心不全の処置における左室リモデリングを逆転させるための少なくとも１種のリモデリング物質と併用するラノラジンの使用
本発明は、治療有効量のラノラジンと少なくとも１種の併用リモデリング物質との併用投与により左室リモデリングを逆転する方法に関する。この併用リモデリング物質は、ＡＣＥインヒビター、ＡＲＢ、またはβ遮断薬であり得る。本方法は、心不全の処置において有用性を見出す。本発明はまた、そのような併用投与に適した薬学的処方物に関する。一つの局面において、上記ＡＣＥインヒビターは、ベナゼプリル、カプトプリル、シラザプリル、エナラプリル、フォシノプリル、イミダプリル、リシノプリル、ペリンドプリル、キナプリル、ラミプリル、テモカプリル、およびトランドラプリルからなる群から選択される。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本出願は、２００４年１１月９日出願の米国仮特許出願第６０／６２６，１５４号に対する優先権を主張しており、その仮特許出願の開示内容全体が、本明細書中に参考として援用される。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、治療有効量のラノラジンと少なくとも１種の併用リモデリング物質との併用投与によって、左室リモデリングを逆転させる方法に関する。この併用リモデリング物質は、ＡＣＥインヒビター、アンギオテンシンＩＩレセプター遮断薬（ＡＲＢ）、またはβ遮断薬であり得る。本方法は、心不全の処置において有用性を見出す。本発明はまた、そのような併用投与に適した薬学的処方物に関する。
【背景技術】
【０００３】
（背景）
心不全は、工業化された社会における死亡および身体障害の主因である。心不全は、それ自体は疾患ではないが、心臓が血液の適切な供給を送り出して身体の組織および臓器の酸素要求量を満たすことができない状態である。その結果、多くの場合、体液が心臓および他の臓器（例えば、肺）に蓄積し、周囲の組織に拡散し、鬱血性心不全（ＣＨＦ）を引き起こす。ＣＨＦは、多くの場合、心血管の問題の症状（例えば、冠状動脈疾患、心筋梗塞、心筋症、心臓弁異常など）である。
【０００４】
心不全の重大な要素は、付随して起こる左室のリモデリングである。心筋が衰え、心筋が有する血液の適切な供給を送り出す能力が失われると、心臓、より具体的には左室（ＬＶ）が、補償しようとして拡大する。このリモデリングまたは拡大の程度は、心不全患者、特にＣＨＦの患者における死亡率の上昇と相互に関連付けられてきた。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
特定のβ遮断薬、およびアンギオテンシン転換酵素すなわち「ＡＣＥ」のインヒビターが、ＬＶリモデリングの進行を減速させ、さらには逆転させることが証明された。しかしながら、これらの物質は共に、望ましくない副作用を有し、これが投薬量を制限している。また、異なるβ遮断薬が有する逆リモデリングを誘発する能力の間には、かなりの変動がある。したがって、逆ＬＶリモデリングを増強するための方法を提供する必要性がある。本発明では、ラノラジン（ｒａｎｏｌａｚｉｎｅ）と併用リモデリング物質との投与が、好ましくない左室リモデリングの逆転を相乗的に増進することを発見した。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
（発明の要旨）
本発明の１つの実施形態において、好ましくない左室リモデリングを逆転するための方法を提供する。本方法は、治療有効量のラノラジンと少なくとも１種の治療有効量の併用リモデリング物質との、それらを必要とする哺乳動物への同時投与を包含する。この併用リモデリング物質は、ＡＣＥインヒビター、ＡＲＢ、またはβ遮断薬であり得る。本方法は、鬱血性心不全（ＣＨＦ）および／または慢性心不全の処置における使用に適している。ラノラジンと併用リモデリング物質とは、別個の投薬形態で投与されても単一の投薬形態で投与されてもよい。
【０００７】
本発明の別の実施形態において、治療有効量のラノラジン、少なくとも１種の治療有効量の併用リモデリング物質、および少なくとも１種の薬学的に受容可能なキャリアを含む薬学的処方物を提供する。
【０００８】
本発明のさらに別の実施形態において、哺乳動物における心不全を処置するための方法を提供する。本方法は、治療有効量のラノラジンと少なくとも１種の治療有効量の併用リモデリング物質の、それらを必要とする哺乳動物への同時投与を包含する。本方法は、鬱血性心不全（ＣＨＦ）および／または慢性心不全の処置における使用に適している。ラノラジンと併用リモデリング物質とは、別個の投薬形態で投与されても、単一の投薬形態で投与されてもよい。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
（発明の詳細な説明）
（定義および一般パラメータ）
本明細書中で使用される場合、次の語句は、一般的に、それらが使用される状況が他を示す場合を除き、以下に提示する意味を有することが意図される。
【００１０】
「任意の」または「必要に応じて」は、その次に記載される出来事または状況が、起こっても起こらなくてもよく、その記載が、その出来事または状況が起こる場合および起こらない場合を含むことを意味する。
【００１１】
用語「ＡＣＥインヒビター」は、アンギオテンシン転換酵素を阻害し、それにより、アンギオテンシンＩのアンギオテンシンＩＩへの転換を減少させ得る物質をいう。補足的な作用として、ＡＣＥインヒビターはまた、ブラジキニンの分解を減少させる。適切なＡＣＥインヒビターとしては、これらに限定されないが、ベナゼプリル、カプトプリル、シラザプリル、エナラプリル、フォシノプリル、イミダプリル、リシノプリル、ペリンドプリル、キナプリル、ラミプリル、テモカプリル（ｔｅｍｏｃａｐｒｉｌ）、およびトランドラプリルが挙げられる。
【００１２】
用語「ＡＲＢ」は、アンギオテンシンＩＩレセプター遮断薬である物質をいい、アンギオテンシンアンタゴニストとも呼ばれる。ＡＣＥインヒビター同様、ＡＲＢはアンギオテンシンＩＩを減少させるが、ＡＣＥインヒビターが肺内の血流中でアンギオテンシンＩＩを減少させる代わりに、ＡＲＢは細胞壁でアンギオテンシンＩＩを減少させ、それにより、より全身性の様式で作用する。適切なＡＲＢとしては、これらに限定されないが、カンデサルタン（ｃａｎｄｅｓａｒｔａｎ）、シレキセチル（ｃｉｌｅｘｅｔｉｌ）、エプロサルタン（ｅｐｒｏｓａｒｔａｎ）、イルベサルタン（ｉｒｂｅｓａｒｔａｎ）、ロサルタン、オルメサルタン（ｏｌｍｅｓａｒｔａｎ）、メドキソミル（ｍｅｄｏｘｏｍｉｌ）、テルミサルタン（ｔｅｌｍｉｓａｒｔａｎ）、バルサルタン（ｖａｌｓａｒｔａｎ）、ゾラサルタン（ｚｏｌａｓａｒｔｉｎ）、およびタソサルタン（ｔａｓｏｓａｒｔａｎ）が挙げられる。
【００１３】
用語「β遮断薬」は、βアドレナリン作動性レセプターに結合し、βアドレナリン作動性刺激の作用を阻害する物質をいう。β遮断薬はまた、ＡＶ結節伝達を増加させる。さらにβ遮断薬は、心拍数を制御するシナプス後神経終末に対するノルエピネフリンの作用を遮断することにより、心拍数を減少させる。β遮断薬はまた、後脱分極が媒介する自動性を阻害する細胞内Ｃａ＋＋過負荷を軽減する。β遮断薬の例としては、これらに限定されないが、アセブトロール、アテノロール、ベタキソロール、ビソプロロール、カルテオロール、ラベタロール、メトプロロール、ナドロール、オクスプレノロール、ペンブトロール、ピンドロール、プロプラノロール、ソタロール、チモロール、エスモロール、ソタロール、カルベジロール、メドロキサロール、ブシンドロール、レボブノロール、メチプラノロール、セリプロロール、およびプロパフェノンが挙げられる。
【００１４】
「非経口投与」は、患者への注射による治療薬の全身送達をいう。
【００１５】
用語「治療有効量」は、以下に既定されるような処置を必要とする哺乳動物に投与した場合に、そのような処置をもたらすのに十分な式Ｉの化合物の量をいう。治療有効量は、使用される治療薬の比活性、患者の疾患状態の重篤度、ならびに患者の年齢、身体状態、他の疾患状態の存在および栄養状態に応じて変化する。さらに、患者が受けているかも知れない他の薬物治療が、投与すべき治療薬の治療有効量の決定に影響する。
【００１６】
用語「処置」または「処置する」は、哺乳動物における疾患のあらゆる状態処置をいい：
（ｉ）疾患を予防すること、すなわち、疾患の臨床症状を発現させないこと；および／または
（ｉｉ）疾患を阻害すること、すなわち、臨床症状の発現を停止すること；
（ｉｉｉ）疾患を緩和すること、すなわち、臨床症状の軽減をもたらすこと
を含む。
【００１７】
本明細書中で使用される場合、「薬学的に受容可能なキャリア」は、あらゆる溶媒、分散媒、被覆物、抗菌物質および抗真菌物質、等張剤および吸収遅延物質などを含む。薬学的に活性な物質に対するそのような媒体および物質の使用は、当該技術分野において周知である。任意の従来の媒体または物質が活性成分と適合性でない場合を除き、治療組成物におけるその使用が是認される。補足的な活性成分もまた、組成物中に組み込まれ得る。
【００１８】
用語「好ましくない左室リモデリング」は、心室の大きさの変化、壁の厚さの変化、および左室の他の寸法変化、ならびに、拡張期および／または収縮期の機能の低下によって明示され得る心筋障害に応答して起こる左室の他のあらゆる変化をいう。
【００１９】
（発明の方法）
本発明は、好ましくない左室リモデリングを逆転させる方法に関する。本方法は、それらを必要とする哺乳動物への治療有効量のラノラジンと少なくとも１種の治療有効量の併用リモデリング物質の同時投与を包含する。この併用リモデリング物質は、ＡＣＥインヒビター、ＡＲＢまたはβ遮断薬であり得る。本方法は、鬱血性心不全（ＣＨＦ）および／または慢性心不全の処置における使用に適している。
【００２０】
ラノラジンおよび併用リモデリング物質は、別個の投薬形態で投与されても、単一の投薬形態で投与されてもよい。別個の投薬形態として投与される場合、別個の成分は任意の順序で投与され得、同時にまたは時間をずらして服用され得る。
【００２１】
ラノラジン（±）−Ｎ−（２，６−−ジメチルフェニル）−４−［２−ヒドロキシ−３−（２−メトキシフェノキシ）−プロピル］−１−ピペラジンアセトアミドは、現在、アンギナの処置についての臨床試験が進行中の抗虚血物質である。化合物自体は、米国特許第４，５６７，２６４号に開示されており、その明細書が、参考として本明細書中に援用される。ラノラジンの徐放性処方物が好ましく、これらは、米国特許第６，５０３，９１１号、米国特許第６，３６９，０６２号、および米国特許第６，６１７，３２８号で開示されている。
【００２２】
ラノラジンが有する心不全の処置における利益を提供する能力は、これまでに、米国特許第６，５２８，５１１号および米国特許第６，５２８，５１１号、ならびにＳａｂｂａｈ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｊ．Ｃａｒｄ．Ｆａｉｌ．，８（６）：４１６−２２で開示されている。これらの参考文献において、心不全の処置におけるラノラジンの使用が、ＬＶの機能を改善するこの化合物の能力によって支持される。しかしながら、本発明より前には、併用リモデリング物質と共に投与される場合の、この化合物が有する逆ＬＶリモデリングを誘発する相乗的な能力は知られていなかった。
【００２３】
ラノラジンと同時投与される物質とは、単一かまたは複数の用量のいずれかで、類似した有用性を有する物質の容認されている任意の投与様式、（例えば、参考として援用される特許および特許出願に記載されるような投与様式、口腔投与、動脈内注射による投与、静脈内投与、腹腔内投与、非経口投与、筋肉内投与、皮下投与、経口投与、あるいは、例えばステントなどの含浸もしくは被覆デバイス、または動脈に挿入された円筒状高分子を通じた投与を含む）によって患者に与えられ得る。
【００２４】
１つの投与様式は、非経口であり、特に注射によるものである。本発明の新規の組成物を注射による投与のために組み込み得る形態としては、水性の懸濁剤または乳剤、ゴマ油、トウモロコシ油、綿実油もしくは落花生油を含む油性の懸濁剤または乳剤、エリキシル剤、マンニトール、デキストロースもしくは滅菌水溶液、および類似した薬学的ビヒクルが挙げられる。生理食塩水中の水溶液もまた、注射用に好都合に使用されるが、本発明の状況においてはそれほど好ましくない。エタノール、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコールなど（およびそれらの適切な混合物）、シクロデキストリン誘導体ならびに植物油もまた使用し得る。適切な流動性を、例えば、被覆物（例えば、レシチン）の使用により、分散の場合に必要とされる粒径の維持により、そして界面活性剤の使用により、維持し得る。微生物の活動の防止は、種々の抗菌物質および抗真菌物質、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなどによりもたらされ得る。
【００２５】
滅菌注射可能溶液を、必要とされる量の成分を、上記に列挙されるような種々の他の成分と共に適切な溶媒中に組み込み、必要に応じ、続いて濾過滅菌することにより調製する。一般的には、分散剤（ｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎ）を、塩基性分散媒および上記に列挙された成分からの必要とされる他の成分を含む滅菌ビヒクルに種々の滅菌活性成分を組み込むことにより調製する。滅菌注射可能溶液の調製のための滅菌粉末の場合には、調製の好ましい方法は、真空乾燥および凍結乾燥技術であり、それにより、先に滅菌濾過した活性成分の溶液から活性成分と任意のさらなる所望の成分との粉末を生成する。
【００２６】
経口投与は、これらの成分の投与のための別の経路である。投与は、カプセル剤または腸溶錠などを介し得る。ラノラジンおよび少なくとも１種の同時投与される物質を含む薬学的組成物を作成するには、通常は、活性成分を賦形剤によって希釈し、そして／またはカプセル、サシェ、紙もしくは他の容器の形態であり得るようなキャリア内に封入する。賦形剤が希釈剤として機能する場合、この賦形剤は固体、半固体もしくは液体の物質（上記のとおり）であり得、これが、活性成分のビヒクル、キャリアまたは媒体として機能する。したがって、これらの組成物は、錠剤、丸剤、散剤、ロゼンジ、サシェ、カシェ剤、エリキシル剤、懸濁剤、乳剤、液剤、シロップ剤、エアゾール剤（固体としてまたは液体媒体中に含んで）、軟膏（例えば、１０重量％までの活性化合物を含む）、軟質および硬質のゼラチンカプセル、滅菌注射可能溶液、ならびに滅菌包装した粉末の形態であり得る。
【００２７】
適切な賦形剤の一部の例としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アラビアゴム、リン酸カルシウム、アルギナート、トラガカント、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、滅菌水、シロップ、およびメチルセルロースが挙げられる。処方物はさらに：潤滑剤（例えば、タルク、ステアリン酸マグネシウムおよび鉱油）；湿潤剤；乳化剤および懸濁剤；保存剤（例えば、安息香酸メチルおよびヒドロキシ安息香酸プロピル）；甘味剤；および矯味矯臭剤を含み得る。
【００２８】
本発明の組成物を、当該技術分野で公知の手順を使用することにより、患者への投与後に活性成分の即時放出、持続放出または遅延放出を提供するように処方し得る。上記で検討したように、ラノラジンの生物学的利用能の低下を考慮すると、徐放性の処方物が一般的には好ましい。経口投与のための制御放出薬物送達システムとしては、浸透圧ポンプシステム、および高分子被覆レザバもしくは薬物−高分子マトリックス処方物を含む溶解システムが挙げられる。制御放出システムの例が、米国特許第３，８４５，７７０号；米国特許第４，３２６，５２５号；米国特許第４，９０２，５１４号；および米国特許第５，６１６，３４５号に与えられている。
【００２９】
本組成物は、好ましくは、単位投薬形態で処方される。用語「単位投薬形態」は、ヒト被験体および他の哺乳動物のための単回投薬に適した物理的に別個の単位であり、各単位が適切な薬学的賦形剤と共に所望の治療効果を生ずるように算定された所定量の活性物質を含むもの（例えば、錠剤、カプセル剤、アンプル）をいう。本発明の活性物質は、広範な投薬量域にわたり有効であり、一般的に、薬学的有効量で投与される。しかしながら、実際に投与される各活性物質の量は、処置される状態、選択される投与経路、投与される実際の化合物およびそれらの相対活性、個々の患者の年齢、体重および応答、その患者の症状の重篤度などを含む関連状況を考慮して、医師により決定されることが理解される。
【００３０】
錠剤などの固体組成物を調製するために、主要な活性成分を薬学的賦形剤と混合して、本発明の化合物の均一混合物を含む固体の予備処方組成物を形成する。これらの予備処方組成物を均一という場合、この組成物が等しい効果を有する単位投薬形態（例えば、錠剤、丸剤およびカプセル剤）に即座に細分化され得るように、活性成分がその組成物全体に均等に分散していることを意味する。
【００３１】
本発明の錠剤または丸剤は被覆され得、そうでない場合は、長期的な作用の利点を与える投薬形態を提供するように、または胃の酸性条件から保護するように調合され得る。例えば、錠剤または丸剤は、内部投薬成分および外部投薬成分を含み得、後者は前者を覆う外被の形態である。ラノラジンと同時投与物質（単数または複数）とは、胃における分解に耐え、内部成分が変化せずに十二指腸に入ることまたは内部成分の放出を遅延させることを可能とする役目を果たす腸溶性の層によって分離され得る。種々の物質を、そのような腸溶性の層または被覆物に使用し得、そのような物質としては、多数のポリマー酸、ならびにポリマー酸と、セラック、セチルアルコールおよび酢酸セルロースのような物質との混合物が挙げられる。
【００３２】
以下の実施例は、本発明の好ましい実施形態を示すために含まれる。以下の実施例に開示される技術は本発明の実施において十分に機能するように本発明者により開示される技術を代表しており、したがって、その実施のための好ましい形態を構成すると考え得ることが、当業者に理解されるべきである。しかしながら、開示される特定の実施形態において多くの変更が成され得、それでもなお本発明の精神および範囲から逸脱することなく同じかまたは類似した結果が得られ得ることを、本開示にかんがみて、当業者は理解すべきである。
【００３３】
以下の実施例は、本発明の好ましい実施形態を示すために含まれる。以下の実施例に開示される技術は本発明の実施において十分に機能するように本発明者により開示される技術を代表しており、したがって、その実施のための好ましい形態を構成すると考え得ることが、当業者に理解されるべきである。しかしながら、開示される特定の実施形態において多くの変更が成され得、それでもなお本発明の精神および範囲から逸脱することなく同じかまたは類似した結果が得られ得ることを、本開示にかんがみて、当業者は理解すべきである。
【実施例】
【００３４】
本発明のβ遮断薬、ＡＣＥインヒビターおよびＡＲＢは、当該技術分野において周知であり、市販されている。ラノラジンを、従来的な方法、例えば、米国特許第４，５６７，２６４号に開示された様式により調製し得、この米国特許の開示内容全体が本明細書中に参考として援用される。
【００３５】
（実施例１）
以下の実施例は、多発性続発性冠状動脈内微小塞栓形成により生ずる慢性心不全のイヌにおける左室（ＬＶ）機能障害およびＬＶ心房リモデリングの進行に対する、ラノラジン単独での効果、およびアンギオテンシン転換酵素（ＡＣＥ）インヒビターと併用した効果、およびβ遮断薬と併用した効果を検定する。
【００３６】
（動物の調製）
イヌにおける慢性ＬＶ機能障害および不全は、以前にＳａｂｂａｈ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２６０：Ｈ１３７９−Ｈ１３８４に記載されるように、ポリスチレンラテックス微小球（直径７７〜１０９μｍ）を用いた多発性続発性冠状動脈内塞栓形成により生じた。冠状動脈微小塞栓形成を、全身麻酔および無菌状態下で心臓カテーテル法の間に実施した。ヒドロモルホン（０．２２ｍｇ／ｋｇ）、ジアゼパム（０．２〜０．６ｍｇ／ｋｇ）およびペントバルビタールナトリウム（５０〜１００ｍｇ）の静脈内注射の組み合わせを使用して、麻酔を誘導した。麻酔の水準を、１％〜２％イソフランを使用して、この研究を通じて維持した。左右心臓カテーテル法を、大動脈切開および静脈切開により実施した。各カテーテル法後、６−０シルクを使用して脈管を修復し、４−０縫合糸で皮膚を閉鎖した。血管造影により決定されるＬＶ駆出率が３０％と４０％との間となったときに、微小塞栓形成を中止した。最後の塞栓形成後、確実に最後の微小塞栓形成により生じた梗塞を完治させ、心不全を確立させるために２週間の期間をおいた。次いで、研究プロトコルを実施した。
【００３７】
（研究対象動物）
健康で、条件付けられ、実験目的で繁殖した、体重が１９ｋｇと２５ｋｇとの間にある雑種イヌ。
【００３８】
（研究プロトコル）
無作為盲検プラセボ制御研究デザインを使用した。合計２８匹のイヌが、慢性心不全を生じさせるために、上記のような多発性続発性冠状動脈内微小塞栓形成を受けた。最後の塞栓形成から２週間後、イヌを無作為に抽出して４つの研究グループ（処置群）に分けた。イヌを無作為に抽出して、ラノラジンのみ（３７５ｍｇ、１日２回、ｎ＝７）、酒石酸メトプロロール（２５ｍｇ、１日２回、ｎ＝７）と併用するラノラジン（３７５ｍｇ、１日２回）、エナラプリル（１０ｍｇ、１日２回、ｎ＝７）と併用するラノラジン（３７５ｍｇ、１日２回）、またはプラセボ（ラノラジンビヒクル、１日２回、ｎ＝７）を用いて３ヶ月の経口治療を施した。血行動態測定、血管造影測定、心エコー測定、ドップラー測定および神経ホルモン測定を、無作為抽出（最後の塞栓形成から２週間後）の前および治療の完了後（治療開始から３ヵ月後）に実施した。最後の血行動態および血管造影研究が完了した後に、イヌを安楽死させ、心臓を摘出し、組織を調製し、後の組織学的および生化学的評価のために保管した。この研究の１次終点および２次終点は、以下の通りであった：
（１次終点）
血管造影により決定されるＬＶ駆出率の評価に基づく進行性ＬＶ機能障害の予防または弱化。
【００３９】
血管造影により決定されるＬＶ拡張終期の容積およびＬＶ収縮終期の容積の測定に基づく進行性ＬＶリモデリングの予防または弱化。
【００４０】
（２次終点）
１）ＬＶピーク−ｄＰ／ｄｔ、２）拡張早期のＬＶ時定数（Ｔａｕ）、３）僧帽弁速度ＰＥ／ＰＡ、および４）ＬＶ拡張終期の円周方向壁応力（ｃｉｒｃｕｍｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｗａｌｌ ｓｔｒｅｓｓ）の評価に基づく進行性のＬＶ拡張期の機能障害の予防または弱化。
【００４１】
心筋細胞肥大の弱化の程度、置換性線維形成の容積分率、間質性線維形成の容積分率、毛細管密度、および酸素拡散距離。
【００４２】
血漿神経ホルモン（血漿ノルエピネフリン（ＰＮＥ）、血漿レニン活性（ＰＲＡ）および血漿心房性ナトリウム利尿因子（ＡＮＦ））の循環レベルの変化、ならびに経心筋（ｔｒａｎｓｍｙｏｃａｒｄｉａｌ）血漿ノルエピネフリンの変化（動脈と冠静脈洞との差異）。
【００４３】
（血行動態測定）
血行動態測定は全て、麻酔したイヌの左右心臓カテーテル法の間に実施した。全ての血行動態パラメータを確実に正常限界範囲内にするために、ベースライン測定を、あらゆる微小塞栓形成の前に、実施した。正常でないイヌを研究から除外した。以下のパラメータを、３回全ての研究期間に全てのイヌについて測定した：心拍数、平均大動脈血圧、等容性収縮期のＬＶ血圧の最高変化率（ピーク＋ｄＰ／ｄｔ）、等容性弛緩期のＬＶ血圧の最高変化率（ピーク−ｄＰ／ｄｔ）、およびＬＶ拡張終期の血圧。
【００４４】
（心室造影測定）
左心室造影記録を、血行動態測定の完了後に心臓カテーテル法の間に実施した。心室造影記録を、イヌを右側を下にして寝かせ、２０ｍｌの造影物質（ＲＥＮＯ−Ｍ−６０，Ｓｑｕｉｂｂ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）の高圧注入の間に１秒間当たり３０コマで、３５ｍｍの撮影用フィルム（ｃｉｎｅ）に記録した。画像拡大の修正を、ＬＶの高さに配置した放射線不透性グリッドを使用して実施した。ＬＶ収縮終期および拡大終期の容積を、エリアレングス法（４）を使用して、血管造影のシルエットから算定した。期外収縮心拍および期外収縮後心拍を分析から除外した。ＬＶ駆出率を、拡張終期容積と収縮終期容積との差異と、拡張終期容積との比の１００倍として算定した。拍出量を、ＬＶ拡張終期容積と収縮終期容積との間の差異として算定した。心拍出量を、拍出量に心拍数をかけて算定し、心係数を、心拍出量を体表面積で除して算定した。
【００４５】
（心エコーおよびドップラー測定）
心エコーおよびドップラー研究を、３．５ＭＨＺ変換器を備えた７７０３０Ａ超音波装置（Ｈｅｗｌｅｔｔ−Ｐａｃｋａｒｄ）を使用して、全ての特定の研究時点において全てのイヌについて実施した。全ての心エコー測定を、イヌを右側臥位の姿勢で寝かせて実施し、後のオフライン分析のためにＰａｎａｓｏｎｉｃ ６３００ ＶＨＳレコーダーで記録した。横断（ｔｒａｎｓｖｅｒｓｅ）２次元心エコー図を、ＬＶ乳頭筋の高さで得て、ＬＶ断面積の短縮（ｆｒａｃｔｉｏｎａｌ ａｒｅａ ｏｆ ｓｈｏｒｔｎｉｎｇ）を算定するために使用した。後者を拡張周期ＬＶ内腔面積から収縮終期内腔面積を差し引き、拡張終期内腔面積で除し、それを１００倍して算定した。２腔像２次元心エコー図もまた得て、ＬＶ拡張終期の円周方向壁応力の算定のために使用されるＬＶの長半軸および短半軸を確かめた。壁応力を以下の通り算定した：応力＝Ｐｂ／ｈ（１−ｈ／２ｂ）（１−ｈｂ／２ａ２）であり、ここでＰはＬＶ拡張終期血圧であり、ａはＬＶ長半軸であり、ｂはＬＶ短半軸であり、ｈはＬＶ壁厚である。
【００４６】
僧帽弁流入速度を、パルス波ドップラー心エコーにより測定した。速度波形を使用して、拡張早期の最高僧帽弁流入速度（ＰＥ）、ＬＡ収縮期の最高僧帽弁流入速度（ＰＡ）、ＰＥとＰＡとの比率、および早期僧帽弁流入減速時間を算定した。機能的僧帽弁逆流（ＭＲ）の存在の有無を、心尖部２腔像と心尖部４腔像との両方を使用して、ドップラーカラーフローマッピング（Ｈｅｗｌｅｔｔ−Ｐａｃｋａｒｄ ｍｏｄｅｌ ７７０２０Ａ Ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ Ｓｙｓｔｅｍ）で決定した。存在する場合、機能的ＭＲの重篤度を、逆流ジェット面積と左心房の面積との比率の１００倍に基づいて定量化した。次いで、両像から算定された比率を平均して、機能的ＭＲの重篤度についての単一の代表値を得た。
【００４７】
（血液神経ホルモンおよび電解質の測定）
数種の神経ホルモンの血漿濃度の評価を、血行動態評価を補完するために実施した。測定を、血行動態および血管造影評価について記載された各研究時点において実施した。経心筋ＰＮＥ濃度を、心臓カテーテル法の間に上行大動脈および冠静脈洞から血液サンプルを得て推定した。経心筋ＰＮＥを、２つのサンプル間の差異として算定した。静脈血サンプルを、放射線免疫アッセイを用いたノルエピネフリンの血漿濃度、血漿レニン活性および血漿心房性ナトリウム利尿因子の測定のために、心臓カテーテル法の前に意識のあるイヌから２連で得た。さらに、血液サンプルを、血清電解質（Ｎａ＋、Ｋ＋、クレアチニンおよびＢＵＮ）の決定のために、同じ時間間隔で得た。
【００４８】
（組織形態計測学的評価）
血行動態および血管造影研究の完了後の屠殺する日に、イヌの胸部を左開胸術により切開し、心膜を切開し、心臓を迅速に摘出し、氷冷トリス緩衝液（ｐＨ７．４）に入れた。３つの２ｍｍ厚横断スライスをＬＶから得た；３つのスライスのうち１つは３分割した場合の底部であり、１つは３分割した場合の中間部であり、１つは３分割した場合の頂部であり、これらを１０％ホルマリンに入れた。経壁ブロック（ｔｒａｎｓｍｕｒａｌ ｂｌｏｃｋ）も得て、イソペンタン中で液体窒素により−１６０℃に冷却して急速に冷凍し、必要となるまで−７０℃にて保管した。ＬＶ組織サンプルも得て、後のスキャニング研究および透過型電子顕微鏡研究のためにグルタルアルデヒド（ｇｌｕｔｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ）中に保管した。
【００４９】
各心臓から、ＬＶの３つ全ての横断スライスを、１つは３分割した場合の底部、１つは３分割した場合の中間部、１つは３分割した場合の頂部から、各々約３ｍｍ厚で得た。比較のために、７匹の正常なイヌからの組織サンプルを得て、同一の様式で調製した。各横断スライスから、経壁組織ブロックを得て、パラフィンブロック中に包埋した。各ブロックから、６μｍ厚の切片標本を調製し、線維組織を同定するためにゴモリ３色染色法で染色した。置換性線維形成の容積分率、すなわち、３つの横断ＬＶスライス中の瘢痕組織と生組織との割合を、コンピュータベースのビデオデンシトメトリー（ＭＯＣＨＡ，Ｊａｎｄｅｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃｏｒｔｅ Ｍａｄｅｒａ，ＣＡ）を使用して、線維組織が占める総表面積のパーセントとして算定した。ＬＶを含まない壁組織ブロックを２番目の中間部心室横断スライスから得て、Ｔｉｓｓｕｅ−Ｔｅｋ包埋剤（Ｓａｋｕｒａ，Ｔｏｒｒａｎｃｅ，ＣＡ）を使用してコルク上に置き、液体窒素で予め冷却したイソペンタン中で迅速に冷凍し、使用するまで−７０℃にて保管した。低温切片（ｃｒｙｏｓｔａｔ ｓｅｃｔｉｏｎ）を、約８μｍ厚で各ブロックから調製し、筋細胞の境界および毛細血管（５）を含む間質腔をの輪郭を描くために３．３Ｕ／ｍｌのノイラミニダーゼ（ｎｅｕｒｏａｍｉｎｉｄａｓｅ）Ｖ型（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ．ＭＯ）で前処理し、その後、フルオレセイン標識ピーナッツ凝集素（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｉｎｃ．，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ）で染色した。毛細血管を同定するために、切片を、ローダミン標識Ｇｒｉｆｆｏｎｉａ ｓｉｍｐｌｉｃｉｆｏｌｉａ ｌｅｃｔｉｎ Ｉ（ＧＳＬ−Ｉ）で２重に染色した。放射方向の１０の顕微鏡視野（倍率×１００、対物レンズ×４０、接眼レンズ２．５）を、分析のために各切片から無作為に選択した。瘢痕組織（梗塞）を含む視野を除外した。平均筋細胞断面積を、コンピュータ支援面積測定を使用して、各イヌについて算定した。間質腔が占める総表面積および毛細血管が占める総表面積を、コンピュータベースのビデオデンシトメトリー（ＭＯＣＨＡ，Ｊａｎｄｅｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃｏｒｔｅ Ｍａｄｅｒａ，ＣＡ）を使用して、無作為に選択した各視野から測定した。間質コラーゲンの容積分率を、間質腔が占める総表面積のパーセントから毛細血管（５）が占める総面積のパーセントを差し引いたものとして算定した。毛細血管密度を、１ｍｍ２当たりの毛細血管の数として算定した。酸素拡散距離を、２つの隣接する毛細血管の間の半分の距離として算定した。比較のために、同一の測定を、７匹の正常なイヌから得たＬＶ組織を使用して実施した。
【００５０】
（統計分析）
確実に全ての研究測定値をベースラインにおいて類似させるために、いずれの塞栓形成の前および治療の開始前の無作為抽出の際に、４つ全ての研究群の間で比較を行った。これらの比較のために、一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）を、αを０．０５に設定して使用した。有意性が得られた場合は、グループワイズの比較（ｇｒｏｕｐ ｗｉｓｅ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ）を、有意性をｐ≦０．０５に設定したスチューデント・ニューマン・クールズ検定を使用して実施した。処置前および処置後の測定値の間の群内の比較を、ｐ＜０．０５を有意であるとみなす、対応スチューデントｔ検定を使用して実施した。処置の効果を評価するために、処置前から処置後までの各測定値の変化（△）を、４つの研究群の各々について算定した。△についての有意な差異が群間に存在するかどうかを決定するために、ＡＮＯＶＡを、αを０．０５に設定して使用した。有意性が得られた場合は、グループワイズの比較を、有意性をｐ≦０．０５に設定したスチューデント・ニューマン・クールズ検定を使用して実施した。全てのデータを、平均±ＳＥＭとして報告する。
【００５１】
（ベースライン測定）
いずれの微小塞栓形成にも先立って得られた血行動態、血液造影、心エコー、ドップラー、ならびに血漿神経ホルモンおよび電解質のベースライン測定値を表１〜表４に示す。４つの研究群の間に、いずれのベースライン測定値にも有意な差異は存在しなかった。
【００５２】
（処置前測定）
無作為抽出の際に得られた血行動態、血液造影、心エコー、ドップラー、ならびに血漿神経ホルモンおよび電解質の測定値を表５〜表８に示す。４つの研究群の間に、いずれの処置前測定値にも有意な差異は存在しなかった。
【００５３】
（群内比較−プラセボ（表５〜表８））
プラセボに対して無作為抽出されたイヌにおいて、心拍数、平均大動脈血圧およびＬＶ拡張終期血圧について、処置前と処置後の間で差異は存在しなかった。しかしながら、ＬＶピーク＋ｄＰ／ｄｔおよび−ｄＰ／ｄｔの両方が、有意に低下した。この研究群では、３か月の処置の終わりに、ＬＶ拡張終期容積および収縮終期容積が有意に増大し、一方で、ＬＶ駆出率および拍出量が有意に低減した。心拍出量および心係数も低減する傾向にあったが、その低減は統計的な差異には到らなかった。心エコーおよびドップラーの結果は、ＬＶ断面積の短縮の有意な低減、僧帽弁流入ＰＥ／ＰＡ比および減速時間に有意な低減、そして機能的僧帽弁逆流の重篤度およびＬＶ拡張終期の円周方向壁応力の有意な拡大を示した。血漿神経ホルモンおよび電解質に、有意な差異は存在しなかった。
【００５４】
（群内比較−ラノラジンのみ（表５〜表８））
ラノラジンを用いた単剤療法（ｍｏｎｏｔｈｅｒａｐｙ）に対して無作為抽出されたイヌにおいて、心拍数、平均大動脈血圧、ＬＶピーク＋ｄＰ／ｄｔおよびピーク−ｄＰ／ｄｔついての差異は存在しなかったが、ＬＶ拡張終期血圧が有意に低減した。この研究群では、３か月の処置の終わりに、ＬＶ拡張終期容積および収縮終期容積は変化しなかったが、ＬＶ駆出率、拍出量および心係数が有意に拡大した。心拍出量もまた拡大する傾向にあったが、その拡大は統計的な差異には到らなかった。心エコーおよびドップラーの結果は、ＬＶ断面積の短縮、僧帽弁流入ＰＥ／ＰＡ比、減速時間、および機能的僧帽弁逆流の重篤度に有意な変化を示さなかった。しかしながら、ＬＶ拡張終期の円周方向壁応力は有意に低減した。血漿神経ホルモンおよび電解質においては、有意な差異は見られなかった。
【００５５】
（群内比較−ラノラジン＋エナラプリル（表５〜表８））
ラノラジンとエナラプリルとの併用療法に対して無作為抽出されたイヌにおいて、心拍数、平均大動脈血圧、ＬＶピーク＋ｄＰ／ｄｔおよびピーク−ｄＰ／ｄｔついての差異は存在しなかったが、ＬＶ拡張終期血圧が有意に低減した。この研究群では、３か月の処置の終わりに、ＬＶ拡張終期容積は変化せず、収縮終期容積が有意に低減し、一方で、ＬＶ駆出率、拍出量および心係数が有意に拡大した。心拍出量もまた拡大する傾向にあったが、その拡大は統計的な差異には到らなかった。心エコーおよびドップラーの結果は、ＬＶ断面積の短縮および減速時間について有意な拡大を示した。ＰＥ／ＰＡ比は拡大する傾向にあったが、その拡大は統計的な差異には到らなかった。機能的僧帽弁逆流の重篤度およびＬＶ拡張終期の円周方向壁応力は有意に低減した。血漿神経ホルモンおよび電解質においては、有意な差異は見られなかった。
【００５６】
（群内比較−ラノラジン＋メトプロロール（表５〜表８））
ラノラジンおよびメトプロロールとの併用療法に対して無作為抽出されたイヌにおいて、心拍数、平均大動脈血圧、ＬＶピーク＋ｄＰ／ｄｔおよびピーク−ｄＰ／ｄｔついての差異は存在しなかったが、ＬＶ拡張終期血圧が有意に低下した。この研究群では、３か月の処置の終わりに、ＬＶ拡張終期容積および収縮終期容積が有意に低減し、一方で、ＬＶ駆出率、拍出量および心係数が有意に拡大した。心拍出量もまた拡大する傾向にあったが、その拡大は統計的な差異には到らなかった。心エコーおよびドップラーの結果は、ＬＶ断面積の短縮、ＰＥ／ＰＡ比および減速時間において有意な拡大を示した。機能的僧帽弁逆流の重篤度およびＬＶ拡張終期の円周方向壁応力は有意に低減した。血漿神経ホルモンおよび電解質においては、有意な差異は見られなかった。
【００５７】
（処置効果−群間比較（表９〜表１２））
処置効果データを表９〜表１２に示し、個々のイヌのデータを付表１に示す。処置効果分析は、心拍数および平均大動脈血圧について、４つの群の間の差異を示さなかった。プラセボと比較すると、ＬＶ拡張終期血圧、ピーク＋ｄＰ／ｄｔおよびピーク−ｄＰ／ｄｔが、ラノラジンのみで処置したイヌ、およびラノラジンとエナラプリルかもしくはメトプロロールとを併用して処置したイヌで有意に拡大した。ＬＶ拡張終期容積、収縮終期容積、駆出率、拍出量および心係数は全て、プラセボと比較すると、３つの処置群全てにおいて有意に改善した。心拍出量もまた、プラセボと比較すると、処置群において拡大する傾向にあったが、その拡大は統計的な差異には到らなかった。ＬＶ容積の低減およびＬＶ駆出率の拡大は、ラノラジンのみに対して無作為抽出されたイヌと比較すると、併用療法に対して無作為抽出されたイヌにおいて有意に大きかった。
【００５８】
プラセボと比較すると、ラノラジンのみは、ＬＶ断面積の短縮を有意に拡大し、ＬＶ拡張終期の円周方向壁応力を有意に低減した。ＰＥ／ＰＡ比、ＭＲの重篤度、および減速時間は、プラセボと比較すると、ラノラジンのみで改善する傾向にあったが、この改善の程度は統計的な差異には到らなかった。プラセボと比較すると、併用療法は、ＬＶ断面積の短縮、ＰＥ／ＰＡ比、機能的僧帽弁逆流の重篤度、減速時間、およびＬＶ拡張終期の円周方向壁応力を、有意に改善した。血漿神経ホルモンおよび電解質について、４つの群の間に有意な差異は存在しなかった。
【００５９】
（組織形態計測学的発見）
組織形態計測学的データを、表１３に示す。正常なイヌと比較すると、プラセボで処置したイヌは、筋細胞断面積、置換性および間質性線維形成の容積分率、ならびに酸素拡散距離において有意な拡大を示すと共に、毛細血管密度において有意な低減を示した。ラノラジンのみを用いた処置、ならびに併用療法を用いた処置が、プラセボと比較した上記の組織形態計測学的測定値の全てを有意に改善した。改善の程度は、ラノラジンのみで処置したイヌよりも、併用療法で処置したイヌで有意に大きかった。
【００６０】
中程度の心不全のイヌについて実施したこの研究の結果は、ラノラジンを用いた単剤療法がＬＶ機能の保存およびＬＶリモデリングの弱化により証明されるように、心不全の進行を妨げる。ＡＣＥインヒビターまたはβ遮断薬と併用した場合、ラノラジンは、ＬＶの大きさの低減、ならびに筋細胞肥大、間質性線維形成、毛細血管密度および酸素拡散距離の改善によって証明されるように、ＬＶ収縮期および拡張期の機能を明らかに改善し、全体的および細胞レベルのＬＶリモデリングの逆転を誘発する。これらの結果は、慢性心不全の処置のための補助療法としてのラノラジンの使用を支持している。
（表１：いずれの微小塞栓形成よりも前に実施されたベースラインにおける血行動態測定）
【００６１】
【表１】
ＬＶ＝左室；ＲＡＮ＝ラノラジン；ＥＮＡ＝エナラプリル；ＭＥＴ＝メトプロロール
（表２：いずれの微小塞栓形成よりも前に実施されたベースライン血管造影測定）
【００６２】
【表２】
ＬＶ＝左室；ＲＡＮ＝ラノラジン；ＥＮＡ＝エナラプリル；ＭＥＴ＝メトプロロール
（表３：いずれの微小塞栓形成よりも前に実施されたベースラインにおける心エコーおよびドップラー測定）
【００６３】
【表３】
ＬＶ＝左室；ＲＡＮ＝ラノラジン；ＥＮＡ＝エナラプリル；ＭＥＴ＝メトプロロール；ＥＤＷＳ＝拡張終期の円周方向壁応力
（表４：いずれの微小塞栓形成よりも前に実施されたベースラインにおける神経ホルモンおよび電解質測定）
【００６４】
【表４】
ＬＶ＝左室；ＲＡＮ＝ラノラジン；ＥＮＡ＝エナラプリル；ＭＥＴ＝メトプロロール；ＡＮＦ＝心房性ナトリウム利尿因子；ＰＮＥ＝血漿ノルエピネフリン
（表５：無作為抽出時（ＰＲＥ）および治療の３ヵ月後（ＰＯＳＴ）における血行動態測定）
【００６５】
【表５】
ＲＡＮ＝ラノラジン；ＥＮＡ＝エナラプリル；ＭＥＴ＝メトプロロール；ＨＲ＝心拍数（拍数／分）；ｍＡｏＰ＝平均大動脈血圧（ｍｍＨｇ）；ＬＶＥＤＰ＝ＬＶ拡張終期血圧（ｍｍＨｇ）；＋ｄＰ／ｄｔ＝ピークＬＶ＋ｄＰ／ｄｔ（ｍｍＨｇ／秒）；−ｄＰ／ｄｔ＝ピークＬＶ−ｄＰ／ｄｔ（ｍｍＨｇ／秒）；＊＝ｐ＜０．０５
（表６：無作為抽出時（ＰＲＥ）および治療の３ヵ月後（ＰＯＳＴ）における血管造影測定）
【００６６】
【表６】
ＲＡＮ＝ラノラジン；ＥＮＡ＝エナラプリル；ＭＥＴ＝メトプロロール；ＥＤＶ＝ＬＶ拡張終期容積（ｍｌ）；ＥＳＶ＝ＬＶ収縮終期容積（ｍｌ）；ＥＦ＝ＬＶ駆出率（％）；ＳＶ＝拍出量（ｍｌ）；ＣＯ＝心拍出量（Ｌ／分）；ＣＩ＝心係数（Ｌ／分／ｍ２）；＊＝ｐ＜０．０５
（表７：無作為抽出時（ＰＲＥ）および治療の３ヵ月後（ＰＯＳＴ）における心エコーおよびドップラー測定）
【００６７】
【表７】
ＲＡＮ＝ラノラジン；ＥＮＡ＝エナラプリル；ＭＥＴ＝メトプロロール；ＦＡＳ＝ＬＶ断面積の短縮（％）；ＭＲ＝僧帽弁逆流の重篤度（％）；ＤＴ＝減速時間（ｍ秒）；ＥＤＷＳ＝ＬＶ拡張終期の円周方向壁応力（ｇｍ−ｃｍ２）；＊＝ｐ＜０．０５
（表８：無作為抽出時（ＰＲＥ）および治療の３ヵ月後（ＰＯＳＴ）における神経ホルモンおよび電解質測定）
【００６８】
【表８】
ＲＡＮ＝ラノラジン；ＥＮＡ＝エナラプリル；ＭＥＴ＝メトプロロール；Ｃｒｅａｔ＝血清クレアチニン（ｍｇ／ｄＬ）；ＢＵＮ＝血中尿素窒素（ｍｇ／ｄＬ）；ＰＮＥ＝血漿ノルエピネフリン（ｐｇ／ｍｌ）；ＰＲＡ＝血漿レニン活性（ｎｇ／ｍｌ／時間）；ＡＮＦ＝心房性ナトリウム利尿因子（ｐｇ／ｍｌ）；Ｔ−ＰＮＥ＝経心筋ノルエピネフリン
（処置効果の表）
（表９：４つの研究群の間の血行動態測定における処置前から処置後の変化（△）の比較（処置効果））
【００６９】
【表９】
ＲＡＮ＝ラノラジン；ＥＮＡ＝エナラプリル；ＭＥＴ＝メトプロロール；ＨＲ＝心拍数（拍数／分）；ｍＡｏＰ＝平均大動脈血圧（ｍｍＨｇ）；ＬＶＥＤＰ＝ＬＶ拡張終期血圧（ｍｍＨｇ）；＋ｄＰ／ｄｔ＝ピークＬＶ＋ｄＰ／ｄｔ（ｍｍＨｇ／秒）；−ｄＰ／ｄｔ＝ピークＬＶ−ｄＰ／ｄｔ（ｍｍＨｇ／秒）；＊＝ｐ＜０．０５対プラセボ
（表１０：４つの研究群の間の血管造影測定における処置前から処置後の変化（△）の比較（処置効果））
【００７０】
【表１０】
ＲＡＮ＝ラノラジン；ＥＮＡ＝エナラプリル；ＭＥＴ＝メトプロロール；ＥＤＶ＝ＬＶ拡張終期容積（ｍｌ）；ＥＳＶ＝ＬＶ収縮終期容積（ｍｌ）；ＥＦ＝ＬＶ駆出率（％）；ＳＶ＝拍出量（ｍｌ）；ＣＯ＝心拍出量（Ｌ／分）；ＣＩ＝心係数（Ｌ／分／ｍ２）；＊＝ｐ＜０．０５対プラセボ；†＝ｐ＜０．０５対ＲＡＮのみ
（表１１：４つの研究群の間の心エコーおよびドップラー測定における処置前から処置後の変化（△）の比較（処置効果））
【００７１】
【表１１】
ＲＡＮ＝ラノラジン；ＥＮＡ＝エナラプリル；ＭＥＴ＝メトプロロール；ＦＡＳ＝ＬＶ断面積の短縮（％）；ＭＲ＝僧帽弁逆流の重篤度（％）；ＤＴ＝減速時間（ｍ秒）；ＥＤＷＳ＝ＬＶ拡張終期の円周方向壁応力（ｇｍ−ｃｍ２）；＊＝ｐ＜０．０５対プラセボ
（表１２：４つの研究群の間の神経ホルモンおよび電解質測定における処置前から処置後の変化（△）の比較（処置効果））
【００７２】
【表１２】
ＲＡＮ＝ラノラジン；ＥＮＡ＝エナラプリル；ＭＥＴ＝メトプロロール；Ｃｒｅａｔ＝血清クレアチニン（ｍｇ／ｄＬ）；ＢＵＮ＝血中尿素窒素（ｍｇ／ｄＬ）；ＰＮＥ＝血漿ノルエピネフリン（ｐｇ／ｍｌ）；ＰＲＡ＝血漿レニン活性（ｎｇ／ｍｌ／時間）；ＡＮＦ＝心房性ナトリウム利尿因子（ｐｇ／ｍｌ）；Ｔ−ＰＮＥ＝経心筋ノルエピネフリン
（表１３：組織形態計測学的測定）
【００７３】
【表１３】
ＲＡＮ＝ラノラジン；ＥＮＡ＝エナラプリル；ＭＥＴ＝メトプロロール；ＭＣＳＡ＝筋細胞断面積；ＶＦＲＦ＝置換性線維形成の容積分率；ＶＦＩＦ＝間質性線維形成の容積分率；ＣＤ＝毛細血管密度；ＯＤＤ＝酸素拡散距離；＊＝ｐ＜０．０５対正常；†＝ｐ＜０．０５対プラセボ；‡＝ｐ＜０．０５対ＲＡＮのみ。
【００７４】
（実施例２）
ＡＣＥインヒビターのエナラプリルおよびβ遮断薬のメトプロロールがＬＶ逆リモデリングにもたらす効果についての過去のデータを、実施例１においてラノラジンのみ、ラノラジンおよびエナラプリル、ならびにラノラジンおよび酒石酸メトプロロールについて得られたデータと比較した。エナラプリルおよびメトプロロールのデータは、Ｓａｂｂａｈ ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｃｉｒｃ．８９：２８５２−２８５９から引用した。比較結果を、図１および図２にグラフで示した。
【００７５】
図１は、いかに、ラノラジンも、エナラプリルも、メトプロロールも、いずれも独立してＬＶ拡張終期の容積を減少させ得なかったが、ラノラジンとエナラプリルとの併用投与、ならびにラノラジンとメトプロロールとの併用投与が、ＬＶ拡張終期の容積を減少させ得たか、すなわちＬＶリモデリングを逆転させ得たかということを図示している。
【００７６】
図２は、いかに、ラノラジンも、エナラプリルも、メトプロロールも、いずれも独立してＬＶ収縮期容積を減少させ得ないようである、ラノラジンとエナラプリルとの併用投与、ならびにラノラジンとメトプロロールとの併用投与が、ＬＶ拡張終期の容積を減少させ得るか、すなわちＬＶリモデリングを逆転させ得るかということを図示している。
【図面の簡単な説明】
【００７７】
【図１】図１は、ラノラジンと、ラノラジンおよびエナラプリルと、ラノラジンおよび酒石酸メトプロロールとの、拡張終期の容積に関する比較研究の結果をグラフにより示している。エナラプリルおよび酒石酸メトプロロールに関する過去のデータもまた示されている。
【図２】図２は、ラノラジンと、ラノラジンおよびエナラプリルと、ラノラジンおよび酒石酸メトプロロールとの、拡張終期の容積に関する比較研究の結果をグラフにより示している。エナラプリルおよび酒石酸メトプロロールに関する過去のデータもまた示されている。
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の相互参照）
本出願は、２００４年１１月９日出願の米国仮特許出願第６０／６２６，１５４号に対する優先権を主張しており、その仮特許出願の開示内容全体が、本明細書中に参考として援用される。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、治療有効量のラノラジンと少なくとも１種の併用リモデリング物質との併用投与によって、左室リモデリングを逆転させる方法に関する。この併用リモデリング物質は、ＡＣＥインヒビター、アンギオテンシンＩＩレセプター遮断薬（ＡＲＢ）、またはβ遮断薬であり得る。本方法は、心不全の処置において有用性を見出す。本発明はまた、そのような併用投与に適した薬学的処方物に関する。
【背景技術】
【０００３】
（背景）
心不全は、工業化された社会における死亡および身体障害の主因である。心不全は、それ自体は疾患ではないが、心臓が血液の適切な供給を送り出して身体の組織および臓器の酸素要求量を満たすことができない状態である。その結果、多くの場合、体液が心臓および他の臓器（例えば、肺）に蓄積し、周囲の組織に拡散し、鬱血性心不全（ＣＨＦ）を引き起こす。ＣＨＦは、多くの場合、心血管の問題の症状（例えば、冠状動脈疾患、心筋梗塞、心筋症、心臓弁異常など）である。
【０００４】
心不全の重大な要素は、付随して起こる左室のリモデリングである。心筋が衰え、心筋が有する血液の適切な供給を送り出す能力が失われると、心臓、より具体的には左室（ＬＶ）が、補償しようとして拡大する。このリモデリングまたは拡大の程度は、心不全患者、特にＣＨＦの患者における死亡率の上昇と相互に関連付けられてきた。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
特定のβ遮断薬、およびアンギオテンシン転換酵素すなわち「ＡＣＥ」のインヒビターが、ＬＶリモデリングの進行を減速させ、さらには逆転させることが証明された。しかしながら、これらの物質は共に、望ましくない副作用を有し、これが投薬量を制限している。また、異なるβ遮断薬が有する逆リモデリングを誘発する能力の間には、かなりの変動がある。したがって、逆ＬＶリモデリングを増強するための方法を提供する必要性がある。本発明では、ラノラジン（ｒａｎｏｌａｚｉｎｅ）と併用リモデリング物質との投与が、好ましくない左室リモデリングの逆転を相乗的に増進することを発見した。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
（発明の要旨）
本発明の１つの実施形態において、好ましくない左室リモデリングを逆転するための方法を提供する。本方法は、治療有効量のラノラジンと少なくとも１種の治療有効量の併用リモデリング物質との、それらを必要とする哺乳動物への同時投与を包含する。この併用リモデリング物質は、ＡＣＥインヒビター、ＡＲＢ、またはβ遮断薬であり得る。本方法は、鬱血性心不全（ＣＨＦ）および／または慢性心不全の処置における使用に適している。ラノラジンと併用リモデリング物質とは、別個の投薬形態で投与されても単一の投薬形態で投与されてもよい。
【０００７】
本発明の別の実施形態において、治療有効量のラノラジン、少なくとも１種の治療有効量の併用リモデリング物質、および少なくとも１種の薬学的に受容可能なキャリアを含む薬学的処方物を提供する。
【０００８】
本発明のさらに別の実施形態において、哺乳動物における心不全を処置するための方法を提供する。本方法は、治療有効量のラノラジンと少なくとも１種の治療有効量の併用リモデリング物質の、それらを必要とする哺乳動物への同時投与を包含する。本方法は、鬱血性心不全（ＣＨＦ）および／または慢性心不全の処置における使用に適している。ラノラジンと併用リモデリング物質とは、別個の投薬形態で投与されても、単一の投薬形態で投与されてもよい。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
（発明の詳細な説明）
（定義および一般パラメータ）
本明細書中で使用される場合、次の語句は、一般的に、それらが使用される状況が他を示す場合を除き、以下に提示する意味を有することが意図される。
【００１０】
「任意の」または「必要に応じて」は、その次に記載される出来事または状況が、起こっても起こらなくてもよく、その記載が、その出来事または状況が起こる場合および起こらない場合を含むことを意味する。
【００１１】
用語「ＡＣＥインヒビター」は、アンギオテンシン転換酵素を阻害し、それにより、アンギオテンシンＩのアンギオテンシンＩＩへの転換を減少させ得る物質をいう。補足的な作用として、ＡＣＥインヒビターはまた、ブラジキニンの分解を減少させる。適切なＡＣＥインヒビターとしては、これらに限定されないが、ベナゼプリル、カプトプリル、シラザプリル、エナラプリル、フォシノプリル、イミダプリル、リシノプリル、ペリンドプリル、キナプリル、ラミプリル、テモカプリル（ｔｅｍｏｃａｐｒｉｌ）、およびトランドラプリルが挙げられる。
【００１２】
用語「ＡＲＢ」は、アンギオテンシンＩＩレセプター遮断薬である物質をいい、アンギオテンシンアンタゴニストとも呼ばれる。ＡＣＥインヒビター同様、ＡＲＢはアンギオテンシンＩＩを減少させるが、ＡＣＥインヒビターが肺内の血流中でアンギオテンシンＩＩを減少させる代わりに、ＡＲＢは細胞壁でアンギオテンシンＩＩを減少させ、それにより、より全身性の様式で作用する。適切なＡＲＢとしては、これらに限定されないが、カンデサルタン（ｃａｎｄｅｓａｒｔａｎ）、シレキセチル（ｃｉｌｅｘｅｔｉｌ）、エプロサルタン（ｅｐｒｏｓａｒｔａｎ）、イルベサルタン（ｉｒｂｅｓａｒｔａｎ）、ロサルタン、オルメサルタン（ｏｌｍｅｓａｒｔａｎ）、メドキソミル（ｍｅｄｏｘｏｍｉｌ）、テルミサルタン（ｔｅｌｍｉｓａｒｔａｎ）、バルサルタン（ｖａｌｓａｒｔａｎ）、ゾラサルタン（ｚｏｌａｓａｒｔｉｎ）、およびタソサルタン（ｔａｓｏｓａｒｔａｎ）が挙げられる。
【００１３】
用語「β遮断薬」は、βアドレナリン作動性レセプターに結合し、βアドレナリン作動性刺激の作用を阻害する物質をいう。β遮断薬はまた、ＡＶ結節伝達を増加させる。さらにβ遮断薬は、心拍数を制御するシナプス後神経終末に対するノルエピネフリンの作用を遮断することにより、心拍数を減少させる。β遮断薬はまた、後脱分極が媒介する自動性を阻害する細胞内Ｃａ＋＋過負荷を軽減する。β遮断薬の例としては、これらに限定されないが、アセブトロール、アテノロール、ベタキソロール、ビソプロロール、カルテオロール、ラベタロール、メトプロロール、ナドロール、オクスプレノロール、ペンブトロール、ピンドロール、プロプラノロール、ソタロール、チモロール、エスモロール、ソタロール、カルベジロール、メドロキサロール、ブシンドロール、レボブノロール、メチプラノロール、セリプロロール、およびプロパフェノンが挙げられる。
【００１４】
「非経口投与」は、患者への注射による治療薬の全身送達をいう。
【００１５】
用語「治療有効量」は、以下に既定されるような処置を必要とする哺乳動物に投与した場合に、そのような処置をもたらすのに十分な式Ｉの化合物の量をいう。治療有効量は、使用される治療薬の比活性、患者の疾患状態の重篤度、ならびに患者の年齢、身体状態、他の疾患状態の存在および栄養状態に応じて変化する。さらに、患者が受けているかも知れない他の薬物治療が、投与すべき治療薬の治療有効量の決定に影響する。
【００１６】
用語「処置」または「処置する」は、哺乳動物における疾患のあらゆる状態処置をいい：
（ｉ）疾患を予防すること、すなわち、疾患の臨床症状を発現させないこと；および／または
（ｉｉ）疾患を阻害すること、すなわち、臨床症状の発現を停止すること；
（ｉｉｉ）疾患を緩和すること、すなわち、臨床症状の軽減をもたらすこと
を含む。
【００１７】
本明細書中で使用される場合、「薬学的に受容可能なキャリア」は、あらゆる溶媒、分散媒、被覆物、抗菌物質および抗真菌物質、等張剤および吸収遅延物質などを含む。薬学的に活性な物質に対するそのような媒体および物質の使用は、当該技術分野において周知である。任意の従来の媒体または物質が活性成分と適合性でない場合を除き、治療組成物におけるその使用が是認される。補足的な活性成分もまた、組成物中に組み込まれ得る。
【００１８】
用語「好ましくない左室リモデリング」は、心室の大きさの変化、壁の厚さの変化、および左室の他の寸法変化、ならびに、拡張期および／または収縮期の機能の低下によって明示され得る心筋障害に応答して起こる左室の他のあらゆる変化をいう。
【００１９】
（発明の方法）
本発明は、好ましくない左室リモデリングを逆転させる方法に関する。本方法は、それらを必要とする哺乳動物への治療有効量のラノラジンと少なくとも１種の治療有効量の併用リモデリング物質の同時投与を包含する。この併用リモデリング物質は、ＡＣＥインヒビター、ＡＲＢまたはβ遮断薬であり得る。本方法は、鬱血性心不全（ＣＨＦ）および／または慢性心不全の処置における使用に適している。
【００２０】
ラノラジンおよび併用リモデリング物質は、別個の投薬形態で投与されても、単一の投薬形態で投与されてもよい。別個の投薬形態として投与される場合、別個の成分は任意の順序で投与され得、同時にまたは時間をずらして服用され得る。
【００２１】
ラノラジン（±）−Ｎ−（２，６−−ジメチルフェニル）−４−［２−ヒドロキシ−３−（２−メトキシフェノキシ）−プロピル］−１−ピペラジンアセトアミドは、現在、アンギナの処置についての臨床試験が進行中の抗虚血物質である。化合物自体は、米国特許第４，５６７，２６４号に開示されており、その明細書が、参考として本明細書中に援用される。ラノラジンの徐放性処方物が好ましく、これらは、米国特許第６，５０３，９１１号、米国特許第６，３６９，０６２号、および米国特許第６，６１７，３２８号で開示されている。
【００２２】
ラノラジンが有する心不全の処置における利益を提供する能力は、これまでに、米国特許第６，５２８，５１１号および米国特許第６，５２８，５１１号、ならびにＳａｂｂａｈ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｊ．Ｃａｒｄ．Ｆａｉｌ．，８（６）：４１６−２２で開示されている。これらの参考文献において、心不全の処置におけるラノラジンの使用が、ＬＶの機能を改善するこの化合物の能力によって支持される。しかしながら、本発明より前には、併用リモデリング物質と共に投与される場合の、この化合物が有する逆ＬＶリモデリングを誘発する相乗的な能力は知られていなかった。
【００２３】
ラノラジンと同時投与される物質とは、単一かまたは複数の用量のいずれかで、類似した有用性を有する物質の容認されている任意の投与様式、（例えば、参考として援用される特許および特許出願に記載されるような投与様式、口腔投与、動脈内注射による投与、静脈内投与、腹腔内投与、非経口投与、筋肉内投与、皮下投与、経口投与、あるいは、例えばステントなどの含浸もしくは被覆デバイス、または動脈に挿入された円筒状高分子を通じた投与を含む）によって患者に与えられ得る。
【００２４】
１つの投与様式は、非経口であり、特に注射によるものである。本発明の新規の組成物を注射による投与のために組み込み得る形態としては、水性の懸濁剤または乳剤、ゴマ油、トウモロコシ油、綿実油もしくは落花生油を含む油性の懸濁剤または乳剤、エリキシル剤、マンニトール、デキストロースもしくは滅菌水溶液、および類似した薬学的ビヒクルが挙げられる。生理食塩水中の水溶液もまた、注射用に好都合に使用されるが、本発明の状況においてはそれほど好ましくない。エタノール、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコールなど（およびそれらの適切な混合物）、シクロデキストリン誘導体ならびに植物油もまた使用し得る。適切な流動性を、例えば、被覆物（例えば、レシチン）の使用により、分散の場合に必要とされる粒径の維持により、そして界面活性剤の使用により、維持し得る。微生物の活動の防止は、種々の抗菌物質および抗真菌物質、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなどによりもたらされ得る。
【００２５】
滅菌注射可能溶液を、必要とされる量の成分を、上記に列挙されるような種々の他の成分と共に適切な溶媒中に組み込み、必要に応じ、続いて濾過滅菌することにより調製する。一般的には、分散剤（ｄｉｓｐｅｒｓｉｏｎ）を、塩基性分散媒および上記に列挙された成分からの必要とされる他の成分を含む滅菌ビヒクルに種々の滅菌活性成分を組み込むことにより調製する。滅菌注射可能溶液の調製のための滅菌粉末の場合には、調製の好ましい方法は、真空乾燥および凍結乾燥技術であり、それにより、先に滅菌濾過した活性成分の溶液から活性成分と任意のさらなる所望の成分との粉末を生成する。
【００２６】
経口投与は、これらの成分の投与のための別の経路である。投与は、カプセル剤または腸溶錠などを介し得る。ラノラジンおよび少なくとも１種の同時投与される物質を含む薬学的組成物を作成するには、通常は、活性成分を賦形剤によって希釈し、そして／またはカプセル、サシェ、紙もしくは他の容器の形態であり得るようなキャリア内に封入する。賦形剤が希釈剤として機能する場合、この賦形剤は固体、半固体もしくは液体の物質（上記のとおり）であり得、これが、活性成分のビヒクル、キャリアまたは媒体として機能する。したがって、これらの組成物は、錠剤、丸剤、散剤、ロゼンジ、サシェ、カシェ剤、エリキシル剤、懸濁剤、乳剤、液剤、シロップ剤、エアゾール剤（固体としてまたは液体媒体中に含んで）、軟膏（例えば、１０重量％までの活性化合物を含む）、軟質および硬質のゼラチンカプセル、滅菌注射可能溶液、ならびに滅菌包装した粉末の形態であり得る。
【００２７】
適切な賦形剤の一部の例としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アラビアゴム、リン酸カルシウム、アルギナート、トラガカント、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、滅菌水、シロップ、およびメチルセルロースが挙げられる。処方物はさらに：潤滑剤（例えば、タルク、ステアリン酸マグネシウムおよび鉱油）；湿潤剤；乳化剤および懸濁剤；保存剤（例えば、安息香酸メチルおよびヒドロキシ安息香酸プロピル）；甘味剤；および矯味矯臭剤を含み得る。
【００２８】
本発明の組成物を、当該技術分野で公知の手順を使用することにより、患者への投与後に活性成分の即時放出、持続放出または遅延放出を提供するように処方し得る。上記で検討したように、ラノラジンの生物学的利用能の低下を考慮すると、徐放性の処方物が一般的には好ましい。経口投与のための制御放出薬物送達システムとしては、浸透圧ポンプシステム、および高分子被覆レザバもしくは薬物−高分子マトリックス処方物を含む溶解システムが挙げられる。制御放出システムの例が、米国特許第３，８４５，７７０号；米国特許第４，３２６，５２５号；米国特許第４，９０２，５１４号；および米国特許第５，６１６，３４５号に与えられている。
【００２９】
本組成物は、好ましくは、単位投薬形態で処方される。用語「単位投薬形態」は、ヒト被験体および他の哺乳動物のための単回投薬に適した物理的に別個の単位であり、各単位が適切な薬学的賦形剤と共に所望の治療効果を生ずるように算定された所定量の活性物質を含むもの（例えば、錠剤、カプセル剤、アンプル）をいう。本発明の活性物質は、広範な投薬量域にわたり有効であり、一般的に、薬学的有効量で投与される。しかしながら、実際に投与される各活性物質の量は、処置される状態、選択される投与経路、投与される実際の化合物およびそれらの相対活性、個々の患者の年齢、体重および応答、その患者の症状の重篤度などを含む関連状況を考慮して、医師により決定されることが理解される。
【００３０】
錠剤などの固体組成物を調製するために、主要な活性成分を薬学的賦形剤と混合して、本発明の化合物の均一混合物を含む固体の予備処方組成物を形成する。これらの予備処方組成物を均一という場合、この組成物が等しい効果を有する単位投薬形態（例えば、錠剤、丸剤およびカプセル剤）に即座に細分化され得るように、活性成分がその組成物全体に均等に分散していることを意味する。
【００３１】
本発明の錠剤または丸剤は被覆され得、そうでない場合は、長期的な作用の利点を与える投薬形態を提供するように、または胃の酸性条件から保護するように調合され得る。例えば、錠剤または丸剤は、内部投薬成分および外部投薬成分を含み得、後者は前者を覆う外被の形態である。ラノラジンと同時投与物質（単数または複数）とは、胃における分解に耐え、内部成分が変化せずに十二指腸に入ることまたは内部成分の放出を遅延させることを可能とする役目を果たす腸溶性の層によって分離され得る。種々の物質を、そのような腸溶性の層または被覆物に使用し得、そのような物質としては、多数のポリマー酸、ならびにポリマー酸と、セラック、セチルアルコールおよび酢酸セルロースのような物質との混合物が挙げられる。
【００３２】
以下の実施例は、本発明の好ましい実施形態を示すために含まれる。以下の実施例に開示される技術は本発明の実施において十分に機能するように本発明者により開示される技術を代表しており、したがって、その実施のための好ましい形態を構成すると考え得ることが、当業者に理解されるべきである。しかしながら、開示される特定の実施形態において多くの変更が成され得、それでもなお本発明の精神および範囲から逸脱することなく同じかまたは類似した結果が得られ得ることを、本開示にかんがみて、当業者は理解すべきである。
【００３３】
以下の実施例は、本発明の好ましい実施形態を示すために含まれる。以下の実施例に開示される技術は本発明の実施において十分に機能するように本発明者により開示される技術を代表しており、したがって、その実施のための好ましい形態を構成すると考え得ることが、当業者に理解されるべきである。しかしながら、開示される特定の実施形態において多くの変更が成され得、それでもなお本発明の精神および範囲から逸脱することなく同じかまたは類似した結果が得られ得ることを、本開示にかんがみて、当業者は理解すべきである。
【実施例】
【００３４】
本発明のβ遮断薬、ＡＣＥインヒビターおよびＡＲＢは、当該技術分野において周知であり、市販されている。ラノラジンを、従来的な方法、例えば、米国特許第４，５６７，２６４号に開示された様式により調製し得、この米国特許の開示内容全体が本明細書中に参考として援用される。
【００３５】
（実施例１）
以下の実施例は、多発性続発性冠状動脈内微小塞栓形成により生ずる慢性心不全のイヌにおける左室（ＬＶ）機能障害およびＬＶ心房リモデリングの進行に対する、ラノラジン単独での効果、およびアンギオテンシン転換酵素（ＡＣＥ）インヒビターと併用した効果、およびβ遮断薬と併用した効果を検定する。
【００３６】
（動物の調製）
イヌにおける慢性ＬＶ機能障害および不全は、以前にＳａｂｂａｈ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２６０：Ｈ１３７９−Ｈ１３８４に記載されるように、ポリスチレンラテックス微小球（直径７７〜１０９μｍ）を用いた多発性続発性冠状動脈内塞栓形成により生じた。冠状動脈微小塞栓形成を、全身麻酔および無菌状態下で心臓カテーテル法の間に実施した。ヒドロモルホン（０．２２ｍｇ／ｋｇ）、ジアゼパム（０．２〜０．６ｍｇ／ｋｇ）およびペントバルビタールナトリウム（５０〜１００ｍｇ）の静脈内注射の組み合わせを使用して、麻酔を誘導した。麻酔の水準を、１％〜２％イソフランを使用して、この研究を通じて維持した。左右心臓カテーテル法を、大動脈切開および静脈切開により実施した。各カテーテル法後、６−０シルクを使用して脈管を修復し、４−０縫合糸で皮膚を閉鎖した。血管造影により決定されるＬＶ駆出率が３０％と４０％との間となったときに、微小塞栓形成を中止した。最後の塞栓形成後、確実に最後の微小塞栓形成により生じた梗塞を完治させ、心不全を確立させるために２週間の期間をおいた。次いで、研究プロトコルを実施した。
【００３７】
（研究対象動物）
健康で、条件付けられ、実験目的で繁殖した、体重が１９ｋｇと２５ｋｇとの間にある雑種イヌ。
【００３８】
（研究プロトコル）
無作為盲検プラセボ制御研究デザインを使用した。合計２８匹のイヌが、慢性心不全を生じさせるために、上記のような多発性続発性冠状動脈内微小塞栓形成を受けた。最後の塞栓形成から２週間後、イヌを無作為に抽出して４つの研究グループ（処置群）に分けた。イヌを無作為に抽出して、ラノラジンのみ（３７５ｍｇ、１日２回、ｎ＝７）、酒石酸メトプロロール（２５ｍｇ、１日２回、ｎ＝７）と併用するラノラジン（３７５ｍｇ、１日２回）、エナラプリル（１０ｍｇ、１日２回、ｎ＝７）と併用するラノラジン（３７５ｍｇ、１日２回）、またはプラセボ（ラノラジンビヒクル、１日２回、ｎ＝７）を用いて３ヶ月の経口治療を施した。血行動態測定、血管造影測定、心エコー測定、ドップラー測定および神経ホルモン測定を、無作為抽出（最後の塞栓形成から２週間後）の前および治療の完了後（治療開始から３ヵ月後）に実施した。最後の血行動態および血管造影研究が完了した後に、イヌを安楽死させ、心臓を摘出し、組織を調製し、後の組織学的および生化学的評価のために保管した。この研究の１次終点および２次終点は、以下の通りであった：
（１次終点）
血管造影により決定されるＬＶ駆出率の評価に基づく進行性ＬＶ機能障害の予防または弱化。
【００３９】
血管造影により決定されるＬＶ拡張終期の容積およびＬＶ収縮終期の容積の測定に基づく進行性ＬＶリモデリングの予防または弱化。
【００４０】
（２次終点）
１）ＬＶピーク−ｄＰ／ｄｔ、２）拡張早期のＬＶ時定数（Ｔａｕ）、３）僧帽弁速度ＰＥ／ＰＡ、および４）ＬＶ拡張終期の円周方向壁応力（ｃｉｒｃｕｍｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｗａｌｌ ｓｔｒｅｓｓ）の評価に基づく進行性のＬＶ拡張期の機能障害の予防または弱化。
【００４１】
心筋細胞肥大の弱化の程度、置換性線維形成の容積分率、間質性線維形成の容積分率、毛細管密度、および酸素拡散距離。
【００４２】
血漿神経ホルモン（血漿ノルエピネフリン（ＰＮＥ）、血漿レニン活性（ＰＲＡ）および血漿心房性ナトリウム利尿因子（ＡＮＦ））の循環レベルの変化、ならびに経心筋（ｔｒａｎｓｍｙｏｃａｒｄｉａｌ）血漿ノルエピネフリンの変化（動脈と冠静脈洞との差異）。
【００４３】
（血行動態測定）
血行動態測定は全て、麻酔したイヌの左右心臓カテーテル法の間に実施した。全ての血行動態パラメータを確実に正常限界範囲内にするために、ベースライン測定を、あらゆる微小塞栓形成の前に、実施した。正常でないイヌを研究から除外した。以下のパラメータを、３回全ての研究期間に全てのイヌについて測定した：心拍数、平均大動脈血圧、等容性収縮期のＬＶ血圧の最高変化率（ピーク＋ｄＰ／ｄｔ）、等容性弛緩期のＬＶ血圧の最高変化率（ピーク−ｄＰ／ｄｔ）、およびＬＶ拡張終期の血圧。
【００４４】
（心室造影測定）
左心室造影記録を、血行動態測定の完了後に心臓カテーテル法の間に実施した。心室造影記録を、イヌを右側を下にして寝かせ、２０ｍｌの造影物質（ＲＥＮＯ−Ｍ−６０，Ｓｑｕｉｂｂ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）の高圧注入の間に１秒間当たり３０コマで、３５ｍｍの撮影用フィルム（ｃｉｎｅ）に記録した。画像拡大の修正を、ＬＶの高さに配置した放射線不透性グリッドを使用して実施した。ＬＶ収縮終期および拡大終期の容積を、エリアレングス法（４）を使用して、血管造影のシルエットから算定した。期外収縮心拍および期外収縮後心拍を分析から除外した。ＬＶ駆出率を、拡張終期容積と収縮終期容積との差異と、拡張終期容積との比の１００倍として算定した。拍出量を、ＬＶ拡張終期容積と収縮終期容積との間の差異として算定した。心拍出量を、拍出量に心拍数をかけて算定し、心係数を、心拍出量を体表面積で除して算定した。
【００４５】
（心エコーおよびドップラー測定）
心エコーおよびドップラー研究を、３．５ＭＨＺ変換器を備えた７７０３０Ａ超音波装置（Ｈｅｗｌｅｔｔ−Ｐａｃｋａｒｄ）を使用して、全ての特定の研究時点において全てのイヌについて実施した。全ての心エコー測定を、イヌを右側臥位の姿勢で寝かせて実施し、後のオフライン分析のためにＰａｎａｓｏｎｉｃ ６３００ ＶＨＳレコーダーで記録した。横断（ｔｒａｎｓｖｅｒｓｅ）２次元心エコー図を、ＬＶ乳頭筋の高さで得て、ＬＶ断面積の短縮（ｆｒａｃｔｉｏｎａｌ ａｒｅａ ｏｆ ｓｈｏｒｔｎｉｎｇ）を算定するために使用した。後者を拡張周期ＬＶ内腔面積から収縮終期内腔面積を差し引き、拡張終期内腔面積で除し、それを１００倍して算定した。２腔像２次元心エコー図もまた得て、ＬＶ拡張終期の円周方向壁応力の算定のために使用されるＬＶの長半軸および短半軸を確かめた。壁応力を以下の通り算定した：応力＝Ｐｂ／ｈ（１−ｈ／２ｂ）（１−ｈｂ／２ａ２）であり、ここでＰはＬＶ拡張終期血圧であり、ａはＬＶ長半軸であり、ｂはＬＶ短半軸であり、ｈはＬＶ壁厚である。
【００４６】
僧帽弁流入速度を、パルス波ドップラー心エコーにより測定した。速度波形を使用して、拡張早期の最高僧帽弁流入速度（ＰＥ）、ＬＡ収縮期の最高僧帽弁流入速度（ＰＡ）、ＰＥとＰＡとの比率、および早期僧帽弁流入減速時間を算定した。機能的僧帽弁逆流（ＭＲ）の存在の有無を、心尖部２腔像と心尖部４腔像との両方を使用して、ドップラーカラーフローマッピング（Ｈｅｗｌｅｔｔ−Ｐａｃｋａｒｄ ｍｏｄｅｌ ７７０２０Ａ Ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ Ｓｙｓｔｅｍ）で決定した。存在する場合、機能的ＭＲの重篤度を、逆流ジェット面積と左心房の面積との比率の１００倍に基づいて定量化した。次いで、両像から算定された比率を平均して、機能的ＭＲの重篤度についての単一の代表値を得た。
【００４７】
（血液神経ホルモンおよび電解質の測定）
数種の神経ホルモンの血漿濃度の評価を、血行動態評価を補完するために実施した。測定を、血行動態および血管造影評価について記載された各研究時点において実施した。経心筋ＰＮＥ濃度を、心臓カテーテル法の間に上行大動脈および冠静脈洞から血液サンプルを得て推定した。経心筋ＰＮＥを、２つのサンプル間の差異として算定した。静脈血サンプルを、放射線免疫アッセイを用いたノルエピネフリンの血漿濃度、血漿レニン活性および血漿心房性ナトリウム利尿因子の測定のために、心臓カテーテル法の前に意識のあるイヌから２連で得た。さらに、血液サンプルを、血清電解質（Ｎａ＋、Ｋ＋、クレアチニンおよびＢＵＮ）の決定のために、同じ時間間隔で得た。
【００４８】
（組織形態計測学的評価）
血行動態および血管造影研究の完了後の屠殺する日に、イヌの胸部を左開胸術により切開し、心膜を切開し、心臓を迅速に摘出し、氷冷トリス緩衝液（ｐＨ７．４）に入れた。３つの２ｍｍ厚横断スライスをＬＶから得た；３つのスライスのうち１つは３分割した場合の底部であり、１つは３分割した場合の中間部であり、１つは３分割した場合の頂部であり、これらを１０％ホルマリンに入れた。経壁ブロック（ｔｒａｎｓｍｕｒａｌ ｂｌｏｃｋ）も得て、イソペンタン中で液体窒素により−１６０℃に冷却して急速に冷凍し、必要となるまで−７０℃にて保管した。ＬＶ組織サンプルも得て、後のスキャニング研究および透過型電子顕微鏡研究のためにグルタルアルデヒド（ｇｌｕｔｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ）中に保管した。
【００４９】
各心臓から、ＬＶの３つ全ての横断スライスを、１つは３分割した場合の底部、１つは３分割した場合の中間部、１つは３分割した場合の頂部から、各々約３ｍｍ厚で得た。比較のために、７匹の正常なイヌからの組織サンプルを得て、同一の様式で調製した。各横断スライスから、経壁組織ブロックを得て、パラフィンブロック中に包埋した。各ブロックから、６μｍ厚の切片標本を調製し、線維組織を同定するためにゴモリ３色染色法で染色した。置換性線維形成の容積分率、すなわち、３つの横断ＬＶスライス中の瘢痕組織と生組織との割合を、コンピュータベースのビデオデンシトメトリー（ＭＯＣＨＡ，Ｊａｎｄｅｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃｏｒｔｅ Ｍａｄｅｒａ，ＣＡ）を使用して、線維組織が占める総表面積のパーセントとして算定した。ＬＶを含まない壁組織ブロックを２番目の中間部心室横断スライスから得て、Ｔｉｓｓｕｅ−Ｔｅｋ包埋剤（Ｓａｋｕｒａ，Ｔｏｒｒａｎｃｅ，ＣＡ）を使用してコルク上に置き、液体窒素で予め冷却したイソペンタン中で迅速に冷凍し、使用するまで−７０℃にて保管した。低温切片（ｃｒｙｏｓｔａｔ ｓｅｃｔｉｏｎ）を、約８μｍ厚で各ブロックから調製し、筋細胞の境界および毛細血管（５）を含む間質腔をの輪郭を描くために３．３Ｕ／ｍｌのノイラミニダーゼ（ｎｅｕｒｏａｍｉｎｉｄａｓｅ）Ｖ型（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ．ＭＯ）で前処理し、その後、フルオレセイン標識ピーナッツ凝集素（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｉｎｃ．，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ）で染色した。毛細血管を同定するために、切片を、ローダミン標識Ｇｒｉｆｆｏｎｉａ ｓｉｍｐｌｉｃｉｆｏｌｉａ ｌｅｃｔｉｎ Ｉ（ＧＳＬ−Ｉ）で２重に染色した。放射方向の１０の顕微鏡視野（倍率×１００、対物レンズ×４０、接眼レンズ２．５）を、分析のために各切片から無作為に選択した。瘢痕組織（梗塞）を含む視野を除外した。平均筋細胞断面積を、コンピュータ支援面積測定を使用して、各イヌについて算定した。間質腔が占める総表面積および毛細血管が占める総表面積を、コンピュータベースのビデオデンシトメトリー（ＭＯＣＨＡ，Ｊａｎｄｅｌ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｃｏｒｔｅ Ｍａｄｅｒａ，ＣＡ）を使用して、無作為に選択した各視野から測定した。間質コラーゲンの容積分率を、間質腔が占める総表面積のパーセントから毛細血管（５）が占める総面積のパーセントを差し引いたものとして算定した。毛細血管密度を、１ｍｍ２当たりの毛細血管の数として算定した。酸素拡散距離を、２つの隣接する毛細血管の間の半分の距離として算定した。比較のために、同一の測定を、７匹の正常なイヌから得たＬＶ組織を使用して実施した。
【００５０】
（統計分析）
確実に全ての研究測定値をベースラインにおいて類似させるために、いずれの塞栓形成の前および治療の開始前の無作為抽出の際に、４つ全ての研究群の間で比較を行った。これらの比較のために、一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）を、αを０．０５に設定して使用した。有意性が得られた場合は、グループワイズの比較（ｇｒｏｕｐ ｗｉｓｅ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓ）を、有意性をｐ≦０．０５に設定したスチューデント・ニューマン・クールズ検定を使用して実施した。処置前および処置後の測定値の間の群内の比較を、ｐ＜０．０５を有意であるとみなす、対応スチューデントｔ検定を使用して実施した。処置の効果を評価するために、処置前から処置後までの各測定値の変化（△）を、４つの研究群の各々について算定した。△についての有意な差異が群間に存在するかどうかを決定するために、ＡＮＯＶＡを、αを０．０５に設定して使用した。有意性が得られた場合は、グループワイズの比較を、有意性をｐ≦０．０５に設定したスチューデント・ニューマン・クールズ検定を使用して実施した。全てのデータを、平均±ＳＥＭとして報告する。
【００５１】
（ベースライン測定）
いずれの微小塞栓形成にも先立って得られた血行動態、血液造影、心エコー、ドップラー、ならびに血漿神経ホルモンおよび電解質のベースライン測定値を表１〜表４に示す。４つの研究群の間に、いずれのベースライン測定値にも有意な差異は存在しなかった。
【００５２】
（処置前測定）
無作為抽出の際に得られた血行動態、血液造影、心エコー、ドップラー、ならびに血漿神経ホルモンおよび電解質の測定値を表５〜表８に示す。４つの研究群の間に、いずれの処置前測定値にも有意な差異は存在しなかった。
【００５３】
（群内比較−プラセボ（表５〜表８））
プラセボに対して無作為抽出されたイヌにおいて、心拍数、平均大動脈血圧およびＬＶ拡張終期血圧について、処置前と処置後の間で差異は存在しなかった。しかしながら、ＬＶピーク＋ｄＰ／ｄｔおよび−ｄＰ／ｄｔの両方が、有意に低下した。この研究群では、３か月の処置の終わりに、ＬＶ拡張終期容積および収縮終期容積が有意に増大し、一方で、ＬＶ駆出率および拍出量が有意に低減した。心拍出量および心係数も低減する傾向にあったが、その低減は統計的な差異には到らなかった。心エコーおよびドップラーの結果は、ＬＶ断面積の短縮の有意な低減、僧帽弁流入ＰＥ／ＰＡ比および減速時間に有意な低減、そして機能的僧帽弁逆流の重篤度およびＬＶ拡張終期の円周方向壁応力の有意な拡大を示した。血漿神経ホルモンおよび電解質に、有意な差異は存在しなかった。
【００５４】
（群内比較−ラノラジンのみ（表５〜表８））
ラノラジンを用いた単剤療法（ｍｏｎｏｔｈｅｒａｐｙ）に対して無作為抽出されたイヌにおいて、心拍数、平均大動脈血圧、ＬＶピーク＋ｄＰ／ｄｔおよびピーク−ｄＰ／ｄｔついての差異は存在しなかったが、ＬＶ拡張終期血圧が有意に低減した。この研究群では、３か月の処置の終わりに、ＬＶ拡張終期容積および収縮終期容積は変化しなかったが、ＬＶ駆出率、拍出量および心係数が有意に拡大した。心拍出量もまた拡大する傾向にあったが、その拡大は統計的な差異には到らなかった。心エコーおよびドップラーの結果は、ＬＶ断面積の短縮、僧帽弁流入ＰＥ／ＰＡ比、減速時間、および機能的僧帽弁逆流の重篤度に有意な変化を示さなかった。しかしながら、ＬＶ拡張終期の円周方向壁応力は有意に低減した。血漿神経ホルモンおよび電解質においては、有意な差異は見られなかった。
【００５５】
（群内比較−ラノラジン＋エナラプリル（表５〜表８））
ラノラジンとエナラプリルとの併用療法に対して無作為抽出されたイヌにおいて、心拍数、平均大動脈血圧、ＬＶピーク＋ｄＰ／ｄｔおよびピーク−ｄＰ／ｄｔついての差異は存在しなかったが、ＬＶ拡張終期血圧が有意に低減した。この研究群では、３か月の処置の終わりに、ＬＶ拡張終期容積は変化せず、収縮終期容積が有意に低減し、一方で、ＬＶ駆出率、拍出量および心係数が有意に拡大した。心拍出量もまた拡大する傾向にあったが、その拡大は統計的な差異には到らなかった。心エコーおよびドップラーの結果は、ＬＶ断面積の短縮および減速時間について有意な拡大を示した。ＰＥ／ＰＡ比は拡大する傾向にあったが、その拡大は統計的な差異には到らなかった。機能的僧帽弁逆流の重篤度およびＬＶ拡張終期の円周方向壁応力は有意に低減した。血漿神経ホルモンおよび電解質においては、有意な差異は見られなかった。
【００５６】
（群内比較−ラノラジン＋メトプロロール（表５〜表８））
ラノラジンおよびメトプロロールとの併用療法に対して無作為抽出されたイヌにおいて、心拍数、平均大動脈血圧、ＬＶピーク＋ｄＰ／ｄｔおよびピーク−ｄＰ／ｄｔついての差異は存在しなかったが、ＬＶ拡張終期血圧が有意に低下した。この研究群では、３か月の処置の終わりに、ＬＶ拡張終期容積および収縮終期容積が有意に低減し、一方で、ＬＶ駆出率、拍出量および心係数が有意に拡大した。心拍出量もまた拡大する傾向にあったが、その拡大は統計的な差異には到らなかった。心エコーおよびドップラーの結果は、ＬＶ断面積の短縮、ＰＥ／ＰＡ比および減速時間において有意な拡大を示した。機能的僧帽弁逆流の重篤度およびＬＶ拡張終期の円周方向壁応力は有意に低減した。血漿神経ホルモンおよび電解質においては、有意な差異は見られなかった。
【００５７】
（処置効果−群間比較（表９〜表１２））
処置効果データを表９〜表１２に示し、個々のイヌのデータを付表１に示す。処置効果分析は、心拍数および平均大動脈血圧について、４つの群の間の差異を示さなかった。プラセボと比較すると、ＬＶ拡張終期血圧、ピーク＋ｄＰ／ｄｔおよびピーク−ｄＰ／ｄｔが、ラノラジンのみで処置したイヌ、およびラノラジンとエナラプリルかもしくはメトプロロールとを併用して処置したイヌで有意に拡大した。ＬＶ拡張終期容積、収縮終期容積、駆出率、拍出量および心係数は全て、プラセボと比較すると、３つの処置群全てにおいて有意に改善した。心拍出量もまた、プラセボと比較すると、処置群において拡大する傾向にあったが、その拡大は統計的な差異には到らなかった。ＬＶ容積の低減およびＬＶ駆出率の拡大は、ラノラジンのみに対して無作為抽出されたイヌと比較すると、併用療法に対して無作為抽出されたイヌにおいて有意に大きかった。
【００５８】
プラセボと比較すると、ラノラジンのみは、ＬＶ断面積の短縮を有意に拡大し、ＬＶ拡張終期の円周方向壁応力を有意に低減した。ＰＥ／ＰＡ比、ＭＲの重篤度、および減速時間は、プラセボと比較すると、ラノラジンのみで改善する傾向にあったが、この改善の程度は統計的な差異には到らなかった。プラセボと比較すると、併用療法は、ＬＶ断面積の短縮、ＰＥ／ＰＡ比、機能的僧帽弁逆流の重篤度、減速時間、およびＬＶ拡張終期の円周方向壁応力を、有意に改善した。血漿神経ホルモンおよび電解質について、４つの群の間に有意な差異は存在しなかった。
【００５９】
（組織形態計測学的発見）
組織形態計測学的データを、表１３に示す。正常なイヌと比較すると、プラセボで処置したイヌは、筋細胞断面積、置換性および間質性線維形成の容積分率、ならびに酸素拡散距離において有意な拡大を示すと共に、毛細血管密度において有意な低減を示した。ラノラジンのみを用いた処置、ならびに併用療法を用いた処置が、プラセボと比較した上記の組織形態計測学的測定値の全てを有意に改善した。改善の程度は、ラノラジンのみで処置したイヌよりも、併用療法で処置したイヌで有意に大きかった。
【００６０】
中程度の心不全のイヌについて実施したこの研究の結果は、ラノラジンを用いた単剤療法がＬＶ機能の保存およびＬＶリモデリングの弱化により証明されるように、心不全の進行を妨げる。ＡＣＥインヒビターまたはβ遮断薬と併用した場合、ラノラジンは、ＬＶの大きさの低減、ならびに筋細胞肥大、間質性線維形成、毛細血管密度および酸素拡散距離の改善によって証明されるように、ＬＶ収縮期および拡張期の機能を明らかに改善し、全体的および細胞レベルのＬＶリモデリングの逆転を誘発する。これらの結果は、慢性心不全の処置のための補助療法としてのラノラジンの使用を支持している。
（表１：いずれの微小塞栓形成よりも前に実施されたベースラインにおける血行動態測定）
【００６１】
【表１】
ＬＶ＝左室；ＲＡＮ＝ラノラジン；ＥＮＡ＝エナラプリル；ＭＥＴ＝メトプロロール
（表２：いずれの微小塞栓形成よりも前に実施されたベースライン血管造影測定）
【００６２】
【表２】
ＬＶ＝左室；ＲＡＮ＝ラノラジン；ＥＮＡ＝エナラプリル；ＭＥＴ＝メトプロロール
（表３：いずれの微小塞栓形成よりも前に実施されたベースラインにおける心エコーおよびドップラー測定）
【００６３】
【表３】
ＬＶ＝左室；ＲＡＮ＝ラノラジン；ＥＮＡ＝エナラプリル；ＭＥＴ＝メトプロロール；ＥＤＷＳ＝拡張終期の円周方向壁応力
（表４：いずれの微小塞栓形成よりも前に実施されたベースラインにおける神経ホルモンおよび電解質測定）
【００６４】
【表４】
ＬＶ＝左室；ＲＡＮ＝ラノラジン；ＥＮＡ＝エナラプリル；ＭＥＴ＝メトプロロール；ＡＮＦ＝心房性ナトリウム利尿因子；ＰＮＥ＝血漿ノルエピネフリン
（表５：無作為抽出時（ＰＲＥ）および治療の３ヵ月後（ＰＯＳＴ）における血行動態測定）
【００６５】
【表５】
ＲＡＮ＝ラノラジン；ＥＮＡ＝エナラプリル；ＭＥＴ＝メトプロロール；ＨＲ＝心拍数（拍数／分）；ｍＡｏＰ＝平均大動脈血圧（ｍｍＨｇ）；ＬＶＥＤＰ＝ＬＶ拡張終期血圧（ｍｍＨｇ）；＋ｄＰ／ｄｔ＝ピークＬＶ＋ｄＰ／ｄｔ（ｍｍＨｇ／秒）；−ｄＰ／ｄｔ＝ピークＬＶ−ｄＰ／ｄｔ（ｍｍＨｇ／秒）；＊＝ｐ＜０．０５
（表６：無作為抽出時（ＰＲＥ）および治療の３ヵ月後（ＰＯＳＴ）における血管造影測定）
【００６６】
【表６】
ＲＡＮ＝ラノラジン；ＥＮＡ＝エナラプリル；ＭＥＴ＝メトプロロール；ＥＤＶ＝ＬＶ拡張終期容積（ｍｌ）；ＥＳＶ＝ＬＶ収縮終期容積（ｍｌ）；ＥＦ＝ＬＶ駆出率（％）；ＳＶ＝拍出量（ｍｌ）；ＣＯ＝心拍出量（Ｌ／分）；ＣＩ＝心係数（Ｌ／分／ｍ２）；＊＝ｐ＜０．０５
（表７：無作為抽出時（ＰＲＥ）および治療の３ヵ月後（ＰＯＳＴ）における心エコーおよびドップラー測定）
【００６７】
【表７】
ＲＡＮ＝ラノラジン；ＥＮＡ＝エナラプリル；ＭＥＴ＝メトプロロール；ＦＡＳ＝ＬＶ断面積の短縮（％）；ＭＲ＝僧帽弁逆流の重篤度（％）；ＤＴ＝減速時間（ｍ秒）；ＥＤＷＳ＝ＬＶ拡張終期の円周方向壁応力（ｇｍ−ｃｍ２）；＊＝ｐ＜０．０５
（表８：無作為抽出時（ＰＲＥ）および治療の３ヵ月後（ＰＯＳＴ）における神経ホルモンおよび電解質測定）
【００６８】
【表８】
ＲＡＮ＝ラノラジン；ＥＮＡ＝エナラプリル；ＭＥＴ＝メトプロロール；Ｃｒｅａｔ＝血清クレアチニン（ｍｇ／ｄＬ）；ＢＵＮ＝血中尿素窒素（ｍｇ／ｄＬ）；ＰＮＥ＝血漿ノルエピネフリン（ｐｇ／ｍｌ）；ＰＲＡ＝血漿レニン活性（ｎｇ／ｍｌ／時間）；ＡＮＦ＝心房性ナトリウム利尿因子（ｐｇ／ｍｌ）；Ｔ−ＰＮＥ＝経心筋ノルエピネフリン
（処置効果の表）
（表９：４つの研究群の間の血行動態測定における処置前から処置後の変化（△）の比較（処置効果））
【００６９】
【表９】
ＲＡＮ＝ラノラジン；ＥＮＡ＝エナラプリル；ＭＥＴ＝メトプロロール；ＨＲ＝心拍数（拍数／分）；ｍＡｏＰ＝平均大動脈血圧（ｍｍＨｇ）；ＬＶＥＤＰ＝ＬＶ拡張終期血圧（ｍｍＨｇ）；＋ｄＰ／ｄｔ＝ピークＬＶ＋ｄＰ／ｄｔ（ｍｍＨｇ／秒）；−ｄＰ／ｄｔ＝ピークＬＶ−ｄＰ／ｄｔ（ｍｍＨｇ／秒）；＊＝ｐ＜０．０５対プラセボ
（表１０：４つの研究群の間の血管造影測定における処置前から処置後の変化（△）の比較（処置効果））
【００７０】
【表１０】
ＲＡＮ＝ラノラジン；ＥＮＡ＝エナラプリル；ＭＥＴ＝メトプロロール；ＥＤＶ＝ＬＶ拡張終期容積（ｍｌ）；ＥＳＶ＝ＬＶ収縮終期容積（ｍｌ）；ＥＦ＝ＬＶ駆出率（％）；ＳＶ＝拍出量（ｍｌ）；ＣＯ＝心拍出量（Ｌ／分）；ＣＩ＝心係数（Ｌ／分／ｍ２）；＊＝ｐ＜０．０５対プラセボ；†＝ｐ＜０．０５対ＲＡＮのみ
（表１１：４つの研究群の間の心エコーおよびドップラー測定における処置前から処置後の変化（△）の比較（処置効果））
【００７１】
【表１１】
ＲＡＮ＝ラノラジン；ＥＮＡ＝エナラプリル；ＭＥＴ＝メトプロロール；ＦＡＳ＝ＬＶ断面積の短縮（％）；ＭＲ＝僧帽弁逆流の重篤度（％）；ＤＴ＝減速時間（ｍ秒）；ＥＤＷＳ＝ＬＶ拡張終期の円周方向壁応力（ｇｍ−ｃｍ２）；＊＝ｐ＜０．０５対プラセボ
（表１２：４つの研究群の間の神経ホルモンおよび電解質測定における処置前から処置後の変化（△）の比較（処置効果））
【００７２】
【表１２】
ＲＡＮ＝ラノラジン；ＥＮＡ＝エナラプリル；ＭＥＴ＝メトプロロール；Ｃｒｅａｔ＝血清クレアチニン（ｍｇ／ｄＬ）；ＢＵＮ＝血中尿素窒素（ｍｇ／ｄＬ）；ＰＮＥ＝血漿ノルエピネフリン（ｐｇ／ｍｌ）；ＰＲＡ＝血漿レニン活性（ｎｇ／ｍｌ／時間）；ＡＮＦ＝心房性ナトリウム利尿因子（ｐｇ／ｍｌ）；Ｔ−ＰＮＥ＝経心筋ノルエピネフリン
（表１３：組織形態計測学的測定）
【００７３】
【表１３】
ＲＡＮ＝ラノラジン；ＥＮＡ＝エナラプリル；ＭＥＴ＝メトプロロール；ＭＣＳＡ＝筋細胞断面積；ＶＦＲＦ＝置換性線維形成の容積分率；ＶＦＩＦ＝間質性線維形成の容積分率；ＣＤ＝毛細血管密度；ＯＤＤ＝酸素拡散距離；＊＝ｐ＜０．０５対正常；†＝ｐ＜０．０５対プラセボ；‡＝ｐ＜０．０５対ＲＡＮのみ。
【００７４】
（実施例２）
ＡＣＥインヒビターのエナラプリルおよびβ遮断薬のメトプロロールがＬＶ逆リモデリングにもたらす効果についての過去のデータを、実施例１においてラノラジンのみ、ラノラジンおよびエナラプリル、ならびにラノラジンおよび酒石酸メトプロロールについて得られたデータと比較した。エナラプリルおよびメトプロロールのデータは、Ｓａｂｂａｈ ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｃｉｒｃ．８９：２８５２−２８５９から引用した。比較結果を、図１および図２にグラフで示した。
【００７５】
図１は、いかに、ラノラジンも、エナラプリルも、メトプロロールも、いずれも独立してＬＶ拡張終期の容積を減少させ得なかったが、ラノラジンとエナラプリルとの併用投与、ならびにラノラジンとメトプロロールとの併用投与が、ＬＶ拡張終期の容積を減少させ得たか、すなわちＬＶリモデリングを逆転させ得たかということを図示している。
【００７６】
図２は、いかに、ラノラジンも、エナラプリルも、メトプロロールも、いずれも独立してＬＶ収縮期容積を減少させ得ないようである、ラノラジンとエナラプリルとの併用投与、ならびにラノラジンとメトプロロールとの併用投与が、ＬＶ拡張終期の容積を減少させ得るか、すなわちＬＶリモデリングを逆転させ得るかということを図示している。
【図面の簡単な説明】
【００７７】
【図１】図１は、ラノラジンと、ラノラジンおよびエナラプリルと、ラノラジンおよび酒石酸メトプロロールとの、拡張終期の容積に関する比較研究の結果をグラフにより示している。エナラプリルおよび酒石酸メトプロロールに関する過去のデータもまた示されている。
【図２】図２は、ラノラジンと、ラノラジンおよびエナラプリルと、ラノラジンおよび酒石酸メトプロロールとの、拡張終期の容積に関する比較研究の結果をグラフにより示している。エナラプリルおよび酒石酸メトプロロールに関する過去のデータもまた示されている。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
好ましくない左室リモデリングを逆転するための方法であって、治療有効量のラノラジンおよび少なくとも１種の治療有効量の併用リモデリング物質を、それらを必要とする哺乳動物に投与する工程を包含する、方法。
【請求項２】
請求項１に記載の方法であって、前記併用リモデリング物質が、ＡＣＥインヒビター、ＡＲＢ、またはβ遮断薬を含む、方法。
【請求項３】
請求項２に記載の方法であって、前記併用リモデリング物質が、ＡＣＥインヒビターを含む、方法。
【請求項４】
請求項３に記載の方法であって、前記ＡＣＥインヒビターが、ベナゼプリル、カプトプリル、シラザプリル、エナラプリル、フォシノプリル、イミダプリル、リシノプリル、ペリンドプリル、キナプリル、ラミプリル、テモカプリル、およびトランドラプリルからなる群から選択される、方法。
【請求項５】
請求項２に記載の方法であって、前記併用リモデリング物質が、ＡＲＢを含む、方法。
【請求項６】
請求項５に記載の方法であって、前記ＡＲＢが、カンデサルタン、シレキセチル、エプロサルタン、イルベサルタン、ロサルタン、オルメサルタン、メドキソミル、テルミサルタン、バルサルタン、ゾラサルタン、およびタソサルタンからなる群から選択される、方法。
【請求項７】
請求項２に記載の方法であって、前記併用リモデリング物質が、β遮断薬を含む、方法。
【請求項８】
請求項７に記載の方法であって、前記β遮断薬が、アセブトロール、アテノロール、ベタキソロール、ビソプロロール、カルテオロール、ラベタロール、メトプロロール、ナドロール、オクスプレノロール、ペンブトロール、ピンドロール、プロプラノロール、ソタロール、チモロール、エスモロール、ソタロール、カルベジロール、メドロキサロール、ブシンドロール、レボブノロール、メチプラノロール、セリプロロール、およびプロパフェノンからなる群から選択される、方法。
【請求項９】
請求項２に記載の方法であって、前記左室リモデリングが、鬱血性心不全（ＣＨＦ）および／または慢性心不全の結果である、方法。
【請求項１０】
請求項１に記載の方法であって、前記ラノラジンと前記併用リモデリング物質とが、別個の投薬形態として投与される、方法。
【請求項１１】
請求項１に記載の方法であって、前記ラノラジンと前記併用リモデリング物質とが、単一の投薬形態として投与される、方法。
【請求項１２】
治療有効量のラノラジン、少なくとも１種の治療有効量の併用リモデリング物質、および少なくとも１種の薬学的に受容可能なキャリアを含む、薬学的処方物。
【請求項１３】
請求項１２に記載の処方物であって、前記併用リモデリング物質が、ＡＣＥインヒビター、ＡＲＢ、またはβ遮断薬を含む、処方物。
【請求項１４】
請求項１３に記載の処方物であって、前記併用リモデリング物質が、ＡＣＥインヒビターを含む、処方物。
【請求項１５】
請求項１４に記載の処方物であって、前記ＡＣＥインヒビターが、ベナゼプリル、カプトプリル、シラザプリル、エナラプリル、フォシノプリル、イミダプリル、リシノプリル、ペリンドプリル、キナプリル、ラミプリル、テモカプリル、およびトランドラプリルからなる群から選択される、処方物。
【請求項１６】
請求項１３に記載の処方物であって、前記併用リモデリング物質が、ＡＲＢを含む、処方物。
【請求項１７】
請求項１６に記載の処方物であって、前記ＡＲＢが、カンデサルタン、シレキセチル、エプロサルタン、イルベサルタン、ロサルタン、オルメサルタン、メドキソミル、テルミサルタン、バルサルタン、ゾラサルタン、およびタソサルタンからなる群から選択される、処方物。
【請求項１８】
請求項１３に記載の処方物であって、前記併用リモデリング物質が、β遮断薬を含む、処方物。
【請求項１９】
請求項１８に記載の処方物であって、前記β遮断薬が、アセブトロール、アテノロール、ベタキソロール、ビソプロロール、カルテオロール、ラベタロール、メトプロロール、ナドロール、オクスプレノロール、ペンブトロール、ピンドロール、プロプラノロール、ソタロール、チモロール、エスモロール、ソタロール、カルベジロール、メドロキサロール、ブシンドロール、レボブノロール、メチプラノロール、セリプロロール、およびプロパフェノンからなる群から選択される、処方物。
【請求項２０】
心不全を処置するための方法であって、治療有効量のラノラジン、および少なくとも１種の治療有効量の併用リモデリング物質を、それらを必要とする哺乳動物に投与する工程を包含する、方法。
【請求項２１】
請求項２０に記載の方法であって、前記併用リモデリング物質が、ＡＣＥインヒビター、ＡＲＢ、またはβ遮断薬を含む、方法。
【請求項２２】
請求項２１に記載の方法であって、前記併用リモデリング物質が、ＡＣＥインヒビターを含む、方法。
【請求項２３】
請求項２２に記載の方法であって、前記ＡＣＥインヒビターが、ベナゼプリル、カプトプリル、シラザプリル、エナラプリル、フォシノプリル、イミダプリル、リシノプリル、ペリンドプリル、キナプリル、ラミプリル、テモカプリル、およびトランドラプリルからなる群から選択される、方法。
【請求項２４】
請求項２１に記載の方法であって、前記併用リモデリング物質が、ＡＲＢを含む、方法。
【請求項２５】
請求項２４に記載の方法であって、前記ＡＲＢが、カンデサルタン、シレキセチル、エプロサルタン、イルベサルタン、ロサルタン、オルメサルタン、メドキソミル、テルミサルタン、バルサルタン、ゾラサルタン、およびタソサルタンからなる群から選択される、方法。
【請求項２６】
請求項２１に記載の方法であって、前記併用リモデリング物質が、β遮断薬を含む、方法。
【請求項２７】
請求項２６に記載の方法であって、前記β遮断薬が、アセブトロール、アテノロール、ベタキソロール、ビソプロロール、カルテオロール、ラベタロール、メトプロロール、ナドロール、オクスプレノロール、ペンブトロール、ピンドロール、プロプラノロール、ソタロール、チモロール、エスモロール、ソタロール、カルベジロール、メドロキサロール、ブシンドロール、レボブノロール、メチプラノロール、セリプロロール、およびプロパフェノンからなる群から選択される、方法。
【請求項２８】
請求項２１に記載の方法であって、前記心不全が、鬱血性心不全（ＣＨＦ）または慢性心不全である、方法。
【請求項２９】
請求項２０に記載の方法であって、前記ラノラジンと前記併用リモデリング物質とが、別個の投薬形態として投与される、方法。
【請求項３０】
請求項２０に記載の方法であって、前記ラノラジンと前記併用リモデリング物質とが、単一の投薬形態として投与される、方法。
【請求項１】
好ましくない左室リモデリングを逆転するための方法であって、治療有効量のラノラジンおよび少なくとも１種の治療有効量の併用リモデリング物質を、それらを必要とする哺乳動物に投与する工程を包含する、方法。
【請求項２】
請求項１に記載の方法であって、前記併用リモデリング物質が、ＡＣＥインヒビター、ＡＲＢ、またはβ遮断薬を含む、方法。
【請求項３】
請求項２に記載の方法であって、前記併用リモデリング物質が、ＡＣＥインヒビターを含む、方法。
【請求項４】
請求項３に記載の方法であって、前記ＡＣＥインヒビターが、ベナゼプリル、カプトプリル、シラザプリル、エナラプリル、フォシノプリル、イミダプリル、リシノプリル、ペリンドプリル、キナプリル、ラミプリル、テモカプリル、およびトランドラプリルからなる群から選択される、方法。
【請求項５】
請求項２に記載の方法であって、前記併用リモデリング物質が、ＡＲＢを含む、方法。
【請求項６】
請求項５に記載の方法であって、前記ＡＲＢが、カンデサルタン、シレキセチル、エプロサルタン、イルベサルタン、ロサルタン、オルメサルタン、メドキソミル、テルミサルタン、バルサルタン、ゾラサルタン、およびタソサルタンからなる群から選択される、方法。
【請求項７】
請求項２に記載の方法であって、前記併用リモデリング物質が、β遮断薬を含む、方法。
【請求項８】
請求項７に記載の方法であって、前記β遮断薬が、アセブトロール、アテノロール、ベタキソロール、ビソプロロール、カルテオロール、ラベタロール、メトプロロール、ナドロール、オクスプレノロール、ペンブトロール、ピンドロール、プロプラノロール、ソタロール、チモロール、エスモロール、ソタロール、カルベジロール、メドロキサロール、ブシンドロール、レボブノロール、メチプラノロール、セリプロロール、およびプロパフェノンからなる群から選択される、方法。
【請求項９】
請求項２に記載の方法であって、前記左室リモデリングが、鬱血性心不全（ＣＨＦ）および／または慢性心不全の結果である、方法。
【請求項１０】
請求項１に記載の方法であって、前記ラノラジンと前記併用リモデリング物質とが、別個の投薬形態として投与される、方法。
【請求項１１】
請求項１に記載の方法であって、前記ラノラジンと前記併用リモデリング物質とが、単一の投薬形態として投与される、方法。
【請求項１２】
治療有効量のラノラジン、少なくとも１種の治療有効量の併用リモデリング物質、および少なくとも１種の薬学的に受容可能なキャリアを含む、薬学的処方物。
【請求項１３】
請求項１２に記載の処方物であって、前記併用リモデリング物質が、ＡＣＥインヒビター、ＡＲＢ、またはβ遮断薬を含む、処方物。
【請求項１４】
請求項１３に記載の処方物であって、前記併用リモデリング物質が、ＡＣＥインヒビターを含む、処方物。
【請求項１５】
請求項１４に記載の処方物であって、前記ＡＣＥインヒビターが、ベナゼプリル、カプトプリル、シラザプリル、エナラプリル、フォシノプリル、イミダプリル、リシノプリル、ペリンドプリル、キナプリル、ラミプリル、テモカプリル、およびトランドラプリルからなる群から選択される、処方物。
【請求項１６】
請求項１３に記載の処方物であって、前記併用リモデリング物質が、ＡＲＢを含む、処方物。
【請求項１７】
請求項１６に記載の処方物であって、前記ＡＲＢが、カンデサルタン、シレキセチル、エプロサルタン、イルベサルタン、ロサルタン、オルメサルタン、メドキソミル、テルミサルタン、バルサルタン、ゾラサルタン、およびタソサルタンからなる群から選択される、処方物。
【請求項１８】
請求項１３に記載の処方物であって、前記併用リモデリング物質が、β遮断薬を含む、処方物。
【請求項１９】
請求項１８に記載の処方物であって、前記β遮断薬が、アセブトロール、アテノロール、ベタキソロール、ビソプロロール、カルテオロール、ラベタロール、メトプロロール、ナドロール、オクスプレノロール、ペンブトロール、ピンドロール、プロプラノロール、ソタロール、チモロール、エスモロール、ソタロール、カルベジロール、メドロキサロール、ブシンドロール、レボブノロール、メチプラノロール、セリプロロール、およびプロパフェノンからなる群から選択される、処方物。
【請求項２０】
心不全を処置するための方法であって、治療有効量のラノラジン、および少なくとも１種の治療有効量の併用リモデリング物質を、それらを必要とする哺乳動物に投与する工程を包含する、方法。
【請求項２１】
請求項２０に記載の方法であって、前記併用リモデリング物質が、ＡＣＥインヒビター、ＡＲＢ、またはβ遮断薬を含む、方法。
【請求項２２】
請求項２１に記載の方法であって、前記併用リモデリング物質が、ＡＣＥインヒビターを含む、方法。
【請求項２３】
請求項２２に記載の方法であって、前記ＡＣＥインヒビターが、ベナゼプリル、カプトプリル、シラザプリル、エナラプリル、フォシノプリル、イミダプリル、リシノプリル、ペリンドプリル、キナプリル、ラミプリル、テモカプリル、およびトランドラプリルからなる群から選択される、方法。
【請求項２４】
請求項２１に記載の方法であって、前記併用リモデリング物質が、ＡＲＢを含む、方法。
【請求項２５】
請求項２４に記載の方法であって、前記ＡＲＢが、カンデサルタン、シレキセチル、エプロサルタン、イルベサルタン、ロサルタン、オルメサルタン、メドキソミル、テルミサルタン、バルサルタン、ゾラサルタン、およびタソサルタンからなる群から選択される、方法。
【請求項２６】
請求項２１に記載の方法であって、前記併用リモデリング物質が、β遮断薬を含む、方法。
【請求項２７】
請求項２６に記載の方法であって、前記β遮断薬が、アセブトロール、アテノロール、ベタキソロール、ビソプロロール、カルテオロール、ラベタロール、メトプロロール、ナドロール、オクスプレノロール、ペンブトロール、ピンドロール、プロプラノロール、ソタロール、チモロール、エスモロール、ソタロール、カルベジロール、メドロキサロール、ブシンドロール、レボブノロール、メチプラノロール、セリプロロール、およびプロパフェノンからなる群から選択される、方法。
【請求項２８】
請求項２１に記載の方法であって、前記心不全が、鬱血性心不全（ＣＨＦ）または慢性心不全である、方法。
【請求項２９】
請求項２０に記載の方法であって、前記ラノラジンと前記併用リモデリング物質とが、別個の投薬形態として投与される、方法。
【請求項３０】
請求項２０に記載の方法であって、前記ラノラジンと前記併用リモデリング物質とが、単一の投薬形態として投与される、方法。
【図１】
【図２】
【図２】
【公表番号】特表２００８−５１９７７０（Ｐ２００８−５１９７７０Ａ）
【公表日】平成２０年６月１２日（２００８．６．１２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−５４０４１６（Ｐ２００７−５４０４１６）
【出願日】平成１７年１１月９日（２００５．１１．９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０４０８２４
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０５３１６１
【国際公開日】平成１８年５月１８日（２００６．５．１８）
【出願人】（５０４００３２２６）シーブイ・セラピューティクス・インコーポレイテッド (62)
【氏名又は名称原語表記】ＣＶ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ， Ｉｎｃ．
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２０年６月１２日（２００８．６．１２）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年１１月９日（２００５．１１．９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０４０８２４
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０５３１６１
【国際公開日】平成１８年５月１８日（２００６．５．１８）
【出願人】（５０４００３２２６）シーブイ・セラピューティクス・インコーポレイテッド (62)
【氏名又は名称原語表記】ＣＶ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ， Ｉｎｃ．
【Ｆターム（参考）】
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