感覚改善剤
【課題】日常的な経口摂取、あるいは皮膚への直接塗布により、末梢での感覚の鈍化を改善する効果を示す感覚改善剤を提供することを課題とする。
【解決手段】スフィンゴシンを有するリン脂質及び／又はその誘導体、特にスフィンゴミエリンを感覚改善剤の有効成分とする。また、スフィンゴシンを有するリン脂質及び／又はその誘導体、特にスフィンゴミエリンを感覚改善用飲食品又は飼料の有効成分として配合する。本発明により、経口摂取、あるいは皮膚への直接塗布により、末梢での感覚の鈍化を改善効果示す感覚改善剤、感覚改善用飲食品又は飼料、化粧品を提供することができる。また、本発明の有効成分であるスフィンゴシンを有するリン脂質及び／又はその誘導体、特にスフィンゴミエリンは、食品由来成分であることから安全性が高く、日常的な経口摂取が可能である。
【解決手段】スフィンゴシンを有するリン脂質及び／又はその誘導体、特にスフィンゴミエリンを感覚改善剤の有効成分とする。また、スフィンゴシンを有するリン脂質及び／又はその誘導体、特にスフィンゴミエリンを感覚改善用飲食品又は飼料の有効成分として配合する。本発明により、経口摂取、あるいは皮膚への直接塗布により、末梢での感覚の鈍化を改善効果示す感覚改善剤、感覚改善用飲食品又は飼料、化粧品を提供することができる。また、本発明の有効成分であるスフィンゴシンを有するリン脂質及び／又はその誘導体、特にスフィンゴミエリンは、食品由来成分であることから安全性が高く、日常的な経口摂取が可能である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、スフィンゴシンを有するリン脂質及び／又はその誘導体を有効成分とする、末梢の感覚の鈍化を改善する効果を有する感覚改善剤、及びこの感覚改善剤を配合した感覚改善用飲食品又は飼料、化粧品に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、高齢化にともない、骨粗しょう症や認知症等、加齢による疾患の増加が社会的問題となっている。そのため、このような加齢にともなう疾患を予防または改善するために、様々な医薬品が開発されている。しかしながら、医薬品は常に副作用を考慮に入れる必要があることから、近年では、食生活の見直しや、特定の食品成分の摂取によって、加齢にともなう疾患を予防または改善しようとする試みがなされている。例えば、骨粗しょう症に対しては、牛乳に含まれる塩基性タンパク質の摂取により、当該疾患を予防または改善することが知られている（特許文献1）。また、牛乳中に比較的多く含まれるリン脂質であるスフィンゴミエリンを有効成分とするアルツハイマー型記憶障害を予防あるいは改善する記憶障害予防治療剤が知られている（特許文献2）。
【０００３】
加齢に伴う症状の一つとして、末梢での感覚の鈍化が挙げられるが、この末梢での感覚の鈍化は、加齢だけでなく、糖尿病等の疾患によっても生じる。末梢での感覚の鈍化は、例えば、熱いものに触れたときに、正しく熱いと感じることができず、火傷等の危険性が高まることや、痛覚の鈍化により怪我の発見が遅れるといった問題を生じさせる。近年、こういった危険性を回避するため、加齢や疾患による末梢での感覚の鈍化を改善させる研究が進められている。例えば、外因性のセラミドや内因性のセラミドの生合成を増加させる効果のある酵素であるスフィンゴミエリナーゼやホスファチジルコリン特異的ホスホリパーゼCは、株化繊維芽細胞3T3細胞を介した神経モデル細胞であるP-12細胞の分化を促進することが報告されている（非特許文献1）。神経モデル細胞の分化促進は、末梢での感覚鈍化の改善効果を示唆するものである。しかし、上述のセラミドや酵素は食品成分ではないことから、その使用に際しては安全性を検討する必要がある。また、上述の実験は皮膚に直接塗布した場合の結果であることから、経口摂取した場合の効果については不明である。このような状況の下、より安全で、日常的な摂取あるいは皮膚への塗布によって、末梢での感覚の鈍化を改善する効果のある剤が求められている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、安全で、日常的に摂取あるいは皮膚への塗布により、末梢での感覚の鈍化を改善する効果を示す感覚改善剤を提供することを課題とする。また、本発明は、経口摂取や皮膚への塗布により末梢での感覚の鈍化を改善する効果を示す感覚改善用飲食品又は飼料、化粧品を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは、これらの問題点を鑑み、安全で、感覚の鈍化に対して優れた改善効果を示す成分について鋭意探索を進めたところ、スフィンゴシンを有するリン脂質及び／又はその誘導体、特にスフィンゴミエリンを経口摂取、あるいは皮膚に直接塗布することにより、感覚、特に末梢での感覚の鈍化を改善できることを見出した。そこで、このスフィンゴシンを有するリン脂質及び／又はその誘導体、特にスフィンゴミエリンを有効成分として使用した感覚改善剤を完成させるに至った。また、これらの感覚改善剤を飲食品や飼料、化粧品に配合して感覚改善用飲食品又は飼料、化粧品とすることができることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００６】
乳中においてスフィンゴミエリンは、リン脂質中の２０〜３０重量％と多く含まれているにも関わらず、その機能についての研究は細胞レベルにとどまっており、生体における生理学的機能についての知見は少ない。そのため、これまで栄養素の一成分としての有効性は認識されていなかった。スフィンゴミエリンの利用に関しては、消炎鎮痛外用剤、脂質の消化吸収機能改善剤、腸管運動機能不全性疾患治療剤（特許文献３〜５）などが知られているが、末梢での感覚の鈍化を予防・改善する効果についてはなんら明らかにされていない。
【特許文献１】特開平８-１５１３３１号公報
【特許文献２】特開２００３−１４６８８３号公報
【特許文献３】特開平５−１８６３３０号公報
【特許文献４】特開平１１−２６９０７４号公報
【特許文献５】特開２００３−２５２７６５号公報
【非特許文献１】コスメトロジー研究報告 (２００２) 第１０号；中畑則道、大久保聡子：皮膚保護作用を有するセラミドの生理作用発現機構に関する研究
【発明の効果】
【０００７】
本発明により、スフィンゴシンを有するリン脂質及び／又はその誘導体、特にスフィンゴミエリンを有効成分とする感覚改善剤や、これらの感覚改善剤を配合した感覚改善用飲食品又は飼料、化粧品を提供することができる。本発明の感覚改善剤は、有効成分が食品由来成分のため安全であり、末梢での感覚の鈍化を改善する効果を示す。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
本発明の感覚改善剤はスフィンゴシンを有するリン脂質及び／又はその誘導体、特にスフィンゴミエリンを有効成分とする。スフィンゴシンを有するリン脂質及び／又はその誘導体、特にスフィンゴミエリンは精製したものを用いてもよいし、スフィンゴミエリン含有組成物として用いてもよい。スフィンゴミエリンは動物脳や乳脂肪に多く含まれるが、本発明の実施上、乳由来であることが望ましい。乳由来スフィンゴミエリンとしては、生乳やホエータンパク質濃縮物（ＷＰＣ）などを原料として調製することができる。生乳やＷＰＣなどからスフィンゴミエリン含有組成物を得る方法としては、エーテルやアセトンで抽出する方法、バターを加温融解して得られるバターカードやバターセーラムを含む水溶性画分を用いる方法等、公知の方法を例示することができる。さらに、得られたスフィンゴミエリン含有組成物を透析、硫安分画、ゲル濾過、等電点沈殿、イオン交換クロマトグラフィー、溶媒分画、限外濾過（ＵＦ）、精密濾過（ＭＦ）などの手法により精製することでスフィンゴミエリンの純度を高めることができる。これらのスフィンゴミエリンやスフィンゴミエリン含有組成物は、液体、粉末や錠剤等の形態を適宜とることができ、直接、経口投与することができる。
【０００９】
本発明の感覚改善剤の有効量としては、後述するヒト試験の結果から、通常、成人一人一日あたり、スフィンゴシンを有するリン脂質及び／又はその誘導体、特にスフィンゴミエリンを４ｍｇ以上、好ましくは８ｍｇ以上摂取することにより感覚、特に、末梢での感覚の鈍化の改善が期待できるので、この必要量を確保できるようにすればよい。また、皮膚へ塗布する場合には、特に制限はないが、スフィンゴシンを有するリン脂質及び／又はその誘導体、特にスフィンゴミエリンを、塗布剤中に0.001〜30 重量％、好ましくは0.1〜10 重量％含有させると良い。
【００１０】
本発明の感覚改善用飲食品としては、通常の飲食品、例えばヨーグルト、乳飲料、ウエハース、デザート等に、スフィンゴシンを有するリン脂質及び／又はその誘導体、特にスフィンゴミエリンを有効成分とする感覚改善剤を配合すればよい。これらの感覚改善用飲食品については、成人一人一日あたり、スフィンゴシンを有するリン脂質及び／又はその誘導体、特にスフィンゴミエリンを４ｍｇ以上摂取させるために、飲食品の形態にもよるが飲食品１００ｇあたりスフィンゴシンを有するリン脂質及び／又はその誘導体、特にスフィンゴミエリンを０.５〜２０００ｍｇ配合することが好ましい。また、本発明の感覚改善用飼料は、通常の飼料、例えば家畜用飼料やペットフード等にスフィンゴシンを有するリン脂質及び／又はその誘導体、特にスフィンゴミエリンを配合すればよい。これらの飼料については、一日あたり、スフィンゴシンを有するリン脂質及び／又はその誘導体、特にスフィンゴミエリンを２ｍｇ以上摂取させるために、飼料１００ｇあたりスフィンゴシンを有するリン脂質及び／又はその誘導体、特にスフィンゴミエリンを０.５〜２０００ｍｇ配合することが好ましい。
【００１１】
本発明では、スフィンゴシンを有するリン脂質及び／又はその誘導体、特にスフィンゴミエリンを配合する方法に特に制限はないが、例えば、溶液中で添加、配合するには、スフィンゴシンを有するリン脂質及び／又はその誘導体、特にスフィンゴミエリンを脱イオン水に懸濁あるいは溶解し、撹拌混合した後、医薬品、飲食品や飼料の形態に調製して使用する。撹拌混合の条件としては、スフィンゴシンを有するリン脂質及び／又はその誘導体、特にスフィンゴミエリンが均一に混合されればよく、ウルトラディスパーサーやTKホモミクサー等を使用して撹拌混合することも可能である。また、このスフィンゴシンを有するリン脂質及び／又はその誘導体、特にスフィンゴミエリンの溶液は、医薬品、飲食品や飼料に使用しやすいように、必要に応じて、ＲＯ膜等での濃縮や、凍結乾燥して使用することができる。本発明では、医薬品、飲食品や飼料の製造に通常使用される殺菌処理が可能であり、粉末状であっては乾熱殺菌も可能である。従って、本発明のスフィンゴシンを有するリン脂質及び／又はその誘導体、特にスフィンゴミエリンを含有する液状、ゲル状、粉末状、顆粒状等様々な形態の医薬品、飲食品や飼料を製造することができる。
【００１２】
以下に、実施例及び試験例を示し、本発明についてより詳細に説明するが、これらは単に例示するのみであり、本発明はこれらによって何ら限定されるものではない。
【実施例１】
【００１３】
ホエータンパク質濃縮物（ＷＰＣ）の１０％水溶液にプロテアーゼを作用させて得られた反応液をクロロホルム-メタノール（２：１）溶液で抽出した後、濃縮し、さらにアセトン抽出してリン脂質画分を得た。得られたリン脂質画分をシリカゲルクロマトグラフィーに供し、クロロホルム-メタノール溶液で段階抽出したものを凍結乾燥し、精製スフィンゴミエリンとした。精製標品を薄層クロマトグラフィーにより分画し、ディットマー試薬で発色した後、デンシトメーターを用いて定量した。その結果、スフィンゴミエリン含有率は９５．２％であった。このようにして得られたスフィンゴミエリンは、感覚改善剤としてそのまま利用可能である。
【実施例２】
【００１４】
スフィンゴミエリン含量２５％のスフィンゴミエリン素材（リン脂質７００、Ｆｏｎｔｅｒｒａ社）を、アセトン抽出してリン脂質画分を得た。得られたリン脂質画分をシリカゲルクロマトグラフィーに供し、ヘキサン-エタノール溶液で段階抽出したものを凍結乾燥し、精製スフィンゴミエリンとした。精製標品を薄層クロマトグラフィーにより分画し、ディットマー試薬で発色した後、デンシトメーターを用いて定量した。その結果、スフィンゴミエリン含有率は７８．２％であった。このようにして得られたスフィンゴミエリンは、感覚改善剤としてそのまま利用可能である。
【実施例３】
【００１５】
（感覚改善用化粧品（クリーム）の調製）
実施例２で得られたスフィンゴミエリンを使用し、表１に記載される割合で原料を混合し、感覚改善用化粧品（クリーム）を製造した。
【００１６】
【表１】
【００１７】
[試験例１］
(細胞実験)
皮膚に存在することが知られている繊維芽細胞の細胞株である３Ｔ３細胞を、実施例１のスフィンゴミエリンを２００μg/Lの濃度で添加した状態で、２日間培養した（Ａ群）。また、対照として、３Ｔ３細胞を、スフィンゴミエリンを添加しないで２日間培養した（Ｂ群）。それら培養上清を用いて神経のモデル細胞であるＰＣ−１２細胞を培養し、ＰＣ−１２細胞の形態的な分化を観察した。その結果、Ａ群の培養上清は、どちらもＰＣ−１２細胞を強く分化させた。また、この実験を数回繰り返し、分化の割合を光学顕微鏡下で観察した結果、Ａ群では９４％以上の細胞に分化が認められた。一方、Ｂ群の培養上清は、ＰＣ−１２細胞を分化させず、数回の繰り返し実験における光学顕微鏡下の観察において、まったく分化は認められなかった。このことから、実施例１のスフィンゴミエリンが、神経のモデル細胞であるＰＣ−１２細胞の分化を促進することがわかった。
【００１８】
[試験例2]
（経口摂取による感覚改善効果試験）
手の感覚の鈍化を感じている健康な高齢者（平均年齢７５±３歳）を１５名ずつ、３群に分けた。それぞれに実施例２のスフィンゴミエリンを０ｍｇ、４ｍｇ、８ｍｇになるよう１２週間摂取してもらった。摂取前と１２週間の摂取終了後に表在知覚計アルゲジオメーター(インタークロス(株)社製)を用い、上腕内側の痛覚を基準として手掌と足底土踏まずの痛覚を使用方法に基づき正常、低下I〜IIIの計４段階で測定した。また、１２週間の摂取終了後に、それぞれの高齢者に、手の感覚の改善についてアンケート調査を実施した。その結果を表２、３に示す。
（測定方法）
・ ５種類の太さの違うピンと５つの支点位置で痛覚を評価した。まず、最も細い1pinを上腕内側に転がし、正常な痛覚の度合いを被験者に確認した。
・ 次に、手掌と足底に1pinにてホルダを持つ支点の位置を順に変えて転がし、最初
に感じた痛覚と同程度の痛みを感じる支点の位置を探した。
（評価方法）
アルゲジオメーターは上腕内側で1pin(支点５０ｇ)を転がした場合と、手掌での2pin(５０ｇ)で同じ痛みを生じるように設計されており、使用方法に基づき、以下のように評価した。また、痛みの評価に点数をつけ、平均値を算出した。
2pin(５０ｇ)で同じ痛みであれば、正常 (0点)
1pin(５０ｇ)で同じ痛みであれば、低下I(1点)
1pin(６０ｇ)で同じ痛みであれば、低下II(2点)
1pin(７０ｇ)で同じ痛みであれば、低下III(3点)
【００１９】
【表２】
【００２０】
【表３】
【００２１】
表２、３に示したように、スフィンゴミエリンを４ｍｇ摂取することにより、手、足底の感覚が改善する傾向が認められ、８ｍｇでは改善した。このことから、通常、成人一人一日あたり、スフィンゴシンを有するリン脂質及び／又はその誘導体、特にスフィンゴミエリンを４ｍｇ以上、好ましくは８ｍｇ以上摂取することにより感覚、特に、抹消での感覚の鈍化の期待できることがわかった。
【００２２】
[試験例３]
（皮膚への塗布による感覚改善効果試験）
手の感覚の鈍化を感じている健康な高齢者（平均年齢７５±３歳）を１５名ずつ、Ａ群、Ｂ群の２群に分けた。Ａ群では実施例３と同様の方法で製造した、感覚改善剤を含まない化粧品（クリーム）を、Ｂ群では、実施例３の感覚改善用化粧品（クリーム）を１日１回手と足の全体へ塗布した。塗布期間は８週間とし、塗布前と８週間の塗布終了後に表在知覚計アルゲジオメーター(インタークロス(株)社製)を用い、上腕内側の痛覚を基準として手掌と足底土踏まずの痛覚を使用方法に基づき正常、低下I〜IIIの計４段階で測定した。また、８週間の塗布終了後に、被験者それぞれに、手の感覚の改善についてアンケート調査を実施した。その結果を表４、５に示す。なお、測定方法については試験例２と同様に行った。
【００２３】
【表４】
【００２４】
【表５】
【００２５】
表４、５に示したように、実施例３の感覚改善用化粧品（クリーム）を塗布することにより、手、足底の感覚が改善する傾向が認められた。このことから、本発明の感覚改善剤を含有するクリームを塗布することで、感覚、特に、末梢での感覚の鈍化を改善の期待できることがわかった。
【実施例４】
【００２６】
表６に示す配合で原料を混合後、常法により１ｇに成型、打錠して本発明の感覚改善剤を錠剤として製造した。この感覚改善剤１ｇ中には、スフィンゴミエリンが１０ｍｇ含まれていた。
【００２７】
【表６】
【実施例５】
【００２８】
スフィンゴミエリン含量２５％のスフィンゴミエリン素材（リン脂質７００、Ｆｏｎｔｅｒｒａ社）５０ｇを４９５０ｇの脱イオン水に溶解し、５０℃まで加熱後、ＴＫホモミクサー（ＴＫ ＲＯＢＯ ＭＩＣＳ；特殊機化工業社）にて、６０００ｒｐｍで３０分間撹拌混合してスフィンゴミエリン含量２５０ｍｇ／１００ｇのスフィンゴミエリン溶液（感覚改善剤）を得た。このスフィンゴミエリン溶液４．０ｋｇに、カゼイン５．０ｋｇ、大豆タンパク質５．０ｋｇ、魚油１．０ｋｇ、シソ油３．０ｋｇ、デキストリン１８．０ｋｇ、ミネラル混合物６．０ｋｇ、ビタミン混合物１．９５ｋｇ、乳化剤２．０ｋｇ、安定剤４．０ｋｇ、香料０．０５ｋｇを配合し、２００ｍｌのレトルトパウチに充填し、レトルト殺菌機（第１種圧力容器、ＴＹＰＥ：ＲＣＳ−４ＣＲＴＧＮ、日阪製作所社）で１２１℃、２０分間殺菌して、本発明の感覚改善用液状栄養組成物５０ｋｇを製造した。なお、この感覚改善用液状栄養組成物には、１００ｇあたり、スフィンゴミエリンが２０ｍｇ含まれていた。
【実施例６】
【００２９】
スフィンゴミエリン含量１０％のスフィンゴミエリン素材（リン脂質５００、Ｆｏｎｔｅｒｒａ社製）１０ｇを７００ｇの脱イオン水に溶解し、５０℃まで加熱後、ウルトラディスパーサー（ＵＬＴＲＡ−ＴＵＲＲＡＸ Ｔ−２５；ＩＫＡジャパン社）にて、９５００ｒｐｍで３０分間撹拌混合し、スフィンゴミエリンを有効成分とする感覚改善剤を得た。この感覚改善剤に、ソルビトール４０ｇ、酸味料２ｇ、香料２ｇ、ペクチン５ｇ、乳清タンパク質濃縮物５ｇ、乳酸カルシウム１ｇ、脱イオン水２３５ｇを添加して、撹拌混合した後、２００ｍｌのチアパックに充填し、８５℃、２０分間殺菌後、密栓し、本発明の感覚改善用ゲル状食品５袋（２００ｇ入り）を調製した。このようにして得られた感覚改善用ゲル状食品は、すべて沈殿等は認められず、風味に異常は感じられなかった。なお、この感覚改善用ゲル状食品には、１００ｇあたり、スフィンゴミエリンが１００ｍｇ含まれていた。
【実施例７】
【００３０】
酸味料２ｇを７００ｇの脱イオン水に溶解した後、スフィンゴミエリン含量２５％のスフィンゴミエリン素材（リン脂質７００、Ｆｏｎｔｅｒｒａ社製）１０ｇを溶解し、５０℃まで加熱後、ウルトラディスパーサー（ＵＬＴＲＡ−ＴＵＲＲＡＸ Ｔ−２５；ＩＫＡジャパン社）にて、９５００ｒｐｍで３０分間撹拌混合し、スフィンゴミエリンを有効成分とする感覚改善剤を得た。この感覚改善剤に、マルチトール１００ｇ、還元水飴２０ｇ、香料２ｇ、脱イオン水１６６ｇを添加した後、１００ｍｌのガラス瓶に充填し、９０℃、１５分間殺菌後、密栓し、感覚改善用飲料１０本（１００ｍｌ入り）を調製した。このようにして得られた感覚改善用飲料は、すべて沈殿は認められず、風味に異常は感じられなかった。なお、この感覚改善用飲料には、１００ｇあたり、スフィンゴミエリンが２５０ｍｇ含まれていた。
【実施例８】
【００３１】
スフィンゴミエリン含量４％のスフィンゴミエリン素材（ＳＭ−４、Ｃｏｒｍａｎ社）２ｋｇを９８ｋｇの脱イオン水に溶解し、５０℃まで加熱後、ＴＫホモミクサー（ＭＡＲＫII １６０型；特殊機化工業社）にて、３６００ｒｐｍで４０分間撹拌混合してスフィンゴミエリン含量８０ｍｇ／１００ｇの感覚改善剤を得た。この感覚改善剤１０ｋｇに大豆粕１２ｋｇ、脱脂粉乳１４ｋｇ、大豆油４ｋｇ、コーン油２ｋｇ、パーム油２３．２ｋｇ、トウモロコシ澱粉１４ｋｇ、小麦粉９ｋｇ、ふすま２ｋｇ、ビタミン混合物５ｋｇ、セルロース２．８ｋｇ、ミネラル混合物２ｋｇを配合し、１２０℃、４分間殺菌して、本発明の感覚改善用イヌ飼育飼料１００ｋｇを製造した。なお、この感覚改善用イヌ飼育飼料には、１００ｇあたり、スフィンゴミエリンが８ｍｇ含まれていた。
【実施例９】
【００３２】
（感覚改善用化粧品（ローション）の調製）
表５に記載される割合で原料を混合し、感覚改善用化粧品（ローション）を製造した。
【００３３】
【表７】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、スフィンゴシンを有するリン脂質及び／又はその誘導体を有効成分とする、末梢の感覚の鈍化を改善する効果を有する感覚改善剤、及びこの感覚改善剤を配合した感覚改善用飲食品又は飼料、化粧品に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、高齢化にともない、骨粗しょう症や認知症等、加齢による疾患の増加が社会的問題となっている。そのため、このような加齢にともなう疾患を予防または改善するために、様々な医薬品が開発されている。しかしながら、医薬品は常に副作用を考慮に入れる必要があることから、近年では、食生活の見直しや、特定の食品成分の摂取によって、加齢にともなう疾患を予防または改善しようとする試みがなされている。例えば、骨粗しょう症に対しては、牛乳に含まれる塩基性タンパク質の摂取により、当該疾患を予防または改善することが知られている（特許文献1）。また、牛乳中に比較的多く含まれるリン脂質であるスフィンゴミエリンを有効成分とするアルツハイマー型記憶障害を予防あるいは改善する記憶障害予防治療剤が知られている（特許文献2）。
【０００３】
加齢に伴う症状の一つとして、末梢での感覚の鈍化が挙げられるが、この末梢での感覚の鈍化は、加齢だけでなく、糖尿病等の疾患によっても生じる。末梢での感覚の鈍化は、例えば、熱いものに触れたときに、正しく熱いと感じることができず、火傷等の危険性が高まることや、痛覚の鈍化により怪我の発見が遅れるといった問題を生じさせる。近年、こういった危険性を回避するため、加齢や疾患による末梢での感覚の鈍化を改善させる研究が進められている。例えば、外因性のセラミドや内因性のセラミドの生合成を増加させる効果のある酵素であるスフィンゴミエリナーゼやホスファチジルコリン特異的ホスホリパーゼCは、株化繊維芽細胞3T3細胞を介した神経モデル細胞であるP-12細胞の分化を促進することが報告されている（非特許文献1）。神経モデル細胞の分化促進は、末梢での感覚鈍化の改善効果を示唆するものである。しかし、上述のセラミドや酵素は食品成分ではないことから、その使用に際しては安全性を検討する必要がある。また、上述の実験は皮膚に直接塗布した場合の結果であることから、経口摂取した場合の効果については不明である。このような状況の下、より安全で、日常的な摂取あるいは皮膚への塗布によって、末梢での感覚の鈍化を改善する効果のある剤が求められている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、安全で、日常的に摂取あるいは皮膚への塗布により、末梢での感覚の鈍化を改善する効果を示す感覚改善剤を提供することを課題とする。また、本発明は、経口摂取や皮膚への塗布により末梢での感覚の鈍化を改善する効果を示す感覚改善用飲食品又は飼料、化粧品を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは、これらの問題点を鑑み、安全で、感覚の鈍化に対して優れた改善効果を示す成分について鋭意探索を進めたところ、スフィンゴシンを有するリン脂質及び／又はその誘導体、特にスフィンゴミエリンを経口摂取、あるいは皮膚に直接塗布することにより、感覚、特に末梢での感覚の鈍化を改善できることを見出した。そこで、このスフィンゴシンを有するリン脂質及び／又はその誘導体、特にスフィンゴミエリンを有効成分として使用した感覚改善剤を完成させるに至った。また、これらの感覚改善剤を飲食品や飼料、化粧品に配合して感覚改善用飲食品又は飼料、化粧品とすることができることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００６】
乳中においてスフィンゴミエリンは、リン脂質中の２０〜３０重量％と多く含まれているにも関わらず、その機能についての研究は細胞レベルにとどまっており、生体における生理学的機能についての知見は少ない。そのため、これまで栄養素の一成分としての有効性は認識されていなかった。スフィンゴミエリンの利用に関しては、消炎鎮痛外用剤、脂質の消化吸収機能改善剤、腸管運動機能不全性疾患治療剤（特許文献３〜５）などが知られているが、末梢での感覚の鈍化を予防・改善する効果についてはなんら明らかにされていない。
【特許文献１】特開平８-１５１３３１号公報
【特許文献２】特開２００３−１４６８８３号公報
【特許文献３】特開平５−１８６３３０号公報
【特許文献４】特開平１１−２６９０７４号公報
【特許文献５】特開２００３−２５２７６５号公報
【非特許文献１】コスメトロジー研究報告 (２００２) 第１０号；中畑則道、大久保聡子：皮膚保護作用を有するセラミドの生理作用発現機構に関する研究
【発明の効果】
【０００７】
本発明により、スフィンゴシンを有するリン脂質及び／又はその誘導体、特にスフィンゴミエリンを有効成分とする感覚改善剤や、これらの感覚改善剤を配合した感覚改善用飲食品又は飼料、化粧品を提供することができる。本発明の感覚改善剤は、有効成分が食品由来成分のため安全であり、末梢での感覚の鈍化を改善する効果を示す。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
本発明の感覚改善剤はスフィンゴシンを有するリン脂質及び／又はその誘導体、特にスフィンゴミエリンを有効成分とする。スフィンゴシンを有するリン脂質及び／又はその誘導体、特にスフィンゴミエリンは精製したものを用いてもよいし、スフィンゴミエリン含有組成物として用いてもよい。スフィンゴミエリンは動物脳や乳脂肪に多く含まれるが、本発明の実施上、乳由来であることが望ましい。乳由来スフィンゴミエリンとしては、生乳やホエータンパク質濃縮物（ＷＰＣ）などを原料として調製することができる。生乳やＷＰＣなどからスフィンゴミエリン含有組成物を得る方法としては、エーテルやアセトンで抽出する方法、バターを加温融解して得られるバターカードやバターセーラムを含む水溶性画分を用いる方法等、公知の方法を例示することができる。さらに、得られたスフィンゴミエリン含有組成物を透析、硫安分画、ゲル濾過、等電点沈殿、イオン交換クロマトグラフィー、溶媒分画、限外濾過（ＵＦ）、精密濾過（ＭＦ）などの手法により精製することでスフィンゴミエリンの純度を高めることができる。これらのスフィンゴミエリンやスフィンゴミエリン含有組成物は、液体、粉末や錠剤等の形態を適宜とることができ、直接、経口投与することができる。
【０００９】
本発明の感覚改善剤の有効量としては、後述するヒト試験の結果から、通常、成人一人一日あたり、スフィンゴシンを有するリン脂質及び／又はその誘導体、特にスフィンゴミエリンを４ｍｇ以上、好ましくは８ｍｇ以上摂取することにより感覚、特に、末梢での感覚の鈍化の改善が期待できるので、この必要量を確保できるようにすればよい。また、皮膚へ塗布する場合には、特に制限はないが、スフィンゴシンを有するリン脂質及び／又はその誘導体、特にスフィンゴミエリンを、塗布剤中に0.001〜30 重量％、好ましくは0.1〜10 重量％含有させると良い。
【００１０】
本発明の感覚改善用飲食品としては、通常の飲食品、例えばヨーグルト、乳飲料、ウエハース、デザート等に、スフィンゴシンを有するリン脂質及び／又はその誘導体、特にスフィンゴミエリンを有効成分とする感覚改善剤を配合すればよい。これらの感覚改善用飲食品については、成人一人一日あたり、スフィンゴシンを有するリン脂質及び／又はその誘導体、特にスフィンゴミエリンを４ｍｇ以上摂取させるために、飲食品の形態にもよるが飲食品１００ｇあたりスフィンゴシンを有するリン脂質及び／又はその誘導体、特にスフィンゴミエリンを０.５〜２０００ｍｇ配合することが好ましい。また、本発明の感覚改善用飼料は、通常の飼料、例えば家畜用飼料やペットフード等にスフィンゴシンを有するリン脂質及び／又はその誘導体、特にスフィンゴミエリンを配合すればよい。これらの飼料については、一日あたり、スフィンゴシンを有するリン脂質及び／又はその誘導体、特にスフィンゴミエリンを２ｍｇ以上摂取させるために、飼料１００ｇあたりスフィンゴシンを有するリン脂質及び／又はその誘導体、特にスフィンゴミエリンを０.５〜２０００ｍｇ配合することが好ましい。
【００１１】
本発明では、スフィンゴシンを有するリン脂質及び／又はその誘導体、特にスフィンゴミエリンを配合する方法に特に制限はないが、例えば、溶液中で添加、配合するには、スフィンゴシンを有するリン脂質及び／又はその誘導体、特にスフィンゴミエリンを脱イオン水に懸濁あるいは溶解し、撹拌混合した後、医薬品、飲食品や飼料の形態に調製して使用する。撹拌混合の条件としては、スフィンゴシンを有するリン脂質及び／又はその誘導体、特にスフィンゴミエリンが均一に混合されればよく、ウルトラディスパーサーやTKホモミクサー等を使用して撹拌混合することも可能である。また、このスフィンゴシンを有するリン脂質及び／又はその誘導体、特にスフィンゴミエリンの溶液は、医薬品、飲食品や飼料に使用しやすいように、必要に応じて、ＲＯ膜等での濃縮や、凍結乾燥して使用することができる。本発明では、医薬品、飲食品や飼料の製造に通常使用される殺菌処理が可能であり、粉末状であっては乾熱殺菌も可能である。従って、本発明のスフィンゴシンを有するリン脂質及び／又はその誘導体、特にスフィンゴミエリンを含有する液状、ゲル状、粉末状、顆粒状等様々な形態の医薬品、飲食品や飼料を製造することができる。
【００１２】
以下に、実施例及び試験例を示し、本発明についてより詳細に説明するが、これらは単に例示するのみであり、本発明はこれらによって何ら限定されるものではない。
【実施例１】
【００１３】
ホエータンパク質濃縮物（ＷＰＣ）の１０％水溶液にプロテアーゼを作用させて得られた反応液をクロロホルム-メタノール（２：１）溶液で抽出した後、濃縮し、さらにアセトン抽出してリン脂質画分を得た。得られたリン脂質画分をシリカゲルクロマトグラフィーに供し、クロロホルム-メタノール溶液で段階抽出したものを凍結乾燥し、精製スフィンゴミエリンとした。精製標品を薄層クロマトグラフィーにより分画し、ディットマー試薬で発色した後、デンシトメーターを用いて定量した。その結果、スフィンゴミエリン含有率は９５．２％であった。このようにして得られたスフィンゴミエリンは、感覚改善剤としてそのまま利用可能である。
【実施例２】
【００１４】
スフィンゴミエリン含量２５％のスフィンゴミエリン素材（リン脂質７００、Ｆｏｎｔｅｒｒａ社）を、アセトン抽出してリン脂質画分を得た。得られたリン脂質画分をシリカゲルクロマトグラフィーに供し、ヘキサン-エタノール溶液で段階抽出したものを凍結乾燥し、精製スフィンゴミエリンとした。精製標品を薄層クロマトグラフィーにより分画し、ディットマー試薬で発色した後、デンシトメーターを用いて定量した。その結果、スフィンゴミエリン含有率は７８．２％であった。このようにして得られたスフィンゴミエリンは、感覚改善剤としてそのまま利用可能である。
【実施例３】
【００１５】
（感覚改善用化粧品（クリーム）の調製）
実施例２で得られたスフィンゴミエリンを使用し、表１に記載される割合で原料を混合し、感覚改善用化粧品（クリーム）を製造した。
【００１６】
【表１】
【００１７】
[試験例１］
(細胞実験)
皮膚に存在することが知られている繊維芽細胞の細胞株である３Ｔ３細胞を、実施例１のスフィンゴミエリンを２００μg/Lの濃度で添加した状態で、２日間培養した（Ａ群）。また、対照として、３Ｔ３細胞を、スフィンゴミエリンを添加しないで２日間培養した（Ｂ群）。それら培養上清を用いて神経のモデル細胞であるＰＣ−１２細胞を培養し、ＰＣ−１２細胞の形態的な分化を観察した。その結果、Ａ群の培養上清は、どちらもＰＣ−１２細胞を強く分化させた。また、この実験を数回繰り返し、分化の割合を光学顕微鏡下で観察した結果、Ａ群では９４％以上の細胞に分化が認められた。一方、Ｂ群の培養上清は、ＰＣ−１２細胞を分化させず、数回の繰り返し実験における光学顕微鏡下の観察において、まったく分化は認められなかった。このことから、実施例１のスフィンゴミエリンが、神経のモデル細胞であるＰＣ−１２細胞の分化を促進することがわかった。
【００１８】
[試験例2]
（経口摂取による感覚改善効果試験）
手の感覚の鈍化を感じている健康な高齢者（平均年齢７５±３歳）を１５名ずつ、３群に分けた。それぞれに実施例２のスフィンゴミエリンを０ｍｇ、４ｍｇ、８ｍｇになるよう１２週間摂取してもらった。摂取前と１２週間の摂取終了後に表在知覚計アルゲジオメーター(インタークロス(株)社製)を用い、上腕内側の痛覚を基準として手掌と足底土踏まずの痛覚を使用方法に基づき正常、低下I〜IIIの計４段階で測定した。また、１２週間の摂取終了後に、それぞれの高齢者に、手の感覚の改善についてアンケート調査を実施した。その結果を表２、３に示す。
（測定方法）
・ ５種類の太さの違うピンと５つの支点位置で痛覚を評価した。まず、最も細い1pinを上腕内側に転がし、正常な痛覚の度合いを被験者に確認した。
・ 次に、手掌と足底に1pinにてホルダを持つ支点の位置を順に変えて転がし、最初
に感じた痛覚と同程度の痛みを感じる支点の位置を探した。
（評価方法）
アルゲジオメーターは上腕内側で1pin(支点５０ｇ)を転がした場合と、手掌での2pin(５０ｇ)で同じ痛みを生じるように設計されており、使用方法に基づき、以下のように評価した。また、痛みの評価に点数をつけ、平均値を算出した。
2pin(５０ｇ)で同じ痛みであれば、正常 (0点)
1pin(５０ｇ)で同じ痛みであれば、低下I(1点)
1pin(６０ｇ)で同じ痛みであれば、低下II(2点)
1pin(７０ｇ)で同じ痛みであれば、低下III(3点)
【００１９】
【表２】
【００２０】
【表３】
【００２１】
表２、３に示したように、スフィンゴミエリンを４ｍｇ摂取することにより、手、足底の感覚が改善する傾向が認められ、８ｍｇでは改善した。このことから、通常、成人一人一日あたり、スフィンゴシンを有するリン脂質及び／又はその誘導体、特にスフィンゴミエリンを４ｍｇ以上、好ましくは８ｍｇ以上摂取することにより感覚、特に、抹消での感覚の鈍化の期待できることがわかった。
【００２２】
[試験例３]
（皮膚への塗布による感覚改善効果試験）
手の感覚の鈍化を感じている健康な高齢者（平均年齢７５±３歳）を１５名ずつ、Ａ群、Ｂ群の２群に分けた。Ａ群では実施例３と同様の方法で製造した、感覚改善剤を含まない化粧品（クリーム）を、Ｂ群では、実施例３の感覚改善用化粧品（クリーム）を１日１回手と足の全体へ塗布した。塗布期間は８週間とし、塗布前と８週間の塗布終了後に表在知覚計アルゲジオメーター(インタークロス(株)社製)を用い、上腕内側の痛覚を基準として手掌と足底土踏まずの痛覚を使用方法に基づき正常、低下I〜IIIの計４段階で測定した。また、８週間の塗布終了後に、被験者それぞれに、手の感覚の改善についてアンケート調査を実施した。その結果を表４、５に示す。なお、測定方法については試験例２と同様に行った。
【００２３】
【表４】
【００２４】
【表５】
【００２５】
表４、５に示したように、実施例３の感覚改善用化粧品（クリーム）を塗布することにより、手、足底の感覚が改善する傾向が認められた。このことから、本発明の感覚改善剤を含有するクリームを塗布することで、感覚、特に、末梢での感覚の鈍化を改善の期待できることがわかった。
【実施例４】
【００２６】
表６に示す配合で原料を混合後、常法により１ｇに成型、打錠して本発明の感覚改善剤を錠剤として製造した。この感覚改善剤１ｇ中には、スフィンゴミエリンが１０ｍｇ含まれていた。
【００２７】
【表６】
【実施例５】
【００２８】
スフィンゴミエリン含量２５％のスフィンゴミエリン素材（リン脂質７００、Ｆｏｎｔｅｒｒａ社）５０ｇを４９５０ｇの脱イオン水に溶解し、５０℃まで加熱後、ＴＫホモミクサー（ＴＫ ＲＯＢＯ ＭＩＣＳ；特殊機化工業社）にて、６０００ｒｐｍで３０分間撹拌混合してスフィンゴミエリン含量２５０ｍｇ／１００ｇのスフィンゴミエリン溶液（感覚改善剤）を得た。このスフィンゴミエリン溶液４．０ｋｇに、カゼイン５．０ｋｇ、大豆タンパク質５．０ｋｇ、魚油１．０ｋｇ、シソ油３．０ｋｇ、デキストリン１８．０ｋｇ、ミネラル混合物６．０ｋｇ、ビタミン混合物１．９５ｋｇ、乳化剤２．０ｋｇ、安定剤４．０ｋｇ、香料０．０５ｋｇを配合し、２００ｍｌのレトルトパウチに充填し、レトルト殺菌機（第１種圧力容器、ＴＹＰＥ：ＲＣＳ−４ＣＲＴＧＮ、日阪製作所社）で１２１℃、２０分間殺菌して、本発明の感覚改善用液状栄養組成物５０ｋｇを製造した。なお、この感覚改善用液状栄養組成物には、１００ｇあたり、スフィンゴミエリンが２０ｍｇ含まれていた。
【実施例６】
【００２９】
スフィンゴミエリン含量１０％のスフィンゴミエリン素材（リン脂質５００、Ｆｏｎｔｅｒｒａ社製）１０ｇを７００ｇの脱イオン水に溶解し、５０℃まで加熱後、ウルトラディスパーサー（ＵＬＴＲＡ−ＴＵＲＲＡＸ Ｔ−２５；ＩＫＡジャパン社）にて、９５００ｒｐｍで３０分間撹拌混合し、スフィンゴミエリンを有効成分とする感覚改善剤を得た。この感覚改善剤に、ソルビトール４０ｇ、酸味料２ｇ、香料２ｇ、ペクチン５ｇ、乳清タンパク質濃縮物５ｇ、乳酸カルシウム１ｇ、脱イオン水２３５ｇを添加して、撹拌混合した後、２００ｍｌのチアパックに充填し、８５℃、２０分間殺菌後、密栓し、本発明の感覚改善用ゲル状食品５袋（２００ｇ入り）を調製した。このようにして得られた感覚改善用ゲル状食品は、すべて沈殿等は認められず、風味に異常は感じられなかった。なお、この感覚改善用ゲル状食品には、１００ｇあたり、スフィンゴミエリンが１００ｍｇ含まれていた。
【実施例７】
【００３０】
酸味料２ｇを７００ｇの脱イオン水に溶解した後、スフィンゴミエリン含量２５％のスフィンゴミエリン素材（リン脂質７００、Ｆｏｎｔｅｒｒａ社製）１０ｇを溶解し、５０℃まで加熱後、ウルトラディスパーサー（ＵＬＴＲＡ−ＴＵＲＲＡＸ Ｔ−２５；ＩＫＡジャパン社）にて、９５００ｒｐｍで３０分間撹拌混合し、スフィンゴミエリンを有効成分とする感覚改善剤を得た。この感覚改善剤に、マルチトール１００ｇ、還元水飴２０ｇ、香料２ｇ、脱イオン水１６６ｇを添加した後、１００ｍｌのガラス瓶に充填し、９０℃、１５分間殺菌後、密栓し、感覚改善用飲料１０本（１００ｍｌ入り）を調製した。このようにして得られた感覚改善用飲料は、すべて沈殿は認められず、風味に異常は感じられなかった。なお、この感覚改善用飲料には、１００ｇあたり、スフィンゴミエリンが２５０ｍｇ含まれていた。
【実施例８】
【００３１】
スフィンゴミエリン含量４％のスフィンゴミエリン素材（ＳＭ−４、Ｃｏｒｍａｎ社）２ｋｇを９８ｋｇの脱イオン水に溶解し、５０℃まで加熱後、ＴＫホモミクサー（ＭＡＲＫII １６０型；特殊機化工業社）にて、３６００ｒｐｍで４０分間撹拌混合してスフィンゴミエリン含量８０ｍｇ／１００ｇの感覚改善剤を得た。この感覚改善剤１０ｋｇに大豆粕１２ｋｇ、脱脂粉乳１４ｋｇ、大豆油４ｋｇ、コーン油２ｋｇ、パーム油２３．２ｋｇ、トウモロコシ澱粉１４ｋｇ、小麦粉９ｋｇ、ふすま２ｋｇ、ビタミン混合物５ｋｇ、セルロース２．８ｋｇ、ミネラル混合物２ｋｇを配合し、１２０℃、４分間殺菌して、本発明の感覚改善用イヌ飼育飼料１００ｋｇを製造した。なお、この感覚改善用イヌ飼育飼料には、１００ｇあたり、スフィンゴミエリンが８ｍｇ含まれていた。
【実施例９】
【００３２】
（感覚改善用化粧品（ローション）の調製）
表５に記載される割合で原料を混合し、感覚改善用化粧品（ローション）を製造した。
【００３３】
【表７】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
スフィンゴシンを有するリン脂質及び／又はその誘導体を有効成分とする感覚改善剤。
【請求項２】
スフィンゴシンを有するリン脂質が、スフィンゴミエリンである請求項１記載の感覚改善剤。
【請求項３】
請求項１又は２記載の感覚改善剤を配合した感覚改善用飲食品、飼料、化粧品。
【請求項１】
スフィンゴシンを有するリン脂質及び／又はその誘導体を有効成分とする感覚改善剤。
【請求項２】
スフィンゴシンを有するリン脂質が、スフィンゴミエリンである請求項１記載の感覚改善剤。
【請求項３】
請求項１又は２記載の感覚改善剤を配合した感覚改善用飲食品、飼料、化粧品。
【公開番号】特開２００９−１２６７８７（Ｐ２００９−１２６７８７Ａ）
【公開日】平成２１年６月１１日（２００９．６．１１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−２９９８７７（Ｐ２００７−２９９８７７）
【出願日】平成１９年１１月１９日（２００７．１１．１９）
【出願人】（０００００６６９９）雪印乳業株式会社 (155)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２１年６月１１日（２００９．６．１１）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年１１月１９日（２００７．１１．１９）
【出願人】（０００００６６９９）雪印乳業株式会社 (155)
【Ｆターム（参考）】
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