生物活性化合物の粒子サイズの低減
本発明は、流体中に懸濁させた生物活性化合物粒子もしくは凝集体の平均サイズを、この生物活性化合物粒子もしくは凝集体の実質的部分の平均サイズを少なくとも２５％低減させるためにその中に懸濁させた生物活性化合物粒子もしくは凝集体を有するこの流体を１つ以上の磁場に通して１回以上流動させるステップによって低減させる方法を提供する。本方法は、生物活性化合物調製剤を製造するための工程に組み込むことができる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、懸濁液を磁場に通して誘導することにより水性懸濁液中の固形薬物粒子のサイズを低減させる方法に関し、それによりこの粒子サイズはマイクロメートル〜ナノメートル範囲に低減される。さらに、本発明は、入手されたナノ粒子の安定化を可能にする方法、ならびにこの安定化されたナノ粒子を含有する調製物に関する。本発明のこの調製物は、難溶性薬物粒子を経口送達するために特に重要である。
【０００２】
より一般的には、本発明は、極めて小さなサイズの生物活性化合物の粒子の製造分野に含まれる。より詳細には、本発明は、生物活性化合物の粒子の懸濁液の磁気処理に関する。本発明は、結果として生じた粒子の平均粒子サイズおよび粒子サイズ分布を調節する方法にさらに関する。最後に、本発明は、そのような小さなサイズの生物活性化合物粒子を組み込んでいる医薬製剤、植物医薬製剤および獣医学製剤に関する。
【背景技術】
【０００３】
新規の化学物質の分子構造はより複雑になってきており、依然として好ましい薬物投与経路である経口投与後に低水溶性および溶解速度限定性吸収を備える薬物となる。新しく合成された多数の分子が水性環境において難溶性であるという事実を考察すると、これらの化合物を有用な治療薬へ転換するステップは今もなお難易度が高い。水難溶性薬物の溶解およびバイオアベイラビリティを向上させるために一般に使用されてきた技術には、一般に微粉化、界面活性剤の使用、および固体分散体の形成が含まれる。
【０００４】
固体状態の分散体内での６つのタイプの薬物−担体相互作用は、既に文献において説明されている：単純な共融混合物、固溶体、ガラス溶液、ガラス懸濁液、結晶性担体中の無定形沈殿物および化合物もしくは複合体形成。湿潤性の上昇、拡散層での担体による薬物の可溶化、ならびに凝集および凝集体形成の減少もしくは不在などの他の要素もまた溶解上昇の一因となることがある。
【０００５】
溶解限定性経口吸収を有する薬物は、周知のＮｏｙｅｓ−Ｗｈｉｔｎｅｙ関係の変形である下記の方程式：
【０００６】
【数１】
【０００７】
（式中、ｄＭ／ｄｔは溶解速度、Ａは薬物粒子の比表面積、Ｄは拡散係数、ｈは拡散層の厚さ、Ｃｓは飽和溶解度、およびＣｔは時間ｔでの薬物濃度である）に指摘されているように、粒子サイズの低減から利益を得る可能性がある。表面積は粒子サイズが低減するにつれて増大するので、薬物物質の粒子サイズの低減によってより高度の溶解速度を達成し得る。この作用は、規則的に粉末化された形状とは対照的な所定の水難溶性薬物の微粉化後の優れた溶解速度によって明らかにされてきた。しかし、粒子サイズの低減は、溶解速度における予想された向上を必ずしも生じさせるわけではない。この作用は、表面エネルギーの上昇およびこれに伴うより強力な非極性分子間のファン・デル・ワールス引力に起因する極めて微細な粒子の凝集体形成および凝集に起因する有効表面積の減少の結果として発生する。このため、粒子の表面は、凝集体形成から保護される必要がある。
【０００８】
米国特許第５，１４５，６８４号は、１０ｍｇ／ｍＬ未満の水溶性を有する基本的に９９．９〜１０重量％の結晶性薬物物質から構成される粒子であって、この薬物物質が０．１〜９０重量％の量でその表面に吸収された、約４００ｎｍ未満の平均有効粒子サイズを維持するために十分な非架橋表面改質剤を有している粒子について開示している。詳細には、この特許は、約６８〜５２０ｎｍの範囲内の粒子サイズ分布および２０４ｎｍの数平均粒子サイズを備える、５％ステロイドＡを含む改質ステロイドＡ水性分散体を開示している。
【０００９】
米国特許第５，５０３，７２３号は、ナノ粒子分散体を２つの電極間に配置してこの電極間に電場を印加するステップによってナノ粒子分散体精製することを開示しており、このときこの分散体は基本的に難溶性結晶性治療薬もしくは診断薬の粒子から構成され、この粒子の９９％は４００ｎｍ未満の粒子サイズを有しており、このナノ粒子を安定化できる表面改質剤と結び付いている。詳細には、この特許は粒子の１０％のサイズが１８０ｎｍへ低減されたダナゾール分散体について記載している。
【００１０】
米国特許第５，８５８，４１０号は、ジェット流原理を用いて、Ｔｗｅｅｎ ８０およびマンニトールなどの界面活性剤を用いて調製された、水、水性媒体および／または有機溶媒中に不溶性、難溶性もしくは中等度に可溶性の治療剤の粒子を含む薬物担体であって、このときこの治療剤が１，０００ｎｍ未満の平均径を有し、総集団中の粒子サイズ５μｍを超える粒子の比率が０．１％未満である薬物担体を開示している。詳細には、この特許は、２〜１５％の置換プテリジンおよび少なくとも０．１％のＴｗｅｅｎ ８０を含む水性ナノ懸濁液であって、このとき平均粒径が２００〜８００ｎｍの範囲内にある水性ナノ懸濁液について記載している。この特許は、低い（１％）薬物濃度を備える特別なテトラカイン組成物については、平均粒子サイズ９１ｎｍを備えるナノ懸濁液を入手できることも教示している。
【００１１】
米国特許第５，９２２，３５５号は、（例えば、超音波処理、均質化、粉末化、微細流動化および沈殿、または再結晶化および抗溶媒沈殿法によって）粒子サイズを低減させる前もしくは低減させる間に、懸濁液もしくは固体形にあるリン脂質および表面改質剤の濃度が０．１〜５０％の範囲内になるように、この粒子を（ａ）リン脂質、および（ｂ）少なくとも１種の界面活性剤と混合すること、およびその後にこの混合物へエネルギーを印加することによって非水溶性もしくは水難溶性化合物の微粒子を調製することを開示している。この特許は、詳細には薬物濃度が２〜５％である薬物調製物を開示しているが、このとき平均粒子サイズは３５〜９８ｎｍであり、この調製物を４℃で１週間以上保管した後に平均粒子サイズにおける実質的変動は生じない。
【００１２】
米国特許第６，２２１，４００号は、平均粒子サイズが４００ｎｍ未満であるＨＩＶプロテアーゼ阻害剤のナノ結晶性調製物を開示している。この特許は、詳細にはナノ粒子の平均サイズが１２７〜２６７ｎｍであるインジナビルのナノ粒子組成物を記載している。
【００１３】
ＰＣＴ国際特許出願第０２／０５５０５９号は、有機化合物のサブミクロンサイズの粒子を調製するための第１水混和性溶媒および第２水性溶媒の両方を含んでいる方法を開示している。これらの方法を用いると、平均粒径が１８０〜７００ｎｍの範囲内にある懸濁液調製物が得られる。
【００１４】
したがって、先行技術出版物に共通する特徴は、平均粒子サイズがナノメートル範囲内にある、好ましくは５００ｎｍ未満である薬物懸濁液を入手するのが極めて困難であることにある。これはおそらく、懸濁液中の薬物濃度が例えば５重量％未満のように低いことを前提にすると、極めて特殊な薬物でしか達成されなかった。
【００１５】
イトラコナゾールは水難溶性の、通常は結晶性の有効成分であるので、イトラコナゾールに対してはそのバイオアベイラビリティを向上させるための多数の試みが実施されてきた。例えば、米国特許第６，３４６，５３３号は、向上したバイオアベイラビリティを示し、０．５〜１０μｍの粒径を有する無定形にあるイトラコナゾールを入手するための方法を開示している。米国特許第６，４９７，９０５号は、モノステアリン酸グリセリン、モノグリセリド、ジグリセリド、トリグリセリド、もしくはワックスなどの通常は疎水性のビヒクルの固溶体として結晶性イトラコナゾールを無定形へ転換させることを開示している。この固溶体は、イトラコナゾールが乾量で約５〜６０％で存在する顆粒状粒子の成分として使用できる。顆粒状粒子の粒子サイズは規定されていない。
【００１６】
ＰＣＴ国際特許出願第２００４／０４３５８０号は、２種以上の不混和性液体を含むプレミックスを、このプレミックスを乳化するための条件下で１つ以上の磁場に通して流動させる、誘導する、もしくは循環させるステップを含む乳化方法であって、このプレミックスが好ましくは少なくとも１種の親水性液体および少なくとも１種の親油性液体を含む方法を開示している。この方法によって調製されたエマルジョンを獣医学組成物もしくは医薬組成物中に含めることはできるが、この文書自体は難溶性薬物の可溶化について言及していない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１７】
当技術分野においては、様々な治療薬群の多数の生物活性化合物に対して、これらの化合物の水溶性が余りに低いために、動物およびヒトにおけるバイオアベイラビリティを改善するための必要が高まっている。
【００１８】
本発明は、流体中に懸濁させた生物活性化合物の粒子の実質的部分は、その中に懸濁させた生物活性化合物を有するこの流体を１回以上にわたり１つ以上の磁場に通して流動させることによってサイズを有意に低減させることができるという予想外の発見に基づいている。本発明のまた別の発見は、この方法で処理される多数の生物活性化合物、特には難溶性薬物が、インビトロおよびインビボの両方において、動物およびヒトにおける向上したバイオアベイラビリティを示すことにある。
【００１９】
（定義）
本明細書で使用する用語「生物活性化合物」は、ヒト、動物もしくは植物の生体機能に作用する、もしくは影響を及ぼす化学物質であって、この化学物質が金属イオンおよび１つ以上の原子または例えばイオン結合および／またはイオン錯体の形態をとっている原子のグループを含んでいない限りにおける化学物質、好ましくは有機物質を意味する。
【００２０】
本明細書で使用する用語「粒子」は、たとえば、限定されないが生物活性化合物の結晶、および通常は約１ナノメーター（ｎｍ）〜約１０μｍ、好ましくは０．４５μｍ〜約５μｍの範囲内の平均サイズを有する集団の一部分であるなどの個別の個々の単位を意味する。０．４５μｍの最小平均粒子サイズは、Ｅ． Ｗｅｉｎｅｒ、Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２０００）， ｐａｇｅ ６７に説明されているように水中に存在する全懸濁固形分（ＴＳＳ）を濾過するために使用されるフィルターの公称孔径を意味する。
【００２１】
本明細書で使用する用語「凝集体」は、通常は約１０μｍ〜約１００μｍの範囲内の平均サイズを有する集団の一部である粒子の集合を意味する。
【００２２】
本明細書で使用する用語「ナノ粒子」は、約０．４５μｍ（４５０ｎｍ）未満、好まし
くは１ｎｍ〜約４５０ｎｍの範囲内の平均サイズを有する集団の一部である粒子を意味する。
【００２３】
本明細書で使用する用語「固体分散体」は、流体薬物−担体の組み合わせを固体状態へ転換させるステップによって形成された生成物を意味する。例えばＣｏｒｒｉｇａｎ， Ｄｒｕｇ Ｄｅｖ． Ｉｎｄ． Ｐｈａｒｍ． １１（１９８５）６９７−７２４を参照されたい。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２４】
第１の実施形態では、本発明は、流体中に懸濁させた生物活性化合物粒子もしくは凝集体の実質的部分の平均サイズを、その中に懸濁させた生物活性化合物粒子もしくは凝集体を有するこの流体を１つ以上の磁場に通して１回以上流動させることによって、少なくとも約２５％、好ましくは少なくとも約５０％、より好ましくは少なくとも約８０％低減させる方法および装置に関する。本発明は、流体中に懸濁させた生物活性化合物粒子もしくは凝集体の実質的部分の平均サイズを低減させるための装置であって、この装置が、流体中に懸濁させた生物活性化合物粒子もしくは凝集体源と、１つ以上の磁場を発生させるための手段と、およびその中に懸濁させた生物活性化合物粒子もしくは凝集体を有するこの流体を１つ以上の磁場に通して１回以上流動させるための手段と，を含む装置をさらに提供する。工程制御のために必要であれば、その中に懸濁させた生物活性化合物粒子もしくは凝集体を備える流体の濁度を測定するための手段をこの装置内に含むことができる。さらにまた別の工程制御のために必要であれば、流体中に懸濁させた生物活性化合物粒子もしくは凝集体の粒子サイズを測定するための手段をこの装置内に用意することもできる。
【００２５】
本発明の方法によると、粒子もしくは凝集体の平均サイズに本方法が及ぼす作用は、磁場の強さがより高い場合、および／またはこの磁場を通過する流動回数がより多い場合は、有意により重要であることが理解されなければならない。市販されている各磁石の強さは通常は約１０，０００ガウスに限定されるので、有効磁場を増加させるための手段は、（特には処理所要時間を限定するために）直列に配列された多数の磁場装置に通して懸濁液を流動させる、および／または同一磁場に通して懸濁液を数回再循環させることである。好ましくは、本発明の方法を実施するために使用されるこの磁場の各々の強さは、少なくとも約２，０００ガウスである。
【００２６】
本発明によって磁気処理されるべき粒子もしくは凝集体中に存在する生物活性化合物は、極めて広範囲の種から選択されてよい。一般に、医薬製剤、獣医学製剤または植物医薬製剤として使用される化合物は有機物質である。このため、好ましい実施形態では、本発明は有機生物活性化合物の磁気処理に関する。本発明の方法は、生物活性化合物、特別には低溶解度および／または低溶解速度を有する生物活性化合物を、それを必要とする動物もしくはヒトへ経口投与するために適合する薬物送達調製物の調製において特に有用である。典型的には、溶解限定性経口吸収を有する薬物は、生物薬剤分類系（Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ、以下、ＢＣＳと呼ぶ）においてクラスＩＩもしくはクラスＩＶ化合物であると分類されている。Ｐｈａｒｍ． Ｒｅｓ．（１９９５）１２：４１３−４２０におけるＧ． ＡｍｉｄｏｎらによるＢＣＳは、２つのクラスの難溶性薬物、すなわちクラスＩＩおよびクラスＩＶ、ならびに２つのクラスの高溶解性薬物、すなわちクラスＩおよびクラスＩＩＩを規定している。Ｍ． Ｍａｒｔｉｎｅｚら、Ａｐｐｌｙｉｎｇ ｔｈｅ Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ ｔｏ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ（Ｐａｒｔ Ｉ： Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ ａｎｄ Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ Ｃｏｎｓｉｄｅｒａｔｉｏｎ）， Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ（２００２）５４：８０５−８２４によると、薬物物質は最高用量強度が１〜７．５のｐＨ範囲にわたり多くと
も２５０ｍＬの水性媒体中で溶解性である場合は高度に可溶性であると分類すべきである。特に、本発明の方法を用いてこの化合物を調製することによってそのバイオアベイラビリティを向上させることのできる生物活性化合物には次のものが含まれる：アセチルサリチル酸、アンプレナビル、アニパミル、ベンタゾン、ベンゾカイン、ベンザフィブレート、ベキサロテン、ビペリデン、ブタゾリジン、カプトプリル、カルバマゼピン、クロラムフェニコール、クロファジミン、クロモグリク酸、クロトリマゾール、カフェイン、シクロスポリン、ジアゼパム、ジクロフェナク、ジゴキシン、ジリアゾン、ジルチアゼム、ジメトリダゾール、ジフェンヒドラミン、５，５−ジフェニルヒダントイン、ドロナビノール、デュタステライド、エトポシド、ステアリン酸エリスロマイシン、エスプロン、フェノフィブレート、フレカイニド、フロセミド、フルコナゾール、ガロパミル、グリベンクラミド、グリセオフルビン、ヒドロクロロチアジド、イブプロフェン、インドメタシン、（イソ）トレチノイン、イトラコナゾール、ケトコナゾール、ケトプロフェン、ロペラミド、ロピナビル、メルペロン、メタザクロル、ナリキシジン酸、ナフチドロフリル、ネキソパミル、ニフェジピン、ニモジピン、ニトレンジピン、ニトロフラントイン、オキシブチニン、パラセタモール、ペントキシフィリン、パロキセチン、プラゾシン、プロパフェノン、プロゲステロン、プソイドエフェドリン、ラニチジン、リボフラビン、リスペリドン、リトナビル、サキナビル、シロリムス、セレギリン、スルファメタジン、スルファメトキサゾール、スルファチアゾール、スピリノラクトン、タクロリムス、テオフィリン、トルブタミド、トリアムテレン、トリメトプリム、バルプロ酸およびゾテピン。本発明によって処理し得る薬物もしくは生物活性化合物は、好ましくは約２．５ｍｇ／ｍＬ未満、０．１〜１ｍｇ／ｍＬ（すなわち、米国薬局方に規定されているように「極めて溶けにくい」）と同等の、さらに０．１ｍｇ／ｍＬ（すなわち、米国薬局方において規定されているように「ほとんど溶けない」）未満と同等の、さらにいっそう約５μｇ／ｍＬ未満と同等のの水溶性を有していてよく、さらに室温および生理的ｐＨで約０．２μｇ／ｍＬと同等という低い水溶性を有していてよい。そのような薬物の非限定的例には、例えば、クロロチアジド、ヒドロクロロチアジド、ニモジピン、フルフェナム酸、フロセミド、メフェナム酸、ベンドロフルメチアジド、ベンズチアジド、エタクリン酸、ニトレンジピン、イトラコナゾール、サペルコナゾール、トログリタゾン、プラゾシン、アトバコン、ダナゾール、グリベンクラミド、グリセオフルビン、ケトコナゾール、カルバマゼピン、スルファジアジン、フロルフェニコール、アセトヘキサミド、アジャマリン、ベンズブロマロン、安息香酸ベンジル、ベタメタゾン、クロラムフェニコール、クロルプロパミド、クロルサリドン、クロフィブレート、ジアゼパム、ジクマロール、ジギトキシン、エトトイン、グルテチミド、ヒドロコルチゾン、ヒドロフルメチアジド、ヒドロキニン、インドメタシン、イブプロフェン、ケトプロフェン、ナプロキセン、ケリン、ニトラゼパム、ニトロフラントイン、ノバルギン、オキサゼパム、パパベリン、フェニルブタゾン、フェニントイン、プレドニゾロン、プレドニゾン、レセルピン、スピロノラクトン、スルファベンズアミド、スルファジメトキシン、スルファメラジン、スルファメタジン、スルファメトキシピリダジン、スクシニルスルファチアゾール、スルファメチゾール、スルファメトキサゾール（トリメトプリムとの混合物中でも）、スルファフェナゾール、スルファチアゾール、スルフィソキサゾール、スルピリド、テストステロンおよびジアミノピリミジン類が含まれる。ジアミノピリミジン類の適切な例には、制限なく、２，４−ジアミノ−５−（３，４，５−トリメトキシベンジル）ピリミジン（トリメトプリムとして知られる）、２，４−ジアミノ−５−（３，４−ジメトキシベンジル）ピリミジン（ジアベリジンとして知られる）、２，４−ジアミノ−５−（３，４，６−トリメトキシベンジル）ピリミジン、２，４−ジアミノ−５−（２−メチル−４，５−ジメトキシベンジル）ピリミジン（オルメトプリムとして知られる）、２，４−ジアミノ−５−（３，４−ジメトキシ−５−ブロモベンジル）ピリミジン、および２，４−ジアミノ−５−（４−クロロ−フェニル）−６−エチルピリミジン（ピリメタミンとして知られる）が含まれる。当業者には理解されるように、これらの薬物は、利尿薬、降圧薬、抗ウイルス薬、抗菌薬、抗真菌薬などの様々な治療薬クラスに属しており、ヒトまたは獣医学的使用のみには限定されない。生物活性
化合物は、さらにまた化粧品、診断薬、除草剤、殺虫剤、殺生物剤もしくは殺菌剤であってもよい。特により近年に開発された薬物、タンパク質およびペプチドは重要な部分を表している。これらの化合物は、インビボにおける迅速な薬物代謝および不都合な薬物動態とともに、難透過性、難溶性であり、生理的流体中で不安定であることが多い。このため、本発明の方法は、タンパク質およびペプチド薬を投与するための送達形を調製するために有用であることも実証することができる。
【００２７】
本発明の方法が（上記に定義したような）生物活性化合物凝集体上で実施される場合は、この生物活性化合物凝集体の実質的部分の平均サイズは、約０．４５μｍ〜５μｍの範囲内へ低減させることができる、および／または低減したサイズを備える凝集体のこの実質的部分は、懸濁させた凝集体の少なくとも約５０重量％である。本発明の方法が（上記に定義したような）生物活性化合物粒子上で実施される場合は、この生物活性化合物粒子の平均粒子サイズは約０．５ｎｍ〜約５００ｎｍ、好ましくは１〜３００ｎｍ、より好ましくは５〜２００ｎｍ、最も好ましくは５〜１００ｎｍの範囲へ低減させることができる、および／または低減したサイズを備える粒子のこの実質的部分は、懸濁させた粒子の少なくとも約１０重量％、好ましくは少なくとも２０重量％である。当業者は、生物活性化合物粒子もしくは凝集体のサイズが低減させる程度は、磁場の強さおよびそのような粒子もしくは凝集体を含む懸濁液の処理時間にだけではなく、例えば限定されないが生物活性化合物の性質（特には、イオン結合の性質および双極子強度）、生物活性化合物粒子もしくは凝集体が懸濁させられている流体の流量、この流体中のそのような粒子もしくは凝集体の濃度、処理中の物理的および化学的条件（ｐＨを含む）、粒子の結晶形もしくは幾何学的形状、この粒子もしくは凝集体中、またはこの粒子もしくは凝集体と一緒の任意の他の成分の存在などにも依存する。以下ではすべてのそのようなパラメータをさらに詳細に考察するが、当業者であれば下記の教示を読むことで不要な実験的負担を伴わずに目標を達成するために、各パラメータおよびパラメータの所定の組み合わせに所定の変更を加えられることは理解されるであろう。
【００２８】
好ましくは、生物活性化合物粒子もしくは凝集体が懸濁される流体は、本発明の磁気処理中に優勢である温度および圧力条件下では液体である。より好ましくは、この流体は水であるが、この流体はまた、例えばアルコール、エステル、エーテル、ケトン、アミド、もしくはそれらの混合物、または１種以上のそのような有機溶媒と水との組み合わせからなる群から選択される有機溶媒であってよい。当該の特定流体の選択について特別な制限はなく、これは関係する生物活性化合物粒子もしくは凝集体のサイズを有意に低減させる必要がある用途において優勢である通常の条件に適応させることができる。重要であるのは、この生物活性化合物粒子もしくは凝集体がこの流体中に実質的に懸濁されるのであって溶解されるのではないこと、すなわち好ましくはスラリーの形状で懸濁されることであるが、このときこの流体中のこの生物活性化合物粒子もしくは凝集体の濃度は、このスラリーを磁場に通して流動させる間に優勢である物理的（温度、圧力）および化学的（ｐＨ）条件下でこの流体中のこの生物活性化合物の溶解限度の少なくとも１．０５倍、好ましくは少なくとも２倍である。所定の流体中の所定の生物活性化合物の溶解限度は、文献において容易に入手できる、または当技術分野において周知の技術を使用することによって当業者によって容易に決定することのできるパラメータである。溶解限度は温度およびｐＨに重度に依存する可能性があることは周知であるので、このためまず最初に、文献が特定の温度およびｐＨ条件についての値について何も記載していない場合は注意深く決定しなければならない。明らかな実際的な理由から、流体中の生物活性化合物粒子もしくは凝集体の上方濃度は、流体が液体である場合は、この流体を１つ以上の磁場に通して有効線形流量で流動させるための必要性によって決定される、すなわち流体懸濁液の粘度によって決定される。
【００２９】
所定の特別な用途のためには、その中に生物活性化合物粒子もしくは凝集体が懸濁され
る流体は、ガスもしくは超臨界流体（例、二酸化炭素）であってもよい。このガスもしくは臨界流体の性質は、この生物活性化合物の化学組成および反応性に広範に依存する可能性がある。
【００３０】
流体が何であろうと、この流体を１つ以上の磁場に通して流動させるステップは、好ましくはこの１つ以上の磁場を生成させるために使用された磁場材料のキュリー温度の半分未満の温度で、例えばＡｌ−Ｎｉ−Ｃｏ型の磁気機器に対しては約４００℃未満で実行される（当業者には周知のように、キュリー温度は合金の正確な組成に左右される）。その中に生物活性化合物粒子もしくは凝集体が懸濁される流体が液体である場合は、この液体をこの１つ以上の磁場に通して流動させるステップは、好ましくはこの流体をこの１つ以上の磁場に通して流動させる間に優勢である圧力下でこの流体の凝固点と沸点との間の温度で実施される。例えば、この流体が周囲圧力下で水である場合は、この液体をこの１つ以上の磁場に通して流動させるステップは、好ましくは約２℃〜９５℃の温度で実施される。
【００３１】
本発明のサイズ低減処理を受けた生物活性化合物粒子は、例えば球形粒子、プリズム状粒子、ならびに立方晶形、正方晶形、六方晶形および八面形構造を含むがそれらに限定されないあらゆる幾何学的形状もしくは結晶形であってもよい。
【００３２】
所定の用途にとっては、本発明の方法を、その中に生物活性化合物粒子もしくは凝集体が懸濁される液体がサイズ低減された粒子もしくは凝集体の再凝集体形成もしくは再凝集を防止するための１種以上の安定剤を含んでいるような方法で実施するのが有益なことがある。そのような安定剤は、界面活性剤、ポリマー、親水性物質、ケイ酸塩またはそれらの組み合わせのいずれかであってよい。少なくとも微量のこの安定剤は最終医学的もしくは獣医学的送達形で存在したままである可能性はあるため、安定剤は、好ましくは医薬上許容される賦形剤であるべきである。このために適合する親水性物質は、特にグルコース、フルクトース、ラクトース、ソルビトール、キシリトール、マンニトールおよびデンプンなどの非限定的な化合物リストから選択することができる。この目的に適合するポリマーは、セルロース誘導体（例、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムもしくはカルシウム、ヒドロキシエチルセルロース、微結晶性セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、酢酸フタル酸セルロース）、アルブミン、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、ポリメタクリレート、ポリアクリル酸、ポリアクリレート、シクロデキストリンおよびその誘導体、トラガカント、アカシアガム、ゼラチン、ペクチン、グアールガム、キサンタンガム、ポリビニルピロリドン、ポリビニルピロリドン−コ−ビニルアセテート、ポリエチレングリコール、酸化エチレンと酸化プロピレンのコポリマー、ポリビニルアルコールなどの非限定的リストから選択することができる。適切な界面活性剤は、セトステアリルアルコール、セチルアルコール、セトリミド、ドキュセートナトリウム、モノグリセリド、ジグリセリド、レシチン、タウロコール酸塩、ポリオキシエチレナルキルエーテル、ポリオキシエチレンヒマシ油誘導体、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンステアレート、ラウリル硫酸ナトリウム、ソルビタン脂肪酸エステル、ステアリルアルコールなど、およびそれらの混合物からなる群から選択することができる。
【００３３】
好ましくは、本発明による方法は、その中に生物活性化合物粒子もしくは凝集体が懸濁された流体を１つ以上の磁場に通して（例えば、閉鎖回路内で）２回以上再循環させるステップを含んでいる。再循環回数は、所定の用途に含まれる特定生物活性化合物を標的とする特定平均サイズへ容易に適合させることができる。その中に生物活性化合物粒子もしくは凝集体が懸濁される流体が、磁場処理が有意な程度までのサイズ低減を効果的に実施するのを可能にする速度で１つ以上の磁場に通して流動もしくは循環させることが重要で
ある。好ましくは、各この磁場を通るこの流体の線形流量は約０．２５〜２５ｍ／秒である。磁場の長さを考慮に入れると、各この磁場を通過するこの流体の滞留時間は、回数もしくは再循環時間に依存して、約６０マイクロ秒間〜１０秒間であると計算することができる。
【００３４】
本発明の磁場処理の通常の結果としてこの生物活性化合物粒子の懸濁液の濁度は変化する。サイズ低減およびそのようなサイズ低減が発生する程度によってより影響される粒子もしくは凝集体の集団に依存して（大きいサイズであるか中等度のサイズであるか）、当技術分野において周知の濁度計によって推定もしくは測定できるように、濁度は低減もしくは増加させることができる。このため濁度は、本発明の以下の他の実施形態に記載するように、結果として生じた粒子懸濁液を特性付けるための追加の特性として使用できる。
【００３５】
また別の実施形態では、本発明は、さらに生物活性化合物粒子もしくは凝集体の使用を含み、この生物活性化合物粒子もしくは凝集体の実質的部分の平均サイズを少なくとも２５％、好ましくは少なくとも５０％、より好ましくは少なくとも８０％減少させるステップを含み、このときこのステップが本発明の第１の実施形態に関して記載した方法を含む工程を提供する。そのような工程は、サイズ低減ステップ後に実施される１つ以上の後処理ステップをさらに含んでいてよい。
【００３６】
この後処理ステップは、加熱ステップであってよい。また別の実施例では、この後処理ステップは、その中に生物活性化合物粒子もしくは凝集体が粒径減少ステップ中に懸濁させられている流体を実質的に除去するための乾燥させるステップであってよい。いずれかの知られている乾燥技術によって実施できるそのような乾燥ステップは、この工程のその後のステップへ乾燥させたより小さな粒子を提供するために必要になることがある。好ましい実施形態では、この工程は凍結乾燥ステップを含んでいる。第３実施形態のこの変形の特定実施例は、（ｉ）生物活性化合物の粒子および／または凝集体および１種以上の安定剤を含む懸濁液を調製するステップと、（ｉｉ）この懸濁液を１つ以上の磁場に通して流動させるステップと、（ｉｉｉ）この混合物を即時に凍結するステップと、および（ｉｖ）固体分散体を入手するためにこの調製物を凍結乾燥するステップと、を含む生物活性化合物の固体分散体を調製するための工程である。また別の好ましい実施形態では、この工程は噴霧乾燥ステップを含んでいる。第３実施形態のこの変形の特定実施例は、（ｉ）生物活性化合物の粒子および／または凝集体および１種以上の安定剤を含む懸濁液を調製するステップと、（ｉｉ）この懸濁液を１つ以上の磁場に通して流動させるステップと、（ｉｉｉ）固体分散体を入手するためにこの調製物を噴霧乾燥させるステップと、を含む生物活性化合物の固体分散体を調製するための工程である。あるいは、磁気処理後には、懸濁液を医薬ペレット剤（例えば、不活性糖スフェア）上でスプレーコーティングすることができ、これらのコーティングされたペレット剤はその後にカプセル剤または錠剤などの他の固形製剤に調製することができる。
【００３７】
本発明のこの実施形態のまた別の変形では、後処理ステップは、１種以上のアジュバントもしくは添加物を低減したサイズを備える任意で乾燥させた粒子もしくは凝集体と一緒に混合するステップであってよい。そのような種類のアジュバントもしくは添加物を混合するステップは、ボールミリング法または当業者には周知の他の混合技術によって実施されてよい。
【００３８】
本発明のこの実施形態のさらにまた別の変形では、後処理ステップはこの懸濁液内への流体の添加を通して低減したサイズを備える生物活性化合物粒子もしくは凝集体の懸濁液を希釈するステップであってよい。例えば、この希釈するステップにおいて使用される流体は、サイズ低減ステップにおいて存在する流体と混和性（例えば同一）であってよい。
【００３９】
品質管理のために、本発明のこの実施形態の工程は、磁気処理法中もしくは磁気処理法後に生成される生物活性化合物粒子もしくは凝集体のサイズを調節する１つ以上のステップ、すなわち本発明の第１の実施形態を構成する方法をさらに含んでいてよい。含まれる粒子サイズの大きさのオーダーを考慮に入れると、このサイズを調節するステップは、好ましくは動的光散乱分析法によって実施される。この工程がサイズ低減ステップの後に実施される後処理ステップを含む場合は、それはこの後処理ステップ中もしくは後に生成される生物活性化合物粒子もしくは凝集体のサイズを調節する１つ以上のステップをさらに含んでいてよいが、この場合には、この後処理ステップ後のこのサイズを調節するステップは動的光散乱分析法によって実施されてよい。このサイズを調節するステップは、この工程の様々なステップ中に生成される粒子の平均サイズおよび／またはサイズ分布を測定できるような方法で実施されてよい。本発明の第３実施形態のまた別の変形では、後処理ステップは超超音波処理ステップであってよい。
【００４０】
品質管理のためには、本発明のこの実施形態による工程は、この工程に含まれる生物活性化合物粒子もしくは凝集体の懸濁液の濁度を調節する１つ以上のステップをさらにまた含んでいてよい。この濁度を調節するステップは、適切には当業者であれば入手できるあらゆるタイプもしくは濁度計によって実施することができる。
【００４１】
本発明はさらに、約１ｎｍ〜約４０ｎｍ、好ましくは約２ｎｍ〜約２０ｎｍ、より好ましくは約３ｎｍ〜約１５ｎｍの平均粒子サイズを備える、および／または狭い粒子サイズ分布（例えば、約１．１〜約４．０、好ましくは約１．２〜約３．０、より好ましくは約１．３〜約２．０の多分散性）を備えるたとえば上述したような所定の生物活性化合物の集団に関する。つまりそのように小さい粒子サイズおよび／または狭い粒子サイズ分布で製造することが決して可能ではなかった生物活性化合物に関する。そのような生物活性化合物粒子集団は、この磁気処理後に、超遠心分離、限外濾過もしくは例えば透過性膜を用いるナノ濾過などの当技術分野において周知の技術による分離ステップを実施することによって本発明の磁気処理から入手できる粒子から単離することができる。
【００４２】
生物活性化合物は、それ自体として、またはさらに例えば乳化剤もしくは界面活性剤、増粘剤、ゲル化剤もしくはその他の添加物などの１種以上の生理学的（例、医学的）に許容される賦形剤をさらに含むこの生物活性成分（例、薬物）の調製物として処理することができるが、このとき有効成分（例、薬物）の装填量、すなわち調製物中の有効成分（例、薬物）の比率もしくは含量は、広範囲にわたり変動してよい。例えば、この有効成分含量は、少なくとも約０．１重量％、好ましくは少なくとも１重量％、より好ましくは少なくとも５重量％であってよい。さらに、この有効成分含量は、多くとも約９９重量％、好ましくは多くとも９５重量％、より好ましくは多くとも５０重量％であってよい。
【００４３】
治療的に有効な調製物もしくは洗剤組成物にとって適合する乳化剤もしくは界面活性剤には、水溶性天然石鹸および水溶性合成界面活性剤が含まれる。適切な石鹸には、高級、好ましくは飽和の、脂肪酸（Ｃ１０−Ｃ２２）の、またはココヤシ油、パーム油もしくは獣脂油から入手できる天然脂肪酸混合物の、アルカリもしくはアルカリ土類金属塩、未置換もしくは置換アンモニウム塩、例えばオレイン酸もしくはステアリン酸のナトリウムもしくはカリウム塩が含まれる。合成界面活性剤には、アニオン性、カチオン性および非イオン性界面活性剤、例えばポリアクリル酸のナトリウムもしくはカルシウム塩；好ましくは８〜２２個の炭素原子を含有するスルホン化ベンズイミダゾール誘導体；アルキルアリールスルホネート；および通常はアルカリもしくはアルカリ土類金属塩、未置換アンモニウム塩または８〜２２個の炭素原子を有するアルキルもしくはアシルラジカルで置換されたアンモニウム塩の形態である、脂肪スルホン酸塩もしくは硫酸塩、例えば、リグノスルホン酸もしくはドデシルスルホン酸のナトリウムもしくはカルシウム塩または天然脂肪酸、脂肪アルコール／酸化エチレン付加物の硫酸もしくはスルホン酸エステル（ラウリル硫
酸ナトリウムなど）のアルカリもしくはアルカリ土類金属塩から入手された脂肪アルコール硫酸塩の混合物が含まれる。アルキルアリールスルホネートの例は、ドデシルベンゼンスルホン酸もしくはジブチル−ナフタレンスルホン酸またはナフタレンースルホン酸／ホルムアルデヒド縮合生成物のナトリウム、カルシウム、もしくはアルカノールアミン塩である。同様に適合するのはこれに対応するリン酸塩であり、例えばリン酸エステルの塩およびｐ−ノニルフェノールの酸化エチレンおよび／または酸化プロピレンとの付加物などである。
【００４４】
適切な乳化剤には、さらに脂肪酸（例、ラウリン酸、パルミチン酸、ステアリン酸もしくはオレイン酸）の部分エステルまたは市販されているポリソルベートなどのソルビトール由来のヘキシトール無水物（例、ヘキシタンおよびヘキシド）が含まれる。使用できるその他の乳化剤には、商標名ＴｗｅｅｎとしてＩＣＩ Ａｍｅｒｉｃａｓ社から市販されている界面活性剤；および商標名ＰｌｕｒｏｎｉｃとしてＢＡＳＦ社によって市販されているポリ（オキシエチレン）／ポリ（オキシプロピレン）材料などの、上記の部分エステルの非エステル化ヒドロキシル基を備えるポリオキシエチレン鎖の付加物（１〜４０モルの酸化エチレン）が含まれるが、それらに限定されない。
【００４５】
本発明の生物活性調製物のための適切な構造形成剤、増粘剤もしくはゲル形成剤には、商標名Ａｅｒｏｓｉｌとして市販されている生成物などの高分散性ケイ酸塩；ベントナイト；モンモリロナイトのテトラアルキルアンモニウム塩（例、商標名Ｂｅｎｔｏｎｅとして市販されている生成物）、このとき各アルキル基は１〜２０個の炭素原子を含有していてよい；セトステアリルアルコールおよび改質ひまし油生成物（例、商標名Ａｎｔｉｓｅｔｔｌｅとして市販されている生成物）が含まれる。
【００４６】
本発明の生物活性成分調製物に含めることのできるゲル化剤には、カルボキシメチルセルロース、酢酸セルロースなどのセルロース誘導体；アラビアガム、キサンタンガム、トラガカントガム、グアールガムなどの天然ガム；ゼラチン；二酸化ケイ素；カルボマーなどの合成ポリマー、およびそれらの混合物が含まれるが、それらに限定されない。ゼラチンおよび改質セルロースは、好ましいクラスのゲル化剤を表している。
【００４７】
親水性セルロース誘導体は、本発明による治療上有効な成分の調製物のための医薬上許容される賦形剤としても同様に使用できる。本明細書で使用する用語「親水性」は、生理的に重要なｐＨで、水素結合、特に水分子と結合することのできる１つ以上の基、好ましくは非イオン化基を有するセルロース誘導体もしくはポリマーを意味する。本発明において使用できる親水性セルロースポリマーの適切な例には、エーテル結合置換基を有するポリマー、例えばヒドロキシプロピルメチルセルロースなどのヒドロキシ−アルキルアルキルセルロース（このとき、アルキル基は、好ましくは１〜４個の炭素原子を有する）が含まれる。ヒドロキシプロピルメチルセルロースは、セルロース２−ヒドロキシプロピルメチルエーテル（以下、、ＨＰＭＣと呼ぶ）である。これは、温水中には不溶性であるが、冷水中には緩徐に溶解するメチルセルロースの非イオン性水溶性エーテルである。医薬錠剤賦形剤として広範囲に使用されているＨＰＭＣは、様々な商標名を付けて市販されている。適切な等級のＨＰＭＣには、Ｄｏｗ Ｃｈｅｍｉｃａｌ社からのＭｅｔｈｏｃｅｌ Ｋ１００などの低粘性等級、Ｍｅｔｈｏｃｅｌ Ｋ１００Ｍなどの高粘性等級、およびＳｈｉｎｅｔｓｕ社からのＭｅｔｏｌｏｓｅ ９０ＳＨシリーズなどの他のタイプが含まれる。
【００４８】
両親媒性物質は、本発明による治療上有効な成分の調製物のための医薬上許容される賦形剤としても同様に使用できる。本明細書で使用する用語「両親媒性」は、例えば脂肪族もしくは芳香族炭化水素基を含む疎水性部分、および親水性部分を有する物質を意味する。そのような両親媒性物質の適切な例には、グリセリド由来の部分とポリエチレングリコ
ールエステル由来の部分の両方を有する物質が含まれる。例えば、本発明における両親媒性物質賦形剤としてポリグリコシル化グリセリドを使用することが適合する。本明細書で使用する表現「ポリグリコシル化グリセリド」は、モノ−、ジ−およびトリグリセリドと好ましくは約２００〜約６００の分子量を備えるＣ８−Ｃ１８脂肪酸のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）モノエステルおよびジエステルとの混合物を意味しており、任意でさらにグリセロールおよび／または遊離ＰＥＧを含む。ここで、ＰＥＧの親水性−親油性バランス（ＨＬＢ）価はＰＥＧの鎖長によって調節され、ＰＥＧの融点は脂肪酸の鎖長、ＰＥＧの鎖長および脂肪酸、したがって出発油の飽和度によって調節される。同様に、本明細書で使用する表現「Ｃ８−Ｃ１８脂肪酸」は、様々な比率のこれらの酸が飽和している場合はカプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸およびステアリン酸およびこれらの対応する不飽和酸の混合物を意味する。当業者には既知のように、これらの脂肪酸の比率は、出発油の関数として変動する可能性がある。後者の例には、商標名ＬａｂｒａｓｏｌとしてＧａｔｔｅｆｏｓｓｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎによって販売されているＰＥＧ−８カプリル酸塩−カプリン酸グリセリドエステルなどの飽和ポリグリコール化Ｃ８−Ｃ１０グリセリド；商標名Ｓｏｆｔｉｇｅｎ ７６７としてＨｕｌｓ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔによって販売されているＰＥＧ−６カプリル酸／カプリン酸グリセリド；商標名Ｃｒｏｖｏｌ Ｍ−７０としてＣｒｏｄａ社によって販売されているＰＥＧ−６０コーングリセリド；商標名Ｅｕｍｕｌｇｉｎ Ｂ２としてＨｅｎｋｅｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ社によって販売されているＣｅｔｅａｒｅｔｈ−２０；商標名ＴｒａｎｓｃｕｔｏｌとしてＧａｔｔｅｆｏｓｓｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎによって販売されているジエチレングリコールモノエチルエーテル；たとえば商標名Ｇｅｌｕｃｉｒｅ ４８／０９、Ｇｅｌｕｃｉｒｅ ４４／１４およびＧｅｌｕｃｉｒｅ ４２／１２としてＧａｔｔｅｆｏｓｓｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ社によって販売されているような約４２〜４８℃の範囲内の融点および約８〜１６の範囲内のＨＬＢを有するＣ８−Ｃ１８飽和ポリグリコシル化グリセリドの混合物；および様々な比率にあるそれらの混合物が含まれるが、それらに限定されない。
【００４９】
本発明による生物活性成分調製物中に存在していてよい他の任意の賦形剤には、酸化マグネシウム；アゾ染料；有機顔料および二酸化チタンなどの無機顔料；ＵＶ吸収剤；安定剤；臭気マスキング剤；増粘剤；例えばアスコルビン酸パルミテート、重亜硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウムなどの酸化防止剤、およびそれらの混合物；例えば、ソルビン酸カリウム、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸、没食子酸プロピル、ベンジルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベンなどの保存料；エチレンジアミン四酢酸などの金属イオン遮蔽剤；天然バニリンなどのフレーバー剤；クエン酸もしくは酢酸などの緩衝剤；ケイ酸塩、珪藻土、酸化マグネシウムもしくは酸化アルミニウムなどの増量剤もしくは充填剤；マグネシウム塩などの緻密化剤；およびそれらの混合物などの添加物が含まれる。
【００５０】
生物活性調製物が発泡性顆粒を作製することを企図している場合は、それは二酸化炭素遊離促進物質として作用する重炭酸ナトリウムおよびクエン酸もしくは酒石酸などの１種以上の弱酸を含んでいなければならない。そのような発泡性顆粒は、例えば義歯を洗浄するための発泡錠のために作製することができる。
【００５１】
本発明の生物活性調製物中の最適な賦形剤およびそれらの比率は、当業者に周知の方法で、例えば限定されないが、調製される特定生物活性成分、エンドユーザーの必要条件、生物活性成分の装填量（すなわち、重量比率）および必要な生物活性成分（例、薬物）遊離特性（特に、動態）に依存する。
【００５２】
本発明は、先行技術の方法に比して多数の長所を示す。第１に、このサイズ低減は、いずれかのタイプの安価で容易に入手できる磁気装置によって達成されるが、これは標的と
するサイズ低減の程度を微調整するための多数の方法と結び付けることができる。第２に、これは極めて多数の生物活性化合物、特に双極子を含む生物活性化合物の粒子および凝集体の実質的なサイズ低減を達成する。
【００５３】
以下の実施例は、例示する目的でのみ提供するものであり、決して本発明の範囲を限定するものであると解釈すべきではない。
【実施例１】
【００５４】
４８ｍｇのＴｗｅｅｎ ８０（英国ロンドンに所在するＩｍｐｅｒｉａｌ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ ｐｌｃ社から市販されている）を２０ｍＬの二重蒸留水と混合し、マグネチックバースターラーを用いて１００ｒｐｍで数分間攪拌した。Ｔｗｅｅｎミセルは、ＡＬＶ社（ドイツ国）から市販されているＨｅ−Ｎｅ高性能粒度分析装置（２．５ｍＷ）を用いて動的光散乱法（以下、ＤＬＳと呼ぶ）によって粒度を分析した。図１は、Ｔｗｅｅｎ ８０が水中で約１０ｎｍの平均粒径を備えるミセルへと組織化することを示している。
【実施例２】
【００５５】
５０ｍｇのジアゼパム（ベルギー国のＺｗｅｖｅｇｅｍに所在するＡｌｐｈａ Ｐｈａｒｍａ ＮＶ社から市販されている）および４８ｍｇのＴｗｅｅｎ ８０（実施例１に記載したものと同一）を乳鉢内で粉砕した。１５０ｍＬの二重蒸留水を添加し、この懸濁液を２０分間にわたり超音波処理した。超音波処理後、この懸濁液をその後に使用するまで６００ｒｐｍに設定したマグネチックスターラーを用いて持続的に攪拌した。
【００５６】
磁気処理は、総容量が１００ｍＬであり、（１）チュービング（米国イリノイ州に所在するＣｏｌｅ−Ｐａｒｍｅｒ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ Ｃｏｍｐａｎｙ社製のＭａｓｔｅｒｆｌｅｘ Ｔｙｇｏｎ ｌａｂ ｌ／Ｐ ７０）、（２）Ａｌ−Ｎｉ−Ｃｏタイプの内部磁石（ベルギーのＢｏｒｇｅｒｈｏｕｔに所在するＣＥＰＩ−ＣＯ社製のＷ， ＳＡＮ
Ｒ１／４Ｄ）、（３）三方向水平ボール弁（スイス国Ｓｃｈａｆｆｈａｕｓｅｎに所在するＧｅｏｒｇ Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｒｏｈｒｌｅｉｔｕｎｇｓｓｙｓｔｅｍｅ ＡＧ製の３４３ ＤＮ１０／１５型）、および（４）ポンプ（米国イリノイ州に所在するＣｏｌｅ−Ｐａｒｍｅｒ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ Ｃｏｍｐａｎｙ製のＭａｓｔｅｒｆｌｅｘＩ／Ｐ）から構成される図２に示した閉鎖システム内で実施した。ポンプは、１１ｍ／秒の磁場通過速度に等しい４．７Ｌ／分の流量および装置の通過１回に付き１３６μｓの磁場滞留時間で作動させた。一部のジアゼパム懸濁液を閉鎖システム内に導入し、磁場に通して再循環させた。
【００５７】
磁場に通しての各々１，４１０および２，８２０回の再循環（通過）に相当する３０および６０分間の処理後に、サンプルを採取した。サンプル採取の直後に、ＤＬＳ測定を実施した。これらのサンプルを粒度分析装置内に配置する前に振とうした。図３は、磁気処理の前後のジアゼパム分散剤の粒子サイズ分布を比較している。図３は、両方の磁気処理サンプルが有意な量の１μｍより小さい粒子を有しており、主要集団が約１１〜１３ｎｍの範囲と約２００〜２５０ｎｍ範囲に中央を有することを示している。未処理参照サンプルは、１μｍ未満粒子は極めて少数しか含有しておらず、主要集団の発生は２．５μｍで見られ得る。約１０ｎｍのサイズを備える粒子は、（実施例１の教示に基づくと）Ｔｗｅｅｎミセルの存在と高度に関連していると思われる。
【００５８】
３，７６０回の再循環（通過）に対応する８０分間の処理後に、第３サンプルを採取した。このサンプルを、１μｍの孔径を有するポリスルホン膜（英国のメードストーンに所在するＷｈａｔｍａｎ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＬＴＤから市販されている）を備えるＰｕｒａｄｉｓｃ ２５ ＡＳディスポーザブルフィルタに通して濾過した。その後
、結果として生じた濾液についてＤＬＳ測定を実施し、図４において未処理分散体の濾液と粒子サイズ分布を比較した。磁気処理懸濁液の粒子サイズ分布は、濾過を実施した場合（図４）および濾過を実施していない場合（図３）と類似であった。未処理懸濁液の濾液は、Ｔｗｅｅｎミセル（ピークは１１ｎｍ）および２００ｎｍのジアゼパム粒子を含有している（図４）。これらの観察は、それらの存在が１μｍより大きな粒子が富裕であることによって遮蔽されたために、未濾過、未処理懸濁液を分析したときには明らかにならなかった（図３）。そこで、未処理分散体中のマイクロメーターサイズの粒子は、本発明の磁気処理によってナノメーターサイズの粒子に破砕されたと結論することができる。
【実施例３】
【００５９】
２ｇ／Ｌのジアゼパム（ベルギー国のＺｗｅｖｅｇｅｍに所在するＡｌｐｈａ Ｐｈａｒｍａ ＮＶ社から市販されている）および２ｇ／ＬのＴｗｅｅｎ ８０（実施例１に記載したものと同一）を乳鉢内で二重蒸留水と混合した。結果として生じた懸濁液をビーカーに注ぎ入れ、２０分間にわたり超音波処理し、その後に使用するまでマグネチックスターラーを使用して６００ｒｐｍで持続的に攪拌し続けた。
【００６０】
この懸濁液の一部を、実施例２で使用したものに類似するが、総用量が１５０ｍＬである閉鎖システム（図２Ａ）内で磁気処理にかけた。磁場を通しての２，８２０回の再循環に相当する４．７Ｌ／分での処理の９０分後に、濾過するために磁気処理サンプルを収集した。この懸濁液の第２部分は、内蔵磁気装置を備えていない１５０ｍＬの閉鎖システム（図２Ｂ）内で処理した。磁場を通しての２，８２０回の再循環に相当する４．７Ｌ／分での処理の９０分後に、濾過するために空再循環サンプルを収集した。最初の懸濁液の第３の部分は、１時間にわたり６００ｒｐｍでマグネチックスターラーを使用して持続的に攪拌した（未処理参照サンプル）。
【００６１】
ポリテトラフルオロエチレン（以下、ＰＴＦＥと呼ぶ）を備え、孔径が０．４５μｍであるＰｒｏＦｉｌｌシリンジフィルタ（米国イリノイ州に所在するＡｌｌｔｅｃｈ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ Ｉｎｃ．から市販されている）を二重蒸留水で洗浄し、７０℃で１２時間かけて乾燥させた。ＰＴＦＥを備えて孔径が０．２μｍであるＰｒｏＦｉｌｌシリンジフィルタ（米国イリノイ州に所在するＡｌｌｔｅｃｈ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ Ｉｎｃ．から市販されている）は洗浄も乾燥もしなかった。４０ｍＬの懸濁液を濾過し、濾液をペトリ皿へ注ぎ入れ、フィルタとペトリ皿の両方を７０℃で４８時間にわたり乾燥させた。この実験は、両方のタイプのフィルタを使用して、磁気処理、空再循環および未処理の懸濁液を用いて実施した。乾燥させた後、ペトリ皿中およびフィルタ上に存在する固形物質の量を各実験について定量した。以下の表１は、総乾質量の百分率としてのフィルタによって保持された物質の量を表している。
【００６２】
【表１】
【００６３】
濾過中に界面活性剤（Ｔｗｅｅｎ ８０）が全く保持されなかったと想定すると、ほぼ全部のジアゼパム（９４〜９６％）は、未処理参照サンプル中には４５０ｎｍおよび２００ｎｍ両方のフィルタによって保持されると結論することができる。空再循環サンプル中では、ジアゼパムの３２％は４５０ｎｍより大きく、４２％は２００ｎｍより大きい。他方磁気処理サンプル中では、４５０ｎｍより大きいジアゼパムは１０％に過ぎず、２００ｎｍより大きいのは１６％である。これは、粒子の寸法に磁気処理が及ぼす有益な作用を例示している。空再循環サンプル中には未処理サンプル中に比較してフィルタ上により少ないジアゼパムが保持されていたという事実は、上昇した溶解度（例、ポンプによって生成された熱に起因するために）、閉鎖システムと接触している粒子の摩耗などを含む多数の要素によって説明し得る。
【実施例４】
【００６４】
４種の相違するサンプルについての２θ＝０．７〜２θ＝４０のＸ線回折図は、０．０２／４秒のステップでＳｉｅｍｅｎｓ Ｄ５０００ ｍａｔｉｃ Ｘ線回折計を用いて測定した。第１のサンプルは、結晶性イトラコナゾール（ベルギー国Ｂｅｅｒｓｅに所在するＪａｎｓｓｅｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａ社から入手できる；表２では「ｉｔｒａ」と略記されている）であった（Ｘ線回折パターンは図５に示されている）。第２のサンプルは、２５０ｍｇのこの結晶性イトラコナゾールを、１２０ｍｇのＴｗｅｅｎ ８０（実施例１に記載したものと同一）界面活性剤を含む８０ｍＬの二重蒸留水中に懸濁させることによって調製した。この懸濁液は磁気装置を備えていない８０ｍＬ閉鎖システム（図２Ｂ）内で、４．７Ｌ／分で１時間にわたり空再循環させたが、これは３，５２５回の再循環に相当する。空再循環の直後に、分散体を液体窒素中で保持した予冷ボール内で凝固させた。一晩にわたる凍結乾燥で水を１ｍｂａｒ未満で昇華させ、粉末サンプルを入手した（図６に示したＸ線回折パターン）。第３サンプルは、４５０ｍｇのヒドロキシプロピルメチルセルロース（ベルギー国Ｔｕｒｎｈｏｕｔに所在するＳａｎｉｃｏ社から、商標名ＨＰＭＣ ２９１０として市販で入手できる。ＨＰＭＣ２９１０は、セルロース上のヒドロキシプロピル置換基の１０重量％およびメチル置換基の２９重量％を示している）、３００ｍｇの結晶性イトラコナゾールおよび１２０ｍｇのＴｗｅｅｎ ８０を１００ｍＬの二重蒸留水中に添加することによって調製した。結果として生じた懸濁液を、磁気装置を備えた１００ｍＬの閉鎖システム（図２Ａ）内で４．７Ｌ／分で１時間にわたり磁気処理したが、これは１１ｍ／秒の速度で磁場に通過させる２，８２０回の再循環（通過）に相当する。粉末サンプルは、液体窒素中での即時の凝固および凍結乾燥後に入手した（Ｘ線回折パターンは図７に示した）。第４サンプルは、２５０ｍｇの結晶性イトラコナゾールおよび１００ｍｇのＴｗｅｅｎ ８０を１００ｍＬの二重蒸留水中に添加することによ
って調製した。この懸濁液を、磁気装置を備えた１００ｍＬの閉鎖システム（図２Ａ）内で４．７Ｌ／分で１時間にわたり磁気処理したが、これは１１ｍ／秒の速度で磁場に通過させる２，８２０回の再循環（通過）に相当する。粉末サンプルは、液体窒素中での即時の凝固および凍結乾燥後に入手した（Ｘ線回折パターンは図８に示した）。
【００６５】
４種のサンプルについて、２つの回折図ピークの幅の比較を実施した（表２）。ＸＲＤ回折図における幅広がりのピークの発生は、当業者によってナノサイズの粒子が存在することを明確に示していると見なされる。ピークの幅広がりを引き起こす臨界サイズもまた推定できる。（１）イトラコナゾール分子のサイズが約１．５ｎｍであること、そして（２）ピークの幅広がりを引き起こす反復単位の推定最高量は約５０であると推定すると、７５ｎｍ未満の粒子だけがピークの幅広がりの原因であると計算できる。
【００６６】
【表２】
【００６７】
磁気処理サンプルについて観察されたピーク幅は、未処理もしくは空再循環サンプルのものより明らかに高かったが、これは磁気処理サンプルがナノサイズのイトラコナゾール粒子をより多く含むことを示している。
【実施例５】
【００６８】
結晶性イトラコナゾールを含有する２種のサンプル（実施例４と同一）を、商標名ＸＬ３０ ＥＳＥＭ ＦＥＧとしてＦＥＩ Ｃｏｍｐａｎｙ（米国オレゴン州）から入手できる環境走査型電子顕微鏡（ＥＳＥＭ）を用いて分析した。第１のサンプルは、２５０ｍｇの結晶性イトラコナゾールを、１２０ｍｇのＴｗｅｅｎ ８０（実施例１に記載したものと同一）界面活性剤を含む８０ｍＬの二重蒸留水中に懸濁させることによって調製した。この懸濁液は磁気装置を備えていない８０ｍＬ閉鎖システム（図２Ｂ）内で４．７Ｌ／分で１時間にわたり空再循環させたが、これは３，５２５回の再循環に相当する。空再循環の直後に、分散体、液体窒素中で保持した予冷ボール内で凝固させた。一晩にわたる凍結乾燥で水を１ｍｂａｒ未満で昇華させ、粉末サンプルを入手した（図９に示したＳＥＭ写真）。第２のサンプルは、２５０ｍｇの結晶性イトラコナゾールおよび１００ｍｇの界面活性剤Ｔｗｅｅｎ ８０を１００ｍＬの二重蒸留水中に添加することによって調製した。この懸濁液は、磁気装置を備えた１００ｍＬの閉鎖システム（図２Ａ）内で４．７Ｌ／分で１時間にわたり磁気処理したが、これは１１ｍ／秒の速度で磁場に通過させる２，８２０回の再循環に相当する。粉末サンプルは、液体窒素中での即時の凝固および凍結乾燥後に入手した（ＳＥＭ写真は図１０に示した）。
【００６９】
空再循環サンプルのＥＳＥＭ写真（図９）は、自形結晶形態を備える主として大きな粒子を示している。写真の中心には、長さおよそ８０μｍおよび幅およそ２０μｍを備える大きなニードル形粒子が観察される。この粒子は、数マイクロメーターから数十マイクロメーターの少なくとも１つの寸法を備える極めて多数の大きな粒子に取り囲まれている。これらの粒子の多くの量は１つの寸法が他の寸法より明らかに長い結晶サイドを有するニードル形であるが、他の一部の大きな粒子は相違する形状を有する。しかしいずれにせよ
、大きな粒子の結晶面は明確な形状である。これらの大きな粒子の上には、サイズ約１μｍの少量の粒子が散乱している。これらの小さな粒子は、大きな粒子の極めて平滑な結晶面上の凹凸として観察される。
【００７０】
磁気処理サンプルのＥＳＥＭ写真（図１０）の中央は、長さおよそ６０μｍおよびおよそ幅３０μｍを備える粒子を示している。上側の結晶面は、中央では平滑であるが、両側の近くでは不規則である。この結晶面はさらに、２つの大きな亀裂も示している（１つは長さが２０μｍ、もう１つは長さが１０μｍ）。この大きな粒子の結晶形態は、空再循環サンプルの大きな粒子よりはるかに形状が明確ではないことが明らかである。記載した粒子は、図１０において示した大きな粒子だけである。無作為の形状のより小さな断片の多量の凝集体が大きな粒子の周囲に散乱している（図１０）。これらの凝集体の個々の断片はおよそ１μｍの寸法を有する。
【００７１】
磁気処理サンプル（図１０）と参照サンプル（図９）の間の明確なサイズおよび形状の相違は、磁気処理による有意な粒子サイズ低減の発生を確証した。
【実施例６】
【００７２】
ロペラミド（ベルギー国Ｂｅｅｒｓｅに所在するＪａｎｓｓｅｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａ社から市販されている）を含有する４種のサンプルを調製し、それらの溶解プロファイルを測定した。１ｇ／Ｌのロペラミドおよび１０ｇ／ＬのＡｅｒｏｓｉｌ ３８０（ドイツ国デュッセルドルフに所在するＤｅｇｕｓｓａａ社から市販されているケイ酸塩）を乳鉢中で二重蒸留水と混合した。未処理サンプルは、液体窒素中に維持した予冷ボール中でのこの懸濁液の一部の迅速な凝固およびその後の凍結乾燥によって調製した。懸濁液のまた別の部分は、図２Ｃのセットアップに従った、そして（１）ガラス製漏斗、（２）チュービング（Ｍａｓｔｅｒｆｌｅｘ Ｔｙｇｏｎｌａｂ Ｉ／Ｐ ７０、Ｃｏｌｅ−Ｐａｒｍｅｒ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ Ｃｏｍｐａｎｙ社、米国イリノイ州）、（３）ポンプ（Ｍａｓｔｅｒｆｌｅｘ Ｉ／Ｐ、Ｃｏｌｅ−Ｐａｒｍｅｒ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ
Ｃｏｍｐａｎｙ社、米国イリノイ州）、（４）Ａｌ−Ｎｉ−Ｃｏタイプの内蔵磁石（商標名Ｗ ＳＡＮ Ｒ１／４Ｄとしてベルギー国Ｂｏｒｇｅｒｈｏｕｔに所在するＣＥＰＩ−ＣＯ社から市販されている）、および（５）液体窒素中に維持した予冷ボールから構成される一連の９個の連結磁気装置を通してポンプで送出した。磁場を通る１１ｍ／秒の速度に相当する４．７Ｌ／ｍｉｎの流速および磁場内での９×１３６μｓの滞留時間を使用した。システムの出口では、この懸濁液は液体窒素中に維持した予冷ボール中で凝固させ、その後に凍結乾燥を実施した。これらの未処理および磁気処理サンプルの溶解プロファイルは図１１に示されている。
【００７３】
１ｇ／Ｌのロペラミドおよび２５ｍｇ／Ｌの界面活性剤Ｔｗｅｅｎ ８０を乳鉢中で二重蒸留水と混合した。未処理サンプルは、液体窒素中に維持した予冷ボール中でのこの懸濁液の一部の迅速な凝固およびその後の凍結乾燥によって調製した。この懸濁液のまた別の部分は、本明細書に記載した同一条件を用いて図２Ｃに記載の構成に従って一連の９個の連続磁気装置に通してポンプで送出した。この磁気システムの出口では、この懸濁液は液体窒素中に維持した予冷ボール中で凝固させ、その後に凍結乾燥を実施した。これらの未処理および磁気処理サンプルの溶解プロファイルは図１２に示されている。
【００７４】
溶解実験は、ＵＳＰ ２４法（パドル法、１００ｒｐｍ）を使用しながら、ＳＲ８ ＰＬＵＳ Ｈａｎｓｏｎ溶解試験ステーション（米国Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ社から市販されている）において実施した。サンプル（１６．７ｍｇのロペラミドに相当する）を水中の０．００５Ｍ フタル酸水素カリウム（ベルギー国Ｇｅｅｌに所在するＡｃｒｏｓ Ｏｒｇａｎｉｃｓ社から市販されている）および０．００１９２Ｎ ＮａＯＨの溶液である５００ｍＬの溶解媒体へ添加し、溶解媒体の温度は３７±０．１℃に維持した。２ｍＬのサ
ンプルを採取し、直ちに１０、２０、３０、４５、６０および１２０分後に各々新鮮溶解媒体と取り替え、その後０．４５μｍのＰＶＤＦフィルタ（米国ニューヨーク州に所在するＰａｌｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから市販されている）を用いてＨＰＬＣバイアル（１．５ｍＬ、ドイツ国ダルムシュタットに所在するＭｅｒｃｋ社から市販されている）内へ濾過した。対応する濃度は、ＨＰＬＣを用いた検量線から決定した。
【００７５】
この決定のために使用したＨＰＬＣシステムは、全部がＭｅｒｃｋ−Ｈｉｔａｃｈｉ社（ドイツ国ダルムシュタット）から市販されているＬｉＣｈｒｏＧｒａｐｈｓ（登録商標）Ｌ−７１００ ＨＰＬＣポンプ、１００μＬループを装備したＬ−７２００型オートサンプラ、２２０ｎｍに設定したＬ−７４００型ＵＶ検出器、およびＩｎｔｅｒｆａｃｅ Ｄ−７０００から構成した。ＵＶシグナルを検出し、Ｄ−７０００ ＨＳＭソフトウエアを用いてピークを積分した。全部のクロマトグラフィー分離は室温で実施した。使用したカラムは、Ｈｙｐｅｒｓｉｌ ＢＤＳ Ｃ１８（ドイツ国ダルムシュタットに所在するＭｅｒｃｋ社から市販されている）であった。移動相は０．００１Ｍのアセトニトリル／テトラブチルアンモニウムハイドロゲンサルフェート混合物（容量で３０：７０）から構成され、使用前に超音波処理によって脱気させた。流量は、総計１ｍＬ／分であった。これらの条件でのロペラミドの保持時間は７分であった。
【００７６】
ケイ酸塩（Ａｅｒｏｓｉｌ）の存在下および界面活性剤（Ｔｗｅｅｎ ８０）の存在下のどちらにおいても、図１１および１は、ロペラミドの溶解速度が、対応する未処理サンプルと比較して本発明の磁気処理によって有意に上昇することを示している。
【図面の簡単な説明】
【００７７】
【図１】動的光散乱法によって測定された、水中のＴｗｅｅｎ ８０界面活性剤のミセルサイズ分布を示した図である。
【図２】本発明の方法の１つの実施形態を実施するための装置の３つの概略構成図である。
【図３】未処理参照サンプルと比較した、２種の磁気処理ジアゼパムサンプルの粒子サイズ分布を示した図である。
【図４】濾過後の未処理参照サンプルと比較した、磁気処理ジアゼパムサンプルの粒子サイズ分布を示した図である。
【図５】未処理結晶性イトラコナゾールのＸ線回折パターンを示した図である。
【図６】イトラコナゾールおよびＴｗｅｅｎ ８０界面活性剤の混合物のＸ線回折パターンを示した図である。
【図７】イトラコナゾール、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）およびＴｗｅｅｎ ８０界面活性剤の磁気処理混合物のＸ線回折パターンを示した図である。
【図８】イトラコナゾールおよびＴｗｅｅｎ ８０界面活性剤の磁気処理混合物のＸ線回折パターンを示した図である。
【図９】イトラコナゾールおよびＴｗｅｅｎ ８０界面活性剤の混合物の環境走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）写真を示した図である。
【図１０】イトラコナゾールおよびＴｗｅｅｎ ８０界面活性剤の磁気処理混合物の環境ＳＥＭ写真を示した図である。
【図１１】未処理混合物と比較した、ロペラミドおよびケイ酸塩の磁気処理混合物の溶解プロファイルを示した図である。
【図１２】未処理混合物と比較した、ロペラミドおよびＴｗｅｅｎ ８０界面活性剤の磁気処理混合物の溶解プロファイルを示した図である。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、懸濁液を磁場に通して誘導することにより水性懸濁液中の固形薬物粒子のサイズを低減させる方法に関し、それによりこの粒子サイズはマイクロメートル〜ナノメートル範囲に低減される。さらに、本発明は、入手されたナノ粒子の安定化を可能にする方法、ならびにこの安定化されたナノ粒子を含有する調製物に関する。本発明のこの調製物は、難溶性薬物粒子を経口送達するために特に重要である。
【０００２】
より一般的には、本発明は、極めて小さなサイズの生物活性化合物の粒子の製造分野に含まれる。より詳細には、本発明は、生物活性化合物の粒子の懸濁液の磁気処理に関する。本発明は、結果として生じた粒子の平均粒子サイズおよび粒子サイズ分布を調節する方法にさらに関する。最後に、本発明は、そのような小さなサイズの生物活性化合物粒子を組み込んでいる医薬製剤、植物医薬製剤および獣医学製剤に関する。
【背景技術】
【０００３】
新規の化学物質の分子構造はより複雑になってきており、依然として好ましい薬物投与経路である経口投与後に低水溶性および溶解速度限定性吸収を備える薬物となる。新しく合成された多数の分子が水性環境において難溶性であるという事実を考察すると、これらの化合物を有用な治療薬へ転換するステップは今もなお難易度が高い。水難溶性薬物の溶解およびバイオアベイラビリティを向上させるために一般に使用されてきた技術には、一般に微粉化、界面活性剤の使用、および固体分散体の形成が含まれる。
【０００４】
固体状態の分散体内での６つのタイプの薬物−担体相互作用は、既に文献において説明されている：単純な共融混合物、固溶体、ガラス溶液、ガラス懸濁液、結晶性担体中の無定形沈殿物および化合物もしくは複合体形成。湿潤性の上昇、拡散層での担体による薬物の可溶化、ならびに凝集および凝集体形成の減少もしくは不在などの他の要素もまた溶解上昇の一因となることがある。
【０００５】
溶解限定性経口吸収を有する薬物は、周知のＮｏｙｅｓ−Ｗｈｉｔｎｅｙ関係の変形である下記の方程式：
【０００６】
【数１】
【０００７】
（式中、ｄＭ／ｄｔは溶解速度、Ａは薬物粒子の比表面積、Ｄは拡散係数、ｈは拡散層の厚さ、Ｃｓは飽和溶解度、およびＣｔは時間ｔでの薬物濃度である）に指摘されているように、粒子サイズの低減から利益を得る可能性がある。表面積は粒子サイズが低減するにつれて増大するので、薬物物質の粒子サイズの低減によってより高度の溶解速度を達成し得る。この作用は、規則的に粉末化された形状とは対照的な所定の水難溶性薬物の微粉化後の優れた溶解速度によって明らかにされてきた。しかし、粒子サイズの低減は、溶解速度における予想された向上を必ずしも生じさせるわけではない。この作用は、表面エネルギーの上昇およびこれに伴うより強力な非極性分子間のファン・デル・ワールス引力に起因する極めて微細な粒子の凝集体形成および凝集に起因する有効表面積の減少の結果として発生する。このため、粒子の表面は、凝集体形成から保護される必要がある。
【０００８】
米国特許第５，１４５，６８４号は、１０ｍｇ／ｍＬ未満の水溶性を有する基本的に９９．９〜１０重量％の結晶性薬物物質から構成される粒子であって、この薬物物質が０．１〜９０重量％の量でその表面に吸収された、約４００ｎｍ未満の平均有効粒子サイズを維持するために十分な非架橋表面改質剤を有している粒子について開示している。詳細には、この特許は、約６８〜５２０ｎｍの範囲内の粒子サイズ分布および２０４ｎｍの数平均粒子サイズを備える、５％ステロイドＡを含む改質ステロイドＡ水性分散体を開示している。
【０００９】
米国特許第５，５０３，７２３号は、ナノ粒子分散体を２つの電極間に配置してこの電極間に電場を印加するステップによってナノ粒子分散体精製することを開示しており、このときこの分散体は基本的に難溶性結晶性治療薬もしくは診断薬の粒子から構成され、この粒子の９９％は４００ｎｍ未満の粒子サイズを有しており、このナノ粒子を安定化できる表面改質剤と結び付いている。詳細には、この特許は粒子の１０％のサイズが１８０ｎｍへ低減されたダナゾール分散体について記載している。
【００１０】
米国特許第５，８５８，４１０号は、ジェット流原理を用いて、Ｔｗｅｅｎ ８０およびマンニトールなどの界面活性剤を用いて調製された、水、水性媒体および／または有機溶媒中に不溶性、難溶性もしくは中等度に可溶性の治療剤の粒子を含む薬物担体であって、このときこの治療剤が１，０００ｎｍ未満の平均径を有し、総集団中の粒子サイズ５μｍを超える粒子の比率が０．１％未満である薬物担体を開示している。詳細には、この特許は、２〜１５％の置換プテリジンおよび少なくとも０．１％のＴｗｅｅｎ ８０を含む水性ナノ懸濁液であって、このとき平均粒径が２００〜８００ｎｍの範囲内にある水性ナノ懸濁液について記載している。この特許は、低い（１％）薬物濃度を備える特別なテトラカイン組成物については、平均粒子サイズ９１ｎｍを備えるナノ懸濁液を入手できることも教示している。
【００１１】
米国特許第５，９２２，３５５号は、（例えば、超音波処理、均質化、粉末化、微細流動化および沈殿、または再結晶化および抗溶媒沈殿法によって）粒子サイズを低減させる前もしくは低減させる間に、懸濁液もしくは固体形にあるリン脂質および表面改質剤の濃度が０．１〜５０％の範囲内になるように、この粒子を（ａ）リン脂質、および（ｂ）少なくとも１種の界面活性剤と混合すること、およびその後にこの混合物へエネルギーを印加することによって非水溶性もしくは水難溶性化合物の微粒子を調製することを開示している。この特許は、詳細には薬物濃度が２〜５％である薬物調製物を開示しているが、このとき平均粒子サイズは３５〜９８ｎｍであり、この調製物を４℃で１週間以上保管した後に平均粒子サイズにおける実質的変動は生じない。
【００１２】
米国特許第６，２２１，４００号は、平均粒子サイズが４００ｎｍ未満であるＨＩＶプロテアーゼ阻害剤のナノ結晶性調製物を開示している。この特許は、詳細にはナノ粒子の平均サイズが１２７〜２６７ｎｍであるインジナビルのナノ粒子組成物を記載している。
【００１３】
ＰＣＴ国際特許出願第０２／０５５０５９号は、有機化合物のサブミクロンサイズの粒子を調製するための第１水混和性溶媒および第２水性溶媒の両方を含んでいる方法を開示している。これらの方法を用いると、平均粒径が１８０〜７００ｎｍの範囲内にある懸濁液調製物が得られる。
【００１４】
したがって、先行技術出版物に共通する特徴は、平均粒子サイズがナノメートル範囲内にある、好ましくは５００ｎｍ未満である薬物懸濁液を入手するのが極めて困難であることにある。これはおそらく、懸濁液中の薬物濃度が例えば５重量％未満のように低いことを前提にすると、極めて特殊な薬物でしか達成されなかった。
【００１５】
イトラコナゾールは水難溶性の、通常は結晶性の有効成分であるので、イトラコナゾールに対してはそのバイオアベイラビリティを向上させるための多数の試みが実施されてきた。例えば、米国特許第６，３４６，５３３号は、向上したバイオアベイラビリティを示し、０．５〜１０μｍの粒径を有する無定形にあるイトラコナゾールを入手するための方法を開示している。米国特許第６，４９７，９０５号は、モノステアリン酸グリセリン、モノグリセリド、ジグリセリド、トリグリセリド、もしくはワックスなどの通常は疎水性のビヒクルの固溶体として結晶性イトラコナゾールを無定形へ転換させることを開示している。この固溶体は、イトラコナゾールが乾量で約５〜６０％で存在する顆粒状粒子の成分として使用できる。顆粒状粒子の粒子サイズは規定されていない。
【００１６】
ＰＣＴ国際特許出願第２００４／０４３５８０号は、２種以上の不混和性液体を含むプレミックスを、このプレミックスを乳化するための条件下で１つ以上の磁場に通して流動させる、誘導する、もしくは循環させるステップを含む乳化方法であって、このプレミックスが好ましくは少なくとも１種の親水性液体および少なくとも１種の親油性液体を含む方法を開示している。この方法によって調製されたエマルジョンを獣医学組成物もしくは医薬組成物中に含めることはできるが、この文書自体は難溶性薬物の可溶化について言及していない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１７】
当技術分野においては、様々な治療薬群の多数の生物活性化合物に対して、これらの化合物の水溶性が余りに低いために、動物およびヒトにおけるバイオアベイラビリティを改善するための必要が高まっている。
【００１８】
本発明は、流体中に懸濁させた生物活性化合物の粒子の実質的部分は、その中に懸濁させた生物活性化合物を有するこの流体を１回以上にわたり１つ以上の磁場に通して流動させることによってサイズを有意に低減させることができるという予想外の発見に基づいている。本発明のまた別の発見は、この方法で処理される多数の生物活性化合物、特には難溶性薬物が、インビトロおよびインビボの両方において、動物およびヒトにおける向上したバイオアベイラビリティを示すことにある。
【００１９】
（定義）
本明細書で使用する用語「生物活性化合物」は、ヒト、動物もしくは植物の生体機能に作用する、もしくは影響を及ぼす化学物質であって、この化学物質が金属イオンおよび１つ以上の原子または例えばイオン結合および／またはイオン錯体の形態をとっている原子のグループを含んでいない限りにおける化学物質、好ましくは有機物質を意味する。
【００２０】
本明細書で使用する用語「粒子」は、たとえば、限定されないが生物活性化合物の結晶、および通常は約１ナノメーター（ｎｍ）〜約１０μｍ、好ましくは０．４５μｍ〜約５μｍの範囲内の平均サイズを有する集団の一部分であるなどの個別の個々の単位を意味する。０．４５μｍの最小平均粒子サイズは、Ｅ． Ｗｅｉｎｅｒ、Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２０００）， ｐａｇｅ ６７に説明されているように水中に存在する全懸濁固形分（ＴＳＳ）を濾過するために使用されるフィルターの公称孔径を意味する。
【００２１】
本明細書で使用する用語「凝集体」は、通常は約１０μｍ〜約１００μｍの範囲内の平均サイズを有する集団の一部である粒子の集合を意味する。
【００２２】
本明細書で使用する用語「ナノ粒子」は、約０．４５μｍ（４５０ｎｍ）未満、好まし
くは１ｎｍ〜約４５０ｎｍの範囲内の平均サイズを有する集団の一部である粒子を意味する。
【００２３】
本明細書で使用する用語「固体分散体」は、流体薬物−担体の組み合わせを固体状態へ転換させるステップによって形成された生成物を意味する。例えばＣｏｒｒｉｇａｎ， Ｄｒｕｇ Ｄｅｖ． Ｉｎｄ． Ｐｈａｒｍ． １１（１９８５）６９７−７２４を参照されたい。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２４】
第１の実施形態では、本発明は、流体中に懸濁させた生物活性化合物粒子もしくは凝集体の実質的部分の平均サイズを、その中に懸濁させた生物活性化合物粒子もしくは凝集体を有するこの流体を１つ以上の磁場に通して１回以上流動させることによって、少なくとも約２５％、好ましくは少なくとも約５０％、より好ましくは少なくとも約８０％低減させる方法および装置に関する。本発明は、流体中に懸濁させた生物活性化合物粒子もしくは凝集体の実質的部分の平均サイズを低減させるための装置であって、この装置が、流体中に懸濁させた生物活性化合物粒子もしくは凝集体源と、１つ以上の磁場を発生させるための手段と、およびその中に懸濁させた生物活性化合物粒子もしくは凝集体を有するこの流体を１つ以上の磁場に通して１回以上流動させるための手段と，を含む装置をさらに提供する。工程制御のために必要であれば、その中に懸濁させた生物活性化合物粒子もしくは凝集体を備える流体の濁度を測定するための手段をこの装置内に含むことができる。さらにまた別の工程制御のために必要であれば、流体中に懸濁させた生物活性化合物粒子もしくは凝集体の粒子サイズを測定するための手段をこの装置内に用意することもできる。
【００２５】
本発明の方法によると、粒子もしくは凝集体の平均サイズに本方法が及ぼす作用は、磁場の強さがより高い場合、および／またはこの磁場を通過する流動回数がより多い場合は、有意により重要であることが理解されなければならない。市販されている各磁石の強さは通常は約１０，０００ガウスに限定されるので、有効磁場を増加させるための手段は、（特には処理所要時間を限定するために）直列に配列された多数の磁場装置に通して懸濁液を流動させる、および／または同一磁場に通して懸濁液を数回再循環させることである。好ましくは、本発明の方法を実施するために使用されるこの磁場の各々の強さは、少なくとも約２，０００ガウスである。
【００２６】
本発明によって磁気処理されるべき粒子もしくは凝集体中に存在する生物活性化合物は、極めて広範囲の種から選択されてよい。一般に、医薬製剤、獣医学製剤または植物医薬製剤として使用される化合物は有機物質である。このため、好ましい実施形態では、本発明は有機生物活性化合物の磁気処理に関する。本発明の方法は、生物活性化合物、特別には低溶解度および／または低溶解速度を有する生物活性化合物を、それを必要とする動物もしくはヒトへ経口投与するために適合する薬物送達調製物の調製において特に有用である。典型的には、溶解限定性経口吸収を有する薬物は、生物薬剤分類系（Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ、以下、ＢＣＳと呼ぶ）においてクラスＩＩもしくはクラスＩＶ化合物であると分類されている。Ｐｈａｒｍ． Ｒｅｓ．（１９９５）１２：４１３−４２０におけるＧ． ＡｍｉｄｏｎらによるＢＣＳは、２つのクラスの難溶性薬物、すなわちクラスＩＩおよびクラスＩＶ、ならびに２つのクラスの高溶解性薬物、すなわちクラスＩおよびクラスＩＩＩを規定している。Ｍ． Ｍａｒｔｉｎｅｚら、Ａｐｐｌｙｉｎｇ ｔｈｅ Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ ｔｏ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ（Ｐａｒｔ Ｉ： Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ ａｎｄ Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ Ｃｏｎｓｉｄｅｒａｔｉｏｎ）， Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ（２００２）５４：８０５−８２４によると、薬物物質は最高用量強度が１〜７．５のｐＨ範囲にわたり多くと
も２５０ｍＬの水性媒体中で溶解性である場合は高度に可溶性であると分類すべきである。特に、本発明の方法を用いてこの化合物を調製することによってそのバイオアベイラビリティを向上させることのできる生物活性化合物には次のものが含まれる：アセチルサリチル酸、アンプレナビル、アニパミル、ベンタゾン、ベンゾカイン、ベンザフィブレート、ベキサロテン、ビペリデン、ブタゾリジン、カプトプリル、カルバマゼピン、クロラムフェニコール、クロファジミン、クロモグリク酸、クロトリマゾール、カフェイン、シクロスポリン、ジアゼパム、ジクロフェナク、ジゴキシン、ジリアゾン、ジルチアゼム、ジメトリダゾール、ジフェンヒドラミン、５，５−ジフェニルヒダントイン、ドロナビノール、デュタステライド、エトポシド、ステアリン酸エリスロマイシン、エスプロン、フェノフィブレート、フレカイニド、フロセミド、フルコナゾール、ガロパミル、グリベンクラミド、グリセオフルビン、ヒドロクロロチアジド、イブプロフェン、インドメタシン、（イソ）トレチノイン、イトラコナゾール、ケトコナゾール、ケトプロフェン、ロペラミド、ロピナビル、メルペロン、メタザクロル、ナリキシジン酸、ナフチドロフリル、ネキソパミル、ニフェジピン、ニモジピン、ニトレンジピン、ニトロフラントイン、オキシブチニン、パラセタモール、ペントキシフィリン、パロキセチン、プラゾシン、プロパフェノン、プロゲステロン、プソイドエフェドリン、ラニチジン、リボフラビン、リスペリドン、リトナビル、サキナビル、シロリムス、セレギリン、スルファメタジン、スルファメトキサゾール、スルファチアゾール、スピリノラクトン、タクロリムス、テオフィリン、トルブタミド、トリアムテレン、トリメトプリム、バルプロ酸およびゾテピン。本発明によって処理し得る薬物もしくは生物活性化合物は、好ましくは約２．５ｍｇ／ｍＬ未満、０．１〜１ｍｇ／ｍＬ（すなわち、米国薬局方に規定されているように「極めて溶けにくい」）と同等の、さらに０．１ｍｇ／ｍＬ（すなわち、米国薬局方において規定されているように「ほとんど溶けない」）未満と同等の、さらにいっそう約５μｇ／ｍＬ未満と同等のの水溶性を有していてよく、さらに室温および生理的ｐＨで約０．２μｇ／ｍＬと同等という低い水溶性を有していてよい。そのような薬物の非限定的例には、例えば、クロロチアジド、ヒドロクロロチアジド、ニモジピン、フルフェナム酸、フロセミド、メフェナム酸、ベンドロフルメチアジド、ベンズチアジド、エタクリン酸、ニトレンジピン、イトラコナゾール、サペルコナゾール、トログリタゾン、プラゾシン、アトバコン、ダナゾール、グリベンクラミド、グリセオフルビン、ケトコナゾール、カルバマゼピン、スルファジアジン、フロルフェニコール、アセトヘキサミド、アジャマリン、ベンズブロマロン、安息香酸ベンジル、ベタメタゾン、クロラムフェニコール、クロルプロパミド、クロルサリドン、クロフィブレート、ジアゼパム、ジクマロール、ジギトキシン、エトトイン、グルテチミド、ヒドロコルチゾン、ヒドロフルメチアジド、ヒドロキニン、インドメタシン、イブプロフェン、ケトプロフェン、ナプロキセン、ケリン、ニトラゼパム、ニトロフラントイン、ノバルギン、オキサゼパム、パパベリン、フェニルブタゾン、フェニントイン、プレドニゾロン、プレドニゾン、レセルピン、スピロノラクトン、スルファベンズアミド、スルファジメトキシン、スルファメラジン、スルファメタジン、スルファメトキシピリダジン、スクシニルスルファチアゾール、スルファメチゾール、スルファメトキサゾール（トリメトプリムとの混合物中でも）、スルファフェナゾール、スルファチアゾール、スルフィソキサゾール、スルピリド、テストステロンおよびジアミノピリミジン類が含まれる。ジアミノピリミジン類の適切な例には、制限なく、２，４−ジアミノ−５−（３，４，５−トリメトキシベンジル）ピリミジン（トリメトプリムとして知られる）、２，４−ジアミノ−５−（３，４−ジメトキシベンジル）ピリミジン（ジアベリジンとして知られる）、２，４−ジアミノ−５−（３，４，６−トリメトキシベンジル）ピリミジン、２，４−ジアミノ−５−（２−メチル−４，５−ジメトキシベンジル）ピリミジン（オルメトプリムとして知られる）、２，４−ジアミノ−５−（３，４−ジメトキシ−５−ブロモベンジル）ピリミジン、および２，４−ジアミノ−５−（４−クロロ−フェニル）−６−エチルピリミジン（ピリメタミンとして知られる）が含まれる。当業者には理解されるように、これらの薬物は、利尿薬、降圧薬、抗ウイルス薬、抗菌薬、抗真菌薬などの様々な治療薬クラスに属しており、ヒトまたは獣医学的使用のみには限定されない。生物活性
化合物は、さらにまた化粧品、診断薬、除草剤、殺虫剤、殺生物剤もしくは殺菌剤であってもよい。特により近年に開発された薬物、タンパク質およびペプチドは重要な部分を表している。これらの化合物は、インビボにおける迅速な薬物代謝および不都合な薬物動態とともに、難透過性、難溶性であり、生理的流体中で不安定であることが多い。このため、本発明の方法は、タンパク質およびペプチド薬を投与するための送達形を調製するために有用であることも実証することができる。
【００２７】
本発明の方法が（上記に定義したような）生物活性化合物凝集体上で実施される場合は、この生物活性化合物凝集体の実質的部分の平均サイズは、約０．４５μｍ〜５μｍの範囲内へ低減させることができる、および／または低減したサイズを備える凝集体のこの実質的部分は、懸濁させた凝集体の少なくとも約５０重量％である。本発明の方法が（上記に定義したような）生物活性化合物粒子上で実施される場合は、この生物活性化合物粒子の平均粒子サイズは約０．５ｎｍ〜約５００ｎｍ、好ましくは１〜３００ｎｍ、より好ましくは５〜２００ｎｍ、最も好ましくは５〜１００ｎｍの範囲へ低減させることができる、および／または低減したサイズを備える粒子のこの実質的部分は、懸濁させた粒子の少なくとも約１０重量％、好ましくは少なくとも２０重量％である。当業者は、生物活性化合物粒子もしくは凝集体のサイズが低減させる程度は、磁場の強さおよびそのような粒子もしくは凝集体を含む懸濁液の処理時間にだけではなく、例えば限定されないが生物活性化合物の性質（特には、イオン結合の性質および双極子強度）、生物活性化合物粒子もしくは凝集体が懸濁させられている流体の流量、この流体中のそのような粒子もしくは凝集体の濃度、処理中の物理的および化学的条件（ｐＨを含む）、粒子の結晶形もしくは幾何学的形状、この粒子もしくは凝集体中、またはこの粒子もしくは凝集体と一緒の任意の他の成分の存在などにも依存する。以下ではすべてのそのようなパラメータをさらに詳細に考察するが、当業者であれば下記の教示を読むことで不要な実験的負担を伴わずに目標を達成するために、各パラメータおよびパラメータの所定の組み合わせに所定の変更を加えられることは理解されるであろう。
【００２８】
好ましくは、生物活性化合物粒子もしくは凝集体が懸濁される流体は、本発明の磁気処理中に優勢である温度および圧力条件下では液体である。より好ましくは、この流体は水であるが、この流体はまた、例えばアルコール、エステル、エーテル、ケトン、アミド、もしくはそれらの混合物、または１種以上のそのような有機溶媒と水との組み合わせからなる群から選択される有機溶媒であってよい。当該の特定流体の選択について特別な制限はなく、これは関係する生物活性化合物粒子もしくは凝集体のサイズを有意に低減させる必要がある用途において優勢である通常の条件に適応させることができる。重要であるのは、この生物活性化合物粒子もしくは凝集体がこの流体中に実質的に懸濁されるのであって溶解されるのではないこと、すなわち好ましくはスラリーの形状で懸濁されることであるが、このときこの流体中のこの生物活性化合物粒子もしくは凝集体の濃度は、このスラリーを磁場に通して流動させる間に優勢である物理的（温度、圧力）および化学的（ｐＨ）条件下でこの流体中のこの生物活性化合物の溶解限度の少なくとも１．０５倍、好ましくは少なくとも２倍である。所定の流体中の所定の生物活性化合物の溶解限度は、文献において容易に入手できる、または当技術分野において周知の技術を使用することによって当業者によって容易に決定することのできるパラメータである。溶解限度は温度およびｐＨに重度に依存する可能性があることは周知であるので、このためまず最初に、文献が特定の温度およびｐＨ条件についての値について何も記載していない場合は注意深く決定しなければならない。明らかな実際的な理由から、流体中の生物活性化合物粒子もしくは凝集体の上方濃度は、流体が液体である場合は、この流体を１つ以上の磁場に通して有効線形流量で流動させるための必要性によって決定される、すなわち流体懸濁液の粘度によって決定される。
【００２９】
所定の特別な用途のためには、その中に生物活性化合物粒子もしくは凝集体が懸濁され
る流体は、ガスもしくは超臨界流体（例、二酸化炭素）であってもよい。このガスもしくは臨界流体の性質は、この生物活性化合物の化学組成および反応性に広範に依存する可能性がある。
【００３０】
流体が何であろうと、この流体を１つ以上の磁場に通して流動させるステップは、好ましくはこの１つ以上の磁場を生成させるために使用された磁場材料のキュリー温度の半分未満の温度で、例えばＡｌ−Ｎｉ−Ｃｏ型の磁気機器に対しては約４００℃未満で実行される（当業者には周知のように、キュリー温度は合金の正確な組成に左右される）。その中に生物活性化合物粒子もしくは凝集体が懸濁される流体が液体である場合は、この液体をこの１つ以上の磁場に通して流動させるステップは、好ましくはこの流体をこの１つ以上の磁場に通して流動させる間に優勢である圧力下でこの流体の凝固点と沸点との間の温度で実施される。例えば、この流体が周囲圧力下で水である場合は、この液体をこの１つ以上の磁場に通して流動させるステップは、好ましくは約２℃〜９５℃の温度で実施される。
【００３１】
本発明のサイズ低減処理を受けた生物活性化合物粒子は、例えば球形粒子、プリズム状粒子、ならびに立方晶形、正方晶形、六方晶形および八面形構造を含むがそれらに限定されないあらゆる幾何学的形状もしくは結晶形であってもよい。
【００３２】
所定の用途にとっては、本発明の方法を、その中に生物活性化合物粒子もしくは凝集体が懸濁される液体がサイズ低減された粒子もしくは凝集体の再凝集体形成もしくは再凝集を防止するための１種以上の安定剤を含んでいるような方法で実施するのが有益なことがある。そのような安定剤は、界面活性剤、ポリマー、親水性物質、ケイ酸塩またはそれらの組み合わせのいずれかであってよい。少なくとも微量のこの安定剤は最終医学的もしくは獣医学的送達形で存在したままである可能性はあるため、安定剤は、好ましくは医薬上許容される賦形剤であるべきである。このために適合する親水性物質は、特にグルコース、フルクトース、ラクトース、ソルビトール、キシリトール、マンニトールおよびデンプンなどの非限定的な化合物リストから選択することができる。この目的に適合するポリマーは、セルロース誘導体（例、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムもしくはカルシウム、ヒドロキシエチルセルロース、微結晶性セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、酢酸フタル酸セルロース）、アルブミン、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、ポリメタクリレート、ポリアクリル酸、ポリアクリレート、シクロデキストリンおよびその誘導体、トラガカント、アカシアガム、ゼラチン、ペクチン、グアールガム、キサンタンガム、ポリビニルピロリドン、ポリビニルピロリドン−コ−ビニルアセテート、ポリエチレングリコール、酸化エチレンと酸化プロピレンのコポリマー、ポリビニルアルコールなどの非限定的リストから選択することができる。適切な界面活性剤は、セトステアリルアルコール、セチルアルコール、セトリミド、ドキュセートナトリウム、モノグリセリド、ジグリセリド、レシチン、タウロコール酸塩、ポリオキシエチレナルキルエーテル、ポリオキシエチレンヒマシ油誘導体、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンステアレート、ラウリル硫酸ナトリウム、ソルビタン脂肪酸エステル、ステアリルアルコールなど、およびそれらの混合物からなる群から選択することができる。
【００３３】
好ましくは、本発明による方法は、その中に生物活性化合物粒子もしくは凝集体が懸濁された流体を１つ以上の磁場に通して（例えば、閉鎖回路内で）２回以上再循環させるステップを含んでいる。再循環回数は、所定の用途に含まれる特定生物活性化合物を標的とする特定平均サイズへ容易に適合させることができる。その中に生物活性化合物粒子もしくは凝集体が懸濁される流体が、磁場処理が有意な程度までのサイズ低減を効果的に実施するのを可能にする速度で１つ以上の磁場に通して流動もしくは循環させることが重要で
ある。好ましくは、各この磁場を通るこの流体の線形流量は約０．２５〜２５ｍ／秒である。磁場の長さを考慮に入れると、各この磁場を通過するこの流体の滞留時間は、回数もしくは再循環時間に依存して、約６０マイクロ秒間〜１０秒間であると計算することができる。
【００３４】
本発明の磁場処理の通常の結果としてこの生物活性化合物粒子の懸濁液の濁度は変化する。サイズ低減およびそのようなサイズ低減が発生する程度によってより影響される粒子もしくは凝集体の集団に依存して（大きいサイズであるか中等度のサイズであるか）、当技術分野において周知の濁度計によって推定もしくは測定できるように、濁度は低減もしくは増加させることができる。このため濁度は、本発明の以下の他の実施形態に記載するように、結果として生じた粒子懸濁液を特性付けるための追加の特性として使用できる。
【００３５】
また別の実施形態では、本発明は、さらに生物活性化合物粒子もしくは凝集体の使用を含み、この生物活性化合物粒子もしくは凝集体の実質的部分の平均サイズを少なくとも２５％、好ましくは少なくとも５０％、より好ましくは少なくとも８０％減少させるステップを含み、このときこのステップが本発明の第１の実施形態に関して記載した方法を含む工程を提供する。そのような工程は、サイズ低減ステップ後に実施される１つ以上の後処理ステップをさらに含んでいてよい。
【００３６】
この後処理ステップは、加熱ステップであってよい。また別の実施例では、この後処理ステップは、その中に生物活性化合物粒子もしくは凝集体が粒径減少ステップ中に懸濁させられている流体を実質的に除去するための乾燥させるステップであってよい。いずれかの知られている乾燥技術によって実施できるそのような乾燥ステップは、この工程のその後のステップへ乾燥させたより小さな粒子を提供するために必要になることがある。好ましい実施形態では、この工程は凍結乾燥ステップを含んでいる。第３実施形態のこの変形の特定実施例は、（ｉ）生物活性化合物の粒子および／または凝集体および１種以上の安定剤を含む懸濁液を調製するステップと、（ｉｉ）この懸濁液を１つ以上の磁場に通して流動させるステップと、（ｉｉｉ）この混合物を即時に凍結するステップと、および（ｉｖ）固体分散体を入手するためにこの調製物を凍結乾燥するステップと、を含む生物活性化合物の固体分散体を調製するための工程である。また別の好ましい実施形態では、この工程は噴霧乾燥ステップを含んでいる。第３実施形態のこの変形の特定実施例は、（ｉ）生物活性化合物の粒子および／または凝集体および１種以上の安定剤を含む懸濁液を調製するステップと、（ｉｉ）この懸濁液を１つ以上の磁場に通して流動させるステップと、（ｉｉｉ）固体分散体を入手するためにこの調製物を噴霧乾燥させるステップと、を含む生物活性化合物の固体分散体を調製するための工程である。あるいは、磁気処理後には、懸濁液を医薬ペレット剤（例えば、不活性糖スフェア）上でスプレーコーティングすることができ、これらのコーティングされたペレット剤はその後にカプセル剤または錠剤などの他の固形製剤に調製することができる。
【００３７】
本発明のこの実施形態のまた別の変形では、後処理ステップは、１種以上のアジュバントもしくは添加物を低減したサイズを備える任意で乾燥させた粒子もしくは凝集体と一緒に混合するステップであってよい。そのような種類のアジュバントもしくは添加物を混合するステップは、ボールミリング法または当業者には周知の他の混合技術によって実施されてよい。
【００３８】
本発明のこの実施形態のさらにまた別の変形では、後処理ステップはこの懸濁液内への流体の添加を通して低減したサイズを備える生物活性化合物粒子もしくは凝集体の懸濁液を希釈するステップであってよい。例えば、この希釈するステップにおいて使用される流体は、サイズ低減ステップにおいて存在する流体と混和性（例えば同一）であってよい。
【００３９】
品質管理のために、本発明のこの実施形態の工程は、磁気処理法中もしくは磁気処理法後に生成される生物活性化合物粒子もしくは凝集体のサイズを調節する１つ以上のステップ、すなわち本発明の第１の実施形態を構成する方法をさらに含んでいてよい。含まれる粒子サイズの大きさのオーダーを考慮に入れると、このサイズを調節するステップは、好ましくは動的光散乱分析法によって実施される。この工程がサイズ低減ステップの後に実施される後処理ステップを含む場合は、それはこの後処理ステップ中もしくは後に生成される生物活性化合物粒子もしくは凝集体のサイズを調節する１つ以上のステップをさらに含んでいてよいが、この場合には、この後処理ステップ後のこのサイズを調節するステップは動的光散乱分析法によって実施されてよい。このサイズを調節するステップは、この工程の様々なステップ中に生成される粒子の平均サイズおよび／またはサイズ分布を測定できるような方法で実施されてよい。本発明の第３実施形態のまた別の変形では、後処理ステップは超超音波処理ステップであってよい。
【００４０】
品質管理のためには、本発明のこの実施形態による工程は、この工程に含まれる生物活性化合物粒子もしくは凝集体の懸濁液の濁度を調節する１つ以上のステップをさらにまた含んでいてよい。この濁度を調節するステップは、適切には当業者であれば入手できるあらゆるタイプもしくは濁度計によって実施することができる。
【００４１】
本発明はさらに、約１ｎｍ〜約４０ｎｍ、好ましくは約２ｎｍ〜約２０ｎｍ、より好ましくは約３ｎｍ〜約１５ｎｍの平均粒子サイズを備える、および／または狭い粒子サイズ分布（例えば、約１．１〜約４．０、好ましくは約１．２〜約３．０、より好ましくは約１．３〜約２．０の多分散性）を備えるたとえば上述したような所定の生物活性化合物の集団に関する。つまりそのように小さい粒子サイズおよび／または狭い粒子サイズ分布で製造することが決して可能ではなかった生物活性化合物に関する。そのような生物活性化合物粒子集団は、この磁気処理後に、超遠心分離、限外濾過もしくは例えば透過性膜を用いるナノ濾過などの当技術分野において周知の技術による分離ステップを実施することによって本発明の磁気処理から入手できる粒子から単離することができる。
【００４２】
生物活性化合物は、それ自体として、またはさらに例えば乳化剤もしくは界面活性剤、増粘剤、ゲル化剤もしくはその他の添加物などの１種以上の生理学的（例、医学的）に許容される賦形剤をさらに含むこの生物活性成分（例、薬物）の調製物として処理することができるが、このとき有効成分（例、薬物）の装填量、すなわち調製物中の有効成分（例、薬物）の比率もしくは含量は、広範囲にわたり変動してよい。例えば、この有効成分含量は、少なくとも約０．１重量％、好ましくは少なくとも１重量％、より好ましくは少なくとも５重量％であってよい。さらに、この有効成分含量は、多くとも約９９重量％、好ましくは多くとも９５重量％、より好ましくは多くとも５０重量％であってよい。
【００４３】
治療的に有効な調製物もしくは洗剤組成物にとって適合する乳化剤もしくは界面活性剤には、水溶性天然石鹸および水溶性合成界面活性剤が含まれる。適切な石鹸には、高級、好ましくは飽和の、脂肪酸（Ｃ１０−Ｃ２２）の、またはココヤシ油、パーム油もしくは獣脂油から入手できる天然脂肪酸混合物の、アルカリもしくはアルカリ土類金属塩、未置換もしくは置換アンモニウム塩、例えばオレイン酸もしくはステアリン酸のナトリウムもしくはカリウム塩が含まれる。合成界面活性剤には、アニオン性、カチオン性および非イオン性界面活性剤、例えばポリアクリル酸のナトリウムもしくはカルシウム塩；好ましくは８〜２２個の炭素原子を含有するスルホン化ベンズイミダゾール誘導体；アルキルアリールスルホネート；および通常はアルカリもしくはアルカリ土類金属塩、未置換アンモニウム塩または８〜２２個の炭素原子を有するアルキルもしくはアシルラジカルで置換されたアンモニウム塩の形態である、脂肪スルホン酸塩もしくは硫酸塩、例えば、リグノスルホン酸もしくはドデシルスルホン酸のナトリウムもしくはカルシウム塩または天然脂肪酸、脂肪アルコール／酸化エチレン付加物の硫酸もしくはスルホン酸エステル（ラウリル硫
酸ナトリウムなど）のアルカリもしくはアルカリ土類金属塩から入手された脂肪アルコール硫酸塩の混合物が含まれる。アルキルアリールスルホネートの例は、ドデシルベンゼンスルホン酸もしくはジブチル−ナフタレンスルホン酸またはナフタレンースルホン酸／ホルムアルデヒド縮合生成物のナトリウム、カルシウム、もしくはアルカノールアミン塩である。同様に適合するのはこれに対応するリン酸塩であり、例えばリン酸エステルの塩およびｐ−ノニルフェノールの酸化エチレンおよび／または酸化プロピレンとの付加物などである。
【００４４】
適切な乳化剤には、さらに脂肪酸（例、ラウリン酸、パルミチン酸、ステアリン酸もしくはオレイン酸）の部分エステルまたは市販されているポリソルベートなどのソルビトール由来のヘキシトール無水物（例、ヘキシタンおよびヘキシド）が含まれる。使用できるその他の乳化剤には、商標名ＴｗｅｅｎとしてＩＣＩ Ａｍｅｒｉｃａｓ社から市販されている界面活性剤；および商標名ＰｌｕｒｏｎｉｃとしてＢＡＳＦ社によって市販されているポリ（オキシエチレン）／ポリ（オキシプロピレン）材料などの、上記の部分エステルの非エステル化ヒドロキシル基を備えるポリオキシエチレン鎖の付加物（１〜４０モルの酸化エチレン）が含まれるが、それらに限定されない。
【００４５】
本発明の生物活性調製物のための適切な構造形成剤、増粘剤もしくはゲル形成剤には、商標名Ａｅｒｏｓｉｌとして市販されている生成物などの高分散性ケイ酸塩；ベントナイト；モンモリロナイトのテトラアルキルアンモニウム塩（例、商標名Ｂｅｎｔｏｎｅとして市販されている生成物）、このとき各アルキル基は１〜２０個の炭素原子を含有していてよい；セトステアリルアルコールおよび改質ひまし油生成物（例、商標名Ａｎｔｉｓｅｔｔｌｅとして市販されている生成物）が含まれる。
【００４６】
本発明の生物活性成分調製物に含めることのできるゲル化剤には、カルボキシメチルセルロース、酢酸セルロースなどのセルロース誘導体；アラビアガム、キサンタンガム、トラガカントガム、グアールガムなどの天然ガム；ゼラチン；二酸化ケイ素；カルボマーなどの合成ポリマー、およびそれらの混合物が含まれるが、それらに限定されない。ゼラチンおよび改質セルロースは、好ましいクラスのゲル化剤を表している。
【００４７】
親水性セルロース誘導体は、本発明による治療上有効な成分の調製物のための医薬上許容される賦形剤としても同様に使用できる。本明細書で使用する用語「親水性」は、生理的に重要なｐＨで、水素結合、特に水分子と結合することのできる１つ以上の基、好ましくは非イオン化基を有するセルロース誘導体もしくはポリマーを意味する。本発明において使用できる親水性セルロースポリマーの適切な例には、エーテル結合置換基を有するポリマー、例えばヒドロキシプロピルメチルセルロースなどのヒドロキシ−アルキルアルキルセルロース（このとき、アルキル基は、好ましくは１〜４個の炭素原子を有する）が含まれる。ヒドロキシプロピルメチルセルロースは、セルロース２−ヒドロキシプロピルメチルエーテル（以下、、ＨＰＭＣと呼ぶ）である。これは、温水中には不溶性であるが、冷水中には緩徐に溶解するメチルセルロースの非イオン性水溶性エーテルである。医薬錠剤賦形剤として広範囲に使用されているＨＰＭＣは、様々な商標名を付けて市販されている。適切な等級のＨＰＭＣには、Ｄｏｗ Ｃｈｅｍｉｃａｌ社からのＭｅｔｈｏｃｅｌ Ｋ１００などの低粘性等級、Ｍｅｔｈｏｃｅｌ Ｋ１００Ｍなどの高粘性等級、およびＳｈｉｎｅｔｓｕ社からのＭｅｔｏｌｏｓｅ ９０ＳＨシリーズなどの他のタイプが含まれる。
【００４８】
両親媒性物質は、本発明による治療上有効な成分の調製物のための医薬上許容される賦形剤としても同様に使用できる。本明細書で使用する用語「両親媒性」は、例えば脂肪族もしくは芳香族炭化水素基を含む疎水性部分、および親水性部分を有する物質を意味する。そのような両親媒性物質の適切な例には、グリセリド由来の部分とポリエチレングリコ
ールエステル由来の部分の両方を有する物質が含まれる。例えば、本発明における両親媒性物質賦形剤としてポリグリコシル化グリセリドを使用することが適合する。本明細書で使用する表現「ポリグリコシル化グリセリド」は、モノ−、ジ−およびトリグリセリドと好ましくは約２００〜約６００の分子量を備えるＣ８−Ｃ１８脂肪酸のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）モノエステルおよびジエステルとの混合物を意味しており、任意でさらにグリセロールおよび／または遊離ＰＥＧを含む。ここで、ＰＥＧの親水性−親油性バランス（ＨＬＢ）価はＰＥＧの鎖長によって調節され、ＰＥＧの融点は脂肪酸の鎖長、ＰＥＧの鎖長および脂肪酸、したがって出発油の飽和度によって調節される。同様に、本明細書で使用する表現「Ｃ８−Ｃ１８脂肪酸」は、様々な比率のこれらの酸が飽和している場合はカプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸およびステアリン酸およびこれらの対応する不飽和酸の混合物を意味する。当業者には既知のように、これらの脂肪酸の比率は、出発油の関数として変動する可能性がある。後者の例には、商標名ＬａｂｒａｓｏｌとしてＧａｔｔｅｆｏｓｓｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎによって販売されているＰＥＧ−８カプリル酸塩−カプリン酸グリセリドエステルなどの飽和ポリグリコール化Ｃ８−Ｃ１０グリセリド；商標名Ｓｏｆｔｉｇｅｎ ７６７としてＨｕｌｓ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔによって販売されているＰＥＧ−６カプリル酸／カプリン酸グリセリド；商標名Ｃｒｏｖｏｌ Ｍ−７０としてＣｒｏｄａ社によって販売されているＰＥＧ−６０コーングリセリド；商標名Ｅｕｍｕｌｇｉｎ Ｂ２としてＨｅｎｋｅｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ社によって販売されているＣｅｔｅａｒｅｔｈ−２０；商標名ＴｒａｎｓｃｕｔｏｌとしてＧａｔｔｅｆｏｓｓｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎによって販売されているジエチレングリコールモノエチルエーテル；たとえば商標名Ｇｅｌｕｃｉｒｅ ４８／０９、Ｇｅｌｕｃｉｒｅ ４４／１４およびＧｅｌｕｃｉｒｅ ４２／１２としてＧａｔｔｅｆｏｓｓｅ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ社によって販売されているような約４２〜４８℃の範囲内の融点および約８〜１６の範囲内のＨＬＢを有するＣ８−Ｃ１８飽和ポリグリコシル化グリセリドの混合物；および様々な比率にあるそれらの混合物が含まれるが、それらに限定されない。
【００４９】
本発明による生物活性成分調製物中に存在していてよい他の任意の賦形剤には、酸化マグネシウム；アゾ染料；有機顔料および二酸化チタンなどの無機顔料；ＵＶ吸収剤；安定剤；臭気マスキング剤；増粘剤；例えばアスコルビン酸パルミテート、重亜硫酸ナトリウム、メタ重亜硫酸ナトリウムなどの酸化防止剤、およびそれらの混合物；例えば、ソルビン酸カリウム、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸、没食子酸プロピル、ベンジルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベンなどの保存料；エチレンジアミン四酢酸などの金属イオン遮蔽剤；天然バニリンなどのフレーバー剤；クエン酸もしくは酢酸などの緩衝剤；ケイ酸塩、珪藻土、酸化マグネシウムもしくは酸化アルミニウムなどの増量剤もしくは充填剤；マグネシウム塩などの緻密化剤；およびそれらの混合物などの添加物が含まれる。
【００５０】
生物活性調製物が発泡性顆粒を作製することを企図している場合は、それは二酸化炭素遊離促進物質として作用する重炭酸ナトリウムおよびクエン酸もしくは酒石酸などの１種以上の弱酸を含んでいなければならない。そのような発泡性顆粒は、例えば義歯を洗浄するための発泡錠のために作製することができる。
【００５１】
本発明の生物活性調製物中の最適な賦形剤およびそれらの比率は、当業者に周知の方法で、例えば限定されないが、調製される特定生物活性成分、エンドユーザーの必要条件、生物活性成分の装填量（すなわち、重量比率）および必要な生物活性成分（例、薬物）遊離特性（特に、動態）に依存する。
【００５２】
本発明は、先行技術の方法に比して多数の長所を示す。第１に、このサイズ低減は、いずれかのタイプの安価で容易に入手できる磁気装置によって達成されるが、これは標的と
するサイズ低減の程度を微調整するための多数の方法と結び付けることができる。第２に、これは極めて多数の生物活性化合物、特に双極子を含む生物活性化合物の粒子および凝集体の実質的なサイズ低減を達成する。
【００５３】
以下の実施例は、例示する目的でのみ提供するものであり、決して本発明の範囲を限定するものであると解釈すべきではない。
【実施例１】
【００５４】
４８ｍｇのＴｗｅｅｎ ８０（英国ロンドンに所在するＩｍｐｅｒｉａｌ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ ｐｌｃ社から市販されている）を２０ｍＬの二重蒸留水と混合し、マグネチックバースターラーを用いて１００ｒｐｍで数分間攪拌した。Ｔｗｅｅｎミセルは、ＡＬＶ社（ドイツ国）から市販されているＨｅ−Ｎｅ高性能粒度分析装置（２．５ｍＷ）を用いて動的光散乱法（以下、ＤＬＳと呼ぶ）によって粒度を分析した。図１は、Ｔｗｅｅｎ ８０が水中で約１０ｎｍの平均粒径を備えるミセルへと組織化することを示している。
【実施例２】
【００５５】
５０ｍｇのジアゼパム（ベルギー国のＺｗｅｖｅｇｅｍに所在するＡｌｐｈａ Ｐｈａｒｍａ ＮＶ社から市販されている）および４８ｍｇのＴｗｅｅｎ ８０（実施例１に記載したものと同一）を乳鉢内で粉砕した。１５０ｍＬの二重蒸留水を添加し、この懸濁液を２０分間にわたり超音波処理した。超音波処理後、この懸濁液をその後に使用するまで６００ｒｐｍに設定したマグネチックスターラーを用いて持続的に攪拌した。
【００５６】
磁気処理は、総容量が１００ｍＬであり、（１）チュービング（米国イリノイ州に所在するＣｏｌｅ−Ｐａｒｍｅｒ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ Ｃｏｍｐａｎｙ社製のＭａｓｔｅｒｆｌｅｘ Ｔｙｇｏｎ ｌａｂ ｌ／Ｐ ７０）、（２）Ａｌ−Ｎｉ−Ｃｏタイプの内部磁石（ベルギーのＢｏｒｇｅｒｈｏｕｔに所在するＣＥＰＩ−ＣＯ社製のＷ， ＳＡＮ
Ｒ１／４Ｄ）、（３）三方向水平ボール弁（スイス国Ｓｃｈａｆｆｈａｕｓｅｎに所在するＧｅｏｒｇ Ｆｉｓｃｈｅｒ Ｒｏｈｒｌｅｉｔｕｎｇｓｓｙｓｔｅｍｅ ＡＧ製の３４３ ＤＮ１０／１５型）、および（４）ポンプ（米国イリノイ州に所在するＣｏｌｅ−Ｐａｒｍｅｒ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ Ｃｏｍｐａｎｙ製のＭａｓｔｅｒｆｌｅｘＩ／Ｐ）から構成される図２に示した閉鎖システム内で実施した。ポンプは、１１ｍ／秒の磁場通過速度に等しい４．７Ｌ／分の流量および装置の通過１回に付き１３６μｓの磁場滞留時間で作動させた。一部のジアゼパム懸濁液を閉鎖システム内に導入し、磁場に通して再循環させた。
【００５７】
磁場に通しての各々１，４１０および２，８２０回の再循環（通過）に相当する３０および６０分間の処理後に、サンプルを採取した。サンプル採取の直後に、ＤＬＳ測定を実施した。これらのサンプルを粒度分析装置内に配置する前に振とうした。図３は、磁気処理の前後のジアゼパム分散剤の粒子サイズ分布を比較している。図３は、両方の磁気処理サンプルが有意な量の１μｍより小さい粒子を有しており、主要集団が約１１〜１３ｎｍの範囲と約２００〜２５０ｎｍ範囲に中央を有することを示している。未処理参照サンプルは、１μｍ未満粒子は極めて少数しか含有しておらず、主要集団の発生は２．５μｍで見られ得る。約１０ｎｍのサイズを備える粒子は、（実施例１の教示に基づくと）Ｔｗｅｅｎミセルの存在と高度に関連していると思われる。
【００５８】
３，７６０回の再循環（通過）に対応する８０分間の処理後に、第３サンプルを採取した。このサンプルを、１μｍの孔径を有するポリスルホン膜（英国のメードストーンに所在するＷｈａｔｍａｎ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＬＴＤから市販されている）を備えるＰｕｒａｄｉｓｃ ２５ ＡＳディスポーザブルフィルタに通して濾過した。その後
、結果として生じた濾液についてＤＬＳ測定を実施し、図４において未処理分散体の濾液と粒子サイズ分布を比較した。磁気処理懸濁液の粒子サイズ分布は、濾過を実施した場合（図４）および濾過を実施していない場合（図３）と類似であった。未処理懸濁液の濾液は、Ｔｗｅｅｎミセル（ピークは１１ｎｍ）および２００ｎｍのジアゼパム粒子を含有している（図４）。これらの観察は、それらの存在が１μｍより大きな粒子が富裕であることによって遮蔽されたために、未濾過、未処理懸濁液を分析したときには明らかにならなかった（図３）。そこで、未処理分散体中のマイクロメーターサイズの粒子は、本発明の磁気処理によってナノメーターサイズの粒子に破砕されたと結論することができる。
【実施例３】
【００５９】
２ｇ／Ｌのジアゼパム（ベルギー国のＺｗｅｖｅｇｅｍに所在するＡｌｐｈａ Ｐｈａｒｍａ ＮＶ社から市販されている）および２ｇ／ＬのＴｗｅｅｎ ８０（実施例１に記載したものと同一）を乳鉢内で二重蒸留水と混合した。結果として生じた懸濁液をビーカーに注ぎ入れ、２０分間にわたり超音波処理し、その後に使用するまでマグネチックスターラーを使用して６００ｒｐｍで持続的に攪拌し続けた。
【００６０】
この懸濁液の一部を、実施例２で使用したものに類似するが、総用量が１５０ｍＬである閉鎖システム（図２Ａ）内で磁気処理にかけた。磁場を通しての２，８２０回の再循環に相当する４．７Ｌ／分での処理の９０分後に、濾過するために磁気処理サンプルを収集した。この懸濁液の第２部分は、内蔵磁気装置を備えていない１５０ｍＬの閉鎖システム（図２Ｂ）内で処理した。磁場を通しての２，８２０回の再循環に相当する４．７Ｌ／分での処理の９０分後に、濾過するために空再循環サンプルを収集した。最初の懸濁液の第３の部分は、１時間にわたり６００ｒｐｍでマグネチックスターラーを使用して持続的に攪拌した（未処理参照サンプル）。
【００６１】
ポリテトラフルオロエチレン（以下、ＰＴＦＥと呼ぶ）を備え、孔径が０．４５μｍであるＰｒｏＦｉｌｌシリンジフィルタ（米国イリノイ州に所在するＡｌｌｔｅｃｈ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ Ｉｎｃ．から市販されている）を二重蒸留水で洗浄し、７０℃で１２時間かけて乾燥させた。ＰＴＦＥを備えて孔径が０．２μｍであるＰｒｏＦｉｌｌシリンジフィルタ（米国イリノイ州に所在するＡｌｌｔｅｃｈ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ Ｉｎｃ．から市販されている）は洗浄も乾燥もしなかった。４０ｍＬの懸濁液を濾過し、濾液をペトリ皿へ注ぎ入れ、フィルタとペトリ皿の両方を７０℃で４８時間にわたり乾燥させた。この実験は、両方のタイプのフィルタを使用して、磁気処理、空再循環および未処理の懸濁液を用いて実施した。乾燥させた後、ペトリ皿中およびフィルタ上に存在する固形物質の量を各実験について定量した。以下の表１は、総乾質量の百分率としてのフィルタによって保持された物質の量を表している。
【００６２】
【表１】
【００６３】
濾過中に界面活性剤（Ｔｗｅｅｎ ８０）が全く保持されなかったと想定すると、ほぼ全部のジアゼパム（９４〜９６％）は、未処理参照サンプル中には４５０ｎｍおよび２００ｎｍ両方のフィルタによって保持されると結論することができる。空再循環サンプル中では、ジアゼパムの３２％は４５０ｎｍより大きく、４２％は２００ｎｍより大きい。他方磁気処理サンプル中では、４５０ｎｍより大きいジアゼパムは１０％に過ぎず、２００ｎｍより大きいのは１６％である。これは、粒子の寸法に磁気処理が及ぼす有益な作用を例示している。空再循環サンプル中には未処理サンプル中に比較してフィルタ上により少ないジアゼパムが保持されていたという事実は、上昇した溶解度（例、ポンプによって生成された熱に起因するために）、閉鎖システムと接触している粒子の摩耗などを含む多数の要素によって説明し得る。
【実施例４】
【００６４】
４種の相違するサンプルについての２θ＝０．７〜２θ＝４０のＸ線回折図は、０．０２／４秒のステップでＳｉｅｍｅｎｓ Ｄ５０００ ｍａｔｉｃ Ｘ線回折計を用いて測定した。第１のサンプルは、結晶性イトラコナゾール（ベルギー国Ｂｅｅｒｓｅに所在するＪａｎｓｓｅｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａ社から入手できる；表２では「ｉｔｒａ」と略記されている）であった（Ｘ線回折パターンは図５に示されている）。第２のサンプルは、２５０ｍｇのこの結晶性イトラコナゾールを、１２０ｍｇのＴｗｅｅｎ ８０（実施例１に記載したものと同一）界面活性剤を含む８０ｍＬの二重蒸留水中に懸濁させることによって調製した。この懸濁液は磁気装置を備えていない８０ｍＬ閉鎖システム（図２Ｂ）内で、４．７Ｌ／分で１時間にわたり空再循環させたが、これは３，５２５回の再循環に相当する。空再循環の直後に、分散体を液体窒素中で保持した予冷ボール内で凝固させた。一晩にわたる凍結乾燥で水を１ｍｂａｒ未満で昇華させ、粉末サンプルを入手した（図６に示したＸ線回折パターン）。第３サンプルは、４５０ｍｇのヒドロキシプロピルメチルセルロース（ベルギー国Ｔｕｒｎｈｏｕｔに所在するＳａｎｉｃｏ社から、商標名ＨＰＭＣ ２９１０として市販で入手できる。ＨＰＭＣ２９１０は、セルロース上のヒドロキシプロピル置換基の１０重量％およびメチル置換基の２９重量％を示している）、３００ｍｇの結晶性イトラコナゾールおよび１２０ｍｇのＴｗｅｅｎ ８０を１００ｍＬの二重蒸留水中に添加することによって調製した。結果として生じた懸濁液を、磁気装置を備えた１００ｍＬの閉鎖システム（図２Ａ）内で４．７Ｌ／分で１時間にわたり磁気処理したが、これは１１ｍ／秒の速度で磁場に通過させる２，８２０回の再循環（通過）に相当する。粉末サンプルは、液体窒素中での即時の凝固および凍結乾燥後に入手した（Ｘ線回折パターンは図７に示した）。第４サンプルは、２５０ｍｇの結晶性イトラコナゾールおよび１００ｍｇのＴｗｅｅｎ ８０を１００ｍＬの二重蒸留水中に添加することによ
って調製した。この懸濁液を、磁気装置を備えた１００ｍＬの閉鎖システム（図２Ａ）内で４．７Ｌ／分で１時間にわたり磁気処理したが、これは１１ｍ／秒の速度で磁場に通過させる２，８２０回の再循環（通過）に相当する。粉末サンプルは、液体窒素中での即時の凝固および凍結乾燥後に入手した（Ｘ線回折パターンは図８に示した）。
【００６５】
４種のサンプルについて、２つの回折図ピークの幅の比較を実施した（表２）。ＸＲＤ回折図における幅広がりのピークの発生は、当業者によってナノサイズの粒子が存在することを明確に示していると見なされる。ピークの幅広がりを引き起こす臨界サイズもまた推定できる。（１）イトラコナゾール分子のサイズが約１．５ｎｍであること、そして（２）ピークの幅広がりを引き起こす反復単位の推定最高量は約５０であると推定すると、７５ｎｍ未満の粒子だけがピークの幅広がりの原因であると計算できる。
【００６６】
【表２】
【００６７】
磁気処理サンプルについて観察されたピーク幅は、未処理もしくは空再循環サンプルのものより明らかに高かったが、これは磁気処理サンプルがナノサイズのイトラコナゾール粒子をより多く含むことを示している。
【実施例５】
【００６８】
結晶性イトラコナゾールを含有する２種のサンプル（実施例４と同一）を、商標名ＸＬ３０ ＥＳＥＭ ＦＥＧとしてＦＥＩ Ｃｏｍｐａｎｙ（米国オレゴン州）から入手できる環境走査型電子顕微鏡（ＥＳＥＭ）を用いて分析した。第１のサンプルは、２５０ｍｇの結晶性イトラコナゾールを、１２０ｍｇのＴｗｅｅｎ ８０（実施例１に記載したものと同一）界面活性剤を含む８０ｍＬの二重蒸留水中に懸濁させることによって調製した。この懸濁液は磁気装置を備えていない８０ｍＬ閉鎖システム（図２Ｂ）内で４．７Ｌ／分で１時間にわたり空再循環させたが、これは３，５２５回の再循環に相当する。空再循環の直後に、分散体、液体窒素中で保持した予冷ボール内で凝固させた。一晩にわたる凍結乾燥で水を１ｍｂａｒ未満で昇華させ、粉末サンプルを入手した（図９に示したＳＥＭ写真）。第２のサンプルは、２５０ｍｇの結晶性イトラコナゾールおよび１００ｍｇの界面活性剤Ｔｗｅｅｎ ８０を１００ｍＬの二重蒸留水中に添加することによって調製した。この懸濁液は、磁気装置を備えた１００ｍＬの閉鎖システム（図２Ａ）内で４．７Ｌ／分で１時間にわたり磁気処理したが、これは１１ｍ／秒の速度で磁場に通過させる２，８２０回の再循環に相当する。粉末サンプルは、液体窒素中での即時の凝固および凍結乾燥後に入手した（ＳＥＭ写真は図１０に示した）。
【００６９】
空再循環サンプルのＥＳＥＭ写真（図９）は、自形結晶形態を備える主として大きな粒子を示している。写真の中心には、長さおよそ８０μｍおよび幅およそ２０μｍを備える大きなニードル形粒子が観察される。この粒子は、数マイクロメーターから数十マイクロメーターの少なくとも１つの寸法を備える極めて多数の大きな粒子に取り囲まれている。これらの粒子の多くの量は１つの寸法が他の寸法より明らかに長い結晶サイドを有するニードル形であるが、他の一部の大きな粒子は相違する形状を有する。しかしいずれにせよ
、大きな粒子の結晶面は明確な形状である。これらの大きな粒子の上には、サイズ約１μｍの少量の粒子が散乱している。これらの小さな粒子は、大きな粒子の極めて平滑な結晶面上の凹凸として観察される。
【００７０】
磁気処理サンプルのＥＳＥＭ写真（図１０）の中央は、長さおよそ６０μｍおよびおよそ幅３０μｍを備える粒子を示している。上側の結晶面は、中央では平滑であるが、両側の近くでは不規則である。この結晶面はさらに、２つの大きな亀裂も示している（１つは長さが２０μｍ、もう１つは長さが１０μｍ）。この大きな粒子の結晶形態は、空再循環サンプルの大きな粒子よりはるかに形状が明確ではないことが明らかである。記載した粒子は、図１０において示した大きな粒子だけである。無作為の形状のより小さな断片の多量の凝集体が大きな粒子の周囲に散乱している（図１０）。これらの凝集体の個々の断片はおよそ１μｍの寸法を有する。
【００７１】
磁気処理サンプル（図１０）と参照サンプル（図９）の間の明確なサイズおよび形状の相違は、磁気処理による有意な粒子サイズ低減の発生を確証した。
【実施例６】
【００７２】
ロペラミド（ベルギー国Ｂｅｅｒｓｅに所在するＪａｎｓｓｅｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａ社から市販されている）を含有する４種のサンプルを調製し、それらの溶解プロファイルを測定した。１ｇ／Ｌのロペラミドおよび１０ｇ／ＬのＡｅｒｏｓｉｌ ３８０（ドイツ国デュッセルドルフに所在するＤｅｇｕｓｓａａ社から市販されているケイ酸塩）を乳鉢中で二重蒸留水と混合した。未処理サンプルは、液体窒素中に維持した予冷ボール中でのこの懸濁液の一部の迅速な凝固およびその後の凍結乾燥によって調製した。懸濁液のまた別の部分は、図２Ｃのセットアップに従った、そして（１）ガラス製漏斗、（２）チュービング（Ｍａｓｔｅｒｆｌｅｘ Ｔｙｇｏｎｌａｂ Ｉ／Ｐ ７０、Ｃｏｌｅ−Ｐａｒｍｅｒ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ Ｃｏｍｐａｎｙ社、米国イリノイ州）、（３）ポンプ（Ｍａｓｔｅｒｆｌｅｘ Ｉ／Ｐ、Ｃｏｌｅ−Ｐａｒｍｅｒ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ
Ｃｏｍｐａｎｙ社、米国イリノイ州）、（４）Ａｌ−Ｎｉ−Ｃｏタイプの内蔵磁石（商標名Ｗ ＳＡＮ Ｒ１／４Ｄとしてベルギー国Ｂｏｒｇｅｒｈｏｕｔに所在するＣＥＰＩ−ＣＯ社から市販されている）、および（５）液体窒素中に維持した予冷ボールから構成される一連の９個の連結磁気装置を通してポンプで送出した。磁場を通る１１ｍ／秒の速度に相当する４．７Ｌ／ｍｉｎの流速および磁場内での９×１３６μｓの滞留時間を使用した。システムの出口では、この懸濁液は液体窒素中に維持した予冷ボール中で凝固させ、その後に凍結乾燥を実施した。これらの未処理および磁気処理サンプルの溶解プロファイルは図１１に示されている。
【００７３】
１ｇ／Ｌのロペラミドおよび２５ｍｇ／Ｌの界面活性剤Ｔｗｅｅｎ ８０を乳鉢中で二重蒸留水と混合した。未処理サンプルは、液体窒素中に維持した予冷ボール中でのこの懸濁液の一部の迅速な凝固およびその後の凍結乾燥によって調製した。この懸濁液のまた別の部分は、本明細書に記載した同一条件を用いて図２Ｃに記載の構成に従って一連の９個の連続磁気装置に通してポンプで送出した。この磁気システムの出口では、この懸濁液は液体窒素中に維持した予冷ボール中で凝固させ、その後に凍結乾燥を実施した。これらの未処理および磁気処理サンプルの溶解プロファイルは図１２に示されている。
【００７４】
溶解実験は、ＵＳＰ ２４法（パドル法、１００ｒｐｍ）を使用しながら、ＳＲ８ ＰＬＵＳ Ｈａｎｓｏｎ溶解試験ステーション（米国Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ社から市販されている）において実施した。サンプル（１６．７ｍｇのロペラミドに相当する）を水中の０．００５Ｍ フタル酸水素カリウム（ベルギー国Ｇｅｅｌに所在するＡｃｒｏｓ Ｏｒｇａｎｉｃｓ社から市販されている）および０．００１９２Ｎ ＮａＯＨの溶液である５００ｍＬの溶解媒体へ添加し、溶解媒体の温度は３７±０．１℃に維持した。２ｍＬのサ
ンプルを採取し、直ちに１０、２０、３０、４５、６０および１２０分後に各々新鮮溶解媒体と取り替え、その後０．４５μｍのＰＶＤＦフィルタ（米国ニューヨーク州に所在するＰａｌｌ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから市販されている）を用いてＨＰＬＣバイアル（１．５ｍＬ、ドイツ国ダルムシュタットに所在するＭｅｒｃｋ社から市販されている）内へ濾過した。対応する濃度は、ＨＰＬＣを用いた検量線から決定した。
【００７５】
この決定のために使用したＨＰＬＣシステムは、全部がＭｅｒｃｋ−Ｈｉｔａｃｈｉ社（ドイツ国ダルムシュタット）から市販されているＬｉＣｈｒｏＧｒａｐｈｓ（登録商標）Ｌ−７１００ ＨＰＬＣポンプ、１００μＬループを装備したＬ−７２００型オートサンプラ、２２０ｎｍに設定したＬ−７４００型ＵＶ検出器、およびＩｎｔｅｒｆａｃｅ Ｄ−７０００から構成した。ＵＶシグナルを検出し、Ｄ−７０００ ＨＳＭソフトウエアを用いてピークを積分した。全部のクロマトグラフィー分離は室温で実施した。使用したカラムは、Ｈｙｐｅｒｓｉｌ ＢＤＳ Ｃ１８（ドイツ国ダルムシュタットに所在するＭｅｒｃｋ社から市販されている）であった。移動相は０．００１Ｍのアセトニトリル／テトラブチルアンモニウムハイドロゲンサルフェート混合物（容量で３０：７０）から構成され、使用前に超音波処理によって脱気させた。流量は、総計１ｍＬ／分であった。これらの条件でのロペラミドの保持時間は７分であった。
【００７６】
ケイ酸塩（Ａｅｒｏｓｉｌ）の存在下および界面活性剤（Ｔｗｅｅｎ ８０）の存在下のどちらにおいても、図１１および１は、ロペラミドの溶解速度が、対応する未処理サンプルと比較して本発明の磁気処理によって有意に上昇することを示している。
【図面の簡単な説明】
【００７７】
【図１】動的光散乱法によって測定された、水中のＴｗｅｅｎ ８０界面活性剤のミセルサイズ分布を示した図である。
【図２】本発明の方法の１つの実施形態を実施するための装置の３つの概略構成図である。
【図３】未処理参照サンプルと比較した、２種の磁気処理ジアゼパムサンプルの粒子サイズ分布を示した図である。
【図４】濾過後の未処理参照サンプルと比較した、磁気処理ジアゼパムサンプルの粒子サイズ分布を示した図である。
【図５】未処理結晶性イトラコナゾールのＸ線回折パターンを示した図である。
【図６】イトラコナゾールおよびＴｗｅｅｎ ８０界面活性剤の混合物のＸ線回折パターンを示した図である。
【図７】イトラコナゾール、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）およびＴｗｅｅｎ ８０界面活性剤の磁気処理混合物のＸ線回折パターンを示した図である。
【図８】イトラコナゾールおよびＴｗｅｅｎ ８０界面活性剤の磁気処理混合物のＸ線回折パターンを示した図である。
【図９】イトラコナゾールおよびＴｗｅｅｎ ８０界面活性剤の混合物の環境走査型電子顕微鏡（ＳＥＭ）写真を示した図である。
【図１０】イトラコナゾールおよびＴｗｅｅｎ ８０界面活性剤の磁気処理混合物の環境ＳＥＭ写真を示した図である。
【図１１】未処理混合物と比較した、ロペラミドおよびケイ酸塩の磁気処理混合物の溶解プロファイルを示した図である。
【図１２】未処理混合物と比較した、ロペラミドおよびＴｗｅｅｎ ８０界面活性剤の磁気処理混合物の溶解プロファイルを示した図である。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
流体中に懸濁させた生物活性化合物粒子もしくは凝集体の平均サイズを、その中に懸濁させた生物活性化合物粒子もしくは凝集体を有する前記流体を１つ以上の磁場に通して１回以上流動させることによって低減させるための方法であって、前記生物活性化合物粒子もしくは凝集体の実質的部分の平均サイズを少なくとも２５％、好ましくは少なくとも５０％、より好ましくは少なくとも８０％低減させる方法。
【請求項２】
各前記磁場の強さが少なくとも約２，０００ガウスである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記方法を実施する前の前記生物活性化合物凝集体の平均サイズが約１０μｍ〜約１００μｍの範囲内にある、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記方法を実施した後の前記生物活性化合物凝集体の実質的部分の平均サイズが約０．４５μｍ〜５μｍの範囲内にある、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記実質的部分が前記懸濁させた凝集体の少なくとも５０重量％である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記方法を実施する前の前記生物活性化合物粒子の平均粒子サイズが約０．５μｍ〜約１０μｍの範囲内にある、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
実施後の前記生物活性化合物粒子の平均粒子サイズが約０．５ｎｍ〜約５００ｎｍの範囲まで低減される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記流体が液体である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記流体が水である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記流体が有機溶媒またはそれと水との組み合わせである、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記生物活性化合物粒子もしくは凝集体がスラリーの形態で前記流体中に懸濁され、かつ前記流体中の前記生物活性化合物粒子もしくは凝集体の濃度が、前記スラリーを前記磁場に通して流動させる間に優勢である物理的（温度、圧力）および化学的（ｐＨ）条件下で前記流体中の前記生物活性化合物の溶解限度の少なくとも２倍である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記流体が液体であり、前記液体を前記磁場に通して流動させるステップが、前記流体を前記磁場に通して流動させる間に優勢である圧力下で前記流体の凝固点と沸点との間の温度で実施される、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記流体が水であり、前記液体を前記１つ以上の磁場に通して流動させるステップが大気圧下の約２℃〜９５℃の温度で実施される、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記流体がガスもしくは超臨界流体である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記流体が１種以上の安定剤を含む、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記安定剤が、界面活性剤、ポリマー、ケイ酸塩、親水性物質もしくはそれらの組み合わせである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記安定剤が、界面活性剤でキャップされたナノ粒子を生成できるような量で界面活性剤を含有する、請求項１５または１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記流体が前記１つ以上の磁場に通して２回以上再循環される、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
各前記磁場を通る前記流体の線流速が０．２５〜２５ｍ／秒である、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
各前記磁場を通る５種の前記流体の滞留時間が６０マイクロ秒間〜１０秒間である、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記生物活性化合物が結晶形である、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記生物活性化合物が無定形である、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記生物活性化合物が生物薬剤分類系のクラスＩＩまたはクラスＩＶであると分類できる薬物である、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記生物活性化合物が約２ｍｇ／ｍＬ未満の水溶性を有する薬物である、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記生物活性化合物が約５μｇ／ｍＬ未満の水溶性を有する薬物である、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記生物活性化合物が、化粧品、診断薬、除草剤、殺虫剤、殺生物剤もしくは殺菌剤である、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
生物活性化合物調製物を製造するための工程であって、前記工程が生物活性化合物粒子もしくは凝集体の使用を含み、前記生物活性化合物粒子もしくは凝集体の実質的部分の平均サイズを少なくとも２５％低減させるステップを含み、このとき前記ステップが請求項１〜２６のいずれか一項に記載の方法を含む工程。
【請求項２８】
前記工程が、前記サイズを低減させるステップの後に実施される１つ以上の後処理ステップをさらに含む、請求項２７に記載の工程。
【請求項２９】
前記後処理ステップが、前記サイズを低減させるステップ中にその中に生物活性化合物粒子もしくは凝集体が懸濁されている流体を実質的に除去するための乾燥させるステップである、請求項２７または２８に記載の工程。
【請求項３０】
前記乾燥させるステップが凍結乾燥法を含む、請求項２９に記載の工程。
【請求項３１】
前記乾燥させるステップが噴霧乾燥法を含む、請求項２９に記載の工程。
【請求項３２】
前記後処理ステップが、アジュバントを任意的に乾燥させた低減されたサイズを備える粒子もしくは凝集体と一緒に混合するステップである、請求項２７〜３１のいずれか一項
に記載の工程。
【請求項３３】
請求項１〜２６のいずれか一項に記載の方法または請求項２７〜３２のいずれか一項に記載の工程によって入手される生物活性化合物粒子の集団。
【請求項１】
流体中に懸濁させた生物活性化合物粒子もしくは凝集体の平均サイズを、その中に懸濁させた生物活性化合物粒子もしくは凝集体を有する前記流体を１つ以上の磁場に通して１回以上流動させることによって低減させるための方法であって、前記生物活性化合物粒子もしくは凝集体の実質的部分の平均サイズを少なくとも２５％、好ましくは少なくとも５０％、より好ましくは少なくとも８０％低減させる方法。
【請求項２】
各前記磁場の強さが少なくとも約２，０００ガウスである、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記方法を実施する前の前記生物活性化合物凝集体の平均サイズが約１０μｍ〜約１００μｍの範囲内にある、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記方法を実施した後の前記生物活性化合物凝集体の実質的部分の平均サイズが約０．４５μｍ〜５μｍの範囲内にある、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
前記実質的部分が前記懸濁させた凝集体の少なくとも５０重量％である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
前記方法を実施する前の前記生物活性化合物粒子の平均粒子サイズが約０．５μｍ〜約１０μｍの範囲内にある、請求項１〜５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
実施後の前記生物活性化合物粒子の平均粒子サイズが約０．５ｎｍ〜約５００ｎｍの範囲まで低減される、請求項１〜６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項８】
前記流体が液体である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記流体が水である、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記流体が有機溶媒またはそれと水との組み合わせである、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
前記生物活性化合物粒子もしくは凝集体がスラリーの形態で前記流体中に懸濁され、かつ前記流体中の前記生物活性化合物粒子もしくは凝集体の濃度が、前記スラリーを前記磁場に通して流動させる間に優勢である物理的（温度、圧力）および化学的（ｐＨ）条件下で前記流体中の前記生物活性化合物の溶解限度の少なくとも２倍である、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記流体が液体であり、前記液体を前記磁場に通して流動させるステップが、前記流体を前記磁場に通して流動させる間に優勢である圧力下で前記流体の凝固点と沸点との間の温度で実施される、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１３】
前記流体が水であり、前記液体を前記１つ以上の磁場に通して流動させるステップが大気圧下の約２℃〜９５℃の温度で実施される、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記流体がガスもしくは超臨界流体である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１５】
前記流体が１種以上の安定剤を含む、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１６】
前記安定剤が、界面活性剤、ポリマー、ケイ酸塩、親水性物質もしくはそれらの組み合わせである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記安定剤が、界面活性剤でキャップされたナノ粒子を生成できるような量で界面活性剤を含有する、請求項１５または１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記流体が前記１つ以上の磁場に通して２回以上再循環される、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
各前記磁場を通る前記流体の線流速が０．２５〜２５ｍ／秒である、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
各前記磁場を通る５種の前記流体の滞留時間が６０マイクロ秒間〜１０秒間である、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
前記生物活性化合物が結晶形である、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
前記生物活性化合物が無定形である、請求項１〜２０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
前記生物活性化合物が生物薬剤分類系のクラスＩＩまたはクラスＩＶであると分類できる薬物である、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
前記生物活性化合物が約２ｍｇ／ｍＬ未満の水溶性を有する薬物である、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
前記生物活性化合物が約５μｇ／ｍＬ未満の水溶性を有する薬物である、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
前記生物活性化合物が、化粧品、診断薬、除草剤、殺虫剤、殺生物剤もしくは殺菌剤である、請求項１〜２５のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２７】
生物活性化合物調製物を製造するための工程であって、前記工程が生物活性化合物粒子もしくは凝集体の使用を含み、前記生物活性化合物粒子もしくは凝集体の実質的部分の平均サイズを少なくとも２５％低減させるステップを含み、このとき前記ステップが請求項１〜２６のいずれか一項に記載の方法を含む工程。
【請求項２８】
前記工程が、前記サイズを低減させるステップの後に実施される１つ以上の後処理ステップをさらに含む、請求項２７に記載の工程。
【請求項２９】
前記後処理ステップが、前記サイズを低減させるステップ中にその中に生物活性化合物粒子もしくは凝集体が懸濁されている流体を実質的に除去するための乾燥させるステップである、請求項２７または２８に記載の工程。
【請求項３０】
前記乾燥させるステップが凍結乾燥法を含む、請求項２９に記載の工程。
【請求項３１】
前記乾燥させるステップが噴霧乾燥法を含む、請求項２９に記載の工程。
【請求項３２】
前記後処理ステップが、アジュバントを任意的に乾燥させた低減されたサイズを備える粒子もしくは凝集体と一緒に混合するステップである、請求項２７〜３１のいずれか一項
に記載の工程。
【請求項３３】
請求項１〜２６のいずれか一項に記載の方法または請求項２７〜３２のいずれか一項に記載の工程によって入手される生物活性化合物粒子の集団。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図２】
【図３】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【公表番号】特表２００７−５０３３９９（Ｐ２００７−５０３３９９Ａ）
【公表日】平成１９年２月２２日（２００７．２．２２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００６−５２４１８１（Ｐ２００６−５２４１８１）
【出願日】平成１６年８月２５日（２００４．８．２５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＢＥ２００４／０００１２１
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０１８６１１
【国際公開日】平成１７年３月３日（２００５．３．３）
【出願人】（５９９０９８４９３）カー・イュー・ルーベン・リサーチ・アンド・ディベロップメント (83)
【氏名又は名称原語表記】Ｋ．Ｕ． Ｌｅｕｖｅｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ＆ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１９年２月２２日（２００７．２．２２）
【国際特許分類】
【出願日】平成１６年８月２５日（２００４．８．２５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＢＥ２００４／０００１２１
【国際公開番号】ＷＯ２００５／０１８６１１
【国際公開日】平成１７年３月３日（２００５．３．３）
【出願人】（５９９０９８４９３）カー・イュー・ルーベン・リサーチ・アンド・ディベロップメント (83)
【氏名又は名称原語表記】Ｋ．Ｕ． Ｌｅｕｖｅｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ＆ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ
【Ｆターム（参考）】
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