマンタジンから選択される、請求項１０の組成物。
【請求項１４】
少なくとも１つの該別の化合物が、ＨＣＶメタロプロテアーゼ、ＨＣＶセリンプロテアーゼ、ＨＣＶポリメラーゼ、ＨＣＶヘリカーゼ、ＨＣＶ ＮＳ４Ｂタンパク質、ＨＣＶエントリー、ＨＣＶアセンブリー、ＨＣＶイグレス、ＨＣＶ ＮＳ５Ａタンパク質、およびＩＭＰＤＨから選択される標的の機能を阻害して、ＨＣＶ感染症の治療に有効である、請求項１０の組成物。
【請求項１５】
治療有効量の請求項１の化合物、またはその医薬的に許容される塩を患者に投与することを特徴とする、患者におけるＨＣＶ感染症の治療方法。
【請求項１６】
請求項１の化合物、またはその医薬的に許容される塩の、前、後、または同時に、抗ＨＣＶ活性を有する少なくとも１つの別の化合物をさらに投与することを特徴とする、請求項１５の方法。
【請求項１７】
少なくとも１つの該別の化合物がインターフェロンまたはリバビリンである、請求項１６の方法。
【請求項１８】
該インターフェロンが、インターフェロンα２Ｂ、ペグ化インターフェロンα、コンセンサスインターフェロン、インターフェロンα２Ａ、およびリンパ芽球様インターフェロンτから選択される、請求項１７の方法。
【請求項１９】
少なくとも１つの該別の化合物が、インターロイキン２、インターロイキン６、インターロイキン１２、１型ヘルパーＴ細胞応答の発生を亢進する化合物、干渉ＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、イミキモド、リバビリン、イノシン ５'−一リン酸脱水素酵素阻害剤、アマンタジン、およびリマンタジンから選択される、請求項１６の方法。
【請求項２０】
少なくとも１つの該別の化合物が、ＨＣＶメタロプロテアーゼ、ＨＣＶセリンプロテアーゼ、ＨＣＶポリメラーゼ、ＨＣＶヘリカーゼ、ＨＣＶ ＮＳ４Ｂタンパク質、ＨＣＶエントリー、ＨＣＶアセンブリー、ＨＣＶイグレス、ＨＣＶ ＮＳ５Ａタンパク質、およびＩＭＰＤＨから選択される標的の機能を阻害して、ＨＣＶ感染症の治療に有効である、請求項１６の方法。
【公表番号】特表２０１１−５２０９０６（Ｐ２０１１−５２０９０６Ａ）
【公表日】平成２３年７月２１日（２０１１．７．２１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５０９７０３（Ｐ２０１１−５０９７０３）
【出願日】平成２１年５月１４日（２００９．５．１４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０４３９６１
【国際公開番号】ＷＯ２００９／１４０５００
【国際公開日】平成２１年１１月１９日（２００９．１１．１９）
【出願人】（３９１０１５７０８）ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニー (494)
【氏名又は名称原語表記】ＢＲＩＳＴＯＬ−ＭＹＥＲＳ ＳＱＵＩＢＢ ＣＯＭＰＡＮＹ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２３年７月２１日（２０１１．７．２１）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年５月１４日（２００９．５．１４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０４３９６１
【国際公開番号】ＷＯ２００９／１４０５００
【国際公開日】平成２１年１１月１９日（２００９．１１．１９）
【出願人】（３９１０１５７０８）ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニー (494)
【氏名又は名称原語表記】ＢＲＩＳＴＯＬ−ＭＹＥＲＳ ＳＱＵＩＢＢ ＣＯＭＰＡＮＹ
【Ｆターム（参考）】
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