ツタの葉抽出物の製造方法
本発明は、抽出剤を用いての、α−ヘデリン含有ツタの葉抽出物の製造方法に関する。この方法において、一定量の乾燥したツタの葉を、まず粉砕し、その後水を加え発酵させ、続いて抽出剤を加えて抽出し、最後に抽出物を乾燥する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抽出剤を用いて、ツタの葉の抽出物、α−ヘデリンを含有する乾燥抽出物を製造する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
今日では、ツタの葉抽出物は、特に該抽出物が鎮痙、去たん、抗閉塞性作用を示すので、気道疾患を治療するために成功裏に用いられている。これらの作用は、特にトリテルペンサポニン類に属するツタの葉抽出物が、治療上重要な成分であることに基づいている。これに関連して、主要なサポニンはバイデスモサイドである（ｂｉｄｅｓｍｏｓｉｄｉｃ）ヘドラコサイドＣ、およびヘドラコサイドＣからエステル加水分解により形成されるα−ヘデリンである。検出された別のサポニンは、ヘドラゲニンである。
【０００３】
ツタの葉からは様々な方法で抽出物を得ることができるため、これら抽出物は様々な効能の度合いを示す。これは、その成分含量が、抽出物を製造するために用いる個々の方法に依存することに起因している。
【０００４】
本出願人は、実施した研究に基づき、α−ヘデリンが特に鎮咳・気管支拡張に対して寄与することを見いだした。α−ヘデリンは、特有の方法でβ−アドレナリン作動性受容体の内在化過程を阻害することが見いだされた。リガンドがβ−アドレナリン作動性受容体と結合することによって、まずアデニル酸シクラーゼ系を活性化し、それにより、例えば気管支系の平滑筋組織が、その結果として弛緩作用を起こすことになる。とりわけ、膜に位置する受容体は、細胞へ内在化することにより弱められて、過剰などんな効果も中和される。
【０００５】
これに関連して、α−ヘデリンはβ−アドレナリン作動性受容体を直接攻撃しないで、その代わりに、受容体／リガンドが細胞へ内在化するのを阻害する。受容体／リガンド複合体の内在化が阻害されると、アデニル酸シクラーゼ系が連続的に活性化され、それによって気管支の平滑筋組織の弛緩が強められる（鎮痙）。
【０００６】
一方、ヘデラコサイドＣおよびヘデラゲニンの物質は、内在化過程を阻害することができなかった。したがって、α−ヘデリンを高含量有する抽出物は、特に医薬として用いるのに適している。
【０００７】
植物原料から乾燥抽出物を製造するために、非常に多くの方法が、特に薬学および医薬製剤の分野で記述されている。
【０００８】
植物原料の乾燥抽出物を製造する方法は、例えばドイツ公開特許ＤＥ １０１ １２１６８ Ａ１に開示されている。この公開特許公報で開示されている方法を用いて、親油性および親水性物質の含量を調整することができると言われている。これに関しては、植物原料を、異なる親油性を有する溶媒で少なくとも２回抽出して、この抽出で得られた抽出物を別々に単離する。その抽出物をそれぞれ別々に乾燥し、それから所望の割合で混合する。このようにして、親油性と親水性物質の含量を調整することができる。その方法は、ツタ（セイヨウキヅタ：Ｈｅｄｅｒａ ｈｅｌｉｘ）の乾燥抽出物を単離するのに適しているとも言われている。
【０００９】
しかしながら、この方法の不利益な点は、２回の抽出を行わなければならず、それによりこの方法を総じて非常に複雑なものにしている。
【００１０】
また、ドイツ公開特許ＤＥ ３０ ２５ ２２３ Ａ１には、ツタの葉抽出物に基づく医薬製剤およびその製造方法が開示されており、その方法によれば、ヘデラサポニンＣを６０％および９０％有するツタの葉抽出物が、アセトンおよびメタノールを用いてそれぞれ製造されている。ヘデラサポニンＣまたはヘデラコサイドＣをα−ヘデリンに変換するために、およびそれによってα−ヘデリンだけを含有する抽出物を得るために、上記公開特許出願では、９０％抽出物が水酸化ナトリウムまたは水酸化カリウムにより加水分解されている。
【００１１】
しかしながら、この方法の不利な点は、ヘデラコサイドＣを得た後にヘデラコサイドまたはヘデラサポニンをα−ヘデリンに変換するために、さらなる工程を必要とする複雑さにある。
【００１２】
Ｇ．Ｗｕｌｆｆ“Ｎｅｕｅｒｅ Ｅｎｔｗｉｃｋｌｕｎｇｅｎ ａｕｆ ｄｅｍ Ｓａｐｏｎｉｎｇｅｂｉｅｔ［サポニン分野における最近の展開］”，Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ａｐｏｔｈｅｋｅｒ Ｚｅｉｔｕｎｇ［ドイツ薬剤師ジャーナル］，１０８（Ｎｏ．２３），１９６８，ｐｐ．７９７−８０８には、新鮮なツタの葉を粉砕し、水中で終夜放置した場合、その後α−ヘデリンのみが見いだされることが開示されている。新鮮な葉に存在する酵素は、この効果の原因となるように保持されている。
【００１３】
しかしながら、医薬産業が乾燥した薬剤を用いるのは、乾燥物が安定であり、より取り扱いやすいからである。酵素活性は、こうした乾燥した薬剤では期待することができない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
したがって、本発明の目的は、少ない工程で長い時間を消費することなく、α−ヘデリンが少なくとも大幅に富化されている抽出物、特に乾燥抽出物を得ることができる方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
冒頭で詳細に記載した方法によると、本発明の目的は、
ａ）一定量の乾燥したツタの葉を粉砕し、
ｂ）水を加えて発酵させ、ヘデラコサイドＣをα−ヘデリンに変換させ、
ｃ）抽出剤を加えることにより抽出し、および
ｄ）必要に応じて、抽出物を乾燥する、
工程を含む方法により達成される。
【００１６】
本発明の目的は、このようにして完全に達成される。
【００１７】
したがって、本発明による方法を用いると、富化された形態で、またはツタの葉に元々存在するヘデラコサイドＣのうちの多くの部分、または必要に応じてその全てを、α−ヘデリンに変換することができる、有効成分としてのα−ヘデリンを含有する抽出物をα−ヘデリンを調製する過程で得ることができる。
【００１８】
本発明者らは、彼ら自身の実験で、乾燥したツタの葉を用いた場合、発酵工程により確実にヘデラコサイドＣがα−ヘデリンにほとんど完全に変換することを証明した。その結果、抽出後、得られた成分をさらに反応させる工程は全く必要としない。それどころか、正確には、中間発酵工程の効果として、要する時間および用いることができる物質の両方に関して、全体的なプロセスをより経済的に実施することができ、先行技術で記述されている方法と比較して、大きな利点を構成するものである。
【００１９】
この場合、「発酵」とは、発酵媒体、例えば液体を、必要に応じて発酵工程に適合した特定のパラメーター、例えば時間および温度で、元の物質に加えるとき、元の物質に存在した成分を分解する、または他の物質へと変換することを意味する。
【００２０】
本発明者らは、水が発酵工程で用いられるのに特に適していることを見いだした。水を加えることにより、ヘデラコサイドＣがα−ヘデリンに変換するプロセスが促進される。
【００２１】
したがって、特に高含量のα−ヘデリンを有する抽出物を製造するために、本発明による方法を用いることができる。高含量のα−ヘデリンを有する抽出物は、気道疾患を治療するのに特に好ましい。その理由は、本出願人による検討により、これに関する原因となる因子が確かにα−ヘデリンであることを確立したからである。
【００２２】
上記のように、ツタの葉に存在するサポニンのうち、特にα−ヘデリンが気管支の鎮痙作用に関与する。したがって、α−ヘデリンの高含量の結果として、この抽出物の活性は、ヘデラコサイドＣの比較的に高含量な抽出物の活性と比較して、著しく向上する。
【００２３】
医薬を製造する際に、乾燥した薬剤は、乾燥させていない製造されたばかりの薬剤よりも、とりわけ安定性に関して取り扱いやすいという利点を有する。
【００２４】
製薬技術の分野において、乾燥した薬用植物および薬用植物の一部分は、定義により、「薬剤」を指す。これに関して、「薬剤」として存在するような薬用植物はそのままの形態または粉砕した形態のどちらでも用いられる。
【００２５】
製薬産業で用いられるような乾燥したツタの葉の場合、α−ヘデリンへの変換が単に水を加えることにより達成されるということは、当業者にとって驚くべきことであると考えられる。
【００２６】
最初に言及したドイツ公開特許ＤＥ ３０ ２５ ２２３ Ａ１の場合では、化学プロセスを活性化するために、加水分解のためのアルカリ金属水酸化物を加える必要があった。
【００２７】
また、ツタの葉は、工程ａ）において、５×５ｍｍ以下に粉砕するのが好ましく、特に２×２ｍｍ以下に粉砕するのが好ましい。
【００２８】
上記寸法にツタの葉を粉砕することは、本発明により製造される抽出物のα−ヘデリン含量に及ぼす効果を発揮するのに特に有利である。これに関して、成分の抽出および発酵は、粉砕された葉の大きさが増大するにつれて、より悪くなることが知見された。
【００２９】
また、本発明による方法において、抽出剤はアルコールと水の混合物が好ましい。
【００３０】
用いられるアルコールは特にＣ2〜Ｃ10アルコール、特にエタノールが好ましい。
【００３１】
エタノールは、実績のある製薬溶媒であり、製薬技術の分野で抽出剤として、種々の方法で用いられる。しかしながら、他のアルコール、例えばプロパノールやイソプロパノールなどもまた用いることができるのは勿論である。すなわち、どんなアルコールでも製薬製造過程における抽出で、水／アルコール混合物として用いることができる。
【００３２】
また、抽出剤における水／アルコールの割合は、１０／９０〜９０／１０（質量比）であることが好ましく、特に水／アルコールの割合が７０／３０であることが好ましい。
【００３３】
本発明においては、種々の割合のアルコール／水が、本発明方法を成功裏に実施するのに適している。これに関して、３０％アルコールを含む抽出剤を用いることが特に適していることが見いだされた。
【００３４】
また、ツタの葉と抽出剤の割合は、１：１〜１：５０であることが好ましく、特に１：１２であるのが好ましい。
【００３５】
本発明方法に関して、処理されるツタの葉と抽出剤との特定の量的な割合を選択することが、抽出物中のα−ヘデリン含量に影響を与える。一方では、上記量的な割合を決定する際、ヘデラコサイドＣは適宜、完全に変換させる必要があることを考慮しなければならない。他方では、用いられる抽出剤の量が極力少ないにもかかわらず、確実に抽出が成功するような方法に、使用すべき抽出剤の量を適合させるべきである。この目的のために、本発明方法においては、様々な量的な割合を用いることができることは、当業者にとって明らかであろう。
【００３６】
本発明方法の一つの実施態様では、工程ｂ）において抽出剤の水画分を加えることが好ましく、特に最初に抽出剤の半分の量の水画分を加えることが好ましい。
【００３７】
この実施態様では、抽出剤のアルコール、そして必要に応じて、さらなる抽出剤を、発酵させた後に加えるだけである。水を加えて発酵させた後に、抽出剤のアルコールを加えることは、プロセス工学的な観点から有利である。その理由は、様々なバッチで用いられるべき抽出剤の量を、それぞれの場合、前もって正確にそして容易に計算し用いることができるからである。工程ｂ）およびｃ）において、個々の容量の水およびアルコールは、それぞれの場合、お互い別々に加えることができ、またはお互いを補完することができる。
【００３８】
これに関連して、発酵のために、抽出剤の半量に含まれている水画分を加えることが特に適しており、これにより、本発明方法はさらに実施可能となる。しかしながら、発酵を促進するために、ひいては、ヘデラコサイドＣからα−ヘデリンへの変換プロセスに効果を与えるために、他の量の水をさらに加えることも排除するものではない。
【００３９】
また、工程ｂ）は１分間〜１２０分間の間で実施するのが好ましく、好ましいのは６０分間である。
【００４０】
本発明方法に関しては、発酵の時間を変えることにより、抽出物のα−ヘデリン含量をさらに調整することができる。
【００４１】
これに関連して、発酵は１０℃〜４０℃の間の温度で実施するのが好ましく、特に３０℃が好ましい。
【００４２】
本発明方法の別の実施態様では、工程ｃ）での抽出は、予備膨潤および浸出（ｐｅｒｃｏｌａｔｉｏｎ）により実施するのが好ましい。
【００４３】
両方の手段とも、当該分野での、特に植物由来の医薬製剤の分野においての常法である。ツタの葉の完全な抽出を達成するのに、予備膨潤および浸出の工程を用いることができる。したがって、水を加えた発酵の後、適当なアルコールを混合物に加え、その後、予備膨潤を行う。発酵および他の抽出工程で先に用いられた特定の抽出剤の残余部を、浸出のために加えるのが好ましい。
【００４４】
これに関連して、予備膨潤は１時間〜３０時間、実施するのが好ましく、特に６時間が好ましい。
【００４５】
本発明方法の開発において、工程ｄ）の乾燥が、薄膜蒸発そして続けて噴霧乾燥により実施するのが好ましい。
【００４６】
上記両方の手段とも従来の乾燥方法であり、薄膜蒸発を用いる薄膜蒸発法は、医薬品の製造に関して穏やかな蒸発法であることが見いだされ、噴霧乾燥法と同様に、経験上、証明されているように、液体製剤を乾燥し、粉末状の最終製品を形成するに用いることができる。そのような粉末状の最終製品は、特に例えば水と容易に再度混合し、用時使用製剤とすることができることによって特徴づけられる。
【００４７】
また、本発明による方法は、ツタの葉抽出物中のα−ヘデリンおよびヘデラコサイドの含量を調整するために用いるのが好ましい。
【００４８】
さらに、α−ヘデリンの含量を選択的に調整するために、本発明方法を用いることができる。これに関して、ツタの葉抽出物中のヘデラコサイドをα−ヘデリンに完全に変換するか、さもなければヘデラコサイドをα−ヘデリンに部分的に変換するためにだけ、本発明方法を用いることができる。
【００４９】
したがって、例えば、まず薬剤の所定の一部を水で発酵させ、それから発酵が終わった後、薬剤の残りの部分を抽出液に加えることができる。このようにして、全てのヘデラコサイドＣがα−ヘデリンに変換したとは限らない乾燥抽出物を、選択的に製造することができる。
【００５０】
また、このことによって、抽出物中のα−ヘデリン含量を特定の方法で調整することができる。このことは、例えば抽出物中のα−ヘデリンの含量が高すぎるべきではなく、むしろある一定のヘデラコサイドＣが依然として存在するのが好ましい。
【００５１】
また、本発明は、本発明方法を用いて製造されたツタの葉抽出物に関する。
【００５２】
α−ヘデリンを高含量有する抽出物は、例えば気道疾患の治療に関して有効である。その理由は、α−ヘデリンが高度に濃縮された形態で存在する場合、α−ヘデリンは高度に濃縮された形態で存在するツタの葉の中で最も活性のある成分であるからである。
【００５３】
また、本発明は、医薬を製造するため、特に気道疾患を治療するための医薬を製造するために、本発明にしたがって調製された抽出物、特に乾燥した抽出物の使用に関する。
【００５４】
本発明は、本発明方法を用いて調製された抽出物を含有する医薬にもまた関する。
【００５５】
これに関して、該医薬は、カプセル、錠剤、糖衣錠、座薬、顆粒、粉剤、溶液、クリーム、乳剤、エアロゾル、軟膏、オイル剤の形態を取ることができ、経口投与の形態が特に好ましい。これに関して、該医薬は、従来医薬の製造で用いられる助剤を含有することができる。多くの適した物質が、例えばＡ．Ｋｉｂｂｅ，Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ（医薬賦形剤ハンドブック），３ｒｄ Ｅｄ．，２０００，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ（アメリカ薬学会と医薬誌）に記載されている。
【００５６】
さらなる効果は、本願明細書の記載および添付図面から明らかである。
【００５７】
上記において言及した特徴、および以下で説明する特徴は、それぞれの場合で特定される組み合わせだけではなく、他の組み合わせで、あるいはそのまま、本発明の範囲から逸脱することなく用いることができる。
【実施例】
【００５８】
当該分野で以前に実施された抽出方法は、次のような多段階工程の抽出方法を含む。すなわち、３０％（質量比）エタノールを、乾燥した薬剤を切り刻んだ後、これに直ちに加える。乾燥抽出物中のヘデラコサイドＣ／α−ヘデリンの割合は、薬剤中のその割合にほぼ対応する。近年製造された抽出物の分析によれば、ヘデラコサイドＣ含量は抽出物全体の約５％〜２０％を示し、一方、α−ヘデリンは抽出物全体の約１〜５％である。したがって、公知の先行技術に基づき、抽出方法においてヘデラコサイドＣがα−ヘデリンに変換することを含むようなプロセスが提供されるべきである。この目的を考慮して、まず第一に、いくつかの予備実験を行った。
【００５９】
＜実施例１＞ 新鮮な未乾燥葉の、徹底的、強力な粉砕、そして引き続く該薬剤の乾燥
薬剤の収穫後の処理およびその後の抽出物に及ぼす影響を検討するために、ツタの葉を新鮮な状態のまま注意深く手で収穫した。全ての葉は同時に同じ場所に集められ、収穫後、いろいろな手順工程に付した。その後、試料を以下のように分析した：乾燥した薬剤約２００ｍｇに対応する１つの試料をミルで粉砕し、４５％（ｖ／ｖ）エタノール３０ｍｌで１時間振とうした。その混合物をクロマトグラフィー管に移した後、新鮮な４５％（ｖ／ｖ）エタノール（最大１００ｍｌ）で浸出させた。異なる試料を得るために、粉砕時間および乾燥時間に関する変法が実施された。
【００６０】
試料１：新鮮な葉を３×３ｍｍの大きさの砕片にカットし、１２時間保存後乾燥のみを行った。
試料２：新鮮な葉を３×３ｍｍの大きさの砕片にカットし、直ちに乾燥した。
試料３：収穫後、裁断していない葉を５０℃で乾燥し、抽出工程の直前に約３×３ｍｍの大きさの砕片になるように粉砕のみを行った。
【００６１】
次の表は、α−ヘデリンおよびヘデラコサイドＣの含量に関するクロマトグラフィーによる検討の記録である：
【００６２】
【表１】
【００６３】
結果はお互いに同程度であり、お互いに有意差はなかったが、それでも新鮮な状態で裁断した葉の場合、α−ヘデリンが多くなるようなヘデラコサイドＣ／α−ヘデリンの割合へとわずかながらも変位しているように見える。
【００６４】
さらなる検討では、ツタの葉を粉砕する程度および含量の測定時に関する様々な変法が実施された。
【００６５】
試料１：新鮮な葉を細かい粉末にし、直ちに４５％（ｖ／ｖ）エタノールで抽出した。
試料２：新鮮な葉を細かい粉末にし、４５分後に４５％ （ｖ／ｖ）エタノールで抽出した。
試料３：収穫後、裁断していない葉を５０℃で乾燥し、抽出工程の直前に粉砕した。
【００６６】
α−ヘデリンおよびヘデラコサイドＣの含量に関するクロマトグラフィーによる検討結果を、次の表２に記録している：
【００６７】
【表２】
【００６８】
表に示すように、徹底的な粉砕によって、ほとんどすべてのヘデラコサイドＣがα−ヘデリンに変換した。
【００６９】
＜実施例２＞ 抽出に先立って乾燥・粉砕した薬剤の発酵
細胞の完全な状態を破壊するために、ヘデラコサイドＣをα−ヘデリンに変換するプロセスを、徹底的な粉砕および水の添加によって促進した。このことは、次の実験により証明された：
【００７０】
前もって測定されたヘデラコサイドＣ７．９４％含量、α−ヘデリン０．５９％含量を有する全乾燥ツタの葉を次のように処理した：
【００７１】
試料１：徹底的に粉砕した葉２００ｍｇに水２０ｍｌを加える。水を減圧留去した後、その混合物を４５％（ｖ／ｖ）エタノールにより通常の方法で抽出する。
試料２：薬剤を試料１と同様に処理するが、水の代わりに３０％（質量比）エタノールを用いる。
【００７２】
α−ヘデリンおよびヘデラコサイドＣの含量に関するクロマトグラフィー検討結果が、次の表３に記録される：
【００７３】
【表３】
【００７４】
データに示すように、粉砕した薬剤に水を加えることによって、ヘデラコサイドＣが完全にα−ヘデリンに変換した。
【００７５】
図１は、ＨＰＬＣによって得られた、試料１（図１ｂ）および試料２（図１ａ）のクロマトグラムを示す。図中、それぞれの場合、ヘデラコサイドＣに対して得られたピークを「ＨＣ」と表示し、α−ヘデリンに対して得られたピークを「α−Ｈ」と表示した。図１ａおよび図１ｂ中のピークを比較して見ると、ヘデラコサイドＣの含量は、α−ヘデリンへの変換により、ほぼ完全に減少しており、このことはヘデラコサイドＣのすべてが変換されたことを示している。
【００７６】
また、３０％（質量比）エタノール中での発酵は、ヘデラコサイドＣの化学分解をもたらすが、この化学分解の程度は明らかに低かった。
【００７７】
他の検討において、薬剤の粉砕の程度および供給される水の量が、変換の程度にとって極めて重要であることが示された：既述の通り水中で発酵した約５×５ｍｍの大きさのツタの葉の砕片を用いた抽出実験によって、ヘデラコサイドＣの消費に応じてα−ヘデリンが富化されることが示された一方、細胞の多くが元のままであるために変換は不完全であった。ほんのわずかに水で噴霧し、細かく粉砕したツタの葉の実験においてもまた、ヘデラコサイドＣの変換は不完全であった。
【００７８】
上記した、ヘデラコサイドＣのα−ヘデリンへの変換という先に得られた知見を、成功する抽出プロトコルへと変換するために、次に示す変法が実施された。
【００７９】
抽出物１：粉砕したツタの葉（５×５ｍｍ）３．０ｇを、３０％（質量比）エタノールで１２回抽出した（通常の抽出）。
抽出物２：粉砕したツタの葉（５×５ｍｍ）３．０ｇを、クロマトグラフィーカラム中、水で覆った。１時間後、排出栓から水を排出した。その後、３０％（質量比）エタノールで１２回抽出した。
抽出物３：１２部の抽出剤（３０％（質量比）エタノール）の水画分を、粉砕したツタの葉（５×５ｍｍ）３．０ｇに加えた。１時間の発酵後、１２部の抽出剤のエタノール画分を加えてツタの葉を抽出した。
【００８０】
クロマトグラフィー分析により得られた結果を、次の表４に示す：
【００８１】
【表４】
【００８２】
これらの抽出において、薬剤は５×５ｍｍにのみ粉砕をしたため、変換は不完全であった。表より、明らかなように、発酵水溶液（抽出物２）の排出により成分の損失が生じた。
【００８３】
上記予備実験の組み合わせにより、乾燥したツタの葉抽出物中のα−ヘデリン含量を調整するために用いることができる、別の抽出方法が開発された。
【００８４】
＜実施例３＞ 調整可能なα−ヘデリン含量を有する、乾燥したツタの葉抽出物を製造するための抽出方法
薬剤（ＤＡＣツタの葉）の一部を、品質および放出性を試験するために品質評価をした後、ミルで広範囲に粉砕し、砕片の大きさが最大２×２ｍｍであることを防護篩いによって保証した。また、篩い分けられた物質は、より大きい粒子や不純物がないか視覚的に検査した。
【００８５】
６部の抽出剤（３０％（質量比）エタノール）の水画分を、粉砕した試料に対して加えた。この混合物を３０℃で６０分間、時々混合・攪拌しながら発酵させた。
【００８６】
その後、６部の抽出剤の９６％エタノール画分を加え、混合物を攪拌して均一にした。
【００８７】
６時間の予備膨潤段階の後、溶出液を分離除去し、その後残っている薬剤を、残りの６部の抽出剤により浸出した。
【００８８】
薬剤の小さな粒子を取り除くために、合わせた溶出液を再度一度ろ過して均一化し、その後５５℃および１５０ｍｂａｒの条件で薄膜蒸発法により厚いペーストになるように乾燥した。このペーストを均一化し、４５〜６０℃で噴霧乾燥により乾燥し、乾燥ツタの葉抽出物を得た。
【００８９】
この製造方法を検討するために、次の抽出物を調製した：すなわち、ヘデラコサイドＣ３．９１％およびα−ヘデリン０．２０％を含有するツタの葉から、従来法（乾燥した試料を粉砕し、続いて直接３０％（質量比）エタノールを加え、抽出する）により抽出物を調製する一方、新規方法により抽出物を調製した。α−ヘデリンおよびヘデラコサイドＣの含量に関するクロマトグラフィーの結果を、次の表５に記録する：
【００９０】
【表５】
【００９１】
表に示すように、新規な抽出方法により、ツタの葉中に存在するヘデラコサイドＣをα−ヘデリンに完全に変換することができた。
【００９２】
ヘデラコサイドＣ換算のサポニンの合計量もまた同じオーダーの大きさであるから、薬剤中の対応するサポニン濃度を知り、約２〜３の富化要因を考慮に入れて、抽出物中のα−ヘデリンの最終含量を推定することができる。
【００９３】
したがって、薬剤中に存在するヘデラコサイドＣの一部をα−ヘデリンに変換するだけのためには、他の全てのパラメーターを一定にしたまま、薬剤の所定の一部を水で発酵させる工程に付すことによってのみ可能である。６０分間の発酵が終わった後、６時間の予備膨潤のために、残りの薬剤およびエタノールを加える。
【００９４】
したがって、発酵工程を導入することで、時間と資源を大量に投入することなく、本発明方法を、乾燥したツタの葉抽出物の成分の範囲を著しく変えるために用いることができる。特にα−ヘデリンの活性に関する多くの刊行物により確認されているように、乾燥抽出物または医薬品中のα−ヘデリン含量に選択的に影響を及ぼして、抽出物の活性に陽性の効果を与えている。
【図面の簡単な説明】
【００９５】
【図１ａ】全く発酵させていない試料のクロマトグラムを示す。
【図１ｂ】発酵させた試料のクロマトグラムを示す。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抽出剤を用いて、ツタの葉の抽出物、α−ヘデリンを含有する乾燥抽出物を製造する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
今日では、ツタの葉抽出物は、特に該抽出物が鎮痙、去たん、抗閉塞性作用を示すので、気道疾患を治療するために成功裏に用いられている。これらの作用は、特にトリテルペンサポニン類に属するツタの葉抽出物が、治療上重要な成分であることに基づいている。これに関連して、主要なサポニンはバイデスモサイドである（ｂｉｄｅｓｍｏｓｉｄｉｃ）ヘドラコサイドＣ、およびヘドラコサイドＣからエステル加水分解により形成されるα−ヘデリンである。検出された別のサポニンは、ヘドラゲニンである。
【０００３】
ツタの葉からは様々な方法で抽出物を得ることができるため、これら抽出物は様々な効能の度合いを示す。これは、その成分含量が、抽出物を製造するために用いる個々の方法に依存することに起因している。
【０００４】
本出願人は、実施した研究に基づき、α−ヘデリンが特に鎮咳・気管支拡張に対して寄与することを見いだした。α−ヘデリンは、特有の方法でβ−アドレナリン作動性受容体の内在化過程を阻害することが見いだされた。リガンドがβ−アドレナリン作動性受容体と結合することによって、まずアデニル酸シクラーゼ系を活性化し、それにより、例えば気管支系の平滑筋組織が、その結果として弛緩作用を起こすことになる。とりわけ、膜に位置する受容体は、細胞へ内在化することにより弱められて、過剰などんな効果も中和される。
【０００５】
これに関連して、α−ヘデリンはβ−アドレナリン作動性受容体を直接攻撃しないで、その代わりに、受容体／リガンドが細胞へ内在化するのを阻害する。受容体／リガンド複合体の内在化が阻害されると、アデニル酸シクラーゼ系が連続的に活性化され、それによって気管支の平滑筋組織の弛緩が強められる（鎮痙）。
【０００６】
一方、ヘデラコサイドＣおよびヘデラゲニンの物質は、内在化過程を阻害することができなかった。したがって、α−ヘデリンを高含量有する抽出物は、特に医薬として用いるのに適している。
【０００７】
植物原料から乾燥抽出物を製造するために、非常に多くの方法が、特に薬学および医薬製剤の分野で記述されている。
【０００８】
植物原料の乾燥抽出物を製造する方法は、例えばドイツ公開特許ＤＥ １０１ １２１６８ Ａ１に開示されている。この公開特許公報で開示されている方法を用いて、親油性および親水性物質の含量を調整することができると言われている。これに関しては、植物原料を、異なる親油性を有する溶媒で少なくとも２回抽出して、この抽出で得られた抽出物を別々に単離する。その抽出物をそれぞれ別々に乾燥し、それから所望の割合で混合する。このようにして、親油性と親水性物質の含量を調整することができる。その方法は、ツタ（セイヨウキヅタ：Ｈｅｄｅｒａ ｈｅｌｉｘ）の乾燥抽出物を単離するのに適しているとも言われている。
【０００９】
しかしながら、この方法の不利益な点は、２回の抽出を行わなければならず、それによりこの方法を総じて非常に複雑なものにしている。
【００１０】
また、ドイツ公開特許ＤＥ ３０ ２５ ２２３ Ａ１には、ツタの葉抽出物に基づく医薬製剤およびその製造方法が開示されており、その方法によれば、ヘデラサポニンＣを６０％および９０％有するツタの葉抽出物が、アセトンおよびメタノールを用いてそれぞれ製造されている。ヘデラサポニンＣまたはヘデラコサイドＣをα−ヘデリンに変換するために、およびそれによってα−ヘデリンだけを含有する抽出物を得るために、上記公開特許出願では、９０％抽出物が水酸化ナトリウムまたは水酸化カリウムにより加水分解されている。
【００１１】
しかしながら、この方法の不利な点は、ヘデラコサイドＣを得た後にヘデラコサイドまたはヘデラサポニンをα−ヘデリンに変換するために、さらなる工程を必要とする複雑さにある。
【００１２】
Ｇ．Ｗｕｌｆｆ“Ｎｅｕｅｒｅ Ｅｎｔｗｉｃｋｌｕｎｇｅｎ ａｕｆ ｄｅｍ Ｓａｐｏｎｉｎｇｅｂｉｅｔ［サポニン分野における最近の展開］”，Ｄｅｕｔｓｃｈｅ Ａｐｏｔｈｅｋｅｒ Ｚｅｉｔｕｎｇ［ドイツ薬剤師ジャーナル］，１０８（Ｎｏ．２３），１９６８，ｐｐ．７９７−８０８には、新鮮なツタの葉を粉砕し、水中で終夜放置した場合、その後α−ヘデリンのみが見いだされることが開示されている。新鮮な葉に存在する酵素は、この効果の原因となるように保持されている。
【００１３】
しかしながら、医薬産業が乾燥した薬剤を用いるのは、乾燥物が安定であり、より取り扱いやすいからである。酵素活性は、こうした乾燥した薬剤では期待することができない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
したがって、本発明の目的は、少ない工程で長い時間を消費することなく、α−ヘデリンが少なくとも大幅に富化されている抽出物、特に乾燥抽出物を得ることができる方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
冒頭で詳細に記載した方法によると、本発明の目的は、
ａ）一定量の乾燥したツタの葉を粉砕し、
ｂ）水を加えて発酵させ、ヘデラコサイドＣをα−ヘデリンに変換させ、
ｃ）抽出剤を加えることにより抽出し、および
ｄ）必要に応じて、抽出物を乾燥する、
工程を含む方法により達成される。
【００１６】
本発明の目的は、このようにして完全に達成される。
【００１７】
したがって、本発明による方法を用いると、富化された形態で、またはツタの葉に元々存在するヘデラコサイドＣのうちの多くの部分、または必要に応じてその全てを、α−ヘデリンに変換することができる、有効成分としてのα−ヘデリンを含有する抽出物をα−ヘデリンを調製する過程で得ることができる。
【００１８】
本発明者らは、彼ら自身の実験で、乾燥したツタの葉を用いた場合、発酵工程により確実にヘデラコサイドＣがα−ヘデリンにほとんど完全に変換することを証明した。その結果、抽出後、得られた成分をさらに反応させる工程は全く必要としない。それどころか、正確には、中間発酵工程の効果として、要する時間および用いることができる物質の両方に関して、全体的なプロセスをより経済的に実施することができ、先行技術で記述されている方法と比較して、大きな利点を構成するものである。
【００１９】
この場合、「発酵」とは、発酵媒体、例えば液体を、必要に応じて発酵工程に適合した特定のパラメーター、例えば時間および温度で、元の物質に加えるとき、元の物質に存在した成分を分解する、または他の物質へと変換することを意味する。
【００２０】
本発明者らは、水が発酵工程で用いられるのに特に適していることを見いだした。水を加えることにより、ヘデラコサイドＣがα−ヘデリンに変換するプロセスが促進される。
【００２１】
したがって、特に高含量のα−ヘデリンを有する抽出物を製造するために、本発明による方法を用いることができる。高含量のα−ヘデリンを有する抽出物は、気道疾患を治療するのに特に好ましい。その理由は、本出願人による検討により、これに関する原因となる因子が確かにα−ヘデリンであることを確立したからである。
【００２２】
上記のように、ツタの葉に存在するサポニンのうち、特にα−ヘデリンが気管支の鎮痙作用に関与する。したがって、α−ヘデリンの高含量の結果として、この抽出物の活性は、ヘデラコサイドＣの比較的に高含量な抽出物の活性と比較して、著しく向上する。
【００２３】
医薬を製造する際に、乾燥した薬剤は、乾燥させていない製造されたばかりの薬剤よりも、とりわけ安定性に関して取り扱いやすいという利点を有する。
【００２４】
製薬技術の分野において、乾燥した薬用植物および薬用植物の一部分は、定義により、「薬剤」を指す。これに関して、「薬剤」として存在するような薬用植物はそのままの形態または粉砕した形態のどちらでも用いられる。
【００２５】
製薬産業で用いられるような乾燥したツタの葉の場合、α−ヘデリンへの変換が単に水を加えることにより達成されるということは、当業者にとって驚くべきことであると考えられる。
【００２６】
最初に言及したドイツ公開特許ＤＥ ３０ ２５ ２２３ Ａ１の場合では、化学プロセスを活性化するために、加水分解のためのアルカリ金属水酸化物を加える必要があった。
【００２７】
また、ツタの葉は、工程ａ）において、５×５ｍｍ以下に粉砕するのが好ましく、特に２×２ｍｍ以下に粉砕するのが好ましい。
【００２８】
上記寸法にツタの葉を粉砕することは、本発明により製造される抽出物のα−ヘデリン含量に及ぼす効果を発揮するのに特に有利である。これに関して、成分の抽出および発酵は、粉砕された葉の大きさが増大するにつれて、より悪くなることが知見された。
【００２９】
また、本発明による方法において、抽出剤はアルコールと水の混合物が好ましい。
【００３０】
用いられるアルコールは特にＣ2〜Ｃ10アルコール、特にエタノールが好ましい。
【００３１】
エタノールは、実績のある製薬溶媒であり、製薬技術の分野で抽出剤として、種々の方法で用いられる。しかしながら、他のアルコール、例えばプロパノールやイソプロパノールなどもまた用いることができるのは勿論である。すなわち、どんなアルコールでも製薬製造過程における抽出で、水／アルコール混合物として用いることができる。
【００３２】
また、抽出剤における水／アルコールの割合は、１０／９０〜９０／１０（質量比）であることが好ましく、特に水／アルコールの割合が７０／３０であることが好ましい。
【００３３】
本発明においては、種々の割合のアルコール／水が、本発明方法を成功裏に実施するのに適している。これに関して、３０％アルコールを含む抽出剤を用いることが特に適していることが見いだされた。
【００３４】
また、ツタの葉と抽出剤の割合は、１：１〜１：５０であることが好ましく、特に１：１２であるのが好ましい。
【００３５】
本発明方法に関して、処理されるツタの葉と抽出剤との特定の量的な割合を選択することが、抽出物中のα−ヘデリン含量に影響を与える。一方では、上記量的な割合を決定する際、ヘデラコサイドＣは適宜、完全に変換させる必要があることを考慮しなければならない。他方では、用いられる抽出剤の量が極力少ないにもかかわらず、確実に抽出が成功するような方法に、使用すべき抽出剤の量を適合させるべきである。この目的のために、本発明方法においては、様々な量的な割合を用いることができることは、当業者にとって明らかであろう。
【００３６】
本発明方法の一つの実施態様では、工程ｂ）において抽出剤の水画分を加えることが好ましく、特に最初に抽出剤の半分の量の水画分を加えることが好ましい。
【００３７】
この実施態様では、抽出剤のアルコール、そして必要に応じて、さらなる抽出剤を、発酵させた後に加えるだけである。水を加えて発酵させた後に、抽出剤のアルコールを加えることは、プロセス工学的な観点から有利である。その理由は、様々なバッチで用いられるべき抽出剤の量を、それぞれの場合、前もって正確にそして容易に計算し用いることができるからである。工程ｂ）およびｃ）において、個々の容量の水およびアルコールは、それぞれの場合、お互い別々に加えることができ、またはお互いを補完することができる。
【００３８】
これに関連して、発酵のために、抽出剤の半量に含まれている水画分を加えることが特に適しており、これにより、本発明方法はさらに実施可能となる。しかしながら、発酵を促進するために、ひいては、ヘデラコサイドＣからα−ヘデリンへの変換プロセスに効果を与えるために、他の量の水をさらに加えることも排除するものではない。
【００３９】
また、工程ｂ）は１分間〜１２０分間の間で実施するのが好ましく、好ましいのは６０分間である。
【００４０】
本発明方法に関しては、発酵の時間を変えることにより、抽出物のα−ヘデリン含量をさらに調整することができる。
【００４１】
これに関連して、発酵は１０℃〜４０℃の間の温度で実施するのが好ましく、特に３０℃が好ましい。
【００４２】
本発明方法の別の実施態様では、工程ｃ）での抽出は、予備膨潤および浸出（ｐｅｒｃｏｌａｔｉｏｎ）により実施するのが好ましい。
【００４３】
両方の手段とも、当該分野での、特に植物由来の医薬製剤の分野においての常法である。ツタの葉の完全な抽出を達成するのに、予備膨潤および浸出の工程を用いることができる。したがって、水を加えた発酵の後、適当なアルコールを混合物に加え、その後、予備膨潤を行う。発酵および他の抽出工程で先に用いられた特定の抽出剤の残余部を、浸出のために加えるのが好ましい。
【００４４】
これに関連して、予備膨潤は１時間〜３０時間、実施するのが好ましく、特に６時間が好ましい。
【００４５】
本発明方法の開発において、工程ｄ）の乾燥が、薄膜蒸発そして続けて噴霧乾燥により実施するのが好ましい。
【００４６】
上記両方の手段とも従来の乾燥方法であり、薄膜蒸発を用いる薄膜蒸発法は、医薬品の製造に関して穏やかな蒸発法であることが見いだされ、噴霧乾燥法と同様に、経験上、証明されているように、液体製剤を乾燥し、粉末状の最終製品を形成するに用いることができる。そのような粉末状の最終製品は、特に例えば水と容易に再度混合し、用時使用製剤とすることができることによって特徴づけられる。
【００４７】
また、本発明による方法は、ツタの葉抽出物中のα−ヘデリンおよびヘデラコサイドの含量を調整するために用いるのが好ましい。
【００４８】
さらに、α−ヘデリンの含量を選択的に調整するために、本発明方法を用いることができる。これに関して、ツタの葉抽出物中のヘデラコサイドをα−ヘデリンに完全に変換するか、さもなければヘデラコサイドをα−ヘデリンに部分的に変換するためにだけ、本発明方法を用いることができる。
【００４９】
したがって、例えば、まず薬剤の所定の一部を水で発酵させ、それから発酵が終わった後、薬剤の残りの部分を抽出液に加えることができる。このようにして、全てのヘデラコサイドＣがα−ヘデリンに変換したとは限らない乾燥抽出物を、選択的に製造することができる。
【００５０】
また、このことによって、抽出物中のα−ヘデリン含量を特定の方法で調整することができる。このことは、例えば抽出物中のα−ヘデリンの含量が高すぎるべきではなく、むしろある一定のヘデラコサイドＣが依然として存在するのが好ましい。
【００５１】
また、本発明は、本発明方法を用いて製造されたツタの葉抽出物に関する。
【００５２】
α−ヘデリンを高含量有する抽出物は、例えば気道疾患の治療に関して有効である。その理由は、α−ヘデリンが高度に濃縮された形態で存在する場合、α−ヘデリンは高度に濃縮された形態で存在するツタの葉の中で最も活性のある成分であるからである。
【００５３】
また、本発明は、医薬を製造するため、特に気道疾患を治療するための医薬を製造するために、本発明にしたがって調製された抽出物、特に乾燥した抽出物の使用に関する。
【００５４】
本発明は、本発明方法を用いて調製された抽出物を含有する医薬にもまた関する。
【００５５】
これに関して、該医薬は、カプセル、錠剤、糖衣錠、座薬、顆粒、粉剤、溶液、クリーム、乳剤、エアロゾル、軟膏、オイル剤の形態を取ることができ、経口投与の形態が特に好ましい。これに関して、該医薬は、従来医薬の製造で用いられる助剤を含有することができる。多くの適した物質が、例えばＡ．Ｋｉｂｂｅ，Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ（医薬賦形剤ハンドブック），３ｒｄ Ｅｄ．，２０００，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｅｓｓ（アメリカ薬学会と医薬誌）に記載されている。
【００５６】
さらなる効果は、本願明細書の記載および添付図面から明らかである。
【００５７】
上記において言及した特徴、および以下で説明する特徴は、それぞれの場合で特定される組み合わせだけではなく、他の組み合わせで、あるいはそのまま、本発明の範囲から逸脱することなく用いることができる。
【実施例】
【００５８】
当該分野で以前に実施された抽出方法は、次のような多段階工程の抽出方法を含む。すなわち、３０％（質量比）エタノールを、乾燥した薬剤を切り刻んだ後、これに直ちに加える。乾燥抽出物中のヘデラコサイドＣ／α−ヘデリンの割合は、薬剤中のその割合にほぼ対応する。近年製造された抽出物の分析によれば、ヘデラコサイドＣ含量は抽出物全体の約５％〜２０％を示し、一方、α−ヘデリンは抽出物全体の約１〜５％である。したがって、公知の先行技術に基づき、抽出方法においてヘデラコサイドＣがα−ヘデリンに変換することを含むようなプロセスが提供されるべきである。この目的を考慮して、まず第一に、いくつかの予備実験を行った。
【００５９】
＜実施例１＞ 新鮮な未乾燥葉の、徹底的、強力な粉砕、そして引き続く該薬剤の乾燥
薬剤の収穫後の処理およびその後の抽出物に及ぼす影響を検討するために、ツタの葉を新鮮な状態のまま注意深く手で収穫した。全ての葉は同時に同じ場所に集められ、収穫後、いろいろな手順工程に付した。その後、試料を以下のように分析した：乾燥した薬剤約２００ｍｇに対応する１つの試料をミルで粉砕し、４５％（ｖ／ｖ）エタノール３０ｍｌで１時間振とうした。その混合物をクロマトグラフィー管に移した後、新鮮な４５％（ｖ／ｖ）エタノール（最大１００ｍｌ）で浸出させた。異なる試料を得るために、粉砕時間および乾燥時間に関する変法が実施された。
【００６０】
試料１：新鮮な葉を３×３ｍｍの大きさの砕片にカットし、１２時間保存後乾燥のみを行った。
試料２：新鮮な葉を３×３ｍｍの大きさの砕片にカットし、直ちに乾燥した。
試料３：収穫後、裁断していない葉を５０℃で乾燥し、抽出工程の直前に約３×３ｍｍの大きさの砕片になるように粉砕のみを行った。
【００６１】
次の表は、α−ヘデリンおよびヘデラコサイドＣの含量に関するクロマトグラフィーによる検討の記録である：
【００６２】
【表１】
【００６３】
結果はお互いに同程度であり、お互いに有意差はなかったが、それでも新鮮な状態で裁断した葉の場合、α−ヘデリンが多くなるようなヘデラコサイドＣ／α−ヘデリンの割合へとわずかながらも変位しているように見える。
【００６４】
さらなる検討では、ツタの葉を粉砕する程度および含量の測定時に関する様々な変法が実施された。
【００６５】
試料１：新鮮な葉を細かい粉末にし、直ちに４５％（ｖ／ｖ）エタノールで抽出した。
試料２：新鮮な葉を細かい粉末にし、４５分後に４５％ （ｖ／ｖ）エタノールで抽出した。
試料３：収穫後、裁断していない葉を５０℃で乾燥し、抽出工程の直前に粉砕した。
【００６６】
α−ヘデリンおよびヘデラコサイドＣの含量に関するクロマトグラフィーによる検討結果を、次の表２に記録している：
【００６７】
【表２】
【００６８】
表に示すように、徹底的な粉砕によって、ほとんどすべてのヘデラコサイドＣがα−ヘデリンに変換した。
【００６９】
＜実施例２＞ 抽出に先立って乾燥・粉砕した薬剤の発酵
細胞の完全な状態を破壊するために、ヘデラコサイドＣをα−ヘデリンに変換するプロセスを、徹底的な粉砕および水の添加によって促進した。このことは、次の実験により証明された：
【００７０】
前もって測定されたヘデラコサイドＣ７．９４％含量、α−ヘデリン０．５９％含量を有する全乾燥ツタの葉を次のように処理した：
【００７１】
試料１：徹底的に粉砕した葉２００ｍｇに水２０ｍｌを加える。水を減圧留去した後、その混合物を４５％（ｖ／ｖ）エタノールにより通常の方法で抽出する。
試料２：薬剤を試料１と同様に処理するが、水の代わりに３０％（質量比）エタノールを用いる。
【００７２】
α−ヘデリンおよびヘデラコサイドＣの含量に関するクロマトグラフィー検討結果が、次の表３に記録される：
【００７３】
【表３】
【００７４】
データに示すように、粉砕した薬剤に水を加えることによって、ヘデラコサイドＣが完全にα−ヘデリンに変換した。
【００７５】
図１は、ＨＰＬＣによって得られた、試料１（図１ｂ）および試料２（図１ａ）のクロマトグラムを示す。図中、それぞれの場合、ヘデラコサイドＣに対して得られたピークを「ＨＣ」と表示し、α−ヘデリンに対して得られたピークを「α−Ｈ」と表示した。図１ａおよび図１ｂ中のピークを比較して見ると、ヘデラコサイドＣの含量は、α−ヘデリンへの変換により、ほぼ完全に減少しており、このことはヘデラコサイドＣのすべてが変換されたことを示している。
【００７６】
また、３０％（質量比）エタノール中での発酵は、ヘデラコサイドＣの化学分解をもたらすが、この化学分解の程度は明らかに低かった。
【００７７】
他の検討において、薬剤の粉砕の程度および供給される水の量が、変換の程度にとって極めて重要であることが示された：既述の通り水中で発酵した約５×５ｍｍの大きさのツタの葉の砕片を用いた抽出実験によって、ヘデラコサイドＣの消費に応じてα−ヘデリンが富化されることが示された一方、細胞の多くが元のままであるために変換は不完全であった。ほんのわずかに水で噴霧し、細かく粉砕したツタの葉の実験においてもまた、ヘデラコサイドＣの変換は不完全であった。
【００７８】
上記した、ヘデラコサイドＣのα−ヘデリンへの変換という先に得られた知見を、成功する抽出プロトコルへと変換するために、次に示す変法が実施された。
【００７９】
抽出物１：粉砕したツタの葉（５×５ｍｍ）３．０ｇを、３０％（質量比）エタノールで１２回抽出した（通常の抽出）。
抽出物２：粉砕したツタの葉（５×５ｍｍ）３．０ｇを、クロマトグラフィーカラム中、水で覆った。１時間後、排出栓から水を排出した。その後、３０％（質量比）エタノールで１２回抽出した。
抽出物３：１２部の抽出剤（３０％（質量比）エタノール）の水画分を、粉砕したツタの葉（５×５ｍｍ）３．０ｇに加えた。１時間の発酵後、１２部の抽出剤のエタノール画分を加えてツタの葉を抽出した。
【００８０】
クロマトグラフィー分析により得られた結果を、次の表４に示す：
【００８１】
【表４】
【００８２】
これらの抽出において、薬剤は５×５ｍｍにのみ粉砕をしたため、変換は不完全であった。表より、明らかなように、発酵水溶液（抽出物２）の排出により成分の損失が生じた。
【００８３】
上記予備実験の組み合わせにより、乾燥したツタの葉抽出物中のα−ヘデリン含量を調整するために用いることができる、別の抽出方法が開発された。
【００８４】
＜実施例３＞ 調整可能なα−ヘデリン含量を有する、乾燥したツタの葉抽出物を製造するための抽出方法
薬剤（ＤＡＣツタの葉）の一部を、品質および放出性を試験するために品質評価をした後、ミルで広範囲に粉砕し、砕片の大きさが最大２×２ｍｍであることを防護篩いによって保証した。また、篩い分けられた物質は、より大きい粒子や不純物がないか視覚的に検査した。
【００８５】
６部の抽出剤（３０％（質量比）エタノール）の水画分を、粉砕した試料に対して加えた。この混合物を３０℃で６０分間、時々混合・攪拌しながら発酵させた。
【００８６】
その後、６部の抽出剤の９６％エタノール画分を加え、混合物を攪拌して均一にした。
【００８７】
６時間の予備膨潤段階の後、溶出液を分離除去し、その後残っている薬剤を、残りの６部の抽出剤により浸出した。
【００８８】
薬剤の小さな粒子を取り除くために、合わせた溶出液を再度一度ろ過して均一化し、その後５５℃および１５０ｍｂａｒの条件で薄膜蒸発法により厚いペーストになるように乾燥した。このペーストを均一化し、４５〜６０℃で噴霧乾燥により乾燥し、乾燥ツタの葉抽出物を得た。
【００８９】
この製造方法を検討するために、次の抽出物を調製した：すなわち、ヘデラコサイドＣ３．９１％およびα−ヘデリン０．２０％を含有するツタの葉から、従来法（乾燥した試料を粉砕し、続いて直接３０％（質量比）エタノールを加え、抽出する）により抽出物を調製する一方、新規方法により抽出物を調製した。α−ヘデリンおよびヘデラコサイドＣの含量に関するクロマトグラフィーの結果を、次の表５に記録する：
【００９０】
【表５】
【００９１】
表に示すように、新規な抽出方法により、ツタの葉中に存在するヘデラコサイドＣをα−ヘデリンに完全に変換することができた。
【００９２】
ヘデラコサイドＣ換算のサポニンの合計量もまた同じオーダーの大きさであるから、薬剤中の対応するサポニン濃度を知り、約２〜３の富化要因を考慮に入れて、抽出物中のα−ヘデリンの最終含量を推定することができる。
【００９３】
したがって、薬剤中に存在するヘデラコサイドＣの一部をα−ヘデリンに変換するだけのためには、他の全てのパラメーターを一定にしたまま、薬剤の所定の一部を水で発酵させる工程に付すことによってのみ可能である。６０分間の発酵が終わった後、６時間の予備膨潤のために、残りの薬剤およびエタノールを加える。
【００９４】
したがって、発酵工程を導入することで、時間と資源を大量に投入することなく、本発明方法を、乾燥したツタの葉抽出物の成分の範囲を著しく変えるために用いることができる。特にα−ヘデリンの活性に関する多くの刊行物により確認されているように、乾燥抽出物または医薬品中のα−ヘデリン含量に選択的に影響を及ぼして、抽出物の活性に陽性の効果を与えている。
【図面の簡単な説明】
【００９５】
【図１ａ】全く発酵させていない試料のクロマトグラムを示す。
【図１ｂ】発酵させた試料のクロマトグラムを示す。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の工程：
ａ）一定量の乾燥したツタの葉を粉砕し、
ｂ）水を加えて発酵させ、ヘデラコサイドＣをα−ヘデリンに変換させ、
ｃ）抽出剤を加えることにより抽出し、そして
ｄ）必要に応じて、抽出物を乾燥する、
ことを含むことを特徴とする、抽出剤を用いた、α−ヘデリンを含有するツタの葉抽出物の製造方法。
【請求項２】
工程ａ）において、ツタの葉が５×５ｍｍ以下に粉砕されることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ツタの葉が、２×２ｍｍ以下に粉砕されることを特徴とする、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
抽出剤として、アルコール画分および水画分の混合物を用いることを特徴とする、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
抽出剤に用いられるアルコールがＣ2〜Ｃ10アルコールであることを特徴とする、請求項１〜４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
用いられるアルコールが９６％エタノールであることを特徴とする、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
抽出剤における水画分／アルコール画分の割合が、１０／９０〜９０／１０（質量比）であることを特徴とする、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
水／アルコールの割合が、７０／３０であることを特徴とする、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
抽出剤に対するツタの葉の割合が１：１〜１：５０であることを特徴とする、請求項１〜８のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
抽出剤に対するツタの葉の割合が１：１２であることを特徴とする、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
工程ｂ）において、抽出剤の水画分を用いることを特徴とする、請求項１〜９のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
工程ｂ）において、抽出剤全量の半分からの水画分を加えることを特徴とする、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
６部の抽出剤からの水画分を加えることを特徴とする、請求項１０〜１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
工程ｂ）を１分〜１２０分間実施することを特徴とする、請求項１〜１３のいずれかに記載の方法。
【請求項１５】
工程ｂ）を６０分間実施することを特徴とする、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
工程ｂ）を１０〜４０℃の温度で実施することを特徴とする、請求項１〜１５のいずれかに記載の方法。
【請求項１７】
工程ｂ）を３０℃の温度で実施することを特徴とする、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
工程ｃ）における抽出を、予備膨潤および浸出により実施することを特徴とする、請求項１〜１７のいずれかに記載の方法。
【請求項１９】
予備膨潤を１時間〜３０時間実施することを特徴とする、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
予備膨潤を６時間実施することを特徴とする、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
工程ｄ）の乾燥を、薄膜蒸発およびそれに続く噴霧乾燥により実施することを特徴とする、請求項１〜２０のいずれかに記載の方法。
【請求項２２】
ツタの葉抽出物中のα−ヘデリンおよびヘデラコサイドの含量を調整するための、請求項１〜２１のいずれかに記載の方法。
【請求項２３】
請求項１〜２２のいずれかに記載の方法を用いて製造されることを特徴とする、ツタの葉抽出物。
【請求項２４】
医薬を製造するための、請求項２３に記載の抽出物の使用。
【請求項２５】
医薬が気道疾患を治療するために用いられることを特徴とする、請求項２４に記載の使用。
【請求項２６】
請求項２５に記載の抽出物を含有する医薬。
【請求項１】
次の工程：
ａ）一定量の乾燥したツタの葉を粉砕し、
ｂ）水を加えて発酵させ、ヘデラコサイドＣをα−ヘデリンに変換させ、
ｃ）抽出剤を加えることにより抽出し、そして
ｄ）必要に応じて、抽出物を乾燥する、
ことを含むことを特徴とする、抽出剤を用いた、α−ヘデリンを含有するツタの葉抽出物の製造方法。
【請求項２】
工程ａ）において、ツタの葉が５×５ｍｍ以下に粉砕されることを特徴とする、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ツタの葉が、２×２ｍｍ以下に粉砕されることを特徴とする、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
抽出剤として、アルコール画分および水画分の混合物を用いることを特徴とする、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
抽出剤に用いられるアルコールがＣ2〜Ｃ10アルコールであることを特徴とする、請求項１〜４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
用いられるアルコールが９６％エタノールであることを特徴とする、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
抽出剤における水画分／アルコール画分の割合が、１０／９０〜９０／１０（質量比）であることを特徴とする、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
水／アルコールの割合が、７０／３０であることを特徴とする、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
抽出剤に対するツタの葉の割合が１：１〜１：５０であることを特徴とする、請求項１〜８のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
抽出剤に対するツタの葉の割合が１：１２であることを特徴とする、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
工程ｂ）において、抽出剤の水画分を用いることを特徴とする、請求項１〜９のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
工程ｂ）において、抽出剤全量の半分からの水画分を加えることを特徴とする、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
６部の抽出剤からの水画分を加えることを特徴とする、請求項１０〜１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
工程ｂ）を１分〜１２０分間実施することを特徴とする、請求項１〜１３のいずれかに記載の方法。
【請求項１５】
工程ｂ）を６０分間実施することを特徴とする、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
工程ｂ）を１０〜４０℃の温度で実施することを特徴とする、請求項１〜１５のいずれかに記載の方法。
【請求項１７】
工程ｂ）を３０℃の温度で実施することを特徴とする、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
工程ｃ）における抽出を、予備膨潤および浸出により実施することを特徴とする、請求項１〜１７のいずれかに記載の方法。
【請求項１９】
予備膨潤を１時間〜３０時間実施することを特徴とする、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
予備膨潤を６時間実施することを特徴とする、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
工程ｄ）の乾燥を、薄膜蒸発およびそれに続く噴霧乾燥により実施することを特徴とする、請求項１〜２０のいずれかに記載の方法。
【請求項２２】
ツタの葉抽出物中のα−ヘデリンおよびヘデラコサイドの含量を調整するための、請求項１〜２１のいずれかに記載の方法。
【請求項２３】
請求項１〜２２のいずれかに記載の方法を用いて製造されることを特徴とする、ツタの葉抽出物。
【請求項２４】
医薬を製造するための、請求項２３に記載の抽出物の使用。
【請求項２５】
医薬が気道疾患を治療するために用いられることを特徴とする、請求項２４に記載の使用。
【請求項２６】
請求項２５に記載の抽出物を含有する医薬。
【図１ａ】
【図１ｂ】
【図１ｂ】
【公表番号】特表２００６−５２２０５１（Ｐ２００６−５２２０５１Ａ）
【公表日】平成１８年９月２８日（２００６．９．２８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５０４９３６（Ｐ２００６−５０４９３６）
【出願日】平成１６年３月３１日（２００４．３．３１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００４／００３４２０
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０８７１８３
【国際公開日】平成１６年１０月１４日（２００４．１０．１４）
【出願人】（５０５３６４５００）エンゲルハルト アルツナイミッテル ゲーエムベーハー アンド コー ケイジー (3)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１８年９月２８日（２００６．９．２８）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年３月３１日（２００４．３．３１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００４／００３４２０
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０８７１８３
【国際公開日】平成１６年１０月１４日（２００４．１０．１４）
【出願人】（５０５３６４５００）エンゲルハルト アルツナイミッテル ゲーエムベーハー アンド コー ケイジー (3)
【Ｆターム（参考）】
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