蛇、特にジャララカの毒腺から分泌されたペプチド類、バソぺプチダーゼ阻害薬、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる薬学組成物の製造法、および用途開発のための関連製品および晩成退行性疾病での使用
本発明は、シクロデキストリン類またはそれらの誘導体に含まれるか、または一種以上の薬理学的活性剤または担体中に結合または包含されているバソペプチダーゼ阻害薬ペプチド類、ＥＶＡＳＩＮペプチド類、およびそれらの構造的または立体配置的類似体からなる薬学組成物または関連製品を特徴とする。本発明の更なる特徴はリポソームおよび生分解性高分子およびそれらの混合物のような放出制御システム内で、選択的にシクロデキストリン類内に含まれているＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体をマイクロカプセル化することである。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、蛇、特にジャララカ（Ｂｏｔｈｒｏｐｓ Ｊａｒａｒａｃａ）の毒腺から分泌されたペプチド類、バソぺプチダーゼ（ｖａｓｏｐｅｐｔｉｄａｓｅ）阻害薬ペプチド類、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる薬学組成物の製造法、および用途開発のための関連製品および／または晩成退行性疾病に対する関連製品を特徴とする。
【０００２】
本発明は、シクロデキストリン類またはそれらの誘導体に含まれるか、または一種以上の薬理学的活性剤および／または担体中に結合または包含されているバソペプチダーゼ阻害薬ペプチド類、ＥＶＡＳＩＮペプチド類、およびそれらの構造的および／または立体配置的類似体からなる薬学組成物および／または関連製品を特徴とする。本発明の更なる特徴はリポソームおよび生分解性高分子およびそれらの混合物のような放出制御システム内で、選択的にシクロデキストリン類内に含まれているＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体をマイクロカプセル化することである。
【０００３】
本発明でクレームしている薬学組成物はシクロデキストリン類またはそれらの誘導体に含まれたＥＶＡＳＩＮ類またはその誘導体；単独に、混合物の形態で、または１種以上の薬理学的活性剤と結合された形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に結合または包含されているＥＶＡＳＩＮ類；リポソームおよび生分解性高分子および／またはそれらの混合物のような放出制御システム内に、選択的にシクロデキストリン内に含まれているか、または選択的にマイクロカプセル化されているＥＶＡＳＩＮ類からなる。
【０００４】
また、本発明は晩成退行性疾病の研究および治療のための用途を有する、ＥＶＡＳＩＮ類の他の生化学的作用機転を同定することも含む。
【０００５】
ＥＶＡＳＩＮ類（ＥＶＡＳＩＮ７ａを除く）およびそれらの類似体および誘導体の薬学組成物は、中性エンドペプチダーゼ（ミクロモル範囲のＫｉ）およびアンギオテンシンＩ転換酵素（ナノモル範囲のＫｉ）に対する特異的な阻害活性により特性決定される。これらの薬学組成物の更なる特徴は、シクロデキストリン類またはそれらの誘導体に含まれると、ＥＶＡＳＩＮ類の生物学的利用能、作用効果持続時間および／または効能を増加にある。
【０００６】
そのような薬学組成物は、経口または静脈内を介して提供された場合、シクロデキストリン類またはそれらの誘導体に含まれているＥＶＡＳＩＮ類の生物学的利用能、作用効果持続時間および／または効能を増加させる。
【背景技術】
【０００７】
世界のほとんどの国で、大人の人口の１５〜２５％が高血圧を患っている。ＭａｃＭａｈｏｎ，Ｓ．ｅｔ．Ａｌ．Ｂｌｏｏｄ ｐｒｅｓｓｕｒｅ，ｓｔｒｏｋｅ，ａｎｄ ｃｏｒｏｎａｒｙ ｈｅａｒｔ ｄｉｓｅａｓｅ，Ｌａｎｃｅｔ ３３５：７６５−７７４，１９９０参照。血圧値が高くなるたびに心血官性疾患の発病可能性が高くなる。血圧が高ければ高いほど、卒中および冠状動脈性事象の危険度が高くなる。高血圧が冠状動脈性、大脳性および腎性血管疾病の主な危険因子であることを考えると、高血圧は大人において死亡および能力障害をもたらす主な原因である。
【０００８】
世界的に心不全は６０〜８０歳の患者が入院するようになる主な原因である。その集団の年齢自体が発現率を高める一つの因子になるものの、２５〜５４歳のヒトのうち１％が心不全を患っている。高齢者で、この発現率はより高くなり、７５歳を超えると１０％に達する。Ｋａｎｎｅｌ，Ｗ．Ｂ．ｅｔ．ａｌ．Ｃｈａｎｇｉｎｇ ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｆｅａｔｕｒｅｓ ｏｆ ｃａｒｄｉａｃ ｆａｉｌｕｒｅ，Ｂｒ．Ｈｅａｒ Ｊ １９９４；７２（ｓｕｐｐｌ）：Ｓ３-Ｓ９参照。
【０００９】
臨床上のプロフィルから分かるように、心不全は制限的な疾病である。すなわち、悪化すると、患者の生活の質は低下し、より深刻なケースでは、現在に至るまでも初年度の死亡率が６０％を超える悪性疾病である。Ｏｌｉｖｅｉｒａ， Ｍ．Ｔ．Ｃａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃａｓ ｃｌｉｎｉｃａｓ ｅ ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃｏ ｄｅ ｐａｃｉｅｎｔｅｓ ｃｏｍ ｉｎｓｕｆｉｃｅｎｃｉａ ｃａｒｄｉａｃａ ｃｏｎｇｅｓｔｉｖａ ａｖａｎｃａｄａ，Ｆａｃｕｌｄａｄｅ ｄｅ Ｍｅｄｉｃｉｎａ，ＵＳＰ １９９９参照。産業化された社会で１５００万名以上のヒトがその疾病を患っており、例えば米国だけを見ても、１９７３年から１９９０年までその数値が４５０％増加した。Ｋａｎｎｅｌ，Ｗ．Ｂ．ｅｔ．Ｅｌ．Ｃｈａｎｇｉｎｇ ｅｐｉｄｅｒｍｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｆｅａｔｕｒｅｓ ｏｆ ｃａｒｄｉａｃ ｆａｉｌｕｒｅ，Ｂｒ． Ｈｅａｒ Ｊ １９９４； ７２（ｓｕｐｐｌ３）：Ｓ３−Ｓ９参照。
【００１０】
高血圧は複雑な、多因子性の、広く蔓延する疾病で、幾つかの有害な悪影響および高い羅病率／死亡率にも係わっている。Ｋａｐｌａｎ Ｎ．Ｍ．Ｂｌｏｏｄ Ｐｒｅｓｓｕｒｅ ａｓ ａ ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｒｉｓｋ ｆａｃｔｏｒ：ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．ＪＡＭＡ．２７５：１５７１−１５７６，１９９６参照。より良く理解するために、一般集団および特定の集団におけるその制御の有効性を評価する、数多くの研究が行なわれてきた。薬物および／または関連危険因子（糖尿病、肥満、喫煙）を用いる薬剤学的介入を排除した血圧制御は、一般的に冠状動脈疾病に起因する死亡率を減少させるのに係る高血圧長期治療の利益を減らすだけでなく除去する場合もある。Ｗｉｌｓｏｎ，Ｐ．Ｗ．ｅｔ．ａｌ．Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ，ｔｈｅ ｒｉｓｋ ｆａｃｔｏｒｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｒｉｓｋ ｏｆ ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ．９４−１１４参照。
【００１１】
高血圧は心血官性動脈硬貨症の発病に寄与する主な因子である。Ｔｈｅ ｆｉｆｔｈ Ｒｅｐｏｒｔ ｏｆ ｔｈｅ Ｊｏｉｎｔ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｍｍｉｔｔｅ ｏｎ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ，ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ，ａｎｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｉｇｈ Ｂｌｏｏｄ Ｐｒｅｓｓｕｒｅ．Ｎａｔｉｏｎａｌ ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ （ＶＪＮＣ）．Ａｒｃｈ．ｉｎｔｅｒｎ．Ｍｅｄ．１５３：１５４−１８１，１９９４参照。統計学によれば、四人の米国人のうち一人が高血圧患者であるか、または高血圧患者になり、４７８万名が心不全を患うことになると予測される。毎年４十万の新たなケースが診断され、８万ケースが入院し、その治療に１７８億ＵＳドルが費やされる。
【００１２】
ブラジルでは、ＳＵＳ（Ｕｎｉｆｉｅｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｙｓｔｅｍ）のデータから、心不全は１９９７年に心臓疾病のうち入院の主な原因であったことが分かった。政府はその治療に１億５０００万Ｒ＄を費やしたが、その金額は健康費用の４．６％に相当する。Ｆｉｌｈｏ，Ａｌｂａｎｅｓｉ Ｆ．ｉｎｓｕｆｉｃｉｅｎｃｉａ ｃａｒｄｉａｃａ ｎｏ Ｂｒａｓｉｌ．Ａｒｑ．Ｂｒａｓ．Ｃａｒｄｉｏｌ，７１：５６１-５６２，１９９８参照。
【００１３】
レニン−アンギオテンシン系（ＲＡＳ）は、生理学的および病理学的状態下で、血圧、心血管恒常性および電解質平衡を調節する機能をする。Ｓａｎｔｏｓ，Ｒ．Ａ．Ｓ．；Ｃａｍｐａｇｎｏｌｅ−Ｓａｎｔｏｓ，Ｍ．Ｊ．；Ａｎｄｒａｄｅ，Ｓ．Ｐ．Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ−（１−７）：ａｎ ｕｐｄａｔｅ．Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，９１：４５−６２，２０００参照。アンギオテンシンＩＩ（ＡｎｇＩＩ）は、血圧上昇作用、副腎ステロイド合成刺激作用、増殖作用（線維芽細胞、血管平滑筋）および肥大作用（心筋細胞）を持つ、ＲＡＳの主な効果器ペプチドである。その形成経路は、傍糸球体系（ｊｕｓｔａｇｌｏｍｅｒｕｌａｒ ｓｙｓｔｅｍ）でのレニンの産生および肝臓によるアンギオテンシンの産生を含む。これらの物質は、アンギオテンシンがレニンにより加水分解される血流へ放出され、それによって形成されたＡｎｇＩは、肺でアンギオテンシン転換酵素（ＡＣＥ）の作用を受け、ＡｎｇＩＩを産生し、続いてＡｎｇＩＩはその産生部位から離れた標的器官に作用する。Ｓａｎｔｏｓ，Ｒ．Ａ．Ｓ．；Ｃａｍｐａｇｎｏｌｅ−Ｓａｎｔｏｓ，Ｍ．Ｊ．；Ａｎｄｒａｄｅ，Ｓ．Ｐ．ＡｎｇＩｏｔｅｎｓＩｎ−(１−７)：ａｎ ｕｐｄａｔｅ．Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，９１：４５−６２，２０００)参照。
【００１４】
最近、循環ＡｎｇＩＩを産生する系に加えて、異なる組織は局所的な作用により明らかに、ＲＡＳを産生する独立的ＡｎｇＩＩを含むということが分かった。この組織ＲＡＳ成分は血管、子宮、膵臓の外分泌部、目、心臓、副腎皮質、睾丸、卵巣、脳下垂体前面および中間葉、松下体および脳の壁上で見られる。これらの組織ＳＲＡの作用は未だ明らかにされていない。Ａｒｄａｉｌｌｏｕ，Ｒ．；Ｍｉｃｈｅｌ，Ｊ．Ｂ．Ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｒｏｌｅｓ ｏｆ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ ａｎｄ ｔｉｓｓｕｅ ｒｅｎｉｎ−ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ ｓｙｓｔｅｍｓ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．Ｄｉａｌ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．，１４：２８３−２８６， １９９９参照。ＲＡＳの局所的な作用は、ペプチドを産生する細胞（内分泌および自己分泌作用）で、隣接した細胞（傍分泌作用）上で、または産生部位から離れた部位（内分泌の作用）で起こり得る。
【００１５】
最近報告によると、ＲＡＳの重要な抹消的および中央的作用は、ＡｎｇＩＩＩ[Ａｎｇ−(２−８)]、ＡｎｇＩＶ[Ａｎｇ−(３−８)]およびＡｎｇ−（１−７）を含む、より短いアンギオテンシン性ペプチド配列により介される。ＡｎｇＩ[Ａｎｇ−(１−１０)]およびＡｎｇＩＩ[Ａｎｇ−(１−８)]は生体内変化過程を経て、生物学的に活性なアンギオテンシンペプチド類の“系統群”を産生することと考えられる。Ｓａｎｔｏｓ，Ｒ．Ａ．Ｓ．；Ｃａｍｐａｇｎｏｌｅ−Ｓａｎｔｏｓ，Ｍ．Ｊ．；Ａｎｄｒａｄｅ，Ｓ．Ｐ．Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ−（１−７）：ａｎ ｕｐｄａｔｅ．Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，９１：４５−６２，２０００参照。
【００１６】
Ａｎｇ−（１−７）はＡｎｇＩＩと共に主なＲＡＳ効果器である。ＡｎｇＩＩからの二つの重要な特徴的な分泌Ａｎｇ−（１−７）：第一は非常に特異的な生物学的作用を待ち、かつその形成経路はＡＣＥから独立的である。Ｓａｎｔｏｓ，Ｒ．Ａ．Ｓ．；Ｃａｍｐａｇｎｏｌｅ−Ｓａｎｔｏｓ，Ｍ．Ｊ．；Ａｎｄｒａｄｅ，Ｓ．Ｐ．Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ−（１−７）：ａｎ ｕｐｄａｔｅ．Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，９１：４５−６２，２０００参照。ＥＶＡＳＩＮ類はＡｎｇＩ濃度を増加させることによりＡｎｇ−（１−７）を形成し、ＡＣＥを阻害することによってその代謝を低下させる傾向がある。
【００１７】
高血圧治療の主な目的は、費用を下げるだけでなく、必要に応じて使用薬物および生活の質を変化させることにより標的臓器で損傷を防止することにある。Ｔｈｅ Ｆｉｆｔｈ Ｒｅｐｏｒｔ ｏｆ Ｔｈｅ Ｊｏｉｎｔ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｎ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ，ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ，ａｎｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｉｇｈ Ｂｌｏｏｄ Ｐｒｅｓｓｕｒｅ．Ｎａｔｉｏｎａｌ ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ（ＶＪＮＣ）．Ａｒｃｈ．Ｉｎｔｅｒｎ．Ｍｅｄ．１５３：１５４−１８１，１９９４）．
【００１８】
薬物治療は、３〜６ヶ月後生活様式の変化に対する無反応の場合および標的器官での損傷（左心室肥大、心筋虚血、卒中または高血圧網膜症）の場合に必要とされる。１６０ｍｍＨｇ以上の収縮期血圧または１００ｍｍＨｇ以上の拡張期血圧を示す全ての患者には、他の因子が存在するか否かに係わらず、薬理学的治療を行なうべきである。Ｒｅｐｏｒｔ ｔｈｅ Ｃａｎａｄｉａｎ Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ．Ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ．３．Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．ｘａｎ．Ｍｅｄ．Ａｓｓｏｃ．Ｊ．１４９（３）：５７５−５８４，１９９３参照。
【００１９】
しかしながら、７０年代から８０年代までの間に、抗高血圧薬は高血圧の治療において重要なツールとなった。Ｍｅｎａｒｄ，Ｊ．Ａｎｔｈｏｌｏｇｙ ｏｆ ｒｅｎｉｎ−ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ ｓｙｓｔｅｍ：Ａ ｏｎｅ ｈｕｎｄｒｅｄ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ａｐｐｒｏａｃｈ ｔｏ ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ ＩＩ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ．Ｊ．Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ ＩＩ （ｓｕｐｐｌ）：Ｓ３−Ｓ１１，１９９３参照。最近４０年間の薬理的な研究により、高血圧治療のための新たな部類の薬物、すなわち６０年代の利尿薬、７０年代のベータ遮断薬、カルシウムチャンネル遮断薬、アンジオテンシンＩＩ受容体の拮抗薬およびアンジオテンシン転換酵素（ＡＣＥ）阻害薬が現れた。
【００２０】
利尿薬は三つのカテゴリに分けることができる：チアジド系ループおよびカリウム保留薬。チアジド類はクロロチアジドおよびハイドロクロロチアジドを含むが、これらは治療開示後第一日以内に血圧を約１０〜１５％減少させ、そのような減少は第二の細胞外体積の減少、利尿増加およびナトリウム排泄増加に係わる。次いで、６ヶ月後、血漿体積および心臓血液伯出量は正常値へ戻り、血圧減少は抹消血管抵抗の減少に係わる。Ｆｒｏｌｉｃｈ，Ｅ．Ｃｕｒｒｅｎｔ ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ，４０５−４６９参照。これらは単一治療法として用いられるが、黒人および高齢者（低容量の場合）において応答の改善が見られた。次のような副作用が現れた：インシュリンに対する抹消抵抗の増加、トリグリセライドの増加、ＬＤＬの増加、低カルシウム症、高尿酸血症。ルップ利尿薬のうちフロセミド、ブメタミドおよびトリアンテレンはチアジド系利尿薬に比べより高い有効性を持つ。これらは主にヘンレ係蹄の皮質および髄質部分に作用する。これらはチアジド系利尿薬と同じ副作用を示す。カリウム保持性利尿薬は弱い利尿作用を持つ薬物で、単独に用いられるのはまれである。これらの例として、アミロライド、トリアンテレンおよびスピロラクトンが挙げられる。
【００２１】
アテノロールおよびナオロール（Ｎａｏｌｏｌ）を含むベータ遮断薬はベータ１およびベータ２として分類される。抗高血圧作用機転は、未だ完全に解明されていないが、ベータ遮断薬がシナプス前性のベータ受容体を阻害し、ノルアドレナリンの放出を防止するという証拠によって基本的に裏付けられる。その副作用としては、インシュリンに対する反応における変化、ハイポグルセミック（Ｈｙｐｏｇｌｕｃｅｍｉｃ）昏睡の延長、トリグリセライドの増加および腎血流の減少によるクレアチニンの増加が挙げられる。
【００２２】
カルシウムチャンネル遮断薬は少なくとも２５年間用いられてきた。Ｆｒｏｌｉｃｈ，Ｅ．Ｄ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ，４０５−４６９，１９９４参照。これらは薬理学的作用にしたがって大きく二つのグルップ、すなわち刺激伝導に対する作用を増加させるもの（例えば、べラパミルおよびジルチアゼム）および優れた血管拡張作用を持つもの（例えば、ニフェジピンのようなジヒドロピリジン誘導体類）に分けることができる。Ｆｒｏｌｉｃｈ，Ｅ．Ｄ．，Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．Ａｄｕｌｔ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ Ｓｅｌｆ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ Ｐｒｏｇｒａｍ（ＡＣＣＳＡＰ），６：３−１９，１９９５参照。副作用として下肢の水腫および心急迫などがある。
【００２３】
転換酵素阻害薬は主にアンジオテンシンＩからアンジオテンシンＩＩへの転換を阻害することによって作用する。したがって、アンジオテンシンＩＩの血管収縮作用は必ず最小化される。予備研究結果、初めて臨床的に用いられた阻害薬であるテプロチド（ＥＶＡＳＩＮ−９ａ）は静脈内へ投与される際に抗高血圧活性を有するが、経口で投与される際には不活性であるため、その用途は制限された。本発明者らはＡＣＥが多様な作用を持つ酵素であること、すなわち幾つかの基質に作用することができるということを発見した。アンギオテンシンＩおよびブラジキニンに対しジペプチダーゼ（ｄｉｐｅｐｔｉｄａｓｅ）として作用すること以外に、カリウム保持性利尿性ペプチドのペプチド鎖を分解することができるが、それは酵素が幾つかの組織に作用することができるということを意味する。またＡＣＥは循環する組織Ａｎｇ−（１−７）の不活性化で重要な役割を果たす。その循環ペプチドの濃度はＡｎｇＩＩの濃度と類似し、ＡＣＥ阻害後に増加する。そのような増加は、前駆体（ＡｎｇＩ）の増加およびＡＣＥ分解の減少に起因する可能性がある。Ｓａｎｔｏｓ，Ｒ．Ａ．Ｓ．；Ｃａｍｐａｇｎｏｌｅ−Ｓａｎｔｏｓ，Ｍ．Ｊ．；Ａｎｄｒａｄｅ，Ｓ．Ｐ．Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ−（１−７）：ａｎ ｕｐｄａｔｅ．Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，９１：４５−６２，２０００参照。
【００２４】
オマパットリラット（Ｏｍａｐａｔｒｉｌａｔ）活性について言及する当該技術の説明は下記の特許で見られる。ＵＳ２００２１３３０７−Ａ１（Ｋｏｔｈａｒｉ ａｎｄ Ｄｅｓａｉ）、ＵＳ２００２００４５００−Ａ１（ＷＯ２００１７４３４８−Ａ２，ＡＵ２００１８７２８９‐Ａ）、 Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏ（ＢＲＩＭ）ａｎｄ Ｒｅｅｖｅｓ ｅｔ ａｌ．；ＵＳ６１６６２２７−Ａ（ＷＯ２００００３９８１−Ａ２，ＡＵ９９４８５２８−Ａ）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏ（ＢＲＩＭ）ａｎｄ Ｇｏｄｆｒｅｙ ｅｔ ａｌ．しかしながら、この血管ぺプチダーゼ阻害薬化合物およびそれらの類似物は中性エンドぺプチダーゼ（ＮＥＰ）に対する高い阻害活性の結果として関連副作用（血管性水腫および咳）を示す。
【００２５】
ＡＣＥＩは、ＡＣＥ阻害薬が高血圧患者の６０〜７０％で血圧を比較的に迅速に減少させるため、単独療法として投与されても優れた効果を示す。Ｇａｎｏｎｇ，Ｗ．Ｎｅｕｒｏｐｅｐｔｉｄｅｓ ｉｎ ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｊ．Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓ ２（ｓｕｐｐｌ３）：１５−２２，１９８４参照。それらは一般的に許容可能であるが、その使用によって副作用および逆反応を引き起こし、それらのうち幾つかは深刻であり、例えば血管神経性水腫、発疹および乾性咳（８〜１０％）、Ｂｌｏｏｄ ｄｉｓｃｒａｓｉａｓおよび性交不能を含む。
【００２６】
アンギオテンシンＩ転換酵素阻害薬またはバソぺプチダーゼ阻害薬は、腫瘍、急性心筋梗塞、卒中、左心室肥大、糖尿病性血管肥大、抹消虚血、狭心症、および心筋梗塞後心不全の進行およびアテローム性硬症、および 糖尿病および血管新生を含む数多くの疾病を治療および予防するために用いられてきたかまたは提案されてきた。Ｙａｓｕｍａｒｕ Ｍ，Ｔｓｕｊｉｓ Ｓ，Ｔｓｕｊｉｉ Ｍ，ｉｒｉｅ Ｔ，Ｋｏｍｏｒｉ Ｍ，Ｋｉｍｕｒａ Ａ，Ｎｉｓｈｉｄａ Ｔ，Ｋａｋｉｕｃｈｉ Ｙ，Ｋａｗａｉ Ｎ，Ｍｕｒａｔａ Ｈ，Ｈｏｒｉｍｏｔｏ Ｍ，Ｓａｓａｋｉ Ｙ，Ｈａｙａｓｈｉ Ｎ，Ｋａｗａｎｏ Ｓ，Ｈｏｒｉ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ ＩＩ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｔｈｅ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ−２ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｖｉａ ｉｎｓｕｌｉｎ−ｌｉｋｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ Ｉ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｐａｔｈｗａｙ；Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２００３ Ｏｃｔ １５；６３（２０）：６７２６−３４；Ｋｉｎｕｙａ Ｓ，Ｙｏｋｏｙａｍａ Ｋ，Ｋａｗａｓｈｉｍａ Ａ， Ｈｉｒａｍａｔｓｕ Ｔ， Ｋｏｎｉｓｈｉ Ｓ，Ｓｈｕｋｅ Ｎ，Ｗａｔａｎａｂｅ Ｎ，Ｔａｋａｙａｍａ Ｔ，Ｍｉｃｈｉｇｉｓｈｉ Ｔ，Ｔｏｎａｍｉ Ｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ ＩＩ ａｎｄ ｋｉｎｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｃｏｌｏｎ ｃａｎｃｅｒ ｘｅｎｏｇｒａｆｔｓ．Ｊ Ｎｕｃｌ Ｍｅｄ．２０００ Ｊｕｌ；４１（７）：１２４４−９．；ｖｏｌｐｅｒｔ Ｏｖ，Ｗａｒｄ ＷＦ， Ｌｉｎｇｅｎ ＭＷ，Ｃｈｅｓｌｅｒ Ｌ，Ｓｏｌｔ ＤＢ，Ｊｏｈｎｓｏｎ ＭＤ，Ｍｏｌｔｅｎｉ Ａ，Ｐｏｌｖｅｒｉｎｉ ＰＪ，Ｂｏｕｃｋ ＮＰ．Ｃａｐｔｏｐｒｉｌ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ ｓｈｏｗｓ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｔｕｍｏｒｓ ｉｎ ｒａｔｓ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．１９９６ Ａｕｇ １；９８(３)：６７１−９．；Ｋｏｗａｌｓｋｉ Ｊ，Ｈｅｒｍａｎ ＺＳ．Ｃａｐｔｏｐｒｉｌ ａｕｇｍｅｎｔｓ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ ｉｎ ｍｉｃｅ．Ｐｏｌ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９９６ Ｍａｙ−Ｊｕｎ；４８（３）：２８１−５．；Ｋｏｗａｌｓｋｉ Ｊ， Ｂｅｌｏｗｓｋｉ Ｄ，Ｍａｄｅｊ Ａ，Ｈｅｒｍａｎ ＺＳ．Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｈｉｏｒｐｈａｎ， ｂｅｓｔａｔｉｎ ａｎｄ ｃａｐｔｏｐｒｉｌ ｏｎ ｔｈｅ Ｌｅｗｉｓ ｌｕｎｇ Ｃｃａｒｃｉｎｏｍａ ｍｅｔｓｔａｓｅｓ ｉｎ ｍｉｃｅ．Ｐｏｌ Ｊ ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９９５ Ｓｅｐ−Ｏｃｔ；４７(５)：４２３‐７．； Ｋｏｗａｌｓｋｉ Ｊ，Ｂｅｌｏｗｓｋｉ Ｄ，Ｗｉｅｌｇｕｓ Ｊ，Ｇａｂｒｙｅｌ Ｂ，Ｋｌｉｎ Ｍ，Ｈｅｒｍａｎ ＺＳ．Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｃａｐｔｏｐｒｉｌ ａｎｄ ｔｈｉｏｒｐｈａｎ ｏｎ ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｎ ｃｙｔｏｓｔａｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ａｌｐｈａ ｏｒ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ． Ａｒｃｈ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｔｈｅｒ Ｅｘｐ（Ｗａｒｓｚ）．１９９５；４３(１)：４７−５０．しかしながら、退行性慢性疾病の治療および研究での使用に対し薬理学的に許容可能な担体または賦形剤と共に製剤化された、シクロデキシトリン中に含まれているかまたは含まれていないＥＶＡＳＩＮの薬学組成物をクレームするいかなる特許も当該技術分野では見当たらない。
【００２７】
ＡｎｇＩＩ拮抗薬を開発するための試みは７０年代初から始まり、その時はＡｎｇＩＩ−類似体ペプチドの開発に集中していた。第一の拮抗薬はサララシン、１−サルコシン、８−イソロイシン・アンギオテンシンＩＩなどであった。しかしながら、それらは部分的なアゴニスト活性を持つため、臨床的に受け入れられなかった。１９８２年に、初めて二つのＡＴ1受容体および非ペプチド系拮抗薬が開発され（Ｓ−８３０７およびＳ−８３０８）、これらは高度に特異的で、アゴニスト活性は持たないものの、ＡｎｇＩＩ受容体に対する結合力が弱かった。強度を改善し、選択性を維持し、かつ薬物動力学的特性を得るために、これらの二つの親化合物の分子構造を幾つか変更させることによって、新たな、強力で高い特異性を持つ経口製品、すなわちロサルタンが開発された。その後、その他幾つかの非ペプチド拮抗薬、例えばカンデサルタン（Ｃａｎｄｅｓａｒｔａｎ）、イルベサルタン（Ｉｒｂｅｓａｒｔａｎ）、バルサルタン（Ｖａｌｓａｒｔａｎ）、テルミサルタン（ＴｅｌｍＩｓａｒｔａｎ）、エプロサルタン（Ｅｐｒｏｓａｒｔａｎ）、タソサルタン（Ｔａｓｏｓａｒｔａｎ）およびゾラサルタン（Ｚｏｌａｓａｒｔａｎ）が開発された。本発明の薬学組成物および製剤は薬学的に許容可能な賦形剤と、ＥＶＡＳＩＮ類および類似体との混合物を利用することを特徴とする。製剤は賦形剤またはそれらの混合物から製造され得る。賦形剤の例としては、水、食塩水、燐酸バッファ溶液、リンガー液、ブドウ糖、ハンクス液、生体適合性食塩水（ポリエチレングリコルを含むかあるいは含まない）が挙げられる。他の有用な製剤は増粘剤、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトールまたはデキストランを含む。賦形剤はまた少量の添加剤、例えば等張性および化学的安定性を増加させる物質またはブッファを含むことができる。バッファの例としては、燐酸塩バッファ、重炭酸塩バッファおよびとリスバッファがあり、防腐剤の例としては，チメロサール、メターまたはオルトークレゾール、ホルマリンおよびベンジルアルコールがある。標準製剤は液体または固体であり得る。したがって、非液体製剤において、賦形剤はデキストロース、ヒト血清アルブミン、防腐剤などを含んでも良く、投与する前に水または滅菌の食塩水を添加することができる。
【００２８】
さらに本発明はＥＶＡＳＩＮ類またはその類似体および誘導体を含む放出制御システムの製造法を特徴とする。十分な放出制御システムには、シクロデキストリン類、生体適合性高分子類、生分解性高分子類、他の高分子基質、カプセル、マイクロカプセル、微小粒子、巨丸剤（丸薬）、浸透圧ポンプ、拡散装置、リポソーム、リポスペアーおよび経皮投与システムを含むが、これらに制限されない。本発明による他の放出制御組成物は、動物に投与された後、その部位で固体またはゲルを形成する液体を含む。
【００２９】
ＵＳ４５９８０７０（ＣＡ１２１５３５９、ＤＫ３５６６８４，ＥＰ１３５０４４，ＥＳ８５０６７５７，ＧＲ８２３２２，ＪＰ６００２５９６７）。抗高血圧薬であるトリプデン（Ｔｒｉｐｕｄｉｎｅ）とシクロデキストリン類（α‐シクロデキストリン類およびβ‐シクロデキストリン類）との包接化合物が開発された。Ｍａｓｈｉｒｏ，Ｋａｗａｈａｒａ ｅｔ．ａｌ．（１９８６）参照。トリパミドは水中にわずかに溶解可能であるが、シクロデキストリン類を利用することにより溶解性化合物が得られる。本発明はまた幾つかの特徴的な技術、例えば示差走査熱量測定（ＤＳＣ）およびＸ線回折を利用する。
【００３０】
ＵＳ４６６６７０５．Ｄｅ Ｃｒｏｓｔａ，Ｍａｒｋ．Ｔ．ｅｔ．ａｌ．(１９８７)は抗高血圧薬の放出制御に基づいた発明を報告した。ＡＣＥ阻害薬（非ペプチド、活性部位指向性ＡＣＥ阻害薬）であるカプトプリルは、迅速な吸収および２時間の半減期を持つため利用された。その放出を遅らせるために、この発明は高分子または共重合体と共にカプトプリルを含有する錠剤に基づく。使用された高分子はポーリビニルピローリドン（ＰＶＰ）であり、使用された技術は乾式造粒法である。その結果、体で薬物の留置時間の増加（４〜１６時間）が得られた。
【００３１】
ＵＳ５５１９０１２．Ｆｅｃｅｊ−Ｔｅｍｅｊｏｏｖ，Ｄａｒｊａ ｅｔ．ａｌ．（１９９６）は、メチル−（β―シクロデキシトリンおよびその他の誘導体、例えば（ヒドロキシル化β―シクロデキシトリン）と抗高血圧薬（すなわち１，４‐ジヒドロプリジン）との新たな包接化合物に基づいた発明をなした。
【００３２】
ＵＳ５７２８４０２．Ｃｈｅｎ，Ｃｈｉｎ−Ｍｉｎｇ ｅｔ．ａｌ．（１９９８）はカプトプリルおよびヒドロゲルを含む内相、およびその他に胃内で不溶性である外相を含む薬学組成物によって薬物の放出制御に基づいた発明を開示している。この発明の目的は単独で投与された場合に、１時間である薬物吸収時間を増加させることにあった。
【００３３】
ＵＳ５８３４４３２（ＡＵ５９９０７９６，ＣＡ２２２１７３０，ＥＰ０８２８５０５，ＷＯ０９６３９１６４，ＪＰ１１５０７３６２５）．Ｒｏｄｇｅｒｓ，Ｋａｔｌｅｎ Ｅｌｉｚａｂｅｔｈ ｅｔ．ａｌ．（１９９８）は傷の治療を促すためにＡＴ２受容体を用いた。
【００３４】
ＵＳ６０８７３８６（ＷＯ９７４９３９２Ａ１）．Ｃｈｅｎ，Ｔｚｙｙ−Ｓｈｏｗ Ｈ．ｅｔ．ａｌ．（２０００）はエナラプリル（ＡＣＥ阻害薬）およびロサルタン（ＡＩＩ拮抗薬）を含む薬学組成物（それは、ロサルタンカリウム塩の層およびエナラプリルマレイン酸塩の更なる層からなる。）からなる発明を開示している。この発明の目的は薬理的作用を改善させ、吸収時間を増加させ、かつ副作用を減少させることにある。
【００３５】
ＵＳ６１７８３４９．Ｋｉｅｖａｌ，Ｒｏｂｅｒｔ Ｓ．ｅｔ．ａｌ．（２００１）は心血管疾病の治療のために、神経性刺激により薬物を放出させる装置を開発した。この装置は神経につながっている電極、移植可能なパルス発生器および投与されるべき薬物を含む貯蔵所を含む。使用する際に、電極および薬物の放出は神経を刺激し、続いて心血管系を制御できるようになる。
【００３６】
薬物はその特徴、例えば体内分析、薬力学および溶解度を持つように化学的に修飾され得る。薬物の溶解度および安定性を増加させるために幾つかの方法（例えば、有機溶媒類、エマルジョン類、リポソーム類、ｐＨ調整剤、化学的変更、および適切なカプセル化剤、例えばシクロデキストリン類との薬物錯体化、生分解性高分子内へのマイクロカプセル化）が用いられてきた。
【００３７】
シクロデキストリン類は、バシラスマセランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍａｃｅｒａｎｓ）の作用によるでん粉分解生成物としてビロー（Ｖｉｌｅｒ）により１８９１年に始めて分離された。１９０４年に、シャルジンガー（Ｓｃｈａｒｄｉｇｅｒ）はそれらが環状オリゴ糖であることを明らかにした。１９４８年に、フルデンベルグ（Ｆｒｕｄｅｎｂｅｒｇｒ）らは、シクロデキストリン類が（α１→４）結合により連結されているグルコース単位を含んでいることを報告した。１９４８年に、フルデンベルグらは、シクロデキストリン類が包接化合物または錯体を形成することができることを見出し、彼らによると、その錯体は純粋シクロデキストリン類の合成工程から製造される。１９５４年から、クレイマー（Ｃｒａｍｅｒ）らは他の化合物とのシクロデキストリン錯体を形成することについて体系的な研究を遂行した。１９５５年から１９６０年の間に、薬物との包接錯体の形成に関し初めて研究が行われた。これらの研究は日本、ハンガリー、フランス、イタリアおよび他の国で集中的に続けられてきた。
【００３８】
シクロデキストリン類はでん粉の酵素的分解により得られる。その方法は次のような段階を含む：酵素生産および精製、でん粉の酵素的転換並びにシクロデキストリン類の回収および分離。かかる酵素はシクロデキストリンーグリコシルトランスペラーゼ（ＣＧＴ）である。この酵素は幾つかの微生物から得られるが、主にバシラスマセランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍａｃｅｒａｎｓ）、Ｂ．メガテリウム（Ｂ．ｍｅｇａｔｈｅｒｉｕｍ）、Ｂ．ステレオテルモピルス（Ｂ．ｓｔｅｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）およびクレくブシエラニュウモニアエ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に由来する。Ｋｏｒｏｌｋｏｂａｓ，Ａ．ｉｎｃｌｕｓａｏ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｅ ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎａｓ：ｐｒｏｐｒｉｅｄａｄｅｓ ｅ ａｐｌｉｃａｃｏｅｓ ｔｅｒａｐｅｕｔｉｃａｓ．ＥＮＬＡＣＥ Ｆａｒｍａｌａｂ，２／９１，Ａｎｏ ５，ｖｏｌ．ＩＩ，ｐ．６−１５参照。
【００３９】
シクロデキストリン類は６個、７個または８個のグルコピラノース単位からなる環状オリゴ糖である。立体的相互作用の結果、シクロデキストリン類、ＣＤは内部無極性空洞を有する切断型錘状体の環状構造物を形成する。それは、位置選択的に変更され得る化学的に安定した化合物を含む。シクロデキストリン類（ホスト）は幾つかの疎水性分子（ゲスト）と共に、空洞内それらを完全に或いは部分的に含む、錯体を形成する。ＣＤは薬物、香水および芳香剤の可溶化およびカプセル化のために用いられてきた。Ｓｚｅｊｔｌｉ，Ｊ．，Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ,（１９９８），９８，１７４３−１７５３．Ｓｚｅｊｔｌｉ， Ｊ．，Ｊ．Ｍａｔｅｒ．Ｃｈｅｍ．，（１９９７），７，５７５−５８７参照。詳しい毒性、突然変異誘発性、催奇形性に関する研究結果、それらは低い毒性を有するというのが判明された。Ｒａｊｅｗｓｋｉ，Ｒ．Ａ．，Ｓｔｅｌｌａ，ｖ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，（１９９６），８５，１１４２−１１６９参照。特にヒドロキシプロピルーシクロデキストリン類に関しては、Ｓｚｅｊｔｌｉ，Ｊ．Ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ａｎｄ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．Ｄｒｕｇ ｉｎｖｅｓｔｉｇ．，２（ｓｕｐｐｌ．４）：１１−２１，１９９０参照。赤血球に損傷を与える幾つかの高濃度の誘導体を除けば、それらの生成物は一般的に健康上危険をもたらすことはない。食料品の添加剤としてシクロデキストリン類を利用するのは多くの国（例えば、日本およびハンガリー）で正式に許可されている。フランスおよびデンマークの場合、もっと特定の用途に対し許可されている。このような特徴すべては、新しい用途の発見に対するきっかけになるということを意味する。
【００４０】
シクロデキストリン類の他に、放出制御装置により体内で薬物の吸収速度を減少させるものとして生分解性高分子が用いられる。これらのシステムにおいて、数日、数ヶ月または数年間に渡って少量の制御可能な日用量の薬物を体内へ放出するように微粒子または超微粒子内へ薬物をカプセル化するために、薬物は高分子基質中に取り込まれている。
【００４１】
放出制御システムに対し幾つかの高分子が既にテストされた。それらのうち幾つかはそれらの物理的特性の関数として分類される。例えば、弾性に関連してポリ（ウレタン）、優れた分離剤に関連してポリ（シロキサン）またはシリコーン、物理的強度の結果としてポリ（メチルーメタクリレート）、疎水性および抵抗性の結果としてポリ（ビニルアルコール）、硬度および不浸透性のためのポリ（エチレン）が挙げられる。Ｇｉｌｄｉｎｇ，Ｄ．Ｋ．Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ ｐｏｌｙｍｅｒｓ．Ｂｉｏｃｏｍｐａｔ．Ｃｌｉｎ．Ｉｍｐｌａｔ．Ｍａｔｅｒ．２：２０９−２３２，１９８１参照。
【００４２】
それにもかかわらず、ヒトで利用するためには、材料は不純物がなく、かつ化学的に不活性でなければならない。放出システムに用いられる物質の幾つかは次のような化合物を含む：ポリ（２−ヒドロキシ−エチルメタクリレート）、ポリアクリルアミド、乳酸系（ＰＬＡ）およびグリコール酸系（ＰＧＡ）高分子およびそれに相応する共重合体、（ＰＬＧＡ）およびポリ（無水物）、例えばセバス酸系（ｓｅｂａｓｉｃ ａｃｉｄ、ＰＳＡ）高分子および疎水性高分子との共重合体。
【００４３】
従来技術としてリポソームの製造に関する幾つかの特許が挙げられる。ＵＳ特許４，５５２，８０３（Ｌｅｎｋ）；ＵＳ特許４，３１０，５０６（Ｂａｌｄｅｓｃｈｗｅｉｌｅｒ）；ＵＳ特許４，２３５，８７１（Ｐａｐａｈａｄｊｏｐｏｕｌｏｓ）；ＵＳ特許４，２２４，１７９（Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ）；ＵＳ特許４，０７８，０５２（Ｐａｐａｈａｄｊｏｐｏｕｌｏｓ）； ＵＳ特許４，３９４，３７２（Ａｌｆａｉａｔｅ）；ＵＳ特許４，３０８，１６６（Ｍａｒｃｈｅｔｔｉ）；ＵＳ特許４，４８５，０５４（Ｍｅｚｅｉ）；およびＵＳ特許４，５０８，７０３（Ｒｅｄｚｉｎｉａｋ）；Ｗｏｏｄｌｅ ａｎｄ Ｐａｐａｈａｄｊｏｐｏｕｌｏｓ， Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１７１：１９３−２１５（１９８９）。
【００４４】
単一膜リポソームは水の体積を含む単一膜を有する。Ｈｕａｎｇ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｔｒｙ ８：３３４−３５２（１９６９）参照。多重膜リポソームは幾つかの同心円状の膜を有する。Ｂａｎｇｈａｍ ｅｔ Ｃｏｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１３：２３８−２５２（１９６５）参照。抗生物質、ホルモンおよび抗癌剤を含む多様な薬理的に活性な物質に対して、リポソーム系担体が提案されてきた。Ｍｅｄｉｃａｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ（Ｄ．Ｄ．Ｌａｓｉｃ，Ｄ．Ｐａｐａｈａｄｊｏｐｏｕｌｏｓ Ｅｄ．），Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｂ．ｖ．，Ｈｏｌｌａｎｄ，１９９８参照。
【００４５】
その他のリポソームの製造法は既に当業界で知られている。例えば、Ｃｕｌｌｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ，Ｆｒｏｍ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ ｔｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（Ｍ．Ｏｓｔｒｏ，ｅｄ．），Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ），１９８７，ｐｐ．３９−７２；Ｗｏｏｄｌｅ ａｎｄ Ｐａｐａｈａｄｊｏｐｏｕｌｏｓ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１７１：１９３−２１５（１９８９）；Ｌｉｐｏｓｏｍｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｇ．Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ ｅｄ．），ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，ＦＬ，１９９３参照。
【００４６】
Ｂａｎｇｈａｍの製造法[Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１３：２３８−２５２（１９６５）]は“通常の多重膜リポソーム”（ＭＬＶｓ）を生産する。“通常の”ＭＬＶｓは水の区画で不等溶質分布を有し得、したがって区画の間に異なる浸透圧を示す。Ｌｅｎｋら（ＵＳ特許４，５２２，８０３；ＵＳ５，０３０，４５３；およびＵＳ５，１６９，６３７）、Ｆｏｕｎｔａｉｎら（ＵＳ特許４，５８８，５７８）、Ｃｕｌｌｉｓら（ＵＳ特許４，９７５，２８２）およびＧｒｅｇｏｒｉａｄｉｓら（特許ＷＯ９９／６５４６５）は区画の間に実質的に等しい溶質分布を有する多重膜リポソームの製造法を開示している。異なる区画の間での等しい溶質分布は、より高い薬物カプセル効率およびより低い浸透圧差を意味し、結局これらのＭＬＶｓは通常のＭＬＶに比べてより安定する。
【００４７】
単一膜リポソームは、ＭＬＶｓを音波処理（Ｐａｐｈａｄｊｏｐｏｕｌｏｕ ｅｔ ａｌ．（１９６８）参照）または、ポリカルボネート膜を通じて圧出させることによって生産され得る。Ｃｕｌｌｉｓら（ＵＳ特許５，００８，０５０）およびＬｏｕｇｈｅｒｙら（ＵＳ特許５，０５９，４２１）参照。良好な脂質は、例えば重合化または非重合化された形態の、ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロール、カルジオリピン、コレステロール、ホスファチジン酸、スフィンゴリピド、脂肪酸、ステローる、ポスパチジルエタノールアミン、重合可能なホスホリピド、およびそれらの混合物を含む。
【００４８】
本発明のリポソーム組成物は、小胞を変更し、器官または細胞に特異性を与えることにより特性決定される。リポソーム特異性はかかる解剖学的因子および機転に基づき分類される。解剖学的分類は選択性の水準、例えば器官特異性、細胞特異性、または生物特異性に基づく。機転の観点から見れば、特異性は手動的なものまたは能動的なものに分類され得る。
【００４９】
手動的特異性は洞様毛細血管を含む器官内際網内皮系の細胞によって取り込まれる通常のリポソームの自然的な傾向を用いる。本発明のリポソームは、血流への除去速度の減少に起因し、改善された薬物担体として（ＬＥＥ）方法（また“ＰＥＧ−リポソーム”として知れている。）により立体的に確立された。Ｌａｓｉｃ ａｎｄ Ｍａｒｔｉｎ，Ｓｔｅａｌｔｈ Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．（１９９５）参照。ＬＥＥは、その表面が高分子により覆われたリポソームであり、その高分子は、リン脂質と共有接合されたポリエチレングリコール（ＰＥＧ）であるのが好ましく、小胞二重層から親水性雲を生成する。このような立体障害はオプソニンによるリポソーム認知を遅らせ、ＬＥＥを従来のリポソームにより長く血流内に保持させる。Ｌａｓｉｃ ａｎｄ Ｍａｒｔｉｎ，Ｓｅａｌｔｈ Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．（１９９５）；Ｗｏｏｄｌｅ ｅｔ Ｃｏｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １１０５：１９３−２００（１９９２）；Ｌｉｔｚｉｎｇｅｒ ｅｔ Ｃｏｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １１９０：９９−１０７（１９９７）；Ｂｅｄｕ Ａｄｄｏ，ｅｔ Ｃｏｌ．，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１３：７１８−７２４（１９９６）参照。また、そのような立体障害は、幾つかの化学治療薬物および生物学的に活性なペプチドに示されるように、カプセル化された薬剤の薬理学的な有効性を増加させる。Ｌａｓｉｃ ａｎｄ Ｍａｒｔｉｎ，Ｃａｕｔｅｌａ Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，ｉｎｃ．，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．（１９９５）；Ａｌｌｅｎ Ｔ．Ｍ．ｉｎ：Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ， Ｎｅｗ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｎｅｗ Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ ｔｈｅｉｒ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ（Ｆ．Ｐｕｉｓｉｅｕｘ，Ｐ．Ｃｏｕｖｒｅｕｒ，Ｊ．Ｄｅｌａｔｔｒｅ，Ｊ．−Ｐ．Ｄｅｖｉｓｓａｇｕｅｔ Ｅｄ．），Ｅｄｉｔｉｏｎｓ ｄｅ ｌａ Ｓａｎｔｅ，Ｆｒａｎｃａ，１９９５，ｐｐ．１２５参照。
【００５０】
この分野に関する研究の結果、異なる因子がＬＥＥの循環半減期に影響を及ぼし、小胞直系は２００ｎｍ未満で、ＰＥＧは５％の割合で約２，０００Ｄａの分子量を有するのが理想的である。Ｌａｓｉｃ ａｎｄ Ｍａｒｔｉｎ，Ｃａｕｔｅｌａ Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．（１９９５）；Ｗｏｏｄｌｅ ｅｔ Ｃｏｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １１０５：１９３−２００（１９９２）；Ｌｉｔｚｉｎｇｅｒ ｅｔ Ｃｏｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １１９０：９９−１０７（１９９４）；Ｂｅｄｕ Ａｄｄｏ ｅｔ Ｃｏｌ．，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１３：７１８−７２４（１９９６）参照。
【００５１】
能動的な標的化は、結合剤、例えばモノクロナール抗体、糖、糖脂質、たんぱく質、高分子による、または従来のリポソームが蓄積する部位とは異なる細胞および器官へこれらを標的化するリポソームの大きさおよび組成を変えることによる、リポソームの変更を含む。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｇａｎｎａｒｏ，Ａ．Ｒ．，ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，１８ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，ｐｐ．１６９１−１６９３参照。
【００５２】
ペプチドの効果を延長するためのリポソーム適用技術の例として、（吻側−腹外側骨髄（ＲＶＬＭ）で）一側性に微量注射されたＡｎｇ−（１−７）（ＬＡｎｇ）を含むリポソームの製造がある。血圧は、自由に動けるように放置したレット（ｕｎｄｉｓｔｕｒｂｅｄ ｒａｔ）で４日前に開示し、１２日後終わるまで、１０分ことに１０秒間遠隔測定により測った。ＬＡｎｇ微量注射により朝に有意の昇圧効果が現れ、それが５日間続いた。最も高いＭＢＰは３日で測定され（１１４±４ｍｍＨｇ）、それは０日での測定値（１００±３ｍｍＨｇ）と有意に異なっていた。予測した通り、ＬＶａｚはＭＢＰで有意に変化しなかった（３日で９４±５ｍｍＨｇ ｖｓ ０日で９０±５ｍｍＨｇ）。さらに、朝ＭＢＰは１日、２日、３日でＬｖａｚ群に比べてＬａｎｇ群で有意に高かった。朝ＭＢＰとは対照的に、夜ＭＢＰはＬＡｎｇ微量注射により有意の影響を受けなかった。以前の研究で、ＢＲＶＬに対する、類似の容量（２５〜５０ｎｇ）の遊離型Ａｎｇ−（１−７）の微量注射（カプセルかされていない）は約１０分間１５ｍｍＨｇを増加させる。Ｆｏｎｔｅｓ Ｍａ，Ｐｉｎｇｅ ＭＣ，Ｎａｖｅｓ ｖ，Ｃａｍｐａｇｎｏｌｅ Ｓａｎｔｏｓ ＭＪ，Ｌｏｐｅｓ ＯＵ，Ｋｈｏｓｌａ ＭＣ，Ｓａｎｔｏｓ ＲＡＳ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕａｒ ｅｆｆｅｃｔ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｂｙ ｍｉｃｒｏｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎｓ ａｎｄ ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｖｅｎｔｒｏｌａｔｅｒａｌ ｍｅｄｕｌｌａ ｏｆ ｆｒｅｅｌｙ ｍｏｖｉｎｇ ｒａｔｓ．Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．このような効果の短い持続時間はインビボでの高いたんぱく質代謝に起因する。Ｓｉｌｖａ−Ｂａｒｃｅｌｌｏｓ ｅｔ Ｃｏｌ．，Ｈｙｐｅｒｔｅｎｔｉｏｎ，３８（６）：１２６６−７１（２００１）参照。
【発明の開示】
【００５３】
本発明は、毒またはジャララカの組織で見られる少なくとも２１種類のブラジキニン増強ペプチド類（一般的にＢＰＰまたはブラジキニン増強ペプチドと呼ばれる。）を利用することにより特徴付けられる。また、本発明は質量分析法により測定され、かつこのヘビ亜目の非毒腺組織で発現されるこれらの分子の親化合物のｃＤＮＡで推論されたアミノ配列を有する。これらをＥＶＡＳＩＮ類または内因性バソペプチド阻害薬と呼ぶ。
【００５４】
【表１】
【００５５】
これらのペプチドのうちほとんどは構造的モチーフＣ‐末端ＰＸ1Ｘ2ＰＰを有する。ここで Ｘ1は任意のアミノ酸であり、Ｘ2は通常イソロイシン（Ｉ）であり、およびＮ‐末端アミノ酸は主にピログルタミン酸の残基により遮断されている（＜Ｅ）。その合成ペプチドに対し、組み換えＡＣＥのＣとＮ部位阻害薬としての、並びにレットでブラジキニンの降圧活性とモルモットから分離された回腸でブラジキニンの収縮作用の両方に対する賦活薬（ｐｏｔｅｎｔｉａｔｏｒ）としての有効性を調べるためにテストを行なった。レットで血圧に対する降圧活性およびモルモットから分離された回腸でブラジキニン収縮作用の復活薬として、もっとも選択的かつ有効なのは５〜１３アミノ酸残基を持つ５００〜１７００Ｄａの分子量を有するものであった。活性分子は化学的に修飾されたため、定性的に類似の特性を持つ、異なるペプチドを産生する。
【００５６】
本発明で製剤化される５〜１３アミノ酸のオリゴペプチドであるＥＶＡＳＩＮ類は以下の通りである。
【表２】
ここで、Ｐは常にプローリンである。他は、三文字および一文字のコードとして表示されるＬ−またはＤ−アミノ酸および誘導体であり得る。
【表３】
＜Ｅ1ピログルタミン酸はＮ−末端アミノ酸であり；
ａａ2はアミノ酸で、典型的に式ＩおよびＩＩに対してはＷ，ＳまたはＫであり、式ＩＶ〜ＸＩに対してはＡ，Ｗ，Ｓ，ＧまたはＮであり；
ａａ3は典型的に式Ｉ〜ＩＩＩに対してはＷ，Ｐ，ＦまたはＧであり、式ＩＶ〜ＸＩに対してはＡ，Ｐ，Ｇ，ＷまたはＲであり；
ａａ4はアミノ酸で、典型的に式Ｉ〜ＩＩＩに対してはＰ，ＡまたはＲであり、式ＩＶ〜ＸＩに対してはＰ，Ｌ，Ｑ，Ａ，ＲまたはＷであり；
ａａ5はアミノ酸で、典型的に式ＩＩおよびＩＩＩに対してはＧ，ＲまたはＩであり、式ＩＶ〜ＸＩに対してはＴ，Ｐ，Ｇ，Ｈ，Ｒ，ＷまたはＥであり；
ａａ6はアミノ酸で、典型的に式Ｖ、ＶＩＩ、ＶＩＩＩおよびＸＩに対してはＱ
，Ｎ，Ｐ，Ｔ，Ｈ，ＲまたはＧであり；一般的に式ＩＶに対してはＩ、Ａ，ＴまたはＹであり；
ａａ7はアミノ酸で、典型的に式ＶＩ、ＶＩＩＩおよびＩＸに対してはＰ，Ｎ，Ｑ，ＧまたはＲであり、式Ｖ対してはＩ，Ａ，ＴまたはＹであり；
ａａ8はアミノ酸で、典型的に式ＶＩＩおよびＩＸに対してはＱ，ＰまたはＧであり、式ＶＩに対してはＩ，Ａ，ＴまたはＹであり；
ａａ9はアミノ酸で、典型的に式ＶＩＩＩに対してはＰ，Ｑ，ＮまたはＧであり、式ＶＩＩに対してはＩ，Ａ，ＴまたはＹであり；
ａａ10はアミノ酸で、典型的に式ＩＸに対してはＱおよびＥであり、式ＶＩＩＩに対してはＩ，Ａ，ＴまたはＹであり；
ａａ11は一般的に式ＩＸに対してＩ，Ａ，ＴまたはＹである。
【００５７】
本発明の更なる特徴は、次のような化学的変化により内皮細胞および血管平滑筋に対する作用として、並びにバソペプチダーゼ阻害薬として、血管病理学に係る異なる標的分子上に対するそれらの作用特異性および薬物動力学を改善させるために、全てのＥＶＡＳＩＮ類を変更する可能性である：
１）Ｌ−アミノ酸をＤ−アミノ酸に置き換え、逆β−ターン構造（“ヘアピン”）を導入させたり、またはα−置換アミノ酸の導入し(例えば、α−イソ酪酸の導入）ポリペプチド鎖軸をα−へリックスまたは延長構造またはβ−ターンにさせたりすることによる、局在的立体配置の変化。α−アミノ酸におけるＮ−メチル置換は、アミド結合の作用を制限し、水素ボンドの形成を除去し、ポリペプチド主鎖のねじれ角に影響を及ぼし、並びにシスペプチドボンドを形成させる。他の変更は、プロテアーゼの作用に対抗してそのボンドを保護するための、ペプチドボンドの非−アミドボンドへの置換である。
２）閉環による全体的な構造の変化は二次構造を安定化させる。システインまたは、チオール基を含むそのほかの有機化合物（それぞれβ，β−ジメチルぺニシリンアラニン（β，β−ｄＩｍｅｔｈｙｌｐｅｎＩｃＩｌｌＩｎａｌａｎＩｎｅ）類似体を有する。）への置換に対し選択される二つのアミノ酸は、ＥＶＡＳＩＮ配列の任意の残基またはそれらの類似体（二つ以上のポリペプチド鎖アミノ酸残基により互いに区別される。）であり得る。Ｓ−Ｓ結合は二つのチオール残基の間で形成しやすく、したがって環状ペプチドが形成される。閉環は、またカルボキシ基のないポリペプチドとアミノ基との間にラクタムボンドを形成することにより、或いはペプチド閉環を形成しやすい任意の他の化学的工程により得られる。
３）アミノ酸側鎖での変化（χ−“制約”）。α−アミノ酸側鎖のねじれ角を決定することにより、その結合部位にポリペプチドをより良く調整する幾何学的変化、たとえばチロシンをβ−メチル−２’，６’−ジメチルチロシン（ＴＭＴ）へ置換すること（相互作用部位に対し優先的構造を定義することができる。）が可能となる。このような変化については、例えばＶＩｃｔｏｒ Ｊ．Ｈｒｕｂｙ ｐｕｂｌＩｓｈｅｄ Ｉｎ Ｎａｔｕｒｅ，１，８４７−８５８，２００２参照。
【００５８】
本発明は、胃腸官（ＧＩＴ）による分解を減らし、特に経口製剤のための生物学的システムでペプチドの生物学的利用能を高めるシクロデキストリン類およびそれらの誘導体を用いてオリゴペプチド類、ＥＶＡＳＩＮ類の放出システムを得ることを特徴とする。さらに、例えば静脈内、筋肉内、局所、肺吸入、鼻腔内、口腔内、またはＰＬＡおよびＰＬＧＡまたはこれらの混合物（これらに制限されるわけではない）として生分解性高分子を用いる遊離制御型ダイアポジティブ（ｄＩａｐｏｓＩｔＩｖｅ）としての数多くの投与形態がある。
【００５９】
さらに、本発明はペプチドの生物学的利用能を高めるリポソームを利用する、オリゴペプチド類、ＥＶＡＳＩＮ類の放出制御システムを特徴とする。リポソームはそのような分子で内部水相を含む小泡であり、例えば個体状態のリポソームを投与した後に薬物を徐々に放出するように薬物をカプセル化することもできる。
【００６０】
シクロデキストリン類またはそれらの誘導体の中に含まれたオリゴペプチド類、ＥＶＡＳＩＮ類またはそれらの構造的および/または立体配置的類似体をＰＬＡまたはＰＬＧＡまたはそれらの混合物またはリポソームのような生分解性高分子内へマイクロカプセル化した適用例はいままで開示されたことがない。本発明は三つの異なる技術、すなわちオリゴペプチド類、ＥＶＡＳＩＮ類およびそれらの類似体をシクロデキストリン類内へ分子的カプセル化する技術、および生分解性高分子またはリポソームおよび/またはそれらの混合物へのマイクロカプセル化技術、および製剤化する前と比べて経口組成物および製剤内でＥＶＡＳＩＮ類の生物学的利用能（ｂＩｏｄＩｓｐｏｎＩｂＩｌＩｔｙ）を高めることを特徴とする。ペプチドおよび／または非ペプチド系薬物および／または薬学組成物および／または製剤の開発のための分子モデルとしてＥＶＡＳＩＮ７ａ，１０ｃ，１１ｅ，１２ｂおよびそれらの類似体および誘導体を利用することを特徴とする，ＥＶＡＳＩＮ類およびそれらの構造的および／または立体位置的類似体の薬学組成物および／または製剤は今まで開示されたことがない。
【００６１】
本発明の更なる特徴は、温血動物における高血圧、他の心血管疾病およびそれらの合併症（非制限的な例：急性心筋梗塞、卒中、左心不全、糖尿病性血管肥大、抹消虚血、狭心症、および心筋梗塞後心不全の進行およびアテローム性硬化症）、腫瘍、糖尿病、精子の運動性および精子形成の阻害、腎症、性的不能、胃腸および婦人科の障害、血管新生、髪の毛の喪失、血の疾病および血管形成術（血管形成術後再狭窄、血管内プロテアーゼ）の治療および研究において、リポソームおよびＰＬＡ、ＰＬＧＡ生分解性高分子および／またはそれらの混合物のような放出制御システム内に、選択的にマイクロカプセル化された、ＥＶＡＳＩＮ類およびそれらの類似体および誘導体、およびシクロデキストリン類またはそれらの誘導体の封入および／または結合を特徴とするＥＶＡＳＩＮ類およびそれらの類似体および誘導体の薬学組成物および／または製剤の使用である。
【００６２】
本明細書にクレームされた薬学組成物は、シクロデキストリン類またはそれらの誘導体に含まれたＥＶＡＳＩＮ類；薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体内に、単独に、または混合物の形態で、または一種以上の薬理学的活性剤と共に結合された形態で、包含または結合されているＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体；またはリポソームおよびＰＬＡ、ＰＬＧＡ性分解性高分子類および／またはそれらの混合物のような放出制御システム内にマイクロカプセル化された、選択的にシクロデキストリン内に含まれているＥＶＡＳＩＮ類またはそれらの類似体または誘導体からなる。
【００６３】
また、本発明は慢性退行性疾病の治療および研究における用途を有するＥＶＡＳＩＮ類の、他の生化学的作用機転を同定することも含む。
【００６４】
ＥＶＡＳＩＮ類（ＥＶＡＳＩＮ７ａを除く）、およびそれらの類似体および誘導体の薬学組成物は中性エンドぺプチダーゼ（ミクロモル範囲のＫｉ）およびアンギオテンシンＩ転換酵素（ナノモル範囲のＫｉ）に対し特異的な阻害活性を示すことを特徴とする。これらの薬学組成物および製剤の更なる特徴は、シクロデキストリン類に含まれた際に（例えば、経口製剤として）、上記ペプチドの生物学的利用能、持続時間および／または有効性を増加させることにある。
【発明を実施するための最良の形態】
【００６５】
本発明は下記のような非制限的な実施例に基づいてより良く理解できるだろう。
【実施例１】
【００６６】
合成、精製および特性決定、およびＥＶＡＳＩＮ類によるアンギオテンシンＩ転換酵素の触媒部位の選択的阻害を測定するための酵素分析
この実施例は、合成、精製、特徴付けおよびＥＶＡＳＩＮ類によるＥＣＡの部位Ｃ−またはＮ−末端選択的阻害について説明する。オリゴペプチドは当分野に知れている方法を用いて合成した。この技法ＢｏｃはＢａｒａｎｙ，Ｇ．＆ Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｒ．Ｂ．（Ｇｒｏｓｓ，Ｅ．＆ Ｍｅｉｎｈｏｆｅｒ，Ｊ．，Ｅｄｓ．）（１９８０），Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ：Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．ＩＩ，１，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ．２−Ｓｔｅｗａｒｔ，Ｊ．Ｍ．＆ Ｙｏｕｎｇ，Ｊ．Ｄ．（１９８４），Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄに記載されているデータに基づく。
【００６７】
オリゴペプチドは当分野の技術によって修飾された。そのような変化はＶｉｃｔｏｒ Ｊ．Ｈｒｕｂｙ ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｊｏｕｒｎａｌ Ｎａｔｕｒｅ，１，８４７−８５８，２００２に記載されている。
【００６８】
合成ＥＶＡＳＩＮ類をＨＰＬＣシステムで精製し、その得られた物質を質量分析法により分析した。
【００６９】
精製において、使用された溶媒は任意のＨＰＬＣ用溶媒であり、使用された水は、塩および有機化合物を保持させるカートリッジを備えたＭｉｌｌｉ−Ｑシステムでの蒸留およびろ過により得られた。
【００７０】
精製から得られた分画に対し、精製後ＥＶＡＳＩＮ類のモル質量に従い、質量分析を行った。
【００７１】
５０ｍＭのＨｅｐｅｓバッファ（ｐＨ６．８）、２００ｍＭのＮａＣｌおよび１０μＭのＺｎＣｌ2で（２５℃）、基質Ｍｃａ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−ＤｐａＯＨを用い、組み換えＡＣＥ阻害に対する酵素分析を行った。その反応は、蛍光光度計内でＡＣＥによる基質分解（Ｓ＝Ｋm，４０μＭ）結果から得られた、λem＝３９０ｎｍ（λex＝３４０ｎｍ）での蛍光増加を測定することにより連続的にモニターされた。ＥＶＡＳＩＮ類は、基質を追加する前に酵素によりプレインキュベートされた。
【００７２】
表４はＥＶＡＳＩＮ類による、アンギオテンシンＩ転換酵素のＣ−およびＮ−末端触媒部位活性の阻害分析結果を示す。
【表４】
【００７３】
ＥＶＡＳＩＮ類によるＡＣＥ阻害に対するＫＩ値の結果はｎＭで表示された。ほとんどのＥＶＡＳＩＮ類はＣ−末端に対し選択的な阻害薬であった。たとえば、ＥＶＡＳＩＮ−１０ｃのＫＩ値は０．５ｎＭであったが、それはこのドメインに対し４００倍選択的であることを示す。他のＥＶＡＳＩＮもＮ−末端部位に対し選択的な阻害を示したが、例えばＥＶＡＳＩＮ−１２ｂを用いて得られたＫＩ値はＮ−およびＣ−末端に対しそれぞれ５ｎＭおよび１５０ｎＭであった。
【００７４】
当分野の技術によると、アンギオテンシンＩ転換酵素を遺伝子欠失させたマウスは不妊である。Ｅｓｔｈｅｒ ＣＲ Ｊｒ，Ｈｏｗａｒｄ ＴＥ，Ｍａｒｉｎｏ ＥＭ，Ｇｏｄｄａｒｄ Ｊｍ，Ｃａｐｅｃｃｈｉ ＭＲ，Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ ＫＥ．Ｍｉｃｅ ｌａｃｋｉｎｇ ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ−ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅ ｈａｖｅ ｌｏｗ ｂｌｏｏｄ ｐｒｅｓｓｕｒｅ，ｒｅｎａｌ ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，ａｎｄ ｒｅｄｕｃｅｄ ｍａｌｅ ｆｅｒｔｉｌｉｔｙ．Ｌａｂ Ｉｎｖｅｓｔ．１９９６ Ｍａｙ；７４（５）：９５３−６５参照。睾丸のＡＣＥはＮ−末端体性のＡＣＥに相当する。Ｒａｍａｒａｊ Ｐ，Ｋｅｓｓｌｅｒ ＳＰ，Ｃｏｌｍｅｎａｒｅｓ Ｃ，Ｓｅｎ ＧＣ Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｒｅｓｔｏｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｑａｌｅ ｆｅｔｉｌｉｔｙ ｉｎ ｍｉｃｅ ｌａｃｋｉｎｇ ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ−ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅｓ ｂｙ ｓｐｅｒｍ−ｓｐｅｃｉｔｉｃ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｔｅｓｔｉｃｕｌａｒ ｉｓｏｚｙｍｅ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．１９９８ Ｊｕｌ １５；１０２（２）：３７１−８参照。ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の薬学組成物はオスの避妊薬として用いられる可能性を有する。したがって、本発明はまた、クロスボンドを持ち、シクロデキストリン類の有機−水性または固体溶液、またはアルキル、ヒドロキシアルキル、ヒドロキシプロピルおよびアシル基からなるシクロデキストリン誘導体またはシクロデキストリン高分子類と、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体の有機−水性または固体溶液との混合物をオスの避妊薬として使用することを特徴とする。一方、Ｃ−末端部位に選択性を持つＥＶＡＳＩＮ類は、Ｎ部位に選択的であるかまたは選択的ではない阻害薬とは異なる明確な特徴を示す場合もある。
【実施例２】
【００７５】
ＥＶＡＳＩＮ類により誘導されたＮＥＰ阻害を測定するための酵素分析
５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌバッファ、ｐＨ７．５、３７℃で、基質Ａｂｚ−ＲＬ−ＥＤＤｎｐを用い、組み換えＮＥＰ阻害に対し蛍光光度分析を行なった。反応は、蛍光光度計でＮＥＰによる基質分解（Ｋｍ＝８．４μＭ）結果から得られた、λem＝４１８ｎｍ（λex＝３１８ｎｍ）での蛍光の増加を測定することによって、連続的にモニターされた。
【００７６】
ＥＶＡＳＩＮ類はそれほど強力なＮＥＰ阻害薬ではなかった。ＥＶＡＳＩＮ類により誘導されたＮＥＰ阻害に対するＫＩ値はμＭで表示された。もっとも良い阻害薬の一つはＥＶＡＳＩＮ９ａで、そのＫｉ値は８６μＭであった。
【００７７】
表５はＥＶＡＳＩＮ類の作用による中性エンドペプチダーゼ活性の阻害分析結果を示す。
【表５】
【００７８】
阻害常数（Ｋｉ）値は、見掛け阻害常数（Ｋｉ(app)）および基質Ｋｍの割合によって測定された。（Ｓａｌｖｅｓｅｎ ａｎｄ Ｎａｇａｓｅ，１９９０）．ｉｎ：Ｐｒｏｔｅｏｌｙｔｉｃ ｅｎｚｙｍｅｓ ａ ｐｒａｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ．，Ｂｅｙｎｏｎ ａｎｄ Ｂｏｎｄ Ｅｄｓ Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｅｎｇｌａｎｄ，８７−８８）参照。
【００７９】
上記の結果は、ＮＥＰによるＥＶＡＳＩＮ類の低い親化性を示し、それは当該技術分野に関連するバソペプチダーゼ阻害薬（例えば、オマパチリラット）に比べて、血管性水腫および咳のような付帯的な効果の減少が可能であることを示唆する。
【実施例３】
【００８０】
ＥＶＡＳＩＮブラジキニン増強活性テスト−モルモットから分離された回腸での生物学的分析
ブラジキニンにより誘導された平滑筋収縮活性を用いる、合成ペプチドの増強活性をテストし、モルモットから分離された回腸試料を用いてＵＰ値を測定した。ＵＰは、ブラジキニンの単一容量の反応効果を等しい２回容量に変えられるＥＶＡＳＩＮの濃度（ｎｍｏｌ／製剤のｍｌ）に相応する。
【００８１】
メスのモルモットを用いた。分析を始まる前に、回腸をＴｙｒｏｄｅ溶液中に保存した。次いで、回腸分画（１．５〜２．０ｃｍ）の一方の末端を結んで、毛細血管を用いる一定な酸素泡を備えた、かつ３７℃のＴｙｒｏｄｅ食塩水を含む、グラスカップの底に含まれたセミリングを作った。他の末端は既に検定用テコに固定させた。１ｇの張力を維持し、モルモットから分離された回腸の収縮を記録した。ブラジキニンに対するサンプルの増強効果を測定するために、モルモットから分離された回腸に対するブラジキニン効果のログー容量反応曲線をプロットした。ブラジキニンの活性は、モルモットから分離された回腸収縮を測定することにより決定され、標準ブラジキニン容量に対する組織反応の増加として示される。Ｓｈｉｍｕｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．７０（４），５５１−５５４（１９８１）参照。
【００８２】
ＥＶＡＳＩＮ類をそれぞれテストし、ブラジキニン単一容量を投与する前にスパイクした。使用時に脱イオン水を用いてサンプル希釈液を製造した。測定された反応はログ容量−効果曲線の線形部分上に補間され、したがって標準ブラジキニン容量に対する製剤反応の増加として増強活性を得た。ＴＹＲＯＤＥ溶液：原液Ｉ２０ｍＬ、母液ＩＩ４０ｍＬ、ジジフェニトラミン（Ｄｉｐｈｅｎｙｄｒａｍｉｎｅ）溶液（１ｍｇ／ｍＬ）１ｍｌ、アトロピン溶液（１ｍｇ／ｍＬ）１ｍＬ、５．６０ｍＭのＤ−グリコースおよびＨ2Ｏ ｑ．ｓ．１Ｌ．この分析で用いられる全ての試薬は分析用試薬であった。
【００８３】
全てのＥＶＡＳＩＮは、モルモットから分離された回腸でブラジキニンの収縮作用を増強させ、０．２２〜３０ｎｍｏｌの濃度でブラジキニンの収縮効果は２倍となった。
【実施例４】
【００８４】
麻酔させたレットの血圧に対するＥＶＡＳＩＮ類の作用
ブラジキニンの降圧効果の増強活性を、麻酔させたレットでテストした。ペントバルビタールナトリウム（商品名：Ｈｙｐｎｏｌ Ｃｒｉｓｔａｌｉａ，５０ｍｇ／ｋｇ，腹膜内）を用い正常血圧のオスのレット（ＫＷＹ）を麻酔させ、３６．５〜３７．５℃の体温を維持するために制御温度ボード上に置いた。生理学的交換機につながっている多用途記録計を用いた。血圧値は、ベースライン血圧により制限された領域を積分し、それらと対照分析で得られた値を比較することによって求めた。インビボ分析で、麻酔されたレット血圧におけるブラジキニンの降圧効果に対するＥＶＡＳＩＮ類の増強活性を観察した。麻酔されたレット（ｎ＝５）の血圧に対するブラジキニンの増強効果を比較するために、二つのパラメタを測定した：
１）麻酔させたレットの血圧に対するブラジキニンの降圧活性の増強効果の強度：この値は、増強剤２００ｎｍｏｌを注入した後得られた単一用量のブラジキニンにより増加された降圧百分率（％）として定義付けられる。２）増強効果の持続時間：単一用量のブラジキニンに対する増強効果を５０％へ減少させるのに必要とされる時間。
【００８５】
ブラジキニンの降圧効果は、静脈注射により麻酔させたレットにおいて定常濃度２００ｎｍｏｌ（ＥＶＡＳＩＮ）／レットで、ＥＶＡＳＩＮ類により４０〜３４０％増強された。最初増強効果が５０％へ減少するのに、持続時間が１０分であるもの(最小持続時間)も見られたが、１２０分以上かかるものもあった。
【００８６】
表６は、麻酔させたレットの血圧に対するブラジキニンの降圧効果のＥＶＡＳＩＮ類による増強を示す。
【表６】
【実施例５】
【００８７】
β−シクロデキストリン類およびそれらの誘導体とＥＶＡＳＩＮ類およびそれらの類似体との包接化合物の製造
その実施例はＨＰ−β−シクロデキストリン類とＥＶＡＳＩＮ５ａとの包接化合物（それらに制限されるわけではない。）の特性決定について示す。その製剤は、水溶液でβ−シクロデキストリン類およびそれらの誘導体と、ＥＶＡＳＩＮ類およびそれらの類似体とのモル比が１：１および１：２になるように製造された。その溶液混合物を絶えず攪拌してβ−シクロデキストリン類の完全な溶液を得た。次いで、その混合物を液体質素温度で冷凍させ、２４時間凍結乾燥させた。そのようにして得られた固体の特性決定は、物理化学的分析技法により行われた。核磁気共鳴はホスト／ゲスト上に関連情報を提供する技術であった。
【００８８】
その製剤は等しいモル比を持つシクロデキストリン類とペプチド類から製造された。下記の表はそのように製造された包接化合物について示す。それらのシステムに対し生物学的テストを行った。
【００８９】
表７は生物学的なテストが行われたシクロデキストリン類とＥＶＡＳＩＮ類との包接化合物を示す。
【表７】
【００９０】
溶液を製造し、ＨＢ−β―ＣＤおよびペプチドのＮＭＲ1Ｈおよび13Ｃスペクトルのシミュレーションを行った後、ＨＢ−β−ＣＤ／ＢＰＰ−５ａの包接化合物、およびＢＰＰ−５ａ（単独）およびＨＢ−β−ＣＤ（単独）に対するＮＭＲ−特徴決定を行った。シクロデキストリン類およびホスト分子ＢＰＰ−５ａ； ＣＯＳＹ，ＴＯＣＳＹ，13Ｃ−ＤＥＰＴ１３５、ＨＭＱＣの構造解明のための水素−1ＨＮＭＲ；化学的変位−δの変化分析；縦緩和−ＲＭＮ Ｔ1およびＮＯＥＳＹ試験（核オーバーハウザー効果分光法）の時間測定を行って封入を検証した。シクロデキストリン水素シグナルが重なる場合に、ホスト分子の水素だけをプローブとして用い、δおよびＴ１分析を行った。
【００９１】
ペンタペプチドＢＰＰ−５ａからＲＭＮまでの構造を解明するために、ｓｐｅｃｉｆｉｃｓ遊離型アミノ酸のＲＭＮ1Ｈスペクトルを基準物質として用いた。ＴＨＥ ＳＡＤＴＬＥＲ ＳＴＡＮＤＡＲＤ ＳＰＥＣＴＲＡ。Ｓａｄｔｌｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ．１９７２参照。分子の複雑さとそのスペクトルのために、一次元または二次元の多様なＲＮＭ技術、また４００ＭＨｚ分光計を用いることが必要であった。サンプルをＤ2Ｏ中に溶解させると、それらは溶媒の重水素原子へ変更され、水素核磁気共鳴でのスペクトルは、ヒドロキシ、アミダおよびアミナ基の作用下、および水素シグナルの不在下で、非常に単純になった。
【００９２】
ＥＶＡＳＩＮ−５ａの相応するシミュレーションに基づき、純粋化合物の実際のスペクトルの分析結果は以下のようである。
１）ＮＭＲ1ＨスペクトルおよびＣＯＳＹは４．８ｐｐｍで強いシグナルを示したが、これは重水素化溶媒で不純物“Ｈ2Ｏ”が存在するためであった。
２）“ＣＨ”基水素は水シグナルに隣接する。これらの水素はペプチド結合およびアミノ官能基との間をつなぐ。
３）“ＣＨ2”基は２．８〜３．７ｐｐｍの化学的変異に含まれる領域内に存在し、これらの基はペプチド結合に隣接する“ＣＨ”基に結合する。
４）約１．３〜２．５ｐｐｍで、幾つかの官能基に付属する“ＣＨ2”に関する多重線が見られる。
５）１．２ｐｐｍで、アミノ酸アラリン（Ａｌａｌｉｎｅ）の分節のＣＨ3基に関する二重線が見られる。ＣＯＳＹを用いると、４．６ｐｐｍでその基と“ＣＨ”とのスカラーカップリング（四重線）が見られる。
６）７．７〜７．１ｐｐｍの化学的変位に含まれた領域は芳香族基スピンシステム（アミノ酸トリプトファンの分節に相応する）に割り当てられた。
【００９３】
ＨＰ−β―ＣＤスペクトルは、シミュレートされたスペクトルに基づいても、相変わらず非常に複雑であり、割り当てにくいということを示した。しかしながら、一部のシグナルは以下のように割り当てることができる。
【００９４】
３．３〜４．３ｐｐｍの化学的変位で、複雑な多重線は、ヒドロキシルに結合されている炭素の“ＣＨ”基に起因したものと見られる。１．１〜１．８ｐｐｍの化学的変位で、ヒドロキシプロピル基に関するシグナルが見られる。
【００９５】
包接化合物のＮＭＲ分析に関して、純粋なＥＶＡＳＩＮ−５ａに比べて、スペクトル線の明確な分離が観察され、また芳香族基領域内に２次的な化学的転移の変化が見られた（δ≒７．７−７．１）。これはＨＰ−β−ＣＤとこのペプチドの領域との相互作用を強く示唆する。この現象は、ペプチドの芳香族基の電子的分布において外乱（ｄｉｓｔｕｒｂａｎｃｅ）を引き起こすことができるシクロデキストリン類の酸素原子Ｃ１−Ｏ１−Ｃ４の電子に起因する。この結果はＨＰ−β―ＣＤ空洞への芳香族基のカプセル化が可能であることを示唆する。
【００９６】
表４および５に示されたＥＶＡＳＩＮ−５ａに関連して（Ｔ１の数値）、水素１６および１９だけが有意の変化を示し、この核のＴ１変化は各々の測定で得られた標準偏差より遥かに大きかった。その他の水素分析は、各々の測定の標準偏差に比べて疑わしいＴ１変化を示した。
【００９７】
下記の表から、ホスト分子芳香族水素の緩和時間、Ｔ１の減少が観察された。このような変化は、シクロデキストリンの空洞内へホスト分子を封入した後の、遅い回転力学、対称的変化およびゲスト分子の運動性の減少を示唆する。
【００９８】
表８は２００ＭＨｚで測定された、純粋ペプチドＢＰＰ−５ａの１Ｈでの幾つかの核の縦緩和時間値を示す。
【表８】
【００９９】
表９は２００ＭＨｚで測定された、システムＨＰ−β−ＣＤ／ＢＰＰ−５ａの１Ｈでの幾つかの核の縦緩和時間ちを示す。
【表９】
【０１００】
ＲＭＮデータに加えて、β−ＣＤｅＢＰＰ−５ａ／ＨＰ−β−ＣＤのＮＯＥＳＹ試験を用いてシクロデキストリンの空洞の内部でゲスト分子の空間配置を決定することができた。ＮＯＥＳＹ試験はＢＰＰ−５ａに対しＤ８＝６５０ｍｓを用いて行なわれた。これはＨＰ−β−ＣＤとＢＰＰ−５ａとの空間的近接を示す、相互関連性を観察できるＤ８の特殊値であった。
【実施例６】
【０１０１】
非麻酔の高血圧レットの血圧に対するＥＶＡＳＩＮ類の効果
分析の一日前に、動物に大腿動脈および静脈のカニューレ挿入する手術を行なった。エテールでレットを麻酔させ、外科手術台上にその背面が置かれるように配置した。小さい皮膚切開片を製造し、大腿心血管バンチ（ｂｕｎｃｈ）を位置決めするために筋系を分離した。心臓血管のパラメタを記録するために大腿動脈を介し腹大動脈へ、並びに薬物を投与するために大腿静脈を介し下大静脈へ、カニューレを挿入した。挿入後、カニューレを、手術糸（ｓｕｒｇｉｃａｌ ｌｉｎｅ）を用いて結び、バンチにした。次いで、カニューレは、それらが外面化され、また縫合線を用いて固定される肩甲骨へ、トロケーター（ｔｒｏｃａｔｅｒ）により皮下に送られる。心臓血管のパラメタを記録するために動脈カニューレを、薬物を投与するために静脈カニューレを利用した。
【０１０２】
大腿動脈および静脈カニューレ挿入後１日に、血圧および心拍数を記録した。分析は自由運動可能な非麻酔動物で行なわれた。そのレットの動脈圧（ＰＡＰ）、平均動脈圧（ＭＡＰ）および心拍数（ＨＲ）は、データ収集システム（ＢＩＯＰＡＣ）を用いて、コンピューターによりモニターした。全ての実験から、データを収集した。
【０１０３】
薬物を投与する前に、レットのＰＢＰ、ＭＢＰおよびＨＲをモニターした。総容積０．２ｍＬで（ＮａＣｌ０．９％溶液）ＥＶＡＳＩＮ類の丸薬を注射した後、得られた降圧効果および効果持続時間をモニターした。この分析で、各ペプチドの標準容量（７０ｎｍｏｌ／１００ｇ体重）をテストした。（ｎ＝４）ＥＶＡＳＩＮ−１０ｃは最も優れた降圧効果を有する強力なペプチドで、平均血圧を−２９．５±９．５０ｍｍＨｇ減少させ、次いでＥＶＡＳＩＮ−９ａはＭＢＰを−２７．０±１．５０ｍｍＨｇ減少させた。ＥＶＡＳＩＮ−５ａおよびＥＶＡＳＩＮ−７ａはＭＢＰを最大それぞれ−１９．１７±４．３６ｍｍＨｇおよび１３．００±２．７８ｍｍＨｇ減少させた。
【０１０４】
効果持続時間を比較した結果、ＥＶＡＳＩＮ−７ａは１００分以上持続する降圧効果を示すペプチドであることが分かった。ＥＶＡＳＩＮ−９ａおよびＥＶＡＳＩＮ−１０ｃはそれぞれ８４分と９４分で、両方は効果持続時間の観点から類似であった。ＥＶＡＳＩＮ−５ａの効果持続時間は短く、投与後そのＭＡＰがベ−スラインへ戻るのに３７分が掛かった。
【実施例７】
【０１０５】
意識のあるレットの血圧に対する、シクロデキストリン類内へカプセル化されたＥＶＡＳＩＮ類の効果
この実施例は高血圧のレットの血圧にＥＶＡＳＩＮ−５ａとヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（ＨＰβＣＤ）との包接化合物の投与効果を説明する。分析の一日前に、動物に大腿動脈と静脈のカニューレ挿入術を行なった。エテールでレットを麻酔させ、外科手術台上にその背面が置かれるように配置した。小さい皮膚切開片を製造し、大腿心血管Ｂｕｎｃｈを配置するために筋系を分離した。心臓血管のパラメタを記録するために大腿動脈を介し腹大動脈へ、並びに薬物を投与するために大腿静脈を介し下大静脈へ、カニューレを挿入した。挿入後、カニューレを、手術糸を用いて結び、バンチにした。次いで、カニューレは、それらが外面化され、また縫合線を用いて固定される肩甲骨へ、トロカーターにより皮下に送られる。心臓血管のパラメタを記録するために動脈カニューレを、薬物の投与のために静脈カニューレを利用した。
【０１０６】
大腿動脈および静脈カニューレ挿入後１日に、血圧および心拍数を記録した。分析は自由運動可能な、意識のある動物で行なわれた。そのレットの動脈圧（ＰＡＰ）、平均動脈圧（ＭＡＰ）および心拍数（ＨＲ）は、データ収集システム（ＢＩＯＰＡＣ）を用いて、コンピューターによりモニターした。全ての実験から、データを収集した。
【０１０７】
薬物を投与する前に、レットのＰＢＰ、ＭＢＰおよびＨＲを６０分間モニターした。総容積０．２ｍＬで（ＮａＣｌ０．９％溶液）ＥＶＡＳＩＮ類の丸薬を注射した後、得られた降圧効果および効果持続時間をモニターした。この分析では、標準容量０．０７１ｎｍｏｌ／１００ｇ（体重）、ｎ＝６を利用した。
【０１０８】
ＨＰβＣＤに含まれたＥＶＡＳＩＮ−５ａおよび遊離型ＥＶＡＳＩＮ−５ａを投与して得られた結果を比較した結果、最大の降圧効果において遊離型ペンタペプチドおよびカプセル化されたものとの間に差は見られなかった。（ＭＡＰはそれぞれ２３±４．２ｍｍＨｇおよび２２±３．３ｍｍＨｇ減少した。）また、効果持続時間において、カプセル化されたＥＶＡＳＩＮ−５ａ（持続時間：１４０分）はその遊離型ペプチド（持続時間：３８分）に比べ４倍近く増加したのが分かった。
【実施例８】
【０１０９】
異種の、高血圧のレットの血圧に対するＥＶＡＳＩＮ類の効果比較（ＳＨＲおよびＴＧＲ（ｍＲＥＮ２）Ｌ２７）
この実施例では、異なる種類の高血圧のレットの血圧に対するＥＶＡＳＩＮ５ａの注入効果について説明する。
【０１１０】
分析の一日前に、動物に大腿動脈と静脈のカニューレ挿入術を行なった。エテールでレットを麻酔させ、外科手術台上にその背面が置かれるように配置した。小さい皮膚切開片を製造し、大腿心血管バンチを配置するために筋系を分離した。心臓血管のパラメタを記録するために大腿動脈を介し腹大動脈へ、並びに薬物を投与するために大腿静脈を介し下大静脈へ、カニューレを挿入した。挿入後、カニューレを、手術糸を用いて結び、バンチにした。次いで、カニューレは、それらが外面化され、また縫合線を用いて固定される肩甲骨へ、トロカーターにより皮下に送られる。心臓血管のパラメタを記録するために動脈カニューレを、薬物の投与のために静脈カニューレを利用した。
【０１１１】
大腿動脈および静脈カニューレ挿入後１日に、血圧および心拍数を記録した。分析は自由運動可能な、意識のある動物で行なわれた。そのレットの動脈圧（ＰＡＰ）、平均動脈圧（ＭＡＰ）および心拍数（ＨＲ）は、データ収集システム（ＢＩＯＰＡＣ）を用いて、コンピューターによりモニターされる。全ての実験から、データを収集した。
【０１１２】
薬物を投与する前に、レットのＰＢＰ、ＭＢＰおよびＨＲを６０分間モニターした。０．９％ＮａＣｌ溶液中に１時間当たり９００μｇ／１００ｇ（体重）でＥＶＡＳＩＮ‐５ａを注入する間、並びにその後、心臓血管パラメタを登録した。異種、すなわちＳＨＲおよびＴＧＲ（ｍＲＥＮ２）Ｌ２７にＥＶＡＳＩＮ−５ａを投与すると、ＭＡＰはそれぞれ２８±２．７ｍｍＨｇおよび３４±０．９ｍｍＨｇ減少した。しかしながら、注入を中断すると、ＳＨＲでは６時間後、ＴＧＲではたった１時間後変化が見られた。そのような持続時間の差は、異なる程度のレニン−アンギオテンシン系活性を有する、ＥＶＡＳＩＮ−５ａの生化学的作用機転における重要な差を示唆する。
【実施例９】
【０１１３】
遠隔測定システムにより測定されたＳＨＲ血圧に対するＥＶＡＳＩＮ類の投与効果
遠隔測定システムは、収縮期血圧、拡張期血圧、平均血圧および心拍数を測定するために利用される。このようなモニターシステムは移植可能な無線周波数装置、受容版、マトリックス、およびデータ収集および分析用ソフトウェアを備えたコンピューターからなる。Ｂｒａｇａ，ｅｔ ａｌ．，２００２参照。
【０１１４】
オスのＳＨＲレットを利用した。手術前２４時間その動物に餌を与えなかった。そのレットを、２．５％の２,２,２−トリブロモエタノール（１ｍＬ／１００ｇ体重）により麻酔させ、外科手術台上にその背面が置かれるように配置し、レットの腹部をクリップし、ヨウ素化アルコールで無菌化した。中央腹部線に沿って約２ｃｍの切開部を作り、長骨の二分支がよく見れるようにした。腸を除去し、腹部血管への完全なアクセスが出来るようにした。腹大動脈が大静脈から適切に分離かつ同定されるまで、綿棒およびガーゼを用い、血管層に沿って脂肪および結合組織を精密に除去した。食塩水で湿らせたコルドネット（ｃｏｒｄｏｎｅｔ）糸で大静脈を取り巻くことによって血流を止め、９０°の角度で曲がった針（２５ｘ８）を用い小さい切断部を作った。次いで、ガイドはさみを用い、生体適合性ゲルを受容する、装置のポリエチレンカテーテルを動脈内へ挿入した。そのカテーテルの注入口を洗浄し、乾燥させ、極少量の組織接着剤を塗布した。接着剤上に、一枚の小さいセルロース紙を用いてカテーテルを大静脈内に固定させた。磁石で装置バッテリーを作動させ、ＡＭ無線（同調されていないもの）を用い、大静脈内カテーテルの位置に特有な音を記録した。腹部の筋系を縫合し、シリコンタブにより装置を固定させた。次いで、皮膚を縫合した。ヨウ素化アルコールおよび０．１ｍＬのペンタバイオチック（ｐｅｎｔａｂｉｏｔｉｃ）を筋肉内へ投与することによって無菌化した。動物を個別の檻に入れて、麻酔から完全に回復されるまで暖かい条件を維持させた。回復後、その動物を、１２時間／１２時間昼間／夜間サイクル（６：００ａ．ｍ．から６：００ｐ．ｍ．までが昼間で、６：００ｐ．ｍ．から６：００ａ．ｍ．までが夜間である。）で維持されかつ２５℃に調節された遠隔測定室に置いた。その動物に水と餌は自由に与えられた。
【０１１５】
分析を行う前に、動物を個別の檻（１５ｃｍｘ１２ｃｍｘ６ｃｍ）に置き、遠隔測定プロットが血圧および心拍数の回復を示すまで、その状態を８日間維持させた。データは10分ことに１０秒／２４時間で標本抽出された。
【０１１６】
β−シクロデキストリン内にカプセル化されたＥＶＡＳＩＮ−７ａおよびＥＶＡＳＩＮ−１０ｃの経口投与から得られた結果は、両方のペプチドが任意の高血圧レットで降圧効果を奏すると言うことを示す。ＥＶＡＳＩＮ−７ａは9時間の持続時間を示し、５時間後ＭＡＰが最大２０ｍｍＨｇ減少し、ペプチド投与後および５時間でそれぞれ８ｍｍＨｇ以内であった。ＥＶＡＳＩＮ−１０ａの場合、作用持続時間は５時間であり、投与後２時間で最大減少値１３ｍｍＨｇを示した。
【実施例１０】
【０１１７】
ＥＶＡＳＩＮ類の生体内分布
マウスでクロラミンＴ方法にしたがって、125Ｉラベル付きＥＶＡＳＩＮ類を静脈投与した結果、これらのペプチドが腎臓に著しく集中されていることが分かった。例えば、125Ｉ−ＥＶＡＳＩＮ−１０ｃを静脈注射すると、１５分後、このペプチドは肺および肝臓に比べて腎臓で２倍高い濃度（組織グラム当たり）で分布された。ほかの組織および血液で、その放射性ペプチドの濃度は有意に低かった。このような差はほかの組織に比べて腎臓で増加し、その濃度は３０分後最高に至り、組織では早く下がるが、腎臓ではより遅く下がり、投与後３時間で最高濃度の約５０％を維持した。このような分布プロフィールは、その放射性ペプチドを該ペプチドの濃度より１０倍のモル濃度のカプトプリルと共に投与した際に、（カプトプリルなしで）放射性ペプチドにより得られる最高濃度を約３０％減少させた。
【０１１８】
腎臓でのＥＶＡＳＩＮ類の体内分布および滞留時間の両方は、腎臓に対し良好な選択性を持ち、かつカプトプリルに比べてより長く、組織に対する結合状態を維持した。一方、ＥＶＡＳＩＮ類の腎臓結合での３０％減少はアンギオテンシン転換酵素に対するリガンドのためである。
【技術分野】
【０００１】
本発明は、蛇、特にジャララカ（Ｂｏｔｈｒｏｐｓ Ｊａｒａｒａｃａ）の毒腺から分泌されたペプチド類、バソぺプチダーゼ（ｖａｓｏｐｅｐｔｉｄａｓｅ）阻害薬ペプチド類、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる薬学組成物の製造法、および用途開発のための関連製品および／または晩成退行性疾病に対する関連製品を特徴とする。
【０００２】
本発明は、シクロデキストリン類またはそれらの誘導体に含まれるか、または一種以上の薬理学的活性剤および／または担体中に結合または包含されているバソペプチダーゼ阻害薬ペプチド類、ＥＶＡＳＩＮペプチド類、およびそれらの構造的および／または立体配置的類似体からなる薬学組成物および／または関連製品を特徴とする。本発明の更なる特徴はリポソームおよび生分解性高分子およびそれらの混合物のような放出制御システム内で、選択的にシクロデキストリン類内に含まれているＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体をマイクロカプセル化することである。
【０００３】
本発明でクレームしている薬学組成物はシクロデキストリン類またはそれらの誘導体に含まれたＥＶＡＳＩＮ類またはその誘導体；単独に、混合物の形態で、または１種以上の薬理学的活性剤と結合された形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に結合または包含されているＥＶＡＳＩＮ類；リポソームおよび生分解性高分子および／またはそれらの混合物のような放出制御システム内に、選択的にシクロデキストリン内に含まれているか、または選択的にマイクロカプセル化されているＥＶＡＳＩＮ類からなる。
【０００４】
また、本発明は晩成退行性疾病の研究および治療のための用途を有する、ＥＶＡＳＩＮ類の他の生化学的作用機転を同定することも含む。
【０００５】
ＥＶＡＳＩＮ類（ＥＶＡＳＩＮ７ａを除く）およびそれらの類似体および誘導体の薬学組成物は、中性エンドペプチダーゼ（ミクロモル範囲のＫｉ）およびアンギオテンシンＩ転換酵素（ナノモル範囲のＫｉ）に対する特異的な阻害活性により特性決定される。これらの薬学組成物の更なる特徴は、シクロデキストリン類またはそれらの誘導体に含まれると、ＥＶＡＳＩＮ類の生物学的利用能、作用効果持続時間および／または効能を増加にある。
【０００６】
そのような薬学組成物は、経口または静脈内を介して提供された場合、シクロデキストリン類またはそれらの誘導体に含まれているＥＶＡＳＩＮ類の生物学的利用能、作用効果持続時間および／または効能を増加させる。
【背景技術】
【０００７】
世界のほとんどの国で、大人の人口の１５〜２５％が高血圧を患っている。ＭａｃＭａｈｏｎ，Ｓ．ｅｔ．Ａｌ．Ｂｌｏｏｄ ｐｒｅｓｓｕｒｅ，ｓｔｒｏｋｅ，ａｎｄ ｃｏｒｏｎａｒｙ ｈｅａｒｔ ｄｉｓｅａｓｅ，Ｌａｎｃｅｔ ３３５：７６５−７７４，１９９０参照。血圧値が高くなるたびに心血官性疾患の発病可能性が高くなる。血圧が高ければ高いほど、卒中および冠状動脈性事象の危険度が高くなる。高血圧が冠状動脈性、大脳性および腎性血管疾病の主な危険因子であることを考えると、高血圧は大人において死亡および能力障害をもたらす主な原因である。
【０００８】
世界的に心不全は６０〜８０歳の患者が入院するようになる主な原因である。その集団の年齢自体が発現率を高める一つの因子になるものの、２５〜５４歳のヒトのうち１％が心不全を患っている。高齢者で、この発現率はより高くなり、７５歳を超えると１０％に達する。Ｋａｎｎｅｌ，Ｗ．Ｂ．ｅｔ．ａｌ．Ｃｈａｎｇｉｎｇ ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｆｅａｔｕｒｅｓ ｏｆ ｃａｒｄｉａｃ ｆａｉｌｕｒｅ，Ｂｒ．Ｈｅａｒ Ｊ １９９４；７２（ｓｕｐｐｌ）：Ｓ３-Ｓ９参照。
【０００９】
臨床上のプロフィルから分かるように、心不全は制限的な疾病である。すなわち、悪化すると、患者の生活の質は低下し、より深刻なケースでは、現在に至るまでも初年度の死亡率が６０％を超える悪性疾病である。Ｏｌｉｖｅｉｒａ， Ｍ．Ｔ．Ｃａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃａｓ ｃｌｉｎｉｃａｓ ｅ ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃｏ ｄｅ ｐａｃｉｅｎｔｅｓ ｃｏｍ ｉｎｓｕｆｉｃｅｎｃｉａ ｃａｒｄｉａｃａ ｃｏｎｇｅｓｔｉｖａ ａｖａｎｃａｄａ，Ｆａｃｕｌｄａｄｅ ｄｅ Ｍｅｄｉｃｉｎａ，ＵＳＰ １９９９参照。産業化された社会で１５００万名以上のヒトがその疾病を患っており、例えば米国だけを見ても、１９７３年から１９９０年までその数値が４５０％増加した。Ｋａｎｎｅｌ，Ｗ．Ｂ．ｅｔ．Ｅｌ．Ｃｈａｎｇｉｎｇ ｅｐｉｄｅｒｍｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｆｅａｔｕｒｅｓ ｏｆ ｃａｒｄｉａｃ ｆａｉｌｕｒｅ，Ｂｒ． Ｈｅａｒ Ｊ １９９４； ７２（ｓｕｐｐｌ３）：Ｓ３−Ｓ９参照。
【００１０】
高血圧は複雑な、多因子性の、広く蔓延する疾病で、幾つかの有害な悪影響および高い羅病率／死亡率にも係わっている。Ｋａｐｌａｎ Ｎ．Ｍ．Ｂｌｏｏｄ Ｐｒｅｓｓｕｒｅ ａｓ ａ ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｒｉｓｋ ｆａｃｔｏｒ：ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．ＪＡＭＡ．２７５：１５７１−１５７６，１９９６参照。より良く理解するために、一般集団および特定の集団におけるその制御の有効性を評価する、数多くの研究が行なわれてきた。薬物および／または関連危険因子（糖尿病、肥満、喫煙）を用いる薬剤学的介入を排除した血圧制御は、一般的に冠状動脈疾病に起因する死亡率を減少させるのに係る高血圧長期治療の利益を減らすだけでなく除去する場合もある。Ｗｉｌｓｏｎ，Ｐ．Ｗ．ｅｔ．ａｌ．Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ，ｔｈｅ ｒｉｓｋ ｆａｃｔｏｒｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｒｉｓｋ ｏｆ ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ．９４−１１４参照。
【００１１】
高血圧は心血官性動脈硬貨症の発病に寄与する主な因子である。Ｔｈｅ ｆｉｆｔｈ Ｒｅｐｏｒｔ ｏｆ ｔｈｅ Ｊｏｉｎｔ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｍｍｉｔｔｅ ｏｎ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ，ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ，ａｎｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｉｇｈ Ｂｌｏｏｄ Ｐｒｅｓｓｕｒｅ．Ｎａｔｉｏｎａｌ ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ （ＶＪＮＣ）．Ａｒｃｈ．ｉｎｔｅｒｎ．Ｍｅｄ．１５３：１５４−１８１，１９９４参照。統計学によれば、四人の米国人のうち一人が高血圧患者であるか、または高血圧患者になり、４７８万名が心不全を患うことになると予測される。毎年４十万の新たなケースが診断され、８万ケースが入院し、その治療に１７８億ＵＳドルが費やされる。
【００１２】
ブラジルでは、ＳＵＳ（Ｕｎｉｆｉｅｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｙｓｔｅｍ）のデータから、心不全は１９９７年に心臓疾病のうち入院の主な原因であったことが分かった。政府はその治療に１億５０００万Ｒ＄を費やしたが、その金額は健康費用の４．６％に相当する。Ｆｉｌｈｏ，Ａｌｂａｎｅｓｉ Ｆ．ｉｎｓｕｆｉｃｉｅｎｃｉａ ｃａｒｄｉａｃａ ｎｏ Ｂｒａｓｉｌ．Ａｒｑ．Ｂｒａｓ．Ｃａｒｄｉｏｌ，７１：５６１-５６２，１９９８参照。
【００１３】
レニン−アンギオテンシン系（ＲＡＳ）は、生理学的および病理学的状態下で、血圧、心血管恒常性および電解質平衡を調節する機能をする。Ｓａｎｔｏｓ，Ｒ．Ａ．Ｓ．；Ｃａｍｐａｇｎｏｌｅ−Ｓａｎｔｏｓ，Ｍ．Ｊ．；Ａｎｄｒａｄｅ，Ｓ．Ｐ．Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ−（１−７）：ａｎ ｕｐｄａｔｅ．Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，９１：４５−６２，２０００参照。アンギオテンシンＩＩ（ＡｎｇＩＩ）は、血圧上昇作用、副腎ステロイド合成刺激作用、増殖作用（線維芽細胞、血管平滑筋）および肥大作用（心筋細胞）を持つ、ＲＡＳの主な効果器ペプチドである。その形成経路は、傍糸球体系（ｊｕｓｔａｇｌｏｍｅｒｕｌａｒ ｓｙｓｔｅｍ）でのレニンの産生および肝臓によるアンギオテンシンの産生を含む。これらの物質は、アンギオテンシンがレニンにより加水分解される血流へ放出され、それによって形成されたＡｎｇＩは、肺でアンギオテンシン転換酵素（ＡＣＥ）の作用を受け、ＡｎｇＩＩを産生し、続いてＡｎｇＩＩはその産生部位から離れた標的器官に作用する。Ｓａｎｔｏｓ，Ｒ．Ａ．Ｓ．；Ｃａｍｐａｇｎｏｌｅ−Ｓａｎｔｏｓ，Ｍ．Ｊ．；Ａｎｄｒａｄｅ，Ｓ．Ｐ．ＡｎｇＩｏｔｅｎｓＩｎ−(１−７)：ａｎ ｕｐｄａｔｅ．Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，９１：４５−６２，２０００)参照。
【００１４】
最近、循環ＡｎｇＩＩを産生する系に加えて、異なる組織は局所的な作用により明らかに、ＲＡＳを産生する独立的ＡｎｇＩＩを含むということが分かった。この組織ＲＡＳ成分は血管、子宮、膵臓の外分泌部、目、心臓、副腎皮質、睾丸、卵巣、脳下垂体前面および中間葉、松下体および脳の壁上で見られる。これらの組織ＳＲＡの作用は未だ明らかにされていない。Ａｒｄａｉｌｌｏｕ，Ｒ．；Ｍｉｃｈｅｌ，Ｊ．Ｂ．Ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｒｏｌｅｓ ｏｆ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ ａｎｄ ｔｉｓｓｕｅ ｒｅｎｉｎ−ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ ｓｙｓｔｅｍｓ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．Ｄｉａｌ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．，１４：２８３−２８６， １９９９参照。ＲＡＳの局所的な作用は、ペプチドを産生する細胞（内分泌および自己分泌作用）で、隣接した細胞（傍分泌作用）上で、または産生部位から離れた部位（内分泌の作用）で起こり得る。
【００１５】
最近報告によると、ＲＡＳの重要な抹消的および中央的作用は、ＡｎｇＩＩＩ[Ａｎｇ−(２−８)]、ＡｎｇＩＶ[Ａｎｇ−(３−８)]およびＡｎｇ−（１−７）を含む、より短いアンギオテンシン性ペプチド配列により介される。ＡｎｇＩ[Ａｎｇ−(１−１０)]およびＡｎｇＩＩ[Ａｎｇ−(１−８)]は生体内変化過程を経て、生物学的に活性なアンギオテンシンペプチド類の“系統群”を産生することと考えられる。Ｓａｎｔｏｓ，Ｒ．Ａ．Ｓ．；Ｃａｍｐａｇｎｏｌｅ−Ｓａｎｔｏｓ，Ｍ．Ｊ．；Ａｎｄｒａｄｅ，Ｓ．Ｐ．Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ−（１−７）：ａｎ ｕｐｄａｔｅ．Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，９１：４５−６２，２０００参照。
【００１６】
Ａｎｇ−（１−７）はＡｎｇＩＩと共に主なＲＡＳ効果器である。ＡｎｇＩＩからの二つの重要な特徴的な分泌Ａｎｇ−（１−７）：第一は非常に特異的な生物学的作用を待ち、かつその形成経路はＡＣＥから独立的である。Ｓａｎｔｏｓ，Ｒ．Ａ．Ｓ．；Ｃａｍｐａｇｎｏｌｅ−Ｓａｎｔｏｓ，Ｍ．Ｊ．；Ａｎｄｒａｄｅ，Ｓ．Ｐ．Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ−（１−７）：ａｎ ｕｐｄａｔｅ．Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，９１：４５−６２，２０００参照。ＥＶＡＳＩＮ類はＡｎｇＩ濃度を増加させることによりＡｎｇ−（１−７）を形成し、ＡＣＥを阻害することによってその代謝を低下させる傾向がある。
【００１７】
高血圧治療の主な目的は、費用を下げるだけでなく、必要に応じて使用薬物および生活の質を変化させることにより標的臓器で損傷を防止することにある。Ｔｈｅ Ｆｉｆｔｈ Ｒｅｐｏｒｔ ｏｆ Ｔｈｅ Ｊｏｉｎｔ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｎ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ，ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ，ａｎｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｉｇｈ Ｂｌｏｏｄ Ｐｒｅｓｓｕｒｅ．Ｎａｔｉｏｎａｌ ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ（ＶＪＮＣ）．Ａｒｃｈ．Ｉｎｔｅｒｎ．Ｍｅｄ．１５３：１５４−１８１，１９９４）．
【００１８】
薬物治療は、３〜６ヶ月後生活様式の変化に対する無反応の場合および標的器官での損傷（左心室肥大、心筋虚血、卒中または高血圧網膜症）の場合に必要とされる。１６０ｍｍＨｇ以上の収縮期血圧または１００ｍｍＨｇ以上の拡張期血圧を示す全ての患者には、他の因子が存在するか否かに係わらず、薬理学的治療を行なうべきである。Ｒｅｐｏｒｔ ｔｈｅ Ｃａｎａｄｉａｎ Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ．Ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ．３．Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．ｘａｎ．Ｍｅｄ．Ａｓｓｏｃ．Ｊ．１４９（３）：５７５−５８４，１９９３参照。
【００１９】
しかしながら、７０年代から８０年代までの間に、抗高血圧薬は高血圧の治療において重要なツールとなった。Ｍｅｎａｒｄ，Ｊ．Ａｎｔｈｏｌｏｇｙ ｏｆ ｒｅｎｉｎ−ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ ｓｙｓｔｅｍ：Ａ ｏｎｅ ｈｕｎｄｒｅｄ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ａｐｐｒｏａｃｈ ｔｏ ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ ＩＩ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ．Ｊ．Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ ＩＩ （ｓｕｐｐｌ）：Ｓ３−Ｓ１１，１９９３参照。最近４０年間の薬理的な研究により、高血圧治療のための新たな部類の薬物、すなわち６０年代の利尿薬、７０年代のベータ遮断薬、カルシウムチャンネル遮断薬、アンジオテンシンＩＩ受容体の拮抗薬およびアンジオテンシン転換酵素（ＡＣＥ）阻害薬が現れた。
【００２０】
利尿薬は三つのカテゴリに分けることができる：チアジド系ループおよびカリウム保留薬。チアジド類はクロロチアジドおよびハイドロクロロチアジドを含むが、これらは治療開示後第一日以内に血圧を約１０〜１５％減少させ、そのような減少は第二の細胞外体積の減少、利尿増加およびナトリウム排泄増加に係わる。次いで、６ヶ月後、血漿体積および心臓血液伯出量は正常値へ戻り、血圧減少は抹消血管抵抗の減少に係わる。Ｆｒｏｌｉｃｈ，Ｅ．Ｃｕｒｒｅｎｔ ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ，４０５−４６９参照。これらは単一治療法として用いられるが、黒人および高齢者（低容量の場合）において応答の改善が見られた。次のような副作用が現れた：インシュリンに対する抹消抵抗の増加、トリグリセライドの増加、ＬＤＬの増加、低カルシウム症、高尿酸血症。ルップ利尿薬のうちフロセミド、ブメタミドおよびトリアンテレンはチアジド系利尿薬に比べより高い有効性を持つ。これらは主にヘンレ係蹄の皮質および髄質部分に作用する。これらはチアジド系利尿薬と同じ副作用を示す。カリウム保持性利尿薬は弱い利尿作用を持つ薬物で、単独に用いられるのはまれである。これらの例として、アミロライド、トリアンテレンおよびスピロラクトンが挙げられる。
【００２１】
アテノロールおよびナオロール（Ｎａｏｌｏｌ）を含むベータ遮断薬はベータ１およびベータ２として分類される。抗高血圧作用機転は、未だ完全に解明されていないが、ベータ遮断薬がシナプス前性のベータ受容体を阻害し、ノルアドレナリンの放出を防止するという証拠によって基本的に裏付けられる。その副作用としては、インシュリンに対する反応における変化、ハイポグルセミック（Ｈｙｐｏｇｌｕｃｅｍｉｃ）昏睡の延長、トリグリセライドの増加および腎血流の減少によるクレアチニンの増加が挙げられる。
【００２２】
カルシウムチャンネル遮断薬は少なくとも２５年間用いられてきた。Ｆｒｏｌｉｃｈ，Ｅ．Ｄ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ，４０５−４６９，１９９４参照。これらは薬理学的作用にしたがって大きく二つのグルップ、すなわち刺激伝導に対する作用を増加させるもの（例えば、べラパミルおよびジルチアゼム）および優れた血管拡張作用を持つもの（例えば、ニフェジピンのようなジヒドロピリジン誘導体類）に分けることができる。Ｆｒｏｌｉｃｈ，Ｅ．Ｄ．，Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ．Ａｄｕｌｔ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ Ｓｅｌｆ Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ Ｐｒｏｇｒａｍ（ＡＣＣＳＡＰ），６：３−１９，１９９５参照。副作用として下肢の水腫および心急迫などがある。
【００２３】
転換酵素阻害薬は主にアンジオテンシンＩからアンジオテンシンＩＩへの転換を阻害することによって作用する。したがって、アンジオテンシンＩＩの血管収縮作用は必ず最小化される。予備研究結果、初めて臨床的に用いられた阻害薬であるテプロチド（ＥＶＡＳＩＮ−９ａ）は静脈内へ投与される際に抗高血圧活性を有するが、経口で投与される際には不活性であるため、その用途は制限された。本発明者らはＡＣＥが多様な作用を持つ酵素であること、すなわち幾つかの基質に作用することができるということを発見した。アンギオテンシンＩおよびブラジキニンに対しジペプチダーゼ（ｄｉｐｅｐｔｉｄａｓｅ）として作用すること以外に、カリウム保持性利尿性ペプチドのペプチド鎖を分解することができるが、それは酵素が幾つかの組織に作用することができるということを意味する。またＡＣＥは循環する組織Ａｎｇ−（１−７）の不活性化で重要な役割を果たす。その循環ペプチドの濃度はＡｎｇＩＩの濃度と類似し、ＡＣＥ阻害後に増加する。そのような増加は、前駆体（ＡｎｇＩ）の増加およびＡＣＥ分解の減少に起因する可能性がある。Ｓａｎｔｏｓ，Ｒ．Ａ．Ｓ．；Ｃａｍｐａｇｎｏｌｅ−Ｓａｎｔｏｓ，Ｍ．Ｊ．；Ａｎｄｒａｄｅ，Ｓ．Ｐ．Ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ−（１−７）：ａｎ ｕｐｄａｔｅ．Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，９１：４５−６２，２０００参照。
【００２４】
オマパットリラット（Ｏｍａｐａｔｒｉｌａｔ）活性について言及する当該技術の説明は下記の特許で見られる。ＵＳ２００２１３３０７−Ａ１（Ｋｏｔｈａｒｉ ａｎｄ Ｄｅｓａｉ）、ＵＳ２００２００４５００−Ａ１（ＷＯ２００１７４３４８−Ａ２，ＡＵ２００１８７２８９‐Ａ）、 Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏ（ＢＲＩＭ）ａｎｄ Ｒｅｅｖｅｓ ｅｔ ａｌ．；ＵＳ６１６６２２７−Ａ（ＷＯ２００００３９８１−Ａ２，ＡＵ９９４８５２８−Ａ）、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏ（ＢＲＩＭ）ａｎｄ Ｇｏｄｆｒｅｙ ｅｔ ａｌ．しかしながら、この血管ぺプチダーゼ阻害薬化合物およびそれらの類似物は中性エンドぺプチダーゼ（ＮＥＰ）に対する高い阻害活性の結果として関連副作用（血管性水腫および咳）を示す。
【００２５】
ＡＣＥＩは、ＡＣＥ阻害薬が高血圧患者の６０〜７０％で血圧を比較的に迅速に減少させるため、単独療法として投与されても優れた効果を示す。Ｇａｎｏｎｇ，Ｗ．Ｎｅｕｒｏｐｅｐｔｉｄｅｓ ｉｎ ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｃｏｎｔｒｏｌ．Ｊ．Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓ ２（ｓｕｐｐｌ３）：１５−２２，１９８４参照。それらは一般的に許容可能であるが、その使用によって副作用および逆反応を引き起こし、それらのうち幾つかは深刻であり、例えば血管神経性水腫、発疹および乾性咳（８〜１０％）、Ｂｌｏｏｄ ｄｉｓｃｒａｓｉａｓおよび性交不能を含む。
【００２６】
アンギオテンシンＩ転換酵素阻害薬またはバソぺプチダーゼ阻害薬は、腫瘍、急性心筋梗塞、卒中、左心室肥大、糖尿病性血管肥大、抹消虚血、狭心症、および心筋梗塞後心不全の進行およびアテローム性硬症、および 糖尿病および血管新生を含む数多くの疾病を治療および予防するために用いられてきたかまたは提案されてきた。Ｙａｓｕｍａｒｕ Ｍ，Ｔｓｕｊｉｓ Ｓ，Ｔｓｕｊｉｉ Ｍ，ｉｒｉｅ Ｔ，Ｋｏｍｏｒｉ Ｍ，Ｋｉｍｕｒａ Ａ，Ｎｉｓｈｉｄａ Ｔ，Ｋａｋｉｕｃｈｉ Ｙ，Ｋａｗａｉ Ｎ，Ｍｕｒａｔａ Ｈ，Ｈｏｒｉｍｏｔｏ Ｍ，Ｓａｓａｋｉ Ｙ，Ｈａｙａｓｈｉ Ｎ，Ｋａｗａｎｏ Ｓ，Ｈｏｒｉ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ ＩＩ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｔｈｅ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ−２ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｖｉａ ｉｎｓｕｌｉｎ−ｌｉｋｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ Ｉ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｐａｔｈｗａｙ；Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２００３ Ｏｃｔ １５；６３（２０）：６７２６−３４；Ｋｉｎｕｙａ Ｓ，Ｙｏｋｏｙａｍａ Ｋ，Ｋａｗａｓｈｉｍａ Ａ， Ｈｉｒａｍａｔｓｕ Ｔ， Ｋｏｎｉｓｈｉ Ｓ，Ｓｈｕｋｅ Ｎ，Ｗａｔａｎａｂｅ Ｎ，Ｔａｋａｙａｍａ Ｔ，Ｍｉｃｈｉｇｉｓｈｉ Ｔ，Ｔｏｎａｍｉ Ｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ ＩＩ ａｎｄ ｋｉｎｉｎａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ ｒａｄｉｏｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｃｏｌｏｎ ｃａｎｃｅｒ ｘｅｎｏｇｒａｆｔｓ．Ｊ Ｎｕｃｌ Ｍｅｄ．２０００ Ｊｕｌ；４１（７）：１２４４−９．；ｖｏｌｐｅｒｔ Ｏｖ，Ｗａｒｄ ＷＦ， Ｌｉｎｇｅｎ ＭＷ，Ｃｈｅｓｌｅｒ Ｌ，Ｓｏｌｔ ＤＢ，Ｊｏｈｎｓｏｎ ＭＤ，Ｍｏｌｔｅｎｉ Ａ，Ｐｏｌｖｅｒｉｎｉ ＰＪ，Ｂｏｕｃｋ ＮＰ．Ｃａｐｔｏｐｒｉｌ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ ｓｈｏｗｓ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｔｕｍｏｒｓ ｉｎ ｒａｔｓ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．１９９６ Ａｕｇ １；９８(３)：６７１−９．；Ｋｏｗａｌｓｋｉ Ｊ，Ｈｅｒｍａｎ ＺＳ．Ｃａｐｔｏｐｒｉｌ ａｕｇｍｅｎｔｓ ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ ｉｎ ｍｉｃｅ．Ｐｏｌ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９９６ Ｍａｙ−Ｊｕｎ；４８（３）：２８１−５．；Ｋｏｗａｌｓｋｉ Ｊ， Ｂｅｌｏｗｓｋｉ Ｄ，Ｍａｄｅｊ Ａ，Ｈｅｒｍａｎ ＺＳ．Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｈｉｏｒｐｈａｎ， ｂｅｓｔａｔｉｎ ａｎｄ ｃａｐｔｏｐｒｉｌ ｏｎ ｔｈｅ Ｌｅｗｉｓ ｌｕｎｇ Ｃｃａｒｃｉｎｏｍａ ｍｅｔｓｔａｓｅｓ ｉｎ ｍｉｃｅ．Ｐｏｌ Ｊ ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９９５ Ｓｅｐ−Ｏｃｔ；４７(５)：４２３‐７．； Ｋｏｗａｌｓｋｉ Ｊ，Ｂｅｌｏｗｓｋｉ Ｄ，Ｗｉｅｌｇｕｓ Ｊ，Ｇａｂｒｙｅｌ Ｂ，Ｋｌｉｎ Ｍ，Ｈｅｒｍａｎ ＺＳ．Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｃａｐｔｏｐｒｉｌ ａｎｄ ｔｈｉｏｒｐｈａｎ ｏｎ ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｎｅｏｐｌａｓｔｉｃ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｎ ｃｙｔｏｓｔａｔｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ａｌｐｈａ ｏｒ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ． Ａｒｃｈ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｔｈｅｒ Ｅｘｐ（Ｗａｒｓｚ）．１９９５；４３(１)：４７−５０．しかしながら、退行性慢性疾病の治療および研究での使用に対し薬理学的に許容可能な担体または賦形剤と共に製剤化された、シクロデキシトリン中に含まれているかまたは含まれていないＥＶＡＳＩＮの薬学組成物をクレームするいかなる特許も当該技術分野では見当たらない。
【００２７】
ＡｎｇＩＩ拮抗薬を開発するための試みは７０年代初から始まり、その時はＡｎｇＩＩ−類似体ペプチドの開発に集中していた。第一の拮抗薬はサララシン、１−サルコシン、８−イソロイシン・アンギオテンシンＩＩなどであった。しかしながら、それらは部分的なアゴニスト活性を持つため、臨床的に受け入れられなかった。１９８２年に、初めて二つのＡＴ1受容体および非ペプチド系拮抗薬が開発され（Ｓ−８３０７およびＳ−８３０８）、これらは高度に特異的で、アゴニスト活性は持たないものの、ＡｎｇＩＩ受容体に対する結合力が弱かった。強度を改善し、選択性を維持し、かつ薬物動力学的特性を得るために、これらの二つの親化合物の分子構造を幾つか変更させることによって、新たな、強力で高い特異性を持つ経口製品、すなわちロサルタンが開発された。その後、その他幾つかの非ペプチド拮抗薬、例えばカンデサルタン（Ｃａｎｄｅｓａｒｔａｎ）、イルベサルタン（Ｉｒｂｅｓａｒｔａｎ）、バルサルタン（Ｖａｌｓａｒｔａｎ）、テルミサルタン（ＴｅｌｍＩｓａｒｔａｎ）、エプロサルタン（Ｅｐｒｏｓａｒｔａｎ）、タソサルタン（Ｔａｓｏｓａｒｔａｎ）およびゾラサルタン（Ｚｏｌａｓａｒｔａｎ）が開発された。本発明の薬学組成物および製剤は薬学的に許容可能な賦形剤と、ＥＶＡＳＩＮ類および類似体との混合物を利用することを特徴とする。製剤は賦形剤またはそれらの混合物から製造され得る。賦形剤の例としては、水、食塩水、燐酸バッファ溶液、リンガー液、ブドウ糖、ハンクス液、生体適合性食塩水（ポリエチレングリコルを含むかあるいは含まない）が挙げられる。他の有用な製剤は増粘剤、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトールまたはデキストランを含む。賦形剤はまた少量の添加剤、例えば等張性および化学的安定性を増加させる物質またはブッファを含むことができる。バッファの例としては、燐酸塩バッファ、重炭酸塩バッファおよびとリスバッファがあり、防腐剤の例としては，チメロサール、メターまたはオルトークレゾール、ホルマリンおよびベンジルアルコールがある。標準製剤は液体または固体であり得る。したがって、非液体製剤において、賦形剤はデキストロース、ヒト血清アルブミン、防腐剤などを含んでも良く、投与する前に水または滅菌の食塩水を添加することができる。
【００２８】
さらに本発明はＥＶＡＳＩＮ類またはその類似体および誘導体を含む放出制御システムの製造法を特徴とする。十分な放出制御システムには、シクロデキストリン類、生体適合性高分子類、生分解性高分子類、他の高分子基質、カプセル、マイクロカプセル、微小粒子、巨丸剤（丸薬）、浸透圧ポンプ、拡散装置、リポソーム、リポスペアーおよび経皮投与システムを含むが、これらに制限されない。本発明による他の放出制御組成物は、動物に投与された後、その部位で固体またはゲルを形成する液体を含む。
【００２９】
ＵＳ４５９８０７０（ＣＡ１２１５３５９、ＤＫ３５６６８４，ＥＰ１３５０４４，ＥＳ８５０６７５７，ＧＲ８２３２２，ＪＰ６００２５９６７）。抗高血圧薬であるトリプデン（Ｔｒｉｐｕｄｉｎｅ）とシクロデキストリン類（α‐シクロデキストリン類およびβ‐シクロデキストリン類）との包接化合物が開発された。Ｍａｓｈｉｒｏ，Ｋａｗａｈａｒａ ｅｔ．ａｌ．（１９８６）参照。トリパミドは水中にわずかに溶解可能であるが、シクロデキストリン類を利用することにより溶解性化合物が得られる。本発明はまた幾つかの特徴的な技術、例えば示差走査熱量測定（ＤＳＣ）およびＸ線回折を利用する。
【００３０】
ＵＳ４６６６７０５．Ｄｅ Ｃｒｏｓｔａ，Ｍａｒｋ．Ｔ．ｅｔ．ａｌ．(１９８７)は抗高血圧薬の放出制御に基づいた発明を報告した。ＡＣＥ阻害薬（非ペプチド、活性部位指向性ＡＣＥ阻害薬）であるカプトプリルは、迅速な吸収および２時間の半減期を持つため利用された。その放出を遅らせるために、この発明は高分子または共重合体と共にカプトプリルを含有する錠剤に基づく。使用された高分子はポーリビニルピローリドン（ＰＶＰ）であり、使用された技術は乾式造粒法である。その結果、体で薬物の留置時間の増加（４〜１６時間）が得られた。
【００３１】
ＵＳ５５１９０１２．Ｆｅｃｅｊ−Ｔｅｍｅｊｏｏｖ，Ｄａｒｊａ ｅｔ．ａｌ．（１９９６）は、メチル−（β―シクロデキシトリンおよびその他の誘導体、例えば（ヒドロキシル化β―シクロデキシトリン）と抗高血圧薬（すなわち１，４‐ジヒドロプリジン）との新たな包接化合物に基づいた発明をなした。
【００３２】
ＵＳ５７２８４０２．Ｃｈｅｎ，Ｃｈｉｎ−Ｍｉｎｇ ｅｔ．ａｌ．（１９９８）はカプトプリルおよびヒドロゲルを含む内相、およびその他に胃内で不溶性である外相を含む薬学組成物によって薬物の放出制御に基づいた発明を開示している。この発明の目的は単独で投与された場合に、１時間である薬物吸収時間を増加させることにあった。
【００３３】
ＵＳ５８３４４３２（ＡＵ５９９０７９６，ＣＡ２２２１７３０，ＥＰ０８２８５０５，ＷＯ０９６３９１６４，ＪＰ１１５０７３６２５）．Ｒｏｄｇｅｒｓ，Ｋａｔｌｅｎ Ｅｌｉｚａｂｅｔｈ ｅｔ．ａｌ．（１９９８）は傷の治療を促すためにＡＴ２受容体を用いた。
【００３４】
ＵＳ６０８７３８６（ＷＯ９７４９３９２Ａ１）．Ｃｈｅｎ，Ｔｚｙｙ−Ｓｈｏｗ Ｈ．ｅｔ．ａｌ．（２０００）はエナラプリル（ＡＣＥ阻害薬）およびロサルタン（ＡＩＩ拮抗薬）を含む薬学組成物（それは、ロサルタンカリウム塩の層およびエナラプリルマレイン酸塩の更なる層からなる。）からなる発明を開示している。この発明の目的は薬理的作用を改善させ、吸収時間を増加させ、かつ副作用を減少させることにある。
【００３５】
ＵＳ６１７８３４９．Ｋｉｅｖａｌ，Ｒｏｂｅｒｔ Ｓ．ｅｔ．ａｌ．（２００１）は心血管疾病の治療のために、神経性刺激により薬物を放出させる装置を開発した。この装置は神経につながっている電極、移植可能なパルス発生器および投与されるべき薬物を含む貯蔵所を含む。使用する際に、電極および薬物の放出は神経を刺激し、続いて心血管系を制御できるようになる。
【００３６】
薬物はその特徴、例えば体内分析、薬力学および溶解度を持つように化学的に修飾され得る。薬物の溶解度および安定性を増加させるために幾つかの方法（例えば、有機溶媒類、エマルジョン類、リポソーム類、ｐＨ調整剤、化学的変更、および適切なカプセル化剤、例えばシクロデキストリン類との薬物錯体化、生分解性高分子内へのマイクロカプセル化）が用いられてきた。
【００３７】
シクロデキストリン類は、バシラスマセランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍａｃｅｒａｎｓ）の作用によるでん粉分解生成物としてビロー（Ｖｉｌｅｒ）により１８９１年に始めて分離された。１９０４年に、シャルジンガー（Ｓｃｈａｒｄｉｇｅｒ）はそれらが環状オリゴ糖であることを明らかにした。１９４８年に、フルデンベルグ（Ｆｒｕｄｅｎｂｅｒｇｒ）らは、シクロデキストリン類が（α１→４）結合により連結されているグルコース単位を含んでいることを報告した。１９４８年に、フルデンベルグらは、シクロデキストリン類が包接化合物または錯体を形成することができることを見出し、彼らによると、その錯体は純粋シクロデキストリン類の合成工程から製造される。１９５４年から、クレイマー（Ｃｒａｍｅｒ）らは他の化合物とのシクロデキストリン錯体を形成することについて体系的な研究を遂行した。１９５５年から１９６０年の間に、薬物との包接錯体の形成に関し初めて研究が行われた。これらの研究は日本、ハンガリー、フランス、イタリアおよび他の国で集中的に続けられてきた。
【００３８】
シクロデキストリン類はでん粉の酵素的分解により得られる。その方法は次のような段階を含む：酵素生産および精製、でん粉の酵素的転換並びにシクロデキストリン類の回収および分離。かかる酵素はシクロデキストリンーグリコシルトランスペラーゼ（ＣＧＴ）である。この酵素は幾つかの微生物から得られるが、主にバシラスマセランス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍａｃｅｒａｎｓ）、Ｂ．メガテリウム（Ｂ．ｍｅｇａｔｈｅｒｉｕｍ）、Ｂ．ステレオテルモピルス（Ｂ．ｓｔｅｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）およびクレくブシエラニュウモニアエ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に由来する。Ｋｏｒｏｌｋｏｂａｓ，Ａ．ｉｎｃｌｕｓａｏ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｅ ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎａｓ：ｐｒｏｐｒｉｅｄａｄｅｓ ｅ ａｐｌｉｃａｃｏｅｓ ｔｅｒａｐｅｕｔｉｃａｓ．ＥＮＬＡＣＥ Ｆａｒｍａｌａｂ，２／９１，Ａｎｏ ５，ｖｏｌ．ＩＩ，ｐ．６−１５参照。
【００３９】
シクロデキストリン類は６個、７個または８個のグルコピラノース単位からなる環状オリゴ糖である。立体的相互作用の結果、シクロデキストリン類、ＣＤは内部無極性空洞を有する切断型錘状体の環状構造物を形成する。それは、位置選択的に変更され得る化学的に安定した化合物を含む。シクロデキストリン類（ホスト）は幾つかの疎水性分子（ゲスト）と共に、空洞内それらを完全に或いは部分的に含む、錯体を形成する。ＣＤは薬物、香水および芳香剤の可溶化およびカプセル化のために用いられてきた。Ｓｚｅｊｔｌｉ，Ｊ．，Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ,（１９９８），９８，１７４３−１７５３．Ｓｚｅｊｔｌｉ， Ｊ．，Ｊ．Ｍａｔｅｒ．Ｃｈｅｍ．，（１９９７），７，５７５−５８７参照。詳しい毒性、突然変異誘発性、催奇形性に関する研究結果、それらは低い毒性を有するというのが判明された。Ｒａｊｅｗｓｋｉ，Ｒ．Ａ．，Ｓｔｅｌｌａ，ｖ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，（１９９６），８５，１１４２−１１６９参照。特にヒドロキシプロピルーシクロデキストリン類に関しては、Ｓｚｅｊｔｌｉ，Ｊ．Ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ａｎｄ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．Ｄｒｕｇ ｉｎｖｅｓｔｉｇ．，２（ｓｕｐｐｌ．４）：１１−２１，１９９０参照。赤血球に損傷を与える幾つかの高濃度の誘導体を除けば、それらの生成物は一般的に健康上危険をもたらすことはない。食料品の添加剤としてシクロデキストリン類を利用するのは多くの国（例えば、日本およびハンガリー）で正式に許可されている。フランスおよびデンマークの場合、もっと特定の用途に対し許可されている。このような特徴すべては、新しい用途の発見に対するきっかけになるということを意味する。
【００４０】
シクロデキストリン類の他に、放出制御装置により体内で薬物の吸収速度を減少させるものとして生分解性高分子が用いられる。これらのシステムにおいて、数日、数ヶ月または数年間に渡って少量の制御可能な日用量の薬物を体内へ放出するように微粒子または超微粒子内へ薬物をカプセル化するために、薬物は高分子基質中に取り込まれている。
【００４１】
放出制御システムに対し幾つかの高分子が既にテストされた。それらのうち幾つかはそれらの物理的特性の関数として分類される。例えば、弾性に関連してポリ（ウレタン）、優れた分離剤に関連してポリ（シロキサン）またはシリコーン、物理的強度の結果としてポリ（メチルーメタクリレート）、疎水性および抵抗性の結果としてポリ（ビニルアルコール）、硬度および不浸透性のためのポリ（エチレン）が挙げられる。Ｇｉｌｄｉｎｇ，Ｄ．Ｋ．Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ ｐｏｌｙｍｅｒｓ．Ｂｉｏｃｏｍｐａｔ．Ｃｌｉｎ．Ｉｍｐｌａｔ．Ｍａｔｅｒ．２：２０９−２３２，１９８１参照。
【００４２】
それにもかかわらず、ヒトで利用するためには、材料は不純物がなく、かつ化学的に不活性でなければならない。放出システムに用いられる物質の幾つかは次のような化合物を含む：ポリ（２−ヒドロキシ−エチルメタクリレート）、ポリアクリルアミド、乳酸系（ＰＬＡ）およびグリコール酸系（ＰＧＡ）高分子およびそれに相応する共重合体、（ＰＬＧＡ）およびポリ（無水物）、例えばセバス酸系（ｓｅｂａｓｉｃ ａｃｉｄ、ＰＳＡ）高分子および疎水性高分子との共重合体。
【００４３】
従来技術としてリポソームの製造に関する幾つかの特許が挙げられる。ＵＳ特許４，５５２，８０３（Ｌｅｎｋ）；ＵＳ特許４，３１０，５０６（Ｂａｌｄｅｓｃｈｗｅｉｌｅｒ）；ＵＳ特許４，２３５，８７１（Ｐａｐａｈａｄｊｏｐｏｕｌｏｓ）；ＵＳ特許４，２２４，１７９（Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ）；ＵＳ特許４，０７８，０５２（Ｐａｐａｈａｄｊｏｐｏｕｌｏｓ）； ＵＳ特許４，３９４，３７２（Ａｌｆａｉａｔｅ）；ＵＳ特許４，３０８，１６６（Ｍａｒｃｈｅｔｔｉ）；ＵＳ特許４，４８５，０５４（Ｍｅｚｅｉ）；およびＵＳ特許４，５０８，７０３（Ｒｅｄｚｉｎｉａｋ）；Ｗｏｏｄｌｅ ａｎｄ Ｐａｐａｈａｄｊｏｐｏｕｌｏｓ， Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１７１：１９３−２１５（１９８９）。
【００４４】
単一膜リポソームは水の体積を含む単一膜を有する。Ｈｕａｎｇ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｔｒｙ ８：３３４−３５２（１９６９）参照。多重膜リポソームは幾つかの同心円状の膜を有する。Ｂａｎｇｈａｍ ｅｔ Ｃｏｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１３：２３８−２５２（１９６５）参照。抗生物質、ホルモンおよび抗癌剤を含む多様な薬理的に活性な物質に対して、リポソーム系担体が提案されてきた。Ｍｅｄｉｃａｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ（Ｄ．Ｄ．Ｌａｓｉｃ，Ｄ．Ｐａｐａｈａｄｊｏｐｏｕｌｏｓ Ｅｄ．），Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｂ．ｖ．，Ｈｏｌｌａｎｄ，１９９８参照。
【００４５】
その他のリポソームの製造法は既に当業界で知られている。例えば、Ｃｕｌｌｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ，Ｆｒｏｍ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃｓ ｔｏ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ（Ｍ．Ｏｓｔｒｏ，ｅｄ．），Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ），１９８７，ｐｐ．３９−７２；Ｗｏｏｄｌｅ ａｎｄ Ｐａｐａｈａｄｊｏｐｏｕｌｏｓ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．１７１：１９３−２１５（１９８９）；Ｌｉｐｏｓｏｍｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（Ｇ．Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ ｅｄ．），ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，ＦＬ，１９９３参照。
【００４６】
Ｂａｎｇｈａｍの製造法[Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１３：２３８−２５２（１９６５）]は“通常の多重膜リポソーム”（ＭＬＶｓ）を生産する。“通常の”ＭＬＶｓは水の区画で不等溶質分布を有し得、したがって区画の間に異なる浸透圧を示す。Ｌｅｎｋら（ＵＳ特許４，５２２，８０３；ＵＳ５，０３０，４５３；およびＵＳ５，１６９，６３７）、Ｆｏｕｎｔａｉｎら（ＵＳ特許４，５８８，５７８）、Ｃｕｌｌｉｓら（ＵＳ特許４，９７５，２８２）およびＧｒｅｇｏｒｉａｄｉｓら（特許ＷＯ９９／６５４６５）は区画の間に実質的に等しい溶質分布を有する多重膜リポソームの製造法を開示している。異なる区画の間での等しい溶質分布は、より高い薬物カプセル効率およびより低い浸透圧差を意味し、結局これらのＭＬＶｓは通常のＭＬＶに比べてより安定する。
【００４７】
単一膜リポソームは、ＭＬＶｓを音波処理（Ｐａｐｈａｄｊｏｐｏｕｌｏｕ ｅｔ ａｌ．（１９６８）参照）または、ポリカルボネート膜を通じて圧出させることによって生産され得る。Ｃｕｌｌｉｓら（ＵＳ特許５，００８，０５０）およびＬｏｕｇｈｅｒｙら（ＵＳ特許５，０５９，４２１）参照。良好な脂質は、例えば重合化または非重合化された形態の、ホスファチジルコリン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロール、カルジオリピン、コレステロール、ホスファチジン酸、スフィンゴリピド、脂肪酸、ステローる、ポスパチジルエタノールアミン、重合可能なホスホリピド、およびそれらの混合物を含む。
【００４８】
本発明のリポソーム組成物は、小胞を変更し、器官または細胞に特異性を与えることにより特性決定される。リポソーム特異性はかかる解剖学的因子および機転に基づき分類される。解剖学的分類は選択性の水準、例えば器官特異性、細胞特異性、または生物特異性に基づく。機転の観点から見れば、特異性は手動的なものまたは能動的なものに分類され得る。
【００４９】
手動的特異性は洞様毛細血管を含む器官内際網内皮系の細胞によって取り込まれる通常のリポソームの自然的な傾向を用いる。本発明のリポソームは、血流への除去速度の減少に起因し、改善された薬物担体として（ＬＥＥ）方法（また“ＰＥＧ−リポソーム”として知れている。）により立体的に確立された。Ｌａｓｉｃ ａｎｄ Ｍａｒｔｉｎ，Ｓｔｅａｌｔｈ Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．（１９９５）参照。ＬＥＥは、その表面が高分子により覆われたリポソームであり、その高分子は、リン脂質と共有接合されたポリエチレングリコール（ＰＥＧ）であるのが好ましく、小胞二重層から親水性雲を生成する。このような立体障害はオプソニンによるリポソーム認知を遅らせ、ＬＥＥを従来のリポソームにより長く血流内に保持させる。Ｌａｓｉｃ ａｎｄ Ｍａｒｔｉｎ，Ｓｅａｌｔｈ Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．（１９９５）；Ｗｏｏｄｌｅ ｅｔ Ｃｏｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １１０５：１９３−２００（１９９２）；Ｌｉｔｚｉｎｇｅｒ ｅｔ Ｃｏｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １１９０：９９−１０７（１９９７）；Ｂｅｄｕ Ａｄｄｏ，ｅｔ Ｃｏｌ．，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１３：７１８−７２４（１９９６）参照。また、そのような立体障害は、幾つかの化学治療薬物および生物学的に活性なペプチドに示されるように、カプセル化された薬剤の薬理学的な有効性を増加させる。Ｌａｓｉｃ ａｎｄ Ｍａｒｔｉｎ，Ｃａｕｔｅｌａ Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，ｉｎｃ．，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．（１９９５）；Ａｌｌｅｎ Ｔ．Ｍ．ｉｎ：Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ， Ｎｅｗ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｎｅｗ Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ ｔｈｅｉｒ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ（Ｆ．Ｐｕｉｓｉｅｕｘ，Ｐ．Ｃｏｕｖｒｅｕｒ，Ｊ．Ｄｅｌａｔｔｒｅ，Ｊ．−Ｐ．Ｄｅｖｉｓｓａｇｕｅｔ Ｅｄ．），Ｅｄｉｔｉｏｎｓ ｄｅ ｌａ Ｓａｎｔｅ，Ｆｒａｎｃａ，１９９５，ｐｐ．１２５参照。
【００５０】
この分野に関する研究の結果、異なる因子がＬＥＥの循環半減期に影響を及ぼし、小胞直系は２００ｎｍ未満で、ＰＥＧは５％の割合で約２，０００Ｄａの分子量を有するのが理想的である。Ｌａｓｉｃ ａｎｄ Ｍａｒｔｉｎ，Ｃａｕｔｅｌａ Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ．（１９９５）；Ｗｏｏｄｌｅ ｅｔ Ｃｏｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １１０５：１９３−２００（１９９２）；Ｌｉｔｚｉｎｇｅｒ ｅｔ Ｃｏｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ １１９０：９９−１０７（１９９４）；Ｂｅｄｕ Ａｄｄｏ ｅｔ Ｃｏｌ．，Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１３：７１８−７２４（１９９６）参照。
【００５１】
能動的な標的化は、結合剤、例えばモノクロナール抗体、糖、糖脂質、たんぱく質、高分子による、または従来のリポソームが蓄積する部位とは異なる細胞および器官へこれらを標的化するリポソームの大きさおよび組成を変えることによる、リポソームの変更を含む。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｇａｎｎａｒｏ，Ａ．Ｒ．，ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，１８ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，ｐｐ．１６９１−１６９３参照。
【００５２】
ペプチドの効果を延長するためのリポソーム適用技術の例として、（吻側−腹外側骨髄（ＲＶＬＭ）で）一側性に微量注射されたＡｎｇ−（１−７）（ＬＡｎｇ）を含むリポソームの製造がある。血圧は、自由に動けるように放置したレット（ｕｎｄｉｓｔｕｒｂｅｄ ｒａｔ）で４日前に開示し、１２日後終わるまで、１０分ことに１０秒間遠隔測定により測った。ＬＡｎｇ微量注射により朝に有意の昇圧効果が現れ、それが５日間続いた。最も高いＭＢＰは３日で測定され（１１４±４ｍｍＨｇ）、それは０日での測定値（１００±３ｍｍＨｇ）と有意に異なっていた。予測した通り、ＬＶａｚはＭＢＰで有意に変化しなかった（３日で９４±５ｍｍＨｇ ｖｓ ０日で９０±５ｍｍＨｇ）。さらに、朝ＭＢＰは１日、２日、３日でＬｖａｚ群に比べてＬａｎｇ群で有意に高かった。朝ＭＢＰとは対照的に、夜ＭＢＰはＬＡｎｇ微量注射により有意の影響を受けなかった。以前の研究で、ＢＲＶＬに対する、類似の容量（２５〜５０ｎｇ）の遊離型Ａｎｇ−（１−７）の微量注射（カプセルかされていない）は約１０分間１５ｍｍＨｇを増加させる。Ｆｏｎｔｅｓ Ｍａ，Ｐｉｎｇｅ ＭＣ，Ｎａｖｅｓ ｖ，Ｃａｍｐａｇｎｏｌｅ Ｓａｎｔｏｓ ＭＪ，Ｌｏｐｅｓ ＯＵ，Ｋｈｏｓｌａ ＭＣ，Ｓａｎｔｏｓ ＲＡＳ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕａｒ ｅｆｆｅｃｔ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｂｙ ｍｉｃｒｏｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎｓ ａｎｄ ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｖｅｎｔｒｏｌａｔｅｒａｌ ｍｅｄｕｌｌａ ｏｆ ｆｒｅｅｌｙ ｍｏｖｉｎｇ ｒａｔｓ．Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．このような効果の短い持続時間はインビボでの高いたんぱく質代謝に起因する。Ｓｉｌｖａ−Ｂａｒｃｅｌｌｏｓ ｅｔ Ｃｏｌ．，Ｈｙｐｅｒｔｅｎｔｉｏｎ，３８（６）：１２６６−７１（２００１）参照。
【発明の開示】
【００５３】
本発明は、毒またはジャララカの組織で見られる少なくとも２１種類のブラジキニン増強ペプチド類（一般的にＢＰＰまたはブラジキニン増強ペプチドと呼ばれる。）を利用することにより特徴付けられる。また、本発明は質量分析法により測定され、かつこのヘビ亜目の非毒腺組織で発現されるこれらの分子の親化合物のｃＤＮＡで推論されたアミノ配列を有する。これらをＥＶＡＳＩＮ類または内因性バソペプチド阻害薬と呼ぶ。
【００５４】
【表１】
【００５５】
これらのペプチドのうちほとんどは構造的モチーフＣ‐末端ＰＸ1Ｘ2ＰＰを有する。ここで Ｘ1は任意のアミノ酸であり、Ｘ2は通常イソロイシン（Ｉ）であり、およびＮ‐末端アミノ酸は主にピログルタミン酸の残基により遮断されている（＜Ｅ）。その合成ペプチドに対し、組み換えＡＣＥのＣとＮ部位阻害薬としての、並びにレットでブラジキニンの降圧活性とモルモットから分離された回腸でブラジキニンの収縮作用の両方に対する賦活薬（ｐｏｔｅｎｔｉａｔｏｒ）としての有効性を調べるためにテストを行なった。レットで血圧に対する降圧活性およびモルモットから分離された回腸でブラジキニン収縮作用の復活薬として、もっとも選択的かつ有効なのは５〜１３アミノ酸残基を持つ５００〜１７００Ｄａの分子量を有するものであった。活性分子は化学的に修飾されたため、定性的に類似の特性を持つ、異なるペプチドを産生する。
【００５６】
本発明で製剤化される５〜１３アミノ酸のオリゴペプチドであるＥＶＡＳＩＮ類は以下の通りである。
【表２】
ここで、Ｐは常にプローリンである。他は、三文字および一文字のコードとして表示されるＬ−またはＤ−アミノ酸および誘導体であり得る。
【表３】
＜Ｅ1ピログルタミン酸はＮ−末端アミノ酸であり；
ａａ2はアミノ酸で、典型的に式ＩおよびＩＩに対してはＷ，ＳまたはＫであり、式ＩＶ〜ＸＩに対してはＡ，Ｗ，Ｓ，ＧまたはＮであり；
ａａ3は典型的に式Ｉ〜ＩＩＩに対してはＷ，Ｐ，ＦまたはＧであり、式ＩＶ〜ＸＩに対してはＡ，Ｐ，Ｇ，ＷまたはＲであり；
ａａ4はアミノ酸で、典型的に式Ｉ〜ＩＩＩに対してはＰ，ＡまたはＲであり、式ＩＶ〜ＸＩに対してはＰ，Ｌ，Ｑ，Ａ，ＲまたはＷであり；
ａａ5はアミノ酸で、典型的に式ＩＩおよびＩＩＩに対してはＧ，ＲまたはＩであり、式ＩＶ〜ＸＩに対してはＴ，Ｐ，Ｇ，Ｈ，Ｒ，ＷまたはＥであり；
ａａ6はアミノ酸で、典型的に式Ｖ、ＶＩＩ、ＶＩＩＩおよびＸＩに対してはＱ
，Ｎ，Ｐ，Ｔ，Ｈ，ＲまたはＧであり；一般的に式ＩＶに対してはＩ、Ａ，ＴまたはＹであり；
ａａ7はアミノ酸で、典型的に式ＶＩ、ＶＩＩＩおよびＩＸに対してはＰ，Ｎ，Ｑ，ＧまたはＲであり、式Ｖ対してはＩ，Ａ，ＴまたはＹであり；
ａａ8はアミノ酸で、典型的に式ＶＩＩおよびＩＸに対してはＱ，ＰまたはＧであり、式ＶＩに対してはＩ，Ａ，ＴまたはＹであり；
ａａ9はアミノ酸で、典型的に式ＶＩＩＩに対してはＰ，Ｑ，ＮまたはＧであり、式ＶＩＩに対してはＩ，Ａ，ＴまたはＹであり；
ａａ10はアミノ酸で、典型的に式ＩＸに対してはＱおよびＥであり、式ＶＩＩＩに対してはＩ，Ａ，ＴまたはＹであり；
ａａ11は一般的に式ＩＸに対してＩ，Ａ，ＴまたはＹである。
【００５７】
本発明の更なる特徴は、次のような化学的変化により内皮細胞および血管平滑筋に対する作用として、並びにバソペプチダーゼ阻害薬として、血管病理学に係る異なる標的分子上に対するそれらの作用特異性および薬物動力学を改善させるために、全てのＥＶＡＳＩＮ類を変更する可能性である：
１）Ｌ−アミノ酸をＤ−アミノ酸に置き換え、逆β−ターン構造（“ヘアピン”）を導入させたり、またはα−置換アミノ酸の導入し(例えば、α−イソ酪酸の導入）ポリペプチド鎖軸をα−へリックスまたは延長構造またはβ−ターンにさせたりすることによる、局在的立体配置の変化。α−アミノ酸におけるＮ−メチル置換は、アミド結合の作用を制限し、水素ボンドの形成を除去し、ポリペプチド主鎖のねじれ角に影響を及ぼし、並びにシスペプチドボンドを形成させる。他の変更は、プロテアーゼの作用に対抗してそのボンドを保護するための、ペプチドボンドの非−アミドボンドへの置換である。
２）閉環による全体的な構造の変化は二次構造を安定化させる。システインまたは、チオール基を含むそのほかの有機化合物（それぞれβ，β−ジメチルぺニシリンアラニン（β，β−ｄＩｍｅｔｈｙｌｐｅｎＩｃＩｌｌＩｎａｌａｎＩｎｅ）類似体を有する。）への置換に対し選択される二つのアミノ酸は、ＥＶＡＳＩＮ配列の任意の残基またはそれらの類似体（二つ以上のポリペプチド鎖アミノ酸残基により互いに区別される。）であり得る。Ｓ−Ｓ結合は二つのチオール残基の間で形成しやすく、したがって環状ペプチドが形成される。閉環は、またカルボキシ基のないポリペプチドとアミノ基との間にラクタムボンドを形成することにより、或いはペプチド閉環を形成しやすい任意の他の化学的工程により得られる。
３）アミノ酸側鎖での変化（χ−“制約”）。α−アミノ酸側鎖のねじれ角を決定することにより、その結合部位にポリペプチドをより良く調整する幾何学的変化、たとえばチロシンをβ−メチル−２’，６’−ジメチルチロシン（ＴＭＴ）へ置換すること（相互作用部位に対し優先的構造を定義することができる。）が可能となる。このような変化については、例えばＶＩｃｔｏｒ Ｊ．Ｈｒｕｂｙ ｐｕｂｌＩｓｈｅｄ Ｉｎ Ｎａｔｕｒｅ，１，８４７−８５８，２００２参照。
【００５８】
本発明は、胃腸官（ＧＩＴ）による分解を減らし、特に経口製剤のための生物学的システムでペプチドの生物学的利用能を高めるシクロデキストリン類およびそれらの誘導体を用いてオリゴペプチド類、ＥＶＡＳＩＮ類の放出システムを得ることを特徴とする。さらに、例えば静脈内、筋肉内、局所、肺吸入、鼻腔内、口腔内、またはＰＬＡおよびＰＬＧＡまたはこれらの混合物（これらに制限されるわけではない）として生分解性高分子を用いる遊離制御型ダイアポジティブ（ｄＩａｐｏｓＩｔＩｖｅ）としての数多くの投与形態がある。
【００５９】
さらに、本発明はペプチドの生物学的利用能を高めるリポソームを利用する、オリゴペプチド類、ＥＶＡＳＩＮ類の放出制御システムを特徴とする。リポソームはそのような分子で内部水相を含む小泡であり、例えば個体状態のリポソームを投与した後に薬物を徐々に放出するように薬物をカプセル化することもできる。
【００６０】
シクロデキストリン類またはそれらの誘導体の中に含まれたオリゴペプチド類、ＥＶＡＳＩＮ類またはそれらの構造的および/または立体配置的類似体をＰＬＡまたはＰＬＧＡまたはそれらの混合物またはリポソームのような生分解性高分子内へマイクロカプセル化した適用例はいままで開示されたことがない。本発明は三つの異なる技術、すなわちオリゴペプチド類、ＥＶＡＳＩＮ類およびそれらの類似体をシクロデキストリン類内へ分子的カプセル化する技術、および生分解性高分子またはリポソームおよび/またはそれらの混合物へのマイクロカプセル化技術、および製剤化する前と比べて経口組成物および製剤内でＥＶＡＳＩＮ類の生物学的利用能（ｂＩｏｄＩｓｐｏｎＩｂＩｌＩｔｙ）を高めることを特徴とする。ペプチドおよび／または非ペプチド系薬物および／または薬学組成物および／または製剤の開発のための分子モデルとしてＥＶＡＳＩＮ７ａ，１０ｃ，１１ｅ，１２ｂおよびそれらの類似体および誘導体を利用することを特徴とする，ＥＶＡＳＩＮ類およびそれらの構造的および／または立体位置的類似体の薬学組成物および／または製剤は今まで開示されたことがない。
【００６１】
本発明の更なる特徴は、温血動物における高血圧、他の心血管疾病およびそれらの合併症（非制限的な例：急性心筋梗塞、卒中、左心不全、糖尿病性血管肥大、抹消虚血、狭心症、および心筋梗塞後心不全の進行およびアテローム性硬化症）、腫瘍、糖尿病、精子の運動性および精子形成の阻害、腎症、性的不能、胃腸および婦人科の障害、血管新生、髪の毛の喪失、血の疾病および血管形成術（血管形成術後再狭窄、血管内プロテアーゼ）の治療および研究において、リポソームおよびＰＬＡ、ＰＬＧＡ生分解性高分子および／またはそれらの混合物のような放出制御システム内に、選択的にマイクロカプセル化された、ＥＶＡＳＩＮ類およびそれらの類似体および誘導体、およびシクロデキストリン類またはそれらの誘導体の封入および／または結合を特徴とするＥＶＡＳＩＮ類およびそれらの類似体および誘導体の薬学組成物および／または製剤の使用である。
【００６２】
本明細書にクレームされた薬学組成物は、シクロデキストリン類またはそれらの誘導体に含まれたＥＶＡＳＩＮ類；薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体内に、単独に、または混合物の形態で、または一種以上の薬理学的活性剤と共に結合された形態で、包含または結合されているＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体；またはリポソームおよびＰＬＡ、ＰＬＧＡ性分解性高分子類および／またはそれらの混合物のような放出制御システム内にマイクロカプセル化された、選択的にシクロデキストリン内に含まれているＥＶＡＳＩＮ類またはそれらの類似体または誘導体からなる。
【００６３】
また、本発明は慢性退行性疾病の治療および研究における用途を有するＥＶＡＳＩＮ類の、他の生化学的作用機転を同定することも含む。
【００６４】
ＥＶＡＳＩＮ類（ＥＶＡＳＩＮ７ａを除く）、およびそれらの類似体および誘導体の薬学組成物は中性エンドぺプチダーゼ（ミクロモル範囲のＫｉ）およびアンギオテンシンＩ転換酵素（ナノモル範囲のＫｉ）に対し特異的な阻害活性を示すことを特徴とする。これらの薬学組成物および製剤の更なる特徴は、シクロデキストリン類に含まれた際に（例えば、経口製剤として）、上記ペプチドの生物学的利用能、持続時間および／または有効性を増加させることにある。
【発明を実施するための最良の形態】
【００６５】
本発明は下記のような非制限的な実施例に基づいてより良く理解できるだろう。
【実施例１】
【００６６】
合成、精製および特性決定、およびＥＶＡＳＩＮ類によるアンギオテンシンＩ転換酵素の触媒部位の選択的阻害を測定するための酵素分析
この実施例は、合成、精製、特徴付けおよびＥＶＡＳＩＮ類によるＥＣＡの部位Ｃ−またはＮ−末端選択的阻害について説明する。オリゴペプチドは当分野に知れている方法を用いて合成した。この技法ＢｏｃはＢａｒａｎｙ，Ｇ．＆ Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｒ．Ｂ．（Ｇｒｏｓｓ，Ｅ．＆ Ｍｅｉｎｈｏｆｅｒ，Ｊ．，Ｅｄｓ．）（１９８０），Ｔｈｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ：Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．ＩＩ，１，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ．２−Ｓｔｅｗａｒｔ，Ｊ．Ｍ．＆ Ｙｏｕｎｇ，Ｊ．Ｄ．（１９８４），Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄに記載されているデータに基づく。
【００６７】
オリゴペプチドは当分野の技術によって修飾された。そのような変化はＶｉｃｔｏｒ Ｊ．Ｈｒｕｂｙ ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｊｏｕｒｎａｌ Ｎａｔｕｒｅ，１，８４７−８５８，２００２に記載されている。
【００６８】
合成ＥＶＡＳＩＮ類をＨＰＬＣシステムで精製し、その得られた物質を質量分析法により分析した。
【００６９】
精製において、使用された溶媒は任意のＨＰＬＣ用溶媒であり、使用された水は、塩および有機化合物を保持させるカートリッジを備えたＭｉｌｌｉ−Ｑシステムでの蒸留およびろ過により得られた。
【００７０】
精製から得られた分画に対し、精製後ＥＶＡＳＩＮ類のモル質量に従い、質量分析を行った。
【００７１】
５０ｍＭのＨｅｐｅｓバッファ（ｐＨ６．８）、２００ｍＭのＮａＣｌおよび１０μＭのＺｎＣｌ2で（２５℃）、基質Ｍｃａ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ａｓｐ−Ｌｙｓ−ＤｐａＯＨを用い、組み換えＡＣＥ阻害に対する酵素分析を行った。その反応は、蛍光光度計内でＡＣＥによる基質分解（Ｓ＝Ｋm，４０μＭ）結果から得られた、λem＝３９０ｎｍ（λex＝３４０ｎｍ）での蛍光増加を測定することにより連続的にモニターされた。ＥＶＡＳＩＮ類は、基質を追加する前に酵素によりプレインキュベートされた。
【００７２】
表４はＥＶＡＳＩＮ類による、アンギオテンシンＩ転換酵素のＣ−およびＮ−末端触媒部位活性の阻害分析結果を示す。
【表４】
【００７３】
ＥＶＡＳＩＮ類によるＡＣＥ阻害に対するＫＩ値の結果はｎＭで表示された。ほとんどのＥＶＡＳＩＮ類はＣ−末端に対し選択的な阻害薬であった。たとえば、ＥＶＡＳＩＮ−１０ｃのＫＩ値は０．５ｎＭであったが、それはこのドメインに対し４００倍選択的であることを示す。他のＥＶＡＳＩＮもＮ−末端部位に対し選択的な阻害を示したが、例えばＥＶＡＳＩＮ−１２ｂを用いて得られたＫＩ値はＮ−およびＣ−末端に対しそれぞれ５ｎＭおよび１５０ｎＭであった。
【００７４】
当分野の技術によると、アンギオテンシンＩ転換酵素を遺伝子欠失させたマウスは不妊である。Ｅｓｔｈｅｒ ＣＲ Ｊｒ，Ｈｏｗａｒｄ ＴＥ，Ｍａｒｉｎｏ ＥＭ，Ｇｏｄｄａｒｄ Ｊｍ，Ｃａｐｅｃｃｈｉ ＭＲ，Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ ＫＥ．Ｍｉｃｅ ｌａｃｋｉｎｇ ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ−ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅ ｈａｖｅ ｌｏｗ ｂｌｏｏｄ ｐｒｅｓｓｕｒｅ，ｒｅｎａｌ ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，ａｎｄ ｒｅｄｕｃｅｄ ｍａｌｅ ｆｅｒｔｉｌｉｔｙ．Ｌａｂ Ｉｎｖｅｓｔ．１９９６ Ｍａｙ；７４（５）：９５３−６５参照。睾丸のＡＣＥはＮ−末端体性のＡＣＥに相当する。Ｒａｍａｒａｊ Ｐ，Ｋｅｓｓｌｅｒ ＳＰ，Ｃｏｌｍｅｎａｒｅｓ Ｃ，Ｓｅｎ ＧＣ Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｒｅｓｔｏｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｑａｌｅ ｆｅｔｉｌｉｔｙ ｉｎ ｍｉｃｅ ｌａｃｋｉｎｇ ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ−ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅｓ ｂｙ ｓｐｅｒｍ−ｓｐｅｃｉｔｉｃ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｔｅｓｔｉｃｕｌａｒ ｉｓｏｚｙｍｅ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ．１９９８ Ｊｕｌ １５；１０２（２）：３７１−８参照。ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の薬学組成物はオスの避妊薬として用いられる可能性を有する。したがって、本発明はまた、クロスボンドを持ち、シクロデキストリン類の有機−水性または固体溶液、またはアルキル、ヒドロキシアルキル、ヒドロキシプロピルおよびアシル基からなるシクロデキストリン誘導体またはシクロデキストリン高分子類と、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体の有機−水性または固体溶液との混合物をオスの避妊薬として使用することを特徴とする。一方、Ｃ−末端部位に選択性を持つＥＶＡＳＩＮ類は、Ｎ部位に選択的であるかまたは選択的ではない阻害薬とは異なる明確な特徴を示す場合もある。
【実施例２】
【００７５】
ＥＶＡＳＩＮ類により誘導されたＮＥＰ阻害を測定するための酵素分析
５０ｍＭのＴｒｉｓ−ＨＣｌバッファ、ｐＨ７．５、３７℃で、基質Ａｂｚ−ＲＬ−ＥＤＤｎｐを用い、組み換えＮＥＰ阻害に対し蛍光光度分析を行なった。反応は、蛍光光度計でＮＥＰによる基質分解（Ｋｍ＝８．４μＭ）結果から得られた、λem＝４１８ｎｍ（λex＝３１８ｎｍ）での蛍光の増加を測定することによって、連続的にモニターされた。
【００７６】
ＥＶＡＳＩＮ類はそれほど強力なＮＥＰ阻害薬ではなかった。ＥＶＡＳＩＮ類により誘導されたＮＥＰ阻害に対するＫＩ値はμＭで表示された。もっとも良い阻害薬の一つはＥＶＡＳＩＮ９ａで、そのＫｉ値は８６μＭであった。
【００７７】
表５はＥＶＡＳＩＮ類の作用による中性エンドペプチダーゼ活性の阻害分析結果を示す。
【表５】
【００７８】
阻害常数（Ｋｉ）値は、見掛け阻害常数（Ｋｉ(app)）および基質Ｋｍの割合によって測定された。（Ｓａｌｖｅｓｅｎ ａｎｄ Ｎａｇａｓｅ，１９９０）．ｉｎ：Ｐｒｏｔｅｏｌｙｔｉｃ ｅｎｚｙｍｅｓ ａ ｐｒａｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ．，Ｂｅｙｎｏｎ ａｎｄ Ｂｏｎｄ Ｅｄｓ Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｅｎｇｌａｎｄ，８７−８８）参照。
【００７９】
上記の結果は、ＮＥＰによるＥＶＡＳＩＮ類の低い親化性を示し、それは当該技術分野に関連するバソペプチダーゼ阻害薬（例えば、オマパチリラット）に比べて、血管性水腫および咳のような付帯的な効果の減少が可能であることを示唆する。
【実施例３】
【００８０】
ＥＶＡＳＩＮブラジキニン増強活性テスト−モルモットから分離された回腸での生物学的分析
ブラジキニンにより誘導された平滑筋収縮活性を用いる、合成ペプチドの増強活性をテストし、モルモットから分離された回腸試料を用いてＵＰ値を測定した。ＵＰは、ブラジキニンの単一容量の反応効果を等しい２回容量に変えられるＥＶＡＳＩＮの濃度（ｎｍｏｌ／製剤のｍｌ）に相応する。
【００８１】
メスのモルモットを用いた。分析を始まる前に、回腸をＴｙｒｏｄｅ溶液中に保存した。次いで、回腸分画（１．５〜２．０ｃｍ）の一方の末端を結んで、毛細血管を用いる一定な酸素泡を備えた、かつ３７℃のＴｙｒｏｄｅ食塩水を含む、グラスカップの底に含まれたセミリングを作った。他の末端は既に検定用テコに固定させた。１ｇの張力を維持し、モルモットから分離された回腸の収縮を記録した。ブラジキニンに対するサンプルの増強効果を測定するために、モルモットから分離された回腸に対するブラジキニン効果のログー容量反応曲線をプロットした。ブラジキニンの活性は、モルモットから分離された回腸収縮を測定することにより決定され、標準ブラジキニン容量に対する組織反応の増加として示される。Ｓｈｉｍｕｔａ ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．７０（４），５５１−５５４（１９８１）参照。
【００８２】
ＥＶＡＳＩＮ類をそれぞれテストし、ブラジキニン単一容量を投与する前にスパイクした。使用時に脱イオン水を用いてサンプル希釈液を製造した。測定された反応はログ容量−効果曲線の線形部分上に補間され、したがって標準ブラジキニン容量に対する製剤反応の増加として増強活性を得た。ＴＹＲＯＤＥ溶液：原液Ｉ２０ｍＬ、母液ＩＩ４０ｍＬ、ジジフェニトラミン（Ｄｉｐｈｅｎｙｄｒａｍｉｎｅ）溶液（１ｍｇ／ｍＬ）１ｍｌ、アトロピン溶液（１ｍｇ／ｍＬ）１ｍＬ、５．６０ｍＭのＤ−グリコースおよびＨ2Ｏ ｑ．ｓ．１Ｌ．この分析で用いられる全ての試薬は分析用試薬であった。
【００８３】
全てのＥＶＡＳＩＮは、モルモットから分離された回腸でブラジキニンの収縮作用を増強させ、０．２２〜３０ｎｍｏｌの濃度でブラジキニンの収縮効果は２倍となった。
【実施例４】
【００８４】
麻酔させたレットの血圧に対するＥＶＡＳＩＮ類の作用
ブラジキニンの降圧効果の増強活性を、麻酔させたレットでテストした。ペントバルビタールナトリウム（商品名：Ｈｙｐｎｏｌ Ｃｒｉｓｔａｌｉａ，５０ｍｇ／ｋｇ，腹膜内）を用い正常血圧のオスのレット（ＫＷＹ）を麻酔させ、３６．５〜３７．５℃の体温を維持するために制御温度ボード上に置いた。生理学的交換機につながっている多用途記録計を用いた。血圧値は、ベースライン血圧により制限された領域を積分し、それらと対照分析で得られた値を比較することによって求めた。インビボ分析で、麻酔されたレット血圧におけるブラジキニンの降圧効果に対するＥＶＡＳＩＮ類の増強活性を観察した。麻酔されたレット（ｎ＝５）の血圧に対するブラジキニンの増強効果を比較するために、二つのパラメタを測定した：
１）麻酔させたレットの血圧に対するブラジキニンの降圧活性の増強効果の強度：この値は、増強剤２００ｎｍｏｌを注入した後得られた単一用量のブラジキニンにより増加された降圧百分率（％）として定義付けられる。２）増強効果の持続時間：単一用量のブラジキニンに対する増強効果を５０％へ減少させるのに必要とされる時間。
【００８５】
ブラジキニンの降圧効果は、静脈注射により麻酔させたレットにおいて定常濃度２００ｎｍｏｌ（ＥＶＡＳＩＮ）／レットで、ＥＶＡＳＩＮ類により４０〜３４０％増強された。最初増強効果が５０％へ減少するのに、持続時間が１０分であるもの(最小持続時間)も見られたが、１２０分以上かかるものもあった。
【００８６】
表６は、麻酔させたレットの血圧に対するブラジキニンの降圧効果のＥＶＡＳＩＮ類による増強を示す。
【表６】
【実施例５】
【００８７】
β−シクロデキストリン類およびそれらの誘導体とＥＶＡＳＩＮ類およびそれらの類似体との包接化合物の製造
その実施例はＨＰ−β−シクロデキストリン類とＥＶＡＳＩＮ５ａとの包接化合物（それらに制限されるわけではない。）の特性決定について示す。その製剤は、水溶液でβ−シクロデキストリン類およびそれらの誘導体と、ＥＶＡＳＩＮ類およびそれらの類似体とのモル比が１：１および１：２になるように製造された。その溶液混合物を絶えず攪拌してβ−シクロデキストリン類の完全な溶液を得た。次いで、その混合物を液体質素温度で冷凍させ、２４時間凍結乾燥させた。そのようにして得られた固体の特性決定は、物理化学的分析技法により行われた。核磁気共鳴はホスト／ゲスト上に関連情報を提供する技術であった。
【００８８】
その製剤は等しいモル比を持つシクロデキストリン類とペプチド類から製造された。下記の表はそのように製造された包接化合物について示す。それらのシステムに対し生物学的テストを行った。
【００８９】
表７は生物学的なテストが行われたシクロデキストリン類とＥＶＡＳＩＮ類との包接化合物を示す。
【表７】
【００９０】
溶液を製造し、ＨＢ−β―ＣＤおよびペプチドのＮＭＲ1Ｈおよび13Ｃスペクトルのシミュレーションを行った後、ＨＢ−β−ＣＤ／ＢＰＰ−５ａの包接化合物、およびＢＰＰ−５ａ（単独）およびＨＢ−β−ＣＤ（単独）に対するＮＭＲ−特徴決定を行った。シクロデキストリン類およびホスト分子ＢＰＰ−５ａ； ＣＯＳＹ，ＴＯＣＳＹ，13Ｃ−ＤＥＰＴ１３５、ＨＭＱＣの構造解明のための水素−1ＨＮＭＲ；化学的変位−δの変化分析；縦緩和−ＲＭＮ Ｔ1およびＮＯＥＳＹ試験（核オーバーハウザー効果分光法）の時間測定を行って封入を検証した。シクロデキストリン水素シグナルが重なる場合に、ホスト分子の水素だけをプローブとして用い、δおよびＴ１分析を行った。
【００９１】
ペンタペプチドＢＰＰ−５ａからＲＭＮまでの構造を解明するために、ｓｐｅｃｉｆｉｃｓ遊離型アミノ酸のＲＭＮ1Ｈスペクトルを基準物質として用いた。ＴＨＥ ＳＡＤＴＬＥＲ ＳＴＡＮＤＡＲＤ ＳＰＥＣＴＲＡ。Ｓａｄｔｌｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ．１９７２参照。分子の複雑さとそのスペクトルのために、一次元または二次元の多様なＲＮＭ技術、また４００ＭＨｚ分光計を用いることが必要であった。サンプルをＤ2Ｏ中に溶解させると、それらは溶媒の重水素原子へ変更され、水素核磁気共鳴でのスペクトルは、ヒドロキシ、アミダおよびアミナ基の作用下、および水素シグナルの不在下で、非常に単純になった。
【００９２】
ＥＶＡＳＩＮ−５ａの相応するシミュレーションに基づき、純粋化合物の実際のスペクトルの分析結果は以下のようである。
１）ＮＭＲ1ＨスペクトルおよびＣＯＳＹは４．８ｐｐｍで強いシグナルを示したが、これは重水素化溶媒で不純物“Ｈ2Ｏ”が存在するためであった。
２）“ＣＨ”基水素は水シグナルに隣接する。これらの水素はペプチド結合およびアミノ官能基との間をつなぐ。
３）“ＣＨ2”基は２．８〜３．７ｐｐｍの化学的変異に含まれる領域内に存在し、これらの基はペプチド結合に隣接する“ＣＨ”基に結合する。
４）約１．３〜２．５ｐｐｍで、幾つかの官能基に付属する“ＣＨ2”に関する多重線が見られる。
５）１．２ｐｐｍで、アミノ酸アラリン（Ａｌａｌｉｎｅ）の分節のＣＨ3基に関する二重線が見られる。ＣＯＳＹを用いると、４．６ｐｐｍでその基と“ＣＨ”とのスカラーカップリング（四重線）が見られる。
６）７．７〜７．１ｐｐｍの化学的変位に含まれた領域は芳香族基スピンシステム（アミノ酸トリプトファンの分節に相応する）に割り当てられた。
【００９３】
ＨＰ−β―ＣＤスペクトルは、シミュレートされたスペクトルに基づいても、相変わらず非常に複雑であり、割り当てにくいということを示した。しかしながら、一部のシグナルは以下のように割り当てることができる。
【００９４】
３．３〜４．３ｐｐｍの化学的変位で、複雑な多重線は、ヒドロキシルに結合されている炭素の“ＣＨ”基に起因したものと見られる。１．１〜１．８ｐｐｍの化学的変位で、ヒドロキシプロピル基に関するシグナルが見られる。
【００９５】
包接化合物のＮＭＲ分析に関して、純粋なＥＶＡＳＩＮ−５ａに比べて、スペクトル線の明確な分離が観察され、また芳香族基領域内に２次的な化学的転移の変化が見られた（δ≒７．７−７．１）。これはＨＰ−β−ＣＤとこのペプチドの領域との相互作用を強く示唆する。この現象は、ペプチドの芳香族基の電子的分布において外乱（ｄｉｓｔｕｒｂａｎｃｅ）を引き起こすことができるシクロデキストリン類の酸素原子Ｃ１−Ｏ１−Ｃ４の電子に起因する。この結果はＨＰ−β―ＣＤ空洞への芳香族基のカプセル化が可能であることを示唆する。
【００９６】
表４および５に示されたＥＶＡＳＩＮ−５ａに関連して（Ｔ１の数値）、水素１６および１９だけが有意の変化を示し、この核のＴ１変化は各々の測定で得られた標準偏差より遥かに大きかった。その他の水素分析は、各々の測定の標準偏差に比べて疑わしいＴ１変化を示した。
【００９７】
下記の表から、ホスト分子芳香族水素の緩和時間、Ｔ１の減少が観察された。このような変化は、シクロデキストリンの空洞内へホスト分子を封入した後の、遅い回転力学、対称的変化およびゲスト分子の運動性の減少を示唆する。
【００９８】
表８は２００ＭＨｚで測定された、純粋ペプチドＢＰＰ−５ａの１Ｈでの幾つかの核の縦緩和時間値を示す。
【表８】
【００９９】
表９は２００ＭＨｚで測定された、システムＨＰ−β−ＣＤ／ＢＰＰ−５ａの１Ｈでの幾つかの核の縦緩和時間ちを示す。
【表９】
【０１００】
ＲＭＮデータに加えて、β−ＣＤｅＢＰＰ−５ａ／ＨＰ−β−ＣＤのＮＯＥＳＹ試験を用いてシクロデキストリンの空洞の内部でゲスト分子の空間配置を決定することができた。ＮＯＥＳＹ試験はＢＰＰ−５ａに対しＤ８＝６５０ｍｓを用いて行なわれた。これはＨＰ−β−ＣＤとＢＰＰ−５ａとの空間的近接を示す、相互関連性を観察できるＤ８の特殊値であった。
【実施例６】
【０１０１】
非麻酔の高血圧レットの血圧に対するＥＶＡＳＩＮ類の効果
分析の一日前に、動物に大腿動脈および静脈のカニューレ挿入する手術を行なった。エテールでレットを麻酔させ、外科手術台上にその背面が置かれるように配置した。小さい皮膚切開片を製造し、大腿心血管バンチ（ｂｕｎｃｈ）を位置決めするために筋系を分離した。心臓血管のパラメタを記録するために大腿動脈を介し腹大動脈へ、並びに薬物を投与するために大腿静脈を介し下大静脈へ、カニューレを挿入した。挿入後、カニューレを、手術糸（ｓｕｒｇｉｃａｌ ｌｉｎｅ）を用いて結び、バンチにした。次いで、カニューレは、それらが外面化され、また縫合線を用いて固定される肩甲骨へ、トロケーター（ｔｒｏｃａｔｅｒ）により皮下に送られる。心臓血管のパラメタを記録するために動脈カニューレを、薬物を投与するために静脈カニューレを利用した。
【０１０２】
大腿動脈および静脈カニューレ挿入後１日に、血圧および心拍数を記録した。分析は自由運動可能な非麻酔動物で行なわれた。そのレットの動脈圧（ＰＡＰ）、平均動脈圧（ＭＡＰ）および心拍数（ＨＲ）は、データ収集システム（ＢＩＯＰＡＣ）を用いて、コンピューターによりモニターした。全ての実験から、データを収集した。
【０１０３】
薬物を投与する前に、レットのＰＢＰ、ＭＢＰおよびＨＲをモニターした。総容積０．２ｍＬで（ＮａＣｌ０．９％溶液）ＥＶＡＳＩＮ類の丸薬を注射した後、得られた降圧効果および効果持続時間をモニターした。この分析で、各ペプチドの標準容量（７０ｎｍｏｌ／１００ｇ体重）をテストした。（ｎ＝４）ＥＶＡＳＩＮ−１０ｃは最も優れた降圧効果を有する強力なペプチドで、平均血圧を−２９．５±９．５０ｍｍＨｇ減少させ、次いでＥＶＡＳＩＮ−９ａはＭＢＰを−２７．０±１．５０ｍｍＨｇ減少させた。ＥＶＡＳＩＮ−５ａおよびＥＶＡＳＩＮ−７ａはＭＢＰを最大それぞれ−１９．１７±４．３６ｍｍＨｇおよび１３．００±２．７８ｍｍＨｇ減少させた。
【０１０４】
効果持続時間を比較した結果、ＥＶＡＳＩＮ−７ａは１００分以上持続する降圧効果を示すペプチドであることが分かった。ＥＶＡＳＩＮ−９ａおよびＥＶＡＳＩＮ−１０ｃはそれぞれ８４分と９４分で、両方は効果持続時間の観点から類似であった。ＥＶＡＳＩＮ−５ａの効果持続時間は短く、投与後そのＭＡＰがベ−スラインへ戻るのに３７分が掛かった。
【実施例７】
【０１０５】
意識のあるレットの血圧に対する、シクロデキストリン類内へカプセル化されたＥＶＡＳＩＮ類の効果
この実施例は高血圧のレットの血圧にＥＶＡＳＩＮ−５ａとヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン（ＨＰβＣＤ）との包接化合物の投与効果を説明する。分析の一日前に、動物に大腿動脈と静脈のカニューレ挿入術を行なった。エテールでレットを麻酔させ、外科手術台上にその背面が置かれるように配置した。小さい皮膚切開片を製造し、大腿心血管Ｂｕｎｃｈを配置するために筋系を分離した。心臓血管のパラメタを記録するために大腿動脈を介し腹大動脈へ、並びに薬物を投与するために大腿静脈を介し下大静脈へ、カニューレを挿入した。挿入後、カニューレを、手術糸を用いて結び、バンチにした。次いで、カニューレは、それらが外面化され、また縫合線を用いて固定される肩甲骨へ、トロカーターにより皮下に送られる。心臓血管のパラメタを記録するために動脈カニューレを、薬物の投与のために静脈カニューレを利用した。
【０１０６】
大腿動脈および静脈カニューレ挿入後１日に、血圧および心拍数を記録した。分析は自由運動可能な、意識のある動物で行なわれた。そのレットの動脈圧（ＰＡＰ）、平均動脈圧（ＭＡＰ）および心拍数（ＨＲ）は、データ収集システム（ＢＩＯＰＡＣ）を用いて、コンピューターによりモニターした。全ての実験から、データを収集した。
【０１０７】
薬物を投与する前に、レットのＰＢＰ、ＭＢＰおよびＨＲを６０分間モニターした。総容積０．２ｍＬで（ＮａＣｌ０．９％溶液）ＥＶＡＳＩＮ類の丸薬を注射した後、得られた降圧効果および効果持続時間をモニターした。この分析では、標準容量０．０７１ｎｍｏｌ／１００ｇ（体重）、ｎ＝６を利用した。
【０１０８】
ＨＰβＣＤに含まれたＥＶＡＳＩＮ−５ａおよび遊離型ＥＶＡＳＩＮ−５ａを投与して得られた結果を比較した結果、最大の降圧効果において遊離型ペンタペプチドおよびカプセル化されたものとの間に差は見られなかった。（ＭＡＰはそれぞれ２３±４．２ｍｍＨｇおよび２２±３．３ｍｍＨｇ減少した。）また、効果持続時間において、カプセル化されたＥＶＡＳＩＮ−５ａ（持続時間：１４０分）はその遊離型ペプチド（持続時間：３８分）に比べ４倍近く増加したのが分かった。
【実施例８】
【０１０９】
異種の、高血圧のレットの血圧に対するＥＶＡＳＩＮ類の効果比較（ＳＨＲおよびＴＧＲ（ｍＲＥＮ２）Ｌ２７）
この実施例では、異なる種類の高血圧のレットの血圧に対するＥＶＡＳＩＮ５ａの注入効果について説明する。
【０１１０】
分析の一日前に、動物に大腿動脈と静脈のカニューレ挿入術を行なった。エテールでレットを麻酔させ、外科手術台上にその背面が置かれるように配置した。小さい皮膚切開片を製造し、大腿心血管バンチを配置するために筋系を分離した。心臓血管のパラメタを記録するために大腿動脈を介し腹大動脈へ、並びに薬物を投与するために大腿静脈を介し下大静脈へ、カニューレを挿入した。挿入後、カニューレを、手術糸を用いて結び、バンチにした。次いで、カニューレは、それらが外面化され、また縫合線を用いて固定される肩甲骨へ、トロカーターにより皮下に送られる。心臓血管のパラメタを記録するために動脈カニューレを、薬物の投与のために静脈カニューレを利用した。
【０１１１】
大腿動脈および静脈カニューレ挿入後１日に、血圧および心拍数を記録した。分析は自由運動可能な、意識のある動物で行なわれた。そのレットの動脈圧（ＰＡＰ）、平均動脈圧（ＭＡＰ）および心拍数（ＨＲ）は、データ収集システム（ＢＩＯＰＡＣ）を用いて、コンピューターによりモニターされる。全ての実験から、データを収集した。
【０１１２】
薬物を投与する前に、レットのＰＢＰ、ＭＢＰおよびＨＲを６０分間モニターした。０．９％ＮａＣｌ溶液中に１時間当たり９００μｇ／１００ｇ（体重）でＥＶＡＳＩＮ‐５ａを注入する間、並びにその後、心臓血管パラメタを登録した。異種、すなわちＳＨＲおよびＴＧＲ（ｍＲＥＮ２）Ｌ２７にＥＶＡＳＩＮ−５ａを投与すると、ＭＡＰはそれぞれ２８±２．７ｍｍＨｇおよび３４±０．９ｍｍＨｇ減少した。しかしながら、注入を中断すると、ＳＨＲでは６時間後、ＴＧＲではたった１時間後変化が見られた。そのような持続時間の差は、異なる程度のレニン−アンギオテンシン系活性を有する、ＥＶＡＳＩＮ−５ａの生化学的作用機転における重要な差を示唆する。
【実施例９】
【０１１３】
遠隔測定システムにより測定されたＳＨＲ血圧に対するＥＶＡＳＩＮ類の投与効果
遠隔測定システムは、収縮期血圧、拡張期血圧、平均血圧および心拍数を測定するために利用される。このようなモニターシステムは移植可能な無線周波数装置、受容版、マトリックス、およびデータ収集および分析用ソフトウェアを備えたコンピューターからなる。Ｂｒａｇａ，ｅｔ ａｌ．，２００２参照。
【０１１４】
オスのＳＨＲレットを利用した。手術前２４時間その動物に餌を与えなかった。そのレットを、２．５％の２,２,２−トリブロモエタノール（１ｍＬ／１００ｇ体重）により麻酔させ、外科手術台上にその背面が置かれるように配置し、レットの腹部をクリップし、ヨウ素化アルコールで無菌化した。中央腹部線に沿って約２ｃｍの切開部を作り、長骨の二分支がよく見れるようにした。腸を除去し、腹部血管への完全なアクセスが出来るようにした。腹大動脈が大静脈から適切に分離かつ同定されるまで、綿棒およびガーゼを用い、血管層に沿って脂肪および結合組織を精密に除去した。食塩水で湿らせたコルドネット（ｃｏｒｄｏｎｅｔ）糸で大静脈を取り巻くことによって血流を止め、９０°の角度で曲がった針（２５ｘ８）を用い小さい切断部を作った。次いで、ガイドはさみを用い、生体適合性ゲルを受容する、装置のポリエチレンカテーテルを動脈内へ挿入した。そのカテーテルの注入口を洗浄し、乾燥させ、極少量の組織接着剤を塗布した。接着剤上に、一枚の小さいセルロース紙を用いてカテーテルを大静脈内に固定させた。磁石で装置バッテリーを作動させ、ＡＭ無線（同調されていないもの）を用い、大静脈内カテーテルの位置に特有な音を記録した。腹部の筋系を縫合し、シリコンタブにより装置を固定させた。次いで、皮膚を縫合した。ヨウ素化アルコールおよび０．１ｍＬのペンタバイオチック（ｐｅｎｔａｂｉｏｔｉｃ）を筋肉内へ投与することによって無菌化した。動物を個別の檻に入れて、麻酔から完全に回復されるまで暖かい条件を維持させた。回復後、その動物を、１２時間／１２時間昼間／夜間サイクル（６：００ａ．ｍ．から６：００ｐ．ｍ．までが昼間で、６：００ｐ．ｍ．から６：００ａ．ｍ．までが夜間である。）で維持されかつ２５℃に調節された遠隔測定室に置いた。その動物に水と餌は自由に与えられた。
【０１１５】
分析を行う前に、動物を個別の檻（１５ｃｍｘ１２ｃｍｘ６ｃｍ）に置き、遠隔測定プロットが血圧および心拍数の回復を示すまで、その状態を８日間維持させた。データは10分ことに１０秒／２４時間で標本抽出された。
【０１１６】
β−シクロデキストリン内にカプセル化されたＥＶＡＳＩＮ−７ａおよびＥＶＡＳＩＮ−１０ｃの経口投与から得られた結果は、両方のペプチドが任意の高血圧レットで降圧効果を奏すると言うことを示す。ＥＶＡＳＩＮ−７ａは9時間の持続時間を示し、５時間後ＭＡＰが最大２０ｍｍＨｇ減少し、ペプチド投与後および５時間でそれぞれ８ｍｍＨｇ以内であった。ＥＶＡＳＩＮ−１０ａの場合、作用持続時間は５時間であり、投与後２時間で最大減少値１３ｍｍＨｇを示した。
【実施例１０】
【０１１７】
ＥＶＡＳＩＮ類の生体内分布
マウスでクロラミンＴ方法にしたがって、125Ｉラベル付きＥＶＡＳＩＮ類を静脈投与した結果、これらのペプチドが腎臓に著しく集中されていることが分かった。例えば、125Ｉ−ＥＶＡＳＩＮ−１０ｃを静脈注射すると、１５分後、このペプチドは肺および肝臓に比べて腎臓で２倍高い濃度（組織グラム当たり）で分布された。ほかの組織および血液で、その放射性ペプチドの濃度は有意に低かった。このような差はほかの組織に比べて腎臓で増加し、その濃度は３０分後最高に至り、組織では早く下がるが、腎臓ではより遅く下がり、投与後３時間で最高濃度の約５０％を維持した。このような分布プロフィールは、その放射性ペプチドを該ペプチドの濃度より１０倍のモル濃度のカプトプリルと共に投与した際に、（カプトプリルなしで）放射性ペプチドにより得られる最高濃度を約３０％減少させた。
【０１１８】
腎臓でのＥＶＡＳＩＮ類の体内分布および滞留時間の両方は、腎臓に対し良好な選択性を持ち、かつカプトプリルに比べてより長く、組織に対する結合状態を維持した。一方、ＥＶＡＳＩＮ類の腎臓結合での３０％減少はアンギオテンシン転換酵素に対するリガンドのためである。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
蛇、特にジャララカ（Ｂｏｔｈｒｏｐｓ Ｊａｒａｒａｃａ）の毒腺から分泌されたペプチド類、バソぺプチダーゼ阻薬、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる薬学組成物であって、
ａ）５〜１３のアミノ酸オリゴペプチド類
【表１】
ここで、Ｐは常にプローリンで、他は、三文字および一文字のコードとして表示されるＬ−またはＤ−アミノ酸および誘導体であり得、
【表２】
（Ｅ1ピログルタミン酸はＮ−末端アミノ酸であり；
ａａ2はアミノ酸で、典型的に式ＩおよびＩＩに対してはＷ，ＳまたはＫであり、式ＩＶ〜ＸＩに対してはＡ，Ｗ，Ｓ，ＧまたはＮであり；
ａａ3は典型的に式Ｉ〜ＩＩＩに対してはＷ，Ｐ，ＦまたはＧであり、式ＩＶ〜ＸＩに対してはＡ，Ｐ，Ｇ，ＷまたはＲであり；
ａａ4はアミノ酸で、典型的に式Ｉ〜ＩＩＩに対してはＰ，ＡまたはＲであり、式ＩＶ〜ＸＩに対してはＰ，Ｌ，Ｑ，Ａ，ＲまたはＷであり；
ａａ5はアミノ酸で、典型的に式ＩＩおよびＩＩＩに対してはＧ，ＲまたはＩであり、式ＩＶ〜ＸＩに対してはＴ，Ｐ，Ｇ，Ｈ，Ｒ，ＷまたはＥであり；
ａａ6はアミノ酸で、典型的に式Ｖ、ＶＩＩ、ＶＩＩＩおよびＸＩに対してはＱ，Ｎ，Ｐ，Ｔ，Ｈ，ＲまたはＧであり；一般的に式ＩＶに対してはＩ、Ａ，ＴまたはＹであり；
ａａ7はアミノ酸で、典型的に式ＶＩ、ＶＩＩＩおよびＩＸに対してはＰ，Ｎ，Ｑ，ＧまたはＲであり、式Ｖ対してはＩ，Ａ，ＴまたはＹであり；
ａａ8はアミノ酸で、典型的に式ＶＩＩおよびＩＸに対してはＱ，ＰまたはＧであり、式ＶＩに対してはＩ，Ａ，ＴまたはＹであり；
ａａ9はアミノ酸で、典型的に式ＶＩＩＩに対してはＰ，Ｑ，ＮまたはＧであり、式ＶＩＩに対してはＩ，Ａ，ＴまたはＹであり；
ａａ10はアミノ酸で、典型的に式ＩＸに対してはＱおよびＥであり、式ＶＩＩＩに対してはＩ，Ａ，ＴまたはＹであり；
ａａ11は一般的に式ＩＸに対してＩ，Ａ，ＴまたはＹである。）；
ｂ）シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または単独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に結合または包含されているか、または一種以上の薬理学的活性剤と結合されている、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体または誘導体の包接化合物；
ｃ）リポソームおよび生分解性高分子および／またはそれらの混合物のような放出制御システム内に、マイクロカプセル化されているかまたはされていない、シクロデキストリン類内に含まれているかまたは含まれていないＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなることを特徴とする薬学組成物。
【請求項２】
ペプチド類化合物および／または非ペプチドバソペプチダーゼ阻害薬に基づく薬物および／または製剤を開発するための分子モデルとしてＥＶＡＳＩＮ７ａ、１０ｃ，１１ｅ，１２ｂ、それらの類似体および誘導体を用いることを特徴とするＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の薬学化合物。
【請求項３】
ペプチド類化合物および／または非ペプチド・リガンド作用物質および膜に結合されているアンギオテンシン転換酵素の拮抗物質に基づく薬物および／または製剤を開発するための分子モデルとして、ＥＶＡＳＩＮ７ａ、１０ｃ，１１ｅ，１２ｂ、それらの類似体および誘導体を用いることを特徴とする配列番号１乃至配列番号５９５のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる薬学組成物。
【請求項４】
中性エンドペプチダーゼ（ミクロモル範囲のＫi）およびアンギオテンシンＩ転換酵素（ナノモル範囲のＫi）に対し特異的な阻害活性を示すことを特徴とする請求項１または２記載のＥＶＡＳＩＮ類（ＥＶＡＳＩＮ７ａを除く）、それらの類似体および誘導体からなる薬学組成物。
【請求項５】
アンギオテンシンＩ転換酵素のＮ‐ドメインに比べ、Ｃ−末端ドメインに対し５０倍乃至４００倍より強力な選択的阻害活性を示すことを特徴とする請求項１または２記載のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる薬学組成物。
【請求項６】
アンギオテンシンＩ転換酵素のＮ‐ドメインに比べ、Ｃ−末端ドメインに対し５０倍乃至４００倍より強力に選択的に結合することを特徴とする請求項１または２記載のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる薬学組成物。
【請求項７】
アンギオテンシンＩ転換酵素および中性エンドペプチダーゼと類似の阻害活性を示すことを特徴とする請求項１または２記載のＥＶＡＳＩＮ−７ａ、その類似体および誘導体からなる薬学組成物。
【請求項８】
血管拡張活性および／または血管保護活性を示すことを特徴とするペプチド類化合物および／または非ペプチド化合物に基づく薬物および／または製剤を開発するための分子モデルとしてＥＶＡＳＩＮ７ａ、１０ｃ，１１ｅ，１２ｂ、それらの類似体および誘導体の使用。
【請求項９】
動脈高血圧およびその他の心血管疾病およびそれらの合併症の治療および研究を行うために、リポソームおよび生分解性高分子および／またはそれらの混合物のような放出制御システム内に、マイクロカプセル化されているかまたはされていない、シクロデキストリン類およびそれらの誘導体とＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体との包接化合物または結合物を用いることを特徴とする請求項１から３のいずれか一項に記載のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる薬学組成物。
【請求項１０】
温血動物における急性心筋梗塞、左心室肥大、糖尿病性脈官障害、抹消虚血、狭心症、心筋梗塞後の進行性心不全、アテローム性硬症、腫瘍、糖尿病、精子の運動性、精子形成の阻害、腎症、性的不能、胃腸および婦人科の障害、血管新生、体毛の喪失、血の疾病、血管形成術（血管形成術後再狭窄、血管内プロテアーゼ）の治療および研究を行うために、リポソームおよび生分解性高分子および／またはそれらの混合物のような放出制御システム内に、マイクロカプセル化されているかまたはされていない、シクロデキストリン類およびそれらの誘導体とＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体との包接化合物および結合物を用いることを特徴とする請求項１から６のいずれか一項に記載のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる薬学組成物。
【請求項１１】
アルキル、ヒドロキシアルキル、ヒドロキシプロピルおよびアシルからなる群から選択されるシクロデキストリン類またはそれらの誘導体またはクロスボンドを有するシクロデキストリン類またはシクロデキストリン高分子類の有機‐水性固体または溶液と、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の溶液との、１：１または１：２（モル比）の混合物を特徴とする請求項１または２記載の薬学組成物。
【請求項１２】
シクロデキストリン類または、リポソーム、生分解性高分子類、生分解性高分子の誘導体、またはそれらの混合物からなる他の放出制御システムを利用することを特徴とするＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体または誘導体からなる薬学組成物。
【請求項１３】
請求項４記載の、中性エンドペプチダーゼおよびアンギオテンシンＩ転換酵素に対し特異的な阻害活性を有する薬物および／または製剤を開発するための分子モデルとして、 中性エンドペプチダーゼに対しより低い阻害活性を有し、咳および血管水腫のような二次的な効果の発生率がより低いことを特徴とする配列番号１乃至配列番号５９５のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の使用。
【請求項１４】
アルキル、ヒドロキシアルキル、ヒドロキシプロピルおよびアシルからなる群から選択されるシクロデキストリン類またはそれらの誘導体、またはクロスボンドを有するシクロデキストリン類またはシクロデキストリン高分子類の有機‐水性または固体溶液とＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の水性または固体溶液との混合物であることを特徴とする、動脈高血圧およびその他の心血管疾病およびそれらの合併症の治療および研究のための薬学組成物。
【請求項１５】
アルキル、ヒドロキシアルキル、ヒドロキシプロピルおよびアシルからなる群から選択されるシクロデキストリン類またはそれらの誘導体、またはクロスボンドを有するシクロデキストリン類またはシクロデキストリン高分子類の有機‐水性または固体溶液と、 ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の水性または固体溶液との混合物であることを特徴とする、温血動物における急性心筋梗塞、左心室肥大、糖尿病性脈官障害、抹消虚血、狭心症、心筋梗塞後の進行性心不全、アテローム性硬症、腫瘍、糖尿病、精子の運動性、精子形成の阻害、腎症、性的不能、胃腸および婦人科の障害、血管新生、体毛の喪失、血の疾病、血管形成術（血管形成術後再狭窄、血管内プロテアーゼ）の治療および研究のための薬学組成物。
【請求項１６】
アルキル、ヒドロキシアルキル、ヒドロキシプロピルおよびアシルからなる群から選択されるシクロデキストリン類またはそれらの誘導体、またはクロスボンドを有するシクロデキストリン類またはシクロデキストリン高分子類の有機‐水性または固体溶液と、 ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の水性または固体溶液との混合物であることを特徴とする、オスの避妊に使用するための薬学組成物。
【請求項１７】
シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に包含または結合されている際に、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の生物学的利用能が増加することを特徴とする、請求項１から３のいずれか一項に記載のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる薬学組成物。
【請求項１８】
シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または単独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に包含または結合されている際に、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の持続期間および／または有効性が増加することを特徴とする、請求項１または２記載のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる薬学組成物。
【請求項１９】
高血圧の応急治療のために、ポリエチレングリコルを含有するかまたはしない、水、食塩水、バッファ溶液、リンガー液、ブドウ糖液、ハンクス液、生体適合性食塩水を含む薬学的に許容可能な賦形剤との混合物として用いられることを特徴とする、請求項１から４のいずれか一項に記載の経口用薬学組成物。
【請求項２０】
シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に包含または結合されている際に、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の生物学的利用能が増加することを特徴とする、請求項１から４のいずれか一項に記載のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる経口用薬学組成物。
【請求項２１】
シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または単独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に包含または結合されている際に、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の持続期間および／または有効性が増加することを特徴とする、請求項１または２記載のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる経口用薬学組成物。
【請求項２２】
シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または単独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に包含または結合されている際に、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の生物学的利用能が増加することを特徴とする、筋肉内、皮下、局所、吸入（肺、鼻腔内、口腔内）投与用の、または移植可能なまたは注射可能な装置としての請求項１から４のいずれか一項に記載のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる組成物および製剤。
【請求項２３】
シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または単独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に包含または結合されているか、またはリポソームおよび生分解性高分子類および／またはそれらの混合物のような放出制御システム内にマイクロカプセル化されているかまたはされていない一種以上の他の薬理学的活性剤と混合または結合されている際に、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の生物学的利用能が増加することを特徴とする、筋肉内、皮下、局所、吸入（肺、鼻腔内、口腔内）投与用の、または移植可能なまたは注射可能な装置としての請求項１から４のいずれか一項に記載のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる組成物および製剤。
【請求項２４】
シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または単独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に包含または結合されている際に、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の効果持続時間および／または有効性が増加することを特徴とする、筋肉内、皮下、局所、吸入（肺、鼻腔内、口腔内）投与用の、または移植可能なまたは注射可能な装置としての請求項１から４のいずれか一項に記載のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる組成物および製剤。
【請求項２５】
シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または単独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に包含または結合されているか、またはリポソームおよび生分解性高分子類および／またはそれらの混合物のような放出制御システム内にマイクロカプセルか化されているかまたはされていない一種以上の他の薬理学的活性剤と混合または結合されている際に、動脈高血圧およびその他の心血管疾病およびそれらの合併症の治療および研究にＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体を使用することを特徴とする、筋肉内、皮下、局所、吸入（肺、鼻腔内、口腔内）投与用の、または移植可能なまたは注射可能な装置としての、請求項１から４のいずれか一項に記載の組成物および製剤。
【請求項２６】
シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または単独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に包含または結合されているか、またはリポソームおよび生分解性高分子類および／またはそれらの混合物のような放出制御システム内にマイクロカプセル化されているかまたはされていない一種以上の他の薬理学的活性剤と結合されている際に、温血動物における急性心筋梗塞、左心室肥大、糖尿病性脈官障害、抹消虚血、狭心症、心筋梗塞後の進行性心不全、アテローム性硬症、腫瘍、糖尿病、精子の運動性、精子形成の阻害、腎症、性的不能、胃腸および婦人科の障害、血管新生、体毛の喪失、血の疾病、血管形成術（血管形成術後再狭窄、血管内プロテアーゼ）の治療および研究にＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体を使用することを特徴とする、筋肉内、皮下、局所、吸入（肺、鼻腔内、口腔内）投与用の、または移植可能なまたは注射可能な装置としての、請求項１から４のいずれか一項に記載の組成物および製剤。
【請求項２７】
シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または単独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に包含または結合されているか、またはリポソームおよび生分解性高分子類および／またはそれらの混合物のような放出制御システム内にマイクロカプセル化されているかまたはされていない一種以上の他の薬理学的活性剤と結合されている際に、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の生物学的利用能が増加することを特徴とする、筋肉内、皮下、局所、吸入（肺、鼻腔内、口腔内）投与用の、または移植可能なまたは注射可能な装置としての請求項１または２記載のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる薬学組成物。
【請求項２８】
シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または単独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に包含または結合されている際に、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の効果持続時間および／または有効性が増加することを特徴とする、筋肉内、皮下、局所、吸入（肺、鼻腔内、口腔内）投与用の、または移植可能なまたは注射可能な装置としての請求項１から４のいずれか一項に記載のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる薬学組成物。
【請求項２９】
シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または単独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に包含または結合されているか、またはリポソームおよび生分解性高分子類および／またはそれらの混合物のような放出制御システム内にマイクロカプセル化されているかまたはされていない一種以上の他の薬理学的活性剤と結合されている際に、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の効果持続時間および／または有効性が増加することを特徴とする、筋肉内、皮下、局所、吸入（肺、鼻腔内、口腔内）投与用の、または移植可能なまたは注射可能な装置としての、請求項１から４のいずれか一項に記載のＥＶＡＳＩＮ類、それらの構造的および立体配置的類似体からなる薬学組成物。
【請求項３０】
シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または単独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に包含または結合されているか、またはリポソームおよび生分解性高分子類および／またはそれらの混合物のような放出制御システム内にマイクロカプセル化されているかまたはされていない一種以上の他の薬理学的活性剤と結合されている際に、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体を使用することを特徴とする、動脈高血圧およびその他の心血管疾病およびそれらの合併症の治療および研究に用いられる、筋肉内、皮下、局所、吸入（肺、鼻腔内、口腔内）投与用の、または移植可能なまたは注射可能な装置としての、請求項１から４のいずれか一項に記載の薬学組成物。
【請求項３１】
シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または単独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に包含または結合されているか、またはリポソームおよび生分解性高分子類および／またはそれらの混合物のような放出制御システム内にマイクロカプセル化されているかまたはされていない一種以上の他の薬理学的活性剤と結合されている際に、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体を使用することを特徴とする、温血動物における急性心筋梗塞、左心室肥大、糖尿病性脈官障害、抹消虚血、狭心症、心筋梗塞後の進行性心不全、アテローム性硬症、腫瘍、糖尿病、精子の運動性、精子形成の阻害、腎症、性的不能、胃腸および婦人科の障害、血管新生、体毛の喪失、血の疾病、血管形成術（血管形成術後再狭窄、血管内プロテアーゼ）の治療および研究に用いられる、筋肉内、皮下、局所、吸入（肺、鼻腔内、口腔内）投与用の、または移植可能なまたは注射可能な装置としての、請求項１から４のいずれか一項に記載の薬学組成物。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
蛇、特にジャララカ（Ｂｏｔｈｒｏｐｓ Ｊａｒａｒａｃａ）の毒腺から分泌されたペプチド類、バソぺプチダーゼ阻害薬、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる薬学組成物であって、
ａ）５〜１３のアミノ酸オリゴペプチド類
配列番号１乃至配列番号１０３のＥＶＡＳＩＮ−５、
配列番号１０４乃至配列番号２４３のＥＶＡＳＩＮ−６、
配列番号２４４乃至配列番号３２５のＥＶＡＳＩＮ−７、
配列番号３２６乃至配列番号４２２および配列番号５９５のＥＶＡＳＩＮ−９、
配列番号４２３乃至配列番号５１６のＥＶＡＳＩＮ−１０、
配列番号５１７乃至配列番号５５６のＥＶＡＳＩＮ−１１、
配列番号５５７乃至配列番号５８９のＥＶＡＳＩＮ−１２、
配列番号５９０乃至配列番号５９４のＥＶＡＳＩＮ−１３；
ｂ）シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または単独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に結合または包含されているか、または単独にまたは一種以上の薬理学的活性剤と結合されている、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体または誘導体の包接化合物；
ｃ）リポソームおよび生分解性高分子および／またはそれらの混合物のような放出制御システム内に、マイクロカプセル化されているかまたはされていない、シクロデキストリン類内に含まれているかまたは含まれていない配列番号１乃至配列番号５９５のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体；からなることを特徴とする薬学組成物。
【請求項２】
ペプチド類化合物および／または非ペプチドバソペプチダーゼ阻害薬に基づく薬物および／または製剤を開発するための分子モデルとして配列番号２５３のＥＶＡＳＩＮ７ａ、配列番号４７２のＥＶＡＳＩＮ−１０ｃ、配列番号５５５のＥＶＡＳＩＮ１１ｅ、配列番号５５７のＥＶＡＳＩＮ１２ｂ、それらの類似体および誘導体を用いることを特徴とするＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の薬学化合物。
【請求項３】
ペプチド類化合物および／または非ペプチド・リガンド作用物質および膜に結合されているアンギオテンシン転換酵素の拮抗物質に基づく薬物および／または製剤を開発するための分子モデルとして、配列番号２５３のＥＶＡＳＩＮ７ａ、配列番号４７２のＥＶＡＳＩＮ−１０ｃ、配列番号５５５のＥＶＡＳＩＮ１１ｅ、配列番号５５７のＥＶＡＳＩＮ１２ｂ、それらの類似体および誘導体を用いることを特徴とする配列番号１乃至配列番号５９５のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる薬学組成物。
【請求項４】
中性エンドペプチダーゼ（ミクロモル範囲のＫｉ）およびアンギオテンシンＩ転換酵素（ナノモル範囲のＫｉ）に対し特異的な阻害活性を示すことを特徴とする請求項１または２記載のＥＶＡＳＩＮ類（配列番号２５３のＥＶＡＳＩＮ７ａを除く）、それらの類似体および誘導体からなる薬学組成物。
【請求項５】
アンギオテンシンＩ転換酵素のＮ‐ドメインに比べ、Ｃ−末端ドメインに対し５０倍乃至４００倍より強力な選択的阻害活性を示すことを特徴とする請求項１または２記載のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる薬学組成物。
【請求項６】
アンギオテンシンＩ転換酵素のＮ‐ドメインに比べ、Ｃ−末端ドメインに対し５０倍乃至４００倍より強力に選択的に結合することを特徴とする請求項１または２記載のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる薬学組成物。
【請求項７】
アンギオテンシンＩ転換酵素および中性エンドペプチダーゼと類似の阻害活性を示すことを特徴とする請求項１または２記載の配列番号２５３のＥＶＡＳＩＮ−７ａ、その類似体および誘導体からなる薬学組成物。
【請求項８】
血管拡張活性および／または血管保護活性を示すことを特徴とするペプチド類化合物および／または非ペプチド化合物に基づく薬物および／または製剤を開発するための分子モデルとして配列番号２５３のＥＶＡＳＩＮ７ａ、配列番号４７２のＥＶＡＳＩＮ−１０ｃ、配列番号５５５のＥＶＡＳＩＮ１１ｅ、配列番号５５７のＥＶＡＳＩＮ１２ｂ、それらの類似体および誘導体の使用。
【請求項９】
動脈高血圧およびその他の心血管疾病およびそれらの合併症の治療および研究を行うために、リポソームおよび生分解性高分子および／またはそれらの混合物のような放出制御システム内に、マイクロカプセル化されているかまたはされていない、シクロデキストリン類およびそれらの誘導体とＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体との包接化合物または結合物を用いることを特徴とする請求項１から３のいずれか一項に記載のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる薬学組成物。
【請求項１０】
温血動物における急性心筋梗塞、左心室肥大、糖尿病性脈官障害、抹消虚血、狭心症、心筋梗塞後の進行性心不全、アテローム性硬症、腫瘍、糖尿病、精子の運動性、精子形成の阻害、腎症、性的不能、胃腸および婦人科の障害、血管新生、体毛の喪失、血の疾病、血管形成術（血管形成術後再狭窄、血管内プロテアーゼ）の治療および研究を行うために、リポソームおよび生分解性高分子および／またはそれらの混合物のような放出制御システム内に、マイクロカプセル化されているかまたはされていない、シクロデキストリン類およびそれらの誘導体とＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体との包接化合物および結合物を用いることを特徴とする請求項１から６のいずれか一項に記載のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる薬学組成物。
【請求項１１】
アルキル、ヒドロキシアルキル、ヒドロキシプロピルおよびアシルからなる群から選択されるシクロデキストリン類またはそれらの誘導体またはクロスボンドを有するシクロデキストリン類またはシクロデキストリン高分子類の有機‐水性固体または溶液と、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の溶液との、１：１または１：２（モル比）の混合物を特徴とする請求項１または２記載の薬学組成物。
【請求項１２】
シクロデキストリン類または、リポソーム、生分解性高分子類、生分解性高分子の誘導体、またはそれらの混合物からなる他の放出制御システムを利用することを特徴とする配列番号１乃至配列番号５９５のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体または誘導体からなる薬学組成物。
【請求項１３】
請求項４記載の、中性エンドペプチダーゼおよびアンギオテンシンＩ転換酵素に対し特異的な阻害活性を有する薬物および／または製剤を開発するための分子モデルとして、 中性エンドペプチダーゼに対しより低い阻害活性を有し、咳および血管水腫のような二次的な効果の発生率がより低いことを特徴とする配列番号１乃至配列番号５９５のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の使用。
【請求項１４】
アルキル、ヒドロキシアルキル、ヒドロキシプロピルおよびアシルからなる群から選択されるシクロデキストリン類またはそれらの誘導体、またはクロスボンドを有するシクロデキストリン類またはシクロデキストリン高分子類の有機‐水性または固体溶液と、 配列番号１乃至配列番号５９５のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の水性または固体溶液との混合物であることを特徴とする、動脈高血圧およびその他の心血管疾病およびそれらの合併症の治療および研究のための薬学組成物。
【請求項１５】
アルキル、ヒドロキシアルキル、ヒドロキシプロピルおよびアシルからなる群から選択されるシクロデキストリン類またはそれらの誘導体、またはクロスボンドを有するシクロデキストリン類またはシクロデキストリン高分子類の有機‐水性または固体溶液と、 配列番号１乃至配列番号５９５のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の水性または固体溶液との、１：１または１：２（モル比）の混合物であることを特徴とする、温血動物における急性心筋梗塞、左心室肥大、糖尿病性脈官障害、抹消虚血、狭心症、心筋梗塞後の進行性心不全、アテローム性硬症、腫瘍、糖尿病、精子の運動性、精子形成の阻害、腎症、性的不能、胃腸および婦人科の障害、血管新生、体毛の喪失、血の疾病、血管形成術（血管形成術後再狭窄、血管内プロテアーゼ）の治療および研究のための薬学組成物。
【請求項１６】
アルキル、ヒドロキシアルキル、ヒドロキシプロピルおよびアシルからなる群から選択されるシクロデキストリン類またはそれらの誘導体、またはクロスボンドを有するシクロデキストリン類またはシクロデキストリン高分子類の有機‐水性または固体溶液と、 配列番号１乃至配列番号５９５のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の水性または固体溶液との、１：１または１：２（モル比）の混合物であることを特徴とする、オスの避妊に使用するための薬学組成物。
【請求項１７】
シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に包含または結合されている際に、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の生物学的利用能が増加することを特徴とする、請求項１から３のいずれか一項に記載のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる薬学組成物。
【請求項１８】
シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または単独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に包含または結合されている際に、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の持続期間および／または有効性が増加することを特徴とする、請求項１または２記載のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる薬学組成物。
【請求項１９】
高血圧の応急治療のために、ポリエチレングリコルを含有するかまたはしない、水、食塩水、バッファ溶液、リンガー液、ブドウ糖液、ハンクス液、生体適合性食塩水を含む薬学的に許容可能な賦形剤との混合物として用いられることを特徴とする、請求項１から４のいずれか一項に記載の経口用薬学組成物。
【請求項２０】
シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に包含または結合されている際に、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の生物学的利用能が増加することを特徴とする、請求項１から４のいずれか一項に記載のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる経口用薬学組成物。
【請求項２１】
シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または単独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に包含または結合されている際に、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の持続期間および／または有効性が増加することを特徴とする、請求項１または２記載のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる経口用薬学組成物。
【請求項２２】
シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または単独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に包含または結合されている際に、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の生物学的利用能が増加することを特徴とする、筋肉内、皮下、局所、吸入（肺、鼻腔内、口腔内）投与用の、または移植可能なまたは注射可能な装置としての請求項１から４のいずれか一項に記載のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる組成物および製剤。
【請求項２３】
シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または単独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に包含または結合されているか、またはリポソームおよび生分解性高分子類および／またはそれらの混合物のような放出制御システム内にマイクロカプセル化されているかまたはされていない一種以上の他の薬理学的活性剤と混合または結合されている際に、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の生物学的利用能が増加することを特徴とする、筋肉内、皮下、局所、吸入（肺、鼻腔内、口腔内）投与用の、または移植可能なまたは注射可能な装置としての請求項１から４のいずれか一項に記載のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる組成物および製剤。
【請求項２４】
シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または単独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に包含または結合されている際に、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の効果持続時間および／または有効性が増加することを特徴とする、筋肉内、皮下、局所、吸入（肺、鼻腔内、口腔内）投与用の、または移植可能なまたは注射可能な装置としての請求項１から４のいずれか一項に記載のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる組成物および製剤。
【請求項２５】
シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または単独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に包含または結合されているか、またはリポソームおよび生分解性高分子類および／またはそれらの混合物のような放出制御システム内にマイクロカプセルか化されているかまたはされていない一種以上の他の薬理学的活性剤と混合または結合されている際に、動脈高血圧およびその他の心血管疾病およびそれらの合併症の治療および研究にＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体を使用することを特徴とする、筋肉内、皮下、局所、吸入（肺、鼻腔内、口腔内）投与用の、または移植可能なまたは注射可能な装置としての、請求項１から４のいずれか一項に記載の組成物および製剤。
【請求項２６】
シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または単独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に包含または結合されているか、またはリポソームおよび生分解性高分子類および／またはそれらの混合物のような放出制御システム内にマイクロカプセル化されているかまたはされていない一種以上の他の薬理学的活性剤と結合されている際に、温血動物における急性心筋梗塞、左心室肥大、糖尿病性脈官障害、抹消虚血、狭心症、心筋梗塞後の進行性心不全、アテローム性硬症、腫瘍、糖尿病、精子の運動性、精子形成の阻害、腎症、性的不能、胃腸および婦人科の障害、血管新生、体毛の喪失、血の疾病、血管形成術（血管形成術後再狭窄、血管内プロテアーゼ）の治療および研究にＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体を使用することを特徴とする、筋肉内、皮下、局所、吸入（肺、鼻腔内、口腔内）投与用の、または移植可能なまたは注射可能な装置としての、請求項１から４のいずれか一項に記載の組成物および製剤。
【請求項２７】
シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または単独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に包含または結合されているか、またはリポソームおよび生分解性高分子類および／またはそれらの混合物のような放出制御システム内にマイクロカプセル化されているかまたはされていない一種以上の他の薬理学的活性剤と結合されている際に、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の生物学的利用能が増加することを特徴とする、筋肉内、皮下、局所、吸入（肺、鼻腔内、口腔内）投与用の、または移植可能なまたは注射可能な装置としての請求項１または２記載のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる薬学組成物。
【請求項２８】
シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または単独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に包含または結合されている際に、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の効果持続時間および／または有効性が増加することを特徴とする、筋肉内、皮下、局所、吸入（肺、鼻腔内、口腔内）投与用の、または移植可能なまたは注射可能な装置としての請求項１から４のいずれか一項に記載のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる薬学組成物。
【請求項２９】
シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または単独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に包含または結合されているか、またはリポソームおよび生分解性高分子類および／またはそれらの混合物のような放出制御システム内にマイクロカプセル化されているかまたはされていない一種以上の他の薬理学的活性剤と結合されている際に、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の効果持続時間および／または有効性が増加することを特徴とする、筋肉内、皮下、局所、吸入（肺、鼻腔内、口腔内）投与用の、または移植可能なまたは注射可能な装置としての、請求項１から４のいずれか一項に記載のＥＶＡＳＩＮ類、それらの構造的および立体配置的類似体からなる薬学組成物。
【請求項３０】
シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または単独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に包含または結合されているか、またはリポソームおよび生分解性高分子類および／またはそれらの混合物のような放出制御システム内にマイクロカプセル化されているかまたはされていない一種以上の他の薬理学的活性剤と結合されている際に、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体を使用することを特徴とする、動脈高血圧およびその他の心血管疾病およびそれらの合併症の治療および研究に用いられる、筋肉内、皮下、局所、吸入（肺、鼻腔内、口腔内）投与用の、または移植可能なまたは注射可能な装置としての、請求項１から４のいずれか一項に記載の薬学組成物。
【請求項３１】
シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または単独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に包含または結合されているか、またはリポソームおよび生分解性高分子類および／またはそれらの混合物のような放出制御システム内にマイクロカプセル化されているかまたはされていない一種以上の他の薬理学的活性剤と結合されている際に、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体を使用することを特徴とする、温血動物における急性心筋梗塞、左心室肥大、糖尿病性脈官障害、抹消虚血、狭心症、心筋梗塞後の進行性心不全、アテローム性硬症、腫瘍、糖尿病、精子の運動性、精子形成の阻害、腎症、性的不能、胃腸および婦人科の障害、血管新生、体毛の喪失、血の疾病、血管形成術（血管形成術後再狭窄、血管内プロテアーゼ）の治療および研究に用いられる、筋肉内、皮下、局所、吸入（肺、鼻腔内、口腔内）投与用の、または移植可能なまたは注射可能な装置としての、請求項１から４のいずれか一項に記載の薬学組成物。
【請求項１】
蛇、特にジャララカ（Ｂｏｔｈｒｏｐｓ Ｊａｒａｒａｃａ）の毒腺から分泌されたペプチド類、バソぺプチダーゼ阻薬、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる薬学組成物であって、
ａ）５〜１３のアミノ酸オリゴペプチド類
【表１】
ここで、Ｐは常にプローリンで、他は、三文字および一文字のコードとして表示されるＬ−またはＤ−アミノ酸および誘導体であり得、
【表２】
（Ｅ1ピログルタミン酸はＮ−末端アミノ酸であり；
ａａ2はアミノ酸で、典型的に式ＩおよびＩＩに対してはＷ，ＳまたはＫであり、式ＩＶ〜ＸＩに対してはＡ，Ｗ，Ｓ，ＧまたはＮであり；
ａａ3は典型的に式Ｉ〜ＩＩＩに対してはＷ，Ｐ，ＦまたはＧであり、式ＩＶ〜ＸＩに対してはＡ，Ｐ，Ｇ，ＷまたはＲであり；
ａａ4はアミノ酸で、典型的に式Ｉ〜ＩＩＩに対してはＰ，ＡまたはＲであり、式ＩＶ〜ＸＩに対してはＰ，Ｌ，Ｑ，Ａ，ＲまたはＷであり；
ａａ5はアミノ酸で、典型的に式ＩＩおよびＩＩＩに対してはＧ，ＲまたはＩであり、式ＩＶ〜ＸＩに対してはＴ，Ｐ，Ｇ，Ｈ，Ｒ，ＷまたはＥであり；
ａａ6はアミノ酸で、典型的に式Ｖ、ＶＩＩ、ＶＩＩＩおよびＸＩに対してはＱ，Ｎ，Ｐ，Ｔ，Ｈ，ＲまたはＧであり；一般的に式ＩＶに対してはＩ、Ａ，ＴまたはＹであり；
ａａ7はアミノ酸で、典型的に式ＶＩ、ＶＩＩＩおよびＩＸに対してはＰ，Ｎ，Ｑ，ＧまたはＲであり、式Ｖ対してはＩ，Ａ，ＴまたはＹであり；
ａａ8はアミノ酸で、典型的に式ＶＩＩおよびＩＸに対してはＱ，ＰまたはＧであり、式ＶＩに対してはＩ，Ａ，ＴまたはＹであり；
ａａ9はアミノ酸で、典型的に式ＶＩＩＩに対してはＰ，Ｑ，ＮまたはＧであり、式ＶＩＩに対してはＩ，Ａ，ＴまたはＹであり；
ａａ10はアミノ酸で、典型的に式ＩＸに対してはＱおよびＥであり、式ＶＩＩＩに対してはＩ，Ａ，ＴまたはＹであり；
ａａ11は一般的に式ＩＸに対してＩ，Ａ，ＴまたはＹである。）；
ｂ）シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または単独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に結合または包含されているか、または一種以上の薬理学的活性剤と結合されている、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体または誘導体の包接化合物；
ｃ）リポソームおよび生分解性高分子および／またはそれらの混合物のような放出制御システム内に、マイクロカプセル化されているかまたはされていない、シクロデキストリン類内に含まれているかまたは含まれていないＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなることを特徴とする薬学組成物。
【請求項２】
ペプチド類化合物および／または非ペプチドバソペプチダーゼ阻害薬に基づく薬物および／または製剤を開発するための分子モデルとしてＥＶＡＳＩＮ７ａ、１０ｃ，１１ｅ，１２ｂ、それらの類似体および誘導体を用いることを特徴とするＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の薬学化合物。
【請求項３】
ペプチド類化合物および／または非ペプチド・リガンド作用物質および膜に結合されているアンギオテンシン転換酵素の拮抗物質に基づく薬物および／または製剤を開発するための分子モデルとして、ＥＶＡＳＩＮ７ａ、１０ｃ，１１ｅ，１２ｂ、それらの類似体および誘導体を用いることを特徴とする配列番号１乃至配列番号５９５のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる薬学組成物。
【請求項４】
中性エンドペプチダーゼ（ミクロモル範囲のＫi）およびアンギオテンシンＩ転換酵素（ナノモル範囲のＫi）に対し特異的な阻害活性を示すことを特徴とする請求項１または２記載のＥＶＡＳＩＮ類（ＥＶＡＳＩＮ７ａを除く）、それらの類似体および誘導体からなる薬学組成物。
【請求項５】
アンギオテンシンＩ転換酵素のＮ‐ドメインに比べ、Ｃ−末端ドメインに対し５０倍乃至４００倍より強力な選択的阻害活性を示すことを特徴とする請求項１または２記載のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる薬学組成物。
【請求項６】
アンギオテンシンＩ転換酵素のＮ‐ドメインに比べ、Ｃ−末端ドメインに対し５０倍乃至４００倍より強力に選択的に結合することを特徴とする請求項１または２記載のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる薬学組成物。
【請求項７】
アンギオテンシンＩ転換酵素および中性エンドペプチダーゼと類似の阻害活性を示すことを特徴とする請求項１または２記載のＥＶＡＳＩＮ−７ａ、その類似体および誘導体からなる薬学組成物。
【請求項８】
血管拡張活性および／または血管保護活性を示すことを特徴とするペプチド類化合物および／または非ペプチド化合物に基づく薬物および／または製剤を開発するための分子モデルとしてＥＶＡＳＩＮ７ａ、１０ｃ，１１ｅ，１２ｂ、それらの類似体および誘導体の使用。
【請求項９】
動脈高血圧およびその他の心血管疾病およびそれらの合併症の治療および研究を行うために、リポソームおよび生分解性高分子および／またはそれらの混合物のような放出制御システム内に、マイクロカプセル化されているかまたはされていない、シクロデキストリン類およびそれらの誘導体とＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体との包接化合物または結合物を用いることを特徴とする請求項１から３のいずれか一項に記載のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる薬学組成物。
【請求項１０】
温血動物における急性心筋梗塞、左心室肥大、糖尿病性脈官障害、抹消虚血、狭心症、心筋梗塞後の進行性心不全、アテローム性硬症、腫瘍、糖尿病、精子の運動性、精子形成の阻害、腎症、性的不能、胃腸および婦人科の障害、血管新生、体毛の喪失、血の疾病、血管形成術（血管形成術後再狭窄、血管内プロテアーゼ）の治療および研究を行うために、リポソームおよび生分解性高分子および／またはそれらの混合物のような放出制御システム内に、マイクロカプセル化されているかまたはされていない、シクロデキストリン類およびそれらの誘導体とＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体との包接化合物および結合物を用いることを特徴とする請求項１から６のいずれか一項に記載のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる薬学組成物。
【請求項１１】
アルキル、ヒドロキシアルキル、ヒドロキシプロピルおよびアシルからなる群から選択されるシクロデキストリン類またはそれらの誘導体またはクロスボンドを有するシクロデキストリン類またはシクロデキストリン高分子類の有機‐水性固体または溶液と、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の溶液との、１：１または１：２（モル比）の混合物を特徴とする請求項１または２記載の薬学組成物。
【請求項１２】
シクロデキストリン類または、リポソーム、生分解性高分子類、生分解性高分子の誘導体、またはそれらの混合物からなる他の放出制御システムを利用することを特徴とするＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体または誘導体からなる薬学組成物。
【請求項１３】
請求項４記載の、中性エンドペプチダーゼおよびアンギオテンシンＩ転換酵素に対し特異的な阻害活性を有する薬物および／または製剤を開発するための分子モデルとして、 中性エンドペプチダーゼに対しより低い阻害活性を有し、咳および血管水腫のような二次的な効果の発生率がより低いことを特徴とする配列番号１乃至配列番号５９５のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の使用。
【請求項１４】
アルキル、ヒドロキシアルキル、ヒドロキシプロピルおよびアシルからなる群から選択されるシクロデキストリン類またはそれらの誘導体、またはクロスボンドを有するシクロデキストリン類またはシクロデキストリン高分子類の有機‐水性または固体溶液とＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の水性または固体溶液との混合物であることを特徴とする、動脈高血圧およびその他の心血管疾病およびそれらの合併症の治療および研究のための薬学組成物。
【請求項１５】
アルキル、ヒドロキシアルキル、ヒドロキシプロピルおよびアシルからなる群から選択されるシクロデキストリン類またはそれらの誘導体、またはクロスボンドを有するシクロデキストリン類またはシクロデキストリン高分子類の有機‐水性または固体溶液と、 ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の水性または固体溶液との混合物であることを特徴とする、温血動物における急性心筋梗塞、左心室肥大、糖尿病性脈官障害、抹消虚血、狭心症、心筋梗塞後の進行性心不全、アテローム性硬症、腫瘍、糖尿病、精子の運動性、精子形成の阻害、腎症、性的不能、胃腸および婦人科の障害、血管新生、体毛の喪失、血の疾病、血管形成術（血管形成術後再狭窄、血管内プロテアーゼ）の治療および研究のための薬学組成物。
【請求項１６】
アルキル、ヒドロキシアルキル、ヒドロキシプロピルおよびアシルからなる群から選択されるシクロデキストリン類またはそれらの誘導体、またはクロスボンドを有するシクロデキストリン類またはシクロデキストリン高分子類の有機‐水性または固体溶液と、 ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の水性または固体溶液との混合物であることを特徴とする、オスの避妊に使用するための薬学組成物。
【請求項１７】
シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に包含または結合されている際に、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の生物学的利用能が増加することを特徴とする、請求項１から３のいずれか一項に記載のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる薬学組成物。
【請求項１８】
シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または単独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に包含または結合されている際に、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の持続期間および／または有効性が増加することを特徴とする、請求項１または２記載のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる薬学組成物。
【請求項１９】
高血圧の応急治療のために、ポリエチレングリコルを含有するかまたはしない、水、食塩水、バッファ溶液、リンガー液、ブドウ糖液、ハンクス液、生体適合性食塩水を含む薬学的に許容可能な賦形剤との混合物として用いられることを特徴とする、請求項１から４のいずれか一項に記載の経口用薬学組成物。
【請求項２０】
シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に包含または結合されている際に、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の生物学的利用能が増加することを特徴とする、請求項１から４のいずれか一項に記載のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる経口用薬学組成物。
【請求項２１】
シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または単独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に包含または結合されている際に、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の持続期間および／または有効性が増加することを特徴とする、請求項１または２記載のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる経口用薬学組成物。
【請求項２２】
シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または単独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に包含または結合されている際に、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の生物学的利用能が増加することを特徴とする、筋肉内、皮下、局所、吸入（肺、鼻腔内、口腔内）投与用の、または移植可能なまたは注射可能な装置としての請求項１から４のいずれか一項に記載のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる組成物および製剤。
【請求項２３】
シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または単独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に包含または結合されているか、またはリポソームおよび生分解性高分子類および／またはそれらの混合物のような放出制御システム内にマイクロカプセル化されているかまたはされていない一種以上の他の薬理学的活性剤と混合または結合されている際に、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の生物学的利用能が増加することを特徴とする、筋肉内、皮下、局所、吸入（肺、鼻腔内、口腔内）投与用の、または移植可能なまたは注射可能な装置としての請求項１から４のいずれか一項に記載のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる組成物および製剤。
【請求項２４】
シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または単独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に包含または結合されている際に、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の効果持続時間および／または有効性が増加することを特徴とする、筋肉内、皮下、局所、吸入（肺、鼻腔内、口腔内）投与用の、または移植可能なまたは注射可能な装置としての請求項１から４のいずれか一項に記載のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる組成物および製剤。
【請求項２５】
シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または単独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に包含または結合されているか、またはリポソームおよび生分解性高分子類および／またはそれらの混合物のような放出制御システム内にマイクロカプセルか化されているかまたはされていない一種以上の他の薬理学的活性剤と混合または結合されている際に、動脈高血圧およびその他の心血管疾病およびそれらの合併症の治療および研究にＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体を使用することを特徴とする、筋肉内、皮下、局所、吸入（肺、鼻腔内、口腔内）投与用の、または移植可能なまたは注射可能な装置としての、請求項１から４のいずれか一項に記載の組成物および製剤。
【請求項２６】
シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または単独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に包含または結合されているか、またはリポソームおよび生分解性高分子類および／またはそれらの混合物のような放出制御システム内にマイクロカプセル化されているかまたはされていない一種以上の他の薬理学的活性剤と結合されている際に、温血動物における急性心筋梗塞、左心室肥大、糖尿病性脈官障害、抹消虚血、狭心症、心筋梗塞後の進行性心不全、アテローム性硬症、腫瘍、糖尿病、精子の運動性、精子形成の阻害、腎症、性的不能、胃腸および婦人科の障害、血管新生、体毛の喪失、血の疾病、血管形成術（血管形成術後再狭窄、血管内プロテアーゼ）の治療および研究にＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体を使用することを特徴とする、筋肉内、皮下、局所、吸入（肺、鼻腔内、口腔内）投与用の、または移植可能なまたは注射可能な装置としての、請求項１から４のいずれか一項に記載の組成物および製剤。
【請求項２７】
シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または単独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に包含または結合されているか、またはリポソームおよび生分解性高分子類および／またはそれらの混合物のような放出制御システム内にマイクロカプセル化されているかまたはされていない一種以上の他の薬理学的活性剤と結合されている際に、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の生物学的利用能が増加することを特徴とする、筋肉内、皮下、局所、吸入（肺、鼻腔内、口腔内）投与用の、または移植可能なまたは注射可能な装置としての請求項１または２記載のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる薬学組成物。
【請求項２８】
シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または単独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に包含または結合されている際に、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の効果持続時間および／または有効性が増加することを特徴とする、筋肉内、皮下、局所、吸入（肺、鼻腔内、口腔内）投与用の、または移植可能なまたは注射可能な装置としての請求項１から４のいずれか一項に記載のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる薬学組成物。
【請求項２９】
シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または単独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に包含または結合されているか、またはリポソームおよび生分解性高分子類および／またはそれらの混合物のような放出制御システム内にマイクロカプセル化されているかまたはされていない一種以上の他の薬理学的活性剤と結合されている際に、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の効果持続時間および／または有効性が増加することを特徴とする、筋肉内、皮下、局所、吸入（肺、鼻腔内、口腔内）投与用の、または移植可能なまたは注射可能な装置としての、請求項１から４のいずれか一項に記載のＥＶＡＳＩＮ類、それらの構造的および立体配置的類似体からなる薬学組成物。
【請求項３０】
シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または単独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に包含または結合されているか、またはリポソームおよび生分解性高分子類および／またはそれらの混合物のような放出制御システム内にマイクロカプセル化されているかまたはされていない一種以上の他の薬理学的活性剤と結合されている際に、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体を使用することを特徴とする、動脈高血圧およびその他の心血管疾病およびそれらの合併症の治療および研究に用いられる、筋肉内、皮下、局所、吸入（肺、鼻腔内、口腔内）投与用の、または移植可能なまたは注射可能な装置としての、請求項１から４のいずれか一項に記載の薬学組成物。
【請求項３１】
シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または単独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に包含または結合されているか、またはリポソームおよび生分解性高分子類および／またはそれらの混合物のような放出制御システム内にマイクロカプセル化されているかまたはされていない一種以上の他の薬理学的活性剤と結合されている際に、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体を使用することを特徴とする、温血動物における急性心筋梗塞、左心室肥大、糖尿病性脈官障害、抹消虚血、狭心症、心筋梗塞後の進行性心不全、アテローム性硬症、腫瘍、糖尿病、精子の運動性、精子形成の阻害、腎症、性的不能、胃腸および婦人科の障害、血管新生、体毛の喪失、血の疾病、血管形成術（血管形成術後再狭窄、血管内プロテアーゼ）の治療および研究に用いられる、筋肉内、皮下、局所、吸入（肺、鼻腔内、口腔内）投与用の、または移植可能なまたは注射可能な装置としての、請求項１から４のいずれか一項に記載の薬学組成物。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
蛇、特にジャララカ（Ｂｏｔｈｒｏｐｓ Ｊａｒａｒａｃａ）の毒腺から分泌されたペプチド類、バソぺプチダーゼ阻害薬、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる薬学組成物であって、
ａ）５〜１３のアミノ酸オリゴペプチド類
配列番号１乃至配列番号１０３のＥＶＡＳＩＮ−５、
配列番号１０４乃至配列番号２４３のＥＶＡＳＩＮ−６、
配列番号２４４乃至配列番号３２５のＥＶＡＳＩＮ−７、
配列番号３２６乃至配列番号４２２および配列番号５９５のＥＶＡＳＩＮ−９、
配列番号４２３乃至配列番号５１６のＥＶＡＳＩＮ−１０、
配列番号５１７乃至配列番号５５６のＥＶＡＳＩＮ−１１、
配列番号５５７乃至配列番号５８９のＥＶＡＳＩＮ−１２、
配列番号５９０乃至配列番号５９４のＥＶＡＳＩＮ−１３；
ｂ）シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または単独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に結合または包含されているか、または単独にまたは一種以上の薬理学的活性剤と結合されている、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体または誘導体の包接化合物；
ｃ）リポソームおよび生分解性高分子および／またはそれらの混合物のような放出制御システム内に、マイクロカプセル化されているかまたはされていない、シクロデキストリン類内に含まれているかまたは含まれていない配列番号１乃至配列番号５９５のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体；からなることを特徴とする薬学組成物。
【請求項２】
ペプチド類化合物および／または非ペプチドバソペプチダーゼ阻害薬に基づく薬物および／または製剤を開発するための分子モデルとして配列番号２５３のＥＶＡＳＩＮ７ａ、配列番号４７２のＥＶＡＳＩＮ−１０ｃ、配列番号５５５のＥＶＡＳＩＮ１１ｅ、配列番号５５７のＥＶＡＳＩＮ１２ｂ、それらの類似体および誘導体を用いることを特徴とするＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の薬学化合物。
【請求項３】
ペプチド類化合物および／または非ペプチド・リガンド作用物質および膜に結合されているアンギオテンシン転換酵素の拮抗物質に基づく薬物および／または製剤を開発するための分子モデルとして、配列番号２５３のＥＶＡＳＩＮ７ａ、配列番号４７２のＥＶＡＳＩＮ−１０ｃ、配列番号５５５のＥＶＡＳＩＮ１１ｅ、配列番号５５７のＥＶＡＳＩＮ１２ｂ、それらの類似体および誘導体を用いることを特徴とする配列番号１乃至配列番号５９５のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる薬学組成物。
【請求項４】
中性エンドペプチダーゼ（ミクロモル範囲のＫｉ）およびアンギオテンシンＩ転換酵素（ナノモル範囲のＫｉ）に対し特異的な阻害活性を示すことを特徴とする請求項１または２記載のＥＶＡＳＩＮ類（配列番号２５３のＥＶＡＳＩＮ７ａを除く）、それらの類似体および誘導体からなる薬学組成物。
【請求項５】
アンギオテンシンＩ転換酵素のＮ‐ドメインに比べ、Ｃ−末端ドメインに対し５０倍乃至４００倍より強力な選択的阻害活性を示すことを特徴とする請求項１または２記載のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる薬学組成物。
【請求項６】
アンギオテンシンＩ転換酵素のＮ‐ドメインに比べ、Ｃ−末端ドメインに対し５０倍乃至４００倍より強力に選択的に結合することを特徴とする請求項１または２記載のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる薬学組成物。
【請求項７】
アンギオテンシンＩ転換酵素および中性エンドペプチダーゼと類似の阻害活性を示すことを特徴とする請求項１または２記載の配列番号２５３のＥＶＡＳＩＮ−７ａ、その類似体および誘導体からなる薬学組成物。
【請求項８】
血管拡張活性および／または血管保護活性を示すことを特徴とするペプチド類化合物および／または非ペプチド化合物に基づく薬物および／または製剤を開発するための分子モデルとして配列番号２５３のＥＶＡＳＩＮ７ａ、配列番号４７２のＥＶＡＳＩＮ−１０ｃ、配列番号５５５のＥＶＡＳＩＮ１１ｅ、配列番号５５７のＥＶＡＳＩＮ１２ｂ、それらの類似体および誘導体の使用。
【請求項９】
動脈高血圧およびその他の心血管疾病およびそれらの合併症の治療および研究を行うために、リポソームおよび生分解性高分子および／またはそれらの混合物のような放出制御システム内に、マイクロカプセル化されているかまたはされていない、シクロデキストリン類およびそれらの誘導体とＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体との包接化合物または結合物を用いることを特徴とする請求項１から３のいずれか一項に記載のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる薬学組成物。
【請求項１０】
温血動物における急性心筋梗塞、左心室肥大、糖尿病性脈官障害、抹消虚血、狭心症、心筋梗塞後の進行性心不全、アテローム性硬症、腫瘍、糖尿病、精子の運動性、精子形成の阻害、腎症、性的不能、胃腸および婦人科の障害、血管新生、体毛の喪失、血の疾病、血管形成術（血管形成術後再狭窄、血管内プロテアーゼ）の治療および研究を行うために、リポソームおよび生分解性高分子および／またはそれらの混合物のような放出制御システム内に、マイクロカプセル化されているかまたはされていない、シクロデキストリン類およびそれらの誘導体とＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体との包接化合物および結合物を用いることを特徴とする請求項１から６のいずれか一項に記載のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる薬学組成物。
【請求項１１】
アルキル、ヒドロキシアルキル、ヒドロキシプロピルおよびアシルからなる群から選択されるシクロデキストリン類またはそれらの誘導体またはクロスボンドを有するシクロデキストリン類またはシクロデキストリン高分子類の有機‐水性固体または溶液と、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の溶液との、１：１または１：２（モル比）の混合物を特徴とする請求項１または２記載の薬学組成物。
【請求項１２】
シクロデキストリン類または、リポソーム、生分解性高分子類、生分解性高分子の誘導体、またはそれらの混合物からなる他の放出制御システムを利用することを特徴とする配列番号１乃至配列番号５９５のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体または誘導体からなる薬学組成物。
【請求項１３】
請求項４記載の、中性エンドペプチダーゼおよびアンギオテンシンＩ転換酵素に対し特異的な阻害活性を有する薬物および／または製剤を開発するための分子モデルとして、 中性エンドペプチダーゼに対しより低い阻害活性を有し、咳および血管水腫のような二次的な効果の発生率がより低いことを特徴とする配列番号１乃至配列番号５９５のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の使用。
【請求項１４】
アルキル、ヒドロキシアルキル、ヒドロキシプロピルおよびアシルからなる群から選択されるシクロデキストリン類またはそれらの誘導体、またはクロスボンドを有するシクロデキストリン類またはシクロデキストリン高分子類の有機‐水性または固体溶液と、 配列番号１乃至配列番号５９５のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の水性または固体溶液との混合物であることを特徴とする、動脈高血圧およびその他の心血管疾病およびそれらの合併症の治療および研究のための薬学組成物。
【請求項１５】
アルキル、ヒドロキシアルキル、ヒドロキシプロピルおよびアシルからなる群から選択されるシクロデキストリン類またはそれらの誘導体、またはクロスボンドを有するシクロデキストリン類またはシクロデキストリン高分子類の有機‐水性または固体溶液と、 配列番号１乃至配列番号５９５のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の水性または固体溶液との、１：１または１：２（モル比）の混合物であることを特徴とする、温血動物における急性心筋梗塞、左心室肥大、糖尿病性脈官障害、抹消虚血、狭心症、心筋梗塞後の進行性心不全、アテローム性硬症、腫瘍、糖尿病、精子の運動性、精子形成の阻害、腎症、性的不能、胃腸および婦人科の障害、血管新生、体毛の喪失、血の疾病、血管形成術（血管形成術後再狭窄、血管内プロテアーゼ）の治療および研究のための薬学組成物。
【請求項１６】
アルキル、ヒドロキシアルキル、ヒドロキシプロピルおよびアシルからなる群から選択されるシクロデキストリン類またはそれらの誘導体、またはクロスボンドを有するシクロデキストリン類またはシクロデキストリン高分子類の有機‐水性または固体溶液と、 配列番号１乃至配列番号５９５のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の水性または固体溶液との、１：１または１：２（モル比）の混合物であることを特徴とする、オスの避妊に使用するための薬学組成物。
【請求項１７】
シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に包含または結合されている際に、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の生物学的利用能が増加することを特徴とする、請求項１から３のいずれか一項に記載のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる薬学組成物。
【請求項１８】
シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または単独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に包含または結合されている際に、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の持続期間および／または有効性が増加することを特徴とする、請求項１または２記載のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる薬学組成物。
【請求項１９】
高血圧の応急治療のために、ポリエチレングリコルを含有するかまたはしない、水、食塩水、バッファ溶液、リンガー液、ブドウ糖液、ハンクス液、生体適合性食塩水を含む薬学的に許容可能な賦形剤との混合物として用いられることを特徴とする、請求項１から４のいずれか一項に記載の経口用薬学組成物。
【請求項２０】
シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に包含または結合されている際に、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の生物学的利用能が増加することを特徴とする、請求項１から４のいずれか一項に記載のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる経口用薬学組成物。
【請求項２１】
シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または単独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に包含または結合されている際に、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の持続期間および／または有効性が増加することを特徴とする、請求項１または２記載のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる経口用薬学組成物。
【請求項２２】
シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または単独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に包含または結合されている際に、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の生物学的利用能が増加することを特徴とする、筋肉内、皮下、局所、吸入（肺、鼻腔内、口腔内）投与用の、または移植可能なまたは注射可能な装置としての請求項１から４のいずれか一項に記載のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる組成物および製剤。
【請求項２３】
シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または単独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に包含または結合されているか、またはリポソームおよび生分解性高分子類および／またはそれらの混合物のような放出制御システム内にマイクロカプセル化されているかまたはされていない一種以上の他の薬理学的活性剤と混合または結合されている際に、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の生物学的利用能が増加することを特徴とする、筋肉内、皮下、局所、吸入（肺、鼻腔内、口腔内）投与用の、または移植可能なまたは注射可能な装置としての請求項１から４のいずれか一項に記載のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる組成物および製剤。
【請求項２４】
シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または単独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に包含または結合されている際に、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の効果持続時間および／または有効性が増加することを特徴とする、筋肉内、皮下、局所、吸入（肺、鼻腔内、口腔内）投与用の、または移植可能なまたは注射可能な装置としての請求項１から４のいずれか一項に記載のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる組成物および製剤。
【請求項２５】
シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または単独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に包含または結合されているか、またはリポソームおよび生分解性高分子類および／またはそれらの混合物のような放出制御システム内にマイクロカプセルか化されているかまたはされていない一種以上の他の薬理学的活性剤と混合または結合されている際に、動脈高血圧およびその他の心血管疾病およびそれらの合併症の治療および研究にＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体を使用することを特徴とする、筋肉内、皮下、局所、吸入（肺、鼻腔内、口腔内）投与用の、または移植可能なまたは注射可能な装置としての、請求項１から４のいずれか一項に記載の組成物および製剤。
【請求項２６】
シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または単独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に包含または結合されているか、またはリポソームおよび生分解性高分子類および／またはそれらの混合物のような放出制御システム内にマイクロカプセル化されているかまたはされていない一種以上の他の薬理学的活性剤と結合されている際に、温血動物における急性心筋梗塞、左心室肥大、糖尿病性脈官障害、抹消虚血、狭心症、心筋梗塞後の進行性心不全、アテローム性硬症、腫瘍、糖尿病、精子の運動性、精子形成の阻害、腎症、性的不能、胃腸および婦人科の障害、血管新生、体毛の喪失、血の疾病、血管形成術（血管形成術後再狭窄、血管内プロテアーゼ）の治療および研究にＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体を使用することを特徴とする、筋肉内、皮下、局所、吸入（肺、鼻腔内、口腔内）投与用の、または移植可能なまたは注射可能な装置としての、請求項１から４のいずれか一項に記載の組成物および製剤。
【請求項２７】
シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または単独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に包含または結合されているか、またはリポソームおよび生分解性高分子類および／またはそれらの混合物のような放出制御システム内にマイクロカプセル化されているかまたはされていない一種以上の他の薬理学的活性剤と結合されている際に、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の生物学的利用能が増加することを特徴とする、筋肉内、皮下、局所、吸入（肺、鼻腔内、口腔内）投与用の、または移植可能なまたは注射可能な装置としての請求項１または２記載のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる薬学組成物。
【請求項２８】
シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または単独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に包含または結合されている際に、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の効果持続時間および／または有効性が増加することを特徴とする、筋肉内、皮下、局所、吸入（肺、鼻腔内、口腔内）投与用の、または移植可能なまたは注射可能な装置としての請求項１から４のいずれか一項に記載のＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体からなる薬学組成物。
【請求項２９】
シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または単独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に包含または結合されているか、またはリポソームおよび生分解性高分子類および／またはそれらの混合物のような放出制御システム内にマイクロカプセル化されているかまたはされていない一種以上の他の薬理学的活性剤と結合されている際に、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体の効果持続時間および／または有効性が増加することを特徴とする、筋肉内、皮下、局所、吸入（肺、鼻腔内、口腔内）投与用の、または移植可能なまたは注射可能な装置としての、請求項１から４のいずれか一項に記載のＥＶＡＳＩＮ類、それらの構造的および立体配置的類似体からなる薬学組成物。
【請求項３０】
シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または単独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に包含または結合されているか、またはリポソームおよび生分解性高分子類および／またはそれらの混合物のような放出制御システム内にマイクロカプセル化されているかまたはされていない一種以上の他の薬理学的活性剤と結合されている際に、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体を使用することを特徴とする、動脈高血圧およびその他の心血管疾病およびそれらの合併症の治療および研究に用いられる、筋肉内、皮下、局所、吸入（肺、鼻腔内、口腔内）投与用の、または移植可能なまたは注射可能な装置としての、請求項１から４のいずれか一項に記載の薬学組成物。
【請求項３１】
シクロデキストリン類またはそれらの誘導体内に含まれているか、または単独にまたは混合物の形態で、薬学的に許容可能な賦形剤および／または担体中に包含または結合されているか、またはリポソームおよび生分解性高分子類および／またはそれらの混合物のような放出制御システム内にマイクロカプセル化されているかまたはされていない一種以上の他の薬理学的活性剤と結合されている際に、ＥＶＡＳＩＮ類、それらの類似体および誘導体を使用することを特徴とする、温血動物における急性心筋梗塞、左心室肥大、糖尿病性脈官障害、抹消虚血、狭心症、心筋梗塞後の進行性心不全、アテローム性硬症、腫瘍、糖尿病、精子の運動性、精子形成の阻害、腎症、性的不能、胃腸および婦人科の障害、血管新生、体毛の喪失、血の疾病、血管形成術（血管形成術後再狭窄、血管内プロテアーゼ）の治療および研究に用いられる、筋肉内、皮下、局所、吸入（肺、鼻腔内、口腔内）投与用の、または移植可能なまたは注射可能な装置としての、請求項１から４のいずれか一項に記載の薬学組成物。
【公表番号】特表２００６−５１７５２０（Ｐ２００６−５１７５２０Ａ）
【公表日】平成１８年７月２７日（２００６．７．２７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００４−５５７６８９（Ｐ２００４−５５７６８９）
【出願日】平成１５年１２月９日（２００３．１２．９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＢＲ２００３／０００１９２
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０５２２７３
【国際公開日】平成１６年６月２４日（２００４．６．２４）
【出願人】（５０３３３９４８７）バイオラブ サナス ファーマシューティカ リミターダ (1)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成１８年７月２７日（２００６．７．２７）
【国際特許分類】
【出願日】平成１５年１２月９日（２００３．１２．９）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＢＲ２００３／０００１９２
【国際公開番号】ＷＯ２００４／０５２２７３
【国際公開日】平成１６年６月２４日（２００４．６．２４）
【出願人】（５０３３３９４８７）バイオラブ サナス ファーマシューティカ リミターダ (1)
【Ｆターム（参考）】
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