非マルトース生成エキソアミラーゼ改変体
本発明者らは、非マルトース生成エキソアミラーゼ活性を有する親ポリペプチドから誘導可能であるＰＳ４改変体ポリペプチドであって、配列番号１に示したＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｉａエキソアミラーゼ配列の位置の番号付けを参照して、１２１、１６１、２２３、１４６、１５７、１５８、１９８、２２９、３０３、３０９、３１６、３５３、２６、７０、１４５、１８８、２７２、３３９からなる群から選択される１つ以上の位置でのアミノ酸突然変異を含むＰＳ４改変体ポリペプチドについて、記載する。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
非マルトース生成エキソアミラーゼ活性を有する親ポリペプチドから誘導可能であるＰＳ４改変体ポリペプチドであって、配列番号１に示したＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｉａエキソアミラーゼ配列の位置の番号付けを参照して１２１、１６１、２２３、１４６、１５７、１５８、１９８、２２９、３０３、３０６、３０９、３１６、３５３、２６、７０、１４５、１８８、２７２、３３９からなる群から選択される１つ以上の位置でのアミノ酸突然変異を含む、ＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項２】
前記ＰＳ４改変体ポリペプチドが、１２１Ｆ、１２１Ｙ、１２１Ｗ、１６１Ａ、２２３Ｅ、２２３Ｋ、１４６Ｇ、１４６Ｍ、１５７Ｍ、１５８Ｔ、１５８Ａ、１５８Ｓ、１９８Ｗ、１９８Ｆ、２２９Ｐ、３０３Ｅ、３０３Ｄ、３０６Ｔ、３０６Ｇ、３０９Ｐ、３１６Ｓ、３１６Ｐ、３１６Ｋ、３１６Ｑ、３５３Ｔ、２６Ｅ、７０Ｄ、１１４５Ｄ、１８８Ｓ、１８８Ｔ、１８８Ｈ、２７２Ｑ、３３９Ａ、３３９Ｅからなる群から選択されるアミノ酸突然変異を含む、請求項１に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項３】
前記ＰＳ４改変体ポリペプチドが、３３位、３４位、１２１位、１３４位、１４１位、１５７位、１６１位、１７８位、１７９位、２２３位、３０７位および３３４位からなる群から選択される１つ以上の突然変異であって、好ましくは３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１５７Ｌ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、２２３Ｅ、３０７Ｌおよび３３４Ｐからなる群から選択される突然変異をさらに含む、請求項１または請求項２に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項４】
前記ＰＳ４改変体ポリペプチドが、以下の突然変異：
（ａ）３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１４６Ｇ、１５７Ｌ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、２２３Ｅ、３０７Ｌおよび３３４Ｐ；
（ｂ）３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１５７Ｍ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、２２３Ｅ、３０７Ｌおよび３３４Ｐ；
（ｃ）３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１５７Ｌ、１５８Ｔ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、２２３Ｅ、３０７Ｌおよび３３４Ｐ；
（ｄ）３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１５７Ｌ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、１９８Ｗ、２２３Ｅ、３０７Ｌおよび３３４Ｐ；
（ｅ）３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１５７Ｌ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、２２３Ｅ、２２９Ｐ、３０７Ｌおよび３３４Ｐ；
（ｆ）３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１５７Ｌ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、１９８Ｗ、２２３Ｅ、２２９Ｐ、３０７Ｌおよび３３４Ｐ；
（ｇ）３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１５７Ｌ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、２２３Ｅ、３０３Ｅ、３０７Ｌおよび３３４Ｐ；
（ｈ）３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１５７Ｌ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、２２３Ｅ、３０３Ｄ、３０７Ｌおよび３３４Ｐ；
（ｉ）３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１５７Ｌ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、２２３Ｅ、３０６Ｔ、３０７Ｌおよび３３４Ｐ；
（ｊ）３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１５７Ｌ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、２２３Ｅ、３０６Ｇ、３０７Ｌおよび３３４Ｐ；
（ｋ）３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１５７Ｌ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、２２３Ｅ、３０９Ｐ、３０７Ｌおよび３３４Ｐ；
（ｌ）３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１５７Ｌ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、２２３Ｅ、３０７Ｌ、３１６Ｓ、および３３４Ｐ；
（ｍ）３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１５７Ｌ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、２２３Ｅ、３０７Ｌ、３１６Ｐおよび３３４Ｐ；
（ｎ）３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１５７Ｌ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、２２３Ｅ、３０７Ｌ、３３４Ｐおよび３５３Ｔ
（の各々を含む、請求項１、請求項２または請求項３のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項５】
前記ＰＳ４改変体ポリペプチドが、以下の突然変異：
（ａ）Ｎ２６Ｅ、Ｎ３３Ｙ、Ｄ３４Ｎ、Ｇ１２１Ｆ、Ｇ１３４Ｒ、Ａ１４１Ｐ、Ｉ１５７Ｌ、Ｌ１７８Ｆ、Ａ１７９Ｔ、Ｇ２２３Ａ、Ｈ３０７Ｌ、Ｓ３３４Ｐ；
（ｂ）Ｎ３３Ｙ、Ｄ３４Ｎ、Ｇ７０Ｄ、Ｇ１２１Ｆ、Ｇ１３４Ｒ、Ａ１４１Ｐ、Ｙ１４６Ｇ、Ｉ１５７Ｌ、Ｇ１５８Ｔ、Ｓ１６１Ａ、Ｌ１７８Ｆ、Ａ１７９Ｔ、Ｇ２２３Ｅ、Ｓ２２９Ｐ、Ｈ３０７Ｌ、Ａ３０９Ｐ、Ｓ３３４Ｐ；
（ｃ）Ｎ３３Ｙ、Ｄ３４Ｎ、Ｇ１２１Ｆ、Ｇ１３４Ｒ、Ａ１４１Ｐ、Ｎ１４５Ｄ、Ｙ１４６Ｇ、Ｉ１５７Ｌ、Ｇ１５８Ｔ、Ｓ１６１Ａ、Ｌ１７８Ｆ、Ａ１７９Ｔ、Ｇ２２３Ｅ、Ｓ２２９Ｐ、Ｈ３０７Ｌ、Ａ３０９Ｐ、Ｓ３３４Ｐ；
（ｄ）Ｎ３３Ｙ、Ｄ３４Ｎ、Ｇ７０Ｄ、Ｇ１２１Ｆ、Ｇ１３４Ｒ、Ａ１４１Ｐ、Ｎ１４５Ｄ、Ｙ１４６Ｇ、Ｉ１５７Ｌ、Ｇ１５８Ｔ、Ｓ１６１Ａ、Ｌ１７８Ｆ、Ａ１７９Ｔ、Ｇ１８８Ｈ、Ｇ２２３Ｅ、Ｓ２２９Ｐ、Ｈ３０７Ｌ、Ａ３０９Ｐ、Ｓ３３４Ｐ、Ｗ３３９Ｅ；
（ｅ）Ｎ３３Ｙ、Ｄ３４Ｎ、Ｇ７０Ｄ、Ｇ１２１Ｆ、Ｇ１３４Ｒ、Ａ１４１Ｐ、Ｎ１４５Ｄ、Ｙ１４６Ｇ、Ｉ１５７Ｌ、Ｇ１５８Ｔ、Ｓ１６１Ａ、Ｌ１７８Ｆ、Ａ１７９Ｔ、Ｇ１８８Ｓ、Ｇ２２３Ｅ、Ｓ２２９Ｐ、Ｈ３０７Ｌ、Ａ３０９Ｐ、Ｓ３３４Ｐ、Ｗ３３９Ｅ；
（ｆ）Ｎ３３Ｙ、Ｄ３４Ｎ、Ｇ１２１Ｆ、Ｇ１３４Ｒ、Ａ１４１Ｐ、Ｙ１４６Ｇ、Ｉ１５７Ｌ、Ｇ１５８Ｔ、Ｓ１６１Ａ、Ｌ１７８Ｆ、Ａ１７９Ｔ、Ｇ２２３Ｅ、Ｓ２２９Ｐ、Ｈ３０７Ｌ、Ａ３０９Ｐ、Ｓ３３４Ｐ、Ｗ３３９Ａ；
（ｇ）Ｎ３３Ｙ、Ｄ３４Ｎ、Ｇ１２１Ｆ、Ｇ１３４Ｒ、Ａ１４１Ｐ、Ｙ１４６Ｇ、Ｉ１５７Ｌ、Ｇ１５８Ｔ、Ｓ１６１Ａ、Ｌ１７８Ｆ、Ａ１７９Ｔ、Ｇ２２３Ｅ、Ｓ２２９Ｐ、Ｈ３０７Ｌ、Ａ３０９Ｐ、Ｓ３３４Ｐ、Ｗ３３９Ｅ
の各々を含む、請求項１〜請求項４のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項６】
前記ＰＳ４改変体ポリペプチドが、８７位における突然変異であって、好ましくは８７Ｓであり、より好ましくはＧ８７Ｓである突然変異をさらに含む、請求項１〜請求項５のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項７】
前記親ポリペプチドが、非マルトース生成エキソアミラーゼ、好ましくはグルカン１，４−α−マルトテトラヒドロラーゼ（ＥＣ３．２．１．６０）を含む、請求項１〜請求項６のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項８】
前記親ポリペプチドが、シュードモナス種、好ましくはＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｉａもしくはＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｔｕｚｅｒｉであるか、またはシュードモナス種から、好ましくはＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｉａもしくはＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｔｕｚｅｒｉから誘導可能である、請求項１〜請求項７のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項９】
前記親ポリペプチドが、配列番号１もしくは配列番号５に示した配列を有するＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｉａエキソアミラーゼ由来の非マルトース生成エキソアミラーゼである、請求項１〜請求項８のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項１０】
配列番号１または配列番号５と少なくとも７５％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項１〜請求項９のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項１１】
前記親ポリペプチドが、配列番号７もしくは配列番号１１に示した配列を有するＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｔｕｚｅｒｉ由来の非マルトース生成エキソアミラーゼである、請求項１〜請求項８のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項１２】
配列番号７または配列番号１１と少なくとも７５％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項１〜請求項８または請求項１１のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項１３】
本明細書、請求項または図面に記載の配列を含む、請求項１〜請求項１２のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項１４】
ＰＳａｃ−Ｄ３４（配列番号２）、ＰＳａｃ−Ｄ２０（配列番号３）、ＰＳａｃ−Ｄ１４（配列番号４）、ＰＳｔｕ−Ｄ３４（配列番号８）、ＰＳｔｕ−Ｄ２０（配列番号９）、ＰＳｔｕ−Ｄ１４（配列番号１０）、ｐＭＤ５５（配列番号１３）、ｐＭＤ９６（配列番号１４）、ＳＳＭ３８１（配列番号１５）、ＳＳＭ２７９ Ｂ１（配列番号１６）、ＳＳＭ２３７Ｐ２（配列番号１７）、配列番号１８、ＳＳＭ３２５Ｆ３（配列番号１９）、ｐＭＤ１２９（配列番号２０）、ＳＳＭ３４１Ａ９（配列番号２１）、ＳＳＭ３４１Ｇ１１（配列番号２２）、ＳＳＭ３５０Ｂ１１（配列番号２３）、ＳＳＭ３５０Ｃ１２（配列番号２４）、ＳＳＭ３３２Ｑ４（配列番号２５）、ＳＳＭ３６５Ｂ４（配列番号２６）、ＳＳＭ３６５Ｆ４（配列番号２７）およびＳＳＭ３６０Ｃ７（配列番号２８）、ＳＳＭ２１９Ｂ３、ＳＡＳ１４０１Ｌ１０、ＳＡＳ１３８７Ｄ１６ｂｆ、ｐＭＤ２３６、ｐＭＤ２３７ｂｆ、ＳＡＳ１３７９Ｏ１３およびＳＡＳ１３７９Ｏ９からなる群から選択される配列を含む、請求項１〜請求項１３のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項１５】
前記ＰＳ４改変体ポリペプチドが、同一条件下で試験した場合に前記親ポリペプチドもしくは野生型ポリペプチドと比較して高い熱安定性を有する、請求項１〜請求項１４のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項１６】
半減期（ｔ１／２）であって、好ましくは６０℃における半減期が、前記親ポリペプチドもしくは野生型ポリペプチドと比較して、１５％以上、好ましくは５０％以上、最も好ましくは１００％以上増加している、請求項１〜請求項１５のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項１７】
同一条件下で試験した場合に前記親ポリペプチドもしくは野生型ポリペプチドと比較して高いエキソ特異性を有する、請求項１〜請求項１６のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項１８】
前記ＰＳ４改変体ポリペプチドが、前記親ポリペプチドもしくは前記野生型ポリペプチドと比較して、１０％以上、好ましくは２０％以上、好ましくは５０％以上のエキソ特異性を有する、請求項１〜請求項１７のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項１９】
請求項１〜請求項１８のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチドの少なくとも２０個の残基のフラグメントを含むポリペプチドであって、非マルトース生成エキソアミラーゼ活性を有するポリペプチド。
【請求項２０】
請求項１〜請求項１９のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド配列の１つ以上の残基での突然変異によって該ＰＳ４改変体ポリペプチドから誘導可能であるポリペプチドであって、該ＰＳ４改変体ポリペプチドの前記親ポリペプチドもしくは野生型ポリペプチドと比較してより高い熱安定性もしくはより高いエキソ特異性またはその両方を有するポリペプチド。
【請求項２１】
請求項１〜請求項２０のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチドの、食品または飼料添加物としての使用。
【請求項２２】
デンプンを処理するためのプロセスであって、該デンプンを請求項１〜請求項２０のいずれか１項に記載のポリペプチドと接触させる工程と、該ポリペプチドに該デンプンから１種以上の直鎖状生成物を生成させる工程とを包含するプロセス。
【請求項２３】
食品または飼料製品を調製する際の請求項１〜請求項２０のいずれか１項に記載のポリペプチドの使用。
【請求項２４】
食品または飼料製品を調製するプロセスであって、請求項１〜請求項２０のいずれか１項に記載のポリペプチドを食品の成分または飼料の成分と混合する工程を包含するプロセス。
【請求項２５】
該食品が生地もしくは生地製品、好ましくは加工された生地製品を含む、請求項２３に記載の使用、または請求項２４に記載のプロセス。
【請求項２６】
該食品がベーカリー製品である、請求項２１〜請求項２５のいずれか１項に記載の使用またはプロセス。
【請求項２７】
ベーカリー製品を製造するためのプロセスであって：（ａ）デンプン媒質を提供する工程と；（ｂ）該デンプン媒質に請求項１〜請求項２０のいずれか１項に記載のポリペプチドを添加する工程と；（ｃ）ベーカリー製品を製造するために工程（ｂ）の間または工程（ｂ）の後に該デンプン媒質に熱を加える工程と、を包含するプロセス。
【請求項２８】
請求項２３〜請求項２７のいずれか１項に記載のプロセスによって得られる食品、飼料製品、生地製品またはベーカリー製品。
【請求項２９】
生地のための改善剤組成物であって、請求項１〜請求項２０のいずれか１項に記載のポリペプチド、および少なくとも１種のさらなる生地成分もしくは生地添加物を含有する、改善剤組成物。
【請求項３０】
粉および請求項１〜請求項２０のいずれか１項に記載のポリペプチドを含有する組成物。
【請求項３１】
生地製品において、該生地製品の硬化を遅延もしくは減少させ、好ましくは有害な老化を遅延もしくは減少させるための、請求項１〜請求項３０のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチドの使用。
【請求項３２】
請求項１〜請求項３１のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチドと、Ｎｏｖａｍｙｌ、またはマルトース生成αアミラーゼ活性を有するＮｏｖａｍｙｌの改変体、ホモログ、または突然変異体との組み合わせ。
【請求項３３】
請求項１〜請求項３２のいずれか１項に記載の用途のための請求項３２に記載の組み合わせの使用。
【請求項３４】
請求項３２に記載の組み合わせを用いた処理によって製造された食品または飼料製品。
【請求項３５】
請求項１〜請求項２０のいずれか１項に記載のポリペプチドをコード可能である核酸。
【請求項３６】
配列番号６または配列番号１２と少なくとも７５％同一である核酸配列を有する、請求項３５に記載の核酸。
【請求項３７】
非マルトース生成エキソアミラーゼ活性を有するポリペプチドをコード可能である、請求項３５または請求項３６に記載の核酸の少なくとも６０残基のフラグメントを含む核酸。
【請求項３８】
親配列から誘導可能である核酸配列であって、該親配列が非マルトース生成エキソアミラーゼをコード可能であり、該核酸配列は、該核酸が配列番号１に示したＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｉａエキソアミラーゼ配列の位置の番号付けを参照して特定された位置における以下の突然変異：（ａ）１２１Ｆ、１２１Ｙ、１２１Ｗ、１６１Ａ、２２３Ｅ、２２３Ｋ；（ｂ）１４６Ｇ、１４６Ｍ、１５７Ｍ、１５８Ｔ、１５８Ａ、１５８Ｓ、１９８Ｗ、１９８Ｆ、２２９Ｐ、３０３Ｅ、３０３Ｄ、３０６Ｔ、３０６Ｇ、３０９Ｐ、３１６Ｓ、３１６Ｐ、３１６Ｋ、３１６Ｑ、３５３Ｔ；および（ｃ）２６Ｅ、７０Ｄ、１１４５Ｄ、１８８Ｓ、１８８Ｔ、１８８Ｈ、２７２Ｑ、３３９Ａ、３３９Ｅの１つ以上をコードするように１つ以上の残基において置換を含む、核酸配列。
【請求項３９】
１つ以上のヌクレオチド残基の置換によって非マルトース生成エキソアミラーゼをコードする親配列から誘導される、請求項３５〜請求項３８のいずれか１項に記載のＰＳ４核酸配列。
【請求項４０】
請求項３５〜請求項３９のいずれか１項に記載のＰＳ４核酸を含むプラスミド。
【請求項４１】
請求項３５〜請求項４０のいずれか１項に記載のＰＳ４核酸を含む発現ベクター、または請求項１〜請求項２０のいずれか１項に記載のポリペプチドを発現可能である発現ベクター。
【請求項４２】
請求項４０に記載のプラスミドまたは請求項４１に記載の発現ベクターを含む宿主細胞であって、好ましくは該プラスミドまたは該発現ベクターを用いて形質転換されている宿主細胞。
【請求項４３】
請求項１〜請求項２０のいずれか１項に記載のポリペプチドを発現可能である細胞。
【請求項４４】
細菌細胞、真菌細胞または酵母細胞である、請求項４２に記載の宿主細胞、または請求項４３に記載の細胞。
【請求項４５】
ＰＳ４改変体ポリペプチドを発現する方法であって、請求項４２、請求項４３または請求項４４に記載の宿主細胞もしくは細胞を得る工程と、該細胞もしくは該宿主細胞から該ポリペプチドを発現させる工程と、および必要に応じて該ポリペプチドを精製する工程と、を包含する方法。
【請求項４６】
非マルトース生成エキソアミラーゼ活性を有する親ポリペプチド内に、（配列番号１に示したＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｉａエキソアミラーゼ配列の位置の番号付けを参照して）（ａ）１２１Ｆ、１２１Ｙ、１２１Ｗ、１６１Ａ、２２３Ｅ、２２３Ｋ；（ｂ）１４６Ｇ、１４６Ｍ、１５７Ｍ、１５８Ｔ、１５８Ａ、１５８Ｓ、１９８Ｗ、１９８Ｆ、２２９Ｐ、３０３Ｅ、３０３Ｄ、３０６Ｔ、３０６Ｇ、３０９Ｐ、３１６Ｓ、３１６Ｐ、３１６Ｋ、３１６Ｑ、３５３Ｔ；および（ｃ）２６Ｅ、７０Ｄ、１１４５Ｄ、１８８Ｓ、１８８Ｔ、１８８Ｈ、２７２Ｑ、３３９Ａ、３３９Ｅからなる群から選択されるアミノ酸置換を導入する工程によってポリペプチドの配列を変化させる方法。
【請求項４７】
配列番号１に示したＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｉａエキソアミラーゼ配列の位置の番号付けを参照して（ａ）１２１Ｆ、１２１Ｙ、１２１Ｗ、１６１Ａ、２２３Ｅ、２２３Ｋ；（ｂ）１４６Ｇ、１４６Ｍ、１５７Ｍ、１５８Ｔ、１５８Ａ、１５８Ｓ、１９８Ｗ、１９８Ｆ、２２９Ｐ、３０３Ｅ、３０３Ｄ、３０６Ｔ、３０６Ｇ、３０９Ｐ、３１６Ｓ、３１６Ｐ、３１６Ｋ、３１６Ｑ、３５３Ｔ；および（ｃ）２６Ｅ、７０Ｄ、１１４５Ｄ、１８８Ｓ、１８８Ｔ、１８８Ｈ、２７２Ｑ、３３９Ａ、３３９Ｅからなる群から選択される置換を導入する工程によって非マルトース生成エキソアミラーゼの配列を変化させる方法。
【請求項４８】
非マルトース生成エキソアミラーゼの配列が非マルトース生成エキソアミラーゼをコードする核酸の配列を変化させる工程によって変化させられる、請求項４６または４７に記載の方法。
【請求項４９】
ＰＳ４改変体ポリペプチドを製造する方法であって、非マルトース生成エキソアミラーゼ活性を有する親ポリペプチド内にアミノ酸置換を導入する工程であって、該アミノ酸置換が配列番号１に示したＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｉａエキソアミラーゼ配列の位置の番号付けを参照して（ａ）１２１Ｆ、１２１Ｙ、１２１Ｗ、１６１Ａ、２２３Ｅ、２２３Ｋ；（ｂ）１４６Ｇ、１４６Ｍ、１５７Ｍ、１５８Ｔ、１５８Ａ、１５８Ｓ、１９８Ｗ、１９８Ｆ、２２９Ｐ、３０３Ｅ、３０３Ｄ、３０６Ｔ、３０６Ｇ、３０９Ｐ、３１６Ｓ、３１６Ｐ、３１６Ｋ、３１６Ｑ、３５３Ｔ；および（ｃ）２６Ｅ、７０Ｄ、１１４５Ｄ、１８８Ｓ、１８８Ｔ、１８８Ｈ、２７２Ｑ、３３９Ａ、３３９Ｅからなる群から選択される工程を包含する方法。
【請求項５０】
前記親ポリペプチドをコードする核酸の配列が前記アミノ酸置換を導入するように変化させられる、請求項４８または４９に記載の方法。
【請求項５１】
非マルトース生成エキソアミラーゼをコードする核酸配列を変化させる方法であって、配列番号１に示したＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｉａエキソアミラーゼ配列の位置の番号付けを参照して（ａ）１２１Ｆ、１２１Ｙ、１２１Ｗ、１６１Ａ、２２３Ｅ、２２３Ｋ；（ｂ）１４６Ｇ、１４６Ｍ、１５７Ｍ、１５８Ｔ、１５８Ａ、１５８Ｓ、１９８Ｗ、１９８Ｆ、２２９Ｐ、３０３Ｅ、３０３Ｄ、３０６Ｔ、３０６Ｇ、３０９Ｐ、３１６Ｓ、３１６Ｐ、３１６Ｋ、３１６Ｑ、３５３Ｔ；および（ｃ）２６Ｅ、７０Ｄ、１１４５Ｄ、１８８Ｓ、１８８Ｔ、１８８Ｈ、２７２Ｑ、３３９Ａ、３３９Ｅからなる群から選択されるアミノ酸残基をコードするコドンを該配列に導入する工程を、包含する方法。
【請求項５２】
ポリペプチドの熱安定性、もしくはエキソ特異性、またはその両方を増加させる方法であって、請求項４４〜請求項５１のいずれか１項に記載の工程を包含する方法。
【請求項５３】
前記ポリペプチドが単離されるかもしくは精製される、または単離されかつ精製される、請求項４４〜請求項５２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５４】
請求項４４〜請求項５３のいずれか１項に記載の方法によって得られ得るポリペプチド。
【請求項５５】
請求項４４〜請求項５４のいずれか１項に記載の方法によって得られたポリペプチド。
【請求項５６】
実質的に、添付の図面を参考として上述しそして添付の図面に示した通りである、ＰＳ４改変体ポリペプチド、使用、プロセス、食品、飼料製品、生地製品、ベーカリー製品、改善剤組成物、組成物、核酸、ベクターもしくは宿主細胞。
【請求項１】
非マルトース生成エキソアミラーゼ活性を有する親ポリペプチドから誘導可能であるＰＳ４改変体ポリペプチドであって、配列番号１に示したＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｉａエキソアミラーゼ配列の位置の番号付けを参照して１２１、１６１、２２３、１４６、１５７、１５８、１９８、２２９、３０３、３０６、３０９、３１６、３５３、２６、７０、１４５、１８８、２７２、３３９からなる群から選択される１つ以上の位置でのアミノ酸突然変異を含む、ＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項２】
前記ＰＳ４改変体ポリペプチドが、１２１Ｆ、１２１Ｙ、１２１Ｗ、１６１Ａ、２２３Ｅ、２２３Ｋ、１４６Ｇ、１４６Ｍ、１５７Ｍ、１５８Ｔ、１５８Ａ、１５８Ｓ、１９８Ｗ、１９８Ｆ、２２９Ｐ、３０３Ｅ、３０３Ｄ、３０６Ｔ、３０６Ｇ、３０９Ｐ、３１６Ｓ、３１６Ｐ、３１６Ｋ、３１６Ｑ、３５３Ｔ、２６Ｅ、７０Ｄ、１１４５Ｄ、１８８Ｓ、１８８Ｔ、１８８Ｈ、２７２Ｑ、３３９Ａ、３３９Ｅからなる群から選択されるアミノ酸突然変異を含む、請求項１に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項３】
前記ＰＳ４改変体ポリペプチドが、３３位、３４位、１２１位、１３４位、１４１位、１５７位、１６１位、１７８位、１７９位、２２３位、３０７位および３３４位からなる群から選択される１つ以上の突然変異であって、好ましくは３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１５７Ｌ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、２２３Ｅ、３０７Ｌおよび３３４Ｐからなる群から選択される突然変異をさらに含む、請求項１または請求項２に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項４】
前記ＰＳ４改変体ポリペプチドが、以下の突然変異：
（ａ）３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１４６Ｇ、１５７Ｌ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、２２３Ｅ、３０７Ｌおよび３３４Ｐ；
（ｂ）３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１５７Ｍ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、２２３Ｅ、３０７Ｌおよび３３４Ｐ；
（ｃ）３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１５７Ｌ、１５８Ｔ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、２２３Ｅ、３０７Ｌおよび３３４Ｐ；
（ｄ）３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１５７Ｌ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、１９８Ｗ、２２３Ｅ、３０７Ｌおよび３３４Ｐ；
（ｅ）３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１５７Ｌ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、２２３Ｅ、２２９Ｐ、３０７Ｌおよび３３４Ｐ；
（ｆ）３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１５７Ｌ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、１９８Ｗ、２２３Ｅ、２２９Ｐ、３０７Ｌおよび３３４Ｐ；
（ｇ）３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１５７Ｌ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、２２３Ｅ、３０３Ｅ、３０７Ｌおよび３３４Ｐ；
（ｈ）３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１５７Ｌ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、２２３Ｅ、３０３Ｄ、３０７Ｌおよび３３４Ｐ；
（ｉ）３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１５７Ｌ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、２２３Ｅ、３０６Ｔ、３０７Ｌおよび３３４Ｐ；
（ｊ）３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１５７Ｌ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、２２３Ｅ、３０６Ｇ、３０７Ｌおよび３３４Ｐ；
（ｋ）３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１５７Ｌ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、２２３Ｅ、３０９Ｐ、３０７Ｌおよび３３４Ｐ；
（ｌ）３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１５７Ｌ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、２２３Ｅ、３０７Ｌ、３１６Ｓ、および３３４Ｐ；
（ｍ）３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１５７Ｌ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、２２３Ｅ、３０７Ｌ、３１６Ｐおよび３３４Ｐ；
（ｎ）３３Ｙ、３４Ｎ、１２１Ｆ、１３４Ｒ、１４１Ｐ、１５７Ｌ、１６１Ａ、１７８Ｆ、１７９Ｔ、２２３Ｅ、３０７Ｌ、３３４Ｐおよび３５３Ｔ
（の各々を含む、請求項１、請求項２または請求項３のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項５】
前記ＰＳ４改変体ポリペプチドが、以下の突然変異：
（ａ）Ｎ２６Ｅ、Ｎ３３Ｙ、Ｄ３４Ｎ、Ｇ１２１Ｆ、Ｇ１３４Ｒ、Ａ１４１Ｐ、Ｉ１５７Ｌ、Ｌ１７８Ｆ、Ａ１７９Ｔ、Ｇ２２３Ａ、Ｈ３０７Ｌ、Ｓ３３４Ｐ；
（ｂ）Ｎ３３Ｙ、Ｄ３４Ｎ、Ｇ７０Ｄ、Ｇ１２１Ｆ、Ｇ１３４Ｒ、Ａ１４１Ｐ、Ｙ１４６Ｇ、Ｉ１５７Ｌ、Ｇ１５８Ｔ、Ｓ１６１Ａ、Ｌ１７８Ｆ、Ａ１７９Ｔ、Ｇ２２３Ｅ、Ｓ２２９Ｐ、Ｈ３０７Ｌ、Ａ３０９Ｐ、Ｓ３３４Ｐ；
（ｃ）Ｎ３３Ｙ、Ｄ３４Ｎ、Ｇ１２１Ｆ、Ｇ１３４Ｒ、Ａ１４１Ｐ、Ｎ１４５Ｄ、Ｙ１４６Ｇ、Ｉ１５７Ｌ、Ｇ１５８Ｔ、Ｓ１６１Ａ、Ｌ１７８Ｆ、Ａ１７９Ｔ、Ｇ２２３Ｅ、Ｓ２２９Ｐ、Ｈ３０７Ｌ、Ａ３０９Ｐ、Ｓ３３４Ｐ；
（ｄ）Ｎ３３Ｙ、Ｄ３４Ｎ、Ｇ７０Ｄ、Ｇ１２１Ｆ、Ｇ１３４Ｒ、Ａ１４１Ｐ、Ｎ１４５Ｄ、Ｙ１４６Ｇ、Ｉ１５７Ｌ、Ｇ１５８Ｔ、Ｓ１６１Ａ、Ｌ１７８Ｆ、Ａ１７９Ｔ、Ｇ１８８Ｈ、Ｇ２２３Ｅ、Ｓ２２９Ｐ、Ｈ３０７Ｌ、Ａ３０９Ｐ、Ｓ３３４Ｐ、Ｗ３３９Ｅ；
（ｅ）Ｎ３３Ｙ、Ｄ３４Ｎ、Ｇ７０Ｄ、Ｇ１２１Ｆ、Ｇ１３４Ｒ、Ａ１４１Ｐ、Ｎ１４５Ｄ、Ｙ１４６Ｇ、Ｉ１５７Ｌ、Ｇ１５８Ｔ、Ｓ１６１Ａ、Ｌ１７８Ｆ、Ａ１７９Ｔ、Ｇ１８８Ｓ、Ｇ２２３Ｅ、Ｓ２２９Ｐ、Ｈ３０７Ｌ、Ａ３０９Ｐ、Ｓ３３４Ｐ、Ｗ３３９Ｅ；
（ｆ）Ｎ３３Ｙ、Ｄ３４Ｎ、Ｇ１２１Ｆ、Ｇ１３４Ｒ、Ａ１４１Ｐ、Ｙ１４６Ｇ、Ｉ１５７Ｌ、Ｇ１５８Ｔ、Ｓ１６１Ａ、Ｌ１７８Ｆ、Ａ１７９Ｔ、Ｇ２２３Ｅ、Ｓ２２９Ｐ、Ｈ３０７Ｌ、Ａ３０９Ｐ、Ｓ３３４Ｐ、Ｗ３３９Ａ；
（ｇ）Ｎ３３Ｙ、Ｄ３４Ｎ、Ｇ１２１Ｆ、Ｇ１３４Ｒ、Ａ１４１Ｐ、Ｙ１４６Ｇ、Ｉ１５７Ｌ、Ｇ１５８Ｔ、Ｓ１６１Ａ、Ｌ１７８Ｆ、Ａ１７９Ｔ、Ｇ２２３Ｅ、Ｓ２２９Ｐ、Ｈ３０７Ｌ、Ａ３０９Ｐ、Ｓ３３４Ｐ、Ｗ３３９Ｅ
の各々を含む、請求項１〜請求項４のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項６】
前記ＰＳ４改変体ポリペプチドが、８７位における突然変異であって、好ましくは８７Ｓであり、より好ましくはＧ８７Ｓである突然変異をさらに含む、請求項１〜請求項５のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項７】
前記親ポリペプチドが、非マルトース生成エキソアミラーゼ、好ましくはグルカン１，４−α−マルトテトラヒドロラーゼ（ＥＣ３．２．１．６０）を含む、請求項１〜請求項６のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項８】
前記親ポリペプチドが、シュードモナス種、好ましくはＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｉａもしくはＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｔｕｚｅｒｉであるか、またはシュードモナス種から、好ましくはＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｉａもしくはＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｔｕｚｅｒｉから誘導可能である、請求項１〜請求項７のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項９】
前記親ポリペプチドが、配列番号１もしくは配列番号５に示した配列を有するＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｉａエキソアミラーゼ由来の非マルトース生成エキソアミラーゼである、請求項１〜請求項８のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項１０】
配列番号１または配列番号５と少なくとも７５％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項１〜請求項９のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項１１】
前記親ポリペプチドが、配列番号７もしくは配列番号１１に示した配列を有するＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｔｕｚｅｒｉ由来の非マルトース生成エキソアミラーゼである、請求項１〜請求項８のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項１２】
配列番号７または配列番号１１と少なくとも７５％同一であるアミノ酸配列を有する、請求項１〜請求項８または請求項１１のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項１３】
本明細書、請求項または図面に記載の配列を含む、請求項１〜請求項１２のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項１４】
ＰＳａｃ−Ｄ３４（配列番号２）、ＰＳａｃ−Ｄ２０（配列番号３）、ＰＳａｃ−Ｄ１４（配列番号４）、ＰＳｔｕ−Ｄ３４（配列番号８）、ＰＳｔｕ−Ｄ２０（配列番号９）、ＰＳｔｕ−Ｄ１４（配列番号１０）、ｐＭＤ５５（配列番号１３）、ｐＭＤ９６（配列番号１４）、ＳＳＭ３８１（配列番号１５）、ＳＳＭ２７９ Ｂ１（配列番号１６）、ＳＳＭ２３７Ｐ２（配列番号１７）、配列番号１８、ＳＳＭ３２５Ｆ３（配列番号１９）、ｐＭＤ１２９（配列番号２０）、ＳＳＭ３４１Ａ９（配列番号２１）、ＳＳＭ３４１Ｇ１１（配列番号２２）、ＳＳＭ３５０Ｂ１１（配列番号２３）、ＳＳＭ３５０Ｃ１２（配列番号２４）、ＳＳＭ３３２Ｑ４（配列番号２５）、ＳＳＭ３６５Ｂ４（配列番号２６）、ＳＳＭ３６５Ｆ４（配列番号２７）およびＳＳＭ３６０Ｃ７（配列番号２８）、ＳＳＭ２１９Ｂ３、ＳＡＳ１４０１Ｌ１０、ＳＡＳ１３８７Ｄ１６ｂｆ、ｐＭＤ２３６、ｐＭＤ２３７ｂｆ、ＳＡＳ１３７９Ｏ１３およびＳＡＳ１３７９Ｏ９からなる群から選択される配列を含む、請求項１〜請求項１３のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項１５】
前記ＰＳ４改変体ポリペプチドが、同一条件下で試験した場合に前記親ポリペプチドもしくは野生型ポリペプチドと比較して高い熱安定性を有する、請求項１〜請求項１４のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項１６】
半減期（ｔ１／２）であって、好ましくは６０℃における半減期が、前記親ポリペプチドもしくは野生型ポリペプチドと比較して、１５％以上、好ましくは５０％以上、最も好ましくは１００％以上増加している、請求項１〜請求項１５のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項１７】
同一条件下で試験した場合に前記親ポリペプチドもしくは野生型ポリペプチドと比較して高いエキソ特異性を有する、請求項１〜請求項１６のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項１８】
前記ＰＳ４改変体ポリペプチドが、前記親ポリペプチドもしくは前記野生型ポリペプチドと比較して、１０％以上、好ましくは２０％以上、好ましくは５０％以上のエキソ特異性を有する、請求項１〜請求項１７のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド。
【請求項１９】
請求項１〜請求項１８のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチドの少なくとも２０個の残基のフラグメントを含むポリペプチドであって、非マルトース生成エキソアミラーゼ活性を有するポリペプチド。
【請求項２０】
請求項１〜請求項１９のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチド配列の１つ以上の残基での突然変異によって該ＰＳ４改変体ポリペプチドから誘導可能であるポリペプチドであって、該ＰＳ４改変体ポリペプチドの前記親ポリペプチドもしくは野生型ポリペプチドと比較してより高い熱安定性もしくはより高いエキソ特異性またはその両方を有するポリペプチド。
【請求項２１】
請求項１〜請求項２０のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチドの、食品または飼料添加物としての使用。
【請求項２２】
デンプンを処理するためのプロセスであって、該デンプンを請求項１〜請求項２０のいずれか１項に記載のポリペプチドと接触させる工程と、該ポリペプチドに該デンプンから１種以上の直鎖状生成物を生成させる工程とを包含するプロセス。
【請求項２３】
食品または飼料製品を調製する際の請求項１〜請求項２０のいずれか１項に記載のポリペプチドの使用。
【請求項２４】
食品または飼料製品を調製するプロセスであって、請求項１〜請求項２０のいずれか１項に記載のポリペプチドを食品の成分または飼料の成分と混合する工程を包含するプロセス。
【請求項２５】
該食品が生地もしくは生地製品、好ましくは加工された生地製品を含む、請求項２３に記載の使用、または請求項２４に記載のプロセス。
【請求項２６】
該食品がベーカリー製品である、請求項２１〜請求項２５のいずれか１項に記載の使用またはプロセス。
【請求項２７】
ベーカリー製品を製造するためのプロセスであって：（ａ）デンプン媒質を提供する工程と；（ｂ）該デンプン媒質に請求項１〜請求項２０のいずれか１項に記載のポリペプチドを添加する工程と；（ｃ）ベーカリー製品を製造するために工程（ｂ）の間または工程（ｂ）の後に該デンプン媒質に熱を加える工程と、を包含するプロセス。
【請求項２８】
請求項２３〜請求項２７のいずれか１項に記載のプロセスによって得られる食品、飼料製品、生地製品またはベーカリー製品。
【請求項２９】
生地のための改善剤組成物であって、請求項１〜請求項２０のいずれか１項に記載のポリペプチド、および少なくとも１種のさらなる生地成分もしくは生地添加物を含有する、改善剤組成物。
【請求項３０】
粉および請求項１〜請求項２０のいずれか１項に記載のポリペプチドを含有する組成物。
【請求項３１】
生地製品において、該生地製品の硬化を遅延もしくは減少させ、好ましくは有害な老化を遅延もしくは減少させるための、請求項１〜請求項３０のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチドの使用。
【請求項３２】
請求項１〜請求項３１のいずれか１項に記載のＰＳ４改変体ポリペプチドと、Ｎｏｖａｍｙｌ、またはマルトース生成αアミラーゼ活性を有するＮｏｖａｍｙｌの改変体、ホモログ、または突然変異体との組み合わせ。
【請求項３３】
請求項１〜請求項３２のいずれか１項に記載の用途のための請求項３２に記載の組み合わせの使用。
【請求項３４】
請求項３２に記載の組み合わせを用いた処理によって製造された食品または飼料製品。
【請求項３５】
請求項１〜請求項２０のいずれか１項に記載のポリペプチドをコード可能である核酸。
【請求項３６】
配列番号６または配列番号１２と少なくとも７５％同一である核酸配列を有する、請求項３５に記載の核酸。
【請求項３７】
非マルトース生成エキソアミラーゼ活性を有するポリペプチドをコード可能である、請求項３５または請求項３６に記載の核酸の少なくとも６０残基のフラグメントを含む核酸。
【請求項３８】
親配列から誘導可能である核酸配列であって、該親配列が非マルトース生成エキソアミラーゼをコード可能であり、該核酸配列は、該核酸が配列番号１に示したＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｉａエキソアミラーゼ配列の位置の番号付けを参照して特定された位置における以下の突然変異：（ａ）１２１Ｆ、１２１Ｙ、１２１Ｗ、１６１Ａ、２２３Ｅ、２２３Ｋ；（ｂ）１４６Ｇ、１４６Ｍ、１５７Ｍ、１５８Ｔ、１５８Ａ、１５８Ｓ、１９８Ｗ、１９８Ｆ、２２９Ｐ、３０３Ｅ、３０３Ｄ、３０６Ｔ、３０６Ｇ、３０９Ｐ、３１６Ｓ、３１６Ｐ、３１６Ｋ、３１６Ｑ、３５３Ｔ；および（ｃ）２６Ｅ、７０Ｄ、１１４５Ｄ、１８８Ｓ、１８８Ｔ、１８８Ｈ、２７２Ｑ、３３９Ａ、３３９Ｅの１つ以上をコードするように１つ以上の残基において置換を含む、核酸配列。
【請求項３９】
１つ以上のヌクレオチド残基の置換によって非マルトース生成エキソアミラーゼをコードする親配列から誘導される、請求項３５〜請求項３８のいずれか１項に記載のＰＳ４核酸配列。
【請求項４０】
請求項３５〜請求項３９のいずれか１項に記載のＰＳ４核酸を含むプラスミド。
【請求項４１】
請求項３５〜請求項４０のいずれか１項に記載のＰＳ４核酸を含む発現ベクター、または請求項１〜請求項２０のいずれか１項に記載のポリペプチドを発現可能である発現ベクター。
【請求項４２】
請求項４０に記載のプラスミドまたは請求項４１に記載の発現ベクターを含む宿主細胞であって、好ましくは該プラスミドまたは該発現ベクターを用いて形質転換されている宿主細胞。
【請求項４３】
請求項１〜請求項２０のいずれか１項に記載のポリペプチドを発現可能である細胞。
【請求項４４】
細菌細胞、真菌細胞または酵母細胞である、請求項４２に記載の宿主細胞、または請求項４３に記載の細胞。
【請求項４５】
ＰＳ４改変体ポリペプチドを発現する方法であって、請求項４２、請求項４３または請求項４４に記載の宿主細胞もしくは細胞を得る工程と、該細胞もしくは該宿主細胞から該ポリペプチドを発現させる工程と、および必要に応じて該ポリペプチドを精製する工程と、を包含する方法。
【請求項４６】
非マルトース生成エキソアミラーゼ活性を有する親ポリペプチド内に、（配列番号１に示したＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｉａエキソアミラーゼ配列の位置の番号付けを参照して）（ａ）１２１Ｆ、１２１Ｙ、１２１Ｗ、１６１Ａ、２２３Ｅ、２２３Ｋ；（ｂ）１４６Ｇ、１４６Ｍ、１５７Ｍ、１５８Ｔ、１５８Ａ、１５８Ｓ、１９８Ｗ、１９８Ｆ、２２９Ｐ、３０３Ｅ、３０３Ｄ、３０６Ｔ、３０６Ｇ、３０９Ｐ、３１６Ｓ、３１６Ｐ、３１６Ｋ、３１６Ｑ、３５３Ｔ；および（ｃ）２６Ｅ、７０Ｄ、１１４５Ｄ、１８８Ｓ、１８８Ｔ、１８８Ｈ、２７２Ｑ、３３９Ａ、３３９Ｅからなる群から選択されるアミノ酸置換を導入する工程によってポリペプチドの配列を変化させる方法。
【請求項４７】
配列番号１に示したＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｉａエキソアミラーゼ配列の位置の番号付けを参照して（ａ）１２１Ｆ、１２１Ｙ、１２１Ｗ、１６１Ａ、２２３Ｅ、２２３Ｋ；（ｂ）１４６Ｇ、１４６Ｍ、１５７Ｍ、１５８Ｔ、１５８Ａ、１５８Ｓ、１９８Ｗ、１９８Ｆ、２２９Ｐ、３０３Ｅ、３０３Ｄ、３０６Ｔ、３０６Ｇ、３０９Ｐ、３１６Ｓ、３１６Ｐ、３１６Ｋ、３１６Ｑ、３５３Ｔ；および（ｃ）２６Ｅ、７０Ｄ、１１４５Ｄ、１８８Ｓ、１８８Ｔ、１８８Ｈ、２７２Ｑ、３３９Ａ、３３９Ｅからなる群から選択される置換を導入する工程によって非マルトース生成エキソアミラーゼの配列を変化させる方法。
【請求項４８】
非マルトース生成エキソアミラーゼの配列が非マルトース生成エキソアミラーゼをコードする核酸の配列を変化させる工程によって変化させられる、請求項４６または４７に記載の方法。
【請求項４９】
ＰＳ４改変体ポリペプチドを製造する方法であって、非マルトース生成エキソアミラーゼ活性を有する親ポリペプチド内にアミノ酸置換を導入する工程であって、該アミノ酸置換が配列番号１に示したＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｉａエキソアミラーゼ配列の位置の番号付けを参照して（ａ）１２１Ｆ、１２１Ｙ、１２１Ｗ、１６１Ａ、２２３Ｅ、２２３Ｋ；（ｂ）１４６Ｇ、１４６Ｍ、１５７Ｍ、１５８Ｔ、１５８Ａ、１５８Ｓ、１９８Ｗ、１９８Ｆ、２２９Ｐ、３０３Ｅ、３０３Ｄ、３０６Ｔ、３０６Ｇ、３０９Ｐ、３１６Ｓ、３１６Ｐ、３１６Ｋ、３１６Ｑ、３５３Ｔ；および（ｃ）２６Ｅ、７０Ｄ、１１４５Ｄ、１８８Ｓ、１８８Ｔ、１８８Ｈ、２７２Ｑ、３３９Ａ、３３９Ｅからなる群から選択される工程を包含する方法。
【請求項５０】
前記親ポリペプチドをコードする核酸の配列が前記アミノ酸置換を導入するように変化させられる、請求項４８または４９に記載の方法。
【請求項５１】
非マルトース生成エキソアミラーゼをコードする核酸配列を変化させる方法であって、配列番号１に示したＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌｉａエキソアミラーゼ配列の位置の番号付けを参照して（ａ）１２１Ｆ、１２１Ｙ、１２１Ｗ、１６１Ａ、２２３Ｅ、２２３Ｋ；（ｂ）１４６Ｇ、１４６Ｍ、１５７Ｍ、１５８Ｔ、１５８Ａ、１５８Ｓ、１９８Ｗ、１９８Ｆ、２２９Ｐ、３０３Ｅ、３０３Ｄ、３０６Ｔ、３０６Ｇ、３０９Ｐ、３１６Ｓ、３１６Ｐ、３１６Ｋ、３１６Ｑ、３５３Ｔ；および（ｃ）２６Ｅ、７０Ｄ、１１４５Ｄ、１８８Ｓ、１８８Ｔ、１８８Ｈ、２７２Ｑ、３３９Ａ、３３９Ｅからなる群から選択されるアミノ酸残基をコードするコドンを該配列に導入する工程を、包含する方法。
【請求項５２】
ポリペプチドの熱安定性、もしくはエキソ特異性、またはその両方を増加させる方法であって、請求項４４〜請求項５１のいずれか１項に記載の工程を包含する方法。
【請求項５３】
前記ポリペプチドが単離されるかもしくは精製される、または単離されかつ精製される、請求項４４〜請求項５２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５４】
請求項４４〜請求項５３のいずれか１項に記載の方法によって得られ得るポリペプチド。
【請求項５５】
請求項４４〜請求項５４のいずれか１項に記載の方法によって得られたポリペプチド。
【請求項５６】
実質的に、添付の図面を参考として上述しそして添付の図面に示した通りである、ＰＳ４改変体ポリペプチド、使用、プロセス、食品、飼料製品、生地製品、ベーカリー製品、改善剤組成物、組成物、核酸、ベクターもしくは宿主細胞。
【公表番号】特表２００８−５０５６３２（Ｐ２００８−５０５６３２Ａ）
【公表日】平成２０年２月２８日（２００８．２．２８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−５１９８８４（Ｐ２００７−５１９８８４）
【出願日】平成１７年７月７日（２００５．７．７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＧＢ２００５／００２６７５
【国際公開番号】ＷＯ２００６／００３４６１
【国際公開日】平成１８年１月１２日（２００６．１．１２）
【出願人】（３９７０６０５８８）ダニスコ エイ／エス (67)
【出願人】（５９５１６３６３０）ジェネンコア・インターナショナル，インコーポレイテッド (12)
【氏名又は名称原語表記】ＧＥＮＥＮＣＯＲ ＩＮＴＥＲＮＡＴＩＯＮＡＬ， ＩＮＣ．
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２０年２月２８日（２００８．２．２８）
【国際特許分類】
【出願日】平成１７年７月７日（２００５．７．７）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＧＢ２００５／００２６７５
【国際公開番号】ＷＯ２００６／００３４６１
【国際公開日】平成１８年１月１２日（２００６．１．１２）
【出願人】（３９７０６０５８８）ダニスコ エイ／エス (67)
【出願人】（５９５１６３６３０）ジェネンコア・インターナショナル，インコーポレイテッド (12)
【氏名又は名称原語表記】ＧＥＮＥＮＣＯＲ ＩＮＴＥＲＮＡＴＩＯＮＡＬ， ＩＮＣ．
【Ｆターム（参考）】
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