ＬＥＵ２染色体遺伝子座のガラクトース誘導性プロモーターの制御下で機能的Ｂａｘポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含むＷ３０３ａサッカロミセス・セレヴィシエ酵母細胞、酵母細胞およびｃＤＮＡライブラリーを酵母細胞に形質転換するのに適した酵母プラスミドベクターを含むパーツのキット、Ｂａｘ媒介アポトーシスの阻害剤である又は前記阻害剤をコードするポリヌクレオチドのｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングする酵母細胞の使用、Ｂａｘ媒介アポトーシスを阻害し、酵母細胞でスクリーニングされるヒト海馬ｃＤＮＡライブラリーから同定される遺伝子及びポリペプチド、前記ライブラリーから同定されるＢａｘ媒介アポトーシスの阻害剤を用いる細胞でＢａｘ媒介アポトーシスに対抗する方法、前記ライブラリーから同定される抗アポトーシスポリペプチドの阻害剤又は拮抗薬を用いる細胞でＢａｘ媒介アポトーシスを促進する方法、を開示する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
遺伝子型ＭＡＴ−ａ、ａｄｅ２−１、ｔｒｐ１−１、ｌｅｕ２−３、ｌｅｕ２−１１２、ｈｉｓ３−１１、ｈｉｓ３−１５、ｕｒａ３−１およびｃａｎ１−１００を有し、かつＬＥＵ２染色体遺伝子座において組込まれたガラクトース誘導性プロモーターの制御下で機能的Ｂａｘポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含有する、サッカロミセス・セレヴィシエ酵母細胞。
【請求項２】
遺伝子型ＭＡＴ−ａ、ａｄｅ２−１、ｔｒｐ１−１、ｌｅｕ２−３、ｌｅｕ２−１１２、ｈｉｓ３−１１、ｈｉｓ３−１５、ｕｒａ３−１およびｃａｎ１−１００を有し、かつガラクトース誘導性プロモーターの制御下で機能的Ｂａｘポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含み、およびＬＥＵ２染色体遺伝子座における組込に適したプラスミドを組込む酵母を含有する、サッカロミセス・セレヴィシエ酵母細胞。
【請求項３】
前記酵母細胞が株Ｗ３０３−１Ａである、請求項１または２に記載のサッカロミセス・セレヴィシエ酵母細胞。
【請求項４】
前記機能的ＢａｘポリペプチドがヒトＢａｘポリペプチド、またはそのプロアポトーシス断片または変種を含む、請求項１から３のいずれか一項に記載のサッカロミセス・セレヴィシエ酵母細胞。
【請求項５】
前記機能的Ｂａｘポリペプチドをコードするポリヌクレオチドのコドンが酵母について最適化されている、請求項１から４のいずれか一項に記載のサッカロミセス・セレヴィシエ酵母細胞。
【請求項６】
前記機能的Ｂａｘポリペプチドをコードするポリヌクレオチドが配列番号２の配列を含む、請求項１から５のいずれか一項に記載のサッカロミセス・セレヴィシエ酵母細胞。
【請求項７】
前記ガラクトース誘導性プロモーターがＧＡＬ１またはＧＡＬ１０である、請求項１から６のいずれか一項に記載のサッカロミセス・セレヴィシエ酵母細胞。
【請求項８】
前記機能的ＢａｘポリペプチドをコードするポリヌクレオチドがＳＵＣ２転写ターミネーター配列によって停止される、請求項１から７のいずれか一項に記載のサッカロミセス・セレヴィシエ酵母細胞。
【請求項９】
ガラクトースの存在下における機能的Ｂａｘポリペプチドの発現の結果、細胞の死滅がもたらされる、請求項１から８のいずれか一項に記載のサッカロミセス・セレヴィシエ酵母細胞。
【請求項１０】
株Ｗ３０３ｂａｘｌｅｕである、請求項１から９のいずれか一項に記載のサッカロミセス・セレヴィシエ酵母細胞。
【請求項１１】
請求項１から１０のいずれか一項に記載の酵母細胞、およびポリヌクレオチドのライブラリーを酵母細胞に形質転換するのに適した酵母プラスミドベクターを含むパーツのキット。
【請求項１２】
前記酵母プラスミドベクターが、誘導性プロモーターの制御下でポリヌクレオチドのライブラリーからポリヌクレオチドを発現させるのに適している、請求項１１に記載のパーツのキット。
【請求項１３】
前記酵母プラスミドベクターがｐＹＥＳ２（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）である、請求項１１または１２に記載のパーツのキット。
【請求項１４】
酵母細胞において誘導性プロモーターの制御下にあるポリヌクレオチドの発現を誘導する薬剤をさらに含む、請求項１１から１３のいずれか一項に記載のパーツのキット。
【請求項１５】
酵母細胞におけるポリヌクレオチドの発現を誘導する薬剤がガラクトースである、請求項１４に記載のパーツのキット。
【請求項１６】
ガラクトースをさらに含む、請求項１１から１４のいずれか一項に記載のパーツのキット。
【請求項１７】
前記ポリヌクレオチドのライブラリーがｃＤＮＡライブラリーである、請求項１１から１６のいずれか一項に記載のパーツのキット。
【請求項１８】
Ｂａｘ媒介アポトーシスの阻害剤についてポリヌクレオチドのライブラリーをスクリーニングする方法を行うための指示書をさらに含む、請求項１１から１７のいずれか一項に記載のパーツのキット。
【請求項１９】
（ａ）酵母プラスミドベクター中のポリヌクレオチドのライブラリーを提供し；
（ｂ）前記ポリヌクレオチドのライブラリーを請求項１から１０のいずれか一項に記載の酵母細胞に形質転換し；
（ｃ）酵母プラスミドベクター中の機能的Ｂａｘポリペプチドの、およびポリヌクレオチドの発現を可能とする条件下で形質転換された酵母を平板培養し；および、
（ｄ）成長する酵母コロニーを同定することを含み、
酵母コロニーの成長は、酵母プラスミドベクター中のポリヌクレオチドがＢａｘ媒介アポトーシスの阻害剤である、またはそれをコードすることを示す方法であって、Ｂａｘ媒介アポトーシスの阻害剤である、またはそれをコードするポリヌクレオチドについてスクリーニングする方法。
【請求項２０】
前記ポリヌクレオチドのライブラリーがヒト脳組織、糖尿病に関与する組織、癌組織、心臓組織、関節リウマチに関与する組織、細胞系、または細菌またはウイルスゲノムから生じたｃＤＮＡライブラリーである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記酵母プラスミドベクター中の前記ポリヌクレオチドのライブラリーが誘導性プロモーターの制御下にある、請求項１９または２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記誘導性プロモーターがテトラサイクリン誘導性プロモーター、メチオニン誘導性プロモーター、ガラクトース誘導性プロモーター、ＡＤＨ２プロモーターまたはメタロチオネインプロモーターである、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記ガラクトース誘導性プロモーターがＧＡＬ１またはＧＡＬ１０である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記酵母プラスミドベクターがｐＹＥＳ２である、請求項１９から２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記形質転換工程（ｂ）が高効率形質転換である、請求項１９から２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記平板培養工程（ｃ）が、ガラクトースの存在下で３０℃にて平板培養された酵母細胞を少なくとも７２時間インキュベートすることを含む、請求項１９から２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
前記工程（ｄ）で同定された酵母コロニーに存在する酵母プラスミドベクター中のポリヌクレオチドの配列を得ることをさらに含む、請求項１９から２６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２８】
前記工程（ｄ）で同定された酵母コロニーに存在するプラスミドベクターからのポリヌクレオチド、または前記ポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドを、アポトーシスのモデルにおいてＢａｘ媒介アポトーシスを阻害する能力について再度テストすることをさらに含む、請求項１９から２７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２９】
前記工程（ｄ）で同定された酵母コロニーに存在するプラスミドベクターからのポリヌクレオチドを修飾し、次いで、修飾されたポリヌクレオチド、または前記修飾されたポリヌクレオチドによってコードされたポリペプチドを、アポトーシスのモデルにおいてＢａｘ媒介アポトーシスを阻害する能力についてテストすることをさらに含む、請求項１９から２８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３０】
得られた配列データに基づいてポリヌクレオチドを同定し、次いで、同定されたポリヌクレオチドに対応するポリヌクレオチド、または前記対応するピリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドを、アポトーシスのモデルにおいてＢａｘ媒介アポトーシスを阻害する能力についてテストすることをさらに含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項３１】
前記アポトーシスのモデルが酵母細胞モデル、哺乳動物細胞モデル、およびアポトーシスのインビボモデルから選択される、請求項２８から３０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
Ｂａｘ媒介アポトーシスを阻害する能力を有するポリヌクレオチドまたはポリペプチドを医薬的に許容される組成物に処方する工程をさらに含む、請求項３１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３３】
細胞を、ＦＫＢＰ２（ＦＫＢＰ−１３）；α−シヌクレイン（ＳＮＣＡ）、真核生物翻訳伸長因子１ α１（ＥＥＦ１Ａ１）；小胞結合膜タンパク質３（ＶＡＭＰ３）；シナプトソーム結合タンパク質（ＳＮＡＰ２５）；ＲＩＭＳ３；ＲＡＢ４０Ｂ；３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル−補酵素Ａシンターゼ１（ＨＭＧＣＳ１）；ステアロイル−ＣｏＡデサチュラーゼ５（ＳＣＤ５）；ＡＴＰａｓｅ Ａｔｐ２ａ２（ＡＴＰ２Ａ２）；ｈｎＲＮＰメチルトランスフェラーゼ様１（ＨＲＭＴ１Ｌ１）；および配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８または配列番号１９を含むポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドから選択されるポリペプチド、またはこれらのポリペプチドのいずれかの抗アポトーシス誘導体、または前記ポリペプチドまたは誘導体のいずれかをコードするポリヌクレオチドと接触させることを含む方法であって、細胞においてＢａｘ媒介アポトーシスに対抗する方法。
【請求項３４】
インビトロで行われる、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
細胞においてＢａｘ媒介アポトーシスに対抗するための医薬の調製における、ＦＫＢＰ２、ＳＮＣＡ、ＥＥＦ１Ａ１、ＶＡＭＰ３、ＳＮＡＰ２５、ＲＩＭＳ３、ＲＡＢ４０Ｂ、ＨＭＧＣＳ１、ＳＣＤ５、ＡＴＰ２Ａ２、ＨＲＭＴ１Ｌ１、および配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８または配列番号１９を含むポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドから選択されるポリペプチド、またはこれらのポリペプチドのいずれかの抗アポトーシス誘導体、または前記ポリペプチドまたは誘導体のいずれかをコードするポリヌクレオチドの使用。
【請求項３６】
医療で用いられる、ＦＫＢＰ２、ＳＮＣＡ、ＶＡＭＰ３、ＳＮＡＰ２５、ＲＩＭＳ３、ＲＡＢ４０Ｂ、ＨＭＧＣＳ１、ＳＣＤ５、ＨＲＭＴ１Ｌ１、および配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８または配列番号１９を含むポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドから選択されるポリペプチド、またはこれらのポリペプチドのいずれかの抗アポトーシス誘導体、または前記ポリペプチドまたは誘導体のいずれかをコードするポリヌクレオチド。
【請求項３７】
ＦＫＢＰ２、ＳＮＣＡ、ＶＡＭＰ３、ＳＮＡＰ２５、ＲＩＭＳ３、ＲＡＢ４０Ｂ、ＨＭＧＣＳ１、ＳＣＤ５、ＨＲＭＴ１Ｌ１、および配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８または配列番号１９を含むポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドから選択されるポリペプチド、またはこれらのポリペプチドのいずれかの抗アポトーシス誘導体、また前記前記ポリペプチドまたは誘導体のいずれかをコードするポリヌクレオチド、および医薬的に許容される担体または賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項３８】
ＦＫＢＰ２、ＳＮＣＡ、ＥＥＦ１Ａ１、ＶＡＭＰ３、ＳＮＡＰ２５、ＲＩＭＳ３、ＲＡＢ４０Ｂ、ＨＭＧＣＳ１、ＳＣＤ５、ＡＴＰ２Ａ２、ＨＲＭＴ１Ｌ１、および配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８または配列番号１９を含むポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドから選択されるポリペプチド、またはこれらのポリペプチドのいずれかの抗アポトーシス誘導体、または前記ポリペプチドまたは誘導体のいずれかをコードするポリヌクレオチドを患者に投与することを含む方法であって、神経変性病または疾患、心血管病、関節リウマチおよび糖尿病から選択される患者における病気または疾患に対抗する方法。
【請求項３９】
神経変性病または疾患、心血管病、関節リウマチおよび糖尿病から選択される患者において病気または疾患に対抗するための医薬調製における、ＦＫＢＰ２、ＳＮＣＡ、ＥＥＦ１Ａ１、ＶＡＭＰ３、ＳＮＡＰ２５、ＲＩＭＳ３、ＲＡＢ４０Ｂ、ＨＭＧＣＳ１、ＳＣＤ５、ＡＴＰ２Ａ２、ＨＲＭＴ１Ｌ１、および配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８または配列番号１９を含むポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドから選択されるポリペプチド、またはこれらのポリペプチドのいずれかの抗アポトーシス誘導体、または前記ポリペプチドまたは誘導体のいずれかをコードするポリヌクレオチドの使用。
【請求項４０】
前記神経変性病または疾患が発作、脊髄外傷、頭部負傷、脊髄筋萎縮症（ＳＭＡ）、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）を含む運動ニューロン疾患、アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）およびハンチントン病（ＨＤ）から選択される、請求項３８または３９に記載の方法または使用。
【請求項４１】
細胞を、ＦＫＢＰ２、ＳＮＣＡ、ＥＥＦ１Ａ１、ＶＡＭＰ３、ＳＮＡＰ２５、ＲＩＭＳ３、ＲＡＢ４０Ｂ、ＨＭＧＣＳ１、ＳＣＤ５、ＡＴＰ２Ａ２、ＨＲＭＴ１Ｌ１、および配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８または配列番号１９を含むポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドから選択されるポリペプチドの阻害剤またはアンタゴニストと接触させることを含む方法であって、細胞においてＢａｘ媒介アポトーシスを増加させる方法。
【請求項４２】
インビトロで行われる、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
患者の細胞におけるＢａｘ媒介アポトーシスを増加させるための医薬の調製における、ＦＫＢＰ２、ＳＮＣＡ、ＥＥＦ１Ａ１、ＶＡＭＰ３、ＳＮＡＰ２５、ＲＩＭＳ３、ＲＡＢ４０Ｂ、ＨＭＧＣＳ１、ＳＣＤ５、ＡＴＰ２Ａ２、ＨＲＭＴ１Ｌ１、および配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８または配列番号１９を含むポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドから選択されるポリペプチドの阻害剤またはアンタゴニストの使用。
【請求項４４】
医療で用いるための、ＦＫＢＰ２、ＳＮＣＡ、ＥＥＦ１Ａ１、ＶＡＭＰ３、ＳＮＡＰ２５、ＲＩＭＳ３、ＲＡＢ４０Ｂ、ＨＭＧＣＳ１、ＳＣＤ５、ＡＴＰ２Ａ２、ＨＲＭＴ１Ｌ１、および配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８または配列番号１９を含むポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドから選択されるポリペプチドの阻害剤またはアンタゴニスト、あるいは前記阻害剤またはアンタゴニストのいずれかをコードするポリヌクレオチド。
【請求項４５】
ＦＫＢＰ２、ＳＮＣＡ、ＥＥＦ１Ａ１、ＶＡＭＰ３、ＳＮＡＰ２５、ＲＩＭＳ３、ＲＡＢ４０Ｂ、ＨＭＧＣＳ１、ＳＣＤ５、ＡＴＰ２Ａ２、ＨＲＭＴ１Ｌ１、および配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８または配列番号１９を含むポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドから選択されるポリペプチドの阻害剤またはアンタゴニスト、あるいは前記阻害剤またはアンタゴニストのいずれかをコードするポリヌクレオチド、および医薬的に許容される担体または賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項４６】
ＦＫＢＰ２、ＳＮＣＡ、ＥＥＦ１Ａ１、ＶＡＭＰ３、ＳＮＡＰ２５、ＲＩＭＳ３、ＲＡＢ４０Ｂ、ＨＭＧＣＳ１、ＳＣＤ５、ＡＴＰ２Ａ２、ＨＲＭＴ１Ｌ１、および配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８または配列番号１９を含むポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドから選択されるポリペプチドの阻害剤、またはアンタゴニスト、あるいは前記阻害剤またはアンタゴニストのいずれかをコードするポリヌクレオチドを患者に投与することを含む方法であって、患者において癌に対抗する方法。
【請求項４７】
患者において癌に対抗するための医薬の調製における、ＦＫＢＰ２、ＳＮＣＡ、ＥＥＦ１Ａ１、ＶＡＭＰ３、ＳＮＡＰ２５、ＲＩＭＳ３、ＲＡＢ４０Ｂ、ＨＭＧＣＳ１、ＳＣＤ５、ＡＴＰ２Ａ２、ＨＲＭＴ１Ｌ１、および配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８または配列番号１９を含むポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドから選択されるポリペプチドの阻害剤またはアンタゴニスト、あるいは前記阻害剤またはアンタゴニストのいずれかをコードするポリヌクレオチドの使用。
【請求項４８】
前記阻害剤またはアンタゴニストが前記ポリペプチドが選択的に結合する抗体である、請求項４１から４７のいずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項４９】
前記阻害剤またはアンタゴニストがリボザイム、アンチセンスポリヌクレオチドまたはｓｉＲＮＡ分子である、請求項４１から４７のいずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項５０】
前記阻害剤またはアンタゴニストが請求項５１から７１に記載の方法によって同定可能なまたは同定される、請求項４１から４７のいずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項５１】
ＦＫＢＰ２、ＳＮＣＡ、ＥＥＦ１Ａ１、ＶＡＭＰ３、ＳＮＡＰ２５、ＲＩＭＳ３、ＲＡＢ４０Ｂ、ＨＭＧＣＳ１、ＳＣＤ５、ＡＴＰ２Ａ２、ＨＲＭＴ１Ｌ１から選択される遺伝子、およびその転写されたメッセージが配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８または配列番号１９を含むｃＤＮＡ配列を有する遺伝子からのプロモーターおよび／または調節部分に操作可能に連結されたレポーター遺伝子を含む細胞を提供し、
前記細胞を候補化合物と接触させ；および、
前記レポーター遺伝子の発現を測定することを含み、
候補化合物に対する応答におけるレポーター遺伝子の発現の変化は、ＦＫＢＰ２、ＳＮＣＡ、ＥＥＦ１Ａ１、ＶＡＭＰ３、ＳＮＡＰ２５、ＲＩＭＳ３、ＲＡＢ４０Ｂ、ＨＭＧＣＳ１、ＳＣＤ５、ＡＴＰ２Ａ２、ＨＲＭＴ１Ｌ１から選択される遺伝子、およびその転写されたメッセージが配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８または配列番号１９を含むｃＤＮＡ配列を有する遺伝子の発現を変調することができる化合物を同定する方法であって、ＦＫＢＰ２、ＳＮＣＡ、ＥＥＦ１Ａ１、ＶＡＭＰ３、ＳＮＡＰ２５、ＲＩＭＳ３、ＲＡＢ４０Ｂ、ＨＭＧＣＳ１、ＳＣＤ５、ＡＴＰ２Ａ２、ＨＲＭＴ１Ｌ１から選択される遺伝子、およびその転写されたメッセージが配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８または配列番号１９を含むｃＤＮＡ配列を有する遺伝子の発現を変調する化合物を同定する方法。
【請求項５２】
前記レポーター遺伝子の発現を増加させる同定された化合物が、インビボにてその天然に生じるプロモーターからの各遺伝子によってコードされるポリペプチドの発現を増加させることができる、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
前記レポーター遺伝子の発現を減少させる同定された化合物が、インビボにてその天然に生じるプロモーターからの各遺伝子によってコードされるポリペプチドの発現を減少させることができる、請求項５１に記載の方法。
【請求項５４】
前記レポーター遺伝子がβ―ＧＡＬ、ＧＦＰおよびエクオリンから選択される、請求項５１に記載の方法。
【請求項５５】
ＦＫＢＰ２、ＳＮＣＡ、ＥＥＦ１Ａ１、ＶＡＭＰ３、ＳＮＡＰ２５、ＲＩＭＳ３、ＲＡＢ４０Ｂ、ＨＭＧＣＳ１、ＳＣＤ５、ＡＴＰ２Ａ２、ＨＲＭＴ１Ｌ１から選択される遺伝子、およびその転写されたメッセージが配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８または配列番号１９を含むｃＤＮＡ配列を有する遺伝子のプロモーター部分が、前記遺伝子の転写開始部位から５ｋｂ上流（５’）の領域を含む、請求項５１から５４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５６】
前記プロモーターが前記遺伝子の転写開始部位から３ｋｂまたは２ｋｂまたは１ｋｂまたは５００ｂｐ上流（５’）の領域に位置する、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
ＦＫＢＰ２、ＳＮＣＡ、ＥＥＦ１Ａ１、ＶＡＭＰ３、ＳＮＡＰ２５、ＲＩＭＳ３、ＲＡＢ４０Ｂ、ＨＭＧＣＳ１、ＳＣＤ５、ＡＴＰ２Ａ２、ＨＲＭＴ１Ｌ１から選択される遺伝子、およびその転写されたメッセージが配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８または配列番号１９を含むｃＤＮＡ配列を有する遺伝子の調節部分が、前記遺伝子の転写開始部位から２０ｋｂ上流（５’）にある領域を含む、請求項５１から５６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５８】
前記調節部分が前記遺伝子の転写開始部位から１０ｋｂまたは７ｋｂまたは５ｋｂまたは３ｋｂ以上、好ましくは１ｋｂだけ５’上流にある領域に位置する、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
請求項５１から５８のいずれかの方法に従って、ＦＫＢＰ２、ＳＮＣＡ、ＥＥＦ１Ａ１、ＶＡＭＰ３、ＳＮＡＰ２５、ＲＩＭＳ３、ＲＡＢ４０Ｂ、ＨＭＧＣＳ１、ＳＣＤ５、ＡＴＰ２Ａ２、ＨＲＭＴ１Ｌ１から選択される遺伝子、およびその転写されたメッセージが配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８または配列番号１９を含むｃＤＮＡ配列を有する遺伝子の発現を変調する化合物を同定し、および、
前記同定された化合物をＢａｘ媒介アポトーシス用のアッセイでテストすることを含む方法であって、細胞においてＢａｘ媒介アポトーシスを変調する化合物を同定する方法。
【請求項６０】
前記アポトーシスのモデルが酵母細胞モデル、哺乳動物細胞モデル、およびアポトーシスのインビボモデルから選択される、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
前記レポーター遺伝子の発現を増加させる化合物がＢａｘ媒介アポトーシスの阻害剤である、請求項５９または６０に記載の方法。
【請求項６２】
前記レポーター遺伝子の発現を減少させる化合物がＢａｘ媒介アポトーシスのプロモーターである、請求項５９または６０に記載の方法。
【請求項６３】
誘導性プロモーターの制御下で機能的Ｂａｘポリペプチドを発現し、かつＦＫＢＰ２、ＳＮＣＡ、ＥＥＦ１Ａ１、ＶＡＭＰ３、ＳＮＡＰ２５、ＲＩＭＳ３、ＲＡＢ４０Ｂ、ＨＭＧＣＳ１、ＳＣＤ５、ＡＴＰ２Ａ２、ＨＲＭＴ１Ｌ１、および配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８または配列番号１９を含むポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドから選択させるポリペプチドを、その天然に生じるプロモーターおよび／または調節配列の制御下で発現させる細胞を提供し、
前記細胞を、機能的Ｂａｘポリペプチドの発現を誘導する条件下で候補化合物と接触させ、および、
アポトーシスアッセイを行うことを含み、
前記候補化合物と接触しなかった細胞と比較したアポトーシスのレベルの変化は、Ｂａｘ媒介アポトーシスを変調することができる化合物を示す方法であって、Ｂａｘ媒介アポトーシスを変調する化合物を同定する方法。
【請求項６４】
前記細胞が哺乳動物細胞、好ましくはヒト細胞である、請求項６３に記載の方法。
【請求項６５】
前記細胞が脳細胞、好ましくは海馬細胞の一次培養、またはそれに由来する細胞系からのものである、請求項６３または６４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６６】
前記細胞が、誘導性プロモーターの制御下で機能的Ｂａｘポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを含む構築体でトランスフェクトされているヒト細胞系からのものである、請求項６３から６５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６７】
前記細胞が、候補化合物の不在下において、その天然に生じるプロモーターおよび／または調節配列の制御下で、ＦＫＢＰ２、ＳＮＣＡ、ＥＥＦ１Ａ１、ＶＡＭＰ３、ＳＮＡＰ２５、ＲＩＭＳ３、ＲＡＢ４０Ｂ、ＨＭＧＣＳ１、ＳＣＤ５、ＡＴＰ２Ａ２、ＨＲＭＴ１Ｌ１、および配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８または配列番号１９を含むポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドから選択されるポリペプチドを発現する、請求項６３から６６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６８】
前記アポトーシスのモデルが酵母細胞モデル、哺乳動物細胞、およびアポトーシスのインビボモデルから選択される、請求項６３から６７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６９】
ポリペプチドを候補化合物と接触させ；
前記ポリペプチドおよび前記候補化合物を含有する複合体の存在を検出し；および、
場合により、前記ポリペプチドに結合したいずれかの化合物を同定することを含む方法であって、ＦＫＢＰ２、ＳＮＣＡ、ＥＥＦ１Ａ１、ＶＡＭＰ３、ＳＮＡＰ２５、ＲＩＭＳ３、ＲＡＢ４０Ｂ、ＨＭＧＣＳ１、ＳＣＤ５、ＡＴＰ２Ａ２、ＨＲＭＴ１Ｌ１、および配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８または配列番号１９を含むポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドから選択されるポリペプチド、またはその適当な抗アポトーシス誘導体に結合する化合物についてスクリーニングする方法。
【請求項７０】
前記候補化合物はペプチドまたはポリペプチドである、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
高スループットスクリーニングアッセイである、請求項６９または７０に記載の方法。
【請求項７２】
前記同定された化合物が、薬物様化合物、または薬物様化合物の開発のためのリード化合物である、請求項５１から７１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７３】
前記同定された化合物が、アポトーシスのモデルにおいて、および／または適当な病気モデルにおいてテストされる、請求項５１から７２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７４】
前記同定された化合物が修飾されており、前記修飾された化合物がアポトーシスのモデルにおいて、および／または適当な病気モデルにおいてテストされる、請求項５１から７３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７５】
前記同定された化合物を医薬的に許容される組成物に処方することをさらに含む、請求項５１から７４のいずれか一項に記載の方法。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【図１６】

【図１７】

【図１８】

【図１９】

【図２０】

【図２１】

【図２２】

【図２３】

【図２４】

【図２５Ａ】

【図２５Ｂ】

【図２６】

【図２７】

【図２８】

【図２９】

【図３０】

【図３１】

【図３２】

【図３３】

【図３４】

【図３５】

【図３６】

【図３７】

【図３８】

【図３９Ａ】

【図３９Ｂ】

【図４０】

【図４１】

【図４２】

【図４３】

【図４４】

【図４５】

【図４６】

【図４７】

【図４８】

【図４９】

【図５０】

【図５１】

【図５２】

【図５３】

【図５４】

【図５５】

【図５６】

【図５７】

【図５８】

【図５９】

【図６０】

【図６１Ａ】

【図６１Ｂ】

【図６２Ａ】

【図６２Ｂ】

【図６２Ｃ】

【図６２Ｄ】

【図６２Ｅ】

【図６２Ｆ】

【図６３】

【図６４】

【図６５】

【図６６】

【図６７】

【公表番号】特表２００９−５２６５４１（Ｐ２００９−５２６５４１Ａ）
【公表日】平成２１年７月２３日（２００９．７．２３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５５４８４６（Ｐ２００８−５５４８４６）
【出願日】平成１９年２月１５日（２００７．２．１５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＧＢ２００７／０００５４０
【国際公開番号】ＷＯ２００７／０９３８０７
【国際公開日】平成１９年８月２３日（２００７．８．２３）
【出願人】（５０８１９４２９４）モーヴァス　テクノロジー　リミテッド (5)
【Ｆターム（参考）】