反応性蛍光標識試薬としての水溶性フルオロ置換シアニン色素
生体物質及び他の物質の標識及び検知に有用なシアニン色素を開示する。この色素は、式（Ｉ）
【化１】
であり、式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基の１以上は、−Ｌ−Ｍ又は−Ｌ−Ｐ（式中、Ｌは連結基であり、Ｍは標的結合基であり、Ｐはコンジュゲート成分である）であり、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の１以上は、フッ素を含む。生体標的分子を標識するために、フッ素で置換され、且つ３以上のスルホン酸基でさらに置換されたシアニン色素の使用によって、このような置換されていないシアニン色素と比較して、色素−色素の凝集が減少し、光安定性が向上した標識生成物をもたらす。本発明の色素は、例えば、動態検査において、又は数日間に亘りマイクロアレイスライドの再分析が必要となり得るマイクロアレイ分析などの、連続又は繰り返しの励起が必要である蛍光検出を伴うアッセイにおいて特に有用である。
【化１】
であり、式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基の１以上は、−Ｌ−Ｍ又は−Ｌ−Ｐ（式中、Ｌは連結基であり、Ｍは標的結合基であり、Ｐはコンジュゲート成分である）であり、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の１以上は、フッ素を含む。生体標的分子を標識するために、フッ素で置換され、且つ３以上のスルホン酸基でさらに置換されたシアニン色素の使用によって、このような置換されていないシアニン色素と比較して、色素−色素の凝集が減少し、光安定性が向上した標識生成物をもたらす。本発明の色素は、例えば、動態検査において、又は数日間に亘りマイクロアレイスライドの再分析が必要となり得るマイクロアレイ分析などの、連続又は繰り返しの励起が必要である蛍光検出を伴うアッセイにおいて特に有用である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、蛍光標識試薬の分野、特に、フルオロ置換基を含有する反応性シアニン色素及びこのような色素を利用する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
シアニン色素は、タンパク質、核酸、ホルモン及び薬物などの生物学的に重要な分子の蛍光標識用の試薬に広範に使用されている。実際、シアニン色素は、他の蛍光色素に勝るいくつかの利点を提供する。例えば、シアニン色素の励起及び発光スペクトルは、４５０ｎｍ〜８００ｎｍの可視及び近赤外スペクトルに及ぶ。さらに、シアニン色素は、非常に高い消衰係数、有利な量子収率を有することを特徴とする。例えば、米国特許第６０４８９８２号、同第５２６８４８６号、同５５６９５８７号（Ｗａｇｇｏｎｅｒ，Ａ．Ｓ．ｅｔ ａｌ）を参照されたい。しかし、ある種のシアニン色素構造において、自己会合（又は凝集）し、蛍光消光及び吸光度において著しい浅色性の波長シフトが生じる傾向がある。
【０００３】
最近、Ｗａｇｇｏｎｅｒ ｅｔ ａｌ（Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔｅｒｓ，（２００４），６（６），９０９−９１２）は、水性溶媒中で良好な光安定性を有するポリフルオロ−チアジカルボシアニン色素（ｉ）について記載している。この色素は、非フッ素化類似体と比較した場合、凝集の減少、量子収量の向上及び光退色に対する抵抗性の向上を示した。
【０００４】
【化１】
反応性基又はコンジュゲート物質を導入するための、カルボシアニン色素のインドリニウム環の３位の１以上における修飾については、国際公開第０２／２６８９１号（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ Ｉｎｃ．）に記載されている。国際公開第０２／２６８９１号による修飾色素も、シアニン色素の自己会合する傾向を克服していると報告され、修飾色素で標識した色素コンジュゲートは、構造的に同様なカルボシアニン色素で標識したコンジュゲートより蛍光性であると報告されている。
【０００５】
特願平５−３１３３０４号（富士写真フイルム（株））には、複数のスルホネート基を含む色素が組み込まれ、式（ｉｉ）で表される銀塩感光材料が開示されている。
【０００６】
【化２】
式中、Ｒ１０及びＲ１１は、アルキルカルボキシレート又はアルキルスルホネート部分とすることができ、Ａとしては以下のものが挙げられる。
【０００７】
【化３】
特開昭６１−２４８７８９号（（株）リコー）には、式（ｉｉｉ）の化合物を含有する記録層を含めた光情報記録媒体が開示されている。
【０００８】
【化４】
式中、Ａは次式で表され、
【０００９】
【化５】
Ｙはハロゲン原子であり、ａは１〜４の整数であり、Ｒ１及びＲ２はＣ１〜Ｃ５アルキル基であり、Ｒ３はスルホニル基又はカルボキシル基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ１０アルキル基であり、Ｒ４は水素、ハロゲン、アミノ又はアルカノイルオキシであり、Ｚは４〜８員環の形成のために必要な原子団であり、ｍ及びｎは０〜３の整数（ｍ＋ｎ≦３）である。Ｍａｄｅｒ，Ｏ．ｅｔ ａｌ（Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．，（２００４），１５，７０−７８）は、芳香環位置においてスルホネート、フッ素及びメチルで置換された一連のペンタメチンインドシアニン色素の合成及び光物理的性質について記載している。
【特許文献１】米国特許第６０４８９８２号明細書
【特許文献２】米国特許第５２６８４８６号明細書
【特許文献３】米国特許５５６９５８７号明細書
【特許文献４】国際公開第０２／２６８９１号パンフレット
【特許文献５】特願平５−３１３３０４号公報
【特許文献６】特開昭６１−２４８７８９号公報
【非特許文献１】Waggoner et al, Org.Letters, (2004), 6(6), 909-912
【非特許文献２】Mader, O. et al, Bioconjugate Chem., (2004), 15, 70-78
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１０】
シアニン発色団のインドリニウムの１位及び／又は３位に結合した１以上のスルホン酸基と同様に、１以上、好ましくは複数のフルオロ置換基も含有する色素である、反応性シアニン色素及び物質にコンジュゲートするシアニン色素については、上記の文献のいずれも開示していない。本明細書に記載し特許請求する色素は、標的材料の直接の共有結合標識に適した１以上の基を備えることができる。本発明は、シアニン色素及びこのような色素とコンジュゲートする成分を提供するものであり、このシアニン色素は、光安定性の向上及び色素−色素相互作用の減少という特性を有する。従って、本発明の色素は、例えば、動態検査における連続した励起が必要である蛍光検出を伴うアッセイにおいて、又は数日間に亘りマイクロアレイスライドの再分析が必要となり得るマイクロアレイ分析において、特に有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
従って、第１の態様において式（Ｉ）の化合物が提供される。
【００１２】
【化６】
式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基は−Ｌ−Ｍ、−Ｌ−Ｐ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈ（式中、ｋは１〜１０の整数である）から独立に選択され、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基は水素、−Ｌ−Ｍ、−Ｌ−Ｐ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２−ＣＦ３及び−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは０又は１〜４の整数である）から独立に選択されるか、或いはＲ３とＲ４との組合せ又はＲ５とＲ６との組合せ及び／又はＲ７とＲ８との組合せ又はＲ９とＲ１０との組合せが炭素原子を含有する縮合芳香族六員環を形成していて、適宜−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２−ＣＦ３又は−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは上記で定義した通りである。）で１回以上置換されていてもよく、
Ｌは炭素、窒素、酸素及び硫黄原子からなる群から選択される１〜２０個の連結原子の鎖を有する連結基であり、
Ｍは標的結合基であり、
Ｐはコンジュゲート成分であり、
Ｒ１５基は水素であるか、或いは２以上のＲ１５基が結合して単環又は二環縮合炭化水素系（各環は５個又は６個の炭素原子を有し、残りのＲ１５基は水素である）を形成し、
ｎは１〜３の整数であるが、ただし
ｉ）Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基の１以上が−Ｌ−Ｍ又は−Ｌ−Ｐであり、
ｉｉ）Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の１以上がフッ素を含んでおり、しかも
ｉｉｉ）Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０のいずれかが−ＳＯ３Ｈである場合には、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基の１以上が−Ｌ−Ｍ、−Ｌ−Ｐ及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈから選択される
ことを条件とする。
【００１３】
式（Ｉ）の化合物は、色素発色団上の形式電荷（又は複数の電荷）と釣り合うように正又は負とすることができる対イオンを含むことが適切であろう。対イオンの性質は、本発明に重要なものではなく、ＮＨ４＋、Ｋ＋、Ｎａ＋、トリフルオロアセテート（Ｆ３Ｃ−ＣＯ２−）、パークロレート（ＣｌＯ４−）、Ｂｒ−又はＩ−など多数の公知のイオンいずれかでよい。本発明の状況において、スルホネートは親酸のイオン化した形態であるので、スルホン酸基（−ＳＯ３Ｈ）もスルホネート基（−ＳＯ３−）を含むことを理解されたい。
【００１４】
第１の態様に係る一実施形態では、式（Ｉ）の化合物が提供されるが、上記式中、
Ｒ１及びＲ２基は−Ｌ−Ｍ、−Ｌ−Ｐ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈから独立に選択され、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基は水素、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２−ＣＦ３及び−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは０又は１〜４の整数である）から独立に選択されるか、或いはＲ３とＲ４との組合せ又はＲ５とＲ６との組合せ及び／又はＲ７とＲ８との組合せ又はＲ９とＲ１０との組合せが炭素原子を含有する縮合芳香族六員環を形成していて、適宜−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２−ＣＦ３又は−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは上記で定義した通りである。）で１回以上置換されていてもよく、
Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈから独立に選択され、
Ｒ１５基、Ｌ、Ｍ及びＰ、ｋ及びｎは上記で定義した通りであるが、ただし
ｉ）Ｒ１及びＲ２基の１以上が−Ｌ−Ｍ又は−Ｌ−Ｐであり、
ｉｉ）Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の１以上がフッ素を含んでおり、しかも
ｉｉｉ）Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０のいずれかが−ＳＯ３Ｈである場合は、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基の１以上が−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈである
ことを条件とする。
【００１５】
第１の態様に係る他の実施形態では、式（Ｉ）の化合物が提供されるが、式中、
Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基は−Ｌ−Ｍ、−Ｌ−Ｐ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈから独立に選択され、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基は水素、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２−ＣＦ３及び−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは０又は１〜４の整数である）から独立に選択されるか、或いはＲ３とＲ４との組合せ又はＲ５とＲ６との組合せ及び／又はＲ７とＲ８との組合せ又はＲ９とＲ１０との組合せが炭素原子を含有する縮合芳香族六員環を形成していて、適宜−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２−ＣＦ３又は−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは上記で定義した通りである。）で１回以上置換されていてもよく、
Ｒ１及びＲ２基は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈから独立に選択され、
Ｒ１５基、Ｌ、Ｍ及びＰ、ｋ及びｎは上記で定義した通りであるが、ただし
ｉ）Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基の１以上が−Ｌ−Ｍ又は−Ｌ−Ｐであり、
ｉｉ）Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の１以上がフッ素を含んでおり、しかも
ｉｉｉ）Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０のいずれかが−ＳＯ３Ｈである場合には、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基の１以上は−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈである
ことを条件とする。
【００１６】
好ましくは、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の１以上はフッ素である。
【００１７】
好ましい一実施形態では、Ｒ１５基は全て水素である。他の実施形態では、式（Ｉ）の化合物の複素環部分を連結するポリメチン架橋は次の一般式の炭化水素環系を含んでいてもよい。
【００１８】
【化７】
式中、ｎは１〜３の整数であり、ｐは０又は１である。残りのＲ１５基は水素である。ポリメチン架橋を形成する炭化水素環系の例を、表１に示す。
【００１９】
【表１】
連結基Ｌは、標的結合基Ｍ又はコンジュゲート成分Ｐを、式（Ｉ）の化合物中のシアニン発色団と連結させ、色素のＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及び／又はＲ１４位と共有結合するのに適切である。好ましくは、本発明の色素は、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３又はＲ１４位のいずれかと共有結合した単一の標的結合基−Ｌ−Ｍを含有する。当業者であれば、本発明による標的結合基を有する色素は、−Ｌ−Ｐ基を含んでもよく、蛍光色素が標的成分にコンジュゲートしていることを理解するであろう。好適には、Ｌは、炭素、窒素、酸素及び硫黄原子を含む１〜２０個の連結原子の直鎖又は枝分れ鎖である。好ましくは、Ｌは次式を有する連結基である。
【００２０】
−（ＣＨＲ′）ｐ−Ｑ−（ＣＨＲ′）ｒ−
式中、Ｑは、−ＣＨＲ′−、−ＮＲ′−、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＣＲ′＝ＣＲ′−、−Ａｒ−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ′−及び−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−（式中、Ｒ′は、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり、Ａｒはスルホネートで置換されていてもよいフェニレンである）から選択され、ｐは０〜５であり、ｒは１〜５である。Ｑは、好ましくは−ＣＨＲ′−及び−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（式中、Ｒ′は水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルである）から選択され、さらに好ましくはＱは、−ＣＨＲ′−であり、Ｒ′は水素である。本発明の特に好ましい実施形態では、−Ｌ−Ｍ及び／又は−Ｌ−Ｐは、カルボキシペンチル基を含む。
【００２１】
好適には、本発明の蛍光シアニン色素はシアニン色素発色団に直接又は間接に置換した１以上、好ましくは２以上のフッ素原子を含む。一実施形態では、式（Ｉ）の化合物は好適にはＲ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６位並びに／或いはＲ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０位の１以上、好ましくは２以上、さらに好ましくは３以上がフッ素原子で置換される。この実施形態では、１以上のフッ素原子による置換は、対称又は非対称色素を生じさせ得る。特に好ましい実施形態では、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６位並びに／或いはＲ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０位の各々は、フッ素で置換される。シアニン色素発色団のペルフルオロ置換によって、色素−色素の凝集が低減し、従って蛍光消光が減少し、色素の光安定性が高まることが見い出された（Ｗａｇｇｏｎｅｒ他、上掲）。或いは、式（Ｉ）の化合物は、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５又はＲ６位並びに／或いはＲ７、Ｒ８、Ｒ９又はＲ１０位のいずれか、好ましくは２つ以下において、ペルフルオロＣ１〜Ｃ４アルキル置換基を含んでいてもよい。残りのＲ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基は、Ｈ又はＦから選択されるが、残りのＲ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の１以上がＦであることを条件とする。好ましくは、ペルフルオロＣ１〜Ｃ４アルキル置換基はトリフルオロメチルである。さらに好ましい実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５又はＲ６位並びに／或いはＲ７、Ｒ８、Ｒ９又はＲ１０位の１以上、通常２つ以下において置換された、−ＳＯ２−ＣＦ３基を含んでいてもよい。残りのＲ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基は、Ｈ又はＦ、好ましくはＦから選択される。
【００２２】
インドール又はベンズインドール環系を有する本発明のシアニン色素の具体例を、表２の式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）及び（ＩＶ）の化合物として示す。
【００２３】
【表２】
式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）及び（ＩＶ）の化合物において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基の１以上は−Ｌ−Ｍ又は−Ｌ−Ｐであり、Ｌは次式の連結基であり
−（ＣＨＲ′）ｐ−Ｑ−（ＣＨＲ′）ｒ−
（式中、Ｑは、−ＣＨＲ′−、−ＮＲ′−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ′−及び−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−（式中、Ｒ′は水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルである）から選択され、ｐは０〜５であり、ｒは１〜５である。）、
Ｍは標的結合基であり、
Ｐはコンジュゲート成分であり、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基のいずれかが−Ｌ−Ｍ又は−Ｌ−Ｐでない場合、残りのＲ１、Ｒ２、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基はＣ１〜Ｃ６アルキル及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈ（式中、ｋは１〜１０の整数である）から独立に選択され、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の１以上は−ＳＯ２−ＣＦ３及び−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは０又は１〜４の整数である）から選択される１以上のフルオロ基を含み、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基のいずれかが−ＳＯ２−ＣＦ３又は−（ＣＦ２）ｍ−Ｆでない場合には、残りのＲ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基は水素であり、
Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、Ｒ１９、Ｒ２０、Ｒ２１、Ｒ２２及びＲ２３基は、存在する場合、水素、−ＳＯ２−ＣＦ３及び−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは上記で定義した通りである。）から独立に選択され、
ｎは１〜３の整数である。
【００２４】
一実施形態では、式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）及び（ＩＶ）の化合物のＲ１及びＲ２基の１以上は−Ｌ−Ｍ又は−Ｌ−Ｐであり、残りのＲ１又はＲ２基はＣ１〜Ｃ６アルキル及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈから選択され、
Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基の１以上は−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈであり、残りのＲ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基は、Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、Ｒ１９、Ｒ２０、Ｒ２１、Ｒ２２、Ｒ２３基、Ｌ、Ｍ、Ｐ、ｋ及びｎは上記で定義した通りである。好ましくは、残りのＲ１又はＲ２基は−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈである。
【００２５】
好ましくは、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の１以上はフッ素である。
【００２６】
この実施形態では、好適には、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基の２以上は−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈ基である。好ましくは、Ｒ１１及びＲ１２基のいずれか並びにＲ１３及びＲ１４基のいずれかは−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈ基であり、残りのＲ１１、Ｒ１２、Ｒ１３又はＲ１４基はＣ１〜Ｃ６アルキルである（式中、ｋは上記で定義した通りである。）。このような実施形態では、残りのＲ１１又はＲ１２並びにＲ１３又はＲ１４基は好ましくはメチルである。好ましくは、ｋは３又は４である。従って、特に好ましい−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈ基は、−（ＣＨ２）３−ＳＯ３Ｈ及び−（ＣＨ２）４−ＳＯ３Ｈから選択される。
【００２７】
他の実施形態では、式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）及び（ＩＶ）の化合物のＲ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基の１以上は−Ｌ−Ｍ又は−Ｌ−Ｐであり、残りのＲ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基はＣ１〜Ｃ６アルキル及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈから選択され、
Ｒ１及びＲ２基の１以上は−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈであり、残りのＲ１又はＲ２基はＣ１〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、Ｒ１９、Ｒ２０、Ｒ２１、Ｒ２２、Ｒ２３基、Ｌ、Ｍ、Ｐ、ｋ及びｎは上記で定義した通りである。
【００２８】
好ましくは、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の１以上はフッ素である。
【００２９】
この実施形態では、好ましくは、Ｒ１及びＲ２基は共に−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈ（式中、ｋは１〜１０の整数である）である。特に好ましい−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈ基はｋが３又は４である基であり、即ち−（ＣＨ２）３−ＳＯ３Ｈ及び−（ＣＨ２）４−ＳＯ３Ｈである。
【００３０】
好ましくは、Ｑは−ＣＨＲ′−及びＣ（Ｏ）−ＮＨ−（式中、Ｒ′は水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルである）から選択される。さらに好ましくは、Ｑは−ＣＨＲ′−であり、Ｒ′は水素である。特に好ましい実施形態では、−Ｌ−Ｍ及び／又は−Ｌ−Ｐは、カルボキシペンチル基を含む。
（ＩＩ）から（ＩＶ）の構造において、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の１以上は−ＳＯ２−ＣＦ３及び−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは０又は１〜４の整数である）から選択される１以上のフルオロ基を含む。残りのＲ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基は水素である。好適には、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６位並びに／或いはＲ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０位の１以上、好ましくは２以上、さらに好ましくは３以上がフッ素で置換される。特に好ましい実施形態では、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６位並びに／或いはＲ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０位の各々はフッ素で置換され、残りのＲ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基は水素である。別の実施形態では、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６基並びに／或いはＲ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の１以上、通常２つ以下は、ペルフルオロＣ１〜Ｃ４アルキル基又は−ＳＯ２−ＣＦ３基である。残りのＲ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基はＨ又はＦ、好ましくはＦから選択される。好ましいペルフルオロＣ１〜Ｃ４アルキル基はトリフルオロメチルである。
【００３１】
Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、Ｒ１９、Ｒ２０、Ｒ２１、Ｒ２２及びＲ２３基は、存在する場合、水素、−ＳＯ２−ＣＦ３及び−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは上記で定義した通りである。）から独立に選択される。通常２つ以下、好ましくは１つ以下の−ＳＯ２−ＣＦ３又はペルフルオロＣ１〜Ｃ４アルキル基が、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、Ｒ１９及び／又はＲ２０、Ｒ２１、Ｒ２２及びＲ２３位で置換される。好ましくは、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、Ｒ１９、Ｒ２０、Ｒ２１、Ｒ２２及びＲ２３基は水素及びフッ素から独立に選択される。
【００３２】
１、２、３又は４つのフルオロ基が結合した本発明の色素は、残りのＲ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９又はＲ１０位に直接結合している１以上のスルホン酸基でさらに置換されていてもよい。従って、本発明の色素は、４以下又はそれを超えるスルホン酸基で、好ましくは３〜５つのスルホン酸基で、直接若しくは間接的に置換されていてもよい。生体標的分子を標識するために、フッ素で置換され、且つ３以上のスルホン酸基でさらに置換されているシアニン色素を使用することによって、このように置換されていないシアニンと比較して、色素−色素の凝集が減少し光安定性が向上した標識生成物をもたらす。本発明の好ましい色素で標識した分子の蛍光発光強度は、共有結合する色素の数と共に増加する。さらに、色素分子上の総電荷の増大に加えて、インドリニウムの１位及び／又は３位をスルホン酸基で置換すると、立体的大きさも増え、それによって色素−色素の凝集の低減に寄与する。
【００３３】
好適には、標的結合基Ｍは、色素とコンジュゲート成分との間の共有結合が形成されるのに伴い、標識される成分の相補的基と反応する基である。標的結合基の選択は、標識される成分上で利用可能な基に依存し、従って当業者には周知であろう。例えば、標的結合基は、適切な条件下で成分の相補的官能基と反応することができる反応性基であり得る。タンパク質、ペプチド、核酸、炭水化物などの成分中に存在する官能基の例には、ヒドロキシ、アミノ、スルフヒドリル、（アルデヒド及びケトンを含めた）カルボニル、カルボン酸、並びにチオホスフェートが挙げられる。或いは、標的結合基Ｍは、官能基とすることができ、標的は、色素の官能基が適切な条件下で標的成分の反応性基と反応し得るように、反応性構成成分を含み、又はそれを含むように誘導体化することができる。いずれの場合も、成分は、式（Ｉ）の色素で標識される。好適には、Ｍが反応性基である場合、スクシンイミジルエステル、スルホ−スクシンイミジルエステル、４−スルホ−２，３，５，６−テトラフルオロフェノール（ＳＴＰ）エステル、イソチオシアネート、マレイミド、ハロアセトアミド、酸ハロゲン化物、ヒドラジド、ビニルスルホン、ジクロロトリアジン及びホスホルアミデートから選択される。好ましくは、反応性基は、カルボン酸のスクシンイミジルエステル、イソチオシアネート、マレイミド、ハロアセトアミド又はホスホルアミデートである。好適には、Ｍが官能基である場合、ヒドロキシ、アミノ、スルフヒドリル、（アルデヒド及びケトンを含めた）カルボニル、カルボン酸、並びにチオホスフェート、好ましくは、ヒドロキシ、アミノ又はスルフヒドリルから選択される。このような反応性基及び官能基によって、式（Ｉ）の化合物は、標的成分と反応し、共有結合し得る。
【００３４】
式（Ｉ）による化合物のＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及び／又はＲ１４位における反応性基、並びにＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及び／又はＲ１４基と反応することができる基の例を、表３に示す。或いは、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及び／又はＲ１４は、標的成分の反応性基と反応するであろう表３の官能基でもよい。
【００３５】
【表３】
使用可能なアミノ及びヒドロキシル官能基で標的成分を標識するのに特に有用な好ましい反応性基には、以下のものがある。
【００３６】
【化８】
使用可能なチオール官能基で標的成分を標識するのに有用な特に好ましい反応性基には、以下のものがある。
【００３７】
【化９】
−Ｌ−Ｍ基の特に好ましい例には、カルボキシペンチル基を含むものがあり、例えば以下のものなどである。
【００３８】
【化１０】
他の実施形態では、標的結合基Ｍは、その相補的な特異的結合パートナーと特異的に非共有結合することができる親和性タグとすることができ、従って特異的結合ペアを形成し得る。特異的結合ペアの例には、ビオチン／アビジン、ビオチン／ストレプトアビジン、ニトリロ三酢酸（例えば、Ｎｉ２＋：ＮＴＡ）とのポリヒスチジンタグ−金属イオン錯体が挙げられるが、これらに限定されない。相補的な特異的結合パートナーは、標的成分検出のための標識錯体の１成分とすることができる。従って、１つの好ましい標識化形態では、ビオチン標識用の４つの結合部位を有するストレプトアビジンは、標的成分上のビオチン基を本発明による色素に結合する架橋として使用することができ、Ｍ基は、ビオチン、イミノビオチン、又はデスチオビオチンである。本発明の状況では、互いに他方に対する特異的結合親和性を有する２個の原子又は分子を使用できることを理解されたい。親和性タグの好ましい例は、ビオチン、イミノビオチン及びデスチオビオチンから選択される。
【００３９】
下記は、表４で示すように、本発明によるシアニン色素のさらなる具体例である。
【００４０】
【表４】
式中、
Ｒ１、Ｒ２及びＲ１１基は−（ＣＨ２）５−ＣＯＯＨ及び−（ＣＨ２）４−ＳＯ３Ｈから選択され、
Ｒ１３基は−（ＣＨ２）５−ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）４−ＳＯ３Ｈ及び−ＣＨ３から選択され、
Ｒ１２及びＲ１４基は−ＣＨ３であり、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６基並びに／或いはＲ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の２以上はＦであり、残りのＲ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９又はＲ１０基は、Ｈ、−ＳＯ３−、−ＳＯ２−ＣＦ３及び−ＣＦ３から選択され、
Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８及びＲ１９基並びに／或いはＲ２０、Ｒ２１、Ｒ２２及びＲ２２基は、存在する場合、Ｆであり、
ｎは１〜３の整数である。
【００４１】
本発明の化合物において、−Ｌ−Ｍ基は好適にはアルキルカルボン酸のスクシンイミジルエステル誘導体、好ましくは、５−カルボキシペンチル、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルエステル、又は５−カルボキシペンチル、Ｎ−ヒドロキシ−スルホ−スクシンイミジルエステルである。
【００４２】
本発明の第１の態様に係る色素の特別な例は、以下の通りである。
ｉ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（Ｃｙ５Ｆ）（化合物１）；
ｉｉ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ，７Ｅ）−７−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ヘプタ−１，３−５−トリエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（Ｃｙ７Ｆ）（化合物２）；
ｉｉｉ）３−（５−カルボキシペンチル）−３−メチル−５−スルホ−１−（４−スルホブチル）−２−｛１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ｝−５−［４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−３Ｈ−インドリウム（化合物３）；
ｉｖ）１−（５−カルボキシペンチル）−３−メチル−５−スルホ−３−（４−スルホブチル）−２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−３Ｈ−インドリウム（化合物４）；
ｖ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，６−ジフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物５）；
ｖｉ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，６−ジフルオロ−３，３−ジメチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物６）；
ｖｉｉ）１−（５−カルボキシペンチル）−２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，６−ジフルオロ−３，３−ジメチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物７）；
ｖｉｉｉ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−５−［（トリフルオロメチル）スルホニル］−３Ｈ−インドリウム（化合物８）；
ｉｘ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（４−スルホブチル）−４，６−ビス（トリフルオロメチル）−３−メチル−３−（５−カルボキシペンチル））−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，６−ジフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物９）；
ｘ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−６−（トリフルオロメチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物１０）；
ｘｉ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７，８，９−ヘキサフルオロ−１，１−ジメチル−３−（４−スルホブチル）−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドリウム（化合物１１）；
ｘｉｉ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，６−ジフルオロ−３，３−ジメチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝ −６−フルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−４−（トリフルオロメチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物１２）；
ｘｉｉｉ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，６−ジフルオロ−３，３−ジメチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，６−ジフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物１３）；
ｘｉｖ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，６−ジフルオロ−３，３−ジメチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−３−メチル−５−スルホ−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物１４）；
ｘｖ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［３−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物１５）；
ｘｖｉ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［３−（５−カルボキシペンチル）−６−フルオロ−３−メチル−１−（４−スルホブチル）−４−（トリフルオロメチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物１６）；
ｘｖｉｉ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［３−（５−カルボキシペンチル）−４−トリフルオロメチル−６−フルオロ−３−メチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−３−（５−カルボキシペンチル）−４−トリフルオロメチル−６−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−インドリウム（化合物１７）；
ｘｖｉｉｉ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ，７Ｅ）−７−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ヘプタ−１，３，５−トリエニル｝−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−４，６−ビス（トリフルオロメチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物１８）；
ｘｉｘ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ，７Ｅ）−７−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ヘプタ−１，３，５−トリエニル｝−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−５−トリフルオロメチル−３Ｈ−インドリウム（化合物１９）；
ｘｘ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ）−３−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］プロプ−１−エニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物２０）；及び
ｘｘｉ）１−（５−カルボキシペンチル）−２−｛（１Ｅ，３Ｅ）−３−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］プロプ−１−エニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物２１）。
【００４３】
本発明は、上記で定義したようにＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及び／又はＲ１４位に結合した１以上の−Ｌ−Ｍ基を含む第１の態様に係る化合物を使用して、標識付け、従って標的成分に蛍光特性を与え得る標識方法にも関する。特に、核酸、ＤＮＡ、ＲＮＡ、オリゴヌクレオチド、ヌクレオチド、タンパク質、ペプチド、抗体などの生体分子の多重標識及び検出のために使用し得る。従って、第２の態様では、成分を共有結合的に標識するための方法であって、
ａ）上記成分を、式（Ｉ）の化合物と接触させる段階と、
ｂ）上記化合物を上記成分と反応させて上記化合物で上記成分を標識する段階と
を含んでなる方法を提供する。
【００４４】
【化１１】
式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基は−Ｌ−Ｍ、−Ｌ−Ｐ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈ（式中、ｋは１〜１０の整数である）から独立に選択され、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基は水素、−Ｌ−Ｍ、−Ｌ−Ｐ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２−ＣＦ３及び−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは０又は１〜４の整数である）から独立に選択されるか、或いはＲ３とＲ４との組合せ又はＲ５とＲ６との組合せ及び／又はＲ７とＲ８との組合せ又はＲ９とＲ１０との組合せが炭素原子を含有する縮合芳香族六員環を形成していて、適宜−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２−ＣＦ３又は−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは上記で定義した通りである。）で１回以上置換されていてもよく、
Ｌは炭素、窒素、酸素及び硫黄原子からなる群から選択される１〜２０個の連結原子の鎖を有する連結基であり、
Ｍは標的結合基であり、
Ｐはコンジュゲート成分であり、
Ｒ１５基は水素であるか、或いは２以上のＲ１５基が連結して単環又は二環縮合炭化水素系（各環は５個又は６個の炭素原子を有し、残りのＲ１５基は水素である）を形成し、
ｎは１〜３の整数であるが、ただし
ｉ）Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基の１以上は、−Ｌ−Ｍであり、
ｉｉ）Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の１以上がフッ素を含んでおり、しかも
ｉｉｉ）Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０のいずれかが−ＳＯ３Ｈである場合は、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基の１以上は、−Ｌ−Ｍ及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈから選択される
ことを条件とする。
【００４５】
好ましくは。Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の１以上はフッ素である。
【００４６】
好ましくは、Ｒ１５基は水素である。
【００４７】
標的結合基Ｍは、本明細書で定義した反応性基又は官能基などの、式（Ｉ）の化合物と標的成分との共有結合を形成するのに適切な基である。この方法は、標識される成分を、本発明による化合物のある量と共に、色素が成分と共有結合をするような条件下でインキュベーションする段階を含む。標的成分との色素コンジュゲート又は錯体の形成方法は、当業者に周知であろう。例えば、タンパク質の共有結合的な標識は通常、水性緩衝媒体、適切には炭酸水素塩中（ｐＨ９．０）室温で通常１時間行う。反応は通常、暗所で実施する。標識タンパク質は、サイズ排除クロマトグラフィーによって、例えば固定相としてＳｅｐｈａｄｅｘ（商標）を、溶離液としてホスフェート緩衝剤（ｐＨ７．０）を使用して、未反応の色素から分離することができる。標的生体分子の多重標識のために、色素の量又は濃度と標的材料の比をそれに応じて調節すべきである。
【００４８】
適切な標的成分には、特に限定されないが、抗体、脂質、タンパク質、ペプチド、炭水化物；アミノ、スルフヒドリル、カルボニル、ヒドロキシル、カルボン酸及びチオホスフェート基の１以上を含有するか或いは含有するように誘導体化されたヌクレオチド；アミノ、スルフヒドリル、カルボニル、ヒドロキシル、カルボン酸及びチオホスフェート基の１以上を含有するか或いは含有するように誘導体化されたオキシ又はデオキシポリ核酸；微生物材料、薬物、ホルモン、細胞、細胞膜、毒素、ポリマー粒子、並びにガラスビーズからなる群が挙げられる。
【００４９】
本発明の蛍光色素で標識した成分、例えばタンパク質は、細胞事象、例えば、取込み、輸送、受容体結合、代謝、シグナル伝達及びタンパク質−タンパク質相互作用をモニターするため、又は細胞及び分子事象をインビボで可視化するためにインビトロアッセイで使用し得る。色素標識した成分は、光学イメージング手順、例えば電荷結合素子（ＣＣＤ）検出を用いることによって、直接又は間接的に検出し得る。適切でハイスループットな細胞内イメージング計器が利用可能であり、例えばＩＮ Ｃｅｌｌ Ａｎａｌｙｓｅｒ１０００及びｅＸｐｌｏｒｅ Ｏｐｔｉｘ（商標）、Ｉｎ ｖｉｖｏ蛍光光学イメージングシステム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）である。
【００５０】
上記の一段階標識法に加えて、本発明は、二段階標識法にも関する。本発明による色素が、第１段階において、抗体、タンパク質、ＤＮＡプローブなどの一次成分に結合、従って標識する。次いでこの標識法の第２段階において、蛍光標識した一次成分を、抗体が特異的になる抗原などの二次成分検出のためのプローブとして使用する。
【００５１】
本発明の化合物を使用して、系中の特定のタンパク質又は他の成分の濃度を決定することもできる。プローブと反応することができるタンパク質上の反応性基の数がわかっている場合、１分子当たりの蛍光性を知ることができ、系中のこれらの分子の濃度を系の全蛍光強度により決定することができる。この特定の方法を用いて、マイクロタイタープレートリーダー又は他の公知の免疫蛍光検出システムを使用して様々な標識した分析物の濃度を測定することができる。蛍光標識した材料の濃度は、例えば蛍光偏光検出器を使用して決定することもできる。
【００５２】
本発明の化合物は、抗体などの複数の異なる一次成分に複数の蛍光色素を共有結合させる検出方法で使用することもでき、二次成分の混合物中の複数の二次成分を各々特定するために、一次成分は各々、抗原などの異なる二次成分に特異的である。有用なこの方法によれば、他の一次成分を標識するために使用される色素分子と比べて、一次成分は各々、異なる光吸収及び光放出の波長特性を有する蛍光色素で別々に標識される。次いで、標識した一次成分を、抗原などの二次成分を含有する調製物に添加し、一次成分を、それが選択的である二次成分に各々結合させる。
【００５３】
未反応のプローブ材料は、分析への干渉を防ぐため、例えば洗浄によって調製物から除去することができる。次いで、調製物を、特定の蛍光化合物の吸収波長を含めた、様々な励起波長にかける。次に、蛍光顕微鏡、又は励起波長の光線を選択し蛍光波長を選択するためのフィルター若しくはモノクロメーターを有するフローサイトメーターや蛍光分光光度計など他の蛍光検出システムを使用して、使用する蛍光化合物に対応する発光波長の強度、特定の標識した一次成分と結合している二次成分の量を示す蛍光強度を決定する。多パラメータの蛍光研究を行うための公知の技術には、例えば多パラメータのフローサイトメトリーが含まれる。ある場合には、単一の励起波長を使用して、各々が異なる波長において蛍光を発する混合物中の２以上の材料からの蛍光を励起させることができ、各々の標識した種の量は、その各々の発光波長における個別の蛍光強度を検出することによって測定することができる。所望であれば、光吸収法も使用することができる。
【００５４】
本発明の検出法は、蛍光一次成分の生成が可能である任意の系に適用することができる。例えば、適切に反応する蛍光化合物をＤＮＡ又はＲＮＡ断片にコンジュゲートさせ、次いで得られたコンジュゲートを、ＤＮＡ又はＲＮＡの相補的標的ストランドに結合させることができる。次いで、適切な蛍光検出装置を使用して、結合した蛍光コンジュゲートの存在を検出することができる。
【００５５】
本発明は、中間体及び式（Ｉ）の色素を調製するために適切な方法に関する。従って、第３の態様では、式（Ａ）の化合物が提供される。
【００５６】
【化１２】
式中、
Ｒ１、Ｒ１１及びＲ１２基は−Ｌ−Ｍ、−Ｌ−Ｐ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈ（式中、ｋは１〜１０の整数である）から独立に選択され、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６基は水素、−Ｌ−Ｍ、−Ｌ−Ｐ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２−ＣＦ３及び−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは０又は１〜４の整数である）から独立に選択されるか、或いはＲ３とＲ４との組合せ又はＲ５とＲ６との組合せが炭素原子を含有する縮合芳香族六員環を形成していて、適宜−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２−ＣＦ３又は−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは上記で定義した通りである。）で１回以上置換されていてもよく、
Ｌは炭素、窒素、酸素及び硫黄原子からなる群から選択される１〜２０個の連結原子の鎖を有する連結基であり、
Ｍは標的結合基であり、
Ｐはコンジュゲート成分であるが、ただし
ｉ）Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ１１及びＲ１２基の１以上が−Ｌ−Ｍ又は−Ｌ−Ｐであり、
ｉｉ）Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６基の１以上がフッ素を含んでおり、しかも
ｉｉｉ）Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６のいずれかが−ＳＯ３Ｈである場合には、Ｒ１１及びＲ１２基の１以上が−Ｌ−Ｍ、−Ｌ−Ｐ及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈから選択される
ことを条件とする。
【００５７】
一実施形態では、Ｒ１、Ｒ１１及びＲ１２基の１以上は、−Ｌ−Ｍ（式中、Ｌは上記で定義した通りであり、Ｍは、スクシンイミジルエステル、スルホ−スクシンイミジルエステル、４−スルホ−２，３，５，６−テトラフルオロフェノール（ＳＴＰ）エステル、イソチオシアネート、マレイミド、ハロアセトアミド、酸ハロゲン化物、ヒドラジド、ビニルスルホン、ジクロロトリアジン及びホスホルアミデートから選択される反応性基を含む）である。
【００５８】
他の実施形態では、Ｒ１、Ｒ１１及びＲ１２基の１以上は−Ｌ−Ｍであり、Ｌは上記で定義した通りであり、Ｍはヒドロキシ、アミノ、スルフヒドリル、イミダゾール、アルデヒド及びケトンを含むカルボニル、カルボン酸、並びにチオホスフェートから選択される官能基を含む。
【００５９】
好ましくは、残りのＲ１、Ｒ１１及びＲ１２基はＣ１〜Ｃ６アルキル及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈ（式中、ｋは１〜１０の整数である）から選択される。好ましくは、ｋは３又は４である。
【００６０】
好ましくは、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６基の１以上はフッ素である。さらに好ましくは、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６基の２以上がＦであり、残りのＲ３、Ｒ４、Ｒ５又はＲ６基はＨ、−ＳＯ２−ＣＦ３及びＣＦ３から、好ましくはＨから選択される。特に好ましい実施形態では、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６基はＦである。
【００６１】
式（Ａ）の化合物の具体例は、Ｒ１及びＲ１１基の１以上が−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈであり、残りのＲ１又はＲ１１基が−（ＣＨ２）５−ＣＯＯＨ及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈから選択され、Ｒ１２基がＣ１〜Ｃ６アルキル、好ましくはメチルであり、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６基がＦであり、ｋが３又は４であるものである。
【００６２】
本発明の化合物は、
ａ）次の式（Ａ）の第１の化合物と、
【００６３】
【化１３】
ｂ）第１の化合物と同一又は異なる次の式（Ｂ）の第２の化合物と、
【００６４】
【化１４】
ｃ）第３の化合物（Ｃ）とを、第１の化合物と第２の化合物との間にコンジュゲート結合を形成するのに適切な条件下で反応させる段階を含む方法によって調製することができる。
式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基は−Ｌ−Ｍ、−Ｌ−Ｐ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈ（式中、ｋは１〜１０の整数である）から独立に選択され、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基は水素、−Ｌ−Ｍ、−Ｌ−Ｐ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２−ＣＦ３及び−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは０又は１〜４の整数である）から独立に選択されるか、或いはＲ３とＲ４との組合せ又はＲ５とＲ６との組合せ及び／又はＲ７とＲ８との組合せ又はＲ９とＲ１０との組合せが炭素原子を含有する縮合芳香族六員環を形成していて、適宜−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２−ＣＦ３又は−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは上記で定義した通りである。）で１回以上置換されていてもよく、
Ｌは炭素、窒素、酸素及び硫黄原子からなる群から選択される１〜２０個の連結原子の鎖を有する連結基であり、
Ｍは標的結合基であり、
Ｐはコンジュゲート成分であるが、ただし
ｉ）Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基の１以上が−Ｌ−Ｍ又は−Ｌ−Ｐであり、
ｉｉ）Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の１以上がフッ素を含んでおり、しかも
ｉｉｉ）Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０のいずれかが−ＳＯ３Ｈである場合には、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基の１以上が−Ｌ−Ｍ、−Ｌ−Ｐ及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈから選択される
ことを条件とする。
【００６５】
好ましくは、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の１以上はフッ素である。
【００６６】
好ましくは、−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈは−（ＣＨ２）３−ＳＯ３Ｈ及び−（ＣＨ２）４−ＳＯ３Ｈから選択される。
【００６７】
この方法に従って、中間体化合物（Ａ）、（Ｃ）及び（Ｂ）を単一段階又は多段階の方法で反応させて、式（Ｉ）の化合物を形成することができる。構造（Ａ）及び（Ｂ）が同じである式（Ｉ）の対称化合物は、２モル比の式（Ａ）（又は（Ｂ））の化合物を、１個、３個、又は５個の炭素原子を含有し、本明細書で定義したＲ１５を形成するための基で置換された適切なビス官能性メチン断片と反応させることによって適切に調製することができる。例えば、トリメチンシアニン色素類似体を調製するための第３の化合物（Ｃ）として、置換Ｎ，Ｎ′−ジフェニルホルムアミジン、又はオルトエステルを使用する。対応する方式で、ペンタメチンシアニン色素類似体を調製するには、適切に置換されたマロンジアルデヒドジアニルを使用し、ヘプタメチンシアニン色素類似体を調製するには、グルタコンアルデヒドを使用することができる。反応は通常、ピリジンなどの有機溶媒中で行い、加熱還流する。続いて、混合物を冷却し、エーテルなどの有機溶媒に注ぎ込む。得られる固体又は半固体を、一連のメタノール／クロロホルム溶媒を使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製することができる。或いは、逆相カラムを使用して、０．１％ＴＦＡ／アセトニトリルを含有する水からなる溶離液で精製することができる。
【００６８】
構造（Ａ）及び（Ｂ）が異なる式（Ｉ）の非対称化合物は、二段階法で好都合に調製することができる。この方法では、式（Ａ）のインドリニウム化合物と、結合の形成に適した化合物、例えば適切に置換されたＮ，Ｎ′−ジフェニルホルムアミジン又はマロンアルデヒドジアニルを無水酢酸の存在下で反応させて、２−アニリノビニル又は４−アニリン−１，３−ブタジエニル第四級塩を形成することによって中間体化合物をまず形成する。中間体第四級塩と、第２の２−メチルインドリニウム第四級塩を反応させて、式（Ｉ）の化合物を得る。複素環系を結合させるポリメチン結合を形成するための代替中間体は公知であり、例えば、Ｈａｍｅｒ，Ｆ．Ｍ．，“Ｔｈｅ Ｃｙａｎｉｎｅ Ｄｙｅｓ ａｎｄ Ｒｅｌａｔｅｄ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ”，Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（１９６４）に記載されている。
【００６９】
本発明を、下記の実施例及び図を参照してさらに例示する。
【００７０】
Ｃｙ（商標）は、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｍｉｔｅｄの商標である。
【００７１】
ｅＸｐｌｏｒｅ Ｏｐｔｉｘ（商標）は、ＡＲＴ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．の商標である。
【実施例】
【００７２】
１． ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（Ｃｙ５Ｆ）（化合物１）
【００７３】
【化１５】
１．１ ５−（エトキシカルボニル）−５−メチル−６−オキソヘプタン−１−スルホネート、ナトリウム塩
【００７４】
【化１６】
水素化ナトリウム（６０重量％、１２ｇ≡０．３ｍｏｌのＮａＨ）を、乾燥ＤＭＦ（１００ｍｌ）中でスラリー化した。得られた懸濁液を撹拌しながら０℃に冷却した。これに、温度を１０℃未満に維持し発泡が制御されるように、エチル２−メチルアセトアセテート（５０ｇ、０．３４６ｍｏｌ）をＤＭＦ（２５ｍｌ）に溶かした溶液を、滴下した。添加が完了し水素の発生が止まった後に、透明な薄黄色溶液が生じるまで混合物を温水浴中で温めた。これを再び０℃に冷却した。１，４−ブタンスルトン（４５ｇ、０．３３ｍｏｌ）をＤＭＦ（２５ｍｌ）に溶かした溶液を、１５分かけて添加し、温度を１０℃未満に維持した。添加が完了すると、混合物を５０℃で１６時間加熱した。次いで、溶媒を減圧下で蒸発乾固し、残渣を水とジエチルエーテルに分配した。水層を保持し、有機層を新たな水で抽出し、次いで廃棄した。水様抽出物を合わせて、新たなエーテルで洗浄し、次いで減圧下で蒸発させて、ワックス状固体の生成物を得た。
δＨ（２７０ＭＨｚ；Ｄ２Ｏ）４．２３（２Ｈ，ｑ）、２．９（２Ｈ，ａｐｐ ｔ）、２．２６（３Ｈ，ｓ）、２．０〜１．６（６Ｈ，ｍ）、１．３６（３Ｈ，ｓ）及び１．２６（３Ｈ，ｔ）。
【００７５】
１．２ ５−メチル−６−オキソヘプタン−１−スルホン酸
【００７６】
【化１７】
ＴＬＣが反応の終了を示すまで（〜約３時間）、５−（エトキシカルボニル）−５−メチル−６−オキソヘプタン−１−スルホネート、ナトリウム塩（１．１からの）を濃塩酸（２００ｍｌ）中９０℃で加熱した。次いで、溶媒を減圧下で蒸発させ、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（シリカ、エタノール／ジクロロメタン混合物）によって精製して、５−メチル−６−オキソヘプタン−１−スルホン酸４９．６ｇを得た。
δＨ（２７０ＭＨｚ；Ｄ２Ｏ）２．９（２Ｈ，ａｐｐ ｔ）、２．６８（１Ｈ，ｍ）、２．２（３Ｈ，ｓ）、１．８〜１．３（６Ｈ，ｍ）及び１．１８（３Ｈ，ｄ）。
【００７７】
１．３ ２，３−ジメチル−３−（４−スルホブチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３Ｈ−インドール、ジナトリウム塩
【００７８】
【化１８】
２，３，４，５−テトラフルオロ−アニリン（１．７５ｇ、０．０１Ｍ）を、濃ＨＣｌ（２８０ｍｌ）中で溶解した。フラスコを−１０℃に保ち、ＮａＮＯ２（１当量）を水（１０ｍｌ）に溶かした溶液に続いて、塩化スズ（ＩＩ）（３．４ｇ）を濃ＨＣｌ（４０ｍｌ）に溶かした溶液を滴下した。反応物を室温に戻し、１時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、黄色の塩（７ｇ）の粗生成物を得た．
ヒドラジン塩及び未精製材料を、スルホン化ケトン、５−メチル−６−オキソヘプタン−１−スルホン酸（６ｇ）と共に、酢酸（５０ｍｌ）中で溶解した。この溶液を１４０℃で２時間加熱し、微細なオレンジ色の沈殿物を有するオレンジ色の溶液を得た。溶媒を蒸発して、茶色のガムを得た。生成物を逆相ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡ、水／アセトニトリルグラジエント）によって単離し、生成物を得た。ＭＨ＋＝３５４。
【００７９】
１．４ １−（５−カルボキシペンチル）−２，３−ジメチル−３−（４−スルホブチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３Ｈ−インドリウム
【００８０】
【化１９】
テトラフッ化インドール（１．３から）（１５０ｍｇ、４．２×１０−４ｍｏｌ、１当量）を、ブロモヘキサン酸（１５ｇ、０．０７３ｍｏｌ、２６０当量）と１４０℃で窒素下２４時間加熱した。生成物をジエチルエーテルと共に粉砕し、減圧下で乾燥し、茶色の塊を得た。主要な成分は、ＬＣ−ＭＳによって１−（５−カルボキシペンチル）−２，３−ジメチル−３−（４−スルホブチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３Ｈ−インドリウム［４］と確認され、さらに精製されずに使用した。ＭＨ＋＝４７０。
【００８１】
１．５ ２，３−ジメチル−４，５，６，７−テトラフルオロ−１，３−ビス（４−スルホナトブチル）−３Ｈ−インドリウム、ジナトリウム塩
【００８２】
【化２０】
１．３からのテトラフッ化インドール（１００ｍｇ、２．８×１０−４ｍｏｌ、１当量）を、ブタンスルトン（１０ｇ、０．０７３ｍｏｌ）と共に１４０℃で窒素下２４時間加熱した。生成物をジエチルエーテルと共に粉砕し、減圧下で乾燥し、茶色の塊を得た。主要な成分は、ＬＣ−ＭＳによって２，３−ジメチル−４，５，６，７−テトラフルオロ−１，３−ビス（４−スルホナトブチル）−３Ｈ−インドリウム、ジナトリウム塩と確認され、さらに精製されずに使用された。Ｍ＋＝４９０。
【００８３】
１．６ ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（Ｃｙ５Ｆ）（化合物１）
アルキル化インドレニン（１．４から（５ｍｇ）及び１．５から（１当量））を、エタノール及びピリジン（２５０μｌ）中で溶解した。１，１，１−トリメトキシプロペン（１当量）を添加し、その溶液を２時間撹拌した。逆相ＬＣ−ＭＳによる分析によって、名目上は２種類の対称色素及び所望の生成物である、３種類の６５０ｎｍで吸収する生成物が観察された。所望の非対称生成物を、ＨＰＬＣにより単離し、質量分析により分析した。Ｍａｌｄｉ−ＴＯＦ ＭＨ＋＝９９３。Ａｂｓλｍａｘ＝６４４ｎｍ（Ａｑ）。Ｅｍλｍａｘ＝６５９ｎｍ。両方の異性体に対して、ＬＣ−ＭＳは９９３ｍ／ｚのメインピークを示す。ピーク純度９９％を超える６４３ｎｍにおいて、ＨＰＬＣ−ＤＡＤは９８％を超える。
【００８４】
１．７ ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（Ｃｙ５Ｆ ＮＨＳエステル）
Ｃｙ５Ｆ遊離酸（５００μｇ）を、ジイソプロピルエチルアミン（４％ｖ／ｖ）（２０μｌ）を含有するジメチル−スルホキシド（５００μｌ）中で溶解した。この溶液（１μｌ）の一定分量を、対照として保持した。ジピロリジノ−（Ｎ−スクシンイミジルオキシ）カルベニウムヘキサフルオロホスフェート（１ｍｇ）を添加し、その溶液を、ＴＬＣ（Ｍｅｒｃｋ ＲＰ−１８Ｆ２５４、１：１の水：アセトニトリル＋０．１％ｖ／ｖＴＦＡ）による分析の前に１時間撹拌した。出発物質（Ｒｆ０．４）の新規生成物スポット（Ｒｆ０．３６）への完全な転化が観察された。この生成物（Ｃｙ５Ｆ ＮＨＳエステル）を、さらに精製せずに抗体コンジュゲートのために直ちに使用した。
【００８５】
１．８ 抗体コンジュゲート
アフィニティー精製されたヤギ抗マウス抗体ＩｇＧ（１００μｇ）（Ｒｏｃｋｌａｎｄ Ｉｎｃ．Ｃａｔａｌｏｇｕｅ Ｎｏ．６１０−１０１−１２１）を、予め浸漬されたＳｌｉｄｅ−Ａ−Ｌｙｚｅｒ（登録商標）透析カセット（Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０Ｋ分画分子量）に移し、透析した（０．１ＭのＮａＨＣＯ３緩衝液、ｐＨ９．２）。透析した生成物を、Ｃｙ５Ｆ ＮＨＳエステル（１．７から）（１ｍｇ／ｍｌ溶液を４９μｌ）と混合し、室温で１時間撹拌した。反応混合物を予め浸漬されたＳｌｉｄｅ−Ａ−Ｌｙｚｅｒ（登録商標）透析カセット（Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０Ｋ分画分子量）に移し、４℃で４８時間透析した（０．１ＭのＰＢＳ、ｐＨ７．２、２×２ｌ）。透析後の色素標識した抗体の存在を、ＵＶ／可視分光法により決定した。λｍａｘ６４５ｎｍ、Ａ＝０．３ＡＵ。
【００８６】
２． ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ，７Ｅ）−７−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ヘプタ−１，３−５−トリエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（Ｃｙ７Ｆ）（化合物２）
【００８７】
【化２１】
２．１ アルキル化インドール（１．５から）（０．１ｍｍｏｌ）及びＮ−５−（フェニルアミノ）−２，４−ペンタジエニリデン（Ａｌｄｒｉｃｈ）（０．０６ｍｍｏｌ）を、酢酸及び無水酢酸１：１の混合物中（１．５ｍｌ）において１２０℃で３０分間加熱した。これを室温に冷却し、酢酸カリウム（８当量）と共に、アルキル化インドール（１．４から）を添加した（０．０７ｍｍｏｌ）。この混合物を４０℃で一晩撹拌し、黒緑色の溶液が観察された。冷却した溶液をＨＰＬＣ（水（０．１％ＴＦＡ）中の５〜９５％アセトニトリル（０．１％ＴＦＡ）グラジエント）で精製した。ＬＣ−ＭＳによって、２種類の異性体生成物を両方ともｍ／ｚ＝１０１９（Ｍ＋１）で単離した（ＲＴ＝７．９８ｍ及び８．５分）。
【００８８】
３． ３−（５−カルボキシペンチル）−３−メチル−５−スルホ−１−（４−スルホブチル）−２−｛１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ｝−５−［４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−３Ｈ−インドリウム（化合物３）
【００８９】
【化２２】
３．１ ３−（カルボキシペンチル）−２，３−ジメチルインドレニン−５−スルホン酸
【００９０】
【化２３】
１ｌの丸底フラスコ内で、４−ヒドラジノベンゼンスルホン酸（１３．４２ｇ、７１．４ｍｍｏｌ）を、酢酸（７１ｍｌ）と共に、７−メチル−８−オキソノナン酸（２０ｇ、〜１０７ｍｍｏｌ）に添加した。ピンク色懸濁液を、１４０℃で５時間撹拌した。反応混合物を、ロータリーエバポレーターにかけて、赤／茶色の油を得た。この油をジエチルエーテル（４×５０ｍｌ）と共に粉砕し、半固体の粘着性塊が生成された。これを水（２００ｍｌ）に溶解し、フラッシュクロマトグラフィーによって精製した。この生成物を、１０％アセトニトリル／水＋０．１％ＴＦＡで黄色のバンドとして溶出した。ＨＰＬＣ分析は、黄色のバンドが適切な純度であり、２３．５分で大半の不純物から分離されることを示した。収量１８ｇ。
【００９１】
３．２ ２，３−ジメチル−３−（５−カルボキシペンチル）−５−スルホ−１−（３−スルホブチル）インドリウム、ジナトリウム塩
【００９２】
【化２４】
３−（カルボキシペンチル）−２，３−ジメチルインドレニン−５−スルホン酸（３．１から）（５ｇ、１４．５ｍｍｏｌ）及び酢酸ナトリウム（１．５５ｇ、１９．２ｍｍｏｌ）を、メタノール（〜３０ｍｌ）中で溶解し、この混合物を５分間撹拌した。次いで、この混合物を３回メタノールからロータリーエバポレーターにかけて、黄色のふわふわした固体を生成した。スルホラン（５０ｍｌ）中のブタンスルトン（１０ｇ、５当量）を添加し、この混合物を１５０℃で４時間撹拌しながら加熱した。赤色固体がフラスコの底に析出した。赤色固体の試料を、１００％水（０．１％ＴＦＡ）から５０％アセトニトリル（０．１％ＴＦＡ）と共に２７４ｎｍのＵＶ検出で３０分に亘り逆相（Ｃ１８）ＨＰＬＣ（Ｊｕｐｉｔｅｒ１０μＣ１８４．６ｍｍ×２５０ｍｍ）によって分析した。反応混合物を冷却させ、＋２℃で保存した。この反応混合物を加温し、撹拌しながらジエチルエーテル（５００ｍｌ）に注ぎ込み、エーテルをデカントし、単離されたピンク色の固体が残った。
【００９３】
３．３ ２，３−ジメチル−４，５，６，７−テトラフルオロ−１，３−ビス（４−スルホナトブチル）−３Ｈ−インドリウム、ジナトリウム塩
【００９４】
【化２５】
テトラフッ化インドール（１．３から）（１００ｍｇ、２．８×１０−４ｍｏｌ、１当量）を、ブタンスルトン（１０ｇ、０．０７３ｍｏｌ）と共に１４０℃で２４時間窒素下加熱した。生成物をジエチルエーテルと共に粉砕し、減圧下で乾燥し、茶色の塊を得た。主要な成分は、ＬＣ−ＭＳによって（１．５）であると確認され、さらに精製せずに使用された。Ｍ＋＝４９１。
【００９５】
３．４ ３−（５−カルボキシペンチル）−３−メチル−５−スルホ−１−（４−スルホブチル）−２−｛１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ｝−５−［４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−３Ｈ−インドリウム（化合物３）
２，３−ジメチル−３−（５−カルボキシペンチル）−５−スルホ−１−（３−スルホブチル）インドリウム、ジナトリウム塩（３．２から）（３．４ｇ、６．８４ｍｍｏｌ）を、トリエチルアミン（２．５ｍｌ）を含有した酢酸（２５ｍｌ）中で溶解した。マロンアルデヒドビスフェニルイミンＨＣｌ（４．１５ｇ、１６ｍｍｏｌ）を添加し、この混合物を、一晩撹拌しながら１４０℃で加熱した。反応混合物をロータリーエバポレーターにかけて、赤色油を得て、それを水（５０ｍｌ）及びアセトニトリル（３０ｍｌ）中に溶解した。これを濾過し、精製し、色素中間体１ｇを得た。２４ｍｇ（３．９×１０−５ｍｏｌ、４．９モル当量）を、酢酸：無水酢酸１：１ｖ／ｖの１ｍｌ溶液中で溶解し、明赤色溶液が形成した。２，３−ジメチル−４，５，６，７−テトラフルオロ−１，３−ビス（４−スルホナトブチル）−３Ｈ−インドリウム、ジナトリウム塩（４ｍｇ、８．１２×１０−６ｍｏｌ）及び酢酸カリウム（５０ｍｇ）を添加し、反応物を１２０℃で１時間撹拌した。未精製の青色／緑色の材料を、逆相分取ＨＰＬＣによって精製し、濃い青色の生成物を得た。ロータリーエバポレーション及び凍結乾燥によって、青色固体１ｍｇ（収率１２％）を得た。Ｍ＋＝１０００．６７。
【００９６】
４． １−（５−カルボキシペンチル）−３−メチル−５−スルホ−３−（４−スルホブチル）−２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−３Ｈ−インドリウム（化合物４）
【００９７】
【化２６】
４．１ 色素中間体
【００９８】
【化２７】
１−（カルボキシペンチニル）−２，３，３−トリメチル−インドレニニウム−５−スルホネート（９００ｍｇ、１．９１ｍｍｏｌ）、マロンアルデヒドビスフェニルイミン（３２０ｍｇ、１．２４ｍｍｏｌ、０．９当量）、無水酢酸（１２ｍｌ）及び酢酸（６ｍｌ）を１２０℃で１時間加熱した。この赤色／オレンジ色混合物冷却させた。ＵＶ及びＨＰＬＣ分析によって、反応が完了したことを示す。この材料を、さらなる分析をせずに下記の段階（４．２）で使用した。
【００９９】
４．２ １−（５−カルボキシペンチル）−３−メチル−５−スルホ−３−（４−スルホブチル）−２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−３Ｈ−インドリウム（化合物４）
２，３−ジメチル−３−（５−カルボキシペンチル）−５−スルホ−１−（３−スルホブチル）インドリウム、ジナトリウム塩（５ｍｇ）を、５．１からの色素中間体（５０ｍｇ／ｍｌ、１００μｌ）及び酢酸カリウム（８ｍｇ、８当量）に添加した。反応物を室温で一晩撹拌し、藍色の溶液を得た。この生成物を、逆相ＨＰＬＣ（アセトニトリル／水／０．１％トリフルオロ酢酸）によって単離した。Ｍ＋＝８７９。ＵＶ／Ｖはλｍａｘ６４７ｎｍである。収量４．５ｍｇ。
【０１００】
５． ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，６−ジフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物５）
【０１０１】
【化２８】
５．１ ４，６−ジフルオロ−２，３−ジメチル−３−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドール
【０１０２】
【化２９】
酢酸（２０ｍｌ）中の３，５−ジフルオロフェニルヒドラジン塩酸塩（１ｇ）に、５−メチル−６−オキソヘプタン−１−スルホン酸（１．６ｇ）を添加し、この溶液を一晩加熱還流した。揮発性物質をロータリーエバポレーターで除去し、粗生成物を得て、そのうちの５０ｍｇを分取ＨＰＬＣで精製した。当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、所望の生成物（１９ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝３１７。
【０１０３】
５．２ ４，６−ジフルオロ−２，３−ジメチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム
【０１０４】
【化３０】
４，６−ジフルオロ−２，３−ジメチル−３−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドール（１ｇの未精製材料）に、ブタンスルトン（１０ｍｌ）を添加し、その溶液を、２日間１４０℃に加熱した。冷却すると、この生成物を水中に抽出し、分取ＨＰＬＣによって精製した。当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、所望の生成物（９０ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝４５４。
【０１０５】
５．３ ６−［（２Ｅ）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−２−［（２Ｅ，４Ｅ）−４−（フェニルイミノ）ブト−２−エニリデン］−３−（４−スルホブチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ヘキサン酸
【０１０６】
【化３１】
１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（１２ｍｇ）に、マロンアルデヒドビス（フェニルイミン）モノハイドロクロライド（７ｍｇ）、無水酢酸（２ｍｌ）及び酢酸（１ｍｌ）を添加した。この混合物を、１時間５０分間１２０℃に加熱し、その後室温に冷却した。この未精製の反応混合物（約５ｍｇ／ｍｌの生成物）をさらに説明するように、精製せずに使用した。
【０１０７】
５．４ ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，６−ジフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物５）
６−［（２Ｅ）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−２−［（２Ｅ，４Ｅ）−４−（フェニルイミノ）ブト−２−エニリデン］−３−（４−スルホブチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ヘキサン酸（約５ｍｇ／ｍｌを０．４ｍｌ）に、４，６−ジフルオロ−２，３−ジメチル−３−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドール（２ｍｇ）及び酢酸カリウム（４．４ｍｇ）を添加した。一晩の撹拌に続いて分取ＨＰＬＣを行い、当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、所望の生成物（４ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝９５７。
【０１０８】
６． ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，６−ジフルオロ−３，３−ジメチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物６）
【０１０９】
【化３２】
６．１ ４，６−ジフルオロ−２，３，３−トリメチル−３Ｈ−インドール
【０１１０】
【化３３】
エタノール（３０ｍｌ）中の３，５−ジフルオロフェニルヒドラジン塩酸塩（２．６ｇ）に、３−メチル−２−ブタノン（６ｍｌ）を添加し、その溶液を３時間７８℃に加熱した。その後、この混合物を冷却し、揮発性物質をロータリーエバポレーターで除去し、赤色固体を得た。これにポリリン酸（１０ｇ）及び酢酸（２５ｍｌ）を添加した。この混合物を３時間１２０℃に加熱し、次いで一晩冷却させた。揮発性物質を、ロータリーエバポレーターで除去し、水酸化ナトリウムを添加することによってｐＨをｐＨ５．５に調節し、粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル／ヘキサン／酢酸エチル）によって精製した。当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、所望の生成物（２ｇ）を得た。ＭＨ＋＝１９６。
【０１１１】
６．２ １−（５−カルボキシペンチル）−４，６−ジフルオロ−２，３，３−トリメチル−３Ｈ−インドリウム
【０１１２】
【化３４】
４，６−ジフルオロ−２，３，３−トリメチル−３Ｈ−インドール（２ｇ）に、６−ブロモヘキサン酸（５ｇ）及びスルホラン（５ｍｌ）を添加し、この混合物を５時間１４０℃に加熱した。冷却すると、混合物を水で希釈し、分取ＨＰＬＣを行い、所望の生成物（１．４ｇ）を得た。Ｍ＋＝３１０。
【０１１３】
６．３ ６−［（２Ｅ）−４，６−ジフルオロ−３，３−ジメチル−２−［（２Ｅ，４Ｅ）−４−（フェニルイミノ）ブト−２−エニリデン］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ヘキサン酸
【０１１４】
【化３５】
１−（５−カルボキシペンチル）−４，６−ジフルオロ−２，３，３−トリメチル−３Ｈ−インドリウム（５０ｍｇ）に、マロンアルデヒドビス（フェニルイミン）モノハイドロクロライド（３７．６ｍｇ）、無水酢酸（２ｍｌ）及び酢酸（１ｍｌ）を添加した。この混合物を、１２０℃に１時間加熱し、その後室温に冷却した。この未精製の反応混合物（約３２ｍｇ／ｍｌの生成物）を、さらに説明するように精製せずに使用した。
【０１１５】
６．４ ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，６−ジフルオロ−３，３−ジメチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物６）
６−［（２Ｅ）−４，６−ジフルオロ−３，３−ジメチル−２−［（２Ｅ，４Ｅ）−４−（フェニルイミノ）ブト−２−エニリデン］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ヘキサン酸（０．０４ｍｍｏｌ）に、４，５，６，７−テトラフルオロ−２，３−ジメチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（１９．６ｍｇ）及び酢酸カリウム（３５ｍｇ）を添加した。一晩の撹拌に続いて分取ＨＰＬＣを行い、当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、所望の生成物（６ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝８３５。
【０１１６】
６．５ ２−［（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−（１−｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝−４，６−ジフルオロ−３，３−ジメチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン）ペンタ−１，３−ジエニル］−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム
【０１１７】
【化３６】
２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，６−ジフルオロ−３，３−ジメチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（２ｍｇ）に、ＤＭＳＯ（１ｍｌ）、ジピロリジノ−（Ｎ−スクシンイミジルオキシ）カルベニウムヘキサフルオロホスフェート（４ｍｇ）及びジイソプロピルエチルアミン（４０μｌ）を添加した。３時間撹拌した後、この反応混合物を分取ＨＰＬＣにかけ、所望の生成物（０．４ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝９３２。
【０１１８】
７． １−（５−カルボキシペンチル）−２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，６−ジフルオロ−３，３−ジメチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物７）
【０１１９】
【化３７】
７．１ １−（５−カルボキシペンチル）−４，６−ジフルオロ−２，３−ジメチル−３−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム
【０１２０】
【化３８】
４，６−ジフルオロ−２，３−ジメチル−３−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドール（０．８ｇの未精製材料）に、６−ブロモヘキサン酸（１．６ｇ）を添加し、その溶液を２日間１４０℃に加熱した。冷却すると、生成物をアセトニトリルで希釈し、２ショットで分取ＨＰＬＣによって精製した。当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、所望の生成物（１１０ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝４３２。
【０１２１】
７．２ １−（５−カルボキシペンチル）−２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，６−ジフルオロ−３，３−ジメチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物７）
６−［（２Ｅ）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−２−［（２Ｅ，４Ｅ）−４−（フェニルイミノ）ブト−２−エニリデン］−３−（４−スルホブチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ヘキサン酸（約５ｍｇ／ｍｌを０．７ｍｌ）に、１−（５−カルボキシペンチル）−４，６−ジフルオロ−２，３−ジメチル−３−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（２．８ｍｇ）及び酢酸カリウム（６ｍｇ）を添加した。一晩の撹拌に続いて分取ＨＰＬＣを行い、当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、所望の生成物（１．６ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝９３６。
【０１２２】
８． ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−５−［（トリフルオロメチル）スルホニル］−３Ｈ−インドリウム（化合物８）
【０１２３】
【化３９】
８．１ ４−（トリフルオロメチルチオ）フェニルヒドラジン
【０１２４】
【化４０】
４−（トリフルオロメチルチオ）アニリン（５ｇ）に、ｃＨＣｌ（３００ｍｌ）を添加した。０℃〜−５℃で、水（５０ｍｌ）中の亜硝酸ナトリウム（２．５ｇ）を１５分かけて添加した。この温度でさらに２５分後に混合物を濾過し、塩化スズ（ＩＩ）二水和物を、５分かけてこの溶液に添加した。混合物を一晩撹拌しながら室温に加温した。得られた沈殿物を濾過し、白色固体（３．３ｇ）を得た。Ｍ＋＝２０８。
【０１２５】
８．２ ５−（トリフルオロメチルチオ）−２，３−ジメチル−３−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドール
【０１２６】
【化４１】
酢酸（４０ｍｌ）中の４−（トリフルオロメチルチオ）フェニルヒドラジン（１ｇ）に、５−メチル−６−オキソヘプタン−１−スルホン酸（１．４ｇ）を添加し、その溶液を一晩加熱還流した。揮発性物質をロータリーエバポレーターで除去し、粗生成物を得て、そのうちの１．１ｇを分取ＨＰＬＣで精製した。当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、所望の生成物（２６０ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝３８１。
【０１２７】
８．３ ５−（トリフルオロメチルチオ）−２，３−ジメチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム
【０１２８】
【化４２】
５−（トリフルオロメチルチオ）−２，３−ジメチル−３−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドール（３６ｍｇ）に、ブタンスルトン（２ｍｌ）を添加し、その溶液を一晩１４０℃に加熱した。冷却すると、生成物を水中で抽出し、分取ＨＰＬＣで精製した。当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、所望の生成物（１５ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝５１８。
【０１２９】
８．４ ５−（トリフルオロメチルスルホニル）−２，３−ジメチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム
【０１３０】
【化４３】
５−（トリフルオロメチルチオ）−２，３−ジメチル−１，３−ビス（４−スルホナトブチル）−３Ｈ−インドリウム（４ｍｇ）に、濃硫酸（０．４ｍｌ）及びクロム三酸化物（５ｍｇ）を添加した。６０分後に混合物を水で希釈し、分取ＨＰＬＣで精製した。当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、所望の生成物（１ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝５５０。
【０１３１】
８．５ ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−５−［（トリフルオロメチル）スルホニル］−３Ｈ−インドリウム（化合物８）
６−［（２Ｅ）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−２−［（２Ｅ，４Ｅ）−４−（フェニルイミノ）ブト−２−エニリデン］−３−（４−スルホブチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ヘキサン酸（約５ｍｇ／ｍｌを０．２１ｍｌ）に、５−（トリフルオロメチルスルホニル）−２，３−ジメチル−１，３−ビス（４−スルホナトブチル）−３Ｈ−インドリウム（１ｍｇ）及び酢酸カリウム（４ｍｇ）を添加した。一晩の撹拌に続いて分取ＨＰＬＣを行い、当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、所望の生成物（０．１ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝１０５４。
【０１３２】
９． ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（４−スルホブチル）−４，６−ビス（トリフルオロメチル）−３−メチル−３−（５−カルボキシペンチル））−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，６−ジフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物９）
【０１３３】
【化４４】
９．１ ４，６−ビス（トリフルオロメチル）−２，３−ジメチル−３−（５−カルボキシペンチル）−３Ｈ−インドール
【０１３４】
【化４５】
酢酸（２０ｍｌ）中の３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニルヒドラジン塩酸塩（１ｇ）に、７−メチル−８−オキソノナン酸（０．６６ｇ）を添加し、その溶液を５時間加熱還流した。揮発性物質をロータリーエバポレーターで除去し、粗生成物を得て、そのうちの１ｍｌを分取ＨＰＬＣで精製した。当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、所望の生成物（１７ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝３９５。
【０１３５】
９．２ ３−（５−カルボキシペンチル）−４，６−ビス（トリフルオロメチル）−２，３−ジメチル−１−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム
【０１３６】
【化４６】
４，６−ビス（トリフルオロメチル）−２，３−ジメチル−３−（５−カルボキシペンチル）−３Ｈ−インドール（３００ｍｇの未精製材料）に、ブタンスルトン（３ｍｌ）を添加し、その溶液を１日間１４０℃に加熱した。冷却すると、生成物を水中で抽出し、分取ＨＰＬＣで精製した。当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、所望の生成物（１９ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝５３２。
【０１３７】
９．３ ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（４−スルホブチル）−４，６−ビス（トリフルオロメチル）−３−メチル−３−（５−カルボキシペンチル））−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，６−ジフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物９）
３−（５−カルボキシペンチル）−４，６−ビス（トリフルオロメチル）−２，３−ジメチル−１−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（３．７ｍｇ）に、マロンアルデヒドビス（フェニルイミン）モノハイドロクロライド（１．６ｍｇ）、無水酢酸（０．５ｍｌ）及び酢酸（０．２５ｍｌ）を添加した。この混合物を１２０℃で１時間加熱し、次いで室温に冷却した。４，６−ジフルオロ−２，３−ジメチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（３．１５ｍｇ）及び酢酸カリウム（６．１ｍｇ）を添加した。一晩の撹拌に続いて分取ＨＰＬＣを行い、当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、所望の生成物（０．５ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝１０２１。
【０１３８】
１０． ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−６−（トリフルオロメチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物１０）
【０１３９】
【化４７】
１０．１ ６−トリフルオロメチル−２，３−ジメチル−３−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドール
【０１４０】
【化４８】
酢酸（３０ｍｌ）中の３−（トリフルオロメチル）フェニルヒドラジン（１ｇ）に、５−メチル−６−オキソヘプタン−１−スルホン酸（１．３ｇ）を添加し、この溶液を一晩加熱還流した。揮発性物質をロータリーエバポレーターで除去し、粗生成物を得て、そのうちの１．３ｇを分取ＨＰＬＣで精製した。当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、所望の生成物（５５ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝３４９。
【０１４１】
１０．２ ６−トリフルオロメチル−２，３−ジメチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム
【０１４２】
【化４９】
６−トリフルオロメチル−２，３−ジメチル−３−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドール（２７ｍｇ）に、ブタンスルトン（２ｍｌ）を添加し、その溶液を３日間１４０℃に加熱した。冷却すると、生成物を水中で抽出し、分取ＨＰＬＣで精製した。当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、所望の生成物（１４ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝４８６。
【０１４３】
１０．３ ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−６−（トリフルオロメチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物１０）
６−［（２Ｅ）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−２−［（２Ｅ，４Ｅ）−４−（フェニルイミノ）ブト−２−エニリデン］−３−（４−スルホブチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ヘキサン酸（約５ｍｇ／ｍｌを０．６５ｍｌ）に、６−トリフルオロメチル−２，３−ジメチル−１，３−ビス（４−スルホナトブチル）−３Ｈ−インドリウム（２．６ｍｇ）及び酢酸カリウム（６ｍｇ）を添加した。一晩の撹拌に続いて分取ＨＰＬＣを行い、当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、所望の生成物（０．１ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝９８９。
【０１４４】
１１． ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７，８，９−ヘキサフルオロ−１，１−ジメチル−３−（４−スルホブチル）−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドリウム（化合物１１）
【０１４５】
【化５０】
１１．１ （１，２，３，４，６，７，９−ヘプタフルオロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アンヌレン−８−イル）ヒドラジン
【０１４６】
【化５１】
オクタフルオロナフタレン（１．２ｇ）に、エタノール（２０ｍｌ）及びヒドラジン水和物（０．６ｍｌ）を添加した。混合物を、一晩５０℃に加熱した。冷却すると、混合物を水に注ぎ、得られた沈殿物を濾過した。空気乾燥によって、淡黄色の材料１ｇを得て、それをさらに精製せずに使用した。
Ｍ＋＝２８４。
【０１４７】
１１．２ ３−メチルブタン２−オン（１，２，３，４，６，７，９−ヘプタフルオロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アンヌレン−８−イル）ヒドラゾン
【０１４８】
【化５２】
（１，２，３，４，６，７，９−ヘプタフルオロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アンヌレン−８−イル）ヒドラジン（１ｇ）に、エタノール（２０ｍｌ）及び３−メチル−２−ブタノン（０．３８ｇ）を添加した。混合物を３時間加熱還流し、その後揮発性物質をロータリーエバポレーターで除去し、固体（１ｇ）を得て、それを次の段階で使用した。Ｍ＋＝３５２。
【０１４９】
１１．３ ４，５，６，７，８，９−ヘキサフルオロ−１，１，２−トリメチル−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール
【０１５０】
【化５３】
３−メチルブタン２−オン（１，２，３，４，６，７，９−ヘプタフルオロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アンヌレン−８−イル）ヒドラゾン（４４ｍｇ）に、テトラリン（２ｍｌ）を添加し、この混合物を一晩２００℃に加熱した。室温に冷却すると、混合物を分取ＨＰＬＣにかけた。当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、所望の生成物（２ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝３１７。
【０１５１】
１１．４ ４，５，６，７，８，９−ヘキサフルオロ−１，１，２−トリメチル−３−（４−スルホブチル）−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドリウム
【０１５２】
【化５４】
４，５，６，７，８，９−ヘキサフルオロ−１，１，２−トリメチル−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール（２ｍｇ）に、ブタンスルトン（２００μｌ）を添加し、この混合物を一晩１４０℃に加熱した。分取ＨＰＬＣの後に当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、所望の生成物（１ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝４５４。
【０１５３】
１１．５ ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７，８，９−ヘキサフルオロ−１，１−ジメチル−３−（４−スルホブチル）−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドリウム（化合物１１）
６−［（２Ｅ）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−２−［（２Ｅ，４Ｅ）−４−（フェニルイミノ）ブト−２−エニリデン］−３−（４−スルホブチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ヘキサン酸（約５ｍｇ／ｍｌを０．１８ｍｌ）に、４，５，６，７，８，９−ヘキサフルオロ−１，１，２−トリメチル−３−（４−スルホブチル）−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドリウム（０．７ｍｇ）及び酢酸カリウム（４ｍｇ）を添加した。一晩の撹拌に続いて分取ＨＰＬＣを行い、当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、所望の生成物（０．１ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝９５７。
【０１５４】
１２． ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，６−ジフルオロ−３，３−ジメチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−６−フルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−４−（トリフルオロメチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物１２）
【０１５５】
【化５５】
１２．１ ４−トリフルオロメチル−６−フルオロ−２，３−ジメチル−３−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドール
【０１５６】
【化５６】
３−トリフルオロメチル−５−フルオロフェニルヒドラジン（２ｇ）に、５−メチル−６−オキソヘプタン−１−スルホン酸（３ｇ）及び酢酸（６０ｍｌ）を添加し、この混合物を５時間１４０℃に加熱した。この後、揮発性物質をロータリーエバポレーターで除去し、残渣を水（１０ｍｌ）に溶解し、濾過し、分取ＨＰＬＣで精製し、所望の生成物（７９０ｍｇ）を得た。ＭＨ＋＝３６８。
【０１５７】
１２．２ ４−トリフルオロメチル−６−フルオロ−２，３−ジメチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム
【０１５８】
【化５７】
４−トリフルオロメチル−６−フルオロ−２，３−ジメチル−３−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドール（７９０ｍｇ）に、ブタンスルトン（１０ｍｌ）を添加し、この混合物を１４０℃で一晩加熱した。混合物を水（４ｍｌ）で希釈し、濾過し、分取ＨＰＬＣで精製し、所望の物質（１ｇ）を得た。ＭＨ＋＝５０５。
【０１５９】
１２．３ ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，６−ジフルオロ−３，３−ジメチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−６−フルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−４−（トリフルオロメチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物１２）
６−［（２Ｅ）−４，６−ジフルオロ−３，３−ジメチル−２−［（２Ｅ，４Ｅ）−４−（フェニルイミノ）ブト−２−エニリデン］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ヘキサン酸（０．０４ｍｍｏｌ）に、４−トリフルオロメチル−６−フルオロ−２，３−ジメチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（２０ｍｇ）及び酢酸カリウム（３５ｍｇ）を添加した。一晩の撹拌に続いて分取ＨＰＬＣを行い、当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、所望の生成物（４．２ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝８４９。
【０１６０】
１３． ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，６−ジフルオロ−３，３−ジメチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，６−ジフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物１３）
【０１６１】
【化５８】
１３．１ ６−［（２Ｅ）−４，６−ジフルオロ−３，３−ジメチル−２−［（２Ｅ，４Ｅ）−４−（フェニルイミノ）ブト−２−エニリデン］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ヘキサン酸（０．０４ｍｍｏｌ）に、４，６−ジフルオロ−２，３−ジメチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（１８．１ｍｇ）及び酢酸カリウム（３５ｍｇ）を添加した。一晩の撹拌に続いて分取ＨＰＬＣを行い、当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、所望の生成物（１０．７ｍｇ）を得た。ＭＨ＋＝８００。
【０１６２】
１４． ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，６−ジフルオロ−３，３−ジメチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−３−メチル−５−スルホ−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物１４）
【０１６３】
【化５９】
１４．１ ２，３−ジメチル−３−（４−スルホブチル）−５−スルホ−３Ｈ−インドール
【０１６４】
【化６０】
ヒドラジノベンゼンスルホン酸（４０ｇ）に、酢酸（５００ｍｌ）及び５−メチル−６−オキソヘプタン−１−スルホン酸（６０ｇ）を添加した。混合物を、６時間１５０℃に加熱し、次いで室温に冷却した。濾過後に、揮発性物質をロータリーエバポレーターで除去し、固体（１１０ｇ）を得て、そのうちの１００ｇをメタノール（１Ｌ）中で溶解し、メタノール（３００ｍｌ）中の水酸化カリウム（３８ｇ）を添加した。この混合物を１時間撹拌し、次いで一晩静置した。液体層をデカントし、揮発性物質をロータリーエバポレーターで除去して、淡黄色の固体（８０ｇ）として生成物を得た。
【０１６５】
１４．２ ２，３−ジメチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−５−スルホ−３Ｈ−インドール
【０１６６】
【化６１】
２，３−ジメチル−３−（４−スルホブチル）−５−スルホ−３Ｈ−インドール（１０ｇ）に、ブタンスルトン（３０ｇ）を添加し、この混合物を一晩１４０℃に加熱した。室温に冷却すると、スルホラン（２０ｍｌ）を添加し、この混合物をジエチルエーテル（５００ｍｌ）に注いだ。生成した沈殿を濾過により除去し、乾燥して、所望の生成物（１２ｇ）を得た。
【０１６７】
１４．３ ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，６−ジフルオロ−３，３−ジメチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−３−メチル−５−スルホ−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物１４）
６−［（２Ｅ）−４，６−ジフルオロ−３，３−ジメチル−２−［（２Ｅ，４Ｅ）−４−（フェニルイミノ）ブト−２−エニリデン］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ヘキサン酸（０．０４ｍｍｏｌ）に、２，３−ジメチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−５−スルホ−３Ｈ−インドール（２０ｍｇ）及び酢酸カリウム（３５ｍｇ）を添加した。一晩の撹拌に続いて分取ＨＰＬＣを行い、当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、所望の生成物（８．９ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝８４３。
【０１６８】
１５． ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［３−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物１５）
【０１６９】
【化６２】
１５．１ ６−（４，５，６，７−テトラフルオロ−２，３−ジメチル−３Ｈ−インドール−３−イル）ヘキサン酸
【０１７０】
【化６３】
テトラフルオロフェニルヒドラジン（２ｇ）に、５−メチル−６−オキソヘプタン−１−カルボン酸（３ｇ）及び酢酸（５０ｍｌ）を添加し、この混合物を５時間１４０℃に加熱した。冷却すると、揮発性成分をロータリーエバポレーターで除去し、残渣を水（１０ｍｌ）に溶解し、濾過し、２ショットで分取ＨＰＬＣにより精製し、所望の生成物（６００ｍｇ）を得た。ＭＨ＋＝３３２。
【０１７１】
１５．２ ３−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−２，３−ジメチル−１−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム
【０１７２】
【化６４】
６−（４，５，６，７−テトラフルオロ−２，３−ジメチル−３Ｈ−インドール−３−イル）ヘキサン酸（６００ｍｇ）に、ブタンスルトン（４ｍｌ）を添加し、この混合物を一晩１４０℃に加熱した。冷却すると、この混合物を水（４ｍｌ）で希釈し、濾過し、分取ＨＰＬＣで精製し、所望の生成物（８００ｍｇ）を得た。ＭＨ＋＝４６８。
【０１７３】
１５．３ ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［３−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物１５）
３−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−２，３−ジメチル−１−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（１９ｍｇ）に、マロンアルデヒドビスフェニルイミン（９．４ｍｇ）、無水酢酸（０．５ｍｌ）及び酢酸（０．２５ｍｌ）を添加した。混合物を、１２０℃で１時間加熱し、次いで室温まで冷却した。２，３−ジメチル−４，５，６，７−テトラフルオロ−１，３−ビス（４−スルホナトブチル）−３Ｈ−インドリウム（２０ｍｇ）及び酢酸カリウム（３５．７ｍｇ）を添加し、この混合物を一晩撹拌した。分取ＨＰＬＣ精製によって、所望の生成物（４．５ｍｇ）を得た。ＭＨ＋＝９９４。
【０１７４】
１５．４ ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［３−｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム
【０１７５】
【化６５】
２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［３−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（２ｍｇ）に、ＤＭＳＯ（１ｍｌ）、ジピロリジノ−（Ｎ−スクシンイミジルオキシ）カルベニウムヘキサフルオロホスフェート（４ｍｇ）及びジイソプロピルエチルアミン（４０μｌ）を添加した。３時間撹拌した後、反応混合物を分取ＨＰＬＣにかけ、所望の生成物（０．７ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝１０９１。
【０１７６】
１６． ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［３−（５−カルボキシペンチル）−６−フルオロ−３−メチル−１−（４−スルホブチル）−４−（トリフルオロメチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物１６）
【０１７７】
【化６６】
１６．１ ６−（４−トリフルオロメチル−６−フルオロ−２，３−ジメチル−３Ｈ−インドール−３−イル）ヘキサン酸
【０１７８】
【化６７】
３−トリフルオロメチル−５−フルオロフェニルヒドラジン（２ｇ）に、５−メチル−６−オキソヘプタン−１−カルボン酸（３ｇ）及び酢酸（５０ｍｌ）を添加し、この混合物を５時間１４０℃に加熱した。冷却すると、揮発性成分をロータリーエバポレーターで除去し、残渣を水（１０ｍｌ）に溶解し、濾過し、２ショットで分取ＨＰＬＣによって精製し、所望の生成物（６００ｍｇ）を得た。ＭＨ＋＝３４６。
【０１７９】
１６．２ ３−（５−カルボキシペンチル）−４−トリフルオロメチル−６−フルオロ−２，３−ジメチル−１−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム
【０１８０】
【化６８】
６−（４−トリフルオロメチル−６−フルオロ−２，３−ジメチル−３Ｈ−インドール−３−イル）ヘキサン酸（６００ｍｇ）に、ブタンスルトン（４ｍｌ）を添加し、この混合物を一晩１４０℃に加熱した。冷却すると、混合物を水（４ｍｌ）で希釈し、濾過し、分取ＨＰＬＣで精製し、所望の生成物（８００ｍｇ）を得た。ＭＨ＋＝４８３。
【０１８１】
１６．３ ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［３−（５−カルボキシペンチル）−６−フルオロ−３−メチル−１−（４−スルホブチル）−４−（トリフルオロメチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物１６）
３−（５−カルボキシペンチル）−４−トリフルオロメチル−６−フルオロ−２，３−ジメチル−１−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（５０ｍｇ）に、マロンアルデヒドビスフェニルイミン（２４ｍｇ）、無水酢酸（０．５ｍｌ）及び酢酸（０．２５ｍｌ）を添加した。混合物を１２０℃で１時間加熱し、次いで室温に冷却した。２，３−ジメチル−４，５，６，７−テトラフルオロ−１，３−ビス（４−スルホナトブチル）−３Ｈ−インドリウム（５１ｍｇ）及び酢酸カリウム（９２ｍｇ）を添加し、混合物を一晩撹拌した。分取ＨＰＬＣ精製によって、所望の生成物（１９．５ｍｇ）を得た。ＭＨ＋＝１００８。
【０１８２】
１６．４ ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［３−｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝−６−フルオロ−３−メチル−１−（４−スルホブチル）−４−（トリフルオロメチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム
【０１８３】
【化６９】
２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［３−（５−カルボキシペンチル）−４−トリフルオロメチル−６−フルオロ−３−メチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（５ｍｇ）に、ＤＭＳＯ（１ｍｌ）、ジピロリジノ−（Ｎ−スクシンイミジルオキシ）カルベニウムヘキサフルオロホスフェート（１０ｍｇ）及びジイソプロピルエチルアミン（４０μｌ）を添加した。３時間撹拌した後、反応混合物を分取ＨＰＬＣにかけ、所望の生成物（２．１ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝１１０４。
【０１８４】
１６．５ ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［３−（６−｛［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ｐｙｒｒｏｌ−１−イル）エチル］アミノ｝−６−オキソヘキシル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム
【０１８５】
【化７０】
Ｎ−［２−（Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル）アミノエチル］マレイミド（４ｍｇ）を、４ＭのＨＣｌと共に、ダイオキシン（１００μｌ）中で１時間撹拌した。回転蒸発の後、ＤＭＦ（１ｍｌ）中の２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［３−｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝−６−フルオロ−３−メチル−１−（４−スルホブチル）−４−（トリフルオロメチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（２ｍｇ）及びジイソプロピルエチルアミン（４０μｌ）を添加し、混合物を２時間撹拌した。分取ＨＰＬＣによって所望の生成物（２．１ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝１１２９。
【０１８６】
１７． ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［３−（５−カルボキシペンチル）−４−トリフルオロメチル−６−フルオロ−３−メチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−３−（５−カルボキシペンチル）−４−トリフルオロメチル−６−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−インドリウム（化合物１７）
【０１８７】
【化７１】
１７．１ ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［３−（５−カルボキシペンチル）−４−トリフルオロメチル−６−フルオロ−３−メチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−３−（５−カルボキシペンチル）−４−トリフルオロメチル−６−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−インドリウム（化合物１７）
１６．３で記載した実験で、分取ＨＰＬＣ（８．５ｍｇ）によって単離されたこの物質も得られた。ＭＨ＋＝１０００。
【０１８８】
１８． ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ，７Ｅ）−７−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ヘプタ−１，３，５−トリエニル｝−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−４，６−ビス（トリフルオロメチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物１８）
【０１８９】
【化７２】
１８．１ ４，６−ビス（トリフルオロメチル）−２，３−ジメチル−３−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドール
【０１９０】
【化７３】
酢酸（３０ｍｌ）中の３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニルヒドラジン（１ｇ）に、５−メチル−６−オキソヘプタン−１−スルホン酸（１．５ｇ）を添加し、その溶液を３日間加熱還流した。揮発性物質をロータリーエバポレーターで除去し、粗生成物を得て、そのうち０．８ｇを分取ＨＰＬＣで精製した。当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、所望の生成物（６０ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝４１７。
【０１９１】
１８．２ ４，６−ビス（トリフルオロメチル）−２，３−ジメチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム
【０１９２】
【化７４】
４，６−ビス（トリフルオロメチル）−２，３−ジメチル−３−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドール（２７ｍｇ）に、ブタンスルトン（２ｍｌ）を添加し、その溶液を３日間１４０℃に加熱した。冷却すると、生成物を水中で抽出し、分取ＨＰＬＣで精製した。当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、所望の生成物（７ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝５５４。
【０１９３】
１８．３ ６−［（２Ｅ）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−２−［（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−６−（フェニルイミノ）ヘキサ−２，４−ジエニリデン］−３−（４−スルホブチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ヘキサン酸
【０１９４】
【化７５】
１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（２４ｍｇ）に、Ｎ−５−（フェニルアミノ）−２，４−ペンタジエニリデンモノハイドロクロライド（１３ｍｇ）、無水酢酸（４ｍｌ）及び酢酸（２ｍｌ）を添加した。この混合物を、１時間４５分間１２０℃に加熱し、その後室温に冷却した。この未精製の反応混合物（約５ｍｇ／ｍｌの生成物）をさらに説明するように、精製せずに使用した。
【０１９５】
１８．４ ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ，７Ｅ）−７−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ヘプタ−１，３，５−トリエニル｝−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−４，６−ビス（トリフルオロメチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物１８）
６−［（２Ｅ）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−２−［（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−６−（フェニルイミノ）ヘキサ−２，４−ジエニリデン］−３−（４−スルホブチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ヘキサン酸（約５ｍｇ／ｍｌを１．６ｍｌ）に、４，６−ビス（トリフルオロメチル）−２，３−ジメチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（７ｍｇ）及び酢酸カリウム（１０ｍｇ）を添加した。一晩の撹拌に続いて分取ＨＰＬＣを行い、当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、所望の生成物（１ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝１０８３。
【０１９６】
１９． ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ，７Ｅ）−７−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ヘプタ−１，３，５−トリエニル｝−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−５−トリフルオロメチル−３Ｈ−インドリウム（化合物１９）
【０１９７】
【化７６】
１９．１ ５−トリフルオロメチル−２，３−ジメチル−３−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドール
【０１９８】
【化７７】
酢酸（３０ｍｌ）中の４−（トリフルオロメチル）フェニルヒドラジン（２．１８ｇ）に、５−メチル−６−オキソヘプタン−１−スルホン酸（４ｇ）を添加し、その溶液を一晩加熱還流した。揮発性物質をロータリーエバポレーターで除去し、粗生成物を得て、そのうちの０．４４ｇを分取ＨＰＬＣで精製した。当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、所望の生成物（１８０ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝３４９。
【０１９９】
１９．２ ５−トリフルオロメチル−２，３−ジメチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム
【０２００】
【化７８】
５−トリフルオロメチル−２，３−ジメチル−３−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドール（５０ｍｇ）に、ブタンスルトン（２ｍｌ）を添加し、その溶液を１４０℃に３日間加熱した。冷却すると、生成物を水中で抽出し、分取ＨＰＬＣで精製した。当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、所望の生成物（２９ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝４８６。
【０２０１】
１９．３ ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ，７Ｅ）−７−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ヘプタ−１，３，５−トリエニル｝−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−５−トリフルオロメチル−３Ｈ−インドリウム（化合物１９）
６−［（２Ｅ）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−２−［（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−６−（フェニルイミノ）ヘキサ−２，４−ジエニリデン］−３−（４−スルホブチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ヘキサン酸（約５ｍｇ／ｍｌを１．６ｍｌ）に、５−トリフルオロメチル−２，３−ジメチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（６ｍｇ）及び酢酸カリウム（１０ｍｇ）を添加した。一晩の撹拌に続いて分取ＨＰＬＣを行い、当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、所望の生成物（２．８ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝１０１５。
【０２０２】
２０． ２−｛（１Ｅ，３Ｅ）−３−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］プロペ−１−ニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物２０）
【０２０３】
【化７９】
２０．１ １−（５−カルボキシペンチル）−２，３−ジメチル−３−（４−スルホブチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３Ｈ−インドリウム（２ｍｇ）に、２，３−ジメチル−４，５，６，７−テトラフルオロ−１，３−ビス（４−スルホナトブチル）−３Ｈ−インドリウム（２．３ｍｇ）、エタノール（０．５ｍｌ）、トリエチルオルトホルメート（１００μｌ）及びピリジン（２０μｌ）を添加した。この混合物を、油浴において１２０℃で４時間加熱し、その後一晩室温に置いた。この混合物を水で希釈し、分取ＨＰＬＣを行った。当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、所望の生成物（０．１ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝９６７。さらなる化合物も、２１で説明するように単離した。
【０２０４】
２１． １−（５−カルボキシペンチル）−２−｛（１Ｅ，３Ｅ）−３−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］プロペ−１−ニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物２１）
【０２０５】
【化８０】
２１．１ ２０．１で説明した実験によって、分取ＨＰＬＣによって単離したこの物質が得られた（０．１ｍｇ）。Ｍ＋＝９４５。
【０２０６】
２２． ３−（５−カルボキシペンチル）−３−メチル−２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−５−スルホ−１−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物２２）
【０２０７】
【化８１】
２２．１ ２，３−ジメチル−１，３−ビス（４−スルホナトブチル）−３Ｈ−インドリウム、ジナトリウム塩
【０２０８】
【化８２】
スルホン化インドール（〜５ｇ、１８ｍｍｏｌ）及びブタンスルトン（１２．２ｇ、９０ｍｍｏｌ、５当量）を、１４０°で４時間撹拌した。反応混合物を冷却し、次いで撹拌しながら酢酸エチルに注いだ。この物質は沈殿せず、油として残り、ここから酢酸エチルをデカントした。収量：〜１０ｇ。Ｍ＋＝４１８。
【０２０９】
２２．２ ３−（５−カルボキシペンチル）−３−メチル−２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−５−スルホ−１−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物２２）
２，３−ジメチル−３−（５−カルボキシペンチル）−５−スルホ−１−（３−スルホブチル）インドリウム、ジナトリウム塩（３．４ｇ、６．８４ｍｍｏｌ）を、トリエチルアミン（２．５ｍｌ）を含有する酢酸（２５ｍｌ）中で溶解した。マロンアルデヒドビスフェニルイミンＨＣｌ（４．１５ｇ、１６ｍｍｏｌ）を添加し、この混合物を一晩撹拌しながら１４０℃で加熱した。反応混合物をロータリーエバポレーターにかけて、赤色油を得て、これを水（５０ｍｌ）及びアセトニトリル（３０ｍｌ）中で溶解した。これを濾過し、精製し、色素中間体１ｇを得た。色素中間体を、１当量の２，３−ジメチル−１，３−ビス（４−スルホナトブチル）−３Ｈ−インドリウム（ジナトリウム塩）及び酢酸カリウム（２ｇ）と共に、酢酸：酢酸（１：１、５０ｍｌ）中で溶解した。反応物を、１２０°で４時間撹拌し、次いで乾燥するまでロータリーエバポレーターにかけて、逆相ＨＰＬＣによって精製した。収量：８５ｍｇ。Ｍ＋＝９２９。
【０２１０】
２３． 光安定性試験
光安定性試験を、下記で詳述する通り行った。全てのフルオロフォアを、等モル濃度で水中にて溶解した。各々の溶液をさらにバイアルに分けた。いくつかのバイアルを、実験の間対照試料として暗い環境に保持した。その他は強い光源に曝した。
【０２１１】
Ｗａｌｌａｃライトボックス（１２９５−０１３）を強い光源として使用した。試料を光源の２２ｃｍ上に保持し、連続して光に曝した。各々の試料のＵＶ／可視スペクトルを、２４時間毎に測定した。各々の測定点で同じキュベット及び分光光度計を使用した。暗所に保持した対照試料については、ＵＶ／可視吸収スペクトルを実験の開始と終了時の両方で測定した。７組の実験を行った。
【０２１２】
２３．１ Ｃｙ５Ｆ（化合物１）及び化合物４の光安定性を、非フッ素化類似体Ｃｙ５と比較して試験した。
【０２１３】
２３．２ Ｃｙ７Ｆ（化合物２）、化合物１８及び化合物１９の光安定性を、非フッ素化類似体Ｃｙ７と比較した。
【０２１４】
２３．３ 化合物３及び化合物２２の光安定性を、Ａｌｅｘａ６４７（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）と比較した。
【０２１５】
２３．４ 化合物５、７、９、１１及び１３の光安定性を、Ａｌｅｘａ６４７（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）及びＣｙ５と比較した。
【０２１６】
２３．５ 化合物６、８、１０、１２及び１４の光安定性を、Ｃｙ５と比較した。
【０２１７】
２３．６ 化合物１５、１６及び１７の光安定性を、Ａｌｅｘａ６４７（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）及びＣｙ５と比較した。
【０２１８】
２３．７ 化合物２０及び化合物２１の光安定性を、Ｃｙ３．と比較した。
【０２１９】
各々の実験のデータを正規化し、図３、４、５、６、７、８及び９に示すようにグラフ化した。非フッ素化色素類似体と比較した場合、フッ素化色素は、光退色に対する抵抗性が大きいことを一般に示すことが、その結果によって示された。同じ期間に亘って光に曝されていなかった対照の反応は、吸収の減少を示さなかった。
【図面の簡単な説明】
【０２２０】
【図１】式（ＩＩ）及び式（ＩＩＩ）に関して、合成されたフッ素化色素化合物（化合物１〜化合物２１）をまとめた図である。
【図２】式（ＩＩ）及び式（ＩＩＩ）に関して、合成されたフッ素化色素化合物（化合物１〜化合物２１）をまとめた図である。
【図３】Ｃｙ５Ｆ（化合物１）及び化合物５の光安定性のデータを例示したグラフである。比較をする目的で、非フッ素化類似体Ｃｙ（商標）５の光安定性のデータも示す。
【図４】非フッ素化類似体（Ｃｙ７）と比較して、Ｃｙ７Ｆ（化合物２）、化合物１８及び化合物１９の光安定性のデータを示したグラフである。
【図５】Ａｌｅｘａ（登録商標）６４７（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）と比較して、化合物３及び化合物２２の光安定性のデータを示したグラフである。
【図６】Ａｌｅｘａ（登録商標）６４７（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）及びＣｙ５と比較して、化合物５、７、９、１１及び１３の光安定性のデータを示したグラフである。
【図７】Ｃｙ５と比較して、化合物６、８、１０、１２及び１４の光安定性のデータを示したグラフである。
【図８】Ａｌｅｘａ（登録商標）６４７（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）及びＣｙ５と比較して、化合物１５、１６及び１７の光安定性のデータを示したグラフである。
【図９】Ｃｙ３と比較して、化合物２０及び化合物２１の光安定性のデータを示したグラフである。
【図１０】Ｔ＝９６時間のデータポイントでの光安定性の順序に並び替えた、化合物１、３及び５〜１７を示すグラフである。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、蛍光標識試薬の分野、特に、フルオロ置換基を含有する反応性シアニン色素及びこのような色素を利用する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
シアニン色素は、タンパク質、核酸、ホルモン及び薬物などの生物学的に重要な分子の蛍光標識用の試薬に広範に使用されている。実際、シアニン色素は、他の蛍光色素に勝るいくつかの利点を提供する。例えば、シアニン色素の励起及び発光スペクトルは、４５０ｎｍ〜８００ｎｍの可視及び近赤外スペクトルに及ぶ。さらに、シアニン色素は、非常に高い消衰係数、有利な量子収率を有することを特徴とする。例えば、米国特許第６０４８９８２号、同第５２６８４８６号、同５５６９５８７号（Ｗａｇｇｏｎｅｒ，Ａ．Ｓ．ｅｔ ａｌ）を参照されたい。しかし、ある種のシアニン色素構造において、自己会合（又は凝集）し、蛍光消光及び吸光度において著しい浅色性の波長シフトが生じる傾向がある。
【０００３】
最近、Ｗａｇｇｏｎｅｒ ｅｔ ａｌ（Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔｅｒｓ，（２００４），６（６），９０９−９１２）は、水性溶媒中で良好な光安定性を有するポリフルオロ−チアジカルボシアニン色素（ｉ）について記載している。この色素は、非フッ素化類似体と比較した場合、凝集の減少、量子収量の向上及び光退色に対する抵抗性の向上を示した。
【０００４】
【化１】
反応性基又はコンジュゲート物質を導入するための、カルボシアニン色素のインドリニウム環の３位の１以上における修飾については、国際公開第０２／２６８９１号（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ Ｉｎｃ．）に記載されている。国際公開第０２／２６８９１号による修飾色素も、シアニン色素の自己会合する傾向を克服していると報告され、修飾色素で標識した色素コンジュゲートは、構造的に同様なカルボシアニン色素で標識したコンジュゲートより蛍光性であると報告されている。
【０００５】
特願平５−３１３３０４号（富士写真フイルム（株））には、複数のスルホネート基を含む色素が組み込まれ、式（ｉｉ）で表される銀塩感光材料が開示されている。
【０００６】
【化２】
式中、Ｒ１０及びＲ１１は、アルキルカルボキシレート又はアルキルスルホネート部分とすることができ、Ａとしては以下のものが挙げられる。
【０００７】
【化３】
特開昭６１−２４８７８９号（（株）リコー）には、式（ｉｉｉ）の化合物を含有する記録層を含めた光情報記録媒体が開示されている。
【０００８】
【化４】
式中、Ａは次式で表され、
【０００９】
【化５】
Ｙはハロゲン原子であり、ａは１〜４の整数であり、Ｒ１及びＲ２はＣ１〜Ｃ５アルキル基であり、Ｒ３はスルホニル基又はカルボキシル基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ１０アルキル基であり、Ｒ４は水素、ハロゲン、アミノ又はアルカノイルオキシであり、Ｚは４〜８員環の形成のために必要な原子団であり、ｍ及びｎは０〜３の整数（ｍ＋ｎ≦３）である。Ｍａｄｅｒ，Ｏ．ｅｔ ａｌ（Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．，（２００４），１５，７０−７８）は、芳香環位置においてスルホネート、フッ素及びメチルで置換された一連のペンタメチンインドシアニン色素の合成及び光物理的性質について記載している。
【特許文献１】米国特許第６０４８９８２号明細書
【特許文献２】米国特許第５２６８４８６号明細書
【特許文献３】米国特許５５６９５８７号明細書
【特許文献４】国際公開第０２／２６８９１号パンフレット
【特許文献５】特願平５−３１３３０４号公報
【特許文献６】特開昭６１−２４８７８９号公報
【非特許文献１】Waggoner et al, Org.Letters, (2004), 6(6), 909-912
【非特許文献２】Mader, O. et al, Bioconjugate Chem., (2004), 15, 70-78
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１０】
シアニン発色団のインドリニウムの１位及び／又は３位に結合した１以上のスルホン酸基と同様に、１以上、好ましくは複数のフルオロ置換基も含有する色素である、反応性シアニン色素及び物質にコンジュゲートするシアニン色素については、上記の文献のいずれも開示していない。本明細書に記載し特許請求する色素は、標的材料の直接の共有結合標識に適した１以上の基を備えることができる。本発明は、シアニン色素及びこのような色素とコンジュゲートする成分を提供するものであり、このシアニン色素は、光安定性の向上及び色素−色素相互作用の減少という特性を有する。従って、本発明の色素は、例えば、動態検査における連続した励起が必要である蛍光検出を伴うアッセイにおいて、又は数日間に亘りマイクロアレイスライドの再分析が必要となり得るマイクロアレイ分析において、特に有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
従って、第１の態様において式（Ｉ）の化合物が提供される。
【００１２】
【化６】
式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基は−Ｌ−Ｍ、−Ｌ−Ｐ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈ（式中、ｋは１〜１０の整数である）から独立に選択され、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基は水素、−Ｌ−Ｍ、−Ｌ−Ｐ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２−ＣＦ３及び−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは０又は１〜４の整数である）から独立に選択されるか、或いはＲ３とＲ４との組合せ又はＲ５とＲ６との組合せ及び／又はＲ７とＲ８との組合せ又はＲ９とＲ１０との組合せが炭素原子を含有する縮合芳香族六員環を形成していて、適宜−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２−ＣＦ３又は−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは上記で定義した通りである。）で１回以上置換されていてもよく、
Ｌは炭素、窒素、酸素及び硫黄原子からなる群から選択される１〜２０個の連結原子の鎖を有する連結基であり、
Ｍは標的結合基であり、
Ｐはコンジュゲート成分であり、
Ｒ１５基は水素であるか、或いは２以上のＲ１５基が結合して単環又は二環縮合炭化水素系（各環は５個又は６個の炭素原子を有し、残りのＲ１５基は水素である）を形成し、
ｎは１〜３の整数であるが、ただし
ｉ）Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基の１以上が−Ｌ−Ｍ又は−Ｌ−Ｐであり、
ｉｉ）Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の１以上がフッ素を含んでおり、しかも
ｉｉｉ）Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０のいずれかが−ＳＯ３Ｈである場合には、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基の１以上が−Ｌ−Ｍ、−Ｌ−Ｐ及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈから選択される
ことを条件とする。
【００１３】
式（Ｉ）の化合物は、色素発色団上の形式電荷（又は複数の電荷）と釣り合うように正又は負とすることができる対イオンを含むことが適切であろう。対イオンの性質は、本発明に重要なものではなく、ＮＨ４＋、Ｋ＋、Ｎａ＋、トリフルオロアセテート（Ｆ３Ｃ−ＣＯ２−）、パークロレート（ＣｌＯ４−）、Ｂｒ−又はＩ−など多数の公知のイオンいずれかでよい。本発明の状況において、スルホネートは親酸のイオン化した形態であるので、スルホン酸基（−ＳＯ３Ｈ）もスルホネート基（−ＳＯ３−）を含むことを理解されたい。
【００１４】
第１の態様に係る一実施形態では、式（Ｉ）の化合物が提供されるが、上記式中、
Ｒ１及びＲ２基は−Ｌ−Ｍ、−Ｌ−Ｐ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈから独立に選択され、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基は水素、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２−ＣＦ３及び−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは０又は１〜４の整数である）から独立に選択されるか、或いはＲ３とＲ４との組合せ又はＲ５とＲ６との組合せ及び／又はＲ７とＲ８との組合せ又はＲ９とＲ１０との組合せが炭素原子を含有する縮合芳香族六員環を形成していて、適宜−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２−ＣＦ３又は−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは上記で定義した通りである。）で１回以上置換されていてもよく、
Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈから独立に選択され、
Ｒ１５基、Ｌ、Ｍ及びＰ、ｋ及びｎは上記で定義した通りであるが、ただし
ｉ）Ｒ１及びＲ２基の１以上が−Ｌ−Ｍ又は−Ｌ−Ｐであり、
ｉｉ）Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の１以上がフッ素を含んでおり、しかも
ｉｉｉ）Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０のいずれかが−ＳＯ３Ｈである場合は、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基の１以上が−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈである
ことを条件とする。
【００１５】
第１の態様に係る他の実施形態では、式（Ｉ）の化合物が提供されるが、式中、
Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基は−Ｌ−Ｍ、−Ｌ−Ｐ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈから独立に選択され、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基は水素、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２−ＣＦ３及び−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは０又は１〜４の整数である）から独立に選択されるか、或いはＲ３とＲ４との組合せ又はＲ５とＲ６との組合せ及び／又はＲ７とＲ８との組合せ又はＲ９とＲ１０との組合せが炭素原子を含有する縮合芳香族六員環を形成していて、適宜−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２−ＣＦ３又は−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは上記で定義した通りである。）で１回以上置換されていてもよく、
Ｒ１及びＲ２基は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈから独立に選択され、
Ｒ１５基、Ｌ、Ｍ及びＰ、ｋ及びｎは上記で定義した通りであるが、ただし
ｉ）Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基の１以上が−Ｌ−Ｍ又は−Ｌ−Ｐであり、
ｉｉ）Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の１以上がフッ素を含んでおり、しかも
ｉｉｉ）Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０のいずれかが−ＳＯ３Ｈである場合には、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基の１以上は−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈである
ことを条件とする。
【００１６】
好ましくは、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の１以上はフッ素である。
【００１７】
好ましい一実施形態では、Ｒ１５基は全て水素である。他の実施形態では、式（Ｉ）の化合物の複素環部分を連結するポリメチン架橋は次の一般式の炭化水素環系を含んでいてもよい。
【００１８】
【化７】
式中、ｎは１〜３の整数であり、ｐは０又は１である。残りのＲ１５基は水素である。ポリメチン架橋を形成する炭化水素環系の例を、表１に示す。
【００１９】
【表１】
連結基Ｌは、標的結合基Ｍ又はコンジュゲート成分Ｐを、式（Ｉ）の化合物中のシアニン発色団と連結させ、色素のＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及び／又はＲ１４位と共有結合するのに適切である。好ましくは、本発明の色素は、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３又はＲ１４位のいずれかと共有結合した単一の標的結合基−Ｌ−Ｍを含有する。当業者であれば、本発明による標的結合基を有する色素は、−Ｌ−Ｐ基を含んでもよく、蛍光色素が標的成分にコンジュゲートしていることを理解するであろう。好適には、Ｌは、炭素、窒素、酸素及び硫黄原子を含む１〜２０個の連結原子の直鎖又は枝分れ鎖である。好ましくは、Ｌは次式を有する連結基である。
【００２０】
−（ＣＨＲ′）ｐ−Ｑ−（ＣＨＲ′）ｒ−
式中、Ｑは、−ＣＨＲ′−、−ＮＲ′−、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＣＲ′＝ＣＲ′−、−Ａｒ−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ′−及び−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−（式中、Ｒ′は、水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり、Ａｒはスルホネートで置換されていてもよいフェニレンである）から選択され、ｐは０〜５であり、ｒは１〜５である。Ｑは、好ましくは−ＣＨＲ′−及び−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（式中、Ｒ′は水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルである）から選択され、さらに好ましくはＱは、−ＣＨＲ′−であり、Ｒ′は水素である。本発明の特に好ましい実施形態では、−Ｌ−Ｍ及び／又は−Ｌ−Ｐは、カルボキシペンチル基を含む。
【００２１】
好適には、本発明の蛍光シアニン色素はシアニン色素発色団に直接又は間接に置換した１以上、好ましくは２以上のフッ素原子を含む。一実施形態では、式（Ｉ）の化合物は好適にはＲ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６位並びに／或いはＲ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０位の１以上、好ましくは２以上、さらに好ましくは３以上がフッ素原子で置換される。この実施形態では、１以上のフッ素原子による置換は、対称又は非対称色素を生じさせ得る。特に好ましい実施形態では、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６位並びに／或いはＲ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０位の各々は、フッ素で置換される。シアニン色素発色団のペルフルオロ置換によって、色素−色素の凝集が低減し、従って蛍光消光が減少し、色素の光安定性が高まることが見い出された（Ｗａｇｇｏｎｅｒ他、上掲）。或いは、式（Ｉ）の化合物は、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５又はＲ６位並びに／或いはＲ７、Ｒ８、Ｒ９又はＲ１０位のいずれか、好ましくは２つ以下において、ペルフルオロＣ１〜Ｃ４アルキル置換基を含んでいてもよい。残りのＲ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基は、Ｈ又はＦから選択されるが、残りのＲ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の１以上がＦであることを条件とする。好ましくは、ペルフルオロＣ１〜Ｃ４アルキル置換基はトリフルオロメチルである。さらに好ましい実施形態では、式（Ｉ）の化合物は、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５又はＲ６位並びに／或いはＲ７、Ｒ８、Ｒ９又はＲ１０位の１以上、通常２つ以下において置換された、−ＳＯ２−ＣＦ３基を含んでいてもよい。残りのＲ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基は、Ｈ又はＦ、好ましくはＦから選択される。
【００２２】
インドール又はベンズインドール環系を有する本発明のシアニン色素の具体例を、表２の式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）及び（ＩＶ）の化合物として示す。
【００２３】
【表２】
式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）及び（ＩＶ）の化合物において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基の１以上は−Ｌ−Ｍ又は−Ｌ−Ｐであり、Ｌは次式の連結基であり
−（ＣＨＲ′）ｐ−Ｑ−（ＣＨＲ′）ｒ−
（式中、Ｑは、−ＣＨＲ′−、−ＮＲ′−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ′−及び−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−（式中、Ｒ′は水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルである）から選択され、ｐは０〜５であり、ｒは１〜５である。）、
Ｍは標的結合基であり、
Ｐはコンジュゲート成分であり、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基のいずれかが−Ｌ−Ｍ又は−Ｌ−Ｐでない場合、残りのＲ１、Ｒ２、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基はＣ１〜Ｃ６アルキル及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈ（式中、ｋは１〜１０の整数である）から独立に選択され、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の１以上は−ＳＯ２−ＣＦ３及び−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは０又は１〜４の整数である）から選択される１以上のフルオロ基を含み、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基のいずれかが−ＳＯ２−ＣＦ３又は−（ＣＦ２）ｍ−Ｆでない場合には、残りのＲ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基は水素であり、
Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、Ｒ１９、Ｒ２０、Ｒ２１、Ｒ２２及びＲ２３基は、存在する場合、水素、−ＳＯ２−ＣＦ３及び−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは上記で定義した通りである。）から独立に選択され、
ｎは１〜３の整数である。
【００２４】
一実施形態では、式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）及び（ＩＶ）の化合物のＲ１及びＲ２基の１以上は−Ｌ−Ｍ又は−Ｌ−Ｐであり、残りのＲ１又はＲ２基はＣ１〜Ｃ６アルキル及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈから選択され、
Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基の１以上は−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈであり、残りのＲ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基は、Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、Ｒ１９、Ｒ２０、Ｒ２１、Ｒ２２、Ｒ２３基、Ｌ、Ｍ、Ｐ、ｋ及びｎは上記で定義した通りである。好ましくは、残りのＲ１又はＲ２基は−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈである。
【００２５】
好ましくは、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の１以上はフッ素である。
【００２６】
この実施形態では、好適には、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基の２以上は−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈ基である。好ましくは、Ｒ１１及びＲ１２基のいずれか並びにＲ１３及びＲ１４基のいずれかは−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈ基であり、残りのＲ１１、Ｒ１２、Ｒ１３又はＲ１４基はＣ１〜Ｃ６アルキルである（式中、ｋは上記で定義した通りである。）。このような実施形態では、残りのＲ１１又はＲ１２並びにＲ１３又はＲ１４基は好ましくはメチルである。好ましくは、ｋは３又は４である。従って、特に好ましい−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈ基は、−（ＣＨ２）３−ＳＯ３Ｈ及び−（ＣＨ２）４−ＳＯ３Ｈから選択される。
【００２７】
他の実施形態では、式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）及び（ＩＶ）の化合物のＲ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基の１以上は−Ｌ−Ｍ又は−Ｌ−Ｐであり、残りのＲ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基はＣ１〜Ｃ６アルキル及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈから選択され、
Ｒ１及びＲ２基の１以上は−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈであり、残りのＲ１又はＲ２基はＣ１〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、Ｒ１９、Ｒ２０、Ｒ２１、Ｒ２２、Ｒ２３基、Ｌ、Ｍ、Ｐ、ｋ及びｎは上記で定義した通りである。
【００２８】
好ましくは、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の１以上はフッ素である。
【００２９】
この実施形態では、好ましくは、Ｒ１及びＲ２基は共に−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈ（式中、ｋは１〜１０の整数である）である。特に好ましい−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈ基はｋが３又は４である基であり、即ち−（ＣＨ２）３−ＳＯ３Ｈ及び−（ＣＨ２）４−ＳＯ３Ｈである。
【００３０】
好ましくは、Ｑは−ＣＨＲ′−及びＣ（Ｏ）−ＮＨ−（式中、Ｒ′は水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルである）から選択される。さらに好ましくは、Ｑは−ＣＨＲ′−であり、Ｒ′は水素である。特に好ましい実施形態では、−Ｌ−Ｍ及び／又は−Ｌ−Ｐは、カルボキシペンチル基を含む。
（ＩＩ）から（ＩＶ）の構造において、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の１以上は−ＳＯ２−ＣＦ３及び−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは０又は１〜４の整数である）から選択される１以上のフルオロ基を含む。残りのＲ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基は水素である。好適には、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６位並びに／或いはＲ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０位の１以上、好ましくは２以上、さらに好ましくは３以上がフッ素で置換される。特に好ましい実施形態では、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６位並びに／或いはＲ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０位の各々はフッ素で置換され、残りのＲ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基は水素である。別の実施形態では、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６基並びに／或いはＲ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の１以上、通常２つ以下は、ペルフルオロＣ１〜Ｃ４アルキル基又は−ＳＯ２−ＣＦ３基である。残りのＲ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基はＨ又はＦ、好ましくはＦから選択される。好ましいペルフルオロＣ１〜Ｃ４アルキル基はトリフルオロメチルである。
【００３１】
Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、Ｒ１９、Ｒ２０、Ｒ２１、Ｒ２２及びＲ２３基は、存在する場合、水素、−ＳＯ２−ＣＦ３及び−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは上記で定義した通りである。）から独立に選択される。通常２つ以下、好ましくは１つ以下の−ＳＯ２−ＣＦ３又はペルフルオロＣ１〜Ｃ４アルキル基が、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、Ｒ１９及び／又はＲ２０、Ｒ２１、Ｒ２２及びＲ２３位で置換される。好ましくは、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、Ｒ１９、Ｒ２０、Ｒ２１、Ｒ２２及びＲ２３基は水素及びフッ素から独立に選択される。
【００３２】
１、２、３又は４つのフルオロ基が結合した本発明の色素は、残りのＲ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９又はＲ１０位に直接結合している１以上のスルホン酸基でさらに置換されていてもよい。従って、本発明の色素は、４以下又はそれを超えるスルホン酸基で、好ましくは３〜５つのスルホン酸基で、直接若しくは間接的に置換されていてもよい。生体標的分子を標識するために、フッ素で置換され、且つ３以上のスルホン酸基でさらに置換されているシアニン色素を使用することによって、このように置換されていないシアニンと比較して、色素−色素の凝集が減少し光安定性が向上した標識生成物をもたらす。本発明の好ましい色素で標識した分子の蛍光発光強度は、共有結合する色素の数と共に増加する。さらに、色素分子上の総電荷の増大に加えて、インドリニウムの１位及び／又は３位をスルホン酸基で置換すると、立体的大きさも増え、それによって色素−色素の凝集の低減に寄与する。
【００３３】
好適には、標的結合基Ｍは、色素とコンジュゲート成分との間の共有結合が形成されるのに伴い、標識される成分の相補的基と反応する基である。標的結合基の選択は、標識される成分上で利用可能な基に依存し、従って当業者には周知であろう。例えば、標的結合基は、適切な条件下で成分の相補的官能基と反応することができる反応性基であり得る。タンパク質、ペプチド、核酸、炭水化物などの成分中に存在する官能基の例には、ヒドロキシ、アミノ、スルフヒドリル、（アルデヒド及びケトンを含めた）カルボニル、カルボン酸、並びにチオホスフェートが挙げられる。或いは、標的結合基Ｍは、官能基とすることができ、標的は、色素の官能基が適切な条件下で標的成分の反応性基と反応し得るように、反応性構成成分を含み、又はそれを含むように誘導体化することができる。いずれの場合も、成分は、式（Ｉ）の色素で標識される。好適には、Ｍが反応性基である場合、スクシンイミジルエステル、スルホ−スクシンイミジルエステル、４−スルホ−２，３，５，６−テトラフルオロフェノール（ＳＴＰ）エステル、イソチオシアネート、マレイミド、ハロアセトアミド、酸ハロゲン化物、ヒドラジド、ビニルスルホン、ジクロロトリアジン及びホスホルアミデートから選択される。好ましくは、反応性基は、カルボン酸のスクシンイミジルエステル、イソチオシアネート、マレイミド、ハロアセトアミド又はホスホルアミデートである。好適には、Ｍが官能基である場合、ヒドロキシ、アミノ、スルフヒドリル、（アルデヒド及びケトンを含めた）カルボニル、カルボン酸、並びにチオホスフェート、好ましくは、ヒドロキシ、アミノ又はスルフヒドリルから選択される。このような反応性基及び官能基によって、式（Ｉ）の化合物は、標的成分と反応し、共有結合し得る。
【００３４】
式（Ｉ）による化合物のＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及び／又はＲ１４位における反応性基、並びにＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及び／又はＲ１４基と反応することができる基の例を、表３に示す。或いは、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及び／又はＲ１４は、標的成分の反応性基と反応するであろう表３の官能基でもよい。
【００３５】
【表３】
使用可能なアミノ及びヒドロキシル官能基で標的成分を標識するのに特に有用な好ましい反応性基には、以下のものがある。
【００３６】
【化８】
使用可能なチオール官能基で標的成分を標識するのに有用な特に好ましい反応性基には、以下のものがある。
【００３７】
【化９】
−Ｌ−Ｍ基の特に好ましい例には、カルボキシペンチル基を含むものがあり、例えば以下のものなどである。
【００３８】
【化１０】
他の実施形態では、標的結合基Ｍは、その相補的な特異的結合パートナーと特異的に非共有結合することができる親和性タグとすることができ、従って特異的結合ペアを形成し得る。特異的結合ペアの例には、ビオチン／アビジン、ビオチン／ストレプトアビジン、ニトリロ三酢酸（例えば、Ｎｉ２＋：ＮＴＡ）とのポリヒスチジンタグ−金属イオン錯体が挙げられるが、これらに限定されない。相補的な特異的結合パートナーは、標的成分検出のための標識錯体の１成分とすることができる。従って、１つの好ましい標識化形態では、ビオチン標識用の４つの結合部位を有するストレプトアビジンは、標的成分上のビオチン基を本発明による色素に結合する架橋として使用することができ、Ｍ基は、ビオチン、イミノビオチン、又はデスチオビオチンである。本発明の状況では、互いに他方に対する特異的結合親和性を有する２個の原子又は分子を使用できることを理解されたい。親和性タグの好ましい例は、ビオチン、イミノビオチン及びデスチオビオチンから選択される。
【００３９】
下記は、表４で示すように、本発明によるシアニン色素のさらなる具体例である。
【００４０】
【表４】
式中、
Ｒ１、Ｒ２及びＲ１１基は−（ＣＨ２）５−ＣＯＯＨ及び−（ＣＨ２）４−ＳＯ３Ｈから選択され、
Ｒ１３基は−（ＣＨ２）５−ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）４−ＳＯ３Ｈ及び−ＣＨ３から選択され、
Ｒ１２及びＲ１４基は−ＣＨ３であり、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６基並びに／或いはＲ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の２以上はＦであり、残りのＲ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９又はＲ１０基は、Ｈ、−ＳＯ３−、−ＳＯ２−ＣＦ３及び−ＣＦ３から選択され、
Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８及びＲ１９基並びに／或いはＲ２０、Ｒ２１、Ｒ２２及びＲ２２基は、存在する場合、Ｆであり、
ｎは１〜３の整数である。
【００４１】
本発明の化合物において、−Ｌ−Ｍ基は好適にはアルキルカルボン酸のスクシンイミジルエステル誘導体、好ましくは、５−カルボキシペンチル、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルエステル、又は５−カルボキシペンチル、Ｎ−ヒドロキシ−スルホ−スクシンイミジルエステルである。
【００４２】
本発明の第１の態様に係る色素の特別な例は、以下の通りである。
ｉ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（Ｃｙ５Ｆ）（化合物１）；
ｉｉ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ，７Ｅ）−７−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ヘプタ−１，３−５−トリエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（Ｃｙ７Ｆ）（化合物２）；
ｉｉｉ）３−（５−カルボキシペンチル）−３−メチル−５−スルホ−１−（４−スルホブチル）−２−｛１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ｝−５−［４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−３Ｈ−インドリウム（化合物３）；
ｉｖ）１−（５−カルボキシペンチル）−３−メチル−５−スルホ−３−（４−スルホブチル）−２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−３Ｈ−インドリウム（化合物４）；
ｖ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，６−ジフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物５）；
ｖｉ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，６−ジフルオロ−３，３−ジメチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物６）；
ｖｉｉ）１−（５−カルボキシペンチル）−２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，６−ジフルオロ−３，３−ジメチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物７）；
ｖｉｉｉ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−５−［（トリフルオロメチル）スルホニル］−３Ｈ−インドリウム（化合物８）；
ｉｘ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（４−スルホブチル）−４，６−ビス（トリフルオロメチル）−３−メチル−３−（５−カルボキシペンチル））−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，６−ジフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物９）；
ｘ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−６−（トリフルオロメチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物１０）；
ｘｉ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７，８，９−ヘキサフルオロ−１，１−ジメチル−３−（４−スルホブチル）−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドリウム（化合物１１）；
ｘｉｉ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，６−ジフルオロ−３，３−ジメチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝ −６−フルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−４−（トリフルオロメチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物１２）；
ｘｉｉｉ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，６−ジフルオロ−３，３−ジメチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，６−ジフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物１３）；
ｘｉｖ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，６−ジフルオロ−３，３−ジメチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−３−メチル−５−スルホ−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物１４）；
ｘｖ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［３−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物１５）；
ｘｖｉ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［３−（５−カルボキシペンチル）−６−フルオロ−３−メチル−１−（４−スルホブチル）−４−（トリフルオロメチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物１６）；
ｘｖｉｉ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［３−（５−カルボキシペンチル）−４−トリフルオロメチル−６−フルオロ−３−メチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−３−（５−カルボキシペンチル）−４−トリフルオロメチル−６−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−インドリウム（化合物１７）；
ｘｖｉｉｉ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ，７Ｅ）−７−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ヘプタ−１，３，５−トリエニル｝−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−４，６−ビス（トリフルオロメチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物１８）；
ｘｉｘ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ，７Ｅ）−７−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ヘプタ−１，３，５−トリエニル｝−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−５−トリフルオロメチル−３Ｈ−インドリウム（化合物１９）；
ｘｘ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ）−３−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］プロプ−１−エニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物２０）；及び
ｘｘｉ）１−（５−カルボキシペンチル）−２−｛（１Ｅ，３Ｅ）−３−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］プロプ−１−エニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物２１）。
【００４３】
本発明は、上記で定義したようにＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及び／又はＲ１４位に結合した１以上の−Ｌ−Ｍ基を含む第１の態様に係る化合物を使用して、標識付け、従って標的成分に蛍光特性を与え得る標識方法にも関する。特に、核酸、ＤＮＡ、ＲＮＡ、オリゴヌクレオチド、ヌクレオチド、タンパク質、ペプチド、抗体などの生体分子の多重標識及び検出のために使用し得る。従って、第２の態様では、成分を共有結合的に標識するための方法であって、
ａ）上記成分を、式（Ｉ）の化合物と接触させる段階と、
ｂ）上記化合物を上記成分と反応させて上記化合物で上記成分を標識する段階と
を含んでなる方法を提供する。
【００４４】
【化１１】
式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基は−Ｌ−Ｍ、−Ｌ−Ｐ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈ（式中、ｋは１〜１０の整数である）から独立に選択され、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基は水素、−Ｌ−Ｍ、−Ｌ−Ｐ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２−ＣＦ３及び−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは０又は１〜４の整数である）から独立に選択されるか、或いはＲ３とＲ４との組合せ又はＲ５とＲ６との組合せ及び／又はＲ７とＲ８との組合せ又はＲ９とＲ１０との組合せが炭素原子を含有する縮合芳香族六員環を形成していて、適宜−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２−ＣＦ３又は−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは上記で定義した通りである。）で１回以上置換されていてもよく、
Ｌは炭素、窒素、酸素及び硫黄原子からなる群から選択される１〜２０個の連結原子の鎖を有する連結基であり、
Ｍは標的結合基であり、
Ｐはコンジュゲート成分であり、
Ｒ１５基は水素であるか、或いは２以上のＲ１５基が連結して単環又は二環縮合炭化水素系（各環は５個又は６個の炭素原子を有し、残りのＲ１５基は水素である）を形成し、
ｎは１〜３の整数であるが、ただし
ｉ）Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基の１以上は、−Ｌ−Ｍであり、
ｉｉ）Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の１以上がフッ素を含んでおり、しかも
ｉｉｉ）Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０のいずれかが−ＳＯ３Ｈである場合は、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基の１以上は、−Ｌ−Ｍ及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈから選択される
ことを条件とする。
【００４５】
好ましくは。Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の１以上はフッ素である。
【００４６】
好ましくは、Ｒ１５基は水素である。
【００４７】
標的結合基Ｍは、本明細書で定義した反応性基又は官能基などの、式（Ｉ）の化合物と標的成分との共有結合を形成するのに適切な基である。この方法は、標識される成分を、本発明による化合物のある量と共に、色素が成分と共有結合をするような条件下でインキュベーションする段階を含む。標的成分との色素コンジュゲート又は錯体の形成方法は、当業者に周知であろう。例えば、タンパク質の共有結合的な標識は通常、水性緩衝媒体、適切には炭酸水素塩中（ｐＨ９．０）室温で通常１時間行う。反応は通常、暗所で実施する。標識タンパク質は、サイズ排除クロマトグラフィーによって、例えば固定相としてＳｅｐｈａｄｅｘ（商標）を、溶離液としてホスフェート緩衝剤（ｐＨ７．０）を使用して、未反応の色素から分離することができる。標的生体分子の多重標識のために、色素の量又は濃度と標的材料の比をそれに応じて調節すべきである。
【００４８】
適切な標的成分には、特に限定されないが、抗体、脂質、タンパク質、ペプチド、炭水化物；アミノ、スルフヒドリル、カルボニル、ヒドロキシル、カルボン酸及びチオホスフェート基の１以上を含有するか或いは含有するように誘導体化されたヌクレオチド；アミノ、スルフヒドリル、カルボニル、ヒドロキシル、カルボン酸及びチオホスフェート基の１以上を含有するか或いは含有するように誘導体化されたオキシ又はデオキシポリ核酸；微生物材料、薬物、ホルモン、細胞、細胞膜、毒素、ポリマー粒子、並びにガラスビーズからなる群が挙げられる。
【００４９】
本発明の蛍光色素で標識した成分、例えばタンパク質は、細胞事象、例えば、取込み、輸送、受容体結合、代謝、シグナル伝達及びタンパク質−タンパク質相互作用をモニターするため、又は細胞及び分子事象をインビボで可視化するためにインビトロアッセイで使用し得る。色素標識した成分は、光学イメージング手順、例えば電荷結合素子（ＣＣＤ）検出を用いることによって、直接又は間接的に検出し得る。適切でハイスループットな細胞内イメージング計器が利用可能であり、例えばＩＮ Ｃｅｌｌ Ａｎａｌｙｓｅｒ１０００及びｅＸｐｌｏｒｅ Ｏｐｔｉｘ（商標）、Ｉｎ ｖｉｖｏ蛍光光学イメージングシステム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）である。
【００５０】
上記の一段階標識法に加えて、本発明は、二段階標識法にも関する。本発明による色素が、第１段階において、抗体、タンパク質、ＤＮＡプローブなどの一次成分に結合、従って標識する。次いでこの標識法の第２段階において、蛍光標識した一次成分を、抗体が特異的になる抗原などの二次成分検出のためのプローブとして使用する。
【００５１】
本発明の化合物を使用して、系中の特定のタンパク質又は他の成分の濃度を決定することもできる。プローブと反応することができるタンパク質上の反応性基の数がわかっている場合、１分子当たりの蛍光性を知ることができ、系中のこれらの分子の濃度を系の全蛍光強度により決定することができる。この特定の方法を用いて、マイクロタイタープレートリーダー又は他の公知の免疫蛍光検出システムを使用して様々な標識した分析物の濃度を測定することができる。蛍光標識した材料の濃度は、例えば蛍光偏光検出器を使用して決定することもできる。
【００５２】
本発明の化合物は、抗体などの複数の異なる一次成分に複数の蛍光色素を共有結合させる検出方法で使用することもでき、二次成分の混合物中の複数の二次成分を各々特定するために、一次成分は各々、抗原などの異なる二次成分に特異的である。有用なこの方法によれば、他の一次成分を標識するために使用される色素分子と比べて、一次成分は各々、異なる光吸収及び光放出の波長特性を有する蛍光色素で別々に標識される。次いで、標識した一次成分を、抗原などの二次成分を含有する調製物に添加し、一次成分を、それが選択的である二次成分に各々結合させる。
【００５３】
未反応のプローブ材料は、分析への干渉を防ぐため、例えば洗浄によって調製物から除去することができる。次いで、調製物を、特定の蛍光化合物の吸収波長を含めた、様々な励起波長にかける。次に、蛍光顕微鏡、又は励起波長の光線を選択し蛍光波長を選択するためのフィルター若しくはモノクロメーターを有するフローサイトメーターや蛍光分光光度計など他の蛍光検出システムを使用して、使用する蛍光化合物に対応する発光波長の強度、特定の標識した一次成分と結合している二次成分の量を示す蛍光強度を決定する。多パラメータの蛍光研究を行うための公知の技術には、例えば多パラメータのフローサイトメトリーが含まれる。ある場合には、単一の励起波長を使用して、各々が異なる波長において蛍光を発する混合物中の２以上の材料からの蛍光を励起させることができ、各々の標識した種の量は、その各々の発光波長における個別の蛍光強度を検出することによって測定することができる。所望であれば、光吸収法も使用することができる。
【００５４】
本発明の検出法は、蛍光一次成分の生成が可能である任意の系に適用することができる。例えば、適切に反応する蛍光化合物をＤＮＡ又はＲＮＡ断片にコンジュゲートさせ、次いで得られたコンジュゲートを、ＤＮＡ又はＲＮＡの相補的標的ストランドに結合させることができる。次いで、適切な蛍光検出装置を使用して、結合した蛍光コンジュゲートの存在を検出することができる。
【００５５】
本発明は、中間体及び式（Ｉ）の色素を調製するために適切な方法に関する。従って、第３の態様では、式（Ａ）の化合物が提供される。
【００５６】
【化１２】
式中、
Ｒ１、Ｒ１１及びＲ１２基は−Ｌ−Ｍ、−Ｌ−Ｐ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈ（式中、ｋは１〜１０の整数である）から独立に選択され、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６基は水素、−Ｌ−Ｍ、−Ｌ−Ｐ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２−ＣＦ３及び−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは０又は１〜４の整数である）から独立に選択されるか、或いはＲ３とＲ４との組合せ又はＲ５とＲ６との組合せが炭素原子を含有する縮合芳香族六員環を形成していて、適宜−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２−ＣＦ３又は−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは上記で定義した通りである。）で１回以上置換されていてもよく、
Ｌは炭素、窒素、酸素及び硫黄原子からなる群から選択される１〜２０個の連結原子の鎖を有する連結基であり、
Ｍは標的結合基であり、
Ｐはコンジュゲート成分であるが、ただし
ｉ）Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ１１及びＲ１２基の１以上が−Ｌ−Ｍ又は−Ｌ−Ｐであり、
ｉｉ）Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６基の１以上がフッ素を含んでおり、しかも
ｉｉｉ）Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６のいずれかが−ＳＯ３Ｈである場合には、Ｒ１１及びＲ１２基の１以上が−Ｌ−Ｍ、−Ｌ−Ｐ及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈから選択される
ことを条件とする。
【００５７】
一実施形態では、Ｒ１、Ｒ１１及びＲ１２基の１以上は、−Ｌ−Ｍ（式中、Ｌは上記で定義した通りであり、Ｍは、スクシンイミジルエステル、スルホ−スクシンイミジルエステル、４−スルホ−２，３，５，６−テトラフルオロフェノール（ＳＴＰ）エステル、イソチオシアネート、マレイミド、ハロアセトアミド、酸ハロゲン化物、ヒドラジド、ビニルスルホン、ジクロロトリアジン及びホスホルアミデートから選択される反応性基を含む）である。
【００５８】
他の実施形態では、Ｒ１、Ｒ１１及びＲ１２基の１以上は−Ｌ−Ｍであり、Ｌは上記で定義した通りであり、Ｍはヒドロキシ、アミノ、スルフヒドリル、イミダゾール、アルデヒド及びケトンを含むカルボニル、カルボン酸、並びにチオホスフェートから選択される官能基を含む。
【００５９】
好ましくは、残りのＲ１、Ｒ１１及びＲ１２基はＣ１〜Ｃ６アルキル及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈ（式中、ｋは１〜１０の整数である）から選択される。好ましくは、ｋは３又は４である。
【００６０】
好ましくは、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６基の１以上はフッ素である。さらに好ましくは、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６基の２以上がＦであり、残りのＲ３、Ｒ４、Ｒ５又はＲ６基はＨ、−ＳＯ２−ＣＦ３及びＣＦ３から、好ましくはＨから選択される。特に好ましい実施形態では、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６基はＦである。
【００６１】
式（Ａ）の化合物の具体例は、Ｒ１及びＲ１１基の１以上が−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈであり、残りのＲ１又はＲ１１基が−（ＣＨ２）５−ＣＯＯＨ及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈから選択され、Ｒ１２基がＣ１〜Ｃ６アルキル、好ましくはメチルであり、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６基がＦであり、ｋが３又は４であるものである。
【００６２】
本発明の化合物は、
ａ）次の式（Ａ）の第１の化合物と、
【００６３】
【化１３】
ｂ）第１の化合物と同一又は異なる次の式（Ｂ）の第２の化合物と、
【００６４】
【化１４】
ｃ）第３の化合物（Ｃ）とを、第１の化合物と第２の化合物との間にコンジュゲート結合を形成するのに適切な条件下で反応させる段階を含む方法によって調製することができる。
式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基は−Ｌ−Ｍ、−Ｌ−Ｐ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈ（式中、ｋは１〜１０の整数である）から独立に選択され、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基は水素、−Ｌ−Ｍ、−Ｌ−Ｐ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２−ＣＦ３及び−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは０又は１〜４の整数である）から独立に選択されるか、或いはＲ３とＲ４との組合せ又はＲ５とＲ６との組合せ及び／又はＲ７とＲ８との組合せ又はＲ９とＲ１０との組合せが炭素原子を含有する縮合芳香族六員環を形成していて、適宜−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２−ＣＦ３又は−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは上記で定義した通りである。）で１回以上置換されていてもよく、
Ｌは炭素、窒素、酸素及び硫黄原子からなる群から選択される１〜２０個の連結原子の鎖を有する連結基であり、
Ｍは標的結合基であり、
Ｐはコンジュゲート成分であるが、ただし
ｉ）Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基の１以上が−Ｌ−Ｍ又は−Ｌ−Ｐであり、
ｉｉ）Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の１以上がフッ素を含んでおり、しかも
ｉｉｉ）Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０のいずれかが−ＳＯ３Ｈである場合には、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基の１以上が−Ｌ−Ｍ、−Ｌ−Ｐ及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈから選択される
ことを条件とする。
【００６５】
好ましくは、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の１以上はフッ素である。
【００６６】
好ましくは、−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈは−（ＣＨ２）３−ＳＯ３Ｈ及び−（ＣＨ２）４−ＳＯ３Ｈから選択される。
【００６７】
この方法に従って、中間体化合物（Ａ）、（Ｃ）及び（Ｂ）を単一段階又は多段階の方法で反応させて、式（Ｉ）の化合物を形成することができる。構造（Ａ）及び（Ｂ）が同じである式（Ｉ）の対称化合物は、２モル比の式（Ａ）（又は（Ｂ））の化合物を、１個、３個、又は５個の炭素原子を含有し、本明細書で定義したＲ１５を形成するための基で置換された適切なビス官能性メチン断片と反応させることによって適切に調製することができる。例えば、トリメチンシアニン色素類似体を調製するための第３の化合物（Ｃ）として、置換Ｎ，Ｎ′−ジフェニルホルムアミジン、又はオルトエステルを使用する。対応する方式で、ペンタメチンシアニン色素類似体を調製するには、適切に置換されたマロンジアルデヒドジアニルを使用し、ヘプタメチンシアニン色素類似体を調製するには、グルタコンアルデヒドを使用することができる。反応は通常、ピリジンなどの有機溶媒中で行い、加熱還流する。続いて、混合物を冷却し、エーテルなどの有機溶媒に注ぎ込む。得られる固体又は半固体を、一連のメタノール／クロロホルム溶媒を使用したシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって精製することができる。或いは、逆相カラムを使用して、０．１％ＴＦＡ／アセトニトリルを含有する水からなる溶離液で精製することができる。
【００６８】
構造（Ａ）及び（Ｂ）が異なる式（Ｉ）の非対称化合物は、二段階法で好都合に調製することができる。この方法では、式（Ａ）のインドリニウム化合物と、結合の形成に適した化合物、例えば適切に置換されたＮ，Ｎ′−ジフェニルホルムアミジン又はマロンアルデヒドジアニルを無水酢酸の存在下で反応させて、２−アニリノビニル又は４−アニリン−１，３−ブタジエニル第四級塩を形成することによって中間体化合物をまず形成する。中間体第四級塩と、第２の２−メチルインドリニウム第四級塩を反応させて、式（Ｉ）の化合物を得る。複素環系を結合させるポリメチン結合を形成するための代替中間体は公知であり、例えば、Ｈａｍｅｒ，Ｆ．Ｍ．，“Ｔｈｅ Ｃｙａｎｉｎｅ Ｄｙｅｓ ａｎｄ Ｒｅｌａｔｅｄ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ”，Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ（１９６４）に記載されている。
【００６９】
本発明を、下記の実施例及び図を参照してさらに例示する。
【００７０】
Ｃｙ（商標）は、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｌｉｍｉｔｅｄの商標である。
【００７１】
ｅＸｐｌｏｒｅ Ｏｐｔｉｘ（商標）は、ＡＲＴ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｉｎｃ．の商標である。
【実施例】
【００７２】
１． ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（Ｃｙ５Ｆ）（化合物１）
【００７３】
【化１５】
１．１ ５−（エトキシカルボニル）−５−メチル−６−オキソヘプタン−１−スルホネート、ナトリウム塩
【００７４】
【化１６】
水素化ナトリウム（６０重量％、１２ｇ≡０．３ｍｏｌのＮａＨ）を、乾燥ＤＭＦ（１００ｍｌ）中でスラリー化した。得られた懸濁液を撹拌しながら０℃に冷却した。これに、温度を１０℃未満に維持し発泡が制御されるように、エチル２−メチルアセトアセテート（５０ｇ、０．３４６ｍｏｌ）をＤＭＦ（２５ｍｌ）に溶かした溶液を、滴下した。添加が完了し水素の発生が止まった後に、透明な薄黄色溶液が生じるまで混合物を温水浴中で温めた。これを再び０℃に冷却した。１，４−ブタンスルトン（４５ｇ、０．３３ｍｏｌ）をＤＭＦ（２５ｍｌ）に溶かした溶液を、１５分かけて添加し、温度を１０℃未満に維持した。添加が完了すると、混合物を５０℃で１６時間加熱した。次いで、溶媒を減圧下で蒸発乾固し、残渣を水とジエチルエーテルに分配した。水層を保持し、有機層を新たな水で抽出し、次いで廃棄した。水様抽出物を合わせて、新たなエーテルで洗浄し、次いで減圧下で蒸発させて、ワックス状固体の生成物を得た。
δＨ（２７０ＭＨｚ；Ｄ２Ｏ）４．２３（２Ｈ，ｑ）、２．９（２Ｈ，ａｐｐ ｔ）、２．２６（３Ｈ，ｓ）、２．０〜１．６（６Ｈ，ｍ）、１．３６（３Ｈ，ｓ）及び１．２６（３Ｈ，ｔ）。
【００７５】
１．２ ５−メチル−６−オキソヘプタン−１−スルホン酸
【００７６】
【化１７】
ＴＬＣが反応の終了を示すまで（〜約３時間）、５−（エトキシカルボニル）−５−メチル−６−オキソヘプタン−１−スルホネート、ナトリウム塩（１．１からの）を濃塩酸（２００ｍｌ）中９０℃で加熱した。次いで、溶媒を減圧下で蒸発させ、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（シリカ、エタノール／ジクロロメタン混合物）によって精製して、５−メチル−６−オキソヘプタン−１−スルホン酸４９．６ｇを得た。
δＨ（２７０ＭＨｚ；Ｄ２Ｏ）２．９（２Ｈ，ａｐｐ ｔ）、２．６８（１Ｈ，ｍ）、２．２（３Ｈ，ｓ）、１．８〜１．３（６Ｈ，ｍ）及び１．１８（３Ｈ，ｄ）。
【００７７】
１．３ ２，３−ジメチル−３−（４−スルホブチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３Ｈ−インドール、ジナトリウム塩
【００７８】
【化１８】
２，３，４，５−テトラフルオロ−アニリン（１．７５ｇ、０．０１Ｍ）を、濃ＨＣｌ（２８０ｍｌ）中で溶解した。フラスコを−１０℃に保ち、ＮａＮＯ２（１当量）を水（１０ｍｌ）に溶かした溶液に続いて、塩化スズ（ＩＩ）（３．４ｇ）を濃ＨＣｌ（４０ｍｌ）に溶かした溶液を滴下した。反応物を室温に戻し、１時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去し、黄色の塩（７ｇ）の粗生成物を得た．
ヒドラジン塩及び未精製材料を、スルホン化ケトン、５−メチル−６−オキソヘプタン−１−スルホン酸（６ｇ）と共に、酢酸（５０ｍｌ）中で溶解した。この溶液を１４０℃で２時間加熱し、微細なオレンジ色の沈殿物を有するオレンジ色の溶液を得た。溶媒を蒸発して、茶色のガムを得た。生成物を逆相ＨＰＬＣ（０．１％ＴＦＡ、水／アセトニトリルグラジエント）によって単離し、生成物を得た。ＭＨ＋＝３５４。
【００７９】
１．４ １−（５−カルボキシペンチル）−２，３−ジメチル−３−（４−スルホブチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３Ｈ−インドリウム
【００８０】
【化１９】
テトラフッ化インドール（１．３から）（１５０ｍｇ、４．２×１０−４ｍｏｌ、１当量）を、ブロモヘキサン酸（１５ｇ、０．０７３ｍｏｌ、２６０当量）と１４０℃で窒素下２４時間加熱した。生成物をジエチルエーテルと共に粉砕し、減圧下で乾燥し、茶色の塊を得た。主要な成分は、ＬＣ−ＭＳによって１−（５−カルボキシペンチル）−２，３−ジメチル−３−（４−スルホブチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３Ｈ−インドリウム［４］と確認され、さらに精製されずに使用した。ＭＨ＋＝４７０。
【００８１】
１．５ ２，３−ジメチル−４，５，６，７−テトラフルオロ−１，３−ビス（４−スルホナトブチル）−３Ｈ−インドリウム、ジナトリウム塩
【００８２】
【化２０】
１．３からのテトラフッ化インドール（１００ｍｇ、２．８×１０−４ｍｏｌ、１当量）を、ブタンスルトン（１０ｇ、０．０７３ｍｏｌ）と共に１４０℃で窒素下２４時間加熱した。生成物をジエチルエーテルと共に粉砕し、減圧下で乾燥し、茶色の塊を得た。主要な成分は、ＬＣ−ＭＳによって２，３−ジメチル−４，５，６，７−テトラフルオロ−１，３−ビス（４−スルホナトブチル）−３Ｈ−インドリウム、ジナトリウム塩と確認され、さらに精製されずに使用された。Ｍ＋＝４９０。
【００８３】
１．６ ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（Ｃｙ５Ｆ）（化合物１）
アルキル化インドレニン（１．４から（５ｍｇ）及び１．５から（１当量））を、エタノール及びピリジン（２５０μｌ）中で溶解した。１，１，１−トリメトキシプロペン（１当量）を添加し、その溶液を２時間撹拌した。逆相ＬＣ−ＭＳによる分析によって、名目上は２種類の対称色素及び所望の生成物である、３種類の６５０ｎｍで吸収する生成物が観察された。所望の非対称生成物を、ＨＰＬＣにより単離し、質量分析により分析した。Ｍａｌｄｉ−ＴＯＦ ＭＨ＋＝９９３。Ａｂｓλｍａｘ＝６４４ｎｍ（Ａｑ）。Ｅｍλｍａｘ＝６５９ｎｍ。両方の異性体に対して、ＬＣ−ＭＳは９９３ｍ／ｚのメインピークを示す。ピーク純度９９％を超える６４３ｎｍにおいて、ＨＰＬＣ−ＤＡＤは９８％を超える。
【００８４】
１．７ ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（Ｃｙ５Ｆ ＮＨＳエステル）
Ｃｙ５Ｆ遊離酸（５００μｇ）を、ジイソプロピルエチルアミン（４％ｖ／ｖ）（２０μｌ）を含有するジメチル−スルホキシド（５００μｌ）中で溶解した。この溶液（１μｌ）の一定分量を、対照として保持した。ジピロリジノ−（Ｎ−スクシンイミジルオキシ）カルベニウムヘキサフルオロホスフェート（１ｍｇ）を添加し、その溶液を、ＴＬＣ（Ｍｅｒｃｋ ＲＰ−１８Ｆ２５４、１：１の水：アセトニトリル＋０．１％ｖ／ｖＴＦＡ）による分析の前に１時間撹拌した。出発物質（Ｒｆ０．４）の新規生成物スポット（Ｒｆ０．３６）への完全な転化が観察された。この生成物（Ｃｙ５Ｆ ＮＨＳエステル）を、さらに精製せずに抗体コンジュゲートのために直ちに使用した。
【００８５】
１．８ 抗体コンジュゲート
アフィニティー精製されたヤギ抗マウス抗体ＩｇＧ（１００μｇ）（Ｒｏｃｋｌａｎｄ Ｉｎｃ．Ｃａｔａｌｏｇｕｅ Ｎｏ．６１０−１０１−１２１）を、予め浸漬されたＳｌｉｄｅ−Ａ−Ｌｙｚｅｒ（登録商標）透析カセット（Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０Ｋ分画分子量）に移し、透析した（０．１ＭのＮａＨＣＯ３緩衝液、ｐＨ９．２）。透析した生成物を、Ｃｙ５Ｆ ＮＨＳエステル（１．７から）（１ｍｇ／ｍｌ溶液を４９μｌ）と混合し、室温で１時間撹拌した。反応混合物を予め浸漬されたＳｌｉｄｅ−Ａ−Ｌｙｚｅｒ（登録商標）透析カセット（Ｐｉｅｒｃｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０Ｋ分画分子量）に移し、４℃で４８時間透析した（０．１ＭのＰＢＳ、ｐＨ７．２、２×２ｌ）。透析後の色素標識した抗体の存在を、ＵＶ／可視分光法により決定した。λｍａｘ６４５ｎｍ、Ａ＝０．３ＡＵ。
【００８６】
２． ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ，７Ｅ）−７−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ヘプタ−１，３−５−トリエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（Ｃｙ７Ｆ）（化合物２）
【００８７】
【化２１】
２．１ アルキル化インドール（１．５から）（０．１ｍｍｏｌ）及びＮ−５−（フェニルアミノ）−２，４−ペンタジエニリデン（Ａｌｄｒｉｃｈ）（０．０６ｍｍｏｌ）を、酢酸及び無水酢酸１：１の混合物中（１．５ｍｌ）において１２０℃で３０分間加熱した。これを室温に冷却し、酢酸カリウム（８当量）と共に、アルキル化インドール（１．４から）を添加した（０．０７ｍｍｏｌ）。この混合物を４０℃で一晩撹拌し、黒緑色の溶液が観察された。冷却した溶液をＨＰＬＣ（水（０．１％ＴＦＡ）中の５〜９５％アセトニトリル（０．１％ＴＦＡ）グラジエント）で精製した。ＬＣ−ＭＳによって、２種類の異性体生成物を両方ともｍ／ｚ＝１０１９（Ｍ＋１）で単離した（ＲＴ＝７．９８ｍ及び８．５分）。
【００８８】
３． ３−（５−カルボキシペンチル）−３−メチル−５−スルホ−１−（４−スルホブチル）−２−｛１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ｝−５−［４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−３Ｈ−インドリウム（化合物３）
【００８９】
【化２２】
３．１ ３−（カルボキシペンチル）−２，３−ジメチルインドレニン−５−スルホン酸
【００９０】
【化２３】
１ｌの丸底フラスコ内で、４−ヒドラジノベンゼンスルホン酸（１３．４２ｇ、７１．４ｍｍｏｌ）を、酢酸（７１ｍｌ）と共に、７−メチル−８−オキソノナン酸（２０ｇ、〜１０７ｍｍｏｌ）に添加した。ピンク色懸濁液を、１４０℃で５時間撹拌した。反応混合物を、ロータリーエバポレーターにかけて、赤／茶色の油を得た。この油をジエチルエーテル（４×５０ｍｌ）と共に粉砕し、半固体の粘着性塊が生成された。これを水（２００ｍｌ）に溶解し、フラッシュクロマトグラフィーによって精製した。この生成物を、１０％アセトニトリル／水＋０．１％ＴＦＡで黄色のバンドとして溶出した。ＨＰＬＣ分析は、黄色のバンドが適切な純度であり、２３．５分で大半の不純物から分離されることを示した。収量１８ｇ。
【００９１】
３．２ ２，３−ジメチル−３−（５−カルボキシペンチル）−５−スルホ−１−（３−スルホブチル）インドリウム、ジナトリウム塩
【００９２】
【化２４】
３−（カルボキシペンチル）−２，３−ジメチルインドレニン−５−スルホン酸（３．１から）（５ｇ、１４．５ｍｍｏｌ）及び酢酸ナトリウム（１．５５ｇ、１９．２ｍｍｏｌ）を、メタノール（〜３０ｍｌ）中で溶解し、この混合物を５分間撹拌した。次いで、この混合物を３回メタノールからロータリーエバポレーターにかけて、黄色のふわふわした固体を生成した。スルホラン（５０ｍｌ）中のブタンスルトン（１０ｇ、５当量）を添加し、この混合物を１５０℃で４時間撹拌しながら加熱した。赤色固体がフラスコの底に析出した。赤色固体の試料を、１００％水（０．１％ＴＦＡ）から５０％アセトニトリル（０．１％ＴＦＡ）と共に２７４ｎｍのＵＶ検出で３０分に亘り逆相（Ｃ１８）ＨＰＬＣ（Ｊｕｐｉｔｅｒ１０μＣ１８４．６ｍｍ×２５０ｍｍ）によって分析した。反応混合物を冷却させ、＋２℃で保存した。この反応混合物を加温し、撹拌しながらジエチルエーテル（５００ｍｌ）に注ぎ込み、エーテルをデカントし、単離されたピンク色の固体が残った。
【００９３】
３．３ ２，３−ジメチル−４，５，６，７−テトラフルオロ−１，３−ビス（４−スルホナトブチル）−３Ｈ−インドリウム、ジナトリウム塩
【００９４】
【化２５】
テトラフッ化インドール（１．３から）（１００ｍｇ、２．８×１０−４ｍｏｌ、１当量）を、ブタンスルトン（１０ｇ、０．０７３ｍｏｌ）と共に１４０℃で２４時間窒素下加熱した。生成物をジエチルエーテルと共に粉砕し、減圧下で乾燥し、茶色の塊を得た。主要な成分は、ＬＣ−ＭＳによって（１．５）であると確認され、さらに精製せずに使用された。Ｍ＋＝４９１。
【００９５】
３．４ ３−（５−カルボキシペンチル）−３−メチル−５−スルホ−１−（４−スルホブチル）−２−｛１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ｝−５−［４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−３Ｈ−インドリウム（化合物３）
２，３−ジメチル−３−（５−カルボキシペンチル）−５−スルホ−１−（３−スルホブチル）インドリウム、ジナトリウム塩（３．２から）（３．４ｇ、６．８４ｍｍｏｌ）を、トリエチルアミン（２．５ｍｌ）を含有した酢酸（２５ｍｌ）中で溶解した。マロンアルデヒドビスフェニルイミンＨＣｌ（４．１５ｇ、１６ｍｍｏｌ）を添加し、この混合物を、一晩撹拌しながら１４０℃で加熱した。反応混合物をロータリーエバポレーターにかけて、赤色油を得て、それを水（５０ｍｌ）及びアセトニトリル（３０ｍｌ）中に溶解した。これを濾過し、精製し、色素中間体１ｇを得た。２４ｍｇ（３．９×１０−５ｍｏｌ、４．９モル当量）を、酢酸：無水酢酸１：１ｖ／ｖの１ｍｌ溶液中で溶解し、明赤色溶液が形成した。２，３−ジメチル−４，５，６，７−テトラフルオロ−１，３−ビス（４−スルホナトブチル）−３Ｈ−インドリウム、ジナトリウム塩（４ｍｇ、８．１２×１０−６ｍｏｌ）及び酢酸カリウム（５０ｍｇ）を添加し、反応物を１２０℃で１時間撹拌した。未精製の青色／緑色の材料を、逆相分取ＨＰＬＣによって精製し、濃い青色の生成物を得た。ロータリーエバポレーション及び凍結乾燥によって、青色固体１ｍｇ（収率１２％）を得た。Ｍ＋＝１０００．６７。
【００９６】
４． １−（５−カルボキシペンチル）−３−メチル−５−スルホ−３−（４−スルホブチル）−２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−３Ｈ−インドリウム（化合物４）
【００９７】
【化２６】
４．１ 色素中間体
【００９８】
【化２７】
１−（カルボキシペンチニル）−２，３，３−トリメチル−インドレニニウム−５−スルホネート（９００ｍｇ、１．９１ｍｍｏｌ）、マロンアルデヒドビスフェニルイミン（３２０ｍｇ、１．２４ｍｍｏｌ、０．９当量）、無水酢酸（１２ｍｌ）及び酢酸（６ｍｌ）を１２０℃で１時間加熱した。この赤色／オレンジ色混合物冷却させた。ＵＶ及びＨＰＬＣ分析によって、反応が完了したことを示す。この材料を、さらなる分析をせずに下記の段階（４．２）で使用した。
【００９９】
４．２ １−（５−カルボキシペンチル）−３−メチル−５−スルホ−３−（４−スルホブチル）−２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−３Ｈ−インドリウム（化合物４）
２，３−ジメチル−３−（５−カルボキシペンチル）−５−スルホ−１−（３−スルホブチル）インドリウム、ジナトリウム塩（５ｍｇ）を、５．１からの色素中間体（５０ｍｇ／ｍｌ、１００μｌ）及び酢酸カリウム（８ｍｇ、８当量）に添加した。反応物を室温で一晩撹拌し、藍色の溶液を得た。この生成物を、逆相ＨＰＬＣ（アセトニトリル／水／０．１％トリフルオロ酢酸）によって単離した。Ｍ＋＝８７９。ＵＶ／Ｖはλｍａｘ６４７ｎｍである。収量４．５ｍｇ。
【０１００】
５． ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，６−ジフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物５）
【０１０１】
【化２８】
５．１ ４，６−ジフルオロ−２，３−ジメチル−３−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドール
【０１０２】
【化２９】
酢酸（２０ｍｌ）中の３，５−ジフルオロフェニルヒドラジン塩酸塩（１ｇ）に、５−メチル−６−オキソヘプタン−１−スルホン酸（１．６ｇ）を添加し、この溶液を一晩加熱還流した。揮発性物質をロータリーエバポレーターで除去し、粗生成物を得て、そのうちの５０ｍｇを分取ＨＰＬＣで精製した。当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、所望の生成物（１９ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝３１７。
【０１０３】
５．２ ４，６−ジフルオロ−２，３−ジメチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム
【０１０４】
【化３０】
４，６−ジフルオロ−２，３−ジメチル−３−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドール（１ｇの未精製材料）に、ブタンスルトン（１０ｍｌ）を添加し、その溶液を、２日間１４０℃に加熱した。冷却すると、この生成物を水中に抽出し、分取ＨＰＬＣによって精製した。当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、所望の生成物（９０ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝４５４。
【０１０５】
５．３ ６−［（２Ｅ）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−２−［（２Ｅ，４Ｅ）−４−（フェニルイミノ）ブト−２−エニリデン］−３−（４−スルホブチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ヘキサン酸
【０１０６】
【化３１】
１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（１２ｍｇ）に、マロンアルデヒドビス（フェニルイミン）モノハイドロクロライド（７ｍｇ）、無水酢酸（２ｍｌ）及び酢酸（１ｍｌ）を添加した。この混合物を、１時間５０分間１２０℃に加熱し、その後室温に冷却した。この未精製の反応混合物（約５ｍｇ／ｍｌの生成物）をさらに説明するように、精製せずに使用した。
【０１０７】
５．４ ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，６−ジフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物５）
６−［（２Ｅ）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−２−［（２Ｅ，４Ｅ）−４−（フェニルイミノ）ブト−２−エニリデン］−３−（４−スルホブチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ヘキサン酸（約５ｍｇ／ｍｌを０．４ｍｌ）に、４，６−ジフルオロ−２，３−ジメチル−３−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドール（２ｍｇ）及び酢酸カリウム（４．４ｍｇ）を添加した。一晩の撹拌に続いて分取ＨＰＬＣを行い、当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、所望の生成物（４ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝９５７。
【０１０８】
６． ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，６−ジフルオロ−３，３−ジメチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物６）
【０１０９】
【化３２】
６．１ ４，６−ジフルオロ−２，３，３−トリメチル−３Ｈ−インドール
【０１１０】
【化３３】
エタノール（３０ｍｌ）中の３，５−ジフルオロフェニルヒドラジン塩酸塩（２．６ｇ）に、３−メチル−２−ブタノン（６ｍｌ）を添加し、その溶液を３時間７８℃に加熱した。その後、この混合物を冷却し、揮発性物質をロータリーエバポレーターで除去し、赤色固体を得た。これにポリリン酸（１０ｇ）及び酢酸（２５ｍｌ）を添加した。この混合物を３時間１２０℃に加熱し、次いで一晩冷却させた。揮発性物質を、ロータリーエバポレーターで除去し、水酸化ナトリウムを添加することによってｐＨをｐＨ５．５に調節し、粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル／ヘキサン／酢酸エチル）によって精製した。当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、所望の生成物（２ｇ）を得た。ＭＨ＋＝１９６。
【０１１１】
６．２ １−（５−カルボキシペンチル）−４，６−ジフルオロ−２，３，３−トリメチル−３Ｈ−インドリウム
【０１１２】
【化３４】
４，６−ジフルオロ−２，３，３−トリメチル−３Ｈ−インドール（２ｇ）に、６−ブロモヘキサン酸（５ｇ）及びスルホラン（５ｍｌ）を添加し、この混合物を５時間１４０℃に加熱した。冷却すると、混合物を水で希釈し、分取ＨＰＬＣを行い、所望の生成物（１．４ｇ）を得た。Ｍ＋＝３１０。
【０１１３】
６．３ ６−［（２Ｅ）−４，６−ジフルオロ−３，３−ジメチル−２−［（２Ｅ，４Ｅ）−４−（フェニルイミノ）ブト−２−エニリデン］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ヘキサン酸
【０１１４】
【化３５】
１−（５−カルボキシペンチル）−４，６−ジフルオロ−２，３，３−トリメチル−３Ｈ−インドリウム（５０ｍｇ）に、マロンアルデヒドビス（フェニルイミン）モノハイドロクロライド（３７．６ｍｇ）、無水酢酸（２ｍｌ）及び酢酸（１ｍｌ）を添加した。この混合物を、１２０℃に１時間加熱し、その後室温に冷却した。この未精製の反応混合物（約３２ｍｇ／ｍｌの生成物）を、さらに説明するように精製せずに使用した。
【０１１５】
６．４ ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，６−ジフルオロ−３，３−ジメチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物６）
６−［（２Ｅ）−４，６−ジフルオロ−３，３−ジメチル−２−［（２Ｅ，４Ｅ）−４−（フェニルイミノ）ブト−２−エニリデン］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ヘキサン酸（０．０４ｍｍｏｌ）に、４，５，６，７−テトラフルオロ−２，３−ジメチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（１９．６ｍｇ）及び酢酸カリウム（３５ｍｇ）を添加した。一晩の撹拌に続いて分取ＨＰＬＣを行い、当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、所望の生成物（６ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝８３５。
【０１１６】
６．５ ２−［（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−（１−｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝−４，６−ジフルオロ−３，３−ジメチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン）ペンタ−１，３−ジエニル］−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム
【０１１７】
【化３６】
２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，６−ジフルオロ−３，３−ジメチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（２ｍｇ）に、ＤＭＳＯ（１ｍｌ）、ジピロリジノ−（Ｎ−スクシンイミジルオキシ）カルベニウムヘキサフルオロホスフェート（４ｍｇ）及びジイソプロピルエチルアミン（４０μｌ）を添加した。３時間撹拌した後、この反応混合物を分取ＨＰＬＣにかけ、所望の生成物（０．４ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝９３２。
【０１１８】
７． １−（５−カルボキシペンチル）−２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，６−ジフルオロ−３，３−ジメチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物７）
【０１１９】
【化３７】
７．１ １−（５−カルボキシペンチル）−４，６−ジフルオロ−２，３−ジメチル−３−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム
【０１２０】
【化３８】
４，６−ジフルオロ−２，３−ジメチル−３−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドール（０．８ｇの未精製材料）に、６−ブロモヘキサン酸（１．６ｇ）を添加し、その溶液を２日間１４０℃に加熱した。冷却すると、生成物をアセトニトリルで希釈し、２ショットで分取ＨＰＬＣによって精製した。当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、所望の生成物（１１０ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝４３２。
【０１２１】
７．２ １−（５−カルボキシペンチル）−２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，６−ジフルオロ−３，３−ジメチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物７）
６−［（２Ｅ）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−２−［（２Ｅ，４Ｅ）−４−（フェニルイミノ）ブト−２−エニリデン］−３−（４−スルホブチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ヘキサン酸（約５ｍｇ／ｍｌを０．７ｍｌ）に、１−（５−カルボキシペンチル）−４，６−ジフルオロ−２，３−ジメチル−３−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（２．８ｍｇ）及び酢酸カリウム（６ｍｇ）を添加した。一晩の撹拌に続いて分取ＨＰＬＣを行い、当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、所望の生成物（１．６ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝９３６。
【０１２２】
８． ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−５−［（トリフルオロメチル）スルホニル］−３Ｈ−インドリウム（化合物８）
【０１２３】
【化３９】
８．１ ４−（トリフルオロメチルチオ）フェニルヒドラジン
【０１２４】
【化４０】
４−（トリフルオロメチルチオ）アニリン（５ｇ）に、ｃＨＣｌ（３００ｍｌ）を添加した。０℃〜−５℃で、水（５０ｍｌ）中の亜硝酸ナトリウム（２．５ｇ）を１５分かけて添加した。この温度でさらに２５分後に混合物を濾過し、塩化スズ（ＩＩ）二水和物を、５分かけてこの溶液に添加した。混合物を一晩撹拌しながら室温に加温した。得られた沈殿物を濾過し、白色固体（３．３ｇ）を得た。Ｍ＋＝２０８。
【０１２５】
８．２ ５−（トリフルオロメチルチオ）−２，３−ジメチル−３−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドール
【０１２６】
【化４１】
酢酸（４０ｍｌ）中の４−（トリフルオロメチルチオ）フェニルヒドラジン（１ｇ）に、５−メチル−６−オキソヘプタン−１−スルホン酸（１．４ｇ）を添加し、その溶液を一晩加熱還流した。揮発性物質をロータリーエバポレーターで除去し、粗生成物を得て、そのうちの１．１ｇを分取ＨＰＬＣで精製した。当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、所望の生成物（２６０ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝３８１。
【０１２７】
８．３ ５−（トリフルオロメチルチオ）−２，３−ジメチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム
【０１２８】
【化４２】
５−（トリフルオロメチルチオ）−２，３−ジメチル−３−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドール（３６ｍｇ）に、ブタンスルトン（２ｍｌ）を添加し、その溶液を一晩１４０℃に加熱した。冷却すると、生成物を水中で抽出し、分取ＨＰＬＣで精製した。当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、所望の生成物（１５ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝５１８。
【０１２９】
８．４ ５−（トリフルオロメチルスルホニル）−２，３−ジメチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム
【０１３０】
【化４３】
５−（トリフルオロメチルチオ）−２，３−ジメチル−１，３−ビス（４−スルホナトブチル）−３Ｈ−インドリウム（４ｍｇ）に、濃硫酸（０．４ｍｌ）及びクロム三酸化物（５ｍｇ）を添加した。６０分後に混合物を水で希釈し、分取ＨＰＬＣで精製した。当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、所望の生成物（１ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝５５０。
【０１３１】
８．５ ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−５−［（トリフルオロメチル）スルホニル］−３Ｈ−インドリウム（化合物８）
６−［（２Ｅ）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−２−［（２Ｅ，４Ｅ）−４−（フェニルイミノ）ブト−２−エニリデン］−３−（４−スルホブチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ヘキサン酸（約５ｍｇ／ｍｌを０．２１ｍｌ）に、５−（トリフルオロメチルスルホニル）−２，３−ジメチル−１，３−ビス（４−スルホナトブチル）−３Ｈ−インドリウム（１ｍｇ）及び酢酸カリウム（４ｍｇ）を添加した。一晩の撹拌に続いて分取ＨＰＬＣを行い、当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、所望の生成物（０．１ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝１０５４。
【０１３２】
９． ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（４−スルホブチル）−４，６−ビス（トリフルオロメチル）−３−メチル−３−（５−カルボキシペンチル））−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，６−ジフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物９）
【０１３３】
【化４４】
９．１ ４，６−ビス（トリフルオロメチル）−２，３−ジメチル−３−（５−カルボキシペンチル）−３Ｈ−インドール
【０１３４】
【化４５】
酢酸（２０ｍｌ）中の３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニルヒドラジン塩酸塩（１ｇ）に、７−メチル−８−オキソノナン酸（０．６６ｇ）を添加し、その溶液を５時間加熱還流した。揮発性物質をロータリーエバポレーターで除去し、粗生成物を得て、そのうちの１ｍｌを分取ＨＰＬＣで精製した。当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、所望の生成物（１７ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝３９５。
【０１３５】
９．２ ３−（５−カルボキシペンチル）−４，６−ビス（トリフルオロメチル）−２，３−ジメチル−１−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム
【０１３６】
【化４６】
４，６−ビス（トリフルオロメチル）−２，３−ジメチル−３−（５−カルボキシペンチル）−３Ｈ−インドール（３００ｍｇの未精製材料）に、ブタンスルトン（３ｍｌ）を添加し、その溶液を１日間１４０℃に加熱した。冷却すると、生成物を水中で抽出し、分取ＨＰＬＣで精製した。当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、所望の生成物（１９ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝５３２。
【０１３７】
９．３ ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（４−スルホブチル）−４，６−ビス（トリフルオロメチル）−３−メチル−３−（５−カルボキシペンチル））−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，６−ジフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物９）
３−（５−カルボキシペンチル）−４，６−ビス（トリフルオロメチル）−２，３−ジメチル−１−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（３．７ｍｇ）に、マロンアルデヒドビス（フェニルイミン）モノハイドロクロライド（１．６ｍｇ）、無水酢酸（０．５ｍｌ）及び酢酸（０．２５ｍｌ）を添加した。この混合物を１２０℃で１時間加熱し、次いで室温に冷却した。４，６−ジフルオロ−２，３−ジメチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（３．１５ｍｇ）及び酢酸カリウム（６．１ｍｇ）を添加した。一晩の撹拌に続いて分取ＨＰＬＣを行い、当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、所望の生成物（０．５ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝１０２１。
【０１３８】
１０． ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−６−（トリフルオロメチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物１０）
【０１３９】
【化４７】
１０．１ ６−トリフルオロメチル−２，３−ジメチル−３−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドール
【０１４０】
【化４８】
酢酸（３０ｍｌ）中の３−（トリフルオロメチル）フェニルヒドラジン（１ｇ）に、５−メチル−６−オキソヘプタン−１−スルホン酸（１．３ｇ）を添加し、この溶液を一晩加熱還流した。揮発性物質をロータリーエバポレーターで除去し、粗生成物を得て、そのうちの１．３ｇを分取ＨＰＬＣで精製した。当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、所望の生成物（５５ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝３４９。
【０１４１】
１０．２ ６−トリフルオロメチル−２，３−ジメチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム
【０１４２】
【化４９】
６−トリフルオロメチル−２，３−ジメチル−３−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドール（２７ｍｇ）に、ブタンスルトン（２ｍｌ）を添加し、その溶液を３日間１４０℃に加熱した。冷却すると、生成物を水中で抽出し、分取ＨＰＬＣで精製した。当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、所望の生成物（１４ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝４８６。
【０１４３】
１０．３ ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−６−（トリフルオロメチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物１０）
６−［（２Ｅ）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−２−［（２Ｅ，４Ｅ）−４−（フェニルイミノ）ブト−２−エニリデン］−３−（４−スルホブチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ヘキサン酸（約５ｍｇ／ｍｌを０．６５ｍｌ）に、６−トリフルオロメチル−２，３−ジメチル−１，３−ビス（４−スルホナトブチル）−３Ｈ−インドリウム（２．６ｍｇ）及び酢酸カリウム（６ｍｇ）を添加した。一晩の撹拌に続いて分取ＨＰＬＣを行い、当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、所望の生成物（０．１ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝９８９。
【０１４４】
１１． ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７，８，９−ヘキサフルオロ−１，１−ジメチル−３−（４−スルホブチル）−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドリウム（化合物１１）
【０１４５】
【化５０】
１１．１ （１，２，３，４，６，７，９−ヘプタフルオロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アンヌレン−８−イル）ヒドラジン
【０１４６】
【化５１】
オクタフルオロナフタレン（１．２ｇ）に、エタノール（２０ｍｌ）及びヒドラジン水和物（０．６ｍｌ）を添加した。混合物を、一晩５０℃に加熱した。冷却すると、混合物を水に注ぎ、得られた沈殿物を濾過した。空気乾燥によって、淡黄色の材料１ｇを得て、それをさらに精製せずに使用した。
Ｍ＋＝２８４。
【０１４７】
１１．２ ３−メチルブタン２−オン（１，２，３，４，６，７，９−ヘプタフルオロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アンヌレン−８−イル）ヒドラゾン
【０１４８】
【化５２】
（１，２，３，４，６，７，９−ヘプタフルオロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アンヌレン−８−イル）ヒドラジン（１ｇ）に、エタノール（２０ｍｌ）及び３−メチル−２−ブタノン（０．３８ｇ）を添加した。混合物を３時間加熱還流し、その後揮発性物質をロータリーエバポレーターで除去し、固体（１ｇ）を得て、それを次の段階で使用した。Ｍ＋＝３５２。
【０１４９】
１１．３ ４，５，６，７，８，９−ヘキサフルオロ−１，１，２−トリメチル−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール
【０１５０】
【化５３】
３−メチルブタン２−オン（１，２，３，４，６，７，９−ヘプタフルオロ−５Ｈ−ベンゾ［７］アンヌレン−８−イル）ヒドラゾン（４４ｍｇ）に、テトラリン（２ｍｌ）を添加し、この混合物を一晩２００℃に加熱した。室温に冷却すると、混合物を分取ＨＰＬＣにかけた。当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、所望の生成物（２ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝３１７。
【０１５１】
１１．４ ４，５，６，７，８，９−ヘキサフルオロ−１，１，２−トリメチル−３−（４−スルホブチル）−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドリウム
【０１５２】
【化５４】
４，５，６，７，８，９−ヘキサフルオロ−１，１，２−トリメチル−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール（２ｍｇ）に、ブタンスルトン（２００μｌ）を添加し、この混合物を一晩１４０℃に加熱した。分取ＨＰＬＣの後に当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、所望の生成物（１ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝４５４。
【０１５３】
１１．５ ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７，８，９−ヘキサフルオロ−１，１−ジメチル−３−（４−スルホブチル）−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドリウム（化合物１１）
６−［（２Ｅ）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−２−［（２Ｅ，４Ｅ）−４−（フェニルイミノ）ブト−２−エニリデン］−３−（４−スルホブチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ヘキサン酸（約５ｍｇ／ｍｌを０．１８ｍｌ）に、４，５，６，７，８，９−ヘキサフルオロ−１，１，２−トリメチル−３−（４−スルホブチル）−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドリウム（０．７ｍｇ）及び酢酸カリウム（４ｍｇ）を添加した。一晩の撹拌に続いて分取ＨＰＬＣを行い、当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、所望の生成物（０．１ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝９５７。
【０１５４】
１２． ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，６−ジフルオロ−３，３−ジメチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−６−フルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−４−（トリフルオロメチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物１２）
【０１５５】
【化５５】
１２．１ ４−トリフルオロメチル−６−フルオロ−２，３−ジメチル−３−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドール
【０１５６】
【化５６】
３−トリフルオロメチル−５−フルオロフェニルヒドラジン（２ｇ）に、５−メチル−６−オキソヘプタン−１−スルホン酸（３ｇ）及び酢酸（６０ｍｌ）を添加し、この混合物を５時間１４０℃に加熱した。この後、揮発性物質をロータリーエバポレーターで除去し、残渣を水（１０ｍｌ）に溶解し、濾過し、分取ＨＰＬＣで精製し、所望の生成物（７９０ｍｇ）を得た。ＭＨ＋＝３６８。
【０１５７】
１２．２ ４−トリフルオロメチル−６−フルオロ−２，３−ジメチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム
【０１５８】
【化５７】
４−トリフルオロメチル−６−フルオロ−２，３−ジメチル−３−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドール（７９０ｍｇ）に、ブタンスルトン（１０ｍｌ）を添加し、この混合物を１４０℃で一晩加熱した。混合物を水（４ｍｌ）で希釈し、濾過し、分取ＨＰＬＣで精製し、所望の物質（１ｇ）を得た。ＭＨ＋＝５０５。
【０１５９】
１２．３ ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，６−ジフルオロ−３，３−ジメチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−６−フルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−４−（トリフルオロメチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物１２）
６−［（２Ｅ）−４，６−ジフルオロ−３，３−ジメチル−２−［（２Ｅ，４Ｅ）−４−（フェニルイミノ）ブト−２−エニリデン］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ヘキサン酸（０．０４ｍｍｏｌ）に、４−トリフルオロメチル−６−フルオロ−２，３−ジメチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（２０ｍｇ）及び酢酸カリウム（３５ｍｇ）を添加した。一晩の撹拌に続いて分取ＨＰＬＣを行い、当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、所望の生成物（４．２ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝８４９。
【０１６０】
１３． ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，６−ジフルオロ−３，３−ジメチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，６−ジフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物１３）
【０１６１】
【化５８】
１３．１ ６−［（２Ｅ）−４，６−ジフルオロ−３，３−ジメチル−２−［（２Ｅ，４Ｅ）−４−（フェニルイミノ）ブト−２−エニリデン］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ヘキサン酸（０．０４ｍｍｏｌ）に、４，６−ジフルオロ−２，３−ジメチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（１８．１ｍｇ）及び酢酸カリウム（３５ｍｇ）を添加した。一晩の撹拌に続いて分取ＨＰＬＣを行い、当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、所望の生成物（１０．７ｍｇ）を得た。ＭＨ＋＝８００。
【０１６２】
１４． ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，６−ジフルオロ−３，３−ジメチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−３−メチル−５−スルホ−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物１４）
【０１６３】
【化５９】
１４．１ ２，３−ジメチル−３−（４−スルホブチル）−５−スルホ−３Ｈ−インドール
【０１６４】
【化６０】
ヒドラジノベンゼンスルホン酸（４０ｇ）に、酢酸（５００ｍｌ）及び５−メチル−６−オキソヘプタン−１−スルホン酸（６０ｇ）を添加した。混合物を、６時間１５０℃に加熱し、次いで室温に冷却した。濾過後に、揮発性物質をロータリーエバポレーターで除去し、固体（１１０ｇ）を得て、そのうちの１００ｇをメタノール（１Ｌ）中で溶解し、メタノール（３００ｍｌ）中の水酸化カリウム（３８ｇ）を添加した。この混合物を１時間撹拌し、次いで一晩静置した。液体層をデカントし、揮発性物質をロータリーエバポレーターで除去して、淡黄色の固体（８０ｇ）として生成物を得た。
【０１６５】
１４．２ ２，３−ジメチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−５−スルホ−３Ｈ−インドール
【０１６６】
【化６１】
２，３−ジメチル−３−（４−スルホブチル）−５−スルホ−３Ｈ−インドール（１０ｇ）に、ブタンスルトン（３０ｇ）を添加し、この混合物を一晩１４０℃に加熱した。室温に冷却すると、スルホラン（２０ｍｌ）を添加し、この混合物をジエチルエーテル（５００ｍｌ）に注いだ。生成した沈殿を濾過により除去し、乾燥して、所望の生成物（１２ｇ）を得た。
【０１６７】
１４．３ ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，６−ジフルオロ−３，３−ジメチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−３−メチル−５−スルホ−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物１４）
６−［（２Ｅ）−４，６−ジフルオロ−３，３−ジメチル−２−［（２Ｅ，４Ｅ）−４−（フェニルイミノ）ブト−２−エニリデン］−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ヘキサン酸（０．０４ｍｍｏｌ）に、２，３−ジメチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−５−スルホ−３Ｈ−インドール（２０ｍｇ）及び酢酸カリウム（３５ｍｇ）を添加した。一晩の撹拌に続いて分取ＨＰＬＣを行い、当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、所望の生成物（８．９ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝８４３。
【０１６８】
１５． ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［３−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物１５）
【０１６９】
【化６２】
１５．１ ６−（４，５，６，７−テトラフルオロ−２，３−ジメチル−３Ｈ−インドール−３−イル）ヘキサン酸
【０１７０】
【化６３】
テトラフルオロフェニルヒドラジン（２ｇ）に、５−メチル−６−オキソヘプタン−１−カルボン酸（３ｇ）及び酢酸（５０ｍｌ）を添加し、この混合物を５時間１４０℃に加熱した。冷却すると、揮発性成分をロータリーエバポレーターで除去し、残渣を水（１０ｍｌ）に溶解し、濾過し、２ショットで分取ＨＰＬＣにより精製し、所望の生成物（６００ｍｇ）を得た。ＭＨ＋＝３３２。
【０１７１】
１５．２ ３−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−２，３−ジメチル−１−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム
【０１７２】
【化６４】
６−（４，５，６，７−テトラフルオロ−２，３−ジメチル−３Ｈ−インドール−３−イル）ヘキサン酸（６００ｍｇ）に、ブタンスルトン（４ｍｌ）を添加し、この混合物を一晩１４０℃に加熱した。冷却すると、この混合物を水（４ｍｌ）で希釈し、濾過し、分取ＨＰＬＣで精製し、所望の生成物（８００ｍｇ）を得た。ＭＨ＋＝４６８。
【０１７３】
１５．３ ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［３−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物１５）
３−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−２，３−ジメチル−１−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（１９ｍｇ）に、マロンアルデヒドビスフェニルイミン（９．４ｍｇ）、無水酢酸（０．５ｍｌ）及び酢酸（０．２５ｍｌ）を添加した。混合物を、１２０℃で１時間加熱し、次いで室温まで冷却した。２，３−ジメチル−４，５，６，７−テトラフルオロ−１，３−ビス（４−スルホナトブチル）−３Ｈ−インドリウム（２０ｍｇ）及び酢酸カリウム（３５．７ｍｇ）を添加し、この混合物を一晩撹拌した。分取ＨＰＬＣ精製によって、所望の生成物（４．５ｍｇ）を得た。ＭＨ＋＝９９４。
【０１７４】
１５．４ ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［３−｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム
【０１７５】
【化６５】
２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［３−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（２ｍｇ）に、ＤＭＳＯ（１ｍｌ）、ジピロリジノ−（Ｎ−スクシンイミジルオキシ）カルベニウムヘキサフルオロホスフェート（４ｍｇ）及びジイソプロピルエチルアミン（４０μｌ）を添加した。３時間撹拌した後、反応混合物を分取ＨＰＬＣにかけ、所望の生成物（０．７ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝１０９１。
【０１７６】
１６． ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［３−（５−カルボキシペンチル）−６−フルオロ−３−メチル−１−（４−スルホブチル）−４−（トリフルオロメチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物１６）
【０１７７】
【化６６】
１６．１ ６−（４−トリフルオロメチル−６−フルオロ−２，３−ジメチル−３Ｈ−インドール−３−イル）ヘキサン酸
【０１７８】
【化６７】
３−トリフルオロメチル−５−フルオロフェニルヒドラジン（２ｇ）に、５−メチル−６−オキソヘプタン−１−カルボン酸（３ｇ）及び酢酸（５０ｍｌ）を添加し、この混合物を５時間１４０℃に加熱した。冷却すると、揮発性成分をロータリーエバポレーターで除去し、残渣を水（１０ｍｌ）に溶解し、濾過し、２ショットで分取ＨＰＬＣによって精製し、所望の生成物（６００ｍｇ）を得た。ＭＨ＋＝３４６。
【０１７９】
１６．２ ３−（５−カルボキシペンチル）−４−トリフルオロメチル−６−フルオロ−２，３−ジメチル−１−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム
【０１８０】
【化６８】
６−（４−トリフルオロメチル−６−フルオロ−２，３−ジメチル−３Ｈ−インドール−３−イル）ヘキサン酸（６００ｍｇ）に、ブタンスルトン（４ｍｌ）を添加し、この混合物を一晩１４０℃に加熱した。冷却すると、混合物を水（４ｍｌ）で希釈し、濾過し、分取ＨＰＬＣで精製し、所望の生成物（８００ｍｇ）を得た。ＭＨ＋＝４８３。
【０１８１】
１６．３ ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［３−（５−カルボキシペンチル）−６−フルオロ−３−メチル−１−（４−スルホブチル）−４−（トリフルオロメチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物１６）
３−（５−カルボキシペンチル）−４−トリフルオロメチル−６−フルオロ−２，３−ジメチル−１−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（５０ｍｇ）に、マロンアルデヒドビスフェニルイミン（２４ｍｇ）、無水酢酸（０．５ｍｌ）及び酢酸（０．２５ｍｌ）を添加した。混合物を１２０℃で１時間加熱し、次いで室温に冷却した。２，３−ジメチル−４，５，６，７−テトラフルオロ−１，３−ビス（４−スルホナトブチル）−３Ｈ−インドリウム（５１ｍｇ）及び酢酸カリウム（９２ｍｇ）を添加し、混合物を一晩撹拌した。分取ＨＰＬＣ精製によって、所望の生成物（１９．５ｍｇ）を得た。ＭＨ＋＝１００８。
【０１８２】
１６．４ ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［３−｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝−６−フルオロ−３−メチル−１−（４−スルホブチル）−４−（トリフルオロメチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム
【０１８３】
【化６９】
２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［３−（５−カルボキシペンチル）−４−トリフルオロメチル−６−フルオロ−３−メチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（５ｍｇ）に、ＤＭＳＯ（１ｍｌ）、ジピロリジノ−（Ｎ−スクシンイミジルオキシ）カルベニウムヘキサフルオロホスフェート（１０ｍｇ）及びジイソプロピルエチルアミン（４０μｌ）を添加した。３時間撹拌した後、反応混合物を分取ＨＰＬＣにかけ、所望の生成物（２．１ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝１１０４。
【０１８４】
１６．５ ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［３−（６−｛［２−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−ｐｙｒｒｏｌ−１−イル）エチル］アミノ｝−６−オキソヘキシル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム
【０１８５】
【化７０】
Ｎ−［２−（Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル）アミノエチル］マレイミド（４ｍｇ）を、４ＭのＨＣｌと共に、ダイオキシン（１００μｌ）中で１時間撹拌した。回転蒸発の後、ＤＭＦ（１ｍｌ）中の２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［３−｛６−［（２，５−ジオキソピロリジン−１−イル）オキシ］−６−オキソヘキシル｝−６−フルオロ−３−メチル−１−（４−スルホブチル）−４−（トリフルオロメチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（２ｍｇ）及びジイソプロピルエチルアミン（４０μｌ）を添加し、混合物を２時間撹拌した。分取ＨＰＬＣによって所望の生成物（２．１ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝１１２９。
【０１８６】
１７． ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［３−（５−カルボキシペンチル）−４−トリフルオロメチル−６−フルオロ−３−メチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−３−（５−カルボキシペンチル）−４−トリフルオロメチル−６−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−インドリウム（化合物１７）
【０１８７】
【化７１】
１７．１ ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［３−（５−カルボキシペンチル）−４−トリフルオロメチル−６−フルオロ−３−メチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−３−（５−カルボキシペンチル）−４−トリフルオロメチル−６−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−インドリウム（化合物１７）
１６．３で記載した実験で、分取ＨＰＬＣ（８．５ｍｇ）によって単離されたこの物質も得られた。ＭＨ＋＝１０００。
【０１８８】
１８． ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ，７Ｅ）−７−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ヘプタ−１，３，５−トリエニル｝−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−４，６−ビス（トリフルオロメチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物１８）
【０１８９】
【化７２】
１８．１ ４，６−ビス（トリフルオロメチル）−２，３−ジメチル−３−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドール
【０１９０】
【化７３】
酢酸（３０ｍｌ）中の３，５−ビス（トリフルオロメチル）フェニルヒドラジン（１ｇ）に、５−メチル−６−オキソヘプタン−１−スルホン酸（１．５ｇ）を添加し、その溶液を３日間加熱還流した。揮発性物質をロータリーエバポレーターで除去し、粗生成物を得て、そのうち０．８ｇを分取ＨＰＬＣで精製した。当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、所望の生成物（６０ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝４１７。
【０１９１】
１８．２ ４，６−ビス（トリフルオロメチル）−２，３−ジメチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム
【０１９２】
【化７４】
４，６−ビス（トリフルオロメチル）−２，３−ジメチル−３−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドール（２７ｍｇ）に、ブタンスルトン（２ｍｌ）を添加し、その溶液を３日間１４０℃に加熱した。冷却すると、生成物を水中で抽出し、分取ＨＰＬＣで精製した。当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、所望の生成物（７ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝５５４。
【０１９３】
１８．３ ６−［（２Ｅ）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−２−［（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−６−（フェニルイミノ）ヘキサ−２，４−ジエニリデン］−３−（４−スルホブチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ヘキサン酸
【０１９４】
【化７５】
１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（２４ｍｇ）に、Ｎ−５−（フェニルアミノ）−２，４−ペンタジエニリデンモノハイドロクロライド（１３ｍｇ）、無水酢酸（４ｍｌ）及び酢酸（２ｍｌ）を添加した。この混合物を、１時間４５分間１２０℃に加熱し、その後室温に冷却した。この未精製の反応混合物（約５ｍｇ／ｍｌの生成物）をさらに説明するように、精製せずに使用した。
【０１９５】
１８．４ ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ，７Ｅ）−７−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ヘプタ−１，３，５−トリエニル｝−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−４，６−ビス（トリフルオロメチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物１８）
６−［（２Ｅ）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−２−［（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−６−（フェニルイミノ）ヘキサ−２，４−ジエニリデン］−３−（４−スルホブチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ヘキサン酸（約５ｍｇ／ｍｌを１．６ｍｌ）に、４，６−ビス（トリフルオロメチル）−２，３−ジメチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（７ｍｇ）及び酢酸カリウム（１０ｍｇ）を添加した。一晩の撹拌に続いて分取ＨＰＬＣを行い、当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、所望の生成物（１ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝１０８３。
【０１９６】
１９． ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ，７Ｅ）−７−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ヘプタ−１，３，５−トリエニル｝−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−５−トリフルオロメチル−３Ｈ−インドリウム（化合物１９）
【０１９７】
【化７６】
１９．１ ５−トリフルオロメチル−２，３−ジメチル−３−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドール
【０１９８】
【化７７】
酢酸（３０ｍｌ）中の４−（トリフルオロメチル）フェニルヒドラジン（２．１８ｇ）に、５−メチル−６−オキソヘプタン−１−スルホン酸（４ｇ）を添加し、その溶液を一晩加熱還流した。揮発性物質をロータリーエバポレーターで除去し、粗生成物を得て、そのうちの０．４４ｇを分取ＨＰＬＣで精製した。当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、所望の生成物（１８０ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝３４９。
【０１９９】
１９．２ ５−トリフルオロメチル−２，３−ジメチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム
【０２００】
【化７８】
５−トリフルオロメチル−２，３−ジメチル−３−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドール（５０ｍｇ）に、ブタンスルトン（２ｍｌ）を添加し、その溶液を１４０℃に３日間加熱した。冷却すると、生成物を水中で抽出し、分取ＨＰＬＣで精製した。当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、所望の生成物（２９ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝４８６。
【０２０１】
１９．３ ２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ，７Ｅ）−７−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ヘプタ−１，３，５−トリエニル｝−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−５−トリフルオロメチル−３Ｈ−インドリウム（化合物１９）
６−［（２Ｅ）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−２−［（２Ｅ，４Ｅ，６Ｅ）−６−（フェニルイミノ）ヘキサ−２，４−ジエニリデン］−３−（４−スルホブチル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インドール−１−イル］ヘキサン酸（約５ｍｇ／ｍｌを１．６ｍｌ）に、５−トリフルオロメチル−２，３−ジメチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（６ｍｇ）及び酢酸カリウム（１０ｍｇ）を添加した。一晩の撹拌に続いて分取ＨＰＬＣを行い、当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、所望の生成物（２．８ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝１０１５。
【０２０２】
２０． ２−｛（１Ｅ，３Ｅ）−３−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］プロペ−１−ニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物２０）
【０２０３】
【化７９】
２０．１ １−（５−カルボキシペンチル）−２，３−ジメチル−３−（４−スルホブチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３Ｈ−インドリウム（２ｍｇ）に、２，３−ジメチル−４，５，６，７−テトラフルオロ−１，３−ビス（４−スルホナトブチル）−３Ｈ−インドリウム（２．３ｍｇ）、エタノール（０．５ｍｌ）、トリエチルオルトホルメート（１００μｌ）及びピリジン（２０μｌ）を添加した。この混合物を、油浴において１２０℃で４時間加熱し、その後一晩室温に置いた。この混合物を水で希釈し、分取ＨＰＬＣを行った。当該画分を混合し、ロータリーエバポレーターで濃縮し、凍結乾燥し、所望の生成物（０．１ｍｇ）を得た。Ｍ＋＝９６７。さらなる化合物も、２１で説明するように単離した。
【０２０４】
２１． １−（５−カルボキシペンチル）−２−｛（１Ｅ，３Ｅ）−３−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］プロペ−１−ニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物２１）
【０２０５】
【化８０】
２１．１ ２０．１で説明した実験によって、分取ＨＰＬＣによって単離したこの物質が得られた（０．１ｍｇ）。Ｍ＋＝９４５。
【０２０６】
２２． ３−（５−カルボキシペンチル）−３−メチル−２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−５−スルホ−１−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物２２）
【０２０７】
【化８１】
２２．１ ２，３−ジメチル−１，３−ビス（４−スルホナトブチル）−３Ｈ−インドリウム、ジナトリウム塩
【０２０８】
【化８２】
スルホン化インドール（〜５ｇ、１８ｍｍｏｌ）及びブタンスルトン（１２．２ｇ、９０ｍｍｏｌ、５当量）を、１４０°で４時間撹拌した。反応混合物を冷却し、次いで撹拌しながら酢酸エチルに注いだ。この物質は沈殿せず、油として残り、ここから酢酸エチルをデカントした。収量：〜１０ｇ。Ｍ＋＝４１８。
【０２０９】
２２．２ ３−（５−カルボキシペンチル）−３−メチル−２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−５−スルホ−１−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物２２）
２，３−ジメチル−３−（５−カルボキシペンチル）−５−スルホ−１−（３−スルホブチル）インドリウム、ジナトリウム塩（３．４ｇ、６．８４ｍｍｏｌ）を、トリエチルアミン（２．５ｍｌ）を含有する酢酸（２５ｍｌ）中で溶解した。マロンアルデヒドビスフェニルイミンＨＣｌ（４．１５ｇ、１６ｍｍｏｌ）を添加し、この混合物を一晩撹拌しながら１４０℃で加熱した。反応混合物をロータリーエバポレーターにかけて、赤色油を得て、これを水（５０ｍｌ）及びアセトニトリル（３０ｍｌ）中で溶解した。これを濾過し、精製し、色素中間体１ｇを得た。色素中間体を、１当量の２，３−ジメチル−１，３−ビス（４−スルホナトブチル）−３Ｈ−インドリウム（ジナトリウム塩）及び酢酸カリウム（２ｇ）と共に、酢酸：酢酸（１：１、５０ｍｌ）中で溶解した。反応物を、１２０°で４時間撹拌し、次いで乾燥するまでロータリーエバポレーターにかけて、逆相ＨＰＬＣによって精製した。収量：８５ｍｇ。Ｍ＋＝９２９。
【０２１０】
２３． 光安定性試験
光安定性試験を、下記で詳述する通り行った。全てのフルオロフォアを、等モル濃度で水中にて溶解した。各々の溶液をさらにバイアルに分けた。いくつかのバイアルを、実験の間対照試料として暗い環境に保持した。その他は強い光源に曝した。
【０２１１】
Ｗａｌｌａｃライトボックス（１２９５−０１３）を強い光源として使用した。試料を光源の２２ｃｍ上に保持し、連続して光に曝した。各々の試料のＵＶ／可視スペクトルを、２４時間毎に測定した。各々の測定点で同じキュベット及び分光光度計を使用した。暗所に保持した対照試料については、ＵＶ／可視吸収スペクトルを実験の開始と終了時の両方で測定した。７組の実験を行った。
【０２１２】
２３．１ Ｃｙ５Ｆ（化合物１）及び化合物４の光安定性を、非フッ素化類似体Ｃｙ５と比較して試験した。
【０２１３】
２３．２ Ｃｙ７Ｆ（化合物２）、化合物１８及び化合物１９の光安定性を、非フッ素化類似体Ｃｙ７と比較した。
【０２１４】
２３．３ 化合物３及び化合物２２の光安定性を、Ａｌｅｘａ６４７（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）と比較した。
【０２１５】
２３．４ 化合物５、７、９、１１及び１３の光安定性を、Ａｌｅｘａ６４７（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）及びＣｙ５と比較した。
【０２１６】
２３．５ 化合物６、８、１０、１２及び１４の光安定性を、Ｃｙ５と比較した。
【０２１７】
２３．６ 化合物１５、１６及び１７の光安定性を、Ａｌｅｘａ６４７（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）及びＣｙ５と比較した。
【０２１８】
２３．７ 化合物２０及び化合物２１の光安定性を、Ｃｙ３．と比較した。
【０２１９】
各々の実験のデータを正規化し、図３、４、５、６、７、８及び９に示すようにグラフ化した。非フッ素化色素類似体と比較した場合、フッ素化色素は、光退色に対する抵抗性が大きいことを一般に示すことが、その結果によって示された。同じ期間に亘って光に曝されていなかった対照の反応は、吸収の減少を示さなかった。
【図面の簡単な説明】
【０２２０】
【図１】式（ＩＩ）及び式（ＩＩＩ）に関して、合成されたフッ素化色素化合物（化合物１〜化合物２１）をまとめた図である。
【図２】式（ＩＩ）及び式（ＩＩＩ）に関して、合成されたフッ素化色素化合物（化合物１〜化合物２１）をまとめた図である。
【図３】Ｃｙ５Ｆ（化合物１）及び化合物５の光安定性のデータを例示したグラフである。比較をする目的で、非フッ素化類似体Ｃｙ（商標）５の光安定性のデータも示す。
【図４】非フッ素化類似体（Ｃｙ７）と比較して、Ｃｙ７Ｆ（化合物２）、化合物１８及び化合物１９の光安定性のデータを示したグラフである。
【図５】Ａｌｅｘａ（登録商標）６４７（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）と比較して、化合物３及び化合物２２の光安定性のデータを示したグラフである。
【図６】Ａｌｅｘａ（登録商標）６４７（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）及びＣｙ５と比較して、化合物５、７、９、１１及び１３の光安定性のデータを示したグラフである。
【図７】Ｃｙ５と比較して、化合物６、８、１０、１２及び１４の光安定性のデータを示したグラフである。
【図８】Ａｌｅｘａ（登録商標）６４７（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）及びＣｙ５と比較して、化合物１５、１６及び１７の光安定性のデータを示したグラフである。
【図９】Ｃｙ３と比較して、化合物２０及び化合物２１の光安定性のデータを示したグラフである。
【図１０】Ｔ＝９６時間のデータポイントでの光安定性の順序に並び替えた、化合物１、３及び５〜１７を示すグラフである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物。
【化１】
式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基は−Ｌ−Ｍ、−Ｌ−Ｐ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈ（式中、ｋは１〜１０の整数である）から独立に選択され、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基は水素、−Ｌ−Ｍ、−Ｌ−Ｐ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２−ＣＦ３及び−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは０又は１〜４の整数である）から独立に選択されるか、或いはＲ３とＲ４との組合せ又はＲ５とＲ６との組合せ及び／又はＲ７とＲ８との組合せ又はＲ９とＲ１０との組合せが炭素原子を含有する縮合芳香族六員環を形成していて、適宜−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２−ＣＦ３又は−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは上記で定義した通りである。）で１回以上置換されていてもよく、
Ｌは炭素、窒素、酸素及び硫黄原子からなる群から選択される１〜２０個の連結原子の鎖を有する連結基であり、
Ｍは標的結合基であり、
Ｐはコンジュゲート成分であり、
Ｒ１５基は水素であるか、或いは２以上のＲ１５基が結合して単環又は二環縮合炭化水素系（各環は５個又は６個の炭素原子を有し、残りのＲ１５基は水素である。）を形成し、
ｎは１〜３の整数であるが、ただし
ｉ）Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基の１以上が−Ｌ−Ｍ又は−Ｌ−Ｐであり、
ｉｉ）Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の１以上がフッ素を含んでおり、しかも
ｉｉｉ）Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０のいずれかが−ＳＯ３Ｈである場合には、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基の１以上が−Ｌ−Ｍ、−Ｌ−Ｐ及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈから選択される
ことを条件とする。
【請求項２】
Ｒ１及びＲ２基が−Ｌ−Ｍ、−Ｌ−Ｐ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈから独立に選択され、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基が水素、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２−ＣＦ３及び−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは０又は１〜４の整数である）から独立に選択されるか、或いはＲ３とＲ４との組合せ又はＲ５とＲ６との組合せ及び／又はＲ７とＲ８との組合せ又はＲ９とＲ１０との組合せが炭素原子を含有する縮合芳香族六員環を形成していて、適宜−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２−ＣＦ３又は−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは上記で定義した通りである。）で１回以上置換されていてもよく、
Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基がＣ１〜Ｃ６アルキル及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈから独立に選択され、
Ｒ１５基、Ｌ、Ｍ及びＰ、ｋ及びｎは請求項１で定義した通りであるが、ただし
ｉ）Ｒ１及びＲ２基の１以上が−Ｌ−Ｍ又は−Ｌ−Ｐであり、
ｉｉ）Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の１以上がフッ素を含んでおり、しかも
ｉｉｉ）Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０のいずれかが−ＳＯ３Ｈである場合には、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基の１以上が−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈである
ことを条件とする、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基が−Ｌ−Ｍ、−Ｌ−Ｐ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈから独立に選択され、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基が水素、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２−ＣＦ３及び−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは０又は１〜４の整数である）から独立に選択されるか、或いはＲ３とＲ４との組合せ又はＲ５とＲ６との組合せ及び／又はＲ７とＲ８との組合せ又はＲ９とＲ１０との組合せが炭素原子を含有する縮合芳香族六員環を形成していて、適宜−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２−ＣＦ３又は−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは上記で定義した通りである。）で１回以上置換されていてもよく、
Ｒ１及びＲ２基がＣ１〜Ｃ６アルキル及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈから独立に選択され、
Ｒ１５基、Ｌ、Ｍ及びＰ、ｋ及びｎは請求項１で定義した通りであるが、ただし
ｉ）Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基の１以上が−Ｌ−Ｍ又は−Ｌ−Ｐであり、
ｉｉ）Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の１以上がフッ素を含んでおり、しかも
ｉｉｉ）Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０のいずれかが−ＳＯ３Ｈである場合には、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基の１以上が−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈである
ことを条件とする、請求項１記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の１以上がフッ素である、請求項１乃至請求項３のいずれか１項記載の化合物。
【請求項５】
２以上のＲ１５基が次式の炭化水素環系を形成する、請求項１乃至請求項３のいずれか１項記載の化合物。
【化２】
式中、ｎは１〜３の整数であり、ｐは０又は１であり、残りのＲ１５基は水素である。
【請求項６】
各Ｒ１５基が水素である、請求項１乃至請求項３のいずれか１項記載の化合物。
【請求項７】
Ｌが次式の連結基である、請求項１乃至請求項６のいずれか１項記載の化合物。
−（ＣＨＲ′）ｐ−Ｑ−（ＣＨＲ′）ｒ−
式中、Ｑは−ＣＨＲ′−、−ＮＲ′−、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＣＲ′＝ＣＲ′−、−Ａｒ−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ′−及び−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−から選択され、Ｒ′は水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり、Ａｒはスルホネートで置換されていてもよいフェニレンであり、ｐは０〜５であり、ｒは１〜５である。
【請求項８】
Ｑが−ＣＨＲ′−及び−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（式中、Ｒ′上記で定義した通りである。）から選択される、請求項７記載の化合物。
【請求項９】
Ｑが−ＣＨＲ′−であり、Ｒ′が水素である、請求項７又は請求項８記載の化合物。
【請求項１０】
−Ｌ−Ｍ及び／又は−Ｌ−Ｐがカルボキシペンチル基を含む、請求項１乃至請求項６のいずれか１項記載の化合物。
【請求項１１】
以下に示すものから選択される化合物。
【化３】
式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基の１以上は−Ｌ−Ｍ又は−Ｌ−Ｐであって、Ｌは次式の連結基であり
−（ＣＨＲ′）ｐ−Ｑ−（ＣＨＲ′）ｒ−
（式中、Ｑは、−ＣＨＲ′−、−ＮＲ′−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ′−及び−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−（式中、Ｒ′は水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルである）から選択され、ｐは０〜５であり、ｒは１〜５である。）、
Ｍは標的結合基であり、
Ｐはコンジュゲート成分であり、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基のいずれかが−Ｌ−Ｍ又は−Ｌ−Ｐでない場合には、残りのＲ１、Ｒ２、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基はＣ１〜Ｃ６アルキル及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈ（式中、ｋは１〜１０の整数である）から独立に選択され、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の１以上は−ＳＯ２−ＣＦ３及び−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは０又は１〜４の整数である）から選択される１以上のフルオロ基を含み、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基のいずれかが−ＳＯ２−ＣＦ３又は−（ＣＦ２）ｍ−Ｆでない場合には、残りのＲ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基は水素であり、
Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、Ｒ１９、Ｒ２０、Ｒ２１、Ｒ２２及びＲ２３基は、存在する場合、水素、−ＳＯ２−ＣＦ３及び−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは上記で定義した通りである。）から独立に選択され、
ｎは１〜３の整数である。
【請求項１２】
Ｒ１及びＲ２基の１以上が−Ｌ−Ｍ又は−Ｌ−Ｐであり、残りのＲ１又はＲ２基がＣ１〜Ｃ６アルキル及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈから選択され、
Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基の１以上が−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈであり、残りのＲ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基がＣ１〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、Ｒ１９、Ｒ２０、Ｒ２１、Ｒ２２、Ｒ２３基、Ｌ、Ｍ、Ｐ、ｋ及びｎは請求項１１で定義した通りである、請求項１１記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の１以上がフッ素である、請求項１２記載の化合物。
【請求項１４】
残りのＲ１又はＲ２基が−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈである、請求項１１記載の化合物。
【請求項１５】
Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４の２以上が−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈである、請求項１１記載の化合物。
【請求項１６】
Ｒ１１及びＲ１２基のいずれか並びにＲ１３及びＲ１４基のいずれかが−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈであり、残りのＲ１１、Ｒ１２、Ｒ１３又はＲ１４基がＣ１〜Ｃ６アルキルである、請求項１５記載の化合物。
【請求項１７】
Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基の１以上が−Ｌ−Ｍ又は−Ｌ−Ｐであり、残りのＲ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基がＣ１〜Ｃ６アルキル及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈから選択され、
Ｒ１及びＲ２基の１以上が−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈであり、残りのＲ１又はＲ２基がＣ１〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、Ｒ１９、Ｒ２０、Ｒ２１、Ｒ２２、Ｒ２３基、Ｌ、Ｍ、Ｐ、ｋ及びｎは請求項１０で定義した通りである、請求項１１記載の化合物。
【請求項１８】
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の１以上がフッ素である、請求項１７記載の化合物。
【請求項１９】
Ｒ１及びＲ２が−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈ（式中、ｋは上記で定義した通りである。）である、請求項１７記載の化合物。
【請求項２０】
−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈが−（ＣＨ２）３−ＳＯ３Ｈ及び−（ＣＨ２）４−ＳＯ３Ｈから選択される、請求項１乃至請求項１９のいずれか１項記載の化合物。
【請求項２１】
Ｑが−ＣＨＲ′−及び−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（式中、Ｒ′上記で定義した通りである。）から選択される、請求項１１乃至請求項２０のいずれか１項記載の化合物。
【請求項２２】
Ｑが−ＣＨＲ′−であり、Ｒ′が水素である、請求項１１乃至請求項２０のいずれか１項記載の化合物。
【請求項２３】
−Ｌ−Ｍ又は−Ｌ−Ｐがカルボキシペンチル基を含む、請求項１１乃至請求項２０のいずれか１項記載の化合物。
【請求項２４】
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６基、並びに／或いはＲ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の２以上がＦであり、残りのＲ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９又はＲ１０基がＨである、請求項１乃至請求項２３のいずれか１項記載の化合物。
【請求項２５】
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６基並びに／或いはＲ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基がＦである、請求項１乃至請求項２３のいずれか１項記載の化合物。
【請求項２６】
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６基並びに／或いはＲ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の１以上がペルフルオロＣ１〜Ｃ４アルキルであり、残りのＲ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基がＨ又はＦから選択される、請求項１乃至請求項２３のいずれか１項記載の化合物。
【請求項２７】
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６位並びに／或いはＲ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０位の２以下がペルフルオロＣ１〜Ｃ４アルキルで置換されている、請求項２６記載の化合物。
【請求項２８】
前記ペルフルオロＣ１〜Ｃ４アルキルがトリフルオロメチルである、請求項２６又は請求項２７記載の化合物。
【請求項２９】
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６基並びに／或いはＲ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の１以上が−ＳＯ２−ＣＦ３であり、残りのＲ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基がＨ又はＦから選択される、請求項１乃至請求項２３のいずれか１項記載の化合物。
【請求項３０】
前記標的結合基Ｍが標的材料上の官能基との反応のための反応性基又は標的材料上の反応性基との反応のための官能基を含む、請求項１乃至請求項２９のいずれか１項記載の化合物。
【請求項３１】
前記反応性基がスクシンイミジルエステル、スルホ−スクシンイミジルエステル、４−スルホ−２，３，５，６−テトラフルオロフェノール（ＳＴＰ）エステル、イソチオシアネート、マレイミド、ハロアセトアミド、酸ハロゲン化物、ヒドラジド、ビニルスルホン、ジクロロトリアジン及びホスホルアミデートから選択される、請求項３０記載の化合物。
【請求項３２】
前記官能基がヒドロキシ、アミノ、スルフヒドリル、イミダゾール、アルデヒド及びケトンを含むカルボニル、カルボン酸、並びにチオホスフェートから選択される、請求項３０記載の化合物。
【請求項３３】
前記標的結合基Ｍが親和性タグを含む、請求項１乃至請求項２９のいずれか１項記載の化合物。
【請求項３４】
Ｐが抗体、脂質、タンパク質、ペプチド、炭水化物；アミノ、スルフヒドリル、カルボニル、ヒドロキシル、カルボン酸及びチオホスフェート基の１以上を含有するか或いは含有するように誘導体化されたヌクレオチド；アミノ、スルフヒドリル、カルボニル、ヒドロキシル、カルボン酸及びチオホスフェート基の１以上を含有するか或いは含有するように誘導体化されたオキシ又はデオキシポリ核酸；微生物材料、薬物、ホルモン、細胞、細胞膜、毒素からなる群から選択される、請求項１乃至請求項２９のいずれか１項記載の化合物。
【請求項３５】
次式の化合物。
【化４】
式中、
Ｒ１、Ｒ２及びＲ１１基は、−（ＣＨ２）５−ＣＯＯＨ及び−（ＣＨ２）４−ＳＯ３Ｈから独立に選択され、
Ｒ１３基は、−（ＣＨ２）５−ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）４−ＳＯ３Ｈ及び−ＣＨ３から選択され、
Ｒ１２及びＲ１４基は、−ＣＨ３であり、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６基並びに／或いはＲ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の２以上は、Ｆであり、残りのＲ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９又はＲ１０基は、Ｈ、−ＳＯ３−、−ＳＯ２−ＣＦ３及び−ＣＦ３から独立に選択され、
Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８及びＲ１９基並びに／或いはＲ２０、Ｒ２１、Ｒ２２及びＲ２２基は、存在する場合はＦであり、
ｎは１〜３の整数である。
【請求項３６】
成分を標識する方法であって、
ａ）上記成分を、式（Ｉ）の化合物と接触させる段階と、
ｂ）上記化合物を上記成分と反応させて上記化合物で上記成分を標識する段階と
を含んでなる方法。
【化５】
式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基は−Ｌ−Ｍ、−Ｌ−Ｐ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈ（式中、ｋは１〜１０の整数である）から独立に選択され、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基は水素、−Ｌ−Ｍ、−Ｌ−Ｐ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２−ＣＦ３及び−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは０又は１〜４の整数である）から独立に選択されるか、或いはＲ３とＲ４との組合せ又はＲ５とＲ６との組合せ及び／又はＲ７とＲ８との組合せ又はＲ９とＲ１０との組合せが炭素原子を含有する縮合芳香族六員環を形成していて、適宜−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２−ＣＦ３又は−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは上記で定義した通りである。）で１回以上置換されていてもよく、
Ｌは炭素、窒素、酸素及び硫黄原子からなる群から選択される１〜２０個の連結原子の鎖を有する連結基であり、
Ｍは標的結合基であり、
Ｐはコンジュゲート成分であり、
Ｒ１５基は水素であるか、或いは２以上のＲ１５基が結合して単環又は二環縮合炭化水素系（各環は５個又は６個の炭素原子を有し、残りのＲ１５基は水素である）を形成し、
ｎは１〜３の整数であるが、ただし
ｉ）Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基の１以上は、−Ｌ−Ｍであり、
ｉｉ）Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の１以上がフッ素を含んでおり、しかも
ｉｉｉ）Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０のいずれかが−ＳＯ３Ｈである場合には、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基の１以上は、−Ｌ−Ｍ及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈから選択される
ことを条件とする。
【請求項３７】
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の１以上がフッ素である、請求項３６記載の方法。
【請求項３８】
前記成分が、抗体、脂質、タンパク質、ペプチド、炭水化物；アミノ、スルフヒドリル、カルボニル、ヒドロキシル、カルボン酸及びチオホスフェート基の１以上を含有するか或いは含有するように誘導体化されたヌクレオチド；アミノ、スルフヒドリル、カルボニル、ヒドロキシル、カルボン酸及びチオホスフェート基の１以上を含有するか或いは含有するように誘導体化されたオキシ又はデオキシポリ核酸；微生物材料、薬物、ホルモン、細胞、細胞膜、毒素、ポリマー粒子、並びにガラスビーズからなる群から選択される、請求項３６記載の方法。
【請求項３９】
光学イメージングのための、請求項３６乃至請求項３８の方法で調製した色素標識成分の使用。
【請求項４０】
ａ）次の式（Ａ）の第１の化合物と、
【化６】
ｂ）第１の化合物と同一又は異なる次の式（Ｂ）の第２の化合物と、
ｃ）第３の化合物（Ｃ）と
を第１の化合物と第２の化合物との間にコンジュゲート結合を形成するのに適切な条件下で反応させる段階を含む、請求項１乃至請求項３５のいずれか１項記載の化合物を調製する方法。
【化７】
式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基は−Ｌ−Ｍ、−Ｌ−Ｐ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈ（式中、ｋは１〜１０の整数である）から独立に選択され、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基は水素、−Ｌ−Ｍ、−Ｌ−Ｐ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２−ＣＦ３及び−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは０又は１〜４の整数である）から独立に選択されるか、或いはＲ３とＲ４との組合せ又はＲ５とＲ６との組合せ及び／又はＲ７とＲ８との組合せ又はＲ９とＲ１０との組合せが炭素原子を含有する縮合芳香族六員環を形成していて、適宜−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２−ＣＦ３又は−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは上記で定義した通りである。）で１回以上置換されていてもよく、
Ｌは炭素、窒素、酸素及び硫黄原子からなる群から選択される１〜２０個の連結原子の鎖を有する連結基であり、
Ｍは標的結合基であり、
Ｐはコンジュゲート成分であるが、ただし
ｉ）Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基の１以上が−Ｌ−Ｍ又は−Ｌ−Ｐであり、
ｉｉ）Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の１以上がフッ素を含んでおり、しかも
ｉｉｉ）Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０のいずれかが−ＳＯ３Ｈである場合には、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基の１以上が−Ｌ−Ｍ、−Ｌ−Ｐ及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈから選択される
ことを条件とする。
【請求項４１】
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の１以上がフッ素である、請求項４０記載の方法。
【請求項４２】
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６基並びに／或いはＲ７、Ｒ８、Ｒ９又はＲ１０基の２以上がＦであり、残りのＲ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９又はＲ１０基がＨである、請求項４０記載の方法。
【請求項４３】
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６基並びに／或いはＲ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基がＦである、請求項４０記載の方法。
【請求項４４】
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５又はＲ６基並びに／或いはＲ７、Ｒ８、Ｒ９又はＲ１０基の１以上がペルフルオロＣ１〜Ｃ４アルキルであり、残りのＲ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基がＨ又はＦから選択される、請求項４０記載の方法。
【請求項４５】
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５又はＲ６基並びに／或いはＲ７、Ｒ８、Ｒ９又はＲ１０基の１以上が−ＳＯ２−ＣＦ３であり、残りのＲ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基がＨ又はＦから選択される、請求項４０記載の方法。
【請求項４６】
次式の化合物。
【化８】
式中、
Ｒ１、Ｒ１１及びＲ１２基は−Ｌ−Ｍ、−Ｌ−Ｐ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈ（式中、ｋは１〜１０の整数である）から独立に選択され、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６基は水素、−Ｌ−Ｍ、−Ｌ−Ｐ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２−ＣＦ３及び−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは０又は１〜４の整数である）から独立に選択されるか、或いはＲ３とＲ４との組合せ又はＲ５とＲ６との組合せが炭素原子を含有する縮合芳香族六員環を形成していて、適宜−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２−ＣＦ３又は−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは上記で定義した通りである。）で１回以上置換されていてもよく、
Ｌは炭素、窒素、酸素及び硫黄原子からなる群から選択される１〜２０個の連結原子の鎖を有する連結基であり、
Ｍは標的結合基であり、
Ｐはコンジュゲート成分であるが、ただし
ｉ）Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ１１及びＲ１２基の１以上が−Ｌ−Ｍ又は−Ｌ−Ｐであり、
ｉｉ）Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６基の１以上がフッ素を含んでおり、しかも
ｉｉｉ）Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６のいずれかが−ＳＯ３Ｈである場合には、Ｒ１１及びＲ１２基の１以上が−Ｌ−Ｍ、−Ｌ−Ｐ及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈから選択される
ことを条件とする。
【請求項４７】
Ｒ１、Ｒ１１及びＲ１２基の１以上が−Ｌ−Ｍ（式中、Ｌは上記で定義した通りであり、Ｍはスクシンイミジルエステル、スルホ−スクシンイミジルエステル、４−スルホ−２，３，５，６−テトラフルオロフェノール（ＳＴＰ）エステル、イソチオシアネート、マレイミド、ハロアセトアミド、酸ハロゲン化物、ヒドラジド、ビニルスルホン、ジクロロトリアジン及びホスホルアミデートから選択される反応性基を含む。）である、請求項４６記載の化合物。
【請求項４８】
Ｒ１、Ｒ１１及びＲ１２基の１以上が−Ｌ−Ｍ（式中、Ｌは上記で定義した通りであり、Ｍは、ヒドロキシ、アミノ、スルフヒドリル、イミダゾール、アルデヒド及びケトンを含むカルボニル、カルボン酸、並びにチオホスフェートから選択される官能基を含む。）である、請求項４６記載の化合物。
【請求項４９】
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６基の１以上がフッ素である、請求項４６乃至請求項４８のいずれか１項記載の化合物。
【請求項５０】
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６基の２以上がＦであり、残りのＲ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６基がＨである、請求項４６乃至請求項４８のいずれか１項記載の化合物。
【請求項５１】
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６基がＦである、請求項４６乃至請求項４８のいずれか１項記載の化合物。
【請求項５２】
Ｒ１、Ｒ１１及びＲ１２基の１以上が−Ｌ−Ｍ（式中、Ｌは上記で定義した通りであり、Ｍは親和性タグを含む）である、請求項４６記載の化合物。
【請求項５３】
次式の化合物。
【化９】
式中、
Ｒ１及びＲ１１基の１以上は−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈであり、
残りのＲ１又はＲ１１基は−（ＣＨ２）５−ＣＯＯＨ及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈから選択され、
Ｒ１２基はＣ１〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６基はＦであり、
ｋは３又は４である。
【請求項５４】
Ｐが、抗体、脂質、タンパク質、ペプチド、炭水化物；アミノ、スルフヒドリル、カルボニル、ヒドロキシル、カルボン酸及びチオホスフェート基の１以上を含有するか或いは含有するように誘導体化されたヌクレオチド；アミノ、スルフヒドリル、カルボニル、ヒドロキシル、カルボン酸及びチオホスフェート基の１以上を含有するか或いは含有するように誘導体化されたオキシ又はデオキシポリ核酸；微生物材料、薬物、ホルモン、細胞、細胞膜、毒素、ポリマー粒子、並びにガラスビーズからなる群から選択される、請求項４６記載の化合物。
【請求項５５】
ｉ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（Ｃｙ５Ｆ）（化合物１）；
ｉｉ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ，７Ｅ）−７−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ヘプタ−１，３−５−トリエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（Ｃｙ７Ｆ）（化合物２）；
ｉｉｉ）３−（５−カルボキシペンチル）−３−メチル−５−スルホ−１−（４−スルホブチル）−２−｛１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ｝−５−［４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−３Ｈ−インドリウム（化合物３）；
ｉｖ）１−（５−カルボキシペンチル）−３−メチル−５−スルホ−３−（４−スルホブチル）−２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−３Ｈ−インドリウム（化合物４）；
ｖ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，６−ジフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物５）；
ｖｉ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，６−ジフルオロ−３，３−ジメチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物６）；
ｖｉｉ）１−（５−カルボキシペンチル）−２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，６−ジフルオロ−３，３−ジメチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物７）；
ｖｉｉｉ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−５−［（トリフルオロメチル）スルホニル］−３Ｈ−インドリウム（化合物８）；
ｉｘ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（４−スルホブチル）−４，６−ビス（トリフルオロメチル）−３−メチル−３−（５−カルボキシペンチル））−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，６−ジフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物９）；
ｘ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−６−（トリフルオロメチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物１０）；
ｘｉ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７，８，９−ヘキサフルオロ−１，１−ジメチル−３−（４−スルホブチル）−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドリウム（化合物１１）；
ｘｉｉ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，６−ジフルオロ−３，３−ジメチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝ −６−フルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−４−（トリフルオロメチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物１２）；
ｘｉｉｉ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，６−ジフルオロ−３，３−ジメチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，６−ジフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物１３）；
ｘｉｖ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，６−ジフルオロ−３，３−ジメチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−３−メチル−５−スルホ−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物１４）；
ｘｖ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［３−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物１５）；
ｘｖｉ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［３−（５−カルボキシペンチル）−６−フルオロ−３−メチル−１−（４−スルホブチル）−４−（トリフルオロメチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物１６）；
ｘｖｉｉ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［３−（５−カルボキシペンチル）−４−トリフルオロメチル−６−フルオロ−３−メチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−３−（５−カルボキシペンチル）−４−トリフルオロメチル−６−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−インドリウム（化合物１７）；
ｘｖｉｉｉ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ，７Ｅ）−７−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ヘプタ−１，３，５−トリエニル｝−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−４，６−ビス（トリフルオロメチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物１８）；
ｘｉｘ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ，７Ｅ）−７−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ヘプタ−１，３，５−トリエニル｝−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−５−トリフルオロメチル−３Ｈ−インドリウム（化合物１９）；
ｘｘ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ）−３−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］プロプ−１−エニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物２０）；及び
ｘｘｉ）１−（５−カルボキシペンチル）−２−｛（１Ｅ，３Ｅ）−３−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］プロプ−１−エニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物２１）
から選択される化合物。
【請求項５６】
ｘｘｉｉ）１−（５−カルボキシペンチル）−２，３−ジメチル−３−（４−スルホブチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３Ｈ−インドリウム；
ｘｘｉｉｉ）２，３−ジメチル−４，５，６，７−テトラフルオロ−１，３−ビス（４−スルホナトブチル）−３Ｈ−インドリウム、二ナトリウム塩；及び
ｘｘｉｖ）３−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−２，３−ジメチル−１−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム
から選択される化合物。
【請求項５７】
ｘｘｖ）２，３−ジメチル−３−（４−スルホブチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３Ｈ−インドール、二ナトリウム塩；
ｘｘｖｉ）６−（４，５，６，７−テトラフルオロ−２，３−ジメチル−３Ｈ−インドール−３−イル）ヘキサン酸
から選択される化合物。
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物。
【化１】
式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基は−Ｌ−Ｍ、−Ｌ−Ｐ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈ（式中、ｋは１〜１０の整数である）から独立に選択され、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基は水素、−Ｌ−Ｍ、−Ｌ−Ｐ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２−ＣＦ３及び−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは０又は１〜４の整数である）から独立に選択されるか、或いはＲ３とＲ４との組合せ又はＲ５とＲ６との組合せ及び／又はＲ７とＲ８との組合せ又はＲ９とＲ１０との組合せが炭素原子を含有する縮合芳香族六員環を形成していて、適宜−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２−ＣＦ３又は−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは上記で定義した通りである。）で１回以上置換されていてもよく、
Ｌは炭素、窒素、酸素及び硫黄原子からなる群から選択される１〜２０個の連結原子の鎖を有する連結基であり、
Ｍは標的結合基であり、
Ｐはコンジュゲート成分であり、
Ｒ１５基は水素であるか、或いは２以上のＲ１５基が結合して単環又は二環縮合炭化水素系（各環は５個又は６個の炭素原子を有し、残りのＲ１５基は水素である。）を形成し、
ｎは１〜３の整数であるが、ただし
ｉ）Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基の１以上が−Ｌ−Ｍ又は−Ｌ−Ｐであり、
ｉｉ）Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の１以上がフッ素を含んでおり、しかも
ｉｉｉ）Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０のいずれかが−ＳＯ３Ｈである場合には、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基の１以上が−Ｌ−Ｍ、−Ｌ−Ｐ及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈから選択される
ことを条件とする。
【請求項２】
Ｒ１及びＲ２基が−Ｌ−Ｍ、−Ｌ−Ｐ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈから独立に選択され、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基が水素、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２−ＣＦ３及び−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは０又は１〜４の整数である）から独立に選択されるか、或いはＲ３とＲ４との組合せ又はＲ５とＲ６との組合せ及び／又はＲ７とＲ８との組合せ又はＲ９とＲ１０との組合せが炭素原子を含有する縮合芳香族六員環を形成していて、適宜−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２−ＣＦ３又は−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは上記で定義した通りである。）で１回以上置換されていてもよく、
Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基がＣ１〜Ｃ６アルキル及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈから独立に選択され、
Ｒ１５基、Ｌ、Ｍ及びＰ、ｋ及びｎは請求項１で定義した通りであるが、ただし
ｉ）Ｒ１及びＲ２基の１以上が−Ｌ−Ｍ又は−Ｌ−Ｐであり、
ｉｉ）Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の１以上がフッ素を含んでおり、しかも
ｉｉｉ）Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０のいずれかが−ＳＯ３Ｈである場合には、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基の１以上が−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈである
ことを条件とする、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基が−Ｌ−Ｍ、−Ｌ−Ｐ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈから独立に選択され、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基が水素、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２−ＣＦ３及び−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは０又は１〜４の整数である）から独立に選択されるか、或いはＲ３とＲ４との組合せ又はＲ５とＲ６との組合せ及び／又はＲ７とＲ８との組合せ又はＲ９とＲ１０との組合せが炭素原子を含有する縮合芳香族六員環を形成していて、適宜−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２−ＣＦ３又は−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは上記で定義した通りである。）で１回以上置換されていてもよく、
Ｒ１及びＲ２基がＣ１〜Ｃ６アルキル及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈから独立に選択され、
Ｒ１５基、Ｌ、Ｍ及びＰ、ｋ及びｎは請求項１で定義した通りであるが、ただし
ｉ）Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基の１以上が−Ｌ−Ｍ又は−Ｌ−Ｐであり、
ｉｉ）Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の１以上がフッ素を含んでおり、しかも
ｉｉｉ）Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０のいずれかが−ＳＯ３Ｈである場合には、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基の１以上が−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈである
ことを条件とする、請求項１記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の１以上がフッ素である、請求項１乃至請求項３のいずれか１項記載の化合物。
【請求項５】
２以上のＲ１５基が次式の炭化水素環系を形成する、請求項１乃至請求項３のいずれか１項記載の化合物。
【化２】
式中、ｎは１〜３の整数であり、ｐは０又は１であり、残りのＲ１５基は水素である。
【請求項６】
各Ｒ１５基が水素である、請求項１乃至請求項３のいずれか１項記載の化合物。
【請求項７】
Ｌが次式の連結基である、請求項１乃至請求項６のいずれか１項記載の化合物。
−（ＣＨＲ′）ｐ−Ｑ−（ＣＨＲ′）ｒ−
式中、Ｑは−ＣＨＲ′−、−ＮＲ′−、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＣＲ′＝ＣＲ′−、−Ａｒ−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ′−及び−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−から選択され、Ｒ′は水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルであり、Ａｒはスルホネートで置換されていてもよいフェニレンであり、ｐは０〜５であり、ｒは１〜５である。
【請求項８】
Ｑが−ＣＨＲ′−及び−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（式中、Ｒ′上記で定義した通りである。）から選択される、請求項７記載の化合物。
【請求項９】
Ｑが−ＣＨＲ′−であり、Ｒ′が水素である、請求項７又は請求項８記載の化合物。
【請求項１０】
−Ｌ−Ｍ及び／又は−Ｌ−Ｐがカルボキシペンチル基を含む、請求項１乃至請求項６のいずれか１項記載の化合物。
【請求項１１】
以下に示すものから選択される化合物。
【化３】
式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基の１以上は−Ｌ−Ｍ又は−Ｌ−Ｐであって、Ｌは次式の連結基であり
−（ＣＨＲ′）ｐ−Ｑ−（ＣＨＲ′）ｒ−
（式中、Ｑは、−ＣＨＲ′−、−ＮＲ′−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ（Ｏ）−ＮＲ′−及び−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−（式中、Ｒ′は水素又はＣ１〜Ｃ４アルキルである）から選択され、ｐは０〜５であり、ｒは１〜５である。）、
Ｍは標的結合基であり、
Ｐはコンジュゲート成分であり、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基のいずれかが−Ｌ−Ｍ又は−Ｌ−Ｐでない場合には、残りのＲ１、Ｒ２、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基はＣ１〜Ｃ６アルキル及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈ（式中、ｋは１〜１０の整数である）から独立に選択され、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の１以上は−ＳＯ２−ＣＦ３及び−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは０又は１〜４の整数である）から選択される１以上のフルオロ基を含み、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基のいずれかが−ＳＯ２−ＣＦ３又は−（ＣＦ２）ｍ−Ｆでない場合には、残りのＲ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基は水素であり、
Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、Ｒ１９、Ｒ２０、Ｒ２１、Ｒ２２及びＲ２３基は、存在する場合、水素、−ＳＯ２−ＣＦ３及び−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは上記で定義した通りである。）から独立に選択され、
ｎは１〜３の整数である。
【請求項１２】
Ｒ１及びＲ２基の１以上が−Ｌ−Ｍ又は−Ｌ−Ｐであり、残りのＲ１又はＲ２基がＣ１〜Ｃ６アルキル及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈから選択され、
Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基の１以上が−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈであり、残りのＲ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基がＣ１〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、Ｒ１９、Ｒ２０、Ｒ２１、Ｒ２２、Ｒ２３基、Ｌ、Ｍ、Ｐ、ｋ及びｎは請求項１１で定義した通りである、請求項１１記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の１以上がフッ素である、請求項１２記載の化合物。
【請求項１４】
残りのＲ１又はＲ２基が−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈである、請求項１１記載の化合物。
【請求項１５】
Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４の２以上が−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈである、請求項１１記載の化合物。
【請求項１６】
Ｒ１１及びＲ１２基のいずれか並びにＲ１３及びＲ１４基のいずれかが−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈであり、残りのＲ１１、Ｒ１２、Ｒ１３又はＲ１４基がＣ１〜Ｃ６アルキルである、請求項１５記載の化合物。
【請求項１７】
Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基の１以上が−Ｌ−Ｍ又は−Ｌ−Ｐであり、残りのＲ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基がＣ１〜Ｃ６アルキル及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈから選択され、
Ｒ１及びＲ２基の１以上が−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈであり、残りのＲ１又はＲ２基がＣ１〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８、Ｒ１９、Ｒ２０、Ｒ２１、Ｒ２２、Ｒ２３基、Ｌ、Ｍ、Ｐ、ｋ及びｎは請求項１０で定義した通りである、請求項１１記載の化合物。
【請求項１８】
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の１以上がフッ素である、請求項１７記載の化合物。
【請求項１９】
Ｒ１及びＲ２が−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈ（式中、ｋは上記で定義した通りである。）である、請求項１７記載の化合物。
【請求項２０】
−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈが−（ＣＨ２）３−ＳＯ３Ｈ及び−（ＣＨ２）４−ＳＯ３Ｈから選択される、請求項１乃至請求項１９のいずれか１項記載の化合物。
【請求項２１】
Ｑが−ＣＨＲ′−及び−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（式中、Ｒ′上記で定義した通りである。）から選択される、請求項１１乃至請求項２０のいずれか１項記載の化合物。
【請求項２２】
Ｑが−ＣＨＲ′−であり、Ｒ′が水素である、請求項１１乃至請求項２０のいずれか１項記載の化合物。
【請求項２３】
−Ｌ−Ｍ又は−Ｌ−Ｐがカルボキシペンチル基を含む、請求項１１乃至請求項２０のいずれか１項記載の化合物。
【請求項２４】
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６基、並びに／或いはＲ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の２以上がＦであり、残りのＲ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９又はＲ１０基がＨである、請求項１乃至請求項２３のいずれか１項記載の化合物。
【請求項２５】
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６基並びに／或いはＲ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基がＦである、請求項１乃至請求項２３のいずれか１項記載の化合物。
【請求項２６】
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６基並びに／或いはＲ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の１以上がペルフルオロＣ１〜Ｃ４アルキルであり、残りのＲ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基がＨ又はＦから選択される、請求項１乃至請求項２３のいずれか１項記載の化合物。
【請求項２７】
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６位並びに／或いはＲ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０位の２以下がペルフルオロＣ１〜Ｃ４アルキルで置換されている、請求項２６記載の化合物。
【請求項２８】
前記ペルフルオロＣ１〜Ｃ４アルキルがトリフルオロメチルである、請求項２６又は請求項２７記載の化合物。
【請求項２９】
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６基並びに／或いはＲ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の１以上が−ＳＯ２−ＣＦ３であり、残りのＲ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基がＨ又はＦから選択される、請求項１乃至請求項２３のいずれか１項記載の化合物。
【請求項３０】
前記標的結合基Ｍが標的材料上の官能基との反応のための反応性基又は標的材料上の反応性基との反応のための官能基を含む、請求項１乃至請求項２９のいずれか１項記載の化合物。
【請求項３１】
前記反応性基がスクシンイミジルエステル、スルホ−スクシンイミジルエステル、４−スルホ−２，３，５，６−テトラフルオロフェノール（ＳＴＰ）エステル、イソチオシアネート、マレイミド、ハロアセトアミド、酸ハロゲン化物、ヒドラジド、ビニルスルホン、ジクロロトリアジン及びホスホルアミデートから選択される、請求項３０記載の化合物。
【請求項３２】
前記官能基がヒドロキシ、アミノ、スルフヒドリル、イミダゾール、アルデヒド及びケトンを含むカルボニル、カルボン酸、並びにチオホスフェートから選択される、請求項３０記載の化合物。
【請求項３３】
前記標的結合基Ｍが親和性タグを含む、請求項１乃至請求項２９のいずれか１項記載の化合物。
【請求項３４】
Ｐが抗体、脂質、タンパク質、ペプチド、炭水化物；アミノ、スルフヒドリル、カルボニル、ヒドロキシル、カルボン酸及びチオホスフェート基の１以上を含有するか或いは含有するように誘導体化されたヌクレオチド；アミノ、スルフヒドリル、カルボニル、ヒドロキシル、カルボン酸及びチオホスフェート基の１以上を含有するか或いは含有するように誘導体化されたオキシ又はデオキシポリ核酸；微生物材料、薬物、ホルモン、細胞、細胞膜、毒素からなる群から選択される、請求項１乃至請求項２９のいずれか１項記載の化合物。
【請求項３５】
次式の化合物。
【化４】
式中、
Ｒ１、Ｒ２及びＲ１１基は、−（ＣＨ２）５−ＣＯＯＨ及び−（ＣＨ２）４−ＳＯ３Ｈから独立に選択され、
Ｒ１３基は、−（ＣＨ２）５−ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）４−ＳＯ３Ｈ及び−ＣＨ３から選択され、
Ｒ１２及びＲ１４基は、−ＣＨ３であり、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６基並びに／或いはＲ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の２以上は、Ｆであり、残りのＲ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９又はＲ１０基は、Ｈ、−ＳＯ３−、−ＳＯ２−ＣＦ３及び−ＣＦ３から独立に選択され、
Ｒ１６、Ｒ１７、Ｒ１８及びＲ１９基並びに／或いはＲ２０、Ｒ２１、Ｒ２２及びＲ２２基は、存在する場合はＦであり、
ｎは１〜３の整数である。
【請求項３６】
成分を標識する方法であって、
ａ）上記成分を、式（Ｉ）の化合物と接触させる段階と、
ｂ）上記化合物を上記成分と反応させて上記化合物で上記成分を標識する段階と
を含んでなる方法。
【化５】
式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基は−Ｌ−Ｍ、−Ｌ−Ｐ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈ（式中、ｋは１〜１０の整数である）から独立に選択され、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基は水素、−Ｌ−Ｍ、−Ｌ−Ｐ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２−ＣＦ３及び−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは０又は１〜４の整数である）から独立に選択されるか、或いはＲ３とＲ４との組合せ又はＲ５とＲ６との組合せ及び／又はＲ７とＲ８との組合せ又はＲ９とＲ１０との組合せが炭素原子を含有する縮合芳香族六員環を形成していて、適宜−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２−ＣＦ３又は−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは上記で定義した通りである。）で１回以上置換されていてもよく、
Ｌは炭素、窒素、酸素及び硫黄原子からなる群から選択される１〜２０個の連結原子の鎖を有する連結基であり、
Ｍは標的結合基であり、
Ｐはコンジュゲート成分であり、
Ｒ１５基は水素であるか、或いは２以上のＲ１５基が結合して単環又は二環縮合炭化水素系（各環は５個又は６個の炭素原子を有し、残りのＲ１５基は水素である）を形成し、
ｎは１〜３の整数であるが、ただし
ｉ）Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基の１以上は、−Ｌ−Ｍであり、
ｉｉ）Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の１以上がフッ素を含んでおり、しかも
ｉｉｉ）Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０のいずれかが−ＳＯ３Ｈである場合には、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基の１以上は、−Ｌ−Ｍ及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈから選択される
ことを条件とする。
【請求項３７】
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の１以上がフッ素である、請求項３６記載の方法。
【請求項３８】
前記成分が、抗体、脂質、タンパク質、ペプチド、炭水化物；アミノ、スルフヒドリル、カルボニル、ヒドロキシル、カルボン酸及びチオホスフェート基の１以上を含有するか或いは含有するように誘導体化されたヌクレオチド；アミノ、スルフヒドリル、カルボニル、ヒドロキシル、カルボン酸及びチオホスフェート基の１以上を含有するか或いは含有するように誘導体化されたオキシ又はデオキシポリ核酸；微生物材料、薬物、ホルモン、細胞、細胞膜、毒素、ポリマー粒子、並びにガラスビーズからなる群から選択される、請求項３６記載の方法。
【請求項３９】
光学イメージングのための、請求項３６乃至請求項３８の方法で調製した色素標識成分の使用。
【請求項４０】
ａ）次の式（Ａ）の第１の化合物と、
【化６】
ｂ）第１の化合物と同一又は異なる次の式（Ｂ）の第２の化合物と、
ｃ）第３の化合物（Ｃ）と
を第１の化合物と第２の化合物との間にコンジュゲート結合を形成するのに適切な条件下で反応させる段階を含む、請求項１乃至請求項３５のいずれか１項記載の化合物を調製する方法。
【化７】
式中、
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基は−Ｌ−Ｍ、−Ｌ−Ｐ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈ（式中、ｋは１〜１０の整数である）から独立に選択され、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基は水素、−Ｌ−Ｍ、−Ｌ−Ｐ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２−ＣＦ３及び−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは０又は１〜４の整数である）から独立に選択されるか、或いはＲ３とＲ４との組合せ又はＲ５とＲ６との組合せ及び／又はＲ７とＲ８との組合せ又はＲ９とＲ１０との組合せが炭素原子を含有する縮合芳香族六員環を形成していて、適宜−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２−ＣＦ３又は−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは上記で定義した通りである。）で１回以上置換されていてもよく、
Ｌは炭素、窒素、酸素及び硫黄原子からなる群から選択される１〜２０個の連結原子の鎖を有する連結基であり、
Ｍは標的結合基であり、
Ｐはコンジュゲート成分であるが、ただし
ｉ）Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基の１以上が−Ｌ−Ｍ又は−Ｌ−Ｐであり、
ｉｉ）Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の１以上がフッ素を含んでおり、しかも
ｉｉｉ）Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０のいずれかが−ＳＯ３Ｈである場合には、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３及びＲ１４基の１以上が−Ｌ−Ｍ、−Ｌ−Ｐ及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈから選択される
ことを条件とする。
【請求項４１】
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基の１以上がフッ素である、請求項４０記載の方法。
【請求項４２】
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６基並びに／或いはＲ７、Ｒ８、Ｒ９又はＲ１０基の２以上がＦであり、残りのＲ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９又はＲ１０基がＨである、請求項４０記載の方法。
【請求項４３】
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６基並びに／或いはＲ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基がＦである、請求項４０記載の方法。
【請求項４４】
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５又はＲ６基並びに／或いはＲ７、Ｒ８、Ｒ９又はＲ１０基の１以上がペルフルオロＣ１〜Ｃ４アルキルであり、残りのＲ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基がＨ又はＦから選択される、請求項４０記載の方法。
【請求項４５】
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５又はＲ６基並びに／或いはＲ７、Ｒ８、Ｒ９又はＲ１０基の１以上が−ＳＯ２−ＣＦ３であり、残りのＲ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９及びＲ１０基がＨ又はＦから選択される、請求項４０記載の方法。
【請求項４６】
次式の化合物。
【化８】
式中、
Ｒ１、Ｒ１１及びＲ１２基は−Ｌ−Ｍ、−Ｌ−Ｐ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈ（式中、ｋは１〜１０の整数である）から独立に選択され、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６基は水素、−Ｌ−Ｍ、−Ｌ−Ｐ、−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２−ＣＦ３及び−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは０又は１〜４の整数である）から独立に選択されるか、或いはＲ３とＲ４との組合せ又はＲ５とＲ６との組合せが炭素原子を含有する縮合芳香族六員環を形成していて、適宜−ＳＯ３Ｈ、−ＳＯ２−ＣＦ３又は−（ＣＦ２）ｍ−Ｆ（式中、ｍは上記で定義した通りである。）で１回以上置換されていてもよく、
Ｌは炭素、窒素、酸素及び硫黄原子からなる群から選択される１〜２０個の連結原子の鎖を有する連結基であり、
Ｍは標的結合基であり、
Ｐはコンジュゲート成分であるが、ただし
ｉ）Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ１１及びＲ１２基の１以上が−Ｌ−Ｍ又は−Ｌ−Ｐであり、
ｉｉ）Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６基の１以上がフッ素を含んでおり、しかも
ｉｉｉ）Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６のいずれかが−ＳＯ３Ｈである場合には、Ｒ１１及びＲ１２基の１以上が−Ｌ−Ｍ、−Ｌ−Ｐ及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈから選択される
ことを条件とする。
【請求項４７】
Ｒ１、Ｒ１１及びＲ１２基の１以上が−Ｌ−Ｍ（式中、Ｌは上記で定義した通りであり、Ｍはスクシンイミジルエステル、スルホ−スクシンイミジルエステル、４−スルホ−２，３，５，６−テトラフルオロフェノール（ＳＴＰ）エステル、イソチオシアネート、マレイミド、ハロアセトアミド、酸ハロゲン化物、ヒドラジド、ビニルスルホン、ジクロロトリアジン及びホスホルアミデートから選択される反応性基を含む。）である、請求項４６記載の化合物。
【請求項４８】
Ｒ１、Ｒ１１及びＲ１２基の１以上が−Ｌ−Ｍ（式中、Ｌは上記で定義した通りであり、Ｍは、ヒドロキシ、アミノ、スルフヒドリル、イミダゾール、アルデヒド及びケトンを含むカルボニル、カルボン酸、並びにチオホスフェートから選択される官能基を含む。）である、請求項４６記載の化合物。
【請求項４９】
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６基の１以上がフッ素である、請求項４６乃至請求項４８のいずれか１項記載の化合物。
【請求項５０】
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６基の２以上がＦであり、残りのＲ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６基がＨである、請求項４６乃至請求項４８のいずれか１項記載の化合物。
【請求項５１】
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６基がＦである、請求項４６乃至請求項４８のいずれか１項記載の化合物。
【請求項５２】
Ｒ１、Ｒ１１及びＲ１２基の１以上が−Ｌ−Ｍ（式中、Ｌは上記で定義した通りであり、Ｍは親和性タグを含む）である、請求項４６記載の化合物。
【請求項５３】
次式の化合物。
【化９】
式中、
Ｒ１及びＲ１１基の１以上は−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈであり、
残りのＲ１又はＲ１１基は−（ＣＨ２）５−ＣＯＯＨ及び−（ＣＨ２）ｋ−ＳＯ３Ｈから選択され、
Ｒ１２基はＣ１〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６基はＦであり、
ｋは３又は４である。
【請求項５４】
Ｐが、抗体、脂質、タンパク質、ペプチド、炭水化物；アミノ、スルフヒドリル、カルボニル、ヒドロキシル、カルボン酸及びチオホスフェート基の１以上を含有するか或いは含有するように誘導体化されたヌクレオチド；アミノ、スルフヒドリル、カルボニル、ヒドロキシル、カルボン酸及びチオホスフェート基の１以上を含有するか或いは含有するように誘導体化されたオキシ又はデオキシポリ核酸；微生物材料、薬物、ホルモン、細胞、細胞膜、毒素、ポリマー粒子、並びにガラスビーズからなる群から選択される、請求項４６記載の化合物。
【請求項５５】
ｉ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（Ｃｙ５Ｆ）（化合物１）；
ｉｉ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ，７Ｅ）−７−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ヘプタ−１，３−５−トリエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（Ｃｙ７Ｆ）（化合物２）；
ｉｉｉ）３−（５−カルボキシペンチル）−３−メチル−５−スルホ−１−（４−スルホブチル）−２−｛１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ｝−５−［４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−３Ｈ−インドリウム（化合物３）；
ｉｖ）１−（５−カルボキシペンチル）−３−メチル−５−スルホ−３−（４−スルホブチル）−２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−３Ｈ−インドリウム（化合物４）；
ｖ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，６−ジフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物５）；
ｖｉ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，６−ジフルオロ−３，３−ジメチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物６）；
ｖｉｉ）１−（５−カルボキシペンチル）−２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，６−ジフルオロ−３，３−ジメチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物７）；
ｖｉｉｉ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−５−［（トリフルオロメチル）スルホニル］−３Ｈ−インドリウム（化合物８）；
ｉｘ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（４−スルホブチル）−４，６−ビス（トリフルオロメチル）−３−メチル−３−（５−カルボキシペンチル））−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，６−ジフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物９）；
ｘ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−６−（トリフルオロメチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物１０）；
ｘｉ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７，８，９−ヘキサフルオロ−１，１−ジメチル−３−（４−スルホブチル）−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドリウム（化合物１１）；
ｘｉｉ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，６−ジフルオロ−３，３−ジメチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝ −６−フルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−４−（トリフルオロメチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物１２）；
ｘｉｉｉ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，６−ジフルオロ−３，３−ジメチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，６−ジフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物１３）；
ｘｉｖ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，６−ジフルオロ−３，３−ジメチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−３−メチル−５−スルホ−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物１４）；
ｘｖ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［３−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物１５）；
ｘｖｉ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［３−（５−カルボキシペンチル）−６−フルオロ−３−メチル−１−（４−スルホブチル）−４−（トリフルオロメチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物１６）；
ｘｖｉｉ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ）−５−［３−（５−カルボキシペンチル）−４−トリフルオロメチル−６−フルオロ−３−メチル−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ペンタ−１，３−ジエニル｝−３−（５−カルボキシペンチル）−４−トリフルオロメチル−６−フルオロ−３−メチル−３Ｈ−インドリウム（化合物１７）；
ｘｖｉｉｉ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ，７Ｅ）−７−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ヘプタ−１，３，５−トリエニル｝−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−４，６−ビス（トリフルオロメチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物１８）；
ｘｉｘ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ，５Ｅ，７Ｅ）−７−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］ヘプタ−１，３，５−トリエニル｝−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−５−トリフルオロメチル−３Ｈ−インドリウム（化合物１９）；
ｘｘ）２−｛（１Ｅ，３Ｅ）−３−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］プロプ−１−エニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−１，３−ビス（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物２０）；及び
ｘｘｉ）１−（５−カルボキシペンチル）−２−｛（１Ｅ，３Ｅ）−３−［１−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−インドール−２−イリデン］プロプ−１−エニル｝−４，５，６，７−テトラフルオロ−３−メチル−３−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム（化合物２１）
から選択される化合物。
【請求項５６】
ｘｘｉｉ）１−（５−カルボキシペンチル）−２，３−ジメチル−３−（４−スルホブチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３Ｈ−インドリウム；
ｘｘｉｉｉ）２，３−ジメチル−４，５，６，７−テトラフルオロ−１，３−ビス（４−スルホナトブチル）−３Ｈ−インドリウム、二ナトリウム塩；及び
ｘｘｉｖ）３−（５−カルボキシペンチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−２，３−ジメチル−１−（４−スルホブチル）−３Ｈ−インドリウム
から選択される化合物。
【請求項５７】
ｘｘｖ）２，３−ジメチル−３−（４−スルホブチル）−４，５，６，７−テトラフルオロ−３Ｈ−インドール、二ナトリウム塩；
ｘｘｖｉ）６−（４，５，６，７−テトラフルオロ−２，３−ジメチル−３Ｈ−インドール−３−イル）ヘキサン酸
から選択される化合物。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【公表番号】特表２００８−５３８３８２（Ｐ２００８−５３８３８２Ａ）
【公表日】平成２０年１０月２３日（２００８．１０．２３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−５０７１５５（Ｐ２００８−５０７１５５）
【出願日】平成１８年４月１８日（２００６．４．１８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＧＢ２００６／００１４００
【国際公開番号】ＷＯ２００６／１１１７２６
【国際公開日】平成１８年１０月２６日（２００６．１０．２６）
【出願人】（３９８０４８９１４）ジーイー・ヘルスケア・ユーケイ・リミテッド (30)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２０年１０月２３日（２００８．１０．２３）
【国際特許分類】
【出願日】平成１８年４月１８日（２００６．４．１８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＧＢ２００６／００１４００
【国際公開番号】ＷＯ２００６／１１１７２６
【国際公開日】平成１８年１０月２６日（２００６．１０．２６）
【出願人】（３９８０４８９１４）ジーイー・ヘルスケア・ユーケイ・リミテッド (30)
【Ｆターム（参考）】
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