抗凝固療法の主要な制限の１つは、治療に関連する出血の危険性、および過剰投薬の場合または緊急外科的処置が必要な場合において、抗凝固活性を迅速に反転させる能力の制限である。したがって、すべての形態の抗凝固療法に対する特異的かつ有効な解毒剤が非常に望ましい。本発明は、第Ｘａ因子を標的とする抗凝固剤に対する解毒剤に関する。解毒剤は、第Ｘａ因子阻害剤と結合してそれを実質的に中和するが、集合してプロトロンビナーゼ複合体を形成しない第Ｘａ因子タンパク質誘導体である。本明細書に記載の誘導体は、内因性の凝固活性を欠くか、それが減少している。本明細書では、現在第Ｘａ因子阻害剤を用いた抗凝固療法を受けている患者において出血を停止または予防する方法を開示する。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
第Ｘａ因子阻害剤と結合し、そしてプロトロンビナーゼ複合体を集合して形成しない第Ｘａ因子タンパク質誘導体の有効量を対象に投与することを含む、前記第Ｘａ因子阻害剤を用いた抗凝固療法を受けている前記対象において出血を防止または減少する方法。
【請求項２】
前記第Ｘａ因子阻害剤と結合し、そしてプロトロンビナーゼ複合体を集合して形成しないＸａタンパク質誘導体の有効量を対象に投与することを含む、前記対象において体外から投与した第Ｘａ因子阻害剤と選択的に結合してそれを阻害する方法。
【請求項３】
前記第Ｘａ因子タンパク質誘導体が、直接または間接的に前記第Ｘａ因子阻害剤と結合する、請求項１または請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記誘導体が、凝固促進活性が減少しているか、または凝固促進活性を有さない、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記誘導体が、Ｇｌａ欠損第Ｘａ因子タンパク質誘導体またはデス−Ｇｌａ第Ｘａ因子タンパク質である、請求項１から４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
前記誘導体が修飾された活性部位を有する、請求項１から５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
前記誘導体が、配列番号３の少なくともアミノ酸残基４６〜４４８またはその均等物を含む、請求項１から６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
前記誘導体が、配列番号３の少なくともアミノ酸残基４６〜１３９および１９５〜４４８またはその均等物を含む、請求項１から７のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
前記誘導体が、ｆＸａの軽鎖を欠き、前記重鎖中に存在するセリンプロテアーゼ触媒ドメインを含有する、請求項１から８のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
前記誘導体が、配列番号５のアミノ酸配列を含むポリペプチドである、請求項１から９のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
前記誘導体が、タンパク質分解活性を欠くが、結合に必要な構造的特徴を維持するように任意選択で化学的にまたは組換えによって修飾された触媒ドメインを含み、前記ドメインが、
ａ．血漿カリクレイン、トロンビン、およびトリプシンからなる群から選択される哺乳動物プロテアーゼ；または
ｂ．細菌プロテアーゼのサブチリシン
のいずれかに由来する、請求項１から１０のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
前記誘導体が、修飾された軽鎖を有する配列番号７のアミノ酸配列またはその均等物を含む、請求項１から１１のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
前記誘導体が、リン脂質膜結合が減少するように修飾された軽鎖を含む、請求項１から１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
前記修飾された軽鎖が、野生型ヒト第Ｘａ因子タンパク質の前記Ｇｌａ−ドメインと比較して、前記Ｇｌａ−ドメイン中に少なくとも１つのアミノ酸置換、付加、または欠失を含む、請求項１から１３のいずれかに記載の方法。
【請求項１５】
前記誘導体が、未カルボキシル化、低カルボキシル化、および脱カルボキシル化第Ｘａ因子タンパク質からなる群から選択される、請求項１から１４のいずれかに記載の方法。
【請求項１６】
前記誘導体が、修飾されている配列番号７の前記重鎖またはその均等物を含む、請求項１から１５のいずれかに記載の方法。
【請求項１７】
前記誘導体が、Ｇｌｕ２１６、Ｇｌｕ２１８、Ａｒｇ３３２、Ａｒｇ３４７、Ｌｙｓ３５１、およびＳｅｒ３７９からなる群から選択されるアミノ酸の少なくとも１つのアミノ酸置換によって修飾されている、請求項１から１６のいずれかに記載の方法。
【請求項１８】
Ｓｅｒ３７９がデヒドロ−アラニンまたはアラニンへと修飾されている、請求項１から１７のいずれかに記載の方法。
【請求項１９】
前記誘導体が、配列番号１０のアミノ酸配列またはその均等物を有するデス−Ｇｌａアンヒドロ−ｆＸａである、請求項１から１８のいずれかに記載の方法。
【請求項２０】
前記誘導体が、配列番号１１のアミノ酸配列またはその均等物を有するデス−Ｇｌａ ｆＸａ−Ｓ３７９Ａである、請求項１から１９のいずれかに記載の方法。
【請求項２１】
前記誘導体が、ＡＴＩＩＩ、補因子ｆＶ／ｆＶａおよび／またはｆＶＩＩＩ／ｆＶＩＩＩａとの相互作用が減少しており、配列番号７のアミノ酸配列またはその均等物を含む、請求項１から２０のいずれかに記載の方法。
【請求項２２】
前記誘導体が、配列番号１２もしくは１３もしくは１５のアミノ酸配列または配列番号１２もしくは１３もしくは１５と少なくとも８０％の相同性を有するポリペプチドを含む、請求項１から２１のいずれかに記載の方法。
【請求項２３】
前記誘導体が、アミノ酸位置Ａｒｇ３０６、Ｇｌｕ３１０、Ａｒｇ３４７、Ｌｙｓ３５１、Ｌｙｓ４１４、またはＡｒｇ４２４で少なくとも１つのアミノ酸置換を有する、請求項１から２２のいずれかに記載の方法。
【請求項２４】
前記誘導体が、ＥＧＦドメイン中に修飾を有し、前記修飾が、ＥＧＦ１ドメインの欠失、ＥＧＦ２ドメインの欠失、ならびに前記ＥＧＦ１およびＥＧＦ２ドメインの両方の欠失からなる群から選択される、請求項１から２３のいずれかに記載の方法。
【請求項２５】
前記誘導体が、前記誘導体の循環半減期を延長させることができる部分とコンジュゲートしている、請求項１から２４のいずれかに記載の方法。
【請求項２６】
前記部分が、ポリエチレングリコール、アシル基、リポソーム、カプセル封入剤、担体タンパク質、人工リン脂質膜、ナノ粒子、Ｆｃペプチド断片、Ｆｃ担体ドメインおよびｆＸａ誘導体を含むキメラタンパク質ならびにその組合せからなる群から選択される、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記誘導体の循環半減期を延長させる薬剤を有効量投与することをさらに含む、請求項１から２６のいずれかに記載の方法。
【請求項２８】
前記薬剤が、ｆＸａの非活性部位またはα−２−マクログロブリンと結合したｆＸａ誘導体を特異的に認識してそれと結合する抗ｆＸａ抗体である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
前記第Ｘａ因子阻害剤が、フォンダパリヌクス、イドラパリナックス、ビオチン標識イドラパリナックス、エノキサパリン、ｆｒａｇｍｉｎ、ＮＡＰ−５、ｒＮＡＰｃ２、組織因子経路阻害剤、ＤＸ−９０６５ａ、ＹＭ−６０８２８、ＹＭ−１５０、アピキサバン、リバロキサバン、ＰＤ−３４８２９２、オタミキサバン、ＤＵ−１７６ｂ、ＬＹ５１７７１７、ＧＳＫ９１３８９３、ラザキサバン、低分子量ヘパリン、ベトリキサバンまたは製薬上許容されるその塩、およびその組合せからなる群から選択される、請求項１から２８のいずれかに記載の方法。
【請求項３０】
前記第Ｘａ因子阻害剤が、ベトリキサバン、リバラオキサバン、アピキサバン、低分子量ヘパリン、およびその組合せから選択される、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記対象が、出血、重要臓器内への出血、再手術または新しい治療手順を要する出血、および関連する明白な出血を伴う２．０以上の出血指数からなる群から選択される臨床的な大量出血事象を起こしている、請求項１から３０のいずれかに記載の方法。
【請求項３２】
前記対象が、持続性または再発性の鼻出血、治療手順を必要としない直腸または尿路の出血、実質的な注射部位の血腫、非注射部位での自発性血腫、小さな外傷に伴って発生する血腫、実質的な失血、および予定外の輸血を要する出血からなる群から選択される出血事象を起こしている、請求項１から３１のいずれかに記載の方法。
【請求項３３】
前記誘導体を手術前に投与する、請求項１から３２のいずれかに記載の方法。
【請求項３４】
第Ｘａ因子阻害剤と結合し、プロトロンビナーゼ複合体を集合して形成しない第Ｘａ因子誘導体タンパク質と、製薬上許容される担体とを含む薬剤組成物。
【請求項３５】
配列番号１２のアミノ酸配列または配列番号１２と少なくとも８０％の相同性を有するポリペプチドを含む、単離したポリペプチド。
【請求項３６】
配列番号１２のアミノ酸配列を含む、単離したポリペプチド。
【請求項３７】
配列番号１３のアミノ酸配列または配列番号１３と少なくとも８０％の相同性を有するポリペプチドを含む、単離した二本鎖ポリペプチド。
【請求項３８】
配列番号１５のアミノ酸配列または配列番号１５と少なくとも８０％の相同性を有するポリペプチドを含む、単離したポリペプチド。
【請求項３９】
請求項３５から３８のいずれか一項に記載のポリペプチドと共有または非共有結合した担体を含む、ペプチドコンジュゲート。
【請求項４０】
前記担体が、リポソーム、ミセル、製薬上許容されるポリマー、または製薬上許容される担体である、請求項３９に記載のペプチドコンジュゲート。
【請求項４１】
担体および請求項３５から３８のいずれか一項に記載のポリペプチドを含む薬剤組成物。
【請求項４２】
請求項３５から３８のいずれか一項に記載のポリペプチドをコードしているポリヌクレオチド。
【請求項４３】
請求項３５から３８のいずれか一項に記載のポリペプチドと結合する抗体。
【請求項４４】
前記抗体が、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体またはヒト化抗体である、請求項４３に記載の抗体。
【請求項４５】
請求項４３に記載の抗体の生物活性断片。
【請求項４６】
検出可能に標識されている、請求項４３に記載の抗体。
【請求項４７】
請求項４３に記載の抗体および担体を含む組成物。
【請求項４８】
請求項４５に記載の抗体断片を含む組成物。
【請求項４９】
請求項４６に記載の抗体および前記抗体と特異的に結合するポリペプチドを含む、抗体−ペプチド複合体。
【請求項５０】
前記ポリペプチドが、それに対する抗体が産生されたポリペプチドである、請求項４９に記載の複合体。
【請求項５１】
前記抗体が、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、キメラ抗体またはヒト化抗体である、請求項４９に記載の複合体。
【請求項５２】
請求項３５から３８のいずれか一項に記載のポリペプチドをコードしているポリヌクレオチドを、原核または真核宿主細胞中で発現させることを含む、請求項３５から３８のいずれか一項に記載のポリペプチドを調製する方法。
【請求項５３】
前記ポリペプチドが、配列番号１２のアミノ酸配列を含み、前記ポリヌクレオチドが、配列番号１６のヌクレオチド配列を含む、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記宿主細胞がチャイニーズハムスター卵巣細胞である、請求項５２に記載の方法。
【請求項５５】
前記ポリペプチドを単離することをさらに含む、請求項５２から５４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５６】
請求項３５から３８のいずれか一項に記載のポリペプチドをコードしているポリヌクレオチドを含む、単離した原核または真核宿主細胞。
【請求項５７】
担体および請求項５６に記載の原核または真核宿主細胞を含む組成物。
【請求項５８】
請求項４１に記載の組成物を対象に有効量投与することを含む、第Ｘａ因子阻害剤を用いた抗凝固療法を受けている前記対象において出血を防止または減少する方法。
【請求項５９】
請求項４１に記載の組成物を対象に有効量投与することを含む、第Ｘａ因子阻害剤を用いた抗凝固療法を受けている前記対象において、体外から投与した第Ｘａ因子阻害剤と選択的に結合してそれを阻害する方法。
【請求項６０】
前記第Ｘａ因子阻害剤が、フォンダパリヌクス、イドラパリナックス、ビオチン標識イドラパリナックス、エノキサパリン、ｆｒａｇｍｉｎ、ＮＡＰ−５、ｒＮＡＰｃ２、組織因子経路阻害剤、ＤＸ−９０６５ａ、ＹＭ−６０８２８、ＹＭ−１５０、アピキサバン、リバロキサバン、ＰＤ−３４８２９２、オタミキサバン、ＤＵ−１７６ｂ、ＬＹ５１７７１７、ＧＳＫ９１３８９３、ラザキサバン、低分子量ヘパリン、ベトリキサバンまたは製薬上許容されるその塩、およびその組合せからなる群から選択される、請求項５８または５９に記載の方法。
【請求項６１】
前記第Ｘａ因子阻害剤が、ベトリキサバン、リバラオキサバン、アピキサバン、低分子量ヘパリン、およびその組合せから選択される、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
前記誘導体を手術前に投与する、請求項６０に記載の方法。

【図２１】

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１３】

【図１４】

【図１５】

【図１６】

【図１７】

【図１８】

【図１９】

【図２０】

【図２２】

【公表番号】特表２０１０−５３９９４５（Ｐ２０１０−５３９９４５Ａ）
【公表日】平成２２年１２月２４日（２０１０．１２．２４）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１０−５２７２２０（Ｐ２０１０−５２７２２０）
【出願日】平成２０年９月２６日（２００８．９．２６）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０７８０１４
【国際公開番号】ＷＯ２００９／０４２９６２
【国際公開日】平成２１年４月２日（２００９．４．２）
【出願人】（５０６１０９１５５）ポートラ　ファーマシューティカルズ，　インコーポレイテッド (19)
【Ｆターム（参考）】