化学的に反応性の非天然アミノ酸を使用するキャリア−ペプチド接合体の製造
キャリアポリペプチドを製造する方法が提供され、該方法は、第一の非天然アミノ酸をキャリアポリペプチド変異体中に組み入れること、第二の非天然アミノ酸を標的ポリペプチド変異体中に組み入れること、並びに第一及び第二の非天然アミノ酸を反応させて接合体を生成させることを含む。提供された方法を使用して製造される接合体も提供される。さらに、メチロトローフ酵母における直交性翻訳系並びにこれらの系を使用して非天然アミノ酸を含むキャリア及び標的ポリペプチド変異体を製造する方法が提供される。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
共有結合でカップリングされたキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体を製造する方法であって、
キャリアポリペプチドの合成又は翻訳の間に第一の非天然アミノ酸残基をキャリアポリペプチド中に組み入れること；
標的ポリペプチドの合成又は翻訳の間に第二の非天然アミノ酸残基を標的ポリペプチド中に組み入れること；及び
第一の非天然アミノ酸残基と第二の非天然アミノ酸残基とを反応させて、共有結合でカップリングしたキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体を生成させること、
を含む、上記方法。
【請求項２】
第一の非天然アミノ酸を翻訳の間にキャリアポリペプチド中に組み入れることが：
（ａ）（ｉ）第一の非天然アミノ酸、
（ｉｉ）直交性ｔＲＮＡ−合成酵素（Ｏ−ＲＳ）、
（ｉｉｉ）Ｏ−ＲＳにより第一の非天然アミノ酸で特異的にアミノアシル化される直交性ｔＲＮＡ（Ｏ−ｔＲＮＡ）、及び
（ｉｖ） キャリアペプチドをコードする核酸［ここで該核酸はＯ−ｔＲＮＡにより認識されるセレクターコドンを含む］
を含む翻訳系を備えること；ならびに
（ｂ）核酸を翻訳し、それにより翻訳の間に第一の非天然アミノ酸をキャリアポリペプチド中に組み入れること
を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
キャリポリペプチド又は標的ポリペプチドがメチロトローフ酵母細胞において産生される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
キャリアポリペプチド又は標的ポリペプチドが、カンジダ属細胞、ハンゼヌラ属細胞、ピキア属細胞、又はトルロプシス属細胞において産生される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
キャリアポリペプチドがヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）に対して相同である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
キャリアポリペプチドが、抗体、ＨＥＲ２抗体、及びＯＫＴ３抗体、抗体フラグメント、Ｆａｂ、Ｆｃ、ｓｃＦｖ、アルブミン、血清アルブミン、ウシ血清アルブミン、オボアルブミン、ｃ反応性タンパク質、コンアルブミン、ラクトアルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、イオンキャリアタンパク質、アシルキャリアタンパク質、シグナル伝達アダプタータンパク質、アンドロゲン結合タンパク質、カルシウム結合タンパク質、カルモジュリン結合タンパク質、セルロプラスミン、コレステロールエステル輸送タンパク質、ｆボックスタンパク質、脂肪酸結合タンパク質、フォリスタチン、フォリスタチン関連タンパク質、ＧＴＰ結合タンパク質、インスリン様増殖因子結合タンパク質、鉄結合タンパク質、潜在型ＴＧＦベータ結合タンパク質、集光性タンパク質複合体、リンパ球抗原、膜輸送タンパク質、ニューロフィジン、周辺質結合タンパク質、リン酸結合タンパク質、ホスファチジルエタノールアミン結合タンパク質、リン脂質輸送タンパク質、レチノール結合タンパク質、ＲＮＡ結合タンパク質、ｓ期キナーゼ関連タンパク質、性ホルモン結合グロブリン、チロキシン結合タンパク質、トランスコバラミン、トランスコルチン、トランスフェリン結合タンパク質、又はビタミンＤ結合タンパク質であるか、又はこれらに対して相同である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
標的ポリペプチドが、ＴＳＰ−１、ＡＢＴ−５１０、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、リボソーム不活性化タンパク質（ＲＩＰ）、アンジオスタチン、エキセンディン−４、アポタンパク質、心房性ナトリウム利尿因子、心房性ナトリウム利尿ポリペプチド、心房性ペプチド、Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン、Ｔ３９７６５、ＮＡＰ−２、ＥＮＡ−７８、ｇｒｏ−ａ、ｇｒｏ−ｂ、ｇｒｏ−ｃ、ＩＰ−１０、ＧＣＰ−２、ＮＡＰ−４、ＰＦ４、ＭＩＧ、カルシトニン、ｃ−ｋｉｔリガンド、サイトカイン、ＣＣケモカイン、単球走化性タンパク質−１、単球走化性タンパク質−２、単球走化性タンパク質−３、単球炎症性タンパク質−１アルファ、単球炎症性タンパク質−１ベータ、ＲＡＮＴＥＳ、Ｉ３０９、Ｒ８３９１５、Ｒ９１７３３、Ｔ５８８４７、Ｄ３１０６５、Ｔ６４２６２、ＣＤ４０リガンド、補体阻害剤、サイトカイン、上皮好中球活性化ペプチド−７８、ＧＲＯΥ、ＭＧＳＡ、ＧＲＯβ、ＧＲＯγ、ＭＩＰ１−α、ＭＩＰ１−β、ＭＣＰ−１、上皮好中球活性化ペプチド、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、表皮剥脱毒素、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、ＦＧＦ２１、Ｇ−ＣＳＦ、ゴナドトロピン、増殖因子、ヒルジン、ＬＦＡ−１、ヒトインスリン、ヒトインスリン様増殖因子（ｈＩＧＦ）、ｈＩＧＦ−Ｉ、ｈＩＧＦ−ＩＩ、ヒトインターフェロン、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ、インターロイキン、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ケラチノサイト増殖因子（ＫＧＦ）、白血病抑制因子、ニュールツリン、ＰＤＧＦ、ペプチドホルモン、プレイオトロフィン、発熱性外毒素Ａ、発熱性外毒素Ｂ、発熱性外毒素Ｃ、レラキシン、ソマトスタチン、スーパーオキシドジムスターゼ、チモシンアルファ１、ヒト腫瘍壊死因子（ｈＴＮＦ）、ヒト腫瘍壊死因子アルファ、ヒト腫瘍壊死因子ベータ、Ｒａｓ、Ｔａｔ、炎症性分子、シグナル伝達分子、ウシ膵臓トリプシン阻害剤（ＢＰＴＩ）、又はＢＰ３２０抗原であるか、又はこれらに対して相同である、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
第一の非天然アミノ酸をキャリアポリペプチド中に組み入れることにより、第一の非天然アミノ酸を含むＨＳＡ変異体が生じる、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
第一の非天然アミノ酸がｐ−アセチルフェニルアラニンである、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
第一の非天然アミノ酸が、ＨＳＡ変異体にアミノ酸位置３７において組み入れられ、ここでアミノ酸位置の番号は配列番号１のものに対してである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
第一の非天然アミノ酸が、翻訳の間にＨＳＡ変異体中に組み入れられる、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
第二の非天然アミノ酸を標的ポリペプチド中に組み入れることにより、第二の非天然アミノ酸を含むＴＳＰ−１変異体が生じる、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
第二の非天然アミノ酸を標的ポリペプチド中に組み入れることにより、第二の非天然アミノ酸を含むＡＢＴ−５１０変異体が生じる、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
第二のアミノ酸がε−（２−（アミノオキシ）アセチル）−Ｌ−リジンである、請求項１２又は１３に記載の方法。
【請求項１５】
ε−（２−（アミノオキシ）アセチル）−Ｌ−リジンが、ＴＳＰ−１変異体中にアミノ酸位置６において組み入れられ、ここでアミノ酸位置の番号は配列番号２のそれに対してである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
ε−（２−（アミノオキシ）アセチル）−Ｌ−リジンがＴＳＰ−１変異体中にアミノ酸位置１において組み入れられ、ここでアミノ酸位置の番号は配列番号２のアミノ酸位置のそれに対してである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
ε−（２−（アミノオキシ）アセチル）−Ｌ−リジンがＴＳＰ−１変異体中に合成の間に組み入れられる、請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】
ε−（２−（アミノオキシ）アセチル）−Ｌ−リジンがＡＢＴ−５１０変異体中にアミノ酸位置６において組み入れられ、ここでアミノ酸位置の番号は配列番号３のアミノ酸位置のそれに対してである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１９】
ε−（２−（アミノオキシ）アセチル）−Ｌ−リジンがＡＢＴ−５１０変異体中にアミノ酸位置１において組み入れられ、ここでアミノ酸位置の番号は配列番号３のアミノ酸位置のそれに対してである、請求項１４に記載の方法。
【請求項２０】
ε−（２−（アミノオキシ）アセチル）−Ｌ−リジンが、合成の間にＡＢＴ−５１０変異体中に組み入れられる、請求項１４に記載の方法。
【請求項２１】
キャリアポリペプチドがＨＳＡ変異体であり、ここで第一の非天然アミノ酸はｐ−アセチルフェニルアラニンであり、ｐ−アセチルフェニルアラニンはＨＳＡ変異体中にアミノ酸位置３７において翻訳の間に組み入れられ、ここでＨＳＡ変異体におけるアミノ酸位置の番号は配列番号１に対してであり、標的ポリペプチドはＴＳＰ−１変異体であり、ここで第二の非天然アミノ酸はε−（２−（アミノオキシ）アセチル）−Ｌ−リジンであり、ε−（２−（アミノオキシ）アセチル）−Ｌ−リジンはＴＳＰ−１変異体中にアミノ酸位置６において合成の間に組み入れられ、ここでＴＳＰ−１変異体におけるアミノ酸位置の番号は配列番号２に対してであり、そしてここでｐ−アセチルフェニルアラニン及びε−（２−（アミノオキシ）アセチル）−Ｌ−リジンをオキシム連結反応を介して反応させてＨＳＡ−ＴＳＰ−１接合体を生成させる、請求項１に記載の方法。
【請求項２２】
キャリアポリペプチドがＨＳＡ変異体であり、ここで第一の非天然アミノ酸はｐ−アセチルフェニルアラニンであり、ｐ−アセチルフェニルアラニンは翻訳の間にアミノ酸位置３７においてＨＳＡ変異体中に組み入れられ、ここでＨＳＡ変異体におけるアミノ酸位置の番号は配列番号１に対してであり、標的ポリペプチドはＡＢＴ−５１０変異体であり、第二の非天然アミノ酸はε−（２−（アミノオキシ）アセチル）−Ｌ−リジンであり、ε−（２−（アミノオキシ）アセチル）−Ｌ−リジンは合成の間にＡＢＴ−５１０変異体中にアミノ酸位置６において組み入れられ、ここでＡＢＴ−５１０変異体におけるアミノ酸位置の番号は配列番号３に対してであり、そしてｐ−アセチルフェニルアラニン及びε−（２−（アミノオキシ）アセチル）−Ｌ−リジンをオキシム連結反応を介して反応させてＨＳＡ−ＡＢＴ−５１０接合体を生成させる、請求項１に記載の方法。
【請求項２３】
第一の非天然アミノ酸と第二の非天然アミノ酸とを：求電子剤−求核剤反応、求核剤とケトンの反応、オキシム連結反応、求核剤とアルデヒドの反応、カルボニル基と求核剤との間の反応、スルホニル基と求核剤との間の反応、エステル化反応、立体障害エステル基と求核剤との間の反応、チオエステル基と求核剤との間の反応、安定イミン基と求核剤との間の反応、エポキシド基と求核剤との間の反応、アジリジン基と求核剤との間の反応、求電子剤と脂肪族若しくは芳香族アミンとの間の反応、求電子剤とヒドラジドとの間の反応、求電子剤とカルボヒドラジドとの間の反応、求電子剤とセミカルバジドとの間の反応、求電子剤とチオセミカルバジドとの間の反応、求電子剤とカルボニルヒドラジドとの間の反応、求電子剤とチオカルボニルヒドラジドとの間の反応、求電子剤とスルホニルヒドラジドとの間の反応、求電子剤とカルバジドとの間の反応、求電子剤とチオカルバジドとの間の反応、求電子剤とヒドロキシルアミンとの間の反応、ヒドロキシル若しくはジオールのような一つ若しくは複数の求核剤とボロン酸若しくはエステルとの間の反応、遷移金属触媒反応、パラジウム触媒反応、銅触媒ヘテロ原子アルキル化反応、付加環化反応、１，３付加環化反応、２，３付加環化反応、アルキン−アジド反応、ディールズアルダー反応、又はスズキカップリング反応のうちの１つ又はそれ以上を介して反応させる、請求項１に記載の方法。
【請求項２４】
反応が、５０％より高い効率、７０％より高い効率、又は９０％より高い効率である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
請求項１に記載の方法により製造される、キャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体。
【請求項２６】
キャリアポリペプチドは少なくとも第一の非天然アミノ酸を含むＨＳＡ変異体であり、そして標的ポリペプチドは第二の非天然アミノ酸を含むＴＳＰ−１変異体である、請求項２５に記載のキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体。
【請求項２７】
キャリアポリペプチドは少なくとも第一の非天然アミノ酸を含むＨＳＡ変異体であり、そして標的ポリペプチドは第二の非天然アミノ酸を含むＡＢＴ−５１０変異体である、請求項２５に記載のキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体。
【請求項２８】
第一の非天然アミノ酸がｐ−アセチルフェニルアラニンである、請求項２６又は２７に記載のキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体。
【請求項２９】
第一のアミノ酸がＨＳＡ変異体中のアミノ酸位置３７において組み入れられ、ここでアミノ酸位置の番号は配列番号１のそれに対してである、請求項２８に記載のキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体。
【請求項３０】
第一のアミノ酸が翻訳の間にＨＳＡ変異体中に組み入れられる、請求項２９に記載のキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体。
【請求項３１】
第二のアミノ酸がε−（２−（アミノオキシ）アセチル）−Ｌ−リジンである、請求項２６又は２７に記載のキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体。
【請求項３２】
ε−（２−（アミノオキシ）アセチル）−Ｌ−リジンがＴＳＰ−１変異体中にアミノ酸位置６において組み入れられ、ここでアミノ酸位置の番号は配列番号２のそれに対してである、請求項３１に記載のキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体。
【請求項３３】
ε−（２−（アミノオキシ）アセチル）−Ｌ−リジンがＴＳＰ−１変異体中にアミノ酸位置１において組み入れられ、ここでアミノ酸位置の番号は配列番号２のそれに対してである、請求項３１に記載のキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体。
【請求項３４】
第二の非天然アミノ酸が合成の間にＴＳＰ−１変異体中に組み入れられる、請求項３２又は３３に記載のキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体。
【請求項３５】
ε−（２−（アミノオキシ）アセチル）−Ｌ−リジンがＡＢＴ−５１０変異体中にアミノ酸位置６において組み入れられ、ここでアミノ酸位置の番号は配列番号３のそれに対してである、請求項３１に記載のキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体。
【請求項３６】
ε−（２−（アミノオキシ）アセチル）−Ｌ−リジンがＡＢＴ−５１０変異体中にアミノ酸位置１において組み入れられ、ここでアミノ酸位置の番号は配列番号３のそれに対してである、請求項３１に記載のキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体。
【請求項３７】
第二の非天然アミノ酸が合成の間にＴＳＰ−１変異体中に組み入れられる、請求項３５又は３６に記載のキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体。
【請求項３８】
キャリアポリペプチドは、ｐ−アセチルフェニルアラニンをアミノ酸位置３７に含むＨＳＡ変異体であり、標的ポリペプチドは、ε−（２−（アミノオキシ）アセチル）−Ｌ−リジンをアミノ酸位置６に含むＴＳＰ−１変異体であり、そしてキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体は、ｐ−アセチルフェニルアラニンとε−（２−（アミノオキシ）アセチル）−Ｌ−リジンとをオキシム連結反応を介して反応させることにより生成される、請求項２６に記載のキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体。
【請求項３９】
キャリアポリペプチドは、ｐ−アセチルフェニルアラニンをアミノ酸位置３７に含むＨＳＡ変異体であり、標的ポリペプチドは、ε−（２−（アミノオキシ）アセチル）−Ｌ−リジンをアミノ酸位置６に含むＡＢＴ−５１０変異体であり、そしてキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体は、ｐ−アセチルフェニルアラニン及びε−（２−（アミノオキシ）アセチル）−Ｌ−リジンをオキシム連結反応を介して反応させることにより生成される、請求項２６に記載のキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体。
【請求項４０】
キャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体が、標的ポリペプチドより長い血清半減期を有する、請求項２５に記載のキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体。
【請求項４１】
第一の非天然アミノ酸残基を含むキャリアポリペプチドドメイン；及び
第二の非天然アミノ酸残基を含む標的ポリペプチドドメイン、
を含むキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体であって、
ここでキャリアポリペプチドドメイン及び標的ポリペプチドドメインは、第一の非天然アミノ酸残基及び第二の非天然アミノ酸残基を通して一緒に接合される、キャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体。
【請求項４２】
キャリアポリペプチドドメインが、抗体、抗体フラグメント、アルブミン、血清アルブミン、ウシ血清アルブミン、オボアルブミン、ｃ反応性タンパク質、コンアルブミン、ラクトアルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、イオンキャリアタンパク質、アシルキャリアタンパク質、シグナル伝達アダプタータンパク質、アンドロゲン結合タンパク質、カルシウム結合タンパク質、カルモジュリン結合タンパク質、セルロプラスミン、コレステロールエステル輸送タンパク質、ｆボックスタンパク質、脂肪酸結合タンパク質、フォリスタチン、フォリスタチン関連タンパク質、ＧＴＰ結合タンパク質、インスリン様増殖因子結合タンパク質、鉄結合タンパク質、潜在型ＴＧＦベータ結合タンパク質、集光性タンパク質複合体、リンパ球抗原、膜輸送タンパク質、ニューロフィジン、周辺質結合タンパク質、リン酸結合タンパク質、ホスファチジルエタノールアミン結合タンパク質、リン脂質輸送タンパク質、レチノール結合タンパク質、ＲＮＡ結合タンパク質、ｓ期キナーゼ関連タンパク質、性ホルモン結合グロブリン、チロキシン結合タンパク質、トランスコバラミン、トランスコルチン、トランスフェリン結合タンパク質、又はビタミンＤ結合タンパク質を含む、請求項４１に記載のキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体。
【請求項４３】
標的ポリペプチドドメインが：ＴＳＰ−１、ＡＢＴ−５１０、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、リボソーム不活性化タンパク質（ＲＩＰ）、アンジオスタチン、エキセンディン−４、アポタンパク質、心房性ナトリウム利尿因子、心房性ナトリウム利尿ポリペプチド、心房性ペプチド、Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン、Ｔ３９７６５、ＮＡＰ−２、ＥＮＡ−７８、ｇｒｏ−ａ、ｇｒｏ−ｂ、ｇｒｏ−ｃ、ＩＰ−１０、ＧＣＰ−２、ＮＡＰ−４、ＰＦ４、ＭＩＧ、カルシトニン、ｃ−ｋｉｔリガンド、サイトカイン、ＣＣケモカイン、単球走化性タンパク質−１、単球走化性タンパク質−２、単球走化性タンパク質−３、単球炎症性タンパク質−１アルファ、単球炎症性タンパク質−１ベータ、ＲＡＮＴＥＳ、Ｉ３０９、Ｒ８３９１５、Ｒ９１７３３、Ｔ５８８４７、Ｄ３１０６５、Ｔ６４２６２、ＣＤ４０リガンド、補体阻害剤、サイトカイン、上皮好中球活性化ペプチド−７８、ＧＲＯΥ、ＭＧＳＡ、ＧＲＯβ、ＧＲＯγ、ＭＩＰ１−α、ＭＩＰ１−β、ＭＣＰ−１、上皮好中球活性化ペプチド、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、表皮剥脱毒素、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、ＦＧＦ２１、Ｇ−ＣＳＦ、ゴナドトロピン、増殖因子、ヒルジン、ＬＦＡ−１、ヒトインスリン、ヒトインスリン様増殖因子（ｈＩＧＦ）、ｈＩＧＦ−Ｉ、ｈＩＧＦ−ＩＩ、ヒトインターフェロン、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ、インターロイキン、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ケラチノサイト増殖因子（ＫＧＦ）、白血病抑制因子、ニュールツリン、ＰＤＧＦ、ペプチドホルモン、プレイオトロフィン、発熱性外毒素Ａ、発熱性外毒素Ｂ、発熱性外毒素Ｃ、レラキシン、ソマトスタチン、スーパーオキシドジムスターゼ、チモシンアルファ１、ヒト腫瘍壊死因子（ｈＴＮＦ）、ヒト腫瘍壊死因子アルファ、ヒト腫瘍壊死因子ベータ、Ｒａｓ、Ｔａｔ、炎症性分子、シグナル伝達分子、ウシ膵臓トリプシン阻害剤（ＢＰＴＩ）、又はＢＰ３２０抗原のうち１つ又はそれ以上を含む、請求項４１に記載のキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体。
【請求項４４】
キャリアポリペプチドドメインはＨＳＡを含み、第一の非天然アミノ酸残基はｐ−アセチルフェニルアラニンであり、標的ポリペプチドドメインはＴＳＰ−１を含み、そして第二の非天然アミノ酸残基はε−（２−（アミノオキシ）アセチル）−Ｌ−リジンである、請求項４１に記載のキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体。
【請求項４５】
キャリアポリペプチドドメインはＨＳＡを含み、第一の非天然アミノ酸残基はｐ−アセチルフェニルアラニンであり、標的ポリペプチドドメインはＡＢＴ−５１０を含み、そして第二の非天然アミノ酸残基はε−（２−（アミノオキシ）アセチル）−Ｌ−リジンである、請求項４１に記載のキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体。
【請求項４６】
第一の非天然アミノ酸及び第二の非天然アミノ酸が：求電子剤−求核剤反応、求核剤とケトンの反応、オキシム連結反応、求核剤とアルデヒドの反応、カルボニル基と求核剤との間の反応、スルホニル基と求核剤との間の反応、エステル化反応、立体障害エステル基と求核剤との間の反応、チオエステル基と求核剤との間の反応、安定イミン基と求核剤との間の反応、エポキシド基と求核剤との間の反応、アジリジン基と求核剤との間の反応、求電子剤と脂肪族若しくは芳香族アミンとの間の反応、求電子剤とヒドラジドとの間の反応、求電子剤とカルボヒドラジドとの間の反応、求電子剤とセミカルバジドとの間の反応、求電子剤とチオセミカルバジドとの間の反応、求電子剤とカルボニルヒドラジドとの間の反応、求電子剤とチオカルボニルヒドラジドとの間の反応、求電子剤とスルホニルヒドラジドとの間の反応、求電子剤とカルバジドとの間の反応、求電子剤とチオカルバジドとの間の反応、求電子剤とヒドロキシルアミンとの間の反応、ヒドロキシル若しくはジオールのような一つ若しくは複数の求核剤とボロン酸若しくはエステルとの間の反応、遷移金属触媒反応、パラジウム触媒反応、銅触媒ヘテロ原子アルキル化反応、付加環化反応、１，３付加環化反応、２，３付加環化反応、アルキン−アジド反応、ディールズアルダー反応、又はスズキカップリング反応のうち１つ又はそれ以上により共有結合でカップリングされる、請求項４１に記載のキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体。
【請求項４７】
請求項３１に記載のキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体を含む細胞。
【請求項４８】
キャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体のキャリアポリペプチドドメインが、第一の非天然アミノ酸を含むＨＳＡ変異体を含む、請求項４７に記載の細胞。
【請求項４９】
第一の非天然アミノ酸がｐ−アセチルフェニルアラニンである、請求項４８に記載の細胞。
【請求項５０】
キャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体の標的ポリペプチドドメインが、第二の非天然アミノ酸を含むＴＳＰ−１変異体を含む、請求項４７に記載の細胞。
【請求項５１】
キャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体の標的ポリペプチドドメインが、第二の非天然アミノ酸を含むＡＢＴ−５１０変異体を含む、請求項４７に記載の細胞。
【請求項５２】
第二の非天然アミノ酸がε−（２−（アミノオキシ）アセチル）−Ｌ−リジンである、請求項５０又は５１に記載の細胞。
【請求項１】
共有結合でカップリングされたキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体を製造する方法であって、
キャリアポリペプチドの合成又は翻訳の間に第一の非天然アミノ酸残基をキャリアポリペプチド中に組み入れること；
標的ポリペプチドの合成又は翻訳の間に第二の非天然アミノ酸残基を標的ポリペプチド中に組み入れること；及び
第一の非天然アミノ酸残基と第二の非天然アミノ酸残基とを反応させて、共有結合でカップリングしたキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体を生成させること、
を含む、上記方法。
【請求項２】
第一の非天然アミノ酸を翻訳の間にキャリアポリペプチド中に組み入れることが：
（ａ）（ｉ）第一の非天然アミノ酸、
（ｉｉ）直交性ｔＲＮＡ−合成酵素（Ｏ−ＲＳ）、
（ｉｉｉ）Ｏ−ＲＳにより第一の非天然アミノ酸で特異的にアミノアシル化される直交性ｔＲＮＡ（Ｏ−ｔＲＮＡ）、及び
（ｉｖ） キャリアペプチドをコードする核酸［ここで該核酸はＯ−ｔＲＮＡにより認識されるセレクターコドンを含む］
を含む翻訳系を備えること；ならびに
（ｂ）核酸を翻訳し、それにより翻訳の間に第一の非天然アミノ酸をキャリアポリペプチド中に組み入れること
を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
キャリポリペプチド又は標的ポリペプチドがメチロトローフ酵母細胞において産生される、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
キャリアポリペプチド又は標的ポリペプチドが、カンジダ属細胞、ハンゼヌラ属細胞、ピキア属細胞、又はトルロプシス属細胞において産生される、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
キャリアポリペプチドがヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）に対して相同である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
キャリアポリペプチドが、抗体、ＨＥＲ２抗体、及びＯＫＴ３抗体、抗体フラグメント、Ｆａｂ、Ｆｃ、ｓｃＦｖ、アルブミン、血清アルブミン、ウシ血清アルブミン、オボアルブミン、ｃ反応性タンパク質、コンアルブミン、ラクトアルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、イオンキャリアタンパク質、アシルキャリアタンパク質、シグナル伝達アダプタータンパク質、アンドロゲン結合タンパク質、カルシウム結合タンパク質、カルモジュリン結合タンパク質、セルロプラスミン、コレステロールエステル輸送タンパク質、ｆボックスタンパク質、脂肪酸結合タンパク質、フォリスタチン、フォリスタチン関連タンパク質、ＧＴＰ結合タンパク質、インスリン様増殖因子結合タンパク質、鉄結合タンパク質、潜在型ＴＧＦベータ結合タンパク質、集光性タンパク質複合体、リンパ球抗原、膜輸送タンパク質、ニューロフィジン、周辺質結合タンパク質、リン酸結合タンパク質、ホスファチジルエタノールアミン結合タンパク質、リン脂質輸送タンパク質、レチノール結合タンパク質、ＲＮＡ結合タンパク質、ｓ期キナーゼ関連タンパク質、性ホルモン結合グロブリン、チロキシン結合タンパク質、トランスコバラミン、トランスコルチン、トランスフェリン結合タンパク質、又はビタミンＤ結合タンパク質であるか、又はこれらに対して相同である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
標的ポリペプチドが、ＴＳＰ−１、ＡＢＴ−５１０、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、リボソーム不活性化タンパク質（ＲＩＰ）、アンジオスタチン、エキセンディン−４、アポタンパク質、心房性ナトリウム利尿因子、心房性ナトリウム利尿ポリペプチド、心房性ペプチド、Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン、Ｔ３９７６５、ＮＡＰ−２、ＥＮＡ−７８、ｇｒｏ−ａ、ｇｒｏ−ｂ、ｇｒｏ−ｃ、ＩＰ−１０、ＧＣＰ−２、ＮＡＰ−４、ＰＦ４、ＭＩＧ、カルシトニン、ｃ−ｋｉｔリガンド、サイトカイン、ＣＣケモカイン、単球走化性タンパク質−１、単球走化性タンパク質−２、単球走化性タンパク質−３、単球炎症性タンパク質−１アルファ、単球炎症性タンパク質−１ベータ、ＲＡＮＴＥＳ、Ｉ３０９、Ｒ８３９１５、Ｒ９１７３３、Ｔ５８８４７、Ｄ３１０６５、Ｔ６４２６２、ＣＤ４０リガンド、補体阻害剤、サイトカイン、上皮好中球活性化ペプチド−７８、ＧＲＯΥ、ＭＧＳＡ、ＧＲＯβ、ＧＲＯγ、ＭＩＰ１−α、ＭＩＰ１−β、ＭＣＰ−１、上皮好中球活性化ペプチド、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、表皮剥脱毒素、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、ＦＧＦ２１、Ｇ−ＣＳＦ、ゴナドトロピン、増殖因子、ヒルジン、ＬＦＡ−１、ヒトインスリン、ヒトインスリン様増殖因子（ｈＩＧＦ）、ｈＩＧＦ−Ｉ、ｈＩＧＦ−ＩＩ、ヒトインターフェロン、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ、インターロイキン、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ケラチノサイト増殖因子（ＫＧＦ）、白血病抑制因子、ニュールツリン、ＰＤＧＦ、ペプチドホルモン、プレイオトロフィン、発熱性外毒素Ａ、発熱性外毒素Ｂ、発熱性外毒素Ｃ、レラキシン、ソマトスタチン、スーパーオキシドジムスターゼ、チモシンアルファ１、ヒト腫瘍壊死因子（ｈＴＮＦ）、ヒト腫瘍壊死因子アルファ、ヒト腫瘍壊死因子ベータ、Ｒａｓ、Ｔａｔ、炎症性分子、シグナル伝達分子、ウシ膵臓トリプシン阻害剤（ＢＰＴＩ）、又はＢＰ３２０抗原であるか、又はこれらに対して相同である、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
第一の非天然アミノ酸をキャリアポリペプチド中に組み入れることにより、第一の非天然アミノ酸を含むＨＳＡ変異体が生じる、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
第一の非天然アミノ酸がｐ−アセチルフェニルアラニンである、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
第一の非天然アミノ酸が、ＨＳＡ変異体にアミノ酸位置３７において組み入れられ、ここでアミノ酸位置の番号は配列番号１のものに対してである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
第一の非天然アミノ酸が、翻訳の間にＨＳＡ変異体中に組み入れられる、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
第二の非天然アミノ酸を標的ポリペプチド中に組み入れることにより、第二の非天然アミノ酸を含むＴＳＰ−１変異体が生じる、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
第二の非天然アミノ酸を標的ポリペプチド中に組み入れることにより、第二の非天然アミノ酸を含むＡＢＴ−５１０変異体が生じる、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
第二のアミノ酸がε−（２−（アミノオキシ）アセチル）−Ｌ−リジンである、請求項１２又は１３に記載の方法。
【請求項１５】
ε−（２−（アミノオキシ）アセチル）−Ｌ−リジンが、ＴＳＰ−１変異体中にアミノ酸位置６において組み入れられ、ここでアミノ酸位置の番号は配列番号２のそれに対してである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
ε−（２−（アミノオキシ）アセチル）−Ｌ−リジンがＴＳＰ−１変異体中にアミノ酸位置１において組み入れられ、ここでアミノ酸位置の番号は配列番号２のアミノ酸位置のそれに対してである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
ε−（２−（アミノオキシ）アセチル）−Ｌ−リジンがＴＳＰ−１変異体中に合成の間に組み入れられる、請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】
ε−（２−（アミノオキシ）アセチル）−Ｌ−リジンがＡＢＴ−５１０変異体中にアミノ酸位置６において組み入れられ、ここでアミノ酸位置の番号は配列番号３のアミノ酸位置のそれに対してである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１９】
ε−（２−（アミノオキシ）アセチル）−Ｌ−リジンがＡＢＴ−５１０変異体中にアミノ酸位置１において組み入れられ、ここでアミノ酸位置の番号は配列番号３のアミノ酸位置のそれに対してである、請求項１４に記載の方法。
【請求項２０】
ε−（２−（アミノオキシ）アセチル）−Ｌ−リジンが、合成の間にＡＢＴ−５１０変異体中に組み入れられる、請求項１４に記載の方法。
【請求項２１】
キャリアポリペプチドがＨＳＡ変異体であり、ここで第一の非天然アミノ酸はｐ−アセチルフェニルアラニンであり、ｐ−アセチルフェニルアラニンはＨＳＡ変異体中にアミノ酸位置３７において翻訳の間に組み入れられ、ここでＨＳＡ変異体におけるアミノ酸位置の番号は配列番号１に対してであり、標的ポリペプチドはＴＳＰ−１変異体であり、ここで第二の非天然アミノ酸はε−（２−（アミノオキシ）アセチル）−Ｌ−リジンであり、ε−（２−（アミノオキシ）アセチル）−Ｌ−リジンはＴＳＰ−１変異体中にアミノ酸位置６において合成の間に組み入れられ、ここでＴＳＰ−１変異体におけるアミノ酸位置の番号は配列番号２に対してであり、そしてここでｐ−アセチルフェニルアラニン及びε−（２−（アミノオキシ）アセチル）−Ｌ−リジンをオキシム連結反応を介して反応させてＨＳＡ−ＴＳＰ−１接合体を生成させる、請求項１に記載の方法。
【請求項２２】
キャリアポリペプチドがＨＳＡ変異体であり、ここで第一の非天然アミノ酸はｐ−アセチルフェニルアラニンであり、ｐ−アセチルフェニルアラニンは翻訳の間にアミノ酸位置３７においてＨＳＡ変異体中に組み入れられ、ここでＨＳＡ変異体におけるアミノ酸位置の番号は配列番号１に対してであり、標的ポリペプチドはＡＢＴ−５１０変異体であり、第二の非天然アミノ酸はε−（２−（アミノオキシ）アセチル）−Ｌ−リジンであり、ε−（２−（アミノオキシ）アセチル）−Ｌ−リジンは合成の間にＡＢＴ−５１０変異体中にアミノ酸位置６において組み入れられ、ここでＡＢＴ−５１０変異体におけるアミノ酸位置の番号は配列番号３に対してであり、そしてｐ−アセチルフェニルアラニン及びε−（２−（アミノオキシ）アセチル）−Ｌ−リジンをオキシム連結反応を介して反応させてＨＳＡ−ＡＢＴ−５１０接合体を生成させる、請求項１に記載の方法。
【請求項２３】
第一の非天然アミノ酸と第二の非天然アミノ酸とを：求電子剤−求核剤反応、求核剤とケトンの反応、オキシム連結反応、求核剤とアルデヒドの反応、カルボニル基と求核剤との間の反応、スルホニル基と求核剤との間の反応、エステル化反応、立体障害エステル基と求核剤との間の反応、チオエステル基と求核剤との間の反応、安定イミン基と求核剤との間の反応、エポキシド基と求核剤との間の反応、アジリジン基と求核剤との間の反応、求電子剤と脂肪族若しくは芳香族アミンとの間の反応、求電子剤とヒドラジドとの間の反応、求電子剤とカルボヒドラジドとの間の反応、求電子剤とセミカルバジドとの間の反応、求電子剤とチオセミカルバジドとの間の反応、求電子剤とカルボニルヒドラジドとの間の反応、求電子剤とチオカルボニルヒドラジドとの間の反応、求電子剤とスルホニルヒドラジドとの間の反応、求電子剤とカルバジドとの間の反応、求電子剤とチオカルバジドとの間の反応、求電子剤とヒドロキシルアミンとの間の反応、ヒドロキシル若しくはジオールのような一つ若しくは複数の求核剤とボロン酸若しくはエステルとの間の反応、遷移金属触媒反応、パラジウム触媒反応、銅触媒ヘテロ原子アルキル化反応、付加環化反応、１，３付加環化反応、２，３付加環化反応、アルキン−アジド反応、ディールズアルダー反応、又はスズキカップリング反応のうちの１つ又はそれ以上を介して反応させる、請求項１に記載の方法。
【請求項２４】
反応が、５０％より高い効率、７０％より高い効率、又は９０％より高い効率である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
請求項１に記載の方法により製造される、キャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体。
【請求項２６】
キャリアポリペプチドは少なくとも第一の非天然アミノ酸を含むＨＳＡ変異体であり、そして標的ポリペプチドは第二の非天然アミノ酸を含むＴＳＰ−１変異体である、請求項２５に記載のキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体。
【請求項２７】
キャリアポリペプチドは少なくとも第一の非天然アミノ酸を含むＨＳＡ変異体であり、そして標的ポリペプチドは第二の非天然アミノ酸を含むＡＢＴ−５１０変異体である、請求項２５に記載のキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体。
【請求項２８】
第一の非天然アミノ酸がｐ−アセチルフェニルアラニンである、請求項２６又は２７に記載のキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体。
【請求項２９】
第一のアミノ酸がＨＳＡ変異体中のアミノ酸位置３７において組み入れられ、ここでアミノ酸位置の番号は配列番号１のそれに対してである、請求項２８に記載のキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体。
【請求項３０】
第一のアミノ酸が翻訳の間にＨＳＡ変異体中に組み入れられる、請求項２９に記載のキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体。
【請求項３１】
第二のアミノ酸がε−（２−（アミノオキシ）アセチル）−Ｌ−リジンである、請求項２６又は２７に記載のキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体。
【請求項３２】
ε−（２−（アミノオキシ）アセチル）−Ｌ−リジンがＴＳＰ−１変異体中にアミノ酸位置６において組み入れられ、ここでアミノ酸位置の番号は配列番号２のそれに対してである、請求項３１に記載のキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体。
【請求項３３】
ε−（２−（アミノオキシ）アセチル）−Ｌ−リジンがＴＳＰ−１変異体中にアミノ酸位置１において組み入れられ、ここでアミノ酸位置の番号は配列番号２のそれに対してである、請求項３１に記載のキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体。
【請求項３４】
第二の非天然アミノ酸が合成の間にＴＳＰ−１変異体中に組み入れられる、請求項３２又は３３に記載のキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体。
【請求項３５】
ε−（２−（アミノオキシ）アセチル）−Ｌ−リジンがＡＢＴ−５１０変異体中にアミノ酸位置６において組み入れられ、ここでアミノ酸位置の番号は配列番号３のそれに対してである、請求項３１に記載のキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体。
【請求項３６】
ε−（２−（アミノオキシ）アセチル）−Ｌ−リジンがＡＢＴ−５１０変異体中にアミノ酸位置１において組み入れられ、ここでアミノ酸位置の番号は配列番号３のそれに対してである、請求項３１に記載のキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体。
【請求項３７】
第二の非天然アミノ酸が合成の間にＴＳＰ−１変異体中に組み入れられる、請求項３５又は３６に記載のキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体。
【請求項３８】
キャリアポリペプチドは、ｐ−アセチルフェニルアラニンをアミノ酸位置３７に含むＨＳＡ変異体であり、標的ポリペプチドは、ε−（２−（アミノオキシ）アセチル）−Ｌ−リジンをアミノ酸位置６に含むＴＳＰ−１変異体であり、そしてキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体は、ｐ−アセチルフェニルアラニンとε−（２−（アミノオキシ）アセチル）−Ｌ−リジンとをオキシム連結反応を介して反応させることにより生成される、請求項２６に記載のキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体。
【請求項３９】
キャリアポリペプチドは、ｐ−アセチルフェニルアラニンをアミノ酸位置３７に含むＨＳＡ変異体であり、標的ポリペプチドは、ε−（２−（アミノオキシ）アセチル）−Ｌ−リジンをアミノ酸位置６に含むＡＢＴ−５１０変異体であり、そしてキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体は、ｐ−アセチルフェニルアラニン及びε−（２−（アミノオキシ）アセチル）−Ｌ−リジンをオキシム連結反応を介して反応させることにより生成される、請求項２６に記載のキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体。
【請求項４０】
キャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体が、標的ポリペプチドより長い血清半減期を有する、請求項２５に記載のキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体。
【請求項４１】
第一の非天然アミノ酸残基を含むキャリアポリペプチドドメイン；及び
第二の非天然アミノ酸残基を含む標的ポリペプチドドメイン、
を含むキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体であって、
ここでキャリアポリペプチドドメイン及び標的ポリペプチドドメインは、第一の非天然アミノ酸残基及び第二の非天然アミノ酸残基を通して一緒に接合される、キャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体。
【請求項４２】
キャリアポリペプチドドメインが、抗体、抗体フラグメント、アルブミン、血清アルブミン、ウシ血清アルブミン、オボアルブミン、ｃ反応性タンパク質、コンアルブミン、ラクトアルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、イオンキャリアタンパク質、アシルキャリアタンパク質、シグナル伝達アダプタータンパク質、アンドロゲン結合タンパク質、カルシウム結合タンパク質、カルモジュリン結合タンパク質、セルロプラスミン、コレステロールエステル輸送タンパク質、ｆボックスタンパク質、脂肪酸結合タンパク質、フォリスタチン、フォリスタチン関連タンパク質、ＧＴＰ結合タンパク質、インスリン様増殖因子結合タンパク質、鉄結合タンパク質、潜在型ＴＧＦベータ結合タンパク質、集光性タンパク質複合体、リンパ球抗原、膜輸送タンパク質、ニューロフィジン、周辺質結合タンパク質、リン酸結合タンパク質、ホスファチジルエタノールアミン結合タンパク質、リン脂質輸送タンパク質、レチノール結合タンパク質、ＲＮＡ結合タンパク質、ｓ期キナーゼ関連タンパク質、性ホルモン結合グロブリン、チロキシン結合タンパク質、トランスコバラミン、トランスコルチン、トランスフェリン結合タンパク質、又はビタミンＤ結合タンパク質を含む、請求項４１に記載のキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体。
【請求項４３】
標的ポリペプチドドメインが：ＴＳＰ−１、ＡＢＴ−５１０、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）、副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、リボソーム不活性化タンパク質（ＲＩＰ）、アンジオスタチン、エキセンディン−４、アポタンパク質、心房性ナトリウム利尿因子、心房性ナトリウム利尿ポリペプチド、心房性ペプチド、Ｃ−Ｘ−Ｃケモカイン、Ｔ３９７６５、ＮＡＰ−２、ＥＮＡ−７８、ｇｒｏ−ａ、ｇｒｏ−ｂ、ｇｒｏ−ｃ、ＩＰ−１０、ＧＣＰ−２、ＮＡＰ−４、ＰＦ４、ＭＩＧ、カルシトニン、ｃ−ｋｉｔリガンド、サイトカイン、ＣＣケモカイン、単球走化性タンパク質−１、単球走化性タンパク質−２、単球走化性タンパク質−３、単球炎症性タンパク質−１アルファ、単球炎症性タンパク質−１ベータ、ＲＡＮＴＥＳ、Ｉ３０９、Ｒ８３９１５、Ｒ９１７３３、Ｔ５８８４７、Ｄ３１０６５、Ｔ６４２６２、ＣＤ４０リガンド、補体阻害剤、サイトカイン、上皮好中球活性化ペプチド−７８、ＧＲＯΥ、ＭＧＳＡ、ＧＲＯβ、ＧＲＯγ、ＭＩＰ１−α、ＭＩＰ１−β、ＭＣＰ−１、上皮好中球活性化ペプチド、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、表皮剥脱毒素、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、ＦＧＦ２１、Ｇ−ＣＳＦ、ゴナドトロピン、増殖因子、ヒルジン、ＬＦＡ−１、ヒトインスリン、ヒトインスリン様増殖因子（ｈＩＧＦ）、ｈＩＧＦ−Ｉ、ｈＩＧＦ−ＩＩ、ヒトインターフェロン、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ、インターロイキン、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ケラチノサイト増殖因子（ＫＧＦ）、白血病抑制因子、ニュールツリン、ＰＤＧＦ、ペプチドホルモン、プレイオトロフィン、発熱性外毒素Ａ、発熱性外毒素Ｂ、発熱性外毒素Ｃ、レラキシン、ソマトスタチン、スーパーオキシドジムスターゼ、チモシンアルファ１、ヒト腫瘍壊死因子（ｈＴＮＦ）、ヒト腫瘍壊死因子アルファ、ヒト腫瘍壊死因子ベータ、Ｒａｓ、Ｔａｔ、炎症性分子、シグナル伝達分子、ウシ膵臓トリプシン阻害剤（ＢＰＴＩ）、又はＢＰ３２０抗原のうち１つ又はそれ以上を含む、請求項４１に記載のキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体。
【請求項４４】
キャリアポリペプチドドメインはＨＳＡを含み、第一の非天然アミノ酸残基はｐ−アセチルフェニルアラニンであり、標的ポリペプチドドメインはＴＳＰ−１を含み、そして第二の非天然アミノ酸残基はε−（２−（アミノオキシ）アセチル）−Ｌ−リジンである、請求項４１に記載のキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体。
【請求項４５】
キャリアポリペプチドドメインはＨＳＡを含み、第一の非天然アミノ酸残基はｐ−アセチルフェニルアラニンであり、標的ポリペプチドドメインはＡＢＴ−５１０を含み、そして第二の非天然アミノ酸残基はε−（２−（アミノオキシ）アセチル）−Ｌ−リジンである、請求項４１に記載のキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体。
【請求項４６】
第一の非天然アミノ酸及び第二の非天然アミノ酸が：求電子剤−求核剤反応、求核剤とケトンの反応、オキシム連結反応、求核剤とアルデヒドの反応、カルボニル基と求核剤との間の反応、スルホニル基と求核剤との間の反応、エステル化反応、立体障害エステル基と求核剤との間の反応、チオエステル基と求核剤との間の反応、安定イミン基と求核剤との間の反応、エポキシド基と求核剤との間の反応、アジリジン基と求核剤との間の反応、求電子剤と脂肪族若しくは芳香族アミンとの間の反応、求電子剤とヒドラジドとの間の反応、求電子剤とカルボヒドラジドとの間の反応、求電子剤とセミカルバジドとの間の反応、求電子剤とチオセミカルバジドとの間の反応、求電子剤とカルボニルヒドラジドとの間の反応、求電子剤とチオカルボニルヒドラジドとの間の反応、求電子剤とスルホニルヒドラジドとの間の反応、求電子剤とカルバジドとの間の反応、求電子剤とチオカルバジドとの間の反応、求電子剤とヒドロキシルアミンとの間の反応、ヒドロキシル若しくはジオールのような一つ若しくは複数の求核剤とボロン酸若しくはエステルとの間の反応、遷移金属触媒反応、パラジウム触媒反応、銅触媒ヘテロ原子アルキル化反応、付加環化反応、１，３付加環化反応、２，３付加環化反応、アルキン−アジド反応、ディールズアルダー反応、又はスズキカップリング反応のうち１つ又はそれ以上により共有結合でカップリングされる、請求項４１に記載のキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体。
【請求項４７】
請求項３１に記載のキャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体を含む細胞。
【請求項４８】
キャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体のキャリアポリペプチドドメインが、第一の非天然アミノ酸を含むＨＳＡ変異体を含む、請求項４７に記載の細胞。
【請求項４９】
第一の非天然アミノ酸がｐ−アセチルフェニルアラニンである、請求項４８に記載の細胞。
【請求項５０】
キャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体の標的ポリペプチドドメインが、第二の非天然アミノ酸を含むＴＳＰ−１変異体を含む、請求項４７に記載の細胞。
【請求項５１】
キャリアポリペプチド−標的ポリペプチド接合体の標的ポリペプチドドメインが、第二の非天然アミノ酸を含むＡＢＴ−５１０変異体を含む、請求項４７に記載の細胞。
【請求項５２】
第二の非天然アミノ酸がε−（２−（アミノオキシ）アセチル）−Ｌ−リジンである、請求項５０又は５１に記載の細胞。
【図１】
【図２−１】
【図２−２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図２−１】
【図２−２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【公表番号】特表２０１２−５１１３２６（Ｐ２０１２−５１１３２６Ａ）
【公表日】平成２４年５月２４日（２０１２．５．２４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５４０７０３（Ｐ２０１１−５４０７０３）
【出願日】平成２１年１２月９日（２００９．１２．９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００９／００６５００
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０６８２７８
【国際公開日】平成２２年６月１７日（２０１０．６．１７）
【出願人】（３９９０３８６２０）ザ スクリプス リサーチ インスティチュート (51)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２４年５月２４日（２０１２．５．２４）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年１２月９日（２００９．１２．９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００９／００６５００
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０６８２７８
【国際公開日】平成２２年６月１７日（２０１０．６．１７）
【出願人】（３９９０３８６２０）ザ スクリプス リサーチ インスティチュート (51)
【Ｆターム（参考）】
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