嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子の修飾因子
哺乳動物の細胞膜におけるＣＦＴＲの活性を調節するのに使用できる、ＣＦＴＲ活性の修飾因子およびその組成物の必要性もある。そうしたＣＦＴＲ活性の修飾因子を用いてＣＦＴＲにおける変異によって引き起こされる疾患を治療する方法が必要である。哺乳動物のエクスビボでの細胞膜におけるＣＦＴＲ活性を調節する方法が必要である。本発明は、嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子（「ＣＦＴＲ」）の修飾因子、その組成物、およびそれを用いた方法に関する。本発明は、ＣＦＴＲの修飾因子を使用して疾患を治療する方法にも関する。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本出願は、２００８年１０月２３日出願の「ＭＯＤＵＬＡＴＯＲＳ ＯＦ ＣＹＳＴＩＣ ＦＩＢＲＯＳＩＳ ＴＲＡＮＳＭＥＭＢＲＡＮＥ ＣＯＮＤＵＣＴＡＮＣＥ ＲＥＧＵＬＡＴＯＲ」と題された米国仮特許出願番号６１／１０７，８４４号に対して米国特許法の１１９条における優先権の利益を主張し、その全体の内容が本明細書中で参考として援用される。
【０００２】
本発明は、嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子（「ＣＦＴＲ」）の修飾因子、その組成物およびそれを用いる方法に関する。本発明は、ＣＦＴＲの修飾因子を使用して疾患を治療する方法にも関する。
【背景技術】
【０００３】
ＡＴＰカセットトランスポーターは、様々な薬剤、潜在的に有毒性の薬物および生体異物ならびにアニオンの輸送を制御する膜トランスポータータンパク質のファミリーである。それらは、特異的な活性のために、細胞のアデノシン三リン酸（ＡＴＰ）と結合し、それを用いる同種の膜タンパク質である。これらのトランスポーターのいくつかは、化学療法剤に対して悪性癌細胞を防御する多剤耐性タンパク質（ＭＤＲ１−Ｐ糖タンパク質または多剤耐性タンパク質、ＭＲＰ１のような）として発見された。これまで、４８個のそうしたトランスポーターが特定されており、その配列同一性および機能に基づいて７つのファミリーにグループ分けされている。
【０００４】
疾患と一般に関係するＡＴＰカセットトランスポーターのファミリーの１つのメンバーは、ｃＡＭＰ／ＡＴＰ媒介陰イオンチャンネル、ＣＦＴＲである。ＣＦＴＲは、膜を貫通するアニオンフラックス、ならびに他のイオンチャンネルおよびタンパク質の活性をそれが制御する吸収上皮および分泌上皮細胞を含む様々な細胞型において発現される。上皮細胞では、ＣＦＴＲが正常に機能することは、呼吸および消化組織を含む体全体で、電解質輸送を維持するのに重要である。ＣＦＴＲは、それぞれが６つの膜貫通らせんと１つのヌクレオチド結合ドメインを含む膜貫通ドメインの縦列反復で構成されたタンパク質をコードする約１４８０個のアミノ酸を含む。その２つの膜貫通ドメインは、チャンネル活性および細胞輸送を制御する複数のリン酸化部位を有する大きな極性の制御（Ｒ）ドメインによって連結されている。
【０００５】
ＣＦＴＲをコードする遺伝子は特定されており、その配列は決定されている（非特許文献１；非特許文献２、非特許文献３を参照されたい）。この遺伝子の欠陥は、ＣＦＴＲにおける変異を引き起こして、ヒトにおける最も一般的な致命的遺伝的疾患である嚢胞性線維症（「ＣＦ」）をもたらす。米国において、幼児２，５００人に約１人が嚢胞性線維症を発症している。米国の全人口のうちの１０００万に及ぶ人が、明らかな病的影響なしで、欠陥遺伝子の単一コピーを担持している。その一方、ＣＦ関連遺伝子の２つのコピーを有する個体は、慢性肺疾患を含むＣＦの身体を衰弱させる致命的な影響に苦しんでいる。
【０００６】
嚢胞性線維症を有する患者においては、呼吸上皮で内因的に発現したＣＦＴＲにおける変異は頂端アニオン分泌の低下をもたらし、イオンおよび液輸送における不均衡を引き起こす。結果としてのアニオン輸送の低下は、肺における粘液蓄積の増進と付随する微生物感染をもたらし、これは最終的にＣＦ患者を死に至らしめる。呼吸器系疾患に加えて、ＣＦ患者は一般に、胃腸障害および膵機能不全に苦しみ、もし治療されないままでいたら死に至る。さらに、嚢胞性線維症を有する男性の大部分は不妊性であり、嚢胞性線維症を有する女性では受胎能力が低下する。ＣＦ関連遺伝子の２つのコピーの深刻な影響とは対照的に、ＣＦ関連遺伝子の単一のコピーを有する個体は、コレラおよび下痢によってもたらされる脱水に対して高い耐性を示し、これはおそらく、個体群内においてＣＦ遺伝子が比較的高い頻度で存在することを説明している。
【０００７】
ＣＦ染色体のＣＦＴＲ遺伝子の配列分析によれば、様々な病原性の変異が解明されている（非特許文献４；非特許文献５；および非特許文献６；非特許文献７）。これまで、１０００を超える、ＣＦ遺伝子における病原性の変異が確認されている（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｅｎｅｔ．ｓｉｃｋｋｉｄｓ．ｏｎ．ｃａ／ｃｆｔｒ／）。最も多く見られる変異は、ＣＦＴＲアミノ酸配列の５０８位におけるフェニルアラニンの欠失であり、一般にこれはΔＦ５０８−ＣＦＴＲと称される。この変異は、嚢胞性線維症の症例の約７０％において起こり、重症疾患と関係している。
【０００８】
ΔＦ５０８−ＣＦＴＲにおける残基５０８の欠失は、新生タンパク質が正確に折りたたまれるのを妨げる。その結果、変異タンパク質がＥＲを出て原形質膜へ移動することができなくなる。結果として膜の中に存在するチャンネルの数は、野生型ＣＦＴＲを発現する細胞において見られる数よりずっと少なくなる。輸送障害に加えて、この変異はチャンネルゲート開閉の欠陥をもたらす。膜におけるチャンネル数の減少とチャンネルゲート開閉の欠陥が一緒になって、上皮を貫通するアニオン輸送の低下をもたらし、イオンおよび液輸送の欠陥をもたらす。（非特許文献８）。しかし、研究によれば、膜中でのΔＦ５０８−ＣＦＴＲの数の減少は、野生型ＣＦＴＲより少ないにしても、有効であることが示されている（非特許文献９；Ｄｅｎｎｉｎｇら、上記；非特許文献１０）。ΔＦ５０８−ＣＦＴＲ、Ｒ１１７Ｈ−ＣＦＴＲおよびＧ５５１Ｄ−ＣＦＴＲに加えて、輸送、合成および／またはチャンネルゲート開閉の欠陥をもたらすＣＦＴＲにおける他の病原性の変異は、上方制御または下方制御されて、アニオン分泌を変え、疾患の増悪および重症度を改変する可能性がある。
【０００９】
ＣＦＴＲは、アニオンに加えて様々な分子を輸送するが、この役割（アニオン、塩素イオンおよび重炭酸塩イオンの輸送）は、上皮を貫通してイオンおよび水を輸送する重要な機序における１つの要素を表していることは明らかである。他の要素には、細胞中への塩素イオンの取込みに関係する、上皮のＮａ＋チャンネル、ＥＮａＣ、Ｎａ＋／２Ｃｌ−／Ｋ＋コトランスポーター、Ｎａ＋−Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅポンプおよび側底膜Ｋ＋チャンネルが含まれる。
【００１０】
これらの要素は一緒になって、細胞内でのその選択的な発現および局在化によって、上皮を貫通する一定方向の輸送を実現するように作用する。塩素イオン吸収は、頂端膜に存在するＥＮａＣおよびＣＦＴＲの協調活性と、細胞の側底面で発現されるＮａ＋−Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅポンプおよびＣｌチャンネルによって起こる。腔側からの塩素イオンの二次的能動輸送は、細胞内塩素イオンの蓄積をもたらし、次いでこれは、Ｃｌ−イオンチャンネルを介して受動的に細胞から離れ、一定方向の輸送をもたらすことができる。側底面上のＮａ＋／２Ｃｌ−／Ｋ＋コトランスポーター、Ｎａ＋−Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅポンプおよび側底膜Ｋ＋チャンネルと腔側上のＣＦＴＲの配置は、腔側上のＣＦＴＲを介して塩素イオンの分泌を調整する。水はおそらくそれ自体能動的に輸送されないので、上皮を貫通するその流れは、ナトリウムおよび塩素イオンのバルクフローによってもたらされる微小な経上皮浸透勾配に依存する。
【００１１】
ＣＦＴＲにおける変異に起因する重炭酸塩イオン輸送の欠陥は、特定の分泌機能における欠陥を引き起こすと仮定される。例えば、非特許文献１１を参照されたい。
【００１２】
中程度のＣＦＴＲ機能不全に関係するＣＦＴＲにおける変異は、ＣＦとある種の疾患症状を共有するがＣＦの診断基準に当てはまらない状態を有する患者においても明らかである。これらの疾患には、先天性両側性輸精管欠損、特発性慢性膵炎、慢性気管支炎および慢性鼻副鼻腔炎が含まれる。変異体ＣＦＴＲが、変更遺伝子または環境因子と共に危険因子であると考えられる他の疾患には、原発性硬化性胆管炎、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症およびぜんそくが含まれる。
【００１３】
たばこの煙、低酸素および低酸素シグナル伝達を誘発する環境因子はＣＦＴＲ機能を損なうことも実証されており、慢性気管支炎などの特定の形態の呼吸器系疾患の原因となる可能性がある。ＣＦＴＲ機能の欠陥に起因するがＣＦの診断基準に当てはまらない疾患は、ＣＦＴＲ関連疾患と位置付けられる。
【００１４】
嚢胞性線維症に加えて、ＣＦＴＲ活性の調節は、ＣＦＴＲによって媒介される分泌性疾患および他のタンパク質折りたたみ（不全）疾患などの、ＣＦＴＲにおける変異によっては直接引き起こされない他の疾患に有益であり得る。ＣＦＴＲは、多くの細胞の上皮を貫通する塩素イオンおよび重炭酸塩イオンフラックスを制御して、流体運動、タンパク質可溶化、粘液粘度および酵素活性をコントロールする。ＣＦＴＲにおける欠陥は、気道または肝臓および膵臓を含む多くの器官中の導管の閉塞を引き起こす恐れがある。増強物質は、細胞膜中に存在するＣＦＴＲのゲート開閉活性を増進させる化合物である。粘液の濃厚化、流体制御障害、粘液クリアランス障害、または炎症および組織破壊をもたらす導管閉塞に関係するどの疾患も、増強物質の候補である可能性がある。
【００１５】
それらには、これらに限定されないが、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、ぜんそく、喫煙誘発性ＣＯＰＤ、慢性気管支炎、鼻副鼻腔炎、便秘、ドライアイ疾患およびシェーグレン症候群、胃食道逆流症、胆石、直腸脱および炎症性大腸炎が含まれる。ＣＯＰＤは、漸進的であり、完全には可逆的ではない空気流制限を特徴とする。空気流制限は、粘液分泌過多、肺気腫および細気管支炎に起因する。変異体または野生型ＣＦＴＲの活性化因子は、ＣＯＰＤによくある粘液分泌過多および粘膜毛様体クリアランス障害の治療の可能性を提供する。具体的には、ＣＦＴＲを貫通するアニオン分泌の増大は、気道表面液中への液輸送を容易にし、粘液に潤いを与え、繊毛周囲流体の粘度を最適化することができる。これは、粘膜毛様体クリアランスの増進と、ＣＯＰＤに伴う症状の減退をもたらすことになる。さらに、気道クリアランスの向上に起因して進行中の感染症および炎症を阻止することによって、ＣＦＴＲ修飾因子は、肺気腫を特徴づける気道の実質性（ｐａｒｅｎｃｈｉｍａｌ）破壊を防止または遅延させ、かつ、気道疾患における粘液分泌過多のもとにある（ｕｎｄｅｒｌｙｓｅｓ）、粘液を分泌する細胞の数およびサイズを減少または逆転させることができる。ドライアイ疾患は、涙液産生の減少ならびに異常な涙液膜脂質、タンパク質およびムチンプロファイルを特徴とする。ドライアイには多くの原因があり、そのいくつかには、年齢、レーシック眼科手術、関節炎、薬物療法、化学火傷／熱傷、アレルギーならびに嚢胞性線維症およびシェーグレン症候群などの疾患が含まれる。ＣＦＴＲを介したアニオン分泌の増大は、角膜内皮細胞および目の周囲の分泌腺からの流輸送を増進させ、角膜の潤いを高める。これは、ドライアイ疾患に伴う症状を緩和する助けとなる。シェーグレン症候群は、免疫系が、目、口、皮膚、呼吸組織、肝臓、膣および腸を含む体全体の水分生成腺を攻撃する自己免疫疾患である。その症状には、ドライアイ、口および膣ならびに肺の疾患が含まれる。この疾患（シェーグレン症候群）は、関節リウマ、全身性狼瘡、全身性硬化症、多発性筋炎（ｐｏｌｙｍｙｐｏｓｉｔｉｓ）／皮膚筋炎にも関係する。タンパク質輸送の欠陥は、それに対する治療法の選択肢が限定される疾患を引き起こすと考えられている。ＣＦＴＲ活性の修飾因子は、病気にかかっている様々な器官に潤いを与えることができ、随伴する症状を軽減する助けとなり得る。嚢胞性線維症を有する個体は、腸閉塞の再発エピソード、および直腸脱（ｒｅｃｔａｌ ｐｏｌａｐｓｅ）、胆石、胃食道逆流症、ＧＩ悪性腫瘍および炎症性大腸炎のより高い発生率を有しており、これは、ＣＦＴＲ機能がそうした疾患を予防するのに重要な役割を果たせることを示唆している。
【００１６】
上記で論じたように、ΔＦ５０８−ＣＦＴＲにおける残基５０８の欠失は、新生タンパク質が正確に折りたたまれるのを妨げ、この変異タンパク質がＥＲを出て原形質膜へ移動できないようにすると考えられる。結果として、不十分な量の成熟タンパク質しか原形質膜に存在せず、上皮組織内の塩素イオン輸送は著しく低下する。実際に、ＥＲ機構によるＣＦＴＲのＥＲプロセッシングの欠陥のこの細胞現象は、ＣＦ疾患だけでなく、広範囲の孤立性で遺伝性の疾患の基礎にあることが示されている。ＥＲ機構が正常に機能しない可能性のある２つの仕方は、分解に至るタンパク質のＥＲ搬出との連関の喪失によるか、または、これらの欠陥のある／ミスフォールドしたタンパク質のＥＲ蓄積によるものである［非特許文献１２；非特許文献１３；非特許文献１４；非特許文献１５；非特許文献１６］。ＥＲ機能不全の第１の部類と関係する疾患は、嚢胞性線維症（上記で論じたようなミスフォールドしたΔＦ５０８−ＣＦＴＲに起因する）、遺伝性肺気腫（ａ１−抗トリプシン；非Ｐｉｚ変異体に起因する）、遺伝性ヘモクロマトーシス、凝固−線維素溶解性欠乏症、例えばプロテインＣ欠乏症、１型遺伝性血管性浮腫、脂質プロセッシング欠乏症、例えば家族性高コレステロール血症、１型乳糜血症、無βリポタンパク血症、リソソーム蓄積症、例えばＩ細胞病／偽ハーラー、ムコ多糖症（リソソームプロセッシング酵素に起因する）、サンドホフ／テイサックス（β−ヘキソサミニダーゼに起因する）、クリグラーナジャーＩＩ型（ＵＤＰ−グルクロニル−シアリック−トランスフェラーゼに起因する）、多腺性内分泌障害／高インスリン血（ｈｙｐｅｒｉｎｓｕｌｅｍｉａ）、真性糖尿病（インスリン受容体に起因する）、ラロン型小人症（成長ホルモン受容体に起因する）、ミエロペルオキシダーゼ欠損症（ｍｙｌｅｏｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ）、原発性甲状腺機能低下症（プレプロ副甲状腺ホルモンに起因する）、メラノーマ（チロシナーゼに起因する）である。ＥＲ機能不全の後者の部類と関係する疾患は、グリカン糖鎖異常ＣＤＧ１型、遺伝性肺気腫（α１−抗トリプシン（ＰｉＺ変異体、）に起因する、先天性甲状腺機能亢進症、骨形成不全症（Ｉ型、ＩＩ型、ＩＶ型プロコラーゲンに起因する）、遺伝性低フィブリノゲン血症（フィブリノゲンに起因する）、ＡＣＴ欠乏症（α１−抗キモトリプシンに起因する）、尿崩症（ＤＩ）、ニューロフィシン性ＤＩ（バソプレシンホルモン（ｖａｓｏｐｖｅｓｓｉｎ ｈｏｒｍｏｎｅ）／Ｖ２−受容体に起因する）、腎性（ｎｅｐｒｏｇｅｎｉｃ）ＤＩ（アクアポリンＩＩに起因する）、シャルコーマリートゥース病（末梢ミエリンタンパク質２２に起因する）、ペリツェウスメルツバッハー病（Ｐｅｒｌｉｚａｅｕｓ−Ｍｅｒｚｂａｃｈｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ）、神経変性疾患、例えばアルツハイマー病（βＡＰＰおよびプレセニリンに起因する）、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、進行性核上麻痺、ピック病、いくつかのポリグルタミン神経障害、例えばハンチントン病、脊髄小脳失調Ｉ型（ｓｐｉｎｏｃｅｒｅｂｕｌｌａｒ ａｔａｘｉａ ｔｙｐｅ Ｉ）、球脊髄性筋萎縮症、歯状核赤核淡蒼球ルイ体および筋強直性ジストロフィー、ならびに海綿状脳症、例えば遺伝性クロイツフェルトヤコブ病（プリオンタンパク質プロセッシング欠損症に起因する）、ファブリー病（リソソームα−ガラクトシダーゼＡに起因する）、シュトロイスラー−シャインカー症候群（Ｐｒｐプロセッシング欠損症に起因する）、膵炎性不妊症（ｉｎｆｅｒｔｉｌｉｔｙ ｐａｎｃｒｅａｔｉｔｉｓ）、膵機能不全、骨粗しょう症、骨減少症、ゴーハム症候群、クロリドチャンネル病、先天性筋強直症（トムセンおよびベッカー型）、バーター症候群ＩＩＩ型、デント病、過剰驚愕症、てんかん、過剰驚愕症、リソソーム蓄積症、アンジェルマン症候群、原発性線毛機能不全（ＰＣＤ）、内臓逆位を伴うＰＣＤ（カールタジュナー症候群としても公知）、内臓逆位および毛様体形成不全を伴わないＰＣＤならびに肝疾患である。
【００１７】
ＣＦＴＲにおける変異に関係する他の疾患には、先天性両側性輸精管欠損（ＣＢＡＶＤ）によって引き起こされる男性不妊症、軽度の肺疾患、特発性膵炎およびアレルギー性気管支肺アスペルギルス症（ＡＢＰＡ）が含まれる。非特許文献１７（これを参照により本明細書に組み込む）を参照されたい。
【００１８】
ＣＦＴＲ活性の上方調節に加えて、ＣＦＴＲ修飾因子によるアニオン分泌の減少は分泌性下痢の治療に有益であり得、そこでは、分泌促進活性化による塩素イオン輸送の結果として、上皮水分輸送は劇的に増大する。この機序は、ｃＡＭＰの上昇とＣＦＴＲの刺激を含む。
【００１９】
下痢には多くの原因があるが、過剰な塩素イオン輸送からもたらされる下痢性疾患の主な結果はすべてに共通しており、脱水、アシドーシス、成長障害および死を含む。急性および慢性の下痢は、世界の多くの地域において、主要な医学的課題を代表するものである。下痢は、栄養失調における重要な因子であり、かつ５才未満の子供の死亡（５，０００，０００人の死者／年）の主要原因でもある。
【００２０】
分泌性下痢は、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）および慢性炎症性大腸炎（ＩＢＤ）を有する患者においてもやはり危険な状態である。その重症度と件数は旅行する国や地域によるが、１６００万人の先進工業国から発展途上国への旅行者が毎年下痢を発症している。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００２１】
【非特許文献１】Ｇｒｅｇｏｒｙ，Ｒ． Ｊ．ら（１９９０年）Ｎａｔｕｒｅ ３４７巻：３８２〜３８６頁
【非特許文献２】Ｒｉｃｈ，Ｄ． Ｐ．ら（１９９０年）Ｎａｔｕｒｅ ３４７巻：３５８〜３６２頁
【非特許文献３】Ｒｉｏｒｄａｎ，Ｊ． Ｒ．ら（１９８９年）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４５巻：１０６６〜１０７３頁
【非特許文献４】Ｃｕｔｔｉｎｇ，Ｇ． Ｒ．ら（１９９０年）Ｎａｔｕｒｅ ３４６巻：３６６〜３６９頁
【非特許文献５】Ｄｅａｎ，Ｍ．ら（１９９０年）Ｃｅｌｌ ６１巻：８６３：８７０頁
【非特許文献６】Ｋｅｒｅｍ，Ｂ−Ｓ．ら（１９８９年）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４５巻：１０７３〜１０８０頁
【非特許文献７】Ｋｅｒｅｍ，Ｂ−Ｓら（１９９０年）Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８７巻：８４４７〜８４５１頁
【非特許文献８】Ｑｕｉｎｔｏｎ，Ｐ． Ｍ．（１９９０年）、ＦＡＳＥＢ Ｊ．４巻：２７０９〜２７２７頁
【非特許文献９】Ｄｏｌｍａｎｓら（１９９１年）、Ｎａｔｕｒｅ Ｌｏｎｄ． ３５４巻：５２６〜５２８頁
【非特許文献１０】Ｐａｓｙｋ ａｎｄ Ｆｏｓｋｅｔｔ（１９９５年）、Ｊ． Ｃｅｌｌ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． ２７０巻：１２３４７〜５５０頁
【非特許文献１１】「Ｃｙｓｔｉｃ ｆｉｂｒｏｓｉｓ：ｉｍｐａｉｒｅｄ ｂｉｃａｒｂｏｎａｔｅ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｕｃｏｖｉｓｃｉｄｏｓｉｓ」、Ｐａｕｌ Ｍ． Ｑｕｉｎｔｏｎ、Ｌａｎｃｅｔ ２００８年；３７２巻：４１５〜４１７頁
【非特許文献１２】Ａｒｉｄｏｒ Ｍら、Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ．、５巻（７号）７４５〜７５１頁（１９９９年）
【非特許文献１３】Ｓｈａｓｔｒｙ，Ｂ．Ｓ．ら、Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ． Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、４３巻、１〜７頁（２００３年）
【非特許文献１４】Ｒｕｔｉｓｈａｕｓｅｒ，Ｊ．ら、Ｓｗｉｓｓ Ｍｅｄ Ｗｋｌｙ、１３２巻、２１１〜２２２頁（２００２年）
【非特許文献１５】Ｍｏｒｅｌｌｏ，ＪＰら、ＴＩＰＳ、２１巻、４６６〜４６９頁（２０００年）
【非特許文献１６】Ｂｒｏｓｓ Ｐ．ら、Ｈｕｍａｎ Ｍｕｔ．、１４巻、１８６〜１９８頁（１９９９年）
【非特許文献１７】「ＣＦＴＲ−ｏｐａｔｈｉｅｓ：ｄｉｓｅａｓｅ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｃｙｓｔｉｃ ｆｉｂｒｏｓｉｓ ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ ｒｅｇｕｌａｔｏｒ ｇｅｎｅ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ」、Ｐｅａｄｅｒ Ｇ． Ｎｏｏｎｅ ａｎｄ Ｍｉｃｈａｅｌ Ｒ． Ｋｎｏｗｌｅｓ、Ｒｅｓｐｉｒ． Ｒｅｓ． ２００１年、２巻：３２８〜３３２頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２２】
したがって、野生型および変異型のヒトＣＦＴＲの強力で選択的なＣＦＴＲ増強物質の必要性がある。これらのＣＦＴＲ変異体には、これらに限定されないが、ΔＦ５０８ｄｅｌ、Ｇ５５１Ｄ、Ｒ１１７Ｈ、２７８９＋５Ｇ−＞Ａが含まれる。
【００２３】
哺乳動物の細胞膜におけるＣＦＴＲの活性を調節するのに使用できる、ＣＦＴＲ活性の修飾因子およびその組成物の必要性もある。
【００２４】
そうしたＣＦＴＲ活性の修飾因子を用いてＣＦＴＲにおける変異によって引き起こされる疾患を治療する方法が必要である。
【００２５】
哺乳動物のエクスビボでの細胞膜におけるＣＦＴＲ活性を調節する方法が必要である。
【課題を解決するための手段】
【００２６】
本発明の化合物および薬学的に許容されるその組成物は、ＣＦＴＲ活性の修飾因子として有用であることをここに見出した。これらの化合物は一般式（Ｉ）：
【００２７】
【化１】
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｘ、ＹおよびＡは以下に概略説明され、部類および下位部類で説明される）
または薬学的に許容されるその塩である。
【００２８】
これらの化合物および薬学的に許容される組成物は、ＣＦＴＲにおける変異に伴う様々な疾患、障害または状態を治療するまたはその重症度を軽減するのに有用である。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
本発明の化合物の概要：
本発明は、ＣＦＴＲ活性の修飾因子として有用な式（Ｉ）の化合物：
【００３０】
【化２】
（式中、環Ａは、
【００３１】
【化３】
から選択され、
式中、
Ｒ１は、−ＣＨ３、−ＣＦ３または−ＣＮであり、
Ｒ２は、水素、−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり、
Ｒ３は、水素、−ＣＨ３、−ＯＣＨ３または−ＣＮであり、）
ただし、Ｒ２とＲ３は同時に水素であることはなく、
Ｘは炭素または窒素であり、
Ｙは炭素または窒素であり、
ただし、ＸとＹは同時に窒素であることはない）
または薬学的に許容されるその塩に関する。
【００３２】
化合物および定義：
本発明の化合物は、上記に概略説明され、本明細書で開示する部類、下位部類および種類でさらに示されるものが含まれる。本明細書での使用では、別段の記載のない限り、以下の定義が適用されるものとする。
【００３３】
本明細書で用いる「ＡＢＣ−トランスポーター」という用語は、インビボまたはインビトロで存在する、少なくとも１つの結合ドメインを含むＡＢＣ−トランスポータータンパク質またはそのフラグメントを意味する。本明細書で用いる「結合ドメイン」という用語は、修飾因子と結合することができるＡＢＣ−トランスポーター上のドメインを意味する。例えば、Ｈｗａｎｇ，Ｔ． Ｃ．ら、Ｊ． Ｇｅｎ． Ｐｈｙｓｉｏｌ．（１９９８年）：１１１巻（３号）、４７７〜９０頁を参照されたい。
【００３４】
本明細書で用いる「ＣＦＴＲ」という用語は、ΔＦ５０８ＣＦＴＲ、Ｒ１１７Ｈ ＣＦＴＲおよびＧ５５１Ｄ ＣＦＴＲを含むがそれに限定されない、制御因子活性の能力のある嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子またはその変異を意味する（例えば、ＣＦＴＲ変異についてのｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｅｎｅｔ．ｓｉｃｋｋｉｄｓ．ｏｎ．ｃａ／ｃｆｔｒ／を参照されたい）。
【００３５】
本明細書で用いる「調節する（ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ）」という用語は、測定可能量で増大または減少させることを意味する。
【００３６】
本明細書で用いる「正常ＣＦＴＲ」または「正常ＣＦＴＲ機能」という用語は、喫煙、汚染などの環境因子または肺に炎症をもたらすすべてのものに起因する任意の機能的障害を伴わない野生型様のＣＦＴＲを意味する。
【００３７】
本明細書で用いる「低いＣＦＴＲ」または「低いＣＦＴＲ機能」という用語は、正常ＣＦＴＲより低い、または正常ＣＦＴＲ機能より低いことを意味する。本発明のために、化学元素は、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｃｓ、７５ｔｈ Ｅｄの元素周期表、ＣＡＳ版によって特定される。さらに、有機化学の一般的原理は、「Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」、Ｔｈｏｍａｓ Ｓｏｒｒｅｌｌ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｂｏｏｋｓ、Ｓａｕｓａｌｉｔｏ：１９９９年、および「Ｍａｒｃｈ’ｓ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」、５ｔｈ Ｅｄ．、Ｅｄ．：Ｓｍｉｔｈ、Ｍ． Ｂ． ａｎｄ Ｍａｒｃｈ、Ｊ．、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：２００１年に記載されている。これらの内容全体を参照により本明細書に組み込む。
【００３８】
本発明で想定される置換基の組合せは、好ましくは、安定なまたは化学的に実現可能な化合物の生成をもたらすものである。本明細書で用いる「安定な」という用語は、その製造、検出、好ましくはその回収、精製、および本明細書で開示する目的の１つまたは複数のための使用を可能にする条件にかけた場合、実質的に変化しない化合物を指す。いくつかの実施形態では、安定な化合物または化学的に実現可能な化合物は、水分または他の化学的に反応性の条件がないもとで、４０℃以下の温度で少なくとも１週間保持しても実質的に変化しない化合物である。
【００３９】
本明細書で用いる「保護基」という用語は、多官能化合物の１つまたは複数の所望反応点を一時的に封鎖するために用いられる物質を指す。特定の実施形態では、保護基は以下の特徴：ａ）良好な収率で選択的に反応して、他の反応点の１つまたは複数で起こる反応に対して安定な保護された基体を提供すること、および、ｂ）再生された官能基を攻撃しない試薬によって良好な収率で選択的に取り除くことができるということの１つもしくは複数または好ましくはそのすべてを有する。保護基の例は、Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．，Ｗｕｔｓ、Ｐ． Ｇ ｉｎ 「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：１９９９年、およびこの本の他の版に詳述されている。その内容全体を参照により本明細書に組み込む。
【００４０】
別段の言及のない限り、本明細書で示す構造は、その構造のすべての異性体（例えば、鏡像異性体的、ジアステレオマー的および幾何学的（または立体配座的））形態の構造；例えば、各不斉中心についてのＲ型およびＳ型構造、Ｚ型およびＥ型二重結合異性体ならびにＺ型およびＥ型の配座異性体を含むことも意味する。したがって、本発明の化合物の単一の立体化学的異性体、ならびに鏡像異性体的、ジアステレオマー的および幾何学的（または立体配座的）混合物は本発明の範囲内である。別段の言及のない限り、本発明の化合物のすべての互変異性形態は本発明の範囲内である；例えば、式（Ｉ）の化合物は互変異性体：
【００４１】
【化４】
として存在することができる。
【００４２】
さらに、別段の言及のない限り、本明細書で示す構造は、１つまたは複数の同位体的に濃縮された原子が存在することだけが異なる化合物を含むことも意味する。例えば、水素を重水素または三重水素で置き換えていること、あるいは、炭素を１３Ｃ−または１４Ｃ−濃縮炭素で置き換えていること以外は本発明の構造を有する化合物は本発明の範囲内である。そうした化合物は、例えば、生物学的アッセイにおける分析ツールまたはプローブとして有用である。
【００４３】
例示化合物の説明：
一実施形態によると、本発明は、式（Ｉ）の化合物：
【００４４】
【化５】
（式中、環Ａは、
【００４５】
【化６】
から選択され、
式中、
Ｒ１は、−ＣＨ３、−ＣＦ３または−ＣＮであり、
Ｒ２は、水素、−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり、
Ｒ３は、水素、−ＣＨ３、−ＯＣＨ３または−ＣＮであり、
ただし、Ｒ２とＲ３は同時に水素であることはなく、
ＸおよびＹの一方は窒素であり、もう一方は炭素である）
または薬学的に許容されるその塩を提供する。
【００４６】
この実施形態の一態様では、その化合物は遊離アミンである。
【００４７】
他の態様では、その化合物はＨＣｌ塩などの薬学的に許容される塩である。
【００４８】
一実施形態では、環Ａは
【００４９】
【化７】
である。
【００５０】
一実施形態では、環Ａは
【００５１】
【化８】
である。
【００５２】
他の実施形態では、環Ａは
【００５３】
【化９】
である。
【００５４】
さらに他の実施形態では、環Ａは
【００５５】
【化１０】
である。
【００５６】
一実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ３である。
【００５７】
一実施形態では、Ｒ１は−ＣＦ３である。
【００５８】
他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＮである。
【００５９】
一実施形態では、Ｒ２は−ＣＨ３である。
【００６０】
他の実施形態では、Ｒ２は−ＣＦ３である。
【００６１】
他の実施形態では、Ｒ２は−ＯＨである。
【００６２】
他の実施形態では、Ｒ２は−ＣＨ２ＯＨである。
【００６３】
一実施形態では、Ｒ３は−ＣＨ３である。
【００６４】
一実施形態では、Ｒ３は−ＯＣＨ３である。
【００６５】
他の実施形態では、Ｒ３は−ＣＮである。
【００６６】
一実施形態では、Ｒ２は水素であり、Ｒ３は、−ＣＨ３、−ＯＣＨ３または−ＣＮである。
【００６７】
式（Ｉ）のいくつかの実施形態では、環Ａは
【００６８】
【化１１】
であり、Ｒ１は−ＣＦ３であり、Ｒ２は水素であり、Ｒ３は、−ＣＨ３、−ＯＣＨ３または−ＣＮである。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ３である。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＮである。一実施形態では、Ｒ３は−ＯＣＨ３である。またはＲ３は−ＣＨ３である。またはＲ３は−ＣＮである。
【００６９】
式（Ｉ）のさらなる実施形態では、環Ａは
【００７０】
【化１２】
であり、Ｒ１は−ＣＦ３であり、Ｒ２は、−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり、Ｒ３は、水素である。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ３である。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＮである。一実施形態では、Ｒ２は−ＣＨ３である。またはＲ２は−ＣＦ３である。またはＲ２は−ＯＨである。またはＲ２は−ＣＨ２ＯＨである。
【００７１】
他の実施形態では、Ｒ２は、−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり、Ｒ３は水素である。
【００７２】
式（Ｉ）のいくつかの実施形態では、環Ａは
【００７３】
【化１３】
であり、Ｒ１は−ＣＦ３であり、Ｒ２は水素であり、Ｒ３は、−ＣＨ３、−ＯＣＨ３または−ＣＮである。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ３である。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＮである。一実施形態では、Ｒ３は−ＣＨ３である。またはＲ３は−ＯＣＨ３である。またはＲ３は−ＣＮである。
【００７４】
式（Ｉ）のいくつかの実施形態では、環Ａは
【００７５】
【化１４】
であり、Ｒ１は−ＣＦ３であり、Ｒ２は水素であり、Ｒ３は、−ＣＨ３、−ＯＣＨ３または−ＣＮである。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ３である。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＮである。一実施形態では、Ｒ３は−ＣＨ３である。またはＲ３は−ＯＣＨ３である。またはＲ３は−ＣＮである。
【００７６】
式（Ｉ）のさらなる実施形態では、環Ａは
【００７７】
【化１５】
であり、Ｒ１は−ＣＦ３であり、Ｒ２は、−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり、Ｒ３は、水素である。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ３である。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＮである。一実施形態では、Ｒ２は−ＣＨ３である。またはＲ２は−ＣＦ３である。またはＲ２は−ＯＨである。またはＲ２は−ＣＨ２ＯＨである。
【００７８】
式（Ｉ）のいくつかの実施形態では、環Ａは
【００７９】
【化１６】
であり、Ｒ１は−ＣＦ３であり、Ｒ２は水素であり、Ｒ３は、−ＣＨ３、−ＯＣＨ３または−ＣＮである。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ３である。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＮである。一実施形態では、Ｒ３は−ＣＨ３である。またはＲ３は−ＯＣＨ３である。またはＲ３は−ＣＮである。
【００８０】
式（Ｉ）のさらなる実施形態では、環Ａは
【００８１】
【化１７】
であり、Ｒ１は−ＣＦ３であり、Ｒ２は、−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり、Ｒ３は、水素である。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ３である。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＮである。一実施形態では、Ｒ２は−ＣＨ３である。またはＲ２は−ＣＦ３である。またはＲ２は−ＯＨである。またはＲ２は−ＣＨ２ＯＨである。
【００８２】
式（Ｉ）のいくつかの実施形態では、環Ａは、
【００８３】
【化１８】
であり、Ｒ１は−ＣＦ３であり、Ｒ２は水素であり、Ｒ３は−ＣＨ３、−ＯＣＨ３または−ＣＮである。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ３である。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＮである。一実施形態では、Ｒ３は−ＣＨ３である。または、Ｒ３は−ＯＣＨ３である。または、Ｒ３は−ＣＮである。
【００８４】
式（Ｉ）の他の実施形態では、環Ａは、
【００８５】
【化１９】
であり、Ｒ１は−ＣＦ３であり、Ｒ２は−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり、Ｒ３は水素である。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ３である。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＮである。一実施形態では、Ｒ２は−ＣＨ３である。または、Ｒ２は−ＣＦ３である。または、Ｒ２は−ＯＨである。または、Ｒ２は−ＣＨ２ＯＨである。
【００８６】
他の態様によれば、本発明は式（Ｉａ）の化合物：
【００８７】
【化２０】
（式中、環Ａは、
【００８８】
【化２１】
から選択され、
Ｒ１は−ＣＨ３、−ＣＦ３または−ＣＮであり、
Ｒ２は水素、−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり、
Ｒ３は水素、−ＣＨ３、−ＯＣＨ３または−ＣＮであり、
ただし、Ｒ２とＲ３は同時に水素であることはない）
または薬学的に許容されるその塩を提供する。
【００８９】
式（Ｉａ）の一実施形態では、環Ａは、
【００９０】
【化２２】
である。
【００９１】
式（Ｉａ）の一実施形態では、環Ａは、
【００９２】
【化２３】
である。
【００９３】
式（Ｉａ）の他の実施形態では、環Ａは、
【００９４】
【化２４】
である。
【００９５】
式（Ｉａ）のさらに他の実施形態では、環Ａは、
【００９６】
【化２５】
である。
【００９７】
式（Ｉａ）の一実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ３である。
【００９８】
式（Ｉａ）の一実施形態では、Ｒ１は−ＣＦ３である。
【００９９】
式（Ｉａ）の他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＮである。
【０１００】
式（Ｉａ）の一実施形態では、Ｒ２は−ＣＨ３である。
【０１０１】
式（Ｉａ）の他の実施形態では、Ｒ２は−ＣＦ３である。
【０１０２】
式（Ｉａ）の他の実施形態では、Ｒ２は−ＯＨである。
【０１０３】
式（Ｉａ）の他の実施形態では、Ｒ２は−ＣＨ２ＯＨである。
【０１０４】
式（Ｉａ）の一実施形態では、Ｒ３は−ＣＨ３である。
【０１０５】
式（Ｉａ）の一実施形態では、Ｒ３は−ＯＣＨ３である。
【０１０６】
式（Ｉａ）の他の実施形態では、Ｒ３は−ＣＮである。
【０１０７】
式（Ｉａ）の一実施形態では、Ｒ２は水素であり、Ｒ３は−ＣＨ３、−ＯＣＨ３または−ＣＮである。
【０１０８】
式（Ｉａ）の他の実施形態では、Ｒ２は−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり、Ｒ３は水素である。
【０１０９】
式（Ｉａ）のいくつかの実施形態では、環Ａは、
【０１１０】
【化２６】
であり、Ｒ１は−ＣＦ３であり、Ｒ２は水素であり、Ｒ３は−ＣＨ３、−ＯＣＨ３または−ＣＮである。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ３である。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＮである。一実施形態では、Ｒ３は−ＯＣＨ３である。または、Ｒ３は−ＣＨ３である。または、Ｒ３は−ＣＮである。
【０１１１】
式（Ｉａ）の他の実施形態では、環Ａは、
【０１１２】
【化２７】
であり、Ｒ１は−ＣＦ３であり、Ｒ２は−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり、Ｒ３は水素である。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ３である。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＮである。一実施形態では、Ｒ２は−ＣＨ３である。または、Ｒ２は−ＣＦ３である。または、Ｒ２は−ＯＨである。または、Ｒ２は−ＣＨ２ＯＨである。
【０１１３】
式（Ｉａ）のいくつかの実施形態では、環Ａは、
【０１１４】
【化２８】
であり、Ｒ１は−ＣＦ３であり、Ｒ２は水素であり、Ｒ３は−ＣＨ３、−ＯＣＨ３または−ＣＮである。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ３である。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＮである。一実施形態では、Ｒ３は−ＣＨ３である。または、Ｒ３は−ＯＣＨ３である。または、Ｒ３は−ＣＮである。
【０１１５】
式（Ｉａ）の他の実施形態では、環Ａは、
【０１１６】
【化２９】
であり、Ｒ１は−ＣＦ３であり、Ｒ２は−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり、Ｒ３は水素である。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ３である。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＮである。一実施形態では、Ｒ２は−ＣＨ３である。または、Ｒ２は−ＣＦ３である。または、Ｒ２は−ＯＨである。または、Ｒ２は−ＣＨ２ＯＨである。
【０１１７】
式（Ｉａ）のいくつかの実施形態では、環Ａは、
【０１１８】
【化３０】
であり、Ｒ１は−ＣＦ３であり、Ｒ２は水素であり、Ｒ３は−ＣＨ３、−ＯＣＨ３または−ＣＮである。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ３である。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＮである。一実施形態では、Ｒ３は−ＣＨ３である。または、Ｒ３は−ＯＣＨ３である。または、Ｒ３は−ＣＮである。
【０１１９】
式（Ｉａ）の他の実施形態では、環Ａは、
【０１２０】
【化３１】
であり、Ｒ１は−ＣＦ３であり、Ｒ２は−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり、Ｒ３は水素である。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ３である。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＮである。一実施形態では、Ｒ２は−ＣＨ３である。または、Ｒ２は−ＣＦ３である。または、Ｒ２は−ＯＨである。または、Ｒ２は−ＣＨ２ＯＨである。
【０１２１】
式（Ｉａ）のいくつかの実施形態では、環Ａは、
【０１２２】
【化３２】
であり、Ｒ１は−ＣＦ３であり、Ｒ２は水素であり、Ｒ３は−ＣＨ３、−ＯＣＨ３または−ＣＮである。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ３である。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＮである。一実施形態では、Ｒ３は−ＣＨ３である。または、Ｒ３は−ＯＣＨ３である。または、Ｒ３は−ＣＮである。
【０１２３】
式（Ｉａ）の他の実施形態では、環Ａは、
【０１２４】
【化３３】
であり、Ｒ１は−ＣＦ３であり、Ｒ２は−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり、Ｒ３は水素である。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ３である。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＮである。一実施形態では、Ｒ２は−ＣＨ３である。または、Ｒ２は−ＣＦ３である。または、Ｒ２は−ＯＨである。または、Ｒ２は−ＣＨ２ＯＨである。
【０１２５】
他の実施形態によれば、本発明は式（Ｉｂ）の化合物：
【０１２６】
【化３４】
（式中、環Ａは、
【０１２７】
【化３５】
から選択され、
Ｒ１は−ＣＨ３、−ＣＦ３または−ＣＮであり、
Ｒ２は水素、−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり、
Ｒ３は水素、−ＣＨ３、−ＯＣＨ３または−ＣＮであり、
ただし、Ｒ２とＲ３は同時に水素であることはない）
または薬学的に許容されるその塩を提供する。
【０１２８】
式（Ｉｂ）の一実施形態では、環Ａは、
【０１２９】
【化３６】
である。
【０１３０】
式（Ｉｂ）の一実施形態では、環Ａは、
【０１３１】
【化３７】
である。
【０１３２】
式（Ｉｂ）の他の実施形態では、環Ａは、
【０１３３】
【化３８】
である。
【０１３４】
式（Ｉｂ）のさらに他の実施形態では、環Ａは、
【０１３５】
【化３９】
である。
【０１３６】
式（Ｉｂ）の一実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ３である。
【０１３７】
式（Ｉｂ）の一実施形態では、Ｒ１は−ＣＦ３である。
【０１３８】
式（Ｉｂ）の他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＮである。
【０１３９】
式（Ｉｂ）の一実施形態では、Ｒ２は−ＣＨ３である。
【０１４０】
式（Ｉｂ）の他の実施形態では、Ｒ２は−ＣＦ３である。
【０１４１】
式（Ｉｂ）の他の実施形態では、Ｒ２は−ＯＨである。
【０１４２】
式（Ｉｂ）の他の実施形態では、Ｒ２は−ＣＨ２ＯＨである。
【０１４３】
式（Ｉｂ）の一実施形態では、Ｒ３は−ＣＨ３である。
【０１４４】
式（Ｉｂ）の一実施形態では、Ｒ３は−ＯＣＨ３である。
【０１４５】
式（Ｉｂ）の他の実施形態では、Ｒ３は−ＣＮである。
【０１４６】
式（Ｉｂ）の一実施形態では、Ｒ２は水素であり、Ｒ３は−ＣＨ３、−ＯＣＨ３または−ＣＮである。
【０１４７】
式（Ｉｂ）の他の実施形態では、Ｒ２は−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり、Ｒ３は水素である。
【０１４８】
式（Ｉｂ）のいくつかの実施形態では、環Ａは、
【０１４９】
【化４０】
であり、Ｒ１は−ＣＦ３であり、Ｒ２は水素であり、Ｒ３は−ＣＨ３、−ＯＣＨ３または−ＣＮである。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＮである。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ３である。一実施形態では、Ｒ３は−ＯＣＨ３である。または、Ｒ３は−ＣＨ３である。または、Ｒ３は−ＣＮである。
【０１５０】
式（Ｉｂ）の他の実施形態では、環Ａは、
【０１５１】
【化４１】
であり、Ｒ１は−ＣＦ３であり、Ｒ２は−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり、Ｒ３は水素である。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＮである。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ３である。一実施形態では、Ｒ２は−ＣＨ３である。または、Ｒ２は−ＣＦ３である。または、Ｒ２は−ＯＨである。または、Ｒ２は−ＣＨ２ＯＨである。
【０１５２】
式（Ｉｂ）のいくつかの実施形態では、環Ａは、
【０１５３】
【化４２】
であり、Ｒ１は−ＣＦ３であり、Ｒ２は水素であり、Ｒ３は−ＣＨ３、−ＯＣＨ３または−ＣＮである。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＮである。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ３である。一実施形態では、Ｒ３は−ＣＨ３である。または、Ｒ３は−ＯＣＨ３である。または、Ｒ３は−ＣＮである。
【０１５４】
式（Ｉｂ）の他の実施形態では、環Ａは、
【０１５５】
【化４３】
であり、Ｒ１は−ＣＦ３であり、Ｒ２は−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり、Ｒ３は水素である。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＮである。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ３である。一実施形態では、Ｒ２は−ＣＨ３である。または、Ｒ２は−ＣＦ３である。または、Ｒ２は−ＯＨである。または、Ｒ２は−ＣＨ２ＯＨである。
【０１５６】
式（Ｉｂ）のいくつかの実施形態では、環Ａは、
【０１５７】
【化４４】
であり、Ｒ１は−ＣＦ３であり、Ｒ２は水素であり、Ｒ３は−ＣＨ３、−ＯＣＨ３または−ＣＮである。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＮである。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ３である。一実施形態では、Ｒ３は−ＣＨ３である。または、Ｒ３は−ＯＣＨ３である。または、Ｒ３は−ＣＮである。
【０１５８】
式（Ｉｂ）の他の実施形態では、環Ａは、
【０１５９】
【化４５】
であり、Ｒ１は−ＣＦ３であり、Ｒ２は−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり、Ｒ３は水素である。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＮである。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ３である。一実施形態では、Ｒ２は−ＣＨ３である。または、Ｒ２は−ＣＦ３である。または、Ｒ２は−ＯＨである。または、Ｒ２は−ＣＨ２ＯＨである。
【０１６０】
式（Ｉｂ）のいくつかの実施形態では、環Ａは、
【０１６１】
【化４６】
であり、Ｒ１は−ＣＦ３であり、Ｒ２は水素であり、Ｒ３は−ＣＨ３、−ＯＣＨ３または−ＣＮである。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＮである。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ３である。一実施形態では、Ｒ３は−ＣＨ３である。または、Ｒ３は−ＯＣＨ３である。または、Ｒ３は−ＣＮである。
【０１６２】
式（Ｉｂ）の他の実施形態では、環Ａは、
【０１６３】
【化４７】
であり、Ｒ１は−ＣＦ３であり、Ｒ２は−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり、Ｒ３は水素である。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＮである。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ３である。一実施形態では、Ｒ２は−ＣＨ３である。または、Ｒ２は−ＣＦ３である。または、Ｒ２は−ＯＨである。または、Ｒ２は−ＣＨ２ＯＨである。
【０１６４】
本発明の代表的化合物を以下の表１に示す。
【０１６５】
【表１】
基本合成スキーム
本発明の化合物は、当業界で公知の方法で容易に調製される。以下の本明細書の実施例のスキームで例示するのは、本発明の化合物の調製方法の例である。
【０１６６】
使用、処方および投与
薬学的に許容される組成物
本発明の１つの態様では、本明細書で説明する化合物のいずれかおよび任意選択で薬学的に許容される担体、補助剤または媒体を含む薬学的に許容される組成物を提供する。特定の実施形態では、これらの組成物は、任意選択で１つまたは複数の追加の治療薬をさらに含む。
【０１６７】
本発明の化合物のいくつかは、治療用に遊離形態で存在することができ、適切な場合、薬学的に許容される誘導体またはそのプロドラッグとして存在することができることも理解されよう。本発明によれば、薬学的に許容される誘導体またはプロドラッグには、これらに限定されないが、薬学的に許容される塩、エステル、そうしたエステルの塩、あるいは、それを必要とする患者に投与したとき直接または間接に本明細書で別途説明するような化合物またはその代謝産物もしくは残基を提供できる他の任意の付加物もしくは誘導体が含まれる。
【０１６８】
本明細書で用いる「薬学的に許容される塩」、という用語は、健全な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、炎症、アレルギー反応などを伴うことなくヒトや下等動物の組織と接触して用いるのに適しており、かつ、妥当な便益／リスク比に相応した塩を指す。「薬学的に許容される塩」は、レシピエントに投与したとき直接または間接に、本発明の化合物または阻害的に活性なその代謝産物もしくは残基を提供できる本発明の化合物の任意の非毒性塩またはエステルの塩を意味する。
【０１６９】
薬学的に許容される塩は当業界で周知である。例えばＳ． Ｍ． Ｂｅｒｇｅらは、Ｊ． Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、１９７７年、６６巻、１〜１９頁において薬学的に許容される塩を詳細に記載している。これを参照により本明細書に組み込む。本発明の化合物の薬学的に許容される塩には、適切な無機および有機の酸および塩基から誘導されるものが含まれる。薬学的に許容される非毒性付加塩の例は、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸および過塩素酸などの無機酸、または酢酸、シュウ酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、コハク酸もしくはマロン酸などの有機酸と形成させるか、あるいは、イオン交換などの当業界で用いられている他の方法によるアミノ基の塩である。
【０１７０】
他の薬学的に許容される塩には、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、ショウノウ酸塩、カンファースルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エジシル酸塩（エタンジスルホン酸塩）、エタンスルホン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸、グリセロリン酸塩、グルコン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモン酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩などが含まれる。適切な塩基から誘導される塩には、アルカリ金属、アルカリ土類金属、アンモニウムおよびＮ＋（Ｃ１〜４アルキル）４塩が含まれる。本発明は、本明細書で開示する化合物の任意の塩基性窒素含有基の四級化も想定する。そうした四級化によって、水溶性もしくは油溶性または分散性の生成物を得ることができる。代表的なアルカリまたはアルカリ土類金属塩には、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなどの塩が含まれる。他の薬学的に許容される塩には、適切な場合、ハライド、ヒドロキシド、カルボキシレート、サルフェート、ホスフェート、ナイトレート、低級アルキルスルホネートならびにアリールスルホネートなどの対イオンを用いて形成される、非毒性アンモニウム、四級アンモニウムおよびアミンカチオンが含まれる。
【０１７１】
上記で説明したように、本発明の薬学的に許容される組成物は、本明細書で用いるように、具体的な所望剤形に適した任意のすべての溶媒、賦形剤もしくは他の液媒体、分散もしくは懸濁助剤、表面活性剤、等張剤、増粘剤もしくは乳化剤、保存剤、固体結合剤、滑沢剤などを含む薬学的に許容される担体、補助剤または媒体を追加的に含む。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓｉｘｔｅｅｎｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｅ． Ｗ． Ｍａｒｔｉｎ（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐａ．、１９８０年）は、薬学的に許容される組成物を処方するのに使用される様々な担体、およびそれを調製するための公知の技術を開示している。通常の任意の担体媒体が、望まない生物学的作用をもたらすか、あるいは、薬学的に許容される組成物の他の任意の成分と有害な形で相互作用することなどによって本発明の化合物と適合しない場合を除いて、その使用は本発明の範囲内であるものとする。薬学的に許容される担体として働くことができる材料のいくつかの例には、これらに限定されないが、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、血清タンパク質、例えばヒト血清アルブミン、緩衝物質、例えばリン酸塩、グリシン、ソルビン酸もしくはソルビン酸カリウム、飽和植物性脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩または電解質、例えば硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイド状シリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン−ポリオキシプロピレン−ブロックポリマー、羊毛脂、糖類、例えばラクトース、グルコースおよびスクロース；デンプン、例えばコーンスターチおよびバレイショデンプン；セルロースおよびその誘導体、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロース；粉末トラガカント；モルト；ゼラチン；タルク；添加剤、例えばココアバターおよび坐薬用ワックス；オイル、例えばピーナッツ油、綿実油；サフラワー油；ゴマ油；オリーブ油；コーンオイルおよび大豆油；グリコール；例えばプロピレングリコールまたはポリエチレングリコール；エステル、例えばオレイン酸エチルおよびラウリン酸エチル；寒天；緩衝剤、例えば水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウム；アルギン酸；パイロジェン除去水；等張食塩水；リンガー溶液；エチルアルコールおよびリン酸緩衝液、ならびに他の非毒性の適合性滑沢剤、例えばラウリル硫酸ナトリウムおよびステアリン酸マグネシウムが含まれるが、また、処方者の判断に従って、着色剤、離型剤、コーティング剤、甘味剤、香味剤および芳香剤、保存剤および酸化防止剤も組成物中に含めることができる。
【０１７２】
化合物および薬学的に許容される組成物の使用
さらに他の態様では、本発明は、ＣＦＴＲ変異に関係する状態、疾患または障害を治療するまたはその重症度を軽減する方法を提供する。特定の実施形態では、本発明は、ＣＦＴＲ活性の欠乏に関係する状態、疾患または障害を治療する方法であって、式（Ｉ）の化合物を含む組成物を、それを必要とする対象、好ましくは哺乳動物に投与することを含む方法を提供する。
【０１７３】
特定の実施形態では、本発明は、ＣＦＴＲコード遺伝子の変異または環境因子（例えば、喫煙）に起因するＣＦＴＲ機能の低下に伴う疾患を治療する方法を提供する。これらの疾患には、嚢胞性線維症、慢性気管支炎、反復性気管支炎、急性気管支炎、先天性両側性輸精管欠損（ＣＢＡＶＤ）によって引き起こされる男性不妊症、子宮および膣の先天的欠損（ＣＡＵＶ）によって引き起こされる女性不妊症、特発性慢性膵炎（ＩＣＰ）、特発性反復性膵炎、特発性急性膵炎、慢性鼻副鼻腔炎、原発性硬化性胆管炎、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、糖尿病、ドライアイ、便秘、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症（ＡＢＰＡ）、骨疾患（例えば、骨粗しょう症）ならびにぜんそくが含まれる。
【０１７４】
特定の実施形態では、本発明は、正常ＣＦＴＲ機能に伴う疾患を治療する方法を提供する。これらの疾患には、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性気管支炎、反復性気管支炎、急性気管支炎、鼻副鼻腔炎、便秘、慢性膵炎、反復性膵炎および急性膵炎を含む膵炎、膵機能不全、先天性両側性輸精管欠損（ＣＢＡＶＤ）によって引き起こされる男性不妊症、軽度の肺疾患、特発性膵炎、肝疾患、遺伝性肺気腫、胆石、胃食道逆流性疾患（ｇａｓｇｔｒｏ−ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ ｒｅｆｌｕｘ ｄｉｓｅａｓｅ）、胃腸の悪性腫瘍、炎症性大腸炎、便秘、糖尿病、関節炎、骨粗しょう症ならびに骨減少症が含まれる。
【０１７５】
特定の実施形態では、本発明は、遺伝性ヘモクロマトーシス、凝固−線維素溶解性欠乏症、例えばプロテインＣ欠乏症、１型遺伝性血管性浮腫、脂質プロセッシング欠乏症、例えば家族性高コレステロール血症、１型乳糜血症、無βリポタンパク血症、リソソーム蓄積症、例えばＩ細胞病／偽ハーラー、ムコ多糖症、サンドホフ／テイサックス、クリグラーナジャーＩＩ型、多腺性内分泌障害／高インスリン血、真性糖尿病、ラロン型小人症、ミエロペルオキシダーゼ欠損症、原発性甲状腺機能低下症、メラノーマ、グリカン糖鎖異常ＣＤＧ１型、先天性甲状腺機能亢進症、骨形成不全症、遺伝性低フィブリノゲン血症、ＡＣＴ欠乏症、尿崩症（ＤＩ）、ニューロフィシン性ＤＩ、腎性ＤＩ、シャルコーマリートゥース病、ペリツェウスメルツバッハー病、神経変性疾患、例えばアルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、進行性核上麻痺、ピック病、いくつかのポリグルタミン神経障害、例えばハンチントン病、脊髄小脳失調Ｉ型、球脊髄性筋萎縮症、歯状核赤核淡蒼球ルイ体および筋強直性ジストロフィー、ならびに、海綿状脳症、例えば遺伝性クロイツフェルトヤコブ病（プリオンタンパク質プロセッシング欠損症に起因する）、ファブリー病、シュトロイスラー−シャインカー症候群、ゴーハム症候群、クロリドチャンネル病、先天性筋強直症（トムセンおよびベッカー型）、バーター症候群ＩＩＩ型、デント病、過剰驚愕症、てんかん、過剰驚愕症、リソソーム蓄積症、アンジェルマン症候群、原発性線毛機能不全（ＰＣＤ）、内臓逆位を伴うＰＣＤ（カールタジュナー症候群としても公知）、内臓逆位および毛様体形成不全を伴わないＰＣＤまたはシェーグレン病を含む正常ＣＦＴＲ機能に伴う疾患を治療する方法であって、前記哺乳動物に有効量の本発明の化合物を含む組成物を投与するステップを含む方法を提供する。
【０１７６】
代替の好ましい実施形態によれば、本発明は、前記哺乳動物に有効量の本発明の化合物を含む組成物を投与するステップを含む、前記哺乳動物に組成物を投与するステップを含む嚢胞性線維症を治療する方法を提供する。
【０１７７】
本発明によれば、「有効量」の化合物または薬学的に許容される組成物は、上記したような疾患、障害または状態の１つもしくは複数を治療するまたはその重症度を軽減するのに有効な量である。
【０１７８】
本発明の方法による化合物および組成物は、上記したような疾患、障害または状態の１つもしくは複数を治療するまたはその重症度を軽減するのに有効な任意の量および任意の投与経路を用いて投与することができる。
【０１７９】
特定の実施形態では、本発明の化合物および組成物は、呼吸および非呼吸上皮の頂端膜で残留ＣＦＴＲ活性を示す患者の嚢胞性線維症を治療するまたはその重症度を軽減するのに有用である。上皮の表面での残留ＣＦＴＲ活性の存在は、当業界で公知の方法、例えば標準的な電気生理学的、生化学的または組織化学的技法を用いて容易に検出することができる。そうした方法は、インビボもしくはエクスビボでの電気生理学的技法、汗もしくは唾液Ｃｌ−濃度の測定、または細胞表面密度をモニターするエクスビボでの生化学的もしくは組織化学的技法を用いてＣＦＴＲ活性を特定する。そうした方法を用いて、残留ＣＦＴＲ活性は、最も一般的な変異ΔＦ５０８に対してホモ接合性またはヘテロ接合性の患者を含む様々な異なる変異に対してヘテロ接合性またはホモロ接合性の患者において容易に検出することができる。
【０１８０】
他の実施形態では、本発明の化合物および組成物は、薬理学的方法または遺伝子治療を用いて誘発されるかまたは増大した残留ＣＦＴＲ活性を有する患者の嚢胞性線維症を治療するまたはその重症度を軽減するのに有用である。そうした方法は、細胞表面に存在するＣＦＴＲの量を増加させ、それによって、患者においてそれまでなかったＣＦＴＲ活性を誘発させるか、または患者における残留ＣＦＴＲ活性の存在レベルを上昇させる。
【０１８１】
一実施形態では、本発明の化合物および組成物は、残留ＣＦＴＲ活性、例えばクラスＩＩＩ変異（制御またはゲート開閉の障害）、クラスＩＶ変異（コンダクタンスの変化）、またはクラスＶ変異（合成の低下）を示す特定の遺伝子型（Ｌｅｅ Ｒ． Ｃｈｏｏ−Ｋａｎｇ、Ｐａｍｅｌａ Ｌ．，Ｚｅｉｔｌｉｎ、Ｔｙｐｅ Ｉ，ＩＩ，ＩＩＩ，ＩＶ，ａｎｄ Ｖ ｃｙｓｔｉｃ ｆｉｂｒｏｓｉｓ Ｔａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ Ｃｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ Ｄｅｆｅｃｔｓ ａｎｄ Ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｔｉｅｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｙ；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ６巻：５２１〜５２９頁、２０００年）の患者の嚢胞性線維症を治療するまたはその重症度を軽減するのに有用である。残留ＣＦＴＲ活性を示す遺伝子型の他の患者には、これらのクラスの１つに対してホモ接合性であるか、またはクラスＩ変異、クラスＩＩ変異もしくはそうしたクラスのない変異を含む任意の他の部類の変異とヘテロ接合性である患者が含まれる。
【０１８２】
一実施形態では、本発明の化合物および組成物は、特定の臨床表現型、例えば、上皮の頂端膜での残留ＣＦＴＲ活性の量と一般に相関する中程度〜軽度の臨床表現型の患者の嚢胞性線維症を治療するまたはその重症度を軽減するのに有用である。そうした表現型は、膵機能不全を示す患者、または特発性膵炎および先天性両側性輸精管欠損もしくは軽度の肺疾患と診断された患者を含む。
【０１８３】
必要とされる正確な量は、対象の種、年齢および全身状態、感染症の重症度、具体的な薬剤、その投与方式などによって対象毎に変わることになる。発明の化合物は、好ましくは、投与を容易にし投薬を均一にする投薬単位形態で処方する。本明細書で用いる「投薬単位形態」という表現は、治療を受ける患者に適した物理的に離散した薬剤の単位を指す。しかし、本発明の化合物および組成物の合計日用量は、健全な医学的判断の範囲内で、担当医によって判断されることになることを理解されよう。特定の任意の患者または生命体のための具体的な有効量レベルは、治療を受ける障害およびその障害の重症度；使用する具体的な化合物の活性；使用する具体的な組成物；患者の年齢、体重、全体的な健康、性別および食事；使用する具体的な化合物の投与時間、投与経路および排出速度；治療の期間；使用する具体的な化合物と併用するかまたは同時に使用する薬物を含む様々な因子、ならびに医学的技術分野で周知の同様の因子に依存することになる。本明細書で用いる「患者」という用語は、動物、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトを意味する。
【０１８４】
本発明の薬学的に許容される組成物は、治療を受ける感染症の重症度に応じて、経口、経直腸、非経口、嚢内、経膣、腹腔内、局所（粉剤、軟膏剤または滴下剤（ｄｒｏｐ）またはパッチ剤）、頬側で、また、経口または経鼻スプレーなどでヒトや他の動物に投与することができる。特定の実施形態では、本発明の化合物は、所望の治療効果を得るために、１日に対象体重当たり約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇの投薬レベルで、日に１回または複数回、経口または非経口で投与することができる。
【０１８５】
経口投与用の液体剤形には、これらに限定されないが、薬学的に許容される乳剤、マイクロエマルジョン、液剤、懸濁剤、シロップ剤およびエリキシル剤が含まれる。活性化合物に加えて、液体剤形は、当業界で通常用いられる不活性賦形剤、例えば水または他の溶媒、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、オイル（具体的には、綿実油、ラッカセイ油、コーンオイル、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコールおよびソルビタンの脂肪酸エステルならびにその混合物などの可溶化剤および乳化剤などを含むことができる。不活性賦形剤の他に、経口組成物は、湿潤剤、乳化剤および懸濁化剤、甘味剤、香味剤ならびに芳香剤などの補助剤も含むことができる。
【０１８６】
注射用製剤、例えば滅菌した水性または油性の注射用懸濁剤は、適切な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を用いて当分野の公知の技術によって処方することができる。滅菌注射用製剤は、非毒性の非経口的に許容される賦形剤もしくは溶媒中の滅菌注射用の液剤、懸濁剤または乳剤、例えば１，３−ブタンジオール中の液剤であってもよい。使用できる許容される媒体および溶媒には、水、リンガー溶液、Ｕ．Ｓ．Ｐ．および等張性塩化ナトリウム溶液がある。さらに、滅菌固定油は、溶媒または懸濁化媒体として慣用的に使用される。そのために、合成モノ−またはジグリセリドを含む任意の滅菌固定油を用いることができる。さらに、オレイン酸などの脂肪酸が、注射用物質の製剤で使用される。
【０１８７】
注射用処方物は、例えば、細菌保持フィルターでろ過するか、あるいは、使用前に滅菌水または他の滅菌注射用媒体中に溶解または分散させることができる滅菌固体組成物の形態の滅菌剤を混ぜ込むことによって滅菌することができる。
【０１８８】
本発明の化合物の作用を持続させるために、皮下または筋肉内注射による化合物の吸収を遅延させることがしばしば望ましい。これは、水への溶解性の低い結晶性または無定型の物質の懸濁液を使用することによって実現することができる。化合物の吸収速度はその溶解速度に依存する。したがってその速度は結晶サイズや結晶形態に依存する。あるいは、非経口で投与された化合物形態の吸収を遅延させることは、それを油性媒体に溶解または懸濁させることによって実現される。注射用デポー形態は、ポリラクチド−ポリグリコリドなどの生分解性ポリマー中に、化合物のマイクロカプセル化マトリックスを形成させることによって作製される。化合物とポリマーの比、および使用する具体的なポリマーの特性に応じて、化合物の放出速度を制御することができる。他の生分解性ポリマーの例には、ポリ（オルトエステル）およびポリ（アンヒドリド）が含まれる。デポー注射用処方物は、生体組織に適合するリポソームまたはマイクロエマルジョン中に化合物を取り込むことによっても調製される。
【０１８９】
経直腸または経膣投与のための組成物は、本発明の化合物を、周囲温度では固体であるが体温で液体であり、したがって、直腸または膣腔内で溶融して活性化合物を放出する、ココアバター、ポリエチレングリコールまたは坐薬用ワックスなどの適切な非刺激性の添加剤または担体と混合することによって調製することができる。
【０１９０】
経口投与用の固体剤形には、カプセル剤、錠剤、丸薬、粉剤および顆粒剤が含まれる。そうした固体剤形では、活性化合物を、少なくとも１つの薬学的に許容される不活性な添加剤または担体、例えばクエン酸ナトリウムまたは第二リン酸カルシウム、および／または、ａ）フィラーすなわち増量剤、例えばデンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトールおよびケイ酸、ｂ）結合剤、例えばカルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリジノン、スクロースおよびアカシア、ｃ）保湿剤、例えばグリセロール、ｄ）崩壊剤、例えば寒天、炭酸カルシウム、バレイショまたはタピオカデンプン、アルギン酸、ある種のケイ酸塩、および炭酸ナトリウム、ｅ）溶解遅延剤、例えばパラフィン、ｆ）吸収促進剤、例えば四級アンモニウム化合物、ｇ）湿潤剤、例えばセチルアルコールおよびグリセロールモノステアレート、ｈ）吸収剤、例えばカオリンおよびベントナイト粘土、ならびに、ｉ）滑沢剤、例えばタルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウムおよびその混合物と混合させる。カプセル剤、錠剤および丸薬の場合、その剤形は緩衝剤を含むこともできる。
【０１９１】
同様の種類の固体組成物は、ラクトースまたは乳糖ならびに高分子量のポリエチレングリコールなどの添加剤を用いて、軟質および硬質のゼラチンカプセル中のフィラーとして用いることもできる。固体剤形の錠剤、糖衣錠、カプセル剤、丸薬および顆粒剤は、腸溶コーティングおよび製薬技術分野で周知の他のコーティングなどのコーティングおよびシェルを用いて調製することができる。それらは、任意選択で乳白剤を含むことができ、また、任意選択で遅延した形で、腸管内の特定の部分において、活性成分だけか、またはそれを優先して放出する組成物でできていてもよい。使用できる埋込み型組成物の例には、高分子物質およびワックスが含まれる。同種の固体組成物は、ラクトースまたは乳糖ならびに高分子量のポリエチレングリコールなどの添加剤を用いて、軟質および硬質のゼラチンカプセル中のフィラーとして用いることもできる。
【０１９２】
活性化合物は、上記したような１つまたは複数の添加剤でマイクロカプセル化した形態であってもよい。固体剤形の錠剤、糖衣錠、カプセル剤、丸薬および顆粒剤は、腸溶コーティング、放出制御コーティングおよび製薬技術分野で周知の他のコーティングなどのコーティングおよびシェルを用いて調製することができる。このような固体剤形では、活性化合物を、スクロース、ラクトースまたはデンプンなどの少なくとも１つの不活性賦形剤と混合することができる。そうした剤形は、通常実施されるように、不活性賦形剤以外の他の物質、例えば、ステアリン酸マグネシウムや微結晶性セルロースのような錠剤化用滑沢剤および他の錠剤化用助剤も含むことができる。カプセル剤、錠剤および丸薬の場合、その剤形は緩衝剤を含むこともできる。それらは任意選択で乳白剤を含むことができ、また、任意選択で遅延した形で、腸管内の特定の部分において、活性成分だけを放出するか、またはそれを優先して放出する組成物でできていてもよい。使用できる埋込み型組成物の例には、高分子物質およびワックスが含まれる。
【０１９３】
本発明の化合物の局所または経皮投与のための剤形は、軟膏剤、ペースト剤、クリーム剤、ローション剤、ゲル剤、粉剤、液剤、噴霧剤、吸入剤またはパッチ剤を含む。活性成分は、無菌条件下で、薬学的に許容される担体、必要に応じて任意の所要保存剤または緩衝剤と混合する。眼科用処方物、点耳剤および点眼剤も考えられ、これらも本発明の範囲内である。さらに、本発明は、身体に化合物を制御放出するという追加的な利点を有する経皮パッチ剤の使用を考慮する。そうした剤形は、適切な媒体中に化合物を溶解または分散させて調製される。吸収促進剤を用いて、皮膚を通る化合物フラックスを増大させることもできる。その速度は、速度制御膜を提供するか、またはポリマーマトリックスもしくはゲル中に化合物を分散させることによって制御することができる。
【０１９４】
ＣＦＴＲの修飾因子として本発明で使用する化合物の活性は、当業界および本明細書の実施例で概略説明されている方法によってアッセイすることができる。
【０１９５】
本発明の化合物および薬学的に許容される組成物は、併用治療で使用できる、すなわち、その化合物および薬学的に許容される組成物を１つもしくは複数の他の所望治療薬または医学的手順と同時か、それに先行するかまたはその後に投与できる治療で使用できることも理解されよう。併用レジメンにおいて用いる治療の具体的な組合せ（治療薬または手順）については、所望の治療薬および／または手順の適合性および達成すべき所望の治療効果を考慮に入れることになる。用いる治療法は、同じ障害について所望の効果を達成することができる（例えば、本発明の化合物を、同じ障害を治療するのに使用される別の薬剤と同時に投与することができる）、またはそれらは異なる効果（例えば、何らかの副作用の制御）を達成できることも理解されよう。本明細書で使用するような、特定の疾患または状態を治療または予防するために通常投与される追加の治療薬は、「治療を受ける疾患または状態に適している」ものとして公知である。
【０１９６】
一実施形態では、追加の薬剤は、粘液溶解薬、気管支拡張薬、抗生物質、抗感染症薬、抗炎症薬、本発明の化合物以外のＣＦＴＲ修飾因子または栄養剤から選択される。他の実施形態では、追加の薬剤は本発明の化合物以外のＣＦＴＲ修飾因子である。
【０１９７】
一実施形態では、追加の薬剤は抗生物質である。本明細書で有用な抗生物質の例には、トブラマイシン吸入用粉末（ＴＩＰ）を含むトブラマイシン、アジスロマイシン、エアロゾール化された形態のアズトレオナムを含むアズトレオナム、そのリポソーム製剤を含むアミカシン、吸入による投与に適したその製剤を含むシプロフロキサシン、そのエアロゾール化された製剤を含むレボフロキサシ、ならびに２つの抗生物質、例えばホスホマイシンとトブラマイシンの組合せが含まれる。
【０１９８】
他の実施形態では、追加の薬剤は粘液溶解薬である。本明細書で有用な粘液溶解薬の例には、Ｐｕｌｍｏｚｙｍｅ（登録商標）が含まれる。
【０１９９】
他の実施形態では、追加の薬剤は気管支拡張薬である。気管支拡張薬の例には、アルブテロール、硫酸メタプロテレノール、酢酸ピルブテロール、サルメテロールまたは硫酸テトラブリンが含まれる。
【０２００】
他の実施形態では、追加の薬剤は、肺気道表面液の回復に効果的なものである。そうした薬剤は、細胞の内外での塩の動きを向上させ、肺気道中の粘液がより潤う、したがってより簡単にのどがすっきりとなるようにする。そうした薬剤の例には、高張食塩水、デヌホソル四ナトリウム（［［（３Ｓ，５Ｒ）−５−（４−アミノ−２−オキソピリミジン−１−イル）−３−ヒドロキシオキソラン−２−イル］メトキシ−ヒドロキシホスホリル］［［［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２，４−ジオキソピリミジン−１−イル）−３、４−ジヒドロキシオキソラン−２−イル］メトキシ−ヒドロキシホスホリル］オキシ−ヒドロキシホスホリル］リン酸水素）またはｂｒｏｎｃｈｉｔｏｌ（マンニトールの吸入用製剤）が含まれる。
【０２０１】
他の実施形態では、追加の薬剤は、抗炎症薬、すなわち肺の炎症を低減できる薬剤である。本明細書で有用なそうした薬剤の例には、イブプロフェン、ドコサヘキサエン酸（ｄｏｃｏｓａｈｅｘａｎｏｉｃ ａｃｉｄ）（ＤＨＡ）、シルデナフィル、吸入用グルタチオン、ピオグリタゾン、ヒドロキシクロロキンまたはシンバスタチン（ｓｉｍａｖａｓｔａｔｉｎ）が含まれる。
【０２０２】
他の実施形態では、追加の薬剤は、チャンネルを遮断することによって直接的に、またはＥＮａＣ活性の増大をもたらすプロテアーゼ（例えば、セリンプロテアーゼ（ｓｅｉｎｅ ｐｒｏｔｅａｓｅ）、チャンネル−活性化プロテアーゼ）の調節によって間接的に上皮のナトリウムチャンネルブロッカー（ＥＮａＣ）の活性を低下させる。そうした薬剤の例には、カモスタット（トリプシン様プロテアーゼ阻害剤）、ＱＡＵ１４５、５５２−０２、ＧＳ−９４１１、ＩＮＯ−４９９５、Ａｅｒｏｌｙｔｉｃおよびアミロリドが含まれる。上皮のナトリウムチャンネルブロッカー（ＥＮａＣ）の活性を低下させる追加の薬剤は、例えばＰＣＴ出願番号ＷＯ２００９／０７４５７５に見ることができる。その内容全体を参照により本明細書に組み込む。
【０２０３】
本明細書で説明する他の疾患の中では、式Ｉの化合物などのＣＦＴＲ修飾因子とＥＮａＣの活性を低下させる薬剤の組合せを、リドル症候群、嚢胞性線維症を含む炎症またはアレルギー状態、原発性線毛機能不全、慢性気管支炎、慢性閉塞性肺疾患、ぜんそく、呼吸管感染症、肺癌、口腔乾燥症および乾性角結膜炎（ｋｅｒａｔｏｃｏｎｊｕｎｃｔｉｖｉｔｉｓ ｓｉｒｅ）、呼吸管感染症（急性および慢性；ウイルス性および細菌性）ならびに肺癌を治療するために使用する。
【０２０４】
式Ｉの化合物などのＣＦＴＲ修飾因子とＥＮａＣの活性を低下させる薬剤の組合せは、上皮を貫通する異常な流体制御に関係し、おそらくその表面上の保護表面液の生理学的異常を伴う呼吸器系疾患以外の疾患、例えば口腔乾燥症（口渇）または乾性角結膜炎（ドライアイ）も含む、上皮のナトリウムチャンネルの遮断によって媒介される疾患を治療するのにも有用である。さらに、腎臓における上皮のナトリウムチャンネルの遮断は、利尿を促進させ、それによって血圧低下作用を誘発させるために使用することができる。
【０２０５】
ぜんそくには、内因性（非アレルギー性）ぜんそくと外因性（アレルギー）ぜんそくの両方、軽度のぜんそく、中程度のぜんそく、重度のぜんそく、気管支ぜんそく、運動誘発性ぜんそく、職業性ぜんそくおよび細菌感染に続いて誘発されるぜんそくが含まれる。ぜんそくの治療は、ゼーゼーという症状を示し、主要な医学関連の確立された患者区分であり現在しばしば初期または早期ぜんそく患者（便宜上この特別なぜんそく状態は「ぜんそく幼児（ｗｈｅｅｚｙ ｉｎｆａｎｔ）症候群」と称される）として特定される「ぜんそく幼児」として診断されるかまたは診断可能な例えば４才または５才未満の対象の治療も包含することを理解されたい。ぜんそくの治療における予防的効能は、症候発作、例えば急性ぜんそく性発作もしくは気管支収縮剤発作の頻度または重症度の低下、肺機能の改善または気道過反応性の改善によって証明される。それは、例えば抗炎症剤（例えば、コルチコステロイド）または気管支拡張剤により起こる場合、他の対症療法、すなわち症候発作を抑えるかまたは止めるための治療の必要性を少なくすることによってさらに証明され得る。ぜんそくにおける予防的利益は、「モーニングディッピング（ｍｏｒｎｉｎｇ ｄｉｐｐｉｎｇ）」の傾向がある対象において特に明らかであり得る。「モーニングディッピング」は、相当な割合のぜんそく患者に共通しており、例えば、おおよそ午前４〜６時の間、すなわち、それまで施された任意の症候ぜんそく治療から通常相当間をおいた時間でのぜんそく発作を特徴とする、認識されているぜんそく症候群である。
【０２０６】
慢性閉塞性肺疾患は、慢性気管支炎またはそれに伴う呼吸困難、肺気腫、ならびに薬物治療、特に他の吸入薬物治療の結果として起こる気道過反応性の増悪を含む。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物などのＣＦＴＲ修飾因子とＥＮａＣの活性を低下させる薬剤の併用は、急性、アラキン酸性、カタル性、クループ性、慢性もしくはフチノイド性の気管支炎を含むどんなタイプまたは由来の気管支炎の治療にも有用である。
【０２０７】
他の実施形態では、追加の薬剤は、式Ｉの化合物以外のＣＦＴＲ修飾因子、すなわち、ＣＦＴＲ活性を調節するのに有効な薬剤である。そうした薬剤の例には、アタルレン（「ＰＴＣ１２４（登録商標）」；３−［５−（２−フルオロフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］安息香酸）、シナプルチド、ランコブチド（ｌａｎｃｏｖｕｔｉｄｅ）、デペレスタット（ヒト組換え好中球エラスターゼ阻害剤）、コビプロストン（７−｛（２Ｒ、４ａＲ、５Ｒ、７ａＲ）−２−［（３Ｓ）−１，１−ジフルオロ−３−メチルペンチル］−２−ヒドロキシ−６−オキソオクタヒドロシクロペンタ［ｂ］ピラン−５−イル｝ヘプタン酸）または（３−（６−（１−（２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）シクロプロパンカルボキシアミド）−３−メチルピリジン−２−イル）安息香酸が含まれる。他の実施形態では、追加の薬剤は（３−（６−（１−（２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）シクロプロパンカルボキシアミド）−３−メチルピリジン−２−イル）安息香酸である。
【０２０８】
他の実施形態では、追加の薬剤は栄養剤である。そうした薬剤の例には、Ｐａｎｃｒｅａｓｅ（登録商標）、Ｐａｎｃｒｅａｃａｒｂ（登録商標）、Ｕｌｔｒａｓｅ（登録商標）もしくはＣｒｅｏｎ（登録商標）、Ｌｉｐｒｏｔｏｍａｓｅ（登録商標）（以前はＴｒｉｚｙｔｅｋ（登録商標））、Ａｑｕａｄｅｋｓ（登録商標）を含むパンクレリパーゼ（パンクレアチン酵素補充療法剤（ｐａｎｃｒｅａｔｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅ ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ））またはグルタチオン吸入剤が含まれる。一実施形態では、追加の栄養剤はパンクレリパーゼである。
【０２０９】
本発明の組成物中に存在する追加の治療薬の量は、その治療薬を唯一の活性剤として含む組成物で通常投与される量を超えないことになる。好ましくは、本発明で開示する組成物中の追加の治療薬の量は、その治療薬を唯一の治療用活性剤として含む組成物中に通常存在する量の約５０％〜１００％の範囲となる。
【０２１０】
本発明の化合物または薬学的に許容されるその組成物は、人工装具、人工弁、代用血管、ステントおよびカテーテルなどの埋込み型医療デバイスをコーティングするための組成物中に取り込むこともできる。したがって、本発明は、他の態様では、上記に概略説明し、かつ本明細書での部類および下位部類にある本発明の化合物ならびに前記埋込み型デバイスをコーティングするのに適した担体を含む、埋込み型デバイスをコーティングする組成物を含む。さらに他の態様では、本発明は、上記に概略説明し、かつ本明細書での部類および下位部類にある本発明の化合物ならびに前記埋込み型デバイスをコーティングするのに適した担体を含む組成物でコーティングされた埋込み型デバイスを含む。適切なコーティング、およびコーティングされた埋込み型デバイスの一般的な作製法は、米国特許第６，０９９，５６２号、同第５，８８６，０２６号および同第５，３０４，１２１号に記載されている。コーティングはヒドロゲルポリマー、ポリメチルジシロキサン、ポリカプロラクトン、ポリエチレングリコール、ポリ乳酸、エチレン酢酸ビニルおよびその混合物などの一般に生体適合性のあるポリマー材料である。そのコーティングを、フルオロシリコーン、多糖、ポリエチレングリコール、リン脂質またはその組合せの適切なトップコートで任意選択でさらに被覆して組成物に制御放出の特性を付与することができる。
【０２１１】
本発明の他の態様は、生物学的試料または患者のＣＦＴＲ活性（例えば、インビトロまたはインビボで）を調節する方法であって、式（Ｉ）の化合物または前記化合物を含む組成物を患者に投与するか、またはそれを前記生物学的試料と接触させる方法に関する。本明細書で用いる「生物学的試料」という用語は、これらに限定されないが、細胞培養物またはその抽出物；哺乳動物から得られた生検材料またはその抽出物；および血液、唾液、尿、糞便、精液、涙液または他の体液もしくはその抽出物を含む。
【０２１２】
生物学的試料におけるＣＦＴＲの調節は、当業者に公知である様々な目的に有用である。そうした目的の例には、これらに限定されないが、生物学的および病理学的現象におけるＣＦＴＲの研究；ＣＦＴＲの新規な修飾因子の比較評価が含まれる。
【０２１３】
さらに他の実施形態では、前記チャンネルを式（Ｉ）の化合物と接触させるステップを含む、インビトロまたはインビボで陰イオンチャンネルの活性を調節する方法を提供する。好ましい実施形態では、陰イオンチャンネルは塩素イオンチャンネルまたは重炭酸塩イオンチャンネルである。他の好ましい実施形態では、陰イオンチャンネルは塩素イオンチャンネルである。
【０２１４】
代替の実施形態によれば、本発明は、細胞膜中の機能性ＣＦＴＲの数を増加させる方法であって、前記細胞を式（Ｉ）の化合物と接触させるステップを含む方法を提供する。
【０２１５】
他の好ましい実施形態によれば、ＣＦＴＲの活性は、膜貫通電位を測定することによって測られる。生物学的試料の膜貫通電位を測定する手段としては、光学的膜電位アッセイまたは他の電気生理学的方法などの当業界で公知の方法のいずれかを用いることができる。
【０２１６】
光学的膜電位アッセイは、Ｇｏｎｚａｌｅｚ ａｎｄ Ｔｓｉｅｎが記載している（Ｇｏｎｚａｌｅｚ，Ｊ． Ｅ． ａｎｄ Ｒ． Ｙ． Ｔｓｉｅｎ（１９９５年）「Ｖｏｌｔａｇｅ ｓｅｎｓｉｎｇ ｂｙ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ ｅｎｅｒｇｙ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｉｎ ｓｉｎｇｌｅ ｃｅｌｌｓ．」Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｊ ６９巻（４号）：１２７２〜８０頁、およびＧｏｎｚａｌｅｚ，Ｊ． Ｅ． ａｎｄ Ｒ． Ｙ． Ｔｓｉｅｎ（１９９７年）；「Ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｉｎｄｉｃａｔｏｒｓ ｏｆ ｃｅｌｌ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｔｈａｔ ｕｓｅ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ ｅｎｅｒｇｙ ｔｒａｎｓｆｅｒ」Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ ４巻（４号）：２６９〜７７頁を参照されたい）電位感受性ＦＲＥＴセンサーを、電圧／イオンプローブリーダー（ＶＩＰＲ）などの蛍光変化を測定する装置（Ｇｏｎｚａｌｅｚ，Ｊ． Ｅ．、Ｋ． Ｏａｄｅｓら（１９９９年）「Ｃｅｌｌ−ｂａｓｅｄ ａｓｓａｙｓ ａｎｄ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｉｏｎ−ｃｈａｎｎｅｌ ｔａｒｇｅｔｓ」Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ Ｔｏｄａｙ ４巻（９号）：４３１〜４３９頁を参照されたい）と共に使用する。
【０２１７】
これらの電位感受性アッセイは、膜溶解性の電位感受性染料ＤｉＳＢＡＣ２（３）と蛍光リン脂質ＣＣ２−ＤＭＰＥ（これは、原形質膜の外葉と結合しており、ＦＲＥＴ供与体として働く）の間の蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）の変化を基にしている。膜電位（Ｖｍ）の変化は、負の電荷を帯びたＤｉＳＢＡＣ２（３）を、原形質膜を通して再分配させ、したがって、ＣＣ２−ＤＭＰＥからのエネルギー移動量は変化する。蛍光発光の変化は、９６ウェルまたは３８４ウェルのマイクロタイタープレートにおいて、細胞に基づくスクリーンとなるように設計された統合液体処理装置（ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ｌｉｑｕｉｄ ｈａｎｄｌｅｒ）および蛍光検出器である、ＶＩＰＲ（商標）ＩＩを用いてモニターすることができる。
【０２１８】
他の態様では、本発明は、（ｉ）式（Ｉ）の化合物または上記実施形態のいずれかを含む組成物；および、（ｉｉ）ａ．）その組成物を生物学的試料と接触させ、ｂ．）前記ＣＦＴＲまたはそのフラグメントの活性を測定するための取扱説明書を含む、インビトロまたはインビボでの生物学的試料中のＣＦＴＲまたはそのフラグメントの活性を測定するのに使用するためのキットを提供する。一実施形態では、そのキットは、ａ．）追加の組成物を生物学的試料と接触させ、ｂ．）前記追加の化合物の存在下で前記ＣＦＴＲまたはそのフラグメントの活性を測定し、ｃ．）追加の化合物の存在下でのＣＦＴＲの活性を、式（Ｉ）の組成物の存在下でのＣＦＴＲの密度と比較するための取扱説明書をさらに含む。好ましい実施形態では、キットを、ＣＦＴＲの密度を測定するために使用する。
【０２１９】
本明細書で説明する本発明がより完全に理解されるように、以下の実施例を示す。これらの実施例は、例示のためだけのものであり、本発明を限定するものと解釈されるものではないことを理解すべきである。
【０２２０】
式Ｉの化合物を作製するための方法および中間体
本発明の他の態様は、式（Ｉｃ）の化合物：
【０２２１】
【化４８】
または薬学的に許容されるその塩を調製する方法であって、
（ａ）式１ｄの酸を式２ｃのアミンと反応させて式（Ｉｃ）の化合物
【０２２２】
【化４９】
（式中、環Ａは、
【０２２３】
【化５０】
から選択され、
Ｒ１は、−ＣＨ３、−ＣＦ３または−ＣＮであり、
Ｒ２は、水素、−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり、
Ｒ３は、水素、−ＣＨ３、−ＯＣＨ３または−ＣＮであり、
ただし、Ｒ２とＲ３は同時に水素であることはなく、
Ｒａは、水素、またはトリメチルシリル（ＴＭＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）、トリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）および［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル（ＳＥＭ）からなる群から選択されるシリル保護基であり、
ＸおよびＹの一方は窒素であり、もう一方は炭素である）
を提供する方法に関する。
【０２２４】
一実施形態では、式１ｄの酸と式２ｃのアミンの反応を、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）およびトリエチルアミンが存在する溶媒中、またはプロピルホスホン酸環状無水物（Ｔ３Ｐ（登録商標））およびピリジンが存在する溶媒中で実施する。より具体的には、その溶媒はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、酢酸エチルまたは２−メチルテトラヒドロフランを含む。
【０２２５】
他の実施形態では、Ｒａは水素またはＴＢＤＭＳである。
【０２２６】
他の実施形態では、ＲａはＴＢＤＭＳである。
【０２２７】
他の実施形態では、上記方法は、例えば、環Ａが
【０２２８】
【化５１】
（式中、Ｒａはシリル保護基である）
である場合、環Ａが
【０２２９】
【化５２】
である式Ｉの化合物を生成する脱保護ステップをさらに含む。一般に、シリル保護基の除去には、酢酸または希薄鉱酸などの酸で処理する必要があるが、フッ素イオンの供給源（例えば、テトラブチルアンモニウムフルオリド）などの他の試薬を使用することもできる。
【０２３０】
この方法では、式２ｃのアミンを式２ａの化合物から調製する方法であって、
（ａ）式２ａの化合物を式３のアミンと反応させて式２ｂの化合物
【０２３１】
【化５３】
（式中、Ｈａｌは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩであり、
式３のアミンは
【０２３２】
【化５４】
である）
を得るステップと、
（ｂ）式２ｂの化合物を還元して式２ｃのアミン
【０２３３】
【化５５】
を得るステップと
を含む方法である。
【０２３４】
式２ｃのアミンを作製する方法の１つの実施形態では、ステップ（ａ）の式３のアミンを、アミン塩酸塩などの対応する四級アンモニウム塩からインサイチュで生成させるが、他のアンモニウム塩（例えば、トリフルオロ酢酸塩）を使用することもできる。
【０２３５】
式２ｃのアミンを生成させるためのステップ（ａ）の１つの実施形態では、式３のアミンが
【０２３６】
【化５６】
である場合、Ｒａは水素またはＴＢＤＭＳである。より具体的には、ＲａはＴＢＤＭＳである。
【０２３７】
他の実施形態では、ステップ（ａ）を、第３アミン塩基の存在下、極性非プロトン性溶媒中で実施する。使用できる溶媒の例には、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシドまたはアセトニトリルが含まれる。使用できる第３アミンの例には、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、１，５−ジアザビシクロ［４．３．０］ノナ−５−エン（ＤＢＮ）、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（ＤＢＵ）、１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン（ＤＡＢＣＯ）およびピリジンが含まれる。
【０２３８】
一実施形態では、第３アミン塩基はトリエチルアミンである。
【０２３９】
他の実施形態では、ステップ（ａ）を、トリエチルアミンの存在下、アセトニトリル中で実施する。
【０２４０】
他の実施形態では、ステップ（ａ）の反応温度は約７５℃から約８５℃の間である。
【０２４１】
他の実施形態では、ステップ（ａ）の反応時間は約２から約３０時間の間である。
【０２４２】
式２ｃのアミンを作製する方法の１つの実施形態では、ステップ（ｂ）を、パラジウム触媒の存在下、極性プロトン性溶媒または極性プロトン性溶媒の混合物中で実施する。パラジウムが触媒である場合、ステップ（ｂ）の溶媒は一般にアルコールなどの極性プロトン性溶媒である。より具体的には、溶媒は、メタノールまたはエタノールを含む。
【０２４３】
他の実施形態では、ステップ（ｂ）を、ＦｅおよびＦｅＳＯ４またはＺｎおよびＡｃＯＨの存在下、水などの極性プロトン性溶媒中で実施する。
【０２４４】
本発明の他の態様は、式Ｉｃの化合物：
【０２４５】
【化５７】
または薬学的に許容されるその塩を調製する方法であって、
（ａ）式２ａの化合物を式３のアミンと反応させて式２ｂの化合物
【０２４６】
【化５８】
を得るステップと、
（ｂ）前記式２ｂの化合物を水素化により前記式２ｃのアミン
【０２４７】
【化５９】
に転換させるステップと、
（ｃ）前記式２ｃのアミンを式１ｄの酸と反応させて式Ｉの化合物
【０２４８】
【化６０】
（式中、
Ｈａｌは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩであり、
前記式３のアミンは
【０２４９】
【化６１】
であり、
環Ａは
【０２５０】
【化６２】
から選択され、
Ｒ１は、−ＣＨ３、−ＣＦ３または−ＣＮであり、
Ｒ２は、水素、−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり、
Ｒ３は、水素、−ＣＨ３、−ＯＣＨ３または−ＣＮであり、
ただし、Ｒ２とＲ３は同時に水素であることはなく、
Ｒａは、水素、またはトリメチルシリル（ＴＭＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）、トリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）および［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル（ＳＥＭ）からなる群から選択されるシリル保護基であり、
ＸおよびＹの一方は窒素であり、もう一方は炭素である）
を得るステップを含む方法に関する。
【０２５１】
一実施形態では、ステップ（ａ）の式３のアミンを、アミン塩酸塩などの対応する四級アンモニウム塩からインサイチュで生成させるが、他のアンモニウム塩（例えば、トリフルオロ酢酸塩）を使用することもできる。
【０２５２】
式２ｃのアミンを生成させるためのステップ（ａ）の１つの実施形態では、式３のアミンが
【０２５３】
【化６３】
である場合、Ｒａは水素またはＴＢＤＭＳである。より具体的には、ＲａはＴＢＤＭＳである。
【０２５４】
他の実施形態では、ステップ（ａ）を、第３アミン塩基の存在下、極性非プロトン性溶媒中で実施する。使用できる溶媒の例には、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシドまたはアセトニトリルが含まれる。使用できる第３アミンの例には、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、１，５−ジアザビシクロ［４．３．０］ノナ−５−エン（ＤＢＮ）、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（ＤＢＵ）、１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン（ＤＡＢＣＯ）およびピリジンが含まれる。
【０２５５】
一実施形態では、第３アミン塩基がトリエチルアミンである。
【０２５６】
他の実施形態では、ステップ（ａ）を、トリエチルアミンの存在下、アセトニトリル中で実施する。
【０２５７】
他の実施形態では、ステップ（ａ）の反応温度は約７５℃から約８５℃の間である。
【０２５８】
他の実施形態では、ステップ（ａ）の反応時間は約２から約３０時間の間である。
【０２５９】
式２ｃのアミンを作製する方法の１つの実施形態では、ステップ（ｂ）を、パラジウム触媒の存在下、極性プロトン性溶媒または極性プロトン性溶媒の混合物中で実施する。パラジウムが触媒である場合、ステップ（ｂ）の溶媒は一般にアルコールなどの極性プロトン性溶媒である。より具体的には、メタノールまたはエタノールを含む。
【０２６０】
他の実施形態では、ステップ（ｂ）を、ＦｅおよびＦｅＳＯ４またはＺｎおよびＡｃＯＨの存在下、水などの極性プロトン性溶媒中で実施する。
【０２６１】
ステップ（ｃ）の１つの実施形態では、式１ｄの酸と式２ｃのアミンの反応を、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）およびトリエチルアミンが存在する溶媒中、またはプロピルホスホン酸環状無水物（Ｔ３Ｐ（登録商標））およびピリジンが存在する溶媒中で実施する。より具体的には、溶媒は、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、酢酸エチルまたは２−メチルテトラヒドロフランを含む。
【０２６２】
他の実施形態では、Ｒａは水素またはＴＢＤＭＳである。
【０２６３】
他の実施形態では、ＲａはＴＢＤＭＳである。
【０２６４】
他の実施形態では、上記方法は、例えば環Ａが
【０２６５】
【化６４】
（式中、Ｒａはシリル保護基である）
である場合、環Ａが
【０２６６】
【化６５】
である式Ｉの化合物を生成する脱保護ステップをさらに含む。一般に、シリル保護基の除去は、酢酸または希薄鉱酸などの酸で処理する必要があるが、フッ素イオンの供給源（例えば、テトラブチルアンモニウムフルオリド）などの他の試薬を使用することもできる。
【０２６７】
本発明の他の態様は、
【０２６８】
【化６６】
（式中、環Ａは、
【０２６９】
【化６７】
であり、
Ｒ１は、−ＣＨ３、−ＣＦ３または−ＣＮであり、
Ｒａは、水素、またはトリメチルシリル（ＴＭＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）、トリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）および［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル（ＳＥＭ）からなる群から選択されるシリル保護基であり、
ＸおよびＹの一方は窒素であり、もう一方は炭素である）
である化合物に関する。
【０２７０】
本発明の他の態様は、
【０２７１】
【化６８】
（式中、環Ａは
【０２７２】
【化６９】
であり、
Ｒ１は、−ＣＨ３、−ＣＦ３または−ＣＮであり、
Ｒａは、水素、またはトリメチルシリル（ＴＭＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）、トリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）および［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル（ＳＥＭ）からなる群から選択されるシリル保護基であり、
ＸおよびＹの一方は窒素であり、もう一方は炭素である）
である化合物に関する。
【０２７３】
本発明の他の態様は、式Ｉｃの化合物：
【０２７４】
【化７０】
または薬学的に許容されるその塩
（式中、環Ａは、
【０２７５】
【化７１】
から選択され、
Ｒ１は、−ＣＨ３、−ＣＦ３または−ＣＮであり、
Ｒ２は、水素、−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり、
Ｒ３は、水素、−ＣＨ３、−ＯＣＨ３または−ＣＮであり、
ただし、Ｒ２とＲ３は同時に水素であることはなく、
Ｒａは、トリメチルシリル（ＴＭＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）およびトリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）および［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル（ＳＥＭ）からなる群から選択されるシリル保護基であり、ＸおよびＹの一方は窒素であり、もう一方は炭素である）に関する。
【０２７６】
本発明の他の態様は、本明細書で開示するいずれかの方法で作製された式Ｉの化合物；
【０２７７】
【化７２】
または薬学的に許容されるその塩
（式中、環Ａは、
【０２７８】
【化７３】
から選択され、
Ｒ１は、−ＣＨ３、−ＣＦ３または−ＣＮであり、
Ｒ２は、水素、−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり、
Ｒ３は、水素、−ＣＨ３、−ＯＣＨ３または−ＣＮであり、
ＸおよびＹの一方は窒素であり、もう一方は炭素である）に関する。
【０２７９】
本発明の他の態様は、本明細書で開示するいずれかの方法で作製された
【０２８０】
【化７４】
からなる群から選択される化合物に関する。
【０２８１】
基本合成スキーム
スキーム１〜３に本発明の式（Ｉ）の化合物の合成を例示する。
【０２８２】
【化７５】
スキーム１は、１ａおよび２ａから式（Ｉ）の化合物を調製する収束的アプローチを示す。最終的な変換において、カルボン酸１ｄをアミン２ｃとカップリングして式（Ｉ）の化合物を得るアミド生成は、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中のＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）およびトリエチルアミンか、または２−メチルテトラヒドロフラン中のプロピルスルホン酸（ｐｒｏｐｙｌ ｓｕｌｆｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ）環状無水物（Ｔ３Ｐ（登録商標））およびピリジンを用いて実施することができる。カルボン酸１ｄは、１ａを適切なマロン酸エステル（ＣＯ２Ｒ）２ＣＨ＝ＣＨ（ＯＲ）（Ｒはメチル、エチルなどのアルキル基である）と加熱により縮合させて１ｂを得ることから始める一連の反応によって対応する置換ベンゼン誘導体１ａから調製する。
【０２８３】
化合物１ｂを、Ｄｏｗｔｈｅｒｍまたはジフェニルエーテル中での加熱還流による分子内環化（ステップｂ）、続くパラジウム触媒による脱ハロゲン化条件下での封鎖ハロ基の除去（ステップｃ）（必要なら）および酸または塩基触媒によるけん化（ステップｄ）を含む３つの一連のステップを経てカルボン酸１ｄに転換させる。脱保護ステップとけん化ステップの順番は逆にすることができる；すなわちスキーム１に示すように、ステップｃは、ステップｄの前でも後でも行うことができる。
【０２８４】
再びスキーム１を参照して、アニリン誘導体２ｃを、ニトロ化合物２ａから３つの一連のステップを経て調製することができる。したがって、トリエチルアミンの存在下での本明細書で定義する２ａの環状アミン
【０２８５】
【化７６】
とのカップリングによって化合物２ｂが提供される。パラジウム触媒による２ｂの還元によってアミン２ｃが提供される。
【０２８６】
【化７７】
スキーム２は、プロピニルアミン側鎖を担持する式（Ｉ）の化合物の合成を示す。したがって、ＤＭＳＯ中の炭酸カリウムの存在下でのニトロベンゼン２ａ（Ｈａｌはブロミド、クロリドなどである）の本明細書で定義する
【０２８７】
【化７８】
とのカップリングは化合物４を提供する。Ｎ，Ｎ−ジメチルプロパ−２−イン−１−アミンを用いた化合物４のパラジウム触媒によるカップリング、続く、鉄または亜鉛触媒によるニトロ部分の還元はアミン５を提供する。アミン５のカルボン酸１ｄとのカップリングは、式（Ｉ）の化合物である化合物６を提供する。
【０２８８】
【化７９】
スキーム３は式（Ｉ）の化合物の合成法を示す。ここで、
【０２８９】
【化８０】
は７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタンであり、任意選択で、２位にエキソまたはエンドヒドロキシ基を担持する。ヒドロキシ置換付加体（＋）−エンド−７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−オル、（−）−エンド−７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−オル、（＋）−エキソ−７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−オルおよび（−）−エキソ−７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−オルは、Ｆｌｅｔｃｈｅｒ，Ｓ．Ｒ．ら、「Ｔｏｔａｌ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ａｂｓｏｌｕｔｅ Ｃｏｎｆｉｇｕｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｅｐｉｂａｔｉｄｉｎｅ」、Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ、５９巻、１７７１〜１７７８頁（１９９４年）に記載されている手順を用いて調製することができる。７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン自体は、Ｔｙｇｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．３２４ Ｓｔｏｋｅｓ Ａｖｅｎｕｅ Ｅｗｉｎｇ、ＮＪ、０８６３８ＵＳＡから市販されている。
【０２９０】
したがって、スキーム１および２にまとめた一連の変換のように、化合物２ａのビシクロ［２．２．１］アミン７とのカップリングによって化合物８が提供される。化合物８中にヒドロキシ基が存在する場合、後続する変換の前にヒドロキシ基を保護基で保護する必要があり得る。したがって、公知の条件を用いた化合物８のｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロリドでの処理によって、保護化合物９が提供され、次いでニトロ部分を還元してアミン１０が得られる。１ｄを用いたアミド生成（スキーム３参照）およびヒドロキシ保護基の除去（必要に応じて）によって、式（Ｉ）の化合物である化合物１１が得られる。
【実施例】
【０２９１】
中間体１：４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸の調製
【０２９２】
【化８１】
ジエチル２−（（２−クロロ−５−（トリフルオロメチル）フェニルアミノ）メチレン）マロネート（１４）の調製。２−クロロ−５−（トリフルオロメチル）アニリン１２（２００ｇ、１．０２３ｍｏｌ）、ジエチル２−（エトキシメチレン）マロネート１３（２７６ｇ、１．３ｍｏｌ）およびトルエン（１００ｍＬ）を、ディーンスターク凝縮器を備えた三つ口１Ｌ丸底フラスコ中、窒素雰囲気下で混合した。溶液を撹拌しながら１４０℃に加熱し、その温度で４時間保持した。反応混合物を７０℃に冷却し、ヘキサン（６００ｍＬ）を徐々に加えた。得られたスラリーを撹拌し、室温に加温した。固体をろ取し、ヘキサン（２×４００ｍＬ）中の１０％酢酸エチルで洗浄し、次いで真空下で乾燥して白色固体（３５０ｇ、９４％収率）を所望の縮合生成物ジエチル２−（（２−クロロ−５−（トリフルオロメチル）フェニルアミノ）メチレン）マロネート１４として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６） δ １１．２８（ｄ，Ｊ＝１３．０Ｈｚ，１Ｈ），８．６３（ｄ，Ｊ＝１３．０Ｈｚ，１Ｈ），８．１０（ｓ，１Ｈ），７．８０（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｄｄ，Ｊ＝１．５，８．４Ｈｚ，１Ｈ），４．２４（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），４．１７（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），１．２７（ｍ，６Ｈ）。
【０２９３】
エチル８−クロロ−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキシレート（１５）の調製。三つ口１ＬフラスコにＤｏｗｔｈｅｒｍ（登録商標）（２００ｍＬ、８ｍＬ／ｇ）をチャージし、これを２００℃で１時間脱ガスした。溶媒を２６０℃に加熱し、ジエチル２−（（２−クロロ−５−（トリフルオロメチル）フェニルアミノ）メチレン）マロネート１４（２５ｇ、０．０７ｍｏｌ）を１０分にわたって一括チャージした。得られた混合物を２６０℃で６．５時間撹拌し、得られたエタノール副生物を蒸留により除去した。混合物を徐々に８０℃に冷却した。ヘキサン（１５０ｍＬ）を３０分間かけて徐々に加え、続いて追加の２００ｍＬのヘキサンを一括添加した。スラリーを室温になるまで撹拌した。固体をろ過し、ヘキサン（３×１５０ｍＬ）で洗浄し、次いで真空下で乾燥してエチル８−クロロ−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキシレート１５を黄褐色固体（１３．９ｇ、６５％収率）として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６） δ １１．９１（ｓ，１Ｈ），８．３９（ｓ，１Ｈ），８．０６（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），７．８１（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），４．２４（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），１．２９（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ）。
【０２９４】
エチル４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−キノリン−３−カルボキシレート（１６）の調製。三つ口５Ｌフラスコに、エチル８−クロロ−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキシレート１５（１００ｇ、０．３ｍｏｌ）、エタノール（１２５０ｍＬ、１２．５ｍＬ／ｇ）およびトリエチルアミン（２２０ｍＬ、１．６ｍｏｌ）をチャージした。次いで容器に５℃で１０ｇの１０％Ｐｄ／Ｃ（５０％ウェット）をチャージした。反応物を水素雰囲気下、５℃で２０時間強力に撹拌し、次いで反応混合物を濃縮して約１５０ｍＬの容積にした。Ｐｄ／Ｃを含むスラリーとしての生成物、エチル４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−キノリン−３−カルボキシレート１６を直接次のステップに供した。
【０２９５】
４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸（１７）の調製。エチル４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−キノリン−３−カルボキシレート１６（５８ｇ、０．２ｍｏｌ、Ｐｄ／Ｃを含む粗製反応スラリー）を、還流凝縮器を備えた１Ｌフラスコ中でＮａＯＨ（８１４ｍＬの５Ｍ、４．１ｍｏｌ）に懸濁させ、８０℃で１８時間加熱し、続いて１００℃で５時間さらに加熱した。セライト（Ｃｅｌｉｔｅ）充填物で反応物を温かい状態でろ過してＰｄ／Ｃを除去し、セライトを１Ｎ ＮａＯＨで濯いだ。ろ液を酸性化して約ｐＨ１にして濃厚な白色沈殿物を得た。沈殿物をろ過し、次いで水および冷アセトニトリルで濯いだ。次いで固体を真空下で乾燥して４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸１７を白色固体（４８ｇ、９２％収率）として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００．０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６） δ １５．２６（ｓ，１Ｈ），１３．６６（ｓ，１Ｈ），８．９８（ｓ，１Ｈ），８．１３（ｄｄ，Ｊ＝１．６，７．８Ｈｚ，１Ｈ），８．０６−７．９９（ｍ，２Ｈ）。
【０２９６】
中間体２：６−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−アミンの調製。
【０２９７】
【化８２】
無水ＣＨ３ＣＮ（１００ｍＬ）中の２，６−ジブロモピリジン（１０．０ｇ、４２．６ｍｍｏｌ）の溶液にＮＯ２＋ＢＦ４−（１１．３ｇ、８５．２ｍｍｏｌ）を徐々に加えた。反応混合物を窒素雰囲気下、８０℃で２４時間加熱した。次いで、混合物を乾燥するまで蒸発させ、シリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル中の０〜３％酢酸エチル）で精製して２，６−ジブロモ−３−ニトロピリジン（５．７ｇ、４７．９％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ ８．０３（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１ Ｈ），７．６５（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）。
【０２９８】
ＤＭＦ（４０ｍＬ）中の２，６−ジブロモ−３−ニトロピリジン（５．７ｇ、２０．４ｍｍｏｌ）の溶液にＣｕＩ（３．９ｇ、２０．４ｍｍｏｌ）およびＦＳＯ２ＣＦ２ＣＯ２Ｍｅ（４．７ｇ、２４．５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を８０℃で１時間撹拌した。室温に冷却した後、反応混合物を水（１００ｍＬ）に注加し、酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で抽出した。一緒にした有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、シリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル中の０〜３％酢酸エチル）で精製して６−ブロモ−３−ニトロ−２−（トリフルオロメチル）ピリジン（３．０ｇ、４５％収率）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ ８．１２（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１ Ｈ），７．９４（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）。
【０２９９】
アセトニトリル（３ｍＬ）中の６−ブロモ−３−ニトロ−２−（トリフルオロメチル）ピリジン（３００ｍｇ、１．１０７ｍｍｏｌ）、７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン塩酸塩（１７７．４ｍｇ、１．３２８ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（２２４．０ｍｇ、３０８．５μＬ、２．２１４ｍｍｏｌ）の溶液を８０℃で終夜加熱した。反応物を室温に冷却し、水でクエンチした。得られた沈殿物をろ過し、水で洗浄し、真空下で乾燥して７−［５−ニトロ−６−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］−７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン（３００ｍｇ、９４％収率）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００．０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６） δ ８．２７（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２０（ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ），４．７１（ｓ，２Ｈ），１．７１（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，４Ｈ），１．５５（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，４Ｈ）。
【０３００】
７−［５−ニトロ−６−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］−７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン（５３０ｍｇ、１．８４５ｍｍｏｌ）および１０％Ｐｄ／Ｃ（５３ｍｇ、０．４９８０ｍｍｏｌ）をチャージしたフラスコを窒素でフラッシュし、続いて真空をかけて排出した。不活性雰囲気下でエタノール（６ｍＬ）を加え、フラスコに水素バルーンを取り付けた。１６時間強力に撹拌した後、ろ過によりＰｄ／Ｃを除去し、減圧下で溶媒を除去した。粗製物質をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中の０〜１０％酢酸エチル）で精製して６−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−アミン（３８１ｍｇ、８０％収率）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００．０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６） δ ７．１７（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），６．９７（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），５．０３（ｓ，２Ｈ），４．２９（ｓ，２Ｈ），１．５９（ｔ，Ｊ＝３．４Ｈｚ，４Ｈ），１．３７（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，４Ｈ）。
【０３０１】
中間体３：６−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−４−メチルピリジン−３−アミンの調製。
【０３０２】
【化８３】
アセトニトリル（５ｍＬ）中の２−フルオロ−４−メチル−５−ニトロピリジン（１５０ｍｇ、０．９６０８ｍｍｏｌ）の溶液に、７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン塩酸塩（１５２．９ｍｇ、１．１５３ｍｍｏｌ）およびＥｔ３Ｎ（２４３．１ｍｇ、３３４．８μＬ、２．４０２ｍｍｏｌ）加えた。反応物を８０℃で１６時間加熱した。反応物を水（２ｍＬ）でクエンチし、溶媒を蒸発させた。残留物を酢酸エチル（１５ｍＬ）に溶解し、１Ｎ ＨＣｌ（１０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、ろ過し濃縮して６−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−４−メチルピリジン−３−アミン（１６０ｍｇ、７１％収率）を黄色固体として得た。これを精製することなく次のステップで使用した。１Ｈ ＮＭＲ（４００．０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ ８．９６（ｓ，１Ｈ），６．３７（ｓ，１Ｈ），４．５９（ｓ，２Ｈ），２．５９（ｄ，Ｊ＝０．４Ｈｚ，３Ｈ），１．８３−１．８０（ｍ，４Ｈ），１．６１−１．５４（ｍ，４Ｈ）。
【０３０３】
メタノール：酢酸エチルの１：１混合液（黄色溶液）中の６−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−４−メチルピリジン−３−アミン（１４６ｍｇ、０．６２５９ｍｍｏｌ）の溶液に１０％Ｐｄ／Ｃを加え、水素雰囲気下で２時間撹拌した。反応物を酢酸エチル（５ｍＬ）で希釈し、セライト充填物でろ過した。ろ液を乾燥するまで濃縮してアニリンを黄色固体（１２０ｍｇ、９４％収率）として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００．０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ ７．６８（ｓ，１Ｈ），６．５０（ｓ，１Ｈ），４．３４−４．３１（ｍ，２Ｈ），３．２０（ｓ，２Ｈ），２．１４（ｓ，３Ｈ），１．７８−１．７５（ｍ，４Ｈ），１．４４−１．３９（ｍ，４Ｈ）。
【０３０４】
実施例化合物２：Ｎ−（６−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル）−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミド（化合物２、表１）の調製。
【０３０５】
【化８４】
２−メチルテトラヒドロフラン（１．０ｍＬ）中の４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−キノリン−３−カルボン酸（１００ｍｇ、０．３８８９ｍｍｏｌ）および６−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−アミン（１１０．１ｍｇ、０．４２７８ｍｍｏｌ）の溶液に、プロピルホスホン酸環状無水物（酢酸エチル中の５０％溶液、４９５．０μＬ、０．７７７８ｍｍｏｌ）およびピリジン（６１．５２ｍｇ、６２．９０μＬ、０．７７７８ｍｍｏｌ）を加えた。反応物をキャップし、６０℃で１６時間加熱した。反応物を室温に冷却し、酢酸エチル（１０ｍＬ）で希釈し、飽和Ｎａ２ＣＯ３溶液（６ｍＬ）でクエンチした。２０分間撹拌した後、有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、ろ過し、濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィー（ジクロロメタン中の０〜２０％酢酸エチル）で精製してＮ−（６−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル）−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミド（１３７ｍｇ、７１％収率）を得た。ＬＣ／ＭＳ ｍ／ｚ ４９７．５［Ｍ＋Ｈ］＋、保持時間１．９２分間（ＲＰ−Ｃ１８、１０〜９９％ＣＨ３ＣＮ／０．０５％ＴＦＡ、３分間で）。
【０３０６】
ジクロロメタン（２ｍＬ）およびメタノール（１ｍＬ）の中のＮ−［６−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）−３−ピリジル］−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−キノリン−３−カルボキサミド（１３０ｍｇ、０．２６１９ｍｍｏｌ）の溶液に、エーテル中の２Ｍ ＨＣｌ（１３１．０μＬ、２Ｍ、０．２６１９ｍｍｏｌ）を窒素雰囲気下で滴下した。反応は、懸濁液から透明な溶液になった。この溶液を２０分間撹拌すると塩酸塩の沈殿物が得られた。懸濁液をジエチルエーテルで希釈し、２時間撹拌した。この塩をろ過し、ジエチルエーテルで洗浄してＮ−［６−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）−３−ピリジル］−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−キノリン−３−カルボキサミド塩酸塩（１３３ｍｇ、９５％収率）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００．０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６） δ １３．２３（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），１２．２２（ｓ，１Ｈ），８．８８（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，１Ｈ），８．２３（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），８．０６（ｄｄ，Ｊ＝２．１，７．２Ｈｚ，１Ｈ），７．９６−７．９０（ｍ，２Ｈ），７．２２（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ），４．５２（ｓ，２Ｈ），１．６８（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，４Ｈ），１．４７（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，４Ｈ）。
【０３０７】
実施例化合物１：Ｎ−（６−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−４−メチルピリジン−３−イル）−５−メチル−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミド塩酸塩（化合物１、表１）の調製。
【０３０８】
【化８５】
２−メチルテトラヒドロフラン（１ｍＬ）中の５−メチル−４−オキソ−１Ｈ−キノリン−３−カルボン酸（６０ｍｇ、０．２９５３ｍｍｏｌ）および６−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−４−メチル−ピリジン−３−アミン（６０．０３ｍｇ、０．２９５３ｍｍｏｌ）の溶液に、プロピルホスホン酸環状無水物（３７５．８μＬ、５０重量／容積％、０．５９０６ｍｍｏｌ）を加え、続いてピリジン（４６．７２ｍｇ、４７．７７μＬ、０．５９０６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物に、マイクロ波条件下、１００℃で１時間照射した。粗製反応混合物を酢酸エチル（２ｍＬ）で希釈し、１０％ＮａＨＣＯ３溶液（３ｍＬ）でクエンチした。得られた沈殿物をろ過し、酢酸エチル（５ｍＬ）で洗浄した。固体を、２０％Ｎａ２ＣＯ３（５ｍＬ）／メタノール水溶液（２ｍＬ）に再懸濁し、３０分間撹拌した。固体をろ過し、水で濯ぎ、空気乾燥してＮ−（６−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−４−メチルピリジン−３−イル）−５−メチル−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミド（３０ｍｇ、２６％収率）を得た。ＬＣ／ＭＳ ｍ／ｚ ３８９．４［Ｍ＋Ｈ］＋、保持時間１．３３分間（ＲＰ−Ｃ１８、１０〜９９％ＣＨ３ＣＮ／０．０５％ＴＦＡ、３分間で）。
【０３０９】
Ｎ−（６−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−４−メチルピリジン−３−イル）−５−メチル−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミドをメタノール（２ｍＬ）に溶解し、エーテル中の２Ｍ ＨＣｌ（２９５．３μＬ、２Ｍ、０．５９０６ｍｍｏｌ）で処理した。溶液を蒸発させてＮ−（６−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−４−メチルピリジン−３−イル）−５−メチル−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミド塩酸塩を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００．０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６） δ １２．７１（ｓ，１Ｈ），１２．１２（ｓ，１Ｈ），８．７８（ｓ，１Ｈ），８．７４（ｓ，１Ｈ），７．６３−７．５９（ｍ，１Ｈ），７．５４（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），７．２２（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ），６．８１（ｓ，１Ｈ），４．４４（ｓ，２Ｈ），２．９１（ｓ，３Ｈ），２．２８（ｓ，３Ｈ），１．６５（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，４Ｈ），１．４２（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，４Ｈ）。
【０３１０】
表１の化合物の分析データを以下の表２に示す：
【０３１１】
【表２】
化合物のΔＦ５０８−ＣＦＴＲ増強特性を検出し測定するためのアッセイ
化合物のΔＦ５０８−ＣＦＴＲ調節特性をアッセイするための膜電位の光学的方法
このアッセイでは、蛍光プレートリーダー（例えば、ＦＬＩＰＲ ＩＩＩ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ、Ｉｎｃ．）を用いて、ＮＩＨ３Ｔ３細胞における機能性ΔＦ５０８−ＣＦＴＲの増大についての読出しとして膜電位の変化を測定するために、蛍光性の電圧感受性染料を使用する。その応答のための推進力は、細胞を前もってその化合物で処理しておき続いて電圧感受性染料をロードした後に液体を１回添加するステップによる、チャンネル活性化と合わせた塩素イオン勾配の生成である。
【０３１２】
増強化合物の特定
ΔＦ５０８−ＣＦＴＲの増強物質を特定するために、二重付加（ｄｏｕｂｌｅ−ａｄｄｉｔｉｏｎ）ＨＴＳアッセイ方式を開発した。このＨＴＳアッセイでは、ＦＬＩＰＲ ＩＩＩ上での膜電位の変化を測定するために、温度補正されたΔＦ５０８ＣＦＴＲ ＮＩＨ３Ｔ３細胞のΔＦ５０８ＣＦＴＲにおけるゲート開閉（コンダクタンス）の増大の測定として、蛍光性の電圧感受性染料を使用する。その応答のための推進力は、細胞を前もって増強化合物（またはＤＭＳＯ媒体対象）で処理しておき続いて再分配染料をロードした後に、ＦＬＩＰＲ ＩＩＩなどの蛍光プレートリーダーを用いた液体を１回添加するステップによる、ホルスコリンでのチャンネル活性化と合わせたＣｌ−イオン勾配の生成である。
【０３１３】
溶液
浴溶液＃１：（ｍＭで）ＮａＣｌ １６０、ＫＣｌ ４．５、ＣａＣｌ２ ２、ＭｇＣｌ２ １、ＨＥＰＥＳ １０、ＮａＯＨでｐＨ７．４。
【０３１４】
塩素イオンフリーの浴溶液：浴溶液＃１の塩酸塩をグルコン酸塩で置き換える。
【０３１５】
細胞培養
ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを安定的に発現するＮＩＨ３Ｔ３マウス線維芽細胞を、膜電位の光学的測定のために使用する。細胞を、１７５ｃｍ２培養フラスコ中、５％ＣＯ２、９０％湿度、３７℃で２ｍＭグルタミン、１０％ウシ胎仔血清、１Ｘ ＮＥＡＡ、β−ＭＥ、１Ｘ ｐｅｎ／ｓｔｒｅｐおよび２５ｍＭ ＨＥＰＥＳを含むダルベッコ変法イーグル培地中で保持する。すべての光学的アッセイについて、細胞を、３８４ウェルのマトリゲルコーティングしたプレート中、約２０，０００／ウェルで播種し、３７℃で２時間培養し、次いで増強物質アッセイのために２７℃で２４時間培養した。補正アッセイのため、細胞を、化合物を用いるかまたは用いないで２７℃または３７℃で１６〜２４時間培養する。化合物のΔＦ５０８−ＣＦＴＲ調節特性をアッセイするための電気生理学的アッセイ
１．Ｕｓｉｎｇチャンバーアッセイ
光学的アッセイで特定されたΔＦ５０８−ＣＦＴＲ修飾因子をさらに特性評価するために、Ｕｓｉｎｇチャンバー実験を、ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを発現する分極した気道上皮細胞で実施した。非ＣＦおよびＣＦ気道上皮を、気管支組織から単離し、従来記載されているようにして培養し（Ｇａｌｉｅｔｔａ，Ｌ．Ｊ．Ｖ．、Ｌａｎｔｅｒｏ，Ｓ．、Ｇａｚｚｏｌｏ，Ａ．、Ｓａｃｃｏ，Ｏ．、Ｒｏｍａｎｏ，Ｌ．、Ｒｏｓｓｉ，Ｇ．Ａ．、＆ Ｚｅｇａｒｒａ−Ｍｏｒａｎ，Ｏ．（１９９８年）Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ｃｅｌｌ． Ｄｅｖ． Ｂｉｏｌ． ３４巻、４７８〜４８１頁）、ＮＩＨ３Ｔ３馴化培地でプレコートしたＣｏｓｔａｒ（登録商標）Ｓｎａｐｗｅｌｌ（商標）フィルター上に播種した。４日後、頂端培地を除去し、使用前に、細胞を気液界面で＞１４日間成長させた。これによって、気道上皮の特徴である線毛状の見かけをもつ十分に分化した円柱状細胞の単分子層が得られた。非ＣＦ ＨＢＥを、既知の肺疾患を全くもたない非喫煙者から単離した。ＣＦ−ＨＢＥを、ΔＦ５０８−ＣＦＴＲについてホモ接合性の患者から単離した。
【０３１６】
Ｃｏｓｔａｒ（登録商標）Ｓｎａｐｗｅｌｌ（商標）細胞培養インサート上で成長させたＨＢＥをＵｓｉｎｇチャンバー（Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｉｎｃ．、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）に取り付け、経上皮抵抗および短絡回路電流を、側底から頂端膜へのＣｌ−勾配（ＩＳＣ）の存在下で、電圧固定システム（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｉｏｗａ、ＩＡ）を用いて測定した。簡単に述べると、電圧固定記録条件（Ｖｈｏｌｄ＝０ｍＶ）のもと、３７℃でＨＢＥを試験した。側底溶液は、（ｍＭで）１４５ ＮａＣｌ、０．８３ Ｋ２ＨＰＯ４、３．３ ＫＨ２ＰＯ４、１．２ ＭｇＣｌ２、１．２ ＣａＣｌ２、１０ グルコース、１０ ＨＥＰＥＳ（ＮａＯＨでｐＨ７．３５に調節）を含み、頂端溶液は、（ｍＭで）１４５ ＮａＧｌｕｃｏｎａｔｅ、１．２ ＭｇＣｌ２、１．２ ＣａＣｌ２、１０ グルコース、１０ ＨＥＰＥＳ（ＮａＯＨでｐＨ７．３５に調節）を含んだ。
【０３１７】
増強化合物の特定
典型的な手順では、側底から頂端膜へのＣｌ−濃度勾配を用いた。
この勾配を設定するために、側底膜で通常のリンガー液を用いて、頂端ＮａＣｌを等モルのグルコン酸ナトリウム（ＮａＯＨでｐＨ７．４まで滴定）で置き換えて、上皮を横断して大きなＣｌ−濃度勾配を得た。ホルスコリン（１０μＭ）およびすべての試験化合物を細胞培養インサートの頂端側に加えた。推定ΔＦ５０８−ＣＦＴＲ増強物質の効力を既知の増強物質、ゲニステインのそれと比較した。
【０３１８】
２．パッチクランプ記録
ΔＦ５０８−ＮＩＨ３Ｔ３細胞における全Ｃｌ−電流を、従来記載されているような多孔パッチ記録構成（ｐｅｒｆｏｒａｔｅｄ−ｐａｔｃｈ ｒｅｃｏｒｄｉｎｇ ｃｏｎｆｉｇｕｒａｔｉｏｎ）でモニターした（Ｒａｅ，Ｊ．、Ｃｏｏｐｅｒ，Ｋ．、Ｇａｔｅｓ，Ｐ．、＆ Ｗａｔｓｋｙ，Ｍ．（１９９１年）Ｊ． Ｎｅｕｒｏｓｃｉ． Ｍｅｔｈｏｄｓ ３７巻、１５〜２６頁）。電圧固定記録をＡｘｏｐａｔｃｈ ２００Ｂパッチクランプ増幅器（Ａｘｏｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｉｎｃ．、Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ、ＣＡ）を用いて２２℃で実施した。ピペット溶液は、（ｍＭで）１５０Ｎ−メチル−Ｄ−グルタミン（ＮＭＤＧ）−Ｃｌ、２ ＭｇＣｌ２、２ ＣａＣｌ２、１０ ＥＧＴＡ、１０ ＨＥＰＥＳおよび２４０μｇ／ｍＬアンフォテリシン−Ｂ（ＨＣｌでｐＨ７．３５に調節）を含んだ。細胞外培地は、（ｍＭで）１５０ ＮＭＤＧ−Ｃｌ、２ ＭｇＣｌ２、２ ＣａＣｌ２、１０ ＨＥＰＥＳ（ＨＣｌでｐＨ７．３５に調節）を含んだ。パルス発生、データ取得および分析を、Ｃｌａｍｐｅｘ８（Ａｘｏｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｉｎｃ．）と一緒にＤｉｇｉｄａｔａ１３２０Ａ／Ｄインターフェースを備えたＰＣを用いて実施した。ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを活性化させるために、１０μＭホルスコリンおよび２０μＭゲニステインを浴に加え、電流−電圧の関係を３０秒毎にモニターした。
【０３１９】
増強化合物の特定
ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを安定的に発現するＮＩＨ３Ｔ３細胞において巨視的なΔＦ５０８−ＣＦＴＲ Ｃｌ−電流（ＩΔＦ５０８）を増大させるΔＦ５０８−ＣＦＴＲ増強物質の能力を、やはり多孔パッチ記録手法を用いて試験した。光学的アッセイにより特定された増強物質は、光学的アッセイで観察されたのと同様の効力および効能でＩΔＦ５０８における用量依存的な増加を引き起こした。試験したすべての細胞において、増強物質を適用する前またはその間の逆転電位はおおよそ−３０ｍＶであった。これは計算されたＥＣｌ（−２８ｍＶ）である。
【０３２０】
細胞培養
ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを安定的に発現するＮＩＨ３Ｔ３マウス線維芽細胞をホールセル記録用に使用する。細胞を、１７５ｃｍ２培養フラスコ中、５％ＣＯ２、９０％湿度、３７℃で２ｍＭグルタミン、１０％ウシ胎仔血清、１Ｘ ＮＥＡＡ、β−ＭＥ、１Ｘ ｐｅｎ／ｓｔｒｅｐおよび２５ｍＭ ＨＥＰＥＳを含むダルベッコ変法イーグル培地中で保持する。ホールセル記録のため、増強物質の活性を試験する前に、２，５００〜５，０００個の細胞をポリ−Ｌ−リシンコーティングしたガラスのカバースリップ上に播種し、２７℃で２４〜４８時間培養し；補正物質（ｃｏｒｒｅｃｔｏｒ）の活性を測定するために補正化合物を含むか含まないで３７℃でインキュベートした。
【０３２１】
３．単一チャンネル記録
ＮＩＨ３Ｔ３細胞において発現されたｗｔ−ＣＦＴＲおよび温度修正ΔＦ５０８−ＣＦＴＲのゲート開閉活性を、Ａｘｏｐａｔｃｈ２００Ｂパッチクランプ増幅器（Ａｘｏｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｉｎｃ．）を使用して、従来記載されているような切取りインサイドアウト型膜パッチ記録法（Ｄａｌｅｍａｎｓ，Ｗ．、Ｂａｒｂｒｙ，Ｐ．、Ｃｈａｍｐｉｇｎｙ，Ｇ．、Ｊａｌｌａｔ，Ｓ．、Ｄｏｔｔ，Ｋ．、Ｄｒｅｙｅｒ，Ｄ．、Ｃｒｙｓｔａｌ，Ｒ．Ｇ．、Ｐａｖｉｒａｎｉ，Ａ．、Ｌｅｃｏｃｑ，Ｊ−Ｐ．、Ｌａｚｄｕｎｓｋｉ，Ｍ．（１９９１年）Ｎａｔｕｒｅ ３５４巻、５２６〜５２８頁）を用いて観察した。ピペットは、（ｍＭで）：１５０ ＮＭＤＧ、１５０ アスパラギン酸、５ ＣａＣｌ２、２ ＭｇＣｌ２および １０ ＨＥＰＥＳ（トリス塩基でｐＨ７．３５に調節）を含んだ。その浴は、（ｍＭで）：１５０ ＮＭＤＧ−Ｃｌ、２ ＭｇＣｌ２、５ ＥＧＴＡ、１０ ＴＥＳおよび １４ トリス塩基（ＨＣｌでｐＨ７．３５に調節）を含んだ。切取りの後、タンパク質ホスファターゼを阻害するために１ｍＭ Ｍｇ−ＡＴＰ、７５ｎＭのｃＡＭＰ依存性タンパク質キナーゼの触媒サブユニット（ＰＫＡ；Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐ．Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）および１０ｍＭ ＮａＦを加えることによってｗｔ−ＣＦＴＲとΔＦ５０８−ＣＦＴＲの両方を活性化させた。これは電流の低下を防止した。ピペット電位を８０ｍＶに保持した。チャンネル活性を、≦２の活性チャンネルを含む膜パッチから分析した。同時開放の最大数が実験の過程の間の活性チャンネルの数を決定した。単一のチャンネル電流振幅を判定するために、１２０秒間のΔＦ５０８−ＣＦＴＲ活性から記録されたデータを１００Ｈｚで「オフライン」フィルターにかけ、次いで、Ｂｉｏ−Ｐａｔｃｈ分析ソフトウェア（Ｂｉｏ−Ｌｏｇｉｃ Ｃｏｍｐ．Ｆｒａｎｃｅ）を用いて、多重ガウス関数で当てはめた全点振幅ヒストグラムを構築するために使用した。全微視的電流および開確率（Ｐｏ）を１２０秒間のチャンネル活性から判定した。Ｐｏを、Ｂｉｏ−Ｐａｔｃｈソフトウェアを用いるか、または関係式Ｐｏ＝Ｉ／ｉ（Ｎ）（Ｉ＝平均電流、ｉ＝単一チャンネル電流振幅であり、Ｎ＝パッチにおける活性チャンネルの数である）から判定した。
【０３２２】
細胞培養
ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを安定的に発現するＮＩＨ３Ｔ３マウス線維芽細胞を、切取り膜パッチクランプ記録用に使用する。細胞を、１７５ｃｍ２培養フラスコ中、５％ＣＯ２、９０％湿度、３７℃で２ｍＭグルタミン、１０％ウシ胎仔血清、１Ｘ ＮＥＡＡ、β−ＭＥ、１Ｘ ｐｅｎ／ｓｔｒｅｐおよび２５ｍＭ ＨＥＰＥＳを含むダルベッコ変法イーグル培地中で保持する。単一チャンネル記録のため、２，５００〜５，０００個の細胞をポリ−Ｌ−リシンコーティングしたガラスのカバースリップ上に播種し、２７℃で２４〜４８時間培養して使用した。
【０３２３】
本発明の化合物はＡＴＰ結合カセットトランスポーターの修飾因子として有用である。式（Ｉ）の化合物の活性および効力の例を以下の表３に示す。化合物の活性を、活性が２．０μ未満と測定された場合「＋＋＋」で示し、活性が２μＭ〜５．０μＭと測定された場合「＋＋」で示し、活性が５．０μＭ超と測定された場合「＋」で示し、データが得られなかった場合「−」で示す。効能を、効能が１００％超と算出された場合「＋＋＋」で示し、効能が１００％〜２５％と算出された場合「＋＋」で示し、効能が２５％未満と算出された場合「＋」で示し、データが得られなかった場合「−」で示す。１００％の効能は４−メチル−２−（５−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノールで得られた最大応答であることに留意すべきである。
【０３２４】
【表３】
【技術分野】
【０００１】
関連出願への相互参照
本出願は、２００８年１０月２３日出願の「ＭＯＤＵＬＡＴＯＲＳ ＯＦ ＣＹＳＴＩＣ ＦＩＢＲＯＳＩＳ ＴＲＡＮＳＭＥＭＢＲＡＮＥ ＣＯＮＤＵＣＴＡＮＣＥ ＲＥＧＵＬＡＴＯＲ」と題された米国仮特許出願番号６１／１０７，８４４号に対して米国特許法の１１９条における優先権の利益を主張し、その全体の内容が本明細書中で参考として援用される。
【０００２】
本発明は、嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子（「ＣＦＴＲ」）の修飾因子、その組成物およびそれを用いる方法に関する。本発明は、ＣＦＴＲの修飾因子を使用して疾患を治療する方法にも関する。
【背景技術】
【０００３】
ＡＴＰカセットトランスポーターは、様々な薬剤、潜在的に有毒性の薬物および生体異物ならびにアニオンの輸送を制御する膜トランスポータータンパク質のファミリーである。それらは、特異的な活性のために、細胞のアデノシン三リン酸（ＡＴＰ）と結合し、それを用いる同種の膜タンパク質である。これらのトランスポーターのいくつかは、化学療法剤に対して悪性癌細胞を防御する多剤耐性タンパク質（ＭＤＲ１−Ｐ糖タンパク質または多剤耐性タンパク質、ＭＲＰ１のような）として発見された。これまで、４８個のそうしたトランスポーターが特定されており、その配列同一性および機能に基づいて７つのファミリーにグループ分けされている。
【０００４】
疾患と一般に関係するＡＴＰカセットトランスポーターのファミリーの１つのメンバーは、ｃＡＭＰ／ＡＴＰ媒介陰イオンチャンネル、ＣＦＴＲである。ＣＦＴＲは、膜を貫通するアニオンフラックス、ならびに他のイオンチャンネルおよびタンパク質の活性をそれが制御する吸収上皮および分泌上皮細胞を含む様々な細胞型において発現される。上皮細胞では、ＣＦＴＲが正常に機能することは、呼吸および消化組織を含む体全体で、電解質輸送を維持するのに重要である。ＣＦＴＲは、それぞれが６つの膜貫通らせんと１つのヌクレオチド結合ドメインを含む膜貫通ドメインの縦列反復で構成されたタンパク質をコードする約１４８０個のアミノ酸を含む。その２つの膜貫通ドメインは、チャンネル活性および細胞輸送を制御する複数のリン酸化部位を有する大きな極性の制御（Ｒ）ドメインによって連結されている。
【０００５】
ＣＦＴＲをコードする遺伝子は特定されており、その配列は決定されている（非特許文献１；非特許文献２、非特許文献３を参照されたい）。この遺伝子の欠陥は、ＣＦＴＲにおける変異を引き起こして、ヒトにおける最も一般的な致命的遺伝的疾患である嚢胞性線維症（「ＣＦ」）をもたらす。米国において、幼児２，５００人に約１人が嚢胞性線維症を発症している。米国の全人口のうちの１０００万に及ぶ人が、明らかな病的影響なしで、欠陥遺伝子の単一コピーを担持している。その一方、ＣＦ関連遺伝子の２つのコピーを有する個体は、慢性肺疾患を含むＣＦの身体を衰弱させる致命的な影響に苦しんでいる。
【０００６】
嚢胞性線維症を有する患者においては、呼吸上皮で内因的に発現したＣＦＴＲにおける変異は頂端アニオン分泌の低下をもたらし、イオンおよび液輸送における不均衡を引き起こす。結果としてのアニオン輸送の低下は、肺における粘液蓄積の増進と付随する微生物感染をもたらし、これは最終的にＣＦ患者を死に至らしめる。呼吸器系疾患に加えて、ＣＦ患者は一般に、胃腸障害および膵機能不全に苦しみ、もし治療されないままでいたら死に至る。さらに、嚢胞性線維症を有する男性の大部分は不妊性であり、嚢胞性線維症を有する女性では受胎能力が低下する。ＣＦ関連遺伝子の２つのコピーの深刻な影響とは対照的に、ＣＦ関連遺伝子の単一のコピーを有する個体は、コレラおよび下痢によってもたらされる脱水に対して高い耐性を示し、これはおそらく、個体群内においてＣＦ遺伝子が比較的高い頻度で存在することを説明している。
【０００７】
ＣＦ染色体のＣＦＴＲ遺伝子の配列分析によれば、様々な病原性の変異が解明されている（非特許文献４；非特許文献５；および非特許文献６；非特許文献７）。これまで、１０００を超える、ＣＦ遺伝子における病原性の変異が確認されている（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｅｎｅｔ．ｓｉｃｋｋｉｄｓ．ｏｎ．ｃａ／ｃｆｔｒ／）。最も多く見られる変異は、ＣＦＴＲアミノ酸配列の５０８位におけるフェニルアラニンの欠失であり、一般にこれはΔＦ５０８−ＣＦＴＲと称される。この変異は、嚢胞性線維症の症例の約７０％において起こり、重症疾患と関係している。
【０００８】
ΔＦ５０８−ＣＦＴＲにおける残基５０８の欠失は、新生タンパク質が正確に折りたたまれるのを妨げる。その結果、変異タンパク質がＥＲを出て原形質膜へ移動することができなくなる。結果として膜の中に存在するチャンネルの数は、野生型ＣＦＴＲを発現する細胞において見られる数よりずっと少なくなる。輸送障害に加えて、この変異はチャンネルゲート開閉の欠陥をもたらす。膜におけるチャンネル数の減少とチャンネルゲート開閉の欠陥が一緒になって、上皮を貫通するアニオン輸送の低下をもたらし、イオンおよび液輸送の欠陥をもたらす。（非特許文献８）。しかし、研究によれば、膜中でのΔＦ５０８−ＣＦＴＲの数の減少は、野生型ＣＦＴＲより少ないにしても、有効であることが示されている（非特許文献９；Ｄｅｎｎｉｎｇら、上記；非特許文献１０）。ΔＦ５０８−ＣＦＴＲ、Ｒ１１７Ｈ−ＣＦＴＲおよびＧ５５１Ｄ−ＣＦＴＲに加えて、輸送、合成および／またはチャンネルゲート開閉の欠陥をもたらすＣＦＴＲにおける他の病原性の変異は、上方制御または下方制御されて、アニオン分泌を変え、疾患の増悪および重症度を改変する可能性がある。
【０００９】
ＣＦＴＲは、アニオンに加えて様々な分子を輸送するが、この役割（アニオン、塩素イオンおよび重炭酸塩イオンの輸送）は、上皮を貫通してイオンおよび水を輸送する重要な機序における１つの要素を表していることは明らかである。他の要素には、細胞中への塩素イオンの取込みに関係する、上皮のＮａ＋チャンネル、ＥＮａＣ、Ｎａ＋／２Ｃｌ−／Ｋ＋コトランスポーター、Ｎａ＋−Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅポンプおよび側底膜Ｋ＋チャンネルが含まれる。
【００１０】
これらの要素は一緒になって、細胞内でのその選択的な発現および局在化によって、上皮を貫通する一定方向の輸送を実現するように作用する。塩素イオン吸収は、頂端膜に存在するＥＮａＣおよびＣＦＴＲの協調活性と、細胞の側底面で発現されるＮａ＋−Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅポンプおよびＣｌチャンネルによって起こる。腔側からの塩素イオンの二次的能動輸送は、細胞内塩素イオンの蓄積をもたらし、次いでこれは、Ｃｌ−イオンチャンネルを介して受動的に細胞から離れ、一定方向の輸送をもたらすことができる。側底面上のＮａ＋／２Ｃｌ−／Ｋ＋コトランスポーター、Ｎａ＋−Ｋ＋−ＡＴＰａｓｅポンプおよび側底膜Ｋ＋チャンネルと腔側上のＣＦＴＲの配置は、腔側上のＣＦＴＲを介して塩素イオンの分泌を調整する。水はおそらくそれ自体能動的に輸送されないので、上皮を貫通するその流れは、ナトリウムおよび塩素イオンのバルクフローによってもたらされる微小な経上皮浸透勾配に依存する。
【００１１】
ＣＦＴＲにおける変異に起因する重炭酸塩イオン輸送の欠陥は、特定の分泌機能における欠陥を引き起こすと仮定される。例えば、非特許文献１１を参照されたい。
【００１２】
中程度のＣＦＴＲ機能不全に関係するＣＦＴＲにおける変異は、ＣＦとある種の疾患症状を共有するがＣＦの診断基準に当てはまらない状態を有する患者においても明らかである。これらの疾患には、先天性両側性輸精管欠損、特発性慢性膵炎、慢性気管支炎および慢性鼻副鼻腔炎が含まれる。変異体ＣＦＴＲが、変更遺伝子または環境因子と共に危険因子であると考えられる他の疾患には、原発性硬化性胆管炎、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症およびぜんそくが含まれる。
【００１３】
たばこの煙、低酸素および低酸素シグナル伝達を誘発する環境因子はＣＦＴＲ機能を損なうことも実証されており、慢性気管支炎などの特定の形態の呼吸器系疾患の原因となる可能性がある。ＣＦＴＲ機能の欠陥に起因するがＣＦの診断基準に当てはまらない疾患は、ＣＦＴＲ関連疾患と位置付けられる。
【００１４】
嚢胞性線維症に加えて、ＣＦＴＲ活性の調節は、ＣＦＴＲによって媒介される分泌性疾患および他のタンパク質折りたたみ（不全）疾患などの、ＣＦＴＲにおける変異によっては直接引き起こされない他の疾患に有益であり得る。ＣＦＴＲは、多くの細胞の上皮を貫通する塩素イオンおよび重炭酸塩イオンフラックスを制御して、流体運動、タンパク質可溶化、粘液粘度および酵素活性をコントロールする。ＣＦＴＲにおける欠陥は、気道または肝臓および膵臓を含む多くの器官中の導管の閉塞を引き起こす恐れがある。増強物質は、細胞膜中に存在するＣＦＴＲのゲート開閉活性を増進させる化合物である。粘液の濃厚化、流体制御障害、粘液クリアランス障害、または炎症および組織破壊をもたらす導管閉塞に関係するどの疾患も、増強物質の候補である可能性がある。
【００１５】
それらには、これらに限定されないが、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、ぜんそく、喫煙誘発性ＣＯＰＤ、慢性気管支炎、鼻副鼻腔炎、便秘、ドライアイ疾患およびシェーグレン症候群、胃食道逆流症、胆石、直腸脱および炎症性大腸炎が含まれる。ＣＯＰＤは、漸進的であり、完全には可逆的ではない空気流制限を特徴とする。空気流制限は、粘液分泌過多、肺気腫および細気管支炎に起因する。変異体または野生型ＣＦＴＲの活性化因子は、ＣＯＰＤによくある粘液分泌過多および粘膜毛様体クリアランス障害の治療の可能性を提供する。具体的には、ＣＦＴＲを貫通するアニオン分泌の増大は、気道表面液中への液輸送を容易にし、粘液に潤いを与え、繊毛周囲流体の粘度を最適化することができる。これは、粘膜毛様体クリアランスの増進と、ＣＯＰＤに伴う症状の減退をもたらすことになる。さらに、気道クリアランスの向上に起因して進行中の感染症および炎症を阻止することによって、ＣＦＴＲ修飾因子は、肺気腫を特徴づける気道の実質性（ｐａｒｅｎｃｈｉｍａｌ）破壊を防止または遅延させ、かつ、気道疾患における粘液分泌過多のもとにある（ｕｎｄｅｒｌｙｓｅｓ）、粘液を分泌する細胞の数およびサイズを減少または逆転させることができる。ドライアイ疾患は、涙液産生の減少ならびに異常な涙液膜脂質、タンパク質およびムチンプロファイルを特徴とする。ドライアイには多くの原因があり、そのいくつかには、年齢、レーシック眼科手術、関節炎、薬物療法、化学火傷／熱傷、アレルギーならびに嚢胞性線維症およびシェーグレン症候群などの疾患が含まれる。ＣＦＴＲを介したアニオン分泌の増大は、角膜内皮細胞および目の周囲の分泌腺からの流輸送を増進させ、角膜の潤いを高める。これは、ドライアイ疾患に伴う症状を緩和する助けとなる。シェーグレン症候群は、免疫系が、目、口、皮膚、呼吸組織、肝臓、膣および腸を含む体全体の水分生成腺を攻撃する自己免疫疾患である。その症状には、ドライアイ、口および膣ならびに肺の疾患が含まれる。この疾患（シェーグレン症候群）は、関節リウマ、全身性狼瘡、全身性硬化症、多発性筋炎（ｐｏｌｙｍｙｐｏｓｉｔｉｓ）／皮膚筋炎にも関係する。タンパク質輸送の欠陥は、それに対する治療法の選択肢が限定される疾患を引き起こすと考えられている。ＣＦＴＲ活性の修飾因子は、病気にかかっている様々な器官に潤いを与えることができ、随伴する症状を軽減する助けとなり得る。嚢胞性線維症を有する個体は、腸閉塞の再発エピソード、および直腸脱（ｒｅｃｔａｌ ｐｏｌａｐｓｅ）、胆石、胃食道逆流症、ＧＩ悪性腫瘍および炎症性大腸炎のより高い発生率を有しており、これは、ＣＦＴＲ機能がそうした疾患を予防するのに重要な役割を果たせることを示唆している。
【００１６】
上記で論じたように、ΔＦ５０８−ＣＦＴＲにおける残基５０８の欠失は、新生タンパク質が正確に折りたたまれるのを妨げ、この変異タンパク質がＥＲを出て原形質膜へ移動できないようにすると考えられる。結果として、不十分な量の成熟タンパク質しか原形質膜に存在せず、上皮組織内の塩素イオン輸送は著しく低下する。実際に、ＥＲ機構によるＣＦＴＲのＥＲプロセッシングの欠陥のこの細胞現象は、ＣＦ疾患だけでなく、広範囲の孤立性で遺伝性の疾患の基礎にあることが示されている。ＥＲ機構が正常に機能しない可能性のある２つの仕方は、分解に至るタンパク質のＥＲ搬出との連関の喪失によるか、または、これらの欠陥のある／ミスフォールドしたタンパク質のＥＲ蓄積によるものである［非特許文献１２；非特許文献１３；非特許文献１４；非特許文献１５；非特許文献１６］。ＥＲ機能不全の第１の部類と関係する疾患は、嚢胞性線維症（上記で論じたようなミスフォールドしたΔＦ５０８−ＣＦＴＲに起因する）、遺伝性肺気腫（ａ１−抗トリプシン；非Ｐｉｚ変異体に起因する）、遺伝性ヘモクロマトーシス、凝固−線維素溶解性欠乏症、例えばプロテインＣ欠乏症、１型遺伝性血管性浮腫、脂質プロセッシング欠乏症、例えば家族性高コレステロール血症、１型乳糜血症、無βリポタンパク血症、リソソーム蓄積症、例えばＩ細胞病／偽ハーラー、ムコ多糖症（リソソームプロセッシング酵素に起因する）、サンドホフ／テイサックス（β−ヘキソサミニダーゼに起因する）、クリグラーナジャーＩＩ型（ＵＤＰ−グルクロニル−シアリック−トランスフェラーゼに起因する）、多腺性内分泌障害／高インスリン血（ｈｙｐｅｒｉｎｓｕｌｅｍｉａ）、真性糖尿病（インスリン受容体に起因する）、ラロン型小人症（成長ホルモン受容体に起因する）、ミエロペルオキシダーゼ欠損症（ｍｙｌｅｏｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ）、原発性甲状腺機能低下症（プレプロ副甲状腺ホルモンに起因する）、メラノーマ（チロシナーゼに起因する）である。ＥＲ機能不全の後者の部類と関係する疾患は、グリカン糖鎖異常ＣＤＧ１型、遺伝性肺気腫（α１−抗トリプシン（ＰｉＺ変異体、）に起因する、先天性甲状腺機能亢進症、骨形成不全症（Ｉ型、ＩＩ型、ＩＶ型プロコラーゲンに起因する）、遺伝性低フィブリノゲン血症（フィブリノゲンに起因する）、ＡＣＴ欠乏症（α１−抗キモトリプシンに起因する）、尿崩症（ＤＩ）、ニューロフィシン性ＤＩ（バソプレシンホルモン（ｖａｓｏｐｖｅｓｓｉｎ ｈｏｒｍｏｎｅ）／Ｖ２−受容体に起因する）、腎性（ｎｅｐｒｏｇｅｎｉｃ）ＤＩ（アクアポリンＩＩに起因する）、シャルコーマリートゥース病（末梢ミエリンタンパク質２２に起因する）、ペリツェウスメルツバッハー病（Ｐｅｒｌｉｚａｅｕｓ−Ｍｅｒｚｂａｃｈｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ）、神経変性疾患、例えばアルツハイマー病（βＡＰＰおよびプレセニリンに起因する）、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、進行性核上麻痺、ピック病、いくつかのポリグルタミン神経障害、例えばハンチントン病、脊髄小脳失調Ｉ型（ｓｐｉｎｏｃｅｒｅｂｕｌｌａｒ ａｔａｘｉａ ｔｙｐｅ Ｉ）、球脊髄性筋萎縮症、歯状核赤核淡蒼球ルイ体および筋強直性ジストロフィー、ならびに海綿状脳症、例えば遺伝性クロイツフェルトヤコブ病（プリオンタンパク質プロセッシング欠損症に起因する）、ファブリー病（リソソームα−ガラクトシダーゼＡに起因する）、シュトロイスラー−シャインカー症候群（Ｐｒｐプロセッシング欠損症に起因する）、膵炎性不妊症（ｉｎｆｅｒｔｉｌｉｔｙ ｐａｎｃｒｅａｔｉｔｉｓ）、膵機能不全、骨粗しょう症、骨減少症、ゴーハム症候群、クロリドチャンネル病、先天性筋強直症（トムセンおよびベッカー型）、バーター症候群ＩＩＩ型、デント病、過剰驚愕症、てんかん、過剰驚愕症、リソソーム蓄積症、アンジェルマン症候群、原発性線毛機能不全（ＰＣＤ）、内臓逆位を伴うＰＣＤ（カールタジュナー症候群としても公知）、内臓逆位および毛様体形成不全を伴わないＰＣＤならびに肝疾患である。
【００１７】
ＣＦＴＲにおける変異に関係する他の疾患には、先天性両側性輸精管欠損（ＣＢＡＶＤ）によって引き起こされる男性不妊症、軽度の肺疾患、特発性膵炎およびアレルギー性気管支肺アスペルギルス症（ＡＢＰＡ）が含まれる。非特許文献１７（これを参照により本明細書に組み込む）を参照されたい。
【００１８】
ＣＦＴＲ活性の上方調節に加えて、ＣＦＴＲ修飾因子によるアニオン分泌の減少は分泌性下痢の治療に有益であり得、そこでは、分泌促進活性化による塩素イオン輸送の結果として、上皮水分輸送は劇的に増大する。この機序は、ｃＡＭＰの上昇とＣＦＴＲの刺激を含む。
【００１９】
下痢には多くの原因があるが、過剰な塩素イオン輸送からもたらされる下痢性疾患の主な結果はすべてに共通しており、脱水、アシドーシス、成長障害および死を含む。急性および慢性の下痢は、世界の多くの地域において、主要な医学的課題を代表するものである。下痢は、栄養失調における重要な因子であり、かつ５才未満の子供の死亡（５，０００，０００人の死者／年）の主要原因でもある。
【００２０】
分泌性下痢は、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）および慢性炎症性大腸炎（ＩＢＤ）を有する患者においてもやはり危険な状態である。その重症度と件数は旅行する国や地域によるが、１６００万人の先進工業国から発展途上国への旅行者が毎年下痢を発症している。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【００２１】
【非特許文献１】Ｇｒｅｇｏｒｙ，Ｒ． Ｊ．ら（１９９０年）Ｎａｔｕｒｅ ３４７巻：３８２〜３８６頁
【非特許文献２】Ｒｉｃｈ，Ｄ． Ｐ．ら（１９９０年）Ｎａｔｕｒｅ ３４７巻：３５８〜３６２頁
【非特許文献３】Ｒｉｏｒｄａｎ，Ｊ． Ｒ．ら（１９８９年）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４５巻：１０６６〜１０７３頁
【非特許文献４】Ｃｕｔｔｉｎｇ，Ｇ． Ｒ．ら（１９９０年）Ｎａｔｕｒｅ ３４６巻：３６６〜３６９頁
【非特許文献５】Ｄｅａｎ，Ｍ．ら（１９９０年）Ｃｅｌｌ ６１巻：８６３：８７０頁
【非特許文献６】Ｋｅｒｅｍ，Ｂ−Ｓ．ら（１９８９年）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４５巻：１０７３〜１０８０頁
【非特許文献７】Ｋｅｒｅｍ，Ｂ−Ｓら（１９９０年）Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８７巻：８４４７〜８４５１頁
【非特許文献８】Ｑｕｉｎｔｏｎ，Ｐ． Ｍ．（１９９０年）、ＦＡＳＥＢ Ｊ．４巻：２７０９〜２７２７頁
【非特許文献９】Ｄｏｌｍａｎｓら（１９９１年）、Ｎａｔｕｒｅ Ｌｏｎｄ． ３５４巻：５２６〜５２８頁
【非特許文献１０】Ｐａｓｙｋ ａｎｄ Ｆｏｓｋｅｔｔ（１９９５年）、Ｊ． Ｃｅｌｌ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． ２７０巻：１２３４７〜５５０頁
【非特許文献１１】「Ｃｙｓｔｉｃ ｆｉｂｒｏｓｉｓ：ｉｍｐａｉｒｅｄ ｂｉｃａｒｂｏｎａｔｅ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ａｎｄ ｍｕｃｏｖｉｓｃｉｄｏｓｉｓ」、Ｐａｕｌ Ｍ． Ｑｕｉｎｔｏｎ、Ｌａｎｃｅｔ ２００８年；３７２巻：４１５〜４１７頁
【非特許文献１２】Ａｒｉｄｏｒ Ｍら、Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄ．、５巻（７号）７４５〜７５１頁（１９９９年）
【非特許文献１３】Ｓｈａｓｔｒｙ，Ｂ．Ｓ．ら、Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ． Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ、４３巻、１〜７頁（２００３年）
【非特許文献１４】Ｒｕｔｉｓｈａｕｓｅｒ，Ｊ．ら、Ｓｗｉｓｓ Ｍｅｄ Ｗｋｌｙ、１３２巻、２１１〜２２２頁（２００２年）
【非特許文献１５】Ｍｏｒｅｌｌｏ，ＪＰら、ＴＩＰＳ、２１巻、４６６〜４６９頁（２０００年）
【非特許文献１６】Ｂｒｏｓｓ Ｐ．ら、Ｈｕｍａｎ Ｍｕｔ．、１４巻、１８６〜１９８頁（１９９９年）
【非特許文献１７】「ＣＦＴＲ−ｏｐａｔｈｉｅｓ：ｄｉｓｅａｓｅ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｃｙｓｔｉｃ ｆｉｂｒｏｓｉｓ ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ ｒｅｇｕｌａｔｏｒ ｇｅｎｅ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ」、Ｐｅａｄｅｒ Ｇ． Ｎｏｏｎｅ ａｎｄ Ｍｉｃｈａｅｌ Ｒ． Ｋｎｏｗｌｅｓ、Ｒｅｓｐｉｒ． Ｒｅｓ． ２００１年、２巻：３２８〜３３２頁
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２２】
したがって、野生型および変異型のヒトＣＦＴＲの強力で選択的なＣＦＴＲ増強物質の必要性がある。これらのＣＦＴＲ変異体には、これらに限定されないが、ΔＦ５０８ｄｅｌ、Ｇ５５１Ｄ、Ｒ１１７Ｈ、２７８９＋５Ｇ−＞Ａが含まれる。
【００２３】
哺乳動物の細胞膜におけるＣＦＴＲの活性を調節するのに使用できる、ＣＦＴＲ活性の修飾因子およびその組成物の必要性もある。
【００２４】
そうしたＣＦＴＲ活性の修飾因子を用いてＣＦＴＲにおける変異によって引き起こされる疾患を治療する方法が必要である。
【００２５】
哺乳動物のエクスビボでの細胞膜におけるＣＦＴＲ活性を調節する方法が必要である。
【課題を解決するための手段】
【００２６】
本発明の化合物および薬学的に許容されるその組成物は、ＣＦＴＲ活性の修飾因子として有用であることをここに見出した。これらの化合物は一般式（Ｉ）：
【００２７】
【化１】
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｘ、ＹおよびＡは以下に概略説明され、部類および下位部類で説明される）
または薬学的に許容されるその塩である。
【００２８】
これらの化合物および薬学的に許容される組成物は、ＣＦＴＲにおける変異に伴う様々な疾患、障害または状態を治療するまたはその重症度を軽減するのに有用である。
【発明を実施するための形態】
【００２９】
本発明の化合物の概要：
本発明は、ＣＦＴＲ活性の修飾因子として有用な式（Ｉ）の化合物：
【００３０】
【化２】
（式中、環Ａは、
【００３１】
【化３】
から選択され、
式中、
Ｒ１は、−ＣＨ３、−ＣＦ３または−ＣＮであり、
Ｒ２は、水素、−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり、
Ｒ３は、水素、−ＣＨ３、−ＯＣＨ３または−ＣＮであり、）
ただし、Ｒ２とＲ３は同時に水素であることはなく、
Ｘは炭素または窒素であり、
Ｙは炭素または窒素であり、
ただし、ＸとＹは同時に窒素であることはない）
または薬学的に許容されるその塩に関する。
【００３２】
化合物および定義：
本発明の化合物は、上記に概略説明され、本明細書で開示する部類、下位部類および種類でさらに示されるものが含まれる。本明細書での使用では、別段の記載のない限り、以下の定義が適用されるものとする。
【００３３】
本明細書で用いる「ＡＢＣ−トランスポーター」という用語は、インビボまたはインビトロで存在する、少なくとも１つの結合ドメインを含むＡＢＣ−トランスポータータンパク質またはそのフラグメントを意味する。本明細書で用いる「結合ドメイン」という用語は、修飾因子と結合することができるＡＢＣ−トランスポーター上のドメインを意味する。例えば、Ｈｗａｎｇ，Ｔ． Ｃ．ら、Ｊ． Ｇｅｎ． Ｐｈｙｓｉｏｌ．（１９９８年）：１１１巻（３号）、４７７〜９０頁を参照されたい。
【００３４】
本明細書で用いる「ＣＦＴＲ」という用語は、ΔＦ５０８ＣＦＴＲ、Ｒ１１７Ｈ ＣＦＴＲおよびＧ５５１Ｄ ＣＦＴＲを含むがそれに限定されない、制御因子活性の能力のある嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子またはその変異を意味する（例えば、ＣＦＴＲ変異についてのｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｇｅｎｅｔ．ｓｉｃｋｋｉｄｓ．ｏｎ．ｃａ／ｃｆｔｒ／を参照されたい）。
【００３５】
本明細書で用いる「調節する（ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ）」という用語は、測定可能量で増大または減少させることを意味する。
【００３６】
本明細書で用いる「正常ＣＦＴＲ」または「正常ＣＦＴＲ機能」という用語は、喫煙、汚染などの環境因子または肺に炎症をもたらすすべてのものに起因する任意の機能的障害を伴わない野生型様のＣＦＴＲを意味する。
【００３７】
本明細書で用いる「低いＣＦＴＲ」または「低いＣＦＴＲ機能」という用語は、正常ＣＦＴＲより低い、または正常ＣＦＴＲ機能より低いことを意味する。本発明のために、化学元素は、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｃｓ、７５ｔｈ Ｅｄの元素周期表、ＣＡＳ版によって特定される。さらに、有機化学の一般的原理は、「Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」、Ｔｈｏｍａｓ Ｓｏｒｒｅｌｌ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｂｏｏｋｓ、Ｓａｕｓａｌｉｔｏ：１９９９年、および「Ｍａｒｃｈ’ｓ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」、５ｔｈ Ｅｄ．、Ｅｄ．：Ｓｍｉｔｈ、Ｍ． Ｂ． ａｎｄ Ｍａｒｃｈ、Ｊ．、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：２００１年に記載されている。これらの内容全体を参照により本明細書に組み込む。
【００３８】
本発明で想定される置換基の組合せは、好ましくは、安定なまたは化学的に実現可能な化合物の生成をもたらすものである。本明細書で用いる「安定な」という用語は、その製造、検出、好ましくはその回収、精製、および本明細書で開示する目的の１つまたは複数のための使用を可能にする条件にかけた場合、実質的に変化しない化合物を指す。いくつかの実施形態では、安定な化合物または化学的に実現可能な化合物は、水分または他の化学的に反応性の条件がないもとで、４０℃以下の温度で少なくとも１週間保持しても実質的に変化しない化合物である。
【００３９】
本明細書で用いる「保護基」という用語は、多官能化合物の１つまたは複数の所望反応点を一時的に封鎖するために用いられる物質を指す。特定の実施形態では、保護基は以下の特徴：ａ）良好な収率で選択的に反応して、他の反応点の１つまたは複数で起こる反応に対して安定な保護された基体を提供すること、および、ｂ）再生された官能基を攻撃しない試薬によって良好な収率で選択的に取り除くことができるということの１つもしくは複数または好ましくはそのすべてを有する。保護基の例は、Ｇｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．，Ｗｕｔｓ、Ｐ． Ｇ ｉｎ 「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ：１９９９年、およびこの本の他の版に詳述されている。その内容全体を参照により本明細書に組み込む。
【００４０】
別段の言及のない限り、本明細書で示す構造は、その構造のすべての異性体（例えば、鏡像異性体的、ジアステレオマー的および幾何学的（または立体配座的））形態の構造；例えば、各不斉中心についてのＲ型およびＳ型構造、Ｚ型およびＥ型二重結合異性体ならびにＺ型およびＥ型の配座異性体を含むことも意味する。したがって、本発明の化合物の単一の立体化学的異性体、ならびに鏡像異性体的、ジアステレオマー的および幾何学的（または立体配座的）混合物は本発明の範囲内である。別段の言及のない限り、本発明の化合物のすべての互変異性形態は本発明の範囲内である；例えば、式（Ｉ）の化合物は互変異性体：
【００４１】
【化４】
として存在することができる。
【００４２】
さらに、別段の言及のない限り、本明細書で示す構造は、１つまたは複数の同位体的に濃縮された原子が存在することだけが異なる化合物を含むことも意味する。例えば、水素を重水素または三重水素で置き換えていること、あるいは、炭素を１３Ｃ−または１４Ｃ−濃縮炭素で置き換えていること以外は本発明の構造を有する化合物は本発明の範囲内である。そうした化合物は、例えば、生物学的アッセイにおける分析ツールまたはプローブとして有用である。
【００４３】
例示化合物の説明：
一実施形態によると、本発明は、式（Ｉ）の化合物：
【００４４】
【化５】
（式中、環Ａは、
【００４５】
【化６】
から選択され、
式中、
Ｒ１は、−ＣＨ３、−ＣＦ３または−ＣＮであり、
Ｒ２は、水素、−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり、
Ｒ３は、水素、−ＣＨ３、−ＯＣＨ３または−ＣＮであり、
ただし、Ｒ２とＲ３は同時に水素であることはなく、
ＸおよびＹの一方は窒素であり、もう一方は炭素である）
または薬学的に許容されるその塩を提供する。
【００４６】
この実施形態の一態様では、その化合物は遊離アミンである。
【００４７】
他の態様では、その化合物はＨＣｌ塩などの薬学的に許容される塩である。
【００４８】
一実施形態では、環Ａは
【００４９】
【化７】
である。
【００５０】
一実施形態では、環Ａは
【００５１】
【化８】
である。
【００５２】
他の実施形態では、環Ａは
【００５３】
【化９】
である。
【００５４】
さらに他の実施形態では、環Ａは
【００５５】
【化１０】
である。
【００５６】
一実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ３である。
【００５７】
一実施形態では、Ｒ１は−ＣＦ３である。
【００５８】
他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＮである。
【００５９】
一実施形態では、Ｒ２は−ＣＨ３である。
【００６０】
他の実施形態では、Ｒ２は−ＣＦ３である。
【００６１】
他の実施形態では、Ｒ２は−ＯＨである。
【００６２】
他の実施形態では、Ｒ２は−ＣＨ２ＯＨである。
【００６３】
一実施形態では、Ｒ３は−ＣＨ３である。
【００６４】
一実施形態では、Ｒ３は−ＯＣＨ３である。
【００６５】
他の実施形態では、Ｒ３は−ＣＮである。
【００６６】
一実施形態では、Ｒ２は水素であり、Ｒ３は、−ＣＨ３、−ＯＣＨ３または−ＣＮである。
【００６７】
式（Ｉ）のいくつかの実施形態では、環Ａは
【００６８】
【化１１】
であり、Ｒ１は−ＣＦ３であり、Ｒ２は水素であり、Ｒ３は、−ＣＨ３、−ＯＣＨ３または−ＣＮである。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ３である。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＮである。一実施形態では、Ｒ３は−ＯＣＨ３である。またはＲ３は−ＣＨ３である。またはＲ３は−ＣＮである。
【００６９】
式（Ｉ）のさらなる実施形態では、環Ａは
【００７０】
【化１２】
であり、Ｒ１は−ＣＦ３であり、Ｒ２は、−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり、Ｒ３は、水素である。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ３である。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＮである。一実施形態では、Ｒ２は−ＣＨ３である。またはＲ２は−ＣＦ３である。またはＲ２は−ＯＨである。またはＲ２は−ＣＨ２ＯＨである。
【００７１】
他の実施形態では、Ｒ２は、−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり、Ｒ３は水素である。
【００７２】
式（Ｉ）のいくつかの実施形態では、環Ａは
【００７３】
【化１３】
であり、Ｒ１は−ＣＦ３であり、Ｒ２は水素であり、Ｒ３は、−ＣＨ３、−ＯＣＨ３または−ＣＮである。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ３である。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＮである。一実施形態では、Ｒ３は−ＣＨ３である。またはＲ３は−ＯＣＨ３である。またはＲ３は−ＣＮである。
【００７４】
式（Ｉ）のいくつかの実施形態では、環Ａは
【００７５】
【化１４】
であり、Ｒ１は−ＣＦ３であり、Ｒ２は水素であり、Ｒ３は、−ＣＨ３、−ＯＣＨ３または−ＣＮである。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ３である。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＮである。一実施形態では、Ｒ３は−ＣＨ３である。またはＲ３は−ＯＣＨ３である。またはＲ３は−ＣＮである。
【００７６】
式（Ｉ）のさらなる実施形態では、環Ａは
【００７７】
【化１５】
であり、Ｒ１は−ＣＦ３であり、Ｒ２は、−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり、Ｒ３は、水素である。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ３である。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＮである。一実施形態では、Ｒ２は−ＣＨ３である。またはＲ２は−ＣＦ３である。またはＲ２は−ＯＨである。またはＲ２は−ＣＨ２ＯＨである。
【００７８】
式（Ｉ）のいくつかの実施形態では、環Ａは
【００７９】
【化１６】
であり、Ｒ１は−ＣＦ３であり、Ｒ２は水素であり、Ｒ３は、−ＣＨ３、−ＯＣＨ３または−ＣＮである。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ３である。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＮである。一実施形態では、Ｒ３は−ＣＨ３である。またはＲ３は−ＯＣＨ３である。またはＲ３は−ＣＮである。
【００８０】
式（Ｉ）のさらなる実施形態では、環Ａは
【００８１】
【化１７】
であり、Ｒ１は−ＣＦ３であり、Ｒ２は、−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり、Ｒ３は、水素である。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ３である。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＮである。一実施形態では、Ｒ２は−ＣＨ３である。またはＲ２は−ＣＦ３である。またはＲ２は−ＯＨである。またはＲ２は−ＣＨ２ＯＨである。
【００８２】
式（Ｉ）のいくつかの実施形態では、環Ａは、
【００８３】
【化１８】
であり、Ｒ１は−ＣＦ３であり、Ｒ２は水素であり、Ｒ３は−ＣＨ３、−ＯＣＨ３または−ＣＮである。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ３である。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＮである。一実施形態では、Ｒ３は−ＣＨ３である。または、Ｒ３は−ＯＣＨ３である。または、Ｒ３は−ＣＮである。
【００８４】
式（Ｉ）の他の実施形態では、環Ａは、
【００８５】
【化１９】
であり、Ｒ１は−ＣＦ３であり、Ｒ２は−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり、Ｒ３は水素である。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ３である。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＮである。一実施形態では、Ｒ２は−ＣＨ３である。または、Ｒ２は−ＣＦ３である。または、Ｒ２は−ＯＨである。または、Ｒ２は−ＣＨ２ＯＨである。
【００８６】
他の態様によれば、本発明は式（Ｉａ）の化合物：
【００８７】
【化２０】
（式中、環Ａは、
【００８８】
【化２１】
から選択され、
Ｒ１は−ＣＨ３、−ＣＦ３または−ＣＮであり、
Ｒ２は水素、−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり、
Ｒ３は水素、−ＣＨ３、−ＯＣＨ３または−ＣＮであり、
ただし、Ｒ２とＲ３は同時に水素であることはない）
または薬学的に許容されるその塩を提供する。
【００８９】
式（Ｉａ）の一実施形態では、環Ａは、
【００９０】
【化２２】
である。
【００９１】
式（Ｉａ）の一実施形態では、環Ａは、
【００９２】
【化２３】
である。
【００９３】
式（Ｉａ）の他の実施形態では、環Ａは、
【００９４】
【化２４】
である。
【００９５】
式（Ｉａ）のさらに他の実施形態では、環Ａは、
【００９６】
【化２５】
である。
【００９７】
式（Ｉａ）の一実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ３である。
【００９８】
式（Ｉａ）の一実施形態では、Ｒ１は−ＣＦ３である。
【００９９】
式（Ｉａ）の他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＮである。
【０１００】
式（Ｉａ）の一実施形態では、Ｒ２は−ＣＨ３である。
【０１０１】
式（Ｉａ）の他の実施形態では、Ｒ２は−ＣＦ３である。
【０１０２】
式（Ｉａ）の他の実施形態では、Ｒ２は−ＯＨである。
【０１０３】
式（Ｉａ）の他の実施形態では、Ｒ２は−ＣＨ２ＯＨである。
【０１０４】
式（Ｉａ）の一実施形態では、Ｒ３は−ＣＨ３である。
【０１０５】
式（Ｉａ）の一実施形態では、Ｒ３は−ＯＣＨ３である。
【０１０６】
式（Ｉａ）の他の実施形態では、Ｒ３は−ＣＮである。
【０１０７】
式（Ｉａ）の一実施形態では、Ｒ２は水素であり、Ｒ３は−ＣＨ３、−ＯＣＨ３または−ＣＮである。
【０１０８】
式（Ｉａ）の他の実施形態では、Ｒ２は−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり、Ｒ３は水素である。
【０１０９】
式（Ｉａ）のいくつかの実施形態では、環Ａは、
【０１１０】
【化２６】
であり、Ｒ１は−ＣＦ３であり、Ｒ２は水素であり、Ｒ３は−ＣＨ３、−ＯＣＨ３または−ＣＮである。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ３である。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＮである。一実施形態では、Ｒ３は−ＯＣＨ３である。または、Ｒ３は−ＣＨ３である。または、Ｒ３は−ＣＮである。
【０１１１】
式（Ｉａ）の他の実施形態では、環Ａは、
【０１１２】
【化２７】
であり、Ｒ１は−ＣＦ３であり、Ｒ２は−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり、Ｒ３は水素である。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ３である。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＮである。一実施形態では、Ｒ２は−ＣＨ３である。または、Ｒ２は−ＣＦ３である。または、Ｒ２は−ＯＨである。または、Ｒ２は−ＣＨ２ＯＨである。
【０１１３】
式（Ｉａ）のいくつかの実施形態では、環Ａは、
【０１１４】
【化２８】
であり、Ｒ１は−ＣＦ３であり、Ｒ２は水素であり、Ｒ３は−ＣＨ３、−ＯＣＨ３または−ＣＮである。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ３である。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＮである。一実施形態では、Ｒ３は−ＣＨ３である。または、Ｒ３は−ＯＣＨ３である。または、Ｒ３は−ＣＮである。
【０１１５】
式（Ｉａ）の他の実施形態では、環Ａは、
【０１１６】
【化２９】
であり、Ｒ１は−ＣＦ３であり、Ｒ２は−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり、Ｒ３は水素である。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ３である。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＮである。一実施形態では、Ｒ２は−ＣＨ３である。または、Ｒ２は−ＣＦ３である。または、Ｒ２は−ＯＨである。または、Ｒ２は−ＣＨ２ＯＨである。
【０１１７】
式（Ｉａ）のいくつかの実施形態では、環Ａは、
【０１１８】
【化３０】
であり、Ｒ１は−ＣＦ３であり、Ｒ２は水素であり、Ｒ３は−ＣＨ３、−ＯＣＨ３または−ＣＮである。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ３である。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＮである。一実施形態では、Ｒ３は−ＣＨ３である。または、Ｒ３は−ＯＣＨ３である。または、Ｒ３は−ＣＮである。
【０１１９】
式（Ｉａ）の他の実施形態では、環Ａは、
【０１２０】
【化３１】
であり、Ｒ１は−ＣＦ３であり、Ｒ２は−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり、Ｒ３は水素である。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ３である。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＮである。一実施形態では、Ｒ２は−ＣＨ３である。または、Ｒ２は−ＣＦ３である。または、Ｒ２は−ＯＨである。または、Ｒ２は−ＣＨ２ＯＨである。
【０１２１】
式（Ｉａ）のいくつかの実施形態では、環Ａは、
【０１２２】
【化３２】
であり、Ｒ１は−ＣＦ３であり、Ｒ２は水素であり、Ｒ３は−ＣＨ３、−ＯＣＨ３または−ＣＮである。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ３である。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＮである。一実施形態では、Ｒ３は−ＣＨ３である。または、Ｒ３は−ＯＣＨ３である。または、Ｒ３は−ＣＮである。
【０１２３】
式（Ｉａ）の他の実施形態では、環Ａは、
【０１２４】
【化３３】
であり、Ｒ１は−ＣＦ３であり、Ｒ２は−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり、Ｒ３は水素である。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ３である。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＮである。一実施形態では、Ｒ２は−ＣＨ３である。または、Ｒ２は−ＣＦ３である。または、Ｒ２は−ＯＨである。または、Ｒ２は−ＣＨ２ＯＨである。
【０１２５】
他の実施形態によれば、本発明は式（Ｉｂ）の化合物：
【０１２６】
【化３４】
（式中、環Ａは、
【０１２７】
【化３５】
から選択され、
Ｒ１は−ＣＨ３、−ＣＦ３または−ＣＮであり、
Ｒ２は水素、−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり、
Ｒ３は水素、−ＣＨ３、−ＯＣＨ３または−ＣＮであり、
ただし、Ｒ２とＲ３は同時に水素であることはない）
または薬学的に許容されるその塩を提供する。
【０１２８】
式（Ｉｂ）の一実施形態では、環Ａは、
【０１２９】
【化３６】
である。
【０１３０】
式（Ｉｂ）の一実施形態では、環Ａは、
【０１３１】
【化３７】
である。
【０１３２】
式（Ｉｂ）の他の実施形態では、環Ａは、
【０１３３】
【化３８】
である。
【０１３４】
式（Ｉｂ）のさらに他の実施形態では、環Ａは、
【０１３５】
【化３９】
である。
【０１３６】
式（Ｉｂ）の一実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ３である。
【０１３７】
式（Ｉｂ）の一実施形態では、Ｒ１は−ＣＦ３である。
【０１３８】
式（Ｉｂ）の他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＮである。
【０１３９】
式（Ｉｂ）の一実施形態では、Ｒ２は−ＣＨ３である。
【０１４０】
式（Ｉｂ）の他の実施形態では、Ｒ２は−ＣＦ３である。
【０１４１】
式（Ｉｂ）の他の実施形態では、Ｒ２は−ＯＨである。
【０１４２】
式（Ｉｂ）の他の実施形態では、Ｒ２は−ＣＨ２ＯＨである。
【０１４３】
式（Ｉｂ）の一実施形態では、Ｒ３は−ＣＨ３である。
【０１４４】
式（Ｉｂ）の一実施形態では、Ｒ３は−ＯＣＨ３である。
【０１４５】
式（Ｉｂ）の他の実施形態では、Ｒ３は−ＣＮである。
【０１４６】
式（Ｉｂ）の一実施形態では、Ｒ２は水素であり、Ｒ３は−ＣＨ３、−ＯＣＨ３または−ＣＮである。
【０１４７】
式（Ｉｂ）の他の実施形態では、Ｒ２は−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり、Ｒ３は水素である。
【０１４８】
式（Ｉｂ）のいくつかの実施形態では、環Ａは、
【０１４９】
【化４０】
であり、Ｒ１は−ＣＦ３であり、Ｒ２は水素であり、Ｒ３は−ＣＨ３、−ＯＣＨ３または−ＣＮである。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＮである。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ３である。一実施形態では、Ｒ３は−ＯＣＨ３である。または、Ｒ３は−ＣＨ３である。または、Ｒ３は−ＣＮである。
【０１５０】
式（Ｉｂ）の他の実施形態では、環Ａは、
【０１５１】
【化４１】
であり、Ｒ１は−ＣＦ３であり、Ｒ２は−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり、Ｒ３は水素である。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＮである。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ３である。一実施形態では、Ｒ２は−ＣＨ３である。または、Ｒ２は−ＣＦ３である。または、Ｒ２は−ＯＨである。または、Ｒ２は−ＣＨ２ＯＨである。
【０１５２】
式（Ｉｂ）のいくつかの実施形態では、環Ａは、
【０１５３】
【化４２】
であり、Ｒ１は−ＣＦ３であり、Ｒ２は水素であり、Ｒ３は−ＣＨ３、−ＯＣＨ３または−ＣＮである。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＮである。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ３である。一実施形態では、Ｒ３は−ＣＨ３である。または、Ｒ３は−ＯＣＨ３である。または、Ｒ３は−ＣＮである。
【０１５４】
式（Ｉｂ）の他の実施形態では、環Ａは、
【０１５５】
【化４３】
であり、Ｒ１は−ＣＦ３であり、Ｒ２は−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり、Ｒ３は水素である。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＮである。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ３である。一実施形態では、Ｒ２は−ＣＨ３である。または、Ｒ２は−ＣＦ３である。または、Ｒ２は−ＯＨである。または、Ｒ２は−ＣＨ２ＯＨである。
【０１５６】
式（Ｉｂ）のいくつかの実施形態では、環Ａは、
【０１５７】
【化４４】
であり、Ｒ１は−ＣＦ３であり、Ｒ２は水素であり、Ｒ３は−ＣＨ３、−ＯＣＨ３または−ＣＮである。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＮである。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ３である。一実施形態では、Ｒ３は−ＣＨ３である。または、Ｒ３は−ＯＣＨ３である。または、Ｒ３は−ＣＮである。
【０１５８】
式（Ｉｂ）の他の実施形態では、環Ａは、
【０１５９】
【化４５】
であり、Ｒ１は−ＣＦ３であり、Ｒ２は−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり、Ｒ３は水素である。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＮである。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ３である。一実施形態では、Ｒ２は−ＣＨ３である。または、Ｒ２は−ＣＦ３である。または、Ｒ２は−ＯＨである。または、Ｒ２は−ＣＨ２ＯＨである。
【０１６０】
式（Ｉｂ）のいくつかの実施形態では、環Ａは、
【０１６１】
【化４６】
であり、Ｒ１は−ＣＦ３であり、Ｒ２は水素であり、Ｒ３は−ＣＨ３、−ＯＣＨ３または−ＣＮである。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＮである。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ３である。一実施形態では、Ｒ３は−ＣＨ３である。または、Ｒ３は−ＯＣＨ３である。または、Ｒ３は−ＣＮである。
【０１６２】
式（Ｉｂ）の他の実施形態では、環Ａは、
【０１６３】
【化４７】
であり、Ｒ１は−ＣＦ３であり、Ｒ２は−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり、Ｒ３は水素である。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＮである。他の実施形態では、Ｒ１は−ＣＨ３である。一実施形態では、Ｒ２は−ＣＨ３である。または、Ｒ２は−ＣＦ３である。または、Ｒ２は−ＯＨである。または、Ｒ２は−ＣＨ２ＯＨである。
【０１６４】
本発明の代表的化合物を以下の表１に示す。
【０１６５】
【表１】
基本合成スキーム
本発明の化合物は、当業界で公知の方法で容易に調製される。以下の本明細書の実施例のスキームで例示するのは、本発明の化合物の調製方法の例である。
【０１６６】
使用、処方および投与
薬学的に許容される組成物
本発明の１つの態様では、本明細書で説明する化合物のいずれかおよび任意選択で薬学的に許容される担体、補助剤または媒体を含む薬学的に許容される組成物を提供する。特定の実施形態では、これらの組成物は、任意選択で１つまたは複数の追加の治療薬をさらに含む。
【０１６７】
本発明の化合物のいくつかは、治療用に遊離形態で存在することができ、適切な場合、薬学的に許容される誘導体またはそのプロドラッグとして存在することができることも理解されよう。本発明によれば、薬学的に許容される誘導体またはプロドラッグには、これらに限定されないが、薬学的に許容される塩、エステル、そうしたエステルの塩、あるいは、それを必要とする患者に投与したとき直接または間接に本明細書で別途説明するような化合物またはその代謝産物もしくは残基を提供できる他の任意の付加物もしくは誘導体が含まれる。
【０１６８】
本明細書で用いる「薬学的に許容される塩」、という用語は、健全な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、炎症、アレルギー反応などを伴うことなくヒトや下等動物の組織と接触して用いるのに適しており、かつ、妥当な便益／リスク比に相応した塩を指す。「薬学的に許容される塩」は、レシピエントに投与したとき直接または間接に、本発明の化合物または阻害的に活性なその代謝産物もしくは残基を提供できる本発明の化合物の任意の非毒性塩またはエステルの塩を意味する。
【０１６９】
薬学的に許容される塩は当業界で周知である。例えばＳ． Ｍ． Ｂｅｒｇｅらは、Ｊ． Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、１９７７年、６６巻、１〜１９頁において薬学的に許容される塩を詳細に記載している。これを参照により本明細書に組み込む。本発明の化合物の薬学的に許容される塩には、適切な無機および有機の酸および塩基から誘導されるものが含まれる。薬学的に許容される非毒性付加塩の例は、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸および過塩素酸などの無機酸、または酢酸、シュウ酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、コハク酸もしくはマロン酸などの有機酸と形成させるか、あるいは、イオン交換などの当業界で用いられている他の方法によるアミノ基の塩である。
【０１７０】
他の薬学的に許容される塩には、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、ショウノウ酸塩、カンファースルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エジシル酸塩（エタンジスルホン酸塩）、エタンスルホン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸、グリセロリン酸塩、グルコン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシ−エタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモン酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩などが含まれる。適切な塩基から誘導される塩には、アルカリ金属、アルカリ土類金属、アンモニウムおよびＮ＋（Ｃ１〜４アルキル）４塩が含まれる。本発明は、本明細書で開示する化合物の任意の塩基性窒素含有基の四級化も想定する。そうした四級化によって、水溶性もしくは油溶性または分散性の生成物を得ることができる。代表的なアルカリまたはアルカリ土類金属塩には、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなどの塩が含まれる。他の薬学的に許容される塩には、適切な場合、ハライド、ヒドロキシド、カルボキシレート、サルフェート、ホスフェート、ナイトレート、低級アルキルスルホネートならびにアリールスルホネートなどの対イオンを用いて形成される、非毒性アンモニウム、四級アンモニウムおよびアミンカチオンが含まれる。
【０１７１】
上記で説明したように、本発明の薬学的に許容される組成物は、本明細書で用いるように、具体的な所望剤形に適した任意のすべての溶媒、賦形剤もしくは他の液媒体、分散もしくは懸濁助剤、表面活性剤、等張剤、増粘剤もしくは乳化剤、保存剤、固体結合剤、滑沢剤などを含む薬学的に許容される担体、補助剤または媒体を追加的に含む。Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓｉｘｔｅｅｎｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｅ． Ｗ． Ｍａｒｔｉｎ（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、Ｐａ．、１９８０年）は、薬学的に許容される組成物を処方するのに使用される様々な担体、およびそれを調製するための公知の技術を開示している。通常の任意の担体媒体が、望まない生物学的作用をもたらすか、あるいは、薬学的に許容される組成物の他の任意の成分と有害な形で相互作用することなどによって本発明の化合物と適合しない場合を除いて、その使用は本発明の範囲内であるものとする。薬学的に許容される担体として働くことができる材料のいくつかの例には、これらに限定されないが、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、血清タンパク質、例えばヒト血清アルブミン、緩衝物質、例えばリン酸塩、グリシン、ソルビン酸もしくはソルビン酸カリウム、飽和植物性脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩または電解質、例えば硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイド状シリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン−ポリオキシプロピレン−ブロックポリマー、羊毛脂、糖類、例えばラクトース、グルコースおよびスクロース；デンプン、例えばコーンスターチおよびバレイショデンプン；セルロースおよびその誘導体、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、エチルセルロースおよび酢酸セルロース；粉末トラガカント；モルト；ゼラチン；タルク；添加剤、例えばココアバターおよび坐薬用ワックス；オイル、例えばピーナッツ油、綿実油；サフラワー油；ゴマ油；オリーブ油；コーンオイルおよび大豆油；グリコール；例えばプロピレングリコールまたはポリエチレングリコール；エステル、例えばオレイン酸エチルおよびラウリン酸エチル；寒天；緩衝剤、例えば水酸化マグネシウムおよび水酸化アルミニウム；アルギン酸；パイロジェン除去水；等張食塩水；リンガー溶液；エチルアルコールおよびリン酸緩衝液、ならびに他の非毒性の適合性滑沢剤、例えばラウリル硫酸ナトリウムおよびステアリン酸マグネシウムが含まれるが、また、処方者の判断に従って、着色剤、離型剤、コーティング剤、甘味剤、香味剤および芳香剤、保存剤および酸化防止剤も組成物中に含めることができる。
【０１７２】
化合物および薬学的に許容される組成物の使用
さらに他の態様では、本発明は、ＣＦＴＲ変異に関係する状態、疾患または障害を治療するまたはその重症度を軽減する方法を提供する。特定の実施形態では、本発明は、ＣＦＴＲ活性の欠乏に関係する状態、疾患または障害を治療する方法であって、式（Ｉ）の化合物を含む組成物を、それを必要とする対象、好ましくは哺乳動物に投与することを含む方法を提供する。
【０１７３】
特定の実施形態では、本発明は、ＣＦＴＲコード遺伝子の変異または環境因子（例えば、喫煙）に起因するＣＦＴＲ機能の低下に伴う疾患を治療する方法を提供する。これらの疾患には、嚢胞性線維症、慢性気管支炎、反復性気管支炎、急性気管支炎、先天性両側性輸精管欠損（ＣＢＡＶＤ）によって引き起こされる男性不妊症、子宮および膣の先天的欠損（ＣＡＵＶ）によって引き起こされる女性不妊症、特発性慢性膵炎（ＩＣＰ）、特発性反復性膵炎、特発性急性膵炎、慢性鼻副鼻腔炎、原発性硬化性胆管炎、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、糖尿病、ドライアイ、便秘、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症（ＡＢＰＡ）、骨疾患（例えば、骨粗しょう症）ならびにぜんそくが含まれる。
【０１７４】
特定の実施形態では、本発明は、正常ＣＦＴＲ機能に伴う疾患を治療する方法を提供する。これらの疾患には、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性気管支炎、反復性気管支炎、急性気管支炎、鼻副鼻腔炎、便秘、慢性膵炎、反復性膵炎および急性膵炎を含む膵炎、膵機能不全、先天性両側性輸精管欠損（ＣＢＡＶＤ）によって引き起こされる男性不妊症、軽度の肺疾患、特発性膵炎、肝疾患、遺伝性肺気腫、胆石、胃食道逆流性疾患（ｇａｓｇｔｒｏ−ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ ｒｅｆｌｕｘ ｄｉｓｅａｓｅ）、胃腸の悪性腫瘍、炎症性大腸炎、便秘、糖尿病、関節炎、骨粗しょう症ならびに骨減少症が含まれる。
【０１７５】
特定の実施形態では、本発明は、遺伝性ヘモクロマトーシス、凝固−線維素溶解性欠乏症、例えばプロテインＣ欠乏症、１型遺伝性血管性浮腫、脂質プロセッシング欠乏症、例えば家族性高コレステロール血症、１型乳糜血症、無βリポタンパク血症、リソソーム蓄積症、例えばＩ細胞病／偽ハーラー、ムコ多糖症、サンドホフ／テイサックス、クリグラーナジャーＩＩ型、多腺性内分泌障害／高インスリン血、真性糖尿病、ラロン型小人症、ミエロペルオキシダーゼ欠損症、原発性甲状腺機能低下症、メラノーマ、グリカン糖鎖異常ＣＤＧ１型、先天性甲状腺機能亢進症、骨形成不全症、遺伝性低フィブリノゲン血症、ＡＣＴ欠乏症、尿崩症（ＤＩ）、ニューロフィシン性ＤＩ、腎性ＤＩ、シャルコーマリートゥース病、ペリツェウスメルツバッハー病、神経変性疾患、例えばアルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、進行性核上麻痺、ピック病、いくつかのポリグルタミン神経障害、例えばハンチントン病、脊髄小脳失調Ｉ型、球脊髄性筋萎縮症、歯状核赤核淡蒼球ルイ体および筋強直性ジストロフィー、ならびに、海綿状脳症、例えば遺伝性クロイツフェルトヤコブ病（プリオンタンパク質プロセッシング欠損症に起因する）、ファブリー病、シュトロイスラー−シャインカー症候群、ゴーハム症候群、クロリドチャンネル病、先天性筋強直症（トムセンおよびベッカー型）、バーター症候群ＩＩＩ型、デント病、過剰驚愕症、てんかん、過剰驚愕症、リソソーム蓄積症、アンジェルマン症候群、原発性線毛機能不全（ＰＣＤ）、内臓逆位を伴うＰＣＤ（カールタジュナー症候群としても公知）、内臓逆位および毛様体形成不全を伴わないＰＣＤまたはシェーグレン病を含む正常ＣＦＴＲ機能に伴う疾患を治療する方法であって、前記哺乳動物に有効量の本発明の化合物を含む組成物を投与するステップを含む方法を提供する。
【０１７６】
代替の好ましい実施形態によれば、本発明は、前記哺乳動物に有効量の本発明の化合物を含む組成物を投与するステップを含む、前記哺乳動物に組成物を投与するステップを含む嚢胞性線維症を治療する方法を提供する。
【０１７７】
本発明によれば、「有効量」の化合物または薬学的に許容される組成物は、上記したような疾患、障害または状態の１つもしくは複数を治療するまたはその重症度を軽減するのに有効な量である。
【０１７８】
本発明の方法による化合物および組成物は、上記したような疾患、障害または状態の１つもしくは複数を治療するまたはその重症度を軽減するのに有効な任意の量および任意の投与経路を用いて投与することができる。
【０１７９】
特定の実施形態では、本発明の化合物および組成物は、呼吸および非呼吸上皮の頂端膜で残留ＣＦＴＲ活性を示す患者の嚢胞性線維症を治療するまたはその重症度を軽減するのに有用である。上皮の表面での残留ＣＦＴＲ活性の存在は、当業界で公知の方法、例えば標準的な電気生理学的、生化学的または組織化学的技法を用いて容易に検出することができる。そうした方法は、インビボもしくはエクスビボでの電気生理学的技法、汗もしくは唾液Ｃｌ−濃度の測定、または細胞表面密度をモニターするエクスビボでの生化学的もしくは組織化学的技法を用いてＣＦＴＲ活性を特定する。そうした方法を用いて、残留ＣＦＴＲ活性は、最も一般的な変異ΔＦ５０８に対してホモ接合性またはヘテロ接合性の患者を含む様々な異なる変異に対してヘテロ接合性またはホモロ接合性の患者において容易に検出することができる。
【０１８０】
他の実施形態では、本発明の化合物および組成物は、薬理学的方法または遺伝子治療を用いて誘発されるかまたは増大した残留ＣＦＴＲ活性を有する患者の嚢胞性線維症を治療するまたはその重症度を軽減するのに有用である。そうした方法は、細胞表面に存在するＣＦＴＲの量を増加させ、それによって、患者においてそれまでなかったＣＦＴＲ活性を誘発させるか、または患者における残留ＣＦＴＲ活性の存在レベルを上昇させる。
【０１８１】
一実施形態では、本発明の化合物および組成物は、残留ＣＦＴＲ活性、例えばクラスＩＩＩ変異（制御またはゲート開閉の障害）、クラスＩＶ変異（コンダクタンスの変化）、またはクラスＶ変異（合成の低下）を示す特定の遺伝子型（Ｌｅｅ Ｒ． Ｃｈｏｏ−Ｋａｎｇ、Ｐａｍｅｌａ Ｌ．，Ｚｅｉｔｌｉｎ、Ｔｙｐｅ Ｉ，ＩＩ，ＩＩＩ，ＩＶ，ａｎｄ Ｖ ｃｙｓｔｉｃ ｆｉｂｒｏｓｉｓ Ｔａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ Ｃｏｎｄｕｃｔａｎｃｅ Ｒｅｇｕｌａｔｏｒ Ｄｅｆｅｃｔｓ ａｎｄ Ｏｐｐｏｒｔｕｎｉｔｉｅｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｙ；Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ６巻：５２１〜５２９頁、２０００年）の患者の嚢胞性線維症を治療するまたはその重症度を軽減するのに有用である。残留ＣＦＴＲ活性を示す遺伝子型の他の患者には、これらのクラスの１つに対してホモ接合性であるか、またはクラスＩ変異、クラスＩＩ変異もしくはそうしたクラスのない変異を含む任意の他の部類の変異とヘテロ接合性である患者が含まれる。
【０１８２】
一実施形態では、本発明の化合物および組成物は、特定の臨床表現型、例えば、上皮の頂端膜での残留ＣＦＴＲ活性の量と一般に相関する中程度〜軽度の臨床表現型の患者の嚢胞性線維症を治療するまたはその重症度を軽減するのに有用である。そうした表現型は、膵機能不全を示す患者、または特発性膵炎および先天性両側性輸精管欠損もしくは軽度の肺疾患と診断された患者を含む。
【０１８３】
必要とされる正確な量は、対象の種、年齢および全身状態、感染症の重症度、具体的な薬剤、その投与方式などによって対象毎に変わることになる。発明の化合物は、好ましくは、投与を容易にし投薬を均一にする投薬単位形態で処方する。本明細書で用いる「投薬単位形態」という表現は、治療を受ける患者に適した物理的に離散した薬剤の単位を指す。しかし、本発明の化合物および組成物の合計日用量は、健全な医学的判断の範囲内で、担当医によって判断されることになることを理解されよう。特定の任意の患者または生命体のための具体的な有効量レベルは、治療を受ける障害およびその障害の重症度；使用する具体的な化合物の活性；使用する具体的な組成物；患者の年齢、体重、全体的な健康、性別および食事；使用する具体的な化合物の投与時間、投与経路および排出速度；治療の期間；使用する具体的な化合物と併用するかまたは同時に使用する薬物を含む様々な因子、ならびに医学的技術分野で周知の同様の因子に依存することになる。本明細書で用いる「患者」という用語は、動物、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトを意味する。
【０１８４】
本発明の薬学的に許容される組成物は、治療を受ける感染症の重症度に応じて、経口、経直腸、非経口、嚢内、経膣、腹腔内、局所（粉剤、軟膏剤または滴下剤（ｄｒｏｐ）またはパッチ剤）、頬側で、また、経口または経鼻スプレーなどでヒトや他の動物に投与することができる。特定の実施形態では、本発明の化合物は、所望の治療効果を得るために、１日に対象体重当たり約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇの投薬レベルで、日に１回または複数回、経口または非経口で投与することができる。
【０１８５】
経口投与用の液体剤形には、これらに限定されないが、薬学的に許容される乳剤、マイクロエマルジョン、液剤、懸濁剤、シロップ剤およびエリキシル剤が含まれる。活性化合物に加えて、液体剤形は、当業界で通常用いられる不活性賦形剤、例えば水または他の溶媒、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、オイル（具体的には、綿実油、ラッカセイ油、コーンオイル、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油およびゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコールおよびソルビタンの脂肪酸エステルならびにその混合物などの可溶化剤および乳化剤などを含むことができる。不活性賦形剤の他に、経口組成物は、湿潤剤、乳化剤および懸濁化剤、甘味剤、香味剤ならびに芳香剤などの補助剤も含むことができる。
【０１８６】
注射用製剤、例えば滅菌した水性または油性の注射用懸濁剤は、適切な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を用いて当分野の公知の技術によって処方することができる。滅菌注射用製剤は、非毒性の非経口的に許容される賦形剤もしくは溶媒中の滅菌注射用の液剤、懸濁剤または乳剤、例えば１，３−ブタンジオール中の液剤であってもよい。使用できる許容される媒体および溶媒には、水、リンガー溶液、Ｕ．Ｓ．Ｐ．および等張性塩化ナトリウム溶液がある。さらに、滅菌固定油は、溶媒または懸濁化媒体として慣用的に使用される。そのために、合成モノ−またはジグリセリドを含む任意の滅菌固定油を用いることができる。さらに、オレイン酸などの脂肪酸が、注射用物質の製剤で使用される。
【０１８７】
注射用処方物は、例えば、細菌保持フィルターでろ過するか、あるいは、使用前に滅菌水または他の滅菌注射用媒体中に溶解または分散させることができる滅菌固体組成物の形態の滅菌剤を混ぜ込むことによって滅菌することができる。
【０１８８】
本発明の化合物の作用を持続させるために、皮下または筋肉内注射による化合物の吸収を遅延させることがしばしば望ましい。これは、水への溶解性の低い結晶性または無定型の物質の懸濁液を使用することによって実現することができる。化合物の吸収速度はその溶解速度に依存する。したがってその速度は結晶サイズや結晶形態に依存する。あるいは、非経口で投与された化合物形態の吸収を遅延させることは、それを油性媒体に溶解または懸濁させることによって実現される。注射用デポー形態は、ポリラクチド−ポリグリコリドなどの生分解性ポリマー中に、化合物のマイクロカプセル化マトリックスを形成させることによって作製される。化合物とポリマーの比、および使用する具体的なポリマーの特性に応じて、化合物の放出速度を制御することができる。他の生分解性ポリマーの例には、ポリ（オルトエステル）およびポリ（アンヒドリド）が含まれる。デポー注射用処方物は、生体組織に適合するリポソームまたはマイクロエマルジョン中に化合物を取り込むことによっても調製される。
【０１８９】
経直腸または経膣投与のための組成物は、本発明の化合物を、周囲温度では固体であるが体温で液体であり、したがって、直腸または膣腔内で溶融して活性化合物を放出する、ココアバター、ポリエチレングリコールまたは坐薬用ワックスなどの適切な非刺激性の添加剤または担体と混合することによって調製することができる。
【０１９０】
経口投与用の固体剤形には、カプセル剤、錠剤、丸薬、粉剤および顆粒剤が含まれる。そうした固体剤形では、活性化合物を、少なくとも１つの薬学的に許容される不活性な添加剤または担体、例えばクエン酸ナトリウムまたは第二リン酸カルシウム、および／または、ａ）フィラーすなわち増量剤、例えばデンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトールおよびケイ酸、ｂ）結合剤、例えばカルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリジノン、スクロースおよびアカシア、ｃ）保湿剤、例えばグリセロール、ｄ）崩壊剤、例えば寒天、炭酸カルシウム、バレイショまたはタピオカデンプン、アルギン酸、ある種のケイ酸塩、および炭酸ナトリウム、ｅ）溶解遅延剤、例えばパラフィン、ｆ）吸収促進剤、例えば四級アンモニウム化合物、ｇ）湿潤剤、例えばセチルアルコールおよびグリセロールモノステアレート、ｈ）吸収剤、例えばカオリンおよびベントナイト粘土、ならびに、ｉ）滑沢剤、例えばタルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウムおよびその混合物と混合させる。カプセル剤、錠剤および丸薬の場合、その剤形は緩衝剤を含むこともできる。
【０１９１】
同様の種類の固体組成物は、ラクトースまたは乳糖ならびに高分子量のポリエチレングリコールなどの添加剤を用いて、軟質および硬質のゼラチンカプセル中のフィラーとして用いることもできる。固体剤形の錠剤、糖衣錠、カプセル剤、丸薬および顆粒剤は、腸溶コーティングおよび製薬技術分野で周知の他のコーティングなどのコーティングおよびシェルを用いて調製することができる。それらは、任意選択で乳白剤を含むことができ、また、任意選択で遅延した形で、腸管内の特定の部分において、活性成分だけか、またはそれを優先して放出する組成物でできていてもよい。使用できる埋込み型組成物の例には、高分子物質およびワックスが含まれる。同種の固体組成物は、ラクトースまたは乳糖ならびに高分子量のポリエチレングリコールなどの添加剤を用いて、軟質および硬質のゼラチンカプセル中のフィラーとして用いることもできる。
【０１９２】
活性化合物は、上記したような１つまたは複数の添加剤でマイクロカプセル化した形態であってもよい。固体剤形の錠剤、糖衣錠、カプセル剤、丸薬および顆粒剤は、腸溶コーティング、放出制御コーティングおよび製薬技術分野で周知の他のコーティングなどのコーティングおよびシェルを用いて調製することができる。このような固体剤形では、活性化合物を、スクロース、ラクトースまたはデンプンなどの少なくとも１つの不活性賦形剤と混合することができる。そうした剤形は、通常実施されるように、不活性賦形剤以外の他の物質、例えば、ステアリン酸マグネシウムや微結晶性セルロースのような錠剤化用滑沢剤および他の錠剤化用助剤も含むことができる。カプセル剤、錠剤および丸薬の場合、その剤形は緩衝剤を含むこともできる。それらは任意選択で乳白剤を含むことができ、また、任意選択で遅延した形で、腸管内の特定の部分において、活性成分だけを放出するか、またはそれを優先して放出する組成物でできていてもよい。使用できる埋込み型組成物の例には、高分子物質およびワックスが含まれる。
【０１９３】
本発明の化合物の局所または経皮投与のための剤形は、軟膏剤、ペースト剤、クリーム剤、ローション剤、ゲル剤、粉剤、液剤、噴霧剤、吸入剤またはパッチ剤を含む。活性成分は、無菌条件下で、薬学的に許容される担体、必要に応じて任意の所要保存剤または緩衝剤と混合する。眼科用処方物、点耳剤および点眼剤も考えられ、これらも本発明の範囲内である。さらに、本発明は、身体に化合物を制御放出するという追加的な利点を有する経皮パッチ剤の使用を考慮する。そうした剤形は、適切な媒体中に化合物を溶解または分散させて調製される。吸収促進剤を用いて、皮膚を通る化合物フラックスを増大させることもできる。その速度は、速度制御膜を提供するか、またはポリマーマトリックスもしくはゲル中に化合物を分散させることによって制御することができる。
【０１９４】
ＣＦＴＲの修飾因子として本発明で使用する化合物の活性は、当業界および本明細書の実施例で概略説明されている方法によってアッセイすることができる。
【０１９５】
本発明の化合物および薬学的に許容される組成物は、併用治療で使用できる、すなわち、その化合物および薬学的に許容される組成物を１つもしくは複数の他の所望治療薬または医学的手順と同時か、それに先行するかまたはその後に投与できる治療で使用できることも理解されよう。併用レジメンにおいて用いる治療の具体的な組合せ（治療薬または手順）については、所望の治療薬および／または手順の適合性および達成すべき所望の治療効果を考慮に入れることになる。用いる治療法は、同じ障害について所望の効果を達成することができる（例えば、本発明の化合物を、同じ障害を治療するのに使用される別の薬剤と同時に投与することができる）、またはそれらは異なる効果（例えば、何らかの副作用の制御）を達成できることも理解されよう。本明細書で使用するような、特定の疾患または状態を治療または予防するために通常投与される追加の治療薬は、「治療を受ける疾患または状態に適している」ものとして公知である。
【０１９６】
一実施形態では、追加の薬剤は、粘液溶解薬、気管支拡張薬、抗生物質、抗感染症薬、抗炎症薬、本発明の化合物以外のＣＦＴＲ修飾因子または栄養剤から選択される。他の実施形態では、追加の薬剤は本発明の化合物以外のＣＦＴＲ修飾因子である。
【０１９７】
一実施形態では、追加の薬剤は抗生物質である。本明細書で有用な抗生物質の例には、トブラマイシン吸入用粉末（ＴＩＰ）を含むトブラマイシン、アジスロマイシン、エアロゾール化された形態のアズトレオナムを含むアズトレオナム、そのリポソーム製剤を含むアミカシン、吸入による投与に適したその製剤を含むシプロフロキサシン、そのエアロゾール化された製剤を含むレボフロキサシ、ならびに２つの抗生物質、例えばホスホマイシンとトブラマイシンの組合せが含まれる。
【０１９８】
他の実施形態では、追加の薬剤は粘液溶解薬である。本明細書で有用な粘液溶解薬の例には、Ｐｕｌｍｏｚｙｍｅ（登録商標）が含まれる。
【０１９９】
他の実施形態では、追加の薬剤は気管支拡張薬である。気管支拡張薬の例には、アルブテロール、硫酸メタプロテレノール、酢酸ピルブテロール、サルメテロールまたは硫酸テトラブリンが含まれる。
【０２００】
他の実施形態では、追加の薬剤は、肺気道表面液の回復に効果的なものである。そうした薬剤は、細胞の内外での塩の動きを向上させ、肺気道中の粘液がより潤う、したがってより簡単にのどがすっきりとなるようにする。そうした薬剤の例には、高張食塩水、デヌホソル四ナトリウム（［［（３Ｓ，５Ｒ）−５−（４−アミノ−２−オキソピリミジン−１−イル）−３−ヒドロキシオキソラン−２−イル］メトキシ−ヒドロキシホスホリル］［［［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−５−（２，４−ジオキソピリミジン−１−イル）−３、４−ジヒドロキシオキソラン−２−イル］メトキシ−ヒドロキシホスホリル］オキシ−ヒドロキシホスホリル］リン酸水素）またはｂｒｏｎｃｈｉｔｏｌ（マンニトールの吸入用製剤）が含まれる。
【０２０１】
他の実施形態では、追加の薬剤は、抗炎症薬、すなわち肺の炎症を低減できる薬剤である。本明細書で有用なそうした薬剤の例には、イブプロフェン、ドコサヘキサエン酸（ｄｏｃｏｓａｈｅｘａｎｏｉｃ ａｃｉｄ）（ＤＨＡ）、シルデナフィル、吸入用グルタチオン、ピオグリタゾン、ヒドロキシクロロキンまたはシンバスタチン（ｓｉｍａｖａｓｔａｔｉｎ）が含まれる。
【０２０２】
他の実施形態では、追加の薬剤は、チャンネルを遮断することによって直接的に、またはＥＮａＣ活性の増大をもたらすプロテアーゼ（例えば、セリンプロテアーゼ（ｓｅｉｎｅ ｐｒｏｔｅａｓｅ）、チャンネル−活性化プロテアーゼ）の調節によって間接的に上皮のナトリウムチャンネルブロッカー（ＥＮａＣ）の活性を低下させる。そうした薬剤の例には、カモスタット（トリプシン様プロテアーゼ阻害剤）、ＱＡＵ１４５、５５２−０２、ＧＳ−９４１１、ＩＮＯ−４９９５、Ａｅｒｏｌｙｔｉｃおよびアミロリドが含まれる。上皮のナトリウムチャンネルブロッカー（ＥＮａＣ）の活性を低下させる追加の薬剤は、例えばＰＣＴ出願番号ＷＯ２００９／０７４５７５に見ることができる。その内容全体を参照により本明細書に組み込む。
【０２０３】
本明細書で説明する他の疾患の中では、式Ｉの化合物などのＣＦＴＲ修飾因子とＥＮａＣの活性を低下させる薬剤の組合せを、リドル症候群、嚢胞性線維症を含む炎症またはアレルギー状態、原発性線毛機能不全、慢性気管支炎、慢性閉塞性肺疾患、ぜんそく、呼吸管感染症、肺癌、口腔乾燥症および乾性角結膜炎（ｋｅｒａｔｏｃｏｎｊｕｎｃｔｉｖｉｔｉｓ ｓｉｒｅ）、呼吸管感染症（急性および慢性；ウイルス性および細菌性）ならびに肺癌を治療するために使用する。
【０２０４】
式Ｉの化合物などのＣＦＴＲ修飾因子とＥＮａＣの活性を低下させる薬剤の組合せは、上皮を貫通する異常な流体制御に関係し、おそらくその表面上の保護表面液の生理学的異常を伴う呼吸器系疾患以外の疾患、例えば口腔乾燥症（口渇）または乾性角結膜炎（ドライアイ）も含む、上皮のナトリウムチャンネルの遮断によって媒介される疾患を治療するのにも有用である。さらに、腎臓における上皮のナトリウムチャンネルの遮断は、利尿を促進させ、それによって血圧低下作用を誘発させるために使用することができる。
【０２０５】
ぜんそくには、内因性（非アレルギー性）ぜんそくと外因性（アレルギー）ぜんそくの両方、軽度のぜんそく、中程度のぜんそく、重度のぜんそく、気管支ぜんそく、運動誘発性ぜんそく、職業性ぜんそくおよび細菌感染に続いて誘発されるぜんそくが含まれる。ぜんそくの治療は、ゼーゼーという症状を示し、主要な医学関連の確立された患者区分であり現在しばしば初期または早期ぜんそく患者（便宜上この特別なぜんそく状態は「ぜんそく幼児（ｗｈｅｅｚｙ ｉｎｆａｎｔ）症候群」と称される）として特定される「ぜんそく幼児」として診断されるかまたは診断可能な例えば４才または５才未満の対象の治療も包含することを理解されたい。ぜんそくの治療における予防的効能は、症候発作、例えば急性ぜんそく性発作もしくは気管支収縮剤発作の頻度または重症度の低下、肺機能の改善または気道過反応性の改善によって証明される。それは、例えば抗炎症剤（例えば、コルチコステロイド）または気管支拡張剤により起こる場合、他の対症療法、すなわち症候発作を抑えるかまたは止めるための治療の必要性を少なくすることによってさらに証明され得る。ぜんそくにおける予防的利益は、「モーニングディッピング（ｍｏｒｎｉｎｇ ｄｉｐｐｉｎｇ）」の傾向がある対象において特に明らかであり得る。「モーニングディッピング」は、相当な割合のぜんそく患者に共通しており、例えば、おおよそ午前４〜６時の間、すなわち、それまで施された任意の症候ぜんそく治療から通常相当間をおいた時間でのぜんそく発作を特徴とする、認識されているぜんそく症候群である。
【０２０６】
慢性閉塞性肺疾患は、慢性気管支炎またはそれに伴う呼吸困難、肺気腫、ならびに薬物治療、特に他の吸入薬物治療の結果として起こる気道過反応性の増悪を含む。いくつかの実施形態では、式Ｉの化合物などのＣＦＴＲ修飾因子とＥＮａＣの活性を低下させる薬剤の併用は、急性、アラキン酸性、カタル性、クループ性、慢性もしくはフチノイド性の気管支炎を含むどんなタイプまたは由来の気管支炎の治療にも有用である。
【０２０７】
他の実施形態では、追加の薬剤は、式Ｉの化合物以外のＣＦＴＲ修飾因子、すなわち、ＣＦＴＲ活性を調節するのに有効な薬剤である。そうした薬剤の例には、アタルレン（「ＰＴＣ１２４（登録商標）」；３−［５−（２−フルオロフェニル）−１，２，４−オキサジアゾール−３−イル］安息香酸）、シナプルチド、ランコブチド（ｌａｎｃｏｖｕｔｉｄｅ）、デペレスタット（ヒト組換え好中球エラスターゼ阻害剤）、コビプロストン（７−｛（２Ｒ、４ａＲ、５Ｒ、７ａＲ）−２−［（３Ｓ）−１，１−ジフルオロ−３−メチルペンチル］−２−ヒドロキシ−６−オキソオクタヒドロシクロペンタ［ｂ］ピラン−５−イル｝ヘプタン酸）または（３−（６−（１−（２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）シクロプロパンカルボキシアミド）−３−メチルピリジン−２−イル）安息香酸が含まれる。他の実施形態では、追加の薬剤は（３−（６−（１−（２，２−ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール−５−イル）シクロプロパンカルボキシアミド）−３−メチルピリジン−２−イル）安息香酸である。
【０２０８】
他の実施形態では、追加の薬剤は栄養剤である。そうした薬剤の例には、Ｐａｎｃｒｅａｓｅ（登録商標）、Ｐａｎｃｒｅａｃａｒｂ（登録商標）、Ｕｌｔｒａｓｅ（登録商標）もしくはＣｒｅｏｎ（登録商標）、Ｌｉｐｒｏｔｏｍａｓｅ（登録商標）（以前はＴｒｉｚｙｔｅｋ（登録商標））、Ａｑｕａｄｅｋｓ（登録商標）を含むパンクレリパーゼ（パンクレアチン酵素補充療法剤（ｐａｎｃｒｅａｔｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅ ｒｅｐｌａｃｅｍｅｎｔ））またはグルタチオン吸入剤が含まれる。一実施形態では、追加の栄養剤はパンクレリパーゼである。
【０２０９】
本発明の組成物中に存在する追加の治療薬の量は、その治療薬を唯一の活性剤として含む組成物で通常投与される量を超えないことになる。好ましくは、本発明で開示する組成物中の追加の治療薬の量は、その治療薬を唯一の治療用活性剤として含む組成物中に通常存在する量の約５０％〜１００％の範囲となる。
【０２１０】
本発明の化合物または薬学的に許容されるその組成物は、人工装具、人工弁、代用血管、ステントおよびカテーテルなどの埋込み型医療デバイスをコーティングするための組成物中に取り込むこともできる。したがって、本発明は、他の態様では、上記に概略説明し、かつ本明細書での部類および下位部類にある本発明の化合物ならびに前記埋込み型デバイスをコーティングするのに適した担体を含む、埋込み型デバイスをコーティングする組成物を含む。さらに他の態様では、本発明は、上記に概略説明し、かつ本明細書での部類および下位部類にある本発明の化合物ならびに前記埋込み型デバイスをコーティングするのに適した担体を含む組成物でコーティングされた埋込み型デバイスを含む。適切なコーティング、およびコーティングされた埋込み型デバイスの一般的な作製法は、米国特許第６，０９９，５６２号、同第５，８８６，０２６号および同第５，３０４，１２１号に記載されている。コーティングはヒドロゲルポリマー、ポリメチルジシロキサン、ポリカプロラクトン、ポリエチレングリコール、ポリ乳酸、エチレン酢酸ビニルおよびその混合物などの一般に生体適合性のあるポリマー材料である。そのコーティングを、フルオロシリコーン、多糖、ポリエチレングリコール、リン脂質またはその組合せの適切なトップコートで任意選択でさらに被覆して組成物に制御放出の特性を付与することができる。
【０２１１】
本発明の他の態様は、生物学的試料または患者のＣＦＴＲ活性（例えば、インビトロまたはインビボで）を調節する方法であって、式（Ｉ）の化合物または前記化合物を含む組成物を患者に投与するか、またはそれを前記生物学的試料と接触させる方法に関する。本明細書で用いる「生物学的試料」という用語は、これらに限定されないが、細胞培養物またはその抽出物；哺乳動物から得られた生検材料またはその抽出物；および血液、唾液、尿、糞便、精液、涙液または他の体液もしくはその抽出物を含む。
【０２１２】
生物学的試料におけるＣＦＴＲの調節は、当業者に公知である様々な目的に有用である。そうした目的の例には、これらに限定されないが、生物学的および病理学的現象におけるＣＦＴＲの研究；ＣＦＴＲの新規な修飾因子の比較評価が含まれる。
【０２１３】
さらに他の実施形態では、前記チャンネルを式（Ｉ）の化合物と接触させるステップを含む、インビトロまたはインビボで陰イオンチャンネルの活性を調節する方法を提供する。好ましい実施形態では、陰イオンチャンネルは塩素イオンチャンネルまたは重炭酸塩イオンチャンネルである。他の好ましい実施形態では、陰イオンチャンネルは塩素イオンチャンネルである。
【０２１４】
代替の実施形態によれば、本発明は、細胞膜中の機能性ＣＦＴＲの数を増加させる方法であって、前記細胞を式（Ｉ）の化合物と接触させるステップを含む方法を提供する。
【０２１５】
他の好ましい実施形態によれば、ＣＦＴＲの活性は、膜貫通電位を測定することによって測られる。生物学的試料の膜貫通電位を測定する手段としては、光学的膜電位アッセイまたは他の電気生理学的方法などの当業界で公知の方法のいずれかを用いることができる。
【０２１６】
光学的膜電位アッセイは、Ｇｏｎｚａｌｅｚ ａｎｄ Ｔｓｉｅｎが記載している（Ｇｏｎｚａｌｅｚ，Ｊ． Ｅ． ａｎｄ Ｒ． Ｙ． Ｔｓｉｅｎ（１９９５年）「Ｖｏｌｔａｇｅ ｓｅｎｓｉｎｇ ｂｙ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ ｅｎｅｒｇｙ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｉｎ ｓｉｎｇｌｅ ｃｅｌｌｓ．」Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｊ ６９巻（４号）：１２７２〜８０頁、およびＧｏｎｚａｌｅｚ，Ｊ． Ｅ． ａｎｄ Ｒ． Ｙ． Ｔｓｉｅｎ（１９９７年）；「Ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｉｎｄｉｃａｔｏｒｓ ｏｆ ｃｅｌｌ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｔｈａｔ ｕｓｅ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ ｅｎｅｒｇｙ ｔｒａｎｓｆｅｒ」Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ ４巻（４号）：２６９〜７７頁を参照されたい）電位感受性ＦＲＥＴセンサーを、電圧／イオンプローブリーダー（ＶＩＰＲ）などの蛍光変化を測定する装置（Ｇｏｎｚａｌｅｚ，Ｊ． Ｅ．、Ｋ． Ｏａｄｅｓら（１９９９年）「Ｃｅｌｌ−ｂａｓｅｄ ａｓｓａｙｓ ａｎｄ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｉｏｎ−ｃｈａｎｎｅｌ ｔａｒｇｅｔｓ」Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ Ｔｏｄａｙ ４巻（９号）：４３１〜４３９頁を参照されたい）と共に使用する。
【０２１７】
これらの電位感受性アッセイは、膜溶解性の電位感受性染料ＤｉＳＢＡＣ２（３）と蛍光リン脂質ＣＣ２−ＤＭＰＥ（これは、原形質膜の外葉と結合しており、ＦＲＥＴ供与体として働く）の間の蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）の変化を基にしている。膜電位（Ｖｍ）の変化は、負の電荷を帯びたＤｉＳＢＡＣ２（３）を、原形質膜を通して再分配させ、したがって、ＣＣ２−ＤＭＰＥからのエネルギー移動量は変化する。蛍光発光の変化は、９６ウェルまたは３８４ウェルのマイクロタイタープレートにおいて、細胞に基づくスクリーンとなるように設計された統合液体処理装置（ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ｌｉｑｕｉｄ ｈａｎｄｌｅｒ）および蛍光検出器である、ＶＩＰＲ（商標）ＩＩを用いてモニターすることができる。
【０２１８】
他の態様では、本発明は、（ｉ）式（Ｉ）の化合物または上記実施形態のいずれかを含む組成物；および、（ｉｉ）ａ．）その組成物を生物学的試料と接触させ、ｂ．）前記ＣＦＴＲまたはそのフラグメントの活性を測定するための取扱説明書を含む、インビトロまたはインビボでの生物学的試料中のＣＦＴＲまたはそのフラグメントの活性を測定するのに使用するためのキットを提供する。一実施形態では、そのキットは、ａ．）追加の組成物を生物学的試料と接触させ、ｂ．）前記追加の化合物の存在下で前記ＣＦＴＲまたはそのフラグメントの活性を測定し、ｃ．）追加の化合物の存在下でのＣＦＴＲの活性を、式（Ｉ）の組成物の存在下でのＣＦＴＲの密度と比較するための取扱説明書をさらに含む。好ましい実施形態では、キットを、ＣＦＴＲの密度を測定するために使用する。
【０２１９】
本明細書で説明する本発明がより完全に理解されるように、以下の実施例を示す。これらの実施例は、例示のためだけのものであり、本発明を限定するものと解釈されるものではないことを理解すべきである。
【０２２０】
式Ｉの化合物を作製するための方法および中間体
本発明の他の態様は、式（Ｉｃ）の化合物：
【０２２１】
【化４８】
または薬学的に許容されるその塩を調製する方法であって、
（ａ）式１ｄの酸を式２ｃのアミンと反応させて式（Ｉｃ）の化合物
【０２２２】
【化４９】
（式中、環Ａは、
【０２２３】
【化５０】
から選択され、
Ｒ１は、−ＣＨ３、−ＣＦ３または−ＣＮであり、
Ｒ２は、水素、−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり、
Ｒ３は、水素、−ＣＨ３、−ＯＣＨ３または−ＣＮであり、
ただし、Ｒ２とＲ３は同時に水素であることはなく、
Ｒａは、水素、またはトリメチルシリル（ＴＭＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）、トリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）および［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル（ＳＥＭ）からなる群から選択されるシリル保護基であり、
ＸおよびＹの一方は窒素であり、もう一方は炭素である）
を提供する方法に関する。
【０２２４】
一実施形態では、式１ｄの酸と式２ｃのアミンの反応を、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）およびトリエチルアミンが存在する溶媒中、またはプロピルホスホン酸環状無水物（Ｔ３Ｐ（登録商標））およびピリジンが存在する溶媒中で実施する。より具体的には、その溶媒はＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、酢酸エチルまたは２−メチルテトラヒドロフランを含む。
【０２２５】
他の実施形態では、Ｒａは水素またはＴＢＤＭＳである。
【０２２６】
他の実施形態では、ＲａはＴＢＤＭＳである。
【０２２７】
他の実施形態では、上記方法は、例えば、環Ａが
【０２２８】
【化５１】
（式中、Ｒａはシリル保護基である）
である場合、環Ａが
【０２２９】
【化５２】
である式Ｉの化合物を生成する脱保護ステップをさらに含む。一般に、シリル保護基の除去には、酢酸または希薄鉱酸などの酸で処理する必要があるが、フッ素イオンの供給源（例えば、テトラブチルアンモニウムフルオリド）などの他の試薬を使用することもできる。
【０２３０】
この方法では、式２ｃのアミンを式２ａの化合物から調製する方法であって、
（ａ）式２ａの化合物を式３のアミンと反応させて式２ｂの化合物
【０２３１】
【化５３】
（式中、Ｈａｌは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩであり、
式３のアミンは
【０２３２】
【化５４】
である）
を得るステップと、
（ｂ）式２ｂの化合物を還元して式２ｃのアミン
【０２３３】
【化５５】
を得るステップと
を含む方法である。
【０２３４】
式２ｃのアミンを作製する方法の１つの実施形態では、ステップ（ａ）の式３のアミンを、アミン塩酸塩などの対応する四級アンモニウム塩からインサイチュで生成させるが、他のアンモニウム塩（例えば、トリフルオロ酢酸塩）を使用することもできる。
【０２３５】
式２ｃのアミンを生成させるためのステップ（ａ）の１つの実施形態では、式３のアミンが
【０２３６】
【化５６】
である場合、Ｒａは水素またはＴＢＤＭＳである。より具体的には、ＲａはＴＢＤＭＳである。
【０２３７】
他の実施形態では、ステップ（ａ）を、第３アミン塩基の存在下、極性非プロトン性溶媒中で実施する。使用できる溶媒の例には、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシドまたはアセトニトリルが含まれる。使用できる第３アミンの例には、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、１，５−ジアザビシクロ［４．３．０］ノナ−５−エン（ＤＢＮ）、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（ＤＢＵ）、１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン（ＤＡＢＣＯ）およびピリジンが含まれる。
【０２３８】
一実施形態では、第３アミン塩基はトリエチルアミンである。
【０２３９】
他の実施形態では、ステップ（ａ）を、トリエチルアミンの存在下、アセトニトリル中で実施する。
【０２４０】
他の実施形態では、ステップ（ａ）の反応温度は約７５℃から約８５℃の間である。
【０２４１】
他の実施形態では、ステップ（ａ）の反応時間は約２から約３０時間の間である。
【０２４２】
式２ｃのアミンを作製する方法の１つの実施形態では、ステップ（ｂ）を、パラジウム触媒の存在下、極性プロトン性溶媒または極性プロトン性溶媒の混合物中で実施する。パラジウムが触媒である場合、ステップ（ｂ）の溶媒は一般にアルコールなどの極性プロトン性溶媒である。より具体的には、溶媒は、メタノールまたはエタノールを含む。
【０２４３】
他の実施形態では、ステップ（ｂ）を、ＦｅおよびＦｅＳＯ４またはＺｎおよびＡｃＯＨの存在下、水などの極性プロトン性溶媒中で実施する。
【０２４４】
本発明の他の態様は、式Ｉｃの化合物：
【０２４５】
【化５７】
または薬学的に許容されるその塩を調製する方法であって、
（ａ）式２ａの化合物を式３のアミンと反応させて式２ｂの化合物
【０２４６】
【化５８】
を得るステップと、
（ｂ）前記式２ｂの化合物を水素化により前記式２ｃのアミン
【０２４７】
【化５９】
に転換させるステップと、
（ｃ）前記式２ｃのアミンを式１ｄの酸と反応させて式Ｉの化合物
【０２４８】
【化６０】
（式中、
Ｈａｌは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩであり、
前記式３のアミンは
【０２４９】
【化６１】
であり、
環Ａは
【０２５０】
【化６２】
から選択され、
Ｒ１は、−ＣＨ３、−ＣＦ３または−ＣＮであり、
Ｒ２は、水素、−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり、
Ｒ３は、水素、−ＣＨ３、−ＯＣＨ３または−ＣＮであり、
ただし、Ｒ２とＲ３は同時に水素であることはなく、
Ｒａは、水素、またはトリメチルシリル（ＴＭＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）、トリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）および［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル（ＳＥＭ）からなる群から選択されるシリル保護基であり、
ＸおよびＹの一方は窒素であり、もう一方は炭素である）
を得るステップを含む方法に関する。
【０２５１】
一実施形態では、ステップ（ａ）の式３のアミンを、アミン塩酸塩などの対応する四級アンモニウム塩からインサイチュで生成させるが、他のアンモニウム塩（例えば、トリフルオロ酢酸塩）を使用することもできる。
【０２５２】
式２ｃのアミンを生成させるためのステップ（ａ）の１つの実施形態では、式３のアミンが
【０２５３】
【化６３】
である場合、Ｒａは水素またはＴＢＤＭＳである。より具体的には、ＲａはＴＢＤＭＳである。
【０２５４】
他の実施形態では、ステップ（ａ）を、第３アミン塩基の存在下、極性非プロトン性溶媒中で実施する。使用できる溶媒の例には、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシドまたはアセトニトリルが含まれる。使用できる第３アミンの例には、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、１，５−ジアザビシクロ［４．３．０］ノナ−５−エン（ＤＢＮ）、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（ＤＢＵ）、１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン（ＤＡＢＣＯ）およびピリジンが含まれる。
【０２５５】
一実施形態では、第３アミン塩基がトリエチルアミンである。
【０２５６】
他の実施形態では、ステップ（ａ）を、トリエチルアミンの存在下、アセトニトリル中で実施する。
【０２５７】
他の実施形態では、ステップ（ａ）の反応温度は約７５℃から約８５℃の間である。
【０２５８】
他の実施形態では、ステップ（ａ）の反応時間は約２から約３０時間の間である。
【０２５９】
式２ｃのアミンを作製する方法の１つの実施形態では、ステップ（ｂ）を、パラジウム触媒の存在下、極性プロトン性溶媒または極性プロトン性溶媒の混合物中で実施する。パラジウムが触媒である場合、ステップ（ｂ）の溶媒は一般にアルコールなどの極性プロトン性溶媒である。より具体的には、メタノールまたはエタノールを含む。
【０２６０】
他の実施形態では、ステップ（ｂ）を、ＦｅおよびＦｅＳＯ４またはＺｎおよびＡｃＯＨの存在下、水などの極性プロトン性溶媒中で実施する。
【０２６１】
ステップ（ｃ）の１つの実施形態では、式１ｄの酸と式２ｃのアミンの反応を、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）およびトリエチルアミンが存在する溶媒中、またはプロピルホスホン酸環状無水物（Ｔ３Ｐ（登録商標））およびピリジンが存在する溶媒中で実施する。より具体的には、溶媒は、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、酢酸エチルまたは２−メチルテトラヒドロフランを含む。
【０２６２】
他の実施形態では、Ｒａは水素またはＴＢＤＭＳである。
【０２６３】
他の実施形態では、ＲａはＴＢＤＭＳである。
【０２６４】
他の実施形態では、上記方法は、例えば環Ａが
【０２６５】
【化６４】
（式中、Ｒａはシリル保護基である）
である場合、環Ａが
【０２６６】
【化６５】
である式Ｉの化合物を生成する脱保護ステップをさらに含む。一般に、シリル保護基の除去は、酢酸または希薄鉱酸などの酸で処理する必要があるが、フッ素イオンの供給源（例えば、テトラブチルアンモニウムフルオリド）などの他の試薬を使用することもできる。
【０２６７】
本発明の他の態様は、
【０２６８】
【化６６】
（式中、環Ａは、
【０２６９】
【化６７】
であり、
Ｒ１は、−ＣＨ３、−ＣＦ３または−ＣＮであり、
Ｒａは、水素、またはトリメチルシリル（ＴＭＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）、トリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）および［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル（ＳＥＭ）からなる群から選択されるシリル保護基であり、
ＸおよびＹの一方は窒素であり、もう一方は炭素である）
である化合物に関する。
【０２７０】
本発明の他の態様は、
【０２７１】
【化６８】
（式中、環Ａは
【０２７２】
【化６９】
であり、
Ｒ１は、−ＣＨ３、−ＣＦ３または−ＣＮであり、
Ｒａは、水素、またはトリメチルシリル（ＴＭＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）、トリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）および［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル（ＳＥＭ）からなる群から選択されるシリル保護基であり、
ＸおよびＹの一方は窒素であり、もう一方は炭素である）
である化合物に関する。
【０２７３】
本発明の他の態様は、式Ｉｃの化合物：
【０２７４】
【化７０】
または薬学的に許容されるその塩
（式中、環Ａは、
【０２７５】
【化７１】
から選択され、
Ｒ１は、−ＣＨ３、−ＣＦ３または−ＣＮであり、
Ｒ２は、水素、−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり、
Ｒ３は、水素、−ＣＨ３、−ＯＣＨ３または−ＣＮであり、
ただし、Ｒ２とＲ３は同時に水素であることはなく、
Ｒａは、トリメチルシリル（ＴＭＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）およびトリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）および［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル（ＳＥＭ）からなる群から選択されるシリル保護基であり、ＸおよびＹの一方は窒素であり、もう一方は炭素である）に関する。
【０２７６】
本発明の他の態様は、本明細書で開示するいずれかの方法で作製された式Ｉの化合物；
【０２７７】
【化７２】
または薬学的に許容されるその塩
（式中、環Ａは、
【０２７８】
【化７３】
から選択され、
Ｒ１は、−ＣＨ３、−ＣＦ３または−ＣＮであり、
Ｒ２は、水素、−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり、
Ｒ３は、水素、−ＣＨ３、−ＯＣＨ３または−ＣＮであり、
ＸおよびＹの一方は窒素であり、もう一方は炭素である）に関する。
【０２７９】
本発明の他の態様は、本明細書で開示するいずれかの方法で作製された
【０２８０】
【化７４】
からなる群から選択される化合物に関する。
【０２８１】
基本合成スキーム
スキーム１〜３に本発明の式（Ｉ）の化合物の合成を例示する。
【０２８２】
【化７５】
スキーム１は、１ａおよび２ａから式（Ｉ）の化合物を調製する収束的アプローチを示す。最終的な変換において、カルボン酸１ｄをアミン２ｃとカップリングして式（Ｉ）の化合物を得るアミド生成は、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中のＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）およびトリエチルアミンか、または２−メチルテトラヒドロフラン中のプロピルスルホン酸（ｐｒｏｐｙｌ ｓｕｌｆｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ）環状無水物（Ｔ３Ｐ（登録商標））およびピリジンを用いて実施することができる。カルボン酸１ｄは、１ａを適切なマロン酸エステル（ＣＯ２Ｒ）２ＣＨ＝ＣＨ（ＯＲ）（Ｒはメチル、エチルなどのアルキル基である）と加熱により縮合させて１ｂを得ることから始める一連の反応によって対応する置換ベンゼン誘導体１ａから調製する。
【０２８３】
化合物１ｂを、Ｄｏｗｔｈｅｒｍまたはジフェニルエーテル中での加熱還流による分子内環化（ステップｂ）、続くパラジウム触媒による脱ハロゲン化条件下での封鎖ハロ基の除去（ステップｃ）（必要なら）および酸または塩基触媒によるけん化（ステップｄ）を含む３つの一連のステップを経てカルボン酸１ｄに転換させる。脱保護ステップとけん化ステップの順番は逆にすることができる；すなわちスキーム１に示すように、ステップｃは、ステップｄの前でも後でも行うことができる。
【０２８４】
再びスキーム１を参照して、アニリン誘導体２ｃを、ニトロ化合物２ａから３つの一連のステップを経て調製することができる。したがって、トリエチルアミンの存在下での本明細書で定義する２ａの環状アミン
【０２８５】
【化７６】
とのカップリングによって化合物２ｂが提供される。パラジウム触媒による２ｂの還元によってアミン２ｃが提供される。
【０２８６】
【化７７】
スキーム２は、プロピニルアミン側鎖を担持する式（Ｉ）の化合物の合成を示す。したがって、ＤＭＳＯ中の炭酸カリウムの存在下でのニトロベンゼン２ａ（Ｈａｌはブロミド、クロリドなどである）の本明細書で定義する
【０２８７】
【化７８】
とのカップリングは化合物４を提供する。Ｎ，Ｎ−ジメチルプロパ−２−イン−１−アミンを用いた化合物４のパラジウム触媒によるカップリング、続く、鉄または亜鉛触媒によるニトロ部分の還元はアミン５を提供する。アミン５のカルボン酸１ｄとのカップリングは、式（Ｉ）の化合物である化合物６を提供する。
【０２８８】
【化７９】
スキーム３は式（Ｉ）の化合物の合成法を示す。ここで、
【０２８９】
【化８０】
は７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタンであり、任意選択で、２位にエキソまたはエンドヒドロキシ基を担持する。ヒドロキシ置換付加体（＋）−エンド−７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−オル、（−）−エンド−７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−オル、（＋）−エキソ−７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−オルおよび（−）−エキソ−７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−２−オルは、Ｆｌｅｔｃｈｅｒ，Ｓ．Ｒ．ら、「Ｔｏｔａｌ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ａｂｓｏｌｕｔｅ Ｃｏｎｆｉｇｕｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｅｐｉｂａｔｉｄｉｎｅ」、Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ、５９巻、１７７１〜１７７８頁（１９９４年）に記載されている手順を用いて調製することができる。７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン自体は、Ｔｙｇｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｃ．３２４ Ｓｔｏｋｅｓ Ａｖｅｎｕｅ Ｅｗｉｎｇ、ＮＪ、０８６３８ＵＳＡから市販されている。
【０２９０】
したがって、スキーム１および２にまとめた一連の変換のように、化合物２ａのビシクロ［２．２．１］アミン７とのカップリングによって化合物８が提供される。化合物８中にヒドロキシ基が存在する場合、後続する変換の前にヒドロキシ基を保護基で保護する必要があり得る。したがって、公知の条件を用いた化合物８のｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロリドでの処理によって、保護化合物９が提供され、次いでニトロ部分を還元してアミン１０が得られる。１ｄを用いたアミド生成（スキーム３参照）およびヒドロキシ保護基の除去（必要に応じて）によって、式（Ｉ）の化合物である化合物１１が得られる。
【実施例】
【０２９１】
中間体１：４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸の調製
【０２９２】
【化８１】
ジエチル２−（（２−クロロ−５−（トリフルオロメチル）フェニルアミノ）メチレン）マロネート（１４）の調製。２−クロロ−５−（トリフルオロメチル）アニリン１２（２００ｇ、１．０２３ｍｏｌ）、ジエチル２−（エトキシメチレン）マロネート１３（２７６ｇ、１．３ｍｏｌ）およびトルエン（１００ｍＬ）を、ディーンスターク凝縮器を備えた三つ口１Ｌ丸底フラスコ中、窒素雰囲気下で混合した。溶液を撹拌しながら１４０℃に加熱し、その温度で４時間保持した。反応混合物を７０℃に冷却し、ヘキサン（６００ｍＬ）を徐々に加えた。得られたスラリーを撹拌し、室温に加温した。固体をろ取し、ヘキサン（２×４００ｍＬ）中の１０％酢酸エチルで洗浄し、次いで真空下で乾燥して白色固体（３５０ｇ、９４％収率）を所望の縮合生成物ジエチル２−（（２−クロロ−５−（トリフルオロメチル）フェニルアミノ）メチレン）マロネート１４として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６） δ １１．２８（ｄ，Ｊ＝１３．０Ｈｚ，１Ｈ），８．６３（ｄ，Ｊ＝１３．０Ｈｚ，１Ｈ），８．１０（ｓ，１Ｈ），７．８０（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），７．５０（ｄｄ，Ｊ＝１．５，８．４Ｈｚ，１Ｈ），４．２４（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），４．１７（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），１．２７（ｍ，６Ｈ）。
【０２９３】
エチル８−クロロ−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキシレート（１５）の調製。三つ口１ＬフラスコにＤｏｗｔｈｅｒｍ（登録商標）（２００ｍＬ、８ｍＬ／ｇ）をチャージし、これを２００℃で１時間脱ガスした。溶媒を２６０℃に加熱し、ジエチル２−（（２−クロロ−５−（トリフルオロメチル）フェニルアミノ）メチレン）マロネート１４（２５ｇ、０．０７ｍｏｌ）を１０分にわたって一括チャージした。得られた混合物を２６０℃で６．５時間撹拌し、得られたエタノール副生物を蒸留により除去した。混合物を徐々に８０℃に冷却した。ヘキサン（１５０ｍＬ）を３０分間かけて徐々に加え、続いて追加の２００ｍＬのヘキサンを一括添加した。スラリーを室温になるまで撹拌した。固体をろ過し、ヘキサン（３×１５０ｍＬ）で洗浄し、次いで真空下で乾燥してエチル８−クロロ−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキシレート１５を黄褐色固体（１３．９ｇ、６５％収率）として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６） δ １１．９１（ｓ，１Ｈ），８．３９（ｓ，１Ｈ），８．０６（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），７．８１（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ），４．２４（ｑ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ），１．２９（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ）。
【０２９４】
エチル４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−キノリン−３−カルボキシレート（１６）の調製。三つ口５Ｌフラスコに、エチル８−クロロ−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキシレート１５（１００ｇ、０．３ｍｏｌ）、エタノール（１２５０ｍＬ、１２．５ｍＬ／ｇ）およびトリエチルアミン（２２０ｍＬ、１．６ｍｏｌ）をチャージした。次いで容器に５℃で１０ｇの１０％Ｐｄ／Ｃ（５０％ウェット）をチャージした。反応物を水素雰囲気下、５℃で２０時間強力に撹拌し、次いで反応混合物を濃縮して約１５０ｍＬの容積にした。Ｐｄ／Ｃを含むスラリーとしての生成物、エチル４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−キノリン−３−カルボキシレート１６を直接次のステップに供した。
【０２９５】
４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸（１７）の調製。エチル４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−キノリン−３−カルボキシレート１６（５８ｇ、０．２ｍｏｌ、Ｐｄ／Ｃを含む粗製反応スラリー）を、還流凝縮器を備えた１Ｌフラスコ中でＮａＯＨ（８１４ｍＬの５Ｍ、４．１ｍｏｌ）に懸濁させ、８０℃で１８時間加熱し、続いて１００℃で５時間さらに加熱した。セライト（Ｃｅｌｉｔｅ）充填物で反応物を温かい状態でろ過してＰｄ／Ｃを除去し、セライトを１Ｎ ＮａＯＨで濯いだ。ろ液を酸性化して約ｐＨ１にして濃厚な白色沈殿物を得た。沈殿物をろ過し、次いで水および冷アセトニトリルで濯いだ。次いで固体を真空下で乾燥して４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボン酸１７を白色固体（４８ｇ、９２％収率）として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００．０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６） δ １５．２６（ｓ，１Ｈ），１３．６６（ｓ，１Ｈ），８．９８（ｓ，１Ｈ），８．１３（ｄｄ，Ｊ＝１．６，７．８Ｈｚ，１Ｈ），８．０６−７．９９（ｍ，２Ｈ）。
【０２９６】
中間体２：６−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−アミンの調製。
【０２９７】
【化８２】
無水ＣＨ３ＣＮ（１００ｍＬ）中の２，６−ジブロモピリジン（１０．０ｇ、４２．６ｍｍｏｌ）の溶液にＮＯ２＋ＢＦ４−（１１．３ｇ、８５．２ｍｍｏｌ）を徐々に加えた。反応混合物を窒素雰囲気下、８０℃で２４時間加熱した。次いで、混合物を乾燥するまで蒸発させ、シリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル中の０〜３％酢酸エチル）で精製して２，６−ジブロモ−３−ニトロピリジン（５．７ｇ、４７．９％）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ ８．０３（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１ Ｈ），７．６５（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）。
【０２９８】
ＤＭＦ（４０ｍＬ）中の２，６−ジブロモ−３−ニトロピリジン（５．７ｇ、２０．４ｍｍｏｌ）の溶液にＣｕＩ（３．９ｇ、２０．４ｍｍｏｌ）およびＦＳＯ２ＣＦ２ＣＯ２Ｍｅ（４．７ｇ、２４．５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を８０℃で１時間撹拌した。室温に冷却した後、反応混合物を水（１００ｍＬ）に注加し、酢酸エチル（３×１００ｍＬ）で抽出した。一緒にした有機層をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、シリカゲルクロマトグラフィー（石油エーテル中の０〜３％酢酸エチル）で精製して６−ブロモ−３−ニトロ−２−（トリフルオロメチル）ピリジン（３．０ｇ、４５％収率）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ ８．１２（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１ Ｈ），７．９４（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，１Ｈ）。
【０２９９】
アセトニトリル（３ｍＬ）中の６−ブロモ−３−ニトロ−２−（トリフルオロメチル）ピリジン（３００ｍｇ、１．１０７ｍｍｏｌ）、７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン塩酸塩（１７７．４ｍｇ、１．３２８ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（２２４．０ｍｇ、３０８．５μＬ、２．２１４ｍｍｏｌ）の溶液を８０℃で終夜加熱した。反応物を室温に冷却し、水でクエンチした。得られた沈殿物をろ過し、水で洗浄し、真空下で乾燥して７−［５−ニトロ−６−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］−７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン（３００ｍｇ、９４％収率）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００．０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６） δ ８．２７（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），７．２０（ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ），４．７１（ｓ，２Ｈ），１．７１（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，４Ｈ），１．５５（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，４Ｈ）。
【０３００】
７−［５−ニトロ−６−（トリフルオロメチル）−２−ピリジル］−７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン（５３０ｍｇ、１．８４５ｍｍｏｌ）および１０％Ｐｄ／Ｃ（５３ｍｇ、０．４９８０ｍｍｏｌ）をチャージしたフラスコを窒素でフラッシュし、続いて真空をかけて排出した。不活性雰囲気下でエタノール（６ｍＬ）を加え、フラスコに水素バルーンを取り付けた。１６時間強力に撹拌した後、ろ過によりＰｄ／Ｃを除去し、減圧下で溶媒を除去した。粗製物質をシリカゲルクロマトグラフィー（ヘキサン中の０〜１０％酢酸エチル）で精製して６−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−アミン（３８１ｍｇ、８０％収率）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００．０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６） δ ７．１７（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），６．９７（ｄ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，１Ｈ），５．０３（ｓ，２Ｈ），４．２９（ｓ，２Ｈ），１．５９（ｔ，Ｊ＝３．４Ｈｚ，４Ｈ），１．３７（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，４Ｈ）。
【０３０１】
中間体３：６−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−４−メチルピリジン−３−アミンの調製。
【０３０２】
【化８３】
アセトニトリル（５ｍＬ）中の２−フルオロ−４−メチル−５−ニトロピリジン（１５０ｍｇ、０．９６０８ｍｍｏｌ）の溶液に、７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン塩酸塩（１５２．９ｍｇ、１．１５３ｍｍｏｌ）およびＥｔ３Ｎ（２４３．１ｍｇ、３３４．８μＬ、２．４０２ｍｍｏｌ）加えた。反応物を８０℃で１６時間加熱した。反応物を水（２ｍＬ）でクエンチし、溶媒を蒸発させた。残留物を酢酸エチル（１５ｍＬ）に溶解し、１Ｎ ＨＣｌ（１０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で脱水し、ろ過し濃縮して６−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−４−メチルピリジン−３−アミン（１６０ｍｇ、７１％収率）を黄色固体として得た。これを精製することなく次のステップで使用した。１Ｈ ＮＭＲ（４００．０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ ８．９６（ｓ，１Ｈ），６．３７（ｓ，１Ｈ），４．５９（ｓ，２Ｈ），２．５９（ｄ，Ｊ＝０．４Ｈｚ，３Ｈ），１．８３−１．８０（ｍ，４Ｈ），１．６１−１．５４（ｍ，４Ｈ）。
【０３０３】
メタノール：酢酸エチルの１：１混合液（黄色溶液）中の６−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−４−メチルピリジン−３−アミン（１４６ｍｇ、０．６２５９ｍｍｏｌ）の溶液に１０％Ｐｄ／Ｃを加え、水素雰囲気下で２時間撹拌した。反応物を酢酸エチル（５ｍＬ）で希釈し、セライト充填物でろ過した。ろ液を乾燥するまで濃縮してアニリンを黄色固体（１２０ｍｇ、９４％収率）として得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００．０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３） δ ７．６８（ｓ，１Ｈ），６．５０（ｓ，１Ｈ），４．３４−４．３１（ｍ，２Ｈ），３．２０（ｓ，２Ｈ），２．１４（ｓ，３Ｈ），１．７８−１．７５（ｍ，４Ｈ），１．４４−１．３９（ｍ，４Ｈ）。
【０３０４】
実施例化合物２：Ｎ−（６−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル）−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミド（化合物２、表１）の調製。
【０３０５】
【化８４】
２−メチルテトラヒドロフラン（１．０ｍＬ）中の４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−キノリン−３−カルボン酸（１００ｍｇ、０．３８８９ｍｍｏｌ）および６−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−アミン（１１０．１ｍｇ、０．４２７８ｍｍｏｌ）の溶液に、プロピルホスホン酸環状無水物（酢酸エチル中の５０％溶液、４９５．０μＬ、０．７７７８ｍｍｏｌ）およびピリジン（６１．５２ｍｇ、６２．９０μＬ、０．７７７８ｍｍｏｌ）を加えた。反応物をキャップし、６０℃で１６時間加熱した。反応物を室温に冷却し、酢酸エチル（１０ｍＬ）で希釈し、飽和Ｎａ２ＣＯ３溶液（６ｍＬ）でクエンチした。２０分間撹拌した後、有機層を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で脱水し、ろ過し、濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィー（ジクロロメタン中の０〜２０％酢酸エチル）で精製してＮ−（６−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）ピリジン−３−イル）−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミド（１３７ｍｇ、７１％収率）を得た。ＬＣ／ＭＳ ｍ／ｚ ４９７．５［Ｍ＋Ｈ］＋、保持時間１．９２分間（ＲＰ−Ｃ１８、１０〜９９％ＣＨ３ＣＮ／０．０５％ＴＦＡ、３分間で）。
【０３０６】
ジクロロメタン（２ｍＬ）およびメタノール（１ｍＬ）の中のＮ−［６−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）−３−ピリジル］−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−キノリン−３−カルボキサミド（１３０ｍｇ、０．２６１９ｍｍｏｌ）の溶液に、エーテル中の２Ｍ ＨＣｌ（１３１．０μＬ、２Ｍ、０．２６１９ｍｍｏｌ）を窒素雰囲気下で滴下した。反応は、懸濁液から透明な溶液になった。この溶液を２０分間撹拌すると塩酸塩の沈殿物が得られた。懸濁液をジエチルエーテルで希釈し、２時間撹拌した。この塩をろ過し、ジエチルエーテルで洗浄してＮ−［６−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−２−（トリフルオロメチル）−３−ピリジル］−４−オキソ−５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−キノリン−３−カルボキサミド塩酸塩（１３３ｍｇ、９５％収率）を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００．０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６） δ １３．２３（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，１Ｈ），１２．２２（ｓ，１Ｈ），８．８８（ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，１Ｈ），８．２３（ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，１Ｈ），８．０６（ｄｄ，Ｊ＝２．１，７．２Ｈｚ，１Ｈ），７．９６−７．９０（ｍ，２Ｈ），７．２２（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ），４．５２（ｓ，２Ｈ），１．６８（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，４Ｈ），１．４７（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，４Ｈ）。
【０３０７】
実施例化合物１：Ｎ−（６−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−４−メチルピリジン−３−イル）−５−メチル−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミド塩酸塩（化合物１、表１）の調製。
【０３０８】
【化８５】
２−メチルテトラヒドロフラン（１ｍＬ）中の５−メチル−４−オキソ−１Ｈ−キノリン−３−カルボン酸（６０ｍｇ、０．２９５３ｍｍｏｌ）および６−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−４−メチル−ピリジン−３−アミン（６０．０３ｍｇ、０．２９５３ｍｍｏｌ）の溶液に、プロピルホスホン酸環状無水物（３７５．８μＬ、５０重量／容積％、０．５９０６ｍｍｏｌ）を加え、続いてピリジン（４６．７２ｍｇ、４７．７７μＬ、０．５９０６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物に、マイクロ波条件下、１００℃で１時間照射した。粗製反応混合物を酢酸エチル（２ｍＬ）で希釈し、１０％ＮａＨＣＯ３溶液（３ｍＬ）でクエンチした。得られた沈殿物をろ過し、酢酸エチル（５ｍＬ）で洗浄した。固体を、２０％Ｎａ２ＣＯ３（５ｍＬ）／メタノール水溶液（２ｍＬ）に再懸濁し、３０分間撹拌した。固体をろ過し、水で濯ぎ、空気乾燥してＮ−（６−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−４−メチルピリジン−３−イル）−５−メチル−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミド（３０ｍｇ、２６％収率）を得た。ＬＣ／ＭＳ ｍ／ｚ ３８９．４［Ｍ＋Ｈ］＋、保持時間１．３３分間（ＲＰ−Ｃ１８、１０〜９９％ＣＨ３ＣＮ／０．０５％ＴＦＡ、３分間で）。
【０３０９】
Ｎ−（６−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−４−メチルピリジン−３−イル）−５−メチル−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミドをメタノール（２ｍＬ）に溶解し、エーテル中の２Ｍ ＨＣｌ（２９５．３μＬ、２Ｍ、０．５９０６ｍｍｏｌ）で処理した。溶液を蒸発させてＮ−（６−（７−アザビシクロ［２．２．１］ヘプタン−７−イル）−４−メチルピリジン−３−イル）−５−メチル−４−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−カルボキサミド塩酸塩を得た。１Ｈ ＮＭＲ（４００．０ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６） δ １２．７１（ｓ，１Ｈ），１２．１２（ｓ，１Ｈ），８．７８（ｓ，１Ｈ），８．７４（ｓ，１Ｈ），７．６３−７．５９（ｍ，１Ｈ），７．５４（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ），７．２２（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，１Ｈ），６．８１（ｓ，１Ｈ），４．４４（ｓ，２Ｈ），２．９１（ｓ，３Ｈ），２．２８（ｓ，３Ｈ），１．６５（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，４Ｈ），１．４２（ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，４Ｈ）。
【０３１０】
表１の化合物の分析データを以下の表２に示す：
【０３１１】
【表２】
化合物のΔＦ５０８−ＣＦＴＲ増強特性を検出し測定するためのアッセイ
化合物のΔＦ５０８−ＣＦＴＲ調節特性をアッセイするための膜電位の光学的方法
このアッセイでは、蛍光プレートリーダー（例えば、ＦＬＩＰＲ ＩＩＩ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ、Ｉｎｃ．）を用いて、ＮＩＨ３Ｔ３細胞における機能性ΔＦ５０８−ＣＦＴＲの増大についての読出しとして膜電位の変化を測定するために、蛍光性の電圧感受性染料を使用する。その応答のための推進力は、細胞を前もってその化合物で処理しておき続いて電圧感受性染料をロードした後に液体を１回添加するステップによる、チャンネル活性化と合わせた塩素イオン勾配の生成である。
【０３１２】
増強化合物の特定
ΔＦ５０８−ＣＦＴＲの増強物質を特定するために、二重付加（ｄｏｕｂｌｅ−ａｄｄｉｔｉｏｎ）ＨＴＳアッセイ方式を開発した。このＨＴＳアッセイでは、ＦＬＩＰＲ ＩＩＩ上での膜電位の変化を測定するために、温度補正されたΔＦ５０８ＣＦＴＲ ＮＩＨ３Ｔ３細胞のΔＦ５０８ＣＦＴＲにおけるゲート開閉（コンダクタンス）の増大の測定として、蛍光性の電圧感受性染料を使用する。その応答のための推進力は、細胞を前もって増強化合物（またはＤＭＳＯ媒体対象）で処理しておき続いて再分配染料をロードした後に、ＦＬＩＰＲ ＩＩＩなどの蛍光プレートリーダーを用いた液体を１回添加するステップによる、ホルスコリンでのチャンネル活性化と合わせたＣｌ−イオン勾配の生成である。
【０３１３】
溶液
浴溶液＃１：（ｍＭで）ＮａＣｌ １６０、ＫＣｌ ４．５、ＣａＣｌ２ ２、ＭｇＣｌ２ １、ＨＥＰＥＳ １０、ＮａＯＨでｐＨ７．４。
【０３１４】
塩素イオンフリーの浴溶液：浴溶液＃１の塩酸塩をグルコン酸塩で置き換える。
【０３１５】
細胞培養
ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを安定的に発現するＮＩＨ３Ｔ３マウス線維芽細胞を、膜電位の光学的測定のために使用する。細胞を、１７５ｃｍ２培養フラスコ中、５％ＣＯ２、９０％湿度、３７℃で２ｍＭグルタミン、１０％ウシ胎仔血清、１Ｘ ＮＥＡＡ、β−ＭＥ、１Ｘ ｐｅｎ／ｓｔｒｅｐおよび２５ｍＭ ＨＥＰＥＳを含むダルベッコ変法イーグル培地中で保持する。すべての光学的アッセイについて、細胞を、３８４ウェルのマトリゲルコーティングしたプレート中、約２０，０００／ウェルで播種し、３７℃で２時間培養し、次いで増強物質アッセイのために２７℃で２４時間培養した。補正アッセイのため、細胞を、化合物を用いるかまたは用いないで２７℃または３７℃で１６〜２４時間培養する。化合物のΔＦ５０８−ＣＦＴＲ調節特性をアッセイするための電気生理学的アッセイ
１．Ｕｓｉｎｇチャンバーアッセイ
光学的アッセイで特定されたΔＦ５０８−ＣＦＴＲ修飾因子をさらに特性評価するために、Ｕｓｉｎｇチャンバー実験を、ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを発現する分極した気道上皮細胞で実施した。非ＣＦおよびＣＦ気道上皮を、気管支組織から単離し、従来記載されているようにして培養し（Ｇａｌｉｅｔｔａ，Ｌ．Ｊ．Ｖ．、Ｌａｎｔｅｒｏ，Ｓ．、Ｇａｚｚｏｌｏ，Ａ．、Ｓａｃｃｏ，Ｏ．、Ｒｏｍａｎｏ，Ｌ．、Ｒｏｓｓｉ，Ｇ．Ａ．、＆ Ｚｅｇａｒｒａ−Ｍｏｒａｎ，Ｏ．（１９９８年）Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ｃｅｌｌ． Ｄｅｖ． Ｂｉｏｌ． ３４巻、４７８〜４８１頁）、ＮＩＨ３Ｔ３馴化培地でプレコートしたＣｏｓｔａｒ（登録商標）Ｓｎａｐｗｅｌｌ（商標）フィルター上に播種した。４日後、頂端培地を除去し、使用前に、細胞を気液界面で＞１４日間成長させた。これによって、気道上皮の特徴である線毛状の見かけをもつ十分に分化した円柱状細胞の単分子層が得られた。非ＣＦ ＨＢＥを、既知の肺疾患を全くもたない非喫煙者から単離した。ＣＦ−ＨＢＥを、ΔＦ５０８−ＣＦＴＲについてホモ接合性の患者から単離した。
【０３１６】
Ｃｏｓｔａｒ（登録商標）Ｓｎａｐｗｅｌｌ（商標）細胞培養インサート上で成長させたＨＢＥをＵｓｉｎｇチャンバー（Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｉｎｃ．、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）に取り付け、経上皮抵抗および短絡回路電流を、側底から頂端膜へのＣｌ−勾配（ＩＳＣ）の存在下で、電圧固定システム（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｉｏｗａ、ＩＡ）を用いて測定した。簡単に述べると、電圧固定記録条件（Ｖｈｏｌｄ＝０ｍＶ）のもと、３７℃でＨＢＥを試験した。側底溶液は、（ｍＭで）１４５ ＮａＣｌ、０．８３ Ｋ２ＨＰＯ４、３．３ ＫＨ２ＰＯ４、１．２ ＭｇＣｌ２、１．２ ＣａＣｌ２、１０ グルコース、１０ ＨＥＰＥＳ（ＮａＯＨでｐＨ７．３５に調節）を含み、頂端溶液は、（ｍＭで）１４５ ＮａＧｌｕｃｏｎａｔｅ、１．２ ＭｇＣｌ２、１．２ ＣａＣｌ２、１０ グルコース、１０ ＨＥＰＥＳ（ＮａＯＨでｐＨ７．３５に調節）を含んだ。
【０３１７】
増強化合物の特定
典型的な手順では、側底から頂端膜へのＣｌ−濃度勾配を用いた。
この勾配を設定するために、側底膜で通常のリンガー液を用いて、頂端ＮａＣｌを等モルのグルコン酸ナトリウム（ＮａＯＨでｐＨ７．４まで滴定）で置き換えて、上皮を横断して大きなＣｌ−濃度勾配を得た。ホルスコリン（１０μＭ）およびすべての試験化合物を細胞培養インサートの頂端側に加えた。推定ΔＦ５０８−ＣＦＴＲ増強物質の効力を既知の増強物質、ゲニステインのそれと比較した。
【０３１８】
２．パッチクランプ記録
ΔＦ５０８−ＮＩＨ３Ｔ３細胞における全Ｃｌ−電流を、従来記載されているような多孔パッチ記録構成（ｐｅｒｆｏｒａｔｅｄ−ｐａｔｃｈ ｒｅｃｏｒｄｉｎｇ ｃｏｎｆｉｇｕｒａｔｉｏｎ）でモニターした（Ｒａｅ，Ｊ．、Ｃｏｏｐｅｒ，Ｋ．、Ｇａｔｅｓ，Ｐ．、＆ Ｗａｔｓｋｙ，Ｍ．（１９９１年）Ｊ． Ｎｅｕｒｏｓｃｉ． Ｍｅｔｈｏｄｓ ３７巻、１５〜２６頁）。電圧固定記録をＡｘｏｐａｔｃｈ ２００Ｂパッチクランプ増幅器（Ａｘｏｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｉｎｃ．、Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ、ＣＡ）を用いて２２℃で実施した。ピペット溶液は、（ｍＭで）１５０Ｎ−メチル−Ｄ−グルタミン（ＮＭＤＧ）−Ｃｌ、２ ＭｇＣｌ２、２ ＣａＣｌ２、１０ ＥＧＴＡ、１０ ＨＥＰＥＳおよび２４０μｇ／ｍＬアンフォテリシン−Ｂ（ＨＣｌでｐＨ７．３５に調節）を含んだ。細胞外培地は、（ｍＭで）１５０ ＮＭＤＧ−Ｃｌ、２ ＭｇＣｌ２、２ ＣａＣｌ２、１０ ＨＥＰＥＳ（ＨＣｌでｐＨ７．３５に調節）を含んだ。パルス発生、データ取得および分析を、Ｃｌａｍｐｅｘ８（Ａｘｏｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｉｎｃ．）と一緒にＤｉｇｉｄａｔａ１３２０Ａ／Ｄインターフェースを備えたＰＣを用いて実施した。ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを活性化させるために、１０μＭホルスコリンおよび２０μＭゲニステインを浴に加え、電流−電圧の関係を３０秒毎にモニターした。
【０３１９】
増強化合物の特定
ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを安定的に発現するＮＩＨ３Ｔ３細胞において巨視的なΔＦ５０８−ＣＦＴＲ Ｃｌ−電流（ＩΔＦ５０８）を増大させるΔＦ５０８−ＣＦＴＲ増強物質の能力を、やはり多孔パッチ記録手法を用いて試験した。光学的アッセイにより特定された増強物質は、光学的アッセイで観察されたのと同様の効力および効能でＩΔＦ５０８における用量依存的な増加を引き起こした。試験したすべての細胞において、増強物質を適用する前またはその間の逆転電位はおおよそ−３０ｍＶであった。これは計算されたＥＣｌ（−２８ｍＶ）である。
【０３２０】
細胞培養
ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを安定的に発現するＮＩＨ３Ｔ３マウス線維芽細胞をホールセル記録用に使用する。細胞を、１７５ｃｍ２培養フラスコ中、５％ＣＯ２、９０％湿度、３７℃で２ｍＭグルタミン、１０％ウシ胎仔血清、１Ｘ ＮＥＡＡ、β−ＭＥ、１Ｘ ｐｅｎ／ｓｔｒｅｐおよび２５ｍＭ ＨＥＰＥＳを含むダルベッコ変法イーグル培地中で保持する。ホールセル記録のため、増強物質の活性を試験する前に、２，５００〜５，０００個の細胞をポリ−Ｌ−リシンコーティングしたガラスのカバースリップ上に播種し、２７℃で２４〜４８時間培養し；補正物質（ｃｏｒｒｅｃｔｏｒ）の活性を測定するために補正化合物を含むか含まないで３７℃でインキュベートした。
【０３２１】
３．単一チャンネル記録
ＮＩＨ３Ｔ３細胞において発現されたｗｔ−ＣＦＴＲおよび温度修正ΔＦ５０８−ＣＦＴＲのゲート開閉活性を、Ａｘｏｐａｔｃｈ２００Ｂパッチクランプ増幅器（Ａｘｏｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｉｎｃ．）を使用して、従来記載されているような切取りインサイドアウト型膜パッチ記録法（Ｄａｌｅｍａｎｓ，Ｗ．、Ｂａｒｂｒｙ，Ｐ．、Ｃｈａｍｐｉｇｎｙ，Ｇ．、Ｊａｌｌａｔ，Ｓ．、Ｄｏｔｔ，Ｋ．、Ｄｒｅｙｅｒ，Ｄ．、Ｃｒｙｓｔａｌ，Ｒ．Ｇ．、Ｐａｖｉｒａｎｉ，Ａ．、Ｌｅｃｏｃｑ，Ｊ−Ｐ．、Ｌａｚｄｕｎｓｋｉ，Ｍ．（１９９１年）Ｎａｔｕｒｅ ３５４巻、５２６〜５２８頁）を用いて観察した。ピペットは、（ｍＭで）：１５０ ＮＭＤＧ、１５０ アスパラギン酸、５ ＣａＣｌ２、２ ＭｇＣｌ２および １０ ＨＥＰＥＳ（トリス塩基でｐＨ７．３５に調節）を含んだ。その浴は、（ｍＭで）：１５０ ＮＭＤＧ−Ｃｌ、２ ＭｇＣｌ２、５ ＥＧＴＡ、１０ ＴＥＳおよび １４ トリス塩基（ＨＣｌでｐＨ７．３５に調節）を含んだ。切取りの後、タンパク質ホスファターゼを阻害するために１ｍＭ Ｍｇ−ＡＴＰ、７５ｎＭのｃＡＭＰ依存性タンパク質キナーゼの触媒サブユニット（ＰＫＡ；Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｒｐ．Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）および１０ｍＭ ＮａＦを加えることによってｗｔ−ＣＦＴＲとΔＦ５０８−ＣＦＴＲの両方を活性化させた。これは電流の低下を防止した。ピペット電位を８０ｍＶに保持した。チャンネル活性を、≦２の活性チャンネルを含む膜パッチから分析した。同時開放の最大数が実験の過程の間の活性チャンネルの数を決定した。単一のチャンネル電流振幅を判定するために、１２０秒間のΔＦ５０８−ＣＦＴＲ活性から記録されたデータを１００Ｈｚで「オフライン」フィルターにかけ、次いで、Ｂｉｏ−Ｐａｔｃｈ分析ソフトウェア（Ｂｉｏ−Ｌｏｇｉｃ Ｃｏｍｐ．Ｆｒａｎｃｅ）を用いて、多重ガウス関数で当てはめた全点振幅ヒストグラムを構築するために使用した。全微視的電流および開確率（Ｐｏ）を１２０秒間のチャンネル活性から判定した。Ｐｏを、Ｂｉｏ−Ｐａｔｃｈソフトウェアを用いるか、または関係式Ｐｏ＝Ｉ／ｉ（Ｎ）（Ｉ＝平均電流、ｉ＝単一チャンネル電流振幅であり、Ｎ＝パッチにおける活性チャンネルの数である）から判定した。
【０３２２】
細胞培養
ΔＦ５０８−ＣＦＴＲを安定的に発現するＮＩＨ３Ｔ３マウス線維芽細胞を、切取り膜パッチクランプ記録用に使用する。細胞を、１７５ｃｍ２培養フラスコ中、５％ＣＯ２、９０％湿度、３７℃で２ｍＭグルタミン、１０％ウシ胎仔血清、１Ｘ ＮＥＡＡ、β−ＭＥ、１Ｘ ｐｅｎ／ｓｔｒｅｐおよび２５ｍＭ ＨＥＰＥＳを含むダルベッコ変法イーグル培地中で保持する。単一チャンネル記録のため、２，５００〜５，０００個の細胞をポリ−Ｌ−リシンコーティングしたガラスのカバースリップ上に播種し、２７℃で２４〜４８時間培養して使用した。
【０３２３】
本発明の化合物はＡＴＰ結合カセットトランスポーターの修飾因子として有用である。式（Ｉ）の化合物の活性および効力の例を以下の表３に示す。化合物の活性を、活性が２．０μ未満と測定された場合「＋＋＋」で示し、活性が２μＭ〜５．０μＭと測定された場合「＋＋」で示し、活性が５．０μＭ超と測定された場合「＋」で示し、データが得られなかった場合「−」で示す。効能を、効能が１００％超と算出された場合「＋＋＋」で示し、効能が１００％〜２５％と算出された場合「＋＋」で示し、効能が２５％未満と算出された場合「＋」で示し、データが得られなかった場合「−」で示す。１００％の効能は４−メチル−２−（５−フェニル−１Ｈ−ピラゾール−３−イル）フェノールで得られた最大応答であることに留意すべきである。
【０３２４】
【表３】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉの化合物：
【化８６】
または薬学的に許容されるその塩
（式中、環Ａは、
【化８７】
から選択され、
Ｒ１は、−ＣＨ３、−ＣＦ３または−ＣＮであり、
Ｒ２は、水素、−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり、
Ｒ３は、水素、−ＣＨ３、−ＯＣＨ３または−ＣＮであり、
ただし、Ｒ２とＲ３は同時に水素であることはなく、ＸおよびＹの一方は窒素であり、もう一方は炭素である）。
【請求項２】
環Ａが
【化８８】
である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
環Ａが
【化８９】
である、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
環Ａが
【化９０】
である、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
環Ａが
【化９１】
である、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ１が−ＣＦ３である、請求項２から５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ１が−ＣＮである、請求項２から５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ１が−ＣＨ３である、請求項２から５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ２が水素である、請求項６から８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ２が−ＣＨ３である、請求項６から８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ２が−ＣＦ３である、請求項６から８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ２が−ＯＨである、請求項６から８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ２が−ＣＨ２ＯＨである、請求項６から８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｒ３が水素である、請求項９から１３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｒ３が−ＣＨ３である、請求項９から１３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１６】
Ｒ３が−ＯＣＨ３である、請求項９から１３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１７】
Ｒ３が−ＣＮである、請求項９から１２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１８】
Ｘが窒素である、請求項１から１７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１９】
Ｙが窒素である、請求項１から１７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２０】
【化９２】
から選択される化合物。
【請求項２１】
請求項１から２０のいずれか一項に記載の化合物および薬学的に許容される担体または補助剤を含む医薬組成物。
【請求項２２】
粘液溶解薬、気管支拡張薬、抗生物質、抗感染症薬、抗炎症薬、式（Ｉ）の化合物以外のＣＦＴＲ修飾因子または栄養剤から選択される追加の薬剤をさらに含む、請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
前記追加の薬剤が式（Ｉ）の化合物以外のＣＦＴＲ修飾因子である、請求項２２に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
患者の疾患を治療するまたはその重症度を軽減する方法であって、該疾患が、嚢胞性線維症、ぜんそく、喫煙誘発ＣＯＰＤ、慢性気管支炎、鼻副鼻腔炎、便秘、膵炎、膵機能不全、先天性両側性輸精管欠損（ＣＢＡＶＤ）によって引き起こされる男性不妊症、軽度の肺疾患、特発性膵炎、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症（ＡＢＰＡ）、肝疾患、遺伝性肺気腫、遺伝性ヘモクロマトーシス、凝固−線維素溶解性欠乏症、例えばプロテインＣ欠乏症、１型遺伝性血管性浮腫、脂質プロセッシング欠乏症、例えば家族性高コレステロール血症、１型乳糜血症、無βリポタンパク血症、リソソーム蓄積症、例えばＩ細胞病／偽ハーラー、ムコ多糖症、サンドホフ／テイサックス、クリグラーナジャーＩＩ型、多腺性内分泌障害／高インスリン血（ｈｙｐｅｒｉｎｓｕｌｅｍｉａ）、真性糖尿病、ラロン型小人症、ミエロペルオキシダーゼ欠損症（ｍｙｌｅｏｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ）、原発性甲状腺機能低下症、メラノーマ、グリカン糖鎖異常ＣＤＧ１型、先天性甲状腺機能亢進症、骨形成不全症、遺伝性低フィブリノゲン血症、ＡＣＴ欠乏症、尿崩症（ＤＩ）、ニューロフィシン性ＤＩ、腎性（ｎｅｐｒｏｇｅｎｉｃ）ＤＩ、シャルコーマリートゥース病、ペリツェウスメルツバッハー病（Ｐｅｒｌｉｚａｅｕｓ−Ｍｅｒｚｂａｃｈｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ）、神経変性疾患、例えばアルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、進行性核上麻痺、ピック病、いくつかのポリグルタミン神経障害、例えばハンチントン病、脊髄小脳失調Ｉ型（ｓｐｉｎｏｃｅｒｅｂｕｌｌａｒ ａｔａｘｉａ ｔｙｐｅ Ｉ）、球脊髄性筋萎縮症、歯状核赤核淡蒼球ルイ体および筋強直性ジストロフィー、ならびに海綿状脳症、例えば遺伝性クロイツフェルトヤコブ病（プリオンタンパク質プロセッシング欠損症に起因する）、ファブリー病、シュトロイスラー−シャインカー症候群、ＣＯＰＤ、ドライアイ疾患、膵機能不全、骨粗しょう症、骨減少症、ゴーハム症候群、クロリドチャンネル病、先天性筋強直症（トムセンおよびベッカー型）、バーター症候群ＩＩＩ型、デント病、過剰驚愕症、てんかん、過剰驚愕症、リソソーム蓄積症、アンジェルマン症候群、原発性線毛機能不全（ＰＣＤ）、内臓逆位を伴うＰＣＤ（カールタジュナー症候群としても公知）、内臓逆位および毛様体形成不全を伴わないＰＣＤまたはシェーグレン病から選択され、該方法が該患者に有効量の請求項１から２０のいずれか一項に記載の化合物を投与するステップを含む方法。
【請求項２５】
前記疾患が嚢胞性線維症である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
患者の疾患を治療するまたはその重症度を軽減する方法であって、該疾患が、ＣＦＴＲをコードする遺伝子の変異または環境因子に起因するＣＦＴＲ機能低下に関係し、前記方法が前記患者に有効量の請求項１から２０のいずれか一項に記載の化合物を投与するステップを含む方法。
【請求項２７】
前記疾患が、嚢胞性線維症、慢性気管支炎、反復性気管支炎、急性気管支炎、先天性両側性輸精管欠損（ＣＢＡＶＤ）によって引き起こされる男性不妊症、子宮および膣の先天的欠損（ＣＡＵＶ）によって引き起こされる女性不妊症、特発性慢性膵炎（ＩＣＰ）、特発性反復性膵炎、特発性急性膵炎、慢性鼻副鼻腔炎、原発性硬化性胆管炎、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、糖尿病、ドライアイ、便秘、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症（ＡＢＰＡ）、骨疾患およびぜんそくである、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
患者の疾患を治療するまたはその重症度を軽減する方法であって、該疾患が正常なＣＦＴＲ機能に関係し、前記方法が前記患者に有効量の請求項１から２０のいずれか一項に記載の化合物を投与するステップを含む方法。
【請求項２９】
前記疾患が、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性気管支炎、反復性気管支炎、急性気管支炎、鼻副鼻腔炎、便秘、慢性膵炎、反復性膵炎および急性膵炎、膵機能不全、先天性両側性輸精管欠損（ＣＢＡＶＤ）によって引き起こされる男性不妊症、軽度の肺疾患、特発性膵炎、肝疾患、遺伝性肺気腫、胆石、胃食道逆流性疾患（ｇａｓｇｔｒｏ−ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ ｒｅｆｌｕｘ ｄｉｓｅａｓｅ）、胃腸の悪性腫瘍、炎症性大腸炎、便秘、糖尿病、関節炎、骨粗しょう症ならびに骨減少症である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記疾患が、遺伝性ヘモクロマトーシス、凝固−線維素溶解性欠乏症、例えばプロテインＣ欠乏症、１型遺伝性血管性浮腫、脂質プロセッシング欠乏症、例えば家族性高コレステロール血症、１型乳糜血症、無βリポタンパク血症、リソソーム蓄積症、例えばＩ細胞病／偽ハーラー、ムコ多糖症、サンドホフ／テイサックス、クリグラーナジャーＩＩ型、多腺性内分泌障害／高インスリン血、真性糖尿病、ラロン型小人症、ミエロペルオキシダーゼ欠損症、原発性甲状腺機能低下症、メラノーマ、グリカン糖鎖異常ＣＤＧ１型、先天性甲状腺機能亢進症、骨形成不全症、遺伝性低フィブリノゲン血症、ＡＣＴ欠乏症、尿崩症（ＤＩ）、ニューロフィシン性ＤＩ、腎性ＤＩ、シャルコーマリートゥース病、ペリツェウスメルツバッハー病、神経変性疾患、例えばアルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、進行性核上麻痺、ピック病、いくつかのポリグルタミン神経障害、例えばハンチントン病、脊髄小脳失調Ｉ型、球脊髄性筋萎縮症、歯状核赤核淡蒼球ルイ体および筋強直性ジストロフィー、ならびに海綿状脳症、例えば遺伝性クロイツフェルトヤコブ病（プリオンタンパク質プロセッシング欠損症に起因する）、ファブリー病、シュトロイスラー−シャインカー症候群、ゴーハム症候群、クロリドチャンネル病、先天性筋強直症（トムセンおよびベッカー型）、バーター症候群ＩＩＩ型、デント病、過剰驚愕症、てんかん、過剰驚愕症、リソソーム蓄積症、アンジェルマン症候群、原発性線毛機能不全（ＰＣＤ）、内臓逆位を伴うＰＣＤ（カールタジュナー症候群としても公知）、内臓逆位および毛様体形成不全を伴わないＰＣＤまたはシェーグレン病である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３１】
生物学的試料におけるインビトロまたはインビボでのＣＦＴＲまたはそのフラグメントの活性を測定するために使用するキットであって、
（ｉ）請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物を含む組成物と、
（ｉｉ）ａ）該組成物を該生物学的試料と接触させ、
ｂ）該ＣＦＴＲまたはそのフラグメントの活性を測定する
ための取扱説明書
を含むキット。
【請求項３２】
ａ）追加の組成物を前記生物学的試料と接触させ、
ｂ）該追加の化合物の存在下で前記ＣＦＴＲまたはそのフラグメントの活性を測定し、
ｃ）該追加の化合物の存在下での前記ＣＦＴＲの活性を式（Ｉ）の組成物の存在下でのＣＦＴＲの密度と比較する
ための取扱説明書をさらに含む、請求項３１に記載のキット。
【請求項３３】
生物学的試料におけるＣＦＴＲ活性を調節する方法であって、該ＣＦＴＲを請求項１から２０のいずれか一項に記載の化合物と接触させるステップを含む方法。
【請求項３４】
式（Ｉｃ）の化合物：
【化９３】
または薬学的に許容されるその塩を調製するプロセスであって、
（ａ）式１ｄの酸を式２ｃのアミンと反応させて式（Ｉ）の化合物
【化９４】
（式中、環Ａは、
【化９５】
から選択され、
Ｒ１は、−ＣＨ３、−ＣＦ３または−ＣＮであり、
Ｒ２は、水素、−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり、
Ｒ３は、水素、−ＣＨ３、−ＯＣＨ３または−ＣＮであり、
ただし、Ｒ２とＲ３は同時に水素であることはなく、
Ｒａは、水素、またはトリメチルシリル（ＴＭＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）トリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）および［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル（ＳＥＭ）からなる群から選択されるシリル保護基であり、
ＸおよびＹの一方は窒素であり、もう一方は炭素である）
を得るステップを含むプロセス。
【請求項３５】
前記式１ｄの酸と式２ｃのアミンの反応を、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）およびトリエチルアミンが存在する溶媒中、またはプロピルホスホン酸環状無水物（Ｔ３Ｐ（登録商標））およびピリジンが存在する溶媒中で実施する、請求項３４に記載のプロセス。
【請求項３６】
前記溶媒が、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、酢酸エチルまたは２−メチルテトラヒドロフランを含む、請求項３５に記載のプロセス。
【請求項３７】
Ｒａが水素またはＴＢＤＭＳである、請求項３４に記載のプロセス。
【請求項３８】
ＲａがＴＢＤＭＳである、請求項３７に記載のプロセス。
【請求項３９】
環Ａが
【化９６】
（式中、Ｒａはシリル保護基である）
である場合、シリル保護基を除去して、環Ａが
【化９７】
である式（Ｉ）の化合物を生成する脱保護ステップをさらに含む、請求項３４に記載のプロセス。
【請求項４０】
前記式２ｃのアミンを式２ａの化合物から調製するプロセスであって、
（ａ）前記式２ａの化合物を式３のアミンと反応させて式２ｂの化合物
【化９８】
（式中、
Ｈａｌは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩであり、
前記式３のアミンは
【化９９】
である）
を得るステップと、
（ｂ）前記式２ｂの化合物を還元して前記式２ｃのアミン
【化１００】
にするステップと
を含む、請求項３４に記載のプロセス。
【請求項４１】
ステップ（ａ）の前記式３のアミンを、インサイチュでアミン塩酸塩から生成させる、請求項４０に記載のプロセス。
【請求項４２】
Ｒａが水素またはＴＢＤＭＳである、請求項４０に記載のプロセス。
【請求項４３】
ＲａがＴＢＤＭＳである、請求項４２に記載のプロセス。
【請求項４４】
ステップ（ａ）を第３アミン塩基の存在下、極性非プロトン性溶媒中で実施する、請求項４０に記載のプロセス。
【請求項４５】
ステップ（ａ）をトリエチルアミンの存在下、アセトニトリル中で実施する、請求項４４に記載のプロセス。
【請求項４６】
ステップ（ａ）の反応温度が約７５℃から約８５℃の間である、請求項４０に記載のプロセス。
【請求項４７】
反応時間が約２から約３０時間の間である、請求項４０に記載のプロセス。
【請求項４８】
ステップ（ｂ）をパラジウム触媒の存在下、極性プロトン性溶媒中で実施する、請求項４０に記載のプロセス。
【請求項４９】
ステップ（ｂ）の前記溶媒がメタノールまたはエタノールを含む、請求項４８に記載のプロセス。
【請求項５０】
ステップ（ｂ）をＦｅおよびＦｅＳＯ４またはＺｎおよびＡｃＯＨの存在下、極性プロトン性溶媒中で実施する、請求項４０に記載のプロセス。
【請求項５１】
前記極性プロトン性溶媒が水である、請求項５０に記載のプロセス。
【請求項５２】
式Ｉｃの化合物
【化１０１】
または薬学的に許容されるその塩を調製するプロセスであって、
（ａ）式２ａの化合物を式３のアミンと反応させて式２ｂの化合物
【化１０２】
を得るステップと、
（ｂ）前記式２ｂの化合物を水素化により前記式２ｃのアミン
【化１０３】
に転換させるステップと、
（ｃ）前記式２ｃのアミンを式１ｄの酸と反応させて式Ｉｃの化合物
【化１０４】
（式中、
Ｈａｌは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩであり、
前記式３のアミンは
【化１０５】
であり、
環Ａは
【化１０６】
から選択され、
Ｒ１は、−ＣＨ３、−ＣＦ３または−ＣＮであり、
Ｒ２は、水素、−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり、
Ｒ３は、水素、−ＣＨ３、−ＯＣＨ３または−ＣＮであり、
ただし、Ｒ２とＲ３は同時に水素であることはなく、
Ｒａは、水素、またはトリメチルシリル（ＴＭＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）、トリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）および［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル（ＳＥＭ）からなる群から選択されるシリル保護基であり、
ＸおよびＹの一方は窒素であり、もう一方は炭素である）
を得るステップと
を含むプロセス。
【請求項５３】
ステップ（ａ）の前記
【化１０７】
のアミンを、インサイチュでアミン塩酸塩から生成させる、請求項５２に記載のプロセス。
【請求項５４】
Ｒａが水素またはＴＢＤＭＳである、請求項５３に記載のプロセス。
【請求項５５】
ＲａがＴＢＤＭＳである、請求項５４に記載のプロセス。
【請求項５６】
ステップ（ａ）を第３アミン塩基の存在下、極性非プロトン性溶媒中で実施する、請求項５２に記載のプロセス。
【請求項５７】
ステップ（ａ）をトリエチルアミンの存在下、アセトニトリル中で実施する、請求項５６に記載のプロセス。
【請求項５８】
ステップ（ａ）の反応温度が約７５℃から約８５℃の間である、請求項５２に記載のプロセス。
【請求項５９】
反応時間が約２から約３０時間の間である、請求項５２に記載のプロセス。
【請求項６０】
ステップ（ｂ）をパラジウム触媒の存在下、極性プロトン性溶媒中で実施する、請求項５２に記載のプロセス。
【請求項６１】
ステップ（ｂ）の前記溶媒がメタノールまたはエタノールを含む、請求項６０に記載のプロセス。
【請求項６２】
ステップ（ｂ）をＦｅおよびＦｅＳＯ４またはＺｎおよびＡｃＯＨの存在下、極性プロトン性溶媒中で実施する、請求項５２に記載のプロセス。
【請求項６３】
前記極性プロトン性溶媒が水である、請求項６２に記載のプロセス。
【請求項６４】
ステップ（ｃ）を、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）およびトリエチルアミンが存在する溶媒中、またはプロピルホスホン酸環状無水物（Ｔ３Ｐ（登録商標））およびピリジンが存在する溶媒中で実施する、請求項５２に記載のプロセス。
【請求項６５】
ステップ（ｃ）の前記溶媒が、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、酢酸エチルまたは２−メチルテトラヒドロフランを含む、請求項６４に記載のプロセス。
【請求項６６】
Ｒａが水素またはＴＢＤＭＳである、請求項６４に記載のプロセス。
【請求項６７】
ＲａがＴＢＤＭＳである、請求項６６に記載のプロセス。
【請求項６８】
環Ａが
【化１０８】
（式中、Ｒａはシリル保護基である）
である場合、脱保護反応により、環Ａが
【化１０９】
である式Ｉの化合物を生成するステップをさらに含む、請求項５２に記載のプロセス。
【請求項６９】
【化１１０】
（式中、環Ａは
【化１１１】
から選択され、
Ｒ１は、−ＣＨ３、−ＣＦ３または−ＣＮであり、
Ｒａは、水素、またはトリメチルシリル（ＴＭＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）、トリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）および［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル（ＳＥＭ）からなる群から選択されるシリル保護基であり、ＸおよびＹの一方は窒素であり、もう一方は炭素である）
である化合物。
【請求項７０】
【化１１２】
（式中、環Ａは
【化１１３】
から選択され、
Ｒ１は、−ＣＨ３、−ＣＦ３または−ＣＮであり、
Ｒａは、水素、またはトリメチルシリル（ＴＭＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）トリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）および［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル（ＳＥＭ）からなる群から選択されるシリル保護基であり、
ＸおよびＹの一方は窒素であり、もう一方は炭素である）
である化合物。
【請求項７１】
式Ｉｃの化合物：
【化１１４】
または薬学的に許容されるその塩
（式中、環Ａは、
【化１１５】
から選択され、
Ｒ１は、−ＣＨ３、−ＣＦ３または−ＣＮであり、
Ｒ２は、水素、−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり、
Ｒ３は、水素、−ＣＨ３、−ＯＣＨ３または−ＣＮであり、
ただし、Ｒ２とＲ３は同時に水素であることはなく、
Ｒａは、トリメチルシリル（ＴＭＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）、トリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）および［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル（ＳＥＭ）からなる群から選択されるシリル保護基であり、ＸおよびＹの一方は窒素であり、もう一方は炭素である）。
【請求項７２】
請求項５２から６８のいずれかに記載のプロセスで作製された式Ｉの化合物；
【化１１６】
または薬学的に許容されるその塩
（式中、環Ａは、
【化１１７】
から選択され、
Ｒ１は、−ＣＨ３、−ＣＦ３または−ＣＮであり、
Ｒ２は、水素、−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり、
Ｒ３は、水素、−ＣＨ３、−ＯＣＨ３または−ＣＮであり、
ただし、Ｒ２とＲ３は同時に水素であることはなく、ＸおよびＹの一方は窒素であり、もう一方は炭素である）。
【請求項７３】
請求項５２から６８のいずれかに記載のプロセスで作製された
【化１１８】
からなる群から選択される化合物。
【請求項１】
式Ｉの化合物：
【化８６】
または薬学的に許容されるその塩
（式中、環Ａは、
【化８７】
から選択され、
Ｒ１は、−ＣＨ３、−ＣＦ３または−ＣＮであり、
Ｒ２は、水素、−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり、
Ｒ３は、水素、−ＣＨ３、−ＯＣＨ３または−ＣＮであり、
ただし、Ｒ２とＲ３は同時に水素であることはなく、ＸおよびＹの一方は窒素であり、もう一方は炭素である）。
【請求項２】
環Ａが
【化８８】
である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
環Ａが
【化８９】
である、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
環Ａが
【化９０】
である、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
環Ａが
【化９１】
である、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ１が−ＣＦ３である、請求項２から５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ１が−ＣＮである、請求項２から５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ１が−ＣＨ３である、請求項２から５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ２が水素である、請求項６から８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ２が−ＣＨ３である、請求項６から８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ２が−ＣＦ３である、請求項６から８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ２が−ＯＨである、請求項６から８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ２が−ＣＨ２ＯＨである、請求項６から８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｒ３が水素である、請求項９から１３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｒ３が−ＣＨ３である、請求項９から１３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１６】
Ｒ３が−ＯＣＨ３である、請求項９から１３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１７】
Ｒ３が−ＣＮである、請求項９から１２のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１８】
Ｘが窒素である、請求項１から１７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１９】
Ｙが窒素である、請求項１から１７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項２０】
【化９２】
から選択される化合物。
【請求項２１】
請求項１から２０のいずれか一項に記載の化合物および薬学的に許容される担体または補助剤を含む医薬組成物。
【請求項２２】
粘液溶解薬、気管支拡張薬、抗生物質、抗感染症薬、抗炎症薬、式（Ｉ）の化合物以外のＣＦＴＲ修飾因子または栄養剤から選択される追加の薬剤をさらに含む、請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
前記追加の薬剤が式（Ｉ）の化合物以外のＣＦＴＲ修飾因子である、請求項２２に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
患者の疾患を治療するまたはその重症度を軽減する方法であって、該疾患が、嚢胞性線維症、ぜんそく、喫煙誘発ＣＯＰＤ、慢性気管支炎、鼻副鼻腔炎、便秘、膵炎、膵機能不全、先天性両側性輸精管欠損（ＣＢＡＶＤ）によって引き起こされる男性不妊症、軽度の肺疾患、特発性膵炎、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症（ＡＢＰＡ）、肝疾患、遺伝性肺気腫、遺伝性ヘモクロマトーシス、凝固−線維素溶解性欠乏症、例えばプロテインＣ欠乏症、１型遺伝性血管性浮腫、脂質プロセッシング欠乏症、例えば家族性高コレステロール血症、１型乳糜血症、無βリポタンパク血症、リソソーム蓄積症、例えばＩ細胞病／偽ハーラー、ムコ多糖症、サンドホフ／テイサックス、クリグラーナジャーＩＩ型、多腺性内分泌障害／高インスリン血（ｈｙｐｅｒｉｎｓｕｌｅｍｉａ）、真性糖尿病、ラロン型小人症、ミエロペルオキシダーゼ欠損症（ｍｙｌｅｏｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ）、原発性甲状腺機能低下症、メラノーマ、グリカン糖鎖異常ＣＤＧ１型、先天性甲状腺機能亢進症、骨形成不全症、遺伝性低フィブリノゲン血症、ＡＣＴ欠乏症、尿崩症（ＤＩ）、ニューロフィシン性ＤＩ、腎性（ｎｅｐｒｏｇｅｎｉｃ）ＤＩ、シャルコーマリートゥース病、ペリツェウスメルツバッハー病（Ｐｅｒｌｉｚａｅｕｓ−Ｍｅｒｚｂａｃｈｅｒ ｄｉｓｅａｓｅ）、神経変性疾患、例えばアルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、進行性核上麻痺、ピック病、いくつかのポリグルタミン神経障害、例えばハンチントン病、脊髄小脳失調Ｉ型（ｓｐｉｎｏｃｅｒｅｂｕｌｌａｒ ａｔａｘｉａ ｔｙｐｅ Ｉ）、球脊髄性筋萎縮症、歯状核赤核淡蒼球ルイ体および筋強直性ジストロフィー、ならびに海綿状脳症、例えば遺伝性クロイツフェルトヤコブ病（プリオンタンパク質プロセッシング欠損症に起因する）、ファブリー病、シュトロイスラー−シャインカー症候群、ＣＯＰＤ、ドライアイ疾患、膵機能不全、骨粗しょう症、骨減少症、ゴーハム症候群、クロリドチャンネル病、先天性筋強直症（トムセンおよびベッカー型）、バーター症候群ＩＩＩ型、デント病、過剰驚愕症、てんかん、過剰驚愕症、リソソーム蓄積症、アンジェルマン症候群、原発性線毛機能不全（ＰＣＤ）、内臓逆位を伴うＰＣＤ（カールタジュナー症候群としても公知）、内臓逆位および毛様体形成不全を伴わないＰＣＤまたはシェーグレン病から選択され、該方法が該患者に有効量の請求項１から２０のいずれか一項に記載の化合物を投与するステップを含む方法。
【請求項２５】
前記疾患が嚢胞性線維症である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
患者の疾患を治療するまたはその重症度を軽減する方法であって、該疾患が、ＣＦＴＲをコードする遺伝子の変異または環境因子に起因するＣＦＴＲ機能低下に関係し、前記方法が前記患者に有効量の請求項１から２０のいずれか一項に記載の化合物を投与するステップを含む方法。
【請求項２７】
前記疾患が、嚢胞性線維症、慢性気管支炎、反復性気管支炎、急性気管支炎、先天性両側性輸精管欠損（ＣＢＡＶＤ）によって引き起こされる男性不妊症、子宮および膣の先天的欠損（ＣＡＵＶ）によって引き起こされる女性不妊症、特発性慢性膵炎（ＩＣＰ）、特発性反復性膵炎、特発性急性膵炎、慢性鼻副鼻腔炎、原発性硬化性胆管炎、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症、糖尿病、ドライアイ、便秘、アレルギー性気管支肺アスペルギルス症（ＡＢＰＡ）、骨疾患およびぜんそくである、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
患者の疾患を治療するまたはその重症度を軽減する方法であって、該疾患が正常なＣＦＴＲ機能に関係し、前記方法が前記患者に有効量の請求項１から２０のいずれか一項に記載の化合物を投与するステップを含む方法。
【請求項２９】
前記疾患が、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、慢性気管支炎、反復性気管支炎、急性気管支炎、鼻副鼻腔炎、便秘、慢性膵炎、反復性膵炎および急性膵炎、膵機能不全、先天性両側性輸精管欠損（ＣＢＡＶＤ）によって引き起こされる男性不妊症、軽度の肺疾患、特発性膵炎、肝疾患、遺伝性肺気腫、胆石、胃食道逆流性疾患（ｇａｓｇｔｒｏ−ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ ｒｅｆｌｕｘ ｄｉｓｅａｓｅ）、胃腸の悪性腫瘍、炎症性大腸炎、便秘、糖尿病、関節炎、骨粗しょう症ならびに骨減少症である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
前記疾患が、遺伝性ヘモクロマトーシス、凝固−線維素溶解性欠乏症、例えばプロテインＣ欠乏症、１型遺伝性血管性浮腫、脂質プロセッシング欠乏症、例えば家族性高コレステロール血症、１型乳糜血症、無βリポタンパク血症、リソソーム蓄積症、例えばＩ細胞病／偽ハーラー、ムコ多糖症、サンドホフ／テイサックス、クリグラーナジャーＩＩ型、多腺性内分泌障害／高インスリン血、真性糖尿病、ラロン型小人症、ミエロペルオキシダーゼ欠損症、原発性甲状腺機能低下症、メラノーマ、グリカン糖鎖異常ＣＤＧ１型、先天性甲状腺機能亢進症、骨形成不全症、遺伝性低フィブリノゲン血症、ＡＣＴ欠乏症、尿崩症（ＤＩ）、ニューロフィシン性ＤＩ、腎性ＤＩ、シャルコーマリートゥース病、ペリツェウスメルツバッハー病、神経変性疾患、例えばアルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、進行性核上麻痺、ピック病、いくつかのポリグルタミン神経障害、例えばハンチントン病、脊髄小脳失調Ｉ型、球脊髄性筋萎縮症、歯状核赤核淡蒼球ルイ体および筋強直性ジストロフィー、ならびに海綿状脳症、例えば遺伝性クロイツフェルトヤコブ病（プリオンタンパク質プロセッシング欠損症に起因する）、ファブリー病、シュトロイスラー−シャインカー症候群、ゴーハム症候群、クロリドチャンネル病、先天性筋強直症（トムセンおよびベッカー型）、バーター症候群ＩＩＩ型、デント病、過剰驚愕症、てんかん、過剰驚愕症、リソソーム蓄積症、アンジェルマン症候群、原発性線毛機能不全（ＰＣＤ）、内臓逆位を伴うＰＣＤ（カールタジュナー症候群としても公知）、内臓逆位および毛様体形成不全を伴わないＰＣＤまたはシェーグレン病である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３１】
生物学的試料におけるインビトロまたはインビボでのＣＦＴＲまたはそのフラグメントの活性を測定するために使用するキットであって、
（ｉ）請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物を含む組成物と、
（ｉｉ）ａ）該組成物を該生物学的試料と接触させ、
ｂ）該ＣＦＴＲまたはそのフラグメントの活性を測定する
ための取扱説明書
を含むキット。
【請求項３２】
ａ）追加の組成物を前記生物学的試料と接触させ、
ｂ）該追加の化合物の存在下で前記ＣＦＴＲまたはそのフラグメントの活性を測定し、
ｃ）該追加の化合物の存在下での前記ＣＦＴＲの活性を式（Ｉ）の組成物の存在下でのＣＦＴＲの密度と比較する
ための取扱説明書をさらに含む、請求項３１に記載のキット。
【請求項３３】
生物学的試料におけるＣＦＴＲ活性を調節する方法であって、該ＣＦＴＲを請求項１から２０のいずれか一項に記載の化合物と接触させるステップを含む方法。
【請求項３４】
式（Ｉｃ）の化合物：
【化９３】
または薬学的に許容されるその塩を調製するプロセスであって、
（ａ）式１ｄの酸を式２ｃのアミンと反応させて式（Ｉ）の化合物
【化９４】
（式中、環Ａは、
【化９５】
から選択され、
Ｒ１は、−ＣＨ３、−ＣＦ３または−ＣＮであり、
Ｒ２は、水素、−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり、
Ｒ３は、水素、−ＣＨ３、−ＯＣＨ３または−ＣＮであり、
ただし、Ｒ２とＲ３は同時に水素であることはなく、
Ｒａは、水素、またはトリメチルシリル（ＴＭＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）トリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）および［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル（ＳＥＭ）からなる群から選択されるシリル保護基であり、
ＸおよびＹの一方は窒素であり、もう一方は炭素である）
を得るステップを含むプロセス。
【請求項３５】
前記式１ｄの酸と式２ｃのアミンの反応を、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）およびトリエチルアミンが存在する溶媒中、またはプロピルホスホン酸環状無水物（Ｔ３Ｐ（登録商標））およびピリジンが存在する溶媒中で実施する、請求項３４に記載のプロセス。
【請求項３６】
前記溶媒が、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、酢酸エチルまたは２−メチルテトラヒドロフランを含む、請求項３５に記載のプロセス。
【請求項３７】
Ｒａが水素またはＴＢＤＭＳである、請求項３４に記載のプロセス。
【請求項３８】
ＲａがＴＢＤＭＳである、請求項３７に記載のプロセス。
【請求項３９】
環Ａが
【化９６】
（式中、Ｒａはシリル保護基である）
である場合、シリル保護基を除去して、環Ａが
【化９７】
である式（Ｉ）の化合物を生成する脱保護ステップをさらに含む、請求項３４に記載のプロセス。
【請求項４０】
前記式２ｃのアミンを式２ａの化合物から調製するプロセスであって、
（ａ）前記式２ａの化合物を式３のアミンと反応させて式２ｂの化合物
【化９８】
（式中、
Ｈａｌは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩであり、
前記式３のアミンは
【化９９】
である）
を得るステップと、
（ｂ）前記式２ｂの化合物を還元して前記式２ｃのアミン
【化１００】
にするステップと
を含む、請求項３４に記載のプロセス。
【請求項４１】
ステップ（ａ）の前記式３のアミンを、インサイチュでアミン塩酸塩から生成させる、請求項４０に記載のプロセス。
【請求項４２】
Ｒａが水素またはＴＢＤＭＳである、請求項４０に記載のプロセス。
【請求項４３】
ＲａがＴＢＤＭＳである、請求項４２に記載のプロセス。
【請求項４４】
ステップ（ａ）を第３アミン塩基の存在下、極性非プロトン性溶媒中で実施する、請求項４０に記載のプロセス。
【請求項４５】
ステップ（ａ）をトリエチルアミンの存在下、アセトニトリル中で実施する、請求項４４に記載のプロセス。
【請求項４６】
ステップ（ａ）の反応温度が約７５℃から約８５℃の間である、請求項４０に記載のプロセス。
【請求項４７】
反応時間が約２から約３０時間の間である、請求項４０に記載のプロセス。
【請求項４８】
ステップ（ｂ）をパラジウム触媒の存在下、極性プロトン性溶媒中で実施する、請求項４０に記載のプロセス。
【請求項４９】
ステップ（ｂ）の前記溶媒がメタノールまたはエタノールを含む、請求項４８に記載のプロセス。
【請求項５０】
ステップ（ｂ）をＦｅおよびＦｅＳＯ４またはＺｎおよびＡｃＯＨの存在下、極性プロトン性溶媒中で実施する、請求項４０に記載のプロセス。
【請求項５１】
前記極性プロトン性溶媒が水である、請求項５０に記載のプロセス。
【請求項５２】
式Ｉｃの化合物
【化１０１】
または薬学的に許容されるその塩を調製するプロセスであって、
（ａ）式２ａの化合物を式３のアミンと反応させて式２ｂの化合物
【化１０２】
を得るステップと、
（ｂ）前記式２ｂの化合物を水素化により前記式２ｃのアミン
【化１０３】
に転換させるステップと、
（ｃ）前記式２ｃのアミンを式１ｄの酸と反応させて式Ｉｃの化合物
【化１０４】
（式中、
Ｈａｌは、Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩであり、
前記式３のアミンは
【化１０５】
であり、
環Ａは
【化１０６】
から選択され、
Ｒ１は、−ＣＨ３、−ＣＦ３または−ＣＮであり、
Ｒ２は、水素、−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり、
Ｒ３は、水素、−ＣＨ３、−ＯＣＨ３または−ＣＮであり、
ただし、Ｒ２とＲ３は同時に水素であることはなく、
Ｒａは、水素、またはトリメチルシリル（ＴＭＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）、トリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）および［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル（ＳＥＭ）からなる群から選択されるシリル保護基であり、
ＸおよびＹの一方は窒素であり、もう一方は炭素である）
を得るステップと
を含むプロセス。
【請求項５３】
ステップ（ａ）の前記
【化１０７】
のアミンを、インサイチュでアミン塩酸塩から生成させる、請求項５２に記載のプロセス。
【請求項５４】
Ｒａが水素またはＴＢＤＭＳである、請求項５３に記載のプロセス。
【請求項５５】
ＲａがＴＢＤＭＳである、請求項５４に記載のプロセス。
【請求項５６】
ステップ（ａ）を第３アミン塩基の存在下、極性非プロトン性溶媒中で実施する、請求項５２に記載のプロセス。
【請求項５７】
ステップ（ａ）をトリエチルアミンの存在下、アセトニトリル中で実施する、請求項５６に記載のプロセス。
【請求項５８】
ステップ（ａ）の反応温度が約７５℃から約８５℃の間である、請求項５２に記載のプロセス。
【請求項５９】
反応時間が約２から約３０時間の間である、請求項５２に記載のプロセス。
【請求項６０】
ステップ（ｂ）をパラジウム触媒の存在下、極性プロトン性溶媒中で実施する、請求項５２に記載のプロセス。
【請求項６１】
ステップ（ｂ）の前記溶媒がメタノールまたはエタノールを含む、請求項６０に記載のプロセス。
【請求項６２】
ステップ（ｂ）をＦｅおよびＦｅＳＯ４またはＺｎおよびＡｃＯＨの存在下、極性プロトン性溶媒中で実施する、請求項５２に記載のプロセス。
【請求項６３】
前記極性プロトン性溶媒が水である、請求項６２に記載のプロセス。
【請求項６４】
ステップ（ｃ）を、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）およびトリエチルアミンが存在する溶媒中、またはプロピルホスホン酸環状無水物（Ｔ３Ｐ（登録商標））およびピリジンが存在する溶媒中で実施する、請求項５２に記載のプロセス。
【請求項６５】
ステップ（ｃ）の前記溶媒が、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、酢酸エチルまたは２−メチルテトラヒドロフランを含む、請求項６４に記載のプロセス。
【請求項６６】
Ｒａが水素またはＴＢＤＭＳである、請求項６４に記載のプロセス。
【請求項６７】
ＲａがＴＢＤＭＳである、請求項６６に記載のプロセス。
【請求項６８】
環Ａが
【化１０８】
（式中、Ｒａはシリル保護基である）
である場合、脱保護反応により、環Ａが
【化１０９】
である式Ｉの化合物を生成するステップをさらに含む、請求項５２に記載のプロセス。
【請求項６９】
【化１１０】
（式中、環Ａは
【化１１１】
から選択され、
Ｒ１は、−ＣＨ３、−ＣＦ３または−ＣＮであり、
Ｒａは、水素、またはトリメチルシリル（ＴＭＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）、トリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）および［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル（ＳＥＭ）からなる群から選択されるシリル保護基であり、ＸおよびＹの一方は窒素であり、もう一方は炭素である）
である化合物。
【請求項７０】
【化１１２】
（式中、環Ａは
【化１１３】
から選択され、
Ｒ１は、−ＣＨ３、−ＣＦ３または−ＣＮであり、
Ｒａは、水素、またはトリメチルシリル（ＴＭＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）トリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）および［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル（ＳＥＭ）からなる群から選択されるシリル保護基であり、
ＸおよびＹの一方は窒素であり、もう一方は炭素である）
である化合物。
【請求項７１】
式Ｉｃの化合物：
【化１１４】
または薬学的に許容されるその塩
（式中、環Ａは、
【化１１５】
から選択され、
Ｒ１は、−ＣＨ３、−ＣＦ３または−ＣＮであり、
Ｒ２は、水素、−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり、
Ｒ３は、水素、−ＣＨ３、−ＯＣＨ３または−ＣＮであり、
ただし、Ｒ２とＲ３は同時に水素であることはなく、
Ｒａは、トリメチルシリル（ＴＭＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジフェニルシリル（ＴＢＤＰＳ）、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）、トリイソプロピルシリル（ＴＩＰＳ）および［２−（トリメチルシリル）エトキシ］メチル（ＳＥＭ）からなる群から選択されるシリル保護基であり、ＸおよびＹの一方は窒素であり、もう一方は炭素である）。
【請求項７２】
請求項５２から６８のいずれかに記載のプロセスで作製された式Ｉの化合物；
【化１１６】
または薬学的に許容されるその塩
（式中、環Ａは、
【化１１７】
から選択され、
Ｒ１は、−ＣＨ３、−ＣＦ３または−ＣＮであり、
Ｒ２は、水素、−ＣＨ３、−ＣＦ３、−ＯＨまたは−ＣＨ２ＯＨであり、
Ｒ３は、水素、−ＣＨ３、−ＯＣＨ３または−ＣＮであり、
ただし、Ｒ２とＲ３は同時に水素であることはなく、ＸおよびＹの一方は窒素であり、もう一方は炭素である）。
【請求項７３】
請求項５２から６８のいずれかに記載のプロセスで作製された
【化１１８】
からなる群から選択される化合物。
【公表番号】特表２０１２−５０６８６７（Ｐ２０１２−５０６８６７Ａ）
【公表日】平成２４年３月２２日（２０１２．３．２２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１１−５３３３８３（Ｐ２０１１−５３３３８３）
【出願日】平成２１年１０月２３日（２００９．１０．２３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０６１９３２
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０４８５６４
【国際公開日】平成２２年４月２９日（２０１０．４．２９）
【出願人】（５９８０３２１０６）バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド (414)
【氏名又は名称原語表記】ＶＥＲＴＥＸ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ ＩＮＣＯＲＰＯＲＡＴＥＤ
【住所又は居所原語表記】１３０ Ｗａｖｅｒｌｙ Ｓｔｒｅｅｔ， Ｃａｍｒｉｄｇｅ， Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ ０２１３９−４２４２， Ｕ．Ｓ．Ａ．
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２４年３月２２日（２０１２．３．２２）
【国際特許分類】
【出願日】平成２１年１０月２３日（２００９．１０．２３）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００９／０６１９３２
【国際公開番号】ＷＯ２０１０／０４８５６４
【国際公開日】平成２２年４月２９日（２０１０．４．２９）
【出願人】（５９８０３２１０６）バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド (414)
【氏名又は名称原語表記】ＶＥＲＴＥＸ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ ＩＮＣＯＲＰＯＲＡＴＥＤ
【住所又は居所原語表記】１３０ Ｗａｖｅｒｌｙ Ｓｔｒｅｅｔ， Ｃａｍｒｉｄｇｅ， Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ ０２１３９−４２４２， Ｕ．Ｓ．Ａ．
【Ｆターム（参考）】
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