修飾された生合成ポリペプチド分子、これらを製造する方法及びこれらの使用が提供される。

【特許請求の範囲】
【請求項１】
式：
ＬＴ−Ｐ−Ｔ’
（式中（ＬＴ）は、局在化ペプチド（Ｌ）、タグ又はリンカー（Ｔ）、任意の順序の局在化ペプチド（Ｌ）及びタグ又はリンカー（Ｔ）、メチオニン及び不存在からなる群から選択され；
Ｐは、ＢＳＰ配列を含み；並びに、
Ｔ’は、タグ若しくはリンカーを含み、又は不存在であり、
Ｌ、Ｔ、Ｐ又はＴ’は、１又は複数の非天然コードアミノ酸を含む。）
を含むポリペプチド。
【請求項２】
式：
Ｆ−（ＬＴ）−Ｐ−Ｔ−Ｆ’
（式中、Ｆはポリペプチド配列を含み、又は不存在であり；
（ＬＴ）は、局在化ペプチド（Ｌ）、タグ又はリンカー（Ｔ）、任意の順序の局在化ペプチド（Ｌ）及びタグ又はリンカー（Ｔ）、メチオニン及び不存在からなる群から選択され；
Ｐは、最大１００個のアミノ酸を有する所望のポリペプチド配列を含み、且つＦ又はＦ’とは異なり；
Ｔ’は、タグ若しくはリンカーを含み、又は不存在であり、
Ｆ’は、ポリペプチド配列を含み、又は不存在であり、
Ｆ、Ｌ、Ｔ、Ｐ、Ｔ’又はＦ’は、１又は複数の非天然コードアミノ酸を含む。）
を含むポリペプチド。
【請求項３】
Ｐが１又は複数の非天然コードアミノ酸を含むＢＳＰをさらに含む、請求項２に記載ポリペプチド。
【請求項４】
ポリペプチドコード配列に作用可能に連結されたプロモーター配列を含み、前記ポリペプチドコード配列が式（ＷＸ）−Ｚを有し、（ＷＸ）が、局在化ペプチドをコードするヌクレオチド配列（Ｗ）、タグ又はリンカーをコードするヌクレオチド配列（Ｘ）、任意の順序の局在化ペプチドをコードするヌクレオチド配列（Ｗ）及びタグ又はリンカーをコードするヌクレオチド配列（Ｘ）、及び不存在からなる群から選択され；
Ｚは所望のＢＳＰをコードするヌクレオチド配列を含み、Ｗ、Ｘ又はＺをコードするヌクレオチド配列はセレクターコドンを含む、核酸分子。
【請求項５】
Ｚに作用可能に連結されたＹ’をさらに含み、Ｙ’がタグをコードするヌクレオチド配列を含み、前記タグをコードする前記ヌクレオチド配列が必要に応じてセレクターコドンを含む、請求項４に記載の核酸分子。
【請求項６】
請求項４又は５に記載の核酸分子を含む発現ベクター。
【請求項７】
請求項６に記載の発現ベクターを含む宿主細胞。
【請求項８】
ａ）式：
（ＬＴ）−Ｐ−Ｔ’
（式中（ＬＴ）は、局在化ペプチド（Ｌ）、タグ又はリンカー（Ｔ）、任意の順序の局在化ペプチド（Ｌ）及びタグ又はリンカー（Ｔ）、メチオニンおよび不存在からなる群から選択され；
Ｐは、ＢＳＰ配列を含み；
Ｔ’は、タグ若しくはリンカーを含み、又は不存在であり、
Ｌ、Ｔ、Ｐ又はＴ’は、選択された条件下で１又は複数のペプチド結合を切断するように決定された官能基を有する１又は複数の非天然コードアミノ酸を含む。）
を含むポリペプチドを、組換え宿主細胞中で生産すること；
ｂ）１又は複数のペプチド結合を少なくとも部分的に切断するのに十分な時間にわたって、選択された条件下で、前記ポリペプチドを反応すること、
ｃ）Ｐを含むペプチドを、反応産物から回収すること、
を含む方法。
【請求項９】
１又は複数の非天然コードアミノ酸を含む、ＢＳＰ。
【請求項１０】
ＢＳＰが１又は複数の翻訳後修飾を含む、請求項９に記載のＢＳＰ。
【請求項１１】
ポリペプチドがリンカー、ポリマー又は生物活性分子に連結されている、請求項９に記載のＢＳＰ。
【請求項１２】
非天然コードアミノ酸が、配列番号２（ＧＬＰ−１）から得られる７位に（すなわち、Ｎ末端に）存在する最初のアミノ酸の前の残基、７Ｈ、８Ａ、９Ｅ、Ｖ１６、１７Ｓ、１８Ｓ、１９Ｙ、２０Ｌ、２１Ｅ、２２Ｇ、２３Ｑ、２４Ａ、２５Ａ、２６Ｋ、２７Ｅ、２８Ｆ、２９Ｉ、３０Ａ、３１Ｗ、３２Ｌ、３３Ｖ、３４Ｋ、３５Ｇ、３６Ｒ、３７Ｇ、３８位での（すなわち、カルボキシ末端の）付加及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される位置において置換されている、請求項９に記載のＢＳＰ。
【請求項１３】
非天然コードアミノ酸が、配列番号２２又は２４（Ｔ−２０）から得られる残基Ｗ６３１、Ｄ６３２、Ｉ６３５、Ｎ６３６、Ｎ６３７、Ｙ６３８、Ｔ６３９、Ｓ６４０、Ｌ６４１、Ｌ６４５、Ｎ６５１及びこれらの任意の組み合わせからなる群から選択される位置において置換されている、請求項９に記載のＢＳＰ。
【請求項１４】
ストリンジェントな条件下で、配列番号１、２、３、２１、２２、２３又は２４をコードするポリヌクレオチド配列にハイブリダイズするポリヌクレオチドを含み、前記ポリヌクレオチドが少なくとも１つのセレクターコドンを含む単離された核酸。
【請求項１５】
非天然コードアミノ酸を含む単離されたＢＳＰを、前記非天然コードアミノ酸と反応する部分を含むリンカー、ポリマー又は生物活性分子と接触させることを含む、請求項１１に記載のＢＳＰを製造する方法。
【請求項１６】
請求項９に記載のＢＳＰと薬学的に許容される担体とを含む組成物。
【請求項１７】
請求項１６に記載の組成物の治療的有効量を患者に投与することを含む、ＢＳＰによって調節される疾患を有する患者を治療する方法。
【請求項１８】
請求項１４に記載の核酸を含む細胞。
【請求項１９】
セレクターコドン、オルソゴナルＲＮＡシンテターゼ及びオルソゴナルｔＲＮＡを含むＢＳＰをコードする一又は複数のポリヌクレオチドを含む細胞を、非天然コードアミノ酸を含むＢＳＰの発現を可能とする条件下で培養することと；及び前記ＢＳＰを精製することとを含む、非天然コードアミノ酸を含むＢＳＰを作製する方法。
【請求項２０】
ＢＳＰ中の天然に存在する一又は複数の何れかのアミノ酸を一又は複数の非天然コードアミノ酸に置き換えることを含む、ＢＳＰの血清半減期又は循環時間を調節する方法。
【請求項２１】
セレクターコドンを含み、且つ少なくとも一つの非天然コードアミノ酸を含むポリペプチドによってコードされるＢＳＰ。
【請求項２２】
請求項２１に記載のＢＳＰと薬学的に許容される担体とを含む組成物。
【請求項２３】
ＢＳＰの単一のアミノ酸に、共有結合によって連結された水溶性ポリマーを含むＢＳＰ。
【請求項２４】
少なくとも一つのリンカー、ポリマー、又は生物活性分子を含み、前記リンカー、ポリマー、又は生物活性分子が、リボソームによってポリペプチド中に取り込まれた非天然コードアミノ酸の官能基を通じてポリペプチドに結合されている、ＢＳＰ。
【請求項２５】
一又は複数の非天然コードアミノ酸に結合された、リンカー、ポリマー又は生物活性分子を含み、前記非天然コードアミノ酸が、予め選択されたポリペプチドの部位中にリボソームによって取り込まれる、ＢＳＰ。
【請求項２６】
ポリペプチドが配列番号１、２、３、２１、２２、２３、２４及びこれらの断片からなる群から選択されるＢＳＰ。

【図１】

【図２】

【図３】

【図４】

【図５】

【図６】

【図７】

【図８】

【図９】

【図１０】

【図１１】

【図１２】

【図１２】

【公表番号】特表２００８−５０７２８０（Ｐ２００８−５０７２８０Ａ）
【公表日】平成２０年３月１３日（２００８．３．１３）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００７−５２２７３２（Ｐ２００７−５２２７３２）
【出願日】平成１７年７月２１日（２００５．７．２１）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０２５８３４
【国際公開番号】ＷＯ２００６／０９１２３１
【国際公開日】平成１８年８月３１日（２００６．８．３１）
【公序良俗違反の表示】
（特許庁注：以下のものは登録商標）
１．ＴＥＦＬＯＮ
【出願人】（５０６１１７０５７）アンブレツクス・インコーポレイテツド (14)
【Ｆターム（参考）】