高眼圧症の制御および緑内障の治療のためのプレニルトランスフェラーゼ阻害剤
一実施形態において、本発明は、緑内障および高い眼内圧を治療する方法に関し、この方法は、少なくとも１つのプレニルトランスフェラーゼ阻害剤を含む薬学的有効量の組成物を投与することを含む。別の実施形態において、本発明は、高い眼内圧および緑内障を治療するための組成物に関し、この組成物は、薬学的有効量のプレニルトランスフェラーゼ阻害剤を含む。本発明の実施形態において、ＧＧＴａｓｅおよび／またはＦＴａｓｅ阻害剤は房水流出を変化させ、高眼圧症および緑内障の治療に有効であることが実証される場合があることが認識されている。好ましい実施形態において、これらの阻害剤の送達は、局所的な眼球、腔内、硝子体内、網膜下または経強膜的投与によって行われる。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願への相互参照）
この出願は、米国特許法§１１９の下、２００６年３月３１日に出願された米国仮特許出願第６０／７８７，９７１号（この全体の内容は、参考として本明細書に援用される）への優先権を主張する。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は一般的に、高眼圧症および緑内障の治療に関し、より具体的には、高眼圧症および緑内障の治療のためのプレニルトランスフェラーゼ阻害剤に関する。
【背景技術】
【０００３】
（発明の背景）
緑内障と称される病状は、視神経への不可逆的な損傷による、永久的な視覚機能の喪失を特徴とする。いくつかの形態学的または機能的に異なる種類の緑内障は、本疾患の病理学的過程に因果的に関すると考えられる、高い眼内圧（ＩＯＰ）を典型的な特徴とする。高眼圧症とは、眼圧が上昇するものの、視覚機能の明らかな喪失は生じない病態のことであり、このような患者は、緑内障に関連する視力喪失を最終的に発症する危険性が高いと考えられる。緑内障または高眼圧症を早期に発見し、眼圧の上昇を効果的に低下させる薬剤で速やかに治療すると、視覚機能の喪失または視覚機能の進行性低下を一般的に改善することができる。また、緑内障により視野を喪失した患者の中には、比較的眼圧の低い患者もいる。これらの、いわゆる正常眼圧または低眼圧緑内障患者には、ＩＯＰを低下させるおよび／または制御する薬剤も有効である。
【０００４】
眼圧の低下に有効であることが実証されている薬物療法には、房水産生を減少させる薬剤、および房水流出率（ｏｕｔｆｌｏｗ ｆａｃｉｌｉｔｙ）を増加させる薬剤の両方が含まれる。このような療法は、一般的に、局所的（目に直接点眼）または経口的という２つの可能な経路のうちの１つにより投与される。しかし、薬学的な抗高眼圧アプローチ（ｏｃｕｌａｒ ａｎｔｉ−ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ）により、様々な望ましくない副作用が生じている。例えば、ピロカルピンなどの縮瞳薬により、霧視、頭痛、およびその他のマイナスの視覚的副作用が生じることがある。また、全身に投与した炭酸脱水酵素阻害剤により、悪心、消化不良、疲労、および代謝性アシドーシスが生じることもある。特定のプロスタグランジンにより、充血、眼のかゆみ、ならびにまつ毛および眼窩周囲の皮膚の黒ずみが生じる。このようなマイナスの副作用により、患者のコンプライアンスが低下するか、治療が中止され、正常な視力が低下し続ける場合がある。さらには、特定の現存の緑内障療法で治療した時に全く良好な応答を示さない個体も存在する。したがって、緑内障および高眼圧症を治療するための他の治療薬剤が必要とされている。
【０００５】
プレニルトランスフェラーゼは、コレステロールの合成およびメバロン酸塩の生成を含むイソプレノイド生合成経路の一部である。ゲラニルゲラニルピロリン酸（ＧＧＰＰ）およびファルネシルピロリン酸（ＦＰＰ）などのメバロン酸塩の下流代謝産物は、タンパク質の翻訳後プロセシングに使用される。このようなプロセシング中に、Ｃ末端アミノ酸モチーフＣＡＡＸにおいて、プレニルトランスフェラーゼＦＴａｓｅおよびＧＧＴａｓｅは、ファルネシル（Ｃ１５）またはゲラニルゲラニル（Ｃ２０）脂質アンカーをタンパク質システイン残基に転移する。Ｒａｓ、ＲａｂおよびＲｈｏなどのプロセシングされたタンパク質は、細胞増殖、細胞シグナル伝達、およびアポトーシスに関与する場合がある（非特許文献１）。特に、Ｒｈｏに依存した細胞性アクチン細胞骨格の変化により、おそらくは眼組織を含む細胞の形状、収縮性および運動性が変化する場合がある（非特許文献２；非特許文献３；非特許文献４）。癌性の病状におけるプレニルトランスフェラーゼの役割については、現在当該技術分野で積極的に研究されている。
【０００６】
小柱網細胞によって産生される結合組織増殖因子（ＣＴＧＦ）および１型プラスミノーゲン活性化因子阻害剤（ＰＡＩ−１）などの因子は、高ＩＯＰの状態の間に増加する場合がある（非特許文献５；非特許文献６；非特許文献７；非特許文献８；非特許文献９；非特許文献１０）。したがって、このような因子が緑内障の病原発生に寄与する場合がある。
【非特許文献１】Ｄｏｌｌら、Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ Ｄｅｖｅｌ．，２００４，Ｖｏｌ．７（４）：４７８−４８６
【非特許文献２】Ｒａｏら、ＩＯＶＳ，２００１，Ｖｏｌ．４２：１０２９
【非特許文献３】Ｒａｏら、Ｅｘｐ Ｅｙｅ Ｒｅｓ，２００５，Ｖｏｌ．８０：１９７−２０６
【非特許文献４】Ｃｅｌｌｉｎｉら、Ｏｐｈｔｈ Ｒｅｓ，２００５，Ｖｏｌ．３７：４３−４９
【非特許文献５】Ｋｉｒｗａｎら、Ｇｌｉａ．，２００５ Ｄｅｃ，Ｖｏｌ．５２（４）：３０９−２４
【非特許文献６】Ｌｉｔｏｎら、Ｊ Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ．，２００５ Ｄｅｃ．，Ｖｏｌ．２０５（３）：３６４−７１
【非特許文献７】Ｅｓｓｏｎら、Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ．，２００４ Ｆｅｂ．，Ｖｏｌ．４５（２）：４８５−９１
【非特許文献８】Ｄａｎｉｅｌｓら、Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ．，２００３ Ｎｏｖ．，Ｖｏｌ．１６３（５）：２０４３−５２
【非特許文献９】Ｌｉａｎｇら、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．，２００３ Ｊｕｌ １８，Ｖｏｌ．２７８（２９）：２７２６７−７７
【非特許文献１０】Ｈｏら、Ｂｒ．Ｊ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．，２００５，Ｖｏｌ．８９：１６９−１７３
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、プレニルトランスフェラーゼゲラニルゲラニルトランスフェラーゼ（ＧＧＴａｓｅ）およびファルネシルトランスフェラーゼ（ＦＴａｓｅ）の阻害剤を使用した、緑内障および高眼圧症の治療に関する。本発明の実施形態において、ＧＧＴａｓｅおよび／またはＦＴａｓｅ阻害剤は房水流出を変化させ、高眼圧症および緑内障の治療に有効であることが実証される場合があることが認識されている。好ましい実施形態において、これらの阻害剤の送達は、局所的な眼球、腔内、硝子体内、網膜下または経強膜的投与によって行われる。
【０００８】
本発明が企図する特定の化合物は、ＧＧＴａｓｅおよびＦＴａｓｅの両阻害活性を有する場合があり、また単独または組成物中で投与される場合がある。他の実施形態においては、個々のＧＧＴａｓｅおよびＦＴａｓｅの阻害化合物を、同じ組成物中で一緒に、または単独で個別に、または異なる組成物中で投与される。
【０００９】
本発明のさらなる特徴は、緑内障を治療または予防する方法であって、小柱網細胞による結合組織増殖因子（ＣＴＧＦ）および１型プラスミノーゲン活性化因子阻害剤（ＰＡＩ−１）の産生を大幅に減少させる方法を提供することである。
【００１０】
前述の概要は、本発明の特定の実施形態の特徴および技術的利点を大まかに説明したものである。さらなる特徴および技術的な利点を、以下の本発明の詳細な説明に記載する。本発明の特徴であると考えられる新規の特徴は、本発明の詳細な説明において、添付図面と照らし合わせて考慮すると、よりよく理解されるであろう。しかし、本明細書で提供される図面は、本発明の説明を助けるか、または本発明の理解を深めるのを助けることを意図するものであって、本発明の適用範囲を定めることを意図するものではない。
【００１１】
本発明および本発明の利点は、同じ参照番号が同じ特徴を示す添付の図面とともに以下の説明を参照することによって、より詳細に理解することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
（発明の詳細な説明）
いくつかの実施形態において、本発明は、高眼圧症および緑内障の治療のためのＧＧＴａｓｅおよびＦＴａｓｅ阻害剤に関する。他の実施形態は、このようなＧＧＴａｓｅおよびＦＴａｓｅ阻害化合物を投与することにより高眼圧症および緑内障を治療する方法を含む。本発明の実施形態によるＧＧＴａｓｅ／ＦＴａｓｅ阻害剤の投与によって、阻害剤は小柱網などの適切な標的組織に治療レベルで到達し、それによって緑内障によるさらなる眼損傷を軽減かつ予防できる場合がある。
【００１３】
本発明の実施形態で使用されるＧＧＴａｓｅ阻害剤は、特に、参考として本明細書で援用される、米国特許第６，６９３，１２３号、第６，６２７，６１０号、第６，２１０，０９５号、第６，２２１，８６５号、第６，２０４，２９３号、第５，９６５，５３９号、および第５，７８９，５５８号に列挙されるＧＧＴａｓｅ阻害化合物を含む。
【００１４】
本発明の実施形態で使用されるＦＴａｓｅ阻害剤は、特に、参考として本明細書で援用される、米国特許第６，６９３，１２３号、第６，６２７，６１０号、第６，３１０，０９５号、第６，２２１，８６５号、第６，２１８，３７５号、第６，２０４，２９３号、第６，０８３，９８５号、第６，０８３，９１７号、第６，０１１，１７５号、第５，８５６，３１０号、および第５，８３４，４３４号に列挙されるＦＴａｓｅ阻害化合物を含む。本発明の実施形態で使用されるさらなるＦＴａｓｅ阻害剤には、ＦＴＩ−２７６、ＦＴＩ−２７７、Ｌ−７３９，７４９、Ｌ−７３９，７５０、Ｌ−７４５，６３１、ＲＰＲ−１３０４０１、ＢＭＳ−１９３２６９、ＢＭＳ−１８４８７８、ＳＣＨ−６６３３６、ＢＺＡ−２Ｂ、ＢＺＡ−５Ｂ、Ｒ−１１５７７７、Ｂ９５６、Ｂ１０８６、およびファルネシルメチルヒドロキシホスフィニルメチルホスホン酸がある（Ｓｅｂｔｉら、Ｅｘｐ Ｏｐｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ Ｄｒｕｇｓ，２０００，Ｖｏｌ．９（１２）：２７６７−２７８２； Ｓｅｂｔｉ，Ｔｈｅ Ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ，２００３，Ｖｏｌ．８（Ｓｕｐｐ ３）：３０−３８）。
【００１５】
本発明の特定の実施形態は、ＧＧＴａｓｅおよびＦＴａｓｅの両阻害活性を有する化合物を含み、一般的にはＣＡＡＸモチーフに基づくペプチド模倣阻害剤である。このような化合物の例には、Ｃ−Ｖ−Ｉ−Ｍ、Ｃ−Ｖ−Ｌ−Ｌ、ＦＴＩ−２７６、ＦＴＩ−２７７、ＧＧＴＩ−２９７、ＧＧＴＩ−２９８、ＦＴＩ−２１４８、ＦＴＩ−２１５３、ＧＧＴＩ−２１５４、ＧＧＴＩ−２１６６、Ｒ１１５７７７、ＳＣＨ６６３３６、ＨＦＰＡが含まれるが、これらに限定されない（Ｓｅｂｔｉら、Ｅｘｐ Ｏｐｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ Ｄｒｕｇｓ，２０００，Ｖｏｌ．９（１２）：２７６７−２７８２）； Ｓｅｂｔｉ，Ｔｈｅ Ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ，２００３，Ｖｏｌ．８（Ｓｕｐｐ ３）：３０−３８）。イミダゾールメチルジアリールエーテル構造の変更により、ＦＴａｓｅおよびＧＧＴａｓｅの２重阻害活性が発揮されることが明らかにされている（ＦＴａｓｅ ＩＣ５０＝２．９ｎＭ、ＧＧＴａｓｅ ＩＣ５０＝７．１ｎＭ）。これらの化合物のいくつかには、ＧＧＴａｓｅ特異的活性を有する化合物（ＧＧＴＩ−２８６およびＧＧＴＩ−２９８）のほか、以下に示すものがある。
【００１６】
【化１】
上述の市販される化合物には阻害定数があり、それを以下の表１に示す。これらの化合物はまた、当業者に既知の技法を使用して合成することもできる。
【００１７】
【表１】
本明細書に開示される化合物は、１つ以上のキラル中心を含有することができることが認識されている。本発明は、本明細書に開示される化合物のすべてのエナンチオマー、ジアステレオマーおよび混合物を企図する。さらに、本発明の特定の実施形態は、開示化合物の薬学的に許容される塩を含む。薬学的に許容される塩には、アレルギー反応または毒性などの過度の望ましくない作用を及ぼすことなく疾患を治療するのに適した可溶性または分散性形態の化合物が含まれるが、これらに限定されない。代表的な薬学的に許容される塩には、酢酸塩、クエン酸塩、安息香酸塩、乳酸塩またはリン酸塩などの酸付加塩、およびリチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩またはアルミニウム塩などの塩基付加塩が含まれるが、これらに限定されない。
【００１８】
指示された構造単位に組み込む場合に単独でまたは複数で置換基が存在する場合があることを認識することが重要である。例えば、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素を意味する置換基ハロゲンは、ハロゲン置換基の結合する単位が、同じである場合もあれば異なる場合もある１つ以上のハロゲン原子で置換される場合があることを示すと思われる。
【００１９】
送達方法
本発明のＧＧＴａｓｅおよびＦＴａｓｅ阻害化合物は、送達のために、様々な種類の眼科用製剤に組み入れることができる。本化合物は、当業者に周知の技法を使用して、直接眼に送達する場合もあれば（例えば、局所的な点眼または軟膏；結膜円蓋に移植されるか、または強膜の隣接部位もしくは眼の内部に移植される薬学的薬剤送達スポンジなどの徐放装置；眼周囲、結膜、テノン嚢下、腔内、硝子体内または視神経管内注射）、あるいは全身に送達する場合もある（例えば、経口、静脈内、皮下または筋内注射；非経口的、皮膚または鼻送達）。さらに、本発明のＧＧＴａｓｅおよびＦＴａｓｅ阻害化合物は、眼内挿入物または植え込み型器具内で処方される場合があることも企図される。
【００２０】
本明細書に開示されるＧＧＴａｓｅおよびＦＴａｓｅ阻害化合物は、眼への送達のために、局所的な眼科用製剤に組み入れるのが好ましい。本化合物は、眼科的に許容される防腐剤、界面活性剤、増粘剤、浸透促進剤、緩衝剤、塩化ナトリウム、および水と混合して、水性滅菌眼科用懸濁液または溶液を生成する場合がある。眼科用溶液製剤は、生理学的に許容される等張水性緩衝剤中で化合物を溶解させることにより調製される場合がある。さらに、眼科用溶液は、本化合物の溶解を助けるために、眼科的に許容される界面活性剤を含む場合もある。さらに、眼科用溶液は、結膜嚢における製剤の保持を改善するために、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース、ポリビニルピロリドンなどの増粘性薬剤を含有する場合もある。ジェランガムおよびキサンタンガムを含むがこれらに限定されないゲル化剤を使用することも可能である。滅菌眼科用軟膏製剤を調製するには、鉱油、液体ラノリンまたは白色ワセリンなどの適切なビヒクル中で、有効成分を防腐剤と混合する。滅菌眼科用ゲル製剤は、類似の眼科用製剤の公開された処方に従って、例えばｃａｒｂｏｐｏｌ−９７４などの組み合わせから調製される親水性基剤中で化合物を懸濁することにより調製される場合があり、防腐剤および等張化剤（ｔｏｎｉｃｉｔｙ ａｇｅｎｔ）を組み込むことができる。
【００２１】
ＧＧＴａｓｅおよびＦＴａｓｅ阻害化合物は、ｐＨ約４〜８の局所的な眼科用懸濁液または溶液として処方するのが好ましい。本化合物は、緑内障患者の中で高ＩＯＰを経験するおよび／または正常なＩＯＰレベルを維持する患者のＩＯＰを低下させるのに十分な量にて、局所的な懸濁液または溶液中に含有される。このような量は、本明細書において「ＩＯＰを制御するのに有効な量」と、あるいはより簡単に「有効量」と称する。本化合物は通常、０．０１〜５重量／体積パーセント（「ｗ／ｖ％」）の量にて、好ましくは０．２５〜２ｗ／ｖ％の量にて、これらの製剤に含有される。したがって、局所的な提示のために、熟練した臨床医の判断により、これらの製剤が１〜２滴、眼の表面に１日１〜４回送達される。
【００２２】
ＧＧＴａｓｅおよびＦＴａｓｅ阻害化合物はまた、ｒｈｏキナーゼ阻害剤、β遮断薬、プロスタグランジン類似体、炭酸脱水酵素阻害剤、α２作動薬、縮瞳薬、および神経保護剤などがあるがこれらに限定されない他の高ＩＯＰ治療薬または緑内障治療薬と併用することも可能である。
【００２３】
生物活性の測定
ｉｎ ｖｉｔｒｏ生物活性アッセイ
特定の化合物のＧＧＴａｓｅおよびＦＴａｓｅを阻害する能力は、特定の実施形態においては、Ｂｕｒｋｅら、ＰＮＡＳ，１９９９，Ｖｏｌ．９６：２３：１３０６２−１３０６７、およびＧｏｏｓｓｅｎｓら、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ａｎａｌｙ．，２００５，Ｖｏｌ．３７：４１７−４２２に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏでのプレニルトランスフェラーゼアッセイなどのｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイにより評価される場合がある。簡潔に述べると、Ｇｏｏｓｓｅｎｓ法を使用して、いずれかの酵素のためのダンシル化された（ｄａｎｓｙｌａｔｅｄ）ペプチド基質とともにＧＧＴａｓｅおよびＦＴａｓｅを含む実験用および対照用調製物が作製された。この実験用調製物に試験化合物を添加して、反応を進行させる。この反応の後、各ペプチドの蛍光反応を測定する。対照に比べて測定された蛍光の減少は、試験化合物についてのより大きな阻害活性を表す。
【００２４】
ｉｎ ｖｉｖｏ生物活性試験
特定のＧＧＴａｓｅおよびＦＴａｓｅ阻害化合物の各酵素を安全に阻害する能力は、特定の実施形態においては、ニュージーランドアルビノウサギおよび／またはカニクイザルを使用したｉｎ ｖｉｖｏアッセイにより評価される場合がある。
【００２５】
ニュージーランドアルビノウサギにおける眼の安全性評価
５羽のニュージーランドアルビノウサギの両眼に、ビヒクル中の試験化合物の１つの３０μＬアリコートを局所投与し、他の動物５羽にはビヒクルのみを投与する。これらの動物を、投与から０．５時間継続して監視した後、２時間まで０．５時間ごとに、または作用が認められなくなるまで継続して監視する。
【００２６】
ニュージーランドアルビノウサギにおける急性ＩＯＰ反応
０．１％のプロパラカインによる軽い角膜麻酔後に、Ｍｅｎｔｏｒ Ｃｌａｓｓｉｃ ３０ニューマトノメーター（ｐｎｅｕｍａｔｏｎｏｍｅｔｅｒ）を使用して、眼内圧（ＩＯＰ）を測定する。各測定後に、眼を１滴または２滴の生理食塩水ですすぐ。ベースラインにおけるＩＯＰの測定後に、試験化合物の３０μＬアリコート１つを各動物の片眼または両眼に点眼するか、あるいは化合物を片眼に、ビヒクルを反対の眼に点眼する。その後、０．５、１、２、３、４および５時間後にＩＯＰの測定を行う。
【００２７】
カニクイザルにおける急性ＩＯＰ反応
既述の通り（Ｓｈａｒｉｆら、Ｊ．Ｏｃｕｌａｒ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．，２００１，Ｖｏｌ．１７：３０５−３１７； Ｍａｙら、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．，２００３，Ｖｏｌ．３０６：３０１−３０９）、０．１％のプロパラカインによる軽い角膜麻酔後に、Ａｌｃｏｎのニューマトノメーターを使用して、眼内圧（ＩＯＰ）を測定する。各測定後に、眼を１滴または２滴の生理食塩水ですすぐ。ベースラインにおけるＩＯＰの測定後に、試験化合物の３０μＬアリコート１つ（３００μｇ）または２つ（６００μｇ）を、９匹のカニクイザルの選択された眼に点眼する。他の動物６匹の選択された眼にはビヒクルを点眼する。その後、１時間、３時間および６時間後にＩＯＰ測定を行う。すべての動物の右眼には、高眼圧症を誘発するために、レーザー線維柱帯形成術を行った。左眼はすべて正常であり、そのため正常のＩＯＰを有している。
【実施例】
【００２８】
以下の実施例は、本発明の特定の実施形態を説明するために提供されるが、本発明の特許請求の範囲の限定を暗示するものとして解釈するべきではない。例えば、実施例４における「プレニルトランスフェラーゼ阻害剤」という語句は、記載の製剤が本明細書に開示されるいずれかのＧＧＴａｓｅおよびＦＴａｓｅ阻害化合物に適すると考えられることを意味する。
【００２９】
（実施例１）
ＲＮＡの単離および定量的ＲＴ−ＰＣＲ
全ＲＮＡを、製造元（Ｑｉａｇｅｎ）の説明書に従い、Ｑｉａｇｅｎ ＲＮｅａｓｙ ９６システムを使用して、ＴＭ細胞から単離した。
【００３０】
ＣＴＧＦおよびＰＡＩ−１の差異的発現を、基本的に既述の通り（Ｓｈｅｐａｒｄら、ＩＯＶＳ，２００１，Ｖｏｌ．４２：３１７３）、ＡＢＩ Ｐｒｉｓｍ（登録商標） ７７００ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して、定量的リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ（ＱＲＴ−ＰＣＲ）により検証した。ＣＴＧＦ増幅用のプライマーは、Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＮＭ＿００１９０１．１（プローブ配列６ＦＡＭ−ＡＡＴＣＧＡＣＡＧＧＡＴＴＣＣＧＡＴＴＣＣＴＧＡＡＣＡＧＴＧ−ＴＡＭＲＡを有する、ＣＡＧＣＴＣＴＧＡＣＡＴＴＣＴＧＡＴＴＣＧＡＡ（ヌクレオチド１６６７〜１６８９）およびＴＧＣＣＡＣＡＡＧＣＴＧＴＣＣＡＧＴＣＴ（ヌクレオチド１７２３〜１７４２）の隣接するエクソンにアニーリングするために、Ｐｒｉｍｅｒ Ｅｘｐｒｅｓｓソフトウェア（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して設計されており、７６−ｂｐの単位複製配列を生成する。ＰＡＩ−１増幅用プライマーは、ＡＢＩ（Ｈｓ００１６７１５５＿ｍｌ）から購入したものであり、Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＮＭ＿０００６０２．１に対応する。ＣＴＧＦまたはＰＡＩ−１の増幅は、６９−ｂｐの単位複製配列を生成する１８Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子（プローブ配列６ＦＡＭ−ＣＴＧＣＡＡＧＣＡＴＡＴＡＡＴＡＣＡ−ＭＧＢＮＦＱを有する、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号Ｘ０３２０５ ＧＴＣＣＣＴＧＣＣＣＴＴＴＧＴＡＣＡＣＡＣ（ヌクレオチド１６８０〜１７００）およびＣＧＡＴＣＣＧＡＧＧＧＣＣＴＣＡＣＴＡ（ヌクレオチド１７３０〜１７４９）に対して設計されたプライマーを使用して、１８ＳリボソームＲＮＡの発現に正規化した。ＣＴＧＦまたはＰＡＩ−１のＱＲＴ−ＰＣＲを、１８Ｓプライマー／プローブセットを使用して、４０ｎＭの１８Ｓ、９００ｎＭのＣＴＧＦ、またはＰＡＩ−１プライマー；１００ｎＭの１８Ｓプローブ、１００ｎＭのＣＴＧＦ、または２５０ｎＭのＰＡＩ−１プローブ；５μＬのＲＮＡ；１×のＭｕｌｔｉｓｃｒｉｂｅおよびＲＮａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ Ｍｉｘ（ＡＢＩ）；ならびに１×のＴａｑＭａｎ（登録商標） Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｍｉｘ（ＡＢＩ）からなる最終容量５０μＬ中で、多重（ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ）で行った。熱サイクル条件は、４８℃にて３０分、９５℃にて１０分の後、９５℃にて１５秒、６０℃にて１分の４０サイクルで構成した。データ分析は、ＳＤＳソフトウェアＶｅｒ．１．９．１（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）およびＭＳ Ｅｘｃｅｌ ２００２（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ）を使用して行った。相対的なＲＮＡ濃度の定量化を、ＰＥ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ Ｕｓｅｒ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ ＃２に記載のデルタデルタＣｔ法を使用して行った。増幅産物のレベルは、ＱＲＴ−ＰＣＲ ４重アッセイの平均±ＳＥＭとして表した。データ分析は、ＳＤＳソフトウェアＶｅｒ．１．９．１（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）およびＭＳ Ｅｘｃｅｌ ９７（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ）を使用して行った。
【００３１】
（実施例２）
ＴＧＦβ刺激されたＣＴＧＦおよびＰＡＩ−１遺伝子発現の阻害
本実施例では、培養したヒト小柱網細胞におけるＣＴＧＦ遺伝子の発現に対するＧＧＴａｓｅおよびＦＴａｓｅ阻害剤の効果を試験した。結果を図１および図２に要約する。本試験では、実施例１のプロトコルに従い、ＱＲＴ−ＰＣＲによってＣＴＧＦ／１８Ｓ ｃＤＮＡレベルを測定および比較した。
【００３２】
図１の結果の要約からも分かる通り、ＧＧＴａｓｅ阻害剤であるＧＧＴＩ−２１３３を、種々のＴＭ細胞培養物中のＣＴＧＦレベルに対する効果を測定するために試験した。図１に示す通り、ＴＧＦβ２がビヒクル中に存在した場合には、ビヒクルのみの場合に比べて、測定したＣＴＧＦレベルが高かった。ＣＴＧＦおよびＧＧＴＩ−２１３３の両方で処理した細胞培養物では、測定したＣＴＧＦレベルが、ビヒクルのみの場合よりも低く、ＴＧＦβ２で処置した細胞に比べるとＣＴＧＦレベルが劇的に低かった。
【００３３】
図２に示す結果では、ＦＴａｓｅ ＦＴＩ−２７７もまた、ＴＧＦβ２のみで処置した細胞株とＴＧＦβ２およびＦＴＩ−２７７の両方で処置した細胞株とを比べると、測定したＣＴＧＦレベルの低下を生じることが示されている。
【００３４】
図３では、ＧＧＴＩ−２１３３とＦＴＩ−２７７がいずれも、ＴＧＦβ２のみで処置した細胞株とＴＧＦβ２およびＧＧＴＩ−２１３３またはＦＴＩ−２７７の両方で処置した細胞株とを比べると、測定したＰＡＩ−１レベルの低下を生じ得ることが示されている。
【００３５】
（実施例３）
図４は、試験化合物による処置後に、培養培地への乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）の放出を測定するＣｙｔｏＴｏｘ−ＯＮＥ Ｈｏｍｏｇｅｎｏｕｓ Ｍｅｍｂｒａｎｅ Ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して、ＧＧＴＩ−２１３３およびＦＴＩ−２７７の細胞毒性作用を表すグラフを示している。いずれの化合物も、試験したすべての濃度において、ビヒクルのみの場合の測定値と似たＬＤＨ放出測定値を有していた。したがって、いずれの化合物も細胞毒性が比較的低いと考えられる。
【００３６】
（実施例４）
【００３７】
【表２】
（実施例５）
【００３８】
【表３】
（実施例６）
【００３９】
【表４】
（実施例７）
【００４０】
【表５】
以上において本発明およびその実施形態を詳細に説明してきた。しかし、本発明の適用範囲は、本明細書に記載のいずれかのプロセス、製造物、組成物、化合物、手段、方法および／または手順の特定の実施形態に限定されることを意図していない。本発明の趣旨および／または本質的な特徴から逸脱することなく、開示する材料の種々の改変、代用および変更を行うことができる。したがって、本明細書に記載の実施形態と本質的に同じ機能を果たすか、本質的に同じ結果を達成する、後の改変、代用および／または変更が、本発明のこのような関連する実施形態に従って利用される場合があることを、当業者であれば本開示内容から容易に理解するであろう。そのため、以下の特許請求の範囲は、本明細書に開示されるプロセス、製造物、組成物、化合物、手段、方法および／または手順の改変、代用および変更をその範囲内に包含することが意図される。
【図面の簡単な説明】
【００４１】
【図１】ＴＭ細胞株における、基底におけるおよびＴＧＦβ２誘導性のＣＴＧＦ遺伝子発現に対するゲラニルゲラニルトランスフェラーゼ阻害剤の効果を示すグラフである。
【図２】ＴＭ細胞株における、基底におけるおよびＴＧＦβ２誘導性のＣＴＧＦ遺伝子発現に対するファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤の効果を示すグラフである。
【図３】ＴＭ細胞株における、基底におけるおよびＴＧＦβ２誘導性のＰＡＩ−１遺伝子発現に対するゲラニルゲラニルトランスフェラーゼ阻害剤およびファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤の効果を示すグラフである。
【図４】ゲラニルゲラニルトランスフェラーゼ阻害剤およびファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤の細胞毒性作用を表すグラフを示す。
【技術分野】
【０００１】
（関連出願への相互参照）
この出願は、米国特許法§１１９の下、２００６年３月３１日に出願された米国仮特許出願第６０／７８７，９７１号（この全体の内容は、参考として本明細書に援用される）への優先権を主張する。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は一般的に、高眼圧症および緑内障の治療に関し、より具体的には、高眼圧症および緑内障の治療のためのプレニルトランスフェラーゼ阻害剤に関する。
【背景技術】
【０００３】
（発明の背景）
緑内障と称される病状は、視神経への不可逆的な損傷による、永久的な視覚機能の喪失を特徴とする。いくつかの形態学的または機能的に異なる種類の緑内障は、本疾患の病理学的過程に因果的に関すると考えられる、高い眼内圧（ＩＯＰ）を典型的な特徴とする。高眼圧症とは、眼圧が上昇するものの、視覚機能の明らかな喪失は生じない病態のことであり、このような患者は、緑内障に関連する視力喪失を最終的に発症する危険性が高いと考えられる。緑内障または高眼圧症を早期に発見し、眼圧の上昇を効果的に低下させる薬剤で速やかに治療すると、視覚機能の喪失または視覚機能の進行性低下を一般的に改善することができる。また、緑内障により視野を喪失した患者の中には、比較的眼圧の低い患者もいる。これらの、いわゆる正常眼圧または低眼圧緑内障患者には、ＩＯＰを低下させるおよび／または制御する薬剤も有効である。
【０００４】
眼圧の低下に有効であることが実証されている薬物療法には、房水産生を減少させる薬剤、および房水流出率（ｏｕｔｆｌｏｗ ｆａｃｉｌｉｔｙ）を増加させる薬剤の両方が含まれる。このような療法は、一般的に、局所的（目に直接点眼）または経口的という２つの可能な経路のうちの１つにより投与される。しかし、薬学的な抗高眼圧アプローチ（ｏｃｕｌａｒ ａｎｔｉ−ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ）により、様々な望ましくない副作用が生じている。例えば、ピロカルピンなどの縮瞳薬により、霧視、頭痛、およびその他のマイナスの視覚的副作用が生じることがある。また、全身に投与した炭酸脱水酵素阻害剤により、悪心、消化不良、疲労、および代謝性アシドーシスが生じることもある。特定のプロスタグランジンにより、充血、眼のかゆみ、ならびにまつ毛および眼窩周囲の皮膚の黒ずみが生じる。このようなマイナスの副作用により、患者のコンプライアンスが低下するか、治療が中止され、正常な視力が低下し続ける場合がある。さらには、特定の現存の緑内障療法で治療した時に全く良好な応答を示さない個体も存在する。したがって、緑内障および高眼圧症を治療するための他の治療薬剤が必要とされている。
【０００５】
プレニルトランスフェラーゼは、コレステロールの合成およびメバロン酸塩の生成を含むイソプレノイド生合成経路の一部である。ゲラニルゲラニルピロリン酸（ＧＧＰＰ）およびファルネシルピロリン酸（ＦＰＰ）などのメバロン酸塩の下流代謝産物は、タンパク質の翻訳後プロセシングに使用される。このようなプロセシング中に、Ｃ末端アミノ酸モチーフＣＡＡＸにおいて、プレニルトランスフェラーゼＦＴａｓｅおよびＧＧＴａｓｅは、ファルネシル（Ｃ１５）またはゲラニルゲラニル（Ｃ２０）脂質アンカーをタンパク質システイン残基に転移する。Ｒａｓ、ＲａｂおよびＲｈｏなどのプロセシングされたタンパク質は、細胞増殖、細胞シグナル伝達、およびアポトーシスに関与する場合がある（非特許文献１）。特に、Ｒｈｏに依存した細胞性アクチン細胞骨格の変化により、おそらくは眼組織を含む細胞の形状、収縮性および運動性が変化する場合がある（非特許文献２；非特許文献３；非特許文献４）。癌性の病状におけるプレニルトランスフェラーゼの役割については、現在当該技術分野で積極的に研究されている。
【０００６】
小柱網細胞によって産生される結合組織増殖因子（ＣＴＧＦ）および１型プラスミノーゲン活性化因子阻害剤（ＰＡＩ−１）などの因子は、高ＩＯＰの状態の間に増加する場合がある（非特許文献５；非特許文献６；非特許文献７；非特許文献８；非特許文献９；非特許文献１０）。したがって、このような因子が緑内障の病原発生に寄与する場合がある。
【非特許文献１】Ｄｏｌｌら、Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ Ｄｅｖｅｌ．，２００４，Ｖｏｌ．７（４）：４７８−４８６
【非特許文献２】Ｒａｏら、ＩＯＶＳ，２００１，Ｖｏｌ．４２：１０２９
【非特許文献３】Ｒａｏら、Ｅｘｐ Ｅｙｅ Ｒｅｓ，２００５，Ｖｏｌ．８０：１９７−２０６
【非特許文献４】Ｃｅｌｌｉｎｉら、Ｏｐｈｔｈ Ｒｅｓ，２００５，Ｖｏｌ．３７：４３−４９
【非特許文献５】Ｋｉｒｗａｎら、Ｇｌｉａ．，２００５ Ｄｅｃ，Ｖｏｌ．５２（４）：３０９−２４
【非特許文献６】Ｌｉｔｏｎら、Ｊ Ｃｅｌｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ．，２００５ Ｄｅｃ．，Ｖｏｌ．２０５（３）：３６４−７１
【非特許文献７】Ｅｓｓｏｎら、Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ．，２００４ Ｆｅｂ．，Ｖｏｌ．４５（２）：４８５−９１
【非特許文献８】Ｄａｎｉｅｌｓら、Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ．，２００３ Ｎｏｖ．，Ｖｏｌ．１６３（５）：２０４３−５２
【非特許文献９】Ｌｉａｎｇら、Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．，２００３ Ｊｕｌ １８，Ｖｏｌ．２７８（２９）：２７２６７−７７
【非特許文献１０】Ｈｏら、Ｂｒ．Ｊ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．，２００５，Ｖｏｌ．８９：１６９−１７３
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、プレニルトランスフェラーゼゲラニルゲラニルトランスフェラーゼ（ＧＧＴａｓｅ）およびファルネシルトランスフェラーゼ（ＦＴａｓｅ）の阻害剤を使用した、緑内障および高眼圧症の治療に関する。本発明の実施形態において、ＧＧＴａｓｅおよび／またはＦＴａｓｅ阻害剤は房水流出を変化させ、高眼圧症および緑内障の治療に有効であることが実証される場合があることが認識されている。好ましい実施形態において、これらの阻害剤の送達は、局所的な眼球、腔内、硝子体内、網膜下または経強膜的投与によって行われる。
【０００８】
本発明が企図する特定の化合物は、ＧＧＴａｓｅおよびＦＴａｓｅの両阻害活性を有する場合があり、また単独または組成物中で投与される場合がある。他の実施形態においては、個々のＧＧＴａｓｅおよびＦＴａｓｅの阻害化合物を、同じ組成物中で一緒に、または単独で個別に、または異なる組成物中で投与される。
【０００９】
本発明のさらなる特徴は、緑内障を治療または予防する方法であって、小柱網細胞による結合組織増殖因子（ＣＴＧＦ）および１型プラスミノーゲン活性化因子阻害剤（ＰＡＩ−１）の産生を大幅に減少させる方法を提供することである。
【００１０】
前述の概要は、本発明の特定の実施形態の特徴および技術的利点を大まかに説明したものである。さらなる特徴および技術的な利点を、以下の本発明の詳細な説明に記載する。本発明の特徴であると考えられる新規の特徴は、本発明の詳細な説明において、添付図面と照らし合わせて考慮すると、よりよく理解されるであろう。しかし、本明細書で提供される図面は、本発明の説明を助けるか、または本発明の理解を深めるのを助けることを意図するものであって、本発明の適用範囲を定めることを意図するものではない。
【００１１】
本発明および本発明の利点は、同じ参照番号が同じ特徴を示す添付の図面とともに以下の説明を参照することによって、より詳細に理解することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
（発明の詳細な説明）
いくつかの実施形態において、本発明は、高眼圧症および緑内障の治療のためのＧＧＴａｓｅおよびＦＴａｓｅ阻害剤に関する。他の実施形態は、このようなＧＧＴａｓｅおよびＦＴａｓｅ阻害化合物を投与することにより高眼圧症および緑内障を治療する方法を含む。本発明の実施形態によるＧＧＴａｓｅ／ＦＴａｓｅ阻害剤の投与によって、阻害剤は小柱網などの適切な標的組織に治療レベルで到達し、それによって緑内障によるさらなる眼損傷を軽減かつ予防できる場合がある。
【００１３】
本発明の実施形態で使用されるＧＧＴａｓｅ阻害剤は、特に、参考として本明細書で援用される、米国特許第６，６９３，１２３号、第６，６２７，６１０号、第６，２１０，０９５号、第６，２２１，８６５号、第６，２０４，２９３号、第５，９６５，５３９号、および第５，７８９，５５８号に列挙されるＧＧＴａｓｅ阻害化合物を含む。
【００１４】
本発明の実施形態で使用されるＦＴａｓｅ阻害剤は、特に、参考として本明細書で援用される、米国特許第６，６９３，１２３号、第６，６２７，６１０号、第６，３１０，０９５号、第６，２２１，８６５号、第６，２１８，３７５号、第６，２０４，２９３号、第６，０８３，９８５号、第６，０８３，９１７号、第６，０１１，１７５号、第５，８５６，３１０号、および第５，８３４，４３４号に列挙されるＦＴａｓｅ阻害化合物を含む。本発明の実施形態で使用されるさらなるＦＴａｓｅ阻害剤には、ＦＴＩ−２７６、ＦＴＩ−２７７、Ｌ−７３９，７４９、Ｌ−７３９，７５０、Ｌ−７４５，６３１、ＲＰＲ−１３０４０１、ＢＭＳ−１９３２６９、ＢＭＳ−１８４８７８、ＳＣＨ−６６３３６、ＢＺＡ−２Ｂ、ＢＺＡ−５Ｂ、Ｒ−１１５７７７、Ｂ９５６、Ｂ１０８６、およびファルネシルメチルヒドロキシホスフィニルメチルホスホン酸がある（Ｓｅｂｔｉら、Ｅｘｐ Ｏｐｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ Ｄｒｕｇｓ，２０００，Ｖｏｌ．９（１２）：２７６７−２７８２； Ｓｅｂｔｉ，Ｔｈｅ Ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ，２００３，Ｖｏｌ．８（Ｓｕｐｐ ３）：３０−３８）。
【００１５】
本発明の特定の実施形態は、ＧＧＴａｓｅおよびＦＴａｓｅの両阻害活性を有する化合物を含み、一般的にはＣＡＡＸモチーフに基づくペプチド模倣阻害剤である。このような化合物の例には、Ｃ−Ｖ−Ｉ−Ｍ、Ｃ−Ｖ−Ｌ−Ｌ、ＦＴＩ−２７６、ＦＴＩ−２７７、ＧＧＴＩ−２９７、ＧＧＴＩ−２９８、ＦＴＩ−２１４８、ＦＴＩ−２１５３、ＧＧＴＩ−２１５４、ＧＧＴＩ−２１６６、Ｒ１１５７７７、ＳＣＨ６６３３６、ＨＦＰＡが含まれるが、これらに限定されない（Ｓｅｂｔｉら、Ｅｘｐ Ｏｐｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ Ｄｒｕｇｓ，２０００，Ｖｏｌ．９（１２）：２７６７−２７８２）； Ｓｅｂｔｉ，Ｔｈｅ Ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ，２００３，Ｖｏｌ．８（Ｓｕｐｐ ３）：３０−３８）。イミダゾールメチルジアリールエーテル構造の変更により、ＦＴａｓｅおよびＧＧＴａｓｅの２重阻害活性が発揮されることが明らかにされている（ＦＴａｓｅ ＩＣ５０＝２．９ｎＭ、ＧＧＴａｓｅ ＩＣ５０＝７．１ｎＭ）。これらの化合物のいくつかには、ＧＧＴａｓｅ特異的活性を有する化合物（ＧＧＴＩ−２８６およびＧＧＴＩ−２９８）のほか、以下に示すものがある。
【００１６】
【化１】
上述の市販される化合物には阻害定数があり、それを以下の表１に示す。これらの化合物はまた、当業者に既知の技法を使用して合成することもできる。
【００１７】
【表１】
本明細書に開示される化合物は、１つ以上のキラル中心を含有することができることが認識されている。本発明は、本明細書に開示される化合物のすべてのエナンチオマー、ジアステレオマーおよび混合物を企図する。さらに、本発明の特定の実施形態は、開示化合物の薬学的に許容される塩を含む。薬学的に許容される塩には、アレルギー反応または毒性などの過度の望ましくない作用を及ぼすことなく疾患を治療するのに適した可溶性または分散性形態の化合物が含まれるが、これらに限定されない。代表的な薬学的に許容される塩には、酢酸塩、クエン酸塩、安息香酸塩、乳酸塩またはリン酸塩などの酸付加塩、およびリチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩またはアルミニウム塩などの塩基付加塩が含まれるが、これらに限定されない。
【００１８】
指示された構造単位に組み込む場合に単独でまたは複数で置換基が存在する場合があることを認識することが重要である。例えば、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素を意味する置換基ハロゲンは、ハロゲン置換基の結合する単位が、同じである場合もあれば異なる場合もある１つ以上のハロゲン原子で置換される場合があることを示すと思われる。
【００１９】
送達方法
本発明のＧＧＴａｓｅおよびＦＴａｓｅ阻害化合物は、送達のために、様々な種類の眼科用製剤に組み入れることができる。本化合物は、当業者に周知の技法を使用して、直接眼に送達する場合もあれば（例えば、局所的な点眼または軟膏；結膜円蓋に移植されるか、または強膜の隣接部位もしくは眼の内部に移植される薬学的薬剤送達スポンジなどの徐放装置；眼周囲、結膜、テノン嚢下、腔内、硝子体内または視神経管内注射）、あるいは全身に送達する場合もある（例えば、経口、静脈内、皮下または筋内注射；非経口的、皮膚または鼻送達）。さらに、本発明のＧＧＴａｓｅおよびＦＴａｓｅ阻害化合物は、眼内挿入物または植え込み型器具内で処方される場合があることも企図される。
【００２０】
本明細書に開示されるＧＧＴａｓｅおよびＦＴａｓｅ阻害化合物は、眼への送達のために、局所的な眼科用製剤に組み入れるのが好ましい。本化合物は、眼科的に許容される防腐剤、界面活性剤、増粘剤、浸透促進剤、緩衝剤、塩化ナトリウム、および水と混合して、水性滅菌眼科用懸濁液または溶液を生成する場合がある。眼科用溶液製剤は、生理学的に許容される等張水性緩衝剤中で化合物を溶解させることにより調製される場合がある。さらに、眼科用溶液は、本化合物の溶解を助けるために、眼科的に許容される界面活性剤を含む場合もある。さらに、眼科用溶液は、結膜嚢における製剤の保持を改善するために、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース、ポリビニルピロリドンなどの増粘性薬剤を含有する場合もある。ジェランガムおよびキサンタンガムを含むがこれらに限定されないゲル化剤を使用することも可能である。滅菌眼科用軟膏製剤を調製するには、鉱油、液体ラノリンまたは白色ワセリンなどの適切なビヒクル中で、有効成分を防腐剤と混合する。滅菌眼科用ゲル製剤は、類似の眼科用製剤の公開された処方に従って、例えばｃａｒｂｏｐｏｌ−９７４などの組み合わせから調製される親水性基剤中で化合物を懸濁することにより調製される場合があり、防腐剤および等張化剤（ｔｏｎｉｃｉｔｙ ａｇｅｎｔ）を組み込むことができる。
【００２１】
ＧＧＴａｓｅおよびＦＴａｓｅ阻害化合物は、ｐＨ約４〜８の局所的な眼科用懸濁液または溶液として処方するのが好ましい。本化合物は、緑内障患者の中で高ＩＯＰを経験するおよび／または正常なＩＯＰレベルを維持する患者のＩＯＰを低下させるのに十分な量にて、局所的な懸濁液または溶液中に含有される。このような量は、本明細書において「ＩＯＰを制御するのに有効な量」と、あるいはより簡単に「有効量」と称する。本化合物は通常、０．０１〜５重量／体積パーセント（「ｗ／ｖ％」）の量にて、好ましくは０．２５〜２ｗ／ｖ％の量にて、これらの製剤に含有される。したがって、局所的な提示のために、熟練した臨床医の判断により、これらの製剤が１〜２滴、眼の表面に１日１〜４回送達される。
【００２２】
ＧＧＴａｓｅおよびＦＴａｓｅ阻害化合物はまた、ｒｈｏキナーゼ阻害剤、β遮断薬、プロスタグランジン類似体、炭酸脱水酵素阻害剤、α２作動薬、縮瞳薬、および神経保護剤などがあるがこれらに限定されない他の高ＩＯＰ治療薬または緑内障治療薬と併用することも可能である。
【００２３】
生物活性の測定
ｉｎ ｖｉｔｒｏ生物活性アッセイ
特定の化合物のＧＧＴａｓｅおよびＦＴａｓｅを阻害する能力は、特定の実施形態においては、Ｂｕｒｋｅら、ＰＮＡＳ，１９９９，Ｖｏｌ．９６：２３：１３０６２−１３０６７、およびＧｏｏｓｓｅｎｓら、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ａｎａｌｙ．，２００５，Ｖｏｌ．３７：４１７−４２２に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏでのプレニルトランスフェラーゼアッセイなどのｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイにより評価される場合がある。簡潔に述べると、Ｇｏｏｓｓｅｎｓ法を使用して、いずれかの酵素のためのダンシル化された（ｄａｎｓｙｌａｔｅｄ）ペプチド基質とともにＧＧＴａｓｅおよびＦＴａｓｅを含む実験用および対照用調製物が作製された。この実験用調製物に試験化合物を添加して、反応を進行させる。この反応の後、各ペプチドの蛍光反応を測定する。対照に比べて測定された蛍光の減少は、試験化合物についてのより大きな阻害活性を表す。
【００２４】
ｉｎ ｖｉｖｏ生物活性試験
特定のＧＧＴａｓｅおよびＦＴａｓｅ阻害化合物の各酵素を安全に阻害する能力は、特定の実施形態においては、ニュージーランドアルビノウサギおよび／またはカニクイザルを使用したｉｎ ｖｉｖｏアッセイにより評価される場合がある。
【００２５】
ニュージーランドアルビノウサギにおける眼の安全性評価
５羽のニュージーランドアルビノウサギの両眼に、ビヒクル中の試験化合物の１つの３０μＬアリコートを局所投与し、他の動物５羽にはビヒクルのみを投与する。これらの動物を、投与から０．５時間継続して監視した後、２時間まで０．５時間ごとに、または作用が認められなくなるまで継続して監視する。
【００２６】
ニュージーランドアルビノウサギにおける急性ＩＯＰ反応
０．１％のプロパラカインによる軽い角膜麻酔後に、Ｍｅｎｔｏｒ Ｃｌａｓｓｉｃ ３０ニューマトノメーター（ｐｎｅｕｍａｔｏｎｏｍｅｔｅｒ）を使用して、眼内圧（ＩＯＰ）を測定する。各測定後に、眼を１滴または２滴の生理食塩水ですすぐ。ベースラインにおけるＩＯＰの測定後に、試験化合物の３０μＬアリコート１つを各動物の片眼または両眼に点眼するか、あるいは化合物を片眼に、ビヒクルを反対の眼に点眼する。その後、０．５、１、２、３、４および５時間後にＩＯＰの測定を行う。
【００２７】
カニクイザルにおける急性ＩＯＰ反応
既述の通り（Ｓｈａｒｉｆら、Ｊ．Ｏｃｕｌａｒ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．，２００１，Ｖｏｌ．１７：３０５−３１７； Ｍａｙら、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．，２００３，Ｖｏｌ．３０６：３０１−３０９）、０．１％のプロパラカインによる軽い角膜麻酔後に、Ａｌｃｏｎのニューマトノメーターを使用して、眼内圧（ＩＯＰ）を測定する。各測定後に、眼を１滴または２滴の生理食塩水ですすぐ。ベースラインにおけるＩＯＰの測定後に、試験化合物の３０μＬアリコート１つ（３００μｇ）または２つ（６００μｇ）を、９匹のカニクイザルの選択された眼に点眼する。他の動物６匹の選択された眼にはビヒクルを点眼する。その後、１時間、３時間および６時間後にＩＯＰ測定を行う。すべての動物の右眼には、高眼圧症を誘発するために、レーザー線維柱帯形成術を行った。左眼はすべて正常であり、そのため正常のＩＯＰを有している。
【実施例】
【００２８】
以下の実施例は、本発明の特定の実施形態を説明するために提供されるが、本発明の特許請求の範囲の限定を暗示するものとして解釈するべきではない。例えば、実施例４における「プレニルトランスフェラーゼ阻害剤」という語句は、記載の製剤が本明細書に開示されるいずれかのＧＧＴａｓｅおよびＦＴａｓｅ阻害化合物に適すると考えられることを意味する。
【００２９】
（実施例１）
ＲＮＡの単離および定量的ＲＴ−ＰＣＲ
全ＲＮＡを、製造元（Ｑｉａｇｅｎ）の説明書に従い、Ｑｉａｇｅｎ ＲＮｅａｓｙ ９６システムを使用して、ＴＭ細胞から単離した。
【００３０】
ＣＴＧＦおよびＰＡＩ−１の差異的発現を、基本的に既述の通り（Ｓｈｅｐａｒｄら、ＩＯＶＳ，２００１，Ｖｏｌ．４２：３１７３）、ＡＢＩ Ｐｒｉｓｍ（登録商標） ７７００ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して、定量的リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ（ＱＲＴ−ＰＣＲ）により検証した。ＣＴＧＦ増幅用のプライマーは、Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＮＭ＿００１９０１．１（プローブ配列６ＦＡＭ−ＡＡＴＣＧＡＣＡＧＧＡＴＴＣＣＧＡＴＴＣＣＴＧＡＡＣＡＧＴＧ−ＴＡＭＲＡを有する、ＣＡＧＣＴＣＴＧＡＣＡＴＴＣＴＧＡＴＴＣＧＡＡ（ヌクレオチド１６６７〜１６８９）およびＴＧＣＣＡＣＡＡＧＣＴＧＴＣＣＡＧＴＣＴ（ヌクレオチド１７２３〜１７４２）の隣接するエクソンにアニーリングするために、Ｐｒｉｍｅｒ Ｅｘｐｒｅｓｓソフトウェア（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して設計されており、７６−ｂｐの単位複製配列を生成する。ＰＡＩ−１増幅用プライマーは、ＡＢＩ（Ｈｓ００１６７１５５＿ｍｌ）から購入したものであり、Ｇｅｎｂａｎｋ受入番号ＮＭ＿０００６０２．１に対応する。ＣＴＧＦまたはＰＡＩ−１の増幅は、６９−ｂｐの単位複製配列を生成する１８Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子（プローブ配列６ＦＡＭ−ＣＴＧＣＡＡＧＣＡＴＡＴＡＡＴＡＣＡ−ＭＧＢＮＦＱを有する、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号Ｘ０３２０５ ＧＴＣＣＣＴＧＣＣＣＴＴＴＧＴＡＣＡＣＡＣ（ヌクレオチド１６８０〜１７００）およびＣＧＡＴＣＣＧＡＧＧＧＣＣＴＣＡＣＴＡ（ヌクレオチド１７３０〜１７４９）に対して設計されたプライマーを使用して、１８ＳリボソームＲＮＡの発現に正規化した。ＣＴＧＦまたはＰＡＩ−１のＱＲＴ−ＰＣＲを、１８Ｓプライマー／プローブセットを使用して、４０ｎＭの１８Ｓ、９００ｎＭのＣＴＧＦ、またはＰＡＩ−１プライマー；１００ｎＭの１８Ｓプローブ、１００ｎＭのＣＴＧＦ、または２５０ｎＭのＰＡＩ−１プローブ；５μＬのＲＮＡ；１×のＭｕｌｔｉｓｃｒｉｂｅおよびＲＮａｓｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ Ｍｉｘ（ＡＢＩ）；ならびに１×のＴａｑＭａｎ（登録商標） Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ Ｍｉｘ（ＡＢＩ）からなる最終容量５０μＬ中で、多重（ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ）で行った。熱サイクル条件は、４８℃にて３０分、９５℃にて１０分の後、９５℃にて１５秒、６０℃にて１分の４０サイクルで構成した。データ分析は、ＳＤＳソフトウェアＶｅｒ．１．９．１（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）およびＭＳ Ｅｘｃｅｌ ２００２（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ）を使用して行った。相対的なＲＮＡ濃度の定量化を、ＰＥ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ Ｕｓｅｒ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ ＃２に記載のデルタデルタＣｔ法を使用して行った。増幅産物のレベルは、ＱＲＴ−ＰＣＲ ４重アッセイの平均±ＳＥＭとして表した。データ分析は、ＳＤＳソフトウェアＶｅｒ．１．９．１（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）およびＭＳ Ｅｘｃｅｌ ９７（Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ）を使用して行った。
【００３１】
（実施例２）
ＴＧＦβ刺激されたＣＴＧＦおよびＰＡＩ−１遺伝子発現の阻害
本実施例では、培養したヒト小柱網細胞におけるＣＴＧＦ遺伝子の発現に対するＧＧＴａｓｅおよびＦＴａｓｅ阻害剤の効果を試験した。結果を図１および図２に要約する。本試験では、実施例１のプロトコルに従い、ＱＲＴ−ＰＣＲによってＣＴＧＦ／１８Ｓ ｃＤＮＡレベルを測定および比較した。
【００３２】
図１の結果の要約からも分かる通り、ＧＧＴａｓｅ阻害剤であるＧＧＴＩ−２１３３を、種々のＴＭ細胞培養物中のＣＴＧＦレベルに対する効果を測定するために試験した。図１に示す通り、ＴＧＦβ２がビヒクル中に存在した場合には、ビヒクルのみの場合に比べて、測定したＣＴＧＦレベルが高かった。ＣＴＧＦおよびＧＧＴＩ−２１３３の両方で処理した細胞培養物では、測定したＣＴＧＦレベルが、ビヒクルのみの場合よりも低く、ＴＧＦβ２で処置した細胞に比べるとＣＴＧＦレベルが劇的に低かった。
【００３３】
図２に示す結果では、ＦＴａｓｅ ＦＴＩ−２７７もまた、ＴＧＦβ２のみで処置した細胞株とＴＧＦβ２およびＦＴＩ−２７７の両方で処置した細胞株とを比べると、測定したＣＴＧＦレベルの低下を生じることが示されている。
【００３４】
図３では、ＧＧＴＩ−２１３３とＦＴＩ−２７７がいずれも、ＴＧＦβ２のみで処置した細胞株とＴＧＦβ２およびＧＧＴＩ−２１３３またはＦＴＩ−２７７の両方で処置した細胞株とを比べると、測定したＰＡＩ−１レベルの低下を生じ得ることが示されている。
【００３５】
（実施例３）
図４は、試験化合物による処置後に、培養培地への乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）の放出を測定するＣｙｔｏＴｏｘ−ＯＮＥ Ｈｏｍｏｇｅｎｏｕｓ Ｍｅｍｂｒａｎｅ Ｉｎｔｅｇｒｉｔｙ Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用して、ＧＧＴＩ−２１３３およびＦＴＩ−２７７の細胞毒性作用を表すグラフを示している。いずれの化合物も、試験したすべての濃度において、ビヒクルのみの場合の測定値と似たＬＤＨ放出測定値を有していた。したがって、いずれの化合物も細胞毒性が比較的低いと考えられる。
【００３６】
（実施例４）
【００３７】
【表２】
（実施例５）
【００３８】
【表３】
（実施例６）
【００３９】
【表４】
（実施例７）
【００４０】
【表５】
以上において本発明およびその実施形態を詳細に説明してきた。しかし、本発明の適用範囲は、本明細書に記載のいずれかのプロセス、製造物、組成物、化合物、手段、方法および／または手順の特定の実施形態に限定されることを意図していない。本発明の趣旨および／または本質的な特徴から逸脱することなく、開示する材料の種々の改変、代用および変更を行うことができる。したがって、本明細書に記載の実施形態と本質的に同じ機能を果たすか、本質的に同じ結果を達成する、後の改変、代用および／または変更が、本発明のこのような関連する実施形態に従って利用される場合があることを、当業者であれば本開示内容から容易に理解するであろう。そのため、以下の特許請求の範囲は、本明細書に開示されるプロセス、製造物、組成物、化合物、手段、方法および／または手順の改変、代用および変更をその範囲内に包含することが意図される。
【図面の簡単な説明】
【００４１】
【図１】ＴＭ細胞株における、基底におけるおよびＴＧＦβ２誘導性のＣＴＧＦ遺伝子発現に対するゲラニルゲラニルトランスフェラーゼ阻害剤の効果を示すグラフである。
【図２】ＴＭ細胞株における、基底におけるおよびＴＧＦβ２誘導性のＣＴＧＦ遺伝子発現に対するファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤の効果を示すグラフである。
【図３】ＴＭ細胞株における、基底におけるおよびＴＧＦβ２誘導性のＰＡＩ−１遺伝子発現に対するゲラニルゲラニルトランスフェラーゼ阻害剤およびファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤の効果を示すグラフである。
【図４】ゲラニルゲラニルトランスフェラーゼ阻害剤およびファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤の細胞毒性作用を表すグラフを示す。
【特許請求の範囲】
【請求項１】
緑内障または高い眼内圧を治療する方法であって、少なくとも１つのプレニルトランスフェラーゼ阻害剤を含む薬学的有効量の組成物を投与することを含む、方法。
【請求項２】
前記少なくとも１つのプレニルトランスフェラーゼ阻害剤が、ゲラニルゲラニルトランスフェラーゼ阻害剤またはファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記投与が、少なくとも１つのゲラニルゲラニルトランスフェラーゼ阻害剤および少なくとも１つのファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤を含む組成物を投与することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記組成物が、眼科的に許容される防腐剤、界面活性剤、増粘剤、浸透促進剤、ゲル化剤、疎水性基剤、ビヒクル、緩衝剤、塩化ナトリウム、および水からなる群から選択される化合物もさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記組成物の一部、または別個の投与のいずれかとして、β遮断薬、プロスタグランジン類似体、炭酸脱水酵素阻害剤、α２作動薬、縮瞳薬、神経保護剤、およびこれらのいずれかの組み合わせからなる群から選択される化合物を投与することもさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記組成物が、約０．０１重量／体積パーセント〜約５重量／体積パーセントの前記少なくとも１つのプレニルトランスフェラーゼ阻害剤を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記組成物が、約０．２５重量／体積パーセント〜約２重量／体積パーセントの前記プレニルトランスフェラーゼ阻害剤を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
高い眼内圧および緑内障の治療のための組成物であって、薬学的有効量のプレニルトランスフェラーゼ阻害剤を含む、組成物。
【請求項９】
前記プレニルトランスフェラーゼ阻害剤が、ゲラニルゲラニルトランスフェラーゼ阻害剤またはファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤である、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
眼科的に許容される防腐剤、界面活性剤、増粘剤、浸透促進剤、ゲル化剤、疎水性基剤、ビヒクル、緩衝剤、塩化ナトリウム、および水からなる群から選択される化合物もさらに含む、請求項８に記載の組成物。
【請求項１１】
前記組成物が、約０．０１重量／体積パーセント〜約５重量／体積パーセントの前記プレニルトランスフェラーゼ阻害剤を含む、請求項８に記載の組成物。
【請求項１２】
前記組成物が、約０．２５重量／体積パーセント〜約２重量／体積パーセントの前記プレニルトランスフェラーゼ阻害剤を含む、請求項８に記載の組成物。
【請求項１３】
前記組成物が、β遮断薬、プロスタグランジン類似体、炭酸脱水酵素阻害剤、α２作動薬、縮瞳薬、神経保護剤、ｒｈｏキナーゼ阻害剤、およびこれらのいずれかの組み合わせからなる群から選択される化合物もさらに含む、請求項８に記載の組成物。
【請求項１４】
前記プレニルトランスフェラーゼ阻害剤が、ＧＧＴＩ−２８６、ＧＧＴＩ−２８７、ＧＧＴＩ−２９７、ＧＧＴＩ−２９８、ＧＧＴＩ−２１３３、ＧＧＴＩ−２１４７、ＦＴＩ−２７６、ＦＴＩ−２７７、ＦＴＩ−２１４８、ＦＴＩ−２１５３、Ｒ１１５７７７、これらの組み合わせ、およびこれらの薬学的に許容される塩からなる群から選択される、請求項８に記載の組成物。
【請求項１５】
緑内障または高い眼内圧を治療する方法であって、ＧＧＴＩ−２８６、ＧＧＴＩ−２８７、ＧＧＴＩ−２９７、ＧＧＴＩ−２９８、ＧＧＴＩ−２１３３、ＧＧＴＩ−２１４７、ＦＴＩ−２７６、ＦＴＩ−２７７、ＦＴＩ−２１４８、ＦＴＩ−２１５３、Ｒ１１５７７７、これらの組み合わせ、およびこれらの薬学的に許容される塩からなる群から選択される治療有効量の化合物を、ヒトまたはその他の哺乳動物に投与することを含む、方法。
【請求項１】
緑内障または高い眼内圧を治療する方法であって、少なくとも１つのプレニルトランスフェラーゼ阻害剤を含む薬学的有効量の組成物を投与することを含む、方法。
【請求項２】
前記少なくとも１つのプレニルトランスフェラーゼ阻害剤が、ゲラニルゲラニルトランスフェラーゼ阻害剤またはファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記投与が、少なくとも１つのゲラニルゲラニルトランスフェラーゼ阻害剤および少なくとも１つのファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤を含む組成物を投与することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記組成物が、眼科的に許容される防腐剤、界面活性剤、増粘剤、浸透促進剤、ゲル化剤、疎水性基剤、ビヒクル、緩衝剤、塩化ナトリウム、および水からなる群から選択される化合物もさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記組成物の一部、または別個の投与のいずれかとして、β遮断薬、プロスタグランジン類似体、炭酸脱水酵素阻害剤、α２作動薬、縮瞳薬、神経保護剤、およびこれらのいずれかの組み合わせからなる群から選択される化合物を投与することもさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記組成物が、約０．０１重量／体積パーセント〜約５重量／体積パーセントの前記少なくとも１つのプレニルトランスフェラーゼ阻害剤を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記組成物が、約０．２５重量／体積パーセント〜約２重量／体積パーセントの前記プレニルトランスフェラーゼ阻害剤を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
高い眼内圧および緑内障の治療のための組成物であって、薬学的有効量のプレニルトランスフェラーゼ阻害剤を含む、組成物。
【請求項９】
前記プレニルトランスフェラーゼ阻害剤が、ゲラニルゲラニルトランスフェラーゼ阻害剤またはファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤である、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
眼科的に許容される防腐剤、界面活性剤、増粘剤、浸透促進剤、ゲル化剤、疎水性基剤、ビヒクル、緩衝剤、塩化ナトリウム、および水からなる群から選択される化合物もさらに含む、請求項８に記載の組成物。
【請求項１１】
前記組成物が、約０．０１重量／体積パーセント〜約５重量／体積パーセントの前記プレニルトランスフェラーゼ阻害剤を含む、請求項８に記載の組成物。
【請求項１２】
前記組成物が、約０．２５重量／体積パーセント〜約２重量／体積パーセントの前記プレニルトランスフェラーゼ阻害剤を含む、請求項８に記載の組成物。
【請求項１３】
前記組成物が、β遮断薬、プロスタグランジン類似体、炭酸脱水酵素阻害剤、α２作動薬、縮瞳薬、神経保護剤、ｒｈｏキナーゼ阻害剤、およびこれらのいずれかの組み合わせからなる群から選択される化合物もさらに含む、請求項８に記載の組成物。
【請求項１４】
前記プレニルトランスフェラーゼ阻害剤が、ＧＧＴＩ−２８６、ＧＧＴＩ−２８７、ＧＧＴＩ−２９７、ＧＧＴＩ−２９８、ＧＧＴＩ−２１３３、ＧＧＴＩ−２１４７、ＦＴＩ−２７６、ＦＴＩ−２７７、ＦＴＩ−２１４８、ＦＴＩ−２１５３、Ｒ１１５７７７、これらの組み合わせ、およびこれらの薬学的に許容される塩からなる群から選択される、請求項８に記載の組成物。
【請求項１５】
緑内障または高い眼内圧を治療する方法であって、ＧＧＴＩ−２８６、ＧＧＴＩ−２８７、ＧＧＴＩ−２９７、ＧＧＴＩ−２９８、ＧＧＴＩ−２１３３、ＧＧＴＩ−２１４７、ＦＴＩ−２７６、ＦＴＩ−２７７、ＦＴＩ−２１４８、ＦＴＩ−２１５３、Ｒ１１５７７７、これらの組み合わせ、およびこれらの薬学的に許容される塩からなる群から選択される治療有効量の化合物を、ヒトまたはその他の哺乳動物に投与することを含む、方法。
【図１】
【図２】
【図３】
【図４】
【図２】
【図３】
【図４】
【公表番号】特表２００９−５３２３７７（Ｐ２００９−５３２３７７Ａ）
【公表日】平成２１年９月１０日（２００９．９．１０）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２００９−５０３２３５（Ｐ２００９−５０３２３５）
【出願日】平成１９年３月２８日（２００７．３．２８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０６５３３４
【国際公開番号】ＷＯ２００７／１１８００９
【国際公開日】平成１９年１０月１８日（２００７．１０．１８）
【出願人】（５０８１８５０７４）アルコン リサーチ， リミテッド (160)
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２１年９月１０日（２００９．９．１０）
【国際特許分類】
【出願日】平成１９年３月２８日（２００７．３．２８）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＵＳ２００７／０６５３３４
【国際公開番号】ＷＯ２００７／１１８００９
【国際公開日】平成１９年１０月１８日（２００７．１０．１８）
【出願人】（５０８１８５０７４）アルコン リサーチ， リミテッド (160)
【Ｆターム（参考）】
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