抗菌剤及びそれを含有する口腔用組成物並びに飲食品
【課題】 安全性が高く、配合特性に優れ、かつ歯周病の原因菌や虫歯の原因菌に対して強い抗菌活性を有する新規の口腔用抗菌剤を提供すること。
【解決手段】 α−リノレン酸モノグリセリドまたはリノール酸モノグリセリドを有効成分とすることを特徴とする。本発明の抗菌剤は口腔用組成物や飲食品の配合成分として好適である。
【解決手段】 α−リノレン酸モノグリセリドまたはリノール酸モノグリセリドを有効成分とすることを特徴とする。本発明の抗菌剤は口腔用組成物や飲食品の配合成分として好適である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はα−リノレン酸モノグリセリドまたはリノール酸モノグリセリドを有効成分とする口腔用抗菌剤に関し、さらには、前記抗菌剤を含有する口腔用組成物および飲食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
脂肪酸のモノグリセリド（モノアシルグリセロールまたはグリセリン脂肪酸エステルともいう）は油脂の一種で、グリセリンと脂肪酸が１個ずつ結合した物質である。脂肪酸のモノグリセリドは食品添加物として加工食品（マーガリン、チョコレート、アイスクリーム、パン、ケーキなど）に幅広く使用されている乳化剤である。
【０００３】
また、グリセリン有機酸脂肪酸エステル（例えば、グリセリン酢酸脂肪酸エステル、グリセリン乳酸脂肪酸エステル、グリセリンクエン酸脂肪酸エステル、グリセリンコハク酸脂肪酸エステルなど）やポリグリセリン脂肪酸エステル類（例えば、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン縮合リシノール酸エステルなど）も加工食品の乳化剤として使用されている（以下、グリセリン有機酸脂肪酸エステルとポリグリセリン脂肪酸エステル類をあわせて「グリセリン脂肪酸誘導体」という）。
【０００４】
上述した脂肪酸のモノグリセリドおよびグリセリン脂肪酸誘導体のうち、中鎖脂肪酸のモノグリセリドには抗菌活性を有するものが知られており、耐熱性芽胞菌や酵母に対する抗菌目的で使用されている。また、長鎖脂肪酸のモノグリセリドに対して有機酸、ヒノキチオール、安息香酸、サリチル酸、チモール、オイゲノール、ビサボロール等の香料、シグリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、アミノ酸第４級アンモニウム塩、ポリリジン、エタノール、グリシン、リゾチーム等を併用し、抗菌効果を増強させることが試みられている（特許文献１〜６参照）。
【０００５】
【特許文献１】特開２００５−１７９２１１号公報
【特許文献２】特開２００３−１８３１０５号公報
【特許文献３】特開２００３−１２４１１号公報
【特許文献４】特開２００２−２１２０２１号公報
【特許文献５】特開２００１−１７１３７号公報
【特許文献６】特開２０００−２７０８２１号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
歯肉炎や歯周炎などの歯周病の罹患率は厚生労働省の統計によると４０才以上の国民の８０％以上であり、口腔内の国民病として大変重要な問題である。また、今後高齢化がさらに進む中で、歯周病の予防対策は急務である。歯周病は歯周ポケットの歯垢中に存在する嫌気性細菌による混合感染症と考えられている。歯周病と最も関連が深い細菌として、ポルフィロモナス・ジンジバリス（P. gingivalis）やフソバクテリウム・ヌクレアタム（F. nucleatum）などの編性嫌気性細菌が知られている。また、虫歯（う蝕）の原因菌としてはストレプトコッカス・ミュータンス（S. mutans）が知られている。
【０００７】
そこで、従来から、歯周病の原因菌や虫歯の原因菌に対し、抗菌剤として上述した中鎖脂肪酸のモノグリセリドが使用されてきた。
【０００８】
しかしながら、中鎖脂肪酸のモノグリセリドはある程度の抗菌活性を有しているが、脂溶性のため水やアルコールに対する溶解度が低く、物性的に結晶が析出しやすいため実用的でない。このため、好適な添加量で口腔用組成物や飲食品に配合するには不適当である。
【０００９】
また、上記のポリグリセリン脂肪酸エステル類や上記以外の脂肪酸グリセリンエステル（ジグリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル）は、比較的水に対する溶解度が向上するが、抗菌活性は相対的に低下する。
【００１０】
さらに、上記以外の抗菌剤としては、例えば、フェノール系、安息香酸系、ソルビン酸系、有機ハロゲン系、ピリジニウム塩、チアゾール系の抗菌剤が知られているが、これらの多くは安全性の面で問題がある。
【００１１】
一方、天然系抗菌剤としては、例えば、エタノール、ポリリジン、リゾチーム、プロタミン、ラクトフェリン、グリシン、キトサン、チモール、オイゲノール、油性甘草エキス、アシタバ抽出エキス、竹抽出エキス、香辛料抽出物が挙げられる。これらの天然系抗菌剤は天然系素材であるため安全性は高いが、いずれも抗菌活性の点で満足いくものではない。
【００１２】
本発明は、上記事情に鑑みてなされたものであり、その目的は、安全性が高く、配合特性に優れ、かつ歯周病の原因菌や虫歯の原因菌に対して強い抗菌活性を有する新規の口腔用抗菌剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明者らは、上記課題を解決するため鋭意検討した結果、α−リノレン酸モノグリセリドとリノール酸モノグリセリドが歯周病の原因菌や虫歯の原因菌に対して強力な抗菌活性を示し、かつ配合特性にも優れることを見出し、本発明を完成した。
【００１４】
すなわち、本発明の要旨は以下のとおりである。
〔１〕 α−リノレン酸モノグリセリドまたはリノール酸モノグリセリドを有効成分とする口腔用抗菌剤、
〔２〕 前記〔１〕記載の抗菌剤を含有する口腔用組成物、
〔３〕 前記〔１〕記載の抗菌剤を含有する飲食品。
【発明の効果】
【００１５】
本発明によれば、安全性が高く、配合特性に優れ、かつ歯周病の原因菌や虫歯の原因菌に対して強い抗菌活性を有する新規の口腔用抗菌剤が提供される。特に、抗菌活性については、ポルフィロモナス・ジンジバリス（P. gingivalis）やフソバクテリウム・ヌクレアタム（F. nucleatum）（ともに歯周病の原因菌）およびストレプトコッカス・ミュータンス（S. mutans）（虫歯の原因菌）に対して高い抗菌活性を示す。このため、本発明に係る抗菌剤を口腔用組成物や飲食品に配合することで、歯周病、虫歯などの予防が容易に実行可能となる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
本発明の抗菌剤は、α−リノレン酸モノグリセリドまたはリノール酸モノグリセリドを有効成分とする点に特徴がある。α−リノレン酸モノグリセリドとは、α−リノレン酸１分子とグリセリン１分子とがエステル結合した化合物であり、リノール酸モノグリセリドとは、リノール酸１分子とグリセリン１分子とがエステル結合した化合物である。
【００１７】
α−リノレン酸モノグリセリドまたはリノール酸モノグリセリドを有効成分とする場合、抗菌活性を損なわない範囲で、該有効成分以外に炭素数が８〜２４の脂肪酸１分子以上とグリセリン、ジグリセリンまたはトリグリセリンなどのグリセリン成分１分子とがエステル結合した他の脂肪酸グリセリンエステルが含有されていてもよい。
【００１８】
他の脂肪酸グリセリンエステルを構成する脂肪酸としては、例えば、オクタン酸、ノナン酸、デカン酸、ウンデカン酸、ドデカン酸、トリデカン酸、テトラデカン酸、ペンタデカン酸、ヘキサデカン酸、ヘプタデカン酸、オクタデカン酸、ミリストレイン酸、パルミトオレイン酸、オレイン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸などが挙げられる。上記の脂肪酸グリセリンエステルが抗菌剤の構成成分として含まれる場合、抗菌剤中のα−リノレン酸モノグリセリドまたはリノール酸モノグリセリドの含量は、全脂肪酸グリセリンエステル中５重量％以上とすることが好ましく、２０重量％以上とすることがより好ましい。
【００１９】
α−リノレン酸モノグリセリドは公知の方法で製造することができ、例えば、化学触媒または酵素（リパーゼ）を用いてα−リノレン酸とグリセリンとをエステル化する方法を挙げることができる。また、リノール酸モノグリセリドは、α−リノレン酸に代えてリノール酸を用いることにより、α−リノレン酸モノグリセリドと同様の方法で製造することができる。本発明では、上記の方法のうち、温和な条件で製造できる点で、リパーゼを用いる方法が好適である。
【００２０】
α−リノレン酸モノグリセリドまたはリノール酸モノグリセリドの反応原料としての脂肪酸は、通常α−リノレン酸またはリノール酸の純品が用いられるが、α−リノレン酸のトリグリセリド及びリノール酸のトリグリセリドを含む油脂を加水分解して得られるα−リノレン酸とリノール酸の混合物を用いることもできる。かかる油脂としては、例えば、亜麻仁油、エゴマ油、ローズヒップ油、月見草油、ボラージ油などの高等植物油などが挙げられ、これらは、そのままで、または精製して用いることができる。また、上記反応原料としての脂肪酸はカビや乳酸菌などの微生物生産により得ることもできる。
【００２１】
触媒として使用されるリパーゼは、グリセリド類を基質として認識するものであれば特に限定されない。例えば、モノグリセリドリパーゼ、モノおよびジグリセリドリパーゼ、トリグリセリドリパーゼ、クチナーゼ、エステラーゼなどが挙げられる。これらの中でもリパーゼが好ましく、特に脂肪酸トリグリセリドを基質としてほとんど認識せず、脂肪酸モノグリセリドおよび／または脂肪酸ジグリセリドを基質として認識するリパーゼが好ましい。このようなリパーゼとして、モノグリセリドリパーゼ、モノおよびジグリセリドリパーゼなどが挙げられる。
【００２２】
このようなリパーゼとしては、例えば、ペニシリウム（Penicillium）属、シュードモナス（Pseudomonas）属、バークホルデリア（Burkholderia）属、アルカリゲネス（Alcaligenes）属、スタフィロコッカス（Staphylococcus）属、バシラス（Bacillus）属、キャンディダ（Candida）属、ゲオトリカム（Geotrichum）属、リゾプス（Rhizopus）属、リゾムコール（Rhizomucor）属、ムコール（Mucor）属、アスペルギルス（Aspergillus）属、シュードチマ（Pseudozyme）属などの微生物由来のリパーゼが用いられる。より好ましくはペニシリウム（Penicillium）属、バシラス（Bacillus）属由来のリパーゼである。これらのリパーゼは一般に市販されており、容易に入手可能である。
【００２３】
リパーゼは精製（粗精製および部分精製を含む）されたものを用いてもよい。さらに、遊離型のまま使用してもよく、あるいはイオン交換樹脂、多孔性樹脂、セラミックス、炭酸カルシウムなどの担体に固定化して使用してもよい。
【００２４】
エステル化反応に使用されるリパーゼの量は、反応温度、反応時間、圧力（減圧度）などにより適宜決定すればよく、特に限定されるものではないが、好ましくは反応混合液１ｇ当たり１単位（Ｕ）〜１００００Ｕである。酵素活性の１Ｕとは、リパーゼの場合、オリーブ油の加水分解において１分間に１μモルの脂肪酸を遊離する酵素量をいう。モノグリセリドリパーゼ、あるいはモノおよびジグリセリドリパーゼの場合は、オレイン酸モノグリセリドの加水分解において、１分間に１μモルのオレイン酸を遊離する酵素量である。
【００２５】
エステル化反応に使用されるα−リノレン酸およびリノール酸は、遊離型、金属塩型、およびエステル型のいずれの形態でもよい。本発明においては、エステル化反応が進行しやすい点で、遊離型が好ましい。
【００２６】
エステル化反応に使用されるグリセリンの量は特に限定されない。通常、遊離型のα−リノレン酸（またはリノール酸）１モル量に対して、好ましくは１〜１０倍モル量、より好ましくは１〜５倍モル量である。
【００２７】
本発明では、エステル化反応において反応温度、反応時間、圧力（減圧度）などを適宜調整することにより、α−リノレン酸とグリセリンを反応原料とする場合は、α−リノレン酸モノグリセリドを純度よく製造することができ、リノール酸とグリセリンを反応原料とする場合は、リノール酸モノグリセリドを純度よく製造することができる。反応温度は好ましくは３０〜６０℃であり、反応時間は好ましくは３０〜６０時間であり、圧力は好ましくは０．１〜３０ｍｍＨｇである。また、リパーゼの活性を維持するため、α−リノレン酸（またはリノール酸）とグリセリンの合計量に対して０．３〜３重量％の水を添加することが好ましい。
【００２８】
エステル化反応は静置反応でもよいし、各種の撹拌法、振盪法、超音波法、窒素などの吹き込み法、ポンプなどによる循環混合法、弁またはピストンを用いる混合法などにより、あるいはこれらの組み合わせにより、反応液を混合しながら行ってもよい。
【００２９】
反応混合液から、α−リノレン酸モノグリセリド（またはリノール酸モノグリセリド）を単離・精製する方法としては、任意の単離・精製法を採用し得る。単離・精製方法としては、例えば、脱酸、水洗、蒸留、溶媒抽出、イオン交換クロマトグラフィー、シリカゲルカラムクロマトグラフィー、膜分離など、およびこれらの方法の組み合わせが挙げられる。なお、反応混合液をそのまま使用してもよい。
【００３０】
本発明の抗菌剤は、ポルフィロモナス・ジンジバリス（P. gingivalis）やフソバクテリウム・ヌクレアタム（F. nucleatum）（歯周病の原因菌）およびストレプトコッカス・ミュータンス（S. mutans）（虫歯の原因菌）に対して高い抗菌活性を示す。
【００３１】
本発明の抗菌剤は、上記の細菌類に対して高い抗菌活性を示す。このため、本発明に係る抗菌剤を口腔用組成物や飲食品に配合することで、歯周病、虫歯などの予防が容易に実行可能となる。口腔用組成物中（または飲食品中）の抗菌剤の含量は、通常０．０００１〜５０重量％であり、好ましくは０．００１〜５重量％である。
【００３２】
本発明の抗菌剤の形態は、口腔用組成物および飲食品の種類に応じて適宜変更可能であり、例えば、粒状、ペースト状、固形状、液体状などが採用できる。
【００３３】
口腔用組成物としては、例えば、練り歯磨き、マウスウォッシュ、口中清涼剤、口中スプレーなど挙げられる。飲食品としては、例えば、チューインガム、キャンディー、錠菓、フィルム状食品、飲料、菓子などが挙げられる。
【００３４】
上記の口腔用組成物または飲食品に本発明の抗菌剤を配合する場合、他の抗菌剤の１種または２種以上を併用してもよい。併用できる他の抗菌剤としては、例えば、塩化セチルピリジニウム、塩化デカリニウム、塩化ベンザルコニウム、クロロヘキシジン、トリクロサン、イソプロピルメチルフェノール、オフロキサシン、ヨウ素、フッ化ナトリウム、安息香酸系、ソルビン酸系、有機ハロゲン系、ベンズイミダゾール系の殺菌剤、銀、銅などの金属イオン、レシチン、ショ糖脂肪酸エステル、中鎖脂肪酸モノグリセリド、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、エタノール、プロピレングリコール、ポリリジン、リゾチーム、プロタミン、プロポリス、ラクトフェリン、グリシン、キトサン、チモール、オイゲノール、油性甘草エキス、桑白皮エキス、アシタバ抽出エキス、香辛料抽出物、ポリフェノールなどの植物抽出物エキスなどが挙げられる。
【００３５】
上記の口腔用組成物または飲食品には、本発明に係る抗菌剤の抗菌作用を阻害しない限り、口腔用組成物または飲食品の種類に応じて常用される成分を配合することができる。
かかる成分としては、糖類、人工甘味料、果汁、チューインガムベース、酸味料、精製水、アルコール類、油性成分、界面活性剤、増粘剤、防腐剤、保湿剤、粉体、香料、色素、乳化剤、ｐＨ調整剤、消臭剤、ステアリン酸カルシウム、ピロリン酸ナトリウム、リン酸カルシウム、二酸化ケイ素、カフェイン、ビタミン類、酵素、セラミド類、ステロール類、抗酸化剤、一重項酸素消去剤、紫外線吸収剤、美白剤、抗炎症剤、他の抗菌剤などが挙げられる。
【００３６】
具体的には、糖類としては、果糖、グルコース、マルトース、デンプン、デキストリン、水飴、還元麦芽水飴、マルチトース、パラチノース、還元パラチノース、ソルビトール、キシリトール、トレハロース、エリスリトール、スクラロースなどが挙げられる。人工甘味料としては、アスパルテーム、サッカリンなどが挙げられる。油性成分としては、流動パラフィン、ワセリン、固形パラフィン、ラノリン、ラノリン脂肪酸誘導体、ジメチルポリシロキサン、高級アルコール高級脂肪酸エステル類、脂肪酸、長鎖アミドアミン類、動植物油脂などが挙げられる。界面活性剤としては、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、イソステアリルグリセリンエーテル、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリエチレングリコール、モノステアリン酸ソルビタン、ポリオキシエチレンモノステアリン酸ソルビタン、ポリオキシエチレンラウリルエーテルリン酸塩、Ｎ−ステアロイル−Ｎ−メチルタウリン塩、ラウリルリン酸、リン酸モノミリスチル、リン酸モノセチル、ポリオキシエチレンラウリルエーテル硫酸塩、ラウリル硫酸トリエタノールアミン、ポリオキシエチレンラウリルエーテル硫酸トリエタノールアミンなどが挙げられる。増粘剤としては、カルボキシビニルポリマー、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルアルコール、カラギーナン、ゼラチンなどの水溶性高分子化合物が挙げられる。保湿剤としては、プロピレングリコール、グリセリン、ソルビトール、キシリトール、マルチトールなどが挙げられる。粉体としては、タルク、セリサイト、マイカ、カオリン、シリカ、ベントナイト、亜鉛華、雲母などが挙げられる。
【００３７】
上記の口腔用組成物または飲食品に本発明の抗菌剤を配合する際は、上述した形態を製造し得る公知の装置（パドルミキサー、ホモミキサー、ホモジナイザーなど）が好適に使用できる。本発明の抗菌剤は配合特性に優れるので、製造された口腔用組成物または飲食品から該抗菌剤が結晶として析出することはない。
【実施例】
【００３８】
以下、試験例などにより本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれらによりなんら限定されるものではない。
【００３９】
１． 各種脂肪酸のモノグリセリドの製造例
1-1. α―リノレン酸モノグリセリド（本発明品）の製造例
約３０ｍｌのバイアル瓶中に、１０ｇのα―リノレン酸／グリセリン（１／２（モル比））の混液、０．１ｇの水、および２００Ｕのモノおよびジグリセリドリパーゼ（天野エンザイム社製、ペニシリウム・カマンベルティ（P. camembertii）由来、商品名「リパーゼＧ」）を添加し、マグネチックスターラーで撹拌しながら、３５℃、２ｍｍＨｇで４８時間反応させた。反応終了後、油層のα−リノレン酸モノグリセリドの含量が８５重量％の組成物を得た。得られた反応品をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて繰り返し抽出し、α―リノレン酸モノグリセリドの含量が９７重量％の精製物を得た。
【００４０】
1-2. 亜麻仁油由来脂肪酸モノグリセリド（本発明品）の製造例
まず、亜麻仁油を加水分解して亜麻仁油由来脂肪酸を製造し、これとグリセリンを反応原料としてリパーゼの存在下エステル化して亜麻仁油由来脂肪酸モノグリセリドを製造した。
（亜麻仁油由来脂肪酸の製造）
１Ｌの円形反応釜中に１２mol／ｌの水酸化ナトリウム水溶液８０ｍｌとエタノール２５０ｍｌを混合した。窒素気流下、亜麻仁油１００ｇを上記混合物に添加し静かに混合した。混合物を６０℃で３０分間静置することによりケン化分解した。反応後冷水２００ｍｌを加え、次いで冷却した反応物に濃塩酸を添加し中和した。中和後、ｎ−ヘキサン３００ｍｌを加え、亜麻仁油由来遊離脂肪酸を含むヘキサン層を抽出した。抽出後、得られたヘキサン層を脱溶媒し、亜麻仁油由来遊離脂肪酸を９０ｇ得た。
（エステル化）
約３０ｍｌのバイアル瓶中に、１０ｇの亜麻仁油由来脂肪酸／グリセリン（１／２（モル比））の混液、０．１ｇの水、および２００Ｕのモノおよびジグリセリドリパーゼ（天野エンザイム社製、ペニシリウム・カマンベルティ（P. camembertii）由来、商品名「リパーゼＧ」）を添加し、マグネチックスターラーで撹拌しながら、３５℃、２ｍｍＨｇで４８時間反応させた。反応終了後、油層の亜麻仁油由来脂肪酸モノグリセリドの含量が８０重量％の組成物を得た。得られた反応品をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて繰り返し抽出し、亜麻仁油由来脂肪酸モノグリセリドの含量が９８重量％の精製物を得た。
（脂肪酸組成）
得られた亜麻仁油由来脂肪酸モノグリセリド中の脂肪酸組成は、パルミチン酸４．９％、ステアリン酸３．３％、オレイン酸１６．９％、リノール酸１６．７％、α−リノレン酸５７．４％、その他０．８％であった。
【００４１】
1-3. リノール酸モノグリセリド（本発明品）の製造例
約３０ｍｌのバイアル瓶中に、１００ｇのリノール酸／グリセリン（１／２（モル比））の混液、０．１ｇの水、および２００Ｕのモノおよびジグリセリドリパーゼ（天野エンザイム社製、ペニシリウム・カマンベルティ（P. camembertii）由来、商品名「リパーゼＧ」）を添加し、マグネチックスターラーで撹拌しながら、３５℃、２ｍｍＨｇで４８時間反応させた。反応終了後、油層のリノール酸モノグリセリドの含量が８３重量％の組成物を得た。得られた反応品をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて繰り返し抽出し、リノール酸モノグリセリドの含量が９７重量％の精製物を得た。
【００４２】
1-4. オレイン酸モノグリセリド（比較品）の製造例
約３０ｍｌのバイアル瓶中に、１０ｇのオレイン酸／グリセリン（１／２（モル比））の混液、０．１ｇの水、および２００Ｕのリパーゼ（天野エンザイム社製、ペニシリウム・カマンベルティ（P. camembertii）由来、商品名「リパーゼＧ」）を添加し、マグネチックスターラーで撹拌しながら、３５℃、２ｍｍＨｇで４８時間反応させた。反応終了後、油層のオレイン酸モノグリセリドの含量が８５重量％の組成物を得た。得られた反応品をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて繰り返し抽出し、オレイン酸モノグリセリドの含量が９７重量％の精製物を得た。
【００４３】
２． ポルフィロモナス・ジンジバリス（P. gingivalis）、フソバクテリウム・ヌクレアタム（F. nucleatum）及びストレプトコッカス・ミュータンス（S. mutans）に対する抗菌効果
９６穴深型マイクロプレートにあらかじめ滅菌処理済の培地（日本製薬社製、商品名「ＧＡＭブイヨン液体培地」）０．５ｍｌを添加し、本発明品（α―リノレン酸モノグリセリド、亜麻仁油由来脂肪酸モノグリセリド、リノール酸モノグリセリド（それぞれ、「１．各種脂肪酸のモノグリセリドの製造例」で製造したもの））を０．５ｍｌ添加し、本発明品を培地中最終濃度で1.5ppm、３ppm、６ppm、１２ppm、２５ppm、５０ppm、１００ppm、２００ppm、４００ppmになるよう段階的に調製した。これらの試料溶液に対し、約１×１０８ＣＦＵ／ｍｌのポルフィロモナス・ジンジバリス（P. gingivalis（JCM5175））、フソバクテリウム・ヌクレアタム（F. nucleatum（ATCC25586））またはストレプトコッカス・ミュータンス（S. mutans（JCM2151)）の各培養菌液を０．１ｍｌ添加し、撹拌後好気条件下で３７℃、２４時間培養を行った。抗菌効果の判定は目視で行い、上記微生物の無添加試験区と比較し、微生物増殖による濁りの見られない試験区を抗菌効果有りとして発育を阻止するために必要な最低濃度（以下、「最小発育阻止濃度」という）を測定した。また、比較例として、口腔用抗菌剤として知られている塩化セチルピリジニウムおよびオレイン酸モノグリセリド（「１．各種脂肪酸のモノグリセリドの製造例」で製造したもの）を用いて、上記と同様の方法により最小発育阻止濃度を測定した。表１に結果を示す。
【００４４】
【表１】
【００４５】
表１より、ポルフィロモナス・ジンジバリス（P. gingivalis）、フソバクテリウム・ヌクレアタム（F. nucleatum）またはストレプトコッカス・ミュータンス（S. mutans）のいずれの菌種に対しても、本発明品は優れた抗菌効果を示すことが分かった。
【００４６】
５．配合特性
＜チューインガム＞
チューインガムベース ３５．０重量部
炭酸カルシウム ２．０
マルチトール ５０．０
エリスリトール ５．０
還元パラチノース ５．０
香料 １．０
α−リノレン酸モノグリセリド ０．５
精製水 １．５
１００．０
（製法）
チューインガムベースを７０℃に加温軟化させた後、保温撹拌しながら炭酸カルシウム、マルチトール、エリスリトール、還元パラチノースおよび精製水を少量ずつ混和した。次いで、上記混和により得られた糖類混和ガムベース中に香料とα−リノレン酸モノグリセリドの混合物を添加し、さらに混和した。最後に、得られた混和物を薄い板状に整形してチューインガムを得た。
（配合特性）
α−リノレン酸モノグリセリド配合チューインガムはガムベースの物性を損なうことなく、風味良好であった。
【００４７】
＜キャンディー＞
グラニュー糖 ６０．０重量部
水飴 ５５．０
クエン酸 １．０
香料 ０．２
α−リノレン酸モノグリセリド ０．１
１１６．３
（製法）
グラニュー糖と水飴を１５０℃に加温軟化後、１２０℃まで放置冷却し、次いでクエン酸、香料とα−リノレン酸モノグリセリドを添加し混合した。次いで、得られた混合物を容器に充填しキャンディーにした。
（配合特性）
α−リノレン酸モノグリセリドを添加したキャンディーは褐変化を伴うことなく、風味良好であった。
【００４８】
＜錠菓＞
マルチトール ８０．０重量部
還元パラチノース １９．７
香料 ０．２
リノール酸モノグリセリド ０．１
１００．０
（製法）
マルチトールと還元パラチノースを粉体混合後、香料とリノール酸モノグリセリドを添加した。得られた混合物は打錠し、錠菓とした。
（配合特性）
混合物は容易に打錠時に固形化し、形状の部分崩壊も見られなかった。且つ風味も良好であった。
【００４９】
＜練り歯磨き＞
第２リン酸カルシウム ５０．０重量部
グリセリン ２０．０
ソルビトール １０．０
ラウリル硫酸ナトリウム １．０
カラギーナン １．０
香料 ０．５
α−リノレン酸モノグリセリド ０．２
精製水 １８．０
１００．７
（製法）
グリセリン、ソルビトール、ラウリル硫酸ナトリウム、カラギーナンおよび精製水を混合後、第２リン酸カルシウムを混和した。次いで、得られた混和物に香料とα−リノレン酸モノグリセリドを混合して練り歯磨きとした。
（配合特性）
α−リノレン酸モノグリセリド配合練り歯磨きは物性を損なうことなく安定であり、風味も良好であった。
【００５０】
＜マウスウォッシュ＞
エタノール １５．０重量部
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油 ２．５
グリセリン ８．０
サッカリンナトリウム ０．５
安息香酸ナトリウム ０．１
香料 ０．１
リノール酸モノグリセリド ０．１
色素 ０．００１
精製水 ７５．０
１０１．３
（製法）
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油をエタノール／グリセリン混合液で加温溶解後、精製水を加え溶解させた。次いで、得られた溶解物にサッカリンナトリウム、安息香酸ナトリウム、香料、リノール酸モノグリセリドおよび色素を添加し溶解混和してマウスウォッシュを得た。
（配合特性）
リノール酸モノグリセリド添加マウスウォッシュは加工時の溶解性は良好であり、沈殿形成は見られず、風味も良好であった。
【産業上の利用可能性】
【００５１】
本発明の抗菌剤は、歯周病の原因菌や虫歯の原因菌に対する抗菌効果に優れるので、例えば、練り歯磨き、マウスウォッシュ、口中清涼剤、口中スプレーなどの口腔用組成物や、例えば、チューインガム、キャンディー、錠菓、フィルム状食品、飲料、菓子などの飲食品の配合成分として好適である。
【技術分野】
【０００１】
本発明はα−リノレン酸モノグリセリドまたはリノール酸モノグリセリドを有効成分とする口腔用抗菌剤に関し、さらには、前記抗菌剤を含有する口腔用組成物および飲食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
脂肪酸のモノグリセリド（モノアシルグリセロールまたはグリセリン脂肪酸エステルともいう）は油脂の一種で、グリセリンと脂肪酸が１個ずつ結合した物質である。脂肪酸のモノグリセリドは食品添加物として加工食品（マーガリン、チョコレート、アイスクリーム、パン、ケーキなど）に幅広く使用されている乳化剤である。
【０００３】
また、グリセリン有機酸脂肪酸エステル（例えば、グリセリン酢酸脂肪酸エステル、グリセリン乳酸脂肪酸エステル、グリセリンクエン酸脂肪酸エステル、グリセリンコハク酸脂肪酸エステルなど）やポリグリセリン脂肪酸エステル類（例えば、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン縮合リシノール酸エステルなど）も加工食品の乳化剤として使用されている（以下、グリセリン有機酸脂肪酸エステルとポリグリセリン脂肪酸エステル類をあわせて「グリセリン脂肪酸誘導体」という）。
【０００４】
上述した脂肪酸のモノグリセリドおよびグリセリン脂肪酸誘導体のうち、中鎖脂肪酸のモノグリセリドには抗菌活性を有するものが知られており、耐熱性芽胞菌や酵母に対する抗菌目的で使用されている。また、長鎖脂肪酸のモノグリセリドに対して有機酸、ヒノキチオール、安息香酸、サリチル酸、チモール、オイゲノール、ビサボロール等の香料、シグリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、アミノ酸第４級アンモニウム塩、ポリリジン、エタノール、グリシン、リゾチーム等を併用し、抗菌効果を増強させることが試みられている（特許文献１〜６参照）。
【０００５】
【特許文献１】特開２００５−１７９２１１号公報
【特許文献２】特開２００３−１８３１０５号公報
【特許文献３】特開２００３−１２４１１号公報
【特許文献４】特開２００２−２１２０２１号公報
【特許文献５】特開２００１−１７１３７号公報
【特許文献６】特開２０００−２７０８２１号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
歯肉炎や歯周炎などの歯周病の罹患率は厚生労働省の統計によると４０才以上の国民の８０％以上であり、口腔内の国民病として大変重要な問題である。また、今後高齢化がさらに進む中で、歯周病の予防対策は急務である。歯周病は歯周ポケットの歯垢中に存在する嫌気性細菌による混合感染症と考えられている。歯周病と最も関連が深い細菌として、ポルフィロモナス・ジンジバリス（P. gingivalis）やフソバクテリウム・ヌクレアタム（F. nucleatum）などの編性嫌気性細菌が知られている。また、虫歯（う蝕）の原因菌としてはストレプトコッカス・ミュータンス（S. mutans）が知られている。
【０００７】
そこで、従来から、歯周病の原因菌や虫歯の原因菌に対し、抗菌剤として上述した中鎖脂肪酸のモノグリセリドが使用されてきた。
【０００８】
しかしながら、中鎖脂肪酸のモノグリセリドはある程度の抗菌活性を有しているが、脂溶性のため水やアルコールに対する溶解度が低く、物性的に結晶が析出しやすいため実用的でない。このため、好適な添加量で口腔用組成物や飲食品に配合するには不適当である。
【０００９】
また、上記のポリグリセリン脂肪酸エステル類や上記以外の脂肪酸グリセリンエステル（ジグリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル）は、比較的水に対する溶解度が向上するが、抗菌活性は相対的に低下する。
【００１０】
さらに、上記以外の抗菌剤としては、例えば、フェノール系、安息香酸系、ソルビン酸系、有機ハロゲン系、ピリジニウム塩、チアゾール系の抗菌剤が知られているが、これらの多くは安全性の面で問題がある。
【００１１】
一方、天然系抗菌剤としては、例えば、エタノール、ポリリジン、リゾチーム、プロタミン、ラクトフェリン、グリシン、キトサン、チモール、オイゲノール、油性甘草エキス、アシタバ抽出エキス、竹抽出エキス、香辛料抽出物が挙げられる。これらの天然系抗菌剤は天然系素材であるため安全性は高いが、いずれも抗菌活性の点で満足いくものではない。
【００１２】
本発明は、上記事情に鑑みてなされたものであり、その目的は、安全性が高く、配合特性に優れ、かつ歯周病の原因菌や虫歯の原因菌に対して強い抗菌活性を有する新規の口腔用抗菌剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明者らは、上記課題を解決するため鋭意検討した結果、α−リノレン酸モノグリセリドとリノール酸モノグリセリドが歯周病の原因菌や虫歯の原因菌に対して強力な抗菌活性を示し、かつ配合特性にも優れることを見出し、本発明を完成した。
【００１４】
すなわち、本発明の要旨は以下のとおりである。
〔１〕 α−リノレン酸モノグリセリドまたはリノール酸モノグリセリドを有効成分とする口腔用抗菌剤、
〔２〕 前記〔１〕記載の抗菌剤を含有する口腔用組成物、
〔３〕 前記〔１〕記載の抗菌剤を含有する飲食品。
【発明の効果】
【００１５】
本発明によれば、安全性が高く、配合特性に優れ、かつ歯周病の原因菌や虫歯の原因菌に対して強い抗菌活性を有する新規の口腔用抗菌剤が提供される。特に、抗菌活性については、ポルフィロモナス・ジンジバリス（P. gingivalis）やフソバクテリウム・ヌクレアタム（F. nucleatum）（ともに歯周病の原因菌）およびストレプトコッカス・ミュータンス（S. mutans）（虫歯の原因菌）に対して高い抗菌活性を示す。このため、本発明に係る抗菌剤を口腔用組成物や飲食品に配合することで、歯周病、虫歯などの予防が容易に実行可能となる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
本発明の抗菌剤は、α−リノレン酸モノグリセリドまたはリノール酸モノグリセリドを有効成分とする点に特徴がある。α−リノレン酸モノグリセリドとは、α−リノレン酸１分子とグリセリン１分子とがエステル結合した化合物であり、リノール酸モノグリセリドとは、リノール酸１分子とグリセリン１分子とがエステル結合した化合物である。
【００１７】
α−リノレン酸モノグリセリドまたはリノール酸モノグリセリドを有効成分とする場合、抗菌活性を損なわない範囲で、該有効成分以外に炭素数が８〜２４の脂肪酸１分子以上とグリセリン、ジグリセリンまたはトリグリセリンなどのグリセリン成分１分子とがエステル結合した他の脂肪酸グリセリンエステルが含有されていてもよい。
【００１８】
他の脂肪酸グリセリンエステルを構成する脂肪酸としては、例えば、オクタン酸、ノナン酸、デカン酸、ウンデカン酸、ドデカン酸、トリデカン酸、テトラデカン酸、ペンタデカン酸、ヘキサデカン酸、ヘプタデカン酸、オクタデカン酸、ミリストレイン酸、パルミトオレイン酸、オレイン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸などが挙げられる。上記の脂肪酸グリセリンエステルが抗菌剤の構成成分として含まれる場合、抗菌剤中のα−リノレン酸モノグリセリドまたはリノール酸モノグリセリドの含量は、全脂肪酸グリセリンエステル中５重量％以上とすることが好ましく、２０重量％以上とすることがより好ましい。
【００１９】
α−リノレン酸モノグリセリドは公知の方法で製造することができ、例えば、化学触媒または酵素（リパーゼ）を用いてα−リノレン酸とグリセリンとをエステル化する方法を挙げることができる。また、リノール酸モノグリセリドは、α−リノレン酸に代えてリノール酸を用いることにより、α−リノレン酸モノグリセリドと同様の方法で製造することができる。本発明では、上記の方法のうち、温和な条件で製造できる点で、リパーゼを用いる方法が好適である。
【００２０】
α−リノレン酸モノグリセリドまたはリノール酸モノグリセリドの反応原料としての脂肪酸は、通常α−リノレン酸またはリノール酸の純品が用いられるが、α−リノレン酸のトリグリセリド及びリノール酸のトリグリセリドを含む油脂を加水分解して得られるα−リノレン酸とリノール酸の混合物を用いることもできる。かかる油脂としては、例えば、亜麻仁油、エゴマ油、ローズヒップ油、月見草油、ボラージ油などの高等植物油などが挙げられ、これらは、そのままで、または精製して用いることができる。また、上記反応原料としての脂肪酸はカビや乳酸菌などの微生物生産により得ることもできる。
【００２１】
触媒として使用されるリパーゼは、グリセリド類を基質として認識するものであれば特に限定されない。例えば、モノグリセリドリパーゼ、モノおよびジグリセリドリパーゼ、トリグリセリドリパーゼ、クチナーゼ、エステラーゼなどが挙げられる。これらの中でもリパーゼが好ましく、特に脂肪酸トリグリセリドを基質としてほとんど認識せず、脂肪酸モノグリセリドおよび／または脂肪酸ジグリセリドを基質として認識するリパーゼが好ましい。このようなリパーゼとして、モノグリセリドリパーゼ、モノおよびジグリセリドリパーゼなどが挙げられる。
【００２２】
このようなリパーゼとしては、例えば、ペニシリウム（Penicillium）属、シュードモナス（Pseudomonas）属、バークホルデリア（Burkholderia）属、アルカリゲネス（Alcaligenes）属、スタフィロコッカス（Staphylococcus）属、バシラス（Bacillus）属、キャンディダ（Candida）属、ゲオトリカム（Geotrichum）属、リゾプス（Rhizopus）属、リゾムコール（Rhizomucor）属、ムコール（Mucor）属、アスペルギルス（Aspergillus）属、シュードチマ（Pseudozyme）属などの微生物由来のリパーゼが用いられる。より好ましくはペニシリウム（Penicillium）属、バシラス（Bacillus）属由来のリパーゼである。これらのリパーゼは一般に市販されており、容易に入手可能である。
【００２３】
リパーゼは精製（粗精製および部分精製を含む）されたものを用いてもよい。さらに、遊離型のまま使用してもよく、あるいはイオン交換樹脂、多孔性樹脂、セラミックス、炭酸カルシウムなどの担体に固定化して使用してもよい。
【００２４】
エステル化反応に使用されるリパーゼの量は、反応温度、反応時間、圧力（減圧度）などにより適宜決定すればよく、特に限定されるものではないが、好ましくは反応混合液１ｇ当たり１単位（Ｕ）〜１００００Ｕである。酵素活性の１Ｕとは、リパーゼの場合、オリーブ油の加水分解において１分間に１μモルの脂肪酸を遊離する酵素量をいう。モノグリセリドリパーゼ、あるいはモノおよびジグリセリドリパーゼの場合は、オレイン酸モノグリセリドの加水分解において、１分間に１μモルのオレイン酸を遊離する酵素量である。
【００２５】
エステル化反応に使用されるα−リノレン酸およびリノール酸は、遊離型、金属塩型、およびエステル型のいずれの形態でもよい。本発明においては、エステル化反応が進行しやすい点で、遊離型が好ましい。
【００２６】
エステル化反応に使用されるグリセリンの量は特に限定されない。通常、遊離型のα−リノレン酸（またはリノール酸）１モル量に対して、好ましくは１〜１０倍モル量、より好ましくは１〜５倍モル量である。
【００２７】
本発明では、エステル化反応において反応温度、反応時間、圧力（減圧度）などを適宜調整することにより、α−リノレン酸とグリセリンを反応原料とする場合は、α−リノレン酸モノグリセリドを純度よく製造することができ、リノール酸とグリセリンを反応原料とする場合は、リノール酸モノグリセリドを純度よく製造することができる。反応温度は好ましくは３０〜６０℃であり、反応時間は好ましくは３０〜６０時間であり、圧力は好ましくは０．１〜３０ｍｍＨｇである。また、リパーゼの活性を維持するため、α−リノレン酸（またはリノール酸）とグリセリンの合計量に対して０．３〜３重量％の水を添加することが好ましい。
【００２８】
エステル化反応は静置反応でもよいし、各種の撹拌法、振盪法、超音波法、窒素などの吹き込み法、ポンプなどによる循環混合法、弁またはピストンを用いる混合法などにより、あるいはこれらの組み合わせにより、反応液を混合しながら行ってもよい。
【００２９】
反応混合液から、α−リノレン酸モノグリセリド（またはリノール酸モノグリセリド）を単離・精製する方法としては、任意の単離・精製法を採用し得る。単離・精製方法としては、例えば、脱酸、水洗、蒸留、溶媒抽出、イオン交換クロマトグラフィー、シリカゲルカラムクロマトグラフィー、膜分離など、およびこれらの方法の組み合わせが挙げられる。なお、反応混合液をそのまま使用してもよい。
【００３０】
本発明の抗菌剤は、ポルフィロモナス・ジンジバリス（P. gingivalis）やフソバクテリウム・ヌクレアタム（F. nucleatum）（歯周病の原因菌）およびストレプトコッカス・ミュータンス（S. mutans）（虫歯の原因菌）に対して高い抗菌活性を示す。
【００３１】
本発明の抗菌剤は、上記の細菌類に対して高い抗菌活性を示す。このため、本発明に係る抗菌剤を口腔用組成物や飲食品に配合することで、歯周病、虫歯などの予防が容易に実行可能となる。口腔用組成物中（または飲食品中）の抗菌剤の含量は、通常０．０００１〜５０重量％であり、好ましくは０．００１〜５重量％である。
【００３２】
本発明の抗菌剤の形態は、口腔用組成物および飲食品の種類に応じて適宜変更可能であり、例えば、粒状、ペースト状、固形状、液体状などが採用できる。
【００３３】
口腔用組成物としては、例えば、練り歯磨き、マウスウォッシュ、口中清涼剤、口中スプレーなど挙げられる。飲食品としては、例えば、チューインガム、キャンディー、錠菓、フィルム状食品、飲料、菓子などが挙げられる。
【００３４】
上記の口腔用組成物または飲食品に本発明の抗菌剤を配合する場合、他の抗菌剤の１種または２種以上を併用してもよい。併用できる他の抗菌剤としては、例えば、塩化セチルピリジニウム、塩化デカリニウム、塩化ベンザルコニウム、クロロヘキシジン、トリクロサン、イソプロピルメチルフェノール、オフロキサシン、ヨウ素、フッ化ナトリウム、安息香酸系、ソルビン酸系、有機ハロゲン系、ベンズイミダゾール系の殺菌剤、銀、銅などの金属イオン、レシチン、ショ糖脂肪酸エステル、中鎖脂肪酸モノグリセリド、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、エタノール、プロピレングリコール、ポリリジン、リゾチーム、プロタミン、プロポリス、ラクトフェリン、グリシン、キトサン、チモール、オイゲノール、油性甘草エキス、桑白皮エキス、アシタバ抽出エキス、香辛料抽出物、ポリフェノールなどの植物抽出物エキスなどが挙げられる。
【００３５】
上記の口腔用組成物または飲食品には、本発明に係る抗菌剤の抗菌作用を阻害しない限り、口腔用組成物または飲食品の種類に応じて常用される成分を配合することができる。
かかる成分としては、糖類、人工甘味料、果汁、チューインガムベース、酸味料、精製水、アルコール類、油性成分、界面活性剤、増粘剤、防腐剤、保湿剤、粉体、香料、色素、乳化剤、ｐＨ調整剤、消臭剤、ステアリン酸カルシウム、ピロリン酸ナトリウム、リン酸カルシウム、二酸化ケイ素、カフェイン、ビタミン類、酵素、セラミド類、ステロール類、抗酸化剤、一重項酸素消去剤、紫外線吸収剤、美白剤、抗炎症剤、他の抗菌剤などが挙げられる。
【００３６】
具体的には、糖類としては、果糖、グルコース、マルトース、デンプン、デキストリン、水飴、還元麦芽水飴、マルチトース、パラチノース、還元パラチノース、ソルビトール、キシリトール、トレハロース、エリスリトール、スクラロースなどが挙げられる。人工甘味料としては、アスパルテーム、サッカリンなどが挙げられる。油性成分としては、流動パラフィン、ワセリン、固形パラフィン、ラノリン、ラノリン脂肪酸誘導体、ジメチルポリシロキサン、高級アルコール高級脂肪酸エステル類、脂肪酸、長鎖アミドアミン類、動植物油脂などが挙げられる。界面活性剤としては、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、イソステアリルグリセリンエーテル、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリエチレングリコール、モノステアリン酸ソルビタン、ポリオキシエチレンモノステアリン酸ソルビタン、ポリオキシエチレンラウリルエーテルリン酸塩、Ｎ−ステアロイル−Ｎ−メチルタウリン塩、ラウリルリン酸、リン酸モノミリスチル、リン酸モノセチル、ポリオキシエチレンラウリルエーテル硫酸塩、ラウリル硫酸トリエタノールアミン、ポリオキシエチレンラウリルエーテル硫酸トリエタノールアミンなどが挙げられる。増粘剤としては、カルボキシビニルポリマー、カルボキシメチルセルロース、ポリビニルアルコール、カラギーナン、ゼラチンなどの水溶性高分子化合物が挙げられる。保湿剤としては、プロピレングリコール、グリセリン、ソルビトール、キシリトール、マルチトールなどが挙げられる。粉体としては、タルク、セリサイト、マイカ、カオリン、シリカ、ベントナイト、亜鉛華、雲母などが挙げられる。
【００３７】
上記の口腔用組成物または飲食品に本発明の抗菌剤を配合する際は、上述した形態を製造し得る公知の装置（パドルミキサー、ホモミキサー、ホモジナイザーなど）が好適に使用できる。本発明の抗菌剤は配合特性に優れるので、製造された口腔用組成物または飲食品から該抗菌剤が結晶として析出することはない。
【実施例】
【００３８】
以下、試験例などにより本発明をさらに詳しく説明するが、本発明はこれらによりなんら限定されるものではない。
【００３９】
１． 各種脂肪酸のモノグリセリドの製造例
1-1. α―リノレン酸モノグリセリド（本発明品）の製造例
約３０ｍｌのバイアル瓶中に、１０ｇのα―リノレン酸／グリセリン（１／２（モル比））の混液、０．１ｇの水、および２００Ｕのモノおよびジグリセリドリパーゼ（天野エンザイム社製、ペニシリウム・カマンベルティ（P. camembertii）由来、商品名「リパーゼＧ」）を添加し、マグネチックスターラーで撹拌しながら、３５℃、２ｍｍＨｇで４８時間反応させた。反応終了後、油層のα−リノレン酸モノグリセリドの含量が８５重量％の組成物を得た。得られた反応品をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて繰り返し抽出し、α―リノレン酸モノグリセリドの含量が９７重量％の精製物を得た。
【００４０】
1-2. 亜麻仁油由来脂肪酸モノグリセリド（本発明品）の製造例
まず、亜麻仁油を加水分解して亜麻仁油由来脂肪酸を製造し、これとグリセリンを反応原料としてリパーゼの存在下エステル化して亜麻仁油由来脂肪酸モノグリセリドを製造した。
（亜麻仁油由来脂肪酸の製造）
１Ｌの円形反応釜中に１２mol／ｌの水酸化ナトリウム水溶液８０ｍｌとエタノール２５０ｍｌを混合した。窒素気流下、亜麻仁油１００ｇを上記混合物に添加し静かに混合した。混合物を６０℃で３０分間静置することによりケン化分解した。反応後冷水２００ｍｌを加え、次いで冷却した反応物に濃塩酸を添加し中和した。中和後、ｎ−ヘキサン３００ｍｌを加え、亜麻仁油由来遊離脂肪酸を含むヘキサン層を抽出した。抽出後、得られたヘキサン層を脱溶媒し、亜麻仁油由来遊離脂肪酸を９０ｇ得た。
（エステル化）
約３０ｍｌのバイアル瓶中に、１０ｇの亜麻仁油由来脂肪酸／グリセリン（１／２（モル比））の混液、０．１ｇの水、および２００Ｕのモノおよびジグリセリドリパーゼ（天野エンザイム社製、ペニシリウム・カマンベルティ（P. camembertii）由来、商品名「リパーゼＧ」）を添加し、マグネチックスターラーで撹拌しながら、３５℃、２ｍｍＨｇで４８時間反応させた。反応終了後、油層の亜麻仁油由来脂肪酸モノグリセリドの含量が８０重量％の組成物を得た。得られた反応品をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて繰り返し抽出し、亜麻仁油由来脂肪酸モノグリセリドの含量が９８重量％の精製物を得た。
（脂肪酸組成）
得られた亜麻仁油由来脂肪酸モノグリセリド中の脂肪酸組成は、パルミチン酸４．９％、ステアリン酸３．３％、オレイン酸１６．９％、リノール酸１６．７％、α−リノレン酸５７．４％、その他０．８％であった。
【００４１】
1-3. リノール酸モノグリセリド（本発明品）の製造例
約３０ｍｌのバイアル瓶中に、１００ｇのリノール酸／グリセリン（１／２（モル比））の混液、０．１ｇの水、および２００Ｕのモノおよびジグリセリドリパーゼ（天野エンザイム社製、ペニシリウム・カマンベルティ（P. camembertii）由来、商品名「リパーゼＧ」）を添加し、マグネチックスターラーで撹拌しながら、３５℃、２ｍｍＨｇで４８時間反応させた。反応終了後、油層のリノール酸モノグリセリドの含量が８３重量％の組成物を得た。得られた反応品をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて繰り返し抽出し、リノール酸モノグリセリドの含量が９７重量％の精製物を得た。
【００４２】
1-4. オレイン酸モノグリセリド（比較品）の製造例
約３０ｍｌのバイアル瓶中に、１０ｇのオレイン酸／グリセリン（１／２（モル比））の混液、０．１ｇの水、および２００Ｕのリパーゼ（天野エンザイム社製、ペニシリウム・カマンベルティ（P. camembertii）由来、商品名「リパーゼＧ」）を添加し、マグネチックスターラーで撹拌しながら、３５℃、２ｍｍＨｇで４８時間反応させた。反応終了後、油層のオレイン酸モノグリセリドの含量が８５重量％の組成物を得た。得られた反応品をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにて繰り返し抽出し、オレイン酸モノグリセリドの含量が９７重量％の精製物を得た。
【００４３】
２． ポルフィロモナス・ジンジバリス（P. gingivalis）、フソバクテリウム・ヌクレアタム（F. nucleatum）及びストレプトコッカス・ミュータンス（S. mutans）に対する抗菌効果
９６穴深型マイクロプレートにあらかじめ滅菌処理済の培地（日本製薬社製、商品名「ＧＡＭブイヨン液体培地」）０．５ｍｌを添加し、本発明品（α―リノレン酸モノグリセリド、亜麻仁油由来脂肪酸モノグリセリド、リノール酸モノグリセリド（それぞれ、「１．各種脂肪酸のモノグリセリドの製造例」で製造したもの））を０．５ｍｌ添加し、本発明品を培地中最終濃度で1.5ppm、３ppm、６ppm、１２ppm、２５ppm、５０ppm、１００ppm、２００ppm、４００ppmになるよう段階的に調製した。これらの試料溶液に対し、約１×１０８ＣＦＵ／ｍｌのポルフィロモナス・ジンジバリス（P. gingivalis（JCM5175））、フソバクテリウム・ヌクレアタム（F. nucleatum（ATCC25586））またはストレプトコッカス・ミュータンス（S. mutans（JCM2151)）の各培養菌液を０．１ｍｌ添加し、撹拌後好気条件下で３７℃、２４時間培養を行った。抗菌効果の判定は目視で行い、上記微生物の無添加試験区と比較し、微生物増殖による濁りの見られない試験区を抗菌効果有りとして発育を阻止するために必要な最低濃度（以下、「最小発育阻止濃度」という）を測定した。また、比較例として、口腔用抗菌剤として知られている塩化セチルピリジニウムおよびオレイン酸モノグリセリド（「１．各種脂肪酸のモノグリセリドの製造例」で製造したもの）を用いて、上記と同様の方法により最小発育阻止濃度を測定した。表１に結果を示す。
【００４４】
【表１】
【００４５】
表１より、ポルフィロモナス・ジンジバリス（P. gingivalis）、フソバクテリウム・ヌクレアタム（F. nucleatum）またはストレプトコッカス・ミュータンス（S. mutans）のいずれの菌種に対しても、本発明品は優れた抗菌効果を示すことが分かった。
【００４６】
５．配合特性
＜チューインガム＞
チューインガムベース ３５．０重量部
炭酸カルシウム ２．０
マルチトール ５０．０
エリスリトール ５．０
還元パラチノース ５．０
香料 １．０
α−リノレン酸モノグリセリド ０．５
精製水 １．５
１００．０
（製法）
チューインガムベースを７０℃に加温軟化させた後、保温撹拌しながら炭酸カルシウム、マルチトール、エリスリトール、還元パラチノースおよび精製水を少量ずつ混和した。次いで、上記混和により得られた糖類混和ガムベース中に香料とα−リノレン酸モノグリセリドの混合物を添加し、さらに混和した。最後に、得られた混和物を薄い板状に整形してチューインガムを得た。
（配合特性）
α−リノレン酸モノグリセリド配合チューインガムはガムベースの物性を損なうことなく、風味良好であった。
【００４７】
＜キャンディー＞
グラニュー糖 ６０．０重量部
水飴 ５５．０
クエン酸 １．０
香料 ０．２
α−リノレン酸モノグリセリド ０．１
１１６．３
（製法）
グラニュー糖と水飴を１５０℃に加温軟化後、１２０℃まで放置冷却し、次いでクエン酸、香料とα−リノレン酸モノグリセリドを添加し混合した。次いで、得られた混合物を容器に充填しキャンディーにした。
（配合特性）
α−リノレン酸モノグリセリドを添加したキャンディーは褐変化を伴うことなく、風味良好であった。
【００４８】
＜錠菓＞
マルチトール ８０．０重量部
還元パラチノース １９．７
香料 ０．２
リノール酸モノグリセリド ０．１
１００．０
（製法）
マルチトールと還元パラチノースを粉体混合後、香料とリノール酸モノグリセリドを添加した。得られた混合物は打錠し、錠菓とした。
（配合特性）
混合物は容易に打錠時に固形化し、形状の部分崩壊も見られなかった。且つ風味も良好であった。
【００４９】
＜練り歯磨き＞
第２リン酸カルシウム ５０．０重量部
グリセリン ２０．０
ソルビトール １０．０
ラウリル硫酸ナトリウム １．０
カラギーナン １．０
香料 ０．５
α−リノレン酸モノグリセリド ０．２
精製水 １８．０
１００．７
（製法）
グリセリン、ソルビトール、ラウリル硫酸ナトリウム、カラギーナンおよび精製水を混合後、第２リン酸カルシウムを混和した。次いで、得られた混和物に香料とα−リノレン酸モノグリセリドを混合して練り歯磨きとした。
（配合特性）
α−リノレン酸モノグリセリド配合練り歯磨きは物性を損なうことなく安定であり、風味も良好であった。
【００５０】
＜マウスウォッシュ＞
エタノール １５．０重量部
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油 ２．５
グリセリン ８．０
サッカリンナトリウム ０．５
安息香酸ナトリウム ０．１
香料 ０．１
リノール酸モノグリセリド ０．１
色素 ０．００１
精製水 ７５．０
１０１．３
（製法）
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油をエタノール／グリセリン混合液で加温溶解後、精製水を加え溶解させた。次いで、得られた溶解物にサッカリンナトリウム、安息香酸ナトリウム、香料、リノール酸モノグリセリドおよび色素を添加し溶解混和してマウスウォッシュを得た。
（配合特性）
リノール酸モノグリセリド添加マウスウォッシュは加工時の溶解性は良好であり、沈殿形成は見られず、風味も良好であった。
【産業上の利用可能性】
【００５１】
本発明の抗菌剤は、歯周病の原因菌や虫歯の原因菌に対する抗菌効果に優れるので、例えば、練り歯磨き、マウスウォッシュ、口中清涼剤、口中スプレーなどの口腔用組成物や、例えば、チューインガム、キャンディー、錠菓、フィルム状食品、飲料、菓子などの飲食品の配合成分として好適である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
α−リノレン酸モノグリセリドまたはリノール酸モノグリセリドを有効成分とする口腔用抗菌剤。
【請求項２】
請求項１記載の抗菌剤を含有する口腔用組成物。
【請求項３】
請求項１記載の抗菌剤を含有する飲食品。
【請求項１】
α−リノレン酸モノグリセリドまたはリノール酸モノグリセリドを有効成分とする口腔用抗菌剤。
【請求項２】
請求項１記載の抗菌剤を含有する口腔用組成物。
【請求項３】
請求項１記載の抗菌剤を含有する飲食品。
【公開番号】特開２００９−１５５２５７（Ｐ２００９−１５５２５７Ａ）
【公開日】平成２１年７月１６日（２００９．７．１６）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−３３４４０８（Ｐ２００７−３３４４０８）
【出願日】平成１９年１２月２６日（２００７．１２．２６）
【出願人】（０００２０８０８６）大洋香料株式会社 (34)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２１年７月１６日（２００９．７．１６）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年１２月２６日（２００７．１２．２６）
【出願人】（０００２０８０８６）大洋香料株式会社 (34)
【Ｆターム（参考）】
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