バチルスサブティリス由来の変異体アルファアミラーゼおよびその使用方法
【課題】デンプンから工業生産物をつくるための改善された方法の必要性が当該分野に存在する。特に、糖化工程における改善された効率の必要性が存在する。
【解決手段】バチルスサブティリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）由来のアルファアミラーゼ（ＡｍｙＥ）、その変異体、同をコードする核酸および該核酸を含む宿主細胞が提供される。ＡｍｙＥまたはその変異体を使用する方法、たとえばデンプンの液化および／または糖化が開示される。かかる方法は、エタノールの生産または高フルクトースコーンシロップの生産に有用な糖をもたらすことができる。ある場合には、該アミラーゼは低ｐＨでカルシウムの不存在下および／またはグルコアミラーゼの不存在下に用いられることができる。
【解決手段】バチルスサブティリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）由来のアルファアミラーゼ（ＡｍｙＥ）、その変異体、同をコードする核酸および該核酸を含む宿主細胞が提供される。ＡｍｙＥまたはその変異体を使用する方法、たとえばデンプンの液化および／または糖化が開示される。かかる方法は、エタノールの生産または高フルクトースコーンシロップの生産に有用な糖をもたらすことができる。ある場合には、該アミラーゼは低ｐＨでカルシウムの不存在下および／またはグルコアミラーゼの不存在下に用いられることができる。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
デンプン転化方法においてデンプンを液化しおよび糖化する方法であって、
デンプン基質をＡｍｙＥポリペプチドに接触させて反応混合物を形成し、該反応混合物中で該デンプン基質を液化しおよび糖化してグルコースを生産する工程を含み、
該液化および糖化がｐＨの調整なしに同じ反応混合物中で実施される、方法。
【請求項２】
糖化が、グルコアミラーゼ活性を有するさらなるポリペプチドの不存在下に実施される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
液化が、グルコアミラーゼポリペプチドの活性に適したｐＨにおいて実施される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
ｐＨが５．０以下である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
ｐＨが４．５以下である、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
ｐＨが４．０以下である、請求項３に記載の方法。
【請求項７】
グルコアミラーゼ活性を有するさらなるポリペプチドが、デンプン基質をＡｍｙＥポリペプチドに接触させる前に、反応混合物に添加される、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
グルコアミラーゼ活性を有するさらなるポリペプチドが、デンプン基質をＡｍｙＥポリペプチドに接触させた後に、反応混合物に添加される、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
グルコアミラーゼ活性を有するさらなるポリペプチドが、デンプン基質をＡｍｙＥポリペプチドに接触させるのと同時に、反応混合物に添加される、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
液化および糖化によって生産されたグルコースを発酵させてアルコールを生産する工程をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
アルコールがエタノールである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
糖化と発酵との少なくとも一部が、同じ反応混合物中で同時に行われる、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
液化および糖化によって生産されたグルコースをグルコースイソメラーゼに接触させてフルクトースを生産する工程をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
外因性カルシウムが反応混合物に添加されない、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
反応混合物中のカルシウム濃度が約８ｐｐｍ未満である、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
液化および糖化によって生産されたグルコースをグルコースイソメラーゼに接触させて、反応混合物中のカルシウムの量を低減することなく、フルクトースを生産する工程をさらに含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
ＡｍｙＥポリペプチドが、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
ＡｍｙＥポリペプチドが、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
ＡｍｙＥポリペプチドが、Ｃ末端デンプン結合ドメインの欠失を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
ＡｍｙＥポリペプチドが、α−アミラーゼ活性および酵素性能を改善する少なくとも１の変えられた特性を有する変異体ポリペプチドであって、該変異体ポリペプチドが、
ＡｍｙＥ（配列番号１）またはＡｍｙＥの切断変異体（配列番号２）から選択された親α−アミラーゼポリペプチドと少なくとも６０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列、ならびに
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 5 243, 244, 245, 246, 247, 248, 249, 250, 251, 252, 253, 254, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263, 264, 265, 267, 268, 270, 271, 272, 273, 274, 275, 276, 277, 278, 279, 280, 281, 282, 283, 284, 285, 286, 287, 288, 289, 290, 291, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 298, 299, 300, 301, 302, 303, 304, 305, 307, 308, 309, 310, 311, 312, 313, 314, 315, 316, 317, 318, 319, 320, 321, 322, 323, 324, 325, 326, 327, 328, 329, 330, 331, 332, 333, 334, 335, 336, 337, 338, 339, 340, 341, 342, 343, 344, 345, 346, 347, 348, 349, 350, 351, 352, 353, 354, 355, 356, 357, 358, 359, 360, 361, 362, 363, 364, 365, 366, 367, 368, 369, 370, 371, 372, 373, 374, 375, 376, 377, 378, 379, 380, 381, 382, 383, 384, 385, 386, 387, 388, 389, 390, 391, 392, 393, 394, 395, 396, 397, 398, 399, 400, 401, 402, 403, 404, 405, 406, 407, 408, 409, 410, 411, 412, 413, 414, 415, 416, 417, 418, 419, 420, 421, 422, 423, 424, および 425からなる群から選択された１以上の位置における修飾を含み、
該修飾が酵素性能を改善する少なくとも１の特性について１．０超の性能指数（ＰＩ）を有する変異体ポリペプチドを生成する、変異体ポリペプチドである、請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
修飾が、IA, 1C, 1D, 1E, 1F, 1G, 1H, 1K, 1M, 1N, 1Q, 1R, 1S, 1T, 1V, 1W, 1Y, 2A, 2C, 2D, 2E, 2F, 2G, 2H, 2I, 2K, 2L, 2M, 2N, 2P, 2Q, 2R, 2S, 2V, 2W, 2Y, 3C, 3D, 3E, 3F, 3G, 3H, 3I, 3K, 3L, 3M, 3N, 3P, 3Q, 3R, 3S, 3V, 3W, 3Y, 4C, 4D, 4E, 4F, 4G, 4H, 4I, 4K, 4L, 4M, 4N, 4Q, 4S, 4T, 4V, 4W, 4Y, 5A, 5C, 5D, 5E, 5F, 5G, 5H, 5I, 5K, 5L, 5N, 5R, 5V, 5W, 5Y, 6C, 6D, 6E, 6H, 6K, 6L, 6M, 6N, 6P, 6Q, 6R, 6S, 6T, 6V, 6W, 7A, 7C, 7D, 7E, 7F, 7G, 7H, 7I, 7L, 7M, 7N, 7P, 7Q, 7R, 7S, 7T, 7W, 7Y, 8A, 8C, 8E, 8F, 8G, 8H, 8I, 8K, 8L, 8M, 8N, 8P, 8Q, 8R, 8T, 8V, 8W, 8Y, 9A, 9C, 9D, 9E, 9F, 9H, 9I, 9K, 9M, 9N, 9P, 9R, 9S, 9T, 9V, 9W, 9Y, 1OA, 10I, 1OL, 1OM, ION, 1OP, 1OQ, 1OS, 10V, 11A, 11F, 11G, 11H, 11M, 11S, 11V, 11W, 11Y, 12I, 12M, 12V, 13A, 13C, 13D, 13E, 13F, 13G, 13I, 13L, 13M, 13Q, 13T, 13V, 13W, 13Y, 14C, 14F, 14G, 14M, 14N, 14S, 14T, 14V, 15A, 15F, 16A, 16D, 16E, 16F, 16G, 16H, 16I, 16L, 16M, 16Q, 16S, 16T, 16V, 17A, 17F, 17I, 17M, 17Q, 17Y, 18A, 18C, 18D, 18E, 18G, 18H, 18M, 18N, 18Q, 18R, 18T, 19A, 19C, 19H, 19L, 19M, 19N, 19S, 19W, 19Y, 2OA, 2OC, 2OD, 2OF, 2OG, 2OH, 20I, 2OK, 2OL, 2OM, 2OP, 2OQ, 2OR, 2OS, 2OT, 20V, 2OW, 2OY, 21A, 21C, 21D, 21E, 21H, 21I, 21K, 21L, 21M, 21N, 21Q, 21R, 21S, 21V, 22I, 22M, 22Q, 22S, 22T, 22V, 23A, 23C, 23D, 23E, 23F, 23G, 23H, 23I, 23L, 23M, 23N, 23R, 23S, 23T, 23V, 23W, 23Y, 24A, 24C, 24D, 24F, 24G, 24L, 24N, 24P, 24Q, 24R, 24S, 24T, 24V, 24Y, 25A, 25C, 25D, 25E, 25F, 25G, 25H, 25I, 25K, 25L, 25R, 25S, 25T, 25V, 25W, 25Y, 26A, 26F, 26I, 26L, 26V, 27A, 27C, 27D, 27E, 27F, 27G, 27H, 27I, 27L, 27M, 27N, 27P, 27Q, 27R, 27S, 27T, 27V, 27W, 27Y, 28A, 28C, 28F, 28G, 28H, 28I, 28K, 28L, 28M, 28N, 28P, 28Q, 28R, 28S, 28T, 28V, 28W, 28Y, 29A, 29C, 29F, 29L, 29M, 29T, 29V, 3OA, 3OC, 3OD, 3OE, 3OF, 3OG, 30I, 3OK, 3OL, 3OM, 3ON, 3OP, 3OQ, 3OR, 3OS, 3OT, 30V, 3OW, 3OY, 31A, 31C, 31E, 31F, 31G, 31H, 31I, 31K, 31L, 31M, 31N, 31Q, 31S, 31T, 31V, 31W, 31Y, 32D, 32F, 32G, 32H, 32K, 32L, 32M, 32Q, 32S, 32T, 32V, 32Y, 33A, 33C, 33D, 33E, 33F, 33H, 33I, 33K, 33L, 33M, 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404E, 404F, 404G, 404H, 404I, 404L, 404M, 404N, 404P, 404R, 404T, 404V, 404W, 404Y, 405E, 405F, 405G, 405H, 405I, 405K, 405Q, 405S, 405T, 406D, 406F, 406L, 406T, 406Y, 407A, 407C, 407E, 407F, 407G, 407H, 407I, 407K, 407M, 407N, 407P, 407Q, 407R, 407S, 407T, 407V, 407W, 407Y, 408A, 408D, 408E, 408F, 408H, 408I, 408K, 408N, 408P, 408Q, 408S, 408T, 408V, 408Y, 409A, 409C, 409D, 409E, 409F, 409H, 409I, 409L, 409M, 409Q, 409R, 409T, 409V, 409W, 409Y, 410F, 410G, 410I, 410K, 410Q, 410S, 410T, 410V, 410W, 410Y, 411A, 411D, 411E, 411F, 411G, 411H, 411I, 411L, 411M, 411N, 411Q, 411R, 411S, 411V, 411W, 411Y, 412A, 412D, 412E, 412H, 412I, 412K, 412L, 412M, 412N, 412R, 412S, 412T, 412V, 412Y, 413C, 413E, 413F, 413G, 413I, 413L, 413M, 413N, 413P, 413R, 413S, 413V, 413W, 413Y, 414A, 414C, 414E, 414F, 414G, 414H, 414L, 414M, 414N, 414P, 414Q, 414T, 414V, 414W, 415D, 415E, 415F, 415G, 415H, 415I, 415K, 415P, 415Q, 415R, 415V, 415W, 416F, 416I, 416L, 416P, 416Q, 416R, 416T, 416V, 416Y, 417A, 417C, 417D, 417F, 417G, 417H, 417I, 417K, 417M, 417N, 417P, 417Q, 417S, 417W, 417Y, 418C, 418D, 418E, 418F, 418H, 418I, 418K, 418N, 418Q, 418R, 418T, 418W, 418Y, 419C, 419D, 419E, 419F, 419G, 419H, 419I, 419L, 419P, 419Q, 419S, 419T, 419Y, 420D, 420E, 420F, 420G, 420H, 420I, 420K, 420L, 420M, 420N, 420Q, 420R, 420S, 420T, 420V, 420W, 420Y, 421A, 421C, 421G, 421I, 421L, 421M, 421S, 421T, 422A, 422F, 422G, 422H, 422I, 422M, 422N, 422Q, 422S, 422V, 422W, 422Y, 423A, 423D, 423G, 423H, 423I, 423K, 423P, 423Q, 423R, 423T, 423V, 423W, 424D, 424E, 424G, 424I, 424K, 424M, 424N, 424Q, 424R, 424S, 424T, 424V, 424W, 424Y, 425A, 4251, 425K, 425L, 425M, 425S, 425T, 425V, 425 W, および 425Yからなる群から選択された１以上の位置における、親ポリペプチド中に存在する１以上のアミノ酸残基を異なるアミノ酸残基に変える置換である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
修飾が位置１５３に存在するアミノ酸残基をＮ、ＫまたはＦに変える置換であり、変異体ポリペプチドが親ポリペプチドと比較してマルトースおよびマルトヘプタオース基質をグルコースに転化する能力の向上を示す、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
修飾が、Ｌ１４２Ｆ、Ｌ１４２Ｇ、Ｌ１４２Ｑ、Ｌ１４２Ｓ、Ｌ１４２Ｗ、Ｌ１４２Ｙ、Ａ２１４Ｉ、Ａ２１４Ｖ、Ｓ２４５Ｙ、Ｑ１２６Ｆ、Ｑ１２６Ｌ、Ｑ１２６Ｐ、Ｑ１２６Ｖ、Ｓ１３１ＬおよびＳ２４５Ｉからなる群から選択された置換である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２４】
修飾が、Ｗ６０Ｌ、Ｗ６０Ｍ、Ｗ６０Ｎ、Ｉ１００Ｆ、Ｉ１００Ｍ、Ｓ１０５Ｍ、Ｓ１０５Ｗ、Ｇ２０７Ａ、Ｔ２７０Ａ、Ｔ２７０Ｅ、Ｔ２７０Ｌ、Ｔ２７０Ｎ、Ｔ２７０ＶおよびＴ２７９Ａからなる群から選択された置換である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２５】
ＡｍｙＥポリペプチドを含んでいない同等のパン生地に観察される老化の量と比較して、老化を低減するのに十分な量のＡｍｙＥポリペプチドをパン生地に添加する工程を含む、パンの老化を低減する方法。
【請求項１】
デンプン転化方法においてデンプンを液化しおよび糖化する方法であって、
デンプン基質をＡｍｙＥポリペプチドに接触させて反応混合物を形成し、該反応混合物中で該デンプン基質を液化しおよび糖化してグルコースを生産する工程を含み、
該液化および糖化がｐＨの調整なしに同じ反応混合物中で実施される、方法。
【請求項２】
糖化が、グルコアミラーゼ活性を有するさらなるポリペプチドの不存在下に実施される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
液化が、グルコアミラーゼポリペプチドの活性に適したｐＨにおいて実施される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
ｐＨが５．０以下である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
ｐＨが４．５以下である、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
ｐＨが４．０以下である、請求項３に記載の方法。
【請求項７】
グルコアミラーゼ活性を有するさらなるポリペプチドが、デンプン基質をＡｍｙＥポリペプチドに接触させる前に、反応混合物に添加される、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
グルコアミラーゼ活性を有するさらなるポリペプチドが、デンプン基質をＡｍｙＥポリペプチドに接触させた後に、反応混合物に添加される、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
グルコアミラーゼ活性を有するさらなるポリペプチドが、デンプン基質をＡｍｙＥポリペプチドに接触させるのと同時に、反応混合物に添加される、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
液化および糖化によって生産されたグルコースを発酵させてアルコールを生産する工程をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
アルコールがエタノールである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
糖化と発酵との少なくとも一部が、同じ反応混合物中で同時に行われる、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
液化および糖化によって生産されたグルコースをグルコースイソメラーゼに接触させてフルクトースを生産する工程をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
外因性カルシウムが反応混合物に添加されない、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
反応混合物中のカルシウム濃度が約８ｐｐｍ未満である、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
液化および糖化によって生産されたグルコースをグルコースイソメラーゼに接触させて、反応混合物中のカルシウムの量を低減することなく、フルクトースを生産する工程をさらに含む、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
ＡｍｙＥポリペプチドが、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
ＡｍｙＥポリペプチドが、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性を有する、請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
ＡｍｙＥポリペプチドが、Ｃ末端デンプン結合ドメインの欠失を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
ＡｍｙＥポリペプチドが、α−アミラーゼ活性および酵素性能を改善する少なくとも１の変えられた特性を有する変異体ポリペプチドであって、該変異体ポリペプチドが、
ＡｍｙＥ（配列番号１）またはＡｍｙＥの切断変異体（配列番号２）から選択された親α−アミラーゼポリペプチドと少なくとも６０％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列、ならびに
1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 121, 122, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 134, 135, 136, 137, 138, 139, 140, 141, 142, 143, 144, 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 193, 194, 195, 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221, 222, 223, 224, 225, 226, 227, 228, 229, 230, 231, 232, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 239, 240, 241, 242, 5 243, 244, 245, 246, 247, 248, 249, 250, 251, 252, 253, 254, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263, 264, 265, 267, 268, 270, 271, 272, 273, 274, 275, 276, 277, 278, 279, 280, 281, 282, 283, 284, 285, 286, 287, 288, 289, 290, 291, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 298, 299, 300, 301, 302, 303, 304, 305, 307, 308, 309, 310, 311, 312, 313, 314, 315, 316, 317, 318, 319, 320, 321, 322, 323, 324, 325, 326, 327, 328, 329, 330, 331, 332, 333, 334, 335, 336, 337, 338, 339, 340, 341, 342, 343, 344, 345, 346, 347, 348, 349, 350, 351, 352, 353, 354, 355, 356, 357, 358, 359, 360, 361, 362, 363, 364, 365, 366, 367, 368, 369, 370, 371, 372, 373, 374, 375, 376, 377, 378, 379, 380, 381, 382, 383, 384, 385, 386, 387, 388, 389, 390, 391, 392, 393, 394, 395, 396, 397, 398, 399, 400, 401, 402, 403, 404, 405, 406, 407, 408, 409, 410, 411, 412, 413, 414, 415, 416, 417, 418, 419, 420, 421, 422, 423, 424, および 425からなる群から選択された１以上の位置における修飾を含み、
該修飾が酵素性能を改善する少なくとも１の特性について１．０超の性能指数（ＰＩ）を有する変異体ポリペプチドを生成する、変異体ポリペプチドである、請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
修飾が、IA, 1C, 1D, 1E, 1F, 1G, 1H, 1K, 1M, 1N, 1Q, 1R, 1S, 1T, 1V, 1W, 1Y, 2A, 2C, 2D, 2E, 2F, 2G, 2H, 2I, 2K, 2L, 2M, 2N, 2P, 2Q, 2R, 2S, 2V, 2W, 2Y, 3C, 3D, 3E, 3F, 3G, 3H, 3I, 3K, 3L, 3M, 3N, 3P, 3Q, 3R, 3S, 3V, 3W, 3Y, 4C, 4D, 4E, 4F, 4G, 4H, 4I, 4K, 4L, 4M, 4N, 4Q, 4S, 4T, 4V, 4W, 4Y, 5A, 5C, 5D, 5E, 5F, 5G, 5H, 5I, 5K, 5L, 5N, 5R, 5V, 5W, 5Y, 6C, 6D, 6E, 6H, 6K, 6L, 6M, 6N, 6P, 6Q, 6R, 6S, 6T, 6V, 6W, 7A, 7C, 7D, 7E, 7F, 7G, 7H, 7I, 7L, 7M, 7N, 7P, 7Q, 7R, 7S, 7T, 7W, 7Y, 8A, 8C, 8E, 8F, 8G, 8H, 8I, 8K, 8L, 8M, 8N, 8P, 8Q, 8R, 8T, 8V, 8W, 8Y, 9A, 9C, 9D, 9E, 9F, 9H, 9I, 9K, 9M, 9N, 9P, 9R, 9S, 9T, 9V, 9W, 9Y, 1OA, 10I, 1OL, 1OM, ION, 1OP, 1OQ, 1OS, 10V, 11A, 11F, 11G, 11H, 11M, 11S, 11V, 11W, 11Y, 12I, 12M, 12V, 13A, 13C, 13D, 13E, 13F, 13G, 13I, 13L, 13M, 13Q, 13T, 13V, 13W, 13Y, 14C, 14F, 14G, 14M, 14N, 14S, 14T, 14V, 15A, 15F, 16A, 16D, 16E, 16F, 16G, 16H, 16I, 16L, 16M, 16Q, 16S, 16T, 16V, 17A, 17F, 17I, 17M, 17Q, 17Y, 18A, 18C, 18D, 18E, 18G, 18H, 18M, 18N, 18Q, 18R, 18T, 19A, 19C, 19H, 19L, 19M, 19N, 19S, 19W, 19Y, 2OA, 2OC, 2OD, 2OF, 2OG, 2OH, 20I, 2OK, 2OL, 2OM, 2OP, 2OQ, 2OR, 2OS, 2OT, 20V, 2OW, 2OY, 21A, 21C, 21D, 21E, 21H, 21I, 21K, 21L, 21M, 21N, 21Q, 21R, 21S, 21V, 22I, 22M, 22Q, 22S, 22T, 22V, 23A, 23C, 23D, 23E, 23F, 23G, 23H, 23I, 23L, 23M, 23N, 23R, 23S, 23T, 23V, 23W, 23Y, 24A, 24C, 24D, 24F, 24G, 24L, 24N, 24P, 24Q, 24R, 24S, 24T, 24V, 24Y, 25A, 25C, 25D, 25E, 25F, 25G, 25H, 25I, 25K, 25L, 25R, 25S, 25T, 25V, 25W, 25Y, 26A, 26F, 26I, 26L, 26V, 27A, 27C, 27D, 27E, 27F, 27G, 27H, 27I, 27L, 27M, 27N, 27P, 27Q, 27R, 27S, 27T, 27V, 27W, 27Y, 28A, 28C, 28F, 28G, 28H, 28I, 28K, 28L, 28M, 28N, 28P, 28Q, 28R, 28S, 28T, 28V, 28W, 28Y, 29A, 29C, 29F, 29L, 29M, 29T, 29V, 3OA, 3OC, 3OD, 3OE, 3OF, 3OG, 30I, 3OK, 3OL, 3OM, 3ON, 3OP, 3OQ, 3OR, 3OS, 3OT, 30V, 3OW, 3OY, 31A, 31C, 31E, 31F, 31G, 31H, 31I, 31K, 31L, 31M, 31N, 31Q, 31S, 31T, 31V, 31W, 31Y, 32D, 32F, 32G, 32H, 32K, 32L, 32M, 32Q, 32S, 32T, 32V, 32Y, 33A, 33C, 33D, 33E, 33F, 33H, 33I, 33K, 33L, 33M, 33P, 33Q, 33S, 33T, 33W, 33Y, 34A, 34F, 34I, 34P, 34W, 35A, 35C, 35F, 35G, 35H, 35I, 35L, 35M, 35N, 35P, 35Q, 35R, 35S, 35V, 35W, 35Y, 36C, 36D, 36E, 36F, 36H, 36I, 36K, 36L, 36M, 36N, 36Q, 36R, 36S, 36T, 36Y, 37L, 37M, 37N, 37V, 38A, 38C, 38D, 38E, 38H, 38L, 38M, 38N, 38P, 38V, 39A, 39C, 39I, 39L, 39M, 39N, 39P, 39S, 39V, 4OA, 4OD, 4OM, 4ON, 4OP, 4OQ, 4OT, 40V, 4OW, 41A, 41C, 41E, 41G, 41N, 41S, 41V, 42A, 42L, 42M, 42P, 42V, 43A, 43G, 43H, 43L, 43M, 43Q, 43S, 43T, 43V, 44A, 44C, 44D, 44E, 44F, 44G, 44H, 44I, 44K, 44L, 44M, 44N, 44P, 44R, 44S, 44T, 44V, 44W, 44Y, 45A, 45C, 45F, 45G, 45H, 45I, 45L, 45M, 45N, 45P, 45Q, 45S, 45T, 45Y, 46A, 46C, 46D, 46E, 46F, 46H, 46I, 46L, 46M, 46N, 46Q, 46R, 46S, 46T, 46V, 46W, 46Y, 47A, 47C, 47D, 47F, 47G, 47H, 47I, 47K, 47L, 47N, 47P, 47R, 47S, 47T, 47V, 47Y, 48A, 48C, 48D, 48E, 48F, 48H, 48I, 48K, 48L, 48N, 48P, 48S, 48T, 48V, 48W, 49A, 49C, 49D, 49F, 49G, 49H, 49I, 49K, 49L, 49P, 49Q, 49R, 49S, 49T, 49V, 49W, 49Y, 5OA, 5OC, 5OE, 5OF, 5OG, 5OH, 50I, 5OK, 5OL, 5OM, 5ON, 5OP, 5OR, 5OS, 5OT, 50V, 5OW, 5OY, 5 IA, 51C, 51D, 51E, 51F, 51H, 51I, 51K, 51L, 51M, 51N, 51P, 51Q, 51R, 51S, 51T, 51V, 51W, 52A, 52C, 52E, 52F, 52G, 52H, 52I, 52K, 52L, 52M, 52N, 52P, 52Q, 52R, 52S, 52T, 52V, 52W, 52Y, 53A, 53C, 53E, 53F, 53G, 53H, 53I, 53L, 53N, 53P, 53R, 53S, 53T, 53V, 53W, 53Y, 54A, 54C, 54D, 54F, 54G, 54H, 54I, 54L, 54M, 54N, 54P, 54Q, 54R, 54T, 54V, 54W, 54Y, 55A, 55C, 55D, 55E, 55F, 55G, 55H, 55I, 55N, 55P, 55Q, 55S, 55T, 55Y, 56A, 56D, 56E, 56F, 56G, 56I, 56K, 56L, 56M, 56N, 56P, 56Q, 56R, 56T, 56V, 56W, 56Y, 57A, 57C, 57D, 57E, 57F, 57H, 57I, 57K, 57L, 57M, 57Q, 57R, 57S, 57T, 57V, 57W, 57Y, 58A, 58F, 58H, 59A, 59C, 59D, 59E, 59F, 59G, 59H, 59K, 59L, 59N, 59P, 59R, 59S, 59T, 59V, 59W, 6OA, 6OC, 6OD, 6OE, 6OG, 60I, 6OK, 6OL, 6OM, 6ON, 6OQ, 6OR, 6OT, 60V, 61C, 61D, 61E, 61F, 61M, 61S, 61T, 61V, 62A, 62C, 62D, 62F, 62G, 62H, 62I, 62K, 62L, 62Q, 62S, 62T, 62V, 63A, 63C, 63D, 63F, 63G, 63H, 63K, 63M, 63N, 63R, 63S, 64A, 64G, 64H, 64I, 64L, 64M, 64N, 64S, 64V, 64Y, 65A, 65C, 65E, 65H, 65I, 65K, 65L, 65M, 65Q, 65R, 65S, 66D, 66E, 66F, 66G, 66H, 66I, 66K, 66L, 66M, 66N, 66Q, 66R, 66T, 66V, 66W, 66Y, 67A, 67C, 67D, 67E, 67F, 67G, 67I, 67K, 67L, 67N, 67P, 67Q, 67S, 67T, 67W, 68A, 68C, 68D, 68E, 68F, 68G, 68H, 68I, 68L, 68M, 68N, 68P, 68R, 68S, 68T, 68V, 68W, 68Y, 69 A, 69C, 69M, 69P, 69T, 69V, 7OA, 7OE, 7OH, 7ON, 70S, 71S, 72C, 72D, 72E, 72F, 72G, 72H, 72I, 72K, 72L, 72P, 72Q, 72S, 72T, 72V, 72W, 72Y, 73A, 73C, 73E, 73F, 73H, 73I, 73K, 73L, 73M, 73P, 73S, 73T, 73V, 73W, 74A, 74E, 74F, 74M, 74S, 74T, 74Y, 75A, 75C, 75D, 75E, 75P, 76A, 76D, 76E, 76F, 76G, 76I, 76L, 76M, 76P, 76Q, 76R, 76S, 76V, 76Y, 77A, 77C, 77D, 77G, 77H, 77I, 77K, 77L, 77R, 77S, 77T, 77V, 77W, 77Y, 78A, 78C, 78D, 78E, 78F, 78G, 78H, 78I, 78K, 78L, 78M, 78N, 78P, 78R, 78S, 78T, 78V, 78W, 78Y, 79A, 79G, 79L, 79M, 79N, 79Q, 79S, 79T, 80A, 80L, 80M, 80W, 80Y, 81A, 81C, 81D, 81E, 81G, 81H, 81I, 81L, 81M, 81N, 81Q, 81R, 81S, 81T, 81V, 81W, 81Y, 82A, 82D, 82F, 82G, 82I, 82K, 82L, 82M, 82Q, 82R, 82S, 82T, 82V, 82W, 82Y, 83A, 83F, 83I, 83L, 83T, 83V, 84A, 84D, 84E, 84G, 84I, 84K, 84M, 84N, 84Q, 84S, 84T, 84V, 85D, 85E, 85F, 85G, 85I, 85K, 85L, 85M, 85N, 85R, 85S, 85T, 85V, 85W, 86C, 86D, 86E, 86F, 86G, 86I, 86K, 86L, 86M, 86N, 86Q, 86R, 86S, 86V, 86W, 86Y, 87F, 87G, 87T, 88A, 88C, 88D, 88F, 88G, 88H, 88I, 88K, 88L, 88M, 88N, 88Q, 88R, 88S, 88T, 88V, 88W, 88Y, 89A, 89C, 89D, 89F, 89G, 89H, 89I, 89K, 89L, 89M, 89N, 89P, 89Q, 89R, 89S, 89T, 89V, 89W, 89Y, 9OC, 9OD, 9OE, 9OF, 9OG, 9OH, 90I, 9OK, 9OL, 9OM, 9ON, 9OQ, 9OR, 90S, 9OT, 90V, 9OW, 91A, 91C, 91D, 91E, 91F, 91H, 91K, 91L, 91M, 91N, 91P, 91Q, 91R, 91S, 91T, 91W, 91Y, 92L, 92N, 92T, 92V, 93A, 93C, 93D, 93E, 93F, 93G, 93I, 93L, 93M, 93N, 93P, 93Q, 93R, 93S, 93T, 93V, 93W, 93Y, 94A, 94C, 94I, 94M, 94T, 95 A, 95F, 95L, 95M, 95V, 95Y, 96A, 96C, 96I, 96L, 96M, 96P, 96T, 97A, 97E, 97M, 97W, 98C, 98G, 98I, 98L, 98M, 98T, 98V, 99 A, 99C, 99E, 99F, 99G, 99I, 99L, 99M, 99N, 99P, 99S, 99T, 10OA, lOOC, 10OF, 10OM, 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【請求項２２】
修飾が位置１５３に存在するアミノ酸残基をＮ、ＫまたはＦに変える置換であり、変異体ポリペプチドが親ポリペプチドと比較してマルトースおよびマルトヘプタオース基質をグルコースに転化する能力の向上を示す、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
修飾が、Ｌ１４２Ｆ、Ｌ１４２Ｇ、Ｌ１４２Ｑ、Ｌ１４２Ｓ、Ｌ１４２Ｗ、Ｌ１４２Ｙ、Ａ２１４Ｉ、Ａ２１４Ｖ、Ｓ２４５Ｙ、Ｑ１２６Ｆ、Ｑ１２６Ｌ、Ｑ１２６Ｐ、Ｑ１２６Ｖ、Ｓ１３１ＬおよびＳ２４５Ｉからなる群から選択された置換である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２４】
修飾が、Ｗ６０Ｌ、Ｗ６０Ｍ、Ｗ６０Ｎ、Ｉ１００Ｆ、Ｉ１００Ｍ、Ｓ１０５Ｍ、Ｓ１０５Ｗ、Ｇ２０７Ａ、Ｔ２７０Ａ、Ｔ２７０Ｅ、Ｔ２７０Ｌ、Ｔ２７０Ｎ、Ｔ２７０ＶおよびＴ２７９Ａからなる群から選択された置換である、請求項２０に記載の方法。
【請求項２５】
ＡｍｙＥポリペプチドを含んでいない同等のパン生地に観察される老化の量と比較して、老化を低減するのに十分な量のＡｍｙＥポリペプチドをパン生地に添加する工程を含む、パンの老化を低減する方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４Ａ】
【図４Ｂ】
【図４Ｃ】
【図４Ｄ】
【図５Ａ】
【図５Ｂ】
【図５Ｃ】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図２】
【図３】
【図４Ａ】
【図４Ｂ】
【図４Ｃ】
【図４Ｄ】
【図５Ａ】
【図５Ｂ】
【図５Ｃ】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【公表番号】特表２０１１−５２２５４６（Ｐ２０１１−５２２５４６Ａ）
【公表日】平成２３年８月４日（２０１１．８．４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５１２７２３（Ｐ２０１１−５１２７２３）
【出願日】平成２１年６月５日（２００９．６．５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０４６５０６
【国際公開番号】ＷＯ２００９／１４９４１９
【国際公開日】平成２１年１２月１０日（２００９．１２．１０）
【出願人】（５０９２４０４７９）ダニスコ・ユーエス・インク (81)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２３年８月４日（２０１１．８．４）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年６月５日（２００９．６．５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０４６５０６
【国際公開番号】ＷＯ２００９／１４９４１９
【国際公開日】平成２１年１２月１０日（２００９．１２．１０）
【出願人】（５０９２４０４７９）ダニスコ・ユーエス・インク (81)
【Ｆターム（参考）】
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