筋緊張性ジストロフィーのためのタンパク質置換治療に関する組成物および方法
開示されるのは、ポリＣＵＧおよびポリＣＣＵＧ繰り返しＲＮＡおよびこれら繰り返しＲＮＡ配列に結合するタンパク質の相互作用に関する組成物および方法である。また開示されるのは、ポリ（ＣＵＧ）ｅｘｐまたはポリ（ＣＣＵＧ）ｅｘｐＲＮＡのマッスルブラインドとの相互作用を阻害する工程を包含するか、または筋緊張性ジストロフィーにおけるスプライス異常の改善を引き起こすことによりＤＭ１またはＤＭ２を処置する方法である。
Notice: Undefined index: DEJ in /mnt/www/gzt_disp.php on line 298
【特許請求の範囲】
【請求項１】
タンパク質とリガンドとの相互作用を阻害する薬剤をスクリーニングする方法であって、該方法は、以下：
ａ）該リガンドを基材に捕捉させる工程；
ｂ）標識化タンパク質を該リガンドと混合する工程；
ｃ）薬剤を工程ｂ）の混合物と接触させる工程；
ｄ）該標識のレベルを決定する工程；および
ｅ）コントロールに対して該標識の量を比較する工程
を包含し、該標識レベルの減少は、該相互作用を阻害する薬剤を示す、方法。
【請求項２】
前記タンパク質が、ポリＣＵＧもしくはポリＣＣＵＧの繰り返しＲＮＡと相互作用するタンパク質、または、ポリＣＵＧもしくはポリＣＣＵＧの繰り返しにより分離されたタンパク質である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ポリＣＵＧもしくはポリＣＣＵＧの繰り返しと相互作用するタンパク質、または、前記ポリＣＵＧもしくはポリＣＣＵＧの繰り返しにより分離されたタンパク質が、ＭＢＮＬ１、ＭＢＮＬ２またはＭＢＮＬ３である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記リガンドが、ポリＣＵＧもしくはポリＣＣＵＧの繰り返しを含むＲＮＡである、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記ポリＣＵＧもしくはポリＣＣＵＧの繰り返しの隣に、ＤＭＰＫ遺伝子に由来するＲＮＡ配列、または、基材への捕捉を可能にする配列が配置されている、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記ポリＣＵＧもしくはポリＣＣＵＧの繰り返しリガンドが、前記基材に結合された相補的な核酸に結合させることによって、該基質に結合される、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記相補的な核酸がビオチン化される、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記ビオチン化核酸が、前記基材に結合されたストレプトアビジンと、ビオチンとの結合によって、該基材に結合される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記相補的な核酸がオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）である、請求項６に記載の方法。
【請求項１０】
前記基材がポリスチレンプレートである、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記標識が蛍光標識である、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記蛍光のレベルが、蛍光計または蛍光プレートリーダーにより決定される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
タンパク質とリガンドとの相互作用を阻害する薬剤をスクリーニングする方法であって、該方法は、以下：
ａ）基材に結合したタンパク質を標識化リガンドと混合する工程；
ｂ）薬剤を工程ａ）の混合物と接触させる工程；
ｃ）該標識のレベルを決定する工程；および
ｄ）コントロールに対して該標識の量を比較する工程
を包含し、該標識レベルの減少は、該相互作用を阻害する薬剤を示す、方法。
【請求項１４】
前記リガンドが、ポリＣＵＧもしくはポリＣＣＵＧの繰り返しＲＮＡを含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記タンパク質が、ポリＣＵＧもしくはポリＣＣＵＧの繰り返しＲＮＡが相互作用するタンパク質、または、ポリＣＵＧもしくはポリＣＣＵＧの繰り返しによって分離されたタンパク質である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
前記ポリＣＵＧもしくはポリＣＣＵＧの繰り返しと相互作用するタンパク質、または、前記ポリＣＵＧもしくはポリＣＣＵＧの繰り返しにより分離されたタンパク質が、ＭＢＮＬ１、ＭＢＮＬ２またはＭＢＮＬ３である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記基材がニトロセルロースフィルタである、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記標識が蛍光標識である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１９】
第一のタンパク質と、核酸上の第一の認識エレメントとの相互作用を阻害する薬剤をスクリーニングする方法であって、該方法は、以下：
ａ）該第一のタンパク質、第二のタンパク質、および、第二の認識エレメントに隣接して該第一の認識エレメントを含む核酸、を含む細胞に薬剤を投与する工程であって、該第一のタンパク質は、該第一の認識エレメントに結合し、そして、該第二のタンパク質は該第二の認識エレメントに結合する、工程；ならびに
ｂ）該第一のタンパク質および該第二のタンパク質の共局在化を検出する工程
を包含し、コントロールに対する、該第一のタンパク質および第二のタンパク質の共局在化の減少は、該相互作用を阻害する薬剤を示す、方法。
【請求項２０】
前記第一のタンパク質がＭＢＮＬ１、ＭＢＮＬ２またはＭＢＮＬ３であり、前記第一の認識エレメントがポリＣＵＧ繰り返しＲＮＡである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記第二のタンパク質がＭＳ２であり、前記第二の認識エレメントが、ＭＳ２被膜タンパク質ＲＮＡ認識エレメントである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
前記第一のタンパク質および前記第二のタンパク質のうち少なくとも一方がドナー蛍光色素を含み、そして、該第一のタンパク質および該第二のタンパク質のうち少なくとも一方がアクセプター色素を含み、該第一のタンパク質と該第二のタンパク質とが共局在化している場合に、該ドナー蛍光色素の励起が、該アクセプター色素を励起する蛍光の放出をもたらす、請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
前記第一のタンパク質および前記第二のタンパク質のうち少なくとも一方が分割βガラクトシダーゼタンパク質の第一の半体を含み、そして、該第一のタンパク質および該第二のタンパク質のうち少なくとも一方が該分割βガラクトシダーゼタンパク質の第二の半体を含み、該第一のタンパク質と該第二のタンパク質とが共局在化している場合に、該βガラクトシダーゼ基質の加水分解が、蛍光の発光をもたらす、請求項１９に記載の方法。
【請求項２４】
前記第一のタンパク質および前記第二のタンパク質のうち少なくとも一方が分割蛍光タンパク質の第一の半体を含み、そして、該第一のタンパク質および該第二のタンパク質のうち少なくとも一方が該分割蛍光タンパク質の第二の半体を含み、該第一のタンパク質と該第二のタンパク質とが共局在化している場合に、該分割蛍光タンパク質の励起が、蛍光の放出をもたらす、請求項１９に記載の方法。
【請求項２５】
前記分割蛍光タンパク質がＶｅｎｕｓ蛍光タンパク質（ＶＦＰ）である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
スプライス異常を改善する薬剤をスクリーニングする方法であって、該方法は、以下：
ａ）スプライシング調節因子、過剰発現されたポリＣＵＧもしくはポリＣＣＵＧの繰り返しＲＮＡ、およびスプライス異常レポーター構築物を含む細胞に薬剤を導入する工程であって、該レポーター構築物は、標識化タンパク質をコードする１以上の遺伝子が隣に配置された、ポリＣＵＧもしくはポリＣＣＵＧの繰り返しにより誘発されるスプライス異常に感受性の遺伝子を含む、工程；ならびに
ｂ）該標識化タンパク質のレベルを測定する工程；ならびに
ｃ）標識化タンパク質の割合を比較する工程
を包含し、標識化タンパク質の増加は、スプライス異常を改善する薬剤を示す、方法。
【請求項２７】
請求項２６に記載の方法であって、ポリＣＵＧもしくはポリＣＣＵＧに感受性の前記遺伝子の隣に、第一の標識化タンパク質および第二の標識化タンパク質をコードする遺伝子が配置され、該第一のタンパク質と該第二のタンパク質とが示差的に標識され；そして、該方法がさらに、
ｄ）該第一の標識化タンパク質の該第二の標識化タンパク質に対する割合を比較する工程
を包含し、高い割合は、スプライス異常を改善する薬剤を示す、方法。
【請求項２８】
前記第一の標識化タンパク質および第二の標識化タンパク質が、それぞれ、ＹＦＰおよびＹ・ＣＦＰである、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
ポリＣＵＧもしくはポリＣＣＵＧに感受性の前記遺伝子の隣に、単一の標識化タンパク質をコードする遺伝子が配置され、該標識化タンパク質の増加は、スプライス異常を改善する薬剤を示す、請求項２６に記載の方法。
【請求項３０】
前記標識化タンパク質がＧＦＰである、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記スプライシング調節因子が、ＭＢＮＬ１、ＭＢＮＬ２、ＭＢＮＬ３、ＣＵＧ−ＢＰＩまたはＥＴＲ−３である、請求項２６に記載の方法。
【請求項３２】
前記スプライス異常に感受性の遺伝子が、ＳＥＲＣＡ１エキソン２２またはＴＮＮＴ３の胎児エキソンである、請求項２６に記載の方法。
【請求項３３】
前記蛍光のレベルが、蛍光比色法または蛍光共鳴エネルギー転移（ＦＲＥＴ）によって決定される、請求項２６に記載の方法。
【請求項３４】
スプライス異常を改善する薬剤をスクリーニングする方法であって、該方法は、以下：
ａ）スプライシング調節因子、過剰発現されたポリＣＵＧもしくはポリＣＣＵＧの繰り返しＲＮＡ、およびスプライス異常レポーター構築物を含む細胞に薬剤を導入する工程であって、該レポーター構築物は、ルシフェラーゼ遺伝子が隣に配置された、ポリＣＵＧもしくはポリＣＣＵＧにより誘発されるスプライス異常に感受性の遺伝子を含む、工程；ならびに
ｂ）該ルシフェラーゼ活性を測定する工程
を包含し、リシフェラーゼ活性の増加は、スプライス異常を改善する薬剤を示す、方法。
【請求項３５】
処置を必要とする被験体における筋ジストロフィ（ＤＭ）を処置する方法であって、ＭＢＮＬ１のポリＣＵＧｅｘｐｍＲＮＡとの相互作用を阻害する薬剤を該被験体に投与する工程を包含する、方法。
【請求項３６】
前記ＤＭが１型筋ジストロフィである、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記薬剤がモルホリノである、請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】
前記モルホリノがＣＡＧ２５である、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記モルホリノが配列番号３に示される、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記モルホリノがアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＯＮ）である、請求項３７に記載の方法。
【請求項４１】
前記モルホリノが配列番号４または配列番号６に示される、請求項３７に記載の方法。
【請求項４２】
前記薬剤がＰＮＡ−ＣＡＧである、請求項３５に記載の方法。
【請求項４３】
前記ＰＮＡ−ＣＡＧが、２回、３回、４回もしくは５回のＣＡＧ繰り返しから構成される、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記薬剤がアミノグリコシド系抗生物質である、請求項３５に記載の方法。
【請求項４５】
処置を必要とする被験体における筋ジストロフィを処置する方法であって、スプライス異常を矯正する薬剤を該被験体に投与する工程を包含する、方法。
【請求項４６】
前記スプライス異常がイオンチャネル疾患をもたらす、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記薬剤がモルホリノである、請求項４５に記載の方法。
【請求項４８】
前記モルホリノがＣＡＧ２５である、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記モルホリノが配列番号３に示される、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記モルホリノが塩素イオンチャネルＣｌＣ−１を標的とする、請求項４７に記載の方法。
【請求項５１】
前記モルホリノがアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＯＮ）である、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記モルホリノが配列番号４または配列番号５に示される、請求項５０に記載の方法。
【請求項５３】
前記薬剤が、ペプチド核酸（ＰＮＡ）−ＣＡＧである、請求項４５に記載の方法。
【請求項５４】
前記ＰＮＡ−ＣＡＧが、２回、３回、４回もしくは５回のＣＡＧ繰り返しから構成される、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記薬剤がアミノグリコシド系抗生物質である、請求項４５に記載の方法。
【請求項５６】
前記抗生物質がネオマイシンまたはゲンタマイシンである、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
第一のタンパク質、第二のタンパク質、および、第二の認識エレメントに隣接して第一の認識エレメントを含む核酸、を含む細胞であって、該第一のタンパク質は該第一の認識エレメントに結合し、そして、該第二のタンパク質は該第二の認識エレメントに結合し、該第一のタンパク質および該第二のタンパク質のうち少なくとも一方は、分割蛍光タンパク質の第一の半体を含み、そして、該第一のタンパク質および該第二のタンパク質のうち少なくとも一方は、該分割蛍光タンパク質の第二の半体を含み、該第一のタンパク質と該第二のタンパク質とが共局在化している場合、該分割蛍光タンパク質の励起が、蛍光の放出をもたらす、細胞。
【請求項５８】
ポリスチレンプレート、ポリＣＵＧｅｘｐｍＲＮＡ、捕捉オリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、および、標識されたマッスルブラインドタンパク質を含む、キット。
【請求項５９】
前記マッスルブラインドタンパク質が、ＭＢＮＬ１、ＭＢＮＬ２またはＭＢＮＬ３である、請求項５８に記載のキット。
【請求項６０】
前記マッスルブラインドタンパク質が蛍光標識される、請求項５８に記載のキット。
【請求項６１】
ニトロセルロースフィルタプレート、標識化ポリＣＵＧｅｘｐｍＲＮＡ、およびマッスルブラインドタンパク質を含む、キット。
【請求項６２】
前記マッスルブラインドタンパク質が、ＭＢＮＬ１、ＭＢＮＬ２またはＭＢＮＬ３である、請求項６１に記載のキット。
【請求項６３】
前記ポリＣＵＧｅｘｐｍＲＮＡが蛍光標識される、請求項６１に記載のキット。
【請求項６４】
配列番号３に示されるアンチセンスオリゴヌクレオチド。
【請求項６５】
配列番号４に示されるアンチセンスオリゴヌクレオチド。
【請求項６６】
配列番号５に示されるアンチセンスオリゴヌクレオチド。
【請求項６７】
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、ペプチド核酸バックボーンを有する、請求項６４〜６６のいずれかに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
【請求項６８】
処置を必要とする被験体において筋ジストロフィを処置する方法であって、請求項６７に記載のペプチド核酸を該被験体に投与する工程を包含する、方法。
【請求項６９】
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドがモルホリノである、請求項６４〜６６のいずれかに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
【請求項７０】
処置を必要とする被験体において筋ジストロフィを処置する方法であって、請求項６９に記載のモルホリノを該被験体に投与する工程を包含する、方法。
【請求項７１】
タンパク質とリガンドとの相互作用を阻害する薬剤をスクリーニングする方法であって、該方法は、以下：
ａ）該タンパク質または標識化リガンドに薬剤を接触させる工程；
ｂ）該タンパク質を標識化リガンドと混合する工程；
ｃ）該タンパク質に結合した標識のレベルを決定する工程；および
ｄ）コントロールに対して該標識の量を比較する工程
を包含し、コントロールに対する、該タンパク質に結合した標識レベルの減少は、該相互作用を阻害する薬剤を示す、方法。
【請求項７２】
タンパク質とリガンドとの相互作用を阻害する薬剤をスクリーニングする方法であって、該方法は、以下：
ａ）標識化タンパク質またはリガンドに薬剤を接触させる工程；
ｂ）該タンパク質をリガンドと混合する工程；
ｃ）該標識のレベルを決定する工程；および
ｄ）コントロールに対して該標識の量を比較する工程
を包含し、該タンパク質に結合した標識のレベルの減少は、該相互作用を阻害する薬剤を示す、方法。
【請求項７３】
タンパク質とリガンドとの相互作用を阻害する薬剤をスクリーニングする方法であって、該方法は、以下：
ａ）該タンパク質および標識化リガンドを混合する工程；
ｂ）該タンパク質および標識化リガンドに薬剤を接触させる工程；ならびに
ｃ）コントロールに対して該タンパク質に結合したリガンドの量を比較する工程
を包含し、該タンパク質に結合した標識のレベルの減少は、該相互作用を阻害する薬剤を示す、方法。
【請求項７４】
タンパク質とリガンドとの相互作用を阻害する薬剤をスクリーニングする方法であって、該方法は、以下：
ａ）該タンパク質または標識化リガンドを薬剤に接触させる工程；
ｂ）該薬剤の存在下で、該タンパク質および標識化リガンドを混合する工程；ならびに
ｃ）コントロールに対して該タンパク質に結合したリガンドの量を比較する工程
を包含し、該タンパク質に結合した標識のレベルの減少は、該相互作用を阻害する薬剤を示す、方法。
【請求項１】
タンパク質とリガンドとの相互作用を阻害する薬剤をスクリーニングする方法であって、該方法は、以下：
ａ）該リガンドを基材に捕捉させる工程；
ｂ）標識化タンパク質を該リガンドと混合する工程；
ｃ）薬剤を工程ｂ）の混合物と接触させる工程；
ｄ）該標識のレベルを決定する工程；および
ｅ）コントロールに対して該標識の量を比較する工程
を包含し、該標識レベルの減少は、該相互作用を阻害する薬剤を示す、方法。
【請求項２】
前記タンパク質が、ポリＣＵＧもしくはポリＣＣＵＧの繰り返しＲＮＡと相互作用するタンパク質、または、ポリＣＵＧもしくはポリＣＣＵＧの繰り返しにより分離されたタンパク質である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ポリＣＵＧもしくはポリＣＣＵＧの繰り返しと相互作用するタンパク質、または、前記ポリＣＵＧもしくはポリＣＣＵＧの繰り返しにより分離されたタンパク質が、ＭＢＮＬ１、ＭＢＮＬ２またはＭＢＮＬ３である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記リガンドが、ポリＣＵＧもしくはポリＣＣＵＧの繰り返しを含むＲＮＡである、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記ポリＣＵＧもしくはポリＣＣＵＧの繰り返しの隣に、ＤＭＰＫ遺伝子に由来するＲＮＡ配列、または、基材への捕捉を可能にする配列が配置されている、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記ポリＣＵＧもしくはポリＣＣＵＧの繰り返しリガンドが、前記基材に結合された相補的な核酸に結合させることによって、該基質に結合される、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
前記相補的な核酸がビオチン化される、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記ビオチン化核酸が、前記基材に結合されたストレプトアビジンと、ビオチンとの結合によって、該基材に結合される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記相補的な核酸がオリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）である、請求項６に記載の方法。
【請求項１０】
前記基材がポリスチレンプレートである、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記標識が蛍光標識である、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記蛍光のレベルが、蛍光計または蛍光プレートリーダーにより決定される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
タンパク質とリガンドとの相互作用を阻害する薬剤をスクリーニングする方法であって、該方法は、以下：
ａ）基材に結合したタンパク質を標識化リガンドと混合する工程；
ｂ）薬剤を工程ａ）の混合物と接触させる工程；
ｃ）該標識のレベルを決定する工程；および
ｄ）コントロールに対して該標識の量を比較する工程
を包含し、該標識レベルの減少は、該相互作用を阻害する薬剤を示す、方法。
【請求項１４】
前記リガンドが、ポリＣＵＧもしくはポリＣＣＵＧの繰り返しＲＮＡを含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記タンパク質が、ポリＣＵＧもしくはポリＣＣＵＧの繰り返しＲＮＡが相互作用するタンパク質、または、ポリＣＵＧもしくはポリＣＣＵＧの繰り返しによって分離されたタンパク質である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
前記ポリＣＵＧもしくはポリＣＣＵＧの繰り返しと相互作用するタンパク質、または、前記ポリＣＵＧもしくはポリＣＣＵＧの繰り返しにより分離されたタンパク質が、ＭＢＮＬ１、ＭＢＮＬ２またはＭＢＮＬ３である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記基材がニトロセルロースフィルタである、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記標識が蛍光標識である、請求項１３に記載の方法。
【請求項１９】
第一のタンパク質と、核酸上の第一の認識エレメントとの相互作用を阻害する薬剤をスクリーニングする方法であって、該方法は、以下：
ａ）該第一のタンパク質、第二のタンパク質、および、第二の認識エレメントに隣接して該第一の認識エレメントを含む核酸、を含む細胞に薬剤を投与する工程であって、該第一のタンパク質は、該第一の認識エレメントに結合し、そして、該第二のタンパク質は該第二の認識エレメントに結合する、工程；ならびに
ｂ）該第一のタンパク質および該第二のタンパク質の共局在化を検出する工程
を包含し、コントロールに対する、該第一のタンパク質および第二のタンパク質の共局在化の減少は、該相互作用を阻害する薬剤を示す、方法。
【請求項２０】
前記第一のタンパク質がＭＢＮＬ１、ＭＢＮＬ２またはＭＢＮＬ３であり、前記第一の認識エレメントがポリＣＵＧ繰り返しＲＮＡである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記第二のタンパク質がＭＳ２であり、前記第二の認識エレメントが、ＭＳ２被膜タンパク質ＲＮＡ認識エレメントである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
前記第一のタンパク質および前記第二のタンパク質のうち少なくとも一方がドナー蛍光色素を含み、そして、該第一のタンパク質および該第二のタンパク質のうち少なくとも一方がアクセプター色素を含み、該第一のタンパク質と該第二のタンパク質とが共局在化している場合に、該ドナー蛍光色素の励起が、該アクセプター色素を励起する蛍光の放出をもたらす、請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
前記第一のタンパク質および前記第二のタンパク質のうち少なくとも一方が分割βガラクトシダーゼタンパク質の第一の半体を含み、そして、該第一のタンパク質および該第二のタンパク質のうち少なくとも一方が該分割βガラクトシダーゼタンパク質の第二の半体を含み、該第一のタンパク質と該第二のタンパク質とが共局在化している場合に、該βガラクトシダーゼ基質の加水分解が、蛍光の発光をもたらす、請求項１９に記載の方法。
【請求項２４】
前記第一のタンパク質および前記第二のタンパク質のうち少なくとも一方が分割蛍光タンパク質の第一の半体を含み、そして、該第一のタンパク質および該第二のタンパク質のうち少なくとも一方が該分割蛍光タンパク質の第二の半体を含み、該第一のタンパク質と該第二のタンパク質とが共局在化している場合に、該分割蛍光タンパク質の励起が、蛍光の放出をもたらす、請求項１９に記載の方法。
【請求項２５】
前記分割蛍光タンパク質がＶｅｎｕｓ蛍光タンパク質（ＶＦＰ）である、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
スプライス異常を改善する薬剤をスクリーニングする方法であって、該方法は、以下：
ａ）スプライシング調節因子、過剰発現されたポリＣＵＧもしくはポリＣＣＵＧの繰り返しＲＮＡ、およびスプライス異常レポーター構築物を含む細胞に薬剤を導入する工程であって、該レポーター構築物は、標識化タンパク質をコードする１以上の遺伝子が隣に配置された、ポリＣＵＧもしくはポリＣＣＵＧの繰り返しにより誘発されるスプライス異常に感受性の遺伝子を含む、工程；ならびに
ｂ）該標識化タンパク質のレベルを測定する工程；ならびに
ｃ）標識化タンパク質の割合を比較する工程
を包含し、標識化タンパク質の増加は、スプライス異常を改善する薬剤を示す、方法。
【請求項２７】
請求項２６に記載の方法であって、ポリＣＵＧもしくはポリＣＣＵＧに感受性の前記遺伝子の隣に、第一の標識化タンパク質および第二の標識化タンパク質をコードする遺伝子が配置され、該第一のタンパク質と該第二のタンパク質とが示差的に標識され；そして、該方法がさらに、
ｄ）該第一の標識化タンパク質の該第二の標識化タンパク質に対する割合を比較する工程
を包含し、高い割合は、スプライス異常を改善する薬剤を示す、方法。
【請求項２８】
前記第一の標識化タンパク質および第二の標識化タンパク質が、それぞれ、ＹＦＰおよびＹ・ＣＦＰである、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
ポリＣＵＧもしくはポリＣＣＵＧに感受性の前記遺伝子の隣に、単一の標識化タンパク質をコードする遺伝子が配置され、該標識化タンパク質の増加は、スプライス異常を改善する薬剤を示す、請求項２６に記載の方法。
【請求項３０】
前記標識化タンパク質がＧＦＰである、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記スプライシング調節因子が、ＭＢＮＬ１、ＭＢＮＬ２、ＭＢＮＬ３、ＣＵＧ−ＢＰＩまたはＥＴＲ−３である、請求項２６に記載の方法。
【請求項３２】
前記スプライス異常に感受性の遺伝子が、ＳＥＲＣＡ１エキソン２２またはＴＮＮＴ３の胎児エキソンである、請求項２６に記載の方法。
【請求項３３】
前記蛍光のレベルが、蛍光比色法または蛍光共鳴エネルギー転移（ＦＲＥＴ）によって決定される、請求項２６に記載の方法。
【請求項３４】
スプライス異常を改善する薬剤をスクリーニングする方法であって、該方法は、以下：
ａ）スプライシング調節因子、過剰発現されたポリＣＵＧもしくはポリＣＣＵＧの繰り返しＲＮＡ、およびスプライス異常レポーター構築物を含む細胞に薬剤を導入する工程であって、該レポーター構築物は、ルシフェラーゼ遺伝子が隣に配置された、ポリＣＵＧもしくはポリＣＣＵＧにより誘発されるスプライス異常に感受性の遺伝子を含む、工程；ならびに
ｂ）該ルシフェラーゼ活性を測定する工程
を包含し、リシフェラーゼ活性の増加は、スプライス異常を改善する薬剤を示す、方法。
【請求項３５】
処置を必要とする被験体における筋ジストロフィ（ＤＭ）を処置する方法であって、ＭＢＮＬ１のポリＣＵＧｅｘｐｍＲＮＡとの相互作用を阻害する薬剤を該被験体に投与する工程を包含する、方法。
【請求項３６】
前記ＤＭが１型筋ジストロフィである、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記薬剤がモルホリノである、請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】
前記モルホリノがＣＡＧ２５である、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記モルホリノが配列番号３に示される、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記モルホリノがアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＯＮ）である、請求項３７に記載の方法。
【請求項４１】
前記モルホリノが配列番号４または配列番号６に示される、請求項３７に記載の方法。
【請求項４２】
前記薬剤がＰＮＡ−ＣＡＧである、請求項３５に記載の方法。
【請求項４３】
前記ＰＮＡ−ＣＡＧが、２回、３回、４回もしくは５回のＣＡＧ繰り返しから構成される、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記薬剤がアミノグリコシド系抗生物質である、請求項３５に記載の方法。
【請求項４５】
処置を必要とする被験体における筋ジストロフィを処置する方法であって、スプライス異常を矯正する薬剤を該被験体に投与する工程を包含する、方法。
【請求項４６】
前記スプライス異常がイオンチャネル疾患をもたらす、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記薬剤がモルホリノである、請求項４５に記載の方法。
【請求項４８】
前記モルホリノがＣＡＧ２５である、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
前記モルホリノが配列番号３に示される、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
前記モルホリノが塩素イオンチャネルＣｌＣ−１を標的とする、請求項４７に記載の方法。
【請求項５１】
前記モルホリノがアンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＯＮ）である、請求項５０に記載の方法。
【請求項５２】
前記モルホリノが配列番号４または配列番号５に示される、請求項５０に記載の方法。
【請求項５３】
前記薬剤が、ペプチド核酸（ＰＮＡ）−ＣＡＧである、請求項４５に記載の方法。
【請求項５４】
前記ＰＮＡ−ＣＡＧが、２回、３回、４回もしくは５回のＣＡＧ繰り返しから構成される、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記薬剤がアミノグリコシド系抗生物質である、請求項４５に記載の方法。
【請求項５６】
前記抗生物質がネオマイシンまたはゲンタマイシンである、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
第一のタンパク質、第二のタンパク質、および、第二の認識エレメントに隣接して第一の認識エレメントを含む核酸、を含む細胞であって、該第一のタンパク質は該第一の認識エレメントに結合し、そして、該第二のタンパク質は該第二の認識エレメントに結合し、該第一のタンパク質および該第二のタンパク質のうち少なくとも一方は、分割蛍光タンパク質の第一の半体を含み、そして、該第一のタンパク質および該第二のタンパク質のうち少なくとも一方は、該分割蛍光タンパク質の第二の半体を含み、該第一のタンパク質と該第二のタンパク質とが共局在化している場合、該分割蛍光タンパク質の励起が、蛍光の放出をもたらす、細胞。
【請求項５８】
ポリスチレンプレート、ポリＣＵＧｅｘｐｍＲＮＡ、捕捉オリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）、および、標識されたマッスルブラインドタンパク質を含む、キット。
【請求項５９】
前記マッスルブラインドタンパク質が、ＭＢＮＬ１、ＭＢＮＬ２またはＭＢＮＬ３である、請求項５８に記載のキット。
【請求項６０】
前記マッスルブラインドタンパク質が蛍光標識される、請求項５８に記載のキット。
【請求項６１】
ニトロセルロースフィルタプレート、標識化ポリＣＵＧｅｘｐｍＲＮＡ、およびマッスルブラインドタンパク質を含む、キット。
【請求項６２】
前記マッスルブラインドタンパク質が、ＭＢＮＬ１、ＭＢＮＬ２またはＭＢＮＬ３である、請求項６１に記載のキット。
【請求項６３】
前記ポリＣＵＧｅｘｐｍＲＮＡが蛍光標識される、請求項６１に記載のキット。
【請求項６４】
配列番号３に示されるアンチセンスオリゴヌクレオチド。
【請求項６５】
配列番号４に示されるアンチセンスオリゴヌクレオチド。
【請求項６６】
配列番号５に示されるアンチセンスオリゴヌクレオチド。
【請求項６７】
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、ペプチド核酸バックボーンを有する、請求項６４〜６６のいずれかに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
【請求項６８】
処置を必要とする被験体において筋ジストロフィを処置する方法であって、請求項６７に記載のペプチド核酸を該被験体に投与する工程を包含する、方法。
【請求項６９】
前記アンチセンスオリゴヌクレオチドがモルホリノである、請求項６４〜６６のいずれかに記載のアンチセンスオリゴヌクレオチド。
【請求項７０】
処置を必要とする被験体において筋ジストロフィを処置する方法であって、請求項６９に記載のモルホリノを該被験体に投与する工程を包含する、方法。
【請求項７１】
タンパク質とリガンドとの相互作用を阻害する薬剤をスクリーニングする方法であって、該方法は、以下：
ａ）該タンパク質または標識化リガンドに薬剤を接触させる工程；
ｂ）該タンパク質を標識化リガンドと混合する工程；
ｃ）該タンパク質に結合した標識のレベルを決定する工程；および
ｄ）コントロールに対して該標識の量を比較する工程
を包含し、コントロールに対する、該タンパク質に結合した標識レベルの減少は、該相互作用を阻害する薬剤を示す、方法。
【請求項７２】
タンパク質とリガンドとの相互作用を阻害する薬剤をスクリーニングする方法であって、該方法は、以下：
ａ）標識化タンパク質またはリガンドに薬剤を接触させる工程；
ｂ）該タンパク質をリガンドと混合する工程；
ｃ）該標識のレベルを決定する工程；および
ｄ）コントロールに対して該標識の量を比較する工程
を包含し、該タンパク質に結合した標識のレベルの減少は、該相互作用を阻害する薬剤を示す、方法。
【請求項７３】
タンパク質とリガンドとの相互作用を阻害する薬剤をスクリーニングする方法であって、該方法は、以下：
ａ）該タンパク質および標識化リガンドを混合する工程；
ｂ）該タンパク質および標識化リガンドに薬剤を接触させる工程；ならびに
ｃ）コントロールに対して該タンパク質に結合したリガンドの量を比較する工程
を包含し、該タンパク質に結合した標識のレベルの減少は、該相互作用を阻害する薬剤を示す、方法。
【請求項７４】
タンパク質とリガンドとの相互作用を阻害する薬剤をスクリーニングする方法であって、該方法は、以下：
ａ）該タンパク質または標識化リガンドを薬剤に接触させる工程；
ｂ）該薬剤の存在下で、該タンパク質および標識化リガンドを混合する工程；ならびに
ｃ）コントロールに対して該タンパク質に結合したリガンドの量を比較する工程
を包含し、該タンパク質に結合した標識のレベルの減少は、該相互作用を阻害する薬剤を示す、方法。
【図１Ａ】
【図１Ｂ】
【図１Ｃ】
【図１Ｄ】
【図２】
【図３Ａ】
【図３Ｂ】
【図３Ｃ】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１Ａ】
【図２１Ｂ】
【図２１Ｃ】
【図２１Ｄ】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５Ａ】
【図２５Ｂ】
【図２５Ｃ】
【図２５Ｄ】
【図２５Ｅ】
【図２５Ｆ】
【図２６】
【図２７】
【図２８】
【図２９】
【図３０Ａ】
【図３０Ｂ】
【図３１】
【図３２】
【図３３】
【図３４】
【図３５】
【図１Ｂ】
【図１Ｃ】
【図１Ｄ】
【図２】
【図３Ａ】
【図３Ｂ】
【図３Ｃ】
【図４】
【図５】
【図６】
【図７】
【図８】
【図９】
【図１０】
【図１１】
【図１２】
【図１３】
【図１４】
【図１５】
【図１６】
【図１７】
【図１８】
【図１９】
【図２０】
【図２１Ａ】
【図２１Ｂ】
【図２１Ｃ】
【図２１Ｄ】
【図２２】
【図２３】
【図２４】
【図２５Ａ】
【図２５Ｂ】
【図２５Ｃ】
【図２５Ｄ】
【図２５Ｅ】
【図２５Ｆ】
【図２６】
【図２７】
【図２８】
【図２９】
【図３０Ａ】
【図３０Ｂ】
【図３１】
【図３２】
【図３３】
【図３４】
【図３５】
【公表番号】特表２０１０−５０４０９８（Ｐ２０１０−５０４０９８Ａ）
【公表日】平成２２年２月１２日（２０１０．２．１２）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５２９２５８（Ｐ２００９−５２９２５８）
【出願日】平成１９年９月２１日（２００７．９．２１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０２０５０３
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０３６４０６
【国際公開日】平成２０年３月２７日（２００８．３．２７）
【出願人】（５０７２４５０２１）ユニバーシティー オブ ロチェスター (9)
【出願人】（５００３６０７６９）ユニバーシティ オブ フロリダ リサーチ ファウンデーション，インコーポレイティド (16)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２２年２月１２日（２０１０．２．１２）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年９月２１日（２００７．９．２１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０２０５０３
【国際公開番号】ＷＯ２００８／０３６４０６
【国際公開日】平成２０年３月２７日（２００８．３．２７）
【出願人】（５０７２４５０２１）ユニバーシティー オブ ロチェスター (9)
【出願人】（５００３６０７６９）ユニバーシティ オブ フロリダ リサーチ ファウンデーション，インコーポレイティド (16)
【Ｆターム（参考）】
[ Back to top ]