褐藻類由来機能性成分の抽出方法
【課題】従来の褐藻類由来機能性成分の抽出方法における課題を解決し、褐藻類に含まれる有用成分である褐藻類由来機能性成分を効率的に、さらに、飛躍的に時間を短縮して抽出する方法を提供すること。
【解決手段】褐藻類を超臨界流体で抽出することを特徴とする褐藻類由来機能性成分の抽出方法。
【解決手段】褐藻類を超臨界流体で抽出することを特徴とする褐藻類由来機能性成分の抽出方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、海洋植物資源から褐藻類由来機能性成分を抽出するための方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
褐藻類はその有用性が認められているカロテノイドの１種であるフコキサンチンやステロールの１種であるフコステロール等の褐藻類由来機能性成分を有している。
【０００３】
上記褐藻類由来機能性成分のうち、フコキサンチンは以下の構造を有する既知の物質であり、その効果としては体内摂取による抗腫瘍効果（特許文献１）や神経細胞保護効果（特許文献２）、最近では血糖値上昇抑制効果（特許文献３）等が報告されている。
【０００４】
【化１】
【０００５】
上記のように、フコキサンチンは体内摂取により効果が得られるため、フコキサンチンの抽出溶媒は人体に無害なものを用いることが望ましい。しかし、上記報告で用いられているフコキサンチンはいずれも有機溶媒により抽出されている。そのため、フコキサンチンを精製する前の抽出の段階で、褐藻類からエタノールまたは含水エタノールを用いる技術（特許文献４および特許文献５）も報告されている。
【０００６】
しかしながら、溶媒の留去や抽出効率の面から、その抽出工程や使用する溶媒量は出来るだけ少ないことが望ましく、上記技術よりもさらなる工程の省略や溶媒の少量化が必要であった。
【０００７】
また、フコキサンチンの活性成分は光によって分解されやすいので、その抽出は遮光下で、迅速に行うのが望ましい。しかしながら、従来法では遮光下という条件やいくつかの抽出工程を経なければならないという煩雑さ、長時間の浸漬による抽出等、フコキサンチンの抽出までに時間を要するという問題があった。
【０００８】
一方、上記褐藻類由来機能性成分のうち、フコステロールは以下の構造を有する既知の物質であり、その効果としては体内摂取による抗動脈硬化作用（特許文献６）やコレステロール低減作用、血栓予防作用等が一般的に提唱されている。そしてフコステロールは副作用のない天然物由来の機能性食品や健康食品として利用されている。
【０００９】
【化２】
【００１０】
しかしながら、フコステロールの抽出にはヘキサン等の脂肪族炭化水素類や酢酸エチル等のエステル類、アセトン等のケトン類、またはこれらの混液等の有機溶媒が用いられ、さらに抽出までに１〜２０日間を要するという、多段式の溶媒抽出法により行われているのが現状であり、このフコステロールについても上記フコキサンチンと同様に、抽出溶媒や抽出時間の問題があった。
【特許文献１】特開平１０−１５８１５６号公報
【特許文献２】特開２００１−３３５４８０号公報
【特許文献３】特開２００７−２９７３７０号公報
【特許文献４】特開２００４−７５６３４号公報
【特許文献５】特開２００４−３５５２８号公報
【特許文献６】特開２００５−１０４８８７号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
従って、本発明は、上記した従来法における課題を解決し、褐藻類に含まれる有用成分であるフコキサンチン、フコステロール等の褐藻類由来機能性成分を効率的に、さらに、飛躍的に時間を短縮して抽出する方法を提供することを課題とするものである。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは上記課題を解決するために鋭意研究をした結果、超臨界流体を利用することにより褐藻類から褐藻類由来機能性成分を効率的に抽出できることを見出し、本発明を完成させた。
【００１３】
すなわち、本発明は褐藻類を超臨界流体で抽出することを特徴とする褐藻類由来機能性成分の抽出方法および前記抽出方法により得られる褐藻類由来機能性成分である。
【発明の効果】
【００１４】
本発明の褐藻類由来機能性成分の抽出方法は、抽出時間を従来法と比較して大幅に短縮できるため、また、その簡便さから試料の露光時間、即ち、褐藻類由来機能性成分の光による劣化を最小限に抑えることができる。
【００１５】
また、上記抽出方法は、従来法には見られない、抽出時に夾雑物であるクロロフィルの混入が比較的少ないという特徴があり、その後の分離・精製に利用しやすい。
【００１６】
従って、本発明の褐藻類由来機能性成分の抽出方法で抽出された褐藻類由来機能性成分は、健康食品や医薬品に好適に用いることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
本明細書において、褐藻類由来機能性成分とは、褐藻類に含まれ、カロテノイドであるフコキサンチン等の色素、フコステロール等の脂溶性成分、多糖類等のことをいい、好ましくはフコキサンチンおよびフコステロールのことをいう。なお、褐藻類由来機能性成分は常法に従って測定することができ、例えば、フコキサンチンであればＨＰＬＣで測定でき、フコステロールであればＧＣ−ＭＳで測定できる。
【００１８】
本発明の褐藻類由来機能性成分の抽出方法（以下、「本発明抽出法」という）は、褐藻類を抽出原料とし、これを超臨界流体を抽出溶媒とする超臨界流体抽出により行われるものである。
【００１９】
本発明抽出法において、抽出原料として用いられる褐藻類としては褐藻類由来機能性成分が含まれているものであれば広く採用することができる。このような褐藻類としては、例えば、ナガマツモ目（Ｃｈｏｒｄａｃｅａｅ）、ヒバマタ目（Ｆｕｃａｌｅｓ）、コンブ目（Ｌａｍｉｎａｒｉａｌｅｓ）等に属する褐藻類等が挙げられる。これら褐藻類の中でも、ナガマツモ目のナガマツモ科（Ｃｈｏｒｄａｃｅａｅ）またはモズク科（Ｓｐｅｒｍａｔｏｃｈｎａｃｅａｅ）、ヒバマタ目のホンダワラ科（Ｓａｒｇａｓｓａｃｅａｅ）、コンブ目のコンブ科（Ｌａｍｉｎａｒｉａｃｅａｅ）またはチガイソ科（Ａｌａｒｉａｃｅａｅ）等に属する褐藻類が好ましく、前記科に属する褐藻類の中でも、ナガマツモ科のオキナワモズク（Ｃｌａｄｏｓｉｐｈｏｎ ｏｋａｍｕｒａｎｕｓ）またはモズク科のモズク（Ｎｅｍａｃｙｓｔｕｓ ｄｅｃｉｐｉｅｎｓ）、ホンダワラ科のホンダワラ（Ｓａｒｇａｓｓｕｍ ｆｕｌｖｅｌｌｕｍ Ｃ．Ａｇａｒｄｈ）またはヒジキ（Ｈｉｚｉｋｉａ ｆｕｓｉｆｏｒｍｉｓ）、コンブ科のアラメ（Ｅｉｓｅｎｉａ ｂｉｃｙｃｌｉｓ （Ｋｊｅｌｌｍａｎ） Ｓｅｔｃｈｅｌｌ）、マコンブ（Ｌａｍｉｎａｒｉａ ｊａｐｏｎｉｃａ）、オニコンブ（Ｌａｍｉｎａｒｉａ ｄｉａｂｏｌｉｃａ）、リシリコンブ（Ｌａｍｉｎａｒｉａ ｏｃｈｏｔｅｎｓｉｓ）、ホソメコンブ（Ｌａｍｉｎａｒｉａ ｒｅｌｉｇｉｏｓａ）、ミツイシコンブ（Ｌａｍｉｎａｒｉａ ａｎｇｕｓｔａｔａ）、ナガコンブ（Ｌａｍｉｎａｒｉａ ｌｏｎｇｉｓｓｉｍａ）またはガゴメコンブ（Ｋｊｅｌｌｍａｎｉｅｌｌａ ｃｒａｓｓｉｉｆｏｌｉａ）、チガイソ科のワカメ（Ｕｎｄａｒｉａ ｐｉｎｎａｔｉｆｉｄａ）が好ましく、特にナガマツモ科のオキナワモズクは褐藻類由来機能性成分を高濃度で含有するためより好ましい。また、抽出原料となる褐藻類は、成熟体から遊走子の放出、遊走子から盤状体または糸状体の発生、盤状体または糸状体の着床による直立体の形成、直立体から成熟体への成長という生育サイクルのうちの、盤状体または糸状体〜成熟体の何れの成長段階のものであってもよいが、褐藻類由来機能性成分を豊富に含むことから盤状体または糸状体が好ましい。なお、盤状体または糸状体は、上記生育サイクルのうちの遊走子と直立体の中間に位置するものであり、別名で呼ばれることもがあるが、本発明においてはこれらの何れも含む。更に、これら抽出原料は、後記する超臨界流体による抽出前に必要に応じて適度な大きさに粉砕しておくことが好ましく、抽出に用いられる容器内の密度をできるだけ小さくするために顆粒状、特に粉末状としておくことが好ましい。
【００２０】
また、本発明抽出法において、抽出溶媒として用いられる超臨界流体としては、例えば、その圧力は高い方が好ましい傾向があるので、７.３８ＭＰａ以上、好ましくは１０ＭＰａ以上、特に好ましくは３０ＭＰａ以上、その温度が２５〜８０℃、好ましくは３０〜８０℃、特に好ましくは７０〜８０℃の超臨界状態の二酸化炭素等が挙げられる。
【００２１】
上記した褐藻類と超臨界流体を用いた褐藻類由来機能性成分の超臨界流体抽出は、超臨界流体を発生するためのポンプと、超臨界流体と褐藻類を接触させ、抽出を行うための容器、抽出液を貯留するための容器および系全体を昇温・保温するためのオーブン等を備える超臨界抽出装置で行われる。このような超臨界流体抽出装置としては各社から市販されている一般的なものを用いることができる。
【００２２】
超臨界流体抽出における超臨界流体の流量や抽出時間等の抽出条件は、容器の大きさ等により変化するので一概に言えないが、例えば、内容積１０ｍｌの容器であれば、流量は後記するモディファイヤーと併せて１〜２ｍｌ／分、抽出時間は５〜３０分が好ましく、５〜２０分がより好ましい。
【００２３】
また、上記超臨界流体抽出の際には、超臨界流体に、さらにモディファイヤーを加えることが好ましい。このようなモディファイヤーとしてはエタノールおよび／または水が挙げられ、エタノールおよび水が好ましく、エタノール単独がより好ましい。モディファイヤーとしてエタノールおよび水を用いる場合、エタノール濃度は１〜１００質量％（以下、単に「％」という）、好ましくは５０〜１００％である。このモディファイヤーを超臨界流体に加えることにより抽出効率が向上し、褐藻類由来機能性成分の収量が高くなる。また、モディファイヤーの量は上記超臨界流体とモディファイヤーを併せた総流量の１〜５０％が好ましく、特に２〜３０％が好ましい。
【００２４】
上記超臨界抽出により、褐藻類から褐藻類由来機能性成分を含む抽出物が抽出される。褐藻類の成熟体から抽出される抽出物には褐藻類由来機能性成分のうち、例えば、フコキサンチンが抽出物１ｇあたり０.５〜１００μｇ程度、フコステロールが抽出物１ｇあたり０.１〜２.５ｍｇ程度含有され、オキナワモズクの盤状体から抽出される抽出物には褐藻類由来機能成分のうち、例えば、フコキサンチンが抽出物１ｇあたり１０〜２０６０μｇ程度、フコステロールが抽出物１ｇあたり１.０〜５.０ｍｇ程度含有されている。また、この抽出物は、従来法と比べてクロロフィル等の夾雑物が少ないものである。更に、この抽出物からクロマトグラフィー、ＨＰＬＣ等の一般的な精製方法で褐藻類由来機能性成分を分離・精製してもよい。
【００２５】
斯くして得られる褐藻類由来機能性成分は上記したコレステロール低減作用や血栓予防作用を期待した各種健康食品や、抗腫瘍効果、神経細胞保護効果、血糖値上昇抑制効果等を目的とした医薬品等の用途に使用することができる。
【実施例】
【００２６】
以下に、褐藻類由来機能性成分の抽出に関する実施例を示すが、本発明はこれら実施例に何ら限定されるものではない。
【００２７】
実 施 例 １
オキナワモズク成熟体の超臨界流体抽出（１）：
（１）試料
オキナワモズク（Ｃｌａｄｏｓｉｐｈｏｎ ｏｋａｍｕｒａｎｕｓ）の成熟体を凍結乾燥後、冷凍保存し、ミル粉砕したもの（粉末状）を試料とした。
【００２８】
（２）超臨界流体抽出
１検体当たり試料約１ｇ（乾燥重）を内容積１０ｍｌの抽出容器に入れ、超臨界抽出システム（ＳＣＦ ｓｅｒｉｅｓ：日本分光（株）製）の所定の位置に設置後、カラムオーブンが４０℃に達した後、設定圧力（１０−４５ＭＰａ）で超臨界二酸化炭素とモディファイヤーを２ｍｌ／分の総流量として２０分間（総溶媒量４０ｍｌ）抽出を行い抽出物を得た。なお、モディファイヤーとしてはエタノールを用い、その流量は０.１ｍｌ／分とした。
【００２９】
（３）フコキサンチンの測定
上記（２）で得られた抽出物をロータリーエバポレーターで乾固・濃縮後、エタノールに溶解させてＨＰＬＣ分析の試料とし、それを以下の条件で定量した。表１に超臨界抽出時の圧力条件を１０、３０または４５ＭＰａとして抽出して得られた抽出物中のフコキサンチン量を示した。
＜ＨＰＬＣ分析条件＞
カラム：Ｗａｋｏｓｉｌ−II ５Ｃ１８ ＨＧ （φ４.６×１５０ｍｍ）
溶出液Ａ：水
溶出液Ｂ：アセトニトリル
流速：１.０ｍｌ／分
検出波長：４４０ｎｍ
【００３０】
【表１】
【００３１】
（４）フコステロールの測定
上記（２）で得られた抽出物をロータリーエバポレーターで乾固・濃縮後、ＧＣ−ＭＳ分析の試料とし、それを以下の条件で定量した。表２に超臨界抽出時の圧力条件を１０、３０または４５ＭＰａとして抽出して得られた抽出物中のフコステロール量を示した。
＜ＧＣ−ＭＳ分析条件＞
カラム：ＤＢ−５ＭＢ （φ０.２５×３０ｍ、０.２５μｍ ｆｉｌｍ）
カラム温度：２５０℃（２分）−（３.０℃／分で昇温）−３２０℃（３分）
イオン源温度：２００℃
インターフェース温度：３２０℃
イオン化法：ＥＩ
検出モード：ＳＩＭ
【００３２】
【表２】
【００３３】
（５）結果
上記結果より、フコキサンチンもフコステロールも抽出圧力が４５ＭＰａの場合に最も多く抽出されることが分かった。
【００３４】
実 施 例 ２
オキナワモズク成熟体の超臨界流体抽出（２）：
実施例１の超臨界流体抽出条件のうち抽出圧力を３０ＭＰａに設定し、温度条件を３０、４０または７５℃として抽出した。得られた抽出物について実施例１と同様にフコキサンチン量およびフコステロール量を測定した。その結果を表３に示した。
【００３５】
【表３】
【００３６】
上記結果より、フコキサンチンもフコステロールも抽出温度が７５℃の場合に最も多く抽出されることが分かった。
【００３７】
実 施 例 ３
超臨界流体抽出におけるモディファイヤーの効果（１）：
（１）試料
実施例１と同様の試料を抽出に供した。
【００３８】
（２）超臨界流体抽出
１検体当たり試料約１ｇ（乾燥重）を内容積１０ｍｌの抽出容器に入れ、超臨界抽出システム（ＳＣＦ ｓｅｒｉｅｓ：日本分光（株）製）の所定の位置に設置後、カラムオーブンが４０℃に達した後、圧力３０ＭＰａで超臨界二酸化炭素とモディファイヤー（エタノール）を２ｍｌ／分の総流量とし、モディファイヤーの流量を総流量の０、２、５、１０または３０％として２０分間抽出を行い抽出物を得た。
【００３９】
（３）測定
モディファイヤー流量を総流量の０、２、５、１０または３０％として抽出して得られた抽出物について実施例１と同様にフコキサンチン量およびフコステロール量を測定した。その結果を表４に示した。
【００４０】
【表４】
【００４１】
上記結果より超臨界流体抽出において、超臨界流体と共にモディファイヤーを用いると、その流量が総流量の２〜１０％の場合に最も多くフコキサンチンおよびフコステロールが抽出されることが分かった。
【００４２】
実 施 例 ４
超臨界流体抽出におけるモディファイヤーの効果（２）：
実施例３の超臨界流体抽出条件のうちモディファイヤーの流量を５％に固定し、モディファイヤーをエタノール単独から水とエタノールの混液を用い、その比率をエタノール濃度５０、７０、９０または１００％として抽出した。得られた抽出物について実施例１と同様にフコキサンチン量およびフコステロール量を測定した。その結果を表５に示した。
【００４３】
【表５】
【００４４】
上記結果より、モディファイヤーに含まれるエタノールの濃度が高いほどフコキサンチンおよびフコステロールが多く抽出されることが分かった。
【００４５】
実 施 例 ５
オキナワモズク成熟体の超臨界流体抽出（３）：
（１）試料
実施例１と同様の試料を抽出に供した。
【００４６】
（２）超臨界流体抽出
１検体当たり試料約１ｇ（乾燥重）を内容積１０ｍｌの抽出容器に入れ、超臨界抽出システム（ＳＣＦ ｓｅｒｉｅｓ：日本分光（株）製）の所定の位置に設置後、超臨界流体抽出の条件を、実施例１〜４の結果から、抽出圧力を４５ＭＰａ、抽出温度を７５℃、モディファイヤーとして１００％エタノールを総流量(２ｍｌ／分)の５％(０.１ｍｌ／分)に設定して２０分間抽出を行った。
【００４７】
（３）測定
上記で抽出して得られた抽出物について実施例１と同様にフコキサンチン量およびフコステロール量を測定した。また、抽出物のクロロフィル量を分光光度計で６６５ｎｍにて測定した。なお、本測定では、クロロフィル量の測定結果を標品と比較しなかったため、クロロフィル量をクロロフィル／フコキサンチンとして示した。
【００４８】
比 較 例 １
オキナワモズク成熟体のエタノール抽出（１）：
実施例１と同様の試料約１ｇ（乾燥重）にエタノールを４０ｍｌ添加し、１分間攪拌した。その後に３０００回転／分で１０分間遠心分離し、１時間静置し、さらに１分間攪拌して上澄みを採取した。この上澄みから溶媒を留去し抽出物を得た。この抽出物についても実施例５と同様にフコキサンチン量、フコステロール量およびクロロフィル量を測定した。
【００４９】
比 較 例 ２
オキナワモズク成熟体のエタノール抽出（２）：
実施例１と同様の試料約１ｇ（乾燥重）にエタノールを４０ｍｌ添加し、攪拌した後に２４時間静置し上澄みを採取した。この上澄みから溶媒を留去し抽出物を得た。この抽出物についても実施例５と同様にフコキサンチン量、フコステロール量およびクロロフィル量を測定した。
【００５０】
試 験 例 １
全抽出物中におけるフコキサンチン量の比較：
実施例５（超臨界流体抽出法）、比較例１（従来法）および比較例２（従来法）で測定されたフコキサンチン量、フコステロール量およびクロロフィル量（クロロフィル／フコキサンチン）を表６に示した。
【００５１】
【表６】
【００５２】
上記結果より、超臨界流体抽出法（実施例５）は、従来法（比較例１および２）よりも短時間かつ簡便な抽出にもかかわらず、フコキサンチンおよびフコステロールが多く得られた。また、超臨界流体抽出法はフコキサンチンと、フコキサンチンと共に抽出されるクロロフィルの比率が従来法と比較して低く、夾雑物の抽出も少ないことが分かった。
【００５３】
実 施 例 ６
オキナワモズク盤状体の超臨界流体抽出（１）：
（１）試料
オキナワモズク（Ｃｌａｄｏｓｉｐｈｏｎ ｏｋａｍｕｒａｎｕｓ）の盤状体を凍結乾燥後、冷凍保存し、ミル粉砕したもの（粉末状）を試料とした。
【００５４】
（２）超臨界流体抽出
１検体当たり試料約１ｇ（乾燥重）を内容積１０ｍｌの抽出容器に入れ、超臨界抽出システム（ＳＣＦ ｓｅｒｉｅｓ：日本分光（株）製）の所定の位置に設置後、カラムオーブンが４０℃に達した後、設定圧力（１０−４５ＭＰａ）で超臨界二酸化炭素とモディファイヤーを２ｍｌ／分の総流量として２０分間（総溶媒量４０ｍｌ）抽出を行い抽出物を得た。なお、モディファイヤーとしてはエタノールを用い、その流量は０.１ｍｌ／分とした。
【００５５】
（３）フコキサンチンの測定
上記（２）で得られた抽出物をロータリーエバポレーターで乾固・濃縮後、エタノールに溶解させてＨＰＬＣ分析の試料とし、それを以下の条件で定量した。表７に超臨界抽出時の圧力条件を１０、３０または４５ＭＰａとして抽出して得られた抽出物中のフコキサンチン量を示した。
＜ＨＰＬＣ分析条件＞
カラム：Ｗａｋｏｓｉｌ−II ５Ｃ１８ ＨＧ （φ４.６×１５０ｍｍ）
溶出液Ａ：水
溶出液Ｂ：アセトニトリル
流速：１.０ｍｌ／分
検出波長：４４０ｎｍ
【００５６】
【表７】
【００５７】
（４）フコステロールの測定
上記（２）で得られた抽出物をロータリーエバポレーターで乾固・濃縮後、ＧＣ−ＭＳ分析の試料とし、それを以下の条件で定量した。表８に超臨界抽出時の圧力条件を１０、３０または４５ＭＰａとして抽出して得られた抽出物中のフコステロール量を示した。
＜ＧＣ−ＭＳ分析条件＞
カラム：ＤＢ−５ＭＢ （φ０.２５×３０ｍ、０.２５μｍ ｆｉｌｍ）
カラム温度：２５０℃（２分）−（３.０℃／分で昇温）−３２０℃（３分）
イオン源温度：２００℃
インターフェース温度：３２０℃
イオン化法：ＥＩ
検出モード：ＳＩＭ
【００５８】
【表８】
【００５９】
（５）結果
上記結果より、オキナワモズクの盤状体からも成熟体と同様にフコキサンチンおよびフコキサンチンが抽出されることが明らかとなった。また、フコキサンチンは抽出圧力が４５ＭＰａの場合およびフコステロールは抽出圧力が３０ＭＰａの場合に最も多く抽出されることが分かった。
【００６０】
実 施 例 ７
オキナワモズク盤状体の超臨界流体抽出（２）：
実施例６の超臨界流体抽出条件のうち抽出圧力を３０ＭＰａに設定し、温度条件を３０、４０または７５℃として抽出した。得られた抽出物について実施例６と同様にフコキサンチン量およびフコステロール量を測定した。その結果を表９に示した。
【００６１】
【表９】
【００６２】
上記結果より、フコキサンチンもフコステロールも抽出温度が７５℃の場合に最も多く抽出されることが分かった。
【００６３】
実 施 例 ８
超臨界流体抽出におけるモディファイヤーの効果（４）：
（１）試料
実施例６と同様の試料を抽出に供した。
【００６４】
（２）超臨界流体抽出
１検体当たり試料約１ｇ（乾燥重）を内容積１０ｍｌの抽出容器に入れ、超臨界抽出システム（ＳＣＦ ｓｅｒｉｅｓ：日本分光（株）製）の所定の位置に設置後、カラムオーブンが４０℃に達した後、圧力３０ＭＰａで超臨界二酸化炭素とモディファイヤー（エタノール）を２ｍｌ／分の総流量とし、モディファイヤーの流量を総流量の０、２、５または３０％として２０分間抽出を行い抽出物を得た。
【００６５】
（３）測定
モディファイヤー流量を総流量の０、２、５または３０％として抽出して得られた抽出物について実施例６と同様にフコキサンチン量およびフコステロール量を測定した。その結果を表１０に示した。
【００６６】
【表１０】
【００６７】
上記結果より超臨界流体抽出において、超臨界流体と共にモディファイヤーを用いると、その流量が総流量の２〜３０％の場合に最も多くフコキサンチンおよびフコステロールが抽出されることが分かった。
【００６８】
実 施 例 ９
超臨界流体抽出におけるモディファイヤーの効果（５）：
実施例８の超臨界流体抽出条件のうちモディファイヤーの流量を５％に固定し、モディファイヤーをエタノール単独から水とエタノールの混液を用い、その比率をエタノール濃度５０、９０または１００％として抽出した。得られた抽出物について実施例６と同様にフコキサンチン量およびフコステロール量を測定した。その結果を表１１に示した。
【００６９】
【表１１】
【００７０】
上記結果より、モディファイヤーに含まれるエタノールの濃度が高いほどフコキサンチンおよびフコステロールが多く抽出されることが分かった。
【００７１】
実 施 例 １０
各種褐藻類からの超臨界流体抽出：
アラメ（Ｅｉｓｅｎｉａ ｂｉｃｙｃｌｉｓ （Ｋｊｅｌｌｍａｎ） Ｓｅｔｃｈｅｌｌ）、コンブ（種類不明）、ヒジキ（Ｈｉｚｉｋｉａ ｆｕｓｉｆｏｒｍｉｓ）、ホンダワラ（Ｓａｒｇａｓｓｕｍ ｆｕｌｖｅｌｌｕｍ Ｃ． Ａｇａｒｄｈ）またはワカメ（Ｕｎｄａｒｉａ ｐｉｎｎａｔｉｆｉｄａ）の成熟体の乾物（市販品）を、それぞれミル粉砕し、小片状あるいは粉末状としたものを試料とし、それらについて実施例６と同様に超臨界流体抽出を行った。得られた抽出物について実施例６と同様にフコキサンチン量およびフコステロール量を測定した。その結果を表１２に示した。
【００７２】
【表１２】
【００７３】
上記結果より、何れの褐藻類の成熟体からもフコキサンチンおよびフコステロールが抽出されることが明らかになった。
【産業上の利用可能性】
【００７４】
本発明抽出法によれば、褐藻類から効率的に短時間でフコキサンチン、フコステロール等の褐藻類由来機能性成分を抽出することができる。
【００７５】
従って、本発明抽出法で抽出された褐藻類由来機能性成分は、健康食品、医薬品等に好適に用いることができる。
以 上
【技術分野】
【０００１】
本発明は、海洋植物資源から褐藻類由来機能性成分を抽出するための方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
褐藻類はその有用性が認められているカロテノイドの１種であるフコキサンチンやステロールの１種であるフコステロール等の褐藻類由来機能性成分を有している。
【０００３】
上記褐藻類由来機能性成分のうち、フコキサンチンは以下の構造を有する既知の物質であり、その効果としては体内摂取による抗腫瘍効果（特許文献１）や神経細胞保護効果（特許文献２）、最近では血糖値上昇抑制効果（特許文献３）等が報告されている。
【０００４】
【化１】
【０００５】
上記のように、フコキサンチンは体内摂取により効果が得られるため、フコキサンチンの抽出溶媒は人体に無害なものを用いることが望ましい。しかし、上記報告で用いられているフコキサンチンはいずれも有機溶媒により抽出されている。そのため、フコキサンチンを精製する前の抽出の段階で、褐藻類からエタノールまたは含水エタノールを用いる技術（特許文献４および特許文献５）も報告されている。
【０００６】
しかしながら、溶媒の留去や抽出効率の面から、その抽出工程や使用する溶媒量は出来るだけ少ないことが望ましく、上記技術よりもさらなる工程の省略や溶媒の少量化が必要であった。
【０００７】
また、フコキサンチンの活性成分は光によって分解されやすいので、その抽出は遮光下で、迅速に行うのが望ましい。しかしながら、従来法では遮光下という条件やいくつかの抽出工程を経なければならないという煩雑さ、長時間の浸漬による抽出等、フコキサンチンの抽出までに時間を要するという問題があった。
【０００８】
一方、上記褐藻類由来機能性成分のうち、フコステロールは以下の構造を有する既知の物質であり、その効果としては体内摂取による抗動脈硬化作用（特許文献６）やコレステロール低減作用、血栓予防作用等が一般的に提唱されている。そしてフコステロールは副作用のない天然物由来の機能性食品や健康食品として利用されている。
【０００９】
【化２】
【００１０】
しかしながら、フコステロールの抽出にはヘキサン等の脂肪族炭化水素類や酢酸エチル等のエステル類、アセトン等のケトン類、またはこれらの混液等の有機溶媒が用いられ、さらに抽出までに１〜２０日間を要するという、多段式の溶媒抽出法により行われているのが現状であり、このフコステロールについても上記フコキサンチンと同様に、抽出溶媒や抽出時間の問題があった。
【特許文献１】特開平１０−１５８１５６号公報
【特許文献２】特開２００１−３３５４８０号公報
【特許文献３】特開２００７−２９７３７０号公報
【特許文献４】特開２００４−７５６３４号公報
【特許文献５】特開２００４−３５５２８号公報
【特許文献６】特開２００５−１０４８８７号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
従って、本発明は、上記した従来法における課題を解決し、褐藻類に含まれる有用成分であるフコキサンチン、フコステロール等の褐藻類由来機能性成分を効率的に、さらに、飛躍的に時間を短縮して抽出する方法を提供することを課題とするものである。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者らは上記課題を解決するために鋭意研究をした結果、超臨界流体を利用することにより褐藻類から褐藻類由来機能性成分を効率的に抽出できることを見出し、本発明を完成させた。
【００１３】
すなわち、本発明は褐藻類を超臨界流体で抽出することを特徴とする褐藻類由来機能性成分の抽出方法および前記抽出方法により得られる褐藻類由来機能性成分である。
【発明の効果】
【００１４】
本発明の褐藻類由来機能性成分の抽出方法は、抽出時間を従来法と比較して大幅に短縮できるため、また、その簡便さから試料の露光時間、即ち、褐藻類由来機能性成分の光による劣化を最小限に抑えることができる。
【００１５】
また、上記抽出方法は、従来法には見られない、抽出時に夾雑物であるクロロフィルの混入が比較的少ないという特徴があり、その後の分離・精製に利用しやすい。
【００１６】
従って、本発明の褐藻類由来機能性成分の抽出方法で抽出された褐藻類由来機能性成分は、健康食品や医薬品に好適に用いることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
本明細書において、褐藻類由来機能性成分とは、褐藻類に含まれ、カロテノイドであるフコキサンチン等の色素、フコステロール等の脂溶性成分、多糖類等のことをいい、好ましくはフコキサンチンおよびフコステロールのことをいう。なお、褐藻類由来機能性成分は常法に従って測定することができ、例えば、フコキサンチンであればＨＰＬＣで測定でき、フコステロールであればＧＣ−ＭＳで測定できる。
【００１８】
本発明の褐藻類由来機能性成分の抽出方法（以下、「本発明抽出法」という）は、褐藻類を抽出原料とし、これを超臨界流体を抽出溶媒とする超臨界流体抽出により行われるものである。
【００１９】
本発明抽出法において、抽出原料として用いられる褐藻類としては褐藻類由来機能性成分が含まれているものであれば広く採用することができる。このような褐藻類としては、例えば、ナガマツモ目（Ｃｈｏｒｄａｃｅａｅ）、ヒバマタ目（Ｆｕｃａｌｅｓ）、コンブ目（Ｌａｍｉｎａｒｉａｌｅｓ）等に属する褐藻類等が挙げられる。これら褐藻類の中でも、ナガマツモ目のナガマツモ科（Ｃｈｏｒｄａｃｅａｅ）またはモズク科（Ｓｐｅｒｍａｔｏｃｈｎａｃｅａｅ）、ヒバマタ目のホンダワラ科（Ｓａｒｇａｓｓａｃｅａｅ）、コンブ目のコンブ科（Ｌａｍｉｎａｒｉａｃｅａｅ）またはチガイソ科（Ａｌａｒｉａｃｅａｅ）等に属する褐藻類が好ましく、前記科に属する褐藻類の中でも、ナガマツモ科のオキナワモズク（Ｃｌａｄｏｓｉｐｈｏｎ ｏｋａｍｕｒａｎｕｓ）またはモズク科のモズク（Ｎｅｍａｃｙｓｔｕｓ ｄｅｃｉｐｉｅｎｓ）、ホンダワラ科のホンダワラ（Ｓａｒｇａｓｓｕｍ ｆｕｌｖｅｌｌｕｍ Ｃ．Ａｇａｒｄｈ）またはヒジキ（Ｈｉｚｉｋｉａ ｆｕｓｉｆｏｒｍｉｓ）、コンブ科のアラメ（Ｅｉｓｅｎｉａ ｂｉｃｙｃｌｉｓ （Ｋｊｅｌｌｍａｎ） Ｓｅｔｃｈｅｌｌ）、マコンブ（Ｌａｍｉｎａｒｉａ ｊａｐｏｎｉｃａ）、オニコンブ（Ｌａｍｉｎａｒｉａ ｄｉａｂｏｌｉｃａ）、リシリコンブ（Ｌａｍｉｎａｒｉａ ｏｃｈｏｔｅｎｓｉｓ）、ホソメコンブ（Ｌａｍｉｎａｒｉａ ｒｅｌｉｇｉｏｓａ）、ミツイシコンブ（Ｌａｍｉｎａｒｉａ ａｎｇｕｓｔａｔａ）、ナガコンブ（Ｌａｍｉｎａｒｉａ ｌｏｎｇｉｓｓｉｍａ）またはガゴメコンブ（Ｋｊｅｌｌｍａｎｉｅｌｌａ ｃｒａｓｓｉｉｆｏｌｉａ）、チガイソ科のワカメ（Ｕｎｄａｒｉａ ｐｉｎｎａｔｉｆｉｄａ）が好ましく、特にナガマツモ科のオキナワモズクは褐藻類由来機能性成分を高濃度で含有するためより好ましい。また、抽出原料となる褐藻類は、成熟体から遊走子の放出、遊走子から盤状体または糸状体の発生、盤状体または糸状体の着床による直立体の形成、直立体から成熟体への成長という生育サイクルのうちの、盤状体または糸状体〜成熟体の何れの成長段階のものであってもよいが、褐藻類由来機能性成分を豊富に含むことから盤状体または糸状体が好ましい。なお、盤状体または糸状体は、上記生育サイクルのうちの遊走子と直立体の中間に位置するものであり、別名で呼ばれることもがあるが、本発明においてはこれらの何れも含む。更に、これら抽出原料は、後記する超臨界流体による抽出前に必要に応じて適度な大きさに粉砕しておくことが好ましく、抽出に用いられる容器内の密度をできるだけ小さくするために顆粒状、特に粉末状としておくことが好ましい。
【００２０】
また、本発明抽出法において、抽出溶媒として用いられる超臨界流体としては、例えば、その圧力は高い方が好ましい傾向があるので、７.３８ＭＰａ以上、好ましくは１０ＭＰａ以上、特に好ましくは３０ＭＰａ以上、その温度が２５〜８０℃、好ましくは３０〜８０℃、特に好ましくは７０〜８０℃の超臨界状態の二酸化炭素等が挙げられる。
【００２１】
上記した褐藻類と超臨界流体を用いた褐藻類由来機能性成分の超臨界流体抽出は、超臨界流体を発生するためのポンプと、超臨界流体と褐藻類を接触させ、抽出を行うための容器、抽出液を貯留するための容器および系全体を昇温・保温するためのオーブン等を備える超臨界抽出装置で行われる。このような超臨界流体抽出装置としては各社から市販されている一般的なものを用いることができる。
【００２２】
超臨界流体抽出における超臨界流体の流量や抽出時間等の抽出条件は、容器の大きさ等により変化するので一概に言えないが、例えば、内容積１０ｍｌの容器であれば、流量は後記するモディファイヤーと併せて１〜２ｍｌ／分、抽出時間は５〜３０分が好ましく、５〜２０分がより好ましい。
【００２３】
また、上記超臨界流体抽出の際には、超臨界流体に、さらにモディファイヤーを加えることが好ましい。このようなモディファイヤーとしてはエタノールおよび／または水が挙げられ、エタノールおよび水が好ましく、エタノール単独がより好ましい。モディファイヤーとしてエタノールおよび水を用いる場合、エタノール濃度は１〜１００質量％（以下、単に「％」という）、好ましくは５０〜１００％である。このモディファイヤーを超臨界流体に加えることにより抽出効率が向上し、褐藻類由来機能性成分の収量が高くなる。また、モディファイヤーの量は上記超臨界流体とモディファイヤーを併せた総流量の１〜５０％が好ましく、特に２〜３０％が好ましい。
【００２４】
上記超臨界抽出により、褐藻類から褐藻類由来機能性成分を含む抽出物が抽出される。褐藻類の成熟体から抽出される抽出物には褐藻類由来機能性成分のうち、例えば、フコキサンチンが抽出物１ｇあたり０.５〜１００μｇ程度、フコステロールが抽出物１ｇあたり０.１〜２.５ｍｇ程度含有され、オキナワモズクの盤状体から抽出される抽出物には褐藻類由来機能成分のうち、例えば、フコキサンチンが抽出物１ｇあたり１０〜２０６０μｇ程度、フコステロールが抽出物１ｇあたり１.０〜５.０ｍｇ程度含有されている。また、この抽出物は、従来法と比べてクロロフィル等の夾雑物が少ないものである。更に、この抽出物からクロマトグラフィー、ＨＰＬＣ等の一般的な精製方法で褐藻類由来機能性成分を分離・精製してもよい。
【００２５】
斯くして得られる褐藻類由来機能性成分は上記したコレステロール低減作用や血栓予防作用を期待した各種健康食品や、抗腫瘍効果、神経細胞保護効果、血糖値上昇抑制効果等を目的とした医薬品等の用途に使用することができる。
【実施例】
【００２６】
以下に、褐藻類由来機能性成分の抽出に関する実施例を示すが、本発明はこれら実施例に何ら限定されるものではない。
【００２７】
実 施 例 １
オキナワモズク成熟体の超臨界流体抽出（１）：
（１）試料
オキナワモズク（Ｃｌａｄｏｓｉｐｈｏｎ ｏｋａｍｕｒａｎｕｓ）の成熟体を凍結乾燥後、冷凍保存し、ミル粉砕したもの（粉末状）を試料とした。
【００２８】
（２）超臨界流体抽出
１検体当たり試料約１ｇ（乾燥重）を内容積１０ｍｌの抽出容器に入れ、超臨界抽出システム（ＳＣＦ ｓｅｒｉｅｓ：日本分光（株）製）の所定の位置に設置後、カラムオーブンが４０℃に達した後、設定圧力（１０−４５ＭＰａ）で超臨界二酸化炭素とモディファイヤーを２ｍｌ／分の総流量として２０分間（総溶媒量４０ｍｌ）抽出を行い抽出物を得た。なお、モディファイヤーとしてはエタノールを用い、その流量は０.１ｍｌ／分とした。
【００２９】
（３）フコキサンチンの測定
上記（２）で得られた抽出物をロータリーエバポレーターで乾固・濃縮後、エタノールに溶解させてＨＰＬＣ分析の試料とし、それを以下の条件で定量した。表１に超臨界抽出時の圧力条件を１０、３０または４５ＭＰａとして抽出して得られた抽出物中のフコキサンチン量を示した。
＜ＨＰＬＣ分析条件＞
カラム：Ｗａｋｏｓｉｌ−II ５Ｃ１８ ＨＧ （φ４.６×１５０ｍｍ）
溶出液Ａ：水
溶出液Ｂ：アセトニトリル
流速：１.０ｍｌ／分
検出波長：４４０ｎｍ
【００３０】
【表１】
【００３１】
（４）フコステロールの測定
上記（２）で得られた抽出物をロータリーエバポレーターで乾固・濃縮後、ＧＣ−ＭＳ分析の試料とし、それを以下の条件で定量した。表２に超臨界抽出時の圧力条件を１０、３０または４５ＭＰａとして抽出して得られた抽出物中のフコステロール量を示した。
＜ＧＣ−ＭＳ分析条件＞
カラム：ＤＢ−５ＭＢ （φ０.２５×３０ｍ、０.２５μｍ ｆｉｌｍ）
カラム温度：２５０℃（２分）−（３.０℃／分で昇温）−３２０℃（３分）
イオン源温度：２００℃
インターフェース温度：３２０℃
イオン化法：ＥＩ
検出モード：ＳＩＭ
【００３２】
【表２】
【００３３】
（５）結果
上記結果より、フコキサンチンもフコステロールも抽出圧力が４５ＭＰａの場合に最も多く抽出されることが分かった。
【００３４】
実 施 例 ２
オキナワモズク成熟体の超臨界流体抽出（２）：
実施例１の超臨界流体抽出条件のうち抽出圧力を３０ＭＰａに設定し、温度条件を３０、４０または７５℃として抽出した。得られた抽出物について実施例１と同様にフコキサンチン量およびフコステロール量を測定した。その結果を表３に示した。
【００３５】
【表３】
【００３６】
上記結果より、フコキサンチンもフコステロールも抽出温度が７５℃の場合に最も多く抽出されることが分かった。
【００３７】
実 施 例 ３
超臨界流体抽出におけるモディファイヤーの効果（１）：
（１）試料
実施例１と同様の試料を抽出に供した。
【００３８】
（２）超臨界流体抽出
１検体当たり試料約１ｇ（乾燥重）を内容積１０ｍｌの抽出容器に入れ、超臨界抽出システム（ＳＣＦ ｓｅｒｉｅｓ：日本分光（株）製）の所定の位置に設置後、カラムオーブンが４０℃に達した後、圧力３０ＭＰａで超臨界二酸化炭素とモディファイヤー（エタノール）を２ｍｌ／分の総流量とし、モディファイヤーの流量を総流量の０、２、５、１０または３０％として２０分間抽出を行い抽出物を得た。
【００３９】
（３）測定
モディファイヤー流量を総流量の０、２、５、１０または３０％として抽出して得られた抽出物について実施例１と同様にフコキサンチン量およびフコステロール量を測定した。その結果を表４に示した。
【００４０】
【表４】
【００４１】
上記結果より超臨界流体抽出において、超臨界流体と共にモディファイヤーを用いると、その流量が総流量の２〜１０％の場合に最も多くフコキサンチンおよびフコステロールが抽出されることが分かった。
【００４２】
実 施 例 ４
超臨界流体抽出におけるモディファイヤーの効果（２）：
実施例３の超臨界流体抽出条件のうちモディファイヤーの流量を５％に固定し、モディファイヤーをエタノール単独から水とエタノールの混液を用い、その比率をエタノール濃度５０、７０、９０または１００％として抽出した。得られた抽出物について実施例１と同様にフコキサンチン量およびフコステロール量を測定した。その結果を表５に示した。
【００４３】
【表５】
【００４４】
上記結果より、モディファイヤーに含まれるエタノールの濃度が高いほどフコキサンチンおよびフコステロールが多く抽出されることが分かった。
【００４５】
実 施 例 ５
オキナワモズク成熟体の超臨界流体抽出（３）：
（１）試料
実施例１と同様の試料を抽出に供した。
【００４６】
（２）超臨界流体抽出
１検体当たり試料約１ｇ（乾燥重）を内容積１０ｍｌの抽出容器に入れ、超臨界抽出システム（ＳＣＦ ｓｅｒｉｅｓ：日本分光（株）製）の所定の位置に設置後、超臨界流体抽出の条件を、実施例１〜４の結果から、抽出圧力を４５ＭＰａ、抽出温度を７５℃、モディファイヤーとして１００％エタノールを総流量(２ｍｌ／分)の５％(０.１ｍｌ／分)に設定して２０分間抽出を行った。
【００４７】
（３）測定
上記で抽出して得られた抽出物について実施例１と同様にフコキサンチン量およびフコステロール量を測定した。また、抽出物のクロロフィル量を分光光度計で６６５ｎｍにて測定した。なお、本測定では、クロロフィル量の測定結果を標品と比較しなかったため、クロロフィル量をクロロフィル／フコキサンチンとして示した。
【００４８】
比 較 例 １
オキナワモズク成熟体のエタノール抽出（１）：
実施例１と同様の試料約１ｇ（乾燥重）にエタノールを４０ｍｌ添加し、１分間攪拌した。その後に３０００回転／分で１０分間遠心分離し、１時間静置し、さらに１分間攪拌して上澄みを採取した。この上澄みから溶媒を留去し抽出物を得た。この抽出物についても実施例５と同様にフコキサンチン量、フコステロール量およびクロロフィル量を測定した。
【００４９】
比 較 例 ２
オキナワモズク成熟体のエタノール抽出（２）：
実施例１と同様の試料約１ｇ（乾燥重）にエタノールを４０ｍｌ添加し、攪拌した後に２４時間静置し上澄みを採取した。この上澄みから溶媒を留去し抽出物を得た。この抽出物についても実施例５と同様にフコキサンチン量、フコステロール量およびクロロフィル量を測定した。
【００５０】
試 験 例 １
全抽出物中におけるフコキサンチン量の比較：
実施例５（超臨界流体抽出法）、比較例１（従来法）および比較例２（従来法）で測定されたフコキサンチン量、フコステロール量およびクロロフィル量（クロロフィル／フコキサンチン）を表６に示した。
【００５１】
【表６】
【００５２】
上記結果より、超臨界流体抽出法（実施例５）は、従来法（比較例１および２）よりも短時間かつ簡便な抽出にもかかわらず、フコキサンチンおよびフコステロールが多く得られた。また、超臨界流体抽出法はフコキサンチンと、フコキサンチンと共に抽出されるクロロフィルの比率が従来法と比較して低く、夾雑物の抽出も少ないことが分かった。
【００５３】
実 施 例 ６
オキナワモズク盤状体の超臨界流体抽出（１）：
（１）試料
オキナワモズク（Ｃｌａｄｏｓｉｐｈｏｎ ｏｋａｍｕｒａｎｕｓ）の盤状体を凍結乾燥後、冷凍保存し、ミル粉砕したもの（粉末状）を試料とした。
【００５４】
（２）超臨界流体抽出
１検体当たり試料約１ｇ（乾燥重）を内容積１０ｍｌの抽出容器に入れ、超臨界抽出システム（ＳＣＦ ｓｅｒｉｅｓ：日本分光（株）製）の所定の位置に設置後、カラムオーブンが４０℃に達した後、設定圧力（１０−４５ＭＰａ）で超臨界二酸化炭素とモディファイヤーを２ｍｌ／分の総流量として２０分間（総溶媒量４０ｍｌ）抽出を行い抽出物を得た。なお、モディファイヤーとしてはエタノールを用い、その流量は０.１ｍｌ／分とした。
【００５５】
（３）フコキサンチンの測定
上記（２）で得られた抽出物をロータリーエバポレーターで乾固・濃縮後、エタノールに溶解させてＨＰＬＣ分析の試料とし、それを以下の条件で定量した。表７に超臨界抽出時の圧力条件を１０、３０または４５ＭＰａとして抽出して得られた抽出物中のフコキサンチン量を示した。
＜ＨＰＬＣ分析条件＞
カラム：Ｗａｋｏｓｉｌ−II ５Ｃ１８ ＨＧ （φ４.６×１５０ｍｍ）
溶出液Ａ：水
溶出液Ｂ：アセトニトリル
流速：１.０ｍｌ／分
検出波長：４４０ｎｍ
【００５６】
【表７】
【００５７】
（４）フコステロールの測定
上記（２）で得られた抽出物をロータリーエバポレーターで乾固・濃縮後、ＧＣ−ＭＳ分析の試料とし、それを以下の条件で定量した。表８に超臨界抽出時の圧力条件を１０、３０または４５ＭＰａとして抽出して得られた抽出物中のフコステロール量を示した。
＜ＧＣ−ＭＳ分析条件＞
カラム：ＤＢ−５ＭＢ （φ０.２５×３０ｍ、０.２５μｍ ｆｉｌｍ）
カラム温度：２５０℃（２分）−（３.０℃／分で昇温）−３２０℃（３分）
イオン源温度：２００℃
インターフェース温度：３２０℃
イオン化法：ＥＩ
検出モード：ＳＩＭ
【００５８】
【表８】
【００５９】
（５）結果
上記結果より、オキナワモズクの盤状体からも成熟体と同様にフコキサンチンおよびフコキサンチンが抽出されることが明らかとなった。また、フコキサンチンは抽出圧力が４５ＭＰａの場合およびフコステロールは抽出圧力が３０ＭＰａの場合に最も多く抽出されることが分かった。
【００６０】
実 施 例 ７
オキナワモズク盤状体の超臨界流体抽出（２）：
実施例６の超臨界流体抽出条件のうち抽出圧力を３０ＭＰａに設定し、温度条件を３０、４０または７５℃として抽出した。得られた抽出物について実施例６と同様にフコキサンチン量およびフコステロール量を測定した。その結果を表９に示した。
【００６１】
【表９】
【００６２】
上記結果より、フコキサンチンもフコステロールも抽出温度が７５℃の場合に最も多く抽出されることが分かった。
【００６３】
実 施 例 ８
超臨界流体抽出におけるモディファイヤーの効果（４）：
（１）試料
実施例６と同様の試料を抽出に供した。
【００６４】
（２）超臨界流体抽出
１検体当たり試料約１ｇ（乾燥重）を内容積１０ｍｌの抽出容器に入れ、超臨界抽出システム（ＳＣＦ ｓｅｒｉｅｓ：日本分光（株）製）の所定の位置に設置後、カラムオーブンが４０℃に達した後、圧力３０ＭＰａで超臨界二酸化炭素とモディファイヤー（エタノール）を２ｍｌ／分の総流量とし、モディファイヤーの流量を総流量の０、２、５または３０％として２０分間抽出を行い抽出物を得た。
【００６５】
（３）測定
モディファイヤー流量を総流量の０、２、５または３０％として抽出して得られた抽出物について実施例６と同様にフコキサンチン量およびフコステロール量を測定した。その結果を表１０に示した。
【００６６】
【表１０】
【００６７】
上記結果より超臨界流体抽出において、超臨界流体と共にモディファイヤーを用いると、その流量が総流量の２〜３０％の場合に最も多くフコキサンチンおよびフコステロールが抽出されることが分かった。
【００６８】
実 施 例 ９
超臨界流体抽出におけるモディファイヤーの効果（５）：
実施例８の超臨界流体抽出条件のうちモディファイヤーの流量を５％に固定し、モディファイヤーをエタノール単独から水とエタノールの混液を用い、その比率をエタノール濃度５０、９０または１００％として抽出した。得られた抽出物について実施例６と同様にフコキサンチン量およびフコステロール量を測定した。その結果を表１１に示した。
【００６９】
【表１１】
【００７０】
上記結果より、モディファイヤーに含まれるエタノールの濃度が高いほどフコキサンチンおよびフコステロールが多く抽出されることが分かった。
【００７１】
実 施 例 １０
各種褐藻類からの超臨界流体抽出：
アラメ（Ｅｉｓｅｎｉａ ｂｉｃｙｃｌｉｓ （Ｋｊｅｌｌｍａｎ） Ｓｅｔｃｈｅｌｌ）、コンブ（種類不明）、ヒジキ（Ｈｉｚｉｋｉａ ｆｕｓｉｆｏｒｍｉｓ）、ホンダワラ（Ｓａｒｇａｓｓｕｍ ｆｕｌｖｅｌｌｕｍ Ｃ． Ａｇａｒｄｈ）またはワカメ（Ｕｎｄａｒｉａ ｐｉｎｎａｔｉｆｉｄａ）の成熟体の乾物（市販品）を、それぞれミル粉砕し、小片状あるいは粉末状としたものを試料とし、それらについて実施例６と同様に超臨界流体抽出を行った。得られた抽出物について実施例６と同様にフコキサンチン量およびフコステロール量を測定した。その結果を表１２に示した。
【００７２】
【表１２】
【００７３】
上記結果より、何れの褐藻類の成熟体からもフコキサンチンおよびフコステロールが抽出されることが明らかになった。
【産業上の利用可能性】
【００７４】
本発明抽出法によれば、褐藻類から効率的に短時間でフコキサンチン、フコステロール等の褐藻類由来機能性成分を抽出することができる。
【００７５】
従って、本発明抽出法で抽出された褐藻類由来機能性成分は、健康食品、医薬品等に好適に用いることができる。
以 上
【特許請求の範囲】
【請求項１】
褐藻類を超臨界流体で抽出することを特徴とする褐藻類由来機能性成分の抽出方法。
【請求項２】
褐藻類由来機能性成分が、フコキサンチンおよびフコステロールである請求項１記載の褐藻類由来機能性成分の抽出方法。
【請求項３】
褐藻類が、褐藻類の盤状体または糸状体である請求項１または２に記載の褐藻類由来機能性成分の抽出方法。
【請求項４】
超臨界流体に、更に、モディファイヤーとしてエタノールおよび／または水を添加するものである請求項１〜３の何れかに記載の褐藻類由来機能性成分の抽出方法。
【請求項５】
請求項１〜４の何れかに記載の抽出方法によって得られた褐藻類由来機能性成分。
【請求項１】
褐藻類を超臨界流体で抽出することを特徴とする褐藻類由来機能性成分の抽出方法。
【請求項２】
褐藻類由来機能性成分が、フコキサンチンおよびフコステロールである請求項１記載の褐藻類由来機能性成分の抽出方法。
【請求項３】
褐藻類が、褐藻類の盤状体または糸状体である請求項１または２に記載の褐藻類由来機能性成分の抽出方法。
【請求項４】
超臨界流体に、更に、モディファイヤーとしてエタノールおよび／または水を添加するものである請求項１〜３の何れかに記載の褐藻類由来機能性成分の抽出方法。
【請求項５】
請求項１〜４の何れかに記載の抽出方法によって得られた褐藻類由来機能性成分。
【公開番号】特開２００９−１９１００８（Ｐ２００９−１９１００８Ａ）
【公開日】平成２１年８月２７日（２００９．８．２７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００８−３２８９９（Ｐ２００８−３２８９９）
【出願日】平成２０年２月１４日（２００８．２．１４）
【出願人】（５０４４２６２１８）株式会社サウスプロダクト (15)
【Ｆターム（参考）】
【公開日】平成２１年８月２７日（２００９．８．２７）
【国際特許分類】
【出願日】平成２０年２月１４日（２００８．２．１４）
【出願人】（５０４４２６２１８）株式会社サウスプロダクト (15)
【Ｆターム（参考）】
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