炎症傷害の処置および評価
【課題】ＴＷＥＡＫおよびＴＮＦ−αによって調節される分子のシグナル伝達経路に関与する被験体の炎症性疾患を処置すること。
【解決手段】ＴＷＥＡＫおよびＴＮＦ−αによって調節される分子のシグナル伝達経路を両方のブロックすることを使用して、様々な炎症性疾患を処置することができる。関節リウマチを有するヒト被験体に対して、ＴＮＦ−α遮断薬と組み合わせたＴＷＥＡＫ遮断薬を、治療効果を提供する量で、治療効果を提供する時間にわたって投与する工程を包含する、方法。
【解決手段】ＴＷＥＡＫおよびＴＮＦ−αによって調節される分子のシグナル伝達経路を両方のブロックすることを使用して、様々な炎症性疾患を処置することができる。関節リウマチを有するヒト被験体に対して、ＴＮＦ−α遮断薬と組み合わせたＴＷＥＡＫ遮断薬を、治療効果を提供する量で、治療効果を提供する時間にわたって投与する工程を包含する、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の引用）
本出願では、２００５年５月１０日に提出された米国特許出願番号６０／６７９５１８に対する優先権を主張する。その内容は引用により本明細書中に組み入れられる。
【背景技術】
【０００２】
（背景）
腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）に関連するサイトカインは、数多くの機能（免疫調節およびアポトーシスの調節に関係している機能が含まれる）を有しているタンパク質のスーパーファミリーである。ＴＮＦスーパーファミリーのメンバーの例としては、ＴＮＦ−αおよびＴＷＥＡＫ（アポトーシスについてのＴＮＦ様の弱いインデューサー）が挙げられる。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００３】
（要旨）
以下にさらに記載されるように、ＴＷＥＡＫおよびＴＮＦ−α経路は、炎症の状況を媒介するように別々に作用する。ＴＷＥＡＫおよびＴＮＦ−αによって調節される分子のシグナル伝達経路を両方のブロックすることを使用して、様々な炎症性疾患を処置することができる。このような処置の例は以下に記載される。
【０００４】
１つの態様においては、本開示は、被験体を炎症性疾患について処置する方法を特徴とする。好ましい実施形態においては、炎症性疾患は、関節炎疾患（例えば、関節リウマチ、乾癬性関節炎、またはシェーグレン症候群）である。この方法には：疾患（例えば、関節リウマチ）を有しているかまたはそのリスクがある被験体（例えば、ヒト被験体）に、ＴＮＦ−α遮断薬と組み合わせてＴＷＥＡＫ遮断薬を投与する工程が含まれる。ＴＷＥＡＫ遮断薬およびＴＮＦ−α遮断薬は、治療効果（例えば、全体的な治療効果）を提供するための量で、そしてそのような時間の間、投与することができる。効果は付加的であり得、また、場合によっては、相乗的であり得る。例えば、両方の遮断薬の効果が、（例えば、特定の被験体の中での）個々の効果の合計よりも大きな全体的な効果である場合がある。
【０００５】
様々なＴＷＥＡＫ遮断薬はＴＷＥＡＫまたはＴＷＥＡＫ−Ｒの相互作用または活性をブロックするために、被験体に投与することができる。「ＴＷＥＡＫ遮断薬」は、ＴＷＥＡＫまたはＴＷＥＡＫ−Ｒの相互作用または活性を少なくとも一部阻害する薬剤（例えば、任意の化合物、例えば、抗体、またはＴＷＥＡＫ受容体の可溶性形態）を意味する。例えば、この薬剤は、活性（例えば、ＴＷＥＡＫのＴＷＥＡＫ−Ｒに対する結合）を少なくとも一部阻害する薬剤、または、ＴＷＥＡＫまたはＴＷＥＡＫ−Ｒをコードする核酸を少なくとも一部阻害する（例えば、ＴＷＥＡＫまたはＴＷＥＡＫ−Ｒタンパク質の発現を減少させるために）薬剤である。
【０００６】
１つの実施形態においては、この薬剤により、ＴＷＥＡＫのＴＷＥＡＫ受容体（例えば、Ｆｎ１４）に結合する能力が低下させられる。この薬剤は、ＴＷＥＡＫに、またはＦｎ１４に結合する遮断抗体であり得る。抗体は、全長のＩｇＧであり得る。１つの実施形態においては、抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、または、有効なヒト抗体である。１つの実施形態においては、ＴＷＥＡＫ遮断抗体は、ＴＷＥＡＫとの結合についてＡＢ．Ｄ３（ＡＴＣＣ登録番号ＨＢ−１２６２２を有している抗体）と競合し、これはヒト化抗体ＡＢ．Ｄ３であり、ＡＢ．Ｄ３の少なくとも２個、３個、４個、５個、または６個のＣＤＲ（ま
たは、そのようなＣＤＲに対して少なくとも全体で８５％、９０％、９２％、９５％、９７％同一であるＣＤＲ）が含まれており、そして／あるいは、抗体ＡＢ．Ｄ３の可変ドメイン（または、そのような可変ドメインに対して少なくとも全体で８５％、９０％、９２％、９５％、９７％同一である１つ以上の可変ドメイン）が含まれている。
【０００７】
１つの実施形態においては、この薬剤は、ＴＷＥＡＫ受容体の可溶性形態であり、例えば、ヒトＴＷＥＡＫ受容体（例えば、Ｆｎ１４）である。ＴＷＥＡＫ受容体の可溶性形態は、抗体のＦｃ領域（例えば、ヒトのＦｃ領域）に融合させることができる。例えば、ＴＷＥＡＫ受容体の可溶性形態には、配列番号２のアミノ酸２８〜Ｘ１に対して少なくとも９５％同一である配列が含まれ、この場合、アミノ酸Ｘ１は、配列番号２の残基６８から８０のグループから選択される。
【０００８】
様々なＴＮＦ−α遮断薬を、ＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−α受容体（例えば、ＴＮＦＲ−ＩまたはＴＮＦＲ−ＩＩ）の相互作用あるいは活性をブロックするために、被験体に投与することができる。「ＴＮＦ−α遮断薬」は、ＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−α受容体の相互作用あるいは活性を少なくとも一部阻害する薬剤（例えば、任意の化合物、例えば、抗体またはＴＮＦ−α受容体の可溶性形態）を意味する。例えば、この薬剤は、活性（例えば、ＴＮＦ−αのＴＮＦ−α受容体への結合）を少なくとも一部阻害するか、この薬剤は、例えば、ＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−α受容体タンパク質の発現を減少させるためにＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−α受容体をコードする核酸を少なくとも一部阻害する。
【０００９】
１つの実施形態においては、ＴＮＦ−α遮断薬によって、ＴＮＦ−α受容体に結合するＴＮＦ−αの能力が低下させられる。例えば、ＴＮＦ−α遮断薬としては、ＴＮＦ−α、ＴＮＦＲ−Ｉ、またはＴＮＦＲ−ＩＩに結合する抗体が挙げられる。例示的な抗体としては、インフリキシマブまたはアダリムマブが含まれる。ＴＮＦ−α遮断薬には、ＴＮＦ−α受容体の可溶性形態、そして状況によっては、Ｆｃドメインが含まれ得る。例えば、ＴＮＦ−α遮断薬はエタネルセプト（ｅｔａｎｅｒｃｅｐｔ）である。
【００１０】
本明細書中で使用される場合は、「組み合わせて投与される」は、２つ以上の薬剤（例えば、ＴＷＥＡＫ遮断薬とＴＮＦ−α遮断薬）が、同時に、または患者に対する個々の薬剤の作用が重複する間隔で被験体に投与されることを意味する。好ましくは、第１の薬剤と第２の薬剤の投与は、併用による効果が得られるように互いに十分に近い間隔をあけて行われる。この間隔は、数時間、数日、または数週間の間隔であり得る。一般的には、これらの薬剤は、被験体の中で同時に生体利用可能であり、例えば、検出可能である。好ましい実施形態においては、これらの薬剤の一方（例えば、第１の薬剤（例えば、ＴＮＦ−α遮断薬））の少なくとも１回の投与は、他方の薬剤（例えば、ＴＷＥＡＫ遮断薬）が被験体の中でなおも治療レベルで存在している間に行われる。
【００１１】
１つの実施形態においては、ＴＷＥＡＫ遮断薬は、ＴＮＦ−α遮断薬の先の投与と後の投与の間に投与される。他の実施形態においては、ＴＮＦ−α遮断薬は、ＴＷＥＡＫ遮断薬の先の投与と後の投与の間に投与される。好ましい実施形態においては、これらの薬剤の一方（例えば、ＴＮＦ−α遮断薬）の少なくとも１回の投与は、他方の薬剤（例えば、ＴＷＥＡＫ遮断薬）の１日、７日、１４日、３０日、または６０日以内に行われる。
【００１２】
１つの実施形態においては、ＴＷＥＡＫ遮断薬およびＴＮＦ−α遮断薬を投与する前に、被験体には、ＴＷＥＡＫ遮断薬またはＴＮＦ−α遮断薬のいずれかが投与されているが、他方は投与されていない。被験体は、予め決定された閾値（例えば、Ｓｈａｒｐスコアの合計またはＳｈａｒｐ浸食スコアの安定化または低下）を満たさない反応を有している場合がある。別の実施形態においては、被験体は、ＴＮＦ−α遮断薬も、ＴＷＥＡＫ遮断薬も、第１の薬剤と第２の薬剤が組み合わせて投与される前の少なくとも３ヶ月間（例え
ば、その前の少なくとも６ヶ月間、９ヶ月間、または１年間）は投与されていない被験体であり得る。
【００１３】
１つの実施態様においては、ＴＷＥＡＫ遮断薬とＴＮＦ−α遮断薬は、共製剤（ｃｏ−ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）として提供され、そして共製剤が被験体に投与される。例えば、共製剤の投与の少なくとも２４時間前または投与の少なくとも２４時間後に、これらの薬剤の一方を他方とは別に投与することがさらに可能である。別の実施態様においては、これらの薬剤は別々の製剤として提供され、そして投与の工程には、これらの薬剤の連続する投与が含まれる。連続投与は、同じ日に（例えば、互いに１時間以内、または少なくとも３時間、６時間、もしくは１２時間の間隔をあけて）、あるいは、別の日に提供され得る。
【００１４】
一般的には、ＴＷＥＡＫ遮断薬とＴＮＦ−α遮断薬は、例えば、レジュメにしたがって時間の間隔を空けられた複数回の用量としてそれぞれ投与される。一方または両方についての投与レジュメは、一定の周期性を有している場合がある。ＴＮＦ−α遮断薬についてのレジュメは、ＴＷＥＡＫ遮断薬についてのレジュメとは異なる周期性を有することができ、例えば、一方を、他方よりも多い頻度で投与することができる。これらの薬剤は、任意の適切な方法によって、例えば、皮下注射で、筋肉内注射で、または静脈内注射で投与することができる。被験体には、１４週間より長い間、６ヶ月間もしくは９ヶ月間より長い間、１年、１．５年、もしくは２年より長い間、ＴＮＦ−α遮断薬の複数の用量と、ＴＷＥＡＫ遮断薬の複数の用量を投与することができる。
【００１５】
いくつかの実施態様においては、これらの薬剤のそれぞれは、単剤療法に使用される用量とほぼ同じ用量で投与される。他の実施態様においては、ＴＮＦ−α遮断薬は、単独で投与された場合の効力に必要な量と同等もしくはそれよりも少ない（例えば、少なくとも１０％、２０％、３０％、もしくは４０％少ない）投与量で投与される。同様に、ＴＷＥＡＫ遮断薬は、単独で投与された場合の効力に必要な量と同等もしくはそれよりも少ない（例えば、少なくとも１０％、２０％、３０％、もしくは４０％少ない）投与量で投与することができる。例えば、被験体にこれまでにＴＮＦ−α遮断薬が投与されているいくつかの実施形態においては、被験体には、ＴＷＥＡＫ遮断薬の投与後に、最初のＴＷＥＡＫ遮断薬の投与の前に投与されたＴＮＦ−α遮断薬の用量と比較して少ない用量のＴＮＦ−α遮断薬が投与される。以前に行われた単剤療法において使用されたものと同じＴＮＦ−α遮断薬を併用療法において使用することができ、また、異なるＴＮＦ−α遮断薬も使用することができる。
【００１６】
被験体を、第１の薬剤および第２の薬剤を投与した後に、例えば、反応性の指標について評価することができる。当業者は、処置の有効性についての様々な臨床的指標または他の指標を使用することができる。被験体を、レジュメの間の様々な時点でモニターすることができる。
【００１７】
１つの実施形態においては、ＴＷＥＡＫ遮断薬およびＴＮＦ−α遮断薬が、炎症シグナルを生じる細胞（例えば、滑膜細胞、軟骨細胞、破骨細胞、骨芽細胞、皮膚線維芽細胞、単球、マクロファージ、または内皮細胞）の中でＴＷＥＡＫ経路およびＴＮＦ−α経路の集合効果を阻害するために有効な量で投与される。これらの薬剤は、そのような細胞の中でのＴＷＥＡＫおよびＴＮＦ−αによって誘導される遺伝子のセットの転写を減少させるために（例えば、ＴＷＥＡＫおよびＴＮＦ−αによって相乗的に活性化される遺伝子（例えば、滑膜細胞、軟骨細胞、破骨細胞、または骨芽細胞の中での表１の遺伝子リストの１つ以上）の転写を減少させるために）有効な量で投与することができる。
【００１８】
いくつかの実施形態においては、ＴＷＥＡＫ遮断薬は、成人である被験体を関節リウマ
チについて処置するためには、ＴＷＥＡＫ遮断薬での単剤療法（または、ＴＮＦ−α遮断薬の非存在下でのＴＷＥＡＫ遮断薬での治療）についての標準的な投与量よりも少なくとも２０％、３０％、５０％、６０％、または７０％少ない量で投与される。例えば、ＴＷＥＡＫ遮断薬は、単剤療法として有効であるために必要とされる量よりも少ない量で投与される。
【００１９】
いくつかの実施形態においては、ＴＮＦ−α遮断薬は、成人である被験体を関節リウマチについて処置するためには、ＴＮＦ−α遮断薬での単剤療法（または、ＴＷＥＡＫ遮断薬の非存在下でのＴＮＦ−α遮断薬での治療）についての標準的な投与量よりも少なくとも２０％、３０％、５０％、６０％、または７０％少ない量で投与される。例えば、ＴＮＦ−α遮断薬は、単剤療法として有効であるために必要とされる量よりも少ない量で投与される。他の実施形態においては、ＴＮＦ−α遮断薬およびＴＷＥＡＫ遮断薬は、単剤療法で使用される用量と同じ用量で投与される。
【００２０】
例えば、被験体は、メトトレキセートを投与されていない。１つの実施形態においては、被験体は、任意の他の疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）（すなわち、ＴＷＥＡＫ遮断薬およびＴＮＦ−α遮断薬以外のもの）を投与されていない。
【００２１】
量は、Ｓｈａｒｐ浸食スコアによって測定された場合に、関節の損傷において統計学的に有意な軽減を生じるために十分な量であり得る。例えば、被験体は疾患の指標であるパラメーターについて１つ以上の場合にモニターすることができる。
【００２２】
この方法には、例えば、疾患の重篤度をランク付けする疾患の症状または指標について、被験体を評価する工程（例えば、定期的に１回以上モニターする工程）が含まれ得る。例えば、関節リウマチの症例においては、Ｓｈａｒｐスコアの合計（ＴＳＳ）、Ｓｈａｒｐ浸食スコア、ＨＡＱ障害指数、または放射線法を使用することが可能である。
【００２３】
別の態様においては、本開示は、以下を含む方法を特徴とする：関節リウマチを有しているかまたはそのリスクがある被験体（例えば、ヒト被験体）に、別のＤＭＡＲＤ（例えば、生物学的なＤＭＡＲＤ）と組み合わせてＴＷＥＡＫ遮断薬を、全体的な治療効果を提供するための量で、およびそのための時間の間、投与する工程。関節リウマチを処置するためのＤＭＡＲＤのいくつかの例が本明細書中に記載される。
【００２４】
別の態様においては、本発明は、その必要がある被験体において関節の炎症を軽減させる方法を特徴とする。この方法には、関節の炎症を有する被験体に、（例えば、本明細書中に記載されるような）ＴＷＥＡＫ遮断薬と組み合わせてＴＮＦ−α遮断薬を投与する工程が含まれる。いくつかの症例においては、被験体は関節炎疾患（例えば、関節リウマチ）を有している。
【００２５】
以下を含む薬学的組成物もまた特徴である：ＴＷＥＡＫ遮断薬；およびＤＭＡＲＤ（例えば、ＴＮＦ−α遮断薬または他のＤＭＡＲＤ）。
【００２６】
ＴＷＥＡＫ遮断薬とＤＭＡＲＤ（例えば、ＴＮＦ−α遮断薬または他のＤＭＡＲＤ）が含まれているキットもまた提供され得る。これらの薬剤は、別の薬学的組成物として提供することができ、また、１つの薬学的組成物として提供することもできる。キットにはさらに、関節リウマチを処置するための投与のための指示書、薬剤の投与のためのデバイス、および／またはパラメーター（例えば、疾患に関係している臨床的パラメーター）を評価するための試薬が含まれ得る。
【００２７】
別の態様においては、本開示は、以下を含む方法を特徴とする：ＴＷＥＡＫおよびＴＮ
Ｆ−α、および／または高いＴＷＥＡＫの発現および活性、および／またはＴＷＥＡＫによってその発現が調節される（例えば、増大させられる）生体マーカーの高い発現もしくは活性（例えば、表２を参照のこと）によって媒介される炎症を有している被験体を同定する工程；ならびに、被験体に治療薬を投与する工程。例えば、治療には：（ｉ）ＴＷＥＡＫ遮断薬；（ｉｉ）ＴＮＦ−α遮断薬；または（ｉｉｉ）（ｉ）と（ｉｉ）の組み合わせを投与することが含まれる。「ＴＷＥＡＫ／ＴＮＦ−αによって相乗的に活性化させられた細胞性プログラム」は、ＴＷＥＡＫとＴＮＦ−αの両方の特定の用量による刺激によって生じる特性を特徴とする細胞の状態であるが、これは、その用量のＴＮＦ−αが存在しない状況でのその用量のＴＷＥＡＫでの刺激によっても、また、その用量のＴＷＥＡＫが存在しない状況でのその用量のＴＮＦ−αでの刺激によっても、同等の程度に達することはできない。被験体は、被験体から得られた炎症シグナルを生じる細胞（例えば、滑膜細胞、軟骨細胞、破骨細胞、骨芽細胞、もしくは皮膚線維芽細胞）または関連する組織の中での１つ以上の遺伝子の発現を評価することによって同定することができる。表１の１つ以上の遺伝子を評価することができる。被験体はまた、関節リウマチの１つ以上の症状について評価することもできる。
【００２８】
別の態様においては、本開示は、以下を含む方法を特徴とする：関節リウマチを有しているかまたはそのリスクがあるヒト被験体、およびＤＭＡＲＤ（ＴＷＥＡＫ遮断薬以外）の使用が中止されている（ｗｉｔｈｄｒａｗｎ）かまたはその使用が中止されたヒト被験体に対して、ＴＷＥＡＫ遮断薬を、例えば、全体的な治療効果を提供するために十分な量で、そしてそのために効果的な時間の間、投与する工程。この方法を使用して、ＴＷＥＡＫ遮断薬をこれまでには投与されていない被験体、またはＴＷＥＡＫ遮断薬を最近は投与されていない（例えば、最近の１ヶ月の間、６ヶ月の間、または１年間）被験体を処置することができる。
【００２９】
１つの実施形態においては、使用が中止されているかまたは使用が中止されるＤＭＡＲＤはＴＮＦ−α遮断薬である。被験体は、ＴＮＦ−α遮断薬に対して不適切な反応を有している場合がある。本明細書中で使用される場合は、「不適切な反応」は、患者または熟練した医師によって評価された場合に、不十分な効力、または受容できないかもしくは許容できない毒性を示す反応を意味する。不十分な効力は、処置に対する予め決定された反応レベルを満たすことができないことによって定義することができる。例えば、ＴＮＦ−α遮断薬は、毒性を引き起こすか、免疫無防備状態を誘導するか、または効力が不足する場合があり、それによって、その使用の中止が促される場合がある。例えば、被験体は、ＴＮＦ−α遮断薬での治療に対して難治性である。被験体は、例えば、結核症、日和見感染、糸球体腎炎、脱髄性症候群（ｄｅｍｙｅｌｉｎａｔｉｎｇ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、狼瘡様の反応、または病原性細菌による感染を有する場合がある。いくつかの場合には、不適切な反応は、ＴＮＦ−α遮断薬での処置の間に検出される有害な事象によって示される。
【００３０】
ＴＮＦ−α遮断薬は、前年、３ヶ月間、１ヶ月間、２週間、または１週間以内に投与される場合がある。いくつかの場合には、被験体には、ＴＮＦ−α遮断薬をなおも投与される場合があるが、その投与量は減少させることができ、また、最後の投与量（例えば、完了前に提供される投与量）とすることもできる。他の例においては、ＴＮＦ−α遮断薬の投与は、ＴＷＥＡＫ遮断薬の１回以上の用量を投与しても、被験体がもはやＴＮＦ遮断薬を受け付けなくなると停止される。
【００３１】
他の実施形態においては、使用が中止されているか、または使用が中止されるＤＭＡＲＤは、メトトレキセート、非経口の金（ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ ｇｏｌｄ）、スルファサラジン、またはヒドロキシクロロキノン（ｈｙｄｒｏｘｙｃｈｌｏｒｏｑｕｉｎｏｎｅ）である。例えば、ＤＭＡＲＤは、ＴＮＦ−α遮断薬以外のものである。ＤＭＡＲＤは毒性
、免疫抑制、または効力が十分ではないことが原因で使用が中止される可能性がある。例えば、有害な事象は、ＤＭＡＲＤでの処置の間に検出することができる。
【００３２】
別の態様においては、本開示は、以下を含む方法を特徴とする：関節リウマチを有しており、そしてＴＷＥＡＫ遮断薬以外のＤＭＡＲＤで処置されたヒト被験体において有害な事象を検出する工程；および、被験体に、ＴＷＥＡＫ遮断薬を、全体的な治療効果を提供するために効果的な量、およびそのために効果的な時間の間、投与する工程。
【００３３】
１つの実施形態においては、被験体は、ＴＮＦ−α遮断薬で処置されている。この方法にはさらに、ＴＮＦ−α遮断薬の使用を中止する工程が含まれ得る。有害な事象には、狼瘡様の反応、細菌感染もしくは日和見感染、または結核症が含まれ得る。
【００３４】
１つの態様においては、本開示は、被験体を炎症性疾患、具体的には、ＴＮＦ−α遮断薬によって悪化しないものについて処置する方法を特徴とする。炎症性疾患は関節リウマチである場合も、また、関節リウマチ以外の疾患である場合もある。例えば、疾患は、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎およびクローン病を含む）、乾癬、または炎症性筋炎であり得る。炎症性疾患のなお他の例としては、ランゲルハンス細胞組織球増殖症、成人呼吸窮迫症候群／閉塞性細気管支炎、ヴェーゲナー肉芽腫症、脈管炎、悪液質、口内炎、特発性肺線維症、皮膚筋炎または多発性筋炎、非感染性強膜炎、肺の関与を伴う慢性サルコイドーシス症候群、骨髄異形成症候群／過度の芽細胞を伴う難治性貧血、潰瘍性大腸炎、中度から重症の慢性閉塞性肺疾患、および巨細胞性大動脈炎であり得る。この方法には炎症性疾患を有しているか、またはそのリスクがあるヒト被験体に、ＴＷＥＡＫ遮断薬を、全体的な治療効果を提供するための量で、そしてそのための時間の間投与する工程が含まれる。この方法には、ＴＮＦ−α遮断薬と組み合わせたＴＷＥＫＡ遮断薬を、全体的な治療効果を提供するための量で、そしてそのための時間の間、投与する工程、または、ＴＮＦ−α遮断薬を提供せずに（例えば、その使用を保留して）ＴＷＥＡＫ遮断薬を投与する工程が含まれ得る。１つの実施形態においては、被験体は、１７歳未満であり、疾患は若年性関節リウマチまたは小児乾癬である。この方法には、本明細書中に記載される他の特徴も含まれ得る。
【００３５】
別の態様においては、本開示は、例えば、インビトロまたはインビボでＴＷＥＡＫ反応および／またはＴＮＦ−α反応を調節する能力について、試験化合物を評価する方法を特徴とする。ＴＷＥＡＫ反応には、ＴＷＥＡＫ自体の調節、またはＴＷＥＡＫ受容体の調節が含まれる。この方法には、試験化合物を細胞、組織、または生物体に対して、ＴＷＥＡＫおよび／またはＴＮＦ−α（例えば、外因性のＴＷＥＡＫおよび／またはＴＮＦ−α）の存在下で接触させる工程が含まれる。この方法にはさらに、試験化合物がＴＷＥＡＫおよび／またはＴＮＦ−αに反応する（例えば、ＴＷＥＡＫ／ＴＮＦ−αによって媒介される細胞性プログラムを低下させる）細胞、組織、または生物体の能力を調節するかどうかを評価する工程が含まれる。この方法には、表１または表２の１つ以上の遺伝子の発現または活性を評価する工程が含まれ得る。この方法にはさらに、例えば、本明細書中に記載されるヒトの疾患の動物モデルを使用して、疾患を調節する試験化合物の能力を評価する工程が含まれ得る。
【００３６】
別の態様においては、本開示は、被験体（例えば、ヒト被験体）を評価する方法を特徴とする。被験体は、本明細書中に記載される１つ以上の薬剤を提供するより前に、１つ以上のそのような薬剤を投与しながら、または１つ以上のそのような薬剤を投与した後に評価することができる。この方法には、表２の１つ以上の遺伝子の発現（タンパク質およびｍＲＮＡの発現が含まれる）が参照値と比較して変化したかどうかを決定するために、被験体に由来する細胞（被験体から得られた試料中の細胞）、組織、または他の材料を評価する工程が含まれる。参照値は、正常な被験体、対照被験体についての参照値、または（
例えば、被験体のコホートについて）決定された値に関係している値であり得る。参照値は、被験体自身についての（例えば、別の時点（例えば、１つ以上の薬剤の投与前）での）参照値などであり得る。評価による情報は、コンピューターで読み取ることができる媒体または別の媒体に保存することができ、そして／また、例えば、コンピューターネットワークを使用して通信することもできる。この方法は、患者がＴＷＥＡＫ反応性であるかどうか、またはＴＷＥＡＫ反応性であると予想されるかどうかを決定するために使用することができる。例えば、表２の１つ以上の遺伝子について高い発現レベルを有している患者は、ＴＷＥＡＫ反応性であると示すことができる。この方法には、被験体がＴＷＥＡＫ反応性であることの指標、および必要に応じては、ＴＷＥＡＫ遮断薬を投与するための指示書を提供する工程が含まれ得る。この方法にはさらに、ＴＷＥＡＫ遮断薬を投与する工程が含まれ得る。
【００３７】
別の態様においては、本開示は、（例えば、治療に使用される）ＴＷＥＡＫ遮断薬およびＴＮＦ−α遮断薬が含まれている医薬品を特徴とする。
【００３８】
別の態様においては、本開示は、医薬品（例えば、本明細書中に記載される炎症性疾患（例えば、関節の炎症または関節炎疾患（例えば、関節リウマチ））の処置のための医薬品）の調製のための、ＴＷＥＡＫ遮断薬およびＴＮＦ−α遮断薬の使用を特徴とする。
【００３９】
別の態様においては、本開示は、例えば、別のＤＭＡＲＤでの治療には反応しない被験体の、本明細書中に記載される炎症性疾患（例えば、関節の炎症または関節疾患（例えば、関節リウマチ））の処置のための医薬品の調製のためのＴＷＥＡＫ遮断薬の使用を特徴とする。
【００４０】
本明細書中で引用される全ての特許、特許出願、および参考文献はそれらの全体が引用により本明細書中に組み入れられる。矛盾する場合には、本出願が支配する。
【００４１】
用語「相乗作用」は、個々の事象のそれぞれの結果の合計よりも大きい、少なくとも２つの事象による結果を意味する。ＡＮＯＶＡを使用して、以下の方程式において相乗作用係数（ｓｙｎｅｒｇｙ ｆａｃｔｏｒ）を決定することができる：
Ｒ＝Ａ＋Ｂ＋ε（Ａ×Ｂ）
相乗作用係数εの例示的な値は、０より大きくなり得、または、予め決定された値（例えば、１、２、またはそれ以上）であり得る。
【００４２】
用語「処置する」は、統計学的に有意な程度、または当業者が検出できる程度のいずれかで、疾患に関係している状態、症状、もしくはパラメーターを改善するかまたは予防するために、あるいは、疾患の発症、進行、もしくは再燃を防ぐために有効な量、様式、ならびに／あるいは形式で治療薬を投与することを意味する。したがって、処置によって治療的および／または予防的利点を得ることができる。有効な量、様式、または形式は、被験体に応じて様々であり得、そして被験体に合わせることができる。
【００４３】
阻害することとの言及には、少なくとも一部の阻害、さらには他の程度の阻害（例えば、実質的または完全）が含まれる。
【００４４】
本発明の１つ以上の実施形態の詳細は、以下の添付の図面および記載に示される。本発明の他の特徴、目的、および利点は、記載および図面から、そして特許請求の範囲から明らかであろう。
【００４５】
本発明により、例えば以下が提供される：
（項目１）
関節リウマチを有するヒト被験体に対して、ＴＮＦ−α遮断薬と組み合わせたＴＷＥＡＫ遮断薬を、治療効果を提供する量で、治療効果を提供する時間にわたって投与する工程を包含する、方法。
（項目２）
前記ＴＷＥＡＫ遮断薬および前記ＴＮＦ−α遮断薬が、滑膜細胞、軟骨細胞、破骨細胞、または骨芽細胞中のＴＷＥＡＫおよびＴＮＦ−αを阻害するために有効な量で投与される、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記ＴＷＥＡＫ遮断薬および前記ＴＮＦ−α遮断薬が、滑膜細胞、軟骨細胞、破骨細胞、または骨芽細胞中での、ＴＷＥＡＫおよびＴＮＦ−αの細胞性プログラムによって誘導される遺伝子セットの転写を減少させるために有効な量で投与される、項目１に記載の方法。
（項目４）
前記ＴＷＥＡＫ遮断薬および前記ＴＮＦ−α遮断薬が、滑膜細胞、軟骨細胞、破骨細胞、または骨芽細胞中での表１に列挙される１つ以上の遺伝子の転写を減少させるために有効な量で投与される、項目１に記載の方法。
（項目５）
前記ＴＷＥＡＫ遮断薬が、関節リウマチについて成人である被験体を処置するためのＴＷＥＡＫ遮断薬の単剤療法についての標準的な投与量よりも少なくとも２０％少ない量で投与される、項目１に記載の方法。
（項目６）
前記ＴＮＦ−α遮断薬が、関節リウマチについて成人である被験体を処置するためのＴＮＦ−α遮断薬の単剤療法についての標準的な投与量よりも少なくとも２０％少ない量で投与される、項目１または５に記載の方法。
（項目７）
前記被験体にはメトトレキセートが投与されていない、項目１に記載の方法。
（項目８）
前記被験体には、他のいずれの疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）も投与されていない、項目１に記載の方法。
（項目９）
前記量によって、Ｓｈａｒｐ浸食スコアによって測定された場合に、関節の損傷において統計学的に有意な軽減が生じる、項目１に記載の方法。
（項目１０）
前記ＴＷＥＡＫ遮断薬によって、ＴＷＥＡＫのＴＷＥＡＫ受容体結合能力が低下させられる、項目１に記載の方法。
（項目１１）
前記ＴＷＥＡＫ遮断薬がＴＷＥＡＫに結合する抗体である、項目１に記載の方法。
（項目１２）
前記ＴＷＥＡＫ遮断薬にＴＷＥＡＫ受容体に結合する抗体が含まれる、項目１に記載の方法。
（項目１３）
前記ＴＷＥＡＫ遮断薬にＴＷＥＡＫ受容体の可溶性形態が含まれる、項目１に記載の方法。
（項目１４）
前記ＴＷＥＡＫ受容体の可溶性形態のＴＷＥＡＫ遮断薬が抗体Ｆｃ領域と融合している、項目１に記載の方法。
（項目１５）
前記ＴＮＦ−α遮断薬によって、ＴＮＦ−αのＴＮＦ−α受容体結合能力が低下させられる、項目１に記載の方法。
（項目１６）
前記ＴＮＦ−α遮断薬に、ＴＮＦ−α、ＴＮＦＲ−Ｉ、またはＴＮＦＲ−ＩＩに結合する抗体が含まれる、項目１に記載の方法。
（項目１７）
前記ＴＮＦ−α遮断薬がインフリキシマブまたはアダリムマブである、項目１６に記載の方法。
（項目１８）
前記ＴＮＦ−α遮断薬にＴＮＦ−α受容体の可溶性形態が含まれる、項目１に記載の方法。
（項目１９）
前記ＴＮＦ−α遮断薬がエタネルセプトである、項目１に記載の方法。
（項目２０）
Ｓｈａｒｐスコアの合計（ＴＳＳ）、Ｓｈａｒｐ浸食スコア、ＨＡＱ障害指数、または放射線法を使用して前記被験体を評価する工程をさらに包含する、項目１に記載の方法。（項目２１）
関節リウマチを有するヒト被験体に対して、別の生物学的ＤＭＡＲＤと組み合わせたＴＷＥＡＫ遮断薬を、治療効果を提供する量で、治療効果を提供する時間にわたって投与する工程を包含する、方法。
（項目２２）
ＴＷＥＡＫ遮断薬およびＴＮＦ−α遮断薬を備えるキットであって、該薬剤は、別々の薬学的組成物として、または１つの薬学的組成物として提供される、キット。
（項目２３）
関節リウマチを処置するための投与のための指示書がさらに含まれている、項目２２に記載のキット。
（項目２４）
ＴＷＥＡＫ遮断薬；および
ＴＮＦ−α遮断薬
を含む、薬学的組成物。
（項目２５）
ＴＷＥＡＫおよびＴＮＦ−αによって媒介される炎症を有する被験体を同定する工程；ならびに
該被験体に対して：（ｉ）ＴＷＥＡＫ遮断薬；（ｉｉ）ＴＮＦ−α遮断薬；または（ｉｉｉ）（ｉ）と（ｉｉ）との組み合わせを投与する工程
を包含する、方法。
（項目２６）
前記被験体が、該被験体に由来する滑膜細胞中での１つ以上の遺伝子の発現を評価することによって同定される、項目２５に記載の方法。
（項目２７）
前記評価される１つ以上の遺伝子に、表１から選択される１つ以上の遺伝子が含まれる、項目２６に記載の方法。
（項目２８）
前記評価する工程が、前記被験体から細胞または組織の試料を得ることを含む、項目２６に記載の方法。
（項目２９）
前記同定する工程が、前記被験体における関節リウマチの症状を検出することをさらに含む、項目２５に記載の方法。
（項目３０）
関節リウマチを有し、かつＴＮＦ−α遮断薬の使用が中止されているかまたはＴＮＦ−α遮断薬の使用が中止されたヒト被験体に対して、ＴＷＥＡＫ遮断薬を、治療効果を提供するために有効な量で、有効な時間にわたって投与する工程を包含する、方法。
（項目３１）
前記ＴＮＦ−α遮断薬が、毒性を引き起こすか、免疫無防備状態を誘導するか、または効力を欠く、項目３０に記載の方法。
（項目３２）
前記被験体が、ＴＮＦ−α遮断薬での治療に対して難治性である、項目３０に記載の方法。
（項目３３）
前記被験体は、結核症、日和見感染、または病原性細菌による感染を有する、項目３０に記載の方法。
（項目３４）
前記被験体が糸球体腎炎を有する、項目３０に記載の方法。
（項目３５）
前記被験体が脱髄性症候群を有する、項目３０に記載の方法。
（項目３６）
前記被験体が狼瘡様の反応を有する、項目３０に記載の方法。
（項目３７）
関節リウマチを有するヒト被験体において有害な事象を検出する工程であって、ここでは、該被験体はＴＮＦ−α遮断薬で処置されているが、ＴＷＥＡＫ遮断薬では処置されていない、工程；および
該被験体に対して、ＴＷＥＡＫ遮断薬を、全体的な治療効果を提供するために有効な量で、有効な時間にわたって投与する工程
を包含する、方法。
（項目３８）
ＴＮＦ−α遮断薬の使用を中止する工程をさらに包含する、項目３７に記載の方法。
（項目３９）
前記有害な事象に狼瘡様の反応が含まれる、項目３７に記載の方法。
（項目４０）
前記有害な事象に細菌感染または日和見感染が含まれる、項目３７に記載の方法。
（項目４１）
前記有害な事象に結核症が含まれる、項目３７に記載の方法。
（項目４２）
関節リウマチを有し、かつＴＷＥＡＫ遮断薬以外のＤＭＡＲＤの使用が中止されているかまたはその使用が中止されたヒト被験体に対して、ＴＷＥＡＫ遮断薬を、治療効果を提供する量で、治療効果を提供する時間にわたって投与する工程を包含する、方法。
（項目４３）
前記ＤＭＡＲＤが、メトトレキセート、非経口金、スルファサラジン、またはヒドロキシクロロキノンである、項目４２に記載の方法。
（項目４４）
前記ＤＭＡＲＤがＴＮＦ−α遮断薬以外のものである、項目４２に記載の方法。
（項目４５）
前記ＤＭＡＲＤが、毒性または効力の欠如が原因で使用が中止される、項目４２に記載の方法。
（項目４６）
炎症性疾患を有するヒト被験体に対して、ＴＮＦ−α遮断薬と組み合わせたＴＷＥＡＫ遮断薬を、治療効果を提供する量で、治療効果を提供する時間にわたって投与する工程であって、ここで、該炎症性疾患は、ＴＮＦ−α遮断薬によって悪化することのない疾患である、工程を包含する、方法。
（項目４７）
前記炎症性疾患が、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、炎症性腸疾患、乾癬、または炎症性筋炎である、項目４６に記載の方法。
（項目４８）
前記被験体が１７歳未満であり、そして前記疾患が若年性関節リウマチまたは小児乾癬である、項目４６に記載の方法。
（項目４９）
関節の炎症を軽減する方法であって、関節の炎症を有する被験体を同定する工程、および該被験体に対して、ＴＮＦ−α遮断薬と組み合わせてＴＷＥＡＫ遮断薬を投与する工程を包含する、方法。
（項目５０）
前記被験体が関節リウマチを有する、項目４９に記載の方法。
（項目５１）
前記ＴＷＥＡＫ遮断薬がＴＷＥＡＫに結合する抗体である、項目４９に記載の方法。
（項目５２）
前記ＴＷＥＡＫ遮断薬にＴＷＥＡＫ受容体に結合する抗体が含まれる、項目４９に記載の方法。
（項目５３）
前記ＴＷＥＡＫ遮断薬にＴＷＥＡＫ受容体の可溶性形態が含まれる、項目４９に記載の方法。
（項目５４）
前記ＴＷＥＡＫ受容体の可溶性形態が抗体Ｆｃ領域と融合している、項目５３に記載の方法。
【図面の簡単な説明】
【００４６】
【図１】図１は、ＴＷＥＡＫ遮断薬とＴＮＦ−α遮断薬の組み合わせ、ＴＷＥＡＫ遮断薬のみ、ＴＮＦ−α遮断薬のみ、ＰＢＳ対照、またはアイソタイプが適合している対照を用いて処置したマウスの関節炎のｍＣＩＡモデルにおける、平均の関節炎指数スコアを示している線グラフである。
【図２】図２は、ＴＷＥＡＫ遮断薬とＴＮＦ−α遮断薬の組み合わせ、ＴＷＥＡＫ遮断薬のみ、ＴＮＦ−α遮断薬のみ、ＰＢＳ対照、またはアイソタイプが適合している対照を用いて処置したマウスの関節炎のｍＣＩＡモデルにおける、平均の中足骨の高さの値を示しているプロットである。
【図３】図３は、ＴＷＥＡＫ遮断薬とＴＮＦ−α遮断薬の組み合わせ、ＴＷＥＡＫ遮断薬のみ、ＴＮＦ−α遮断薬のみ、ＰＢＳ対照、またはアイソタイプが適合している対照を用いて処置したマウスの関節炎のｍＣＩＡモデルにおける、体重変化の割合を示している線グラフである。
【図４】図４は、抗ＴＷＥＡＫ遮断抗体（抗ＴＷＥＡＫ ｍＡｂ）または対照で処置した動物の関節炎のＣＩＡモデルにおける、平均の関節炎指数の値を示している２つの線プロットを示す。左側のパネルは、マウスＣＩＡモデルを使用して得られた結果を示しており；右側のパネルは、ラットＣＩＡモデルを使用して得られた結果を示している。
【図５】図５は、抗ＴＷＥＡＫ遮断抗体（抗ＴＷＥＡＫ ｍＡｂ）または対照で処置した動物の関節炎のＣＩＡモデルにおける、平均の関節炎指数の値を示している２つの線プロットを示す。これらの図は、２種類の投与レジュメの結果を示している：第１のレジュメでは、抗体は関節炎の誘導の時点で投与され、第２のレジュメにおいては、抗体は関節炎の誘導後に投与された。左側のパネルは、マウスＣＩＡモデルを使用して得られた結果を示しており；右側のパネルは、ラットＣＩＡモデルを使用して得られた結果を示している。
【図６】図６には、抗ＴＷＥＡＫ遮断抗体（抗ＡＢＧ．１１）または対照で処置したラットの関節炎のラットＣＩＡモデルにおける、炎症、および軟骨と骨の消失のレベルを示している５つの棒グラフが含まれる。同様な所見がマウスのモデルにおいて認められる。
【図７】図７は、ｍＣＩＡモデルと対照のマウス（ＤＢＡ／１）における関節炎の誘導後の様々な時点での血清ＴＷＥＡＫレベルを示しているプロットである。
【図８】図８には、抗ＴＷＥＡＫ遮断抗体（Ｐ５Ｇ９およびＰ５Ｇ９（完全））または対照で処置したマウスのｍＣＩＡモデルにおける、関節炎の誘導後の様々な時点での、ＭＭＰ９、リンホタクチン、ＩＰ−１０、およびＩＬ−６のレベルを示している４つの棒グラフが含まれる。
【発明を実施するための形態】
【００４７】
（詳細な説明）
本発明者らは、ＴＷＥＡＫ経路とＴＮＦ−α経路が別々に炎症反応（例えば、関節の中に存在している滑膜細胞の中での炎症反応）に関係していること、およびＴＷＥＡＫとＴＮＦ−αの両方が、類似する遺伝子のセットを別々に活性化させることができることを発見した。これらのことは、２つの経路の間での冗長性を示している。したがって、両方の経路の活性を低下させることにより、炎症（例えば、（例えば、関節炎の状態にある）関節の炎症）を緩和させるための有効な治療経路が提供される。ＴＷＥＡＫ経路とＴＮＦ−α経路の両方を同時に遮断することは、関節リウマチのマウスモデル（ｍＣＩＡ）において有効であることが明らかになっており、これによって、これらの経路の１つを遮断するよりも大きな結果が得られる。
【００４８】
関節リウマチに加えて、両方の経路の活性を低下させることによって、他の疾患（例えば、他の炎症性疾患（例えば、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、炎症性腸疾患、乾癬、炎症性筋炎）および本明細書中で開示される他の疾患）を処置するために使用することができる。様々な方法を使用して、ＴＷＥＡＫ経路およびＴＮＦ−α経路の活性を低下させることができる。例えば、ＴＮＦ−α遮断薬と組み合わせてＴＷＥＡＫ遮断薬を投与することが可能である。これらおよび他の薬剤の例は、以下にさらに記載される。
【００４９】
いくつかの実施態様においては、治療上の利点は、２つの経路の一方を低下させることによって得ることができる。例えば、ＴＷＥＡＫ遮断薬を、経路の一方だけを調節する治療薬に対して不適切な反応（例えば、ＴＮＦ−α遮断薬に対する不適切な反応、またはＴＷＥＡＫ遮断薬に対する不適切な反応）を有している被験体に投与することができる。ＴＷＥＡＫ遮断薬はまた、別の薬剤（例えば、ＴＮＦ−α遮断薬以外の薬剤）を伴うＤＭＡＲＤでの処置が中止されているか、またはＤＭＡＲＤでの処置を中止することが計画されている被験体に投与することができる。
【００５０】
（ＴＷＥＡＫ遮断薬）
様々な薬剤をＴＷＥＡＫ遮断薬として使用することができる。薬剤は、被験体に投与することができる任意のタイプの化合物（例えば、小さい有機分子または無機分子、核酸、タンパク質、あるいはペプチド模倣物）であり得る。１つの実施態様においては、遮断薬は生物学的なものであり、例えば、５〜３００ｋＤａの分子量を有しているタンパク質である。例えば、ＴＷＥＡＫ遮断薬は、ＴＷＥＡＫ受容体に対するＴＷＥＡＫの結合を阻害することができるか、または、ＴＷＥＡＫによって媒介されるＮＦ−κＢの活性化を妨げることができる。典型的なＴＷＥＡＫ遮断薬は、ＴＷＥＡＫに、またはＴＷＥＡＫ受容体（例えば、Ｆｎ１４）に結合することができる。ＴＷＥＡＫに、またはＴＷＥＡＫ受容体に結合するＴＷＥＡＫ遮断薬は、ＴＷＥＡＫまたはＴＷＥＡＫ受容体の立体構造を変化させる場合があり、ＴＷＥＡＫまたはＴＷＥＡＫ受容体上の結合部位をブロックする場合があり、あるいは、別の方法で、ＴＷＥＡＫ受容体に対するＴＷＥＡＫの親和性を低下させる場合、また、ＴＷＥＡＫとＴＷＥＡＫ受容体の間での相互作用を妨げる場合もある。
【００５１】
ＴＷＥＡＫ遮断薬（例えば、抗体）は、ＴＷＥＡＫに対して、またはＴＷＥＡＫ受容体に対して、１０−６、１０−７、１０−８、１０−９、または１０−１０Ｍ未満のＫｄで結合することができる。１つの実施態様においては、遮断薬は、ＴＷＥＡＫに対して、ＴＮＦ−αまたは別のＴＮＦスーパーファミリーのメンバー（ＴＷＥＡＫ以外）に対するそ
の親和性よりも、少なくとも５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍、２００倍、５００倍、または１０００倍高い親和性で結合する。１つの実施態様においては、遮断薬は、ＴＷＥＡＫ受容体に対して、ＴＮＦ受容体または別のＴＮＦスーパーファミリーのメンバーの受容体に対するその親和性よりも、少なくとも５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍、２００倍、５００倍、または１０００倍高い親和性で結合する。好ましいＴＷＥＡＫ遮断薬は、ＴＷＥＡＫまたはＴＷＥＡＫ−Ｒに特異的に結合する。
【００５２】
例示的なＴＷＥＡＫタンパク質分子としては、ヒトＴＷＥＡＫ（例えば、ＡＡＣ５１９２３、配列番号１として示される）、マウスＴＷＥＡＫ（例えば、ＮＰ＿０３５７４４．１）、ラットＴＷＥＡＫ（例えば、ＸＰ＿３４０８２７．１）、およびチンパンジー（Ｐａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ）ＴＷＥＡＫ（例えば、ＸＰ＿５１１９６４．１）が挙げられる。上記のＴＷＥＡＫタンパク質の成熟したプロセシングされた領域に対して、少なくとも９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％同一であるか、またはそれと完全に同じであるアミノ酸配列（例えば、配列番号１のアミノ酸Ｘ１〜２４９に対して、少なくとも９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％同一であるか、またはそれと完全に同じであるアミノ酸配列であって、式中、アミノ酸Ｘ１は、配列番号１の残基７５〜１１５のグループから選択され、例えば、Ｘ１は、配列番号１の残基Ａｒｇ９３である）を含むタンパク質、ならびに、自然界に存在しているＴＷＥＡＫタンパク質をコードするヒト、マウス、ラット、またはチンパンジー（Ｐａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ）の遺伝子に対して高いストリンジェンシーの条件下でハイブリダイズする核酸によってコードされるタンパク質も含まれる。好ましくは、そのプロセシングされた成熟形態のＴＷＥＡＫタンパク質は、少なくとも１つのＴＷＥＡＫ活性（例えば、Ｆｎ１４を活性化させる能力）を提供することができる。
【００５３】
例示的なＦｎ１４タンパク質分子としては、ヒトＦｎ１４（例えば、ＮＰ＿０５７７２３．１、配列番号２として示される）、マウスＦｎ１４（例えば、ＮＰ＿０３８７７７．１）、およびラットＦｎ１４（例えば、ＮＰ＿８５１６００．１）、さらには、Ｆｎ１４の細胞外ドメイン（およびそのＴＷＥＡＫ−結合断片）に対して、少なくとも９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％同一であるか、または完全に同じであるアミノ酸配列を含む可溶性タンパク質、ならびに、自然界に存在しているＦｎ１４タンパク質をコードするヒト、マウス、ラット、またはチンパンジー（Ｐａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ）の遺伝子に対して高いストリンジェンシーの条件下でハイブリダイズする核酸によってコードされるタンパク質が挙げられる。好ましくは、本明細書中に記載される方法に有用なＦｎ１４タンパク質は可溶性のＦｎ１４（膜貫通ドメインが欠失している）であり、これにはＴＷＥＡＫタンパク質に結合する領域（例えば、配列番号２のアミノ酸２８〜Ｘ１に対して、少なくとも９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％同一であるか、またはそれと完全に同じであるアミノ酸配列であって、式中、アミノ酸Ｘ１は、配列番号２の残基６８〜８０のグループから選択される）が含まれる。
【００５４】
２つの配列間での「相同性」または「配列同一性」（これらの用語は本明細書中では同義的に使用される）の計算は以下のように行われる。配列は、最適な比較の目的のためにアラインメントされる（例えば、ギャップを、最適なアラインメントのために、第１および第２のアミノ酸配列または核酸配列の一方または両方に導入することができ、そして非相同配列は、比較の目的のために無視することができる）。最適なアラインメントは、１２のギャップペナルティー、４のギャップ伸張ペナルティー、および５のフレームシフトギャップペナルティーを含むＢｌｏｓｓｕｍ ６２スコアリングマトリックスで、ＧＣＧソフトウェアパッケージにおいてＧＡＰプログラムを使用して最良なスコアとして決定される。その後、対応するアミノ酸位置またはヌクレオチド位置のアミノ酸残基またはヌクレオチドが比較される。第１の配列の中の１つの位置が第２の配列の中の対応する位置と同じアミノ酸残基またはヌクレオチドによって占有されている場合には、これらの分子は
その位置で同一である（本明細書中で使用される場合は、アミノ酸または核酸の「同一性」は、アミノ酸または核酸の「相同性」と同等である）。２つの配列の間での同一性の割合は、配列によって共有される同じ位置の数の関数である。本明細書中に記載される関連するタンパク質のアラインメントは、修飾（例えば、挿入、欠失、および置換（例えば、保存的置換または非保存的置換））を寛容するアミノ酸位置を同定するための教示である。
【００５５】
本明細書中で使用される場合は、用語「高いストリンジェンシーの条件下でハイブリダイズする」は、ハイブリダイゼーションおよび洗浄についての条件を記載する。ハイブリダイゼーション反応を行うための指針は、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８９），６．３．１−６．３．６（引用により本明細書中に組み入れられる）において見ることができる。水性方法と非水性方法がその参考文献に記載されており、いずれを使用することもできる。高いストリンジェンシーのハイブリダイゼーション条件としては、約４５℃での６×ＳＳＣ中でのハイブリダイゼーション、その後の、０．２×ＳＳＣ、０．１×ＳＤＳ中で６５℃での１回以上の洗浄、あるいは実質的に同様の条件が挙げられる。
【００５６】
例示的なＴＷＥＡＫ遮断薬としては、ＴＷＥＡＫまたはＴＷＥＡＫ−Ｒに結合する抗体、およびＴＷＥＡＫへの結合について細胞表面ＴＷＥＡＫ−Ｒと競合するＴＷＥＡＫ−Ｒの可溶性形態が挙げられる。ＴＷＥＡＫ−Ｒの可溶性形態の一例は、ＴＷＥＡＫ−Ｒの細胞外ドメインの少なくとも一部（例えば、ＴＷＥＡＫ−Ｒの可溶性のＴＷＥＡＫ結合断片）が含まれているＦｃ融合タンパク質であり、これはＴＷＥＡＫ−Ｒ−Ｆｃと呼ばれる。ＴＷＥＡＫ−Ｒの他の可溶性形態（例えば、Ｆｃドメインが含まれていない形態）もまた使用することができる。抗体遮断薬は以下でさらに議論される。
【００５７】
他のタイプの遮断薬（例えば、低分子、核酸、または核酸をベースとするアプタマー、およびペプチド）を、例えば、Ｊｈａｖｅｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１８：１２９３およびＵ．Ｓ．５，２２３，４０９に記載されているように、スクリーニングによって単離することができる。薬剤がＴＷＥＡＫまたはＴＷＥＡＫ−Ｒに結合するかどうかを決定するため、および薬剤がＴＷＥＡＫ／ＴＷＥＡＫ−Ｒの相互作用を調節するかどうかを決定するための例示的なアッセイは、例えば、Ｕ．Ｓ．２００４−００３３２２５に記載されている。
【００５８】
例示的なＴＷＥＡＫ−Ｒタンパク質の可溶性形態としては、ＴＷＥＡＫに結合するＴＷＥＡＫ−Ｒタンパク質の領域（例えば、配列番号２のおよそ３２〜７５、３１〜７５、３１〜７８、または２８〜７９のアミノ酸）が挙げられる。この領域は、別のアミノ酸（例えば、Ｆｃドメイン）に対して、そのＮ末端またはＣ末端で物理的に会合させる（例えば、融合させる）ことができる。ＴＷＥＡＫ−Ｒに由来する領域は、異種アミノ酸配列に由来するリンカーによって間隔をあけることができる。Ｕ．Ｓ．６，８２４，７７３には、例示的なＴＷＥＡＫ−Ｒ融合タンパク質が記載されている。
【００５９】
（ＴＮＦ−α遮断薬）
様々な薬剤をＴＮＦ−α遮断薬として使用することができる。薬剤は、被験体に投与することができる任意のタイプの化合物（例えば、小さい有機分子または無機分子、核酸、タンパク質、あるいはペプチド模倣物）であり得る。１つの実施態様においては、遮断薬は生物学的なものであり、例えば、５〜３００ｋＤａの分子量を有しているタンパク質である。例えば、ＴＮＦ−α遮断薬は、ＴＮＦ−α受容体に対するＴＮＦ−αの結合を阻害することができるか、または、別の方法で、ＴＮＦ−α受容体の下流のシグナル伝達を妨げることができる。典型的なＴＮＦ−α遮断薬は、ＴＮＦ−αに、またはＴＮＦ−α受容
体（例えば、ＴＮＦＲ−ＩまたはＴＮＦＲ−ＩＩ）に結合することができる。ＴＮＦ−αに、またはＴＮＦ−α受容体に結合するＴＮＦ−α遮断薬は、ＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−α受容体の立体構造を変化させる場合があり、ＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−α受容体上の結合部位をブロックする場合があり、あるいは、別の方法で、ＴＮＦ−α受容体に対するＴＮＦ−αの親和性を低下させる場合、また、ＴＮＦ−αとＴＮＦ−α受容体の間での相互作用を妨げる場合もある。
【００６０】
ＴＮＦ−α遮断薬（例えば、抗体）は、ＴＮＦ−αに対して、またはＴＮＦ−α受容体に対して、１０−６、１０−７、１０−８、１０−９、または１０−１０Ｍ未満のＫｄで結合することができる。１つの実施態様においては、遮断薬は、ＴＮＦ−αに対して、ＴＷＥＡＫまたは別のＴＮＦスーパーファミリーのメンバー（ＴＮＦ−α以外）に対するその親和性よりも、少なくとも５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍、２００倍、５００倍、または１０００倍高い親和性で結合する。好ましいＴＮＦ−α遮断薬は、ＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−α−Ｒに特異的に結合し、例えば、ＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−α−Ｒ特異的抗体である。
【００６１】
例示的なＴＮＦ−α遮断薬としては、ＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−α−Ｒに結合する抗体、およびＴＭＦ−αへの結合について細胞表面ＴＮＦ−α−Ｒと競合するＴＮＦ−α−Ｒの可溶性形態が挙げられる。ＴＮＦ−α−Ｒの可溶性形態の一例は、ＴＮＦ−α−Ｒの細胞外ドメインの少なくとも一部（例えば、ＴＮＦ−α−Ｒの可溶性のＴＮＦ−α−結合断片）が含まれているＦｃ融合タンパク質であり、これはＴＮＦ−α−Ｒ−Ｆｃと呼ばれる。ＴＮＦ−α−Ｒの他の可溶性形態（例えば、Ｆｃドメインが含まれていない形態）もまた使用することができる。抗体遮断薬は以下でさらに議論される。
【００６２】
例示的なＴＮＦ−α受容体タンパク質の可溶性形態は、ＥＮＢＲＥＬ（登録商標）である。例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ＆ Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９４）Ｖａｌ．３７，Ｓ２９５；Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｍｅｄ．（１９９６）Ｖｏｌ．４４，２３５Ａを参照のこと。Ｕ．Ｓ．６，５７２，８５２にはさらに別の例が記載されている。関節リウマチ、乾癬性関節炎、または強直性脊椎炎を有している成人である患者について推奨されるＥＮＢＲＥＬ（登録商標）の用量は１週間に５０ｍｇであり、５０ｍｇ／ｍＬの使い捨ての薬剤充填済み注射器（ｐｒｅｆｉｌｌｅｄ ｓｙｒｉｎｇｅ）を使用して１回の皮下（ＳＣ）注射として投与される。ＥＮＢＲＥＬ（登録商標）に加えて、ＴＮＦ−α受容体の他の同様の領域および／または対応する領域を、別のアミノ酸配列（例えば、Ｆｃドメイン）に対して、そのＮ末端またはＣ末端で物理的に会合させる（例えば、融合させる）ことができる。
【００６３】
ＴＮＦ−α遮断薬の他の十分に特性決定されている例としては以下が挙げられる：インフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標））、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）に結合するキメラ抗体およびアダリムマブ（ＨＵＭＩＲＡ（登録商標））（ＴＮＦ−αに結合するヒト抗体）。例えば、ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標）についての推奨される用量は静脈内注射として投与される３ｍｇ／ｋｇ、その後の、最初の注射後２週間および６週間で、その後は８週間おきに投与されるさらなる同様の用量である。
【００６４】
ＴＮＦ−α遮断薬のさらに別の例としては、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、またはインビトロで作成されたＴＮＦ（例えば、ヒトＴＮＦ−α）に対する抗体（またはその抗原結合断片）が挙げられ、例えば、Ｄ２Ｅ７（ヒトＴＮＦ−α抗体、米国特許第６，２５８，５６２号；ＢＡＳＦ）、ＣＤＰ−５７１／ＣＤＰ−８７０／ＢＡＹ−１０−３３５６（ヒト化抗ＴＮＦ−α抗体；Ｃｅｌｌｔｅｃｈ／Ｐｈａｒｍａｃｉａ）、ｃＡ２（キメラ抗ＴＮＦα抗体；ＲＥＭＩＣＡＤＥ（商標）、Ｃｅｎｔｏｃｏｒ，上記にも記載されている）；抗ＴＮＦ抗体断片（例えば、ＣＰＤ８７０）；ＴＮＦ受容体の可溶性断片（例え
ば、ｐ５５またはｐ７５ヒトＴＮＦ受容体あるいはそれらの誘導体、例えば、７５ｋｄのＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤのＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、ＥＮＢＲＥＬ（商標））、ｐ５５ｋｄのＴＮＦＲ−ＩｇＧ（５５ｋＤのＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質（ＬＥＮＥＲＣＥＰＴ（商標））；酵素アンタゴニスト（例えば、ＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤、例えば、α−スルホニルヒドロキサム酸誘導体、ＰＣＴ出願番号ＷＯ０１／５５１１２、およびＮ−ヒドロキシホルムアミドＴＡＣＥ阻害剤ＧＷ３３３３、−００５、または−０２２）；ならびに、ＴＮＦ−ｂｐ／ｓ−ＴＮＦＲ（可溶性のＴＮＦ結合タンパク質；例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ＆ Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（補遣），Ｓ２８４；Ａｍｅｒ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．−Ｈｅａｒｔ ａｎｄ Ｃｉｒｃｕｌａｔｏｒｙ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ（１９９５）Ｖｏｌ．２６８，ｐｐ．３７−４２を参照のこと）が挙げられる。
【００６５】
（抗体）
例示的なＴＷＥＡＫ遮断薬としては、ＴＷＥＡＫおよび／またはＴＷＥＡＫ−Ｒに結合する抗体が挙げられる。１つの実施形態においては、抗体は、ＴＷＥＡＫとＴＷＥＡＫ受容体の間での相互作用を、例えば、相互作用を物理的にブロックすることによって、ＴＷＥＡＫおよび／またはＴＷＥＡＫ−Ｒのその対応物に対する親和性を低下させることによって、ＴＷＥＡＫ複合体を破壊させるまたは脱安定化させることによって、ＴＷＥＡＫまたはＴＷＥＡＫ−Ｒを封鎖することによって、あるいは、ＴＷＥＡＫまたはＴＷＥＡＫ−Ｒを分解するように標的化させることによって、阻害する。１つの実施形態においては、抗体は、ＴＷＥＡＫとその受容体との間での結合界面に関係している１つ以上のアミノ酸で、ＴＷＥＡＫまたはＴＷＥＡＫ−Ｒに結合することができる。このようなアミノ酸残基は、例えば、アラニンスキャンによって同定することができる。別の実施形態においては、抗体は、結合界面には関係していない残基に結合することができる。例えば、抗体は、ＴＷＥＡＫまたはＴＷＥＡＫ−Ｒの立体構造を変化させることができ、そしてそれによって、結合親和性を低下させることができるか、または、抗体は、立体障害となるように結合する場合もある。１つの実施形態においては、抗体は、ＴＷＥＡＫ−Ｒによって媒介される事象または活性の活性化（例えば、ＮＦ−κＢの活性化）を妨げることができる。
【００６６】
同様に、例示的なＴＮＦ−α遮断薬としては、ＴＮＦ−αおよび／またはＴＮＦ−α受容体（例えば、ＴＮＦＲ−ＩまたはＴＮＦＲ−ＩＩ）に結合する抗体が挙げられる。１つの実施形態においては、抗体は、ＴＮＦ−αとＴＮＦ−α受容体との間での相互作用を、例えば、相互作用を物理的にブロックすることによって、ＴＮＦ−αおよび／またはＴＮＦ−α−Ｒのその対応物に対する親和性を低下させることによって、ＴＮＦ−α複合体を破壊させるまたは脱安定化させることによって、ＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−α−Ｒを封鎖することによって、あるいは、ＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−α受容体を分解するように標的化させることによって、阻害する。１つの実施形態においては、抗体は、ＴＮＦ−α／ＴＮＦ−α受容体の結合界面に関係している１つ以上のアミノ酸で、ＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−α受容体に結合することができる。このようなアミノ酸残基は、例えば、アラニンスキャンによって同定することができる。別の実施形態においては、抗体は、ＴＮＦ−α／ＴＮＦ−α受容体の結合には関係していない残基に結合することができる。例えば、抗体は、ＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−α受容体の立体構造を変化させることができ、そしてそれによって、結合親和性を低下させることができるか、または、抗体は、立体障害となるようにＴＮＦ−α／ＴＮＦ−α受容体に結合する場合もある。
【００６７】
本明細書中で使用される場合は、用語「抗体」は、少なくとも１つの免疫グロブリン可変領域（例えば、免疫グロブリン可変ドメインまたは免疫グロブリン可変ドメイン配列を提供するアミノ酸配列）が含まれているタンパク質を意味する。例えば、抗体には重（Ｈ）鎖可変領域（本明細書中では、ＶＨと省略される）、および軽（Ｌ）鎖可変領域（本明細書中では、ＶＬと省略される）が含まれ得る。別の例においては、抗体には、２つの重
（Ｈ）鎖可変領域と、２つの軽（Ｌ）鎖可変領域が含まれ得る。用語「抗体」には、抗体の抗原結合断片（例えば、単鎖抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、およびｄＡｂ断片）、ならびに、完全な抗体（例えば、ＩｇＡ、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、ＩｇＥ、ＩｇＤ、ＩｇＭ（ならびにそれらのサブタイプ））型免疫グロブリンの完全な、および／または全長の免疫グロブリン）が含まれる。免疫グロブリンの軽鎖は、κ型またはλ型である場合がある。１つの実施形態においては、抗体はグリコシル化される。抗体は、抗体依存性細胞傷害性および／または補体媒介性細胞傷害性について機能的であり得、また、これらの活性の一方または両方について、非機能性である場合もある。
【００６８】
ＶＨおよびＶＬ領域はさらに、「フレームワーク領域」（ＦＲ）と呼ばれるより保存されている領域が点在する「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）と呼ばれる超可変性の領域に細分され得る。ＦＲおよびＣＤＲの範囲は、正確に定義されている（Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１−３２４２；およびＣｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．，（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７を参照のこと）。Ｋａｂａｔの定義が本明細書中で使用される。ＶＨとＶＬはそれぞれ、通常は、アミノ末端からカルボキシル末端に向かって以下の順序で並べられた３個のＣＤＲと４個のＦＲから構成される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。
【００６９】
「免疫グロブリンドメイン」は、免疫グロブリン分子の可変ドメインまたは定常ドメインに由来するドメインを意味する。免疫グロブリンドメインには、通常、およそ７個のβ−鎖から形成される２つのβ−シートと、保存されているジスルフィド結合が含まれる（例えば、Ａ．Ｆ．Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ａ．Ｎ．Ｂａｒｃｌａｙ（１９８８）Ａｎｎ．Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：３８１−４０５を参照のこと）。「免疫グロブリン可変ドメイン配列」は、抗原の結合に適している立体配置の中にＣＤＲ配列を配置するために十分な構造を形成することができるアミノ酸配列を意味する。例えば、配列には、自然界に存在している可変ドメインのアミノ酸配列全体またはその一部が含まれ得る。例えば、配列には、１つ、２つ、もしくはそれ以上のＮ末端またはＣ末端アミノ酸、内部アミノ酸が省略されている場合があり、１つ以上の挿入またはさらなる末端アミノ酸が含まれている場合があり、また、他の変更が含まれている場合もある。１つの実施形態においては、免疫グロブリン可変ドメイン配列が含まれているポリペプチドは、標的結合構造（または「抗原結合部位」）（例えば、標的タンパク質（例えば、ＴＷＥＡＫ、ＴＷＥＡＫ受容体、ＴＮＦ−α、ＴＮＦＲ−Ｉ、またはＴＮＦＲ−ＩＩ）と相互作用する構造）を形成するように、別の免疫グロブリン可変ドメイン配列と会合することができる。
【００７０】
抗体のＶＨまたはＶＬ鎖には、さらに、重鎖もしくは軽鎖定常領域全体またはその一部が含まれ得、それによって、それぞれ、免疫グロブリン重鎖または免疫グロブリン軽鎖が形成される。１つの実施形態においては、抗体は、２つの免疫グロブリン重鎖と２つの免疫グロブリン軽鎖の四量体である。免疫グロブリン重鎖と免疫グロブリン軽鎖は、ジスルフィド結合によって結合させることができる。重鎖定常領域には、通常、３つの定常ドメインＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３が含まれている。軽鎖定常領域には、通常、ＣＬドメインが含まれている。重鎖および軽鎖の可変領域には、抗原と相互作用する結合ドメインが含まれている。抗体の定常領域によって、通常は、宿主組織または因子（免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）、および古典的補体活性化経路（ｃｌａｓｓｉｃａｌ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ｓｙｓｔｅｍ）の第１の成分（Ｃｌｑ）が含まれる）に対する抗体の結合を媒介する。
【００７１】
抗体の１つ以上の領域はヒトのものであり得るか、有効にヒトのものであり得るか、またはヒト化されたものであり得る。例えば、１つ以上の可変領域が、ヒトの領域であり得るか、または有効にヒトのものであり得る。例えば、ＣＤＲの１つ以上（例えば、ＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、ＨＣ ＣＤＲ３、ＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、およびＬＣ ＣＤＲ３）がヒトのものであり得る。軽鎖ＣＤＲのそれぞれはヒトのものであり得る。ＨＣ ＣＤＲ３はヒトのものであり得る。フレームワーク領域の１つ以上は、ヒトのものであり得、例えば、ＨＣまたはＬＣのＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、およびＦＲ４であり得る。１つの実施形態においては、フレームワーク領域の全てが、ヒトのものであり、例えば、ヒトの体細胞（例えば、免疫グロブリンを生じる造血細胞、または非造血細胞）に由来するものである。１つの実施形態においては、ヒト配列は、生殖系列の細胞の配列（例えば、生殖系列の細胞の核酸によってコードされる配列）である。定常領域の１つ以上は、ヒトのものであり得るか、有効にヒトのものであり得るか、またはヒト化されたものであり得る。別の実施形態においては、フレームワーク領域（例えば、ＦＲ１、ＦＲ２と、ＦＲ３（合計で）、もしくはＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３と、ＦＲ４（合計で））あるいは抗体全体の少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、または９８％がヒトのものであり得るか、有効にヒトのものであり得るか、またはヒト化されたものであり得る。例えば、ＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３は、合計で、ヒトの生殖系列の細胞のセグメントによってコードされるヒト配列に対して、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９８％、あるいは９９％同一である場合も、またそれと完全に同一である場合もある。
【００７２】
「有効にヒトの」免疫グロブリン可変領域は、免疫グロブリン可変領域が正常なヒトにおいて免疫反応を誘発することがないように、十分な数のヒトフレームワークアミノ酸位置が含まれている免疫グロブリン可変領域である。「有効にヒトの」抗体は、抗体が正常なヒトにおいては免疫反応を誘発することがないように、十分な数のヒトのアミノ酸位置が含まれている抗体である。
【００７３】
「ヒト化」免疫グロブリン可変領域可変領域は、修飾された形態が修飾されていない形態よりも少ない免疫反応をヒトにおいて誘発するように修飾された（例えば、免疫グロブリン可変領域が正常なヒトにおいては免疫反応を誘発しないように、十分な数のヒトのフレームワークアミノ酸位置を含むように修飾されている）免疫グロブリン可変領域である。「ヒト化」免疫グロブリンの記載としては、例えば、米国特許第６，４０７，２１３号、および同第５，６９３，７６２号が挙げられる。いくつかの場合には、ヒト化免疫グロブリンには、１つ以上のフレームワークアミノ酸位置にヒト以外のアミノ酸が含まれ得る。
【００７４】
（抗体の作製）
標的タンパク質（例えば、ＴＷＥＡＫ、ＴＷＥＡＫ−Ｒ、ＴＮＦ−α、ＴＮＦＲ−Ｉ、またはＴＮＦＲ−ＩＩ）に結合する抗体は、様々な手段（例えば、動物を使用するか、またはファージディスプレイのようなインビトロでの方法における免疫化が含まれる）によって作成することができる。標的タンパク質全体またはその一部を、免疫原として、または選択のための標的として使用することができる。１つの実施形態においては、免疫化された動物には、自然界に存在している、ヒト免疫グロブリン遺伝子座、またはヒト免疫グロブリン遺伝子座の一部を有している免疫グロブリンを生産する細胞が含まれる。１つの実施形態においては、ヒト以外の動物に、ヒト免疫グロブリン遺伝子の少なくとも一部が含まれる。例えば、ヒトＩｇ遺伝子座の大きな断片を用いて、マウスの抗体生産が欠損しているマウス株を操作することができる。ハイブリドーマ技術を使用して、所望される特異性を有している遺伝子に由来する抗原特異的モノクローナル抗体を生産させ、そして選択することができる。例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標），Ｇｒｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９４）Ｎａｔ．Ｇｅｎ．７：１３−２１；Ｕ．Ｓ．２００３−００７０１８５；
米国特許第５，７８９，６５０号；およびＰＣＴ出願番号ＷＯ９６／３４０９６を参照のこと。
【００７５】
標的タンパク質に対するヒト以外の抗体はまた、（例えば、齧歯類の中で）生産させることもできる。ヒト以外の抗体は、（例えば、ＥＰ ２３９ ４４０；米国特許第６，６０２，５０３号；同第５，６９３，７６１号；および同第６，４０７，２１３号に記載されているように）ヒト化させることができるか、脱免疫化させることができるか、または、別の方法で、それをヒトに有効であるようにするために修飾することができる。
【００７６】
ＥＰ ２３９ ４００（Ｗｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．）には、１つの種のそれらの相補性決定領域（ＣＤＲ）の別の種に由来する相補性決定領域での置換（所定の可変領域の中での置換）によって、抗体を変化させることが記載されている。典型的には、ヒト以外（例えば、マウス）の抗体のＣＤＲは、組み換え核酸技術によってヒト抗体の中の対応する領域の中で置換して、所望される置換抗体をコードする配列を得ることができる。所望されるアイソタイプ（通常は、ＣＨについてはγＩ、そしてＣＬについてはκ）のヒトの定常領域遺伝子セグメントを付加することができ、ヒト化重鎖遺伝子および軽鎖遺伝子を哺乳動物細胞の中で同時に発現させて、可溶性のヒト化抗体を生産させることができる。
【００７７】
抗体をヒト化するための他の方法もまた使用することができる。例えば、他の方法で、抗体の三次元構造、結合決定基に近い、三次元構造の中に存在しているフレームワーク位置、および免疫原性ペプチドの配列を説明することができる。例えば、ＰＣＴ出願番号ＷＯ９０／０７８６１；米国特許第５，６９３，７６２号；同第５，６９３，７６１号；同第５，５８５，０８９号；および同第５，５３０，１０１号；Ｔｅｍｐｅｓｔ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：２６６−２７１および米国特許第６，４０７，２１３号を参照のこと。なお別の方法は、ヒューマニアリング（ｈｕｍａｎｅｅｒｉｎｇ）と呼ばれ、例えば、Ｕ．Ｓ．２００５−００８６２５に記載されている。
【００７８】
標的タンパク質に結合する完全にヒトのモノクローナル抗体は、Ｂｏｅｒｎｅｒ ｅｔ
ａｌ．，（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：８６−９５に記載されているように、例えば、インビトロで感作させられたヒト脾臓細胞を使用して、生産させることができる。これらは、Ｐｅｒｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８８：２４３２−２４３６に、またはＨｕａｎｇ ａｎｄ Ｓｔｏｌｌａｒ（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １４１：２２７−２３６；また、米国特許第５，７９８，２３０に記載されているように、レパートリークローニングによって調製することもできる。大きな免疫化されていないヒトファージディスプレイライブラリーもまた、標準的なファージ技術を使用して、ヒトの治療薬として開発することができる高親和性抗体を単離するために使用することができる（例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．，（１９９８）Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ４：１−２０；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｔｏｄａｙ ２：３７１−３７８；およびＵ．Ｓ．２００３−０２３２３３３を参照のこと）。
【００７９】
（抗体およびタンパク質の生産）
本明細書中に記載される抗体および他のタンパク質は、原核生物細胞の中で生産させることができ、また、真核生物細胞の中で生産させることもできる。１つの実施形態においては、抗体（例えば、ｓｃＦｖ）は、ピキア（Ｐｉｃｈｉａ）（例えば、Ｐｏｗｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２５１：１２３−３５）、ハンゼヌラ（Ｈａｎｓｅｕｌａ）、またはサッカロマイセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）のような酵母細胞の中で発現させられる。
【００８０】
抗体（特に、全長の抗体（例えば、ＩｇＧ））は、哺乳動物細胞の中で生産させること
ができる。組み換え発現のための例示的な哺乳動物宿主細胞としては、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（ＤＨＦＲ選択マーカー（例えば、Ｋａｕｆｍａｎ ａｎｄ Ｓｈａｒｐ（１９８２）Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５９：６０１−６２１に記載されているもの）とともに使用される、Ｕｒｌａｕｂ ａｎｄ Ｃｈａｓｉｎ（１９８０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７７：４２１６−４２２０に記載されているｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞が含まれる）、リンパ球細胞株（例えば、ＮＳ０骨髄腫細胞およびＳＰ２細胞）、ＣＯＳ細胞、Ｋ５６２、ならびにトランスジェニック動物（例えば、トランスジェニック哺乳動物）に由来する細胞が挙げられる。例えば、細胞は、哺乳動物の上皮細胞である。
【００８１】
免疫グロブリンドメインをコードする核酸配列に加えて、組み換え発現ベクターは、さらなる核酸配列（例えば、宿主細胞の中でのベクターの複製を調節する配列（例えば、複製起点）および選択マーカー遺伝子）を有している場合がある。選択マーカー遺伝子は、その中にベクターが導入されている宿主細胞の選択を容易にする（例えば、米国特許第４，３９９，２１６号；同第４，６３４，６６５号；および同５，１７９，０１７号を参照のこと）。例示的な選択マーカー遺伝子としては、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）遺伝子（メトトレキセート選択／増幅と共にｄｈｆｒ−宿主細胞において使用される）、およびｎｅｏ遺伝子（Ｇ４１８の選択のため）が挙げられる。
【００８２】
抗体（例えば、全長の抗体またはその抗原結合部分）の組み換え発現のための例示的なシステムにおいては、抗体重鎖および抗体軽鎖の両方をコードする組み換え発現ベクターが、リン酸カルシウム媒介性トランスフェクションによって、ｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞に導入される。組み換え発現ベクターの中では、抗体重鎖および抗体軽鎖遺伝子は、遺伝子の高レベルの転写を駆動するために、それぞれ、エンハンサー／プロモーター調節エレメント（例えば、ＳＶ４０、ＣＭＶ、アデノウイルスなどに由来するもの）（例えば、ＣＭＶエンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節エレメント、またはＳＶ４０エンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節エレメント）に対して、動作可能であるように連結される。組み換え発現ベクターはまた、ＤＨＦＲ遺伝子をも有しており、これによって、メトトレキセート選択／増幅を使用して、ベクターでトランスフェクトされているＣＨＯ細胞を選択することが可能となる。選択された形質転換体宿主細胞は培養されて、抗体重鎖と軽鎖が発現させられ、そして完全な抗体が培養培地から回収される。標準的な分子生物学的技術が、組み換え発現ベクターを調製するため、宿主細胞をトランスフェクトするため、形質転換体を選択するため、宿主細胞を培養するため、そして培養培地から抗体を回収するために使用される。例えば、いくつかの抗体は、プロテインＡまたはプロテインＧを用いるアフィニティークロマトグラフィーによって単離することができる。
【００８３】
抗体（およびＦｃ融合体）には、修飾（例えば、Ｆｃ機能を変化させる（例えば、Ｆｃ受容体と、もしくはＣｌｑと、もしくはそれらの両方との相互作用を低下させるかまたは排除するための）修飾）も含まれ得る。例えば、ヒトＩｇＧ定常領域は、１つ以上の残基（例えば、米国特許第５，６４８，２６０の番号付けにしたがう残基２３４から２３７の１つ以上）で変異させることができる。他の例示的な修飾としては、米国特許第５，６４８，２６０に記載されている修飾が挙げられる。
【００８４】
Ｆｃドメインが含まれているいくつかのタンパク質については、抗体／タンパク質の生産システムは、その中のＦｃ領域がグリコシル化されている抗体または他のタンパク質を合成するように設計される場合がある。例えば、ＩｇＧ分子のＦｃドメインは、ＣＨ２ドメインのアスパラギン２９７でグリコシル化される。Ｆｃドメインにはまた、他の真核生物の翻訳後修飾も含まれ得る。他の場合には、タンパク質は、グリコシル化されていない形態で生産される。
【００８５】
抗体および他のタンパク質はまた、トランスジェニック動物によって生産させることもできる。例えば、米国特許第５，８４９，９９２号には、トランスジェニック哺乳動物の乳腺の中での抗体の発現のための方法が記載されている。乳汁特異的プロモーター、および目的の抗体（例えば、本明細書中に記載されている抗体）と分泌のためのシグナル配列をコードする核酸配列が含まれているトランスジーンが構築される。このようなトランスジェニック哺乳動物の雌によって生産される乳汁には、その中に分泌された目的のタンパク質（例えば、抗体またはＦｃ融合タンパク質）が含まれる。タンパク質は、乳汁から精製することができ、また、いくつかの用途については直接使用することもできる。
【００８６】
抗体の状況において記載される方法は、他のタンパク質（例えば、Ｆｃ融合体および可溶性受容体断片）に適応させることができる。
【００８７】
（核酸である遮断薬）
特定の実施態様においては、核酸である遮断薬は、標的タンパク質（例えば、ＴＷＥＡＫ、ＴＷＥＡＫ−Ｒ（例えば、Ｆｎ１４）、ＴＮＦ−α、ＴＮＦＲ−Ｉ、またはＴＮＦＲ−ＩＩ）の発現を低下させるために使用される。これらの薬剤は、タンパク質様のＴＷＥＡＫ遮断薬およびＴＮＦ−α遮断薬の代わりに、またはそれらに加えて使用することができる。１つの実施形態においては、核酸アンタゴニストは、標的タンパク質をコードする内因性遺伝子から生産されるｍＲＮＡに対して指向させられたｓｉＲＮＡである。例えば、ｓｉＲＮＡには、ｍＲＮＡに相補的な領域が含まれる。他のタイプのアンタゴニスト核酸（例えば、ｄｓＲＮＡ、リボザイム、トリプルヘリックスホーマー（ｔｒｉｐｌｅ−ｈｅｌｉｘ ｆｏｒｍｅｒ））、またはアンチセンス核酸）もまた使用することができる。
【００８８】
ｓｉＲＮＡは、必要に応じて突出が含まれている、小さい二本鎖のＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）である。例えば、ｓｉＲＮＡの二本鎖の領域は、約１８から２５ヌクレオチドの長さ（例えば、約１９、２０、２１、２２、２３、または２４ヌクレオチドの長さ）である。通常、ｓｉＲＮＡ配列は、標的ｍＲＮＡに対して正確に相補的である。ｄｓＲＮＡおよびｓｉＲＮＡは、具体的には、哺乳動物細胞（例えば、ヒト細胞）の中で遺伝子発現をサイレンスにするために使用することができる。例えば、Ｃｌｅｍｅｎｓ ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ），９７：６４９９−６５０３；Ｂｉｌｌｙ ｅｔ ａｌ．，（２００１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９８：１４４２８−１４４３３；Ｅｌｂａｓｈｉｒ ｅｔ ａｌ．，（２００１）Ｎａｔｕｒｅ．４１１：４９４−８；Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，（２００２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９９：９９４２−９９４７、米国特許公報２００３−０１６６２８２；２００３−０１４３２０４；２００４−００３８２７８；および２００３−０２２４４３２を参照のこと。
【００８９】
アンチセンスである薬剤には、例えば、約８から約８０核酸塩基（すなわち、約８から約８０ヌクレオチド）、例えば、約８から約５０核酸塩基、または約１２から約３０核酸塩基が含まれ得る。アンチセンス化合物としては、リボザイム、外部ガイド配列（ＥＧＳ）オリゴヌクレオチド（オリゴザイム）、および標的核酸にハイブリダイズしてその発現を調節する他の短い触媒性ＲＮＡまたは触媒性オリゴヌクレオチドが挙げられる。アンチセンス化合物としては、標的遺伝子中の配列に相補的である少なくとも８個の連続している核酸塩基のストレッチを挙げることができる。オリゴヌクレオチドは、特異的にハイブリダイズすることができるその標的核酸に対して必ずしも１００％相補的でなくてもよい。オリゴヌクレオチドは、標的に対するそのオリゴヌクレオチドの結合によって標的分子の正常な機能を妨害して、有用性の低下を引き起こし、そして、特異的な結合が所望される条件下での（すなわち、インビボでのアッセイまたは治療的処置の場合には生理学的条件下での、また、インビトロでのアッセイの場合には、アッセイが行われる条件下での）標的以外の配列に対するオリゴヌクレオチドの非特異的結合を回避するために十分な程度
の相補性が存在する場合には、特異的にハイブリダイズすることができる。
【００９０】
ｍＲＮＡ（例えば、標的タンパク質をコードするｍＲＮＡ）とのアンチセンスオリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーションによってｍＲＮＡの通常の機能の１つ以上を妨害することができる。妨害されるｍＲＮＡの機能としては、全ての重要な機能（例えば、タンパク質の翻訳部位へのＲＮＡのトランスロケーション、ＲＮＡからのタンパク質の翻訳、１つ以上のｍＲＮＡ種を得るためのＲＮＡのスプライシング、およびＲＮＡが関与している可能性がある触媒活性）が挙げられる。ＲＮＡに対する特異的なタンパク質（単数または複数）の結合が、ＲＮＡに対するアンチセンスオリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーションによって妨害される場合もある。
【００９１】
例示的なアンチセンス化合物としては、標的核酸（例えば、標的タンパク質をコードするｍＲＮＡ）に特異的にハイブリダイズするＤＮＡまたはＲＮＡ配列が挙げられる。相補性領域は、約８核酸塩基から約８０核酸塩基の間にまでまたがり得る。これらの化合物には、１つ以上の修飾された核酸塩基が含まれ得る。修飾された核酸塩基としては、例えば、５−置換ピリミジン（例えば、少し記述するだけでも、５−ヨードウラシル、５−ヨードシトシン、およびＣ５−プロピニルピリミジン（例えば、Ｃ５−プロピニルシトシンおよびＣ５−プロピニルウラシル）を挙げることができる。様々な核酸薬剤についての記載を利用することができる。例えば、米国特許第４，９８７，０７１号；同第５，１１６，７４２号；および同第５，０９３，２４６号；Ｗｏｏｌｆ ｅｔ ａｌ．，（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，；Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ＲＮＡ ａｎｄ ＤＮＡ，Ｄ．Ａ．Ｍｅｌｔｏｎ、編．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８８）；８９：７３０５−９；Ｈａｓｅｌｈｏｆｆ ａｎｄ Ｇｅｒｌａｃｈ（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ ３３４：５８５−５９；Ｈｅｌｅｎｅ，Ｃ．（１９９１）Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ
Ｄｒｕｇ Ｄｅｓ．６：５６９−８４；Ｈｅｌｅｎｅ（１９９２）Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．６６０：２７−３６；およびＭａｈｅｒ（１９９２）Ｂｉｏａｓｓａｙｓ １４：８０７−１５を参照のこと。
【００９２】
本明細書中に記載される核酸（例えば、本明細書中に記載されるアンチセンス核酸）は、薬剤を発現させ、そして生産させるために使用することができる核酸（例えば、アンチセンス核酸）を細胞内に送達するための遺伝子治療プロトコールの一部として使用される遺伝子構築物の中に取り込ませることができる。このような成分の発現構築物は、任意の生物学的に有効な担体の中で、例えば、インビボで細胞にこの成分遺伝子を効率よく送達することができる任意の処方物または組成物の中で、投与することができる。アプローチには、ウイルスベクター（組み換えレトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レンチウイルス、および単純ヘルペスウイルス−１、あるいは、組み換え体の細菌または真核生物プラスミドが含まれる）の中への目的の遺伝子の挿入が含まれる。ウイルスベクターは細胞に直接トランスフェクトする；プラスミドＤＮＡは、例えば、陽イオン性リポソーム（リポフェクチン）または誘導体化された（例えば、抗体が結合させられた）、ポリリジン結合体、グラマシジンＳ、人工のウイルスエンベロープ、または他のそのような細胞内担体の助けを借りて送達することができ、さらに、遺伝子構築物の直接の注入またはＣａＰＯ４沈殿がインビボで行われる。
【００９３】
細胞内への核酸のインビボでの導入のための好ましいアプローチは、核酸（例えば、ｃＤＮＡ）を含むウイルスベクターの使用による。ウイルスベクターでの細胞の感染には、標的化された細胞の大部分が核酸を受け取ることができるという利点がある。加えて、ウイルスベクターの中に（例えば、ウイルスベクターの中に含まれるｃＤＮＡによって）コードされる分子は、ウイルスベクターの核酸を取り込んだ細胞の中で効率よく発現される。
【００９４】
レトロウイルスベクター、およびアデノ随伴ウイルスベクターは、（特に、ヒトへの）インビボでの外因性遺伝子の導入のための組み換え遺伝子送達システムとして使用することができる。これらのベクターにより、細胞への遺伝子の効率的な送達が提供され、そして形質導入された核酸は、宿主の染色体ＤＮＡに安定に組み込まれる。組み換え体レトロウイルスを生産するため、およびインビトロもしくはインビボで細胞をそのようなウイルスに感染させるためのプロトコールは、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．，（編）Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，（１９８９），Ｓｅｃｔｉｏｎｓ ９．１０−９．１４および他の標準的な実験室マニュアルにおいて見ることができる。適切なレトロウイルスの例としては、ｐＬＪ、ｐＺＩＰ、ｐＷＥ、およびｐＥＭが挙げられる。これらは当業者に公知である。エコトロピックなおよび両栄養性レトロウイルスシステムの両方を調製するための適切なパッケージングウイルス株の例としては、＊Ｃｒｉｐ、＊Ｃｒｅ、＊２、および＊Ａｍが挙げられる。レトロウイルスは、インビトロおよび／またはインビボで、上皮細胞を含む多くの様々な細胞のタイプの中に様々な遺伝子を導入するために使用されている（例えば、Ｅｇｌｉｔｉｓ，ｅｔ ａｌ．（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３０：１３９５−１３９８；Ｄａｎｏｓ ａｎｄ Ｍｕｌｌｉｇａｎ（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：６４６０−６４６４；Ｗｉｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：３０１４−３０１８；Ａｒｍｅｎｔａｎｏ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：６１４１−６１４５；Ｈｕｂｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：８０３９−８０４３；Ｆｅｒｒｙ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：８３７７−８３８１；Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５４：１８０２−１８０５；ｖａｎ Ｂｅｕｓｅｃｈｅｍ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：７６４０−７６４４；Ｋａｙ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ３：６４１−６４７；Ｄａｉ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１０８９２−１０８９５；Ｈｗｕ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：４１０４−４１１５；米国特許第４，８６８，１１６、および４，９８０，２８６；ＰＣＴ出願番号ＷＯ８９／０７１３６；同ＷＯ８９／０２４６８；同ＷＯ８９／０５３４５；および同ＷＯ９２／０７５７３を参照のこと）。
【００９５】
別のウイルス遺伝子送達システムでは、アデノウイルスに由来するウイルスが利用される。例えば、Ｂｅｒｋｎｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９８８）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ６：６１６；Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５２：４３１−４３４、およびＲｏｓｅｎｆｅｌｄ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｃｅｌｌ ６８：１４３−１５５を参照のこと。アデノウイルス株Ａｄタイプ５ ｄｌ３２４またはアデノウイルスの他の株（例えば、Ａｄ２、Ａｄ３、Ａｄ７など）に由来する適切なアデノウイルスベクターが当業者に公知である。
【００９６】
本発明の遺伝子の送達に有用であるなお別のウイルスベクターシステムは、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）である。例えば、Ｆｌｏｔｔｅ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．７：３４９−３５６；Ｓａｍｕｌｓｋｉ
ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６３：３８２２−３８２８；およびＭｃＬａｕｇｈｌｉｎ ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６２：１９６３−１９７３）を参照のこと。
【００９７】
（人工的な転写因子）
人工的な転写因子もまた、標的タンパク質（例えば、ＴＷＥＡＫ、ＴＷＥＡＫ−Ｒ（例えば、Ｆｎ１４）、ＴＮＦ−α、ＴＮＦＲ−Ｉ、またはＴＮＦＲ−ＩＩ）の発現を調節するために使用することができる。人工的な転写因子は、例えば、標的タンパク質をコードする内因性の遺伝子の中の（例えば、調節領域の中の）配列（例えば、プロモーター）に結合する能力について、ライブラリーから設計し、そして選択することができる。例えば、人工的な転写因子は、インビトロでの選択（例えば、ファージディスプレイ（米国特許第６，５３４，２１６号）を使用して）またはインビボでの選択によって、あるいは、認識コードに基づく設計によって（例えば、ＰＣＴ出願番号ＷＯ００／４２２１９、および米国特許第６，５１１，８０８号を参照のこと）調製することができる。例えば、特に、多様な亜鉛フィンガードメインのライブラリーを作成するための方法については、Ｒｅｂａｒ ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ ２６７：１２９；Ｇｒｅｉｓｍａｎ ａｎｄ Ｐａｂｏ（１９９７）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７５：６５７；Ｉｓａｌａｎ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １９：６５６；およびＷｕ ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９２：３４４を参照のこと。
【００９８】
必要に応じて、人工的な転写因子を、転写調節ドメイン（例えば、転写を活性化させるためには活性化ドメイン、または転写を抑制するためには抑制ドメイン）に融合させることができる。具体的には、抑制ドメインは、ＴＷＥＡＫ、またはＴＷＥＡＫ−Ｒをコードする内因性遺伝子の発現を低下させるために使用することができる。人工的な転写因子は、それ自体が、異種核酸によってコードされるものであり得、これは細胞に送達されるか、またはタンパク質自体が細胞に送達され得る（例えば、米国特許第６，５３４，２６１号を参照のこと）。人工的な転写因子をコードする配列が含まれている異種核酸は、（例えば、細胞の中での人工的な転写因子のレベルを微調整することを可能にするための）誘導性プロモーターに動作可能であるように連結させることができる。
【００９９】
（関節リウマチ（ＲＡ））
関節リウマチ（ＲＡ）は、主に関節において痛み、腫れ、凝り、および機能障害を引き起こす慢性的な炎症性疾患である。ＲＡは、多くの場合は、滑膜において始まり、これは、関節の周囲を取り囲み、防御性の嚢を作成する膜である。ＲＡに罹患している多くの個体においては、白血球は循環から滑膜へと浸潤して、持続的な異常な炎症（例えば、滑膜炎）を引き起こす。結果として、滑膜は炎症を起こし、熱くなり、赤くなり、腫れ、および痛みを引き起こす。軟骨の中のコラーゲンは段階的に分解されて、関節空間は狭くなり、最終的には骨を損傷する。炎症によって、罹患した領域において侵食性の骨の損傷が生じる。このプロセスの間に、滑膜の細胞は増殖し、そして異常に分裂し、これによって、正常な薄い滑膜の厚みが生じ、腫れた、そして触ってみると浮腫んでいる関節が生じる。
【０１００】
ＲＡが進行するに伴い、異常な滑膜細胞は、関節の中の軟骨および骨に浸潤し、これらを破壊することができる。関節を支えそして安定化させる周辺の筋肉、靭帯、および腱は弱くなり、そして正常に機能できなくなる場合がある。ＲＡはまた、骨粗鬆症に至る可能性があるより全身にわたる骨量減少も引き起こす場合があり、骨を脆くし、骨折しやすくなる。これらの作用の全てによって、ＲＡに伴う痛み、機能障害、および変形が生じる。罹患する可能性がある領域としては、手首、指関節、膝、および母指球が挙げられる。多くの場合には、複数の関節が関係し得、そしてさらには脊椎も罹患する可能性がある。ＲＡに罹患しているヒトのおよそ２５％においては、小さい血管の炎症によって、皮膚下でリウマチ結節またはしこりが引き起こされる可能性がある。皮膚の下には瘤が存在し、これらは多くの場合は、関節の近くに形成される。疾患が進行するに伴い、特に、足関節においては、流体も蓄積する場合がある。ＲＡに罹患している多くの患者は、貧血もまた発症するか、または、赤血球数が正常値よりも低下する。
【０１０１】
ＲＡには、多数の疾患のサブタイプ（例えば、フェルティー症候群、血清反応陰性ＲＡ、「古典的」ＲＡ、進行性および／または再発型ＲＡ、ならびに、脈管炎を伴うＲＡ）が含まれる。一部の専門家らは、疾患を、１型または２型に分類している。１型は、あまり一般的ではない形態であり、ほとんどの場合には数ヶ月間持続し、そして永久的な機能障害は残さない。２型は慢性的であり、数年間持続し、ときには、一生持続する。ＲＡは、皮下のリウマチ結節、内臓の小結節（ｖｉｓｃｅｒａｌ ｎｏｄｕｌｅｓ）、下腿潰瘍もしくは多発単神経炎を引き起こす脈管炎、胸膜および心嚢の滲出、リンパ節腫脹症、フェルティー症候群、シェーグレン症候群、および上強膜炎として発症する場合がある。これらの疾患のサブタイプおよび上記の症状の１つ以上を示す被験体も、本明細書中に記載されている方法を使用して処置することができる。
【０１０２】
ＲＡは、全ての人種および民族にわたって起こる。少なくとも１つの遺伝的素因が同定されており、これは、白色人種において、クラスＩＩ組織適合性遺伝子のＨＬＡ−ＤＲ １遺伝子座の中のペンタペプチドに位置が特定されている。
【０１０３】
ＲＡは、様々な臨床的な測定によって評価することができる。いくつかの例示的な基準としては、Ｓｈａｒｐスコアの合計（ＴＳＳ）、Ｓｈａｒｐ浸食スコア、およびＨＡＱ障害指数が挙げられる。本明細書中に記載される方法は、これらの基準の少なくとも１つの改善を行うために使用することができる。
【０１０４】
（ＴＮＦ−α遮断薬に対して反応しない患者）
１つの態様においては、関節リウマチを有する被験体、またはＲＡのリスクがある被験体、または本明細書中に記載される別の疾患を有しているかもしくはそのリスクがある被験体を、特定の薬剤（例えば、生物学的ＤＭＡＲＤ）に反応するそれらの能力（例えば、ＴＮＦ−α遮断薬（例えば、エタネルセプト、インフリキシマブ、またはアダリムマブ）に反応するそれらの能力）の指標となるパラメーターについて評価することができる。例えば、パラメーターは、ＴＮＦ−αをコードする遺伝子の中に１つのヌクレオチドが存在するか、または存在しないかであり得る。特定の薬剤に対してあまり反応しないかまたは反応しないことが示された被験体には、別の薬剤を投与することができる。例えば、エタネルセプトに反応しないことが示された被験体には、ＴＷＥＡＫ遮断薬を投与することができる。
【０１０５】
ＴＮＦＡ−８５７Ｃ／Ｔ ＳＮＰのＴ対立遺伝子を有している関節リウマチの患者は、Ｃ対立遺伝子についてホモ接合型よりも、エタネルセプト治療に対して良好に反応する可能性がある。Ｋａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ ２００５年４月；４４（４）５４７−５２。したがって、Ｃ対立遺伝子についてホモ接合型であるＲＡ患者は、ＴＷＥＡＫ遮断薬で処置することができ、そして、エタネルセプトまたは他のＴＮＦ−α遮断薬を控えることができ、また、投与量を（例えば、標準的な用量と比較して）減少させることができる。
【０１０６】
（ＲＡ治療に対して反応しない患者）
ＲＡについての様々な処置を、ＴＮＦ−α遮断薬に加えて、利用することができる。これらの多くは、疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）として分類される治療薬である。伝統的なＤＭＡＲＤＳとしては、ＰＬＡＱＵＥＮＩＬ（登録商標）（ヒドロキシクロロキン（ｈｙｄｒｏｘｙｃｈｌｏｒｏｑｕｉｎｅ））、ＡＺＵＬＦＩＤＩＮＥ（登録商標）（スルファサラジン）、またはＲＨＥＵＭＡＴＲＥＸ（登録商標）（メトトレキセート）が挙げられる。関節リウマチについては、関節リウマチにおけるＤＭＡＲＤ治療からの撤退率が、患者に薬物が投与されている時間の長さに伴って増大すること、およびこれらの撤退のうちの多数が効能の低下に関係していることが観察されている（例えば、Ａｎｎａｌｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｒｈｅｕｍａｔｉｃ Ｄｉｓｅａｓｅｓ（２００３）６２：９５−９
６を参照のこと）。したがって、ＴＷＥＡＫ遮断薬もまた、ＤＭＡＲＤでの処置に対して不適切な反応（例えば、以下の薬剤の１つでの処置に対する不適切な反応）を有している被験体に投与することができる：
ａ．サリチル酸塩（例えば、アスピリン）を含む、非ステロイド系抗炎症薬。
【０１０７】
ｂ．金化合物。一部の患者においては、金によって、臨床的寛解が生じる場合があり、そして新しい骨の浸食の形成が減少する場合がある。非経口用の調製物には、金チオリンゴ酸ナトリウムまたは金チオグルコースが含まれる。金は、毒性の兆候が現れると中止されるべきである。小さい毒性の兆候（例えば、軽い掻痒感、軽い発疹）は、金療法を一時中止することによって解消することができる場合があり、その後、症状が穏やかになったおよそ２週間後に、注意深く再開される。しかし、毒性の症状が進行する場合には、金療法は中止されるべきである。ＴＷＥＡＫ遮断薬は、金の使用が中止される場合、または、金キレート化剤（例えば、ジメルカプロール）が金毒性を中和するために投与される場合に、投与することができる。
【０１０８】
ｃ．ヒドロキシクロロキン（ｈｙｄｒｏｘｙｃｈｌｏｒｏｑｕｉｎｅ）もまた、軽いまたは中程度の活動性ＲＡ（ａｃｔｉｖｅ ＲＡ）の症状を制御することができる。毒性の作用は、通常は軽度であり、これには、皮膚炎、筋障害、および一般的に可逆性の角膜混濁が含まれる。しかし、不可逆性の網膜変性が報告されている。ヒドロキシクロロキン（ｈｙｄｒｏｘｙｃｈｌｏｒｏｑｕｉｎｅ）の使用は中止することができ、そして、例えば、ＴＷＥＡＫ遮断薬で、例えば、これらの副作用の１つ以上が検出された時点で、置き換えることができる。
【０１０９】
ｄ．経口ペニシラミンには、金と類似する利点がある場合がある。使用の中止が必要となるような副作用は、金よりも多く見られ、そしてこれには、骨髄抑制、タンパク尿、ネフローゼ、他の深刻な毒性作用（例えば、重症筋無力症、天疱瘡、グッドパスチャー症候群、多発性筋炎、狼瘡様症候群）、発疹、および不快な味覚が含まれる。経口ペニシラミンは、使用を中止することができ、そして、例えば、ＴＷＥＡＫ遮断薬で、例えば、これらの副作用の１つ以上が検出された時点で、置き換えることができる。
【０１１０】
ｅ．ステロイドは、非常に有効な短期間の抗炎症薬である。しかし、ＲＡについてのそれらの臨床的な利点は、多くの場合は時間と共に低下する。ステロイドは、関節破壊の進行を妨げることはないと予想される。さらに、深刻なリバウンドが、多くの場合には、活動性疾患におけるコルチコステロイドの使用の中止後に起こる。したがって、ＴＷＥＡＫ遮断薬を、使用の中止の前に、中止の間に、または完全な中止後に投与することができる。ＴＷＥＡＫ遮断薬の使用の中止またはその使用のきっかけとなり得る他の副作用としては、消化性潰瘍、高血圧、処置されていない感染、真性糖尿病、および緑内障が挙げられる。
【０１１１】
ｆ．免疫抑制剤は、重症の活動性ＲＡの管理において使用することができる。しかし、重篤な副作用が起こる可能性があり、これには、肝疾患、肺炎、骨髄抑制、およびアザチオプリンの長期にわたる使用後の悪性腫瘍が含まれる。免疫抑制剤の使用の中止には、ＴＷＥＡＫ遮断薬を、例えば、副作用が検出された時点で、投与することが含まれ得る。
【０１１２】
あるいは、ＴＷＥＡＫ遮断薬は、ＲＡについての別の処置（例えば、上記の処置の１つ）が投与されている被験体に投与することができる。処置とＴＷＥＡＫ遮断薬の組み合わせを使用して、さらなる治療上の利点を得ることができ、そして、状況によっては、他の処置の投与量を減少させることができる。結果として、副作用および他の問題が軽減させることができる。
【０１１３】
本明細書中に記載される方法（例えば、ＴＷＥＡＫ遮断薬での単剤療法または併用療法（例えば、ＴＷＥＡＫ遮断薬とＴＮＦ−α遮断薬を用いる併用療法））を、ＲＡの１つ以上の重篤な合併症を有している被験体を処置するために使用することができる。このような合併症としては、関節崩壊、消化管出血、心不全、心膜炎、胸膜炎、肺疾患、貧血、血小板数の減少または増加、眼疾患、頚（首）椎の不安定、神経症、および脈管炎が挙げられる。
【０１１４】
（他の疾患）
本明細書中に記載される方法はまた、患者の他の炎症性疾患、免疫疾患、または自己免疫疾患（例えば、ＴＮＦ−α遮断薬の投与によって悪化することのない疾患）を処置するために使用することもできる。処置することができる疾患の例としては、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎およびクロ−ン病を含む）、乾癬、または炎症性筋炎が挙げられる。炎症性疾患のなお他の例としては、ランゲルハンス細胞組織球増殖症、成人呼吸窮迫症候群／閉塞性細気管支炎、ヴェ−ゲナ−肉芽腫症、脈管炎、悪液質、口内炎、特発性肺線維症、皮膚筋炎または多発性筋炎、非感染性強膜炎、肺の関与を伴う慢性サルコイド−シス症候群、骨髄異形成症候群／過度の芽細胞を伴う難治性貧血、潰瘍性大腸炎、中度から重症の慢性閉塞性肺疾患、および巨細胞性大動脈炎が挙げられる。
【０１１５】
これらの疾患の１つのリスクがある、これらの疾患の１つと診断された、またはこれらの疾患の１つに罹患している被験体には、全体的な治療的効果を提供するための量で、そしてそのような時間の間、ＴＷＥＡＫ遮断薬を投与することができる。ＴＷＥＡＫ遮断薬は、ＴＮＦ−α遮断薬と組み合わせて、またはＴＮＦ−α遮断薬を提供することなく（例えば、その使用を中止して）投与することができる。併用療法の場合には、投与される量および時間は、例えば、高い治療効果、または相乗的な治療効果をもたらす量および時間であり得る。さらに、ＴＷＥＡＫ遮断薬（ＴＮＦ−α遮断薬と一緒に、またはＴＮＦ−α遮断薬を伴わない）の投与は、一次（例えば、一次治療）として、または二次治療として（例えば、先におこなわれた治療（すなわち、ＴＷＥＡＫ遮断薬との併用療法以外の治療法）に対して不適切な反応を有している被験体について）使用することができる。
【０１１６】
（薬学的組成物）
ＴＷＥＡＫ遮断薬（例えば、抗体、または可溶性ＴＷＥＡＫ−Ｒタンパク質（例えば、ＴＷＥＡＫ−Ｒ−Ｆｃ））は、例えば、本明細書中に記載される疾患（例えば、関節リウマチまたは本明細書中に記載される他の疾患のような、炎症性疾患）を処置するために被験体に投与される、薬学的組成物として処方することができる。ＴＮＦ−α遮断薬は、同じ組成物中に、または別の組成物としてのいずれかで、同様に処方することができる。
【０１１７】
代表的に、薬学的組成物には、薬学的に許容される担体が含まれる。本明細書中で使用される場合は、「薬学的に許容される担体」には、任意の、およびあらゆる溶媒、分散媒体、コーティング剤、抗菌剤および抗真菌剤、等張化剤および吸収遅延剤などが含まれ、これらは生理学的に適合性である。組成物には、薬学的に許容される塩（例えば、酸付加塩または塩基付加塩（例えば、Ｂｅｒｇｅ，Ｓ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，（１９７７）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６６：１−１９を参照のこと））が含まれ得る。
【０１１８】
薬学的処方物は、十分に確立されている分野であり、例えば、Ｇｅｎｎａｒｏ（編），Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，第２０版，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ（２０００）（ＩＳＢＮ：０６８３３０６４７２）；Ａｎｓｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，第７版，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ（１９９９）（ＩＳＢＮ：０６８３３０５７２７）；
およびＫｉｂｂｅ（編），Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，第３版（２０００）（ＩＳＢＮ：０９１７３３０９６Ｘ）にさらに詳細に記載されている。
【０１１９】
１つの実施形態においては、ＴＷＥＡＫ遮断薬（例えば、抗体またはＴＷＥＡＫ−Ｒ−Ｆｃ）および／またはＴＮＦ−α遮断薬は賦形剤（例えば、塩化ナトリウム、第二リン酸ナトリウム７水和物、リン酸二水素ナトリウム）、および安定剤と共に処方される。これは、例えば、適切な濃度で緩衝化溶液の中に提供され得、そして２〜８℃で保存することができる。
【０１２０】
薬学的組成物は様々な形態であり得る。これらには、例えば、液体、半固体、および固体の投与量形態（例えば、液体溶液（例えば、注射することができる溶液および注入することができる溶液）、分散液または懸濁液、錠剤、丸剤、散剤、リポソーム、および坐剤）が含まれる。好ましい形態は、意図される投与の態様および治療用途に応じて様々であり得る。本明細書中に記載される薬剤についての典型的な組成物は、注射することができる溶液または注入することができる溶液の形態である。
【０１２１】
このような組成物は、非経口の形式（例えば、静脈内注射、皮下注射、腹腔内注射、または筋肉内注射）によって投与することができる。表現「非経口投与」および「非経口的に投与される」は、本明細書中で使用される場合は、腸内投与および局所投与以外の投与の形式を意味し、通常は注射による投与の形式を意味し、これには静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、クモ膜下、髄腔内、硬膜外、ならびに、胸骨内への注射および注入が含まれるが、これらに限定はされない。
【０１２２】
組成物は、溶液、マイクロエマルジョン、分散液、リポソーム、または、高濃度での安定な保存に適している他の秩序立てられた構造として処方することができる。滅菌の注射することができる溶液を、上記の成分の１つまたは組み合わせとともに適切な溶媒の中に本明細書中に記載される薬剤を必要な量配合すること、その後、必要に応じて、濾過滅菌することによって、調製することができる。一般的には、分散液は、基礎となる分散媒体および上記の成分のうち必要な他の成分を含む、滅菌の担体の中に本明細書中に記載される薬剤を配合することによって、調製される。滅菌の注射することができる溶液の調製用の滅菌の粉末の場合に、好ましい調製方法は、減圧乾燥および凍結乾燥であり、これによって、本明細書中に記載される薬剤と任意のさらなる所望される成分の粉末が、それらの予め滅菌濾過された溶液から得られる。溶液の適切な流動性は、例えば、レシチンのようなコーティング剤の使用によって、分散液の場合には必要な粒子の大きさの維持によって、および界面活性剤の使用によって維持することができる。注射することができる組成物の持続的な吸収は、吸収を遅らせる薬剤（例えば、モノステアリン酸塩およびゼラチン）を組成物中に含めることによって得ることができる。
【０１２３】
特定の実施形態においては、ＴＷＥＡＫ遮断薬および／またはＴＮＦ−α遮断薬は、化合物を迅速な放出から保護するであろう担体とともに、例えば、徐放処方物（インプラント、およびマイクロカプセル化された送達システムが含まれる）として調製される場合がある。生体分解性の生体適合性ポリマー（例えば、エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸）を使用することができる。このような処方物の調製のための多くの方法は特許が取られているか、または一般的に知られている。例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ編，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９７８を参照のこ
と。
【０１２４】
ＴＷＥＡＫ遮断薬（例えば、抗体または可溶性ＴＷＥＡＫ−Ｒタンパク質）は、例えば、循環の中での（例えば、血液、血清、または他の組織中での）その安定性および／または保持を（例えば、例えば、少なくとも１．５倍、２倍、５倍、１０倍、または５０倍）改善する部分を用いて、修飾することができる。修飾された遮断薬は、それが炎症の部位（例えば、関節）に到達することができるかどうかを評価するために評価することができる。
【０１２５】
例えば、ＴＷＥＡＫ遮断薬（例えば、抗体または可溶性ＴＷＥＡＫ−Ｒタンパク質）は、ポリマー（例えば、実質的に非抗原性であるポリマー（例えば、ポリアルキレンオキサイドまたはポリエチレンオキサイド））と会合させることができる（例えば、それらに結合させることができる）。適切なポリマーは、重量が大幅に異なるであろう。約２００ダルトンから３５，０００ダルトン（または、約１，０００から約１５，０００、および２，０００から約１２，５００）の範囲の分子数量平均重量を有しているポリマーを使用することができる。
【０１２６】
例えば、ＴＷＥＡＫ遮断薬またはＴＮＦ−α遮断薬は、水溶性ポリマー（例えば、親水性ポリビニルポリマー（例えば、ポリビニルアルコールまたはポリビニルピロリドン））に結合させることができる。このようなポリマーの限定的ではないリストには、ポリアルキレンオキサイドホモポリマー、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）またはポリプロピレングリコール、ポリオキシエチレン化ポリオール、それらのコポリマー、およびそれらのブロックコポリマー（ブロックコポリマーの水溶性が維持される限り）が含まれる。さらなる有用なポリマーとしては、ポリオキシアルキレン、例えば、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン、およびポリオキシエチレンとポリオキシプロピレンのブロックコポリマー；ポリメタクリレート；カルボマー；および分岐したまたは未分岐の多糖類が挙げられる。
【０１２７】
ＴＷＥＡＫ遮断薬（例えば、抗体または可溶性ＴＷＥＡＫ−Ｒタンパク質）が、第２の薬剤（例えば、ＴＮＦ−α遮断薬または本明細書中に記載される他の薬剤）と組み合わせて使用される場合は、２つの薬剤は別々に、または一緒に処方することができる。例えば、それぞれの薬学的組成物を、例えば、投与の直前に混合することができ、そして一緒に投与することができるか、または、別々に、例えば、同時に、または異なるタイミングで投与することもできる。
【０１２８】
本明細書中に記載される他の治療薬もまた、薬学的組成物として、例えば、標準的な方法または本明細書中に記載される方法によって、提供することができる。
【０１２９】
（投与）
ＴＷＥＡＫ遮断薬（例えば、抗体または可溶性ＴＷＥＡＫ−Ｒタンパク質）およびＴＮＦ−α遮断薬は、被験体（例えば、ヒト被験体）に対して、様々な方法によって投与することができる。多くの用途については、投与経路は以下の１つである：静脈内注射または注入（ＩＶ）、皮下注射（ＳＣ）、腹腔内注射（ＩＰ）、または筋肉内注射。関節内への送達を使用することもまた可能である。いくつかの場合には、投与は、炎症部位（例えば、関節または他の炎症を起こしている部位）に対して直接行うことができる。遮断薬は、固定用量として、またはｍｇ／ｋｇの用量で投与することができる。
【０１３０】
用量はまた、ＴＷＥＡＫ遮断薬に対する抗体の生産を減少させるため、または回避するように選択することができる。
【０１３１】
遮断薬の投与経路および／または態様はまた、（例えば、トモグラフィー画像解析法、神経学的試験、および特定の疾患に関係する標準的なパラメーター（例えば、関節リウマチを評価するための基準）を使用して、例えば、被験体をモニターすることによって）個々の症例に合わせることもできる。
【０１３２】
投与レジュメは、所望される反応（例えば、治療反応または組み合わせによる治療効果）を提供するように調節される。一般的には、ＴＷＥＡＫ遮断薬（例えば、抗体）（および必要に応じて、第２の薬剤、例えば、ＴＮＦ−α遮断薬）の用量の任意の組み合わせ（別々に処方されたもの、または一緒に処方されたもののいずれか）を、生体利用される量の薬剤を被験体に提供するために、使用することができる。例えば、０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ、０．５〜１００ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ、０．５〜２０ｍｇ／ｋｇ、または１〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量を投与することができる。他の用量もまた使用することができる。
【０１３３】
投与量単位形態、または「固定用量」は、本明細書中で記載される場合は、処置される被験体についての単位投与量として適している物理的に分離した単位を意味する。個々の単位には、必要とされる薬学的担体と一緒に、および必要に応じて他の薬剤と一緒に、所望される治療効果を生じるように計算された、予め決定された量の活性のある化合物が含まれる。１回の投与量が投与される場合も、また、複数回の投与量が投与される場合もある。あるいは、または加えて、遮断薬は、持続注入によって投与される場合もある。
【０１３４】
ＴＷＥＡＫ遮断薬は、例えば、１日に１回または２回、または１週間に１回から４回、または好ましくは、１週間に１回、２週間に１回（ｂｉｗｅｅｋｌｙ）、または１ヶ月に１回で、例えば、１週間から１０週間にわたって、好ましくは、２週間から８週間にわたって、より好ましくは、３週間から７週間にわたって、そしてなおより好ましくは、約４週間、５週間、もしくは６週間にわたって投与することができる。当業者には、特定の要因が、被験体を効果的に処置するために必要な投与量およびタイミングに影響を与える場合があり、これには、疾患または障害の重篤度、処方物、送達経路、これまでに行われた処置、全体的な健康状態、および／または被験体の年齢、ならびに存在している他の疾患が含まれるが、これらに限定されないことは明らかであろう。さらに、治療有効量の化合物での被験体の処置には１回の処置が含まれ得るか、または好ましくは、これには、一連の処置が含まれ得る。動物モデルもまた、有用な用量（例えば、初回量またはレジュメ）を決定するために使用することができる。
【０１３５】
被験体に炎症性疾患または本明細書中に記載される他の疾患を発症するリスクがある場合には、遮断薬を、疾患の完全な発症の前に（例えば、予防措置として）投与することができる。このような予防的処置の期間は、遮断薬の１回の投与である場合も、また、処置が継続的に行われる（例えば、複数回の投与）である場合もある。例えば、疾患のリスクがある被験体、または疾患の素因を有している被験体は、疾患が発症することまたは劇症化することを防ぐために、遮断薬で数日間、数週間、数ヶ月間、またはさらには数年間処置される場合もある。
【０１３６】
薬学的組成物には、「治療有効量」の本明細書中に記載される薬剤が含まれ得る。このような有効量は、投与される薬剤の効果、または１つ以上の薬剤が使用される場合には、薬剤の組み合わせによる効果に基づいて決定することができる。薬剤の治療有効量はまた、個体の疾患状態、年齢、性別、および体重、および個体において所望される反応を誘発する（例えば、少なくとも１つの疾患のパラメーターを緩和する、または疾患の少なくとも１つの症状を緩和する）化合物の能力のような要因によっても様々であり得る。治療有効量は、治療的に有効な効果が組成物の任意の毒性効果または有害な影響を上回る量でもある。
【０１３７】
（治療用のデバイスおよびキット）
ＴＷＥＡＫ遮断薬（例えば、抗体または可溶性ＴＥＡＫ−Ｒ）が含まれている薬学的組成物は、医学用デバイスを用いて投与することができる。デバイスは、携帯性、室温での保存、および緊急の状況で（例えば、訓練を受けていない被験体が、またはその場で救急隊員が）それを使用することができる、医療設備および他の医学的装置に移すような使用の容易さのような特徴を有するように設計することができる。デバイスとしては、例えば、ＴＷＥＡＫ遮断薬を含む薬学的調製物を保存するための１つ以上のハウジングが含まれ得、そして、遮断薬の１つ以上の単位用量を送達するように設定することができる。デバイスは、第２の薬剤（例えば、ＴＮＦ−α遮断薬）を、ＴＷＥＡＫ遮断薬をも含む１つの薬学的組成物として、または２つの別の薬学的組成物としてのいずれかで投与するように、さらに設定することができる。
【０１３８】
例えば、薬学的組成物は、米国特許第５，３９９，１６３号；同第５，３８３，８５１号；同第５，３１２，３３５号；同第５，０６４，４１３号；同第４，９４１，８８０号；同第４，７９０，８２４号；または同第４，５９６，５５６号に開示されているデバイスのような、針のない皮下注射器具を用いて投与することができる。周知のインプラントおよびモジュールの例としては以下が挙げられる：米国特許第４，４８７，６０３号、ここでは、制御された速度で薬剤を分散させるための、埋め込み型のマイクロ注入ポンプが開示されている；米国特許第４，４８６，１９４号、ここでは、皮膚を介して薬剤を投与するための治療用デバイスが開示されている；米国特許第４，４４７，２２３号、ここでは、正確な注入速度で医薬品を送達するための医学用注入ポンプが開示されている；米国特許第４，４４７，２２４号、ここでは、持続的な薬物の送達のための流速を変化させることができる埋め込み型の注入装置が開示されている；米国特許第４，４３９，１９６号、ここでは、複数のチャンバー区画を有している浸透圧による薬物送達システムが開示されている；および米国特許第４，４７５，１９６号、ここでは、浸透圧による薬物送達システムが開示されている。多くの他のデバイス、インプラント、送達システム、およびモジュールもまた公知である。
【０１３９】
ＴＷＥＡＫ遮断薬（例えば、抗体または可溶性ＴＷＥＡＫ−Ｒタンパク質）は、キットの中で提供され得る。１つの実施形態においては、キットには、（ａ）ＴＷＥＡＫ遮断薬が含まれている組成物を含む容器と、必要に応じて（ｂ）情報が記載されている物質が含まれる。情報が記載されている物質は、記述、教本、製造、あるいは本明細書中に記載される方法および／または治療的利点のための薬剤の使用に関する他の物質であり得る。
【０１４０】
１つの実施形態においては、キットにはまた、炎症性疾患を処置するための第２の薬剤（例えば、ＴＮＦ−α遮断薬）も含まれる。例えば、キットには、ＴＷＥＡＫ遮断薬が含まれている組成物を含む第１の容器と、第２の薬剤が含まれている第２の容器が含まれる。
【０１４１】
キットの情報が記載されている物質は、その形態に限定はされない。１つの実施形態においては、情報が記載されている物質には、化合物の生産、化合物の分子量、濃度、期限日、バッチまたは製造場所についての情報などが含まれ得る。１つの実施形態においては、情報が記載されている物質は、炎症性疾患を有している被験体もしくは炎症性疾患のリスクがある被験体、または本明細書中に記載される他の疾患を有している被験体もしくは他の疾患のリスクがある被験体を処置するために、例えば、適切な用量、投与形態、または投与態様（例えば、本明細書中に記載される投与の用量、投与形態、または態様）で、ＴＷＥＡＫ遮断薬（例えば、抗体または可溶性ＴＷＥＡＫ−Ｒタンパク質）および／またはＴＮＦ−α遮断薬を投与する方法に関する。情報は、様々な形式で提供することができ、これには、印刷されたテキスト、コンピューターで読み取ることができる物質、ビデオ
による記録、または音声記録、または実質的な物質に対する結びつきもしくはそれへの連絡を提供する情報を提供する情報が含まれる。
【０１４２】
遮断薬に加えて、キットの中の組成物には、他の成分（例えば、溶媒または緩衝液、安定剤、あるいは保存剤）が含まれ得る。遮断薬は、任意の形態（例えば、液体、乾燥させられた形体または凍結乾燥させられた形態、好ましくは、実質的に純粋および／または滅菌）で提供され得る。薬剤が液体の溶液中に提供される場合は、液体溶液は好ましくは水溶液である。薬剤が乾燥させられた形態として提供される場合には、通常は、適切な溶媒の添加によって再構成が行われる。溶媒（例えば、滅菌水または緩衝液）が、必要に応じてキットの中に提供され得る。
【０１４３】
キットには、薬剤が含まれている組成物（単数または複数）用の１つ以上の容器が含まれ得る。いくつかの実施形態においては、キットには、組成物と情報が記載されている物質用の別々の容器、仕切り、または区画が含まれる。例えば、組成物は、ボトル、バイアル、または注射器の中に含まれ得、そして情報が記載されている物質は、プラスチック製のスリーブまたはパケットの中に含まれ得る。他の実施形態においては、キットの別のエレメントが、１つの分けられていない容器の中に含まれる。例えば、組成物がボトル、バイアル、または注射器の中に含まれ、それには、ラベルの形態で情報が記載されている物質が貼り付けられている。いくつかの実施形態においては、キットには、複数の個別の容器（例えば、パック）が含まれ、それぞれに薬剤の１つ以上の投与形態（例えば、本明細書中に記載される投与形態）が含まれている。容器には、単位投与量の組み合わせ（例えば、ＴＷＥＡＫ遮断薬と第２の遮断薬の両方が（例えば、所望される比で）含まれている単位）が含まれ得る。例えば、キットには複数の注射器、アンプル、ホイルパケット、ブリスターパック、または医学的デバイスが含まれ、例えば、それぞれに１つの組み合わせられた単位用量が含まれている。キットの容器は、気密性であり、防水性であり得（例えば、水分または水蒸気中で変化しにくい）、そして／または遮光性であり得る。
【０１４４】
キットには、必要に応じて、組成物の投与に適しているデバイス（例えば、注射器、または他の適切な送達デバイス）が含まれる。デバイスには、１つまたは両方の薬剤を予め充填して提供することができ、また、空で、しかし充填に適した状態で提供することもできる。
【０１４５】
（核酸およびタンパク質の分析）
ＴＷＥＡＫまたはＴＷＥＡＫ−Ｒタンパク質および核酸、ならびに本明細書中に記載される他の生体マーカーについてのタンパク質および核酸（表１に列挙されたものが含まれる）を検出するための多数の方法が当業者に利用可能であり、これには、タンパク質の検出のための抗体をベースとする方法（例えば、ウェスタンブロットまたはＥＬＩＳＡ）、および核酸の検出のためのハイブリダイゼーションをベースとする方法（例えば、ＰＣＲ、またはノーザンブロット）が含まれる。
【０１４６】
アレイは、試料（例えば、被験体に由来する試料）を特性決定するための特に有用な分子ツールである。例えば、複数の遺伝子についての捕捉プローブ（ＴＷＥＡＫおよび／または他の生体マーカーについてのプローブ、あるいは、複数のタンパク質についてのプローブが含まれる）を有しているアレイが、本明細書中に記載されている方法において使用され得る。ＴＷＥＡＫ（または本明細書中に提供される他の生体マーカー）核酸および／またはタンパク質の発現の変化を使用して、試料（例えば、被験体に由来する試料）を評価する（例えば、本明細書中に記載される疾患を評価する）ことができる。
【０１４７】
アレイは、基体上に多くのアドレス（場所を確認できる部位）を有し得る。特性決定されたアレイを、様々な形式で配置することができ、その限定ではない例が以下に記載され
る。基体は、不透明であるか、半透明であるか、または透明であり得る。アドレスは、一次元で（例えば、直線的なアレイ）；二次元で（例えば、平面アレイ）；または三次元で（例えば、三次元アレイ）で、基体上に分布させられ得る。固体基体は、任意の便利な形状または形態であり得、例えば、四角、三角、卵型、または円形であり得る。
【０１４８】
アレイは、様々な方法（例えば、フォトリソグラフィー法（例えば、米国特許第５，１４３，８５４号；同第５，５１０，２７０号；および同第５，５２７，６８１号を参照のこと）、メカニカル方式（例えば、米国特許第５，３８４，２６１号に記載されている流れで方向付けられた方法（ｄｉｒｅｃｔｅｄ−ｆｌｏｗ ｍｅｔｈｏｄ）、ピンをベースとする方法（例えば、米国特許第５，２８８，５１４に記載されているもの）、およびビーズをベースとする技術（例えば、ＰＣＴ ＵＳ／９３／０４１４５に記載されているもの））によって組み立てることができる。
【０１４９】
捕捉プローブは、一本鎖の核酸、二本鎖の核酸（例えば、これは、ハイブリダイゼーションの前またはハイブリダイゼーションの間に変性させられる）、または一本鎖の領域と二本鎖の領域を有している核酸であり得る。好ましくは、捕捉プローブは一本鎖である。捕捉プローブは、様々な基準によって選択することができ、好ましくは、最適なパラメーターを用いてコンピュータープログラムによって設計される。捕捉プローブは、遺伝子の配列リッチ（例えば、非ホモポリマー）の領域にハイブリダイズするように選択され得る。捕捉プローブのＴｍは、相補性領域および長さの良識的な選択によって最適化され得る。理想的には、アレイ上の全ての捕捉プローブのＴｍは類似しており、例えば、互いに、２０℃、１０℃、５℃、３℃、または２℃の範囲内である。
【０１５０】
単離された核酸は、好ましくは、ｍＲＮＡであり、これは、日常的に行われている方法（例えば、ゲノムＤＮＡを除去するためのＤＮａｓｅでの処理、およびオリゴｄＴが結合させられている固体基体へのハイブリダイゼーションが含まれる）によって単離することができる（例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎ．Ｙ．に記載されている方法を参照のこと）。基体は洗浄され、そしてｍＲＮＡが溶出させられる。
【０１５１】
単離されたｍＲＮＡは逆転写させることができ、必要に応じて、例えば、ｒｔＰＣＲによって（例えば、米国特許第４，６８３，２０２号に記載されているように）増幅させることができる。核酸は、例えば、ＰＣＲによる増幅産物（米国特許第４，６８３，１９６号および同第４，６８３，２０２号）；ローリングサークル型増幅（Ｒｏｌｌｉｎｇ Ｃｉｒｃｌｅ Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ；「ＲＣＡ」）による増幅産物（米国特許第５，７１４，３２０号）、等温ＲＮＡ増幅による増幅産物（ｉｓｏｔｈｅｒｍａｌ ＲＮＡ
ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ）またはＮＡＳＢＡによる増幅産物（米国特許第５，１３０，２３８号；同第５，４０９，８１８号；および同第５，５５４，５１７号）、ならびに、鎖置換増幅による増幅産物（米国特許第５，４５５，１６６号）であり得る。核酸は、例えば、標識されたヌクレオチドの取り込みによって、増幅の間に標識することができる。好ましい標識の例としては、蛍光標識（例えば、赤色蛍光色素Ｃｙ５（Ａｍｅｒｓｈａｍ）または緑色蛍光色素Ｃｙ３（Ａｍｅｒｓｈａｍ））および化学発光標識（例えば、米国特許第４，２７７，４３７号に記載されている標識）が挙げられる。あるいは、核酸は、ビオチンで標識することができ、そして、標識されたストレプトアビジン（例えば、ストレプトアビジン−フィコエリスリン（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ））とのハイブリダイゼーションの後で検出することができる。
【０１５２】
標識された核酸は、アレイに接触させることができる。加えて、対照核酸または参照核酸を同じアレイに接触させることができる。対照核酸または参照核酸は、試料核酸とは異なる標識（例えば、異なる最大発光を有している標識）で標識することができる。標識さ
れた核酸は、ハイブリダイゼーション条件下でアレイに接触させることができる。アレイは洗浄することができ、その後、アレイの個々のアドレスでの蛍光を検出するために画像化することができる。
【０１５３】
ＴＷＥＡＫまたは他の生体マーカーの発現レベルは、そのポリペプチドに特異的な抗体を使用して決定することができる（例えば、ウェスタンブロットまたはＥＬＩＳＡアッセイを使用して）。さらに、複数のタンパク質（ＴＷＥＡＫおよび本明細書中に提供される例示的な生体マーカーが含まれる）の発現レベルは、ポリペプチドのそれぞれについての抗体捕捉プローブを有しているポリペプチドアレイを使用して同時に、迅速に決定することができる。ポリペプチドに特異的な抗体は、本明細書中に記載される方法によって作成することができる（「抗体の作成」を参照のこと）。ＴＷＥＡＫおよび本明細書中に提供される例示的な生体マーカーの発現レベルは、被験体の中で（例えば、インビボでの画像化）測定することができ、また、被験体に由来する生物学的試料（例えば、血液、血清、血漿、または滑液）の中で測定することもできる。
【０１５４】
低密度（９６ウェル形式）タンパク質アレイが開発されており、ここでは、タンパク質がニトロセルロース膜の上にスポットされる（Ｇｅ（２０００）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２８，ｅ３，Ｉ−ＶＩＩ）。抗体のスクローニングのために使用される高密度タンパク質アレイ（２２２×２２２ｍｍの中に１００，０００試料）は、ポリビニリデンジフルオライド（ＰＶＤＦ）上にタンパク質をスポットすることによって形成された（Ｌｕｅｋｉｎｇ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２７０：１０３−１１１）。例えば、Ｍｅｎｄｏｚａ ｅｔ ａｌ．（１９９９）．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ２７：７７８−７８８；ＭａｃＢｅａｔｈ ａｎｄ Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ（２０００）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８９：１７６０−１７６３、およびＤｅ Ｗｉｌｄｔ ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．１８：９８９−９９４もまた参照のこと。これらの当該分野で公知の方法および他の方法を、試料中のポリペプチドの量を検出するための抗体のアレイを作成するために使用することができる。試料は、蛍光標識に結合させられたストレプトアビジンでのその後の検出のために標識すること（例えば、ビオチニル化すること）ができる。その後、アレイを、個々のアドレスでの結合を測定するためにスキャンすることができる。
【０１５５】
本発明の核酸およびポリペプチドのアレイは多種多様な用途に使用することができる。例えば、アレイは、患者の試料を分析するために使用することができる。試料は、以前に得られたデータ（例えば、既知の臨床標本または他の患者の試料）と比較される。さらに、アレイは、細胞培養物試料を特性決定するために、例えば、パラメーターを変化させた後（例えば、細胞培養物を抗原、トランスジーン、または試験化合物に暴露した後）の細胞の状態を決定するために、使用することができる。
【０１５６】
発現データは、データベース（例えば、ＳＱＬデータベース（例えば、ＯｒａｃｌｅまたはＳｙｂａｓｅデータベース環境）のような関連するデータベース）に保存することができる。データベースには複数の表が含まれ得る。例えば、原発現データが１つの表に保存され得る。ここでは、それぞれの列がアッセイされた遺伝子（例えば、アドレスまたはアレイ）に対応し、それぞれの行が試料に対応する。別の表には、識別名と試料の情報（例えば、使用したアレイのバッチ数、日付、および他の品質管理情報）が保存され得る。
【０１５７】
アレイ上での遺伝子発現の分析によって得られた発現プロフィールは、Ｇｏｌｕｂ ｅｔ ａｌ．，（（１９９９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８６：５３１）に記載されている様々な状態の試料および／または細胞を比較するために使用することができる。１つの実施形態においては、ＴＷＥＡＫをコードする遺伝子および／または本明細書中に提供される例示的な生体マーカーをコードする遺伝子の発現（例えば、ｍＲＮＡの発現またはタンパク質
の発現）情報が、例えば、参照値（例えば、参照値）の比較によって評価される。参照値は、対照（例えば、参照被験体）から得ることができる。参照値はまた、例えば被験体のコホート（例えば、年齢と性別が適合している被験体、例えば、正常な被験体または関節リウマチもしくは本明細書中に記載される他の疾患を有する被験体）についての参照値を提供するための、統計学的分析によって得ることもできる。特定の参照に対する（例えば、リスクがある（ｒｉｓｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ）コホートについての参照に対する）、または正常なコホートに対する統計学的類似性は、被験体（例えば、本明細書中に記載される疾患であると診断されていない被験体）の評価（例えば、炎症性疾患のリスクの指標）を提供するために使用することができる。
【０１５８】
処置に適している被験体は、例えば、ＴＷＥＡＫおよび／または他の生体マーカーの発現ならびに／あるいは活性について評価することもできる。被験体は、ＴＷＥＡＫおよび／または他の生体マーカーの発現ならびに／あるいは活性が参照（例えば、参照値（例えば、正常に関係している参照値））と比較して評価される場合には、処置（例えば、ＴＷＥＡＫ遮断薬での処置）に適していると特定することができる。
【０１５９】
本明細書中に記載される薬剤が投与されるか、または他の処置がおこなわれている被験体は、ＴＷＥＡＫおよび／または本明細書中に記載される他の生体マーカーの発現ならびに／あるいは活性について、記載されるように評価することができる。被験体は、複数回（例えば、治療の経過の間の複数の時点で、例えば、治療レジュメの間に）評価することができる。被験体の処置は、被験体が治療に対してどのように反応するかに応じて修正することができる。例えば、ＴＷＥＡＫの発現または活性の低下、あるいはＴＷＥＡＫによって刺激される遺伝子の発現または活性の低下が、反応性の指標であり得る。
【０１６０】
薬剤によって媒介される特定の効果は、統計学的に有意である（例えば、Ｐ値＜０．０５または０．０２）の差を示し得る（例えば、未処置の被験体、対照被験体、または他の参照と比較して）。統計学的有意性は、任意の当該分野で公知の方法によって決定することができる。例示的な統計学的試験としては、Ｓｔｕｄｅｎｔ Ｔ検定、Ｍａｎｎ Ｗｈｉｔｎｅｙ Ｕノンパラメトリック試験、およびＷｉｌｃｏｘｏｎノンパラメトリック統計学的試験が挙げられる。いくつかの統計学的に有意な関係は、０．０５未満または０．０２未満のＰ値を有している。
【０１６１】
（遺伝的材料を評価する方法）
遺伝的情報を提供するために遺伝的材料を評価する方法は多数存在している。これらの方法は、ＴＷＥＡＫをコードする遺伝子、または本明細書中に記載される生体マーカーをコードする遺伝子が含まれている遺伝子座を評価するために使用することができる。これらの方法は、１つ以上のヌクレオチド（例えば、遺伝子のコード領域または非コード領域（例えば、調節領域の中）（例えば、プロモーター、非翻訳領域またはイントロンをコードする領域など））を評価するために使用することができる。
【０１６２】
核酸試料は、生物物理学的技術（例えば、ハイブリダイゼーション、電気泳動など）、配列決定、酵素をベースとする技術、およびそれらの組み合わせを使用して分析することができる。例えば、試料核酸の核酸マイクロアレイへのハイブリダイゼーションを使用して、ｍＲＮＡ集団の中の複数の配列を評価すること、そして遺伝子の多形性を評価することができる。他のハイブリダイゼーションをベースとする技術としては、配列特異的プライマーの結合（例えば、ＰＣＲまたはＬＣＲ）；ＤＮＡ（例えば、ゲノムＤＮＡ）のサザン分析；ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）のノーザン分析；蛍光プローブをベースとする技術（例えば、Ｂｅａｕｄｅｔ ｅｔ ａｌ．，（２００１）Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．１１（４）６００−８を参照のこと）；および対立遺伝子特異的増幅が挙げられる。酵素による技術としては、制限酵素消化；配列決定、および一塩基伸張（ＳＢＥ）が挙げられる。こ
れらおよび他の技術は、当業者に周知である。
【０１６３】
電気泳動技術としては、キャピラリー電気泳動、および一本鎖立体構造多形（ＳＳＣＰ）検出が挙げられる（例えば、Ｍｙｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ ３１３：４９５−８およびＧａｎｇｕｌｙ（２００２）Ｈｕｍ Ｍｕｔａｔ．１９（４）３３４−４２を参照のこと）。他の生物物理学的方法としては、変性高圧液体クロマトグラフィー（ＤＨＰＬＣ）が挙げられる。
【０１６４】
１つの実施形態においては、選択的なＰＣＲ増幅に依存する対立遺伝子特異的増幅技術が、遺伝的情報を得るために使用される場合がある。特異的な増幅のためのプライマーとして使用されるオリゴヌクレオチドは、分子の中心に目的の変異を有している場合があり（その結果、増幅はディファレンシャルなハイブリダイゼーションに依存する）（Ｇｉｂｂｓ ｅｔ ａｌ．，（１９８９）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１７：２４３７−２４４８）、また、一方のプライマーの３’末端に目的の変異を有している場合もある（この場合は、適切な条件下では、ミスマッチは、ポリメラーゼによる伸張を防止または減少させることができる）（Ｐｒｏｓｓｎｅｒ（１９９３）Ｔｉｂｔｅｃｈ １１：２３８）。加えて、切断をベースとする検出を行うために、変異の領域の中に制限部位を導入することができる（Ｇａｓｐａｒｉｎｉ ｅｔ ａｌ．，（１９９２）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｂｅｓ ６：１）。別の実施形態においては、増幅は、増幅用のＴａｑリガーゼを使用して行うことができる（Ｂａｒａｎｙ（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８８：１８９）。このような場合には、連結は、５’配列の３’末端が完全に適合している場合にのみ起こり、これによって、増幅が存在しているか存在していないかを調べることによって、特異的部位での既知の変異の存在を検出することが可能となるであろう。
【０１６５】
配列を検出するための酵素による方法としては、ポリメラーゼ連鎖反応のような増幅をベースとする方法（ＰＣＲ；Ｓａｉｋｉ，ｅｔ ａｌ．，（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３１：１３５０−１３５４）およびリガーゼ連鎖反応（ＬＣＲ；Ｗｕ．ｅｔ ａｌ．，（１９８９）Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ４：５６０−５６９；Ｂａｒｒｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，（１９９０），Ｇｅｎｅ １９８９：１１７−１２２；Ｆ．Ｂａｒａｎｙ（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９８８：１８９−１９３）；核酸を増幅するためにＲＮＡポリメラーゼによるＲＮＡ合成を利用する転写をベースとする方法（米国特許第６，０６６，４５７号；同第６，１３２，９９７号；および同第５，７１６，７８５号；Ｓａｒｋａｒ ｅｔ ａｌ．，（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：３３１−３４；Ｓｔｏｆｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：４９１）；ＮＡＳＢＡ（米国特許第５，１３０，２３８号；同第５，４０９，８１８号；および同第５，５５４，５１７号）；ローリングサークル型増幅（ＲＣＡ；米国特許第５，８５４，０３３号および同第６，１４３，４９５号）、ならびに鎖置換増幅（ＳＤＡ；米国特許第５，４５５，１６６号および同第５，６２４，８２５号）が挙げられ得る。増幅方法は、他の技術と組み合わせて使用することができる。
【０１６６】
他の酵素による技術としては、ポリメラーゼ（例えば、ＤＮＡポリメラーゼおよびそのバリエーション）を使用する配列決定（例えば、一塩基伸張技術）が挙げられる。例えば、米国特許第６，２９４，３３６号；同第６，０１３，４３１号；および同第５，９５２，１７４号を参照のこと。
【０１６７】
蛍光をベースとする検出もまた、核酸の多形性を検出するために使用することができる。例えば、様々なターミネーターｄｄＮＴＰを、様々な蛍光色素で標識することができる。プライマーを、多形の近くまたはすぐ近くに隣接してアニーリングさせることができ、多形部位のヌクレオチドを、取り込まれている蛍光色素のタイプ（例えば、「色」）によ
って検出することができる。
【０１６８】
マイクロアレイに対するハイブリダイゼーションもまた、多形（ＳＮＰが含まれる）を検出するために使用することができる。例えば、様々なオリゴヌクレオチドのセット（オリゴヌクレオチドの様々な位置に多形性ヌクレオチドを有している）を核酸のアレイ上に配置することができる。位置と他の対立遺伝子に特異的なオリゴヌクレオチドに対するハイブリダイゼーションの関数としてのハイブリダイゼーションの程度を使用して、特定の多形が存在しているかどうかを決定することができる。例えば、米国特許第６，０６６，４５４号を参照のこと。
【０１６９】
１つの態様においては、ハイブリダイゼーションプローブには、二本鎖の形成を脱安定化させ、そしてアッセイに敏感にさせる１つ以上のさらなるミスマッチが含まれ得る。ミスマッチは、問題の位置にすぐ隣接している場合も、また問題の位置から１０、７、５、４、３、または２ヌクレオチド以内に存在している場合もある。ハイブリダイゼーションプローブは、特定のＴｍ（例えば、４５〜６０℃、５５〜６５℃、または６０〜７５℃）を有するように選択することができる。複数のアッセイにおいては、Ｔｍは、互いに、５℃、３℃、または２℃以内となるように選択することができる。
【０１７０】
例えば、増幅と配列決定、または増幅、クローニングと配列決定による、特定の遺伝子座についての核酸の直接の配列決定もまた可能である。高スループットの自動（例えば、キャピラリーベースまたはマイクロチップベースの）配列決定装置を使用することができる。なお他の実施形態においては、目的のタンパク質の配列はその遺伝子配列を推察するために分析される。タンパク質配列を分析する方法としては、タンパク質配列決定、質量スペクトル分析、配列／エピトープ特異的免疫グロブリン、およびプロテアーゼによる消化が挙げられる。
【０１７１】
上記の方法の任意の組み合わせもまた使用することができる。上記の方法は、任意の遺伝子座を評価するために、例えば、個体の特定のグループによる遺伝的情報を分析するための方法において、または本明細書中に記載されている疾患（例えば、関節リウマチ）に関係している多形（例えば、ＴＷＥＡＫまたは本明細書中に記載される別の生体マーカーをコードする遺伝子の中のもの）を分析するための方法において、使用することができる。
【実施例】
【０１７２】
（実施例１：例示的な配列：）
ヒトＴＷＥＡＫタンパク質の例示的な配列は以下である：
【０１７３】
【化１】
ヒトＦｎ１４タンパク質の例示的な配列は以下である：
【０１７４】
【化２】
（実施例２：ＴＷＥＡＫおよびＴＮＦ−αによって相乗的に活性化される遺伝子）
マイクロアレイを、ヒトの滑膜細胞の中でのその発現がＴＷＥＡＫおよびＴＮＦ−αによって誘導される遺伝子を同定するために分析した。以下は、ＴＷＥＡＫおよびＴＮＦ−αによって相乗的に活性化される遺伝子の例である。
【０１７５】
【表１−１】
【０１７６】
【表１−２】
【０１７７】
【表１−３】
なお他の遺伝子が、（ｉ）ＴＮＦ−αが存在しない条件下でのＴＷＥＡＫ、および（ｉｉ）ＴＷＥＡＫが存在しない条件下でのＴＮＦ−αのいずれによっても、活性化される。
【０１７８】
（実施例３：平均の関節炎指数によって測定したｍＣＩＡ中のＴＷＥＡＫおよびＴＮＦの遮断の組み合わせの効果）
マウスのコラーゲンによって誘導される関節炎（ｍＣＩＡ）モデルは、関節リウマチについての一般的に使用されているモデルである（例えば、Ｓｔｕａｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．６９：６７３−６８３（１９８２）を参照のこと）。ｍＣＩＡモデルを、関節炎の発症に対する抗ＴＷＥＡＫ処置および抗ＴＮＦ−α処置の併用の効果を研究するために使用した。関節炎はコラーゲン免疫化（ＣＩＩ／ＣＦＡ：コラーゲンＩＩと完全なフロイトのアジュバント）によってマウスにおいて誘導した。抗ＴＷＥＡＫモノクローナル抗体（ｍｕ抗ＴＷＥＡＫ ｍＡｂ＋ｈｕ ＩｇＧ１）；可溶性ＴＮＦ−α受容体（ＴＮＦｒ−ｈｕ Ｆｃ＋ｍｕ ＩｇＧ２ａ）；抗ＴＷＥＡＫモノクローナル抗体と可溶性ＴＮＦ−α受容体の組み合わせ（ｍｕ抗ＴＷＥＡＫ ｍＡｂ＋ＴＮＦｒ−ｈｕ
Ｆｃ）；またはＰＢＳもしくはアイソタイプが適合しているネガティブ対照を、コラーゲン免疫化の２０日後、２３日後、２７日後、３０日後、および３４日後に投与した。それぞれの処置グループには１０匹のマウスを含めた。それぞれの抗体は、１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与した。関節炎を、平均の関節炎指数を使用して評価した（例えば、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｅｓ．Ｔｈｅｒ．６：Ｒ２７３−Ｒ２８１（２００４）を参照のこと）。４本の肢を、スコアリングシステムを使用してそれぞれのマウスについて測定した：０＝正常な肢；１＝個々の指の腫れ；２＝足首または手首の関節の中度の腫れおよび赤み；３＝少なくとも２つの関節の腫れおよび赤み；ならびに、４＝肢全体の腫れ。４つの肢のスコアの合計（ｙ軸）を、コラーゲン免疫化後の日数（ｘ軸）に対してプロットした。
【０１７９】
図１は、この実験の結果を示している。抗ＴＷＥＡＫ薬と抗ＴＮＦ−α薬の組み合わせで処置したマウスは、いずれかの単独の遮断薬、または対照で処置したマウスよりも低い平均の関節炎指数スコアを有していた。また、「罹患率％」としてグラフの右側に示したように、組み合わせで処置したマウスは、いずれかの薬剤のみ（抗ＴＮＦ−αでの処置については６７％；抗ＴＷＥＡＫ ｍＡｂでの処置については８０％）、または対照（ＰＢＳでの処置については８０％；アイソタイプが適合している抗体での処置については９０％）で処置したマウスよりも、全体的に低い関節炎の罹患率（６０％）を有していた。
【０１８０】
（実施例４：平均の中足骨の高さによって測定したｍＣＩＡにおけるＴＷＥＡＫとＴＮＦの遮断の組み合わせの効果）
ｍＣＩＡモデルを、平均の中足骨の高さ／肢の厚みによって測定した関節炎の進行に対する抗ＴＷＥＡＫ治療と抗ＴＮＦ−α治療の組み合わせの効果を研究するために使用した（例えば、Ｃａｍｐｏ ｅｔ ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｅｓ．Ｔｈｅｒ．５：Ｒ
１２２−Ｒ１３１（２００３）を参照のこと）。マウスを、抗ＴＷＥＡＫモノクローナル抗体（ｍｕ抗ＴＷＥＡＫ ｍＡｂ＋ｈｕ ＩｇＧ１）；可溶性ＴＮＦ−α受容体（ＴＮＦＲｐ５５：ｈｕ Ｆｕ＋ｍｕ ＩｇＧ２ａ）；抗ＴＷＥＡＫモノクローナル抗体と可溶性ＴＮＦ−α受容体の組み合わせ（ｍｕ抗ＴＷＥＡＫ ｍＡｂ＋ＴＮＦＲｐ５５：ｈｕ Ｆｃ）；またはＰＢＳもしくはアイソタイプが適合しているネガティブ対照で、コラーゲン免疫化の２０日後、２３日後、２７日後、３０日後、および３４日後に処置した。それぞれの処置グループには１０匹のマウスを含めた。それぞれの抗体は１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与した。中足骨の高さを、コラーゲン免疫化の３８日後に、キャリパーを使用して測定した。処置（ｘ軸）あたりのそれぞれのマウスについての平均の中足骨の高さ（ｙ軸）をプロットした。
【０１８１】
図２は、この実験の結果を示している。抗ＴＷＥＡＫ薬と抗ＴＮＦ−α薬の組み合わせで処置したマウスは、いずれかの単独の遮断薬、または対照で処置したマウスよりも統計学的に有意に低い平均の中足骨の高さの値を有していた（＊対照と比較した場合の処置あたりの平均値についてｐ＜０．０５）。
【０１８２】
（実施例５：体重の変化によって測定したｍＣＩＡにおけるＴＷＥＡＫおよびＴＮＦの遮断の組み合わせの効果）
ｍＣＩＡモデルを、体重の変化の割合（％）によって測定した関節炎の進行に対する抗ＴＷＥＡＫ治療と抗ＴＮＦ−α治療の組み合わせの効果を研究するために使用した（例えば、Ｃａｍｐｏ ｅｔ ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｅｓ．Ｔｈｅｒ．５：Ｒ１２２−Ｒ１３１（２００３））。マウスを、抗ＴＷＥＡＫモノクローナル抗体（ｍｕ抗ＴＷＥＡＫ ｍＡｂ＋ｈｕ ＩｇＧ１（ＴＮＦＲｐ５５：ｈｕ Ｆｃについてのアイソタイプが適合している対照））；可溶性ＴＮＦ−α受容体（ＴＮＦＲｐ５５：ｈｕ Ｆｕ＋ｍｕ ＩｇＧ２ａ）；抗ＴＷＥＡＫモノクローナル抗体と可溶性ＴＮＦ−α受容体の組み合わせ（ｍｕ抗ＴＷＥＡＫ ｍＡｂ＋ＴＮＦＲｐ５５：ｈｕ Ｆｃ）；またはＰＢＳもしくはアイソタイプが適合しているネガティブ対照で、コラーゲン免疫化の２０日後、２３日後、２７日後、３０日後、および３４日後に処置した。それぞれの処置グループには１０匹のマウスを含めた。それぞれの抗体は１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与した。マウスを、コラーゲン免疫化後に様々な時点で体重を測定し、そして体重の変化の割合（％）を、処置あたりとして計算した。それぞれの処置についての体重の変化の割合（％）（ｙ軸）を、コラーゲン免疫化による関節炎の誘導後の日数（ｘ軸）に対してプロットした。
【０１８３】
図３は、この実験の結果を示している。抗ＴＷＥＡＫ薬と抗ＴＮＦ−α薬の組み合わせで処置したマウスは、いずれかの単独の遮断薬、または対照で処置したマウスよりも統計学的に有意に小さい体重の変化の割合（％）を有していた（＊対照に対して、または、ＴＮＦＲｐ５５：ｈｕ Ｆｃ＋ｍｕ ＩｇＧ２ａで処置したマウスに対して比較した場合の処置あたりの値についてｐ＜０．０１）。
【０１８４】
（実施例６：ＴＷＥＡＫによって誘導される遺伝子）
本発明者らは、６時間および２４時間の両方の時点で、細胞に対してＴＷＥＡＫの用量（５ｎｇ／ｍｌおよび５０ｎｇ／ｍｌ）を加え、そして、いくつかの遺伝子がＴＷＥＡＫだけによって調節されることを観察した。これらの遺伝子は、５ｎｇ／ｍｌの濃度では、ＴＮＦ−αの添加による影響は受けなかった。このような遺伝子の例は以下である：
表２
１．ＮＩＫ／分裂促進因子によって活性化されるプロテインキナーゼキナーゼキナーゼ１４（ＭＡＰ３Ｋ１４）
２．ヒト（Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ）ｃＤＮＡ ＦＬＪ１１７９６ ｆｉｓ，ｃｌｏｎｅ ＨＥＭＢＡ１００６１５８，ヒト（Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ）の転写因子フォークヘッド様７（ｆｏｒｋｈｅａｄ−ｌｉｋｅ ７）（ＦＫＨＬ７）遺伝子に高度に類似して
いる
３．グルコサミン−６−スルファターゼに類似している、ヒト（Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ）血清グルココルチコイドによって調節されるキナーゼ（ＳＧＫ），ｍＲＮＡ
４．ヒト（Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ）ＲＥＶ３（酵母ホモログ）様，ＤＮＡポリメラーゼゼータ（ＲＥＶ３Ｌ）の触媒サブユニット，ｍＲＮＡ。
５．ＡＤＡＭ １０／ａ ディスインテグリン（ｄｉｓｉｎｔｅｇｒｉｎ）およびメタロプロテイナーゼドメイン１０（ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ ｄｏｍａｉｎ １０）
６．核因子（赤血球由来２）様１
７．ヒト（Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ）ＳｅｒＡｒｇ関連核マトリックスタンパク質（多くのプロリン１０１様）（ＳＲＭ１６０）、ｍＲＮＡ。
８．ヒト（Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ）ダブルコルチンおよびＣａＭキナーゼ様１（ＤＣＡＭＫＬ１）、ｍＲＮＡ。
９．ヒト（Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ）Ｃｄｃ４２エフェクタータンパク質４；Ｒｈｏ ＧＴＰａｓｅｓ ４（ＣＥＰ４）の結合因子、ｍＲＮＡ。
１０．ヒト（Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ）ｍＲＮＡ；ｃＤＮＡ ＤＫＦＺｐ７６２Ｌ１０６（クローン ＤＫＦＺｐ７６２Ｌ１０６由来）；部分的なｃｄｓ。
【０１８５】
加えて、正常なヒトの滑膜細胞においては、ＣＢＲ３およびＩＬ８は、ＴＷＥＡＫでの処置（５ｎｇ／ｍｌ）のみによって誘導される。
【０１８６】
（実施例７：ＴＷＥＡＫを用いた実験）
図４は、ＴＷＥＡＫ遮断モノクローナルでの処置によって、関節炎のマウスＣＩＡモデルとラットＣＩＡモデルの両方において関節炎の進行を弱めることができることを示している。左側のパネルは、抗ＴＷＥＡＫ抗体（マウス抗ＴＷＥＡＫ ｍＡｂ）での処置によって、ＣＩＩ／ＣＦＡで関節炎を誘導したマウスＣＩＡモデルにおいて、対照抗体（ｍＩｇＧ２ａ）での処置と比較すると、平均の関節炎指数において低い値が生じたことを示している。右側のパネルは、抗ＴＷＥＡＫ抗体（抗ＴＷＥＡＫ ｍＡｂ）での処置が、コラーゲンＩＩとフロイトの不完全なアジュバント（ＣＩＩ／ＩＦＡ）で関節炎を誘導したラットＣＩＡモデルにおいて、対照抗体（Ｈａ ４／８）またはＰＢＳでの処置と比較すると、平均の関節炎指数において低い値を生じたことを示している。
【０１８７】
図５は、ＴＷＥＡＫ遮断モノクローナル抗体を、コラーゲン免疫化による関節炎の誘導と同時（投与スキーム１）または誘導後（投与スキーム２）に投与することができ、そして、なおも関節炎のマウスＣＩＡモデルとラットＣＩＡモデルの両方において関節炎の進行を弱める効果があることを示している。左側のパネルは、マウスＣＩＡモデルにおいて、対照抗体（ｍＩｇＧ２ａ）の投与と比較して平均の関節炎指数において低い値を得るために、抗ＴＷＥＡＫ抗体を関節炎の誘導前または誘導後に投与できることを示している。右側のパネルは、抗ＴＷＥＡＫ抗体を、ラットのＣＩＡモデルにおいて、対照抗体（Ｈａ
４／８）またはＰＢＳの投与と比較して、平均の関節炎指数において低い値を得るために、関節炎の誘導前または誘導後に投与できることを示している。
【０１８８】
図６は、抗ＴＷＥＡＫモノクローナル抗体（ＡＢＧ．１１）での処置によって、臨床的な肢スコアおよび全体的な炎症スコアによって測定した場合に、ラットＣＩＡモデルにおいて炎症が軽減されることを示している；また、処置によって、骨吸収のパラメーターによって測定した場合に軟骨および骨量の減少が少なくなり、トルイジンブルーの取り込み量が少なくなり、そして、関節軟骨の減少も少なくなる。同様の結果がマウスＣＩＡモデルにおいても見られた。
【０１８９】
図７は、関節炎の誘導後の様々な時点（２３日目（Ｄ）、２８日目、３０日目、および
３８日目）での、マウスＣＩＡモデルにおける血清ＴＷＥＡＫのレベルを示している。ＴＷＥＡＫレベルは、対照マウス（ＤＢＡ／１）におけるレベルと比較すると高かった。
【０１９０】
図８は、マウスＣＩＡモデルにおける関節炎の誘導後の様々な時点（２３日目、３０日目、および４０日目）での、ＭＭＰ９、リンホタクチン、ＩＰ−１０、およびＩＬ−６のレベルを示している。抗ＴＷＥＡＫモノクローナル抗体（Ｐ５Ｇ９およびＰ５Ｇ９（完全、投与スキーム１とも呼ばれる）での処置によって、対照（ｍＩｇＧ２ａ）で処置したマウスにおけるレベル、または関節炎を発症するように免疫化しなかったマウス（正常なＤＢＡ）におけるレベルと比較して、これらのタンパク質のレベルの増大を同程度に妨げた。同様の結果が、ラットＣＩＡモデルにおいても見られた。
【０１９１】
抗ＴＷＥＡＫ抗体でのＴＷＥＡＫの阻害が適応的免疫反応には影響を与えないことを明らかにするための実験を行った。コラーゲン免疫化後、抗ＴＷＥＡＫモノクローナル抗体で処置したマウスは、対照のアイソタイプが適合している抗体（ｍＩｇＧ２ａ；データは示さない）で処置したマウスと同程度にまで、コラーゲン特異的Ｂ細胞およびＴ細胞応答を上昇させることができた。
【０１９２】
関節において見られる初代ヒト細胞型：線維芽細胞様滑膜細胞、関節軟骨細胞、および骨芽細胞に対するＦｎ１４（ＴＷＥＡＫ受容体）のレベルを測定するための実験を行った。抗Ｆｎ１４抗体（ＩＴＥＭ−４）または対照抗体（抗ｍＦｃ）を使用した蛍光活性化細胞選別実験は、Ｆｎ１４レベルが、３種類の細胞型の全てにおいてバックグラウンドを上回るほどに上昇し、軟骨細胞よりも、滑膜細胞および骨芽細胞の中でレベルがより高かったことを明らかにした。
【０１９３】
ＴＷＥＡＫおよびＴＮＦ−αが、それぞれ、軟骨細胞によるマトリックスメタロプロテアーゼの生産を刺激することを明らかにするための実験を行った。ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、およびＭＭＰ−９レベルは全て、ＴＷＥＡＫ（１００ｎｇ／ｍｌ）またはＴＮＦ−α（５０ｎｇ／ｍｌ）での処置後に上昇した。
【０１９４】
ＴＷＥＡＫおよびＴＮＦ−αのアゴニスト性の相乗効果を明らかにするための実験を行った。ヒト線維芽細胞様滑膜細胞を、様々な濃度の、ＴＷＥＡＫのみ、ＴＮＦ−αのみ、またはＴＷＥＡＫとＴＮＦ−αの組み合わせで処理し、それぞれの処置を行ったＲＡＮＴＥＳの生産のレベルをＥＬＩＳＡによって測定した。ＴＷＥＡＫとＴＮＦ−αはいずれもＲＡＮＴＥＳの生産を誘導した。しかし、ＴＷＥＡＫおよびＴＮＦ−αを一緒に投与した場合には、ＲＡＮＴＥＳの生産について相乗的なレベルが得られた。したがって、ＴＷＥＡＫおよびＴＮＦ−αは、特定の炎症遺伝子の発現を誘導するように相乗的に作用することができる。
【０１９５】
（実施例８：正常な滑膜細胞中でＴＷＥＡＫおよびＴＮＦ−αの併用療法によって誘導される遺伝子）
健常なドナーに由来する滑膜細胞をインビトロで培養し、５ｎｇ／ｍｌのＴＷＥＡＫと０．５ｎｇ／ｍｌのＴＮＦ−αで処理した。表３には、その発現がＴＷＥＡＫおよびＴＮＦ−αでの処理によって統計学的に有意な程度に影響を受ける遺伝子を列挙する。遺伝子を、それらの遺伝子のオントロジーカテゴリーによって分類した。
【０１９６】
【表３】
変化を、超幾何学的平均に基づいて統計学的に有意なＧｏカテゴリーとして同定した。
【０１９７】
（実施例９：ＲＡ滑膜細胞中でＴＷＥＡＫとＴＮＦ−αの併用療法によって誘導される遺伝子）
関節リウマチの患者ドナーに由来する滑膜細胞をインビトロで培養し、５ｎｇ／ｍｌのＴＷＥＡＫと０．５ｎｇ／ｍｌのＴＮＦ−αで処置した。表４には、その発現がＴＷＥＡＫおよびＴＮＦ−αでの処理によって統計学的に有意な程度に影響を受ける遺伝子を列挙する。遺伝子を、それらの遺伝子のオントロジーカテゴリーによって分類した。
【０１９８】
【表４】
変化を、超幾何学的平均に基づいて統計学的に有意なＧｏカテゴリーとして同定した。
【０１９９】
（実施例１０）
Ｐ２Ｄ１０は例示的なマウスの抗ＴＷＥＡＫ抗体である。マウスＰ２Ｄ１０重鎖可変ドメインの配列（配列番号３）（ＣＤＲには下線を付けた）は以下である：
【０２００】
【化３】
これはマウスのサブグループ３Ｄ重鎖可変ドメインである。
【０２０１】
マウスのＰ２Ｄ１０軽鎖可変ドメインの配列（配列番号４）（ＣＤＲには下線を付けた）は以下である：
【０２０２】
【化４】
これはマウスのサブグループ２κ軽鎖である。
【０２０３】
これは成熟ｈｕＰ２Ｄ１０ Ｈ１ ＩｇＧ１重鎖の例示的なアミノ酸配列（配列番号５）である：
【０２０４】
【化５】
これは成熟ｈｕＰ２Ｄ１０ Ｌ１軽鎖の例示的なアミノ酸配列（配列番号６）である：
【０２０５】
【化６】
これは成熟ｈｕＰ２Ｄ１０ Ｌ２軽鎖の例示的なアミノ酸配列（配列番号７）である：
【０２０６】
【化７】
本発明の多数の実施形態が記載されている。それにもかかわらず、様々な改変を本発明の精神および範囲から逸脱することなく行うことができることが理解されるであろう。したがって、他の実施形態も以下の特許請求の範囲の中にある。
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の引用）
本出願では、２００５年５月１０日に提出された米国特許出願番号６０／６７９５１８に対する優先権を主張する。その内容は引用により本明細書中に組み入れられる。
【背景技術】
【０００２】
（背景）
腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）に関連するサイトカインは、数多くの機能（免疫調節およびアポトーシスの調節に関係している機能が含まれる）を有しているタンパク質のスーパーファミリーである。ＴＮＦスーパーファミリーのメンバーの例としては、ＴＮＦ−αおよびＴＷＥＡＫ（アポトーシスについてのＴＮＦ様の弱いインデューサー）が挙げられる。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００３】
（要旨）
以下にさらに記載されるように、ＴＷＥＡＫおよびＴＮＦ−α経路は、炎症の状況を媒介するように別々に作用する。ＴＷＥＡＫおよびＴＮＦ−αによって調節される分子のシグナル伝達経路を両方のブロックすることを使用して、様々な炎症性疾患を処置することができる。このような処置の例は以下に記載される。
【０００４】
１つの態様においては、本開示は、被験体を炎症性疾患について処置する方法を特徴とする。好ましい実施形態においては、炎症性疾患は、関節炎疾患（例えば、関節リウマチ、乾癬性関節炎、またはシェーグレン症候群）である。この方法には：疾患（例えば、関節リウマチ）を有しているかまたはそのリスクがある被験体（例えば、ヒト被験体）に、ＴＮＦ−α遮断薬と組み合わせてＴＷＥＡＫ遮断薬を投与する工程が含まれる。ＴＷＥＡＫ遮断薬およびＴＮＦ−α遮断薬は、治療効果（例えば、全体的な治療効果）を提供するための量で、そしてそのような時間の間、投与することができる。効果は付加的であり得、また、場合によっては、相乗的であり得る。例えば、両方の遮断薬の効果が、（例えば、特定の被験体の中での）個々の効果の合計よりも大きな全体的な効果である場合がある。
【０００５】
様々なＴＷＥＡＫ遮断薬はＴＷＥＡＫまたはＴＷＥＡＫ−Ｒの相互作用または活性をブロックするために、被験体に投与することができる。「ＴＷＥＡＫ遮断薬」は、ＴＷＥＡＫまたはＴＷＥＡＫ−Ｒの相互作用または活性を少なくとも一部阻害する薬剤（例えば、任意の化合物、例えば、抗体、またはＴＷＥＡＫ受容体の可溶性形態）を意味する。例えば、この薬剤は、活性（例えば、ＴＷＥＡＫのＴＷＥＡＫ−Ｒに対する結合）を少なくとも一部阻害する薬剤、または、ＴＷＥＡＫまたはＴＷＥＡＫ−Ｒをコードする核酸を少なくとも一部阻害する（例えば、ＴＷＥＡＫまたはＴＷＥＡＫ−Ｒタンパク質の発現を減少させるために）薬剤である。
【０００６】
１つの実施形態においては、この薬剤により、ＴＷＥＡＫのＴＷＥＡＫ受容体（例えば、Ｆｎ１４）に結合する能力が低下させられる。この薬剤は、ＴＷＥＡＫに、またはＦｎ１４に結合する遮断抗体であり得る。抗体は、全長のＩｇＧであり得る。１つの実施形態においては、抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、または、有効なヒト抗体である。１つの実施形態においては、ＴＷＥＡＫ遮断抗体は、ＴＷＥＡＫとの結合についてＡＢ．Ｄ３（ＡＴＣＣ登録番号ＨＢ−１２６２２を有している抗体）と競合し、これはヒト化抗体ＡＢ．Ｄ３であり、ＡＢ．Ｄ３の少なくとも２個、３個、４個、５個、または６個のＣＤＲ（ま
たは、そのようなＣＤＲに対して少なくとも全体で８５％、９０％、９２％、９５％、９７％同一であるＣＤＲ）が含まれており、そして／あるいは、抗体ＡＢ．Ｄ３の可変ドメイン（または、そのような可変ドメインに対して少なくとも全体で８５％、９０％、９２％、９５％、９７％同一である１つ以上の可変ドメイン）が含まれている。
【０００７】
１つの実施形態においては、この薬剤は、ＴＷＥＡＫ受容体の可溶性形態であり、例えば、ヒトＴＷＥＡＫ受容体（例えば、Ｆｎ１４）である。ＴＷＥＡＫ受容体の可溶性形態は、抗体のＦｃ領域（例えば、ヒトのＦｃ領域）に融合させることができる。例えば、ＴＷＥＡＫ受容体の可溶性形態には、配列番号２のアミノ酸２８〜Ｘ１に対して少なくとも９５％同一である配列が含まれ、この場合、アミノ酸Ｘ１は、配列番号２の残基６８から８０のグループから選択される。
【０００８】
様々なＴＮＦ−α遮断薬を、ＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−α受容体（例えば、ＴＮＦＲ−ＩまたはＴＮＦＲ−ＩＩ）の相互作用あるいは活性をブロックするために、被験体に投与することができる。「ＴＮＦ−α遮断薬」は、ＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−α受容体の相互作用あるいは活性を少なくとも一部阻害する薬剤（例えば、任意の化合物、例えば、抗体またはＴＮＦ−α受容体の可溶性形態）を意味する。例えば、この薬剤は、活性（例えば、ＴＮＦ−αのＴＮＦ−α受容体への結合）を少なくとも一部阻害するか、この薬剤は、例えば、ＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−α受容体タンパク質の発現を減少させるためにＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−α受容体をコードする核酸を少なくとも一部阻害する。
【０００９】
１つの実施形態においては、ＴＮＦ−α遮断薬によって、ＴＮＦ−α受容体に結合するＴＮＦ−αの能力が低下させられる。例えば、ＴＮＦ−α遮断薬としては、ＴＮＦ−α、ＴＮＦＲ−Ｉ、またはＴＮＦＲ−ＩＩに結合する抗体が挙げられる。例示的な抗体としては、インフリキシマブまたはアダリムマブが含まれる。ＴＮＦ−α遮断薬には、ＴＮＦ−α受容体の可溶性形態、そして状況によっては、Ｆｃドメインが含まれ得る。例えば、ＴＮＦ−α遮断薬はエタネルセプト（ｅｔａｎｅｒｃｅｐｔ）である。
【００１０】
本明細書中で使用される場合は、「組み合わせて投与される」は、２つ以上の薬剤（例えば、ＴＷＥＡＫ遮断薬とＴＮＦ−α遮断薬）が、同時に、または患者に対する個々の薬剤の作用が重複する間隔で被験体に投与されることを意味する。好ましくは、第１の薬剤と第２の薬剤の投与は、併用による効果が得られるように互いに十分に近い間隔をあけて行われる。この間隔は、数時間、数日、または数週間の間隔であり得る。一般的には、これらの薬剤は、被験体の中で同時に生体利用可能であり、例えば、検出可能である。好ましい実施形態においては、これらの薬剤の一方（例えば、第１の薬剤（例えば、ＴＮＦ−α遮断薬））の少なくとも１回の投与は、他方の薬剤（例えば、ＴＷＥＡＫ遮断薬）が被験体の中でなおも治療レベルで存在している間に行われる。
【００１１】
１つの実施形態においては、ＴＷＥＡＫ遮断薬は、ＴＮＦ−α遮断薬の先の投与と後の投与の間に投与される。他の実施形態においては、ＴＮＦ−α遮断薬は、ＴＷＥＡＫ遮断薬の先の投与と後の投与の間に投与される。好ましい実施形態においては、これらの薬剤の一方（例えば、ＴＮＦ−α遮断薬）の少なくとも１回の投与は、他方の薬剤（例えば、ＴＷＥＡＫ遮断薬）の１日、７日、１４日、３０日、または６０日以内に行われる。
【００１２】
１つの実施形態においては、ＴＷＥＡＫ遮断薬およびＴＮＦ−α遮断薬を投与する前に、被験体には、ＴＷＥＡＫ遮断薬またはＴＮＦ−α遮断薬のいずれかが投与されているが、他方は投与されていない。被験体は、予め決定された閾値（例えば、Ｓｈａｒｐスコアの合計またはＳｈａｒｐ浸食スコアの安定化または低下）を満たさない反応を有している場合がある。別の実施形態においては、被験体は、ＴＮＦ−α遮断薬も、ＴＷＥＡＫ遮断薬も、第１の薬剤と第２の薬剤が組み合わせて投与される前の少なくとも３ヶ月間（例え
ば、その前の少なくとも６ヶ月間、９ヶ月間、または１年間）は投与されていない被験体であり得る。
【００１３】
１つの実施態様においては、ＴＷＥＡＫ遮断薬とＴＮＦ−α遮断薬は、共製剤（ｃｏ−ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）として提供され、そして共製剤が被験体に投与される。例えば、共製剤の投与の少なくとも２４時間前または投与の少なくとも２４時間後に、これらの薬剤の一方を他方とは別に投与することがさらに可能である。別の実施態様においては、これらの薬剤は別々の製剤として提供され、そして投与の工程には、これらの薬剤の連続する投与が含まれる。連続投与は、同じ日に（例えば、互いに１時間以内、または少なくとも３時間、６時間、もしくは１２時間の間隔をあけて）、あるいは、別の日に提供され得る。
【００１４】
一般的には、ＴＷＥＡＫ遮断薬とＴＮＦ−α遮断薬は、例えば、レジュメにしたがって時間の間隔を空けられた複数回の用量としてそれぞれ投与される。一方または両方についての投与レジュメは、一定の周期性を有している場合がある。ＴＮＦ−α遮断薬についてのレジュメは、ＴＷＥＡＫ遮断薬についてのレジュメとは異なる周期性を有することができ、例えば、一方を、他方よりも多い頻度で投与することができる。これらの薬剤は、任意の適切な方法によって、例えば、皮下注射で、筋肉内注射で、または静脈内注射で投与することができる。被験体には、１４週間より長い間、６ヶ月間もしくは９ヶ月間より長い間、１年、１．５年、もしくは２年より長い間、ＴＮＦ−α遮断薬の複数の用量と、ＴＷＥＡＫ遮断薬の複数の用量を投与することができる。
【００１５】
いくつかの実施態様においては、これらの薬剤のそれぞれは、単剤療法に使用される用量とほぼ同じ用量で投与される。他の実施態様においては、ＴＮＦ−α遮断薬は、単独で投与された場合の効力に必要な量と同等もしくはそれよりも少ない（例えば、少なくとも１０％、２０％、３０％、もしくは４０％少ない）投与量で投与される。同様に、ＴＷＥＡＫ遮断薬は、単独で投与された場合の効力に必要な量と同等もしくはそれよりも少ない（例えば、少なくとも１０％、２０％、３０％、もしくは４０％少ない）投与量で投与することができる。例えば、被験体にこれまでにＴＮＦ−α遮断薬が投与されているいくつかの実施形態においては、被験体には、ＴＷＥＡＫ遮断薬の投与後に、最初のＴＷＥＡＫ遮断薬の投与の前に投与されたＴＮＦ−α遮断薬の用量と比較して少ない用量のＴＮＦ−α遮断薬が投与される。以前に行われた単剤療法において使用されたものと同じＴＮＦ−α遮断薬を併用療法において使用することができ、また、異なるＴＮＦ−α遮断薬も使用することができる。
【００１６】
被験体を、第１の薬剤および第２の薬剤を投与した後に、例えば、反応性の指標について評価することができる。当業者は、処置の有効性についての様々な臨床的指標または他の指標を使用することができる。被験体を、レジュメの間の様々な時点でモニターすることができる。
【００１７】
１つの実施形態においては、ＴＷＥＡＫ遮断薬およびＴＮＦ−α遮断薬が、炎症シグナルを生じる細胞（例えば、滑膜細胞、軟骨細胞、破骨細胞、骨芽細胞、皮膚線維芽細胞、単球、マクロファージ、または内皮細胞）の中でＴＷＥＡＫ経路およびＴＮＦ−α経路の集合効果を阻害するために有効な量で投与される。これらの薬剤は、そのような細胞の中でのＴＷＥＡＫおよびＴＮＦ−αによって誘導される遺伝子のセットの転写を減少させるために（例えば、ＴＷＥＡＫおよびＴＮＦ−αによって相乗的に活性化される遺伝子（例えば、滑膜細胞、軟骨細胞、破骨細胞、または骨芽細胞の中での表１の遺伝子リストの１つ以上）の転写を減少させるために）有効な量で投与することができる。
【００１８】
いくつかの実施形態においては、ＴＷＥＡＫ遮断薬は、成人である被験体を関節リウマ
チについて処置するためには、ＴＷＥＡＫ遮断薬での単剤療法（または、ＴＮＦ−α遮断薬の非存在下でのＴＷＥＡＫ遮断薬での治療）についての標準的な投与量よりも少なくとも２０％、３０％、５０％、６０％、または７０％少ない量で投与される。例えば、ＴＷＥＡＫ遮断薬は、単剤療法として有効であるために必要とされる量よりも少ない量で投与される。
【００１９】
いくつかの実施形態においては、ＴＮＦ−α遮断薬は、成人である被験体を関節リウマチについて処置するためには、ＴＮＦ−α遮断薬での単剤療法（または、ＴＷＥＡＫ遮断薬の非存在下でのＴＮＦ−α遮断薬での治療）についての標準的な投与量よりも少なくとも２０％、３０％、５０％、６０％、または７０％少ない量で投与される。例えば、ＴＮＦ−α遮断薬は、単剤療法として有効であるために必要とされる量よりも少ない量で投与される。他の実施形態においては、ＴＮＦ−α遮断薬およびＴＷＥＡＫ遮断薬は、単剤療法で使用される用量と同じ用量で投与される。
【００２０】
例えば、被験体は、メトトレキセートを投与されていない。１つの実施形態においては、被験体は、任意の他の疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）（すなわち、ＴＷＥＡＫ遮断薬およびＴＮＦ−α遮断薬以外のもの）を投与されていない。
【００２１】
量は、Ｓｈａｒｐ浸食スコアによって測定された場合に、関節の損傷において統計学的に有意な軽減を生じるために十分な量であり得る。例えば、被験体は疾患の指標であるパラメーターについて１つ以上の場合にモニターすることができる。
【００２２】
この方法には、例えば、疾患の重篤度をランク付けする疾患の症状または指標について、被験体を評価する工程（例えば、定期的に１回以上モニターする工程）が含まれ得る。例えば、関節リウマチの症例においては、Ｓｈａｒｐスコアの合計（ＴＳＳ）、Ｓｈａｒｐ浸食スコア、ＨＡＱ障害指数、または放射線法を使用することが可能である。
【００２３】
別の態様においては、本開示は、以下を含む方法を特徴とする：関節リウマチを有しているかまたはそのリスクがある被験体（例えば、ヒト被験体）に、別のＤＭＡＲＤ（例えば、生物学的なＤＭＡＲＤ）と組み合わせてＴＷＥＡＫ遮断薬を、全体的な治療効果を提供するための量で、およびそのための時間の間、投与する工程。関節リウマチを処置するためのＤＭＡＲＤのいくつかの例が本明細書中に記載される。
【００２４】
別の態様においては、本発明は、その必要がある被験体において関節の炎症を軽減させる方法を特徴とする。この方法には、関節の炎症を有する被験体に、（例えば、本明細書中に記載されるような）ＴＷＥＡＫ遮断薬と組み合わせてＴＮＦ−α遮断薬を投与する工程が含まれる。いくつかの症例においては、被験体は関節炎疾患（例えば、関節リウマチ）を有している。
【００２５】
以下を含む薬学的組成物もまた特徴である：ＴＷＥＡＫ遮断薬；およびＤＭＡＲＤ（例えば、ＴＮＦ−α遮断薬または他のＤＭＡＲＤ）。
【００２６】
ＴＷＥＡＫ遮断薬とＤＭＡＲＤ（例えば、ＴＮＦ−α遮断薬または他のＤＭＡＲＤ）が含まれているキットもまた提供され得る。これらの薬剤は、別の薬学的組成物として提供することができ、また、１つの薬学的組成物として提供することもできる。キットにはさらに、関節リウマチを処置するための投与のための指示書、薬剤の投与のためのデバイス、および／またはパラメーター（例えば、疾患に関係している臨床的パラメーター）を評価するための試薬が含まれ得る。
【００２７】
別の態様においては、本開示は、以下を含む方法を特徴とする：ＴＷＥＡＫおよびＴＮ
Ｆ−α、および／または高いＴＷＥＡＫの発現および活性、および／またはＴＷＥＡＫによってその発現が調節される（例えば、増大させられる）生体マーカーの高い発現もしくは活性（例えば、表２を参照のこと）によって媒介される炎症を有している被験体を同定する工程；ならびに、被験体に治療薬を投与する工程。例えば、治療には：（ｉ）ＴＷＥＡＫ遮断薬；（ｉｉ）ＴＮＦ−α遮断薬；または（ｉｉｉ）（ｉ）と（ｉｉ）の組み合わせを投与することが含まれる。「ＴＷＥＡＫ／ＴＮＦ−αによって相乗的に活性化させられた細胞性プログラム」は、ＴＷＥＡＫとＴＮＦ−αの両方の特定の用量による刺激によって生じる特性を特徴とする細胞の状態であるが、これは、その用量のＴＮＦ−αが存在しない状況でのその用量のＴＷＥＡＫでの刺激によっても、また、その用量のＴＷＥＡＫが存在しない状況でのその用量のＴＮＦ−αでの刺激によっても、同等の程度に達することはできない。被験体は、被験体から得られた炎症シグナルを生じる細胞（例えば、滑膜細胞、軟骨細胞、破骨細胞、骨芽細胞、もしくは皮膚線維芽細胞）または関連する組織の中での１つ以上の遺伝子の発現を評価することによって同定することができる。表１の１つ以上の遺伝子を評価することができる。被験体はまた、関節リウマチの１つ以上の症状について評価することもできる。
【００２８】
別の態様においては、本開示は、以下を含む方法を特徴とする：関節リウマチを有しているかまたはそのリスクがあるヒト被験体、およびＤＭＡＲＤ（ＴＷＥＡＫ遮断薬以外）の使用が中止されている（ｗｉｔｈｄｒａｗｎ）かまたはその使用が中止されたヒト被験体に対して、ＴＷＥＡＫ遮断薬を、例えば、全体的な治療効果を提供するために十分な量で、そしてそのために効果的な時間の間、投与する工程。この方法を使用して、ＴＷＥＡＫ遮断薬をこれまでには投与されていない被験体、またはＴＷＥＡＫ遮断薬を最近は投与されていない（例えば、最近の１ヶ月の間、６ヶ月の間、または１年間）被験体を処置することができる。
【００２９】
１つの実施形態においては、使用が中止されているかまたは使用が中止されるＤＭＡＲＤはＴＮＦ−α遮断薬である。被験体は、ＴＮＦ−α遮断薬に対して不適切な反応を有している場合がある。本明細書中で使用される場合は、「不適切な反応」は、患者または熟練した医師によって評価された場合に、不十分な効力、または受容できないかもしくは許容できない毒性を示す反応を意味する。不十分な効力は、処置に対する予め決定された反応レベルを満たすことができないことによって定義することができる。例えば、ＴＮＦ−α遮断薬は、毒性を引き起こすか、免疫無防備状態を誘導するか、または効力が不足する場合があり、それによって、その使用の中止が促される場合がある。例えば、被験体は、ＴＮＦ−α遮断薬での治療に対して難治性である。被験体は、例えば、結核症、日和見感染、糸球体腎炎、脱髄性症候群（ｄｅｍｙｅｌｉｎａｔｉｎｇ ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、狼瘡様の反応、または病原性細菌による感染を有する場合がある。いくつかの場合には、不適切な反応は、ＴＮＦ−α遮断薬での処置の間に検出される有害な事象によって示される。
【００３０】
ＴＮＦ−α遮断薬は、前年、３ヶ月間、１ヶ月間、２週間、または１週間以内に投与される場合がある。いくつかの場合には、被験体には、ＴＮＦ−α遮断薬をなおも投与される場合があるが、その投与量は減少させることができ、また、最後の投与量（例えば、完了前に提供される投与量）とすることもできる。他の例においては、ＴＮＦ−α遮断薬の投与は、ＴＷＥＡＫ遮断薬の１回以上の用量を投与しても、被験体がもはやＴＮＦ遮断薬を受け付けなくなると停止される。
【００３１】
他の実施形態においては、使用が中止されているか、または使用が中止されるＤＭＡＲＤは、メトトレキセート、非経口の金（ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ ｇｏｌｄ）、スルファサラジン、またはヒドロキシクロロキノン（ｈｙｄｒｏｘｙｃｈｌｏｒｏｑｕｉｎｏｎｅ）である。例えば、ＤＭＡＲＤは、ＴＮＦ−α遮断薬以外のものである。ＤＭＡＲＤは毒性
、免疫抑制、または効力が十分ではないことが原因で使用が中止される可能性がある。例えば、有害な事象は、ＤＭＡＲＤでの処置の間に検出することができる。
【００３２】
別の態様においては、本開示は、以下を含む方法を特徴とする：関節リウマチを有しており、そしてＴＷＥＡＫ遮断薬以外のＤＭＡＲＤで処置されたヒト被験体において有害な事象を検出する工程；および、被験体に、ＴＷＥＡＫ遮断薬を、全体的な治療効果を提供するために効果的な量、およびそのために効果的な時間の間、投与する工程。
【００３３】
１つの実施形態においては、被験体は、ＴＮＦ−α遮断薬で処置されている。この方法にはさらに、ＴＮＦ−α遮断薬の使用を中止する工程が含まれ得る。有害な事象には、狼瘡様の反応、細菌感染もしくは日和見感染、または結核症が含まれ得る。
【００３４】
１つの態様においては、本開示は、被験体を炎症性疾患、具体的には、ＴＮＦ−α遮断薬によって悪化しないものについて処置する方法を特徴とする。炎症性疾患は関節リウマチである場合も、また、関節リウマチ以外の疾患である場合もある。例えば、疾患は、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎およびクローン病を含む）、乾癬、または炎症性筋炎であり得る。炎症性疾患のなお他の例としては、ランゲルハンス細胞組織球増殖症、成人呼吸窮迫症候群／閉塞性細気管支炎、ヴェーゲナー肉芽腫症、脈管炎、悪液質、口内炎、特発性肺線維症、皮膚筋炎または多発性筋炎、非感染性強膜炎、肺の関与を伴う慢性サルコイドーシス症候群、骨髄異形成症候群／過度の芽細胞を伴う難治性貧血、潰瘍性大腸炎、中度から重症の慢性閉塞性肺疾患、および巨細胞性大動脈炎であり得る。この方法には炎症性疾患を有しているか、またはそのリスクがあるヒト被験体に、ＴＷＥＡＫ遮断薬を、全体的な治療効果を提供するための量で、そしてそのための時間の間投与する工程が含まれる。この方法には、ＴＮＦ−α遮断薬と組み合わせたＴＷＥＫＡ遮断薬を、全体的な治療効果を提供するための量で、そしてそのための時間の間、投与する工程、または、ＴＮＦ−α遮断薬を提供せずに（例えば、その使用を保留して）ＴＷＥＡＫ遮断薬を投与する工程が含まれ得る。１つの実施形態においては、被験体は、１７歳未満であり、疾患は若年性関節リウマチまたは小児乾癬である。この方法には、本明細書中に記載される他の特徴も含まれ得る。
【００３５】
別の態様においては、本開示は、例えば、インビトロまたはインビボでＴＷＥＡＫ反応および／またはＴＮＦ−α反応を調節する能力について、試験化合物を評価する方法を特徴とする。ＴＷＥＡＫ反応には、ＴＷＥＡＫ自体の調節、またはＴＷＥＡＫ受容体の調節が含まれる。この方法には、試験化合物を細胞、組織、または生物体に対して、ＴＷＥＡＫおよび／またはＴＮＦ−α（例えば、外因性のＴＷＥＡＫおよび／またはＴＮＦ−α）の存在下で接触させる工程が含まれる。この方法にはさらに、試験化合物がＴＷＥＡＫおよび／またはＴＮＦ−αに反応する（例えば、ＴＷＥＡＫ／ＴＮＦ−αによって媒介される細胞性プログラムを低下させる）細胞、組織、または生物体の能力を調節するかどうかを評価する工程が含まれる。この方法には、表１または表２の１つ以上の遺伝子の発現または活性を評価する工程が含まれ得る。この方法にはさらに、例えば、本明細書中に記載されるヒトの疾患の動物モデルを使用して、疾患を調節する試験化合物の能力を評価する工程が含まれ得る。
【００３６】
別の態様においては、本開示は、被験体（例えば、ヒト被験体）を評価する方法を特徴とする。被験体は、本明細書中に記載される１つ以上の薬剤を提供するより前に、１つ以上のそのような薬剤を投与しながら、または１つ以上のそのような薬剤を投与した後に評価することができる。この方法には、表２の１つ以上の遺伝子の発現（タンパク質およびｍＲＮＡの発現が含まれる）が参照値と比較して変化したかどうかを決定するために、被験体に由来する細胞（被験体から得られた試料中の細胞）、組織、または他の材料を評価する工程が含まれる。参照値は、正常な被験体、対照被験体についての参照値、または（
例えば、被験体のコホートについて）決定された値に関係している値であり得る。参照値は、被験体自身についての（例えば、別の時点（例えば、１つ以上の薬剤の投与前）での）参照値などであり得る。評価による情報は、コンピューターで読み取ることができる媒体または別の媒体に保存することができ、そして／また、例えば、コンピューターネットワークを使用して通信することもできる。この方法は、患者がＴＷＥＡＫ反応性であるかどうか、またはＴＷＥＡＫ反応性であると予想されるかどうかを決定するために使用することができる。例えば、表２の１つ以上の遺伝子について高い発現レベルを有している患者は、ＴＷＥＡＫ反応性であると示すことができる。この方法には、被験体がＴＷＥＡＫ反応性であることの指標、および必要に応じては、ＴＷＥＡＫ遮断薬を投与するための指示書を提供する工程が含まれ得る。この方法にはさらに、ＴＷＥＡＫ遮断薬を投与する工程が含まれ得る。
【００３７】
別の態様においては、本開示は、（例えば、治療に使用される）ＴＷＥＡＫ遮断薬およびＴＮＦ−α遮断薬が含まれている医薬品を特徴とする。
【００３８】
別の態様においては、本開示は、医薬品（例えば、本明細書中に記載される炎症性疾患（例えば、関節の炎症または関節炎疾患（例えば、関節リウマチ））の処置のための医薬品）の調製のための、ＴＷＥＡＫ遮断薬およびＴＮＦ−α遮断薬の使用を特徴とする。
【００３９】
別の態様においては、本開示は、例えば、別のＤＭＡＲＤでの治療には反応しない被験体の、本明細書中に記載される炎症性疾患（例えば、関節の炎症または関節疾患（例えば、関節リウマチ））の処置のための医薬品の調製のためのＴＷＥＡＫ遮断薬の使用を特徴とする。
【００４０】
本明細書中で引用される全ての特許、特許出願、および参考文献はそれらの全体が引用により本明細書中に組み入れられる。矛盾する場合には、本出願が支配する。
【００４１】
用語「相乗作用」は、個々の事象のそれぞれの結果の合計よりも大きい、少なくとも２つの事象による結果を意味する。ＡＮＯＶＡを使用して、以下の方程式において相乗作用係数（ｓｙｎｅｒｇｙ ｆａｃｔｏｒ）を決定することができる：
Ｒ＝Ａ＋Ｂ＋ε（Ａ×Ｂ）
相乗作用係数εの例示的な値は、０より大きくなり得、または、予め決定された値（例えば、１、２、またはそれ以上）であり得る。
【００４２】
用語「処置する」は、統計学的に有意な程度、または当業者が検出できる程度のいずれかで、疾患に関係している状態、症状、もしくはパラメーターを改善するかまたは予防するために、あるいは、疾患の発症、進行、もしくは再燃を防ぐために有効な量、様式、ならびに／あるいは形式で治療薬を投与することを意味する。したがって、処置によって治療的および／または予防的利点を得ることができる。有効な量、様式、または形式は、被験体に応じて様々であり得、そして被験体に合わせることができる。
【００４３】
阻害することとの言及には、少なくとも一部の阻害、さらには他の程度の阻害（例えば、実質的または完全）が含まれる。
【００４４】
本発明の１つ以上の実施形態の詳細は、以下の添付の図面および記載に示される。本発明の他の特徴、目的、および利点は、記載および図面から、そして特許請求の範囲から明らかであろう。
【００４５】
本発明により、例えば以下が提供される：
（項目１）
関節リウマチを有するヒト被験体に対して、ＴＮＦ−α遮断薬と組み合わせたＴＷＥＡＫ遮断薬を、治療効果を提供する量で、治療効果を提供する時間にわたって投与する工程を包含する、方法。
（項目２）
前記ＴＷＥＡＫ遮断薬および前記ＴＮＦ−α遮断薬が、滑膜細胞、軟骨細胞、破骨細胞、または骨芽細胞中のＴＷＥＡＫおよびＴＮＦ−αを阻害するために有効な量で投与される、項目１に記載の方法。
（項目３）
前記ＴＷＥＡＫ遮断薬および前記ＴＮＦ−α遮断薬が、滑膜細胞、軟骨細胞、破骨細胞、または骨芽細胞中での、ＴＷＥＡＫおよびＴＮＦ−αの細胞性プログラムによって誘導される遺伝子セットの転写を減少させるために有効な量で投与される、項目１に記載の方法。
（項目４）
前記ＴＷＥＡＫ遮断薬および前記ＴＮＦ−α遮断薬が、滑膜細胞、軟骨細胞、破骨細胞、または骨芽細胞中での表１に列挙される１つ以上の遺伝子の転写を減少させるために有効な量で投与される、項目１に記載の方法。
（項目５）
前記ＴＷＥＡＫ遮断薬が、関節リウマチについて成人である被験体を処置するためのＴＷＥＡＫ遮断薬の単剤療法についての標準的な投与量よりも少なくとも２０％少ない量で投与される、項目１に記載の方法。
（項目６）
前記ＴＮＦ−α遮断薬が、関節リウマチについて成人である被験体を処置するためのＴＮＦ−α遮断薬の単剤療法についての標準的な投与量よりも少なくとも２０％少ない量で投与される、項目１または５に記載の方法。
（項目７）
前記被験体にはメトトレキセートが投与されていない、項目１に記載の方法。
（項目８）
前記被験体には、他のいずれの疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）も投与されていない、項目１に記載の方法。
（項目９）
前記量によって、Ｓｈａｒｐ浸食スコアによって測定された場合に、関節の損傷において統計学的に有意な軽減が生じる、項目１に記載の方法。
（項目１０）
前記ＴＷＥＡＫ遮断薬によって、ＴＷＥＡＫのＴＷＥＡＫ受容体結合能力が低下させられる、項目１に記載の方法。
（項目１１）
前記ＴＷＥＡＫ遮断薬がＴＷＥＡＫに結合する抗体である、項目１に記載の方法。
（項目１２）
前記ＴＷＥＡＫ遮断薬にＴＷＥＡＫ受容体に結合する抗体が含まれる、項目１に記載の方法。
（項目１３）
前記ＴＷＥＡＫ遮断薬にＴＷＥＡＫ受容体の可溶性形態が含まれる、項目１に記載の方法。
（項目１４）
前記ＴＷＥＡＫ受容体の可溶性形態のＴＷＥＡＫ遮断薬が抗体Ｆｃ領域と融合している、項目１に記載の方法。
（項目１５）
前記ＴＮＦ−α遮断薬によって、ＴＮＦ−αのＴＮＦ−α受容体結合能力が低下させられる、項目１に記載の方法。
（項目１６）
前記ＴＮＦ−α遮断薬に、ＴＮＦ−α、ＴＮＦＲ−Ｉ、またはＴＮＦＲ−ＩＩに結合する抗体が含まれる、項目１に記載の方法。
（項目１７）
前記ＴＮＦ−α遮断薬がインフリキシマブまたはアダリムマブである、項目１６に記載の方法。
（項目１８）
前記ＴＮＦ−α遮断薬にＴＮＦ−α受容体の可溶性形態が含まれる、項目１に記載の方法。
（項目１９）
前記ＴＮＦ−α遮断薬がエタネルセプトである、項目１に記載の方法。
（項目２０）
Ｓｈａｒｐスコアの合計（ＴＳＳ）、Ｓｈａｒｐ浸食スコア、ＨＡＱ障害指数、または放射線法を使用して前記被験体を評価する工程をさらに包含する、項目１に記載の方法。（項目２１）
関節リウマチを有するヒト被験体に対して、別の生物学的ＤＭＡＲＤと組み合わせたＴＷＥＡＫ遮断薬を、治療効果を提供する量で、治療効果を提供する時間にわたって投与する工程を包含する、方法。
（項目２２）
ＴＷＥＡＫ遮断薬およびＴＮＦ−α遮断薬を備えるキットであって、該薬剤は、別々の薬学的組成物として、または１つの薬学的組成物として提供される、キット。
（項目２３）
関節リウマチを処置するための投与のための指示書がさらに含まれている、項目２２に記載のキット。
（項目２４）
ＴＷＥＡＫ遮断薬；および
ＴＮＦ−α遮断薬
を含む、薬学的組成物。
（項目２５）
ＴＷＥＡＫおよびＴＮＦ−αによって媒介される炎症を有する被験体を同定する工程；ならびに
該被験体に対して：（ｉ）ＴＷＥＡＫ遮断薬；（ｉｉ）ＴＮＦ−α遮断薬；または（ｉｉｉ）（ｉ）と（ｉｉ）との組み合わせを投与する工程
を包含する、方法。
（項目２６）
前記被験体が、該被験体に由来する滑膜細胞中での１つ以上の遺伝子の発現を評価することによって同定される、項目２５に記載の方法。
（項目２７）
前記評価される１つ以上の遺伝子に、表１から選択される１つ以上の遺伝子が含まれる、項目２６に記載の方法。
（項目２８）
前記評価する工程が、前記被験体から細胞または組織の試料を得ることを含む、項目２６に記載の方法。
（項目２９）
前記同定する工程が、前記被験体における関節リウマチの症状を検出することをさらに含む、項目２５に記載の方法。
（項目３０）
関節リウマチを有し、かつＴＮＦ−α遮断薬の使用が中止されているかまたはＴＮＦ−α遮断薬の使用が中止されたヒト被験体に対して、ＴＷＥＡＫ遮断薬を、治療効果を提供するために有効な量で、有効な時間にわたって投与する工程を包含する、方法。
（項目３１）
前記ＴＮＦ−α遮断薬が、毒性を引き起こすか、免疫無防備状態を誘導するか、または効力を欠く、項目３０に記載の方法。
（項目３２）
前記被験体が、ＴＮＦ−α遮断薬での治療に対して難治性である、項目３０に記載の方法。
（項目３３）
前記被験体は、結核症、日和見感染、または病原性細菌による感染を有する、項目３０に記載の方法。
（項目３４）
前記被験体が糸球体腎炎を有する、項目３０に記載の方法。
（項目３５）
前記被験体が脱髄性症候群を有する、項目３０に記載の方法。
（項目３６）
前記被験体が狼瘡様の反応を有する、項目３０に記載の方法。
（項目３７）
関節リウマチを有するヒト被験体において有害な事象を検出する工程であって、ここでは、該被験体はＴＮＦ−α遮断薬で処置されているが、ＴＷＥＡＫ遮断薬では処置されていない、工程；および
該被験体に対して、ＴＷＥＡＫ遮断薬を、全体的な治療効果を提供するために有効な量で、有効な時間にわたって投与する工程
を包含する、方法。
（項目３８）
ＴＮＦ−α遮断薬の使用を中止する工程をさらに包含する、項目３７に記載の方法。
（項目３９）
前記有害な事象に狼瘡様の反応が含まれる、項目３７に記載の方法。
（項目４０）
前記有害な事象に細菌感染または日和見感染が含まれる、項目３７に記載の方法。
（項目４１）
前記有害な事象に結核症が含まれる、項目３７に記載の方法。
（項目４２）
関節リウマチを有し、かつＴＷＥＡＫ遮断薬以外のＤＭＡＲＤの使用が中止されているかまたはその使用が中止されたヒト被験体に対して、ＴＷＥＡＫ遮断薬を、治療効果を提供する量で、治療効果を提供する時間にわたって投与する工程を包含する、方法。
（項目４３）
前記ＤＭＡＲＤが、メトトレキセート、非経口金、スルファサラジン、またはヒドロキシクロロキノンである、項目４２に記載の方法。
（項目４４）
前記ＤＭＡＲＤがＴＮＦ−α遮断薬以外のものである、項目４２に記載の方法。
（項目４５）
前記ＤＭＡＲＤが、毒性または効力の欠如が原因で使用が中止される、項目４２に記載の方法。
（項目４６）
炎症性疾患を有するヒト被験体に対して、ＴＮＦ−α遮断薬と組み合わせたＴＷＥＡＫ遮断薬を、治療効果を提供する量で、治療効果を提供する時間にわたって投与する工程であって、ここで、該炎症性疾患は、ＴＮＦ−α遮断薬によって悪化することのない疾患である、工程を包含する、方法。
（項目４７）
前記炎症性疾患が、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、炎症性腸疾患、乾癬、または炎症性筋炎である、項目４６に記載の方法。
（項目４８）
前記被験体が１７歳未満であり、そして前記疾患が若年性関節リウマチまたは小児乾癬である、項目４６に記載の方法。
（項目４９）
関節の炎症を軽減する方法であって、関節の炎症を有する被験体を同定する工程、および該被験体に対して、ＴＮＦ−α遮断薬と組み合わせてＴＷＥＡＫ遮断薬を投与する工程を包含する、方法。
（項目５０）
前記被験体が関節リウマチを有する、項目４９に記載の方法。
（項目５１）
前記ＴＷＥＡＫ遮断薬がＴＷＥＡＫに結合する抗体である、項目４９に記載の方法。
（項目５２）
前記ＴＷＥＡＫ遮断薬にＴＷＥＡＫ受容体に結合する抗体が含まれる、項目４９に記載の方法。
（項目５３）
前記ＴＷＥＡＫ遮断薬にＴＷＥＡＫ受容体の可溶性形態が含まれる、項目４９に記載の方法。
（項目５４）
前記ＴＷＥＡＫ受容体の可溶性形態が抗体Ｆｃ領域と融合している、項目５３に記載の方法。
【図面の簡単な説明】
【００４６】
【図１】図１は、ＴＷＥＡＫ遮断薬とＴＮＦ−α遮断薬の組み合わせ、ＴＷＥＡＫ遮断薬のみ、ＴＮＦ−α遮断薬のみ、ＰＢＳ対照、またはアイソタイプが適合している対照を用いて処置したマウスの関節炎のｍＣＩＡモデルにおける、平均の関節炎指数スコアを示している線グラフである。
【図２】図２は、ＴＷＥＡＫ遮断薬とＴＮＦ−α遮断薬の組み合わせ、ＴＷＥＡＫ遮断薬のみ、ＴＮＦ−α遮断薬のみ、ＰＢＳ対照、またはアイソタイプが適合している対照を用いて処置したマウスの関節炎のｍＣＩＡモデルにおける、平均の中足骨の高さの値を示しているプロットである。
【図３】図３は、ＴＷＥＡＫ遮断薬とＴＮＦ−α遮断薬の組み合わせ、ＴＷＥＡＫ遮断薬のみ、ＴＮＦ−α遮断薬のみ、ＰＢＳ対照、またはアイソタイプが適合している対照を用いて処置したマウスの関節炎のｍＣＩＡモデルにおける、体重変化の割合を示している線グラフである。
【図４】図４は、抗ＴＷＥＡＫ遮断抗体（抗ＴＷＥＡＫ ｍＡｂ）または対照で処置した動物の関節炎のＣＩＡモデルにおける、平均の関節炎指数の値を示している２つの線プロットを示す。左側のパネルは、マウスＣＩＡモデルを使用して得られた結果を示しており；右側のパネルは、ラットＣＩＡモデルを使用して得られた結果を示している。
【図５】図５は、抗ＴＷＥＡＫ遮断抗体（抗ＴＷＥＡＫ ｍＡｂ）または対照で処置した動物の関節炎のＣＩＡモデルにおける、平均の関節炎指数の値を示している２つの線プロットを示す。これらの図は、２種類の投与レジュメの結果を示している：第１のレジュメでは、抗体は関節炎の誘導の時点で投与され、第２のレジュメにおいては、抗体は関節炎の誘導後に投与された。左側のパネルは、マウスＣＩＡモデルを使用して得られた結果を示しており；右側のパネルは、ラットＣＩＡモデルを使用して得られた結果を示している。
【図６】図６には、抗ＴＷＥＡＫ遮断抗体（抗ＡＢＧ．１１）または対照で処置したラットの関節炎のラットＣＩＡモデルにおける、炎症、および軟骨と骨の消失のレベルを示している５つの棒グラフが含まれる。同様な所見がマウスのモデルにおいて認められる。
【図７】図７は、ｍＣＩＡモデルと対照のマウス（ＤＢＡ／１）における関節炎の誘導後の様々な時点での血清ＴＷＥＡＫレベルを示しているプロットである。
【図８】図８には、抗ＴＷＥＡＫ遮断抗体（Ｐ５Ｇ９およびＰ５Ｇ９（完全））または対照で処置したマウスのｍＣＩＡモデルにおける、関節炎の誘導後の様々な時点での、ＭＭＰ９、リンホタクチン、ＩＰ−１０、およびＩＬ−６のレベルを示している４つの棒グラフが含まれる。
【発明を実施するための形態】
【００４７】
（詳細な説明）
本発明者らは、ＴＷＥＡＫ経路とＴＮＦ−α経路が別々に炎症反応（例えば、関節の中に存在している滑膜細胞の中での炎症反応）に関係していること、およびＴＷＥＡＫとＴＮＦ−αの両方が、類似する遺伝子のセットを別々に活性化させることができることを発見した。これらのことは、２つの経路の間での冗長性を示している。したがって、両方の経路の活性を低下させることにより、炎症（例えば、（例えば、関節炎の状態にある）関節の炎症）を緩和させるための有効な治療経路が提供される。ＴＷＥＡＫ経路とＴＮＦ−α経路の両方を同時に遮断することは、関節リウマチのマウスモデル（ｍＣＩＡ）において有効であることが明らかになっており、これによって、これらの経路の１つを遮断するよりも大きな結果が得られる。
【００４８】
関節リウマチに加えて、両方の経路の活性を低下させることによって、他の疾患（例えば、他の炎症性疾患（例えば、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、炎症性腸疾患、乾癬、炎症性筋炎）および本明細書中で開示される他の疾患）を処置するために使用することができる。様々な方法を使用して、ＴＷＥＡＫ経路およびＴＮＦ−α経路の活性を低下させることができる。例えば、ＴＮＦ−α遮断薬と組み合わせてＴＷＥＡＫ遮断薬を投与することが可能である。これらおよび他の薬剤の例は、以下にさらに記載される。
【００４９】
いくつかの実施態様においては、治療上の利点は、２つの経路の一方を低下させることによって得ることができる。例えば、ＴＷＥＡＫ遮断薬を、経路の一方だけを調節する治療薬に対して不適切な反応（例えば、ＴＮＦ−α遮断薬に対する不適切な反応、またはＴＷＥＡＫ遮断薬に対する不適切な反応）を有している被験体に投与することができる。ＴＷＥＡＫ遮断薬はまた、別の薬剤（例えば、ＴＮＦ−α遮断薬以外の薬剤）を伴うＤＭＡＲＤでの処置が中止されているか、またはＤＭＡＲＤでの処置を中止することが計画されている被験体に投与することができる。
【００５０】
（ＴＷＥＡＫ遮断薬）
様々な薬剤をＴＷＥＡＫ遮断薬として使用することができる。薬剤は、被験体に投与することができる任意のタイプの化合物（例えば、小さい有機分子または無機分子、核酸、タンパク質、あるいはペプチド模倣物）であり得る。１つの実施態様においては、遮断薬は生物学的なものであり、例えば、５〜３００ｋＤａの分子量を有しているタンパク質である。例えば、ＴＷＥＡＫ遮断薬は、ＴＷＥＡＫ受容体に対するＴＷＥＡＫの結合を阻害することができるか、または、ＴＷＥＡＫによって媒介されるＮＦ−κＢの活性化を妨げることができる。典型的なＴＷＥＡＫ遮断薬は、ＴＷＥＡＫに、またはＴＷＥＡＫ受容体（例えば、Ｆｎ１４）に結合することができる。ＴＷＥＡＫに、またはＴＷＥＡＫ受容体に結合するＴＷＥＡＫ遮断薬は、ＴＷＥＡＫまたはＴＷＥＡＫ受容体の立体構造を変化させる場合があり、ＴＷＥＡＫまたはＴＷＥＡＫ受容体上の結合部位をブロックする場合があり、あるいは、別の方法で、ＴＷＥＡＫ受容体に対するＴＷＥＡＫの親和性を低下させる場合、また、ＴＷＥＡＫとＴＷＥＡＫ受容体の間での相互作用を妨げる場合もある。
【００５１】
ＴＷＥＡＫ遮断薬（例えば、抗体）は、ＴＷＥＡＫに対して、またはＴＷＥＡＫ受容体に対して、１０−６、１０−７、１０−８、１０−９、または１０−１０Ｍ未満のＫｄで結合することができる。１つの実施態様においては、遮断薬は、ＴＷＥＡＫに対して、ＴＮＦ−αまたは別のＴＮＦスーパーファミリーのメンバー（ＴＷＥＡＫ以外）に対するそ
の親和性よりも、少なくとも５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍、２００倍、５００倍、または１０００倍高い親和性で結合する。１つの実施態様においては、遮断薬は、ＴＷＥＡＫ受容体に対して、ＴＮＦ受容体または別のＴＮＦスーパーファミリーのメンバーの受容体に対するその親和性よりも、少なくとも５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍、２００倍、５００倍、または１０００倍高い親和性で結合する。好ましいＴＷＥＡＫ遮断薬は、ＴＷＥＡＫまたはＴＷＥＡＫ−Ｒに特異的に結合する。
【００５２】
例示的なＴＷＥＡＫタンパク質分子としては、ヒトＴＷＥＡＫ（例えば、ＡＡＣ５１９２３、配列番号１として示される）、マウスＴＷＥＡＫ（例えば、ＮＰ＿０３５７４４．１）、ラットＴＷＥＡＫ（例えば、ＸＰ＿３４０８２７．１）、およびチンパンジー（Ｐａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ）ＴＷＥＡＫ（例えば、ＸＰ＿５１１９６４．１）が挙げられる。上記のＴＷＥＡＫタンパク質の成熟したプロセシングされた領域に対して、少なくとも９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％同一であるか、またはそれと完全に同じであるアミノ酸配列（例えば、配列番号１のアミノ酸Ｘ１〜２４９に対して、少なくとも９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％同一であるか、またはそれと完全に同じであるアミノ酸配列であって、式中、アミノ酸Ｘ１は、配列番号１の残基７５〜１１５のグループから選択され、例えば、Ｘ１は、配列番号１の残基Ａｒｇ９３である）を含むタンパク質、ならびに、自然界に存在しているＴＷＥＡＫタンパク質をコードするヒト、マウス、ラット、またはチンパンジー（Ｐａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ）の遺伝子に対して高いストリンジェンシーの条件下でハイブリダイズする核酸によってコードされるタンパク質も含まれる。好ましくは、そのプロセシングされた成熟形態のＴＷＥＡＫタンパク質は、少なくとも１つのＴＷＥＡＫ活性（例えば、Ｆｎ１４を活性化させる能力）を提供することができる。
【００５３】
例示的なＦｎ１４タンパク質分子としては、ヒトＦｎ１４（例えば、ＮＰ＿０５７７２３．１、配列番号２として示される）、マウスＦｎ１４（例えば、ＮＰ＿０３８７７７．１）、およびラットＦｎ１４（例えば、ＮＰ＿８５１６００．１）、さらには、Ｆｎ１４の細胞外ドメイン（およびそのＴＷＥＡＫ−結合断片）に対して、少なくとも９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、９９％同一であるか、または完全に同じであるアミノ酸配列を含む可溶性タンパク質、ならびに、自然界に存在しているＦｎ１４タンパク質をコードするヒト、マウス、ラット、またはチンパンジー（Ｐａｎ ｔｒｏｇｌｏｄｙｔｅｓ）の遺伝子に対して高いストリンジェンシーの条件下でハイブリダイズする核酸によってコードされるタンパク質が挙げられる。好ましくは、本明細書中に記載される方法に有用なＦｎ１４タンパク質は可溶性のＦｎ１４（膜貫通ドメインが欠失している）であり、これにはＴＷＥＡＫタンパク質に結合する領域（例えば、配列番号２のアミノ酸２８〜Ｘ１に対して、少なくとも９０％、９２％、９５％、９７％、９８％、もしくは９９％同一であるか、またはそれと完全に同じであるアミノ酸配列であって、式中、アミノ酸Ｘ１は、配列番号２の残基６８〜８０のグループから選択される）が含まれる。
【００５４】
２つの配列間での「相同性」または「配列同一性」（これらの用語は本明細書中では同義的に使用される）の計算は以下のように行われる。配列は、最適な比較の目的のためにアラインメントされる（例えば、ギャップを、最適なアラインメントのために、第１および第２のアミノ酸配列または核酸配列の一方または両方に導入することができ、そして非相同配列は、比較の目的のために無視することができる）。最適なアラインメントは、１２のギャップペナルティー、４のギャップ伸張ペナルティー、および５のフレームシフトギャップペナルティーを含むＢｌｏｓｓｕｍ ６２スコアリングマトリックスで、ＧＣＧソフトウェアパッケージにおいてＧＡＰプログラムを使用して最良なスコアとして決定される。その後、対応するアミノ酸位置またはヌクレオチド位置のアミノ酸残基またはヌクレオチドが比較される。第１の配列の中の１つの位置が第２の配列の中の対応する位置と同じアミノ酸残基またはヌクレオチドによって占有されている場合には、これらの分子は
その位置で同一である（本明細書中で使用される場合は、アミノ酸または核酸の「同一性」は、アミノ酸または核酸の「相同性」と同等である）。２つの配列の間での同一性の割合は、配列によって共有される同じ位置の数の関数である。本明細書中に記載される関連するタンパク質のアラインメントは、修飾（例えば、挿入、欠失、および置換（例えば、保存的置換または非保存的置換））を寛容するアミノ酸位置を同定するための教示である。
【００５５】
本明細書中で使用される場合は、用語「高いストリンジェンシーの条件下でハイブリダイズする」は、ハイブリダイゼーションおよび洗浄についての条件を記載する。ハイブリダイゼーション反応を行うための指針は、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８９），６．３．１−６．３．６（引用により本明細書中に組み入れられる）において見ることができる。水性方法と非水性方法がその参考文献に記載されており、いずれを使用することもできる。高いストリンジェンシーのハイブリダイゼーション条件としては、約４５℃での６×ＳＳＣ中でのハイブリダイゼーション、その後の、０．２×ＳＳＣ、０．１×ＳＤＳ中で６５℃での１回以上の洗浄、あるいは実質的に同様の条件が挙げられる。
【００５６】
例示的なＴＷＥＡＫ遮断薬としては、ＴＷＥＡＫまたはＴＷＥＡＫ−Ｒに結合する抗体、およびＴＷＥＡＫへの結合について細胞表面ＴＷＥＡＫ−Ｒと競合するＴＷＥＡＫ−Ｒの可溶性形態が挙げられる。ＴＷＥＡＫ−Ｒの可溶性形態の一例は、ＴＷＥＡＫ−Ｒの細胞外ドメインの少なくとも一部（例えば、ＴＷＥＡＫ−Ｒの可溶性のＴＷＥＡＫ結合断片）が含まれているＦｃ融合タンパク質であり、これはＴＷＥＡＫ−Ｒ−Ｆｃと呼ばれる。ＴＷＥＡＫ−Ｒの他の可溶性形態（例えば、Ｆｃドメインが含まれていない形態）もまた使用することができる。抗体遮断薬は以下でさらに議論される。
【００５７】
他のタイプの遮断薬（例えば、低分子、核酸、または核酸をベースとするアプタマー、およびペプチド）を、例えば、Ｊｈａｖｅｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１８：１２９３およびＵ．Ｓ．５，２２３，４０９に記載されているように、スクリーニングによって単離することができる。薬剤がＴＷＥＡＫまたはＴＷＥＡＫ−Ｒに結合するかどうかを決定するため、および薬剤がＴＷＥＡＫ／ＴＷＥＡＫ−Ｒの相互作用を調節するかどうかを決定するための例示的なアッセイは、例えば、Ｕ．Ｓ．２００４−００３３２２５に記載されている。
【００５８】
例示的なＴＷＥＡＫ−Ｒタンパク質の可溶性形態としては、ＴＷＥＡＫに結合するＴＷＥＡＫ−Ｒタンパク質の領域（例えば、配列番号２のおよそ３２〜７５、３１〜７５、３１〜７８、または２８〜７９のアミノ酸）が挙げられる。この領域は、別のアミノ酸（例えば、Ｆｃドメイン）に対して、そのＮ末端またはＣ末端で物理的に会合させる（例えば、融合させる）ことができる。ＴＷＥＡＫ−Ｒに由来する領域は、異種アミノ酸配列に由来するリンカーによって間隔をあけることができる。Ｕ．Ｓ．６，８２４，７７３には、例示的なＴＷＥＡＫ−Ｒ融合タンパク質が記載されている。
【００５９】
（ＴＮＦ−α遮断薬）
様々な薬剤をＴＮＦ−α遮断薬として使用することができる。薬剤は、被験体に投与することができる任意のタイプの化合物（例えば、小さい有機分子または無機分子、核酸、タンパク質、あるいはペプチド模倣物）であり得る。１つの実施態様においては、遮断薬は生物学的なものであり、例えば、５〜３００ｋＤａの分子量を有しているタンパク質である。例えば、ＴＮＦ−α遮断薬は、ＴＮＦ−α受容体に対するＴＮＦ−αの結合を阻害することができるか、または、別の方法で、ＴＮＦ−α受容体の下流のシグナル伝達を妨げることができる。典型的なＴＮＦ−α遮断薬は、ＴＮＦ−αに、またはＴＮＦ−α受容
体（例えば、ＴＮＦＲ−ＩまたはＴＮＦＲ−ＩＩ）に結合することができる。ＴＮＦ−αに、またはＴＮＦ−α受容体に結合するＴＮＦ−α遮断薬は、ＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−α受容体の立体構造を変化させる場合があり、ＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−α受容体上の結合部位をブロックする場合があり、あるいは、別の方法で、ＴＮＦ−α受容体に対するＴＮＦ−αの親和性を低下させる場合、また、ＴＮＦ−αとＴＮＦ−α受容体の間での相互作用を妨げる場合もある。
【００６０】
ＴＮＦ−α遮断薬（例えば、抗体）は、ＴＮＦ−αに対して、またはＴＮＦ−α受容体に対して、１０−６、１０−７、１０−８、１０−９、または１０−１０Ｍ未満のＫｄで結合することができる。１つの実施態様においては、遮断薬は、ＴＮＦ−αに対して、ＴＷＥＡＫまたは別のＴＮＦスーパーファミリーのメンバー（ＴＮＦ−α以外）に対するその親和性よりも、少なくとも５倍、１０倍、２０倍、５０倍、１００倍、２００倍、５００倍、または１０００倍高い親和性で結合する。好ましいＴＮＦ−α遮断薬は、ＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−α−Ｒに特異的に結合し、例えば、ＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−α−Ｒ特異的抗体である。
【００６１】
例示的なＴＮＦ−α遮断薬としては、ＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−α−Ｒに結合する抗体、およびＴＭＦ−αへの結合について細胞表面ＴＮＦ−α−Ｒと競合するＴＮＦ−α−Ｒの可溶性形態が挙げられる。ＴＮＦ−α−Ｒの可溶性形態の一例は、ＴＮＦ−α−Ｒの細胞外ドメインの少なくとも一部（例えば、ＴＮＦ−α−Ｒの可溶性のＴＮＦ−α−結合断片）が含まれているＦｃ融合タンパク質であり、これはＴＮＦ−α−Ｒ−Ｆｃと呼ばれる。ＴＮＦ−α−Ｒの他の可溶性形態（例えば、Ｆｃドメインが含まれていない形態）もまた使用することができる。抗体遮断薬は以下でさらに議論される。
【００６２】
例示的なＴＮＦ−α受容体タンパク質の可溶性形態は、ＥＮＢＲＥＬ（登録商標）である。例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ＆ Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９４）Ｖａｌ．３７，Ｓ２９５；Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｍｅｄ．（１９９６）Ｖｏｌ．４４，２３５Ａを参照のこと。Ｕ．Ｓ．６，５７２，８５２にはさらに別の例が記載されている。関節リウマチ、乾癬性関節炎、または強直性脊椎炎を有している成人である患者について推奨されるＥＮＢＲＥＬ（登録商標）の用量は１週間に５０ｍｇであり、５０ｍｇ／ｍＬの使い捨ての薬剤充填済み注射器（ｐｒｅｆｉｌｌｅｄ ｓｙｒｉｎｇｅ）を使用して１回の皮下（ＳＣ）注射として投与される。ＥＮＢＲＥＬ（登録商標）に加えて、ＴＮＦ−α受容体の他の同様の領域および／または対応する領域を、別のアミノ酸配列（例えば、Ｆｃドメイン）に対して、そのＮ末端またはＣ末端で物理的に会合させる（例えば、融合させる）ことができる。
【００６３】
ＴＮＦ−α遮断薬の他の十分に特性決定されている例としては以下が挙げられる：インフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標））、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）に結合するキメラ抗体およびアダリムマブ（ＨＵＭＩＲＡ（登録商標））（ＴＮＦ−αに結合するヒト抗体）。例えば、ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標）についての推奨される用量は静脈内注射として投与される３ｍｇ／ｋｇ、その後の、最初の注射後２週間および６週間で、その後は８週間おきに投与されるさらなる同様の用量である。
【００６４】
ＴＮＦ−α遮断薬のさらに別の例としては、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、またはインビトロで作成されたＴＮＦ（例えば、ヒトＴＮＦ−α）に対する抗体（またはその抗原結合断片）が挙げられ、例えば、Ｄ２Ｅ７（ヒトＴＮＦ−α抗体、米国特許第６，２５８，５６２号；ＢＡＳＦ）、ＣＤＰ−５７１／ＣＤＰ−８７０／ＢＡＹ−１０−３３５６（ヒト化抗ＴＮＦ−α抗体；Ｃｅｌｌｔｅｃｈ／Ｐｈａｒｍａｃｉａ）、ｃＡ２（キメラ抗ＴＮＦα抗体；ＲＥＭＩＣＡＤＥ（商標）、Ｃｅｎｔｏｃｏｒ，上記にも記載されている）；抗ＴＮＦ抗体断片（例えば、ＣＰＤ８７０）；ＴＮＦ受容体の可溶性断片（例え
ば、ｐ５５またはｐ７５ヒトＴＮＦ受容体あるいはそれらの誘導体、例えば、７５ｋｄのＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤのＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、ＥＮＢＲＥＬ（商標））、ｐ５５ｋｄのＴＮＦＲ−ＩｇＧ（５５ｋＤのＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質（ＬＥＮＥＲＣＥＰＴ（商標））；酵素アンタゴニスト（例えば、ＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤、例えば、α−スルホニルヒドロキサム酸誘導体、ＰＣＴ出願番号ＷＯ０１／５５１１２、およびＮ−ヒドロキシホルムアミドＴＡＣＥ阻害剤ＧＷ３３３３、−００５、または−０２２）；ならびに、ＴＮＦ−ｂｐ／ｓ−ＴＮＦＲ（可溶性のＴＮＦ結合タンパク質；例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ＆ Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９（補遣），Ｓ２８４；Ａｍｅｒ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．−Ｈｅａｒｔ ａｎｄ Ｃｉｒｃｕｌａｔｏｒｙ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ（１９９５）Ｖｏｌ．２６８，ｐｐ．３７−４２を参照のこと）が挙げられる。
【００６５】
（抗体）
例示的なＴＷＥＡＫ遮断薬としては、ＴＷＥＡＫおよび／またはＴＷＥＡＫ−Ｒに結合する抗体が挙げられる。１つの実施形態においては、抗体は、ＴＷＥＡＫとＴＷＥＡＫ受容体の間での相互作用を、例えば、相互作用を物理的にブロックすることによって、ＴＷＥＡＫおよび／またはＴＷＥＡＫ−Ｒのその対応物に対する親和性を低下させることによって、ＴＷＥＡＫ複合体を破壊させるまたは脱安定化させることによって、ＴＷＥＡＫまたはＴＷＥＡＫ−Ｒを封鎖することによって、あるいは、ＴＷＥＡＫまたはＴＷＥＡＫ−Ｒを分解するように標的化させることによって、阻害する。１つの実施形態においては、抗体は、ＴＷＥＡＫとその受容体との間での結合界面に関係している１つ以上のアミノ酸で、ＴＷＥＡＫまたはＴＷＥＡＫ−Ｒに結合することができる。このようなアミノ酸残基は、例えば、アラニンスキャンによって同定することができる。別の実施形態においては、抗体は、結合界面には関係していない残基に結合することができる。例えば、抗体は、ＴＷＥＡＫまたはＴＷＥＡＫ−Ｒの立体構造を変化させることができ、そしてそれによって、結合親和性を低下させることができるか、または、抗体は、立体障害となるように結合する場合もある。１つの実施形態においては、抗体は、ＴＷＥＡＫ−Ｒによって媒介される事象または活性の活性化（例えば、ＮＦ−κＢの活性化）を妨げることができる。
【００６６】
同様に、例示的なＴＮＦ−α遮断薬としては、ＴＮＦ−αおよび／またはＴＮＦ−α受容体（例えば、ＴＮＦＲ−ＩまたはＴＮＦＲ−ＩＩ）に結合する抗体が挙げられる。１つの実施形態においては、抗体は、ＴＮＦ−αとＴＮＦ−α受容体との間での相互作用を、例えば、相互作用を物理的にブロックすることによって、ＴＮＦ−αおよび／またはＴＮＦ−α−Ｒのその対応物に対する親和性を低下させることによって、ＴＮＦ−α複合体を破壊させるまたは脱安定化させることによって、ＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−α−Ｒを封鎖することによって、あるいは、ＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−α受容体を分解するように標的化させることによって、阻害する。１つの実施形態においては、抗体は、ＴＮＦ−α／ＴＮＦ−α受容体の結合界面に関係している１つ以上のアミノ酸で、ＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−α受容体に結合することができる。このようなアミノ酸残基は、例えば、アラニンスキャンによって同定することができる。別の実施形態においては、抗体は、ＴＮＦ−α／ＴＮＦ−α受容体の結合には関係していない残基に結合することができる。例えば、抗体は、ＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−α受容体の立体構造を変化させることができ、そしてそれによって、結合親和性を低下させることができるか、または、抗体は、立体障害となるようにＴＮＦ−α／ＴＮＦ−α受容体に結合する場合もある。
【００６７】
本明細書中で使用される場合は、用語「抗体」は、少なくとも１つの免疫グロブリン可変領域（例えば、免疫グロブリン可変ドメインまたは免疫グロブリン可変ドメイン配列を提供するアミノ酸配列）が含まれているタンパク質を意味する。例えば、抗体には重（Ｈ）鎖可変領域（本明細書中では、ＶＨと省略される）、および軽（Ｌ）鎖可変領域（本明細書中では、ＶＬと省略される）が含まれ得る。別の例においては、抗体には、２つの重
（Ｈ）鎖可変領域と、２つの軽（Ｌ）鎖可変領域が含まれ得る。用語「抗体」には、抗体の抗原結合断片（例えば、単鎖抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｄ断片、Ｆｖ断片、およびｄＡｂ断片）、ならびに、完全な抗体（例えば、ＩｇＡ、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、ＩｇＥ、ＩｇＤ、ＩｇＭ（ならびにそれらのサブタイプ））型免疫グロブリンの完全な、および／または全長の免疫グロブリン）が含まれる。免疫グロブリンの軽鎖は、κ型またはλ型である場合がある。１つの実施形態においては、抗体はグリコシル化される。抗体は、抗体依存性細胞傷害性および／または補体媒介性細胞傷害性について機能的であり得、また、これらの活性の一方または両方について、非機能性である場合もある。
【００６８】
ＶＨおよびＶＬ領域はさらに、「フレームワーク領域」（ＦＲ）と呼ばれるより保存されている領域が点在する「相補性決定領域」（「ＣＤＲ」）と呼ばれる超可変性の領域に細分され得る。ＦＲおよびＣＤＲの範囲は、正確に定義されている（Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ．９１−３２４２；およびＣｈｏｔｈｉａ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．，（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７を参照のこと）。Ｋａｂａｔの定義が本明細書中で使用される。ＶＨとＶＬはそれぞれ、通常は、アミノ末端からカルボキシル末端に向かって以下の順序で並べられた３個のＣＤＲと４個のＦＲから構成される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。
【００６９】
「免疫グロブリンドメイン」は、免疫グロブリン分子の可変ドメインまたは定常ドメインに由来するドメインを意味する。免疫グロブリンドメインには、通常、およそ７個のβ−鎖から形成される２つのβ−シートと、保存されているジスルフィド結合が含まれる（例えば、Ａ．Ｆ．Ｗｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ａ．Ｎ．Ｂａｒｃｌａｙ（１９８８）Ａｎｎ．Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：３８１−４０５を参照のこと）。「免疫グロブリン可変ドメイン配列」は、抗原の結合に適している立体配置の中にＣＤＲ配列を配置するために十分な構造を形成することができるアミノ酸配列を意味する。例えば、配列には、自然界に存在している可変ドメインのアミノ酸配列全体またはその一部が含まれ得る。例えば、配列には、１つ、２つ、もしくはそれ以上のＮ末端またはＣ末端アミノ酸、内部アミノ酸が省略されている場合があり、１つ以上の挿入またはさらなる末端アミノ酸が含まれている場合があり、また、他の変更が含まれている場合もある。１つの実施形態においては、免疫グロブリン可変ドメイン配列が含まれているポリペプチドは、標的結合構造（または「抗原結合部位」）（例えば、標的タンパク質（例えば、ＴＷＥＡＫ、ＴＷＥＡＫ受容体、ＴＮＦ−α、ＴＮＦＲ−Ｉ、またはＴＮＦＲ−ＩＩ）と相互作用する構造）を形成するように、別の免疫グロブリン可変ドメイン配列と会合することができる。
【００７０】
抗体のＶＨまたはＶＬ鎖には、さらに、重鎖もしくは軽鎖定常領域全体またはその一部が含まれ得、それによって、それぞれ、免疫グロブリン重鎖または免疫グロブリン軽鎖が形成される。１つの実施形態においては、抗体は、２つの免疫グロブリン重鎖と２つの免疫グロブリン軽鎖の四量体である。免疫グロブリン重鎖と免疫グロブリン軽鎖は、ジスルフィド結合によって結合させることができる。重鎖定常領域には、通常、３つの定常ドメインＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３が含まれている。軽鎖定常領域には、通常、ＣＬドメインが含まれている。重鎖および軽鎖の可変領域には、抗原と相互作用する結合ドメインが含まれている。抗体の定常領域によって、通常は、宿主組織または因子（免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）、および古典的補体活性化経路（ｃｌａｓｓｉｃａｌ ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ｓｙｓｔｅｍ）の第１の成分（Ｃｌｑ）が含まれる）に対する抗体の結合を媒介する。
【００７１】
抗体の１つ以上の領域はヒトのものであり得るか、有効にヒトのものであり得るか、またはヒト化されたものであり得る。例えば、１つ以上の可変領域が、ヒトの領域であり得るか、または有効にヒトのものであり得る。例えば、ＣＤＲの１つ以上（例えば、ＨＣ ＣＤＲ１、ＨＣ ＣＤＲ２、ＨＣ ＣＤＲ３、ＬＣ ＣＤＲ１、ＬＣ ＣＤＲ２、およびＬＣ ＣＤＲ３）がヒトのものであり得る。軽鎖ＣＤＲのそれぞれはヒトのものであり得る。ＨＣ ＣＤＲ３はヒトのものであり得る。フレームワーク領域の１つ以上は、ヒトのものであり得、例えば、ＨＣまたはＬＣのＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、およびＦＲ４であり得る。１つの実施形態においては、フレームワーク領域の全てが、ヒトのものであり、例えば、ヒトの体細胞（例えば、免疫グロブリンを生じる造血細胞、または非造血細胞）に由来するものである。１つの実施形態においては、ヒト配列は、生殖系列の細胞の配列（例えば、生殖系列の細胞の核酸によってコードされる配列）である。定常領域の１つ以上は、ヒトのものであり得るか、有効にヒトのものであり得るか、またはヒト化されたものであり得る。別の実施形態においては、フレームワーク領域（例えば、ＦＲ１、ＦＲ２と、ＦＲ３（合計で）、もしくはＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３と、ＦＲ４（合計で））あるいは抗体全体の少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、または９８％がヒトのものであり得るか、有効にヒトのものであり得るか、またはヒト化されたものであり得る。例えば、ＦＲ１、ＦＲ２、およびＦＲ３は、合計で、ヒトの生殖系列の細胞のセグメントによってコードされるヒト配列に対して、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９２％、９５％、９８％、あるいは９９％同一である場合も、またそれと完全に同一である場合もある。
【００７２】
「有効にヒトの」免疫グロブリン可変領域は、免疫グロブリン可変領域が正常なヒトにおいて免疫反応を誘発することがないように、十分な数のヒトフレームワークアミノ酸位置が含まれている免疫グロブリン可変領域である。「有効にヒトの」抗体は、抗体が正常なヒトにおいては免疫反応を誘発することがないように、十分な数のヒトのアミノ酸位置が含まれている抗体である。
【００７３】
「ヒト化」免疫グロブリン可変領域可変領域は、修飾された形態が修飾されていない形態よりも少ない免疫反応をヒトにおいて誘発するように修飾された（例えば、免疫グロブリン可変領域が正常なヒトにおいては免疫反応を誘発しないように、十分な数のヒトのフレームワークアミノ酸位置を含むように修飾されている）免疫グロブリン可変領域である。「ヒト化」免疫グロブリンの記載としては、例えば、米国特許第６，４０７，２１３号、および同第５，６９３，７６２号が挙げられる。いくつかの場合には、ヒト化免疫グロブリンには、１つ以上のフレームワークアミノ酸位置にヒト以外のアミノ酸が含まれ得る。
【００７４】
（抗体の作製）
標的タンパク質（例えば、ＴＷＥＡＫ、ＴＷＥＡＫ−Ｒ、ＴＮＦ−α、ＴＮＦＲ−Ｉ、またはＴＮＦＲ−ＩＩ）に結合する抗体は、様々な手段（例えば、動物を使用するか、またはファージディスプレイのようなインビトロでの方法における免疫化が含まれる）によって作成することができる。標的タンパク質全体またはその一部を、免疫原として、または選択のための標的として使用することができる。１つの実施形態においては、免疫化された動物には、自然界に存在している、ヒト免疫グロブリン遺伝子座、またはヒト免疫グロブリン遺伝子座の一部を有している免疫グロブリンを生産する細胞が含まれる。１つの実施形態においては、ヒト以外の動物に、ヒト免疫グロブリン遺伝子の少なくとも一部が含まれる。例えば、ヒトＩｇ遺伝子座の大きな断片を用いて、マウスの抗体生産が欠損しているマウス株を操作することができる。ハイブリドーマ技術を使用して、所望される特異性を有している遺伝子に由来する抗原特異的モノクローナル抗体を生産させ、そして選択することができる。例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標），Ｇｒｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９４）Ｎａｔ．Ｇｅｎ．７：１３−２１；Ｕ．Ｓ．２００３−００７０１８５；
米国特許第５，７８９，６５０号；およびＰＣＴ出願番号ＷＯ９６／３４０９６を参照のこと。
【００７５】
標的タンパク質に対するヒト以外の抗体はまた、（例えば、齧歯類の中で）生産させることもできる。ヒト以外の抗体は、（例えば、ＥＰ ２３９ ４４０；米国特許第６，６０２，５０３号；同第５，６９３，７６１号；および同第６，４０７，２１３号に記載されているように）ヒト化させることができるか、脱免疫化させることができるか、または、別の方法で、それをヒトに有効であるようにするために修飾することができる。
【００７６】
ＥＰ ２３９ ４００（Ｗｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．）には、１つの種のそれらの相補性決定領域（ＣＤＲ）の別の種に由来する相補性決定領域での置換（所定の可変領域の中での置換）によって、抗体を変化させることが記載されている。典型的には、ヒト以外（例えば、マウス）の抗体のＣＤＲは、組み換え核酸技術によってヒト抗体の中の対応する領域の中で置換して、所望される置換抗体をコードする配列を得ることができる。所望されるアイソタイプ（通常は、ＣＨについてはγＩ、そしてＣＬについてはκ）のヒトの定常領域遺伝子セグメントを付加することができ、ヒト化重鎖遺伝子および軽鎖遺伝子を哺乳動物細胞の中で同時に発現させて、可溶性のヒト化抗体を生産させることができる。
【００７７】
抗体をヒト化するための他の方法もまた使用することができる。例えば、他の方法で、抗体の三次元構造、結合決定基に近い、三次元構造の中に存在しているフレームワーク位置、および免疫原性ペプチドの配列を説明することができる。例えば、ＰＣＴ出願番号ＷＯ９０／０７８６１；米国特許第５，６９３，７６２号；同第５，６９３，７６１号；同第５，５８５，０８９号；および同第５，５３０，１０１号；Ｔｅｍｐｅｓｔ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ９：２６６−２７１および米国特許第６，４０７，２１３号を参照のこと。なお別の方法は、ヒューマニアリング（ｈｕｍａｎｅｅｒｉｎｇ）と呼ばれ、例えば、Ｕ．Ｓ．２００５−００８６２５に記載されている。
【００７８】
標的タンパク質に結合する完全にヒトのモノクローナル抗体は、Ｂｏｅｒｎｅｒ ｅｔ
ａｌ．，（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：８６−９５に記載されているように、例えば、インビトロで感作させられたヒト脾臓細胞を使用して、生産させることができる。これらは、Ｐｅｒｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８８：２４３２−２４３６に、またはＨｕａｎｇ ａｎｄ Ｓｔｏｌｌａｒ（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ １４１：２２７−２３６；また、米国特許第５，７９８，２３０に記載されているように、レパートリークローニングによって調製することもできる。大きな免疫化されていないヒトファージディスプレイライブラリーもまた、標準的なファージ技術を使用して、ヒトの治療薬として開発することができる高親和性抗体を単離するために使用することができる（例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．，（１９９８）Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ４：１−２０；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｔｏｄａｙ ２：３７１−３７８；およびＵ．Ｓ．２００３−０２３２３３３を参照のこと）。
【００７９】
（抗体およびタンパク質の生産）
本明細書中に記載される抗体および他のタンパク質は、原核生物細胞の中で生産させることができ、また、真核生物細胞の中で生産させることもできる。１つの実施形態においては、抗体（例えば、ｓｃＦｖ）は、ピキア（Ｐｉｃｈｉａ）（例えば、Ｐｏｗｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２５１：１２３−３５）、ハンゼヌラ（Ｈａｎｓｅｕｌａ）、またはサッカロマイセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）のような酵母細胞の中で発現させられる。
【００８０】
抗体（特に、全長の抗体（例えば、ＩｇＧ））は、哺乳動物細胞の中で生産させること
ができる。組み換え発現のための例示的な哺乳動物宿主細胞としては、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（ＤＨＦＲ選択マーカー（例えば、Ｋａｕｆｍａｎ ａｎｄ Ｓｈａｒｐ（１９８２）Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５９：６０１−６２１に記載されているもの）とともに使用される、Ｕｒｌａｕｂ ａｎｄ Ｃｈａｓｉｎ（１９８０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７７：４２１６−４２２０に記載されているｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞が含まれる）、リンパ球細胞株（例えば、ＮＳ０骨髄腫細胞およびＳＰ２細胞）、ＣＯＳ細胞、Ｋ５６２、ならびにトランスジェニック動物（例えば、トランスジェニック哺乳動物）に由来する細胞が挙げられる。例えば、細胞は、哺乳動物の上皮細胞である。
【００８１】
免疫グロブリンドメインをコードする核酸配列に加えて、組み換え発現ベクターは、さらなる核酸配列（例えば、宿主細胞の中でのベクターの複製を調節する配列（例えば、複製起点）および選択マーカー遺伝子）を有している場合がある。選択マーカー遺伝子は、その中にベクターが導入されている宿主細胞の選択を容易にする（例えば、米国特許第４，３９９，２１６号；同第４，６３４，６６５号；および同５，１７９，０１７号を参照のこと）。例示的な選択マーカー遺伝子としては、ジヒドロ葉酸レダクターゼ（ＤＨＦＲ）遺伝子（メトトレキセート選択／増幅と共にｄｈｆｒ−宿主細胞において使用される）、およびｎｅｏ遺伝子（Ｇ４１８の選択のため）が挙げられる。
【００８２】
抗体（例えば、全長の抗体またはその抗原結合部分）の組み換え発現のための例示的なシステムにおいては、抗体重鎖および抗体軽鎖の両方をコードする組み換え発現ベクターが、リン酸カルシウム媒介性トランスフェクションによって、ｄｈｆｒ−ＣＨＯ細胞に導入される。組み換え発現ベクターの中では、抗体重鎖および抗体軽鎖遺伝子は、遺伝子の高レベルの転写を駆動するために、それぞれ、エンハンサー／プロモーター調節エレメント（例えば、ＳＶ４０、ＣＭＶ、アデノウイルスなどに由来するもの）（例えば、ＣＭＶエンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節エレメント、またはＳＶ４０エンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節エレメント）に対して、動作可能であるように連結される。組み換え発現ベクターはまた、ＤＨＦＲ遺伝子をも有しており、これによって、メトトレキセート選択／増幅を使用して、ベクターでトランスフェクトされているＣＨＯ細胞を選択することが可能となる。選択された形質転換体宿主細胞は培養されて、抗体重鎖と軽鎖が発現させられ、そして完全な抗体が培養培地から回収される。標準的な分子生物学的技術が、組み換え発現ベクターを調製するため、宿主細胞をトランスフェクトするため、形質転換体を選択するため、宿主細胞を培養するため、そして培養培地から抗体を回収するために使用される。例えば、いくつかの抗体は、プロテインＡまたはプロテインＧを用いるアフィニティークロマトグラフィーによって単離することができる。
【００８３】
抗体（およびＦｃ融合体）には、修飾（例えば、Ｆｃ機能を変化させる（例えば、Ｆｃ受容体と、もしくはＣｌｑと、もしくはそれらの両方との相互作用を低下させるかまたは排除するための）修飾）も含まれ得る。例えば、ヒトＩｇＧ定常領域は、１つ以上の残基（例えば、米国特許第５，６４８，２６０の番号付けにしたがう残基２３４から２３７の１つ以上）で変異させることができる。他の例示的な修飾としては、米国特許第５，６４８，２６０に記載されている修飾が挙げられる。
【００８４】
Ｆｃドメインが含まれているいくつかのタンパク質については、抗体／タンパク質の生産システムは、その中のＦｃ領域がグリコシル化されている抗体または他のタンパク質を合成するように設計される場合がある。例えば、ＩｇＧ分子のＦｃドメインは、ＣＨ２ドメインのアスパラギン２９７でグリコシル化される。Ｆｃドメインにはまた、他の真核生物の翻訳後修飾も含まれ得る。他の場合には、タンパク質は、グリコシル化されていない形態で生産される。
【００８５】
抗体および他のタンパク質はまた、トランスジェニック動物によって生産させることもできる。例えば、米国特許第５，８４９，９９２号には、トランスジェニック哺乳動物の乳腺の中での抗体の発現のための方法が記載されている。乳汁特異的プロモーター、および目的の抗体（例えば、本明細書中に記載されている抗体）と分泌のためのシグナル配列をコードする核酸配列が含まれているトランスジーンが構築される。このようなトランスジェニック哺乳動物の雌によって生産される乳汁には、その中に分泌された目的のタンパク質（例えば、抗体またはＦｃ融合タンパク質）が含まれる。タンパク質は、乳汁から精製することができ、また、いくつかの用途については直接使用することもできる。
【００８６】
抗体の状況において記載される方法は、他のタンパク質（例えば、Ｆｃ融合体および可溶性受容体断片）に適応させることができる。
【００８７】
（核酸である遮断薬）
特定の実施態様においては、核酸である遮断薬は、標的タンパク質（例えば、ＴＷＥＡＫ、ＴＷＥＡＫ−Ｒ（例えば、Ｆｎ１４）、ＴＮＦ−α、ＴＮＦＲ−Ｉ、またはＴＮＦＲ−ＩＩ）の発現を低下させるために使用される。これらの薬剤は、タンパク質様のＴＷＥＡＫ遮断薬およびＴＮＦ−α遮断薬の代わりに、またはそれらに加えて使用することができる。１つの実施形態においては、核酸アンタゴニストは、標的タンパク質をコードする内因性遺伝子から生産されるｍＲＮＡに対して指向させられたｓｉＲＮＡである。例えば、ｓｉＲＮＡには、ｍＲＮＡに相補的な領域が含まれる。他のタイプのアンタゴニスト核酸（例えば、ｄｓＲＮＡ、リボザイム、トリプルヘリックスホーマー（ｔｒｉｐｌｅ−ｈｅｌｉｘ ｆｏｒｍｅｒ））、またはアンチセンス核酸）もまた使用することができる。
【００８８】
ｓｉＲＮＡは、必要に応じて突出が含まれている、小さい二本鎖のＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）である。例えば、ｓｉＲＮＡの二本鎖の領域は、約１８から２５ヌクレオチドの長さ（例えば、約１９、２０、２１、２２、２３、または２４ヌクレオチドの長さ）である。通常、ｓｉＲＮＡ配列は、標的ｍＲＮＡに対して正確に相補的である。ｄｓＲＮＡおよびｓｉＲＮＡは、具体的には、哺乳動物細胞（例えば、ヒト細胞）の中で遺伝子発現をサイレンスにするために使用することができる。例えば、Ｃｌｅｍｅｎｓ ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（ＵＳＡ），９７：６４９９−６５０３；Ｂｉｌｌｙ ｅｔ ａｌ．，（２００１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９８：１４４２８−１４４３３；Ｅｌｂａｓｈｉｒ ｅｔ ａｌ．，（２００１）Ｎａｔｕｒｅ．４１１：４９４−８；Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，（２００２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９９：９９４２−９９４７、米国特許公報２００３−０１６６２８２；２００３−０１４３２０４；２００４−００３８２７８；および２００３−０２２４４３２を参照のこと。
【００８９】
アンチセンスである薬剤には、例えば、約８から約８０核酸塩基（すなわち、約８から約８０ヌクレオチド）、例えば、約８から約５０核酸塩基、または約１２から約３０核酸塩基が含まれ得る。アンチセンス化合物としては、リボザイム、外部ガイド配列（ＥＧＳ）オリゴヌクレオチド（オリゴザイム）、および標的核酸にハイブリダイズしてその発現を調節する他の短い触媒性ＲＮＡまたは触媒性オリゴヌクレオチドが挙げられる。アンチセンス化合物としては、標的遺伝子中の配列に相補的である少なくとも８個の連続している核酸塩基のストレッチを挙げることができる。オリゴヌクレオチドは、特異的にハイブリダイズすることができるその標的核酸に対して必ずしも１００％相補的でなくてもよい。オリゴヌクレオチドは、標的に対するそのオリゴヌクレオチドの結合によって標的分子の正常な機能を妨害して、有用性の低下を引き起こし、そして、特異的な結合が所望される条件下での（すなわち、インビボでのアッセイまたは治療的処置の場合には生理学的条件下での、また、インビトロでのアッセイの場合には、アッセイが行われる条件下での）標的以外の配列に対するオリゴヌクレオチドの非特異的結合を回避するために十分な程度
の相補性が存在する場合には、特異的にハイブリダイズすることができる。
【００９０】
ｍＲＮＡ（例えば、標的タンパク質をコードするｍＲＮＡ）とのアンチセンスオリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーションによってｍＲＮＡの通常の機能の１つ以上を妨害することができる。妨害されるｍＲＮＡの機能としては、全ての重要な機能（例えば、タンパク質の翻訳部位へのＲＮＡのトランスロケーション、ＲＮＡからのタンパク質の翻訳、１つ以上のｍＲＮＡ種を得るためのＲＮＡのスプライシング、およびＲＮＡが関与している可能性がある触媒活性）が挙げられる。ＲＮＡに対する特異的なタンパク質（単数または複数）の結合が、ＲＮＡに対するアンチセンスオリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーションによって妨害される場合もある。
【００９１】
例示的なアンチセンス化合物としては、標的核酸（例えば、標的タンパク質をコードするｍＲＮＡ）に特異的にハイブリダイズするＤＮＡまたはＲＮＡ配列が挙げられる。相補性領域は、約８核酸塩基から約８０核酸塩基の間にまでまたがり得る。これらの化合物には、１つ以上の修飾された核酸塩基が含まれ得る。修飾された核酸塩基としては、例えば、５−置換ピリミジン（例えば、少し記述するだけでも、５−ヨードウラシル、５−ヨードシトシン、およびＣ５−プロピニルピリミジン（例えば、Ｃ５−プロピニルシトシンおよびＣ５−プロピニルウラシル）を挙げることができる。様々な核酸薬剤についての記載を利用することができる。例えば、米国特許第４，９８７，０７１号；同第５，１１６，７４２号；および同第５，０９３，２４６号；Ｗｏｏｌｆ ｅｔ ａｌ．，（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，；Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ ＲＮＡ ａｎｄ ＤＮＡ，Ｄ．Ａ．Ｍｅｌｔｏｎ、編．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．（１９８８）；８９：７３０５−９；Ｈａｓｅｌｈｏｆｆ ａｎｄ Ｇｅｒｌａｃｈ（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ ３３４：５８５−５９；Ｈｅｌｅｎｅ，Ｃ．（１９９１）Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ
Ｄｒｕｇ Ｄｅｓ．６：５６９−８４；Ｈｅｌｅｎｅ（１９９２）Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．６６０：２７−３６；およびＭａｈｅｒ（１９９２）Ｂｉｏａｓｓａｙｓ １４：８０７−１５を参照のこと。
【００９２】
本明細書中に記載される核酸（例えば、本明細書中に記載されるアンチセンス核酸）は、薬剤を発現させ、そして生産させるために使用することができる核酸（例えば、アンチセンス核酸）を細胞内に送達するための遺伝子治療プロトコールの一部として使用される遺伝子構築物の中に取り込ませることができる。このような成分の発現構築物は、任意の生物学的に有効な担体の中で、例えば、インビボで細胞にこの成分遺伝子を効率よく送達することができる任意の処方物または組成物の中で、投与することができる。アプローチには、ウイルスベクター（組み換えレトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レンチウイルス、および単純ヘルペスウイルス−１、あるいは、組み換え体の細菌または真核生物プラスミドが含まれる）の中への目的の遺伝子の挿入が含まれる。ウイルスベクターは細胞に直接トランスフェクトする；プラスミドＤＮＡは、例えば、陽イオン性リポソーム（リポフェクチン）または誘導体化された（例えば、抗体が結合させられた）、ポリリジン結合体、グラマシジンＳ、人工のウイルスエンベロープ、または他のそのような細胞内担体の助けを借りて送達することができ、さらに、遺伝子構築物の直接の注入またはＣａＰＯ４沈殿がインビボで行われる。
【００９３】
細胞内への核酸のインビボでの導入のための好ましいアプローチは、核酸（例えば、ｃＤＮＡ）を含むウイルスベクターの使用による。ウイルスベクターでの細胞の感染には、標的化された細胞の大部分が核酸を受け取ることができるという利点がある。加えて、ウイルスベクターの中に（例えば、ウイルスベクターの中に含まれるｃＤＮＡによって）コードされる分子は、ウイルスベクターの核酸を取り込んだ細胞の中で効率よく発現される。
【００９４】
レトロウイルスベクター、およびアデノ随伴ウイルスベクターは、（特に、ヒトへの）インビボでの外因性遺伝子の導入のための組み換え遺伝子送達システムとして使用することができる。これらのベクターにより、細胞への遺伝子の効率的な送達が提供され、そして形質導入された核酸は、宿主の染色体ＤＮＡに安定に組み込まれる。組み換え体レトロウイルスを生産するため、およびインビトロもしくはインビボで細胞をそのようなウイルスに感染させるためのプロトコールは、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．ｅｔ ａｌ．，（編）Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，（１９８９），Ｓｅｃｔｉｏｎｓ ９．１０−９．１４および他の標準的な実験室マニュアルにおいて見ることができる。適切なレトロウイルスの例としては、ｐＬＪ、ｐＺＩＰ、ｐＷＥ、およびｐＥＭが挙げられる。これらは当業者に公知である。エコトロピックなおよび両栄養性レトロウイルスシステムの両方を調製するための適切なパッケージングウイルス株の例としては、＊Ｃｒｉｐ、＊Ｃｒｅ、＊２、および＊Ａｍが挙げられる。レトロウイルスは、インビトロおよび／またはインビボで、上皮細胞を含む多くの様々な細胞のタイプの中に様々な遺伝子を導入するために使用されている（例えば、Ｅｇｌｉｔｉｓ，ｅｔ ａｌ．（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３０：１３９５−１３９８；Ｄａｎｏｓ ａｎｄ Ｍｕｌｌｉｇａｎ（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：６４６０−６４６４；Ｗｉｌｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：３０１４−３０１８；Ａｒｍｅｎｔａｎｏ ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：６１４１−６１４５；Ｈｕｂｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：８０３９−８０４３；Ｆｅｒｒｙ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：８３７７−８３８１；Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５４：１８０２−１８０５；ｖａｎ Ｂｅｕｓｅｃｈｅｍ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：７６４０−７６４４；Ｋａｙ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ３：６４１−６４７；Ｄａｉ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：１０８９２−１０８９５；Ｈｗｕ ｅｔ ａｌ．（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０：４１０４−４１１５；米国特許第４，８６８，１１６、および４，９８０，２８６；ＰＣＴ出願番号ＷＯ８９／０７１３６；同ＷＯ８９／０２４６８；同ＷＯ８９／０５３４５；および同ＷＯ９２／０７５７３を参照のこと）。
【００９５】
別のウイルス遺伝子送達システムでは、アデノウイルスに由来するウイルスが利用される。例えば、Ｂｅｒｋｎｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９８８）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ６：６１６；Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄ ｅｔ ａｌ．（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５２：４３１−４３４、およびＲｏｓｅｎｆｅｌｄ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ｃｅｌｌ ６８：１４３−１５５を参照のこと。アデノウイルス株Ａｄタイプ５ ｄｌ３２４またはアデノウイルスの他の株（例えば、Ａｄ２、Ａｄ３、Ａｄ７など）に由来する適切なアデノウイルスベクターが当業者に公知である。
【００９６】
本発明の遺伝子の送達に有用であるなお別のウイルスベクターシステムは、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）である。例えば、Ｆｌｏｔｔｅ ｅｔ ａｌ．（１９９２）Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．７：３４９−３５６；Ｓａｍｕｌｓｋｉ
ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６３：３８２２−３８２８；およびＭｃＬａｕｇｈｌｉｎ ｅｔ ａｌ．（１９８９）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６２：１９６３−１９７３）を参照のこと。
【００９７】
（人工的な転写因子）
人工的な転写因子もまた、標的タンパク質（例えば、ＴＷＥＡＫ、ＴＷＥＡＫ−Ｒ（例えば、Ｆｎ１４）、ＴＮＦ−α、ＴＮＦＲ−Ｉ、またはＴＮＦＲ−ＩＩ）の発現を調節するために使用することができる。人工的な転写因子は、例えば、標的タンパク質をコードする内因性の遺伝子の中の（例えば、調節領域の中の）配列（例えば、プロモーター）に結合する能力について、ライブラリーから設計し、そして選択することができる。例えば、人工的な転写因子は、インビトロでの選択（例えば、ファージディスプレイ（米国特許第６，５３４，２１６号）を使用して）またはインビボでの選択によって、あるいは、認識コードに基づく設計によって（例えば、ＰＣＴ出願番号ＷＯ００／４２２１９、および米国特許第６，５１１，８０８号を参照のこと）調製することができる。例えば、特に、多様な亜鉛フィンガードメインのライブラリーを作成するための方法については、Ｒｅｂａｒ ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ ２６７：１２９；Ｇｒｅｉｓｍａｎ ａｎｄ Ｐａｂｏ（１９９７）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７５：６５７；Ｉｓａｌａｎ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ １９：６５６；およびＷｕ ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９２：３４４を参照のこと。
【００９８】
必要に応じて、人工的な転写因子を、転写調節ドメイン（例えば、転写を活性化させるためには活性化ドメイン、または転写を抑制するためには抑制ドメイン）に融合させることができる。具体的には、抑制ドメインは、ＴＷＥＡＫ、またはＴＷＥＡＫ−Ｒをコードする内因性遺伝子の発現を低下させるために使用することができる。人工的な転写因子は、それ自体が、異種核酸によってコードされるものであり得、これは細胞に送達されるか、またはタンパク質自体が細胞に送達され得る（例えば、米国特許第６，５３４，２６１号を参照のこと）。人工的な転写因子をコードする配列が含まれている異種核酸は、（例えば、細胞の中での人工的な転写因子のレベルを微調整することを可能にするための）誘導性プロモーターに動作可能であるように連結させることができる。
【００９９】
（関節リウマチ（ＲＡ））
関節リウマチ（ＲＡ）は、主に関節において痛み、腫れ、凝り、および機能障害を引き起こす慢性的な炎症性疾患である。ＲＡは、多くの場合は、滑膜において始まり、これは、関節の周囲を取り囲み、防御性の嚢を作成する膜である。ＲＡに罹患している多くの個体においては、白血球は循環から滑膜へと浸潤して、持続的な異常な炎症（例えば、滑膜炎）を引き起こす。結果として、滑膜は炎症を起こし、熱くなり、赤くなり、腫れ、および痛みを引き起こす。軟骨の中のコラーゲンは段階的に分解されて、関節空間は狭くなり、最終的には骨を損傷する。炎症によって、罹患した領域において侵食性の骨の損傷が生じる。このプロセスの間に、滑膜の細胞は増殖し、そして異常に分裂し、これによって、正常な薄い滑膜の厚みが生じ、腫れた、そして触ってみると浮腫んでいる関節が生じる。
【０１００】
ＲＡが進行するに伴い、異常な滑膜細胞は、関節の中の軟骨および骨に浸潤し、これらを破壊することができる。関節を支えそして安定化させる周辺の筋肉、靭帯、および腱は弱くなり、そして正常に機能できなくなる場合がある。ＲＡはまた、骨粗鬆症に至る可能性があるより全身にわたる骨量減少も引き起こす場合があり、骨を脆くし、骨折しやすくなる。これらの作用の全てによって、ＲＡに伴う痛み、機能障害、および変形が生じる。罹患する可能性がある領域としては、手首、指関節、膝、および母指球が挙げられる。多くの場合には、複数の関節が関係し得、そしてさらには脊椎も罹患する可能性がある。ＲＡに罹患しているヒトのおよそ２５％においては、小さい血管の炎症によって、皮膚下でリウマチ結節またはしこりが引き起こされる可能性がある。皮膚の下には瘤が存在し、これらは多くの場合は、関節の近くに形成される。疾患が進行するに伴い、特に、足関節においては、流体も蓄積する場合がある。ＲＡに罹患している多くの患者は、貧血もまた発症するか、または、赤血球数が正常値よりも低下する。
【０１０１】
ＲＡには、多数の疾患のサブタイプ（例えば、フェルティー症候群、血清反応陰性ＲＡ、「古典的」ＲＡ、進行性および／または再発型ＲＡ、ならびに、脈管炎を伴うＲＡ）が含まれる。一部の専門家らは、疾患を、１型または２型に分類している。１型は、あまり一般的ではない形態であり、ほとんどの場合には数ヶ月間持続し、そして永久的な機能障害は残さない。２型は慢性的であり、数年間持続し、ときには、一生持続する。ＲＡは、皮下のリウマチ結節、内臓の小結節（ｖｉｓｃｅｒａｌ ｎｏｄｕｌｅｓ）、下腿潰瘍もしくは多発単神経炎を引き起こす脈管炎、胸膜および心嚢の滲出、リンパ節腫脹症、フェルティー症候群、シェーグレン症候群、および上強膜炎として発症する場合がある。これらの疾患のサブタイプおよび上記の症状の１つ以上を示す被験体も、本明細書中に記載されている方法を使用して処置することができる。
【０１０２】
ＲＡは、全ての人種および民族にわたって起こる。少なくとも１つの遺伝的素因が同定されており、これは、白色人種において、クラスＩＩ組織適合性遺伝子のＨＬＡ−ＤＲ １遺伝子座の中のペンタペプチドに位置が特定されている。
【０１０３】
ＲＡは、様々な臨床的な測定によって評価することができる。いくつかの例示的な基準としては、Ｓｈａｒｐスコアの合計（ＴＳＳ）、Ｓｈａｒｐ浸食スコア、およびＨＡＱ障害指数が挙げられる。本明細書中に記載される方法は、これらの基準の少なくとも１つの改善を行うために使用することができる。
【０１０４】
（ＴＮＦ−α遮断薬に対して反応しない患者）
１つの態様においては、関節リウマチを有する被験体、またはＲＡのリスクがある被験体、または本明細書中に記載される別の疾患を有しているかもしくはそのリスクがある被験体を、特定の薬剤（例えば、生物学的ＤＭＡＲＤ）に反応するそれらの能力（例えば、ＴＮＦ−α遮断薬（例えば、エタネルセプト、インフリキシマブ、またはアダリムマブ）に反応するそれらの能力）の指標となるパラメーターについて評価することができる。例えば、パラメーターは、ＴＮＦ−αをコードする遺伝子の中に１つのヌクレオチドが存在するか、または存在しないかであり得る。特定の薬剤に対してあまり反応しないかまたは反応しないことが示された被験体には、別の薬剤を投与することができる。例えば、エタネルセプトに反応しないことが示された被験体には、ＴＷＥＡＫ遮断薬を投与することができる。
【０１０５】
ＴＮＦＡ−８５７Ｃ／Ｔ ＳＮＰのＴ対立遺伝子を有している関節リウマチの患者は、Ｃ対立遺伝子についてホモ接合型よりも、エタネルセプト治療に対して良好に反応する可能性がある。Ｋａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ ２００５年４月；４４（４）５４７−５２。したがって、Ｃ対立遺伝子についてホモ接合型であるＲＡ患者は、ＴＷＥＡＫ遮断薬で処置することができ、そして、エタネルセプトまたは他のＴＮＦ−α遮断薬を控えることができ、また、投与量を（例えば、標準的な用量と比較して）減少させることができる。
【０１０６】
（ＲＡ治療に対して反応しない患者）
ＲＡについての様々な処置を、ＴＮＦ−α遮断薬に加えて、利用することができる。これらの多くは、疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）として分類される治療薬である。伝統的なＤＭＡＲＤＳとしては、ＰＬＡＱＵＥＮＩＬ（登録商標）（ヒドロキシクロロキン（ｈｙｄｒｏｘｙｃｈｌｏｒｏｑｕｉｎｅ））、ＡＺＵＬＦＩＤＩＮＥ（登録商標）（スルファサラジン）、またはＲＨＥＵＭＡＴＲＥＸ（登録商標）（メトトレキセート）が挙げられる。関節リウマチについては、関節リウマチにおけるＤＭＡＲＤ治療からの撤退率が、患者に薬物が投与されている時間の長さに伴って増大すること、およびこれらの撤退のうちの多数が効能の低下に関係していることが観察されている（例えば、Ａｎｎａｌｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｒｈｅｕｍａｔｉｃ Ｄｉｓｅａｓｅｓ（２００３）６２：９５−９
６を参照のこと）。したがって、ＴＷＥＡＫ遮断薬もまた、ＤＭＡＲＤでの処置に対して不適切な反応（例えば、以下の薬剤の１つでの処置に対する不適切な反応）を有している被験体に投与することができる：
ａ．サリチル酸塩（例えば、アスピリン）を含む、非ステロイド系抗炎症薬。
【０１０７】
ｂ．金化合物。一部の患者においては、金によって、臨床的寛解が生じる場合があり、そして新しい骨の浸食の形成が減少する場合がある。非経口用の調製物には、金チオリンゴ酸ナトリウムまたは金チオグルコースが含まれる。金は、毒性の兆候が現れると中止されるべきである。小さい毒性の兆候（例えば、軽い掻痒感、軽い発疹）は、金療法を一時中止することによって解消することができる場合があり、その後、症状が穏やかになったおよそ２週間後に、注意深く再開される。しかし、毒性の症状が進行する場合には、金療法は中止されるべきである。ＴＷＥＡＫ遮断薬は、金の使用が中止される場合、または、金キレート化剤（例えば、ジメルカプロール）が金毒性を中和するために投与される場合に、投与することができる。
【０１０８】
ｃ．ヒドロキシクロロキン（ｈｙｄｒｏｘｙｃｈｌｏｒｏｑｕｉｎｅ）もまた、軽いまたは中程度の活動性ＲＡ（ａｃｔｉｖｅ ＲＡ）の症状を制御することができる。毒性の作用は、通常は軽度であり、これには、皮膚炎、筋障害、および一般的に可逆性の角膜混濁が含まれる。しかし、不可逆性の網膜変性が報告されている。ヒドロキシクロロキン（ｈｙｄｒｏｘｙｃｈｌｏｒｏｑｕｉｎｅ）の使用は中止することができ、そして、例えば、ＴＷＥＡＫ遮断薬で、例えば、これらの副作用の１つ以上が検出された時点で、置き換えることができる。
【０１０９】
ｄ．経口ペニシラミンには、金と類似する利点がある場合がある。使用の中止が必要となるような副作用は、金よりも多く見られ、そしてこれには、骨髄抑制、タンパク尿、ネフローゼ、他の深刻な毒性作用（例えば、重症筋無力症、天疱瘡、グッドパスチャー症候群、多発性筋炎、狼瘡様症候群）、発疹、および不快な味覚が含まれる。経口ペニシラミンは、使用を中止することができ、そして、例えば、ＴＷＥＡＫ遮断薬で、例えば、これらの副作用の１つ以上が検出された時点で、置き換えることができる。
【０１１０】
ｅ．ステロイドは、非常に有効な短期間の抗炎症薬である。しかし、ＲＡについてのそれらの臨床的な利点は、多くの場合は時間と共に低下する。ステロイドは、関節破壊の進行を妨げることはないと予想される。さらに、深刻なリバウンドが、多くの場合には、活動性疾患におけるコルチコステロイドの使用の中止後に起こる。したがって、ＴＷＥＡＫ遮断薬を、使用の中止の前に、中止の間に、または完全な中止後に投与することができる。ＴＷＥＡＫ遮断薬の使用の中止またはその使用のきっかけとなり得る他の副作用としては、消化性潰瘍、高血圧、処置されていない感染、真性糖尿病、および緑内障が挙げられる。
【０１１１】
ｆ．免疫抑制剤は、重症の活動性ＲＡの管理において使用することができる。しかし、重篤な副作用が起こる可能性があり、これには、肝疾患、肺炎、骨髄抑制、およびアザチオプリンの長期にわたる使用後の悪性腫瘍が含まれる。免疫抑制剤の使用の中止には、ＴＷＥＡＫ遮断薬を、例えば、副作用が検出された時点で、投与することが含まれ得る。
【０１１２】
あるいは、ＴＷＥＡＫ遮断薬は、ＲＡについての別の処置（例えば、上記の処置の１つ）が投与されている被験体に投与することができる。処置とＴＷＥＡＫ遮断薬の組み合わせを使用して、さらなる治療上の利点を得ることができ、そして、状況によっては、他の処置の投与量を減少させることができる。結果として、副作用および他の問題が軽減させることができる。
【０１１３】
本明細書中に記載される方法（例えば、ＴＷＥＡＫ遮断薬での単剤療法または併用療法（例えば、ＴＷＥＡＫ遮断薬とＴＮＦ−α遮断薬を用いる併用療法））を、ＲＡの１つ以上の重篤な合併症を有している被験体を処置するために使用することができる。このような合併症としては、関節崩壊、消化管出血、心不全、心膜炎、胸膜炎、肺疾患、貧血、血小板数の減少または増加、眼疾患、頚（首）椎の不安定、神経症、および脈管炎が挙げられる。
【０１１４】
（他の疾患）
本明細書中に記載される方法はまた、患者の他の炎症性疾患、免疫疾患、または自己免疫疾患（例えば、ＴＮＦ−α遮断薬の投与によって悪化することのない疾患）を処置するために使用することもできる。処置することができる疾患の例としては、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎およびクロ−ン病を含む）、乾癬、または炎症性筋炎が挙げられる。炎症性疾患のなお他の例としては、ランゲルハンス細胞組織球増殖症、成人呼吸窮迫症候群／閉塞性細気管支炎、ヴェ−ゲナ−肉芽腫症、脈管炎、悪液質、口内炎、特発性肺線維症、皮膚筋炎または多発性筋炎、非感染性強膜炎、肺の関与を伴う慢性サルコイド−シス症候群、骨髄異形成症候群／過度の芽細胞を伴う難治性貧血、潰瘍性大腸炎、中度から重症の慢性閉塞性肺疾患、および巨細胞性大動脈炎が挙げられる。
【０１１５】
これらの疾患の１つのリスクがある、これらの疾患の１つと診断された、またはこれらの疾患の１つに罹患している被験体には、全体的な治療的効果を提供するための量で、そしてそのような時間の間、ＴＷＥＡＫ遮断薬を投与することができる。ＴＷＥＡＫ遮断薬は、ＴＮＦ−α遮断薬と組み合わせて、またはＴＮＦ−α遮断薬を提供することなく（例えば、その使用を中止して）投与することができる。併用療法の場合には、投与される量および時間は、例えば、高い治療効果、または相乗的な治療効果をもたらす量および時間であり得る。さらに、ＴＷＥＡＫ遮断薬（ＴＮＦ−α遮断薬と一緒に、またはＴＮＦ−α遮断薬を伴わない）の投与は、一次（例えば、一次治療）として、または二次治療として（例えば、先におこなわれた治療（すなわち、ＴＷＥＡＫ遮断薬との併用療法以外の治療法）に対して不適切な反応を有している被験体について）使用することができる。
【０１１６】
（薬学的組成物）
ＴＷＥＡＫ遮断薬（例えば、抗体、または可溶性ＴＷＥＡＫ−Ｒタンパク質（例えば、ＴＷＥＡＫ−Ｒ−Ｆｃ））は、例えば、本明細書中に記載される疾患（例えば、関節リウマチまたは本明細書中に記載される他の疾患のような、炎症性疾患）を処置するために被験体に投与される、薬学的組成物として処方することができる。ＴＮＦ−α遮断薬は、同じ組成物中に、または別の組成物としてのいずれかで、同様に処方することができる。
【０１１７】
代表的に、薬学的組成物には、薬学的に許容される担体が含まれる。本明細書中で使用される場合は、「薬学的に許容される担体」には、任意の、およびあらゆる溶媒、分散媒体、コーティング剤、抗菌剤および抗真菌剤、等張化剤および吸収遅延剤などが含まれ、これらは生理学的に適合性である。組成物には、薬学的に許容される塩（例えば、酸付加塩または塩基付加塩（例えば、Ｂｅｒｇｅ，Ｓ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，（１９７７）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６６：１−１９を参照のこと））が含まれ得る。
【０１１８】
薬学的処方物は、十分に確立されている分野であり、例えば、Ｇｅｎｎａｒｏ（編），Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，第２０版，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ（２０００）（ＩＳＢＮ：０６８３３０６４７２）；Ａｎｓｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，第７版，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ（１９９９）（ＩＳＢＮ：０６８３３０５７２７）；
およびＫｉｂｂｅ（編），Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，第３版（２０００）（ＩＳＢＮ：０９１７３３０９６Ｘ）にさらに詳細に記載されている。
【０１１９】
１つの実施形態においては、ＴＷＥＡＫ遮断薬（例えば、抗体またはＴＷＥＡＫ−Ｒ−Ｆｃ）および／またはＴＮＦ−α遮断薬は賦形剤（例えば、塩化ナトリウム、第二リン酸ナトリウム７水和物、リン酸二水素ナトリウム）、および安定剤と共に処方される。これは、例えば、適切な濃度で緩衝化溶液の中に提供され得、そして２〜８℃で保存することができる。
【０１２０】
薬学的組成物は様々な形態であり得る。これらには、例えば、液体、半固体、および固体の投与量形態（例えば、液体溶液（例えば、注射することができる溶液および注入することができる溶液）、分散液または懸濁液、錠剤、丸剤、散剤、リポソーム、および坐剤）が含まれる。好ましい形態は、意図される投与の態様および治療用途に応じて様々であり得る。本明細書中に記載される薬剤についての典型的な組成物は、注射することができる溶液または注入することができる溶液の形態である。
【０１２１】
このような組成物は、非経口の形式（例えば、静脈内注射、皮下注射、腹腔内注射、または筋肉内注射）によって投与することができる。表現「非経口投与」および「非経口的に投与される」は、本明細書中で使用される場合は、腸内投与および局所投与以外の投与の形式を意味し、通常は注射による投与の形式を意味し、これには静脈内、筋肉内、動脈内、髄腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下、表皮下、関節内、被膜下、クモ膜下、髄腔内、硬膜外、ならびに、胸骨内への注射および注入が含まれるが、これらに限定はされない。
【０１２２】
組成物は、溶液、マイクロエマルジョン、分散液、リポソーム、または、高濃度での安定な保存に適している他の秩序立てられた構造として処方することができる。滅菌の注射することができる溶液を、上記の成分の１つまたは組み合わせとともに適切な溶媒の中に本明細書中に記載される薬剤を必要な量配合すること、その後、必要に応じて、濾過滅菌することによって、調製することができる。一般的には、分散液は、基礎となる分散媒体および上記の成分のうち必要な他の成分を含む、滅菌の担体の中に本明細書中に記載される薬剤を配合することによって、調製される。滅菌の注射することができる溶液の調製用の滅菌の粉末の場合に、好ましい調製方法は、減圧乾燥および凍結乾燥であり、これによって、本明細書中に記載される薬剤と任意のさらなる所望される成分の粉末が、それらの予め滅菌濾過された溶液から得られる。溶液の適切な流動性は、例えば、レシチンのようなコーティング剤の使用によって、分散液の場合には必要な粒子の大きさの維持によって、および界面活性剤の使用によって維持することができる。注射することができる組成物の持続的な吸収は、吸収を遅らせる薬剤（例えば、モノステアリン酸塩およびゼラチン）を組成物中に含めることによって得ることができる。
【０１２３】
特定の実施形態においては、ＴＷＥＡＫ遮断薬および／またはＴＮＦ−α遮断薬は、化合物を迅速な放出から保護するであろう担体とともに、例えば、徐放処方物（インプラント、およびマイクロカプセル化された送達システムが含まれる）として調製される場合がある。生体分解性の生体適合性ポリマー（例えば、エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸）を使用することができる。このような処方物の調製のための多くの方法は特許が取られているか、または一般的に知られている。例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ編，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９７８を参照のこ
と。
【０１２４】
ＴＷＥＡＫ遮断薬（例えば、抗体または可溶性ＴＷＥＡＫ−Ｒタンパク質）は、例えば、循環の中での（例えば、血液、血清、または他の組織中での）その安定性および／または保持を（例えば、例えば、少なくとも１．５倍、２倍、５倍、１０倍、または５０倍）改善する部分を用いて、修飾することができる。修飾された遮断薬は、それが炎症の部位（例えば、関節）に到達することができるかどうかを評価するために評価することができる。
【０１２５】
例えば、ＴＷＥＡＫ遮断薬（例えば、抗体または可溶性ＴＷＥＡＫ−Ｒタンパク質）は、ポリマー（例えば、実質的に非抗原性であるポリマー（例えば、ポリアルキレンオキサイドまたはポリエチレンオキサイド））と会合させることができる（例えば、それらに結合させることができる）。適切なポリマーは、重量が大幅に異なるであろう。約２００ダルトンから３５，０００ダルトン（または、約１，０００から約１５，０００、および２，０００から約１２，５００）の範囲の分子数量平均重量を有しているポリマーを使用することができる。
【０１２６】
例えば、ＴＷＥＡＫ遮断薬またはＴＮＦ−α遮断薬は、水溶性ポリマー（例えば、親水性ポリビニルポリマー（例えば、ポリビニルアルコールまたはポリビニルピロリドン））に結合させることができる。このようなポリマーの限定的ではないリストには、ポリアルキレンオキサイドホモポリマー、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）またはポリプロピレングリコール、ポリオキシエチレン化ポリオール、それらのコポリマー、およびそれらのブロックコポリマー（ブロックコポリマーの水溶性が維持される限り）が含まれる。さらなる有用なポリマーとしては、ポリオキシアルキレン、例えば、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン、およびポリオキシエチレンとポリオキシプロピレンのブロックコポリマー；ポリメタクリレート；カルボマー；および分岐したまたは未分岐の多糖類が挙げられる。
【０１２７】
ＴＷＥＡＫ遮断薬（例えば、抗体または可溶性ＴＷＥＡＫ−Ｒタンパク質）が、第２の薬剤（例えば、ＴＮＦ−α遮断薬または本明細書中に記載される他の薬剤）と組み合わせて使用される場合は、２つの薬剤は別々に、または一緒に処方することができる。例えば、それぞれの薬学的組成物を、例えば、投与の直前に混合することができ、そして一緒に投与することができるか、または、別々に、例えば、同時に、または異なるタイミングで投与することもできる。
【０１２８】
本明細書中に記載される他の治療薬もまた、薬学的組成物として、例えば、標準的な方法または本明細書中に記載される方法によって、提供することができる。
【０１２９】
（投与）
ＴＷＥＡＫ遮断薬（例えば、抗体または可溶性ＴＷＥＡＫ−Ｒタンパク質）およびＴＮＦ−α遮断薬は、被験体（例えば、ヒト被験体）に対して、様々な方法によって投与することができる。多くの用途については、投与経路は以下の１つである：静脈内注射または注入（ＩＶ）、皮下注射（ＳＣ）、腹腔内注射（ＩＰ）、または筋肉内注射。関節内への送達を使用することもまた可能である。いくつかの場合には、投与は、炎症部位（例えば、関節または他の炎症を起こしている部位）に対して直接行うことができる。遮断薬は、固定用量として、またはｍｇ／ｋｇの用量で投与することができる。
【０１３０】
用量はまた、ＴＷＥＡＫ遮断薬に対する抗体の生産を減少させるため、または回避するように選択することができる。
【０１３１】
遮断薬の投与経路および／または態様はまた、（例えば、トモグラフィー画像解析法、神経学的試験、および特定の疾患に関係する標準的なパラメーター（例えば、関節リウマチを評価するための基準）を使用して、例えば、被験体をモニターすることによって）個々の症例に合わせることもできる。
【０１３２】
投与レジュメは、所望される反応（例えば、治療反応または組み合わせによる治療効果）を提供するように調節される。一般的には、ＴＷＥＡＫ遮断薬（例えば、抗体）（および必要に応じて、第２の薬剤、例えば、ＴＮＦ−α遮断薬）の用量の任意の組み合わせ（別々に処方されたもの、または一緒に処方されたもののいずれか）を、生体利用される量の薬剤を被験体に提供するために、使用することができる。例えば、０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ、０．５〜１００ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ、０．５〜２０ｍｇ／ｋｇ、または１〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量を投与することができる。他の用量もまた使用することができる。
【０１３３】
投与量単位形態、または「固定用量」は、本明細書中で記載される場合は、処置される被験体についての単位投与量として適している物理的に分離した単位を意味する。個々の単位には、必要とされる薬学的担体と一緒に、および必要に応じて他の薬剤と一緒に、所望される治療効果を生じるように計算された、予め決定された量の活性のある化合物が含まれる。１回の投与量が投与される場合も、また、複数回の投与量が投与される場合もある。あるいは、または加えて、遮断薬は、持続注入によって投与される場合もある。
【０１３４】
ＴＷＥＡＫ遮断薬は、例えば、１日に１回または２回、または１週間に１回から４回、または好ましくは、１週間に１回、２週間に１回（ｂｉｗｅｅｋｌｙ）、または１ヶ月に１回で、例えば、１週間から１０週間にわたって、好ましくは、２週間から８週間にわたって、より好ましくは、３週間から７週間にわたって、そしてなおより好ましくは、約４週間、５週間、もしくは６週間にわたって投与することができる。当業者には、特定の要因が、被験体を効果的に処置するために必要な投与量およびタイミングに影響を与える場合があり、これには、疾患または障害の重篤度、処方物、送達経路、これまでに行われた処置、全体的な健康状態、および／または被験体の年齢、ならびに存在している他の疾患が含まれるが、これらに限定されないことは明らかであろう。さらに、治療有効量の化合物での被験体の処置には１回の処置が含まれ得るか、または好ましくは、これには、一連の処置が含まれ得る。動物モデルもまた、有用な用量（例えば、初回量またはレジュメ）を決定するために使用することができる。
【０１３５】
被験体に炎症性疾患または本明細書中に記載される他の疾患を発症するリスクがある場合には、遮断薬を、疾患の完全な発症の前に（例えば、予防措置として）投与することができる。このような予防的処置の期間は、遮断薬の１回の投与である場合も、また、処置が継続的に行われる（例えば、複数回の投与）である場合もある。例えば、疾患のリスクがある被験体、または疾患の素因を有している被験体は、疾患が発症することまたは劇症化することを防ぐために、遮断薬で数日間、数週間、数ヶ月間、またはさらには数年間処置される場合もある。
【０１３６】
薬学的組成物には、「治療有効量」の本明細書中に記載される薬剤が含まれ得る。このような有効量は、投与される薬剤の効果、または１つ以上の薬剤が使用される場合には、薬剤の組み合わせによる効果に基づいて決定することができる。薬剤の治療有効量はまた、個体の疾患状態、年齢、性別、および体重、および個体において所望される反応を誘発する（例えば、少なくとも１つの疾患のパラメーターを緩和する、または疾患の少なくとも１つの症状を緩和する）化合物の能力のような要因によっても様々であり得る。治療有効量は、治療的に有効な効果が組成物の任意の毒性効果または有害な影響を上回る量でもある。
【０１３７】
（治療用のデバイスおよびキット）
ＴＷＥＡＫ遮断薬（例えば、抗体または可溶性ＴＥＡＫ−Ｒ）が含まれている薬学的組成物は、医学用デバイスを用いて投与することができる。デバイスは、携帯性、室温での保存、および緊急の状況で（例えば、訓練を受けていない被験体が、またはその場で救急隊員が）それを使用することができる、医療設備および他の医学的装置に移すような使用の容易さのような特徴を有するように設計することができる。デバイスとしては、例えば、ＴＷＥＡＫ遮断薬を含む薬学的調製物を保存するための１つ以上のハウジングが含まれ得、そして、遮断薬の１つ以上の単位用量を送達するように設定することができる。デバイスは、第２の薬剤（例えば、ＴＮＦ−α遮断薬）を、ＴＷＥＡＫ遮断薬をも含む１つの薬学的組成物として、または２つの別の薬学的組成物としてのいずれかで投与するように、さらに設定することができる。
【０１３８】
例えば、薬学的組成物は、米国特許第５，３９９，１６３号；同第５，３８３，８５１号；同第５，３１２，３３５号；同第５，０６４，４１３号；同第４，９４１，８８０号；同第４，７９０，８２４号；または同第４，５９６，５５６号に開示されているデバイスのような、針のない皮下注射器具を用いて投与することができる。周知のインプラントおよびモジュールの例としては以下が挙げられる：米国特許第４，４８７，６０３号、ここでは、制御された速度で薬剤を分散させるための、埋め込み型のマイクロ注入ポンプが開示されている；米国特許第４，４８６，１９４号、ここでは、皮膚を介して薬剤を投与するための治療用デバイスが開示されている；米国特許第４，４４７，２２３号、ここでは、正確な注入速度で医薬品を送達するための医学用注入ポンプが開示されている；米国特許第４，４４７，２２４号、ここでは、持続的な薬物の送達のための流速を変化させることができる埋め込み型の注入装置が開示されている；米国特許第４，４３９，１９６号、ここでは、複数のチャンバー区画を有している浸透圧による薬物送達システムが開示されている；および米国特許第４，４７５，１９６号、ここでは、浸透圧による薬物送達システムが開示されている。多くの他のデバイス、インプラント、送達システム、およびモジュールもまた公知である。
【０１３９】
ＴＷＥＡＫ遮断薬（例えば、抗体または可溶性ＴＷＥＡＫ−Ｒタンパク質）は、キットの中で提供され得る。１つの実施形態においては、キットには、（ａ）ＴＷＥＡＫ遮断薬が含まれている組成物を含む容器と、必要に応じて（ｂ）情報が記載されている物質が含まれる。情報が記載されている物質は、記述、教本、製造、あるいは本明細書中に記載される方法および／または治療的利点のための薬剤の使用に関する他の物質であり得る。
【０１４０】
１つの実施形態においては、キットにはまた、炎症性疾患を処置するための第２の薬剤（例えば、ＴＮＦ−α遮断薬）も含まれる。例えば、キットには、ＴＷＥＡＫ遮断薬が含まれている組成物を含む第１の容器と、第２の薬剤が含まれている第２の容器が含まれる。
【０１４１】
キットの情報が記載されている物質は、その形態に限定はされない。１つの実施形態においては、情報が記載されている物質には、化合物の生産、化合物の分子量、濃度、期限日、バッチまたは製造場所についての情報などが含まれ得る。１つの実施形態においては、情報が記載されている物質は、炎症性疾患を有している被験体もしくは炎症性疾患のリスクがある被験体、または本明細書中に記載される他の疾患を有している被験体もしくは他の疾患のリスクがある被験体を処置するために、例えば、適切な用量、投与形態、または投与態様（例えば、本明細書中に記載される投与の用量、投与形態、または態様）で、ＴＷＥＡＫ遮断薬（例えば、抗体または可溶性ＴＷＥＡＫ−Ｒタンパク質）および／またはＴＮＦ−α遮断薬を投与する方法に関する。情報は、様々な形式で提供することができ、これには、印刷されたテキスト、コンピューターで読み取ることができる物質、ビデオ
による記録、または音声記録、または実質的な物質に対する結びつきもしくはそれへの連絡を提供する情報を提供する情報が含まれる。
【０１４２】
遮断薬に加えて、キットの中の組成物には、他の成分（例えば、溶媒または緩衝液、安定剤、あるいは保存剤）が含まれ得る。遮断薬は、任意の形態（例えば、液体、乾燥させられた形体または凍結乾燥させられた形態、好ましくは、実質的に純粋および／または滅菌）で提供され得る。薬剤が液体の溶液中に提供される場合は、液体溶液は好ましくは水溶液である。薬剤が乾燥させられた形態として提供される場合には、通常は、適切な溶媒の添加によって再構成が行われる。溶媒（例えば、滅菌水または緩衝液）が、必要に応じてキットの中に提供され得る。
【０１４３】
キットには、薬剤が含まれている組成物（単数または複数）用の１つ以上の容器が含まれ得る。いくつかの実施形態においては、キットには、組成物と情報が記載されている物質用の別々の容器、仕切り、または区画が含まれる。例えば、組成物は、ボトル、バイアル、または注射器の中に含まれ得、そして情報が記載されている物質は、プラスチック製のスリーブまたはパケットの中に含まれ得る。他の実施形態においては、キットの別のエレメントが、１つの分けられていない容器の中に含まれる。例えば、組成物がボトル、バイアル、または注射器の中に含まれ、それには、ラベルの形態で情報が記載されている物質が貼り付けられている。いくつかの実施形態においては、キットには、複数の個別の容器（例えば、パック）が含まれ、それぞれに薬剤の１つ以上の投与形態（例えば、本明細書中に記載される投与形態）が含まれている。容器には、単位投与量の組み合わせ（例えば、ＴＷＥＡＫ遮断薬と第２の遮断薬の両方が（例えば、所望される比で）含まれている単位）が含まれ得る。例えば、キットには複数の注射器、アンプル、ホイルパケット、ブリスターパック、または医学的デバイスが含まれ、例えば、それぞれに１つの組み合わせられた単位用量が含まれている。キットの容器は、気密性であり、防水性であり得（例えば、水分または水蒸気中で変化しにくい）、そして／または遮光性であり得る。
【０１４４】
キットには、必要に応じて、組成物の投与に適しているデバイス（例えば、注射器、または他の適切な送達デバイス）が含まれる。デバイスには、１つまたは両方の薬剤を予め充填して提供することができ、また、空で、しかし充填に適した状態で提供することもできる。
【０１４５】
（核酸およびタンパク質の分析）
ＴＷＥＡＫまたはＴＷＥＡＫ−Ｒタンパク質および核酸、ならびに本明細書中に記載される他の生体マーカーについてのタンパク質および核酸（表１に列挙されたものが含まれる）を検出するための多数の方法が当業者に利用可能であり、これには、タンパク質の検出のための抗体をベースとする方法（例えば、ウェスタンブロットまたはＥＬＩＳＡ）、および核酸の検出のためのハイブリダイゼーションをベースとする方法（例えば、ＰＣＲ、またはノーザンブロット）が含まれる。
【０１４６】
アレイは、試料（例えば、被験体に由来する試料）を特性決定するための特に有用な分子ツールである。例えば、複数の遺伝子についての捕捉プローブ（ＴＷＥＡＫおよび／または他の生体マーカーについてのプローブ、あるいは、複数のタンパク質についてのプローブが含まれる）を有しているアレイが、本明細書中に記載されている方法において使用され得る。ＴＷＥＡＫ（または本明細書中に提供される他の生体マーカー）核酸および／またはタンパク質の発現の変化を使用して、試料（例えば、被験体に由来する試料）を評価する（例えば、本明細書中に記載される疾患を評価する）ことができる。
【０１４７】
アレイは、基体上に多くのアドレス（場所を確認できる部位）を有し得る。特性決定されたアレイを、様々な形式で配置することができ、その限定ではない例が以下に記載され
る。基体は、不透明であるか、半透明であるか、または透明であり得る。アドレスは、一次元で（例えば、直線的なアレイ）；二次元で（例えば、平面アレイ）；または三次元で（例えば、三次元アレイ）で、基体上に分布させられ得る。固体基体は、任意の便利な形状または形態であり得、例えば、四角、三角、卵型、または円形であり得る。
【０１４８】
アレイは、様々な方法（例えば、フォトリソグラフィー法（例えば、米国特許第５，１４３，８５４号；同第５，５１０，２７０号；および同第５，５２７，６８１号を参照のこと）、メカニカル方式（例えば、米国特許第５，３８４，２６１号に記載されている流れで方向付けられた方法（ｄｉｒｅｃｔｅｄ−ｆｌｏｗ ｍｅｔｈｏｄ）、ピンをベースとする方法（例えば、米国特許第５，２８８，５１４に記載されているもの）、およびビーズをベースとする技術（例えば、ＰＣＴ ＵＳ／９３／０４１４５に記載されているもの））によって組み立てることができる。
【０１４９】
捕捉プローブは、一本鎖の核酸、二本鎖の核酸（例えば、これは、ハイブリダイゼーションの前またはハイブリダイゼーションの間に変性させられる）、または一本鎖の領域と二本鎖の領域を有している核酸であり得る。好ましくは、捕捉プローブは一本鎖である。捕捉プローブは、様々な基準によって選択することができ、好ましくは、最適なパラメーターを用いてコンピュータープログラムによって設計される。捕捉プローブは、遺伝子の配列リッチ（例えば、非ホモポリマー）の領域にハイブリダイズするように選択され得る。捕捉プローブのＴｍは、相補性領域および長さの良識的な選択によって最適化され得る。理想的には、アレイ上の全ての捕捉プローブのＴｍは類似しており、例えば、互いに、２０℃、１０℃、５℃、３℃、または２℃の範囲内である。
【０１５０】
単離された核酸は、好ましくは、ｍＲＮＡであり、これは、日常的に行われている方法（例えば、ゲノムＤＮＡを除去するためのＤＮａｓｅでの処理、およびオリゴｄＴが結合させられている固体基体へのハイブリダイゼーションが含まれる）によって単離することができる（例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｎ．Ｙ．に記載されている方法を参照のこと）。基体は洗浄され、そしてｍＲＮＡが溶出させられる。
【０１５１】
単離されたｍＲＮＡは逆転写させることができ、必要に応じて、例えば、ｒｔＰＣＲによって（例えば、米国特許第４，６８３，２０２号に記載されているように）増幅させることができる。核酸は、例えば、ＰＣＲによる増幅産物（米国特許第４，６８３，１９６号および同第４，６８３，２０２号）；ローリングサークル型増幅（Ｒｏｌｌｉｎｇ Ｃｉｒｃｌｅ Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ；「ＲＣＡ」）による増幅産物（米国特許第５，７１４，３２０号）、等温ＲＮＡ増幅による増幅産物（ｉｓｏｔｈｅｒｍａｌ ＲＮＡ
ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ）またはＮＡＳＢＡによる増幅産物（米国特許第５，１３０，２３８号；同第５，４０９，８１８号；および同第５，５５４，５１７号）、ならびに、鎖置換増幅による増幅産物（米国特許第５，４５５，１６６号）であり得る。核酸は、例えば、標識されたヌクレオチドの取り込みによって、増幅の間に標識することができる。好ましい標識の例としては、蛍光標識（例えば、赤色蛍光色素Ｃｙ５（Ａｍｅｒｓｈａｍ）または緑色蛍光色素Ｃｙ３（Ａｍｅｒｓｈａｍ））および化学発光標識（例えば、米国特許第４，２７７，４３７号に記載されている標識）が挙げられる。あるいは、核酸は、ビオチンで標識することができ、そして、標識されたストレプトアビジン（例えば、ストレプトアビジン−フィコエリスリン（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ））とのハイブリダイゼーションの後で検出することができる。
【０１５２】
標識された核酸は、アレイに接触させることができる。加えて、対照核酸または参照核酸を同じアレイに接触させることができる。対照核酸または参照核酸は、試料核酸とは異なる標識（例えば、異なる最大発光を有している標識）で標識することができる。標識さ
れた核酸は、ハイブリダイゼーション条件下でアレイに接触させることができる。アレイは洗浄することができ、その後、アレイの個々のアドレスでの蛍光を検出するために画像化することができる。
【０１５３】
ＴＷＥＡＫまたは他の生体マーカーの発現レベルは、そのポリペプチドに特異的な抗体を使用して決定することができる（例えば、ウェスタンブロットまたはＥＬＩＳＡアッセイを使用して）。さらに、複数のタンパク質（ＴＷＥＡＫおよび本明細書中に提供される例示的な生体マーカーが含まれる）の発現レベルは、ポリペプチドのそれぞれについての抗体捕捉プローブを有しているポリペプチドアレイを使用して同時に、迅速に決定することができる。ポリペプチドに特異的な抗体は、本明細書中に記載される方法によって作成することができる（「抗体の作成」を参照のこと）。ＴＷＥＡＫおよび本明細書中に提供される例示的な生体マーカーの発現レベルは、被験体の中で（例えば、インビボでの画像化）測定することができ、また、被験体に由来する生物学的試料（例えば、血液、血清、血漿、または滑液）の中で測定することもできる。
【０１５４】
低密度（９６ウェル形式）タンパク質アレイが開発されており、ここでは、タンパク質がニトロセルロース膜の上にスポットされる（Ｇｅ（２０００）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２８，ｅ３，Ｉ−ＶＩＩ）。抗体のスクローニングのために使用される高密度タンパク質アレイ（２２２×２２２ｍｍの中に１００，０００試料）は、ポリビニリデンジフルオライド（ＰＶＤＦ）上にタンパク質をスポットすることによって形成された（Ｌｕｅｋｉｎｇ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２７０：１０３−１１１）。例えば、Ｍｅｎｄｏｚａ ｅｔ ａｌ．（１９９９）．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ２７：７７８−７８８；ＭａｃＢｅａｔｈ ａｎｄ Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ（２０００）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８９：１７６０−１７６３、およびＤｅ Ｗｉｌｄｔ ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ．１８：９８９−９９４もまた参照のこと。これらの当該分野で公知の方法および他の方法を、試料中のポリペプチドの量を検出するための抗体のアレイを作成するために使用することができる。試料は、蛍光標識に結合させられたストレプトアビジンでのその後の検出のために標識すること（例えば、ビオチニル化すること）ができる。その後、アレイを、個々のアドレスでの結合を測定するためにスキャンすることができる。
【０１５５】
本発明の核酸およびポリペプチドのアレイは多種多様な用途に使用することができる。例えば、アレイは、患者の試料を分析するために使用することができる。試料は、以前に得られたデータ（例えば、既知の臨床標本または他の患者の試料）と比較される。さらに、アレイは、細胞培養物試料を特性決定するために、例えば、パラメーターを変化させた後（例えば、細胞培養物を抗原、トランスジーン、または試験化合物に暴露した後）の細胞の状態を決定するために、使用することができる。
【０１５６】
発現データは、データベース（例えば、ＳＱＬデータベース（例えば、ＯｒａｃｌｅまたはＳｙｂａｓｅデータベース環境）のような関連するデータベース）に保存することができる。データベースには複数の表が含まれ得る。例えば、原発現データが１つの表に保存され得る。ここでは、それぞれの列がアッセイされた遺伝子（例えば、アドレスまたはアレイ）に対応し、それぞれの行が試料に対応する。別の表には、識別名と試料の情報（例えば、使用したアレイのバッチ数、日付、および他の品質管理情報）が保存され得る。
【０１５７】
アレイ上での遺伝子発現の分析によって得られた発現プロフィールは、Ｇｏｌｕｂ ｅｔ ａｌ．，（（１９９９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２８６：５３１）に記載されている様々な状態の試料および／または細胞を比較するために使用することができる。１つの実施形態においては、ＴＷＥＡＫをコードする遺伝子および／または本明細書中に提供される例示的な生体マーカーをコードする遺伝子の発現（例えば、ｍＲＮＡの発現またはタンパク質
の発現）情報が、例えば、参照値（例えば、参照値）の比較によって評価される。参照値は、対照（例えば、参照被験体）から得ることができる。参照値はまた、例えば被験体のコホート（例えば、年齢と性別が適合している被験体、例えば、正常な被験体または関節リウマチもしくは本明細書中に記載される他の疾患を有する被験体）についての参照値を提供するための、統計学的分析によって得ることもできる。特定の参照に対する（例えば、リスクがある（ｒｉｓｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ）コホートについての参照に対する）、または正常なコホートに対する統計学的類似性は、被験体（例えば、本明細書中に記載される疾患であると診断されていない被験体）の評価（例えば、炎症性疾患のリスクの指標）を提供するために使用することができる。
【０１５８】
処置に適している被験体は、例えば、ＴＷＥＡＫおよび／または他の生体マーカーの発現ならびに／あるいは活性について評価することもできる。被験体は、ＴＷＥＡＫおよび／または他の生体マーカーの発現ならびに／あるいは活性が参照（例えば、参照値（例えば、正常に関係している参照値））と比較して評価される場合には、処置（例えば、ＴＷＥＡＫ遮断薬での処置）に適していると特定することができる。
【０１５９】
本明細書中に記載される薬剤が投与されるか、または他の処置がおこなわれている被験体は、ＴＷＥＡＫおよび／または本明細書中に記載される他の生体マーカーの発現ならびに／あるいは活性について、記載されるように評価することができる。被験体は、複数回（例えば、治療の経過の間の複数の時点で、例えば、治療レジュメの間に）評価することができる。被験体の処置は、被験体が治療に対してどのように反応するかに応じて修正することができる。例えば、ＴＷＥＡＫの発現または活性の低下、あるいはＴＷＥＡＫによって刺激される遺伝子の発現または活性の低下が、反応性の指標であり得る。
【０１６０】
薬剤によって媒介される特定の効果は、統計学的に有意である（例えば、Ｐ値＜０．０５または０．０２）の差を示し得る（例えば、未処置の被験体、対照被験体、または他の参照と比較して）。統計学的有意性は、任意の当該分野で公知の方法によって決定することができる。例示的な統計学的試験としては、Ｓｔｕｄｅｎｔ Ｔ検定、Ｍａｎｎ Ｗｈｉｔｎｅｙ Ｕノンパラメトリック試験、およびＷｉｌｃｏｘｏｎノンパラメトリック統計学的試験が挙げられる。いくつかの統計学的に有意な関係は、０．０５未満または０．０２未満のＰ値を有している。
【０１６１】
（遺伝的材料を評価する方法）
遺伝的情報を提供するために遺伝的材料を評価する方法は多数存在している。これらの方法は、ＴＷＥＡＫをコードする遺伝子、または本明細書中に記載される生体マーカーをコードする遺伝子が含まれている遺伝子座を評価するために使用することができる。これらの方法は、１つ以上のヌクレオチド（例えば、遺伝子のコード領域または非コード領域（例えば、調節領域の中）（例えば、プロモーター、非翻訳領域またはイントロンをコードする領域など））を評価するために使用することができる。
【０１６２】
核酸試料は、生物物理学的技術（例えば、ハイブリダイゼーション、電気泳動など）、配列決定、酵素をベースとする技術、およびそれらの組み合わせを使用して分析することができる。例えば、試料核酸の核酸マイクロアレイへのハイブリダイゼーションを使用して、ｍＲＮＡ集団の中の複数の配列を評価すること、そして遺伝子の多形性を評価することができる。他のハイブリダイゼーションをベースとする技術としては、配列特異的プライマーの結合（例えば、ＰＣＲまたはＬＣＲ）；ＤＮＡ（例えば、ゲノムＤＮＡ）のサザン分析；ＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）のノーザン分析；蛍光プローブをベースとする技術（例えば、Ｂｅａｕｄｅｔ ｅｔ ａｌ．，（２００１）Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．１１（４）６００−８を参照のこと）；および対立遺伝子特異的増幅が挙げられる。酵素による技術としては、制限酵素消化；配列決定、および一塩基伸張（ＳＢＥ）が挙げられる。こ
れらおよび他の技術は、当業者に周知である。
【０１６３】
電気泳動技術としては、キャピラリー電気泳動、および一本鎖立体構造多形（ＳＳＣＰ）検出が挙げられる（例えば、Ｍｙｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，（１９８５）Ｎａｔｕｒｅ ３１３：４９５−８およびＧａｎｇｕｌｙ（２００２）Ｈｕｍ Ｍｕｔａｔ．１９（４）３３４−４２を参照のこと）。他の生物物理学的方法としては、変性高圧液体クロマトグラフィー（ＤＨＰＬＣ）が挙げられる。
【０１６４】
１つの実施形態においては、選択的なＰＣＲ増幅に依存する対立遺伝子特異的増幅技術が、遺伝的情報を得るために使用される場合がある。特異的な増幅のためのプライマーとして使用されるオリゴヌクレオチドは、分子の中心に目的の変異を有している場合があり（その結果、増幅はディファレンシャルなハイブリダイゼーションに依存する）（Ｇｉｂｂｓ ｅｔ ａｌ．，（１９８９）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１７：２４３７−２４４８）、また、一方のプライマーの３’末端に目的の変異を有している場合もある（この場合は、適切な条件下では、ミスマッチは、ポリメラーゼによる伸張を防止または減少させることができる）（Ｐｒｏｓｓｎｅｒ（１９９３）Ｔｉｂｔｅｃｈ １１：２３８）。加えて、切断をベースとする検出を行うために、変異の領域の中に制限部位を導入することができる（Ｇａｓｐａｒｉｎｉ ｅｔ ａｌ．，（１９９２）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｐｒｏｂｅｓ ６：１）。別の実施形態においては、増幅は、増幅用のＴａｑリガーゼを使用して行うことができる（Ｂａｒａｎｙ（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８８：１８９）。このような場合には、連結は、５’配列の３’末端が完全に適合している場合にのみ起こり、これによって、増幅が存在しているか存在していないかを調べることによって、特異的部位での既知の変異の存在を検出することが可能となるであろう。
【０１６５】
配列を検出するための酵素による方法としては、ポリメラーゼ連鎖反応のような増幅をベースとする方法（ＰＣＲ；Ｓａｉｋｉ，ｅｔ ａｌ．，（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３１：１３５０−１３５４）およびリガーゼ連鎖反応（ＬＣＲ；Ｗｕ．ｅｔ ａｌ．，（１９８９）Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ４：５６０−５６９；Ｂａｒｒｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，（１９９０），Ｇｅｎｅ １９８９：１１７−１２２；Ｆ．Ｂａｒａｎｙ（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９８８：１８９−１９３）；核酸を増幅するためにＲＮＡポリメラーゼによるＲＮＡ合成を利用する転写をベースとする方法（米国特許第６，０６６，４５７号；同第６，１３２，９９７号；および同第５，７１６，７８５号；Ｓａｒｋａｒ ｅｔ ａｌ．，（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：３３１−３４；Ｓｔｏｆｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３９：４９１）；ＮＡＳＢＡ（米国特許第５，１３０，２３８号；同第５，４０９，８１８号；および同第５，５５４，５１７号）；ローリングサークル型増幅（ＲＣＡ；米国特許第５，８５４，０３３号および同第６，１４３，４９５号）、ならびに鎖置換増幅（ＳＤＡ；米国特許第５，４５５，１６６号および同第５，６２４，８２５号）が挙げられ得る。増幅方法は、他の技術と組み合わせて使用することができる。
【０１６６】
他の酵素による技術としては、ポリメラーゼ（例えば、ＤＮＡポリメラーゼおよびそのバリエーション）を使用する配列決定（例えば、一塩基伸張技術）が挙げられる。例えば、米国特許第６，２９４，３３６号；同第６，０１３，４３１号；および同第５，９５２，１７４号を参照のこと。
【０１６７】
蛍光をベースとする検出もまた、核酸の多形性を検出するために使用することができる。例えば、様々なターミネーターｄｄＮＴＰを、様々な蛍光色素で標識することができる。プライマーを、多形の近くまたはすぐ近くに隣接してアニーリングさせることができ、多形部位のヌクレオチドを、取り込まれている蛍光色素のタイプ（例えば、「色」）によ
って検出することができる。
【０１６８】
マイクロアレイに対するハイブリダイゼーションもまた、多形（ＳＮＰが含まれる）を検出するために使用することができる。例えば、様々なオリゴヌクレオチドのセット（オリゴヌクレオチドの様々な位置に多形性ヌクレオチドを有している）を核酸のアレイ上に配置することができる。位置と他の対立遺伝子に特異的なオリゴヌクレオチドに対するハイブリダイゼーションの関数としてのハイブリダイゼーションの程度を使用して、特定の多形が存在しているかどうかを決定することができる。例えば、米国特許第６，０６６，４５４号を参照のこと。
【０１６９】
１つの態様においては、ハイブリダイゼーションプローブには、二本鎖の形成を脱安定化させ、そしてアッセイに敏感にさせる１つ以上のさらなるミスマッチが含まれ得る。ミスマッチは、問題の位置にすぐ隣接している場合も、また問題の位置から１０、７、５、４、３、または２ヌクレオチド以内に存在している場合もある。ハイブリダイゼーションプローブは、特定のＴｍ（例えば、４５〜６０℃、５５〜６５℃、または６０〜７５℃）を有するように選択することができる。複数のアッセイにおいては、Ｔｍは、互いに、５℃、３℃、または２℃以内となるように選択することができる。
【０１７０】
例えば、増幅と配列決定、または増幅、クローニングと配列決定による、特定の遺伝子座についての核酸の直接の配列決定もまた可能である。高スループットの自動（例えば、キャピラリーベースまたはマイクロチップベースの）配列決定装置を使用することができる。なお他の実施形態においては、目的のタンパク質の配列はその遺伝子配列を推察するために分析される。タンパク質配列を分析する方法としては、タンパク質配列決定、質量スペクトル分析、配列／エピトープ特異的免疫グロブリン、およびプロテアーゼによる消化が挙げられる。
【０１７１】
上記の方法の任意の組み合わせもまた使用することができる。上記の方法は、任意の遺伝子座を評価するために、例えば、個体の特定のグループによる遺伝的情報を分析するための方法において、または本明細書中に記載されている疾患（例えば、関節リウマチ）に関係している多形（例えば、ＴＷＥＡＫまたは本明細書中に記載される別の生体マーカーをコードする遺伝子の中のもの）を分析するための方法において、使用することができる。
【実施例】
【０１７２】
（実施例１：例示的な配列：）
ヒトＴＷＥＡＫタンパク質の例示的な配列は以下である：
【０１７３】
【化１】
ヒトＦｎ１４タンパク質の例示的な配列は以下である：
【０１７４】
【化２】
（実施例２：ＴＷＥＡＫおよびＴＮＦ−αによって相乗的に活性化される遺伝子）
マイクロアレイを、ヒトの滑膜細胞の中でのその発現がＴＷＥＡＫおよびＴＮＦ−αによって誘導される遺伝子を同定するために分析した。以下は、ＴＷＥＡＫおよびＴＮＦ−αによって相乗的に活性化される遺伝子の例である。
【０１７５】
【表１−１】
【０１７６】
【表１−２】
【０１７７】
【表１−３】
なお他の遺伝子が、（ｉ）ＴＮＦ−αが存在しない条件下でのＴＷＥＡＫ、および（ｉｉ）ＴＷＥＡＫが存在しない条件下でのＴＮＦ−αのいずれによっても、活性化される。
【０１７８】
（実施例３：平均の関節炎指数によって測定したｍＣＩＡ中のＴＷＥＡＫおよびＴＮＦの遮断の組み合わせの効果）
マウスのコラーゲンによって誘導される関節炎（ｍＣＩＡ）モデルは、関節リウマチについての一般的に使用されているモデルである（例えば、Ｓｔｕａｒｔ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．６９：６７３−６８３（１９８２）を参照のこと）。ｍＣＩＡモデルを、関節炎の発症に対する抗ＴＷＥＡＫ処置および抗ＴＮＦ−α処置の併用の効果を研究するために使用した。関節炎はコラーゲン免疫化（ＣＩＩ／ＣＦＡ：コラーゲンＩＩと完全なフロイトのアジュバント）によってマウスにおいて誘導した。抗ＴＷＥＡＫモノクローナル抗体（ｍｕ抗ＴＷＥＡＫ ｍＡｂ＋ｈｕ ＩｇＧ１）；可溶性ＴＮＦ−α受容体（ＴＮＦｒ−ｈｕ Ｆｃ＋ｍｕ ＩｇＧ２ａ）；抗ＴＷＥＡＫモノクローナル抗体と可溶性ＴＮＦ−α受容体の組み合わせ（ｍｕ抗ＴＷＥＡＫ ｍＡｂ＋ＴＮＦｒ−ｈｕ
Ｆｃ）；またはＰＢＳもしくはアイソタイプが適合しているネガティブ対照を、コラーゲン免疫化の２０日後、２３日後、２７日後、３０日後、および３４日後に投与した。それぞれの処置グループには１０匹のマウスを含めた。それぞれの抗体は、１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与した。関節炎を、平均の関節炎指数を使用して評価した（例えば、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｅｓ．Ｔｈｅｒ．６：Ｒ２７３−Ｒ２８１（２００４）を参照のこと）。４本の肢を、スコアリングシステムを使用してそれぞれのマウスについて測定した：０＝正常な肢；１＝個々の指の腫れ；２＝足首または手首の関節の中度の腫れおよび赤み；３＝少なくとも２つの関節の腫れおよび赤み；ならびに、４＝肢全体の腫れ。４つの肢のスコアの合計（ｙ軸）を、コラーゲン免疫化後の日数（ｘ軸）に対してプロットした。
【０１７９】
図１は、この実験の結果を示している。抗ＴＷＥＡＫ薬と抗ＴＮＦ−α薬の組み合わせで処置したマウスは、いずれかの単独の遮断薬、または対照で処置したマウスよりも低い平均の関節炎指数スコアを有していた。また、「罹患率％」としてグラフの右側に示したように、組み合わせで処置したマウスは、いずれかの薬剤のみ（抗ＴＮＦ−αでの処置については６７％；抗ＴＷＥＡＫ ｍＡｂでの処置については８０％）、または対照（ＰＢＳでの処置については８０％；アイソタイプが適合している抗体での処置については９０％）で処置したマウスよりも、全体的に低い関節炎の罹患率（６０％）を有していた。
【０１８０】
（実施例４：平均の中足骨の高さによって測定したｍＣＩＡにおけるＴＷＥＡＫとＴＮＦの遮断の組み合わせの効果）
ｍＣＩＡモデルを、平均の中足骨の高さ／肢の厚みによって測定した関節炎の進行に対する抗ＴＷＥＡＫ治療と抗ＴＮＦ−α治療の組み合わせの効果を研究するために使用した（例えば、Ｃａｍｐｏ ｅｔ ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｅｓ．Ｔｈｅｒ．５：Ｒ
１２２−Ｒ１３１（２００３）を参照のこと）。マウスを、抗ＴＷＥＡＫモノクローナル抗体（ｍｕ抗ＴＷＥＡＫ ｍＡｂ＋ｈｕ ＩｇＧ１）；可溶性ＴＮＦ−α受容体（ＴＮＦＲｐ５５：ｈｕ Ｆｕ＋ｍｕ ＩｇＧ２ａ）；抗ＴＷＥＡＫモノクローナル抗体と可溶性ＴＮＦ−α受容体の組み合わせ（ｍｕ抗ＴＷＥＡＫ ｍＡｂ＋ＴＮＦＲｐ５５：ｈｕ Ｆｃ）；またはＰＢＳもしくはアイソタイプが適合しているネガティブ対照で、コラーゲン免疫化の２０日後、２３日後、２７日後、３０日後、および３４日後に処置した。それぞれの処置グループには１０匹のマウスを含めた。それぞれの抗体は１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与した。中足骨の高さを、コラーゲン免疫化の３８日後に、キャリパーを使用して測定した。処置（ｘ軸）あたりのそれぞれのマウスについての平均の中足骨の高さ（ｙ軸）をプロットした。
【０１８１】
図２は、この実験の結果を示している。抗ＴＷＥＡＫ薬と抗ＴＮＦ−α薬の組み合わせで処置したマウスは、いずれかの単独の遮断薬、または対照で処置したマウスよりも統計学的に有意に低い平均の中足骨の高さの値を有していた（＊対照と比較した場合の処置あたりの平均値についてｐ＜０．０５）。
【０１８２】
（実施例５：体重の変化によって測定したｍＣＩＡにおけるＴＷＥＡＫおよびＴＮＦの遮断の組み合わせの効果）
ｍＣＩＡモデルを、体重の変化の割合（％）によって測定した関節炎の進行に対する抗ＴＷＥＡＫ治療と抗ＴＮＦ−α治療の組み合わせの効果を研究するために使用した（例えば、Ｃａｍｐｏ ｅｔ ａｌ．，Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｅｓ．Ｔｈｅｒ．５：Ｒ１２２−Ｒ１３１（２００３））。マウスを、抗ＴＷＥＡＫモノクローナル抗体（ｍｕ抗ＴＷＥＡＫ ｍＡｂ＋ｈｕ ＩｇＧ１（ＴＮＦＲｐ５５：ｈｕ Ｆｃについてのアイソタイプが適合している対照））；可溶性ＴＮＦ−α受容体（ＴＮＦＲｐ５５：ｈｕ Ｆｕ＋ｍｕ ＩｇＧ２ａ）；抗ＴＷＥＡＫモノクローナル抗体と可溶性ＴＮＦ−α受容体の組み合わせ（ｍｕ抗ＴＷＥＡＫ ｍＡｂ＋ＴＮＦＲｐ５５：ｈｕ Ｆｃ）；またはＰＢＳもしくはアイソタイプが適合しているネガティブ対照で、コラーゲン免疫化の２０日後、２３日後、２７日後、３０日後、および３４日後に処置した。それぞれの処置グループには１０匹のマウスを含めた。それぞれの抗体は１０ｍｇ／ｋｇの用量で投与した。マウスを、コラーゲン免疫化後に様々な時点で体重を測定し、そして体重の変化の割合（％）を、処置あたりとして計算した。それぞれの処置についての体重の変化の割合（％）（ｙ軸）を、コラーゲン免疫化による関節炎の誘導後の日数（ｘ軸）に対してプロットした。
【０１８３】
図３は、この実験の結果を示している。抗ＴＷＥＡＫ薬と抗ＴＮＦ−α薬の組み合わせで処置したマウスは、いずれかの単独の遮断薬、または対照で処置したマウスよりも統計学的に有意に小さい体重の変化の割合（％）を有していた（＊対照に対して、または、ＴＮＦＲｐ５５：ｈｕ Ｆｃ＋ｍｕ ＩｇＧ２ａで処置したマウスに対して比較した場合の処置あたりの値についてｐ＜０．０１）。
【０１８４】
（実施例６：ＴＷＥＡＫによって誘導される遺伝子）
本発明者らは、６時間および２４時間の両方の時点で、細胞に対してＴＷＥＡＫの用量（５ｎｇ／ｍｌおよび５０ｎｇ／ｍｌ）を加え、そして、いくつかの遺伝子がＴＷＥＡＫだけによって調節されることを観察した。これらの遺伝子は、５ｎｇ／ｍｌの濃度では、ＴＮＦ−αの添加による影響は受けなかった。このような遺伝子の例は以下である：
表２
１．ＮＩＫ／分裂促進因子によって活性化されるプロテインキナーゼキナーゼキナーゼ１４（ＭＡＰ３Ｋ１４）
２．ヒト（Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ）ｃＤＮＡ ＦＬＪ１１７９６ ｆｉｓ，ｃｌｏｎｅ ＨＥＭＢＡ１００６１５８，ヒト（Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ）の転写因子フォークヘッド様７（ｆｏｒｋｈｅａｄ−ｌｉｋｅ ７）（ＦＫＨＬ７）遺伝子に高度に類似して
いる
３．グルコサミン−６−スルファターゼに類似している、ヒト（Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ）血清グルココルチコイドによって調節されるキナーゼ（ＳＧＫ），ｍＲＮＡ
４．ヒト（Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ）ＲＥＶ３（酵母ホモログ）様，ＤＮＡポリメラーゼゼータ（ＲＥＶ３Ｌ）の触媒サブユニット，ｍＲＮＡ。
５．ＡＤＡＭ １０／ａ ディスインテグリン（ｄｉｓｉｎｔｅｇｒｉｎ）およびメタロプロテイナーゼドメイン１０（ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ ｄｏｍａｉｎ １０）
６．核因子（赤血球由来２）様１
７．ヒト（Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ）ＳｅｒＡｒｇ関連核マトリックスタンパク質（多くのプロリン１０１様）（ＳＲＭ１６０）、ｍＲＮＡ。
８．ヒト（Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ）ダブルコルチンおよびＣａＭキナーゼ様１（ＤＣＡＭＫＬ１）、ｍＲＮＡ。
９．ヒト（Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ）Ｃｄｃ４２エフェクタータンパク質４；Ｒｈｏ ＧＴＰａｓｅｓ ４（ＣＥＰ４）の結合因子、ｍＲＮＡ。
１０．ヒト（Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓ）ｍＲＮＡ；ｃＤＮＡ ＤＫＦＺｐ７６２Ｌ１０６（クローン ＤＫＦＺｐ７６２Ｌ１０６由来）；部分的なｃｄｓ。
【０１８５】
加えて、正常なヒトの滑膜細胞においては、ＣＢＲ３およびＩＬ８は、ＴＷＥＡＫでの処置（５ｎｇ／ｍｌ）のみによって誘導される。
【０１８６】
（実施例７：ＴＷＥＡＫを用いた実験）
図４は、ＴＷＥＡＫ遮断モノクローナルでの処置によって、関節炎のマウスＣＩＡモデルとラットＣＩＡモデルの両方において関節炎の進行を弱めることができることを示している。左側のパネルは、抗ＴＷＥＡＫ抗体（マウス抗ＴＷＥＡＫ ｍＡｂ）での処置によって、ＣＩＩ／ＣＦＡで関節炎を誘導したマウスＣＩＡモデルにおいて、対照抗体（ｍＩｇＧ２ａ）での処置と比較すると、平均の関節炎指数において低い値が生じたことを示している。右側のパネルは、抗ＴＷＥＡＫ抗体（抗ＴＷＥＡＫ ｍＡｂ）での処置が、コラーゲンＩＩとフロイトの不完全なアジュバント（ＣＩＩ／ＩＦＡ）で関節炎を誘導したラットＣＩＡモデルにおいて、対照抗体（Ｈａ ４／８）またはＰＢＳでの処置と比較すると、平均の関節炎指数において低い値を生じたことを示している。
【０１８７】
図５は、ＴＷＥＡＫ遮断モノクローナル抗体を、コラーゲン免疫化による関節炎の誘導と同時（投与スキーム１）または誘導後（投与スキーム２）に投与することができ、そして、なおも関節炎のマウスＣＩＡモデルとラットＣＩＡモデルの両方において関節炎の進行を弱める効果があることを示している。左側のパネルは、マウスＣＩＡモデルにおいて、対照抗体（ｍＩｇＧ２ａ）の投与と比較して平均の関節炎指数において低い値を得るために、抗ＴＷＥＡＫ抗体を関節炎の誘導前または誘導後に投与できることを示している。右側のパネルは、抗ＴＷＥＡＫ抗体を、ラットのＣＩＡモデルにおいて、対照抗体（Ｈａ
４／８）またはＰＢＳの投与と比較して、平均の関節炎指数において低い値を得るために、関節炎の誘導前または誘導後に投与できることを示している。
【０１８８】
図６は、抗ＴＷＥＡＫモノクローナル抗体（ＡＢＧ．１１）での処置によって、臨床的な肢スコアおよび全体的な炎症スコアによって測定した場合に、ラットＣＩＡモデルにおいて炎症が軽減されることを示している；また、処置によって、骨吸収のパラメーターによって測定した場合に軟骨および骨量の減少が少なくなり、トルイジンブルーの取り込み量が少なくなり、そして、関節軟骨の減少も少なくなる。同様の結果がマウスＣＩＡモデルにおいても見られた。
【０１８９】
図７は、関節炎の誘導後の様々な時点（２３日目（Ｄ）、２８日目、３０日目、および
３８日目）での、マウスＣＩＡモデルにおける血清ＴＷＥＡＫのレベルを示している。ＴＷＥＡＫレベルは、対照マウス（ＤＢＡ／１）におけるレベルと比較すると高かった。
【０１９０】
図８は、マウスＣＩＡモデルにおける関節炎の誘導後の様々な時点（２３日目、３０日目、および４０日目）での、ＭＭＰ９、リンホタクチン、ＩＰ−１０、およびＩＬ−６のレベルを示している。抗ＴＷＥＡＫモノクローナル抗体（Ｐ５Ｇ９およびＰ５Ｇ９（完全、投与スキーム１とも呼ばれる）での処置によって、対照（ｍＩｇＧ２ａ）で処置したマウスにおけるレベル、または関節炎を発症するように免疫化しなかったマウス（正常なＤＢＡ）におけるレベルと比較して、これらのタンパク質のレベルの増大を同程度に妨げた。同様の結果が、ラットＣＩＡモデルにおいても見られた。
【０１９１】
抗ＴＷＥＡＫ抗体でのＴＷＥＡＫの阻害が適応的免疫反応には影響を与えないことを明らかにするための実験を行った。コラーゲン免疫化後、抗ＴＷＥＡＫモノクローナル抗体で処置したマウスは、対照のアイソタイプが適合している抗体（ｍＩｇＧ２ａ；データは示さない）で処置したマウスと同程度にまで、コラーゲン特異的Ｂ細胞およびＴ細胞応答を上昇させることができた。
【０１９２】
関節において見られる初代ヒト細胞型：線維芽細胞様滑膜細胞、関節軟骨細胞、および骨芽細胞に対するＦｎ１４（ＴＷＥＡＫ受容体）のレベルを測定するための実験を行った。抗Ｆｎ１４抗体（ＩＴＥＭ−４）または対照抗体（抗ｍＦｃ）を使用した蛍光活性化細胞選別実験は、Ｆｎ１４レベルが、３種類の細胞型の全てにおいてバックグラウンドを上回るほどに上昇し、軟骨細胞よりも、滑膜細胞および骨芽細胞の中でレベルがより高かったことを明らかにした。
【０１９３】
ＴＷＥＡＫおよびＴＮＦ−αが、それぞれ、軟骨細胞によるマトリックスメタロプロテアーゼの生産を刺激することを明らかにするための実験を行った。ＭＭＰ−１、ＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、およびＭＭＰ−９レベルは全て、ＴＷＥＡＫ（１００ｎｇ／ｍｌ）またはＴＮＦ−α（５０ｎｇ／ｍｌ）での処置後に上昇した。
【０１９４】
ＴＷＥＡＫおよびＴＮＦ−αのアゴニスト性の相乗効果を明らかにするための実験を行った。ヒト線維芽細胞様滑膜細胞を、様々な濃度の、ＴＷＥＡＫのみ、ＴＮＦ−αのみ、またはＴＷＥＡＫとＴＮＦ−αの組み合わせで処理し、それぞれの処置を行ったＲＡＮＴＥＳの生産のレベルをＥＬＩＳＡによって測定した。ＴＷＥＡＫとＴＮＦ−αはいずれもＲＡＮＴＥＳの生産を誘導した。しかし、ＴＷＥＡＫおよびＴＮＦ−αを一緒に投与した場合には、ＲＡＮＴＥＳの生産について相乗的なレベルが得られた。したがって、ＴＷＥＡＫおよびＴＮＦ−αは、特定の炎症遺伝子の発現を誘導するように相乗的に作用することができる。
【０１９５】
（実施例８：正常な滑膜細胞中でＴＷＥＡＫおよびＴＮＦ−αの併用療法によって誘導される遺伝子）
健常なドナーに由来する滑膜細胞をインビトロで培養し、５ｎｇ／ｍｌのＴＷＥＡＫと０．５ｎｇ／ｍｌのＴＮＦ−αで処理した。表３には、その発現がＴＷＥＡＫおよびＴＮＦ−αでの処理によって統計学的に有意な程度に影響を受ける遺伝子を列挙する。遺伝子を、それらの遺伝子のオントロジーカテゴリーによって分類した。
【０１９６】
【表３】
変化を、超幾何学的平均に基づいて統計学的に有意なＧｏカテゴリーとして同定した。
【０１９７】
（実施例９：ＲＡ滑膜細胞中でＴＷＥＡＫとＴＮＦ−αの併用療法によって誘導される遺伝子）
関節リウマチの患者ドナーに由来する滑膜細胞をインビトロで培養し、５ｎｇ／ｍｌのＴＷＥＡＫと０．５ｎｇ／ｍｌのＴＮＦ−αで処置した。表４には、その発現がＴＷＥＡＫおよびＴＮＦ−αでの処理によって統計学的に有意な程度に影響を受ける遺伝子を列挙する。遺伝子を、それらの遺伝子のオントロジーカテゴリーによって分類した。
【０１９８】
【表４】
変化を、超幾何学的平均に基づいて統計学的に有意なＧｏカテゴリーとして同定した。
【０１９９】
（実施例１０）
Ｐ２Ｄ１０は例示的なマウスの抗ＴＷＥＡＫ抗体である。マウスＰ２Ｄ１０重鎖可変ドメインの配列（配列番号３）（ＣＤＲには下線を付けた）は以下である：
【０２００】
【化３】
これはマウスのサブグループ３Ｄ重鎖可変ドメインである。
【０２０１】
マウスのＰ２Ｄ１０軽鎖可変ドメインの配列（配列番号４）（ＣＤＲには下線を付けた）は以下である：
【０２０２】
【化４】
これはマウスのサブグループ２κ軽鎖である。
【０２０３】
これは成熟ｈｕＰ２Ｄ１０ Ｈ１ ＩｇＧ１重鎖の例示的なアミノ酸配列（配列番号５）である：
【０２０４】
【化５】
これは成熟ｈｕＰ２Ｄ１０ Ｌ１軽鎖の例示的なアミノ酸配列（配列番号６）である：
【０２０５】
【化６】
これは成熟ｈｕＰ２Ｄ１０ Ｌ２軽鎖の例示的なアミノ酸配列（配列番号７）である：
【０２０６】
【化７】
本発明の多数の実施形態が記載されている。それにもかかわらず、様々な改変を本発明の精神および範囲から逸脱することなく行うことができることが理解されるであろう。したがって、他の実施形態も以下の特許請求の範囲の中にある。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
本明細書中に記載される発明。
【請求項１】
本明細書中に記載される発明。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【公開番号】特開２０１３−１８７９０（Ｐ２０１３−１８７９０Ａ）
【公開日】平成２５年１月３１日（２０１３．１．３１）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−２３１５８０（Ｐ２０１２−２３１５８０）
【出願日】平成２４年１０月１９日（２０１２．１０．１９）
【分割の表示】特願２００９−１１４０３１（Ｐ２００９−１１４０３１）の分割
【原出願日】平成１８年５月１０日（２００６．５．１０）
【出願人】（５９２２２１５２８）バイオジェン・アイデック・エムエイ・インコーポレイテッド (224)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２５年１月３１日（２０１３．１．３１）
【国際特許分類】
【出願日】平成２４年１０月１９日（２０１２．１０．１９）
【分割の表示】特願２００９−１１４０３１（Ｐ２００９−１１４０３１）の分割
【原出願日】平成１８年５月１０日（２００６．５．１０）
【出願人】（５９２２２１５２８）バイオジェン・アイデック・エムエイ・インコーポレイテッド (224)
【Ｆターム（参考）】
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