分娩後由来細胞を用いた軟骨と骨の修復と再生
【解決手段】 分娩後組織由来細胞と軟骨形成または骨形成表現型の細胞への分化を単離、誘導する方法が本発明によって提供される。本発明では、さらに分娩後由来細胞の培養と組成、およびそれに関連する製剤を提供する。本発明の分娩後由来細胞とそれに関連する製剤は多く使用され、これだけに限らないが、例えば骨および軟骨疾患の治療における研究、診断、治療応用を含む。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
実質的に血液を含まないヒト分娩後組織に由来する細胞を有する分娩後由来細胞であって、前記細胞は培養において自己複製及び増殖することができ、骨形成または軟骨形成表現型の細胞に分化する能力を有し、前記細胞は増殖にＬ−バリンを必要とし、前記細胞は約５％〜２０％の酸素で増殖することができ、前記細胞はさらに、以下の特徴、
（ａ）顆粒球走化性タンパク質２（ＧＣＰ−２）、レチキュロン１、組織因子、ビメンチン、α−平滑筋アクチンの少なくとも１つの産生、
（ｂ）フローサイトメトリーで検出されるとおり、ＧＲＯ−αまたは酸化低密度リポタンパク質受容体の少なくとも１つの生産の欠如、
（ｃ）ＣＤ１０、ＣＤ１３、ＣＤ４４、ＣＤ７３、ＣＤ９０、ＰＤＧＦｒ−α、ＰＤ−Ｌ２、ＨＬＡ−Ａ、Ｂ、Ｃの少なくとも１つの産生、
（ｄ）フローサイトメトリーで検出されるとおり、ＣＤ３１、ＣＤ３４、ＣＤ４５、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１１７、ＣＤ１４１、ＣＤ１７８、Ｂ７−Ｈ２、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＬＡ−ＤＲ、ＤＰ、ＤＱの少なくとも１つの産生の欠如、
（ｅ）線維芽細胞、間葉幹細胞、または回腸稜の骨髄細胞であるヒト細胞と関連して、インターロイキン８、レチキュロン１、ケモカイン（Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフ）リガンド１（メラノーマ増殖刺激活性、α）、ケモカイン（Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフ）リガンド６（顆粒球走化性タンパク質２）、ケモカイン（Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフ）リガンド３、腫瘍壊死因子、α誘導蛋白質３の少なくとも１つで上昇し、または線維芽細胞、間葉幹細胞、または回腸稜の骨髄細胞であるヒト細胞と関連した発現が、Ｃ型レクチンスーパーファミリーメンバーＡ２、ウィルムス腫瘍１、アルデヒド・デヒドロゲナーゼ１ファミリーメンバーＡ２、レニン、酸化低密度リポタンパク質受容体１、タンパク質キナーゼＣゼータ、クローンＩＭＡＧＥ：４１７９６７１、ｏｖｅｒｉａｎ ｃａｎｃｅｒ １でダウンレギュレートされた仮想タンパク質ＤＫＦＺｐ５６４Ｆ０１３、クローンＤＫＦＺｐ５４７Ｋ１１１３の少なくとも１つで上昇することと、
（ｆ）線維芽細胞、間葉幹細胞、または回腸稜の骨髄細胞であるヒト細胞と関連した発現が、少なくとも以下の１つで減少し、これが低身長感受性（ｓｈｏｒｔ ｓｔａｔｕｒ
ｅ）ホメオボックス２、熱ショック２７ｋＤａ蛋白質２、ケモカイン（Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフ）リガンド１２（間質細胞由来因子１）、エラスチン、ｃＤＮＡ ＤＫＦＺｐ５８６Ｍ２０２２（クローンＤＫＦＺｐ５８６Ｍ２０２２より）、間葉（ｍｅｓｅｎｃｈｙｍｅ）ホメオボックス２、ｓｉｎｅ ｏｃｕｌｉｓホメオボックスホモログ１、クリスタリンαＢ、形態形成のｄｉｓｈｅｖｅｌｌｅｄ関連アクチベータ２（ｄｉｓｈｅｖｅｌｌｅｄ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｏｆ ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ２）、ＤＫＦＺＰ５８６Ｂ２４２０蛋白質、ニューラリン１の類似体、テトラネクチン、Ｓｒｃホモロジー３（ＳＨ３）およびシステインリッチドメイン、Ｂ−細胞転座遺伝子１（抗増殖性）、コレステロール２５−水酸化酵素、ｒｕｎｔ関連転写因子３、仮想蛋白質ＦＬＪ２３１９１、インターロイキン１１受容体α、プロコラーゲンＣ−エンドペプチターゼエンハンサー、縮合（ｆｒｉｚｚｌｅｄ）ホモログ７、仮想遺伝子ＢＣ００８９６７、コラーゲンＶＩＩＩ型、α１、テネイシンＣ、ｉｒｏｑｕｏｉｓホメオボックス蛋白質５、ヘファエスチン、インテグリンβ８、シナプス小胞糖タンパク２、ｃＤＮＡ ＦＬＪ１２２８０ ｆｉｓ、クローンＭＡＭＭＡ１００１７４４、サイトカイン受容体様因子１、カリウム中間体／低透過カルシウム活性化チャネル（サブファミリーＮ、メンバー４）、インテグリンα７、ＤＫＦＺＰ５８６Ｌ１５１蛋白質、ＰＤＺ−結合モチーフ（ＴＡＺ）を有する転写コアクチベーター、ｓｉｎｅ ｏｃｕｌｉｓホメオボックスホモログ２、ＫＩＡＡ１０３４蛋白質、初期成長応答３、ディスタル・レス・ホメオボックス５、仮想的蛋白質ＦＬＪ２０３７３、アルド−ケトレダクターゼファミリー１メンバーＣ３（３−αヒドロキシステロイド脱水素酵素ＩＩ型）、バイグリカン、フィブロネクチン１、プロエンケファリン、インテグリンβ様１（ＥＧＦ様反復ドメインを有する）、ｃＤＮＡクローンＥＵＲＯＩＭＡＧＥ １９６８４２２、ＥｐｈＡ３、ＫＩＡＡ０３６７蛋白質、ナトリウム利尿ペプチド受容体Ｃ／グアニル酸シクラーゼＣ（心房ナトリウム利尿ペプチド受容体Ｃ）、仮想的蛋白質ＦＬＪ１４０５４、ｃＤＮＡ ＤＫＦＺｐ５６４Ｂ２２２（クローンＤＫＦＺｐ５６４Ｂ２２２より）、小胞関連膜タンパク５、ＥＧＦ含有フィブリン（ｆｉｂｕｌｉｎ）様細胞外マトリックスタンパク質１、ＢＣＬ２／アデノウィルスＥ１Ｂ １９ｋＤａ相互作用蛋白質３様、ＡＥ結合蛋白質１、シトクロムｃ酸化酵素サブユニットＶＩＩａポリペプチド１（筋肉）、線維芽細胞種・腫瘍原性の抑制１（ｎｅｕｒｏｂｌａｓｔｏｍａ、ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｉｃｉｔｙ １）、インスリン様成長因子結合蛋白質２（３６ｋＤａ）である場合と、
（ｇ）単球走化性タンパク質−１、インターロイキン（ＩＬ）−６、ＩＬ−８、顆粒球走化性タンパク質−２、肝細胞増殖因子、角化細胞増殖因子、線維芽細胞増殖因子、ヘパリン結合上皮成長因子、脳由来神経栄養因子、トロンボポエチン、マクロファージ炎症性タンパク質（ＭＩＰ）−１ａ、ＲＡＮＴＥＳ、組織マトリックスメタロプロテアーゼ阻害物質１の少なくとも１つの分泌と、
（ｈ）ＥＬＩＳＡで検出されるとおり、トランスフォーミング成長因子−β２、アンジオポエチン−２、血小板由来増殖因子−ｂｂ、ＭＩＰ１ｂ、Ｉ３０９、マクロファージ由来ケモカイン、血管内皮増殖因子の少なくとも１つの分泌の欠如、および
（ｉ）培養で少なくとも４０回倍加を受ける能力、
の特徴のうち少なくとも１つを有することを特徴とする前記細胞。
【請求項２】
請求項１の細胞であって、マトリックスメタロプロテアーゼ、中性プロテアーゼ、ヒアルロン酸を消化する粘液溶解酵素の少なくとも１つを用いた酵素解離により、分娩後の胎盤またはその断片から単離された細胞。
【請求項３】
請求項１の分娩後由来細胞の分化を軟骨形成表現型に誘導する方法であって、前記細胞を１若しくはそれ以上の軟骨形成分化誘導因子に曝露する工程を有する方法。
【請求項４】
請求項３の方法において、
前記軟骨形成分化誘導因子は、トランスフォーミング成長因子−β３（ＴＧＦβ３）、および、増殖および分化因子−５（ＧＤＦ−５）、の少なくとも１つを有するものである。
【請求項５】
請求項３の方法であって、さらに軟骨形成培地で前記細胞を培養する工程を有する方法。
【請求項６】
請求項５の方法において、
前記軟骨形成培地は、ダルベッコ改変イーグル培地、Ｌ−グルタミン、ピルビン酸ナトリウム、Ｌ−プロリン、デキサメタゾン、Ｌ−アスコルビン酸、インスリン、トランスフェリン、セレニウム、抗生剤を有するものである。
【請求項７】
請求項６の方法において、
前記軟骨形成培地は、さらにコラーゲンと水酸化ナトリウムの少なくとも１つを有するものである。
【請求項８】
請求項３の方法であって、さらに、
ペレット培養アッセイにより前記細胞の分化を評価する工程を有する方法。
【請求項９】
請求項３の方法であって、さらに、
グリコサミノグリカンまたはコラーゲンの有無を検出することで、前記細胞の分化を評価する工程を有する方法。
【請求項１０】
請求項９の方法において、
前記評価する工程は、サフラニン−Ｏまたはヘマトキシリン／エオシンを用いて前記細胞を染色する工程を有するものである。
【請求項１１】
請求項３の方法によって生産される、前記細胞。
【請求項１２】
請求項１の分娩後由来細胞の分化を骨形成表現型に誘導する方法であって、前記細胞を１若しくはそれ以上の骨形成分化誘導因子に曝露する工程を有するものである。
【請求項１３】
請求項１２の方法において、
前記分化誘導因子は、骨形態形成タンパク質（ＢＭＰ）−２、ＢＭＰ−４、トランスフォーミング成長因子−β１の少なくとも１つを有するものである。
【請求項１４】
請求項１２の方法であって、さらに、
骨形成培地で前記細胞を培養する工程を有する方法。
【請求項１５】
請求項１４の方法において、
前記骨形成培地は、低グルコースダルベッコ改変イーグル培地、血清、β−グリセロリン酸、デキサメタゾン、アスコルビン酸リン酸塩、および少なくとも１種類の抗生物質または抗真菌剤を有するものである。
【請求項１６】
請求項１２の方法であって、さらに、
骨形成細胞系譜特異的マーカーを検出することで、前記分化を評価する工程を有する方法。
【請求項１７】
請求項１６の方法において、
前記マーカーは、オステオカルシン、骨シアロタンパク質、またはアルカリホスファターゼである。
【請求項１８】
請求項１２の方法であって、さらに、
石灰化を測定することで、前記分化を検出する工程を有する方法。
【請求項１９】
請求項１８の方法において、
前記検出段階は、ｖｏｎ Ｋｏｓｓａ染色を有するものである。
【請求項２０】
請求項１２の方法によって生産される前記細胞。
【請求項２１】
請求項１の前記分娩後由来細胞を有する細胞集団。
【請求項２２】
請求項２１の細胞集団において、前記細胞集団は実質的に均一である。
【請求項２３】
請求項２１の細胞集団において、前記細胞集団は不均一である。
【請求項２４】
請求項２３の細胞集団であって、さらに、
骨髄細胞、軟骨細胞、軟骨芽細胞、軟骨細胞前駆細胞、または幹細胞の少なくとも１細胞タイプを有する細胞集団。
【請求項２５】
請求項１２の前記分娩後由来細胞を有する細胞集団。
【請求項２６】
請求項２５の細胞集団において、前記細胞集団は実質的に均一である。
【請求項２７】
請求項２５の細胞集団において、前記細胞集団は不均一である。
【請求項２８】
請求項２７の細胞集団であって、さらに、
骨髄細胞、軟骨細胞、軟骨芽細胞、軟骨細胞前駆細胞、幹細胞、または他の多能性または多分化能細胞の少なくとも１細胞タイプを有する細胞集団。
【請求項２９】
請求項２０の前記分娩後由来細胞を有する細胞集団。
【請求項３０】
請求項２９の細胞集団において、前記細胞集団は実質的に均一である。
【請求項３１】
請求項２９の細胞集団において、前記細胞集団は不均一である。
【請求項３２】
請求項３１の細胞集団であって、さらに、
骨髄細胞、骨細胞、骨芽細胞、破骨細胞、骨裏打ち細胞、幹細胞、または他の多能性または多分化能細胞の少なくとも１細胞タイプを有する細胞集団。
【請求項３３】
請求項２１の前記細胞集団から調製された細胞溶解物。
【請求項３４】
請求項３３の前記細胞溶解物から調製された可溶性細胞画分。
【請求項３５】
請求項２５の前記細胞集団から調製された細胞溶解物。
【請求項３６】
請求項３５の前記細胞溶解物から調製された可溶性細胞画分。
【請求項３７】
請求項２９の前記細胞集団から調製された細胞溶解物。
【請求項３８】
請求項３７の前記細胞溶解物から調製された可溶性細胞画分。
【請求項３９】
請求項２１の前記細胞集団の細胞外基質。
【請求項４０】
請求項２５の前記細胞集団の細胞外基質。
【請求項４１】
請求項２９の前記細胞集団の細胞外基質。
【請求項４２】
請求項２１の前記細胞集団と、１若しくはそれ以上の生理活性因子を有する組成物。
【請求項４３】
請求項２５の前記細胞集団と、１若しくはそれ以上の生理活性因子を有する組成物。
【請求項４４】
請求項２９の前記細胞集団と、１若しくはそれ以上の生理活性因子を有する組成物。
【請求項４５】
請求項４２の前記組成物において、
前記生理活性因子は、軟骨形成分化誘導因子である。
【請求項４６】
請求項４２の前記組成物において、
前記生理活性因子は、骨形成分化誘導因子である。
【請求項４７】
請求項１の細胞と、薬学的に許容可能な担体とを有する薬学的組成物。
【請求項４８】
請求項１１の細胞と、薬学的に許容可能な担体とを有する薬学的組成物。
【請求項４９】
請求項２０の細胞と、薬学的に許容可能な担体とを有する薬学的組成物。
【請求項５０】
請求項３９の細胞外基質と、薬学的に許容可能な担体とを有する薬学的組成物。
【請求項５１】
請求項４０の細胞外基質と、薬学的に許容可能な担体とを有する薬学的組成物。
【請求項５２】
請求項４１の細胞外基質と、薬学的に許容可能な担体とを有する薬学的組成物。
【請求項５３】
請求項３３の溶解物と、薬学的に許容可能な担体とを有する薬学的組成物。
【請求項５４】
請求項３５の溶解物と、薬学的に許容可能な担体とを有する薬学的組成物。
【請求項５５】
請求項３７の溶解物と、薬学的に許容可能な担体とを有する薬学的組成物。
【請求項５６】
培地において請求項１の少なくとも１つの細胞を有する細胞培養。
【請求項５７】
請求項５６の細胞培養において、
前記培養培地は、軟骨形成培地または骨形成培地を有するものである。
【請求項５８】
請求項５６の細胞培養であって、さらに、
軟骨形成分化誘導因子の少なくとも１つを有する細胞培養。
【請求項５９】
請求項５８の細胞培養において、
前記軟骨形成分化誘導因子は、トランスフォーミング成長因子−β３および増殖および分化因子−５の少なくとも１つである。
【請求項６０】
請求項５６の細胞培養であって、さらに、
骨形成分化誘導因子の少なくとも１つを有する細胞培養。
【請求項６１】
請求項６０の細胞培養において、
前記骨形成分化誘導因子は、トランスフォーミング成長因子−β１、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）−２、またはＢＭＰ４の少なくとも１つである。
【請求項６２】
請求項２１の細胞集団を有する基質。
【請求項６３】
請求項２５の細胞集団を有する基質。
【請求項６４】
請求項２９の細胞集団を有する基質。
【請求項６５】
請求項６２の基質において、
前記基質は、３次元骨格を有するものである。
【請求項６６】
請求項６３の基質において、
前記基質は、３次元骨格を有するものである。
【請求項６７】
請求項６４の基質において、
前記基質は、３次元骨格を有するものである。
【請求項６８】
患者の疾患を治療する方法であって、前記患者に１若しくはそれ以上の請求項１の分娩後由来細胞を投与する工程を有する方法。
【請求項６９】
請求項６８の方法において、
前記疾患は、骨疾患または軟骨疾患である。
【請求項７０】
請求項６９の方法において、
前記骨疾患または前記軟骨疾患は、先天性な骨または軟骨の欠陥、半月板の損傷または欠陥、骨／脊髄変形、骨肉腫、骨髄腫、骨異形成症または脊柱側弯症、骨粗鬆症、歯周病、歯骨の喪失、骨軟化症、くる病、線維性骨炎、腎性骨ジストロフィー、脊椎固定術、椎間板の再構築または除去、骨パジェット病、関節リウマチ、変形性関節症、または外傷または外科的損傷である。
【請求項７１】
請求項６８の方法において、
前記分娩後由来細胞は、少なくとも１種類の他細胞タイプと共に投与されるものである。
【請求項７２】
請求項７１の方法において、
前記少なくとも１つの他細胞タイプは、骨髄細胞、軟骨細胞、軟骨芽細胞、軟骨細胞前駆細胞、骨細胞、骨芽細胞、破骨細胞、骨裏打ち細胞、幹細胞、または多能性または多分化能細胞である。
【請求項７３】
請求項６８の方法において、
前記分娩後由来細胞は、基質上に接種されるものである。
【請求項７４】
請求項７３の方法において、
前記基質は、前記患者に移植されるものである。
【請求項７５】
請求項６８の方法において、
前記分娩後由来細胞は、前記投与する工程の前に、軟骨形成または骨形成表現型に分化するように誘導されるものである。
【請求項７６】
請求項６８の方法において、
前記分娩後由来細胞は、少なくとも１種類の生理活性因子が同時に投与されるものである。
【請求項７７】
請求項６８の方法において、
前記細胞は、前記患者の骨に投与されるものである。
【請求項７８】
請求項６８の方法において、
前記細胞は、前記患者の軟骨に投与されるものである。
【請求項７９】
組織の再生を必要とする患者で前記組織を再生する方法であって、請求項２１の細胞集団を前記患者に投与する工程を有する方法。
【請求項８０】
請求項７９の方法において、
前記組織は、骨または軟骨である。
【請求項８１】
組織の再生を必要とする患者で前記組織を再生する方法であって、請求項２５の細胞集団を前記患者に投与する工程を有する方法。
【請求項８２】
請求項８１の方法において、
前記組織は、骨または軟骨である。
【請求項８３】
組織の再生を必要とする患者で前記組織を再生する方法であって、前記請求項２９の細胞集団を前記患者に投与する工程を有する方法。
【請求項８４】
請求項８３の方法において、
前記組織は、骨または軟骨である。
【請求項８５】
請求項６８の方法において、
前記細胞は、前記患者に移植されるものである。
【請求項８６】
請求項５６の培養を増殖させることで生成した条件培地。
【請求項８７】
分娩後由来細胞の軟骨形成を刺激する化合物を同定する方法であって、請求項１の細胞と前記化合物とを接触させ、前記細胞の軟骨形成マーカーをモニタリングする工程を有する方法。
【請求項８８】
分娩後由来細胞の骨形成を刺激する化合物を同定する方法であって、請求項１の細胞と前記化合物を接触させ、前記細胞の骨形成マーカーをモニタリングする工程を有する方法。
【請求項８９】
請求項１の分娩後由来細胞に対して毒性がある化合物を同定する方法であって、前記細胞に前記化合物を接触させ、前記細胞の生存をモニタリングする工程を有する方法。
【請求項９０】
請求項１の少なくとも１つの細胞と、さらに基質、水和剤、細胞培養基質、分化誘導剤、および細胞培地の少なくとも１つの成分とを有するキット。
【請求項９１】
請求項９０のキットにおいて、
前記基質は、３次元骨格である。
【請求項９２】
請求項９１のキットにおいて、
前記細胞は、前記骨格に播種されるものである。
【請求項９３】
請求項９０のキットにおいて、
前記分化誘導剤は、骨形成分化誘導剤または軟骨形成分化誘導剤である。
【請求項９４】
骨疾患または軟骨疾患を有する患者を治療する方法であって、前記請求項１の細胞の細胞外基質を前記患者に投与する工程を有する方法。
【請求項９５】
骨疾患または軟骨疾患を有する患者を治療する方法であって、前記請求項３３の細胞溶解物を前記患者に投与する工程を有する方法。
【請求項９６】
骨疾患または軟骨疾患を有する患者を治療する方法であって、前記請求項８６の条件培地を前記患者に投与する工程を有する方法。
【請求項９７】
請求項４７の薬学的組成物において、
前記組成物は、骨疾患または軟骨疾患を治療するために有効な量の前記細胞を有するものである。
【請求項９８】
請求項４８の薬学的組成物において、
前記組成物は、骨疾患または軟骨疾患を治療するために有効な量の前記細胞を有するものである。
【請求項９９】
請求項４９の薬学的組成物において、
前記組成物は、骨疾患または軟骨疾患を治療するために有効な量の前記細胞を有するものである。
【請求項１００】
請求項５０の薬学的組成物において、
前記組成物は、骨疾患または軟骨疾患を治療するために有効な量の前記細胞外基質を有するものである。
【請求項１０１】
請求項５１の薬学的組成物において、
前記組成物は、骨疾患または軟骨疾患を治療するために有効な量の前記細胞外基質を有するものである。
【請求項１０２】
請求項５２の薬学的組成物において、
前記組成物は、骨疾患または軟骨疾患を治療するために有効な量の前記細胞外基質を有するものである。
【請求項１０３】
請求項５３の薬学的組成物において、
前記組成物は、骨疾患または軟骨疾患を治療するために有効な量の前記溶解物を有するものである。
【請求項１０４】
請求項５４の薬学的組成物において、
前記組成物は、骨疾患または軟骨疾患を治療するために有効な量の前記溶解物を有するものである。
【請求項１０５】
請求項５５の薬学的組成物において、
前記組成物は、骨疾患または軟骨疾患を治療するために有効な量の前記溶解物を有するものである。
【請求項１０６】
請求項４７の薬学的組成物であって、さらに、
幹細胞、骨髄細胞、軟骨細胞、軟骨芽細胞、骨細胞、骨芽細胞、破骨細胞、骨裏打ち細胞、他の骨または軟骨前駆細胞の他の細胞タイプの少なくとも１種類を有する方法。
【請求項１０７】
請求項４８の薬学的組成物であって、さらに、
幹細胞、骨髄細胞、軟骨細胞、軟骨芽細胞、骨細胞、骨芽細胞、破骨細胞、骨裏打ち細胞、他の骨または軟骨前駆細胞の他の細胞タイプの少なくとも１種類を有する方法。
【請求項１０８】
請求項４９の薬学的組成物であって、さらに、
幹細胞、骨髄細胞、軟骨細胞、軟骨芽細胞、骨細胞、骨芽細胞、破骨細胞、骨裏打ち細胞、他の骨または軟骨前駆細胞の他の細胞タイプの少なくとも１種類を有する方法。
【請求項１】
実質的に血液を含まないヒト分娩後組織に由来する細胞を有する分娩後由来細胞であって、前記細胞は培養において自己複製及び増殖することができ、骨形成または軟骨形成表現型の細胞に分化する能力を有し、前記細胞は増殖にＬ−バリンを必要とし、前記細胞は約５％〜２０％の酸素で増殖することができ、前記細胞はさらに、以下の特徴、
（ａ）顆粒球走化性タンパク質２（ＧＣＰ−２）、レチキュロン１、組織因子、ビメンチン、α−平滑筋アクチンの少なくとも１つの産生、
（ｂ）フローサイトメトリーで検出されるとおり、ＧＲＯ−αまたは酸化低密度リポタンパク質受容体の少なくとも１つの生産の欠如、
（ｃ）ＣＤ１０、ＣＤ１３、ＣＤ４４、ＣＤ７３、ＣＤ９０、ＰＤＧＦｒ−α、ＰＤ−Ｌ２、ＨＬＡ−Ａ、Ｂ、Ｃの少なくとも１つの産生、
（ｄ）フローサイトメトリーで検出されるとおり、ＣＤ３１、ＣＤ３４、ＣＤ４５、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１１７、ＣＤ１４１、ＣＤ１７８、Ｂ７−Ｈ２、ＨＬＡ−Ｇ、ＨＬＡ−ＤＲ、ＤＰ、ＤＱの少なくとも１つの産生の欠如、
（ｅ）線維芽細胞、間葉幹細胞、または回腸稜の骨髄細胞であるヒト細胞と関連して、インターロイキン８、レチキュロン１、ケモカイン（Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフ）リガンド１（メラノーマ増殖刺激活性、α）、ケモカイン（Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフ）リガンド６（顆粒球走化性タンパク質２）、ケモカイン（Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフ）リガンド３、腫瘍壊死因子、α誘導蛋白質３の少なくとも１つで上昇し、または線維芽細胞、間葉幹細胞、または回腸稜の骨髄細胞であるヒト細胞と関連した発現が、Ｃ型レクチンスーパーファミリーメンバーＡ２、ウィルムス腫瘍１、アルデヒド・デヒドロゲナーゼ１ファミリーメンバーＡ２、レニン、酸化低密度リポタンパク質受容体１、タンパク質キナーゼＣゼータ、クローンＩＭＡＧＥ：４１７９６７１、ｏｖｅｒｉａｎ ｃａｎｃｅｒ １でダウンレギュレートされた仮想タンパク質ＤＫＦＺｐ５６４Ｆ０１３、クローンＤＫＦＺｐ５４７Ｋ１１１３の少なくとも１つで上昇することと、
（ｆ）線維芽細胞、間葉幹細胞、または回腸稜の骨髄細胞であるヒト細胞と関連した発現が、少なくとも以下の１つで減少し、これが低身長感受性（ｓｈｏｒｔ ｓｔａｔｕｒ
ｅ）ホメオボックス２、熱ショック２７ｋＤａ蛋白質２、ケモカイン（Ｃ−Ｘ−Ｃモチーフ）リガンド１２（間質細胞由来因子１）、エラスチン、ｃＤＮＡ ＤＫＦＺｐ５８６Ｍ２０２２（クローンＤＫＦＺｐ５８６Ｍ２０２２より）、間葉（ｍｅｓｅｎｃｈｙｍｅ）ホメオボックス２、ｓｉｎｅ ｏｃｕｌｉｓホメオボックスホモログ１、クリスタリンαＢ、形態形成のｄｉｓｈｅｖｅｌｌｅｄ関連アクチベータ２（ｄｉｓｈｅｖｅｌｌｅｄ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｏｆ ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ２）、ＤＫＦＺＰ５８６Ｂ２４２０蛋白質、ニューラリン１の類似体、テトラネクチン、Ｓｒｃホモロジー３（ＳＨ３）およびシステインリッチドメイン、Ｂ−細胞転座遺伝子１（抗増殖性）、コレステロール２５−水酸化酵素、ｒｕｎｔ関連転写因子３、仮想蛋白質ＦＬＪ２３１９１、インターロイキン１１受容体α、プロコラーゲンＣ−エンドペプチターゼエンハンサー、縮合（ｆｒｉｚｚｌｅｄ）ホモログ７、仮想遺伝子ＢＣ００８９６７、コラーゲンＶＩＩＩ型、α１、テネイシンＣ、ｉｒｏｑｕｏｉｓホメオボックス蛋白質５、ヘファエスチン、インテグリンβ８、シナプス小胞糖タンパク２、ｃＤＮＡ ＦＬＪ１２２８０ ｆｉｓ、クローンＭＡＭＭＡ１００１７４４、サイトカイン受容体様因子１、カリウム中間体／低透過カルシウム活性化チャネル（サブファミリーＮ、メンバー４）、インテグリンα７、ＤＫＦＺＰ５８６Ｌ１５１蛋白質、ＰＤＺ−結合モチーフ（ＴＡＺ）を有する転写コアクチベーター、ｓｉｎｅ ｏｃｕｌｉｓホメオボックスホモログ２、ＫＩＡＡ１０３４蛋白質、初期成長応答３、ディスタル・レス・ホメオボックス５、仮想的蛋白質ＦＬＪ２０３７３、アルド−ケトレダクターゼファミリー１メンバーＣ３（３−αヒドロキシステロイド脱水素酵素ＩＩ型）、バイグリカン、フィブロネクチン１、プロエンケファリン、インテグリンβ様１（ＥＧＦ様反復ドメインを有する）、ｃＤＮＡクローンＥＵＲＯＩＭＡＧＥ １９６８４２２、ＥｐｈＡ３、ＫＩＡＡ０３６７蛋白質、ナトリウム利尿ペプチド受容体Ｃ／グアニル酸シクラーゼＣ（心房ナトリウム利尿ペプチド受容体Ｃ）、仮想的蛋白質ＦＬＪ１４０５４、ｃＤＮＡ ＤＫＦＺｐ５６４Ｂ２２２（クローンＤＫＦＺｐ５６４Ｂ２２２より）、小胞関連膜タンパク５、ＥＧＦ含有フィブリン（ｆｉｂｕｌｉｎ）様細胞外マトリックスタンパク質１、ＢＣＬ２／アデノウィルスＥ１Ｂ １９ｋＤａ相互作用蛋白質３様、ＡＥ結合蛋白質１、シトクロムｃ酸化酵素サブユニットＶＩＩａポリペプチド１（筋肉）、線維芽細胞種・腫瘍原性の抑制１（ｎｅｕｒｏｂｌａｓｔｏｍａ、ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｉｃｉｔｙ １）、インスリン様成長因子結合蛋白質２（３６ｋＤａ）である場合と、
（ｇ）単球走化性タンパク質−１、インターロイキン（ＩＬ）−６、ＩＬ−８、顆粒球走化性タンパク質−２、肝細胞増殖因子、角化細胞増殖因子、線維芽細胞増殖因子、ヘパリン結合上皮成長因子、脳由来神経栄養因子、トロンボポエチン、マクロファージ炎症性タンパク質（ＭＩＰ）−１ａ、ＲＡＮＴＥＳ、組織マトリックスメタロプロテアーゼ阻害物質１の少なくとも１つの分泌と、
（ｈ）ＥＬＩＳＡで検出されるとおり、トランスフォーミング成長因子−β２、アンジオポエチン−２、血小板由来増殖因子−ｂｂ、ＭＩＰ１ｂ、Ｉ３０９、マクロファージ由来ケモカイン、血管内皮増殖因子の少なくとも１つの分泌の欠如、および
（ｉ）培養で少なくとも４０回倍加を受ける能力、
の特徴のうち少なくとも１つを有することを特徴とする前記細胞。
【請求項２】
請求項１の細胞であって、マトリックスメタロプロテアーゼ、中性プロテアーゼ、ヒアルロン酸を消化する粘液溶解酵素の少なくとも１つを用いた酵素解離により、分娩後の胎盤またはその断片から単離された細胞。
【請求項３】
請求項１の分娩後由来細胞の分化を軟骨形成表現型に誘導する方法であって、前記細胞を１若しくはそれ以上の軟骨形成分化誘導因子に曝露する工程を有する方法。
【請求項４】
請求項３の方法において、
前記軟骨形成分化誘導因子は、トランスフォーミング成長因子−β３（ＴＧＦβ３）、および、増殖および分化因子−５（ＧＤＦ−５）、の少なくとも１つを有するものである。
【請求項５】
請求項３の方法であって、さらに軟骨形成培地で前記細胞を培養する工程を有する方法。
【請求項６】
請求項５の方法において、
前記軟骨形成培地は、ダルベッコ改変イーグル培地、Ｌ−グルタミン、ピルビン酸ナトリウム、Ｌ−プロリン、デキサメタゾン、Ｌ−アスコルビン酸、インスリン、トランスフェリン、セレニウム、抗生剤を有するものである。
【請求項７】
請求項６の方法において、
前記軟骨形成培地は、さらにコラーゲンと水酸化ナトリウムの少なくとも１つを有するものである。
【請求項８】
請求項３の方法であって、さらに、
ペレット培養アッセイにより前記細胞の分化を評価する工程を有する方法。
【請求項９】
請求項３の方法であって、さらに、
グリコサミノグリカンまたはコラーゲンの有無を検出することで、前記細胞の分化を評価する工程を有する方法。
【請求項１０】
請求項９の方法において、
前記評価する工程は、サフラニン−Ｏまたはヘマトキシリン／エオシンを用いて前記細胞を染色する工程を有するものである。
【請求項１１】
請求項３の方法によって生産される、前記細胞。
【請求項１２】
請求項１の分娩後由来細胞の分化を骨形成表現型に誘導する方法であって、前記細胞を１若しくはそれ以上の骨形成分化誘導因子に曝露する工程を有するものである。
【請求項１３】
請求項１２の方法において、
前記分化誘導因子は、骨形態形成タンパク質（ＢＭＰ）−２、ＢＭＰ−４、トランスフォーミング成長因子−β１の少なくとも１つを有するものである。
【請求項１４】
請求項１２の方法であって、さらに、
骨形成培地で前記細胞を培養する工程を有する方法。
【請求項１５】
請求項１４の方法において、
前記骨形成培地は、低グルコースダルベッコ改変イーグル培地、血清、β−グリセロリン酸、デキサメタゾン、アスコルビン酸リン酸塩、および少なくとも１種類の抗生物質または抗真菌剤を有するものである。
【請求項１６】
請求項１２の方法であって、さらに、
骨形成細胞系譜特異的マーカーを検出することで、前記分化を評価する工程を有する方法。
【請求項１７】
請求項１６の方法において、
前記マーカーは、オステオカルシン、骨シアロタンパク質、またはアルカリホスファターゼである。
【請求項１８】
請求項１２の方法であって、さらに、
石灰化を測定することで、前記分化を検出する工程を有する方法。
【請求項１９】
請求項１８の方法において、
前記検出段階は、ｖｏｎ Ｋｏｓｓａ染色を有するものである。
【請求項２０】
請求項１２の方法によって生産される前記細胞。
【請求項２１】
請求項１の前記分娩後由来細胞を有する細胞集団。
【請求項２２】
請求項２１の細胞集団において、前記細胞集団は実質的に均一である。
【請求項２３】
請求項２１の細胞集団において、前記細胞集団は不均一である。
【請求項２４】
請求項２３の細胞集団であって、さらに、
骨髄細胞、軟骨細胞、軟骨芽細胞、軟骨細胞前駆細胞、または幹細胞の少なくとも１細胞タイプを有する細胞集団。
【請求項２５】
請求項１２の前記分娩後由来細胞を有する細胞集団。
【請求項２６】
請求項２５の細胞集団において、前記細胞集団は実質的に均一である。
【請求項２７】
請求項２５の細胞集団において、前記細胞集団は不均一である。
【請求項２８】
請求項２７の細胞集団であって、さらに、
骨髄細胞、軟骨細胞、軟骨芽細胞、軟骨細胞前駆細胞、幹細胞、または他の多能性または多分化能細胞の少なくとも１細胞タイプを有する細胞集団。
【請求項２９】
請求項２０の前記分娩後由来細胞を有する細胞集団。
【請求項３０】
請求項２９の細胞集団において、前記細胞集団は実質的に均一である。
【請求項３１】
請求項２９の細胞集団において、前記細胞集団は不均一である。
【請求項３２】
請求項３１の細胞集団であって、さらに、
骨髄細胞、骨細胞、骨芽細胞、破骨細胞、骨裏打ち細胞、幹細胞、または他の多能性または多分化能細胞の少なくとも１細胞タイプを有する細胞集団。
【請求項３３】
請求項２１の前記細胞集団から調製された細胞溶解物。
【請求項３４】
請求項３３の前記細胞溶解物から調製された可溶性細胞画分。
【請求項３５】
請求項２５の前記細胞集団から調製された細胞溶解物。
【請求項３６】
請求項３５の前記細胞溶解物から調製された可溶性細胞画分。
【請求項３７】
請求項２９の前記細胞集団から調製された細胞溶解物。
【請求項３８】
請求項３７の前記細胞溶解物から調製された可溶性細胞画分。
【請求項３９】
請求項２１の前記細胞集団の細胞外基質。
【請求項４０】
請求項２５の前記細胞集団の細胞外基質。
【請求項４１】
請求項２９の前記細胞集団の細胞外基質。
【請求項４２】
請求項２１の前記細胞集団と、１若しくはそれ以上の生理活性因子を有する組成物。
【請求項４３】
請求項２５の前記細胞集団と、１若しくはそれ以上の生理活性因子を有する組成物。
【請求項４４】
請求項２９の前記細胞集団と、１若しくはそれ以上の生理活性因子を有する組成物。
【請求項４５】
請求項４２の前記組成物において、
前記生理活性因子は、軟骨形成分化誘導因子である。
【請求項４６】
請求項４２の前記組成物において、
前記生理活性因子は、骨形成分化誘導因子である。
【請求項４７】
請求項１の細胞と、薬学的に許容可能な担体とを有する薬学的組成物。
【請求項４８】
請求項１１の細胞と、薬学的に許容可能な担体とを有する薬学的組成物。
【請求項４９】
請求項２０の細胞と、薬学的に許容可能な担体とを有する薬学的組成物。
【請求項５０】
請求項３９の細胞外基質と、薬学的に許容可能な担体とを有する薬学的組成物。
【請求項５１】
請求項４０の細胞外基質と、薬学的に許容可能な担体とを有する薬学的組成物。
【請求項５２】
請求項４１の細胞外基質と、薬学的に許容可能な担体とを有する薬学的組成物。
【請求項５３】
請求項３３の溶解物と、薬学的に許容可能な担体とを有する薬学的組成物。
【請求項５４】
請求項３５の溶解物と、薬学的に許容可能な担体とを有する薬学的組成物。
【請求項５５】
請求項３７の溶解物と、薬学的に許容可能な担体とを有する薬学的組成物。
【請求項５６】
培地において請求項１の少なくとも１つの細胞を有する細胞培養。
【請求項５７】
請求項５６の細胞培養において、
前記培養培地は、軟骨形成培地または骨形成培地を有するものである。
【請求項５８】
請求項５６の細胞培養であって、さらに、
軟骨形成分化誘導因子の少なくとも１つを有する細胞培養。
【請求項５９】
請求項５８の細胞培養において、
前記軟骨形成分化誘導因子は、トランスフォーミング成長因子−β３および増殖および分化因子−５の少なくとも１つである。
【請求項６０】
請求項５６の細胞培養であって、さらに、
骨形成分化誘導因子の少なくとも１つを有する細胞培養。
【請求項６１】
請求項６０の細胞培養において、
前記骨形成分化誘導因子は、トランスフォーミング成長因子−β１、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）−２、またはＢＭＰ４の少なくとも１つである。
【請求項６２】
請求項２１の細胞集団を有する基質。
【請求項６３】
請求項２５の細胞集団を有する基質。
【請求項６４】
請求項２９の細胞集団を有する基質。
【請求項６５】
請求項６２の基質において、
前記基質は、３次元骨格を有するものである。
【請求項６６】
請求項６３の基質において、
前記基質は、３次元骨格を有するものである。
【請求項６７】
請求項６４の基質において、
前記基質は、３次元骨格を有するものである。
【請求項６８】
患者の疾患を治療する方法であって、前記患者に１若しくはそれ以上の請求項１の分娩後由来細胞を投与する工程を有する方法。
【請求項６９】
請求項６８の方法において、
前記疾患は、骨疾患または軟骨疾患である。
【請求項７０】
請求項６９の方法において、
前記骨疾患または前記軟骨疾患は、先天性な骨または軟骨の欠陥、半月板の損傷または欠陥、骨／脊髄変形、骨肉腫、骨髄腫、骨異形成症または脊柱側弯症、骨粗鬆症、歯周病、歯骨の喪失、骨軟化症、くる病、線維性骨炎、腎性骨ジストロフィー、脊椎固定術、椎間板の再構築または除去、骨パジェット病、関節リウマチ、変形性関節症、または外傷または外科的損傷である。
【請求項７１】
請求項６８の方法において、
前記分娩後由来細胞は、少なくとも１種類の他細胞タイプと共に投与されるものである。
【請求項７２】
請求項７１の方法において、
前記少なくとも１つの他細胞タイプは、骨髄細胞、軟骨細胞、軟骨芽細胞、軟骨細胞前駆細胞、骨細胞、骨芽細胞、破骨細胞、骨裏打ち細胞、幹細胞、または多能性または多分化能細胞である。
【請求項７３】
請求項６８の方法において、
前記分娩後由来細胞は、基質上に接種されるものである。
【請求項７４】
請求項７３の方法において、
前記基質は、前記患者に移植されるものである。
【請求項７５】
請求項６８の方法において、
前記分娩後由来細胞は、前記投与する工程の前に、軟骨形成または骨形成表現型に分化するように誘導されるものである。
【請求項７６】
請求項６８の方法において、
前記分娩後由来細胞は、少なくとも１種類の生理活性因子が同時に投与されるものである。
【請求項７７】
請求項６８の方法において、
前記細胞は、前記患者の骨に投与されるものである。
【請求項７８】
請求項６８の方法において、
前記細胞は、前記患者の軟骨に投与されるものである。
【請求項７９】
組織の再生を必要とする患者で前記組織を再生する方法であって、請求項２１の細胞集団を前記患者に投与する工程を有する方法。
【請求項８０】
請求項７９の方法において、
前記組織は、骨または軟骨である。
【請求項８１】
組織の再生を必要とする患者で前記組織を再生する方法であって、請求項２５の細胞集団を前記患者に投与する工程を有する方法。
【請求項８２】
請求項８１の方法において、
前記組織は、骨または軟骨である。
【請求項８３】
組織の再生を必要とする患者で前記組織を再生する方法であって、前記請求項２９の細胞集団を前記患者に投与する工程を有する方法。
【請求項８４】
請求項８３の方法において、
前記組織は、骨または軟骨である。
【請求項８５】
請求項６８の方法において、
前記細胞は、前記患者に移植されるものである。
【請求項８６】
請求項５６の培養を増殖させることで生成した条件培地。
【請求項８７】
分娩後由来細胞の軟骨形成を刺激する化合物を同定する方法であって、請求項１の細胞と前記化合物とを接触させ、前記細胞の軟骨形成マーカーをモニタリングする工程を有する方法。
【請求項８８】
分娩後由来細胞の骨形成を刺激する化合物を同定する方法であって、請求項１の細胞と前記化合物を接触させ、前記細胞の骨形成マーカーをモニタリングする工程を有する方法。
【請求項８９】
請求項１の分娩後由来細胞に対して毒性がある化合物を同定する方法であって、前記細胞に前記化合物を接触させ、前記細胞の生存をモニタリングする工程を有する方法。
【請求項９０】
請求項１の少なくとも１つの細胞と、さらに基質、水和剤、細胞培養基質、分化誘導剤、および細胞培地の少なくとも１つの成分とを有するキット。
【請求項９１】
請求項９０のキットにおいて、
前記基質は、３次元骨格である。
【請求項９２】
請求項９１のキットにおいて、
前記細胞は、前記骨格に播種されるものである。
【請求項９３】
請求項９０のキットにおいて、
前記分化誘導剤は、骨形成分化誘導剤または軟骨形成分化誘導剤である。
【請求項９４】
骨疾患または軟骨疾患を有する患者を治療する方法であって、前記請求項１の細胞の細胞外基質を前記患者に投与する工程を有する方法。
【請求項９５】
骨疾患または軟骨疾患を有する患者を治療する方法であって、前記請求項３３の細胞溶解物を前記患者に投与する工程を有する方法。
【請求項９６】
骨疾患または軟骨疾患を有する患者を治療する方法であって、前記請求項８６の条件培地を前記患者に投与する工程を有する方法。
【請求項９７】
請求項４７の薬学的組成物において、
前記組成物は、骨疾患または軟骨疾患を治療するために有効な量の前記細胞を有するものである。
【請求項９８】
請求項４８の薬学的組成物において、
前記組成物は、骨疾患または軟骨疾患を治療するために有効な量の前記細胞を有するものである。
【請求項９９】
請求項４９の薬学的組成物において、
前記組成物は、骨疾患または軟骨疾患を治療するために有効な量の前記細胞を有するものである。
【請求項１００】
請求項５０の薬学的組成物において、
前記組成物は、骨疾患または軟骨疾患を治療するために有効な量の前記細胞外基質を有するものである。
【請求項１０１】
請求項５１の薬学的組成物において、
前記組成物は、骨疾患または軟骨疾患を治療するために有効な量の前記細胞外基質を有するものである。
【請求項１０２】
請求項５２の薬学的組成物において、
前記組成物は、骨疾患または軟骨疾患を治療するために有効な量の前記細胞外基質を有するものである。
【請求項１０３】
請求項５３の薬学的組成物において、
前記組成物は、骨疾患または軟骨疾患を治療するために有効な量の前記溶解物を有するものである。
【請求項１０４】
請求項５４の薬学的組成物において、
前記組成物は、骨疾患または軟骨疾患を治療するために有効な量の前記溶解物を有するものである。
【請求項１０５】
請求項５５の薬学的組成物において、
前記組成物は、骨疾患または軟骨疾患を治療するために有効な量の前記溶解物を有するものである。
【請求項１０６】
請求項４７の薬学的組成物であって、さらに、
幹細胞、骨髄細胞、軟骨細胞、軟骨芽細胞、骨細胞、骨芽細胞、破骨細胞、骨裏打ち細胞、他の骨または軟骨前駆細胞の他の細胞タイプの少なくとも１種類を有する方法。
【請求項１０７】
請求項４８の薬学的組成物であって、さらに、
幹細胞、骨髄細胞、軟骨細胞、軟骨芽細胞、骨細胞、骨芽細胞、破骨細胞、骨裏打ち細胞、他の骨または軟骨前駆細胞の他の細胞タイプの少なくとも１種類を有する方法。
【請求項１０８】
請求項４９の薬学的組成物であって、さらに、
幹細胞、骨髄細胞、軟骨細胞、軟骨芽細胞、骨細胞、骨芽細胞、破骨細胞、骨裏打ち細胞、他の骨または軟骨前駆細胞の他の細胞タイプの少なくとも１種類を有する方法。
【公表番号】特表２００７−５２８７０６（Ｐ２００７−５２８７０６Ａ）
【公表日】平成１９年１０月１８日（２００７．１０．１８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５１７７８８（Ｐ２００６−５１７７８８）
【出願日】平成１６年６月２５日（２００４．６．２５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０２０９５８
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０３８０１２
【国際公開日】平成１７年４月２８日（２００５．４．２８）
【出願人】（５０３３２５９４１）エチコン、インコーポレイテッド (8)
【氏名又は名称原語表記】ＥＴＨＩＣＯＮ，ＩＮＣ．
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１９年１０月１８日（２００７．１０．１８）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年６月２５日（２００４．６．２５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０２０９５８
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０３８０１２
【国際公開日】平成１７年４月２８日（２００５．４．２８）
【出願人】（５０３３２５９４１）エチコン、インコーポレイテッド (8)
【氏名又は名称原語表記】ＥＴＨＩＣＯＮ，ＩＮＣ．
【Ｆターム（参考）】
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