微生物迅速染色方法及び微生物迅速染色装置
本発明の微生物迅速染色方法は、室温でない温度に加温された染色液を用いるものである。本発明の微生物迅速染色装置は、試薬を貯液する複数の試薬用貯液槽と、洗浄液を貯液する複数又は単数の洗浄液用貯液槽と、試薬用貯液槽の下流側に接続され、試薬を規定温度に制御する少なくとも一つ設けられる温度制御手段と、温度制御手段の下流側に接続され、試薬を吐出させる複数の試薬用吐出弁と、洗浄液用貯液槽の下流側に接続され、洗浄液を吐出させる単数又は複数の洗浄液用吐出弁と、試薬用吐出弁、洗浄液用吐出弁、又は試薬用吐出弁及び洗浄液用吐出弁の下流側に接続され、試薬、洗浄液を試料に噴射する液体噴射装置とを備えるものである。さらに、本発明の微生物迅速染色装置は、使用済み試薬を回収する回収貯蔵槽を備えるものであってもよい。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
本発明は、病医院や各研究所に於いて、組織片或いは細胞（本明細書に於いては、これらをまとめて試料とする）を顕微鏡観察すべく、迅速に染色処理するのに利用される顕微鏡標本の染色方法及び染色装置に関するものである。
【背景技術】
現在、臨床検査室で実施している微生物学的検査は依然、培養法を主体とした検査法が根強く残っているため、臨床的に有用な成績を医師に供給するには１日以上の時間を要する。しかし、敗血症、髄膜炎、肺炎のような、緊急に適切な治療が要求される感染症に関しては隔日単位のレポートでは全く意味のないことが多い。この時間的なロスを克服するために新しい方法が導入されてきたが、従来法の一つとして行われてきた顕微鏡学的検査も有用で迅速な診断法として評価されている。
この顕微鏡学的検査において顕微鏡観察による病気の原因菌診断を容易に行うため、スライドグラスに塗抹した試料を染色することが行われており、その中で診断的価値の高い顕微鏡検査としてグラム染色と抗酸性染色がある。そのうちグラム染色は、費用対効果、取扱いの柔軟性の点から顕微鏡学的検査法の代表的な方法として広く用いられている。
グラム染色法にはＨｕｃｋｅｒ法、Ｈｕｃｋｅｒの変法、Ｂａｒｔｈｏｌｏｍｅｗ＆Ｍｉｔｔｗｅｒ法などがある。おのおのの方法で用いられる色素や試薬にはわずかな違いはあるが、いずれも染色に要する時間は大差なく、例えばＨｕｃｋｅｒの変法では、各染色に約３０〜６０秒間、脱色には約２０〜３０秒を要し、水洗を加えると、全工程に約５分間を要するのが一般的である。
感染症その他の診断にグラム染色法を用いる場合、試料中のグラム陽性菌、グラム陰性菌および形態を識別することによってその診断がなされる。この識別には、例えば、図解臨床細菌検査（第２版）１６頁（坂崎利一著 文光堂）に示されている下記手順が採られている。
まず、１枚のスライドグラス上に顕微鏡検査の対象となる試料と標本となる陽性菌、陰性菌を塗抹したものを準備し、染色工程として、前染色、水洗、媒染色、水洗、脱色、水洗、後染色、水洗、を経て染色作業を終え、染色されたスライドグラス上の試料を顕微鏡検査により、グラム陽性菌は青、グラム陰性菌は赤に染色された像として観察している。この場合、全工程は全て室温で実施され、前染色、媒染色は、それぞれ約６０秒、水洗、脱色、後染色はそれぞれ約３０秒で、全ての染色作業を終了するのに約５分間を必要としている。この時間は、用手法でも自動染色装置利用の場合でも同じ程度である。
また、上記のような検査の効率を向上させるために各種の用手装置又は自動染色装置が創作されている。例えば、特開平８−４３３８０号公報の「グラム染色装置及び方法」、特開平１０−９０１４６号公報の「顕微鏡標本の自動染色装置」、特開２０００−３４６７６９号公報の「顕微観察用試料を着色するための自動着色装置」などがある。しかし、これらの装置は染色時間を短縮するものではなく、検査する側の効率を向上させるために多数の検体を一度に染色するものである。この結果、検査するための単位数が揃うまで採取された検体は時間待ちの状態となり、診察したその場で検査の結果を出すことは困難であった。このため診察した後日に診察結果が判明し、治療が開始されることとなり、緊急の処置を要する感染症患者に適切に対応できない状態である。
本発明は、かかる緊急を要する患者にも適切に対応すべく、迅速に染色する方法及び装置を提供するものである。
【発明の開示】
前記課題を解決するために、本発明に係る微生物迅速染色法は、室温でない温度に加温された染色液を用いるものである。
また、本発明に係る微生物迅速染色装置は、複数の試薬用の試薬用貯液槽と、複数又は単数の洗浄液用の洗浄液用貯液槽と、前記試薬用貯液槽の下流側に接続され、試薬を規定温度に制御する温度制御手段と、前記温度制御手段の下流側に接続され、試薬を吐出させる複数の試薬用吐出弁と、前記洗浄液用貯液槽の下流側に接続され、洗浄液を吐出させる単数又は複数の洗浄液用吐出弁と、前記試薬用吐出弁、前記洗浄液用吐出弁、又は前記試薬用吐出弁及び前記洗浄液用吐出弁の下流側に接続され、試薬、洗浄液、又は試薬及び洗浄液を試料に噴射する少なくとも一つの液体噴射装置とを備えるものである。
【図面の簡単な説明】
図１は、グラム陽性菌の青強調度、グラム陽性菌の青の強調度を室温で染色した従来法と染色液を３０℃から６０℃の各温度に加温した本発明法で染色した場合の青の強調度をＭｉｃｒｏ ａｎａｌｙｚｅｒにより計測し比較した図である。
図２は、グラム陰性菌の赤強調度、グラム陰性菌の赤の強調度を室温で染色した従来法と染色液を３０℃から６０℃の各温度に加温した本発明法で染色した場合の赤の強調度をＭｉｃｒｏ ａｎａｌｙｚｅｒにより計測し比較した図である。
図３は、従来法と本発明法の染色手順を示す図である。
図４の（ａ）は第１実施形態の微生物迅速染色装置の側面図、（ｂ）は（ａ）の微生物迅速染色装置の上視図である。
図５の（ａ）は第２実施形態の微生物迅速染色装置の上視図であって一部透視したものを示す図、（ｂ）は（ａ）の（ｂ）−（ｂ）断面図である。
【発明を実施するための最良の形態】
次に、本発明の実施の形態について説明するが、本発明は以下の実施の形態に限定されるものではない。まず、本発明に係る微生物迅速染色法の実施の形態について説明する。
試料については従来法で採用されている上記の手順に従って試料が作成される。次に、染色はＨｕｃｋｅｒの変法に本発明を適用した方法（本明細書においては本発明法という）が用いられた。
前染色で使用する試薬はクリスタルバイオレット、媒染色で使用する試薬はルゴール液で、この２種の液は共に４５℃に加温し、脱色用の試薬はアセトンとエタノールの等量混合液とし室温状態で用いた。これらの試薬は日本ビオメリュウ株式会社からの購入品である。後染色で使用する試薬のサフラニン液は和光純薬株式会社から購入の原液を５倍に希釈した希釈液を４５℃に加温したものを用いた。水洗用の水は室温状態で用いた。以上のそれぞれの温度に設定された、前染色液、媒染色液、脱色液、後染色液、水洗用水を用意し、既に準備されている、スライドグラス上に塗抹された菌株などを水洗用水以外は全て１秒間それぞれの試薬でおおい、後直ちに約１０秒間水洗し、水きり後、次工程に移す方法をとった。これらの染色手順は従来法と本発明法として図３に比較して示した。なお、手順は表の上から下へ順次進める。
この図３から従来法では５分間必要としていた染色時間が本発明法では４４秒即ち約１分以下に短縮できることがわかる。
顕微鏡検査により本発明法により染色した試料と従来法で染色した試料を比較し同等の染色結果が得られていることを確かめた。
従来法と本発明法を比較するため、試料の作成は従来法と本発明法の双方に同一の菌株を用いた。即ち一枚のスライドグラス上に複数の区画を設けその区画中２箇所の区画にそれぞれ陽性および陰性の対照菌を塗抹し、さらに残りの区画に菌株を塗抹し、試料とした。標準手順に従い、標準菌株として陽性対照菌はＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ ＡＴＣＣ２５９２３を、陰性対照菌はＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＡＴＣＣ２５９２２を塗抹した。試料としての菌株は臨床分離株の中でグラム腸性菌に較べ染色性がやや劣るグラム陰性菌と特に難染色性菌といわれているＨａｅｍｏｐｈｉｌｉｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅを用いた。グラム陰性菌としてはＥｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ａｅｒｏｇｅｎｅｓ，Ｍｏｒｇａｎｅｌｌａ．ｍｏｒｇａｎｉｉ，Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ，Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ，Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ ｋｏｓｅｉ，Ｅｎｔｒｏｂａｃｔｅｒ ｃｌｏａｃａｅ，Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｏｘｙｔｃａ，Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅの各菌種を用いた。染色後の試料の色強調度計測には日本ポラデジタル株式会社製のデジタル画像計測ソフトＭｉｃｒｏ ａｎａｌｙｚｅｒ Ｖｅｒ．１．１ｃを用いた。
準備された試料を図３の従来法による染色方法に従って染色し、他方本発明法による染色は前染色、媒染色、後染色の液温を３０℃から６０℃まで５℃間隔で変化させ、水洗、脱色は室温で、また、各工程の時間は図３の値に設定し全染色時間は４４秒になるようにした。本発明法に記載の脱色、後染色については図３記載の方法を見出すまでに各種の探索が行われた。脱色については加温の効果と液の組成が調べられ、また後染色については液の濃度の影響も調べられ染色の迅速性を発揮する本発明法の液組成と温度が設定された。本発明法における加温の効果をみるために多数枚のスライドグラスについて行いその平均的結果を図１および図２に示す。上記の各温度に加温された染色液で染色し、室温で水洗、脱色して染色作業を終えた試料を顕微鏡写真にとり、その画像をパソコン搭載の前記、デジタル画像計測ソフトＭｉｃｒｏ ａｎａｌｙｚｅｒにより色強調度を計測し表示した。図１は各スライドグラス上の標準菌株としての陽性対象菌の染色即ちグラム陽性菌の青強調度を各染色液温度ごとに表示した。図中左端の室温とあるのは従来法による図３記載の方法で所要時間５分間の染色後の青強調度計測値である。この図から本発明法による４５℃の加温液による染色が従来法よりグラム陽性菌の染色が強調されているのが判る。図２は各スライドグラス上の標準菌株としての陰性対象菌の染色即ちグラム陰性菌の赤強調度を染色液温度ごとに表示した。図中左端の室温とあるのは従来法による図３記載の方法で所要時間５分間の染色後の赤強調度計測値である。この図から本発明法による４５℃の加温液による染色が従来法よりグラム陰性菌の染色が強調されているのが判る。
この図では３０℃以上６０℃まで全ての範囲で従来法よりグラム陰性菌の染色が強調されているのが判る。その他、前記の難染色性菌、グラム陰性菌の全ての試料について本発明法が従来法に較べ同等以上の染色作用を示すことが確認された。
本発明法では染色液温を４５℃としているが、これは染色時間を作業上の最短時間として１秒を設定していることにより、前染色、媒染色の染色時間を３秒に設定しその他の条件は本発明法の通りに設定すれば染色液温度は４０℃から５０℃の範囲に設定することができる。
本実施形態によれば、緊急に適切な治療が要求される感染症その他の診断にグラム染色法を用いる場合、染色液を適当な温度に設定、加温することにより、従来法では約５分間要していた染色時間が本発明法を用いることにより約１分以下に短縮されより迅速な診断が可能となるだけでなく、従来、用手法では個人の技能に左右された染色作業が各染色、脱色に１秒という短時間ですむため、個人技能による影響を少なくできる。
次に、本発明に係る微生物迅速染色装置の実施の形態について説明する。まず、本発明に係る微生物迅速染色装置の第１実施形態について説明する。図４の（ａ）は第１実施形態の徴生物迅速染色装置の側面図であって、一部に微生物迅速染色装置内部を示す図、（ｂ）は（ａ）の微生物迅速染色装置の上視図である。
微生物迅速染色装置１０は、試薬を貯液する試薬用貯液槽１１ａ、１１ｃ、１１ｄ、１１ｆと、洗浄液を貯液する洗浄液用貯液槽１１ｂ、１１ｅと、試薬用貯液槽１１ａ、１１ｃ、１１ｆの各下流側に接続され、試薬を規定温度に制御する３つの温度制御装置（温度制御装置全体は不図示）と、これらの温度制御装置の各下流側に接続され、試薬を吐出させる試薬用吐出弁１３ａ、１３ｃ、１３ｆと、試薬用貯液槽１１ｄの下流側に接続され、一時的に液体を貯蔵できる一時貯液槽１２ｄと、一時貯液槽１２ｄの下流側に接続され、試薬を吐出させる試薬用吐出弁１３ｄと、洗浄液用貯液槽１１ｂ、１１ｅの各下流側に接続され、一時的に液体を貯蔵できる一時貯液槽１２ｂ、１２ｅと、一時貯液槽１２ｄの下流側に接続され、試薬を吐出させる洗浄液を吐出させる洗浄液用吐出弁１３ｂ、１３ｅと、試薬用吐出弁１３ａ、１３ｃ、１３ｆ及び洗浄液用吐出弁１３ｂ、１３ｅの下流側に接続され、試薬及び洗浄液を試料１８に噴射する液体噴射装置１７と、試料１８に噴射された使用済み試薬及び使用済み洗浄液を回収し貯蔵する回収貯液槽１９とを備えるものである。
試薬用貯液槽１１ａ、１１ｃ、１１ｄ、１１ｆは、蓄圧型の試薬用貯液槽である。ここで、蓄圧型の試薬用貯液槽とは、試薬用貯液槽１１ａ内を加圧状態にするために、液圧または気圧による蓄圧装置（不図示）を内装しているものであり、例えば弾力性を有する液袋または気袋を内装し、その圧力源配管（例えば、水道配管）として配管４０を設置し、試薬用貯液槽１１ａに対しては継手４１ａを介して圧力を供給するものである。同様に、試薬用貯液槽１１ｃ、１１ｄ、１１ｆについても、継手４１ｃ、４１ｄ、４１ｆを介して圧力を供給するものである。なお、液体噴射装置１７で必要な圧力が得られるまで位置的に高水程位置に通常の試薬用貯液槽１１ａ、１１ｃ、１１ｄ、１１ｆを設置することが可能である場合には蓄圧装置を省略することができる。これらの試薬用貯液槽１１ａ、１１ｃ、１１ｄ、１１ｆには、種類の異なる試薬をそれぞれ充填することができる。
洗浄液用貯液槽１１ｂ、１１ｅも、試薬用貯液槽１１ａ、１１ｃ、１１ｄ、１１ｆと同様の蓄圧型の洗浄液用貯液槽であり、蓄圧装置（不図示）により配管４０及び継手４１ｂ、４１ｅを介して加圧することができるものである。なお、液体噴射装置１７で必要な圧力が得られるまで位置的に高水程位置に通常の洗浄液用貯液槽１１ｂ、１１ｅを設置することが可能である場合には蓄圧装置を省略することができる。なお、試料の水洗は、常温の洗浄液で十分であるため、洗浄液用貯液槽１１ｂ、１１ｅの下部に設置されている一時貯液槽１２ｂ、１２ｅ内の洗浄液の温度制御を行う必要は必ずしもない。また、洗浄液には水道水、蒸留水やアルコールなどが使用される。
温度制御装置（温度制御装置全体は不図示）は、試薬用貯液槽１１ａ、１１ｃ、１１ｆと各試薬用吐出弁１３ａ、１３ｃ、１３ｆとの接続途中に設けられる一時貯液部１２ａ、１２ｃ、１２ｆと、一時貯液部１２ａ、１２ｃ、１２ｆ内の試薬の温度を計測する温度計（不図示）と、一時貯液部１２ａ、１２ｃ、１２ｆ内の試薬を加熱する加熱装置（不図示）と、温度計の測定値によって加熱手段の加熱の強弱を制御する制御部（不図示）とを備えるものである。一時貯液部１２ａ、１２ｃ、１２ｆは、各配管１４ａ、１４ｃ、１４ｆを介して試薬用貯液槽１１ａ、１１ｃ、１１ｆと接続されており、試薬用貯液槽１１ａ、１１ｃ、１１ｆからの試薬を一時的に貯めるものであり、温度制御装置の加温装置や制御部などによって噴射する一時貯液部１２ａ、１２ｃ、１２ｆ内の試薬の温度制御が行われる。この温度制御装置は、一時貯液部１２ａ、１２ｃ、１２ｆ内の温度を１５〜６０℃までの範囲又は４５℃±３℃の範囲に制御するものであることが好ましい。なお、試薬は、加熱装置によって直接加熱されてもよいし、一時貯液部１２ａ、１２ｃ、１２ｆを加熱して間接的に加熱されてもよい。また、加熱装置としては、例えば電気ヒーターなどがあげられる。
試薬用吐出弁１３ａ、１３ｃ、１３ｆは、図示しない制御装置などによって解放される時間が制御されるものである。例えば、試薬用吐出弁１３ａが解放されているときには、温度制御装置（不図示）の一時貯液槽１２ａに貯められていた試薬を配管１４ａ、試薬用吐出弁１３ａ、配管１５ａ、ヘッダー１６の順に流通させるものである。試薬用吐出弁１３ｃ、１３ｆについても同様である。試薬用吐出弁１３ｄ及び洗浄液用吐出弁１３ｂ、１３ｅも試薬用吐出弁１３ａ、１３ｃ、１３ｆと同様に図示しない制御装置などによって解放される時間が制御されるものである。例えば、試薬用吐出弁１３ｄが解放されているときには、一時貯液部２０ｄに貯められていた洗浄液を配管１４ｄ、試薬用吐出弁１３ｄ、配管１５ｄ、ヘッダー１６の順に流通させるものである。洗浄液用吐出弁１３ｂ、１３ｅについても同様である。なお、試薬用吐出弁１３ａ、１３ｃ、１３ｄ、１３ｆ及び洗浄液用吐出弁１３ｂ、１３ｅは、支持部材（不図示）により固定支持されている。
配管１４ａ、１４ｂ、１４ｃ、１４ｄ、１４ｅ、１４ｆは、試薬用貯液槽１１ａ、１１ｃ、１１ｄ、１１ｆ内や洗浄液用貯液槽１１ｂ、１１ｅ内が加圧される場合には、その加圧に耐えることができるものであることが好ましい。
ヘッダー１６は、各配管１５ａ、１５ｂ、１５ｃ、１５ｄ、１５ｅ、１５ｆを一箇所に集める管寄せである。
液体噴射装置１７は、図示しない噴射制御装置によって、試料１８に噴射する試薬及び洗浄液の噴射順序、噴射時間及び噴射量を制御されるものであることが好ましい。
試料１８は、例えばスライドグラスの平面部に菌株が塗布されたものなどであり、その平面部を傾くように配置して、試薬や洗浄液を下方へ流れやすくしておくことが好ましい。
回収貯液槽１９は、使用済みの試薬及び洗浄液を回収し貯蔵するものであるが、本発明に使用される試薬及び洗浄液は有害物質ではないので、回収貯液槽１９を有しない装置とし、そのまま試薬を下水へ流すこととしてもよい。
次に、本実施形態に係る微生物迅速染色装置１０の染色作用の一例について説明する。
ここでは一例の染色法としてＨｕｃｋｅｒの変法の迅速染色法に本発明を適用した場合について述べる。
試薬用貯液槽１１ａにはクリスタルバイオレットが充填されており、このクリスタルバイオレットの一部は試薬用貯液槽１１ａ下部の配管１４ａを通じて温度制御装置（不図示）内の一時貯液槽１２ａに貯められる。そして、このクリスタルバイオレットを温度制御装置（不図示）内の一時貯液槽１２ａにて１５〜６０℃までの範囲、好ましくは４５℃±３℃の範囲に加温する。その後、制御装置（不図示）からの指令に従って、試薬用吐出弁１３ａの開口時期及び時間を制御して最低１秒間弁口を開き、加温されたクリスタルバイオレットを配管１５ａ、ヘッダー１６、液体噴射装置１７の順に流通させ、液体噴射装置１７の噴射により試料１８の菌株を前染色する。前染色工程を終えた試薬は、試料１８下方に設置された回収貯液槽１９内に貯蔵される。
前染色工程が終了すると次に水洗工程に入る。試薬用貯液槽１１ａに隣接する洗浄液用貯液槽１１ｂには水道水が充填されており、この水道水の一部は洗浄液用貯液槽１１ｂ下部の配管１４ｂを通じて一時貯液槽１２ｂに室温程度で貯蔵する。制御装置（不図示）からの指令に従って、洗浄液用吐出弁１３ｂの開口時期及び時間を制御して約１０秒間弁口を開き、一時貯液槽１２ｂ内の水道水を配管１５ｂ、ヘッダー１６、液体噴射装置１７の順に流通させ、液体噴射装置１７の噴射により試料１８の菌株を水洗する。この水洗工程を終えた使用済み水道水は、試料１８下方に設置された回収貯液槽１９内に貯蔵される。
水洗工程が終了すると次に媒染工程に入る。そのために洗浄液用貯液槽１１ｂに隣接する試薬用貯液槽１１ｃの系統が使用される。試薬用貯液槽１１ｃにはルゴール液を充填しておき、このルゴール液をその下部に設置された温度制御装置（不図示）内の一時貯液槽１２ｃ内にて１５〜６０℃までの範囲、好ましくは４５℃±３℃の範囲に加温する。制御装置（不図示）からの指令に従って、試薬用吐出弁１３ｃの開口時期及び時間を制御して最低１秒間弁口を開き、加温されたルゴール液を配管１５ｃ、ヘッダー１６、液体噴射装置１７の順に流通させ、液体噴射装置１７の噴射により試料１８の菌株を媒染色する。媒染工程を終えた試薬は、試料１８下方に設置された回収貯液槽１９内に貯蔵される。
媒染色工程が終了すると次は水洗工程に入る。そのために試薬用貯液槽１１ｃに隣接する水道水が充填された洗浄液用貯液槽１１ｂの系統が使用される。ここでは、すでに上述した前染色工程後の水洗工程と同様の水洗工程を行うものである。
水洗工程が終了すると次は脱色工程に入る。そのためには洗浄液用貯液槽１１ｅに隣接する試薬用貯液槽１１ｄの系統が使用される。試薬用貯液槽１１ｄにはアセトンとエタノールを等量混合した液を充填しておく。そして、この混合液を試薬用貯液槽１１ｄ下部の一時貯液槽１２ｄ内にて室温程度で貯蔵する。なお、この混合液は必ずしも加温される必要はない。その後、制御装置（不図示）からの指令に従って、一時貯液槽１２ｄ下部の試薬用吐出弁１３ｄの開口時期及び時間を制御して約１０秒間弁口を開き、上記一時貯液槽１２ｄ内の混合液を配管１５ｄ、ヘッダー１６、液体噴射装置１７の順に流通させ、液体噴射装置１７の噴射により試料１８の菌株を脱色する。この脱色工程を終えた試薬は、試料１８下方に設置された回収貯液槽１９内に貯蔵される。
脱色工程が終了すると次は水洗工程に入る。そのためには試薬用貯液槽１１ｄに隣接する水道水が充填された洗浄液用貯液槽１１ｅの系統が使用される。まず、洗浄液用貯液槽１１ｅ内の水道水の一部を洗浄液用貯液槽１１ｅ下部の一時貯液槽１２ｅ内にて室温程度で貯蔵する。その後、制御装置（不図示）からの指令に従って、試薬用吐出弁１３ｅの開口時期及び時間を制御して約１０秒間弁口を開き、一時貯液槽１２ｅ内の水道水を配管１５ｅ、ヘッダー１６、液体噴射装置１７の順に流通させ、液体噴射装置１７の噴射により試料１８の菌株を水洗する。この水洗工程を終えた使用済み水道水は、試料１８下方に設置された回収貯液槽１９内に貯蔵される。
水洗工程が終了すると次は後染色工程に入る。そのためには洗浄液用貯液槽１１ｅに隣接する試薬用貯液槽１１ｆの系統が使用される。試薬用貯液槽１１ｆにはサフラニン液の５倍希釈液を充填しておき、このサフラニン液の５倍希釈液を試薬用貯液槽１１ｆ下部に設置された温度制御装置（不図示）内の一時貯液槽１２ｆ内にて１５〜６０℃までの範囲、好ましくは４５℃±３℃の範囲に加温する。その後、制御装置（不図示）からの指令に従って、試薬用吐出弁１３ｆの開口時期及び時間を制御して最低１秒間弁口を開き、サフラニン液の５倍希釈液を配管１５ｆ、ヘッダー１６、液体噴射装置１７の順に流通させ、液体噴射装置１７の噴射により試料１８の菌株を後染色する。後染色工程を終えた試薬は、試料１８下方に設置された回収貯液槽１９内に貯蔵される。
後染色工程が終了すると次は水洗工程に入る。そのためには試薬用貯液槽１１ｆに隣接する水道水が充填された洗浄液用貯液槽１１ｅの系統が使用される。ここでは、すでに上述した脱色工程後の水洗工程と同様の水洗工程を行うものである。
以上のようにして１枚のスライドグラス上に塗布された菌株のグラム染色作業は行われるが、約１分以下で上記のグラム染色作業の全工程を終了することができる。従って、緊急を要する患者にも適切に対応することができ、検査結果を迅速に出すことができる。
なお、本実施形態の場合、洗浄用に使用された洗浄液貯液槽は１１ｂまたは１１ｅのいずれか一方のみで済ますことができることは勿論である。
次に、本発明に係る微生物迅速染色装置の第２実施形態について説明する。図５の（ａ）は第２実施形態の微生物迅速染色装置の上視図であって一部透視したものを示す図、（ｂ）は（ａ）の（ｂ）−（ｂ）断面図である。
微生物迅速染色装置２０は、試薬を貯液する試薬用貯液槽２１ａ、２１ｃ、２１ｅ、２１ｇと、洗浄液を貯液する洗浄液用貯液槽（不図示）と、試薬用貯液槽２１ａ、２１ｃ、２１ｇの各下流側に接続され、試薬を規定温度に制御する３つの温度制御装置（温度制御装置全体は不図示）と、これらの温度制御装置の各下流側に接続され、試薬を吐出させる試薬用吐出弁２３ａ、２３ｃ、２３ｇと、試薬用貯液槽２１ｅの下流側に接続され、一時的に液体を貯蔵できる一時貯液槽２２ｅと、一時貯液槽２２ｅの下流側に接続され、試薬を吐出させる試薬用吐出弁２３ｅと、洗浄液用貯液槽（不図示）に配管４０、継手４１ｂ、４１ｄ、４１ｆ、４１ｈ及び配管２４ｂ、２４ｄ、２４ｆ、２４ｈを介して接続され、一時的に液体を貯蔵できる一時貯液槽２２ｂ、２２ｄ、２２ｆ、２２ｈと、一時貯液槽２２ｂ、２２ｄ、２２ｆ、２２ｈの各下流側に接続され、洗浄液を吐出させる洗浄液用吐出弁２３ｂ、２３ｄ、２３ｆ、２３ｈとを備えてなる。さらに、微生物迅速染色装置２０は、試薬用吐出弁２３ａ、２３ｃ、２３ｅ、２３ｇの各下流側に接続され、試薬を試料２８ａ、２８ｃ、２８ｅ、２８ｇに噴射する液体噴射装置２７ａ、２７ｃ、２７ｅ、２７ｇと、洗浄液用吐出弁２３ｂ、２３ｄ、２３ｆ、２３ｈの各下流側に接続され、洗浄液を試料２８ｂ、２８ｄ、２８ｆ、２８ｈに噴射する液体噴射装置２７ｂ、２７ｄ、２７ｆ、２７ｈと、液体噴射装置２７ａ、２７ｂ、２７ｃ、２７ｄ、２７ｅ、２７ｆ、２７ｇ、２７ｈ（以下、液体噴射装置２７ａ〜２７ｈとする）によって噴射された使用済み試薬及び使用済み洗浄液を回収し貯蔵する回収貯液槽２９ａ、２９ｂ、２９ｃ、２９ｄ、２９ｅ、２９ｆ、２９ｇ、２９ｈ（以下、回収貯液槽２９ａ〜２９ｈとする）と、試料２８ａ、２８ｂ、２８ｃ、２８ｄ、２８ｅ、２８ｆ、２８ｇ、２８ｈ（以下、試料２８ａ〜２８ｈとする）を載置可能な円盤３０と、円盤３０の回転角度を制御自在なモータ３１と、モータ３１を固定支持する土台３２とを備えてなる。
試薬用貯液槽２１ａ、２１ｃ、２１ｅ、２１ｇは、蓄圧型の試薬用貯液槽である。ここでは、弾力性を有する液袋を内装し、その圧力源配管（例えば、水道配管）として配管４０を設置し、試薬用貯液槽１１ａに対しては継手４１ａを介して圧力を供給するものである。なお、液体噴射装置２７ａ、２７ｃ、２７ｅ、２７ｇで必要な圧力が得られるまで位置的に高水程位置に通常の試薬用貯液槽２１ａ、２１ｃ、２１ｅ、２１ｇを設置することが可能である場合には蓄圧装置を省略することができる。これらの試薬用貯液槽２１ａ、２１ｃ、２１ｅ、２１ｇには、種類の異なる試薬をそれぞれ充填することができる。
図示していない洗浄液用貯液槽は、蓄圧型の洗浄液用貯液槽である。図５（ａ）に示すように、洗浄液を継手４１ａを介して配管４０に送ることができるものである。加圧された洗浄液は継手４１ａ、４１ｂ、４１ｃ、４１ｄ、４１ｅ、４１ｆ、４１ｇ、４１ｈを介して所望される各部位へと配送される。なお、液体噴射装置２７ｂ、２７ｄ、２７ｆ、２７ｈで必要な圧力が得られるまで位置的に高水程位置に通常の洗浄液用貯液槽を設置することが可能である場合には蓄圧装置を省略することができる。なお、試料の水洗は、常温の洗浄液で十分であるため、一時的に液体を貯蔵できる一時貯液槽２２ｂ、２２ｄ、２２ｆ、２２ｈ内の洗浄液の温度制御を行う必要は必ずしもない。また、洗浄液には水道水、蒸留水やアルコールなどが使用される。
温度制御装置（温度制御装置全体は不図示）は、試薬用貯液槽２１ａ、２１ｃ、２１ｇと各試薬用吐出弁２３ａ、２３ｃ、２３ｇとの接続途中に設けられる一時貯液槽２２ａ、２２ｃ、２２ｇと、一時貯液槽２２ａ、２２ｃ、２２ｇ内の試薬の温度を計測する温度計（不図示）と、一時貯液槽２２ａ、２２ｃ、２２ｇ内の試薬を加熱する加熱装置（不図示）と、温度計の測定値によって加熱手段の加熱の強弱を制御する制御部（不図示）とを備えるものである。一時貯液槽２２ａ、２２ｃ、２２ｇは、各配管２４ａ、２４ｃ、２４ｇを介して試薬用貯液槽２１ａ、２１ｃ、２１ｇと接続されているものであって、試薬用貯液槽２１ａ、２１ｃ、２１ｇからの試薬を一時的に貯めるものであって、温度制御装置の加温装置や制御部などによって噴射する一時貯液槽２２ａ、２２ｃ、２２ｇ内の試薬の温度制御が行われる。なお、一時貯液槽２２ａ、２２ｃ、２２ｇ内の温度は、１５〜６０℃までの範囲又は４５℃±３℃の範囲に制御されるものであることが好ましい。また、試薬は、加熱装置によって直接加熱されてもよいし、一時貯液槽２２ａ、２２ｃ、２２ｇを加熱して間接的に加熱されてもよい。また、加熱装置としては、例えば電気ヒーターなどがあげられる。
試薬用吐出弁２３ａ、２３ｃ、２３ｇは、図示しない制御装置などによって解放される時間が制御されるものである。例えば、試薬用吐出弁２３ａが解放されているときには、温度制御装置（不図示）の一時貯液槽２２ａに貯められていた試薬を配管２４ａ、試薬用吐出弁２３ａ、配管２５ａの順に流通させるものである。試薬用吐出弁２３ｃ、２３ｇについても同様である。試薬用吐出弁２３ｅ及び洗浄液用吐出弁２３ｂ、２３ｄ、２３ｆ、２３ｈも試薬用吐出弁２３ａ、２３ｃ、２３ｆと同様に図示しない制御装置などによって解放される時間が制御されるものである。例えば、洗浄液用吐出弁２３ｄが解放されているときには、一時貯液槽２２ｄに貯められていた洗浄液を配管２４ｄ、洗浄液用吐出弁２３ｄ、配管２５ｄの順に流通させるものである。試薬用吐出弁２３ｅ及び洗浄液用吐出弁２３ｂ、２３ｆ、２３ｈについても同様の動作が行われる。なお、試薬用吐出弁２３ａ、２３ｃ、２３ｅ、２３ｇ及び洗浄液用吐出弁２３ｂ、２３ｄ、２３ｆ、２３ｈは、支持部材３３により固定支持されている。
配管２４ａ、２４ｂ、２４ｃ、２４ｄ、２４ｅ、２４ｆ、２４ｇ、２４ｈは、試薬用貯液槽２１ａ、２１ｃ、２１ｅ、２１ｇ内や洗浄液用貯液槽内が加圧される場合には、その加圧に耐えることができるものであることが好ましい。
液体噴射装置２７ａ〜２７ｈは、図示しない噴射制御装置によって、試料２８ａ〜２８ｈに噴射する試薬及び洗浄液の噴射順序、噴射時間及び噴射量を制御されるものであることが好ましい。また、図５では噴射ノズルを３本示している態様としているがこれに限られず、１本以上あればよい。
試料２８ａ〜２８ｈは、例えばスライドグラスの平面部に菌株が塗布されたものなどであり、その平面部を傾くように配置して、試薬や洗浄液を下方へ流れやすくしておくことが好ましい。
回収貯液槽２９ａ〜２９ｈは、使用済みの試薬及び洗浄液を回収し貯蔵するものである。本発明に使用される試薬及び洗浄液は有害物質ではないので、回収貯液槽２９ａ〜２９ｈを有しない装置とし、そのまま試薬を下水へ流すこととしてもよいが、本実施形態に係る微生物迅速染色装置においては、試薬を各液体噴射装置２７ａ〜２７ｈにおいて別々に噴射するため、使用済み試薬ごとに分別して回収できるので各試薬の再利用が可能となる。
円盤３０は、試料２８ａ〜２８ｈを等間隔で放射状に、かつ、試料２８ａ〜２８ｈの平面部をやや傾けて載置できるようになっている。また、試料２８ａ〜２８ｈの回りには噴射された試薬及び洗浄液を下方の回収貯液槽２９ａ〜２９ｈに流れ落とすための穴が設けられている。
モータ３１は、その回転軸が円盤３０の中心部に固定接続され、円盤３０をその中心を軸として水平に回転させることができるものである。なお、モータ３１に接続された制御装置（不図示）によって、円盤３０の回転角度の制御を行うものである。
次に、第２実施形態の微生物迅速染色装置の染色作用について説明する。
ここでは一例の染色法としてＨｕｃｋｅｒの変法の迅速染色法に本発明を適用した場合について述べる。Ｈｕｃｋｅｒの変法の迅速染色法では薬液を使用する工程は、前染色、媒染色、脱色、後染色があり図５に適用した場合、試薬用貯液槽２１ａの系統は前染色に、試薬用貯液槽２１ｃの系統は媒染色に、試薬用貯液槽２１ｅの系統は脱色に、試薬用貯液槽２１ｇの系統は後染色に対応する。他方、洗浄液用貯液槽２１ｂ系統、洗浄液用貯液槽２１ｄ系統、洗浄液用貯液槽２１ｆ系統、洗浄液用貯液槽２１ｈ系統はすべて水洗工程に対応するものである。
次に、各工程について説明する。
まず、液体噴射装置２７ａ下部の回転円盤３０上に菌株を上面に塗布した試料２８ａを載せる。試薬用貯液槽２１ａにはクリスタルバイオレットが充填されており、このクリスタルバイオレットの一部は試薬用貯液槽２１ａ下部の配管２４ａを通じて温度制御装置（不図示）内の一時貯液槽２２ａに貯められる。そして、このクリスタルバイオレットを温度制御装置（不図示）内の一時貯液槽２２ａにて１５〜６０℃までの範囲、好ましくは４５℃±３℃の範囲に加温する。その後、制御装置（不図示）からの指令に従って、試薬用吐出弁２３ａの開口時期及び時間を制御して最低１秒間弁口を開き、加温されたクリスタルバイオレットを配管２５ａ、液体噴射装置２７ａの順に流通させ、液体噴射装置２７ａの噴射により試料２８ａの菌株を前染色する。前染色工程を終えた試薬は、試料２８ａ下方に設置された回収貯液槽２９ａ内に単独で貯蔵される。
次に回転円盤３０は、制御装置からの信号によって回転するモータ３１により、反時計方向に４５度回転した位置に静止する。このとき、前染色工程を終了した菌株を貼着した試料２８ａは試料２８ａの前染色工程のときに試料２８ｂがあった位置にくる（図５（ａ）参照）。そこで洗浄水分岐継手４１ｂから導入された加圧水（水道水）は制御装置からの信号により開口作動を開始した洗浄液用吐出弁２３ｂを通過して約１０秒間、配管２５ｂを経由して液体噴射装置２７ｂから鉛直下方に位置する試料２８ａ上に貼着された前染色工程終了済みの試料に向けて噴射し、水洗工程を行う。水洗工程を終えた洗浄液は、試料２８ａ下方に設置された回収貯液槽２９ｂ内に単独で貯蔵される。なお、洗浄液は下水にそのまま流すこととしてもよい。また、必ずしも洗浄液は加温されている必要はない。以下の水洗工程においても同様である。
次に再び回転円盤３０は、制御装置からの信号によって回転するモータ３１により、反時計方向に４５度回転した位置に静止する。このとき、水洗工程を終了した菌株を貼着した試料２８ａは試料２８ａの前染色工程のときに試料２８ｃがあった位置にくる（図５（ａ）参照）。試薬用貯液槽２１ｃにはルゴール液が充填されており、このルゴール液の一部は試薬用貯液槽２１ｃ下部の配管２４ｃを通じて温度制御装置（不図示）内の一時貯液槽２２ｃに貯められる。そして、このルゴール液を温度制御装置（不図示）内の一時貯液槽２２ｃにて１５〜６０℃までの範囲、好ましくは４５℃±３℃の範囲に加温する。その後、制御装置（不図示）からの指令に従って、試薬用吐出弁２３ｃの開口時期及び時間を制御して最低１秒間弁口を開き、加温されたルゴール液を配管２５ｃ、液体噴射装置２７ｃの順に流通させ、液体噴射装置２７ｃの噴射により試料２８ａの菌株を媒染色する。媒染色工程を終えた試薬は、試料２８ａ下方に設置された回収貯液槽２９ｃ内に単独で貯蔵される。
次に再び回転円盤３０は、制御装置からの信号によって回転するモータ３１により、反時計方向に４５度回転した位置に静止する。このとき、媒染色工程を終了した菌株を貼着した試料２８ａは試料２８ａの前染色工程のときに試料２８ｄがあった位置にくる（図５（ａ）参照）。そこで洗浄水分岐継手４１ｄから導入された加圧水（水道水）は制御装置からの信号により開口作動を開始した洗浄液用吐出弁２３ｄを通過して約１０秒間、配管２５ｄを経由して液体噴射装置２７ｄから鉛直下方に位置する試料２８ａ上に貼着された媒染色工程終了済みの試料に向けて噴射し、水洗工程を行う。水洗工程を終えた洗浄液は、試料２８ａ下方に設置された回収貯液槽２９ｄ内に単独で貯蔵される。
次に再び回転円盤３０は、制御装置からの信号によって回転するモータ３１により、反時計方向に４５度回転した位置に静止する。このとき、水洗工程を終了した菌株を貼着した試料２８ａは試料２８ａの前染色工程のときに試料２８ｅがあった位置にくる（図５（ａ）参照）。試薬用貯液槽２１ｅには、脱色工程に必要な脱色薬液としてアセトンとエタノールとを等量混合した液が充填されており、この混合液の一部は一時貯液槽２２ｅに貯められる。一時貯液槽２２ｅ内の混合液は、制御装置からの信号により開口作動を開始した試薬用吐出弁２３ｅを通過して約１０秒間、配管２５ｅを経由して、液体噴射装置２７ｅから鉛直下方に位置する試料２８ａ上に貼着された試料に向けて噴射し、脱色工程を行う。脱色工程を終えた試薬は、試料２８ａ下方に設置された回収貯液槽２９ｅ内に単独で貯蔵される。なお、必ずしも上記混合液は加温されている必要はない。
次に再び回転円盤３０は、制御装置からの信号によって回転するモータ３１により、反時計方向に４５度回転した位置に静止する。このとき、脱色工程を終了した菌株を貼着した試料２８ａは試料２８ａの前染色工程のときに試料２８ｆがあった位置にくる（図５（ａ）参照）。そこで洗浄水分岐継手４１ｆから導入された加圧水（水道水）は制御装置からの信号により開口作動を開始した洗浄液用吐出弁２３ｆを通過して約１０秒間、配管２５ｆを経由して液体噴射装置２７ｆから鉛直下方に位置する試料２８ａ上に貼着された脱色工程終了済みの試料に向けて噴射し、水洗工程を行う。水洗工程を終えた洗浄液は、試料２８ａ下方に設置された回収貯液槽２９ｆ内に単独で貯蔵される。
次に再び回転円盤３０は、制御装置からの信号によって回転するモータ３１により、反時計方向に４５度回転した位置に静止する。このとき、水洗工程を終了した菌株を貼着した試料２８ａは試料２８ａの前染色工程のときに試料２８ｇがあった位置にくる（図５（ａ）参照）。試薬用貯液槽２１ｇには後染色工程に必要な薬液としてサフラニン液の５倍希釈液が充填されており、このサフラニン液の５倍希釈液の一部は試薬用貯液槽２１ｇ下部の配管２４ｇを通じて温度制御装置（不図示）内の一時貯液槽２２ｇに貯められる。そして、このルゴール液を温度制御装置（不図示）内の一時貯液槽２２ｇにて１５〜６０℃までの範囲、好ましくは４５℃±３℃の範囲に加温する。その後、制御装置（不図示）からの指令に従って、試薬用吐出弁２３ｇの開口時期及び時間を制御して最低１秒間弁口を開き、加温されたルゴール液を配管２５ｇ、液体噴射装置２７ｇの順に流通させ、液体噴射装置２７ｇの噴射により試料２８ａの菌株を後染色する。後染色工程を終えた試薬は、試料２８ａ下方に設置された回収貯液槽２９ｇ内に単独で貯蔵される。
次に再び回転円盤３０は、制御装置からの信号によって回転するモータ３１により、反時計方向に４５度回転した位置に静止する。このとき、水洗工程を終了した菌株を貼着した試料２８ａは試料２８ａの前染色工程のときに試料２８ｈがあった位置にくる（図５（ａ）参照）。そこで洗浄水分岐継手４１ｈから導入された加圧水（水道水）は制御装置からの信号により開口作動を開始した洗浄液用吐出弁２３ｈを通過して約１０秒間、配管２５ｈを経由して液体噴射装置２７ｈから鉛直下方に位置する試料２８ａ上に貼着された脱色工程終了済みの試料に向けて噴射し、水洗工程を行う。水洗工程を終えた洗浄液は、試料２８ａ下方に設置された回収貯液槽２９ｈ内に単独で貯蔵される。
このようにして図５における円盤３０の所定位置に取り付けられた試料２８ａは、上記したように回転円盤を４５度づつ反時計方向に回転させる毎に前染色、水洗、媒染色、水洗、脱色、水洗、後染色、水洗とＨｕｃｋｅｒの変法の迅速染色法に従って染色工程を終えることができる。
以上は試料２８ａの染色工程を示したものであるが、図５（ａ）に示すように他の試料も円盤３０に載置すれば、上記と同じ手順を順次繰り返すことにより、複数の試料について順次染色することができる。例えば、以下の手順である。最初に図５（ａ）の試料２８ａの位置に試料を円盤３０に載置し、前染色工程を１秒間行う。次に、試料２８ａをモーター３１により反時計回りに４５度回転させ（図５（ａ）の試料２８ｂの位置に載置される）、水洗工程を１０秒間行う。このとき、図５（ａ）の試料２８ａの位置には、まだ次の試料を入れることができない。なぜなら、前染色工程の試薬の噴射時間と、水洗工程の洗浄液の噴射時間とが異なる上、噴射圧力源が同じであるので、試薬と洗浄液との同時及び同期間一斉噴射をすることができないからである。
次に、再び試料２８ａをモーター３１により反時計回りに４５度回転させ（図５（ａ）の試料２８ｃの位置に載置される）、図５（ａ）の試料２８ａの位置に新たな試料を載置し、最初の試料（図５（ａ）の試料２８ｃの位置にある試料）については媒染色工程を、新たな試料（図５（ａ）の試料２８ａの位置にある試料）については前染色工程を行う。
このように、先に載置された試料が水洗工程にあるときは新たな試料の載置をせず、各染色工程や脱色工程にあるときに新たな試料を順次追加載置するという作業を行う。これにより、本実施形態の微生物迅速染色装置は、最大４枚の試料の載置が可能で、これらの試料について、前染色、水洗、媒染色、水洗、脱色、水洗、後染色、水洗の各工程が順次行われることとなり、迅速に染色を行うことができる。
本実施形態によれば、約１分以下で一つの試料についてのグラム染色作業の全工程を終了することができる。従って、緊急を要する患者にも適切に対応することができ、検査結果を迅速に出すことができる。しかも、複数の試料を順次検査していくことができるため、一定時間における試料検査数を従来よりも大幅に増加させることができ、効率のよい検査をすることができる。
【産業上の利用可能性】
緊急に適切な治療が要求される感染症その他の診断にグラム染色法を用いる場合、従来、約５分間要していた染色時間が微生物迅速染色法により約１分以下に短縮されたことから従来費用対効果の面から採用されなかった１枚を含む少数枚数の染色作業も採用する可能性が生じてきた。その可能性をさらに強化するには構造簡単な低コストの装置が求められていた。この発明により費用対効果の面も向上し、１枚でも迅速に低コストで診断に利用されるようになり、緊急時でも適切な治療の機会が増加し、感染症などの予防が推進される。
【図１】
【図２】
【図３】
【技術分野】
本発明は、病医院や各研究所に於いて、組織片或いは細胞（本明細書に於いては、これらをまとめて試料とする）を顕微鏡観察すべく、迅速に染色処理するのに利用される顕微鏡標本の染色方法及び染色装置に関するものである。
【背景技術】
現在、臨床検査室で実施している微生物学的検査は依然、培養法を主体とした検査法が根強く残っているため、臨床的に有用な成績を医師に供給するには１日以上の時間を要する。しかし、敗血症、髄膜炎、肺炎のような、緊急に適切な治療が要求される感染症に関しては隔日単位のレポートでは全く意味のないことが多い。この時間的なロスを克服するために新しい方法が導入されてきたが、従来法の一つとして行われてきた顕微鏡学的検査も有用で迅速な診断法として評価されている。
この顕微鏡学的検査において顕微鏡観察による病気の原因菌診断を容易に行うため、スライドグラスに塗抹した試料を染色することが行われており、その中で診断的価値の高い顕微鏡検査としてグラム染色と抗酸性染色がある。そのうちグラム染色は、費用対効果、取扱いの柔軟性の点から顕微鏡学的検査法の代表的な方法として広く用いられている。
グラム染色法にはＨｕｃｋｅｒ法、Ｈｕｃｋｅｒの変法、Ｂａｒｔｈｏｌｏｍｅｗ＆Ｍｉｔｔｗｅｒ法などがある。おのおのの方法で用いられる色素や試薬にはわずかな違いはあるが、いずれも染色に要する時間は大差なく、例えばＨｕｃｋｅｒの変法では、各染色に約３０〜６０秒間、脱色には約２０〜３０秒を要し、水洗を加えると、全工程に約５分間を要するのが一般的である。
感染症その他の診断にグラム染色法を用いる場合、試料中のグラム陽性菌、グラム陰性菌および形態を識別することによってその診断がなされる。この識別には、例えば、図解臨床細菌検査（第２版）１６頁（坂崎利一著 文光堂）に示されている下記手順が採られている。
まず、１枚のスライドグラス上に顕微鏡検査の対象となる試料と標本となる陽性菌、陰性菌を塗抹したものを準備し、染色工程として、前染色、水洗、媒染色、水洗、脱色、水洗、後染色、水洗、を経て染色作業を終え、染色されたスライドグラス上の試料を顕微鏡検査により、グラム陽性菌は青、グラム陰性菌は赤に染色された像として観察している。この場合、全工程は全て室温で実施され、前染色、媒染色は、それぞれ約６０秒、水洗、脱色、後染色はそれぞれ約３０秒で、全ての染色作業を終了するのに約５分間を必要としている。この時間は、用手法でも自動染色装置利用の場合でも同じ程度である。
また、上記のような検査の効率を向上させるために各種の用手装置又は自動染色装置が創作されている。例えば、特開平８−４３３８０号公報の「グラム染色装置及び方法」、特開平１０−９０１４６号公報の「顕微鏡標本の自動染色装置」、特開２０００−３４６７６９号公報の「顕微観察用試料を着色するための自動着色装置」などがある。しかし、これらの装置は染色時間を短縮するものではなく、検査する側の効率を向上させるために多数の検体を一度に染色するものである。この結果、検査するための単位数が揃うまで採取された検体は時間待ちの状態となり、診察したその場で検査の結果を出すことは困難であった。このため診察した後日に診察結果が判明し、治療が開始されることとなり、緊急の処置を要する感染症患者に適切に対応できない状態である。
本発明は、かかる緊急を要する患者にも適切に対応すべく、迅速に染色する方法及び装置を提供するものである。
【発明の開示】
前記課題を解決するために、本発明に係る微生物迅速染色法は、室温でない温度に加温された染色液を用いるものである。
また、本発明に係る微生物迅速染色装置は、複数の試薬用の試薬用貯液槽と、複数又は単数の洗浄液用の洗浄液用貯液槽と、前記試薬用貯液槽の下流側に接続され、試薬を規定温度に制御する温度制御手段と、前記温度制御手段の下流側に接続され、試薬を吐出させる複数の試薬用吐出弁と、前記洗浄液用貯液槽の下流側に接続され、洗浄液を吐出させる単数又は複数の洗浄液用吐出弁と、前記試薬用吐出弁、前記洗浄液用吐出弁、又は前記試薬用吐出弁及び前記洗浄液用吐出弁の下流側に接続され、試薬、洗浄液、又は試薬及び洗浄液を試料に噴射する少なくとも一つの液体噴射装置とを備えるものである。
【図面の簡単な説明】
図１は、グラム陽性菌の青強調度、グラム陽性菌の青の強調度を室温で染色した従来法と染色液を３０℃から６０℃の各温度に加温した本発明法で染色した場合の青の強調度をＭｉｃｒｏ ａｎａｌｙｚｅｒにより計測し比較した図である。
図２は、グラム陰性菌の赤強調度、グラム陰性菌の赤の強調度を室温で染色した従来法と染色液を３０℃から６０℃の各温度に加温した本発明法で染色した場合の赤の強調度をＭｉｃｒｏ ａｎａｌｙｚｅｒにより計測し比較した図である。
図３は、従来法と本発明法の染色手順を示す図である。
図４の（ａ）は第１実施形態の微生物迅速染色装置の側面図、（ｂ）は（ａ）の微生物迅速染色装置の上視図である。
図５の（ａ）は第２実施形態の微生物迅速染色装置の上視図であって一部透視したものを示す図、（ｂ）は（ａ）の（ｂ）−（ｂ）断面図である。
【発明を実施するための最良の形態】
次に、本発明の実施の形態について説明するが、本発明は以下の実施の形態に限定されるものではない。まず、本発明に係る微生物迅速染色法の実施の形態について説明する。
試料については従来法で採用されている上記の手順に従って試料が作成される。次に、染色はＨｕｃｋｅｒの変法に本発明を適用した方法（本明細書においては本発明法という）が用いられた。
前染色で使用する試薬はクリスタルバイオレット、媒染色で使用する試薬はルゴール液で、この２種の液は共に４５℃に加温し、脱色用の試薬はアセトンとエタノールの等量混合液とし室温状態で用いた。これらの試薬は日本ビオメリュウ株式会社からの購入品である。後染色で使用する試薬のサフラニン液は和光純薬株式会社から購入の原液を５倍に希釈した希釈液を４５℃に加温したものを用いた。水洗用の水は室温状態で用いた。以上のそれぞれの温度に設定された、前染色液、媒染色液、脱色液、後染色液、水洗用水を用意し、既に準備されている、スライドグラス上に塗抹された菌株などを水洗用水以外は全て１秒間それぞれの試薬でおおい、後直ちに約１０秒間水洗し、水きり後、次工程に移す方法をとった。これらの染色手順は従来法と本発明法として図３に比較して示した。なお、手順は表の上から下へ順次進める。
この図３から従来法では５分間必要としていた染色時間が本発明法では４４秒即ち約１分以下に短縮できることがわかる。
顕微鏡検査により本発明法により染色した試料と従来法で染色した試料を比較し同等の染色結果が得られていることを確かめた。
従来法と本発明法を比較するため、試料の作成は従来法と本発明法の双方に同一の菌株を用いた。即ち一枚のスライドグラス上に複数の区画を設けその区画中２箇所の区画にそれぞれ陽性および陰性の対照菌を塗抹し、さらに残りの区画に菌株を塗抹し、試料とした。標準手順に従い、標準菌株として陽性対照菌はＳｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ ＡＴＣＣ２５９２３を、陰性対照菌はＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＡＴＣＣ２５９２２を塗抹した。試料としての菌株は臨床分離株の中でグラム腸性菌に較べ染色性がやや劣るグラム陰性菌と特に難染色性菌といわれているＨａｅｍｏｐｈｉｌｉｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅを用いた。グラム陰性菌としてはＥｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ ａｅｒｏｇｅｎｅｓ，Ｍｏｒｇａｎｅｌｌａ．ｍｏｒｇａｎｉｉ，Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ，Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ，Ｃｉｔｒｏｂａｃｔｅｒ ｋｏｓｅｉ，Ｅｎｔｒｏｂａｃｔｅｒ ｃｌｏａｃａｅ，Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｏｘｙｔｃａ，Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅの各菌種を用いた。染色後の試料の色強調度計測には日本ポラデジタル株式会社製のデジタル画像計測ソフトＭｉｃｒｏ ａｎａｌｙｚｅｒ Ｖｅｒ．１．１ｃを用いた。
準備された試料を図３の従来法による染色方法に従って染色し、他方本発明法による染色は前染色、媒染色、後染色の液温を３０℃から６０℃まで５℃間隔で変化させ、水洗、脱色は室温で、また、各工程の時間は図３の値に設定し全染色時間は４４秒になるようにした。本発明法に記載の脱色、後染色については図３記載の方法を見出すまでに各種の探索が行われた。脱色については加温の効果と液の組成が調べられ、また後染色については液の濃度の影響も調べられ染色の迅速性を発揮する本発明法の液組成と温度が設定された。本発明法における加温の効果をみるために多数枚のスライドグラスについて行いその平均的結果を図１および図２に示す。上記の各温度に加温された染色液で染色し、室温で水洗、脱色して染色作業を終えた試料を顕微鏡写真にとり、その画像をパソコン搭載の前記、デジタル画像計測ソフトＭｉｃｒｏ ａｎａｌｙｚｅｒにより色強調度を計測し表示した。図１は各スライドグラス上の標準菌株としての陽性対象菌の染色即ちグラム陽性菌の青強調度を各染色液温度ごとに表示した。図中左端の室温とあるのは従来法による図３記載の方法で所要時間５分間の染色後の青強調度計測値である。この図から本発明法による４５℃の加温液による染色が従来法よりグラム陽性菌の染色が強調されているのが判る。図２は各スライドグラス上の標準菌株としての陰性対象菌の染色即ちグラム陰性菌の赤強調度を染色液温度ごとに表示した。図中左端の室温とあるのは従来法による図３記載の方法で所要時間５分間の染色後の赤強調度計測値である。この図から本発明法による４５℃の加温液による染色が従来法よりグラム陰性菌の染色が強調されているのが判る。
この図では３０℃以上６０℃まで全ての範囲で従来法よりグラム陰性菌の染色が強調されているのが判る。その他、前記の難染色性菌、グラム陰性菌の全ての試料について本発明法が従来法に較べ同等以上の染色作用を示すことが確認された。
本発明法では染色液温を４５℃としているが、これは染色時間を作業上の最短時間として１秒を設定していることにより、前染色、媒染色の染色時間を３秒に設定しその他の条件は本発明法の通りに設定すれば染色液温度は４０℃から５０℃の範囲に設定することができる。
本実施形態によれば、緊急に適切な治療が要求される感染症その他の診断にグラム染色法を用いる場合、染色液を適当な温度に設定、加温することにより、従来法では約５分間要していた染色時間が本発明法を用いることにより約１分以下に短縮されより迅速な診断が可能となるだけでなく、従来、用手法では個人の技能に左右された染色作業が各染色、脱色に１秒という短時間ですむため、個人技能による影響を少なくできる。
次に、本発明に係る微生物迅速染色装置の実施の形態について説明する。まず、本発明に係る微生物迅速染色装置の第１実施形態について説明する。図４の（ａ）は第１実施形態の徴生物迅速染色装置の側面図であって、一部に微生物迅速染色装置内部を示す図、（ｂ）は（ａ）の微生物迅速染色装置の上視図である。
微生物迅速染色装置１０は、試薬を貯液する試薬用貯液槽１１ａ、１１ｃ、１１ｄ、１１ｆと、洗浄液を貯液する洗浄液用貯液槽１１ｂ、１１ｅと、試薬用貯液槽１１ａ、１１ｃ、１１ｆの各下流側に接続され、試薬を規定温度に制御する３つの温度制御装置（温度制御装置全体は不図示）と、これらの温度制御装置の各下流側に接続され、試薬を吐出させる試薬用吐出弁１３ａ、１３ｃ、１３ｆと、試薬用貯液槽１１ｄの下流側に接続され、一時的に液体を貯蔵できる一時貯液槽１２ｄと、一時貯液槽１２ｄの下流側に接続され、試薬を吐出させる試薬用吐出弁１３ｄと、洗浄液用貯液槽１１ｂ、１１ｅの各下流側に接続され、一時的に液体を貯蔵できる一時貯液槽１２ｂ、１２ｅと、一時貯液槽１２ｄの下流側に接続され、試薬を吐出させる洗浄液を吐出させる洗浄液用吐出弁１３ｂ、１３ｅと、試薬用吐出弁１３ａ、１３ｃ、１３ｆ及び洗浄液用吐出弁１３ｂ、１３ｅの下流側に接続され、試薬及び洗浄液を試料１８に噴射する液体噴射装置１７と、試料１８に噴射された使用済み試薬及び使用済み洗浄液を回収し貯蔵する回収貯液槽１９とを備えるものである。
試薬用貯液槽１１ａ、１１ｃ、１１ｄ、１１ｆは、蓄圧型の試薬用貯液槽である。ここで、蓄圧型の試薬用貯液槽とは、試薬用貯液槽１１ａ内を加圧状態にするために、液圧または気圧による蓄圧装置（不図示）を内装しているものであり、例えば弾力性を有する液袋または気袋を内装し、その圧力源配管（例えば、水道配管）として配管４０を設置し、試薬用貯液槽１１ａに対しては継手４１ａを介して圧力を供給するものである。同様に、試薬用貯液槽１１ｃ、１１ｄ、１１ｆについても、継手４１ｃ、４１ｄ、４１ｆを介して圧力を供給するものである。なお、液体噴射装置１７で必要な圧力が得られるまで位置的に高水程位置に通常の試薬用貯液槽１１ａ、１１ｃ、１１ｄ、１１ｆを設置することが可能である場合には蓄圧装置を省略することができる。これらの試薬用貯液槽１１ａ、１１ｃ、１１ｄ、１１ｆには、種類の異なる試薬をそれぞれ充填することができる。
洗浄液用貯液槽１１ｂ、１１ｅも、試薬用貯液槽１１ａ、１１ｃ、１１ｄ、１１ｆと同様の蓄圧型の洗浄液用貯液槽であり、蓄圧装置（不図示）により配管４０及び継手４１ｂ、４１ｅを介して加圧することができるものである。なお、液体噴射装置１７で必要な圧力が得られるまで位置的に高水程位置に通常の洗浄液用貯液槽１１ｂ、１１ｅを設置することが可能である場合には蓄圧装置を省略することができる。なお、試料の水洗は、常温の洗浄液で十分であるため、洗浄液用貯液槽１１ｂ、１１ｅの下部に設置されている一時貯液槽１２ｂ、１２ｅ内の洗浄液の温度制御を行う必要は必ずしもない。また、洗浄液には水道水、蒸留水やアルコールなどが使用される。
温度制御装置（温度制御装置全体は不図示）は、試薬用貯液槽１１ａ、１１ｃ、１１ｆと各試薬用吐出弁１３ａ、１３ｃ、１３ｆとの接続途中に設けられる一時貯液部１２ａ、１２ｃ、１２ｆと、一時貯液部１２ａ、１２ｃ、１２ｆ内の試薬の温度を計測する温度計（不図示）と、一時貯液部１２ａ、１２ｃ、１２ｆ内の試薬を加熱する加熱装置（不図示）と、温度計の測定値によって加熱手段の加熱の強弱を制御する制御部（不図示）とを備えるものである。一時貯液部１２ａ、１２ｃ、１２ｆは、各配管１４ａ、１４ｃ、１４ｆを介して試薬用貯液槽１１ａ、１１ｃ、１１ｆと接続されており、試薬用貯液槽１１ａ、１１ｃ、１１ｆからの試薬を一時的に貯めるものであり、温度制御装置の加温装置や制御部などによって噴射する一時貯液部１２ａ、１２ｃ、１２ｆ内の試薬の温度制御が行われる。この温度制御装置は、一時貯液部１２ａ、１２ｃ、１２ｆ内の温度を１５〜６０℃までの範囲又は４５℃±３℃の範囲に制御するものであることが好ましい。なお、試薬は、加熱装置によって直接加熱されてもよいし、一時貯液部１２ａ、１２ｃ、１２ｆを加熱して間接的に加熱されてもよい。また、加熱装置としては、例えば電気ヒーターなどがあげられる。
試薬用吐出弁１３ａ、１３ｃ、１３ｆは、図示しない制御装置などによって解放される時間が制御されるものである。例えば、試薬用吐出弁１３ａが解放されているときには、温度制御装置（不図示）の一時貯液槽１２ａに貯められていた試薬を配管１４ａ、試薬用吐出弁１３ａ、配管１５ａ、ヘッダー１６の順に流通させるものである。試薬用吐出弁１３ｃ、１３ｆについても同様である。試薬用吐出弁１３ｄ及び洗浄液用吐出弁１３ｂ、１３ｅも試薬用吐出弁１３ａ、１３ｃ、１３ｆと同様に図示しない制御装置などによって解放される時間が制御されるものである。例えば、試薬用吐出弁１３ｄが解放されているときには、一時貯液部２０ｄに貯められていた洗浄液を配管１４ｄ、試薬用吐出弁１３ｄ、配管１５ｄ、ヘッダー１６の順に流通させるものである。洗浄液用吐出弁１３ｂ、１３ｅについても同様である。なお、試薬用吐出弁１３ａ、１３ｃ、１３ｄ、１３ｆ及び洗浄液用吐出弁１３ｂ、１３ｅは、支持部材（不図示）により固定支持されている。
配管１４ａ、１４ｂ、１４ｃ、１４ｄ、１４ｅ、１４ｆは、試薬用貯液槽１１ａ、１１ｃ、１１ｄ、１１ｆ内や洗浄液用貯液槽１１ｂ、１１ｅ内が加圧される場合には、その加圧に耐えることができるものであることが好ましい。
ヘッダー１６は、各配管１５ａ、１５ｂ、１５ｃ、１５ｄ、１５ｅ、１５ｆを一箇所に集める管寄せである。
液体噴射装置１７は、図示しない噴射制御装置によって、試料１８に噴射する試薬及び洗浄液の噴射順序、噴射時間及び噴射量を制御されるものであることが好ましい。
試料１８は、例えばスライドグラスの平面部に菌株が塗布されたものなどであり、その平面部を傾くように配置して、試薬や洗浄液を下方へ流れやすくしておくことが好ましい。
回収貯液槽１９は、使用済みの試薬及び洗浄液を回収し貯蔵するものであるが、本発明に使用される試薬及び洗浄液は有害物質ではないので、回収貯液槽１９を有しない装置とし、そのまま試薬を下水へ流すこととしてもよい。
次に、本実施形態に係る微生物迅速染色装置１０の染色作用の一例について説明する。
ここでは一例の染色法としてＨｕｃｋｅｒの変法の迅速染色法に本発明を適用した場合について述べる。
試薬用貯液槽１１ａにはクリスタルバイオレットが充填されており、このクリスタルバイオレットの一部は試薬用貯液槽１１ａ下部の配管１４ａを通じて温度制御装置（不図示）内の一時貯液槽１２ａに貯められる。そして、このクリスタルバイオレットを温度制御装置（不図示）内の一時貯液槽１２ａにて１５〜６０℃までの範囲、好ましくは４５℃±３℃の範囲に加温する。その後、制御装置（不図示）からの指令に従って、試薬用吐出弁１３ａの開口時期及び時間を制御して最低１秒間弁口を開き、加温されたクリスタルバイオレットを配管１５ａ、ヘッダー１６、液体噴射装置１７の順に流通させ、液体噴射装置１７の噴射により試料１８の菌株を前染色する。前染色工程を終えた試薬は、試料１８下方に設置された回収貯液槽１９内に貯蔵される。
前染色工程が終了すると次に水洗工程に入る。試薬用貯液槽１１ａに隣接する洗浄液用貯液槽１１ｂには水道水が充填されており、この水道水の一部は洗浄液用貯液槽１１ｂ下部の配管１４ｂを通じて一時貯液槽１２ｂに室温程度で貯蔵する。制御装置（不図示）からの指令に従って、洗浄液用吐出弁１３ｂの開口時期及び時間を制御して約１０秒間弁口を開き、一時貯液槽１２ｂ内の水道水を配管１５ｂ、ヘッダー１６、液体噴射装置１７の順に流通させ、液体噴射装置１７の噴射により試料１８の菌株を水洗する。この水洗工程を終えた使用済み水道水は、試料１８下方に設置された回収貯液槽１９内に貯蔵される。
水洗工程が終了すると次に媒染工程に入る。そのために洗浄液用貯液槽１１ｂに隣接する試薬用貯液槽１１ｃの系統が使用される。試薬用貯液槽１１ｃにはルゴール液を充填しておき、このルゴール液をその下部に設置された温度制御装置（不図示）内の一時貯液槽１２ｃ内にて１５〜６０℃までの範囲、好ましくは４５℃±３℃の範囲に加温する。制御装置（不図示）からの指令に従って、試薬用吐出弁１３ｃの開口時期及び時間を制御して最低１秒間弁口を開き、加温されたルゴール液を配管１５ｃ、ヘッダー１６、液体噴射装置１７の順に流通させ、液体噴射装置１７の噴射により試料１８の菌株を媒染色する。媒染工程を終えた試薬は、試料１８下方に設置された回収貯液槽１９内に貯蔵される。
媒染色工程が終了すると次は水洗工程に入る。そのために試薬用貯液槽１１ｃに隣接する水道水が充填された洗浄液用貯液槽１１ｂの系統が使用される。ここでは、すでに上述した前染色工程後の水洗工程と同様の水洗工程を行うものである。
水洗工程が終了すると次は脱色工程に入る。そのためには洗浄液用貯液槽１１ｅに隣接する試薬用貯液槽１１ｄの系統が使用される。試薬用貯液槽１１ｄにはアセトンとエタノールを等量混合した液を充填しておく。そして、この混合液を試薬用貯液槽１１ｄ下部の一時貯液槽１２ｄ内にて室温程度で貯蔵する。なお、この混合液は必ずしも加温される必要はない。その後、制御装置（不図示）からの指令に従って、一時貯液槽１２ｄ下部の試薬用吐出弁１３ｄの開口時期及び時間を制御して約１０秒間弁口を開き、上記一時貯液槽１２ｄ内の混合液を配管１５ｄ、ヘッダー１６、液体噴射装置１７の順に流通させ、液体噴射装置１７の噴射により試料１８の菌株を脱色する。この脱色工程を終えた試薬は、試料１８下方に設置された回収貯液槽１９内に貯蔵される。
脱色工程が終了すると次は水洗工程に入る。そのためには試薬用貯液槽１１ｄに隣接する水道水が充填された洗浄液用貯液槽１１ｅの系統が使用される。まず、洗浄液用貯液槽１１ｅ内の水道水の一部を洗浄液用貯液槽１１ｅ下部の一時貯液槽１２ｅ内にて室温程度で貯蔵する。その後、制御装置（不図示）からの指令に従って、試薬用吐出弁１３ｅの開口時期及び時間を制御して約１０秒間弁口を開き、一時貯液槽１２ｅ内の水道水を配管１５ｅ、ヘッダー１６、液体噴射装置１７の順に流通させ、液体噴射装置１７の噴射により試料１８の菌株を水洗する。この水洗工程を終えた使用済み水道水は、試料１８下方に設置された回収貯液槽１９内に貯蔵される。
水洗工程が終了すると次は後染色工程に入る。そのためには洗浄液用貯液槽１１ｅに隣接する試薬用貯液槽１１ｆの系統が使用される。試薬用貯液槽１１ｆにはサフラニン液の５倍希釈液を充填しておき、このサフラニン液の５倍希釈液を試薬用貯液槽１１ｆ下部に設置された温度制御装置（不図示）内の一時貯液槽１２ｆ内にて１５〜６０℃までの範囲、好ましくは４５℃±３℃の範囲に加温する。その後、制御装置（不図示）からの指令に従って、試薬用吐出弁１３ｆの開口時期及び時間を制御して最低１秒間弁口を開き、サフラニン液の５倍希釈液を配管１５ｆ、ヘッダー１６、液体噴射装置１７の順に流通させ、液体噴射装置１７の噴射により試料１８の菌株を後染色する。後染色工程を終えた試薬は、試料１８下方に設置された回収貯液槽１９内に貯蔵される。
後染色工程が終了すると次は水洗工程に入る。そのためには試薬用貯液槽１１ｆに隣接する水道水が充填された洗浄液用貯液槽１１ｅの系統が使用される。ここでは、すでに上述した脱色工程後の水洗工程と同様の水洗工程を行うものである。
以上のようにして１枚のスライドグラス上に塗布された菌株のグラム染色作業は行われるが、約１分以下で上記のグラム染色作業の全工程を終了することができる。従って、緊急を要する患者にも適切に対応することができ、検査結果を迅速に出すことができる。
なお、本実施形態の場合、洗浄用に使用された洗浄液貯液槽は１１ｂまたは１１ｅのいずれか一方のみで済ますことができることは勿論である。
次に、本発明に係る微生物迅速染色装置の第２実施形態について説明する。図５の（ａ）は第２実施形態の微生物迅速染色装置の上視図であって一部透視したものを示す図、（ｂ）は（ａ）の（ｂ）−（ｂ）断面図である。
微生物迅速染色装置２０は、試薬を貯液する試薬用貯液槽２１ａ、２１ｃ、２１ｅ、２１ｇと、洗浄液を貯液する洗浄液用貯液槽（不図示）と、試薬用貯液槽２１ａ、２１ｃ、２１ｇの各下流側に接続され、試薬を規定温度に制御する３つの温度制御装置（温度制御装置全体は不図示）と、これらの温度制御装置の各下流側に接続され、試薬を吐出させる試薬用吐出弁２３ａ、２３ｃ、２３ｇと、試薬用貯液槽２１ｅの下流側に接続され、一時的に液体を貯蔵できる一時貯液槽２２ｅと、一時貯液槽２２ｅの下流側に接続され、試薬を吐出させる試薬用吐出弁２３ｅと、洗浄液用貯液槽（不図示）に配管４０、継手４１ｂ、４１ｄ、４１ｆ、４１ｈ及び配管２４ｂ、２４ｄ、２４ｆ、２４ｈを介して接続され、一時的に液体を貯蔵できる一時貯液槽２２ｂ、２２ｄ、２２ｆ、２２ｈと、一時貯液槽２２ｂ、２２ｄ、２２ｆ、２２ｈの各下流側に接続され、洗浄液を吐出させる洗浄液用吐出弁２３ｂ、２３ｄ、２３ｆ、２３ｈとを備えてなる。さらに、微生物迅速染色装置２０は、試薬用吐出弁２３ａ、２３ｃ、２３ｅ、２３ｇの各下流側に接続され、試薬を試料２８ａ、２８ｃ、２８ｅ、２８ｇに噴射する液体噴射装置２７ａ、２７ｃ、２７ｅ、２７ｇと、洗浄液用吐出弁２３ｂ、２３ｄ、２３ｆ、２３ｈの各下流側に接続され、洗浄液を試料２８ｂ、２８ｄ、２８ｆ、２８ｈに噴射する液体噴射装置２７ｂ、２７ｄ、２７ｆ、２７ｈと、液体噴射装置２７ａ、２７ｂ、２７ｃ、２７ｄ、２７ｅ、２７ｆ、２７ｇ、２７ｈ（以下、液体噴射装置２７ａ〜２７ｈとする）によって噴射された使用済み試薬及び使用済み洗浄液を回収し貯蔵する回収貯液槽２９ａ、２９ｂ、２９ｃ、２９ｄ、２９ｅ、２９ｆ、２９ｇ、２９ｈ（以下、回収貯液槽２９ａ〜２９ｈとする）と、試料２８ａ、２８ｂ、２８ｃ、２８ｄ、２８ｅ、２８ｆ、２８ｇ、２８ｈ（以下、試料２８ａ〜２８ｈとする）を載置可能な円盤３０と、円盤３０の回転角度を制御自在なモータ３１と、モータ３１を固定支持する土台３２とを備えてなる。
試薬用貯液槽２１ａ、２１ｃ、２１ｅ、２１ｇは、蓄圧型の試薬用貯液槽である。ここでは、弾力性を有する液袋を内装し、その圧力源配管（例えば、水道配管）として配管４０を設置し、試薬用貯液槽１１ａに対しては継手４１ａを介して圧力を供給するものである。なお、液体噴射装置２７ａ、２７ｃ、２７ｅ、２７ｇで必要な圧力が得られるまで位置的に高水程位置に通常の試薬用貯液槽２１ａ、２１ｃ、２１ｅ、２１ｇを設置することが可能である場合には蓄圧装置を省略することができる。これらの試薬用貯液槽２１ａ、２１ｃ、２１ｅ、２１ｇには、種類の異なる試薬をそれぞれ充填することができる。
図示していない洗浄液用貯液槽は、蓄圧型の洗浄液用貯液槽である。図５（ａ）に示すように、洗浄液を継手４１ａを介して配管４０に送ることができるものである。加圧された洗浄液は継手４１ａ、４１ｂ、４１ｃ、４１ｄ、４１ｅ、４１ｆ、４１ｇ、４１ｈを介して所望される各部位へと配送される。なお、液体噴射装置２７ｂ、２７ｄ、２７ｆ、２７ｈで必要な圧力が得られるまで位置的に高水程位置に通常の洗浄液用貯液槽を設置することが可能である場合には蓄圧装置を省略することができる。なお、試料の水洗は、常温の洗浄液で十分であるため、一時的に液体を貯蔵できる一時貯液槽２２ｂ、２２ｄ、２２ｆ、２２ｈ内の洗浄液の温度制御を行う必要は必ずしもない。また、洗浄液には水道水、蒸留水やアルコールなどが使用される。
温度制御装置（温度制御装置全体は不図示）は、試薬用貯液槽２１ａ、２１ｃ、２１ｇと各試薬用吐出弁２３ａ、２３ｃ、２３ｇとの接続途中に設けられる一時貯液槽２２ａ、２２ｃ、２２ｇと、一時貯液槽２２ａ、２２ｃ、２２ｇ内の試薬の温度を計測する温度計（不図示）と、一時貯液槽２２ａ、２２ｃ、２２ｇ内の試薬を加熱する加熱装置（不図示）と、温度計の測定値によって加熱手段の加熱の強弱を制御する制御部（不図示）とを備えるものである。一時貯液槽２２ａ、２２ｃ、２２ｇは、各配管２４ａ、２４ｃ、２４ｇを介して試薬用貯液槽２１ａ、２１ｃ、２１ｇと接続されているものであって、試薬用貯液槽２１ａ、２１ｃ、２１ｇからの試薬を一時的に貯めるものであって、温度制御装置の加温装置や制御部などによって噴射する一時貯液槽２２ａ、２２ｃ、２２ｇ内の試薬の温度制御が行われる。なお、一時貯液槽２２ａ、２２ｃ、２２ｇ内の温度は、１５〜６０℃までの範囲又は４５℃±３℃の範囲に制御されるものであることが好ましい。また、試薬は、加熱装置によって直接加熱されてもよいし、一時貯液槽２２ａ、２２ｃ、２２ｇを加熱して間接的に加熱されてもよい。また、加熱装置としては、例えば電気ヒーターなどがあげられる。
試薬用吐出弁２３ａ、２３ｃ、２３ｇは、図示しない制御装置などによって解放される時間が制御されるものである。例えば、試薬用吐出弁２３ａが解放されているときには、温度制御装置（不図示）の一時貯液槽２２ａに貯められていた試薬を配管２４ａ、試薬用吐出弁２３ａ、配管２５ａの順に流通させるものである。試薬用吐出弁２３ｃ、２３ｇについても同様である。試薬用吐出弁２３ｅ及び洗浄液用吐出弁２３ｂ、２３ｄ、２３ｆ、２３ｈも試薬用吐出弁２３ａ、２３ｃ、２３ｆと同様に図示しない制御装置などによって解放される時間が制御されるものである。例えば、洗浄液用吐出弁２３ｄが解放されているときには、一時貯液槽２２ｄに貯められていた洗浄液を配管２４ｄ、洗浄液用吐出弁２３ｄ、配管２５ｄの順に流通させるものである。試薬用吐出弁２３ｅ及び洗浄液用吐出弁２３ｂ、２３ｆ、２３ｈについても同様の動作が行われる。なお、試薬用吐出弁２３ａ、２３ｃ、２３ｅ、２３ｇ及び洗浄液用吐出弁２３ｂ、２３ｄ、２３ｆ、２３ｈは、支持部材３３により固定支持されている。
配管２４ａ、２４ｂ、２４ｃ、２４ｄ、２４ｅ、２４ｆ、２４ｇ、２４ｈは、試薬用貯液槽２１ａ、２１ｃ、２１ｅ、２１ｇ内や洗浄液用貯液槽内が加圧される場合には、その加圧に耐えることができるものであることが好ましい。
液体噴射装置２７ａ〜２７ｈは、図示しない噴射制御装置によって、試料２８ａ〜２８ｈに噴射する試薬及び洗浄液の噴射順序、噴射時間及び噴射量を制御されるものであることが好ましい。また、図５では噴射ノズルを３本示している態様としているがこれに限られず、１本以上あればよい。
試料２８ａ〜２８ｈは、例えばスライドグラスの平面部に菌株が塗布されたものなどであり、その平面部を傾くように配置して、試薬や洗浄液を下方へ流れやすくしておくことが好ましい。
回収貯液槽２９ａ〜２９ｈは、使用済みの試薬及び洗浄液を回収し貯蔵するものである。本発明に使用される試薬及び洗浄液は有害物質ではないので、回収貯液槽２９ａ〜２９ｈを有しない装置とし、そのまま試薬を下水へ流すこととしてもよいが、本実施形態に係る微生物迅速染色装置においては、試薬を各液体噴射装置２７ａ〜２７ｈにおいて別々に噴射するため、使用済み試薬ごとに分別して回収できるので各試薬の再利用が可能となる。
円盤３０は、試料２８ａ〜２８ｈを等間隔で放射状に、かつ、試料２８ａ〜２８ｈの平面部をやや傾けて載置できるようになっている。また、試料２８ａ〜２８ｈの回りには噴射された試薬及び洗浄液を下方の回収貯液槽２９ａ〜２９ｈに流れ落とすための穴が設けられている。
モータ３１は、その回転軸が円盤３０の中心部に固定接続され、円盤３０をその中心を軸として水平に回転させることができるものである。なお、モータ３１に接続された制御装置（不図示）によって、円盤３０の回転角度の制御を行うものである。
次に、第２実施形態の微生物迅速染色装置の染色作用について説明する。
ここでは一例の染色法としてＨｕｃｋｅｒの変法の迅速染色法に本発明を適用した場合について述べる。Ｈｕｃｋｅｒの変法の迅速染色法では薬液を使用する工程は、前染色、媒染色、脱色、後染色があり図５に適用した場合、試薬用貯液槽２１ａの系統は前染色に、試薬用貯液槽２１ｃの系統は媒染色に、試薬用貯液槽２１ｅの系統は脱色に、試薬用貯液槽２１ｇの系統は後染色に対応する。他方、洗浄液用貯液槽２１ｂ系統、洗浄液用貯液槽２１ｄ系統、洗浄液用貯液槽２１ｆ系統、洗浄液用貯液槽２１ｈ系統はすべて水洗工程に対応するものである。
次に、各工程について説明する。
まず、液体噴射装置２７ａ下部の回転円盤３０上に菌株を上面に塗布した試料２８ａを載せる。試薬用貯液槽２１ａにはクリスタルバイオレットが充填されており、このクリスタルバイオレットの一部は試薬用貯液槽２１ａ下部の配管２４ａを通じて温度制御装置（不図示）内の一時貯液槽２２ａに貯められる。そして、このクリスタルバイオレットを温度制御装置（不図示）内の一時貯液槽２２ａにて１５〜６０℃までの範囲、好ましくは４５℃±３℃の範囲に加温する。その後、制御装置（不図示）からの指令に従って、試薬用吐出弁２３ａの開口時期及び時間を制御して最低１秒間弁口を開き、加温されたクリスタルバイオレットを配管２５ａ、液体噴射装置２７ａの順に流通させ、液体噴射装置２７ａの噴射により試料２８ａの菌株を前染色する。前染色工程を終えた試薬は、試料２８ａ下方に設置された回収貯液槽２９ａ内に単独で貯蔵される。
次に回転円盤３０は、制御装置からの信号によって回転するモータ３１により、反時計方向に４５度回転した位置に静止する。このとき、前染色工程を終了した菌株を貼着した試料２８ａは試料２８ａの前染色工程のときに試料２８ｂがあった位置にくる（図５（ａ）参照）。そこで洗浄水分岐継手４１ｂから導入された加圧水（水道水）は制御装置からの信号により開口作動を開始した洗浄液用吐出弁２３ｂを通過して約１０秒間、配管２５ｂを経由して液体噴射装置２７ｂから鉛直下方に位置する試料２８ａ上に貼着された前染色工程終了済みの試料に向けて噴射し、水洗工程を行う。水洗工程を終えた洗浄液は、試料２８ａ下方に設置された回収貯液槽２９ｂ内に単独で貯蔵される。なお、洗浄液は下水にそのまま流すこととしてもよい。また、必ずしも洗浄液は加温されている必要はない。以下の水洗工程においても同様である。
次に再び回転円盤３０は、制御装置からの信号によって回転するモータ３１により、反時計方向に４５度回転した位置に静止する。このとき、水洗工程を終了した菌株を貼着した試料２８ａは試料２８ａの前染色工程のときに試料２８ｃがあった位置にくる（図５（ａ）参照）。試薬用貯液槽２１ｃにはルゴール液が充填されており、このルゴール液の一部は試薬用貯液槽２１ｃ下部の配管２４ｃを通じて温度制御装置（不図示）内の一時貯液槽２２ｃに貯められる。そして、このルゴール液を温度制御装置（不図示）内の一時貯液槽２２ｃにて１５〜６０℃までの範囲、好ましくは４５℃±３℃の範囲に加温する。その後、制御装置（不図示）からの指令に従って、試薬用吐出弁２３ｃの開口時期及び時間を制御して最低１秒間弁口を開き、加温されたルゴール液を配管２５ｃ、液体噴射装置２７ｃの順に流通させ、液体噴射装置２７ｃの噴射により試料２８ａの菌株を媒染色する。媒染色工程を終えた試薬は、試料２８ａ下方に設置された回収貯液槽２９ｃ内に単独で貯蔵される。
次に再び回転円盤３０は、制御装置からの信号によって回転するモータ３１により、反時計方向に４５度回転した位置に静止する。このとき、媒染色工程を終了した菌株を貼着した試料２８ａは試料２８ａの前染色工程のときに試料２８ｄがあった位置にくる（図５（ａ）参照）。そこで洗浄水分岐継手４１ｄから導入された加圧水（水道水）は制御装置からの信号により開口作動を開始した洗浄液用吐出弁２３ｄを通過して約１０秒間、配管２５ｄを経由して液体噴射装置２７ｄから鉛直下方に位置する試料２８ａ上に貼着された媒染色工程終了済みの試料に向けて噴射し、水洗工程を行う。水洗工程を終えた洗浄液は、試料２８ａ下方に設置された回収貯液槽２９ｄ内に単独で貯蔵される。
次に再び回転円盤３０は、制御装置からの信号によって回転するモータ３１により、反時計方向に４５度回転した位置に静止する。このとき、水洗工程を終了した菌株を貼着した試料２８ａは試料２８ａの前染色工程のときに試料２８ｅがあった位置にくる（図５（ａ）参照）。試薬用貯液槽２１ｅには、脱色工程に必要な脱色薬液としてアセトンとエタノールとを等量混合した液が充填されており、この混合液の一部は一時貯液槽２２ｅに貯められる。一時貯液槽２２ｅ内の混合液は、制御装置からの信号により開口作動を開始した試薬用吐出弁２３ｅを通過して約１０秒間、配管２５ｅを経由して、液体噴射装置２７ｅから鉛直下方に位置する試料２８ａ上に貼着された試料に向けて噴射し、脱色工程を行う。脱色工程を終えた試薬は、試料２８ａ下方に設置された回収貯液槽２９ｅ内に単独で貯蔵される。なお、必ずしも上記混合液は加温されている必要はない。
次に再び回転円盤３０は、制御装置からの信号によって回転するモータ３１により、反時計方向に４５度回転した位置に静止する。このとき、脱色工程を終了した菌株を貼着した試料２８ａは試料２８ａの前染色工程のときに試料２８ｆがあった位置にくる（図５（ａ）参照）。そこで洗浄水分岐継手４１ｆから導入された加圧水（水道水）は制御装置からの信号により開口作動を開始した洗浄液用吐出弁２３ｆを通過して約１０秒間、配管２５ｆを経由して液体噴射装置２７ｆから鉛直下方に位置する試料２８ａ上に貼着された脱色工程終了済みの試料に向けて噴射し、水洗工程を行う。水洗工程を終えた洗浄液は、試料２８ａ下方に設置された回収貯液槽２９ｆ内に単独で貯蔵される。
次に再び回転円盤３０は、制御装置からの信号によって回転するモータ３１により、反時計方向に４５度回転した位置に静止する。このとき、水洗工程を終了した菌株を貼着した試料２８ａは試料２８ａの前染色工程のときに試料２８ｇがあった位置にくる（図５（ａ）参照）。試薬用貯液槽２１ｇには後染色工程に必要な薬液としてサフラニン液の５倍希釈液が充填されており、このサフラニン液の５倍希釈液の一部は試薬用貯液槽２１ｇ下部の配管２４ｇを通じて温度制御装置（不図示）内の一時貯液槽２２ｇに貯められる。そして、このルゴール液を温度制御装置（不図示）内の一時貯液槽２２ｇにて１５〜６０℃までの範囲、好ましくは４５℃±３℃の範囲に加温する。その後、制御装置（不図示）からの指令に従って、試薬用吐出弁２３ｇの開口時期及び時間を制御して最低１秒間弁口を開き、加温されたルゴール液を配管２５ｇ、液体噴射装置２７ｇの順に流通させ、液体噴射装置２７ｇの噴射により試料２８ａの菌株を後染色する。後染色工程を終えた試薬は、試料２８ａ下方に設置された回収貯液槽２９ｇ内に単独で貯蔵される。
次に再び回転円盤３０は、制御装置からの信号によって回転するモータ３１により、反時計方向に４５度回転した位置に静止する。このとき、水洗工程を終了した菌株を貼着した試料２８ａは試料２８ａの前染色工程のときに試料２８ｈがあった位置にくる（図５（ａ）参照）。そこで洗浄水分岐継手４１ｈから導入された加圧水（水道水）は制御装置からの信号により開口作動を開始した洗浄液用吐出弁２３ｈを通過して約１０秒間、配管２５ｈを経由して液体噴射装置２７ｈから鉛直下方に位置する試料２８ａ上に貼着された脱色工程終了済みの試料に向けて噴射し、水洗工程を行う。水洗工程を終えた洗浄液は、試料２８ａ下方に設置された回収貯液槽２９ｈ内に単独で貯蔵される。
このようにして図５における円盤３０の所定位置に取り付けられた試料２８ａは、上記したように回転円盤を４５度づつ反時計方向に回転させる毎に前染色、水洗、媒染色、水洗、脱色、水洗、後染色、水洗とＨｕｃｋｅｒの変法の迅速染色法に従って染色工程を終えることができる。
以上は試料２８ａの染色工程を示したものであるが、図５（ａ）に示すように他の試料も円盤３０に載置すれば、上記と同じ手順を順次繰り返すことにより、複数の試料について順次染色することができる。例えば、以下の手順である。最初に図５（ａ）の試料２８ａの位置に試料を円盤３０に載置し、前染色工程を１秒間行う。次に、試料２８ａをモーター３１により反時計回りに４５度回転させ（図５（ａ）の試料２８ｂの位置に載置される）、水洗工程を１０秒間行う。このとき、図５（ａ）の試料２８ａの位置には、まだ次の試料を入れることができない。なぜなら、前染色工程の試薬の噴射時間と、水洗工程の洗浄液の噴射時間とが異なる上、噴射圧力源が同じであるので、試薬と洗浄液との同時及び同期間一斉噴射をすることができないからである。
次に、再び試料２８ａをモーター３１により反時計回りに４５度回転させ（図５（ａ）の試料２８ｃの位置に載置される）、図５（ａ）の試料２８ａの位置に新たな試料を載置し、最初の試料（図５（ａ）の試料２８ｃの位置にある試料）については媒染色工程を、新たな試料（図５（ａ）の試料２８ａの位置にある試料）については前染色工程を行う。
このように、先に載置された試料が水洗工程にあるときは新たな試料の載置をせず、各染色工程や脱色工程にあるときに新たな試料を順次追加載置するという作業を行う。これにより、本実施形態の微生物迅速染色装置は、最大４枚の試料の載置が可能で、これらの試料について、前染色、水洗、媒染色、水洗、脱色、水洗、後染色、水洗の各工程が順次行われることとなり、迅速に染色を行うことができる。
本実施形態によれば、約１分以下で一つの試料についてのグラム染色作業の全工程を終了することができる。従って、緊急を要する患者にも適切に対応することができ、検査結果を迅速に出すことができる。しかも、複数の試料を順次検査していくことができるため、一定時間における試料検査数を従来よりも大幅に増加させることができ、効率のよい検査をすることができる。
【産業上の利用可能性】
緊急に適切な治療が要求される感染症その他の診断にグラム染色法を用いる場合、従来、約５分間要していた染色時間が微生物迅速染色法により約１分以下に短縮されたことから従来費用対効果の面から採用されなかった１枚を含む少数枚数の染色作業も採用する可能性が生じてきた。その可能性をさらに強化するには構造簡単な低コストの装置が求められていた。この発明により費用対効果の面も向上し、１枚でも迅速に低コストで診断に利用されるようになり、緊急時でも適切な治療の機会が増加し、感染症などの予防が推進される。
【図１】
【図２】
【図３】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
室温でない温度に加温された染色液を用いる微生物迅速染色方法。
【請求項２】
前記室温でない温度が４０℃から５０℃の範囲である請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記室温でない温度が４５℃±３℃の範囲である請求項１記載の方法。
【請求項４】
試薬を貯液する複数の試薬用貯液槽と、
洗浄液を貯液する複数又は単数の洗浄液用貯液槽と、
前記試薬用貯液槽の下流側に接続され、試薬を規定温度に制御する少なくとも一つ設けられる温度制御手段と、
前記温度制御手段の下流側に接続され、試薬を吐出させる複数の試薬用吐出弁と、
前記洗浄液用貯液槽の下流側に接続され、洗浄液を吐出させる単数又は複数の洗浄液用吐出弁と、
前記試薬用吐出弁、前記洗浄液用吐出弁、又は前記試薬用吐出弁及び前記洗浄液用吐出弁の下流側に接続され、試薬、洗浄液、又は試薬及び洗浄液を試料に噴射する少なくとも一つの液体噴射装置とを備える微生物迅速染色装置。
【請求項５】
前記温度制御手段が、前記試薬用貯液槽と前記吐出弁との接続途中に設けられる一時貯液部と、前記一時貯液部内の試薬の温度を計測する温度計と、前記一時貯液部内の試薬を加熱する加熱手段と、前記温度計の測定値によって加熱手段の加熱の強弱を制御する制御部とを備える請求項４記載の微生物迅速染色装置。
【請求項６】
前記温度制御手段が、前記一時貯液部内の温度を１５〜６０℃までの範囲に制御する請求項５に記載の微生物迅速染色装置。
【請求項７】
前記温度制御手段が、前記一時貯液部内の温度を４５℃±３℃の範囲に制御する請求項５に記載の微生物迅速染色装置。
【請求項８】
前記液体噴射装置から噴射する試薬及び洗浄液の噴射順序、噴射時間及び噴射量を制御する噴射制御手段をさらに備える請求項４〜７のいずれかに記載の微生物迅速染色装置。
【請求項９】
少なくとも一つの試料を載置可能であって、中心を軸として水平に回転自在な円盤と、前記円盤の回転角度制御機構とをさらに備える請求項４〜７のいずれかに記載の微生物迅速染色装置。
【請求項１０】
試料に噴射された各使用済み試薬を個別に回収し貯蔵する複数の回収貯液槽をさらに備える請求項９記載の微生物迅速染色装置。
【請求項１１】
前記試薬用貯液槽、前記洗浄液用貯液槽、又は前記試薬用貯液槽及び前記洗浄液用貯液槽を前記噴射装置が必要とする圧力に加圧する加圧手段をさらに備える請求項４〜７のいずれかに記載の微生物迅速染色装置。
【請求項１】
室温でない温度に加温された染色液を用いる微生物迅速染色方法。
【請求項２】
前記室温でない温度が４０℃から５０℃の範囲である請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記室温でない温度が４５℃±３℃の範囲である請求項１記載の方法。
【請求項４】
試薬を貯液する複数の試薬用貯液槽と、
洗浄液を貯液する複数又は単数の洗浄液用貯液槽と、
前記試薬用貯液槽の下流側に接続され、試薬を規定温度に制御する少なくとも一つ設けられる温度制御手段と、
前記温度制御手段の下流側に接続され、試薬を吐出させる複数の試薬用吐出弁と、
前記洗浄液用貯液槽の下流側に接続され、洗浄液を吐出させる単数又は複数の洗浄液用吐出弁と、
前記試薬用吐出弁、前記洗浄液用吐出弁、又は前記試薬用吐出弁及び前記洗浄液用吐出弁の下流側に接続され、試薬、洗浄液、又は試薬及び洗浄液を試料に噴射する少なくとも一つの液体噴射装置とを備える微生物迅速染色装置。
【請求項５】
前記温度制御手段が、前記試薬用貯液槽と前記吐出弁との接続途中に設けられる一時貯液部と、前記一時貯液部内の試薬の温度を計測する温度計と、前記一時貯液部内の試薬を加熱する加熱手段と、前記温度計の測定値によって加熱手段の加熱の強弱を制御する制御部とを備える請求項４記載の微生物迅速染色装置。
【請求項６】
前記温度制御手段が、前記一時貯液部内の温度を１５〜６０℃までの範囲に制御する請求項５に記載の微生物迅速染色装置。
【請求項７】
前記温度制御手段が、前記一時貯液部内の温度を４５℃±３℃の範囲に制御する請求項５に記載の微生物迅速染色装置。
【請求項８】
前記液体噴射装置から噴射する試薬及び洗浄液の噴射順序、噴射時間及び噴射量を制御する噴射制御手段をさらに備える請求項４〜７のいずれかに記載の微生物迅速染色装置。
【請求項９】
少なくとも一つの試料を載置可能であって、中心を軸として水平に回転自在な円盤と、前記円盤の回転角度制御機構とをさらに備える請求項４〜７のいずれかに記載の微生物迅速染色装置。
【請求項１０】
試料に噴射された各使用済み試薬を個別に回収し貯蔵する複数の回収貯液槽をさらに備える請求項９記載の微生物迅速染色装置。
【請求項１１】
前記試薬用貯液槽、前記洗浄液用貯液槽、又は前記試薬用貯液槽及び前記洗浄液用貯液槽を前記噴射装置が必要とする圧力に加圧する加圧手段をさらに備える請求項４〜７のいずれかに記載の微生物迅速染色装置。
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０５３４８２
【国際公開日】平成１６年６月２４日（２００４．６．２４）
【発行日】平成１８年４月１３日（２００６．４．１３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００４−５５８４８４（Ｐ２００４−５５８４８４）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＪＰ２００３／０１５９３４
【国際出願日】平成１５年１２月１２日（２００３．１２．１２）
【出願人】（８００００００５７）財団法人新産業創造研究機構 (99)
【Ｆターム（参考）】
【国際公開日】平成１６年６月２４日（２００４．６．２４）
【発行日】平成１８年４月１３日（２００６．４．１３）
【国際特許分類】
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＪＰ２００３／０１５９３４
【国際出願日】平成１５年１２月１２日（２００３．１２．１２）
【出願人】（８００００００５７）財団法人新産業創造研究機構 (99)
【Ｆターム（参考）】
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