Ａ型インフルエンザウイルス感染症の治療または予防用のＰＡＲ−１アンタゴニスト
本発明は、Ａ型ウイルス・インフルエンザ感染症、特にＨ１Ｎ１感染症の治療または予防のための方法及びＰＡＲ１アンタゴニストからなる（医薬組成物のような）組成物を提供するものである。ＰＡＲ１アンタゴニストは、ＰＡＲ２アゴニストと併用してよい。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ａ型インフルエンザウイルス感染症の治療または予防のための方法及び組成物（医薬組成物など）を提供するものである。
【背景技術】
【０００２】
流行性ウイルス感染症は、ありふれた風邪から命に関わるインフルエンザ感染症、西ナイル熱感染症、ＨＩＶ感染症に至るヒトの疾患を通じて、甚大な地球規模の生命の損失及び金銭的被害をもたらすものである。流行性、汎発性、および動物間流行性の状況では、適時に発見し、診断し、治療することが、病気の蔓延に歯止めをかける上で肝要である。特に、ウイルスの構築と増殖を速やかに阻害する予防薬や治療薬が、治療のための投薬計画において極めて有益である。
【０００３】
Ａ型インフルエンザウイルス（ＩＡＶ）が引き起こす急性呼吸器系感染症は、伝染性が強く、人畜の罹病率及び死亡率も著しい。そういうわけで、新規で改良された抗ウイルス薬が臨床分野において求められている。本発明は、そのような求めに合致するものである。
【０００４】
宿主に本来備わっている免疫システムの活性化は、ＩＡＶ感染症の蔓延および悪影響を制御することを目的としている。しかしながら、サイトカイン放出の調節が不全で感染症の部位での好中球の動因が強化されることから炎症反応が過剰となると、それもまた、重篤な肺炎を引き起し、ＩＡＶの発病率を上げることになることがある。そういうわけで、ＩＡＶ感染症に際して、サイトカイン調節不全がＩＡＶの致命的結末につながることがよくある。
【０００５】
呼吸器内のウイルス複製部位は、複雑な微環境の典型であり、そこに細胞外プロテアーゼが大量に存在している。このようなプロテアーゼの幾つか（トリプシン、トリプターゼ）は、ウイルス複製（Ｒｉｔｅａｕ Ｂ．ｅｔ ａｌ．２００６；ＬｅＢｏｕｄｅｒ Ｆ．ｅｔ ａｌ．２００８）および自然免疫反応において、ある役割を有し得、それは、それらが、プロテアーゼ活性化受容体群（ＰＡＲ）と呼ばれる受容体ファミリーの活性化を介する炎症プロセスの重要なメディエーターであるためである（Ｓｔｅｉｎｈｏｆｆ Ｍ．ｅｔ ａｌ．２００５；Ｖｅｒｇｎｏｌｌｅ Ｎ．ｅｔ ａｌ．２００８）。
【０００６】
これまでに、異なるプロテアーゼにより活性化される４つのＰＡＲがクローニングされている（ＰＡＲ１〜４）。受容体が複数のプロテアーゼにより切断された後、その受容体は、新たに放出されたアミノ末端配列により結合され、内部で活性化される。
【０００７】
肺のＩＡＶ感染症においてＰＡＲ１が有する役割は、これまで記載されていない。しかしながら、ＩＡＶに感染したマウスの気道内でｐＡＲ１のＰＡＲレベルが上がることは観察されてきており（Ｌａｎ ＲＳ．ｅｔ ａｌ．２００４）、ウイルス性疾患の発病における、この受容体の役割が示唆されている。インビボまたはインビトロでのＰＡＲ１活性化／不活性化についての特定の役割については、これまで検討されたことがない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、Ａ型インフルエンザウイルス感染症の治療または予防用のＰＡＲ１アンタゴニストに関するものである。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１Ａ】ＰＡＲ１アゴニストにより上皮細胞中のウイルス複製が増大することを示す図である。Ａ５４９をＩＡＶ Ａ／ＰＲ／８／３４に感染させ、ＰＡＲ１アゴニストペプチドで治療し、または治療しなかった。感染後の、指定された時間の後に、培養上清中の感染性ウイルス力価を、プラークアッセイにより測定した。
【図１Ｂ】ＰＡＲ１アゴニストにより上皮細胞中へのサイトカイン放出が調節されることを示す図である。Ａ５４９をＩＡＶ Ａ／ＰＲ／８／３４に感染させ、ＰＡＲ１アゴニストペプチドで治療し、または治療しなかった。感染後の、指定された時間の後に、指定されたサイトカインの放出を従来のＥＬＩＳＡで測定した。
【図１Ｃ】ＰＡＲ１アゴニストにより上皮細胞中へのサイトカイン放出が調節されることを示す図である。Ａ５４９をＩＡＶ Ａ／ＰＲ／８／３４に感染させ、ＰＡＲ１アゴニストペプチドで治療し、または治療しなかった。感染後の、指定された時間の後に、指定されたサイトカインの放出を従来のＥＬＩＳＡで測定した。
【図１Ｄ】ＰＡＲ１アゴニストにより上皮細胞中へのサイトカイン放出が調節されることを示す図である。Ａ５４９をＩＡＶ Ａ／ＰＲ／８／３４に感染させ、ＰＡＲ１アゴニストペプチドで治療し、または治療しなかった。感染後の、指定された時間の後に、指定されたサイトカインの放出を従来のＥＬＩＳＡで測定した。
【図２Ａ】ＰＡＲ１アゴニストペプチドにより、特定の依存的な様式で、マウスにおけるＩＡＶ誘発性の死亡が増大することを示す図である。Ａ− ＰＡＲ１アゴニストＴＦＬＬＲ−ＮＨ２による治療を受けた、または治療を受けなかった、感染マウスの生存率。
【図２Ｂ】ＰＡＲ１アゴニストペプチドにより、特定の依存的な様式で、マウスにおけるＩＡＶ誘発性の死亡が増大することを示す図である。Ｂ−感染しなかった複数のマウスのうち、ＰＡＲ１アゴニストＴＦＬＬＲ−ＮＨ２による治療を受けた、または治療を受けなかった、非感染マウスの生存率及び体重（最初の体重の％で示す）：非感染マウスにおいてＰＡＲ１アゴニストペプチドの副作用はない。
【図２Ｃ】ＰＡＲ１アゴニストによりインビボでのウイルス複製が増大することを示す図である。マウスをＩＡＶ Ａ／ＰＲ／８／３４（マウス一匹当たり５０ｐｆｕまたは５００ｐｆｕ）に感染させ、ＰＡＲ１アゴニストペプチドで治療し、または治療しなかった。感染後の指定の時点で肺におけるＩＡＶウイルス力価を従来のプラークアッセイで分析した。
【図３Ａ】ＰＡＲ１アンタゴニストＳＣＨ７９７９７により、用量−反応依存性の様式（Ａ）で、ＩＡＶ誘発性の死亡からマウスが防御されることを示す図である。
【図３Ｂ】ＰＡＲ１アンタゴニストＳＣＨ７９７９７により、マウス一匹当たりのｐｆｕを変えて感染させた後（Ｂ）で、ＩＡＶ誘発性の死亡からマウスが防御されることを示す図である。
【図３Ｃ】ＰＡＲ１アンタゴニストＳＣＨ７９７９７によりインビボでのウイルス複製が阻害されることを示す図である。マウスをＩＡＶ Ａ／ＰＲ／８／３４（マウス当たり５０ｐｆｕまたは５００ｐｆｕで）に感染させ、ＰＡＲ１アンタゴニストＳＣＨ７９７９７で治療し、または治療しなかった。次に、感染後の指定の時点で肺におけるＩＡＶウイルス力価を従来のプラークアッセイで分析した。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本発明は、Ａ型インフルエンザウイルス感染症の治療または予防のための方法および組成物（医薬組成物など）を提供するものである。
【００１１】
本発明者等は、実際に、インフルエンザ発病におけるＰＡＲ１の役割を、インビトロおよびインビボにおいて調べた。インビボで、上皮細胞上のＰＡＲ１を刺激するとＡ型インフルエンザウイルス（ＩＡＶ）の複製が増大した。インビボで、特異的アゴニストを用いてＰＡＲ１を刺激すると、ＩＡＶ誘発性の急性の肺の損傷および死に関して害を及ぼした。この効果は、サイトカイン放出の修飾と相関関係を有するものであった。更に重要なことは、ＰＡＲ１のアンタゴニストを用いてＰＡＲ１をブロックすると、ＩＡＶ誘発性の死からマウスが防御されたことである。このような結果は意義があるものと認められた。
【００１２】
したがって、本発明の第一の態様は、Ａ型インフルエンザウイルス感染症の治療または予防用のＰＡＲ１アンタゴニストに関するものである。
【００１３】
本文中で用いる場合、「Ａ型インフルエンザウイルス感染症」という語は、Ａ型インフルエンザウイルスによって引き起こされる感染症の一切を指すものとし、その際ヘマグルチニン（Ｈ１からＨ１５）およびノイラミニダーゼ（Ｎ１からＮ９）の発現に基づく血清型は考慮しないこととする。本発明で検討される典型的なＡ型インフルエンザウイルスとしては、Ｈ１Ｎ１、Ｈ２Ｎ２、Ｈ３Ｎ２、Ｈ５Ｎ１、Ｈ７Ｎ７、Ｈ１Ｎ２、Ｈ９Ｎ２、Ｈ７Ｎ２、Ｈ７Ｎ３及びＨ１０Ｎ７が挙げられるが、それらに限られるというわけではない。好ましい実施態様において、本発明に従ったインフルエンザウイルスのタイプは、Ｈ１Ｎ１である。
【００１４】
最大限に広く解釈した意味では、「治療」という語はＡ型インフルエンザウイルス感染症の進行を逆転させ、緩和し、阻害することを意味し、好ましくはＡ型インフルエンザウイルスの増殖を阻害することを意味する。特に、Ａ型インフルエンザウイルス感染症の「予防」または「予防処置」という時には、Ａ型インフルエンザウイルス感染症の症状を予防する本発明の化合物を投与することを指すことがある。
【００１５】
投与の量および頻度は、その処置が治療なのか予防なのかによって変化し得る。予防の用途で行なう場合には、比較的低い頻度の間隔で長期間にわたって、比較的少ない量を投与する。中には生涯にわたり処置を継続して受ける患者もいる。治療の用途で行なう場合には、病気の進行が緩和されるか、または終了するまで、好ましくは患者に病状の部分的もしくは完全な改善が見られるまで、比較的高い投与量を比較的短い間隔で投与することが必要となることもある。その後は、予防のための投薬計画で患者に投与を行なってよい。
【００１６】
予防の用途で行なう場合には、ＰＡＲ１のアンタゴニストを含有する組成物を、まだＡ型インフルエンザウイルス感染症にかかっていない患者に投与する。むしろ、このような組成物は、そのような疾患を発症する恐れがある、またはこのような疾患を発症する傾向がある患者に対するものである。このような適用により、患者の抵抗力を強めたり、Ａ型インフルエンザウイルス感染症の進行を遅らせたりすることができる。
【００１７】
本文中で用いる場合、「プロテアーゼ活性化受容体−１」、「プロテイナーゼ活性化受容体−１」、または「ＰＡＲ１」、もしくは「ＰＡＲ−１」という語は、互いに入れ換え可能で、トロンビン切断によって活性化され、その結果、Ｎ末端で繋がれたリガンドを露出する、Ｇタンパク質結合受容体を指す。ＰＡＲ１はまた、「トロンビン受容体」および「凝固因子ＩＩ受容体前駆体」としても知られている。例えばＶｕ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ（１９９１）６４（６）：１０５７−６８；Ｃｏｕｇｈｌｉｎ，ｅｔ ａｌ，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ（１９９２）８９（２）：３５Ｉ−５５；そしてＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｕｍｂｅｒ ＮＭ＿００１９９２参照。繋がれたリガンドがＰＡＲ１の細胞外ドメインに分子内結合すると、細胞内シグナル伝達とカルシウム流出が引き起こされる。例えばＴｒａｙｎｅｌｉｓ ａｎｄ Ｔｒｅｊｏ，Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｈｅｍａｔｏｌ（２００７）１４（３）：２３０−５；そしてＨｏｌｌｅｎｂｅｒｇ，ｅｔ ａｌ，Ｃａｎ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．（１９９７）７５（７）：８３２−４１参照。
【００１８】
この用語には、天然ＰＡＲ１ならびにその変異体および修飾形態が含まれ得る。ＰＡＲ１は何に由来するものでもよいが、典型的には哺乳動物（例えばヒトおよびヒト以外の霊長類）のＰＡＲ１であり、特にヒトＰＡＲ１である。
【００１９】
ＰＡＲ１のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列は当技術分野で知られている。例えばＶｕ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ（１９９１）６４（６）：１０５７−６８；Ｃｏｕｇｈｌｉｎ，ｅｔ ａｌ，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ （１９９２）８９（２）：３５１−５５；およびＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｕｍｂｅｒ ＮＭ＿００１９９２参照。ヒトＰＡＲ１の核酸配列はＧｅｎＢａｎｋ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｕｍｂｅｒ ＮＭ＿００１９９２として公表されている（合わせてＭ６２４２４．１およびｇｉ４５０３６３６も参照）。ヒトＰＡＲ１のアミノ酸配列はＮＰ＿００１９８３とＡＡＡ３６７４３として公表されている。
【００２０】
「アンタゴニスト」という語は、本文中で用いる場合、受容体に特異的に結合して、その受容体を介するシグナル伝達を阻害する能力を有し、その受容体が媒介する反応を全面的に阻止するか、検出可能な程度に阻害する物質を言う。例えば、本文中で用いる場合、「ＰＡＲ１アンタゴニスト」という語は、ＰＡＲ１に全面的または部分的に結合してそれを不活性化することにより、経路のシグナル伝達と、それに続く生物学的プロセスを開始させる、天然または合成の化合物のことである。ＰＡＲ−１アンタゴニストの活性は、既に知られている様々な方法を用いて評価され得る。場合によっては、ＰＡＲ１アンタゴニストは、ＰＡＲ１と結合してＰＡＲ１からの細胞内シグナル伝達に続くトロンビン誘発性のカルシウム流出またはトロンビン誘発性のＩＬ−８産生を阻害する能力に基づいて（例えば、ＦｌｉｐＲアッセイで、またはＥＬＩＳＡにより測定される）同定され得る。さらなるアッセイは、Ｋａｗａｂａｔａ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｅｘｐ Ｔｈｅｒ．（１９９９）２８８（１）：３５８−７０に記載されている。阻害が発生するのは、例えばカルシウム流出またはＩＬ−８の産生により測定される、本発明のアンタゴニストに曝されたＰＡＲ１からのＰＡＲ１細胞内シグナル伝達が、アンタゴニストに曝されていない対照ＰＡＲ１からの細胞内シグナル伝達と比較して、少なくとも約１０％少ない、例えば少なくとも約２５％、５０％、７５％少ない、または完全に阻害されている場合である。対照ＰＡＲ１は、抗体もしくは抗原結合分子に曝されていないか、別の抗原と特異的に結合する抗体もしくは抗原結合分子に曝されているか、またはアンタゴニストとして機能しないことが知られている抗ＰＡＲ１抗体または抗原結合分子に曝されていてよい。「抗体アンタゴニスト」というのは、アンタゴニストが阻害性の抗体である状況を指す。
【００２１】
ある実施態様において、本発明のＰＡＲ１アンタゴニストは、ペプチド、ペプチド模倣物、小分子有機化合物、アプタマー、ペプデュシン（ｐｅｐｄｕｃｉｎ）、ポリヌクレオチド、または抗体でありうる。
【００２２】
本発明の一つの実施態様においては、ＰＡＲ１アンタゴニストの投与により、ＰＡＲ１シグナル伝達活性が阻害される。このような方法のうちの幾つかで用いられるＰＡＲ１アンタゴニストはペプチド模倣物であり、それは例えばＲＷＪ−５６１１０または（［α］Ｓ）−Ｗ−［（ｌＳ）−３−アミノ−１−［［｛フェニルメチル）アミノ］カルボニル］プロピル］−［α］−［［［［［１−（２，６−ジクロロフェニル）メチル］−３−（１−ピロリジニルメチル）−１Ｈ−インドール−６−イル］アミノ］カルボニル］アミノ］−３，４−ジフルオロベンゼンプロパンアミドである。
【００２３】
本発明のもう一つ別の実施態様では、ＰＡＲ１アンタゴニストは小分子有機化合物である。「有機小分子」という語は調合薬において一般的に用いられる有機分子に匹敵する大きさの分子を指す。この用語は、（例えばタンパク質、核酸等の）生物学的高分子には当てはまらない。有機小分子の大きさとして好ましい範囲は約５０００Ｄａまでであり、更に好ましいのは２０００Ｄａまで、そして最も好ましいのは約１０００Ｄａまでである。一つの好ましい実施態様において、ＰＡＲ１アンタゴニストは有機小分子ＳＣＨ−７９７９７であり、これは（Ｎ３−シクロプロピル−７−｛［４−（１−メチルエチル）フェニル］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［３，２−ｆ］キナゾリン−１，３−ジアミン）である。
【００２４】
本発明のもう一つ別の実施態様では、ＰＡＲ１アンタゴニストはアンタゴニストＰＡＲ１抗体または抗原結合分子である。本文中で用いる場合、他に規定がなければ、「抗体」という語はポリクローナル抗体とモノクローナル抗体の両方に加えて、そのような抗体の抗原への特異的な結合親和性を有する抗体断片も含み、そのような抗体断片にはＦｖ断片、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ）’２断片、および一本鎖（ｓＦｖ）の人工的な抗体分子があるが、それらに限るものではない。その用語には更に、明確に除外されているのでなければ、キメラ抗体とヒト化抗体を含み、更に、ヒト抗体を産生可能な環境にあればヒト抗体も含む。
【００２５】
このような抗ＰＡＲ１物質は、例えばＰＡＲ１介在性のインターロイキン分泌のような、ＰＡＲ１介在性のシグナル伝達活性に拮抗する能力を有するものである。モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体を調製するための一般的な方法は、当技術分野において周知である。例えば、Ｈａｒｌｏｗ＆Ｌａｎｅ，Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９８；Ｋｏｈｌｅｒ＆Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５−４９７（１９７５）；Ｋｏｚｂｏｒ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ ４：７２（１９８３）；およびＣｏｌｅ ｅｔ ａｌ．，ｐｐ．７７−９６ ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，１９８５参照。
【００２６】
更に、特異的ＰＡＲ１アンタゴニスト抗体は、これまで既に当技術分野で開示されてきている。例えば、Ｒ．Ｒ．Ｖａｓｓａｌｌｏ，Ｊｒ．ｅｔ ａｌ．“Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−Ｆｕｎｃｔｉｏｎ Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ ｉｎ ｔｈｅ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｌａｔｅｌｅｔ Ｔｈｒｏｍｂｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｂｙ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ−Ｄｅｒｉｖｅｄ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，”Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７：６０８１−６０８５（１９９２）（“Ｖａｓｓａｌｌｏ，Ｊｒ．ｅｔ ａｌ．（１９９２”））；Ｌ．Ｆ．Ｂｒａｓｓ ｅｔ ａｌ．，“Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｈｕｍａｎ Ｐｌａｔｅｌｅｔ Ｔｈｒｏｍｂｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ，”Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７：１３７９５−１３７９８（１９９２）（“Ｂｒａｓｓ ｅｔ ａｌ．（１９９２）”）；そしてＲ．Ｋａｕｆｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，“Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ ｏｆ ＰＡＲ−ｌ−Ｔｙｐｅ Ｔｈｒｏｍｂｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｉｎ Ｒａｔ Ｇｌｉｏｍａ Ｃ６ Ｃｅｌｌｓ ｗｉｔｈ ａ Ｎｏｖｅｌ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉ−ＰＡＲ−１ Ａｎｔｉｂｏｄｙ （Ｍａｂ ＣＯＲ７−６Ｈ９），Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｙｔｏｌ．２７：６６１−６６６（１９９８）（“Ｋａｕｆｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．（１９９８）”参照）。両文献とも、ここで参照されることにより、本文中に一体的に組み入れられている。
【００２７】
Ｂｒａｓｓ ｅｔ ａｌ．（１９９２）において、モノクローナル抗体は、ヒトＰＡＲ１の残基４２〜５５に相当する免疫原ＳＦＬＬＲＮＰＮＤＫＹＥＰＦ（配列番号１）に対するものとして調製されたものである。このようなモノクローナル抗体は標準的な技術によって調製され、まず、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）に結合した免疫原ＳＦＬＬＲＮＰＮＤＫＹＥＰＦ（配列番号１）を用いてマウスの免疫化を行なうというものである。このようなモノクローナル抗体としては、以下のようなものがある。
（１）その免疫原の第一断片、具体的にはＳＦＬＬＲＮＰＮＤ（配列番号２）と結合する、Ｂｒａｓｓ ｅｔ ａｌ．（１９９２）においてＡＴＡＰ２と呼ばれるモノクローナル抗体、
（２）その免疫原の第二断片、具体的にはＮＰＮＤＫＹＥＰＦ（配列番号３）と結合する、Ｂｒａｓｓ ｅｔ ａｌ．（１９９２）においてＡＴＡＰ１２０と呼ばれるモノクローナル抗体、および同様にＮＰＮＤＫＹＥＰＦ（配列番号３）と結合する、Ｂｒａｓｓ ｅｔ ａｌ．においてＡＴＡＰ１３８と呼ばれるモノクローナル抗体。
【００２８】
更に加えて、本発明の組成物や方法で使用可能なモノクローナル抗体には、ＳＦＬＬＲＮＰＮＤ（配列番号２）またはＮＰＮＤＫＹＥＰＦ（配列番号３）のいずれかまたは両方に特異的に結合し、その結果、ＳＦＬＬＲＮＰＮＤ（配列番号２）またはＮＰＮＤＫＹＥＰＦ（配列番号３）のいずれかまたは両方への親和性が、抗原−抗体複合体の解離定数の逆数によって測定すると、ＡＴＡＰ２、ＡＴＡＰ２０、またはＡＴＡＰ１３８のいずれかと同様に少なくとも８０％となる、モノクローナル抗体が含まれる。
【００２９】
更に加えて、本発明の組成物や方法で使用可能なモノクローナル抗体には、ＡＴＡＰ２、ＡＴＡＰ２０、またはＡＴＡＰ１３８の相補性決定領域と同一の相補性決定領域を有するモノクローナル抗体が含まれる。更に加えて、本発明の組成物や方法で使用可能なモノクローナル抗体には、ＳＦＬＬＲＮＰＮＤ（配列番号２）もしくは（ＮＰＮＤＫＹＥＰＦ（配列番号３）のいずれかもしくは両方と特異的に結合する、上記のモノクローナル抗体と同一の相補性決定領域を有するモノクローナル抗体、または、上記のモノクローナル抗体と同一の相補性決定領域を有し、その結果、ＳＦＬＬＲＮＰＮＤ（配列番号２）もしくは（ＮＰＮＤＫＹＥＰＦ（配列番号３）のいずれかもしくは両方への親和性が、ＡＴＡＰ２、ＡＴＡＰ２０、もしくはＡＴＡＰ１３８のいずれかと同様に少なくとも８０％となる、モノクローナル抗体が含まれる。
【００３０】
Ｋａｕｆｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．（１９９８）に記載されたラットＰＡＲ１受容体に対するモノクローナル抗体は、配列ＧＲＡＶＹＬＮＫＳＲＦＰＰＭＰＰＰＰＦＩＳＥＤＡＳＧ（配列番号４）を有するペプチドを用いて調製されたものである。この配列は、受容体のトロンビン切断部位の下にあるものとして記載されている。類似の抗体を、ヒトＰＡＲ１受容体の対応領域に対して調製することができる。全体として、本発明の抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ１、ＩｇＥ１、ＩｇＭ１、またはＩｇＹ１など、どのようなクラスのものでもよいが、典型的に望ましいのはＩｇＧ抗体である。抗体は、ヒト、ネズミ科（マウスまたはラット）、ロバ、羊、山羊、ウサギ、ラクダ、馬、または鶏も含めた、どのような哺乳動物または鳥類のものでもよい。抗体を二重特異性のものにし得る場合もある。何らかのタイプの分子を抗体に共有結合的に付着させることによりその抗体を修飾することも可能である。限定する趣旨でなく例を挙げれば、抗体誘導体には、例えばグリコシル化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、アミド化、既に知られている保護基／ブロック基による誘導体化、タンパク分解性切断、細胞リガンドもしくはその他のタンパク質への連結、または当技術分野で知られたその他の修飾により修飾された抗体が含まれる。モノクローナル抗体の調製には、ハイブリドーマ、組換え体、およびファージディスプレイ技術、またはそれらの組合せを含む、当技術分野で知られた様々な技術を用いることが可能である。
【００３１】
例えば、モノクローナル抗体は、当技術分野で知られており例えばＨａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ．，“Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ”，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，２ｎｄ ｅｄ．１９８８）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ，ｅｔ ａｌ．，ｉｎ：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔ−ＣｅＩＩ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ ５６３−６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１）で教示されているものを含むハイブリドーマ技術を用いて、または、当技術分野で知られた他の標準的な方法によって産生することができる。
【００３２】
「モノクローナル抗体」という語は、本文中で用いる場合、ハイブリドーマ技術を通じて産生される抗体に限らない。「モノクローナル抗体」という語は、一切の真核細胞性クローン、原核細胞性クローン、またはファージクローンを含む、単一クローンから派生する抗体を指し、その産生に用いる方法を言うのではない。例えば、好適な抗体を、ファージディスプレイまたはその他の技術を用いて産生することが可能である。
【００３３】
それに加えて、但し、限定する趣旨でなく、ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン配列から誘導された抗体ライブラリーを用いるファージディスプレイ法を含む様々な技術によって、および機能的内因性免疫グロブリンを発現する能力はないがヒト免疫グロブリン遺伝子を発現することはできるトランスジェニックマウスを用いることによって作製することができる。例えば、ヒト重鎖および軽鎖免疫グロブリン遺伝子複合体を無作為に、または相同組換えにより、マウスの胚性幹細胞に導入することができる。抗体は、このような抗体をコードするポリヌクレオチドの発現により産生することもできる。
【００３４】
更に加えて、本発明の抗体を、例えば精製を促進するためのペプチドタグのようなマーカー配列に融合させることができる。適切なタグはヘキサヒスチジンタグである。抗体を、当技術分野で知られた方法により、診断薬や治療薬にコンジュゲートすることもできる。そのようなコンジュゲートを調製する技術は、当技術分野において周知である。
【００３５】
このようなモノクローナル抗体、ならびにキメラ抗体、ヒト化抗体、および一本鎖抗体を調製する他の方法は、当技術分野で知られている。
【００３６】
ＰＡＲ１の生化学活性もしくはシグナル伝達活性を阻害また抑制する化合物だけではなく、ＰＡＲ１発現を抑制し得る、またはＰＡＲ１細胞レベルの下方調節を行なうことのできる化合物も、本発明を実施する際に使用可能である。ＰＡＲ１発現の抑制またはその細胞レベルの下方調節とは、対照細胞（ＰＡＲ１アンタゴニスト化合物を用いた治療を受けなかった細胞）との比較で、検査対象となった細胞（ＰＡＲ１アンタゴニスト化合物に接触させられた細胞）においてＰＡＲ１発現が減少するか、あるいはなくなることを言う。ＰＡＲ１のレベルや発現は、対照細胞でのＰＡＲ１のレベルや発現に比べて、少なくとも約１０％（例えば２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％）減少または低下させることが可能である。
【００３７】
以上に示したように、発現の抑制またはＰＡＲ１細胞レベルの下方調節は、ＰＡＲ１の遺伝子をｍＲＮＡに転写するレベル、またはＰＡＲ１のｍＲＮＡを対応するタンパク質に翻訳するレベルのいずれかで行なうことができる。
【００３８】
実施態様によっては、阻害性のヌクレオチドを用いて、ＰＡＲ１介在性の心臓リモデリングに対してまたはＰＡＲ１発現を抑制することによるＰＡＲ１のその他の効果に対して拮抗させることもある。これらの例として挙げられるのは、低分子干渉性ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、および合成ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、アンチセンス核酸または相補ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）である。好ましい実施態様には、ＰＡＲ１発現を標的化するｓｉＲＮＡを用いるものもある。ｓｉＲＮＡのような二本鎖ＲＮＡによる内因性遺伝子の機能および発現への干渉が、これまで様々な生物において示されている。例えば、Ａ．Ｆｉｒｅ ｅｔ ａｌ．，“Ｐｏｔｅｎｔ ａｎｄ Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ ｂｙ Ｄｏｕｂｌｅ−Ｓｔｒａｎｄｅｄ ＲＮＡ ｉｎ Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ ｅｌｅｇａｎｓ”Ｎａｔｕｒｅ ３９１：８０６−８１１（１９９８）；Ｊ．Ｒ．Ｋｅｎｎｅｒｄｅｌｌ＆Ｒ．Ｗ．Ｃａｒｔｈｅｗ，“Ｕｓｅ ｏｆ ｄｓＤＮＡ−Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ ｔｏ Ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅ ｔｈａｔ ｆｒｉｚｚｌｅｄ ａｎｄ ｆｒｉｚｚｌｅｄ ２ Ａｃｔ ｉｎ ｔｈｅ Ｗｉｎｇｌｅｓｓ Ｐａｔｈｗａｙ，”ＣｅＪ ９５：１０１７−１０２６（１９９８）；Ｆ．Ｗｉａｎｎｉ＆Ｍ．Ｚｅｒｎｉｃｋａ−Ｇｏｅｔｚ，“Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ ｗｉｔｈ Ｇｅｎｅ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｂｙ Ｄｏｕｂｌｅ−Ｓｔｒａｎｄｅｄ ＲＮＡ ｉｎ Ｅａｒｌｙ Ｍｏｕｓｅ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，”Ｎａｔ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．２：７０−７５（２０００）参照。ｓｉＲＮＡには、自己相補配列または二本鎖配列を包含するヘアピンループが含まれる。ｓｉＲＮＡは、塩基対が１００対よりも少ないのが一般的で、例えば約３０ｂｐ以下の長さしかないこともあり得、相補的ＤＮＡ鎖の使用または合成アプローチを含む、当技術分野で知られたアプローチにより作製され得る。そのような二本鎖ＲＮＡの合成は、鋳型の両方向からの一本鎖ＲＮＡ読み取りのインビトロでの転写と、センスおよびアンチセンスＲＮＡ鎖のインビトロでのアニーリングとにより可能である。ＰＡＲ１を標的化する二本鎖ＲＮＡはまた、逆反復配列により分離された反対の向きでクローニングされているＰＡＲ１遺伝子（例えばヒトＰＡＲ１遺伝子）を有する、ｃＤＮＡベクター構築物からも合成可能である。細胞のトランスフェクションに続き、ＲＮＡの転写が行なわれ、相補鎖が再アニーリングされる。ＰＡＲ１遺伝子を標的化する二本鎖ＲＮＡは、適切な構築物のトランスフェクションにより、細胞（例えば腫瘍細胞）に導入可能である。
【００３９】
一般的には、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、またはｓｈＲＮＡが媒介するＲＮＡ干渉は、翻訳のレベルで媒介されるのであって、言い換えれば、このような干渉ＲＮＡ分子は、対応するｍＲＮＡ分子の翻訳を妨げ、ひいては、その分解を導くものである。他の可能性として、ＲＮＡ干渉が転写のレベルでも働いて、このような干渉ＲＮＡ分子に対応するゲノムの領域の転写をブロックすることもあり得る。
【００４０】
このような干渉ＲＮＡ分子の構造及び機能は当技術分野において周知であり、例えば、引用することで本文中に一体化して組み込まれている、Ｒ．Ｆ．Ｇｅｓｔｅｌａｎｄ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ，“Ｔｈｅ ＲＮＡ Ｗｏｒｌｄ”（３ｒｄ ｅｄ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，２００６），ｐｐ．５３５−５６５に記載されている。［０１１０］このようなアプローチでは、ベクターの内部へのクローニングやトランスフェクション法もまた当技術分野において周知であり、例えば、引用することで本文中に一体化して組み込まれている、Ｊ．Ｓａｍｂｒｏｏｋ＆Ｄ．Ｒ．Ｒｕｓｓｅｌｌ，“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ”（３ｒｄ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，２００１）に記載されている。
【００４１】
二本鎖ＲＮＡの他にも、例えばアンチセンス核酸のような、ＰＡＲ１を標的化する他の核酸物質もまた、本発明の実施に際して使用可能である。アンチセンス核酸は、特異的な標的をもつｍＲＮＡ分子の少なくとも一つの部分に相補的なＤＮＡまたはＲＮＡ分子である。細胞内で、一本鎖アンチセンス分子がｍＲＮＡにハイブリダイズして、二本鎖分子を形成することになる。細胞は、ｍＲＮＡをこのような二本鎖の形に翻訳しない。それゆえ、アンチセンス核酸は、ｍＲＮＡをタンパク質に翻訳することに干渉し、また、そのことで、そのｍＲＮＡに転写された遺伝子の発現に干渉する。アンチセンス方法は、インビトロで多くの遺伝子の発現を阻害するために用いられてきている。例えば、ＣＪ．Ｍａｒｃｕｓ−Ｓｅｋｕｒａ，“Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｆｏｒ Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙ ｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｔｏ Ｓｔｕｄｙ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，”Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１７２：２８９−２９５（１９８８）；Ｊ．Ｅ．Ｈａｍｂｏｒ ｅｔ ａｌ．，“Ｕｓｅ ｏｆ ａｎ Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ Ｖｉｒｕｓ Ｅｐｉｓｏｍａｌ Ｒｅｐｌｉｃｏｎ ｆｏｒ Ａｎｔｉ−Ｓｅｎｓｅ ＲＮＡ−Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｇｅｎｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｉｎ ａ Ｈｕｍａｎ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｔ−Ｃｅｌｌ Ｃｌｏｎｅ，”Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５：４０１０−４０１４（１９８８）；Ｈ Ａｒｉｍａ ｅｔ ａｌ．，“Ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｌｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１０ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ Ｍｕｒｉｎｅ Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ−Ｌｉｋｅ Ｃｅｌｌｓ ｂｙ Ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｔｈｉｏａｔｅ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，”Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖ．８：３１９−３２７（１９９８）；そしてＷ．−Ｆ．Ｈｏｕ ｅｔ ａｌ．，“Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ Ｄｉｒｅｃｔｅｄ ｔｏ Ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ Ｃａｌｍｏｄｕｌｉｎ Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｓ ｏｎ ｔｈｅ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ＰＣ１２ Ｃｅｌｌｓ，”Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖ．８：２９５−３０８（１９９８）参照。これらの文献全てが、このように引用することで本文中に一体化して組み込まれている。アンチセンス技術はまた、引用することで本文中に一体化して組み込まれている、Ｃ．Ｌｉｃｈｔｅｎｓｔｅｉｎ＆Ｗ．Ｎｅｌｌｅｎ，ｅｄｓ．，“Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ”（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，１９９７）にも記載されている。［０１１１］ヒトおよびその他多くの哺乳動物のＰＡＲ１ポリヌクレオチド配列は全て、当技術分野で記述されてきている。例えば、ヒトＰＡＲ１のｃＤＮＡ配列（ＮＭ＿００１９９２）は、引用することで本文中に一体化して組み込まれている、Ｔ．−Ｋ．Ｈ．Ｖｕ ｅｔ ａｌ．，“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ ｏｆ ａ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｔｈｒｏｍｂｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｒｅｖｅａｌｓ ａ Ｎｏｖｅｌ Ｐｒｏｔｅｏｌｙｔｉｃ Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，”ＣｅＪ ６４：１０５７−１０６８（１９９１）において報告されている。既に知られている配列に基づき、ＰＡＲ１を標的化する阻害性のヌクレオチド（例えばｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、またはｓｈＲＮＡ）を、当技術分野において周知の方法を用いて容易に合成することができる。
【００４２】
本発明の典型的なｓｉＲＮＡは、最大２９ｂｐ、２５ｂｐ、２２ｂｐ、２１ｂｐ、２０ｂｐ、１５ｂｐ、１０ｂｐ、５ｂｐ、またはこれらの数の間のあらゆる整数の塩基対を有し得る。最適な阻害性のｓｉＲＮＡを設計するためのツールには、ＤＮＡｅｎｇｉｎｅ Ｉｎｃ．（Ｓｅａｔｔｌｅ、ＷＡ）やＡｍｂｉｏｎ，Ｉｎｃ．（Ａｕｓｔｉｎ、ＴＸ）から購入可能なものが含まれる。特異的なＰＡＲ１阻害性ヌクレオチドや、ＰＡＲ１発現の下方調節におけるそれらの使用も、当技術分野、例えばＱ．Ｆａｎｇ ｅｔ ａｌ．，“Ｔｈｒｏｍｂｉｎ Ｉｎｄｕｃｅｓ Ｃｏｌｌａｇｅｎ Ｇｅｌ Ｃｏｎｔｒａｃｔｉｏｎ Ｐａｒｔｉａｌｌｙ Ｔｈｒｏｕｇｈ ＰＡＲＩ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ａｎｄ ＰＫＣ−［ｅｐｓｉｌｏｎ］，”Ｅｕｒ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｊ．２４：９１８−９２４（２００４）；およびＹ．−Ｊ．Ｙｉｎ ｅｔ ａｌ．，“Ｍａｍｍａｒｙ Ｇｌａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｔａｒｇｅｔｅｄ Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｐｒｏｔｅａｓｅ−Ａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ １ Ｒｅｖｅａｌｓ ａ Ｎｏｖｅｌ Ｌｉｎｋ ｔｏ［ｂｅｔａ］−Ｃａｔｅｎｉｎ Ｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ，”Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６６：５２２４−５２３３（２００６）で開示されてきており、両方とも、このように引用することで本文中に一体化して組み込まれている。
【００４３】
本発明で検討の対象となるその他の典型的なＰＡＲ１アンタゴニストは、以下の文献に記載されているが、これに限定されるものではない。
−文献全体が、引用により、本文中に一体化して組み込まれており、具体的には、トロンビン受容体アンタゴニストとして機能する化合物の教示が、引用することで、本文中に一体化して組み込まれている（例えば、第二欄、３１行目から第三欄の終わりまでとＥｘａｍｐｌｅ１から１０参照）、米国特許第６，０１７，８９０号明細書（Ｈｏｅｋｓｔｒａ ｅｔ ａｌ．：“Ａｚｏｌｅ Ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃｓ ａｓ Ｔｈｒｏｍｂｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ”）。
−文献全体が、引用により、本文中に一体化して組み込まれており、具体的には、トロンビン受容体アンタゴニストとして機能する化合物の教示が、引用することで、本文中に一体化して組み込まれている（例えば要約と特許請求の範囲参照）、米国特許第５，４４６，１３１号明細書（Ｍａｒａｇａｎｏｒｅに付与されたもの：“Ｔｈｒｏｍｂｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ”）。
−文献全体が、引用により、本文中に一体化して組み込まれており、具体的には、トロンビン受容体アンタゴニストとして機能する化合物の教示が、引用することで、本文中に一体化して組み込まれている（例えば要約、特許請求の範囲、およびＥｘａｍｐｌｅ１から１６参照）、米国特許第５，８６６，６８１号明細書（Ｓｃａｒｂｏｒｏｕｇｈに付与されたもの：“Ｔｈｒｏｍｂｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ”）。
−文献全体が、引用により、本文中に一体化して組み込まれており、具体的には、トロンビン受容体アンタゴニストとして機能する化合物の教示が、引用することで、本文中に一体化して組み込まれている（例えばＥｘａｍｐｌｅ５及び６と特許請求の範囲参照）、米国特許第５，７５９，９９４号明細書（Ｃｏｕｇｈｌｉｎに付与されたもの：“Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｔｈｒｏｍｂｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｎｄ Ｒｅｌａｔｅｄ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ”）。
−文献全体が、引用により、本文中に一体化して組み込まれており、具体的には、トロンビン受容体アンタゴニストとして機能する化合物の教示が、引用することで、本文中に一体化して組み込まれている（例えばＥｘａｍｐｌｅ５及び６と特許請求の範囲参照）、米国特許第５，７９８，２４８号明細書（Ｃｏｕｇｈｌｉｎに付与されたもの： “Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｔｈｒｏｍｂｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｎｄ Ｒｅｌａｔｅｄ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ”）。
−文献全体が、引用により、本文中に一体化して組み込まれており、具体的には、トロンビン受容体アンタゴニストとして機能する化合物の教示が、引用することで、本文中に一体化して組み込まれている（例えばＴａｂｌｅ１から８参照）、Ｂｅｒｎａｔｏｗｉｃｚ ｅｔ ａｌ．（“Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ Ｐｏｔｅｎｔ Ｔｈｒｏｍｂｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ．”Ｊ．Ｍｅｃｌ．Ｃｈｅｍ．３９：４８７９−４８８７，１９９６）。
−文献全体が、引用により、本文中に一体化して組み込まれており、具体的には、トロンビン受容体アンタゴニストとして機能する化合物の教示が、引用することで、本文中に一体化して組み込まれている（例えばＴａｂｌｅＩ参照）、Ｖａｓｓａｌｌｏ ｅｔ ａｌ．（“Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−Ｆｕｎｃｔｉｏｎ Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ ｉｎ ｔｈｅ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｌａｔｅｌｅｔ Ｔｈｒｏｍｂｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｂｙ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ−Ｄｅｒｉｖｅｄ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ．”Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７：６０８１−６０８５，１９９２）。
−文献全体が、引用により、本文中に一体化して組み込まれており、具体的には、トロンビン受容体アンタゴニストとして機能する化合物の教示が、引用することで、本文中に一体化して組み込まれている（例えばＦｉｇ．１参照）、Ａｎｄｒａｄｅ−Ｇｏｒｄｏｎ ｅｔ ａｌ．（“Ｄｅｓｉｇｎ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ Ｐｅｐｔｉｄｅ−Ｍｉｍｅｔｉｃ Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ ｆｏｒ ａ Ｔｅｔｈｅｒｅｄ−Ｌｉｇａｎｄ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ．”Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９６：１２２５７−１２２６２，１９９９）。
−文献全体が、引用により、本文中に一体化して組み込まれており、具体的には、トロンビン受容体アンタゴニストとして機能する化合物の教示が、引用することで、本文中に一体化して組み込まれている（例えばＴａｂｌｅ１および２参照）、Ｈｏｅｋｓｔｒａ ｅｔ ａｌ．（“Ｔｈｒｏｍｂｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＰＡＲ−１）Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ．Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅ−Ｂａｓｅｄ Ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃｓ ｏｆ ｔｈｅ ＳＦＬＬＲ Ａｇｏｎｉｓｔ Ｍｏｔｉｆ．”Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．８：１６４９−１６５４，１９９８）。
−文献全体が、引用により、本文中に一体化して組み込まれており、具体的には、トロンビン受容体アンタゴニストとして機能する化合物の教示が、引用することで、本文中に一体化して組み込まれている（例えばＦｉｇ．１参照）、Ｋａｔｏ ｅｔ ａｌ．（“ｉｎ ｖｉｔｒｏ Ａｎｔｉｐｌａｔｅｌｅｔ Ｐｒｏｆｉｌｅ ｏｆ ＦＲ１７１１１３，ａ Ｎｏｖｅｌ Ｎｏｎ−Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｔｈｒｏｍｂｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ．”Ｅｕｒｏ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３８４：１９７−２０２，１９９９）。
−文献全体が、引用により、本文中に一体化して組み込まれており、具体的には、トロンビン受容体アンタゴニストとして機能する化合物の教示が、引用することで、本文中に一体化して組み込まれている（例えば要約およびＦｉｇ．１参照）、Ｒｕｄａ ｅｔ ａｌ．（“Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｍａｌｌ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ａｎａｌｏｇｕｅｓ Ｈａｖｉｎｇ Ａｇｏｎｉｓｔ ａｎｄ Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｔ ｔｈｅ Ｐｌａｔｅｌｅｔ Ｔｈｒｏｍｂｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ．”Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３７：２４１７−２４２６，１９８８）。
−文献全体が、引用により、本文中に一体化して組み込まれており、具体的には、トロンビン受容体アンタゴニストとして機能する化合物の教示が、引用することで、本文中に一体化して組み込まれている（例えばＴａｂｌｅ２参照）、Ｒｕｄａ ｅｔ ａｌ．（“Ｔｈｒｏｍｂｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐｌａｔｅｌｅｔ Ｔｈｒｏｍｂｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｎｄ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ Ｐｒｏｓｔａｃｙｃｌｉｎ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｂｙ Ｈｕｍａｎ Ｕｍｂｉｌｉｃａｌ Ｖｅｉｎ Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｃｅｌｌｓ．”Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３９：３７３−３８１，１９９０）。
−文献全体が、引用により、本文中に一体化して組み込まれており、具体的には、トロンビン受容体アンタゴニストとして機能する化合物の教示が、引用することで、本文中に一体化して組み込まれている（例えば１５９２８ページ左欄の要約参照）、Ｈａｒｍｏｎ ａｎｄ Ｊａｍｉｅｓｏｎ（“Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｌａｔｅｌｅｔｓ ｂｙ Ａｌｐｈａ−Ｔｈｒｏｍｂｉｎ ｉｓ ａ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ−Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｅｖｅｎｔ．”Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６１：１５９２８−１５９３３，１９８６）。
−文献全体が、引用により、本文中に一体化して組み込まれており、具体的には、トロンビン受容体アンタゴニストとして機能する化合物の教示が、引用することで、本文中に一体化して組み込まれている（例えばＦｉｇ．３参照）、Ｄｏｏｒｂａｒ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ（“Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ ａ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ ｔｏ ｔｈｅ Ｔｈｒｏｍｂｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｕｓｉｎｇ Ｐｈａｇｅ Ｄｉｓｐｌａｙ．”Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４４：３６１３６９，１９９４）。
−文献全体が、引用により、本文中に一体化して組み込まれており、具体的には、トロンビン受容体アンタゴニストとして機能する化合物の教示が、引用することで、本文中に一体化して組み込まれている（例えばＴａｂｌｅ１および２参照）、Ａｈｎ ｅｔ ａｌ．（“Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ ｏｆ Ｐｙｒｒｏｌｏｑｕｉｎａｚｏｌｉｎｅｓ ａｓ Ｔｈｒｏｍｂｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ．”Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．９：２０７３−２０７８，１９９９）。
−文献全体が、引用により、本文中に一体化して組み込まれており、具体的には、トロンビン受容体アンタゴニストとして機能する化合物の教示が、引用することで、本文中に一体化して組み込まれている（例えば要約参照）、Ｓｅｉｌｅｒ ｅｔ ａｌ．（“Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｈｒｏｍｂｉｎ ａｎｄ ＳＦＬＬＲ−Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｌａｔｅｌｅｔ Ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ，Ｐｈｏｓｐｈｌｉｐａｓｅ Ａ２ ａｎｄ Ｎａ＋／Ｈ＋ Ｅｘｃｈａｎｇｅ ｂｙ ａ Ｔｈｒｏｍｂｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ．”Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４９：５１９−５２８，１９９５）。
−文献全体が、引用により、本文中に一体化して組み込まれており、具体的には、トロンビン受容体アンタゴニストとして機能する化合物の教示が、引用することで、本文中に一体化して組み込まれている（例えばＴａｂｌｅ１参照）、Ｅｌｌｉｏｔ ｅｔ ａｌ．（“Ｐｈｏｔｏａｃｔｉｖａｔａｂｌｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ Ｂａｓｅｄ ｏｎ ＢＭＳ−１９７５２５：Ａ Ｐｏｔｅｎｔ Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ ｏｆ ｔｈｅ Ｈｕｍａｎ Ｔｈｒｏｍｂｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＰＡＲ−１）．”Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．９：２７９−２８４，１９９９）。
−文献全体が、引用により、本文中に一体化して組み込まれており、具体的には、トロンビン受容体アンタゴニストとして機能する化合物の教示が、引用することで、本文中に一体化して組み込まれている（例えば要約参照）、Ｆｕｊｉｔａ ｅｔ ａｌ．（“Ａ Ｎｏｖｅｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ Ｔｈｒｏｍｂｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ．”Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．９：１３５１−１３５６，１９９９）。
−文献全体が、引用により、本文中に一体化して組み込まれており、具体的には、トロンビン受容体アンタゴニストとして機能する化合物の教示が、引用することで、本文中に一体化して組み込まれている（例えば要約参照）、Ｄｅｂｅｉｒ ｅｔ ａｌ．（“Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｏｔｅａｓｅ−Ａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＰＡＲ−１）ｉｎ Ｒａｔ Ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ．”Ｅｕｒｏ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３２３：１１１−１１７，１９９７）。
−文献全体が、引用により、本文中に一体化して組み込まれており、具体的には、トロンビン受容体アンタゴニストとして機能する化合物の教示が、引用することで、本文中に一体化して組み込まれている（例えばＦｉｇ．５およびＴａｂｌｅ１参照）、Ａｈｎ ｅｔ ａｌ．（“Ｂｉｎｄｉｎｇ ｏｆ ａ Ｔｈｒｏｍｂｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｔｅｔｈｅｒｅｄ Ｌｉｇａｎｄ Ａｎａｌｏｇｕｅ ｔｏ Ｈｕｍａｎ Ｐｌａｔｅｌｅｔ Ｔｈｒｏｍｂｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ．”Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５１：３５０３５６，１９９７）。
−文献全体が、引用により、本文中に一体化して組み込まれており、具体的には、トロンビン受容体アンタゴニストとして機能する化合物の教示が、引用することで、本文中に一体化して組み込まれている（例えばＴａｂｌｅ：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｄｅｔａ参照）、ＭｃＣｏｍｓｅｙ ｅｔ ａｌ．（“Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅ−ｐｅｐｔｉｄｅ ｈｙｂｒｉｄ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ．Ａｍｉｎｏｔｒｉａｚｏｌｅ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ａｇｏｎｉｓｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｔｈｒｏｍｂｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＰＡＲ−１）．”Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ ９：１４２３−１４２８，１９９９）。
−文献全体が、引用により、本文中に一体化して組み込まれており、具体的には、トロンビン受容体アンタゴニストとして機能する化合物の教示が、引用することで、本文中に一体化して組み込まれている（例えばＴａｂｌｅ１、Ｔａｂｌｅ２、Ｔａｂｌｅ３参照）、Ｎａｎｔｅｒｍｅｔ ｅｔ ａｌ．（“Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ｏｆ ａ ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ ｏｆ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｐｌａｔｅｌｅｔ ｔｈｒｏｍｂｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＰＡＲ−１）．”Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ １２：３１９−３２３，２００２）。
−文献全体が、引用により、本文中に一体化して組み込まれており、具体的には、トロンビン受容体アンタゴニストとして機能する化合物の教示が、引用することで、本文中に一体化して組み込まれている（例えばＴａｂｌｅ１から５参照）、Ｂａｒｒｏｗ ｅｔ ａｌ．（“Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ａｎｄ ｉｎｉｔｉａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−ａｃｔｉｖｉｔｙ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｏｆ ｔｒｉｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ ｕｒｅａｓ ａｓ ｔｈｒｏｍｂｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＰＡＲ−１）ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ．”Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ １１：２６９１−２６９６，２００１）。
−文献全体が、引用により、本文中に一体化して組み込まれており、具体的には、トロンビン受容体アンタゴニストとして機能する化合物の教示が、引用することで、本文中に一体化して組み込まれている（例えばＦｉｇ．１参照）、Ａｈｎ ｅｔ ａｌ．（“Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｒｏｍｂｉｎ ｂｙ Ｎ３−ｃｙｃｌｏｐｒｏｐｙｌ−７［［４−（１−ｍｅｔｈｙｌｅｔｈｙｌ）ｐｈｅｎｙｌ］ｍｅｔｈｙｌ］−７Ｈ−ｐｙｒｒｏｌｅ［３，２ｆ］ｑｕｉｎａｚｏｌｉｎｅｌ，３−ｄｉａｍｉｎｅ（ＳＣＨ７９７９７），ａ ｎｏｎ−ｐｅｐｔｉｄｅ ｔｈｒｏｍｂｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ．”Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ６０：１４２５−１４３４，２０００）。
−文献全体が、引用により、本文中に一体化して組み込まれており、具体的には、トロンビン受容体アンタゴニストとして機能する化合物の教示が、引用することで、本文中に一体化して組み込まれている、Ｃｈａｃｋａｌａｍａｎｎｉｌ（“Ｔｈｒｏｍｂｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ ａｓ ｎｏｖｅｌ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｔａｒｇｅｔｓ．”Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ４：４１７−４２７，２００１）。
−文献全体が、引用により、本文中に一体化して組み込まれており、具体的には、トロンビン受容体アンタゴニストとして機能する化合物の教示が、引用することで、本文中に一体化して組み込まれている（例えばＦｉｇ１参照）、Ｓｔｅａｄ ｅｔ ａｌ．（“Ｅｒｙｌｏｓｉｄｅ Ｆ，ａ ｎｏｖｅｌ ｐｅｎａｓｔｅｒｏｌ ｄｉｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｐｏｓｓｅｓｓｉｎｇ ｐｏｔｅｎｔ ｔｈｒｏｍｂｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ ａｃｔｉｖｉｔｙ．”Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｃｌ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１０：６６１−６６４，２０００）。
−文献全体が、引用により、本文中に一体化して組み込まれており、具体的には、トロンビン受容体アンタゴニストとして機能する化合物の教示が、引用することで、本文中に一体化して組み込まれている（例えばＦｉｇ．１および２参照）、Ｐａｋａｌａ ｅｔ ａｌ．（“Ａ ｐｅｐｔｉｄｅ ａｎａｌｏｇｕｅ ｏｆ ｔｈｒｏｍｂｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ｐｅｐｔｉｄｅ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｔｈｒｏｍｂｉｎ ａｎｄ ｔｈｒｏｍｂｉｎ−ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ｐｅｐｔｉｄｅ ｉｎｄｕｃｅｄ ｖａｓｃｕｌａｒ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ．”J．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３７：６１９−６２９，２００１）。
−文献全体が、引用により、本文中に一体化して組み込まれており、具体的には、トロンビン受容体アンタゴニストとして機能する化合物の教示が、引用することで、本文中に一体化して組み込まれている、Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．（“Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ａｎｄ ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｎｏｖｅｌ ｓｅｒｉｅｓ ｏｆ ｔｈｒｏｍｂｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＰＡＲ−１）ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ：ｐｏｔｅｎｔ，ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｐｅｐｔｉｄｅ ｍｉｍｅｔｉｃｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｉｎｄｏｌｅ ａｎｄ ｉｎｄａｚｏｌｅ ｔｅｍｐｌａｔｅｓ．”Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４４：１０２１−１０２４，２００１）。
【００４４】
本発明の更にもう一つの目的は、Ａ型インフルエンザウイルス感染症の治療または予防用のＰＡＲ１アンタゴニストをスクリーニングするための方法に関するものである。例えば、スクリーニング法は、ある候補化合物のＰＡＲ１への結合、またはＰＡＲ１を有する細胞もしくは膜への結合、あるいはその融合タンパク質を、その候補化合物と直接または間接的に関連づけられた標識を用いて測定することができる。更に、スクリーニング法は、前記候補化合物のＰＡＲ１を不活性化する能力を測定すること、または質的もしくは量的に検出することを伴い得る。
【００４５】
一つの特定の実施態様において、本発明のスクリーニング法は、
ａ）表面にＰＡＲ１を発現する複数の細胞を用意すること、
ｂ）前記細胞を候補化合物とともにインキュベートすること、
ｃ）前記候補化合物がＰＡＲ１と結合しそれを不活性化するかどうかを決定すること、および
ｄ）ＰＡＲ１と結合しそれを不活性化する候補化合物を選択すること
からなるステップを包含する。
【００４６】
一つの特定の実施態様においては、本発明のスクリーニング法は、ステップｄ）で選択された候補化合物を、Ａ型インフルエンザウイルス感染症のモデル動物に投与して、前記候補化合物の防御効果を実証することからなるステップを包含してもよい。
【００４７】
一般に、そのようなスクリーニング法では、表面にＰＡＲ１を発現する適切な細胞を用意する。特に、ＰＡＲ１をコードする核酸を細胞のトランスフェクションに用いて、本発明の受容体を発現するようにしてもよい。そのようなトランスフェクションは、当技術分野において周知の方法によって成し遂げることができる。一つの特定の実施態様において、前記細胞を、これまでにＰＡＲ１を発現したことが報告されている哺乳動物細胞（例えば上皮細胞）からなる群から選択してもよい。
【００４８】
本発明のスクリーニング法は、そのような細胞とスクリーニング対象の化合物とを接触させて、そのような化合物がＰＡＲ１を不活性化するかどうかを決定することにより、ＰＡＲ１アンタゴニストを決定するために用いてもよい。
【００４９】
本発明の一つの実施態様では、候補化合物を、事前に合成された化合物のライブラリーから、またはデータベースにおいて構造が決定された化合物のライブラリーから、またはデノボ合成された化合物もしくは天然化合物のライブラリーから選択してもよい。候補化合物を、（ａ）タンパク質またはペプチド、（ｂ）核酸、および（ｃ）（天然かどうかに関わらず）有機化合物または化学的化合物の群から選択してもよい。
【００５０】
候補化合物を用いたＰＡＲ１不活性化は、当業者の知る様々な方法で試験することができる。
【００５１】
本発明のもう一つの目的は、そのような処置を必要とする患者にＰＡＲ１アンタゴニストを投与することを含む、Ａ型インフルエンザウイルス感染症を治療または予防する方法に関する。
【００５２】
本文中で用いる場合、「患者」という語は、豚や霊長類のような哺乳動物を指す。好ましくは、本発明に従った患者はヒトである。
【００５３】
ＰＡＲ１アンタゴニストは、以下に規定するような医薬組成物の形で投与してよい。
【００５４】
好ましくは、本発明のＰＡＲ１アンタゴニストは、治療有効量で投与される。「治療有効量」は、どのような医療行為にも適用可能な合理的なリスク対効果比でＡ型インフルエンザウイルス感染症を治療または予防するために十分な量の本発明のＰＡＲ１アンタゴニストを意味する。
【００５５】
本発明の化合物および組成物の毎日の使用量の合計は、担当医師が妥当な医療判断の範囲で決定することになることが理解されよう。いずれかの特定の患者に対する具体的な治療有効量は、治療対象となる障害およびその障害の重症度、使用される特定の化合物の活性、使用される特定の組成物の活性、患者の年齢、体重、全般的な健康状態、性別、および食事、投与の時間、投与の経路、および使用される特定の化合物の排出率、治療期間、使用する特定のポリペプチドと組み合わされるかまたは同時に用いられる薬剤、ならびに医療分野で周知の同様の要素も含む、様々な要素に左右される。例えば、化合物の用量を、望ましい治療効果を達成するために必要な量よりも低いレベルで始めて、その望ましい効果が達成されるまで次第に投与量を増やしていくことは、当業者の間では周知である。
【００５６】
しかしながら、薬剤の毎日の投与量は、大人一人当たりで一日当たり０．０１から１０００ｍｇまで大幅に変化することがある。好ましくは、治療対象の患者への投与量を症状に応じて調節するために、組成物に含まれる活性成分は、０．０１、０．０５、０．１、０．５、１．０、２．５、５．０、１０．０、１５．０、２５．０、５０．０、１００、２５０、および５００ｍｇである。医薬品に含まれる活性成分は、約０．０１ｍｇから約５００ｍｇまでが一般的で、１ｍｇから約１００ｍｇの活性成分が含まれていることが望ましい。薬剤の有効量は、通常、一日当たり体重１キログラムにつき、０．０００２ｍｇから約２０ｍｇの投与量レベルで与えられ、特に、一日当たり体重１キログラムにつき、約０．００１ｍｇから７ｍｇの投与量レベルで与えられる。
【００５７】
ＰＡＲ１アンタゴニストは、薬学上許容される賦形剤と併用可能であり、任意で、例えば生物分解性のポリマーのような、持続放出基材と併用して、治療用組成物を形成してもよい。
【００５８】
「薬学的に」または「薬学上許容される」は、適宜、哺乳動物、特にヒトに投与する際に、副作用、アレルギー反応、またはその他の不都合な反応を生じさせない分子のまとまりや組成物を言う。薬学上許容される担体または賦形剤は、毒性のない、固体、半固体または液状の充填剤、希釈剤、カプセル材、またはあらゆるタイプの製剤補助剤を言う。
【００５９】
本発明の医薬組成物においては、活性成分は、単独で用いるにせよ、他の活性成分と組み合わせて用いるにせよ、従来の薬学的支持体との混合物として、単位投与の形態で動物や人間に投与することが可能である。単位投与の形態として適切ものとして挙げられるのは、錠剤、ゲルカプセル、粉末、顆粒、および内用懸濁液または内用溶液のような経口投与形態、舌下投与形態および口腔内投与形態、エアロゾル、インプラント、皮下投与形態、経皮投与形態、局所投与形態、腹腔内投与形態、筋肉内投与形態、静脈内投与形態、皮下投与形態、経皮投与形態、髄腔内投与形態、および鼻腔内投与形態、ならびに直腸投与形態である。本発明の医薬組成物は好ましくは鼻腔内投与形態で投与されるのが望ましい。
【００６０】
医薬組成物に含まれる媒体は、注射可能な製剤に薬学上許容されるものであることが望ましい。これらは特に、等張溶液、無菌溶液、生理食塩水（リン酸１ナトリウムもしくはリン酸２ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、もしくは塩化マグネシウム等、またはこのような塩の混合物）、または、場合により滅菌水または生理食塩水を加えれば注射可能な溶液を構成することができる、乾燥組成物、特に凍結乾燥組成物であり得る。
【００６１】
注射用の薬学的形態として挙げられるのは、無菌の水溶液または分散液；胡麻油、ピーナツ油、または水性プロピレングリコールを含む製剤；および無菌の注射溶液または注射分散液を即席で調製するための無菌粉末である。いずれの場合においても、その形態は、無菌でなければならず、そして、容易な注射可能性が存在する程度にまで流動性を有していなければならない。その形態は、製造条件下及び保管条件下において安定していなければならず、そして、細菌や真菌などの微生物の汚染作用に対して保護されていなければならない。
【００６２】
本発明の化合物を遊離塩基または薬理学的に許容される塩として含む溶液は、ヒドロキシプロピルセルロースのような界面活性剤と適度に混合された水において調製することができる。分散液もまた、グリセロール、液状ポリエチレングリコール、およびそれらの混合物において、ならびに油において調製することができる。通常の保管条件と使用条件の下では、このような調製物には微生物の成長を妨げる防腐剤が含まれている。
【００６３】
ＰＡＲ１アンタゴニストは、中性もしくは塩の形の組成物に処方することができる。薬学上許容される塩として挙げられるのは、酸付加塩（タンパク質の遊離アミン基を用いて形成された）があり、これは、例えば塩酸やリン酸のような無機酸を用いて、または、酢酸、シュウ酸、酒石酸、マンデル酸等のような有機酸を用いて形成される。遊離カルボキシル基を用いて形成した塩はまた、例えば水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カルシウム、または水酸化第二鉄のような無機塩基、およびイソプロピルアミン、トリメチルアミン、ヒスチジン、プロカイン等の有機塩基から誘導することができる。
【００６４】
担体はまた、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えばグリセロール、プロピレングリコール、および液状ポリエチレングリコール等）、その適切な混合物、および植物油を含む溶媒または分散媒質であってよい。適当な流動性は、例えばレシチンのようなコーティングの使用によって、分散液の場合には所要の粒度を維持することによって、そして界面活性剤を用いることによって維持することができる。微生物の作用の予防は、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサール等の様々な抗菌剤や抗真菌剤を用いることによってもたらされ得る。多くの場合、例えば糖類または塩化ナトリウムのような等張剤を含ませるのが望ましい。注射用組成物の持続的吸収は、例えば、モノステアリン酸アルミニウムやゼラチンのような吸収遅延剤を組成物において用いることによってもたらされ得る。
【００６５】
無菌の注射溶液は、所望により、適切な溶媒中に必要量の活性ポリペプチドを、上記に列挙した他の様々な成分と混ぜ合わせ、その後に、濾過滅菌することによって調製される。一般に、分散液の調製は、塩基性の分散媒質と、上記に列挙されたもののうちから選んだ、その他必要な成分とを含む無菌媒体の中に、様々な無菌活性成分を混ぜ合わせることにより行なわれる。無菌注射溶液を調製するための無菌粉末の場合、調製方法として望ましいのは、真空乾燥技術および凍結乾燥技術であり、それにより、活性成分の粉末だけでなく、それに加えて、前もって滅菌濾過されたその溶液から、他の望ましい成分も得られる。
【００６６】
製剤の際、溶液の投与は、投与製剤に適合した様式、および治療に有効な量で行われる。製剤は、上述の注射溶液のタイプなどの様々な投与形態で容易に投与されるが、薬剤放出カプセル等も使用可能である。
【００６７】
水溶液での非経口投与では、例えば、溶液は必要に応じて緩衝されるべきであり、液状希釈剤をまず、十分な量の生理食塩水またはグルコースで等調にすべきである。このような特定の水溶液が特に適しているのは、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、および腹腔内投与である。これに関連して、使用可能な無菌水性媒質は、本開示に照らして当業者には周知である。例えば一回の投与量は、１ｍｌの等張性のＮａＣｌ溶液に溶解して、１０００ｍｌの皮下投与液に加えるか、点滴を提案された部位で注入することができる。投与量をいくらか変化させることも、治療中の患者の状態に応じて必要となる。投与の責任者は、いずれにしても、個別の対象に適した用量を決定することになる。
【００６８】
ＰＡＲ１アンタゴニストは、用量当たり約０．０００１から１．０ｍｇまたは約０．００１から０．１ｍｇまたは約０．１から１．０、またはさらに約１０ｍｇ程度を包含するように、治療的混合物内に製剤することができる。複数回用量を投与することもできる。
【００６９】
静脈注射または筋肉内注射のような非経口投与向けに製剤された本発明の化合物だけでなく、他にも薬学上許容される形式として挙げられるのは、例えば錠剤またはその他の経口投与用固形物；リポソ−ム製剤；放出持続性のカプセル；およびその他一切の現在用いられている形態である。
【００７０】
本発明では、ＰＡＲ１アンタゴニストは、一つまたは複数の別々の薬学的物質、好ましくはＡ型インフルエンザウイルス感染症治療用の薬学的物質と組み合わせて製剤することができる。そのような物質は、特に有益な治療効果をもたらすために、大いに異なる生化学経路で作用することがある。
【００７１】
本発明では、一つまたは複数の活性物質を、同時投与される単剤療法製剤または単一の共製剤のいずれかとして投与してよい。
【００７２】
好ましい実施態様においては、活性物質の一つはＰＡＲ２アゴニストである。
【００７３】
本発明の更にもう一つの目的は、
（ｉ）少なくとも一つのＰＡＲ−１アンタゴニストと、
（ｉｉ）少なくとも一つのプロテアーゼ活性化受容体−２（ＰＡＲ−２）アゴニスト
とからなる医薬組成物に関するものである。
【００７４】
本発明の更にもう一つの目的は、対象のＡ型インフルエンザウイルス感染症の治療または予防のための前記医薬組成物の使用に関するものである。
【００７５】
本発明の更にもう一つの目的は、対象のＡ型インフルエンザウイルス感染症の治療または予防のために同時使用、個別使用または逐次使用する複合調製物として、
（ｉ）少なくとも一つのＰＡＲ−１アンタゴニストと、
（ｉｉ）少なくとも一つのプロテアーゼ活性化受容体−２（ＰＡＲ−２）アゴニスト、
とを含む製品に関するものである。
【００７６】
本文中で用いる場合、「ＰＡＲ２」という語は、当技術分野における一般的な意味を有し、プロテアーゼ活性化受容体−２を指す。その語に含まれうるのは、天然ＰＡＲ２ならびにその変異体および修飾形態である。ＰＡＲ２は何に由来するものであってもよいが、典型的には（例えばヒトやヒトの他の霊長類のような）哺乳動物であり、特にヒトＰＡＲ２である。
【００７７】
本文中で用いる場合、「ＰＡＲ２アゴニスト」という語は、ＰＡＲ２と結合し、それを活性化して、経路のシグナル伝達およびさらなる生物学的プロセスを開始させる、天然または合成の化合物を指す。ＰＡＲ−２アゴニスト活性を評価しうる方法としては様々なものが知られている。例えばＨｏｌｌｅｎｂｅｒｇの方法（Ｈｏｌｌｅｎｂｅｒｇ，Ｍ．Ｄ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｔｉ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，７５，８３２−８４１（１９９７））、Ｋａｗａｂａｔａの方法（Ｋａｗａｂａｔａ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．，２８８，３５８−３７０（１９９９））、およびＨａｗｔｈｏｒｎｅの方法（Ｈｏｗｔｈｏｒｎｅ ｅｔ ａｌ．，Ａ Ｈｉｇｈ−Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ Ｍｉｃｒｏｔｉｔｅｒ Ｐｌａｔｅ−Ｂａｓｅｄ Ｃａｌｃｉｕｍ Ａｓｓａｙ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｓｔｕｄｙ Ｏｆ Ｐｒｏｔｅａｓｅ−Ａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ２ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２９０，３７８−３７９（２００１））を用いてＰＡＲ−２アゴニスト活性の評価を行なってよい。
【００７８】
ある実施態様においては、本発明のＰＡＲ２アゴニストは有機小分子であってよい。本発明での検討の対象となるＰＡＲ２アゴニストの代表的なものとして挙げられるものは、限定はしないが、米国特許出願公開第２００７１２３５０８号明細書および米国特許出願公開第２００８３１８９６０号明細書に記載されているものがあり、これらは、本文中で引用することにより、本開示内容の一部として組み込まれている。他の例として挙げられるもののとしては、Ｇｒａｄｄｉｌ ＬＲ ｅｔ ａｌ．２００８に記載されているものがあり、それは更に具体的にはＡＣ−５５５４１［Ｎ−［［１−（３−ブロモフェニル）−ｃｔｈ−（Ｅ）−イリデンヒドラジノカルボニル］−（４−オキソ−３，４−ジヒドロフタラジン−ｌ−イル）−メチルｊ−ベンズアミド］およびＡＣ−２６４６１３［２−オキソ−４−フェニルピロリジン−３−カルボン酸［ｔ（３−ブロモフェニル）−（Ｅ／Ｚ）−エチリデン］−ヒドラジド］である。
【００７９】
もう一つ別の実施態様では、本発明のＰＡＲ２アゴニストは、ＰＡＲ２活性化ペプチドで、それはＨＯＯＣ−ＳＬＩＧＲＬ−ＮＨ２（配列番号５）またはＨＯＯＣ−ＳＬＩＧＫＶ−ＮＨ２（配列番号６）であってよい。
【００８０】
もう一つ別の実施態様では、本発明のＰＡＲ２アゴニストは、ＨＯＯＣ−ＬＩＧＲＬＯ−ＮＨ２、ＨＯＯＣ−Ｆｌｕｏｒｙｉ−ＬＩＧＲＬＯ−ＮＨ２、およびトランスシンナモイル−ＬＩＧＲＬＯ（ｔｃ）−ＮＨ２から構成される群から選ばれるＰＡＲ２活性化ペプチド誘導体であってよい。
【００８１】
本発明で検討の対象となるその他のＰＡＲ２活性化ペプチド誘導体として挙げられるものとしては、（ここで引用することにより本開示内容に組み入れるものとする）国際公開第０３／１０４２６８号パンフレットに記載の、以下の一般式（Ｉ）で表されるものまたはその塩である。
【００８２】
Ｚ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−ＮＨ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−ＡＡ１−ＡＡ２−ＣＯ−Ｒ（Ｉ）
【００８３】
式中、Ｚは、置換基を有していてもいなくてもよいアリール基または置換基を有していてもいなくてもよいヘテロアリール基を表し、ｎは０、１または２を表し、ＡＡ１−ＡＡ２はＬｙｓ−ＶａｌまたはＡｒｇ−Ｌｅｕを表し、Ｒは−ＯＨか−ＮＨ２を表す。
【００８４】
Ｚで表されるアリール基は、６から３０個の炭素原子、好ましくは６から１４個の炭素原子を有する、単環型、多環型または縮合環型の炭素環基であってよく、具体的な例を挙げると、フェニル基やナフチル基が望ましい。Ｚで表されるヘテロアリール基は、５から７員の単環型、多環型または縮合環型の複素環基で、環の中に少なくとも１から３個の窒素原子、酸素原子または硫黄原子を含むものであってよく、具体的な例を挙げると、フリル基、チエニル基、ピリジル基またはキノリル基が好ましい。
【００８５】
Ｚで表されるアリール基またはヘテロアリール基は、置換基を有していてもいなくてもよく、限定はしないが本発明のペプチド誘導体の活性に対する副作用のないあらゆるアリール基またはヘテロアリール基を含み、具体的な例を挙げると、ハロゲン原子、低級アルキル基、低級アルコキシル基、フェニル基、フェニル低級アルキル基、ニトロ基、アミノ基、ヒドロキシル基、およびカルボキシル基が含まれる。
【００８６】
ハロゲン原子の例としては、塩素原子、フッ素原子、および臭素原子が挙げられる。低級アルキル基は、好ましくは、１個から１５個の炭素原子、好ましくは１個から６個の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖状の低級アルキル基で、例を挙げればメチル基とエチル基などである。低級アルコキシル基には、好ましくは、１個から１５個の炭素原子、好ましくは１個から６個の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖状の低級アルコキシル基が含まれ、その例を挙げれば、メトキシ基やエトキシル基などである。
【００８７】
フェニル低級アルキル基中の低級アルキル基には、アルキレン基が含まれ、これには例えばメチレン基やエチレン基のような低級アルキル基が含まれる。
【００８８】
この低級アルキル基、低級アルコキシル基、フェニル基、およびフェニル低級アルキル基の置換基は更にハロゲン原子等で置換されてもよい。
【００８９】
本発明の一般式（Ｉ）の中のＺ基の例として挙げられるのは、置換または未置換のフェニル基、ナフチル基、フリル基、チエニル基、ピリジル基、およびキノリル基であり、具体的な例を挙げると、フェニル基、４−メトキシフェニル基、３−メトキシフェニル基、２−メトキシフェニル基、２，４−ジメトキシフェニル基、３，５−ジメトキシフェニル基、４−フェネチルフェニル基、３−フェネチルフェニル基、２−フェネチルフェニル基、４−ニトロフェニル基、３−ニトロフェニル基、２−ニトロフェニル基、２，４−ジニトロフェニル基、３，４−ジニトロフェニル基、４−メチルフェニル基、３−メチルフェニル基、２−メチルフェニル基、２，４−ジメチルフェニル基、３，５−ジメチルフェニル基、４−フルオロフェニル基、３−フルオロフェニル基、２−フルオロフェニル基、２，４−ジフルオロフェニル基、３，５−ジフルオロフェニル基、２，４，５−トリフルオロフェニル基、４−フェニルフェニル基、３−フェニルフェニル基、２−フェニルフェニル基、２−フリル基、３−フリル基、５−メトキシ−２−フリル基、５−メチル−２−フリル基、１−ナフチル基、２−ナフチル基、４−メトキシ−１−ナフチル基、４−メチル−１−ナフチル基、４−メトキシ−２−ナフチル基、４−ニエチル−２−ナフチル基、４−ピリジル基、２−ピリジル基、３−ピリジル基、２−メチル−４−ピリジル基、４−メチル−２−ピリジル基、２−チエニル基、３−チエニル基、３−メチル−２−チエニル基、４−メチル−２−チエニル基、４−メチル−３−チエニル基、６−キノリル基、７−キノリル基、８−キノリル基、４−キノリル基、４−メチル−６−キノリル基等がある。
【００９０】
本発明の一般式（Ｉ）において、ｎは０、１または２であり、下付き文字ｎの付いた基がＺ基に結合している。ｎが０の時、Ｚ基は直接、カルボニル基に結合している。ｎがｔの時、Ｚ基はメチレン基を介してカルボニル基に結合している。そしてｎが２の時、Ｚ基はエチレン基を介してカルボニル基に結合している。
【００９１】
一般式（Ｉ）のＲは−ＯＨもしくは−ＮＨ２、またはその塩を示す。
【００９２】
本発明においては、一般式（Ｉ）のＡＡｌ−ＡＡ２は、共に結合した二つのタイプのアミノ酸を示す。アミノ酸ＡＡｌは、好ましくはＬｙｓまたはＡｒｇであり、一方、ＡＡ２は、好ましくはＶａｌまたはＬｅｕであることが望ましい。ＡＡｌおよびＡＡ２は、Ｎ末端からＣ末端への方向に沿って配列ＡＡ１−ＡＡ２に共に結合される。好ましくは、ＡＡ１−ＡＡ２にはＬｙｓ−ＶａｌまたはＡｒｇ−Ｌｅｕが含まれる。
【００９３】
もう一つ別の実施態様では、本発明のＰＡＲ２アゴニストは、ＰＡＲ２を活性化することが知られているプロテアーゼである。例えばトリプシンおよびトリプターゼは、ＰＡＲ２の主なアゴニストである。トリプシンおよびトリプターゼによりＰＡＲ２が切断されると、テザーリガンドＳＬＩＧＲＬ（配列番号１）（ラットおよびマウスのＰＡＲ２）が暴露され、それがつぎに、切断された受容体の細胞外ループＩＩの中の保存領域と結合する。因子ＶＩＩａや因子Ｘａのように、ＰＡＲ２を活性化できる凝固因子も幾つかある。他の例として挙げられるのは、マトリプターゼ、ヒト気道トリプシン様プロテアーゼ、および膵外性のトリプシン酵素のような、上皮細胞由来のプロテアーゼである。
【００９４】
もう一つ別の実施態様では、ＰＡＲ２アゴニストは、抗体（この語は抗体断片も含む）からなっていてよい。特に、ＰＡＲ２アゴニストは、前記抗体が受容体を活性化するという意味で、ＰＡＲ２に対する抗体からなっていてよい。
【００９５】
もう一つ別の実施態様では、ＰＡＲ２アゴニストはアプタマーであってよい。アプタマーは、分子認識において、抗体に代わる分子のクラスである。アプタマーは、実質上どのようなクラスの目標分子でも高い親和性および特異性で認識する能力を有するオリゴヌクレオチドまたはオリゴペプチド配列である。そのようなリガンドは、Ｔｕｅｒｋ Ｃ．ａｎｄ Ｇｏｌｄ Ｌ．，１９９０に記載のように、ランダム配列ライブラリーの、ＥＸｐｏｎｅｎｔｉａｌ ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ（ＳＥＬＥＸ）によるＳｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ Ｌｉｇａｎｄｓを通して単離可能である。ランダム配列ライブラリーは、ＤＮＡの組み合わせ化学合成により、入手可能である。このライブラリーにおいて、各構成要素は、固有の配列から最終的に化学的修飾された、直鎖オリゴマーである。このクラスの分子の修飾、利用及び利点として考えうるものがＪａｙａｓｅｎａ Ｓ．Ｄ．，１９９９において概説されている。ペプチドアプタマーは、ツーハイブリッド法によって複合ライブラリーから選ばれた大腸菌チオレドキシンＡのようなプラットホームタンパク質により提示される、立体構造的に拘束された抗体可変領域から構成される（Ｃｏｌａｓ ｅｔ ａｌ．，１９９６）。
【００９６】
上記に説明したようなＰＡＲ２に対するアプタマーを得た後、当業者であればＰＡＲ２を活性化するものを容易に選べる。
【００９７】
本発明のもう一つの態様は、Ａ型インフルエンザウイルスの複製を阻害するためのＰＡＲ１アンタゴニストに関するものである。
【００９８】
本発明の更にもう一つの目的は、対象がＡ型インフルエンザウイルス感染症にかかりやすいかを検証する方法に関するものであって、その方法は、前記対象から採取した生物学的サンプルを分析することにより、
（ｉ）ＰＡＲ１遺伝子における突然変異および／もしくはそれに関連するプロモーターの存在を検出し、および／または
（ｉｉ）そのＰＡＲ１遺伝子の発現を分析する、
という手順からなるものである。
【００９９】
本文中で用いる場合、「生物学的サンプル」という語は、血液または血清のような、対象から採取したあらゆるサンプルを言う。
【０１００】
ＰＡＲ１遺伝子における突然変異を検出する方法の典型的なものとして挙げられるのは、制限断片長多型法、ハイブリダイゼーション技術、ＤＮＡ配列決定法、エキソヌクレアーゼ耐性、ミクロ配列決定、ｄｄＮＴＰを用いる固相伸長、ｄｄＮＴＰを用いる溶液中の伸長反応、オリゴヌクレオチドアッセイ、動的対立遺伝子特異的ハイブリダイゼーションなどの単一ヌクレオチド多型検出方法、ライゲーション連鎖反応、ミニ配列決定、ＤＮＡ「チップ」、ＰＣＲまたは分子標識と組み合わせた、単一標識または二重標識プローブでの対立遺伝子特異的オリゴヌクレオチドハイブリダイゼーションなどがある。
【０１０１】
ＰＡＲ１遺伝子の発現の分析の評価は、転写された核酸または翻訳されたタンパク質の発現を検出するための様々な周知の方法のいずれかによって行なってもよい。
【０１０２】
好ましい実施態様においては、ＰＡＲ１遺伝子の発現の評価は、新生ＲＮＡのような、前記遺伝子のｍＲＮＡ転写産物またはｍＲＮＡ前駆体の発現を分析することによって行なわれる。前記分析は、対象から採取した生物学的サンプル中の細胞からｍＲＮＡ／ｃＤＮＡを調製し、そのｍＲＮＡ／ｃＤＮＡを参照ポリヌクレオチドとハイブリダイズすることによって評価することができる。調製されたｍＲＮＡ／ｃＤＮＡを用いてハイブリダイゼーションまたは増幅アッセイを行なうことができ、その例として挙げられるのは、限定はしないが、サザン分析またはノーザン分析、ポリメラーゼ連鎖反応分析、例えば定量ＰＣＲ（ＴａｑＭａｎ）、およびＧｅｎｅＣｈｉｐ（商標）ＤＮＡアレイ（ＡＦＦ ＹＭＥＴＲＩＸ）のようなプローブアレイである。
【０１０３】
好適には、ＰＡＲ１遺伝子から転写したｍＲＮＡの発現レベルの分析の一環として、（米国特許第４，６８３，２０２号に記載の実験例のような）ＲＴ−ＰＣＲによる核酸増幅、リガーゼ連鎖反応（ＢＡＲＡＮＹ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，ｖｏｌ．８８，ｐ：１８９−１９３，１９９１）、自家持続配列複製（ＧＵＡＴＥＬＬＩ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，ｖｏｌ．５７，ｐ：１８７４−１８７８，１９９０）、転写増幅システム（ＫＷＯＨ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，ｖｏｌ．８６，ｐ：１１７３−１１７７，１９８９）、Ｑβレプリカーゼ（ＬＩＺＡＲＤＩ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｌ．Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．６，ｐ：１１９７，１９８８）、ローリングサークル複製（米国特許第５，８５４，０３３号）もしくは、その他のいずれかの核酸増幅法を行なった後、当業者に周知の技術を用いて増幅分子の検出を行なう。このような検出方式の数々が、核酸分子の検出に特に役立つのは、そのような分子の存在が、極めて少数である場合である。本文中で用いる場合、増幅プライマーというのは、一つの遺伝子（それぞれ正および負の鎖もしくは逆）の５’か３’領域にアニール可能な一対の核酸分子であって、その間に短い領域を内包するものとして定義づけられる。一般に、増幅プライマーは、長さが約１０から３０ヌクレオチドで、長さが約５０から２００ヌクレオチドの一つの領域の側面に位置する。条件が適切で試薬も適切であれば、そのようなプライマーにより、両側にそのようなプライマーが並んでいるヌクレオチド配列からなる核酸分子を増幅することが可能となる。
【０１０４】
もう一つ別の好ましい実施例においては、ＰＡＲ１遺伝子の発現の評価を、前記遺伝子から翻訳されたタンパク質の発現を分析することにより、行なう。前記分析の評価に用いることができるのは、（例えば放射標識された、発色団で標識した、発蛍光団標識もしくは酵素標識の抗体のような）抗体、（例えば、基質と、もしくは（例えばビオチンストレプトアビジンのような）タンパク質／リガンドの一対のタンパク質のタンパク質かリガンドと共役の抗体のような）抗体誘導体、あるいは、そのＰＡＲ１遺伝子から翻訳されたタンパク質と特異的に結合する（例えば単鎖抗体、分離された抗体高度可変ドメイン等のような）抗体断片がある。
【０１０５】
前記分析の評価方法として考えられる技術としては、様々なものが業界で知られており、その例として挙げられ、但し、そのような例に限定されるわけではないのが、酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、放射免疫測定（ＲＩＡ）、ウェスタンブロット法と酵素結合免疫吸着法（ＲＩＡ）である。
【０１０６】
本発明の方法の一環として、患者から採取した生物学的サンプル中のＰＡＲ２遺伝子の発現レベルを、比較対照用のものの中の、前記遺伝子の正常な発現レベルと比較することがあってもよい。正常な発現レベルと比べて、患者の生物学的サンプル中の、前記遺伝子の発現レベルが有意に高いということは、その患者が、Ａ型インフルエンザウイルス感染症にかかりやすくなっている徴である。ＰＡＲ２遺伝子の発現レベルが「正常」だということは、Ａ型インフルエンザウイルス感染症には全くかかっていない被験者の生物学的サンプル中の、前記遺伝子の発現レベルだということである。できれば、前記正常な発現レベルは、（例えば、Ａ型インフルエンザウイルス感染症には全くかかっていない健康な被験者からのサンプルのような）比較対照用サンプルの中で評価することが望ましく、そして、幾つかの比較対照用サンプル中の前記遺伝子の平均的発現レベルであることが望ましい。
【０１０７】
本発明では、Ａ型インフルエンザウイルス感染症患者の治療または予防は、呼吸窮迫症候群の治療または予防ではない。
【０１０８】
本発明を以下の図と実例で更にはっきりと説明していく。しかしながら、このような図と実例は、いかなる意味でも、本発明の範囲を限定するものと解釈すべきではない。
【実施例１】
【０１０９】
素材及び方法
【０１１０】
実験動物
【０１１１】
複数の雌野生型Ｃ５７ＢＬ６マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ，Ｒｈｏｎｅ，Ｆｒａｎｃｅ）を用いて以下の研究をおこなった。マウスは全て、受け入れ時に生後五週間で、実験に供する前の七週間、以下のような条件に順応し、蛇口から出る水と標準的な実験動物用の餌を自由に摂取できるようにした。マウスたちは、国立農学研究所（Ｉｎｓｔｉｔｕｔ Ｎａｔｉｏｎａｌ ｄｅ ｌａ Ｒｅｃｈｅｒｃｈｅ Ａｇｒｏｎｏｍｉｑｕｅ）（ＩＮＲＡ）動物愛護施設（Ｊｏｕｙ−ｅｎ−Ｊｏｓａｓ，Ｆｒａｎｃｅ）において、（一定光周期、１２：１２時間明暗周期、２２℃という）適切な条件に置かれた。そのマウスたちに関わる処置の全ては、獣医業務局（ｄｉｒｅｃｔｉｏｎ ｄｅｓ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ Ｖｅｔｅｒｉｎａｉｒｅｓ）発行（認定番号７８−１１４）の免許証の権威の下でおこなわれた。
【０１１２】
上皮細胞とウイルス株
【０１１３】
この研究で用いられたヒトＩＩ型肺胞上皮細胞（Ａ５４９）とイヌ遠位尿細管由来の細胞株（ＭＤＣＫ）は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（アメリカ・養細胞系統保存機関）から入手し、それぞれＭＥＭＥ（１０％ ＳＶＦ、ＰＳ、グルタミン）とＭＥＭＥ（５％ ＳＶＦ、ＰＳ、グルタミン）の中で育成したものである。Ｇ．Ｆ．Ｒｉｍｍｅｌｚｗａａｎ（Ｅｒａｓｍｕｓ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｒｏｔｔｅｒｄａｍ，Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）より寄贈のＩＡＶ Ａ／ＰＲ／８／３４（ＨｌＮｌ）を育成し、前述のように産生した（Ｆ．ＬｅＢｏｕｄｅｒ ａｎｄ ａｌ，２００８；Ｋ．Ｋｈｏｕｆａｃｈｅ ａｎｄ ａｌ，２００９）。
【０１１４】
使用した薬剤
【０１１５】
ＰＡＲ１−アゴニストペプチドＴＦＬＬＲ−ＮＨ２（Ｈ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−ＮＨ２，ＳＥＱ ＩＤ Ｎ°７）と比較対照用ペプチドＦＴＬＬＲ−ＮＨ２（Ｈ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−ＮＨ２，ＳＥＱ ＩＤＮ°８）をスイスのＢＡＣＨＥＭ（Ｂｕｂｅｎｄｏｒｆ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）から購入した。ＰＡＲ−１アンタゴニストＳＣＨ７９７９７二塩酸塩をオランダのＡＸＯＮ ＭＥＤＣＨＥＭ（Ｇｒｏｎｉｎｇｅｎ，Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）から購入した。
【０１１６】
ＰＡＲ１−アゴニストＴＦＬＬＲ−ＮＨ２によるＡ５４９の前処理
【０１１７】
ＩＡＶ Ａ／ＰＲ／８／３４菌株に感染させる前に、Ａ５４９細胞の幾つかを五分間、２５０μＭのＰＡＲ１特異的活性化ペプチドＴＦＬＬＲ−ＮＨ２で刺激し、あるいは刺激しなかった。放出されたＲＡＮＴＥＳ、ＩＬ−６及びＩＬ−８の量を、ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）による感染から、８時間、２４時間、４８時間そして７２時間後に、培養脱離液中で分析した。ウイルス滴定量もまた、従来のプラーク検定法により同じ脱離液中で測定した。
【０１１８】
インビボのＰＡＲ１−アゴニストＴＦＬＬＲ−ＮＨ２の効果
【０１１９】
ＰＡＲ１アゴニスト（ＴＦＬＬＲ−ＮＨ２）刺激実験については、生後六週間のＣ５７ＢＬ／６雌のマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ＆Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）に三日間、毎日、麻酔をかけ（ＩＰ）、鼻腔内を２５μｌの様々な溶液に曝した。最初の日、麻酔をかけたマウスの鼻腔内に（５０００、５００、５０または１０ＰＦＵのＡ／ＰＲ／８／３４に、５０μＭのＴＦＬＬＲ−ＮＨ２ ＰＡＲ−１アゴニストまたはＦＴＬＬＲ−ＮＨ２ ＰＡＲ−１比較対照用薬剤付きの、または抜きの）２５μｌ溶液を接種した。感染してから二日後と三日後に、そのようなマウスのまさに鼻腔内を２５μｌのペプチドのみに曝し、あるいは治療なしのマウスにはＭＥＭＥ媒質（２５μｌ／マウス）にした。つぎに感染したマウスの生存率と体重を毎日、観察し、ウイルス負荷をプラーク検定により測定し、サイトカイン（ＲＡＮＴＥＳ＆ＩＬ−６）と多核好中球（ＰＭＮ）を、犠牲に供したマウスの肺の中で、感染から２４時間後と４８時間後に、気管支肺胞洗浄液（ＬＢＡ）中に添加した。最後に、ＰＡＲ−１アゴニストの二次的効果をインビボで確認するために、そのマウスの鼻腔内を２５μｌのＰＡＲ−１アゴニスト（５０μＭ）に曝す一方で、比較対照用マウスはＭＥＭＥ媒質に曝した。つぎに治療したマウスの生存率と体重を毎日、観察した。
【０１２０】
インビボのＰＡＲ１−アンタゴニストＳＣＨ７９７９７の効果
【０１２１】
インビボのＳＣＨ７９７９７保護投与量を確認するため、生後六週間のＣ５７ＢＬ／６雌のマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ＆Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）複数に、三日間、毎日、麻酔をかけ（ＩＰ）、鼻腔内を、濃度可変のＳＣＨ７９７９７（５０；５；０．５及び０，２μＭ）と一定のＡ／ＰＲ／８／３４ｐｆｕ（５０００ｐｆｕ）を含む２５μｌの溶液に曝した。最初の日、麻酔をかけたマウスの鼻腔内に、５０、５、０．５及び０．２μＭのＳＣＨ７９７９７ＰＡＲ−１アンタゴニストを伴い、もしくは伴わないで、２５μｌの溶液（５０００、ＰＦＵのＡ／ＰＲ／８／３４）を接種した。感染した後の二日目と三日目に、そのようなマウスの鼻腔内を２５μｌのＳＣＨ７９７９７に、５０、５、０．５そして０．２μＭで曝し、一方、比較対照用の（感染した）マウスには等量のＭＥＭＥにした。つぎに、感染したマウスの生存と体重を毎日、観察した。
【０１２２】
第二の手順として、そしてＩＡＶｐｆｕの低い値でのＳＣＨ７９７９７の保護率を確認するために、生後六週間のＣ５７ＢＬ／６雌のマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ＆Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）に三日間、毎日、麻酔をかけ（ＩＰ）、そして鼻腔内を、ｐｆｕが可変のＡ／ＰＲ／８／３４（５０００、５００、５０ｐｆｕ）ウイルスと、一定濃度のＳＣＨ７９７９７（５０μＭ）を含む２５μｌの溶液に曝した。処置後、二日目と三日目に、そのマウスたちの鼻腔内をまさに、２５μｌのＳＣＨ７９７９７に５０μＭで曝し、あるいは比較対照用マウスにはＭＥＭＥにした。つぎに、上記のように、感染したマウスたちの生存と体重を毎日、観察し、ウイルス負荷をプラーク検定により測定し、感染の２４時間後と４８時間後に、犠牲に供したマウスの肺の中で、サイトカイン（ＲＡＮＴＥＳ＆ＩＬ−６）と多核好中球（ＰＭＮ）を気管支肺胞洗浄液（ＬＢＡ）中に添加した。
【０１２３】
メイ・グリュンヴァルト・ギムザ染色
【０１２４】
気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）を１ｍＭ ＥＤＴＡ（ｉｎ ｖｉｔｒｏｇｅｎ）を補ったＰＢＳ（ｉｎ ｖｉｔｒｏｇｅｎ）中に回収した。細胞遠心分離後、多核好中球のパーセンテージの測定を、メイ・グリュンヴァルト・ギムザ染色を施した集細胞遠心装置Ｓｕｐｅｒｆｒｏｓｔ−Ｐｌｕｓ（登録商標）のスライド複数を顕微鏡検査することによって、サンプル毎の５００個の細胞の合計を数えることにより、行なった。
【０１２５】
肺組織学
【０１２６】
複数の肺組織切片を１０％ホルマリン液の中に固定した肺全体から切り出し、パラフィンの中に埋め込んだ。十二マイクロメーターの厚みの切片を取り、前述の病理組織学的評価のため、Ｈ＆Ｅで染色した。
【０１２７】
統計的分析
【０１２８】
マンホイットニーのＵ検定を、ウイルス複製の統計的有意性とＥＬＩＳＡ実験のために用いた。カプラン・マイヤー検定をマウスの生存率の差について用いた。その統計的有意性を、必要時に記録し、ｐ＜０．０５の敷居値で検定した。
【０１２９】
結果
【０１３０】
ＰＡＲ１−アゴニストＴＦＬＬＲ−ＮＨ２はＩＡＶに感染した上皮細胞中のＩＡＶウイルス複製の放出を増大させる
【０１３１】
ＩＡＶ複製におけるＰＡＲ１の役割を詳しく調べるために、Ａ５４９肺胞上皮細胞をＩＡＶに感染させて、選択的ＴＦＬＬＲ−ＮＨ２ＰＡＲ１アゴニストか比較対照用のペプチドで刺激した。ＰＡＲ１アゴニストに曝された時、ＩＡＶに感染した細胞は、その後に、比較対照用の不活性なペプチドに曝された細胞と比べると、より多くのウイルス（図１Ａ）を産生した。ＰＡＲ１活性化は、Ａ５４９に感染した細胞中のウイルス産生を増大させることになるという結論に達した。
【０１３２】
つぎに、ＩＡＶに感染した肺上皮細胞中の炎症サイトカインの放出に及ぼすＰＡＲ１活性化の効果を詳しく調べた。そのような細胞中のＰＡＲ１の刺激により、ＲＡＮＴＥＳ、ＩＬ−８及びＩＬ−６の放出が有意に増大した（図１Ｂ、Ｃ、Ｄ）。そのようにして、ＰＡＲ１のアゴニストは、Ａ５４９−ＩＡＶに感染した−細胞中のサイトカイン放出に影響を及ぼす。
【０１３３】
ＰＡＲ１−アゴニストＴＦＬＬＲ−ＮＨ２はインビボの発病及び死を増大させる
【０１３４】
ＰＡＲ１のインビボでの役割を詳しく調べるために、マウスの鼻腔内を、様々な量（５０００、５００、５０そして１０ｐｆｕ／マウス）で投与したＩＡＶに曝し、５０μＭのＰＡＲ１アゴニストペプチドで刺激し、または刺激しなかった。結果を見たところ、ＰＡＲ１アゴニストによる処置で、ＩＡＶが誘発するマウスの死亡率は、刺激しなかったマウスに比べて、増大した（図２Ａ）。感染しなかったマウスはＰＡＲ１アゴニストに感応しなかったので、この死亡率上昇は、ＰＡＲ１の副作用によるものではない（図２Ｂ）。このようにＩＡＶに感染したマウスの発病がＰＡＲ１アゴニストにより増大したことを見て、ＰＡＲ１アゴニストがインビボでのＩＡＶの複製を調節しうるのかどうかを、更に詳しく調べることになった。そういうわけで、感染したマウスを、感染してから２４時間後と４８時間後、ＰＡＲ１アゴニストで刺激し、あるいは刺激せずに、その肺の中のウイルス負荷の数値を求めた。結果を見たところ、ＰＡＲ１特異的アゴニストで処置した感染マウスは、刺激を受けなかったマウスに比べて、肺の中の感染性ウイルス負荷が有意に増大していた（図２Ｃ）。このことは、ｐｆｕ／マウスの値が異なった二つの場合において観察された。そういうわけで、ＰＡＲ１アゴニストはインビボでのＩＡＶ複製を増大させる。
【０１３５】
ＰＡＲ１−アンタゴニストＳＣＨ７９７９７によるＩＡＶ誘発性の発病及び死からの保護
【０１３６】
インビボでのＰＡＲ１アンタゴニストの役割を詳しく調べるため、マウスの鼻腔内に５０００ｐｆｕ／マウスを投与して感染させ、様々な濃度のＰＡＲ１アンタゴニストＳＣＨ７９７９７で処置した。結果を見たところ、ＰＡＲ１アンタゴニストを用いた処置により、その投与量に応じた形で、マウスはＩＡＶが誘発する死から保護されていた（図３Ａ）。更に、５０００、５００そして５０のような、様々なｐｆｕ／マウスの値で感染させた後も、５０μＭのアンタゴニストＰＡＲ１により、マウスはＩＡＶが誘発する死から保護された（図３Ｂ）。このことから、ＰＡＲ１アンタゴニストは、マウスをＩＡＶが誘発する死から守ったという結論に達した。最後に、感染したマウスを、感染してから２４時間後と４８時間後、ＰＡＲ１アンタゴニストで刺激し、あるいは刺激せずに、その肺の中のウイルス負荷の数値を求めた。結果を見たところ、特異的なＰＡＲ１のアンタゴニストの処置を受けた感染マウスは、処置を受けなかったマウスに比べて、肺の中の感染性のウイルス負荷が有意に減少していた（図３Ｃ）。したがって、ＰＡＲ１アンタゴニストは、ウイルス複製を阻害し、ＩＡＶ誘発性の発病及び死からマウスを保護する。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０１３７】
【非特許文献１】Ｒｉｔｅａｕ Ｂ．ｅｔ ａｌ．２００６；ＬｅＢｏｕｄｅｒ Ｆ．ｅｔ ａｌ．２００８
【非特許文献２】Ｓｔｅｉｎｈｏｆｆ Ｍ．ｅｔ ａｌ．２００５；Ｖｅｒｇｎｏｌｌｅ Ｎ．ｅｔ ａｌ．２００８
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ａ型インフルエンザウイルス感染症の治療または予防のための方法及び組成物（医薬組成物など）を提供するものである。
【背景技術】
【０００２】
流行性ウイルス感染症は、ありふれた風邪から命に関わるインフルエンザ感染症、西ナイル熱感染症、ＨＩＶ感染症に至るヒトの疾患を通じて、甚大な地球規模の生命の損失及び金銭的被害をもたらすものである。流行性、汎発性、および動物間流行性の状況では、適時に発見し、診断し、治療することが、病気の蔓延に歯止めをかける上で肝要である。特に、ウイルスの構築と増殖を速やかに阻害する予防薬や治療薬が、治療のための投薬計画において極めて有益である。
【０００３】
Ａ型インフルエンザウイルス（ＩＡＶ）が引き起こす急性呼吸器系感染症は、伝染性が強く、人畜の罹病率及び死亡率も著しい。そういうわけで、新規で改良された抗ウイルス薬が臨床分野において求められている。本発明は、そのような求めに合致するものである。
【０００４】
宿主に本来備わっている免疫システムの活性化は、ＩＡＶ感染症の蔓延および悪影響を制御することを目的としている。しかしながら、サイトカイン放出の調節が不全で感染症の部位での好中球の動因が強化されることから炎症反応が過剰となると、それもまた、重篤な肺炎を引き起し、ＩＡＶの発病率を上げることになることがある。そういうわけで、ＩＡＶ感染症に際して、サイトカイン調節不全がＩＡＶの致命的結末につながることがよくある。
【０００５】
呼吸器内のウイルス複製部位は、複雑な微環境の典型であり、そこに細胞外プロテアーゼが大量に存在している。このようなプロテアーゼの幾つか（トリプシン、トリプターゼ）は、ウイルス複製（Ｒｉｔｅａｕ Ｂ．ｅｔ ａｌ．２００６；ＬｅＢｏｕｄｅｒ Ｆ．ｅｔ ａｌ．２００８）および自然免疫反応において、ある役割を有し得、それは、それらが、プロテアーゼ活性化受容体群（ＰＡＲ）と呼ばれる受容体ファミリーの活性化を介する炎症プロセスの重要なメディエーターであるためである（Ｓｔｅｉｎｈｏｆｆ Ｍ．ｅｔ ａｌ．２００５；Ｖｅｒｇｎｏｌｌｅ Ｎ．ｅｔ ａｌ．２００８）。
【０００６】
これまでに、異なるプロテアーゼにより活性化される４つのＰＡＲがクローニングされている（ＰＡＲ１〜４）。受容体が複数のプロテアーゼにより切断された後、その受容体は、新たに放出されたアミノ末端配列により結合され、内部で活性化される。
【０００７】
肺のＩＡＶ感染症においてＰＡＲ１が有する役割は、これまで記載されていない。しかしながら、ＩＡＶに感染したマウスの気道内でｐＡＲ１のＰＡＲレベルが上がることは観察されてきており（Ｌａｎ ＲＳ．ｅｔ ａｌ．２００４）、ウイルス性疾患の発病における、この受容体の役割が示唆されている。インビボまたはインビトロでのＰＡＲ１活性化／不活性化についての特定の役割については、これまで検討されたことがない。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、Ａ型インフルエンザウイルス感染症の治療または予防用のＰＡＲ１アンタゴニストに関するものである。
【図面の簡単な説明】
【０００９】
【図１Ａ】ＰＡＲ１アゴニストにより上皮細胞中のウイルス複製が増大することを示す図である。Ａ５４９をＩＡＶ Ａ／ＰＲ／８／３４に感染させ、ＰＡＲ１アゴニストペプチドで治療し、または治療しなかった。感染後の、指定された時間の後に、培養上清中の感染性ウイルス力価を、プラークアッセイにより測定した。
【図１Ｂ】ＰＡＲ１アゴニストにより上皮細胞中へのサイトカイン放出が調節されることを示す図である。Ａ５４９をＩＡＶ Ａ／ＰＲ／８／３４に感染させ、ＰＡＲ１アゴニストペプチドで治療し、または治療しなかった。感染後の、指定された時間の後に、指定されたサイトカインの放出を従来のＥＬＩＳＡで測定した。
【図１Ｃ】ＰＡＲ１アゴニストにより上皮細胞中へのサイトカイン放出が調節されることを示す図である。Ａ５４９をＩＡＶ Ａ／ＰＲ／８／３４に感染させ、ＰＡＲ１アゴニストペプチドで治療し、または治療しなかった。感染後の、指定された時間の後に、指定されたサイトカインの放出を従来のＥＬＩＳＡで測定した。
【図１Ｄ】ＰＡＲ１アゴニストにより上皮細胞中へのサイトカイン放出が調節されることを示す図である。Ａ５４９をＩＡＶ Ａ／ＰＲ／８／３４に感染させ、ＰＡＲ１アゴニストペプチドで治療し、または治療しなかった。感染後の、指定された時間の後に、指定されたサイトカインの放出を従来のＥＬＩＳＡで測定した。
【図２Ａ】ＰＡＲ１アゴニストペプチドにより、特定の依存的な様式で、マウスにおけるＩＡＶ誘発性の死亡が増大することを示す図である。Ａ− ＰＡＲ１アゴニストＴＦＬＬＲ−ＮＨ２による治療を受けた、または治療を受けなかった、感染マウスの生存率。
【図２Ｂ】ＰＡＲ１アゴニストペプチドにより、特定の依存的な様式で、マウスにおけるＩＡＶ誘発性の死亡が増大することを示す図である。Ｂ−感染しなかった複数のマウスのうち、ＰＡＲ１アゴニストＴＦＬＬＲ−ＮＨ２による治療を受けた、または治療を受けなかった、非感染マウスの生存率及び体重（最初の体重の％で示す）：非感染マウスにおいてＰＡＲ１アゴニストペプチドの副作用はない。
【図２Ｃ】ＰＡＲ１アゴニストによりインビボでのウイルス複製が増大することを示す図である。マウスをＩＡＶ Ａ／ＰＲ／８／３４（マウス一匹当たり５０ｐｆｕまたは５００ｐｆｕ）に感染させ、ＰＡＲ１アゴニストペプチドで治療し、または治療しなかった。感染後の指定の時点で肺におけるＩＡＶウイルス力価を従来のプラークアッセイで分析した。
【図３Ａ】ＰＡＲ１アンタゴニストＳＣＨ７９７９７により、用量−反応依存性の様式（Ａ）で、ＩＡＶ誘発性の死亡からマウスが防御されることを示す図である。
【図３Ｂ】ＰＡＲ１アンタゴニストＳＣＨ７９７９７により、マウス一匹当たりのｐｆｕを変えて感染させた後（Ｂ）で、ＩＡＶ誘発性の死亡からマウスが防御されることを示す図である。
【図３Ｃ】ＰＡＲ１アンタゴニストＳＣＨ７９７９７によりインビボでのウイルス複製が阻害されることを示す図である。マウスをＩＡＶ Ａ／ＰＲ／８／３４（マウス当たり５０ｐｆｕまたは５００ｐｆｕで）に感染させ、ＰＡＲ１アンタゴニストＳＣＨ７９７９７で治療し、または治療しなかった。次に、感染後の指定の時点で肺におけるＩＡＶウイルス力価を従来のプラークアッセイで分析した。
【発明を実施するための形態】
【００１０】
本発明は、Ａ型インフルエンザウイルス感染症の治療または予防のための方法および組成物（医薬組成物など）を提供するものである。
【００１１】
本発明者等は、実際に、インフルエンザ発病におけるＰＡＲ１の役割を、インビトロおよびインビボにおいて調べた。インビボで、上皮細胞上のＰＡＲ１を刺激するとＡ型インフルエンザウイルス（ＩＡＶ）の複製が増大した。インビボで、特異的アゴニストを用いてＰＡＲ１を刺激すると、ＩＡＶ誘発性の急性の肺の損傷および死に関して害を及ぼした。この効果は、サイトカイン放出の修飾と相関関係を有するものであった。更に重要なことは、ＰＡＲ１のアンタゴニストを用いてＰＡＲ１をブロックすると、ＩＡＶ誘発性の死からマウスが防御されたことである。このような結果は意義があるものと認められた。
【００１２】
したがって、本発明の第一の態様は、Ａ型インフルエンザウイルス感染症の治療または予防用のＰＡＲ１アンタゴニストに関するものである。
【００１３】
本文中で用いる場合、「Ａ型インフルエンザウイルス感染症」という語は、Ａ型インフルエンザウイルスによって引き起こされる感染症の一切を指すものとし、その際ヘマグルチニン（Ｈ１からＨ１５）およびノイラミニダーゼ（Ｎ１からＮ９）の発現に基づく血清型は考慮しないこととする。本発明で検討される典型的なＡ型インフルエンザウイルスとしては、Ｈ１Ｎ１、Ｈ２Ｎ２、Ｈ３Ｎ２、Ｈ５Ｎ１、Ｈ７Ｎ７、Ｈ１Ｎ２、Ｈ９Ｎ２、Ｈ７Ｎ２、Ｈ７Ｎ３及びＨ１０Ｎ７が挙げられるが、それらに限られるというわけではない。好ましい実施態様において、本発明に従ったインフルエンザウイルスのタイプは、Ｈ１Ｎ１である。
【００１４】
最大限に広く解釈した意味では、「治療」という語はＡ型インフルエンザウイルス感染症の進行を逆転させ、緩和し、阻害することを意味し、好ましくはＡ型インフルエンザウイルスの増殖を阻害することを意味する。特に、Ａ型インフルエンザウイルス感染症の「予防」または「予防処置」という時には、Ａ型インフルエンザウイルス感染症の症状を予防する本発明の化合物を投与することを指すことがある。
【００１５】
投与の量および頻度は、その処置が治療なのか予防なのかによって変化し得る。予防の用途で行なう場合には、比較的低い頻度の間隔で長期間にわたって、比較的少ない量を投与する。中には生涯にわたり処置を継続して受ける患者もいる。治療の用途で行なう場合には、病気の進行が緩和されるか、または終了するまで、好ましくは患者に病状の部分的もしくは完全な改善が見られるまで、比較的高い投与量を比較的短い間隔で投与することが必要となることもある。その後は、予防のための投薬計画で患者に投与を行なってよい。
【００１６】
予防の用途で行なう場合には、ＰＡＲ１のアンタゴニストを含有する組成物を、まだＡ型インフルエンザウイルス感染症にかかっていない患者に投与する。むしろ、このような組成物は、そのような疾患を発症する恐れがある、またはこのような疾患を発症する傾向がある患者に対するものである。このような適用により、患者の抵抗力を強めたり、Ａ型インフルエンザウイルス感染症の進行を遅らせたりすることができる。
【００１７】
本文中で用いる場合、「プロテアーゼ活性化受容体−１」、「プロテイナーゼ活性化受容体−１」、または「ＰＡＲ１」、もしくは「ＰＡＲ−１」という語は、互いに入れ換え可能で、トロンビン切断によって活性化され、その結果、Ｎ末端で繋がれたリガンドを露出する、Ｇタンパク質結合受容体を指す。ＰＡＲ１はまた、「トロンビン受容体」および「凝固因子ＩＩ受容体前駆体」としても知られている。例えばＶｕ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ（１９９１）６４（６）：１０５７−６８；Ｃｏｕｇｈｌｉｎ，ｅｔ ａｌ，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ（１９９２）８９（２）：３５Ｉ−５５；そしてＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｕｍｂｅｒ ＮＭ＿００１９９２参照。繋がれたリガンドがＰＡＲ１の細胞外ドメインに分子内結合すると、細胞内シグナル伝達とカルシウム流出が引き起こされる。例えばＴｒａｙｎｅｌｉｓ ａｎｄ Ｔｒｅｊｏ，Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｈｅｍａｔｏｌ（２００７）１４（３）：２３０−５；そしてＨｏｌｌｅｎｂｅｒｇ，ｅｔ ａｌ，Ｃａｎ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．（１９９７）７５（７）：８３２−４１参照。
【００１８】
この用語には、天然ＰＡＲ１ならびにその変異体および修飾形態が含まれ得る。ＰＡＲ１は何に由来するものでもよいが、典型的には哺乳動物（例えばヒトおよびヒト以外の霊長類）のＰＡＲ１であり、特にヒトＰＡＲ１である。
【００１９】
ＰＡＲ１のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列は当技術分野で知られている。例えばＶｕ，ｅｔ ａｌ．，Ｃｅｌｌ（１９９１）６４（６）：１０５７−６８；Ｃｏｕｇｈｌｉｎ，ｅｔ ａｌ，Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ （１９９２）８９（２）：３５１−５５；およびＧｅｎＢａｎｋ Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｕｍｂｅｒ ＮＭ＿００１９９２参照。ヒトＰＡＲ１の核酸配列はＧｅｎＢａｎｋ ａｃｃｅｓｓｉｏｎ ｎｕｍｂｅｒ ＮＭ＿００１９９２として公表されている（合わせてＭ６２４２４．１およびｇｉ４５０３６３６も参照）。ヒトＰＡＲ１のアミノ酸配列はＮＰ＿００１９８３とＡＡＡ３６７４３として公表されている。
【００２０】
「アンタゴニスト」という語は、本文中で用いる場合、受容体に特異的に結合して、その受容体を介するシグナル伝達を阻害する能力を有し、その受容体が媒介する反応を全面的に阻止するか、検出可能な程度に阻害する物質を言う。例えば、本文中で用いる場合、「ＰＡＲ１アンタゴニスト」という語は、ＰＡＲ１に全面的または部分的に結合してそれを不活性化することにより、経路のシグナル伝達と、それに続く生物学的プロセスを開始させる、天然または合成の化合物のことである。ＰＡＲ−１アンタゴニストの活性は、既に知られている様々な方法を用いて評価され得る。場合によっては、ＰＡＲ１アンタゴニストは、ＰＡＲ１と結合してＰＡＲ１からの細胞内シグナル伝達に続くトロンビン誘発性のカルシウム流出またはトロンビン誘発性のＩＬ−８産生を阻害する能力に基づいて（例えば、ＦｌｉｐＲアッセイで、またはＥＬＩＳＡにより測定される）同定され得る。さらなるアッセイは、Ｋａｗａｂａｔａ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｅｘｐ Ｔｈｅｒ．（１９９９）２８８（１）：３５８−７０に記載されている。阻害が発生するのは、例えばカルシウム流出またはＩＬ−８の産生により測定される、本発明のアンタゴニストに曝されたＰＡＲ１からのＰＡＲ１細胞内シグナル伝達が、アンタゴニストに曝されていない対照ＰＡＲ１からの細胞内シグナル伝達と比較して、少なくとも約１０％少ない、例えば少なくとも約２５％、５０％、７５％少ない、または完全に阻害されている場合である。対照ＰＡＲ１は、抗体もしくは抗原結合分子に曝されていないか、別の抗原と特異的に結合する抗体もしくは抗原結合分子に曝されているか、またはアンタゴニストとして機能しないことが知られている抗ＰＡＲ１抗体または抗原結合分子に曝されていてよい。「抗体アンタゴニスト」というのは、アンタゴニストが阻害性の抗体である状況を指す。
【００２１】
ある実施態様において、本発明のＰＡＲ１アンタゴニストは、ペプチド、ペプチド模倣物、小分子有機化合物、アプタマー、ペプデュシン（ｐｅｐｄｕｃｉｎ）、ポリヌクレオチド、または抗体でありうる。
【００２２】
本発明の一つの実施態様においては、ＰＡＲ１アンタゴニストの投与により、ＰＡＲ１シグナル伝達活性が阻害される。このような方法のうちの幾つかで用いられるＰＡＲ１アンタゴニストはペプチド模倣物であり、それは例えばＲＷＪ−５６１１０または（［α］Ｓ）−Ｗ−［（ｌＳ）−３−アミノ−１−［［｛フェニルメチル）アミノ］カルボニル］プロピル］−［α］−［［［［［１−（２，６−ジクロロフェニル）メチル］−３−（１−ピロリジニルメチル）−１Ｈ−インドール−６−イル］アミノ］カルボニル］アミノ］−３，４−ジフルオロベンゼンプロパンアミドである。
【００２３】
本発明のもう一つ別の実施態様では、ＰＡＲ１アンタゴニストは小分子有機化合物である。「有機小分子」という語は調合薬において一般的に用いられる有機分子に匹敵する大きさの分子を指す。この用語は、（例えばタンパク質、核酸等の）生物学的高分子には当てはまらない。有機小分子の大きさとして好ましい範囲は約５０００Ｄａまでであり、更に好ましいのは２０００Ｄａまで、そして最も好ましいのは約１０００Ｄａまでである。一つの好ましい実施態様において、ＰＡＲ１アンタゴニストは有機小分子ＳＣＨ−７９７９７であり、これは（Ｎ３−シクロプロピル−７−｛［４−（１−メチルエチル）フェニル］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［３，２−ｆ］キナゾリン−１，３−ジアミン）である。
【００２４】
本発明のもう一つ別の実施態様では、ＰＡＲ１アンタゴニストはアンタゴニストＰＡＲ１抗体または抗原結合分子である。本文中で用いる場合、他に規定がなければ、「抗体」という語はポリクローナル抗体とモノクローナル抗体の両方に加えて、そのような抗体の抗原への特異的な結合親和性を有する抗体断片も含み、そのような抗体断片にはＦｖ断片、Ｆａｂ断片、Ｆａｂ’断片、Ｆ（ａｂ）’２断片、および一本鎖（ｓＦｖ）の人工的な抗体分子があるが、それらに限るものではない。その用語には更に、明確に除外されているのでなければ、キメラ抗体とヒト化抗体を含み、更に、ヒト抗体を産生可能な環境にあればヒト抗体も含む。
【００２５】
このような抗ＰＡＲ１物質は、例えばＰＡＲ１介在性のインターロイキン分泌のような、ＰＡＲ１介在性のシグナル伝達活性に拮抗する能力を有するものである。モノクローナル抗体またはポリクローナル抗体を調製するための一般的な方法は、当技術分野において周知である。例えば、Ｈａｒｌｏｗ＆Ｌａｎｅ，Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９８；Ｋｏｈｌｅｒ＆Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５−４９７（１９７５）；Ｋｏｚｂｏｒ ｅｔ ａｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ ４：７２（１９８３）；およびＣｏｌｅ ｅｔ ａｌ．，ｐｐ．７７−９６ ｉｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，１９８５参照。
【００２６】
更に、特異的ＰＡＲ１アンタゴニスト抗体は、これまで既に当技術分野で開示されてきている。例えば、Ｒ．Ｒ．Ｖａｓｓａｌｌｏ，Ｊｒ．ｅｔ ａｌ．“Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−Ｆｕｎｃｔｉｏｎ Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ ｉｎ ｔｈｅ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｌａｔｅｌｅｔ Ｔｈｒｏｍｂｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｂｙ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ−Ｄｅｒｉｖｅｄ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，”Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７：６０８１−６０８５（１９９２）（“Ｖａｓｓａｌｌｏ，Ｊｒ．ｅｔ ａｌ．（１９９２”））；Ｌ．Ｆ．Ｂｒａｓｓ ｅｔ ａｌ．，“Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｈｕｍａｎ Ｐｌａｔｅｌｅｔ Ｔｈｒｏｍｂｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ，”Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７：１３７９５−１３７９８（１９９２）（“Ｂｒａｓｓ ｅｔ ａｌ．（１９９２）”）；そしてＲ．Ｋａｕｆｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，“Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ ｏｆ ＰＡＲ−ｌ−Ｔｙｐｅ Ｔｈｒｏｍｂｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｉｎ Ｒａｔ Ｇｌｉｏｍａ Ｃ６ Ｃｅｌｌｓ ｗｉｔｈ ａ Ｎｏｖｅｌ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉ−ＰＡＲ−１ Ａｎｔｉｂｏｄｙ （Ｍａｂ ＣＯＲ７−６Ｈ９），Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｙｔｏｌ．２７：６６１−６６６（１９９８）（“Ｋａｕｆｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．（１９９８）”参照）。両文献とも、ここで参照されることにより、本文中に一体的に組み入れられている。
【００２７】
Ｂｒａｓｓ ｅｔ ａｌ．（１９９２）において、モノクローナル抗体は、ヒトＰＡＲ１の残基４２〜５５に相当する免疫原ＳＦＬＬＲＮＰＮＤＫＹＥＰＦ（配列番号１）に対するものとして調製されたものである。このようなモノクローナル抗体は標準的な技術によって調製され、まず、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）に結合した免疫原ＳＦＬＬＲＮＰＮＤＫＹＥＰＦ（配列番号１）を用いてマウスの免疫化を行なうというものである。このようなモノクローナル抗体としては、以下のようなものがある。
（１）その免疫原の第一断片、具体的にはＳＦＬＬＲＮＰＮＤ（配列番号２）と結合する、Ｂｒａｓｓ ｅｔ ａｌ．（１９９２）においてＡＴＡＰ２と呼ばれるモノクローナル抗体、
（２）その免疫原の第二断片、具体的にはＮＰＮＤＫＹＥＰＦ（配列番号３）と結合する、Ｂｒａｓｓ ｅｔ ａｌ．（１９９２）においてＡＴＡＰ１２０と呼ばれるモノクローナル抗体、および同様にＮＰＮＤＫＹＥＰＦ（配列番号３）と結合する、Ｂｒａｓｓ ｅｔ ａｌ．においてＡＴＡＰ１３８と呼ばれるモノクローナル抗体。
【００２８】
更に加えて、本発明の組成物や方法で使用可能なモノクローナル抗体には、ＳＦＬＬＲＮＰＮＤ（配列番号２）またはＮＰＮＤＫＹＥＰＦ（配列番号３）のいずれかまたは両方に特異的に結合し、その結果、ＳＦＬＬＲＮＰＮＤ（配列番号２）またはＮＰＮＤＫＹＥＰＦ（配列番号３）のいずれかまたは両方への親和性が、抗原−抗体複合体の解離定数の逆数によって測定すると、ＡＴＡＰ２、ＡＴＡＰ２０、またはＡＴＡＰ１３８のいずれかと同様に少なくとも８０％となる、モノクローナル抗体が含まれる。
【００２９】
更に加えて、本発明の組成物や方法で使用可能なモノクローナル抗体には、ＡＴＡＰ２、ＡＴＡＰ２０、またはＡＴＡＰ１３８の相補性決定領域と同一の相補性決定領域を有するモノクローナル抗体が含まれる。更に加えて、本発明の組成物や方法で使用可能なモノクローナル抗体には、ＳＦＬＬＲＮＰＮＤ（配列番号２）もしくは（ＮＰＮＤＫＹＥＰＦ（配列番号３）のいずれかもしくは両方と特異的に結合する、上記のモノクローナル抗体と同一の相補性決定領域を有するモノクローナル抗体、または、上記のモノクローナル抗体と同一の相補性決定領域を有し、その結果、ＳＦＬＬＲＮＰＮＤ（配列番号２）もしくは（ＮＰＮＤＫＹＥＰＦ（配列番号３）のいずれかもしくは両方への親和性が、ＡＴＡＰ２、ＡＴＡＰ２０、もしくはＡＴＡＰ１３８のいずれかと同様に少なくとも８０％となる、モノクローナル抗体が含まれる。
【００３０】
Ｋａｕｆｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．（１９９８）に記載されたラットＰＡＲ１受容体に対するモノクローナル抗体は、配列ＧＲＡＶＹＬＮＫＳＲＦＰＰＭＰＰＰＰＦＩＳＥＤＡＳＧ（配列番号４）を有するペプチドを用いて調製されたものである。この配列は、受容体のトロンビン切断部位の下にあるものとして記載されている。類似の抗体を、ヒトＰＡＲ１受容体の対応領域に対して調製することができる。全体として、本発明の抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＤ１、ＩｇＥ１、ＩｇＭ１、またはＩｇＹ１など、どのようなクラスのものでもよいが、典型的に望ましいのはＩｇＧ抗体である。抗体は、ヒト、ネズミ科（マウスまたはラット）、ロバ、羊、山羊、ウサギ、ラクダ、馬、または鶏も含めた、どのような哺乳動物または鳥類のものでもよい。抗体を二重特異性のものにし得る場合もある。何らかのタイプの分子を抗体に共有結合的に付着させることによりその抗体を修飾することも可能である。限定する趣旨でなく例を挙げれば、抗体誘導体には、例えばグリコシル化、アセチル化、ペグ化、リン酸化、アミド化、既に知られている保護基／ブロック基による誘導体化、タンパク分解性切断、細胞リガンドもしくはその他のタンパク質への連結、または当技術分野で知られたその他の修飾により修飾された抗体が含まれる。モノクローナル抗体の調製には、ハイブリドーマ、組換え体、およびファージディスプレイ技術、またはそれらの組合せを含む、当技術分野で知られた様々な技術を用いることが可能である。
【００３１】
例えば、モノクローナル抗体は、当技術分野で知られており例えばＨａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ．，“Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ”，（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，２ｎｄ ｅｄ．１９８８）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇ，ｅｔ ａｌ．，ｉｎ：Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔ−ＣｅＩＩ Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ ５６３−６８１（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８１）で教示されているものを含むハイブリドーマ技術を用いて、または、当技術分野で知られた他の標準的な方法によって産生することができる。
【００３２】
「モノクローナル抗体」という語は、本文中で用いる場合、ハイブリドーマ技術を通じて産生される抗体に限らない。「モノクローナル抗体」という語は、一切の真核細胞性クローン、原核細胞性クローン、またはファージクローンを含む、単一クローンから派生する抗体を指し、その産生に用いる方法を言うのではない。例えば、好適な抗体を、ファージディスプレイまたはその他の技術を用いて産生することが可能である。
【００３３】
それに加えて、但し、限定する趣旨でなく、ヒト抗体は、ヒト免疫グロブリン配列から誘導された抗体ライブラリーを用いるファージディスプレイ法を含む様々な技術によって、および機能的内因性免疫グロブリンを発現する能力はないがヒト免疫グロブリン遺伝子を発現することはできるトランスジェニックマウスを用いることによって作製することができる。例えば、ヒト重鎖および軽鎖免疫グロブリン遺伝子複合体を無作為に、または相同組換えにより、マウスの胚性幹細胞に導入することができる。抗体は、このような抗体をコードするポリヌクレオチドの発現により産生することもできる。
【００３４】
更に加えて、本発明の抗体を、例えば精製を促進するためのペプチドタグのようなマーカー配列に融合させることができる。適切なタグはヘキサヒスチジンタグである。抗体を、当技術分野で知られた方法により、診断薬や治療薬にコンジュゲートすることもできる。そのようなコンジュゲートを調製する技術は、当技術分野において周知である。
【００３５】
このようなモノクローナル抗体、ならびにキメラ抗体、ヒト化抗体、および一本鎖抗体を調製する他の方法は、当技術分野で知られている。
【００３６】
ＰＡＲ１の生化学活性もしくはシグナル伝達活性を阻害また抑制する化合物だけではなく、ＰＡＲ１発現を抑制し得る、またはＰＡＲ１細胞レベルの下方調節を行なうことのできる化合物も、本発明を実施する際に使用可能である。ＰＡＲ１発現の抑制またはその細胞レベルの下方調節とは、対照細胞（ＰＡＲ１アンタゴニスト化合物を用いた治療を受けなかった細胞）との比較で、検査対象となった細胞（ＰＡＲ１アンタゴニスト化合物に接触させられた細胞）においてＰＡＲ１発現が減少するか、あるいはなくなることを言う。ＰＡＲ１のレベルや発現は、対照細胞でのＰＡＲ１のレベルや発現に比べて、少なくとも約１０％（例えば２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、または９０％）減少または低下させることが可能である。
【００３７】
以上に示したように、発現の抑制またはＰＡＲ１細胞レベルの下方調節は、ＰＡＲ１の遺伝子をｍＲＮＡに転写するレベル、またはＰＡＲ１のｍＲＮＡを対応するタンパク質に翻訳するレベルのいずれかで行なうことができる。
【００３８】
実施態様によっては、阻害性のヌクレオチドを用いて、ＰＡＲ１介在性の心臓リモデリングに対してまたはＰＡＲ１発現を抑制することによるＰＡＲ１のその他の効果に対して拮抗させることもある。これらの例として挙げられるのは、低分子干渉性ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、および合成ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、アンチセンス核酸または相補ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）である。好ましい実施態様には、ＰＡＲ１発現を標的化するｓｉＲＮＡを用いるものもある。ｓｉＲＮＡのような二本鎖ＲＮＡによる内因性遺伝子の機能および発現への干渉が、これまで様々な生物において示されている。例えば、Ａ．Ｆｉｒｅ ｅｔ ａｌ．，“Ｐｏｔｅｎｔ ａｎｄ Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ ｂｙ Ｄｏｕｂｌｅ−Ｓｔｒａｎｄｅｄ ＲＮＡ ｉｎ Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ ｅｌｅｇａｎｓ”Ｎａｔｕｒｅ ３９１：８０６−８１１（１９９８）；Ｊ．Ｒ．Ｋｅｎｎｅｒｄｅｌｌ＆Ｒ．Ｗ．Ｃａｒｔｈｅｗ，“Ｕｓｅ ｏｆ ｄｓＤＮＡ−Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ ｔｏ Ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅ ｔｈａｔ ｆｒｉｚｚｌｅｄ ａｎｄ ｆｒｉｚｚｌｅｄ ２ Ａｃｔ ｉｎ ｔｈｅ Ｗｉｎｇｌｅｓｓ Ｐａｔｈｗａｙ，”ＣｅＪ ９５：１０１７−１０２６（１９９８）；Ｆ．Ｗｉａｎｎｉ＆Ｍ．Ｚｅｒｎｉｃｋａ−Ｇｏｅｔｚ，“Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ ｗｉｔｈ Ｇｅｎｅ Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｂｙ Ｄｏｕｂｌｅ−Ｓｔｒａｎｄｅｄ ＲＮＡ ｉｎ Ｅａｒｌｙ Ｍｏｕｓｅ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，”Ｎａｔ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．２：７０−７５（２０００）参照。ｓｉＲＮＡには、自己相補配列または二本鎖配列を包含するヘアピンループが含まれる。ｓｉＲＮＡは、塩基対が１００対よりも少ないのが一般的で、例えば約３０ｂｐ以下の長さしかないこともあり得、相補的ＤＮＡ鎖の使用または合成アプローチを含む、当技術分野で知られたアプローチにより作製され得る。そのような二本鎖ＲＮＡの合成は、鋳型の両方向からの一本鎖ＲＮＡ読み取りのインビトロでの転写と、センスおよびアンチセンスＲＮＡ鎖のインビトロでのアニーリングとにより可能である。ＰＡＲ１を標的化する二本鎖ＲＮＡはまた、逆反復配列により分離された反対の向きでクローニングされているＰＡＲ１遺伝子（例えばヒトＰＡＲ１遺伝子）を有する、ｃＤＮＡベクター構築物からも合成可能である。細胞のトランスフェクションに続き、ＲＮＡの転写が行なわれ、相補鎖が再アニーリングされる。ＰＡＲ１遺伝子を標的化する二本鎖ＲＮＡは、適切な構築物のトランスフェクションにより、細胞（例えば腫瘍細胞）に導入可能である。
【００３９】
一般的には、ｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、またはｓｈＲＮＡが媒介するＲＮＡ干渉は、翻訳のレベルで媒介されるのであって、言い換えれば、このような干渉ＲＮＡ分子は、対応するｍＲＮＡ分子の翻訳を妨げ、ひいては、その分解を導くものである。他の可能性として、ＲＮＡ干渉が転写のレベルでも働いて、このような干渉ＲＮＡ分子に対応するゲノムの領域の転写をブロックすることもあり得る。
【００４０】
このような干渉ＲＮＡ分子の構造及び機能は当技術分野において周知であり、例えば、引用することで本文中に一体化して組み込まれている、Ｒ．Ｆ．Ｇｅｓｔｅｌａｎｄ ｅｔ ａｌ．，ｅｄｓ，“Ｔｈｅ ＲＮＡ Ｗｏｒｌｄ”（３ｒｄ ｅｄ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，２００６），ｐｐ．５３５−５６５に記載されている。［０１１０］このようなアプローチでは、ベクターの内部へのクローニングやトランスフェクション法もまた当技術分野において周知であり、例えば、引用することで本文中に一体化して組み込まれている、Ｊ．Ｓａｍｂｒｏｏｋ＆Ｄ．Ｒ．Ｒｕｓｓｅｌｌ，“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ”（３ｒｄ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，２００１）に記載されている。
【００４１】
二本鎖ＲＮＡの他にも、例えばアンチセンス核酸のような、ＰＡＲ１を標的化する他の核酸物質もまた、本発明の実施に際して使用可能である。アンチセンス核酸は、特異的な標的をもつｍＲＮＡ分子の少なくとも一つの部分に相補的なＤＮＡまたはＲＮＡ分子である。細胞内で、一本鎖アンチセンス分子がｍＲＮＡにハイブリダイズして、二本鎖分子を形成することになる。細胞は、ｍＲＮＡをこのような二本鎖の形に翻訳しない。それゆえ、アンチセンス核酸は、ｍＲＮＡをタンパク質に翻訳することに干渉し、また、そのことで、そのｍＲＮＡに転写された遺伝子の発現に干渉する。アンチセンス方法は、インビトロで多くの遺伝子の発現を阻害するために用いられてきている。例えば、ＣＪ．Ｍａｒｃｕｓ−Ｓｅｋｕｒａ，“Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ｆｏｒ Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙ ｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ｔｏ Ｓｔｕｄｙ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，”Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１７２：２８９−２９５（１９８８）；Ｊ．Ｅ．Ｈａｍｂｏｒ ｅｔ ａｌ．，“Ｕｓｅ ｏｆ ａｎ Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒ Ｖｉｒｕｓ Ｅｐｉｓｏｍａｌ Ｒｅｐｌｉｃｏｎ ｆｏｒ Ａｎｔｉ−Ｓｅｎｓｅ ＲＮＡ−Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｇｅｎｅ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｉｎ ａ Ｈｕｍａｎ Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ Ｔ−Ｃｅｌｌ Ｃｌｏｎｅ，”Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５：４０１０−４０１４（１９８８）；Ｈ Ａｒｉｍａ ｅｔ ａｌ．，“Ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｌｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１０ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ Ｍｕｒｉｎｅ Ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ−Ｌｉｋｅ Ｃｅｌｌｓ ｂｙ Ｐｈｏｓｐｈｏｒｏｔｈｉｏａｔｅ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，”Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖ．８：３１９−３２７（１９９８）；そしてＷ．−Ｆ．Ｈｏｕ ｅｔ ａｌ．，“Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｏｌｉｇｏｄｅｏｘｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ Ｄｉｒｅｃｔｅｄ ｔｏ Ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ Ｃａｌｍｏｄｕｌｉｎ Ｇｅｎｅ Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｓ ｏｎ ｔｈｅ Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ＰＣ１２ Ｃｅｌｌｓ，”Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖ．８：２９５−３０８（１９９８）参照。これらの文献全てが、このように引用することで本文中に一体化して組み込まれている。アンチセンス技術はまた、引用することで本文中に一体化して組み込まれている、Ｃ．Ｌｉｃｈｔｅｎｓｔｅｉｎ＆Ｗ．Ｎｅｌｌｅｎ，ｅｄｓ．，“Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ”（ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，１９９７）にも記載されている。［０１１１］ヒトおよびその他多くの哺乳動物のＰＡＲ１ポリヌクレオチド配列は全て、当技術分野で記述されてきている。例えば、ヒトＰＡＲ１のｃＤＮＡ配列（ＮＭ＿００１９９２）は、引用することで本文中に一体化して組み込まれている、Ｔ．−Ｋ．Ｈ．Ｖｕ ｅｔ ａｌ．，“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ ｏｆ ａ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｔｈｒｏｍｂｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｒｅｖｅａｌｓ ａ Ｎｏｖｅｌ Ｐｒｏｔｅｏｌｙｔｉｃ Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，”ＣｅＪ ６４：１０５７−１０６８（１９９１）において報告されている。既に知られている配列に基づき、ＰＡＲ１を標的化する阻害性のヌクレオチド（例えばｓｉＲＮＡ、ｍｉＲＮＡ、またはｓｈＲＮＡ）を、当技術分野において周知の方法を用いて容易に合成することができる。
【００４２】
本発明の典型的なｓｉＲＮＡは、最大２９ｂｐ、２５ｂｐ、２２ｂｐ、２１ｂｐ、２０ｂｐ、１５ｂｐ、１０ｂｐ、５ｂｐ、またはこれらの数の間のあらゆる整数の塩基対を有し得る。最適な阻害性のｓｉＲＮＡを設計するためのツールには、ＤＮＡｅｎｇｉｎｅ Ｉｎｃ．（Ｓｅａｔｔｌｅ、ＷＡ）やＡｍｂｉｏｎ，Ｉｎｃ．（Ａｕｓｔｉｎ、ＴＸ）から購入可能なものが含まれる。特異的なＰＡＲ１阻害性ヌクレオチドや、ＰＡＲ１発現の下方調節におけるそれらの使用も、当技術分野、例えばＱ．Ｆａｎｇ ｅｔ ａｌ．，“Ｔｈｒｏｍｂｉｎ Ｉｎｄｕｃｅｓ Ｃｏｌｌａｇｅｎ Ｇｅｌ Ｃｏｎｔｒａｃｔｉｏｎ Ｐａｒｔｉａｌｌｙ Ｔｈｒｏｕｇｈ ＰＡＲＩ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ａｎｄ ＰＫＣ−［ｅｐｓｉｌｏｎ］，”Ｅｕｒ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｊ．２４：９１８−９２４（２００４）；およびＹ．−Ｊ．Ｙｉｎ ｅｔ ａｌ．，“Ｍａｍｍａｒｙ Ｇｌａｎｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｔａｒｇｅｔｅｄ Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｈｕｍａｎ Ｐｒｏｔｅａｓｅ−Ａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ １ Ｒｅｖｅａｌｓ ａ Ｎｏｖｅｌ Ｌｉｎｋ ｔｏ［ｂｅｔａ］−Ｃａｔｅｎｉｎ Ｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ，”Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６６：５２２４−５２３３（２００６）で開示されてきており、両方とも、このように引用することで本文中に一体化して組み込まれている。
【００４３】
本発明で検討の対象となるその他の典型的なＰＡＲ１アンタゴニストは、以下の文献に記載されているが、これに限定されるものではない。
−文献全体が、引用により、本文中に一体化して組み込まれており、具体的には、トロンビン受容体アンタゴニストとして機能する化合物の教示が、引用することで、本文中に一体化して組み込まれている（例えば、第二欄、３１行目から第三欄の終わりまでとＥｘａｍｐｌｅ１から１０参照）、米国特許第６，０１７，８９０号明細書（Ｈｏｅｋｓｔｒａ ｅｔ ａｌ．：“Ａｚｏｌｅ Ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃｓ ａｓ Ｔｈｒｏｍｂｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ”）。
−文献全体が、引用により、本文中に一体化して組み込まれており、具体的には、トロンビン受容体アンタゴニストとして機能する化合物の教示が、引用することで、本文中に一体化して組み込まれている（例えば要約と特許請求の範囲参照）、米国特許第５，４４６，１３１号明細書（Ｍａｒａｇａｎｏｒｅに付与されたもの：“Ｔｈｒｏｍｂｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ”）。
−文献全体が、引用により、本文中に一体化して組み込まれており、具体的には、トロンビン受容体アンタゴニストとして機能する化合物の教示が、引用することで、本文中に一体化して組み込まれている（例えば要約、特許請求の範囲、およびＥｘａｍｐｌｅ１から１６参照）、米国特許第５，８６６，６８１号明細書（Ｓｃａｒｂｏｒｏｕｇｈに付与されたもの：“Ｔｈｒｏｍｂｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ”）。
−文献全体が、引用により、本文中に一体化して組み込まれており、具体的には、トロンビン受容体アンタゴニストとして機能する化合物の教示が、引用することで、本文中に一体化して組み込まれている（例えばＥｘａｍｐｌｅ５及び６と特許請求の範囲参照）、米国特許第５，７５９，９９４号明細書（Ｃｏｕｇｈｌｉｎに付与されたもの：“Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｔｈｒｏｍｂｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｎｄ Ｒｅｌａｔｅｄ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ”）。
−文献全体が、引用により、本文中に一体化して組み込まれており、具体的には、トロンビン受容体アンタゴニストとして機能する化合物の教示が、引用することで、本文中に一体化して組み込まれている（例えばＥｘａｍｐｌｅ５及び６と特許請求の範囲参照）、米国特許第５，７９８，２４８号明細書（Ｃｏｕｇｈｌｉｎに付与されたもの： “Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｔｈｒｏｍｂｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｎｄ Ｒｅｌａｔｅｄ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ”）。
−文献全体が、引用により、本文中に一体化して組み込まれており、具体的には、トロンビン受容体アンタゴニストとして機能する化合物の教示が、引用することで、本文中に一体化して組み込まれている（例えばＴａｂｌｅ１から８参照）、Ｂｅｒｎａｔｏｗｉｃｚ ｅｔ ａｌ．（“Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ Ｐｏｔｅｎｔ Ｔｈｒｏｍｂｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ．”Ｊ．Ｍｅｃｌ．Ｃｈｅｍ．３９：４８７９−４８８７，１９９６）。
−文献全体が、引用により、本文中に一体化して組み込まれており、具体的には、トロンビン受容体アンタゴニストとして機能する化合物の教示が、引用することで、本文中に一体化して組み込まれている（例えばＴａｂｌｅＩ参照）、Ｖａｓｓａｌｌｏ ｅｔ ａｌ．（“Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−Ｆｕｎｃｔｉｏｎ Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ ｉｎ ｔｈｅ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｌａｔｅｌｅｔ Ｔｈｒｏｍｂｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｂｙ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ−Ｄｅｒｉｖｅｄ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ．”Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７：６０８１−６０８５，１９９２）。
−文献全体が、引用により、本文中に一体化して組み込まれており、具体的には、トロンビン受容体アンタゴニストとして機能する化合物の教示が、引用することで、本文中に一体化して組み込まれている（例えばＦｉｇ．１参照）、Ａｎｄｒａｄｅ−Ｇｏｒｄｏｎ ｅｔ ａｌ．（“Ｄｅｓｉｇｎ，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ Ｐｅｐｔｉｄｅ−Ｍｉｍｅｔｉｃ Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ ｆｏｒ ａ Ｔｅｔｈｅｒｅｄ−Ｌｉｇａｎｄ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ．”Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９６：１２２５７−１２２６２，１９９９）。
−文献全体が、引用により、本文中に一体化して組み込まれており、具体的には、トロンビン受容体アンタゴニストとして機能する化合物の教示が、引用することで、本文中に一体化して組み込まれている（例えばＴａｂｌｅ１および２参照）、Ｈｏｅｋｓｔｒａ ｅｔ ａｌ．（“Ｔｈｒｏｍｂｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＰＡＲ−１）Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ．Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅ−Ｂａｓｅｄ Ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃｓ ｏｆ ｔｈｅ ＳＦＬＬＲ Ａｇｏｎｉｓｔ Ｍｏｔｉｆ．”Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．８：１６４９−１６５４，１９９８）。
−文献全体が、引用により、本文中に一体化して組み込まれており、具体的には、トロンビン受容体アンタゴニストとして機能する化合物の教示が、引用することで、本文中に一体化して組み込まれている（例えばＦｉｇ．１参照）、Ｋａｔｏ ｅｔ ａｌ．（“ｉｎ ｖｉｔｒｏ Ａｎｔｉｐｌａｔｅｌｅｔ Ｐｒｏｆｉｌｅ ｏｆ ＦＲ１７１１１３，ａ Ｎｏｖｅｌ Ｎｏｎ−Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｔｈｒｏｍｂｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ．”Ｅｕｒｏ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３８４：１９７−２０２，１９９９）。
−文献全体が、引用により、本文中に一体化して組み込まれており、具体的には、トロンビン受容体アンタゴニストとして機能する化合物の教示が、引用することで、本文中に一体化して組み込まれている（例えば要約およびＦｉｇ．１参照）、Ｒｕｄａ ｅｔ ａｌ．（“Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｍａｌｌ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ａｎａｌｏｇｕｅｓ Ｈａｖｉｎｇ Ａｇｏｎｉｓｔ ａｎｄ Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｔ ｔｈｅ Ｐｌａｔｅｌｅｔ Ｔｈｒｏｍｂｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ．”Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３７：２４１７−２４２６，１９８８）。
−文献全体が、引用により、本文中に一体化して組み込まれており、具体的には、トロンビン受容体アンタゴニストとして機能する化合物の教示が、引用することで、本文中に一体化して組み込まれている（例えばＴａｂｌｅ２参照）、Ｒｕｄａ ｅｔ ａｌ．（“Ｔｈｒｏｍｂｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｐｌａｔｅｌｅｔ Ｔｈｒｏｍｂｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｎｄ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｎ Ｐｒｏｓｔａｃｙｃｌｉｎ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｂｙ Ｈｕｍａｎ Ｕｍｂｉｌｉｃａｌ Ｖｅｉｎ Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ Ｃｅｌｌｓ．”Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３９：３７３−３８１，１９９０）。
−文献全体が、引用により、本文中に一体化して組み込まれており、具体的には、トロンビン受容体アンタゴニストとして機能する化合物の教示が、引用することで、本文中に一体化して組み込まれている（例えば１５９２８ページ左欄の要約参照）、Ｈａｒｍｏｎ ａｎｄ Ｊａｍｉｅｓｏｎ（“Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｌａｔｅｌｅｔｓ ｂｙ Ａｌｐｈａ−Ｔｈｒｏｍｂｉｎ ｉｓ ａ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ−Ｍｅｄｉａｔｅｄ Ｅｖｅｎｔ．”Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６１：１５９２８−１５９３３，１９８６）。
−文献全体が、引用により、本文中に一体化して組み込まれており、具体的には、トロンビン受容体アンタゴニストとして機能する化合物の教示が、引用することで、本文中に一体化して組み込まれている（例えばＦｉｇ．３参照）、Ｄｏｏｒｂａｒ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ（“Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ ａ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ ｔｏ ｔｈｅ Ｔｈｒｏｍｂｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｕｓｉｎｇ Ｐｈａｇｅ Ｄｉｓｐｌａｙ．”Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４４：３６１３６９，１９９４）。
−文献全体が、引用により、本文中に一体化して組み込まれており、具体的には、トロンビン受容体アンタゴニストとして機能する化合物の教示が、引用することで、本文中に一体化して組み込まれている（例えばＴａｂｌｅ１および２参照）、Ａｈｎ ｅｔ ａｌ．（“Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ ｏｆ Ｐｙｒｒｏｌｏｑｕｉｎａｚｏｌｉｎｅｓ ａｓ Ｔｈｒｏｍｂｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ．”Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．９：２０７３−２０７８，１９９９）。
−文献全体が、引用により、本文中に一体化して組み込まれており、具体的には、トロンビン受容体アンタゴニストとして機能する化合物の教示が、引用することで、本文中に一体化して組み込まれている（例えば要約参照）、Ｓｅｉｌｅｒ ｅｔ ａｌ．（“Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｈｒｏｍｂｉｎ ａｎｄ ＳＦＬＬＲ−Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｌａｔｅｌｅｔ Ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ，Ｐｈｏｓｐｈｌｉｐａｓｅ Ａ２ ａｎｄ Ｎａ＋／Ｈ＋ Ｅｘｃｈａｎｇｅ ｂｙ ａ Ｔｈｒｏｍｂｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ．”Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４９：５１９−５２８，１９９５）。
−文献全体が、引用により、本文中に一体化して組み込まれており、具体的には、トロンビン受容体アンタゴニストとして機能する化合物の教示が、引用することで、本文中に一体化して組み込まれている（例えばＴａｂｌｅ１参照）、Ｅｌｌｉｏｔ ｅｔ ａｌ．（“Ｐｈｏｔｏａｃｔｉｖａｔａｂｌｅ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ Ｂａｓｅｄ ｏｎ ＢＭＳ−１９７５２５：Ａ Ｐｏｔｅｎｔ Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ ｏｆ ｔｈｅ Ｈｕｍａｎ Ｔｈｒｏｍｂｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＰＡＲ−１）．”Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．９：２７９−２８４，１９９９）。
−文献全体が、引用により、本文中に一体化して組み込まれており、具体的には、トロンビン受容体アンタゴニストとして機能する化合物の教示が、引用することで、本文中に一体化して組み込まれている（例えば要約参照）、Ｆｕｊｉｔａ ｅｔ ａｌ．（“Ａ Ｎｏｖｅｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｓｉｇｎ ｏｆ Ｔｈｒｏｍｂｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ．”Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．９：１３５１−１３５６，１９９９）。
−文献全体が、引用により、本文中に一体化して組み込まれており、具体的には、トロンビン受容体アンタゴニストとして機能する化合物の教示が、引用することで、本文中に一体化して組み込まれている（例えば要約参照）、Ｄｅｂｅｉｒ ｅｔ ａｌ．（“Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐｒｏｔｅａｓｅ−Ａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＰＡＲ−１）ｉｎ Ｒａｔ Ａｓｔｒｏｃｙｔｅｓ．”Ｅｕｒｏ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３２３：１１１−１１７，１９９７）。
−文献全体が、引用により、本文中に一体化して組み込まれており、具体的には、トロンビン受容体アンタゴニストとして機能する化合物の教示が、引用することで、本文中に一体化して組み込まれている（例えばＦｉｇ．５およびＴａｂｌｅ１参照）、Ａｈｎ ｅｔ ａｌ．（“Ｂｉｎｄｉｎｇ ｏｆ ａ Ｔｈｒｏｍｂｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ Ｔｅｔｈｅｒｅｄ Ｌｉｇａｎｄ Ａｎａｌｏｇｕｅ ｔｏ Ｈｕｍａｎ Ｐｌａｔｅｌｅｔ Ｔｈｒｏｍｂｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ．”Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５１：３５０３５６，１９９７）。
−文献全体が、引用により、本文中に一体化して組み込まれており、具体的には、トロンビン受容体アンタゴニストとして機能する化合物の教示が、引用することで、本文中に一体化して組み込まれている（例えばＴａｂｌｅ：Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｄｅｔａ参照）、ＭｃＣｏｍｓｅｙ ｅｔ ａｌ．（“Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｅ−ｐｅｐｔｉｄｅ ｈｙｂｒｉｄ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ．Ａｍｉｎｏｔｒｉａｚｏｌｅ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ａｇｏｎｉｓｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｔｈｒｏｍｂｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＰＡＲ−１）．”Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ ９：１４２３−１４２８，１９９９）。
−文献全体が、引用により、本文中に一体化して組み込まれており、具体的には、トロンビン受容体アンタゴニストとして機能する化合物の教示が、引用することで、本文中に一体化して組み込まれている（例えばＴａｂｌｅ１、Ｔａｂｌｅ２、Ｔａｂｌｅ３参照）、Ｎａｎｔｅｒｍｅｔ ｅｔ ａｌ．（“Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ｏｆ ａ ｓｍａｌｌ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ ｏｆ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｐｌａｔｅｌｅｔ ｔｈｒｏｍｂｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＰＡＲ−１）．”Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ １２：３１９−３２３，２００２）。
−文献全体が、引用により、本文中に一体化して組み込まれており、具体的には、トロンビン受容体アンタゴニストとして機能する化合物の教示が、引用することで、本文中に一体化して組み込まれている（例えばＴａｂｌｅ１から５参照）、Ｂａｒｒｏｗ ｅｔ ａｌ．（“Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ａｎｄ ｉｎｉｔｉａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−ａｃｔｉｖｉｔｙ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ ｏｆ ｔｒｉｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ ｕｒｅａｓ ａｓ ｔｈｒｏｍｂｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＰＡＲ−１）ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ．”Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ １１：２６９１−２６９６，２００１）。
−文献全体が、引用により、本文中に一体化して組み込まれており、具体的には、トロンビン受容体アンタゴニストとして機能する化合物の教示が、引用することで、本文中に一体化して組み込まれている（例えばＦｉｇ．１参照）、Ａｈｎ ｅｔ ａｌ．（“Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｒｏｍｂｉｎ ｂｙ Ｎ３−ｃｙｃｌｏｐｒｏｐｙｌ−７［［４−（１−ｍｅｔｈｙｌｅｔｈｙｌ）ｐｈｅｎｙｌ］ｍｅｔｈｙｌ］−７Ｈ−ｐｙｒｒｏｌｅ［３，２ｆ］ｑｕｉｎａｚｏｌｉｎｅｌ，３−ｄｉａｍｉｎｅ（ＳＣＨ７９７９７），ａ ｎｏｎ−ｐｅｐｔｉｄｅ ｔｈｒｏｍｂｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ．”Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ６０：１４２５−１４３４，２０００）。
−文献全体が、引用により、本文中に一体化して組み込まれており、具体的には、トロンビン受容体アンタゴニストとして機能する化合物の教示が、引用することで、本文中に一体化して組み込まれている、Ｃｈａｃｋａｌａｍａｎｎｉｌ（“Ｔｈｒｏｍｂｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ ａｓ ｎｏｖｅｌ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｔａｒｇｅｔｓ．”Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ４：４１７−４２７，２００１）。
−文献全体が、引用により、本文中に一体化して組み込まれており、具体的には、トロンビン受容体アンタゴニストとして機能する化合物の教示が、引用することで、本文中に一体化して組み込まれている（例えばＦｉｇ１参照）、Ｓｔｅａｄ ｅｔ ａｌ．（“Ｅｒｙｌｏｓｉｄｅ Ｆ，ａ ｎｏｖｅｌ ｐｅｎａｓｔｅｒｏｌ ｄｉｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｐｏｓｓｅｓｓｉｎｇ ｐｏｔｅｎｔ ｔｈｒｏｍｂｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ ａｃｔｉｖｉｔｙ．”Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｃｌ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．１０：６６１−６６４，２０００）。
−文献全体が、引用により、本文中に一体化して組み込まれており、具体的には、トロンビン受容体アンタゴニストとして機能する化合物の教示が、引用することで、本文中に一体化して組み込まれている（例えばＦｉｇ．１および２参照）、Ｐａｋａｌａ ｅｔ ａｌ．（“Ａ ｐｅｐｔｉｄｅ ａｎａｌｏｇｕｅ ｏｆ ｔｈｒｏｍｂｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ｐｅｐｔｉｄｅ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｔｈｒｏｍｂｉｎ ａｎｄ ｔｈｒｏｍｂｉｎ−ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ｐｅｐｔｉｄｅ ｉｎｄｕｃｅｄ ｖａｓｃｕｌａｒ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ．”J．Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３７：６１９−６２９，２００１）。
−文献全体が、引用により、本文中に一体化して組み込まれており、具体的には、トロンビン受容体アンタゴニストとして機能する化合物の教示が、引用することで、本文中に一体化して組み込まれている、Ｚｈａｎｇ ｅｔ ａｌ．（“Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ ａｎｄ ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｎｏｖｅｌ ｓｅｒｉｅｓ ｏｆ ｔｈｒｏｍｂｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ（ＰＡＲ−１）ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ：ｐｏｔｅｎｔ，ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｐｅｐｔｉｄｅ ｍｉｍｅｔｉｃｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｉｎｄｏｌｅ ａｎｄ ｉｎｄａｚｏｌｅ ｔｅｍｐｌａｔｅｓ．”Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４４：１０２１−１０２４，２００１）。
【００４４】
本発明の更にもう一つの目的は、Ａ型インフルエンザウイルス感染症の治療または予防用のＰＡＲ１アンタゴニストをスクリーニングするための方法に関するものである。例えば、スクリーニング法は、ある候補化合物のＰＡＲ１への結合、またはＰＡＲ１を有する細胞もしくは膜への結合、あるいはその融合タンパク質を、その候補化合物と直接または間接的に関連づけられた標識を用いて測定することができる。更に、スクリーニング法は、前記候補化合物のＰＡＲ１を不活性化する能力を測定すること、または質的もしくは量的に検出することを伴い得る。
【００４５】
一つの特定の実施態様において、本発明のスクリーニング法は、
ａ）表面にＰＡＲ１を発現する複数の細胞を用意すること、
ｂ）前記細胞を候補化合物とともにインキュベートすること、
ｃ）前記候補化合物がＰＡＲ１と結合しそれを不活性化するかどうかを決定すること、および
ｄ）ＰＡＲ１と結合しそれを不活性化する候補化合物を選択すること
からなるステップを包含する。
【００４６】
一つの特定の実施態様においては、本発明のスクリーニング法は、ステップｄ）で選択された候補化合物を、Ａ型インフルエンザウイルス感染症のモデル動物に投与して、前記候補化合物の防御効果を実証することからなるステップを包含してもよい。
【００４７】
一般に、そのようなスクリーニング法では、表面にＰＡＲ１を発現する適切な細胞を用意する。特に、ＰＡＲ１をコードする核酸を細胞のトランスフェクションに用いて、本発明の受容体を発現するようにしてもよい。そのようなトランスフェクションは、当技術分野において周知の方法によって成し遂げることができる。一つの特定の実施態様において、前記細胞を、これまでにＰＡＲ１を発現したことが報告されている哺乳動物細胞（例えば上皮細胞）からなる群から選択してもよい。
【００４８】
本発明のスクリーニング法は、そのような細胞とスクリーニング対象の化合物とを接触させて、そのような化合物がＰＡＲ１を不活性化するかどうかを決定することにより、ＰＡＲ１アンタゴニストを決定するために用いてもよい。
【００４９】
本発明の一つの実施態様では、候補化合物を、事前に合成された化合物のライブラリーから、またはデータベースにおいて構造が決定された化合物のライブラリーから、またはデノボ合成された化合物もしくは天然化合物のライブラリーから選択してもよい。候補化合物を、（ａ）タンパク質またはペプチド、（ｂ）核酸、および（ｃ）（天然かどうかに関わらず）有機化合物または化学的化合物の群から選択してもよい。
【００５０】
候補化合物を用いたＰＡＲ１不活性化は、当業者の知る様々な方法で試験することができる。
【００５１】
本発明のもう一つの目的は、そのような処置を必要とする患者にＰＡＲ１アンタゴニストを投与することを含む、Ａ型インフルエンザウイルス感染症を治療または予防する方法に関する。
【００５２】
本文中で用いる場合、「患者」という語は、豚や霊長類のような哺乳動物を指す。好ましくは、本発明に従った患者はヒトである。
【００５３】
ＰＡＲ１アンタゴニストは、以下に規定するような医薬組成物の形で投与してよい。
【００５４】
好ましくは、本発明のＰＡＲ１アンタゴニストは、治療有効量で投与される。「治療有効量」は、どのような医療行為にも適用可能な合理的なリスク対効果比でＡ型インフルエンザウイルス感染症を治療または予防するために十分な量の本発明のＰＡＲ１アンタゴニストを意味する。
【００５５】
本発明の化合物および組成物の毎日の使用量の合計は、担当医師が妥当な医療判断の範囲で決定することになることが理解されよう。いずれかの特定の患者に対する具体的な治療有効量は、治療対象となる障害およびその障害の重症度、使用される特定の化合物の活性、使用される特定の組成物の活性、患者の年齢、体重、全般的な健康状態、性別、および食事、投与の時間、投与の経路、および使用される特定の化合物の排出率、治療期間、使用する特定のポリペプチドと組み合わされるかまたは同時に用いられる薬剤、ならびに医療分野で周知の同様の要素も含む、様々な要素に左右される。例えば、化合物の用量を、望ましい治療効果を達成するために必要な量よりも低いレベルで始めて、その望ましい効果が達成されるまで次第に投与量を増やしていくことは、当業者の間では周知である。
【００５６】
しかしながら、薬剤の毎日の投与量は、大人一人当たりで一日当たり０．０１から１０００ｍｇまで大幅に変化することがある。好ましくは、治療対象の患者への投与量を症状に応じて調節するために、組成物に含まれる活性成分は、０．０１、０．０５、０．１、０．５、１．０、２．５、５．０、１０．０、１５．０、２５．０、５０．０、１００、２５０、および５００ｍｇである。医薬品に含まれる活性成分は、約０．０１ｍｇから約５００ｍｇまでが一般的で、１ｍｇから約１００ｍｇの活性成分が含まれていることが望ましい。薬剤の有効量は、通常、一日当たり体重１キログラムにつき、０．０００２ｍｇから約２０ｍｇの投与量レベルで与えられ、特に、一日当たり体重１キログラムにつき、約０．００１ｍｇから７ｍｇの投与量レベルで与えられる。
【００５７】
ＰＡＲ１アンタゴニストは、薬学上許容される賦形剤と併用可能であり、任意で、例えば生物分解性のポリマーのような、持続放出基材と併用して、治療用組成物を形成してもよい。
【００５８】
「薬学的に」または「薬学上許容される」は、適宜、哺乳動物、特にヒトに投与する際に、副作用、アレルギー反応、またはその他の不都合な反応を生じさせない分子のまとまりや組成物を言う。薬学上許容される担体または賦形剤は、毒性のない、固体、半固体または液状の充填剤、希釈剤、カプセル材、またはあらゆるタイプの製剤補助剤を言う。
【００５９】
本発明の医薬組成物においては、活性成分は、単独で用いるにせよ、他の活性成分と組み合わせて用いるにせよ、従来の薬学的支持体との混合物として、単位投与の形態で動物や人間に投与することが可能である。単位投与の形態として適切ものとして挙げられるのは、錠剤、ゲルカプセル、粉末、顆粒、および内用懸濁液または内用溶液のような経口投与形態、舌下投与形態および口腔内投与形態、エアロゾル、インプラント、皮下投与形態、経皮投与形態、局所投与形態、腹腔内投与形態、筋肉内投与形態、静脈内投与形態、皮下投与形態、経皮投与形態、髄腔内投与形態、および鼻腔内投与形態、ならびに直腸投与形態である。本発明の医薬組成物は好ましくは鼻腔内投与形態で投与されるのが望ましい。
【００６０】
医薬組成物に含まれる媒体は、注射可能な製剤に薬学上許容されるものであることが望ましい。これらは特に、等張溶液、無菌溶液、生理食塩水（リン酸１ナトリウムもしくはリン酸２ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、もしくは塩化マグネシウム等、またはこのような塩の混合物）、または、場合により滅菌水または生理食塩水を加えれば注射可能な溶液を構成することができる、乾燥組成物、特に凍結乾燥組成物であり得る。
【００６１】
注射用の薬学的形態として挙げられるのは、無菌の水溶液または分散液；胡麻油、ピーナツ油、または水性プロピレングリコールを含む製剤；および無菌の注射溶液または注射分散液を即席で調製するための無菌粉末である。いずれの場合においても、その形態は、無菌でなければならず、そして、容易な注射可能性が存在する程度にまで流動性を有していなければならない。その形態は、製造条件下及び保管条件下において安定していなければならず、そして、細菌や真菌などの微生物の汚染作用に対して保護されていなければならない。
【００６２】
本発明の化合物を遊離塩基または薬理学的に許容される塩として含む溶液は、ヒドロキシプロピルセルロースのような界面活性剤と適度に混合された水において調製することができる。分散液もまた、グリセロール、液状ポリエチレングリコール、およびそれらの混合物において、ならびに油において調製することができる。通常の保管条件と使用条件の下では、このような調製物には微生物の成長を妨げる防腐剤が含まれている。
【００６３】
ＰＡＲ１アンタゴニストは、中性もしくは塩の形の組成物に処方することができる。薬学上許容される塩として挙げられるのは、酸付加塩（タンパク質の遊離アミン基を用いて形成された）があり、これは、例えば塩酸やリン酸のような無機酸を用いて、または、酢酸、シュウ酸、酒石酸、マンデル酸等のような有機酸を用いて形成される。遊離カルボキシル基を用いて形成した塩はまた、例えば水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カルシウム、または水酸化第二鉄のような無機塩基、およびイソプロピルアミン、トリメチルアミン、ヒスチジン、プロカイン等の有機塩基から誘導することができる。
【００６４】
担体はまた、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えばグリセロール、プロピレングリコール、および液状ポリエチレングリコール等）、その適切な混合物、および植物油を含む溶媒または分散媒質であってよい。適当な流動性は、例えばレシチンのようなコーティングの使用によって、分散液の場合には所要の粒度を維持することによって、そして界面活性剤を用いることによって維持することができる。微生物の作用の予防は、例えばパラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサール等の様々な抗菌剤や抗真菌剤を用いることによってもたらされ得る。多くの場合、例えば糖類または塩化ナトリウムのような等張剤を含ませるのが望ましい。注射用組成物の持続的吸収は、例えば、モノステアリン酸アルミニウムやゼラチンのような吸収遅延剤を組成物において用いることによってもたらされ得る。
【００６５】
無菌の注射溶液は、所望により、適切な溶媒中に必要量の活性ポリペプチドを、上記に列挙した他の様々な成分と混ぜ合わせ、その後に、濾過滅菌することによって調製される。一般に、分散液の調製は、塩基性の分散媒質と、上記に列挙されたもののうちから選んだ、その他必要な成分とを含む無菌媒体の中に、様々な無菌活性成分を混ぜ合わせることにより行なわれる。無菌注射溶液を調製するための無菌粉末の場合、調製方法として望ましいのは、真空乾燥技術および凍結乾燥技術であり、それにより、活性成分の粉末だけでなく、それに加えて、前もって滅菌濾過されたその溶液から、他の望ましい成分も得られる。
【００６６】
製剤の際、溶液の投与は、投与製剤に適合した様式、および治療に有効な量で行われる。製剤は、上述の注射溶液のタイプなどの様々な投与形態で容易に投与されるが、薬剤放出カプセル等も使用可能である。
【００６７】
水溶液での非経口投与では、例えば、溶液は必要に応じて緩衝されるべきであり、液状希釈剤をまず、十分な量の生理食塩水またはグルコースで等調にすべきである。このような特定の水溶液が特に適しているのは、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与、および腹腔内投与である。これに関連して、使用可能な無菌水性媒質は、本開示に照らして当業者には周知である。例えば一回の投与量は、１ｍｌの等張性のＮａＣｌ溶液に溶解して、１０００ｍｌの皮下投与液に加えるか、点滴を提案された部位で注入することができる。投与量をいくらか変化させることも、治療中の患者の状態に応じて必要となる。投与の責任者は、いずれにしても、個別の対象に適した用量を決定することになる。
【００６８】
ＰＡＲ１アンタゴニストは、用量当たり約０．０００１から１．０ｍｇまたは約０．００１から０．１ｍｇまたは約０．１から１．０、またはさらに約１０ｍｇ程度を包含するように、治療的混合物内に製剤することができる。複数回用量を投与することもできる。
【００６９】
静脈注射または筋肉内注射のような非経口投与向けに製剤された本発明の化合物だけでなく、他にも薬学上許容される形式として挙げられるのは、例えば錠剤またはその他の経口投与用固形物；リポソ−ム製剤；放出持続性のカプセル；およびその他一切の現在用いられている形態である。
【００７０】
本発明では、ＰＡＲ１アンタゴニストは、一つまたは複数の別々の薬学的物質、好ましくはＡ型インフルエンザウイルス感染症治療用の薬学的物質と組み合わせて製剤することができる。そのような物質は、特に有益な治療効果をもたらすために、大いに異なる生化学経路で作用することがある。
【００７１】
本発明では、一つまたは複数の活性物質を、同時投与される単剤療法製剤または単一の共製剤のいずれかとして投与してよい。
【００７２】
好ましい実施態様においては、活性物質の一つはＰＡＲ２アゴニストである。
【００７３】
本発明の更にもう一つの目的は、
（ｉ）少なくとも一つのＰＡＲ−１アンタゴニストと、
（ｉｉ）少なくとも一つのプロテアーゼ活性化受容体−２（ＰＡＲ−２）アゴニスト
とからなる医薬組成物に関するものである。
【００７４】
本発明の更にもう一つの目的は、対象のＡ型インフルエンザウイルス感染症の治療または予防のための前記医薬組成物の使用に関するものである。
【００７５】
本発明の更にもう一つの目的は、対象のＡ型インフルエンザウイルス感染症の治療または予防のために同時使用、個別使用または逐次使用する複合調製物として、
（ｉ）少なくとも一つのＰＡＲ−１アンタゴニストと、
（ｉｉ）少なくとも一つのプロテアーゼ活性化受容体−２（ＰＡＲ−２）アゴニスト、
とを含む製品に関するものである。
【００７６】
本文中で用いる場合、「ＰＡＲ２」という語は、当技術分野における一般的な意味を有し、プロテアーゼ活性化受容体−２を指す。その語に含まれうるのは、天然ＰＡＲ２ならびにその変異体および修飾形態である。ＰＡＲ２は何に由来するものであってもよいが、典型的には（例えばヒトやヒトの他の霊長類のような）哺乳動物であり、特にヒトＰＡＲ２である。
【００７７】
本文中で用いる場合、「ＰＡＲ２アゴニスト」という語は、ＰＡＲ２と結合し、それを活性化して、経路のシグナル伝達およびさらなる生物学的プロセスを開始させる、天然または合成の化合物を指す。ＰＡＲ−２アゴニスト活性を評価しうる方法としては様々なものが知られている。例えばＨｏｌｌｅｎｂｅｒｇの方法（Ｈｏｌｌｅｎｂｅｒｇ，Ｍ．Ｄ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃａｔｉ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，７５，８３２−８４１（１９９７））、Ｋａｗａｂａｔａの方法（Ｋａｗａｂａｔａ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．，２８８，３５８−３７０（１９９９））、およびＨａｗｔｈｏｒｎｅの方法（Ｈｏｗｔｈｏｒｎｅ ｅｔ ａｌ．，Ａ Ｈｉｇｈ−Ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ Ｍｉｃｒｏｔｉｔｅｒ Ｐｌａｔｅ−Ｂａｓｅｄ Ｃａｌｃｉｕｍ Ａｓｓａｙ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｓｔｕｄｙ Ｏｆ Ｐｒｏｔｅａｓｅ−Ａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ２ Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ，Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２９０，３７８−３７９（２００１））を用いてＰＡＲ−２アゴニスト活性の評価を行なってよい。
【００７８】
ある実施態様においては、本発明のＰＡＲ２アゴニストは有機小分子であってよい。本発明での検討の対象となるＰＡＲ２アゴニストの代表的なものとして挙げられるものは、限定はしないが、米国特許出願公開第２００７１２３５０８号明細書および米国特許出願公開第２００８３１８９６０号明細書に記載されているものがあり、これらは、本文中で引用することにより、本開示内容の一部として組み込まれている。他の例として挙げられるもののとしては、Ｇｒａｄｄｉｌ ＬＲ ｅｔ ａｌ．２００８に記載されているものがあり、それは更に具体的にはＡＣ−５５５４１［Ｎ−［［１−（３−ブロモフェニル）−ｃｔｈ−（Ｅ）−イリデンヒドラジノカルボニル］−（４−オキソ−３，４−ジヒドロフタラジン−ｌ−イル）−メチルｊ−ベンズアミド］およびＡＣ−２６４６１３［２−オキソ−４−フェニルピロリジン−３−カルボン酸［ｔ（３−ブロモフェニル）−（Ｅ／Ｚ）−エチリデン］−ヒドラジド］である。
【００７９】
もう一つ別の実施態様では、本発明のＰＡＲ２アゴニストは、ＰＡＲ２活性化ペプチドで、それはＨＯＯＣ−ＳＬＩＧＲＬ−ＮＨ２（配列番号５）またはＨＯＯＣ−ＳＬＩＧＫＶ−ＮＨ２（配列番号６）であってよい。
【００８０】
もう一つ別の実施態様では、本発明のＰＡＲ２アゴニストは、ＨＯＯＣ−ＬＩＧＲＬＯ−ＮＨ２、ＨＯＯＣ−Ｆｌｕｏｒｙｉ−ＬＩＧＲＬＯ−ＮＨ２、およびトランスシンナモイル−ＬＩＧＲＬＯ（ｔｃ）−ＮＨ２から構成される群から選ばれるＰＡＲ２活性化ペプチド誘導体であってよい。
【００８１】
本発明で検討の対象となるその他のＰＡＲ２活性化ペプチド誘導体として挙げられるものとしては、（ここで引用することにより本開示内容に組み入れるものとする）国際公開第０３／１０４２６８号パンフレットに記載の、以下の一般式（Ｉ）で表されるものまたはその塩である。
【００８２】
Ｚ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＯ−ＮＨ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｇｌｙ−ＡＡ１−ＡＡ２−ＣＯ−Ｒ（Ｉ）
【００８３】
式中、Ｚは、置換基を有していてもいなくてもよいアリール基または置換基を有していてもいなくてもよいヘテロアリール基を表し、ｎは０、１または２を表し、ＡＡ１−ＡＡ２はＬｙｓ−ＶａｌまたはＡｒｇ−Ｌｅｕを表し、Ｒは−ＯＨか−ＮＨ２を表す。
【００８４】
Ｚで表されるアリール基は、６から３０個の炭素原子、好ましくは６から１４個の炭素原子を有する、単環型、多環型または縮合環型の炭素環基であってよく、具体的な例を挙げると、フェニル基やナフチル基が望ましい。Ｚで表されるヘテロアリール基は、５から７員の単環型、多環型または縮合環型の複素環基で、環の中に少なくとも１から３個の窒素原子、酸素原子または硫黄原子を含むものであってよく、具体的な例を挙げると、フリル基、チエニル基、ピリジル基またはキノリル基が好ましい。
【００８５】
Ｚで表されるアリール基またはヘテロアリール基は、置換基を有していてもいなくてもよく、限定はしないが本発明のペプチド誘導体の活性に対する副作用のないあらゆるアリール基またはヘテロアリール基を含み、具体的な例を挙げると、ハロゲン原子、低級アルキル基、低級アルコキシル基、フェニル基、フェニル低級アルキル基、ニトロ基、アミノ基、ヒドロキシル基、およびカルボキシル基が含まれる。
【００８６】
ハロゲン原子の例としては、塩素原子、フッ素原子、および臭素原子が挙げられる。低級アルキル基は、好ましくは、１個から１５個の炭素原子、好ましくは１個から６個の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖状の低級アルキル基で、例を挙げればメチル基とエチル基などである。低級アルコキシル基には、好ましくは、１個から１５個の炭素原子、好ましくは１個から６個の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖状の低級アルコキシル基が含まれ、その例を挙げれば、メトキシ基やエトキシル基などである。
【００８７】
フェニル低級アルキル基中の低級アルキル基には、アルキレン基が含まれ、これには例えばメチレン基やエチレン基のような低級アルキル基が含まれる。
【００８８】
この低級アルキル基、低級アルコキシル基、フェニル基、およびフェニル低級アルキル基の置換基は更にハロゲン原子等で置換されてもよい。
【００８９】
本発明の一般式（Ｉ）の中のＺ基の例として挙げられるのは、置換または未置換のフェニル基、ナフチル基、フリル基、チエニル基、ピリジル基、およびキノリル基であり、具体的な例を挙げると、フェニル基、４−メトキシフェニル基、３−メトキシフェニル基、２−メトキシフェニル基、２，４−ジメトキシフェニル基、３，５−ジメトキシフェニル基、４−フェネチルフェニル基、３−フェネチルフェニル基、２−フェネチルフェニル基、４−ニトロフェニル基、３−ニトロフェニル基、２−ニトロフェニル基、２，４−ジニトロフェニル基、３，４−ジニトロフェニル基、４−メチルフェニル基、３−メチルフェニル基、２−メチルフェニル基、２，４−ジメチルフェニル基、３，５−ジメチルフェニル基、４−フルオロフェニル基、３−フルオロフェニル基、２−フルオロフェニル基、２，４−ジフルオロフェニル基、３，５−ジフルオロフェニル基、２，４，５−トリフルオロフェニル基、４−フェニルフェニル基、３−フェニルフェニル基、２−フェニルフェニル基、２−フリル基、３−フリル基、５−メトキシ−２−フリル基、５−メチル−２−フリル基、１−ナフチル基、２−ナフチル基、４−メトキシ−１−ナフチル基、４−メチル−１−ナフチル基、４−メトキシ−２−ナフチル基、４−ニエチル−２−ナフチル基、４−ピリジル基、２−ピリジル基、３−ピリジル基、２−メチル−４−ピリジル基、４−メチル−２−ピリジル基、２−チエニル基、３−チエニル基、３−メチル−２−チエニル基、４−メチル−２−チエニル基、４−メチル−３−チエニル基、６−キノリル基、７−キノリル基、８−キノリル基、４−キノリル基、４−メチル−６−キノリル基等がある。
【００９０】
本発明の一般式（Ｉ）において、ｎは０、１または２であり、下付き文字ｎの付いた基がＺ基に結合している。ｎが０の時、Ｚ基は直接、カルボニル基に結合している。ｎがｔの時、Ｚ基はメチレン基を介してカルボニル基に結合している。そしてｎが２の時、Ｚ基はエチレン基を介してカルボニル基に結合している。
【００９１】
一般式（Ｉ）のＲは−ＯＨもしくは−ＮＨ２、またはその塩を示す。
【００９２】
本発明においては、一般式（Ｉ）のＡＡｌ−ＡＡ２は、共に結合した二つのタイプのアミノ酸を示す。アミノ酸ＡＡｌは、好ましくはＬｙｓまたはＡｒｇであり、一方、ＡＡ２は、好ましくはＶａｌまたはＬｅｕであることが望ましい。ＡＡｌおよびＡＡ２は、Ｎ末端からＣ末端への方向に沿って配列ＡＡ１−ＡＡ２に共に結合される。好ましくは、ＡＡ１−ＡＡ２にはＬｙｓ−ＶａｌまたはＡｒｇ−Ｌｅｕが含まれる。
【００９３】
もう一つ別の実施態様では、本発明のＰＡＲ２アゴニストは、ＰＡＲ２を活性化することが知られているプロテアーゼである。例えばトリプシンおよびトリプターゼは、ＰＡＲ２の主なアゴニストである。トリプシンおよびトリプターゼによりＰＡＲ２が切断されると、テザーリガンドＳＬＩＧＲＬ（配列番号１）（ラットおよびマウスのＰＡＲ２）が暴露され、それがつぎに、切断された受容体の細胞外ループＩＩの中の保存領域と結合する。因子ＶＩＩａや因子Ｘａのように、ＰＡＲ２を活性化できる凝固因子も幾つかある。他の例として挙げられるのは、マトリプターゼ、ヒト気道トリプシン様プロテアーゼ、および膵外性のトリプシン酵素のような、上皮細胞由来のプロテアーゼである。
【００９４】
もう一つ別の実施態様では、ＰＡＲ２アゴニストは、抗体（この語は抗体断片も含む）からなっていてよい。特に、ＰＡＲ２アゴニストは、前記抗体が受容体を活性化するという意味で、ＰＡＲ２に対する抗体からなっていてよい。
【００９５】
もう一つ別の実施態様では、ＰＡＲ２アゴニストはアプタマーであってよい。アプタマーは、分子認識において、抗体に代わる分子のクラスである。アプタマーは、実質上どのようなクラスの目標分子でも高い親和性および特異性で認識する能力を有するオリゴヌクレオチドまたはオリゴペプチド配列である。そのようなリガンドは、Ｔｕｅｒｋ Ｃ．ａｎｄ Ｇｏｌｄ Ｌ．，１９９０に記載のように、ランダム配列ライブラリーの、ＥＸｐｏｎｅｎｔｉａｌ ｅｎｒｉｃｈｍｅｎｔ（ＳＥＬＥＸ）によるＳｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ ｏｆ Ｌｉｇａｎｄｓを通して単離可能である。ランダム配列ライブラリーは、ＤＮＡの組み合わせ化学合成により、入手可能である。このライブラリーにおいて、各構成要素は、固有の配列から最終的に化学的修飾された、直鎖オリゴマーである。このクラスの分子の修飾、利用及び利点として考えうるものがＪａｙａｓｅｎａ Ｓ．Ｄ．，１９９９において概説されている。ペプチドアプタマーは、ツーハイブリッド法によって複合ライブラリーから選ばれた大腸菌チオレドキシンＡのようなプラットホームタンパク質により提示される、立体構造的に拘束された抗体可変領域から構成される（Ｃｏｌａｓ ｅｔ ａｌ．，１９９６）。
【００９６】
上記に説明したようなＰＡＲ２に対するアプタマーを得た後、当業者であればＰＡＲ２を活性化するものを容易に選べる。
【００９７】
本発明のもう一つの態様は、Ａ型インフルエンザウイルスの複製を阻害するためのＰＡＲ１アンタゴニストに関するものである。
【００９８】
本発明の更にもう一つの目的は、対象がＡ型インフルエンザウイルス感染症にかかりやすいかを検証する方法に関するものであって、その方法は、前記対象から採取した生物学的サンプルを分析することにより、
（ｉ）ＰＡＲ１遺伝子における突然変異および／もしくはそれに関連するプロモーターの存在を検出し、および／または
（ｉｉ）そのＰＡＲ１遺伝子の発現を分析する、
という手順からなるものである。
【００９９】
本文中で用いる場合、「生物学的サンプル」という語は、血液または血清のような、対象から採取したあらゆるサンプルを言う。
【０１００】
ＰＡＲ１遺伝子における突然変異を検出する方法の典型的なものとして挙げられるのは、制限断片長多型法、ハイブリダイゼーション技術、ＤＮＡ配列決定法、エキソヌクレアーゼ耐性、ミクロ配列決定、ｄｄＮＴＰを用いる固相伸長、ｄｄＮＴＰを用いる溶液中の伸長反応、オリゴヌクレオチドアッセイ、動的対立遺伝子特異的ハイブリダイゼーションなどの単一ヌクレオチド多型検出方法、ライゲーション連鎖反応、ミニ配列決定、ＤＮＡ「チップ」、ＰＣＲまたは分子標識と組み合わせた、単一標識または二重標識プローブでの対立遺伝子特異的オリゴヌクレオチドハイブリダイゼーションなどがある。
【０１０１】
ＰＡＲ１遺伝子の発現の分析の評価は、転写された核酸または翻訳されたタンパク質の発現を検出するための様々な周知の方法のいずれかによって行なってもよい。
【０１０２】
好ましい実施態様においては、ＰＡＲ１遺伝子の発現の評価は、新生ＲＮＡのような、前記遺伝子のｍＲＮＡ転写産物またはｍＲＮＡ前駆体の発現を分析することによって行なわれる。前記分析は、対象から採取した生物学的サンプル中の細胞からｍＲＮＡ／ｃＤＮＡを調製し、そのｍＲＮＡ／ｃＤＮＡを参照ポリヌクレオチドとハイブリダイズすることによって評価することができる。調製されたｍＲＮＡ／ｃＤＮＡを用いてハイブリダイゼーションまたは増幅アッセイを行なうことができ、その例として挙げられるのは、限定はしないが、サザン分析またはノーザン分析、ポリメラーゼ連鎖反応分析、例えば定量ＰＣＲ（ＴａｑＭａｎ）、およびＧｅｎｅＣｈｉｐ（商標）ＤＮＡアレイ（ＡＦＦ ＹＭＥＴＲＩＸ）のようなプローブアレイである。
【０１０３】
好適には、ＰＡＲ１遺伝子から転写したｍＲＮＡの発現レベルの分析の一環として、（米国特許第４，６８３，２０２号に記載の実験例のような）ＲＴ−ＰＣＲによる核酸増幅、リガーゼ連鎖反応（ＢＡＲＡＮＹ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，ｖｏｌ．８８，ｐ：１８９−１９３，１９９１）、自家持続配列複製（ＧＵＡＴＥＬＬＩ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，ｖｏｌ．５７，ｐ：１８７４−１８７８，１９９０）、転写増幅システム（ＫＷＯＨ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，ｖｏｌ．８６，ｐ：１１７３−１１７７，１９８９）、Ｑβレプリカーゼ（ＬＩＺＡＲＤＩ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｌ．Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．６，ｐ：１１９７，１９８８）、ローリングサークル複製（米国特許第５，８５４，０３３号）もしくは、その他のいずれかの核酸増幅法を行なった後、当業者に周知の技術を用いて増幅分子の検出を行なう。このような検出方式の数々が、核酸分子の検出に特に役立つのは、そのような分子の存在が、極めて少数である場合である。本文中で用いる場合、増幅プライマーというのは、一つの遺伝子（それぞれ正および負の鎖もしくは逆）の５’か３’領域にアニール可能な一対の核酸分子であって、その間に短い領域を内包するものとして定義づけられる。一般に、増幅プライマーは、長さが約１０から３０ヌクレオチドで、長さが約５０から２００ヌクレオチドの一つの領域の側面に位置する。条件が適切で試薬も適切であれば、そのようなプライマーにより、両側にそのようなプライマーが並んでいるヌクレオチド配列からなる核酸分子を増幅することが可能となる。
【０１０４】
もう一つ別の好ましい実施例においては、ＰＡＲ１遺伝子の発現の評価を、前記遺伝子から翻訳されたタンパク質の発現を分析することにより、行なう。前記分析の評価に用いることができるのは、（例えば放射標識された、発色団で標識した、発蛍光団標識もしくは酵素標識の抗体のような）抗体、（例えば、基質と、もしくは（例えばビオチンストレプトアビジンのような）タンパク質／リガンドの一対のタンパク質のタンパク質かリガンドと共役の抗体のような）抗体誘導体、あるいは、そのＰＡＲ１遺伝子から翻訳されたタンパク質と特異的に結合する（例えば単鎖抗体、分離された抗体高度可変ドメイン等のような）抗体断片がある。
【０１０５】
前記分析の評価方法として考えられる技術としては、様々なものが業界で知られており、その例として挙げられ、但し、そのような例に限定されるわけではないのが、酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、放射免疫測定（ＲＩＡ）、ウェスタンブロット法と酵素結合免疫吸着法（ＲＩＡ）である。
【０１０６】
本発明の方法の一環として、患者から採取した生物学的サンプル中のＰＡＲ２遺伝子の発現レベルを、比較対照用のものの中の、前記遺伝子の正常な発現レベルと比較することがあってもよい。正常な発現レベルと比べて、患者の生物学的サンプル中の、前記遺伝子の発現レベルが有意に高いということは、その患者が、Ａ型インフルエンザウイルス感染症にかかりやすくなっている徴である。ＰＡＲ２遺伝子の発現レベルが「正常」だということは、Ａ型インフルエンザウイルス感染症には全くかかっていない被験者の生物学的サンプル中の、前記遺伝子の発現レベルだということである。できれば、前記正常な発現レベルは、（例えば、Ａ型インフルエンザウイルス感染症には全くかかっていない健康な被験者からのサンプルのような）比較対照用サンプルの中で評価することが望ましく、そして、幾つかの比較対照用サンプル中の前記遺伝子の平均的発現レベルであることが望ましい。
【０１０７】
本発明では、Ａ型インフルエンザウイルス感染症患者の治療または予防は、呼吸窮迫症候群の治療または予防ではない。
【０１０８】
本発明を以下の図と実例で更にはっきりと説明していく。しかしながら、このような図と実例は、いかなる意味でも、本発明の範囲を限定するものと解釈すべきではない。
【実施例１】
【０１０９】
素材及び方法
【０１１０】
実験動物
【０１１１】
複数の雌野生型Ｃ５７ＢＬ６マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ，Ｒｈｏｎｅ，Ｆｒａｎｃｅ）を用いて以下の研究をおこなった。マウスは全て、受け入れ時に生後五週間で、実験に供する前の七週間、以下のような条件に順応し、蛇口から出る水と標準的な実験動物用の餌を自由に摂取できるようにした。マウスたちは、国立農学研究所（Ｉｎｓｔｉｔｕｔ Ｎａｔｉｏｎａｌ ｄｅ ｌａ Ｒｅｃｈｅｒｃｈｅ Ａｇｒｏｎｏｍｉｑｕｅ）（ＩＮＲＡ）動物愛護施設（Ｊｏｕｙ−ｅｎ−Ｊｏｓａｓ，Ｆｒａｎｃｅ）において、（一定光周期、１２：１２時間明暗周期、２２℃という）適切な条件に置かれた。そのマウスたちに関わる処置の全ては、獣医業務局（ｄｉｒｅｃｔｉｏｎ ｄｅｓ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ Ｖｅｔｅｒｉｎａｉｒｅｓ）発行（認定番号７８−１１４）の免許証の権威の下でおこなわれた。
【０１１２】
上皮細胞とウイルス株
【０１１３】
この研究で用いられたヒトＩＩ型肺胞上皮細胞（Ａ５４９）とイヌ遠位尿細管由来の細胞株（ＭＤＣＫ）は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（アメリカ・養細胞系統保存機関）から入手し、それぞれＭＥＭＥ（１０％ ＳＶＦ、ＰＳ、グルタミン）とＭＥＭＥ（５％ ＳＶＦ、ＰＳ、グルタミン）の中で育成したものである。Ｇ．Ｆ．Ｒｉｍｍｅｌｚｗａａｎ（Ｅｒａｓｍｕｓ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｒｏｔｔｅｒｄａｍ，Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）より寄贈のＩＡＶ Ａ／ＰＲ／８／３４（ＨｌＮｌ）を育成し、前述のように産生した（Ｆ．ＬｅＢｏｕｄｅｒ ａｎｄ ａｌ，２００８；Ｋ．Ｋｈｏｕｆａｃｈｅ ａｎｄ ａｌ，２００９）。
【０１１４】
使用した薬剤
【０１１５】
ＰＡＲ１−アゴニストペプチドＴＦＬＬＲ−ＮＨ２（Ｈ−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−ＮＨ２，ＳＥＱ ＩＤ Ｎ°７）と比較対照用ペプチドＦＴＬＬＲ−ＮＨ２（Ｈ−Ｐｈｅ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−ＮＨ２，ＳＥＱ ＩＤＮ°８）をスイスのＢＡＣＨＥＭ（Ｂｕｂｅｎｄｏｒｆ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）から購入した。ＰＡＲ−１アンタゴニストＳＣＨ７９７９７二塩酸塩をオランダのＡＸＯＮ ＭＥＤＣＨＥＭ（Ｇｒｏｎｉｎｇｅｎ，Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）から購入した。
【０１１６】
ＰＡＲ１−アゴニストＴＦＬＬＲ−ＮＨ２によるＡ５４９の前処理
【０１１７】
ＩＡＶ Ａ／ＰＲ／８／３４菌株に感染させる前に、Ａ５４９細胞の幾つかを五分間、２５０μＭのＰＡＲ１特異的活性化ペプチドＴＦＬＬＲ−ＮＨ２で刺激し、あるいは刺激しなかった。放出されたＲＡＮＴＥＳ、ＩＬ−６及びＩＬ−８の量を、ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）による感染から、８時間、２４時間、４８時間そして７２時間後に、培養脱離液中で分析した。ウイルス滴定量もまた、従来のプラーク検定法により同じ脱離液中で測定した。
【０１１８】
インビボのＰＡＲ１−アゴニストＴＦＬＬＲ−ＮＨ２の効果
【０１１９】
ＰＡＲ１アゴニスト（ＴＦＬＬＲ−ＮＨ２）刺激実験については、生後六週間のＣ５７ＢＬ／６雌のマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ＆Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）に三日間、毎日、麻酔をかけ（ＩＰ）、鼻腔内を２５μｌの様々な溶液に曝した。最初の日、麻酔をかけたマウスの鼻腔内に（５０００、５００、５０または１０ＰＦＵのＡ／ＰＲ／８／３４に、５０μＭのＴＦＬＬＲ−ＮＨ２ ＰＡＲ−１アゴニストまたはＦＴＬＬＲ−ＮＨ２ ＰＡＲ−１比較対照用薬剤付きの、または抜きの）２５μｌ溶液を接種した。感染してから二日後と三日後に、そのようなマウスのまさに鼻腔内を２５μｌのペプチドのみに曝し、あるいは治療なしのマウスにはＭＥＭＥ媒質（２５μｌ／マウス）にした。つぎに感染したマウスの生存率と体重を毎日、観察し、ウイルス負荷をプラーク検定により測定し、サイトカイン（ＲＡＮＴＥＳ＆ＩＬ−６）と多核好中球（ＰＭＮ）を、犠牲に供したマウスの肺の中で、感染から２４時間後と４８時間後に、気管支肺胞洗浄液（ＬＢＡ）中に添加した。最後に、ＰＡＲ−１アゴニストの二次的効果をインビボで確認するために、そのマウスの鼻腔内を２５μｌのＰＡＲ−１アゴニスト（５０μＭ）に曝す一方で、比較対照用マウスはＭＥＭＥ媒質に曝した。つぎに治療したマウスの生存率と体重を毎日、観察した。
【０１２０】
インビボのＰＡＲ１−アンタゴニストＳＣＨ７９７９７の効果
【０１２１】
インビボのＳＣＨ７９７９７保護投与量を確認するため、生後六週間のＣ５７ＢＬ／６雌のマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ＆Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）複数に、三日間、毎日、麻酔をかけ（ＩＰ）、鼻腔内を、濃度可変のＳＣＨ７９７９７（５０；５；０．５及び０，２μＭ）と一定のＡ／ＰＲ／８／３４ｐｆｕ（５０００ｐｆｕ）を含む２５μｌの溶液に曝した。最初の日、麻酔をかけたマウスの鼻腔内に、５０、５、０．５及び０．２μＭのＳＣＨ７９７９７ＰＡＲ−１アンタゴニストを伴い、もしくは伴わないで、２５μｌの溶液（５０００、ＰＦＵのＡ／ＰＲ／８／３４）を接種した。感染した後の二日目と三日目に、そのようなマウスの鼻腔内を２５μｌのＳＣＨ７９７９７に、５０、５、０．５そして０．２μＭで曝し、一方、比較対照用の（感染した）マウスには等量のＭＥＭＥにした。つぎに、感染したマウスの生存と体重を毎日、観察した。
【０１２２】
第二の手順として、そしてＩＡＶｐｆｕの低い値でのＳＣＨ７９７９７の保護率を確認するために、生後六週間のＣ５７ＢＬ／６雌のマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ＆Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）に三日間、毎日、麻酔をかけ（ＩＰ）、そして鼻腔内を、ｐｆｕが可変のＡ／ＰＲ／８／３４（５０００、５００、５０ｐｆｕ）ウイルスと、一定濃度のＳＣＨ７９７９７（５０μＭ）を含む２５μｌの溶液に曝した。処置後、二日目と三日目に、そのマウスたちの鼻腔内をまさに、２５μｌのＳＣＨ７９７９７に５０μＭで曝し、あるいは比較対照用マウスにはＭＥＭＥにした。つぎに、上記のように、感染したマウスたちの生存と体重を毎日、観察し、ウイルス負荷をプラーク検定により測定し、感染の２４時間後と４８時間後に、犠牲に供したマウスの肺の中で、サイトカイン（ＲＡＮＴＥＳ＆ＩＬ−６）と多核好中球（ＰＭＮ）を気管支肺胞洗浄液（ＬＢＡ）中に添加した。
【０１２３】
メイ・グリュンヴァルト・ギムザ染色
【０１２４】
気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬＦ）を１ｍＭ ＥＤＴＡ（ｉｎ ｖｉｔｒｏｇｅｎ）を補ったＰＢＳ（ｉｎ ｖｉｔｒｏｇｅｎ）中に回収した。細胞遠心分離後、多核好中球のパーセンテージの測定を、メイ・グリュンヴァルト・ギムザ染色を施した集細胞遠心装置Ｓｕｐｅｒｆｒｏｓｔ−Ｐｌｕｓ（登録商標）のスライド複数を顕微鏡検査することによって、サンプル毎の５００個の細胞の合計を数えることにより、行なった。
【０１２５】
肺組織学
【０１２６】
複数の肺組織切片を１０％ホルマリン液の中に固定した肺全体から切り出し、パラフィンの中に埋め込んだ。十二マイクロメーターの厚みの切片を取り、前述の病理組織学的評価のため、Ｈ＆Ｅで染色した。
【０１２７】
統計的分析
【０１２８】
マンホイットニーのＵ検定を、ウイルス複製の統計的有意性とＥＬＩＳＡ実験のために用いた。カプラン・マイヤー検定をマウスの生存率の差について用いた。その統計的有意性を、必要時に記録し、ｐ＜０．０５の敷居値で検定した。
【０１２９】
結果
【０１３０】
ＰＡＲ１−アゴニストＴＦＬＬＲ−ＮＨ２はＩＡＶに感染した上皮細胞中のＩＡＶウイルス複製の放出を増大させる
【０１３１】
ＩＡＶ複製におけるＰＡＲ１の役割を詳しく調べるために、Ａ５４９肺胞上皮細胞をＩＡＶに感染させて、選択的ＴＦＬＬＲ−ＮＨ２ＰＡＲ１アゴニストか比較対照用のペプチドで刺激した。ＰＡＲ１アゴニストに曝された時、ＩＡＶに感染した細胞は、その後に、比較対照用の不活性なペプチドに曝された細胞と比べると、より多くのウイルス（図１Ａ）を産生した。ＰＡＲ１活性化は、Ａ５４９に感染した細胞中のウイルス産生を増大させることになるという結論に達した。
【０１３２】
つぎに、ＩＡＶに感染した肺上皮細胞中の炎症サイトカインの放出に及ぼすＰＡＲ１活性化の効果を詳しく調べた。そのような細胞中のＰＡＲ１の刺激により、ＲＡＮＴＥＳ、ＩＬ−８及びＩＬ−６の放出が有意に増大した（図１Ｂ、Ｃ、Ｄ）。そのようにして、ＰＡＲ１のアゴニストは、Ａ５４９−ＩＡＶに感染した−細胞中のサイトカイン放出に影響を及ぼす。
【０１３３】
ＰＡＲ１−アゴニストＴＦＬＬＲ−ＮＨ２はインビボの発病及び死を増大させる
【０１３４】
ＰＡＲ１のインビボでの役割を詳しく調べるために、マウスの鼻腔内を、様々な量（５０００、５００、５０そして１０ｐｆｕ／マウス）で投与したＩＡＶに曝し、５０μＭのＰＡＲ１アゴニストペプチドで刺激し、または刺激しなかった。結果を見たところ、ＰＡＲ１アゴニストによる処置で、ＩＡＶが誘発するマウスの死亡率は、刺激しなかったマウスに比べて、増大した（図２Ａ）。感染しなかったマウスはＰＡＲ１アゴニストに感応しなかったので、この死亡率上昇は、ＰＡＲ１の副作用によるものではない（図２Ｂ）。このようにＩＡＶに感染したマウスの発病がＰＡＲ１アゴニストにより増大したことを見て、ＰＡＲ１アゴニストがインビボでのＩＡＶの複製を調節しうるのかどうかを、更に詳しく調べることになった。そういうわけで、感染したマウスを、感染してから２４時間後と４８時間後、ＰＡＲ１アゴニストで刺激し、あるいは刺激せずに、その肺の中のウイルス負荷の数値を求めた。結果を見たところ、ＰＡＲ１特異的アゴニストで処置した感染マウスは、刺激を受けなかったマウスに比べて、肺の中の感染性ウイルス負荷が有意に増大していた（図２Ｃ）。このことは、ｐｆｕ／マウスの値が異なった二つの場合において観察された。そういうわけで、ＰＡＲ１アゴニストはインビボでのＩＡＶ複製を増大させる。
【０１３５】
ＰＡＲ１−アンタゴニストＳＣＨ７９７９７によるＩＡＶ誘発性の発病及び死からの保護
【０１３６】
インビボでのＰＡＲ１アンタゴニストの役割を詳しく調べるため、マウスの鼻腔内に５０００ｐｆｕ／マウスを投与して感染させ、様々な濃度のＰＡＲ１アンタゴニストＳＣＨ７９７９７で処置した。結果を見たところ、ＰＡＲ１アンタゴニストを用いた処置により、その投与量に応じた形で、マウスはＩＡＶが誘発する死から保護されていた（図３Ａ）。更に、５０００、５００そして５０のような、様々なｐｆｕ／マウスの値で感染させた後も、５０μＭのアンタゴニストＰＡＲ１により、マウスはＩＡＶが誘発する死から保護された（図３Ｂ）。このことから、ＰＡＲ１アンタゴニストは、マウスをＩＡＶが誘発する死から守ったという結論に達した。最後に、感染したマウスを、感染してから２４時間後と４８時間後、ＰＡＲ１アンタゴニストで刺激し、あるいは刺激せずに、その肺の中のウイルス負荷の数値を求めた。結果を見たところ、特異的なＰＡＲ１のアンタゴニストの処置を受けた感染マウスは、処置を受けなかったマウスに比べて、肺の中の感染性のウイルス負荷が有意に減少していた（図３Ｃ）。したがって、ＰＡＲ１アンタゴニストは、ウイルス複製を阻害し、ＩＡＶ誘発性の発病及び死からマウスを保護する。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０１３７】
【非特許文献１】Ｒｉｔｅａｕ Ｂ．ｅｔ ａｌ．２００６；ＬｅＢｏｕｄｅｒ Ｆ．ｅｔ ａｌ．２００８
【非特許文献２】Ｓｔｅｉｎｈｏｆｆ Ｍ．ｅｔ ａｌ．２００５；Ｖｅｒｇｎｏｌｌｅ Ｎ．ｅｔ ａｌ．２００８
【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者のＡ型ウイルス・インフルエンザ感染症の治療または予防の際のプロテアーゼ活性化受容体−１（ＰＡＲ−１）アンタゴニストの使用方法。
【請求項２】
前記Ａ型ウイルス・インフルエンザがＨ１Ｎ１ウイルスである請求項１の使用方法。
【請求項３】
前記ＰＡＲ−１アンタゴニストが、ペプチド、ペプチド模倣物、小分子有機化合物、アプタマー、ペプデュシン、ポリヌクレオチドまたは抗体のうちのいずれかから選ぶものである請求項１または２の使用方法。
【請求項４】
前記ＰＡＲ−１アンタゴニストが、Ｎ３−シクロプロピル−７−｛［４−（１−メチルｅｔｈｙｌ）フェニル］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［３，２−ｆ］キナゾリン−１，３−ジアミンである請求項１から３のいずれかの使用方法。
【請求項５】
その患者が哺乳動物で、できればヒトであることが望ましい請求項１から４のいずれかの使用方法。
【請求項６】
（ｉ）少なくとも一つのＰＡＲ−１アンタゴニストと、（ｉｉ）少なくとも一つのプロテアーゼ活性化受容体−２（ＰＡＲ−２）アゴニストとからなる医薬組成物。
【請求項７】
患者のＡ型ウイルス・インフルエンザ感染症の治療または予防のための請求項６の医薬組成物の使用方法。
【請求項８】
患者のＡ型ウイルス・インフルエンザ感染症の治療または予防のために、同時使用、個別使用または逐次使用するための総合製剤として、（ｉ）少なくとも一つのＰＡＲ−１アンタゴニストと、（ｉｉ）少なくとも一つのプロテアーゼ活性化受容体−２（ＰＡＲ−２）アゴニストとを含む製品。
【請求項１】
患者のＡ型ウイルス・インフルエンザ感染症の治療または予防の際のプロテアーゼ活性化受容体−１（ＰＡＲ−１）アンタゴニストの使用方法。
【請求項２】
前記Ａ型ウイルス・インフルエンザがＨ１Ｎ１ウイルスである請求項１の使用方法。
【請求項３】
前記ＰＡＲ−１アンタゴニストが、ペプチド、ペプチド模倣物、小分子有機化合物、アプタマー、ペプデュシン、ポリヌクレオチドまたは抗体のうちのいずれかから選ぶものである請求項１または２の使用方法。
【請求項４】
前記ＰＡＲ−１アンタゴニストが、Ｎ３−シクロプロピル−７−｛［４−（１−メチルｅｔｈｙｌ）フェニル］メチル｝−７Ｈ−ピロロ［３，２−ｆ］キナゾリン−１，３−ジアミンである請求項１から３のいずれかの使用方法。
【請求項５】
その患者が哺乳動物で、できればヒトであることが望ましい請求項１から４のいずれかの使用方法。
【請求項６】
（ｉ）少なくとも一つのＰＡＲ−１アンタゴニストと、（ｉｉ）少なくとも一つのプロテアーゼ活性化受容体−２（ＰＡＲ−２）アゴニストとからなる医薬組成物。
【請求項７】
患者のＡ型ウイルス・インフルエンザ感染症の治療または予防のための請求項６の医薬組成物の使用方法。
【請求項８】
患者のＡ型ウイルス・インフルエンザ感染症の治療または予防のために、同時使用、個別使用または逐次使用するための総合製剤として、（ｉ）少なくとも一つのＰＡＲ−１アンタゴニストと、（ｉｉ）少なくとも一つのプロテアーゼ活性化受容体−２（ＰＡＲ−２）アゴニストとを含む製品。
【図１Ａ】
【図１Ｂ】
【図１Ｃ】
【図１Ｄ】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図２Ｃ】
【図３Ａ】
【図３Ｂ】
【図３Ｃ】
【図１Ｂ】
【図１Ｃ】
【図１Ｄ】
【図２Ａ】
【図２Ｂ】
【図２Ｃ】
【図３Ａ】
【図３Ｂ】
【図３Ｃ】
【公表番号】特表２０１３−５１０８３２（Ｐ２０１３−５１０８３２Ａ）
【公表日】平成２５年３月２８日（２０１３．３．２８）
【国際特許分類】
【出願番号】特願２０１２−５３８３６０（Ｐ２０１２−５３８３６０）
【出願日】平成２２年１１月１５日（２０１０．１１．１５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２０１０／０６７５１６
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０５８１８３
【国際公開日】平成２３年５月１９日（２０１１．５．１９）
【出願人】（５０５１２９０７９）アンスティテュ ナシオナル ドゥ ラ ルシェルシュ アグロノミック (15)
【氏名又は名称原語表記】ＩＮＳＴＩＴＵＴ ＮＡＴＩＯＮＡＬ ＤＥ ＬＡ ＲＥＣＨＥＲＣＨＥ ＡＧＲＯＮＯＭＩＱＵＥ
【Ｆターム（参考）】
【公表日】平成２５年３月２８日（２０１３．３．２８）
【国際特許分類】
【出願日】平成２２年１１月１５日（２０１０．１１．１５）
【国際出願番号】ＰＣＴ／ＥＰ２０１０／０６７５１６
【国際公開番号】ＷＯ２０１１／０５８１８３
【国際公開日】平成２３年５月１９日（２０１１．５．１９）
【出願人】（５０５１２９０７９）アンスティテュ ナシオナル ドゥ ラ ルシェルシュ アグロノミック (15)
【氏名又は名称原語表記】ＩＮＳＴＩＴＵＴ ＮＡＴＩＯＮＡＬ ＤＥ ＬＡ ＲＥＣＨＥＲＣＨＥ ＡＧＲＯＮＯＭＩＱＵＥ
【Ｆターム（参考）】
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