４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアートの、心血管疾患の治療における利用方法
新規の化合物４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアート、その調製方法、および心血管疾患の治療における利用方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規の化合物４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアートおよびその調製方法に関するものである（以下の化学式５の化合物）。
【０００２】
【化１】
【０００３】
本発明はまた、４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアートの、心血管疾患の治療における利用にも関している。
【背景技術】
【０００４】
心血管疾患（ＣＶＤ）は、心臓および血管の疾患群である。
【０００５】
推計１６７０万件の死亡（つまり世界の全死亡の２９．２％）は、心血管疾患（ＣＶＤ）のさまざまな形態に起因している。
【０００６】
心筋梗塞（心臓発作）は、冠動脈疾患による重篤な疾患である。心筋梗塞（ＭＩ）は、長時間の虚血に続発する心筋の不可逆的壊死である。心臓発作すなわち心筋梗塞は、心臓への血液供給が突然にそして大幅に減少あるいは途絶されて、酸素の欠乏により筋肉の死を引き起こすという医学的な緊急事態である。毎年１１０万人超の人々が心臓発作（心筋梗塞）に襲われており、そしてそれらの人々の多くにとって、心臓発作は彼らの初めての冠動脈疾患の症状なのである。心臓発作は、死をもたらすに十分なほど深刻なこともあるし、無症状のこともある。五人に一人もの人は、軽度の症状のみあるいは全く症状がなく、心臓発作はその後しばらくして行われた定期的な心電図検査によって初めて発見されることもある。
【０００７】
心臓発作（心筋梗塞）は、通常、心臓の動脈を塞ぐ血栓が原因で起こる。動脈は、多くの場合、動脈壁への脂肪性沈着物によって既に狭くなっている。これらの沈着物は、裂けたり破れたりする可能性があるが、これは血流を減らし、また、血液の血小板を粘り気のある、またより血栓を形成し易いものにする物質を放出することになる。ときには、血栓は心臓そのものの中に形成され、それから剥離して心臓に血液を供給する動脈に詰まることがある。これらの動脈のうちの一つにおける痙攣は、血流を止める原因となる。
【０００８】
γ‐ブチロベタインは、最初に、心臓拡張期に呼吸を速め、唾液分泌および流涙、瞳孔拡張、血管収縮および心停止を引き起こす毒性物質として特徴づけられ、哺乳動物は、該物質からカルニチンを合成する。ＬＩＮＮＥＷＥＨ，Ｗ．Ｇａｍｍａ−Ｂｕｔｙｒｏｂｅｔａｉｎ，Ｃｒｏｔｏｎｂｅｔａｉｎ ｕｎｄ Ｃａｒｎｉｔｉｎ ｉｍ ｔｉｅｒｉｓｃｈｅｎ Ｓｔｏｆｆｗｅｃｈｓｅｌ．Ｈｏｐｐｅ−Ｓｅｙｌｅｒｓ Ｚｅｉｔｓｃｈｒｉｆｔ ｆｕｒ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｓｃｈｅ Ｃｈｅｍｉｅ．１９２９年第１８１巻４２〜５３ページ。その一方で、より最近の研究論文で、他の著者達により、γ‐ブチロベタインの毒性が極めて低い（ＬＤ５０＞７０００ｍｇ／ｋｇ、皮下注射）ことが確認された。ＲＯＴＺＳＣＨ，Ｗ．Ｉｂｅｒ ｄｉｅ Ｔｏｘｉｚｉｔａｔ ｄｅｓ Ｃａｒｎｉｔｉｎｓ ｕｎｄ ｅｉｎｉｇｅｒ ｖｅｒｗａｎｄｔｅｒ Ｓｔｏｆｆｅ．Ａｃｔａ ｂｉｏｌ．ｍｅｄ．ｇｅｒｍ．．１９５９年第３巻２８〜３６ページ。
【０００９】
非置換γ‐ブチロベタインの文献データには、心臓血管系作用は記載されていないが、ＨＯＳＥＩＮ，Ｅ．Ａ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ γ‐ｂｕｔｙｒｏｂｅｔａｉｎｅ．（γ‐ブチロベタインの薬理学的作用）Ｎａｔｕｒｅ．１９５９年第１８３巻３２８〜３２９ページでは、γ‐ブチロベタインが、持続性作用を伴うアセチルコリンと類似した物質であることが報告されている。しかしながら、後に、同じ著者達は、実験結果が、誤りにより、γ‐ブチロベタインの代わりに、実際にコリン作動性の特性をもつそのメチルエステルを取り込んでいたことを報告した。前者に反して、γ‐ブチロベタインは、薬理学的な不活性物質として特徴付けられた。ＨＯＳＥＩＮ，Ｅ．Ａ．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｒｏｂａｂｌｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｂｅｔａｉｎｅ ｅｓｔｅｒｓ ｉｎ ｂｒａｉｎ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ．（脳代謝におけるベタインエステルの分離および予想される機能）Ｎａｔｕｒｅ．１９６０年第１８７巻３２１〜３２２ページ。
【００１０】
４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアートに構造的に関係している化合物が、以下において開示されている：
・英国特許第１２３８８６８号明細書１９７１年７月１４日において、４−トリメチルアンモニオブタノアートのような、ポリマーとして利用されるベタインが開示された。しかしながら、これらのベタインの薬理学的特性は示されなかった；
・米国特許第５９７３０２６号明細書（ＸＥＲＯＸ ＣＯＲＰ ゼロックス社）１９９９年１０月２６日において、インク組成物用の利用のための、４−トリメチルアンモニオブタノアートおよび３−［ジエチル（メチル）アンモニオ］プロピオナートが開示された；
・ＬＬＯＹＤ ＡＮＤＲＥＷ氏他 Ａ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｇｌｙｃｉｎｅ，ｓａｒｃｏｓｉｎｅ，Ｎ，Ｎ−ｄｉｍｅｔｈｙｌｇｌｙｃｉｎｅ，ｇｌｙｃｉｎｅｂｅｔａｉｎｅ ａｎｄ Ｎ−ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｂｅｔａｉｎｅｓ ａｓ ｌｉｐｏｓｏｍｅ ｃｒｙｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔｓ．（リポソーム凍結防止剤としてのグリシン、サルコシン、Ｎ，Ｎ−ジメチルグリシン、グリシンベタイン及びＮ−修飾ベタイン類の比較）Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｐｈａｒｍａｃｙ ａｎｄ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ．１９９２年第４４巻第６号５０７〜５１１ページにおいて、リポソーム用の抗凍結剤として利用される、２−［エチル（ジメチル）アンモニオ］アセテートが開示された；
・ＤＡＶＩＤ Ｂ．，ＴＨＯＭＡＳ氏他 Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ， Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ，ａｎｄ Ａｑｕｅｏｕｓ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｂｅｈａｖｉｏｒ ｏｆ Ｅｌｅｃｔｒｏｌｙｔｅ− ａｎｄ ｐＨ−Ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ Ｃａｒｂｏｘｙｂｅｔａｉｎｅ−Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ Ｃｙｃｌｏｃｏｐｏｌｙｍｅｒｓ．（電解質及びｐＨ応答性のカルボキシベタイン含有シクロコポリマの合成、特性解析と水溶液挙動）Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ．２００３年第３６巻第２６号９７１０〜９７１５ページにおいて、４−［ジアリル（メチル）アンモニオ］ブタノアートおよび、Ｎ，Ｎ−ジアリル−Ｎ−メチルアンモニウムと４−ブロモ酪酸エチルとから始まるその合成が開示されている。遊離酸は、イオン交換樹脂アンバーライトを利用する第二段階においてエステルから得られる。生成物は、ポリマーを合成するための中間体として利用される；
・Ｐｒｅｌｏｇ Ｖ．１９３０年第２巻７１２〜７２２ページにおいて、４−ジメチルアンモニオブタノアートおよびヨウ化メチルから始まる４−トリメチルアンモニオブタノアートの合成が開示された；
・特開第２００９‐０９６７６６号公報（甲南学園）２００９年０５月０７日に、４−トリメチルアンモニオブタノアートおよび、トリメチルアミンと４−ブロモ酪酸エチルとから始まるその合成が記載された。遊離酸は、イオン交換樹脂アンバーライトを利用する第二段階においてエステルから得られる；
・国際公開第２００８／０５５８４３号（ＫＡＬＶＩＮＳＨ ＩＶＡＲＳ；ＣＨＥＲＮＯＢＲＯＶＩＪＳ ＡＬＥＫＳＡＮＤＲＳ；ＶＡＲＡＣＨＥＶＡ ＬＡＲＩＳＡ；ＰＵＧＯＶＩＣＨＳ ＯＳＶＡＬＤＳ）２００８年０５月１５日において、４−トリメチルアンモニオブタノアートおよび、対応するエステルから始まり、ＫＯＨ溶液を利用する合成が記載された；
・加国特許第２５０８０９４号明細書（ＶＩＶＩＥＲ ＣＡＮＡＤＡ社）２００６年１１月２０日において、ベタイン、たとえば４−トリメチルアンモニオブタノアートが、コラーゲン合成を促進するための薬剤として開示された；
・米国特許第５９６５６１５号明細書（大鵬薬品工業株式会社；ＶＡＬＳＴＳ ＺＩＮＡＴＮＩＳＫＡ ＩＥＳＴＡＤＥ ＢＥＺＰ）１９９９年１０月１２日において、心筋代謝異常の治療用の薬剤として４−トリメチルアンモニオブタノアートが開示され、同じ化合物が米国特許第２００７１９１３８１号明細書（ＣＯＮＣＥＲＴ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ社）２００７年０８月１６日において、心筋梗塞の治療用に開示された。
【００１１】
３−（２，２，２−トリメチルヒドラジニウム）プロピオナート二水和物は、心臓保護特性をもつ化合物として既知である（この物質は、その国際一般名であるメルドニウムとして既知のものである）。３−（２，２，２−トリメチルヒドラジニウム）プロピオナートは、米国特許第４４８１２１８号明細書（ＩＮＳＴ ＯＲＧＡＮＩＣＨＥＳＫＯＧＯ ＳＩＮＴＥＺＡ）１９８４年１１月０６日において、ならびに米国特許第４４５１４８５号明細書（ＩＮＳＴＩＴＵ ＯＲＣＨ ＳＩＮＴＥＺＡ ＡＫＡＤＥＭＩＩ）１９８４年０５月２９日において開示されている。
【００１２】
二水和物としての３−（２，２，２−トリメチルヒドラジニウム）プロピオナートが、カルニチン対ガンマ−ブチロベタインの濃度比、ひいては体内の脂肪酸ベータ酸化速度を制御するために広く利用されていることは、非常に既知である。ＤＡＭＢＲＯＶＡ Ｍ．，ＬＩＥＰＩＮＳＨ Ｅ．，ＫＡＬＶＩＮＳＨ Ｉ．Ｉ．Ｍｉｌｄｒｏｎａｔｅ：ｃａｒｄｉｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ａｃｔｉｏｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ｃａｒｎｉｔｉｎｅ−ｌｏｗｅｒｉｎｇ ｅｆｆｅｃｔ．（ミルドロネート：カルニチン低下効果による心臓保護作用）Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，．２００２年第１２巻第６号２７５〜２７９ページ。
【００１３】
これらの特性により、メルドニウムは、さまざまな心血管疾患および他の組織虚血を伴う病理の治療において、抗虚血薬、抗ストレス薬、心臓保護薬として、医学の分野で幅広く適用されている。ＫＡＲＰＯＶ Ｒ．Ｓ．，ＫＯＳＨＥＬＳＫＡＹＡ Ｏ．Ａ．，ＶＲＵＢＬＥＶＳＫＹ Ａ．Ｖ．，ＳＯＫＯＬＯＶ Ａ．Ａ．，ＴＥＰＬＹＡＫＯＶ Ａ．Ｔ．，ＳＫＡＲＤＡ Ｉ．，ＤＺＥＲＶＥ Ｖ．，ＫＬＩＮＴＳＡＲＥ Ｄ．，ＶＩＴＯＬＳ Ａ．，ＫＡＬＮＩＮＳ Ｕ．，ＫＡＬＶＩＮＳＨ Ｉ．，ＭＡＴＶＥＹＡ Ｌ．，ＵＲＢＡＮＥ Ｄ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｅｆｆｉｃａｃｙ ａｎｄ Ｓａｆｅｔｙ ｏｆ Ｍｉｌｄｒｏｎａｔｅ ｉｎ Ｐａｔｉｅｎｔｓ Ｗｉｔｈ Ｉｓｃｈｅｍｉｃ Ｈｅａｒｔ Ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ Ｃｈｒｏｎｉｃ Ｈｅａｒｔ Ｆａｉｌｕｒｅ．（虚血性心疾患と慢性心不全の患者におけるミルドロネートの臨床効果と安全性）Ｋａｒｄｉｏｌｏｇｉｙａ．２０００年第６号６９〜７４ページ。心血管疾患の治療において、３−（２，２，２−トリメチルヒドラジニウム）プロピオナートの作用機序は、カルニチン生合成速度の制限および、関連する長鎖脂肪酸の運搬のミトコンドリア膜を介した制限に基づくものである。ＳＩＭＫＨＯＶＩＣＨ Ｂ．Ｚ．，ＳＨＵＴＥＮＫＯ Ｚ．Ｖ．，ＭＥＩＲＥＮＡ Ｄ．Ｖ．，ＫＨＡＧＩ Ｋ．Ｂ．，ＭＥＺＨＡＰＵＫＥ Ｒ．Ｊ．，ＭＯＬＯＤＣＨＩＮＡ Ｔ．Ｎ．，ＫＡＬＶＩＮＳ Ｉ．Ｊ．，ＬＵＫＥＶＩＣＳ Ｅ。
【００１４】
３−（２，２，２，−Ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｈｙｄｒａｚｉｎｉｕｍ）ｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ（ＴＨＰ）−ａ ｎｏｖｅｌ ｇａｍｍａ−ｂｕｔｙｒｏｂｅｔａｉｎｅ ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｗｉｔｈ ｃａｒｄｉｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ．（３−（２，２，２−トリメチルヒドラジニウム）プロピオナート（ＴＨＰ）−心臓保護特性を備えた新規のガンマ−ブチロベタインヒドロキシナーゼ阻害剤）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ．１９８８年第３７巻１９５〜２０２ページ、 ＫＩＲＩＭＯＴＯ Ｔ．，ＡＳＡＫＡ Ｎ．，ＮＡＫＡＮＯ Ｍ．，ＴＡＪＩＭＡ Ｋ．，ＭＩＹＡＫＥ Ｈ．，ＭＡＴＳＵＵＲＡ Ｎ．Ｂｅｎｅｆｉｃｉａｌ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ＭＥＴ−８８，ａ γ‐ｂｕｔｙｒｏｂｅｔａｉｎｅ ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｉｎ ｒａｔｓ ｗｉｔｈ ｈｅａｒｔ ｆａｉｌｕｒｅ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ．（心筋梗塞に伴う心不全ラットにおけるγ‐ブチロベタインヒドロキシラーゼ阻害剤ＭＥＴ‐８８の有益な効果）Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ．２０００年第３９５巻第３号２１７〜２２４ページ。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
メルドニウム二水和物の心臓保護作用は既知であったが、しかしγ‐ブチロベタインそのものに明白な心臓保護作用があるとのデータはないのである。欧州特許第０８４５９８６号明細書（ＫＡＬＶＩＮＳＨ ＩＶＡＲＳ，ＶＥＶＥＲＩＳ ＭＡＲＩＳ）２００３年０４月０２日では、心血管疾患の治療において用いられるメルドニウム二水和物およびγ‐ブチロベタインの医薬組成物が開示されている。
【００１６】
本発明の一つの目的は、明白な心臓保護作用をもつ化合物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
上記の目的は、メルドニウムまたはγ‐ブチロベタインと類似の構造をもつ、新規の化合物４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアート（化学式５の化合物）を提供することによって達成される。
【００１８】
【化２】
【００１９】
驚くべきことに、４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアートは、明白な心臓保護作用を有し、また、メルドニウム二水和物のｉｎ ｖｉｖｏでの心筋梗塞モデルよりも効果的であり、この特性のために、４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアートは医学の分野で利用されることが可能である。４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアートは、注射液および錠剤として利用されることができる。
【００２０】
本発明の次の目的は、前記化学式５の化合物の調製方法である。
【００２１】
化学式５の目標化合物４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアートを生成するために利用されることができる四つの過程が開示されるが、以下の図解を参照頂きたい。
【００２２】
【化３】
【００２３】
第一の過程（ルートＡ）は、以下の工程段階を含む：
ａ）Ｎ−エチル−４−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムブロミドを生成するために、４−（ジメチルアンモニオ）ブタノアートに、臭化エチルを加える；
ｂ）望まれる化合物４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアートを得るために、Ｎ−エチル−４−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムブロミドを水酸化カリウムで処理する。
【００２４】
第二の過程（ルートＢ）は、以下の工程段階を含む：
ａ）Ｎ−エチル−４−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムブロミドを生成するために、４−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムクロリドに、炭酸カリウムおよびブロモエタンを加える；
ｂ）４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアートを得るために、Ｎ−エチル−４−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムブロミドを、イオン交換樹脂カラムに通す。
【００２５】
第三の過程（ルートＣ）は、以下の工程段階を含む：
ａ）メチル−４−（ジメチルアミノ）ブタノアートを生成するために、４−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムクロリドに、炭酸カリウムおよびジクロロメタンを加える；
ｂ）Ｎ−エチル−４−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムブロミドを得るために、メチル−４−（ジメチルアミノ）ブタノアートを、ジクロロメタン中のブロモエタンで、撹拌する；
ｃ）望まれる化合物４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアートを得るために、Ｎ−エチル−４−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムブロミドを水酸化カリウムで処理する。
【００２６】
第四の過程（ルートＤ）は、以下の工程段階を含む：
ａ）４−エトキシ−Ｎ−エチル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムブロミドを得るために、ジクロロメタン中のエチル４−ブロモブタノアートに、Ｎ，Ｎ−ジメチルエチルアミンを加える；
ｂ）４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアートを得るために、４−エトキシ−Ｎ−エチル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムブロミドを、イオン交換樹脂カラムに通す。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
本発明は、以下の非制限例を参照しながら、より詳細に説明されていく。
【００２８】
４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアート（５）の合成
【００２９】
４−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムクロリド（３）の調製
【００３０】
無水メタノール（３００ｍｌ）中の３−カルボキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−プロパンアミニウムクロリド（２）（４５．９３ｇ、０．２７ｍｏｌ）の溶液に、（−１０）−０℃でゆっくりと塩化チオニル（５５ｍｌ、０．７６ｍｏｌ）が加えられて、反応混合物は室温で１時間の間撹拌された。反応混合物は、その後４０〜５０℃で３時間の間撹拌され、そして蒸発した。残留物は、アセトン（１１０ｍｌ）の中で溶解され、エーテル（４００ｍｌ）を添加することによって沈殿した。固形物は、濾過され、エーテルで洗浄され、そしてもう一度アセトン（１１０ｍｌ）の中で溶解され、続いてエーテル（４００ｍｌ）で沈殿した。沈殿物は、濾過され、エーテルで洗浄され、そして乾燥されて、３８．４ｇ（７７％）の４−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムクロリドが得られた。
【００３１】
１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，ＨＭＤＳＯ）δ：１．９１（ｑｕｉ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，２Ｈ）；２．４３（ｔ，Ｊ＝７．７４Ｈｚ，２Ｈ）；２．７１（ｄ，J＝４．９Ｈｚ，６Ｈ）；２．９８−３．０６（ｍ，２Ｈ），３．６１（ｓ，３Ｈ）；１０．７６（ｂｓ，１Ｈ）。
【００３２】
ルートＡ
【００３３】
４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアート（５）の調製
【００３４】
無水アセトン（２０ｍｌ）中の４−（ジメチルアンモニオ）ブタノアート（４）（７．８７ｇ、０．０６ｍｏｌ）と臭化エチル（１３．０８ｇ、０．１２ｍｏｌ）との混合物は、出発物質４−（ジメチルアンモニオ）ブタノアートが無くなるまで還流された（ＴＬＣ標準品、メタノール：含水水酸化アンモニウム、３:１）。反応混合物は、イソプロパノール（１００ｍｌ）が補充されて、溶液は蒸発乾固された。９６％エタノール（７０ｍｌ）中のＫＯＨ（７．２８ｇ、０．１３ｍｏｌ）の溶液が、０℃で残留物に加えられ、そして反応混合物は４時間の間撹拌された。沈殿物は濾過されて取り除かれ、濾液は、媒体のｐＨが７〜８になるまでメタノール中の２Ｎ ＨＣｌで処理された。反応混合物は、１２時間の間−１８℃で保たれたのち濾過された。濾液は蒸発乾固され、残留物はイソプロパノール（３×１００ｍｌ）で共沸乾燥された。得られた油状固形物（１３．４ｇ）は、イソプロパノール（１００ｍｌ）の中で溶解されて、１２時間の間−１８℃に保たれた。沈殿物は濾過され、そして濾液は、蒸発乾固され、−１８℃でアセトン（３０ｍｌ）から結晶化して、４．１４ｇ（４３％）の４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアートを得た。
【００３５】
１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，ＨＭＤＳＯ）δ：１．２４（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，３Ｈ）；１．６８−１．７８（ｍ，２Ｈ）；１．８７（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ）；２．９６（ｓ，６Ｈ）；３．１６−３．２３（ｍ，２Ｈ）；３．２９（ｑ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ）。ＬＣ ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：１６０[Ｍ＋Ｈ]＋。
【００３６】
Ｃ８Ｈ１７ＮＯ２・１．３Ｈ２Ｏの解析計算値：Ｃ５２．６１，Ｈ１０．８２，Ｎ７．６７。
【００３７】
実測値：Ｃ５２．６４，Ｈ１１．００，Ｎ７．５８。
【００３８】
ルートＢ
【００３９】
Ｎ−エチル−４−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムブロミド（６ａ）の調製
【００４０】
アセトン（４０ｍｌ）中の、４−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムクロリド（３）（７．２７ｇ、０．０４ｍｏｌ）と、無水Ｋ２ＣＯ３（５．５２ｇ、０．０４ｍｏｌ）と、ブロモエタン（４．４８ｍｌ、０．０６ｍｏｌ）との混合物は、室温で２日間の間しっかり撹拌された。沈殿物は、濾過され、アセトンで洗浄され、イソプロパノール（１００ｍｌ）中に懸濁され、そして室温で２時間の間しっかり撹拌された。混合物は濾過され、濾液は、蒸発乾固されて、イソプロパノールで数回共沸乾燥された。残留物は、酢酸エチル（３５ｍｌ）の添加によりアセトン（１０ｍｌ）から結晶化され、Ｐ２Ｏ５上で真空乾燥されて、６．５１ｇ（６４％）のＮ−エチル−４−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムブロミドが得られた。
【００４１】
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，ＨＭＤＳＯ）δ：１．４４（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）；２．０１−２．１２（ｍ，２Ｈ）；２．５５（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ）；３．４０（ｓ，６Ｈ）；３．６６−３．７３（ｍ，４Ｈ）；３．６９（ｓ，３Ｈ）。
【００４２】
ＬＣ ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：１７４[Ｍ＋Ｈ]＋。
【００４３】
Ｃ９Ｈ２０ＢｒＮＯ２・０．０９Ｈ２Ｏの解析計算値：Ｃ４２．２６，Ｈ７．９５，Ｎ．４８。
【００４４】
実測値：Ｃ４２．２６，Ｈ８．２８，Ｎ５．３５。
【００４５】
４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアート（５）の調製
【００４６】
エタノール（２０ｍｌ）中の、Ｎ−エチル−４−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムブロミド（６ａ）（６．５１ｇ、０．０２５ｍｏｌ）の溶液は、エタノール（１００ｍｌ）でゆっくりと溶出するアンバーライト（登録商標）ＩＲＡ−４１０（ＯＨ）イオン交換樹脂カラム（１９０ｍｌ）に通された。溶出液は蒸発乾固され、残留物は、イソプロパノールで数回共沸乾燥され、それからイソプロパノール（５０ｍｌ）に溶解されて、１２時間の間０℃に保たれた。混合物は濾過され、濾液は蒸発した。残留物（７．３５ｇ）は、冷たい酢酸エチルと混合されて、１２時間の間０℃に保たれた。混合物は濾過され、沈殿物はＰ２Ｏ５上で真空乾燥されて、３．５４ｇ（８６％）の４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアートが得られた。材料の純度は、４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアートの水溶液をＤＯＷＥＸ（登録商標）５０ＷＸ８イオン交換樹脂に通すことによって増した。溶液は蒸発乾固され；残留物は、イソプロパノールで共沸乾燥され、続いてＰ２Ｏ５上で真空乾燥されて、１．２７ｇ（３１％）の４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアートが得られた。
【００４７】
ルートＣ
【００４８】
メチル−４−（ジメチルアミノ）ブタノアート（７）の調製
【００４９】
ジクロロメタン（７０ｍｌ）中の、４−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムクロリド（３）（５．４４ｇ、０．０３ｍｏｌ）と無水Ｋ２ＣＯ３（５．５２ｇ、０．０４ｍｏｌ）の懸濁液は、室温で２４時間の間しっかりと撹拌された。沈殿物は濾過され、ジクロロメタンで洗浄され、そして濾液は蒸発した。残留物は、３２〜３５℃／３〜４ｍｍＨｇで蒸留されて、２．８８ｇ（６６％）の４−（ジメチルアミノ）ブタノアートが得られた。
【００５０】
１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，ＨＭＤＳＯ）δ：１．６４（ｑｕｉ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）；２．０９（ｓ，６Ｈ）；２．１７（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ）；２．３０（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ）；３．５７（ｓ，３Ｈ）。
【００５１】
Ｎ−エチル−４−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムブロミド（６ａ）の調製
【００５２】
ジクロロメタン（１５ｍｌ）中の、メチル−４−（ジメチルアミノ）ブタノアート（７）（１．４５ｇ、１０ｍｍｏｌ）と、ブロモエタン（１．２ｍｌ、１６ｍｍｏｌ）との混合物は、室温で撹拌された。反応混合物は蒸発乾固され、白い固形物（２．４３８ｇ）は、アセトンを用いて粉砕され、濾過され、Ｐ２Ｏ５上で真空乾燥されて、２．３９７ｇ（９４％）のＮ−エチル−４−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムブロミドが得られた。
【００５３】
ルートＤ
【００５４】
４−エトキシ−Ｎ−エチル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムブロミド（６ｂ）の調製
【００５５】
氷浴温度のジクロロメタン中のエチル−４−ブロモブタノアート（８）（１９．５ｇ、０．１ｍｏｌ）の溶液に、Ｎ，Ｎ−ジメチルエチルアミン（１０．８ｍｌ、０．１ｍｏｌ）が加えられ、室温で一晩中撹拌された。反応混合物は蒸発乾固され、残留物はアセトン（５０ｍｌ）を用いて粉砕されて０．５時間の間０℃に保たれた。沈殿物は濾過されＰ２Ｏ５上で真空乾燥されて、２２．２７４ｇ（９４％）の４−エトキシ−Ｎ−エチル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムブロミドが得られた。
【００５６】
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，ＨＭＤＳＯ）δ：１．２６（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）；１．４４（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ）；２．００−２．１１（ｍ，２Ｈ）；２．５２（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ）；３．４０（ｓ，６Ｈ）；３．６４−３．７３（ｍ，２Ｈ）；３．６９（ｑ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ）；４．１４（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）。
【００５７】
４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアート（５）の調製
【００５８】
水（１０ｍｌ）中の、４−エトキシ−Ｎ−エチル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムブロミド（６ｂ）（１２．００ｇ、４４．７ｍｏｌ）は、エタノール（ＴＬＣ標準品）でゆっくりと溶出する（約１０滴／分）アンバーライト（登録商標）ＩＲＡ−４１０（ＯＨ）イオン交換樹脂カラム（２５０ｍｌ）に通された。溶出液は蒸発し、残留物（１２ｇ）は水（５０ｍｌ）の中に溶解された。この溶液にＤＯＷＥＸ（登録商標）５０ＷＸ８イオン交換樹脂（５ｇ）が加えられて、０．５時間の間室温で撹拌された。反応混合物は、セライト（１ｃｍ）を通して濾過され、溶出液は蒸発乾固された。残留物は、イソプロパノール、アセトニトリル、およびアセトンで共沸乾燥された。得られた固形物はアセトン（１０ｍｌ）を用いて粉砕され、混合物は２時間の間０℃に保たれた。沈殿物は濾過され、Ｐ２Ｏ５上で真空乾燥されて、４．６５ｇ（６５％）の４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアートが得られた。
【００５９】
１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，ＨＭＤＳＯ）δ：１．２４（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，３Ｈ）；１．６６−１．７６（ｍ，２Ｈ）；１．８１（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ）；２．９５（ｓ，６Ｈ）；３．１６−３．２３（ｍ，２Ｈ）；３．２９（ｑ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ）。ＬＣ ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：１６０[Ｍ＋Ｈ]＋。
【００６０】
Ｃ８Ｈ１７ＮＯ２・１．５５Ｈ２Ｏの解析計算値：Ｃ５１．３４；Ｈ１０．８２；Ｎ７．４８。実測値：Ｃ５１．３６，Ｈ１１．４０，Ｎ７．３４。
【００６１】
心臓保護作用
【００６２】
２００〜２５０ｇの生後１０週間のウィスター系ラットの雄５０匹が、標準環境下（２１〜２３℃、１２時間の明／暗サイクル）で収容され、食べ物（Ｒ３規定食、Ｌａｃｔａｍｉｎ ＡＢ、スウェーデン）と水が制限なく与えられた。
【００６３】
ラットは、治療開始前２週間の間、局地的条件に適応された。一回分の投与量５ｍｇ／ｋｇあるいは１００ｍｇ／ｋｇのメルドニウム二水和物、一回分の投与量５ｍｇ／ｋｇのガンマ−ブチロベタイン、そして一回分の投与量２０ｍｇ／ｋｇのＥＧが、経口で毎日、８週間の間投与された。対照群ラットは水を与えられた。
【００６４】
単離ラット心筋梗塞調査
【００６５】
単離ラット心臓の実験は、基本的に先に記述されたように行われた（Ｌｉｅｐｉｎｓｈ氏他，Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００６；４８（６）：３１４−９）。最後の投薬の２４時間後、心臓は摘出され、３７℃で、酸素を含んだクレブス−ヘンゼライトバッファーで一定の圧力で大動脈を介して逆行的にかん流された。心拍数、左心室拡張終期圧および最大左心室圧が、連続的に記録された。冠血流は、超音波探傷器（ＨＳＥ）およびＡＤＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ社製のＰｏｗｅｒＬａｂ８／３０システムを使って測定された。心臓は、血行動態機能を安定させるために２０分の間かん流され、それからプラスチックチューブに通した糸を締め付けることによって、６０分の間閉塞された。冠血流の約４０％の低下によって、閉塞の成功が確認された。糸を解放することによって、再かん流が達成された。１５０分間の再かん流の終わりに、リスク領域は、０．１％のメチレンブルーで輪郭が描かれた。それから心臓は、心尖から心底まで２ｍｍの厚さの５枚の薄片に、横に切開され、そして、生活組織を赤色にまた壊死組織を白色に染色するために１０分間の間リン酸緩衝液（ｐＨ７．４，３７℃）中の１％のトリフェニルテトラゾリウムクロリドの中で培養された。百分率％で表される左心室のリスク領域と壊死領域を測定するために、ソフトウェアＩｍａｇｅ−Ｐｒｏ Ｐｌｕｓ ６．３を利用して、ＳＯＮＹ Ａ９００の写真の、コンピュータによる面積測定分析が行われた。得られた値はそれから、以下の式にしたがって、リスク領域の百分率％としての梗塞面積（ＩＳ）を計算するために利用された：
【００６６】
梗塞面積＝壊死領域／リスク領域×１００％。
【００６７】
単離ラット心筋梗塞モデルにおける効果
【００６８】
調べられた物質の抗梗塞効果が、単離ラット心筋梗塞モデルにおいて調査された。左冠状動脈の閉塞の間に、全ての実験群における冠血流が４０％低下した（１１ｍｌ／分から７ｍｌ／分）。さらに、最大左心室圧の５０％の低下が観察された。閉塞時間の間の心拍数には著しい変化はなかった。再かん流の段階において、冠血流、最大左心室圧、±ｄｐ／ｄｔの値は、対照群レベルの約８０％まで回復した。対照群と治療群の間に著しい差はなかった。
【００６９】
単離ラット心筋梗塞実験におけるメルドニウム二水和物（５ｍｇ／ｋｇあるいは１００ｍｇ／ｋｇ）、ガンマ−ブチロベタイン（５ｍｇ／ｋｇ）、そして４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアート（ＥＧ）（５ｍｇ／ｋｇ）の、治療２週間後の梗塞面積への効果が、表１に示されている。
【００７０】
【表１】
【００７１】
表１に示されるように、一回分の投与量５ｍｇ／ｋｇのメルドニウム二水和物治療は梗塞面積を５％小さくしたが、メルドニウム二水和物の治療作用は１００ｍｇ／ｋｇになって初めて観察され、梗塞面積は２４％小さくなった。一回分の投与量５ｍｇ／ｋｇのガンマ−ブチロベタインは、治療効果を示さなかった。一回分の投与量５ｍｇ／ｋｇの４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアートでは、梗塞面積を４１％小さくするという、最良の治療効果が観察された。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００７２】
【特許文献１】英国特許第１２３８８６８号明細書
【特許文献２】米国特許第５９７３０２６号明細書
【特許文献３】特開２００９−０９６７６６号公報
【特許文献４】国際公開第２００８／０５５８４３号
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規の化合物４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアートおよびその調製方法に関するものである（以下の化学式５の化合物）。
【０００２】
【化１】
【０００３】
本発明はまた、４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアートの、心血管疾患の治療における利用にも関している。
【背景技術】
【０００４】
心血管疾患（ＣＶＤ）は、心臓および血管の疾患群である。
【０００５】
推計１６７０万件の死亡（つまり世界の全死亡の２９．２％）は、心血管疾患（ＣＶＤ）のさまざまな形態に起因している。
【０００６】
心筋梗塞（心臓発作）は、冠動脈疾患による重篤な疾患である。心筋梗塞（ＭＩ）は、長時間の虚血に続発する心筋の不可逆的壊死である。心臓発作すなわち心筋梗塞は、心臓への血液供給が突然にそして大幅に減少あるいは途絶されて、酸素の欠乏により筋肉の死を引き起こすという医学的な緊急事態である。毎年１１０万人超の人々が心臓発作（心筋梗塞）に襲われており、そしてそれらの人々の多くにとって、心臓発作は彼らの初めての冠動脈疾患の症状なのである。心臓発作は、死をもたらすに十分なほど深刻なこともあるし、無症状のこともある。五人に一人もの人は、軽度の症状のみあるいは全く症状がなく、心臓発作はその後しばらくして行われた定期的な心電図検査によって初めて発見されることもある。
【０００７】
心臓発作（心筋梗塞）は、通常、心臓の動脈を塞ぐ血栓が原因で起こる。動脈は、多くの場合、動脈壁への脂肪性沈着物によって既に狭くなっている。これらの沈着物は、裂けたり破れたりする可能性があるが、これは血流を減らし、また、血液の血小板を粘り気のある、またより血栓を形成し易いものにする物質を放出することになる。ときには、血栓は心臓そのものの中に形成され、それから剥離して心臓に血液を供給する動脈に詰まることがある。これらの動脈のうちの一つにおける痙攣は、血流を止める原因となる。
【０００８】
γ‐ブチロベタインは、最初に、心臓拡張期に呼吸を速め、唾液分泌および流涙、瞳孔拡張、血管収縮および心停止を引き起こす毒性物質として特徴づけられ、哺乳動物は、該物質からカルニチンを合成する。ＬＩＮＮＥＷＥＨ，Ｗ．Ｇａｍｍａ−Ｂｕｔｙｒｏｂｅｔａｉｎ，Ｃｒｏｔｏｎｂｅｔａｉｎ ｕｎｄ Ｃａｒｎｉｔｉｎ ｉｍ ｔｉｅｒｉｓｃｈｅｎ Ｓｔｏｆｆｗｅｃｈｓｅｌ．Ｈｏｐｐｅ−Ｓｅｙｌｅｒｓ Ｚｅｉｔｓｃｈｒｉｆｔ ｆｕｒ ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｓｃｈｅ Ｃｈｅｍｉｅ．１９２９年第１８１巻４２〜５３ページ。その一方で、より最近の研究論文で、他の著者達により、γ‐ブチロベタインの毒性が極めて低い（ＬＤ５０＞７０００ｍｇ／ｋｇ、皮下注射）ことが確認された。ＲＯＴＺＳＣＨ，Ｗ．Ｉｂｅｒ ｄｉｅ Ｔｏｘｉｚｉｔａｔ ｄｅｓ Ｃａｒｎｉｔｉｎｓ ｕｎｄ ｅｉｎｉｇｅｒ ｖｅｒｗａｎｄｔｅｒ Ｓｔｏｆｆｅ．Ａｃｔａ ｂｉｏｌ．ｍｅｄ．ｇｅｒｍ．．１９５９年第３巻２８〜３６ページ。
【０００９】
非置換γ‐ブチロベタインの文献データには、心臓血管系作用は記載されていないが、ＨＯＳＥＩＮ，Ｅ．Ａ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ ａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ γ‐ｂｕｔｙｒｏｂｅｔａｉｎｅ．（γ‐ブチロベタインの薬理学的作用）Ｎａｔｕｒｅ．１９５９年第１８３巻３２８〜３２９ページでは、γ‐ブチロベタインが、持続性作用を伴うアセチルコリンと類似した物質であることが報告されている。しかしながら、後に、同じ著者達は、実験結果が、誤りにより、γ‐ブチロベタインの代わりに、実際にコリン作動性の特性をもつそのメチルエステルを取り込んでいたことを報告した。前者に反して、γ‐ブチロベタインは、薬理学的な不活性物質として特徴付けられた。ＨＯＳＥＩＮ，Ｅ．Ａ．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｒｏｂａｂｌｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｂｅｔａｉｎｅ ｅｓｔｅｒｓ ｉｎ ｂｒａｉｎ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ．（脳代謝におけるベタインエステルの分離および予想される機能）Ｎａｔｕｒｅ．１９６０年第１８７巻３２１〜３２２ページ。
【００１０】
４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアートに構造的に関係している化合物が、以下において開示されている：
・英国特許第１２３８８６８号明細書１９７１年７月１４日において、４−トリメチルアンモニオブタノアートのような、ポリマーとして利用されるベタインが開示された。しかしながら、これらのベタインの薬理学的特性は示されなかった；
・米国特許第５９７３０２６号明細書（ＸＥＲＯＸ ＣＯＲＰ ゼロックス社）１９９９年１０月２６日において、インク組成物用の利用のための、４−トリメチルアンモニオブタノアートおよび３−［ジエチル（メチル）アンモニオ］プロピオナートが開示された；
・ＬＬＯＹＤ ＡＮＤＲＥＷ氏他 Ａ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｇｌｙｃｉｎｅ，ｓａｒｃｏｓｉｎｅ，Ｎ，Ｎ−ｄｉｍｅｔｈｙｌｇｌｙｃｉｎｅ，ｇｌｙｃｉｎｅｂｅｔａｉｎｅ ａｎｄ Ｎ−ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｂｅｔａｉｎｅｓ ａｓ ｌｉｐｏｓｏｍｅ ｃｒｙｏｐｒｏｔｅｃｔａｎｔｓ．（リポソーム凍結防止剤としてのグリシン、サルコシン、Ｎ，Ｎ−ジメチルグリシン、グリシンベタイン及びＮ−修飾ベタイン類の比較）Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｐｈａｒｍａｃｙ ａｎｄ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ．１９９２年第４４巻第６号５０７〜５１１ページにおいて、リポソーム用の抗凍結剤として利用される、２−［エチル（ジメチル）アンモニオ］アセテートが開示された；
・ＤＡＶＩＤ Ｂ．，ＴＨＯＭＡＳ氏他 Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ， Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ，ａｎｄ Ａｑｕｅｏｕｓ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ Ｂｅｈａｖｉｏｒ ｏｆ Ｅｌｅｃｔｒｏｌｙｔｅ− ａｎｄ ｐＨ−Ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ Ｃａｒｂｏｘｙｂｅｔａｉｎｅ−Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ Ｃｙｃｌｏｃｏｐｏｌｙｍｅｒｓ．（電解質及びｐＨ応答性のカルボキシベタイン含有シクロコポリマの合成、特性解析と水溶液挙動）Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ．２００３年第３６巻第２６号９７１０〜９７１５ページにおいて、４−［ジアリル（メチル）アンモニオ］ブタノアートおよび、Ｎ，Ｎ−ジアリル−Ｎ−メチルアンモニウムと４−ブロモ酪酸エチルとから始まるその合成が開示されている。遊離酸は、イオン交換樹脂アンバーライトを利用する第二段階においてエステルから得られる。生成物は、ポリマーを合成するための中間体として利用される；
・Ｐｒｅｌｏｇ Ｖ．１９３０年第２巻７１２〜７２２ページにおいて、４−ジメチルアンモニオブタノアートおよびヨウ化メチルから始まる４−トリメチルアンモニオブタノアートの合成が開示された；
・特開第２００９‐０９６７６６号公報（甲南学園）２００９年０５月０７日に、４−トリメチルアンモニオブタノアートおよび、トリメチルアミンと４−ブロモ酪酸エチルとから始まるその合成が記載された。遊離酸は、イオン交換樹脂アンバーライトを利用する第二段階においてエステルから得られる；
・国際公開第２００８／０５５８４３号（ＫＡＬＶＩＮＳＨ ＩＶＡＲＳ；ＣＨＥＲＮＯＢＲＯＶＩＪＳ ＡＬＥＫＳＡＮＤＲＳ；ＶＡＲＡＣＨＥＶＡ ＬＡＲＩＳＡ；ＰＵＧＯＶＩＣＨＳ ＯＳＶＡＬＤＳ）２００８年０５月１５日において、４−トリメチルアンモニオブタノアートおよび、対応するエステルから始まり、ＫＯＨ溶液を利用する合成が記載された；
・加国特許第２５０８０９４号明細書（ＶＩＶＩＥＲ ＣＡＮＡＤＡ社）２００６年１１月２０日において、ベタイン、たとえば４−トリメチルアンモニオブタノアートが、コラーゲン合成を促進するための薬剤として開示された；
・米国特許第５９６５６１５号明細書（大鵬薬品工業株式会社；ＶＡＬＳＴＳ ＺＩＮＡＴＮＩＳＫＡ ＩＥＳＴＡＤＥ ＢＥＺＰ）１９９９年１０月１２日において、心筋代謝異常の治療用の薬剤として４−トリメチルアンモニオブタノアートが開示され、同じ化合物が米国特許第２００７１９１３８１号明細書（ＣＯＮＣＥＲＴ ＰＨＡＲＭＡＣＥＵＴＩＣＡＬＳ社）２００７年０８月１６日において、心筋梗塞の治療用に開示された。
【００１１】
３−（２，２，２−トリメチルヒドラジニウム）プロピオナート二水和物は、心臓保護特性をもつ化合物として既知である（この物質は、その国際一般名であるメルドニウムとして既知のものである）。３−（２，２，２−トリメチルヒドラジニウム）プロピオナートは、米国特許第４４８１２１８号明細書（ＩＮＳＴ ＯＲＧＡＮＩＣＨＥＳＫＯＧＯ ＳＩＮＴＥＺＡ）１９８４年１１月０６日において、ならびに米国特許第４４５１４８５号明細書（ＩＮＳＴＩＴＵ ＯＲＣＨ ＳＩＮＴＥＺＡ ＡＫＡＤＥＭＩＩ）１９８４年０５月２９日において開示されている。
【００１２】
二水和物としての３−（２，２，２−トリメチルヒドラジニウム）プロピオナートが、カルニチン対ガンマ−ブチロベタインの濃度比、ひいては体内の脂肪酸ベータ酸化速度を制御するために広く利用されていることは、非常に既知である。ＤＡＭＢＲＯＶＡ Ｍ．，ＬＩＥＰＩＮＳＨ Ｅ．，ＫＡＬＶＩＮＳＨ Ｉ．Ｉ．Ｍｉｌｄｒｏｎａｔｅ：ｃａｒｄｉｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ａｃｔｉｏｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ｃａｒｎｉｔｉｎｅ−ｌｏｗｅｒｉｎｇ ｅｆｆｅｃｔ．（ミルドロネート：カルニチン低下効果による心臓保護作用）Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，．２００２年第１２巻第６号２７５〜２７９ページ。
【００１３】
これらの特性により、メルドニウムは、さまざまな心血管疾患および他の組織虚血を伴う病理の治療において、抗虚血薬、抗ストレス薬、心臓保護薬として、医学の分野で幅広く適用されている。ＫＡＲＰＯＶ Ｒ．Ｓ．，ＫＯＳＨＥＬＳＫＡＹＡ Ｏ．Ａ．，ＶＲＵＢＬＥＶＳＫＹ Ａ．Ｖ．，ＳＯＫＯＬＯＶ Ａ．Ａ．，ＴＥＰＬＹＡＫＯＶ Ａ．Ｔ．，ＳＫＡＲＤＡ Ｉ．，ＤＺＥＲＶＥ Ｖ．，ＫＬＩＮＴＳＡＲＥ Ｄ．，ＶＩＴＯＬＳ Ａ．，ＫＡＬＮＩＮＳ Ｕ．，ＫＡＬＶＩＮＳＨ Ｉ．，ＭＡＴＶＥＹＡ Ｌ．，ＵＲＢＡＮＥ Ｄ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｅｆｆｉｃａｃｙ ａｎｄ Ｓａｆｅｔｙ ｏｆ Ｍｉｌｄｒｏｎａｔｅ ｉｎ Ｐａｔｉｅｎｔｓ Ｗｉｔｈ Ｉｓｃｈｅｍｉｃ Ｈｅａｒｔ Ｄｉｓｅａｓｅ ａｎｄ Ｃｈｒｏｎｉｃ Ｈｅａｒｔ Ｆａｉｌｕｒｅ．（虚血性心疾患と慢性心不全の患者におけるミルドロネートの臨床効果と安全性）Ｋａｒｄｉｏｌｏｇｉｙａ．２０００年第６号６９〜７４ページ。心血管疾患の治療において、３−（２，２，２−トリメチルヒドラジニウム）プロピオナートの作用機序は、カルニチン生合成速度の制限および、関連する長鎖脂肪酸の運搬のミトコンドリア膜を介した制限に基づくものである。ＳＩＭＫＨＯＶＩＣＨ Ｂ．Ｚ．，ＳＨＵＴＥＮＫＯ Ｚ．Ｖ．，ＭＥＩＲＥＮＡ Ｄ．Ｖ．，ＫＨＡＧＩ Ｋ．Ｂ．，ＭＥＺＨＡＰＵＫＥ Ｒ．Ｊ．，ＭＯＬＯＤＣＨＩＮＡ Ｔ．Ｎ．，ＫＡＬＶＩＮＳ Ｉ．Ｊ．，ＬＵＫＥＶＩＣＳ Ｅ。
【００１４】
３−（２，２，２，−Ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｈｙｄｒａｚｉｎｉｕｍ）ｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ（ＴＨＰ）−ａ ｎｏｖｅｌ ｇａｍｍａ−ｂｕｔｙｒｏｂｅｔａｉｎｅ ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｗｉｔｈ ｃａｒｄｉｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ．（３−（２，２，２−トリメチルヒドラジニウム）プロピオナート（ＴＨＰ）−心臓保護特性を備えた新規のガンマ−ブチロベタインヒドロキシナーゼ阻害剤）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ．１９８８年第３７巻１９５〜２０２ページ、 ＫＩＲＩＭＯＴＯ Ｔ．，ＡＳＡＫＡ Ｎ．，ＮＡＫＡＮＯ Ｍ．，ＴＡＪＩＭＡ Ｋ．，ＭＩＹＡＫＥ Ｈ．，ＭＡＴＳＵＵＲＡ Ｎ．Ｂｅｎｅｆｉｃｉａｌ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ＭＥＴ−８８，ａ γ‐ｂｕｔｙｒｏｂｅｔａｉｎｅ ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ ｉｎ ｒａｔｓ ｗｉｔｈ ｈｅａｒｔ ｆａｉｌｕｒｅ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ．（心筋梗塞に伴う心不全ラットにおけるγ‐ブチロベタインヒドロキシラーゼ阻害剤ＭＥＴ‐８８の有益な効果）Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ．２０００年第３９５巻第３号２１７〜２２４ページ。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
メルドニウム二水和物の心臓保護作用は既知であったが、しかしγ‐ブチロベタインそのものに明白な心臓保護作用があるとのデータはないのである。欧州特許第０８４５９８６号明細書（ＫＡＬＶＩＮＳＨ ＩＶＡＲＳ，ＶＥＶＥＲＩＳ ＭＡＲＩＳ）２００３年０４月０２日では、心血管疾患の治療において用いられるメルドニウム二水和物およびγ‐ブチロベタインの医薬組成物が開示されている。
【００１６】
本発明の一つの目的は、明白な心臓保護作用をもつ化合物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
上記の目的は、メルドニウムまたはγ‐ブチロベタインと類似の構造をもつ、新規の化合物４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアート（化学式５の化合物）を提供することによって達成される。
【００１８】
【化２】
【００１９】
驚くべきことに、４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアートは、明白な心臓保護作用を有し、また、メルドニウム二水和物のｉｎ ｖｉｖｏでの心筋梗塞モデルよりも効果的であり、この特性のために、４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアートは医学の分野で利用されることが可能である。４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアートは、注射液および錠剤として利用されることができる。
【００２０】
本発明の次の目的は、前記化学式５の化合物の調製方法である。
【００２１】
化学式５の目標化合物４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアートを生成するために利用されることができる四つの過程が開示されるが、以下の図解を参照頂きたい。
【００２２】
【化３】
【００２３】
第一の過程（ルートＡ）は、以下の工程段階を含む：
ａ）Ｎ−エチル−４−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムブロミドを生成するために、４−（ジメチルアンモニオ）ブタノアートに、臭化エチルを加える；
ｂ）望まれる化合物４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアートを得るために、Ｎ−エチル−４−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムブロミドを水酸化カリウムで処理する。
【００２４】
第二の過程（ルートＢ）は、以下の工程段階を含む：
ａ）Ｎ−エチル−４−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムブロミドを生成するために、４−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムクロリドに、炭酸カリウムおよびブロモエタンを加える；
ｂ）４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアートを得るために、Ｎ−エチル−４−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムブロミドを、イオン交換樹脂カラムに通す。
【００２５】
第三の過程（ルートＣ）は、以下の工程段階を含む：
ａ）メチル−４−（ジメチルアミノ）ブタノアートを生成するために、４−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムクロリドに、炭酸カリウムおよびジクロロメタンを加える；
ｂ）Ｎ−エチル−４−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムブロミドを得るために、メチル−４−（ジメチルアミノ）ブタノアートを、ジクロロメタン中のブロモエタンで、撹拌する；
ｃ）望まれる化合物４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアートを得るために、Ｎ−エチル−４−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムブロミドを水酸化カリウムで処理する。
【００２６】
第四の過程（ルートＤ）は、以下の工程段階を含む：
ａ）４−エトキシ−Ｎ−エチル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムブロミドを得るために、ジクロロメタン中のエチル４−ブロモブタノアートに、Ｎ，Ｎ−ジメチルエチルアミンを加える；
ｂ）４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアートを得るために、４−エトキシ−Ｎ−エチル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムブロミドを、イオン交換樹脂カラムに通す。
【発明を実施するための形態】
【００２７】
本発明は、以下の非制限例を参照しながら、より詳細に説明されていく。
【００２８】
４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアート（５）の合成
【００２９】
４−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムクロリド（３）の調製
【００３０】
無水メタノール（３００ｍｌ）中の３−カルボキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−プロパンアミニウムクロリド（２）（４５．９３ｇ、０．２７ｍｏｌ）の溶液に、（−１０）−０℃でゆっくりと塩化チオニル（５５ｍｌ、０．７６ｍｏｌ）が加えられて、反応混合物は室温で１時間の間撹拌された。反応混合物は、その後４０〜５０℃で３時間の間撹拌され、そして蒸発した。残留物は、アセトン（１１０ｍｌ）の中で溶解され、エーテル（４００ｍｌ）を添加することによって沈殿した。固形物は、濾過され、エーテルで洗浄され、そしてもう一度アセトン（１１０ｍｌ）の中で溶解され、続いてエーテル（４００ｍｌ）で沈殿した。沈殿物は、濾過され、エーテルで洗浄され、そして乾燥されて、３８．４ｇ（７７％）の４−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムクロリドが得られた。
【００３１】
１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，ＨＭＤＳＯ）δ：１．９１（ｑｕｉ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，２Ｈ）；２．４３（ｔ，Ｊ＝７．７４Ｈｚ，２Ｈ）；２．７１（ｄ，J＝４．９Ｈｚ，６Ｈ）；２．９８−３．０６（ｍ，２Ｈ），３．６１（ｓ，３Ｈ）；１０．７６（ｂｓ，１Ｈ）。
【００３２】
ルートＡ
【００３３】
４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアート（５）の調製
【００３４】
無水アセトン（２０ｍｌ）中の４−（ジメチルアンモニオ）ブタノアート（４）（７．８７ｇ、０．０６ｍｏｌ）と臭化エチル（１３．０８ｇ、０．１２ｍｏｌ）との混合物は、出発物質４−（ジメチルアンモニオ）ブタノアートが無くなるまで還流された（ＴＬＣ標準品、メタノール：含水水酸化アンモニウム、３:１）。反応混合物は、イソプロパノール（１００ｍｌ）が補充されて、溶液は蒸発乾固された。９６％エタノール（７０ｍｌ）中のＫＯＨ（７．２８ｇ、０．１３ｍｏｌ）の溶液が、０℃で残留物に加えられ、そして反応混合物は４時間の間撹拌された。沈殿物は濾過されて取り除かれ、濾液は、媒体のｐＨが７〜８になるまでメタノール中の２Ｎ ＨＣｌで処理された。反応混合物は、１２時間の間−１８℃で保たれたのち濾過された。濾液は蒸発乾固され、残留物はイソプロパノール（３×１００ｍｌ）で共沸乾燥された。得られた油状固形物（１３．４ｇ）は、イソプロパノール（１００ｍｌ）の中で溶解されて、１２時間の間−１８℃に保たれた。沈殿物は濾過され、そして濾液は、蒸発乾固され、−１８℃でアセトン（３０ｍｌ）から結晶化して、４．１４ｇ（４３％）の４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアートを得た。
【００３５】
１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，ＨＭＤＳＯ）δ：１．２４（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，３Ｈ）；１．６８−１．７８（ｍ，２Ｈ）；１．８７（ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，２Ｈ）；２．９６（ｓ，６Ｈ）；３．１６−３．２３（ｍ，２Ｈ）；３．２９（ｑ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ）。ＬＣ ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：１６０[Ｍ＋Ｈ]＋。
【００３６】
Ｃ８Ｈ１７ＮＯ２・１．３Ｈ２Ｏの解析計算値：Ｃ５２．６１，Ｈ１０．８２，Ｎ７．６７。
【００３７】
実測値：Ｃ５２．６４，Ｈ１１．００，Ｎ７．５８。
【００３８】
ルートＢ
【００３９】
Ｎ−エチル−４−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムブロミド（６ａ）の調製
【００４０】
アセトン（４０ｍｌ）中の、４−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムクロリド（３）（７．２７ｇ、０．０４ｍｏｌ）と、無水Ｋ２ＣＯ３（５．５２ｇ、０．０４ｍｏｌ）と、ブロモエタン（４．４８ｍｌ、０．０６ｍｏｌ）との混合物は、室温で２日間の間しっかり撹拌された。沈殿物は、濾過され、アセトンで洗浄され、イソプロパノール（１００ｍｌ）中に懸濁され、そして室温で２時間の間しっかり撹拌された。混合物は濾過され、濾液は、蒸発乾固されて、イソプロパノールで数回共沸乾燥された。残留物は、酢酸エチル（３５ｍｌ）の添加によりアセトン（１０ｍｌ）から結晶化され、Ｐ２Ｏ５上で真空乾燥されて、６．５１ｇ（６４％）のＮ−エチル−４−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムブロミドが得られた。
【００４１】
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，ＨＭＤＳＯ）δ：１．４４（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）；２．０１−２．１２（ｍ，２Ｈ）；２．５５（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ）；３．４０（ｓ，６Ｈ）；３．６６−３．７３（ｍ，４Ｈ）；３．６９（ｓ，３Ｈ）。
【００４２】
ＬＣ ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：１７４[Ｍ＋Ｈ]＋。
【００４３】
Ｃ９Ｈ２０ＢｒＮＯ２・０．０９Ｈ２Ｏの解析計算値：Ｃ４２．２６，Ｈ７．９５，Ｎ．４８。
【００４４】
実測値：Ｃ４２．２６，Ｈ８．２８，Ｎ５．３５。
【００４５】
４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアート（５）の調製
【００４６】
エタノール（２０ｍｌ）中の、Ｎ−エチル−４−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムブロミド（６ａ）（６．５１ｇ、０．０２５ｍｏｌ）の溶液は、エタノール（１００ｍｌ）でゆっくりと溶出するアンバーライト（登録商標）ＩＲＡ−４１０（ＯＨ）イオン交換樹脂カラム（１９０ｍｌ）に通された。溶出液は蒸発乾固され、残留物は、イソプロパノールで数回共沸乾燥され、それからイソプロパノール（５０ｍｌ）に溶解されて、１２時間の間０℃に保たれた。混合物は濾過され、濾液は蒸発した。残留物（７．３５ｇ）は、冷たい酢酸エチルと混合されて、１２時間の間０℃に保たれた。混合物は濾過され、沈殿物はＰ２Ｏ５上で真空乾燥されて、３．５４ｇ（８６％）の４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアートが得られた。材料の純度は、４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアートの水溶液をＤＯＷＥＸ（登録商標）５０ＷＸ８イオン交換樹脂に通すことによって増した。溶液は蒸発乾固され；残留物は、イソプロパノールで共沸乾燥され、続いてＰ２Ｏ５上で真空乾燥されて、１．２７ｇ（３１％）の４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアートが得られた。
【００４７】
ルートＣ
【００４８】
メチル−４−（ジメチルアミノ）ブタノアート（７）の調製
【００４９】
ジクロロメタン（７０ｍｌ）中の、４−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムクロリド（３）（５．４４ｇ、０．０３ｍｏｌ）と無水Ｋ２ＣＯ３（５．５２ｇ、０．０４ｍｏｌ）の懸濁液は、室温で２４時間の間しっかりと撹拌された。沈殿物は濾過され、ジクロロメタンで洗浄され、そして濾液は蒸発した。残留物は、３２〜３５℃／３〜４ｍｍＨｇで蒸留されて、２．８８ｇ（６６％）の４−（ジメチルアミノ）ブタノアートが得られた。
【００５０】
１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，ＨＭＤＳＯ）δ：１．６４（ｑｕｉ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）；２．０９（ｓ，６Ｈ）；２．１７（ｔ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，２Ｈ）；２．３０（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ）；３．５７（ｓ，３Ｈ）。
【００５１】
Ｎ−エチル−４−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムブロミド（６ａ）の調製
【００５２】
ジクロロメタン（１５ｍｌ）中の、メチル−４−（ジメチルアミノ）ブタノアート（７）（１．４５ｇ、１０ｍｍｏｌ）と、ブロモエタン（１．２ｍｌ、１６ｍｍｏｌ）との混合物は、室温で撹拌された。反応混合物は蒸発乾固され、白い固形物（２．４３８ｇ）は、アセトンを用いて粉砕され、濾過され、Ｐ２Ｏ５上で真空乾燥されて、２．３９７ｇ（９４％）のＮ−エチル−４−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムブロミドが得られた。
【００５３】
ルートＤ
【００５４】
４−エトキシ−Ｎ−エチル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムブロミド（６ｂ）の調製
【００５５】
氷浴温度のジクロロメタン中のエチル−４−ブロモブタノアート（８）（１９．５ｇ、０．１ｍｏｌ）の溶液に、Ｎ，Ｎ−ジメチルエチルアミン（１０．８ｍｌ、０．１ｍｏｌ）が加えられ、室温で一晩中撹拌された。反応混合物は蒸発乾固され、残留物はアセトン（５０ｍｌ）を用いて粉砕されて０．５時間の間０℃に保たれた。沈殿物は濾過されＰ２Ｏ５上で真空乾燥されて、２２．２７４ｇ（９４％）の４−エトキシ−Ｎ−エチル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムブロミドが得られた。
【００５６】
１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，ＨＭＤＳＯ）δ：１．２６（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，３Ｈ）；１．４４（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ）；２．００−２．１１（ｍ，２Ｈ）；２．５２（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，２Ｈ）；３．４０（ｓ，６Ｈ）；３．６４−３．７３（ｍ，２Ｈ）；３．６９（ｑ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ）；４．１４（ｑ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ）。
【００５７】
４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアート（５）の調製
【００５８】
水（１０ｍｌ）中の、４−エトキシ−Ｎ−エチル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムブロミド（６ｂ）（１２．００ｇ、４４．７ｍｏｌ）は、エタノール（ＴＬＣ標準品）でゆっくりと溶出する（約１０滴／分）アンバーライト（登録商標）ＩＲＡ−４１０（ＯＨ）イオン交換樹脂カラム（２５０ｍｌ）に通された。溶出液は蒸発し、残留物（１２ｇ）は水（５０ｍｌ）の中に溶解された。この溶液にＤＯＷＥＸ（登録商標）５０ＷＸ８イオン交換樹脂（５ｇ）が加えられて、０．５時間の間室温で撹拌された。反応混合物は、セライト（１ｃｍ）を通して濾過され、溶出液は蒸発乾固された。残留物は、イソプロパノール、アセトニトリル、およびアセトンで共沸乾燥された。得られた固形物はアセトン（１０ｍｌ）を用いて粉砕され、混合物は２時間の間０℃に保たれた。沈殿物は濾過され、Ｐ２Ｏ５上で真空乾燥されて、４．６５ｇ（６５％）の４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアートが得られた。
【００５９】
１Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６，ＨＭＤＳＯ）δ：１．２４（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，３Ｈ）；１．６６−１．７６（ｍ，２Ｈ）；１．８１（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ）；２．９５（ｓ，６Ｈ）；３．１６−３．２３（ｍ，２Ｈ）；３．２９（ｑ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ）。ＬＣ ＥＳＩ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：１６０[Ｍ＋Ｈ]＋。
【００６０】
Ｃ８Ｈ１７ＮＯ２・１．５５Ｈ２Ｏの解析計算値：Ｃ５１．３４；Ｈ１０．８２；Ｎ７．４８。実測値：Ｃ５１．３６，Ｈ１１．４０，Ｎ７．３４。
【００６１】
心臓保護作用
【００６２】
２００〜２５０ｇの生後１０週間のウィスター系ラットの雄５０匹が、標準環境下（２１〜２３℃、１２時間の明／暗サイクル）で収容され、食べ物（Ｒ３規定食、Ｌａｃｔａｍｉｎ ＡＢ、スウェーデン）と水が制限なく与えられた。
【００６３】
ラットは、治療開始前２週間の間、局地的条件に適応された。一回分の投与量５ｍｇ／ｋｇあるいは１００ｍｇ／ｋｇのメルドニウム二水和物、一回分の投与量５ｍｇ／ｋｇのガンマ−ブチロベタイン、そして一回分の投与量２０ｍｇ／ｋｇのＥＧが、経口で毎日、８週間の間投与された。対照群ラットは水を与えられた。
【００６４】
単離ラット心筋梗塞調査
【００６５】
単離ラット心臓の実験は、基本的に先に記述されたように行われた（Ｌｉｅｐｉｎｓｈ氏他，Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２００６；４８（６）：３１４−９）。最後の投薬の２４時間後、心臓は摘出され、３７℃で、酸素を含んだクレブス−ヘンゼライトバッファーで一定の圧力で大動脈を介して逆行的にかん流された。心拍数、左心室拡張終期圧および最大左心室圧が、連続的に記録された。冠血流は、超音波探傷器（ＨＳＥ）およびＡＤＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ社製のＰｏｗｅｒＬａｂ８／３０システムを使って測定された。心臓は、血行動態機能を安定させるために２０分の間かん流され、それからプラスチックチューブに通した糸を締め付けることによって、６０分の間閉塞された。冠血流の約４０％の低下によって、閉塞の成功が確認された。糸を解放することによって、再かん流が達成された。１５０分間の再かん流の終わりに、リスク領域は、０．１％のメチレンブルーで輪郭が描かれた。それから心臓は、心尖から心底まで２ｍｍの厚さの５枚の薄片に、横に切開され、そして、生活組織を赤色にまた壊死組織を白色に染色するために１０分間の間リン酸緩衝液（ｐＨ７．４，３７℃）中の１％のトリフェニルテトラゾリウムクロリドの中で培養された。百分率％で表される左心室のリスク領域と壊死領域を測定するために、ソフトウェアＩｍａｇｅ−Ｐｒｏ Ｐｌｕｓ ６．３を利用して、ＳＯＮＹ Ａ９００の写真の、コンピュータによる面積測定分析が行われた。得られた値はそれから、以下の式にしたがって、リスク領域の百分率％としての梗塞面積（ＩＳ）を計算するために利用された：
【００６６】
梗塞面積＝壊死領域／リスク領域×１００％。
【００６７】
単離ラット心筋梗塞モデルにおける効果
【００６８】
調べられた物質の抗梗塞効果が、単離ラット心筋梗塞モデルにおいて調査された。左冠状動脈の閉塞の間に、全ての実験群における冠血流が４０％低下した（１１ｍｌ／分から７ｍｌ／分）。さらに、最大左心室圧の５０％の低下が観察された。閉塞時間の間の心拍数には著しい変化はなかった。再かん流の段階において、冠血流、最大左心室圧、±ｄｐ／ｄｔの値は、対照群レベルの約８０％まで回復した。対照群と治療群の間に著しい差はなかった。
【００６９】
単離ラット心筋梗塞実験におけるメルドニウム二水和物（５ｍｇ／ｋｇあるいは１００ｍｇ／ｋｇ）、ガンマ−ブチロベタイン（５ｍｇ／ｋｇ）、そして４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアート（ＥＧ）（５ｍｇ／ｋｇ）の、治療２週間後の梗塞面積への効果が、表１に示されている。
【００７０】
【表１】
【００７１】
表１に示されるように、一回分の投与量５ｍｇ／ｋｇのメルドニウム二水和物治療は梗塞面積を５％小さくしたが、メルドニウム二水和物の治療作用は１００ｍｇ／ｋｇになって初めて観察され、梗塞面積は２４％小さくなった。一回分の投与量５ｍｇ／ｋｇのガンマ−ブチロベタインは、治療効果を示さなかった。一回分の投与量５ｍｇ／ｋｇの４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアートでは、梗塞面積を４１％小さくするという、最良の治療効果が観察された。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００７２】
【特許文献１】英国特許第１２３８８６８号明細書
【特許文献２】米国特許第５９７３０２６号明細書
【特許文献３】特開２００９−０９６７６６号公報
【特許文献４】国際公開第２００８／０５５８４３号
【特許請求の範囲】
【請求項１】
４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアート。
【化１】
【請求項２】
以下を含む、４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアート調製方法：
ａ）Ｎ−エチル−４−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムブロミドを生成するために、アセトン中の４−（ジメチルアンモニオ）ブタノアートに、臭化エチルを加える；
ｂ）望まれる化合物４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアートを得るために、Ｎ−エチル−４−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムブロミドを、エタノール中の水酸化カリウムの溶液で処理する。
【請求項３】
以下を含む、４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアート調製方法：
ａ）Ｎ−エチル−４−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムブロミドを生成するために、アセトン中の４−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムクロリドに、炭酸カリウムおよびブロモエタンを加える；
ｂ）４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアートを得るために、エタノール存在下のＮ−エチル−４−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムブロミドを、イオン交換樹脂カラムに通す。
【請求項４】
以下を含む、４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアート調製方法：
ａ）メチル−４−（ジメチルアミノ）ブタノアートを生成するために、４−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムクロリドに、炭酸カリウムおよびジクロロメタンを加える；
ｂ）Ｎ−エチル−４−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムブロミドを得るために、メチル−４−（ジメチルアミノ）ブタノアートを、ジクロロメタン中のブロモエタンで、撹拌する；
ｃ）望まれる化合物４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアートを得るために、Ｎ−エチル−４−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムブロミドを、エタノール中の水酸化カリウムの溶液で処理する。
【請求項５】
以下を含む、４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアート調製方法：
ａ）４−エトキシ−Ｎ−エチル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムブロミドを得るために、ジクロロメタン中のエチル４−ブロモブタノアートに、Ｎ，Ｎ−ジメチルエチルアミンを加える；
ｂ）４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアートを得るために、水に溶解した４−エトキシ−Ｎ−エチル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムブロミドを、イオン交換樹脂カラムに通す。
【請求項６】
薬剤として利用するための、４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアート。
【請求項７】
心血管疾患の治療に利用するための、４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアート。
【請求項８】
心血管疾患の治療用の薬剤の製造のための、４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアートの利用方法。
【請求項９】
虚血性心疾患の治療用の薬剤の製造のための、請求項８に記載の４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアートの利用方法。
【請求項１０】
虚血性心疾患が心筋梗塞である、請求項９に記載の利用方法。
【請求項１】
４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアート。
【化１】
【請求項２】
以下を含む、４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアート調製方法：
ａ）Ｎ−エチル−４−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムブロミドを生成するために、アセトン中の４−（ジメチルアンモニオ）ブタノアートに、臭化エチルを加える；
ｂ）望まれる化合物４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアートを得るために、Ｎ−エチル−４−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムブロミドを、エタノール中の水酸化カリウムの溶液で処理する。
【請求項３】
以下を含む、４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアート調製方法：
ａ）Ｎ−エチル−４−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムブロミドを生成するために、アセトン中の４−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムクロリドに、炭酸カリウムおよびブロモエタンを加える；
ｂ）４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアートを得るために、エタノール存在下のＮ−エチル−４−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムブロミドを、イオン交換樹脂カラムに通す。
【請求項４】
以下を含む、４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアート調製方法：
ａ）メチル−４−（ジメチルアミノ）ブタノアートを生成するために、４−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムクロリドに、炭酸カリウムおよびジクロロメタンを加える；
ｂ）Ｎ−エチル−４−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムブロミドを得るために、メチル−４−（ジメチルアミノ）ブタノアートを、ジクロロメタン中のブロモエタンで、撹拌する；
ｃ）望まれる化合物４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアートを得るために、Ｎ−エチル−４−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムブロミドを、エタノール中の水酸化カリウムの溶液で処理する。
【請求項５】
以下を含む、４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアート調製方法：
ａ）４−エトキシ−Ｎ−エチル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムブロミドを得るために、ジクロロメタン中のエチル４−ブロモブタノアートに、Ｎ，Ｎ−ジメチルエチルアミンを加える；
ｂ）４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアートを得るために、水に溶解した４−エトキシ−Ｎ−エチル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−オキソ−１−ブタンアミニウムブロミドを、イオン交換樹脂カラムに通す。
【請求項６】
薬剤として利用するための、４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアート。
【請求項７】
心血管疾患の治療に利用するための、４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアート。
【請求項８】
心血管疾患の治療用の薬剤の製造のための、４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアートの利用方法。
【請求項９】
虚血性心疾患の治療用の薬剤の製造のための、請求項８に記載の４−［エチル（ジメチル）アンモニオ］ブタノアートの利用方法。
【請求項１０】
虚血性心疾患が心筋梗塞である、請求項９に記載の利用方法。
【公表番号】特表２０１３−５０８３４２（Ｐ２０１３−５０８３４２Ａ）
【公表日】平成２５年３月７日（２０１３．３．７）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５３４７０９（Ｐ２０１２−５３４７０９）
【出願日】平成２２年１０月２２日（２０１０．１０．２２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２０１０／０６５９２４
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０４８２０１
【国際公開日】平成２３年４月２８日（２０１１．４．２８）
【出願人】（５０９１２６１１７）グリンデクス，ア ジョイント ストック カンパニー (9)
【氏名又は名称原語表記】ＧＲＩＮＤＥＫＳ，ａ ｊｏｉｎｔ ｓｔｏｃｋ ｃｏｍｐａｎｙ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２５年３月７日（２０１３．３．７）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年１０月２２日（２０１０．１０．２２）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２０１０／０６５９２４
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０４８２０１
【国際公開日】平成２３年４月２８日（２０１１．４．２８）
【出願人】（５０９１２６１１７）グリンデクス，ア ジョイント ストック カンパニー (9)
【氏名又は名称原語表記】ＧＲＩＮＤＥＫＳ，ａ ｊｏｉｎｔ ｓｔｏｃｋ ｃｏｍｐａｎｙ
【Ｆターム（参考）】
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