アクネ菌のバイオフィルム形成阻害剤
【課題】ニキビの増悪原因であるアクネ菌のバイオフィルム形成を阻害し、効果的にニキビを予防又は治療する安全性・安定性にも優れた外用剤を提供する。
【解決手段】マラセチア属真菌の培養液は、アクネ菌のバイオフィルム形成を阻害する。また、マラセチア属真菌培養液を抗菌剤と併用することによって、抗菌剤単独の場合と比較し、アクネ菌に対する抗菌性は向上する。さらに、マラセチア属真菌培養液を含有する外用剤、並びにマラセチア属真菌培養物及び抗菌剤を含有する外用剤は、優れたニキビ予防及び症状緩和効果を示し、安全性、安定性にも優れる。これらのことから、アクネ菌バイオフィルム形成阻害剤は、ニキビ予防及び症状緩和に有効である。
【解決手段】マラセチア属真菌の培養液は、アクネ菌のバイオフィルム形成を阻害する。また、マラセチア属真菌培養液を抗菌剤と併用することによって、抗菌剤単独の場合と比較し、アクネ菌に対する抗菌性は向上する。さらに、マラセチア属真菌培養液を含有する外用剤、並びにマラセチア属真菌培養物及び抗菌剤を含有する外用剤は、優れたニキビ予防及び症状緩和効果を示し、安全性、安定性にも優れる。これらのことから、アクネ菌バイオフィルム形成阻害剤は、ニキビ予防及び症状緩和に有効である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ニキビの増悪原因であるアクネ菌のバイオフィルム形成を阻害し、効果的にニキビを予防又は治療する外用剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
皮膚疾患の一つであるニキビ（尋常性ざ瘡）は、毛穴が閉塞し皮脂が貯留した脂腺性毛包内でアクネ菌が増殖することによって発症する。アクネ菌は毛包内でバイオフィルムを形成しており、このバイオフィルムの発達はニキビの発症に深く関与していると考えられている（非特許文献１）。
【０００３】
バイオフィルムとは、微生物が生成した細胞外多糖類と菌体等からなる集合体であり、環境中の微生物はこのバイオフィルム内で生存している。バイオフィルムが形成されていると、抗菌剤を投与しても抗菌剤が内部に浸透しないため、期待される効果が得られない。つまり、環境中の微生物の制御には、適切な抗菌剤を用いるだけでなく、バイオフィルム形成を阻害することが重要と言える。
【０００４】
バイオフィルム形成阻害剤としては、アミド化合物や多価アルコールといった化学物質を用いた方法が報告されている（特許文献１及び２）。しかし、天然物、特に微生物由来のバイオフィルム形成阻害剤は知られていなかった。
【０００５】
【非特許文献１】Ｉｎｔ Ｊ Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｖｏｌ.４２（１２）,ＰＰ.９２５−９２７（２００３）
【特許文献１】特開２０１０−４３００３
【特許文献２】特開２００５−２２５８３０
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
ニキビの原因の一つであるアクネ菌のバイオフィルム形成を阻害し、安全性、安定性にも優れている外用剤が望まれていた。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、上記課題の解決に向け鋭意検討を行った結果、マラセチア属真菌培養液がアクネ菌のバイオフィルム形成を阻害することを見出した。さらに、マラセチア属真菌培養液を含有する外用剤、並びにマラセチア属真菌培養物及び抗菌剤を含有する外用剤は、安全性、安定性にも優れており、本発明を完成するに至った。
【０００８】
本発明に用いられるマラセチア属真菌培養液は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ ｆｕｒｆｕｒ、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ ｓｙｍｐｏｄｉａｌｉｓ、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ ｇｌｏｂｏｓａ、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ ｒｅｓｔｒｉｃｔａ、又はＭａｌａｓｓｅｚｉａ ｄｅｒｍａｔｉｓを培養して作製した。
【０００９】
本発明の皮膚外用剤には、その効果を損なわない範囲内で、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、金属石鹸、防腐剤、香料、保湿剤、粉体、紫外線吸収剤、増粘剤、色素、酸化防止剤、美白剤、キレート剤等の成分を配合することもできる。
【００１０】
本発明の皮膚外用剤は、化粧品、医薬部外品及び医薬品のいずれにも用いることができ、その剤型としては、例えば、化粧水、クリーム、乳液、ゲル剤、エアゾール剤、エッセンス、パック、洗浄剤、浴用剤、ファンデーション、打粉、口紅、軟膏、パップ剤、洗口剤、液体歯磨、練歯磨等が挙げられる。
【発明の効果】
【００１１】
マラセチア属真菌培養液は、アクネ菌のバイオフィルム形成を阻害した。また、本培養液及び抗菌剤を含有する外用剤の抗菌効果は、抗菌剤のみを含有する外用剤と比較して増強した。
【００１２】
次に本発明を詳細に説明するため、実施例及び実験例を挙げるが、本発明はこれに限定されるものではない。
【実施例１】
【００１３】
製造例１ Ｍ．ｆｕｒｆｕｒ培養液
Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ ｆｕｒｆｕｒ ＮＢＲＣ０６５６をＬｅｅｍｉｎｇ＆Ｎｏｔｍａｎ培地（全量１０００ｍＬ中、ペプトン １０ｇ、ウシ胆汁エキス ４ｇ、酵母エキス ０．１ｇ、グルコース ５ｇ、グリセリン １ｇ、グリセリンモノステアレート ０．５ｇ、Ｔｗｅｅｎ６０ ０．５ｇ、３．２５％脂肪乳 １０ｍＬ）（非特許文献２）を用いて３２℃にて１週間培養した後、０．４５μｍのフィルターにて濾過し、Ｍ．ｆｕｒｆｕｒ培養液を作製した。
【００１４】
製造例２ Ｍ．ｇｌｏｂｏｓａ培養液
Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ ｇｌｏｂｏｓａを製造例１の方法にて培養した後、同様に濾過して、Ｍ．ｇｌｏｂｏｓａ培養液を作製した。
【００１５】
製造例３ Ｍ．ｒｅｓｔｒｉｃｔａ培養液
Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ ｒｅｓｔｒｉｃｔａを製造例１の方法にて培養した後、同様に濾過して、Ｍ．ｒｅｓｔｒｉｃｔａ培養液を作製した。
【００１６】
製造例４ Ｍ．ｓｙｍｐｏｄｉａｌｉｓ培養液
Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ ｓｙｍｐｏｄｉａｌｉｓを製造例１の方法にて培養した後、同様に濾過して、Ｍ．ｓｙｍｐｏｄｉａｌｉｓ培養液を作製した。
【００１７】
製造例５ Ｍ．ｄｅｒｍａｔｉｓ培養液
Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ ｄｅｒｍａｔｉｓを製造例１の方法にて培養した後、同様に濾過して、Ｍ．ｄｅｒｍａｔｉｓ培養液を作製した。
【００１８】
処方例１ 化粧水
処方 配合量（部）
１．Ｍ．ｆｕｒｆｕｒ培養液（製造例１） ５．０
２．硫酸カリウムアルミニウム ０．３
３．１，３−ブチレングリコール ８．０
４．グリセリン ２．０
５．キサンタンガム ０．０２
６．クエン酸 ０．０１
７．クエン酸ナトリウム ０．１
８．エタノール ５．０
９．パラオキシ安息香酸メチル ０．１
１０．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（４０Ｅ．Ｏ．） ０．１
１１．香料 ０．１
１２．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜７及び１２と、成分８〜１１をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合し濾過して製品とする。
【００１９】
比較例 従来の化粧水
処方例１において、成分１を精製水５．０部に置き換えたものを従来の化粧水とした。
【００２０】
処方例２ クリーム
処方 配合量（部）
１．Ｍ．ｇｌｏｂｏｓａ培養液（製造例２） ３．０
２．サリチル酸 ０．１
３．１，３−ブチレングリコール ８．５
４．パラオキシ安息香酸エチル ０．０５
５．パラオキシ安息香酸メチル ０．２
６．水酸化ナトリウム ０．１７
７．リン酸二水素カリウム ０．６８
８．スクワラン ６．０
９．オリーブ油 ３．０
１０．ステアリン酸 ２．０
１１．ミツロウ ２．０
１２．ミリスチン酸オクチルドデシル ３．５
１３．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．） ３．０
１４．ベヘニルアルコール １．５
１５．モノステアリン酸グリセリン ２．５
１６．香料 ０．１
１７．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分８〜１５を加熱溶解して混合した後、７０℃に保ち油相とする。成分２〜７及び１７を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃にて成分１及び１６を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。
【００２１】
処方例３ 乳液
処方 配合量（部）
１．Ｍ．ｒｅｓｔｒｉｃｔａ培養液（製造例３） ３．０
２．トリクロサン ０．０５
３．スクワラン ５．０
４．オリーブ油 ５．０
５．ホホバ油 ５．０
６．セタノール １．５
７．モノステアリン酸グリセリン ２．０
８．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．） ３．０
９．ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（２０Ｅ．Ｏ．） ２．０
１０．香料 ０．１
１１．プロピレングリコール １．０
１２．グリセリン ２．０
１３．パラオキシ安息香酸メチル ０．２
１４．ホウ酸ナトリウム十水和物 １．０
１５．塩酸 ０．１７
１６．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜９を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１１〜１６を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃にて成分１及び１０を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。
【００２２】
処方例４ ゲル剤
処方 配合量（部）
１．Ｍ．ｓｙｍｐｏｄｉａｌｉｓ培養液（製造例４） ４．０
２．ピオニン ０．００１
３．１，３−ブチレングリコール ５．０
４．グリセリン ５．０
５．キサンタンガム ０．１
６．カルボキシビニルポリマー ０．２
７．水酸化カリウム ０．２
８．トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン ０．８０
９．塩酸 ０．１２
１０．エタノール ５．０
１１．パラオキシ安息香酸メチル ０．１
１２．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（６０Ｅ．Ｏ．） ０．１
１３．香料 ０．１
１４．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜９及び１４と、成分１０〜１３をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合して製品とする。
【００２３】
処方例５ 軟膏
処方 配合量
１．Ｍ．ｄｅｒｍａｔｉｓ培養液（製造例５） ５．０
２．サリチル酸 ０．０５
３．トリクロサン ０．０５
４．ポリオキシエチレンセチルエーテル（３０Ｅ．Ｏ．） ２．０
５．モノステアリン酸グリセリン １０．０
６．流動パラフィン ５．０
７．セタノール ６．０
８．パラオキシ安息香酸メチル ０．１
９．プロピレングリコール １０．０
１０．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分３〜７を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分２及び８〜１０を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃にて成分１を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。
【実施例２】
【００２４】
実験例1 マラセチア属真菌培養液によるアクネ菌のバイオフィルム形成阻害効果
強化クロストリジア培地（Ｏｘｏｉｄ）８０μＬ、アクネ菌分散液（菌数１０９／ｍＬ）１０μＬ、製造例１〜５で作製したマラセチア属真菌培養液又はＬｅｅｍｉｎｇ＆Ｎｏｔｍａｎ培地（ネガティブコントロール）１０μＬを９６穴マイクロプレートに加え、３５℃にて嫌気培養した。１週間後、上清を取り除き、リン酸緩衝液にて洗浄した後、０．５％クリスタルバイオレットを加えてバイオフィルムを染色した。さらにリン酸緩衝液にて洗浄した後、エタノールを加えて色素を溶出し、９５０ｎｍにおける吸光度を測定してバイオフィルム形成量とした。
【００２５】
【非特許文献２】Ｊ Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｖｏｌ．２５，ＰＰ．２０１７−２０１９（１９８７）
【００２６】
結果を表１に示す。
【００２７】
【表１】
【００２８】
上記の表１から、マラセチア属真菌培養液を含む場合、アクネ菌のバイオフィルム形成は抑制されていることが明らかである。
【００２９】
他のマラセチア菌種においても、Ｍ．ｆｕｒｆｕｒを用いた場合と同様に、アクネ菌のバイオフィルム抑制効果を認めた。
【実施例３】
【００３０】
実験例２ 抗菌剤とマラセチア属真菌培養液の併用効果
実施例２の方法に準じ、マラセチア培養液又はＬｅｅｍｉｎｇ＆Ｎｏｔｍａｎ培地の存在下でアクネ菌を培養した後、２％（Ｗ／Ｖ）の硫酸カリウムアルミニウムを添加し、６時間後のアクネ菌の生菌数を培養法にて測定した。
【００３１】
結果を表２に示す。
【００３２】
【表２】
【００３３】
マラセチア属真菌培養液を添加してアクネ菌を培養した場合、マラセチア属真菌培養液を含まない時よりもアクネ菌の生菌数が減少したことから、マラセチア属真菌培養液が硫酸カリウムアルミニウムのアクネ菌に対する抗菌効果を増大させたことが明らかである。
【００３４】
他のマラセチア菌種においても、Ｍ．ｆｕｒｆｕｒを用いた場合と同様に、硫酸カリウムアルミニウムのアクネ菌に対する抗菌効果を増強した。
【００３５】
抗菌剤として、ナジフロキサシン、リン酸クリンダマイシン、サリチル酸、トリクロサン又はピオニンを用いた場合においても、マラセチア属真菌培養液は、これらの抗菌剤のアクネ菌に対する抗菌性を増強した。
【実施例４】
【００３６】
実験例３ 使用試験
処方例１及び比較例の化粧水を用いて、顔面にニキビを有する成人２０名（男性１０名、女性１０名）を対象に１ヶ月間の使用試験を行った。使用後、アンケート調査によりニキビの改善について判定した。
【００３７】
結果を表３に示す。
【００３８】
【表３】
【００３９】
マラセチア属真菌培養液を含有する化粧水は、優れたニキビ症状の改善効果を示した。なお、試験期間中皮膚トラブルは一人もなく、安全性においても問題なかった。
【００４０】
処方例２〜５で得られた化粧品、医薬品についても同様に使用試験を行った結果、いずれもニキビの予防改善効果を示した。
【産業上の利用可能性】
【００４１】
本発明のマラセチア属真菌培養液を含有する外用剤は、ニキビの予防及び治療を目的とする化粧品、医薬部外品、医薬品に利用可能である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ニキビの増悪原因であるアクネ菌のバイオフィルム形成を阻害し、効果的にニキビを予防又は治療する外用剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
皮膚疾患の一つであるニキビ（尋常性ざ瘡）は、毛穴が閉塞し皮脂が貯留した脂腺性毛包内でアクネ菌が増殖することによって発症する。アクネ菌は毛包内でバイオフィルムを形成しており、このバイオフィルムの発達はニキビの発症に深く関与していると考えられている（非特許文献１）。
【０００３】
バイオフィルムとは、微生物が生成した細胞外多糖類と菌体等からなる集合体であり、環境中の微生物はこのバイオフィルム内で生存している。バイオフィルムが形成されていると、抗菌剤を投与しても抗菌剤が内部に浸透しないため、期待される効果が得られない。つまり、環境中の微生物の制御には、適切な抗菌剤を用いるだけでなく、バイオフィルム形成を阻害することが重要と言える。
【０００４】
バイオフィルム形成阻害剤としては、アミド化合物や多価アルコールといった化学物質を用いた方法が報告されている（特許文献１及び２）。しかし、天然物、特に微生物由来のバイオフィルム形成阻害剤は知られていなかった。
【０００５】
【非特許文献１】Ｉｎｔ Ｊ Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｖｏｌ.４２（１２）,ＰＰ.９２５−９２７（２００３）
【特許文献１】特開２０１０−４３００３
【特許文献２】特開２００５−２２５８３０
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
ニキビの原因の一つであるアクネ菌のバイオフィルム形成を阻害し、安全性、安定性にも優れている外用剤が望まれていた。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、上記課題の解決に向け鋭意検討を行った結果、マラセチア属真菌培養液がアクネ菌のバイオフィルム形成を阻害することを見出した。さらに、マラセチア属真菌培養液を含有する外用剤、並びにマラセチア属真菌培養物及び抗菌剤を含有する外用剤は、安全性、安定性にも優れており、本発明を完成するに至った。
【０００８】
本発明に用いられるマラセチア属真菌培養液は、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ ｆｕｒｆｕｒ、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ ｓｙｍｐｏｄｉａｌｉｓ、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ ｇｌｏｂｏｓａ、Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ ｒｅｓｔｒｉｃｔａ、又はＭａｌａｓｓｅｚｉａ ｄｅｒｍａｔｉｓを培養して作製した。
【０００９】
本発明の皮膚外用剤には、その効果を損なわない範囲内で、油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、金属石鹸、防腐剤、香料、保湿剤、粉体、紫外線吸収剤、増粘剤、色素、酸化防止剤、美白剤、キレート剤等の成分を配合することもできる。
【００１０】
本発明の皮膚外用剤は、化粧品、医薬部外品及び医薬品のいずれにも用いることができ、その剤型としては、例えば、化粧水、クリーム、乳液、ゲル剤、エアゾール剤、エッセンス、パック、洗浄剤、浴用剤、ファンデーション、打粉、口紅、軟膏、パップ剤、洗口剤、液体歯磨、練歯磨等が挙げられる。
【発明の効果】
【００１１】
マラセチア属真菌培養液は、アクネ菌のバイオフィルム形成を阻害した。また、本培養液及び抗菌剤を含有する外用剤の抗菌効果は、抗菌剤のみを含有する外用剤と比較して増強した。
【００１２】
次に本発明を詳細に説明するため、実施例及び実験例を挙げるが、本発明はこれに限定されるものではない。
【実施例１】
【００１３】
製造例１ Ｍ．ｆｕｒｆｕｒ培養液
Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ ｆｕｒｆｕｒ ＮＢＲＣ０６５６をＬｅｅｍｉｎｇ＆Ｎｏｔｍａｎ培地（全量１０００ｍＬ中、ペプトン １０ｇ、ウシ胆汁エキス ４ｇ、酵母エキス ０．１ｇ、グルコース ５ｇ、グリセリン １ｇ、グリセリンモノステアレート ０．５ｇ、Ｔｗｅｅｎ６０ ０．５ｇ、３．２５％脂肪乳 １０ｍＬ）（非特許文献２）を用いて３２℃にて１週間培養した後、０．４５μｍのフィルターにて濾過し、Ｍ．ｆｕｒｆｕｒ培養液を作製した。
【００１４】
製造例２ Ｍ．ｇｌｏｂｏｓａ培養液
Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ ｇｌｏｂｏｓａを製造例１の方法にて培養した後、同様に濾過して、Ｍ．ｇｌｏｂｏｓａ培養液を作製した。
【００１５】
製造例３ Ｍ．ｒｅｓｔｒｉｃｔａ培養液
Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ ｒｅｓｔｒｉｃｔａを製造例１の方法にて培養した後、同様に濾過して、Ｍ．ｒｅｓｔｒｉｃｔａ培養液を作製した。
【００１６】
製造例４ Ｍ．ｓｙｍｐｏｄｉａｌｉｓ培養液
Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ ｓｙｍｐｏｄｉａｌｉｓを製造例１の方法にて培養した後、同様に濾過して、Ｍ．ｓｙｍｐｏｄｉａｌｉｓ培養液を作製した。
【００１７】
製造例５ Ｍ．ｄｅｒｍａｔｉｓ培養液
Ｍａｌａｓｓｅｚｉａ ｄｅｒｍａｔｉｓを製造例１の方法にて培養した後、同様に濾過して、Ｍ．ｄｅｒｍａｔｉｓ培養液を作製した。
【００１８】
処方例１ 化粧水
処方 配合量（部）
１．Ｍ．ｆｕｒｆｕｒ培養液（製造例１） ５．０
２．硫酸カリウムアルミニウム ０．３
３．１，３−ブチレングリコール ８．０
４．グリセリン ２．０
５．キサンタンガム ０．０２
６．クエン酸 ０．０１
７．クエン酸ナトリウム ０．１
８．エタノール ５．０
９．パラオキシ安息香酸メチル ０．１
１０．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（４０Ｅ．Ｏ．） ０．１
１１．香料 ０．１
１２．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜７及び１２と、成分８〜１１をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合し濾過して製品とする。
【００１９】
比較例 従来の化粧水
処方例１において、成分１を精製水５．０部に置き換えたものを従来の化粧水とした。
【００２０】
処方例２ クリーム
処方 配合量（部）
１．Ｍ．ｇｌｏｂｏｓａ培養液（製造例２） ３．０
２．サリチル酸 ０．１
３．１，３−ブチレングリコール ８．５
４．パラオキシ安息香酸エチル ０．０５
５．パラオキシ安息香酸メチル ０．２
６．水酸化ナトリウム ０．１７
７．リン酸二水素カリウム ０．６８
８．スクワラン ６．０
９．オリーブ油 ３．０
１０．ステアリン酸 ２．０
１１．ミツロウ ２．０
１２．ミリスチン酸オクチルドデシル ３．５
１３．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．） ３．０
１４．ベヘニルアルコール １．５
１５．モノステアリン酸グリセリン ２．５
１６．香料 ０．１
１７．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分８〜１５を加熱溶解して混合した後、７０℃に保ち油相とする。成分２〜７及び１７を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃にて成分１及び１６を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。
【００２１】
処方例３ 乳液
処方 配合量（部）
１．Ｍ．ｒｅｓｔｒｉｃｔａ培養液（製造例３） ３．０
２．トリクロサン ０．０５
３．スクワラン ５．０
４．オリーブ油 ５．０
５．ホホバ油 ５．０
６．セタノール １．５
７．モノステアリン酸グリセリン ２．０
８．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．） ３．０
９．ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート（２０Ｅ．Ｏ．） ２．０
１０．香料 ０．１
１１．プロピレングリコール １．０
１２．グリセリン ２．０
１３．パラオキシ安息香酸メチル ０．２
１４．ホウ酸ナトリウム十水和物 １．０
１５．塩酸 ０．１７
１６．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜９を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１１〜１６を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃にて成分１及び１０を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。
【００２２】
処方例４ ゲル剤
処方 配合量（部）
１．Ｍ．ｓｙｍｐｏｄｉａｌｉｓ培養液（製造例４） ４．０
２．ピオニン ０．００１
３．１，３−ブチレングリコール ５．０
４．グリセリン ５．０
５．キサンタンガム ０．１
６．カルボキシビニルポリマー ０．２
７．水酸化カリウム ０．２
８．トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン ０．８０
９．塩酸 ０．１２
１０．エタノール ５．０
１１．パラオキシ安息香酸メチル ０．１
１２．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（６０Ｅ．Ｏ．） ０．１
１３．香料 ０．１
１４．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜９及び１４と、成分１０〜１３をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合して製品とする。
【００２３】
処方例５ 軟膏
処方 配合量
１．Ｍ．ｄｅｒｍａｔｉｓ培養液（製造例５） ５．０
２．サリチル酸 ０．０５
３．トリクロサン ０．０５
４．ポリオキシエチレンセチルエーテル（３０Ｅ．Ｏ．） ２．０
５．モノステアリン酸グリセリン １０．０
６．流動パラフィン ５．０
７．セタノール ６．０
８．パラオキシ安息香酸メチル ０．１
９．プロピレングリコール １０．０
１０．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分３〜７を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分２及び８〜１０を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃にて成分１を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。
【実施例２】
【００２４】
実験例1 マラセチア属真菌培養液によるアクネ菌のバイオフィルム形成阻害効果
強化クロストリジア培地（Ｏｘｏｉｄ）８０μＬ、アクネ菌分散液（菌数１０９／ｍＬ）１０μＬ、製造例１〜５で作製したマラセチア属真菌培養液又はＬｅｅｍｉｎｇ＆Ｎｏｔｍａｎ培地（ネガティブコントロール）１０μＬを９６穴マイクロプレートに加え、３５℃にて嫌気培養した。１週間後、上清を取り除き、リン酸緩衝液にて洗浄した後、０．５％クリスタルバイオレットを加えてバイオフィルムを染色した。さらにリン酸緩衝液にて洗浄した後、エタノールを加えて色素を溶出し、９５０ｎｍにおける吸光度を測定してバイオフィルム形成量とした。
【００２５】
【非特許文献２】Ｊ Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｖｏｌ．２５，ＰＰ．２０１７−２０１９（１９８７）
【００２６】
結果を表１に示す。
【００２７】
【表１】
【００２８】
上記の表１から、マラセチア属真菌培養液を含む場合、アクネ菌のバイオフィルム形成は抑制されていることが明らかである。
【００２９】
他のマラセチア菌種においても、Ｍ．ｆｕｒｆｕｒを用いた場合と同様に、アクネ菌のバイオフィルム抑制効果を認めた。
【実施例３】
【００３０】
実験例２ 抗菌剤とマラセチア属真菌培養液の併用効果
実施例２の方法に準じ、マラセチア培養液又はＬｅｅｍｉｎｇ＆Ｎｏｔｍａｎ培地の存在下でアクネ菌を培養した後、２％（Ｗ／Ｖ）の硫酸カリウムアルミニウムを添加し、６時間後のアクネ菌の生菌数を培養法にて測定した。
【００３１】
結果を表２に示す。
【００３２】
【表２】
【００３３】
マラセチア属真菌培養液を添加してアクネ菌を培養した場合、マラセチア属真菌培養液を含まない時よりもアクネ菌の生菌数が減少したことから、マラセチア属真菌培養液が硫酸カリウムアルミニウムのアクネ菌に対する抗菌効果を増大させたことが明らかである。
【００３４】
他のマラセチア菌種においても、Ｍ．ｆｕｒｆｕｒを用いた場合と同様に、硫酸カリウムアルミニウムのアクネ菌に対する抗菌効果を増強した。
【００３５】
抗菌剤として、ナジフロキサシン、リン酸クリンダマイシン、サリチル酸、トリクロサン又はピオニンを用いた場合においても、マラセチア属真菌培養液は、これらの抗菌剤のアクネ菌に対する抗菌性を増強した。
【実施例４】
【００３６】
実験例３ 使用試験
処方例１及び比較例の化粧水を用いて、顔面にニキビを有する成人２０名（男性１０名、女性１０名）を対象に１ヶ月間の使用試験を行った。使用後、アンケート調査によりニキビの改善について判定した。
【００３７】
結果を表３に示す。
【００３８】
【表３】
【００３９】
マラセチア属真菌培養液を含有する化粧水は、優れたニキビ症状の改善効果を示した。なお、試験期間中皮膚トラブルは一人もなく、安全性においても問題なかった。
【００４０】
処方例２〜５で得られた化粧品、医薬品についても同様に使用試験を行った結果、いずれもニキビの予防改善効果を示した。
【産業上の利用可能性】
【００４１】
本発明のマラセチア属真菌培養液を含有する外用剤は、ニキビの予防及び治療を目的とする化粧品、医薬部外品、医薬品に利用可能である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
酵母様真菌の培養液を有効成分とするアクネ菌のバイオフィルム形成阻害剤。
【請求項２】
マラセチア属真菌の培養液を有効成分とするアクネ菌のバイオフィルム形成阻害剤。
【請求項３】
マラセチア属真菌の培養液を有効成分とするニキビ予防又は治療用皮膚外用剤。
【請求項４】
マラセチア属真菌の培養液及び抗菌剤を含有するアクネ菌に対する抗菌組成物。
【請求項１】
酵母様真菌の培養液を有効成分とするアクネ菌のバイオフィルム形成阻害剤。
【請求項２】
マラセチア属真菌の培養液を有効成分とするアクネ菌のバイオフィルム形成阻害剤。
【請求項３】
マラセチア属真菌の培養液を有効成分とするニキビ予防又は治療用皮膚外用剤。
【請求項４】
マラセチア属真菌の培養液及び抗菌剤を含有するアクネ菌に対する抗菌組成物。
【公開番号】特開２０１２−２０６９７３（Ｐ２０１２−２０６９７３Ａ）
【公開日】平成２４年１０月２５日（２０１２．１０．２５）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−７２９５４（Ｐ２０１１−７２９５４）
【出願日】平成２３年３月２９日（２０１１．３．２９）
【出願人】（５９２２６２５４３）日本メナード化粧品株式会社 (223)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２４年１０月２５日（２０１２．１０．２５）
【国際特許分類】
【出願日】平成２３年３月２９日（２０１１．３．２９）
【出願人】（５９２２６２５４３）日本メナード化粧品株式会社 (223)
【Ｆターム（参考）】
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