フタロシアニン色素およびそれらの製造および使用
【課題】細胞媒体中に極めて可溶であって腫瘍にのみ非常に選択的に蓄積し、無毒の化合物に急速に代謝され、化合物の吸収最大が６３０ｎｍより高い光力学療法用または光診断用または感染症、ガンおよび皮膚疾患の治療用の光増感剤およびその製法の提供。
【解決手段】一般式（ＩＩ）
（式中、Ｒ１−Ｒ８は、直鎖または分枝鎖の８つ以内の炭素原子を有するアルキル基を表し、Ｒ９−Ｒ１２は、水素、直鎖または分枝鎖の８つ以内の炭素原子を有するアルキル基またはハロゲンを表し、Ｍｅは亜鉛、アルミニウム、マグネシウム、水素、ガリウム、ゲルマニウムまたは錫を表し、Ｍは水素、金属カチオンまたはアンモニウムカチオンを表して、所望により１つ以上の未置換または置換されたアルキル基またはヒドロキシアルコキシアルキル基により置換されてもよく、ｍ、ｎ、ｏ、ｐは１または２である）で示されるフタロシアニン色素。
【解決手段】一般式（ＩＩ）
（式中、Ｒ１−Ｒ８は、直鎖または分枝鎖の８つ以内の炭素原子を有するアルキル基を表し、Ｒ９−Ｒ１２は、水素、直鎖または分枝鎖の８つ以内の炭素原子を有するアルキル基またはハロゲンを表し、Ｍｅは亜鉛、アルミニウム、マグネシウム、水素、ガリウム、ゲルマニウムまたは錫を表し、Ｍは水素、金属カチオンまたはアンモニウムカチオンを表して、所望により１つ以上の未置換または置換されたアルキル基またはヒドロキシアルコキシアルキル基により置換されてもよく、ｍ、ｎ、ｏ、ｐは１または２である）で示されるフタロシアニン色素。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規な置換した水溶性のフタロシアニン色素、それらの塩、それらの製造方法、並びに光力学療法およびウイルス、かびまたは微生物により誘導される感染症、ガンおよび皮膚疾患の治療のための薬剤および製薬組成物におけるそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
光力学療法は、感光性物質すなわち光増感剤および組織に含まれる酸素と組み合わせて光による腫瘍および他の組織の変性を治療する方法である。これらの光増感剤またはその代謝前駆物質の１つは、患者に投与される。この光増感剤または代謝前駆物質は、選択的に腫瘍に蓄積される。いくらかの待ち時間後、腫瘍およびそれを囲む健康な組織は、適切な波長の光により照射される。光物理プロセスは、組織中に含まれる酸素から毒性の物質、いわゆる反応性酸素種を発生する。これらの反応性酸素種は、光増感剤が腫瘍組織中に蓄積されるために、選択的に腫瘍を傷つける。
【０００３】
外科的治療に比べて、光力学療法は、非侵襲性またはわずかに侵襲性の治療の利点を有する。特に、安全性の理由から、腫瘍に近い健康な組織を多量に除く必要がない。光による照射は、１００ｍＷ／ｃｍ２から１０００ｍＷ／ｃｍ２の典型的な光強度で１０分から１００分である。組織は、それゆえ、わずかに加熱されるに過ぎない。腫瘍の光力学療法は、通常、唯１つの治療を要するに過ぎないが、治療を反復することも可能である。通常の波長の光が使用されるので、患者に対する影響は、「伝統的な」治療に比べて比較的小さい。光力学療法の不利は、わずか数ｍｍに過ぎない比較的浅い光の浸透深さである。そのため、ほとんどの場合に、初期の段階の腫瘍または平らな形状の腫瘍のみが、有効に治療できる。光力学療法に好適な腫瘍は、例えば、例えば紫外線角皮症または基底細胞ガンのような皮膚腫瘍ばかりでなく、いぼである。レーザーおよび光ファイバーの光のガイドは、また、もしそれらの表面に内視鏡を近づけることができるならば、身体内の腫瘍の治療を可能にする。
【０００４】
現在、身体内の腫瘍の光力学療法は、非常に稀に使用され、ほとんどの場合、食道、胆管または胆嚢のガン、または脳腫瘍における緩和の目的でのみ使用される。
光力学療法は、２０世紀の初頭においてミュンヘンで既に検討されていた。それは、光増感剤の改良およびレーザーの使用後、８０年代において初めて広く使用されるようになった。典型的な適用範囲は、膀胱、頭部の表面、口腔、喉頭、肺、胆管および生殖器における腫瘍の治療である。
【０００５】
光力学療法の基礎的な物理的プロセスは、いくつかの段階を含み、そしてほとんどの細胞に十分な量で存在する酸素の存在を必要とする。光増感剤の分子は、光フォトンを吸収し、そしてその最初の励起された一重項状態に励起される。もしこの一重項の状態の寿命が十分に長いものであるならば、相互結合による励起された三重項の状態への遷移の可能性は、増大する。この励起された三重項の状態から基底状態への光学的遷移は、非常に起こりそうではないので、その寿命は非常に長い。これは、周囲の多くの分子との接触を可能にする。それが三重項基底状態の分子と接触する場合、エネルギーの交換は可能であり、両者の分子は一重項の状態へ変化する。三重項基底状態の稀な分子の１つは、分子状酸素である。励起された光増感剤分子のエネルギーは、励起された一重項状態への酸素の遷移に必要なエネルギーよりも高いので、このような遷移は可能である。励起された一重項酸素は、その基底状態への光学的遷移に関して非常に長い寿命を有する。励起された一重項酸素は非常に反応性であるので、それは、酸素によって付近の細胞構成成分を損傷できる。壊死が誘導されるか、またはミトコンドリア膜への影響によりアポトースが誘導される。
【０００６】
ほとんどの場合、ポルフィリンが光増感剤として使用される。それらは、６３０ｎｍから６３５ｎｍの波長の赤色光への暴露により活性化される。プロトポルフィリンの代謝前駆物質である５−アミノレビュリン酸またはそのメチルエステルも、ときには使用される。プロトポルフィリンは、腫瘍細胞中でポルフィリンの合成を選択的に開始する。最近の光増感剤は、より高い波長で活性化が可能であり、組織中への光のより大きな浸透深さを得る利点がある。光増感剤は、通常、蛍光を示し、そのため、腫瘍の蛍光診断に使用される。
【０００７】
光力学療法に用いられる最適な波長は、６００ｎｍから１５００ｎｍに存在する。より短い波長では、組織は、照射にとり十分に透明ではなく、一方より長い波長では、照射のエネルギーは余りにも低い。組織における浸透深さは、６３０ｎｍの波長で４ｍｍであり、そして７００ｎｍの波長で８ｍｍである。
【０００８】
光力学療法において光増感剤としてフタロシアニン色素を使用することは、先ず非特許文献１に明らかにされ、次に非特許文献２−３に記述されている。膜に対するスルホン化フタロシアニンの光力学活性および吸着は、非特許文献４に記載されている。
式（Ｉ）
【０００９】
【化１２】
のしばしば使用される亜鉛フタロシアニン色素の合成および光増感剤としてのその光力学活性は、非特許文献６に記載されている。
【００１０】
光力学療法のための光増感剤としての未置換フタロシアニン色素は、特許文献１に記載されている。フタロシアニン色素の中心原子は、シリシウムまたはアルミニウムである。
【００１１】
光力学療法のための光増感剤としての未置換フタロシアニン色素は、また特許文献２に記載されている。フタロシアニン色素の中心原子は、シリシウムまたはアルミニウムである。
【００１２】
光力学療法のための光増感剤としての未置換フタロシアニン色素は、また特許文献３に記載されている。フタロシアニン色素の中心原子は、シリシウムである。
光力学療法のための光増感剤としての未置換フタロシアニン色素は、また特許文献４に記載されている。フタロシアニン色素の中心原子は、反磁性金属原子またはシリシウムである。
【００１３】
光力学療法のための光増感剤としての未置換フタロシアニン色素は、また特許文献２に記載されている。フタロシアニン色素の中心原子は、シリシウム、亜鉛またはアルミニウムである。
【００１４】
【特許文献１】ＷＯ ９２／０１７５３
【特許文献２】ＷＯ ９５／０６６８８
【特許文献３】米国特許５４８４７７８
【特許文献４】ＷＯ ９５／０５８１８
【特許文献５】ＷＯ ０２／０９０３６１
【非特許文献１】Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｒａｄｉａｔｉｏｎ Ｂｉｏｌｏｇｙ、４７、１４５−１４７（１９８５）
【非特許文献２】Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｏｒｐｈｙｒｉｎｓ ａｎｄ Ｐｈｔｈａｌｏｃｙａｎｉｎｅｓ，５，１６１−１６９（２００２）
【非特許文献３】Ｋ．Ｍ．Ｋａｄｉｓｈら、「Ｔｈｅ Ｐｏｒｐｈｙｒｉｎ Ｈａｎｄｂｏｏｋ」、１９巻、１−３５ページ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ（２００３）
【非特許文献４】Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ、１７６８、２４５９−２４６５（２００７）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
光力学療法用の理想的な光増感剤は、細胞媒体中に極めて可溶であり、無毒で非常に有効でなければならない。それは、それが有毒である場合腫瘍にのみ非常に選択的に蓄積し、身体から容易に排除できる害のない無毒の化合物に急速に代謝されねばならない。
【００１６】
そのため、これらの性質を有する光力学療法用の改善された光増感剤が求められている。特に、化合物の吸収最大は、６３０ｎｍより高く、好ましくは６５０ｎｍより高くなければならない。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
本発明者は、新規な置換フタロシアニン色素がこれらの性質を有し、それゆえ光力学療法用の理想的な光増感剤であることを驚くべきことに見いだした。
本発明のさらなる目的は、本発明によるフタロシアニン色素を含む光力学療法用の製薬組成物および薬剤を提供することである。
本発明は、一般式（ＩＩ）
【００１８】
【化１３】
（式中、Ｒ１−Ｒ８は、独立して直鎖または分枝鎖の８つ以内の炭素原子を有するアルキル基を表し、Ｒ９−Ｒ１２は、独立して水素、直鎖または分枝鎖の８つ以内の炭素原子を有するアルキル基またはハロゲンを表し、Ｍｅは亜鉛、アルミニウム、マグネシウム、水素、ガリウム、ゲルマニウムまたは錫を表し、Ｍは水素、金属カチオンまたはアンモニウムカチオンを表して、所望によりそれぞれ１−１２の炭素原子を有する１つ以上の未置換または置換されたアルキル基またはヒドロキシアルコキシアルキル基により置換されてもよく、ｍ、ｎ、ｏ、ｐは独立して１または２である）
の新規なフタロシアニン色素に関する。
【００１９】
ｍ、ｎ、ｏおよびｐが１に等しいフタロシアニン色素が好ましい。
Ｍｅが亜鉛、アルミニウム、マグネシウムまたは水素を表すフタロシアニン色素も好ましい。
【００２０】
また好ましいのは、Ｍが金属ナトリウム、カリウムまたはリチウムのカチオンまたはアンモニウムカチオンであって、それぞれ１−６の炭素原子を有する１つ以上の未置換または置換されたアルキル基またはヒドロキシアルコキシアルキル基により置換されているフタロシアニン色素である。
特に好ましいのは、一般式（ＩＩＩ）
【００２１】
【化１４】
（式中、４つの同じ置換基は中心のＭｅ原子のまわりに配置されている）
の対称性フタロシアニン色素である。これらの色素では、ｍ、ｎ、ｏおよびｐは同じ値を有する。置換基Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５およびＲ７は同じであり、置換基Ｒ２、Ｒ４、Ｒ６およびＲ８は同じであり、同様にＲ９、Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１２は同じである。Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１０、Ｍｅ
およびｍは前記で規定された通りである。
ｍが１に等しい対称性フタロシアニン色素が好ましい。
【００２２】
Ｍｅが亜鉛、アルミニウム、マグネシウムまたは水素を表す対称性フタロシアニン色素が好ましい。
また好ましいのは、Ｍが金属ナトリウム、カリウムまたはリチウムのカチオンまたはアンモニウムカチオンであって、それぞれ１−６炭素原子を有する１つ以上の未置換または置換されたアルキル基またはヒドロキシアルコキシアルキル基により置換されている。
【００２３】
本発明は、また、本発明による一般式（ＩＩ）のフタロシアニン色素の製造方法に関しており、その方法は、一般式（ＩＶＡ）
【００２４】
【化１５】
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１０およびｍは前記同様である）の芳香族アミン、一般式（ＩＶＢ）
【００２５】
【化１６】
（式中、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１１およびｎは前記同様である）の芳香族アミン、一般式（ＩＶＣ）
【００２６】
【化１７】
（式中、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ１２およびｏは前記同様である）の芳香族アミンおよび一般式（ＩＶＤ）
【００２７】
【化１８】
（式中、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびｐは請求項１において規定した通りである）の芳香族アミンと式（Ｖ）
【００２８】
【化１９】
のアシルクロリドとを、一般式（ＶＩＡ）
【００２９】
【化２０】
のアミド、一般式（ＶＩＢ）
【００３０】
【化２１】
のアミド、一般式（ＶＩＣ）
【００３１】
【化２２】
のアミドおよび一般式（ＶＩＤ）
【００３２】
【化２３】
のアミドが形成される条件下で反応させる。
【００３３】
一般式（ＩＩ）の対称性フタロシアニン色素の製造では、もしＭｅが水素を表すものでないならば、アミド（ＶＩＡ）、（ＶＩＢ）、（ＶＩＣ）および（ＶＩＤ）の混合物と金属Ｍｅの塩とを、強塩基の存在下非プロトン性溶媒中で高温度で反応させる。
【００３４】
特に好ましい非プロトン性溶媒は、Ｎ−メチルピロリドン、Ｎ−メチルアセトアミドおよびホルムアミドである。同様な性質を有する他の非プロトン性溶媒も使用できる。
【００３５】
好適な金属塩は、酢酸塩、硝酸塩および塩化物である。
好適な強塩基は、１，８−ジアザアビシクロ（４．４．０）ウンデセ−７−エン、１，４−ジアザアビシクロ（２．２．２）オクタンおよび同様な塩基性を有する他の化合物である。
【００３６】
この反応に関する好適な条件は、例えば、Ｈｏｕｂｅｎ−Ｗｅｙｌ「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」Ｇｅｏｒｇ Ｔｈｅｉｍｅ編、７１７−８４２ページ、Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ−Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９８）により記述されている。
【００３７】
もしＭｅが水素を表さないならば、一般式（ＩＶＡ）のアミドを、一般式（ＩＩＩ）の対称性フタロシアニン色素の製造のために金属Ｍｅの塩と反応させる。
一般式（ＩＩＩ）の以下の対称性フタロシアニン色素は、特定の例であり、置換基は表１に規定されている。
【００３８】
【化２４】
【００３９】
【化２５】
【００４０】
【化２６】
【００４１】
【化２７】
【００４２】
【化２８】
【００４３】
【化２９】
【００４４】
【化３０】
本発明は、一般式（ＩＩ）および（ＩＩＩ）の純粋なフタロシアニン色素に関するばかりでなく、これらのフタロシアニン色素の混合物に関する。
本発明による一般式（ＩＩ）および（ＩＩＩ）のフタロシアニン色素は、種々の腫瘍の光力学療法並びに微生物およびウイルスの感染の治療のための非常に好適な光増感剤である。それらは、また、光診断剤として非常に適している。
【００４５】
本発明によるフタロシアニン色素は、ガン組織、前ガン性細胞組織、光老化またはそれ以外により損傷されたまたは病理学的細胞、活性化細胞例えば免疫系のリンパ球または他の細胞、並びに炎症細胞を破壊するのに使用されるばかりか、ウイルス、かびまたは細菌感染の疾患、ガンおよび皮膚疾患の治療に使用される。
【００４６】
本発明によるフタロシアニン色素は、約６７０ｎｍより長い波長を有する光によって活性化され、身体組織へ極めて容易に浸透する。
置換基の親水性および／または親水性の担体への吸収は、本発明によるフタロシアニン色素の身体中の劣化を改善できる。この理由のため、本発明によるフタロシアニン色素は、身体から生体内で急速に排除され、そして毒性および皮膚光毒性に関する問題を劇的に低下させる。
【００４７】
本発明による一般式（ＩＩ）および（ＩＩＩ）のフタロシアニン色素は、好ましくは、製薬担体例えばポリエチレングリコール、エタノールおよび水の混合物、ポリエチレングリコールおよび水の混合物、リポソーム、ナノコンテナー、バイオポリマーまたは他の好適な許容できる製薬担体および好適な希釈剤を含む製薬組成物および薬剤で使用される。
【００４８】
本発明による一般式（ＩＩ）および（ＩＩＩ）のフタロシアニン色素を含む製薬組成物および薬剤は、種々の腫瘍の光力学療法並びに微生物およびウイルス感染のための光増感性組成物および製薬生成物として非常に好適である。それらは、また、光診断剤として非常に適している。
【００４９】
本発明による一般式（ＩＩ）および（ＩＩＩ）のフタロシアニン色素を含む製薬組成物および薬剤は、ガン組織、前ガン性細胞組織、光老化およびそれ以外で損傷されたまたは病理学的細胞、活性化細胞例えば免疫系のリンパ球または他の細胞、並びに炎症細胞を破壊するのに使用されるばかりか、ウイルス、かびまたは細菌の感染症、ガンおよび皮膚疾患の治療に使用される。
本発明は、本発明のフタロシアニン色素の範囲を決して制限することなく、以下の実施例により詳細に説明される。
【実施例１】
【００５０】
対称性亜鉛フタロシアニン色素（１００）は、以下の方法により製造された。
６．７ｇ（３０ｍモル）の式（ＶＩＩ）
【００５１】
【化３１】
のアニリン（「Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｒｇａｎｏｍｅｔａｌｌｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」６７９、１１０−１１５ページ（２００３）に記載された方法により製造）を２５ｍＬのピリジンに懸濁した。
５．７ｇ（３０ｍモル）の式（ＶＩＩＩ）
【００５２】
【化３２】
のアシルクロリド（「Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ」１２４、４９２２−４９３２（２００２）に記載された方法により製造）を８ｍＬの酢酸エチルに溶解し、温度が３０℃を越えないやり方で、氷冷しつつ上記の懸濁物へ滴下した。添加完了後、反応混合物を室温で１８時間攪拌した。その後、混合物を４０ｍＬの酢酸エチルにより希釈し、沈殿物を吸引濾過し、１４０ｍＬのメタノール中で再結晶することにより精製した。７．２ｇの式（ＩＸ）
【００５３】
【化３３】
のアミドを、乾燥後得た。
【００５４】
１０ｍＬのホルムアミド中の７．０ｇ（１６ｍモル）の式（ＩＸ）のアミド、０．８８ｇ（４ｍモル）の酢酸亜鉛二水和物および４．０ｇの１，８−ジアザビシクロ（５．４．０）ウンデセ−７−エンを、１１０℃の温度で１８時間攪拌した。その後、濃緑色の溶液を室温に冷却し、３０ｍＬのエタノールにより希釈し、５．０ｇの酢酸カリウムの添加によりカリウム塩として色素を沈殿させ、そして沈殿物を濾去した。４．０ｇのフタロシアニン色素（１００）のカリウム塩がこの方法で得られた。
【００５５】
１，８−ジアザビシクロ（５．４．０）ウンデセ−７−エンの代わりに、他の強有機塩基例えば１，４−ジアザビシクロ（２．２．２）オクタンが使用できる。酢酸カリウムの代わりに、他のアルカリ金属の酢酸塩または塩化物例えば酢酸ナトリウムまたは塩化リチウムが使用できる。この場合、フタロシアニン色素はナトリウムまたはリチウムの塩として得られる。
本発明による対称性フタロシアニン色素（１０１）−（１０６）は、適切な量の適切な原料を使用することにより同様な方法で製造できる。
【実施例２】
【００５６】
対称性亜鉛フタロシアニン色素は、以下の方法で製造された。
７．７ｇ（３０ｍモル）の式（Ｘ）
【００５７】
【化３４】
のアニリン（「Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｒｇａｎｏｍｅｔａｌｌｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」６７９、１１０−１１５ページ（２００３）により記載された方法に従って製造）を３０ｍＬのピリジン中に懸濁した。
【００５８】
５．７ｇ（３０ｍモル）の式（ＶＩＩＩ）のアシルクロリドを、温度が３０℃を越えないやり方で、この懸濁物に氷冷しつつ滴下した。添加完了後、反応混合物を室温で１８時間攪拌した。その後、混合物を２０ｍＬのＮ−メチルピロリドンおよび２０ｍＬの酢酸エチルにより希釈し、濾過しそして濃縮した。粗生成物を５０ｍＬの塩化ナトリウムの飽和溶液中で攪拌することにより精製した。６．７ｇの式（ＸＩ）
【００５９】
【化３５】
のアミドを乾燥後得た。
【００６０】
１０ｍＬのホルムアミド中の３．５ｇ（８ｍモル）の式（Ｘ）のアミドおよび３．９ｇ（８ｍモル）の式（ＸＩ）のアミド、０．８ｇ（４ｍモル）の酢酸亜鉛二水和物および２．４ｇの１，８−ジアザビシクロ（５．４．０）ウンデセ−７−エンを、１１０℃の温度で１８時間攪拌した。その後、濃緑色の溶液を室温に冷却し、３０ｍＬのエタノールにより希釈し、５．０ｇの酢酸カリウムの添加によりカリウム塩として色素を沈殿させ、そして沈殿物を濾去した。３．０ｇのフタロシアニン色素の混合物のカリウムをこの方法で得た。
亜鉛フタロシアニン色素の混合物は、他の色素のほかに、式
【００６１】
【化３６】
の亜鉛フタロシアニン色素、式
【００６２】
【化３７】
の亜鉛フタロシアニン色素、式
【００６３】
【化３８】
の亜鉛フタロシアニン色素、および式
【００６４】
【化３９】
の亜鉛フタロシアニン色素を含み、４つの前記の式中、Ｍｅは亜鉛を表す。
（１．テスト）
１．水溶液中の光吸収
水溶液中の吸収スペクトルは、７．０のｐＨの値で緩衝された水溶液中で、分光計Ｃａｒｙ １００ Ｂｉｏ ＵＶ／ＶＩＳ（Ｖａｒｉａｎ Ｉｎｃ．Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，米国）により厚さ１ｃｍの光学セル中のフタロシアニン色素の２０ｍｇ／Ｌから３０ｍｇ／Ｌの濃度で測定した。
【００６５】
フタロシアニン色素は水溶液中で凝集する。吸収最大は、そのため、形成された凝集物のそれである。
（２．ポリエチレングリコールの水溶液中の光吸収）
吸収スペクトルは、７．０のｐＨの値で、５０重量％のポリエチレングリコール４００を含む緩衝された水溶液中で、分光計Ｃａｒｙ １００ Ｂｉｏ ＵＶ／ＶＩＳにより厚さ１ｃｍの光学セル中のフタロシアニン色素の２０ｍｇ／Ｌから３０ｍｇ／Ｌの濃度で測定した。
【００６６】
フタロシアニン色素は、ポリエチレングリコールの水溶液中でわずかに凝集するに過ぎない。吸収最大は、そのため、モノマーフタロシアニン色素のそれである。この吸収最大は、フタロシアニン色素凝集物のそれよりも長い波長である。
（３．ウシ胎仔血清の存在下の光吸収）
吸収スペクトルは、３００−８００ｎｍで分光計Ｃａｒｙ １００ Ｂｉｏ ＵＶ／ＶＩＳにより測定した。１ｍｇのフタロシアニン色素をポリエチレングリコール４００、エタノールおよび水（３０：２０：５０）の溶液に溶解した。得られた溶液を、１０％の濃度でウシ胎仔血清を含む生理学的塩溶液により１０μｇ／ｍＬの濃度へ希釈した。ウシ胎仔血清を含むこの溶液は、細胞内部の生物学的条件をシミュレートする。
【００６７】
ウシ胎仔血清を含む溶液中で、光力学療法に特に好適なフタロシアニン色素は、フタロシアニン色素のモノマー形の吸収最大における吸収およびその凝集形の吸収最大における吸収の高い比を示す。
（４．光力学活性）
フタロシアニン色素は、「Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ あんｄ Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌｏｇｙ Ｂ；Ｂｉｏｌｏｇｙ」６９、１７９−１９２（２００３）に記載された方法を使用することによりそれらの光力学活性についてテストした。
【００６８】
この方法では、光力学療法に対して非常に抵抗性のあるタイプＨＴ２９の細胞（ヒト腺ガン細胞、ＣＥＲＤＩＣ、Ｓｏｐｈｉａ−Ａｎｔｉｐｏｌｉｓ、フランスから入手）およびタイプＦ９０の細胞を当業者に周知の方法（上記文献のパラグラフ２．２．３参照）により細胞培養培地ＲＰＭＩで光力学療法に関するテストについて調製した。２４時間後、細胞を４時間、１０μｇ／ｍＬ以内の濃度でフタロシアニン色素とともにインキュベートした。その後、細胞を、整調できるレーザーＣＲ５９９（Ｃｏｈｅｒｅｎｔ Ｌａｓｅｒ Ｇｒｏｕｐ、Ｓａｎｔａ Ｃｌａｒａ，米国から入手）を使用して、光ファイバーを通して、２０Ｊ／ｃｍ２の照射エネルギーに曝した。光力学療法のにもかかわらず生存する細胞の数を、ＭＭＴ（［３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド］、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｅ ＧｍｂＨ、Ｂｕｃｈｓ、スイスから入手）比色法により測定した。
【００６９】
照射の量は、ヒトの組織の光力学療法において生体内で通常使用される照射の２００Ｊ／ｃｍ２の量に事実上相当する。
（５．反応性酸素種）
光に曝された間に発生する反応性酸素種の量は、以下の方法で測定された。
【００７０】
フタロシアニン色素を、１０μｇ／ｍＬの濃度でウシ胎仔血清の水溶液（１０％）に溶解した。ルミノール（３−フタールヒドラジド、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｅ ＧｍｂＨ、Ｂｕｃｈｓ，スイスから入手）を、１２．４のｐＨの値で、０．５ｍｇ／Ｌの濃度でホスフェート０．１モル緩衝溶液に溶解した。ルミノールの溶液１ｍＬを、フタロシアニン色素の溶液を含む長さ１ｃｍの正方形の分光蛍光計セル中に注いだ。その後、セルを、３０℃の温度でフタロシアニン色素の吸収最大で１０Ｊ／ｃｍ２の光により照射した。反応性酸素種が発生し、ルミノールを酸化して４８５ｎｍで吸収最大を有する蛍光を発するアミノフタール酸を得た。３９５ｎｍの波長の光によるアミノフタール酸の励起後、この溶液の蛍光スペクトルは、照射の終わり１５分後、蛍光分光計Ｃａｒｙ ＰＣＢ１５０（Ｖａｒｉａｎ Ｉｎｃ．Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，米国から入手）により測定された。発生した反応性酸素種の量は、照射されたテストセルの測定された蛍光およびフタロシアニン色素を含まない照射された比較セルの測定された蛍光の差に比例する。最も反応性のフタロシアニン色素は、最高の値を示す（任意の単位）。
（結果）
異なる金属Ｍｅおよび異なる金属カチオンＭを有する本発明によるフタロシアニン色素の測定された吸収最大は、表１に示される。
【００７１】
【表１】
色素（１０６）の吸収最大は、水およびエタノールの１：１混合物で測定された。
【００７２】
式（Ｉ）のフタロシアニン色素は、Ｆｒｏｎｔｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｃ、Ｌｏｇａｎ、米国から入手できる。
両方の溶液中の表１の吸収最大の比較は、本発明によるフタロシアニン色素（１００）−（１０６）および従来の技術を示す式（Ｉ）のフタロシアニン色素が、水溶液中で凝集物を示しそしてポリエチレングリコールの水溶液中でモノマー形を示すことを明らかに示す。
【００７３】
ともに１０μｇ／ｍＬの濃度における本発明によるフタロシアニン色素（１０１）および従来技術の式（Ｉ）のフタロシアニン色素のウシ胎仔血清の存在下の光吸収の測定の結果を表２に示す。フタロシアニン色素のモノマー形の吸収最大における吸収およびフタロシアニン色素の凝集物形の吸収最大における吸収の比が示される。
【００７４】
【表２】
表２における値の比較は、本発明によるフタロシアニン色素（１０１）が、従来技術の式（Ｉ）のフタロシアニン色素に比較して、フタロシアニン色素のモノマー形の吸収最大における吸収およびフタロシアニン色素の凝集物形の吸収最大における吸収のより好適な比を光力学療法について有することを明らかに示す。
【００７５】
本発明によるモノマー形フタロシアニン色素（１０１）および従来技術の式（Ｉ）のフタロシアニン色素の吸収最大における照射後の光力学活性の測定の結果は、ともに１０μｇ／ｍＬの濃度で、表３にリストされる。
【００７６】
【表３】
表３の結果は、両方の細胞系について、従来技術の式（Ｉ）のフタロシアニン色素が使用される場合に比べて、本発明によるフタロシアニン色素（１０１）が使用される場合には、かなり少ない細胞が生存することを示している。本発明による亜鉛フタロシアニン色素（１０１）は、それゆえ、従来技術の式（Ｉ）のフタロシアニン色素に比べて、かなり高い光力学活性を有する。
【００７７】
本発明による亜鉛フタロシアニン色素（１０１）および従来技術の式（Ｉ）のフタロシアニン色素の形成された反応性酸素種の量の測定結果は、表４にリストされる。
【００７８】
【表４】
表４の結果は、本発明によるフタロシアニン色素（１０１）が、照射がフタロシアニン色素（１０１）の凝集物形の吸収最大で行われる場合でも、従来技術の式（Ｉ）のフタロシアニン色素に比べて、かなり多い反応性酸素種を発生することを明らかに示す。
【図面の簡単な説明】
【００７９】
【図１】水溶液（６４０ｎｍでの吸収最大）中およびポリエチレングリコールの水溶液（６７７ｎｍでの吸収最大）中の本発明によるフタロシアニン色素（１０１）の正常化された吸収スペクトルを示す。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規な置換した水溶性のフタロシアニン色素、それらの塩、それらの製造方法、並びに光力学療法およびウイルス、かびまたは微生物により誘導される感染症、ガンおよび皮膚疾患の治療のための薬剤および製薬組成物におけるそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
光力学療法は、感光性物質すなわち光増感剤および組織に含まれる酸素と組み合わせて光による腫瘍および他の組織の変性を治療する方法である。これらの光増感剤またはその代謝前駆物質の１つは、患者に投与される。この光増感剤または代謝前駆物質は、選択的に腫瘍に蓄積される。いくらかの待ち時間後、腫瘍およびそれを囲む健康な組織は、適切な波長の光により照射される。光物理プロセスは、組織中に含まれる酸素から毒性の物質、いわゆる反応性酸素種を発生する。これらの反応性酸素種は、光増感剤が腫瘍組織中に蓄積されるために、選択的に腫瘍を傷つける。
【０００３】
外科的治療に比べて、光力学療法は、非侵襲性またはわずかに侵襲性の治療の利点を有する。特に、安全性の理由から、腫瘍に近い健康な組織を多量に除く必要がない。光による照射は、１００ｍＷ／ｃｍ２から１０００ｍＷ／ｃｍ２の典型的な光強度で１０分から１００分である。組織は、それゆえ、わずかに加熱されるに過ぎない。腫瘍の光力学療法は、通常、唯１つの治療を要するに過ぎないが、治療を反復することも可能である。通常の波長の光が使用されるので、患者に対する影響は、「伝統的な」治療に比べて比較的小さい。光力学療法の不利は、わずか数ｍｍに過ぎない比較的浅い光の浸透深さである。そのため、ほとんどの場合に、初期の段階の腫瘍または平らな形状の腫瘍のみが、有効に治療できる。光力学療法に好適な腫瘍は、例えば、例えば紫外線角皮症または基底細胞ガンのような皮膚腫瘍ばかりでなく、いぼである。レーザーおよび光ファイバーの光のガイドは、また、もしそれらの表面に内視鏡を近づけることができるならば、身体内の腫瘍の治療を可能にする。
【０００４】
現在、身体内の腫瘍の光力学療法は、非常に稀に使用され、ほとんどの場合、食道、胆管または胆嚢のガン、または脳腫瘍における緩和の目的でのみ使用される。
光力学療法は、２０世紀の初頭においてミュンヘンで既に検討されていた。それは、光増感剤の改良およびレーザーの使用後、８０年代において初めて広く使用されるようになった。典型的な適用範囲は、膀胱、頭部の表面、口腔、喉頭、肺、胆管および生殖器における腫瘍の治療である。
【０００５】
光力学療法の基礎的な物理的プロセスは、いくつかの段階を含み、そしてほとんどの細胞に十分な量で存在する酸素の存在を必要とする。光増感剤の分子は、光フォトンを吸収し、そしてその最初の励起された一重項状態に励起される。もしこの一重項の状態の寿命が十分に長いものであるならば、相互結合による励起された三重項の状態への遷移の可能性は、増大する。この励起された三重項の状態から基底状態への光学的遷移は、非常に起こりそうではないので、その寿命は非常に長い。これは、周囲の多くの分子との接触を可能にする。それが三重項基底状態の分子と接触する場合、エネルギーの交換は可能であり、両者の分子は一重項の状態へ変化する。三重項基底状態の稀な分子の１つは、分子状酸素である。励起された光増感剤分子のエネルギーは、励起された一重項状態への酸素の遷移に必要なエネルギーよりも高いので、このような遷移は可能である。励起された一重項酸素は、その基底状態への光学的遷移に関して非常に長い寿命を有する。励起された一重項酸素は非常に反応性であるので、それは、酸素によって付近の細胞構成成分を損傷できる。壊死が誘導されるか、またはミトコンドリア膜への影響によりアポトースが誘導される。
【０００６】
ほとんどの場合、ポルフィリンが光増感剤として使用される。それらは、６３０ｎｍから６３５ｎｍの波長の赤色光への暴露により活性化される。プロトポルフィリンの代謝前駆物質である５−アミノレビュリン酸またはそのメチルエステルも、ときには使用される。プロトポルフィリンは、腫瘍細胞中でポルフィリンの合成を選択的に開始する。最近の光増感剤は、より高い波長で活性化が可能であり、組織中への光のより大きな浸透深さを得る利点がある。光増感剤は、通常、蛍光を示し、そのため、腫瘍の蛍光診断に使用される。
【０００７】
光力学療法に用いられる最適な波長は、６００ｎｍから１５００ｎｍに存在する。より短い波長では、組織は、照射にとり十分に透明ではなく、一方より長い波長では、照射のエネルギーは余りにも低い。組織における浸透深さは、６３０ｎｍの波長で４ｍｍであり、そして７００ｎｍの波長で８ｍｍである。
【０００８】
光力学療法において光増感剤としてフタロシアニン色素を使用することは、先ず非特許文献１に明らかにされ、次に非特許文献２−３に記述されている。膜に対するスルホン化フタロシアニンの光力学活性および吸着は、非特許文献４に記載されている。
式（Ｉ）
【０００９】
【化１２】
のしばしば使用される亜鉛フタロシアニン色素の合成および光増感剤としてのその光力学活性は、非特許文献６に記載されている。
【００１０】
光力学療法のための光増感剤としての未置換フタロシアニン色素は、特許文献１に記載されている。フタロシアニン色素の中心原子は、シリシウムまたはアルミニウムである。
【００１１】
光力学療法のための光増感剤としての未置換フタロシアニン色素は、また特許文献２に記載されている。フタロシアニン色素の中心原子は、シリシウムまたはアルミニウムである。
【００１２】
光力学療法のための光増感剤としての未置換フタロシアニン色素は、また特許文献３に記載されている。フタロシアニン色素の中心原子は、シリシウムである。
光力学療法のための光増感剤としての未置換フタロシアニン色素は、また特許文献４に記載されている。フタロシアニン色素の中心原子は、反磁性金属原子またはシリシウムである。
【００１３】
光力学療法のための光増感剤としての未置換フタロシアニン色素は、また特許文献２に記載されている。フタロシアニン色素の中心原子は、シリシウム、亜鉛またはアルミニウムである。
【００１４】
【特許文献１】ＷＯ ９２／０１７５３
【特許文献２】ＷＯ ９５／０６６８８
【特許文献３】米国特許５４８４７７８
【特許文献４】ＷＯ ９５／０５８１８
【特許文献５】ＷＯ ０２／０９０３６１
【非特許文献１】Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｒａｄｉａｔｉｏｎ Ｂｉｏｌｏｇｙ、４７、１４５−１４７（１９８５）
【非特許文献２】Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｏｒｐｈｙｒｉｎｓ ａｎｄ Ｐｈｔｈａｌｏｃｙａｎｉｎｅｓ，５，１６１−１６９（２００２）
【非特許文献３】Ｋ．Ｍ．Ｋａｄｉｓｈら、「Ｔｈｅ Ｐｏｒｐｈｙｒｉｎ Ｈａｎｄｂｏｏｋ」、１９巻、１−３５ページ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ（２００３）
【非特許文献４】Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ、１７６８、２４５９−２４６５（２００７）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
光力学療法用の理想的な光増感剤は、細胞媒体中に極めて可溶であり、無毒で非常に有効でなければならない。それは、それが有毒である場合腫瘍にのみ非常に選択的に蓄積し、身体から容易に排除できる害のない無毒の化合物に急速に代謝されねばならない。
【００１６】
そのため、これらの性質を有する光力学療法用の改善された光増感剤が求められている。特に、化合物の吸収最大は、６３０ｎｍより高く、好ましくは６５０ｎｍより高くなければならない。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
本発明者は、新規な置換フタロシアニン色素がこれらの性質を有し、それゆえ光力学療法用の理想的な光増感剤であることを驚くべきことに見いだした。
本発明のさらなる目的は、本発明によるフタロシアニン色素を含む光力学療法用の製薬組成物および薬剤を提供することである。
本発明は、一般式（ＩＩ）
【００１８】
【化１３】
（式中、Ｒ１−Ｒ８は、独立して直鎖または分枝鎖の８つ以内の炭素原子を有するアルキル基を表し、Ｒ９−Ｒ１２は、独立して水素、直鎖または分枝鎖の８つ以内の炭素原子を有するアルキル基またはハロゲンを表し、Ｍｅは亜鉛、アルミニウム、マグネシウム、水素、ガリウム、ゲルマニウムまたは錫を表し、Ｍは水素、金属カチオンまたはアンモニウムカチオンを表して、所望によりそれぞれ１−１２の炭素原子を有する１つ以上の未置換または置換されたアルキル基またはヒドロキシアルコキシアルキル基により置換されてもよく、ｍ、ｎ、ｏ、ｐは独立して１または２である）
の新規なフタロシアニン色素に関する。
【００１９】
ｍ、ｎ、ｏおよびｐが１に等しいフタロシアニン色素が好ましい。
Ｍｅが亜鉛、アルミニウム、マグネシウムまたは水素を表すフタロシアニン色素も好ましい。
【００２０】
また好ましいのは、Ｍが金属ナトリウム、カリウムまたはリチウムのカチオンまたはアンモニウムカチオンであって、それぞれ１−６の炭素原子を有する１つ以上の未置換または置換されたアルキル基またはヒドロキシアルコキシアルキル基により置換されているフタロシアニン色素である。
特に好ましいのは、一般式（ＩＩＩ）
【００２１】
【化１４】
（式中、４つの同じ置換基は中心のＭｅ原子のまわりに配置されている）
の対称性フタロシアニン色素である。これらの色素では、ｍ、ｎ、ｏおよびｐは同じ値を有する。置換基Ｒ１、Ｒ３、Ｒ５およびＲ７は同じであり、置換基Ｒ２、Ｒ４、Ｒ６およびＲ８は同じであり、同様にＲ９、Ｒ１０、Ｒ１１およびＲ１２は同じである。Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１０、Ｍｅ
およびｍは前記で規定された通りである。
ｍが１に等しい対称性フタロシアニン色素が好ましい。
【００２２】
Ｍｅが亜鉛、アルミニウム、マグネシウムまたは水素を表す対称性フタロシアニン色素が好ましい。
また好ましいのは、Ｍが金属ナトリウム、カリウムまたはリチウムのカチオンまたはアンモニウムカチオンであって、それぞれ１−６炭素原子を有する１つ以上の未置換または置換されたアルキル基またはヒドロキシアルコキシアルキル基により置換されている。
【００２３】
本発明は、また、本発明による一般式（ＩＩ）のフタロシアニン色素の製造方法に関しており、その方法は、一般式（ＩＶＡ）
【００２４】
【化１５】
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１０およびｍは前記同様である）の芳香族アミン、一般式（ＩＶＢ）
【００２５】
【化１６】
（式中、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１１およびｎは前記同様である）の芳香族アミン、一般式（ＩＶＣ）
【００２６】
【化１７】
（式中、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ１２およびｏは前記同様である）の芳香族アミンおよび一般式（ＩＶＤ）
【００２７】
【化１８】
（式中、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびｐは請求項１において規定した通りである）の芳香族アミンと式（Ｖ）
【００２８】
【化１９】
のアシルクロリドとを、一般式（ＶＩＡ）
【００２９】
【化２０】
のアミド、一般式（ＶＩＢ）
【００３０】
【化２１】
のアミド、一般式（ＶＩＣ）
【００３１】
【化２２】
のアミドおよび一般式（ＶＩＤ）
【００３２】
【化２３】
のアミドが形成される条件下で反応させる。
【００３３】
一般式（ＩＩ）の対称性フタロシアニン色素の製造では、もしＭｅが水素を表すものでないならば、アミド（ＶＩＡ）、（ＶＩＢ）、（ＶＩＣ）および（ＶＩＤ）の混合物と金属Ｍｅの塩とを、強塩基の存在下非プロトン性溶媒中で高温度で反応させる。
【００３４】
特に好ましい非プロトン性溶媒は、Ｎ−メチルピロリドン、Ｎ−メチルアセトアミドおよびホルムアミドである。同様な性質を有する他の非プロトン性溶媒も使用できる。
【００３５】
好適な金属塩は、酢酸塩、硝酸塩および塩化物である。
好適な強塩基は、１，８−ジアザアビシクロ（４．４．０）ウンデセ−７−エン、１，４−ジアザアビシクロ（２．２．２）オクタンおよび同様な塩基性を有する他の化合物である。
【００３６】
この反応に関する好適な条件は、例えば、Ｈｏｕｂｅｎ−Ｗｅｙｌ「Ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」Ｇｅｏｒｇ Ｔｈｅｉｍｅ編、７１７−８４２ページ、Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ−Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９８）により記述されている。
【００３７】
もしＭｅが水素を表さないならば、一般式（ＩＶＡ）のアミドを、一般式（ＩＩＩ）の対称性フタロシアニン色素の製造のために金属Ｍｅの塩と反応させる。
一般式（ＩＩＩ）の以下の対称性フタロシアニン色素は、特定の例であり、置換基は表１に規定されている。
【００３８】
【化２４】
【００３９】
【化２５】
【００４０】
【化２６】
【００４１】
【化２７】
【００４２】
【化２８】
【００４３】
【化２９】
【００４４】
【化３０】
本発明は、一般式（ＩＩ）および（ＩＩＩ）の純粋なフタロシアニン色素に関するばかりでなく、これらのフタロシアニン色素の混合物に関する。
本発明による一般式（ＩＩ）および（ＩＩＩ）のフタロシアニン色素は、種々の腫瘍の光力学療法並びに微生物およびウイルスの感染の治療のための非常に好適な光増感剤である。それらは、また、光診断剤として非常に適している。
【００４５】
本発明によるフタロシアニン色素は、ガン組織、前ガン性細胞組織、光老化またはそれ以外により損傷されたまたは病理学的細胞、活性化細胞例えば免疫系のリンパ球または他の細胞、並びに炎症細胞を破壊するのに使用されるばかりか、ウイルス、かびまたは細菌感染の疾患、ガンおよび皮膚疾患の治療に使用される。
【００４６】
本発明によるフタロシアニン色素は、約６７０ｎｍより長い波長を有する光によって活性化され、身体組織へ極めて容易に浸透する。
置換基の親水性および／または親水性の担体への吸収は、本発明によるフタロシアニン色素の身体中の劣化を改善できる。この理由のため、本発明によるフタロシアニン色素は、身体から生体内で急速に排除され、そして毒性および皮膚光毒性に関する問題を劇的に低下させる。
【００４７】
本発明による一般式（ＩＩ）および（ＩＩＩ）のフタロシアニン色素は、好ましくは、製薬担体例えばポリエチレングリコール、エタノールおよび水の混合物、ポリエチレングリコールおよび水の混合物、リポソーム、ナノコンテナー、バイオポリマーまたは他の好適な許容できる製薬担体および好適な希釈剤を含む製薬組成物および薬剤で使用される。
【００４８】
本発明による一般式（ＩＩ）および（ＩＩＩ）のフタロシアニン色素を含む製薬組成物および薬剤は、種々の腫瘍の光力学療法並びに微生物およびウイルス感染のための光増感性組成物および製薬生成物として非常に好適である。それらは、また、光診断剤として非常に適している。
【００４９】
本発明による一般式（ＩＩ）および（ＩＩＩ）のフタロシアニン色素を含む製薬組成物および薬剤は、ガン組織、前ガン性細胞組織、光老化およびそれ以外で損傷されたまたは病理学的細胞、活性化細胞例えば免疫系のリンパ球または他の細胞、並びに炎症細胞を破壊するのに使用されるばかりか、ウイルス、かびまたは細菌の感染症、ガンおよび皮膚疾患の治療に使用される。
本発明は、本発明のフタロシアニン色素の範囲を決して制限することなく、以下の実施例により詳細に説明される。
【実施例１】
【００５０】
対称性亜鉛フタロシアニン色素（１００）は、以下の方法により製造された。
６．７ｇ（３０ｍモル）の式（ＶＩＩ）
【００５１】
【化３１】
のアニリン（「Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｒｇａｎｏｍｅｔａｌｌｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」６７９、１１０−１１５ページ（２００３）に記載された方法により製造）を２５ｍＬのピリジンに懸濁した。
５．７ｇ（３０ｍモル）の式（ＶＩＩＩ）
【００５２】
【化３２】
のアシルクロリド（「Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ」１２４、４９２２−４９３２（２００２）に記載された方法により製造）を８ｍＬの酢酸エチルに溶解し、温度が３０℃を越えないやり方で、氷冷しつつ上記の懸濁物へ滴下した。添加完了後、反応混合物を室温で１８時間攪拌した。その後、混合物を４０ｍＬの酢酸エチルにより希釈し、沈殿物を吸引濾過し、１４０ｍＬのメタノール中で再結晶することにより精製した。７．２ｇの式（ＩＸ）
【００５３】
【化３３】
のアミドを、乾燥後得た。
【００５４】
１０ｍＬのホルムアミド中の７．０ｇ（１６ｍモル）の式（ＩＸ）のアミド、０．８８ｇ（４ｍモル）の酢酸亜鉛二水和物および４．０ｇの１，８−ジアザビシクロ（５．４．０）ウンデセ−７−エンを、１１０℃の温度で１８時間攪拌した。その後、濃緑色の溶液を室温に冷却し、３０ｍＬのエタノールにより希釈し、５．０ｇの酢酸カリウムの添加によりカリウム塩として色素を沈殿させ、そして沈殿物を濾去した。４．０ｇのフタロシアニン色素（１００）のカリウム塩がこの方法で得られた。
【００５５】
１，８−ジアザビシクロ（５．４．０）ウンデセ−７−エンの代わりに、他の強有機塩基例えば１，４−ジアザビシクロ（２．２．２）オクタンが使用できる。酢酸カリウムの代わりに、他のアルカリ金属の酢酸塩または塩化物例えば酢酸ナトリウムまたは塩化リチウムが使用できる。この場合、フタロシアニン色素はナトリウムまたはリチウムの塩として得られる。
本発明による対称性フタロシアニン色素（１０１）−（１０６）は、適切な量の適切な原料を使用することにより同様な方法で製造できる。
【実施例２】
【００５６】
対称性亜鉛フタロシアニン色素は、以下の方法で製造された。
７．７ｇ（３０ｍモル）の式（Ｘ）
【００５７】
【化３４】
のアニリン（「Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｏｒｇａｎｏｍｅｔａｌｌｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」６７９、１１０−１１５ページ（２００３）により記載された方法に従って製造）を３０ｍＬのピリジン中に懸濁した。
【００５８】
５．７ｇ（３０ｍモル）の式（ＶＩＩＩ）のアシルクロリドを、温度が３０℃を越えないやり方で、この懸濁物に氷冷しつつ滴下した。添加完了後、反応混合物を室温で１８時間攪拌した。その後、混合物を２０ｍＬのＮ−メチルピロリドンおよび２０ｍＬの酢酸エチルにより希釈し、濾過しそして濃縮した。粗生成物を５０ｍＬの塩化ナトリウムの飽和溶液中で攪拌することにより精製した。６．７ｇの式（ＸＩ）
【００５９】
【化３５】
のアミドを乾燥後得た。
【００６０】
１０ｍＬのホルムアミド中の３．５ｇ（８ｍモル）の式（Ｘ）のアミドおよび３．９ｇ（８ｍモル）の式（ＸＩ）のアミド、０．８ｇ（４ｍモル）の酢酸亜鉛二水和物および２．４ｇの１，８−ジアザビシクロ（５．４．０）ウンデセ−７−エンを、１１０℃の温度で１８時間攪拌した。その後、濃緑色の溶液を室温に冷却し、３０ｍＬのエタノールにより希釈し、５．０ｇの酢酸カリウムの添加によりカリウム塩として色素を沈殿させ、そして沈殿物を濾去した。３．０ｇのフタロシアニン色素の混合物のカリウムをこの方法で得た。
亜鉛フタロシアニン色素の混合物は、他の色素のほかに、式
【００６１】
【化３６】
の亜鉛フタロシアニン色素、式
【００６２】
【化３７】
の亜鉛フタロシアニン色素、式
【００６３】
【化３８】
の亜鉛フタロシアニン色素、および式
【００６４】
【化３９】
の亜鉛フタロシアニン色素を含み、４つの前記の式中、Ｍｅは亜鉛を表す。
（１．テスト）
１．水溶液中の光吸収
水溶液中の吸収スペクトルは、７．０のｐＨの値で緩衝された水溶液中で、分光計Ｃａｒｙ １００ Ｂｉｏ ＵＶ／ＶＩＳ（Ｖａｒｉａｎ Ｉｎｃ．Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，米国）により厚さ１ｃｍの光学セル中のフタロシアニン色素の２０ｍｇ／Ｌから３０ｍｇ／Ｌの濃度で測定した。
【００６５】
フタロシアニン色素は水溶液中で凝集する。吸収最大は、そのため、形成された凝集物のそれである。
（２．ポリエチレングリコールの水溶液中の光吸収）
吸収スペクトルは、７．０のｐＨの値で、５０重量％のポリエチレングリコール４００を含む緩衝された水溶液中で、分光計Ｃａｒｙ １００ Ｂｉｏ ＵＶ／ＶＩＳにより厚さ１ｃｍの光学セル中のフタロシアニン色素の２０ｍｇ／Ｌから３０ｍｇ／Ｌの濃度で測定した。
【００６６】
フタロシアニン色素は、ポリエチレングリコールの水溶液中でわずかに凝集するに過ぎない。吸収最大は、そのため、モノマーフタロシアニン色素のそれである。この吸収最大は、フタロシアニン色素凝集物のそれよりも長い波長である。
（３．ウシ胎仔血清の存在下の光吸収）
吸収スペクトルは、３００−８００ｎｍで分光計Ｃａｒｙ １００ Ｂｉｏ ＵＶ／ＶＩＳにより測定した。１ｍｇのフタロシアニン色素をポリエチレングリコール４００、エタノールおよび水（３０：２０：５０）の溶液に溶解した。得られた溶液を、１０％の濃度でウシ胎仔血清を含む生理学的塩溶液により１０μｇ／ｍＬの濃度へ希釈した。ウシ胎仔血清を含むこの溶液は、細胞内部の生物学的条件をシミュレートする。
【００６７】
ウシ胎仔血清を含む溶液中で、光力学療法に特に好適なフタロシアニン色素は、フタロシアニン色素のモノマー形の吸収最大における吸収およびその凝集形の吸収最大における吸収の高い比を示す。
（４．光力学活性）
フタロシアニン色素は、「Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ あんｄ Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌｏｇｙ Ｂ；Ｂｉｏｌｏｇｙ」６９、１７９−１９２（２００３）に記載された方法を使用することによりそれらの光力学活性についてテストした。
【００６８】
この方法では、光力学療法に対して非常に抵抗性のあるタイプＨＴ２９の細胞（ヒト腺ガン細胞、ＣＥＲＤＩＣ、Ｓｏｐｈｉａ−Ａｎｔｉｐｏｌｉｓ、フランスから入手）およびタイプＦ９０の細胞を当業者に周知の方法（上記文献のパラグラフ２．２．３参照）により細胞培養培地ＲＰＭＩで光力学療法に関するテストについて調製した。２４時間後、細胞を４時間、１０μｇ／ｍＬ以内の濃度でフタロシアニン色素とともにインキュベートした。その後、細胞を、整調できるレーザーＣＲ５９９（Ｃｏｈｅｒｅｎｔ Ｌａｓｅｒ Ｇｒｏｕｐ、Ｓａｎｔａ Ｃｌａｒａ，米国から入手）を使用して、光ファイバーを通して、２０Ｊ／ｃｍ２の照射エネルギーに曝した。光力学療法のにもかかわらず生存する細胞の数を、ＭＭＴ（［３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド］、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｅ ＧｍｂＨ、Ｂｕｃｈｓ、スイスから入手）比色法により測定した。
【００６９】
照射の量は、ヒトの組織の光力学療法において生体内で通常使用される照射の２００Ｊ／ｃｍ２の量に事実上相当する。
（５．反応性酸素種）
光に曝された間に発生する反応性酸素種の量は、以下の方法で測定された。
【００７０】
フタロシアニン色素を、１０μｇ／ｍＬの濃度でウシ胎仔血清の水溶液（１０％）に溶解した。ルミノール（３−フタールヒドラジド、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ Ｃｈｅｍｉｅ ＧｍｂＨ、Ｂｕｃｈｓ，スイスから入手）を、１２．４のｐＨの値で、０．５ｍｇ／Ｌの濃度でホスフェート０．１モル緩衝溶液に溶解した。ルミノールの溶液１ｍＬを、フタロシアニン色素の溶液を含む長さ１ｃｍの正方形の分光蛍光計セル中に注いだ。その後、セルを、３０℃の温度でフタロシアニン色素の吸収最大で１０Ｊ／ｃｍ２の光により照射した。反応性酸素種が発生し、ルミノールを酸化して４８５ｎｍで吸収最大を有する蛍光を発するアミノフタール酸を得た。３９５ｎｍの波長の光によるアミノフタール酸の励起後、この溶液の蛍光スペクトルは、照射の終わり１５分後、蛍光分光計Ｃａｒｙ ＰＣＢ１５０（Ｖａｒｉａｎ Ｉｎｃ．Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，米国から入手）により測定された。発生した反応性酸素種の量は、照射されたテストセルの測定された蛍光およびフタロシアニン色素を含まない照射された比較セルの測定された蛍光の差に比例する。最も反応性のフタロシアニン色素は、最高の値を示す（任意の単位）。
（結果）
異なる金属Ｍｅおよび異なる金属カチオンＭを有する本発明によるフタロシアニン色素の測定された吸収最大は、表１に示される。
【００７１】
【表１】
色素（１０６）の吸収最大は、水およびエタノールの１：１混合物で測定された。
【００７２】
式（Ｉ）のフタロシアニン色素は、Ｆｒｏｎｔｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｃ、Ｌｏｇａｎ、米国から入手できる。
両方の溶液中の表１の吸収最大の比較は、本発明によるフタロシアニン色素（１００）−（１０６）および従来の技術を示す式（Ｉ）のフタロシアニン色素が、水溶液中で凝集物を示しそしてポリエチレングリコールの水溶液中でモノマー形を示すことを明らかに示す。
【００７３】
ともに１０μｇ／ｍＬの濃度における本発明によるフタロシアニン色素（１０１）および従来技術の式（Ｉ）のフタロシアニン色素のウシ胎仔血清の存在下の光吸収の測定の結果を表２に示す。フタロシアニン色素のモノマー形の吸収最大における吸収およびフタロシアニン色素の凝集物形の吸収最大における吸収の比が示される。
【００７４】
【表２】
表２における値の比較は、本発明によるフタロシアニン色素（１０１）が、従来技術の式（Ｉ）のフタロシアニン色素に比較して、フタロシアニン色素のモノマー形の吸収最大における吸収およびフタロシアニン色素の凝集物形の吸収最大における吸収のより好適な比を光力学療法について有することを明らかに示す。
【００７５】
本発明によるモノマー形フタロシアニン色素（１０１）および従来技術の式（Ｉ）のフタロシアニン色素の吸収最大における照射後の光力学活性の測定の結果は、ともに１０μｇ／ｍＬの濃度で、表３にリストされる。
【００７６】
【表３】
表３の結果は、両方の細胞系について、従来技術の式（Ｉ）のフタロシアニン色素が使用される場合に比べて、本発明によるフタロシアニン色素（１０１）が使用される場合には、かなり少ない細胞が生存することを示している。本発明による亜鉛フタロシアニン色素（１０１）は、それゆえ、従来技術の式（Ｉ）のフタロシアニン色素に比べて、かなり高い光力学活性を有する。
【００７７】
本発明による亜鉛フタロシアニン色素（１０１）および従来技術の式（Ｉ）のフタロシアニン色素の形成された反応性酸素種の量の測定結果は、表４にリストされる。
【００７８】
【表４】
表４の結果は、本発明によるフタロシアニン色素（１０１）が、照射がフタロシアニン色素（１０１）の凝集物形の吸収最大で行われる場合でも、従来技術の式（Ｉ）のフタロシアニン色素に比べて、かなり多い反応性酸素種を発生することを明らかに示す。
【図面の簡単な説明】
【００７９】
【図１】水溶液（６４０ｎｍでの吸収最大）中およびポリエチレングリコールの水溶液（６７７ｎｍでの吸収最大）中の本発明によるフタロシアニン色素（１０１）の正常化された吸収スペクトルを示す。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（ＩＩ）
【化１】
（式中、Ｒ１−Ｒ８は、独立して直鎖または分枝鎖の８つ以内の炭素原子を有するアルキル基を表し、Ｒ９−Ｒ１２は、独立して水素、直鎖または分枝鎖の８つ以内の炭素原子を有するアルキル基またはハロゲンを表し、Ｍｅは亜鉛、アルミニウム、マグネシウム、水素、ガリウム、ゲルマニウムまたは錫を表し、Ｍは水素、金属カチオンまたはアンモニウムカチオンを表して、所望によりそれぞれ１−１２の炭素原子を有する１つ以上の未置換または置換されたアルキル基またはヒドロキシアルコキシアルキル基により置換されてもよく、ｍ、ｎ、ｏ、ｐは独立して１または２である）
を有することを特徴とするフタロシアニン色素。
【請求項２】
Ｒ１−Ｒ８、Ｒ９−Ｒ１２、ＭｅおよびＭが請求項１において規定した通りであり、ｍ、ｎ、ｏ、ｐが１に等しい請求項１のフタロシアニン色素。
【請求項３】
一般式（ＩＩＩ）
【化２】
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１０、Ｍｅ、Ｍおよびｍは請求項１において規定した通りである）
を有する請求項１のフタロシアニン色素。
【請求項４】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１０、ＭｅおよびＭが請求項１において規定した通りであり、ｍが１に等しい請求項３のフタロシアニン色素。
【請求項５】
一般式（ＩＶＡ）
【化３】
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１０およびｍは請求項１において規定した通りである）の芳香族アミン、一般式（ＩＶＢ）
【化４】
（式中、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１１およびｎは請求項１において規定した通りである）の芳香族アミン、一般式（ＩＶＣ）
【化５】
（式中、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ１２およびｏは請求項１において規定した通りである）の芳香族アミンおよび一般式（ＩＶＤ）
【化６】
（式中、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびｐは請求項１において規定した通りである）の芳香族アミンと式（Ｖ）
【化７】
のアシルクロリドとを反応させて、一般式（ＶＩＡ）
【化８】
のアミド、一般式（ＶＩＢ）
【化９】
のアミド、一般式（ＶＩＣ）
【化１０】
のアミドおよび一般式（ＶＩＤ）
【化１１】
のアミドを形成し、そしてもしＭｅが水素でないならば、一般式（ＶＩＡ）、（ＶＩＢ）、（ＶＩＣ）および（ＶＩＤ）のアミドの混合物を金属Ｍｅの塩と反応させる工程をもつことを特徴とする請求項１のフタロシアニン色素の製造方法。
【請求項６】
製薬担体および請求項１−４の何れか１つの項の１つ以上のフタロシアニン色素を含むことを特徴とする製薬組成物。
【請求項７】
製薬担体が、ポリエチレングリコール、エタノールおよび水の混合物であるか、またはリポソーム、ナノコンテナー、バイオポリマーまたはこれらの混合物からなるか、またはこれらを含む請求項６の製薬組成物。
【請求項８】
光力学治療用の医薬としてまたは光診断剤としての請求項６または７の製薬組成物の使用。
【請求項９】
ウイルス、かびまたはウイルス感染の疾患、ガンまたは皮膚疾患の治療用の医薬としての請求項６または７の製薬組成物の使用。
【請求項１０】
光力学療法用、光診断剤用またはウイルス、かびまたはウイルス感染の疾患、ガンまたは皮膚疾患の治療用の請求項１−４の何れか１つの項のフタロシアニン色素の使用。
【請求項１】
一般式（ＩＩ）
【化１】
（式中、Ｒ１−Ｒ８は、独立して直鎖または分枝鎖の８つ以内の炭素原子を有するアルキル基を表し、Ｒ９−Ｒ１２は、独立して水素、直鎖または分枝鎖の８つ以内の炭素原子を有するアルキル基またはハロゲンを表し、Ｍｅは亜鉛、アルミニウム、マグネシウム、水素、ガリウム、ゲルマニウムまたは錫を表し、Ｍは水素、金属カチオンまたはアンモニウムカチオンを表して、所望によりそれぞれ１−１２の炭素原子を有する１つ以上の未置換または置換されたアルキル基またはヒドロキシアルコキシアルキル基により置換されてもよく、ｍ、ｎ、ｏ、ｐは独立して１または２である）
を有することを特徴とするフタロシアニン色素。
【請求項２】
Ｒ１−Ｒ８、Ｒ９−Ｒ１２、ＭｅおよびＭが請求項１において規定した通りであり、ｍ、ｎ、ｏ、ｐが１に等しい請求項１のフタロシアニン色素。
【請求項３】
一般式（ＩＩＩ）
【化２】
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１０、Ｍｅ、Ｍおよびｍは請求項１において規定した通りである）
を有する請求項１のフタロシアニン色素。
【請求項４】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１０、ＭｅおよびＭが請求項１において規定した通りであり、ｍが１に等しい請求項３のフタロシアニン色素。
【請求項５】
一般式（ＩＶＡ）
【化３】
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１０およびｍは請求項１において規定した通りである）の芳香族アミン、一般式（ＩＶＢ）
【化４】
（式中、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ１１およびｎは請求項１において規定した通りである）の芳香族アミン、一般式（ＩＶＣ）
【化５】
（式中、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ１２およびｏは請求項１において規定した通りである）の芳香族アミンおよび一般式（ＩＶＤ）
【化６】
（式中、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９およびｐは請求項１において規定した通りである）の芳香族アミンと式（Ｖ）
【化７】
のアシルクロリドとを反応させて、一般式（ＶＩＡ）
【化８】
のアミド、一般式（ＶＩＢ）
【化９】
のアミド、一般式（ＶＩＣ）
【化１０】
のアミドおよび一般式（ＶＩＤ）
【化１１】
のアミドを形成し、そしてもしＭｅが水素でないならば、一般式（ＶＩＡ）、（ＶＩＢ）、（ＶＩＣ）および（ＶＩＤ）のアミドの混合物を金属Ｍｅの塩と反応させる工程をもつことを特徴とする請求項１のフタロシアニン色素の製造方法。
【請求項６】
製薬担体および請求項１−４の何れか１つの項の１つ以上のフタロシアニン色素を含むことを特徴とする製薬組成物。
【請求項７】
製薬担体が、ポリエチレングリコール、エタノールおよび水の混合物であるか、またはリポソーム、ナノコンテナー、バイオポリマーまたはこれらの混合物からなるか、またはこれらを含む請求項６の製薬組成物。
【請求項８】
光力学治療用の医薬としてまたは光診断剤としての請求項６または７の製薬組成物の使用。
【請求項９】
ウイルス、かびまたはウイルス感染の疾患、ガンまたは皮膚疾患の治療用の医薬としての請求項６または７の製薬組成物の使用。
【請求項１０】
光力学療法用、光診断剤用またはウイルス、かびまたはウイルス感染の疾患、ガンまたは皮膚疾患の治療用の請求項１−４の何れか１つの項のフタロシアニン色素の使用。
【図１】
【公開番号】特開２００９−１４３９０９（Ｐ２００９−１４３９０９Ａ）
【公開日】平成２１年７月２日（２００９．７．２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−３１３８７１（Ｐ２００８−３１３８７１）
【出願日】平成２０年１２月１０日（２００８．１２．１０）
【出願人】（５９９０８５４１５）イルフォード イメージング スウィツアランド ゲーエムベーハー (13)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２１年７月２日（２００９．７．２）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年１２月１０日（２００８．１２．１０）
【出願人】（５９９０８５４１５）イルフォード イメージング スウィツアランド ゲーエムベーハー (13)
【Ｆターム（参考）】
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