ピリミジン−２−イルアミノ誘導体および炎症を治療するためのその使用
式（Ｉ）［式中、Ｘ１およびＸ２は、各々同時にＮまたはＣＨであり；Ｘ３は、ＣＨ−Ｒ２またはＮ−ＳＯ２Ｒ（式中、Ｒは低級アルキルである）であり；Ｒ１は、０〜３個の低級アルキル基で置換されたアリールまたはヘテロアリールであり；Ｒ２は、式（II）（式中、Ｒ３は、Ｈ、低級アシル、またはアミノ酸である）である］で示される化合物、またはその薬学的に許容しうる塩は、ＪＮＫを調節する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ｃ−ＪｕｎＮ末端キナーゼ（ＪＮＫ）を調節するための方法、および複素環式化合物を用いてＪＮＫを調節することによって軽減することができる疾患または症状に罹患している被験体を治療する方法に関する。本発明は、さらに、新規複素環式化合物および該化合物を含む薬学的組成物に関する。
【０００２】
ｃ−ＪｕｎＮ末端キナーゼ（ＪＮＫ）は、ｐ３８および細胞外シグナル制御キナーゼ（ＥＲＫ）と共にマイトジェン活性化タンパク質キナーゼファミリーのメンバーである。１０種のスプライス変異体をコードする３つの別個の遺伝子（ｊｎｋ１、ｊｎｋ２およびｊｎｋ３）が同定されている（Y.T. Ip and R.J. Davis, Curr. Opin. Cell Biol. (1998) 10:205-19）。ＪＮＫ１およびＪＮＫ２は、様々な組織で発現するが、ＪＮＫ３は、主にニューロンにおいて、そしてそれより少ない程度で心臓および精巣において発現する（D.D. Yang et al., Nature (1997) 389:865-70）。ＪＮＫファミリーのメンバーは、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）およびインターロイキン１β（ＩＬ−１β）などの炎症性サイトカインに加えて、環境ストレスよっても活性化される。ＪＮＫの活性化は、Ｔｈｒ−１８３およびＴｙｒ−１８５の二重リン酸化を介して、ＪＮＫの上流のキナーゼであるＭＫＫ４およびＭＫＫ７によってメディエーションされる（B. Derijard et al., Cell (1994) 76:1025-37）。外部刺激および細胞の状況に依存して、ＭＥＫＫ１およびＭＥＫＫ４を含む多様な上流のキナーゼによりＭＫＫ４およびＭＭＫ７を活性化できることが示されている（D. Boyle et al., Arthritis Rheum (2003) 48:2450-24）。ＪＮＫシグナル伝達の特異性は、ＪＮＫ相互作用タンパク質と呼ばれるスカフォールドタンパク質を使用して、キナーゼカスケードの複数の成分を含有しているＪＮＫ特異的シグナル伝達複合体を形成することにより達成される（J. Yasuda et al., Mol. Cell. Biol. (1999) 19:7245-54）。ＪＮＫは、ｃ−Ｊｕｎ、アクチベータータンパク質−１（ＡＰ１）ファミリーの成分およびＡＴＦ２などの転写因子に加えて、ＩＲＳ−１およびＢｃｌ−２などの非転写因子を含む特異的基質のリン酸化により炎症、Ｔ細胞機能、アポトーシスおよび細胞の生存において重要な役割を果たすことが示されている（A.M. Manning and R.J. Davis, Nat. Rev. Drug Discov. (2003) 2:554-65）。ＪＮＫの過剰活性化は、癌および疼痛に加えて、自己免疫、炎症性、代謝性、神経系疾患における重要な機序であると考えられる。
【０００３】
関節リウマチ（ＲＡ）は、関節の慢性炎症を特徴とする全身性の自己免疫疾患である。炎症過程によって引き起こされる関節腫脹および関節痛に加えて、ほとんどのＲＡ患者で、最終的には衰弱性関節損傷および変形が発生する。細胞および動物モデルにおける説得力のある薬学的および遺伝学的証拠のいくつかの系統は、ＲＡの病因における活性化されたＪＮＫの関連性および重要性を強く示唆している。まず、ＪＮＫの異常活性化は、ＲＡ患者由来のヒト関節炎関節（G. Schett et al., Arthritis Rheum (2000) 43:2501-12）および関節炎の動物モデル由来のげっ歯類関節炎関節（Z. Han et al., J. Clin. Invest. (2001) 108:73-81）の両方で検出された。さらに、選択的ＪＮＫインヒビターによるＪＮＫ活性化の阻害は、ヒト滑膜細胞、マクロファージおよびリンパ球における炎症性サイトカインおよびＭＭＰ産生をブロックした（前記、Z. Han et al., (2001)）。重要なことに、アジュバント関節炎のラット（前記、Z. Han et al., (2001)）、またはコラーゲン誘導性関節炎のマウス（P. Gaillard et al., J Med Chem. (2005) 14:4596-607）における選択的ＪＮＫインヒビターの投与は、サイトカインおよびコラゲナーゼ発現を阻害することにより、関節を破壊から有効に保護し、そして足腫脹を著しく低減した。更に、ＪＮＫ２欠損マウスは、関節破壊から部分的に保護されたが、受動性コラーゲン誘導性関節炎モデルにおける足腫脹および炎症に対する効果はほとんど示さなかった。これらの研究は、ＪＮＫ２が、マトリックス分解、炎症および足腫脹における役割に関してＪＮＫ１と機能的に重複していることを示す。したがって、ＲＡの有効な治療には、ＪＮＫ１およびＪＮＫ２活性の両方をまとめて阻害することが必要である（Z. Han et al., Arthritis Rheum. (2002) 46:818-23）。
【０００４】
喘息は、細胞性炎症過程の存在、および気道の構造変化を伴う気管支過敏性を特徴とする気道の慢性炎症性疾患である（B. Bradley et al., J. Allergy Clin. Immunol. (1991) 88:661-74）。この障害は、Ｔリンパ球、好酸球、マスト細胞、好中球および上皮細胞を含む気道における多くの細胞型によって駆動されることが示されている（J. Bousquet et al., Am. J. Respir. Crit. Care Med. (2000) 161:1720-45）。選択的ＪＮＫインヒビターを使用して、喘息の細胞および動物モデルにおける最近の概念実証研究に基づいて、喘息の有望な治療ターゲットとしてＪＮＫが浮上している（K. Blease et al., Expert Opin. Emerg. Drugs (2003) 8:71-81）。ＪＮＫインヒビターは、活性化されたヒトの気道平滑細胞におけるＲＡＮＴＥＳ産生を有意にブロックすることが示された（K. Kujime et al., J. Immunol. (2000) 164:3222-28）。より重要なことに、ＪＮＫインヒビターは、細胞浸潤、炎症、過敏性、平滑筋増殖、およびＩｇＥ産生を低下させる能力について、慢性ラットおよびマウスモデルにおいて優れた有効性を示した（P. Nath et al., Eur. J. Pharmacol. (2005) 506:273-83; P. Eynott et al., Br. J. Pharmacol. (2003) 140:1373-80）。これらの所見は、アレルギー性炎症、過敏性に関連する気道のリモデリングプロセスにおけるＪＮＫの重要な役割を示唆する。したがって、ＪＮＫ活性のブロックが喘息の治療にとって有益であると予想される。
【０００５】
２型糖尿病は、酸化ストレスに関連した慢性的な低レベルの炎症および脂質代謝異常の結果として、インシュリン抵抗性およびインシュリン分泌障害を特徴とする最も重篤で最も蔓延している代謝性疾患である。肥満および糖尿病条件下で、様々な糖尿病のターゲット組織においてＪＮＫ活性が異常に上昇することが報告されている（J. Hirosumi et al., Nature (2002) 420:333-36; H. Kaneto, Expert. Opin. Ther. Targets (2005) 9:581-92）。炎症性サイトカインおよび酸化ストレスによるＪＮＫ経路の活性化は、Ｓｅｒ３０７におけるインスリン受容体基質−１（ＩＲＳ−１）のリン酸化を介してインシュリンシグナル伝達を負にレギュレーションするので、インシュリン抵抗性および耐糖能の一因となる（前記、J. Hirosumi et al., Nature (2002) ; Y. Lee et al., J. Biol. Chem. (2003) 278:2896-902; Y. Nakatani et al., J. Biol. Chem. (2004) 279:45803-09）。遺伝性（ｏｂ／ｏｂ）肥満マウスまたは食餌性肥満マウスのいずれかと交配したｊｎｋ−／−マウスを使用した見事な動物モデル研究から説得力のある遺伝学的証拠が得られた。ＪＮＫ１は欠失している（ＪＮＫ１−／−）が、ＪＮＫ２の機能は欠失していない（ｊｎｋ２−／−）肥満マウスは、体重増加、血糖の定常的な濃度上昇、血漿インスリン濃度の低下から保護された（前記、J. Hirosumi et al., Nature (2002)）。更に、小分子ＪＮＫインヒビターであるＣＣ１０５（B. Bennett et al., Curr. Opin. Pharmacol. (2003) 3:420-25）、またはＪＮＫ相互作用タンパク質−１（ＪＩＰ−１）のＪＮＫ結合ドメインに由来するＪＮＫ阻害性ペプチドＩ（ＪＩＰ）（H. Kaneto et al., Nat. Med. (2004) 10:1128-32）のいずれかを投与することにより、遺伝性糖尿病マウス（ｄｂ／ｄｂマウス）において、有意に低下した血糖値及びより高い血漿インスリン濃度を含む有益な効果が観察された。より興味深いことに、別の最近の報告（A. Jaeschke et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. (2005) 102:6931-35）により、インスリン生成β細胞の自己免疫の破壊によって引き起こされる１型糖尿病においてＪＮＫ２が重要な役割を果たしていることが明らかになった。ＪＮＫ２発現が欠損している非肥満糖尿病のマウスは、恐らくＴｈ２表現型に対する偏った極性に起因して、破壊的膵島炎の緩和および糖尿病への疾患進行の遅延を示した。まとめると、これらの研究は、肥満／２型糖尿病の治療におけるＪＮＫインヒビターの有用性を実証した。
【０００６】
アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）および卒中などの神経変性疾患は、シナプスの損失、ニューロンの萎縮および死を特徴とする。ｃ−Ｊｕｎの活性化を導くＪＮＫ経路は、様々な刺激を誘導したとき、単離一次胚ニューロンおよび複数の神経細胞株のアポトーシスにおいて因果的役割を果たすことが示されている（D. Bozyczko-Coyne et al., Curr. Drug Targets CNS Neurol. Disord. (2002) 1:31-49）。ＪＮＫの過剰活性化は、ＡＤ患者に由来するヒト脳 (J. Pei et al., J. Alzheimers Dis. (2001) 3:41-48）、または神経変性疾患の動物モデルに由来するげっ歯類の脳切片（M. Saporito et al., J. Neurochem. (2000) 75:1200-08）で観察された。例えば、ＡＤ患者に由来する死後脳においてリン酸化ＪＮＫの増加が検出された。β−アミロイドペプチド投与によって誘導されたＡＤのげっ歯類モデルにおけるＪＮＫ阻害性ペプチド（ＪＩＰ−１ペプチド）の投与は、シナプス可塑性の障害を防いだ。ＰＤの動物モデル（ＭＰＴＰモデル）では、神経細胞死に付随して、リン酸化ＭＫＫ４およびリン酸化ＪＮＫの増加が観察された。マウスの線条体にＪＮＫ阻害性ペプチド（ＪＩＰ−１ペプチド）のアデノウイルス遺伝子導入すると、ＭＰＴＰ介在性ＪＮＫ、ｃ−Ｊｕｎおよびカスパーゼ活性化が阻害され、黒質における神経細胞死がブロックされることにより、行動障害が減弱した（X. Xia et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA. (2001) 98:10433-38）。さらに、グルタミン酸興奮毒性によって誘導された虚血性卒中の動物モデルでは、ＪＮＫ３は欠損しているが、ＪＮＫ１またはＪＮＫ２は欠損していないマウスは、カイニン酸（グルタミン酸受容体アゴニスト）介在性発作または神経細胞死に対して耐性を有していた（D. D.Yang et al., Nature (1997) 389:865-70）。これらのデータは、ＪＮＫ３が、虚血状態の重要な構成要素であるグルタミン酸興奮毒性の主な原因であることを示唆する。まとめると、前記データは、ＪＮＫが神経細胞死に関連する複数のＣＮＳ疾患の魅力的なターゲットであることを示唆する。
【０００７】
コントロールされていない細胞成長、増殖および遊走は、無秩序な血管形成とともに、悪性腫瘍の形成を導く。ＪＮＫシグナル伝達経路は、もっぱらアポトーシスにおいて作用する訳ではなく、最近、ＡＰ１活性化を導く持続的なＪＮＫ活性化が、グリア細胞腫瘍およびＢＣＬ−ＡＢＬ形質転換Ｂリンパ芽球などの特定の種類の癌の細胞生存の一因として関与しているとみなされている（M. Antonyak et al., Oncogene (2002) 21:5038-46; P. Hess et al., Nat. Genet. (2002) 32:201-05）。グリア細胞腫瘍の場合、ほとんどの原発性脳腫瘍サンプルでＪＮＫ／ＡＰ１活性の増強がみられた。形質転換Ｂリンパ芽球では、ＢＣＬ−ＡＢＬが、ＪＮＫ経路を活性化し、次いで抗アポトーシス性ｂｃｌ−２遺伝子の発現をアップレギュレーションすることが示された。興味深いことに、治療抵抗性ＡＭＬ患者で見られる多剤耐性および過剰増殖は、これらのＡＭＬサンプル中に存在する持続的ＪＮＫ活性が原因として関連づけられている（L. Cripe et al., Leukemia (2002) 16:799-812）。白血病細胞におけるＪＮＫの活性化は、多剤耐性に関与しているｍｄｒ１およびＭＲＰ１などの排出ポンプの発現を誘導した。また、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼπおよびγ−グルタミルシステインシンターゼを含む酸化ストレス応答性の延命効果を有する遺伝子も、活性化されたＪＮＫ経路によってアップレギュレーションされた。
【０００８】
したがって、ＪＮＫモジュレーターは様々な疾患および／または症状を治療するのに有用である。
【０００９】
本発明の１つの局面は、式Ｉ：
【００１０】
【化１】
［式中
Ｘ１およびＸ２は、各々同時にＮまたはＣＨであり；
Ｘ３は、ＣＨ−Ｒ２またはＮ−ＳＯ２Ｒ（式中、Ｒは低級アルキル基である）であり；
Ｒ１は、０〜３個の低級アルキル基で置換されたアリールまたはヘテロアリールであり；
Ｒ２は、
【００１１】
【化２】
（式中、Ｒ３は、Ｈ、低級アシル、またはアミノ酸である）である］
で示される化合物、またはその薬学的に許容しうる塩を提供する。
【００１２】
本発明は、また、薬学的組成物、前述の化合物を使用する方法、および前述の化合物を調製する方法を提供する。
【００１３】
本発明の化合物および組成物は、自己免疫障害、炎症性障害、代謝性障害、神経系疾患、疼痛および癌などのｃ−ＪｕｎＮ末端キナーゼ介在性障害の治療および／または予防に有用である。いくつかの態様では、本発明の化合物および組成物は、関節リウマチ、喘息、II型糖尿病、アルツハイマー病、パーキンソン病および／または卒中の治療および／または予防に有用である。
【００１４】
定義
特に明記しない限り、本明細書および特許請求の範囲を含む本願で使用される以下の用語は、以下に示す定義を有する。本明細書及び添付の特許請求の範囲において使用されるとき、単数形の「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈上特に断りのない限り、複数の対象を含むことに留意しなければならない。
【００１５】
「アルキル」は、１〜１２個の炭素原子を有する、炭素原子および水素原子のみからなる、一価の直鎖または分岐鎖の飽和炭化水素部分を意味する。「低級アルキル」は、１〜６個の炭素原子のアルキル基、すなわち、Ｃ１−Ｃ６アルキルを指す。アルキル基の例は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、イソブチル、sec-ブチル、tert-ブチル、ペンチル、ｎ−ヘキシル、オクチル、ドデシルなどを含むが、これらに限定されない。「分岐鎖アルキル」は、少なくとも１つの分岐を有するアルキル部分、例えばイソプロピル、イソブチル、tert-ブチルなどを指す。同様に、「低級アルコキシ」は、−ＯＲの形態の部分を指し、「アシル」は、−Ｃ（Ｏ）Ｒ（式中、Ｒは低級アルキルである）の形態の部分を指す。
【００１６】
「アルキレン」は、１〜６個の炭素原子の直鎖飽和二価炭化水素部分、または３〜６個の炭素原子の分岐鎖飽和二価炭化水素基、例えばメチレン、エチレン、２，２−ジメチルエチレン、プロピレン、２−メチルプロピレン、ブチレン、ペンチレンなどを意味する。
【００１７】
「アルキレンジオキシ」は式−Ｏ−Ｒ−Ｏ−（式中、Ｒは本明細書において定義されるアルキレンである）の二価部分を意味する。
【００１８】
「アリール」は、単環式、二環式、または三環式の芳香環からなる一価環式芳香族炭化水素部分を意味する。アリール基は、場合により、本明細書における定義の通り置換されてもよい。アリール部分の例は、場合により置換されているフェニル、ナフチル、フェナントリル、フルオレニル、インデニル、ペンタレニル、アズレニル、オキシジフェニル、ビフェニル、メチレンジフェニル、アミノジフェニル、ジフェニルスルフィジル、ジフェニルスルホニル、ジフェニルイソプロピリデニル、ベンゾジオキサニル、ベンゾフラニル、ベンゾジオキシリル、ベンゾピラニル、ベンズオキサジニル、ベンズオキサジノニル、ベンゾピペラジニル（benzopiperadinyl）、ベンゾピペラジニル（benzopiperazinyl）、ベンゾピロリジニル、ベンゾモルホリニル、メチレンジオキシフェニル、エチレンジオキシフェニルなどを含むが、これらに限定されず、これらの部分水素化誘導体も含む。
【００１９】
「ヘテロアリール」は、Ｎ、ＯまたはＳから選択される１、２、または３個の環ヘテロ原子を有し、残りの環原子がＣである、５〜７個の環原子の単環式部分を意味する。ヘテロアリール環は、場合により、本明細書における定義の通り置換されてもよい。ヘテロアリール部分の例は、場合により置換されているイミダゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、ピラジニル、チエニル、チオフェニル、フラニル、ピラニル、ピリジニル、ピロリル、ピラゾリル、ピリミジル、ピリダジニルなどを含むが、これらに限定されず、これらの部分水素化誘導体も含む。
【００２０】
用語「ハロ」、「ハロゲン」および「ハロゲン化物」は、本明細書において互換的に使用され、置換基フルオロ、クロロ、ブロモまたはヨードを指す。用語「オキソ」は二重結合酸素、すなわち＝Ｏを指す。本明細書において使用するとき、用語「ケタール」は、２個のアルコキシ基が、同じ炭素原子に結合しているか、または式−Ｏ−（低級アルキル）−Ｏ−の基の両端が単一の炭素原子に結合しているケトン誘導体を指す。
【００２１】
本明細書において使用するとき、用語「アミノ酸」は、アミン基およびカルボン酸基の両方を有する有機部分を指す。例示的なアミノ酸は、アラニン、β−アラニン、システイン、アスパラギン酸、グルタミン酸、フェニルアラニン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、リシン、ロイシン、メチオニン、アスパラギン、プロリン、グルタミン、アルギニン、セリン、トレオニン、バリン、トリプトファン、およびチロシンを含む。
【００２２】
「場合により置換されている」は、参照される基が、独立して１つ以上の置換基、好ましくは１〜４個、より好ましくは１〜３個の記載されている置換基で置換されていてもよいことを意味する。例えば、「場合によりＯＨで置換されているシクロアルキル」は、非置換であるか、または１つ以上のヒドロキシ基で置換されている、本明細書の定義内のすべてのシクロアルキル基を含む。この記載に適う例示的な基は、シクロブチル、シクロヘキシル、シクロペンチル、シクロプロピル、２−ヒドロキシシクロブチル、ヒドロキシシクロプロピル、３，４−ジヒドロキシシクロへキシル、３−ヒドロキシシクロペンチルなどを含むが、これらに限定されない。
【００２３】
「脱離基」は、有機合成化学において慣習的にそれに関連する意味を有する基、すなわち置換反応条件下で置換可能な原子または基を意味する。脱離基の例は、ハロゲン、例えば、メタンスルホニルオキシ、エタンスルホニルオキシ、チオメチル、ベンゼンスルホニルオキシ、トシルオキシ、およびチエニルオキシなどのアルカン−またはアリーレンスルホニルオキシ、ジハロホスフィノイルオキシ、場合により置換されているベンジルオキシ、イソプロピルオキシ、アシルオキシなどを含むが、これらに限定されない。
【００２４】
「疾患」および「病状」は、任意の疾患、症状、病徴、障害または徴候を意味する。
【００２５】
例えば、ベンゼン、トルエン、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、クロロホルム、塩化メチレンまたはジクロロメタン、ジクロロエタン、ジエチルエーテル、酢酸エチル、アセトン、メチルエチルケトン、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、tert-ブタノール、ジオキサン、ピリジンなどを含む「不活性有機溶媒」または「不活性溶媒」は、溶媒が、それと併せて記載される反応条件下で不活性であることを意味する。特に逆の指定のない限り、本発明の反応で使用される溶媒は不活性溶媒である。
【００２６】
「薬学的に許容しうる」は、一般に安全で、無毒で、生物学的にも他の意味でも不所望ではなく、そして、獣医学的及びヒトの薬学的使用のために許容しうる薬学的組成物の調製において有用であることを意味する。
【００２７】
化合物の「薬学的に許容しうる塩」は、本明細書において定義されるように、薬学的に許容することができ、そして親化合物の望ましい薬理学的活性を有する塩を意味する。このような塩は、以下を含む：
塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などの無機酸とともに形成される酸付加塩；または、酢酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、ショウノウスルホン酸、クエン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グルコヘプトン酸、グルコン酸、グルタミン酸、グリコール酸、ヒドロキシナフトエ酸（hydroxynaphtoic acid）、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、乳酸、マレイン酸、リンゴ酸、マロン酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、ムコン酸、２−ナフタレンスルホン酸、プロピオン酸、サリチル酸、コハク酸、酒石酸、ｐ−トルエンスルホン酸、トリメチル酢酸などの有機酸とともに形成される酸付加塩；
あるいは、親化合物の中に存在する酸性プロトンが金属イオン、例えばアルカリ金属イオン、アルカリ土類イオン、またはアルミニウムイオンにより置換されたときに形成される塩；あるいは有機または無機塩基が配位した塩。許容しうる有機塩基は、ジエタノールアミン、エタノールアミン、Ｎ−メチルグルカミン、トリエタノールアミン、トロメタミンなどを含む。許容しうる無機塩基は、水酸化アルミニウム、水酸化カルシウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、水酸化ナトリウムなどを含む。
【００２８】
好ましい薬学的に許容しうる塩は、酢酸、塩酸、硫酸、メタンスルホン酸、マレイン酸、リン酸、酒石酸、クエン酸、ナトリウム、カリウム、カルシウム、亜鉛およびマグネシウムから形成される塩である。
【００２９】
「保護基（Protective group）」または「保護基（protecting group）」は、合成化学において慣習的にそれに関連する意味で、別の非保護反応部位において化学反応を選択的に実行することができるように、多官能化合物における１つの反応部位を選択的にブロックする化学基を示す。本発明の特定のプロセスは、保護基に依存して、反応物質中に存在する反応性窒素および／または酸素原子をブロックする。例えば、「アミノ保護基」および「窒素保護基」という用語は、本明細書において互換的に使用され、合成手順中に不所望の反応から窒素原子を保護することを意図する有機基を指す。例示的な窒素保護基は、トリフルオロアセチル、アセトアミド、ベンジル（Ｂｎ）、ベンジルオキシカルボニル（カルボベンジルオキシ、ＣＢＺ）、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル、ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル、tert-ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）などを含むが、これらに限定されない。当業者は、除去の容易さ、および以下の反応に耐える能力について基を選択する方法を知るであろう。
【００３０】
「被験体」は、哺乳類および非哺乳類を意味する。哺乳類は、ヒト；チンパンジーおよび他の類人猿などの非ヒト霊長類、ならびにサル種；ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギおよびブタなどの家畜；ウサギ、イヌおよびネコなどの家庭動物；ラット、マウスおよびモルモットなどのげっ歯類を含む実験動物；などを含むが、これらに限定されない哺乳綱の任意のメンバーを意味する。非哺乳類の例は、鳥類などを含むが、これらに限定されない。用語「被験体」は、特定の年齢または性別を意味するものではない。
【００３１】
「治療上有効量」は、ある病状を治療するために被験体に投与されたとき、前記病状を治療するのに十分な化合物の量を意味する。「治療上有効量」は、化合物、治療されている病状、重症度または治療される疾患、被験者の年齢および相対的な健康、投与の経路および形態、参加する医師又は獣医師の判断、ならびに他の要因に依存して変化する。
【００３２】
用語「上に定義された」および「本明細書において定義される」は、変数に言及するとき、広い定義の変数に加えて、存在する場合、好ましい、より好ましい、および最も好ましい定義も参照することにより組み込む。
【００３３】
病状を「治療すること」または「治療」は、以下を含む：
（ｉ）病状の予防、すなわち、病状に曝されるか、または病状に罹患しやすい可能性があるが、未だ病状を経験していないか、または病状の病徴を示していない被験体において病状の臨床症状を発生させないこと、
（ii）病状の阻害、すなわち、病状またはその臨床症状の発生を妨げること、あるいは
（iii）病状の軽減、すなわち、病状またはその臨床症状を一時的または永続的に後退させること。
【００３４】
用語「処理」、「接触」、および「反応」は、化学反応に言及するとき、指示されたおよび／または望ましい生成物を生成するのに適切な条件下で２つ以上の試薬を添加または混合することを意味する。指示されたおよび／または望ましい生成物を生成する反応は、必ずしも最初に添加された２つの試薬の組み合わせから直接得られる訳ではない、すなわち、混合物中で生成される１つ以上の中間体が存在し、それが最終的に指示されたおよび／または望ましい生成物の形成を導く場合もあることを理解すべきである。本明細書において使用するとき、用語「嫌気性雰囲気」は、一般的に酸素を除く大気を指す。嫌気性雰囲気下で行なわれる反応は、例えば反応混合物に窒素またはアルゴン（または別の不活性ガス）を通気し、好ましくは反応物の脱気も行うことによって実施することができる。用語「高ｐＨ」は、反応混合物が完全に水性であろうとなかろうと、例えば、Ｎａ２ＣＯ３などの適度に強い塩基が存在する反応混合物を指す。本明細書において使用するとき、用語「高温」は、７０℃を超える、典型的には１０５℃を超える反応温度を指す。
【００３５】
式Ｉで示される化合物は、限定するものではないが、被験体の炎症および／または疼痛の治療に有用である。本発明の化合物を用いて、関節リウマチ、脊椎関節症、痛風性関節炎、変形性関節症、全身性エリテマトーデスおよび若年性関節炎、変形性関節症、痛風性関節炎、および他の関節炎状態を含むが、これらに限定されない関節炎によって引き起こされる疼痛および炎症を治療することができる。このような化合物は、成人型呼吸窮迫症候群、肺サルコイドーシス、喘息、珪肺症、および慢性肺炎症性疾患を含む肺疾患または肺炎症の治療にも有用である。また、前記化合物は、敗血症、敗血症性ショック、グラム陰性菌敗血症、マラリア、脳膜炎、感染または悪性腫瘍に続発する悪液質、肺炎およびヘルペスウィルスを含む、ウイルスおよび細菌感染によって引き起こされる炎症の治療に有用である。
【００３６】
「疼痛」は、多かれ少なかれ、特殊な神経終末の刺激に起因する不快感、窮迫またはアゴニーの限局性感覚を意味する。電撃痛、幻想痛、疼くような痛み、急性疼痛、炎症性疼痛、神経因性疼痛、複合性局所疼痛、神経痛、神経障害などを含むが、これらに限定されない多くの種類の疼痛が存在する（Dorland's Illustrated Medical Dictionary, 28th Edition, W. B. Saunders Company, Philadelphia, PA）。疼痛の治療目的は、治療される被験体が知覚する疼痛の重症度を低下させることである。「神経因性疼痛」は、機能障害および／または病理変化に加えて、末梢神経系における非炎症性病変に起因する疼痛を意味する。神経因性疼痛の例は、熱または機械的痛覚過敏、熱または機械的異痛、糖尿病性疼痛、絞扼性疼痛などを含むが、これらに限定されない。
【００３７】
命名法および構造
一般的に、本願の中で使用される命名法は、ＩＵＰＡＣの体系的命名法を作成するためにBeilstein Instituteによりコンピュータ化されたシステムであるAUTONOM（商標）v.4.0に基づく。本明細書に示される化学構造は、ＩＳＩＳ（登録商標）バージョン２．２を使用して作成した。本明細書における構造中の炭素、酸素または窒素原子に出現する任意の空の結合価（open valency）は、水素原子の存在を示す。
【００３８】
不斉炭素が化学構造中に存在するときは常に、その不斉炭素に関連する立体異性体はすべて、前記構造によって包含されることを意図する。
【００３９】
本明細書において特定される特許および刊行物はすべて、全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【００４０】
一般的な方法
本発明の１つの局面は、式Ｉ：
【００４１】
【化３】
［式中
Ｘ１およびＸ２は、各々同時にＮまたはＣＨであり；
Ｘ３は、ＣＨ−Ｒ２またはＮ−ＳＯ２Ｒ（式中、Ｒは低級アルキルである）であり；
Ｒ１は、０〜３個の低級アルキル基で置換されたアリールまたはヘテロアリールであり；
Ｒ２は、
【００４２】
【化４】
（式中、Ｒ３は、Ｈ、低級アシル、またはアミノ酸である）である］
で示される化合物、またはその薬学的に許容しうる塩を提供する。
【００４３】
いくつかの態様では、Ｘ１およびＸ２は各々Ｎである。いくつかの態様では、Ｘ３はＣＨ−Ｒ２であり、Ｒ２は、
【００４４】
【化５】
であり、Ｒ３はＨである。さらなる態様では、Ｒ１は、０〜３個の低級アルキル基、例えばメチル基で置換されたフェニルである。他の態様では、Ｒ１は、０〜３個の低級アルキル基で置換されたヘテロアリールである。さらなる態様では、ヘテロアリール基は、チオフリル、ピリジル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、フリル、イミダゾリル、およびピラゾリルからなる群より選択される。さらなる態様では、ヘテロアリール基は、チオフリル、ピリジル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、フリル、イミダゾリル、およびピラゾリルからなる群より選択される。
【００４５】
他の態様では、Ｘ３はＮ−ＳＯ２Ｒであり、Ｒはメチルである。さらなる態様では、Ｒ１は、０〜３個の低級アルキル基、例えばメチル基で置換されたフェニルである。他の態様では、Ｒ１は、０〜３個の低級アルキル基で置換されたヘテロアリールである。さらなる態様では、ヘテロアリール基は、チオフリル、ピリジル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、フリル、イミダゾリル、およびピラゾリルからなる群より選択される。
【００４６】
他の態様では、Ｘ１およびＸ２は各々ＣＨである。いくつかの態様では、Ｘ３はＣＨ−Ｒ２であり、Ｒ２は、
【００４７】
【化６】
であり、Ｒ３はＨである。さらなる態様では、Ｒ１は、０〜３個の低級アルキル基、例えばメチル基で置換されたフェニルである。他の態様では、Ｒ１は、０〜３個の低級アルキル基で置換されたヘテロアリールである。さらなる態様では、ヘテロアリール基は、チオフリル、ピリジル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、フリル、イミダゾリル、およびピラゾリルからなる群より選択される。
【００４８】
他の態様では、Ｘ１およびＸ２は各々ＣＨであり、Ｘ３はＮ−ＳＯ２Ｒであり、Ｒはメチルである。さらなる態様では、Ｒ１は、０〜３個の低級アルキル基、例えばメチル基で置換されたフェニルである。他の態様では、Ｒ１は、０〜３個の低級アルキル基で置換されたヘテロアリールである。さらなる態様では、ヘテロアリール基は、チオフリル、ピリジル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、フリル、イミダゾリル、およびピラゾリルからなる群より選択される。
【００４９】
本発明の別の局面は、炎症を治療するための方法であって、前記治療を必要としている被験体に有効量の本発明の化合物を投与することを含む。
【００５０】
本発明の別の局面は、本発明の化合物および薬学的に許容しうる賦形剤を含む薬学的組成物である。
【００５１】
本発明の別の局面は、嫌気性雰囲気、高ｐＨ、および高温下で、式Ｉで示される化合物を生成するのに十分な時間、式
【００５２】
【化７】
で示される中間物を、Ｒ１−Ｂ（ＯＨ）２、
【００５３】
【化８】
などのＲ１のボロン酸誘導体、ならびにこれらのエステルおよび塩から選択される第１の試薬と、式Ｐｄ［Ｐ（Ｃ６Ｈ５）３］４を有する第２の試薬とで処理することにより、本発明の化合物を調製するためのプロセスである。
【００５４】
本明細書に記載される様々な基の組み合わせが他の態様を形成する可能性があることを認識すべきである。このように、様々な異なる化合物が本発明に包含される。
【００５５】
本発明の例示的な化合物を以下の表１に示す。
【表１】
【００５６】
合成
本発明の化合物は、以下の実施例の項に示す実例となる例において記載される様々な方法によって作製することができる。これらの化合物の調製に用いられる出発物質および試薬は、一般的に、Aldrich Chemical Co.などの商業的供給元から入手可能であるか、またはFieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis; Wiley & Sons: New York, 1991, Volumes 1-15; Rodd’s Chemistry of Carbon Compounds, Elsevier Science Publishers, 1989, Volumes 1-5 and Supplements; and Organic Reactions, Wiley & Sons: New York, 1991, Volumes 1-40などの参照文献に記載されている手順に従って当業者に公知の方法により調製される。以下の合成反応スキームは、本発明の化合物を合成することができるいくつかの方法の単なる例証であり、これらの合成反応スキームに対して様々な変更を行ってもよく、前記変更は、本明細書に含まれる開示を参照した当業者に示唆される。
【００５７】
必要に応じて、濾過、蒸留、結晶化、クロマトグラフィーなどを含むが、これらに限定されない従来の技術を使用して、合成反応スキームの出発物質および中間体を単離し、そして精製することができる。このような物質は、物理定数およびスペクトルのデータを含む、従来の手段を使用して特性評価することができる。
【００５８】
特に逆の指定のない限り、本明細書に記載される反応は、好ましくは、不活性雰囲気下で、大気圧で、約−７８℃〜約２３０℃の範囲、最も好ましくは、そして便利には室温（すなわち、周囲温度）、例えば約２０℃の反応温度で実施される。
【００５９】
以下のスキームでは、異なる指定のない限り、Ｒ、Ｒ１、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３などは、上に定義された通りであるが；Ｘは、Ｃｌ、ＢｒまたはＩである。
【００６０】
【化９】
【００６１】
工程（ａ）：ＤＭＦなどの非プロトン性溶媒中でＮａＨなどの強塩基を使用して、置換インドールまたはトリアゾール（II）をハロピリミジン（Ｉ）とカップリングさせて、中間体（III）を形成する。
【００６２】
工程（ｂ）：酸性水性溶媒中にてＮａＮＯ２で中間体を処理するなどの標準的な手段によって、中間体（III）をハロゲン化し、次いで、ＫＩまたはＫＢｒなどのハロゲン化物塩と反応させて、中間体（IV）を形成する。
【００６３】
工程（ｃ）：例えば、ＤＣＭ中のＭＣＰＢＡを用いて、中間体（IV）のスルファニル部分をスルフィニルに酸化して、中間体（Ｖ）を提供する。
【００６４】
工程（ｄ、ｅ）：次いで、中間体（Ｖ）のメチルスルフィニル基を、１，４−ジオキサン中で加熱することにより、４−アミノ−シクロヘキサンカルボン酸エチルエステル（工程（ｄ））または１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イルアミン（工程（ｅ））で置換して、それぞれ中間体（VI）または（VII）を提供する。
【００６５】
工程（ｆ）：中間体（VI）のエチルエステルを、ＴＨＦの中のＬｉＯＨで処理するなどの標準的な手段によって鹸化し、次いで、４−ヒドロキシピペリジンでアミド化して、中間体（VIII）を提供する。
【００６６】
工程（ｇ）：次いで、例えば、フェニル基またはヘテロアリール基の適切なボロン酸誘導体と混ぜ合わせ、そして、１１０℃で、トルエン、またはトルエンとＥｔＯＨとの混合物などの有機溶媒中にて、嫌気性条件下で、Ｎａ２ＣＯ３およびＰｄ（ＰＰｈ３）４で処理することなどにより、中間体（VII）または（VIII）のハロ基を、望ましいフェニル基またはヘテロアリール基で置換する。あるいは、フェニル基またはヘテロアリール基を、工程（ｄ〜ｆ）の前に中間体（Ｖ）にカップリングさせてもよい。
【００６７】
有用である可能性のある他の合成法は、両方とも全体が参照により本明細書に組み込まれる、２００７年９月７日出願の米国特許出願第１１／８９９，７５８号、および２００７年１２月７日出願の米国特許出願第１２／００１，０２１号に記載されている。
【００６８】
次いで、例えば、抽出、結晶化、分取ＨＰＬＣ、フラッシュクロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィーなどにより、生成物を精製してもよい。
【００６９】
有用性
本発明の化合物は、ＪＮＫ調節剤であり、したがって広範囲にわたるＪＮＫ介在性障害の治療に有効であると予想される。例示的なＪＮＫ介在性障害は、自己免疫障害、炎症性障害、代謝性障害、神経系疾患、および癌を含むが、これらに限定されない。したがって、本発明の化合物を用いて、このような障害のうち１つ以上を治療することができる。いくつかの態様では、本発明の化合物を用いて、関節リウマチ、喘息、II型糖尿病、アルツハイマー病、パーキンソン病または卒中などのＪＮＫ介在性障害を治療することができる。
【００７０】
投与および薬学的組成物
本発明は、本発明の少なくとも１つの化合物、あるいはその個々の異性体、異性体のラセミ混合物もしくは非ラセミ混合物、または薬学的に許容しうる塩もしくは溶媒和物とともに、薬学的に許容しうる担体、場合により他の治療成分および／または予防成分を含む薬学的組成物を含む。
【００７１】
一般的に、本発明の化合物は、類似の有用性を有する剤について許容されている任意の投与方法により、治療上有効量投与される。適切な用量域は、治療される疾患の重症度、被験者の年齢および相対的健康、用いられる化合物の効力、投与の経路および形態、投与の対象となる徴候、ならびに関与する医師の嗜好および経験などの多くの要因に依存して、典型的には、毎日１〜５００mg、好ましくは毎日１〜１００mg、最も好ましくは毎日１〜３０mgである。このような疾患を治療する当業者は、過度の実験をすることなく、そして自分自身の認識および本願の開示に依存して、所与の疾患に対する本発明の化合物の治療上有効量を突き止めることができる。
【００７２】
本発明の化合物は、経口（頬側および舌下を含む）、直腸内、鼻腔内、局所、肺内、膣内、非経口（筋肉内、動脈内、鞘内、皮下、静脈内を含む）投与に適しているものを含む薬学的製剤として、または吸入もしくは吹送による投与に適している形態で投与してよい。好ましい投与方法は、一般的に、病気の程度によって調節することができる便利な一日量の投与計画を使用する経口である。
【００７３】
本発明の化合物は、１つ以上の従来の佐剤、担体または希釈剤とともに、薬学的組成物および単位剤形の形態にしてもよい。薬学的組成物および単位剤形は、さらなる活性化合物または成分を含むまたは含まない、従来の比率の従来の成分で構成されてよく、単位剤形は、使用される対象の日用量域に相応する任意の適切な有効量の活性成分を含有してよい。薬学的組成物は、錠剤または充填カプセル剤などの固体、半固体、散剤、徐放性製剤、あるいは液剤、懸濁剤、乳剤、エリキシル剤、または経口用途用の充填カプセル剤などの液体として；あるいは直腸または膣内投与用の坐剤の形態で；あるいは非経口用途用の無菌注射剤溶液の形態で使用してよい。したがって、錠剤１個当たり、約１mg、またはより広く約０．０１〜約１００mgの活性成分を含有する製剤が、適切な例示的単位剤形である。
【００７４】
本発明の化合物は、広範囲にわたる経口投与剤形に製剤してよい。薬学的組成物および剤形は、活性成分として本発明の化合物、またはその薬学的に許容しうる塩を含んでよい。薬学的に許容しうる担体は、固体または液体のいずれであってもよい。固体形態の調製品は、散剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、カシェ剤、坐剤および分散性顆粒剤を含む。固体担体は、希釈剤、着香剤、可溶化剤、滑沢剤、懸濁化剤、結合剤、保存剤、錠剤崩壊剤または封入材料としても作用しうる１つ以上の物質であってよい。散剤では、担体は、一般的に、微粉活性成分を含む混合物である、微粉固体である。錠剤では、活性成分は、一般的に、必要な結合能を有する担体と適切な比率で混合され、望ましい形態および大きさに圧縮される。散剤および錠剤は、好ましくは、約１〜約７０パーセントの活性化合物を含有する。適切な担体は、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、糖、ラクトース、ペクチン、デキストリン、デンプン、ゼラチン、トラガント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、低融点ろう、カカオ脂などを含むが、これらに限定されない。用語「調製品」は、担体を含むかまたは含まない活性成分が、それに関連する担体により包まれたカプセル剤を提供する、担体として封入材料を含む活性化合物の製剤を含むことを意図する。同様に、カシェ剤およびロゼンジ剤も含まれる。錠剤、散剤、カプセル剤、丸剤、カシェ剤およびロゼンジ剤は、経口投与に適している固体形態であり得る。
【００７５】
経口投与に適している他の形態は、乳剤、シロップ剤、エリキシル剤、水溶液、水懸濁液を含む液体形態の調製品、または使用直前に液体形態の調製品に変換することを意図する固体形態の調製品を含む。乳剤は、溶液、例えばプロピレングリコール水溶液中で調製してもよく、例えば、レシチン、モノオレイン酸ソルビタンまたはアラビアゴムなどの乳化剤を含有してもよい。水溶液は、水に活性成分を溶解させ、そして適切な着色剤、香料、安定剤、および増粘剤を添加することにより調製できる。水懸濁液は、天然または合成のゴム、樹脂、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、および他の周知の懸濁化剤などの粘着性物質とともに、水中に微粉活性成分を分散させることにより調製できる。固体形態の調製品は、液剤、懸濁剤、および乳剤を含み、活性成分に加えて、着色剤、香料、安定剤、バッファ、人工および天然の甘味料、分散剤、増粘剤、可溶化剤などを含有してもよい。
【００７６】
本発明の化合物は、非経口投与（例えば、注入、例えば迅速投与または持続注入による）用に製剤することができ、そして、アンプル、プレフィルドシリンジ、少量注入の単位剤形で、または保存剤を添加した複数回用量容器で提示してもよい。組成物は、油性または水性のビヒクル中の懸濁液、溶液、またはエマルション、例えば、ポリエチレングリコール水溶液などの形態をとってよい。油性または非水性の担体、希釈剤、溶媒、またはビヒクルの例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油（例えばオリーブ油）および注射可能な有機エステル（例えばオレイン酸エチル）を含み、そして保存剤、湿潤剤、乳化剤もしくは懸濁化剤、安定剤、および／または分散剤などの製剤化剤（formulatory agent）を含有してもよい。あるいは、活性成分は、無菌固体を無菌的に単離することによるか、または適切なビヒクル、例えば、無菌の発熱物質不含水を用いて使用前に構成するために溶液を凍結乾燥することによって得られる粉末形態であってもよい。
【００７７】
本発明の化合物は、軟膏剤、クリーム剤またはローション剤、あるいは経皮貼布として表皮に局所投与するために製剤してよい。軟膏剤およびクリーム剤は、適切な増粘剤および／またはゲル化剤を添加した水性または油性の基剤を用いて調剤することができる。ローション剤は、水性または油性の基剤を用いて調剤することができ、そして、一般的に、１つ以上の乳化剤、安定剤、分散剤、懸濁化剤、増粘剤または着色剤も含有する。口内の局所投与に適している製剤は、風味のある基剤、通常、スクロース、およびアラビアゴムまたはトラガント中に活性剤を含むロゼンジ剤；ゼラチンおよびグリセリン、またはスクロースおよびアラビアゴムなどの不活性基剤中に活性成分を含むパステル剤；および適切な液体担体中に活性成分を含む口内洗浄液を含む。
【００７８】
本発明の化合物は、坐剤として投与するために製剤してもよい。脂肪酸グリセリドの混合物またはカカオ脂などの低融点ろうを、まず融解させ、そして、例えば撹拌によって、活性成分を均質に分散させる。次に、融解した均質な混合物を便利な大きさの型に注ぎ、冷却し、そして固化させる。
【００７９】
本発明の化合物は、膣内投与するために調剤してもよい。活性成分に加えてこのような担体も含有する、ペッサリー、タンポン、クリーム剤、ゲル剤、ペースト剤、発泡剤、または噴霧剤は、適切であることが当技術分野において公知である。
【００８０】
対象化合物は、鼻腔内投与用に製剤してもよい。液剤または懸濁剤は、例えば、滴瓶、ピペットまたはスプレーを用いて、従来の手段によって鼻腔に直接適用される。製剤は、単回または複数回投与形態で提供してよい。滴瓶またはピペットの後者の場合、これは、患者が適切な所定の体積の液剤または懸濁剤を投与するよって達成され得る。スプレーの場合、これは、例えば、定量霧化噴霧ポンプによって達成され得る。
【００８１】
本発明の化合物は、鼻腔内投与を含む、特に呼吸器官へのエアロゾル投与用に製剤することができる。化合物は、一般に、例えば約５ミクロン以下の小さな粒径を有する。このような粒径は、当技術分野において公知の手段、例えば微粒子化によって得ることができる。活性成分は、クロロフルオロカーボン（ＣＦＣ）、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、またはジクロロテトラフルオロエタン、または二酸化炭素、または他の適切な気体などの適切な噴射剤を含む加圧パックで提供される。エアロゾルは、また、便利なようにレシチンなどの界面活性剤を含有してもよい。薬の用量は、定量バルブによってコントロールすることができる。あるいは、活性成分は、乾燥粉末の形態、例えば、ラクトース、デンプン、ヒドロキシプロピルメチルセルロースなどの澱粉誘導体、およびポリビニルピロリジン（ＰＶＰ）などの適切な粉末基剤中の化合物の混合粉体で提供されてもよい。粉末担体は、鼻腔内でゲルを形成する。粉末組成物は、例えばゼラチンのカプセルまたはカートリッジで単位剤形として、または吸入器を用いて粉末を投与することができるブリスターパックとして提示してもよい。
【００８２】
望ましい場合、活性成分の持続または制御放出投与に適合した腸溶コーティングを施した製剤を調製してもよい。例えば、本発明の化合物は、経皮または皮下薬物送達デバイスに製剤することができる。化合物の持続放出が必要なとき、および患者が治療レジメンを遵守することが重要なとき、これらの送達システムは有利である。経皮送達システムにおいて化合物は、皮膚接着剤固体支持体に付着していることが多い。対象となる化合物は、経皮吸収促進剤、例えばＡｚｏｎｅ（１−ドデシルアザシクロヘプタン−２−オン）と混ぜ合わせてもよい。持続放出送達システムは、外科処置または注入によって皮下層に皮下挿入される。皮下インプラントは、脂質可溶性膜、例えばシリコーンゴム、または生分解性ポリマー、例えばポリ乳酸中に化合物を封入する。
【００８３】
薬学的調製品は、好ましくは単位剤形である。このような形態では、調製品は、適切な量の活性成分を含有している単位用量に細分される。単位剤形は、パッケージ化調製品であってもよく、前記パッケージは、パケット化（packeted）錠剤、カプセル剤およびバイアルまたはアンプル中の散剤などの離散量の調製品を含む。また、単位剤形は、カプセル、錠剤、カシェ剤またはロゼンジ剤自体であってもよく、パッケージ化形態の適切な数の任意のこれら剤であってもよい。
【００８４】
他の適切な薬学的担体およびそれらの製剤は、Remington: The Science and Practice of Pharmacy 1995, edited by E. W. Martin, Mack Publishing Company, 19th edition, Easton, Pennsylvania.に記載されている。本発明の化合物を含有する例示的な薬学的製剤を以下に記載する。
【００８５】
実施例
本発明のさらなる目的、利点および新規特徴は、これらに限定することを意図するものではないが、以下の本発明の実施例を検討することにより当業者に明らかになるであろう。
【００８６】
略語のリスト
ＡｃＯＨ（酢酸）；Ｂｎ（ベンジル）；ＢＯＰ（ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート）；（ＢＯＣ）２Ｏ（ジ−tert−ブチルジカーボネート；ＣＳＩ（クロロスルホニルイソシアネート）；ＤＢＵ（１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］−ウンデカ−７−エン；ＤＣＭ（ジクロロメタン（塩化メチレン））；ＤＥＡ（ジエチルアミン）；ＤＩＰＥＡ（ジイソプロピルエチルアミン）；ＤＭＦ（Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド）；ＥＤＣＩ（１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩；Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）；ＥｔＯＨ（エタノール）；ＥｔＯＡｃ（酢酸エチル）；ＨＯＢｔ（１−ヒドロキシベンゾトリアゾール）；ｉ−ＰｒＯＨ（イソプロパノール）；ＬＡＨ（水素化アルミニウムリチウム）；ｍ−ＣＰＢＡ（また、ＭＣＰＢＡ）（３−クロロペルオキシ安息香酸）；ＭｅＯＨ（メタノール）；ＭＷ（マイクロ波）；ＮＣＳ（Ｎ−クロロスクシンイミド）；ＮＭＰ（１−メチル−２−ピロリジノン）；ｐ−ＴＳＡ（ｐ−トルエンスルホン酸）；ＲＴ（室温）；ＴＥＡ（トリエチルアミン）；ＴＨＦ（テトラヒドロフラン）；ＴＬＣ（薄層クロマトグラフィー）。
【００８７】
実施例１： （４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−（４−｛４−［４−（４−メチルチオフェン−３−イル）−ベンゾトリアゾール−１−イル］−ピリミジン−２−イルアミノ｝−シクロヘキシル）−メタノン（化合物１）の合成
ＡｃＯＨ（１００mL）中の３−ニトロベンゼン−１，２−ジアミン（１５．０ｇ）の混合物に、ＮａＮＯ２（７．０ｇ）を添加した。ＲＴで１５分間反応混合物を撹拌し、次いで、約２時間６０℃で加熱したところ、その間に反応混合物は赤色になった。混合物をＲＴに冷却し、氷水で希釈し、得られた沈殿物を濾過し、氷水で洗浄し、次いで真空下で乾燥させて、薄茶色の固体として４−ニトロ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール（１３．４５ｇ、収率８３．６％）を得た。さらに精製することなく、生成物を使用した。
【００８８】
（Ｂ） ＥｔＯＨ（４０mL）中の４−ニトロ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール（０．４９２ｇ）と１０％のＰｄＣ（０．１０ｇ）との混合物を、１時間Parr装置内で４０psiにて水素化した。セライト（Celite）によって生成物を濾過し、ＥｔＯＡｃで数回洗浄し、合わせた濾液を減圧下で濃縮して、橙色の固体（０．４０５ｇ）を得た。生成物を、短いＳｉＯ２カラム（１：１ ＥｔＯＡｃ−ヘキサン）で精製し、橙色の固体として４−アミノ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール（０．３２２ｇ、収率８０％）を得た。
【００８９】
（Ｃ） 氷浴中にて、Ｎ２下で無水ＤＭＦ（１００mL）を冷却した。これに、４−アミノ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール（９．０ｇ）を添加し、混合物を１０分間撹拌した。これに、ＮａＨ（６０％、２．９５ｇ）を添加し、１５分間氷浴上で混合物を撹拌した。最後に、４−クロロ−２−メチルスルファニル−ピリミジン（１１．００ｇ）を添加し、氷浴を除去し、混合物をＲＴに加温し、次いで、１時間８５℃に加熱した。次に、反応混合物をＲＴに冷却し、氷水で希釈した。細かい黄色の沈殿物を濾過し、冷水で洗浄し、ＥｔＯＡｃとともに粉砕（titurate）して、１−（２−メチルスルファニル−ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−４−イルアミン（１３．４３ｇ、収率７８％）を得た。
【００９０】
（Ｄ） １−（２−メチルスルファニル−ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−４−イルアミン（１２．０ｇ）、氷（５０ｇ）、Ｈ２Ｏ（２５mL）およびＨＣｌ（濃、２５mL）の混合物を５分間氷浴中で撹拌した。ＮａＮＯ２（３．３８ｇ）のＨ２Ｏ（２５mL）溶液をゆっくり反応混合物の表面下に添加し、３０分間撹拌した。次いで、これにＨ２Ｏ（２５mL）中のＫＩ（９．３ｇ）を添加し、反応混合物を一晩撹拌した。次いで、１０％のＮａＯＨ（水溶液）で混合物を塩基化し、ＣＨＣｌ３で抽出した。合わせた有機抽出物をＨ２Ｏおよびブラインで洗浄し、減圧下で溶媒を除去して、赤色残留物として４−ヨード−１−（２−メチルスルファニル−ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ベンゾトリアゾール（１１．１５ｇ、６５％）を得た。
【００９１】
（Ｅ） ４−ヨード−１−（２−メチルスルファニル−ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ベンゾトリアゾール（３．６２ｇ）のＤＣＭ（１２５mL）溶液を氷浴で冷却し、添加漏斗を使用して、１時間にわたって、ＭＣＰＢＡ（２．２４ｇ）のＤＣＭ（５０mL）溶液を滴下することにより処理した。次いで、１０％のＮａ２Ｓ２Ｏ７溶液で反応混合物をクエンチし、ＤＣＭで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３、Ｈ２Ｏ、およびブラインで洗浄した。Ｎａ２ＳＯ４で有機層を乾燥させ、溶媒を減圧下で除去した。残留物をシリカを用いたクロマトグラフィー（３〜５％のＭｅＯＨ−ＤＣＭ）で分離して、薄橙色の固体として４−ヨード−１−（２−メチルスルフィニル−ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ベンゾトリアゾール（２．６５ｇ、６９％）を得た。
【００９２】
（Ｆ） １，４−ジオキサン（２５mL）中の４−ヨード−１−（２−メチルスルフィニル−ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ベンゾトリアゾール（２．０ｇ）および４−アミノ−シクロヘキサンカルボン酸エチルエステル（１．８ｇ）の混合物を、１１０℃で４時間撹拌した。減圧下で溶媒を除去して油を得、これをＥｔＯＨに溶解させ（taken up in EtOH）、薄橙色の固体が形成されるまで水浴中で加熱した。固体を濾過し、Ｅｔ２Ｏで洗浄し、乾燥させて、薄橙色の粉末として４−［４−（４−ヨードベンゾトリアゾール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキサンカルボン酸エチルエステル（３．５６ｇ、９３％）を得た。
【００９３】
（Ｇ） ＴＨＦ（２０mL）、ＥｔＯＨ（２０mL）およびＨ２Ｏ（１５mL）中の４−［４−（４−ヨードベンゾトリアゾール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキサンカルボン酸エチルエステル（２．５６ｇ）の混合物に、ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（０．６５ｇ）を添加し、得られた混合物をＲＴで一晩撹拌した。次いで、Ｈ２Ｏ（１０mL）中のクエン酸（２．９９ｇ）で反応混合物を酸性化し、溶媒を減圧下で除去した。得られた薄橙色の固体をＨ２Ｏ中で３０分間撹拌し、濾過し、Ｈ２Ｏで洗浄し、乾燥させて、薄橙色の粉末として４−［４−（４−ヨードベンゾトリアゾール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキサンカルボン酸（２．１ｇ、８７％）を得た。Ｍｐ＝２５２〜２５４℃。
【００９４】
（Ｈ） ＴＨＦ（６０mL）中の４−［４−（４−ヨードベンゾトリアゾール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキサンカルボン酸（２．１ｇ）、（ＢＯＰ（３．０ｇ）、４−ヒドロキシピリジン（０．６９ｇ）、およびＤＩＰＥＡ（０．５７mL）の混合物を、ＲＴで一晩撹拌した。次いで、反応混合物を濾過し、薄橙の固体をＥｔ２Ｏで洗浄し、乾燥させて、生成物を得た。母液を濃縮し、Ｈ２Ｏで希釈し、ＤＣＭで抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を揮散させ、合計収量２．２５ｇの（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−｛４−［４−（４−ヨードベンゾトリアゾール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−メタノンを得た。Ｍｐ＝２６５．６〜２６８．１℃。
【００９５】
（Ｉ） （４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−｛４−［４−（４−ヨードベンゾトリアゾール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル）｝−メタノン（０．２５ｇ）、４−メチル−３−チオフェンボロン酸（０．０６８ｇ）、およびＮａ２ＣＯ３（２Ｍ、０．７mL、脱気）の混合物を、１５分間Ｎ２下でＲＴにて撹拌した。これに、トルエン（８mL、脱気）およびＥｔＯＨ（０．５mL）とともにＰｄ（ＰＰｈ３）４（０．０１６ｇ）を添加し、混合物を１１０℃で一晩撹拌した。次いで、反応混合物を水で希釈し、ＤＣＭで抽出し、水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を揮散させて、固体を得た。固体を、ＤＣＭ：１％のＮＨ４ＯＨ−ＭｅＯＨ（１０００：５０）で溶出して、シリカを用いたフラッシュクロマトグラフィーで分離し、オフホワイトの固体として（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−（４−｛４−［４−（４−メチルチオフェン−３−イル）−ベンゾトリアゾール−１−イル］−ピリミジン−２−イルアミノ｝−シクロヘキシル）−メタノン（化合物１、０．１１４ｇ、４０％）を得た。Ｍｐ＝２４６〜２４７℃；Ｍ＋Ｈ＝５１８。
【００９６】
実施例２： （４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−｛４−［４−（４−ｏ−トリル−ベンゾトリアゾール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−メタノン（化合物２）の合成
（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−｛４−［４−（４−ヨードベンゾトリアゾール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−メタノン（０．４ｇ）、ｏ−トリルボロン酸（０．１０４ｇ）およびＮａ２ＣＯ３（２Ｍ、１．１mL、脱気）の混合物をアルゴンで５分間脱気し、次いで、１５分間Ｎ２下でＲＴにて撹拌した。これに、トルエン（１３mL、脱気）およびＥｔＯＨ（１mL）とともにＰｄ（ＰＰｈ３）４（０．０２５ｇ）を添加し、混合物を１１０℃で一晩撹拌した。次いで、反応混合物を水で希釈し、ＤＣＭで抽出し、水及びブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を揮散させて、固体を得た。固体を、ＤＣＭ：１％のＮＨ４ＯＨ−ＭｅＯＨ（１０００：５０）で溶出して、シリカを用いたフラッシュクロマトグラフィーで分離し、オフホワイトの固体として（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−｛４−［４−（４−ｏ−トリル−ベンゾトリアゾール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロへキシル｝−メタノン（化合物２、０．２７２ｇ、７３％）を得た。Ｍｐ＝２２４〜２２６℃；Ｍ＋Ｈ＝５１２。
【００９７】
実施例３： （４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−（４−｛４−［４−（４−メチルピリジン−３−イル）−ベンゾトリアゾール−１−イル］−ピリミジン−２−イルアミノ｝−シクロヘキシル）−メタノン（化合物３）の合成
（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−｛４−［４−（４−ヨードベンゾトリアゾール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−メタノン（０．３１ｇ）、４−メチル−ピリジン−３−ボロン酸（０．０８６ｇ）、およびＮａ２ＣＯ３（２Ｍ、０．８６mL、脱気）の混合物をアルゴンで５分間脱気し、次いで、１５分間Ｎ２下でＲＴにて撹拌した。これに、トルエン（１３mL、脱気）およびＥｔＯＨ（１mL）とともにＰｄ（ＰＰｈ３）４（０．０２５ｇ）を添加し、混合物を１１０℃で一晩撹拌した。ＴＬＣが出発物質の存在を示したので、４−メチル−ピリジン−３−ボロン酸（０．０８６ｇ）およびＰｄ（ＰＰｈ３）４（２０mg）のさらなるアリコートを添加し、混合物を１１０℃でさらに７時間撹拌した。次いで、反応混合物を水で希釈し、ＤＣＭで抽出し、水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を揮散させて、固体を得た。固体を、ＤＣＭ：１％のＮＨ４ＯＨ−ＭｅＯＨ（１０００：５０）で溶出して、シリカを用いたフラッシュクロマトグラフィーで分離し、オフホワイトの固体として（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−（４−｛４−［４−（４−メチルピリン−３−イル）−ベンゾトリアゾール−１−イル］−ピリミジン−２−イルアミノ｝−シクロヘキシル）−メタノン（化合物３、０．１０８ｇ、３７％）を得た。Ｍｐ＝１９４．３〜２１８．２℃；Ｍ＋Ｈ＝５１３。
【００９８】
実施例４： （４−｛４−［４−（３，５−ジメチルイソオキサゾール−４−イル）−ベンゾトリアゾール−１−イル］−ピリミジン−２−イルアミノ｝−シクロヘキシル）−（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−メタノン（化合物４）の合成
（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−｛４−［４−（４−ヨードベンゾトリアゾール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−メタノン（０．３１ｇ）、（３，５−ジメチルイソオキサゾール−４−イル）ボロン酸（０．０８８ｇ）、およびＮａ２ＣＯ３（２Ｍ、０．８６mL、脱気）の混合物を、１５分間Ｎ２下でＲＴにて撹拌した。これに、トルエン（１０mL、脱気）およびＥｔＯＨ（１mL）とともにＰｄ（ＰＰｈ３）４（０．０１９ｇ）を添加し、混合物を１１０℃で一晩撹拌した。ＴＬＣが出発物質の存在を示したので、（３，５−ジメチルイソオキサゾール４−イル）ボロン酸（０．０８８ｇ）およびＰｄ（ＰＰｈ３）４（２０mg）のさらなる部分を添加し、混合物を１１０℃で一晩撹拌した。次いで、反応混合物を水で希釈し、ＤＣＭで抽出し、水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を揮散させて、薄灰色の固体を得た。前記固体を、ＤＣＭ：１％のＮＨ４ＯＨ−ＭｅＯＨ（１０００：５０）で溶出して、シリカを用いたフラッシュクロマトグラフィーで分離し、白色の粉末（０．２１ｇ）を得た。Ｅｔ２Ｏ（２５mL）に粉末を溶解させ、水浴中で加熱し、水浴から取り出し、消火し（extinguished）、白色粉末として（４−｛４−［４−（３，５−ジメチルイソオキサゾール−４−イル）−ベンゾトリアゾール−１−イル］−ピリミジン−２−イルアミノ｝−シクロヘキシル）−（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−メタノン（化合物４、０．１２９ｇ、４４％）を回収した。Ｍｐ＝＞３００℃；Ｍ＋Ｈ＝５１７。
【００９９】
実施例５： （１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イル）−｛４−［４−（４−メチル−チオフェン−３−イル）−ベンゾトリアゾール−１−イル］−ピリミジン−２−イル｝−アミン（化合物５）の合成
１，４−ジオキサン（２０mL）中の４−ヨード−１−（２−メタンスルフィニル−ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ベンゾトリアゾール（７００mg）および１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イルアミン（６４２mg）の混合物をアルゴン下で撹拌し、次いで、１１０℃で４．５時間加熱した。次いで、反応混合物を冷却し、減圧下で溶媒を除去して、固体を得た。０〜１００％のＥｔＯＡｃ／ヘキサンを使用して、前記固体をシリカを用いたクロマトグラフィーで分離し、［４−（４−ヨードベンゾトリアゾール−１−イル）−ピリミジン−２−イル］−（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イル）−アミン（７３１mg）を得た。
【０１００】
（Ｂ） ［４−（４−ヨードベンゾトリアゾール−１−イル）−ピリミジン−２−イル］−（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イル）−アミン（３６４mg）、（４−メチル−３−チオフェンボロン酸（１０９mg）、ならびにＮａ２ＣＯ３（２Ｍの水溶液、１．１mL、脱気）、トルエン（１３mL、脱気）およびＥｔＯＨ（１mL）の混合物にアルゴンを通気し、ねじ蓋圧力フラスコ内で１０分間ＲＴで撹拌した。これに、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（２５mg）を添加し、フラスコを密閉し、混合物を１１０℃で一晩撹拌した。次いで、反応混合物をＲＴに冷却し、水で希釈し、ＤＣＭで抽出し、水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を揮散させて、固体を得た。前記固体を、０〜３０％のMagic Base／ＤＣＭで溶出して、シリカを用いたクロマトグラフィーで分離し、次いで、０〜１００％のＥｔＯＡｃ／ヘキサンを使用して、再度シリカを用いたクロマトグラフィーで分離した。生成物をＥｔ２Ｏとともに粉砕し、濾過し、減圧下で一晩蒸発させて、（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イル）−｛４−［４−（４−メチル−チオフェン−３−イル）−ベンゾトリアゾール−１−イル］−ピリミジン−２−イル｝−アミン（化合物５、２１９mg）を得た。Ｍｐ＝２４４．０〜２４５．０℃；Ｍ＋Ｈ＝４７０。
【０１０１】
実施例６： （４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−｛４−［４−（４−チオフェン−３−イルベンゾトリアゾール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−メタノン（化合物６）の合成
（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−｛４−［４−（４−ヨードベンゾトリアゾール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−メタノン（２７４mg）および３−チオフェンボロン酸（６７mg）の混合物をねじ蓋圧力フラスコに入れ、Ｎａ２ＣＯ３（２Ｍの水溶液、０．７mL、脱気）、トルエン（５mL、脱気）およびＥｔＯＨ（５mL）を添加した。これに、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（２０mg）を添加し、フラスコを密閉し、混合物を１１０℃で一晩撹拌した。次いで、反応混合物をＲＴに冷却し、水で希釈し、ＤＣＭで抽出し、水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を揮散させて、粗固体（０．２５ｇ）を得た。粗生成物を、０〜７０％のMagic Base／ＤＣＭで溶出して、シリカを用いたクロマトグラフィーで分離し、Ｅｔ２Ｏ中で粉砕し、濾過し、蒸発させて、（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−｛４−［４−（４−チオフェン−３−イルベンゾトリアゾール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−メタノン（化合物６、２０１mg）を得た。ｍｐ＝２３３〜２３４℃；Ｍ＋Ｈ＝５０４。
【０１０２】
実施例７： （４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−（４−｛４−［４−（４−メチル−チオフェン−３−イル）−インドール−１−イル］−ピリミジン−２−イルアミノ｝−シクロヘキシル）−メタノン（化合物７）の合成
ＮａＨ（７．５９ｇ、６０％）のＤＭＦ（２００mL）懸濁液に、Ｎ２下で４−ブロモインドールを少しずつ添加し、混合物を０℃で１５分間撹拌した。これに、４−クロロ−２−メチルスルファニル−ピリミジン（１５．４５mL）を少しずつ添加し、０℃で３０分間反応混合物を撹拌し、次いで、更に３０分間撹拌しながらＲＴに加温した。次いで、反応混合物を０℃の冷水でクエンチし、得られた懸濁液を濾過し、水で洗浄し、乾燥させて、粗生成物（４１．０１ｇ）を得た。前記粗生成物（２１．９０ｇ）を、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ（９００：１００）で溶出して、シリカを用いたクロマトグラフィーで分離し、オフホワイトの固体（１６．４ｇ）を得た。蒸気浴上のＥｔＯＨ中で固体を加熱し、結晶化させ、濾過し、乾燥させて、４−ブロモ−１−（２−メチルスルファニル−ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インドールを得た。
【０１０３】
（Ｂ） ０℃で、４−ブロモ−１−（２−メチルスルファニル−ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インドール（５．０ｇ）のＤＣＭ（２００mL）溶液に、ＭＣＰＢＡ（４．０１ｇ）を少しずつ添加し、０℃で１時間混合物を撹拌した。反応混合物を１０％のＮａ２ＳＯ３（水溶液）でクエンチし、ＤＣＭとＮａＨＣＯ３（水溶液）との間で分配し、有機層をＮａＨＣＯ３（水溶液）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を揮散させて、薄黄色の固体を得、これを次に、熱ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（５０：５０）で処理し、濾過し、乾燥させて、オフホワイトの粉末として４−ブロモ−１−（２−メチルスルフィニル−ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インドール（４．９８ｇ）を得た。
【０１０４】
（Ｃ） １，４−ジオキサン（１００mL）中の４−ブロモ−１−（２−メチルスルフィニル−ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インドール（４．９８ｇ）および４−アミノ−シクロヘキサンカルボン酸エチルエステル（５．０７ｇ）の混合物を、５．５時間Ｎ２下で１１０℃にて撹拌した。減圧下で溶媒を除去して油を得、これをＲＴで固化させた。生成物を、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ（７：３〜６：４）で溶出して、シリカを用いたフラッシュクロマトグラフィーで分離し、白色粉末として４−［４−（４−ブロモインドール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキサンカルボン酸エチルエステル（５．８２ｇ、８９％）を得た。
【０１０５】
（Ｄ） ＴＨＦ（１００mL）、ＥｔＯＨ（４０mL）、およびＨ２Ｏ（３０mL）中の４−［４−（４−ブロモインドール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキサンカルボン酸エチルエステル（５．８ｇ）およびＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（１．６５ｇ）の混合物を一晩ＲＴで撹拌した。次いで、クエン酸（２０mLのＨ２Ｏ中７．５４ｇ）で反応混合物を酸性化させ、１時間ＲＴで撹拌した。沈殿物を濾過し、水、次いでＥｔ２Ｏで洗浄し、乾燥させて、白色粉末として４−［４−（４−ブロモインドール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキサンカルボン酸（５．２７ｇ、９７％）を得た。
【０１０６】
（Ｅ） ＴＨＦ（２００mL）中の４−［４−（４−ブロモインドール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキサンカルボン酸（５．２７ｇ）、（ＢＯＰ（８．４２ｇ）、４−ヒドロキシピペリジン（１．９３ｇ）、およびヒューニッヒ塩基（４．４２mL）の混合物を、４．２５時間ＲＴで撹拌した。反応混合物を濾過して、白色粉体（３．０１ｇ）を得た。母液を濃縮し、Ｈ２Ｏで希釈し、ＤＣＭで抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、揮散させてオフホワイトの固体を得、これをＥｔＯＨ中で加熱し、濾過し、乾燥させて、｛４−［４−（４−ブロモ−インドール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−メタノン（合計６．０９ｇ、９６％）を得た。
【０１０７】
（Ｆ） ｛４−［４−（４−ブロモ−インドール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−メタノン（０．３０ｇ）、４−メチル−３−チオフェンボロン酸（０．０９４ｇ）、ならびにＮａ２ＣＯ３（２Ｍの水溶液、０．９mL、脱気）、トルエン（１０mL、脱気）およびＥｔＯＨ（２mL）の混合物を、１０分間ＲＴで撹拌した。これに、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（０．０２ｇ）を添加し、Ｎ２下で１１０℃にて一晩撹拌した。次いで、反応混合物をＲＴに冷却し、水で希釈し、ＤＣＭで抽出し、水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を揮散させて粉末を得た。固体を、ＤＣＭ：１％のＮＨ４ＯＨ−ＭｅＯＨ（１０００：５０）で溶出して、シリカを用いたフラッシュクロマトグラフィで分離し、オフホワイトの固体を得、これをＥｔＯＨから結晶化させて、（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−（４−｛４−［４−（４−メチル−チオフェン−３−イル）−インドール−１−イル］−ピリミジン−２−イルアミノ｝−シクロヘキシル）−メタノン（化合物７、０．１２ｇ、３９％）を得た。Ｍｐ＝１６８〜１８８℃；Ｍ＋Ｈ＝５１６。
【０１０８】
実施例８： （４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−｛４−［４−（４−ピリジン−４−イル−ベンジルトリアゾール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−メタノン（化合物８）の合成
（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−｛４−［４−（４−ヨードベンゾトリアゾール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−メタノン（２７４mg）および４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキキソボロラン−２−イル）−ピリジン（１０８mg）の混合物をねじ蓋圧力フラスコに入れ、Ｎａ２ＣＯ３（２Ｍの水溶液、０．７mL、脱気）、トルエン（５mL、脱気）およびＥｔＯＨ（５mL）を添加した。これに、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（２０mg）を添加し、フラスコを密閉し、混合物を１１０℃で一晩撹拌した。次いで、反応混合物をＲＴに冷却し、水で希釈し、ＤＣＭで抽出し、水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を揮散させて、粗固体（０．２９ｇ）を得た。粗生成物を、０〜７０％のMagic Base／ＤＣＭで溶出して、シリカを用いたクロマトグラフィーで分離し、一晩Ｅｔ２Ｏ中で粉砕し、濾過し、蒸発させて、（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−｛４−［４−（４−ピリジン−４−イル−ベンジルトリアゾール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−メタノン（化合物８、１３０mg）を得た。ｍｐ＝２６６．０〜２６７．０℃；Ｍ＋Ｈ＝４９９。
【０１０９】
実施例９： ｛４−［４−（４−フラン−３−イル−ベンゾトリアゾール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−メタノン（化合物９）の合成
（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−｛４−［４−（４−ヨードベンゾトリアゾール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−メタノン（２７４mg）および３−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキキソボロラン−２−イル）−フラン（１０２mg）の混合物をねじ蓋圧力フラスコに入れ、Ｎａ２ＣＯ３（２Ｍの水溶液、０．７mL、脱気）、トルエン（５mL、脱気）およびＥｔＯＨ（５mL）を添加した。これに、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（２０mg）を添加し、フラスコを密閉し、混合物を１１０℃で一晩撹拌した。次いで、反応混合物をＲＴに冷却し、水で希釈し、ＤＣＭで抽出し、水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を揮散させて、粗固体を得た。粗生成物を、０〜６０％のMagic Base／ＤＣＭで溶出して、シリカを用いたクロマトグラフィーで分離し、一晩Ｅｔ２Ｏ中で粉砕し、濾過し、蒸発させて、｛４−［４−（４−フラン−３−イル−ベンゾトリアゾール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−メタノン（化合物９、１０３mg）を得た。ｍｐ＝２４３．０〜２４４．０℃；Ｍ＋Ｈ＝４８８。
【０１１０】
実施例１０： （１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イル）−｛４−［４−（３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−ベンゾトリアゾール−１−イル］−ピリミジン−２−イル｝−アミン（化合物１０）の合成
［４−（４−ヨードベンゾトリアゾール−１−イル）−ピリミジン−２−イル］−（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イル）−アミン（２５０mg）、３−メチル−ピラゾール−４−ボロン酸ピナコールエステル（１０９mg）、ならびにＮａ２ＣＯ３（２Ｍの水溶液、０．７mL、脱気）、トルエン（９mL、脱気）およびＥｔＯＨ（０．７mL）の混合物を、ねじ蓋圧力フラスコに添加した。これに、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（２０mg）を添加し、フラスコを密閉し、混合物を１１０℃で一晩撹拌した。次いで、反応混合物をＲＴに冷却し、３−メチル−ピラゾール−４−ボロン酸ピナコールエステル（１０９mg）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（２０mg）およびＥｔＯＨ（５mL）のさらなる部分を添加した。再度フラスコを密閉し、１１０℃で一晩加熱した。次いで、反応混合物を水で希釈し、ＤＣＭで抽出し、水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を揮散させて、固体（０．３４ｇ）を得た。固体を、０〜６０％のMagic Base／ＤＣＭで溶出して、シリカを用いたクロマトグラフィーで分離し、次いで、０〜６０％のMagic Base／ＤＣＭを使用して、再度シリカを用いたクロマトグラフィーで分離した。Ｅｔ２Ｏとともに生成物を粉砕し、濾過し、減圧下で一晩乾燥させて、（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イル）−｛４−［４−（３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−ベンゾトリアゾール−１−イル］−ピリミジン−２−イル｝−アミン（化合物１０、３９mg）を得た。Ｍｐ＝２３１〜２３２℃；Ｍ＋Ｈ＝４５４。
【０１１１】
実施例１１： （４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−（４−｛４−［４−（３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ベンゾトリアゾール−１−イル］−ピリミジン−２−イルアミノ｝−シクロヘキシル）−メタノン（化合物１１）の合成
（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−｛４−［４−（４−ヨードベンゾトリアゾール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−メタノン（２７４mg）および３−メチル−ピラゾール−４−ボロン酸ピナコールエステル（１０９mg）、Ｎａ２ＣＯ３（２Ｍの水溶液、０．７mL、脱気）、トルエン（９mL、脱気）およびＥｔＯＨ（０．７mL）の混合物に、１０分間ねじ蓋圧力フラスコ内にてアルゴンを通気した。これに、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（１８mg）を添加し、フラスコを密閉し、混合物を１１０℃で一晩撹拌した。反応混合物をＲＴに冷却し、次いで、３−メチル−ピラゾール−４−ボロン酸ピナコールエステル（１０９mg）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（２０mg）およびＥｔＯＨ（５mL）のさらなる部分を添加し、フラスコを密閉し、１１０℃で６時間再度加熱した。３−メチル−ピラゾール−４−ボロン酸ピナコールエステル（１０９mg）およびＰｄ（ＰＰｈ３）４（２０mg）のさらなる部分を添加し、混合物を１１０℃で一晩撹拌した。次いで、反応混合物をＲＴに冷却し、水で希釈し、ＤＣＭで抽出し、水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を揮散させて、粗固体（３１１mg）を得た。粗生成物（５２mg）を、０〜６０％のMagic Base／ＤＣＭで溶出して、シリカを用いたクロマトグラフィーで分離し、一晩Ｅｔ２Ｏ中で粉砕し、濾過し、乾燥させて、（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−（４−｛４−［４−（３−メチル−１Ｈ−ピラゾール４−イル）−ベンジルトリアゾール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ｝−シクロヘキシル）−メタノン（化合物１１、２８mg）を得た。ｍｐ＝１９０〜１９５℃；Ｍ＋Ｈ＝５０２。
【０１１２】
実施例１２： （４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−（４−｛４−［４−（３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）インドール−１−イル］−ピリミジン−２−イルアミノ｝−シクロヘキシル）−メタノン（化合物１２）の合成
｛４−［４−（４−ブロモ−インドール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−メタノン（０．５１ｇ）、３−メチル−ピラゾール−４−ボロン酸ピナコールエステル（０．２３４ｇ）、ならびにＮａ２ＣＯ３（２Ｍの水溶液、１．５３mL、脱気）、トルエン（１８mL、脱気）およびＥｔＯＨ（４mL）の混合物を、ねじ蓋圧力フラスコに添加した。これに、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（０．０３５ｇ）を添加し、フラスコを密閉し、混合物を１１０℃で一晩撹拌した。次いで、反応混合物を水で希釈し、ＤＣＭで抽出し、水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を揮散させて、薄黄色の固体（０．４５ｇ）を得た。前記固体を、０〜６０％のMagic Base／ＤＣＭで溶出して、シリカを用いたフラッシュクロマトグラフィーで分離し、次いで、ＤＣＭ：１％のＮＨ４ＯＨ−ＭｅＯＨ（１０００：５０）で溶出して、シリカを用いた再度クロマトグラフィーで分離し、オフホワイトの粉末として（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−（４−｛４−［４−（３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−インドール−１−イル］−ピリミジン−２−イルアミノ｝−シクロヘキシル）−メタノン（化合物１２、０．１１ｇ、２２％）を得た。Ｍｐ＝２１５〜２２０℃。
【０１１３】
実施例１３： （４−｛４−［４−（３，５−ジメチル−イソオキサゾール−４−イル）−インドール−１−イル］−ピリミジン−２−イルアミノ｝−シクロヘキシル）−（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−メタノン（化合物１３）の合成
｛４−［４−（４−ブロモ−インドール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−メタノン（０．５１ｇ）、３，５−ジメチル−イソオキサゾール−４−イル−ボロン酸（０．１７６ｇ）、ならびにＮａ２ＣＯ３（２Ｍの水溶液、１．５３mL、脱気）、トルエン（１８mL、脱気）およびＥｔＯＨ（４mL）の混合物を、ねじ蓋圧力フラスコに添加した。これに、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（０．０３５ｇ）を添加し、フラスコを密閉し、混合物を１１０℃で一晩撹拌した。次いで、反応混合物を水で希釈し、ＤＣＭで抽出し、水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を揮散させて、薄黄色の固体（０．６１ｇ）を得た。前記固体を、ＤＣＭ：１％のＮＨ４ＯＨ−ＭｅＯＨ（９００：５０）で溶出して、シリカを用いたフラッシュクロマトグラフィーで分離し、オフホワイトの粉末として（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−（４−｛４−［４−（３，５−ジメチル−イソオキサゾール−４−イル）−インドール−１−イル］−ピリミジン−２−イルアミノ｝−シクロヘキシル）−メタノン（化合物１３、０．３２ｇ、６２％）を得た。Ｍｐ＝２０３〜２０４℃。
【０１１４】
実施例１４： （４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−（４−｛４−［４−（４−メチル−ピリジン−３−イル）−インドール−１−イル］−ピリミジン−２−イルアミノ｝−シクロヘキシル）−メタノン（化合物１４）の合成
｛４−［４−（４−ブロモ−インドール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−メタノン（０．３ｇ）、４−メチルピリジン−３−ボロン酸（０．０９ｇ）、ならびにＮａ２ＣＯ３（２Ｍの水溶液、０．９mL、脱気）、トルエン（１０mL、脱気）およびＥｔＯＨ（２mL）の混合物を、ねじ蓋圧力フラスコに添加した。これに、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（０．０２ｇ）を添加し、フラスコを密閉し、混合物を１１０℃で一晩撹拌した。次いで、反応混合物を水で希釈し、ＤＣＭで抽出し、水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を揮散させて、暗褐色の油（０．３８ｇ）を得た。前記油を、ＤＣＭ：１％のＮＨ４ＯＨ−ＭｅＯＨ（１０００：２５〜１０００：５０）で溶出して、シリカを用いたフラッシュクロマトグラフィーで分離し、白色の粉末として（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−（４−｛４−［４−（４−メチル−ピリジン−３−イル）−インドール−１−イル］−ピリミジン−２−イルアミノ｝−シクロヘキシル）−メタノン（化合物１４、０．１５ｇ、２９％）を得た。Ｍｐ＝１７６〜１７８℃。
【０１１５】
実施例１５： （４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−｛４−［４−（４−ｏ−トリル−インドール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−メタノン（化合物１５）の合成
｛４−［４−（４−ブロモ−インドール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−メタノン（０．３ｇ）、ｏ−トリル−ボロン酸（０．０８９ｇ）、ならびにＮａ２ＣＯ３（２Ｍの水溶液、０．９mL、脱気）、トルエン（１２mL、脱気）およびＥｔＯＨ（３mL）の混合物を、ねじ蓋圧力フラスコに添加した。これに、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（０．０２ｇ）を添加し、フラスコを密閉し、混合物を１１０℃で一晩撹拌した。次いで、反応混合物を水で希釈し、ＤＣＭで抽出し、水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を揮散させて、油（０．４１ｇ）を得た。前記油を、ＤＣＭ：１％のＮＨ４ＯＨ−ＭｅＯＨ（１０００：２５）で溶出して、シリカを用いたフラッシュクロマトグラフィーで分離し、白色の粉末として（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−｛４−［４−（４−ｏ−トリル−インドール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロへキシル｝−メタノン（化合物１５、０．２３ｇ、４６％）を得た。Ｍｐ＝１５８〜１６０℃。
【０１１６】
実施例１６： （４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−｛４−［４−（４−ピリジン−４−イル−インドール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−メタノン（化合物１６）の合成
｛４−［４−（４−ブロモ−インドール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−メタノン（０．３ｇ）、４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサ−ボロラン−２−イル）−ピリジン（０．１３５ｇ）、ならびにＮａ２ＣＯ３（２Ｍの水溶液、０．９mL、脱気）、トルエン（１２mL、脱気）およびＥｔＯＨ（３mL）の混合物を、ねじ蓋圧力フラスコに添加した。これに、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（０．０２ｇ）を添加し、フラスコを密閉し、混合物を１１０℃で一晩撹拌した。次いで、反応混合物を水で希釈し、ＤＣＭで抽出し、水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を揮散させて、油を得た。前記油を、ＤＣＭ：１％のＮＨ４ＯＨ−ＭｅＯＨ（１０００：５０）で溶出して、シリカを用いたフラッシュクロマトグラフィーで分離し、白色の粉末として（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−｛４−［４−（４−ピリジン−４−イル−インドール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロへキシル｝−メタノン（化合物１６、０．１１２ｇ、３０％）を得た。Ｍｐ＝２５８〜２５９℃；Ｍ＋Ｈ＝４９７。
【０１１７】
実施例１７： （４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−｛４−［４−（４−フェニル−インドール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−メタノン（化合物１７）の合成
｛４−［４−（４−ブロモ−インドール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−メタノン（０．３ｇ）、ベンゼン−ボロン酸（０．０８６ｇ）、ならびにＮａ２ＣＯ３（２Ｍの水溶液、０．９mL、脱気）、トルエン（１２mL、脱気）およびＥｔＯＨ（４mL）の混合物を、ねじ蓋圧力フラスコに添加した。これに、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（０．０２ｇ）を添加し、フラスコを密閉し、混合物を１１０℃で一晩撹拌した。次いで、反応混合物を水で希釈し、１０％のＭｅＯＨ−ＤＣＭで抽出し、水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を揮散させて、薄茶色の固体を得た。前記固体を、ＤＣＭ：１％のＮＨ４ＯＨ−ＭｅＯＨ（１０００：２５）で溶出して、シリカを用いたフラッシュクロマトグラフィーで分離し、白色の粉末として（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−｛４−［４−（４−フェニル−インドール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロへキシル｝−メタノン（化合物１７、０．１７１ｇ、５８％）を得た。Ｍｐ＝１９０〜１９１℃；Ｍ＋Ｈ＝４９６。
【０１１８】
実施例１８： （４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−｛４−［４−（４−チオフェン−３−イル−インドール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−メタノン（化合物１８）の合成
｛４−［４−（４−ブロモ−インドール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−メタノン（０．５１ｇ）、３−チオフェン−ボロン酸（０．１６ｇ）、ならびにＮａ２ＣＯ３（２Ｍの水溶液、１．５３mL、脱気）、トルエン（１２mL、脱気）およびＥｔＯＨ（１２mL）の混合物を、ねじ蓋圧力フラスコに添加した。これに、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（０．０３５ｇ）を添加し、フラスコを密閉し、混合物を１１０℃で一晩撹拌した。次いで、反応混合物を水で希釈し、ＤＣＭで抽出し、水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を揮散させて、黄色の固体を得た。前記固体を、ＤＣＭ：１％のＮＨ４ＯＨ−ＭｅＯＨ（１０００：５０）で溶出して、シリカを用いたフラッシュクロマトグラフィーで分離し、薄黄色の粉末として（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−｛４−［４−（４−チオフェン−３−イル−インドール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロへキシル｝−メタノン（化合物１８、０．３２ｇ、６３％）を得た。Ｍｐ＝１７１〜１７２℃；Ｍ＋Ｈ＝５０２。
【０１１９】
実施例１９： 製剤
以下の表に示すように、様々な経路によって送達するための薬学的調製品を製剤する。以下の表で用いられるとき、「活性成分」または「活性化合物」は、式Ｉで示される化合物のうち１つ以上を意味する。
【０１２０】
【表２】
【０１２１】
成分を混合し、各々約１００mgを含有するカプセルに分配する；１個のカプセルは、おおよそ合計日用量である。
【０１２２】
【表３】
【０１２３】
成分を混ぜ合せて、メタノールなどの溶媒を用いて顆粒化する。次いで、その製剤を乾燥させて、適切な打錠機で錠剤（約２０mgの活性化合物を含有する）に成形する。
【０１２４】
【表４】
【０１２５】
成分を混合して、経口投与用の懸濁剤を形成する。
【０１２６】
【表５】
【０１２７】
活性成分を注射用水の一部に溶解させる。次いで、十分な量の塩化ナトリウムを撹拌しながら添加し、等張溶液を作製する。注射用水の残りを用いて溶液の重量を調整し、０．２ミクロンのメンブランフィルターを用いて濾過し、無菌条件下でパッケージ化する。
【０１２８】
【表６】
【０１２９】
成分を一緒に融解させ、蒸気浴上で混合し、全重量２．５ｇを収容する型に注ぐ。
【０１３０】
【表７】
【０１３１】
水以外の成分をすべて混ぜ合わせて、撹拌しながら約６０℃に加熱する。次いで、約６０℃の十分な量の水を激しく撹拌しながら添加して、成分を乳化し、次いで、適量である約１００ｇの水を添加する。
【０１３２】
鼻内噴霧製剤
鼻内噴霧製剤として約０．０２５〜０．５パーセントの活性化合物を含有しているいくつかの水懸濁剤を調製する。前記製剤は、場合により、例えば、微結晶性セルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、デキストロースなどの非活性成分を含有してもよい。塩酸を添加してｐＨを調節してもよい。鼻内噴霧製剤は、典型的には、１回の作動当たり約５０〜１００μLの製剤が鼻内噴霧定量ポンプを介して送達され得る。典型的な投与スケジュールは、４〜１２時間毎に２〜４回噴霧である。
【０１３３】
実施例２０： インビトロにおけるＪＮＫアッセイ
[γ−３３Ｐ］ＡＴＰを用いたＧＳＴ−ＡＴＦ２（１９−９６）のリン酸化によりＪＮＫ活性を測定した。Ｋｍ濃度のＡＴＰと基質を用い、２５mMのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）、２mMのジチオスレイトール、１５０mMのＮａＣｌ、２０mMのＭｇＣｌ２、０．００１％のTween（登録商標）２０、０．１％のＢＳＡおよび１０％のＤＭＳＯを含有するバッファ中の最終体積４０μLで酵素反応を行った。ヒトＪＮＫ２α２アッセイは、１nMの酵素、１μMのＡＴＦ２、１μCiの［γ−３３Ｐ］ＡＴＰを含む８μMのＡＴＰを含有する。ヒトＪＮＫ１α１アッセイは、２ｎＭのｎＭ酵素、１μMのＡＴＦ２、１μCiのCi［γ−３３Ｐ］ＡＴＰを含む６μMのＡＴＰを含有する。ヒトＪＮＫ３（Upstate Biotech #14-501M）アッセイは、２ｎＭの酵素、１μMのＡＴＦ２、１μCiの［γ-33P］ＡＴＰを含む４μMのＡＴＰを含有する。いくつかの濃度の化合物の存在下または非存在下で酵素アッセイを実行した。ＪＮＫおよび化合物を１０分間プレインキュベーションし、次いでＡＴＰおよび基質を添加することにより酵素反応を開始させた。３０分間３０℃で反応混合物をインキュベーションした。インキュベーションの終わりに、反応混合物２５μLを、１３５mMのＥＤＴＡを含有している１０％のグルタチオンSepharose（登録商標）スラリー（Amersham # 27-4574-01)スラリー１５０μLに移すことにより反応を終了させた。親和性樹脂に反応生成物を捕捉させ、濾過プレート(Millipore, MABVNOB50）上においてリン酸緩衝生理食塩水で６回洗浄して、遊離放射性ヌクレオチドを除去した。マイクロプレートシンチレーションカウンター（Packard Topcount）を用いて、３３ＰのＡＴＦ２への取込みを定量した。３パラメータモデルに適合させた１０本の濃度阻害曲線から得られたＩＣ５０値により、ＪＮＫに対する化合物の阻害効力を測定した：阻害（％）＝最大／（１＋（ＩＣ５０／［インヒビター］）勾配）。パラメータ推定のためにMicrosoft Excelでデータを解析した。結果を以下の表２に示す：
【０１３４】
【表８】
【０１３５】
実施例２１： リン酸化ｃ−Ｊｕｎ移行アッセイ
炎症は、炎症経路の他の遺伝子に対するｃ−Ｊｕｎの作用によって部分的にレギュレーションされる。したがって、リン酸化ｃ−Ｊｕｎの核への移行阻害は、化合物の抗炎症作用の指標を提供する。American Tissue Culture CollectionからＳＷ１３５３細胞を購入し、培養条件（３７℃、５％のＣＯ２）下で、１０％のウシ胎児血清（Invitrogen）、アスコルビン酸（Sigma）およびペニシリン／ストレプトマイシン／グルタメート（Invitrogen）を含むＤＭＥＭ培地（Invitrogen）を含有する成長培地中で維持した。化合物処理の２４時間前に、１００μLの成長培地中に８，０００細胞／ウェルの密度で細胞をプレーティングした。化合物処理直前に、成長培地を９０μLの新たな培地に交換した。まず、１０mMの化合物原液を化合物ビヒクル（ＤＭＳＯ）で３mMに希釈し、次いで、無血清培地で希釈し、各ウェルに１０×濃縮溶液として１０μLの体積を添加し、混合し、５％ ＣＯ２中、３７℃で３０分間、細胞とともにプレインキュベーションした。すべてのサンプルについて、１％の終末濃度で化合物ビヒクル（ＤＭＳＯ）を維持した。３０分間インキュベーションした後、２０分間ＴＮＦα（１ng／mL、Roche Biochem）で細胞を活性化させた。次いで、細胞を固定し、透過性にし、製造業者の指示に従って、抗−リン酸化ｃ−Ｊｕｎ抗体（Santa Cruz）、次いでAlexa Fluor 488で標識した二次抗体およびHoechet 33342色素（Invitrogen）で染色した。ArrayScan HCSシステム（Cellomic）により、１ウェル当り４００個の細胞についてリン酸化ｃ−Ｊｕｎのシグナルを測定した。ActivityBaseプログラム（ＩＤＢＳ）において４つのパラメータ適合関数を使用して、対照値の５０％までリン酸化ｃ−Ｊｕｎ活性が阻害される化合物の濃度としてＩＣ５０値を計算した。結果を以下の表３に示す：
【０１３６】
【表９】
【０１３７】
実施例２２： ラットのインビボＴＮＦ誘導性ＩＬ−６産生アッセイ
Charles River Laboratoriesから入手したメスのWistar-Hanラットを、使用前に１週間順化させ、そして体重を９５〜１３０ｇにする。ラットに、経口強制飼養を介して試験化合物を投与し、その３０分後０．５μgの組み換えラットＴＮＦ−α（Biosource）を腹腔内投与する。ＴＮＦ−α投与の９０分後、心臓穿刺を介して血液を回収する。リチウムヘパリン分離管（BD microtainer）を使用して血漿を調製し、分析するまで−８０℃で凍結させる。ラット特異的ＩＬ−６ ＥＬＩＳＡキット（Biosource）を使用して、ＩＬ−６濃度を決定する。阻害率およびＥＤ５０値（ＴＮＦ−α産生が対照値の５０％である化合物の投与量として計算）を決定する。結果は、本発明の化合物が、ＴＮＦ−α誘導性ＩＬ−６産生を阻害することを実証する。
【０１３８】
実施例２３： 齧歯類のコラーゲン誘導性関節炎
Harlan Laboratoriesから入手した７〜８週齢のメスのLewisラットを、使用前に１週間順化させ、そして体重を１２０〜１４０ｇにする。実験０日目に、不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ；２〜３部位で合計０．１mL）中１００μgのウシII型コラーゲン（Chondrex）のエマルションで、ラットの背中数部位に皮内（i.d.）感作させる。一般に、初回抗原刺激から１２〜１４日で関節炎誘導が観察されるが；尾の基部又は背中の別の部位に約７〜１０日目に、１００μgのコラーゲン／ＩＦＡを追加免疫注射（i.d.、合計０．１mL以内）して、疾患の誘導を同期させる。化合物投与は、予防的（追加免疫時又は１〜２日前に開始）であっても、治療的（追加免疫後、１〜２の初期疾患スコア（以下の臨床スコアを参照されたい）と同時に開始）であってもよい。次の２１日間、疾患の発生および進行について動物を評価する。
【０１３９】
スコアリングシステム（下記）を使用したり、各足について足容積測定装置を用いて足容積を測定したり、キャリパを用いて足又は関節の厚さを測定したりしてラットを評価する。０日目にベースライン測定を行い、腫脹の最初の徴候が現れたときに測定を再開し、実験の終わりまで１週間当たり最高３回測定する。各足について以下のようにスコアリングを評価する：
１＝足または１本の指における腫脹および／または発赤、
２＝２つ以上の関節における腫脹、
３＝２つを超える関節が関与している足全体の腫脹、
４＝足および指全てにおける重篤な関節炎。
【０１４０】
個々の足についての４つのスコアを加えることにより、各ラットの関節炎スコアを評価し、最高スコアは１６となる。連続的に疾患の発症および進行を測定するために、足容積測定装置を用いて後足の足容積も決定する。
【０１４１】
研究の終わりに、体重決定、組織学的、細胞および／または分子分析のために後足（および他の組織）を摘出する。さらに、心臓穿刺を介して血液を回収し、リチウムヘパリン分離管（BD microtainer）を使用して血漿を調製し、分析するまで−７０℃で凍結させる。血漿、またはホモジネートされた関節組織の炎症性サイトカイン濃度（例えば、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１およびＩＬ−６）を、ラット特異的ＥＬＩＳＡキット（R&D）を使用して決定する。対照動物と比較した臨床スコア、足容積および組織病理の変化を総合して（as a composite of）、疾患保護または阻害のレベルを決定する。
【０１４２】
実施例２４： ＴＮＦ−α誘導性ヒト軟骨肉腫ＳＷ１３５３細胞におけるＩＬ−８産生アッセイ
American Tissue Culture CollectionからＳＷ１３５３細胞を購入し、３７℃、５％のＣＯ２の培養条件下で、１０％のウシ胎児血清(Invitrogen）、アスコルビン酸（Sigma）およびペニシリン（Invitrogen）を含むＤＭＥＭ培地（Invitrogen）からなる成長培地中で維持する。化合物処理の４８時間前に、１００μLの培地に、１ウェル当り１×１０４細胞の密度で細胞をプレーティングする。化合物処理直前に、培地を１６０μLの新たな培地に交換する。化合物原液（１０mM）を成長培地で希釈し、各ウェルに１０×濃縮溶液として２０μLの体積を添加し、混合し、３０分間細胞とともにプレインキュベーションする。すべてのサンプル中１％の終末濃度で化合物ビヒクル（ＤＭＳＯ）を維持する。３０分後、１０ng／mLのＴＮＦ−α（Roche Biochem）で細胞を活性化させる。ＴＮＦ−αを、成長培地で作成した１０×濃縮溶液として添加し、１ウェル当り２０μLの体積を添加する。細胞プレートを５時間培養する。細胞培地を回収し、−２０℃で保存する。製造業者（BD Bioscience）の指示に従い、ＩＬ−８の存在についてサンドイッチＥＬＩＳＡにより培地のアリコートを分析する。Microsoft ExcelプログラムのXlfit3を用いて、ＩＬ−８産生が対照値の５０％に減少した化合物の濃度としてＩＣ５０値を計算する。特定の化合物は、このアッセイにおいて０．１〜２０μMの範囲のＩＣ５０値を有する。
【０１４３】
実施例２５： オボアルブミン感作喘息モデル
（Ａ） オスのBrown-Norway ラットを、３週間にわたって週１回（０日目、７日目、および１４日目）、０．２mLのミョウバン中１００μgのＯＡ（オボアルブミン）でi.p.感作する。最後の感作後の週、ラットを試験する準備が整う。抗原投与の１〜２日前、動物の体重を測る。２１日目、ＯＡのエアロゾル抗原投与（４５分間、１％ＯＡ）の３０分前に、ビヒクルまたは化合物製剤のいずれかをラットの皮下にq.d.投与し、抗原投与の４時間後または２４時間後に屠殺する（terminated）。屠殺時に、ラットに麻酔をかける（ウレタン、およそ２ｇ／kg、i.p.）。屠殺時にＰＫのためにラットから血漿を回収する。屠殺時に腹大動脈から血液を採取する。気管カニューレを挿入し、３×３mLのＰＢＳで肺を洗浄する。総白血球数および白血球百分率についてＢＡＬ流体を分析する。Coulter計数機を使用して、細胞（２０〜１００μL）のアリコート中の総白血球数を決定する。白血球百分率については、５０〜２００μLのサンプルをCytospinで遠心分離し、スライドをDiff-Quikで染色する。標準的な形態学的基準を使用して光学顕微鏡下で単球、好酸球、好中球およびリンパ球の比率をカウントし、百分率として表す。残りのＢＡＬ流体を遠心分離して（１５００rpm、１０分間）、上清を−８０℃で保存する。また、タンパク質および／またはＲＮＡ分析のために肺を摘出する。
【０１４４】
実施例２６： ＣＦＡ誘導性熱痛覚過敏アッセイ
Charles River LaboratoriesからオスのWistarラット（約２００ｇ）を購入する。実験前、自由に食物および水を与える。０日目、イソフルラン麻酔下で右後足の足底側に、５０μL（１．０mg／mL）の１００％完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ；Sigma Chemical Co, St. Louis, MO, USA)を注射する。麻酔からの回復した後、熱痛覚過敏試験を行う実験室にラットを移動させ、３０分間透明な矩形プラスチック箱に入れる。馴化の後、通常のケースにラットを戻す。
【０１４５】
１日目、ラットを一晩絶食させ、２日目（ＣＦＡ注射の４８時間後）、ラットを実験室に戻し、少なくとも１時間その部屋に馴化させる。次いで、実験開始前に、透明なプラスチック床の上に置いた透明なプラスチック箱に、１０分間ラットを個別に入れる。ハーグリーヴス試験を使用して、熱に対する足引込め閾値（thermal paw withdrawal threshold）を測定する。足底試験装置（Ugo Basile, Italy）を使用し、プラスチック床を通して各後足に光ファイバー放射熱（強度設定６０）を印加する。ラットが熱源から足を離した時間を記録する。対側足のターゲット閾値は約１０秒であった。各足を、少なくとも５分間隔で３回、同側および対側足を交互に試験する。ベースラインを決定した後、ラットにビヒクルまたは薬剤のいずれかを投与し、投与の３０〜１２０分後に上記試験を繰り返した。試験者は、処理群について知らされない。研究の終わりにＣＯ２吸入によりラットを安楽死させ、５〜１０分間観察して、確実に死に至らしめる。本発明の化合物は、このアッセイにおいて有効に疼痛を軽減する。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ｃ−ＪｕｎＮ末端キナーゼ（ＪＮＫ）を調節するための方法、および複素環式化合物を用いてＪＮＫを調節することによって軽減することができる疾患または症状に罹患している被験体を治療する方法に関する。本発明は、さらに、新規複素環式化合物および該化合物を含む薬学的組成物に関する。
【０００２】
ｃ−ＪｕｎＮ末端キナーゼ（ＪＮＫ）は、ｐ３８および細胞外シグナル制御キナーゼ（ＥＲＫ）と共にマイトジェン活性化タンパク質キナーゼファミリーのメンバーである。１０種のスプライス変異体をコードする３つの別個の遺伝子（ｊｎｋ１、ｊｎｋ２およびｊｎｋ３）が同定されている（Y.T. Ip and R.J. Davis, Curr. Opin. Cell Biol. (1998) 10:205-19）。ＪＮＫ１およびＪＮＫ２は、様々な組織で発現するが、ＪＮＫ３は、主にニューロンにおいて、そしてそれより少ない程度で心臓および精巣において発現する（D.D. Yang et al., Nature (1997) 389:865-70）。ＪＮＫファミリーのメンバーは、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）およびインターロイキン１β（ＩＬ−１β）などの炎症性サイトカインに加えて、環境ストレスよっても活性化される。ＪＮＫの活性化は、Ｔｈｒ−１８３およびＴｙｒ−１８５の二重リン酸化を介して、ＪＮＫの上流のキナーゼであるＭＫＫ４およびＭＫＫ７によってメディエーションされる（B. Derijard et al., Cell (1994) 76:1025-37）。外部刺激および細胞の状況に依存して、ＭＥＫＫ１およびＭＥＫＫ４を含む多様な上流のキナーゼによりＭＫＫ４およびＭＭＫ７を活性化できることが示されている（D. Boyle et al., Arthritis Rheum (2003) 48:2450-24）。ＪＮＫシグナル伝達の特異性は、ＪＮＫ相互作用タンパク質と呼ばれるスカフォールドタンパク質を使用して、キナーゼカスケードの複数の成分を含有しているＪＮＫ特異的シグナル伝達複合体を形成することにより達成される（J. Yasuda et al., Mol. Cell. Biol. (1999) 19:7245-54）。ＪＮＫは、ｃ−Ｊｕｎ、アクチベータータンパク質−１（ＡＰ１）ファミリーの成分およびＡＴＦ２などの転写因子に加えて、ＩＲＳ−１およびＢｃｌ−２などの非転写因子を含む特異的基質のリン酸化により炎症、Ｔ細胞機能、アポトーシスおよび細胞の生存において重要な役割を果たすことが示されている（A.M. Manning and R.J. Davis, Nat. Rev. Drug Discov. (2003) 2:554-65）。ＪＮＫの過剰活性化は、癌および疼痛に加えて、自己免疫、炎症性、代謝性、神経系疾患における重要な機序であると考えられる。
【０００３】
関節リウマチ（ＲＡ）は、関節の慢性炎症を特徴とする全身性の自己免疫疾患である。炎症過程によって引き起こされる関節腫脹および関節痛に加えて、ほとんどのＲＡ患者で、最終的には衰弱性関節損傷および変形が発生する。細胞および動物モデルにおける説得力のある薬学的および遺伝学的証拠のいくつかの系統は、ＲＡの病因における活性化されたＪＮＫの関連性および重要性を強く示唆している。まず、ＪＮＫの異常活性化は、ＲＡ患者由来のヒト関節炎関節（G. Schett et al., Arthritis Rheum (2000) 43:2501-12）および関節炎の動物モデル由来のげっ歯類関節炎関節（Z. Han et al., J. Clin. Invest. (2001) 108:73-81）の両方で検出された。さらに、選択的ＪＮＫインヒビターによるＪＮＫ活性化の阻害は、ヒト滑膜細胞、マクロファージおよびリンパ球における炎症性サイトカインおよびＭＭＰ産生をブロックした（前記、Z. Han et al., (2001)）。重要なことに、アジュバント関節炎のラット（前記、Z. Han et al., (2001)）、またはコラーゲン誘導性関節炎のマウス（P. Gaillard et al., J Med Chem. (2005) 14:4596-607）における選択的ＪＮＫインヒビターの投与は、サイトカインおよびコラゲナーゼ発現を阻害することにより、関節を破壊から有効に保護し、そして足腫脹を著しく低減した。更に、ＪＮＫ２欠損マウスは、関節破壊から部分的に保護されたが、受動性コラーゲン誘導性関節炎モデルにおける足腫脹および炎症に対する効果はほとんど示さなかった。これらの研究は、ＪＮＫ２が、マトリックス分解、炎症および足腫脹における役割に関してＪＮＫ１と機能的に重複していることを示す。したがって、ＲＡの有効な治療には、ＪＮＫ１およびＪＮＫ２活性の両方をまとめて阻害することが必要である（Z. Han et al., Arthritis Rheum. (2002) 46:818-23）。
【０００４】
喘息は、細胞性炎症過程の存在、および気道の構造変化を伴う気管支過敏性を特徴とする気道の慢性炎症性疾患である（B. Bradley et al., J. Allergy Clin. Immunol. (1991) 88:661-74）。この障害は、Ｔリンパ球、好酸球、マスト細胞、好中球および上皮細胞を含む気道における多くの細胞型によって駆動されることが示されている（J. Bousquet et al., Am. J. Respir. Crit. Care Med. (2000) 161:1720-45）。選択的ＪＮＫインヒビターを使用して、喘息の細胞および動物モデルにおける最近の概念実証研究に基づいて、喘息の有望な治療ターゲットとしてＪＮＫが浮上している（K. Blease et al., Expert Opin. Emerg. Drugs (2003) 8:71-81）。ＪＮＫインヒビターは、活性化されたヒトの気道平滑細胞におけるＲＡＮＴＥＳ産生を有意にブロックすることが示された（K. Kujime et al., J. Immunol. (2000) 164:3222-28）。より重要なことに、ＪＮＫインヒビターは、細胞浸潤、炎症、過敏性、平滑筋増殖、およびＩｇＥ産生を低下させる能力について、慢性ラットおよびマウスモデルにおいて優れた有効性を示した（P. Nath et al., Eur. J. Pharmacol. (2005) 506:273-83; P. Eynott et al., Br. J. Pharmacol. (2003) 140:1373-80）。これらの所見は、アレルギー性炎症、過敏性に関連する気道のリモデリングプロセスにおけるＪＮＫの重要な役割を示唆する。したがって、ＪＮＫ活性のブロックが喘息の治療にとって有益であると予想される。
【０００５】
２型糖尿病は、酸化ストレスに関連した慢性的な低レベルの炎症および脂質代謝異常の結果として、インシュリン抵抗性およびインシュリン分泌障害を特徴とする最も重篤で最も蔓延している代謝性疾患である。肥満および糖尿病条件下で、様々な糖尿病のターゲット組織においてＪＮＫ活性が異常に上昇することが報告されている（J. Hirosumi et al., Nature (2002) 420:333-36; H. Kaneto, Expert. Opin. Ther. Targets (2005) 9:581-92）。炎症性サイトカインおよび酸化ストレスによるＪＮＫ経路の活性化は、Ｓｅｒ３０７におけるインスリン受容体基質−１（ＩＲＳ−１）のリン酸化を介してインシュリンシグナル伝達を負にレギュレーションするので、インシュリン抵抗性および耐糖能の一因となる（前記、J. Hirosumi et al., Nature (2002) ; Y. Lee et al., J. Biol. Chem. (2003) 278:2896-902; Y. Nakatani et al., J. Biol. Chem. (2004) 279:45803-09）。遺伝性（ｏｂ／ｏｂ）肥満マウスまたは食餌性肥満マウスのいずれかと交配したｊｎｋ−／−マウスを使用した見事な動物モデル研究から説得力のある遺伝学的証拠が得られた。ＪＮＫ１は欠失している（ＪＮＫ１−／−）が、ＪＮＫ２の機能は欠失していない（ｊｎｋ２−／−）肥満マウスは、体重増加、血糖の定常的な濃度上昇、血漿インスリン濃度の低下から保護された（前記、J. Hirosumi et al., Nature (2002)）。更に、小分子ＪＮＫインヒビターであるＣＣ１０５（B. Bennett et al., Curr. Opin. Pharmacol. (2003) 3:420-25）、またはＪＮＫ相互作用タンパク質−１（ＪＩＰ−１）のＪＮＫ結合ドメインに由来するＪＮＫ阻害性ペプチドＩ（ＪＩＰ）（H. Kaneto et al., Nat. Med. (2004) 10:1128-32）のいずれかを投与することにより、遺伝性糖尿病マウス（ｄｂ／ｄｂマウス）において、有意に低下した血糖値及びより高い血漿インスリン濃度を含む有益な効果が観察された。より興味深いことに、別の最近の報告（A. Jaeschke et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U S A. (2005) 102:6931-35）により、インスリン生成β細胞の自己免疫の破壊によって引き起こされる１型糖尿病においてＪＮＫ２が重要な役割を果たしていることが明らかになった。ＪＮＫ２発現が欠損している非肥満糖尿病のマウスは、恐らくＴｈ２表現型に対する偏った極性に起因して、破壊的膵島炎の緩和および糖尿病への疾患進行の遅延を示した。まとめると、これらの研究は、肥満／２型糖尿病の治療におけるＪＮＫインヒビターの有用性を実証した。
【０００６】
アルツハイマー病（ＡＤ）、パーキンソン病（ＰＤ）および卒中などの神経変性疾患は、シナプスの損失、ニューロンの萎縮および死を特徴とする。ｃ−Ｊｕｎの活性化を導くＪＮＫ経路は、様々な刺激を誘導したとき、単離一次胚ニューロンおよび複数の神経細胞株のアポトーシスにおいて因果的役割を果たすことが示されている（D. Bozyczko-Coyne et al., Curr. Drug Targets CNS Neurol. Disord. (2002) 1:31-49）。ＪＮＫの過剰活性化は、ＡＤ患者に由来するヒト脳 (J. Pei et al., J. Alzheimers Dis. (2001) 3:41-48）、または神経変性疾患の動物モデルに由来するげっ歯類の脳切片（M. Saporito et al., J. Neurochem. (2000) 75:1200-08）で観察された。例えば、ＡＤ患者に由来する死後脳においてリン酸化ＪＮＫの増加が検出された。β−アミロイドペプチド投与によって誘導されたＡＤのげっ歯類モデルにおけるＪＮＫ阻害性ペプチド（ＪＩＰ−１ペプチド）の投与は、シナプス可塑性の障害を防いだ。ＰＤの動物モデル（ＭＰＴＰモデル）では、神経細胞死に付随して、リン酸化ＭＫＫ４およびリン酸化ＪＮＫの増加が観察された。マウスの線条体にＪＮＫ阻害性ペプチド（ＪＩＰ−１ペプチド）のアデノウイルス遺伝子導入すると、ＭＰＴＰ介在性ＪＮＫ、ｃ−Ｊｕｎおよびカスパーゼ活性化が阻害され、黒質における神経細胞死がブロックされることにより、行動障害が減弱した（X. Xia et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA. (2001) 98:10433-38）。さらに、グルタミン酸興奮毒性によって誘導された虚血性卒中の動物モデルでは、ＪＮＫ３は欠損しているが、ＪＮＫ１またはＪＮＫ２は欠損していないマウスは、カイニン酸（グルタミン酸受容体アゴニスト）介在性発作または神経細胞死に対して耐性を有していた（D. D.Yang et al., Nature (1997) 389:865-70）。これらのデータは、ＪＮＫ３が、虚血状態の重要な構成要素であるグルタミン酸興奮毒性の主な原因であることを示唆する。まとめると、前記データは、ＪＮＫが神経細胞死に関連する複数のＣＮＳ疾患の魅力的なターゲットであることを示唆する。
【０００７】
コントロールされていない細胞成長、増殖および遊走は、無秩序な血管形成とともに、悪性腫瘍の形成を導く。ＪＮＫシグナル伝達経路は、もっぱらアポトーシスにおいて作用する訳ではなく、最近、ＡＰ１活性化を導く持続的なＪＮＫ活性化が、グリア細胞腫瘍およびＢＣＬ−ＡＢＬ形質転換Ｂリンパ芽球などの特定の種類の癌の細胞生存の一因として関与しているとみなされている（M. Antonyak et al., Oncogene (2002) 21:5038-46; P. Hess et al., Nat. Genet. (2002) 32:201-05）。グリア細胞腫瘍の場合、ほとんどの原発性脳腫瘍サンプルでＪＮＫ／ＡＰ１活性の増強がみられた。形質転換Ｂリンパ芽球では、ＢＣＬ−ＡＢＬが、ＪＮＫ経路を活性化し、次いで抗アポトーシス性ｂｃｌ−２遺伝子の発現をアップレギュレーションすることが示された。興味深いことに、治療抵抗性ＡＭＬ患者で見られる多剤耐性および過剰増殖は、これらのＡＭＬサンプル中に存在する持続的ＪＮＫ活性が原因として関連づけられている（L. Cripe et al., Leukemia (2002) 16:799-812）。白血病細胞におけるＪＮＫの活性化は、多剤耐性に関与しているｍｄｒ１およびＭＲＰ１などの排出ポンプの発現を誘導した。また、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼπおよびγ−グルタミルシステインシンターゼを含む酸化ストレス応答性の延命効果を有する遺伝子も、活性化されたＪＮＫ経路によってアップレギュレーションされた。
【０００８】
したがって、ＪＮＫモジュレーターは様々な疾患および／または症状を治療するのに有用である。
【０００９】
本発明の１つの局面は、式Ｉ：
【００１０】
【化１】
［式中
Ｘ１およびＸ２は、各々同時にＮまたはＣＨであり；
Ｘ３は、ＣＨ−Ｒ２またはＮ−ＳＯ２Ｒ（式中、Ｒは低級アルキル基である）であり；
Ｒ１は、０〜３個の低級アルキル基で置換されたアリールまたはヘテロアリールであり；
Ｒ２は、
【００１１】
【化２】
（式中、Ｒ３は、Ｈ、低級アシル、またはアミノ酸である）である］
で示される化合物、またはその薬学的に許容しうる塩を提供する。
【００１２】
本発明は、また、薬学的組成物、前述の化合物を使用する方法、および前述の化合物を調製する方法を提供する。
【００１３】
本発明の化合物および組成物は、自己免疫障害、炎症性障害、代謝性障害、神経系疾患、疼痛および癌などのｃ−ＪｕｎＮ末端キナーゼ介在性障害の治療および／または予防に有用である。いくつかの態様では、本発明の化合物および組成物は、関節リウマチ、喘息、II型糖尿病、アルツハイマー病、パーキンソン病および／または卒中の治療および／または予防に有用である。
【００１４】
定義
特に明記しない限り、本明細書および特許請求の範囲を含む本願で使用される以下の用語は、以下に示す定義を有する。本明細書及び添付の特許請求の範囲において使用されるとき、単数形の「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈上特に断りのない限り、複数の対象を含むことに留意しなければならない。
【００１５】
「アルキル」は、１〜１２個の炭素原子を有する、炭素原子および水素原子のみからなる、一価の直鎖または分岐鎖の飽和炭化水素部分を意味する。「低級アルキル」は、１〜６個の炭素原子のアルキル基、すなわち、Ｃ１−Ｃ６アルキルを指す。アルキル基の例は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、イソブチル、sec-ブチル、tert-ブチル、ペンチル、ｎ−ヘキシル、オクチル、ドデシルなどを含むが、これらに限定されない。「分岐鎖アルキル」は、少なくとも１つの分岐を有するアルキル部分、例えばイソプロピル、イソブチル、tert-ブチルなどを指す。同様に、「低級アルコキシ」は、−ＯＲの形態の部分を指し、「アシル」は、−Ｃ（Ｏ）Ｒ（式中、Ｒは低級アルキルである）の形態の部分を指す。
【００１６】
「アルキレン」は、１〜６個の炭素原子の直鎖飽和二価炭化水素部分、または３〜６個の炭素原子の分岐鎖飽和二価炭化水素基、例えばメチレン、エチレン、２，２−ジメチルエチレン、プロピレン、２−メチルプロピレン、ブチレン、ペンチレンなどを意味する。
【００１７】
「アルキレンジオキシ」は式−Ｏ−Ｒ−Ｏ−（式中、Ｒは本明細書において定義されるアルキレンである）の二価部分を意味する。
【００１８】
「アリール」は、単環式、二環式、または三環式の芳香環からなる一価環式芳香族炭化水素部分を意味する。アリール基は、場合により、本明細書における定義の通り置換されてもよい。アリール部分の例は、場合により置換されているフェニル、ナフチル、フェナントリル、フルオレニル、インデニル、ペンタレニル、アズレニル、オキシジフェニル、ビフェニル、メチレンジフェニル、アミノジフェニル、ジフェニルスルフィジル、ジフェニルスルホニル、ジフェニルイソプロピリデニル、ベンゾジオキサニル、ベンゾフラニル、ベンゾジオキシリル、ベンゾピラニル、ベンズオキサジニル、ベンズオキサジノニル、ベンゾピペラジニル（benzopiperadinyl）、ベンゾピペラジニル（benzopiperazinyl）、ベンゾピロリジニル、ベンゾモルホリニル、メチレンジオキシフェニル、エチレンジオキシフェニルなどを含むが、これらに限定されず、これらの部分水素化誘導体も含む。
【００１９】
「ヘテロアリール」は、Ｎ、ＯまたはＳから選択される１、２、または３個の環ヘテロ原子を有し、残りの環原子がＣである、５〜７個の環原子の単環式部分を意味する。ヘテロアリール環は、場合により、本明細書における定義の通り置換されてもよい。ヘテロアリール部分の例は、場合により置換されているイミダゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、オキサジアゾリル、チアジアゾリル、ピラジニル、チエニル、チオフェニル、フラニル、ピラニル、ピリジニル、ピロリル、ピラゾリル、ピリミジル、ピリダジニルなどを含むが、これらに限定されず、これらの部分水素化誘導体も含む。
【００２０】
用語「ハロ」、「ハロゲン」および「ハロゲン化物」は、本明細書において互換的に使用され、置換基フルオロ、クロロ、ブロモまたはヨードを指す。用語「オキソ」は二重結合酸素、すなわち＝Ｏを指す。本明細書において使用するとき、用語「ケタール」は、２個のアルコキシ基が、同じ炭素原子に結合しているか、または式−Ｏ−（低級アルキル）−Ｏ−の基の両端が単一の炭素原子に結合しているケトン誘導体を指す。
【００２１】
本明細書において使用するとき、用語「アミノ酸」は、アミン基およびカルボン酸基の両方を有する有機部分を指す。例示的なアミノ酸は、アラニン、β−アラニン、システイン、アスパラギン酸、グルタミン酸、フェニルアラニン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、リシン、ロイシン、メチオニン、アスパラギン、プロリン、グルタミン、アルギニン、セリン、トレオニン、バリン、トリプトファン、およびチロシンを含む。
【００２２】
「場合により置換されている」は、参照される基が、独立して１つ以上の置換基、好ましくは１〜４個、より好ましくは１〜３個の記載されている置換基で置換されていてもよいことを意味する。例えば、「場合によりＯＨで置換されているシクロアルキル」は、非置換であるか、または１つ以上のヒドロキシ基で置換されている、本明細書の定義内のすべてのシクロアルキル基を含む。この記載に適う例示的な基は、シクロブチル、シクロヘキシル、シクロペンチル、シクロプロピル、２−ヒドロキシシクロブチル、ヒドロキシシクロプロピル、３，４−ジヒドロキシシクロへキシル、３−ヒドロキシシクロペンチルなどを含むが、これらに限定されない。
【００２３】
「脱離基」は、有機合成化学において慣習的にそれに関連する意味を有する基、すなわち置換反応条件下で置換可能な原子または基を意味する。脱離基の例は、ハロゲン、例えば、メタンスルホニルオキシ、エタンスルホニルオキシ、チオメチル、ベンゼンスルホニルオキシ、トシルオキシ、およびチエニルオキシなどのアルカン−またはアリーレンスルホニルオキシ、ジハロホスフィノイルオキシ、場合により置換されているベンジルオキシ、イソプロピルオキシ、アシルオキシなどを含むが、これらに限定されない。
【００２４】
「疾患」および「病状」は、任意の疾患、症状、病徴、障害または徴候を意味する。
【００２５】
例えば、ベンゼン、トルエン、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、クロロホルム、塩化メチレンまたはジクロロメタン、ジクロロエタン、ジエチルエーテル、酢酸エチル、アセトン、メチルエチルケトン、メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、tert-ブタノール、ジオキサン、ピリジンなどを含む「不活性有機溶媒」または「不活性溶媒」は、溶媒が、それと併せて記載される反応条件下で不活性であることを意味する。特に逆の指定のない限り、本発明の反応で使用される溶媒は不活性溶媒である。
【００２６】
「薬学的に許容しうる」は、一般に安全で、無毒で、生物学的にも他の意味でも不所望ではなく、そして、獣医学的及びヒトの薬学的使用のために許容しうる薬学的組成物の調製において有用であることを意味する。
【００２７】
化合物の「薬学的に許容しうる塩」は、本明細書において定義されるように、薬学的に許容することができ、そして親化合物の望ましい薬理学的活性を有する塩を意味する。このような塩は、以下を含む：
塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などの無機酸とともに形成される酸付加塩；または、酢酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、ショウノウスルホン酸、クエン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グルコヘプトン酸、グルコン酸、グルタミン酸、グリコール酸、ヒドロキシナフトエ酸（hydroxynaphtoic acid）、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、乳酸、マレイン酸、リンゴ酸、マロン酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、ムコン酸、２−ナフタレンスルホン酸、プロピオン酸、サリチル酸、コハク酸、酒石酸、ｐ−トルエンスルホン酸、トリメチル酢酸などの有機酸とともに形成される酸付加塩；
あるいは、親化合物の中に存在する酸性プロトンが金属イオン、例えばアルカリ金属イオン、アルカリ土類イオン、またはアルミニウムイオンにより置換されたときに形成される塩；あるいは有機または無機塩基が配位した塩。許容しうる有機塩基は、ジエタノールアミン、エタノールアミン、Ｎ−メチルグルカミン、トリエタノールアミン、トロメタミンなどを含む。許容しうる無機塩基は、水酸化アルミニウム、水酸化カルシウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、水酸化ナトリウムなどを含む。
【００２８】
好ましい薬学的に許容しうる塩は、酢酸、塩酸、硫酸、メタンスルホン酸、マレイン酸、リン酸、酒石酸、クエン酸、ナトリウム、カリウム、カルシウム、亜鉛およびマグネシウムから形成される塩である。
【００２９】
「保護基（Protective group）」または「保護基（protecting group）」は、合成化学において慣習的にそれに関連する意味で、別の非保護反応部位において化学反応を選択的に実行することができるように、多官能化合物における１つの反応部位を選択的にブロックする化学基を示す。本発明の特定のプロセスは、保護基に依存して、反応物質中に存在する反応性窒素および／または酸素原子をブロックする。例えば、「アミノ保護基」および「窒素保護基」という用語は、本明細書において互換的に使用され、合成手順中に不所望の反応から窒素原子を保護することを意図する有機基を指す。例示的な窒素保護基は、トリフルオロアセチル、アセトアミド、ベンジル（Ｂｎ）、ベンジルオキシカルボニル（カルボベンジルオキシ、ＣＢＺ）、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル、ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル、tert-ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）などを含むが、これらに限定されない。当業者は、除去の容易さ、および以下の反応に耐える能力について基を選択する方法を知るであろう。
【００３０】
「被験体」は、哺乳類および非哺乳類を意味する。哺乳類は、ヒト；チンパンジーおよび他の類人猿などの非ヒト霊長類、ならびにサル種；ウシ、ウマ、ヒツジ、ヤギおよびブタなどの家畜；ウサギ、イヌおよびネコなどの家庭動物；ラット、マウスおよびモルモットなどのげっ歯類を含む実験動物；などを含むが、これらに限定されない哺乳綱の任意のメンバーを意味する。非哺乳類の例は、鳥類などを含むが、これらに限定されない。用語「被験体」は、特定の年齢または性別を意味するものではない。
【００３１】
「治療上有効量」は、ある病状を治療するために被験体に投与されたとき、前記病状を治療するのに十分な化合物の量を意味する。「治療上有効量」は、化合物、治療されている病状、重症度または治療される疾患、被験者の年齢および相対的な健康、投与の経路および形態、参加する医師又は獣医師の判断、ならびに他の要因に依存して変化する。
【００３２】
用語「上に定義された」および「本明細書において定義される」は、変数に言及するとき、広い定義の変数に加えて、存在する場合、好ましい、より好ましい、および最も好ましい定義も参照することにより組み込む。
【００３３】
病状を「治療すること」または「治療」は、以下を含む：
（ｉ）病状の予防、すなわち、病状に曝されるか、または病状に罹患しやすい可能性があるが、未だ病状を経験していないか、または病状の病徴を示していない被験体において病状の臨床症状を発生させないこと、
（ii）病状の阻害、すなわち、病状またはその臨床症状の発生を妨げること、あるいは
（iii）病状の軽減、すなわち、病状またはその臨床症状を一時的または永続的に後退させること。
【００３４】
用語「処理」、「接触」、および「反応」は、化学反応に言及するとき、指示されたおよび／または望ましい生成物を生成するのに適切な条件下で２つ以上の試薬を添加または混合することを意味する。指示されたおよび／または望ましい生成物を生成する反応は、必ずしも最初に添加された２つの試薬の組み合わせから直接得られる訳ではない、すなわち、混合物中で生成される１つ以上の中間体が存在し、それが最終的に指示されたおよび／または望ましい生成物の形成を導く場合もあることを理解すべきである。本明細書において使用するとき、用語「嫌気性雰囲気」は、一般的に酸素を除く大気を指す。嫌気性雰囲気下で行なわれる反応は、例えば反応混合物に窒素またはアルゴン（または別の不活性ガス）を通気し、好ましくは反応物の脱気も行うことによって実施することができる。用語「高ｐＨ」は、反応混合物が完全に水性であろうとなかろうと、例えば、Ｎａ２ＣＯ３などの適度に強い塩基が存在する反応混合物を指す。本明細書において使用するとき、用語「高温」は、７０℃を超える、典型的には１０５℃を超える反応温度を指す。
【００３５】
式Ｉで示される化合物は、限定するものではないが、被験体の炎症および／または疼痛の治療に有用である。本発明の化合物を用いて、関節リウマチ、脊椎関節症、痛風性関節炎、変形性関節症、全身性エリテマトーデスおよび若年性関節炎、変形性関節症、痛風性関節炎、および他の関節炎状態を含むが、これらに限定されない関節炎によって引き起こされる疼痛および炎症を治療することができる。このような化合物は、成人型呼吸窮迫症候群、肺サルコイドーシス、喘息、珪肺症、および慢性肺炎症性疾患を含む肺疾患または肺炎症の治療にも有用である。また、前記化合物は、敗血症、敗血症性ショック、グラム陰性菌敗血症、マラリア、脳膜炎、感染または悪性腫瘍に続発する悪液質、肺炎およびヘルペスウィルスを含む、ウイルスおよび細菌感染によって引き起こされる炎症の治療に有用である。
【００３６】
「疼痛」は、多かれ少なかれ、特殊な神経終末の刺激に起因する不快感、窮迫またはアゴニーの限局性感覚を意味する。電撃痛、幻想痛、疼くような痛み、急性疼痛、炎症性疼痛、神経因性疼痛、複合性局所疼痛、神経痛、神経障害などを含むが、これらに限定されない多くの種類の疼痛が存在する（Dorland's Illustrated Medical Dictionary, 28th Edition, W. B. Saunders Company, Philadelphia, PA）。疼痛の治療目的は、治療される被験体が知覚する疼痛の重症度を低下させることである。「神経因性疼痛」は、機能障害および／または病理変化に加えて、末梢神経系における非炎症性病変に起因する疼痛を意味する。神経因性疼痛の例は、熱または機械的痛覚過敏、熱または機械的異痛、糖尿病性疼痛、絞扼性疼痛などを含むが、これらに限定されない。
【００３７】
命名法および構造
一般的に、本願の中で使用される命名法は、ＩＵＰＡＣの体系的命名法を作成するためにBeilstein Instituteによりコンピュータ化されたシステムであるAUTONOM（商標）v.4.0に基づく。本明細書に示される化学構造は、ＩＳＩＳ（登録商標）バージョン２．２を使用して作成した。本明細書における構造中の炭素、酸素または窒素原子に出現する任意の空の結合価（open valency）は、水素原子の存在を示す。
【００３８】
不斉炭素が化学構造中に存在するときは常に、その不斉炭素に関連する立体異性体はすべて、前記構造によって包含されることを意図する。
【００３９】
本明細書において特定される特許および刊行物はすべて、全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【００４０】
一般的な方法
本発明の１つの局面は、式Ｉ：
【００４１】
【化３】
［式中
Ｘ１およびＸ２は、各々同時にＮまたはＣＨであり；
Ｘ３は、ＣＨ−Ｒ２またはＮ−ＳＯ２Ｒ（式中、Ｒは低級アルキルである）であり；
Ｒ１は、０〜３個の低級アルキル基で置換されたアリールまたはヘテロアリールであり；
Ｒ２は、
【００４２】
【化４】
（式中、Ｒ３は、Ｈ、低級アシル、またはアミノ酸である）である］
で示される化合物、またはその薬学的に許容しうる塩を提供する。
【００４３】
いくつかの態様では、Ｘ１およびＸ２は各々Ｎである。いくつかの態様では、Ｘ３はＣＨ−Ｒ２であり、Ｒ２は、
【００４４】
【化５】
であり、Ｒ３はＨである。さらなる態様では、Ｒ１は、０〜３個の低級アルキル基、例えばメチル基で置換されたフェニルである。他の態様では、Ｒ１は、０〜３個の低級アルキル基で置換されたヘテロアリールである。さらなる態様では、ヘテロアリール基は、チオフリル、ピリジル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、フリル、イミダゾリル、およびピラゾリルからなる群より選択される。さらなる態様では、ヘテロアリール基は、チオフリル、ピリジル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、フリル、イミダゾリル、およびピラゾリルからなる群より選択される。
【００４５】
他の態様では、Ｘ３はＮ−ＳＯ２Ｒであり、Ｒはメチルである。さらなる態様では、Ｒ１は、０〜３個の低級アルキル基、例えばメチル基で置換されたフェニルである。他の態様では、Ｒ１は、０〜３個の低級アルキル基で置換されたヘテロアリールである。さらなる態様では、ヘテロアリール基は、チオフリル、ピリジル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、フリル、イミダゾリル、およびピラゾリルからなる群より選択される。
【００４６】
他の態様では、Ｘ１およびＸ２は各々ＣＨである。いくつかの態様では、Ｘ３はＣＨ−Ｒ２であり、Ｒ２は、
【００４７】
【化６】
であり、Ｒ３はＨである。さらなる態様では、Ｒ１は、０〜３個の低級アルキル基、例えばメチル基で置換されたフェニルである。他の態様では、Ｒ１は、０〜３個の低級アルキル基で置換されたヘテロアリールである。さらなる態様では、ヘテロアリール基は、チオフリル、ピリジル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、フリル、イミダゾリル、およびピラゾリルからなる群より選択される。
【００４８】
他の態様では、Ｘ１およびＸ２は各々ＣＨであり、Ｘ３はＮ−ＳＯ２Ｒであり、Ｒはメチルである。さらなる態様では、Ｒ１は、０〜３個の低級アルキル基、例えばメチル基で置換されたフェニルである。他の態様では、Ｒ１は、０〜３個の低級アルキル基で置換されたヘテロアリールである。さらなる態様では、ヘテロアリール基は、チオフリル、ピリジル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、フリル、イミダゾリル、およびピラゾリルからなる群より選択される。
【００４９】
本発明の別の局面は、炎症を治療するための方法であって、前記治療を必要としている被験体に有効量の本発明の化合物を投与することを含む。
【００５０】
本発明の別の局面は、本発明の化合物および薬学的に許容しうる賦形剤を含む薬学的組成物である。
【００５１】
本発明の別の局面は、嫌気性雰囲気、高ｐＨ、および高温下で、式Ｉで示される化合物を生成するのに十分な時間、式
【００５２】
【化７】
で示される中間物を、Ｒ１−Ｂ（ＯＨ）２、
【００５３】
【化８】
などのＲ１のボロン酸誘導体、ならびにこれらのエステルおよび塩から選択される第１の試薬と、式Ｐｄ［Ｐ（Ｃ６Ｈ５）３］４を有する第２の試薬とで処理することにより、本発明の化合物を調製するためのプロセスである。
【００５４】
本明細書に記載される様々な基の組み合わせが他の態様を形成する可能性があることを認識すべきである。このように、様々な異なる化合物が本発明に包含される。
【００５５】
本発明の例示的な化合物を以下の表１に示す。
【表１】
【００５６】
合成
本発明の化合物は、以下の実施例の項に示す実例となる例において記載される様々な方法によって作製することができる。これらの化合物の調製に用いられる出発物質および試薬は、一般的に、Aldrich Chemical Co.などの商業的供給元から入手可能であるか、またはFieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis; Wiley & Sons: New York, 1991, Volumes 1-15; Rodd’s Chemistry of Carbon Compounds, Elsevier Science Publishers, 1989, Volumes 1-5 and Supplements; and Organic Reactions, Wiley & Sons: New York, 1991, Volumes 1-40などの参照文献に記載されている手順に従って当業者に公知の方法により調製される。以下の合成反応スキームは、本発明の化合物を合成することができるいくつかの方法の単なる例証であり、これらの合成反応スキームに対して様々な変更を行ってもよく、前記変更は、本明細書に含まれる開示を参照した当業者に示唆される。
【００５７】
必要に応じて、濾過、蒸留、結晶化、クロマトグラフィーなどを含むが、これらに限定されない従来の技術を使用して、合成反応スキームの出発物質および中間体を単離し、そして精製することができる。このような物質は、物理定数およびスペクトルのデータを含む、従来の手段を使用して特性評価することができる。
【００５８】
特に逆の指定のない限り、本明細書に記載される反応は、好ましくは、不活性雰囲気下で、大気圧で、約−７８℃〜約２３０℃の範囲、最も好ましくは、そして便利には室温（すなわち、周囲温度）、例えば約２０℃の反応温度で実施される。
【００５９】
以下のスキームでは、異なる指定のない限り、Ｒ、Ｒ１、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３などは、上に定義された通りであるが；Ｘは、Ｃｌ、ＢｒまたはＩである。
【００６０】
【化９】
【００６１】
工程（ａ）：ＤＭＦなどの非プロトン性溶媒中でＮａＨなどの強塩基を使用して、置換インドールまたはトリアゾール（II）をハロピリミジン（Ｉ）とカップリングさせて、中間体（III）を形成する。
【００６２】
工程（ｂ）：酸性水性溶媒中にてＮａＮＯ２で中間体を処理するなどの標準的な手段によって、中間体（III）をハロゲン化し、次いで、ＫＩまたはＫＢｒなどのハロゲン化物塩と反応させて、中間体（IV）を形成する。
【００６３】
工程（ｃ）：例えば、ＤＣＭ中のＭＣＰＢＡを用いて、中間体（IV）のスルファニル部分をスルフィニルに酸化して、中間体（Ｖ）を提供する。
【００６４】
工程（ｄ、ｅ）：次いで、中間体（Ｖ）のメチルスルフィニル基を、１，４−ジオキサン中で加熱することにより、４−アミノ−シクロヘキサンカルボン酸エチルエステル（工程（ｄ））または１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イルアミン（工程（ｅ））で置換して、それぞれ中間体（VI）または（VII）を提供する。
【００６５】
工程（ｆ）：中間体（VI）のエチルエステルを、ＴＨＦの中のＬｉＯＨで処理するなどの標準的な手段によって鹸化し、次いで、４−ヒドロキシピペリジンでアミド化して、中間体（VIII）を提供する。
【００６６】
工程（ｇ）：次いで、例えば、フェニル基またはヘテロアリール基の適切なボロン酸誘導体と混ぜ合わせ、そして、１１０℃で、トルエン、またはトルエンとＥｔＯＨとの混合物などの有機溶媒中にて、嫌気性条件下で、Ｎａ２ＣＯ３およびＰｄ（ＰＰｈ３）４で処理することなどにより、中間体（VII）または（VIII）のハロ基を、望ましいフェニル基またはヘテロアリール基で置換する。あるいは、フェニル基またはヘテロアリール基を、工程（ｄ〜ｆ）の前に中間体（Ｖ）にカップリングさせてもよい。
【００６７】
有用である可能性のある他の合成法は、両方とも全体が参照により本明細書に組み込まれる、２００７年９月７日出願の米国特許出願第１１／８９９，７５８号、および２００７年１２月７日出願の米国特許出願第１２／００１，０２１号に記載されている。
【００６８】
次いで、例えば、抽出、結晶化、分取ＨＰＬＣ、フラッシュクロマトグラフィー、薄層クロマトグラフィーなどにより、生成物を精製してもよい。
【００６９】
有用性
本発明の化合物は、ＪＮＫ調節剤であり、したがって広範囲にわたるＪＮＫ介在性障害の治療に有効であると予想される。例示的なＪＮＫ介在性障害は、自己免疫障害、炎症性障害、代謝性障害、神経系疾患、および癌を含むが、これらに限定されない。したがって、本発明の化合物を用いて、このような障害のうち１つ以上を治療することができる。いくつかの態様では、本発明の化合物を用いて、関節リウマチ、喘息、II型糖尿病、アルツハイマー病、パーキンソン病または卒中などのＪＮＫ介在性障害を治療することができる。
【００７０】
投与および薬学的組成物
本発明は、本発明の少なくとも１つの化合物、あるいはその個々の異性体、異性体のラセミ混合物もしくは非ラセミ混合物、または薬学的に許容しうる塩もしくは溶媒和物とともに、薬学的に許容しうる担体、場合により他の治療成分および／または予防成分を含む薬学的組成物を含む。
【００７１】
一般的に、本発明の化合物は、類似の有用性を有する剤について許容されている任意の投与方法により、治療上有効量投与される。適切な用量域は、治療される疾患の重症度、被験者の年齢および相対的健康、用いられる化合物の効力、投与の経路および形態、投与の対象となる徴候、ならびに関与する医師の嗜好および経験などの多くの要因に依存して、典型的には、毎日１〜５００mg、好ましくは毎日１〜１００mg、最も好ましくは毎日１〜３０mgである。このような疾患を治療する当業者は、過度の実験をすることなく、そして自分自身の認識および本願の開示に依存して、所与の疾患に対する本発明の化合物の治療上有効量を突き止めることができる。
【００７２】
本発明の化合物は、経口（頬側および舌下を含む）、直腸内、鼻腔内、局所、肺内、膣内、非経口（筋肉内、動脈内、鞘内、皮下、静脈内を含む）投与に適しているものを含む薬学的製剤として、または吸入もしくは吹送による投与に適している形態で投与してよい。好ましい投与方法は、一般的に、病気の程度によって調節することができる便利な一日量の投与計画を使用する経口である。
【００７３】
本発明の化合物は、１つ以上の従来の佐剤、担体または希釈剤とともに、薬学的組成物および単位剤形の形態にしてもよい。薬学的組成物および単位剤形は、さらなる活性化合物または成分を含むまたは含まない、従来の比率の従来の成分で構成されてよく、単位剤形は、使用される対象の日用量域に相応する任意の適切な有効量の活性成分を含有してよい。薬学的組成物は、錠剤または充填カプセル剤などの固体、半固体、散剤、徐放性製剤、あるいは液剤、懸濁剤、乳剤、エリキシル剤、または経口用途用の充填カプセル剤などの液体として；あるいは直腸または膣内投与用の坐剤の形態で；あるいは非経口用途用の無菌注射剤溶液の形態で使用してよい。したがって、錠剤１個当たり、約１mg、またはより広く約０．０１〜約１００mgの活性成分を含有する製剤が、適切な例示的単位剤形である。
【００７４】
本発明の化合物は、広範囲にわたる経口投与剤形に製剤してよい。薬学的組成物および剤形は、活性成分として本発明の化合物、またはその薬学的に許容しうる塩を含んでよい。薬学的に許容しうる担体は、固体または液体のいずれであってもよい。固体形態の調製品は、散剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、カシェ剤、坐剤および分散性顆粒剤を含む。固体担体は、希釈剤、着香剤、可溶化剤、滑沢剤、懸濁化剤、結合剤、保存剤、錠剤崩壊剤または封入材料としても作用しうる１つ以上の物質であってよい。散剤では、担体は、一般的に、微粉活性成分を含む混合物である、微粉固体である。錠剤では、活性成分は、一般的に、必要な結合能を有する担体と適切な比率で混合され、望ましい形態および大きさに圧縮される。散剤および錠剤は、好ましくは、約１〜約７０パーセントの活性化合物を含有する。適切な担体は、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、糖、ラクトース、ペクチン、デキストリン、デンプン、ゼラチン、トラガント、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、低融点ろう、カカオ脂などを含むが、これらに限定されない。用語「調製品」は、担体を含むかまたは含まない活性成分が、それに関連する担体により包まれたカプセル剤を提供する、担体として封入材料を含む活性化合物の製剤を含むことを意図する。同様に、カシェ剤およびロゼンジ剤も含まれる。錠剤、散剤、カプセル剤、丸剤、カシェ剤およびロゼンジ剤は、経口投与に適している固体形態であり得る。
【００７５】
経口投与に適している他の形態は、乳剤、シロップ剤、エリキシル剤、水溶液、水懸濁液を含む液体形態の調製品、または使用直前に液体形態の調製品に変換することを意図する固体形態の調製品を含む。乳剤は、溶液、例えばプロピレングリコール水溶液中で調製してもよく、例えば、レシチン、モノオレイン酸ソルビタンまたはアラビアゴムなどの乳化剤を含有してもよい。水溶液は、水に活性成分を溶解させ、そして適切な着色剤、香料、安定剤、および増粘剤を添加することにより調製できる。水懸濁液は、天然または合成のゴム、樹脂、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、および他の周知の懸濁化剤などの粘着性物質とともに、水中に微粉活性成分を分散させることにより調製できる。固体形態の調製品は、液剤、懸濁剤、および乳剤を含み、活性成分に加えて、着色剤、香料、安定剤、バッファ、人工および天然の甘味料、分散剤、増粘剤、可溶化剤などを含有してもよい。
【００７６】
本発明の化合物は、非経口投与（例えば、注入、例えば迅速投与または持続注入による）用に製剤することができ、そして、アンプル、プレフィルドシリンジ、少量注入の単位剤形で、または保存剤を添加した複数回用量容器で提示してもよい。組成物は、油性または水性のビヒクル中の懸濁液、溶液、またはエマルション、例えば、ポリエチレングリコール水溶液などの形態をとってよい。油性または非水性の担体、希釈剤、溶媒、またはビヒクルの例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油（例えばオリーブ油）および注射可能な有機エステル（例えばオレイン酸エチル）を含み、そして保存剤、湿潤剤、乳化剤もしくは懸濁化剤、安定剤、および／または分散剤などの製剤化剤（formulatory agent）を含有してもよい。あるいは、活性成分は、無菌固体を無菌的に単離することによるか、または適切なビヒクル、例えば、無菌の発熱物質不含水を用いて使用前に構成するために溶液を凍結乾燥することによって得られる粉末形態であってもよい。
【００７７】
本発明の化合物は、軟膏剤、クリーム剤またはローション剤、あるいは経皮貼布として表皮に局所投与するために製剤してよい。軟膏剤およびクリーム剤は、適切な増粘剤および／またはゲル化剤を添加した水性または油性の基剤を用いて調剤することができる。ローション剤は、水性または油性の基剤を用いて調剤することができ、そして、一般的に、１つ以上の乳化剤、安定剤、分散剤、懸濁化剤、増粘剤または着色剤も含有する。口内の局所投与に適している製剤は、風味のある基剤、通常、スクロース、およびアラビアゴムまたはトラガント中に活性剤を含むロゼンジ剤；ゼラチンおよびグリセリン、またはスクロースおよびアラビアゴムなどの不活性基剤中に活性成分を含むパステル剤；および適切な液体担体中に活性成分を含む口内洗浄液を含む。
【００７８】
本発明の化合物は、坐剤として投与するために製剤してもよい。脂肪酸グリセリドの混合物またはカカオ脂などの低融点ろうを、まず融解させ、そして、例えば撹拌によって、活性成分を均質に分散させる。次に、融解した均質な混合物を便利な大きさの型に注ぎ、冷却し、そして固化させる。
【００７９】
本発明の化合物は、膣内投与するために調剤してもよい。活性成分に加えてこのような担体も含有する、ペッサリー、タンポン、クリーム剤、ゲル剤、ペースト剤、発泡剤、または噴霧剤は、適切であることが当技術分野において公知である。
【００８０】
対象化合物は、鼻腔内投与用に製剤してもよい。液剤または懸濁剤は、例えば、滴瓶、ピペットまたはスプレーを用いて、従来の手段によって鼻腔に直接適用される。製剤は、単回または複数回投与形態で提供してよい。滴瓶またはピペットの後者の場合、これは、患者が適切な所定の体積の液剤または懸濁剤を投与するよって達成され得る。スプレーの場合、これは、例えば、定量霧化噴霧ポンプによって達成され得る。
【００８１】
本発明の化合物は、鼻腔内投与を含む、特に呼吸器官へのエアロゾル投与用に製剤することができる。化合物は、一般に、例えば約５ミクロン以下の小さな粒径を有する。このような粒径は、当技術分野において公知の手段、例えば微粒子化によって得ることができる。活性成分は、クロロフルオロカーボン（ＣＦＣ）、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、またはジクロロテトラフルオロエタン、または二酸化炭素、または他の適切な気体などの適切な噴射剤を含む加圧パックで提供される。エアロゾルは、また、便利なようにレシチンなどの界面活性剤を含有してもよい。薬の用量は、定量バルブによってコントロールすることができる。あるいは、活性成分は、乾燥粉末の形態、例えば、ラクトース、デンプン、ヒドロキシプロピルメチルセルロースなどの澱粉誘導体、およびポリビニルピロリジン（ＰＶＰ）などの適切な粉末基剤中の化合物の混合粉体で提供されてもよい。粉末担体は、鼻腔内でゲルを形成する。粉末組成物は、例えばゼラチンのカプセルまたはカートリッジで単位剤形として、または吸入器を用いて粉末を投与することができるブリスターパックとして提示してもよい。
【００８２】
望ましい場合、活性成分の持続または制御放出投与に適合した腸溶コーティングを施した製剤を調製してもよい。例えば、本発明の化合物は、経皮または皮下薬物送達デバイスに製剤することができる。化合物の持続放出が必要なとき、および患者が治療レジメンを遵守することが重要なとき、これらの送達システムは有利である。経皮送達システムにおいて化合物は、皮膚接着剤固体支持体に付着していることが多い。対象となる化合物は、経皮吸収促進剤、例えばＡｚｏｎｅ（１−ドデシルアザシクロヘプタン−２−オン）と混ぜ合わせてもよい。持続放出送達システムは、外科処置または注入によって皮下層に皮下挿入される。皮下インプラントは、脂質可溶性膜、例えばシリコーンゴム、または生分解性ポリマー、例えばポリ乳酸中に化合物を封入する。
【００８３】
薬学的調製品は、好ましくは単位剤形である。このような形態では、調製品は、適切な量の活性成分を含有している単位用量に細分される。単位剤形は、パッケージ化調製品であってもよく、前記パッケージは、パケット化（packeted）錠剤、カプセル剤およびバイアルまたはアンプル中の散剤などの離散量の調製品を含む。また、単位剤形は、カプセル、錠剤、カシェ剤またはロゼンジ剤自体であってもよく、パッケージ化形態の適切な数の任意のこれら剤であってもよい。
【００８４】
他の適切な薬学的担体およびそれらの製剤は、Remington: The Science and Practice of Pharmacy 1995, edited by E. W. Martin, Mack Publishing Company, 19th edition, Easton, Pennsylvania.に記載されている。本発明の化合物を含有する例示的な薬学的製剤を以下に記載する。
【００８５】
実施例
本発明のさらなる目的、利点および新規特徴は、これらに限定することを意図するものではないが、以下の本発明の実施例を検討することにより当業者に明らかになるであろう。
【００８６】
略語のリスト
ＡｃＯＨ（酢酸）；Ｂｎ（ベンジル）；ＢＯＰ（ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート）；（ＢＯＣ）２Ｏ（ジ−tert−ブチルジカーボネート；ＣＳＩ（クロロスルホニルイソシアネート）；ＤＢＵ（１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］−ウンデカ−７−エン；ＤＣＭ（ジクロロメタン（塩化メチレン））；ＤＥＡ（ジエチルアミン）；ＤＩＰＥＡ（ジイソプロピルエチルアミン）；ＤＭＦ（Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド）；ＥＤＣＩ（１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩；Ｅｔ２Ｏ（ジエチルエーテル）；ＥｔＯＨ（エタノール）；ＥｔＯＡｃ（酢酸エチル）；ＨＯＢｔ（１−ヒドロキシベンゾトリアゾール）；ｉ−ＰｒＯＨ（イソプロパノール）；ＬＡＨ（水素化アルミニウムリチウム）；ｍ−ＣＰＢＡ（また、ＭＣＰＢＡ）（３−クロロペルオキシ安息香酸）；ＭｅＯＨ（メタノール）；ＭＷ（マイクロ波）；ＮＣＳ（Ｎ−クロロスクシンイミド）；ＮＭＰ（１−メチル−２−ピロリジノン）；ｐ−ＴＳＡ（ｐ−トルエンスルホン酸）；ＲＴ（室温）；ＴＥＡ（トリエチルアミン）；ＴＨＦ（テトラヒドロフラン）；ＴＬＣ（薄層クロマトグラフィー）。
【００８７】
実施例１： （４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−（４−｛４−［４−（４−メチルチオフェン−３−イル）−ベンゾトリアゾール−１−イル］−ピリミジン−２−イルアミノ｝−シクロヘキシル）−メタノン（化合物１）の合成
ＡｃＯＨ（１００mL）中の３−ニトロベンゼン−１，２−ジアミン（１５．０ｇ）の混合物に、ＮａＮＯ２（７．０ｇ）を添加した。ＲＴで１５分間反応混合物を撹拌し、次いで、約２時間６０℃で加熱したところ、その間に反応混合物は赤色になった。混合物をＲＴに冷却し、氷水で希釈し、得られた沈殿物を濾過し、氷水で洗浄し、次いで真空下で乾燥させて、薄茶色の固体として４−ニトロ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール（１３．４５ｇ、収率８３．６％）を得た。さらに精製することなく、生成物を使用した。
【００８８】
（Ｂ） ＥｔＯＨ（４０mL）中の４−ニトロ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール（０．４９２ｇ）と１０％のＰｄＣ（０．１０ｇ）との混合物を、１時間Parr装置内で４０psiにて水素化した。セライト（Celite）によって生成物を濾過し、ＥｔＯＡｃで数回洗浄し、合わせた濾液を減圧下で濃縮して、橙色の固体（０．４０５ｇ）を得た。生成物を、短いＳｉＯ２カラム（１：１ ＥｔＯＡｃ−ヘキサン）で精製し、橙色の固体として４−アミノ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール（０．３２２ｇ、収率８０％）を得た。
【００８９】
（Ｃ） 氷浴中にて、Ｎ２下で無水ＤＭＦ（１００mL）を冷却した。これに、４−アミノ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール（９．０ｇ）を添加し、混合物を１０分間撹拌した。これに、ＮａＨ（６０％、２．９５ｇ）を添加し、１５分間氷浴上で混合物を撹拌した。最後に、４−クロロ−２−メチルスルファニル−ピリミジン（１１．００ｇ）を添加し、氷浴を除去し、混合物をＲＴに加温し、次いで、１時間８５℃に加熱した。次に、反応混合物をＲＴに冷却し、氷水で希釈した。細かい黄色の沈殿物を濾過し、冷水で洗浄し、ＥｔＯＡｃとともに粉砕（titurate）して、１−（２−メチルスルファニル−ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−４−イルアミン（１３．４３ｇ、収率７８％）を得た。
【００９０】
（Ｄ） １−（２−メチルスルファニル−ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ベンゾトリアゾール−４−イルアミン（１２．０ｇ）、氷（５０ｇ）、Ｈ２Ｏ（２５mL）およびＨＣｌ（濃、２５mL）の混合物を５分間氷浴中で撹拌した。ＮａＮＯ２（３．３８ｇ）のＨ２Ｏ（２５mL）溶液をゆっくり反応混合物の表面下に添加し、３０分間撹拌した。次いで、これにＨ２Ｏ（２５mL）中のＫＩ（９．３ｇ）を添加し、反応混合物を一晩撹拌した。次いで、１０％のＮａＯＨ（水溶液）で混合物を塩基化し、ＣＨＣｌ３で抽出した。合わせた有機抽出物をＨ２Ｏおよびブラインで洗浄し、減圧下で溶媒を除去して、赤色残留物として４−ヨード−１−（２−メチルスルファニル−ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ベンゾトリアゾール（１１．１５ｇ、６５％）を得た。
【００９１】
（Ｅ） ４−ヨード−１−（２−メチルスルファニル−ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ベンゾトリアゾール（３．６２ｇ）のＤＣＭ（１２５mL）溶液を氷浴で冷却し、添加漏斗を使用して、１時間にわたって、ＭＣＰＢＡ（２．２４ｇ）のＤＣＭ（５０mL）溶液を滴下することにより処理した。次いで、１０％のＮａ２Ｓ２Ｏ７溶液で反応混合物をクエンチし、ＤＣＭで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３、Ｈ２Ｏ、およびブラインで洗浄した。Ｎａ２ＳＯ４で有機層を乾燥させ、溶媒を減圧下で除去した。残留物をシリカを用いたクロマトグラフィー（３〜５％のＭｅＯＨ−ＤＣＭ）で分離して、薄橙色の固体として４−ヨード−１−（２−メチルスルフィニル−ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ベンゾトリアゾール（２．６５ｇ、６９％）を得た。
【００９２】
（Ｆ） １，４−ジオキサン（２５mL）中の４−ヨード−１−（２−メチルスルフィニル−ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ベンゾトリアゾール（２．０ｇ）および４−アミノ−シクロヘキサンカルボン酸エチルエステル（１．８ｇ）の混合物を、１１０℃で４時間撹拌した。減圧下で溶媒を除去して油を得、これをＥｔＯＨに溶解させ（taken up in EtOH）、薄橙色の固体が形成されるまで水浴中で加熱した。固体を濾過し、Ｅｔ２Ｏで洗浄し、乾燥させて、薄橙色の粉末として４−［４−（４−ヨードベンゾトリアゾール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキサンカルボン酸エチルエステル（３．５６ｇ、９３％）を得た。
【００９３】
（Ｇ） ＴＨＦ（２０mL）、ＥｔＯＨ（２０mL）およびＨ２Ｏ（１５mL）中の４−［４−（４−ヨードベンゾトリアゾール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキサンカルボン酸エチルエステル（２．５６ｇ）の混合物に、ＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（０．６５ｇ）を添加し、得られた混合物をＲＴで一晩撹拌した。次いで、Ｈ２Ｏ（１０mL）中のクエン酸（２．９９ｇ）で反応混合物を酸性化し、溶媒を減圧下で除去した。得られた薄橙色の固体をＨ２Ｏ中で３０分間撹拌し、濾過し、Ｈ２Ｏで洗浄し、乾燥させて、薄橙色の粉末として４−［４−（４−ヨードベンゾトリアゾール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキサンカルボン酸（２．１ｇ、８７％）を得た。Ｍｐ＝２５２〜２５４℃。
【００９４】
（Ｈ） ＴＨＦ（６０mL）中の４−［４−（４−ヨードベンゾトリアゾール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキサンカルボン酸（２．１ｇ）、（ＢＯＰ（３．０ｇ）、４−ヒドロキシピリジン（０．６９ｇ）、およびＤＩＰＥＡ（０．５７mL）の混合物を、ＲＴで一晩撹拌した。次いで、反応混合物を濾過し、薄橙の固体をＥｔ２Ｏで洗浄し、乾燥させて、生成物を得た。母液を濃縮し、Ｈ２Ｏで希釈し、ＤＣＭで抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を揮散させ、合計収量２．２５ｇの（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−｛４−［４−（４−ヨードベンゾトリアゾール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−メタノンを得た。Ｍｐ＝２６５．６〜２６８．１℃。
【００９５】
（Ｉ） （４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−｛４−［４−（４−ヨードベンゾトリアゾール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル）｝−メタノン（０．２５ｇ）、４−メチル−３−チオフェンボロン酸（０．０６８ｇ）、およびＮａ２ＣＯ３（２Ｍ、０．７mL、脱気）の混合物を、１５分間Ｎ２下でＲＴにて撹拌した。これに、トルエン（８mL、脱気）およびＥｔＯＨ（０．５mL）とともにＰｄ（ＰＰｈ３）４（０．０１６ｇ）を添加し、混合物を１１０℃で一晩撹拌した。次いで、反応混合物を水で希釈し、ＤＣＭで抽出し、水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を揮散させて、固体を得た。固体を、ＤＣＭ：１％のＮＨ４ＯＨ−ＭｅＯＨ（１０００：５０）で溶出して、シリカを用いたフラッシュクロマトグラフィーで分離し、オフホワイトの固体として（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−（４−｛４−［４−（４−メチルチオフェン−３−イル）−ベンゾトリアゾール−１−イル］−ピリミジン−２−イルアミノ｝−シクロヘキシル）−メタノン（化合物１、０．１１４ｇ、４０％）を得た。Ｍｐ＝２４６〜２４７℃；Ｍ＋Ｈ＝５１８。
【００９６】
実施例２： （４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−｛４−［４−（４−ｏ−トリル−ベンゾトリアゾール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−メタノン（化合物２）の合成
（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−｛４−［４−（４−ヨードベンゾトリアゾール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−メタノン（０．４ｇ）、ｏ−トリルボロン酸（０．１０４ｇ）およびＮａ２ＣＯ３（２Ｍ、１．１mL、脱気）の混合物をアルゴンで５分間脱気し、次いで、１５分間Ｎ２下でＲＴにて撹拌した。これに、トルエン（１３mL、脱気）およびＥｔＯＨ（１mL）とともにＰｄ（ＰＰｈ３）４（０．０２５ｇ）を添加し、混合物を１１０℃で一晩撹拌した。次いで、反応混合物を水で希釈し、ＤＣＭで抽出し、水及びブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を揮散させて、固体を得た。固体を、ＤＣＭ：１％のＮＨ４ＯＨ−ＭｅＯＨ（１０００：５０）で溶出して、シリカを用いたフラッシュクロマトグラフィーで分離し、オフホワイトの固体として（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−｛４−［４−（４−ｏ−トリル−ベンゾトリアゾール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロへキシル｝−メタノン（化合物２、０．２７２ｇ、７３％）を得た。Ｍｐ＝２２４〜２２６℃；Ｍ＋Ｈ＝５１２。
【００９７】
実施例３： （４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−（４−｛４−［４−（４−メチルピリジン−３−イル）−ベンゾトリアゾール−１−イル］−ピリミジン−２−イルアミノ｝−シクロヘキシル）−メタノン（化合物３）の合成
（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−｛４−［４−（４−ヨードベンゾトリアゾール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−メタノン（０．３１ｇ）、４−メチル−ピリジン−３−ボロン酸（０．０８６ｇ）、およびＮａ２ＣＯ３（２Ｍ、０．８６mL、脱気）の混合物をアルゴンで５分間脱気し、次いで、１５分間Ｎ２下でＲＴにて撹拌した。これに、トルエン（１３mL、脱気）およびＥｔＯＨ（１mL）とともにＰｄ（ＰＰｈ３）４（０．０２５ｇ）を添加し、混合物を１１０℃で一晩撹拌した。ＴＬＣが出発物質の存在を示したので、４−メチル−ピリジン−３−ボロン酸（０．０８６ｇ）およびＰｄ（ＰＰｈ３）４（２０mg）のさらなるアリコートを添加し、混合物を１１０℃でさらに７時間撹拌した。次いで、反応混合物を水で希釈し、ＤＣＭで抽出し、水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を揮散させて、固体を得た。固体を、ＤＣＭ：１％のＮＨ４ＯＨ−ＭｅＯＨ（１０００：５０）で溶出して、シリカを用いたフラッシュクロマトグラフィーで分離し、オフホワイトの固体として（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−（４−｛４−［４−（４−メチルピリン−３−イル）−ベンゾトリアゾール−１−イル］−ピリミジン−２−イルアミノ｝−シクロヘキシル）−メタノン（化合物３、０．１０８ｇ、３７％）を得た。Ｍｐ＝１９４．３〜２１８．２℃；Ｍ＋Ｈ＝５１３。
【００９８】
実施例４： （４−｛４−［４−（３，５−ジメチルイソオキサゾール−４−イル）−ベンゾトリアゾール−１−イル］−ピリミジン−２−イルアミノ｝−シクロヘキシル）−（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−メタノン（化合物４）の合成
（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−｛４−［４−（４−ヨードベンゾトリアゾール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−メタノン（０．３１ｇ）、（３，５−ジメチルイソオキサゾール−４−イル）ボロン酸（０．０８８ｇ）、およびＮａ２ＣＯ３（２Ｍ、０．８６mL、脱気）の混合物を、１５分間Ｎ２下でＲＴにて撹拌した。これに、トルエン（１０mL、脱気）およびＥｔＯＨ（１mL）とともにＰｄ（ＰＰｈ３）４（０．０１９ｇ）を添加し、混合物を１１０℃で一晩撹拌した。ＴＬＣが出発物質の存在を示したので、（３，５−ジメチルイソオキサゾール４−イル）ボロン酸（０．０８８ｇ）およびＰｄ（ＰＰｈ３）４（２０mg）のさらなる部分を添加し、混合物を１１０℃で一晩撹拌した。次いで、反応混合物を水で希釈し、ＤＣＭで抽出し、水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を揮散させて、薄灰色の固体を得た。前記固体を、ＤＣＭ：１％のＮＨ４ＯＨ−ＭｅＯＨ（１０００：５０）で溶出して、シリカを用いたフラッシュクロマトグラフィーで分離し、白色の粉末（０．２１ｇ）を得た。Ｅｔ２Ｏ（２５mL）に粉末を溶解させ、水浴中で加熱し、水浴から取り出し、消火し（extinguished）、白色粉末として（４−｛４−［４−（３，５−ジメチルイソオキサゾール−４−イル）−ベンゾトリアゾール−１−イル］−ピリミジン−２−イルアミノ｝−シクロヘキシル）−（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−メタノン（化合物４、０．１２９ｇ、４４％）を回収した。Ｍｐ＝＞３００℃；Ｍ＋Ｈ＝５１７。
【００９９】
実施例５： （１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イル）−｛４−［４−（４−メチル−チオフェン−３−イル）−ベンゾトリアゾール−１−イル］−ピリミジン−２−イル｝−アミン（化合物５）の合成
１，４−ジオキサン（２０mL）中の４−ヨード−１−（２−メタンスルフィニル−ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−ベンゾトリアゾール（７００mg）および１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イルアミン（６４２mg）の混合物をアルゴン下で撹拌し、次いで、１１０℃で４．５時間加熱した。次いで、反応混合物を冷却し、減圧下で溶媒を除去して、固体を得た。０〜１００％のＥｔＯＡｃ／ヘキサンを使用して、前記固体をシリカを用いたクロマトグラフィーで分離し、［４−（４−ヨードベンゾトリアゾール−１−イル）−ピリミジン−２−イル］−（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イル）−アミン（７３１mg）を得た。
【０１００】
（Ｂ） ［４−（４−ヨードベンゾトリアゾール−１−イル）−ピリミジン−２−イル］−（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イル）−アミン（３６４mg）、（４−メチル−３−チオフェンボロン酸（１０９mg）、ならびにＮａ２ＣＯ３（２Ｍの水溶液、１．１mL、脱気）、トルエン（１３mL、脱気）およびＥｔＯＨ（１mL）の混合物にアルゴンを通気し、ねじ蓋圧力フラスコ内で１０分間ＲＴで撹拌した。これに、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（２５mg）を添加し、フラスコを密閉し、混合物を１１０℃で一晩撹拌した。次いで、反応混合物をＲＴに冷却し、水で希釈し、ＤＣＭで抽出し、水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を揮散させて、固体を得た。前記固体を、０〜３０％のMagic Base／ＤＣＭで溶出して、シリカを用いたクロマトグラフィーで分離し、次いで、０〜１００％のＥｔＯＡｃ／ヘキサンを使用して、再度シリカを用いたクロマトグラフィーで分離した。生成物をＥｔ２Ｏとともに粉砕し、濾過し、減圧下で一晩蒸発させて、（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イル）−｛４−［４−（４−メチル−チオフェン−３−イル）−ベンゾトリアゾール−１−イル］−ピリミジン−２−イル｝−アミン（化合物５、２１９mg）を得た。Ｍｐ＝２４４．０〜２４５．０℃；Ｍ＋Ｈ＝４７０。
【０１０１】
実施例６： （４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−｛４−［４−（４−チオフェン−３−イルベンゾトリアゾール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−メタノン（化合物６）の合成
（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−｛４−［４−（４−ヨードベンゾトリアゾール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−メタノン（２７４mg）および３−チオフェンボロン酸（６７mg）の混合物をねじ蓋圧力フラスコに入れ、Ｎａ２ＣＯ３（２Ｍの水溶液、０．７mL、脱気）、トルエン（５mL、脱気）およびＥｔＯＨ（５mL）を添加した。これに、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（２０mg）を添加し、フラスコを密閉し、混合物を１１０℃で一晩撹拌した。次いで、反応混合物をＲＴに冷却し、水で希釈し、ＤＣＭで抽出し、水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を揮散させて、粗固体（０．２５ｇ）を得た。粗生成物を、０〜７０％のMagic Base／ＤＣＭで溶出して、シリカを用いたクロマトグラフィーで分離し、Ｅｔ２Ｏ中で粉砕し、濾過し、蒸発させて、（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−｛４−［４−（４−チオフェン−３−イルベンゾトリアゾール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−メタノン（化合物６、２０１mg）を得た。ｍｐ＝２３３〜２３４℃；Ｍ＋Ｈ＝５０４。
【０１０２】
実施例７： （４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−（４−｛４−［４−（４−メチル−チオフェン−３−イル）−インドール−１−イル］−ピリミジン−２−イルアミノ｝−シクロヘキシル）−メタノン（化合物７）の合成
ＮａＨ（７．５９ｇ、６０％）のＤＭＦ（２００mL）懸濁液に、Ｎ２下で４−ブロモインドールを少しずつ添加し、混合物を０℃で１５分間撹拌した。これに、４−クロロ−２−メチルスルファニル−ピリミジン（１５．４５mL）を少しずつ添加し、０℃で３０分間反応混合物を撹拌し、次いで、更に３０分間撹拌しながらＲＴに加温した。次いで、反応混合物を０℃の冷水でクエンチし、得られた懸濁液を濾過し、水で洗浄し、乾燥させて、粗生成物（４１．０１ｇ）を得た。前記粗生成物（２１．９０ｇ）を、ヘキサン：ＥｔＯＡｃ（９００：１００）で溶出して、シリカを用いたクロマトグラフィーで分離し、オフホワイトの固体（１６．４ｇ）を得た。蒸気浴上のＥｔＯＨ中で固体を加熱し、結晶化させ、濾過し、乾燥させて、４−ブロモ−１−（２−メチルスルファニル−ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インドールを得た。
【０１０３】
（Ｂ） ０℃で、４−ブロモ−１−（２−メチルスルファニル−ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インドール（５．０ｇ）のＤＣＭ（２００mL）溶液に、ＭＣＰＢＡ（４．０１ｇ）を少しずつ添加し、０℃で１時間混合物を撹拌した。反応混合物を１０％のＮａ２ＳＯ３（水溶液）でクエンチし、ＤＣＭとＮａＨＣＯ３（水溶液）との間で分配し、有機層をＮａＨＣＯ３（水溶液）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を揮散させて、薄黄色の固体を得、これを次に、熱ＥｔＯＡｃ／ヘキサン（５０：５０）で処理し、濾過し、乾燥させて、オフホワイトの粉末として４−ブロモ−１−（２−メチルスルフィニル−ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インドール（４．９８ｇ）を得た。
【０１０４】
（Ｃ） １，４−ジオキサン（１００mL）中の４−ブロモ−１−（２−メチルスルフィニル−ピリミジン−４−イル）−１Ｈ−インドール（４．９８ｇ）および４−アミノ−シクロヘキサンカルボン酸エチルエステル（５．０７ｇ）の混合物を、５．５時間Ｎ２下で１１０℃にて撹拌した。減圧下で溶媒を除去して油を得、これをＲＴで固化させた。生成物を、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ（７：３〜６：４）で溶出して、シリカを用いたフラッシュクロマトグラフィーで分離し、白色粉末として４−［４−（４−ブロモインドール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキサンカルボン酸エチルエステル（５．８２ｇ、８９％）を得た。
【０１０５】
（Ｄ） ＴＨＦ（１００mL）、ＥｔＯＨ（４０mL）、およびＨ２Ｏ（３０mL）中の４−［４−（４−ブロモインドール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキサンカルボン酸エチルエステル（５．８ｇ）およびＬｉＯＨ・Ｈ２Ｏ（１．６５ｇ）の混合物を一晩ＲＴで撹拌した。次いで、クエン酸（２０mLのＨ２Ｏ中７．５４ｇ）で反応混合物を酸性化させ、１時間ＲＴで撹拌した。沈殿物を濾過し、水、次いでＥｔ２Ｏで洗浄し、乾燥させて、白色粉末として４−［４−（４−ブロモインドール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキサンカルボン酸（５．２７ｇ、９７％）を得た。
【０１０６】
（Ｅ） ＴＨＦ（２００mL）中の４−［４−（４−ブロモインドール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキサンカルボン酸（５．２７ｇ）、（ＢＯＰ（８．４２ｇ）、４−ヒドロキシピペリジン（１．９３ｇ）、およびヒューニッヒ塩基（４．４２mL）の混合物を、４．２５時間ＲＴで撹拌した。反応混合物を濾過して、白色粉体（３．０１ｇ）を得た。母液を濃縮し、Ｈ２Ｏで希釈し、ＤＣＭで抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、揮散させてオフホワイトの固体を得、これをＥｔＯＨ中で加熱し、濾過し、乾燥させて、｛４−［４−（４−ブロモ−インドール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−メタノン（合計６．０９ｇ、９６％）を得た。
【０１０７】
（Ｆ） ｛４−［４−（４−ブロモ−インドール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−メタノン（０．３０ｇ）、４−メチル−３−チオフェンボロン酸（０．０９４ｇ）、ならびにＮａ２ＣＯ３（２Ｍの水溶液、０．９mL、脱気）、トルエン（１０mL、脱気）およびＥｔＯＨ（２mL）の混合物を、１０分間ＲＴで撹拌した。これに、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（０．０２ｇ）を添加し、Ｎ２下で１１０℃にて一晩撹拌した。次いで、反応混合物をＲＴに冷却し、水で希釈し、ＤＣＭで抽出し、水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を揮散させて粉末を得た。固体を、ＤＣＭ：１％のＮＨ４ＯＨ−ＭｅＯＨ（１０００：５０）で溶出して、シリカを用いたフラッシュクロマトグラフィで分離し、オフホワイトの固体を得、これをＥｔＯＨから結晶化させて、（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−（４−｛４−［４−（４−メチル−チオフェン−３−イル）−インドール−１−イル］−ピリミジン−２−イルアミノ｝−シクロヘキシル）−メタノン（化合物７、０．１２ｇ、３９％）を得た。Ｍｐ＝１６８〜１８８℃；Ｍ＋Ｈ＝５１６。
【０１０８】
実施例８： （４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−｛４−［４−（４−ピリジン−４−イル−ベンジルトリアゾール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−メタノン（化合物８）の合成
（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−｛４−［４−（４−ヨードベンゾトリアゾール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−メタノン（２７４mg）および４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキキソボロラン−２−イル）−ピリジン（１０８mg）の混合物をねじ蓋圧力フラスコに入れ、Ｎａ２ＣＯ３（２Ｍの水溶液、０．７mL、脱気）、トルエン（５mL、脱気）およびＥｔＯＨ（５mL）を添加した。これに、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（２０mg）を添加し、フラスコを密閉し、混合物を１１０℃で一晩撹拌した。次いで、反応混合物をＲＴに冷却し、水で希釈し、ＤＣＭで抽出し、水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を揮散させて、粗固体（０．２９ｇ）を得た。粗生成物を、０〜７０％のMagic Base／ＤＣＭで溶出して、シリカを用いたクロマトグラフィーで分離し、一晩Ｅｔ２Ｏ中で粉砕し、濾過し、蒸発させて、（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−｛４−［４−（４−ピリジン−４−イル−ベンジルトリアゾール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−メタノン（化合物８、１３０mg）を得た。ｍｐ＝２６６．０〜２６７．０℃；Ｍ＋Ｈ＝４９９。
【０１０９】
実施例９： ｛４−［４−（４−フラン−３−イル−ベンゾトリアゾール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−メタノン（化合物９）の合成
（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−｛４−［４−（４−ヨードベンゾトリアゾール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−メタノン（２７４mg）および３−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキキソボロラン−２−イル）−フラン（１０２mg）の混合物をねじ蓋圧力フラスコに入れ、Ｎａ２ＣＯ３（２Ｍの水溶液、０．７mL、脱気）、トルエン（５mL、脱気）およびＥｔＯＨ（５mL）を添加した。これに、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（２０mg）を添加し、フラスコを密閉し、混合物を１１０℃で一晩撹拌した。次いで、反応混合物をＲＴに冷却し、水で希釈し、ＤＣＭで抽出し、水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を揮散させて、粗固体を得た。粗生成物を、０〜６０％のMagic Base／ＤＣＭで溶出して、シリカを用いたクロマトグラフィーで分離し、一晩Ｅｔ２Ｏ中で粉砕し、濾過し、蒸発させて、｛４−［４−（４−フラン−３−イル−ベンゾトリアゾール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−メタノン（化合物９、１０３mg）を得た。ｍｐ＝２４３．０〜２４４．０℃；Ｍ＋Ｈ＝４８８。
【０１１０】
実施例１０： （１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イル）−｛４−［４−（３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−ベンゾトリアゾール−１−イル］−ピリミジン−２−イル｝−アミン（化合物１０）の合成
［４−（４−ヨードベンゾトリアゾール−１−イル）−ピリミジン−２−イル］−（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イル）−アミン（２５０mg）、３−メチル−ピラゾール−４−ボロン酸ピナコールエステル（１０９mg）、ならびにＮａ２ＣＯ３（２Ｍの水溶液、０．７mL、脱気）、トルエン（９mL、脱気）およびＥｔＯＨ（０．７mL）の混合物を、ねじ蓋圧力フラスコに添加した。これに、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（２０mg）を添加し、フラスコを密閉し、混合物を１１０℃で一晩撹拌した。次いで、反応混合物をＲＴに冷却し、３−メチル−ピラゾール−４−ボロン酸ピナコールエステル（１０９mg）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（２０mg）およびＥｔＯＨ（５mL）のさらなる部分を添加した。再度フラスコを密閉し、１１０℃で一晩加熱した。次いで、反応混合物を水で希釈し、ＤＣＭで抽出し、水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を揮散させて、固体（０．３４ｇ）を得た。固体を、０〜６０％のMagic Base／ＤＣＭで溶出して、シリカを用いたクロマトグラフィーで分離し、次いで、０〜６０％のMagic Base／ＤＣＭを使用して、再度シリカを用いたクロマトグラフィーで分離した。Ｅｔ２Ｏとともに生成物を粉砕し、濾過し、減圧下で一晩乾燥させて、（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イル）−｛４−［４−（３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−ベンゾトリアゾール−１−イル］−ピリミジン−２−イル｝−アミン（化合物１０、３９mg）を得た。Ｍｐ＝２３１〜２３２℃；Ｍ＋Ｈ＝４５４。
【０１１１】
実施例１１： （４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−（４−｛４−［４−（３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）ベンゾトリアゾール−１−イル］−ピリミジン−２−イルアミノ｝−シクロヘキシル）−メタノン（化合物１１）の合成
（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−｛４−［４−（４−ヨードベンゾトリアゾール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−メタノン（２７４mg）および３−メチル−ピラゾール−４−ボロン酸ピナコールエステル（１０９mg）、Ｎａ２ＣＯ３（２Ｍの水溶液、０．７mL、脱気）、トルエン（９mL、脱気）およびＥｔＯＨ（０．７mL）の混合物に、１０分間ねじ蓋圧力フラスコ内にてアルゴンを通気した。これに、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（１８mg）を添加し、フラスコを密閉し、混合物を１１０℃で一晩撹拌した。反応混合物をＲＴに冷却し、次いで、３−メチル−ピラゾール−４−ボロン酸ピナコールエステル（１０９mg）、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（２０mg）およびＥｔＯＨ（５mL）のさらなる部分を添加し、フラスコを密閉し、１１０℃で６時間再度加熱した。３−メチル−ピラゾール−４−ボロン酸ピナコールエステル（１０９mg）およびＰｄ（ＰＰｈ３）４（２０mg）のさらなる部分を添加し、混合物を１１０℃で一晩撹拌した。次いで、反応混合物をＲＴに冷却し、水で希釈し、ＤＣＭで抽出し、水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を揮散させて、粗固体（３１１mg）を得た。粗生成物（５２mg）を、０〜６０％のMagic Base／ＤＣＭで溶出して、シリカを用いたクロマトグラフィーで分離し、一晩Ｅｔ２Ｏ中で粉砕し、濾過し、乾燥させて、（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−（４−｛４−［４−（３−メチル−１Ｈ−ピラゾール４−イル）−ベンジルトリアゾール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ｝−シクロヘキシル）−メタノン（化合物１１、２８mg）を得た。ｍｐ＝１９０〜１９５℃；Ｍ＋Ｈ＝５０２。
【０１１２】
実施例１２： （４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−（４−｛４−［４−（３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）インドール−１−イル］−ピリミジン−２−イルアミノ｝−シクロヘキシル）−メタノン（化合物１２）の合成
｛４−［４−（４−ブロモ−インドール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−メタノン（０．５１ｇ）、３−メチル−ピラゾール−４−ボロン酸ピナコールエステル（０．２３４ｇ）、ならびにＮａ２ＣＯ３（２Ｍの水溶液、１．５３mL、脱気）、トルエン（１８mL、脱気）およびＥｔＯＨ（４mL）の混合物を、ねじ蓋圧力フラスコに添加した。これに、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（０．０３５ｇ）を添加し、フラスコを密閉し、混合物を１１０℃で一晩撹拌した。次いで、反応混合物を水で希釈し、ＤＣＭで抽出し、水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を揮散させて、薄黄色の固体（０．４５ｇ）を得た。前記固体を、０〜６０％のMagic Base／ＤＣＭで溶出して、シリカを用いたフラッシュクロマトグラフィーで分離し、次いで、ＤＣＭ：１％のＮＨ４ＯＨ−ＭｅＯＨ（１０００：５０）で溶出して、シリカを用いた再度クロマトグラフィーで分離し、オフホワイトの粉末として（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−（４−｛４−［４−（３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−インドール−１−イル］−ピリミジン−２−イルアミノ｝−シクロヘキシル）−メタノン（化合物１２、０．１１ｇ、２２％）を得た。Ｍｐ＝２１５〜２２０℃。
【０１１３】
実施例１３： （４−｛４−［４−（３，５−ジメチル−イソオキサゾール−４−イル）−インドール−１−イル］−ピリミジン−２−イルアミノ｝−シクロヘキシル）−（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−メタノン（化合物１３）の合成
｛４−［４−（４−ブロモ−インドール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−メタノン（０．５１ｇ）、３，５−ジメチル−イソオキサゾール−４−イル−ボロン酸（０．１７６ｇ）、ならびにＮａ２ＣＯ３（２Ｍの水溶液、１．５３mL、脱気）、トルエン（１８mL、脱気）およびＥｔＯＨ（４mL）の混合物を、ねじ蓋圧力フラスコに添加した。これに、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（０．０３５ｇ）を添加し、フラスコを密閉し、混合物を１１０℃で一晩撹拌した。次いで、反応混合物を水で希釈し、ＤＣＭで抽出し、水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を揮散させて、薄黄色の固体（０．６１ｇ）を得た。前記固体を、ＤＣＭ：１％のＮＨ４ＯＨ−ＭｅＯＨ（９００：５０）で溶出して、シリカを用いたフラッシュクロマトグラフィーで分離し、オフホワイトの粉末として（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−（４−｛４−［４−（３，５−ジメチル−イソオキサゾール−４−イル）−インドール−１−イル］−ピリミジン−２−イルアミノ｝−シクロヘキシル）−メタノン（化合物１３、０．３２ｇ、６２％）を得た。Ｍｐ＝２０３〜２０４℃。
【０１１４】
実施例１４： （４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−（４−｛４−［４−（４−メチル−ピリジン−３−イル）−インドール−１−イル］−ピリミジン−２−イルアミノ｝−シクロヘキシル）−メタノン（化合物１４）の合成
｛４−［４−（４−ブロモ−インドール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−メタノン（０．３ｇ）、４−メチルピリジン−３−ボロン酸（０．０９ｇ）、ならびにＮａ２ＣＯ３（２Ｍの水溶液、０．９mL、脱気）、トルエン（１０mL、脱気）およびＥｔＯＨ（２mL）の混合物を、ねじ蓋圧力フラスコに添加した。これに、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（０．０２ｇ）を添加し、フラスコを密閉し、混合物を１１０℃で一晩撹拌した。次いで、反応混合物を水で希釈し、ＤＣＭで抽出し、水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を揮散させて、暗褐色の油（０．３８ｇ）を得た。前記油を、ＤＣＭ：１％のＮＨ４ＯＨ−ＭｅＯＨ（１０００：２５〜１０００：５０）で溶出して、シリカを用いたフラッシュクロマトグラフィーで分離し、白色の粉末として（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−（４−｛４−［４−（４−メチル−ピリジン−３−イル）−インドール−１−イル］−ピリミジン−２−イルアミノ｝−シクロヘキシル）−メタノン（化合物１４、０．１５ｇ、２９％）を得た。Ｍｐ＝１７６〜１７８℃。
【０１１５】
実施例１５： （４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−｛４−［４−（４−ｏ−トリル−インドール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−メタノン（化合物１５）の合成
｛４−［４−（４−ブロモ−インドール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−メタノン（０．３ｇ）、ｏ−トリル−ボロン酸（０．０８９ｇ）、ならびにＮａ２ＣＯ３（２Ｍの水溶液、０．９mL、脱気）、トルエン（１２mL、脱気）およびＥｔＯＨ（３mL）の混合物を、ねじ蓋圧力フラスコに添加した。これに、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（０．０２ｇ）を添加し、フラスコを密閉し、混合物を１１０℃で一晩撹拌した。次いで、反応混合物を水で希釈し、ＤＣＭで抽出し、水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を揮散させて、油（０．４１ｇ）を得た。前記油を、ＤＣＭ：１％のＮＨ４ＯＨ−ＭｅＯＨ（１０００：２５）で溶出して、シリカを用いたフラッシュクロマトグラフィーで分離し、白色の粉末として（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−｛４−［４−（４−ｏ−トリル−インドール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロへキシル｝−メタノン（化合物１５、０．２３ｇ、４６％）を得た。Ｍｐ＝１５８〜１６０℃。
【０１１６】
実施例１６： （４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−｛４−［４−（４−ピリジン−４−イル−インドール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−メタノン（化合物１６）の合成
｛４−［４−（４−ブロモ−インドール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−メタノン（０．３ｇ）、４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサ−ボロラン−２−イル）−ピリジン（０．１３５ｇ）、ならびにＮａ２ＣＯ３（２Ｍの水溶液、０．９mL、脱気）、トルエン（１２mL、脱気）およびＥｔＯＨ（３mL）の混合物を、ねじ蓋圧力フラスコに添加した。これに、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（０．０２ｇ）を添加し、フラスコを密閉し、混合物を１１０℃で一晩撹拌した。次いで、反応混合物を水で希釈し、ＤＣＭで抽出し、水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を揮散させて、油を得た。前記油を、ＤＣＭ：１％のＮＨ４ＯＨ−ＭｅＯＨ（１０００：５０）で溶出して、シリカを用いたフラッシュクロマトグラフィーで分離し、白色の粉末として（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−｛４−［４−（４−ピリジン−４−イル−インドール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロへキシル｝−メタノン（化合物１６、０．１１２ｇ、３０％）を得た。Ｍｐ＝２５８〜２５９℃；Ｍ＋Ｈ＝４９７。
【０１１７】
実施例１７： （４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−｛４−［４−（４−フェニル−インドール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−メタノン（化合物１７）の合成
｛４−［４−（４−ブロモ−インドール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−メタノン（０．３ｇ）、ベンゼン−ボロン酸（０．０８６ｇ）、ならびにＮａ２ＣＯ３（２Ｍの水溶液、０．９mL、脱気）、トルエン（１２mL、脱気）およびＥｔＯＨ（４mL）の混合物を、ねじ蓋圧力フラスコに添加した。これに、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（０．０２ｇ）を添加し、フラスコを密閉し、混合物を１１０℃で一晩撹拌した。次いで、反応混合物を水で希釈し、１０％のＭｅＯＨ−ＤＣＭで抽出し、水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を揮散させて、薄茶色の固体を得た。前記固体を、ＤＣＭ：１％のＮＨ４ＯＨ−ＭｅＯＨ（１０００：２５）で溶出して、シリカを用いたフラッシュクロマトグラフィーで分離し、白色の粉末として（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−｛４−［４−（４−フェニル−インドール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロへキシル｝−メタノン（化合物１７、０．１７１ｇ、５８％）を得た。Ｍｐ＝１９０〜１９１℃；Ｍ＋Ｈ＝４９６。
【０１１８】
実施例１８： （４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−｛４−［４−（４−チオフェン−３−イル−インドール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−メタノン（化合物１８）の合成
｛４−［４−（４−ブロモ−インドール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−メタノン（０．５１ｇ）、３−チオフェン−ボロン酸（０．１６ｇ）、ならびにＮａ２ＣＯ３（２Ｍの水溶液、１．５３mL、脱気）、トルエン（１２mL、脱気）およびＥｔＯＨ（１２mL）の混合物を、ねじ蓋圧力フラスコに添加した。これに、Ｐｄ（ＰＰｈ３）４（０．０３５ｇ）を添加し、フラスコを密閉し、混合物を１１０℃で一晩撹拌した。次いで、反応混合物を水で希釈し、ＤＣＭで抽出し、水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を揮散させて、黄色の固体を得た。前記固体を、ＤＣＭ：１％のＮＨ４ＯＨ−ＭｅＯＨ（１０００：５０）で溶出して、シリカを用いたフラッシュクロマトグラフィーで分離し、薄黄色の粉末として（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−｛４−［４−（４−チオフェン−３−イル−インドール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロへキシル｝−メタノン（化合物１８、０．３２ｇ、６３％）を得た。Ｍｐ＝１７１〜１７２℃；Ｍ＋Ｈ＝５０２。
【０１１９】
実施例１９： 製剤
以下の表に示すように、様々な経路によって送達するための薬学的調製品を製剤する。以下の表で用いられるとき、「活性成分」または「活性化合物」は、式Ｉで示される化合物のうち１つ以上を意味する。
【０１２０】
【表２】
【０１２１】
成分を混合し、各々約１００mgを含有するカプセルに分配する；１個のカプセルは、おおよそ合計日用量である。
【０１２２】
【表３】
【０１２３】
成分を混ぜ合せて、メタノールなどの溶媒を用いて顆粒化する。次いで、その製剤を乾燥させて、適切な打錠機で錠剤（約２０mgの活性化合物を含有する）に成形する。
【０１２４】
【表４】
【０１２５】
成分を混合して、経口投与用の懸濁剤を形成する。
【０１２６】
【表５】
【０１２７】
活性成分を注射用水の一部に溶解させる。次いで、十分な量の塩化ナトリウムを撹拌しながら添加し、等張溶液を作製する。注射用水の残りを用いて溶液の重量を調整し、０．２ミクロンのメンブランフィルターを用いて濾過し、無菌条件下でパッケージ化する。
【０１２８】
【表６】
【０１２９】
成分を一緒に融解させ、蒸気浴上で混合し、全重量２．５ｇを収容する型に注ぐ。
【０１３０】
【表７】
【０１３１】
水以外の成分をすべて混ぜ合わせて、撹拌しながら約６０℃に加熱する。次いで、約６０℃の十分な量の水を激しく撹拌しながら添加して、成分を乳化し、次いで、適量である約１００ｇの水を添加する。
【０１３２】
鼻内噴霧製剤
鼻内噴霧製剤として約０．０２５〜０．５パーセントの活性化合物を含有しているいくつかの水懸濁剤を調製する。前記製剤は、場合により、例えば、微結晶性セルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、デキストロースなどの非活性成分を含有してもよい。塩酸を添加してｐＨを調節してもよい。鼻内噴霧製剤は、典型的には、１回の作動当たり約５０〜１００μLの製剤が鼻内噴霧定量ポンプを介して送達され得る。典型的な投与スケジュールは、４〜１２時間毎に２〜４回噴霧である。
【０１３３】
実施例２０： インビトロにおけるＪＮＫアッセイ
[γ−３３Ｐ］ＡＴＰを用いたＧＳＴ−ＡＴＦ２（１９−９６）のリン酸化によりＪＮＫ活性を測定した。Ｋｍ濃度のＡＴＰと基質を用い、２５mMのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）、２mMのジチオスレイトール、１５０mMのＮａＣｌ、２０mMのＭｇＣｌ２、０．００１％のTween（登録商標）２０、０．１％のＢＳＡおよび１０％のＤＭＳＯを含有するバッファ中の最終体積４０μLで酵素反応を行った。ヒトＪＮＫ２α２アッセイは、１nMの酵素、１μMのＡＴＦ２、１μCiの［γ−３３Ｐ］ＡＴＰを含む８μMのＡＴＰを含有する。ヒトＪＮＫ１α１アッセイは、２ｎＭのｎＭ酵素、１μMのＡＴＦ２、１μCiのCi［γ−３３Ｐ］ＡＴＰを含む６μMのＡＴＰを含有する。ヒトＪＮＫ３（Upstate Biotech #14-501M）アッセイは、２ｎＭの酵素、１μMのＡＴＦ２、１μCiの［γ-33P］ＡＴＰを含む４μMのＡＴＰを含有する。いくつかの濃度の化合物の存在下または非存在下で酵素アッセイを実行した。ＪＮＫおよび化合物を１０分間プレインキュベーションし、次いでＡＴＰおよび基質を添加することにより酵素反応を開始させた。３０分間３０℃で反応混合物をインキュベーションした。インキュベーションの終わりに、反応混合物２５μLを、１３５mMのＥＤＴＡを含有している１０％のグルタチオンSepharose（登録商標）スラリー（Amersham # 27-4574-01)スラリー１５０μLに移すことにより反応を終了させた。親和性樹脂に反応生成物を捕捉させ、濾過プレート(Millipore, MABVNOB50）上においてリン酸緩衝生理食塩水で６回洗浄して、遊離放射性ヌクレオチドを除去した。マイクロプレートシンチレーションカウンター（Packard Topcount）を用いて、３３ＰのＡＴＦ２への取込みを定量した。３パラメータモデルに適合させた１０本の濃度阻害曲線から得られたＩＣ５０値により、ＪＮＫに対する化合物の阻害効力を測定した：阻害（％）＝最大／（１＋（ＩＣ５０／［インヒビター］）勾配）。パラメータ推定のためにMicrosoft Excelでデータを解析した。結果を以下の表２に示す：
【０１３４】
【表８】
【０１３５】
実施例２１： リン酸化ｃ−Ｊｕｎ移行アッセイ
炎症は、炎症経路の他の遺伝子に対するｃ−Ｊｕｎの作用によって部分的にレギュレーションされる。したがって、リン酸化ｃ−Ｊｕｎの核への移行阻害は、化合物の抗炎症作用の指標を提供する。American Tissue Culture CollectionからＳＷ１３５３細胞を購入し、培養条件（３７℃、５％のＣＯ２）下で、１０％のウシ胎児血清（Invitrogen）、アスコルビン酸（Sigma）およびペニシリン／ストレプトマイシン／グルタメート（Invitrogen）を含むＤＭＥＭ培地（Invitrogen）を含有する成長培地中で維持した。化合物処理の２４時間前に、１００μLの成長培地中に８，０００細胞／ウェルの密度で細胞をプレーティングした。化合物処理直前に、成長培地を９０μLの新たな培地に交換した。まず、１０mMの化合物原液を化合物ビヒクル（ＤＭＳＯ）で３mMに希釈し、次いで、無血清培地で希釈し、各ウェルに１０×濃縮溶液として１０μLの体積を添加し、混合し、５％ ＣＯ２中、３７℃で３０分間、細胞とともにプレインキュベーションした。すべてのサンプルについて、１％の終末濃度で化合物ビヒクル（ＤＭＳＯ）を維持した。３０分間インキュベーションした後、２０分間ＴＮＦα（１ng／mL、Roche Biochem）で細胞を活性化させた。次いで、細胞を固定し、透過性にし、製造業者の指示に従って、抗−リン酸化ｃ−Ｊｕｎ抗体（Santa Cruz）、次いでAlexa Fluor 488で標識した二次抗体およびHoechet 33342色素（Invitrogen）で染色した。ArrayScan HCSシステム（Cellomic）により、１ウェル当り４００個の細胞についてリン酸化ｃ−Ｊｕｎのシグナルを測定した。ActivityBaseプログラム（ＩＤＢＳ）において４つのパラメータ適合関数を使用して、対照値の５０％までリン酸化ｃ−Ｊｕｎ活性が阻害される化合物の濃度としてＩＣ５０値を計算した。結果を以下の表３に示す：
【０１３６】
【表９】
【０１３７】
実施例２２： ラットのインビボＴＮＦ誘導性ＩＬ−６産生アッセイ
Charles River Laboratoriesから入手したメスのWistar-Hanラットを、使用前に１週間順化させ、そして体重を９５〜１３０ｇにする。ラットに、経口強制飼養を介して試験化合物を投与し、その３０分後０．５μgの組み換えラットＴＮＦ−α（Biosource）を腹腔内投与する。ＴＮＦ−α投与の９０分後、心臓穿刺を介して血液を回収する。リチウムヘパリン分離管（BD microtainer）を使用して血漿を調製し、分析するまで−８０℃で凍結させる。ラット特異的ＩＬ−６ ＥＬＩＳＡキット（Biosource）を使用して、ＩＬ−６濃度を決定する。阻害率およびＥＤ５０値（ＴＮＦ−α産生が対照値の５０％である化合物の投与量として計算）を決定する。結果は、本発明の化合物が、ＴＮＦ−α誘導性ＩＬ−６産生を阻害することを実証する。
【０１３８】
実施例２３： 齧歯類のコラーゲン誘導性関節炎
Harlan Laboratoriesから入手した７〜８週齢のメスのLewisラットを、使用前に１週間順化させ、そして体重を１２０〜１４０ｇにする。実験０日目に、不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ；２〜３部位で合計０．１mL）中１００μgのウシII型コラーゲン（Chondrex）のエマルションで、ラットの背中数部位に皮内（i.d.）感作させる。一般に、初回抗原刺激から１２〜１４日で関節炎誘導が観察されるが；尾の基部又は背中の別の部位に約７〜１０日目に、１００μgのコラーゲン／ＩＦＡを追加免疫注射（i.d.、合計０．１mL以内）して、疾患の誘導を同期させる。化合物投与は、予防的（追加免疫時又は１〜２日前に開始）であっても、治療的（追加免疫後、１〜２の初期疾患スコア（以下の臨床スコアを参照されたい）と同時に開始）であってもよい。次の２１日間、疾患の発生および進行について動物を評価する。
【０１３９】
スコアリングシステム（下記）を使用したり、各足について足容積測定装置を用いて足容積を測定したり、キャリパを用いて足又は関節の厚さを測定したりしてラットを評価する。０日目にベースライン測定を行い、腫脹の最初の徴候が現れたときに測定を再開し、実験の終わりまで１週間当たり最高３回測定する。各足について以下のようにスコアリングを評価する：
１＝足または１本の指における腫脹および／または発赤、
２＝２つ以上の関節における腫脹、
３＝２つを超える関節が関与している足全体の腫脹、
４＝足および指全てにおける重篤な関節炎。
【０１４０】
個々の足についての４つのスコアを加えることにより、各ラットの関節炎スコアを評価し、最高スコアは１６となる。連続的に疾患の発症および進行を測定するために、足容積測定装置を用いて後足の足容積も決定する。
【０１４１】
研究の終わりに、体重決定、組織学的、細胞および／または分子分析のために後足（および他の組織）を摘出する。さらに、心臓穿刺を介して血液を回収し、リチウムヘパリン分離管（BD microtainer）を使用して血漿を調製し、分析するまで−７０℃で凍結させる。血漿、またはホモジネートされた関節組織の炎症性サイトカイン濃度（例えば、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１およびＩＬ−６）を、ラット特異的ＥＬＩＳＡキット（R&D）を使用して決定する。対照動物と比較した臨床スコア、足容積および組織病理の変化を総合して（as a composite of）、疾患保護または阻害のレベルを決定する。
【０１４２】
実施例２４： ＴＮＦ−α誘導性ヒト軟骨肉腫ＳＷ１３５３細胞におけるＩＬ−８産生アッセイ
American Tissue Culture CollectionからＳＷ１３５３細胞を購入し、３７℃、５％のＣＯ２の培養条件下で、１０％のウシ胎児血清(Invitrogen）、アスコルビン酸（Sigma）およびペニシリン（Invitrogen）を含むＤＭＥＭ培地（Invitrogen）からなる成長培地中で維持する。化合物処理の４８時間前に、１００μLの培地に、１ウェル当り１×１０４細胞の密度で細胞をプレーティングする。化合物処理直前に、培地を１６０μLの新たな培地に交換する。化合物原液（１０mM）を成長培地で希釈し、各ウェルに１０×濃縮溶液として２０μLの体積を添加し、混合し、３０分間細胞とともにプレインキュベーションする。すべてのサンプル中１％の終末濃度で化合物ビヒクル（ＤＭＳＯ）を維持する。３０分後、１０ng／mLのＴＮＦ−α（Roche Biochem）で細胞を活性化させる。ＴＮＦ−αを、成長培地で作成した１０×濃縮溶液として添加し、１ウェル当り２０μLの体積を添加する。細胞プレートを５時間培養する。細胞培地を回収し、−２０℃で保存する。製造業者（BD Bioscience）の指示に従い、ＩＬ−８の存在についてサンドイッチＥＬＩＳＡにより培地のアリコートを分析する。Microsoft ExcelプログラムのXlfit3を用いて、ＩＬ−８産生が対照値の５０％に減少した化合物の濃度としてＩＣ５０値を計算する。特定の化合物は、このアッセイにおいて０．１〜２０μMの範囲のＩＣ５０値を有する。
【０１４３】
実施例２５： オボアルブミン感作喘息モデル
（Ａ） オスのBrown-Norway ラットを、３週間にわたって週１回（０日目、７日目、および１４日目）、０．２mLのミョウバン中１００μgのＯＡ（オボアルブミン）でi.p.感作する。最後の感作後の週、ラットを試験する準備が整う。抗原投与の１〜２日前、動物の体重を測る。２１日目、ＯＡのエアロゾル抗原投与（４５分間、１％ＯＡ）の３０分前に、ビヒクルまたは化合物製剤のいずれかをラットの皮下にq.d.投与し、抗原投与の４時間後または２４時間後に屠殺する（terminated）。屠殺時に、ラットに麻酔をかける（ウレタン、およそ２ｇ／kg、i.p.）。屠殺時にＰＫのためにラットから血漿を回収する。屠殺時に腹大動脈から血液を採取する。気管カニューレを挿入し、３×３mLのＰＢＳで肺を洗浄する。総白血球数および白血球百分率についてＢＡＬ流体を分析する。Coulter計数機を使用して、細胞（２０〜１００μL）のアリコート中の総白血球数を決定する。白血球百分率については、５０〜２００μLのサンプルをCytospinで遠心分離し、スライドをDiff-Quikで染色する。標準的な形態学的基準を使用して光学顕微鏡下で単球、好酸球、好中球およびリンパ球の比率をカウントし、百分率として表す。残りのＢＡＬ流体を遠心分離して（１５００rpm、１０分間）、上清を−８０℃で保存する。また、タンパク質および／またはＲＮＡ分析のために肺を摘出する。
【０１４４】
実施例２６： ＣＦＡ誘導性熱痛覚過敏アッセイ
Charles River LaboratoriesからオスのWistarラット（約２００ｇ）を購入する。実験前、自由に食物および水を与える。０日目、イソフルラン麻酔下で右後足の足底側に、５０μL（１．０mg／mL）の１００％完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ；Sigma Chemical Co, St. Louis, MO, USA)を注射する。麻酔からの回復した後、熱痛覚過敏試験を行う実験室にラットを移動させ、３０分間透明な矩形プラスチック箱に入れる。馴化の後、通常のケースにラットを戻す。
【０１４５】
１日目、ラットを一晩絶食させ、２日目（ＣＦＡ注射の４８時間後）、ラットを実験室に戻し、少なくとも１時間その部屋に馴化させる。次いで、実験開始前に、透明なプラスチック床の上に置いた透明なプラスチック箱に、１０分間ラットを個別に入れる。ハーグリーヴス試験を使用して、熱に対する足引込め閾値（thermal paw withdrawal threshold）を測定する。足底試験装置（Ugo Basile, Italy）を使用し、プラスチック床を通して各後足に光ファイバー放射熱（強度設定６０）を印加する。ラットが熱源から足を離した時間を記録する。対側足のターゲット閾値は約１０秒であった。各足を、少なくとも５分間隔で３回、同側および対側足を交互に試験する。ベースラインを決定した後、ラットにビヒクルまたは薬剤のいずれかを投与し、投与の３０〜１２０分後に上記試験を繰り返した。試験者は、処理群について知らされない。研究の終わりにＣＯ２吸入によりラットを安楽死させ、５〜１０分間観察して、確実に死に至らしめる。本発明の化合物は、このアッセイにおいて有効に疼痛を軽減する。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１０】
［式中、
Ｘ１およびＸ２は、各々同時にＮまたはＣＨであり；
Ｘ３は、ＣＨ−Ｒ２またはＮ−ＳＯ２Ｒ（式中、Ｒは低級アルキルである）であり；
Ｒ１は、０〜３個の低級アルキル基で置換されたアリールまたはヘテロアリールであり；
Ｒ２は、
【化１１】
（式中、Ｒ３は、Ｈ、低級アシル、またはアミノ酸である）である］
で示される化合物、またはその薬学的に許容しうる塩。
【請求項２】
Ｘ１およびＸ２が各々Ｎである、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
Ｘ１およびＸ２が各々ＣＨである、請求項１記載の化合物。
【請求項４】
Ｘ３がＣＨ−Ｒ２であり、Ｒ２が
【化１２】
であり、Ｒ３がＨである、請求項１〜３のいずれか１項記載の化合物。
【請求項５】
Ｘ３がＮ−ＳＯ２Ｒであり、Ｒがメチルである、請求項１〜４のいずれか１項記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ１が、０〜３個のメチル基で置換されたフェニルである、請求項１〜５のいずれか１項記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ１が、０〜３個の低級アルキル基で置換されたヘテロアリールである、請求項１〜５のいずれか１項記載の化合物。
【請求項８】
ヘテロアリールが、チオフリル、ピリジル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、フリル、イミダゾリルおよびピラゾリルからなる群より選択される、請求項７記載の化合物。
【請求項９】
（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−（４−｛４−［４−（４−メチル−チオフェン−３−イル）−ベンゾトリアゾール−１−イル］−ピリミジン−２−イルアミノ｝−シクロヘキシル）−メタノン；
（４−ヒドロキシピペリジン−１−イル）−｛４−［４−（４−ｏ−トリル−ベンゾトリアゾール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝メタノン；
（４−ヒドロキシピペリジン−１−イル）−（４−｛４−［４−（４−メチルピリジン−３−イル）−ベンゾトリアゾール−１−イル］−ピリミジン−２−イルアミノ｝−シクロヘキシル）−メタノン；
（４−｛４−［４−（３，５−ジメチル−イソオキサゾール−４−イル）−ベンゾトリアゾール−１−イル］−ピリミジン−２−イルアミノ｝−シクロヘキシル）−（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−メタノン；
（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イル）−｛４−［４−（４−メチル−チオフェン−３−イル）−ベンゾトリアゾール−１−イル］−ピリミジン−２−イル｝−アミン；
（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−（４−｛４−［４−（チオフェン−３−イル）−ベンゾトリアゾール−１−イル］−ピリミジン−２−イルアミノ｝−シクロヘキシル）−メタノン；
（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−（４−｛４−［４−（４−メチルチオフェン−３−イル）−インドール−１−イル］−ピリミジン−２−イルアミノ｝−シクロヘキシル）−メタノン；
（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−｛４−［４−（４−ピリジン−４−イル−ベンゾトリアゾール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−メタノン；
｛４−［４−（４−フラン−３−イル−ベンゾトリアゾール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−（４−ヒドロキシピペリジン−１−イル）−メタノン；
（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イル）−｛４−［４−（３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−ベンゾトリアゾール−１−イル］−ピリミジン−２−イル｝−アミン；
（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−（４−｛４−［４−（３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−ベンゾトリアゾール−１−イル］−ピリミジン−２−イルアミノ｝−シクロヘキシル）−メタノン；
（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−（４−｛４−［４−（３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−インドール−１−イル］−ピリミジン−２−イルアミノ｝−シクロヘキシル）−メタノン；
（４−｛４−［４−（３，５−ジメチル−イソオキサゾール−４−イル）−インドール−１−イル］−ピリミジン−２−イルアミノ｝−シクロヘキシル）−（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−メタノン；
（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−（４−｛４−［４−（４−メチル−ピリジン−３−イル）−インドール−１−イル］−ピリミジン−２−イルアミノ｝−シクロヘキシル）−メタノン；
（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−｛４−［４−（４−ｏ−トリル−インドール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−メタノン；
（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−｛４−［４−（４−ピリジン−４−イルインドール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−メタノン；
（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−｛４−［４−（４−フェニル−インドール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−メタノン；及び
（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−｛４−［４−（４−チオフェン−３−イルインドール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−メタノンからなる群より選択される化合物、またはその薬学的に許容しうる塩。
【請求項１０】
有効量の式Ｉ：
【化１３】
［式中、
Ｘ１およびＸ２は、各々同時にＮまたはＣＨであり；
Ｘ３は、ＣＨ−Ｒ２またはＮ−ＳＯ２Ｒ（式中、Ｒは低級アルキルである）であり；
Ｒ１は、０〜３個の低級アルキル基で置換されたアリールまたはヘテロアリールであり；
Ｒ２は、
【化１４】
（式中、Ｒ３は、Ｈ、低級アシル、またはアミノ酸である）である］
で示される化合物、
および薬学的に許容しうる賦形剤、
またはその薬学的に許容しうる塩を含む薬学的製剤。
【請求項１１】
有効量の式Ｉ：
【化１５】
［式中、
Ｘ１およびＸ２は、各々同時にＮまたはＣＨであり；
Ｘ３は、ＣＨ−Ｒ２またはＮ−ＳＯ２Ｒ（式中、Ｒは低級アルキルである）であり；
Ｒ１は、０〜３個の低級アルキル基で置換されたアリールまたはヘテロアリールであり；
Ｒ２は、
【化１６】
（式中、Ｒ３は、Ｈ、低級アシル、またはアミノ酸である）である］
で示される化合物、またはその薬学的に許容しうる塩を哺乳類に投与することを含む、哺乳類の炎症を治療する方法。
【請求項１２】
炎症性障害を治療するための医薬の製造における請求項１〜９のいずれか１項記載の化合物の使用。
【請求項１３】
炎症性障害の治療において使用するための請求項１〜９のいずれか１項記載の化合物。
【請求項１４】
式Ｉ
【化１７】
［式中、
Ｘ１およびＸ２は、各々同時にＮまたはＣＨであり；
Ｘ３は、ＣＨ−Ｒ２またはＮ−ＳＯ２Ｒ（式中、Ｒは低級アルキルである）であり；
Ｒ１は、０〜３個の低級アルキル基で置換されたアリールまたはヘテロアリールであり；
Ｒ２は、
【化１８】
（式中、Ｒ３は、Ｈ、低級アシル、またはアミノ酸である）である］
で示される化合物、またはその薬学的に許容しうる塩を作製するための方法であって、
式
【化１９】
（式中、Ｘはハロである）で示される第１の中間体を提供することと、
前記第１の中間体を、Ｒ１−Ｂ（ＯＨ）２、
【化２０】
およびこれらのエステルから選択される第１の試薬、ならびに式Ｐｄ［Ｐ（Ｃ６Ｈ５）３］４を有する第２の試薬と、嫌気性雰囲気、高ｐＨ、および高温条件下で、式Ｉで示される化合物を生成するのに十分な時間接触させることと、
を含む方法。
【請求項１５】
上記のような本発明。
【請求項１】
式Ｉ：
【化１０】
［式中、
Ｘ１およびＸ２は、各々同時にＮまたはＣＨであり；
Ｘ３は、ＣＨ−Ｒ２またはＮ−ＳＯ２Ｒ（式中、Ｒは低級アルキルである）であり；
Ｒ１は、０〜３個の低級アルキル基で置換されたアリールまたはヘテロアリールであり；
Ｒ２は、
【化１１】
（式中、Ｒ３は、Ｈ、低級アシル、またはアミノ酸である）である］
で示される化合物、またはその薬学的に許容しうる塩。
【請求項２】
Ｘ１およびＸ２が各々Ｎである、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
Ｘ１およびＸ２が各々ＣＨである、請求項１記載の化合物。
【請求項４】
Ｘ３がＣＨ−Ｒ２であり、Ｒ２が
【化１２】
であり、Ｒ３がＨである、請求項１〜３のいずれか１項記載の化合物。
【請求項５】
Ｘ３がＮ−ＳＯ２Ｒであり、Ｒがメチルである、請求項１〜４のいずれか１項記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ１が、０〜３個のメチル基で置換されたフェニルである、請求項１〜５のいずれか１項記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ１が、０〜３個の低級アルキル基で置換されたヘテロアリールである、請求項１〜５のいずれか１項記載の化合物。
【請求項８】
ヘテロアリールが、チオフリル、ピリジル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、フリル、イミダゾリルおよびピラゾリルからなる群より選択される、請求項７記載の化合物。
【請求項９】
（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−（４−｛４−［４−（４−メチル−チオフェン−３−イル）−ベンゾトリアゾール−１−イル］−ピリミジン−２−イルアミノ｝−シクロヘキシル）−メタノン；
（４−ヒドロキシピペリジン−１−イル）−｛４−［４−（４−ｏ−トリル−ベンゾトリアゾール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝メタノン；
（４−ヒドロキシピペリジン−１−イル）−（４−｛４−［４−（４−メチルピリジン−３−イル）−ベンゾトリアゾール−１−イル］−ピリミジン−２−イルアミノ｝−シクロヘキシル）−メタノン；
（４−｛４−［４−（３，５−ジメチル−イソオキサゾール−４−イル）−ベンゾトリアゾール−１−イル］−ピリミジン−２−イルアミノ｝−シクロヘキシル）−（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−メタノン；
（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イル）−｛４−［４−（４−メチル−チオフェン−３−イル）−ベンゾトリアゾール−１−イル］−ピリミジン−２−イル｝−アミン；
（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−（４−｛４−［４−（チオフェン−３−イル）−ベンゾトリアゾール−１−イル］−ピリミジン−２−イルアミノ｝−シクロヘキシル）−メタノン；
（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−（４−｛４−［４−（４−メチルチオフェン−３−イル）−インドール−１−イル］−ピリミジン−２−イルアミノ｝−シクロヘキシル）−メタノン；
（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−｛４−［４−（４−ピリジン−４−イル−ベンゾトリアゾール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−メタノン；
｛４−［４−（４−フラン−３−イル−ベンゾトリアゾール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−（４−ヒドロキシピペリジン−１−イル）−メタノン；
（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イル）−｛４−［４−（３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−ベンゾトリアゾール−１−イル］−ピリミジン−２−イル｝−アミン；
（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−（４−｛４−［４−（３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−ベンゾトリアゾール−１−イル］−ピリミジン−２−イルアミノ｝−シクロヘキシル）−メタノン；
（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−（４−｛４−［４−（３−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル）−インドール−１−イル］−ピリミジン−２−イルアミノ｝−シクロヘキシル）−メタノン；
（４−｛４−［４−（３，５−ジメチル−イソオキサゾール−４−イル）−インドール−１−イル］−ピリミジン−２−イルアミノ｝−シクロヘキシル）−（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−メタノン；
（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−（４−｛４−［４−（４−メチル−ピリジン−３−イル）−インドール−１−イル］−ピリミジン−２−イルアミノ｝−シクロヘキシル）−メタノン；
（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−｛４−［４−（４−ｏ−トリル−インドール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−メタノン；
（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−｛４−［４−（４−ピリジン−４−イルインドール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−メタノン；
（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−｛４−［４−（４−フェニル−インドール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−メタノン；及び
（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−｛４−［４−（４−チオフェン−３−イルインドール−１−イル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−メタノンからなる群より選択される化合物、またはその薬学的に許容しうる塩。
【請求項１０】
有効量の式Ｉ：
【化１３】
［式中、
Ｘ１およびＸ２は、各々同時にＮまたはＣＨであり；
Ｘ３は、ＣＨ−Ｒ２またはＮ−ＳＯ２Ｒ（式中、Ｒは低級アルキルである）であり；
Ｒ１は、０〜３個の低級アルキル基で置換されたアリールまたはヘテロアリールであり；
Ｒ２は、
【化１４】
（式中、Ｒ３は、Ｈ、低級アシル、またはアミノ酸である）である］
で示される化合物、
および薬学的に許容しうる賦形剤、
またはその薬学的に許容しうる塩を含む薬学的製剤。
【請求項１１】
有効量の式Ｉ：
【化１５】
［式中、
Ｘ１およびＸ２は、各々同時にＮまたはＣＨであり；
Ｘ３は、ＣＨ−Ｒ２またはＮ−ＳＯ２Ｒ（式中、Ｒは低級アルキルである）であり；
Ｒ１は、０〜３個の低級アルキル基で置換されたアリールまたはヘテロアリールであり；
Ｒ２は、
【化１６】
（式中、Ｒ３は、Ｈ、低級アシル、またはアミノ酸である）である］
で示される化合物、またはその薬学的に許容しうる塩を哺乳類に投与することを含む、哺乳類の炎症を治療する方法。
【請求項１２】
炎症性障害を治療するための医薬の製造における請求項１〜９のいずれか１項記載の化合物の使用。
【請求項１３】
炎症性障害の治療において使用するための請求項１〜９のいずれか１項記載の化合物。
【請求項１４】
式Ｉ
【化１７】
［式中、
Ｘ１およびＸ２は、各々同時にＮまたはＣＨであり；
Ｘ３は、ＣＨ−Ｒ２またはＮ−ＳＯ２Ｒ（式中、Ｒは低級アルキルである）であり；
Ｒ１は、０〜３個の低級アルキル基で置換されたアリールまたはヘテロアリールであり；
Ｒ２は、
【化１８】
（式中、Ｒ３は、Ｈ、低級アシル、またはアミノ酸である）である］
で示される化合物、またはその薬学的に許容しうる塩を作製するための方法であって、
式
【化１９】
（式中、Ｘはハロである）で示される第１の中間体を提供することと、
前記第１の中間体を、Ｒ１−Ｂ（ＯＨ）２、
【化２０】
およびこれらのエステルから選択される第１の試薬、ならびに式Ｐｄ［Ｐ（Ｃ６Ｈ５）３］４を有する第２の試薬と、嫌気性雰囲気、高ｐＨ、および高温条件下で、式Ｉで示される化合物を生成するのに十分な時間接触させることと、
を含む方法。
【請求項１５】
上記のような本発明。
【公表番号】特表２０１２−５１２８２２（Ｐ２０１２−５１２８２２Ａ）
【公表日】平成２４年６月７日（２０１２．６．７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５４１３３２（Ｐ２０１１−５４１３３２）
【出願日】平成２１年１２月９日（２００９．１２．９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００９／０６６７０７
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０６９８３３
【国際公開日】平成２２年６月２４日（２０１０．６．２４）
【出願人】（５９１００３０１３）エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー (1,754)
【氏名又は名称原語表記】Ｆ． ＨＯＦＦＭＡＮＮ−ＬＡ ＲＯＣＨＥ ＡＫＴＩＥＮＧＥＳＥＬＬＳＣＨＡＦＴ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２４年６月７日（２０１２．６．７）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年１２月９日（２００９．１２．９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２００９／０６６７０７
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０６９８３３
【国際公開日】平成２２年６月２４日（２０１０．６．２４）
【出願人】（５９１００３０１３）エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー (1,754)
【氏名又は名称原語表記】Ｆ． ＨＯＦＦＭＡＮＮ−ＬＡ ＲＯＣＨＥ ＡＫＴＩＥＮＧＥＳＥＬＬＳＣＨＡＦＴ
【Ｆターム（参考）】
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